BRPI0709610A2

BRPI0709610A2 - compostos ligantes do domìnio iap bir

Info

Publication number: BRPI0709610A2
Application number: BRPI0709610-0A
Authority: BR
Inventors: Alain Boudreault; Patrick Bureau; James Jaquith; John W Gillard
Original assignee: Aegera Therapeutics Inc
Priority date: 2006-03-16
Filing date: 2007-03-16
Publication date: 2011-07-19
Also published as: US7579320B2; KR20080112304A; PH12014502420B1; WO2007104162A1; US9365614B2; PH12014502420A1; EP2004600A1; NZ571577A; US20130071411A1; EP2004600A4; US20100221261A1; JP5419468B2; JP2009529544A; AU2007224932B2; TWI504597B; US20080069812A1; TW200800961A; SG170739A1; MX2008011837A; US8765681B2

Abstract

COMPOSTOS LIGANTES DO DOMìNIO IAP BIR. é revelado um isómero, enantiómero, diastereoisómero ou tautómero de um composto representado pela Fórmula (I) ou (II) ou um sal seu, no qual R^ 1^, R^ 2^, R^ 3^, R^ 100^, R^ 200^, R^ 300^, A, A^ 1^, BG, Q e Q^ 1^ são substituintes aqui descritos. é também revelado o uso dos compostos de Fórmula I e II para tratar distúrbios proliferativos, tais como câncer.

Description

"COMPOSTOS LIGANTES DO DOMÍNIO IAP BIR"

CAMPO DA INVENÇÃO

A presente invenção envolve compostos em ponte que se ligam aos domínios IAPBIR1 e os quais são úteis para o tratamento de distúrbios proliferativos e distúrbios deapoptose desregulada, tal como câncer.

ANTECEDENTES DA INVENÇÃO

Apoptose, ou morte celular programada, ocorre tipicamente no desenvolvimentonormal e manutenção de tecidos saudáveis em organismos multicelulares. Ela é umprocesso complexo o qual resulta na remoção de células danificadas, doentes ouexcessivas sob um ponto de vista de desenvolvimento, na ausência de sinais de inflamaçãoou necrose.

As vias apoptóticas intrínsecas são conhecidas por serem desreguladas, maisparticularmente no câncer e nas síndromes linfoproliferativas, assim como os distúrbiosauto-imunes tais como esclerose múltipla, nas doenças neurodegenerativas e nainflamação. Da mesma forma, alterações numa resposta apoptótica do hospedeiro têm sidodescritas no desenvolvimento ou manutenção de infecções virais e bacterianas.

As caspases são uma família de enzimas proteolíticas da classe das cisteínaproteases, as quais são conhecidas por iniciar e executar apoptose. Em células normais, ascaspases estão presentes como zimógenos inativos, os quais são cataliticamente ativadosapós os sinais externos, por exemplo, aqueles resultantes da ativação do receptor de morteacionado por ligante, tais como citocinas ou agentes imunológicos, ou pela liberação dosfatores mitocondriais, tais como citocromo C após dano celular induzido por genotoxicidade,quimiotoxicidade ou radiação. Os inibidores das Proteínas Apoptóticas (IAPs) constituemuma família de proteínas as quais são capazes de se ligar a e inibir as caspases, destemodo suprimindo a apoptose celular. Devido aos seus papéis centrais na regulação daatividade da caspase, os IAPs são capazes de inibir a morte celular programada a partir deuma ampla variedade de disparadores, os quais incluem a perda dos mecanismos decontrole do crescimento celular endógeno ou homeostático, assim como fármacosquimioterapêuticos e irradiação.

Os IAPs contêm de um a três domínios estruturais homólogos conhecidos comodomínios de repetição (BIR) IAP de baculovírus. Eles também podem conter um domínio dededo de zinco RING no C-terminal, com uma capacidade de induzir a ubiquitinilação dasmoléculas de ligação ao IAP através de sua função da E3 ligase. Os XIAP, HIAP1 (tambémreferido como clAP2), HIAP2 (clAP1) e IAPs humanos têm cada um três domínios BIR, e um35 dedo de zinco RING carboxiterminal. Outro IAP, NAIP, tem três domínios BIR (BIR1, BIR2 eBIR3), porém nenhum domínio RING, enquanto que Livin, TsIAP e MLIAP têm um únicodomínio BIR e um domínio RING. O inibidor ligado ao cromossomo X da apoptose (XIAP) éum exemplo de um IAP o qual pode inibir o iniciador caspase, conhecido como caspase-9, eas caspases efetoras, Caspase-3 e Caspase-7, pela ligação direta. Ele também pode incluira remoção das caspases através da via proteassoma mediada pela ubiquitilação através daatividade da E3 Iigase de um domínio dedo de zinco RING. É através do domínio BIR3 queXIAP se liga a e inibe a caspase-9. O domínio ligante-BIR2 de XIAP inibe a atividade dascaspases 3 e 7. Os domínios BIR também foram associados com as interações dos IAPscom o fator associado ao receptor do fator de necrose tumoral (TRAFs)-I e -2, e ao TAB1,como proteínas adaptadoras efetuando a sinalização de sobrevivência através da inativaçãode NFkB. Os IAPs1 deste modo, funcionam como uma trava direta na cascata da apoptose,pela prevenção da atividade de, ou inibição das caspases ativas e pelo redirecionamento dasinalização celular para um modo pró-sobrevivência.

O progresso no campo do câncer tem levado a um novo paradigma na biologia docâncer, em que a neoplasia pode ser vista como uma falha das células cancerígenas deexecutar as vias normais de apoptose. As células normais recebem retroalimentaçãocontínua a partir de seus ambientes através dé vários fatores intracelulares e extracelulares,e "cometem suicídio" se removidas desse contexto. Essa indução da apoptose é alcançadapela ativação da cascata caspase. As células cancerígenas, entretanto, ganham acapacidade de superar ou contornar essa regulação da apoptose e continuam a se proliferarinapropriadamente. A maioria dos tratamentos para o câncer induz pelo menos umaresposta apoptótica parcial na célula alvo cancerígena, resultando na remissão ou iniciaçãoda regressão tumoral. Em muitos casos, entretanto, células residuais, as quais sãoresistentes à apoptose, são capazes de escapar da terapia e continuar com o processo dealteração oncogênica/genética, resultando na emergência de doenças metastáticasaltamente resistentes a fármacos, as quais superam a nossa capacidade de tratarefetivamente a doença. Além disso, a maioria das terapias de câncer, incluindo aradioterapia e a tradicional quimioterapia, induz a apoptose nas células cancerígenas, porémtambém causam injúria celular adicional devido à sua falta de especificidade na indução daapoptose somente nas células cancerígenas. A necessidade de melhorar aespecificidade/potência de agentes pró-apoptóticos usados para tratar câncer, e de fatooutros distúrbios proliferativos, é importante devido aos benefícios na redução dos efeitoscolaterais associados com a administração desses agentes. Conseqüentemente, adescoberta de novas formas de induzir a apoptose nas células cancerígenas é umanecessidade médica altamente desejável e sua solução oferece a possibilidade detratamentos totalmente novos para o câncer.

Um corpo crescente de dados indica que as células cancerígenas podem evitar aapoptose pela superexpressão sustentada de um ou mais membros da família IAP deproteínas, conforme documentado em muitas amostras de biópsia de tumores primários,assim como na maioria das linhagens de células cancerígenas estabelecidas. Estudosepidemiológicos demonstraram que a superexpressão de vários IAPs está associada comum fraco prognóstico clínico e sobrevivência. Para XIAP, isso é mostrado em cânceres tãodiversos quanto leucemia e câncer de ovário. A superexpressão de HIAP1 e HIAP2resultante da freqüente amplificação cromossomal da região 11q21-q23, a qual englobaambas, foi observada numa variedade de malignidades, incluindo meduloblastomas,carcinomas de células renais, glioblastomas e carcinomas gástricos. Moléculas regulatórias(X)IAP negativas, tal como XAF1 aparentam ser supressores tumoraís, os quais são muitofreqüentemente perdidos em cânceres clínicos. Deste modo, pela sua capacidade de suprimir a ativação e execução dos mediadores intrínsecos da apoptose, as caspases, osIAPs podem contribuir diretamente para a progressão tumoral e resistência à intervençãofarmacêutica. A indução da apoptose nas células cancerígenas pelo uso de moléculaspequenas potentes, as quais se ligam a domínios IAP específicos, é o assunto dessainvenção.

Nós e outros demonstramos a importância crítica dos domínios BIR individuais paraafetar a função antiapoptótica dos IAPs. Nós propomos que os antagonistas dos IAPs, osquais podem se ligar aos domínios BIR individuais, poderiam romper a função antiapoptóticados IAPs. DE fato, BIRs individuais servem como sítios de ligação críticos para os resíduosSer-Gly-Val-Asp, Ser-Gly-Pro-Ile e Ala-Thre-Pro-Ile terminais das caspases 3, 7 e 9, respectivamente, e tal ligação é imperativa para a função inibitória da caspase dos IAPs. Aligação dos resíduos tetrapeptídicos AxPy N-terminais ao XIAP resulta na liberação dascaspases ativas 3, 7 e 9. No caso de outros IAPs1 tal como c-IAPI e C-IAP2, as funções dosBIRs, quando ligados ao ligante, aparentam direcionar a ativação da ubiquitina Iigase RINGdos IAPs a um alvo ligado, ou aos próprios IAPs individuais para causar a perda proteossomal. Em qualquer caso, antagonistas de moléculas pequenas dos IAPs devem serexcelentes agentes pró-apoptóticos, com usos potenciais no câncer, vários distúrbiosproliferativos e inflamação.

Uma proteína mitocondrial de mamífero, chamada de Ativador das Caspasesderivado da Mitocôndria Secundária (SMAC), a qual antagoniza a função IAP, se liga principalmente aos sítios BIR 3 ou 2 nos IAPs respectivos através de um tetrapeptídeoaminoterminal AxPy. Quatro proteínas indutoras de morte de Drosophila, Reaper, HID, Grime Sickle, as quais antagonizam a capacidade dos IAPs de DRosophiIa de inibir as caspases,também se ligam aos domínios BIR dos IAPs de Drosophila análogos através de umtetrapeptídeo aminoterminal AxPy curto, uma seqüência que se ajusta no bolso de ligaçãoBIR e rompe as interações do IAP-caspase.

A topologia global dos domínios BIR individuais é altamente conservada entre osIAPs humanos e entre os domínios BIR individuais dos IAPs humanos, cada BIR sendo umdomínio de polipeptídeo de dedo de zinco, bloqueado num átomckde Zn coordenado porduas cisteínas e um resíduo de histidina. As estruturas cristalográficas de raio-X de BIR2 eBIR3 XIAP revelam um bolso de ligação crítico para uma porção AXPY na superfície decada domínio BIR. Existem alterações nas seqüências de aminoácidos intervenientes queformam o bolso de ligação e se encaixam tanto em BIR2 quanto em BIR3. Da mesma forma,nós descrevemos domínios homólogos nos BIRs de outros IAPs clAP1 e clAP2. Isso abre apossibilidade de se obter várias classes de compostos de ligação naturais e sintéticos, osquais terão todos diferentes afinidades de especificidade e ligação entre cada um dosdomínios BIR para cada um dos IAPs. A distinção da forma na qual tais compostos irãoafetar a função biológica dos IAPs nas células cancerígenas VS células normais é um novoe principal desafio na descoberta de novos agentes de mecanismo para tratar câncer eoutros distúrbios proliferativos onde a função IAP desregulada é observada. É nossadescoberta que certas classes de compostos de ligação BIR podem se ligar aos BIRs deIAP, com seletividade e potência inesperados, resultando em vantagens terapêuticasdistintas para certas classes estruturais, resultando potencialmente ou da perda de funçãodo IAP ou da perda da proteína IAP celular, ou ambos.

Uma variedade de compostos tipo AxPy peptídico e peptídico AxPy modificadosforam descritos, os quais ativam a Caspase 3 celular pela ligação reportada ao BIR3 doXIAP. Para revisões recentes, ver Elmore et al., Annual Reports in Medicinal Chemistry, 40(2006) 245-262; Sun et al., Bioorg. Med. Chem. Let. 15 (2005) 793-797; Oost et al., J. Med.Chem., 2004, 47 (18), 4417-4426; Park et al., Bioorg. Med. Chem. Lett. 15 (2005) 771-775;Franklin et al., Biochemistry, Vol. 42, No. 27, 2003, 8223-8231; Kip et al., Biochemistry 2002,41, 7344-7349; Wu et al., Chemistry and Biology, Vol.10, 759-767 (2003); Glover et al.,Analytical Biochemistry, 320 (2003) 157-169; pedido de patente publicada americana número 20020177557; e pedido de patente publicada americana número 20040180828;pedido de patente publicada americana número US2006/0025347A1; pedido de patentepublicada americana número US2005/0197403A1; e pedido de patente publicada americananúmero US2006/0194741A1.

Foi demonstrado que os compostos anteriormente mencionados desencadearam um domínio BIR3 isolado de XIAP através do deslocamento de uma sondafluorescentemente marcada e eles aparentam induzir um evento apoptótico num gruposelecionado de linhagens de células cancerígenas com potência na faixa micromolar -nanomolar. Esses compostos apresentaram uma fraca atividade in vivo, provavelmentedevido à biodisponibilidade limitada e podem, deste modo, ter uma aplicação terapêuticalimitada.

Deste modo, os domínios BIR IAP representam um alvo atrativo para a descobertae desenvolvimento de novos agentes terapêuticos, especialmente para o tratamento dedistúrbios proliferativos tal como câncer.

SUMÁRIO DA INVENÇÃO

Os inventores revelaram anteriormente uma série de compostos os quais se ligamàs unidades BIR dos IAPs e incluem apoptose em várias linhagens celulares cancerígenas(pedido de patente publicada americana número 20060264379). Uma característica dessescompostos é a presença de uma unidade pirrolidina central. Agora, nós aqui revelamos quea ligação de duas unidades de ligação BIR através de uma pirrolidina substituída, compreferência pelo sítio, orientação e natureza química da ligação, proporciona classes novase distintamente vantajosas de compostos com um aumento de até 1000 vezes na potência,resultando da indução da apoptose, contra várias linhagens celulares cancerígenas, emrelação a seus compostos de ligação BIR que não estão em ponte correspondentes e queesses compostos apresentam as propriedades de potência, estabilidade e farmacêuticasnecessárias, para o tratamento de cânceres humanos. Vantajosamente, a natureza químicado grupo que faz ponte pode ser escolhida para causar a transmissão da alta potênciacelular intrínseca (sub-nanomolar) para uma potência de micrograma/Kg na inibição e/ousupressão dos IAPs em vários modelos de xenoenxerto in vivo de cânceres humanos. Alémdisso, os compostos descritos têm estabilidade farmaceuticamente aceitável numa faixa detecidos e fluidos mamíferos e têm propriedades farmacêuticas as quais asseguram umasolubilidade e biodisponibilidade adequada usando várias vias de administração, adequadaspara uso clínico. Tal administração resulta em efeitos in vivo sustentados em mamíferosconforme medidos em tecidos normais e tumorais.

Numa modalidade da presente invenção, é fornecido um isômero, enantiômero,diastereoisômero ou tautômero de um composto representado pela Fórmula I ou II:

<formula>formula see original document page 6</formula>Em quem é O, 1 ou 2;Y é NH1 Oou S;BG é

1)-X-L-X1-;

X e X1 são independentemente selecionados de1)0,

2) NR13,

3) S1

4) -alquil C1-C6-,

5) -alquil CrC6-O,

6) -alquil C1-C6-NR13,

7) -alquil C1-C6-S,

8)<formula>formula see original document page 7</formula>

9)<formula>formula see original document page 7</formula>

10)<formula>formula see original document page 7</formula>

11) <formula>formula see original document page 7</formula>

12)<formula>formula see original document page 7</formula>

13)<formula>formula see original document page 7</formula>

14)<formula>formula see original document page 7</formula>,ou<formula>formula see original document page 8</formula>

L é selecionado de:

1) -alquil C1-C20-,

2) -alquenil C2-C6-,

3) -alquinil C2-C4-,

4) -cicloalquil C3-C7-,

5) -aril-,

6) -bifenil-,

7) -heteroaril-,

8) -heterociclil-,

9) -alquil C1-C6-(alquenil C2-C6)-alquil C1-C6-,

10) -alquil C1-C6-(alquinil C2-C4)-alquil C1-C6-,

11) -alquil C1-C6-Ccicloalquil C3-C7)-alquil C1-C6-,

12) -alquil C1-C6-aril-alquil C1-C6-,

13) -alquil C1-C6-bifenil-alquil C1-C6-,

14) -alquil C1-C6-heteroaril-alquil C1-C6-,

15) -alquil C1-C6-heterociclil-alquil C1-C6-,

16) -alquil C1-C6-Y-alquil C1-C6-,

17) -aril-Y-aril-,

18) -heteroaril-Y-heteroaril-,

19) -heterociclil-Y-heterociclil-,

20) N alquil C1-C61—i

21) H '

em que alquil, alquenil, alquinil e cicloalquil são opcionalmente substituídos com umou mais substituintes R6, e aril, bifenil, heteroaril e heterociclil são opcionalmentesubstituídos com um ou mais substituintes R10;

Q e Q1 são independentemente selecionados de

1) NR4R5,

2) OR11 ou

3) S(O)mR11; ou

20)

, ou

/Q e Q1 são independentemente selecionados de

1)arilou

2) heteroaril, o aril e o heteroaril sendo opcionalmente substituídos com um ou maissubstituintes R10;

A e A1 são independentemente selecionados de

1)-CH2-,

2) -CH2CH2-,

3) -CH(alquil C1-C6)-,

4) -HC(cicloalquil C3-C7)-,5) -cicloalquil C3-C7-,

6) -CH(alquil Ci-C6-cicloalquil C3-C7)-,

7) -C(O)- ou

8) -C(O)OR13;

R1 e R100 são independentemente selecionados de15 1) H ou

2) alquil C1-C6 opcionalmente substituído com um ou mais substituintes R6;R2 e R200 são independentemente selecionados de

1) H ou

2) alquil C1-C6 opcionalmente substituído com um òu mais substituintes R6;R3 e R300 são independentemente alquil C1-C6 opcionalmente substituído com umou mais substituintes R6;R4 e R5 são, cada um, independentemente selecionados de

1) H,

2) haloalquil,

3) alquil C1-C6-*,

4) alquenil C2-C6-*,

5) alquinil C2-C4-*,

6) cicloalquil C3-C7-*,

7) cicloalquenil C3-C7-*8) aril-*,

9) heteroaril-*,

10) heterociclil->,

11) heterobiciclil-*,

12) <-C(0)-R11,13)<-C(0)0-R11,

14) <-C(Y)NR8R9 ou

15) <-S(0)2-R11,em que alquil, alquenil, alquinil, cicloalquil, cicloalquenil são opcionalmentesubstituídos com um ou mais substituintes R6; e em que o aril, heteroaril, heterociclil eheterobiciclil são opcionalmente substituídos com um ou mais substituintes R10;

R6 é

1) halogênio,

2) NO2,

3) CN,

4) haloalquil,

5) alquil C1-C6,

6) alquenil C2-C6,

7) alquinil C2-C4,

8) cicloalquil C3-C7,

9) cicloalquenil C3-C7l

10) aril,

11) heteroaril,

12) heterociclil,

13) heterobiciclil,

14) OR7,

15) S(O)mR7,

16) NR8R9,

17) NR8S(O)2R11,

18) COR7,

19) C(O)OR7,

20) CONR8R9,

21) S(O)2NR8R9

22) OC(O)R7,

23) OC(O)Y-R11,

24) SC(O)R71 ou

25) NC(Y)NR8R9,

em que o aril, heteroaril, heterociclil e heterobiciclil são opcionalmente substituídoscom um ou mais substituintes R10;

R7 é

1) H,

2) haloalquil,

3) alquil C1-C6,

4) alquenil C2-C6,

5) alquinil C2-C4,6) cicloalquil C3-C7,

7) cicloalquenil C3-C7,

8) aril,

9) heteroaril,

10) heterociclil,

11) heterobiciclil,

12) R8R9NC(=Y) OU

13) alquil C1-C^alquenil C2-C4 ou

14) alquil C1-C6-Blquinil C2-C4,

em que alquil, alquenil, alquinil, cicloalquil, cicloalquenil são opcionalmentesubstituídos com um ou mais substituintes R6; e em que aril, heteroaril, heterociclil eheterobiciclil são opcionalmente substituídos com um ou mais substituintes R10;R8 e R9 são cada um independentemente

1) H

2) haloalquil,

3) alquil C1-C6,

4) alquenil C2-C6,

5) alquinil C2-C4,

6) cicloalquil C3-C7,

7) cicloalquenil C3-C7,

8) aril,

9) heteroaril,

10) heterociclil,

11) heterobiciclil,

12) C(O)R11,

13) C(O)Y-RH ou

14) S(O)2-R11,

em que o alquil, alquenil, alquinil, cicloalquil ou cicloalquenil são opcionalmentesubstituídos com um ou mais substituintes R6; e em que o aril, heteroaril, heterociclil eheterobiciclil são opcionalmente substituídos com um ou mais substituintes R10;

ou R8 e R9, juntamente com o átomo de nitrogênio ao qual eles estão ligados,formam um anel heterocíclico de cinco, seis ou sete membros opcionalmente substituídocom um ou mais substituintes R6;

R10 é

1) halogênio,

2) NO2,

3) CN,4) B(OR13)(OR14)1,

5) alquil C1-C6,

6) alquenil C2-C6,

7) alquinil C2-C4,

5 8) cicloalquil C3-C7,

9) cicloalquenil C3-C7,

10) haloalquil,

11) OR7,

12) NR8R9,

13) SR7,

14) COR7,

15) C(O)OR7,

16) S(O)mR7,

17) CONR8R9,

18) S(O)2NR8R9,

19) aril,

20) heteroaril,

21) heterociclil, ou

22) heterobiciclil,

em que o alquil, alquenil, alquinil, cicloalquil e cicloalquenil são opcionalmentesubstituídos com um ou mais substituintes R6;R11 é

1) haloalquil,

2) alquil C1-C6,

3) alquenil C2-C6,

4) alquinil C2-C4,

5) cicloalquil C3-C7,

6) cicloalquenil C3-C7,

7) aril,

8) heteroaril,

9) heterociclil, ou

10) heterobiciclil,

em que o alquil, alquenil, alquinil, cicloalquil e o cicloalquenil são opcionalmentesubstituídos com um ou mais substituintes R6; e em que o aril, heteroaril, heterociclil e35 heterobiciclil são opcionalmente substituídos com um ou mais substituintes R10;R12 é

1) haloalquil,2) alquil C1-C6,

3) alquenil C2-C6,

4) alquinil C2-C4l

5) cicloalquil C3-C7,

6) cicloalquenil C3-C7l

7) aril,

8) heteroaril,

9) heterociclil,

10) heterobiciclil,

11) C(O)-R111

12) C(O)O-R111

13) C(O)NR8R91

14) S(O)m-R11 ou

15) C(=Y)NR8R9,

em que o alquil, alquenil, alquinil, cicloalquil e o cicloalquenil são opcionalmentesubstituídos com um ou mais substituintes R6; e em que o aril, heteroaril, heterociclil e oheterobiciclil são opcionalmente substituídos com um ou mais substituintes R10;

R13 e R14 são cada um independentemente

1)H, ou

2) alquil C1-C6; ou

R13 e R14 são combinados para formar um anel heterocíclico ou um anelheterobicíclico;

R20 é

1) H,

2) NH2, ou

3)NHFmoc;

ou um promedicamento; ou o composto de Fórmula I ou Il é marcado com ummarcador detectável ou com um marcador de afinidade.

Em outro aspecto da invenção, é fornecido um composto intermediáriorepresentado pela Fórmula 1-iv:<formula>formula see original document page 14</formula>

Em que PG31 R11 R21 R31 R4 e R5 são conforme aqui definido.Em outro aspecto da presente invenção, é fornecido um composto intermediáriorepresentado pela Fórmula 2-iv:

<formula>formula see original document page 14</formula>

Em que PG41 R11 R21 R31 R4 e R5 são conforme aqui definido.

Em outro aspecto da presente invenção, é fornecido um composto intermediáriorepresentado pela Fórmula 3-ii:

<formula>formula see original document page 14</formula>

Em que PG4, R1, R21 R31 A e Q são conforme aqui definido, e L é -(CH2)r-, -(CH2)r-Y-(CH2)r-, -alquil-aril-alquil-, -alquil-heteroaril-alquil-, cicloalquil, aril ou heteroaril.

Em outro aspecto da invenção, é fornecido um composto intermediáriorepresentado pela Fórmula 4(i):

<formula>formula see original document page 15</formula>

Em que PG4, PG400, L, R1, R100, R2, R200, R3, R300, A, A1, Q e Q1 são conforme aquidefinido.

Em outro aspecto da presente invenção, é fornecido um composto intermediáriorepresentado pela Fórmula 6-ii:

<formula>formula see original document page 15</formula>

Em que PG4, PG400, R1, R100, R2, R200, R3, R300, A, A1, Q e Q1 são conforme aquidefinido.

Em outro aspecto da presente invenção, é fornecido um composto intermediáriorepresentado pela Fórmula 7-v:

<formula>formula see original document page 16</formula>

Em que PG4, PG400, L, R1, R100, R2, R200, R3, R300, A, A1, Q e Q1 sã conforme aquidefinidos.

Em outro aspecto da presente invenção, é fornecido um composto intermediáriorepresentado pela Fórmula 8-ii:

<formula>formula see original document page 16</formula>

Em que PG4, r, L, R100, R200, A1 e Q1 são conforme aqui definidos.

Em outro aspecto da presente invenção, é fornecido um composto intermediáriorepresentado pela Fórmula 8-iii:<formula>formula see original document page 17</formula>

Em que PG4, r, L1 R1, R100, R2, R200, R3, A, A1, Q e Q1 são conforme aqui definidos.Em outro aspecto da presente invenção, é fornecido um composto intermediáriorepresentado pela Fórmula 17-i:

<formula>formula see original document page 17</formula>

Em que PG41 L1 R11 R1001 R21 R2001 R31 R3001 A1 A11 Q e Q1 são conforme aquidefinidos.

Em outro aspecto da presente invenção, é fornecido um composto intermediáriorepresentado pela Fórmula 18-i:<formula>formula see original document page 18</formula>

Em que PG41 L1 R11 R1001 R21 R200, R31 R300, A, A1, Q e Q1 são conforme aquidefinidos.

Em outro aspecto da presente invenção, é fornecido um composto intermediáriorepresentado pela Fórmula 19-2:

<formula>formula see original document page 18</formula>

Em que PG11 PG21 LeX são conforme aqui definidos.

Em outro aspecto da presente invenção, é fornecido um composto intermediáriorepresentado pela Fórmula 19-3:<formula>formula see original document page 19</formula>

Em que PG21 LeX são conforme aqui definidos.

Em outro aspecto da presente invenção, é fornecido um composto intermediáriorepresentado pela Fórmula 19-8:

<formula>formula see original document page 19</formula>

Em que PG41 L, X, X11 R1, R1001 R21 R2001 R31 R3001 R41 R4001 R5 e R500 são conformeaqui definidos.

Em outro aspecto da presente invenção, é fornecido um composto intermediáriorepresentado pela Fórmula 20-1 a:<formula>formula see original document page 20</formula>

Em que PG1, L, X, X1, R4 e R5 são conforme aqui definidos.

Em outro aspecto da presente invenção, é fornecido um composto intermediáriorepresentado pela Fórmula 20-2:

<formula>formula see original document page 20</formula>

Em que PG4, L, X e X1 são conforme aqui definidos.

Em outro aspecto da presente invenção, é fornecido um composto intermediáriorepresentado pela Fórmula 20-4:

<formula>formula see original document page 20</formula>Em que PG41 L1 X, X11 R11 R1001 R21 R2001 R31 R3001 R41 R4001 R5 e R500 são conforme

aqui definidos.

Em outro aspecto da presente invenção, é fornecido um processo para produzircompostos representados pela Fórmula I1 descritos aqui acima, o processo compreendendo:a) o acoplamento de dois intermediários representados pela Fórmula 1-iv:

Em que PG31 R11 R21 R31 A1 e Q são conforme aqui definidos,Num solvente; e

b) a remoção dos grupos protetores de modo a formar compostos de Fórmula 1.Em outro aspecto da presente invenção, é fornecido um processo para produzircompostos representados pela Fórmula I1 descritos aqui acima, o processo compreendendo:a) o acoplamento de um intermediário representados pela Fórmula 2-iv:

Em que PG4 é um grupo protetor, e R1, R2, R3, A, e Q são conforme aqui definidos.

E um diácido ativado (0,5 equiv.) num solvente; e

b) a remoção dos grupos protetores de modo a formar compostos de Fórmula I.

Em outro aspecto da presente invenção, é fornecido um método para o preparo deum sal farmaceuticamente aceitável do composto de Fórmula I e Il1 pelo tratamento de umcomposto de Fórmula I ou Il com 1 a 2 equiv. De um ácido farmaceuticamente aceitável,conforme aqui definido.Em outro aspecto da presente invenção, é fornecida uma composição farmacêuticacompreendendo um composto, conforme descrito acima, misturada com um veículo,diluente ou excipiente farmaceuticamente aceitável.Em outro aspecto da presente invenção, é fornecida uma composição farmacêuticaadaptada para a administração como um agente para tratar um distúrbio proliferativo num

<formula> formula see orginal document page 21</formula>indivíduo, compreendendo uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto,conforme descrito acima.

Em outro aspecto da presente invenção, é fornecida uma composição farmacêuticacompreendendo um composto de Fórmula I juntamente com um ou mais agonistas doreceptor de morte, por exemplo, um agonista do receptor TRAIL.

Em outro aspecto da presente invenção, é fornecida uma composição farmacêuticacompreendendo um composto de Fórmula I juntamente com qualquer agente terapêuticoque aumente a resposta de um ou mais agonistas do receptor de morte, por exemplo,citocinas citotóxicas tais como interferons.

Em outro aspecto da presente invenção, é fornecido um método de preparo de umacomposição farmacêutica, o método compreendendo: a mistura de um composto, conformedescrito acima, com um carreador, diluente ou excipiente farmaceuticamente aceitável.

Em outro aspecto da presente invenção, é fornecido um método de tratamento deum estado de doença caracterizado por apoptose insuficiente, o método compreendendo: aadministração a um indivíduo necessitado disso, uma quantidade terapeuticamente eficazde uma composição farmacêutica, conforme descrito acima, de modo a tratar o estado dedoença.

Em outro aspecto da presente invenção, é fornecido um método para modular afunção IAP, o método compreendendo: o conato da célula com um composto da presenteinvenção de modo a prevenir a ligação de uma proteína de ligação BIR a um domínio BIRIAP, deste modo para modular a função IAP.

Em outro aspecto da presente invenção, é fornecido um método para tratar umadoença proliferativa, o método compreendendo: a administração a um indivíduo necessitadodisso, uma quantidade terapeuticamente eficaz da composição farmacêutica, conformedescrito acima, de modo a tratar a doença proliferativa.

Em outro aspecto da presente invenção, é fornecido um método de tratamento decâncer, o método compreendendo: a administração a um indivíduo necessitado disso, umaquantidade terapeuticamente eficaz da composição farmacêutica, conforme descrito acima,de modo a tratar o câncer.

Em outro aspecto da presente invenção, é fornecido um método de tratamento decâncer, o método compreendendo: a administração a um indivíduo necessitado disso, umaquantidade terapeuticamente eficaz da composição farmacêutica, conforme descrito acima,juntamente ou seqüencialmente com um agente selecionado de:

a) um modulador de receptor de estrogênio,b) um modulador de receptor de androgênio,c) um modulador de receptor retinóide,d) um agente citotóxico,e) um agente antiproliferativo,

f) um inibidor da prenil-proteína transferase,

g) um inibidor da HMG-CoA redutase,

h) um inibidor da HIV protease,

i) um inibidor da transcriptase reversa,

k) um inibidor da angiogênese,

I) um agonista PPAR-γ,

m) um agonista PPAR-δ,

n) um inibidor da resistência a múltiplos fármacos inerente,

o) um agente anti-emético,

p) um agente útil no tratamento da anemia,

q) agentes úteis no tratamento da neutropenia,

r) um fármaco intensificador imunológico,

s) um inibidor do proteassoma,

t) um inibidor HDAC1

u) um inibidor da atividade tipo quimiotripsina no proteassoma; ou

v) inibidores da E3 ligase;

w) um modulador do sistema imune tal como, porém não limitado, ao interferon-alfa,Guerin do Bacillus Calmette (BCG), uma radiação ionizante (UVB) que pode induzir aliberação de citocinas, tais como as interleucinas, TNF ou induzir a liberação dos Iigantes doreceptor de morte, tal como TRAIL;

x) um modulador dos receptores de morte TRAIL e agonistas TRAIL, tais como osanticorpos humanizados HGS-ETR1 e HGS-ETR2;

ou em combinação ou seqüencialmente com a terapia de radiação, de modo atratar o câncer.

Em outro aspecto da presente invenção, é fornecido um método para o tratamentoou prevenção de um distúrbio proliferativo num indivíduo, o método compreendendo:administração ao indivíduo de uma quantidade terapeuticamente eficaz da composição,descrito acima.

Em outro aspecto da presente invenção, o método ainda compreende aadministração ao indivíduo de uma quantidade terapeuticamente eficaz de um agentequimioterapêutico antes de, simultaneamente com ou após a administração da composição.

Ainda em outro aspecto, o método ainda compreende a administração ao indivíduode uma quantidade terapeuticamente eficaz de um agonista de receptor de morte antes de,simultaneamente com ou após a administração da composição. O agonista do receptor demorte é TRAIL ou o agonista do receptor de morte é o anticorpo TRAIL. O agonista doreceptor de morte é tipicamente administrado numa quantidade que produza um efeitosinergístico.

Ainda em outro aspecto, é fornecido o uso do composto conforme descrito acimapara a produção de um medicamento para tratar ou prevenir um estado de doençacaracterizado por apoptose insuficiente.

Ainda em outro aspecto, é fornecido o uso do composto conforme descrito acimapara a produção de um medicamento para tratar ou prevenir um distúrbio proliferativo.

Ainda em outro aspecto, é fornecido o uso do composto conforme descrito acimaem combinação com um agente para a produção de um medicamento para tratar ouprevenir um distúrbio proliferativo, em que o agente é selecionado de:

a) um modulador de receptor de estrogênio,

b) um modulador de receptor de androgênio,

c) um modulador de receptor retinóide,

d) um agente citotóxico,

e) um agente antiproliferativo,

f) um inibidor da prenil-proteína transferase,

g) um inibidor da HMG-CoA redutase,

h) um inibidor da HIV protease,

i) um inibidor da transcriptase reversa,

k) um inibidor da angiogênese,

l) um agonista PPAR-γ,

m) um agonista PPAR-δ,

n) um inibidor da resistência a múltiplos fármacos inerente,

o) um agente anti-emético,

p) um agente útil no tratamento da anemia,

q) agentes úteis no tratamento da neutropenia,

r) um fármaco intensificador imunológico,

s) um inibidor da proteassoma,

t) um inibidor HDAC,

u) um inibidor da atividade tipo quimiotripsina no proteassoma; ou

v) inibidores da E3 ligase;

w) um modulador do sistema imune tal como, porém não limitado, ao interferon-alfa,Guerin do Bacillus Calmette (BCG), uma radiação ionizamte (UVB) que pode induzir aliberação de citocinas, tais como as interleucinas, TNF ou induzir a liberação dos Iigantes doreceptor de morte, tal como TRAIL;

ou em combinação ou seqüencialmente com a terapia de radiação.Ainda em outro aspecto, é fornecido o uso do composto conforme descrito acimaem combinação com um agonista do receptor de morte para a produção de ummedicamento para o tratamento ou prevenção de um distúrbio proliferativo num indivíduo.

Ainda em outro aspecto, é fornecida uma composição farmacêuticacompreendendo o composto conforme descrito acima, misturado com um carreador,diluente ou excipiente farmaceuticamente aceitável, para tratar ou prevenir um estado dedoença caracterizado pela apoptose insuficiente.

Ainda em outro aspecto, é fornecida uma composição farmacêuticacompreendendo o composto conforme descrito acima juntamente com qualquer compostoque aumente o nível circulante de um ou mais agonistas do receptor de morte para prevenirou tratar um distúrbio proliferativo.

Ainda em outro aspecto, é fornecido um método para preparar uma composiçãofarmacêutica, o método compreendendo: a mistura do composto conforme descrito acima,com um carreador, diluente ou excipiente farmaceuticamente aceitável.

Em outro aspecto da presente invenção, é fornecida uma sonda, a sonda sendo umcomposto de Fórmula I ou Il acima, o composto sendo marcado com um marcadordetectável ou um marcador de afinidade.

Em outro aspecto da presente invenção, é fornecido um método de identificaçãodos compostos que se ligam a um domínio BIR IAP1 o ensaio compreendendo:

a) o contato de um domínio BIR IAP com uma sonda para formar um complexosonda:domínio BIR, a sonda sendo deslocável por um composto de teste;

b) a medição de um sinal da sonda de modo a estabelecer um nível de referência;

c) a incubação do complexo sonda:domínio BIR com o composto de teste;

d) a medição do sinal da sonda;

e) a comparação do sinal do passo d) com o nível de referência, a modulação dosinal sendo uma indicação de que o composto de teste se liga ao domínio BIR, em que asonda é um composto de Fórmula I ou Il marcado com um marcador detectável ou ummarcador de afinidade.

Em outro aspecto da presente invenção, é fornecido um método de detecção daperda de função ou supressão de IAPs in vivo, o método compreendendo: a) aadministração a um indivíduo de uma quantidade terapeuticamente eficaz de umacomposição farmacêutica, conforme definido acima; b) o isolamento de uma amostratecidual do indivíduo; e c) a detecção de uma perda de função ou supressão dos IAPs daamostra.

BREVE DESCRIÇÃO DAS FIGURAS

Outros aspectos e vantagens da presente invenção serão mais bem entendidoscom referência à descrição associada com as seguintes Figuras, em que:FIGURA 1 revela um estudo de xenoenxerto da linhagem celular de câncerovariano humano SKOV-3 com o composto 3. Os camundongos nus CD-1 fêmeas(aproximadamente 20 a 25 g) foram injetados subcutaneamente 5 χ 106 células tumoraisovarianas humanas SKOV-3 em matrigel 50% subcutaneamente no flanco direito. No dia 55, quando os tumores estavam com aproximadamente 100 mm3, o tratamento foi iniciado como composto 3 tratando com o composto por 5 dias consecutivos seguido por 2 dias semtratamento com fármaco para a duração do experimento. O tamanho tumoral foi medido compaquímetros digitais e calculado como V = (a χ b2)/2, em que a é a dimensão mais longa e bé a largura. A regressão tumoral foi observada em 1 mg/Kg, enquanto a estase tumoral foi observada em 0,3 mg/Kg.

FIGURA 2 revela um estudo de xenoenxerto da linhagem celular de câncermamífero humano MDA-MB-231 com o composto 3. Os camundongos nus CD-1 fêmeas(aproximadamente 20 a 25 g) foram injetados subcutaneamente com 1 χ 106 célulastumorais mamárias humanas MDA-MB-231 no flanco direito. No dia 71, quando os tumoresestavam com aproximadamente 90 mm3, o tratamento foi iniciado com o composto 3tratando com o composto por 5 dias consecutivos seguido por 2 dias sem tratamento comfármaco pela duração do experimento. O tamanho tumoral foi medido com paquímetrosdigitais e calculado como V = (a χ b2)/2, em que a é a dimensão mais longa e b é a largura.

A regressão tumoral foi observada em 1 mg/Kg.

FIGURA 3 demonstra que o composto 3 induz a perda de clAP-1 nas células HCT-116 /n vitro. As células PC3, SKOV3, MDA-MB-231 e HCT-116 foram tratadas com váriasconcentrações do composto 3 e incubadas a 37 0C por 5 horas. As células foram coletadase o nível de clAP-1 e actina (controle de carga não-apresentado) foram detectados porWestern blot. Os resultados indicaram que o composto 3 induziu a perda de clAP-1 nascélulas cancerígenas humanas de um modo tempo dependente (não-apresentado). Usandoum método similar, conforme descrito na Figura 3, o composto 3 induziu uma perda daperda de c-IAPI das linhagens celulares ES2 e 4T1 (não mostrado) e uma perda de clAP2das células PC3 (não mostrado).

FIGURA 4 demonstra a modulação in vitro de IAPs nas células brancas decamundongo. Sangue total e camundongo CD-1 foi incubado in vitro com váriasconcentrações do composto 3 por 3 horas. Os leucócitos foram isolados do sangue totaltratado através do gradiente Ficoll. A proteína foi isolada dos leucócitos e a quantidaderelativa de clAP-1 e tubulina (controle de carga) foi revelada por western blotting. Osresultados in vitro indicaram que o composto 3 induz a perda de clAP-1 no sangue decamundongo.

FIGURA 5 demonstra a modulação in vivo de Ciap-1 em leucócitos decamundongo. O composto 3 foi administrado a camundongos CD-1 por injeção em bolo i.v.conforme a dose indicada. Depois de 1 a 48 horas, os animais foram sacrificados, o sanguefoi coletado, os leucócitos foram isolados em gradiente Ficoll e a proteína foi extraída. Aquantidade relativa de clAP-1 e tubulina (controle de carga) foi revelada por westem blotting(mostrado abaixo no ponto de tempo de 3 h). Os resultados indicaram que o composto 3induz a infra-regulação de clAP-1 em leucócitos de camundongo, usando métodos dedetecção ex vivo.

FIGURA 6 revela um estudo de xenoenxerto da linhagem celular de câncer demama humano MDA-MB-231 com o composto 24 (1 mg/Kg). Os camundongos nus CD-1fêmeas (aproximadamente 20 a 25 g) foram injetados subcutaneamente 1 χ 106 célulastumorais de mama humanas MDA-MB-231 em matrigel 50% subcutaneamente no flancodireito. No dia 55, quando os tumores estavam com aproximadamente 100 mm3, otratamento foi iniciado com o composto 24 tratando com o composto por 5 dias consecutivosseguido por 2 dias sem tratamento com fármaco para a duração do experimento. O tamanhotumoral foi medido com paquímetros digitais e calculado como V = (a χ b2)/2, em que a é adimensão mais longa e b é a largura. Círculos - 20% de controle HPCD; diamantes -composto 24.

Figura 7 demonstra a modulação in vivo de clAP-1 em leucócitos de rato. Ocomposto 24 foi administrado em ratos por injeção em bolo i.v. Depois de 1 a 48 horas, osangue foi coletado, os leucócitos foram isolados em gradiente Ficoll e a proteína foiextraída. A quantidade relativa de clAP-1 e tubulina (controle de carga) foi revelada porwestern blotting (mostrado abaixo no ponto de tempo de 3 h). Os resultados indicaram que ocomposto 24 induz a perda de clAP-1 em leucócitos de camundongo, usando métodos dedetecção ex vivo.

DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO

Em muitas doenças de câncer e outras, uma supra-regulação dos IAPs induzida pordefeitos genéticos ou por agentes quimioterapêuticos tem sido correlacionada com umaresistência aumentada à apoptose. Inversamente, nossos resultados mostram que ascélulas com níveis de IAP reduzidos são mais sensíveis a agentes quimioterapêuticos e aosagonistas do receptor de morte, tais como TRAIL. Acredita-se que uma pequena molécula, aqual irá antagonizar a função IAP, ou uma perda de IAPs das células doentes, será útil comoum agente terapêutico. Nós reportamos aqui que os compostos da presente invençãopodem se ligar diretamente aos IAPs, causar uma infra-regulação das proteínas IAP nascélulas e induzir a apoptose nas células cancerígenas. Além disso, os compostos dapresente invenção demonstraram efeitos sinergísticos juntamente com agente clinicamenterelevantes usados no tratamento do câncer.

Nós descobrimos uma nova série de compostos em ponte (bridged), os quais seligam aos IAPs celulares intactos e resultam numa infra-regulação de proteína IAPsustentada profunda e numa apoptose celular intensificada das células cancerígenasatravés da liberação intensificada da caspase 3 ativa. Essa resposta biológica foi observadaem várias linhagens celulares derivadas de cânceres de mama, pancreático, cólon, pulmãoe ovariano humanos e de células de leucemia e de Iinfoma humana primárias. Oscompostos foram descobertos como sendo altamente sinergísticos com a morte mediadapelo agonista receptor de morte, tal como TRAIL, anticorpos monoclonais do receptor TRAILe TNF-α, numa faixa grande e abrangente de células cancerígenas. Baseando-se nessasdescobertas, os compostos irão encontrar aplicação no tratamento de muitos tipos decâncer, tais como tumores sólidos e tumores se originando do sistema hematopoiético. Alémdisso, os compostos da presente invenção também encontrarão aplicação na prevenção dainvesão celular do câncer metastático, inflamação e em outras doenças CARACTERIZADASpor células que são resistentes à apoptose através da supra-regulação de qualquer um dosIAPs. Conforme mostrado na Figura 3, o composto 3 é capaz de induzir a perda completadas proteínas c-IAPI/2 de múltiplas linhagens celulares tumorais em concentraçõesinferiores a 10 nM. Foi demonstrado que outros compostos da presente invençãoapresentam uma capacidade similar de induzir a perda de IAP dependente de tempo dascélulas cancerígenas. Essa perda nas proteínas IAP são forteente correlacionadas com aED50 nas células SK0V3.

A ligação das duas unidades de ligação BIR IAP, M1 e M2, descritas abaixo emmaiores detalhes, usando uma "unidade de ligação" apropriada, ligada a um dos anéispirrolidina, proporciona compostos de ligação BIR IAP em ponte, os quais demonstramatividade anti-cancerígena significativamente aumentada (10 a 1000 vezes) em comparaçãocom suas unidades monoméricas. Essa atividade melhorada resulta de uma capacidademelhorada de se ligar aos domínios BIR dos IAPs intactos, e resulta na indução da apoptoseem várias linhagens celulares cancerígenas.

Vários fatores influenciam o caráter pró-apoptótico in vitro dos compostos dapresente invenção. Especificamente, esses incluem i) o ponto de ligação da ligaçãoligante/pirolidina, ii) a estereoquímica na ligação ligante/pirrolidina, iii) as próprias porçõesligantes, incluindo a estereoquímica, a regioquímica e a rigidez do sistema ligante, iv)substituição alquil em R1 e R100, e ν) o padrão de substituição em R4, R4001 R5 e R500.

Por facilidade de descrição, por toda a descrição, os compostos de Fórmula I eFórmula Il também podem incluir o uso dos termos P1, P2, P3, P4 e P5. Esses termos sereferem aos aminoáidos ou aminoácidos modificados ou de Fórmula I ou II. O seguinteilustra o uso dos termos:<formula>formula see original document page29</formula>

Em que a linha ondulada representa uma ligação covalente a outra unidade deligação BIR.

Os compostos da presente invenção também podem ser representados pelaFórmula 3 ou pela Fórmula 4, em que M1 e M2 representam domínios de ligação BIRindependentes.

<formula>formula see original document page29</formula>

Em que R1, R2, R100, R200, R3, R300, R20, A, A1, Q, Q1, e BG são conforme aquidefinidos, e a linha pontilhada representa uma linha divisória hipotética para comparaçãodos substituintes associados com M1 e M2.

Num subgrupo de Fórmula 3, M1 é o mesmo que M2 e a linha pontilhada denotauma linha de simetria. Em outro subgrupo, M1 é diferente de M2.

Num subgrupo, os compostos de Fórmula 4 são assimétricos próximo à linhapontilhada. Em outro subgrupo, os substituintes em M1 e M2 são idênticos. Em outrosubgrupo, os substituintes em M1 e M2 são diferentes.

Uma pessoa versada na técnica irá reconhecer que quando M1 e M2 são iguais, ossubstituintes R1, R2, R41 R51 R6, R7, R8, R9, R10, R11, R131 R14, r, m, Y, A, Q, e X em M1 têm omesmo significado que os substituintes R100, R2001 R4, R5, R6, R7, R8, R9, R10, R111 R13, R141 r,m, Y, A1, Q1 e X1 respectivamente em M2. Quando M1 e M2 são diferentes, pelo menos umsubstituinte R1, R2, R100, R200, R4, R5, R6, R7, R8, R9, R10, R11, R13, R14, r, m, Y, A, A11 Q, Q1,X, e X1 é diferente ou de M1 ou de M2.

Alternativamente, os substituintes em M1 podem ser definidos como R1, R21 R41 R5,R61 R7, R8, R9, R10, R11, R13, R141 r, m, ρ, Y, A, Q e X, e aqueles em M2 podem ser definidoscomo R100, R200, R4001 R500, R6001 R7001 R8001 R9001 R10001 R11001 R13001 R14001 r1, m1, p1, Y1 , A11 Q1e X11 respectivamente. No caso onde M1 e M2 são iguais, os substituintes R11 R2, R4, R5, R6,R71 R81 R91 R101 R111 R131 R14, r, m, Y1 A, Q e X em M1 têm os mesmos significados que R1001p200 p400 p500 p600 p700 p800 p900 p1000 p1100 p1300 p1400 ^ m1 γ1 q1 &respectivamente em M2. No caso onde M1 e M2 são diferentes, pelo menos um dossubstituintes anteriormente mencionados é diferente.

Os compostos da presente invenção são úteis como compostos de ligação aodomínio BIR em IAPs de mamíferos e são representados ou pela Fórmula I ou pela Fórmula

II. As seguintes são modalidades, grupos e substituintes dos compostos de acordo com aFórmula I e com a Fórmula II, os quais são descritos a seguir em detalhes.AeA1:

<formula>formula see original document page 30</formula>

Num subgrupo de compostos de Fórmula I ou II, A e A1 são ambos CH2.

Num subgrupo alternativo dos compostos de Fórmula I ou II, A e A1 são ambosC=O.

Num outro subgrupo alternativo dos compostos de Fórmula I ou II, A é CH2 e A1 éC=O.

Num outro subgrupo alternativo dos compostos de Fórmula I ou II, A e A1 sãoambos C(O)OCH3.

Num outro subgrupo alternativo dos compostos de Fórmula I ou Il1 A e A1 sãoambos C(O)OH.

Qualquer e cada definição individual de A e A11 conforme aqui estabelecida, podeser combinada com qualquer e cada definição individual do núcleo, R1, R2, R1001 R2001 R31R3001 Q, Q1 e BG conforme aqui estabelecido.Núcleo:

Conseqüentemente, para os compostos de Fórmula I1 a presente invençãocompreende os compostos de Fórmula 1A até 1C:

<formula>formula see original document page 31</formula>Em que BG1 A, A1, Q, Q1, R1, R100, R2, R200, R3 e R300 são conforme definido aquiacima e abaixo.

Num exemplo, a presente invenção compreende os compostos de Fórmula 1A.

Num exemplo alternativo, a presente invenção compreende os compostos deFórmula 1B.

Em outro exemplo alternativo, a presente invenção compreende os compostos deFórmula 1C.

Alternativamente, os compostos de Fórmula Il compreendem os compostos deFórmula 2A e 2B:

<formula>formula see original document page 32</formula>

Em que BG, A, A1, Q, Q1, R1, R100, R2, R200 R3, R300 e R20 são conforme definidoaqui acima e abaixo.

Num exemplo, a presente invenção compreende os compostos de Fórmula 2A.

Toda e cada definição individual de núcleo, conforme aqui estabelecida, pode sercombinada com qualquer e cada definição individual de A, A1, R1, R2, R100, R200, R3, R300,R20, Q, Q1 e BG, conforme aqui estabelecido.

BG:Num subgrupo dos compostos acima mencionados, BG é -X-L-X1-.Num subgrupo, para os compostos de Fórmula I nos quais BG é -X-L-X'-, ainvenção compreende os compostos de Fórmula 1a até 1c:

<formula>formula see original document page 33</formula>

Em que L, X, X1, A, A1, Q, Q1, R1, R100, R2, R200, R3 e R300 são conforme definidoaqui acima e abaixo.

Outro subgrupo dos compostos anteriormente mencionados compreende oscompostos de Fórmula 1.1a até 1.1c:<formula>formula see original document page34</formula>

Em que L, Χ, X1, Α, A1, R1, R100, R2, R200, R3, R300, R4, R400, R5 e R500 são conformedefinido aqui acima e abaixo.Num subgrupo, para os compostos de Fórmula Il nos quais BG é -X-L-X1-, ainvenção compreende os compostos de Fórmula 2a:<formula>formula see original document page 35</formula>

Em que L, X. X1, A, A11 Q, Q11 R11 R100, R21 R200, R3 e R20são conforme definidosaqui acima e abaixo.

Qualquer e cada definição individual de BG1 conforme estabelecido aqui, pode sercombinada com qualquer e cada definição individual de núcleo, R1, R21 R100, R200, R31 R300,A, A1 Q e Q1 conforme aqui estabelecido.XeX1:

Num subgrupo dos compostos anteriormente mencionados, X e X1 sãoindependentemente selecionados de1)0,

2) NR13,

3) S1

4) -alquil CrC6-O-,

5)-alquil C1-C6-,

6) <formula>formula see original document page 35</formula>

7) <formula>formula see original document page 35</formula>

8) <formula>formula see original document page 35</formula>

9) <formula>formula see original document page 35</formula>o

10)

Num exemplo, X e X1 são independentemente selecionados de:1)0,

H ,

2) ou

OwO

3) H

Qualquer e cada definição individual de X e X11 conforme estabelecido aqui, podeser combinada com qualquer e cada definição individual de núcleo, L, A, A1, R1, R2, R1001R200, R31 R300, R20, Q1 Q1 e BG conforme aqui estabelecido.L:

Num subgrupo dos compostos anteriormente mencionados, L é selecionado de:

1)-alquil C1-C2O-,

2) —cicloalquil C3-C7-,

3) -aril-,

4) -bifenil-,

5) -heteroaril-,

6) -alquil C1-C6-Calquinil C2-C4)-alquil C1-C6-,

7) -alquil CrCe-aril-alquil C1-C6-,

8) -aril-Y-aril-,

<formula> formula see orginal document page 36</formula>

Em que o alquil e o cicloalquil são opcionalmente substituídos com um ou maissubstituintes R61 e o aril, bifenil e heteroaril são opcionalmente substituídos com um ou maissubstituintes R10.

Exemplos típicos de L incluem<formula>formula see original document page 37</formula>

Qualquer e cada definição individual de L1 conforme aqui estabelecida, pode sercombinada com qualquer e cada definição individual de núcleo, A, A1, r, R1, R2, R100, R200,R3, R300, R20, X, X1, Q, ou Q1 conforme aqui estabelecido,r:

No aspecto anteriormente mencionado, r é um numero inteiro de 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7,8, 9 ou 10.

Qualquer e cada definição individual de r, conforme aqui estabelecido, pode sercombinada com qualquer e cada definição individual de núcleo, A, L, A1, R1, R2, R100, R200,R3, R300, R20, Q, Q1, X e X1 conforme aqui estabelecido.

Mais explicitamente, a invenção compreende os compostos de Fórmula 1.1 até1.18:

<formula>formula see orignal document page 37</formula><formula>formula see original document page 38</formula><formula>formula see original document page 39</formula><formula>formula see original document page 40</formula><formula> formula see orginal document page 41</formula>

Em que r, A, A11 Q, Q11 R11 R1001 R21 R2001 R3 e R300 conforme definido aqui acima.Alternativamente, de um modo mais explícito, a invenção compreende oscompostos de Fórmula 2.1 e 2.2:<formula>formula see original document page 42</formula>

Em que A1 A1, Q, Q1, R1, R100, R2, R200, R3 e R20 são definidos aqui acima.R1 e R100:

Num subgrupo dos compostos anteriormente mencionados, R1 e R100 são ambos H.Num subgrupo dos compostos anteriormente mencionados, R1 e R100 são ambosalquil C1-C6.

Num exemplo, R1 e R100 são ambos CH3.

Qualquer e cada definição individual de R1 e R1001 conforme aqui estabelecido, podeser combinada com qualquer e cada definição individual de núcleo, A1 A1, R2, R200, R3, R300,Q, Q1, B, B1 e BG conforme aqui estabelecido.

R2 e R200:

Num subgrupo dos compostos anteriormente mencionados, R2 e R200 são ambosalquil C1-C6 opcionalmente substituídos com OH.

Num exemplo, R2 e R200 são ambos CH3.

Em outro exemplo, R2 é CH2OH e R300 é CH3.

Em outro exemplo, R2 e R200 são ambos CH2OH.

Em outro exemplo, R2 e R200 são ambos CH2CH3.

Qualquer e cada definição individual de R2 e R200, conforme aqui estabelecido, podeser combinada com qualquer e cada definição individual de núcleo, A, A1, R1, R100, R3, R300,Q, Q1 e BG conforme aqui estabelecido.

R3 e R300:

Num subgrupo dos compostos de Fórmula I, R3 e R300 são ambos alquil C1-C6.

Num exemplo, R3 e R300 são ambos C(CH3)3.

No subgrupo dos compostos de Fórmula II, R é alquil C1-C6. Num exemplo, R éC(CH3)3.

Qualquer e cada definição individual de R3 e R300, conforme aqui estabelecido, podeser combinada com qualquer e cada definição individual de núcleo, A, A1, R1, R100, R2, R2001Q1 Q1 e BG conforme aqui estabelecido.

Q e Q1:

Num subgrupo dos compostos anteriormente mencionados, Q e Q1 são ambosNR4R51 em que R4 e R5 são conforme aqui definidos.

Qualquer e cada definição individual de Q e Q11 conforme aqui definido, pode sercombinada com qualquer e cada definição individual e núcleo, A, A1, R1, R100, R2, R200, R3,R300 e BG conforme aqui estabelecido.

R4 e R5:

Num subgrupo dos compostos anteriormente mencionados, no qual A e A1 sãoambos C=O1 R4 é H e R5 é selecionado de

1) alquil C1-C6->,

2) alquenil C2-C6-^1

3) alquinil C2-C4->,

4) cicloalquil C3-C7->,

5) cicloalquenil C3-C7->- 6) aril-»,

- 7) heteroaril-»,

- 8) heterociclil-» ou

- 9) heterobiciclil-»,

em que alquil, alquenil, alquinil, cicloalquil, cicloalquenil são opcionalmentesubstituídos com um ou mais substituintes R6; e em que o aril, heteroaril, heterociclil eheterobiciclil são opcionalmente substituídos com um ou mais substituintes R10; em que R6 eR10 são conforme aqui definidos.

Num outro subgrupo dos compostos acima, R4 é H e R5 é selecionado de:

1) alquil C1-C6-^ ou

2) aril-»,

Em que o alquil é opcionalmente substituído com um ou dois substituintes R6; e emque o aril é opcionalmente substituído com um substituinte R10;

Em que R6 e R10 são conforme aqui definidos.

Exemplos do subgrupo anteriormente mencionado incluem, R4 é H e R5 éselecionado do grupo consistindo de:

<formula>formula see original document page 44</formula>e

<formula>formula see original document page 45</formula>

Conseqüentemente, quando A e A1 são ambos C=O1 então Q e Q1 são ambos

<formula>formula see original document page 45</formula>

Em outro exemplo, Q e Q1 são ambos

<formula>formula see original document page 45</formula>

Em outro exemplo, Q e Q1 são ambos

<formula>formula see original document page 45</formula>

Em outro exemplo, Q e Q1 são ambos

<formula>formula see original document page 45</formula>

Em outro exemplo, Q e Q1 são ambos

<formula>formula see original document page 45</formula>

Em outro exemplo, Q e Q1 são ambosEm outro exemplo, Q e Q1 são ambos <formula>formula see original document page 46</formula>

Em outro exemplo, Q e Q1 são ambos <formula>formula see original document page 46</formula>

Em outro exemplo, Q e Q1 são ambos <formula>formula see original document page 46</formula><formula>formula see original document page 47</formula>

Em outro exemplo, Q e Q1 são ambos

<formula>formula see original document page 47</formula>

Em outro exemplo, Q e Q1 são ambos

<formula>formula see original document page 47</formula>

Em outro exemplo, Q e Q1 são ambos

<formula>formula see original document page 47</formula>

Em outro exemplo, Q e Q1 são ambos

<formula>formula see original document page 47</formula>

Em outro exemplo, Q e Q1 são ambos

<formula>formula see original document page 47</formula>

Em outro exemplo, Q e Q1 são ambos

<formula>formula see original document page 47</formula>

Em outro exemplo, QeQ são ambosEm outro exemplo, Q e Q1 são ambos

<formula>formula see original document page 48</formula>

Em outro exemplo, QeQ1 são ambos

<formula>formula see original document page 48</formula>

Em outro exemplo, Q e Q1 são ambos

<formula>formula see original document page 48</formula>

Num subgrupo alternativo dos compostos anteriormente mencionados, nos quais Ae A1 são ambos CH2, então R4 e R5 são cada um independentemente

1) haloalquil

2) alquil C1-C6-*,

3) alquenil C2-C6-*,

4) alquinil C2-C4-*,

5) cicloalquil C3-C7-*,

6) cicloalquenil C3-C7-*

7) aril-»,

8) heteroaril-*,

9) heterociclil-*,

10) heterobiciclil-*,

11) <-C(0)-R11,

12) <-C(0)0-R11,

13) <-C(=Y)NR8R9 ou

14) <-S(0)2-R11,

Em que o alquil, alquenil, alquinil, cicloalquil, cicloalquenil são opcionalmentesubstituídos com um ou mais substituintes R6; e em que o aril, heteroaril, heterociclil eheterobiciclil são opcionalmente substituídos com um ou mais substituintes R10; em que Y,R6, R8, R9, R10 e R11 são conforme aqui definidos.

Em outro subgrupo dos compostos acima, R4 e R5 são independentementeselecionados de

1) alquil Ci-C6,

2) <-C(0)-R11,

3) <-C(0)0-R11 ou

4) ^S(O)2-R111

em que o alquil é substituído com um substituinte R6;em que R6 e R11 são conforme aqui definidos.

Num subgrupo dos compostos anteriormente mencionados, R4 é S(O)2CH3 e R5 é

<formula>formula see original document page 49</formula>

Em outro subgrupo dos compostos anteriormente mencionados, R4 é C(O)CH3 e R5

Em outro subgrupo dos compostos anteriormente mencionados, R4 éQualquer e cada definição individual de R4 e R51 conforme aqui estabelecido, podeser combinada com qualquer e cada definição individual de R4 e R5, conforme aquiestabelecido, pode ser combinada com qualquer e cada definição individual de núcleo, A,A1, R1, R100, R2, R200, R3, R300 e BG conforme aqui estabelecido.

<formula>formula see original document page 49</formula>

Num subgrupo dos compostos anteriormente mencionados,

<formula>formula see original document page 49</formula>

1) alquil C1C6 ou

2) aril,

Em que o alquil é opcionalmente substituído com um ou mais substituintes R6; e emque o aril é opcionalmente substituído com um ou mais substituintes R10; em que R6 e R10são conforme aqui definidos.

Num subgrupo dos compostos anteriormente mencionados, R11 é

1) alquil C1-C6 opcionalmente substituído com um ou dois substituintes R6 ou

2) fenil opcionalmente substituído com um substituinte R10;

Em que os substituintes R6 e R10 são conforme aqui definidos.Qualquer e cada definição individua de R11, conforme aqui estabelecido, pode sercombinada com qualquer e cada definição individual de núcleo, A, A1, R1, R100, R2, R200, R4,R5, R3, R300 e BG conforme estabelecido aqui.R6:

Num subgrupo dos compostos anteriormente mencionados, R6 é

1) halogênio,

2) NO2,

3) CN,

4) aril,

5) heteroaril,

6) heterociclil,

7) heterobiciclil,

8) OR7,

9) SR7 ou

10) NR8R9,

Em que R7, R8, R9 e R10 são conforme aqui definidos.Em outro subgrupo dos compostos anteriormente mencionados, R6 é

1) halogênio,

2) aril ou

3) NR8R9,

Em que o aril é opcionalmente substituído com um substituinte R10;Em que R8, R9 e R10 são conforme aqui definidos.

Num subgrupo dos compostos anteriormente mencionados, R6 é

1) halogênio,

2) fenil ou

3) NR8R9,

Em que o fenil é opcionalmente substituído com um substituinte R10;Em que R8 e R9 são conforme aqui definidos.

Qualquer e cada definição individual de R6, conforme estabelecido aqui, pode sercombinada com qualquer e cada definição individual de núcleo, A, A1, R1, R100, R2, R200, R4,R5, R3, R300 e BG conforme estabelecido aqui.R8 e R9:

Num subgrupo dos compostos anteriormente mencionados, R8 e R9 são cada um

independentemente1) H,2) haloalquil,

3) alquil C1-C6,

4) alquenil C2-C6,

5) alquinil C2-C4,

6) cicloalquil C3-C7 ou

7) cicloalquenil C3-C7,Em que o alquil, alquenil, alquinil, cicloalquil, cicloalquenil é opcionalmentesubstituído com um ou mais substituintes R6;

Em que os substituintes R6 são conforme aqui definidos.

Em outro subgrupo dos compostos anteriormente mencionados, R8 e R9 são cadaum independentemente

1) H ou

2) alquil C1-C6,

Em que o alquil é opcionalmente substituído com um aril.

Qualquer e cada definição individual de R8 e R9, conforme aqui estabelecida, podeser combinada com qualquer e cada definição individual de núcleo, A, A11 R1, R100, R21 R200,R4, R5, R3, R300 e BG conforme aqui estabelecido.

R10:

Num aspecto dos compostos anteriormente mencionados, R10 é

1)halogênio,

2) NO2,

3) CN,

4) haloalquil,

5) OR7,

6) NR8R9 ou

7) SR7;Em que R7, R81 e R9 são conforme aqui definidos.Em outro aspecto dos compostos anteriormente mencionados, R10 é1) halogênio ou2) alquil C1-C6-O.

Qualquer e cada definição individual de R10, conforme aqui estabelecido, pode sercombinada com qualquer e cada definição individual de núcleo, A, A1, R1, R100, R2, R200, R4,R5, R3, R300 e BG, conforme aqui estabelecido.

Alternativamente, a invenção proporciona um isômero, um enantiômero,diastereoisômero ou tautômero de um composto representado pela Fórmula I ou pelaFórmula 2:<formula>formula see original document page 52</formula>

Em que

N é O ou 1;

M é 0, 1 ou 2;

P é 1 ou 2;

Y é NH1 Oou S;

LG é

2) -X-L-X1-;

X e X1 são independentemente selecionados de

1) 0,

2) NR131

3) S1

4) alquil C1-C6-O-,

5) alquil C1-C6-NR13-,

6) alquil C1-C6-S-,

7) alquil CrC6-aril-0-,<formula>formula see original document page 53</formula>

L é selecionado de:

1) -alquil CrC2O-,

2) -alquenil C2-C6-,

3) -alquinil C2-C4-,

4) -cicloalquil C3-C7-,

5) -fenil-,

6) -bifenil-,

7) -heteroaril-,

8) -heterocicil-,

9) alquil CrC6-(alquenil C2-C6)-alquil CrC6-,

10) alqu

11) alqu

12) alqu

13) alqu

14) alqu

15) alqu

16) alqu

I C1-C6-(alquinil C2-C4KaIquiI C1-C6-,

IC1-C6-(cicloalquil C3-C7)-alquil C1-C6,

I C1-C6-fenil-alquil C1-C6,

I C1-C6—bifenil—alquil C1-C6,

I C1-C6-heteroaril-alquil C1-C6,

I C1-C6-heterocicil-alquil C1-C6,

I C1-C6-O-Blquil C1-C6,

17) -C(0)-aril-C(0)-,18) -C(0)-heteroaril-C(0)-,

19) -C(0)-(alquil CrC6)-aril-(alquil CrC6)-C(0)-,

20) -C(0)-(alquil C^QO-heteroariKalquil C^-C6)-C(0)-, ou

21) -C(0)-(alquil Ci-C6HcicIoaIquiI C3-C7HaIquiI CrC6)-C(0)-;Q e Q1 são independentemente selecionados de:

1) NR4R51

2) OR11 ou

3) S(O)mR11; ou

Q e Q1 são independentemente selecionados de aril ou heteroaril, sendoopcionalmente substituídos com substituintes R12; ouQeQ1 são independentemente

Em que G é um anel de 5, 6 ou 7 membros o qual incorpora opcionalmente um oumais heteroátomos selecionados de S, N ou O, e o qual é opcionalmente substituído comum ou mais substituintes R121 o anel sendo opcionalmente fundido com um aril ou heteroaril,o aril e o heteroaril sendo opcionalmente substituídos com um ou mais substituintes R12;A e A1 são independentemente selecionados de

1)-CH2-,

2) -CH2CH2-,

3)-CH(alquil CrC6)-,

4) -HC( cicloalquil C3-C7)-,

5) -cicloalquil C3-C7-,

6) -CH(alquil CrC6-cicloalquil C3-C7)- ou

7)-C(O)-;

25 R1 e R100 são independentemente selecionados de

3) H ou

4) alquil C1-C6 opcionalmente substituído com um ou mais substituintes R6;

R2 e R200 são independentemente H ou alquil Ci-C6 opcionalmente substituído comum ou mais substituintes R6;30 R4 e R5 são independentemente selecionados de

1) H,

2) alquil C1-C6-*,

3) cicloalquil C3-C7->,4) haloalquil-»,

5) aril-»,

6) bifenil-»,

7) heteroarilaril-»,

8) arileteroaril-»,

9) arileterociclil—>,

10) heterociclil—

11) heteroaril-»,

12) heterociclil-»,

13) alquil C1-C6-OnC(O)-^,

14) haloalquil-OnC(0)—

15) cicloalquil C3-C7-OnC(O)-K

16) aril-0nC(0)-»,

17) heteroaril-OnC(0)->,

18) heterociclil-OnC(0)->,

19) R8R9NC(=YH·,

20) alquil C1-C6-S(O)2-*,

21) cicloalquil C3-C7-S(O)2-*,

22) aril-S(0)2->,

23) heteroaril-S(0)2->,

24) heterociclil-S(0)2->,

25) aril fundido-cicloalquil C3-C7-^1

26) heteroaril fundido-cicloalquil C3-C7->,

27) aril fundido-heterociclil-»,

28) heteroaril fundido-heterociclil—

29) aril fundido-cicloalquil C3-C7-OnC(O)-^

30) heteroaril fundido-cicloalquil C3-C7-OnC(O)^1

31) aril fundido-heterociclil-OnC(0)-> ou

32) heteroaril fundido-heterociclil-OnC(0)->,

em que o alquil e o cicloalquil são opcionalmente substituídos com um ou maissubstituintes R61 e o aril, o heteroaril e o heterociclil são opcionalmente substituídos com umou mais substituintes R10;

R6 é independentemente selecionado de:

1) halogênio,

2) alquil C1-C6,

3) cicloalquil C3-C7,4) haloalquil,

5) aril,

6) heteroaril,

7) heterociclil,

8) OR71

9) S(O)mR7,

10) NR8R91

11) COR71

12) C(O)OR71

13) OC(O)R71

14) SC(O)R71

15) CONR8R91

16) S(O)2NR8R9 ou

17) N(=Y)NR8R9,

em que o aril, o heteroaril e o heterociclil são opcionalmente substituídos com umou mais substituintes R10;

R7 é independentemente selecionado de:

1) H,

2) alquil C1-C6,

3) cicloalquil C3-C7,

4) haloalquil,

5) aril,

6) heteroaril,

7) heterociclil,

8) C(=Y)NR8R9 ou

9) alquil Ci-C6-alquinil C2-C4,em que aril, heteroaril e heterociclil são opcionalmente substituídos com um oumais R10;

R8 e R9 são independentemente selecionados de:30 1) H

2) alquil CrC6,

3) cicloalquil C3-C7l

4) haloalquil,

5) aril,

6) heteroaril,

7) heterociclil,

8) CO-alquil Ci-C6,9) CO-cicloalquil Ci-C3

10) CO-aril,

11) CO-heteroaril,

12) CO-heterociclil,

13) C(0)Y-alquil C1-C6,

14) C(O)Y-CiCloaIquiI C3-C3,

15) C(0)Y-aril,

16) C(0)Y-heteroaril, ou

17) C(0)Y-heterociclil,

ou R8 e R91 juntamente com o átomo de nitrogênio ao qual eles estão ligados,formam um anel heterocíclico de cinco, seis ou sete membros opcionalmente substituídocom um ou mais substituintes R6;

R10 é independentemente selecionado de:

1) halogênio,

2) NO21

3) CN1

4) alquil CrC6l

5) haloalquil,

6) cicloalquil C3-C7l

7) OR71

8) NR8R91

9) SR71

10) COR71

11) CO2R71

12) S(O)mR71

13) CONR8R9OU

14) S(O)2NR8R91

em que o alquil é opcionalmente substituído com um ou mais substituintes R6;R11 é independentemente selecionado de

1) alquil Ci-C6-»,

2) cicloalquil C3-C7-»,

3) aril-»,

4) heteroaril-» ou

5) heterociclil-»,

em que o alquil e o cicloalquil são opcionalmente substituídos com um ou maissubstituintes R61 e o aril, ο heteroaril e ο heterociclil são opcionalmente substituídos com umou mais substituintes R10;

R12 é independentemente selecionado de

1) alquil C1-C6—>,

2) cicloalquil C3-C7—>,

3) haloalquil—>,

4) aril—>,

5) heteroaril—>,

6) heterociclil—>,

7) alquil C1-C6-OnC(O)—>,

8) haloalquil-OnC(0)-»,

9) cicloalquil C3-C7-OnC(O)^,

10) aril-0nC(0)—>,

11) heteroaril-0nC(0)->,

12) heterociclil-OnC(0)—>,

13) R8R9NC(0)—>,

14) alquil C1-C6-S(O)m—>,

15) cicloalquil C3-C7-S(O)m—>,

16) aril-S(0)m-*,

17) heteroaril-S(0)m-»,

18) heterociclil-S(0)m-»,

19) aril fundido-cicloalquil C3-C7,

20) heteroaril fundido-cicloalquil C3-C7 ou

21)C(=Y)-NR8R9,

em que o alquil e o cicloalquil são opcionalmente substituídos com um ou maissubstituintes R6, e o aril, o heteroaril e o heterociclil são opcionalmente substituídos com umou mais substituintes R10;

R13 é

1) H,

2) alquil CrC6-»,

3) cicloalquil C3-C7-»,

4) haloalquil-»,

5) aril-»,

6) heteroaril-»,

7) heterociclil-»,

8) alquil C1-C6-OnC(O)-*,9) haloalquil-OnC(0)->,

10) cicloalquil C3-C7-OnC(O)^1

11) aril-0nC(0)->,

12) heteroaril-OnC(0)-> ou

13) heterociclil-OnC(0)->;

Ou um promedicamento, ou um sal farmaceuticamente aceitável, ou marcado comum marcador detectável ou um marcador de afinidade seu.

Se qualquer variável, tal como R61 R6001 R101 R1000 e semelhante ocorrer mais do queuma vez em qualquer estrutura constituinte, a definição da variável em cada ocorrência éindependente em cada outra ocorrência. Se um substituinte foi por si próprio substituído comum ou mais substituintes, é para ser entendido que um ou mais substituintes podem estarligados ao mesmo átomo de carbono ou a diferentes átomos de carbono. Combinações desubstituintes e variáveis aqui definidas são permitidas somente se elas produziremcompostos quimicamente estáveis.

Uma pessoa versada na técnica irá entender que os padrões de substituição e ossubstituintes nos compostos da presente invenção podem ser selecionados paraproporcionar compostos que sejam quimicamente estáveis e que possam ser prontamentesintetizados usando a química estabelecida nos exemplos e as técnicas químicas bemconhecidas na técnica usando materiais de partida prontamente disponíveis.

É para ser entendido que muitos substituintes ou grupos descritos aqui têmequivalentes de grupos funcionais, o que significa que o grupo ou substituinte pode sersubstituído por outro grupo ou substituinte que tenha propriedades eletrônicas, dehibridização ou de ligação semelhantes.

Definições

A não ser que seja especificado de outra forma, as seguintes definições se aplicam:

As formas singulares "um", "uma" e "o" incluem as correspondentes referências noplural, a não ser que o contexto claramente diga outra coisa.

Conforme aqui utilizado, o termo "compreendendo" é tencionado a significar que alista de elementos seguindo a palavra "compreendendo" é requerida ou mandatária, porémque outros elementos são opcionais e podem ou não estar presentes.

Conforme aqui utilizado, o termo "consistindo de" é tencionado a significar incluindoe limitado ao que seguir a frase "consistindo de". Deste modo, a frase "consistindo de" indicaque os elementos listados são requeridos ou mandatários e que nenhum outro elementopode estar presente.

Conforme aqui utilizado, o termo "alquil" é tencionado a incluir grupos dehidrocarbonetos alifáticos saturados de cadeia tanto ramificada quanto linear com aquantidade especificada de átomos de carbono, por exemplo, Ci-C6 como em alquil Ci-C6 édefinido como incluindo grupos com 1, 2, 3, 4, 5 ou 6 carbonos num arranjo linear ouramificado, e C1-C4 como em alquil C1-C4 é definido como incluindo grupos com 1, 2, 3 ou 4átomos de carbono num arranjo linear ou ramificado e, por exemplo, C1-C2O como em alquilC1-C2O é definido como incluindo grupos com 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15,16, 17, 18, 19 ou 20 carbonos num arranjo linear ou ramificado. Exemplos de alquil C1-C6 ealquil C1-C4, conforme definidos acima, incluem, porém não estão limitados, a metil, etil, n-propil, /-propil, n-butil, í-butil, /-butil, pentil e hexil.

Conforme aqui utilizado, o termo "alquenil" é tencionado a significar grupos dehidrocarboneto de cadeia linear ou ramificada com a quantidade especificada de átomos decarbono nesse ponto, e nos quais pelo menos dois dos átomos de carbono são ligados unsaos outros por uma dupla ligação, e com a regioquímica ou E ou Z e suas combinações. Porexemplo, C2-C6, como em alquenil C2-C6, é definido como incluindo grupos com 2, 3, 4, 5 ou6 carbonos num arranjo linear ou ramificado, pelo menos dois dos átomos de carbonoestando ligados juntos por uma dupla ligação. Exemplos de alquenil C2-C6 incluem etenil(vinil), 1-propenil, 2-propenil, 1-butenil e semelhantes.

Conforme aqui utilizado, o termo "alquinil" é tencionado a significar grupos dehidrocarboneto insaturados e de cadeia linear com a quantidade especificada de átomos decarbono nesse ponto e nos quais pelo menos dois átomos de carbono são ligados juntos poruma tripla ligação. Por exemplo C2-C4, como em alquinil C2-C4, é definido como incluindogrupos com 2, 3 ou 4 átomos de carbono numa cadeia, pelo menos dois dos átomos decarbono estando ligados juntos por uma tripla ligação. Exemplos de tais grupos alquinilasincluem etinil, 1-propinil, 2-propinil e semelhantes.

Conforme aqui utilizado, o termo "cicloalquil" é tencionado a significar um grupohidrocarboneto alifático saturado monocíclico com a quantidade especificada de átomos decarbono nesse ponto, por exemplo, C3-C7 como em cicloalquil C3-C7 é definido comoincluindo grupos com 3, 4, 5, 6 ou 7 carbonos num arranjo monocíclico. Exemplos decicloalquil C3-C7 conforme definido acima incluem, porém não estão limitados, a ciclopropil,ciclobutil, ciclopentil, cicloexil e cicloeptil.

Conforme aqui utilizado, o termo "cicloalquenil" é tencionado a significar um grupohidrocarboneto alifático saturado monocíclico com a quantidade especificada de átomos decarbono nesse ponto, por exemplo, C3-C7 como em cicloalquenil C3-C7 é definido comoincluindo grupos com 3, 4, 5, 6 ou 7 carbonos num arranjo monocíclico. Exemplos decicloalquenil C3-C7 conforme definido acima incluem, porém não estão limitados, aciclopentenil e cicloexenil.

Conforme aqui utilizado, o termo "halo" ou "halogênio" é tencionado a significarflúor, cloro, bromo e iodo.

Conforme aqui utilizado, o termo "haloalquil" é tencionado a significar um alquilconforme definido acima, no qual cada átomo de hidrogênio pode ser substituído comsucesso por um átomo de halogênio. Exemplos de grupos haloalquilas incluem, porém nãoestão limitados, a CH2F, CHF2 e CF3.

Conforme aqui utilizado, o termo "aril", ou sozinho ou em combinação com outroradical, significa um grupo monocíclico aromático carbocíclico contendo 6 átomos decarbono, o qual pode ser ainda fundido com um segundo carbocíclico de 5 ou 6 membros oqual pode ser aromático, saturado ou insaturado. Aril inclui, porém não está limitado, a fenil,indanil, 1-naftil, 2-naftil e tetraidronaftil. As arilas podem estar conectadas a outro grupo ounuma posição adequada no anel cicloalquil ou no anel aromático. Por exemplo:

<formula>formula see original document page 61</formula>

As linhas com setas desenhadas a partir do sistema de anel indicam que a ligaçãopode estar ligada a qualquer um dos átomos de anel adequados.

Conforme aqui utilizado, o termo "bifenil"; tencionado a significar dois grupos fenilasunidos num dos sítios disponíveis no anel fenil. Por exemplo:

<formula>formula see original document page 61</formula>

Conforme aqui utilizado, o termo "heteroaril" é tencionado a significar um sistemade anel monocíclico ou bicíclico de até dez átomos, em que pelo menos um anel éaromático, e contém de 1 a 4 heteroátomos selecionados do grupo consistindo de O1 N e S.O substituinte heteroaril pode ser ligado ou através de um átomo de carbono do anel ou deum dos heteroátomos. Exemplos de grupos heteroaril incluem, porém não estão limitados, atienil, benzimidazolil, benzo[b]tienil, furil, benzofuranil, piranil, isobenzofuranil, cromenil,xantenil, 2H-pirrolil, pirrolil, imidazolil, pirazolil, piridil, pirazinil, pirimidinil, piridazinil, indolizinil,isoindolil, 3H-indolil, indolil, indazolil, purinil, 4H-quinolizinil, isoquinolil, quinolil, ftalazinil,naptiridinil, quinoxalinil, quinazolinil, cinolinil, pteridinil, isotiazolil, isocromanil, cromanil,isoxazolil, furazanil, indolinil, isoindolinil, tiazolo[4,5-b]-piridina e derivados de fluoresceína,tais como<formula>formula see original document page62</formula>

Conforme aqui utilizado, o termo "heterociclo", "heterocíclico" ou "heterociclil" étencionado a significar um sistema de anel não-aromático de 5, 6 ou 7 membros contendode 1 a 4 heteroátomos selecionados do grupo consistindo de O, N e S. Exemplos deheterociclos incluem, porém não estão limitados, a pirrolidinil, tetraidrofuranil, piperidil,pirrolinil, piperazinil, imidazolidinil, morfolinil, imidazolinil, pirazolidinil, pirazolinil e

<formula>formula see original document page62</formula>

Conforme aqui utilizado, o termo "heterobiciclo", ou sozinho ou em combinação comoutro radical, é tencionado a significar um heterociclo conforme definido acima fundido aoutro ciclo, estar num heterociclo, um aril ou qualquer outro ciclo aqui definido. Exemplos detais heterobiciclos incluem, porém não estão limitados, a cumarina, benzo[d][1,3]dioxol, 2,3-diidrobenzo[b][1,4]dioxina e 3,4-diidro-2H-benzo[b][1,4]dioxepina.

Conforme aqui utilizado, o termo "heteroaril" é tencionado a significar um sistemade anel monocíclico ou bicíclico de até dez átomos, em que pelo menos um anel éaromático, e contém de 1 a 4 heteroátomos selecionados do grupo consistindo de O, N e S.O substituinte heteroaril pode estar ligado ou através de um átomo de carbono do anel ou deum dos heteroátomos. Exemplos de grupos heteroaril incluem, porém não estão limitados, atienil, benzimidazolil, benzo[/)]tienil, furil, benzofuranil, piranil, isobenzofuranil, cromenil,xantenil, 2H-pirrolil, pirrolil, imidazolil, pirazolil, piridil, pirazinil, pirimidinil, piridazinil, indolizinil,isoindolil, 3/-/-indolil, indolil, indazolil, purinil, 4/-/-quinolizinil, isoquinolil, quinolil, ftalazinil,naptiridinil, quinoxalinil, quinazolinil, cinolinil, pteridinil, isotiazolil, isocromanil, cromanil,isoxazolil, furazanil, indolinil e isoindolinil.

Conforme aqui utilizado, o termo "heterociclo", "heterocíclico" ou "heterociclil" étencionado a significar um sistema de anel não-aromático de 5, 6 ou 7 membros contendode 1 a 4 heteroátomos selecionados do grupo consistindo de O, N e S. Exemplos deheterociclos incluem, porém não estão limitados, a pirrolidinil, tetraidrofuranil, piperidil,pirrolinil, piperazinil, imidazolidinil, morfolinil, imidazolinil, pirazolidinil e pirazolinil.Conforme aqui utilizado, o termo "heteroátomo" é tencionado a significar O1 Sou N.

Conforme aqui utilizado, o termo "diácido ativado" é tencionado a significar umdiácido, em que as porções de ácido carboxílico foram transformadas em, por exemplo,porém não limitadas, aos haletos de ácido, a ésteres de succinato ou ésteres HOBt1 ou insitu ou num passo sintético separado. Por exemplo, cloreto de succinila e cloreto detereftaloíla são exemplos de "cloretos diácidos". Ésteres HOBt podem ser formados in situpelo tratamento de um diácido com um agente desidratante tal como DCC, EDC, HBTU ououtros, uma base tal como DIPEA e HOBt num solvente apropriado. A reação de um diácidoativado com uma amina irá resultar na conversão da funcionalidade diácido numafuncionalidade amida.

Conforme aqui utilizado, o termo "marcador detectável" é tencionado a significar umgrupo que pode estar ligado a um composto da presente invenção para produzir uma sondaou a um domínio BIR IAP, de modo que quando a sonda está associada com o domínio BIR1o marcador permite o reconhecimento direto ou indireto da sonda de modo que ela possaser detectada, medida e quantificada. Conforme aqui utilizado, o termo "marcador deafinidade" é tencionado a significar um Iigante ou grupo, o qual esteja ligado ou a umcomposto da presente invenção ou a um domínio BIR IAP para permitir que outro compostoseja extraído de uma solução à qual o Iigante ou grupo esteja ligado.

Conforme aqui utilizado, o termo "sonda" é tencionado a significar um composto deFórmula I, o qual é marcado ou com um marcador detectável ou com uma etiqueta deafinidade, e o qual seja capaz de se ligar, quer covalentemente ou não-covalentemente, comum domínio BIR IAP. Quando, por exemplo, a sonda não está covalentemente ligada, elapode ser deslocada por um composto de teste. Quando, por exemplo, a sonda écovalentemente ligada, ela pode ser usada para formar aductos reticulados, os quais podemser quantificados e inibidos por um composto de teste.

Conforme aqui utilizado, o termo "opcionalmente substituído com um ou maissubstituintes" ou seu termo equivalente "opcionalmente substituído com pelo menos umsubstituinte" é tencionado a significar que o evento de circunstâncias subseqüentementedescrito pode ou não ocorrer, e que a descrição inclui exemplos onde o evento oucircunstância ocorre e exemplos nos quais ele não ocorre. A definição é tencionada asignificar de zero até cinco substituintes.

Se os próprios substituintes forem incompatíveis com os métodos sintéticos dapresente invenção, o substituinte pode ser protegido com um grupo protetor adequado (PG)que é estável às condições reacionais usadas nesses métodos. O grupo protetor pode serremovido num ponto adequado na seqüência reacional do método para fornecer umintermediário desejável ou composto alvo. Grupos protetores adequados e os métodos paraproteger e desproteger substituintes diferentes usado tais grupos protetores adequados sãobem conhecidos pelas pessoas versadas na técnica; exemplos dos quais podem serencontrados em T. Greene e P. Wuts, Protecting Groups in Chemical Synthesis (3a ed.),John Wiley & Sons, NY (1999), o qual é aqui incorporado por referência na sua totalidade.Exemplos de grupos protetores usados do começo ao fim incluem, porém não estãolimitados, a Fmoc1 Bn, Boc1 CBz e COCF3. Em alguns exemplos, um substituinte pode serespecificamente selecionado para ser reativo sob as condições reacionais usadas nosmétodos dessa invenção. Sob essas circunstâncias, as condições reacionais convertem osubstituinte selecionado em outro substituinte que é ou útil num composto intermediário nosmétodos dessa invenção ou é um substituinte desejável num composto alvo.

Abreviações para os α-aminoácidos usadas do início ao fim são como se segue:

<table>table see original document page 64</column></row><table>

Conforme aqui utilizado, o termo "resíduo", ao se referir aos α-aminoácidos, étencionado a significar um radical derivado do α-aminoácido correspondente pela eliminaçãoda hidroxila do grupo carbóxi e um hidrogênio do grupo α-amino. Por exemplo, os termosGln1 Ala, Gly, lie, Arg1 Asp, Phe1 Ser, Leu, Cys, Asn e Tyr representam os resíduos de L-glutamina, L-alanina, glicina, L-isoleucina, L-arginina, L-ácido aspártico, L-fenilalanina, L-serina, L-leucina, L-cisteína, L-asparagina e L-tirosina, respectivamente.

Conforme aqui utilizado, o termo "indivíduo" é tencionado a significar mamíferoshumanos e não-humanos tais como primatas, gatos, cachorros, suínos, gado, ovelhas,cabras, cavalos, coelhos, ratos, camundongos e semelhantes.

Conforme aqui utilizado, o termo "promedicamento" é tencionado a significar umcomposto que pode ser convertido sob condições fisiológicas ou por solvólise a umcomposto biologicamente ativo da presente invenção. Deste modo, o termo"promedicamento" se refere a um precursor de um composto da invenção que sejafarmaceuticamente aceitável. Um promedicamento pode ser inativo ou apresentar atividadelimitada quando administrado a um indivíduo necessitado disso, porém que seja convertidoin vivo num composto ativo da presente invenção. Tipicamente, promedicamentos sãotransformados in vivo para produzir o composto da invenção, por exemplo, pela hidrólise nosangue ou em outros órgãos pelo processamento enzimático. O composto promedicamentogeralmente oferece vantagens de solubilidade, compatibilidade tecidual ou liberaçãoretardada no indivíduo (ver Bundgard, H., Design of Prodrugs (1985), pp. 7-9, 21-24(Elsevier, Amsterdã). A definição de promedicamento inclui quaisquer veículoscovalentemente ligados, os quais liberem o composto ativo da invenção in vivo quando talpromedicamento é administrado a um indivíduo. Promedicamentos de um composto dapresente invenção podem ser preparados pela modificação dos grupos funcionais presentesno composto da invenção de tal modo que as modificações sejam clivadas, ou namanipulação rotineira ou in vivo, num composto de origem da invenção.

Conforme aqui utilizado, o termo "veículo, diluente ou excipiente farmaceuticamenteaceitável" é tencionado a significar, sem limitação, qualquer adjuvante, carreador,excipiente, glidante, agente adoçante, diluente, conservante, tinta/corante, intensificador deflavor, tensoativo, agente umidificante, agente dispersante, agente suspensor, estabilizante,agente isotônico, solvente, emulsificante ou agente encapsulante, tal como lipossoma,ciclodextrinas, sistemas de distribuição polimérica encapsulantes ou matriz depolietilenoglicol, os quais são aceitáveis para uso em indivíduos, preferivelmente emhumanos.

Conforme aqui utilizado, o termo "sal farmaceuticamente aceitável" é tencionado asignificar tanto sais de adição de ácidos quanto de bases.

Conforme aqui utilizado, o termo "sal de adição de ácido farmaceuticamenteaceitável" é tencionado a significar aqueles sais os quais retêm a eficácia biológica e aspropriedades das bases livres, as quais não são biologicamente ou de outra formaindesejáveis, e as quais são formadas com ácidos inorgânicos tais como ácido clorídrico,ácido bromídrico, ácido sulfúrico, ácido nítrico, ácido fosfórico e semelhantes, e ácidosorgânicos tais como ácido acético, ácido trifluoracético, ácido propiônico, ácido glicólico,ácido pirúvico, ácido oxálico, ácido maléico, ácido malônico, ácido succínico, ácido fumárico,ácido tartárico, ácido cítrico, ácido benzóico, ácido cinâmico, ácido mandélico, ácidometanossulfônico, ácido etanossulfônico, ácido p-toluenossulfônico, ácido salicílico esemelhantes.

Conforme aqui utilizado, o termo "sal de adição de base farmaceuticamenteaceitável" é tencionado a significar aqueles sais os quais retêm a eficácia biológica e aspropriedades dos ácidos livres, os quais não são biologicamente ou de outra formaindesejáveis. Esses sais são preparados a partir da adição de uma base inorgânica ou deuma base orgânica do ácido livre. Sais derivados de bases inorgânicas incluem, porém nãoestão limitados, aos sais de sódio, potássio, lítio, amônio, cálcio, magnésio, ferro, zinco,cobre, manganês, alumínio e outros. Sais derivados de bases orgânicas incluem, porém nãoestão limitados, a sais de aminas primárias, secundárias e terciárias, aminas substituídasincluindo aminas substituídas de ocorrência natural, aminas cíclicas e resinas de troca iônicabásicas, tais como resinas de isopropilamina, trimetilamina, dietilamina, trietilamina,tripropilamina, etanolamina, 2-dimetilaminoetanol, 2-dietilaminoetanol, dicicloexilamina,lisina, arginina, histidina, cafeína, procaína, hidrabamina, colina, betaina, etilenodiamina,glucosamina, metilglucamina, teobromina, purinas, piperazina, piperidina, N-etilpiperidina,poliamina e semelhantes.

Conforme aqui utilizado, o termo "ligação ao domínio BIR" é tencionado a significara ação de um composto da presente invenção num domínio BIR IAP, o qual bloqueie oudiminua a ligação de IAPs às proteínas de ligação BIR ou esteja envolvido no deslocamentodas proteínas de ligação BIR de um IAP. Exemplos de proteínas de ligação BIR incluem,porém não estão limitados, a caspases e proteínas de ligação BIR mitocondrialmentederivadas tais como Smac, Omi/WTR2A e semelhantes.

Conforme aqui utilizado, o termo "apoptose insuficiente" é tencionado a significarum estado em que uma doença é causada ou continua porque as células danosas aoindivíduo não sofreram apoptose. Isso inclui, porém não está limitado, a célulascancerígenas que sobrevivem num indivíduo sem tratamento, a células cancerígenas quesobrevivem num indivíduo durante ou após o tratamento anti-câncer, ou a células imunescuja ação seja danosa ao indivíduo e incluem neutrófilos, monócitos e células T auto-reativas.

Conforme aqui utilizado, o termo "quantidade terapeuticamente eficaz" é tencionadoa significar uma quantidade de um composto de Fórmula I ou Il o qual, quando administradoa um indivíduo, seja suficiente para efetuar o tratamento para um estado de doençaassociado com a apoptose insuficiente. A quantidade do composto de Fórmula I irá variardependendo do composto, da condição e de sua severidade e da idade do indivíduo a sertratado, porém pode ser determinada rotineiramente por uma pessoa normalmente versadana técnica levando em consideração seu próprio conhecimento e essa descoberta.

Conforme aqui utilizado, o termo "tratando" ou "tratamento" é tencionado a significartratamento de um estado de doença associado com a apoptose insuficiente, conforme aquirevelado, num indivíduo, e inclui: (i) a prevenção de uma doença ou condição associadacom a apoptose insuficiente de ocorrer num indivíduo, particularmente, quando tal mamíferoé predisposto à doença ou condição, porém ainda não tenha sido diagnosticado como apossuindo; (ii) inibição de uma doença ou condição associada com a apoptose insuficiente,isto é, a interrupção de seu desenvolvimento; ou (iii) alívio de uma doença ou condiçãoassociada com a apoptose insuficiente, isto é, causando a regressão da condição.

Conforme aqui utilizado, o termo "tratando câncer" é tencionado a significar aadministração de uma composição farmacêutica da presente invenção a um indivíduo,preferivelmente a um ser humano, o qual seja afligido com câncer para causar um alívio docâncer pela mòrte, inibição do crescimento ou inibição da metástase das célulascancerígenas.

Conforme aqui utilizado, o termo "prevenção da doença", é tencionado a significar,no caso de câncer, a administração pós-cirúrgica, pós-quimioterápica ou pós-radioterápicade uma composição farmacêutica da presente invenção a um indivíduo, preferivelmente aum ser humano, o qual tenha sofrido com câncer para prevenir o recrescimento do câncerpor morte, inibição do crescimento ou inibição da metástase de quaisquer célulascancerígenas remanescentes. Também incluída nesta definição está a prevenção dascondições pró-sobrevivência que levam a doenças tais como asma, MS e semelhantes.

Conforme aqui utilizado, o termo "efeito sinergístico" é tencionado a significar que oefeito alcançado com a combinação dos compostos da presente invenção e ou os agentesquimioterapêuticos ou os agonistas dor receptor de morte da invenção é maior do que oefeito o qual é obtido com somente um dos compostos, agentes ou agonistas, ouvantajosamente o efeito o qual é obtido com a combinação dos compostos, agentes ouagonistas acima é maior do que a condição dos efeitos obtidos com cada um doscompostos, agentes ou agonistas usados separadamente. Tal sinergia permite que dosesmenores sejam dadas.

Conforme aqui utilizado, o termo "apoptose" ou "morte celular programada" étencionado a significar o processo regulado de morte celular, em que uma célula emprocesso de morte apresenta um grupo de marcas bioquímicas bem caracterizadas queinclui a formação de bolhas na membrana celular, o encolhimento das células somáticas, acondensação da cromatina e a escalada (Iaddering) de DNA, assim como qualquer mortecelular mediada pela caspase.Conforme aqui utilizado, o termo "domínio BIR" ou "BIR" são usadosintercambiavelmente do início ao fim e são tencionados a significar um domínio o qual sejaCARACTERIZADO por uma variedade de resíduos de aminoácidos invariáveis, incluindocisteínas conservadas e um resíduo de histidina conservado na seqüência Cys-(Xaa I^Cys-(Xaa1)i6His-(Xaa1)6-8Cys. Tipicamente, a seqüência de aminoácidos da seqüência deconsenso é: Xaa1-Xaa 1-Xaa 1 -Arg-Leu-XaaI -Thr-Phe-Xaa1 -Xaa1-Trp -Pro-Xaa2-Xaa1-Xaal -Xaa2-Xaa2-Xaa1 -XaaI -XaaI -XaaI-Leu-AIa-XaaI -AIa-GIy-Phe-Tyr-Tyr-Xaa1 -GIy-Xaa 1 -Xaa 1 -Asp-Xaa 1 -VaI-Xaa 1 -Cys-Phe-Xaa 1 -Cys-Xaa 1 -Xaa 1 -Xaa 1 -Xaa 1 -Xaa 1 -Xaa 1 -Trp-Xaa 1 -Xaa 1 -Xaa 1 -Asp-Xaa 1 -Xaa 1 -Xaa 1 -Xaa 1 -Xaa 1-H is-Xaa- 1 -Xaa 1 -Xaa 1 -Xaa 1 -Pro-Xaa1-Cys-Xaa1-Phe-Val, em que Xaal é qualquer aminoácido e Xaa2 é qualqueraminoácido ou está ausente. Preferivelmente, a seqüência é substancialmente idêntica auma das seqüências do domínio BIR fornecidas para XIAP1 HIAP1 ou HIAP2 aqui.

Os resíduos de domínio BIR estão listados abaixo (ver Genome Biology (2001) 1-10):

<table>table see original document page 68</column></row><table>

Conforme aqui utilizado, o termo "dedo de zinco do anel" ou "RZF" é tencionado asignificar um domínio com a seqüência de aminoácidos da seqüência de consenso: Glu-Xaa 1 -Xaa 1 -Xaa 1 -Xaa 1 -Xaa 1 -Xaa- 1 -Xaa2-Xaa1 -XaaI -XaaI -Cys-Lys-Xaa3-Cys-Met-Xaa1 -Xaa 1 -XaaI-Xaa 1 -Xaa 1 -Xaa3-X- aa1 -Phe-XaaI -Pro-Cys-GIy-His-XaaI -XaaI-Xaa 1 -Cys-Xaa1-Xaa1-Cys-Ala-Xaa1-Xaa-1-Xaa1-Xaa1-Xaa1-Cys-Pro-Xaa1-Cys, em que Xaal équalquer aminoácido, Xaa2 é Glu ou Asp, e Xaa3 é Val ou lie.

Conforme aqui utilizado, o termo "IAP" é tencionado a significar um polipeptídeo ouproteína ou fragmento seu codificado por um gene IAP. Exemplos de IAPs incluem, porémnão estão limitados, a NAIP humano ou de camundongo (Birc 1), HIAP-1 (clAP2, Birc 3),HIAP-2 (clAP1, Birc 2), XIAP (Birc 4), survivina (Birc 5), livina (ML-IAP, Birc 7), ILP-2 (Birc 8)e Apollon/BRUCE (Birc 6) (ver, por exemplo, as Patentes Americanas Nos. 6.107.041;6.133.437; 6.156.535; 6.541.457; 6.656.704; 6.689.562; Deveraux e Reed, Genes Dev. 13,239-252, 1999; Kasof e Gomes, J. Biol. Chem., 276, 3238-3246, 2001; Vucic et al., Curr.Biol. 10, 1359-1366, 2000; Ashab et al. FEBS Lett., 495, 56-60, 2001, os conteúdos dosquais são por meio disso incorporados por referência).

Conforme aqui utilizado, o termo "gene IAP" é tencionado a significar um genecodificando um polipeptídeo com pelo menos um domínio BIR e o qual seja capaz demodular (inibir ou intensificar) a apoptose numa célula ou tecido. O gene IAP é um genecom cerca de 50% ou mais de identidade de seqüência de nucleotídeo com pelo menos umNAIP humano ou de camundongo (Birc 1), HIAP-1 (clAP2, Birc 3), HIAP-2 (clAP1, Birc 2),XIAP (Birc 4), survivina (Birc 5), Iivina (ML-IAP, Birc 7), ILP-2 (Birc 8) e Apollon/BRUCE (Birc6). A região da seqüência sobre a qual a identidade é medida é uma região codificando pelomenos um domínio BIR e um domínio de dedo de zinco do anel. Os genes IAP demamíferos incluem seqüências de nucleotídeos isolados de qualquer fonte mamífera.

Conforme aqui utilizado, o termo "IC50" é tencionado a significar uma quantidade,concentração ou dosagem de um composto particular da presente invenção que alcanceuma inibição de 50% de resposta máxima, tal como o deslocamento da ligação da sondafluorescente máxima num ensaio que mede tal resposta.

Conforme aqui utilizado, o termo "EC50" é tencionado a significar uma quantidade,concentração ou dosagem de um composto particular da presente invenção que alcanceuma inibição de 50% da sobrevivência celular.

Conforme aqui utilizado, o termo "modula" ou "modulando" é tencionado a significaro tratamento, prevenção, supressão, intensificação ou indução de uma função ou condiçãousando os compostos da presente invenção. Por exemplo, os compostos da presenteinvenção podem modular a função IAP num indivíduo, deste modo intensificando a apoptosepela redução significativa, ou essencialmente pela eliminação da interação das proteínasapoptóticas ativadas, tais como caspase 3, 7 e 9, com os domínios BIR de IAPs demamíferos ou pela indução da perda da proteína XIAP numa célula.

Conforme aqui utilizado, o termo " intensificando a apoptose" é tencioando asignificar o aumento da quantidade de células que sofrem apoptose numa dada populaçãocelular seja in vitro ou in vivo. Exemplos de populações celulares incluem, porém não estãolimitados, a células de câncer ovariano, células de câncer de cólon, células de câncer demama, células de câncer de pulmão, células de câncer pancreático ou células T esemelhantes. Será percebido que o grau de intensificação da apoptose fornecido por umcomposto intensificador de apoptose da presente invenção num dado ensaio irá variar,porém uma pessoa versada na técnica pode determinar a alteração estatisticamentesignificativa no nível de apoptose que identifica um composto que intensifica a apoptose, deoutra forma limitada por um IAP. Preferivelmente, "intensificação da apoptose" significa queo aumento na quantidade de células sofrendo apoptose é de pelo menos 25%, maispreferivelmente o aumento é de 50%, e mais preferivelmente o aumento é de pelo menosuma vez. Preferivelmente, a amostra monitorada é uma amostra de células quenormalmente sofrem apoptose insuficiente (isto é, células cancerígenas). Métodos paradetectar as alterações no nível de apoptose (isto é, intensificação ou redução) são descritosnos Exemplos e incluem métodos que quantificam a fragmentação do DNA1 métodos quequantificam a translocação de fosfatoilserina do lado citoplasmático para o lado extracelularda membrana, a determinação da ativação das caspases e os métodos que quantificam aliberação do citocromo C e do fator inibitório de apoptose no citoplasma pela mitocôndria.

Conforme aqui utilizado, o termo "doença proliferativa" ou "distúrbio proliferativo" étencionado a significar uma doença que é causada por ou resulta em níveisinapropriadamente altos de divisão celular, níveis inapropriadamente baixos de apoptose ouambos. Por exemplo, cânceres tais como linfoma, leucemia, melanoma, câncer ovariano,câncer de mama, câncer pancreático e câncer de pulmão e distúrbios auto-imunes sãotodos exemplos de doenças proliferativas.Conforme aqui utilizado, o termo "agonista do receptor de morte" é tencionado asignificar um agente capaz de simular, por contato direto ou indireto a resposta pró-apoptótica mediada pelos receptores de morte. Por exemplo, um anticorpo receptor TRAILagonista poderia se ligar ao receptor TRAIL (S) e desencadear uma resposta apoptótica. Poroutro lado, outro agente, tal como interferon-a, poderia desencadear a liberação do TRAILendógeno e/ou supra-regular os receptores TRAIL de tal forma que a resposta pró-apoptótica celular fosse amplificada.Os compostos da presente invenção ou seus sais farmaceuticamente aceitáveispodem conter um ou mais centros assimétricos, eixos quirais e planos quirais e podem,deste modo, gerar enantiômeros, diastereoisômeros e outras formas estereoisoméricas epodem ser definidos em termos de estereoquímica absoluta, tal como (R)- ou (S)-, ou como(D)- ou (L)- para aminoácidos. A presente invenção é tencionada a incluir todos os taispossíveis isômeros, assim como suas formas oticamene puras e racêmicas. Isômeros (+) e(-), (R)- e (S)- ou (D)- e (L)- oticamente ativos podem ser preparados usando sintons quiraisou reagentes quirais, ou separados usando técnicas convencionais, tal como HPLC em fasereversa. As misturas racêmicos podem ser preparadas e, em seguida, separadas emisômeros óticos individuais ou esses isômeros óticos podem ser preparados por síntesequiral. Os enantiômeros podem ser separados por métodos conhecidos pelas pessoasversadas na técnica, por exemplo, pela formação de sais diastereoisoméricos os quaispodem, a seguir, ser separados por cristalização, cromatografia gás-líquida ou líquida,reação seletiva de um enantiômero com um reagente específico de enantiômero. Tambémserá percebido pelas pessoas versadas na técnica que onde o enantiômero desejado éconvertido em outra entidade química por uma técnica de separação, um passo adicional é,deste modo, requerido para formar a forma enantiomérica desejada. Alternativamente,enantiômeros específicos podem ser sintetizados por síntese assimétrica usando reagentes,substratos, catalisadores ou solventes oticamente ativos ou pela conversão de umenantiômero em outro por transformação assimétrica.Certos compostos da presente invenção podem existir na forma zwitteriônica e apresente invenção inclui formas zwitteriônicas desses compostos e suas misturas.

Utilidades

Os compostos da presente invenção são úteis como compostos de ligação aodomínio BIR IAP e, como tais, os compostos, composições e método da presente invençãoincluem a aplicação às células ou indivíduos afligidos com ou tendo uma predisposição parao desenvolvimento de um estado de doença particular, o qual é CARACTERIZADO porapoptose insuficiente. Deste modo, os compostos, composições e métodos da presenteinvenção são usados para tratar doenças/distúrbios proliferativos celulares, os quaisincluem, porém não estão limitados, a i) câncer, ii) doença auto-imune, iii) distúrbiosinflamatórios, iv) proliferação induzida após procedimentos médicos incluindo, porém sem selimitar, a cirurgia, angioplastia e semelhantes.

Os compostos da presente invenção também podem ser úteis no tratamento dedoenças, nas quais há um defeito na morte celular programada ou na maquinaria apoptótica(TRAIL, FAS, apoptossoma), tal como esclerose múltipla, aterosclerose, inflamação, auto-imunidade e semelhantes.

O tratamento envolve a administração a um indivíduo necessitado disso de umcomposto da presente invenção ou de um sal farmaceuticamente aceitável seu, ou umacomposição farmacêutica compreendendo um carreador farmacêutico e uma quantidadeterapeuticamente eficaz de um composto da presente invenção, ou um salfarmaceuticamente aceitável seu. Particularmente, os compostos, composições e métodosda presente invenção são úteis para o tratamento do câncer incluindo tumores sólidos taiscomo de pele, mama, cérebro, pulmão, carcinomas testiculares e semelhantes. Os cânceresque podem ser tratados pelos compostos, composições e métodos da invenção incluem,porém não estão limitados aos seguintes:

<table>table see original document page 71</column></row><table><table>table see original document page 72</column></row><table><table>table see original document page 73</column></row><table><table>table see original document page 74</column></row><table>

Os compostos da presente invenção ou seus sais farmaceuticamente aceitáveis ouseus promedicamentos podem ser administrados na forma pura ou numa composiçãofarmacêutica apropriada, e podem ser executados através de modos aceitos da práticafarmacêutica galênica.

As composições farmacêuticas da presente invenção podem ser preparadas pelamistura de um composto da presente invenção com um veículo, diluente ou excipiente, epodem ser formuladas em preparações nas formas sólida, semi-sólida, líquida ou gasosa,tais como comprimidos, cápsulas, pós, grânulos, ungüentos, soluções, supositórios,injeções, inaladores, géis, microesferas e aerossóis. Vias típicas de administração de taiscomposições farmacêuticas incluem, sem limitação, a oral, tópica, transdérmica, inalatória,parenteral (injeções subcutâneas, intravenosas, intramusculares, injeção transesternal outécnicas de infusão), sublingual, ocular, retal, vaginal e intranasal. Composiçõesfarmacêuticas da presente invenção são formuladas de modo a permitir que os ingredientesativos ali contidos sejam biodisponibilizados na administração da composição a umindivíduo. As composições que serão administradas a um indivíduo ou paciente tomam aforma de uma ou mais unidades de dosagem onde, por exemplo, um comprimido pode seruma unidade de dosagem individual, e um recipiente de um composto da presente invençãona forma de aerossol pode reter uma pluralidade de unidades de dosagem. Os métodosvigentes de preparo de tais formas de dosagem são conhecidos, ou serão aparentes, paraas pessoas versadas nessa técnica; por exemplo, ver Remington1S PharmaceuticalSciences, 18a Ed., (Mack Publishing Company, Easton, Pa., 1990). A composição a seradministrada irá, em qualquer evento, conter uma quantidade terapeuticamente eficaz deum composto da presente invenção, ou um sal farmaceuticamente aceitável seu, para otratamento de um estado de doença conforme descrito acima.

Uma composição farmacêutica da presente invenção pode estar na forma de umsólido ou líquido. Num aspecto, o(s) veículo(s) são particulados, de modo que ascomposições estão, por exemplo, na forma de comprimido ou pó. 0(s) veículo(s) pode serlíquido, com as composições sendo, por exemplo, um xarope oral, um líquido injetável ouum aerossol, o qual é útil, por exemplo, na administração inalatória.

Para administração oral, a composição farmacêutica está preferivelmente ou naforma sólida ou na forma líquida, onde as formas semi-sólida, semi-líquida, de suspensão egel estão incluídas nas formas aqui consideradas ou como sólido ou como líquido.

Como uma composição sólida para administração oral, a composição farmacêuticapode ser formulada na forma de um pó, grânulo, comprimido compresso, pílula, cápsula,goma de mascar, wafer ou semelhante. Tal composição sólida irá tipicamente conter um oumais diluentes inertes ou veículos comestíveis. Além disso, um ou mais dos seguintespodem estar presentes: Iigantes tais como carboximetilcelulose, etilcelulose, celulosemicrocristalina, goma de tragacanto ou gelatina; excipientes tais como amido, Iactose oudextrinas, agentes desintegrantes tais como ácido algínico, alginato de sódio, Primogel,amido de milho e semelhantes; lubrificantes tais como estearato de magnésio ou Sterotex;glidantes tal como dióxido de silício coloidal; agentes adoçantes tais como sacarose ousacarina; um agente flavorizante tal como flavorizante de hortelã-pimenta, salicilato demetila ou laranja; e um agente corante.

Quando a composição farmacêutica está na forma de uma cápsula, por exemplo,uma cápsula de gelatina, ela pode conter, além dos materiais do tipo acima, um carreadorlíquido tal como polietilenoglicol ou um óleo, tal como óleo de soja ou óleo vegetal.

A composição farmacêutica pode estar na forma de um líquido, por exemplo, umelixir, um xarope, uma solução, uma emulsão ou uma suspensão. O líquido pode ser para aadministração oral ou para distribuição por injeção, como dois exemplos. Quandotencionada para administração oral, a composição preferida contém, além dos presentescompostos, um ou mais dentre um agente adoçante, conservantes, tinta/corante e umintensificador de flavor. Numa composição tencionada a ser administrada por injeção, um oumais dentre um tensoativo, conservante, agente umidificante, agente dispersante, agentesuspensor, tampão, estabilizante e agente isotônico pode ser incluído.

As composições farmacêuticas líquidas da presente invenção ou são soluções,suspensões ou outra forma semelhante, podem incluir um ou mais dos seguintesadjuvantes: diluentes estéreis tal como água para injeção, solução salina, preferivelmentesalina fisiológica, solução de Ringer, cloreto de sódio isotônico, óleos fixos tais como monoou diglicerídeos sintéticos, os quais podem servir como o solvente ou meio suspensor,polietilenoglicóis, glicerina, propilenoglicol ou outros solventes; agentes antibacterianos taiscomo álcool benzílico ou metilparabeno; agentes encapsulantes tais como ciclodextrinas ouciclodextrinas funcionalizadas incluindo, porém sem se limitar, a α, β ou δ-hidroxipropilciclodextrinas ou Captisol; antioxidantes tais como ácido ascórbico ou bissulfitode sódio; agentes quelantes tal como ácido etilenodiaminotetracético; tampões tais comoacetatos, citratos ou fosfatos e agentes para o ajuste da tonicidade, tal como cloreto desódio ou dextrose. A preparação parenteral pode ser encerrada em ampolas, seringasdescartáveis ou em frascos de dose múltipla feitos de vidro ou plástico. Uma composiçãofarmacêutica injetável é preferivelmente estéril.

Uma composição farmacêutica líquida da presente invenção usada ou paraadministração parenteral ou oral deve conter uma quantidade de um composto da presenteinvenção de modo que uma dosagem adequada seja obtida. Tipicamente, essa quantidadeé de pelo menos 0,01% de um composto da presente invenção na composição. Quandotencionada para a administração oral, essa quantidade pode variar entre 0,1 e cerca de 70%do peso da composição. Para uso parenteral, as composições e preparações de acordo coma presente invenção são preparadas de modo que a unidade de dosagem parenteralcontenha-entre 0,01 a 10% em peso do composto da presente invenção. As composiçõesfarmacêuticas podem ser ainda diluídas no momento da administração; por exemplo, umaformulação parenteral pode ser adicionalmente diluída com uma solução isotônica e estérilpara injeção, tal como uma salina 0,9%, dextrose 5% em peso (D5W), solução de Ringer ou outras.

A composição farmacêutica da presente invenção pode ser usada paraadministração tópica, em cujo caso o veículo pode adequadamente compreender umasolução, uma emulsão, um ungüento ou uma base de gel. A base, por exemplo, podecompreender um ou mais dos seguintes: petrolato, lanolina, polietilenoglicóis, cera deabelha, óleo mineral, diluentes tais como água e álcool e emulsificantes e estabilizantes.Agentes espessantes podem ser apresentados numa composição farmacêutica paraadministração tópica. Se tencionada para a administração transdérmica, a composição podeincluir um emplastro transdérmico ou um dispositivo de iontoforese. Formulações tópicaspodem conter uma concentração do composto da presente invenção de cerca de 0,1% atécerca de 10% p/v (peso por unidade de volume).

A composição farmacêutica da presente invenção pode ser usada paraadministração retal para tratar, por exemplo, câncer de cólon, na forma, por exemplo, de umsupositório, o qual irá se fundir no reto e liberar o fármaco. A composição paraadministração retal pode conter uma base oleaginosa como um excipiente não-irritativoadequado. Tais bases incluem, sem limitação, lanolina, manteiga de cacau epolietilenoglicol.

A composição farmacêutica da presente invenção pode incluir vários materiais, osquais modificam a forma física de um sólido ou de uma unidade de dosagem líquida. Porexemplo, a composição pode incluir materiais que formam uma camada de revestimento aoredor dos ingredientes ativos. Os materiais que formam a camada de revestimento sãotipicamente inertes e podem ser selecionadas, por exemplo, de açúcar, Iaca purificada eoutros agentes de revestimento entéricos. Alternativamente, os ingredientes ativos podemser encerrados numa cápsula de gelatina.

A composição farmacêutica da presente invenção na forma sólida ou líquida podeincluir um agente que se ligue ao composto da presente invenção e, deste modo, auxilie nadistribuição do composto. Agentes adequados que podem agir nessa capacidade incluem,porém não estão limitados, a um anticorpo monoclonal ou policlonal, uma proteína ou um lipossomo.

A composição farmacêutica da presente invenção pode consistir de unidades dedosagem que possam ser administradas como um aerossol. O termo aerossol é usado paradenotar uma variedade de sistemas variando daqueles de natureza coloidal até os sistemasconsistindo de embalagens pressurizadas. A distribuição pode ser feita através de um gásliqüefeito ou comprimido ou por um sistema de bomba adequado que dispense osingredientes ativos. Aerossóis dos compostos da presente invenção podem ser distribuídosem sistemas de fase única, bifásicos ou trifásicos para distribuir o(s) ingrediente(s) ativo(s).A distribuição do aerossol inclui o recipiente necessário, ativadores, válvulas, subrecipientese semelhantes, os quais juntos podem formar um kit. Uma pessoa versada na técnica, semexperimentação demasiada, pode determinar os aerossóis preferidos.

As composições farmacêuticas da presente invenção podem ser preparadas pelametodologia bem conhecida na técnica farmacêutica. Por exemplo, uma composiçãofarmacêutica tencionada a ser administrada por injeção pode ser preparada pela mistura deum composto da presente invenção com água estéril e destilada, de modo a formar umasolução. Um tensoativo pode ser adicionado para facilitar a formação de uma solução oususpensão homogênea. Os tensoativos são compostos que interagem de modo não-covalente com o composto da presente invenção de modo a facilitar a dissolução dasuspensão homogênea do composto no sistema de distribuição aquoso.

Os compostos da presente invenção, ou seus sais farmaceuticamente aceitáveis,são administrados numa quantidade terapeuticamente eficaz, a qual irá variar dependendode uma variedade de fatores incluindo a atividade do composto específico empregado; aestabilidade metabólica e a extensão de ação do composto; a idade, peso corporal, saúdegeral, sexo e dieta do paciente; o modo e tempo de administração; a taxa de excreção; acombinação de fármacos; a severidade do distúrbio ou condição particular; e o indivíduo quesofre a terapia. Geralmente, uma dose diária terapeuticamente eficaz pode ser de cerca de0,1 mg até cerca de 40 mg/Kg de peso corporal por dia ou duas vezes por dia de umcomposto da presente invenção, ou um sal farmaceuticamente aceitável seu.

Terapia de combinação

Os compostos da presente invenção, ou seus sais farmaceuticamente aceitáveis,também pode ser administrados simultaneamente com, antes de ou após a administraçãode um ou mais dos agentes terapêuticos descritos abaixo. Tal terapia de combinação podeincluir a administração de uma única formulação de dosagem farmacêutica individual, a qualcontenha um composto da presente invenção e um ou mais agentes adicionais dadosabaixo, assim como a administração do composto da presente invenção e cada um dosagentes adicionais na sua própria formulação de dosagem farmacêutica separada. Porexemplo, um composto da presente invenção e um agente quimioterapêutico, tal como taxol(paclitaxel), taxotere, etoposide, cisplatina, vincristina, vinblastina e semelhante pode seradministrado ao paciente ou juntamente numa única composição de dosagem oral, tal comonum comprimido ou numa cápsula, ou cada agente administrado em formulações dedosagem oral separadas ou através da injeção intravenosa. Onde são usadas formulaçõesde dosagem separadas, os compostos da presente invenção e um ou mais agentesadicionais podem ser administrados essencialmente ao mesmo tempo, isto é,concorrentemente ou em tempos separadamente coordenados, isto é, seqüencialmente; aterapia de combinação é entendida como incluindo todos esses regimes. Além disso, essescompostos podem sinergizar com moléculas que podem estimular a via apoptótica doreceptor de morte de uma forma direta ou indireta como, por exemplo, os compostos dapresente invenção podem ser usados juntamente com TRAIL solúvel, qualquer agente ouprocedimentos que possam causar um aumento no nível circulante de TRAIL, tal comointerferon-alfa ou radiação.

Deste modo, a presente invenção também engloba o uso dos compostos dapresente invenção juntamente com a terapia de radiação de um ou mais agentes adicionais,tais como aqueles descritos em WO 03/099211 (PCT/US03/15861), o qual é por meio dissoincorporado por referência.

Exemplos de tais agentes adicionais incluem, porém não estão limitados, aosseguintes:

a) um modulador de receptor de estrogênio,

b) um modulador de receptor de androgênio,

c) um modulador de receptor retinóide,

d) um agente citotóxico,

e) um agente antiproliferativo,

f) um inibidor da prenil-proteína transferase,

g) um inibidor da HMG-CoA redutase,

h) um inibidor da HIV protease,

i) um inibidor da transcriptase reversa,k) um inibidor da angiogênese,

l) um agonista PPAR-γ,

m) um agonista PPAR-δ,

n) um inibidor da resistência a múltiplos fármacos inerente,

o) um agente anti-emético,

p) um agente útil no tratamento da anemia,q) agentes úteis no tratamento da neutropenia,

r) um fármaco intensificador imunológico,

s) um inibidor do proteassoma, tal como Velcade e MG132 (7-Leu-Leu-aldeído) (verHe et al em Oncogene (2004) 23, 2554 - 2558);

t) um inibidor HDAC, tal como butirato de sódio, fenilbutirato, ácidos hidroâmico,ciclino tetrapeptídeo e semelhantes (ver Rosato et al,. Molecular Câncer Therapeutics 2003,1273-1284);

u) um inibidor da atividade tipo quimiotripsina no proteassoma;

v) inibidores da E3 ligase;

w) um modulador do sistema imune tal como interferon-alfa e radiação ionizante(UVB) que pode induzir a liberação de citocinas, tais como as interleucinas, TNF ou induzir aliberação dos Iigantes do receptor de morte, tal como TRAIL;

x) um modulador dos receptores de morte TRAIL e agonistas TRAIL, tais como osanticorpos humanizados HGS-ETR1 e HGS-ETR2; e

Combinações adicionais também podem incluir agentes os quais reduzem atoxicidade dos agentes anteriormente mencionados, tal como a toxicidade hepática, atoxicidade neuronal, a nefrotoxicidade e semelhantes.

Num exemplo, a co-administração de um dos compostos de Fórmula I da presenteinvenção com um agonista do receptor de morte, tal como TRAIL, tal como uma pequenamolécula ou um anticorpo que mimetize TRAIL pode causar um efeito sinergístico vantajoso.Além disso, os compostos da presente invenção podem ser usados juntamente comquaisquer compostos que causem um aumento nos níveis circulantes de TRAIL.

Alcalóides da vinca e compostos relacionados

Alcalóides da vinda que podem ser usados juntamente com os oligômeros denucleobase da invenção para tratar câncer e outros neoplasmas incluem vincristina,vinblastina, vindesina, vinflunina, vinorelbina e anidrovinblastina.

As dolastatinas são oligopeptídeos que interferem primariamente com a tubulina e odomínio de ligação do alcalóide da vinca. Esses compostos também podem ser usadosjuntamente com os compostos da invenção para tratar câncer e outros neoplasmas. Asdolastatinas incluem a dolastatina-10 (NCS 376128), dolastatina-15, ILX651, TZT-1027,simplostatina 1, simplostatina 3 e LU103793 (cemadotina).

Criptoficinas (por exemplo, criptoficina 1 e criptoficina 52 (LY355703)) se ligam àtubulina no domínio de ligação do alcalóide da vinca e induzem a interrupção de G2/M e aapoptose. Qualquer um desses compostos pode ser usado juntamente com os compostosda invenção para tratar câncer e outros neoplasmas.Outros compostos rompedores de microtúbulõs que podem ser usados juntamentecom os compostos da invenção para tratar câncer e outros neoplasmas são descritos nasPatentes Americanas Nos. 6.458.765; 6.433.187; 6.323.315; 6.258.841; 6.143.7216.127.377; 6.103.698; 6.023.626; 5.985.837; 5.965.537; 5.955.423; 5.952.298; 5.939.5275.886.025; 5.831.002; 5.741.892; 5.665.860; 5.654.399; 5.635.483; 5.599.902; 5.530.0975.521.284; 5.504.191; 4.879.278; e 4.816.444, e nas Publicações de Pedidos de patentesAmericanas Nos. 2003/0153505 A1; 2003/0083263 A1; e 2003/0055002 A1, cada uma dasquais sendo por meio disso incorporadas por referência.

Taxanos e outros compostos estabilizadores de microtúbulos

Taxanos, tais como paclitaxel, doxetaxel, RPR 109881A1 SB-T-1213, SB-T-1250,SB-T-101187, BMS-275183, BRT 216, DJ-927, MAC-321, IDN5109 e IDN5390 podem serusados juntamente com os compostos da invenção para tratar câncer e outros neoplasmas.Análogos do taxano (por exemplo, BMS-184476, BMS-188797) e não-taxanosfuncionalmente relacionados (por exemplo, epotilonas (por exemplo, epotilona A, epotilona B(EP0906), desoxiepotilona B e epotilona B Iactama (BMS-247550), eleuterobina,discodermolida, 2-epidiscodermolida, 2-desmetildiscodermolida, 5-hidroximetildiscodermolida, 19-desaminocarbonildiscodermolida, 9(13)-ciclodiscodermolida elaulimalida) também podem ser usados nos métodos e composições da invenção.

Outros compostos estabilizantes de microtúbulos que podem ser usadosjuntamente com os compostos da invenção para tratar câncer e outros eoplasmas sãodescritos nas Patentes Americanas Nos. 6.624.317; 6.610.736; 6.605.599; 6.589.9686.583.290; 6.576.658; 6.515.017; 6.531.497; 6.500.858; 6.498.257; 6.495.594; 6.489.3146.458.976; 6.441.186; 6.441.025; 6.414.015; 6.387.927; 6.380.395; 6.380.394; 6.362.2176.359.140; 6.306.893; 6.302.838; 6.300.355; 6.291.690; 6.291.684; 6.268.381; 6.262.1076.262.094; 6.147.234; 6.136.808; 6.127.406; 6.100.411; 6.096.909; 6.025.385; 6.011.0565.965.718; 5.955.489; 5.919.815; 5.912.263; 5.840.750; 5.821.263; 5.767.297; 5.728.7255.721.268; 5.719.177; 5.714.513; 5.587.489; 5.473.057; 5.407.674; 5.250.722; 5.010.099; e4.939.168; e nas Publicações de Pedidos de Patentes Americanas Nos. 2003/0186965 A1;2003/0176710 A1; 2003/0176473 A1; 2003/0144523 A1; 2003/0134883 A1; 2003/0087888A1; 2003/0060623 A1; 2003/0045711 A1; 2003/0023082 A1; 2002/0198256 A1;2002/0193361 A1; 2002/0188014 A1; 2002/0165257 A1; 2002/0156110 A1; 2002/0128471A1; 2002/0045609 A1; 2002/0022651 A1; 2002/0016356 A1; 2002/0002292 A1, cada umadas quais sendo por meio disto incorporadas por referência.

Outros agentes quimioterapêuticos que podem ser administrados com umcomposto da presente invenção estão listados na Tabela a seguir:<table>table see original document page 81</column></row><table><table>table see original document page 82</column></row><table><table>table see original document page 83</column></row><table><table>table see original document page 84</column></row><table><table>table see original document page 85</column></row><table><table>table see original document page 86</column></row><table><table>table see original document page 87</column></row><table>

Adicionalmente, combinações também podem incluir agentes os quais reduzem atoxicidade dos agentes anteriormente mencionados, tal como toxicidade hepática, toxicidadeneuronal, nefrotoxicidade e semelhantes.

Ensaios de varredura

Os compostos da presente invenção podem também ser usados num método paraefetuar a varredura por outros compostos que se ligam a um domínio BIR IAP. Falando deum modo geral, para usar os compostos da invenção num método de identificação decompostos que se ligam a um domínio BIR IAP1 o IAP está ligado a um suporte e umcomposto da invenção é adicionado ao ensaio. Alternativamente, o composto da invençãotambém pode ser ligado ao suporte e o IAP é adicionado.

Existe uma variedade de formas para determinar a ligação de um composto apresente invenção no domínio BIR. De um modo, o composto da invenção, por exemplo,pode ser fluorescentemente ou radioativamente marcado e a ligação pode ser determinadadiretamente. Por exemplo, isso pode ser feito pela ligação do IAP num suporte sólido, pelaadição de um composto detectavelmente marcado da invenção, pela remoção por lavagemdo excesso de reagente e pela determinação se a quantidade de marcador detectável éaquela presente no suporte sólido. Vários passos de bloqueio e lavagem podem ser usados,os quais são conhecidos pelas pessoas versadas na técnica.

Em alguns casos, somente um dos componentes é marcado. Por exemplo,resíduos específicos no domínio BIR podem ser marcados. Alternativamente, mais de umcomponente pode ser marcado com diferentes marcadores; por exemplo, usando I125 para odomínio BIR, e um marcador fluorescente para a sonda.

Os compostos da invenção também podem ser usados como competidores paraprocurar por fármacos candidatos adicionais ou compostos de teste. Conforme aquiutilizados, os termos "fármaco candidato" ou "compostos de teste" são usadosintercambiavelmente e descrevem qualquer molécula, por exemplo, proteína, oligopeptídeo,molécula orgânica pequena, polissacarídeo, polinucleotídeo e semelhantes a seremtestados quanto à bioatividade. Os compostos podem ser capazes de alterar diretamente ouindiretamente a atividade biológica do IAP.Os fármacos candidatos podem incluir várias classes químicas, embora tipicamenteeles sejam moléculas orgânicas pequenas com um peso molecular não maior do que 100 emenor do que cerca de 2.500 Daltons. Os agentes candidatos tipicamente incluem gruposfuncionais necessários para a interação estrutural com proteínas, por exemplo, ligação dehidrogênio e ligação lipofílica, e tipicamente incluem pelo menos um grupo amina, carbonila,hidroxila, éter ou carboxila. Os fármacos candidatos geralmente incluem estruturasheterocíclicas ou de carbono cíclicas e/ou estruturas aromáticas ou poliaromáticassubstituídas com um ou mais grupos funcionais.

Fármacos candidatos podem ser obtidos a partir de qualquer variedade de fontes,incluindo bibliotecas de compostos sintéticos ou naturais. Por exemplo, várias formas sãodisponíveis para a síntese aleatória e direcionada de uma ampla variedade de compostosorgânicos e biomoléculas, incluindo a expressão de oligonucleotídeos aleatorizados.Alternativamente, as bibliotecas de compostos naturais na forma de extratos bacterianos,fúngicos, vegetais e animais são disponíveis ou prontamente produzidos. Adicionalmente, oscompostos e as bibliotecas naturais ou sinteticamente produzidas são prontamentemodificados através de formas químicas, físicas e bioquímicas convencionais.

Ensaios de varredura competitivos podem ser feitos pela combinação de umdomínio BIR IAP e uma sonda para formar um complexo sonda:domínio BIR numa primeiraamostra, seguido pela adição de um composto de teste a partir de uma segunda amostra. Aligação do composto de teste é determinada, e uma alteração ou diferença na ligação entreas duas amostras indica a presença de um composto de teste capaz de se ligar ao domínioBIR e modular potencialmente a atividade do IAP.

Num caso, a ligação do composto de teste é determinada através do uso dosensaios de ligação competitivos. Nessa modalidade, a sonda é marcada com um marcadorfluorescente. Sob certas circunstâncias, pode haver a ligação competitiva entre o compostode teste e a sonda. Os compostos de teste os quais apresentam a sonda, resultando numaalteração na fluorescência em comparação com o controle, sao considerados como seligando à região BIR.

Num caso, o composto de teste pode ser marcado. Ou o composto de teste ou umcomposto da presente invenção, ou ambos, é adicionado primeiramente ao domínio BIR IAPpor um tempo suficiente para permitir a ligação para formar um complexo.

A formação do complexo sonda:domínio BIR tipicamente requer incubações entre 40C e 40 0C entre 10 minutos até cerca de 1 hora para permitir uma varredura de altaprodutividade. Qualquer excesso de reagentes é geralmente removido ou removido porlavagem. O composto de teste é, a seguir, adicionado, e a presença ou ausência docomponente marcado é seguida para indicar a ligação ao domínio BIR.

Num caso, a sonda é adicionada primeiro, seguido pelo composto de teste. Odeslocamento da sonda é um indicativo de que o composto de teste está ligado ao domínioBIR e, deste modo, é capaz de se ligar a, e potencialmente modular a atividade do IAP.Qualquer componente pode ser marcado. Por exemplo, a presença de sonda na solução delavagem indica o deslocamento pelo composto de teste. Alternativamente, se o composto deteste for marcado, a presença da sonda no suporte indica o deslocamento.

Num caso, o composto de teste pode ser adicionado primeiro, com incubação elavagem, seguido pela sonda. A ausência de ligação pela sonda pode indicar que ocomposto de teste é ligado ao domínio BIR com uma maior afinidade. Deste modo, se asonda for detectada no suporte, o acoplamento com a falta da ligação do composto de testepode indicar que o composto de teste é capaz de se ligar ao domínio BIR.A modulação é testada pela varredura pela capacidade de um composto de testede modular a atividade do IAP e inclui a combinação de um composto de teste com umdomínio BIR IAP, conforme descrito acima, e pela determinação de uma alteração naatividade biológica do IAP. Conseqüentemente, nesse caso, o composto de teste deve tantose ligar ao domínio BIR (embora isso possa não ser necessário) quanto alterar a suaatividade biológica conforme aqui definido.Os controles positivos e os controles negativos podem ser usados nos ensaios.Todas as amostras de controle e de teste são executadas várias vezes para obterresultados significativamente estatísticos. Após a incubação, todas as amostras sãoremovidas por lavagem do material ligado de modo não-específico e a quantidade de sondaligada é determinada. Por exemplo, onde um radiomarcador é empregado, as amostraspodem ser contadas num contador de cintilação para determinar a quantidade de compostoligado.Tipicamente, os sinais que são detectados no ensaio podem incluir fluorescência,transferência de energia de ressonância, fluorescência resolvida por tempo, radioatividade,polarização por fluorescência, ressonância de plasma ou quimiluminescência e semelhante,dependendo da natureza do marcador. Os marcadores detectáveis úteis para efetuarensaios de varredura nessa invenção incluem um marcador fluorescente tal comofluoresceína, verde oregon, dansila, rodamina, tetrametilrodamina, vermelho texas, Eu3+; ummarcador quimiluminescente, tal como luciferase; marcadores colorimétricos; marcadoresenzimátcos; ou radioisótopos tais como trítio, I125 e semelhantes.As etiquetas de afinidade, os quais podem ser úteis na execução dos ensaios devarredura da presente invenção incluem biotina, poliistidina e semelhantes.SÍNTESE E METODOLOGIAMétodos gerais para a síntese dos compostos da presente invenção estão

mostrados abaixo e são revelados meramente cm o propósito de ilustração e não sãotencionados a serem interpretados como Iimitantes dos processos para fazer os compostospor quaisquer outros métodos. As pessoas versadas na técnica perceberão prontamenteque uma variedade de métodos são disponíveis para o preparo dos compostos da presenteinvenção.

Procedimentos gerais

Vários métodos de preparo de compostos em ponte simetricamente ou não-simetricamente representados pela Fórmula I e pela Fórmula Il podem ser previstos. Osmétodos gerais estão ilustrados nos Esquemas de 1 a 8 e nos Esquemas 17 a 20, enquantoque os exemplos específicos estão ilustrados nos Esquemas 9 a 16 e nos Esquemas 21 a 26.

O Esquema 1 ilustra um procedimento geral para o preparo de compostos em pontede bis-alquinila de Fórmula I. N-PG1-2-hidroxiprolina é desprotonada com NaH e tratada combrometo de propargila para proporcionar o intermediário prolina 1-i. A ativação do ácidocarboxílico de 1-i com agente de acoplamento peptídicos e tratamento com uma aminaprimária ou secundária, e a desproteção de PG1 proporciona o intermediário amida 1-ii. Oacoplamento do peptídeo PG2(H)N(R3)CHCO2H com 1-ii é efetuado pela ativação do ácidocarboxílico de PG2(H)N(R3)CHCO2H com agentes de acoplamento de peptídeo, seguidopela adição de 1-ii para proporcionar a amida completamente protegida, a qual pode seradicionalmente desprotegida em PG2 para proporcionar a amida 1-iii. A ativação do ácidocarboxílico de PG3(R1)N(R2)CHCO2H com agentes de acoplamento peptídico, seguido pelaadição de 1-iii para proporcionar o intermediário amida 1-iv. A porção em ponte bis-alquinil épreparada pelo homo-acoplamento das porções alquino de 1-iv usando um sistemacatalisador apropriado, e a subseqüente desproteção de PG31 para proporcionar o composto 1-v.<formula>formula see original document page 91</formula>

Esquema 1

Conforme ilustrado no Esquema 2, o intermediário 2-i é preparado através de umesquema de acoplamento/desproteção de amida típica. Como tal, a porção de ácidocarboxílico de PG1-cis-2-amino-Pro(PG2)-OH é ativada com reagentes de acoplamento deaminoácidos, tratada com uma amina para proporcionar a amida correspondente, seguidopela remoção de PG1, sob condições reacionais apropriadas, para proporcionar ointermediário 2-i. De um modo similar, PG3(H)N(R3)HCCO2H é acoplado com 2-i, seguidopela desproteção de PG3, para proporcionar o 2-ii. PG4(R1)N(R2)HCCO2H é acoplado com 2-ii para proporcionar 2-iii. A desproteção de PG2 proporciona 2-iv.<formula>formula see orignal document page 92</formula>

Esquema 2

O Esquema 3 ilustra que o composto em ponte de amida de Fórmula I pode serpreparado pelo tratamento de 3-i com um diácido apropriadamente ativado na presença deuma base para produzir 3-ii. A desproteção de PG4 proporciona os compostos de Fórmulageral 3-iii. A ativação do diácido pode incluir o uso dos ésteres ativos, dos cloretos de ácido,dos brometos de ácido, dos ésteres de succinamida, de ésteres de HOBt e do uso de outrosreagentes usados na formação das ligações amida.<formula>formula see original document page 93</formula>

L = -(CH2)r-, -(CH2)r-Y-(CH2)r, -alquil-aril-alquil, -alquil-heteroaril-alquil-, cicloalquil,aril ou heteroaril, em que r é de 1 a 10

Esquema 3

O Esquema 4 ilustra compostos em ponte alquil, os quais podem ser preparadosusando os métodos aqui descritos. O tratamento de 3-i com 0,5 equiv. de uma cadeiaalquílica contendo dois grupos de saída, tais como 1,5-dibromopentano, 1,10-dibromodecano e semelhantes proporciona o intermediário 4-i. Alternativamente, aaminação redutora de 3-i com um dialdeído pode produzir o intermediário 4-i. A desproteçãode PG4 produz os compostos de Fórmula 4-ii.<formula>formula see original document page 94</formula>

Esquema 4

O Esquema 5 ilustra um método em que duas unidades em ponte BIR podem estarem ponte através de uma unidade de ligação acetilênica. O acoplamento de 5-i com 5-iiproporciona uma mistura dos intermediários simetricamente em ponte 5-iii e 5-v, e ointermediário assimétrico 5-iv. A separação de 5-ii, 5-iii e 5-v pode ser produzida pormétodos tais como cromatografia ou recristalização. A desproteção dos intermediários 5-iii,5-iv e 5-v, quer independentemente ou como uma mistura combinada, proporciona oscompostos 5-vi, 5-vii e 5-viii.<formula>formula see original document page 95</formula>

Esquema 5: Acoplamento dos intermediários 5-i e 5-ii.

Um método adicional para o preparo de compostos assimetricamente em ponte éilustrado no Esquema 6. O acoplamento de 5-i com 6-i irá proporcionar uma mistura dosintermediários 6-ii, 5-iii e 6-iii. A separação de 6-ii, 5-iii e 6-iii pode ser efetuada por métodostais como cromatografia ou recristalização. A desproteção de PG4 dos intermediários 6-iiifornece o composto 6-iv.<formula>formula see original document page 96</formula>

Esquema 6: Acoplamento dos intermediários 5-i e 6-i.

Uma estratégia alternativa envolve a ligação de duas unidades de ligação BIR emponte através de um grupo de ligação em ponte bis-amida, tal como ilustrado nos Esquemas7 e 8.

O grupo em ponte monoprotegido HO2C-L-CO2PG5 é ativado com agentes deacoplamento peptídicos e subseqüentemente tratado com o intermediário 3-i para fornecer ointermediário 7-ii. A desproteção de PG5 fornece o intermediário 7-iii. O tratamento de 7-iiicom os agentes acopladores de peptídeo, seguido por 7-iv, fornece 7-v. A desproteção dePG4 e PG400 fornece o composto 7-vi.<formula> formula see orginal document page 97</formula>

L = -(CH2)r-, -(CH2)r-Y-(CH2)r-, aril, heteroaril

Esquema 7: compostos em ponte P3-P3 bis-amida

Um processo similar pode ser aplicado ao preparo de unidades de ligação BIRligadas em ponte assimetricamente, as quais foram ligadas em ponte entre P2 e P3,conforme ilustrado no Esquema 8.

O tratamento com 8-i com um anidrido cíclico, tal como anidrido succínico ouglutárico, fornece o intermediário 8-ii. O tratamento de 8-ii com agentes acopladores deamida seguido por 3-i fornece o intermediário 8-iii. A desproteção de PG4 fornece ocomposto 8-iv.<formula>formula see original document page 98</formula>

L = -(CH2)r-, -(CH2)r-Y-(CH2)r-, aril, heteroaril

Esquema 8: Compostos ligados em ponte bis-amida P2-P3

O Esquema 4 ilustra a síntese do composto 1. Boc-cis-2-hidróxi-L-prolina foi tratadocom NaH em DMF, seguido por brometo de propargila para fornecer o intermediário 9-1. Oacoplamento de amida com (R)-1,2,3,4-tetraidro-1-naftilamina, e a desproteção de Boc comTFA produziu o intermediário 9-2. O acoplamento de amida de Boc-terc-BuGly-OH com 9-2,seguido pela desproteção Boc com TFA forneceu o intermediário 9-3. O acoplamento amidade Boc-MeAIa-OH com o intermediário 9-3 forneceu o intermediário 9-4. O homo-acoplamento dos grupos acetileno de 9-4 usando um catalisador Cul/TMEDA em O2produziu o intermediário 9-5, o qual foi desprotegido usando HCI 4 N em 1,4-dioxano, parafornecer o composto 1*2 HCI.<formula>formula see original document page 99</formula>

Esquema 9

O intermediário 10-6 foi usado no preparo do composto 2 e 3 (ver Esquemas 10 a12). O intermediário 10-5 foi preparado usando um procedimento similar ao descrito para ointermediário 9-4, usando Fmoc-AMPC(2S,4S)-OH no primeiro passo. A remoção do grupode proteção Fmoc usando uma base tal como morfolina 20%, num solvente como THF1forneceu o intermediário 10-6.<formula>formula see original document page 100</formula>

Esquema 10

O tratamento do intermediário 10-6 com 0,5 equiv. De cloreto de sebacoíla em THFforneceu 11-1. A remoção dos grupos protetores Boc usando HCI 4 N em 1,4-dioxanoforneceu o composto 2·2 HCI (Esquema 11).<formula>formula see original document page 101</formula>

Esquema 11

Semelhantemente, o tratamento do intermediário 10-6 com 0,5 equiv. De cloreto detereftaloíla em THF forneceu 12-1. A remoção dos grupos protetores Boc usando HCI 1 Nem 1,4-dioxano forneceu o composto 3*2 HCI (Esquema 12).<formula>formula see original document page 102</formula>

Esquema 12

O Esquema 13 ilustra o preparo dos compostos 4 e 5. Os intermediários 9-4 e 13-1foram acoplados usando um sistema de catalisadores CuCl e TMEDA em acetona, sob umaatmosfera de oxigênio, para fornecer uma mistura dos intermediários 9-5, 13-2 e 13-3. Aseparação por cromatografia em sílica gel forneceu os intermediários individuais. Osintermediários 13-2 e 13-3 foram separadamente desprotegidos por tratamento com HCl 4 Nem 1,4-dioxano para fornecer os compostos 4·2 HCl e 5·2 HCl, respectivamente.<formula>formula see original document page 103</formula><formula>formula see original document page 104</formula>Composto 5

Esquema 13: Síntese dos compostos 4 e 5

O Esquema 14 ilustra a preparação do composto 6. Os intermediários 9-4 e 14-1foram acoplados usando um sistema catalisador CuCI e TMEDA em acetona, sob umaatmosfera de oxigênio. O intermediário 14- foi isolado a partir da mistura resultante porcromatografia em sílica gel. O intermediário 14-2 foi desprotegido por tratamento com HCl 4N em 1m4-dioxano para fornecer o composto 6*2 HCl.<formula>formula see orignal document page 105</formula>

Esquema 14

O Esquema 15 ilustra a preparação dos compostos ligados em ponte P2-P3 7 e 8.O intermediário 15-1 foi tratado com anidrido glutárico para fornecer o intermediário 15-2. Otratamento de 15-2 com HBTU1 HOBt e DIPEA1 seguido pela adição de 10-6 em DMF1forneceu o intermediário 15-3. A remoção do grupo protetor Cbz usando H2 em Pd/Cproduziu o intermediário 15-4. A acilação de 15-4 com Boc-N-MeAIa-OH forneceu ointermediário 15-5, o qual foi Boc desprotegido usando HCI 4 N em 1,4-dioxano, produzindoo composto 7*2 HCI.<formula>formula see original document page 106</formula><formula>formula see original document page 107</formula>

Esquema 15

A remoção do grupo protetor Fmoc do composto 7*2 HCl, usando N-metilpiperazinasuportada em poliestireno em DMF forneceu o composto 8. A remoção do grupo protetorBoc a partir do intermediário 15-3, usando HCI 4 N e, 1,4-dioxano, forneceu o composto9*HCI (ver Esquema 16).<formula>formula see original document page 108</formula>

Esquema 16

Esquema 17 ilustra as sínteses dos compostos ligados em ponte por ligaçõessulfonamida. O tratamento de 3-i com um reagente de cloreto de dissulfonila proporciona ointermediário 17-i. A desproteção de PG4 fornece o composto 17-ii.<formula>formula see original document page 109</formula>

Esquema 17

Semelhantemente, ο tratamento de 3-i com bis-isocianato fornece o intermediário18-i, o qual depois da desproteção de PG4 fornece o composto 18-ii.

<formula>formula see original document page 109</formula>Esquema 18

Os Esquemas 19a e 19b descrevem uma rota alternativa para os compostos 3-iii,17-ii ou 18-ii, onde A=CO e Q=NR4R5. O derivado aminoprolina protegido 19-1 é tratado comLG-L-LG para fornecer o intermediário 19-2, o qual é, a seguir, desprotegido em PG1 parafornecer o intermediário 19-3. O intermediário 19-3 é convertido no intermediário 19-5 poruma seqüência de acoplamento de aminoácido/desproteção conforme descritoanteriormente. Um terceiro passo de acoplamento de aminoácido converte o intermediário19-5 no intermediário 19-6. A desproteção de 19-6 em PG2 produz o intermediário diácido19-7. O tratamento de 19-7 com reagentes de acoplamento de aminoácido, seguido porR4R5NH, produz o intermediário 19-8, o qual na desproteção de PG4 produziu o composto19-9.

<formula>formula see original document page 110</formula>Esquema 19a

<formula>formula see original document page 111</formula>

Esquema 19b

Esse método pode ser aplicado na síntese de bis-prolinoamidas ligadas em ponte,sulfonamidas e uréias. Por exemplo, no caso onde o grupo em ponte inclui uma porção Ar,X-L-X = -NHS(O)2-Ar-S(O)2NH-, NHC(O)-Ar-C(O)NH-, ou -NHC(O)NH-Ar-NHC(O)NH-, -O-CH2ArCH2-O-.

Alternativamente, o derivado de prolina 19-2 pode ser desprotegido em PG2 econvertido no intermediário amida 20-3. Após um procedimento similar conforme descritoacima, 20-3 pode ser convertido no composto 19-9.<formula>formula see original document page 112</formula>

Esquema 20

A síntese do composto 20 está ilustrada no Esquema 21. Éster metílico de N-Boc-cis-4-amino-L-prolina, 21-1, foi tratada com cloreto de tereftaloíla para fornecer ointermediário 21-2, o qual foi adicionalmente desprotegido com TFA para produzir ointermediário 21-3. O intermediário 21-3 foi acoplado com Boc-terc-BuGyl-OH, 21-4, usandoHBTU e HOBt, seguido por desproteção de TFA, para fornecer o intermediário 21-6. Ointermediário 21-6 foi acoplado com Boc-N-MeAIa-OH1 21-7, usando HBTU e HOBt parafornecer o intermediário 21-8. A saponificação do éster metílico usando LiOH forneceu ointermediário 21-9. O acoplamento do intermediário 21-9 com fenetilamina usando HBTU eHOBt forneceu o intermediário 21-10, o qual foi desprotegido usando HCI em 1,4-dioxanopara fornecer o composto 20*2 HCI.<formula>formula see original document page 113</formula>Esquema 21

Este método foi usado para o preparo de uma quantidade de derivados deprolinoamida, tais como os compostos 19 a 24 e 46 a 51. Isso é mostrado no Esquema 22em que o intermediário 21-9 foi acoplado com 2-propilamida, seguido pela desproteção deHCI para produzir o composto 22*2 HCI1 durante o acoplamento do intermediário 21-9 a 1,1-difenilmetilamina, seguido por desproteção com HCI forneceu o composto 24*2 HCI.

Esquema 22

A preparação dos derivados de pirrolidina está descrita no Esquema 23. A porçãoéster do intermediário 21-8 foi reduzida a álcool 23-1, a qual foi subseqüentemente oxidadaem aldeído 23-2. A aminação redutora usando fenetilamina produziu o intermediário 23-4. Aacilação de 23-4 ou com o cloreto de acetila ou com o cloreto de benzoíla forneceu 23-5 e23-6, respectivamente. A desproteção com HCI 1 N em 1,4 dioxano forneceu os compostos25-2 HCI e 27·2 HCI.<formula>formula see original document page 115</formula>

Esquema 23a

<formula>formula see original document page 115</formula>Esquema 23b

A sulfonilação de 23-4 com cloreto de metanossulfonila, seguido pela desproteçãocom HC11 N em 1,4-dioxano forneceu o composto 26*2 HCI.

O intermediário 24-1 forneceu um molde útil para a preparação de compostosligados em ponte de éter. O intermediário 24-1 foi preparado a partir de N-Boc-cis-4-hidróxi-L-prolina e σ,σ'-dibromo-p-xileno conforme descrito abaixo. O acoplamento de amida e adesproteção dos grupos protetores Boc usando TFA forneceu o intermediário 24-3. Doispassos de acoplamento e desproteção de aminoácidos seqüenciais, conforme descritoabaixo, forneceram o composto 29*2 HCI.

<formula>formula see original document page 116</formula><formula>formula see original document page 117</formula>

Esquema 24

O intermediário 10-6 foi ligado em ponte usando cloreto de 1,3-benzenodissulfonilapara fornecer o intermediário 25-1.A desproteção com HCl 4 N em 1,4-dioxano forneceu ocomposto 33 como o seu sal de bis-HCl.

<formula>formula see original document page 117</formula>

Esquema 25

Semelhantemente, o intermediário 10-6 foi ligado em ponte usado diisocianato de1,4-fenileno para fornecer o intermediário 26-1, o qual na desproteção com TFA, forneceu ocomposto 44 como o seu sal de bis-TFA.<formula>formula see original document page 118</formula>

Esquema 26

A preparação do composto 35 é ilustrada no Esquema 27. O intermediário 10-1 foidesprotegido pelo tratamento com piperidina em THF para fornecer o intermediário 27-1. Oacoplamento de 27-1 com Cbz-Gly-OH, seguido pela desproteção Boc1 forneceu ointermediário 27-3.TFA. O acoplamento de 27-3 com Boc-t-BuGly-OH seguido peladesproteção Boc forneceu o intermediário 27-5.TFA. O acoplamento de 27-5*2TFA comBoc-NmeAIa-OH forneceu o intermediário 27-6. A remoção do grupo Cbz usando H2 e Pd/Cproduziu 27-7, o qual foi ligado em ponte usando cloreto de tereftaloíla para fornecer ointermediário 27-8. A desproteção do intermediário 27-8 usando HCI 4 N em 1,4-dioxanoforneceu os compostos 35.2 HCI.<formula>formula see original document page 119</formula>

Esquema 27a<formula> formula see orginal document page 120</formula>

Esquema 27b

Várias aminas quirais foram preparadas a partir de (R)-2-hidróxi-1-feniletilaminaoticamente ativa, 28-1. O intermediário 28-1 foi protegido com Boc para fornecer 28-2. Aporção álcool de 28-2 foi alquilada com vários haletos de alquila para fornecer osintermediários 28-3, 28-4 e 28-5. A desproteção dos intermediários 28-3, 28-4 e 28-5 comHCI produziu as aminas quirais 28-6, 28-7 e 28-8.<formula>formula see original document page 121</formula>

Esquema 28

Os intermediários 28-6, 28-7 e 28-8 foram acoplados com o intermediário 21-9 deum modo similar àquele ilustrado para os compostos 22 e 24 (ver Esquema 22) parafornecer os compostos 63, 64 e 65, respectivamente.

Outras aminas quirais podem ser obtidas comercialmente ou preparadas a partir deuma variedade de métodos incluindo a conversão ou interconversão de cetonas, alcoóis ouazidas em aminas, usando químicas quirais ou aquirais, e a resolução quiral dos isômerosatravés dos métodos conhecidos na técnica, tal como cromatografia ou cristalização.

Por exemplo, o Esquema 29 ilustra a síntese enantiosseletiva de 1,1-difenilmetanaminas preparadas pela adição de ácidos arilborônicos em sulfiniminas quirais,seguido pela hidrólise das sulfinaminas com ácido para fornecer os intermediários de aminaoticamente enriquecidos CARACTERIZADOS pelos intermediários 29-4 e 29-5 (Bolshan, Y.;Batey, R. A., Org. Letters 2005, 7, 1481-1484).<formula>formula see orignal document page 29</formula>

Esquema 29

Os intermediários 29-4 e 29-5 foram acoplados com o intermediário 21-9 de ummodo similar àquele ilustrado para os compostos 22 e 24 (ver Esquema 22) para fornecer oscompostos 66 e 67, respectivamente.

Vários métodos existem para a conversão de tetralonas em 1,2,3,4-tetraidronaftiM-aminas, por exemplo, o método reportado por R. A. Stalker, et al., Tetrahedron 2002, 58,4837, conforme resumido abaixo:

<formula>formula see orignal document page 122</formula>

Essas aminas quirais podem ser incorporadas nos compostos da presente invençãousando métodos similares aos ilustrados nos Esquemas 21 e 22.

Os Esquemas acima são aplicáveis tanto para compostos simétricos quanto paracompostos assimétricos da presente invenção. Os substituintes A1, A, Q, Q11 R11 R100, R21R2001 R3, R300 e semelhantes são conforme aqui definidos. LG é um grupo de saída tal como,por exemplo, Cl, Br, I, OTs, OSu ou OMs.

EXEMPLOS

As seguintes abreviações são usadas do início ao fim:

Boc: t-butoxicarbonil;

CBz: benziloxicarbonil;DCM: diclorometano, CH2CI2;DIPEA: diisopropiletilamina;DMAP: 4-(dimetilamino)piridina;DMF: N,N-dimetilformamida;DTT: ditiotreitol;EDC: cloridrato de 3-dimetilaminopropil-3-etilcarbodiimida;EDTA: ácido etilenodiaminotetracético;Fmoc: N-(9-fluorenilmetoxicarbonil);HBTU: hexafIuorfosfato de 0-(benzotriazol-1-il)-N,N,N',N'-tetrametilurônio;HCI: ácido clorídrico;HOAc: ácido acético;HOBt: 1-hidroxibenzotriazol;HPLC: cromatografia líquida de alta eficiência;LCMS: cromatografia líquida-espectrômetro de massa;MeOH: metanol;

MgSO4: sulfato de magnésio;MS:espectro de massa;NaHCO3: hidrogenocarbonato de sódio;Pd/C: paládio em carbono;TEA: trietilamina;

THF: tetraidrofurano; eTMEDA: Ν,Ν,Ν,Ν-tetrametiletilenodiamina.

MÉTODOS SINTÉTICOS

Síntese do composto 1Passo 1: Intermediário 9-1

NaH (440 mg, 11,0 mmol) foi suspenso em DMF seco (5 mL) sob N2 a 0 0C. Boc-cis-2-hidroxil-L-prolina (1,00 g, 4,0 mmol) foi dissolvida em DMF seco (15 mL) e adicionadagota a gota à suspensão de NaH. A mistura foi deixada agitar a 0 0C por 10 min. Brometo depropargila (560 μΙ_, 5,0 mmol) foi adicionada gota a gota à solução. A mistura foi agitada a 030 °C por 1 h, a seguir, suprimida com H2O. Os conteúdos foram adicionados num funil deseparação juntamente com EtOAc e 10% de ácido cítrico (até pH ~ 2). A camada orgânicafoi coletada, seca e concentrada sob pressão reduzida. Cromatografia flash (sílica,hexanos/THF) produziu o intermediário 9-1 como um óleo límpido. MS (m/z) M + Na = 292.

Passo 2: Intermediário 9-2

Intermediário 9-1 (560 mg, 2,1 mmol), HOBt (444 mg, 2,9 mmol), EDC (563 mg,2,9 mmol) e DIPEA (1,46 mL, 8,4 mmol) foram dissolvidos em diclorometano seco (10 mL)sob N2 e agitados por 10 min em temperatura ambiente. 1,2,3,4-(R)-tetraidronaftil-1-amina(368 μί, 2,5 mmol) foi, a seguir, adicionada e a solução foi deixada agitar por 24 h em TA.Os conteúdos foram, a seguir, adicionados num funil de separação juntamente com EtOAc elavados com ácido cítrico 10% (2x), NaHCO3 saturado (2x) e salmoura. A camada orgânicafoi coletada, seca e concentrada sob pressão reduzida. O produto foi tratado com 5 mL deCH2CI2 50%/TFA por 1 h em temperatura ambiente. Os voláteis foram removidos in vácuo e0 resíduo foi triturado com éter dietílico para fornecer o intermediário 9-2.TFA. MS (m/z) M +1 = 299.Passo três: intermediário 9-3Boc-t-Bu-Gly-OH (484 mg, 2,1 mmol), HOBt (375 mg, 2,4 mmol), HBTU (910 mg,2,4 mmol) e DIPEA (1,20 mL, 7 mmol) foram dissolvidos em DMF seco (10 mL) sob N2 eagitados por 10 min em temperatura ambiente. O intermediário 9-2 (720 mg, 1,75 mmol) foi,a seguir, adicionado e a solução foi deixada agitar por 24 h em temperatura ambiente. Osconteúdos foram, a seguir, adicionados num funil de separação juntamente com EtOAc elavado com ácido cítrico 10% (2x), NaHCO3 saturado (2x) e salmoura. A camada orgânicafoi coletada, seca e concentrada sob pressão reduzida. O produzo resultante foi tratado com10 mL de CH2CI2 50%/TFA por 1 h em temperatura ambiente. Os voláteis foram removidosin vácuo e o resíduo triturado com éter dietílico para fornecer o intermediário 9-3*TFA. MS(m/z) M + 1 =412.Passo 4: Intermediário 9-4Boc-N-Me-AIa-OH (278 mg, 1,37 mmol), HOBt (227 mg, 1,49 mmol), EDC (293 mg,1,49 mmol) e DIPEA (796 μί, 4,6 mmol) foram dissolvidos em diclorometano seco (10 mL)sob N2 e agitados por 10 min em temperatura ambiente. O intermediário 9-3.TFA (600 mg,1,14mmol) foi, a seguir, adicionado e a solução foi deixada agitar por 24 h em temperaturaambiente. EtOAc foi adicionado e a camada orgânica foi lavada com ácido cítrico 10% (2x),NaHCO3 saturado (2x) e salmoura, seca em MgSO4 anidro, filtrada e os voláteis foramremovidos sob pressão reduzida. O produto foi purificado por cromatografia em sílica gel,eluindo com 10 a 100% de hexanos/THF para fornecer o intermediário 9-4. MS (m/z) M + Na= 619.Passo 5: Composto 1Intermediário 9-4 (100 mg, 0,17 mmol), CuCI (25 mg, 0,25 mmol) e Ν,Ν,Ν,Ν-tetrametiletilenodiamina (38 μί, 0,25 mmol) foram suspensos em acetona seca (5 mL) eagitado em temperatura ambiente sob uma atmosfera de O2 por 72 h. EtOAc foi adicionadoe a camada orgânica foi lavada com ácido cítrico 10% (2x), NaHCO3 saturado (2x) esalmoura, seco em MgSO4 anidro, filtrado e os voláteis foram removidos sob pressãoreduzida. O produto foi purificado por cromatografia em sílica gel, eluindo com 10 a 100% dehexanos/THF para fornecer o intermediário 9-5. O tratamento de 9-5 com HCI 4 N em 1m4-dioxano a 0 0C, por 2 h, e a remoção dos voláteis sob pressão reduzida forneceu ocomposto 1 e seu sal de bis-HCI. MS (m/z) M+1=991,7.

Síntese do intermediário 10-6

Passo 1: Intermediário 10-1

Fmoc-AMPC(2S,4S)-OH (900 mg, 2,0 mmol), HBTU (1,14 g, 3,0 mmol) e HOBt(415 mg, 3,0 mmol) foram dissolvidos em DMF seco (10 mL) e tratados com DIPEA (1050μl, 6,0 mmol). A mistura foi agitada por 10 minutos antes da adição de (R)-1,2,3,4-tetraidronaftil-1-amina (330 uL, 2,2 mmol). A reação foi agitada de um dia para o outro antesde ser diluída com acetato de etila (100 mL) e ácido cítrico 10% (50 mL). A camada orgânicafoi separada e lavada com ácido cítrico 10% (2 χ 50 mL), bicarbonato de sódio saturado (3 χ25 mL) e salmoura (1 χ 20 mL) antes de ser seca em sulfato de magnésio anidro, filtrada econcentrada sob pressão reduzida para fornecer 10-1 bruto como um sólido branco. Essematerial foi 95% puro por LCMS e foi avançado para o próximo passo sem purificaçãoadicional.

Passo 2: Intermediário 10-2

O intermediário 10-1 foi dissolvido em cloreto de metileno (10 mL) e tratado com

TFA (10 mL). A solução foi agitada em temperatura ambiente por 2 h antes dos voláteisserem removidos sob pressão reduzida. O óleo resultante foi agitado em éter dietílico (25mL) para fornecer um sólido marrom claro, o qual foi filtrado e lavado com éter dietílico (2 χ5 mL) para fornecer o composto 10-2.TFA como um sólido marrom claro (1,17 g).

Passo 3: Intermediário 10-3

Boc-t-BuGly-OH (460 mg, 2,0 mmol), HBTU (760 mg, 2,0 mmol) e HOBt (270 mg,2,0 mmol) e DIPEA (765 uL, 7,5 mmol) foram dissolvidos em DMF seco (10 mL) e a reaçãofoi agitada em temperatura ambiente por 10 minutos antes de o intermediário 10-2 (867 mg,1,5 mmol) ser adicionado. A mistura foi agitada de um dia para o outro antes de ser diluídacom acetato de etila (200 mL) e ácido cítrico 10% (50 mL). A camada orgânica foi separadae lavada com ácido cítrico 10% (2 χ 50 mL), bicarbonato de sódio saturado (3 χ 25 mL) esalmoura (1 χ 20 mL) antes de ser seca em sulfato de magnésio anidro, filtrada econcentrada sob pressão reduzida para fornecer o 10-3 bruto como um sólido branco (920mg, > de 95% puro por LCMS) e avançou para o próximo passo sem purificação adicional.

Passo 4: Intermediário 10-4

O intermediário 10-3 foi dissolvido em cloreto de metileno (10 mL) e tratado comTFA (10 mL). A solução foi agitada em temperatura ambiente por 2 h antes dos voláteisserem removidos sob pressão reduzida. O óleo resultante foi agitado com éter dietílico (20mL) para fornecer um sólido marrom claro o qual foi filtrado, lavado com éter dietílico (2x5mL) para fornecer o composto 10-4*TFA como um sólido branco.

Passo 5: Intermediário 10-5

Boc-MeAIa-OH (308 mg, 1,52 mmol), HBTU (450 mg, 1,91 mmol) e HOBt (260 mg,1,91 mmol) foram dissolvidos em DMF seco (10 mL). DIPEA (886 uL, 5,0 mmol) foiadicionado e a reação foi agitada em temperatura ambiente por 10 minutos antes dointermediário 10-4 (900 mg, 1,27 mmol) ser adicionado. A mistura foi agitada de um dia parao outro antes de ser diluída com acetato de etila (200 mL) e ácido cítrico 10% (50 mL). Acamada orgânica foi separada e lavada com ácido cítrico 10% (2 χ 50 mL), bicarbonato desódio saturado (3 χ 25 mL) e salmoura (1 χ 20 mL) antes de ser seca em sulfato demagnésio anidro, filtrada e concentrada sob pressão reduzida para fornecer o 10-5 brutocomo um sólido branco (0,87 mg, 95,5% puro por LCMS) e avançou para o próximo passosem purificação adicional.

Passo 6: Intermediário 10-6

O intermediário 10-5 foi dissolvido em morfolina 20%/THF (10 mL) e a solução foiagitada em temperatura ambiente por 16 h. Os voláteis foram removidos sob pressãoreduzida para fornecer o composto 10-6 como um sólido branco. Purificação adicional porcromatografia em sílica gel forneceu 10-6, o qual foi 95% puro por LCMS (MS (m/z) M + 1 =617,4.

Síntese do composto 2

Passo 1: Intermediário 11-1

10-6 bruto (200 mg, 0,251 mmol) foi dissolvido em THF (5 mL) e esfriado numbanho de gelo. DIPEA (50 uL, 0,265 mmol) e cloreto de sebacoíla (26 uL, 0,125 mmol)foram adicionados e a reação foi agitada por 4 h em temperatura ambiente antes de serdiluída com acetato de etila (20 mL) e bicarbonato de sódio saturado. A camada orgânica foiseparada, lavada com salmoura, seca em sulfato de magnésio anidro, filtrada e o solventefoi removido sob pressão reduzida. O sólido bruto resultante foi purificado por cromatografiaem sílica gel, eluindo com um gradiente de hexano/THF 10 a 100% para fornecer 11-1 comoum sólido branco (55 mg).

Passo 2: Composto 2

O intermediário 11-1 (50 mg) foi tratado com HCI 4 N em 1,4-dioxano (3 mL) eagitado por 3 h. Os voláteis foram removidos sob pressão reduzida e o sólido resultante foitriturado com éter dietílico (3x5 mL). O sólido resultante foi seco sob pressão reduzida parafornecer o composto 2·2 HCI como um sólido branco sujo (30 mg). MS (m/z) (M+2)/2=541,4.

Composto 3

Passo 1: Intermediário 12-1

10-6 bruto (200 mg, 0,251 mmol) foi dissolvido em THF (5 mL) e esfriado até 4 0Cnum banho de gelo. DIPEA (50 uL, 0,275 mmol) foi adicionado. Cloreto de tereftaloíla (26uL, 0,125 mmol) foi adicionado e a reação foi agitada por 16 horas antes de ser diluída comacetato de etila (20 mL) e bicarbonato de sódio saturado. A camada orgânica foi separada,lavada com salmoura, seca em sulfato de magnésio anidro, filtrada e o solvente foi removidosob pressão reduzida. O sólido bruto resultante foi purificado por cromatografia em sílica gel,eluindo com um gradiente de hexanos/THF 25 a 100% para fornecer 12-1 como um sólidobranco (90 mg).

Passo 2: Composto 3

O intermediário 12-1 (90 mg) foi tratado com HCI 4 N em 1,4-dioxano (3 ml_) eagitado por 3 h. Os voláteis foram removidos sob pressão reduzida e o sólido resultante foitriturado com éter dietílico, filtrado e lavado com éter dietílico (3x5 mL). O sólido resultantefoi seco sob pressão reduzida para fornecer o composto 3*2 HCI como um sólido brancosujo (40 mg). MS (m/z) (M+2)/2=523,4.

Compostos 4e 5

O intermediário 9-4 (130 mg, 0,21 mmol) e o intermediário 13-1 (130 mg, 0,22mmol), CuCI (60 mg, 0,6 mmol) e tetrametiletilenodiamina (90 μΙ_, 0,6 mmol) foramsuspensos em acetona seca (15 mL) e agitados em temperatura ambiente sob umaatmosfera de O2 por 120 h. EtOAc foi adicionado e a camada orgânica foi lavada com ácidocítrico 10% (2x), NaHCO3 saturado (2x) e salmoura, seca em Mg2SO4, filtrada e concentradasob pressão reduzida. O produto foi purificado por cromatografia em sílica gel, eluindo comhexanos/THF de 10 a 100% para fornecer os intermediários 9-5, 13-2 e 13-3. Osintermediários 13-2 e 13-3 foram independentemente tratados com HCI 4 N em 1,4-dioxano.Os voláteis foram removidos e os sólidos resultantes foram triturados com éter dietílico,filtrados e lavados com éter dietílico para fornecer os compostos 4 e 5, respectivamente,como seus sais de bis-HCI.

Composto 4-2HCI: MS (m/s) M+1 =993,5.Composto 5-2HCI: MS (m/z) M+1 =995,6.Composto 6

O intermediário 9-4 (250 mg, 0,400 mmol), o intermediário 14-1 (560 mg, 0,900mmol), CuCI (267 mg, 2,7 mmol) e tetrametiletilenodiamina (405 μΙ_, 2,7 mmol) foramsuspensos em acetona seca (10 mL) e agitados em temperatura ambiente sob umaatmosfera de O2 por 72 h. Celite foi adicionado e a mistura foi filtrada através de um blocode Celite. EtOAc foi adicionado ao filtrado e a camada orgânica resultante foi lavada comácido cítrico 10% (2x), NaHCO3 saturado (2x) e salmoura, seca em Mg2SO4, filtrada econcentrada sob pressão reduzida. O produto foi purificado por cromatografia em sílica gel,eluindo com hexanos/THF de 10 a 100% para fornecer o intermediário 14-2. O intermediário14-2 foi tratado com HCI 4 N em 1,4-dioxano. Os voláteis foram removidos e os sólidosresultantes foram triturados com éter dietílico, filtrados e lavados com éter dietílico parafornecer o composto 6 como seu sal de bis- HCI. MS (m/s) (M+2)/2=514,4.Composto 7

Passo 1:O intermediário 15-1 (1,0 g, 1,2 mmol), anidrido glutárico (190 mg, 1,7 mmol) eDIPEA (836 μΙ, 4,8 mmol) foram dissolvidos em diclorometano (20 mL) sob N2 a 0 0C. Umaquantidade catalítica de DMAP foi adicionada e a solução foi agitada por 30 min em gelo e24 h em temperatura ambiente. EtOAc foi adicionado ao filtrado e a camada orgânica5 resultante foi lavada com ácido cítrico 10% (2x), NaHCO3 saturado (2x) e salmoura, seca emMgSO4 anidro, filtrada e concentrada sob pressão reduzida para fornecer o intermediário 15-2 como um sólido branco.

Passo 2:

O intermediário 15-2 (420 mg, 0,5 mmol), HOBt (85 mg, 0,63 mmol), HBTU (22210 mg, 0,60 mmol) e DIPEA (313 μL, 1,8 mmol) foram dissolvidos em DMF seco (5 mL) sob N2e agitados por 10 min em temperatura ambiente. O intermediário 10-6 (250 mg, 0,45 mmol)foi adicionado e a solução foi deixada agitar por 24 h em temperatura ambiente. EtOAc foiadicionado e a camada orgânica resultante foi lavada com ácido cítrico 10% (2x), NaHCO3saturado (2x) e salmoura, seca em MgSO4 anidro, filtrada e concentrada sob pressãoreduzida. O produto foi purificado por cromatografia em sílica gel, eluindo com hexanos/THFde 10 a 100% para fornecer o intermediário 15-3.

Passo 3:

O intermediário 15-3 (240 mg, 0,17 mmol), Pd/C 10% em peso (50 mg, H2O 50%)foram suspensos em MeOH (10 mL) e agitados por 25 h em temperatura ambiente sobatmosfera de H2 (1 atm). Os conteúdos foram, a seguir, filtrados em celite e lavados comMeOH. O filtrado foi concentrado sob pressão reduzida para fornecer o intermediário 15-4como um sólido branco.

Passo 4:

BocNMe-AIa-OH (57 mg, 0,28 mmol), HOBt (44 mg, 0,33 mmol), HBTU (116 mg,0,31 mmol) e DIPEA (90 DL, 0,52 mmol) foram dissolvidos em DMF seco (5 mL) sob N2 etratados com o intermediário 15-4 (160 mg, 0,13 mmol). Depois de agitar por 24 h emtemperatura ambiente, EtOAc foi adicionado e a camada orgânica resultante foi lavada comácido cítrico 10% (2x), NaHCO3 saturado (2x) e salmoura, seca em MgSO4 anidro, filtrada econcentrada sob pressão reduzida. O produto foi purificado por cromatografia em sílica gel,eluindo com hexanos/THF de 10 a 100% para fornecer o intermediário 15-5. O intermediário15-5 foi agitado com HCI 4 N em 1,4-dioxano por 1 h em temperatura ambiente. Os voláteisforam removidos sob pressão reduzida para fornecer o composto 7 como seu sal de HCI.MS (m/s) (M+2)/2= 618,0.

Composto 8:

O composto 7»HCI (100 mg, 0,08 mmol) é dissolvido em DMF (1 mL) e adicionadonuma suspensão de CH2CI2 (5 mL) de resina de piperazonilmetilpoliestireno (0,86 mmol/g,356 mg, 0,3 mmol). Depois de agitar em temperatura ambiente por 48 h, 200 mg adicionaisde resina foram adicionados. A mistura foi agitada por 20 dias em temperatura ambienteantes de ser filtrada, lavando com MeOH. Os voláteis foram removidos sob pressãoreduzida para fornecer o composto 8 como um sólido branco. MS (m/z) M + 1 = 1012.

Composto 9:

O intermediário 15-3 (10 mg) foi tratado com HCI 4 N em 1,4-dioxano por 1 h. Osvoláteis foram removidos sob pressão reduzida para fornecer o composto 9 como seu sal deHCI. MS (m/s) (M + 2)12 = 642.

Os compostos 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 39, 40, 41, 42, 43, 52, 55, 56, 57 e 58foram preparados de modo similar àquele descrito para o composto 2, em que o cloreto desufonila correspondente ou diácido ativado foi substituído por cloreto de sebacoíla no Passo1. A caracterização por MS desses compostos está resumida na Tabela 1.

O Composto 17 foi preparado de modo similar àquele descrito para o composto 29usando 1,2,3,4-(R)-tetraidronaftil-1-amina no lugar de fenetilamida. MS (m/s) (M + 2)/2 =510,4.

Composto 18:

O intermediário 21-8 foi agitado em HCI 4 N em 1,4-dioxano por 2 h. Os voláteisforam removidos in vácuo e o resíduo foi triturado com éter dietílico para fornecer ocomposto 18*2HCI como um sólido branco. MS (m/z) M + 1 = 815,4.

Os compostos 19, 21, 22, 23, 24, 31, 32, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 54, 59, 60, 61, 63,64, 65 e 67 foram preparados de modo similar àquele descrito para o composto 20, em quefenetilamina foi substituída pela amina correspondente no Passo 6. A caracterização por MSdesses compostos está resumida na Tabela 1.

Composto 20

Passo 1: intermediário 21-2

Numa solução de éster N-Boc-cis-4-amino-L-prolinometílico, 21-1, (10,0 g, 35,61mmol) em CH2CI2 esfriada até 0 °C foram seqüencialmente adicionados TEA (14,88 mL,106,80 mmol), DMAP (10 mg) e cloreto de tereftaloíla (3,61 g, 17,80 mmol) e a reação foiagitada de um dia para o outro em temperatura ambiente. Água e acetato de etila foramadicionados, a camada orgânica foi separada, lavada com ácido cítrico 10% (2x), NaHCO3aquoso e salmoura, seca em MgSO4 anidro, filtrada e concentrada in vácuo. A purificaçãopor cromatografia em sílica gel forneceu o intermediário 21-2 como um sólido branco.

Passo 2: Intermediário 21-3*2TFA

O intermediário 21-2 (4,80 g, 7,76 mmol) foi dissolvido numa mistura de CH2CI2 (40mL) e TFA (40 mL) a 0 °C. A solução foi agitada por 4 h em temperatura ambiente. Osvoláteis foram removidos sob pressão reduzida e o resíduo foi triturado com éter dietílicopara fornecer o intermediário 21-3*2TFA como um sólido branco. MS (m/z) M + 1 = 419,2.

Passo 3: Intermediário 21-5Numa solução de Boc-a-tBuGly-OH, 21-4, (3,95 g, 17,07 mmol) em DMF esfriadaaté 0 0C foram seqüencialmente adicionados DIPEA (13,5 mL, 77,6 mmol), HOBt (2,62 g,19,4 mmol) e HBTU (7,36 g, 19,4 mmol). Depois de agitar por 10 minutos, o intermediário21-3*2TFA (5,02 g, 7,76 mmol) foi adicionado e a mistura reacional foi agitada de um diapara o outro em temperatura ambiente. Água e acetato de etila foram adicionados e acamada orgânica foi separada, lavada com ácido cítrico 10%, NaHCO3 aquoso e salmoura,seca em MgSO4 anidro, filtrada e concentrada in vácuo. A purificação por cromatografia emsílica gel forneceu o intermediário 21-5 como um sólido branco.

Passo 4: Intermediário 21-6*2TFA

O intermediário 21-5 (6,55 g, 7,76 mmol) foi dissolvido numa mistura de CH2CI2 (40mL) e TFA (40 mL) a 0 0C. A solução foi agitada por 3 h em temperatura ambiente. Osvoláteis foram removidos sob pressão reduzida e o resíduo foi triturado com éter dietílicopara fornecer o intermediário 21-6*2TFA como um sólido branco. MS (m/z) M + 1 = 645,4.

Passo 4: Intermediário 21-8

Numa solução de Boc-NMe-AIa-OH, 21-7, (3,15 g, 15,51 mmol) em DMF esfriadaaté 0 0C foram seqüencialmente adicionados DIPEA (12,3 mL, 70,5 mmol), HOBt (2,38 g,17,63 mmol) e HBTU (6,69 g, 17,63 mmol). Depois de agitar por 10 minutos o intermediário21-6 2TFA (6,15 g, 7,05 mmol) foi adicionado e a mistura reacional foi agitada de um diapara o outro em temperatura ambiente. Água e acetato de etila foram adicionados, acamada orgânica foi separada, lavada com ácido cítrico 10%, NaHCO3 aquoso e salmoura,seca em MgSO4 anidro, filtrada e concentrada in vácuo. A purificação por cromatografia emsílica gel forneceu o intermediário 21-8 como um sólido branco.

Passo 5: Intermediário 21-9

Numa solução do intermediário 21-8 (6,20 g, 6,11 mmol) em THF (80 mL) e MeOH(8 mL) esfriada até 0 0C foi adicionado LiOH aquoso 1 N (30,5 mL) e a reação foi agitada deum dia para o outro em temperatura ambiente. O pH foi ajustado para 6 com ácido cítrico10% e acetato de etila foi adicionado, a camada orgânica foi separada, lavada comsalmoura, seca em MgSO4 anidro, filtrada e concentrada in vácuo para fornecer ointermediário 21-9 como um sólido branco.

Passo 6: Intermediário 21-10

Numa solução do intermediário 21-9 (150 mg, 0,15 mmol) em DMF esfriada até 00C foram seqüencialmente adicionados DIPEA (265 uL, 1,52 mmol), HOBt (51 mg, 0,38mmol) e HBTU (144 mg, 0,38 mmol). Depois de agitar por 10 minutos, fenetilamina (42 uL,0,33 mmol) foi adicionada e a mistura reacional foi agitada de um dia para o outro emtemperatura ambiente. Água e acetato de etila foram adicionados, a camada orgânica foiseparada, lavada com ácido cítrico 10%, NaHCO3 aquoso e salmoura, seca em MgSO4anidro, filtrada e concentrada in vácuo. A purificação por cromatografia em sílica gelforneceu o intermediário 21-10 como um sólido branco.

Passo 7: Composto 20*2HCl

HCl 4N em 1,4-dioxano (3,0 mL) foi adicionado ao intermediário 21-10 (145 mg,0,12 mmol) e a solução foi agitada por 1 h a 0 0C. Os voláteis foram removidos sob pressãoreduzida e o resíduo foi triturado com éter dietílico para fornecer o composto 20«2HCI comoum sólido branco. MS (m/z) (M + 2)/2 = 497,6.

Composto 22*2HCl

Passo 1: Intermediário 22-1

Numa solução do intermediário 21-9 (75 mg, 0,08 mmol) em DMF esfriada até 0 0Cforam seqüencialmente adicionados DIPEA (135 uL, 0,76 mmol), HOBt (26 mg, 0,19 mmol)e HBTU (72 mg, 0,19 mmol). Depois de agitar por 10 minutos, isopropilamina (14 uL, 0,17mmol) foi adicionada e a mistura reacional foi agitada de um dia para o outro emtemperatura ambiente. Água e acetato de etila foram adicionados, a camada orgânica foiseparada, lavada com ácido cítrico 10%, NaHCO3 aquoso e salmoura, seca em MgSO4anidro, filtrada e concentrada in vácuo. A purificação por cromatografia em sílica gelforneceu o intermediário 22-1 como um sólido branco.

Passo 2: Composto 22*2HCl

HCl 4N em 1,4-dioxano (2,0 mL) foi adicionado ao intermediário 22-1 (58 mg, 0,05mmol) e a solução foi agitada por 2 h a 0 0C. Os voláteis foram removidos sob pressãoreduzida e o resíduo foi triturado com éter dietílico para fornecer o composto 22«2HCI comoum sólido branco. MS (m/z) (M + 2)/2 = 435,4.

Composto 24*2HCl

Passo 1: Intermediário 22-2

Numa solução do intermediário 21-9 (600 mg, 0,61 mmol) em DMF esfriada até 0°C foram seqüencialmente adicionados DIPEA (1,0 mL, 6,08 mmol), HOBt (205 mg, 1,52mmol) e HBTU (576 mg, 1,52 mmol). Depois de agitar por 10 minutos, aminodifenilmetano(230 uL, 1,34 mmol) foi adicionado e a mistura reacional foi agitada de um dia para o outroem temperatura ambiente. Água e acetato de etila foram adicionados, a camada orgânica foiseparada, lavada com ácido cítrico 10%, NaHCO3 aquoso e salmoura, seca em MgSO4anidro, filtrada e concentrada in vácuo. A purificação por cromatografia em sílica gelforneceu o intermediário 22-2 como um sólido branco.

Passo 2: Composto 24*2HCl

HCl 4N em 1,4-dioxano (1,9 mL) foi adicionado ao intermediário 22-2 (660 mg, 0,50mmol) e a solução foi agitada por 1 h a 0 0C. Os voláteis foram removidos sob pressãoreduzida e o resíduo foi triturado com éter dietílico para fornecer o composto 24*2HCI comoum sólido branco. MS (m/z) (M + 2)/2 = 435,4.

Composto 25Passo 1: Intermediário 23-1

Numa solução do intermediário 21-8 (1,10 g, 1,08 mmol) em THF esfriado até 0°Cfoi adicionado boroidreto de lítio (118 mg, 4,86 mmol) e a mistura reacional foi agitada por 3h em temperatura ambiente. Acetato de etila e ácido cítrico 10% foram adicionados. Acamada orgânica foi separada, lavada com NaHCO3 aquoso e salmoura, seca em MgSO4anidro, filtrada e concentrada in vácuo. A purificação por cromatografia em sílica gelforneceu o intermediário 23-1 como um sólido branco. MS (m/z) M + 1 = 959,6.

Passo 2: Intermediário 23-2

Numa solução do intermediário 23-1 (284 mg, 0,29 mmol) em CH2CI2 foi adicionadoperiodinano Dess Martin (314 mg, 0,74 mmol) e a reação foi agitada por 5 h em temperaturaambiente. NaHCO3 aquoso foi adicionado, a camada orgânica foi separada, lavada comsalmoura, seca em MgSO4 anidro, filtrada e concentrada in vácuo. A purificação porcromatografia em sílica gel forneceu o intermediário 23-2 como um sólido branco.

Passo 3: Intermediário 23-4

Numa solução do intermediário 23-2 (282 mg, 0,29 mmol) em CH2Cl2 foi adicionadafenetilamina (82 uL, 0,65 mmol). Depois de agitar por 30 min em temperatura ambiente,triacetoxiboroidreto de sódio (280 mg, 1,32 mmol) foi adicionado e a mistura reacional foiagitada por 2 h. NaHCO3 aquoso foi adicionado, a camada orgânica foi separada, lavadacom salmoura, seca em MgSO4 anidro, filtrada e concentrada in vácuo. A purificação porcromatografia em sílica gel forneceu o intermediário 23-4 como um sólido branco. MS (m/z)M + 1 = 1165,8.

Passo 4: Intermediário 23-5

Numa solução do intermediário 23-4 (100 mg, 0,08 mmol) em CH2CI2 esfriada até 0°C foram seqüencialmente adicionados trietilamina (60 uL, 0,43 mmol) e cloreto de acetila(14 uL, 0,19 mmol). A reação foi agitada por 2 h em temperatura ambiente antes de água eacetato de etila serem adicionados. A camada orgânica foi separada, lavada com ácidocítrico 10%, NaHCO3 aquoso e salmoura, seca em MgSO4 anidro, filtrada e concentrada invácuo. A purificação por cromatografia em sílica gel forneceu o intermediário 23-5 como umsólido branco.

Passo 5: Composto 25*2HCl

HCI 4 N em 1,4-dioxano (3 mL) foi adicionado ao intermediário 23-5 (80 mg, 0,06mmol) e a solução foi agitada por 1 h em temperatura ambiente. Os voláteis foramremovidos sob pressão reduzida e o resíduo foi triturado com éter dietílico para fornecer ocomposto 25-2HCI como um sólido branco. MS (m/z) (M + 2)12 = 525,6.

Composto 26*2HCl

Passo 1: Intermediário 23-5

Numa solução do intermediário 23-4 (100 mg, 0,08 mmol) em CH2CI2 esfriada até 0°C foram seqüencialmente adicionados TEA (60 uL, 0,43 mmol) e cloreto demetanossulfonila (15 uL, 0,19 mmol) e a reação foi agitada por 2 h em temperaturaambiente. Água e acetato de etila foram adicionados, a camada orgânica foi separada,lavada com ácido cítrico 10%, NaHCO3 aquoso e salmoura, seca em MgSO4 anidro, filtradae concentrada in vácuo. A purificação por cromatografia em sílica gel forneceu ointermediário 23-5 como um sólido branco.

Passo 2: 26-2HCI

HCI 4 N em 1,4-dioxano (3 ml_) foi adicionado ao intermediário 23-5 (79 mg, 0,06mmol) e a solução foi agitada por 1 h em temperatura ambiente. Os voláteis foramremovidos sob pressão reduzida e o resíduo foi triturado com éter dietílico para fornecer ocomposto 25*2HCI como um sólido branco. MS (m/z) (M + 2)12 = 561,6.

Os Compostos 27, 28 e 30 foram preparados de modo semelhante àquele descritopara o composto 26, em que para o composto 27 e 28 cloreto de acetila e cloreto debenzoíla, respectivamente, foram usados no lugar de cloreto de metanossulfonila.

Composto 27- MS (m/z) (M+2)/2=587,6.

Composto 28- MS (m/z) (M+2)/2=543,6.

Composto 30- MS (m/z) (M+2)/2=579,6.

Composto 29

Passo 1: Intermediário 24-1

Numa solução 1,0 M de NaHMDS em THF (21,6 mL, 21,6 mmol) esfriada até 0 0Cfoi lentamente adicionada uma solução de N-Boc-cis-4-hidróxi-L-prolina (2,50 g, 10,8 mmol)em DMF. Depois de agitar por 20 minutos a 0 0C, α,α'-dibromo-p-xileno (1,37 g, 5,0 mmol)foi adicionado e a mistura reacional foi agitada de um dia para o outro em temperaturaambiente. Água e acetato de etila foram adicionados, a camada orgânica foi separada, secaem MgSO4, filtrada e concentrada in vácuo. A purificação por cromatografia em sílica gelforneceu o intermediário 24-1 como um sólido branco.

Passo 2: Intermediário 24-2

Numa solução do intermediário 24-1 (200 mg, 0,35 mmol) em DMF esfriada até 0°C foram seqüencialmente adicionados DIPEA (365 uL, 2,1 mmol), HOBt (132 mg, 0,98mmol) e HBTU (345 mg, 0,91 mmol). Depois de agitar por 10 minutos, fenetilamina (107 uL,0,85 mmol) foi adicionado e a mistura reacional foi agitada de um dia para o outro emtemperatura ambiente. Água e acetato de etila foram adicionados, a camada orgânica foiseparada, lavada com ácido cítrico 10%, NaHCO3 aquoso e salmoura, seca em MgSO4anidro, filtrada e concentrada in vácuo. A purificação por cromatografia em sílica gelforneceu o intermediário 24-2 como um sólido branco.

Passo 3: Intermediário 24-3*2TFA

O intermediário 24-2 (260 mg, 0,35 mmol) foi dissolvido numa mistura de CH2CI2 (3mL) e TFA (3 mL). A solução foi agitada por 1 h em temperatura ambiente. Os voláteis foramremovidos sob pressão reduzida e o resíduo foi triturado com éter dietílico para fornecer ointermediário 24-3*2TFA como um sólido branco. MS (m/z) M + 1 = 571,4.

Passo 4: Intermediário 24-4

Numa solução de Boc-Ci-tBuGIy-OH (256 mg, 1,10 mmol) em DMF esfriada até 0 0Cforam seqüencialmente adicionados DIPEA (361 uL, 2,10 mmol), HOBt (175 mg, 1,3 mmol)e HBTU (455 mg, 1,2 mmol). Depois de agitar por 10 minutos, o intermediário 24-3 2TFA(230 mg, 0,46 mmol) foi adicionado e a mistura reacional foi agitada de um dia para o outroem temperatura ambiente. Água e acetato de etila foram adicionados, a camada orgânica foiseparada, lavada com ácido cítrico 10%, NaHCO3 aquoso e salmoura, seca em MgSO4anidro, filtrada e concentrada in vácuo. A purificação por cromatografia em sílica gelforneceu o intermediário 24-2 como um sólido branco.

Passo 5: Intermediário 24-5*2TFA

O intermediário 24-4 (458 mg, 0,46 mmol) foi dissolvido numa mistura de CH2CI2 (3mL) e TFA (3 mL). A solução foi agitada por 30 min em temperatura ambiente. Os voláteisforam removidos sob pressão reduzida e o resíduo foi triturado com éter dietílico parafornecer o intermediário 24-5*2TFA como um sólido branco. MS (m/z) M + 1 = 797,6.

Passo 6: Intermediário 24-6

Numa solução de Boc-NMe-AIa-OH (119 mg, 0,58 mmol) em DMF esfriada até 0 0Cforam seqüencialmente adicionados DIPEA (209 uL, 1,2 mmol), HOBt (91 mg, 0,67 mmol) eHBTU (236 mg, 0,62 mmol). Depois de agitar por 10 minutos, o intermediário 24-5 2TFA(250 mg, 0,24 mmol) foi adicionado e a mistura reacional foi agitada de um dia para o outroem temperatura ambiente. Água e acetato de etila foram adicionados, a camada orgânica foiseparada, lavada com ácido cítrico 10%, NaHCO3 aquoso e salmoura, seca em MgSO4anidro, filtrada e concentrada in vácuo. A purificação por cromatografia em sílica gelforneceu o intermediário 24-6 como um sólido branco.

Passo 7: Composto 29*2HCI

HCI 4 N em 1,4-dioxano (1,0 mL) foi adicionado ao intermediário 24-6 (280 mg, 0,24mmol) e a solução foi agitada por 1 h a 0 0C. Os voláteis foram removidos sob pressãoreduzida e o resíduo foi triturado com éter dietílico para fornecer o composto 29*2HCI comoum sólido branco. MS (m/z) M + 1 = 967,6.

Composto 33

Passo 1: Intermediário 25-1

Numa solução do intermediário 10-6 (258 mg, 0,50 mmol) em DMF foramseqüencialmente adicionados DIPEA (217 uL, 1,25 mmol) e cloreto de 1,3-benzenodissulfonila (69 mg, 0,25 mmol) e a reação foi agitada de um dia para o outro emtemperatura ambiente. Água e acetato de etila foram adicionados, a camada orgânica foiseparada, lavada com ácido cítrico 10%, NaHCO3 aquoso e salmoura, seca em MgSO4anidro, filtrada e concentrada in vácuo. A purificação por cromatografia em sílica gelforneceu o intermediário 25-1 como um sólido branco.

Passo 2: Composto 33-2HCI

HCI 4 N em 1,4-dioxano (2 mL) foi adicionado ao intermediário 25-1 (143 mg, 0,11mmol) e a solução foi agitada por 1 h a 0 °C. Os voláteis foram removidos sob pressãoreduzida e o resíduo foi triturado com éter dietílico para fornecer o composto 33*2HCI comoum sólido branco. MS (m/z) (M + 2)12 = 559,5.

Composto 34:

O Composto 34 foi preparado de modo similar ao composto 20, em que éster N-Boc-cis-4-amino-L-prolinometílico foi substituído com éster N-Boc-trans-4-amino-L-prolinometílico no passo 1 e fenetilamina foi substituída com 1,2,3,4-(R)-tetraidronaftil-1-amina no Passo 6. MS (m/z) M + 1 = 1045,8.

Composto 35*2HCI

Passo 1: Intermediário 27-1

O intermediário 10-1 (3,90 g, 6,68 mmol) foi dissolvido em THF (100 mL) e tratadocom piperidina (5,0 mL, 68,2 mmol). A solução foi agitada por 16 h em temperaturaambiente antes dos voláteis serem removidos sob pressão reduzida para fornecer um semi-sólido o qual foi suspenso em MeOH (5 mL) e filtrado. O filtrado foi concentrado, suspensoem MeOH (5 mL), filtrado e o filtrado foi concentrado para fornecer o intermediário 27-1como um semi-sólido (80% puro).

Passo 2: Intermediário 27-2

Numa solução de carbobenziloxiglicina (699 mg, 3,34 mmol) em DMF esfriada até 0°C foram seqüencialmente adicionados DIPEA (2,40 mL, 13,9 mmol), HOBt (488 mg, 3,61mmol) e HBTU (1,37 mg, 3,61 mmol). Depois de agitar por 10 minutos, o intermediário 27-1(1,00 g, 2,78 mmol) foi adicionado e a mistura reacional foi agitada de um dia para o outroem temperatura ambiente. Água e acetato de etila foram adicionados, a camada orgânica foiseparada, lavada com ácido cítrico 10%, NaHCO3 aquoso e salmoura, seca em MgSO4anidro, filtrada e concentrada in vácuo. A purificação por cromatografia em sílica gelforneceu o intermediário 27-2 como um sólido branco.

Passo 3: Intermediário 27-3-TFA

O intermediário 27-4 (1,42 g, 2,58 mmol) foi dissolvido numa mistura de CH2CI2 (15mL) e TFA (15 mL). A solução foi agitada por 1 h em temperatura ambiente. Os voláteisforam removidos sob pressão reduzida e o resíduo foi triturado com éter dietílico parafornecer o intermediário 27-3*TFA como um sólido branco. MS (m/z) M + 1 = 451,4.

Passo 4: Intermediário 27-4

Numa solução de Boc-a-tBuGly-OH (668 mg, 2,89 mmol) em DMF esfriada até 0 °Cforam seqüencialmente adicionados DIPEA (2,1 mL_, 12,0 mmol), HOBt (488 mg, 3,61 mmol)e HBTU (1,37 mg, 3,61 mmol). Depois de agitar por 10 minutos, o intermediário 27-3*TFA(1,36 g, 2,41 mmol) foi adicionado e a mistura reacional foi agitada de um dia para o outroem temperatura ambiente. Água e acetato de etila foram adicionados, a camada orgânica foiseparada, lavada com ácido cítrico 10%, NaHCO3 aquoso e salmoura, seca em MgSO4anidro, filtrada e concentrada in vácuo. A purificação por cromatografia em sílica gelforneceu o intermediáriò 27-4 como um sólido branco.

Passo 5: Intermediário 27-5*TFA

O intermediário 27-4 (1,38 g, 2,08 mmol) foi dissolvido numa mistura de DCM (10mL) e TFA (10 mL_). A solução foi agitada por 4 h em temperatura ambiente. Os voláteisforam removidos sob pressão reduzida e o resíduo foi triturado com éter dietílico parafornecer o intermediário 27-5»TFA como um sólido branco. MS (m/z) M + 1 = 564,4.

Passo 6: Intermediário 27-6

Numa solução de Boc-NMe-AIa-OH (902 mg, 4,44 mmol) em DMF esfriada até 0 0Cforam seqüencialmente adicionados DIPEA (3,50 mL, 20,2 mmol), HOBt (682 mg, 5,05mmol) e HBTU (1,92 mg, 5,05 mmol). Depois de agitar por 10 minutos, o intermediário 27-5*TFA (1,14 g, 1,68 mmol) foi adicionado e a mistura reacional foi agitada de um dia para oòutro em temperatura ambiente. Água e acetato de etila foram adicionados, a camadaorgânica foi separada, lavada com ácido cítrico 10%, NaHCO3 aquoso e salmoura, seca emMgSO4 anidro, filtrada e concentrada in vácuo. A purificação por cromatografia em sílica gelforneceu o intermediário 27-6 como um sólido branco.

Passo 7: Intermediário 27-7

Numa solução do intermediário 27-6 (925 mg, 1,24 mmol) em MeOH anidro (25 mL)e agitada sob N2 foi adicionado Pd/C 10% (125 mg). A mistura reacional foi purgada com H2e agitada por 1 h. A reação foi, a seguir, filtrada em celite e o filtrado foi concentrado invácuo. A purificação por cromatografia em sílica gel forneceu o intermediário 27-7 como umsólido branco. MS (m/z) M + 1 = 615,4.

Passo 8: Intermediário 27-8

Numa solução do intermediário 27-7 (150 mg, 0,25 mmol) em DCM esfriada até 0°C foram seqüencialmente adicionados TEA (100 uL, 0,73 mmol) e cloreto de tereftaloíla(25,0 mg, 0,12 mmol) e a reação foi agitada de um dia para o outro em temperaturaambiente. Água e acetato de etila foram adicionados, a camada orgânica foi separada,lavada com ácido cítrico 10%, NaHCO3 aquoso e salmoura, seca em MgSO4 anidro, filtradae concentrada in vácuo. A purificação por cromatografia em sílica gel forneceu ointermediário 27-8 como um sólido branco.

Passo 9: Composto 35*2HCI

HCI 4 N em 1,4-dioxano (2 mL) foi adicionado ao intermediário 27-8 (166 mg, 0,12mmol) e a solução foi agitada por 1 h em temperatura ambiente. Os voláteis foramremovidos sob pressão reduzida e o resíduo foi triturado com éter dietílico para fornecer ocomposto 35.2HCI como um sólido branco. MS (m/z)(M + 2)/2 = 580,6.

Os Compostos 36, 37 e 38 foram preparados a partir do intermediário 27-7, demodo similar àquele descrito para o composto 35, usando cloreto de oxalila, dicloreto deisoftaloíla e cloreto de 4,4'-bifenildicarbonila, respectivamente, no lugar do cloreto de ftaloílano Passo 8.

Composto 36- MS (m/z) (M+2)/2=542,6.Composto 37- MS (m/z) (M+2)/2=580,6.Composto 38- MS (m/z) (M+2)/2=618,6.

Composto 44

Passo 1: Intermediário 26-1

Numa solução do intermediário 10-6 (150 mg, 0,25 mmol) em THF foramseqüencialmente adicionados TEA (112 uL, 0,81 mmol) e diisocianato de 1,4-fenileno (43mg, 0,27 mmol) e a reação foi agitada em temperatura ambiente por 4 h. Os voláteis foramremovidos sob pressão reduzida e o resíduo foi purificado por cromatografia em sílica gelpara fornecer o intermediário 26-1 como um sólido branco.

Passo 2: Composto 44.2TFA

O intermediário 26-1 (148 mg, 0,12 mmol) foi dissolvido numa mistura de CH2CI2(1,5 ml_) e TFA (0,4 mL). A solução foi agitada por 1 h em temperatura ambiente. Os voláteisforam removidos sob pressão reduzida e o resíduo foi triturado com éter dietílico parafornecer o composto 44.2TFA como um sólido branco. MS (m/z)(M + 2)/2 = 538,4.

Composto 62:

O intermediário 21-9 foi tratado com HCI 4 N em 1,4-dioxano por 2 h. Os voláteisforam removidos sob pressão reduzida e o resíduo foi triturado com éter dietílico parafornecer os compostos 62.HCI como um sólido branco sujo. MS (m/z) M + 1 = 787,6.

Intermediário 28-6

Passo 1: Intermediário 28-2

(S)-(+)-2-fenilglicinol, 28-1 (1,64 g, 12,0 mmol) foi dissolvido em CH2Cl2 (90 mL).Boc2O (2,84 g, 13,0 mmol) e DMAP (34 mg, 0,02 mmol) foram adicionados e agitados por 1hora em temperatura ambiente. A mistura reacional foi diluída com éter dietílico (200 mL) eHCI 1 N (100 mL). A camada orgânica foi lavada com HCI 1 M (2 χ 100 mL), seca emMgSO4 anidro, filtrada e os voláteis foram removidos sob pressão reduzida. O resíduoresultante foi purificado por cromatografia em sílica gel, fornecendo um óleo para fornecer ointermediário 28-2 como um sólido branco (2,7 g, 95% de rendimento). MS (m/z) M + 1 =238,2.

Passo 2: Intermediário 28-6O intermediário 28-2 (420 mg, 1,77 mmol) e iodometano (330 μL, 5,29 mmol) foramdissolvidos em DMF anidro (25 mL). A mistura foi esfriada até 0!C1, e a seguir NaH(dispersão de 60% em óleo, 103 mg, 2,58 mmol) foi adicionado. Depois de 2 horas, amistura reacional foi diluída com acetato de etila (200 mL) e HCI 1 M (100 mL). A camadaorgânica foi lavada com HCI 1 M (2 χ 100 mL), seca em MgSO4 anidro, filtrada e os voláteisforam removidos sob pressão reduzida. O resíduo resultante foi purificado por cromatografiaem sílica gel para fornecer o intermediário 28-3 como um óleo. O intermediário 28-3 foi, aseguir, esfriado até 0!C e tratado com HCI 4 M em 1,-dioxano (5 mL). Depois de agitar por90 minutos, os voláteis foram removidos sob pressão reduzida e o sólido resultante foilavado com éter dietílico para fornecer o intermediário 28-6 HCI como um sólido branco (237mg, 69% de rendimento). MS (m/z) M + 1 = 152,2.

Um procedimento similar foi usado para o preparo dos intermediários 28-7 e 28-8,em que iodeto de metila foi substituído com brometo de benzila para o intermediário 28-7 eiodoacetamida para o intermediário 28-8.Composto 66

Composto 66

Passo 1: Intermediário 29-1

Numa solução de benzaldeído (840 uL, 8,25 mmol) em CH2CI2 (150 mL) foiadicionada (S)-2-metilpropano-2-sulfinamida (1,0 g, 8,25 mmol) e etóxido de titânio (3,5 mL,16,50 mmol). A mistura reacional foi submetida a refluxo por 5 horas e esfriada até atemperatura ambiente. Água foi adicionada e a mistura foi vigorosamente agitada, a seguirfiltrada em celite. A camada aquosa foi extraída com CH2CI2 (3x) e os extratos orgânicoscombinados foram lavados com salmoura, secos em MgSO4, filtrados e concentrados invácuo. A purificação por cromatografia em sílica gel forneceu o intermediário 29-1 como umóleo amarelo.

Passo 2: Intermediário 29-2

Numa suspensão de (S,E)-N-benzilideno-2-metilpropano-2-sulfinamida, 29-11 (110mg, 0,526 mmol), [Rh(cod)(CH3CN)2]BF4 (20,1 mg, 0,053 mmol), ácido para-tolilborônico(143 mg, 1,052 mmol) e Et3N (147 μΙ_, 1,052 mmol) em dioxano (1,2 mL) foi adicionada H2O(2,4 mL). A suspensão marrom resultante foi agitada por 2 dias em temperatura ambiente. Acamada aquosa foi extraída com EtOAc (3x) e os extratos orgânicos combinados foramlavados com salmoura, secos em MgSO4 anidro, filtrados e concentrados in vácuo.Purificação por cromatografia em sílica gel forneceu o intermediário 29-2 como um sólidobranco d. e. = 81%).Passo 3: Intermediário 29-4

Numa solução de (S)-2-metil-N-((R)-fenil(p-tolil)metil)propano-2-sulfinamida (82 mg,0,27 mmol), 29-2, em MeOH (270 μΙ_) foi adicionado HCI 4N em 1,4-dioxano 4 (140 pL, 0,54mmol). A solução foi agitada por 1 h em temperatura ambiente, a seguir Et2O foi adicionadoe um precipitado branco foi formado. O precipitado foi filtrado e lavado com Et2O parafornecer o intermediário 29-4*HCI como um sólido branco.Passo 4: Intermediário 29-5Numa solução do intermediário 21-9 (122 mg, 0,123 mmol) em DMF esfriada até 00C foram seqüencialmente adicionados DIPEA (193 μΙ_, 1,107 mmol), HOBt (42 mg, 0,308mmol) e HBTU (117 mg, 0,308 mmol). Depois de agitar por 10 minutos, o intermediário 29-4*HCI (59 mg, 0,253 mmol) foi adicionado e a mistura reacional foi agitada de um dia para ooutro em temperatura ambiente. Água e acetato de etila foram adicionados, a camadaorgânica foi separada, lavada com ácido cítrico 10%, NaHCO3 aquoso e salmoura, seca emMgSO4 anidro, filtrada e concentrada in vácuo. A purificação por cromatografia em sílica gelforneceu o intermediário 66-1 como um sólido rosa.Passo 5: Composto 66*2HCIHCI 4 N em 1,4-dioxano (1 mL) foi adicionado ao intermediário 66-1 (135 mg, 0,12mmol). A solução foi agitada por 1 h a 0 0C. Os voláteis foram removidos sob pressãoreduzida e o resíduo foi triturado com éter dietílico para fornecer o composto 6*2HCI comoum sólido branco. MS (m/z) (M + 2)12 = 573,6.Os compostos representativos da presente invenção foram preparados de acordocom os procedimentos acima e estão ilustrados na Tabela 1:TABELA 1<table>table see original document page 140</column></row><table><table>table see original document page 141</column></row><table><table>table see original document page 142</column></row><table><table>table see original document page 143</column></row><table><table>table see original document page 144</column></row><table><table>table see original document page 145</column></row><table><table>table see original document page 146</column></row><table><table>table see original document page 147</column></row><table><table>table see original document page 148</column></row><table><table>table see original document page 149</column></row><table><table>table see original document page 0</column></row><table><table>table see original document page 151</column></row><table><table>table see original document page 152</column></row><table><table>table see original document page 153</column></row><table><table>table see original document page 154</column></row><table><table>table see original document page 155</column></row><table><table>table see original document page 156</column></row><table><table>table see original document page 157</column></row><table><table>table see original document page 158</column></row><table><table>table see original document page 159</column></row><table><table>table see original document page 160</column></row><table><table>table see original document page 161</column></row><table><table>table see original document page 162</column></row><table>

Os compostos representativos da presente invenção, os quais podem serpreparados pela simples modificação dos procedimentos acima, estão ilustrados nasTabelas 2 a 6:TABELA 2

<formula>formula see original document page 163</formula>

Em que AeA são ambos CH2 ou ambos C(O)1 e

<formula>formula see original document page 163</formula>TABELA 3

M1-BG-M2

Fórmula 1A

BG é<formula>formula see original document page 165</formula>

<table>table see original document page 165</column></row><table><table>table see original document page 166</column></row><table><table>table see original document page 167</column></row><table>TABELA 4M1-BG-M2Fórmula 1BBG é<formula>formula see original document page 168</formula>

<table>table see original document page 168</column></row><table><table>table see original document page 169</column></row><table><table>table see original document page 170</column></row><table><formula>formula see original document page 171</formula>

R1, R2, R3, R100, R200 e R300 são definidos como aqui acima,-X-L-X'- é escolhido de:<formula>formula see original document page 172</formula>

R4 e R400 são Η;

R5 e R500 são escolhidos de:<formula>formula see original document page 173</formula>

Em que as porções aril podem ser substituídas por R10 e em que R10 e R10' sãoindependentemente definidos como R10 aqui acima, e em que o alquil pode ser aindasubstituído por R6 conforme definido aqui acima.

Tabela 6

<formula>formula see original document page 173</formula>R11 R21 R31 R1001 R200 e R300 são definidos conforme aqui acima,-X-L-X'- é escolhido de:

<formula>formula see orignal document page 174</formula>

R4 e R400 são H;

R5 e R500 são escolhidos de:<formula>formula see original document page 175</formula>

Em que as porções aril podem ser substituídas por R e em que R e R sãoindependentemente definidos como R10 aqui acima, e em que o alquil pode ser aindasubstituído por R6 conforme definido aqui acima.

Ensaios

Construções moleculares para expressão

Os aminoácidos 246-497 da seqüência codificadora GST-XIAP BIR3RING:XIAPclonados em PGEX2T1 via BamHI e AVA I. O plasmídeo foi transformado em DH5a de E.coli para uso na expressão e purificação da proteína.

A seqüência codificadora GST-XIAP BIR3RING:XIAP dos aminoácidos 251-363clonados em PGex4T3 via BamHI e Xhol. O plasmídeo foi transformado em DH5a de E. colipara uso na expressão e purificação da proteína.

A seqüência codificadora GST-HIAP1 (clAP-2) BIR3:HIAP1 dos aminoácidos 236-349 clonados em PGex4T3 via BamHI e Xhol. O plasmídeo foi transformado em DH5a deE. coli para uso na expressão e purificação da proteína.A seqüência codificadora GST-Iigante BIR 2 BIR3Ring: XIAP dos aminoácidos 93-497 clonados em PGex4T1 via BamHI e Xhol. Os aminoácidos 93 - 497 foram amplificadosa partir do XIAP de comprimento total em pGex4t3 usando os iniciadores:TTAATAG G ATCCATCAACG G CTTTTATC e G CTG CATGTGTGTCAG AGG, usandocondições de PCR padrões. O fragmento de PCR foi clonado TA em pCR-2.1 (Invitrogen). OIigante BIR 2 BIR 3Ring foi subclonado em pGex4T1 por digestão de BamHI/Xhol. Oplasmídeo foi transformado em DH5a de E. coli para uso na expressão e purificação daproteína.

XIAP humano de comprimento total, plasmídeo AEG número 23. Aminoácidos 1 -497 da seqüência codificadora XIAP clonados no vetor de fusão GST1 PGEX4T1 via ossítios de restrição BamHI e Xho I. O plasmídeo foi transformado em DH5a de E. coli parauso na purificação da proteína.

GST-XIAP Iigante BIR 2: Seqüência codificadora de XIAP Iigante BIR2 dosaminoácidos 93 a 497 clonados em pGex4T3 via BamHI e Xhol. O plasmídeo foitransformado em DH5a de E. coli para uso na expressão e na purificação da proteína.

Expressão e purificação das proteínas recombinantes

A. Expressão das proteínas recombinantes

Proteínas marcadas glutationa S-transferase (GST) foram expressas em cepas deEscherichia coli DH5-alfa. Para a expressão de XIAP de comprimento total, domínios XIAP-BIR individuais ou combinações desses, clAP-1, clAP-2 e bactérias Livin transformadasforam cultivadas de um dia para o outro a 37 0C em meio de Caldo Luria (LB) suplementadocom 50 ug/mL de ampicilina. A cultura de um dia para o outro foi, a seguir, diluída 25 vezesem meio suplementado com ampicilina LB fresco e as bactérias cresceram até uma A600 =0,6, a seguir foram induzidas com isopropil-D-1-tiogalactopiranosídeo 1 mM por 3 horas. Naindução, as células foram centrifugadas a 5000 RPM por 10 minutos e o meio foi removido.Cada pélete obtido a partir de uma cultura de 1 litro recebeu 10 mL de tampão de Iise (Tris-HCI 50 mM, NaCI 200 mM, DTT 1 mM, PMSF 1 mM, 2 mg/mL de lisosima, 100 Dg/mL)), foiincubada a 4 0C com suave agitação. Depois de 20 minutos de incubação, a suspensãocelular foi colocada a -80 0C de um dia para o outro ou até necessário.

B. Purificação das proteínas recombinantes

Para a purificação das proteínas recombinantes, o Iisato celular induzido por IPTGfoi descongelado em vórtex e, a seguir, rompido por congelamento repentino em nitrogêniolíquido duas vezes com vórtèx depois de cada descongelamento. As células foramadicionalmente rompidas pela passagem do extrato quatro vezes através de um dispositivorompedor Bio-Neb Cell (GIas-CoI) ajustado a 100 psi com gás nitrogênio. O extrato foiclarificado por centrifugação a 4 0C a 15000 RPM num rotor Beckman SS-34 por 30 minutos.O sobrenadante resultante foi, a seguir, misturado com 2 mL de pérolas de glutationa-Sepharose (Pharmacia) por 500 mL de cultura celular (por 1000 mL de cultura para XIAP decomprimento total) por 1 hora a 4 0C. A seguir, as pérolas foram lavadas 3 vezes com Salinatamponada com Tris 1X (TBS) para remover proteínas não-ligadas. As proteínas retidasforam eluídas com 2 lavagens de 2 mL de TRIS 50 mM pH 8,0 contendo 10 mM deglutãtiona reduzida. As proteínas eluídas foram reunidas e precipitadas com 604 g/litro desulfato de amônio e o pélete resultante foi ressuspenso num tampão apropriado. Conformejulgado por SDS-PAGE, as proteínas purificadas foram > do que 90% puras. A concentraçãode proteína de proteínas purificadas foi determinada a partir do método Bradford.

As proteínas His-tag foram expressas na cepa de E. coli em células AD494 de E.coli usando um constructo pet28ACPP32. A fração de proteína solúvel foi preparadaconforme descrito acima. Para a purificação protéica, o sobrenadante foi purificado porcromatografia de afinidade usando Sepharose-quelante (Pharmacia) carregada com NiSO4de acordo com as instruções do fabricante. A pureza da proteína eluída foi > do que 90%conforme determinado por SDS-PAGE. A concentração protéica das proteínas purificadasfoi determinada pelo ensaio de Bradford.

Síntese da sonda fluorescente P1

Uma sonda de peptídeo fluorescente, Fmoc-Ala-Val-Pro-Phe-Tyr(t-Bu)-Leu-Pro-Gly(t-Bu)-Gly-OH foi preparada usando a química Fmoc padrão na resina de cloreto de 2-clorotritila (Int. J. Pept. Prot. Res. 38:555-561, 1991). A clivagem da resina foi efetuadausando 20% de ácido acético em diclorometano (DCM)1 o que ainda deixou a cadeia lateralbloqueada. O ácido carboxílico C-terminal protegido foi acoplado com 4'-(aminometil)fluoresceína (Molecular Probes, A-1351; Eugene, Oreg.) usando excesso dediisopropilcarbodiimida (DIC) em dimetilformamida (DMF) em temperatura ambiente e foipurificado por cromatografia em sílica gel (10% de metanol em DCM). O grupo protetorFmoc N-terminal foi removido usando piperidina (20%) em DMF, e foi purificado porcromatografia em sílica gel (20% de metanol em DCM, HOAc 0,5%). Finalmente, os gruposprotetores da cadeia lateral de t-butila foram removidos usando ácido trifluoracético 95%contendo 2,5% de água e 2,5% de triisopropilsilano para fornecer a sonda P1 (> de 95% depureza, HPLC).

Sonda P2<formula>formula see original document page 178</formula>

Ensaio de ligação

Ensaio de competição baseado em polarização de fluorescência

Para todos os ensaios, a fluorescência e a polarização da fluorescência foi avaliadausando um instrumento Tecan Polarion com o filtro de excitação ajustado em 485 nm e como filtro de emissão ajustado em 525 nm. Pra cada ensaio, a concentração da proteína alvofoi primeiramente estabelecida por titulação da proteína selecionada para produzir um sinaldose-resposta linear quando incubado sozinho na presença da sonda fluorescente P1 ouP2. Ao estabelecer essas condições, a potência dos compostos (IC50) e a seletividade foramavaliadas na presença de uma quantidade definida fixa de proteína alvo e de sondafluorescente e uma diluição em série de 10 pontos nos compostos selecionados. Para cadacurva IC50, os ensaios foram executados como se segue: 25 uL/poço de composto diluídoem tampão MES 50 mM pH 65 foram adicionados numa placa de 96 poços preta, a seguir25 uL/poço de albumina de soro bovino (BSA) a 0,5 mg/mL em MES 50 mM pH 6,5. A auto-fluorescência para cada composto foi primeiramente avaliada pela efetuação e uma leiturado composto/solução BSA sozinho. A seguir 25 uL de sonda fluoresceína diluída em MES50 mM contendo 0,05 mg/mL de BSA foram adicionados e uma leitura para detectar asupressão do sinal de fluoresceína foi feita. Finalmente, 25 uL/poço da proteína alvo oucontrole (GST-BIRs) diluída na concentração apropriada em MES 50 mM contendo 0,05mg/mL de BSA foram adicionados e a polarização da fluorescência foi avaliada.

Determinação da IC50 e das constantes inibitóriasPara cada ensaio as unidades de polarização-fluorescência relativas foramesboçadas contra as concentrações finais do composto e a IC50 foi calculada usando osoftware Grad pad prism e/ou Cambridge soft. O valor de ki foi derivado do valor de IC50calculado conforme descrito acima e de acordo com a equação descrita em Nikolovska- Coleska1 Z. (2004) Anal Biochem 332, 261-273.

Ensaio de competição de polarização de fluorescência

O kit de vários compostos no ensaio BIR2-BIR3-ring FP1 usando a sonda P2, foideterminado conforme descrito acima. Por exemplo, o composto 3 apresentou um ki menordo que 100 nM.

Ensaio de desrepressão do ligante-BIR2-BIR3-RING ou XIAP do comprimentototal da caspase-3 ou Iigante BIR2

Para determinar a atividade relativa do composto selecionado contra XIAP-Bir2, nósestabelecemos um ensaio in vitro onde a caspase-3 foi inibida pelas proteínas de fusão GSTdo Iigante XIAP-Bir2, do Ligante XIAP Bir2-Bir3-RING ou do XIAP de comprimento total.Caspase 3 (0,125 uL) e a proteína de fusão GST-XIAP 12,25-34,25 nM (concentração final)(GST-Bir2, GST-Bir2Bir3RING ou XIAP de comprimento total) foram co-incubados comdiluições em série do composto (200 uM - 5 pM). A atividade da caspase 3 foi medida pelasuperposição de 25 uL de uma solução DEVD-AMC 0,4 mM. O volume reacional final foi de100 uL. Todas as diluições foram efetuadas no tampão caspase (Hepes 50 mM pH 7,4,NaCI 100 mM, sacarose 10%, EDTA 1 mM, DTT 10 mM, CHAPS 0,1% (Stennicke, H.R., eSalvesen, G.S. (1997). Biochemical characteristics of caspase-3, -6, -7, and -8. J. Biol.Chem. 272, 25719-25723).

O AMC fluorescente liberado da hidrólise da caspase 3 do substrato foi medida numespectrofotômetro TECAN na excitação de 360 nm e na emissão de 444 nm, depois de 15minutos de incubação em temperatura ambiente. Os valores de IC50 foram calculados nummodelo de competição de um ou dois sítios usando GraphPad v. 4.0, usando os valores defluorescência depois de 15 minutos de incubação esboçados contra a concentração IogIOdo composto.

Foi demonstrado que os valores de IC50 dos compostos preferidos se correlacionamcom os valores de EC50 contra SKOV3 e foram tipicamente inferiores a 1 uM.

Ensaio livre de células

Ensaio de desrepressão da caspase usando extratos celulares (apoptossoma)100 ug de extrato S100 de células 293 e 0,25 uM a 2 uM de proteína de fusão GST-XIAP (XIAP-Bir3RING, XIAP-Bir2Bir3RING ou XIAP de comprimento total) foram co-incubados com diluições em série do composto (40 uM - 5 pM). AS caspases presentes nosextratos foram ativadas pela adição de dATP 1 mM, ALLN 0,1 mM, citocromo C 133 ug(concentrações finais) e pela incubação a 37 0C por 25 minutos. Todas as reações ediluições usaram tampão S100 (Pipes 50 mM pH 7,0, KCI 50 mM, EGTA 0,5 mM pH 8,0,MgCI2 2 mM suplementado com diluições 1/1000 de 2 mg/mL de citocalisina B, 2 mg/mL dequimiostatina, leupeptina, pepstatina, antipaína, PMSF 0,1 M, DTT 1 Μ). O volume reacionalfinal foi de 30 uL. A atividade da caspase-3 foi medida pela sobreposição de 30 uL de umasolução DEVD-AMC 0,4 mM. A clivagem de AMC liberado foi medida numespectrofotômetro TECAN numa excitação a 360 nm e numa emissão de 444 nm, num ciclocinético de 1 hora com leituras tomadas a cada 5 minutos. A atividade da caspase foicalculada como V0 de fluorescência AMC/seg. A desrepressão da caspase pelos nossoscompostos foi comparada com o extrato totalmente ativado e com o extrato ativadoreprimido pela presença da proteína de fusão XIAP.

Foi demonstrado que os valores de IC50 dos compostos preferidos sãocorrelacionados com os valores de EC50 contra SKOV3s e foram tipicamente inferiores a 1uM.

Cultura de células e ensaios de morte celular

A. Cultura celular

Células cancerígenas MDA-MD-231 (mama) e H460 (pulmão) foram cultivadas emmeio RPM11640 suplementado com FBS 10% e 100 unidades/mL de penicilina eestreptomicina.

B. Ensaios

Ensaios de sobrevivência foram efetuados em várias linhagens celulares incluindocélulas MDA-MB-231, SKOV3, H460, PC3, HCT-116 e SW480. AS células foram semeadasem placas de 96 poços numa densidade respectiva de 5000 e 2000 células por poço eincubadas a 37 °C na presença de 5% de CO2 por 24 horas. Os compostos selecionadosforam diluídos no meio em várias concentrações variando de 0,01 uM até 100 uM. Oscompostos diluídos foram adicionados nas células MDA-MB-231. Para as células MDA-MB-231 SKOV3, H460, PC3, HCT-116 e SW480, os compostos foram adicionados ou sozinhosou na presença de 1 a 3 ng/mL de TRAIL. Depois de 72 horas a viabilidade celular foiavaliada por ensaios baseados em MTS. Uma solução do sal interno de [3-(4,5-dimetiltiazol-2-il)-5-(3-carboximetoxifenil)-2-(4-sulfofenil)-2H-tetrazólio; MTS] foi adicionada nas célulaspor um período de 1 a 4 horas. Na incubação, a quantidade de MTS convertido foi avaliadausando um espectrofotômetro Tecan ajustado a 570 nm.

As células MDA-MB-231, SKOV3 e PC3 foram tratadas com os compostosselecionados da presente invenção e foram consideradas como tendo EC50 de 100 nM oumenos. Quando as linhagens celulares acima foram tratadas com os compostos da presenteinvenção na presença de TRAIL, eles foram demonstrados como apresentando EC50 de 50nM ou menos.

Ensaio MTT de sobrevivênciaUm dia antes do tratamento com o composto, de 2000 a 4000 células por poçoforam plaqueadas numa placa de formato de 96 poços tratada com cultura tecidual com 100uL de meio e incubadas a 37 °C 5% de CO2. No dia do tratamento do composto, oscompostos foram diluídos com o meio de cultura celular até uma concentração estoque detrabalho de 2X 100 uL de composto diluído foram, a seguir, adicionados a cada poço. Aplaca tratada foi incubada por 72 h a 37 °C, 5% de CO2. Na incubação, a viabilidade celularfoi avaliada como seguindo 20 uL de reagente MTT em 5 mg/mL foram adicionados porpoço na placa celular. A placa foi incubada por 2 h a 37 °C na presença de 5% de CO2. Osobrenadante foi, a seguir, removido da placa e 100 uL de isopropanol foram adicionados. Aabsorvância foi medida num espectrofotômetro TECAN a 570 nm. A porcentagem deviabilidade foi expressa na porcentagem de sinal obtido com células não-tratadas.

Conforme visto na Tabela 7, os compostos representados ha Tabela 1 aqui acimageralmente apresentaram valores de EC50 contra as células MDA-MB-231 e SKOV-3 de <de 1ΠΜ. Os compostos selecionados tinham uma EC50 de < de 50 nM.

TABELA 7

<table>table see original document page 181</column></row><table>Composto MDA-MB231 EC50 (nM) SKOV-3 EC50 (nM)26 B27 B28 A29 B30 C31 B32 B33 A34 B35 B36 C37 C38 B39 A40 A41 A42 A43 B44 A45 D46 B47 A48 B49 A50 B51 B52 A53 D54 D55 A56 A57 A58 B59 B<table>table see original document page 183</column></row><table>

A - EC5O menor do que 50 nM

B - EC50 menor do que 250 nM

C - EC50 maior do que 1000 nM

D - EC50 maior do que 1000 nM

Ensaio de apoptose: Medição da atividade da caspase 3 das célulascultivadas

Um dia antes do tratamento, 10.000 células por poço foram plaqueadas numa placade 96 poços tratada com cultura de cartilagem com 100 μΙ_ de meio. No dia do tratamento docomposto, os compostos foram diluídos com meio de cultura celular até uma concentraçãoestoque de trabalho de 2x e 100 uL do composto diluído foram adicionados a cada poço e aplaca foi incubada por 5 h a 37 0C na presença de 5% de CO2. Na incubação, a placa foilavada duas vezes com 200 uL de tampão salina tamponado com fosfato TRIS (TBS). Ascélulas foram Iisadas com 50 uL de tampão de ensaio de caspase (20 mM Tris-HCI pH 7,4,NP-40 0,1%, Chaps 0,1%, DTT 1mM, EDTA 0,1 mM, PMSF 0,1 mM, quimostatina 2 mg/mL,leupeptina, pepstatina, atipapina), a seguir incubadas a 4 0C com agitação por 30 minutos.45 uL de tampão de ensaio de caspase e 5 uL de Ac-DEVD-AMC em 1 mg/mL foramadicionados a cada poço, a placa foi agitada e incubada por 16 h a 37 0C. A quantidade deAMC liberada medida num espectrofotômetro TECAN com um filtro de excitação e emissãoajustado em 360 nm e 444 nm. A porcentagem da atividade da caspase-3 foi expressa emcomparação com o sinal obtido com as células não-tratadas.

Foi demonstrado que os valores de IC50 dos compostos preferidos se correlacionamcom os valores de EC50 contra SKOV3s e foram tipicamente inferiores a 1 uM.

Bioquímica celular:

A. Detecção de XIAP e de PARP/Caspase-3/Caspase-9

A detecção da XIAP e PARP expressa na célula foi feita por western blotting. Ascélulas foram plaqueadas a 300 000 células/poço em poços de 60 mm (paca de 6 poços).No dia seguinte as células foram tratadas com o composto selecionado na concentraçãoindicada. 24 horas mais tarde as células foram tripsinizadas, peletizadas por centrifugação a1800 rpm a 4 0C. O pélete resultante foi rinsado duas vezes com TBS gelado. O pélete finallavado de células foi o Iisado com 250 uL de tampão de Iise (NP-40, glicerol, 1% de umcoquetel inibidor da protease (Sigma)), colocado a 4 0C por 25 min com agitação suave. Oextrato de células foi centrifugado a 4 0C por 10 min a 10000 rpm. Tanto o sobrenadantequanto o pélete foram mantidos para análise de western botting conforme descrito abaixo. Apartir do sobrenadante, o conteúdo de proteína foi avaliado e cerca de 50 ug de proteínaforam fracionadas num SDS-PAGE 10%. Os péletes foram lavados com o tampão de Iise eressuspensos em 50 uL de tampão Lamelli 1x, levados à ebulição e fracionados em SDS-PAGE. Na eletroforese, cada gel foi eletrotransferido numa membrana de nitrocelulose a 0,6A por 2 horas. Os sítios de membrana não-específicos foram bloqueados por 1 hora comleite desnatado 5% em TBST (TBS contendo 0,1% (v/v) de Tween 20) em temperaturaambiente. Para a imunodetecção de proteína, as membranas foram incubadas de um diapara o outro com anticorpos primários suscitados contra o clone XIAP 48 obtido da Becton-Dickinson) ou PARP: obtidos do sinal celular ou dos anticorpos primários da caspase-3 ouda caspase-9 foram incubados a 4 0C com agitação nas diluições como se segue:

Clone XIAP 80 (Becton-Dickinson).....1/2500

PARP(CeIlSignaI).........................1/2500

Caspase 3 (Sigma).........................1/1500

Caspase 9 (Upstate)........................1/1000

Na incubação de um dia para o outro, as membranas receberam três lavagens demin em TBST, a seguir foram incubadas por 1 hora em temperatura ambiente napresença de um anticorpo secundário acoplado com a HRP-enzima (Chemicon) e diluído em1/5 000. Na incubação, cada membrana foi lavada três vezes com TBST e as bandasimunorreativas foram detectadas pela adição de um substrato Iuminescente (kit ECLAmeresham) e pela captura do sinal num filme de raio-X a partir de vários tempos deexposição.

Foi demonstrado que certos compostos exemplificados induzem a clivagem dePARP próximo das concentrações as quais se correlacionam com os valores de EC50 contraSKOV3 e foram tipicamente inferiores a 1 uM.

Modelo de fibra oca

Os modelos de fibra oca in vivo foram usados para demonstrar a eficácia in vivodos compostos selecionados contra as linhagens celulares selecionadas como uma terapiade agente individualmente ou em combinação com os agentes citotóxicos selecionados. No30 dia 1, as linhagens celulares selecionadas foram cultivadas e a fibra preenchida numadensidade celular de cerca de 40.000 células/fibra. No dia da operação (dia 4), três fibrasforam implantadas subcutaneamente em 28 a 35 camundongos machos Nu/Nu CD-1. Nodia 5, os camundongos começaram a receber injeções diárias através da via subcutânea doveículo de controle ou do veículo contendo o composto selecionado na concentraçãoapropriada e/ou injeção do agente citotóxico através da via intraperitoneal. Aos 3 a 7 dias detratamentos de fármacos consecutivos, os animais foram sacrificados, cada fibra foiremovida e a viabilidade metabólica das células remanescentes foi determinada pelo ensaioMTT. A eficácia do composto é definida como a diferença entre o animal tratado com veículoe o animal tratado com o composto sozinho ou o composto dado em combinação do agentecitotóxico.

As células MDA-MB-231 foram implantadas no dia 1. O composto 3 foi administradopor 4 dias consecutivos através de injeções em bolo IV (veia da cauda) e, 1, 3 e 10 mg/Kg (2mg/mL em 20% de HPCD aquoso). A completa supressão do crescimento celular, emcomparação com o controle de 20% de HPCD1 foi observada para o composto 3 nasconcentrações de fármacos de 3 mg/Kg.

Estudo de xenoenxerto da linhagem celular de câncer ovariano humanoSKOV-3 com o composto 3

Fêmeas de camundongos nus CD-1 (aproximadamente 20 a 25 g) foram injetadassubcutaneamente com 5 χ 106 células de tumor ovariano humano SKOV-3 em matrigel 50%subcutaneamente no flanco direito. No dia 55, quando os tumores apresentavamaproximadamente 100 mm3, o tratamento foi iniciado com o composto 3 num cronograma detratamento 5 on/2 off pela duração do experimento. O tamanho tumoral foi medido compaquímetros digitais e calculado como V = (a χ b2)/2, em que a é a dimensão mais longa e bé a largura.

A regressão tumoral foi observada durante a dosagem do composto 3 em 1 mg/Kgenquanto que a estasia tumoral foi observada durante a dosagem do composto 3 em 0,3mg/Kg (ver Figura 1).

Estudo de xenoenxerto da linhagem celular de mamífero humano MDA-MB-231 com o composto 3

Fêmeas de camundongos nus CD-1 (aproximadamente 20 a 25 g) foram injetadassubcutaneamente com 1 χ 106 células de tumor mamário humano MDA-MB-231 no flancodireito. No dia 71, quando os tumores apresentavam aproximadamente 90 mm3, otratamento foi iniciado com o composto 3 num cronograma de tratamento 5 on/2 off peladuração do experimento. O tamanho tumoral foi medido com paquímetros digitais ecalculado como V = (a χ b2)/2, em que a é a dimensão mais longa e b é a largura.A regressão tumoral foi observada durante a dosagem do composto 3 em 1 mg/Kg(ver Figura 2).

Estudos farmacocinéticos

Os compostos selecionados foram dissolvidos em salina normal e dados em váriasdoses usando diferentes vias de administração, incluindo massa intravenosa, infusãointravenosa, injeção oral e subcutânea.O composto da presente invenção demonstrou uma farmacocinética aceitávelatravés das diferentes vias de administração.

Potência in vitroFoi demonstrado que os compostos da presente invenção matam as linhagenscelulares SKOV3 (ovariano), MDA-MB-231 (mama), BT549 (mama), HL-60 (leucemiapromielocítica aguda) e PANC-1 (pancreática) in vitro, demonstrando que as EC50 variam de0,1 nM a 1000 nM (ver Tabela 7).

O SAR desses compostos foi mapeado usando SKOV3s e várias tendênciasinteressantes foram evidenciadas. A alteração da estereoquímica no sítio da ligação emponte da pirrolidina afetou a potência dos compostos conforme pode ser visto nas EC50S dosderivados de proliona eis- e trans- 3 e 29 (EC50 = 1 nM, 88 nM, respectivamente. Unidadesde ligação em ponte de amido forneceram compostos ativos, entretanto, uma faixasignificativa na potência contra células SKOV3 foi observada pela variação doscomponentes das unidades em ponte. Unidades em ponte conformacionalmente restritasincluindo, porém sem se limitar, a 1,4-fenildicarboxamidas (tereftaloilamidas), 1,3-fenildícarboxamidas, 2,6-naftildicarboxamidas, 1,4-cicloexildicarboxamidas, 3,5-piridildicarboxamidas ou dicarboxamidas C2-C10 alifáticas proporcionam compostosaltamente ativos. As unidades de ligação em ponte contendo bis-glicinoamidas, tais como oscompostos 30, proporcionam compostos menos ativos (EC50 = 188 nM).

Unidades de ligação em ponte de éter, uréia e sulfonamida proporcionaramcompostos os quais eram ativos contra células SKOV3, embora os compostos em ponte desulfonamida foram geralmente menos ativos.

Alterações significativas na potência contra células SKOV3 foram observadas pelavariação da substituição P4, em que a estereoquímica (R) na amida R4/R400 proporcionacompostos os quais são de 5 a 10 vezes mais potentes do que o isômero (S)correspondente. A introdução de porções hidrofílicas próximo da amida proporcionamcompostos menos ativos, tal como o composto 49.

Adicionalmente, a alquilação da porção alanina N-terminal proporciona compostosos quais são até 100 vezes mais potentes do que os derivados de alanina N-terminal não-substituídos correspondentes.

Um subgrupo de linhagens celulares cancerígenas, entretanto, não foramnaturalmente sensíveis aos compostos da presente invenção, com EC50S maiores do que1000 nM. Nós demonstramos que os compostos de ligação ao BIR IAP apresentam umamorte sinergística de várias linhagens de células cancerígenas com agonistas do receptorde morte tal como TRAIL, agonistas dos anticorpos do receptor TRAIL, TNF-α e outros. Nósaqui revelamos que os compostos de Fórmula I e Il também demonstram a mortesinergística de várias linhagens celulares cancerígenas com agonistas do receptor de morte,tal como TRAIL. Quando essas células foram tratadas com composto e TRAIL, ouantagonista do anticorpo TRAIL, essas linhagens celulares foram altamente sensíveis aocomposto com EC50S geralmente menor do que 100 nM.Essas linhagens de células cancerígenas incluem HELA (cervical), HCT116 (cólon),PC3 (próstata), OVCAR-3 (ovariana), HEY (ovariana), and H460 (pulmão). Na presença deTRAIL (1 a 3 ng/mL) e concentrações variáveis do composto 3, as EC50S para as linhagenscelulares acima foram menores do que 1000 nM.

Potência in vivo

O composto 3 foi testado em modelos de tumores de xenoenxerto SKOV3 e MDA-MB-231 (ver Figuras 1 e 2). Em ambos os casos, a regressão tumoral foi observada em 1mg/Kg quando dada em 5 dias e não dada em 2 dias. A estasia tumoral foi observada noxenoenxerto SKOV3 em 0,1 mg/Kg.

Discussão

Os resultados acima sugerem que os compostos de ligação BIR IAP da presenteinvenção são agentes altamente potentes, tanto in vitro quanto in vivo, em que uma ligaçãomecanística entre a ligação IAP e as modulações IAP podem ser correlacionadas com aeficácia anti-câncer. Nós demonstramos que os compostos da presente invenção se ligamaos domínios BIR dos IAPs com alta afinidade, resultando na liberação das caspases ativas3 e 9. Além disso, esses compostos resultam na indução da apoptose nas célulascancerígenas enquanto sensibilizam sinergisticamente as linhagens celulares aos agonistasdo receptor de morte, tal como TRAIL. Além disso, quando os animais com tumor foramtratados com os compostos da presente invenção, estes demonstraram a estasia tumorale/ou a regressão tumoral em doses farmaceuticamente relevantes.

Compostos da presente invenção demonstraram farmacocinéticas aceitáveisatravés de várias vias de administração.

Outras modalidades

A partir da descrição precedente, será aparente para uma pessoa versada natécnica que as variações e modificações podem ser feitas com a invenção aqui descrita paraadaptá-la a vários usos e condições. Tais modalidades também estão dentro do escopo dapresente invenção.

Todas as publicações mencionadas nessa especificação são por meio dissoincorporadas por referência.

Claims

1. Isômero, enantiômero, diastereoisômero ou tautômero de um composto represen-tado pela Fórmula I ou II<formula>formula see original document page 188</formula>CARACTERIZADO pelo fato de quem é 0, 1 ou 2;Y é NH1 Oou S;BG é-1)-X-L-X1-;X e X1 são independentemente selecionados de-1)0,-2) NR131-3) S1-4) -alquil C1-C6-,-5) -alquil C1-C6-O1-6)-alquil C1-C6-NR131-7) -alquil C1-C6-S1<formula> formula see orginal document page 189</formula>L é selecionado de:1) -alquil C1-C20-,2) -alquenil C2-C6-,3) -alquinil C2-C4-,4) -cicloalquil C3-C7-,5) -aril-,6) -bifenil-,7) -heteroaril-,8) -heterociclil-,9) -alquil Ci-C6-(alquenil C2-C6)-alquil C1-C6-,10) -alquil CrC6-(alquinil C2-C4)-alquil C1-C6-,-11) -alquil CrC6-(cicloalquil C3-C7)-alquil C1-C6-,-12) -alquil CrCe-aril-alquil C1-C6-,-13)-alquil CrC6-bifenil-alquil C1-C6-,-14) -alquil CrCe-heteroaril-alquil C1-C6-,-15)-alquil CrC6-heterociclil-alquil CrC6-,-16) -alquil CrC6-Y-alquil C1-C6-,-17) -aril-Y-aril-,-18) -heteroaril-Y-heteroaril-,-19) -heterociclil-Y-heterociclil-,<formula>formula see original document page 190</formula>em que alquil, alquenil, alquinil e cicloalquil são opcionalmente substituídos com umou mais substituintes R6, e aril, bifenil, heteroaril e heterociclil são opcionalmente substituí-dos com um ou mais substituintes R10;Q e Q1 são independentemente selecionados de-1) NR4R5,-2) OR11 ou-3) S(O)mR11; ouQ e Q1 são independentemente selecionados de-1) aril ou-2) heteroaril, o aril e o heteroaril sendo opcionalmente substituídos com um ou maissubstituintes R10;A e A1 são independentemente selecionados de-1)-CH2-,-2) -CH2CH2-,-3) -CH(alquil C1-C6)-,-4) -HC(cicloalquil C3-C7)-,-5) -cicloalquil C3-C7-,-6) -CH(alquil CrC6-cicloalquil C3-C7)-,-7) -C(O)- ou-8) -C(O)OR13;R1 e R100 são independentemente selecionados de-1) H ou-2) alquil C1-C6 opcionalmente substituído com um ou mais substituintes R6;R2 e R200 são independentemente selecionados de-1)H ou-2)alquil C1-C6 opcionalmente substituído com um ou mais substituintes R6;R3 e R300 são independentemente alquil C1-C6 opcionalmente substituído com umou mais substituintes R6;R4 e R5 são cada um independentemente selecionados de-1)H,-2)haloalquil,-3) alquil C1-C6-»,-4)alquenil C2-C6-»^,-5)alquinil C2-C4-»,-6)cicloalquil C3-C7-»^1-7)cicloalquenil C3-C7->-8)aril-»,-9)heteroaril-»,-10)heterociclil-»,-11)heterobiciclil-»,-12)<-C(0)-R11,-13)<-C(0)0-R11,-14)<—C(Y)NR8R9 ou-15)<-S(0)2-R11,em que alquil, alquenil, alquinil, cicloalquil, cicloalquenil são opcionalmente substitu-ídos com um ou mais substituintes R6; e em que o aril, heteroaril, heterociclil e heterobiciclilsão opcionalmente substituídos com um ou mais substituintes R10;R6 é-1)halogênio,-2)NO2,-3)CN,-4)haloalquil,-5)alquil C1-C6,-6)alquenil C2-C6,-7)alquinil C2-C4,-8)cicloalquil C3-C7,-9)cicloalquenil C3-C7,-10)aril,-11)heteroaril,-12) heterociclil,-13) heterobiciclil,-14) OR71-15) S(O)mR71-16) NR8R91-17) NR8S(O)2R111-18) COR71-19) C(O)OR71-20) CONR8R91-21) S(O)2NR8R9-22) OC(O)R71-23) OC(O)Y-R111-24) SC(O)R71 ou-25) NC(Y)NR8R91em que o aril, heteroaril, heterociclil e heterobiciclil são opcionalmente substituídoscom um ou mais substituintes R10;R7 é-1) H1-2) haloalquil,-3) alquil C1-C6l-4) alquenil C2-C6l-5) alquinil C2-C4l-6) cicloalquil C3-C7l-7) cicloalquenil C3-C7l-8) aril,-9) heteroaril,-10) heterociclil,-11) heterobiciclil,-12) R8R9NC(=I) ou-13) alquil CrC6-alquenil C2-C4 ou-14) alquil Ci-C6-alquinil C2-C4,em que alquil, alquenil, alquinil, cicloalquil, cicloalquenil são opcionalmente substitu-ídos com um ou mais substituintes R6; e em que aril, heteroaril, heterociclil e heterobicicililsão opcionalmente substituídos com um ou mais substituintes R10;R8 e R9 são cada um independentemente-1) H-2) haloalquil,-3) alquil C1-C6,-4) alquenil C2-C6,-5) alquinil C2-C4,-6) cicloalquil C3-C7,-7) cicloalquenil C3-C7,-8) aril,-9) heteroaril,-10) heterociclil,-11) heterobiciclil,-12) C(O)R11,-13) C(O)Y-R11 ou-14) S(O)2-R11,em que o alquil, alquenil, alquinil, cicloalquil ou cicloalquenil são opcionalmentesubstituídos com um ou mais substituintes R6; e em que o aril, heteroaril, heterociclil e hete-robiciclil são opcionalmente substituídos com um ou mais substituintes R10;ou R8 e R9, juntamente com o átomo de nitrogênio ao qual eles estão ligados, for-mam um anel heterocíclico de cinco, seis ou sete membros opcionalmente substituídos comum ou mais substituintes R6;R10 é-1) halogênio,-2) NO2,-3) CN,-4) B(OR13)(OR14),-5) alquil C1-C6,-6) alquenil C2-C6,-7) alquinil C2-C4,-8) cicloalquil C3-C7,-9) cicloalquenil C3-C7,-10) haloalquil,-11) OR7,-12) NR8R9,-13) SR7,-14) COR7,-15) C(O)O R7,-16) S(O)mR7,-17) CONR8R9,-18) S(O)2NR8R9,-19) aril,-20) heteroaril,-21) heterociclil, ou-22) heterobiciclil,em que o alquil, alquenil, alquinil, cicloalquil e cicloalquenil são opcionalmente subs-tituídos com um ou mais substituintes R6;R11 é-1) haloalquil,-2) alquil C1-C6,-3) alquenil C2-C6,-4) alquinil C2-C4,-5) cicloalquil C3-C7,-6) cicloalquenil C3-C7,-7) aril,-8) heteroaril,-9) heterociclil, ou-10) heterobiciclil,em que o alquil, alquenil, alquinil, cicloalquil e o cicloalquenil são opcionalmentesubstituídos com um ou mais substituintes R6; e em que o aril, heteroaril, heterociclil e hete-robiciclil são opcionalmente substituídos com um ou mais substituintes R10;R12 é-1) haloalquil,-2) alquil C1-C6,-3) alquenil C2-C6,-4) alquinil C2-C4,-5) cicloalquil C3-C7,-6) cicloalquenil C3-C7,-7) aril,-8) heteroaril,-9) heterociclil,-10) heterobiciclil,-11) C(O)-R11,-12) C(O)O-R11,-13) C(O)NR8R9,-14) S(O)m-R11 ou-15) C(=Y)NR8R9,em que o alquil, alquenil, alquinil, cicloalquil e o cicloalquenil são opcionalmentesubstituídos com um ou mais substituintes R6; e em que o aril, heteroaril, heterociclil ou oheterobiciclil são opcionalmente substituídos com um ou mais substituintes R10;R13 e R14 são cada um independentementeR13 e R14 são combinados para formar um anel heterocíclico ou um anel heterobicí-clico;R20 é-1) H, ou-2) NH2, OU-3)NHFmoc;ou um promedicamento; ou o composto de Fórmula I ou Il é marcado com um mar-cador detectável ou com um marcador de afinidade;

2. Composto, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADO pelo fato de queA e A1 são ambos CH2.

3. Composto, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADO pelo fato de queA e A1 são ambos C=O.

4. Composto, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADO pelo fato de queA e CH2 e A1 são C=O.

5. Composto, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADO pelo fato de queA e A1 são ambos C(O)OCH3.

6. Composto, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADO pelo fato de queA e A1 são ambos C(O)OH.

7. Composto, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADO pelo fato decompreender compostos de Fórmula de 1A até 1C:<formula>formula see original document page 195</formula><formula> formula see orginal document page 196</formula>em que BG1 Α, A11 Q, Q11 R11 R1001 R2, R2001 R3 e R300 são conforme definido na Rei-vindicação 1.

8. Composto, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADO pelo fato decompreender compostos de Fórmulas 2A e 2B:<formula> formula see orginal document page 196</formula><formula>formula see original document page 197</formula>em que BG, A, A1, Q, Q1, R1, R100, R2, R200 R3 e R20 são conforme definido na Rei-vindicação 1.

9. Composto, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADO pelo fato de queBG é -X-L-X1-.

10. Composto, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADO pelo fato decompreender os compostos de Fórmula 1a até 1c:<formula>formula see original document page 197</formula><formula>formula see original document page 198</formula>em que L, X, X1, A, A1, Q, Q1, R1, R100, R2, R200, R3 e R300 são conforme definido naReivindicação 1.

11. Composto, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADO pelo fato decompreender os compostos de Fórmula 1.1a até 1.1c:<formula>formula see original document page 198</formula><formula>formula see original document page 199</formula>em que L1 X, X11 A, A11 Q1 Q11 R11 R1001 R21 R2001 R31 R3001 R41 R4001 R5 e R500 são con-forme definido na Reivindicação 1.

12. Composto, dè acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADO pelo fato decompreender compostos de Fórmula 2a:<formula>formula see original document page 199</formula>

13. Composto, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADO pelo fato deque X e X1 são independentemente selecionados de-1)0,-2) NR131-3) S1-4) -alquil C1-C6-O-,-5) -alquil C1-C6-,<formula>formula see original document page 200</formula>

14.Composto, de acordo com a Reivindicação 13, CARACTERIZADO pelo fato deque X e X1 são independentemente selecionados de:<formula>formula see original document page 200</formula>

15.Composto, de acordo com a Reivindicação 1, CARACTERIZADO pelo fato deque L é selecionado de:-1)-alquil C1-C20-,-2) -cicloalquil C3-C7-,-3) -aril-,-4) -bifenil-,-5) -heteroaril-,-6) -alquil CT-Ce-talquinil C2-C4)-alquil C1-C6-,-7) -alquil CrCe-aril-alquil C1-C6-,-8) -aril-Y-aril-,<formula>formula see original document page 201</formula>-9)<formula>formula see original document page 201</formula>-10)<formula>formula see original document page 201</formula>em que o alquil e o cicloalquil são opcionalmente substituídos com um ou maissubstituintes R61 e o aril, bifenil e heteroaril são opcionalmente substituídos com um ou maissubstituintes R10.

16. Composto, de acordo com a Reivindicação 15, CARACTERIZADO pelo fato deque L é selecionado do grupo consistindo de:<formula>formula see original document page 201</formula>

17. Composto, de acordo com a reivindicação 16, CARACTERIZADO pelo fato deque ré um número inteiro de 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10.

18. Composto, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADO pelo fato decompreender os compostos de Fórmula 1.1 até 1.18:<formula>formula see original document page 202</formula><formula>formula see original document page 203</formula><formula>formula see original document page 204</formula><formula>formula see original document page</formula>em que ré u número inteiro de 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ou 10, e A, A1, Q1 Q1, R1, R100,R2, R200, R3 e R300 são conforme definido na Reivindicação 1.

19. Composto, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADO pelo fato decompreender os compostos de Fórmula 2.1 e 2.2:<formula>formula see original document page 206</formula>em que Α, A1, Q, Q1, R1, R100, R2, R200, R3, R300 e R20 são conforme definido na Rei-vindicação 1.

20. Composto, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADO pelo fato deque R1 e R100 são ambos H.

21. Composto, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADO pelo fato deque R1 e R100 são ambos alquil C1-C6.

22. Composto, de acordo com a reivindicação 21, CARACTERIZADO pelo fato deque R1 e R100 são ambos CH3.

23. Composto, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADO pelo fato deque R2 e R200 são ambos alquil C1-C6 opcionalmente substituído com OH.

24. Composto, de acordo com a reivindicação 23, CARACTERIZADO pelo fato deque R2 e R200 são ambos CH3.

25. Composto, de acordo com a reivindicação 23, CARACTERIZADO pelo fato deque R2 é CH2OH e R300 é CH3.

26. Composto, de acordo com a reivindicação 23, CARACTERIZADO pelo fato deque R2 e R200 são ambos CH2OH.

27. Composto, de acordo com a reivindicação 23, CARACTERIZADO pelo fato deque R2 e R200 são ambos CH2CH3.

28. Composto, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADO pelo fato deque R3 e R300 são ambos alquil C1-C6.

29. Composto, de acordo com a reivindicação 28, CARACTERIZADO pelo fato deque R3 e R300 são ambos C(CH3)3.

30. Composto, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADO pelo fato deque Q e Q1 são ambos NR4R5.

31. Composto, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADO pelo fato deque A e A1 são ambos C=O e Q1 são ambos NR4R5, R4 é H eR5 é selecionado de-1)<-alquil C1-C6,- 2) <-alquenil C2-C6,-3) <-alquinil C2-C4,-4) <—cicloalquil C3-C7,-5) <-cicloalquenil C3-C7,-6) <—aril,-7) <-heteroaril,-8) <—heterociclil ou-9) <—heterobiciclil,em que o alquil, alquenil, alquinil, cicloalquil, cicloalquenil é opcionalmente substitu-ído com um ou mais substituintes R6: e em que o aril, heteroaril, heterociclil e heterobiciclilsão opcionalmente substituídos com um ou mais substituintes R10;em que R6 e R10 são conforme aqui definido.

32. Composto, de acordo com a reivindicação 31, CARACTERIZADO pelo fato deque R4 é H e R5 é selecionado de:-1) <—alquil C1-C6, ou- 2) <-aril,em que o alquil é opcionalmente substituído com um ou dois substituintes R6; e emque o aril é opcionalmente substituído com um substituinte R10;em que R6 e R10 são conforme aqui definido.

33. Composto, de acordo com a reivindicação 32, CARACTERIZADO pelo fato deque R4 é H e R5 é selecionado do grupo consistindo de:<formula>formula see original document page 208</formula>

34. Composto, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADO pelo fato deque A e A1 são ambos C=O e Q e Q1 são ambos

35. Composto, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADO pelo fato deque A e A1 são ambos C=O1 e Q e Q1 são ambos

36. Composto, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADO pelo fato deque A e A1 são ambos C=O1 e Q é

37. Composto, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADO pelo fato deque A e A1 são ambos C=O1 e Q e Q1 são ambos

38. Composto, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADO pelo fato deque A e A1 são ambos C=O, e Q e Q1 são ambos

39. Composto, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADO pelo fato deque A e A1 são ambos C=O, e Q e Q1 são ambos

40. Composto, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADO pelo fato deque A e A1 são ambos C=O, e Q e Q1 são ambos

41. Composto, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADO pelo fato deque A e A1 são ambos C=O1 e Q e Q1 são ambos

42. Composto, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADO pelo fato de<formula>formula see original document page 210</formula>que A e A1 são ambos C=O1 e Q e Q1 são ambos <formula>formula see original document page 210</formula>

43. Composto, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADO pelo fato deque A e A1 são ambos C=O1 e Q e Q1 são ambos <formula>formula see original document page 210</formula>

44. Composto, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADO pelo fato deque A e A1 são ambos C=O, e Q e Q1 são ambos

45. Composto, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADO pelo fato deque A e A1 são ambos C=O, e Q e Q1 são ambos

46. Composto, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADO pelo fato deque A e A1 são ambos C=O1 e Q e Q1 são ambos <formula>formula see original document page 210</formula>

47. Composto, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADO pelo fato deque A e A1 são ambos C=O1 e Q e Q1 são ambos

48. Composto, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADO pelo fato deque A e A1 são ambos C=O, e Q e Q1 são ambos

49. Composto, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADO pelo fato deque A e A1 são ambos C=O, e Q e Q1 são ambos

50. Composto, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADO pelo fato deque A e A1 são ambos C=O1 e Q e Q1 são ambos

51. Composto, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADO pelo fato deque A e A1 são ambos C=O, e Q e Q1 são ambos

52. Composto, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADO pelo fato deque A e A1 são ambos C=O, e Q e Q1 são ambos

53. Composto, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADO pelo fato deque A e A1 são ambos C=O, e Q e Q1 são ambos

54. Composto, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADO pelo fato de<formula>formula see original document page 212</formula>que A e A1 são ambos C=O, e Q e Q1 são ambos

55. Composto, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADO pelo fato de<formula>formula see original document page 212</formula>que A e A1 são ambos C=O1 e Q e Q1 são ambos I

56. Composto, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADO pelo fato de<formula>formula see original document page 212</formula>que A e A1 são ambos C=O1 e Q e Q1 são ambos

57. Composto, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADO pelo fato de<formula>formula see original document page 212</formula>que A e A1 são ambos C=O1 e Q e Q1 são ambos

58. Composto, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADO pelo fato de<formula>formula see original document page 212</formula>que A e A1 são ambos C=O, e Q e Q1 são ambos<formula>formula see original document page 212</formula>

59. Composto, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADO pelo fato deque A e A1 são ambos CH2 e Q e Q1 são ambos NR4R5, então R4 e R5 são cada um inde-pendentemente-1) haloalquil,-2) alquil C1-C6->,-3) alquenil C2-C6->,-4) alquinil C2-C4-*,-5) cicloalquil C3-C7->,-6)cicloalquenil C3-C7->,-7) aril—-8) heteroaril-»,-9) heterociclil—-10) heterobiciclil-»,-11) ^C(O)-R111-12) C(O)O-R111-13) <—C(=I)NR8R9 ou-14) <—S(O)2-R11,em que alquil, alquenil, alquinil, cicloalquil, cicloalquenil é opcionalmente substituídocom um ou mais substituintes R6; e em que o aril, heteroaril, heterociclil e heterobiciclil sãoopcionalmente substituídos com um ou mais substituintes R10; em que Y, R6, R8, R91 R10 eR11 são conforme aqui definido.

60. Composto, de acordo com a reivindicação 59, CARACTERIZADO pelo fato deque R4 e R5 são independentemente selecionados de-1) alquil Ci-C6,-2) <—C(O)-R11,-3) <—C(O)O-R11 ou-4) <—S(O)2-R11,em que o alquil é substituído com um substituinte R6;em que R6 e R11 são conforme aqui definido.

61. Composto, de acordo com a reivindicação 60, CARACTERIZADO pelo fato de

62. Composto, de acordo com a reivindicação 60, CARACTERIZADO pelo fato deque R4 é C(O)CH3 e R5 é<formula>formula see original document page 213</formula>

63. Composto, de acordo com a reivindicação 60, CARACTERIZADO pelo fato de<formula>formula see original document page 213</formula>

64. Composto, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADO pelo fato deque R11 é- 1) alquil C1-C6, ou- 2) aril,em que o alquil é opcionalmente substituído com um ou mais substituintes R6; e emque o aril é opcionalmente substituído com um ou mais substituintes R10;em que R6 e R10 são conforme aqui definido.

65. Composto, de acordo com a reivindicação 64, CARACTERIZADO pelo fato deque R11 é- 1) alquil C1-C6 opcionalmente substituído com um ou dois substituintes R61 ou- 2) fenil opcionalmente substituído com um substituinte R10;em que os substituintes R6 e R10 são conforme aqui definido.

66. Composto, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADO pelo fato deque R6 é- 1) halogênio,- 2) NO2,- 3) CN,- 4) aril,- 5) heteroaril,- 6) heterociclil,- 7) heterobiciclil,- 8) OR7,- 9) SR7 ou- 10) NR8R9,em que o aril, heteroaril, heterociclil, e heterobiciclil são opcionalmente substituídoscom um ou mais substituintes R10;em que R7, R8, R9 e R10 são conforme aqui definido.

67. Composto, de acordo com a reivindicação 66, CARACTERIZADO pelo fato deque R6 é- 1) halogênio,- 2) aril ou- 3) NR8R9,em que o aril é opcionalmente substituído com um substituinte R10;em que R8, R9 e R10 são conforme aqui definido.

68. Composto, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADO pelo fato deque R8 e R9 são cada um independentemente- 1) H,-2) haloalquil,-3) alquil C1-C6,-4) alquenil C2-C6,-5) alquinil C2-C4,-6) cicloalquíl C3-C7 ou-7) cicloalquenil C3-C7,em que o alquil, alquenil, alquinil, cicloalquíl e cicloalquenil são opcionalmente subs-tituídos com um ou mais substituintes R6;em que os substituintes R6 são conforme aqui definido.

69. Composto, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADO pelo fato deque R10 é-1) halogênio,-2) NO2,-3) CN,-4) haloalquil,-5) OR7,-6) NR8R9 ou-7) SR7;em que R7, R8 e R9 são conforme aqui definido.

70. Composto, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADO pelo fato deser selecionado do grupo consistindo de:<table>table see original document page 215</column></row><table><table>table see original document page 216</column></row><table><table>table see original document page 217</column></row><table><table>table see original document page218</column></row><table><table>table see original document page 219</column></row><table><table>table see original document page 220</column></row><table><table>table see original document page 221</column></row><table><table>table see original document page 222</column></row><table><table>table see original document page 223</column></row><table><table>table see original document page 224</column></row><table><table>table see original document page 225</column></row><table><table>table see original document page 226</column></row><table><table>table see original document page 227</column></row><table><table>table see original document page 228</column></row><table><table>table see original document page 229</column></row><table><table>table see original document page 230</column></row><table><table>table see original document page 231</column></row><table><table>table see original document page 232</column></row><table><table>table see original document page 233</column></row><table><table>table see original document page 234</column></row><table><table>table see original document page 235</column></row><table>

71. Composto, de acordo com a reivindicação 1, CARACTERIZADO pelo fato deselecionado do gruo consistindo de:

72. Composto intermediário representado pela Fórmula 1-iv:<formula> formula see orginal document page 237</formula>CARACTERIZADO pelo fato de que PG31 R11 R21 R31 A, e Q são conforme definidona reivindicação 1.

73. Composto intermediário representado pela Fórmula 2-iv:<formula> formula see orginal document page 237</formula>CARACTERIZADO pelo fato de que PG4, R1, R2, R3, A, e Q são conforme definidona Reivindicação 1.

74. Composto intermediário, CARACTERIZADO pelo fato de ser representado pelaFórmula 3-ii:<formula>formula see original document page 238</formula>em que PG4, PG400, R1, R2, R3, A e Q são conforme definido na Reivindicação 1, e Lé -(CH2)r-, -(C2)r-I-(C2)r-, -alquil-aril-alquil-, -alquil-heteroaril-alquil-, cicloalquil, aril ou hetero-aril.

75. Composto intermediário, CARACTERIZADO pelo fato de ser representado pelaFórmula 4-i:<formula>formula see original document page 238</formula>em que PG41 PG400, L, R1, R100, R2, R200, R3, R300, A, A1, X, X1, Q e Q, são conformedefinido na Reivindicação 1.

76. Composto intermediário, CARACTERIZADO pelo fato de ser representado pelaFórmula 6-ii:<formula>formula see original document page 239</formula>em que PG41 PG4001 R11 R100, R21 R2001 R3, R3001 A, A11 Q e Q1 são conforme defini-do na Reivindicação 1.

77. Composto intermediário, CARACTERIZADO pelo fato de ser representado pelaFórmula 7-v:<formula>formula see original document page 239</formula>em que PG41 PG4001 L1 R11 R1001 R21 R2001 R31 R3001 A1 A11 Q e Q1 são conforme defi-nido na Reivindicação 1.

78. Composto intermediário, CARACTERIZADO pelo fato de ser representado pelaFórmula 8-ii:<formula>formula see original document page 240</formula>em que PG41 r, L1 R1001 R2001 A1 e Q1 são conforme definido na Reivindicação 1.

79. Composto intermediário, CARACTERIZADO pelo fato de ser representado pelaFórmula 8-iii:<formula>formula see original document page 240</formula>em que PG41 PG400, r, L, R11 R1001 R21 R2001 R31 R3001 A1 A11 Q e Q1 são conforme de-finido na Reivindicação 1.

80. Composto intermediário, CARACTERIZADO pelo fato de ser representado pelaFórmula 17-i:<formula>formula see original document page 240</formula>54em que PG41 PG4001 L1 R11 R1001 R21 R2001 R31 R3001 A1 A11 Q e Q1 são conforme defi-nido na Reivindicação 1.

81. Composto intermediário, CARACTERIZADO pelo fato de ser representado pelaFórmula 18-i:<formula>formula see original document page 241</formula>

82. Composto intermediário, CARACTERIZADO pelo fato de ser representado pelaFórmula 19-8:<formula>formula see original document page 241</formula>em que PG4, PG400, L, X, X1, R1, R100, R2, R200, R3, R300, R4, R400, R5 e R500 são con-forme definido na Reivindicação 1.

83. Composto intermediário, CARACTERIZADO pelo fato de ser representado pela Fórmula 19-3<formula>formula see original document page 242</formula>em que PG2, L e X são conforme definido na Reivindicação 1.

84. Composto intermediário, CARACTERIZADO pelo fato de ser representado pelaFórmula 20-2:<formula>formula see original document page 242</formula>em que L1 X1 X11 R4 e R5 são conforme definido na Reivindicação 1.

85. Composto intermediário, CARACTERIZADO pelo fato de ser representado pelaFórmula 20-4:<formula>formula see original document page 242</formula>em que L, X, X1, R3, R4 e R5 são conforme definido na Reivindicação 1.

86. Processo para produzir compostos representados pela Fórmula I, descritos aquiacima, o processo sendo CARACTERIZADO pelo fato de compreender:a) o acoplamento de dois intermediários representados pela Fórmula 1(iv):<formula>formula see original document page 32</formula>em que PG3, R1, R2, R3, A e Q são conforme aqui definido, num solvente; eb) a remoção dos grupos protetores de modo a formar compostos de Fórmula I.

87.Processo para produzir compostos representados pela Fórmula I, descritos aquiacima, o processo sendo CARACTERIZADO pelo fato de compreender: a) o acoplamento de um intermediário representado pela Fórmula 2(iv):<formula>formula see original document page 32</formula>em que PG4 é um grupo protetor, e R11 R2, R31 A e Q são conforme aqui definido, eum diácido ativado (0,5 equiv.) num solvente; eb) a remoção dos grupos protetores de modo a formar compostos de Fórmula I.

88. Uso de um composto representado pela Fórmula I ou II:<formula>formula see original document page 32</formula>ou um sal seu, CARACTERIZADO pelo fato de ser para a produção de um medi-camento para tratar ou prevenir um estado de doença por apoptose insuficiente,em que:m é 0, 1 ou 2;Y é NH1 Oou S;BG é`1)-X-L-X1-;X e X1 são independentemente selecionados de1)0,2) NR1313) S14) -alquil C1-C6-,5) -alquil C1-C6-O16) -alquil C1-C6-NR13-,7) -alquil C1-C6-S-,<formula>formula see original document page 244</formula>-14)<formula>formula see original document page 245</formula> ou-15)<formula>formula see original document page 245</formula>L é selecionado de:-1) -alquil C1-C20-,-2) -alquenil C2-C6-,-3) -alquinil C2-C4-,-4) —cicloalquil C3-C7-,-5) -aril-,-6) -bifenil-,-7) - heteroaril-,-8) - heterociclil-,-9) -alquil C1-C6-Calquenil C2-C6)-alquil Ci-C6-,-10)-alquil C1-C6-Calquinil C2-C4)-alquil Ci-C6-,-11)-alquil CrQrícicloalquil C3-C7)-alquil C1-C6-,-12) -alquil CrC6-aril-alquil C1-C6-,-13)-alquil CrC6-bifenil-alquil C1-C6-,-14)-alquil C-i-Ce-heteroaril-alquil C1-C6-,-15)-alquil C1-C6-IneterocicIiI^IquiI C1-C6-,-16) -alquil C1-C6-Y-Blquil Ci-C6-,-17) -aril-Y-aril-,-18) -heteroaril-Y-heteroaril-,-19) -heterociclil-Y-heterociclil-,-20)<formula>formula see original document page 245</formula>ou-21)<formula>formula see original document page 245</formula>em que o alquil, alquenil, alquinil e cicloalquil são opcionalmente substituídos comum ou mais substituintes R61 e o aril, bifenil, heteroaril e heterociclil são opcionalmente subs-tituídos com um ou mais substituintes R10;Q e Q1 são independentemente selecionados de-1) NR4R51-2) OR11 ou-3) S(O)mR11; ou Q e Q1 são independentemente selecionados de-1) aril, ou-2) heteroaril, o aril e o heteroaril sendo opcionalmente substituídos com um ou maissubstituintes R10;A e A1 são independentemente selecionados de-1)-CH2-,-2) -CH2CH2-,-3) -CH(alquil C1-C6)-,-4) -CH(cicloalquil C3-C7)-,-5) -cicloalquil C3-C7-,-6) -CH(alquil C1-C6-CiCloaIquiI C3-C7)-,-7) -C(O)- ou-8) -C(O)OR13;R1 e R100 são independentemente selecionados de-1) H ou-2) alquil C1-C8 opcionalmente substituído com um ou mais substituintes R6;R2 e R200 são independentemente selecionados de-1)H, ou-2) alquil C1-C6 opcionalmente substituído com um ou mais substituintes R6;R3 e R300 são independentemente alquil C1-C6 opcionalmente substituídos com umou mais substituintes R6;R4 e R5 são cada um independentemente selecionados de-1) H1-2) haloalquil,-3) alquil C1-C6-*,-4) alquenil C2-C6^1-5) alquínil C2-C4->,-6) cicloalquil C3-C7->,-7) cicloalquenil C3-C7->-8) aril-»,-9) heteroaril-»,-10) heterociclil-»,-11) heterobiciclil-»,- 12) <-C(0)-R11,- 13) <—C(O)O-R111- 14) <-C(Y)NR8R9 OU- 15) <-S(0)2-R11,em que alquil, alquenil, alquinil, cicloalquil, cicloalquenil são opcionalmente substitu-ídos com um ou mais substituintes R6; e em que o aril, heteroaril, heterociclil e heterobiciclilsão opcionalmente substituídos com um ou mais substituintes R10;R6 é- 1) halogênio,- 2) NO2,- 3) CN,- 4) haloalquil,- 5) alquil C1-C6,- 6) alquenil C2-C6,- 7) alquinil C2-C4,- 8) cicloalquil C3-C7l- 9) cicloalquenil C3-C7,- 10) aril,11) heteroaril,12) heterociclil,13) heterobiciclil,14) OR7115) S(O)mR7116) NR8R9,17) NR8S(O)2R11,18) COR7119) C(O)OR7,20) CONR8R9,21) S(O)2NR8R922) OC(O)R7,23) OC(O)Y-R11124) SC(O)R71 ou25) NC(Y)NR8R91em que o aril, heteroaril, heterociclil e heterobiciclil são opcionalmente substituídoscom um ou mais substituintes R10;R7 é1)H,-2) haloalquil,-3) alquil C1-C6,-4) alquenil C2-C6,-5) alquinil C2-C4,-6) cicloalquil C3-C7,-7) cicloalquenil C3-C7,-8) aril,-9) heteroaril,-10) heterociclil,-11) heterobiciclil,-12) R8R9NC(=I) OU-13) alquil C1-C6-alquenil C2-C4 ou-14) alquil C1-C6-alquinil C2-C4,em que alquil, alquenil, alquinil, cicloalquil, cicloalquenil são opcionalmente substitu-idos com um ou mais substituintes R6; e em que aril, heteroaril, heterociclil e heterobicicililsão opcionalmente substituídos com um ou mais substituintes R10;R8 e R9 são cada um independentemente-1) H-2) haloalquil,-3) alquil C1-C6,-4) alquenil C2-C6,-5) alquinil C2-C4,-6) cicloalquil C3-C7,-7) cicloalquenil C3-C7,-8) aril,-9) heteroaril,-10) heterociclil,-11) heterobiciclil,-12) C(O)R11,-13) C(O)Y-R11 ou-14) S(O)2-R11,em que o alquil, alquenil, alquinil, cicloalquil ou cicloalquenil são opcionalmentesubstituídos com um ou mais substituintes R6; e em que o aril, heteroaril, heterociclil e hete-robiciclil são opcionalmente substituídos com um ou mais substituintes R10; ou R8 e R9, juntamente com o átomo de nitrogênio ao qual eles estão ligados, for-mam um anel heterocíclico de cinco, seis ou sete membros opcionalmente substituídos comum ou mais substituintes R6;R10 é-1) halogênio,-2) NO2,-3) CN,-4) B(OR13)(OR14),-5) alquil C1-C6,-6) alquenil C2-C6,-7) alquinil C2-C4,-8) cicloalquil C3-C7,-9) cicloalquenil C3-C7,-10) haloalquil,-11) OR7,-12) NR8R9,-13) SR7,-14) COR7,-15) C(O)O R71-16) S(O)mR7,-17) CONR8R9,-18) S(O)2NR8R9,-19) aril,-20) heteroaril,-21) heterociclil, ou-22) heterobiciclil,em que o alquil, alquenil, alquinil, cicloalquil e cicloalquenil são opcionalmente subs-tituídos com um ou mais substituintes R6;R11 é-1) haloalquil,-2) alquil CrC6,-3) alquenil C2-C6,-4) alquinil C2-C4,-5) cicloalquil C3-C7,-6) cicloalquenil C3-C7,-7) aril,-8) heteroaril,-9) heterociclil, ou-10) heterobiciclil,em que o alquil, alquenil, alquinil, cicloalquil e o cicloalquenil são opcionalmentesubstituídos com um ou mais substituintes R6; e em que o aril, heteroaril, heterociclil e hete-robiciclil são opcionalmente substituídos com um ou mais substituintes R10;R12 éI) haloalquil,-2) alquil C1-C6,-3) alquenil C2-C6,-4) alquinil C2-C4,-5) cicloalquil C3-C7l-6) cicloalquenil C3-C7l -7) aril,-8) heteroaril,-9) heterociclil,-10) heterobiciclil,II) C(O)-R111-12) C(O)O-R111-13) C(O)NR8R9,-14) S(O)m-R11 ou-15) C(=Y)NR8R9,em que o alquil, alquenil, alquinil, cicloalquil e o cicloalquenil são opcionalmente substituídos com um ou mais substituintes R6; e em que o aril, heteroaril, heterociclil e o he-terobiciclil são opcionalmente substituídos com um ou mais substituintes R10;R13 e R14 são cada um independentemente-1)H, ou-2) alquil C1-C6; ouR13 e R14 são combinados para formar um anel heterocíclico ou um anel heterobicí-clico; eR20 é-1) H,-2) NH2, ou- 3)NHFmoc;

89. Uso de um composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a-71, CARACTERIZADO pelo fato de ser para a produção de um medicamento para tratar ouprevenir um estado de doença por apoptose insuficiente.

90. Uso, de acordo com as reivindicações 88 ou 89, CARACTERIZADO pelo fatode que o estado de doença é câncer.

91.Uso de um composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 71,CARACTERIZADO pelo fato de ser para a produção de um medicamento para tratar ouprevenir um distúrbio proliferativo.

92. Uso de um composto de qualquer uma das reivindicações 1 a 71,CARACTERIZADO pelo fato de ser em combinação com um agente para a produção de ummedicamento para tratar ou prevenir um distúrbio proliferativo, em que o agente é selecio-nado de:a) um modulador do receptor de estrogênio,b) um modulador do receptor de androgênio,c) um modulador do receptor de retinóide,d) um agente citotóxico,e) um agente proliferativo,f) um inibidor da prenil-proteína transferase,g) um inibidor da HMG-CoA redutase,h) um inibidor da HIV protease,i) um inibidor da transcriptase reversa,k) um inibidor de angiogênese,l) um agonista PPAR-γ,m) um agonista PPAR-δ,n) um inibidor de resistência a multifármacos inerente,o) um agente anti-emético,p) um agente útil no tratamento da anemia,q) agentes úteis no tratamento de neutropenia,r) um fármaco intensificador imunológico.s) um inibidor do proteassoma,t) um inibidor HDAC,u) um inibidor da atividade tipo quimiotripsina no proteassoma; ouv) inibidores da E3 ligase;w) um modulador do sistema imune tal como, porém sem se limitar, a interferon-alfa, Bacillus-Calmette-Guerin (BCG) e radiação ionizante (UVB) que pode induzir a libera-ção de citocinas, tais como as interleucinas, TNF ou induzir a liberação dos Iigantes do re-ceptor de morte tais como TRAIL;x) um modulador dos receptores de morte TRAIL e agonistas TRAIL como os anti-corpos humanizados HGS-ETR1 e HGS-ETR2;ou em combinação ou seqüencialmente com a terapia de radiação.

93. Uso do composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 71,juntamente com um agonista do receptor de morte, CARACTERIZADO pelo fato de ser paraa produção de um medicamento para o tratamento ou prevenção de um distúrbio proliferati-vo num indivíduo.

94. Uso, de acordo com a reivindicação 93, CARACTERIZADO pelo fato de que oagonista do receptor de morte é TRAIL.

95. Uso, de acordo com a reivindicação 93, CARACTERIZADO pelo fato de que oagonista do receptor de morte é um anticorpo TRAIL.

96. Uso, de acordo com a reivindicação 93, CARACTERIZADO pelo fato de que oagonista do receptor de morte é uma quantidade que produz um efeito sinergístico.

97. Uso, de acordo com as reivindicações 92 ou 93, CARACTERIZADO pelo fatode que o distúrbio proliferativo é câncer.

98. Composição farmacêutica, CARACTERIZADA pelo fato de compreender ocomposto de qualquer uma das reivindicações 1 a 71, misturado com um veículo, diluenteou excipiente farmaceuticamente aceitável, para tratar ou prevenir um estado de doença porapoptose insuficiente.

99. Composição farmacêutica, CARACTERIZADA pelo fato de compreender ocomposto de qualquer uma das reivindicações 1 a 71, juntamente com qualquer compostoque aumente o nível circulante de um ou mais agonistas do receptor de morte para prevenirou tratar um distúrbio proliferativo.

100. Método para preparar uma composição farmacêutica, o método sendoCARACTERIZADO pelo fato de compreender: a mistura do composto de qualquer uma dasReivindicações 1 a 71, com um veículo, diluente ou excipiente farmaceuticamente aceitável.

101. Composto intermediário, representado pela Fórmula 19-2:CARACTERIZADO pelo fato de que PG1, PG21 LeX são conforme aqui definido.

102. Composto intermediário, representado pela Fórmula 20-1 a:<formula>formula see original document page 253</formula>CARACTERIZADO pelo fato de que PG11 L, X, X11 R4 e R5 são conforme aqui definido.

103. Método para o preparo de um sal farmaceuticamente aceitável de um compos-to de Fórmula I e II, CARACTERIZADO pelo fato de ser pelo tratamento de um composto deFórmula I ou II com de 1 a 2 equivalentes de um ácido farmaceuticamente aceitável, con-forme aqui definido.

104. Método para detectar a perda de função ou supressão de IAPs in vivo, o mé-todo sendo CARACTERIZADO pelo fato de compreender: a) a administração a um indivíduode uma quantidade terapeuticamente eficaz de uma composição farmacêutica, de acordocom a Reivindicação 88; b) o isolamento de uma amostra tecidual do indivíduo; e c) a detec-ção de perda de função ou supressão de IAPs da amostra.

105. Método, de acordo com a reivindicação 104, CARACTERIZADO pelo fato deque IPA é XIAP.

106. Método, de acordo com a reivindicação 104, CARACTERIZADO pelo fato deque IPA é C-IAP1.

107. Método, de acordo com a reivindicação 104, CARACTERIZADO pelo fato deque IPA é C-IAP2.

108. Método, de acordo com a reivindicação 104, CARACTERIZADO pelo fato deque o tecido é uma amostra de tumor.

109. Método, de acordo com a reivindicação 104, CARACTERIZADO pelo fato deque o tecido é um tecido normal.

110. Método, de acordo com a reivindicação 104, CARACTERIZADO pelo fato deque o tecido é isolado do sistema hematopoiético.

111. Método, de acordo com a reivindicação 104, CARACTERIZADO pelo fato deque as células mononucleares são isoladas de sangue, e a supressão ou perda de IAP émedida nas células mononucleares.