BRPI0713041A2 - derivados de ácido 4-amino-3-(3-azoil-fenoximetil)- tieno[3,2c]piridina-7- carboxìlico - Google Patents

derivados de ácido 4-amino-3-(3-azoil-fenoximetil)- tieno[3,2c]piridina-7- carboxìlico Download PDF

Info

Publication number
BRPI0713041A2
BRPI0713041A2 BRPI0713041-4A BRPI0713041A BRPI0713041A2 BR PI0713041 A2 BRPI0713041 A2 BR PI0713041A2 BR PI0713041 A BRPI0713041 A BR PI0713041A BR PI0713041 A2 BRPI0713041 A2 BR PI0713041A2
Authority
BR
Brazil
Prior art keywords
methyl
pyridine
phenoxymethyl
thieno
carboxylic acid
Prior art date
Application number
BRPI0713041-4A
Other languages
English (en)
Inventor
Chen Yi
Kin-Chun Thomas Luk
Pamela Loreen Rossman
Sung-Sau So
Original Assignee
Hoffmann La Roche
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Hoffmann La Roche filed Critical Hoffmann La Roche
Publication of BRPI0713041A2 publication Critical patent/BRPI0713041A2/pt
Publication of BRPI0713041A8 publication Critical patent/BRPI0713041A8/pt

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D495/00—Heterocyclic compounds containing in the condensed system at least one hetero ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D495/02—Heterocyclic compounds containing in the condensed system at least one hetero ring having sulfur atoms as the only ring hetero atoms in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D495/04—Ortho-condensed systems
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/4353—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems
    • A61K31/4365—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems the heterocyclic ring system having sulfur as a ring hetero atom, e.g. ticlopidine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Vascular Medicine (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Heterocyclic Carbon Compounds Containing A Hetero Ring Having Oxygen Or Sulfur (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Materials For Medical Uses (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Transition And Organic Metals Composition Catalysts For Addition Polymerization (AREA)

Abstract

DERIVADOS DE áCIDO 4-AMINO-3-(3-AZOLIL-FENOXIMETIL)- TIENO[3,2C]PIRIDINA-7-CARBOXìLIçO. São fornecidos os compostos da Fórmula: em que R^ 1^, R^ 2^, R^ 3^, X, o anel A e o anel B são como descritos. Os compostos exibem propriedades anticáncer.

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para "DERIVADOS DE ÁCIDO 4-AMINO-3-(3-AZOLIL-FENOXIMETIL)-TIENO[3,2C]PIRIDINA- 7-CARBOXÍLICO".
A presente invenção refere-se a derivados de ácido tieno[3,2- c]piridina-7 carboxílico que são inibidores de pequenas moléculas de Raf cinase.
Em maiores detalhes, a presente invenção fornece pelo menos um composto de Fórmula.
<formula>formula see original document page 2</formula>
em que
R1 é selecionado do grupo consistindo em hidrogênio, alquila inferior, alquenila inferior, alquinila inferior, alcóxi inferior, ciano, NR4R5, tri- fluorometila e NO2;
R2 pode ser um ou mais grupo(s) selecionado(s) do grupo con- sistindo em hidrogênio, alquila inferior, alquila inferior substituída, alquila in- ferior substituída por arila ou heteroarila, alquenila inferior, alquinila inferior, alcóxi inferior, arila, arila substituída, heteroarila, heteroarila substituída, cia- no, halogênio, metil sulfonila, sulfonamida, trifluorometila, sulfonil uréia, ami- da, éster, carbamato e uréia;
R3 é selecionado do grupo consistindo em hidrogênio, hidroxila, alquila inferior, alquila inferior substituída, alcóxi inferior e NR4R5;
O anel B é selecionado do grupo consistindo em arila e heteroa- rila;
O anel A é opcionalmente também substituído
<formula>formula see original document page 2</formula>
A é independentemente selecionado de C, N, O e S e o Anel A é aromático, R4 e R5 são selecionados de hidrogênio, alquila inferior ou alqui- la substituída por hidroxila ou alcóxi inferior,
Xé Oou NH, e os sais farmaceuticamente aceitáveis destes.
Como acima mencionado, os compostos da invenção são inibi- dores de Raf cinase. Esta inibição está provavelmente ligada à atividade de compostos como agentes anticâncer potentes e seletivos.
Muitos estados de doenças são caracterizados pela proliferação e diferenciação descontrolada de células. Estes estados de doença abran- gem uma variedade de tipos de células e enfermidades tais como câncer, ateroesclerose, e restenose. Em muitos tais estados de doença as cinases, enzimas celulares importantes que executam funções regulando-se a divisão e proliferação celular, parecem desempenhar um papel decisivo.
Os mecanismos moleculares e séries de reação de sinalização que regulam a sobrevivência e proliferação celular estão recebendo conside- rável atenção como alvos potenciais para estratégias anticâncer. Recente- mente, houve um aumento notável em esforços direcionados em alvejar as séries de reação de MAPK, que integram uma ampla disposição de sinais proliferativos iniciados por tirosina cinases receptoras (RTKs) e Receptores acoplados à proteína G.
A cascata de sinal de MAPK inclui a proteína G Ras trabalhando a montante de um módulo núcleo consiste em 3 cinases: Raf fosforila-se e, desse modo, ativa MEK1/2, que sucessivamente finalmente induz à ativação de ERK1/2. Raf cinase foi por muito tempo considerada um alvo atrativo pa- ra descoberta de fármaco devido a sua importância como uma barreira po- tencial para transdução sinal relacionada com câncer (Strumberg e Seeber, Onkologie, 2005, 28: 101-107; Beeram e outro, J. Clin. Oncol. 2005, 23: 6771-6790). A importância da cascata de sinalização de MAPK para a proli- feração e sobrevivência de ceMar de tumor recentemente aumentada com a descoberta de mutações de B-Raf de ativação em tumores humanos. Muta- ções de Raf de ativação foram identificadas em melanoma, tiróide, cólon, e outros cânceres (Strumberg e Seeber, Onkologie, 2005, 28: 101-107; Bollag e outro, Current Opinion in Investigational Drugs, 2003, 4:1436-1441).
Portanto, além de um papel de controlar tumores com mutações de Ras e receptores de fator de desenvolvimento ativados, inibidores de Raf cinase podem alojar potencial terapêutico em tumores transportando um on- cogene B-Raf (Sharma e outro, Câncer Res. 2005, 65: 2412-2421).
A família de Raf serina/treonina cinase mamífera consiste em três proteínas 68 a 74-kd denominadas A-Raf, B-Raf, e C-Raf (Raf-1), que compartilham regiões reguladoras de terminal amino altamente conservadas e domínios catalíticos na terminação carboxila. As proteínas Raf são nor- malmente citosólicas, porém, elas são recrutadas pela membrana de plasma pela proteína G Ras pequena, e esta é uma etapa essencial para sua ativa- ção por fatores de desenvolvimento, citocinas, e hormônios. Na membrana, a ativação de Raf ocorre através de um processo altamente complexo envol- vendo alterações de conformação, ligação a outras proteínas, ligação a lipí- deos, e fosforilação e desfosforilação de alguns resíduos.
Uma variedade de agentes foi descoberta interferir com Raf ci- nase, incluindo oligonucleotídeos anti-sentido e moléculas pequenas. Estes inibidores impedem a expressão de Proteína Raf, bloqueiam a interação de Ras/Raf, ou obstruem sua atividade cinase. A sub-regulação de atividade de B-Raf por siRNA ou através do inibidor de cinase BAY-43-9006 induz à inibi- ção de desenvolvimento de células de melanoma e redução mediada por siRNA de B-Raf induziu ao potencial tumorigênico diminuído de células 1205 Lu. Os inibidores de Raf que estão atualmente passando por avaliação clíni- ca, mostram sinais promissores de eficácia anticâncer com um perfil de se- gurança muito tolerável. Clinicamente mais avançado é o inibidor de Raf BAY 43-9006, que foi recentemente aprovado pelo FDA para o tratamento de carcinoma de célula renal metastática com teste clínico de fase III adicio- nal para o tratamento de outros cânceres.
A despeito do progresso que tem sido feito, a pesquisa continua para compostos de baixo peso molecular que são úteis para o tratamento de uma ampla variedade de tumores e outros distúrbios proliferativos incluindo restenose, angiogênese, retinopatia diabética, psoríase, adesões cirúrgicas, degeneração macular, e aterosclerose. Desse modo, existe uma forte ne- cessidade de fornecer composições, produtos farmacêuticos e/ou medica- mentos com atividade anti-proliferativa. Tais composições, produtos farma- cêuticos e/ou medicamentos podem não possuir apenas forte atividade, po- rém, também exercerem efeitos colaterais diminuídos em comparação a ou- tros agentes anti-proliferativos. Além disso, o espectro de tumores responsi- vos para tratamento com tais composições, produtos farmacêuticos e/ou medicamentos pode ser amplo. Os ingredientes ativos deste tipo podem ser adequados na indicação mencionada como agente único, e/ou em terapia de combinação, estejam eles ligados a outros agentes terapêuticos, com radia- ção, com procedimentos operativos/cirúrgicos, tratamento térmico ou qual- quer outro tratamento conhecido nas indicações mencionadas.
Na especificação, onde indicado, os vários grupos podem ser substituídos por 1-5 ou, preferivelmente, 1-3 substituintes independentemente selecionados do grupo consistindo em alquila inferior, alquenila inferior, alquinila inferior, dioxo-alquileno inferior (formando, por exemplo, um grupo benzodioxila), halogênio, hidróxi, CN, CF3, NH2, N(H, alquila inferior), N(alquila inferior)2, aminocarbonila, carbóxi, NO2, alcóxi inferior, tio-alcóxi inferior, alquilsulfonila inferior, aminossulfonila, alquilcarbonila inferior, alquilcarbonilóxi inferior, alcoxicarbonila inferior, alquila inferior-carbonil-NH, fluoro-alquila inferior, fluoro-alcóxi inferior, alcóxi inferior-carbonil-alcóxi inferior, carbóxi-alcóxi inferior, carbamoil-alcóxi inferior, hidróxi-alcóxi inferior, NH2-alcóxi inferior, N(H, alquila inferior)-alcóxi inferior, N(alquila inferior)2-alcóxi inferior, benzilóxi-alcóxi inferior, alquila inferior e amino-sulfonila substituído por mono ou di-alquila inferior que pode opcionalmente ser substituído com halogênio, hidróxi, NH2, N(H, alquila inferior) ou N(alquila inferior)2.. Substituintes preferidos para os anéis alquila, arila, heteroarila e heterociclo são halogênio, alcóxi inferior, alquila inferior e amino.
A expressão "R2 pode ser um ou mais grupo(s)" significa que pode existir um ou mais R2 grupo(s) ligado(s) ao grupo A, preferivelmente um a três, e mais preferivelmente um ou dois e ainda preferivelmente ape- nas um.
O termo "alquila" refere-se a grupos hidrocarboneto de cadeia linear ou ramificada saturados tendo de 1 a cerca de 20 átomos de carbono, incluindo grupos tendo de 1 a cerca de 7 átomos de carbono. Em certas mo- dalidades, substituintes de alquila podem ser substituintes de alquila inferior. O termo "alquila inferior" refere-se a grupos alquila tendo de 1 a 6 átomos de carbono, e em certas modalidades de 1 a átomos de carbono. Exemplos de grupos alquila incluem, porém, não estão limitados à, metila, etila, n-propila, i-propila, n-butila, s-butila, t-butila, n-pentila, e s-pentila.
Como utilizado aqui, "cicloalquil" destina-se a referir qualquer sistema monocíclico ou policíclico adequado que consiste em átomos de carbono apenas, qualquer anel do qual sendo saturado, e o termo "cicloal- quenila" destina-se a referir a qualquer sistema monocíclico ou policíclico adequado que consiste em átomos de carbono apenas, com pelo menos um anel destes sendo parcialmente insaturado. Cicloalquilas preferidas são C3- C6-cicloalquilas. Exemplos de cicloalquilas incluem, porém, não estão limita- dos à, ciclopropila, ciclobutila, ciclopentila, cicloexila, cicloeptila, adamantila, ciclooctila, bicicloalquilas, incluindo biciclooctanos tais como [2,2,2]biciclooctano ou [3,3,0]biciclooctano, biciclononanos tais como [4,3,0]biciclononano, e biciclodecanos tais como [4,4,0]biciclodecano (deca- lin), ou compostos de espiro. Exemplos de cicloalquenilas incluem, porém, não estão limitados à, ciclopentenila ou cicloexenila.
O termo "alquenila" como usado aqui significa um grupo hidro- carboneto alifático de cadeia linear ou ramificada insaturado contendo uma ligação dupla e tendo 2 a 6, preferivelmente 2 a 4 átomos de carbono. E- xemplos de tal "grupo alquenila" são vinila (etenil), alila, isopropenila, 1- propenila, 2-metil-1-propenila, 1-butenila, 2-butenila, 3-butenila, 2-etil-1- butenila, 3-metil-2-butenila, 1-pentenila, 2-pentenila, 3-pentenila, 4-pentenila, 4-metil-3-pentenila, 1-hexenila, 2-hexenila, 3-hexenila, 4-hexenila e 5- hexenila.
O termo "alquinil" como usado aqui significa um grupo hidrocar- boneto alifático de cadeia linear ou ramificada insaturado contendo uma liga- ção tripla e tendo 2 a 6, preferivelmente 2 a 4 átomos de carbono. Exemplos de tal "grupo alquinila" são etinila, 1-propinila, 2-propinila, 1 -butinila, 2- butinila, 3-butinila, 1-pentinila, 2-pentinila, 3-pentinila, 4-pentinila, 1-hexinila, 2-hexinila, 3-hexinila, 4-hexinila e 5-hexinila.
O termo "amida" significa um -(C=O)-N-RaRb1 em que Ra e Rb são independentemente hidrogênio ou alquila inferior. Um exemplo de um grupo amida é carbamoíla: -(C=O)-NH2.
O termo "éster" significa um grupo -(C=0)-0-C1-6-alquila.
O termo "halogênio" como utilizado nas definições significa flúor, cloro, bromo ou iodo, preferivelmente flúor e cloro.
"Arila" significa um radical hidrocarboneto carbocílico aromático, monocíclico ou bicíclico, monovalente, preferivelmente um sistema de anel aromático de 6-10 membros. Grupos arila preferidos incluem, porém, não estão limitados à, fenila, naftila, tolila, e xilila.
"Heteroarila" significa um sistema de anel heterocíclico aromáti- co contendo até dois anéis. Grupos heteroarila preferidos incluem grupos heteroarila de 5 ou 6 membros, porém, não estão limitados à, tienila, furila, indolila, pirrolila, piridinila, pirazinila, oxazolila, tiaxolila, quinolinila, pirimidini- la, imidazol e tetrazolila.
No caso de arila ou heteroarila que são bicíclicos deve-se en- tender que um anel pode ser arila, enquanto o outro é heteroarila e ambos sendo substituídos ou não substituídos.
"Heterociclo" significa um hidrocarboneto não aromático, mono ou bicíclico, de 5 a 8 membros substituídos ou não substituídos, em que 1 a 3 átomos de carbono são substituídos por um heteroátomo selecionado de átomo de nitrogênio, oxigênio ou enxofre. Exemplos incluem pirrolidin-2-il; pirrolidin-3-il; piperidinila; morfolin-4-il e similares.
"Heteroátomo" significa um átomo selecionado de Ν, O e S.
"Alcóxi, alcoxila ou alcóxi inferior" refere-se a qualquer dos gru- pos alquila inferior acima ligados a um átomo de oxigênio. Grupos alcóxi in- ferior típicos incluem metóxi, etóxi, isopropóxi ou propóxi, butilóxi e similares. Outros incluídos no significado de alcóxi são de cadeia lateral de múltipos alcóxi, por exemplo, etóxi etóxi, metóxi etóxi, metóxi etóxi etóxi e similares e cadeias laterais de alcóxi substituído, por exemplo, dimetilamino etóxi, dieti- Iamino etóxi, dimetóxi-fosforil metóxi e similares.
"Farmaceuticamente aceitável," tais como excipiente, veículo farmaceuticamente aceitável, etc., meios farmacologicamente aceitáveis e substancialmente não tóxicos ao indivíduo cujo o composto particular é ad- ministrado.
"Sal farmaceuticamente aceitável" refere-se a sais de adição de ácido ou sais de adição de base convencionais que retêm propriedades e eficácia biológica dos compostos da presente invenção e são formados de ácidos orgânicos e inorgânicos ou bases orgânicas e inorgânicas não tóxicos adequados. Sais de adição de ácido de amostra incluem aqueles derivados de ácidos inorgânicos tais como ácido hidroclórico, ácido hidrobrômico, ácido hidroiódico, ácido sulfúrico, ácido sulfâmico, ácido fosfórico e ácido nítrico, e aqueles derivados de ácidos orgânicos tais como ácido p-toluenossulfônico, ácido salicílico, ácido metanossulfônico, ácido oxálico, ácido sucínico, ácido cítrico, ácido málico, ácido láctico, ácido fumárico, ácido trifluoroacético e similares. Sais de adição de base de amostra incluem aqueles derivados de amônio, potássio, sódio e, hidróxidos de amônio quartenário, tais como, por exemplo, hidróxi de tetrametilamônio. Modificações químicas de um compos- to farmacêutico (isto é, fármaco) em um sal é uma técnica bem conhecida por químicos farmacêuticos para obter estabilidade física e química melho- rada, higroscopicidade, fluidez e solubilidade de compostos. Veja, por exem- plo, Ansel e outro, Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Sys- tems (6â Edição 1995) nas pags. 196 e 1456-
Os compostos de Fórmula I bem como seus sais que têm pelo menos um átomo de carbono assimétrico presente como misturas racêmicas ou estereoisômeros diferentes. Os vários isômeros podem ser isolados por métodos de separação conhecidos, por exemplo, cromatografia.
Os compostos descritos aqui e abrangidos por Fórmula I acima podem exibir tautomerismo ou isomerismo estrutural. Pretende-se que a in- venção abranja qualquer forma isomérica estrutural destes compostos, ou misturas de tais formas, e não está limitada a qualquer uma forma isomérica estrutural ou tautomérica descrita na Fórmula I acima.
"Quantidade eficaz " significa uma quantidade que é eficaz para prevenir, aliviar ou melhorar os sintomas de doença ou prolongar a sobrevi- vência do indivíduo que está sendo tratado.
"IC50" refere-se à concentração de um composto particular re- querido para inibir 50% de uma atividade avaliada específica. A IC50 pode ser avaliada, interalia, como é descrito mais adiante na descrição de teste.
"Éster farmaceuticamente aceitável" refere-se a convencional- mente composto esterificado de Fórmula I tendo um grupo carboxila ou gru- po hidróxi, cujos ésteres retêm as propriedades e eficácia biológicas dos compostos de Fórmulas I-IV e são clivados in vivo (no organismo) ao ácido carboxílico ativo correspondente ou álcool respectivamente.
Também abrangidos pelos compostos da invenção são aqueles compostos de Fórmula I em que:
R1 é selecionado do grupo consistindo em hidrogênio, alquila inferior, alquenila inferior, alquinila inferior, alcóxi inferior, ciano, NR4R51 tri- fluorometil e NO2;
R2 é selecionado do grupo consistindo em hidrogênio, alquila inferior, alquila inferior substituída, alquila inferior substituída por arila ou he- teroarila, alquenila inferior, alquinila inferior, alcóxi inferior, arila, arila substi- tuída, heteroarila, heteroarila substituída, ciano, halogênio, metil sulfonila, sulfonamida, trifluorometil, sulfonil uréia, amida, éster, carbamoíla, carbama- to e uréia;
R3 é selecionado do grupo consistindo em hidrogênio, alquila inferior, alquila inferior substituída, alcóxi inferior e NR4R5;
O anel B é selecionado do grupo consistindo em arila e heteroa- rila;
O anel A é opcionalmente também substituído
<formula>formula see original document page 9</formula>
A é independentemente selecionado de C, N, O e S e o Anel A é aromático,
R4 e R5 são selecionados de hidrogênio, alquila inferior ou alqui- la substituída por hidroxila ou alcóxi inferior,
X é O ou NH, e os sais farmaceuticamente aceitáveis destes.
Em todas as modalidades dos compostos de Fórmula I de acor- do com a invenção, R2 pode ser um ou mais grupo(s) selecionado do grupo consistindo em: hidrogênio, alquila inferior, alquila inferior substituída por hidróxi, alquila inferior substituída por arila ou heteroarila em que a arila ou heteroarila pode ser substituída por halogênio ou alquila inferior, alquenila inferior, alquinila inferior, alcóxi inferior, arila, aril-alquilenila inferior, em que o grupo arila é substituído por alcóxi inferior ou halogênio, heteroarila, heteroa- rila-alquilenila inferior, em que o grupo heteroarila é substituído por alquila inferior ou por alquila inferior substituída por hidróxi, ciano, halogênio, metil sulfonila, sulfonamida, trifluorometil, sulfonil uréia, amida, éster, carbamato e uréia.
Em todas as modalidades dos compostos de Fórmula I de acor- do com a invenção R3 podem ser selecionados do grupo consistindo em hi- drogênio, hidroxila, alquila inferior, alcóxi inferior e NR4R5.
Em todas as modalidades dos compostos de Fórmula I de acor- do com a invenção, o Anel A pode ser:
<formula>formula see original document page 10</formula>
em que A é independentemente selecionado de C, N, O e S e em que A li- gado a R2 e o A ligado ao resto da molécula são C ou N, e o Anel A é aro- mático.
Preferidos são os compostos da Fórmula em que
R1 é hidrogênio ou alquila inferior no C2 do Anel B de 1-hidróxi 5-substituído em que O Anel B é fenila ou
R1 é hidrogênio ou alquila inferior no C2 do Anel B de 3-hidróxi 5-substituído B em que O anel B é piridina.
Os anéis A preferidos incluem: <formula>formula see original document page 11</formula>
em que os anéis podem também ser também opcionalmente substituídos como acima definido.
Especialmente preferidos são os compostos da Fórmula:
Éster etílico de ácido 4-cloro-3-[3-(5-metil-[1,3,4]oxadiazol-2-il)- fenoximetil]-tieno[3,2-c]piridina-7-carboxílico;
Éster etílico de ácido 4-amino-3-[3-(5-metil-[1,3,4]oxadiazol-2-il)- fenoximetil]-tieno[3,2-c]piridina-7-carboxílico;
(2-hidróxi-etil)-amida de ácido 4-amino-3-[3-(5-metil- [1,3,4]oxadiazol-2-il)-fenoximetil]-tieno[3,2-c]piridina-7-carboxílico,
Éster etílico de ácido 4-cloro-3-[2-metil-5-(5-metil- [1,3,4]oxadiazol-2-il)-fenoximetil]-tieno[3,2-c]piridina-7-carboxílico,
Éster etílico de ácido 4-amino-3-[2-metil-5-(5-metil- [1,3,4]oxadiazol-2-il)-fenoximetil]-tieno[3,2-c]piridina-7-carboxílico,
Sal de ácido trifluoro-acético de (2-hidróxi-etil)-amida de ácido 4- amino-3-[2-metil-5-(5-metil-[1,3,4]oxadiazol-2-il)-fenoximetil]-tieno[3,2- c]piridina-7-carboxílico,
Sal de ácido trifluoro-acético de (2-hidróxi-etil)-amida de ácido 4- amino-3-{5-[4-(2-hidróxi-etil)-5-metil-4H-[1,2,4]triazol-3-il]-2-metil-fenoximetil}- tieno[3,2-c]piridina-7-carboxílico,
Sal de ácido tolueno-4-sulfônico de (2-hidróxi-etil)-amida de áci- do 4-amino-3-í2-metil-5-(5-metil-[1,3,4]oxadiazol-2-il)-fenoximetil]-tieno[3,2- c]piridina-7-carboxílico,
Éster etílico de ácido 4-cloro-3-[2-metil-5-(1-metil-1H- [1,2,3]triazol-4-il)-fenoximetil]-tieno[3,2-c]-piridina-7-carboxílico,
Éster etílico de ácido 4-amino-3-[2-metil-5-(1-metil-1H- [1,2,3]triazol-4-il)-fenoximetil]-tieno[3,2-c]piridina-7-carboxílico,
(2-hidróxi-etil)-amida de ácido 4-amino-3-[2-metil-5-(1-metil-1H- [1,2,3]triazol-4-il)-fenoximetil]-tieno[3,2-c]piridina-7-carboxílico,
Éster etílico de ácido 4-cloro-3-{3-[2-(4-metóxi-benzil)-2H- tetrazol-5-il]-fenoximetil}-tieno[3,2-c]piridina-7-carboxílico,
Éster etílico de ácido 4-amino-3-{3-[2-(4-metóxi-benzil)-2H- tetrazol-5-il]-fenoximetil}-tieno[3,2-c]piridina-7-carboxílico,
(2-hidróxi-etil)-amida de ácido 4-amino-3-{3-[2-(4-metóxi-benzil)- 2H-tetrazol-5-il]-fenoximetil}-tieno[3,2-c]piridina-7-carboxílico,
Éster etílico de ácido 4-cloro-3-[3-(2-metil-2H-tetrazol-5-il)- fenoximetil]-tieno[3,2-c]piridina-7-carboxílico,
Éster etílico de ácido 4-amino-3-[3-(2-metil-2H-tetrazol-5-il)- fenoximetil]-tieno[3,2-c]piridina-7-carboxílico,
(2-hidróxi-etil)-amida de ácido 4-amino-3-[3-(2-metil-2H-tetrazol- 5-il)-fenoximetil]-tieno[3,2-c]piridina-7-carboxílico,
Éster etílico de ácido 4-cloro-3-{5-[1-(4-cloro-benzil)-1H- [1,2,3]triazol-4-il]-2-metil-fenoximetil}-tieno[3,2-c]piridina-7-carboxílico,
Éster etílico de ácido 4-amino-3-{5-[1-(4-cloro-benzil)-1H- [1,2,3]triazol-4-il]-2-metil-fenoximetil}-tieno[3,2-c]piridina-7-carboxílico, (2-hidróxi-etil)-amida de ácido 4-amino-3-{5-[1-(4-cloro-benzil)-
1H-[1,2,3]triazol-4-il]-2-metil-fenoximetil}-tieno[3,2-c]piridina-7-carboxílico,
Sal de ácido tolueno-4-sulfônico de (2-hidróxi-etil)-amida de áci- do 4-amino-3-{5-[1-(4-cloro-benzil)-1H-[1,2,3]triazol-4-il]-2-metil-fenoximetil}- tieno[3,2-c]piridina-7-carboxílico,
Éster etílico de ácido 4-cloro-3-{5-[5-(4-cloro-benzil)- [1,3,4]oxadiazol-2-il]-2-metil-fenoximetil}-tieno[3,2-c]piridina-7-carboxílico,
Éster etílico de ácido 4-amino-3-{5-[5-(4-cloro-benzil)- [1,3,4]oxadiazol-2-il]-2-metil-fenoximetil}-tieno[3,2-c]piridina-7-carboxílico,
(2-hidróxi-etil)-amida de ácido 4-amino-3-{5-[5-(4-cloro-benzil)- [1,3,4]oxadiazol-2-il]-2-metil-fenoximetil}-tieno[3,2-c]piridina-7-carboxílico,
Éster etílico de ácido 4-cloro-3-{5-[5-(4-cloro-fenil)- [1,3,4]oxadiazol-2-il]-2-metil-fenóxi-metil}-tieno[3,2-c]piridina-7-carboxílico,
Éster etílico de ácido 4-amino-3-{5-[5-(4-cloro-fenil)- [1,3,4]oxadiazol-2-il]-2-metil-fenóxi-metil}-tieno[3,2-c]piridina-7-carboxílico, Ácido 4-amino-3-{5-[5-(4-cloro-fenil)-[1,3,4]oxadiazol-2-il]-2-metil- fenóxi-metil}-tieno[3,2-c]piridina-7-carboxílico,
Sal de ácido trifluoroacético de (2-hidróxi-etil)-amida de ácido 4- amino-3-{5-[5-(4-cloro-fenil)-[1,3,4]oxadiazol-2-il]-2-metil-fenóxi-metil}- tieno[3,2-c]piridina-7-carboxílico,
Éster etílico de ácido 4-cloro-3-[2-metil-5-(3-metil- [1,2,4]oxadiazol-5-il)-fenoximetil]-tieno[3,2-c]piridina-7-carboxílico,
Éster etílico de ácido 4-amino-3-[2-metil-5-(3-metil- [1,2,4]oxadiazol-5-il)-fenoximetil]-tieno[3,2-c]piridina-7-carboxílico,
Ácido 4-amino-3-[2-metil-5-(3-metil-[1,2,4]oxadiazol-5-il)- fenoximetil]-tieno[3,2-c]piridina-7-carboxílico,
Sal de ácido trifluoroacético de (2-hidróxi-etil)-amida de ácido 4- amino-3-[2-metil-5-(3-metil-[1,2,4]oxadiazol-5-il)-fenoximetil]-tieno-[3,2- c]piridina-7-carboxílico,
Éster etílico de ácido 4-cloro-3-{5-[4-(4-metóxi-benzil)-5-metil- 4H-[1,2,4]triazol-3-il]-2-metil-fenoximetil}-tieno[3,2-c]piridina-7-carboxílico,
Éster etílico de ácido 4-amino-3-{5-[4-(4-metóxi-benzil)-5-metil- 4H-[1,2,4]triazol-3-il]-2-metil-fenoximetil}-tieno[3,2-c]piridina-7-carboxílico> (2-hidróxi-etil)-amida de ácido 4-amino-3-{5-[4-(4-metóxi-benzil)- 5-metil-4H-[1,2,4]triazol-3-il]-2-metil-fenoximetil}-tieno[3,2-c]piridina-7 carboxílico,
Éster etílico de ácido 4-cloro-3-[2-metil-5-(metil-4H-[1,2,4]triazol- 3-il)-fenoximetil]-tieno[3,2-c]piridina-7-carboxílico,
Éster etílico de ácido 4-amino-3-[2-metil-5-(5-metil-4H- [1,2,4]triazol-3-il)-fenoximetil]-tieno[3,2-c]piridina-7-carboxílico e (2-hidróxi-etil)-amida de ácido 4-amino-3-[2-metil-5-(5-metil-4H- [1,2,4]triazol-3-il)-fenoximetil]-tieno[3,2-c]piridina-7-carboxílico.
Os compostos da presente invenção são úteis no tratamento ou controle de distúrbios proliferativos de células, em particular distúrbios onco- lógicos. Estes compostos e formulações contendo os referidos compostos podem ser úteis no tratamento ou controle de tumores sólidos, tais como, tais como, por exemplo, mama, cólon, pulmão e próstata. Uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto de acordo com esta invenção significa uma quantidade de composto que é efi- caz para prevenir, aliviar ou melhorar sintomas de doença ou prolongar a sobrevivência do indivíduo que está sendo tratado. A determinação de uma quantidade eficaz está na perícia da técnica.
A quantidade terapeuticamente eficaz ou dosagem de um com- posto de acordo com esta invenção pode variar dentro de amplos limites e pode ser determinada de uma maneira conhecida na técnica. Tal dosagem será ajustada aos requisitos individuais em cada caso particular incluindo o(s) composto(s) específico(s) que está(ão) sendo administrado(s), a rotina de administração, a condição que está sendo tratada, bem como o paciente que está sendo tratado. Em geral, no caso de administração a humanos a- dultos pesando aproximadamente 70 Kg, uma dosagem diária de cerca de 10 mg a cerca de 10,000 mg, preferivelmente de cerca de 200 mg a cerca de 1,000 mg, deve ser apropriada, embora o limite superior possa ser excedido quando indicado. A dosagem diária pode ser administrada como uma dose única ou em doses divididas, ou para administração parenteral, ela pode ser administrada como infusão contínua.
As formulações da presente invenção incluem aquelas adequa- das para administração oral, nasal, tópica (incluindo bucal e sublingual), re- tal, vaginal e/ou parenteral. As formulações podem convenientemente ser apresentadas em forma de dosagem e podem ser preparadas por quaisquer métodos bem conhecidos na técnica de farmácia. A quantidade de ingredi- ente ativo que pode ser combinado com um material portador para produzir uma forma de dosagem única variará dependendo do hospedeiro que está sendo tratado, bem como do modo particular de administração. A quantidade de ingrediente ativo que pode ser combinado com um material portador para produzir uma forma de dosagem única geralmente será aquela quantidade de um composto de Fórmula I que produz um efeito terapêutico. Geralmente, além dos cem por cento, esta quantidade variará de cerca de 1 por cento a cerca de noventa e nove por cento de ingrediente ativo, preferivelmente de cerca de 5 por cento a cerca de 70 por cento, mais preferivelmente de cerca de 10 por cento a cerca de 30 por cento.
Métodos para preparar estas formulações ou composições in- cluem a etapa de trazer em associação um composto da presente invenção com o veículo e, opcionalmente, um ou mais ingredientes acessórios. Em geral, as formulações são preparadas uniformemente e intimamente trazen- do em associação um composto da presente invenção com veículos líqui- dos, ou veículos sólidos finamente divididos, ou ambos, e em seguida, se necessário, moldando o produto.
Formulações da invenção adequadas para administração oral podem ser na forma de cápsulas, sachês, pílulas, comprimidos, Iozangos (utilizando uma base aromatizada, geralmente sacarose e acácia ou traga- canto), pós, grânulos, ou como uma solução ou suspensão em um líquido aquoso ou não aquoso, ou como emulsão líquida óleo-em-água ou água-em- óleo, ou como um elixir ou xarope, ou como pastilhas (utilizando uma base inerte, tais como gelatina e glicerina, ou sacarose e acácia) e/ou como antis- séptico bucal e similares, cada qual contendo uma quantidade pre- determinada de um composto da presente invenção como um ingrediente ativo. Um composto da presente invenção pode também ser administrado como um bolo, eletuário ou pasta.
Os compostos desta invenção podem ser sintetizados de acordo com aos seguintes esquemas gerais.
Esquema 1
<formula>formula see original document page 15</formula>
Esquema 2
<formula>formula see original document page 15</formula>
Esquema 3
<formula>formula see original document page 15</formula> Esquema 4
<formula>formula see original document page 16</formula>
Esquema 5
<formula>formula see original document page 16</formula>
Esquema 6
<formula>formula see original document page 16</formula>
Esquema 7
<formula>formula see original document page 16</formula>
Esquema 8
<formula>formula see original document page 16</formula>
Esquema 9
<formula>formula see original document page 16</formula>
Esquema 10
<formula>formula see original document page 16</formula>
Legendas das Figuras: Refluxo; Aquecimento; Hidrazina; Ciclização; Prote- ger; Desproteger; Hidrazina aquosa; Acoplamento; Aquecimento; Dioxano; Conversão em amida.
Nos esquemas 1 a 10, R1, R2, e R3 são como acima definidos para a Fórmula I, Exemplos para grupos R, R' podem ser encontrados nos Exemplos a seguir. PG e PG' são grupos de proteção padrão tais como ilus- trados nos Exemplos a seguir.
As condições de reações de esquemas 1 a 10 são também ilus- trados e especificados nos Exemplos a seguir.
Nestes esquemas, o material de partida é comercialmente dis- ponível ou obtido como descritos nos Exemplos a seguir.
Os seguintes Exemplos e referências são fornecidos para auxili- ar o entendimento da presente invenção, o real escopo da qual é estabeleci- do nas reivindicações anexas.
Exemplo 1
Éster etílico de ácido 3-bromometil-4-cloro-tienof3,2-clpiridina-7-carboxílico
<formula>formula see original document page 17</formula>
O material de partida de éster etílico de ácido 3-bromometil-4- cloro-tieno[3,2-c]piridina-7-carboxílico foi preparado de 3-metiltiofeno de a- cordo com o procedimento de Luk, K.; McDermott, L. A.; Rossman, P. L.; Wovkulich, P. M.; Zhang, Z. Patente dos Estados Unidos 20050256154 A1.
Exemplo 2
Éster etílico de ácido 3-hidróxi-4-metil-benzóico
<formula>formula see original document page 17</formula>
M.W. 180,205 C10H12O3
Uma mistura de ácido 3-hidróxi-4-metilbenzóico (25,42 g, 167 mmol) (TCI US) e ácido sulfúrico concentrado (3 mL) em etanol absoluto (180 mL) foi aquecida em refluxo durante 20 horas. Após resfriamento, bi- carbonato de sódio de sólido (10 g) foi adicionado para neutralizar o ácido. A mistura foi dividida entre éter dietílico (2 X 400 mL) e água (2 X 300 mL). As camadas orgânicas foram lavadas com salmoura (300 mL), combinadas, secadas (MgSO4), filtradas, e concentradas. O resíduo foi recristalizado de hexanos para fornecer éster etílico de ácido 3-hidróxi-4-metil-benzóico como cristais brancos em duas colheitas. (Produção 29,14 g, 96,8%).
Exemplo 3
Éster etílico de ácido 3-metoximetóxi-4-metil-benzóico
<formula>formula see original document page 18</formula>
N,N-Diisopropiletilamina (5,3 mL, 30,5 mmol) (AIdrich) foi adicio- nada a uma suspensão de 3-hidróxi-4-metilbenzoato de etila (5,0 g, 27,75 mmol) (do Exemplo 2 supra) em diclorometano (20 mL) com resfriamento em um banho de água gelada. Éter clorometilmetílico (4,2 mL, 55,5 mmol) (Al- drich) foi em seguida adicionado gota a gota e a mistura agitada em tempe- ratura ambiente durante 5 horas. A mistura foi em seguida diluída com éter (100 mL) e lavada com mistura de água (100 mL), seguido por 0,1 N HCI (2 X 100 mL) e salmoura (100 mL). As camadas orgânicas foram novamente lavadas com éter (100 mL). Soluções orgânicas foram combinadas, secadas (MgSO4), filtradas e concentradas. O resíduo foi filtrado através de sílica gel (Biotage 40L) eluindo com diclorometano. As frações foram combinadas e concentradas para éster etílico de ácido fornecer 3-metoximetóxi-4-metil- benzóico como óleo incolor. (Produção 4,88 g, 78,4%).
Exemplo 4
Éster etílico de ácido 4-metil-3-(2-trimetilsilanil-etoximetóxi)-benzóico
<formula>formula see original document page 18</formula>
M.W. 310.469 Ci6H26O4Si
Hidreto de sódio (60% em óleo, 1,80 g, 45 mmol) (AIdrich) foi lavado com pentano (2 X 50 mL), pentano foi removido por pipetagem. O sólido resultante foi suspenso em Ν,Ν-dimetilformamida anidrosa (15 mL) e resfriado em um banho de água gelada. Uma solução de 3-hidróxi-4- metilbenzoato de etila (5,41 g, 30 mmol) (do Exemplo 2 supra) em N,N- dimetilformamida (10 mL) foi adicionado gota a gota durante 30 minutos. A- pós agitar durante mais 30 minutos cloreto de 2-(trimetilsilil-etoximetila (6,4 mL, 36 mmol) (Aldrich) foi adicionado gota a gota durante 10 minutos. Após agitar em temperatura ambiente durante mais 2 horas, a mistura reacional foi dividida entre água (3 X 100 mL) e éter dietílico (2 X 100 mL). As camadas orgânicas foram lavadas com salmoura (100 mL), em seguida combinadas, secadas (MgSO4), filtradas e concentradas para fornecer éster etílico de áci- do 4-metil-3-(2-trimetilsilanil-etoximetóxi)-benzóico cru como óleo incolor. Isto foi utilizado na próxima etapa sem outra purificação. (Produção 9,00 g, 96,6%).
Exemplo 5
2-metil-5-[4-metil-3-(2-trimetilsilanil-etoximetóxi)-fenil]-[1,3,4]oxadiazol
<formula>formula see original document page 19</formula>
M.W. 320,467 C16H24N2O3Si
Uma suspensão de éster etílico de ácido 4-metil-3-(2- trimetilsilanil-etoximetóxi)-benzóico (9,0 g, 29 mmol) (do Exemplo 4 supra) em hidrazina anidrosa (10 mL, 318 mmol) (AIdrich) foi aquecida em refluxo (150 °C temperatura de banho) durante 1,5 horas. Após resfriamento para temperatura ambiente, a mistura foi dividida entre acetato de etila (2 X 100 mL) e água (3 X 100 mL, com alguns mL de salmoura adicionados). As ca- madas orgânicas foram lavadas com salmoura (100 mL), em seguida combi- nadas, secadas (MgSO4), filtradas e concentradas. O resíduo foi diluído com etanol (300 mL) e concentrado para fornecer a hidrazina intermediária como um sólido branco. Este foi suspenso em ortoacetato de trietila (20 mL, 109 mmol) (Aldrich) e aquecido em refluxo (150 °C temperatura de banho) duran- te 22 horas. Após resfriamento a mistura foi diluída com hexanos e purifica- do por cromatografia flash (Biotage 40L, 5%, em seguida 25% de acetato de etila em hexanos como solvente). As frações foram combinadas e concen- tradas para fornecer 2-metil-5-[4-metil-3-(2-trimetilsilanil-etoximetóxi)-fenil]- [1,3,4]oxadiazol como um óleo amarelo pálido que cristalizou-se como cris- tais brancos em repouso. (Produção 8,22 g, 88,5%).
Exemplo 6
Hidrazina de ácido 3-hidróxi-4-metil-benzóico
<formula>formula see original document page 20</formula>
M.W. 166,181 C8H10N2O2
Uma suspensão de etil 3-hidróxi-4-metilbenzoato (14o42 g, 80 mmol) (do Exemplo 2 supra) em hidrazina anidrosa (30 mL, 956 mmol) (Al- drich) foi aquecida em refluxó (150°C temperatura de banho) durante 2,0 horas. Após resfriamento para temperatura ambiente, a mistura foi concen- trada sob pressão reduzida (vácuo elevado) para fornecer hidrazida de ácido 3-hidróxi-4-metil-benzóico cru como um sólido não totalmente branco. (Produção 13,26 g, 100%).
Exemplo 7
3-(5-metil-n.3.41oxadiazol-2-il)-fenol
<formula>formula see original document page 20</formula>
36721-179B M.W. 176.176 C9H8N2O2
Mistura de hidrazida 3-hidroxibenzóica (0.91 g, 6 mmol) (Aldrich) e ortoacetato de trietila (4,5 mL, 24 mmol) (Aldrich) foi aquecida em um ba- nho a 150°C em um reator de pressão selado durante 22 horas. Após resfri- amento para temperatura ambiente, a mistura foi concentrada e o resíduo purificado por cromatografia flash (Biotage 40L, acetato de etila - hexanos 1:1 como solvente) para fornecer 2 produtos. O material de Rf superior re- cristalizado de diclorometano-hexanos para fornecer 2-(3-etóxi-fenil)-5-metil- [1,3,4]oxadiazol como cristais brancos (Produção 0.29 g, 23.7%). O material de Rf inferior recristalizado de diclorometano - hexanos para fornecer 3-(5- metil-[1,3,4]oxadiazol-2-il)-fenol como cristais brancos. (Produção 0,77 g, 72,8%).
Exemplo 8 Éster etílico de ácido 4-cloro-3-[3-(5-metil-[1,3,4]oxadiazol-2-il)-fenoximetil]- tieno[3,2-c]piridina-7-carboxílico
<formula>formula see original document page 21</formula>
M.W. 429,885 C20H16CIN3O4S
Uma suspensão de 3-(5-metil-[1,3,4]oxadiazol-2-il)-fenol (0.15 g, 0.85 mmol) (do Exemplo 7 supra), carbonato de potássio (0,25 g, 1,8 mmol) e 18-Coroa-6 (10 mg, 0,04 mmol) (Aldrich) in N,N-dimetilformamida (5 mL) foi aquecida a 65 °C em um tubo selado com agitação magnética durante 2 horas. Éster etílico de ácido 3-bromometil-4-cloro-tieno[3,2-c]piridina-7- carboxílico (0,27 g, 0,8 mmol) (do Exemplo 1 supra) e iodeto de potássio (0,13 g, 0,8 mmol) foram em seguida adicionados e a mistura aquecida a 65 °C no tubo selado durante mais 20 horas. Após resfriamento, a mistura foi dividida entre acetato de etila (2 X 100 mL) e água (2 X 100 mL). As cama- das orgânicas foram lavadas com salmoura, em seguida combinadas, seca- das (MgSO4), filtradas e concentradas. O resíduo foi purificado por cromato- grafia flash (Biotage 40S, 20% de acetato de etila em diclorometano como solvente) para fornecer éster etílico de ácido 4-cloro-3-[3-(5-metil- [1,3,4]oxadiazol-2-il)-fenoximetil]-tieno[3,2-c]piridina-7-carboxílico como um pó branco. (Produção 0,22 g, 63,1%).
Exemplo 9
Éster etílico de ácido 4-amino-3-[3-(5-metil-[1,3,4]oxadiazol-2-il)-fenoximetil]- tieno[3,2-c]piridina-7-carboxílico
<formula>formula see original document page 21</formula>
37009-142A M.W. 410.455 C20H18N4O4S
O gás de amônia foi borbulhado em uma solução de éster etílico de ácido 4-cloro-3-[3-(5-metií-[1,3,4]oxadiazol-2-il)-fenoximetil]-tieno[3,2- c]piridina-7-carboxílico (0,12 g, 0,29 mmol) (do Exemplo 8 supra) em 2- propanol (15 mL) durante 20 minutos. A mistura foi aquecida em um reator de microondas a 140°C durante 2 horas. A mistura reacional foi concentra- da. O resíduo foi lavado com metanol quente, filtrado e secado para fornecer éster etílico de ácido 4-amino-3-[3-(5-metil-[1,3,4]oxadiazol-2-il)-fenoximetil]- tieno[3,2-c]piridina-7-carboxílico. (Produção 0,07 g, 58%).
HRMS (ES+) m/z Calculado para C20Hi8N4O4S + H [(M+H)+]: 411.1122. Encontrado: 411.1121.
Exemplo 10
Ácido (2-hidróxi-etil)-amida 4-amino-3-[3-(5-metil-n .3,41oxadiazol-2-il)- fenoximetil]-tieno[3,2-c]piridina-7-carboxilico
<formula>formula see original document page 22</formula>
37009-143A M.W. 425.470 C20H19N5O4S
Uma solução de éster etílico de ácido 4-amino-3-[3-(5-metil- [1,3,4]oxadiazol-2-il)-fenoximetil]-tieno[3,2-c]piridina-7-carboxílico (0,05 g, 0,12 mmol) (do Exemplo 9 supra) em dimetilsulfóxido (0,5 mL) foi tratada com etanolamina (1.5 mL) (Aldrich) e aquecida a 160°C durante 2 horas em um reator de microondas. A mistura reacional foi purificada por cromatogra- fia de fase reversa (Coluna C18) eluindo com acetonitrilo - água para forne- cer 4-amino-3-[3-(5-metil-[1,3,4]oxadiazol-2-il)-fenoximetil]-tieno[3,2- c]piridina-7-carboxílico ácido (2-hidróxi-etil)-amida como um pó branco. (Pro- dução 15.0 mg, 29%).
HRMS (ES+) m/z Calculado para C20H19N5O4S + H [(M+H)+]: 426,1231, Encontrado: 426,1227.
Exemplo 11
2-metil-5-(5-metil-n.3.41oxadiazol-2-il)-fenol
<formula>formula see original document page 22</formula>
M.W. 190.203 C10H10N2O2
Uma suspensão de 3-hidróxi-4-metilbenzoato de etila (3,60 g, 20 mmol) (do Exemplo 6 supra) em hidrazina anidrosa (10 mL, 318 mmol) (Al- drich) foi aquecida em refluxo (150°C temperatura de banho) durante 3 ho- ras. Após resfriamento para temperatura ambiente, a mistura foi concentrada sob pressão reduzida para fornecer um sólido seco. Este foi suspenso em xileno (50 mL) e concentrado sob pressão reduzida. O sólido resultante foi suspenso em orto-acetato de trietila (35 mL, 191 mmol) (AIdrich) e aquecido em refluxo (150 °C temperatura de banho) durante 20 horas com remoção de etanol. Após resfriamento, diclorometano foi adicionado e o sólido foi co- letado por filtragem para fornecer 2-metil-5-(5-metil-[1,3,4]oxadiazol-2-il)- fenol como um material cristalino não totalmente branco. (Produção 2,28 g, 60,0%).
O filtrado do acima foi purificado por cromatografia flash (Biotage 40L, 10% em seguida 40% de acetato de etila em diclorometano como sol- vente) para fornecer segunda colheita de 2-metil-5-(5-metil-[1,3,4]oxadiazol- 2-il)-fenol como um material cristalino branco. (Produção 0,99 g, 26,0%).
Exemplo 12
Éster etílico de ácido 4-cloro-3-f2-metil-5-(5-metil-n,3,4toxadiazol-2-il)- fenoximetil]-tieno[3,2-c1piridina-7-carboxílico
M.W. 443,912 C2IH18CIN3O4S
Uma suspensão de éster etílico de ácido 3-bromometil-4-cloro- tieno[3,2-c]piridina-7-carboxílico (0,29 g, 0,87 mmol) (do Exemplo 1 supra), iodeto de potássio (0,14 g, 0,87 mmol), 2-metil-5-(5-metíl-[1,3,4]oxadiazol-2- il)-fenol (0,17 g, 0,9 mmol) (do Exemplo 11 supra), carbonato de potássio (0,27 g, 1,9 mmol) e 18-Coroa-6 (10 mg, 0,04 mmol) (AIdrich) em N,N- dimetilformamida (5 mL) foi aquecida a 65 0C em um tubo selado com agita- ção magnética durante 20 horas. Após resfriamento, a mistura foi dividida entre acetato de etila (2 X 100 mL) e água (2 X 100 mL). As camadas orgâ- nicas foram extraídas com diclorometano (2 X 100 mL). [O material foi mais solúvel em diclorometano do que acetato de etila.] As camadas orgânicas foram lavadas com salmoura, em seguida combinadas, secadas (MgSO4), filtradas e concentradas. O resíduo foi purificado por cromatografia flash (Βί- otage 40S, diclorometano em seguida 20% de acetato de etila em diclorome- tano como solvente) para fornecer éster etílico de ácido 4-cloro-3-[2-metil-5- (5-metil-[1,3,4]oxadiazol-2-il)-fenoximetil]-tieno[3,2-c]piridina-7-carboxílico como um pó branco. (Produção 0,24 g, 62,4%).
Exemplo 13
Éster etílico de ácido 4-amino-3-f2-metil-5-(5-metil-í1,3,41oxadiazol-2-il)- fenoximetil1-tieno[3,2-clpiridina-7-carboxílico
<formula>formula see original document page 24</formula>
37009-145A M.W. 424.482 C2IH20N4O4S
O gás de amônia foi borbulhado em uma solução de éster etílico de ácido 4-cloro-3-[2-metil-5-(5-metil-[1,3,4]oxadiazol-2-il)-fenóxi-metil]- tieno[3,2-c]piridina-7-carboxílico (0.12 g, 0.28 mmol) (do Exemplo 12 supra) em 2-propanol (15 mL) durante 20 minutos. A mistura foi aquecida em um reator de microondas a 140°C durante 2 horas. A mistura reacional foi con- centrada. O resíduo foi purificado por cromatografia flash eluindo com 30% de acetato de etila em diclorometano para fornecer o material de partida re- cuperado (25 mg) e éster etílico de ácido 4-amino-3-[2-metil-5-(5-metil- [1,3,4]oxadiazol-2-il)-fenoximetil]-tieno[3,2-c]piridina-7-carboxílico como um pó branco. (Produção 0,053 g, 44%).
HRMS (ES+) m/z Calculado para C2iH20N4O4S + H [(M+H)+]: 425,1278. Encontrado: 425,1274.
Exemplo 14
Sal de ácido trifluoro-acético de (2-hidróxi-etil)-amida de ácido 4-amino-3-[2- metil-5-(5-metil-[1,3.41oxadiazol-2-il)-fenoximetil]-tieno[3.2-c]piridina-7- carboxílico
<formula>formula see original document page 24</formula>
37009-148A M.W. 439.497+114.024 C21H21N5O4S-C2HF3O2
Uma solução de éster etílico de ácido 4-amino-3-[2-metil-5-(5- metil-[1,3,4]oxadiazol-2-il)-fenoximetil]-tieno[3,2-c]piridina-7-carboxílico (0,043 g, 0,10 mmol) (do Exemplo 13 supra) em dimetilsulfóxido (0,5 mL) foi tratada com etanolamina (1,5 mL) (AIdrich) e aquecida a 160 cC durante 2 horas em um reator de microondas. A mistura reacional foi purificada por HPLC eluindo com acetonitrilo - água contendo ácido trifluoro-acético para fornecer dois produtos. O primeiro produto forneceu 4-amino-3-[2-metil-5-(5- metil-[1,3,4]oxadiazol-2-il)-fenoximetil]-tieno[3,2-c]piridina-7-carboxílico sal de ácido trifluoro-acético de (2-hidróxi-etil)-amida de ácido como um pó branco. (Produção 20,0 mg, 47%).
HRMS (ES+) m/z Calculado para C21H21N5O4S + H [(M+H)+]: 440,1387. Encontrado: 440.1384.
Exemplo 15
Sal de ácido trifluoro-acético de (2-hidróxi-etil)-amida de ácido 4-amino-3-(5- [4-(2-hidróxi-etil)-5-metil-4H-[1,2,4]triazol-3-il)-2-metil-fenoximetil)-tienor3,2- c]piridina-7-carboxílico
<formula>formula see original document page 25</formula>
37009-148B M.W. 482.565+114.024 C23H26N6O4S-C2HF3O2
O segundo produto (do Exemplo 14 supra) forneceu sal de ácido trifluoro-acético de (2-hidróxi-etil)-amida de ácido 4-amino-3-{5-[4-(2-hidróxi- etil)-5-metil-4H-[1,2,4]triazol-3-il]-2-metil-fenóxi-metil}-tieno[3,2-c]piridina-7- carboxílico. (Produção 10,0 mg, 21%).
HRMS (ES+) m/z Calculado para C23H26N6O4S + H [(M+H)+]: 483.1809. Encontrado: 483.1808.
Exemplo 16
Sal de ácido tolueno-4-sulfônico de (2-hidróxi-etil)-amida de ácido 4-amino-3- [2-metil-5-(5-metil-M ,3,4]oxadiazol-2-il)-fenoximetil1-tienor3,2-c]piridina-7- carboxílico <formula>formula see original document page 26</formula>
37009-187Α M.W. 439,497+172.204 C21H21N5O4S•C7H8O3S
Uma solução de ácido (2-hidróxi-etil)-amida 4-amino-3-[2-metil- 5-(5-metil-[1,3,4]oxadiazol-2-il)-fenoximetil]-tieno[3,2-c]piridina-7-carboxílico (0,045 g, 0.,10 mmol) (do Exemplo 14 supra) em metanol (6 mL) foi tratada com hidrato de ácido tolueno-sulfônico (19,5 mg, 0,10 mmol) (Aldrich) e a- quecida a 40 °C durante 30 minutos. A solução foi concentrada. O resíduo foi lavado com éter dietílico, dissolvido em água e Iiofilizado para fornecer sal de ácido tolueno-4-sulfônico de (2-hidróxi-etil)-amida de ácido 4-amino-3-[2- metil-5-(5-metil-[1,3,4]oxadiazol-2-il)-fenoximetil]-tieno[3,2-c]piridina-7- carboxílico. (Produção 60,8 mg, 97%).
HRMS (ES+) m/z Calculado para C21H21N5O4S + H [(M+H)+]: 440,1387. Encontrado: 440,1384.
Exemplo 17
5-iodo-2-metil-fenol
<formula>formula see original document page 26</formula>
M.W, 234.038 C7H7IO
5-iodo-2-metil-fenol foi publicado de acordo com o procedimento de Laugraud1 S.; Reinier, N. W096/32399, Publicado em 17 de Outubro de 1996.
Uma solução de 5-amino-O-cresol (10,0 g, 81 mmol) (AIdrich) em uma mistura de tetraidrofurano (100 mL), água (150 mL) e ácido sulfúrico concentrado (6 mL, 0.11 mmol) foi resfriado em um banho de água gelada. Uma solução de nitrito de sódio (5,6 g, 81 mmol) em água (30 mL) foi adicio- nada gota a gota durante 30 minutos. A mistura foi agitada com resfriamento durante mais 30 minutos. (Uma suspensão formada). Metal de cobre em pó (200 mg, 3 mmol) foi adicionado seguido por uma solução de iodeto de po- tássio (17,5 g, 0,11 mmol) em água (70 mL). A mistura foi deixada aquecer para temperatura ambiente e agitada durante 90 minutos em seguida despe- jada em água (200 mL). A mistura foi extraída com acetato de etila (2 X 400 mL). As camadas orgânicas foram lavadas com água (400 mL) e salmoura (400 mL), em seguida combinadas, secadas (MgSO4), filtradas e concentra- das. O resíduo foi purificado por cromatografia flash (Biotage 75L, hexanos - diclorometano 2:3 como solvente). As frações puras foram combinadas e o material recristalizado de hexanos para fornecer 5-iodo-2-metil-fenol como agulhas brancas em 2 colheitas. (Produção 10,08 g, 53,0%).
Exemplo 18
4-iodo-2-metoximetóxi-1-metil-benzeno
<formula>formula see original document page 27</formula>
M.W. 278,091 C9H11IO2
N,N-Diisopropiletilamina (8,3 mL, 47,4 mmol) (Aldrich) foi adicio- nada a uma suspensão de 5-iodo-2-metil-fenol (10,1 g, 43,1 mmol) (do E- xemplo 17 supra) em diclorometano (40 mL) com resfriamento in um banho de água gelada. Éter clorometil-metílico (6,5 mL, 86,1 mmol) (Aldrich) foi a- dicionado gota a gota e a mistura agitada em temperatura ambiente durante 5 horas. A mistura foi em seguida diluída com éter (200 mL) e lavada com água (200 mL), seguido por 0.1 N HCl (2 X 200 mL) e salmoura (200 mL). As camadas orgânicas foram novamente lavadas com éter (200 mL). Soluções orgânicas foram combinadas, secadas (MgSO4), filtradas e concentradas. O resíduo foi filtrado através de sílica gel (Biotage 40L) eluindo com diclorome- tano - hexenos (1:4 V/V). As frações foram combinadas e concentradas para fornecer 4-iodo-2-metoximetóxi-1-metil-benzeno como óleo incolor. (Produção 9,05 g, 75,6%).
Exemplo 19
4-Etinil-2-metoximetóxi-1-metil-benzeno
<formula>formula see original document page 27</formula>
M.W. 176,217 C11H12O2
Argônio foi borbulhado em uma mistura do 4-iodo-2- metoximetóxi-1-metil-benzeno (7,63 g, 27,5 mmol) (do Exemplo 18 supra), trietilamina (55 mL) (AIdrich) e acetonitrilo (100 mL) em um reator de pressão durante 20 minutos em temperatura ambiente. Etiniltrimetilsilano (9,2 mL, 64,5 mmol) (Aldrich), iodeto de cobre(l) (245 mg, 1,28 mmol) (AIdrich) e pa- ládio(ll) de diclorobis(trifenil-fosfina) (911 mg, 1,29 mmol) (Aldrich) foram a- dicionados. O reator foi tampado e a mistura aquecida a 100 0C durante 5 horas com agitação magnética. Após resfriamento para temperatura ambien- te, a mistura foi suspensa em éter dietílico (250 mL) e água (250 mL) e filtra- da através de Celite®. As camadas foram separadas. Camada orgânica foi lavada com água (250 mL) e salmoura (250 mL). As camadas orgânicas fo- ram novamente lavadas com éter (250 mL). As camadas orgânicas foram combinadas, secadas (MgS04), filtradas e concentradas. O resíduo foi dis- solvido em metanol (50 mL) e carbonato de potássio (500 mg) foi adiciona- do. A mistura foi agitada em temperatura ambiente durante a noite. Após concentrar, O resíduo foi dividido entre éter dietílico (2 X 250 mL) e água (2 X 250 mL). As camadas orgânicas foram lavadas com salmoura (200 mL), combinadas, secadas (MgSO4), filtradas e concentradas. O resíduo foi purifi- cado por cromatografia flash (Biotage 40 L, hexanos, em seguida hexanos - diclorometano 9:1 e 3:1 como solvente) para fornecer 4-etinil-2- metoximetóxi-1-metil-benzeno como um óleo marrom. (Produção 4,65 g, 96,2 %).
Exemplo 20 4-(3-metoximetóxi-4-metil-fenil)-1-metil-1 H-[1.2,31triazol
<formula>formula see original document page 28</formula>
M.W. 233,27 C12H15N3O2
A uma suspensão de 4-etinil-2-metoximetóxi-1-metil- benzeno (0,64 g, 3,63 mmol) (do Exemplo 19 supra), iodometano (0,23 mL, 3,63 mmol) (Aldrich) e azida de sódio (0,24 g, 3,63 mmol) (Aldrich) em uma mistura de água (6 mL) e t-butanol (6 mL) foi adicionado pó de cobre (0,17 g, 2,68 mmol) e solução de sulfato de cobre aquosa (1 N, 0,7 mL). A mistura reacional foi aquecida a 125 0C durante 20 minutos em um reator de micro- ondas. Após resfriamento, a mistura reacional foi dividida entre acetato de etila e água. A fase aquosa foi extraída com acetato de etila (2X). A fase or- gânica combinada foi água e salmoura, secada (MgSO4) e concentrada. O resíduo foi purificado por cromatografia flash eluindo com 5 - 60% de acetato de etila em hexanos para fornecer 4-(3-metoximetóxi-4-metil-fenil)-1-metil- 1H-[1,2,3]triazol. (Produção 0,57 g, 67%).
Exemplo 21
2-metil-5-(1 -metil-1 H-M ,2,31triazol-4-il)-fenol
<formula>formula see original document page 29</formula>
M.W. 189,219 C10HnN3O
A uma solução de 4-(3-metoximetóxi-4-metil-fenil)-1-metil-1H- [1,2,3]triazol (0,57 g, 2,44 mmol) (do Exemplo 20 supra) em tetraidrofurano - 2-propanol (1:1, 20 mL) foi adicionado HCl em diaxano (4 M, 8 mL) (Aldrich). A mistura reacional foi agitada em temperatura ambiente durante 2 dias. A solução foi concentrada. O resíduo foi diluído com acetato de etila, lavado com solução de bicarbonato de sódio aquoso saturado e salmoura, secada (MgSO4) e concentrada. O resíduo recristalizado de acetato de etila - hexa- nos e secada para fornecer 2-metil-5-(1-metil-1H-[1,2,3]triazol-4-il)-fenol. (Produção 0,24 g, 52%).
Exemplo 22
Éster etílico de ácido 4-cloro-3-f2-metil-5-(1 -metil-1Η-[1,2,3]triazol-4-il)- fenoximetin-tieno[3.2-c]piridina-7-carboxílico
<formula>formula see original document page 29</formula>
M.W. 442,928 C21H19CIN4O3S
Uma suspensão de carbonato de césio (0,56 g, 1,73 mmol) (Al- drich), 2-metil-5-(1-metil-1H-[1,2,3]triazol-4-il)-fenol (0,24 g, 1,27 mmol) (do Exemplo 21 supra) em tetraidrofurano - N,N-dimetilformamida (5:2, 17,5 mL) foi aquecida a 70°C durante 3 horas. Éster etílico de ácido 3-bromometil-4- cloro-tieno[3,2-c]piridina-7-carboxílico (0,40 g, 1,15 mmol) (do Exemplo 1 supra) foi adicionada. O aquecimento foi continuado durante 18 horas. A mistura reacional foi dividida entre acetato de etila e água. A fase aquosa foi extraída com acetato de etila (2X). A fase orgânica combinada foi lavada com água e salmoura, secada (MgSO4) e concentrada. O resíduo foi purifi- cado por cromatografia flash eluindo com 30% de acetato de etila em diclo- rometano para fornecer éster etílico de ácido 4-cloro-3-[2-metil-5-(1-metil-1 H- [1,2,3]triazol-4-il)-fenóxi-metil]-tieno[3,2-c]piridina-7-carboxílico. (Produção 0,25 g, 48%).
Exemplo 23
Éster etílico de ácido 4-amino-3-f2-metil-5-(1-metil-1H-[1,2,3]triazol-4-il)- fenoximetin-tieno[3,2-clpiridina-7-carboxílico
37009-158A M.W. 423,497 C21H21N5O3S
O gás de amônia foi borbulhado em uma solução de éster etílico de ácido 4-cloro-3-[2-metil-5-(1 -metil-1 H-[1,2,3]triazol-4-il)-fenóxi-metil]- tieno[3,2-c]piridina-7-carboxílico (0,17g, 0,38 mmol) (do Exemplo 22 supra) em 2-propanol (15 mL) durante 20 minutos. A mistura foi aquecida em um reator de microondas a 140 0C durante 2 horas. A mistura reacional foi con- centrada. O resíduo foi lavado com metanol quente, filtrado e secado para fornecer éster etílico de ácido 4-amino-3-[2-metil-5-(1-metil-1 H-[1,2,3]triazol- 4-il)-fenoximetil]-tieno[3,2-c]piridina-7-carboxílico como um pó branco. (Pro- dução 0,10 g, 63%).
HRMS (ES+) m/z Calculado para C21H21N5O3S + H [(M+H)+]: 424.1438. Encontrado: 424,1436.
Exemplo 24
Ácido (2-hidróxi-etil)-amida 4-amino-3-í2-metil-5-( 1 -metil-1 H-[1,2,3]triazol-4- il)-fenoximetil1-tieno[3,2-clpiridina-7-carboxílico
<formula>formula see original document page 30</formula> 37009-159A M.W. 438,512 C2IH22N6O3S
Uma solução de 4-amino-3-[2-metil-5-(1-metil-1H-[1,2,3]triazol-4- il)-fenoximetil]-tieno[3,2-c]piridina-7-carboxílico éster etílico de ácido (0,050 g, 0,11 mmol) (do Exemplo 23 supra) em dimetilsulfóxido (0.5 ml_) foi tratada com etanolamina (1.5 mL) (AIdrich) e aquecida a 160 0C durante 2 horas em um reator de microondas. A mistura reacional foi purificada por Coluna C18 eluindo com acetonitrilo - água para fornecer ácido (2-hidróxi-etil)-amida A- amino-3-[2-metil-5-(1 -metil-1 H-[1,2,3]triazol-4-il)-fenoximetil]-tieno[3,2- c]piridina-7-carboxílico como um pó branco. (Produção 31,0 mg, 60%).
HRMS (ES+) m/z Calculado para C2IH22N6O3S + H [(M+H)+]: 439,1547. Encontrado: 439,1545.
Exemplo 25
3-(2H-Tetrazol-5-il)-fenol
M.W. 162.15 C7H6N4O
Uma mistura de 3-cianofenol (4,14 g, 34,75 mmol) (Aldrich), azi- da de sódio (2,49 g, 38,23 mmol) (Aldrich) e cloreto de amônio (2,05 g, 38,23 mmol) em N,N-dimetilformamida (30 mL) foram aquecidos a 160 0C durante 18 horas. A mistura reacional foi concentrada. O resíduo foi purificado por Coluna C18 eluindo com acetonitrilo - água para fornecer 3-(2H-tetrazol-5-il)- fenol. (Produção 0,9 g, 16%).
Exemplo 26
3-(2-(4-metóxi-benzil)-2H-tetrazol-5-il)-fenol
<formula>formula see original document page 31</formula>
M.W. 282.304 C15H14N4O2
Uma suspensão de 4-metoxibenzilcloreto (0,26 mL, 1,94 mmol) (Aldrich), iodeto de potássio (0,31 g, 1,85 mmol) (Aldrich), 3-(2H-tetrazol-5- il)-fenol (0.3 g, 1.85 mmol) (do Exemplo 25 supra), carbonato de potássio (0,38 g, 2,78 mmol) e 18-coroa-6 (24,0 mg, 0,09 mmol) (Aldrich) em N,N- dimetilformamida (15 mL) foi aquecida a 65 °C durante 1 dia. A mistura rea- cional foi dividida entre acetato de etila e água. A fase aquosa foi extraída com acetato de etila (2X). A fase orgânica combinada foi lavada com água e salmoura, secada (MgSO4) e concentrada. O resíduo foi purificado por cro- matografia flash eluindo com 5 - 40% de acetato de etila em hexanos para fornecer 3-[2-(4-metóxi-benzil)-2H-tetrazol-5-il]-fenol . (Produção 0,38 g, 73%).
Exemplo 27
Éster etílico de ácido 4-cloro-3-{3-[2-(4-metóxi-benzil)-2H-tetrazol-5-il]- fenoximetil}-tieno[3,2-c]piridina-7-carboxílico
<formula>formula see original document page 32</formula>
M.W. 536,013 C26H22CIN5O4S
Uma suspensão de carbonato de césio (0,60 g, 1,83 mmol), 3-[2- (4-metóxi-benzil)-2H-tetrazol-5-il]-fenol (0,38g, 1,35 mmol) (do Exemplo 26 supra) em tetraidrofurano - N,N-dimetilformamida (5:2, 17,5 mL) foi aquecida a 70 °C durante 3 horas. Éster etílico de ácido 3-bromometil-4-cloro- tieno[3,2-c]piridina-7-carboxílico (0.41 g, 1.22 mmol) (do Exemplo 1 supra) foi adicionada. O aquecimento foi continuado durante 18 horas. A mistura reacional foi dividida entre acetato de etila e água. A fase aquosa foi extraída com acetato de etila (2X). A fase orgânica combinada foi lavada com água e salmoura, secada (MgSO4) e concentrada. O resíduo foi purificado por cro- matografia flash eluindo com 30% de acetato de etila em hexanos para for- necer 4-cloro-3-{3-[2-(4-metóxi-benzil)-2H-tetrazol-5-il]-fenoximetil}-tieno[3,2- c]piridina-7-carboxílico éster etílico de ácido. (Produção 0,17 g, 26%).
Exemplo 28
Éster etílico de ácido 4-amino-3-{3-[2-(4-metóxi-benzil)-2H-tetrazol-5-il]- fenoximetil}-tieno[3,2-c]piridina-7-carboxílico <formula>formula see original document page 33</formula>
37009-202Α M.W. 516.583 C26H24N6O4S
O gás de amônia foi borbulhado em uma solução de 4-cloro-3- {3-[2-(4-metóxi-benzil)-2H-tetrazol-5-il]-fenóxi-metil}-tieno[3,2-c]piridina-7- carboxílico éster etílico de ácido (0.17 g, 0.32 mmol) (do Exemplo 27 supra) in 2-propanol (15 ml_) durante 20 minutos. A mistura foi aquecida em um rea- tor de microondas a 140 0C durante 2 horas. A mistura reacional foi concen- trada. O resíduo foi lavado com metanol quente, filtrado e secado para for- necer éster etílico de ácido 4-amino-3-{3-[2-(4-metóxi-benzil)-2H-tetrazol-5- il]-fenoximetil}-tieno[3,2-c]piridina-7-carboxílico. (Produção 0,15 g, 94%).
HRMS (ES+) m/z Calculado para C26H24N6O4S + H [(M+H)+]: 517.1653. Encontrado: 517,1653.
Exemplo 29
ácido (2-hidróxi-etil)-amida 4-amino-3-(3-f2-(4-metóxi-benzil)-2H-tetrazol-5- il1-fenoximetil)-tienoí3,2-c1piridina-7-carboxílico
37009-208A M.W. 531.598 C26H25N7O4S
Uma solução de éster etílico de ácido 4-amino-3-{3-[2-(4-metóxi- benzil)-2H-tetrazol-5-il]-fenoximetil}-tieno[3,2-c]piridina-7-carboxílico (0,050 g, 0,10 mmol) (do Exemplo 28 supra) em dimetilsulfóxido (0.5 ml) foi tratada com etanolamina (1,5 ml) (AIdrich) e aquecida a 160 °C durante 2 horas em um reator de microondas. O precipitado foi filtrado e secado para fornecer (2-hidróxi-etil)-amida de ácido 4-amino-3-{3-[2-(4-metóxi-benzil)-2H-tetrazol- 5-il]-fenoximetil}-tieno[3,2-c]piridina-7-carboxílico. (Produção 18,0 mg, 35%).
HRMS (ES+) m/z Calculado para C26H25N7O4S + H[(M+H)+]: 532,1762. Encontrado: 532,1762. Exemplo 30
3-(2-metil-2H-tetrazol-5-il)-fenol
<formula>formula see original document page 34</formula>
M.W. 176,179 C8H8N4O
Uma suspensão de carbonato de césio (0,60 g, 1,83 mmol), 3- (2H-tetrazol-5-il)-fenol (0,30 g, 1,85 mmol) (do Exemplo 25 supra) em tetrai- drofurano - N,N-dimetilformamida (5:2, 17,5 mL) foi aquecida a 70°C duran- te 3 horas. Iodometano (0.29 g, 2,.04 mmol) (AIdrich) foi adicionada. O a- quecimento foi continuado durante 18 horas. A mistura reacional foi dividida entre acetato de etila e água. A fase aquosa foi extraída com acetato de etila (2X). A fase orgânica combinada foi lavada com água e salmoura, secada (MgSO4) e concentrada. O resíduo foi purificado por cromatografia flash elu- indo com 40% de acetato de etila em hexanos para fornecer 3-(2-metil-2H- tetrazol-5-il)-fenol. (Produção 0,23 g, 70%).
Exemplo 31
Éster etílico de ácido 4-cloro-3-[3-(2-metil-2H-tetrazol-5-il)-fenoximetil]- tieno[3.2-c]piridina-7-carboxílico
M.W. 429.888 Ci9H16CIN5O3S
Uma mistura de 3-bromometil-4-cloro-tieno[3,2-c]piridina-7- carboxílico éster etílico de ácido (042 g, 1.24 mmol) (do Exemplo 1 supra), 3- (2-metil-2H-tetrazol-5-il)-fenol (0,23 g, 1,31 mmol) (do Exemplo 30 supra), iodeto de potássio (0.21 g, 1.24 mmol), carbonato de potássio (0,38 g, 2,78 mmol) e 18-coroa-6 (16,0 mg, 0,06 mmol) em N,N-dimetilformamida (15 mL) foi aquecida a 65°C durante 1 dia. A mistura reacional foi dividida entre ace- tato de etila e água. A fase aquosa foi extraída com acetato de etila (2X). A fase orgânica combinada foi lavada com água e salmoura, secada (MgSO4) e concentrada. O resíduo foi purificado por cromatografia flash eluindo com 30% de acetato de etila em hexanos para fornecer éster etílico de ácido 4- cloro-3-[3-(2-metil-2H-tetrazol-5-il)-fenoximetil]-tieno[3,2-c]piridina-7- carboxílico. (Produção 0.15 g, 28%).
Exemplo 32
Éster etílico de ácido 4-amino-3-[3-(2-metil-2H-tetrazol-5-il)-fenoximetil]- tieno[3,2-c]piridina-7-carboxílico
<formula>formula see original document page 35</formula>
37009-206A M.W. 410.458 C19H18N6O3S
O gás de amônia foi borbulhado em uma solução de éster etílico de ácido 4-cloro-3-[3-(2-metil-2H-tetrazol-5-il)-fenoximetil]-tieno[3,2- c]piridina-7-carboxílico (0,15 g, 0,35 mmol) (do Exemplo 31 supra) em 2- propanol (15 mL) durante 20 minutos. A mistura foi aquecida em um reator de microondas a 140°C durante 2 horas. A mistura reacional foi concentra- da. O resíduo foi lavado com metanol quente, filtrado e secado para fornecer éster etílico de ácido 4-amino-3-[3-(2-metil-2H-tetrazol-5-il)-fenoximetil]- tieno[3,2-c]piridina-7-carboxílico como um pó branco. (Produção 0,11 g, 79%).
HRMS (ES+) m/z Calculado para C19H18N6O3S + H [(M+H)+]: 411,1234. Encontrado: 411.1235.
Exemplo 33
Ácido (2-hidróxi-etil)-amida 4-amino-3-[3-(2-metil-2H-tetrazol-5-il)- fenoximetill-tienor3,2-clpiridina-7-carboxílico
<formula>formula see original document page 35</formula>
37009-209A M.W. 425.472 C19H19N7O3S
Uma solução de éster etílico de ácido 4-amino-3-[3-(2-metil-2H- tetrazol-5-il)-fenoximetil]-tieno[3,2-c]piridina-7-carboxílico (0,050 g, 0,12 mmol) (do Exemplo 32 supra) em dimetilsulfóxido (0,5 mL) foi tratada com etanolamina (1,5 mL) (AIdrich) e aquecida a 160°C durante 2 horas em um reator de microondas. O precipitado foi filtrado, lavado com metanol e seca- do para fornecer ácido (2-hidróxi-etil)-amida 4-amino-3-[3-(2-metil-2H- tetrazol-5-il)-fenoximetil]-tieno[3,2-c]piridina-7-carboxílico como um pó bran- co. (Produção 39,0 mg, 75%).
HRMS (ES+) m/z Calculado para Ci9H19N7O3S + H [(M+H)+]: 426,1343. Encontrado: 426,1344.
Exemplo 34
5-[1 -(4-cloro-benzil)-1 Η-Γ1,2,31triazol-4-ill-2-metil-fenol
<formula>formula see original document page 36</formula>
M.W. 299,762 C16H14CIN3O
A uma suspensão de 4-etinil-2-metoximetóxi-1-metil-benzeno (1,50 g, 8,50 mmol) (do Exemplo 19 supra), brometo de 4-clorobenzila (1,76 g, 8,50 mmol) e azida de sódio (0,56 g, 8,50 mmol) em uma mistura de água (12 mL) e t-butanol (12 mL) foi adicionado pó de cobre (0,40 g, 6,30 mmol) e solução aquosa de solução sulfato de cobre (1 N, 1,64 mL). A mistura rea- cional foi aquecida a 130 0C durante 30 minutos em um reator de microon- das. Após resfriamento, a mistura reacional foi dividida entre diclorometano e água. A fase aquosa foi extraída com diclorometano (2X). A fase orgânica combinada foi lavada com água e salmoura, secada (MgSO4) e concentrada.
O resíduo foi purificado por cromatografia flash eluindo com 40% de acetato de etila em hexanos para fornecer 5-[1-(4-cloro-benzil)-1H-[1,2,3]triazol-4-il]- 2-metil-fenol; (Produção 0,75 g, 59%); e 1-(4-cloro-benzil)-4-(3-metoximetóxi- 4-metil-fenil)-1H[1,2,3]triazol. (Produção 0,61 g, 21%).
Exemplo 35
Éster etílico de ácido 4-cloro-3-(5-(1-(4-cloro-benzil)-1H-n,2,3]triazol-4-il]-2- metil-fenoximetil)-tieno[3,2-clpiridina-7-carboxílico
<formula>formula see original document page 36</formula>
M.W. 553.471 C27H22CI2N4O3S Uma suspensão de carbonato de césio (1,11 g, 3,41 mmol), 5-[1- (4-cloro-benzil)-1H-[1,2,3]triazol-4-il]-2-metil-fenol (0,75 g, 2,50 mmol) (do Exemplo 34 supra) em tetraidrofurano - N,N-dimetilformamida (5:2, 23 mL) foi aquecida a 70 °C durante 2 horas. Éster etílico de ácido 3-bromometil-4- cloro-tieno[3,2-c]piridina-7-carboxílico (0,76 g, 2,27 mmol) (do Exemplo 1 supra) foi adicionado. O aquecimento foi continuado durante 18 horas. A mistura reacional foi dividida entre acetato de etila e água. O precipitado foi filtrado, lavado com acetato de etila e secado para fornecer éster etílico de ácido 4-cloro-3-{5-[1-(4-cloro-benzil)-1H-[1,2,3]triazol-4-il]-2-metil- fenoximetil}-tieno[3,2-c]piridina-7-carboxílico como um pó branco. (Produção 0,33 g, 26%).
Exemplo 36
Éster etílico de ácido 4-amino-3-{5-[1-(4-cloro-benzil)-1H-[1,2,3]triazol-4-il]-2- metil-fenoximetil)-tieno[3,2-c]piridina-7-carboxílico
<formula>formula see original document page 37</formula>
M.W. 534.041 C27H24CIN5O3S
O gás de amônia foi borbulhado em uma solução de éster etílico de ácido 4-cloro-3-{5-[1-(4-cloro-benzil)-1H-[1,2,3]triazol-4-il]-2-metil- fenoximetil}-tieno[3,2-c]piridina-7-carboxílico (0,33 g, 0,60 mmol) (do Exem- plo 35 supra) in 2-propanol (30 mL) durante 20 minutos. A mistura foi aque- cida em um reator de microondas a 140 0C durante 2 horas. A mistura rea- cional foi concentrada. O resíduo foi lavado com metanol quente, filtrado e secado para fornecer éster etílico de ácido 4-amino-3-{5-[1-(4-cloro-benzil)- 1H-[1,2,3]triazol-4-il]-2-metil-fenoximetil}-tieno[3,2-c]piridina-7-carboxílico como um pó branco. (Produção 0,23 g, 72%).
Exemplo 37
Ácido (2-hidróxi-etil)-amida 4-amino-3-(5-[1-(4-cloro-benzil)-1H-[1,2,3]triazol- 4-il]-2-metil-fenoximetil)-tieno[3,2-c]piridina-7-carboxílico <formula>formula see original document page 38</formula>
M.W. 549.056 C27H25CIN6O3S
Uma solução de éster etílico de ácido 4-amino-3-{5-[1-(4-cloro- benzil)-1H-[1,2,3]triazol-4-il]-2-metil-fenoximetil}-tieno[3,2-c] piridina-7- carboxílico (0,050 g, 0,09 mmol) (do Exemplo 36 supra) em dimetilsulfóxido (0,5 mL) foi tratada com etanolamina (1,5 mL) (Aldrich) e aquecida a 160°C durante 2 horas em um reator de microondas. O precipitado foi filtrado, lava- do com metanol e secado para fornecer ácido (2-hidróxi-etil)-amida 4-amino- 3-{5-[1-(4-cloro-benzil)-1H-[1,2,3]triazol-4-il]-2-metil-fenoximetil}-tieno[3,2- c]piridina-7-carboxílico como um pó branco. (Produção 34.5 mg, 68%).
HRMS (ES+) m/z Calculado para C27H25CIN6O3S + H [(M+H)+]: 549,1470. Encontrado: 549.1459.
Exemplo 38
Sal de ácido tolueno-4-sulfônico de (2-hidróxi-etil)-amida de ácido 4-amino-3- (5-[1 -(4-cloro-benzil)-1Η-[1,2,3]triazol-4-in-2-metil-fenoximetil)-tieno[3.2- c]piridina-7-carboxílico
<formula>formula see original document page 38</formula>
M.W. 549.056+172.204 C27H25CIN6O3S-C7H8O3S
A solução de ácido (2-hidróxi-etil)-amida 4-amino-3-{5-[1-(4- cloro-benzil)-1 H-[1,2,3]triazol-4-il]-2-metil-fenoximetil}-tieno[3,2-c] piridina-7- carboxílico (0,159 g, 0,29 mmol) (do Exemplo 37 supra) em metanol (10 mL) foi tratada com hidrato de ácido tolueno-sulfônico (61,0 mg, 0,319 mmol) e aquecida em temperatura ambiente durante 40 minutos. A solução foi con- centrada. O resíduo foi lavado com éter dietílico, dissolvido em água e liofili- zado a sal de ácido 1,5 tolueno-4-sulfônico de ácido (2-hidróxi-etil)-amida 4- amino-3-{5-[1-(4-cloro-benzil)-1H-[1,2,3]triazol-4-il]-2-metil-fenoximetil}- tieno[3,2-c]piridina-7-carboxílico. (Produção 0,21 g, 100%).
HRMS (ES+) m/z Calculado para C27H25CIN6O3S + H [(M+H)+]: 549,1470. Encontrado: 549,1467.
Exemplo 39
Ácido N'-í2-(4-cloro-fenil)-acetil1-hidrazida 3-hidróxi-4-metil-benzóico
<formula>formula see original document page 39</formula>
M.W. 318.76 C16H15CIN2O3
Uma mistura de cloreto de 4-clorofenilacetila (1,36 g, 7,22 mmol) (AIdrich)1 hidrazida de ácido 3-hidróxi-4-metil-benzóico (1,0 g, 6,02 mmol) (do Exemplo 6 supra) e trietilamina (1,36 mL) em tetraidrofurano (20 mL) foi aquecida a 85 °C durante 1 dia. A mistura reacional foi dividida entre acetato de etila e água. A fase aquosa foi extraída com acetato de etila (1X). A fase orgânica combinada foi lavada com água e salmoura, secada (sulfato de magnésio) e concentrada. O resíduo foi lavado com acetato de etila e diclo- rometano e secado para fornecer N'-[2-(4-cloro-fenil)-acetil]-hidrazida de áci- do 3-hidróxi-4-metil-benzóico. (Produção 0,91 g, 95%).
Exemplo 40
5-[5-(4-cloro-benzilH1.3,41-oxadiazol-2-il1-2-metil-fenol
M.W. 300.75 C16H16CIN2O2
A uma solução de N'-[2-(4-cloro-fenil)-acetil]-hidrazida de ácido 3-hidróxi-4-metil-benzóico (0,91 g, 2,85 mmol) (do Exemplo 39 supra) em acetonitrilo (20 mL) foi adicionado diisopropiletilamina (3,0 mL, 17,1 mmol) e trifenilfosfina (1,50 g, 5,70 mmol). Após agitar 5 minutos, hexacloroetano (1,01 g, 4,28 mmol) (AIdrich) foi adicionado e a mistura foi deixada agitar durante 2 dias em temperatura ambiente. O solvente foi evaporado. O resí- duo foi dividido entre acetato de etila e água. A fase aquosa foi extraída com acetato de etila (1X). A fase orgânica combinada foi lavada com água e sal- moura, secada (sulfato de magnésio) e concentrada. O resíduo foi purificado por cromatografia flash eluindo com 20% de acetato de etila em hexanos para 5-[5-(4-cloro-benzil)-[1,3,4]-oxadiazol-2-il]-2-metil-fenol. (Produção 0,68 g, 79%).
Exemplo 41
Éster etílico de ácido 4-cloro-3-(5-[5-(4-cloro-benzil)-íl,3,4]oxadiazol-2-in-2- metil-fenoximetilHienoí3.2-c1piridina-7-carboxílico
<formula>formula see original document page 40</formula>
M.W. 554.46 C27H2ICI2N3O4S
Uma suspensão de carbonato de césio (0,54 g, 1,66 mmol), 5-[5- (4-cloro-benzil)-[1,3,4]-oxadiazol-2-il]-2-metil-fenol (0,36 g, 1,20 mmol) (do Exemplo 40 supra) em tetraidrofurano/N,N-dimetilformamida (5:2, 21 mL) foi aquecida a 68 0C durante 2 horas. Éster etílico de ácido 3-bromometil-4- cloro-tieno[3,2-c]piridina-7-carboxílico (0,36 g, 1,08 mmol) (do Exemplo 1 supra) foi adicionado. O aquecimento foi continuado durante 2 horas. A mis- tura reacional foi dividida entre acetato de etila e água. A fase aquosa foi extraída com acetato de etila (2X). A fase orgânica combinada foi lavada com água e salmoura, secada (sulfato de magnésio) e concentrada. O resí- duo foi lavado com acetato de etila e secado para fornecer éster etílico de ácido 4-cloro-3-{5-[5-(4-cloro-benzil)-[1,3,4]oxadiazol-2-il]-2-metil- fenoximetil}-tieno[3,2-c]piridina-7-carboxílico. (Produção 0,17 g, 26%).
Exemplo 42
Éster etílico de ácido 4-amino-3-(5-í5-(4-cloro-benzilH1,3,41oxadiazol-2-il1-2- metil-fenoximetil)-tieno[3,2-clpiridina-7-carboxnico
<formula>formula see original document page 40</formula>
M.W. 535.03 C27H23CIN4O4S
O gás de amônia foi borbulhado em uma solução de éster etílico de ácido 4-cloro-3-{5-[5-(4-cloro-benzil)-[1,3,4]oxadiazol-2-il]-2-metil- fenoximetil}-tieno[3,2-c]piridina-7-carboxílico (0,11 g, 0,20 mmol) (do Exemplo 41 supra) em 2-propanol (15 mL) durante 20 minutos. A mistura foi aquecida em um reator de microondas a 140 0C durante 5,5 horas. A mistura reacional foi concentrada. O resíduo foi lavado com metanol quente, filtrado e secado para fornecer éster etílico de ácido 4-amino-3-{5-[5-(4-cloro-benzil)- [1,3,4]oxadiazol-2-il]-2-metil-fenoximetil}-tieno[3,2-c]piridina-7-carboxílico. (Produção 0,07 g, 64%).
Exemplo 43
(2-hidróxi-etil)-amida de ácido 4-amino-3-{5-[5-(4-cloro-benzil)- [1,3,4]oxadiazol-2-il]-2-metil-fenoximetil}-tieno[3,2-c]piridina-7-carboxílico
<formula>formula see original document page 41</formula>
M.W. 550,037 C27H24CIN5O4S
Uma solução de éster etílico de ácido 4-amino-3-{5-[5-(4-cloro- benzil)-[1,3,4]oxadiazol-2-il]-2-metil-fenoximetil}-tieno[3,2-c]piridina-7- carboxílico (0,07 g, 0,13 mmol) (do Exemplo 42 supra) em dimetilsulfóxido (0,5 mL) foi tratada com etanolamina (1,5 mL) e aquecida a 160 °C durante 2,8 horas em um reator de microondas. A mistura reacional foi purificada por Cromatografia de coluna C18 e cromatografia de coluna SFC para fornecer (2-hidróxi-etil)-amida de ácido 4-amino-3-{5-[5-(4-cloro-benzil)- [1,3,4]oxadiazol-2-il]-2-metil-fenoximetil}-tieno[3,2-c]piridina-7-carboxílico como um pó branco. (Produção 8 mg, 11%).
HRMS (ES+) m/z Calculado para C27H24CIN5O4S + H[(M+H)+]: 550,1311. Encontrado: 550.1311.
Exemplo 44
N'-(4-cloro-benzoil)-hidrazida de ácido 3-hidróxi-4-metil-benzóico
<formula>formula see original document page 41</formula>
M.W. 304.74 C15H13CIN2O3 Uma mistura de cloreto de 4-clorobenzoíla (0,92 mL, 7,22 mmol) (Aldrich), hidrazida de ácido 3-hidróxi-4-metil-benzóico (1.0 g, 6.02 mmol) (do Exemplo 6 supra) e trietilamina (1.36 mL) em tetraidrofurano (20 mL) foi aquecida a 85°C durante 1 dia. A mistura reacional foi dividida entre acetato de etila e água. O precipitado foi lavado com acetato de etila e diclorometano e secado para fornecer N'-(4-cloro-benzoil)-hidrazida de ácido 3-hidróxi-4- metil-benzóico. (Produção 1.28 g, 70%).
Exemplo 45
5-[5-(4-cloro-fenil)-[1.3.4]-oxadiazol-2-il]-2-metil-fenol
<formula>formula see original document page 42</formula>
M.W. 286.72 C15H11CIN2O2
A uma solução de N'-(4-cloro-benzoila-hidrazida de ácido 3- hidróxi-4-metil-benzóico ácido (1,28 g, 4,20 mmol) (do Exemplo 44 supra) em acetonitrilo (20 mL) foi adicionada diisopropiletilamina (4,4 mL, 25,2 mmol) e trifenilfosfina (2,21 g, 8.40 mmol). Após agitar 5 minutos, hexacloro- etano (1,49 g, 6,30 mmol) (Aldrich) foi adicionado e a mistura foi deixada agitar durante 1 dia em temperatura ambiente. O solvente foi evaporado. O resíduo foi dividido entre acetato de etila e água. A fase aquosa foi extraída com acetato de etila (1X). A fase orgânica combinada foi lavada com água e salmoura, secada (sulfato de magnésio) e concentrada. O resíduo foi purifi- cado por cromatografia flash eluindo com 0 - 60% de acetato de etila em he- xanos para fornecer 5-[5-(4-cloro-fenil)-[1,3,4]-oxadiazol-2-il]-2-metil-fenol. (Produção 0.34 g, 28%).
Exemplo 46
Éster etilico de ácido 4-cloro-3-(5-[5-(4-cloro-fenil)-[1,3,4]oxadiazol-2-il]-2- metil-fenóxi-metil)-tieno[3,2-c]piridina-7-carboxílico
<formula>formula see original document page 42</formula>
M.W. 540,43 C26H19CI2N3O4S
Uma suspensão de carbonato de césio (0,54 g, 1,66 mmol), 5-[5- (4-cloro-benzil)-[1,3,4]-oxadiazol-2-il]-2-metil-fenol (0,34 g, 1,19 mmol) (do Exemplo 45 supra) em tetraidrofurano/N,N-dimetilformamida (5:2, 21 mL) foi aquecida a 68°C durante 2 horas. Éster etílico de ácido 3-bromometil-4- cloro-tieno[3,2-c]piridina-7-carboxílico (0,36 g, 1,08 mmol) (do Exemplo 1 supra) foi adicionado. O aquecimento foi continuado durante 2 horas. A mis- tura reacional foi dividida entre acetato de etila e água. A fase aquosa foi extraída com acetato de etila (2X). A fase orgânica combinada foi lavada com água e salmoura, secada (sulfato de magnésio) e concentrada. O resí- duo foi lavado com acetato de etila e secado para fornecer éster etílico de ácido 4-cloro-3-{5-[5-(4-cloro-fenil)-[1,3,4]oxadiazol-2-il]-2-metil-fenoximetil}- tieno[3,2-c]piridina-7-carboxílico. (Produção 0,30 g, 47%).
Exemplo 47
Éster etílico de ácido 4-amino-3-(5-[5-(4-cloro-fenil)-[1,3,4]oxadiazol-2-il]-2- metil-fenóxi-metil)-tieno[3,2-c]piridina-7-carboxílico
<formula>formula see original document page 43</formula>
M.W. 521.00 C26H21CIN4O4S
O gás de amônia foi borbulhado em uma solução de éster etílico de ácido 4-cloro-3-{5-[5-(4-cloro-fenil)-[1,3,4]oxadiazol-2-il]-2-metil- fenoximetil}-tieno[3,2-c]piridina-7-carboxílico (0,30 g, 0,56 mmol) (do Exem- plo 46 supra) em 2-propanol (30 mL) durante 20 minutos. A mistura foi aque- cida em um reator de microondas a 140°C durante 5,5 horas. A mistura re- acional foi concentrada. O resíduo foi lavado com metanol quente, filtrado e secado para fornecer éster etílico de ácido 4-amino-3-{5-[5-(4-cloro-fenil)- [1,3,4]oxadiazol-2-il]-2-metil-fenoximetil}-tieno[3,2-c]piridina-7-carboxílico. (Produção 0,22 g, 76%).
Exemplo 48
Ácido 4-amino-3-(5-[5-(4-cloro-fenil)-[1,3,4]oxadiazol-2-il]-2-metil-fenóxi- metil)-tieno[3,2-c]piridina-7-carboxílico <formula>formula see original document page 44</formula>
M.W. 492,94 C24H17CIN4O4S
Uma solução aquosa de hidróxido de sódio (2 N, 2,0 mL, 1,0 mmol) foi adicionada a uma solução de 4-amino-3-{5-[5-(4-cloro-fenil)- [1,3,4]oxadiazol-2-il]-2-metil-fenoximetil}-tieno [3,2-c] piridina-7-carboxílico éster etílico de ácido (0.22 g, 0.42 mmol) (do Exemplo 47 supra) em tetrai- drofurano/metanol (3:1, 8 mL) e a mistura foi aquecida a 50 °C durante 1 dia. A mistura reacional foi concentrada e azeotropada com tolueno. O resíduo sólido foi triturado com acetato de etila. O sólido foi em seguida suspenso em água e tratado com ácido hidroclórico (1 N). Após agitar 30 minutos, sóli- do foi coletado, lavado com água e secado para fornecer ácido 4-amino-3-{5- [5-(4-cloro-fenil)-[1,3,4]oxadiazol-2-il]-2-metil-fenoximetil}-tieno[3,2-c]piridina- 7-carboxílico. (Produção 0,20 g, 95%). Exemplo 49
Sal de ácido trifluoroacético de (2-hidróxi-etil)-amida de ácido 4-amino-3-(5- [5-(4-cloro-fenil)-[1,3,4]oxadiazol-2-il1-2-metil-fenóxi-metil)-tieno[3,2-
clpiridina-7-carboxílico
<formula>formula see original document page 44</formula>
M.W. 650,032 C26H22CIN5O4S-C2HF3O2
Uma mistura de ácido 4-amino-3-{5-[5-(4-cloro-fenil)- [1,3,4]oxadiazol-2-il]-2-metil-fenoximetil}-tieno[3,2-c]piridina-7-carboxílico (0,10 g, 0,20 mmol) (do Exemplo 48 supra), hidrato de 1-hidroxibenzotriazol (43 mg, 0,32 mmol) (AIdrich) e 1,3-diisopropilcarbodiimida (0.044 mL, 0.17 mmol) (AIdrich) foram combinados em tetraidrofurano/ N,N-dimetilformamida (3,6 mL, 5:1) com agitação. Após 1 hora, etanolamina (0,036 mL, 0,60 mmol) (AIdrich) foi adicionada. A mistura foi agitada em temperatura ambiente du- rante 18 horas e em seguida concentrada. O resíduo foi purificado por HPLC eluindo com acetonitrilo/água para fornecer sal de ácido trifluoro-acético de (2-hidróxi-etil)-amida de ácido 4-amino-3-{5-[5-(4-cloro-fenil)- [1,3,4]oxadiazol-2-il]-2-metil-fenoximetil}-tieno[3,2-c]piridina-7-carboxíNco como um pó branco. (Produção 52 mg, 40%).
HRMS (ES+) m/z Calculado para C26H22CIN5O4S + H [(M+H)+]: 536.1154. Encontrado: 536.1149.
Exemplo 50
Ácido 3-metoximetóxi-4-metil-benzóico
<formula>formula see original document page 45</formula>
C10H12O4 M.W. 196.205
Uma solução de éster etílico de ácido 3-metoximetóxi-4-metil- benzóico (4.5 g, 20 mmol) (do Exemplo 3 supra) em uma mistura de etanol (50 mL), água (20 mL) e 1 N hidróxido de sódio aquoso (30 mL) foi agitada em temperatura ambiente durante 18 horas. A mistura foi concentrada para remover a maioria do etanol. A solução aquosa resultante foi acidificada com ácido acético (2,5 g, 41,6 mmol). Após repousar durante mais 30 minutos, o precipitado formado foi coletado por filtragem, lavado com água e secado para fornecer ácido 3-metoximetóxi-4-metil-benzóico como um pó branco. (Produção 3,82 g, 97%).
Exemplo 51
5-(3-Metoximetóxi-4-metil-fenil)-3-metil-f1,2,4loxadiazol
<formula>formula see original document page 45</formula>
M.W. 234.257 C12H14N2O3
Uma mistura de ácido 3-metoximetóxi-4-metil-benzóico (1,96 g, mmol) (do Exemplo 50 supra), 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiÍmida (1,92 g, 10 mmol) (AIdrich) e hidrato de 1-hidroxibenzotriazol (1,35 g, 10 mmol) (AIdrich) em Ν,Ν-dimetilformamida (25 mL) foi agitada em temperatu- ra ambiente durante 30 minutos. Oxima de acetamída (0,74 g, 10 mmol) (GFS Chemicals) foi adicionada e a mistura aquecida a 140 C durante 2 ho- ras. Após resfriamento, a mistura foi dividida entre acetato de etila (2X) e solução de bicarbonato aquosa saturada. Soluções de acetato de etila foram combinadas e concentrado e o resíduo purificado por cromatografia flash para fornecer 5-(3-metoximetóxi-4-metil-fenil)-3-metil-[1,2,4]oxadiazol. (Pro- dução 1,23 g, 52,5%).
Exemplo 52
2-metil-5-(3-metil-f1.2,41oxadiazol-5-il)-fenol
<formula>formula see original document page 46</formula>
M.W. 190.20 C10H10N2O
A uma solução de 5-(3-metiloximetóxi-4-metil-fenil)-3-metil- [1,2,4]oxadiazol (1,23 g, 5,25 mmol) (do Exemplo 51 supra) em tetraidrofura- no/2-propanol (1:1,30 ml) foi adicionado 13,1 mL de 4M HCI em diaxano (Aldrich). A mistura reacional foi agitada em temperatura ambiente durante 18 horas. A solução foi concentrada. O resíduo foi diluído com acetato de etila, lavado com água e salmoura, secado (sulfato de magnésio) e concen- trado. O resíduo recristalizado de acetato de etila/hexanos e secado para fornecer 2-metil-5-(3-metil-[1,2,4]oxadiazol-5-il)-fenol. (Produção 0,88 g,88%).
Exemplo 53
Éster etílico de ácido 4-cloro-3-í2-metil-5-(3-metil-n,2.41oxadiazol-5-il)- fenoximetin-tienor3,2-c1piridina-7-carboxílico.
<formula>formula see original document page 46</formula>
M.W. 443,91 C21H18CIN3O4S
Uma suspensão de carbonato de césio (1,02 g, 3,13 mmol), 2- metil-5-(3-metil-[1,2,4]oxadiazol-5-il)-fenol (0,42 g, 2,20 mmol) (do Exemplo 52 supra) em tetraidrofurano/N,N-dimetilformamida (5:2, 21 mL) foi aquecida a 70°C durante 2 horas. 3-bromometil-4-cloro-tieno[3,2-c]piridina-7- carboxílico éster etílico de ácido (0,68 g, 2,04 mmol) (do Exemplo 1 supra) foi adicionada. O aquecimento foi continuado durante 1 hora. A mistura rea- cional foi dividida entre diclorometano e água. A fase aquosa foi extraída com diclorometano (2X). A fase orgânica combinada foi lavada com água e salmoura, secada (sulfato de magnésio) e concentrada. O resíduo foi purifi- cado por cromatografia flash eluindo com 5 - 10% de acetato de etila em di- clorometano para fornecer éster etílico de ácido 4-cloro-3-[2-metil-5-(3-metil- [1,2,4]oxadiazol-5-il)-fenoximetil]-tieno[3,2-c]piridina-7-carboxílico. (Produção 0,51 g, 57%).
Exemplo 54
Éster etílico de ácido 4-amino-3-[2-metil-5-(3-metil-[1,2,4]oxadiazol-5-il)- fenoximetil]-tieno[3,2-c]piridina-7-carboxílico.
<formula>formula see original document page 47</formula>
M.W. 424,48 C21H20N4O4S
O gás de amônia foi borbulhado em uma solução de éster etílico de ácido 4-cloro-3-[2-metil-5-(3-metil-[1,2,4]oxadiazol-5-il)-fenoximetil]- tieno[3,2-c]piridina-7-carboxílico (0,42 g, 0,95 mmol) (do Exemplo 53 supra) in 2-propanol (30 mL) durante 20 minutos. A mistura foi aquecida em um rea- tor de microondas a 140°C durante 2 horas. A mistura reacional foi concen- trada. O resíduo foi lavado com metanol quente, filtrado e secado para for- necer éster etílico de ácido 4-amino-3-[2-metil-5-(3-metil-[1,2,4]oxadiazol-5- il)-fenoximetil]-tieno[3,2-c]piridina-7-carboxílico como um pó branco. (Produção 0,33 g, 83%).
Exemplo 55
Ácido 4-amino-3-[2-metil-5-(3-metil-[1,2,4]oxadiazol-5-il)-fenoximetil]- tieno[3,2-c]piridina-7-carboxílico
<formula>formula see original document page 47</formula>
M.W. 396,43 C19H16N4O4S
Uma solução aquosa de hidróxido de sódio (2 N1 3,0 mL, 1,5 mmol) foi adicionada a uma solução de éster etílico de ácido 4-amino-3-[2- metil-5-(3-metil-[1,2,4]oxadiazol-5-il)-fenoximetil]-tieno[3,2-c]piridina-7- carboxílico (0,33 g, 0,78 mmol) (do Exemplo 54 supra) em tetraidrofura- no/metanol (3:1, 8 mL) e a mistura foi aquecida a 50 °C durante 1 dia. A mis- tura reacional foi concentrada e azeotropada com tolueno. O resíduo sólido foi triturado com acetato de etila. O sólido foi em seguida suspenso em água e tratado com ácido hidroclórico (1N). Após agitar 30 minutos, sólido foi cole- tado, lavado com água e secado para ácido 4-amino-3-[2-metil-5-(3-metil- [1,2,4]oxadiazol-5-il)-fenoximetil]-tieno[3,2-c]piridina-7-carboxílico. (Produção 0,29 g, 94%).
Exemplo 56
Sal de ácido trifluoroacético de (2-hidróxi-etil)-amida de ácido 4-amino-3-[2- metil-5-(3-metil-[1,2,4]oxadiazol-5-il)-fenoximetil]-tieno-[3,2-c]piridina-7- carboxílico
<formula>formula see original document page 48</formula>
M.W. 553.516 C21H21N5O4S•C2HF3O2
Uma mistura de ácido 4-amino-3-[2-metil-5-(3-metil- [1,2,4]oxadiazol-5-il)-fenoximetil]-tieno[3,2-c]piridina-7-carboxílico (0,10 g, 0,25 mmol) (do Exemplo 55 supra), hidrato de 1-hidroxibenzotriazol (54 mg, 0,40 mmol) (Aldrich) e 1,3-diisopropilcarbodiimida (0,055 mL, 0,36 mmol) (AIdrich) foram combinados em tetraidrofurano / N,N-dimetilformamida (3,6 mL, 5:1) com agitação. Após 1 hora, etanolamina (0,046 mL, 0,76 mmol) (Al- drich) foi adicionada. A mistura foi agitada em temperatura ambiente durante 18 horas e em seguida concentrada. O resíduo foi purificado por HPLC elu- indo com acetonitrilo/água para fornecer sal de ácido trifluoro-acético de (2- hidróxi-etil)-amida de ácido 4-amino-3-[2-metil-5-(3-metil-[1,2,4]oxadiazol-5- il)-fenoximetil]-tieno[3,2-c]piridina-7-carboxílico como um pó branco. (Produ- ção 70 mg, 50%).
HRMS (ES+) m/z Calculado para C2iH2iN5O4S + H [(M+H)+]: 440,1387, Encontrado: 440,1384.
Exemplo 57
5-[4-(4-Metóxi-benzil)-5-metil-4H-[1,2,4]triazol-3-il]-2-metil-fenol <formula>formula see original document page 49</formula>
M.W. 309,37 C18H19N3O2
Uma mistura de 2-metil-5-(5-metil-[1,3,4]oxadiazol-2-il)-fenol (0,65 g; 3.42 mmol) (do Exemplo 11 supra) e 4-metoxibenzilamina (3,10 g; 22, mmol) (AIdrich) um vaso de reação selado foi aquecida em um banho de óleo a 150 - 155 0C durante 42 horas. A mistura reacional foi resfriada para temperatura ambiente e diluída com diclorometano e hexanos, forçando o produto precipitar-se fora da solução. O sólido cru foi coletado por filtragem e em seguida precipitado novamente de uma solução de diclorometano - me- tanol como o solvente foi evaporado. Sólido foi coletado e secado, para for- necer 5-[4-(4-metóxi-benzil)-5-metil-4H-[1,2,4]triazol-3-il]-2-metil-fenol . (Pro- dução 0,849 g, 76,3%).
Exemplo 58
Éster etílico de ácido 4-cloro-3-(5-f4-(4-metóxi-benzil)-5-metil-4H- [1,2,41triazol-3-il1-2-metil-fenoximetil)-tieno[3,2-c]piridina-7-carboxílico
<formula>formula see original document page 49</formula>
M.W. 563.08 C29H27CIN4O4S
Carbonato de potássio (0,246 g; 1.67 mmol) foi adicionado a uma solução de 5-[4-(4-metóxi-benzil)-5-metil-4H-[1,2,4]triazol-3-il]-2-metil- fenol (0,17 g; 0,55 mmol) (do Exemplo 57 supra) DMF (3,4 mL) e a mistura foi agitada em temperatura ambiente durante 5 minutos. Éster etílico de áci- do 3-bromometil-4-cloro-tieno[3,2-c]piridina-7-carboxílico (0,246 g; 0,74 mmol) (do Exemplo 1 supra) foi em seguida adicionado gado vacum e a agi- tação continuou em temperatura ambiente durante 4.25 horas. A mistura vermelha escura foi diluída com acetato de etila e a mistura foi lavada duas vezes com água e em seguida uma vez com salmoura. A fase orgânica foi secada sobre sulfato e concentrada. O material cru foi purificado por croma- tografia flash (coluna de 80 g, eluindo com 4% metanol em diclorometano seguido por um gradiente a 40% metanol). As frações contendo o produto foram combinadas e concentradas. Um pequeno contamitante foi em segui- da removido do material cromatografado concentrando-se uma solução de diclorometano - hexanos do material em um pequeno volume, resultando na precipitação do produto como um sólido branco que foi em seguida coletado por filtragem e secado para fornecer éster etílico de ácido 4-cloro-3-{5-[4-(4- metóxi-benzil)-5-metil-4H-[1,2,4]triazol-3-il]-2-metil-fenóxi-metil}-tieno[3,2- c]piridina-7-carboxílico. (Produção 0,188 g; 60,8%).
Exemplo 59
Éster etílico de ácido 4-amino-3-(5-r4-(4-metóxi-benzil)-5-metil-4H- [1,2,4]triazol-3-il1-2-metil-fenoximetil)-tieno[3,2-c1piridina-7-carboxílico.
<formula>formula see original document page 50</formula>
M.W. 543.65 C29H29N5O4S
O gás de amônia foi borbulhado in a uma suspensão de éster etílico de ácido 4-cloro-3-{5-[4-(4-metóxi-benzil)-5-metil-4H-[1,2,4]triazol-3-il]- 2-metil-fenoximetil}-tieno[3,2-c]piridina-7-carboxílico (0,330 g; 0,59 mmol) (do Exemplo 58 supra) in 2-propanol (20 mL) durante 15-20 minutos. A mistura foi em seguida aquecida em um reator de microondas a 140 °C durante 90 minutos. A mistura reacional foi concentrada e o resíduo foi purificado por cromatografia flash (coluna de 120 g; 4% de metanol em diclorometano se- guido por um gradiente a 40% de metanol) para fornecer éster etílico de áci- do 4-amino-3-{5-[4-(4-metóxi-benzil)-5-metil-4H-[1,2,4]triazol-3-il]-2-metil- fenoximetil}-tieno[3,2-c]piridina-7-carboxílico (0,263 g; 96% puro; 78.72%).
Exemplo 60
Ácido (2-hidróxi-etil)-amida 4-amino-3-(5-í4-(4-metóxi-benzil)-5-metil-4H- [1,2,41triazol-3-in-2-metil-fenoximetil}-tienoí3,2-clpiridina-7-carboxnico <formula>formula see original document page 51</formula>
M.W. 558.66 C29H30N6O4S
Etanolamina (1,8 mL; 29.9 mmol) (Aldrich) foi adicionada a uma solução de éster etílico de ácido 4-amino-3-{5-[4-(4-metóxi-benzil)-5-metil- 4H-[1,2,4]triazol-3-il]-2-metil-fenoximetil}-tieno[3,2-c]piridina-7-carboxílico (50 mg; 0.08277 mmol) (do Exemplo 59 supra) em dimetilsulfóxido (0,6 mL). A mistura foi aquecida em um reator de microondas a 135°C durante 2,25 ho- ras. Após resfriamento para temperatura ambiente, a mistura reacional foi diluída com água, resultando na precipitação do produto como um sólido leitoso, foi coletada por centrifugação e secada. O sólido cru foi triturado com metanol quente, ligeiramente resfriado, filtrado e secado, para fornecer (2- hidróxi-etil)-amida de ácido 4-amino-3-{5-[4-(4-metóxi-benzil)-5-metil-4H- [1,2,4]triazol-3-il]-2-metil-fenoximetil}-tieno[3,2-c]piridina-7-carboxílico em duas colheitas. (Produção 31,2 mg, 51,3%).
HRMS (ES+) m/z Calculado para C29H30N6O4S + H [(M+H)+]: 559.2122. Encontrado: 559.2120.
Exemplo 61
Éster etílico de ácido 4-cloro-3-í2-metil-5-(metil-4H-H,2,4]triazol-3-il)- fenoximetil1-tienor3,2-clpiridina-7-carboxílico.
<formula>formula see original document page 51</formula>
M.W. 442.93 C2IH19CIN4O3S
Uma mistura de éster etílico de ácido 4-cloro-3-{5-[4-(4-metóxi- benzil)-5-metil-4H-[1 ^^jtriazol-S-ill^-metil-fenoximetil}-tieno[3,2-clpiridina-7- carboxílico (85 mg; 0.151 mmol) (do Exemplo 58 supra) com ácido trifluoroa- cético (1,0 mL; 13 mmol), anisol (100 pL; 0.92 mmol) (Aldrich) e ácido sulfú- rico (50 pL; 0,94 mmol) foi agitada em temperatura ambiente durante 42 ho- ras. A mistura foi concentrada. O resíduo foi diluído com diclorometano e novamente concentrado. O resíduo foi em seguida diluído com diclorometa- no e metanol e lavado com solução de bicarbonato de sódio aquoso satura- do e água. As fases aquosas foram novamente lavadas com uma mistura de diclorometano e metanol. As duas fases orgânicas foram combinadas, seca- das sobre sulfato de sódio e concentradas. O material cru material foi purifi- cado por cromatografia flash (coluna de 12 g; EtOAc seguido por um gradi- ente a 60:40 EtOAc : metanol) para fornecer éster etílico de ácido 4-cloro-3- [2-metil-5-(metil-4H-[1,2,4]-triazol-3-il)-fenoximetil]-tieno[3,2-c]piridina-7- carboxílico. (Produção 56,3 mg, 84,20%).
Exemplo 62
Éster etílico de ácido 4-amino-3-[2-metil-5-(5-metil-4H-[1,2,4]triazol-3-il)- fenoximetil]-tieno[3,2-c]piridina-7-carboxílico.
<formula>formula see original document page 52</formula>
M.W. 423,50 C2iH2IN5O3S
O gás de amônia foi borbulhado em a uma suspensão de éster etílico de ácido 4-cloro-3-[2-metil-5-(metil-4H-[1,2,4]triazol-3-il)-fenoximetil]- tieno[3,2-c]piridina-7-carboxílico (0,106 g; 0,24 mmol) (do Exemplo 61 supra) em 2-propanol (20 mL) durante 15-20 minutos. A mistura foi em seguida aquecida em um reator de microondas a 140°C durante 75 minutos. Após resfriamento para temperatura ambiente a mistura reacional foi diluída com diclorometano (~75mL) e lavada com água e em seguida salmoura. A fase orgânica foi secada (Na2SO4) e concentrada. O resíduo foi triturado duas vezes com diclorometano quente para fornecer éster etílico de ácido 4- amino-3-[2-metil-5-(5-metil-4H-[1,2,4]triazol-3-il)-fenoximetil]-tieno[3,2- c]piridina-7-carboxílico como um sólido branco. (Produção 80,4 mg) O produ- to adicional foi obtido cromatografando-se os líquidos mãe das duas tritura- ções. (Produção 7,7 mg, total 82.49%).
HRMS (ES+) m/z Calculado para C21H2IN5O3S + H [(M+H)+]: 424,1438. Encontrado: 424,1433.
Exemplo 63 (2-hidróxi-etil)-amida de ácido 4-amino-3-[2-metil-5-(5-metil-4H-[1,2,41triazol- 3-il)-fenoximetin-tieno[3,2-clpiridina-7-carboxnico·
<formula>formula see original document page 53</formula>
M.W. 438.51 C21H22N6O3S
Etanolamina (1,5 mL; 24.9 mmol) (Aldrich) foi adicionada a uma suspensão de éster etílico de ácido 4-amino-3-[2-metil-5-(5-metil-4H- [1,2,4]triazol-3-il)-fenoximetil]-tieno[3,2-c]piridina-7-carboxílico (68,4 mg; 0,162 mmol) (do Exemplo 62 supra) em dimetilsulfóxido (0,5 mL). A mistura foi aquecida em um reator de microondas a 135 °C durante 90 minutos e em seguida durante 1 hora a 140 °C. A mistura reacional crua foi concentrada sob vácuo elevado com aquecimento para remover a maioria d etanolamina e DMSO. O resíduo foi diluído com água, causando um precipitado Ieitoso sair da solução. Sólido foi coletado por filtragem, lavado com água e secado. O material foi em seguida triturado com metanol quente para fornecer (2- hidróxi-etil)-amida de ácido 4-amino-3-[2-metil-5-(5-metil-4H-[1,2,4]triazol-3- il)-fenoximetil]-tieno[3,2-c]piridina-7-carboxílico como um sólido não total- mente branco. (Produção 48 mg, 67,8%).
HRMS (ES+) m/z Calculado para C2IH22N6O3S + H [(M+H)+]: 439.1547. Encontrado: 439.1544.
Exemplo 64
Ensaio de Inibicão de Enzima de Cinase (IC50)
Ensaio de c-Raf HTRF com 6H-MEK como Substrato (Resposta de Dose)
Princípio do Ensaio:
O ensaio utiliza 6H-MEK como o substrato. Na fosforilação de c- Raf, 6H-MEK fosforilado é detectado com anticorpos anti-fosfo-MEK1/2 de coelho, anti-coelho rotulado por, e anti-6H rotulado por APC.
Reaqentes e Instrumentos:
Enzima: c-Raf humana clonada com EE-tag; fosforilada (co- expressa com v-src-FLAG em células Hi5 de baculovírus), 0,2 mg/mL (2,74 μΜ assumindo um peso molecular de 73 kD) armazenada a -15 °C. Substrato: 6H-MEK de tamanho natural WTj 4.94 mg/mL (154,4 μΜ assumindo um MW de 32 kD) armazenado a -15 °C. Anticorpos: (a-P-(Ser 217/221 )-MEK-1/2 Ab de Coelho (de Cell Signaling, Cat. # 9121B, Lot 14); Eu-(a-coelho IgG (de Wallac1 Cat. # AD0083, Lot 318663, 710 ug/mL, 4.4 μΜ); (a-6H-SureLight-APC (de Martek, Cat. #AD0059H, Lot E012AB01, 3.03 μΜ).
Leitora: Envision de PerkinEImer, Modo de leitura de HTRF com imagem 412.
Placa de ensaio: Placas de polipropileno totalmente pretas Ma- trix (Cat. # 4344).
Outros: Placas de polipropileno Weidman 384 (REMP) para pla- ca de composto. Procedimento do Ensaio:
(1) Preparar Tampão de Ensaio de Cinase (KAB): 50 mM de HEPES (HyCIone) pH7, 10 mM MgCI2, 1 mM DTT, 0,1 mM de Na3V2O4, e 0,3 mg/ml de BSA.
(2) Preparar 6H-MEK (150 nM) em KAB. Adicionar 12 μΙ/cavidade à placa de ensaio.
(3) Preparar ATP (66 μΜ) em KAB.
(4) Diluir os compostos em 2,4 mM e quaisquer controles positi- vos para 480 μΜ em DMSO. Realizar diluição de 3 χ 10 pontos em DMSO. Retirar 2,5 μΙ/cavidade de solução de DMSO e adicionar a 27,5 μΙ/cavidade de solução de ATP em (3).
(5) Misturar, em seguida adicionar 6 μΙ/cavidade de solução em (4) à placa de ensaio para uma concentração de DMSO de 2,1% durante a fosforilação de MEK.
(6) Preparar c-Raf (12 nM) em KAB.
(7) Adicionar 6 μΙ/cavidade de KAB em colunas 1-2 e 6 μl/cavidade de c-Raf em colunas 3-24.
(8) Incubar a 37 0C durante 30 minutos.
(9) Preparar (a-P-(Ser 217/221 )-MEK-1/2 Ab de Coelho (1:240 de matéria prima) em AB1: 50 mM de HEPES pH7, 0.2 mg/ml de BSA, e 43 mM de EDTA.
(10) Interromper a reação, adicionar 6 μΙ/cavidade de solução de (9) à placa de ensaio e incubar a 37 0C durante 30 minutos.
(11) Preparar Eu-(a-coelho IgG (9 nM) e (a-6H-SureLight-APC (120 nM) em AB2: 50 mM de HEPES pH7 e 0,2 mg/ml de BSA.
(12) Adicionar 6 μΙ/cavidade de solução de (11) à placa de en- saio.
(13) Para determinar o fator de diafonia de espectro, preparar 2 amostras seguindo as etapas (1) a (10). Para amostra de absoluto, adicionar 6 μl/cavidade de AB2. Para a amostra de fator de diafonia, adicionar 6 μl/cavidade de Eu-anti-coelho IgG (9 nM).
(14) Incubar em temperatura ambiente durante 1,5 horas.
(15) Ler os sinais de HTRF 615nm e 665nm no Envision. Norma- lizar os sinais de HTRF após correção de diafonia de espectro.
Expressão e Purificação de c-Raf
c-Raf rotulado com EE de terminal N foi expresso em células High-5. Uma cultura de cinco litros foi co-transferida com vírus para EE-c-Raf e FLAG-vSrc em uma relação de 1:2 e colhida após 48 horas. A pélete de célula foi Iisada em TBS contendo 5 mM de EDTA, 50 mM de KF, 20 mM de pirofosfato de Na, 20 mM de β-glicerolfosfato, 0,5 mM de Na VO3, 1% de NP-40 (peso/volume) e Comprimidos de Protease Completos. O lisado foi centrifugado a 20,000 χ g durante 1 hora. O sobrenadante foi incubado com 8 ml de Proteína G Sefarose de rótulo anti-EE durante 2 horas a 4°C. A re- sina foi em seguida lavada com 30 volumes do tampão acima. A proteína c-
Raf foi eluída por incubação com o tampão acima contendo 100 mg/ml de peptídeo de EE durante 1 hora a 4 0C. A proteína foi concentrada utilizando um Amicon Stir Cell com uma membrana YM10. A proteína concentrada foi dialisada contra TBS contendo 1 mM de DTT e 30% de Glicerol. A concen- tração de proteína foi determinada pelo método BioRad DC.
Purificação de 6H-MEK1 (62-393)
Células E. coli contendo o plasmídeo para uma expressão de 6H-MEK1 (62-393) foram desenvolvidas em Meios Ricos e induzidas com 1 mM de IPTG durante 24 horas a 22 °C. A pélete de célula foi re-suspensa em 50 mM de tampão de fosfato de potássio, pH 8.0, 300 mM de NaCl, 5 mM de MgCI2, 10 mM de CHAPS, 2 mM de TCEP, e Comprimidos Inibidores de Protease Completos. As células foram rompidas por sonicação. O lisado foi clareado por centrifugação a 13,000 χ g durante 45 minutos. O sobrena- dante foi diluído 1:1 com 50 mM de tampão de fosfato de potássio, pH 8.0, 10 mM de imidazol, 4 mM de TCEP1 300 mM de NaCl, 10 mM de CHAPS, 2 mM de pirrol-2-carboxilato, e 100 mM de ZnCl2, em seguida incubado com resina de afinidade de metal de TALÃO durante 1 hora a 4 °C.
A resina foi lavada com 10 volumes de 50 mM de tampão de fos- fato de potássio, pH 8,0, 5 mM de imidazol, 2 mM de TCEP, 300 mM de Na- Cl, 10 mM de CHAPS, 1 mM de pirrol-2-carboxilato, e 50 mM de ZnCI2. As proteínas foram eluídas por incubação com 5 volumes de 20 mM de HEPES, pH 8.0, 100 mM de EDTA, 2 mM de TCEP1 10% volume/volume de glicerol durante 1 hora a 4 °C. O material eluído foi concentrado utilizando dispositi- vos Amicon Ultra 15 com membranas de redução de 10Kd MW. A amostra foi em seguida submetida à cromatografia de exclusão de tamanho em uma coluna Superdex 200 26/60. O pico 6H-MEK1 foi reunido e concentrado co- mo acima. A proteína foi determinada pelo método BioRad.
Ensaio HTRF do tipo selvagem de b-Raf com 6H-MEK como Substrato (Resposta de Dose)
Princípio de Ensaio:
O ensaio utiliza 6H-MEK como o Substrato. Na fosforilação de b- Raf WT, 6H-MEK fosforilado é detectado com anticorpos anti-fosfo-MEK1/2 de coelho, anti-coelho rotulado com Eu, e anti-6H rotulado com APC. Reaqentes e Instrumentos:
Enzima: Extremidade 416 de resíduos de b-Raf humano recom- binante com rótulo GTS de terminal N de Upstate; (expressa por baculovírus em células de inseto Sf21), 0,26 mg/mL (3,87 μΜ assumindo um peso mole- cular de 67,2 kD) Cat. #14-530M, Lot #25502AU, armazenado a -80 °C.
Substrato: 6H-MEK de tamanho natural WT de C. Belunis (5/26/04), 4,94 mg/mL (154.4 μΜ assumindo um MW de 32 kD) armazenado a -15 °C.
Anticorpos: (a-P-(Ser 217/221)-MEK-1/2 Ab de coelho (de Cell Signaling1 Cat. # 9121B, Lot 14); Eu-(a-coelho IgG (de Wallac, Cat. # AD0083, Lot 318663, 710 ug/mL, 4,4 μΜ); (a-6H-SureLight-APC (de Martek, Cat. #AD0059H, Lot E012AB01, 3,03 μΜ).
Leitora: Envision de PerkinElmer, Modo de leitura de HTRF com imagem 412.
Placa de ensaio: Placas de polipropileno totalmente pretas Ma- trix (Cat. # 4344).
Outras: Placas de polipropileno Weidman 384 (REMP) para pla- ca de composto.
Procedimento de Ensaio:
(1) Preparar o Tampão de Ensaio de Cinase (KAB): 50 mM de HEPES (HyClone) pH7, 10 mM de MgCI2, 1 mM DTT, 0,1 mM de Na3V2O4, e 0,3 mg/ml de BSA.
(2) Preparar 6H-MEK (150 nM) em KAB. Adicionar 12 μl/cavidade à placa de ensaio.
(3) Preparar ATP (66 μΜ) em KAB.
(4) Diluir compostos em 2.4 mM e quaisquer controles positivos em 480 μΜ em DMSO. Realizar diluição de 3 χ 10 pontos em DMSO. Retirar 2,5 μl/cavidade de solução de DMSO e adicionar a 27,5 μΙ/cavidade de solu- ção de ATP em (3).
(5) Misturar, em seguida adicionar 6 μΙ/cavidade de solução em (4) à placa de ensaio para uma concentração de DMSO de 2,1% durante a fosforilação de MEK.
(6) Preparar b-Raf WT (100 pM) em KAB.
(7) Adicionar 6 μl/cavidade de KAB em colunas 1-2 e 6 μl/cavidade de b-Raf WT e colunas 3-24.
(8) Incubar a 37 °C durante 30 minutos.
(9) Preparar coelho (a-P-(Ser 217/221 )-MEK-1/2 Ab (1:200 de matéria prima) in AB1: 50 mM de HEPES pH7, 0,2 mg/ml de BSA, e 43 mM de EDTA. (10) Interromper a reação, adicionar 6 μl/cavidade de solução de (9) à placa de ensaio e incubar a 37 0C durante 30 minutos.
(11) Preparar Eu-(a-coelho IgG (9 nM) e (a-6H-SureLight-APC (180 nM) em AB2: 50 mM de HEPES pH7 e 0,2 mg/ml de BSA.
(12) Adicionar 6 μl/cavidade de solução de (11) à placa de en- saio.
(13) Para determinar o fator de diafonia de espectro, preparar 2 amostras seguindo as etapas (1) a (10). Para amostra de absoluto, adicionar 6 μl/cavidade de AB2. Para a amostra de fator de diafonia, adicionar 6 μl/cavidade de Eu-anti-coelho IgG (9 nM).
(14) Incubar em temperatura ambiente durante 1.5 horas.
(15) Ler os sinais de HTRF a 615nm e 665nm no Envision. Nor- malizar os sinais de HTRF após a correção de diafonia de espectro.
Ensaio de HTRF Mutante de V600E de b-Raf com 6H-MEK como substrato
(Resposta de Dose)
Princípio de Ensaio
O ensaio utiliza 6H-MEK como o substrato. Na fosforilação V600E de b-Raf, 6H-MEK fosforilado é detectado com anticorpos de anti- fosfo-MEK1/2 de coelho, anti-coelho rotulado com Eu, e anti-6H rotulado com APC.
Reaqentes e Instrumentos
Enzima: Extremidade 416 de b-raf humano recombinante con- tendo uma mutação de V600E com rótulo GTS de terminal N de Upstate; (expressa baculovírus em células de inseto Sf21), 0,26 mg/mL (7.49 μΜ as- sumindo um peso molecular de 67,3 kD) Cat. #14-5M, Lot #25633AU, arma- zenado a -80 °C.
Substrato: 6H-MEK de tamanho natural WT de C. Belunis (5/26/04), 4.94 mg/mL (154,4 μΜ assumindo a MW de 32 kD) armazenado a -15 °C.
Anticorpos: Coelho (a-P-(Ser 217/221 )-MEK-1/2 Ab (de Cell Sig- naling, Cat. # 9121B, Lot 14); Eu-(a-coelho IgG (de Wallac, Cat. # AD0083, Lot 318663, 710 ug/mL, 4,4 μΜ); (a-6H-SureLight-APC (de Martek, Cat. #AD0059H, Lot E012AB01, 3.03 μΜ).
Leitora: Envision de PerkinEImer, Modo de leitura de HTRF com imagem 412.
Placa de ensaio: Placas de polipropileno totalmente pretas Ma- trix (Cat. # 4344).
Outros: Placas de polipropileno Weidman 384 (REMP) para pla- ca de composto. Procedimento de ensaio
(1) Preparar o Tampão de Ensaio de Cinase (KAB): 50 mM de HEPES (HyClone) pH7, 10 mM de MgCl2, 1 mM de DTT, 0,1 mM de Na3V2O4, e 0,3 mg/ml de BSA.
(2) Preparar 6H-MEK (150 nM) em KAB. Adicionar 12 μl/cavidade à placa de ensaio.
(3) Preparar ATP (66 μΜ) em KAB.
(4) Diluir os compostos para 2,4 mM e controles positivos para 480 μΜ em DMSO. Realizar diluição de 3 χ 10 pontos em DMSO. Retirar 2,5 μl/cavidade de solução de DMSO e adicionar a 27,5 μl/cavidade solução de ATP em (3).
(5) Misturar, em seguida adicionar 6 μl/cavidade de solução em (4) à placa de ensaio para uma concentração de DMSO de 2,1% durante a fosforilação de MEK.
(6) Preparar b-Raf V600E (100 pM) in KAB.
(7) Adicionar 6 μΙ/cavidade de KAB em colunas 1-2 e 6 μl/cavidade de b-Raf V600E em colunas 3-24.
(8) Incubar a 37°C durante 30 minutos.
(9) Preparar coelho a-P-(Ser 217/221)-MEK-1/2 Ab (1:200 de matéria prima) emAB1: 50 mM de HEPES pH7, 0.2 mg/ml de BSA, e 43 mM de EDTA.
(10) Interromper a reação, adicionar 6 μl/cavidade de solução de (9) à placa de ensaio e Incubar a 37°C durante 30 minutos.
(11) Preparar Eu-a-coelho IgG (9 nM) e a-6H-SureLight-APC (180 nM) em AB2: 50 mM de HEPES pH7 e 0,2 mg/ml de BSA. (12) Adicionar 6 μΙ/cavidade de solução de (11) à placa de en- saio.
(13) Para determinar o fator de diafonia de espectro, preparar 2 amostras seguindo as etapas (1) a (10). Para amostra de absoluto, adicionar 6 μl/cavidade de AB2. Para a amostra de fator de diafonia, adicionar 6 μl/cavidade de Eu-anti coelho IgG (9 nM).
(14) Incubar em temperatura ambiente durante 1,5 horas.
(15) Ler os sinais de HTRF a 615nm e 665nm no Envision. Nor- malizar os sinais de HTRF após correção de diafonia de espectro.
10 Dados de ensaio
Tabela 1: Ensaio de inibicão de enzima cinase (IC50)
<table>table see original document page 60</column></row><table>

Claims (11)

1. Composto da Fórmula em que R1 é selecionado do grupo consistindo em hidrogênio, alquila inferior, alquenila inferior, alquinila inferior, alcóxi inferior, ciano, NR4R5, tri- fluorometila e NO2; R2 pode ser um ou mais grupo(s) selecionado(s) do grupo con- sistindo em hidrogênio, alquila inferior, alquila inferior substituída, alquila in- ferior substituída por arila ou heteroarila, alquenila inferior, alquinila inferior, alcóxi inferior, arila, arila substituída, heteroarila, heteroarila substituída, cia- no, halogênio, metil sulfonila, sulfonamida, trifluorometila, sulfonil uréia, ami- da, éster, carbamato e uréia; R3 é selecionado do grupo consistindo em hidrogênio, hidroxila, alquila inferior, alquila inferior substituída, alcóxi inferior e NR4R5; O anel B é selecionado do grupo consistindo em arila e heteroa- rila; O anel A é opcionalmente também substituído <formula>formula see original document page 61</formula> A é independentemente selecionado de C, N, O e S e o Anel A é aromático, R4 e R5 são selecionados de hidrogênio, alquila inferior ou alqui- la substituída por hidroxila ou alcóxi inferior, X é O ou NH, e os sais farmaceuticamente aceitáveis destes.
2. Composto de Fórmula I de acordo com a reivindicação 1, em que: R1 é selecionado do grupo consistindo em hidrogênio, alquila inferior, alquenila inferior, alquinila inferior, alcóxi inferior, ciano, NR4R51 tri- fluorometila e NO2; R2 é selecionado do grupo consistindo em hidrogênio, alquila inferior, alquila inferior substituída, alquila inferior substituída por arila ou he- teroarila, alquenila inferior, alquinila inferior, alcóxi inferior, arila, arila substi- tuída, heteroarila, heteroarila substituída, ciano, halogênio, metil sulfonila, sulfonamida, trifluorometil, sulfonil uréia, amida, éster, carbamoíla, carbama- to e uréia; R3 é selecionado do grupo consistindo em hidrogênio, alquila inferior, alquila inferior substituída, alcóxi inferior e NR4R5; O anel B é selecionado do grupo consistindo em arila e heteroa- rila; O Anel A é <formula>formula see original document page 62</formula> A é independentemente selecionado de C, N, O e S e o Anel A é aromático, R4 e R5 são selecionados de hidrogênio, alquila inferior ou alqui- la substituída por hidroxila ou alcóxi inferior, XéOouNH, e os sais farmaceuticamente aceitáveis destes.
3. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 ou 2, em que R1 é hidrogênio ou alquila inferior no C2 do Anel B de 1-hidróxi -5-substituído em que o Anel B é fenila.
4. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 ou 2, em que R1 é hidrogênio ou alquila inferior no C2 do Anel B de 3-hidróxi -5-substituído em que o Anel B é piridina.
5. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4 em que O Anel A é selecionado do grupo consistindo em <formula>formula see original document page 63</formula> em que R2 é selecionado do grupo consistindo em hidrogênio, alquila inferior, alquila inferior substituída, alquila inferior substituída por arila ou he- teroarila, alquenila inferior, alquinila inferior, alcóxi inferior, arila, arila substi- tuída, heteroarila, heteroarila substituída, ciano, halogênio, metil sulfonila, sulfonamida, trifluorometil, sulfonil uréia, amida, éster, carbamoíla, carbama- to e uréia e O anel B é selecionado do grupo consistindo em arila e heteroa- rila.
6. Composto de acordo com a reivindicação 1, selecionado do grupo consistindo em Éster etílico de ácido 4-cloro-3-[3-(5-metil-[1,3,4]oxadiazol-2-il)- fenoximetil]-tieno[3,2-c]piridina-7-carboxílico; Éster etílico de ácido 4-amino-3-[3-(5-metil-[1,3,4]oxadiazol-2-il)- fenoximetil]-tieno[3,2-c]piridina-7-carboxílico; (2-hidróxi-etil)-amida de ácido 4-amino-3-[3-(5-metil- [1,3,4]oxadiazol-2-il)-fenoximetil]-tieno[3,2-c]piridina-7-carboxílico, Éster etílico de ácido 4-cloro-3-[2-metil-5-(5-metil- [1,3,4]oxadiazol-2-il)-fenoximetil]-tieno[3,2-c]piridina-7-carboxílico, Éster etílico de ácido 4-amino-3-[2-metil-5-(5-metil- [1,3,4]oxadiazol-2-il)-fenoximetil]-tieno[3,2-c]piridina-7-carboxílico, Sal de ácido trifluoro-acético de (2-hidróxi-etil)-amida de ácido 4- amino-3-[2-metil-5-(5-metil-[1,3,4]oxadiazol-2-il)-fenoximetil]-tieno[3,2- c]piridina-7-carboxílico, Sal de ácido trifluoro-acético de (2-hidróxi-etil)-amida de ácido 4- amino-3-{5-[4-(2-hidróxi-etil)-5-metil-4H-[1,2,4]triazol-3-il]-2-metil-fenoximetil}- tieno[3,2-c]piridina-7-carboxílico, Sal de ácido tolueno-4-sulfônico de (2-hidróxi-etil)-amida de áci- do 4-amino-3-[2-metil-5-(5-metil-[1,3,4]oxadiazol-2-il)-fenoximetil]-tieno[3,2- c]piridina-7-carboxílico, Éster etílico de ácido 4-cloro-3-[2-metil-5-(1-metil-1H- [1,2,3]triazol-4-il)-fenoximetil]-tieno[3,2-c]piridina-7-carboxílico e Éster etílico de ácido 4-amino-3-[2-metil-5-(1-metil-1H- [1,2,3]triazol^-iO-fenoximetill-tienot[3-clpiridina-y-carboxílico. 6. Composto de acordo com a reivindicação 1 selecionado do grupo consistindo em (2-hidróxi-etil)-amida de ácido 4-amino-3-[2-metil-5-(1-metil-1H- [1,2,3]triazol-4-il)-fenoximetil]-tieno[3,2-c]piridina-7-carboxílico) Éster etílico de ácido 4-cloro-3-{3-[2-(4-metóxi-benzil)-2H- tetrazol-5-il]-fenoximetil}-tieno[3,2-c]piridina-7-carboxílico, Éster etílico de ácido 4-amino-3-{3-[2-(4-metóxi-benzil)-2H- tetrazol-5-il]-fenoximetil}-tieno[3,2-]piridina-7-carboxílico, (2-hidróxi-etil)-amida de ácido 4-amino-3-{3-[2-(4-metóxi-benzil)- 2H-tetrazol-5-il]-fenoximetil}-tieno[3,2-c]piridina-7-carboxílico, Éster etílico de ácido 4-cloro-3-[3-(2-metil-2H-tetrazol-5-il)- fenoximetil]-tieno[3,2-c]piridina-7-carboxílico, Éster etílico de ácido 4-amino-3-[3-(2-metil-2H-tetrazol-5-il)- fenoximetil]-tieno[3,2-c]piridina-7-carboxílico, (2-hidróxi-etil)-amida de ácido 4-amino-3-[3-(2-metil-2H-tetrazol- -5-il)-fenoximetil]-tieno[3,2-c]piridina-7-carboxílico, Éster etílico de ácido 4-cloro-3-{5-[1-(4-cloro-benzil)-1H- [1,2,3]triazol-4-il]-2-metil-fenoximetil}-tieno[3,2-c]piridina-7-carboxílico, Éster etílico de ácido 4-amino-3-{5-[1-(4-cloro-benzil)-1H- [1,2,3]triazol-4-il]-2-metil-fenoximetil}-tieno[3,2-c]piridina-7-carboxílico, (2-hidróxi-etil)-amida de ácido 4-amino-3-{5-[1-(4-cloro-benzil)- -1H-[1 ^,Sltriazol^-ill^-metil-fenoximetilJ-tienofS^-cjpiridina^-carboxílico e Sal de ácido tolueno-4-sulfônico de (2-hidróxi-etil)-amida de áci- do 4-amino-3-{5-[1 -(4-cloro-benzil)-1 H-[1,2,3]triazol-4-il]-2-metil-fenoximetil}- tieno[3,2-c]piridina-7-carboxílico.
7. Composto de acordo com a reivindicação 1 selecionado do grupo consistindo em Éster etílico de ácido 4-cloro-3-{5-[5-(4-cloro-benzil)- [1,3,4]oxadiazol-2-il]-metil-fenoximetil]-tieno[3,2-c]piridina-T-carboxílico, Éster etílico de ácido 4-amino-3-{5-[5-(4-cloro-benzil)- [1,3,4]oxadiazol^-in-a-metil-fenoximetilJ-tieno[3,2-c]piridina-y-carboxílico, (2-hidróxi-etil)-amida de ácido 4-amino-3-{5-[5-(4-cloro-benzil)- [1,3,4] oxadiazol-2-il]-2-metil-fenoximetil]-tienot[3,2-clpiridina-7-carboxílico, Éster etílico de ácido 4-cloro-3-{5-[5-(4-cloro-fenil)- [1,3,4]oxadiazol-2-il]-2-metil-fenóxi-metil}-tieno[3,2-c]piridina-7-carboxnico, Éster etílico de ácido 4-amino-3-{5-[5-(4-cloro-fenil)- [1,3,4] oxadiazol^-ilJ^-metil-fenóxi-metilJ-tienotS^-clpiridina-y-carboxílico, Ácido 4-amino-3-{5-[5-(4-cloro-fenil)-[1,3,4]oxadiazol-2-il]-2-metil- fenóxi-metil}-tieno[3,2-c]piridina-7-carboxílico, Ácido trifluoroacético de (2-hidróxi-etil)-amida de ácido 4-amino- 3-{5-[5-(4-cloro-fenil)-[1,3,4]oxadiazol-2-il]-2-metil-fenóxi-metil}-tieno[3,2- c]piridina-7-carboxílico e Éster etílico de ácido 4-cloro-3-[2-metil-5-(3-metil- [1,2,4]oxadiazol-5-il)-fenoximetil]-tieno[3,2-c]piridina-7-carboxílico.
8. Composto de acordo com a reivindicação 1 selecionado do grupo consistindo em Éster etílico de ácido 4-amino-3-[2-metil-5-(3-metil- [1,2,4]oxadiazol-5-il)-fenoximetil]-tieno[3,2-c]piridina-7-carboxílico, Ácido 4-amino-3-[2-metil-5-(3-metil-[1,2,4]oxadiazol-5-il)- fenoximetil]-tieno[3,2-c]piridina-7-carboxílico, Sal de ácido trifluoroacético de (2-hidróxi-etil)-amida de ácido 4- amino-3-[2-metil-5-(3-metil-[1,2,4]oxadiazol-5-il)-fenoximetil]-tieno-[3,2- c]piridina-7-carboxílico, Éster etílico de ácido 4-cloro-3-{5-[4-(4-metóxi-benzil)-5-metil- 4H-[1,2,4]triazol-3-il]-2-metil-fenoximetil}-tieno[3,2-c]piridina-7-carboxílico, Éster etílico de ácido 4-amino-3-{5-[4-(4-metóxi-benzil)-5-metil- 4H-[1,2,4]triazol-3-il]-2-metil-fenoximetil}-tieno[3,2-c]piridina-7-carboxílico, (2-hidróxi-etil)-amida de ácido 4-amino-3-{5-[4-(4-metóxi-benzil)- - 5-metil-4H-[1,2,4]triazol-3-il]-2-metil-fenoximetil}-tieno[3,2-c]piridina-7- carboxílico, Éster etílico de ácido 4-cloro-3-[2-metil-5-(metil-4H-[1,2,4]triazol- - 3-il)-fenoximetil]-tieno[3,2c]piridina-7-carboxílico, Éster etíiico de ácido 4-amino-3-[2-metil-5-(5-metil-4H- [1,2,4]triazol-3-il)-fenoximetil]-tieno[3,2-c]piridina-7-carboxílico e (2-hidróxi-etil)-amida de ácido 4-amino-3-[2-metil-5-(5-metil-4H- [1,2,4]triazol-3-il)-fenoximetil]-tieno[3,2-c]piridina-7-carboxílico.
9. Composição farmacêutica compreendendo um composto da Fórmula <formula>formula see original document page 66</formula> em que R1 é selecionado do grupo consistindo em hidrogênio, alquila inferior, alquenila inferior, alquinila inferior, alcóxi inferior, ciano, NR4R51 tri- fluorometil e NO2; R2 é selecionado do grupo consistindo em hidrogênio, alquila inferior, alquila inferior substituída, alquila inferior substituída por arila ou he- teroarila, alquenila inferior, alquinila inferior, alcóxi inferior, arila, arila substi- tuída, heteroarila, heteroarila substituída, ciano, halogênio, metil sulfonila, sulfonamida, trifluorometil, sulfonil uréia, amida, éster, carbamoíla, carbama- to e uréia; R3 é selecionado do grupo consistindo em hidrogênio, hidroxila, alquila inferior, alquila inferior substituída, alcóxi inferior e NR4R5; O anel B é selecionado do grupo consistindo em arila e heteroarila; O Anel A é <formula>formula see original document page 67</formula> A é independentemente selecionado de C, Ν, O e S e o Anel A é aromático, R4 e R5 são selecionados de hidrogênio, alquila inferior ou alqui- la substituída por hidroxila ou alcóxi inferior, X é O ou NH, ou um sal farmaceuticamente aceitável destes juntamente com um veículo farmaceuticamente aceitável.
10. Utilização de um composto de Fórmula I de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 8 para a preparação de um medica- mente útil para o tratamento de câncer, aterosclerose, e/ou restenose.
11. Invenção como aqui acima descrita.
BRPI0713041A 2006-06-29 2007-06-22 compostos derivados de ácido 4-amino-3-(3-azolil-fenoximetil)-tieno[3,2c]piridina-7- carboxílico, uso dos mesmos e composição farmacêutica compreendendo os ditos compostos BRPI0713041A8 (pt)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US81761606P 2006-06-29 2006-06-29
US60/817,616 2006-06-29
PCT/EP2007/056241 WO2008000697A1 (en) 2006-06-29 2007-06-22 Novel 4-amino-3-(-azolyl-phenoxymethyl)-thieno[3,2]pyridine-7-carboxylic acid derivatives

Publications (2)

Publication Number Publication Date
BRPI0713041A2 true BRPI0713041A2 (pt) 2012-04-17
BRPI0713041A8 BRPI0713041A8 (pt) 2019-01-15

Family

ID=38514272

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
BRPI0713041A BRPI0713041A8 (pt) 2006-06-29 2007-06-22 compostos derivados de ácido 4-amino-3-(3-azolil-fenoximetil)-tieno[3,2c]piridina-7- carboxílico, uso dos mesmos e composição farmacêutica compreendendo os ditos compostos

Country Status (16)

Country Link
US (1) US7932390B2 (pt)
EP (1) EP2038288B1 (pt)
JP (1) JP4933617B2 (pt)
KR (1) KR101143286B1 (pt)
CN (1) CN101479278B (pt)
AT (1) ATE489391T1 (pt)
BR (1) BRPI0713041A8 (pt)
CA (1) CA2655398C (pt)
DE (1) DE602007010779D1 (pt)
DK (1) DK2038288T3 (pt)
ES (1) ES2354637T3 (pt)
IL (1) IL195897A (pt)
MX (1) MX2008016068A (pt)
PL (1) PL2038288T3 (pt)
PT (1) PT2038288E (pt)
WO (1) WO2008000697A1 (pt)

Families Citing this family (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US9540322B2 (en) 2008-08-18 2017-01-10 Yale University MIF modulators
US8957216B2 (en) * 2010-03-24 2015-02-17 Amitech Therapeutic Solutions, Inc. Heterocyclic compounds useful for kinase inhibition
US12378229B2 (en) 2021-02-02 2025-08-05 Liminal Biosciences Limited GPR84 antagonists and uses thereof

Family Cites Families (13)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FR2732970B1 (fr) * 1995-04-14 1997-05-16 Hoechst Schering Agrevo Sa Nouveaux derives de l'acide beta-methoxy acrylique, leur procede de preparation et leur application comme pesticides
UA60365C2 (uk) 1998-06-04 2003-10-15 Пфайзер Продактс Інк. Похідні ізотіазолу, спосіб їх одержання, фармацевтична композиція та спосіб лікування гіперпроліферативного захворювання у ссавця
US6232320B1 (en) * 1998-06-04 2001-05-15 Abbott Laboratories Cell adhesion-inhibiting antiinflammatory compounds
HN2000000051A (es) 1999-05-19 2001-02-02 Pfizer Prod Inc Derivados heterociclicos utiles como agentes anticancerosos
IL155371A0 (en) 2000-11-28 2003-11-23 Pfizer Prod Inc Salts of a isothiazole-4-carboxamide and their use as anti-hyperproliferation agents
WO2003082272A1 (en) 2002-03-29 2003-10-09 Chiron Corporation Substituted benzazoles and use thereof as raf kinase inhibitors
WO2004041285A1 (en) * 2002-10-31 2004-05-21 Amgen Inc. Antiinflammation agents
WO2004100947A2 (en) 2003-05-06 2004-11-25 Smithkline Beecham Corporation Novel chemical compounds
US7202363B2 (en) * 2003-07-24 2007-04-10 Abbott Laboratories Thienopyridine and furopyridine kinase inhibitors
US20050026944A1 (en) * 2003-07-24 2005-02-03 Patrick Betschmann Thienopyridine and furopyridine kinase inhibitors
US20050020619A1 (en) * 2003-07-24 2005-01-27 Patrick Betschmann Thienopyridine kinase inhibitors
JP4557984B2 (ja) 2003-12-05 2010-10-06 ベーリンガー インゲルハイム ファーマシューティカルズ インコーポレイテッド Ｉｋｋインヒビターとしての置換３−アミノ−チエノ−［２，３−ｂ］ピリジン−２−カルボン酸アミド化合物
US20050256154A1 (en) * 2004-05-04 2005-11-17 Kin-Chun Luk 4-Amino-thieno[3,2-c]pyridine-7-carboxylic acid amides

Also Published As

Publication number Publication date
CA2655398C (en) 2014-07-29
DE602007010779D1 (en) 2011-01-05
CA2655398A1 (en) 2008-01-03
PL2038288T3 (pl) 2011-05-31
EP2038288B1 (en) 2010-11-24
WO2008000697A1 (en) 2008-01-03
ATE489391T1 (de) 2010-12-15
MX2008016068A (es) 2009-01-15
JP4933617B2 (ja) 2012-05-16
CN101479278B (zh) 2011-12-07
EP2038288A1 (en) 2009-03-25
AU2007263770A1 (en) 2008-01-03
US7932390B2 (en) 2011-04-26
DK2038288T3 (da) 2011-01-03
BRPI0713041A8 (pt) 2019-01-15
US20080009515A1 (en) 2008-01-10
IL195897A0 (en) 2009-09-01
PT2038288E (pt) 2011-01-12
KR20090021195A (ko) 2009-02-27
ES2354637T3 (es) 2011-03-16
KR101143286B1 (ko) 2012-05-24
CN101479278A (zh) 2009-07-08
IL195897A (en) 2016-04-21
JP2009541424A (ja) 2009-11-26

Similar Documents

Publication Publication Date Title
KR101734606B1 (ko) 질소-함유 헤테로아릴 유도체
WO2021228173A1 (zh) 氮杂卓类稠环化合物及其医药用途
BRPI0713041A2 (pt) derivados de ácido 4-amino-3-(3-azoil-fenoximetil)- tieno[3,2c]piridina-7- carboxìlico
ES2344324T3 (es) Derivados del acido tieno(3,2-c)piridin-7-carboxilico.
ES2366268T3 (es) DERIVADOS DE PIRAZOLOL(3,4-d)-PIRIMIDINA COMO AGENTE ANTIPROLIFERATIVOS.
HUT71352A (en) Heterocyclic derivatives
AU2007263770B2 (en) Novel 4-amino-3-(-azolyl-phenoxymethyl)-thieno[3,2]pyridine-7-carboxylic acid derivatives
WO2021129621A1 (zh) 吡唑类化合物
WO2024260408A1 (zh) 一种吡咯烷衍生物及其在医药上的应用
WO2024193640A1 (zh) Cdk抑制剂

Legal Events

Date Code Title Description
B06F Objections, documents and/or translations needed after an examination request according [chapter 6.6 patent gazette]
B07D Technical examination (opinion) related to article 229 of industrial property law [chapter 7.4 patent gazette]

Free format text: DE ACORDO COM O ARTIGO 229-C DA LEI NO 10196/2001, QUE MODIFICOU A LEI NO 9279/96, A CONCESSAO DA PATENTE ESTA CONDICIONADA A ANUENCIA PREVIA DA ANVISA. CONSIDERANDO A APROVACAO DOS TERMOS DO PARECER NO 337/PGF/EA/2010, BEM COMO A PORTARIA INTERMINISTERIAL NO 1065 DE 24/05/2012, ENCAMINHA-SE O PRESENTE PEDIDO PARA AS PROVIDENCIAS CABIVEIS.

B07E Notification of approval relating to section 229 industrial property law [chapter 7.5 patent gazette]
B06U Preliminary requirement: requests with searches performed by other patent offices: procedure suspended [chapter 6.21 patent gazette]
B11B Dismissal acc. art. 36, par 1 of ipl - no reply within 90 days to fullfil the necessary requirements