BRPI0714371A2

BRPI0714371A2 - fraÇço oleÍna lÍquida e estÁvel, mÉtodo para a preparaÇço de uma fraÇço oleÍna lÍquida e estÁvel, uso de uma fraÇço oleÍna lÍquida e estÁvel, e mistura àleo

Info

Publication number: BRPI0714371A2
Application number: BRPI0714371-0A
Authority: BR
Inventors: Joaquim Jesus Salas Linan; Enrique Martinez-Force; Rafael Garces Mancheno
Original assignee: Consejo Superior Investigacion
Priority date: 2006-07-14
Filing date: 2007-07-13
Publication date: 2013-03-26
Also published as: EP2054493A2; KR20090029802A; CO6241163A2; HUE030288T2; US20100009056A1; WO2008006597A3; AR061984A1; JP2009543907A; EP2054493B1; CA2655227A1; RU2435834C2; BG66542B1; JP5405301B2; ECSP099068A; ES2611036T3; BG110311A; RU2009105064A; KR101481847B1; WO2008006597A2; MX2008015724A

Abstract

FRAÇçO OLEINA LÍQUIDA E ESTÁVEL, METODO PARA A PREPARAÇAO DE UMA FRAÇçO OLEINA LÍQUIDA E ESTÁVEL, USO DE UMA FRAÇAO OLEINA LÍQUIDA E ESTÁVEL, E MISTURA àLEO. A presente invenção está relacionada a uma fração oleina líquida estável em que menos que 8,6% das espécies TAG da referida fração oleina possuem a fórmula geral SMS e pelo menos 26% of espécies TAG da referida fração oleina possuem a fórmula geral SMM, em que 5 representa um ácido graxo saturado e M representa a ácido graxo monoenóico, cuja fração oleina é possível de ser obtida mediante fracionamento de um óleo de girassol altamente saturado com alto teor oléico; e coleta da fração liquida. A invenção adicionalmente está relacionada a um método para a preparação de uma fração oleina líquida estável mediante o fracionamento em baixa temperatura de um óleo de girassol altamente saturado, de alto teor oléico.

Description

FRAÇÃO OLEÍNA LÍQUIDA E ESTÁVEL, MÉTODO PARA A PREPARAÇÃO DE UMA FRAÇÃO OLEÍNA LÍQUIDA E ESTÁVEL, USO DE UMA FRAÇÃO OLEÍNA LÍQUIDA E ESTÁVEL, E MISTURA ÓLEO

Campo da Invenção A presente invenção está relacionada a frações

oleina, que são particularmente adequadas para aplicações nas quais o óleo necessita ser liquido e resistência a oxidação. A invenção adicionalmente está relacionada ao uso da fração oleina e a misturas óleo compreendendo essas frações.

Fundamentos da Invenção

Óleos naturalmente ocorrentes são constituídos de triacilgliceróis (TAGs) que concorrem para mais de 98% do óleo total. Portanto, as propriedades químicas e físicas dos óleos são determinadas pelas suas composições em triacilglicerídeo e a distribuição de ácido graxo nessas moléculas.

Óleos e gorduras vegetais usadas para alimentos e outras aplicações não alimentícias, onde a estabilidade a alta oxidação é necessária, requerem uma especial composição do triacilglicerídeo, principalmente se tratamentos químicos tais como hidrogenação são para serem evitados. Óleos parcialmente hidrogenados contêm isômeros trans dos ácidos graxos que são considerados indesejáveis sob o aspecto nutricional. Alguns óleos de consumo satisfazem partes dessas exigências mas possuem desvantagens tecnológicas ou nutricionais. Por exemplo, o óleo de palma e oleina de palma possuem alta estabilidade porém são sólidos ou semi- sólidos na temperatura ambiente devido ao conteúdo de TAG di-saturado e tri-saturado, e não saudáveis sob o ponto de vista alimentício devido principalmente ao teor de ácido palmítico na posição sn-2 do TAG (Renaud et al., J. Nutr. 125:229-237 (1995)). Óleos vegetais de alto teor oléico são líquidos em temperaturas abaixo de 0 0C mas não são suficientemente estáveis. Portanto, usos onde seja necessário óleo líquido e estável não podem ser satisfeitos com esses óleos.

Óleos saudáveis com boa estabilidade oxidativa devem ter um baixo teor de ácidos graxos saturados, compreendendo preferivelmente estearato porque ele é neutro com respeito aos níveis séricos do colesterol (Pearson, Am. J. Clin. Nutr., 60(S):1071S-1072S, (1994); Kelly et al., Eur. J. of Clinicai Nutr., 55:88-96, (2001)), e não devem conter ácidos graxos saturados na posição intermediária (sn-2) do triacilglicerídeo. Óleos com ácido graxo saturados na posição intermediária do triacilglicerídeo têm sido sugeridos serem responsáveis pelos efeitos aterogênicos desses óleos (Renaud et al., J. Nutr. 125:229- 237 (1995)).

WO 0019832 orienta como um óleo de alto teor de estearato e alto teor de oleato de Brassica pode ser obtido. Adicionalmente, ed. Adicionalmente, algumas frações de estearina e oleina foram obtidas.

W099057990 orienta além disso como um óleo de alto teor de estearato e alto teor de oleato proveniente de soja pode ser obtido e como, adicionalmente, algumas frações estearina e oleina foram obtidas. Todos os óleos e frações apresentados nessas publicações de patente possuem mais que 0,5% de linolenato. Portanto, nenhum desses óleos anteriores ou suas frações são um bom material para obter a fração oleina da presente invenção.

Algumas frações oleina tropicais misturadas com óleos de consumo padrões têm sido propostas serem usadas como gorduras de fritura. Como orientado em WO 2006/061100, uma fração oleina proveniente de manteiga de shea tropical pode ser misturada com óleos de consumo resultando em uma gordura de fritura. Todavia, a manteiga, de shea tem a desvantagem de ser um tanto rara, obtida a partir de arvores tropicais. Para a fabricação do óleo em escala industrial a obtenção do óleo de partida pode se tornar um problema.

EP-1290119 descreve o uso de óleo de girassol de alto teor esteárico e alto teor oléico (HSHOSF) para a produção de estearina, que é misturado com um óleo vegetal liquido para preparar uma fase gordura. O teor de sólidos da fração estearina é mais que 50 %p e it contém pelo menos 30 %p de ácidos graxos SUS. A fração estearina é pretendida para a estruturação do óleo vegetal para obter uma margarina ou pasta. A fração estearina desse não proporciona os sólidos nesses produtos e não é propriamente um liquido.

Óleos constituídos parcialmente de ácidos graxos saturados e monoinsaturados possuem muito boa estabilidade, porém, levando em conta a biossíntese do TAG em plantas, óleos com aumentado teor de ácidos graxos saturados irão possuir quantidades expressivas de TAGs com dois ou três ácidos graxos saturados. Esses TAGs irão precipitar, mesmo na temperatura ambiente, fazendo com que esses óleos se solidifiquem muito facilmente. Óleos que liqüefazem em temperaturas tão baixas quanto 0 0C e sejam estáveis são de interesse industrial. Óleos de girassol com alto teor de estearato em base de alto teor de oleato possuem muito boa estabilidade oxidativa, porém, se solidificam facilmente. Frações desse óleo sem a maior parte dos TAGs di-saturados possuem boa estabilidade e serão líquidos numa temperatura em torno de 0 °C.

É portanto o objetivo da presente invenção proporcionar um novo óleo que seja tanto líquido em baixas temperaturas e resistente a oxidação.

SUMÁRIO DA INVENÇÃO

A invenção desse modo está relacionada a uma fração oleína, em que: a. menos que 8,6% das espécies de TAG da referida fração oleina possuem a fórmula geral SMS e

b. pelo menos 26% das espécies de TAG da referida fração oleina possuem a fórmula geral SMM

em que S representa um ácido graxo saturado e M representa a ácido graxo monoenóico, cuja fração é possível de ser obtida pelo óleo resultante do f racionamento de óleo de girassol de alto teor de oleato e de algo teor de saturação (HOHS) e coletar a fração líquida, chamada oleina. A fração líquida é o sobrenadante do fracionamento. 0 óleo HOHS é preferivelmente um óleo de girassol de alto teor oléico e alto teor esteárico (HOHE).

A fração oleina da presente invenção tem superior estabilidade oxidativa, é líquida em temperatura próxima ou abaixo de 0 0C e possui uma composição triacilglicerídeo que a torna saudável comparada a outros óleos estáveis altamente saturados do tipo óleo de palma ou oleina de palma.

Os métodos de fracionamento que são adequadamente usados são o fracionamento a seco ou por solvente.

A invenção também fornece os diferentes usos do óleo. As aprimoradas características da fração oleina permitem que ela seja usada em diversos produtos para fins alimentícios e não alimentícios em situações onde óleos líquidos com aumentada estabilidade oxidativa, estabilidade em fritura e estabilidade de vida de prateleira sejam desejáveis, sendo ao mesmo tempo um produto saudável. A estabilidade oxidativa dos óleos é definida pela composição em ácidos graxos dos TAGs. TAGs ricos em ácidos graxos poli-insaturados são mais instáveis que TAGs ricos em TAGs saturados e monoinsaturados. Os ácidos graxos insaturados encontrados nos óleos de consumo são oleato, linoleato e linolenato possuindo uma, duas e três duplas ligações, respectivamente. 0 linolenato é o ácido graxo mais instável e responsável pelos sabores a peixe, e portanto, devem ser o mais baixo possível nos óleos estáveis, preferivelmente como traços (abaixo de 0,5%). Óleos com linolenato acima desse valor não são bons materiais de partida para fracionar a oleína dessa invenção.

A fração oleína da invenção possui menos que 0.5% em peso de linoleato.

A fração oleína é líquida na temperatura ambiente e mais estável que outros óleos que são líquidos na temperatura ambiente, tal como o óleo padrão CAS-6 (Salas et al. JAOCS, 83:539-545 (2006)) e o óleo de alto teor oléico CAS-9 (Fernandez-Moya et al. J. Agric. Food Chem. 53:5326-5330 (2005)). Óleo de alto teor oléico e alto teor esteárico HOHS (W00074470) é muito is muito estável mas não líquido na temperatura ambiente. 0 óleo de alto teor oléico e alto teor palmítico IG-1297M (W09964546) é igualmente estável mas não líquido na temperatura ambiente e ele compreende teores maiores de palmítico que é menos desejável a partir do ponto de vista nutricional.

DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO

A fração óleo da invenção tem um ponto de turvação mais baixa que 5°C, pref erivelmente mais baixa que O0C, mais preferivelmente mais baixa que -6°C.

A fração óleo estável e liquida da invenção é possível de ser obtida mediante o fracionamento em baixa temperatura de um óleo de girassol altamente saturado, de alto teor oléico.

Em uma primeira modalidade, o fracionamento em baixa temperatura é um fracionamento a seco, que inclui as seguintes etapas:

- reduzir a temperatura do óleo para 12 0C, mais preferivelmente 9,5 0C, ainda mais preferivelmente 5°C,

opcionalmente com agitação;

- separar a oleína da fração sólida; e

opcionalmente fracionar a oleína resultante novamente a 2,5 0C, mais preferível 0 0C para obter uma fração oleína menos saturada.

Em uma outra modalidade o fracionamento em baixa temperatura é um fracionamento por solvente, que inclui as seguintes etapas:

- misturar o óleo com um solvente orgânico do tipo acetona, hexano ou éter etilico;

- reduzir a temperatura da solução óleo para O0C, preferivelmente -5°C;

- separar a oleina da fração sólida; e

- opcionalmente recuperar a oleina mediante remover o solvente do sobrenadante.

Em uma modalidade particular, o solvente é removido

do sobrenadante por destilação a vácuo.

A invenção está baseada no uso de a particular óleo as o óleo de partida para o f racionamento. 0 óleo de partida deve ter uma particular composição de TAG. A fração oleina da invenção compreende entre 1,8 e 9,8% SUS, preferivelmente entre 2,4 e 8,8%, mais preferivelmente entre 3.8 e 7.9%, muito preferivelmente entre 4,2 e 7,6% e entre 54 e 64% SUU, preferivelmente entre 56 e 62%, mais preferivelmente entre 58 e 60%. Óleos de girassol de altamente saturado e de alto

teor de oleato para uso como um material de partida para a preparação de uma fração óleo da invenção pode ser extraída de sementes HOHS descritos em W00074470 (os originais dos quais são CAS-3 (ATCC75968) e um mutante de alto teor tioesterase (ATCC PTA-628)). Essas sementes são também descritos em Fernandez-Moya et al. (J. Agric. Food Chem. 53: 5326-5330 (2005)) as CAS-15. outros óleos são os HOHP descritos em W09964546, sementes de IG-1297M depositadas como ATCC n° 209591, que possuem a mesma composição de TAG que CAS-12 from Alvarez-Ortega et al. (Lipids 32: 833-837 (1997)) ou óleos e sementes descritos em W00074469, esses últimos são também descritos em Serrano-Vega et al. (Lipids 40: 369-374 (2005)) as CAS-25.

As Tabelas 1 e 2 mostram as espécies moleculares de triacilglicerídeo e composição da classe triacilglicerídeo de óleo de alto teor de oleato e alto teor de estearato of CAS-15 em comparação com um óleo de alto teor de oleato (CAS-9).

Tabela 1 - Composição triacilglicerídeo of o óleo de girassol de alto teor de oleato e alto teor de estearato (CAS-15) comparada com um controle óleo de girassol de alto

teor de oleato (CAS-9).

triacilglicerídeo Teor de triacilglicerídeo (%mol) CAS-9 CAS-15 POP - 0,5 POE 0,4 4,5 POO 6, 4 6, 2 PLE - 0, 6 POL - 1,4 PLL - - EOE 0,5 10, 4 EOO 11,7 37, 7 ELE - - 000 70, 9 14, 3 EOL - 7,7 OOL 6, 6 4,0 ELL - 1,2 OLL - 0,8 EOA - 1,5 OOA 0, 9 2,8 OLA - 0,5 EOB - 1,4 00B 2,5 3,7 OLB - 0,7

P = ácido palmítico = 16:0; E = ácido esteárico = 18:0; O =

ácido oléico 18:1 ; L= ácido linoléico = 18:2; A = ácido araquídico =20:0; B= ácido beênico = 22:0 Tabela 2 - Composição da classe triacilglicerídeo of o óleo de girassol de alto teor de oleato e alto teor de estearato (CAS-15) comparado com um controle óleo de girassol de alto teor de oleato (CAS- 9) . S = ácido graxo saturado, M = ácido graxo monoenóico e D = ácido graxo dienóico, U =

Ácido graxo insaturado.

CAS-9 CAS-I5 SMS 0, 9 18,3 SDS - 0, 6 SMM 21, 5 50,4 SDM - 10, 3 SDD - 1,2 MMM 70, 9 14,3 MDM 6, 6 4,0 MDD - 0,8 SUS 0,9 18, 9 SUU 21,5 61, 9 UUU 77,5 19, 1

Em uma primeira modalidade, o óleo é um óleo de

girassol de alto teor oléico e alto teor esteárico (HOHE) possível de ser obtido mediante extrair sementes da linhagem de girassol CAS- 15 (Fernandez-Moya et al. J. Agric. Food Chem. 2005, 53, 5326-5330), que é uma linhagem do tipo HOHS como descrito em WO 0074470, ou a partir de uma outra linhagem HOHE possível de ser obtida através do cruzamento de CAS-3 (ATCC- 75968) com um mutante tioesterase de alto teor oléico (ATCC PTA-628).

Numa segunda modalidade específica, o óleo de girassol altamente saturado com alto teor oléico is a óleo de girassol de alto teor oléico e alto teor palmítico (HOHP) possível de ser obtido mediante extrair sementes da linhagem de girassol IG-1297M (correspondente com CAS-12), cujas sementes foram depositadas em 20 Janeiro de 1998 sob o número de acesso ATCC, ATCC-209591.

Em uma modalidade adicional o óleo de girassol de alto teor oléico e alto teor esteárico é possível de ser obtido mediante extrair sementes de CAS-25, produzindo um óleo de alto teor oléico e alto teor palmítico com baixo palmitoléico e baixo asclépico e possível de ser obtido pelo cruzamento de IG-1297M (ATCC-209591) com CAS-3 (ATCC- 75968).

A fração oleína da invenção pode ser obtida a partir do óleo extraído a partir dessas sementes. A invenção todavia não está limitada a oleína fracionada a partir do óleo extraído a partir dessas sementes. Qualquer óleo HOHS é um óleo de partida adequado para produzir o óleo da invenção. Tal óleo HOHS pode ser usado puro, isto é, extraído diretamente a partir das sementes, ou misturados para ter altos teores de ácido oléico e ácido graxo saturados. Tais óleos são denominados aqui "HOHS". CAS-15, CAS-33 e outros óleos HOHS óleos possuem todos teores similares de oléico e de saturados mas podem diferir em outras características.

0 fracionamento a seco ou por solvente de qualquer óleo altamente saturado de alto teor oléico, em particular, óleos de proporcionar uma fração oleína de acordo com a invenção. O fracionamento por solvente é feito com quantidades iguais de acetona, hexano ou éter etilico e resfriando a mistura a 0 °C. Após centrifugação a IOOOOx g em uma centrifuga preparativa Sorvall a O0C um precipitado, a fração estearina, e um sobrenadante, a fração oleina pode ser separada. A fração liquida oleina tem um teor muito baixo de TAGs di-saturados e um aumentado teor de TAGs insaturados, as Tabelas 3 e 4 mostram uma composição de um exemplo do óleo original proveniente de uma linhagem de HOHS e a fração oleina. A fração oleina possui uma quantidade reduzida dos TAGs di-saturados POP, POS, SOS, SOA e SOB.

Tabela 3 - Composição do triacilglicerideo de uma fração oleina de óleo de girassol altamente saturado de alto teor de oleato comparado com o óleo original (HOHS),

Triacilglicerideo Teor de Triaci, .glicerídeo (%) HOHS Oleina POP 0,3 0,2 POE 2,3 1,1 POO 6,7 7,3 POL 0,7 0,7 EOE 4,2 0, 9 EOO 34, 4 36, 7 000 31, 7 35, 0 EOL 2,7 2,7 OOL 4,2 4,7 OLL 0,4 0,4 EOA 0, 9 0,4 00A 3,4 3, 6 OLA 0, 3 0,0 EOB 1,1 0,0 00B 6, 6 6,2

P = ácido palmitico = 16:0; E = ácido esteárico = 18:0; O =

ácido oléico = 18:1; L = ácido linoléico = 18:2; A = ácido araquidico =20:0; B= ácido beênico = 22:0

Tabela 4 - Composição da classe triacilglicerideo de uma fração oleina de óleo de girassol altamente saturado de alto teor de oleato comparado com o óleo original (HOHS de ....)■ S= ácido graxo saturado, M = ácido graxo monoenóico e D = ácido graxo dienóico.

Classe de Triacilglicerideo Teor de triacilglicerideo (%) HOHS Oleina SMS 8,9 2,7 SDS - - SMM 51, 1 53, 8 SDM 3,7 3,4 SDD - - MMM 31, 7 35, 0 MDM 4,2 4,7 MDD 0,4 0,4 DDD - -

Foi surpreendentemente descoberto que óleos desse

tipo possuem excelentes propriedades de estabilidade, em experimentos de estabilidade por oxidação acelerada, e são líquidos em temperaturas próximas de 0 0C e abaixo.

A estabilidade do óleo da invenção pode ser expressa como a quantidade de TAGs alterados (monômeros de triacilglicerideo oxidados e monômeros de triacilglicerideo polimerizados) após um teste de oxidação acelerada. Para a presente invenção, o teste foi realizado mediante introduzir 2 g dos óleos em um forno a 180 0C e realizando amostragens de 50 mg em intervalos de 2 h para determinar os TAGs alterados. Os óleos restantes após 10 h de tratamento foram retirados e adicionalmente analisados quanto a compostos polares e distribuição em monômeros TAG e polímeros TAG oxidados.

A partir disso segue que o óleo da invenção é líquido em temperaturas baixas em torno de 0 0C e significativamente estáveis. A composição triacilglicerídeo dos óleos da invenção é significativamente diferentes daquelas dos óleos da técnica existente como será demonstrado nos Exemplos.

0 óleo da invenção é um óleo natural que pode ser extraído a partir de sementes de girassol e obtidas pelo fracionamento a seco ou por solvente em baixa temperatura. Essa fração oleína é termoestável sem métodos de modificação como hidrogenação das duplas ligações do ácido graxo, transesterificação de qualquer outra modificação química. O óleo da invenção é obtido sem realizar tais processos artificiais de modificação.

Uma preferida fração oleína do óleo de girassol compreende entre 1,6% e 8,6% SMS, mais pref erivelmente entre 2,1% e 8,4% e muito preferivelmente entre 3,4% e 8% e entre 26% e 62% SMM, pref erivelmente 38% e 60%, mais preferivelmente 40% e 58%, muito preferivelmente 42% e 56%. Adicionalmente, é preferido que as frações óleo da invenção possuam menos que 8% de ácidos graxos saturados na posição sn-2 dos TAGs que constituem o óleo, preferivelmente menos que 5%, mais preferivelmente menos que 3%. Os ácidos graxos saturados são usualmente o ácido

esteárico e ácido palmítico. É preferido que a fração óleo da invenção tenha um teor relativamente alto de estearato, porque o óleo será então mais saudável. Para assegurar a máxima termoestabilidade é preferido que o SMM total da fração oleina deva ser de pelo menos 30%, mais preferivelmente pelo menos 35%, muito preferivelmente 45% ou mais.

É preferido adicionalmente que o óleo tenha um alto teor de ácido oléico e um correspondente baixo teor de ácido linoléico, porque o ácido oléico é mais estável que o ácido linoléico e possui propriedades nutricionais muito boas. É preferido que o óleo tenha adicionalmente menos que 15% de ácido linoléico, mais preferivelmente menos que 10%, muito preferivelmente 5% ou menor com base no peso total dos ácidos graxos. It is também preferível que o teor de linolenato

seja abaixo de 0,5%, porque o linolenato é o mais instável ácido graxo dos óleos de consumo e é responsável pelo sabor a peixe.

Em uma primeira modalidade preferida, a invenção está relacionada a uma fração oleina em que 1,6% a 8,6%, em particular 3,4% das espécies TAG possuem a fórmula geral SMS, 26% a 62%, em particular 48% das espécies TAG possuem a fórmula geral SMM, e a fração oleina possuindo

um ponto de turvação de 40C a -6°C, em particular -

1, 2°C e

uma estabilidade térmica tal que após aquecimento a 18 O0C durante 10 h um máximo de 20,1% a 26,5%, em particular 22,3% se os TAGs são alterados.

Tal óleo é possível de ser obtido por fracionamento a úmido a partir das sementes de CAS-15.

Em uma segunda modalidade preferida, a invenção

está relacionada a uma fração oleína em que 2,6% a 7,4%, em particular 4,2% das espécies TAG possuem a fórmula geral SMS, 39% a 59%, em particular 49% das espécies TAG possuem a fórmula geral SMM, e a fração oleína possuindo um ponto de turvação de 3°C a -4°C, em particular -

0,2°C e

uma estabilidade térmica tal que após aquecimento a 180°C durante 10 h um máximo de 19,8% a 24,2%, em particular 20,2% se os TAGs são alterados. Tal óleo é possível de ser obtido através do

fracionamento a seco de óleo proveniente de sementes de CAS-15.

A fração oleína da invenção é termoestável no sentido de que ela resiste a oxidação e polimerização dos TAGs que constituem o óleo melhor do que o fazem os óleos de alto teor de oleato. Como uma conseqüência disso, a fração oleína da invenção é particularmente adequada para armazenamento de longo prazo e para fritura e cozimento em temperaturas de pelo menos IOO0C, preferivelmente 160°C ou 180°C. A fritura é pretendida abranger fritura e fritura em agitação de produtos alimentícios, tais como carne, aves, peixe, frutas, vegetais, etc., bem como fritura profunda de massas, batatas fritas, aperitivos. Além disso, o óleo da invenção é também adequado para cozeduras, assados, arte culinária, e a produção de maionese, maionese ^ight', maionese com reduzido teor de gordura, mostarda, ketchup, molho tártaro, alimentos para espalhar em sanduíche, molhos engarrafados para saladas, molhos de saladas, alimentos pré-cozidos, sopas pré-preparadas, molhos, cremes, etc.

Em um sentido mais geral a invenção está relacionada ao uso de uma fração oleína, possuindo menos que 15% de ácidos graxos saturados e menos que 10%, preferivelmente menos cjug 5% de ácido linoléico após ter submetido o óleo a condições de altas temperaturas, que consiste em manter o óleo em um forno a 180 0C por 10 h. Na prática, tais condições de alta temperatura são, por exemplo, encontradas em frituras e cozimentos.

A invenção não está limitada ao óleo como tal. A invenção está relacionada ao uso do óleo em misturas com outros óleos, nessas misturas as propriedades como um todo podem diferir do óleo da invenção e também serem usadas em processos industrial do tipo enzimático ou interesterificação química para posterior fracionamento do óleo.

A fração oleína da invenção pode ser usada com alguns antioxidantes ou outros aditivos para melhorar suas propriedades, principalmente em operações descontínuas de fritura, como orientado em Marquez-Ruiz et al. (Eur. J. Lipid Sei. Technol. 106:752-758 (2004)). Nesse trabalho é mostrado que alguns silicones e particularmente dimetilpropilsiloxano (DMPS) acrescentado a óleos e gorduras em concentrações muito baixas melhoram suas propriedades principalmente em operações descontínuas de fritura. Esse aditivo tem sido amplamente usado em óleos de fritura de consumo como inibidor das reações termo- oxidantes em fritura profunda. Δ invenção adicionalmente está relacionada a um método para a preparação de uma fração óleo líquida e estável mediante o fracionamento em baixa temperatura de um óleo de girassol altamente saturado, de alto teor oléico. 0 método é um fracionamento em baixa temperatura e é preferivelmente ou um fracionamento a seco ou um fracionamento por solvente.

Com usado aqui, os termos "fração óleo", "fração oleína" e "óleo da invenção" são usados de modo intercambiável. Embora o produto da invenção seja uma fração proveniente de um óleo ela é propriamente ainda um óleo e desse modo será referida também como "óleo".

As espécies TAG da fórmula geral SUS, em que S é um ácido graxo saturado e U é um ácido graxo insaturado, são SMS e SDS. M é ácido graxo monoenóico com uma ligação insaturada. D é ácido graxo dienóico com duas ligações insaturadas. As espécies SMS são EOE, POP, POE, EOB, EOA. As espécies SDS são PLP, ELE, PLE. As espécies TAG de fórmula geral SUU são SMM, SMD, e SDD. As espécies SMM são P00, E00, OOA e 00B. As espécies SMD são POL, EOL, OLA e OLB. As espécies SDD são PLL e ELL As espécies TAG de fórmula geral UUU são MMM, MMD, MDD e DDD,

A espécie MMM é 000. A espécie MMD é 00L. A espécie MDD é OLL e a espécie DDD é LLL.

A presente invenção será adicionalmente ilustrada nos Exemplos apresentados a seguir que não são de nenhum modo pretendidos limitar a invenção. Nos Exemplos é feita referência à figura apresentada a seguir:

Figura. Gráficos de polimerização de diferentes óleos a 180 °C. Óleo de girassol comum (CAS-6), girassol de alto teor oléico (CAS-9),girassol de alto teor oléico e alto teor palmitico (CAS- 12), óleos de alto teor oléico e alto teor esteárico (HOHS- 17%E e HOHS-20%E) e sobrenadantes do fracionamento de óleos de alto teor oleato e alto teor estearato a 0 0C (sobrenadante 1) e -5°C (sobrenadante 2) foram estudados.

EXEMPLOS

EXEMPLO 1

Preparação dos óleos para a preparação da fração oleína da invenção

1. Material Vegetal

A fração oleina da invenção pode ser preparada a partir de sementes da linhagem depositada IG-1297M ou a partir de sementes que sejam obtidas de qualquer outro modo. Um outro modo de obter tal semente é ilustrado adiante.

Sementes maduras de girassol de alto teor oleato e alto teor esteárico a partir de HOHS como descrito em WO 0074470 e/ou sementes CAS-15 como descrito em Fernandez- Moya et al. (J. Agric. Food Chem. 53:5326-5330 (2005)), todos com alto teor de estearato em base de alto teor oleato foram usadas.

Óleos de alto teor oléico e alto teor esteárico (HOHS) são todos similares e independentemente das sementes usadas para extrair os óleos que foram usados nesses exemplos, os óleos podem ser extraídos a partir de qualquer outra semente e usados puros ou misturados para obter uma específica composição de TAG.

CAS-12 (depositada como IG-1297M (ATCC 209591)) ou CAS-25 (obtida através do cruzamento entre IG-1297M e CAS-3 como descrito em Serrano-Vega et al. Lipids 2005, 40, 369- 374) com ou sem palmitoleato foram usados. Óleos de ato teor oléico e alto teor palmítico são todos similares e independentemente das sementes usadas para extrair os óleos que foram usados nesse exemplos, os óleos podem ser extraídos a partir de qualquer outra semente e usados puros ou misturados para obter uma específica composição TAG.

Como materiais de controle sementes maduras provenientes de uma linhagem normal de girassol (padrão, DAS-β) e linhagem de alto teor oléico (CAS-9) foram usadas.

Alguns exemplos da composição de ácidos graxos dos óleos usados nesses exemplos podem ser encontrados na tabela 5.

Tabela 5 - Composição em ácidos graxos de alguns óleos usados nessa patente.

Oleo de girassol Composição ácidos graxos (mol %) 16: 0 18 : 0 18: 1 18:2 20: 0 22 : 0 Padrão (CAS-6) 4, 96 7,8 28,39 57, 24 0,43 1, 17 Alto teor oléico(CAS-9) 3,71 7, 28 85,48 1,18 0,7 1, 64 HOHS 17%E 4,45 17, 75 70, 37 3, 34 1, 52 2,56 HOHS 20%E 4, 55 20,2 67, 49 2,87 1,74 3,16 HOHS 24E 5, 12 24,0 61, 63 4, 14 2,18 2, 93 HOHS 253 5,71 19, 6 57, 91 12, 83 1,46 2,36

Óleos HOHS 17%, HOHS 24E e HOHS 253 foram extraídos de sementes CAS-33 e CAS-15 e usados puros. HOHS 20% é um óleo misturado.

2. Extração do óleo

numa escala de laboratório, os óleos usados para a preparação da fração oleína dessa invenção foram extraídos a partir de sementes utilizando um processo compreendendo o esmagamento das sementes até um pó fino que foi misturado com 1/5 p/p de sulfato de sódio anidro. Em seguida, a torta resultante foi embalada em cartuchos de papel de filtro contendo aproximadamente 25 g da mistura e extraída em Sohxlett por 16h usando heptano como solvente. A mistura enriquecida em óleo recuperada no reservatório do solvente foi destilada em vácuo a 80°C e os traços de solvente extraídos mês aplicação de um fluxo de nitrogênio. Um método alternativo envolveu o esmagamento das sementes até um pó fino e a extração descontínua do óleo mediante mistura das sementes moidas com 2 fluxo em peso de heptano. A suspensão foi transferida para frascos de tampa de rosca e mantida a 80 0C por 2 horas. Em seguida um volume de NaCl lOg/L foi acrescentado e as fases deixadas a separar. O sobrenadante enriquecido em heptano foi extraído e destilado em vácuo a 80 °C. O óleo foi finalmente extraído com um fluxo de nitrogênio para remover traços do solvente. Para extração em escala maior, o óleo das sementes foi extraído usando uma prensagem contínua para extração do óleo com uma capacidade de 8 kg/h. Bateladas de kg foram extraídas e em seguida refinadas. Uma vez que esses óleos apresentaram baixo teor de fosfato eles não foram refinados. A remoção do excesso de ácidos graxos livres foi realizada por neutralização com solução esterilizante 12° Baume (2,18 M) a 15°C por 40 minutos. Os saponifiçados foram removidos por centrifugação e o óleo foi em seguida lavado com água. A etapa seguinte foi o clareamento do óleo através do tratamento com argila ativada de clareamento (1% p/p) a 70 0C por 10 minutos. Finalmente, o óleo foi desodorizado mediante aplicar vapor 3% a 200 0C por 3 horas sob vácuo por 3 horas.

EXEMPLO 2

Caracterização dos TAGs 1. Distribuição do TAG nos óleos TAG purificado proveniente de óleos de girassol usados para a preparação da fração oleina da invenção foram obtidas mediante passar 3 g de óleo dissolvido em 3 mL de éter de petróleo sobre alumina, que havia sido desativada a 200 0C ou 3 horas imediatamente antes do uso. A alumina (1,5 g. vezes 2) foi colocada dentro de duas pequenas colunas conectadas por uma peça de tubo de silicone e a solução lipidio colocada no topo e deixada filtrar através da alumina. As colunas foram lavadas adicionalmente com 6 mL de éter de petróleo. 0 solvente foi evaporado o TG purificado arrastado com nitrogênio e armazenado a -20°C.

Os TAG estavam desprovidos de tocoferóis como determinado por HPLC seguindo o Padrão IUPAC Método 2432 (IUPAC Standard Methods for the Analysis of Oils, Fats e Derivatives, Blackwell, Oxford, 7.sup.th ed. (1987)).

A composição das espécies moleculares de TAG foi realizada através de cromatografia gasosa do TAG purificado usando uma coluna capilar DB-17-HT (Agilent Technologies, USA) de 15 m. vezes 0,25 de diâmetro interno, 0,1 micron de espessura de filme, hidrogênio como o gás veiculo e detector FID, de acordo com J Agr Food Chem. 2000, 48, 764- 769.

EXEMPLO 3

Preparação das frações oleina da invenção

l.~ Fracionamento dos óleos utilizando solventes

Óleos extraídos das sementes mencionadas no exemplo 1 foram dissolvidos em 3 volumes de um solvente orgânico, tal como hexano, acetona ou éter etilico. Outras relações de óleo para solvente produzem os mesmos resultados, ver "Edible Fats and Oils Processing: Basic Principies e Modern Practices", 1990, World Conference Proceedings, American Oil Chemists' Society. Em seguida eles foram mantidos em baixa temperatura por períodos de 24 h. Os sobrenadantes foram separados dos precipitados por centrifugação a 5000 χ g e o solvente removido da fração oleína por arraste com nitrogênio. As frações oleína foram armazenadas a -20 0C sob atmosfera de nitrogênio. Dois fracionamentos foram realizados a O0C e -5°C, produzindo oleínas de diferentes composições e propriedades. Tabela 6 - Composição triacilglicerol de óleos de alto teor esteárico e alto teor oléico e diferentes frações

preparadas através do fracionamento com acetona a 0 0C (sup. 1) e -50C (sup. 2) .

Triacilglicerideo Composição do triacilglicerídeo (mol %) HOHS 253 HOHS 24E Sup. 1_253 Sup. 1_2 4E Sup. 2_2 53 Sup. 2_24E POP 0, 82 0,83 0, 62 0, 57 0, 69 0, 72 PLP 0,23 0,2 0, 22 POE 4,03 5, 72 1, 95 1, 54 1, 67 1,3 POO 8,54 8, 13 9, 53 13, 75 11, 63 15, 77 PLE 1, 52 0,23 1,41 0, 37 1, 14 0, 38 POL 1,83 1,06 2,13 1,8 6 2,31 2,24 PLL 1,18 1,16 0,21 1,18 EOE 5,28 10, 07 1,12 1, 04 0, 68 0, 59 EOO 27, 67 39,24 30, 3 32, 74 27, 38 30, 22 ELE 2,01 0,6 1, 1 0,23 000 21,24 15,45 23,74 26, 06 27, 02 28, 58 EOL 6, 34 4, 92 6, 91 6, 23 6,09 6,16 OOL 4, 57 2, 95 5,05 5, 37 5,23 5, 63 ELL 4,7 5, 17 5,23 OLL 1, 57 0, 35 2,14 0,8 2, 34 0, 35 LLL 1,06 1,23 0, 92 EOA 1,14 1,56 0, 14 0,42 00A 1, 91 3, 22 2,16 4, 65 2, 05 4, 27 OLA 0, 24 0,23 0,3 0, 55 0, 65 0,49 EOB 0, 61 1, 37 0,19 OOB 2, 98 3,76 3, 22 3, 44 2,51 2, 69 OLB 0, 54 0,3 0,53 0,49 0, 65 0, 38

P = ácido palmitico =16:0; E= ácido esteárico =18:0; O= ácido oléico = 18:1; L = ácido linoléico = 18:2; Δ = ácido araquidico =20:0; B= ácido beênico = 22:0 Os óleos HOHS 24E e HOHS 253 foram extraídos de sementes CAS-33 e CAS-15.

2. Fracionamento por solvente de óleos de alto teor oléico e alto teor esteárico Exemplos do fracionamento por solvente podem ser

encontrados na Tabela 6. Dois óleos de alto teor e alto teor esteárico (HOHS 253 e HOHS 24E) extraídos de sementes das linhagens CAS-15 (descritos em Fernandez-Moya et al. J. Agric Food Chem. 53:5326-5330 (2005)) ou a partir de sementes HOHS sementes como descrito em W00074470, foram fracionados com acetona a 0 0C e suas respectivas frações oleína coletadas (Sup 1_253 e Sup 1_24E). Duas outras frações foram obtidas a -5°C (Sup 2_253 e Sup 2 24E).

As frações obtidas a 0 e -5°C possuem reduzido teor de TAG di-saturado tal como POS, SOS, SOA, SOB etc. A composição TAG pode ser mostrada como classes de TAG de acordo com o teor de TAG saturado (S), monoinsaturado (M) e di-insaturado (D) . A Tabela 7 mostra os dados agrupados como estabelecido acima. Tabela 7 - Composição da classe triacilglicerídeo de óleos de alto teor oléico e alto teor esteárico e diferentes frações preparada através do fracionamento com acetona a 0 0C (sup. 1) e -5 0C (sup. 2). S = ácido graxo saturado, M = ácido graxo monoenóico e D = ácido graxo dienóico, CJ =

ácido graxo insaturado.

Classes de Triacilglicerídeo Composição do triacilglicerídeo (mol %) HOHS 253 HOHS 24E Sup. 1 253 Sup. 1 2 4 E Sup. 2 253 Sup. 2 24E SMS 11, 88 19, 55 3, 69 3,48 3,46 2, 61 SDS 3,76 0,83 2,71 0, 37 1,36 0, 61 SMM 41,1 54, 35 45,21 54, 58 43, 57 52, 95 SMD 8, 95 6,51 9,87 9, 13 9,7 9,27 SDD 5,88 6, 33 0,21 6,41 - MMM 21, 24 15, 45 23,74 26, 06 27, 02 28, 58 MMD 4,57 2, 95 5, 05 5, 37 5,23 5, 63 MDD 1,57 0, 35 2,14 0,8 2, 34 0, 35 DDD 1,06 - 1,23 - 0, 92 - SUS 15, 64 20, 38 6, 4 3,85 4, 82 3, 22 SUU 55, 93 60, 86 61, 41 63, 92 59, 68 62, 22 UUU 28,44 18, 75 32, 16 32, 23 35, 51 34, 56

A partir do acima segue que as frações oleina da

invenção possuem um valor SMS substancialmente menor que o dos óleos de partida. 3. Fracionamento por solvente de óleos de alto teor oléico e alto teor palmitico

outros óleos saturados provenientes de girassol, tal como o óleo de alto teor oléico e alto teor palmitico proveniente de CAS-12, foram também fracionados e uma fração oleina obtida. Essa fração oleina tinha reduzidas quantidades de TAG di-saturado.

A composição TAG do óleo de girassol de alto teor oléico e alto teor palmitico (HOHP de CAS- 12) original e das frações obtidas com acetona a 0 e -5o C após 24 h,

denominadas Sup.l e Sup. 2 respectivamente, são mostrados na tabela 8.

A composição TAG pode ser mostrada como classes TAG. A tabela 9 mostra as classes de TAG do óleo HOHP original e das frações Sup. 1 e Sup. 2.

As frações oleina possuem uma quantidade reduzida

de TAG di-saturado, tal como SMS e uma quantidade aumentada

de TAG mono-saturado e TAG tri-insaturada tal como SMM e MMM. Tabela 8.- Composição triacilgricerol de óleo de alto teor oléico e alto teor palmítico (CAS- 12) e diferentes frações preparadas com acetona a 0 0C (sobrenadante 1) e a -5°C (sobrenadante 2).

Triacilglicerideo Composição do triacilglicerídeo (mol %) HOHP Sup. 1 Sup- 2 PPoP 0, 62 0,71 0, 35 PPoPo 0,28 0, 44 0, 64 POP 17, 5 7, 02 2,26 PAsP 0, 66 - 0,29 PPoO 9,87 16, 46 13, 44 PPoL 1,3 2,49 2, 64 POE 1,85 0, 64 0,48 POO 30, 9 36, 31 29, 73 POAs 5,41 7,07 7,01 POL 8, 22 12, 3 12, 54 PoOO 1,41 - 2, 68 PoOL 0, 54 0, 56 0, 82 EOE 0,25 - - EOO 2, 22 1, 99 3, 67 000 10, 99 8, 08 13, 38 OOAs 3,74 3, 35 5, 57 OOL 1,43 0, 92 1, 49 POB 0, 96 0,15 0,4 OOA 0, 25 0, 22 0,4 OOB 1, 02 0,59 1,2

P= ácido palmitico = 16:0; Po= ácido palmitoléico = 16:1;

Δ 9

E = ácido esteárico = 18 :0; 0 = ácido oléico = 18 : 1 As= ácido asclépico= 18:1a11; L = ácido linoléico = 18:2; A = ácido araquídico =20:0; B= ácido beênico = 22:0 Tabela 9 - Composição da classe triacilglicerídeo de óleo com alto teor oléico e alto teor palmítico e diferentes frações preparadas pelo fracionamento com acetona a 0 0C (sobrenadante 1) e -5 0C (sobrenadante 2) . S = ácido graxo saturado, M = ácido graxo monoenóico e D = ácido graxo dienóico, U = ácido graxo insaturado.

Classes de Triacilglicerídeo Composição do triacilglicerídeo (mol %) HOHP Sup. 1 Sup. 2 SMS 21,84 8, 52 3,78 SDS - - - SMM 49, 95 63, 08 56, 09 SMD 9, 52 14,79 15, 18 SDD - - - MMM 16, 14 11, 43 21, 63 MMD 1, 97 1,48 2, 31 MDD - - - DDD - - - SUS 21,84 8, 52 3,78 SUU 59,47 77,87 71,27 UUU 18,11 12, 91 23, 94

4. Fracionamento a seco dos óleos

Óleos foram fracionados sem solventes através de resfriamento dos óleos por 24-48 h sem qualquer solvente. Os precipitados resultantes foram sedimentados por centrifugação a 5000 χ g por 30 min na temperatura de fracionamento. As oleinas foram separadas como os sobrenadantes. As temperaturas do fracionamento variaram na faixa de 12 a 0 °C. 0 fracionamento a seco é descrito em "Edible Fats and Oils Processing: Basic Principies e Modern Practices", 1990, World Conference Proceedings, American Oil Chemists' Society, pages. 136-141 e 239-245.

Durante o armazenamento em baixa temperatura cristais de TAG saturados são formados e podem ser separados do óleo liquido através de centrifugação, prensagem a frio, etc. Alguns exemplos de fracionamento a seco são mostrados na tabelas 10 e 11. Óleo de alto teor oléico e alto teor esteárico original foi mantido a 9,5 °C, e a oleina chamada sup 1 foi recuperada como o sobrenadante. Oleina Sup 1 foi em seguida fracionada a 5 0C por 24h, resultando numa oleina chamada sup 2 como o sobrenadante. Sup 2 foi em seguida fracionada novamente a 2,5 0C por 24 h e sup 3 nas tabelas 10 e 11 foi obtida.

Como no f racionamento por solvente, o TAG di- saturado se reduz enquanto as espécies de TAG mais insaturadas aumentam. Os mesmos resultados encontrados como classes TAG podem ser encontrados na tabela 11. Tabela 10 - Composição triacilglicerol de óleo de alto teor oléico e alto teor esteárico (óleo obtido a partir de HOHS sementes) e diferentes frações preparadas através do fracionamento a seco a 9,5 0C (sobrenadante 1), 5°C (sobrenadante 2) e 2.5°C (sobrenadante 3).

Triacilglicerideo Composição do triacilglicerídeo (mol %) HOHS Sup. 1 Sup. 2 Sup. 3 POP 0,56 0,46 0,51 0,45 POE 3, 38 2,36 2,19 2,34 POO 7, 18 7,9 8 8,21 PLE - - 0,19 — POL 0, 98 1, 18 1, 14 1, 07 EOE 6,7 3, 15 2, 82 2,81 EOO 36, 65 39,46 37, 38 38, 23 ELE 0,47 - 0, 33 0,3 000 25, 42 27, 78 28, 52 28,59 EOL 4, 98 5, 22 5, 33 5, 13 OOL 4,76 4, 96 5, 13 5,01 OLL 0, 32 - 0, 37 0, 22 EOA 0, 98 0,39 0,4 0, 31 OOA 2, 87 3, 06 2, 98 3,01 OLA 0, 27 - 0,26 0,27 EOB 0, 82 - 0,28 0,24 OOB 3, 47 4,1 3,81 3, 41 OLB 0,2 - 0, 31 0, 38 P = ácido palmitico = 16:0; E = ácido esteárico = 18:0; O = ácido oléico = 18 1 ; L = ácido linoléico = 18:2; A = ácido araquidico = 20:0 B = ácido beênico = 22:0 Tabela 11 - Composição da classe triacilglicerídeo do óleo de alto teor oléico e alto teor esteárico (óleo obtido a partir de HOHS sementes) e diferentes frações preparadas através do fracionamento a seco a 9,5°C (sobrenadante 1), 5 0C (sobrenadante 2) e 2,5°C (sobrenadante 3). S = ácido graxo saturado, M = ácido graxo monoenóico e D = ácido graxo dienóico.

Classe TAG Composição do triacilglicerídeo (mol %) HOHS Sup. 1 Sup. 2 Sup. 3 SMS 12, 44 6, 36 6,2 6, 15 SDS 0,47 0 0, 52 0, 3 SMM 50,17 54, 52 52, 17 52, 86 SMD 6, 43 6,4 7,04 6, 85 SDD - - - - MMM 25, 42 27, 78 28, 52 28, 59 MMD 4,76 4,96 5, 13 5, 01 MDD 0, 32 0 0, 37 0,22 DDD - - - - SUS 12, 91 6,36 6, 72 6, 45 SUU 56,6 60, 92 59,21 59, 71 UUU 30,5 32, 74 34, 02 33, 82

0 f racionamento a seco de um dado óleo é muito

dependente das temperaturas usadas para a cristalização dos triacilglicerideos. Portanto, a composição das resultantes frações oleina foi diferente. Os dados estabelecidos nas tabelas 12 e 13 abaixo são representativos quanto ao fracionamento a seco de um óleo de alto teor oléico e alto teor esteárico, seqüencialmente a 12, 2,5 e 0 0C por 24 h. 0 fracionamento do óleo em temperaturas mais baixo produziu mais oleina liquida com um mais baixo teor de TAGs da forma SMS e um teor maior das classes mais insaturadas do tipo MMM ou MMD. A ocorrência das TAGs da forma SMM atingiu um máximo na sup 1 e em seguida reduziu ligeiramente em sup 2 e sup 3, aumentando as espécies mais insaturadas do tipo MMM e MMD.

Tabela 12. Composição triacilglicerol do óleo de alto teor oléico e alto teor esteárico e diferentes frações preparadas através do fracionamento a seco at. 12°C (sup 1), 2.5 0C (sup. 2) e 0 0C (sup. .3).

Triacilglicerideo Composição do triacilglicerídeo (mol %) HOHS 310 Sup. 1 Sup. 2 Sup. 3 POP 0, 56 0,47 0,47 0, 32 POE 3,78 2, 58 2,42 1, 61 POO 7, 55 7, 35 7, 68 8, 17 POL 0, 92 1 1, 04 0, 99 EOE 7, 45 3,88 3, 18 1,74 EOO 38, 49 41, 63 40,75 37, 3 000 24,77 26, 02 27, 38 32, 1 EOL 4,44 5,19 5,11 4, 93 OOL 4, 14 4, 62 4,86 6,09 OLL 0,29 EOA 1 0, 52 0,3 OOA 2, 58 2,75 2,83 3, 06 EOB 1, 34 0,9 0,76 OOB 2, 99 3,1 3,23 3,41 P = ácido palmitico = 16:0; E = ácido esteárico = 18:0; O = ácido oléico = 18 1 ; L = ácido linoléico = 18:2; A = ácido araquidico = 20:0, B = ácido beênico = 22:0 Tabela 13 - Composição da classe triacilglicerideo do óleo de alto teor oléico e alto teor esteárico e diferentes frações preparadas através do fracionamento a seco a 12°C (sobrenadante 1), 2,5°C (sobrenadante 2) e 0 0C (sobrenadante 3). S = ácido graxo saturado, M = ácido graxo monoenóico e D = ácido graxo dienóico, U = ácido graxo insaturado.

Classe de Triacilglicerideo Composição do triacilglicerideo (mol %) HOHS 310 Sup. 1 Sup. 2 Sup. 3 SMS 14, 13 8, 35 7, 13 3, 67 SDS SMM 51, 61 54, 83 54, 49 51, 94 SMD 5, 36 6, 19 6, 15 5, 92 SDD MMM 24, 77 26, 02 27, 38 32, 1 MMD 4,14 4, 62 4,86 6, 09 MDD 0,29 DDD SUS 14, 13 8,35 7,13 3, 67 SUU 56, 97 61, 02 60, 64 58, 15 UUU 28, 91 30, 64 32, 24 38, 48

EXEMPLO 4

Determinação do ponto de turvação Para muitos propósitos um óleo liquido é

preferível, por exemplo para fritura profunda a maioria das empresas preferem óleo líquidos para evitar isolamento térmico e aquecimento para evitar a solidificação das gorduras. 0 ponto de turvação é definido como a temperatura na qual o óleo se torna turvo devido à solidificação dos TAGs em dadas condições. Ele mede quando um óleo começou a ser sólido e alguns cristais de gordura sólida surgem devido a baixa temperatura. Óleos com pontos de turvação mais baixos são líquidos em baixas temperaturas. Também, quando produtos alimentícios precisam ser armazenados em refrigerador, um óleo líquido com um ponto de turvação próximo ou abaixo de 0 0C é preferível.

Para medir o ponto de turvação das frações oleína com diferentes teores de SUS e óleos controle, quantidades de 10 g de cada um foram transferidos para tubos com tampa rosqueada e foram aquecidos a 80 0C para remover quaisquer traços de sólidos. Em seguida eles foram removidos para um banho termo-estabilizados favorecido com uma lâmpada e uma janela para permitir a verificação da turbidez dos óleos. A temperatura inicial do banho foi de 30 °C, em seguida a temperatura foi reduzida numa taxa de 2 0C a cada 20 minutos, para atingir uma temperatura final de -10 °C. Os pontos de turvação foram estabelecidos visualmente como a temperatura nas quais um dado óleo se tornava turvo. Os pontos de turvação de algumas frações oleína

provenientes do óleo de alto teor oléico e alto teor esteáricos foram determinadas. A composição

triacilglicerídeo dessas frações oleína está na Tabela 14. Tabela 14 - Composição da classe Triacilglicerídeo das frações oleína usadas para determinar o ponto de turvação. S = ácido graxo saturado, M = ácido graxo monoenóico e D = ácido graxo dienóico

Oleina SMS SDS SMM SMD SDD MMM MMD MDD DDD A 3,1 54, 2 3,5 34, 4 4,4 0,4 B 0,7 43,0 5,1 44,8 6, 1 C 3,7 51,9 5,9 32, 1 6,1 0,3 D 7,1 54, 5 6,2 4,9 4,9

A Tabela 15 mostra que o ponto de turvação do óleo

padrão e do óleo de alto teor oléico são iguais, sendo de - 8 °C. Portanto, eles começaram a se tornar sólidos em temperaturas abaixo de 0 °C, mas os óleos altamente saturados possuem ponto de turvação acima de 20 °C, eles solidificam no refrigerador. As frações oleina preparadas pelo f racionamento a seco ou por solvente de um óleo de alto de um óleo de alto teor oléico e alto teor esteárico possuem pontos de turvação próximos a 0 0C e abaixo e próximos do óleo padrão e do óleo de alto teor oléico. O comportamento deles em temperaturas de refrigerador é similar ao do óleo padrão e ao do óleo de alto teor oléico. Tabela 15 - Pontos de turvação de diferentes óleos e frações oleína HOHE

Óleo de girassol Teor de SUS (%) Ponto de Turvação (0C) Padrão (CAS-6) 2 -8 Alto teor oléico (CAS-9) 1 -8 Alto teor oléico e alto teor esteárico (CAS-15) 19 24 Oleina A 3 -4 Oleina B 1 -6 Oleina C 4 -1 Oleina D 7 4

EXEMPLO 5

Termoestabilidade 1. Purificação dos TAGs

TAGs provenientes de diferentes óleos e frações oleina (Sup. 1_253 e Sup. 2 253 do exemplo 3; Tabela 6) foram purificados e esvaziados de tocoferóis antes de realizar os estudos da termoestabilidade mediante utilizar o protocolo descrito no exemplo 3.

Quando do aquecimento a qualidade de um óleo pode se deteriorar porque os TAGs que constituem o óleo são oxidados e/ou polimerizados. Para testar a

termoestabilidade um tratamento térmico a 180 0C durante 10 h foi realizado como a seguir. 2. Tratamento termo-oxidante

o tratamento termo-oxidante das amostras foi realizado sob condições estritamente controladas de acordo com Barrera- Arellano et al. (Grasas Aceites 48, 231-235 (1997). Em resumo, 2,00±0,01 g de TAG purificado foram pesados em tubos de ensaio padrão de 13 cm vezes 1 cm de diâmetro interno, e por sua vez introduzidos dentro de um forno a 180,0±0,1°C. Amostras de 50 mg foram retiradas em intervalos de 2 horas para a análise do TAG polimerizado. Após aguecimento durante um período total de 10 h, as amostras finais foram retomadas e adicionalmente analisadas quanto a compostos polares e distribuição em monômeros TAG oxidados e polímeros TAG. As instruções do Rancimat™ foram cuidadosamente observadas guanto a limpeza dos vasos e correção da temperatura. Não foi aplicado borbulhamento de ar durante o aguecimento e os vasos foram deixados abertos. 3. Quantificação dos TAGs TAG polimerizado nos diversos óleos foram

guantificado através de cromatografia de exclusão de tamanho de alta performance (HPSEC) seguindo uma modificação do Método Padrão IUPAC 2508 (supra) por meio do uso de um detector de espalhamento de luz em lugar de um detector do índice de refração no HPLC. Os compostos polares totais e a distribuição deles nos monômeros TAG oxidados e polímeros de TAG foram determinados através de uma combinação de cromatografia de adsorção e HPSEC (Dobarganes et al. Fat Sei. Technol. 90, 308-311 (1988)). As condições aplicadas para HPSEC foram como a

seguir: As separações foram realizadas em um Módulo Waters 2695 (Milford, MA) favorecido com detector ELS Waters 2420. Os dados foram processados usando um software Empower. Colunas Ultrastyragel (Waters Associates, Milford, Mass., USA) conectadas em série e operadas a 35°C (25 cm .vezes.0.77 cm diâmetro interno), foram recheadas com estireno divinil benzeno altamente reticulado (<10 Am) . Tetraidrofurano de grau HPLC serviram como a fase móvel com um fluxo de 1 mL/min. Soluções de amostras de 50 mg óleo/mL e 15 mg compostos polar/mL em tetraidrofurano foram usadas para a análise do TAG polimerizado e distribuição dos compostos polares, respectivamente. 4. Monitoramento das alterações do TAG

0 monitoramento da formação de dimeros, polímeros e TAGs alterados em condições similares àquelas usadas em frituras industriais e domésticas dá informações acerca da estabilidade oxidativa dos dados óleos e frações. Portanto, TAGs purificados a partir de óleo comum de girassol, que era rico em ácido linoléico CAS-6 (Salas et al. JAOCS 83:539-545 (2006)) (Tabela 5) revelou a mais alta taxa de polimerização (Figura 1), atingindo 28 % de TAGs polimerizados após 10 h a 180 °C.

No óleo de alto teor oléico CAS-9 (Fernandez-Moya et al. J. Agric. Food Chem. 53:532 6- 5330 (2005)) os TAGs foram mais estáveis que no óleo de girassol comum mas eles polimerizaram mais rapidamente que aqueles proveniente de ambos os sobrenadantes obtidos mediante fracionamento de óleos HOHS (Sup. 1 253 e Sup. 2 253 do exemplo 3; Tabela 6) a 0 0C e -5 °C.

Desse modo, essas frações oleina, contendo altos níveis de TAGs da forma SUU e baixos níveis de SUS apresentaram estabilidades maiores que os óleos de girassol comum e de alto teor oléico bem como pontos de turvação mais baixos, o que as torna óleos líquidos estáveis para fritura, cozimento, assados, uso culinário e produção de maionese de alta estabilidade, maionese yIight', maionese de baixo teor de gordura, mostarda, katchup, molho tártaro, alimentos para espalhar em sanduíche, molhos engarrafados para saladas, molhos de saladas, alimentos pré-cozidos, sopas pré-preparadas, molhos, cremes, etc.

Óleos de alto teor oléico e de alto teor esteárico HOHS 17% e HOHS 20% (Tabela 5) e óleo de alto teor palmítico e alto teor oléico (CAS-12) apresentaram taxas similares de polimerização, ligeiramente mais baixa que o sobrenadante de 0 0C devido ao seu teor maior de ácidos graxos saturados, o que os torna semi-sólidos na temperatura ambiente.

Além disso, dados correspondentes aos TAGs alterados após 10 h a 180 0C estavam em boa concordância com o gráfico de polimerização (tabela 16) . Óleo comum e óleo de alto teor oléico apresentaram o maior conteúdo de TAGs alterados, seguido pelas frações oleina isoladas a partir dos sobrenadante 1 e sobrenadante 2 dos óleos HOHS, orientando novamente que estes eram óleos líquidos estáveis. 0 teor mais baixo de TAGs alterados foi descoberto em óleos HOHS e HOHP semi-sólidos altamente saturados. Esses últimos óleos são todavia não líquidos e podem se tornar sólidos durante o transporte ou o armazenamento em baixas temperaturas.

Tabela 16 Composição triacilglicerídeo alterada de diferentes óleos e frações oleína após 10 h a 180°C.

TAGs alterados (% p/p) Monômeros Dímeros Oligômeros Total Padrão (CAS- 6) 8,8 10,2 17,4 26, 3 Alto teor oléico (CAS- 9) 12,4 9, 6 6, 1 28, 1 Alto teor oléico e alto teor palmítico (CAS-12) 8,3 5, 9 2,9 17, 1 HOHS 17 %E 7,8 6, 0 3,4 17,3 HOHS 20%E 8,2 5, 5 2,8 16, 5 Sobrenadante 0 0C 9,4 7,1 4,7 21,3 Sobrenadante -5 0C 10, 8 8, 5 6,4 25,7

Claims

1. FRAÇÃO OLEÍNA LÍQUIDA E ESTÁVEL, caracterizada por a. menos que 8,6% das espécies TAG da referida fração oleína possuírem a fórmula geral SMS e b. pelo menos 26% das espécies TAG da referida fração oleína possuírem a fórmula geral SMM em que S representa um ácido graxo saturado e M representa a ácido graxo monoenóico, cuja fração oleína é possível de ser obtida mediante: fracionamento de um óleo de girassol altamente saturado com alto teor oléico; e coletar a fração líquida.

2. Fração oleína líquida e estável, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada por o fracionamento ser um fracionamento em baixa temperatura.

3. Fração oleína líquida e estável, de acordo com a reivindicação 2, caracterizada por o fracionamento em baixa temperatura ser um fracionamento a seco, compreendendo as seguintes etapas: reduzir a temperatura do óleo para 12 0C, mais preferiveimente 9,5 0C, ainda mais preferivelmente 5°C, opcionalmente com agitação; separar a oleína da fração sólida; e opcionalmente fracionar a oleína resultante novamente a 2,5 0C, mais preferível 0 0C para obter uma fração oleina menos saturada.

4. Fração oleina líquida e estável, de acordo com a reivindicação 2, caracterizada por o fracionamento em baixa temperatura ser um fracionamento a seco, consistindo das seguintes etapas: reduzir a temperatura do óleo para 12 0C, mais preferivelmente 9,5 0C, ainda mais preferivelmente 5°C, opcionalmente com agitação; e separar a oleina da fração sólida.

5. Fração oleina líquida e estável, de acordo com a reivindicação 4, caracterizada por o fracionamento em baixa temperatura adicionalmente conter a etapa de fracionar a oleina resultante novamente a 2,5 0C, mais preferível 0 0C para obter uma fração oleina menos saturada.

6. Fração oleina líquida e estável, de acordo com a reivindicação 2, caracterizada por o fracionamento em baixa temperatura ser um fracionamento por solvente, compreendendo as seguintes etapas: misturar o óleo com um solvente orgânico do tipo acetona, hexano ou éter etíIico; reduzir a temperatura da solução óleo para O0C, preferivelmente -5°C; separar a oleina da fração sólida; e opcionalmente recuperar a oleina mediante remover o solvente do sobrenadante.

7. Fração oleina líquida e estável, de acordo com a reivindicação 2, caracterizada por o fracionamento em baixa temperatura ser um fracionamento por solvente, consistindo das seguintes etapas: misturar o óleo com um solvente orgânico do tipo acetona, hexano ou éter etílico; reduzir a temperatura da solução óleo para O0C, preferivelmente -5°C; separar a oleina da fração sólida.

8. Fração oleina liquida e estável, de acordo com a reivindicação 7, caracterizada por o fracionamento adicionalmente conter a etapa de recuperar a oleina mediante remover o solvente do sobrenadante.

9. Fração oleina liquida e estável, de acordo com a reivindicação 8, em que o solvente é removido do sobrenadante por destilação a vácuo.

10. Fração oleina liquida e estável, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-9, caracterizada por o óleo de girassol altamente saturado com alto teor oléico ser um óleo de girassol de alto teor oléico e alto teor esteárico possível de ser obtido mediante extrair sementes de alto teor oléico e alto teor esteárico as quais são possíveis de serem obtidas pelo cruzamento de CAS-3 (ATCC75968) e um mutante de alto teor tioesterase com o número de depósito ATCC PTA-628.

11. Fração oleina líquida e estável, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-9, caracterizada por o óleo de girassol altamente saturado com alto teor oléico ser óleo de girassol de alto teor palmítico possível de ser obtido mediante extrair sementes da linhagem de girassol IG-1297M, cujas sementes foram depositadas em 20 Janeiro de 1998 sob o número de acesso ATCC-209591

12. Fração oleína líquida e estável, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-9, caracterizada por o óleo de girassol altamente saturado com alto teor oléico ser um óleo de girassol de alto teor oléico e alto teor palmítico com baixo teor. palmitoléico e baixo teor asclépico possível de ser obtido mediante extrair sementes da linhagem de girassol CAS-25, cujas sementes são possíveis de serem obtidas mediante o cruzamento de IG- 1297M (ATCC 209591) e CAS-3 (ATCC 75968).

13. Fração oleína líquida e estável, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-12, caracterizada por o teor de ácido linolênico total na referida fração oleína ser mais baixo que 0,5%.

14. Fração oleína líquida e estável, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-13, caracterizada por o teor de ácido linoléico na referida fração oleína ser mais baixo que 15%, pref erivelmente mais baixo que 10%, preferivelmente mais baixo que 5% .

15. Fração oleína líquida e estável, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-14, caracterizada por menos que 6%, preferivelmente menos que 4% das espécies TAG da referida fração oleína possuírem a fórmula geral SMS.

16. Fração oleina líquida e estável, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-15, caracterizada por pelo menos 30%, preferivelmente pelo menos 35%, mais preferivelmente pelo menos 45% das espécies TAG da referida oleina possuírem a fórmula geral SMM.

17. Fração oleina líquida e estável, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-16, caracterizada por possuir menos que 8%, preferivelmente menos que 5%, mais preferivelmente menos que 3% de ácidos graxos saturados na posição sn-2 dos TAGs que constituem a referida fração oleina.

18. Fração oleina líquida e estável, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-17, caracterizada por possuir um ponto de turvação mais baixo que 5 °C, preferivelmente mais baixo que O0C, mais preferivelmente mais baixo que -6°C.

19. MÉTODO PARA A PREPARAÇÃO DE UMA FRAÇÃO OLEÍNA LÍQUIDA E ESTÁVEL, caracterizado por ser mediante o fracionamento em baixa temperatura de um óleo de girassol altamente saturado, de alto teor oléico.

20. Método, de acordo com a reivindicação 19, caracterizado por o fracionamento em baixa temperatura ser um fracionamento a seco, que inclui as seguintes etapas: reduzir a temperatura do óleo para 12 0C, pref erivelmente 9,5 0C, mais pref erivelmente 5 0C, com ou sem agitação; separação da oleina da fração sólida; e opcionalmente fracionar a oleina resultante novamente a 2,5 0C, mais preferível 0 0C para obter uma fração oleina menos saturada.

21. Método, de acordo com a reivindicação 12, caracterizado por o fracionamento em baixa temperatura ser um fracionamento por solvente que inclui as seguintes etapas: misturar o óleo com um solvente orgânico do tipo acetona, hexano ou éter etíIico; reduzir a temperatura da solução óleo para 0 0C, preferivelmente -5 0C; separar a oleina da fração sólida; opcionalmente recuperar a oleina mediante remover o solvente do sobrenadante por destilação a vácuo.

22. USO DE UMA FRAÇÃO OLEÍNA LÍQUIDA E ESTÁVEL, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-18, caracterizado por ser para a produção de molhos, particularmente maionese, maionese xIight', maionese com reduzido teor de gordura, mostarda, ketchup, molho tártaro, alimentos para espalhar em sanduíche, molhos engarrafados para saladas, molhos de saladas, alimentos pré-cozidos, sopas ou cremes pré-preparados, e sorvetes ou tortas de sorvete.

23. USO DE UMA FRAÇÃO OLEÍNA LÍQUIDA E ESTÁVEL, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-18, caracterizado por ser em condições de alta temperatura através do aquecimento mediante quaisquer meios em temperaturas de pelo menos 100 0C e em particular para fritura, cozimento, uso culinário e assados.

24. Uso, de acordo com a reivindicação 23, caracterizado por as condições de alta temperatura compreenderem temperaturas de pelo menos 160 °C, mais preferivelmente de pelo menos 180 °C.

25. MISTURA ÓLEO, caracterizada por incluir uma fração oleina liquida e estável, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 to 18.

26. USO DE UMA FRAÇÃO OLEÍNA LÍQUIDA E ESTÁVEL, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1-18, caracterizado por ser em processo industrial do tipo enzimático ou interesterificação química e posterior fracionamento do óleo. %