BRPI0711953A2

BRPI0711953A2 - polinucleotìdeo isolado e polipeptìdeo conferindo resistência a glutamina sintetase e métodos para produzir plantas e células vegetais transgênicas apresentando produção e utilização de nitrogênio melhoradas

Info

Publication number: BRPI0711953A2
Application number: BRPI0711953-4A
Authority: BR
Inventors: Nicholas B Duck; Laura Cooper Schouten; Todd K Hinson; Daniel John Tomso; Vadim Beilinson
Original assignee: Athenix Corp
Priority date: 2006-06-08
Filing date: 2007-06-08
Publication date: 2012-01-17
Also published as: US8101389B2; US20110136200A1; ES2418843T3; WO2007146767A8; WO2007146767A2; US20090018016A1; MEP88108A; AR061314A1; US7910805B2; WO2007146767A3; EP2024494A2; EP2024494B1

Abstract

POLINUCLEOTìDEO ISOLADO E POLIPEPTìDEO CONFERINDO RESISTêNCIA A GLUTAMINA SINTETASE E MéTODOS PARA PRODUZIR PLANTAS E CéLULAS VEGETAIS TRANSGêNICAS APRESENTANDO PRODUçãO E UTILIZAçãO DE NITROGêNIO MELHORADAS. São providos composições e métodos para conferir resistência a herbicidas e melhorar a utilização de nitrogênio de bactérias, plantas, células vegetais, tecidos e sementes. Composições compreendendo uma seqüência codificadora para um polipeptídeo que confere resistência ou tolerância a inibidores de glutamina sintetase herbicidas são providas. As sequências codificadoras podem ser usadas em construções de DNA ou cassetes de expressão para transformação e expressão em plantas. Composições também compreendem bactérias, plantas, células, tecidos e sementes vegetais transformadas. Em particular, polinucleotídeos isolados correspondendo a polinucleotídeos resistentes a inibidor de glutamina sintetase herbicida são providos. Adicionalmente, polipeptídeos correspondendo aos polinucleotídeos são englobados. Em particular, a presente invenção provê polinucleotídeos isolados compreendendo um variante de SEQ ID NO: 1, caracterizado pelo fato do polinucleotídeo variante codificar um polipeptídeo que é resistente a inibição por inibidor de glutamina sintetase herbicida.

Description

POLINUCLEOTIDEO ISOLADO E POLIPEPTIDEO CONFERINDO RESISTÊNCIA A GLUTAMINA SINTETASE E MÉTODOS PARA PRODUZIR PLANTAS E CÉLULAS VEGETAIS TRANSGÊNICAS APRESENTANDO PRODUÇÃO E UTILIZAÇÃO DE NITROGÊNIO MELHORADAS

CAMPO DA INVENÇÃO

Esta invenção está relacionada a biologia molecular vegetal, particularmente a uma nova classe de enzimas glutamina sintetases que conferem resistência a inibidores de glutamina sintetase herbicidas.

FUNDAMENTOS DA INVENÇÃO

Plantas obtêm nitrogênio de seu ambiente na forma de compostos inorgânicos, conhecidos por nitrato e amônia retirado pelas raízes, e N2 atmosférico reduzido a amônia em nódulos de raiz fixadores de nitrogênio. A primeira etapa na assimilação de nitrogênio inorgânico na forma orgânica envolve predominantemente a incorporação de amônia com glutamato para formar glutamina, catalisada pela enzima glutamina sintetase.

Diversos herbicidas funcionam inibindo glutamina sintetase vegetal. Um exemplo típico de tal composto é o análogo de ácido glutâmico, glufosinato (ou fosfinotricina) . Vários desses herbicidas inibem a glutamina sintetase presente nas plantas de cultivo, assim como em ervas daninhas, limitando, dessa forma, o uso de tais compostos como glufosinato. Como a seletividade de herbicida é importante em qualquer herbicida comercialmente útil, seria de grande interesse ser capaz de conferir resistência em plantas selecionadas para tais herbicidas não seletivos como glufosinato, assim como a outros inibidores de glutamina sintetase herbicidas.

Enzimas que são resistentes a inibidores de glutamina sintetase herbicidas são conhecidas na técnica. Metiona sulfoximina (MSO), um análogo de glutamato, é um inibidor competitivo misturado de glutamina sintetase de folha de ervilha (Leason et al. (1982) Phytochemistry 21:855). Células de alfafa resistentes a fosfinotricina foram relatadas (Newmark (1983) Nature 305:383-384). A resistência foi devido à amplificação do gene de glutamina sintetase (Donn et al. (1984) Journal of Molecular and Applied Genetics 2: 621-635). 0 gene Bar, isolado de Streptomyces hygroscopicus, codifica a enzima fosfinotricina N-acetiltransferase (PAT). Este gene pode conferir resistência a herbicidas a base de glufosinato, já que PAT desintoxifica fosfinotricina por acetilação, o que produz um composto inativo.

Genes adicionais que são resistentes a inibidores de glutamina sintetase herbicidas são necessários onde a resistência é devido a uma mutação funcional na enzima glutamina sintetase, ao invés de uma amplificação ou inativação por acetilação da enzima. SUMÁRIO DA INVENÇÃO

Composições e métodos para conferir resistência a inibidores de glutamina sintetase herbicidas em plantas, células, tecidos e sementes vegetais são providos. Em um avanço, os polinucleotideos empregados nos vários métodos e composições conferem resistência a glufosinato. Composições incluem polinucleotideos codificando polipeptideos resistentes a inibidores de glutamina sintetase herbicidas, vetores compreendendo aqueles polinucleotideos, e células hospedeiras compreendendo os vetores. Composições compreendendo uma seqüência codificadora para um polipeptideo que confere resistência ou tolerância a inibidores de glutamina sintetase herbicidas são providas. Composições compreendendo uma seqüência codificadora para um polipeptideo que resulta em utilização melhorada de nitrogênio e/ou produção intensificada em uma planta são ainda providas. As seqüências codificadoras podem ser usadas em construções de DNA ou cassetes de expressão para transformação e expressão em organismos, incluindo microorganismos e plantas. As composições também compreendem bactérias, plantas, células, tecidos e sementes vegetais transformadas.

A presente invenção provê polinucleotideos isolados compreendendo SEQ ID NO: 1, assim como variantes da seqüência de polinucleotideos apresentada em SEQ ID N0:1, incluindo SEQ ID NOS: 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45, 47, ou a seqüência de nucleotídeos de glutamina sintetase em um hospedeiro bacteriano, como o No. de Acesso NRRL B-30930, depositado em 8 de junho de 2006 na Autoridade Depositária Intenacional da Coleção de Culturas de Pesquisas Agrícolas (Agricultural Research Culture Collection) (NRRL) International Depository Authority, 1815 N. University Street, Peoria, Illinois 61604 USA, e os polipeptideos correspondentes àqueles polinucleotideos. Em um avanço, Os polinucleotideos da presente invenção compreendem pelo menos uma modificação entre os aminoácidos 125 a 175 ou entre os aminoácidos 200 a 250 correspondentes à SEQ ID NO: 2, ou pelo menos uma modificação que resulte na perda de um sitio de adenilação.

DESCRIÇÃO DAS FIGURAS

As Figuras IA- IC mostram um alinhamento da seqüência de nucleotídeos dos variantes resistentes a herbicidas de glutamina sintetase, incluindo pAX3421ml (SEQ ID NO:4), pAX3422m2 (SEQ ID NO:6), pAX3427m3 (SEQ ID NO:8), pAX3428m4 (SEQ ID NO: 10), pAX3430m6 (SEQ ID NO: 12), pAX3431m7 (SEQ ID NO: 14), pAX3432m8 (SEQ ID NO: 16), pAX3433m9 (SEQ ID NO: 18), pAX3434ml0 (SEQ ID N0:20), pAX3435mll (SEQ ID NO: 22) , pAX3436ml2 (SEQ ID N0:24), pAX3437ml3 (SEQ ID NO: 26) , pAX3438ml4 (SEQ ID NO:28), pAX3426ml5 (SEQ ID NO: 30) e pAX3439ml6 (SEQ ID NO: 32) com a seqüência de aminoácidos agsl de tipo selvagem (SEQ ID NO:2).

DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO I. Composições

Composições e métodos para conferir resistência ou tolerância a herbicidas, particularmente resistência ou tolerância a inibidores de glutamina sintetase herbicidas, em organismos são providos. Os métodos envolvem transformar organismos com polinucleotideos codificando um gene de tolerância a herbicidas que codifica um polipeptideo que é resistente aos inibidores de glutamina sintetase herbicidas. Em um avanço, os polinucleotideos codificam um gene de tolerância a herbicidas que codifica um polipeptideo que é resistente a inibição por glufosinato. Por gene de "resistência a herbicidas" ou "tolerância a herbicidas" da invenção pretende-se a seqüência de nucleotideos apresentada em SEQ ID NO: 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45, ou 47 e fragmentos e variantes desses que codificam um polipeptideo de resistência ou tolerância ao inibidor de glutamina sintetase (inibidor-GS). Da mesma forma, um polipeptideo de "resistência a herbicidas" ou "tolerância a herbicidas" da invenção é um polipeptideo tendo a seqüência de aminoácidos apresentada em SEQ ID NO: 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, 46, e fragmentos e variantes desses, que conferem resistência ou tolerância ao inibidor-GS em uma célula hospedeira. A presente invenção provê polinucleotideos isolados compreendendo variantes da seqüência de polinucleotideos apresentada em SEQ ID N0:1, caracterizado pelo fato de que os variantes codificam polipeptideos que são resistentes a inibidores de glutamina sintetase herbicidas. Em um avanço, os polinucleotideos da presente invenção codificam polipeptideos que compreendem pelo menos uma modificação entre os aminoácidos 125 a 175 ou pelo menos uma modificação entre os aminoácidos 200 a 250 correspondentes a SEQ ID NO:2. Para os propósitos da presente invenção, "modificação" deve significar uma mudança na seqüência de nucleotideos que resulte em uma mudança no polipeptideo codificado. Uma modificação pode englobar também uma substituição de um aminoácido por outro aminoácido em uma seqüência polipeptidica. Por "correspondente a" pretende-se que as posições de aminoácidos mencionadas estejam relacionadas com as posições de aminoácidos designadas em SEQ ID NO:2, e que as substituições correspondentes a essas posições de aminoácidos podem ser encontradas em seqüências variantes quando essas seqüências variantes estão alinhadas com SEQ ID NO:2 usando métodos de alinhamento padrão.

Um plasmideo contendo a seqüência de nucleotideos de resistência a herbicidas da invenção foi depositado na coleção permanente da Coleção de Cultura do Serviço de Pesquisa Agrícola (Agricultural Research Service Culture Collection) , Northern Regional Research Laboratory (NRRL), 1815 North University Street, Peoria, Illinois 61604, Estados Unidos da America, em 8 de junho de 2006, e designado com o No. de Acesso B-30930. Este depósito será mantido sob os termos do Tratado de Budapeste sobre o Reconhecimento Internacional do Depósito de Microorganismos para os Propósitos de Procedimentos de Patentes (International Recognition of the Deposit of Microorganisms for the Purposes of Patent Procedure). Este depósito foi feito meramente como conveniência para aqueles especialistas na técnica e não é uma admissão de que um depósito é necessário sob 35 U.S.C. §112.

A definição da enzima "glutamina sintetase," ou "glutamina sintase" é funcional e inclui qualquer glutamina sintetase capaz de funcionar em um dado hospedeiro desejado, especialmente uma bactéria ou planta, para converter ácido glutâmico para glutamina. 0 termo, portanto, inclui não apenas a enzima da espécie de planta em particular envolvida na transformação, mas pode incluir glutamina sintetase de outra espécie vegetal ou microrganismos, se tal glutamina sintetase é capaz de funcionar na planta transformada ou células bacterianas.

0 termo "inibidor de glutamina sintetase herbicida" ou "inibidor de glutamina sintase herbicida" deve incluir qualquer inibidor, competitivo ou não competitivo, que diminua significativamente a atividade de glutamina sintetase de uma célula vegetal de uma determinada espécie e, como conseqüência disso, cause efeitos herbicidas na célula vegetal. Exemplos de inibidores de glutamina sintetase são glufosinato, fosfinotricina, metionina sulfoximina, assim como outros análogos de ácido glutâmico.

O termo "glufosinato" denota o composto conhecido, em sua forma biologicamente ativa. Pode estar presente em qualquer forma enantiomérica, e pode estar sozinho ou em combinação com outros compostos inertes ou ativos que não interferem com atividade de glufosinato.

A. Glutamina sintetase

Na presente invenção, a classe de enzimas que confere resistência a herbicidas é glutamina sintetase (GS). 0 termo "glutamina sintetase" ou "glutamina sintase" ou "GS", como aqui usado, refere-se tanto a glutamina sintetase nativa ou a um variante ou fragmento dessa.

Glutamina sintetase é uma enzima chave no metabolismo de nitrogênio; possui funções duplas em duas reações bioquímicas essenciais, assimilação de amônia e biossíntese de glutamina. A glutamina produzida por GS é essencial para a síntese de proteínas, e seu nitrogênio da amida é doado para sintetizar vários metabólitos essenciais.

A forma comum de GS é uma enzima duodecamérica com subunidades idênticas de aproximadamente 55 kDa, codificada por glnA. A estrutura cristal desta enzima revelou que é composta de 12 subunidades idênticas arranjadas como dois anéis hexagonais superpostos que são mantidos juntos tanto por interações hidrofóbicas e pontes de hidrogêncio entre as subunidades. (Yamashita et al. (1989) J. Biol. Chem. 264: 17681-17690). Glutamina sintetase catalisa a formação de glutamina a partir de glutamato e amônia em uma reação dependente de ATP. Ela também catalisa a transferência de gama-glutamil de glutamina para hidroxilamina produzindo gama-glutamilhidroximato (Stadtman et al. (1974) in The Enzymes (Boyer, ed.) 3:755-807 (Academic Press, New York).

A catálise de glutamina sintetase envolve a formação inicial de um intermediário gama-glutamil fosfato, seguido pelo deslocamento do grupamento fosfato ativado por amônio através da formação de um intermediário fosforilado tetraédrico. Em E. coli, os resíduos de Asp50 e Glu327 altamente conservados formam um bolso de ligação negativamente carregado que constitui o sítio de ligação de amônia (Liaw et al. (1995) Protein Sei. 4:2358-2365).

Numerosos inibidores potentes que imitam a geometria do intermediário tetraédrico são conhecidos para glutamina sintetase, incluindo glufosinato (ou fosfinotricina (PPT)) a L-metionina-DL-sulfoximida (MSX). A fosforilação de MSX e glufosinato é similar à fosforilação de glutamato na primeira etapa da reação enzimática normal de glutamina sintetase, e é necessária para que a inibição irreversível ocorra (Crespo et al. (1999) Eur. J. Biochem. 266:1202- 1209). Em plantas, a inibição de glutamina sintetase resulta em uma preparação de amônia fitotóxica e uma falta de aminoácidos essenciais, e uma inibição de fotorrespiração e fotossíntese e, por fim, morte da planta. Glufosinato é um composto natural isolado a partir de duas espécies de fungos Streptomicetos que inibe a atividade de glutamina sintetase. A aplicação de glufosinato resulta em níveis de glutamina reduzidos e um aumento correspondente em concentrações de amônia em tecidos vegetais, levando ao rompimento da membrana celular e interrupção de fotossíntese, resultando no ressecamento e morte da planta. Um número de análogos de glufosinato que inibem a glutamina sintetase vegetal é conhecido na técnica. Ver, por exemplo, Berlicki et al. (2005) J. Med. Chem. 48(20): 6340-6349 e Forlani et al. (2006) J. Agric. Food Chem. 54(3): 796-802; cada qual é aqui incorporada por referência em sua íntegra.

B. Glutamina sintetase resistente a herbicidas

Resistência a L-fosfinotricina foi relatada em células de alfafa, após uma seleção passo a passo em níveis crescentes de L-PPT, resultando na amplificação gênica (Donn et al. (1984) J. Mol. Appl. Genet. 2:621), e pela introdução em plantas de tabaco, batata e tomate, via transformação mediada por Agrobacterium do gene Bar, que codifica fosfinotricina acetiltransferase (PAT), uma enzima desintoxificadora (De Block et al. (1987) EMBOJ. 6:2513). Mutantes de enzimas glutamina sintetase vegetais que são resistentes a fosfinotricina são descritos em Patente U.S. No. 5.145.777. Esses mutantes conferem resistência pela super-expressão de glutamina sintetase. C. Atividade de glutamina sintetase

Uma variedade de métodos pode ser usada para medir a atividade de glutamina sintetase. Ver, por exemplo, Crespo et al. (1999) Eur. J. Biochem. 266:1202-1209, Gawronski et al. (2004) Anai. Biochem. 327:114-118, e Patente U.S. Nos. 5.098.838 e 5.145.777, cada qual é aqui incorporada por referência em sua integra. A atividade pode ser medida usando polipeptideos glutamina sintetase purificados, ou testando a habilidade de organismos transformados com os polinucleotideos da invenção para crescer na presença de inibidores de glutamina sintetase herbicidas.

D. Polinucleotideos isolados, e variantes e fragmentos desses

Em alguns avanços, a presente invenção compreende polinucleotideos isolados ou recombinantes codificando polipeptideos que são resistentes a inibidores de glutamina sintetase herbicidas. Um polinucleotideo ou polipeptideo "isolado" ou "purificado", ou porção biologicamente ativa, é substancialmente livre de outro material celular, ou meio de cultura quando produzido por técnicas recombinantes, ou substancialmente livre de precursores químicos ou outros químicos quando quimicamente sintetizado. Por "biologicamente ativo" pretende-se possuir a atividade biológica desejada do polipeptideo nativo, isto é, resistência a inibidores de glutamina sintetase herbicidas. Um polinucleotideo "isolado" pode ser livre de seqüências (por exemplo, seqüências codificando proteínas) que naturalmente flanqueiam o ácido nucléico (i.e., seqüências localizadas nas extremidades 5' e 3' do ácido nucléico) no DNA genômico do organismo do qual o polinucleotideo é derivado. Pra propósitos da invenção, "isolado" quando usado para referir-se a polinucleotídeos exclui cromossomos isolados. Por exemplo, em vários avanços, o polinucleotideo isolado codificando resistência a glifosato pode conter menos de cerca de 5 kb, 4 kb, 3 kb, 2 kb, 1 kb, 0,5 kb, ou 0,1 kb de seqüência de nucleotídeos que naturalmente flanqueiam o polinucleotideo no DNA genômico da célula da qual o polinucleotideo é derivado.

A presente invenção contempla ainda variantes e fragmentos dos polinucleotídeos aqui descritos. Um "fragmento" de um polinucleotideo pode codificar uma porção biologicamente ativa de um polipeptídeo, ou pode ser um fragmento que pode ser usado como uma sonda de hibridização ou primer de PCR usando métodos aqui descritos em outra parte. Polinucleotídeos que são fragmentos de um polinucleotideo compreendem pelo menos cerca de 15, 20, 50, 75, 100, 200, 300, 350, 400, 450, 500, 550, 600, 650, 700, 750, 800, 850, 900, 950, 1000, 1050, 1100, 1150, 1200, 1250, 1300, 1350, 1400 nucleotídeos contíguos, ou até o número de nucleotídeos presentes em polinucleotideo de comprimento total aqui descrito. Por nucleotídeos "contíguos" entende-se que são resíduos de nucleotídeos que são imediatamente adjacentes um ao outro.

Fragmentos dos polinucleotídeos da presente invenção geralmente codificarão fragmentos de polipeptídeos que retêm a atividade biológica da proteína de comprimento total de resistência a herbicidas; i.e., resistência a inibidores de glutamina sintetase herbicidas. Por "retém a atividade de resistência a herbicidas" pretende-se que o fragmento tenha pelo menos cerca de 30%, pelo menos cerca de 50%, pelo menos cerca de 70%, ou pelo menos cerca de 80% da atividade de resistência a herbicidas da proteína de comprimento total de resistência a herbicidas aqui descrita como SEQ ID NO: 6. Métodos para medir a atividade de resistência a herbicidas são bem conhecidos na técnica. Ver, por exemplo, Patente U.S. Nos. 5.098.838 e 5.145.777, cada qual é aqui incorporada por referência em sua íntegra. Atividade pode também referir-se à atividade enzimática da enzima glutamina sintetase como aqui descrito em outra parte.

Um fragmento de um polinucleotídeo que codifica uma porção biologicamente ativa de um polipeptídeo da invenção codificará pelo menos cerca de 15, 25, 30, 50, 75, 100, 1 25, 150, 175 , 2 0 0 , 2 5 0 , 300, 350 , 400, 450 aminoácidos contíguos, ou até o número total de aminoácidos presentes em um polipeptídeo de comprimento total da invenção. A invenção também engloba polinucleotideos variantes. "Variantes" do polinucleotideo incluem aquelas seqüências que codificam os polipeptideos aqui descritos, mas que diferem conservativamente por causa da degeneração do código genético, assim como aquele que são suficientemente idênticos. 0 termo "suficientemente idêntico" deve significar um polipeptideo ou seqüência de polinucleotideos que possui pelo menos cerca de 60% ou 65% de identidade de seqüência, cerca de 70% ou 75% de identidade de seqüência, cerca de 80% ou 85% de identidade de seqüência, cerca de 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de identidade de seqüência comparado a uma seqüência referência usando um dos programas de alinhamento usando parâmetros padrão. Um especialista na técnica reconhecerá que esses valores podem ser apropriadamente ajustados para determinar a identidade correspondente de polipeptideos codificada por dois polinucleotideos . levando-se em consideração a degeneração de códons, similaridade de aminoácidos, posicionamento da fase de leitura, e similares.

Para determinar o percentual de identidade de duas seqüências de aminoácidos ou de dois polinucleotideos, as seqüências são alinhadas para propósitos de comparação ótima. O percentual de identidade entre as duas seqüências é uma função do número de posições idênticas compartilhadas pelas seqüências (i.e., percentual de identidade = número de posições idênticas/número total de posições (e.g., posições se sobrepondo) χ 100). Em um avanço, as duas seqüências são do mesmo comprimento. 0 percentual de identidade entre duas seqüências pode ser determinado usando técnicas similares àquelas descritas abaixo, permitindo ou não espaços vazios. Quando calcular o percentual de identidade, são contadas tipicamente as correspondências exatas.

A determinação do percentual de identidade entre duas seqüências pode ser conseguida usando um algoritmo matemático. Um exemplo não limitante de um algoritmo matemático utilizado para a comparação de duas seqüências é o algoritmo de Karlin and Altschul (1990) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 87:2264, modificado como em Karlin & Altschul (1993) Proc. Natl. Acad. Sei. USA 90:5873-5877. Tal algoritmo é incorporado nos programas BLASTN e BLASTX de Altschul et al. (1990) J. Mol. Biol. 215:403. Buscas de nucleotideos BLAST podem ser realizadas com o programa BLASTN, pontuação = 100, tamanho de palavra = 12, para se obter polinucleotideos homólogos a polinucleotideos codificando resistência a herbicidas usados em métodos da invenção. Buscas BLAST de polipeptideos podem ser efetuadas com o programa BLASTX, pontuação = 50, tamanho de palavra = 3, para se obter seqüências de aminoácidos homólogas a moléculas polipeptidicas expressas usando os métodos da invenção. Para se obter alinhamentos com espaços para fins de comparação, Gapped BLAST pode ser utilizado como descrito em Altschul et al. (1997) Nucleic Acids Res. 25:3389. Alternativamente, PSI-Blast pode ser usado para efetuar uma busca iterada que detecte relações distantes entre moléculas. Ver Altschul et al. (1997) supra. Quando os programas utilizando BLAST, Gapped BLAST, e PSI-Blast, os parâmetros padrão dos respectivos programas (e.g., BLASTX e BLASTN) podem ser usados. Ver www.ncbi.nlm.nih.gov. Outro exemplo não limitante de um algoritmo matemático utilizado para a comparação de seqüências é o algoritmo de ClustalW (Higgins et al. (1994) Nucleic Acids Res. 22:4673-4680). ClustalW compara seqüências e alinha a totalidade da seqüência de aminoácidos ou de DNA e, assim, pode prover dados acerca da conservação de seqüência de toda a seqüência de aminoácidos. 0 algoritmo de ClustalW é usado em diversos pacotes de software de análise de DNA/aminoácido comercialmente disponíveis, tal como o módulo ALIGNX de Vector NTI Program Suite (Invitrogen Corporation, Carlsbad, CA). Após o alinhamento de seqüências de aminoácidos com ClustalW, a percentual de identidade de aminoácidos pode ser avaliada. Um exemplo não limitante de um software útil para análise em alinhamentos de ClustalW é GENEDOC™. GENEDOC™ (Karl Nicholas) permite a obtenção da similaridade e identidade de aminoácidos (ou DNA) entre múltiplos polipeptídeos. Outro exemplo não limitante de um algoritmo matemático utilizado para a comparação de seqüências é o algoritmo de Myers and Miller (1988) CABIOS 4: 11-17. Tal algoritmo é incorporado no programa ALIGN (versão 2.0), que é parte do pacote de software de alinhamento de seqüências GCG. Quando utilizando o programa ALIGN para comparar seqüências de aminoácidos, uma tabela de peso de resíduos PAM 120, uma penalidade por comprimento de espaço de 12, e uma penalidade por espaço de 4 podem ser usadas.

A menos que declarado ao contrário, GAP Versão 10, que usa o algoritmo de Needleman and Wunsch (1970) J. Mol. Biol. 48 (3):443-453 é usado para determinar a identidade ou similaridade de seqüências usando os seguintes parâmetros: % identidade e % similaridade para uma seqüência de nucleotideos usando peso GAP (GAP Weight) de 50 e peso de comprimento (Length Weight) de 3, e a matriz de pontuação de nwsgapdna.cmp; % identidade ou % similaridade para uma seqüência de aminoácidos usando peso GAP de 8 e peso de comprimento de 2, e o programa de pontuação BLOSUM62. Programas equivalentes também podem ser usados. Por "programa equivalente" pretende-se qualquer programa de comparação de seqüências que, para quaisquer duas seqüências em questão, gere um alinhamento tendo correspondências de resíduos de nucleotideos idênticas e identidade de seqüência percentual idêntica quando comparado ao alinhamento correspondente gerado pelo programa GAP Version 10.

Variantes alélicos naturalmente ocorrentes podem ser identificados com o uso de técnicas de biologia molecular bem conhecidas, tal como reação de cadeia de polimerase (PCR) e técnicas de hibridização, como destacado abaixo. Polinucleotideos variantes também incluem polinucleotideos derivados sinteticamente que foram gerados, por exemplo, usando-se mutagênese sítio direcionada, mas que ainda codificam o polipeptideo tendo a atividade biológica desejada.

0 especialista na técnica irá ainda ponderar que mudanças podem ser introduzidas por mutação nos polinucleotideos da invenção, levando, dessa forma, a mudanças na seqüência de aminoácidos dos polipeptideos codificados, sem alterar a atividade biológica dos polipeptideos. Assim, polinucleotideos variantes isolados podem ser criados introduzindo um ou mais substituições, adições ou deleções de nucleotideos no polinucleotideo correspondente aqui descrito, de forma que um ou mais substituições, adições ou deleções de aminoácido sejam introduzidas no polipeptideo codificado. Mutações podem ser introduzidas por técnicas padrão, tal como mutagênese sitio direcionada e mutagênese mediada por PCR, ou técnicas de embaralhamento de genes. Tais polinucleotideos variantes são também englobados pela presente invenção.

Polinucleotideos variantes podem ser feitos introduzindo mutações randomicamente ao longo de toda ou parte da seqüência codificadora, tal como por mutagênese de saturação, e os mutantes resultantes podem ser rastreados para a habilidade de conferir atividade de resistência a herbicidas para identificar mutantes que retêm atividade. Após a mutagênese, o polipeptideo codificado pode ser expresso de forma recombinante, e a atividade do polipeptideo pode ser determinada usando técnicas de teste padrão. Procedimentos de embaralhamento de genes ou PCR sexuado (por exemplo, Smith (1994; Nature 370:324-325; Patente U.S. Nos. 5.837.458; 5.830.721; 5.811.238; e 5.733.731. cada qual é aqui incorporada por referência) podem ser usados para se identificar polinucleotideos adicionais que codificam polipeptideos que efetuam funções similares como aqueles aqui descritos (por exemplo, polipeptideos que são resistentes a inibidores de glutamina sintetase herbicidas). 0 embaralhamento de genes envolve a fragmentação aleatória de diversos DNAs mutantes, seguido por seu reagrupamento por PCR em moléculas de comprimento total. Exemplos de vários procedimentos de embaralhamento de genes incluem, mas não são limitados a, reunião seguido por tratamento com DNase, o processo de extensão alternado (STEP), e recombinação in vitro por iniciação aleatória. No método mediado por DNase, segmentos de DNA isolados a partir de um grupo de mutantes positivos são clivados em fragmentos randômicos com DNaseI e sujeitos a múltiplas rodadas de PCR com nenhum primer adicionado. Os comprimentos de fragmentos randômicos se aproximam aquele do segmento não clivado à medida que os ciclos de PCR prosseguem, resultando em mutações em diferentes clones se tornando misturados e acumulando em algumas das seqüências resultantes. Múltiplos ciclos de seleção e embaralhamento levaram à intensificação funcional de diversas enzimas (Stemmer (1994; Nature 370:389-391; Stemmer (1994) Proc. Natl. Acad. Sei. USA 91 :10747-10751; Crameri et al. (1996) Nat. Biotechnol. 14:315-319; Zhang et al. (1997) Proc. Natl. Acad. Sei. USA 94:4504-4509; e Crameri et al. (1997) Nat. Biotechnol. 15:436-438). Estratégias de mutagênese por permutação podem ser também efetuadas. Ver, por exemplo, U.S. Provisional Application No. 60/813.095, preenchida em 13 de junho de 2006, aqui incorporada por referência em sua integra. Tais procedimentos poderiam ser efetuados, por exemplo, em polinucleotídeos codificando polipeptideos que são resistentes a inibidores de glutamina sintetase herbicidas.

Em um método de hibridização, toda ou parte da seqüência de polinucleotídeos de resistência a herbicidas ou uma seqüência codificando um domínio da invenção podem ser usados para rastrear bibliotecas de cDNA ou genômico. Métodos para a construção de tais bibliotecas de cDNA ou genômico são geralmente conhecidos na técnica e são descritos em Sambrook and Russell, 2001, supra. As chamadas sondas de hiridização podem ser fragmentos de DNA genômico, fragmentos de cDNA, fragmentos de RNA, ou outros oligonucleotídeos, e podem ser rotulados com um grupamento detectável, tal como 32P, ou qualquer outro marcador detectável, tal como outros radioisótopos, um composto fluorescente, uma enzima, ou um co-fator enzimático. Sondas para hibridização podem ser feitas rotulando-se oligonucleotídeos sintéticos baseado na seqüência de nucleotídeos codificando resistência a herbicidas conhecida aqui descrita. Primers degenerados projetados com base nos resíduos de nucleotídeos ou aminoácidos conservados na seqüência de nucleotídeos ou seqüência de aminoácidos codificada podem ser adicionalmente usados. A sonda compreende tipicamente uma região de seqüência de nucleotideos que hibridiza sob condições estringentes a pelo menos cerca de 12, pelo menos cerca de 25, pelo menos cerca de 50, 75, 100, 125, 150, 175, 200, 250, 300, 350, 400, 500, 600, 700, 800, 900, 1000, 1200, ou 1400 nucleotideos consecutivos do polinucleotideo codificando resistência a herbicidas da invenção ou um fragmento ou variante desses. Métodos para a preparação de sondas para hibridização são geralmente conhecidos na técnica e são descritos em Sambrook and Russell (2001) supra, e Sambrook et al. (1989) Molecular Cloning: A Laboratory Manual (2d ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, New York), ambas são aqui incorporadas por referência.

A hibridização de tais seqüências pode ser conduzida sob condições estringentes. Por "condições estringentes" ou "condições de hibridização estringentes" pretende-se condições sob as quais uma sonda hibridizará a sua seqüência alvo em um grau detectavelmente maior do que a outras seqüências (e.g., pelo menos 2 vezes sobre a base). Condições estringentes são dependentes de seqüência e serão diferentes em circunstâncias diferentes. Controlando a estringência das condições de hibridização e/ou lavagem, seqüências alvo que são 100% complementares à sonda podem ser identificadas (sondagem homóloga). Alternativamente, condições de estringência podem ser ajustadas para permitir alguma falta de correspondência em seqüências, de forma que níveis menores de similaridade sejam detectados (sondagem heteróloga). Geralmente, uma sonda é de menos do que cerca de 1000 nucleotideos em comprimento, ou menos do que cerca de 500 nucleotideos em comprimento.

Condições estringentes podem ser aquelas nas quais a concentração de sais é de menos do que cerca de 1,5 M de íons de Na, ou cerca de 0,01 a 1,0 M de concentração de íons de Na (ou outros sais) em pH 7,0 a 8,3 e a temperatura é de pelo menos cerca de 30 0C para sondas curtas (e.g., 10 a 50 nucleotideos) e pelo menos cerca de 60°C para sondas longas (e.g., maiores do que 50 nucleotideos). Condições estringentes podem ser também alcançadas com a adição de agentes desestabilizantes, tais como formamida. Condições exemplares de baixa estringência incluem hibridização com uma solução tampão de 30 a 35% de formamida, NaCl 1 Μ, 1 % SDS (sódio dodecil sulfato) a 37 °C, e uma lavagem em IX a 2X SSC (2OX SSC = NaCl 3,0 M / trissódio citrato 0,3 M) a 50 a 55°C. Condições exemplares de estringência moderada incluem hibridização em 40 a 45% formamida, NaCl 1,0 M, 1% SDS a 37°C, e uma lavagem em 0,5X a IX SSC a 55 a 60°C. Condições exemplares de estringência elevada incluem hibridização em 50% formamida, NaCl 1 M, 1% SDS a 37 °C, e uma lavagem em 0,1X SSC a 60 a 65°C por pelo menos 30 minutos. Opcionalmente, tampões de lavagem podem compreender cerca de 0,1% a cerca de 1% SDS. A duração de hibridização é de geralmente menos do que cerca de 2 4 horas, usualmente cerca de 4 a cerca de 12 horas. A especificidade é tipicamente a função de lavagens pós hibridização, com os fatores críticos sendo a força iônica e temperatura da solução de lavagem final. Para híbridos DNA-DNA, o ponto de fusão (Tm) pode ser aproximado a partir da equação de Meinkoth e Wahl (1984) Anal. Biochem. 138:267-284: Tm = 81,5°C + 16,6 (log M) + 0,41 (%GC) - 0,61 (% form) - 500/L; onde M é a molaridade de cátions monovalentes, %GC é a porcentagem de nucleotídeos guanosina e citosina no DNA, % form é a porcentagem de formamida na solução de hibridização, e L é o comprimento do híbrido em pares de bases. A Tm é a temperatura (sob definidas força iônica e pH) na qual 50% de uma seqüência alvo complementar hibridiza a uma sonda perfeitamente correspondente. A Tm é reduzida em cerca de 1 C para cada 1% de falta de correspondência; assim, condições de Tm, hibridização, e/ou lavagem podem ser ajustadas para hibridizar a seqüências da identidade desejada. Por exemplo, se seqüências com >90% de identidade são procuradas, a Tm pode ser diminuída em 10°C. Por exemplo, se seqüências com >90% de identidade são procuradas, a Tm pode ser diminuída em 10°C. Geralmente, condições estringentes são selecionadas para serem cerca de 5°C menores do que o ponto de fusão (Tm) para a seqüência específica e seu complemento em uma definida força iônica e pH. Contudo, condições severamente estringentes podem utilizar uma hibridização e/ou lavagem a 1, 2, 3, ou 4°C menor do que o ponto de fusão (Tm) ; condições moderadamente estringentes podem utilizar uma hibridização e/ou lavagem a 6, 7, 8, 9 ou 10°C menor do que o ponto de fusão (Tm); condições de baixa estringência podem utilizar uma hibridização e/ou lavagem a 11, 12, 13, 14, 15 ou 20°C menor do gue o ponto de fusão (Tm) . Usando a equação, condições de hibridização e lavagem, e Tm desejada, aqueles de habilidade ordinária entenderão que variações na estringência de soluções de hibridização e/ou lavagem são inerentemente descritas. Se o grau desejado de falta de correspondência resulta em uma Tm de menos do que 45°C (solução aquosa) ou 32°C (solução de formamida), a concentração de SSC pode ser aumentada de forma que uma maior temperatura possa ser usada. Um guia extensivo para a hibridização de ácidos nucléicos é encontrado em Tijssen (1993) Laboratory Techniques in Biochemistry and Molecular Biology—Hybridization with Nucleic Acid Probesf Part I, Chapter 2 (Elsevier, New York); e Ausubel, et al., eds. (1995) Current Protocols in Molecular Biology, Chapter 2 (Greene Publishing and Wiley-Interscience, New York). Ver, Sambrook, et al., (1989) Molecular Cloning: A Laboratory Manual (2d ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press, Plainview, New York).

E. Proteínas Isoladas e Variantes e Fragmentos destas

Polipeptideos de resistência a herbicidas são também englobados na presente invenção. Um polipeptideo de resistência a herbicidas que é substancialmente livre de material celular inclui preparações de polipeptideos tendo menos do que cerca de 30%, 20%, 10%, ou 5% (por peso seco) de polipeptideo que não de resistência a herbicidas (também referido aqui como uma "proteína contaminante"). Na presente invenção, "proteína de resistência a herbicidas"· deve significar um polipeptídeo que é resistente a inibidores de glutamina sintetase herbicidas. Em alguns avanços, a proteína de resistência a herbicida confere resistência para glufosinato. Fragmentos, porções biologicamente ativas, e variantes destas também são providos, e podem ser usados para praticar os métodos da presente invenção.

"Fragmentos" de "porções biologicamente ativas" incluem fragmentos de polipeptídeos compreendendo uma porção de uma seqüência de aminoácidos codificando uma proteína de resistência a herbicidas e que retenha atividade de resistência a herbicida. Uma porção biologicamente de uma proteína de resistência a herbicidas pode ser um polipeptídeo que é, por exemplo, de 10, 25, 50, 100 ou mais aminoácidos em tamanho. Tais porções biologicamente ativas podem ser preparadas por técnicas de recombinação e avaliadas para atividade de resistência a herbicida.

Por "variantes" entende-se que são proteínas ou polipeptídeos tendo uma seqüência de aminoácido que é pelo menos de cerca de 60%, 65%, cerca de 70%, 75%, cerca de 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% idêntica a SEQ ID NO: 2, caracterizado pelo fato de que um ou mais aminoácidos correspondendo às posições 125 até 175 e/ou posições 200-250 da SEQ ID NO: 2 tenham sido modificados de tal forma que o polipeptideo é resistente ao inibidor de glutamina sintetase herbicida, ou caracterizado pelo fato de que um ou mais aminoácidos tenham sido modificados de tal forma que exista uma perda de um ou mais sítios de adenilação no polipeptideo resultante. Esta proteína pode ser alterada de diversas formas incluindo substituições, deleções, encurtamentos, e inserções de aminoácidos de um ou mais aminoácidos da SEQ ID NO:4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, 44, ou 46, incluindo até cerca de 2, cerca de 3, cerca de 4, cerca de 5, cerca de 6, cerca de 7, cerca de 8, cerca de 9, cerca de 10, cerca de 15, cerca de 20, cerca de 25, cerca de 30, cerca de 35, cerca de 40, cerca de 45, cerca de 50, cerca de 55, cerca de 60, cerca de 65, cerca de 70, cerca de 75, cerca de 80, cerca de 85, cerca de 90, cerca de 100 ou mais substituições de aminoácidos, deleções ou inserções. Um especialista na técnica irá reconhecer que esses valores podem ser apropriadamente ajustados para determinar a identidade correspondente do polipeptideo codificado por dois polinucleotídeos levando-se em conta a degeneração de códon, a similaridade de aminoácidos, o posicionamento da fase de leitura, e similares.

Por exemplo, substituições conservadas de aminoácidos podem ser feitas em um ou mais resíduos de aminoácidos não essenciais. Um resíduo de aminoácido "não essencial" é um resíduo que pode ser modificado a partir da seqüência selvagem de um polipeptideo sem alterar a atividade biológica, enquanto que um resíduo de aminoácido "essencial" é necessário para a atividade biológica. Uma "substituição conservada de aminoácido" é uma na qual o resíduo de aminoácido é substituído por um resíduo de aminoácido tendo uma cadeia lateral similar. Famílias de resíduos de aminoácidos tendo cadeias laterais similares foram definidas na técnica. Estas famílias incluem aminoácidos com cadeias laterais básicas (por exemplo, lisina, arginina, histidina), cadeias laterais ácidas (por exemplo, ácido aspártico, ácido glutâmico), cadeias laterais sem carga (por exemplo, glicina, asparagina, glutamina, serina, treonina, tirosina, cisteína), cadeias laterais apolares (por exemplo, alanina, valina, leucina, isoleucina, prolina, fenilalanina, metionina, triptofano), cadeias laterais beta-ramifiçadas (por exemplo, treonina, valina, isoleucina) e cadeias laterais aromáticas (por exemplo, tirosina, fenilalanina, triptofano, histidina).

Substituições de aminoácidos podem ser feitas em regiões não conservadas que retenham a função. Em geral, tais substituições não seriam feitas para resíduos de aminoácidos. conservados, ou para resíduos de aminoácidos residindo em um motivo conservado, onde tais resíduos são essenciais para a atividade do polipeptídeo. Entretanto, um especialista na técnica entenderia que variantes funcionais podem ter pequenas alterações conservativas ou não conservativas ou modificações nos resíduos conservados.

Variantes também incluem polipeptídeos codificados por um polinucleotídeo que hibridiza com o polinucleotídeo que codifica um polipeptídeo que é resistente ao inibidor glutamina sintetase herbicida, ou uma complemento desse, sob condições estringentes. Variantes incluem polipeptideos que diferem na seqüência de aminoácido devido a mutagênese. Proteínas variantes englobadas pela presente invenção são biologicamente ativas, isto é, continuam a possuir a atividade biológica desejada da proteína nativa, que é reter a atividade de resistência a herbicidas. Métodos para medir a atividade de resistência a herbicidas são bem conhecidos na técnica. Ver, por exemplo, Patente U.S. Nos. 5.098.838 e 5.145.777, cada uma das quais é aqui incorporada por referência na sua íntegra.

Genes bacterianos muito freqüentemente possuem múltiplos códons de iniciação para metionina nas proximidades do início do quadro de iniciação de leitura. Freqüentemente, a iniciação da tradução em um ou mais destes códons de iniciação levará à geração de uma proteína funcional. Esses códons de iniciação podem incluir códons ATG. Entretanto, bactérias como Bacillus sp. também reconhecem o códon GTG como um códon de iniciação, e proteínas que iniciam a tradução em códons GTG contém uma metionina como primeiro aminoácido. Adicionalmente, não é freqüentemente determinado a priori quais desses códons são usados naturalmente na bactéria. Então, é compreendido que o uso de um desses códons alternativos de metionina pode levar à geração de variantes que conferem resistência a herbicidas. Essas proteínas de resistência a herbicidas são englobadas na presente invenção e podem ser usadas nos métodos da presente invenção. Anticorpos para os polipeptideos da presente invenção, ou para variantes ou fragmentos desses, também são englobados. Métodos para a produção de anticorpos são bem conhecidos na técnica (ver, por exemplo, Harlow and Lane (1988) Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, NY; Patente U.S. No. 4.196.265).

F. Construções de polinucleotídeos

Os polinucleotídeos empregados nos métodos e composições da invenção podem ser modificados para se obter ou aumentar a expressão nas células vegetais. Os polinucleotídeos codificando os polipeptideos da invenção podem ser providos em cassetes de expressão para expressão na planta de interesse. Um "cassete de expressão em planta" inclui uma construção de DNA que é capaz de resultar na expressão de um polinucleotídeo em uma célula vegetal. O cassete pode incluir na direção de transcrição 5'-3', uma região de iniciação transcricional (ou seja, promotor) operacionalmente ligado a um ou mais polinucleotídeos de interesse, e uma região de terminação de tradução e de trasncrição (ou seja, região de terminação) funcional em plantas. O cassete pode conter adicionalmente pelo menos um polinucleotídeo adicional para ser introduzido no organismo, como um gene marcador selecionável. Alternativamente, o(s) polinucleotídeo(s) adicional(is) pode ser provido em múltiplos cassetes de expressão. Tal cassete de expressão é provido com uma pluralidade de sítios de restrição para inserção do polinucleotídeo a estar sob regulação transcricional das regiões reguladoras.

"Heterólogo" geralmente refere-se ao polinucleotídeo ou polipeptídeo que não é endógeno da célula ou não é endógeno ao local no genoma nativo no qual está presente, e tenha sido adicionado à célula por infecção, transfecção, microinjeção, eletroporação, microprojeção, ou similares. Por "operacionalmente ligado" pretende-se uma ligação funcional entre dois polinucleotídeos. Por exemplo, quando um promotor é operacionalmente ligado a uma seqüência de DNA, a seqüência promotora inicia e medeia a transcrição da seqüência de DNA. É reconhecido que os polinucleotídeos ligados operacionalmente podem ou não ser contíguos e, onde usados para referenciar a junção de duas regiões codificadoras de polipeptídeos, os polipeptídeos são expressos na mesma fase de leitura.

0 promotor pode ser qualquer seqüência de polinucleotídeos que demonstrar atividade na célula vegetal escolhida, parte da planta, ou planta. 0 promotor pode ser nativo ou análogo, ou exógeno ou heterólogo, à planta hospedeira e/ou à seqüência de DNA da invenção. Quando um promotor é "nativo" ou "análogo" à planta hospedeira, pretende-se que este promotor seja encontrado na planta nativa na qual o promotor é introduzido. Quando o promotor é "exógeno" ou "heterólogo" à seqüência de DNA da invenção, pretende-se que o promotor não seja nativo ou naturalmente ocorrente para a seqüência de DNA a qual está operacionalmente ligado na invenção. 0 promotor pode ser induzivel ou constitutivo. Este pode ser naturalmente- ocorrente, pode ser composto de porções de vários promotores naturalmente-ocorrentes, ou pode ser parcialmente ou totalmente sintético. Uma orientação para o desenho de promotores é fornecida por estudos de estrutura de promotor, tais como os de Harley and Reynolds (1987) Nucleic Acids Res. 15: 2343-2361. Ainda, a localização do promotor em relação ao inicio da transcrição pode ser otimizada. Ver, por exemplo, Roberts et al. (1979) Proc. Natl Acad. Sei. USA, 76: 7 60-7 64. Vários promotores adequados para o uso em plantas são bem conhecidos na técnica.

Por exemplo, promotores constitutivos adequados para o uso em plantas incluem: os promotores para viroses de plantas, tais como o promotor de caulimovírus da faixa clorótica de amendoim (PClSV) (Patente U.S. No. 5.850.019); o promotor 35S de virus mosaico de couve-flor (CaMV) (Odell et al. (1985; Nature 313: 810-812); promotores dos genes da metiltransferase do virus de Chlorella (Patente U.S. No. 5.563.328) e o promotor transcrito em tamanho integral de virus mosaico da escrofulária (FMV) (Patente U.S. No. 5.378.619); os promotores de genes tais qual actina de arroz (McElroy et al. (1990) Plant Cell 2:163-171); ubiquitina (Christensen et al. (1989) Plant Mol. Biol. 12 619-632 e Christensen et al. (1992) Plant Mol. Biol. 18 675-689); pEMU (Last et al. (1991) Theor. Appl. Genet. 81 581-588); MAS (Velten et al. (19M) EMBO J. 3:2723-2730); histona Η3 de milho (Lepetit et ai. (1992) Mol. Gen. Genet. 231: 276-285 e Atanassova et ai. (1992) Plant J. 2(3): 291- 300); ALS3 de Brassica napus (PCT application WO 97/41228); e promotores de vários genes de Agrobacterium (ver Patente U.S. Nos. 4.771.002; 5.102.796; 5.182.200; è 5.428.147).

Promotores induziveis adequados para uso em plantas incluem: o promotor de sistema ACEl, o qual responde a cobre (Mett et al. (1993) PNAS 90:4567-4571); o promotor do gene In2 de milho, o qual responde a protetores de herbicida benzenosulfonamida (Hershey et al. (1991) Mol. Gen. Genetics 227:229-237 e Gatz et al. (1994) Mol. Gen. Genetics 243:32-38); e o promotor do repressor Tet de TnIO (Gatz et al. (1991) Mol. Gen. Genet. 227:229-237) . Outro promoter induzivel para uso em plantas é um que responda a um agente indutor ao qual plantas normalmente não respondem. Um exemplar de promotor induzivel deste tipo é o promotor induzivel proveniente de um gene de hormônio esteróide, o qual a atividade transcricional é induzida pelo hormônio glucocorticosteróide (Schena et al. (1991) Proc. Natl. Acad. Sei. USA 88: 10421) ou a aplicação recente de um ativador transcricional quimérico, XVE, para uso em um sistema de expressão de planta induzivel a base de um receptor de estrogênio e ativado por estradiol (Zuo et al. (2000) Plant J. 24: 265-273). Outros promotores induziveis para uso em plantas são descritos em EP 332104, PCT WO 93/21334 e PCT WO 97/06269 os quais são aqui incorporados por referência na integra. Promotores compostos de porções de outros promotores e parcialmente ou totalmente sintéticos podem também ser utilizados. Ver, por exemplo, Ni et al. (1995) Plant J. 7: 661-676 e PCT WO 95/14098 descrevendo tais promotores para uso em plantas.

0 promotor pode incluir, ou ser modificado para incluir, um ou mais elementos intensificadores. Em alguns avanços, o promotor pode incluir uma pluralidade de elementos intensificadores. Promotores contendo elementos intensificadores provêm para altos níveis de transcrição em comparação com promotores que não os incluem. Elementos intensificadores adequados para o uso em plantas incluem o elemento intensificador PClSV (Patente U.S. No. 5.850.01-9), o elemento intensificador CaMV 35S (Patente U.S. Nos. 5.106.739 e 5.164.316) e o elemento intensificador FMV (Maiti et al. (1997) Transgenic Res. 6:143-156). Ver também PCT WO 96/23898.

Freqüentemente, tais construções podem conter regiões não transcritas a 5' e 3'. Tais construções podem conter uma "seqüência sinal" ou "seqüência líder" para facilitar o transporte co-traducional ou pós-traducional do peptídeo de interesse para certas estruturas intracelulares como o cloroplasto (ou outro plastídeo), retículo endoplasmático, ou complexo de Golgi, ou para ser secretado. Por exemplo, a construção pode ser elaborada para conter um peptídeo sinal para facilitar a transferência do peptídeo para o retículo endoplasmático. Por "seqüência sinal" pretende-se uma seqüência que é sabida ou suspeita de estar na origem do transporte co-tradução ou pós-tradução do peptídeo através da membrana celular. Em eucariotos, isso envolve tipicamente secreção para o complexo de Golgi, com alguma glicosilação resultante. Por "seqüência líder" pretende-se qualquer seqüência que, quando traduzida, resulte em uma seqüência de aminoácido suficiente para engatilhar o transporte co-traducional da cadeia peptídica para uma organela sub-celular. Sendo assim, isto inclui seqüências líder direcionando o transporte e/ou glicosilação por passagem por dentro do retículo endoplasmático, passagem para vacúolos, plastídeos incluindo cloroplastos, mitocôndria, e similares. Também pode ser preferível construir o cassete de expressão em planta para conter um íntron, de forma que o processamento do íntron deste mRNA seja necessário para a expressão.

Por "região 3' não traduzida" pretende-se um polinucleotídeo localizado abaixo da seqüência codificadora. Seqüências sinal de poliadenilação e outras seqüências codificando sinais regulatórios capazes de afetar a adição de tratos de ácido poliadenilados à extremidade 3' do mRNA precursor são regiões 3' não traduzidas. Por "regiões 5' não traduzidas" pretende-se um polinucleotídeo localizado acima da seqüência codificadora.

Outros elementos não traduzidos acima ou abaixo incluem os intensificadores. Intensificadores são polinucleotídeos que agem para aumentar a expressão de uma região promotora. Intensificadores são bem conhecidos na técnica e incluem, mas não são limitados a, uma região intensificadora SV40 e o elemento intensificador 35 S. A região de terminação pode ser nativa em relação à região de iniciação de transcrição, pode ser nativa com seqüência da presente invenção, ou pode ser derivada de outra fonte. Regiões de terminação convenientes são disponíveis a partir do plasmídeo Ti de A. tumefaciens, tais como as regiões de terminação de octopina sintase e de nopalina sintase. Ver também Guerineau et al. (1991) Mol. Gen. Genet. 262: 141-144; Proudfoot (1991) Cell 64: 671 - 674; Sanfacon et al. (1991) Genes Dev. 5: 141-149; Mogen et al. (1990) Plant Cell 2: 1261-1272; Munroe et al. (1990) Gene 91: 151-158; Bailas et al. (1989) Nucleic Acids Res. 17: 7891-7903; e Joshi et al. (1987) Nucleic Aeid Res. 15: 9627-9639.

Em um aspecto da invenção, seqüências sintéticas de DNA são desenhadas para um dado polipeptídeo, tais como os polipeptídeos da invenção. A expressão da fase aberta de leitura da seqüência sintética de DNA em uma célula resulta na produção de um polipeptídeo da invenção. Seqüências de DNA sintéticas podem ser úteis para simplesmente remover sítios de restrição indesejáveis, para facilitar estratégias de clonagem de DNA, para alterar ou remover qualquer potencial bias de códon, para alterar ou aumentar o conteúdo de GC, para remover ou alterar quadros de leitura alternados, e/ou para alterar ou remover sítios de reconhecimento de splice de íntron/éxon, sítios de poliadenilação, seqüências Shine-Delgarno, elementos promotores indesejáveis e similares que possam estar presentes na seqüência de DNA nativa. Também é possível que as seqüências de DNA sintéticas possam ser utilizadas para introduzir outros melhoramentos para uma seqüência de DNA, tais como a introdução de uma seqüência de íntron, criação de uma seqüência de DNA que é expressa como proteína de fusão para seqüências com direcionamento para organelas, como peptídeos de trânsito para cloroplasto, peptídeos direcionados para apoplasto/vacúolos, ou seqüências peptídicas que resultem na retenção do peptídeo resultante no retículo endoplasmático. Genes sintéticos também podem ser sintetizados utilizando-se códons preferenciais da célula hospedeira para aumento da expressão, ou podem ser sintetizados utilizando-se códons em uma freqüência de uso preferida pelo hospedeiro. Ver, por exemplo, Campbell and Gowri (1990) Plant Physiol. 92: 1-11; Patente U.S. Nos. 6.320.100; 6.07 5.185; 5.380.831; e 5.4 36.391, U.S. Published Application Nos. 20040005600 e 20010003849, e Murray et al. (1989) Nucleic Acids Res. 17: 477-498, aqui incorporadas por referência.

Em um avanço, os polinucleotídeos de interesse são direcionados para o cloroplasto para expressão. Dessa maneira, aonde o polinucleotídeo de interesse não for diretamente inserido no cloroplasto, o cassete de expressão irá conter adicionalmente um polinucleotídeo codificando um peptídeo de trânsito para direcionar o nucleotídeo de interesse para os cloroplastos. Tais peptídeos de trânsito são conhecidos na técnica. Ver, por exemplo, Von Heijne et al. (1991) Plant Mol. Biol. Rep. 9: 104-126; Clark et al. (1989) J. Biol. Chem. 264: 17544-17550; Della-Cioppa et al. (1987) Plant Physiol. 84: 965-968; Romer et al. (1993) Biochem. Biophys. Res. Commun. 196: 1414-1421; e Shah et al. (1986) Science 233: 478-481.

Os polinucleotideos de interesse a serem direcionados para o cloroplasto podem ser otimizados para expressão no cloroplasto para dar conta de diferenças de utilização de códon entre o núcleo vegetal e esta organela. Desta maneira, os polinucleotideos de interesse podem ser sintetizados usando-se códon de preferência do cloroplasto. Ver, por exemplo, Patente U.S. No. 5.380.831, aqui incorporada como referencia.

Este cassete de expressão vegetal pode ser inserido em um vetor de transformação vegetal. Por "vetor de transformação" pretende-se uma molécula de DNA que permite que a célula seja transformada. Tais moléculas podem consistir de um ou mais cassetes de expressão, e podem ser organizadas dentro de uma ou mais moléculas de DNA vetores.

Por exemplo, vetores binários são vetores de transformação de plantas que são utilizados em dois vetores de DNA não contíguos para codificar todos os requisitos para funções eis- e trans-atuantes para transformação de células vegetais (Hellens and Mullineaux (2000) Trends in Plant Science 5: 446-451). "Vetor" refere-se a uma construcção de polinucleotídeo projetada para transferência entre diferentes células hospedeiras. "Vetor de expressão" refere-se a um vetor que tenha a habilidade de incorporar, integrar e expressar seqüências de DNA heterólogas ou fragmentos em uma célula exógena.

Vetor de transformação vegetal compreende um ou mais vetores de DNA para alcançar a transformação de plantas. Por exemplo, é uma prática comum na técnica utilizar vetores de transformação de plantas que compreendam mais de um segmento de DNA contíguo. Estes vetores são freqüentemente referidos na técnica como vetores binários.

Vetores binários, assim como vetores com plasmídeos ajudantes são mais freqüentemente usados para transformação mediada por Agrobacterium, onde o tamanho e a complexidade dos segmentos de DNA devem alcançar uma eficiência de transformação bem grande, e esta é vantajosa para separar as funções em moléculas separadas de DNA. Vetores binários tipicamente contêm um vetor plasmidial que contém as seqüências cis-atuantes requeridas para a transferência do T-DNA (tais como fronteira esquerda e fronteira direita), um marcador selecionável que é construído para ser capaz de expressar na célula vegetal, e um "polinucleotídeo de interesse" (um polinucleotídeo construído para ser capaz de expressão na célula vegetal para a qual se deseja a geração de transgênicos). Também presentes nesse vetor plasmidial estão seqüências necessárias para replicação bacteriana. As seqüências cis-atuantes são arranjadas de forma que se permita a transferência eficiente para dentro da célula vegetal e a expressão nesta. Por exemplo, a seqüência de um marcador selecionável e a seqüência de interesse são localizadas entre as fronteiras esquerda e direita. Freqüentemente, um segundo vetor plasmidial contém os fatores trans-atuantes que medeiam a transferência do T-DNA de Agrobacterium para as células vegetais. Esse plasmideo normalmente contém as funções de virulência (genes Vir) que permitem a infecção das células vegetais por Agrobacterium, e a transferência de DNA por clivagem nas seqüências das bordas e transferência mediada por vir, como é conhecido na técnica (Hellens and Mullineaux (2000) Trends in Plant Science, 5: 446-451). Diversos tipos de linhagens de Agrobacterium (por exemplo, LBA4404, GV3101, EHAlOl, EHA105, etc.) podem ser usadas para a transformação de plantas. 0 segundo vetor plasmidial não é necessário para a introdução dos polinucleotideos nas plantas por outros métodos, tais como microprojeção, microinjeção, eletroporação, glicol polietileno, etc.

G. Expressão de genes de tolerância a herbicidas e tolerância a insetos

As plantas tolerantes de inibidores de glutamina sintetase aqui descritas podem exibir, ainda, resistência ou tolerância para um ou mais herbicidas (além de inibidores GS) e/ou uma ou mais pestes tais como insetos, nematóides ou fungos. Em alguns avanços, uma ou mais das plantas descritas aqui exibem tolerância ou resistência para um ou mais herbicidas além de inibidores de GS. Um número de genes que conferem resistência a herbicida, tanto transgênicos e não transgênicos, estão disponíveis. Genes conferindo resistência a um herbicida que inibe o ponto de crescimento ou meristema, tais como uma imidazolinona ou uma sulfoniluréia podem ser adequados. Genes exemplares nesta categoria codificam para enzimas mutantes ALS e AHAS são descritos, por exemplo, na Patente U.S. Nos. 5.767.366 e 5.928.937. Patente U.S. Nos. 4.761.373 e 5.013.659 são direcionados para plantas resistentes a vários herbicidas de imidazolinona ou de sulfonamida.

Genes de resistência a glifosato, tais como genes de EPSP sintase resistente a glifosato, são particularmente úteis nos métodos e composições divulgados aqui. Ver, por exemplo, Pedido de Patente U.S. Nos. 11/500.718,

11/185.342, 11/185.560, 11/315.678, 11/312.866, 11/400.598, 11/605.824, e 11/651.752, Patente U.S. No. 4.940.835 e Patente U.S. No. 4.769.061, cada uma das quais é aqui incorporada por referência em sua integra. Patente U.S. No. 5.554.798 descreve plantas de milho transgênicas resistentes a glifosato, nas quais a resistência é conferida por um gene de 5-enolpiruvil-3-fosfochiquimato sintase (EPSP) alterado.

Genes de resistência para compostos fosfono tais como glufosinato de amônio ou fosfinotricina, e ácidos piridinoxi ou fenoxi propiônico e ciclohexonas também são adequados. Ver Pedido de patente Européia No. 0 242 24 6. Ver também, Patente U.S. Nos. 5.879.903, 5.276.268 e 5.561.236. Outros herbicidas adequados incluem estes que inibem a fotossintese, tais como uma triazina e uma benzonitrila (nitrilase) (ver Patente U.S. No. 4.810.648) assim como herbicidas tais como ácido 2,2- dicloropropiônico, setoxidim, haloxifope, herbicidas de imidazolinona, herbicidas de sulfoniluréia, herbicidas de triazolopirimidina, herbicidas de s-triazina e bromoxinil.

As proteínas inseticidas úteis para a invenção podem ser expressas em uma ou mais plantas divulgadas aqui. Genes úteis para resistência a insetos ou pestes incluem, por exemplo, genes para endotoxina codificando toxinas identificadas em organismos Bacillus. Genes codificando toxinas de Bacillus thuringiensis (Bt) de diversas subespécies têm sido clonados e clones recombinantes foram verificados como sendo tóxicos para larvas de insetos lepidópteros, díptera e coleóptera. Ver, por exemplo, Pedido de Patente U.S. Nos. 10/782.020, 10/782.141, 10/782.570, 10/783.417, 10/781.979, 10/782.096, 10/926.819, e 11/343.533, cada qual é aqui incorporada por referência em sua íntegra. Vários outros genes para delta-endotoxina tais como CrylAa, CrylAb, CrylAc, CrylB, CrylC, CrylD, CrylEa, CrylFa, Cry3A, Cry9A, Cry9C e Cry9B; assim como genes codificando proteínas inseticidas vegetativas tais como Vipl, Vip2 e Vip3) , também são úteis nos métodos e composições aqui descritos. Uma lista completa de toxinas Bt pode ser encontrada na rede mundial em www. Iifesci. Sussex. ac.uk/home/Neil_Crickmore/Bt/.

H. Plantas e partes de plantas

Por "planta" pretende-se plantas inteiras, órgãos de planta (por exemplo, folhas, caules, raízes, etc.), sementes, células vegetais, propágulos, embriões e descendentes dos mesmos. Células vegetais podem ser diferenciadas ou indiferenciadas (por exemplo, calo, de células de cultura em suspensão, protoplastos, células de folha, células de raiz, células de floema, pólen). A presente invenção pode ser usada para introdução de polinucleotideos em qualquer espécie de planta, incluindo, mas não se limitando a, monocotiledôneas e dicotiledôneas. Exemplos de plantas de interesse incluem, mas não são limitadas a, milho, sorgo, trigo, girassol, tomate, cruciferas, pimentas, batata, algodão, arroz, soja, beterraba, cana-de-açúcar, tabaco, cevada, e colzas, Brassica sp., alfafa, centeio, milheto, cártamo, amendoim, batata doce, mandioca, café, coco, abacaxi, frutas citricas, cacau, chá, banana, abacate, figo, goiaba, manga, azeitona, mamão, castanhas, macadâmia, amêndoa, aveia, vegetais, plantas ornamentais, e coniferas.

Verduras incluem, mas não estão limitadas a, tomates, alface, feijão verde, feijões, ervilhas, e membros do gênero Curcumis tais como pepino, cantalupo, e meloeiro. Plantas ornamentais incluem, mas não são limitadas a, azaléia, hortênsia, hibisco, rosas, tulipas, narcisos, petúnias, cravo, bico-de-papagaio, e crisântemo. Plantas de cultivo também são de interesse, incluindo, por exemplo, milho, sorgo, trigo, girassol, tomate, cruciferas, pimentas, batatas, algodão, arroz, soja, beterraba, cana- de-açúcar, tabaco, cevada, colza, etc. Esta invenção é adequada para qualquer membro de plantas da família das monocotiledôneas incluindo, mas não se limitando a, milho, arroz, cevada, aveia, trigo, sorgo, centeio, cana-de-açúcar, abacaxi, inhames, cebola, banana, coco, e tâmaras.

II. Métodos

A. Métodos para crescimento de propriedades agronomicamente importantes em plantas

Métodos para aumentar propriedades agronomicamente importantes de plantas também são providos. Esses métodos compreendem introduzir dentro de uma planta ou de uma célula vegetal uma seqüência de nucleotídeos codificando uma enzima glutamina sintetase derivada de bactéria. Por "enzima glutamina sintetase derivada de bactéria" pretende- se uma enzima glutamina sintetase isolada a partir de uma bactéria, ou um variante biologicamente ativo ou fragmento dessa. Em um avanço, a seqüência de nucleotídeos compreende uma variante da SEQ ID NO: 1, onde o polinucleotídeo variante é ao menos 80% idêntico a SEQ ID NO: 1. Em outro avanço, a seqüência de nucleotídeos compreende um polinucleotídeo tendo ao menos uma modificação entre os aminoácidos 125 a 175, ao menos uma modificação entre os aminoácidos 200 a 250 correspondendo a SEQ ID NO: 2, ou ao menos uma modificação que resulte na perda de um ou mais sítios de adenilação. Em outro avanço, o polinucleotídeo é selecionado a partir do grupo constituído da SEQ ID NOS: 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45, ou 47. A expressão dessas enzimas em plantas resulta no aumento das capacidades da planta de assimilação e/ou utilização de nitrogênio, assim como melhoram características agronômicas tais como rendimento da planta.

Conforme definido aqui, o "rendimento" da planta refere-se à qualidade e/ou quantidade de biomassa produzida pela planta. Por "biomassa" pretende-se qualquer produto vegetal medido. Um aumento na produção de biomassa é qualquer melhoramento no rendimento do produto de planta medido. 0 método compreende introduzir dentro de uma planta de interesse um polinucleotídeo codificando uma enzima glutamina sintetase derivada de bactéria. Em um avanço, a enzima glutamina sintetase é resistente aos inibidores de glutamina sintetase herbicidas, apesar da resistência não ser necessária para se alcançar o aumento das propriedades agronômicas. Em outro avanço, a enzima glutamina sintetase aumentou a atividade enzimática relativa a uma enzima glutamina sintetase controle como definido infra.

Embora não vinculado a qualquer teoria ou mecanismo em particular, a expressão de uma enzima glutamina sintetase derivada de bactéria em uma planta pode levar a uma atividade aumentada (resultando em um aumento do rendimento e/ou utilização de nitrogênio) comparada com a glutamina sintetase derivada de planta (incluindo a glutamina sintetase endógena na qual a sintetase derivada de bactéria é expressa de maneira heteróloga) devido a mecanismos regulatórios diferentes para a GS bacteriana em comparação com a GS de plantas. A atividade enzimática da GS bacteriana é regulada de uma maneira que é diferente das enzimas GS de plantas (Moorhead and Smith (2003) Plant Physiol 133: 492-498, aqui incorporada por referência em sua integra). Em um sistema bacteriano, o status do nitrogênio na célula é sentido pela proteína PII. Sob condições de altas concentrações de nitrogênio, PII inicia uma cascata de sinalização que causa a adenilação de subunidades individuais de enzimas GS bacterianas. Adenilação de GS bacterianas causa um decréscimo na atividade enzimática. Então, a atividade enzimática de uma enzima GS bacteriana pode ser modulada pela extensão da adenilação do duodecâmero da GS. Em contraste, desde que plantas não possuem um análogo da cascata de sinalização PII, é improvável que as células vegetais causem a adenilação de uma enzima GS bacteriana.

O desenvolvimento de variedades de plantas que usam nitrogênio mais eficientemente irá reduzir a necessidade de excessivas entradas de nitrogênio, economizar o custo da produção para os fazendeiros, beneficiar os fazendeiros nos países em desenvolvimento que não têm acesso às entradas de fertilizantes, e reduzir a poluição associada com a aplicação excessiva de fertilizantes de nitrogênio. Adicionalmente, prover plantas com rendimento aumentado como resultado da atividade de glutamina sintetase melhorada possui diversas aplicações comerciais. Por exemplo, aumentar a biomassa da folha de planta pode elevar o rendimento de vegetais folhosos para consumo humano ou animal. Ademais, o aumento da biomassa foliar pode ser usado para aumentar a produção de farmacêuticos derivados de planta ou produtos industriais.

De acordo com a presente invenção, as plantas expressando glutamina sintetase derivada de bactéria podem exibir conteúdos nitrogenados aumentados, composições de aminoácidos ou proteínas alterados, características de crescimento vigoroso, rendimento vegetativo aumentado ou melhores rendimentos e qualidades de sementes. Estas plantas podem sem identificadas examinando-se qualquer dos parâmetros a seguir: 1) a taxa de crescimento, medida em termos da taxa de crescimento por peso fresco ou seco; 2) rendimento vegetativo da planta madura, em termos de peso fresco ou seco; 3) rendimento da semente ou fruta; 4) o peso da semente ou fruta; 5) o conteúdo total de nitrogênio da planta; 6) o conteúdo total de nitrogênio da fruta ou semente; 7) o conteúdo de aminoácido livre da planta; 8) o conteúdo de aminoácido livre da fruta ou semente; 9) o conteúdo de proteína total da planta; e 10) o conteúdo de proteína total da fruta ou semente. Os procedimentos e métodos para examinar estes parâmetros são bem conhecidos para aqueles especialistas na técnica. Estes métodos podem envolver testes enzimáticos e imuno-ensaios para medir os níveis de enzima/proteína; testes para medir a composição de aminoácidos, agrupamento de aminoácidos livres ou conteúdo total de nitrogênio de vários tecidos de planta; medição da taxa de crescimento em termos de peso fresco e ganho ao longo do tempo; ou medição de rendimento da planta em termos de peso seco total e/ou peso total da semente.

A medição pode ser in vitro em uma célula expressando a enzima glutamina sintetase ou no material da planta coletado a partir de uma planta expressando a enzima, ou pode ser in vivo em uma planta expressando a enzima. 0 rastreamento pode ser realizado sob condições de deficiência de nitrogênio ou sob condições não limitantes de nitrogênio. Condições de nitrogênio são descritas em relação ao nutriente nitrogenado disponível. Condições deficientes de nitrogênio incluem aquelas que fazem com que o crescimento de uma planta controle cesse ou que seja diminuído de tal forma como a reduzir significativamente o tamanho ou qualidade da planta controle. Condições não limitantes de nitrogênio incluem aquelas tendo quantidades suficientes de nutrientes nitrogenados para sustentar o crescimento saudável da planta. Condições de nitrogênio que constituem não limitantes ou deficientes são conhecidas na técnica para a maioria, se não todas, as variedades de plantas de interesse. Orientações adicionais podem ser encontradas em, por exemplo, Hewitt (1966) Sand and Water Culture Methods Used in the Study of Plant Nutrition, 2nd ed., Farnham Royal (Bucks), Commonwealth Agricultural Bureaux; e, Hewitt (1975) Plant Mineral Nutrition, London, English University Press. Para os propósitos da presente invenção, uma melhoria em qualquer das características acima é em relação ao controle do crescimento da planta ou da célula vegetal sob condições similares. Uma planta ou célula vegetal "controle" é aquela que expressa uma enzima glutamina sintetase que não é uma glutamina sintetase derivada de bactéria. Uma melhoria em qualquer um desses parâmetros pode compreender qualquer aumento incluindo, mas não se limitando a, pelo menos um amento de 1%, pelo menos um amento de 3%, pelo menos um amento de 5%, pelo menos um amento de 10%, pelo menos um amento de 20%, pelo menos de 30%, pelo menos de 50%, pelo menos de 70%, pelo menos de 100% ou um aumento maior em um ou mais desses parâmetros.

Em vários avanços, a enzima GS derivada de bactéria tem atividade enzimática melhorada quando comparada a outras enzimas glutamina sintetases derivadas de bactérias ou plantas. Uma enzima glutamina sintetase com atividade melhorada é uma que tem atividade acima da atividade da enzima AGSl divulgada aqui como SEQ ID NO: 2. Em alguns avanços, a enzima GS derivada de bactéria tem atividade melhorada devido a mutações funcionais na enzima, ao invés da super expressão da enzima em um sistema. A atividade pode ser medida por qualquer método conhecido na técnica. Ao menos que especificado de outra maneira, a enzima glutamina sintetase derivada de bactéria com a atividade melhorada é aquela que tenha atividade melhorada quando comparada à atividade da mesma ou substancialmente a mesma concentração de SEQ ID NO: 2 quando expressa em um sistema bacteriano (por exemplo, em E. coli).

B. Transformação de Planta

Métodos da invenção envolvem introduzir um ou mais polinucleotideos em uma planta. Por "introduzir" pretende- se apresentar à planta o polinucleotideo de tal maneira que este polinucleotideo ganhe acesso ao interior de uma célula de planta. Os métodos da invenção não requerem que um método particular para introdução de um polinucleotideo na planta seja usado, apenas que o polinucleotideo ganhe acesso ao inteiro de ao menos uma célula da planta.

A introdução de um polinucleotideo em células vegetais é realizada por uma das diversas técnicas conhecidas na técnica, incluindo, mas não se limitando a eletroporação ou transformação química (Ver, por exemplo, Ausubel, ed. (1994) Current Protocols in Molecular Biology (John Wiley and Sons, Inc., Indianapolis, IN). Marcadores conferindo resistência a substâncias tóxicas são úteis na identificação de células transformadas (que tenham apanhado e expressado a seqüência de polinucleotideos teste) de células não transformadas (estas não contendo ou não expressando a seqüência de polinucleotideos teste). Em um aspecto da invenção, as seqüências de polinucleotideos aqui descritas são úteis como marcadores para avaliar a introdução do DNA em células vegetais. Métodos para se detectar a presença de um transgene em uma planta, órgão de planta (por exemplo, folhas, caules, raízes, etc.), semente, célula vegetal, propágulo, embrião ou descendentes destes são bem conhecidos na técnica. "Plantas transgênicas" ou "plantas transformadas" ou plantas, células, tecidos ou sementes "transformadas de forma estável" referem-se a plantas que tenham incorporado ou integrado polinucleotideos exógenos na célula vegetal. Por "transformação estável" pretende-se que a construção de polinucleotideos introduzida em uma planta se integre no genoma dessa planta e seja capaz de ser herdada pela progênie desta.

Em geral, os métodos de transformação de plantas envolvem transferir DNA heterólogo para dentro de uma célula vegetal alvo (por exemplo, embriões imaturos ou maduros, culturas de suspensão, calo indiferenciado, protoplastos, etc.), seguido da aplicação de um limiar máximo de três vezes o nivel de seleção apropriado (dependendo do gene marcador selecionável) para se recuperar as células vegetais transformadas a partir de um grupo de massa de células não transformadas. Explantes são tipicamente transferidos para um suporte fresco do mesmo meio e cultivados rotineiramente. Subseqüentemente, as células transformadas são diferenciadas em brotos após a colocação em meio de regeneração suplementado com um nivel limite máximo do agente de seleção de três vezes (ou seja, o herbicida). Os brotos são então transferidos para um meio de enraizamento seletivo recuperar os brotos com raiz ou plântulas. As plântulas transgênicas então crescem em plantas maduras e produzem sementes férteis (por exemplo, Hiei et al. (1994) Plant J. 6: 271-282; Ishida et al. (1996) Nat. Biotechnol. 14: 745-750). Uma descrição geral de técnicas e métodos para gerar plantas transgênicas é encontrada em Ayres and Park (1994) CRC Crit. Rev. Plant Sei. 13: 219-239 e Bommineni and Jauhar (1997) Maydica 42: 107-120. Como o material transformado contém muitas células, tanto células transformadas e não transformadas estão presentes em qualquer pedaço do calo ou tecido ou grupo de células submetido a alvo. A habilidade de matar células não transformadas e permitir que as células transformadas proliferem resulta em culturas da planta transformadas. Freqüentemente, a habilidade para remoção de células não transformadas é uma limitação à recuperação rápida de células vegetais transformadas e geração com sucesso de plantas transgênicas. Métodos moleculares e bioquímicos podem ser utilizados para se confirmar a presença e integridade do polinucleotideo(s) de interesse no genoma da planta transgênica.

A geração de plantas transgênicas pode ser realizada por um dentre diversos métodos, incluindo, mas não se limitando a, introdução de DNA heterólogo por Agrobacterium em células vegetais (transformação mediada por Agrobacterium), bombardeamento de células vegetais com DNA estrangeiro heterólogo aderido a partículas, e vários outros métodos diretamente-mediados e não particulados (por exemplo, Hiei et al. (1994) Plant J. 6: 271-282; Ishida et al. (1996) Nat. Biotechnol 14: 745-750; Ayres and Park (1994) CRC Crit. Rev. Plant Sei. 13: 219-239; Bommineni and Jauhar (1997) Maydica 42: 107-120) para transferência de DNA.

Existem três métodos comuns de transformação de célula vegetal com Agrobacterium. O primeiro método é o co-cultivo de Agrobacterium com protoplastos isolados cultivados. Este método requer um sistema de cultivo estabelecido que permita o cultivo de protoplastos e a regeneração da planta a partir dos protoplastos cultivados. O segundo método é a transformação das células ou tecidos com Agrobacterium.

Esse método requer (a) que as células ou tecidos vegetais possam ser transformados por Agrobacterium e (b) que as células ou tecidos transformados possam ser induzidos a regenerar em plantas inteiras. 0 terceiro método é a transformação das sementes, ápices ou meristemas com Agrobacterium. Esse método requer micropropagação.

A eficiência de transformação por Agrobacterium pode ser intensificada através da utilização de um número de métodos conhecidos na técnica. Por exemplo, tem sido demonstrado que a inclusão de uma molécula natural de resposta a ferimento tal como acetosiringona (AS) a cultura de Agrobacterium intensifica a eficiência de transformação com Agrobacterium tumefaciens (Shahla et al. (1987) Plant Molec. Biol. 8: 291-298). Alternativamente, a eficiência de transformação pode ser aumentada ferindo-se o tecido alvo a ser transformado. 0 ferimento de um tecido de planta pode ser alcançado, por exemplo, esmurrando-se, macerando-se, bombardeando-se com microprojéteis, etc. Ver, por exemplo, Bidney et al. (1992) Plant Molec. Biol. 18: 301-313. Ainda em outros avanços, as células vegetais são transfectadas com vetores via bombardeamento de partículas (ou seja, com uma arma genética). Métodos de transferência de genes mediados por partículas são conhecidos na técnica, são disponíveis comercialmente, e incluem, mas não se limitam a, o instrumento de entrega de gene dirigido por gás descrito na Patente U.S. No. 5.584.807, todos os conteúdos da gual são aqui incorporados por referência em sua íntegra. Este método envolve revestir a seqüência de polinucleotídeos de interesse com partículas de metal pesado, e acelerar as partículas revestidas sob a pressão de gás comprimido para a distribuição ao tecido alvo.

Outros métodos de bombardeamento de partículas também são disponíveis para a introdução de seqüências de polinucleotídeos heterólogas em células vegetais. Geralmente, estes métodos envolvem depositar a seqüência do polinucleotídeo de interesse sobre a superfície de partículas pequenas, densas e de um material tal como ouro, platina, ou tungstênio. As partículas revestidas são então revestidas sobre uma superfície ainda mais rígida, tal como uma chapa de metal, ou sobre uma folha transportadora feita de um material frágil tal como Mylar. A folha revestida é então acelerada rumo ao tecido biológico alvo. O uso da folha lisa gera um espalhamento uniforme das partículas aceleradas que maximiza o número de células recebendo partículas sob condições uniformes, resultando na introdução da amostra de polinucleotideo dentro do tecido alvo.

Sinais específicos de iniciação também podem ser usados para se alcançar uma maior eficiência de tradução de seqüências codificando o polipeptídeo de interesse. Tais sinais incluem o códon de iniciação ATG e seqüências adjacentes. Em casos onde as seqüências codificando o polipeptídeo de interesse, seu códon de iniciação, e seqüências acima sejam inseridas em um vetor de expressão apropriado, nenhum sinal controle adicional para transcrição ou tradução pode ser necessário. Entretanto, em casos onde apenas a seqüência codificadora, ou uma porção dessa, é inserida, sinais controle de tradução exógenos incluindo o códon de iniciação ATG devem ser fornecidos. Ademais, o códon de iniciação deve estar posicionado na fase de leitura correta para garantir a tradução do inserto inteiro. Elementos de tradução exógenos e códons de iniciação podem ser de várias origens, tanto natural como sintético. A eficiência da expressão pode ser reforçada através da inclusão de intensificadores que sejam apropriados para o sistema celular particularmente utilizado, tal como estes descritos na literatura (Scharf et al. (1994) Results Probl Cell Differ. 20 : 125).

Células que tenham sido transformadas com um polinucleotideo codificando um domínio de polipeptídeo da invenção podem ser crescidas em plantas de acordo com caminhos convencionais. Ver, por exemplo, McCormick et al. (1986) Plant Cell Rep. 5: 81-84. Essas plantas podem então ser crescidas, e polinizadas tanto pela mesma linhagem transformada ou por diferentes linhagens, tendo o híbrido resultante a expressão constitutiva do fenótipo desejado caracteristicamente identificado. Duas ou mais gerações podem ser crescidas para garantir que a expressão do fenótipo característico desejado seja mantida e herdada de forma estável e, então, as sementes são colhidas para garantir que a expressão do fenótipo característico desejado tenha sido alcançada. Dessa maneira, a presente invenção fornece sementes transformadas (também referidas como "sementes transgênicas") tendo um polinucleotídeo codificando um domínio de polipeptídeo da invenção, por exemplo, um cassete de expressão da invenção, incorporado de forma estável dentro do genoma dessas.

C. Avaliação da Transformação da Planta

Após a introdução do DNA em células vegetais, a transformação ou integração do polinucleotídeo no genoma vegetal é confirmada por vários métodos, tais como análise de polinucleotídeos, polipeptídeos e metabólitos associados com a seqüência integrada.

Análise de PCR é um método rápido de se rastrear células, tecidos ou brotos para a presença do gene incorporado no estágio anterior, antes do transplante para o solo (Sambrook and Russell (2001) Molecular Cloning: A Laboratory Manual (Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY) ). O PCR é efetuado usando-se primers de oligonucleotídeos específicos para o nucleotídeo de interesse ou no background do vetor de Agrobacteríum, etc.

A introdução de DNA pode ser confirmada por análise de Southern blot do DNA genômico (Sambrook and Russell (2001) supra). Em geral, o DNA total é extraído da célula ou organismo, digerido com enzimas de restrição apropriadas, fracionado em um gel de agarose e transferido para uma membrana de náilon ou nitrocelulose. A membrana ou "blot" é então sondada com, por exemplo, fragmento de DNA rotulado radioativamente com 32P para confirmação da integração do DNA introduzido no genoma da planta de acordo com técnicas padronizadas (Sambrook and Russell (2001) supra).

Na análise Northern, o RNA é isolado de tecidos específicos de uma célula ou organismo, fracionado em um gel de agarose com formaldeído e transferido para um filtro de náilon de acordo com procedimentos padronizados que são usados rotineiramente na técnica (Sambrook and Russell (2001) supra). A expressão de um RNA codificado pelo polinucleotídeo da presente invenção é então testada por hibridizando o filtro a uma sonda radioativa derivada da seqüência de interesse por métodos conhecidos na técnica (Sambrook and Russell (2001) supra).

Western blot, testes bioquímicos e similares podem ser conduzidos nas plantas transgênicas para se determinar a presença de um polipeptideo(s) codificado pelo polinucleotideo(s) de interesse através de procedimentos padrão (Sambrook and Russell (2001) supra) usando-se anticorpos que se liguem a um ou mais epitopos presentes no polipeptideo resistente a herbicida.

D. Métodos para controlar seletivamente as ervas daninhas em um campo de cultivo

Métodos para se controlar seletivamente as ervas daninhas em um campo contendo uma planta também são providos. Em um avanço, as sementes da planta ou as plantas são resistentes aos inibidores de glutamina sintetase herbicidas como resultado da inserção de um polinucleotideo da presente invenção dentro da raiz da planta ou da planta. Em métodos específicos, a planta é tratada com uma concentração efetiva de um herbicida, onde a aplicação de herbicidas resulta em um controle seletivo das ervas daninhas ou outras plantas não transformadas. Por "concentração efetiva" pretende-se a concentração que controle o crescimento ou espalhamento das ervas daninhas ou outra planta não transformada sem afetar significativamente as plantas resistentes a herbicidas ou as raízes dessas plantas. Então, a quantidade pode ser pequena o suficiente para simplesmente retardar ou suprimir o crescimento ou desenvolvimento, ou a quantidade pode ser grande o suficiente para destruir irreversivelmente as plantas sensíveis. Tais concentrações efetivas para os herbicidas de interesse são geralmente conhecidas na técnica. O herbicida pode ser aplicado tanto pré- ou pós emergência de acordo com técnicas usuais para aplicação do herbicida nos campos compreendendo as plantas ou sementes de plantas que tenham se tornado resistentes ao herbicida.

Os exemplos a seguir são fornecidos a titulo de ilustrações e não por meio de limitação.

EXEMPLOS EXPERIMENTAIS

Exemplo 1. Linhagens Resistentes a Glufosinato.

A linhagem bacteriana resistente a glufosinato (ATX 20345) foi isolada de uma amostra de solo através de uma suspensão de solo colocando-se aproximadamente 0,01 gramas de solo em 500 μΐ de água destilada. A suspensão de solo foi agitada, e 20 μΐ foram usados para inocular um volume de 2,5 ml de meio mínimo de cultura suplementado com 5 mM de glufosinato (Riedel-de Haen, disponível através de Sigma- Aldrich, St. Louis, MO). 0 meio mínimo contem os seguintes ingredientes (por 1 litro): 10 gramas de sacarose, 1 ml de 0,8M MgSO4, 1 ml de 0,1M CaCl2, 1 ml de metais traços, 2,38 gramas de KH2PO4, 5,64 gramas de K2HPO4. 0 pH é ajustado para 7,0, e a solução é esterilizada com filtros de 0,2 μπι. Os metais traços consistem de (por 100 ml) 0,1 g de FeSO4 7H20, 0,5 mg de CuSO4 5H20, 1,0 mg de H3BO3, 1,0 mg de MnSO4 5H20, 7,0 mg de ZnS(7H20, 1,0 mg de MoO3, 4,0 g de KCl. Nenhuma fonte adicional de nitrogênio foi fornecida no meio. As culturas foram crescidas a 21 num agitador rotativo por 3 dias e então transferidas para um meio mínimo fresco contendo 5 mM de glufosinato e incubadas a 21°C. Após 2 dias, as culturas foram usadas para inocular o meio mínimo fresco com 5 mM de glufosinato. Após 2 dias, as culturas foram plaqueadas em Luria Bertani (LB) ágar e então re-plaqueadas para isolamento. ATX 20345 foi selecionada pela sua habilidade de crescer na presença de 5 mM de glufosinato. Colônias em LB ágar são róseo- avermelhadas, elevadas, circulares, e com 1-2 mm em diâmetro. ATX20345 foi tipada por análise de ácido-graxo (conforme conhecido na técnica), e determinada como sendo uma linhagem de Serratia marcescens.

ATX 20345 foi capaz de crescer até altas densidades ópticas na presença de glufosinato sob as condições descritas acima, apesar de esta ser incapaz de crescer sob as mesmas condições na ausência de glufosinato. Estes dados sugerem que o glufosinato está fornecendo nitrogênio para a bactéria, seja na forma de uma clivagem do glufosinato para liberar uma forma usável de nitrogênio ou pela suplementação de amônia no complexo glufosinato-amônia fornecido pelo suplemento. A substituição do glufosinato por cloreto de amônia como uma fonte de nitrogênio, entretanto, permite crescimento, sugerindo que a amônia é uma fonte de nitrogênio adequada para esta linhagem. As concentrações altas (5-50 mM), ATX 20345 cresce bem até 50 mM e, de fato, parece crescer melhor em concentrações crescentes de glufosinato de 5 mM até 50 mM de glufosinato. Crescimentos acima de 50 mM não foram testados. Exemplo 2. Clonagem da glutamina sintase de ATX 20345

Para se obter o gene(s) responsável pela resistência da linhagem à glufosinato, uma biblioteca genômica de plasmideos com pequenos insertos foi preparada a partir da linhagem ATX 20345. O DNA genômico foi extraído de uma cultura fresca, crescida durante a noite em LB usando-se SDS, Iise celular com proteinase K seguida de extrações com CTAB/NaCl, fenol-clorofórmio. Digestões parciais foram realizadas no DNA genômico usando-se 0,1 unidades de Sau3A I a 37 °C por 30 minutos seguidos da adição de EDTA e incubação a 65°C por 20 minutos para travar a reação. O DNA resultante tinha aproximativamente entre 4- 12kb de tamanho. O DNA foi purificado em gel, tratado com T4 polinucleotídeo quinase, e então ligado no vetor pUC18 digerido com BamH I. Ligações foram transformadas em DH5a e plaqueadas diretamente em placas do meio mínimo M63 contendo 20mM de glufosinato, 10C^g/ml de carbenicilina, e 0,1 mM de IPTG. Após vários dias, 4 colônias apareceram, tentativamente denominadas TKHl- 4. Elas foram crescidas e o DNA plasmidial foi isolado e analisado por digestão com EcoR 1+ Hind III, e Pst I/ Sac I para se comparar os insertos. Apesar de todos os quatro clones conterem insertos, TKH2 e TKH3 foram idênticos pela análise da digestão com enzimas de restrição, e ambos continham insertos de aproximadamente 4,9 kb.

Para se determinar se algum dos quatro clones codificava a glutamina sintetase, todos foram transformados para a linhagem celular M5004 glnA- (E. coli Genetic Stock Center No. 5531, Mayer (1975) Mol. Gen. Genet. 137: 131- 142), juntamente com o vetor controle pUC 18, e plaqueadas em LB/carbenicilina. As colônias resultantes para cada transformação foram plaqueadas em placas do meio mínimo M63 com ou sem a adição de glutamina. Apenas os clones contendo uma glutamina sintetase funcional deveriam crescer na ausência de glutamina. TKH2 e TKH3 recuperaram o fenótipo glnA-, enquanto que TKHl e TKH4 não (Tabela 1). A habilidade de TKH2 e TKH3 em recuperar completamente o fenótipo glnA- demonstrou que cada uma delas contém uma glutamina sintetase funcional.

Tabela 1. Complementaçâo do fenótipo glnA- por THK2 e THK3

<table>table see original document page 62</column></row><table>

Para se reconfirmar que TKH2 e TKH3 conferem resistência a 20 mM de glufosinato, os plasmídeos purificados foram re-transformados para células DH5a. pUC18 foi re-transformado como controle negativo. As misturas da transformação foram plaqueadas diretamente em placas de M63 mínimo com ou sem 20mM de glufosinato. Enquanto que pUC18, ΤΚΗ2 e ΤΚΗ3 cresceram na ausência de glufosinato, apenas TKH2 e TKH3 cresceram na presença de glufosinato.

0 seqüenciamento do DNA plasmidial de TKH2 e TKH3 com os iniciadores Ml 3 Forward e Ml 3 Reverse, e subseqüente análise das seqüências, revelou que TKH2 e TKH3 são clones idênticos. Baseado na complementação, análise de seqüência, e demonstração da habilidade para conferir resistência à glufosinato em E. coli, nós concluímos que TKH2 e TKH3 codificam uma glutamina sintetase idêntica.

Exemplo 3. Seqüência da glutamina sintetase agsl

A seqüência de DNA do clone TKH foi determinada (aqui referida como agsl), e um quadro de iniciação de leitura com homologia para a família de glutamina sintetase foi identificado. Esta fase aberta de leitura foi amplificada por PCR usando-se polimerase de alta fidelidade (high fidelity) , e clonando-se em pUC19 para produzir pAX685. A proteína codificada (AGSl) demonstra alta identidade de aminoácidos com glutamina sintaxes de bactérias GRAM negativas, incluindo E. coli (identidade de aminoácido de 90%), Erwinia (94%), Pantoa (93%) e Yersinia (96%).

Exemplo 4. Mutagênese de glutamina sintetase agsl selvagem.

Mutantes do gene para glutamina sintetase bacteriana agsl (SEQ ID N0:1) foram criados por mutagênese dirigida por erro usando-se o kit GENEMORPH® Random Mutagenesis, e também usando-se mutagênese sítio direcionada como conhecido na técnica. Entretanto, muitos métodos são disponíveis para a criação de bibliotecas de mutantes. Os mutantes resultantes foram clonados dentro de um vetor pUC19, eletroporados tanto para células de E. coli XL-I ou DH5 alfa, e selecionadas para crescimento em meio M63+ ágar contendo antibióticos e 2, 10, ou 20 mM de glufosinato. Vinte e dois clones foram identificados como capazes de crescer em 20mM de glufosinato, e escolhidos para análises posteriores.

As seqüências dos clones resistentes a glufosinato foram determinadas. Após análise de seqüência, os clones 1 e 15; clones 2 e 3; clones 5 e 6; clones 9, 10, e 12; e os clones 16, 17, 19 e 20 foram verificados como sendo idênticos. Então, os clones 1, 3, 5, 7, 9, 12, 16, 19, e 20 não foram mais analisados.

Os clones 2, 10, 15, 17, e 21 demonstraram-se capazes de crescer no meio mínimo M63+ ágar com 2, 10, 20, 50, e 100 mM de glufosinato após eletroporação para células de E. coli DH5a.

As seqüências de DNA dos clones resistentes a glufosinato foram traduzidas, e as seqüências da proteína resultante foram alinhadas com a seqüência da proteína AGS 1 selvagem. Foram constatadas substituições de aminoácidos correspondentes às posições dos aminoácidos da AGSl selvagem (SEQ ID NO:2) nestes clones resistentes à glufosinato. Estas substituições são ilustradas na Figura 1 e incluem S2T, V39I, S54A, G56A, A72V, F80S, F81S, E82D, D102M, V125M, V150M, A151T, D166N, G168C, P185S, V207I, H212N, V214M, V214A, V214E, G218S, V222M, D264V, S276Y, G289S, I303N, R345S, K395R, A420V, R447C. De particular interesse são as mutações em torno do ácido glutâmico na posição 213, que é o sitio catalitico da glutamina sintetase. Outro grupo interessante de mutações ocorre em torno do aminoácido 150.

Tabela 2. Clones Resistentes à Glufosinato Derivados de

<table>table see original document page 65</column></row><table> <table>table see original document page 66</column></row><table>

NT= não testado

Exemplo 5. Complementação de um mutante glutamina sintase

Clones contendo agslml (pAX3421) e agslm2 (pAX3422) foram selecionados para novos trabalhos. Ambos os clones demonstraram-se capazes de complementar uma E. coli mutante em agsl com agslml crescendo em uma taxa maior do que agslm2.

Exemplo 6. Cinética de glutamina sintases resistentes a glufosinato

agslml (pAX3421) e agslm2 (pAX3422) foram subclonadas dentro do vetor de expressão em E. coli pRSFIB (Invitrogen) de forma a criar uma região N-terminal codificando uma marca {tag) de 6Xhis, purificado e cineticamente caracterizado. AGSlm2 ('pick6') teve atividade enzimática relativamente pequena em um ensaio de 5 minutos quando comparado com a AGS 1 tipo selvagem, mas pareceu chegar à atividade completa durante a noite. AGSlml ('pick 2') foi indistinguivel da enzima selvagem na ausência de glufosinato, mas demonstrou atividade na presença de ΙΟΟμΜ de glufosinato, uma concentração que inibe completamente a enzima glutamina sintetase tipo selvagem agsl.

Exemplo 7. Mutagênese de agslm2 agslm2 foi mutagenizado usando mutagênese de propensão a erro (error-prone) usando-se o kit GENEMORPH® II Random Mutagenesis kit (Stratagene) de acordo com as instruções do fabricante. O produto de PCR mutagenizado foi digerido com Sac I e Hind III, e ligado em um vetor pUC, similarmente digerido com Sac I e Hind III. As ligações foram transformadas para células de E. coli, e plaqueadas em placas de M63+ contendo antibiótico, e 125mM de glufosinato. Os clones crescendo em placas com 125mM de glufosinato foram re-testados em placas com 200mM de glufosinato, e comparados com plaqueamentos similares de agslml e agslm2. Enquanto que as células expressando AGSlml e AGSlm2 não cresceram em 200mM de glufosinato, um único clone, designado pAX3439, foi isolado por força de suas habilidades para crescer em placas com 200mM de glufosinato. A seqüência de DNA da fase de leitura de ags em pAX3439 foi seqüenciada, e o gene designado como agslmló. A seqüência de DNA de agslml6 é representada aqui como SEQ ID NO: 31, e a seqüência de aminoácido é representada aqui como SEQ ID NO: 32. AGSlml6 difere de AGSlm2 em um único aminoácido na posição H212 da proteína, que é modificado de Histidina ('H') para Asparagina ('N'), e contem um total de cinco mudanças de aminoácidos em relação à AGSl tipo selvagem (ver Figura 1 e Tabela 3). Tabela 3. Variantes de agsl

<table>table see original document page 68</column></row><table>

AGSlml6 confere a maior resistência em E. coli. Células contendo AGSlml6 são capazes de crescer em concentrações de glufosinato de até 200mM. Colônias de células contendo AGSlm2, AGSlmll, e AGSlm4 crescem mais rapidamente em 50mM de glifosato do que outras variantes, exceto AGSlml6. Exemplo 8. Variantes agslm!7, agslm!8, agslml9, agslm20, e agslm21

Baseado no conhecimento do mecanismo da reação de GS conhecido na técnica, e no alinhamento de AGSl com outras enzimas GS, pode-se prever a localização do centro de reação de GS em AGSl e variantes, agsl (ml6) foi mutagenizada na região da proteína sugerida como sendo o centro de reação de GS, e foram identificadas diversas variantes gue conferiram crescimento melhorado em placas com 225 mM de glufosinato mediante as células hospedeiras de E. coli. agslml7 (SEQ ID NO: 33) codifica a proteína AGSlml7 (SEQ ID NO:34). agslml8 (SEQ ID NO: 35) codifica a proteína AGSlml8 (SEQ ID NO: 36). agslml9 (SEQ ID NO: 37) codifica a proteína AGSlml9 (SEQ ID NO:38). agslm20 (SEQ ID NO: 39) codifica a proteína AGSlm20 (SEQ ID NO: 40) . Verificou-se que os clones expressando AGSlml7, AGSlml8, AGSlml9, ou AGSlm20 foram todos capazes de crescer em placas contendo 375mM de glufosinato, enquanto que nenhum crescimento de clones expressando AGSlml6 foi observado em placas contendo 375mM de glufosinato.

agslm21 (SEQ ID NO: 41) codifica a proteína AGSlm21 (SEQ ID NO: 42) . AGSlm21 é uma variante de AGSl que contem uma modificação de aminoácido similar à identificada em outras variantes (V214M) , assim como duas novas mutações (N160S e G167R) . Esta enzima foi expressa em E. coli, purificada, e os valores cinéticos Km (glutamato) e Ki (glufosinato) da variante foram medidos por ensaios enzimáticos. Verificou-se que a enzima mutagenizada possui resistência aumentada à glufosinato, como mostrado na Tabela a seguir.

Tabela 4. Cinética de AGSlm21

<table>table see original document page 70</column></row><table>

Exemplo 9. Remoção de sítios de adenilação de AGSl e variantes

É bem conhecido na técnica (Mehta et al. (2004) J. Biol. Chem. 279: 22477- 22482, aqui incorporado pela referência em sua íntegra) que em uma célula bacteriana, enzimas GS bacterianas são freqüentemente sujeitas a regulação negativa por adenilação de um resíduo de tirosina em particular.

agsl(ad-) (SEQ ID NO: 43) codificando a proteína AGSl(AD-) (SEQ ID NO: 44), é uma variante de agsl na qual o sítio de adenilação hipotético tenha sido removido por mutação da tirosina na posição 398 da AGS 1 para uma fenilalanina através de mutagênese sítio direcionada.

agslml7(ad-) (SEQ ID NO: 45) codificando a proteína AGSImH (AD-) (SEQ ID NO: 46), é uma variante de agslml7 na qual o sítio de adenililação putativo foi removido por mutação da tirosina na posição 398 da AGSl para uma fenilalanina através de mutagênese sítio dirigida.

A enzima inalterada (AGSl) foi comparada com AGSl(AD-) e AGSlml7(AD-) através da realização de ensaios enzimáticos em ambas as enzimas seguido de purificação a partir de E. colí. A enzima glutamina sintetase de E. coli (GlnA) também foi testada. Os valores cinéticos obtidos para cada enzima são demonstrados na Tabela 5 abaixo.

Tabela 5. Cinética de AGSl (AD-)

<table>table see original document page 71</column></row><table>

Exemplo 10. Clones resistentes a glufosinato são mutados perto do sítio ativo.

Um número surpreendente de variantes, e todos dentre os clones mais resistentes, continham mutações no sítio ativo da sintetase. Os dois ácidos glutâmicos no centro catalítico (correspondendo às posições 213 e 221 de AGS1, SEQ ID NO: 2) são chave para a atividade da glutamina sintetase. A valina na posição 214 é variada em 13 das variantes, e pode ser mutada para metionina (M) , alanina (A) , serina (S), histidina (H) e ácido glutâmico (E) . Três variantes adicionais, incluindo AGSlml6, têm resíduos modificados nessa região.

Exemplo 11 Identificação de novas enzimas glutamina sintetase que são resistentes à glutamina sintetase herbicida.

Usando-se os métodos da invenção, pode-se identificar outras glutamina sintetases resistentes a herbicida pesquisando-se as bases de dados contendo enzimas glutamina sintetase, e/ou alinhando-se as seqüências de aminoácido das enzimas glutamina sintetase e analisando-se para ao menos uma substituição de aminoácido dentro das posições correspondentes as posições 125 até 175 da SEQ ID NO: 2 ou entre as posições 200 e 250 da SEQ ID NO: 2. É sabido que alguma modificação destas regiões é tolerada na natureza sem perturbar a natureza da resistência a herbicida conferida por estas regiões, e são, portanto equivalentes às seqüências listadas aqui. Portanto, é reconhecido que as enzimas que possuem cerca de 80%, cerca de 85%, cerca de 90%, cerca de 95%, 96%, 97%, 98% ou 99% de homologia à polipeptídeos da invenção podem conferir resistência a inibidores de glutamina sintetase herbicidas.

Exemplo 12. Transformação de planta por bombardeamento de partículas. Espigas de milho são mais bem colhidas entre 8-12 dias após a polinização. Os embriões são isolados a partir das espigas, e aqueles embriões de 0,8-1,5 mm de tamanho são usados preferencialmente na transformação. Os embriões são plaqueados com o lado do escutelo para cima em um meio de incubação adequado, tal como o meio DN62A5S (3,98 g/L de Sais N6; 1 ml/L (de estoque IOOOx) de Vitaminas N6; 800 mg/L de L-Asparagina; 100 mg/L de Mio-inositol; 1,4 g/L de L-Prolina/ 100 mg/L de Casaminoácidos; 50 g/L de sacarose; 1 ml/L (de estoque 1 mg/ml) 2,4-D). Entretanto, outros meios e sais que não DN62A5S são adequados e são conhecidos na técnica. Os embriões são incubados durante a noite a 25°C no escuro. Entretanto, não é necessário por si, incubar os embriões durante a noite.

Os explantes resultantes são transferidos para malha quadrada (30-40 por placa), transferidos sobre meio osmótico por cerca de 30-45 minutos, e então transferidos para uma placa de bombardeamento ver, por exemplo, Publicação do PCT No. W0/0138514 e Patente U.S. No. 5.240.842).

As construções de DNA projetadas para expressar enzimas glutamina sintetase da presente invenção em células vegetais são aceleradas para dentro do tecido da planta usando-se um acelerador de feixe de aerosol, utilizando-se as condições essencialmente como descrito na Publicação do PCT No. WO/0138514. Após o bombardeamento os embriões são incubados por cerca de 30 min em meio osmótico, e colocados sobre o meio de incubação durante a noite a 25cC no escuro. Para se evitar explantes indevidamente danificados, eles são incubados por ao menos 24 horas antes da transferência para o meio de recuperação. Os embriões são então espalhados sobre meio de período de recuperação, por cerca de 5 dias, 25°C no escuro, e então transferidos para um meio de seleção. Os explantes são incubados em meio de seleção por até oito semanas, dependendo da natureza e das características da seleção particularmente utilizada. Após o período de seleção, o calo resultante é transferido para o meio de maturação do embrião até que se observe a formação dos embriões somáticos maduros. Os embriões somáticos maduros resultantes são então colocados sob luz baixa, e o processo de regeneração é iniciado por métodos conhecidos na técnica. Os brotos resultantes são deixados para enraizar no meio de enraizamento, e as plantas resultantes são transferidas para potes de viveiro e propagadas como plantas transgênicas. As plantas são analisadas para resistência melhorada para inibidores de glutamina sintetase herbicídas.

Materiais Meio DN62A5S

<table>table see original document page 75</column></row><table>

Ajustar o pH da solução para pH 5,8 com IN K0H/1N KCl, adicionar Gelrite (Sigma) para 3g/L, e autoclavar. Após resfriar para 50°C, adicionar 2 ml/L de uma solução estoque de nitrato de prata 5 mg/ml (Phytotechnology Labs). A receita rende cerca de 20 placas.

Exemplo 13. Transformação de células vegetais por

Transformação mediada por Agrobacterium

As espigas são mais bem colhidas entre 8-12 dias após a polinização. Os embriões são isolados de espigas, e aqueles embriões com 0,8-1,5 mm de tamanho são preferidos para uso na transformação. Os embriões são plaqueados com o lado do escutelo para cima em um meio de incubação adequado, e incubados durante a noite a 25°C no escuro. Entretanto, não é necessário por si se incubar os embriões durante a noite. Os embriões são postos em contato com uma linhagem de Agrobacterium contendo os vetores apropriados tendo uma seqüência da presente invenção para transferência mediada por plasmideo Ti por cerca de 5-10 min, e então plaqueados sobre meio de co-cultivo por cerca de 3 dias (25°C no escuro). Após co-cultivo, os explantes são transferidos para um meio de período de recuperação por cerca de cinco dias (a 25°C no escuro). Os explantes são incubados no meio seletivo por até oito semanas, dependendo da natureza e características da seleção utilizada em particular. Após o período de seleção, o calo resultante é transferido para o meio de maturação de embrião, até se observar a formação de embriões somáticos maduros. Os embriões somáticos maduros resultantes são então colocados sob luz baixa, e o processo de regeneração é iniciado conforme conhecido na técnica. Os brotos resultantes são deixados para enraizar no meio de enraizamento, e as plantas resultantes são transferidas para potes de viveiro e propagadas como plantas transgênicas.

Exemplo 14. Plantas transgênicas expressando AGSlml6

synagslml6 (SEQ ID NO: 47) é uma seqüência de DNA alternada que codifica a proteína AGSlmló (SEQ ID NO:32). synagslmlô foi clonada dentro de um vetor de lançamento para guiar a super-expressão de AGSlml6 em milho. 0 vetor dispõe a super-expressão de synagslml6 sob o controle do promotor Trp5 (US application 11/377.318, preenchida em 16 de março de 2006 e aqui incorporada por referência em sua integra).

Nove plantas de milho transgênicas contendo agslml6 foram geradas. A expressão da proteína AGSIml6 foi confirmada por Western blot para cada um destes eventos.

Como controles, seis eventos que não continham agslmló foram gerados. A eficiência de utilização de nitrogênio foi avaliada para estes eventos através da determinação do conteúdo protéico das amostras das folhas isoladas das plantas do T0 após quatro semanas de crescimento na estufa.

As proteínas presentes nas amostras de folhas foram quantificadas como segue: Cinqüenta miligramas de material de folha (peso fresco, sem nervura central) foram liofilizados para determinação do peso seco. O tecido de folha desidratado foi então macerado na presença de água Milli Q fresca usando-se um MiniBeadbeater-96™ e esferas de aço inoxidável de 2.3 mm. O tecido de folha macerado foi filtrado através de um filtro de Fluoreto de Polivinilideno de 0.45 μm (PVDF). O corante Bio-Rad Protein Dye foi adicionado às amostras de folha diluídas na água, e o método de Bradford foi realizado e lido no espectrofotômetro no comprimento de 595nm contra marcadores de proteína internos incluídos no método. As concentrações de proteína solúvel foram divididas pelo peso seco de cada amostra para se obter a massa protéica por unidade de peso seco. Surpreendentemente, demonstrou-se que as plantas contendo agslmlô possuíam uma média 24% maior de conteúdo protéico do que as plantas controle que não continham agslmlô.

Tabela 6. Proteína aumentada em plantas com AGSlml6

<table>table see original document page 78</column></row><table> Todas as publicações e aplicações de patentes mencionadas na especificação são indicativas do nivel de conhecimento daqueles especialistas na técnica a qual esta invenção pertence. Todas as publicações e aplicações de patentes são aqui incorporadas por referência na mesma extensão como se cada publicação ou aplicação de patente individual fosse especificamente e individualmente indicada para serem incorporadas por referência.

Apesar de a invenção precedente ter sido descrita em algum detalhe por meio de ilustração e exemplo para fins de clareza de entendimento, será óbvio que certas alterações e modificações podem ser praticadas no escopo das reivindicações em anexo. LISTAGEM DE SEQÜÊNCIAS

<110> Depositante: Athenix Corporation

Nicholas B. Duck Todd K. Hinson Vadim Beilinson Laura Cooper Schouten Daniel John Tomso

<120> Titulo da Invenção: Glutamina Sintetases Bacterianas e Métodos de Uso

<130> Referência do documento: 45600/329367

<150> Número do Documento de Prioridade: 60/812.000

<151> Data de Depósito do Documento de Prioridade: 08-06-2006

<160> Quantidade de SEQ ID NOs.: 47

<170> Software: FastSEQ for Windows Version 4.0

<210> SEQ ID NO: 1 <211> Comprimento: 1410 <212> Tipo: DNA

<213> Organismo: Serratia marcescens

<220> Características:

<221> Nome/Chave: CDS

<222> Localização: (1)... (1410)

<400> Seqüência: 1

atg tcc gct gaa cac gtt ttg acg atg ctg aat gag cat gaa gtg aaa 48

Met Ser Ala Glu His Val Leu Thr Met Leu Asn Glu His Glu Val Lys

15 10 15

ttc gta gac ctg cgt ttc act gac acc aag ggt aag gaa cag cac gtg 96

Phe Val Asp Leu Arg Phe Thr Asp Thr Lys Gly Lys Glu Gln His Val

20 25 30

act ate ccg gct cac cag gta aac gcc gac ttc ttc gaa gaa ggt aaa 144

Thr Ile Pro Ala His Gln Val Asn Ala Asp Phe Phe Glu Glu Gly Lys

35 40 45

atg ttt gac ggc tcc tet ate ggt ggt tgg aag ggc ate aac gaa tet 192

Met Phe Asp Gly Ser Ser Ile Gly Gly Trp Lys Gly Ile Asn Glu Ser

50 55 60

gac atg gtg ctg atg ccg gac gcc age acg gcg gtt ctg gat ccg ttc 240

Asp Met Val Leu Met Pro Asp Ala Ser Thr Ala Val Leu Asp Pro Phe

65 70 75 80

ttc gaa gaa cct acg ctg ate att cgc tgt gac att ctc gag ccg ggc 288

Phe Glu Glu Pro Thr Leu Ile Ile Arg Cys Asp Ile Leu Glu Pro Gly

85 90 95

acc atg caa ggc tac gat cgc gac ccg cgt tcc ate tcc aaa cgc gcc 336

Thr Met Gln Gly Tyr Asp Arg Asp Pro Arg Ser Ile Ser Lys Arg Ala

100 105 110

gaa gac ttc ctg cgc tcc tcc ggc ate gcg gac acc gtg ctg ttc ggg 384

Glu Asp Phe Leu Arg Ser Ser Gly Ile Ala Asp Thr Val Leu Phe Gly

115 120 125 cca gag cct gag ttc ttc ctg ttc gac gac ate cgc ttc ggc age age 432

Pro Glu Pro Glu Phe Phe Leu Phe Asp Asp Ile Arg Phe Gly Ser Ser

130 135 140

ate cgc ggt tcc cac gtg gcg ate gac gat ate gaa ggc gcc tgg aac 480

Ile Arg Gly Ser His Val Ala Ile Asp Asp Ile Glu Gly Ala Trp Asn

145 150 155 160

tcc ggc aca aaa tac gac ggc ggc aac aaa ggc cac cgt ccg gcg gtg 528

Ser Gly Thr Lys Tyr Asp Gly Gly Asn Lys Gly His Arg Pro Ala Val

165 170 175

aaa ggc ggt tac ttc ccg gtt cca ccg gtc gac tet tcg cag gat ctg 576

Lys Gly Gly Tyr Phe Pro Val Pro Pro Val Asp Ser Ser Gln Asp Leu

180 185 190

cgt tcc acc atg tgt ctg acc atg gaa gag atg ggc ctg gtg gtt gaa 624

Arg Ser Thr Met Cys Leu Thr Met Glu Glu Met Gly Leu Val Val Glu

195 200 205

gcg cac cac cac gaa gtg gcg acc gcc ggt cag aac gaa gtg gea acc 672

Ala His His His Glu Val Ala Thr Ala Gly Gln Asn Glu Val Ala Thr

210 215 220

cgc ttc aac acc atg acc aag aaa gcc gac gaa att cag ate tat aag 720

Arg Phe Asn Thr Met Thr Lys Lys Ala Asp Glu Ile Gln Ile Tyr Lys

225 230 235 240

tac gtg gtg cac aac gtg gcg cac gcc ttc ggt aaa acc gcg acc ttc 768

Tyr Val Val His Asn Val Ala His Ala Phe Gly Lys Thr Ala Thr Phe

245 250 255

atg ccg aag ccc atg ttc ggc gac aac ggt tcc ggc atg cac tgc cac 816

Met Pro Lys Pro Met Phe Gly Asp Asn Gly Ser Gly Met His Cys His

260 265 270

atg tcg ctg tcc aag aac ggc acc aac ctg ttc gcc ggc gac aaa tac 864

Met Ser Leu Ser Lys Asn Gly Thr Asn Leu Phe Ala Gly Asp Lys Tyr

275 280 285

ggc ggc ctg tet gaa acc gea ctg ttc tac ate ggc ggt ate ate aag 912

Gly Gly Leu Ser Glu Thr Ala Leu Phe Tyr Ile Gly Gly Ile Ile Lys

290 295 300

cac gcc aag gcg ate aac gcg ctg gcc aac ccg acc acc aac tcg tac 960

His Ala Lys Ala Ile Asn Ala Leu Ala Asn Pro Thr Thr Asn Ser Tyr

305 310 315 320

aaa cgt ctg gtg cca ggc tac gaa gcg ccg gtg atg ctg gct tac tcc 1008

Lys Arg Leu Val Pro Gly Tyr Glu Ala Pro Val Met Leu Ala Tyr Ser

325 330 335

gcc cgt aac cgc tcc gcg tcc ate cgt ate ccg gtg gtc gcc age ccg 1056

Ala Arg Asn Arg Ser Ala Ser Ile Arg Ile Pro Val Val Ala Ser Pro

340 345 350

aaa gcg cgc cgc ate gaa gcc cgc ttc ccg gat ccg gcg gct aac cca 1104

Lys Ala Arg Arg Ile Glu Ala Arg Phe Pro Asp Pro Ala Ala Asn Pro

355 360 365

tac ctg tgc ttc gcc gea ctg ctg atg gcc ggc ctg gac ggc ate ate Tyr Leu Cys Phe Ala Ala Leu Leu Met Ala Gly Leu Asp Gly Ile Ile

1152 370 375 380

aac aag ate cac cct ggc gac gcc atg gac aaa aac ctg tac gac ctg 1200

Asn Lys Ile His Pro Gly Asp Ala Met Asp Lys Asn Leu Tyr Asp Leu

385 390 395 400

ccg ccg gaa gaa gaa gcc gag ate cca aaa gtg gcc ggc tcg ctg gac 1248

Pro Pro Glu Glu Glu Ala Glu Ile Pro Lys Val Ala Gly Ser Leu Asp 405 410 415

gag gcg atg gcc gcg ctg aac gaa gac cgc gag ttc ctg acc cgc ggc 1296

Glu Ala Met Ala Ala Leu Asn Glu Asp Arg Glu Phe Leu Thr Arg Gly 420 425 430

ggc gtg ttc acc gac gat gcg ate gat gcc tac ate gaa ctg cgc aaa 1344

Gly Val Phe Thr Asp Asp Ala Ile Asp Ala Tyr Ile Glu Leu Arg Lys 435 440 445

gaa gag atg gac cgc gtt cgc atg acg cca cac ccg gtc gag ttc gaa 1392

Glu Glu Met Asp Arg Val Arg Met Thr Pro His Pro Val Glu Phe Glu 450 455 460

ctg tac tac age gtc taa 1410

Leu Tyr Tyr Ser Val *

465

<210> SEQ ID NO: 2 <211> Comprimento: 4 69 <212> Tipo: PRT

<213> Organismo: Serratia marcescens <400> Seqüência: 2

Met Ser Ala Glu His Val Leu Thr Met Leu Asn Glu His Glu Val Lys

15 10 15

Phe Val Asp Leu Arg Phe Thr Asp Thr Lys Gly Lys Glu Gln His Val

20 25 30

Thr Ile Pro Ala His Gln Val Asn Ala Asp Phe Phe Glu Glu Gly Lys

35 40 45

Met Phe Asp Gly Ser Ser Ile Gly Gly Trp Lys Gly Ile Asn Glu Ser

50 55 60

Asp Met Val Leu Met Pro Asp Ala Ser Thr Ala Val Leu Asp Pro Phe 65 70 75 80

Phe Glu Glu Pro Thr Leu Ile Ile Arg Cys Asp Ile Leu Glu Pro Gly

85 90 95

Thr Met Gln Gly Tyr Asp Arg Asp Pro Arg Ser Ile Ser Lys Arg Ala

100 105 110

Glu Asp Phe Leu Arg Ser Ser Gly Ile Ala Asp Thr Val Leu Phe Gly

115 120 125

Pro Glu Pro Glu Phe Phe Leu Phe Asp Asp Ile Arg Phe Gly Ser Ser

130 135 140

Ile Arg Gly Ser His Val Ala Ile Asp Asp Ile Glu Gly Ala Trp Asn 145 150 155 160

Ser Gly Thr Lys Tyr Asp Gly Gly Asn Lys Gly His Arg Pro Ala Val

165 170 175

Lys Gly Gly Tyr Phe Pro Val Pro Pro Val Asp Ser Ser Gln Asp Leu

180 185 190

Arg Ser Thr Met Cys Leu Thr Met Glu Glu Met Gly Leu Val Val Glu

195 200 205

Ala His His His Glu Val Ala Thr Ala Gly Gln Asn Glu Val Ala Thr

210 215 220

Arg Phe Asn Thr Met Thr Lys Lys Ala Asp Glu Ile Gln Ile Tyr Lys 225 230 235 240 Tyr Val Val His Met Pro Met Ser

Gly Gly 290 His Ala 305

Lys Arg

Ala Arg

Lys Ala

Tyr Leu 370 Asn Lys 385

Pro Pro

Glu Ala

Gly Val

Glu Glu 450 Leu Tyr 465

Lys Pro 260 Leu Ser 275

Leu Ser

Lys Ala

Leu Val

Asn Arg 340 Arg Arg 355

Cys Phe

Ile His

Glu Glu

Met Ala 420 Phe Thr 435

Met Asp Tyr Ser

Asn Val Ala 245

Met Phe Gly

Lys Asn Gly

Glu Thr Ala 295

Ile Asn Ala

310 Pro Gly Tyr 325

Ser Ala Ser

Ile Glu Ala

Ala Ala Leu 375

Pro Gly Asp

390 Glu Ala Glu 405

Ala Leu Asn

Asp Asp Ala

Arg Val Arg 455

Val

His Ala

Asp Asn 265 Thr Asn 280

Leu Phe

Leu Ala

Glu Ala

Ile Arg 345 Arg Phe 360

Leu Met

Ala Met

Ile Pro

Glu Asp 425 Ile Asp 440

Met Thr

Phe Gly 250

Gly Ser

Leu Phe

Tyr Ile

Asn Pro 315 Pro Val 330

Ile Pro

Pro Asp

Ala Gly

Asp Lys 395 Lys Val 410

Arg Glu Ala Tyr Pro His

Lys Thr Ala

Gly Met His 270

Ala Gly Asp 285

Gly Gly Ile 300

Thr Thr Asn

Met Leu Ala

Val Val Ala 350

Pro Ala Ala

365 Leu Asp Gly 380

Asn Leu Tyr

Ala Gly Ser

Phe Leu Thr 430

Ile Glu Leu

445 Pro Val Glu 460

Thr 255 Cys

Lys

Ile

Ser

Tyr 335 Ser

Asn

Ile

Asp

Leu 415 Arg

Arg

Phe

His

Tyr

Lys

Tyr 320 Ser

Pro

Ile

Leu 400 Asp

Gly

Lys

Glu

<210> SEQ ID NO: 3 <211> Comprimento: 1410 <212> Tipo: DNA

<213> Organismo: Seqüência Artificial

<220> Características:

<223> Outras Informações: agslml

<221> Nome/Chave: CDS

<222> Localização: (1)...(1410)

<400> Seqüência: 3

atg tcc gct gaa cac gtt ttg acg atg ctg aat gag cat gaa gtg aaa 48

Met Ser Ala Glu His Val Leu Thr Met Leu Asn Glu His Glu Val Lys 1 5 10 15

ttc gta gac ctg cgt ttc act gac acc aag ggt aag gaa cag cac gtg 96

Phe Val Asp Leu Arg Phe Thr Asp Thr Lys Gly Lys Glu Gln His Val 20 25 30

act ate ccg gct cac cag ata aac gcc gac ttc ttc gaa gaa ggt aaa 144

Thr Ile Pro Ala His Gln Ile Asn Ala Asp Phe Phe Glu Glu Gly Lys 35 40 45

atg ttt gac ggc tcc tet ate ggt ggt tgg aag ggc ate aac gaa tet 192

Met Phe Asp Gly Ser Ser Ile Gly Gly Trp Lys Gly Ile Asn Glu Ser 50 55 60

gac atg gtg ctg atg ccg gac gcc age acg gcg gtt ctg gat ccg ttc 240 Asp Met Val Leu Met Pro Asp Ala Ser Thr Ala Val Leu Asp Pro Phe 65 70 75 80 ttc gaa gaa cct acg ctg ate att cgc tgt gac att ctc gag ccg ggc 288

Phe Glu Glu Pro Thr Leu Ile Ile Arg Cys Asp Ile Leu Glu Pro Gly

85 90 95

acc atg caa ggc tac gat cgc gac ccg cgt tcc ate tcc aaa cgc gcc 336

Thr Met Gln Gly Tyr Asp Arg Asp Pro Arg Ser Ile Ser Lys Arg Ala

100 105 110

gaa gac ttc ctg cgc tcc tcc ggc ate gcg gac acc gtg ctg ttc ggg 384

Glu Asp Phe Leu Arg Ser Ser Gly Ile Ala Asp Thr Val Leu Phe Gly

115 120 125

cca gag cct gag ttc ttc ctg ttc gac gac ate cgc ttc ggc age age 432

Pro Glu Pro Glu Phe Phe Leu Phe Asp Asp Ile Arg Phe Gly Ser Ser

130 135 140

ate cgc ggt tcc cac gtg gcg ate gac gat ate gaa ggc gcc tgg aac 480

Ile Arg Gly Ser His Val Ala Ile Asp Asp Ile Glu Gly Ala Trp Asn

145 150 155 160

tcc ggc aca aaa tac gac ggc ggc aac aaa ggc cac cgt ccg gcg gtg 528

Ser Gly Thr Lys Tyr Asp Gly Gly Asn Lys Gly His Arg Pro Ala Val

165 170 175

aaa ggc ggt tac ttc ccg gtt cca ccg gtc gac tet tcg cag gat ctg 576

Lys Gly Gly Tyr Phe Pro Val Pro Pro Val Asp Ser Ser Gln Asp Leu

180 185 190

cgt tcc acc atg tgt ctg acc atg gaa gag atg ggc ctg gtg gtt gaa 624

Arg Ser Thr Met Cys Leu Thr Met Glu Glu Met Gly Leu Val Val Glu

195 200 205

gcg cac cac cac gaa atg gcg acc gcc ggt cag aac gaa gtg gea acc 672

Ala His His His Glu Met Ala Thr Ala Gly Gln Asn Glu Val Ala Thr

210 215 220

cgc ttc aac acc atg acc aag aaa gcc gac gaa att cag ate tat aag 720

Arg Phe Asn Thr Met Thr Lys Lys Ala Asp Glu Ile Gln Ile Tyr Lys

225 230 235 240

tac gtg gtg cac aac gtg gcg cac gcc ttc ggt aaa acc gcg acc ttc 768

Tyr Val Val His Asn Val Ala His Ala Phe Gly Lys Thr Ala Thr Phe

245 250 255

atg ccg aag ccc atg ttc ggc gac aac ggt tcc ggc atg cac tgc cac 816

Met Pro Lys Pro Met Phe Gly Asp Asn Gly Ser Gly Met His Cys His

260 265 270

atg tcg ctg tcc aag aac ggc acc aac ctg ttc gcc ggc gac aaa tac 8 64

Met Ser Leu Ser Lys Asn Gly Thr Asn Leu Phe Ala Gly Asp Lys Tyr

275 280 285

ggc ggc ctg tet gaa acc gea ctg ttc tac ate ggc ggt ate ate aag 912

Gly Gly Leu Ser Glu Thr Ala Leu Phe Tyr Ile Gly Gly Ile Ile Lys

290 295 300

cac gcc aag gcg ate aac gcg ctg gcc aac ccg acc acc aac tcg tac 960

His Ala Lys Ala Ile Asn Ala Leu Ala Asn Pro Thr Thr Asn Ser Tyr

305 310 315 320

aaa cgt ctg gtg cca ggc tac gaa gcg ccg gtg atg ctg gct tac tcc Lys Arg Leu Val Pro Gly Tyr Glu Ala Pro Val Met Leu Ala Tyr Ser

1008 325 330 335

gcc cgt aac cgc tcc gcg tcc ate cgt ate ccg gtg gtc gcc age ccg 1056 Ala Arg Asn Arg Ser Ala Ser Ile Arg Ile Pro Val Val Ala Ser Pro 340 345 350

aaa gcg cgc cgc ate gaa gcc cgc ttc ccg gat ccg gcg gct aac cca 1104 Lys Ala Arg Arg Ile Glu Ala Arg Phe Pro Asp Pro Ala Ala Asn Pro 355 360 365

tac ctg tgc ttc gcc gea ctg ctg atg gcc ggc ctg gac ggc ate ate 1152 Tyr Leu Cys Phe Ala Ala Leu Leu Met Ala Gly Leu Asp Gly Ile Ile 370 375 380

aac aag ate cac cct ggc gac gcc atg gac aaa aac ctg tac gac ctg 1200 Asn Lys Ile His Pro Gly Asp Ala Met Asp Lys Asn Leu Tyr Asp Leu 385 390 395 400

ccg ccg gaa gaa gaa gcc gag ate cca aaa gtg gcc ggc tcg ctg gac 1248 Pro Pro Glu Glu Glu Ala Glu Ile Pro Lys Val Ala Gly Ser Leu Asp 405 410 415

gag gcg atg gcc gcg ctg aac gaa gac cgc gag ttc ctg acc cgc ggc 1296 Glu Ala Met Ala Ala Leu Asn Glu Asp Arg Glu Phe Leu Thr Arg Gly 420 425 430

ggc gtg ttc acc gac gat gcg ate gat gcc tac ate gaa ctg cgc aaa 1344 Gly Val Phe Thr Asp Asp Ala Ile Asp Ala Tyr Ile Glu Leu Arg Lys 435 440 445

gaa gag atg gac cgc gtt cgc atg acg cca cac ccg gtc gag ttc gaa 1392 Glu Glu Met Asp Arg Val Arg Met Thr Pro His Pro Val Glu Phe Glu 450 455 460

ctg tac tac age gtc taa 1410

Leu Tyr Tyr Ser Val *

465

<210> SEQ ID NO: 4 <211> Comprimento: 469 <212> Tipo: PRT

<213> Organismo: Seqüência Artificial

<220> Características:

<223> Outras Informações: AGSlMl

<400> Seqüência: 4

Met Ser Ala Glu His Val Leu Thr Met Leu Asn Glu His Glu Val Lys

15 10 15

Phe Val Asp Leu Arg Phe Thr Asp Thr Lys Gly Lys Glu Gln His Val

20 25 30

Thr Ile Pro Ala His Gln Ile Asn Ala Asp Phe Phe Glu Glu Gly Lys

35 40 45

Met Phe Asp Gly Ser Ser Ile Gly Gly Trp Lys Gly Ile Asn Glu Ser

50 55 60

Asp Met Val Leu Met Pro Asp Ala Ser Thr Ala Val Leu Asp Pro Phe 65 70 75 80

Phe Glu Glu Pro Thr Leu Ile Ile Arg Cys Asp Ile Leu Glu Pro Gly

85 90 95

Thr Met Gln Gly Tyr Asp Arg Asp Pro Arg Ser Ile Ser Lys Arg Ala

100 105 110

Glu Asp Phe Leu Arg Ser Ser Gly Ile Ala Asp Thr Val Leu Phe Gly 115 120 125

Pro Glu Pro Glu Phe Phe Leu Phe Asp Asp Ile Arg Phe Gly Ser Ser 130 135 140 Ile Arg Gly Ser His Val Ala Ile Asp Asp Ile Glu Gly Ala Trp Asn 145 150 155 160 Ser Gly Thr Lys Tyr Asp Gly Gly Asn Lys Gly His Arg Pro Ala Val 165 170 175 Lys Gly Gly Tyr Phe Pro Val Pro Pro Val Asp Ser Ser Gln Asp Leu 180 185 190 Arg Ser Thr Met Cys Leu Thr Met Glu Glu Met Gly Leu Val Val Glu 195 200 205 Ala His His His Glu Met Ala Thr Ala Gly Gln Asn Glu Val Ala Thr 210 215 220 Arg Phe Asn Thr Met Thr Lys Lys Ala Asp Glu Ile Gln Ile Tyr Lys 225 230 235 240 Tyr Val Val His Asn Val Ala His Ala Phe Gly Lys Thr Ala Thr Phe 245 250 255 Met Pro Lys Pro Met Phe Gly Asp Asn Gly Ser Gly Met His Cys His 260 265 270 Met Ser Leu Ser Lys Asn Gly Thr Asn Leu Phe Ala Gly Asp Lys Tyr 275 280 285 Gly Gly Leu Ser Glu Thr Ala Leu Phe Tyr Ile Gly Gly Ile Ile Lys 290 295 300 His Ala Lys Ala Ile Asn Ala Leu Ala Asn Pro Thr Thr Asn Ser Tyr 305 310 315 320 Lys Arg Leu Val Pro Gly Tyr Glu Ala Pro Val Met Leu Ala Tyr Ser 325 330 335 Ala Arg Asn Arg Ser Ala Ser Ile Arg Ile Pro Val Val Ala Ser Pro 340 345 350 Lys Ala Arg Arg Ile Glu Ala Arg Phe Pro Asp Pro Ala Ala Asn Pro 355 360 365 Tyr Leu Cys Phe Ala Ala Leu Leu Met Ala Gly Leu Asp Gly Ile Ile 370 375 380 Asn Lys Ile His Pro Gly Asp Ala Met Asp Lys Asn Leu Tyr Asp Leu 385 390 395 400 Pro Pro Glu Glu Glu Ala Glu Ile Pro Lys Val Ala Gly Ser Leu Asp 405 410 415 Glu Ala Met Ala Ala Leu Asn Glu Asp Arg Glu Phe Leu Thr Arg Gly 420 425 430 Gly Val Phe Thr Asp Asp Ala Ile Asp Ala Tyr Ile Glu Leu Arg Lys 435 440 445 Glu Glu Met Asp Arg Val Arg Met Thr Pro His Pro Val Glu Phe Glu 450 455 460 Leu Tyr Tyr Ser Val 465

<210> SEQ ID NO: 5 <211> Comprimento: 1410 <212> Tipo: DNA

<213> Organismo: Seqüência Artificial

<220> Características:

<223> Outras Informações: agslm2

<221> Nome/Chave: CDS

<222> Localização: (1)...(1410)

<400> Seqüência: 5

atg tcc gct gaa cac gtt ttg acg atg ctg aat gag cat gaa gtg aaa

Met Ser Ala Glu His Val Leu Thr Met Leu Asn Glu His Glu Val Lys 15 10 15 ttc gta gac ctg cgt ttc act gac acc aag ggt aag gaa cag cac gtg 96

Phe Val Asp Leu Arg Phe Thr Asp Thr Lys Gly Lys Glu Gln His Val

20 25 30

act ate ccg gct cac cag gta aac gcc gac ttc ttc gaa gaa ggt aaa 144

Thr Ile Pro Ala His Gln Val Asn Ala Asp Phe Phe Glu Glu Gly Lys

35 40 45

atg ttt gac ggc tcc tet ate ggt ggt tgg aag ggc ate aac gaa tet 192

Met Phe Asp Gly Ser Ser Ile Gly Gly Trp Lys Gly Ile Asn Glu Ser

50 55 60

gac atg gtg ctg atg ccg gac gcc age acg gcg gtt ctg gat ccg ttc 240

Asp Met Val Leu Met Pro Asp Ala Ser Thr Ala Val Leu Asp Pro Phe

65 70 75 80

tcc gaa gaa cct acg ctg ate att cgc tgt gac att ctc gag ccg ggc 288

Ser Glu Glu Pro Thr Leu Ile Ile Arg Cys Asp Ile Leu Glu Pro Gly

85 90 95

acc atg caa ggc tac gat cgc gac ccg cgt tcc ate tcc aaa cgc gcc 336

Thr Met Gln Gly Tyr Asp Arg Asp Pro Arg Ser Ile Ser Lys Arg Ala

100 105 110

gaa gac ttc ctg cgc tcc tcc ggc ate gcg gac acc gtg ctg ttc ggg 384

Glu Asp Phe Leu Arg Ser Ser Gly Ile Ala Asp Thr Val Leu Phe Gly

115 120 125

cca gag cct gag ttc ttc ctg ttc gac gac ate cgc ttc ggc age age 432

Pro Glu Pro Glu Phe Phe Leu Phe Asp Asp Ile Arg Phe Gly Ser Ser

130 135 140

ate cgc ggt tcc cac gtg gcg ate gac gat ate gaa ggc gcc tgg aac 4 80

Ile Arg Gly Ser His Val Ala Ile Asp Asp Ile Glu Gly Ala Trp Asn

145 150 155 160

tcc ggc aca aaa tac gac ggc ggc aac aaa ggc cac cgt ccg gcg gtg 528

Ser Gly Thr Lys Tyr Asp Gly Gly Asn Lys Gly His Arg Pro Ala Val

165 170 175

aaa ggc ggt tac ttc ccg gtt cca tcg gtc gac tet tcg cag gat ctg 576

Lys Gly Gly Tyr Phe Pro Val Pro Ser Val Asp Ser Ser Gln Asp Leu

180 185 190

cgt tcc acc atg tgt ctg acc atg gaa gag atg ggc ctg gtg gtt gaa 624

Arg Ser Thr Met Cys Leu Thr Met Glu Glu Met Gly Leu Val Val Glu

195 200 205

gcg cac cac cac gaa gtg gcg acc gcc agt cag aac gaa gtg gea acc 672

Ala His His His Glu Val Ala Thr Ala Ser Gln Asn Glu Val Ala Thr

210 215 220

cgc ttc aac acc atg acc aag aaa gcc gac gaa att cag ate tat aag 720

Arg Phe Asn Thr Met Thr Lys Lys Ala Asp Glu Ile Gln Ile Tyr Lys

225 230 235 240

tac gtg gtg cac aac gtg gea cac gcc ttc ggt aaa acc gcg acc ttc 768

Tyr Val Val His Asn Val Ala His Ala Phe Gly Lys Thr Ala Thr Phe

245 250 255

atg ccg aag ccc atg ttc ggc gac aac ggt tcc ggc atg cac tgc cac 816

Met Pro Lys Pro Met Phe Gly Asp Asn Gly Ser Gly Met His Cys His

260 265 270 atg tcg ctg tcc aag aac ggc acc aac ctg ttc gcc ggc gac aaa tac 864

Met Ser Leu Ser Lys Asn Gly Thr Asn Leu Phe Ala Gly Asp Lys Tyr

275 280 285

ggc ggc ctg tct gaa acc gca ctg ttc tac ate ggc ggt ate aac aag 912

Gly Gly Leu Ser Glu Thr Ala Leu Phe Tyr Ile Gly Gly Ile Asn Lys

290 295 300

cac gcc aag gcg ate aac gcg ctg gcc aac ccg acc acc aac tcg tac 960

His Ala Lys Ala Ile Asn Ala Leu Ala Asn Pro Thr Thr Asn Ser Tyr

305 310 315 320

aaa cgt ctg gtg cca ggc tac gaa gcg ccg gtg atg ctg gct tac tcc 1008

Lys Arg Leu Val Pro Gly Tyr Glu Ala Pro Val Met Leu Ala Tyr Ser 325 330 335

gcc cgt aac cgc tcc gcg tcc ate cgt ate ccg gtg gtc gcc age ccg 1056

Ala Arg Asn Arg Ser Ala Ser Ile Arg Ile Pro Val Val Ala Ser Pro

340 345 350

aaa gcg cgc cgc ate gaa gcc cgc ttc ccg gat ccg gcg gct aac cca 1104

Lys Ala Arg Arg Ile Glu Ala Arg Phe Pro Asp Pro Ala Ala Asn Pro,

355 360 365

tac ctg tgc ttc gcc gca ctg ctg atg gcc ggc ctg gac ggc ate ate 1152

Tyr Leu Cys Phe Ala Ala Leu Leu Met Ala Gly Leu Asp Gly Ile Ile

370 375 380

aac aag ate cac cct ggc gac gcc atg gac aaa aac ctg tac gac ctg 1200

Asn Lys Ile His Pro Gly Asp Ala Met Asp Lys Asn Leu Tyr Asp Leu

385 390 395 400

ccg ccg gaa gaa gaa gcc gag ate cca aaa gtg gcc ggc tcg ctg gac 1248

Pro Pro Glu Glu Glu Ala Glu Ile Pro Lys Val Ala Gly Ser Leu Asp 405 410 415

gag gcg atg gcc gcg ctg aac gaa gac cgc gag ttc ctg acc cgc ggc 1296

Glu Ala Met Ala Ala Leu Asn Glu Asp Arg Glu Phe Leu Thr Arg Gly

420 425 430

ggc gtg ttc act gac gat gcg ate gat gcc tac ate gaa ctg cgc aaa 1344

Gly Val Phe Thr Asp Asp Ala Ile Asp Ala Tyr Ile Glu Leu Arg Lys

435 440 445

gaa gag atg gac cgc gtt cgc atg acg cca cac ccg gtc gag ttc gaa 1392

Glu Glu Met Asp Arg Val Arg Met Thr Pro His Pro Val Glu Phe Glu

450 455 460

ctg tac tac age gtc taa 1410

Leu Tyr Tyr Ser Val *

465

<210> SEQ ID NO: 6 <211> Comprimento: 469 <212> Tipo: PRT

<213> Organismo: Seqüência Artificial

<220> Características:

<223> Outras Informações: AGS1M2

<400> Seqüência: 6 Met Ser Ala Glu His Val Leu Thr Met Leu Asn Glu His Glu Val Lys 1 5 10 15 Phe Val Asp Leu Arg Phe Thr Asp Thr Lys Gly Lys Glu Gln His Val 20 25 30 Thr Ile Pro Ala His Gln Val Asn Ala Asp Phe Phe Glu Glu Gly Lys 35 40 45 Met Phe Asp Gly Ser Ser Ile Gly Gly Trp Lys Gly Ile Asn Glu Ser 50 55 60 Asp Met Val Leu Met Pro Asp Ala Ser Thr Ala Val Leu Asp Pro Phe 65 70 75 80 Ser Glu Glu Pro Thr Leu Ile Ile Arg Cys Asp Ile Leu Glu Pro Gly 85 90 95 Thr Met Gln Gly Tyr Asp Arg Asp Pro Arg Ser Ile Ser Lys Arg Ala 100 105 110 Glu Asp Phe Leu Arg Ser Ser Gly Ile Ala Asp Thr Val Leu Phe Gly 115 120 125 Pro Glu Pro Glu Phe Phe Leu Phe Asp Asp Ile Arg Phe Gly Ser Ser 130 135 140 Ile Arg Gly Ser His Val Ala Ile Asp Asp Ile Glu Gly Ala Trp Asn 145 150 155 160 Ser Gly Thr Lys Tyr Asp Gly Gly Asn Lys Gly His Arg Pro Ala Val 165 170 175 Lys Gly Gly Tyr Phe Pro Val Pro Ser Val Asp Ser Ser Gln Asp Leu 180 185 190 Arg Ser Thr Met Cys Leu Thr Met Glu Glu Met Gly Leu Val Val Glu 195 200 205 Ala His His His Glu Val Ala Thr Ala Ser Gln Asn Glu Val Ala Thr 210 215 220 Arg Phe Asn Thr Met Thr Lys Lys Ala Asp Glu Ile Gln Ile Tyr Lys 225 230 235 240 Tyr Val Val His Asn Val Ala His Ala Phe Gly Lys Thr Ala Thr Phe 245 250 255 Met Pro Lys Pro Met Phe Gly Asp Asn Gly Ser Gly Met His Cys His 260 265 270 Met Ser Leu Ser Lys Asn Gly Thr Asn Leu Phe Ala Gly Asp Lys Tyr 275 280 285 Gly Gly Leu Ser Glu Thr Ala Leu Phe Tyr Ile Gly Gly Ile Asn Lys 290 295 300 His Ala Lys Ala Ile Asn Ala Leu Ala Asn Pro Thr Thr Asn Ser Tyr 305 310 315 320 Lys Arg Leu Val Pro Gly Tyr Glu Ala Pro Val Met Leu Ala Tyr Ser 325 330 335 Ala Arg Asn Arg Ser Ala Ser Ile Arg Ile Pro Val Val Ala Ser Pro 340 345 350 Lys Ala Arg Arg Ile Glu Ala Arg Phe Pro Asp Pro Ala Ala Asn Pro 355 360 365 Tyr Leu Cys Phe Ala Ala Leu Leu Met Ala Gly Leu Asp Gly Ile Ile 370 375 380 Asn Lys Ile His Pro Gly Asp Ala Met Asp Lys Asn Leu Tyr Asp Leu 385 390 395 400 Pro Pro Glu Glu Glu Ala Glu Ile Pro Lys Val Ala Gly Ser Leu Asp 405 410 415 Glu Ala Met Ala Ala Leu Asn Glu Asp Arg Glu Phe Leu Thr Arg Gly 420 425 430 Gly Val Phe Thr Asp Asp Ala Ile Asp Ala Tyr Ile Glu Leu Arg Lys 435 440 445 Glu Glu Met Asp Arg Val Arg Met Thr Pro His Pro Val Glu Phe Glu 450 455 460 Leu Tyr Tyr Ser Val 465

<210> SEQ ID NO: 7 <211> Comprimento: 1410 <212> Tipo: DNA

<213> Organismo: Seqüência Artificial

<220> Características:

<223> Outras Informações: agslm3

<221> Nome/Chave: CDS

<222> Localização: (1)...(1410)

<400> Seqüência: 7

atg tcc gct gaa cac gtt ttg acg atg ctg aat gag cat gag gtg aaa 48

Met Ser Ala Glu His Val Leu Thr Met Leu Asn Glu His Glu Val Lys

15 10 15

ttc gta gac ctg cgt ttc act gac acc aag ggt aag gaa cag cac gtg 96

Phe Val Asp Leu Arg Phe Thr Asp Thr Lys Gly Lys Glu Gln His Val

20 25 30

act ate ccg gct cac cag gta aac gcc gac ttc ttc gaa gaa ggt aaa 144

Thr Ile Pro Ala His Gln Val Asn Ala Asp Phe Phe Glu Glu Gly Lys

35 40 45

atg ttt gac ggc tcc tet ate ggt ggt tgg aag ggc ate aac gaa tet 192

Met Phe Asp Gly Ser Ser Ile Gly Gly Trp Lys Gly Ile Asn Glu Ser

50 55 60

gac atg gtg ctg atg ccg gac gcc age acg gcg gtt ctg gat ccg ttc 240

Asp Met Val Leu Met Pro Asp Ala Ser Thr Ala Val Leu Asp Pro Phe

65 70 75 80

ttc gac gaa cct acg ctg ate att cgc tgt gac att etc gag ccg ggc 288

Phe Asp Glu Pro Thr Leu Ile Ile Arg Cys Asp Ile Leu Glu Pro Gly

85 90 95

acc atg caa ggc tac gat cgc gac ccg cgt tcc ate tcc aaa cgc gcc 336

Thr Met Gln Gly Tyr Asp Arg Asp Pro Arg Ser Ile Ser Lys Arg Ala

100 105 110

gaa gac ttc ctg cgc tcc tcc ggc ate gcg gac acc gtg ctg ttc ggg 384

Glu Asp Phe Leu Arg Ser Ser Gly Ile Ala Asp Thr Val Leu Phe Gly

115 120 125

cca gag cct gag ttc ttc ctg ttc gac gac ate cgc ttc ggc age age 432

Pro Glu Pro Glu Phe Phe Leu Phe Asp Asp Ile Arg Phe Gly Ser Ser

130 135 140

ate cgc ggt tcc cac gtg gcg ate gac gat ate gaa ggc gcc tgg aac 480

Ile Arg Gly Ser His Val Ala Ile Asp Asp Ile Glu Gly Ala Trp Asn

145 150 155 160

tcc ggc aca aaa tac gac ggc ggc aac aaa ggc cac cgt ccg gcg gtg 528

Ser Gly Thr Lys Tyr Asp Gly Gly Asn Lys Gly His Arg Pro Ala Val

165 170 175

aaa ggc ggt tac ttc ccg gtt cca ccg gtc gac tet tcg cag gat ctg 576

Lys Gly Gly Tyr Phe Pro Val Pro Pro Val Asp Ser Ser Gln Asp Leu

180 185 190

cgt tcc acc atg tgt ctg acc atg gaa gag atg ggc ctg gtg gtt gaa 624

Arg Ser Thr Met Cys Leu Thr Met Glu Glu Met Gly Leu Val Val Glu

195 200 205 gcg cac cac cac gaa gcg gcg acc gcc ggt cag aac gaa gtg gca acc 672

Ala His His His Glu Ala Ala Thr Ala Gly Gln Asn Glu Val Ala Thr 210 215 220

cgc ttc aac acc atg acc aag aaa gcc gac gaa att cag ate tat aag 720

Arg Phe Asn Thr Met Thr Lys Lys Ala Asp Glu Ile Gln Ile Tyr Lys

225 230 235 240

tac gtg gtg cac aac gtg gcg cac gcc ttc ggt aaa acc gcg acc ttc 768

Tyr Val Val His Asn Val Ala His Ala Phe Gly Lys Thr Ala Thr Phe 245 250 255

atg ccg aag ccc atg ttc ggc gac aac ggt tcc ggc atg cac tgc cac 816

Met Pro Lys Pro Met Phe Gly Asp Asn Gly Ser Gly Met His Cys His 260 265 270

atg tcg ctg tcc aag aac ggc acc aac ctg ttc gcc ggc gac aaa tac 8 64

Met Ser Leu Ser Lys Asn Gly Thr Asn Leu Phe Ala Gly Asp Lys Tyr 275 280 285

ggc ggc ctg tet gaa acc gca ctg ttc tac ate ggc ggt ate ate aag 912

Gly Gly Leu Ser Glu Thr Ala Leu Phe Tyr Ile Gly Gly Ile Ile Lys 290 295 300

cac gcc aag gcg ate aac gcg ctg gcc aac ccg acc acc aac tcg tac 960

His Ala Lys Ala Ile Asn Ala Leu Ala Asn Pro Thr Thr Asn Ser Tyr

305 310 315 320

aaa cgt ctg gtg cca ggc tac gaa gcg ccg gtg atg ctg gct tac tcc 1008

Lys Arg Leu Val Pro Gly Tyr Glu Ala Pro Val Met Leu Ala Tyr Ser 325 330 335

gcc cgt aac cgc tcc gcg tcc ate cgt ate ccg gtg gtc gcc age ccg 1056

Ala Arg Asn Arg Ser Ala Ser Ile Arg Ile Pro Val Val Ala Ser Pro 340 345 350

aaa gcg cgc cgc ate gaa gcc cgc ttc ccg gat ccg gcg gct aac cca 1104

Lys Ala Arg Arg Ile Glu Ala Arg Phe Pro Asp Pro Ala Ala Asn Pro 355 360 365

tac ctg tgc ttc gcc gca ctg ctg atg gcc ggc ctg gac ggc ate ate 1152

Tyr Leu Cys Phe Ala Ala Leu Leu Met Ala Gly Leu Asp Gly Ile Ile 370 375 380

aac aag ate cac cct ggc gac gcc atg gac aaa aac ctg tac gac ctg 1200

Asn Lys Ile His Pro Gly Asp Ala Met Asp Lys Asn Leu Tyr Asp Leu

385 390 395 400

ccg ccg gaa gaa gaa gcc gag ate cca aaa gtg gcc ggc tcg ctg gac 1248

Pro Pro Glu Glu Glu Ala Glu Ile Pro Lys Val Ala Gly Ser Leu Asp 405 410 415

gag gcg atg gcc gcg ctg aac gaa gac cgc gag ttc ctg acc cgc ggc 1296

Glu Ala Met Ala Ala Leu Asn Glu Asp Arg Glu Phe Leu Thr Arg Gly 420 425 430

ggc gtg ttc acc gac gat gcg ate gat gcc tac ate gaa ctg cgc aaa 1344

Gly Val Phe Thr Asp Asp Ala Ile Asp Ala Tyr Ile Glu Leu Arg Lys 435 440 445

gaa gag atg gac cgc gtt cgc atg acg cca cac ccg gtc gag ttc gaa 1392 Glu Glu Met Asp Arg Val Arg Met Thr Pro His Pro Val Glu Phe Glu 450 455 460 ctg tac tac age gtc taa 1410

Leu Tyr Tyr Ser Val *

465

<210> SEQ ID NO: 8 <211> Comprimento: 4 69 <212> Tipo: PRT

<213> Organismo: Seqüência Artificial <220> Características:

<223> Outras : Informações :: AGS1M3 <400> Seqüência: 8 Met Ser Ala Glu His Val Leu Thr Met Leu Asn Glu His Glu Val Lys 1 5 10 15 Phe Val Asp Leu Arg Phe Thr Asp Thr Lys Gly Lys Glu Gln His Val 20 25 30 Thr Ile Pro Ala His Gln Val Asn Ala Asp Phe Phe Glu Glu Gly Lys 35 40 45 Met Phe Asp Gly Ser Ser Ile Gly Gly Trp Lys Gly Ile Asn Glu Ser 50 55 60 Asp Met Val Leu Met Pro Asp Ala Ser Thr Ala Val Leu Asp Pro Phe 65 70 75 80 Phe Asp Glu Pro Thr Leu Ile Ile Arg Cys Asp Ile Leu Glu Pro Gly 85 90 95 Thr Met Gln Gly Tyr Asp Arg Asp Pro Arg Ser Ile Ser Lys Arg Ala 100 105 110 Glu Asp Phe Leu Arg Ser Ser Gly Ile Ala Asp Thr Val Leu Phe Gly 115 120 125 Pro Glu Pro Glu Phe Phe Leu Phe Asp Asp Ile Arg Phe Gly Ser Ser 130 135 140 Ile Arg Gly Ser His Val Ala Ile Asp Asp Ile Glu Gly Ala Trp Asn 145 150 155 160 Ser Gly Thr Lys Tyr Asp Gly Gly Asn Lys Gly His Arg Pro Ala Val 165 170 175 Lys Gly Gly Tyr Phe Pro Val Pro Pro Val Asp Ser Ser Gln Asp Leu 180 185 190 Arg Ser Thr Met Cys Leu Thr Met Glu Glu Met Gly Leu Val Val Glu 195 200 205 Ala His His His Glu Ala Ala Thr Ala Gly Gln Asn Glu Val Ala Thr 210 215 220 Arg Phe Asn Thr Met Thr Lys Lys Ala Asp Glu Ile Gln Ile Tyr Lys 225 230 235 240 Tyr Val Val His Asn Val Ala His Ala Phe Gly Lys Thr Ala Thr Phe 245 250 255 Met Pro Lys Pro Met Phe Gly Asp Asn Gly Ser Gly Met His Cys His 260 265 270 Met Ser Leu Ser Lys Asn Gly Thr Asn Leu Phe Ala Gly Asp Lys Tyr 275 280 285 Gly Gly Leu Ser Glu Thr Ala Leu Phe Tyr Ile Gly Gly Ile Ile Lys 290 295 300 His Ala Lys Ala Ile Asn Ala Leu Ala Asn Pro Thr Thr Asn Ser Tyr 305 310 315 320 Lys Arg Leu Val Pro Gly Tyr Glu Ala Pro Val Met Leu Ala Tyr Ser 325 330 335 Ala Arg Asn Arg Ser Ala Ser Ile Arg Ile Pro Val Val Ala Ser Pro 340 345 350 Lys Ala Arg Arg Ile Glu Ala Arg Phe Pro Asp Pro Ala Ala Asn Pro 355 360 365 Tyr Leu Cys Phe Ala Ala Leu Leu Met Ala Gly Leu Asp Gly Ile Ile 370 375 380 Asn Lys Ile His Pro Gly Asp Ala Met Asp Lys Asn Leu Tyr Asp Leu 385 390 395 400 Pro Pro Glu Glu Glu Ala Glu Ile Pro Lys Val Ala Gly Ser Leu Asp 405 410 415 Glu Ala Met Ala Ala Leu Asn Glu Asp Arg Glu Phe Leu Thr Arg Gly 420 425 430 Gly Val Phe Thr Asp Asp Ala Ile Asp Ala Tyr Ile Glu Leu Arg Lys 435 440 445 Glu Glu Met Asp Arg Val Arg Met Thr Pro His Pro Val Glu Phe Glu

450 455 460

Leu Tyr Tyr Ser Val 465

<210> SEQ ID NO: 9 <211> Comprimento: 1410 <212> Tipo: DNA

<213> Organismo: Seqüência Artificial

<220> Características:

<223> Outras Informações: agslm4

<221> Nome/Chave: CDS

<222> Localização: (1)...(141Q)

<400> Seqüência: 9

atg tcc gct gaa cac gtt ttg acg atg ctg aat gag cat gaa gtg aaa 48

Met Ser Ala Glu His Val Leu Thr Met Leu Asn Glu His Glu Val Lys

15 10 15

ttc gta gac ctg cgt ttc act gac acc aag ggt aag gaa cag cac gtg 96 Phe Val Asp Leu Arg Phe Thr Asp Thr Lys Gly Lys Glu Gln His Val 20 25 30

act ate ccg gct cac cag gta aac gcc gac ttc ttc gaa gaa ggt aaa 144 Thr Ile Pro Ala His Gln Val Asn Ala Asp Phe Phe Glu Glu Gly Lys 35 40 45

atg ttt gac ggc tcc tet ate ggt ggt tgg aag ggc ate aac gaa tet 192 Met Phe Asp Gly Ser Ser Ile Gly Gly Trp Lys Gly Ile Asn Glu Ser 50 55 60

gac atg gtg ctg atg ccg gac gcc age acg gcg gtt ctg gat ccg ttc 240 Asp Met Val Leu Met Pro Asp Ala Ser Thr Ala Val Leu Asp Pro Phe 65 70 75 80

ttc gaa gaa cct acg ctg ate att cgc tgt gac att ctc gag ccg ggc 288 Phe Glu Glu Pro Thr Leu Ile Ile Arg Cys Asp Ile Leu Glu Pro Gly 85 90 95

acc atg cag ggc tac gat cgc gac ccg cgt tcc ate tcc aaa cgc gcc 336 Thr Met Gln Gly Tyr Asp Arg Asp Pro Arg Ser Ile Ser Lys Arg Ala 100 105 110

gaa gac ttc ctg cgc tcc tcc ggc ate gcg gac acc gtg ctg ttc ggg 384 Glu Asp Phe Leu Arg Ser Ser Gly Ile Ala Asp Thr Val Leu Phe Gly 115 120 125

cca gag cct gag ttc ttc ctg ttc gac gac ate cgc ttc ggc age age 432 Pro Glu Pro Glu Phe Phe Leu Phe Asp Asp Ile Arg Phe Gly Ser Ser 130 135 140

ate cgc ggt tcc cac gtg acg ate gac gat ate gaa ggc gcc tgg aac

480 Ile Arg Gly Ser His Val Thr Ile Asp Asp Ile Glu Gly Ala Trp Asn 145 150 155 160

tcc ggc aca aaa tac gac ggc ggc aac aaa ggc cac cgt ccg gcg gtg 528 Ser Gly Thr Lys Tyr Asp Gly Gly Asn Lys Gly His Arg Pro Ala Val 165 170 175

aaa ggc ggt tac ttc ccg gtt cca ccg gtc gac tct tcg cag gat ctg 576 Lys Gly Gly Tyr Phe Pro Val Pro Pro Val Asp Ser Ser Gln Asp Leu 180 185 190

cgt tcc acc atg tgt ctg acc atg gaa gag atg ggc ctg gtg gtt gaa 624 Arg Ser Thr Met Cys Leu Thr Met Glu Glu Met Gly Leu Val Val Glu 195 200 205

gcg cac cac cac gaa atg gcg acc gcc ggt cag aac gaa gtg gca acc 672 Ala His His His Glu Met Ala Thr Ala Gly Gln Asn Glu Val Ala Thr 210 215 220

cgc ttc aac acc atg acc aag aaa gcc gac gaa att cag ate tat aag 720 Arg Phe Asn Thr Met Thr Lys Lys Ala Asp Glu Ile Gln Ile Tyr Lys 225 230 235 240

tac gtg gtg cac aac gtg gcg cac gcc ttc ggt aaa acc gcg acc ttc 768 Tyr Val Val His Asn Val Ala His Ala Phe Gly Lys Thr Ala Thr Phe 245 250 255

atg ccg aag ccc atg ttc ggc gac aac ggt tcc ggc atg cac tgc cac 816 Met Pro Lys Pro Met Phe Gly Asp Asn Gly Ser Gly Met His Cys His 260 265 270

atg tcg ctg tac aag aac ggc acc aac ctg ttc gcc ggc gac aaa tac 864 Met Ser Leu Tyr Lys Asn Gly Thr Asn Leu Phe Ala Gly Asp Lys Tyr 275 280 285

ggc ggc ctg tct gaa acc gca ctg ttc tac ate ggc ggt ate ate aag 912 Gly Gly Leu Ser Glu Thr Ala Leu Phe Tyr Ile Gly Gly Ile Ile Lys 290 295 300

cac gcc aag gcg ate aac gcg ctg gcc aac ccg acc acc aac tcg tac 960 His Ala Lys Ala Ile Asn Ala Leu Ala Asn Pro Thr Thr Asn Ser Tyr 305 310 315 320

aaa cgt ctg gtg cca ggc tac gaa gcg ccg gtg atg ctg gct tac tcc 1008 Lys Arg Leu Val Pro Gly Tyr Glu Ala Pro Val Met Leu Ala Tyr Ser 325 330 335

tac ctg tgc ttc gcc gca ctg ctg atg gcc ggc ctg gac ggc ate ate 1152 Tyr Leu Cys Phe Ala Ala Leu Leu Met Ala Gly Leu Asp Gly Ile Ile 370 375 380

aac aag ate cac cct ggc gac gcc atg gac aaa aac ctg tac gac ctg 1200 Asn Lys Ile His Pro Gly Asp Ala Met Asp Lys Asn Leu Tyr Asp Leu 385 390 395 400 ccg ccg gaa gaa gaa Pro Pro Glu Glu Glu 405

gag gcg atg gcc gcg Glu Ala Met Ala Ala 420

ggc gtg ttc acc gac Gly Val Phe Thr Asp 435

gaa gag atg gac cgc Glu Glu Met Asp Arg 450

ctg tac tac age gtc Leu Tyr Tyr Ser Val 465

<210> SEQ ID NO: 10 <211> Comprimento: <212> Tipo: PRT <213> Organismo: Seqüência Artificial

<220> Características:

<223> Outras Informações: AGS1M4

<400> Seqüência: : 10 Met Ser Ala Glu His Val Leu Thr Met Leu Asn Glu His Glu Val Lys 1 5 10 15 Phe Val Asp Leu Arg Phe Thr Asp Thr Lys Gly Lys Glu Gln His Val 20 25 30 Thr Ile Pro Ala His Gln Val Asn Ala Asp Phe Phe Glu Glu Gly Lys 35 40 45 Met Phe Asp Gly Ser Ser Ile Gly Gly Trp Lys Gly Ile Asn Glu Ser 50 55 60 Asp Met Val Leu Met Pro Asp Ala Ser Thr Ala Val Leu Asp Pro Phe 65 70 75 80 Phe Glu Glu Pro Thr Leu Ile Ile Arg Cys Asp Ile Leu Glu Pro Gly 85 90 95 Thr Met Gln Gly Tyr Asp Arg Asp Pro Arg Ser Ile Ser Lys Arg Ala 100 105 110 Glu Asp Phe Leu Arg Ser Ser Gly Ile Ala Asp Thr Val Leu Phe Gly 115 120 125 Pro Glu Pro Glu Phe Phe Leu Phe Asp Asp Ile Arg Phe Gly Ser Ser 130 135 140 Ile Arg Gly Ser His Val Thr Ile Asp Asp Ile Glu Gly Ala Trp Asn 145 150 155 160 Ser Gly Thr Lys Tyr Asp Gly Gly Asn Lys Gly His Arg Pro Ala Val 165 170 175 Lys Gly Gly Tyr Phe Pro Val Pro Pro Val Asp Ser Ser Gln Asp Leu 180 185 190 Arg Ser Thr Met Cys Leu Thr Met Glu Glu Met Gly Leu Val Val Glu 195 200 205 Ala His His His Glu Met Ala Thr Ala Gly Gln Asn Glu Val Ala Thr 210 215 220 Arg Phe Asn Thr Met Thr Lys Lys Ala Asp Glu Ile Gln Ile Tyr Lys 225 230 235 240 Tyr Val Val His Asn Val Ala His Ala Phe Gly Lys Thr Ala Thr Phe 245 250 255 Met Pro Lys Pro Met Phe Gly Asp Asn Gly Ser Gly Met His Cys His

gcc gag ate cca aaa gtg gcc ggc tcg ctg gac 1248 Ala Glu Ile Pro Lys Val Ala Gly Ser Leu Asp 410 415

ctg aac gaa gac cgc gag ttc ctg acc cgc ggc 1296 Leu Asn Glu Asp Arg Glu Phe Leu Thr Arg Gly 425 430

gat gcg ate gat gcc tac ate gaa ctg cgc aaa 1344 Asp Ala Ile Asp Ala Tyr Ile Glu Leu Arg Lys 440 445

gtt cgc atg acg cca cac ccg gtc gag ttc gaa 1392 Val Arg Met Thr Pro His Pro Val Glu Phe Glu 455 460

taa 1410

*

469 Met Ser

Gly Gly 290 His Ala 305

Lys Arg

Ala Arg

Lys Ala

Tyr Leu 370 Asn Lys 385

Pro Pro

Glu Ala

Gly Val

Glu Glu 450 Leu Tyr 465

260 Leu Tyr 275

Leu Ser

Lys Ala

Leu Val

Asn Arg 340 Arg Arg 355

Cys Phe

Ile His

Glu Glu

Met Ala 420 Phe Thr 435

Met Asp Tyr Ser

Lys Asn Gly

Glu Thr Ala 295

Ile Asn Ala

310 Pro Gly Tyr 325

Ser Ala Ser

Ile Glu Ala

Ala Ala Leu 375

Pro Gly Asp

390 Glu Ala Glu 405

Ala Leu Asn

Asp Asp Ala

Arg Val Arg 455

Val

265 Thr Asn Leu 280

Leu Phe Tyr

Leu Ala Asn

Glu Ala Pro 330

Ile Arg Ile

345 Arg Phe Pro 360

Leu Met Ala

Ala Met Asp

Ile Pro Lys 410

Glu Asp Arg

425 Ile Asp Ala 440

Met Thr Pro

Phe Ala

Ile Gly 300 Pro Thr 315

Val Met

Pro Val

Asp Pro

Gly Leu 380 Lys Asn 395

Val Ala

Glu Phe

Tyr Ile

His Pro 460

270 Gly Asp 285

Gly Ile

Thr Asn

Leu Ala

Val Ala 350 Ala Ala 365

Asp Gly

Leu Tyr

Gly Ser

Leu Thr 430 Glu Leu 445

Val Glu

Lys

Ile

Ser

Tyr 335 Ser

Asn

Ile

Asp

Leu 415 Arg

Arg

Phe

Tyr

Lys

Tyr 320 Ser

Pro

Ile

Leu 400 Asp

Gly

Lys

Glu

<210> SEQ ID NO: 11 <211> Comprimento: 1410 <212> Tipo: DNA

<213> Organismo: Seqüência Artificial

<220> Características:

<223> Outras Informações: agslm6

<221> Nome/Chave: CDS

<222> Localização: (1)... (1410)

<400> Seqüência: 11

atg tcc gct gaa cac gtt ttg acg atg ctg aat gag cat gaa gtg aaa 48

Met Ser Ala Glu His Val Leu Thr Met Leu Asn Glu His Glu Val Lys

15 10 15

ttc gta gac ctg cgt ttc act gac acc aag ggt aag gaa cag cac gtg 96

Phe Val Asp Leu Arg Phe Thr Asp Thr Lys Gly Lys Glu Gln His Val

20 25 30

act ate ccg gct cac cag gta aac gcc gac ttc ttc gaa gaa ggt aaa 144

Thr Ile Pro Ala His Gln Val Asn Ala Asp Phe Phe Glu Glu Gly Lys

35 40 45

atg ttt gac ggc tcc tet ate ggt ggt tgg aag ggc ate aac gaa tet 192

Met Phe Asp Gly Ser Ser Ile Gly Gly Trp Lys Gly Ile Asn Glu Ser

50 55 60

gac atg gtg ctg atg ccg gac gcc age acg gcg gtt ctg gat ccg ttc 240

Asp Met Val Leu Met Pro Asp Ala Ser Thr Ala Val Leu Asp Pro Phe

65 70 75 80

ttc gaa gaa cct acg ctg ate att cgc tgt gac att etc gag ccg ggc 288 Phe Glu Glu Pro Thr Leu Ile Ile Arg Cys Asp Ile Leu Glu Pro Gly acc atg caa Thr Met Gln

gaa gac ttc Glu Asp Phe 115

cca gag cct Pro Glu Pro 130

ate cgc ggt Ile Arg Gly 145

tcc ggc aca Ser Gly Thr

aaa ggc ggt Lys Gly Gly

cgt tcc acc Arg Ser Thr 195

gcg cac cac Ala His His 210

cgc ttc aac Arg Phe Asn 225

tac gtg gtg Tyr Val Val

atg ccg aag Met Pro Lys

atg tcg ctg Met Ser Leu 275

ggc ggc ctg Gly Gly Leu 290

cac gcc aag His Ala Lys 305

aaa cgt ctg Lys Arg Leu

gcc cgt aac

85

ggc tac gat Gly Tyr Asp 100

ctg cgc tcc Leu Arg Ser

gag ttc ttc Glu Phe Phe

tcc cac gtg Ser His Val 150

aaa tac gac Lys Tyr Asp 165

tac ttc ccg Tyr Phe Pro 180

atg tgt ctg Met Cys Leu

cac gaa gtg His Glu Val

acc atg acc Thr Met Thr 230

cac aac gtg His Asn Val 245

ccc atg ttc Pro Met Phe 260

tcc aag aac Ser Lys Asn

tet gaa acc Ser Glu Thr

gcg ate aac Ala Ile Asn 310

gtg cca ggc Val Pro Gly 325

cgc tcc gcg

cgc gac ccg Arg Asp Pro 105

tcc ggc ate Ser Gly Ile 120

ctg ttc gac Leu Phe Asp 135

gcg ate gac Ala Ile Asp

ggc ggc aac Gly Gly Asn

gtt cca ccg Val Pro Pro 185

acc atg gaa Thr Met Glu 200

gcg acc gcc Ala Thr Ala 215

aag aaa gcc Lys Lys Ala

gcg cac gcc Ala His Ala

ggc gtc aac Gly Val Asn 265

ggc acc aac Gly Thr Asn 280

gea ctg ttc Ala Leu Phe 295

gcg ctg gcc Ala Leu Ala

tac gaa gcg Tyr Glu Ala

tcc ate agt'

90

cgt tcc ate Arg Ser Ile

gcg gac acc Ala Asp Thr

gac ate cgc Asp Ile Arg 140

gat ate gaa Asp Ile Glu 155

aaa ggc cac Lys Gly His 170

gtc gac tet Val Asp Ser

gag atg ggc Glu Met Gly

ggt cag aac Gly Gln Asn 220

gac gaa att Asp Glu Ile 235

ttc ggt aaa Phe Gly Lys 250

ggt tcc ggc Gly Ser Gly

ctg ttc gcc Leu Phe Ala

tac ate ggc Tyr Ile Gly 300

aac cca acc Asn Pro Thr 315

ccg gtg atg Pro Val Met 330

ate ccg gtg

95

tcc aaa cgc Ser Lys Arg 110

gtg ctg ttc Val Leu Phe 125

ttc ggc age Phe Gly Ser

ggc gcc tgg Gly Ala Trp

cgt ccg gcg Arg Pro Ala 175

tcg cag gat Ser Gln Asp 190

ctg gtg gtt Leu Val Val 205

gaa atg gea Glu Met Ala

cag ate tat Gln Ile Tyr

acc gcg acc Thr Ala Thr 255

atg cac tgc Met His Cys 270

ggc gac aaa Gly Asp Lys 285

ggt ate ate Gly Ile Ile

acc aac tcg Thr Asn Ser

ctg gct tac Leu Ala Tyr 335

gtc gcc age

gcc 336 Ala

ggg 384 Gly

age 432 Ser

aac 480 Asn 160

gtg 528 Val

ctg 576 Leu

gaa 624 Glu

acc 672 Thr

aag 720

Lys

240

ttc 768 Phe

cac 816 His

tac 864 Tyr

aag 912 Lys

tac 960

Tyr

320

tcc 1008 Ser

ccg 1056 Ala Arg Asn Arg Ser Ala Ser Ile Ser Ile Pro Val Val Ala Ser Pro 340 345 350

ctg tac tac age gtc taa 1410

Leu Tyr Tyr Ser Val *

465

<210> SEQ ID NO: 12 <211> Comprimento: 4 69 <212> Tipo: PRT

<213> Organismo: Seqüência Artificial

<220> Características:

<223> Outras Informações: AGS1M6

<400> Seqüência: 12

Met Ser Ala Glu His Val Leu Thr Met Leu Asn Glu His Glu Val Lys 1 5 10 15 Phe Val Asp Leu 20 Arg Phe Thr Asp Thr 25 Lys Gly Lys Glu Gln 30 His Val Thr Ile Pro 35 Ala His Gln Val Asn 40 Ala Asp Phe Phe Glu 45 Glu Gly Lys Met Phe 50 Asp Gly Ser Ser Ile 55 Gly Gly Trp Lys Gly 60 Ile Asn Glu Ser Asp Met Val Leu Met Pro Asp Ala Ser Thr Ala Val Leu Asp Pro Phe 65 70 75 80 Phe Glu Glu Pro Thr 85 Leu Ile Ile Arg Cys 90 Asp Ile Leu Glu Pro 95 Gly Thr Met Gln Gly 100 Tyr Asp Arg Asp Pro 105 Arg Ser Ile Ser Lys 110 Arg Ala Glu Asp Phe 115 Leu Arg Ser Ser Gly 120 Ile Ala Asp Thr Val 125 Leu Phe Gly Pro Glu 130 Pro Glu Phe Phe Leu 135 Phe Asp Asp Ile Arg 140 Phe Gly Ser Ser Ile Arg Gly Ser His Val Ala Ile Asp Asp Ile Glu Gly Ala Trp Asn 145 150 155 160 Ser Gly Thr Lys Tyr Asp Gly Gly Asn Lys Gly His Arg Pro Ala Val 165 170 175 Lys Gly Gly Tyr Phe Pro Val Pro Pro Val Asp Ser Ser Gln Asp Leu 180 185 190 Arg Ser Thr Met Cys Leu Thr Met Glu Glu Met Gly Leu Val Val Glu 195 200 205 Ala His His His Glu Val Ala Thr Ala Gly Gln Asn Glu Met Ala Thr 210 215 220 Arg Phe Asn Thr Met Thr Lys Lys Ala Asp Glu Ile Gln Ile Tyr Lys 225 230 235 240 Tyr Val Val His Asn Val Ala His Ala Phe Gly Lys Thr Ala Thr Phe 245 250 255 Met Pro Lys Pro Met Phe Gly Val Asn Gly Ser Gly Met His Cys His 260 265 270 Met Ser Leu Ser Lys Asn Gly Thr Asn Leu Phe Ala Gly Asp Lys Tyr 275 280 285 Gly Gly Leu Ser Glu Thr Ala Leu Phe Tyr Ile Gly Gly Ile Ile Lys 290 295 300 His Ala Lys Ala Ile Asn Ala Leu Ala Asn Pro Thr Thr Asn Ser Tyr 305 310 315 320 Lys Arg Leu Val Pro Gly Tyr Glu Ala Pro Val Met Leu Ala Tyr Ser 325 330 335 Ala Arg Asn Arg Ser Ala Ser Ile Ser Ile Pro Val Val Ala Ser Pro 340 345 350 Lys Ala Arg Arg Ile Glu Ala Arg Phe Pro Asp Pro Ala Ala Asn Pro 355 360 365 Tyr Leu Cys Phe Ala Ala Leu Leu Met Ala Gly Leu Asp Gly Ile Ile 370 375 380 Asn Lys Ile His Pro Gly Asp Ala Met Asp Lys Asn Leu Tyr Asp Leu 385 390 395 400 Pro Pro Glu Glu Glu Ala Glu Ile Pro Lys Val Ala Gly Ser Leu Asp 405 410 415 Glu Ala Met Ala Ala Leu Asn Glu Asp Arg Glu Phe Leu Thr Arg Gly 420 425 430 Gly Val Phe Thr Asp Asp Ala Ile Asp Ala Tyr Ile Glu Leu Arg Lys 435 440 445 Glu Glu Met Asp Arg Val Arg Met Thr Pro His Pro Val Glu Phe Glu 450 455 460 Leu Tyr Tyr Ser Val 465 <210> SEQ ID NO: : 13 <211> Comprimento: 1410 <212> Tipo: DNA <213> Organismo : Seqüência Artificial <220> Características: <223> Outras Informações: agslm7 <221> Nome/Chave: CDS <222> Localização: (1) · ..(1410) <400> Seqüência : 13 atg tcc gct gaa cac gtt ttg acg atg ctg aat gag cat gaa gtg aaa Met Ser Ala Glu His Val Leu Thr Met Leu Asn Glu His Glu Val Lys 1 5 10 15 ttc gta gac ctg cgt ttc act gac a cc aag ggt aag gaa cag cac gtg Phe Val Asp Leu o η Arg Phe Thr Asp Thr O C Lys Gly Lys Glu Gln ι η His Val act ate ccg gct cac cag gta aac gcc gac ttc ttc gaa gaa ggt aaa 144

Thr Ile Pro Ala His Gln Val Asn Ala Asp Phe Phe Glu Glu Gly Lys

35 40 45

atg ttt gac ggc tcc tet ate ggt ggt tgg aag ggc ate aac gaa tet 192

Met Phe Asp Gly Ser Ser Ile Gly Gly Trp Lys Gly Ile Asn Glu Ser

50 55 60

gac atg gtg ctg atg ccg gac gcc age acg gcg gtt ctg gat ccg ttc 240

Asp Met Val Leu Met Pro Asp Ala Ser Thr Ala Val Leu Asp Pro Phe

65 70 75 80

ttc gaa gaa cct acg ctg ate att cgc tgt gac att etc gag ccg ggc 288

Phe Glu Glu Pro Thr Leu Ile Ile Arg Cys Asp Ile Leu Glu Pro Gly

85 90 95

acc atg caa ggc tac gat cgc gac ccg cgt tcc ate tcc aaa cgc gcc 336

Thr Met Gln Gly Tyr Asp Arg Asp Pro Arg Ser Ile Ser Lys Arg Ala

100 105 110

gaa gac ttc ctg cgc tcc tcc ggc ate gcg gac acc gtg ctg ttc ggg 384

Glu Asp Phe Leu Arg Ser Ser Gly Ile Ala Asp Thr Val Leu Phe Gly

115 120 125

cca gag cct gag ttc ttc ctg ttc gac gac ate cgc ttc ggt age age 432

Pro Glu Pro Glu Phe Phe Leu Phe Asp Asp Ile Arg Phe Gly Ser Ser

130 135 140

ate cgc ggt tcc cat gtg gcg ate gac gat ate gaa ggc gcc tgg aac 480

Ile Arg Gly Ser His Val Ala Ile Asp Asp Ile Glu Gly Ala Trp Asn

145 150 155 160

tcc ggc aca aaa tac gac ggc tgc aac aaa ggc cac cgt ccg gcg gtg 528

Ser Gly Thr Lys Tyr Asp Gly Cys Asn Lys Gly His Arg Pro Ala Val

165 170 175

aaa ggc ggt tac ttc ccg gtt cca ccg gtc gac tpt tcg cag gat ctg 576

Lys Gly Gly Tyr Phe Pro Val Pro Pro Val Asp Ser Ser Gln Asp Leu

180 185 190

cgt tcc acc atg tgt ctg acc atg gaa gag atg ggc ctg gtg gtt gaa 624

Arg Ser Thr Met Cys Leu Thr Met Glu Glu Met Gly Leu Val Val Glu

195 200 205

gcg cac cac cac gaa atg gcg acc gcc ggt cag aac gaa gtg gea acc 672

Ala His His His Glu Met Ala Thr Ala Gly Gln Asn Glu Val Ala Thr

210 215 220

cgc ttc aac acc atg acc aag aaa gcc gac gaa att cag ate tat aag 720

Arg Phe Asn Thr Met Thr Lys Lys Ala Asp Glu Ile Gln Ile Tyr Lys

225 230 235 240

tac gtg gtg cac aac gtg gcg cac gcc ttc ggt aaa acc gcg acc ttc 768

Tyr Val Val His Asn Val Ala His Ala Phe Gly Lys Thr Ala Thr Phe

245 250 255

atg ccg aag ccc atg ttc ggc gac aac ggt tcc ggc atg cac tgc cac 816

Met Pro Lys Pro Met Phe Gly Asp Asn Gly Ser Gly Met His Cys His

260 265 270

atg tcg ctg tcc aag aac ggc acc aac ctg ttc gcc ggc gac aaa tac 864 Met Ser Leu Ser Lys Asn Gly Thr Asn Leu Phe Ala Gly Asp Lys Tyr 275 280 285

ggc ggc ctg tct gaa acc gca ctg ttc tac ate ggc ggt ate ate aag 912

Gly Gly Leu Ser Glu Thr Ala Leu Phe Tyr Ile Gly Gly Ile Ile Lys 290 295 300

cac gcc aag gcg ate aac gcg ctg gcc aac ccg acc acc aac tcg tac 960

His Ala Lys Ala Ile Asn Ala Leu Ala Asn Pro Thr Thr Asn Ser Tyr

305 310 315 320

aaa cgt ctg gtg cca ggc tac gaa gcg cct gtg atg ctg gct tac tcc 1008

Lys Arg Leu Val Pro Gly Tyr Glu Ala Pro Val Met Leu Ala Tyr Ser

325 330 335

gcc cgt aac Ala Arg Asn

aaa gcg cgc Lys Ala Arg 355

tac ctg tgc Tyr Leu Cys 370

aac aag ate Asn Lys Ile 385

ccg ccg gaa Pro Pro Glu

gag gcg atg Glu Ala Met

ggc gtg ttc Gly Val Phe 435

gaa gag atg Glu Glu Met 450

ctg tac tac Leu Tyr Tyr 465

cgc tcc gcg Arg Ser Ala 340

cgc ate gaa Arg Ile Glu

ttc CfCC CJCH

Phe Ala Ala

cac cct ggc His Pro Gly 390

gaa gaa gcc Glu Glu Ala 405

gcc gcg ctg Ala Ala Leu 420

acc gac gat Thr Asp Asp

gac cgc gtt Asp Arg Val

age gtc taa Ser Val *

tcc ate cgt Ser Ile Arg 345

gcc cgc ttc Ala Arg Phe 360

ctg ctg atg Leu Leu Met 375

gac gcc atg Asp Ala Met

gag ate cca Glu Ile Pro

aac gaa gac Asn Glu Asp 425

gcg ate gat Ala Ile Asp 440

cgc atg acg Arg Met Thr 455

ate ccg gtg Ile Pro Val

ccg gat ccg Pro Asp Pro

rrr·^· r^ /~r η

■a —

Ala Gly Leu 380

gac aga aac Asp Arg Asn 395

aaa gtg gcc Lys Val Ala 410

cgc gag ttc Arg Glu Phe

gcc tac ate Ala Tyr Ile

cca cac ccg Pro His Pro 460

gtc gcc age

Val Ala Ser 350

gcg gct aac

Ala Ala Asn 365

ÇâC Cj Cj C α lC

Asp Gly Ile

ctg tac gac Leu Tyr Asp

ggc tcg ctg Gly Ser Leu 415

ctg acc cgc Leu Thr Arg 430

gaa ctg cgc Glu Leu Arg 445

gtc gag ttc Val Glu Phe

ccg 1056 Pro

cca 1104 Pro

~ -i -t c o

Cl l- X -L Z

Ile

ctg 1200

Leu

400

gac 1248 Asp

ggc 1296 Gly

aaa 1344 Lys

gaa 1392 Glu

1410

<210> SEQ ID NO: 14

<211> Comprimento: 469

<212> Tipo: PRT

<213> Organismo: Seqüência Artificial

<220> Características:

<223> Outras Informações: AGS1M7

<400> Seqüência: 14

Met Ser Ala Glu His Val Leu Thr Met Leu Asn Glu His Glu Val Lys

15 10 15

Phe Val Asp Leu Arg Phe Thr Asp Thr Lys Gly Lys Glu Gln His Val 20 25 30 Thr Ile Pro Ala His Gln Val Asn Ala Asp Phe Phe Glu Glu Gly Lys 35 40 45 Met Phe Asp Gly Ser Ser Ile Gly Gly Trp Lys Gly Ile Asn Glu Ser 50 55 60 Asp Met Val Leu Met Pro Asp Ala Ser Thr Ala Val Leu Asp Pro Phe 65 70 75 80 Phe Glu Glu Pro Thr Leu Ile Ile Arg Cys Asp Ile Leu Glu Pro Gly 85 90 95 Thr Met Gln Gly Tyr Asp Arg Asp Pro Arg Ser Ile Ser Lys Arg Ala 100 105 110 Glu Asp Phe Leu Arg Ser Ser Gly Ile Ala Asp Thr Val Leu Phe Gly 115 120 125 Pro Glu Pro Glu Phe Phe Leu Phe Asp Asp Ile Arg Phe Gly Ser Ser 130 135 140 Ile Arg Gly Ser His Val Ala Ile Asp Asp Ile Glu Gly Ala Trp Asn 145 150 155 160 Ser Gly Thr Lys Tyr Asp Gly Cys Asn Lys Gly His Arg Pro Ala Val 165 170 175 Lys Gly Gly Tyr Phe Pro Val Pro Pro Val Asp Ser Ser Gln Asp Leu 180 185 190 Arg Ser Thr Met Cys Leu Thr Met Glu Glu Met Gly Leu Val Val Glu 195 onn í. U U ΟΛΕ Zw^ Ala His His His Glu Met Ala Thr Ala Gly Gln Asn Glu Val Ala Thr 210 215 220 Arg Phe Asn Thr Met Thr Lys Lys Ala Asp Glu Ile Gln Ile Tyr Lys 225 230 235 240 Tyr Val Val His Asn Val Ala His Ala Phe Gly Lys Thr Ala Thr Phe 245 250 255 Met Pro Lys Pro Met Phe Gly Asp Asn Gly Ser Gly Met His Cys His 260 265 270 Met Ser Leu Ser Lys Asn Gly Thr Asn Leu Phe Ala Gly Asp Lys Tyr 275 280 285 Gly Gly Leu Ser Glu Thr Ala Leu Phe Tyr Ile Gly Gly Ile Ile Lys 290 295 300 His Ala Lys Ala Ile Asn Ala Leu Ala Asn Pro Thr Thr Asn Ser Tyr 305 310 315 320 Lys Arg Leu Val Pro Gly Tyr Glu Ala Pro Val Met Leu Ala Tyr Ser 325 330 335 Ala Arg Asn Arg Ser Ala Ser Ile Arg Ile Pro Val Val Ala Ser Pro 340 345 350 Lys Ala Arg Arg Ile Glu Ala Arg Phe Pro Asp Pro Ala Ala Asn Pro 355 360 365 Tyr Leu Cys Phe Ala Ala Leu Leu Met Ala Gly Leu Asp Gly Ile Ile 370 375 380 Asn Lys Ile His Pro Gly Asp Ala Met Asp Arg Asn Leu Tyr Asp Leu 385 390 395 400 Pro Pro Glu Glu Glu Ala Glu Ile Pro Lys Val Ala Gly Ser Leu Asp 405 410 415 Glu Ala Met Ala Ala Leu Asn Glu Asp Arg Glu Phe Leu Thr Arg Gly 420 425 430 Gly Val Phe Thr Asp Asp Ala Ile Asp Ala Tyr Ile Glu Leu Arg Lys 435 440 445 Glu Glu Met Asp Arg Val Arg Met Thr Pro His Pro Val Glu Phe Glu 450 455 460 Leu Tyr Tyr Ser Val 465

<210> SEQ ID NO: 15 <211> Comprimento: 1410 <212> Tipo: DNA

<213> Organismo: Seqüência Artificial <220> Características:

<223> Outras Informações: agslm8

<221> Nome/Chave: CDS

<222> Localização: (1)... (1410)

<400> Seqüência: 15

atg tcc gct gaa cac gtt ttg acg atg ctg aat gag cat gaa gtg aaa 48

Met Ser Ala Glu His Val Leu Thr Met Leu Asn Glu His Glu Val Lys 1 5 10 15

ttc gta gac ctg cgt ttc act gac acc aag ggt aag gaa cag cac gtg 96

Phe Val Asp Leu Arg Phe Thr Asp Thr Lys Gly Lys Glu Gln His Val 20 25 30

act ate ccg gct cac cag gta aac gcc gac ttc ttc gaa gaa ggt aaa 144

Thr Ile Pro Ala His Gln Val Asn Ala Asp Phe Phe Glu Glu Gly Lys 35 40 45

atg ttt gac ggc tcc tet ate ggt ggt tgg aag ggc ate aac gaa tet 192

Met Phe Asp Gly Ser Ser Ile Gly Gly Trp Lys Gly Ile Asn Glu Ser Rn RR cn

J J DD \j

gac atg gtg ctg atg ccg gac gcc age acg gcg gtt ctg gat ccg ttc 240

Asp Met Val Leu Met Pro Asp Ala Ser Thr Ala Val Leu Asp Pro Phe 65 70 75 80

ttc gaa gaa cct acg ctg ate att cgc tgt gac att ctc gag ccg ggc 288

Phe Glu Glu Pro Thr Leu Ile Ile Arg Cys Asp Ile Leu Glu Pro Gly 85 90 95

acc atg caa ggc tac gat cgc gac ccg cgt tcc ate tcc aaa cgc gcc 336

Thr Met Gln Gly Tyr Asp Arg Asp Pro Arg Ser Ile Ser Lys Arg Ala 100 105 110

gaa gac ttc ctg cgc tcc tcc ggc ate gcg gac acc gtg ctg ttc ggg 384

Glu Asp Phe Leu Arg Ser Ser Gly Ile Ala Asp Thr Val Leu Phe Gly 115 120 125

cca gag cct gag ttc ttc ctg ttc gac gac ate cgc ttc ggc age age 432

Pro Glu Pro Glu Phe Phe Leu Phe Asp Asp Ile Arg Phe Gly Ser Ser 130 135 140

ate cgc ggt tcc cac gtg gcg ate gac gat ate gaa ggc gcc tgg aac 480

Ile Arg Gly Ser His Val Ala Ile Asp Asp Ile Glu Gly Ala Trp Asn 145 150 155 160

tcc ggc aca aaa tac gac ggc ggc aac aaa ggc cac cgt ccg gcg gtg 528

Ser Gly Thr Lys Tyr Asp Gly Gly Asn Lys Gly His Arg Pro Ala Val

165 170 175

aaa ggc ggt tac ttc ccg gtt cca ccg gtc gac tet tcg cag gat ctg 576

Lys Gly Gly Tyr Phe Pro Val Pro Pro Val Asp Ser Ser Gln Asp Leu 180 185 190

cgt tcc acc atg tgt ctg acc atg gaa gag atg ggc ctg gtg gtt gaa 624

Arg Ser Thr Met Cys Leu Thr Met Glu Glu Met Gly Leu Val Val Glu 195 200 205

gcg cac cac cac gaa gtg gcg acc gcc ggt cag aac gaa gtg gea acc 672

Ala His His His Glu Val Ala Thr Ala Gly Gln Asn Glu Val Ala Thr 210 215 220 cgc ttc aac acc atg acc aag aaa gcc gac gaa att cag ate tat aag 720

Arg Phe Asn Thr Met Thr Lys Lys Ala Asp Glu Ile Gln Ile Tyr Lys 225 230 235 240

tac gtg gtg cac aac gtg gcg cac gcc ttc ggt aaa acc gcg acc ttc 768

Tyr Val Val His Asn Val Ala His Ala Phe Gly Lys Thr Ala Thr Phe 245 250 255

atg ccg aag ccc atg ttc ggc gac aac ggt tcc ggc atg cac tgc cac 816

Met Pro Lys Pro Met Phe Gly Asp Asn Gly Ser Gly Met His Cys His 260 265 270

atg tcg ctg tcc aag aac ggc acc aac ctg ttc gcc ggc gac aaa tac 864

Met Ser Leu Ser Lys Asn Gly Thr Asn Leu Phe Ala Gly Asp Lys Tyr

275 280 285

ggc ggc ctg tet gaa acc gea ctg ttc tac ate ggc ggt ate ate aag 912

Gly Gly Leu Ser Glu Thr Ala Leu Phe Tyr Ile Gly Gly Ile Ile Lys

290 295 300

cac gcc aag gcg ate aac gcg ctg gcc aac ccg acc acc aac tcg tac 960

His Ala Lys Ala Ile Asn Ala Leu Ala Asn Pro Thr Thr Asn Ser Tyr 305 310 315 320

aaa cgt ctg gtg cca ggc tac gaa gcg ccg gtg atg ctg gct tac tcc 1008

Lys Arg Leu Val Pro Gly Tyr Glu Ala Pro Val Met Leu Ala Tyr Ser 325 330 335

gcc cgt aac cgc tcc gcg tcc ate agt ate ccg gtg gtc gcc age ccg 1056

Ala Arg Asn Arg Ser Ala Ser Ile Ser Ile Pro Val Val Ala Ser Pro 340 345 350

aaa gcg cgc cgc ate gaa gcc cgc ttc ccg gat ccg gcg gct aac cca 1104

Lys Ala Arg Arg Ile Glu Ala Arg Phe Pro Asp Pro Ala Ala Asn Pro

355 360 365

tac ctg tgc ttc gcc gea ctg ctg atg gcc ggc ctg gac ggc ate ate 1152

Tyr Leu Cys Phe Ala Ala Leu Leu Met Ala Gly Leu Asp Gly Ile Ile

370 375 380

aac aag ate cac cct ggc gac gcc atg gac aaa aac ctg tac gac ctg 1200

Asn Lys Ile His Pro Gly Asp Ala Met Asp Lys Asn Leu Tyr Asp Leu 385 390 395 400

ccg ccg gaa gaa gaa gcc gag ate cca aaa gtg gcc ggc tcg ctg gac 1248

Pro Pro Glu Glu Glu Ala Glu Ile Pro Lys Val Ala Gly Ser Leu Asp 405 410 415

gag gcg atg gcc gcg ctg aac gaa gac cgc gag ttc ctg acc cgc ggc 1296

Glu Ala Met Ala Ala Leu Asn Glu Asp Arg Glu Phe Leu Thr Arg Gly 420 425 430

ggc gtg ttc acc gac gat gcg ate gat gcc tac ate gaa ctg tgc aaa 1344

Gly Val Phe Thr Asp Asp Ala Ile Asp Ala Tyr Ile Glu Leu Cys Lys

435 440 445

gaa gag atg gac cgc gtt cgc atg acg cca cac ccg gtc gag ttc gaa 1392

Glu Glu Met Asp Arg Val Arg Met Thr Pro His Pro Val Glu Phe Glu

450 455 460

ctg tac tac age gtc taa 1410

Leu Tyr Tyr Ser Val * 465

<210> SEQ ID NO: 16 <211> Comprimento: 4 69 <212> Tipo: PRT

<213> Organismo: Seqüência Artificial

<220> Características:

<223> Outras Informações: AGS1M8

<400> Seqüência: 16 Met Ser Ala Glu His Val Leu Thr Met Leu Asn Glu His Glu Val Lys 1 5 10 15 Phe Val Asp Leu Arg Phe Thr Asp Thr Lys Gly Lys Glu Gln His Val 20 25 30 Thr Ile Pro Ala His Gln Val Asn Ala Asp Phe Phe Glu Glu Gly Lys 35 40 45 Met Phe Asp Gly Ser Ser Ile Gly Gly Trp Lys Gly Ile Asn Glu Ser 50 55 60 Asp Met Val Leu Met Pro Asp Ala Ser Thr Ala Val Leu Asp Pro Phe 65 70 75 80 Phe Glu Glu Pro Tnr Leu Ile Ile Arg Cys Asp Ile Leu ^ t.. VJ _L U Pro r* Ί . . o j- y 85 90 95 Thr Met Gln Gly Tyr Asp Arg Asp Pro Arg Ser Ile Ser Lys Arg Ala 100 105 110 Glu Asp Phe Leu Arg Ser Ser Gly Ile Ala Asp Thr Val Leu Phe Gly 115 120 125 Pro Glu Pro Glu Phe Phe Leu Phe Asp Asp Ile Arg Phe Gly Ser Ser 130 135 140 Ile Arg Gly Ser His Val Ala Ile Asp Asp Ile Glu Gly Ala Trp Asn 145 150 155 160 Ser Gly Thr Lys Tyr Asp Gly Gly Asn Lys Gly His Arg Pro Ala Val 165 170 175 Lys Gly Gly Tyr Phe Pro Val Pro Pro Val Asp Ser Ser Gln Asp Leu 180 185 190 Arg Ser Thr Met Cys Leu Thr Met Glu Glu Met Gly Leu Val Val Glu 195 200 205 Ala His His His Glu Val Ala Thr Ala Gly Gln Asn Glu Val Ala Thr 210 215 220 Arg Phe Asn Thr Met Thr Lys Lys Ala Asp Glu Ile Gln Ile Tyr Lys 225 230 235 240 Tyr Val Val His Asn Val Ala His Ala Phe Gly Lys Thr Ala Thr Phe 245 250 255 Met Pro Lys Pro Met Phe Gly Asp Asn Gly Ser Gly Met His Cys His 260 265 270 Met Ser Leu Ser Lys Asn Gly Thr Asn Leu Phe Ala Gly Asp Lys Tyr 275 280 285 Gly Gly Leu Ser Glu Thr Ala Leu Phe Tyr Ile Gly Gly Ile Ile Lys 290 295 300 His Ala Lys Ala Ile Asn Ala Leu Ala Asn Pro Thr Thr Asn Ser Tyr 305 310 315 320 Lys Arg Leu Val Pro Gly Tyr Glu Ala Pro Val Met Leu Ala Tyr Ser 325 330 335 Ala Arg Asn Arg Ser Ala Ser Ile Ser Ile Pro Val Val Ala Ser Pro 340 345 350 Lys Ala Arg Arg Ile Glu Ala Arg Phe Pro Asp Pro Ala Ala Asn Pro 355 360 365 Tyr Leu Cys Phe Ala Ala Leu Leu Met Ala Gly Leu Asp Gly Ile Ile 370 375 380 Asn Lys Ile His Pro Gly Asp Ala Met Asp Lys Asn Leu Tyr Asp Leu 385 390 395 400 Pro Pro Glu Glu Glu Ala Glu Ile Pro Lys Val Ala Gly Ser Leu Asp 405

Glu Ala Met Ala Ala 420

Gly Val Phe Thr Asp 435

Glu Glu Met Asp Arg 450

Leu Tyr Tyr Ser Val 465

410

Leu Asn Glu Asp Arg Glu 425

Asp Ala Ile Asp Ala Tyr 440

Val Arg Met Thr Pro His 455

415

Phe Leu Thr Arg Gly 430

Ile Glu Leu Cys Lys 445

Pro Val Glu Phe Glu 460

<210> SEQ ID NO: 17 <211> Comprimento: 1410 <212> Tipo: DNA

<213> Organismo: Seqüência Artificial

<220> Características:

<223> Outras Informações: agslm9

<221> Nome/Chave: CDS

<222> Localização: (1).. . (1410)

<4Q0> Seqüência: 17

atg acc gct gaa cac gtt ttg acg atg ctg aat gag cat gaa gtg aaa 48

Met Thr Ala Glu His Val Leu Thr Met Leu Asn Glu His Glu Val Lys

15 10 15

gac atg gtg ctg atg ccg gac gtc age acg gcg gtt ctg gat ccg ttc 240 Asp Met Val Leu Met Pro Asp Val Ser Thr Ala Val Leu Asp Pro Phe 65 70 75 80

acc atg caa ggc tac gat cgc gac ccg cgt tcc ate tcc aaa cgc gcc 336 Thr Met Gln Gly Tyr Asp Arg Asp Pro Arg Ser Ile Ser Lys Arg Ala 100 105 110

ate cgc ggt tcc cac gtg gcg ate gac gat ate gaa ggc gcc tgg aac 480 Ile Arg Gly Ser His Val Ala Ile Asp Asp Ile Glu Gly Ala Trp Asn 145 150 155 160 tcc ggc aca aaa tac gac ggc ggc aac aaa ggc cac cgt ccg gcg gtg 528

Ser Gly Thr Lys Tyr Asp Gly Gly Asn Lys Gly His Arg Pro Ala Val 165 170 175

aaa ggc ggt tac ttc ccg gtt cca ccg gtc gac tct tcg cag gat ctg 576

Lys Gly Gly Tyr Phe Pro Val Pro Pro Val Asp Ser Ser Gln Asp Leu 180 185 190

cgt tcc acc atg tgt ctg acc atg gaa gag atg ggc ctg gtg gtt gaa 624

Arg Ser Thr Met Cys Leu Thr Met Glu Glu Met Gly Leu Val Val Glu

195 200 205

gcg cac cac cac gaa gtg gcg acc gcc ggt cag aac gaa gtg gca acc 672

Ala His His His Glu Val Ala Thr Ala Gly Gln Asn Glu Val Ala Thr

210 215 220

cgc ttc aac acc atg acc aag aaa gcc gac gaa att cag ate tat aag 720

Arg Phe Asn Thr Met Thr Lys Lys Ala Asp Glu Ile Gln Ile Tyr Lys

225 230 235 240

tac gtg gtg cac aac gtg gcg cac gcc ttc ggt aaa acc gcg acc ttc 768

Tyr Val Val His Asn Val Ala His Ala Phe Gly Lys Thr Ala Thr Phe 245 250 255

atg ccg aag ccc atg ttc ggc gac aac ggt tcc ggc atg cac tgc cac 816

Met Pro Lys Pro Met Phe Gly Asp Asn Gly Ser Gly Met His Cys His 260 265 270

atg tcg ctg tcc aag aac ggc acc aac ctg ttc gcc ggc gac aaa tac 864

Met Ser Leu Ser Lys Asn Gly Thr Asn Leu Phe Ala Gly Asp Lys Tyr

275 280 285

ggc ggc ctg tct gaa acc gca ctg ttc tac ate ggc ggt ate ate aag 912

Gly Gly Leu Ser Glu Thr Ala Leu Phe Tyr Ile Gly Gly Ile Ile Lys

290 295 300

cac gcc aag gcg ate aac gcg ctg gcc aac ccg acc acc aac tcg tac 960

His Ala Lys Ala Ile Asn Ala Leu Ala Asn Pro Thr Thr Asn Ser Tyr 305 310 315 320

aaa cgt ctg gtg cca ggc tac gaa gcg ccg gtg atg ctg gct tac tcc 1008

Lys Arg Leu Val Pro Gly Tyr Glu Ala Pro Val Met Leu Ala Tyr Ser 325 330 335

gcc cgt aac cgc tcc gcg tcc ate cgt ate ccg gtg gtc gcc age ccg 1056

Ala Arg Asn Arg Ser Ala Ser Ile Arg Ile Pro Val Val Ala Ser Pro 340 345 350

aaa gcg cgc cgc ate gaa gcc cgc ttc ccg gat ccg gcg gct aac cca 1104

Lys Ala Arg Arg Ile Glu Ala Arg Phe Pro Asp Pro Ala Ala Asn Pro

355 360 365

tac ctg tgc ttc gcc gca ctg ctg atg gcc ggc ctg gac ggc ate ate 1152

Tyr Leu Cys Phe Ala Ala Leu Leu Met Ala Gly Leu Asp Gly Ile Ile

370 375 380

aac aag ate cac cct ggc gac gcc atg gac aaa aac ctg tac gac ctg 1200

Asn Lys Ile His Pro Gly Asp Ala Met Asp Lys Asn Leu Tyr Asp Leu 385 390 395 400

ccg ccg gaa gaa gaa gcc gag ate cca aaa gtg gcc ggc tcg ctg gac 1248

Pro Pro Glu Glu Glu Ala Glu Ile Pro Lys Val Ala Gly Ser Leu Asp 405 410 415 Gly Gly 290 His Ala 305

Lys Arg

Ala Arg

Lys Ala

Tyr Leu 370 Asn Lys 385

Pro Pro

Glu Ala

Gly Val

Glu Glu 450 Leu Tyr 465

Leu Ser Glu Thr Lys Ala Leu Val

Asn Arg 340 Arg Arg 355

Cys Phe

Ile His

Glu Glu

Met Ala 420 Phe Thr 435

Met Asp Tyr Ser

Ile Asn 310 Pro Gly 325

Ser Ala

Ile Glu

Ala Ala

Pro Gly 390 Glu Ala 405

Ala Leu Asp Asp Arg Val Val

Ala 295 Ala

Tyr

Ser

Ala

Leu 375 Asp

Glu

Asn

Ala

Arg 455

Leu Phe Tyr Ile Leu Ala Glu Ala

Ile Arg 345 Arg Phe 360

Leu Met

Ala Met

Ile Pro

Glu Asp 425 Ile Asp 440

Met Thr

Asn Pro 315 Pro Val 330

Ile Pro

Pro Asp

Ala Gly

Asp Lys 395 Lys Val 410

Arg Glu Ala Tyr Pro His

Gly Gly 300

Thr Thr

Met Leu

Val Val

Pro Ala 365 Leu Asp 380

Asn Leu

Ala Gly

Phe Leu

Ile Glu 445 Pro Val 460

Ile Ile Lys

Asn Ser Tyr 320

Ala Tyr Ser 335

Ala Ser Pro 350

Ala Asn Pro

Gly Ile Ile

Tyr Asp Leu 400

Ser Leu Asp 415

Thr Arg Gly 430

Leu Arg Lys Glu Phe Glu

<210> SEQ ID NO: 19 <211> Comprimento: 1410 <212> Tipo: DNA

<213> Organismo: Seqüência Artificial

<220> Características:

<223> Outras Informações: agslmlO

<221> Nome/Chave: CDS

<222> Localização: (1)...(1410)

<400> Seqüência: 19

atg tcc gct gaa cac gtt ttg acg atg ctg aat gag cat gaa gtg aaa 48 Met Ser Ala Glu His Val Leu Thr Met Leu Asn Glu His Glu Val Lys

15 10 15

ttc gaa gaa cct acg ctg ate att cgc tgt gac att etc gag ccg ggc 288 Phe Glu Glu Pro Thr Leu Ile Ile Arg Cys Asp Ile Leu Glu Pro Gly 85 90 95

acc atg caa ggc tac gat cgc gac ccg cgt tcc ate tcc aaa cgc gcc

336 Thr Met Gln

gaa gac ttc Glu Asp Phe 115

cca gag cct Pro Glu Pro 130

ate cgc ggt Ile Arg Gly 145

tcc ggc aca Ser Gly Thr

aaa ggc ggt Lys Gly Gly

cgt tcc acc Arg Ser Thr 195

gcg cac cac Ala His His 210

cgc ttc aac Arg Phe Asn 225

tac gtg gtg Tyr Val Val

atg ccg aag Met Pro Lys

atg tcg ctg Met Ser Leu 275

ggc ggc ctg Gly Gly Leu 290

cac gcc aag His Ala Lys 305

aaa cgt ctg Lys Arg Leu

gcc cgt aac Ala Arg Asn

Gly Tyr Asp 100

ctg cgc tcc Leu Arg Ser

gag ttc ttc Glu Phe Phe

tcc cac atg Ser His Met 150

aaa tac gac Lys Tyr Asp 165

tac ttc ccg Tyr Phe Pro 180

atg tgt ctg Met Cys Leu

cac gaa gtg His Glu Val

acc atg acc Thr Met Thr 230

cac aac gtg His Asn Val 245

ccc atg ttc Pro Met Phe 260

tcc aag aac Ser Lys Asn

tet gaa acc Ser Glu Thr

gcg ate aac Ala Ile Asn 310

gtg cca ggc Val Pro Gly 325

cgc tcc gcg Arg Ser Ala 340

Arg Asp Pro 105

tcc ggc ate Ser Gly Ile 120

ctg ttc gac Leu Phe Asp 135

gcg ate gac Ala Ile Asp

ggc ggc aac Gly Gly Asn

gtt cca ccg Val Pro Pro 185

acc atg gaa Thr Met Glu 200

gcg acc gcc Ala Thr Ala 215

aag aaa gcc Lys Lys Ala

gcg cac gcc Ala His Ala

ggc gac aac Gly Asp Asn 265

ggc acc aac Gly Thr Asn 280

gea ctg ttc Ala Leu Phe 295

gcg ctg gcc Ala Leu Ala

tac gaa gcg Tyr Glu Ala

tcc ate cgt Ser Ile Arg 345

Arg Ser Ile

gcg gac acc Ala Asp Thr

gac ate cgc Asp Ile Arg 140

gat ate gaa Asp Ile Glu 155

aaa ggc cac Lys Gly His 170

gtc gac tet Val Asp Ser

gag atg ggc Glu Met Gly

ggt cag aac Gly Gln Asn 220

gac gaa att Asp Glu Ile 235

ttc ggt aaa Phe Gly Lys 250

ggt tcc ggc Gly Ser Gly

ctg ttc gcc Leu Phe Ala

tac ate ggc Tyr Ile Gly 300

aac ccg acc Asn Pro Thr 315

ccg gtg atg Pro Val Met 330

ate ccg gtg Ile Pro Val

Ser Lys Arg 110

gtg ctg ttc Val Leu Phe 125

ttc ggc age Phe Gly Ser

ggc gcc tgg Gly Ala Trp

cgt ccg gcg Arg Pro Ala 175

tcg cag gat Ser Gln Asp 190

ctg gtg gtt Leu Val Val 205

gaa gtg gea Glu Val Ala

cag ate tat Gln Ile Tyr

acc gcg acc Thr Ala Thr 255

atg cac tgc Met His Cys 270

ggc gac aaa Gly Asp Lys 285

ggt ate ate Gly Ile Ile

acc aac tcg Thr Asn Ser

ctg gct tac Leu Ala Tyr 335

gtc gcc age Val Ala Ser 350

Ala

ggg 384 Gly

age 432 Ser

aac 480 Asn 160

gtg 528 Val

ctg 576 Leu

gaa 624 Glu

acc 672 Thr

aag 720

Lys

240

ttc 768 Phe

cac 816 His

tac 864 Tyr

aag 912 Lys

tac 960

Tyr

320

tcc 1008 Ser

ccg 1056 Pro aaa gcg cgc cgc ate gaa gcc cgc ttc ccg gat ccg gcg gct aac cca 1104 Lys Ala Arg Arg Ile Glu Ala Arg Phe Pro Asp Pro Ala Ala Asn Pro 355 360 365

aac aag ate cac cct ggc gac gcc atg gac aaa aac ctg tat gac ctg 1200 Asn Lys Ile His Pro Gly Asp Ala Met Asp Lys Asn Leu Tyr Asp Leu 385 390 395 400

gag gcg atg gcc gcg ctg aac gaa gac cgc gag ttc ctg acc cgc ggc 12 96 Glu Ala Met Ala Ala Leu Asn Glu Asp Arg Glu Phe Leu Thr Arg Gly 420 425 430

ctg tac tac age gtc taa 1410

Leu Tyr Tyr Ser Val *

465

<210> SEQ ID NO: 20 <211> Comprimento: 469 <212> Tipo: PRT

<213> Organismo: Seqüência Artificial

<220> Características:

<223> Outras Informações: AGS1M10

<400> Seqüência: ; 20 Met Ser Ala Glu His Val Leu Thr Met Leu Asn Glu His Glu Val Lys 1 5 10 15 Phe Val Asp Leu Arg Phe Thr Asp Thr Lys Gly Lys Glu Gln His Val 20 25 30 Thr Ile Pro Ala His Gln Val Asn Ala Asp Phe Phe Glu Glu Gly Lys 35 40 45 Met Phe Asp Gly Ser Ser Ile Gly Gly Trp Lys Gly Ile Asn Glu Ser 50 55 60 Asp Met Val Leu Met Pro Asp Ala Ser Thr Ala Val Leu Asp Pro Phe 65 70 75 80 Phe Glu Glu Pro Thr Leu Ile Ile Arg Cys Asp Ile Leu Glu Pro Gly 85 90 95 Thr Met Gln Gly Tyr Asp Arg Asp Pro Arg Ser Ile Ser Lys Arg Ala 100 105 110 Glu Asp Phe Leu Arg Ser Ser Gly Ile Ala Asp Thr Val Leu Phe Gly 115 120 125 Pro Glu Pro Glu Phe Phe Leu Phe Asp Asp Ile Arg Phe Gly Ser Ser 130 135 140 Ile Arg Gly Ser His Met Ala Ile Asp Asp Ile Glu Gly Ala Trp Asn 145 150 155 160 Ser Gly Thr Lys Tyr Asp Gly Gly Asn Lys Gly His Arg Pro Ala Val 165 170 175 Lys Gly Gly Tyr Phe Pro Val Pro Pro Val Asp Ser Ser Gln Asp Leu 180 185 190 Arg Ser Thr Met Cys Leu Thr Met Glu Glu Met Gly Leu Val Val Glu 195 200 205 Ala His His His Glu Val Ala Thr Ala Gly Gln Asn Glu Val Ala Thr 210 215 220 Arg Phe Asn Thr Met Thr Lys Lys Ala Asp Glu Ile Gln Ile Tyr Lys 225 230 235 240 Tyr Val Val His Asn Val Ala His Ala Phe Gly Lys Thr Ala Thr Phe 245 250 255 Met Pro Lys Pro Met Phe Gly Asp Asn Gly Ser Gly Met His Cys His 260 265 270 Met Ser Leu Ser Lys Asn Gly Thr Asn Leu Phe Ala Gly Asp Lys Tyr 275 280 285 Gly Gly Leu Ser Glu Thr Ala Leu Phe Tyr Ile Gly Gly Ile Ile Lys 290 295 300 His Ala Lys Ala Ile Asn Ala Leu Ala Asn Pro Thr Thr Asn Ser Tyr 305 310 315 320 Lys Arg Leu Val Pro Gly Tyr Glu Ala Pro Val Met Leu Ala Tyr Ser 325 330 335 Ala Arg Asn Arg Ser Ala Ser Ile Arg Ile Pro Val Val Ala Ser Pro 340 345 o c r\ Lys Ala Arg Arg Ile Glu Ala Arg Phe Pro Asp Pro Ala Ala Asn Pro 355 360 365 Tyr Leu Cys Phe Ala Ala Leu Leu Met Ala Gly Leu Asp Gly Ile Ile 370 375 380 Asn Lys Ile His Pro Gly Asp Ala Met Asp Lys Asn Leu Tyr Asp Leu 385 390 395 400 Pro Pro Glu Glu Glu Ala Glu Ile Pro Lys Val Ala Gly Ser Leu Asp 405 410 415 Glu Ala Met Ala Ala Leu Asn Glu Asp Arg Glu Phe Leu Thr Arg Gly 420 425 430 Gly Val Phe Thr Asp Asp Ala Ile Asp Ala Tyr Ile Glu Leu Arg Lys 435 440 445 Glu Glu Met Asp Arg Val Arg Met Thr Pro His Pro Val Glu Phe Glu 450 455 460 Leu Tyr Tyr Ser Val 4 65 <210> SEQ ID NO: : 21 <211> Comprimento: 1410 <212> Tipo: DNA <213> Organismo: : Seqüência Artificial <220> Características: <223> Outras Informações: agslmll <221> Nome/Chave: CDS <222> Localização: (1) ·. ..(1410) <400> Seqüência: : 21 atg tcc gct gaa cac gtt ttg acg atg CtC aat gag cat gaa gtg aaa Met Ser Ala Glu His Val Leu Thr Met Leu Asn Glu His Glu Val Lys 1 5 10 15 ttc gta gac ctg cgt ttc act gac acc aag ggt aag gaa cag cac gtg Phe Val Asp Leu Arg Phe Thr Asp Thr Lys Gly Lys Glu Gln His Val 20 25 30 act ate ccg gct cac cag gta aac gcc gac ttc ttc gaa gaa ggt aaa Thr Ile Pro Ala His Gln Val Asn Ala Asp Phe Phe Glu Glu Gly Lys 35 40 45

atg ttt gac ggc tcc tct ate gct ggt tgg aag ggc ate aac gaa tet 192

Met Phe Asp Gly Ser Ser Ile Ala Gly Trp Lys Gly Ile Asn Glu Ser

50 55 60

gac atg gtg ctg atg ccg gac gcc age acg gcg gtt ctg gat ccg ttc 240

Asp Met Val Leu Met Pro Asp Ala Ser Thr Ala Val Leu Asp Pro Phe

65 70 75 80

ttc gaa gaa cct acg ctg ate att cgc tgt gac att ctc gag ccg ggc 288

Phe Glu Glu Pro Thr Leu Ile Ile Arg Cys Asp Ile Leu Glu Pro Gly

85 90 95

acc atg caa ggc tac gat cgc gac ccg cgt tcc ate tcc aaa cgc gcc 336

Thr Met Gln Gly Tyr Asp Arg Asp Pro Arg Ser Ile Ser Lys Arg Ala

100 105 110

gaa gac ttc ctg cgc tcc tcc ggc ate gcg gac acc gtg ctg ttc ggg 384

Glu Asp Phe Leu Arg Ser Ser Gly Ile Ala Asp Thr Val Leu Phe Gly

115 120 125

cca gag cct gag ttc ttc ctg ttc gac gac ate cgc ttc ggc age age 432

Pro Glu Pro Glu Phe Phe Leu Phe Asp Asp Ile Arg Phe Gly Ser Ser

130 135 140

ate cgc ggt tcc cac gtg gcg ate gac gat ate gaa ggc gcc tgg aac 480

Ile Arg Gly Ser His Val Ala Ile Asp Asp Ile Glu Gly Ala Trp Asn

145 150 155 160

tcc ggc aca aaa tac gac ggc ggc aac aaa ggc cac cgt ccg gcg gtg 528

Ser Gly Thr Lys Tyr Asp Gly Gly Asn Lys Gly His Arg Pro Ala Val

165 170 175

aaa ggc ggt tac ttc ccg gtt cca ccg gtc gac tct tcg cag gat ctg 576

Lys Gly Gly Tyr Phe Pro Val Pro Pro Val Asp Ser Ser Gln Asp Leu

180 185 190

cgt tcc acc atg tgt ctg acc atg gaa gag atg ggc ctg gtg gtt gaa 624

Arg Ser Thr Met Cys Leu Thr Met Glu Glu Met Gly Leu Val Val Glu

195 200 205

gcg cac cac cac gaa gag gcg acc gcc ggt cag aac gaa gtg gea acc 672

Ala His His His Glu Glu Ala Thr Ala Gly Gln Asn Glu Val Ala Thr

210 215 220

cgc ttc aac acc atg acc aag aaa gcc gac gaa att cag ate tat aag 720

Arg Phe Asn Thr Met Thr Lys Lys Ala Asp Glu Ile Gln Ile Tyr Lys

225 230 235 240

tac gtg gtg cac aac gtg gcg cac gcc ttc ggt aaa acc gcg acc ttc 7 68

Tyr Val Val His Asn Val Ala His Ala Phe Gly Lys Thr Ala Thr Phe

245 250 255

atg ccg aag ccc atg ttc ggc gac aac ggt tcc ggc atg cac tgc cac 816

Met Pro Lys Pro Met Phe Gly Asp Asn Gly Ser Gly Met His Cys His

260 265 270

atg tcg ctg tcc aag aac ggc acc aac ctg ttc gcc ggc gac aaa tac 864

Met Ser Leu Ser Lys Asn Gly Thr Asn Leu Phe Ala Gly Asp Lys Tyr

275 280 285

ggc ggc cta tct gaa acc gea ctg ttc tac ate ggc ggt ate att aag

912 Gly Gly Leu Ser Glu Thr Ala Leu Phe Tyr Ile Gly Gly Ile Ile Lys

290 295 300

cac gcc aag gcg ate aac gcg ctg gcc aac ccg acc acc aac tcg tac 960

His Ala Lys Ala Ile Asn Ala Leu Ala Asn Pro Thr Thr Asn Ser Tyr

305 310 315 320

aaa cgt ctg gtg cca ggc tac gaa gcg ccg gtg atg ctg gct tac tcc 1008

Lys Arg Leu Val Pro Gly Tyr Glu Ala Pro Val Met Leu Ala Tyr Ser 325 330 335

gcc cgt aac cgc tcc gcg tcc ate cgt ate ccg gtg gtc gcc age ccg 1056

Ala Arg Asn Arg Ser Ala Ser Ile Arg Ile Pro Val Val Ala Ser Pro 340 345 350

aaa gcg cgc cgc ate gaa gcc cgc ttc ccg gat ccg gcg gct aac cca 1104

Lys Ala Arg Arg Ile Glu Ala Arg Phe Pro Asp Pro Ala Ala Asn Pro 355 360 365

tac ctg tgc ttc gcc gea ctg ctg atg gcc ggc ctg gac ggc ate ate 1152

Tyr Leu Cys Phe Ala Ala Leu Leu Met Ala Gly Leu Asp Gly Ile Ile

370 375 380

aac aag ate cac cct ggc gac gcc atg gat aaa aac ctg tac gac ctg 1200

Asn Lys Ile His Pro Gly Asp Ala Met Asp Lys Asn Leu Tyr Asp Leu

385 390 395 400

ccg ccg gaa gaa gaa gcc gag ate cca aaa gtg gcc ggc tcg ctg gac 1248

Pro Pro Glu Glu Glu Ala Glu Ile Pro Lys Val Ala Gly Ser Leu Asp 405 410 415

gag gcg atg gcc gcg ctg aac gaa gac cgc gag ttc ctg acc cgc ggc 1296

Glu Ala Met Ala Ala Leu Asn Glu Asp Arg Glu Phe Leu Thr Arg Gly 420 425 430

ggc gtg ttc acc gac gat gcg ate gat gcc tac ate gaa ctg cgc aaa 1344

Gly Val Phe Thr Asp Asp Ala Ile Asp Ala Tyr Ile Glu Leu Arg Lys 435 440 445

gaa gag atg gac cgc gtt cgc atg acg cca cat ccg gtc gag ttc gaa 1392

Glu Glu Met Asp Arg Val Arg Met Thr Pro His Pro Val Glu Phe Glu

450 455 460

ctg tac tac age gtc taa 1410

Leu Tyr Tyr Ser Val *

465

<210> SEQ ID NO: 22 <211> Comprimento: 469 <212> Tipo: PRT

<213> Organismo: Seqüência Artificial

<220> Características:

<223> Outras Informações: AGSIMll

<400> Seqüência: 22

Met Ser Ala Glu His Val Leu Thr Met Leu Asn Glu His Glu Val Lys

15 10 15

Phe Val Asp Leu Arg Phe Thr Asp Thr Lys Gly Lys Glu Gln His Val

20 25 30

Thr Ile Pro Ala His Gln Val Asn Ala Asp Phe Phe Glu Glu Gly Lys 35 40 45 Met Phe Asp Gly Ser Ser Ile Ala Gly Trp Lys Gly Ile Asn Glu Ser 50 55 60 Asp Met Val Leu Met Pro Asp Ala Ser Thr Ala Val Leu Asp Pro Phe 65 70 75 80 Phe Glu Glu Pro Thr Leu Ile Ile Arg Cys Asp Ile Leu Glu Pro Gly 85 90 95 Thr Met Gln Gly Tyr Asp Arg Asp Pro Arg Ser Ile Ser Lys Arg Ala 100 105 110 Glu Asp Phe Leu Arg Ser Ser Gly Ile Ala Asp Thr Val Leu Phe Gly 115 120 125 Pro Glu Pro Glu Phe Phe Leu Phe Asp Asp Ile Arg Phe Gly Ser Ser 130 135 ■ 140 Ile Arg Gly Ser His Val Ala Ile Asp Asp Ile Glu Gly Ala Trp Asn 145 150 155 160 Ser Gly Thr Lys Tyr Asp Gly Gly Asn Lys Gly His Arg Pro Ala Val 165 170 175 Lys Gly Gly Tyr Phe Pro Val Pro Pro Val Asp Ser Ser Gln Asp Leu 180 185 190 Arg Ser Thr Met Cys Leu Thr Met Glu Glu Met Gly Leu Val Val Glu 195 200 205 Ala His His His Glu Glu Ala Thr Ala Gly Gln Asn Glu Val Ala Thr 210 215 220 Ara Phe Asn Thr Met Thr Lys Lys Ala Asp Glu Ile Gln Ile Tw1- Lys 225 230 235 240 Tyr Val Val His Asn Val Ala His Ala Phe Gly Lys Thr Ala Thr Phe 245 250 255 Met Pro Lys Pro Met Phe Gly Asp Asn Gly Ser Gly Met His Cys His 260 265 270 Met Ser Leu Ser Lys Asn Gly Thr Asn Leu Phe Ala Gly Asp Lys Tyr 275 280 285 Gly Gly Leu Ser Glu Thr Ala Leu Phe Tyr Ile Gly Gly Ile Ile Lys 290 295 300 His Ala Lys Ala Ile Asn Ala Leu Ala Asn Pro Thr Thr Asn Ser Tyr 305 310 315 320 Lys Arg Leu Val Pro Gly Tyr Glu Ala Pro Val Met Leu Ala Tyr Ser 325 330 335 Ala Arg Asn Arg Ser Ala Ser Ile Arg Ile Pro Val Val Ala Ser Pro 340 345 350 Lys Ala Arg Arg Ile Glu Ala Arg Phe Pro Asp Pro Ala Ala Asn Pro 355 360 365 Tyr Leu Cys Phe Ala Ala Leu Leu Met Ala Gly Leu Asp Gly Ile Ile 370 375 380 Asn Lys Ile His Pro Gly Asp Ala Met Asp Lys Asn Leu Tyr Asp Leu 385 390 395 400 Pro Pro Glu Glu Glu Ala Glu Ile Pro Lys Val Ala Gly Ser Leu Asp 405 410 415 Glu Ala Met Ala Ala Leu Asn Glu Asp Arg Glu Phe Leu Thr Arg Gly 420 425 430 Gly Val Phe Thr Asp Asp Ala Ile Asp Ala Tyr Ile Glu Leu Arg Lys 435 440 445 Glu Glu Met Asp Arg Val Arg Met Thr Pro His Pro Val Glu Phe Glu 450 455 460 Leu Tyr Tyr Ser Val 465

<210> SEQ ID NO: 23

<211> Comprimento: 1410

<212> Tipo: DNA

<213> Organismo: Seqüência Artificial

<220> Características:

<223> Outras Informações: agslml2 <221> Nome/Chave: CDS

<222> Localização: (1) . .. (1410)

<400> Seqüência: 23

atg tcc gct gaa cac gtt ttg acg atg ctg aat gag cat gaa gtg aaa 48

Met Ser Ala Glu His Val Leu Thr Met Leu Asn Glu His Glu Val Lys 1 5 10 15

ttc gta gac ctg cgt ttc act gac acc aag ggt aag gaa cag cac gtg 96

Phe Val Asp Leu Arg Phe Thr Asp Thr Lys Gly Lys Glu Gln His Val

20 25 30

act ate ccg gct cac cag gta aac gcc gac ttc ttc gaa gaa ggt aaa 144

Thr Ile Pro Ala His Gln Val Asn Ala Asp Phe Phe Glu Glu Gly Lys

35 40 45

atg ttt gac ggc tcc tet ate ggt ggt tgg aag ggc ate aac gaa tet 192

Met Phe Asp Gly Ser Ser Ile Gly Gly Trp Lys Gly Ile Asn Glu Ser

50 55 60

gac atg gtg ctg atg ccg gac gcc age acg gcg gtt ctg gat ccg ttc 240

Asp Met Val Leu Met Pro Asp Ala Ser Thr Ala Val Leu Asp Pro Phe 65 70 75 80

ttc gaa gaa cct acg ctg ate att cgc tgt gac att ctc gag ccg ggc 288

Phe Glu Glu Pro Thr Leu Ile Ile Arg Cys Asp Ile Leu Glu Pro Gly 85 90 95

acc atg caa ggc tac gat cgc gac ccg cgt tcc ate tcc aaa cgc gcc 336

Thr Met Gln Gly Tyr Asp Arg Asp Pro Arg Ser Ile Ser Lys Arg Ala

100 105 110

gaa gac ttc ctg cgc tcc tcc ggc ate gcg gac acc gtg ctg ttc ggg 384

Glu Asp Phe Leu Arg Ser Ser Gly Ile Ala Asp Thr Val Leu Phe Gly

115 120 125

cca gag cct gag ttc ttc ctg ttc gac gac ate cgc ttc ggc age age 432

Pro Glu Pro Glu Phe Phe Leu Phe Asp Asp Ile Arg Phe Gly Ser Ser

130 135 140

ate cgc ggt tcc cac gtg gcg ate gac gat ate gaa ggc gcc tgg aac 480

Ile Arg Gly Ser His Val Ala Ile Asp Asp Ile Glu Gly Ala Trp Asn 145 150 155 160

tcc ggc aca aaa tac gat ggc ggc aac aaa ggc cac cgt ccg gcg gtg 528

Ser Gly Thr Lys Tyr Asp Gly Gly Asn Lys Gly His Arg Pro Ala Val

165 170 175

aaa ggc ggt tac ttc ccg gtt cca ccg gtc gac tet tcg cag gat ctg 576

Lys Gly Gly Tyr Phe Pro Val Pro Pro Val Asp Ser Ser Gln Asp Leu

180 185 190

cgt tcc acc atg tgt ctg acc atg gaa gag atg ggc ctg gtg att gaa 624

Arg Ser Thr Met Cys Leu Thr Met Glu Glu Met Gly Leu Val Ile Glu

195 200 205

gcg cac cac cac gaa atg gcg acc gcc ggt cag aac gaa gtg gea acc 672

Ala His His His Glu Met Ala Thr Ala Gly Gln Asn Glu Val Ala Thr

210 215 220

tac gtg gtg cac aac gtg gcg cac gcc ttc ggt aaa acc gcg acc ttc 768

Tyr Val Val His Asn Val Ala His Ala Phe Gly Lys Thr Ala Thr Phe

245 250 255

atg ccg aag ccc atg ttc ggc gac aac ggt tcc ggc atg cac tgc cac 816

Met Pro Lys Pro Met Phe Gly Asp Asn Gly Ser Gly Met His Cys His

260 265 270

atg tcg ctg tcc aag aac ggc acc aac ctg ttc gcc ggc gac aaa tac 864

Met Ser Leu Ser Lys Asn Gly Thr Asn Leu Phe Ala Gly Asp Lys Tyr

275 280 285

ggc ggc ctg tct gaa acc gca ctg ttc tac ate ggc ggt ate ate aag 912

Gly Gly Leu Ser Glu Thr Ala Leu Phe Tyr Ile Gly Gly Ile Ile Lys

290 295 300

cac gcc aag gcg ate aac gcg ctg gcc aac ccg acc acc aac tcg tac 960

His Ala Lys Ala Ile Asn Ala Leu Ala Asn Pro Thr Thr Asn Ser Tyr

305 310 315 320

aaa cgt ctg gtg cca ggc tac gaa gcg ccg gtg atg ctg gct tac tcc 1008

Lys Arg Leu Val Pro Gly Tyr Glu Ala Pro Val Met Leu Ala Tyr Ser

325 330 335

gcc cgt aac cgc tcc gcg tcc ate cgt ate ccg gtg gtc gcc age ccg 1056

Ala Arg Asn Arg Ser Ala Ser Ile Arg Ile Pro Val Val Ala Ser Pro

340 345 350

aaa gcg cgc cgc ate gaa gcc cgc ttc ccg gat ccg gcg gct aac cca 1104

Lys Ala Arg Arg Ile Glu Ala Arg Phe Pro Asp Pro Ala Ala Asn Pro '

355 360 365

tac ctg tgc ttc gcc gca ctg ctg atg gcc ggc ctg gac ggc ate ate 1152

Tyr Leu Cys Phe Ala Ala Leu Leu Met Ala Gly Leu Asp Gly Ile Ile

370 375 380

aac aag ate cac cct ggc gac gcc atg gac aaa aac ctg tac gac ctg 1200

Asn Lys Ile His Pro Gly Asp Ala Met Asp Lys Asn Leu Tyr Asp Leu

385 390 395 400

ccg ccg gaa gaa gaa gcc gag ate cca aaa gtg gcc ggc tcg ctg gac 1248

Pro Pro Glu Glu Glu Ala Glu Ile Pro Lys Val Ala Gly Ser Leu Asp

405 410 415

gag gcg atg gcc gcg ctg aac gaa gac cgc gag ttc ctg acc cgc ggc 1296

Glu Ala Met Ala Ala Leu Asn Glu Asp Arg Glu Phe Leu Thr Arg Gly

420 425 430

ggc gtg ttc acc gac gat gcg ate gat gcc tac ate gaa ctg cgc aaa 1344

Gly Val Phe Thr Asp Asp Ala Ile Asp Ala Tyr Ile Glu Leu Arg Lys

435 440 445

gaa gag atg gac cgc gtt cgc atg acg cca cac ccg gtc gag ttc gaa 1392

Glu Glu Met Asp Arg Val Arg Met Thr Pro His Pro Val Glu Phe Glu

450 455 460

ctg tac tac age gtc taa 1410

Leu Tyr Tyr Ser Val *

465 <210> SEQ ID NO: 24 <211> Comprimento: 469 <212> Tipo: PRT

<213> Organismo: Seqüência Artificial

<220> Características:

<223> Outras Informações: AGS1M12

<400> Seqüência: 24

Met Ser Ala Glu His Val Leu Thr Met Leu Asn Glu His Glu Val Lys

1 5 10 15

Phe Val Asp Leu Arg Phe Thr Asp Thr Lys Gly Lys Glu Gln His Val

20 25 30

Thr Ile Pro Ala His Gln Val Asn Ala Asp Phe Phe Glu Glu Gly Lys

35 40 45

Met Phe Asp Gly Ser Ser Ile Gly Gly Trp Lys Gly Ile Asn Glu Ser

50 55 60

Asp Met Val Leu Met Pro Asp Ala Ser Thr Ala Val Leu Asp Pro Phe 65 70 75 80

Phe Glu Glu Pro Thr Leu Ile Ile Arg Cys Asp Ile Leu Glu Pro Gly

85 90 95

Thr Met Gln Gly Tyr Asp Arg Asp Pro Arg Ser Ile Ser Lys Arg Ala

100 105 110

Glu Asp Phe Leu Arg Ser Ser Gly Ile Ala Asp Thr Val Leu Phe Gly

115 120 125

Pro Glu Pro Glu Phe Phe Leu Phe Asp Asp Ile Arg Phe Gly Ser Ser

130 135 140

Ile Arg Gly Ser His Val Ala Ile Asp Asp Ile Glu Gly Ala Trp Asn 145 150 155 160

Ser Gly Thr Lys Tyr Asp Gly Gly Asn Lys Gly His Arg Pro Ala Val

165 170 175

Lys Gly Gly Tyr Phe Pro Val Pro Pro Val Asp Ser Ser Gln Asp Leu

180 185 190

Arg Ser Thr Met Cys Leu Thr Met Glu Glu Met Gly Leu Val Ile Glu

195 200 205

Ala His His His Glu Met Ala Thr Ala Gly Gln Asn Glu Val Ala Thr

210 215 220

Arg Phe Asn Thr Met Thr Lys Lys Ala Asp Glu Ile Gln Ile Tyr Lys 225 230 235 240

Tyr Val Val His Asn Val Ala His Ala Phe Gly Lys Thr Ala Thr Phe

245 250 255

Met Pro Lys Pro Met Phe Gly Asp Asn Gly Ser Gly Met His Cys His

260 265 270

Met Ser Leu Ser Lys Asn Gly Thr Asn Leu Phe Ala Gly Asp Lys Tyr

275 280 285

Gly Gly Leu Ser Glu Thr Ala Leu Phe Tyr Ile Gly Gly Ile Ile Lys

290 295 300

His Ala Lys Ala Ile Asn Ala Leu Ala Asn Pro Thr Thr Asn Ser Tyr 305 310 315 320

Lys Arg Leu Val Pro Gly Tyr Glu Ala Pro Val Met Leu Ala Tyr Ser

325 330 335

Ala Arg Asn Arg Ser Ala Ser Ile Arg Ile Pro Val Val Ala Ser Pro

340 345 350

Lys Ala Arg Arg Ile Glu Ala Arg Phe Pro Asp Pro Ala Ala Asn Pro

355 360 365

Tyr Leu Cys Phe Ala Ala Leu Leu Met Ala Gly Leu Asp Gly Ile Ile

370 375 380

Asn Lys Ile His Pro Gly Asp Ala Met Asp Lys Asn Leu Tyr Asp Leu 385 390 395 400

Pro Pro Glu Glu Glu Ala Glu Ile Pro Lys Val Ala Gly Ser Leu Asp

405 410 415

Glu Ala Met Ala Ala Leu Asn Glu Asp Arg Glu Phe Leu Thr Arg Gly 420 425 430 Gly Val Phe Thr Asp Asp 435

Glu Glu Met Asp Arg Val 450

Leu Tyr Tyr Ser Val 465

Ala Ile Asp Ala Tyr 440

Arg Met Thr Pro His 455

Ile Glu Leu Arg Lys 445

Pro Val Glu Phe Glu 460

<210> SEQ ID NO: 25 <211> Comprimento: 1410 <212> Tipo: DNA

<213> Organismo: Seqüência Artificial

<220> Características:

<223> Outras Informações: agslml3

<221> Nome/Chave: CDS

<222> Localização: (1) ... (1410)

<400> Seqüência: 25

atg tcc gct gaa cac gtt ttg acg atg ctg aat gag cat gaa gtg aaa 48

Met Ser Ala Glu His Val Leu Thr Met Leu Asn Glu His Glu Val Lys

15 10 15

acc atg caa ggc tac aat cgc gac ccg cgt tcc ate tcc aaa cgc gcc 336 Thr Met Gln Gly Tyr Asn Arg Asp Pro Arg Ser Ile Ser Lys Arg Ala 100 105 110

gaa gac ttc ctg cgc tcc tcc ggc ate gcg gac acc atg ctg ttc ggg 384 Glu Asp Phe Leu Arg Ser Ser Gly Ile Ala Asp Thr Met Leu Phe Gly 115 120 125

ate cgc ggt tcc cac gtg gcg ate gac gat ate gaa ggc gcc tgg aac 480 Ile Arg Gly Ser His Val Ala Ile Asp Asp Ile Glu Gly Ala Trp Asn 145 150 155 160

tcc ggc aca aaa tac gac ggc ggc aac aaa ggc cac cgt ccg gcg gtg 528 Ser Gly Thr Lys Tyr Asp Gly Gly Asn Lys Gly His Arg Pro Ala Val 165 170 175 aaa ggc ggt tac ttc ccg gtt cca ccg gtc gac tct tcg cag gat ctg 576

Lys Gly Gly Tyr Phe Pro Val Pro Pro Val Asp Ser Ser Gln Asp Leu

180 185 190

cgt tcc acc atg tgt ctg acc atg gaa gag atg ggc ctg gtg gtt gaa 624

Arg Ser Thr Met Cys Leu Thr Met Glu Glu Met Gly Leu Val Val Glu

195 200 205

gcg cac cac cac gaa atg gcg acc gcc ggt cag aac gaa gtg gca acc 672

Ala His His His Glu Met Ala Thr Ala Gly Gln Asn Glu Val Ala Thr

210 215 220

cgc ttc aac acc atg acc aag aaa gcc gac gaa att cag ate tat aag 720

Arg Phe Asn Thr Met Thr Lys Lys Ala Asp Glu Ile Gln Ile Tyr Lys

225 230 235 240

tac gtg gtg cac aac gtg gcg cac gcc ttc ggt aaa acc gcg acc ttc 768

Tyr Val Val His Asn Val Ala His Ala Phe Gly Lys Thr Ala Thr Phe

J^1 245 250 255

W

m

atg ccg aag ccc atg ttc ggc gac aac ggt tcc ggc atg cac tgc cac 816

Met Pro Lys Pro Met Phe Gly Asp Asn Gly Ser Gly Met His Cys His

260 265 270

atg tcg ctg tcc aag aac ggc acc aac ctg ttc gcc ggc gac aaa tac 864

Met Ser Leu Ser Lys Asn Gly Thr Asn Leu Phe Ala Gly Asp Lys Tyr

275 280 285

ggc ggc ctg tct gaa acc gca ctg ttc tac ate ggc ggt ate ate aag 912

Gly Gly Leu Ser Glu Thr Ala Leu Phe Tyr Ile Gly Gly Ile Ile Lys

290 295 300

cac gcc aag gcg ate aac gcg ctg gcc aac ccg acc acc aac tcg tac 960

His Ala Lys Ala Ile Asn Ala Leu Ala Asn Pro Thr Thr Asn Ser Tyr

305 310 315 320

aaa cgt ctg gtg cca ggc tac gaa gcg ccg gtg atg ctg gct tac tcc 1008

Lys Arg Leu Val Pro Gly Tyr Glu Ala Pro Val Met Leu Ala Tyr Ser

325 330 335

gcc cgt aac cgc tcc gcg tcc ate cgt ate ccg gtg gtc gcc age ccg 1056

Ala Arg Asn Arg Ser Ala Ser Ile Arg Ile Pro Val Val Ala Ser Pro

340 345 350

aaa gcg cgc cgc ate gaa gcc cgc ttc ccg gat ccg gcg gct aac cca 1104

Lys Ala Arg Arg Ile Glu Ala Arg Phe Pro Asp Pro Ala Ala Asn Pro

355 360 365

tac ctg tgc ttc gcc gca ctg ctg atg gcc ggc ctg gac ggc ate ate 1152

Tyr Leu Cys Phe Ala Ala Leu Leu Met Ala Gly Leu Asp Gly Ile Ile

370 375 380

aac aag ate cac cct ggc gac gcc atg gac aaa aac ctg tac gac ctg 1200

Asn Lys Ile His Pro Gly Asp Ala Met Asp Lys Asn Leu Tyr Asp Leu

385 390 395 400

ccg ccg gaa gaa gaa gcc gag ate cca aaa gtg gcc ggc tcg ctg gac 1248

Pro Pro Glu Glu Glu Ala Glu Ile Pro Lys Val Ala Gly Ser Leu Asp

405 410 415

gag gcg atg gcc gcg ctg aac gaa gac cgc gag ttc ctg acc cgc ggc Glu Ala Met Ala Ala Leu Asn Glu Asp Arg Glu Phe Leu Thr Arg Gly

1296 420 425 430

ggc gtg ttc acc gac gat gcg ate gat gcc tac ate gaa ctg cgt aaa 1344 Gly Val Phe Thr Asp Asp Ala Ile Asp Ala Tyr Ile Glu Leu Arg Lys 435 440 445

ctg tac tac age gtc taa 1410

Leu Tyr Tyr Ser Val *

465

<210> SEQ ID NO: 26 <211> Comprimento: 469 <212> Tipo: PRT

<213> Organismo: Seqüência Artificial

<220> Características:

<223> Outras Informações: AGSIMl3

<400> Seqüência: 26 Met Ser Ala Glu His Val Leu Thr Met Leu Asn Glu His Glu Val Lys 1 5 10 15 Phe Val Asp Leu Arg Phe Thr Asp Thr Lys Gly Lys Glu Gln His Val 20 25 30 Thr Ile Pro Ala His Gln Val Asn Ala Asp Phe Phe Glu Glu Gly Lys 35 40 45 Met Phe Asp Gly Ser Ser Ile Gly Gly Trp Lys Gly Ile Asn Glu Ser 50 55 60 Asp Met Val Leu Met Pro Asp Ala Ser Thr Ala Val Leu Asp Pro Phe 65 70 75 80 Phe Glu Glu Pro Thr Leu Ile Ile Arg Cys Asp Ile Leu Glu Pro Gly 85 90 95 Thr Met Gln Gly Tyr Asn Arg Asp Pro Arg Ser Ile Ser Lys Arg Ala 100 105 110 Glu Asp Phe Leu Arg Ser Ser Gly Ile Ala Asp Thr Met Leu Phe Gly 115 120 125 Pro Glu Pro Glu Phe Phe Leu Phe Asp Asp Ile Arg Phe Gly Ser Ser 130 135 140 Ile Arg Gly Ser His Val Ala Ile Asp Asp Ile Glu Gly Ala Trp Asn 145 150 155 160 Ser Gly Thr Lys Tyr Asp Gly Gly Asn Lys Gly His Arg Pro Ala Val 165 170 175 Lys Gly Gly Tyr Phe Pro Val Pro Pro Val Asp Ser Ser Gln Asp Leu 180 185 190 Arg Ser Thr Met Cys Leu Thr Met Glu Glu Met Gly Leu Val Val Glu 195 200 205 Ala His His His Glu Met Ala Thr Ala Gly Gln Asn Glu Val Ala Thr 210 215 220 Arg Phe Asn Thr Met Thr Lys Lys Ala Asp Glu Ile Gln Ile Tyr Lys 225 230 235 240 Tyr Val Val His Asn Val Ala His Ala Phe Gly Lys Thr Ala Thr Phe 245 250 255 Met Pro Lys Pro Met Phe Gly Asp Asn Gly Ser Gly Met His Cys His 260 265 270 Met Ser Leu Ser Lys Asn Gly Thr Asn Leu Phe Ala Gly Asp Lys Tyr 275 280 285 Gly Gly Leu Ser Glu Thr Ala Leu Phe Tyr Ile Gly Gly Ile Ile Lys 290 295 300 His Ala Lys Ala Ile Asn Ala Leu Ala Asn Pro Thr Thr Asn Ser Tyr 305 310

Lys Arg Leu Val Pro Gly 325

Ala Arg Asn Arg Ser Ala 340

Lys Ala Arg Arg Ile Glu 355

Tyr Leu Cys Phe Ala Ala 370

Asn Lys Ile His Pro Gly 385 390

Pro Pro Glu Glu Glu Ala 405

Glu Ala Met Ala Ala Leu 420

Gly Val Phe Thr Asp Asp 435

Glu Glu Met Asp Arg Val 450

Leu Tyr Tyr Ser Val 465

315

Tyr Glu Ala Pro Val 330

Ser Ile Arg Ile Pro 345

Ala Arg Phe Pro Asp 360

Leu Leu Met Ala Gly 375

Asp Ala Met Asp Lys 395

Glu Ile Pro Lys Val 410

Asn Glu Asp Arg Glu 425

Ala Ile Asp Ala Tyr 440

Arg Met Thr Pro His 455

320

Met Leu Ala Tyr Ser 335

Val Val Ala Ser Pro 350

Pro Ala Ala Asn Pro 365

Leu Asp Gly Ile Ile 380

Asn Leu Tyr Asp Leu 400

Ala Gly Ser Leu Asp 415

Phe Leu Thr Arg Gly 430

Ile Glu Leu Arg Lys 445

Pro Val Glu Phe Glu 460

<210> SEQ ID NO: 27 <211> Comprimento: 1410 <212> Tipo: DNA

<213> Organismo: Seqüência Artificial

<220> Características:

<223> Outras Informações: agslml4

<221> Nome/Chave: CDS

<222> Localização: (1)...(1410)

<400> Seqüência: 27

atg tcc gct gaa cac gtt ttg acg atg ctg aat gag cat gaa gtg aaa 4 8

Met Ser Ala Glu His Val Leu Thr Met Leu Asn Glu His Glu Val Lys

1 5 10 15

acc atg caa ggc tac gat cgc gac ccg cgt tcc ate tcc aaa cgc gcc 336 Thr Met Gln Gly Tyr Asp Arg Asp Pro Arg Ser Ile Ser Lys Arg Ala 100 105 110 gaa gac ttc Glu Asp Phe 115

cca gag cct Pro Glu Pro 130

ate cgc ggt Ile Arg Gly 145

tcc ggc aca Ser Gly Thr

aaa ggc ggt Lys Gly Gly

cgt tcc acc Arg Ser Thr 195

gcg cac cac Ala His His 210

cgc ttc aac Arg Phe Asn 225

tac gtg gtg Tyr Val Val

atg ccg aag Met Pro Lys

atg tcg ctg Met Ser Leu 275

age ggc ctg Ser Gly Leu 290

cac gcc aag His Ala Lys 305

aaa cgt ctg Lys Arg Leu

gcc cgt aac Ala Arg Asn

aaa gcg cgc Lys Ala Arg 355

ctg cgc tcc Leu Arg Ser

gag ttc ttc Glu Phe Phe

tcc cac atg

Ser His Met 150

aaa tac aac Lys Tyr Asn 165

tac ttc ccg

Tyr Phe Pro 180

atg tgt ctg

Met Cys Leu

cac gaa atg His Glu Met

acc atg acc Thr Met Thr 230

cac aac gtg His Asn Val 245

ccc atg ttc Pro Met Phe 260

tcc aag aac Ser Lys Asn

tet gaa acc Ser Glu Thr

gcg ate aac Ala Ile Asn 310

gtg cca ggc Val Pro Gly 325

cgc tcc gcg Arg Ser Ala 340

cgc ate gaa Arg Ile Glu

tcc ggc ate Ser Gly Ile 120

ctg ttc gac Leu Phe Asp 135

gcg ate gac Ala Ile Asp

ggc ggc aac Gly Gly Asn

gtt cca ccg Val Pro Pro 185

acc atg gaa Thr Met Glu 200

gcg acc gcc Ala Thr Ala 215

aag aaa gcc Lys Lys Ala

gcg cac gcc Ala His Ala

ggc gac aac Gly Asp Asn 265

ggc acc aac Gly Thr Asn 280

gea ctg ttc Ala Leu Phe 295

gcg ctg gcc Ala Leu Ala

tac gaa gcg Tyr Glu Ala

tcc ate cgt Ser Ile Arg 345

gcc cgc ttc Ala Arg Phe 360

gcg gac acc Ala Asp Thr

gac ate cgc Asp Ile Arg 140

gat ate gaa Asp Ile Glu 155

aaa ggc cac Lys Gly His 170

gtc gac tet Val Asp Ser

gag atg ggc Glu Met Gly

ggt cag aac Gly Gln Asn 220

gac gaa att Asp Glu Ile 235

ttc ggt aaa Phe Gly Lys 250

ggt tcc ggc Gly Ser Gly

ctg ttc gcc Leu Phe Ala

tac ate ggc Tyr Ile Gly 300

aac ccg acc Asn Pro Thr 315

ccg gtg atg Pro Val Met 330

ate ccg gtg Ile Pro Val

cct gat ccg Pro Asp Pro

gtg ctg ttc Val Leu Phe 125

ttc ggc age Phe Gly Ser

ggc gcc tgg Gly Ala Trp

cgt ccg gcg Arg Pro Ala 175

tcg cag gat Ser Gln Asp 190

ctg gtg gtt Leu Val Val 205

gaa gtg gea Glu Val Ala

cag ate tat Gln Ile Tyr

acc gcg acc Thr Ala Thr 255

atg cac tgc Met His Cys 270

ggc gac aaa Gly Asp Lys 285

ggt ate ate Gly Ile Ile

acc aac tcg Thr Asn Ser

ctg gct tac Leu Ala Tyr 335

gtc gcc age Val Ala Ser 350

gcg gct aac Ala Ala Asn 365

ggg 384 Gly

age 432 Ser

aac 480 Asn 160

gtg 528 Val

ctg 576 Leu

gaa 624 Glu

acc 672 Thr

aag 720

Lys

240

ttc 768 Phe

cac 816 His

tac 864 Tyr

aag 912 Lys

tac 960

Tyr

320

tcc 1008 Ser

ccg 1056 Pro

cca 1104 Pro tat ctg tgc ttc gcc gca ctg ctg atg gcc ggc ctg gac ggc ate ate 1152

Tyr Leu Cys Phe Ala Ala Leu Leu Met Ala Gly Leu Asp Gly Ile Ile

370 375 380

aac aag ate cac cct ggc gac gcc atg gac aaa aac ctg tac gac ctg 1200

Asn Lys Ile His Pro Gly Asp Ala Met Asp Lys Asn Leu Tyr Asp Leu

385 390 395 400

ceg ccg gaa gaa gaa gcc gag ate cca aaa gtg gcc ggc tcg ctg gac 1248

Pro Pro Glu Glu Glu Ala Glu Ile Pro Lys Val Ala Gly Ser Leu Asp

405 410 415

gag gcg atg gtc gcg ctg aac gaa gac cgc gag ttc ctg acc cgc ggc 1296

Glu Ala Met Val Ala Leu Asn Glu Asp Arg Glu Phe Leu Thr Arg Gly

420 425 430

ggc gtg ttc acc gac gat gcg ate gat gcc tac ate gaa ctg cgc aaa 1344

Gly Val Phe Thr Asp Asp Ala Ile Asp Ala Tyr Ile Glu Leu Arg Lys

435 440 445

gaa gag atg gac cgc gtt cgc atg acg cca cac ccg gtc gag ttc gaa 1392

Glu Glu Met Asp Arg Val Arg Met Thr Pro His Pro Val Glu Phe Glu

450 455 460

ctg tac tac age gtc taa 1410

Leu Tyr Tyr Ser Val *

465

m

<210> SEQ ID NO: 28 <211> Comprimento: 469 <212> Tipo: PRT

<213> Organismo: Seqüência Artificial

<220> Características:

<223> Outras Informações: AGS1M14

<400> Seqüência: 28

Met Ser Ala Glu His Val Leu Thr Met Leu Asn Glu His Glu Val Lys

1 5 10 15

Phe Val Asp Leu Arg Phe Thr Asp Thr Lys Gly Lys Glu Gln His Val

20 25 30

Thr Ile Pro Ala His Gln Val Asn Ala Asp Phe Phe Glu Glu Gly Lys

35 40 45

Met Phe Asp Gly Ser Ser Ile Gly Gly Trp Lys Gly Ile Asn Glu Ser

50 55 60

Asp Met Val Leu Met Pro Asp Ala Ser Thr Ala Val Leu Asp Pro Phe 65 70 75 80

Phe Glu Glu Pro Thr Leu Ile Ile Arg Cys Asp Ile Leu Glu Pro Gly

85 90 95

Thr Met Gln Gly Tyr Asp Arg Asp Pro Arg Ser Ile Ser Lys Arg Ala

100 105 110

Glu Asp Phe Leu Arg Ser Ser Gly Ile Ala Asp Thr Val Leu Phe Gly

115 120 125

Pro Glu Pro Glu Phe Phe Leu Phe Asp Asp Ile Arg Phe Gly Ser Ser

130 135 140

Ile Arg Gly Ser His Met Ala Ile Asp Asp Ile Glu Gly Ala Trp Asn 145 150 155 160

Ser Gly Thr Lys Tyr Asn Gly Gly Asn Lys Gly His Arg Pro Ala Val

165 170 175

Lys Gly Gly Tyr Phe Pro Val Pro Pro Val Asp Ser Ser Gln Asp Leu 180 185 190 Arg Ser Thr Met Cys Leu Thr Met Glu Glu Met Gly Leu Val Val Glu

195 200 205

Ala His His His Glu Met Ala Thr Ala Gly Gln Asn Glu Val Ala Thr

210 215 220

Arg Phe Asn Thr Met Thr Lys Lys Ala Asp Glu Ile Gln Ile Tyr Lys 225 230 235 240

Tyr Val Val His Asn Val Ala His Ala Phe Gly Lys Thr Ala Thr Phe

245 250 255

Met Pro Lys Pro Met Phe Gly Asp Asn Gly Ser Gly Met His Cys His

260 265 270

Met Ser Leu Ser Lys Asn Gly Thr Asn Leu Phe Ala Gly Asp Lys Tyr

275 280 285

Ser Gly Leu Ser Glu Thr Ala Leu Phe Tyr Ile Gly Gly Ile Ile Lys

290 295 300

His Ala Lys Ala Ile Asn Ala Leu Ala Asn Pro Thr Thr Asn Ser Tyr 305 310 315 320

Lys Arg Leu Val Pro Gly Tyr Glu Ala Pro Val Met Leu Ala Tyr Ser

325 330 335

Ala Arg Asn Arg Ser Ala Ser Ile Arg Ile Pro Val Val Ala Ser Pro

340 345 350

Lys Ala Arg Arg Ile Glu Ala Arg Phe Pro Asp Pro Ala Ala Asn Pro

355 360 365

Tyr Leu Cys Pne Ala Ala Leu Leu Met Ala Gly Leu Asp Gly Ile Ile

370 375 380

Asn Lys Ile His Pro Gly Asp Ala Met Asp Lys Asn Leu Tyr Asp Leu 385 390 395 400

Pro Pro Glu Glu Glu Ala Glu Ile Pro Lys Val Ala Gly Ser Leu Asp

405 410 415

Glu Ala Met Val Ala Leu Asn Glu Asp Arg Glu Phe Leu Thr Arg Gly

420 425 430

Gly Val Phe Thr Asp Asp Ala Ile Asp Ala Tyr Ile Glu Leu Arg Lys

435 440 445

Glu Glu Met Asp Arg Val Arg Met Thr Pro His Pro Val Glu Phe Glu

450 455 460

Leu Tyr Tyr Ser Val 465

<220> Características:

<223> Outras Informações: agslml5

<221> Nome/Chave: CDS

<222> Localização: (1)...(1410)

<400> Seqüência: 29

atg tcc gct gaa cac gtt ttg acg atg ctg aat gag cat gaa gtg aaa 48

Met Ser Ala Glu His Val Leu Thr Met Leu Asn Glu His Glu Val Lys

15 10 15

atg ttt gac ggc tcc gct ate ggt ggt tgg aag ggc ate aac gaa tet 192

<210> SEQ ID NO: 29 <211> Comprimento: 1410 <212> Tipo: DNA

<213> Organismo: Seqüência Artificial Met Phe Asp Gly Ser Ala Ile Gly Gly Trp Lys Gly Ile Asn Glu Ser 50 55 60

gaa gat ttc ctg cgc tcc tcc ggc ate gcg gac acc gtg ctg ttc ggg 384 Glu Asp Phe Leu Arg Ser Ser Gly Ile Ala Asp Thr Val Leu Phe Gly 115 120 125

ate cgc ggt tcc cac gta gcg ate gac gat ate gaa ggc gcc tgg aac 480 Ile Arg Gly Ser His Val Ala Ile Asp Asp Ile Glu Gly Ala Trp Asn 145 150 155 160

aaa ggc ggt tac ttc ccg gtt cca ccg gtc gac tet tcg cag gat ctg 576 Lys Gly Gly Tyr Phe Pro Val Pro Pro Val Asp Ser Ser Gln Asp Leu 180 185 190

gea cac cac cac gaa gtg gcg acc gcc ggt cag aac gaa gtg gea acc 672 Ala His His His Glu Val Ala Thr Ala Gly Gln Asn Glu Val Ala Thr 210 215 220

ggc ggc ctg tet gaa acc gea ctg ttc tac ate ggc ggt ate ate aag 912 Gly Gly Leu Ser Glu Thr Ala Leu Phe Tyr Ile Gly Gly Ile Ile Lys 290 295 300 cac gcc aag gcg ate aac gcg ctg gcc aac ccg acc acc aac tcg tac 960

His Ala Lys Ala Ile Asn Ala Leu Ala Asn Pro Thr Thr Asn Ser Tyr

305 310 315 320

aaa cgt ctg gtg cca ggc tac gaa gcg ccg gtg atg ctg gct tac tcc 1008

Lys Arg Leu Val Pro Gly Tyr Glu Ala Pro Val Met Leu Ala Tyr Ser

325 330 335

gcc cgt aac cgc tcc gcg tcc ate cgt ate ccg gtg gtc gcc age ccg 1056

Ala Arg Asn Arg Ser Ala Ser Ile Arg Ile Pro Val Val Ala Ser Pro

340 345 350

aaa gcg cgc cgc ate gaa gcc cgc ttc ccg gat ccg gcg gct aac cca 1104

Lys Ala Arg Arg Ile Glu Ala Arg Phe Pro Asp Pro Ala Ala Asn Pro

355 360 365

tac ctg tgc ttc gcc gea ctg cta atg gcc ggc ctg gac ggc ate ate 1152

Tyr Leu Cys Phe Ala Ala Leu Leu Met Ala Gly Leu Asp Gly Ile Ile

370 375 380

^Pi aac aag ate cac cct ggc gac gcc atg gac aaa aac ctg tac gac ctg 1200

Asn Lys Ile His Pro Gly Asp Ala Met Asp Lys Asn Leu Tyr Asp Leu

385 390 395 400

ccg ccg gaa gaa gaa gcc gag ate cca aaa gtg igcc ggc tcg ctg gac 1248

Pro Pro Glu Glu Glu Ala Glu Ile Pro Lys Val Ala Gly Ser Leu Asp

405 410 415

gag gcg atg gcc gcg ctg aac gaa gac cgc gag ttc ctg acc cgc ggc 1296

Glu Ala Met Ala Ala Leu Asn Glu Asp Arg Glu Phe Leu Thr Arg Gly

420 425 430

ggc gtg ttc acc gac gat gcg ate gat gcc tac ate gaa ctg cgc aaa 1344

Gly Val Phe Thr Asp Asp Ala Ile Asp Ala Tyr Ile Glu Leu Arg Lys

435 440 445

gaa gag atg gac cgc gtt cgc atg acg cca cac ccg gtc gag ttc gaa 1392

Glu Glu Met Asp Arg Val Arg Met Thr Pro His Pro Val Glu Phe Glu

450 455 460

I

ctg tac tac age gtc taa 1410

Leu Tyr Tyr Ser Val *

465

<210> SEQ ID NO: 30 <211> Comprimento: 4 69 <212> Tipo: PRT

<213> Organismo: Seqüência Artificial

<220> Características:

<223> Outras Informações: AGS1M15

<400> Seqüência: 30

Met Ser Ala Glu His Val Leu Thr Met Leu Asn Glu His Glu Val Lys 1 5 10 15 Phe Val Asp Leu Arg Phe Thr Asp Thr Lys Gly Lys Glu Gln His Val 20 25 30 Thr Ile Pro Ala His Gln Val Asn Ala Asp Phe Phe Glu Glu Gly Lys 35 40 45 Met Phe Asp Gly Ser Ala Ile Gly Gly Trp Lys Gly Ile Asn Glu Ser 50 55 60 Asp Met Val Leu Met Pro Asp Ala Ser Thr Ala Val Leu Asp Pro Phe 65 70 75 80 Phe Glu Glu Pro Thr Leu Ile Ile Arg Cys Asp Ile Leu Glu Pro Gly 85 90 95 Thr Met Gln Gly Tyr Asp Arg Asp Pro Arg Ser Ile Ser Lys Arg Ala 100 105 110 Glu Asp Phe Leu Arg Ser Ser Gly Ile Ala Asp Thr Val Leu Phe Gly 115 120 125 Pro Glu Pro Glu Phe Phe Leu Phe Asp Asp Ile Arg Phe Gly Ser Ser 130 135 140 Ile Arg Gly Ser His Val Ala Ile Asp Asp Ile Glu Gly Ala Trp Asn 145 150 155 160 Ser Gly Thr Lys Tyr Asp Gly Gly Asn Lys Gly His Arg Pro Ala Val 165 170 175 Lys Gly Gly Tyr Phe Pro Val Pro Pro Val Asp Ser Ser Gln Asp Leu 180 185 190 Arg Ser Thr Met Cys Leu Thr Met Glu Glu Met Gly Leu Val Val Glu 195 200 205 Ala His His His Glu Val Ala Thr Ala Gly Gln Asn Glu Val Ala Thr 210 215 220 Arg Phe Asn Thr Met Thr Lys Lys Ala Asp Glu Ile Gln Ile Tyr Lys 225 230 235 240 Tyr Val Val His Asn Val Ala His Ala Phe Gly Lys Thr Ala Thr Phe 245 250 255 Met Pro Lys Pro Met Phe Gly Asp Asn Gly Ser Gly Met His Cys His 260 265 270 Met Ser Leu Ser Lys Asn Gly Thr Asn Leu Phe Ala Gly Asp Lys Tyr 275 280 285 Gly Gly Leu Ser Glu Thr Ala Leu Phe Tyr Ile Gly Gly Ile Ile Lys 290 295 300 His Ala Lys Ala Ile Asn Ala Leu Ala Asn Pro Thr Thr Asn Ser Tyr 305 310 315 320 Lys Arg Leu Val Pro Gly Tyr Glu Ala Pro Val Met Leu Ala Tyr Ser 325 330 335 Ala Arg Asn Arg Ser Ala Ser Ile Arg Ile Pro Val Val Ala Ser Pro 340 345 350 Lys Ala Arg Arg Ile Glu Ala Arg Phe Pro Asp Pro Ala Ala Asn Pro 355 360 365 Tyr Leu Cys Phe Ala Ala Leu Leu Met Ala Gly Leu Asp Gly Ile Ile 370 375 380 Asn Lys Ile His Pro Gly Asp Ala Met Asp Lys Asn Leu Tyr Asp Leu 385 390 395 400 Pro Pro Glu Glu Glu Ala Glu Ile Pro Lys Val Ala Gly Ser Leu Asp 405 410 415 Glu Ala Met Ala Ala Leu Asn Glu Asp Arg Glu Phe Leu Thr Arg Gly 420 425 430 Gly Val Phe Thr Asp Asp Ala Ile Asp Ala Tyr Ile Glu Leu Arg Lys 435 440 445 Glu Glu Met Asp Arg Val Arg Met Thr Pro His Pro Val Glu Phe Glu 450 455 460 Leu Tyr Tyr Ser Val

465

<210> SEQ ID NO: 31

<211> Comprimento: 1410

<212> Tipo: DNA

<213> Organismo: Seqüência Artificial

<220> Características:

<223> Outras Informações: agslml6

<221> Nome/Chave: CDS

<222> Localização: (1)...(1410) <400> Seqüência: 31

atg tcc gct gaa cac gtt ttg acg atg ctg aat gag cat gaa gtg aaa 48

Met Ser Ala Glu His Val Leu Thr Met Leu Asn Glu His Glu Val Lys

1 5 10 15

ttc gta gac ctg cgt ttc act gac acc aag ggt aag gaa cag cac gtg 96

Phe Val Asp Leu Arg Phe Thr Asp Thr Lys Gly Lys Glu Gln His Val

20 25 30

act ate ccg gct cac cag gta aac gcc gac ttc ttc gaa gaa ggt aaa 14 4

Thr Ile Pro Ala His Gln Val Asn Ala Asp Phe Phe Glu Glu Gly Lys

35 40 45

atg ttt gac ggc tcc tet ate ggt ggt tgg aag ggc ate aac gaa tet 192

Met Phe Asp Gly Ser Ser Ile Gly Gly Trp Lys Gly Ile Asn Glu Ser 50 55 60

tcc gaa gaa cct acg ctg ate att cgc tgt gac att ctc gag ccg ggc 288 Ser Glu Glu Pro Thr Leu Ile Ile Arg Cys Asp Ile Leu Glu Pro Gly 85 90 95

tcc ggc aca aaa tac gac ggc ggc aac aaa ggc cac cgt ccg gcg gtg 528 Ser Gly Thr Lys Tyr Asp Gly Gly Asn Lys Gly His Arg Pro. Ala Val 165 170 175

aaa ggc ggt tac ttc ccg gtt cca tcg gtc gac tet tcg cag gat ctg 576 Lys Gly Gly Tyr Phe Pro Val Pro Ser Val Asp Ser Ser Gln Asp Leu 180 185 190

gcg cac cac aac gaa gtg gcg acc gcc agt cag aac gaa gtg gea acc 672 Ala His His Asn Glu Val Ala Thr Ala Ser Gln Asn Glu Val Ala Thr 210 215 220

tac gtg gtg cac aac gtg gea cac gcc ttc ggt aaa acc gcg acc ttc 768 Tyr Val Val His Asn Val Ala His Ala Phe Gly Lys Thr Ala Thr Phe 245 250 255

ggc ggc ctg tct gaa acc gca ctg ttc tac ate ggc ggt ate aac aag 912 Gly Gly Leu Ser Glu Thr Ala Leu Phe Tyr Ile Gly Gly Ile Asn Lys 290 295 300

ggc gtg ttc act gac gat gcg ate gat gcc tac ate gaa ctg cgc aaa 1344 Gly Val Phe Thr Asp Asp Ala Ile Asp Ala Tyr Ile Glu Leu Arg Lys 435 440 445

ctg tac tac age gtc taa 1410

Leu Tyr Tyr Ser Val *

465

<210> SEQ ID NO: 32 <211> Comprimento: 4 69 <212> Tipo: PRT <213> Organismo: Seqüência Artificial

<220> Características:

<223> Outras Informações: AGSIMl6

<400> Seqüência: 32

Met Ser Ala Glu His Val Leu Thr Met Leu Asn Glu His Glu Val Lys 1 5 10 15 Phe Val Asp Leu Arg Phe Thr Asp Thr Lys Gly Lys Glu Gln His Val 20 25 30 Thr Ile Pro Ala His Gln Val Asn Ala Asp Phe Phe Glu Glu Gly Lys 35 40 45 Met Phe Asp Gly Ser Ser Ile Gly Gly Trp Lys Gly Ile Asn Glu Ser 50 55 60 Asp Met Val Leu Met Pro Asp Ala Ser Thr Ala Val Leu Asp Pro Phe 65 70 75 80 Ser Glu Glu Pro Thr Leu Ile Ile Arg Cys Asp Ile Leu Glu Pro Gly 85 90 95 Thr Met Gln Gly Tyr Asp Arg Asp Pro Arg Ser Ile Ser Lys Arg Ala 100 105 110 Glu Asp Phe Leu Arg Ser Ser Gly Ile Ala Asp Thr Val Leu Phe Gly 115 120 125 Pro Glu Pro Glu Phe Phe Leu Phe Asp Asp -I- Ί ^ J-±G Ax y Phe Gly Ser Ser 130 135 140 Ile Arg Gly Ser His Val Ala Ile Asp Asp Ile Glu Gly Ala Trp Asn 145 150 155 160 Ser Gly Thr Lys Tyr Asp Gly Gly Asn Lys Gly His Arg Pro Ala Val 165 170 175 Lys Gly Gly Tyr Phe Pro Val Pro Ser Val Asp Ser Ser Gln Asp Leu 180 185 190 Arg Ser Thr Met Cys Leu Thr Met Glu Glu Met Gly Leu Val Val Glu 195 200 205 Ala His His Asn Glu Val Ala Thr Ala Ser Gln Asn Glu Val Ala Thr 210 215 220 Arg Phe Asn Thr Met Thr Lys Lys Ala Asp Glu Ile Gln Ile Tyr Lys 225 230 235 240 Tyr Val Val His Asn Val Ala His Ala Phe Gly Lys Thr Ala Thr Phe 245 250 255 Met Pro Lys Pro Met Phe Gly Asp Asn Gly Ser Gly Met His Cys His 260 265 270 Met Ser Leu Ser Lys Asn Gly Thr Asn Leu Phe Ala Gly Asp Lys Tyr 275 280 285 Gly Gly Leu Ser Glu Thr Ala Leu Phe Tyr Ile Gly Gly Ile Asn Lys 290 295 300 His Ala Lys Ala Ile Asn Ala Leu Ala Asn Pro Thr Thr Asn Ser Tyr 305 310 315 320 Lys Arg Leu Val Pro Gly Tyr Glu Ala Pro Val Met Leu Ala Tyr Ser 325 330 335 Ala Arg Asn Arg Ser Ala Ser Ile Arg Ile Pro Val Val Ala Ser Pro 340 345 350 Lys Ala Arg Arg Ile Glu Ala Arg Phe Pro Asp Pro Ala Ala Asn Pro 355 360 365 Tyr Leu Cys Phe Ala Ala Leu Leu Met Ala Gly Leu Asp Gly Ile Ile 370 375 380 Asn Lys Ile His Pro Gly Asp Ala Met Asp Lys Asn Leu Tyr Asp Leu 385 390 395 400 Pro Pro Glu Glu Glu Ala Glu Ile Pro Lys Val Ala Gly Ser Leu Asp 405 410 415 Glu Ala Met Ala Ala Leu Asn Glu Asp Arg Glu Phe Leu Thr Arg Gly 420 425 430 Gly Val Phe Thr Asp Asp Ala Ile Asp Ala Tyr Ile Glu Leu Arg Lys 435 440 445 Glu Glu Met Asp Arg Val Arg Met Thr Pro His Pro Val Glu Phe Glu 450 455 460

Leu Tyr Tyr Ser Val 465

<210> SEQ ID NO: 33 <211> Comprimento: 1410 <212> Tipo: DNA

<213> Organismo: Seqüência Artificial

<220> Características:

<223> Outras Informações: agslml7

<221> Nome/Chave: CDS

<222> Localização: {1) ... (1410)

<400> Seqüência: 33

atg tcc gct gaa cac gtt ttg acg atg ctg aat gag cat gaa gtg aaa 48

Met Ser Ala Glu His Val Leu Thr Met Leu Asn Glu His Glu Val Lys 1 5 10 15

cgt tcc acc atg tgt ctg acc atg gaa gag atg ggc ctg gtg gtt gaa 624

Arg Ser Thr Met Cys Leu Thr Met Glu Glu Met Gly Leu Val Val Glu

195 200 205

gcg cac cac acc gag gca gcg acc gct age cag aac gaa gtg gea acc 672

Ala His His Thr Glu Ala Ala Thr Ala Ser Gln Asn Glu Val Ala Thr

210 215 220

cgc ttc aac acc atg acc aag aaa gcc gac gaa att cag ate tat aag 720

Arg Phe Asn Thr Met Thr Lys Lys Ala Asp Glu Ile Gln Ile Tyr Lys 225 230 235 240

tac gtg gtg cac aac gtg gca cac gcc ttc ggt aaa acc gcg acc ttc 768

Tyr Val Val His Asn Val Ala His Ala Phe Gly Lys Thr Ala Thr Phe 245 250 255

atg ccg aag ccc atg ttc ggc gac aac ggt tcc ggc atg cac tgc cac 816

Met Pro Lys Pro Met Phe Gly Asp Asn Gly Ser Gly Met His Cys His

260 265 270

atg tcg ctg tcc aag aac ggc acc aac ctg ttc gcc ggc gac aaa tac 8 64

Met Ser Leu Ser Lys Asn Gly Thr Asn Leu Phe Ala Gly Asp Lys Tyr

275 280 285

ggc ggc ctg tet gaa acc gca ctg ttc tac ate ggc ggt ate aac aag 912

Gly Gly Leu Ser Glu Thr Ala Leu Phe Tyr Ile Gly Gly Ile Asn Lys

290 295 300

cac gcc aag gcg ate aac gcg ctg gcc aac ccg acc acc aac tcg tac 960

His Ala Lys Ala Ile Asn Ala Leu Ala Asn Pro Thr Thr Asn Ser Tyr 305 310 315 320

aaa cgt ctg gtg cca ggc tac gaa gcg ccg gtg atg ctg gct tac tcc 1008

Lys Arg Leu Val Pro Gly Tyr Glu Ala Pro Val Met Leu Ala Tyr Ser 325 330 335

gcc cgt aac cgc tcc gcg tcc ate cgt ate ccg gtg gtc gcc age ccg 1056

Ala Arg Asn Arg Ser Ala Ser Ile Arg Ile Pro Val Val Ala Ser Pro

340 345 350

aaa gcg cgc cgc ate gaa gcc cgc ttc ccg gat ccg gcg gct aac cca 1104

Lys Ala Arg Arg Ile Glu Ala Arg Phe Pro Asp Pro Ala Ala Asn Pro

355 360 365

tac ctg tgc ttc gcc gca ctg ctg atg gcc ggc ctg gac ggc ate ate 1152

Tyr Leu Cys Phe Ala Ala Leu Leu Met Ala Gly Leu Asp Gly Ile Ile

370 375 380

aac aag ate cac cct ggc gac gcc atg gac aaa aac ctg tac gac ctg 1200

Asn Lys Ile His Pro Gly Asp Ala Met Asp Lys Asn Leu Tyr Asp Leu 385 390 395 400

ccg ccg gaa gaa gaa gcc gag ate cca aaa gtg gcc ggc tcg ctg gac 1248

Pro Pro Glu Glu Glu Ala Glu Ile Pro Lys Val Ala Gly Ser Leu Asp 405 410 415

gag gcg atg gcc gcg ctg aac gaa gac cgc gag ttc ctg acc cgc ggc 1296

Glu Ala Met Ala Ala Leu Asn Glu Asp Arg Glu Phe Leu Thr Arg Gly

420 425 430

ggc gtg ttc act gac gat gcg ate gat gcc tac ate gaa ctg cgc aaa

1344 Gly Val Phe Thr Asp Asp Ala Ile Asp Ala Tyr Ile Glu Leu Arg Lys 435 440 445

ctg tac tac age gtc taa 1410

Leu Tyr Tyr Ser Val *

465

<210> SEQ ID NO: 34 <211> Comprimento: 469 <212> Tipo: PRT

<213> Organismo: Seqüência Artificial

<220> Características:

<223> Outras Informações: AGS1M17

<400> Seqüência: 34

Met Ser Ala Glu His Val Leu Thr Met Leu Asn Glu His Glu Val Lys

1 5 10 15

Phe Val Asp Leu Arg Phe Thr Asp Thr Lys Gly Lys Glu Gln His Val

20 25 30

Thr Ile Pro Ala His Gln Val Asn Ala Asp Phe Phe Glu Glu Gly Lys

35 40 45

Met Phe Asp Gly Ser Ser Ile Gly Gly Trp Lys Gly Ile Asn Glu Ser

50 55 60

Asp Met Val Leu Met Pro Asp Ala Ser Thr Ala Val Leu Asp Pro Phe 65 70 75 80

Ser Glu Glu Pro Thr Leu Ile Ile Arg Cys Asp Ile Leu Glu Pro Gly

85 90 95

Thr Met Gln Gly Tyr Asp Arg Asp Pro Arg Ser Ile Ser Lys Arg Ala

100 105 110

Glu Asp Phe Leu Arg Ser Ser Gly Ile Ala Asp Thr Val Leu Phe Gly

115 120 125

Pro Glu Pro Glu Phe Phe Leu Phe Asp Asp Ile Arg Phe Gly Ser Ser

130 135 140

Ile Arg Gly Ser His Val Ala Ile Asp Asp Ile Glu Gly Ala Trp Asn 145 150 155 160

Ser Gly Thr Lys Tyr Asp Gly Gly Asn Lys Gly His Arg Pro Ala Val

165 170 175

Lys Gly Gly Tyr Phe Pro Val Pro Ser Val Asp Ser Ser Gln Asp Leu

180 185 190

Arg Ser Thr Met Cys Leu Thr Met Glu Glu Met Gly Leu Val Val Glu

195 200 205

Ala His His Thr Glu Ala Ala Thr Ala Ser Gln Asn Glu Val Ala Thr

210 215 220

Arg Phe Asn Thr Met Thr Lys Lys Ala Asp Glu Ile Gln Ile Tyr Lys 225 230 235 240

Tyr Val Val His Asn Val Ala His Ala Phe Gly Lys Thr Ala Thr Phe

245 250 255

Met Pro Lys Pro Met Phe Gly Asp Asn Gly Ser Gly Met His Cys His

260 265 270

Met Ser Leu Ser Lys Asn Gly Thr Asn Leu Phe Ala Gly Asp Lys Tyr

275 280 285

Gly Gly Leu Ser Glu Thr Ala Leu Phe Tyr Ile Gly Gly Ile Asn Lys

290 295 300

His Ala Lys Ala Ile Asn Ala Leu Ala Asn Pro Thr Thr Asn Ser Tyr 305 310 315 320

Lys Arg Leu Val Pro Gly Tyr Glu Ala Pro Val Met Leu Ala Tyr Ser 325 330 335 Ala Arg Asn Arg Ser 340

Lys Ala Arg Arg Ile 355

Tyr Leu Cys Phe Ala 370

Asn Lys Ile His Pro 385

Pro Pro Glu Glu Glu 405

Glu Ala Met Ala Ala 420

Gly Val Phe Thr Asp 435

Glu Glu Met Asp Arg 450

Leu Tyr Tyr Ser Val 465

Ala Ser Ile Arg Ile Pro 345

Glu Ala Arg Phe Pro Asp 360

Ala Leu Leu Met Ala Gly 375

Gly Asp Ala Met Asp Lys 390 395

Ala Glu Ile Pro Lys Val 410

Leu Asn Glu Asp Arg Glu 425

Asp Ala Ile Asp Ala Tyr 440

Val Arg Met Thr Pro His 455

Val Val Ala Ser Pro 350

Pro Ala Ala Asn Pro 365

Leu Asp Gly Ile Ile 380

Asn Leu Tyr Asp Leu 400

Ala Gly Ser Leu Asp 415

Phe Leu Thr Arg Gly 430

Ile Glu Leu Arg Lys 445

Pro Val Glu Phe Glu 460

<210> SEQ ID NO: 35 <211> Comprimento: 1410 <212> Tipo: DNA

<213> Organismo: Següência Artificial

<220> Características:

<223> Outras Informações: agslml8

<221> Nome/Chave: CDS

<222> Localização: (1) ... (1410)

<400> Seqüência: 35

atg tcc gct gaa cac gtt ttg acg atg ctg aat gag cat gaa gtg aaa 48

Met Ser Ala Glu His Val Leu Thr Met Leu Asn Glu His Glu Val Lys

15 10 15

ttc gta gac ctg cgt ttc act gac acc aag ggt aag gaa cag cac gtg 96

Phe Val Asp Leu Arg Phe Thr Asp Thr Lys Gly Lys Glu Gln His Val

20 25 30

act ate ccg gct cac cag gta aac gcc gac ttc ttc gaa gaa ggt aaa 144

Thr Ile Pro Ala His Gln Val Asn Ala Asp Phe Phe Glu Glu Gly Lys

35 40 45

atg ttt gac ggc tcc tet ate ggt ggt tgg aag ggc ate aac gaa tet 192

Met Phe Asp Gly Ser Ser Ile Gly Gly Trp Lys Gly Ile Asn Glu Ser

50 55 60

gac atg gtg ctg atg ccg gac gcc age acg gcg gtt ctg gat ccg ttc 240

Asp Met Val Leu Met Pro Asp Ala Ser Thr Ala Val Leu Asp Pro Phe

65 70 75 80

tcc gaa gaa cct acg ctg ate att cgc tgt gac att ctc gag ccg ggc 288

Ser Glu Glu Pro Thr Leu Ile Ile Arg Cys Asp Ile Leu Glu Pro Gly

85 90 95

acc atg caa ggc tac gat cgc gac ccg cgt tcc ate tcc aaa cgc gcc 336

Thr Met Gln Gly Tyr Asp Arg Asp Pro Arg Ser Ile Ser Lys Arg Ala

100 105 110

gaa gac ttc ctg cgc tcc tcc ggc ate gcg gac acc gtg ctg ttc ggg 384

Glu Asp Phe Leu Arg Ser Ser Gly Ile Ala Asp Thr Val Leu Phe Gly

115 120 125 cca gag cct gag ttc ttc ctg ttc gac gac ate cgc ttc ggc age age 432

Pro Glu Pro Glu Phe Phe Leu Phe Asp Asp Ile Arg Phe Gly Ser Ser

130 135 140

ate cgc ggt tcc cac gtg gcg ate gac gat ate gaa ggc gcc tgg aac 4 80

Ile Arg Gly Ser His Val Ala Ile Asp Asp Ile Glu Gly Ala Trp Asn

145 150 155 160

tcc ggc aca aaa tac gac ggc ggc aac aaa ggc cac cgt ccg gcg gtg 528

Ser Gly Thr Lys Tyr Asp Gly Gly Asn Lys Gly His Arg Pro Ala Val

165 170 175

aaa ggc ggt tac ttc ccg gtt cca tcg gtc gac tet tcg cag gat ctg 576

Lys Gly Gly Tyr Phe Pro Val Pro Ser Val Asp Ser Ser Gln Asp Leu

180 185 190

cgt tcc acc atg tgt ctg acc atg gaa gag atg ggc ctg gtg gtt gaa 624

Arg Ser Thr Met Cys Leu Thr Met Glu Glu Met Gly Leu Val Val Glu

195 200 205

gcg cac cac acg gaa tcc gcg acc gct age cag aac gaa gtg gea acc 672

Ala His His Thr Glu Ser Ala Thr Ala Ser Gln Asn Glu Val Ala Thr

210 215 220

cgc ttc aac acc atg acc aag aaa gcc gac gaa att cag ate tat aag 720

Arg Phe Asn Thr Met Thr Lys Lys Ala Asp Glu Ile Gln Ile Tyr Lys

225 230 235 240

tac gtg gtg cac aac gtg gea cac gcc ttc ggt aaa acc gcg acc ttc 7 68

Tyr Val Val His Asn Val Ala His Ala Phe Gly Lys Thr Ala Thr Phe

245 250 255

atg ccg aag ccc atg ttc ggc gac aac ggt tcc ggc atg cac tgc cac 816

Met Pro Lys Pro Met Phe Gly Asp Asn Gly Ser Gly Met His Cys His

260 265 270

atg tcg ctg tcc aag aac ggc acc aac ctg ttc gcc ggc gac aaa tac 864

Met Ser Leu Ser Lys Asn Gly Thr Asn Leu Phe Ala Gly Asp Lys Tyr

275 280 285

ggc ggc ctg tet gaa acc gea ctg ttc tac ate ggc ggt ate aac aag 912

Gly Gly Leu Ser Glu Thr Ala Leu Phe Tyr Ile Gly Gly Ile Asn Lys

290 295 300

cac gcc aag gcg ate aac gcg ctg gcc aac ccg acc acc aac tcg tac 960

His Ala Lys Ala Ile Asn Ala Leu Ala Asn Pro Thr Thr Asn Ser Tyr

305 310 315 320

aaa cgt ctg gtg cca ggc tac gaa gcg ccg gtg atg ctg gct tac tcc 1008

Lys Arg Leu Val Pro Gly Tyr Glu Ala Pro Val Met Leu Ala Tyr Ser

325 330 335

gcc cgt aac cgc tcc gcg tcc ate cgt ate ccg gtg gtc gcc age ccg 1056

Ala Arg Asn Arg Ser Ala Ser Ile Arg Ile Pro Val Val Ala Ser Pro

340 345 350

aaa gcg cgc cgc ate gaa gcc cgc ttc ccg gat ccg gcg gct aac cca 1104

Lys Ala Arg Arg Ile Glu Ala Arg Phe Pro Asp Pro Ala Ala Asn Pro

355 360 365

1152 370 375 380

aac aag ate cac cct ggc gac gcc atg gac aaa aac ctg tac gac ctg 1200

Asn Lys Ile His Pro Gly Asp Ala Met Asp Lys Asn Leu Tyr Asp Leu

385 390 395 400

ccg ceg gaa Pro Pro Glu

gag gcg atg Glu Ala Met

ggc gtg ttc Gly Val Phe 435

gaa gag atg Glu Glu Met 450

ctg tac tac Leu Tyr Tyr 465

gaa gaa gcc Glu Glu Ala 405

gcc gcg ctg Ala Ala Leu 420

act gac gat Thr Asp Asp

gac cgc gtt Asp Arg Val

age gtc taa Ser Val *

gag ate cca Glu Ile Pro

aac gaa gac Asn Glu Asp 425

gcg ate gat Ala Ile Asp 440

cgc atg acg Arg Met Thr 455

aaa gtg gcc Lys Val Ala 410

cgc gag ttc Arg Glu Phe

gcc tac ate Ala Tyr Ile

cca cac ccg Pro His Pro 460

ggc tcg ctg Gly Ser Leu 415

ctg acc cgc Leu Thr Arg 430

gaa ctg cgc Glu Leu Arg 445

gtc gag ttc Val Glu Phe

gac 1248 Asp

ggc 1296 Gly

aaa 1344 Lys

gaa 1392 Glu

1410

<210> SEQ ID NO: 36 <211> Comprimento: 469 <212> Tipo: PRT

<213> Organismo: Seqüência Artificial

<220> Características:

<223> Outras Informações: AGS1M18

<400> Seqüência: 36

Met Ser Ala Glu His Val Leu Thr Met Leu Asn Glu His Glu Val Lys 1 5 10 15 Phe Val Asp Leu Arg Phe Thr Asp Thr Lys Gly Lys Glu Gln His Val 20 25 30 Thr Ile Pro Ala His Gln Val Asn Ala Asp Phe Phe Glu Glu Gly Lys 35 40 45 Met Phe Asp Gly Ser Ser Ile Gly Gly Trp Lys Gly Ile Asn Glu Ser 50 55 60 Asp Met Val Leu Met Pro Asp Ala Ser Thr Ala Val Leu Asp Pro Phe 65 70 75 80 Ser Glu Glu Pro Thr Leu Ile Ile Arg Cys Asp Ile Leu Glu Pro Gly 85 90 95 Thr Met Gln Gly Tyr Asp Arg Asp Pro Arg Ser Ile Ser Lys Arg Ala 100 105 110 Glu Asp Phe Leu Arg Ser Ser Gly Ile Ala Asp Thr Val Leu Phe Gly 115 120 125 Pro Glu Pro Glu Phe Phe Leu Phe Asp Asp Ile Arg Phe Gly Ser Ser 130 135 140 Ile Arg Gly Ser His Val Ala Ile Asp Asp Ile Glu Gly Ala Trp Asn 145 150 155 160 Ser Gly Thr Lys Tyr Asp Gly Gly Asn Lys Gly His Arg Pro Ala Val 165 170 175 Lys Gly Gly Tyr Phe Pro Val Pro Ser Val Asp Ser Ser Gln Asp Leu 180 185 190 Arg Ser Thr Met Cys Leu Thr Met Glu Glu Met Gly Leu Val Val Glu 195 200 205 Ala His His Thr Glu Ser Ala Thr Ala Ser Gln Asn Glu Val Ala Thr 210 215 220

Arg Phe Asn Thr Met Thr Lys Lys Ala Asp Glu Ile Gln Ile Tyr Lys 225 230 235 240

Tyr Val Val His Asn Val Ala His Ala Phe Gly Lys Thr Ala Thr Phe

245 250 255

Met Pro Lys Pro Met Phe Gly Asp Asn Gly Ser Gly Met His Cys His

260 265 270

Met Ser Leu Ser Lys Asn Gly Thr Asn Leu Phe Ala Gly Asp Lys Tyr

275 280 285

Gly Gly Leu Ser Glu Thr Ala Leu Phe Tyr Ile Gly Gly Ile Asn Lys

290 295 300

His Ala Lys Ala Ile Asn Ala Leu Ala Asn Pro Thr Thr Asn Ser Tyr 305 310 315 320

Lys Arg Leu Val Pro Gly Tyr Glu Ala Pro Val Met Leu Ala Tyr Ser

325 330 335

Ala Arg Asn Arg Ser Ala Ser Ile Arg Ile Pro Val Val Ala Ser Pro

340 345 350

Lys Ala Arg Arg Ile Glu Ala Arg Phe Pro Asp Pro Ala Ala Asn Pro

355 360 365

Tyr Leu Cys Phe Ala Ala Leu Leu Met Ala Gly Leu Asp Gly Ile Ile

370 375 380

Asn Lys Ile His Pro Gly Asp Ala Met Asp Lys Asn Leu Tyr Asp Leu 385 390 395 400

Pro Pro Glu Glu Glu Ala Glu Ile Pro Lys Val Ala Gly Ser Leu Asp

405 410 415

Glu Ala Met Ala Ala Leu Asn Glu Asp Arg Glu Phe Leu Thr Arg Gly

420 425 430

Gly Val Phe Thr Asp Asp Ala Ile Asp Ala Tyr Ile Glu Leu Arg Lys

435 440 445

Glu Glu Met Asp Arg Val Arg Met Thr Pro His Pro Val Glu Phe Glu

450 455 460

Leu Tyr Tyr Ser Val 465

<210> SEQ ID NO: 37 <211> Comprimento: 1410 <212> Tipo: DNA

<213> Organismo: Seqüência Artificial

<220> Características:

<223> Outras Informações: agslml9

<221> Nome/Chave: CDS

<222> Localização: (1)..-(1410)

<400> Seqüência: 37

atg tcc gct gaa cac gtt ttg acg atg ctg aat gag cat gaa gtg aaa 48

Met Ser Ala Glu His Val Leu Thr Met Leu Asn Glu His Glu Val Lys 15 10 15

atg ttt gac ggc tcc tet 'ate ggt ggt tgg aag ggc ate aac gaa tet 192 Met Phe Asp Gly Ser Ser Ile Gly Gly Trp Lys Gly Ile Asn Glu Ser 50 55 60 gac atg gtg ctg atg ccg gac gcc age acg gcg gtt ctg gat ccg ttc 240

Asp Met Val Leu Met Pro Asp Ala Ser Thr Ala Val Leu Asp Pro Phe

65 70 75 80

tcc gaa gaa cct acg ctg ate att cgc tgt gac att ctc gag ccg ggc 288

Ser Glu Glu Pro Thr Leu Ile Ile Arg Cys Asp Ile Leu Glu Pro Gly 85 90 95

acc atg caa ggc tac gat cgc gac ccg cgt tcc ate tcc aaa cgc gcc 336

Thr Met Gln Gly Tyr Asp Arg Asp Pro Arg Ser Ile Ser Lys Arg Ala

100 105 110

gaa gac ttc ctg cgc tcc tcc ggc ate gcg gac acc gtg ctg ttc ggg 384

Glu Asp Phe Leu Arg Ser Ser Gly Ile Ala Asp Thr Val Leu Phe Gly

115 120 125

cca gag cct gag ttc ttc ctg ttc gac gac ate cgc ttc ggc age age 4 32

Pro Glu Pro Glu Phe Phe Leu Phe Asp Asp Ile Arg Phe Gly Ser Ser

130 135 140

ate cgc ggt tcc cac gtg gcg ate gac gat ate gaa ggc gcc tgg aac 480

Ile Arg Gly Ser His Val Ala Ile Asp Asp Ile Glu Gly Ala Trp Asn

145 150 155 160

tcc ggc aca aaa tac gac ggc ggc aac aaa ggc cac cgt ccg gcg gtg 528

Ser Gly Thr Lys Tyr Asp Gly Gly Asn Lys Gly His Arg Pro Ala Val 165 170 175

aaa ggc ggt tac ttc ccg gtt cca tcg gtc gac tet tcg cag gat ctg 576

Lys Gly Gly Tyr Phe Pro Val Pro Ser Val Asp Ser Ser Gln Asp Leu

180 185 190

cgt tcc acc atg tgt ctg acc atg gaa gag atg ggc ctg gtg gtt gaa 624

Arg Ser Thr Met Cys Leu Thr Met Glu Glu Met Gly Leu Val Val Glu

195 200 205

gcg cac cac tcc gag gcc gcg acc gct age cag aac gaa gtg gea acc 672

Ala His His Ser Glu Ala Ala Thr Ala Ser Gln Asn Glu Val Ala Thr

210 215 220

cgc ttc aac acc atg acc aag aaa gcc gac gaa att cag ate tat aag 720

Arg Phe Asn Thr Met Thr Lys Lys Ala Asp Glu Ile Gln Ile Tyr Lys

225 230 235 240

tac gtg gtg cac aac gtg gea cac gcc ttc ggt aaa acc gcg acc ttc 768

Tyr Val Val His Asn Val Ala His Ala Phe Gly Lys Thr Ala Thr Phe 245 250 255

atg ccg aag ccc atg ttc ggc gac aac ggt tcc ggc atg cac tgc cac 816

Met Pro Lys Pro Met Phe Gly Asp Asn Gly Ser Gly Met His Cys His

260 265 270

atg tcg ctg tcc aag aac ggc acc aac ctg ttc gcc ggc gac aaa tac 864

Met Ser Leu Ser Lys Asn Gly Thr Asn Leu Phe Ala Gly Asp Lys Tyr

275 280 285

ggc ggc ctg tet gaa acc gea ctg ttc tac ate ggc ggt ate aac aag 912

Gly Gly Leu Ser Glu Thr Ala Leu Phe Tyr Ile Gly Gly Ile Asn Lys

290 295 300

cac gcc aag gcg ate aac gcg ctg gcc aac ccg acc acc aac tcg tac 960

His Ala Lys Ala Ile Asn Ala Leu Ala Asn Pro Thr Thr Asn Ser Tyr

305 310 315 320 aaa cgt ctg gtg cca ggc tac gaa gcg ccg gtg atg ctg gct tac tcc 1008

Lys Arg Leu Val Pro Gly Tyr Glu Ala Pro Val Met Leu Ala Tyr Ser

325 330 335

gcc cgt aac cgc tcc gcg tcc ate cgt ate ccg gtg gtc gcc age ccg 1056

Ala Arg Asn Arg Ser Ala Ser Ile Arg Ile Pro Val Val Ala Ser Pro

340 345 350

aaa gcg cgc cgc ate gaa gcc cgc ttc ccg gat ccg gcg gct aac cca 1104

Lys Ala Arg Arg Ile Glu Ala Arg Phe Pro Asp Pro Ala Ala Asn Pro

355 360 365

tac ctg tgc ttc gcc gea ctg ctg atg gcc ggc ctg gac ggc ate ate 1152

Tyr Leu Cys Phe Ala Ala Leu Leu Met Ala Gly Leu Asp Gly Ile Ile

370 375 380

aac aag ate cac cct ggc gac gcc atg gac aaa aac ctg tac gac ctg 1200

Asn Lys Ile His Pro Gly Asp Ala Met Asp Lys Asn Leu Tyr Asp Leu

385 390 395 400

ccg ccg gaa gaa gaa gcc gag ate cca aaa gtg gcc ggc tcg ctg gac 124 8

Pro Pro Glu Glu Glu Ala Glu Ile Pro Lys Val Ala Gly Ser Leu Asp

405 410 415

gag gcg atg gcc gcg ctg aac gaa gac cgc gag ttc ctg acc cgc ggc 1296

Glu Ala Met Ala Ala Leu Asn Glu Asp Arg Glu Phe Leu Thr Arg Gly

420 425 430

ggc gtg ttc act gac gat gcg ate gat gcc tac ate gaa ctg cgc aaa 1344

Gly Val Phe Thr Asp Asp Ala Ile Asp Ala Tyr Ile Glu Leu Arg Lys

435 440 445

gaa gag atg gac cgc gtt cgc atg acg cca cac ccg gtc gag ttc gaa 1392

Glu Glu Met Asp Arg Val Arg Met Thr Pro His Pro Val Glu Phe Glu

450 455 460

ctg tac tac age gtc taa 1410

Leu Tyr Tyr Ser Val *

465

<210> SEQ ID NO: 38 <211> Comprimento: 469 <212> Tipo: PRT

<213> Organismo: Seqüência Artificial

<220> Características:

<223> Outras Informações: AGSIMl9

<400> Seqüência: 38

Met Ser Ala Glu His Val Leu Thr Met Leu Asn Glu His Glu Val Lys

15 10 15

Phe Val Asp Leu Arg Phe Thr Asp Thr Lys Gly Lys Glu Gln His Val

20 25 30

Thr Ile Pro Ala His Gln Val Asn Ala Asp Phe Phe Glu Glu Gly Lys

35 40 45

Met Phe Asp Gly Ser Ser Ile Gly Gly Trp Lys Gly Ile Asn Glu Ser

50 55 60

Asp Met Val Leu Met Pro Asp Ala Ser Thr Ala Val Leu Asp Pro Phe 65 70 75 80

Ser Glu Glu Pro Thr Leu Ile Ile Arg Cys Asp Ile Leu Glu Pro Gly 85 90 95 Thr Met Gln Gly Tyr Asp Arg Asp Pro Arg Ser Ile Ser Lys Arg Ala 100 105 110 Glu Asp Phe Leu Arg Ser Ser Gly Ile Ala Asp Thr Val Leu Phe Gly 115 120 125 Pro Glu Pro Glu Phe Phe Leu Phe Asp Asp Ile Arg Phe Gly Ser Ser 130 135 140 Ile Arg Gly Ser His Val Ala Ile Asp Asp Ile Glu Gly Ala Trp Asn 145 150 155 160 Ser Gly Thr Lys Tyr Asp Gly Gly Asn Lys Gly His Arg Pro Ala Val 165 170 175 Lys Gly Gly Tyr Phe Pro Val Pro Ser Val Asp Ser Ser Gln Asp Leu 180 185 190 Arg Ser Thr Met Cys Leu Thr Met Glu Glu Met Gly Leu Val Val Glu 195 200 205 Ala His His Ser Glu Ala Ala Thr Ala Ser Gln Asn Glu Val Ala Thr 210 215 220 Arg Phe Asn Thr Met Thr Lys Lys Ala Asp Glu Ile Gln Ile Tyr Lys 225 230 235 240 Tyr Val Val His Asn Val Ala His Ala Phe Gly Lys Thr Ala Thr Phe 245 250 255 Met Pro Lys Pro Met Phe Gly Asp Asn Gly Ser Gly Met His Cys His 260 265 270 Met Ser Leu Ser Lys Asn Gly Thr Asn Leu Phe Ala Gly Asp Lys Tyr 275 280 285 Gly Gly Leu Ser Glu Thr Ala Leu Phe Tyr Ile Gly Gly Ile Asn Lys 290 295 300 His Ala Lys Ala Ile Asn Ala Leu Ala Asn Pro Thr Thr Asn Ser Tyr 305 310 315 320 Lys Arg Leu Val Pro Gly Tyr Glu Ala Pro Val Met Leu Ala Tyr Ser 325 330 335 Ala Arg Asn Arg Ser Ala Ser Ile Arg Ile Pro Val Val Ala Ser Pro 340 345 350 Lys Ala Arg Arg Ile Glu Ala Arg Phe Pro Asp Pro Ala Ala Asn Pro 355 360 365 Tyr Leu Cys Phe Ala Ala Leu Leu Met Ala Gly Leu Asp Gly Ile Ile 370 375 380 Asn Lys Ile His Pro Gly Asp Ala Met Asp Lys Asn Leu Tyr Asp Leu 385 390 395 400 Pro Pro Glu Glu Glu Ala Glu Ile Pro Lys Val Ala Gly Ser Leu Asp 405 410 415 Glu Ala Met Ala Ala Leu Asn Glu Asp Arg Glu Phe Leu Thr Arg Gly 420 425 430 Gly Val Phe Thr Asp Asp Ala Ile Asp Ala Tyr Ile Glu Leu Arg Lys 435 440 445 Glu Glu Met Asp Arg Val Arg Met Thr Pro His Pro Val Glu Phe Glu 450 455 460 Leu Tyr Tyr Ser Val

465

<210> SEQ ID NO: 39 <211> Comprimento: 1410 <212> Tipo: DNA

<213> Organismo: Seqüência Artificial

<220> Características:

<223> Outras Informações: agslm20

<221> Nome/Chave: CDS

<222> Localização: (1) ... (1410)

<400> Seqüência: 39

atg tcc gct gaa cac gtt ttg acg atg ctg aat gag cat gaa gtg aaa Met Ser Ala Glu His Val Leu Thr Met Leu Asn Glu His Glu Val Lys 1 5 10 15

ttc gta gac ctg cgt ttc act gac acc aag ggt aag gaa cag cac gtg 96

Phe Val Asp Leu Arg Phe Thr Asp Thr Lys Gly Lys Glu Gln His Val 20 25 30

act ate ccg gct cac cag gta aac gcc gac ttc ttc gaa gaa ggt aaa 144

Thr Ile Pro Ala His Gln Val Asn Ala Asp Phe Phe Glu Glu Gly Lys 35 40 45

atg ttt gac ggc tcc tet ate ggt ggt tgg aag ggc ate aac gaa tet 192

Met Phe Asp Gly Ser Ser Ile Gly Gly Trp Lys Gly Ile Asn Glu Ser 50 55 60

gac atg gtg ctg atg ccg gac gcc age acg gcg gtt ctg gat ccg ttc 240

Asp Met Val Leu Met Pro Asp Ala Ser Thr Ala Val Leu Asp Pro Phe 65 70 75 80

tcc gaa gaa cct acg ctg ate att cgc tgt gac att ctc gag ccg ggc 288

Ser Glu Glu Pro Thr Leu Ile Ile Arg Cys Asp Ile Leu Glu Pro Gly 85 90 95

acc atg caa ggc tac gat cgc gac ccg cgt tcc ate tcc aaa cgc gcc 336

Thr Met Gln Gly Tyr Asp Arg Asp Pro Arg Ser Ile Ser Lys Arg Ala 100 105 110

gaa gac ttc ctg cgc tcc tcc ggc ate gcg gac acc gtg ctg ttc ggg 384

Glu Asp Phe Leu Arg Ser Ser Gly Ile Ala Asp Thr Val Leu Phe Gly 115 120 125

cca gag cct gag ttc ttc ctg ttc gac gac ate cgc ttc ggc age age 432

Pro Glu Pro Glu Phe Phe Leu Phe Asp Asp Ile Arg Phe Gly Ser Ser 130 135 140

ate cgc ggt tcc cac gtg gcg ate gac gat ate gaa ggc gcc tgg aac 480

Ile Arg Gly Ser His Val Ala Ile Asp Asp Ile Glu Gly Ala Trp Asn 145 150 155 160

tcc ggc aca aaa tac gac ggc ggc aac aaa ggc cac cgt ccg gcg gtg 528

Ser Gly Thr Lys Tyr Asp Gly Gly Asn Lys Gly His Arg Pro Ala Val

165 170 175

aaa ggc ggt tac ttc ccg gtt cca tcg gtc gac tet tcg cag gat ctg 576

Lys Gly Gly Tyr Phe Pro Val Pro Ser Val Asp Ser Ser Gln Asp Leu 180 185 190

cgt tcc acc atg tgt ctg acc atg gaa gag atg ggc ctg gtg gtt gaa 624

Arg Ser Thr Met Cys Leu Thr Met Glu Glu Met Gly Leu Val Val Glu 195 200 205

gcg cac cac atg gag cat gcg acc gct age cag aac gaa gtg gea acc 672

Ala His His Met Glu His Ala Thr Ala Ser Gln Asn Glu Val Ala Thr 210 215 220

cgc ttc aac acc atg acc aag aaa gcc gac gaa att cag ate tat aag 720

Arg Phe Asn Thr Met Thr Lys Lys Ala Asp Glu Ile Gln Ile Tyr Lys 225 230 235 240

tac gtg gtg cac aac gtg gea cac gcc ttc ggt aaa acc gcg acc ttc 768 Tyr Val Val His Asn Val Ala His Ala Phe Gly Lys Thr Ala Thr Phe 245 250 255 atg ccg aag ccc atg ttc ggc gac aac ggt tcc ggc atg cac tgc cac 816

Met Pro Lys Pro Met Phe Gly Asp Asn Gly Ser Gly Met His Cys His

260 265 270

atg tcg ctg tcc aag aac ggc acc aac ctg ttc gcc ggc gac aaa tac 864

Met Ser Leu Ser Lys Asn Gly Thr Asn Leu Phe Ala Gly Asp Lys Tyr

275 280 285

ggc ggc ctg tct gaa acc gca ctg ttc tac ate ggc ggt ate aac aag 912

Gly Gly Leu Ser Glu Thr Ala Leu Phe Tyr Ile Gly Gly Ile Asn Lys

290 295 300

cac gcc aag gcg ate aac gcg ctg gcc aac ccg acc acc aac tcg tac 960

His Ala Lys Ala Ile Asn Ala Leu Ala Asn Pro Thr Thr Asn Ser Tyr

305 310 315 320

aaa cgt ctg gtg cca ggc tac gaa gcg ccg gtg atg ctg gct tac tcc 1008

Lys Arg Leu Val Pro Gly Tyr Glu Ala Pro Val Met Leu Ala Tyr Ser

325 330 335

gcc cgt aac cgc tcc gcg tcc ate cgt ate ccg gtg gtc gcc age ccg 1056

Ala Arg Asn Arg Ser Ala Ser Ile Arg Ile Pro Val Val Ala Ser Pro

340 345 350

aaa gcg cgc cgc ate gaa gcc cgc ttc ccg gat ccg gcg gct aac cca 1104

Lys Ala Arg Arg Ile Glu Ala Arg Phe Pro Asp Pro Ala Ala Asn Pro

355 360 365

tac ctg tgc ttc gcc gca ctg ctg atg gcc ggc ctg gac ggc ate ate 1152

Tyr Leu Cys Phe Ala Ala Leu Leu Met Ala Gly Leu Asp Gly Ile Ile

370 375 380

aac aag ate cac cct ggc gac gcc atg gac aaa aac ctg tac gac ctg 1200

Asn Lys Ile His Pro Gly Asp Ala Met Asp Lys Asn Leu Tyr Asp Leu

385 390 395 400

ccg ccg gaa gaa gaa gcc gag ate cca aaa gtg gcc ggc tcg ctg gac 1248

Pro Pro Glu Glu Glu Ala Glu Ile Pro Lys Val Ala Gly Ser Leu Asp

405 410 415

gag gcg atg gcc gcg ctg aac gaa gac cgc gag ttc ctg acc cgc ggc 1296

Glu Ala Met Ala Ala Leu Asn Glu Asp Arg Glu Phe Leu Thr Arg Gly

420 425 430

ggc gtg ttc act gac gat gcg ate gat gcc tac ate gaa ctg cgc aaa 1344

Gly Val Phe Thr Asp Asp Ala Ile Asp Ala Tyr Ile Glu Leu Arg Lys

435 440 445

gaa gag atg gac cgc gtt cgc atg acg cca cac ccg gtc gag ttc gaa 1392 Glu Glu Met Asp Arg Val Arg Met Thr Pro His Pro Val Glu Phe Glu

450 455 460

ctg tac tac age gtc taa 1410

Leu Tyr Tyr Ser Val

465

<210> SEQ ID NO: 40 <211> Comprimento: 4 69 <212> Tipo: PRT

<213> Organismo: Seqüência Artificial

<220> Características: <223> Outras Informações: AGS1M20 <400> Seqüência: 40

Met Ser Ala Glu His Val Leu Thr Met Leu Asn Glu His Glu Val Lys

1 5 10 15

Phe Val Asp Leu Arg Phe Thr Asp Thr Lys Gly Lys Glu Gln His Val

20 25 30

Thr Ile Pro Ala His Gln Val Asn Ala Asp Phe Phe Glu Glu Gly Lys

35 40 45

Met Phe Asp Gly Ser Ser Ile Gly Gly Trp Lys Gly Ile Asn Glu Ser

50 55 60

Asp Met Val Leu Met Pro Asp Ala Ser Thr Ala Val Leu Asp Pro Phe 65 70 75 80

Ser Glu Glu Pro Thr Leu Ile Ile Arg Cys Asp Ile Leu Glu Pro Gly

85 90 95

Thr Met Gln Gly Tyr Asp Arg Asp Pro Arg Ser Ile Ser Lys Arg Ala

100 105 110

Glu Asp Phe Leu Arg Ser Ser Gly Ile Ala Asp Thr Val Leu Phe Gly

115 120 125

Pro Glu Pro Glu Phe Phe Leu Phe Asp Asp Ile Arg Phe Gly Ser Ser

130 135 140

Ile Arg Gly Ser His Val Ala Ile Asp Asp Ile Glu Gly Ala Trp Asn 145 150 155 160

Ser Gly Thr Lys Tyr Asp Gly Gly Asn Lys Gly His Arg Pro Ala Val

165 170 175

Lys Gly Gly Tyr Phe Pro Val Pro Ser Val Asp Ser Ser Gln Asp Leu

180 185 190

Arg Ser Thr Met Cys Leu Thr Met Glu Glu Met Gly Leu Val Val Glu

195 200 205

Ala His His Met Glu His Ala Thr Ala Ser Gln Asn Glu Val Ala Thr

210 215 220

Arg Phe Asn Thr Met Thr Lys Lys Ala Asp Glu Ile Gln Ile Tyr Lys 225 230 235 240

Tyr Val Val His Asn Val Ala His Ala Phe Gly Lys Thr Ala Thr Phe

245 250 255

Met Pro Lys Pro Met Phe Gly Asp Asn Gly Ser Gly Met His Cys His

260 265 270

Met Ser Leu Ser Lys Asn Gly Thr Asn Leu Phe Ala Gly Asp Lys Tyr

275 280 285

Gly Gly Leu Ser Glu Thr Ala Leu Phe Tyr Ile Gly Gly Ile Asn Lys

290 295 300

His Ala Lys Ala Ile Asn Ala Leu Ala Asn Pro Thr Thr Asn Ser Tyr 305 310 315 320

Lys Arg Leu Val Pro Gly Tyr Glu Ala Pro Val Met Leu Ala Tyr Ser

325 330 335

Ala Arg Asn Arg Ser Ala Ser Ile Arg Ile Pro Val Val Ala Ser Pro

340 345 350

Lys Ala Arg Arg Ile Glu Ala Arg Phe Pro Asp Pro Ala Ala Asn Pro

355 360 365

Tyr Leu Cys Phe Ala Ala Leu Leu Met Ala Gly Leu Asp Gly Ile Ile

370 375 380

Asn Lys Ile His Pro Gly Asp Ala Met Asp Lys Asn Leu Tyr Asp Leu 385 390 395 400

Pro Pro Glu Glu Glu Ala Glu Ile Pro Lys Val Ala Gly Ser Leu Asp

405 410 415

Glu Ala Met Ala Ala Leu Asn Glu Asp Arg Glu Phe Leu Thr Arg Gly

420 425 430

Gly Val Phe Thr Asp Asp Ala Ile Asp Ala Tyr Ile Glu Leu Arg Lys

435 440 445

Glu Glu Met Asp Arg Val Arg Met Thr Pro His Pro Val Glu Phe Glu

450 455 460

Leu Tyr Tyr Ser Val 465 <210> SEQ ID NO: 41 <211> Comprimento: 1410 <212> Tipo: DNA

<213> Organismo: Seqüência Artificial

<220> Características:

<223> Outras Informações: agslm21

<221> Nome/Chave: CDS

<222> Localização: (1)...{1410)

<400> Seqüência: 41

atg tcc gct gaa cac gtt ttg acg atg ctg aat gag cat gaa gtg aaa 48

Met Ser Ala Glu His Val Leu Thr Met Leu Asn Glu His Glu Val Lys 1 5 10 15

ttc gta gac ctg cgt ttc act gac acc aag ggt aag gaa cag cac gtg 96

Phe Val Asp Leu Arg Phe Thr Asp Thr Lys Gly Lys Glu Gln His Val 20 25 30

act ate ccg gct cac cag gta aac gcc gac ttc ttc gaa gaa ggt aaa 144

Thr Ile Pro Ala His Gln Val Asn Ala Asp Phe Phe Glu Glu Gly Lys 35 40 45

atg ttt gac ggc tcc tet ate ggt ggt tgg aag ggc ate aac gaa tet 192

Met Phe Asp Gly Ser Ser Ile Gly Gly Trp Lys Gly Ile Asn Glu Ser 50 55 60

gac atg gtg ctg atg ccg gac gcc age acg gcg gtt ctg gat ccg ttc 240

Asp Met Val Leu Met Pro Asp Ala Ser Thr Ala Val Leu Asp Pro Phe 65 70 75 80

ttc gaa gaa cct acg ctg ate att cgc tgt gac att ctc gag ccg ggc 288

Phe Glu Glu Pro Thr Leu Ile Ile Arg Cys Asp Ile Leu Glu Pro Gly 85 90 95

cca gag cct gag ttc ttc ctg ttc gac gac ate cgc ttc ggc age age 432

Pro Glu Pro Glu Phe Phe Leu Phe Asp Asp Ile Arg Phe Gly Ser Ser 130 135 140

ate cgc ggt tcc cac gtg gcg ate gac gat ate gaa ggc gcc tgg age 480

Ile Arg Gly Ser His Val Ala Ile Asp Asp Ile Glu Gly Ala Trp Ser

145 150 155 160

tcc ggc aca aaa tac gac aga ggc aac aaa ggc cac cgt ccg gcg gtg 528 Ser Gly Thr Lys Tyr Asp Arg Gly Asn Lys Gly His Arg Pro Ala Val 165 170 175

aaa ggc ggt tac ttc ccg gtt cca ccg gtc gac tet tcg cag gat ctg 576

Lys Gly Gly Tyr Phe Pro Val Pro Pro Val Asp Ser Ser Gln Asp Leu 180 185 190

gcg cac cac cac gaa atg gcg acc gcc ggt cag aac gaa gtg gca acc 672

Ala His His His Glu Met Ala Thr Ala Gly Gln Asn Glu Val Ala Thr

210 215 220

cgc ttc aac acc atg acc aag aaa gcc gac gaa att cag ate tat aag 720

Arg Phe Asn Thr Met Thr Lys Lys Ala Asp Glu Ile Gln Ile Tyr Lys

225 230 235 240

tac gtg gtg cac aac gtg gcg cac gcc ttc ggt aaa acc gcg acc ttc 768

Tyr Val Val His Asn Val Ala His Ala Phe Gly Lys Thr Ala Thr Phe

245 250 255

atg ccg aag ccc atg ttc ggc gac aac ggt tcc ggc atg cac tgc cac 816

Met Pro Lys Pro Met Phe Gly Asp Asn Gly Ser Gly Met His Cys His

260 265 270

atg tcg ctg tcc aag aac ggc acc aac ctg ttc gcc ggc gac aaa tac 864

Met Ser Leu Ser Lys Asn Gly Thr Asn Leu Phe Ala Gly Asp Lys Tyr 275 280 285

ggc ggc ctg tet gaa acc gca ctg ttc tac ate ggc ggt ate ate aag 912

Gly Gly Leu Ser Glu Thr Ala Leu Phe Tyr Ile Gly Gly Ile Ile Lys

290 295 300

cac gcc aag gcg ate aac gcg ctg gcc aac ccg acc acc aac tcg tac 960

His Ala Lys Ala Ile Asn Ala Leu Ala Asn Pro Thr Thr Asn Ser Tyr

305 310 315 320

aaa cgt ctg gtg cca ggc tac gaa gcg ccg gtg atg ctg gct tac tcc 1008

Lys Arg Leu Val Pro Gly Tyr Glu Ala Pro Val Met Leu Ala Tyr Ser

325 330 335

gcc cgt aac cgc tcc gcg tcc ate cgt ate ccg gtg gtc gcc age ccg 1056

Ala Arg Asn Arg Ser Ala Ser Ile Arg Ile Pro Val Val Ala Ser Pro

340 345 350

aaa gcg cgc cgc ate gaa gcc cgc ttc ccg gat ccg gcg gct aac cca 1104

Lys Ala Arg Arg Ile Glu Ala Arg Phe Pro Asp Pro Ala Ala Asn Pro 355 360 365

tac ctg tgc ttc gcc gca ctg ctg atg gcc ggc ctg gac ggc ate ate 1152

Tyr Leu Cys Phe Ala Ala Leu Leu Met Ala Gly Leu Asp Gly Ile Ile

370 375 380

aac aag ate cac cct ggc gac gcc atg gac aaa aac ctg tac gac ctg 1200

Asn Lys Ile His Pro Gly Asp Ala Met Asp Lys Asn Leu Tyr Asp Leu

385 390 395 400

ccg ccg gaa gaa gaa gcc gag ate cca aaa gtg gcc ggc tcg ctg gac 1248

Pro Pro Glu Glu Glu Ala Glu Ile Pro Lys Val Ala Gly Ser Leu Asp

405 410 415

gag gcg atg gcc gcg ctg aac gaa gac cgc gag ttc ctg acc cgc ggc 1296

Glu Ala Met Ala Ala Leu Asn Glu Asp Arg Glu Phe Leu Thr Arg Gly

420 425 430

ggc gtg ttc acc gac gat gcg ate gat gcc tac ate gaa ctg cgc aaa 1344

Gly Val Phe Thr Asp Asp Ala Ile Asp Ala Tyr Ile Glu Leu Arg Lys 435 440 445 gaa gag atg gac cgc gtt cgc atg acg cca cac ccg gtc gag ttc gaa 1392

Glu Glu Met Asp Arg Val Arg Met Thr Pro His Pro Val Glu Phe Glu 450 455 460

ctg tac tac age gtc taa 1410

Leu Tyr Tyr Ser Val *

465

<210> SEQ ID NO: 42 <211> Comprimento: 469 <212> Tipo: PRT

<213> Organismo: Seqüência Artificial

<220> Características:

<223> Outras Informações: AGS1M21

<400> Seqüência: 42

Met Ser Ala Glu His Val Leu Thr Met Leu Asn Glu His Glu Val Lys

1 5 10 15

Phe Val Asp Leu Arg Phe Thr Asp Thr Lys Gly Lys Glu Gln His Val

20 25 30

Tnr Ile Pro Aia His Gin Vai Asn Ala Asp Pne Pne Glu Glu Giy Lys

35 40 45

Met Phe Asp Gly Ser Ser Ile Gly Gly Trp Lys Gly Ile Asn Glu Ser

50 55 60

Asp Met Val Leu Met Pro Asp Ala Ser Thr Ala Val Leu Asp Pro Phe 65 70 75 80

Phe Glu Glu Pro Thr Leu Ile Ile Arg Cys Asp Ile Leu Glu Pro Gly

85 90 95

Thr Met Gln Gly Tyr Asp Arg Asp Pro Arg Ser Ile Ser Lys Arg Ala

100 105 110

Glu Asp Phe Leu Arg Ser Ser Gly Ile Ala Asp Thr Val Leu Phe Gly

115 120 125

Pro Glu Pro Glu Phe Phe Leu Phe Asp Asp Ile Arg Phe Gly Ser Ser

130 135 140

Ile Arg Gly Ser His Val Ala Ile Asp Asp Ile Glu Gly Ala Trp Ser 145 150 155 160

Ser Gly Thr Lys Tyr Asp Arg Gly Asn Lys Gly His Arg Pro Ala Val

165 170 175

Lys Gly Gly Tyr Phe Pro Val Pro Pro Val Asp Ser Ser Gln Asp Leu

180 185 190

Arg Ser Thr Met Cys Leu Thr Met Glu Glu Met Gly Leu Val Val Glu

195 200 205

Ala His His His Glu Met Ala Thr Ala Gly Gln Asn Glu Val Ala Thr

210 215 220

Arg Phe Asn Thr Met Thr Lys Lys Ala Asp Glu Ile Gln Ile Tyr Lys 225 230 235 240

Tyr Val Val His Asn Val Ala His Ala Phe Gly Lys Thr Ala Thr Phe

245 250 255

Met Pro Lys Pro Met Phe Gly Asp Asn Gly Ser Gly Met His Cys His

260 265 270

Met Ser Leu Ser Lys Asn Gly Thr Asn Leu Phe Ala Gly Asp Lys Tyr

275 280 285

Gly Gly Leu Ser Glu Thr Ala Leu Phe Tyr Ile Gly Gly Ile Ile Lys

290 295 300

His Ala Lys Ala Ile Asn Ala Leu Ala Asn Pro Thr Thr Asn Ser Tyr 305 310 315 320

Lys Arg Leu Val Pro Gly Tyr Glu Ala Pro Val Met Leu Ala Tyr Ser

325 330 335

Ala Arg Asn Arg Ser Ala Ser Ile Arg Ile Pro Val Val Ala Ser Pro

340 345 350

Lys Ala Arg Arg Ile Glu Ala Arg Phe Pro Asp Pro Ala Ala Asn Pro 355 360

Tyr Leu Cys Phe Ala Ala Leu Leu

370 375

Asn Lys Ile His Pro Gly Asp Ala 385 390

Pro Pro Glu Glu Glu Ala Glu Ile 405

Glu Ala Met Ala Ala Leu Asn Glu 420

Gly Val Phe Thr Asp Asp Ala Ile 435 440

Glu Glu Met Asp Arg Val Arg Met

450 455

Leu Tyr Tyr Ser Val 465

365

Met Ala Gly Leu Asp Gly Ile Ile 380

Met Asp Lys Asn Leu Tyr Asp Leu 395 400

Pro Lys Val Ala Gly Ser Leu Asp

410 415

Asp Arg Glu Phe Leu Thr Arg Gly 425 430

Asp Ala Tyr Ile Glu Leu Arg Lys 445

Thr Pro His Pro Val Glu Phe Glu 460

<210> SEQ ID NO: 43 <211> Comprimento: 1543 <212> Tipo: DNA

<213> Organismo: Seqüência Artificial

<220> Características:

<223> Outras Informações: agsl(ad-)

<221> Nome/Chave: CDS

<222> Localização: (1)...(1410)

<400> Seqüência: 43

15 10 15

ate cgc ggt tcc cac gtg gcg ate gac gat ate gaa ggc gcc tgg aac 480

Ile Arg Gly Ser His Val Ala Ile Asp Asp Ile Glu Gly Ala Trp Asn 145 150 155 160

tcc ggc aca aaa tac gac ggc ggc aac aaa ggc cac cgt ccg gcg gtg 528

Ser Gly Thr Lys Tyr Asp Gly Gly Asn Lys Gly His Arg Pro Ala Val 165 170 175

aaa ggc ggt tac ttc ccg gtt cca ccg gtc gac tet tcg cag gat ctg 57 6

Lys Gly Gly Tyr Phe Pro Val Pro Pro Val Asp Ser Ser Gln Asp Leu

180 185 190

cgt tcc acc atg tgt ctg acc atg gaa gag atg ggc ctg gtg gtt gaa 624

Arg Ser Thr Met Cys Leu Thr Met Glu Glu Met Gly Leu Val Val Glu 195 200 205

gcg cac cac cac gaa gtg gcg acc gcc ggt cag aac gaa gtg gea acc 672

Ala His His His Glu Val Ala Thr Ala Gly Gln Asn Glu Val Ala Thr 210 215 220

cgc ttc aac acc atg acc aag aaa gcc gac gaa att cag ate tat aag 720

Arg Phe Asn Thr Met Thr Lys Lys Ala Asp Glu Ile Gln Ile Tyr Lys 225 230 235 240

tac gtg gtg cac aac gtg gcg cac gcc ttc ggt aaa acc gcg acc ttc 7 68

Tyr Val Val His Asn Val Ala His Ala Phe Gly Lys Thr Ala Thr Phe 245 250 255

atg ccg aag ccc atg ttc ggc gac aac ggt tcc ggc atg cac tgc cac 816

Met Pro Lys Pro Met Phe Gly Asp Asn Gly Ser Gly Met His Cys His

260 265 270

ggc ggc ctg tet gaa acc gea ctg ttc tac ate ggc ggt ate ate aag 912 Gly Gly Leu Ser Glu Thr Ala Leu Phe Tyr Ile Gly Gly Ile Ile Lys 290 295 300

cac gcc aag gcg ate aac gcg ctg gcc aac ccg acc acc aac tcg tac 960

His Ala Lys Ala Ile Asn Ala Leu Ala Asn Pro Thr Thr Asn Ser Tyr 305 310 315 320

gcc cgt aac cgc tcc gcg tcc ate cgt ate ccg gtg gtc gcc age ccg 1056

Ala Arg Asn Arg Ser Ala Ser Ile Arg Ile Pro Val Val Ala Ser Pro

340 345 350

aaa gcg cgc cgc ate gaa gcc cgc ttc ccg gat ccg gcg gct aac cca 1104

Lys Ala Arg Arg Ile Glu Ala Arg Phe Pro Asp Pro Ala Ala Asn Pro 355 360 365

aac aag ate cac cct ggc gac gcc atg gac aaa aac ctg ttc gac ctg

1200 Asn Lys Ile His Pro Gly Asp Ala Met Asp Lys Asn Leu Phe Asp Leu 385 390 395 400

ctg tac tac age gtc taa gccctacccg cgccgtctgc aaaggcggac 1440

Leu Tyr Tyr Ser Val *

465

ggcgcccaca attttctgca ggtcgacaag cttgcggccg cactcgagtc tggtaaagaa 1500 accgctgctg cgaaatttga acgccagcac atggactcgt cta 1543

<210> SEQ ID NO: 44 <211> Comprimento: 469 <212> Tipo: PRT

<213> Organismo: Seqüência Artificial

<220> Características:

<223> Outras Informações: AGSl(AD-)

<400> Seqüência: 44

Met Ser Ala Glu His Val Leu Thr Met Leu Asn Glu His Glu Val Lys

15 10 15

Phe Val Asp Leu Arg Phe Thr Asp Thr Lys Gly Lys Glu Gln His Val

20 25 30

Thr Ile Pro Ala His Gln Val Asn Ala Asp Phe Phe Glu Glu Gly Lys

35 40 45

Met Phe Asp Gly Ser Ser Ile Gly Gly Trp Lys Gly Ile Asn Glu Ser

50 55 60

Asp Met Val Leu Met Pro Asp Ala Ser Thr Ala Val Leu Asp Pro Phe 65 70 75 80

Phe Glu Glu Pro Thr Leu Ile Ile Arg Cys Asp Ile Leu Glu Pro Gly

85 90 95

Thr Met Gln Gly Tyr Asp Arg Asp Pro Arg Ser Ile Ser Lys Arg Ala

100 105 110

Glu Asp Phe Leu Arg Ser Ser Gly Ile Ala Asp Thr Val Leu Phe Gly

115 120 125

Pro Glu Pro Glu Phe Phe Leu Phe Asp Asp Ile Arg Phe Gly Ser Ser

130 135 140

Ile Arg Gly Ser His Val Ala Ile Asp Asp Ile Glu Gly Ala Trp Asn 145 150 155 160

Ser Gly Thr Lys Tyr Asp Gly Gly Asn Lys Gly His Arg Pro Ala Val

165 170 175

Lys Gly Gly Tyr Phe Pro Val Pro Pro Val Asp Ser Ser Gln Asp Leu

180 185 190

Arg Ser Thr Met Cys Leu Thr Met Glu Glu Met Gly Leu Val Val Glu

195 200 205

Ala His His His Glu Val Ala Thr Ala Gly Gln Asn Glu Val Ala Thr 210 215 220 Arg Phe Asn Thr Met Thr Lys Lys Ala Asp Glu Ile Gln Ile Tyr Lys 225 230 235 240

Tyr Val Val His Asn Val Ala His Ala Phe Gly Lys Thr Ala Thr Phe

245 250 255

Met Pro Lys Pro Met Phe Gly Asp Asn Gly Ser Gly Met His Cys His

260 265 270

Met Ser Leu Ser Lys Asn Gly Thr Asn Leu Phe Ala Gly Asp Lys Tyr

275 280 285

Gly Gly Leu Ser Glu Thr Ala Leu Phe Tyr Ile Gly Gly Ile Ile Lys

290 295 300

His Ala Lys Ala Ile Asn Ala Leu Ala Asn Pro Thr Thr Asn Ser Tyr 305 310 315 320

Lys Arg Leu Val Pro Gly Tyr Glu Ala Pro Val Met Leu Ala Tyr Ser

325 330 335

Ala Arg Asn Arg Ser Ala Ser Ile Arg Ile Pro Val Val Ala Ser Pro

340 345 350

Lys Ala Arg Arg Ile Glu Ala Arg Phe Pro Asp Pro Ala Ala Asn Pro

355 360 365

Tyr Leu Cys Phe Ala Ala Leu Leu Met Ala Gly Leu Asp Gly Ile Ile

370 375 380

Asn Lys Ile His Pro Gly Asp Ala Met Asp Lys Asn Leu Phe Asp Leu 385 390 395 400

Pro Pro Glu Glu Glu Ala Glu Ile Pro Lys Val Ala Gly Ser Leu Asp

405 410 415

Glu Alá Met Ala Ala Leu Asn Glu Asp Arg Glu Phe Leu Thr Arg Gly

420 425 430

Gly Val Phe Thr Asp Asp Ala Ile Asp Ala Tyr Ile Glu Leu Arg Lys

435 440 445

Glu Glu Met Asp Arg Val Arg Met Thr Pro His Pro Val Glu Phe Glu

450 455 460

Leu Tyr Tyr Ser Val 465

<210> SEQ ID NO: 45 <211> Comprimento: 1410 <212> Tipo: DNA

<213> Organismo: Seqüência Artificial <220> Características:

<223> Outras Informações: agslml7(ad-)

<221> Nome/Chave: CDS

<222> Localização: (1). . . (1410)

<400> Seqüência: 45

atg tcc gct gaa cac gtt ttg acg atg ctg aat gag cat gaa gtg aaa 48

Met Ser Ala Glu His Val Leu Thr Met Leu Asn Glu His Glu Val Lys

1 5 10 15

ttc gta gac ctg cgt ttc act gac acc aag ggt aag gaa cag cac gtg 96

Phe Val Asp Leu Arg Phe Thr Asp Thr Lys Gly Lys Glu Gln His Val

20 25 30

act ate ccg gct cac cag gta aac gcc gac ttc ttc gaa gaa ggt aaa 144

Thr Ile Pro Ala His Gln Val Asn Ala Asp Phe Phe Glu Glu Gly Lys

35 40 45

atg ttt gac ggc tcc tet ate ggt ggt tgg aag ggc ate aac gaa tet 192

Met Phe Asp Gly Ser Ser Ile Gly Gly Trp Lys Gly Ile Asn Glu Ser 50 55 60

gac atg gtg ctg atg ccg gac gcc age acg gcg gtt ctg gat ccg ttc 240 Asp Met Val Leu Met Pro Asp Ala Ser Thr Ala Val Leu Asp Pro Phe

65 70 75 80

tcc gaa gaa cct acg ctg ate att cgc tgt gac att ctc gag ccg ggc 288

Ser Glu Glu Pro Thr Leu Ile Ile Arg Cys Asp Ile Leu Glu Pro Gly

85 90 95

acc atg caa ggc tac gat cgc gac ccg cgt tcc ate tcc aaa cgc gcc 336

Thr Met Gln Gly Tyr Asp Arg Asp Pro Arg Ser Ile Ser Lys Arg Ala 100 105 110

gaa gac ttc ctg cgc tcc tcc ggc ate gcg gac acc gtg Ctg ttc ggg 384

Glu Asp Phe Leu Arg Ser Ser Gly Ile Ala Asp Thr Val Leu Phe Gly 115 120 125

cca gag cct gag ttc ttc ctg ttc gac gac ate cgc ttc ggc age age 432

Pro Glu Pro Glu Phe Phe Leu Phe Asp Asp Ile Arg Phe Gly Ser Ser 130 135 140

ate cgc ggt tcc cac gtg gcg ate gac gat ate gaa ggc gcc tgg aac 480

Ile Arg Gly Ser His Val Ala Ile Asp Asp Ile Glu Gly Ala Trp Asn

145 150 155 160

tcc ggc aca aaa tac gac ggc ggc aac aaa ggc cac cgt ccg gcg gtg 528

Ser Gly Thr Lys Tyr Asp Gly Gly Asn Lys Gly His Arg Pro Ala Val

165 170 175

aaa ggc ggt tac ttc ccg gtt cca tcg gtc gac tet tcg cag gat ctg 576

Lys Gly Gly Tyr Phe Pro Val Pro Ser Val Asp Ser Ser Gln Asp Leu 180 185 190

cgt tcc acc atg tgt ctg acc atg gaa gag atg ggc ctg gtg gtt gaa 624

Arg Ser Thr Met Cys Leu Thr Met Glu Glu Met Gly Leu Val Val Glu 195 200 205

gcg cac cac acc gag gea gcg acc gct age cag aac gaa gtg gea acc 672

Ala His His Thr Glu Ala Ala Thr Ala Ser Gln Asn Glu Val Ala Thr 210 215 220

cgc ttc aac acc atg acc aag aaa gcc gac gaa att cag ate tat aag 720

Arg Phe Asn Thr Met Thr Lys Lys Ala Asp Glu Ile Gln Ile Tyr Lys

225 230 235 240

tac gtg gtg cac aac gtg gea cac gcc ttc ggt aaa acc gcg acc ttc 768

Tyr Val Val His Asn Val Ala His Ala Phe Gly Lys Thr Ala Thr Phe

245 250 255

atg ccg aag ccc atg ttc ggc gac aac ggt tcc ggc atg cac tgc cac 816

Met Pro Lys Pro Met Phe Gly Asp Asn Gly Ser Gly Met His Cys His 260 265 270

atg tcg ctg tcc aag aac ggc acc aac ctg ttc gcc ggc gac aaa tac 864

Met Ser Leu Ser Lys Asn Gly Thr Asn Leu Phe Ala Gly Asp Lys Tyr 275 280 285

ggc ggc ctg tet gaa acc gea ctg ttc tac ate ggc ggt ate aac aag 912

Gly Gly Leu Ser Glu Thr Ala Leu Phe Tyr Ile Gly Gly Ile Asn Lys 290 295 300

cac gcc aag gcg ate aac gcg ctg gcc aac ccg acc acc aac tcg tac 960 His Ala Lys Ala Ile Asn Ala Leu Ala Asn Pro Thr Thr Asn Ser Tyr 305 310 315 320 aaa cgt ctg gtg cca ggc tac gaa gcg ccg gtg atg ctg gct tac tcc 1008

Lys Arg Leu Val Pro Gly Tyr Glu Ala Pro Val Met Leu Ala Tyr Ser

325 330 335

gcc cgt aac cgc tcc gcg tcc ate cgt ate ccg gtg gtc gcc age ccg 1056

Ala Arg Asn Arg Ser Ala Ser Ile Arg Ile Pro Val Val Ala Ser Pro

340 345 ' 350

aaa gcg cgc cgc ate gaa gcc cgc ttc ccg gat ccg gcg gct aac cca 1104

Lys Ala Arg Arg Ile Glu Ala Arg Phe Pro Asp Pro Ala Ala Asn Pro

355 360 365

tac ctg tgc ttc gcc gea ctg ctg atg gcc ggc ctg gac ggc ate ate 1152

Tyr Leu Cys Phe Ala Ala Leu Leu Met Ala Gly Leu Asp Gly Ile Ile

370 375 380

aac aag ate cac cct ggc gac gcc atg gac aaa aac ctg ttc gac ctg 1200

Asn Lys Ile His Pro Gly Asp Ala Met Asp Lys Asn Leu Phe Asp Leu

385 390 395 400

ccg ccg gaa gaa gaa gcc gag ate cca aaa gtg gcc ggc tcg ctg gac 1248

Pro Pro Glu Glu Glu Ala Glu Ile Pro Lys Val Ala Gly Ser Leu Asp

405 410 415

gag gcg atg gcc gcg ctg aac gaa gac cgc gag ttc ctg acc cgc ggc 1296

Glu Ala Met Ala Ala Leu Asn Glu Asp Arg Glu Phe Leu Thr Arg Gly

420 425 430

ggc gtg ttc act gac gat gcg ate gat gcc tac ate gaa ctg cgc aaa 1344

Gly Val Phe Thr Asp Asp Ala Ile Asp Ala Tyr Ile Glu Leu Arg Lys

435 440 445

gaa gag atg gac cgc gtt cgc atg acg cca cac ccg gtc gag ttc gaa 1392

Glu Glu Met Asp Arg Val Arg Met Thr Pro His Pro Val Glu Phe Glu

450 455 460

ctg tac tac age gtc taa 1410

Leu Tyr Tyr Ser Val *

465

<210> SEQ ID NO: 46 <211> Comprimento: 469 <212> Tipo: PRT

<213> Organismo: Seqüência Artificial <220> Características:

<223> Outras Informações: AGS1M17(AD-)

<400> Seqüência: 46

Met Ser Ala Glu His Val Leu Thr Met Leu Asn Glu His Glu Val Lys

15 10 15

Phe Val Asp Leu Arg Phe Thr Asp Thr Lys Gly Lys Glu Gln His Val

20 25 30

Thr Ile Pro Ala His Gln Val Asn Ala Asp Phe Phe Glu Glu Gly Lys

35 40 45

Met Phe Asp Gly Ser Ser Ile Gly Gly Trp Lys Gly Ile Asn Glu Ser

50 55 60

Asp Met Val Leu Met Pro Asp Ala Ser Thr Ala Val Leu Asp Pro Phe 65 70 75 80

Ser Glu Glu Pro Thr Leu Ile Ile Arg Cys Asp Ile Leu Glu Pro Gly

85 90 95

Thr Met Gln Gly Tyr Asp Arg Asp Pro Arg Ser Ile Ser Lys Arg Ala 100 105 110

Glu Asp Phe Leu Arg Ser Ser Gly Ile Ala Asp Thr Val Leu Phe Gly

115 120 125

Pro Glu Pro Glu Phe Phe Leu Phe Asp Asp Ile Arg Phe Gly Ser Ser

130 135 140

Ile Arg Gly Ser His Val Ala Ile Asp Asp Ile Glu Gly Ala Trp Asn 145 150 155 160

Ser Gly Thr Lys Tyr Asp Gly Gly Asn Lys Gly His Arg Pro Ala Val

165 170 175

Lys Gly Gly Tyr Phe Pro Val Pro Ser Val Asp Ser Ser Gln Asp Leu

180 185 190

Arg Ser Thr Met Cys Leu Thr Met Glu Glu Met Gly Leu Val Val Glu

195 200 205

Ala His His Thr Glu Ala Ala Thr Ala Ser Gln Asn Glu Val Ala Thr

210 215 220

Arg Phe Asn Thr Met Thr Lys Lys Ala Asp Glu Ile Gln Ile Tyr Lys 225 230 235 240

Tyr Val Val His Asn Val Ala His Ala Phe Gly Lys Thr Ala Thr Phe

245 250 255

Met Pro Lys Pro Met Phe Gly Asp Asn Gly Ser Gly Met His Cys His

260 265 270

Met Ser Leu Ser Lys Asn Gly Thr Asn Leu Phe Ala Gly Asp Lys Tyr

275 280 285

Gly Gly Leu Ser Glu Thr Ala Leu Phe Tyr Ile Gly Gly Ile Asn Lys

290 295 300

His Ala Lys Ala Ile Asn Ala Leu Ala Asn Pro Thr Thr Asn Ser Tyr 305 310 315 320

Lys Arg Leu Val Pro Gly Tyr Glu Ala Pro Val Met Leu Ala Tyr Ser

325 330 335

Ala Arg Asn Arg Ser Ala Ser Ile Arg Ile Pro Val Val Ala Ser Pro

340 345 350

Lys Ala Arg Arg Ile Glu Ala Arg Phe Pro Asp Pro Ala Ala Asn Pro

355 360 365

Tyr Leu Cys Phe Ala Ala Leu Leu Met Ala Gly Leu Asp Gly Ile Ile

370 375 380

Asn Lys Ile His Pro Gly Asp Ala Met Asp Lys Asn Leu Phe Asp Leu 385 390 395 400

Pro Pro Glu Glu Glu Ala Glu Ile Pro Lys Val Ala Gly Ser Leu Asp

405 410 415

Glu Ala Met Ala Ala Leu Asn Glu Asp Arg Glu Phe Leu Thr Arg Gly

420 425 430

Gly Val Phe Thr Asp Asp Ala Ile Asp Ala Tyr Ile Glu Leu Arg Lys

435 440 445

Glu Glu Met Asp Arg Val Arg Met Thr Pro His Pro Val Glu Phe Glu

450 455 460

Leu Tyr Tyr Ser Val 465

<210> SEQ ID NO: 47 <211> Comprimento: 1410 <212> Tipo: DNA

<213> Organismo: Seqüência Artificial

<220> Características:

<223> Outras Informações: synagslml6

<400> Seqüência: 47

atgtcagcag agcatgtgct caccatgctg aatgagcatg aggtgaagtt cgtggacctc 60

cgcttcaccg acaccaaggg caaggagcag catgtcacca tccctgctca tcaagtcaac 120

gccgacttct ttgaagaagg caagatgttt gatggaagct caattggagg atggaagggc 180

atcaatgaga gcgacatggt gctgatgcca gatgcttcga cggcggtgct ggaccccttc 240

tcagaagaac caacattgat catcagatgt gacatcctgg agcctggcac catgcaaggc 300 tatgatcgag atccaagaag catcagcaag cgcgccgagg acttcttgag gagcagcggc 360

atcgccgaca ccgtgctctt cgggccggag ccggagttct tcctcttcga cgacatcaga 420

tttggatcaa gcatcagagg aagtcatgtg gccatcgacg acattgaagg agcatggaac 480

agcggcacca agtacgacgg cggcaacaag ggccaccggc cggcggtgaa gggcggctac 540

ttcccggtgc cgtcggtgga cagcagccaa gatttgagga gcaccatgtg cctcacaatg 600

gaggagatgg ggctggtggt ggaagctcat cacaacgagg tggcgacggc atcacaaaat 660

gaggtggcaa caaggttcaa caccatgacc aagaaggctg atgagatcca gatctacaag 720

tatgtggtgc acaatgttgc tcatgccttc ggcaagacgg ccaccttcat gcccaagcca 780

atgttcggcg acaatggaag cggcatgcac tgccacatga gcttgagcaa gaatggcacc 840

aacctatttg ctggagacaa gtacggcggc ctttctgaga cggcgctctt ctacatcggc 900

ggcatcaaca agcatgccaa ggccatcaac gcgctggcca accccaccac caacagctac 960

aagaggctgg tgcctggata tgaggcgccg gtgatgctgg catattcagc aaggaacagg 1020

agcgcctcca tcaggattcc tgtggtggcc tcgcccaagg caagaagaat tgaagcaaga 1080

tttccagatc ccgccgccaa cccttattta tgcttcgccg cgctgctgat ggccggcctg 1140

gatggcatca tcaacaagat ccatcctgga gatgcaatgg acaagaacct ctacgacctg 1200

ccgccagaag aagaagctga gatccccaag gtggctggat cattggatga agcaatggcg 1260

gcgctcaatg aagatcgaga gttcctcacc cgcggcggcg tcttcactga tgatgccatc 1320

gacgcctaca tcgagctgag gaaggaggag atggacaggg tgaggatgac gccgcacccg 1380

gtggagtttg agctctacta ctccgtgtaa 1410

Claims

1. Polinucleotídeo isolado compreendendo um variante de SEQ ID NO: 1, caracterizado pelo fato de que dito polinucleotídeo variante é pelo menos 80% idêntico a SEQ ID NO: 1 e codifica um polipeptídeo que é resistente a inibição por inibidor de glutamina sintetase herbicida.

2. Polinucleotídeo isolado de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que dito polipeptídeo compreende pelo menos uma modificação entre os aminoácidos - 125 a 175 ou pelo menos uma modificação entre os aminoácidos 200 a 250 correspondentes a SEQ ID NO:2.

3. Polinucleotídeo isolado de acordo com a reivindicação 2, caracterizado pelo fato de que é selecionado do grupo consistindo de SEQ ID NOS: 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, - 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, 47, ou a seqüência de nucleotídeos de resistência a herbicidas do inserto de DNA do plasmídeo depositado como No. de Acesso NRRL B-30930.

4. Polinucleotídeo isolado de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que dito polinucleotídeo codifica um polipeptídeo tendo pelo menos uma modificação que resulta na perda de um sítio de adenilação em dito polipeptídeo.

5. Polinucleotideo isolado de acordo com a reivindicação -4, caracterizado pelo fato de que é selecionado do grupo consistindo de SEQ ID NO:43 e 45.

6. Polinucleotideo isolado de acordo com a reivindicação -1, caracterizado pelo fato de que dito inibidor de glutamina sintetase herbicida compreende glufosinato.

7. Polinucleotideo isolado de acordo com a reivindicação -1, caracterizado pelo fato de que dito polinucleotídeo é uma seqüência sintética que foi projetada para expressão em uma planta.

8. Polinucleotídeo isolado caracterizado por ser de SEQ ID NO: 1.

9. Vetor caracterizado por compreender o polinucleotídeo de acordo com a reivindicação 1.

10. Vetor de acordo com a reivindicação 9, caracterizado por compreender, ainda, um polinucleotideo codificando um polipeptideo heterólogo.

11. Célula hospedeira caracterizada por conter o vetor de acordo com a reivindicação 9.

12. Célula hospedeira de acordo com a reivindicação 11, caracterizada por ser uma célula hospedeira bacteriana.

13. Célula hospedeira de acordo com a reivindicação 11, caracterizada por ser uma célula vegetal.

14. Planta transgênica caracterizada por compreender a célula hospedeira de acordo com a reivindicação 9.

15. Planta de acordo com a reivindicação 14, caracterizada por compreender, ainda, um ou mais de um polinucleotideo codificando um gene de tolerância a herbicidas ou um polinucleotideo codificando um gene de tolerância a insetos.

16. Planta de acordo com a reivindicação 15, caracterizada pelo fato de que dito gene de tolerância a herbicidas é um gene de EPSP sintase.

17. Planta de acordo com a reivindicação 15, caracterizada pelo fato de que dito gene de tolerância a insetos é uma endotoxina.

18. Planta de acordo com a reivindicação 14, caracterizada pelo fato de que dita planta é selecionada do grupo consistindo em milho, sorgo, trigo, girassol, tomate, cruciferas, pimentas, batata, algodão, arroz, soja, beterraba, cana-de-açúcar, tabaco, cevada e colza.

19. Semente transformada caracterizada por compreender o polinucleotideo de acordo com a reivindicação 1.

20. Polipeptideo isolado compreendendo um variante de SEQ ID NO: 2, caracterizado pelo fato de que dito polipeptideo variante é pelo menos 80% idêntico a SEQ ID NO: 2 e é resistente a inibição por inibidor de glutamina sintetase herbicida.

21. Polipeptídeo isolado de acordo com a reivindicação 20, caracterizado pelo fato de que dito polipeptídeo compreende pelo menos uma modificação entre os aminoácidos 125 a 175 ou pelo menos uma modificação entre os aminoácidos 200 a 250 correspondentes a SEQ ID NO:2.

22. Polipeptídeo isolado de acordo com a reivindicação 19, caracterizado por ser selecionado do grupo consistindo em SEQ ID NOS: 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, -28, 30, 32, 34, 36, 38, 40, 42, ou um polipeptídeo que é codificado pela seqüência de nucleotídeos de resistência a herbicidas do inserto de DNA do plasmídeo depositado como No. de Acesso NRRL B- 30930.

23. Polipeptídeo isolado de acordo com a reivindicação 20, caracterizado pelo fato de que dito polipeptídeo compreende pelo menos uma modificação que resulta na perda de um sítio de adenilação em dito polipeptídeo.

24. Polipeptídeo isolado de acordo com a reivindicação 23, caracterizado por ser selecionado do grupo consistindo em SEQ ID NO:44 e 46.

25. Polipeptideo isolado de acordo com a reivindicação 22, caracterizado pelo fato de que dito inibidor de glutamina sintetase herbicida compreende glufosinato.

26. Polipeptideo de acordo com a reivindicação 23, caracterizado por compreender, ainda, uma seqüência de aminoácidos heteróloga.

27. Polipeptideo isolado caracterizado por ser de SEQ ID NO: 2.

28. Método para conferir resistência a inibidores herbicidas de glutamina sintetase em uma planta caracterizado por compreender transformar dita planta com um polinucleotideo compreendendo um variante de SEQ ID NO: -1, em que dito polinucleotideo variante é pelo menos 80% idêntico a SEQ ID N0:1 e codifica um polipeptideo que é resistente a inibição por inibidor de glutamina sintetase herbicida, e regenerar uma planta transformada.

29. Método de acordo com a reivindicação 28, caracterizado pelo fato de que dito polipeptideo compreende pelo menos uma modificação entre os aminoácidos 125 a 175 ou pelo menos uma modificação entre os aminoácidos 200 to 250 correspondentes a SEQ ID NO:2.

30. Método de acordo com a reivindicação 29, caracterizado pelo fato de que dito polinucleotideo é selecionado do grupo consistindo de SEQ ID NOS: 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, - 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, ou 47.

31. Método de acordo com a reivindicação 28, caracterizado pelo fato de que dito polinucleotideo codifica um polipeptideo tendo pelo menos uma modificação que resulta na perda de um sitio de adenilação em dito polipeptideo.

32. Método de acordo com a reivindicação 31, caracterizado pelo fato de que dito polinucleotideo é selecionado do grupo consistindo de SEQ ID NO:43 e 45.

33. Método de acordo com a reivindicação 28, caracterizado pelo fato de que dito inibidor de glutamina sintetase herbicida compreende glufosinato.

34. Método de acordo com a reivindicação 28, caracterizado pelo fato de que dito método compreende ainda a transformação de dita planta com um ou mais de um polinucleotideo codificando um gene de tolerância a herbicidas ou um polinucleotideo codificando um gene de tolerância a insetos.

35. Método de acordo com a reivindicação 34, caracterizado pelo fato de que dito gene de tolerância a herbicidas é um gene de EPSP sintase.

36. Método de acordo com a reivindicação 34, caracterizado pelo fato de que dito gene de tolerância a insetos é uma endotoxina.

37. Planta caracterizada por ter estavelmente incorporada em seu genoma uma construção de DNA compreendendo um polinucleotideo compreendendo um variante de SEQ ID NO: 1 , em que dito polinucleotideo variante é pelo menos 80% idêntico a SEQ ID N0:1 e codifica um polipeptideo que é resistente a inibição por inibidor de glutamina sintetase herbicida.

38. Planta de acordo com a reivindicação 37, caracterizada pelo fato de que dito polipeptideo compreende pelo menos uma modificação entre os aminoácidos 125 a 17 5 ou pelo menos uma modificação entre os aminoácidos 200 a 250 correspondentes a SEQ ID NO: 2.

39. Planta de acordo com a reivindicação 38, caracterizada pelo fato de que dito polinucleotideo é selecionado do grupo consistindo de SEQ ID NOS: 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, -17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, ou 47.

40. Planta de acordo com a reivindicação 37, caracterizada pelo fato de que dito polinucleotideo codifica um polipeptideo tendo pelo menos uma modificação que resulta na perda de um sitio de adenilação em dito polipeptideo.

41. Planta de acordo com a reivindicação 40, caracterizada pelo fato de que dito polinucleotideo é selecionado do grupo consistindo em SEQ ID NO:43 e 45.

42. Planta de acordo com a reivindicação 37, caracterizada pelo fato de que dito inibidor de glutamina sintetase herbicida compreende glufosinato.

43. Planta de acordo com a reivindicação 37, caracterizada pelo fato de que dita planta é uma célula vegetal.

44. Planta de acordo com a reivindicação 37, caracterizada pelo fato de compreender, ainda, um ou mais de um polinucleotideo codificando um gene de tolerância a herbicidas ou um polinucleotideo codificando um gene de tolerância a insetos.

45. Planta de acordo com a reivindicação 44, caracterizada pelo fato de que dito gene de tolerância a herbicidas é um gene de EPSP sintase.

46. Planta de acordo com a reivindicação 44, caracterizada pelo fato de que dito gene de tolerância a insetos é uma endotoxina.

47. Planta de acordo com a reivindicação 37, caracterizada pelo fato de que dita planta é selecionada do grupo consistindo de milho, sorgo, trigo, girassol, tomate, cruciferas, pimentas batata, algodão, arroz, soja, beterraba, cana-de-açúcar, tabaco, cevada e colza.

48. Método para controlar seletivamente ervas daninhas em um campo contendo uma planta tendo sementes plantadas ou plantas, caracterizado por compreender as etapas de: a) plantar as sementes ou plantas que são resistentes a inibidor de glutamina sintetase herbicida como resultado de um polinucleotideo compreendendo um variante de SEQ ID NO: 1 sendo inserido na semente ou planta, caracterizado pelo fato de que dito polinucleotideo variante é pelo menos 80% idêntico a SEQ ID NO:l e codifica um polipeptideo que é resistente a inibição por inibidor de glutamina sintetase herbicida; e, b) aplicar às plantas e ervas daninhas em um campo, uma concentração efetiva de um inibidor de glutamina sintetase herbicida para controlar ervas daninhas sem afetar significativamente as plantas.

49. Método de acordo com a reivindicação 48, caracterizado °pelo fato de que dito polipeptideo compreende pelo menos uma modificação entre os aminoácidos 125 a 175 ou pelo menos uma modificação entre os aminoácidos 200 a 250 correspondentes a SEQ ID NO: 2.

50. Método de acordo com a reivindicação 4 9, caracterizado pelo fato de que dito polinucleotideo é selecionado do grupo consistindo de SEQ ID NOS: 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, -17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 33, 35, 37, 39, 41, ou 47.

51. Método de acordo com a reivindicação 48, caracterizado pelo fato de que dito polinucleotideo codifica um polipeptideo tendo pelo menos uma modificação que resulta na perda de um sitio de adenilação em dito polipeptideo.

52. Método de acordo com a reivindicação 51, caracterizado pelo fato de que dito polinucleotideo é selecionado do grupo consistindo de SEQ ID NO:43 e 45.

53. Método de acordo com a reivindicação 50, caracterizado pelo fato de que dito inibidor de glutamina sintetase herbicida compreende glufosinato.

54. Método de acordo com a reivindicação 48, caracterizado pelo fato de que dita planta ou semente compreende ainda um ou mais de um polinucleotideo codificando um gene de tolerância a herbicidas ou uma polinucleotideo codificando um gene de tolerância a insetos.

55. Método de acordo com a reivindicação 54, caracterizado pelo fato de que dito gene de tolerância a herbicidas é um gene de EPSP sintase.

56. Método de acordo com a reivindicação 54, caracterizado pelo fato de que dito gene de tolerância a insetos é uma endotoxina.

57. Método para melhorar a produção em uma planta caracterizado pelo fato de que compreende introduzir, em dita planta, um polinucleotideo codificando uma enzima glutamina sintetase derivada de uma bactéria.

58. Método de acordo com a reivindicação 57, caracterizado pelo fato de que dito polinucleotideo compreende um variante de SEQ ID N0:1, caracterizado pelo fato de que dito polinucleotideo variante é pelo menos 80% idêntico a SEQ ID NO: 1 e codifica um polipeptideo que é resistente a inibição por inibidor de glutamina sintetase herbicida.

59. Método de acordo com a reivindicação 58, caracterizado pelo fato de que dito polinucleotideo compreende um polinucleotideo selecionado do grupo consistindo de SEQ ID NOS: 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, -31, 33, 35, 37, 39, 41, 47, ou a seqüência de nucleotideos de resistência a herbicidas do inserto de DNA do plasmideo depositado como No. de Acesso NRRL B-30930.

60. Método de acordo com a reivindicação 57, caracterizado pelo fato de que dito polinucleotideo codifica a polipeptideo tendo pelo menos uma modificação que resulta na perda de um sitio de adenilação in dito polipeptideo.

61. Método de acordo com a reivindicação 60, caracterizado pelo fato de que dito polinucleotideo é selecionado do grupo consistindo de SEQ ID NO:43 e 45.

62. Método para melhorar a utilização de nitrogênio em uma planta caracterizado pelo fato de que compreende introduzir, em dita planta, um polinucleotideo codificando uma enzima glutamina sintetase derivada de uma bactéria.

63. Método de acordo com a reivindicação 62, caracterizado pelo fato de que dito polinucleotideo compreende um variante de SEQ ID NO: 1, caracterizado pelo fato de que dito polinucleotideo variante é pelo menos 80% idêntico a SEQ ID NO: Ie codifica um polipeptideo que é resistente a inibição por inibidor de glutamina sintetase herbicida.

64. Método de acordo com a reivindicação 63, caracterizado pelo fato de que dito polinucleotideo compreende um polinucleotideo selecionado do grupo consistindo de SEQ ID NOS: 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, -31, 33, 35, 37, 39, 41, 43, 45, 47, ou a seqüência de nucleotideos de resistência a herbicidas do inserto de DNA do plasmideo depositado como No. de Acesso NRRL B-30930.

65. Método de acordo com a reivindicação 62, caracterizado pelo fato de que dito polinucleotideo codifica um polipeptideo tendo pelo menos uma modificação que resulta na perda de um sitio de adenilação in dito polipeptideo.

66. Método de acordo com a reivindicação 65, caracterizado pelo fato de que dito polinucleotideo é selecionado do grupo consistindo de SEQ ID NO:43 e 45.