BRPI0718120A2 - Derivados de pteridina como inibidores de cinase do tipo pólo úteis no tratamento de câncer - Google Patents

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para "DERIVADOS DE PTERIDINA COMO INIBIDORES DE CINASE DO TIPO PÓLO ÚTEIS NO TRATAMENTO DE CÂNCER".

A presente invenção refere-se a uma série de ésteres de amino- ácido, às composições contendo-os, aos processos para sua preparação e ao uso na medicina como inibidores de cinase do tipo Polo 'PLK'. Cinases do tipo polo (PLKs) são enzimas fundamentais que controlam a entrada mi- tótica de proliferar células e regular muitos aspectos de mitose necessária para citocinese bem-sucedida. Das quatro PLKs humanas conhecidas, PLK1 é a melhor caracterizada e é superexpressa em muitos tipos de tumor com elevação aberrante que freqüentemente constitui um indicador prognós- tico de resultado de doença inferior. Os compostos podem ser de uso no tratamento de doenças proliferativas da célula tal como câncer. A presente invenção abrange compostos que são derivados de di-hidropteridinina. Antecedentes da invenção

As PLKs1 uma família de Ser/Thr proteína cinases nomeadas depois de sua similaridade de seqüência e funcional com a polo cinase ar- quetípica de Drosophila melanogaster, desempenham uma variedade de papéis na mitose (Nat. Rev. Mol. Cell Biol., 2001, 2, 21-32.). Em leveduras (Saccharomices cerevisiae e S. pombe) PLKs únicas existem, considerando que quatro PLKs distintas foram identificadas para marcar em mamíferos. PLK1 humana (Cell Growth Differ., 1994, 5, 249-257), PLK2 (cinase in- duzível por soro, SNK1 Mol. Cell. Biol., 1992, 12, 4164-4169), PLK3 (cinase relacionada à proliferação, PRK J. Biol. Chem. 1997, 272, 28646-28651) e PLK4 (Oncol. Rep., 1997, 4, 505-510) são estruturalmente homólogas e con- têm dois domínios conservados, o domínio de cinase catalítica N-terminal, bem como uma região de C-terminal composta das assim chamadas caixas de pólo denominadas. Considerando que PLK1, PLK2, e PLK3 são expres- sas em todos os tecidos, PLK4 parece possuir papéis fisiológicos únicos e a distribuição de mRNA de PLK4 em adultos é restringida a certos tecidos tais como testes e timo. PLK1 é o membro melhor caracterizado da família de PLK e parece cumprir a maioria das funções conhecidas das únicas PLKs presentes em invertebrados (Nat. Rev. Moi Cell Biol., 2004, 5, 429-441). Níveis de proteína de PLK1 flutuam de uma maneira dependente de ciclo celular e sua atividade de cinase chega ao máximo na transição entre a se- gunda fase de abertura e as fases de mitose (G2/M) do ciclo de divisão celu- lar eucariótico. Na saída da mitose, níveis de PLK1 caem como um resulta- do de proteólise dependente de ubiquitina. PLK1 foi relatada estar envolvida na iniciação da mitose através da ativação da cinase dependente de ciclina, complexo de CDK1/ciclina B, isto é, a mudança principal para entrada mitóti- ca (fator promotor de mitose, MPF Nature, 1990, 344, 503-508). Isto ocorre quando PLK1 fosforila, e desse modo ativa, a fosfa-

tase de especificidade dual CDC25C que por sua vez alivia a supressão me- diada por MYT1 e WEE1 pré-mitótica de atividade de CDK1/ciclina B através da desfosforilação nos sítios pThRi4 e pTyRiõ de CDK1 (Cell, 1991, 67, 197-211). Na entrada da mitose, a fosforilação de CDC25C por PLK1 e PLK3 leva a sua translocação no núcleo. Além de controlar a entrada da mitose através da ativação de CDK1, PLK1 tem papéis adicionais na regula- ção do progressão através de mitose. Está envolvida na formação de fuso bipolar, incluindo a regulação e maturação de centrossoma do centro de or- ganização de microtúbulo, nas etapas subsequentes de mitose que a envol- ve separação de cromátide irmã, e finalmente na citocinese (Dev. Ce//, 2003, 5, 127-138).

Breve Sumário da Invenção

Compostos da invenção são referidos aos compostos descritos em W02004076454. Eles são inibidores de PLK1 e as isoformas destes. Os compostos são desse modo de uso na medicina, por exemplo no trata- mento de uma variedade de estados de doença proliferativa, incluindo cân- ceres. Os compostos são caracterizados pela presença na molécula de um motivo de aminoácido ou um motivo de éster de aminoácido que é hidrolisá- vel por uma carboxilesterase intracelular. Compostos da invenção tendo o motivo de éster de aminoácido lipofílico cruzam a membrana celular, e são hidrolisados ao ácido pela carboxilesterases intracelulares. O produto de hidrólise polar acumula-se na célula desde que não cruze facilmente a membrana celular. Consequentemente, a atividade de PLK1 do composto é prolongada e realçada dentro da célula. Descrição Detalhada da Invenção

De acordo com a invenção é fornecido um composto de fórmula (I), ou um sal, N-óxido, hidrato ou solvato deste:

R3' ChL

ι 3

-Nk/O

H

N N N' ^R1

(D

ι

Rn

em que

R1 é hidrogênio, ou um grupo (Ci-C6)alquila, (C2-C6)alquenila, (C2-C6)alquinila ou (C3-C6)cicloalquila opcionalmente substituído;

R2 é hidrogênio, ou um grupo (CrC6)alquila, (C2-C6)alquenila, (C2-C6)alquinila ou (C3-C6)cicloalquila opcionalmente substituído;

R3 e R3' são independentemente selecionados a partir de hidro- gênio, -CN, hidroxila, halogênio, (Ci-C6)alquila opcionalmente substituída, (C2-C6)alquenila, (C2-C6)alquinila ou (C3-C6)cicloalquila, -NR5Re ou C1-C4 alcóxi, em que R5 e R6 são independentemente hidrogênio ou (Ci-C6)alquila opcionalmente substituída;

anel A é um sistema de anel mono- ou bi-cíclico carbocíclico ou heterocíclico opcionalmente substituído ou um sistema de anel tendo até 12 átomos de anel;

T é um radical de fórmula R-L1-Y1- em que Y1 é uma ligação, -O-, -S-, -NR6-, -(C=O)-, -S(O2)-, -(C=O)NR6-,

-NR6(C=O)-, -S(O2)NR6-, -NR6S(O2)-, ou -NR6(C=O)NR9-, em que R6 e R9 são independentemente hidrogênio ou (CrC^alquila opcionalmente substi- tuída;

L1 é um radical divalente de fórmula -(AIq1)m(Q)n(AIq2)p- em que m, η e ρ são independentemente O ou 1,

Q é (i) um radical divalente mono ou bicíclico carbocíclico ou he- terocíclico opcionalmente substituído tendo 5-13 membros de anel, ou (ii), no caso onde ρ é 0, um radical divalente de fórmula -Q1-X2- em que X2 é -O-, -S- ou NRa- em que Ra é hidrogênio ou CrC3 alquila opcionalmente substitu- ída, e Q1 é um radical divalente mono ou bicíclico carbocíclico ou heterocícli- co opcionalmente substituído tendo 5-13 membros de anel, Alq1 e Alq2 representam independentemente radicais de C3-C7

cicloalquila divalentes opcionalmente substituídos, ou radicais de Ci-C6 al- quileno, C2-C6 alquenileno, ou C2-C6 alquinileno lineares ou ramificados op- cionalmente substituídos que podem opcionalmente conter ou terminar em uma ligação de éter (-0-), tioéter (-S-) ou amino (-NRa-) em que Ra é hidro- gênio ou C1-C3 alquila opcionalmente substituída;

R é um radical de fórmula (X) ou (Y) R7 R7

rs-n vly

H (X) (Y)

em que

R7 é um grupo ácido carboxílico (-COOH), ou um grupo éster que é hidrolisável por uma ou mais enzimas carboxilesterase intracelulares para um grupo ácido carboxílico;

Rs é hidrogênio; ou C1-C6 alquila opcionalmente substituída, C3- C7 cicloalquila, arila ou heteroarila ou -(C=O)R6, -(C=O)OR6, ou -(C=O)NR6 em que R6 é hidrogênio ou (Ci-C6)alquila opcionalmente substituída; e

D é um anel heterocíclico monocíclico de 5 ou 6 átomos de anel em que R7 é ligado a um carbono de anel adjacente ao nitrogênio de anel mostrado, e anel D é opcionalmente fundido a um segundo anel carbocíclico ou heterocíclico de 5 ou 6 átomos de anel caso em que a ligação mostrada cruzado por uma linha ondulada pode ser de um átomo de anel no referido segundo anel.

Nos compostos da invenção, quando Ri é diferente de hidrogê-

nio, o átomo de carbono ao qual o substituinte de Ri é ligado é assimétrico. Preferivelmente, a estereoquímica nesse centro assimétrico é R.

Em outro amplo aspecto, a invenção fornece o uso de um com- posto de fórmula (I) como definido acima, ou um /V-óxido, sal, hidrato ou sol- vato deste na preparação de uma composição para inibir a atividade de PLK1.

Os compostos com que a invenção está preocupada podem ser utilizados para a inibição de atividade de PLK1 ex vivo ou in vivo.

Em um aspecto da invenção, os compostos da invenção podem ser utilizados na preparação de uma composição para tratamento de célula doenças proliferativas tais como tumores sólidos e tumores hemato- oncológicos, tais como Ieucemias e linfomas. Em outro aspecto, a invenção fornece um método para o trata-

mento dos tipos de doença anteriores, que compreende administrar a um indivíduo que sofre de tal doença uma quantidade eficaz de um composto de fórmula (I) como definido acima. Terminologia

Como aqui utilizado, o termo "(Ca-Cb)alquila" em que a e b são

números inteiros, refere-se a um radical alquila de cadeia linear ou ramifica- da tendo átomos de carbono de a a b. Desse modo quando a for 1 e b for 6, por exemplo, o termo inclui metila, etila, n-propila, isopropila, n-butila, isobuti- la, segundo-butila, t-butila, n-pentila e n-hexila. Como aqui utilizado, o termo "radical de (Ca-Cb)alquileno diva-

lente", em que a e b são números inteiros, refere-se a uma cadeia de hidro- carboneto saturada tendo átomos de carbono de a a b e duas valências in- satisfeitas.

Como aqui utilizado, o termo "(Ca-Cb)alquenila" em que a e b são números inteiros, refere-se a uma porção de alquenila de cadeia linear ou ramificada com átomos de carbono de a a b; tendo pelo menos uma ligação dupla de estereoquímica de E ou Z onde aplicável. O termo inclui, por e- xemplo, vinila, alila, 1- e 2-butenila e 2-metil-2-propenila.

Como aqui utilizado, o termo "(Ca-Cb)alquenileno divalente" sig- nifica uma cadeia de hidrocarboneto tendo átomos de carbono de a a b, pelo menos uma ligação dupla, e duas valências insatisfeitas.

Como aqui utilizado, o termo "Ca-Cb alquinila", em que a e b são números inteiros refere-se a grupos hidrocarboneto de cadeia linear ou ca- deia ramificada tendo de dois a seis átomos de carbono e tendo além disso uma ligação tripla. Este termo incluiria, por exemplo, etinila, 1-propinila, 1- e 2-butinila, 2-metil-2-propinila, 2-pentinila, 3-pentinila, 4-pentinila, 2-hexinila, 3-hexinila, 4-hexinila e 5-hexinila.

Como aqui utilizado, o termo "radical de (Ca-Cb)alquinileno diva- lente", em que a e b são números inteiros refere-se a uma cadeia de hidro- carboneto divalente que tem de dois a seis átomos de carbono, e pelo me- nos uma ligação tripla. Como aqui utilizado, o termo "carbocíclico" refere-se a um radi-

cal mono-, bi- ou tricíclico tendo até 16 átomos de anel, todos dos quais são carbono e incluem arila e cicloalquila.

Como aqui utilizado, o termo "cicloalquila" refere-se a um radical monocíclico saturado carbocíclico tendo de 3-8 átomos de carbono e inclui, por exemplo, ciclopropila, ciclobutila, ciclopentila, ciclo-hexila, cicloeptila e ciclo-octila.

Como aqui utilizado, o termo não-qualificado "arila" refere-se a um radical aromático carbocíclico mono-, bi- ou tri-cíclico, e inclui radicais tendo dois anéis monocíclicos carbocíclicos aromáticos que são ligados dire- tamente por uma ligação covalente. Ilustrativo de tais radicais são fenila, bi- fenila e naftila.

Como aqui utilizado, o termo não-qualificado "heteroarila" refere- se a um radical aromático mono-, bi- ou tri-cíclico contendo um ou mais hete- roátomos selecionados de S, N e O, e inclui radicais tendo dois tais anéis monocíclicos, ou um tal anel monocíclico e um anel de arila monocíclico, que são ligados diretamente por uma ligação covalente. Ilustrativos de tais radi- cais são tienila, benztienila, furila, benzfurila, pirrolila, imidazolila, benzimida- zolila, tiazolila, benztiazolila, isotiazolila, benzisotiazolila, pirazolila, oxazolila, benzoxazolila, isoxazolila, benzisoxazolila, isotiazolila, triazolila, benztriazoli- Ia, tiadiazolila, oxadiazolila, piridinila, piridazinila, pirimidinila, pirazinila, tria- zinila, indolila e indazolila.

Como aqui utilizado, o termo não-qualificado "heterociclila" ou "heterocíclico" inclui "heteroarila" como definido acima, e em seu significado não-aromático se refere a um radical mono-, bi- ou tri-cíclico não-aromático que contém um ou mais heteroátomos selecionados de S, N e O, e aos gru- pos que consistem em um radical não-aromático monocíclico que contém um ou mais tais heteroátomos que são covalentemente ligados a outro tal radical ou a um radical monocíclico carbocíclico. Ilustrativos de tais radicais são grupos pirrolila, furanila, tienila, piperidinila, imidazolila, oxazolila, isoxa- zolila, tiazolila, tiadiazolila, pirazolila, piridinila, pirrolidinila, pirimidinila, morfo- linila, piperazinila, indolila, morfolinila, benzfuranila, piranila, isoxazolila, ben- zimidazolila, metilenodioxifenila, etilenodioxifenila, maleimido e sucinimido.

Um "radical fenileno, piridinileno, pirimidinileno, pirazinileno, pi- peridinileno, piperazinileno, pirrolidenileno, pirroleno, ciclopropileno, ciclobuti- leno, ciclopentileno, ciclo-hexileno ou 3-aza-biciclo[3.1.0]hexileno, divalente " é um anel de benzeno, piridina, pirimidina, pirazina, piperidina, piperazina, pirrolideno, pirrol, ciclopropila, ciclobutileno, ciclopentila, ciclo-hexila ou 3- aza-biciclo[3.1.0]hexila, com duas valências insatisfeitas, e inclui 1,3- fenileno, 1,4-fenileno, e o seguinte:

n=<n

N

\ /

/=\ r

rW rWl

+O O Kf Kf

Λ* -hi

A menos que outra maneira especificada no contexto no qual ocorre, o termo "substituído", quando aplicado a qualquer porção aqui, signi- fica substituído com até quatro substituintes compatíveis, cada dos quais independentemente podem ser, por exemplo (Ci-C6)alquila, (Ci-C6)alcóxi, hidróxi, hidroxi(Ci-C6)alquila, mercapto, mercaptoíCrCeJalquila, (Cr C6)alquiltio, fenila, halo (incluindo flúor, bromo e cloro), trifluorometila, trifluo- rometóxi, nitro, nitrilo

(-CN), oxo, -COOH, -COORa, -CORa1 -SO2Ra, -CONH2, -SO2NH2, -CONHRa, -SO2NHRa1 -CONRaRb, -SO2NRaRb1 -NH2l -NHRa1 -NRaRb1 -OCONH2, -OCONHRa, -OCONRaRb, -NHCORa, -NHCOORa1 -NRbCOORa, -NHSO2ORa, -NRbSO2OH, -NRbSO2ORa, -NHCONH2, -NRaCONH2, -NHCONHRb1 -NRaCONHRb1 -NHCONRaRb1 ou -NRaCONRaRb em que Ra e Rb são independentemente um (Ci-C6)alquila, (C3-C6) cicloalquila, fenila ou heteroarila monocíclica tendo 5 ou 6 átomos de anel, ou Ra e Rb quando ligados ao mesmo átomo de nitrogênio formam um grupo amino cíclico (por exemplo, morfolino, piperidinila, piperazinila, ou tetra-hidropirrolila). Um "substituinte opcional" pode ser um dos grupos substituintes anteriores.

Como aqui utilizado, o termo "sal" inclui a adição de base, adi- ção de ácida e sais quaternários. Compostos da invenção que são ácidos podem formar sais, incluindo sais farmaceuticamente aceitáveis, com bases tais como hidróxidos de metal de álcali, por exemplo, hidróxidos de sódio e potássio; hidróxidos de metal alcalino terroso, por exemplo, hidróxidos de cálcio, bário e magnésio; com bases orgânicas por exemplo N-metil-D- glicamina, colina tris(hidroximetil)amino-metano, L-arginina, L-lisina, N-etil piperidina, dibenzilamina e similares. Esses compostos (I) que são básicos podem formar sais, incluindo sais farmaceuticamente aceitáveis com ácidos inorgânicos, por exemplo, com ácidos hidroálicos tais como ácidos hidrocló- rico ou hidrobrômico, ácido sulfúrico, ácido nítrico ou ácido fosfórico e simila- res, e com ácidos orgânicos, por exemplo, com ácidos acético, tartárico, su- cínico, fumárico, maléico, málico, salicílico, cítrico, metanossulfônico, p- toluenossulfônico, benzoico, benzenossulfônico, glutâmico, láctico, e mandé-

lico, e similares.

Compostos da invenção que contém um ou mais centros quirais atuais ou potenciais, por causa da presença de átomos de carbono assimé- tricôs, podem existir como vários diastereoisômeros com estereoquímica R ou S em cada centro quiral. A invenção inclui todos os tais diastereoisôme- ros e misturas dos mesmos.

O termo "éster" ou "grupo carboxila esterificado" com relação ao substituinte R7 acima significa um grupo RxO(C=O)- em que Rx é o grupo que caracteriza o éster, nocionalmente derivado do álcool RxOH. Os substituinte R1-Ri'

Ri é hidrogênio, (C1-C6JaIquiIa, por exemplo metila, etila, n- ou iso-propila, (C2-C6)alquenila, por exemplo alila, (C2-C6)alquinila, por exemplo -CH2C=CH ou (C3-C6)cicloalquila, por exemplo ciclopropila, ciclopentila ou ciclo-hexila. Em uma subdivisão de classe dos compostos da invenção, Ri é etila.

R2 é hidrogênio, (CrC6)alquila, por exemplo metila, etila, n- ou iso-propila, (C2-CeJaIqueniIa, por exemplo alila, (C2-C6)alquinila, por exemplo -CH2C=CH ou (C3-C6)cicloalquila, por exemplo ciclopropila, ciclopentila ou ciclo-hexila, ou C6-M arila, por exemplo, fenila ou naftila. Em uma subdivisão de classe dos compostos da invenção, R2 é ciclopentila.

R3 e R3' são independentemente selecionados a partir de hidro- gênio,

-CN, hidroxila, halogênio, (Ci-C6)alquila, por exemplo, metila, etila, n- ou iso- propila, (C2-C6)alquenila, por exemplo, alila, (C2-C6)alquinila, por exemplo -CH2C=CH ou (C3-C6)cicloalquila, por exemplo, ciclopropila, ciclopentila ou ciclo-hexila, -NR5R6 e CrC4 alcóxi, em que R5 e R6 são independentemente hidrogênio ou (Ci-C6)alquila opcionalmente substituída, por exemplo, metila ou etila. Em uma subclasse dos compostos da invenção, R3 é metóxi, flúor ou cloro, e R13 é hidrogênio, flúor ou cloro. O anel A

Anel A é um anel mono- ou bi-cíclico carbocíclico ou heterocícli- co ou um sistema de anel tendo até 12 átomos de anel. Exemplos de tais anéis são anéis de piperidina, piperazina, piridina, pirimidina, pirazolina, tria- zolina, furano, tiofeno, pirrol, tiazol, isotiazol, oxazol, isoxazol, e anéis de tia- diazol. Anéis A atualmente preferidos são fenila, piridinila e pirimidinila. Anel A pode ser substituído por quaisquer dos substituinte op- cionais referidos acima, por exemplo cloro, bromo ou flúor, trifluorometila, metóxi, e trifluorometóxi. O substituinte T

Este substituinte contém a porção de alfa aminoácido ou éster

de alfa aminoácido de fórmula (X) ou (Y)1 ligada através de um radical Iiga- dor ao anel A.

Os compostos de éster da invenção são convertidos por estera- ses intracelulares ao ácido carboxílico. Tanto os ésteres quanto os ácidos carboxílico podem ter atividade inibidora de PLK em sua própria conta. Os compostos da invenção, portanto, incluem não apenas o éster, porém da mesma forma os produtos de hidrólise de ácido carboxílico correspondentes.

O grupo éster R7 presente no substituinte T deve ser aquele que no composto da invenção é hidrolisável por uma ou mais enzimas carboxi- Iesterase intracelulares para um grupo ácido carboxílico. Enzimas carboxi- Iesterases intracelulares capazes de hidrolisar o grupo éster de um compos- to da invenção para o ácido correspondente inclui os três isótipos de enzima humana conhecidos hCE-1, hCE-2 e hCE-3. Embora estas sejam conside- radas ser as enzimas principais, outras enzimas tal como bifenilidrolase (B- PH) podem da mesma forma ter um papel na hidrolisação dos conjugados. Em geral, se a carboxilesterase hidrolisa o éster de aminoácido livre para o ácido de origem da mesma forma hidrolisará o motivo de éster quando cova- Ientemente conjugado ao modulador. Consequentemente, o ensaio de célu- la quebrada descrito aqui fornece uma primeira avaliação direta, rápida e simples para ésteres que têm o perfil de hidrólise requerido. Motivos de és- ter selecionados dessa maneira podem ser reanalisados no mesmo ensaio de carboxilesterase quando conjugado ao restante da molécula por meio da química de conjugação escolhida, para confirmar que ainda é um substrato de carboxilesterase nessa base. Suscetíveis à exigência que eles são hidrolisáveis por enzimas

carboxilesterase intracelular, exemplos de grupos éster particulares R7 inclu- em aqueles de fórmula -(C=O)ORi0 em que Ri0 é R11R12R13C- em que (i) Rn é hidrogênio ou (CrCsJalquiHZVKCrC^alquil]13- ou (C2- C3)alquenil-(Z1)a-[(Ci-C3)alquil]b- opcionalmente substituído em que a e b são independentemente 0 ou 1 e Z1 é -O-, -S-, ou -NR14- em que R14 é hidrogê- nio ou (Ci-C3)alquila; e R12 e R13 são independentemente hidrogênio ou (C1-

C3)alquil-;

(ii) R11 é hidrogênio ou R15R16N-(Ci-C3)alquil- opcionalmente substituído em que Ri5 é hidrogênio ou (Ci-C3)alquila e R16 é hidrogênio ou (C1-C3JaIquiIa; ou R15 e R16 juntamente com o nitrogênio ao qual eles são ligados formam um anel monocíclico heterocíclico opcionalmente substituído

de 5 ou 6 átomos de anel ou sistemas de anel bicíclico heterocíclico de 8 a átomos de anel, e R12 e R13 são independentemente hidrogênio ou (C1- C3)alquil-; ou

(iii) R11 e R12 empregados juntos com o carbono ao qual eles são ligados formam um anel monocíclico carbocíclico opcionalmente substituído

de 3 a 7 átomos de anel ou sistema de anel bicíclico carbocíclico de 8 a 10 átomos de anel, e Ri3 é hidrogênio.

Dentro destas classes, R10 pode ser, por exemplo, metila, etila, n- ou iso-propila, n-, sec- ou terc-butila, ciclo-hexila, alila, fenila, benzila, 2-, 3- ou 4-piridilmetila, /V-metilpiperidin-4-ila, tetra-hidrofuran-3-ila, metoxietila,

indanila, norbonila, dimetilaminoetila, ou morfolinoetila. Atualmente preferido é onde Ri0 é ciclopentila ou terc-butila. Q anel D

Quando R for um grupo de fórmula (Y), exemplos de R incluem:

Il an e \ /

kN^R7 ^R7 H,

em que R7 é como definido e discutido acima.

O grupo Rg

O grupo R8 está presente nos compostos da invenção quando R na fórmula (I) for um radical de fórmula (X)

R8 pode ser, por exemplo, (CrC6)alquila opcionalmente substitu- ida, (C3-C6)cicloalquila, arila ou heteroarila, por exemplo metila, etila, n-ou isopropila, ciclopropila, ciclopentila, ciclo-hexila, fenila, ou piridila. R8 pode da mesma forma ser, por exemplo hidrogênio ou -(C=O)Ri6, em que R16 é (Ci-C6)alquila opcionalmente substituído tal como metila, etila, n-ou isopropi- Ia, ou n-, iso- ou sec-butila, (C3-C6)cicloalquila tal como ciclopropila, ciclopen- tila, ciclo-hexila, fenila, piridila, tienila, fenil(Ci-C6alquil)-, tienil(Ci-C6alquil)- ou PiridiI(Ci-CeaIquiI)- tal como benzila, 4-metoxifenilmetilcarbonila, tienilme- tila ou piridilmetila.

R8 pode da mesma forma ser, por exemplo -(C=O)ORi7, ou -(C=O)NHRi7 em que Ri7 é hidrogênio ou (Ci-C6)alquila opcionalmente substituída tal como metila, etila, ou n- ou isopropila.

Atualmente é preferido que Rs seja hidrogênio.

Para compostos da invenção que devem ser administrados sis- temicamente, ésteres com uma taxa lenta de clivagem de esterase são pre- feridos, visto que eles são menos suscetíveis ao metabolismo pré-sistêmico. Sua capacidade de alcançar seu tecido-alvo intacto é portanto aumentada, e o éster pode ser convertido dentro das células do tecido-alvo no produto áci- do. Entretanto, para administração local, onde o éster é aplicado diretamen- te ao tecido-alvo ou direcionado por, por exemplo, inalação, será frequente- mente desejável que o éster tenha uma taxa rápida de clivagem de esterase, para minimizar a exposição sistêmica e efeitos colaterais indesejados con- seqüentes. Se um átomo de carbono ao qual o grupo R é ligado é não subs- tituído, isto é, R é ligado a um radical de metileno (-CH2)-, em seguida os ésteres tendem a ser clivados mais rapidamente do que se esse carbono fosse substituído, ou fizesse parte de um sistema de anel tal como um anel de fenila ou ciclo-hexila. O radical-L1-Y1-

Este radical (ou ligação) surge da estratégia de química particu- lar escolhida para unir o motivo de éster de aminoácido R em substituinte T ao anel A do inibidor. Claramente, a estratégia de química para esse aco- plamento pode variar amplamente, e assim muitas combinações das variá- veis Y1 e L1 são possíveis. Entretanto, quando o inibidor é ligado à enzima em seu sítio ativo, o motivo de éster de aminoácido geralmente prolonga-se em uma direção longe da enzima, e assim minimiza ou evita a interferência com o modo de ligação do inibidor. Consequentemente, a combinação pre- cisa da variável que compõe a química de ligação entre o motivo de éster de aminoácido, e o restante da molécula será freqüentemente irrelevante ao modo de ligação primário do composto como um todo.

Com as observações gerais anteriores em mente, empregando as variáveis que compõem o radical-L1-Y1- por sua vez:

Y1 pode ser, por exemplo, -NR3-, -S-, -O-, -C(=0)NR3-, - NR3C(=0)-, ou

-C(=0)0-, em que R3 é hidrogênio ou C1-C6 alquila opcionalmen- te substituído tal como -CH2CH2OH;

No radical L1, exemplos de radicais de Alq1 e Alq2, quando pre- sentes, incluem -CH2-, -CH2CH2 - -CH2CH2CH2-, -CH2CH(OH)CH2-, - CH2CH2CH2CH2-,

-H=CH-, -CH=CHCH2-, -CH2CH=CH-, CH2CH=CHCH2-, -C=C-, -C=CCH2-, -CH2C=C-, e CH2C=CCH2. Exemplos adicionais de Alq1 e Alq2 incluem, em qualquer orientação, -CH2W-, -CH2CH2W-, -CH2CH2WCH2-, CH2CH2WCH(CH3)-, -CH2WCH2CH2-, -CH2WCH2CH2WCH2-, e -WCH2CH2- onde Wé-O-,-S-,-NH-,

-N(CH3)-, ou -Ch2CH2N(CH2CH2OH)CH2-. Outros exemplos de Alq1 e Alq2 incluem radicais de ciclopropila, ciclopentila e ciclo-hexila divalentes.

Alq1 e Alq2 quando presentes podem da mesma forma ser alqui- la de cadeia ramificada tal como -CH(CH3)-, -C(CH3)2-, ou em qualquer ori- entação

-CH2CH(CH3)-, -CH2C(CH3)2-.

Em L1, quando η for O, o radical é uma cadeia de hidrocarboneto (opcionalmente substituído por exemplo por hidroxila) e talvez tendo uma ligação de éter, tioéter ou amino). Agora é preferido que não haja nenhum substituinte opcional em L1. Quando m e ρ forem O, L1 é um radical divalen- te mono ou bicíclico carbocíclico ou heterocíclico com 5-13 átomos de anel (opcionalmente substituídos). Quando η for 1 e pelo menos um de m e ρ for 1, L1 é um radical divalente incluindo uma cadeia de hidrocarboneto ou ca- deias e um radical mono ou bicíclico carbocíclico ou heterocíclico com 5-13 átomos de anel (opcionalmente substituídos). Quando presente, Q pode ser, por exemplo, um radical de fenileno, piridinileno, pirimidinileno, pirazinileno, piperidinileno, piperazinileno, pirrolidenileno, pirrolena, ciclopropileno, ciclo- butileno, ciclopentileno, ciclo-hexileno ou 3-aza-biciclo[3.1.0]hexileno, diva- lente, porém 1,4-fenileno, 1,4-piperidinileno ou 1,4-piperazinila são agora preferidos.

Exemplos específicos do radical -L1-Y1- incluem aqueles presen- tes nos compostos dos Exemplos aqui.

Uma subclasse particular dos compostos da invenção consiste naqueles de fórmula (IA)

R-L1-Y1 - (IA)

em que R3 é que metóxi, flúor ou cloro, e as variáveis restantes são como definidas e discutidas acima. Como mencionado acima, os compostos com os quais a inven-

ção está preocupada são inibidores de atividade de PLK1 cinase e são por- tanto de uso para tratamento de doenças proliferativas de célula tal como câncer.

Será entendido que o nível de dose específico para qualquer paciente particular depende de uma variedade de fatores incluindo a ativida- de do composto específico empregada, a idade, peso corporal, saúde geral, sexo, dieta, tempo de administração, rotina de administração, taxa de excre- ção, combinação de fármaco, e a gravidade da doença particular que passa por tratamento. Níveis de dose ideais e freqüência de dosar serão determi- nadas por experiência clínica.

Os compostos com os quais a invenção está preocupada podem ser preparados para administração por qualquer rotina consistente com suas propriedades farmacocinética. As composições oralmente administráveis podem ser na forma de comprimidos, cápsulas, pós, grânulos, pastilhas, lí- quido ou preparações em gel, tais como suspensões ou soluções parente- rais orais, tópicas ou estéreis. Comprimidos e cápsulas para administração oral podem ser na forma de apresentação de dose única, e podem conter excipientes convencionais tais como agentes de ligação, por exemplo xaro- pe, acácia, gelatina, sorbitol, tragacanto, ou polivinil-pirrolidona; cargas por exemplo lactose, açúcar, amido de milho, fosfato de cálcio, sorbitol ou glici- na; lubrificante de comprimido, por exemplo estearato de magnésio, talco, polietileno glicol ou sílica; desintegrantes por exemplo amido de batata, ou agentes de umectação aceitáveis tal como Iauril sulfato de sódio. Os com- primidos podem ser revestidos de acordo com métodos bem conhecidos na prática farmacêutica normal. Preparações líquidas orais podem ser na forma de, por exemplo, suspensões aquosas ou oleosas, soluções, emulsões, xa- ropes ou elixires, ou podem ser apresentadas como um produto seco para reconstituição com água ou outro veículo adequado antes do uso. Tais pre- parações líquidas podem conter aditivos convencionais tais como agentes de suspensão, por exemplo sorbitol, xarope, metil celulose, xarope de glico- se, gorduras comestíveis hidrogenadas de gelatina; agentes de emulsifica- ção, por exemplo Iecitina1 mono-oleato de sorbitano, ou acácia; veículos não-aquosos (que podem incluir óleos comestíveis), por exemplo óleo de amêndoa, óleo de coco fracionado, ésteres oleosos tal como glicerina, propi- Ieno glicol, ou álcool etílico; preservativos, por exemplo p-hidroxibenzoato de propila ou metila ou ácido sórbico, e se desejado agentes corantes ou aro- matizantes convencionais.

Para aplicação tópica à pele, o fármaco pode ser preparado em um creme, loção ou unguento. Formulações de unguento ou creme que po- dem ser utilizadas para o fármaco são formulações convencionais bem co- nhecidas na técnica, por exemplo como descrito nos livros de ensino pa- drões de farmacêuticos tal como a British Pharmacopoeia.

Para aplicação tópica por inalação, o fármaco pode ser formula- do para liberação de aerossol, por exemplo, por atomizadores de jato dire- cionados por pressão ou atomizadores ultrassônicos, ou preferivelmente por aerossóis com dosímetro direcionados por propulsor ou administração livre de propulsor de pós micronizados, por exemplo, cápsulas de inalação ou outros sistemas de liberação de "pó seco". Excipientes, tais como, por e- xemplo, propulsores (por exemplo, Frigen no caso de aerossóis com dosí- metro),substâncias tensoativas, emulsificantes, estabilizadores, preservati- vos, aromatizantes e cargas (por exemplo, Iactose no caso de inaladores de pó) podem estar presentes em tais formulações inaladas. Com a finalidade de inalação, um número grande de aparatos está disponível com os quais aerossóis de tamanho de partícula ideal podem ser gerados e administrados, utilizando uma técnica de inalação que é apropriada para o paciente. Além do uso de adaptadores (espaçadores, dilatadores) e recipientes em forma de pêra (por exemplo Nebulator®, Volumatic®), e dispositivos automáticos que emitem um spray assoprador (Autohaler®), para aerossóis com dosímetro, em particular no caso de inaladores de pó, várias soluções técnicas estão disponíveis (por exemplo, Diskhaler®, Rotadisk®, Turbohaler® ou os inala- dores por exemplo como descrito no Pedido de Patente Europeu EP 0 505 321).

Para aplicação tópica ao olho, o fármaco pode ser preparado em uma solução ou suspensão em um veículo aquoso ou não-aquoso estéril adequado. Aditivos, por exemplo, tampões tais como metabissulfito de sódio ou edetato dissódico; preservativos que incluem agentes bactericidas e fun- gicidas tal como nitrato ou acetato fenil mercúrico, cloreto de benzalcônio ou clorexidina, e agentes espessantes tal como hipromelose podem da mesma forma ser incluídos.

O ingrediente ativo pode da mesma forma ser administrado pa- renteralmente em um meio estéril. Dependendo do veículo e concentração utilizados, o fármaco pode ser suspenso ou dissolvido no veículo. Vantajo- samente, adjuvantes tal como um anestésico local, preservativo e agentes de tamponamento podem ser dissolvidos no veículo.

Os compostos da invenção podem ser utilizados junto com vá- rias substâncias ativas farmaceuticamente conhecidas. Por exemplo, os compostos da invenção podem ser utilizados com citotóxicos, inibidores de HDAC, inibidores de cinase, inibidores de aminopeptidase, inibidores de pro- tease, antagonistas de bcl-2, inibidores de mTor e anticorpos monoclonais (por exemplo, aqueles direcionados em receptores de fator de crescimento).

Citotóxicos preferidos incluem, por exemplo, taxanos, platinas, antimetabóli- tos tal como 5-fluoracila, inibidores de topoisomerase, e similares. Os medi- camentos da invenção que compreende derivados de aminoácido fórmula (I), tautômeros destes ou sais farmaceuticamente aceitáveis, N-óxidos, hi- dratos ou solvatos destes, portanto, tipicamente compreendem um citotóxi- co, um inibidor de HDAC, um inibidor de cinase, um inibidor de aminopepti- dase e/ou um anticorpo monoclonal.

Além disso, a presente invenção fornece uma composição far- macêutica compreendendo:

(a) um composto (I), ou um sal farmaceuticamente aceitável, N- óxido, hidrato ou solvato deste;

(b) agente citotóxico, um inibidor de HDAC, um inibidor de cina- se, um inibidor de aminopeptidase, um inibidor de protease, um antagonista de bcl-2, um inibidor de mTor e/ou um anticorpo monoclonal; e

(c) um veículo farmaceuticamente aceitável ou diluente. Da mesma forma fornecido é um produto compreendendo:

(a) um composto (I), ou um sal farmaceuticamente aceitável, N- óxido, hidrato ou solvato deste; e

(b) agente citotóxico, um inibidor de HDAC, um inibidor de cina- se, um inibidor de aminopeptidase, um inibidor de protease, um antagonista

de bcl-2, um inibidor de mTor e/ou um anticorpo monoclonal,

para o uso separado, simultâneo ou seqüencial no tratamento do corpo hu- mano ou animal. Síntese

Há múltiplas estratégias sintéticas para a síntese dos compostos (I) com os quais a presente invenção está preocupada, porém todos contam com a química conhecida, conhecida pelo químico orgânico sintético. Desse modo, compostos de acordo com a fórmula (I) podem ser sintetizados de acordo com os procedimentos descritos na literatura padrão e são bem co- nhecidos por aqueles versados na técnica. Fontes de literatura típicas são "Advanced organic chemistry", 4a Edição (Wiley), J March; "Comprehensive Organic Transformation", 2a Edição (Wiley), R.C. Larock,"Handbook of Hete- rocyclic Chemistry2a Edição (Pergamon), A.R. Katritzki; artigos de revisão tal como encontrado em "Synthesis", "Acc. Chem. Res.", "Chem. Rev", ou fontes de literatura primárias identificadas por pesquisas de literatura padrão on-line ou de pesquisas secundárias tal como "Chemical Abstracts" ou "Beilstein".

Os compostos da invenção podem ser preparados por vários

processos alguns dos quais são descritos especificamente nos exemplos abaixo. Nas reações descritas abaixo, pode ser necessário proteger grupos funcionais reativos, por exemplo, grupos hidroxila, amino e carbóxi, onde estes são desejados no produto final, para evitar sua participação não dese- jada nas reações [veja por exemplo, "Protecting Groups in Organic Synthe- sis", 3a Edição, (Wiley), T.W. Greene]. Grupos protetores convencionais po- dem ser utilizados junto com a prática padrão. Em algum exemplos, despro- teção pode ser a etapa final na síntese de um composto de fórmula geral (I), e os processos de acordo com a invenção aqui descrita aqui em seguida são compreendidos para estender-se a tal remoção de grupos protetores. Abreviações AcOH = ácido acético Boc ou boc = terc-butoxicarbonila BOC2O = Di-terc-butildicarbonato Cbz = benziloxicarbonila

DBU = 1,8-diazabiciclo[5,4,0]undec-7-eno DCE = dicloroetano DCM = diclorometano DIPEA = di-isopropiletilamina DMAP = dimetilaminopiridina DMF = dimetilformamida DMSO = dimetil sulfóxido EDC = 1-etil-3-(3-dimetilaminopropil)carbodiimida EtOAc = acetato de etila EtOH = etanol Et2O = éter dietílico EtsN = trietilamina

H2SO4 = ácido sulfúrico HCI = ácido clorídrico HOBt = /V-hidroxibenzotriazol K2CO3 = carbonato de potássio LiOH = hidróxido de lítio MeOH = metanol MgSO4 = sulfato de magnésio Na2CO3 = carbonato de sódio NaH = hidreto de sódio NaHCO3 = hidrogeno carbonato de sódio Nal = iodeto de sódio NaOH = hidróxido de sódio NBS = A/-bromo succinimida NBu4Br = brometo de tetrabutilamônio NMM = A/-metil morfolina

Pd(dppf)CI2 = dicloro-(1,2-bis-(difenilfosfino)etano)-paládio(ll) Pd/C = paládio em carbono PPh3 = trifenilfosfina

PiBrOP = Hexafluorofosfato de bromo-tris-pirrolidinofosfónio STAB = triacetoxiboroidreto de sódio

TBTU = tetrafluoroborato de 0-benzotriazol-1-il-N,N,N',N,-tetrametilurônio TFA = ácido trifluoroacético THF = tetra-hidrofurano aq = aquoso g = grama(s)

LCMS = cromatografia líquida de alto desempenho/espectrometria de massa mg = miligrama(s) min = minutos ml = mililitro(s) μΙ_ = microlitro(s) min = minutos mol = mol(s)

mmol = milimol(s)

RMN = ressonância magnética nuclear TA ou rt = temperatura ambiente sat = saturado

Solventes e reagentes comercialmente disponíveis (grau de H-

PLC) foram utilizados sem outra purificação. Os solventes foram removidos utilizando um evaporador giratório Buchi. Irradiação por micro-ondas foi rea- lizada utilizando um sintetizador de micro-ondas Biotage Initiator® Eight. A purificação dos compostos por cromatografia de coluna instantânea foi reali- zada utilizando sílica-gel, tamanho de partícula 40,63 μππ (230-400 malhas) obtida de Fluorochem. A purificação dos compostos por HPLC preparativa foi realizada em sistemas Gilson utilizando colunas Axia® prep Luna C18 de fase reversa (10 μιτι, 100 χ 21,2mm), gradiente 0-100% de B (A = água / 0,05% de TFA, B = acetonitrilo / 0,05% de TFA) durante 10 min, fluxo = 25mL/min, detecção de UV em 254nm.

Espectros de 1H RMN foram registrados em um espectrômetro Bruker 300 MHz AV em solventes deuterados. Desvios químicos (δ) são em partes por milhões. Análise por cromatografia em camada fina (TLC) foi rea- lizada com placas Kieselgel 60 F254 (Merck) e visualizadas utilizando luz UV. HPLC/MS analítica foi realizada em um sistema Agilent HP1100

LC utilizando colunas C18 Luna de fase reversa (3 μηι, 50 χ 4,6mm), gradi- ente 5-95% de B (A = água / 0,1% de ácido fórmico, B = acetonitrilo / 0,1% de ácido fórmico) durante 2,25 min, fluxo = 2,25mL/min. Espectros de UV foram registrados em 220 e 254nm utilizando um detector G1315B DAD. Espectros de massa foram obtidos sobre a faixa m/z 150 a 800 em um de- tector LC/MSD SL G1956B. Os dados foram integrados e relatados utilizan- do os softwares ChemStation e ChemStation Data Browser. Intermediários

Os intermediários para a preparação dos exemplos aqui descri- tos são mostrados abaixo (figura 1):

R2

Br

R1

-ciclopentila q -'butila y -ciclopentila H q -'butila

R2 η Intermediário

Boc 1 Cbz 1

Boc Cbz

2 2

3A 3B 3C 3D

boc-

tf

ôTo

Intermediário

4A 4B

HN

,boc

„o

XJrO

O

Intermediário 5

R1 R2

-ciclopentila Boc -'butila Boe

Intermediário 6A 6B

HN

-boc

,O

α o

NH,

n= 1 Intermediário 7 A n= 3 Intermediário 7B

α

o boc

NH,

boc

NH C

CTt

o

,NH,

Intermediário 8

Intermediário 9 ΗΝ'*500 HN'CbZ

Intermediário 10 Intermediário 11

,ri ri R2 Intermediário

N

CBz'NV -H -ciclopentila 12A

-CH2CH2NH2 JbuSa8 «B

O O

I

R2

-CH2CH2NH2 12C

Intermediário 13

Intermediário 1:

(7R)-2-Cloro-8-ciclopentil-7-etil-5-metil-718-di-hidropteridin-6(5H)-ona

I

cr N N

O intermediário título foi preparado utilizando a metodologia des- crita em W02004076454. Intermediários 2A- 2F Procedimento geral

Ν-γΝγ°

cr N N ^ ' J ljTT , τ N N N

H

R1

Intermediário 1

Esquema 1 Intermediário 2A: (7R)-8-Ciclopentil-7-etil-2-f(4-hidroxifenin 6(5H)-ona

hoY^I nW

UnVnV

H

O intermediário título foi preparado a partir do Intermediário 1 de acordo com o procedimento geral (esquema 1).

Em uma solução de (7R)-2-cloro-8-ciclopentil-7-etil-5-metil-7,8-

di-hidropteridin-6(5/-/)-ona [intermediário 1] (200 mg, 0,68 mmol) em EtOH (2 ml), água (8 ml) e HCI concentrado (0,2 ml), foi adicionado 4-aminofenol (148 mg, 1,36 mmol). A mistura reacional foi refluxada durante 18 horas e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi dividido entre NaHCO3 sat. (20 ml) e uma mistura de MeOH/DCM (1:3, 20 ml). A camada aquosa foi separada e extraída com MeOH/DCM (1:3, 20 ml). As camadas orgânicas combinadas foram secas (MgSO4) e concentradas sob pressão reduzida pa- ra produzir um sólido marrom. A trituração com Et20 proporcionou o inter- mediário titulado como um sólido cinzento (125 mg, 50% de rendimento). ESMS: m/z 368 [M+H]+. 1H RMN (DMSO-d6, 300 MHz) 8,90 (1H, s), 8,64 (1H, s), 7,74 (1H, s), 7,43 (2H, d,J= 8,9 Hz), 6,64 (2H, d, J = 8,9 Hz), 4,39 - 4,29 (1H, m), 4,16 (1H, dd, J = 3,6, 7,8 Hz), 3,22 (3H, s), 1,99 - 1,54 (10H, m), 0,77 (3H, t, J = 7,4 Hz).

Os intermediários na tabela abaixo foram preparados pelos mé- todos análogos ao método descrito acima. R2.

R1

I

Νγ°

Intermediário R1 R2 Nome ESMS 2B -OMe -OH (7R)-8-Ciclopentil-7-etil-2-[(4- hidróxi 2-metoxifenil)amino]-5- metil-7,8-di-hidropteridin- m/z 398 [M+Hf Intermediário R1 R2 Nome ESMS 6(5H)-ona 2C -OMe -CO2H Ácido 4-{[(7f?)-8-ciclopentil-7- etil-5-metil-6-oxo-5,6,7,8-tetra- hidropteridin-2-il]amino}-3- metoxibenzóico m/z 426 [M+H]+ 2D -Me -CO2H Ácido 4-{[(7R)-8-Ciclopentil-7- etil-5-metil-6-oxo-5,6,7,8-tetra- hidropteridin-2-il]amino}-3- metilbenzóico m/z 410 [M+Hf 2E -F -CO2H Ácido 4-{[(7R)-8-ciclopentil-7- etil-5-metil-6-oxo-5,6,7,8-tetra- hidropteridin-2-il]amino}-3- fluorobenzóico m/z 414 [M+H]+ 2F -H -I (7R)-8-Ciclopentil-7-etil-2-[(4- iodo-fenil)amino]-5-metil-7,8- di-hidropteridin-6(5/-/)-ona m/z 478 [M+H]+

Intermediário 3A:

Ciclopentila (2S)-4-bromo-2-f(terc-butoxicarbonil)amino1butanoato

boc

0 intermediário título foi preparado de acordo com o procedi- mento esboçado abaixo (esquema 2). Η,Ν

TBDMSiCI DBU, MeCN

Estágio 1

Estágio 2

boc~

Ciclopentanol EDC1 DMAP, DCM, temperatura ambiente

:Estágio 3

boc-

PPh3, piridina, NBS DCM, temperatura ambiente

Estágio 5

boCs

AcOH/THF/água, 30°C Estágio 4

boc-

Esquema 2

Estágio 1 -0-[terc-butil(dimetil)silil]-L-homosserina

Em uma suspensão de L-homosserina (1 ,OOgj 8,40 mmols) em acetonitrilo (10 ml) a 0 0C foi adicionado DBU (1,32 ml, 8,80 mmols), cloreto de terc-Butil-dimetil silila (1,33 g, 8,80 mmols), foi em seguida adicionado porção a porção durante 5 minutos, e a mistura reacional permitida aquecer em TA e agitada durante 16 horas. O sólido branco foi filtrado e lavado com acetonitrilo para produzir o produto (1,80 g, 92% de rendimento). ESMS: m/z 234 [M+H]+.

Estágio 2 -A/-(íerc-butoxicarbonil)-0-[íerc-butil(dimetil)silil]-L-homosserina

Em uma suspensão de 0-[terc-butil(dimetil)silii]-L-homosserina (1,80 g, 7,70 mmols) em DCM (100 ml) a 0°C, foram adicionados Et3N (2,15 ml, 15,4 mmols) e BOC2O (1,77 g, 8,10 mmols). A mistura reacional foi agi- tada em TA durante 16 horas. O DCM foi removido sob pressão reduzida, e

o resíduo foi redissolvido em EtOAc (20 ml) e salmoura (10 ml). A camada de EtOAc foi seca (MgSO 4) e concentrada sob pressão reduzida para pro- duzir o produto bruto que foi empregado adiante sem outra purificação (2,53 g, 99% de rendimento). ESMS: m/z 356 [M+H]+.

Estágio 3- N-(terc-Butoxicarbonil)-0-[íerc-butil(dimetil)silil]-L-homosserinato

de ciclopentila

Em uma solução de N-(ferc-butoxicarbonil)-0-[ferc- butil(dimetil)silil]-L-homosserina (2,53 g, 7,6 mmols) em DCM (50 ml) a 0°C, foram adicionados ciclopentanol (1,39 ml, 15,3 mmols), EDC (1,61 g, 8,40 mmols) e DMAP (93 mg, 0,76 mmol). A mistura reacional foi agitada durante 16 horas em TA antes da concentração sob pressão reduzida. O resíduo bruto foi dissolvido em EtOAc (100 ml) e lavado com 1M de HCI (30 ml), 1M de Na2CO3 (30 ml) e salmoura (20 ml). A camada orgânica foi seca (MgSO4) e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromato- grafia de coluna (EtOAc a 25%/heptano), para proporcionar o produto (2,24 g, 73% de rendimento). ESMS: m/z 402 [M+H]+. Estágio 4- N-(terc-Butoxicarbonil)-L-homosserinato de ciclopentila

Uma solução de N-(íerc-butoxicarbonil)-0-[terc-butil(dimetil)silil]- L-homosserinato de ciclopentila (1,57 g, 3,90 mmols) em ácido acéti- co:THF:água (3:1:1, 100 ml) foi agitada a 30°C durante 16 horas. EtOAc (200 ml), foi adicionado e lavado com 1M de Na2CO3 (10 ml), 1M de HCI (10 ml) e salmoura (10 ml). A camada de EtOAc foi seca (MgSO4) e concentra- da sob pressão reduzida para proporcionar o produto como um óleo claro que solidificou em repouso (1,00 g, 95% de rendimento). ESMS: m/z 310 [M+Na]+.

Estágio 5 - (2S)-4-Bromo-2-[(/erc-butoxicarbonil)amino]butanoato de ciclo- pentila

Em uma suspensão de NBS (1,86 g, 10,4 mmols) em DCM (16 ml), foi adicionada uma solução de trifenilfosfina (2,56 g, 9,70 mmols) em DCM (7 ml). A solução foi agitada durante 5 minutos depois da adição. Piri- dina (0,34 ml, 4,20 mmols), foi adicionada seguida por uma solução de N- (ferc-butoxicarbonil)-L-homosserinato de ciclopentila (1,00 g, 3,5 mmols) em DCM (9 ml). A solução foi agitada em TA durante 18 horas, concentrada sob pressão reduzida, e o solvente residual azeotropado com tolueno (3x16 ml). O resíduo foi triturado com Et2O (10 ml) e EtOAc:heptano (1:9, 2 χ 10 ml). As soluções orgânicas combinadas foram concentradas sobre sílica e purifi- cadas por cromatografia de coluna (EtOAc a 10%-25%/heptano), para pro- porcionar o intermediário título (1,02 g, 84% de rendimento). ESMS: m/z 351 [M+H]+. 1H RMN (300 MHz1 CDCI3) 5,30 - 5,05 (2H, m), 4,45 - 4,30(1 H, m), 3,45 (2H, t, J = 7,3 Hz), 2,50 - 2,30 (1H, m), 2,25 - 2,10 (1H, m), 1,95 - 1,60 (8H, brm)e 1,47 (9H, s). Intermediário 3B:

(2S)-2-U(benzilóxi)carboninamino)-4-bromobutanoato de terc-butila

Br

Cbz

O intermediário título foi preparado de acordo com o procedi-

O

mento esboçado abaixo (esquema 3). O

Cbz-CIoreto, NaOH Dioxano, água

Estágio 1

Cbz

i) EtOCOCI, NEt3, THF

ii) NaBH4, THF/água

Estágio 2

Cbz

NBS, PPh3, DCM, Piridina Estágio 3

Cbz

Esquema 3

Estágio 1 - Ácido (3S)-3-{[(benzilóxi)carbonil]amino}-4-terc-butóxi-4- oxobutanóico

Em uma solução de ácido (3S)-3-amino-4-terc-butóxi-4- oxobutanóico (900 mg, 4,75 mmols) e hidróxido de sódio (280 mg, 7,13 mmols) em 25% de água/dioxano (50 ml) a 0°C, foi adicionado cloroformiato de benzila (2 g, 4,13 mmols) em dioxano (10 ml). A mistura foi agitada a O0C durante 1 hora, e em seguida em TA durante a noite. Água (10 ml) foi adi- cionada, e a mistura foi extraída com EtOAc (2 χ 20 ml). A fase orgânica foi outra vez extraída com uma solução aquosa saturada de NaHCO3 (2x10 ml). As camadas aquosas combinadas foram acidificadas em pH 1 com 1M de HCI, e extraídas com EtOAc (3x10 ml). As camadas orgânicas combi- nadas foram secas (MgSO4) e concentradas sob pressão reduzida. O resí- duo foi purificado por cromatografia de coluna (35% de EtOAc/heptano) para produzir o produto como um óleo incolor (0,76 g, 50% de rendimento). ESMS: m/z 346 [M+23]+ Estágio 2 - N-[(Benzilóxi)carbonil]-L-homosserinato de ferc-butila

Em uma solução de ácido (3S)-3-{[(benzilóxi)carbonil]amino}-4- terc-butóxi-4-oxobutanóico (600 mg, 1,87 mmol) em THF anidroso (20 ml) a - 20°C, foi adicionado Et3N lentamente (32 μΙ_, 2,24 mmols) e cloroformiato de etila (21 μΙ_, 2,24 mmols). A mistura foi agitada a -20°C durante 2 horas. O sólido formado foi filtrado e lavada com THF (2 χ 10 ml). O filtrado foi adi- cionado gota a gota a uma solução de boro-hidreto de sódio (0,2 g, 5,61 mmols) a 0°C durante 10 minutos, e em seguida permitido aquecer em TA. A mistura foi agitada durante um adicional de 4 horas. O solvente foi remo- vido sob pressão reduzida, e o resíduo foi diluído com água (10 ml), acidifi- cado em pH 5 com 1M de HCI e extraído com EtOAc (2 χ 20 ml). As frações orgânicas combinadas foram lavadas com NaOH aquoso a 10% (10 ml), á- gua (10 ml) e salmoura (10 ml). A camada orgânica foi seca (MgSO4) e con- centrada sob pressão reduzida para produzir o produto como um óleo claro (0,3 g, 51% de rendimento). ESMS: m/z 332 [M+23]+. Estágio 3 - (2S)-2-{[(benzilóxi)carbonil]amino}-4-bromobutanoato de terc- butila

Em uma solução de NBS (520 mg, 2,91 mmols) em DCM (10 ml), foi adicionada uma solução de trifenilfosfina lentamente (0,71 g, 2,72 mmols) em DCM (10 ml). A mistura foi agitada em TA durante 5 minutos antes de piridina (94 μί, 1,16 mmol), e uma solução de N- [(benzilóxi)carbonil]-L-homosserinato de ferc-butila (0,30 g, 0,97 mmol) em DCM (20 ml), foi adicionada gota a gota. A mistura foi agitada em TA duran- te outras 18 horas. O solvente foi removido sob pressão reduzida, o resíduo foi azeotropado com tolueno (2 χ 15 ml) e triturado com Et2O (2 χ 25 ml) e EtOAc a 10% em heptanos. O filtrado das triturações foi combinado e con- centrado sob pressão reduzida. O produto bruto foi purificado por cromato- grafia de coluna (EtOAc a 15%/heptanos) para produzir o intermediário título 10

15

como um óleo claro (0,16 g, 44% de rendimento). ESMS: m/z 395 [M+23f. 1H RMN (300 MHz1 CDCI3) δ ppm 7,39 - 7,30 (5H, m), 5,40 (1H, d, J = 6,8Hz), 5,12 (2H, s), 4,38 (1H, q, J = 7,7Hz), 3,47 - 3,38 (2H, m), 5,49 - 2,33 (1H, m), 2,28 - 2,13 (1H, m) e 1,48 (9H, s). Intermediário 3C:

5-Bromo-N-(ferc-butoxicarbonil)-L-norvalinato de ciclopentila

O intermediário título foi preparado de acordo com o procedi- mento esboçado abaixo (esquema 4).

Esquema 4

Estágio 1 - N-(terc-Butoxicarbonil)-L-glutamato de 5-benzil 1-ciclopentila

Em uma solução de ácido (2S)-5-(benzilóxi)-2-[(ferc- butoxicarbonil)amino]-5-oxopentanoico (15 g, 44,5 mmols) em DCM (220 ml) a 0°C, foram adicionados ciclopentanol (4,8 ml, 53,3 mmols), EDC (9,4 g, 48,9 mmols) e DMAP (543 mg, 4,4 mmols). A mistura reacional foi permitida aquecer em TA e agitada durante um adicional de 12 horas. A mistura rea- cional foi diluída com DCM (200 ml) e lavada com 1M de HCI (50 ml), 1M de Na2CO3 (30 ml) e salmoura (50 ml). A camada orgânica foi seca (MgSO4) e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatogra- fia de coluna (EtOAc a 25%/heptano) para produzir o produto como um sóli- do branco (12,4 g, 69% de rendimento). ESMS: m/z 406 [M+H]+. Estágio 2 - Ácido N-(terc-butoxicarbonil)-L-glutamático de 1-ciclopentila

A/-(ferc-butoxicarbonil)-L-glutamato de 5-benzil 1-ciclopentila (12,4 g, 30,5 mmols) foi dissolvido em EtOAc (200 ml) e purgado com nitro- gênio antes da adição de Pd(OH)2 em catalisador de carbono (1,3 g, 20% em p/p). O frasco reacional foi em seguida purgado com gás de hidrogênio por um período de 5 minutos antes de deixar sob um balão de hidrogênio durante 5 horas. O catalisador foi removido por filtração através de Celite®, lavando completamente com EtOAc (50 ml). O solvente foi removido sob pressão reduzida para produzir o produto como um óleo claro (7,73 g, 85% de rendimento). ESMS: m/z 316 [M+H]+.

Estágio 3 - A/-(ferc-butoxicarbonil)-5-hidróxi-L-norvalinato de ciclopentila

Em uma solução agitada de ácido N-(ferc-butoxicarbonil)-L- glutamático de 1-ciclopentila (6,73 g, 21,4 mmols) em THF(150 ml) a -20°C foi adicionado NMM (3,05 ml, 27,8 mmols) e cloroformiato de etila (2,45 ml, 25,6 mmols). A mistura reacional foi agitada a -20°C durante 2 horas. O sólido foi removido por filtração, foi adicionado gota a gota durante 20 minu- tos a uma solução de boro-hidreto de sódio (2,43 g, 64,1 mmols) em THF (20 ml) e água (5 ml) a 0°C. A mistura reacional foi permitida aquecer em TA e deixada durante um adicional de 4 horas. A mistura foi acidificada em pH 5 com 1M de HCI, e o THF removido sob pressão reduzida. A solução aquosa foi extraída com EtOAc (3 χ 100 ml), seca (MgSO4) e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia de coluna (0-5% de MeOH/DCM) para produzir o produto como um óleo claro (5,0 g, 78% de rendimento). ESMS: m/z 302 [M+Hf.

Estágio 4 - 5-Bromo-N-(terc-butoxicarbonil)-L-norvalinato de Ciclopentila

Em uma suspensão de NBS (3,54 g, 19,9 mmols) em DCM (30 ml), foi adicionada uma solução de trifenilfosfina (4,87 g, 18,8 mmols) em DCM (15 ml). A solução foi agitada durante um adicional de 5 minutos antes da adição de piridina (644 μΙ_, 7,96 mmols) e uma solução de N-(terc- butoxicarbonil)-5-hidróxi-L-norvalinato de ciclopentila (2,0 g, 6,64 mmols) em DCM (20 ml). A solução foi agitada durante 18 horas, concentrada sob pressão reduzida, e o solvente residual azeotropado com tolueno (3 χ 30 ml). O resíduo foi triturado com Et2O (30 ml) e EtOAc a 10%/heptano (2 χ 30 ml). O Et2O combinado e soluções de EtOAc/heptano foram concentrados em sílica e purificados por cromatografia de coluna (EtOAc a 10%-25%/heptano) para produzir o intermediário título como um óleo claro (1,34 g, 55% de ren- dimento). ESMS: m/z 365 [M+H]+. 1H RMN (300 MHz1 CDCI3) δ 5,25 (1 Η, m), 5,05 (1H, bd), 3,45 (2H, m), 2,00 - 1,55 (12H, bm) e 1,45 (9H, s). Intermediário 3D:

A/-f(benzilóxi)carbonil1-5-bromo-L-norvalinato de terc-butila

,Br

Cbz^ .O. N

H o

O intermediário título foi preparado de acordo com o procedi-

mento esboçado para o intermediário 3B [esquema 3] começando com ácido (4S)-4-amino-5-terc-butóxi-5-oxopentanoico. ESMS: m/z 409 [M+Na]+. intermediário 4A:

(2R)-4-Bromo-2-f(terc-butoxicarboni0amino1butanoato de ciclopentila

Br

J

H O

O intermediário título foi preparado de acordo com o procedi-

mento esboçado para o intermediário 3A [esquema 2] começando com D- homosserina. ESMS: m/z 351 [M+H]+. Intermediário 4B:

5-Bromo-N-(ferc-butoxicarbonil)-D-norvalinato de ciclopentila

.Br

bo^Yt)

O intermediário título foi preparado de acordo com o procedi-

mento esboçado para o intermediário 3C [esquema 4] começando com ácido de (2R)-5-(benzilóxi)-2-[(íerc-butoxicarbonil)amino]-5-oxopentanoico. ESMS: m/z 365 [M+H]+. Intermediário 5

(2S)-2-r(terc-butoxicarbonil)aminol-4-oxobutanoato de (1 R.2S,5R)-2-

isopropil-5-metilciclo-hexila

10

15

O intermediário título foi preparado de acordo com o procedi- mento esboçado abaixo (esquema 5).

o ι J? Vs

J^ I \ ΓίΛΛ Λ D I-IM

HN

HO

Ο

(-)-mentol, DMAP, EDC, DCM

Estágio 1

vTr0Y^

V^1-'- O

Γ

0

1

Siv.

(Esquema 2 Estágio 2)

THF, H2O, AcOH

Estágio 2

O ι

ηνΛΑ ^J0Yu

O

Periodinano de Dess-Martin, DCM

Estágio 3

O I

a„J<

O

X

HN O'

Esquema 5

Estágio 1 - A/-(ferc-butoxicarbonil)-0-[terc-butil(dimetil)silil]-L-homosserinato de (1 R,2S,5R)-2-isopropil-5-metilciclo-hexila

Em uma suspensão de /V-(terc-butoxicarbonil)-0-[terc- butil(dimetil)silil]-L-homosserina [esquema 2 Estágio 2] (6,22 g, 19 mmols) em DCM (120 ml) a O0C foi adicionado (-)-mentol (5,85 g, 37,0 mmols), DMAP (228 mg, 1,87 mmol) e EDC (3,93 g, 20,3 mmols). A solução foi per- mitida aquecer em TA e agitada durante um adicional de 18 horas. A mistu- ra reacional foi concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia de coluna (EtOAc a 20%/heptano) para produzir o produto como um óleo claro (4,86 g, 55% de rendimento). ESMS: m/z 394 [M+Na]+. Estágio 2- A/-(terc-butoxicarbonil)-L-homosserinato de (1/?,2S,5R)-2- isopropil-5-metilciclo-hexila

Uma suspensão de A/-(terc-butoxicarbonil)-0-[ferc- butil(dimetil)silil]-L-homosserinato de (1R,2S,5R)-2-isopropil-5-metilciclo- hexila (4,86 g,14,0 mmols) em THF / água / ácido acético (60mL : 60ml_ : 180 ml) foi aquecida a 30°C durante 20 horas. A reação foi diluída com E- tOAc (60 ml) e lavada com solução de NaHCO3 sat. (20 ml), 1M de HCI (30 ml) e salmoura (30 ml). A camada orgânica foi seca (MgSO4) e concentrada sob pressão reduzida para proporcionar o produto (3,45g 69% de rendimen- to). ESMS: m/z 380 [M+Na]+.

Estágio 3- (2S)-2-[(ferc-butoxicarbonil)amino]-4-oxobutanoato de (1R,2S,5R)-2-isopropil-5-metilciclo-hexila

Em uma suspensão de /V-(terc-butoxicarbonil)-L-homosserinato de (1R,2S,5R)-2-isopropil-5-metilciclo-hexila (500 mg, 1,40 mmol) em DCM (20 ml) a 0°C, foi adicionado periodinano de Dess-Martin (595 mg, 1,54 mmol). A reação foi permitida aquecer em TA e agitada durante 3 horas. À solução foi adicionado solução saturada 1:1 de NaaSO3 / NaHCO3 (30 ml), e a mistura agitada durante 15 min. A camada orgânica foi separada, e a ca- mada aquosa extraída com DCM (2x10 ml). As camadas orgânicas combi- nadas foram lavadas com solução 1:1 de Na2S03/NaHC03 (15 ml), secas (MgSO4) e concentradas sob pressão reduzida para produzir o intermediário título como um óleo incolor (480 g 97% de rendimento). ESMS: m/z 378 [M+Na]+. 1H RMN (CDCI3) δ : 7,90 (1H, m), 5,30 (1H, d J = 4,7Hz), 4,70 - 4,57 (2H, m), 4,45 (1H, br. s), 2,92 (2H, t, J = 5,7Hz), 1,91-1,68 (6H, m), 1,58 (9H, s), 1,05-0,85 (4H, m) e 0,66 (6H, d, J = 7,0Hz). Intermediário 6A

4-Amino-N-(ferc-butoxicarbonih-L-fenilalaninato de ciclopentila O intermediário título foi preparado de acordo com o procedi- mento esboçado abaixo (esquema 6).

'N02 Ciclopentanol EDC, DMAP

DMF H2(3). Pd/C, EtOAc

Estágio 1 botKN"'Sí'0V^ Estágio 2

H S Ly

Estágio 1- /V-(terc-butoxicarbonil)-4-nitro-L-fenilalaninato de ciclopentila

Em uma solução de A/-(terc-butoxicarbonil)-4-nitro-L-fenilalanina (1,00 g, 3,23 mmols) em DMF (10 ml) a 0°C, foram adicionados ciclopenta- nol (0,585 ml, 6,44 mmols), DMAP (39 mg, 0,32 mmol) e EDC (0,655 g, 3,39 mmols). A mistura reacional foi permitida aquecer em TA e agitada durante um adicional de 16 horas. A mistura foi dividida entre água (200 ml) e EtOAc (200 ml). A camada orgânica foi extraída com água (3x50 ml), seca (Mg- SO4) e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cro- matografia de coluna (heptano a 33%/EtOAc), para proporcionar o produto como um óleo amarelo pálido (1,12 g, 95% de rendimento). ESMS: m/z 365 [M+H]+.

Estágio 2- 4-Amino-N-(terc-butoxicarbonil)-L-fenilalaninato de ciclopentila Em uma solução A/-(terc-butoxicarbonil)-4-nitro-L-fenilalaninato

de ciclopentila (480 mg, 1,32 mmol) em EtOAc (10 ml), foram adicionados 10% de Pd / C (48 mg, 10% em p/p). O frasco foi evacuado e colocado sob uma atmosfera de hidrogênio durante duas horas. A reação foi evacuada, e a mistura filtrada através de Celite®, lavando com EtOAc em excesso (20 ml). O filtrado foi concentrado sob pressão reduzida para proporcionar o intermediário título como um óleo rosa (432 mg, 98% de rendimento). ESMS: m/z 335 [M+Hf. 1H RMN (300 MHz, CDCI3) δ : 6,62 (2H, d, J = 8,4Hz), 5,15-5,25 (1H, m, CH), 4,95 (1H, d, J = 4,2Hz), 4,40 - 4,55 (1H, m), 6,94 (2H, d, J = 8,1 Hz), 3,62 (2H, br s), 2,97 (2H, d, J = 5,7Hz), 1,50-1,96 (9H, m) e 1,44 (9H, s). Intermediário 6B

4-Amino-N-(ferc-butoxicarboniO-L-fenilalaninato de ferc-butila 0

0 intermediário título foi preparado de acordo com o procedi- mento esboçado abaixo (esquema 7).

.NO, <ίί^Ν02

tricloroacetimidato de tbutila Γ |T η Cube™

BF3 OEt2l ciclohexano, DCM H2(g), Pd/C, EIOAc

Estágio 1 boc>. Estágio 2

Esquema 7

Estágio 1- N-(terc-Butoxicarbonil)-4-nitro-L-fenilalaninato de ferc-butila Em uma solução de A/-(terc-butoxicarbonil)-4-nitro-L-fenilalanina

(500 mg, 1,61 mmol) em DCM a 66% / cicloexano (30 ml) a O0C foi adiciona- do eterato de dietila de trifluoreto de boro (10 μΙ_) seguido imediatamente por adição gota a gota durante 10 minutos de tricloroacetimidato de ferc-butila (704 mg, 3,22 mmols) em cicloexano (10 ml). A mistura foi permitida aque- cer em TA e agitada durante 30 minutos antes de extinguir com NaHCOs em pó (80mg). A mistura crua foi filtrada através de Celite®, e o filtrado concen- trado sob pressão reduzida para produzir um resíduo. O resíduo foi purifica- do por cromatografia de coluna (EtOAc a 20% / heptano) para produzir o produto como um sólido amarelo (320 mg, 54% de rendimento). ESMS: m/z 389 [M+Na]+.

Estágio 2- 4-Amino-N-(terc-butoxicarbonil)-L-fenilalaninato de terc-butila

O produto do Estágio 1 (0,53 g, 1,40 mmol) foi dissolvido em MeOH (29 ml) para preparar uma solução de 0,05M. A solução foi passada através de um hidrogenador contínuo Η-Cube® (Thales Nanotechnology, HC-2, SS). A reação foi realizada utilizando um CatCart® de 30 mm (10% de Pd/C) por modo de H2 completo. Uma taxa de fluxo de 1 ml/min foi man- tida, com uma temperatura de 25°C e pressão de H2 de 0,1 MPa (1 bar). O produto foi eluído em 2M de NaOH (20 ml), e o MeOH removido sob pressão reduzida. A solução aquosa foi extraída com EtOAc (2 χ 20 ml). As cama- das orgânicas combinadas foram secas (MgSO4) e concentradas sob pres- são reduzida para proporcionar o intermediário título como um óleo amarelo. (0,15 g, 31% de rendimento). ESMS: m/z 359 [M+Naf. 1H RMN (300 MHz1 MeOD) δ: 6,97 (2H, d, J = 8,5 Hz), 6,68 (2H, d, J = 8,3 Hz), 4,15 (1H, t, J = 5,9 Hz), 2,85 (2H, dd, J = 19,0, 7,2 Hz) e 1,42 (18H, s). Intermediário 7 A

(2S)-4-Amino-2-[(terc-butoxicarbonil)amino1butanoato de ciclopentila

HN'b0C

O intermediário título foi preparado de acordo com o procedi- mento esboçado abaixo (esquema 8).

NHBoc NHBoe Pd/C, H2 NHBoe

/-y-O.X/^ NaN3lDMF, 40 °C -^O^Js^ AcOH, EtOH1 ta

VJ O Êstágiõ^l ~ VJ O 3 Estagio2 VJ O

(Intermediário 3A)

Esquema 8

Estágio 1- (2S)-4-Azido-2-[(terc-butoxicarbonil)amino]butanoato de ciclopen- tila

Em uma solução de (2S)-4-bromo-2-[(terc- butoxicarbonil)amino]butanoato de ciclopentila [Intermediário 3A] (1,00 g, 2,90 mmols) em DMF (30 ml), foi adicionada azida de sódio (0,93 g, 14,3 mmols). A mistura reacional foi agitada a 40°C durante 32 horas e concen- trada sob pressão reduzida. O resíduo foi dividido entre EtaO (100 ml) e Na2CC>3 sat. (100 ml). A camada orgânica foi separada, lavada com NaaCO3 sat. (100 ml), e salmoura (100 ml), seca (MgSO4) e concentrada sob pressão reduzida para produzir o produto como um óleo amarelo (1,05 g). Este pro- duto foi utilizado sem outra purificação. ESMS: m/z 335 [M+Na]+ Estágio 2- (2S)-4-Amino-2-[(terc-butoxicarbonil)amino]butanoato de ciclo- pentila

Em uma solução de (2S)-4-azido-2-[(ferc- butoxicarbonil)amino]butanoato de ciclopentila bruto (1,05 g, 2,90 mmols) em etanol (50 ml), foi adicionado ácido acético (0,16 ml, 2,90 mmols). A mistura reacional foi estimulada 3 vezes com nitrogênio. Pd/C (50 mg, 10% em p/p), foi adicionado. A mistura foi estimulada 3 vezes com nitrogênio e finalmente agitada sob uma atmosfera de hidrogênio em TA durante 2 horas. A mistura reacional foi filtrada através de uma almofada curta de Celite®, e o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida. O resíduo foi dividido entre EtOAc (50 ml) e Na2COs sat. (50 ml). A camada orgânica foi separada, lavada com salmoura (50 ml), seca (MgSO4) e concentrada sob pressão reduzida para produzir um óleo amarelo. A purificação por cromatografia de coluna (2% de amônias: 5% de MeOH em DCM) proporcionou o intermediário título como um óleo incolor (638 mg, 78% de rendimento durante 2 etapas). ESMS: m/z 287 [M+H]+. 1H RMN (300 MHz, CDCI3) δ: 5,55 (1H, br d), 5,21 (1H, m), 4,35 (1H, m), 2,81 (2H, m), 1,89 (2H, m), 1,81 -1,55 (8H, m) e 1,45 (9H, s).

Intermediário 7B

A/2-(ferc-Butoxicarbonil)lisinato de ciclopentila

U o

O intermediário título foi preparado de acordo com o procedi- mento esboçado abaixo (esquema 9).

HO

EDC1 DMAP Ciclopentanol, DCM

Estágio 1

Pd(OH)2 / C, H2 Etanol

Estágio 2

Esquema 9

Estágio 1- A/6-[(Benzilóxi)carbonil]-N2-(terc-butoxicarbonil)lisinato de ciclo- pentila

Em uma solução de A/6-[(benzilóxi)carbonil]-N2-(terc- butoxicarbonil)lisina (1,00 g, 2,63 mmols) em DCM anidroso (20 ml) a O0C foram adicionados DMAP (32 mg, 0,26 mmol), ciclopentanol (0,48 ml, 5,23 mmols) e EDC (552 mg, 2,89 mmols). A reação foi permitida aquecer em TA e agitada por um adicional de 16 horas. A mistura foi diluída com DCM (50 ml) e lavada com salmoura (50 ml). A camada orgânica foi seca (MgSO4) e concentrada sob pressão reduzida, para produzir o produto bruto como um óleo (1,18 g, 100% de rendimento) que foi utilizado sem outra purificação. ESMS: m/z 471 [M+Na]+.

Estágio 2- A/2-(terc-Butoxicarbonil)lisinato de ciclopentila

Em uma solução de r\P-[(benz\\óx\)carbori\\]-N2-(terc- butoxicarbonil)lisinato de ciclopentila (1,18 g, 2,63 mmols) em etanol (5 ml), foi adicionado cuidadosamente hidróxido de paládio em carbono (235 mg, 20% em p/p) sob uma atmosfera de nitrogênio. A mistura reacional foi eva- cuada e colocada sob uma atmosfera de H2. Isto foi repetido por mais duas vezes, e a reação permitida agitar sob uma atmosfera de H2 durante 2 horas. A mistura reacional foi filtrada através de Celite® e concentrada para produ- zir o intermediário título (250 mg). ESMS: m/z 315 [M+H]+. 1H RMN (300 MHz, DMSO) δ: 6,70 - 6,77 (1H, m), 5,13-5,15 (1H, m), 4,08 - 4,09 (1H, m), 2,88 - 2,90 (2H, m), 1,82 (2H, m), 1,57 - 1,66 (10H, m) e 1,03 - 1,37 (11H, m).

Intermediário 8

(2S,4S)-4-Aminopirrolidina-1.2-dicarboxilato de 1-ferc-butil 2-ciclopentila

H2N

O intermediário título foi preparado de acordo com o procedi- mento esboçado abaixo (esquema 10). ο

HO—^

V-NBoc

EDC1 DMAP Ciclopentanol, DCM

Estágio 1

BnO

O

)—NBoe Bn Õ

Pd(OH)2 EtOH, ciclo-hexano refluxo

Estágio 2

, .O O-^

)—NBoc

i) MsCI, Et3N, DMAP, DCM ii) NaN3, DMF, 55 0C

Pd(OH)2 EtOH1 THF1 H2, rt

Estágio 3

NBoc

Estágio 4

H,N

NBoe

Esquema 10

Estágio 1- (2S,4f?)-4-(Benzilóxi)pirrolidina-1,2-dicarboxilato de 1-terc-butil 2- ciclopentila

Em uma solução de (4R)-4-(benzilóxi)-1-(terc-butoxicarbonil)-L- prolina (5,06 g, 15,7 mmols) em DCM (50 ml) a O0C, foram adicionados ci- clopentanol (2,9 ml, 31,4 mmols), DMAP (192 mg, 1,60 mmol) e EDC (3,32 g, 17,3 mmols). A mistura reacional foi permitida aquecer em TA e agitada durante um adicional de 18 horas. A mistura foi lavada com Na2CO3 sat. (30 ml), 1M de HCI (30 ml) e salmoura (30 ml). A camada orgânica foi seca (MgSO4) e concentrada sob pressão reduzida para produzir um óleo amarelo pálido. A purificação por cromatografia de coluna (EtOAc a 15%/heptano) proporcionou o produto como um óleo incolor (5,21 g, 85% de rendimento). ESMS: m/z 412 [M+Na]+ e 801 [2M+Na]+.

Estágio 2- (2S,4R)-4-Hidroxipirrolidina-1,2-dicarboxilato de 1-terc-butil 2- ciclopentila

Em uma solução de (2S,4R)-4-(benzilóxi)pirrolidina-1,2- dicarboxilato de 1-terc-butila 2-ciclopentila (5,21 g, 13,4 mmols) em E- tOH.ciclo-hexano (5:1, 120 ml), foi adicionado cuidadosamente hidróxido de paládio em carbono (521 mg, 20% em p/p). A mistura reacional foi evacua- da e estimulada com nitrogênio 3 vezes e refluxada durante 21 horas. A mistura reacional foi filtrada através de Celite®, e o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida para produzir um óleo amarelo pálido. A purificação por cromatografia de coluna (EtOAc a 50%/heptano) proporcionou o produto como um óleo rosa pálido (3,77 g, 100% de rendimento). ESMS: m/z 621 [2M+Na]+.

Estágio 3- (2S,4S)-4-(2l5-triaz-1-en-2-in-1-il)pirrolidina-1,2-dicarboxilato de 1-ferc-butil 2-ciclopentila Em uma solução de (2S,4R)-4-hidróxi-pirrolidina-1,2-

dicarboxilato de 1 -ferc-butila 2-ciclopentila (3,07 g, 10,3 mmols) em DCM (100 ml) a 0°C foram adicionados Et3N (2,90 ml, 20,5 mmols), DMAP (125 mg, 1,02 mmol) e cloreto de metanossulfonila (0,87 ml, 11,3 mmols). A mis- tura reacional foi permitida aquecer em TA e agitada durante 1 hora. A mis- tura foi lavada com água (50 ml) e salmoura (50 ml). A camada orgânica foi seca (MgSO4) e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi dissolvido em DMF (100 ml) e azida de sódio (100 mg, 15,5 mmols), foi adicionada. A mistura reacional foi agitada a 60°C durante 3 dias, permitida resfriar em TA e dividida entre água (200 ml) e EtOAc (200 ml). A camada orgânica foi se- parada, lavada com salmoura (200 ml), seca (MgSO4) e concentrada sob pressão reduzida para produzir um óleo amarelo pálido. A purificação por cromatografia de coluna (EtOAc a 30%/heptano) proporcionou o composto do título como um óleo incolor (3,26 g, 98% de rendimento). ESMS: m/z 671 [2M+Na]+

Estágio 4- (2S,4S)-4-Aminopirrolidina-1,2-dicarboxilato de 1-terc-butil 2- ciclopentila

Em uma solução de (2S,4S)-4-(2l5-triaz-1-en-2-in-1-il)pirrolidina- 1,2-dicarboxilato de 1-terc-butila 2-ciclopentila (3,26 g, 10,0 mmols) em E- tOH:THF (5:1, 120 ml), foi adicionado hidróxido de paládio em carbono (326 mg, 20% em p/p). A mistura reacional foi evacuada e colocada sob uma at- mosfera de H2. Isto foi repetido mais duas vezes, e a reação permitida agitar sob uma atmosfera de H2 durante 16 horas. A mistura reacional foi filtrada através de Celite®, e o filtrado foi concentrado sob pressão reduzida para produzir um óleo amarelo pálido. A purificação por cromatografia de coluna (5-10% de MeOH/DCM) proporcionou o intermediário título como um óleo incolor espesso (1,34 g, 45% de rendimento). ESMS: m/z 299 [M+H]+ e 597 [2M+Na]+. 1H RMN (300 MHz, CDCI3) δ: 5,27 - 5,19 (1H, m), 4,31 - 4,18 (1H, m), 3,75 - 3,63 (1Η, m), 3,57 - 3,50 (2Η, m), 3,31 - 3,22 (1Η, m), 2,52 - 2,43 (1 Η, m) e 1,91-1,38 (15Η, m). Intermediário 9

3-Γ1 -(2-Aminoetinpiperidin-4-il1-/\/-(terc-butoxicarbonil)alaninato de ciclopenti-

Ia

O

NH i^N'

,NH.

O

O intermediário título foi preparado de acordo com o procedi- mento esboçado abaixo (esquema 11).

boc mn.

EDC1 DMAP1 DCM boc Ciclopentanol

I Pd(OH)2/C1H2 O-^O ^N"Cbz Etenpl__ ^An

L N^ Estágio 1 HO O Cbz

Cbz^

vCbz _Etanol

Estágio 2

0 O

Dess-Martin ,OH DCM Cbz-

Estágio 2a

STAB/DCE Estágio 3

H

boc.

NH

Crt

N^^ 2

H2ZPd(OH)2 boc' Etanol

Estágio 4

,.Cbz

Esquema 11

Estágio 1 - 4-{2-[(terc-Butoxicarbonil)amino]-3-(ciclopentilóxi)-3-

oxopropil}piperidina-1 -carboxilato de benzila

Em uma solução de 3-{1-[(benzilóxi)carbonil]piperidin-4-il}-N- (ferc-butoxicarbonil)alanina (250 mg, 0,62 mmol) em DCM (5 ml) a O0C, fo- ram adicionados ciclopentanol (0,11 ml, 1,23 mmol), DMAP (9,6 mg, 0,06 mmol) e EDC (180 mg, 0,68 mmol). A reação foi permitida aquecer em TA e agitada durante um adicional de 16 horas. A mistura reacional foi diluída com água (30 ml) e EtOAc (30 ml). A camada aquosa foi re-extraída com EtOAc (2 χ 30 ml), e as camadas orgânicas combinadas lavadas com sal- moura, secas (MgSO4) e concentradas sob pressão reduzida para produzir o produto bruto (340 mg, >100% de rendimento) que foi utilizado sem outra purificação. ESMS: m/z 475 [M+H]+.

Estágio 2- /V-(terc-Butoxicarbonil)-3-piperidin-4-ilalaninato de ciclopentila Em uma solução de A/-(terc-butoxicarbonil)-3-piperidin-4-ilalanina (340 mg, 0,72 mmol) em etanol (5 ml), foi adicionado hidróxido de paládio cuidadosamente em carbono (68 mg, 20% em p/p) sob uma atmosfera de nitrogênio. A mistura reacional foi evacuada e colocada sob uma atmosfera de H2. Isto foi repetido mais duas vezes, e a reação permitida agitar abaixo e atmosfera de H2 durante 3 horas. A mistura reacional foi filtrada através de Celite® e concentrada sob pressão reduzida para produzir o produto (250 mg, >100% de rendimento). ESMS: m/z 341 [M+H]+. Estágio 2a- (2-Oxoetil)carbamato de benzila Em uma solução de (2-hidroxietil)carbamato de benzila (210 mg,

1,08 mmol) em DCM (3 ml) a -78°C, foi adicionado periodinano de Dess- Martin (504 mg, 1,19 mmol). A reação foi permitida aquecer em TA e agita- da por um adicional de 2 horas. A reação foi extinguida pela adição de uma solução saturada 1:1 de Na2SO3 / NaHCO3 (20 ml), e em seguida extraída com DCM (3 χ 30 ml). Os orgânicos combinados foram secos (MgSO 4) e concentrados sob pressão reduzida para produzir o produto desejado (150 mg, 70% de rendimento) que não requeriu outra purificação. 1H RMN (300 MHz, CDCI3) δ: 9,59 (1H, s), 7,28 - 7,30 (5H, m), 5,06 (2H, s) e 4,08 (2H, d, J = 5,0Hz).

Estágio 3- 3-[1-(2-{[(Benzilóxi)carbonil]amino}etil)piperidin-4-il]-/\/-(terc- butoxicarbonil)alaninato de ciclopentila

Em uma solução de /V-(te/-c-butoxicarbonil)-3-piperidin-4- ilalaninato de ciclopentila (250 mg, 0,74 mmol) em DCE (5 ml), foi adicionado (2-oxoetil)carbamato de benzila (131 mg, 0,67 mmol). A reação foi permitida agitar durante 30 mins, e em seguida STAB (424 mg, 2,01 mmols), foi adi- cionado. A reação foi agitada durante um adicional de 16 horas, e em se- guida extinguida pela adição de solução de NaHCO3 sat. (10 ml). A mistura foi extraída com DCM (3 χ 30 ml), as camadas orgânicas combinadas, secas (MgSO4) e concentradas sob pressão reduzida, para produzir o produto (240 mg, 69% de rendimento). ESMS: m/z 518 [M+H]+.

Estágio 4- 3-[1-(2-Aminoetil)piperidin-4-il]-N-(ferc-butoxicarbonil)alaninato de ciclopentila Em uma solução de 3-[1 -(2-

{[(benzilóxi)carbonil]amino}etil)piperidin-4-i^

de ciclopentila (240 mg, 0,46 mmol) em etanol (5 ml), foi adicionado cuida- dosamente hidróxido de paládio em carbono (48 mg, 20% em p/p) sob uma atmosfera de nitrogênio. A mistura reacional foi evacuada e colocada sob uma atmosfera de H2. Isto foi repetido mais duas vezes, e a reação permiti- da agitar sob uma atmosfera de H2 durante 3 horas. Uma outra porção de hidróxido de paládio em carbono (48 mg, 20% em p/p), foi adicionada, e a reação agitada durante um adicional de 16 horas. A mistura reacional foi filtrada através de Celite® e concentrada sob pressão reduzida para produzir o intermediário título (250mg). ESMS: m/z 384 [M+H]+. Intermediário 10

Q-[4-(Aminometil)fenil1-N-(ferc-butoxicarbonil)-L-homosserinato de ciclopenti-

Ia

HN'

,boc

O

O

NH,

O

O intermediário título foi preparado de acordo com o procedi- mento esboçado abaixo (esquema 12).

HO

Benzilcloroformato,

Estágio 1 HO

Intermediário 3A N.Cbz K2CO3DMF H ->

Estágio 2

HN

,boc

a1

10% Pd/C, EtOH

HN

,boc

,Cbz

Estágio 3

NH,

cr

Esquema 12

Estágio 1- (4-Hidroxibenzil)carbamato de benzila

Em uma suspensão de 4-(aminometil)fenol (300 mg, 2,44 mmols) em 10% de THF/H20 (10 ml), foi adicionado NaHCO3 (266 mg, 3,17 mmols). A mistura foi resfriada a 0°C e benzilcloroformiato (344 μΙ_, 2,44 mmols) adicionado lentamente. A reação foi agitada durante 1,5 hora em TA. A mistura reacional foi dividida entre água (40 ml) e EtOAc (40 ml). A camada orgânica foi separada, e a camada aquosa foi re-extraída com EtO- Ac (20 ml). As camadas orgânicas combinadas foram secas (MgSO4) e concentradas sob pressão reduzida. O resíduo foi triturado com heptano, para proporcionar o produto como um sólido branco (610 mg, 97% de rendi- mento). ESMS: m/z 258 [M+H]+ Estágio 2- Ciclopentil éster de ácido (S)-4-[4-(benziloxicarbonilamino-metil)- fenóxi]-2-ferc butoxicarbonilamino-butírico

Em uma solução de (4-hidroxibenzil)carbamato de benzila (150 mg, 0,58 mmol) em DMF (5 ml), foram adicionados carbonato de potássio (107 mg, 0,77 mmol) e (2S)-4-bromo-2-[(terc-butoxicarbonil)amino]butanoato de ciclopentila [intermediário 3A] (219 mg, 0,64 mmol). A reação foi aqueci- da durante 20 horas a 60°C. A mistura reacional foi concentrada sob pres- são reduzida e em seguida dividida entre água (30 ml) e EtOAc (30 ml). A camada aquosa foi extraída com EtOAc (20 ml), e as camadas orgânicas combinadas foram secas (MgSO4) e concentradas sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia de coluna (EtOAc a 10- 50%/heptano), para proporcionar o produto (250 mg, 74% de rendimento). ESMS: m/z 527 [M+Hf

Estágio 3- 0-[4-(Aminometil)fenil]-N-(terc-butoxicarbonil)-L-homosserinato de ciclopentila

Em uma solução de ciclopentil éster de ácido (S)-4-[4-

(Benziloxicarbonilamino-metil)-fenóxi]-2-ferc-butoxicarbonilamino-butírico (250 mg, 0,47 mmol) em etanol (8 ml), foi adicionada um suspensão de Pd/C (50 mg, 20% em p/p) em EtOH (2 ml). A reação foi evacuada e colocada sob uma atmosfera de H2 durante 2 horas. A mistura reacional foi filtrada através de Celite® e lavada com etanol (15 ml). O filtrado foi concentrado sob pressão reduzida para proporcionar o intermediário título (110 mg, 59% de rendimento). ESMS: m/z 393 [M+H]+. 1H RMN (300 MHz, CDCI3) δ: 7,21 (2Η, d, 8,1Hz), 6,84 (2H, d, J = 8,4Hz), 5,38 (1H, m), 5,22 (1H, m), 4,42 (1H, d, J = 6,3Hz), 4,03 (2H, t, 6Hz), 3,80 (2H, s), 3,72 (1H, m), 2,29 - 1,51 (9H, m) 1,45 (9H, s), 1,28 - 1,20 (2H, m). Intermediário 11

Q-r4-(Aminometil)fenin-N-r(benzilóxi)carbonin-L-homosserínato de ferc-butila

HN'°bZ [^Y".....NH-

o

O intermediário título foi preparado de acordo com o procedi- mento esboçado abaixo (esquema 13).

HO

Metanol,

NaHCO3, BOC2O NH, J *

Estágio 1 HO

Intermediário 3B ^boc K2CO3DMF

H -:-»

Estágio 2

HN

,Cbz

Il N

I H

-boc

>r

o

HCl a 4M em dioxano

Estágio 3

HN'CbZ r^Y ^NH2

Ύ

Esquema 13

Estágio 1- (4-Hidroxibenzil)carbamato de ferc-butila Em uma solução de 4-(aminometil)fenol (200 mg, 1,62 mmol) em

MeOH (2,5 ml), foram adicionados bicarbonato de sódio (476 mg, 5,68 mmols) e BOC2O (390 mg, 1,79 mmol). A solução foi agitada em TA durante 72 horas. A mistura reacional foi dividida entre água (20 ml) e EtOAc (20 ml). A camada orgânica foi separada, e a camada aquosa foi extraída com EtOAc(IOmI). As camadas orgânicas combinadas foram secas (MgSO4) e concentradas sob pressão reduzida para produzir o produto como um óleo amarelo (360mg). ESMS: m/z 224 [M+H]+.

Estágio 2- /N/-[(Benzilóxi)carbonil]-0-(4-{[(íerc-butoxicarbonil)amino]metil} fenil)-L-homosserinato de terc-butila Procedimento como no estágio 2 esquema 12 utilizando o intermediário 3B. ESMS: m/z 515 [M+H]+.

Estágio 3- 0-[4-(Aminometil)fenil]-A/-[(benzilóxi)carbonil]-L-homosserinato de terc-butila

A/-[(benzilóxi)carbonil]-0-(4-{[(terc- butoxicarbonil)amino]metil}fenil)-L-homosserinato de terc-butila (200 mg, 0,39 mmol) foi dissolvido em HCI/dioxano a 4M (1,5 ml) e agitado a 0°C du- rante 20 minutos. A mistura reacional foi filtrada através de Celite® e lavada com etanol (15 ml). O resíduo foi diluído com EtOAc (15 ml), e o pH ajusta- do em 12 com solução de NaOH de 1M. A camada aquosa foi extraída com EtOAc (3x10 ml), e os orgânicos combinados foram secos (MgSO4) e con- centrados sob pressão reduzida para proporcionar o intermediário título co- mo um óleo incolor (152 mg, 95% de rendimento). ESMS: m/z 224 [M+H]+. 1H RMN (300 MHz, CDCI3) δ: 7,36 (5H, s), 7,19 (2H, d, J = 8,5Hz), 6,83 (2H, d, J = 8,3Hz), 5,12 (2H, s), 4,45 (1H, br. s.), 4,25 (2H, d, J = 5,3Hz), 4,04 (2H, t, J = 6,0Hz), 2,11- 2,46 (2H, m) e 1,48 (9H, s). Intermediário 12A Piperazina-1,2-dicarboxilato de 1-benzila 2-ciclopentila

Cbz

O intermediário título foi preparado de acordo com o procedi- mento esboçado abaixo (esquema 14).

Ciclopentanol, rh ^n

I J DMAP1 EDC1 DCM Cbz J HCI a 4M dioxano

Cbz^ -------cr^ci ~ 1

I Estágio 1 υ Y Estágio 2

O-^OH

Esquema 14

Estágio 1- Piperazina-1,2,4-tricarboxilato de 1-benzil 4-terc-butil 2- ciclopentila

Em uma solução de ácido 1-[(benzilóxi)carbonil]-4-(íerc- butoxicarbonil)piperazina-2-carboxílico (1,00 g, 2,85 mmols) em DCM (20 ml) a 0°C, foram adicionados ciclopentanol (520 μΙ_, 5,70 mmols), EDC (602 mg, 3,14 mmols) e DMAP (35 mg, 0,29 mmol). A mistura reacional foi agitada durante 48 horas em TA, em seguida o solvente removido sob pressão redu- zida. O resíduo bruto foi dissolvido em EtOAc (30 ml) e lavado com 1M de HCI (15 ml), 1M de Na2CO3 (15 ml) e salmoura (10 ml). A camada orgânica foi seca (MgSO4), e o solvente removido sob pressão reduzida para produzir o produto (1,23 g, 95% de rendimento). ESMS: m/z 433 [M+H]+. Estágio 2- Piperazina-1,2-dicarboxilato de 1-benzil 2-ciclopentila Piperazina-1,2-dicarboxilato de 1-benzil 2-ciclopentila (200 mg,

0,39 mmol) foi dissolvido em HCI/dioxano a 4M (3 ml) e agitado a 0°C duran- te 1 hora. A mistura reacional foi concentrada sob pressão reduzida para proporcionar o intermediário título como um óleo incolor (145mg). ESMS: m/z 333 [M+Hf. 1H RMN (300 MHz, CDCI3) δ: 7,20 - 7,28 (5H, m), 5,16-5,17 (1H, m), 5,01-5,09 (2H, m), 4,49 - 4,60 (1H, m), 3,82 (1H, t J = 14,8Hz), 3,43 (1H, t J = 12,9Hz), 2,26 - 3,12 (4H, m) e 1,51-1,76 (8H, m). Intermediário 12B

4-(2-Aminoetil)piperazina-1,2-dicarboxilato de 1-benzil 2-ciclopentila

NH2

rr

Cbz

O^O

O intermediário título foi preparado de acordo com o procedi- mento esboçado abaixo (esquema 15).

N J J1 J ^N

Cbz DCE STAB CbZ HCI a 4M em dioxano Cbz

-NH2

Estágio! O "Ό Estágio 2

Intermediário 12A

Esquema 15 Estágio 1- 4-{2-[(ferc-Butoxicarbonil)amino]etil}piperazina-1,2-dicarboxilato de 1-terc-butil 2-ciclopentila

ciclopentila [Intermediário 12A] (165 mg, 0,50 mmol) em DCE (8 ml), foi adi- cionado o (2-oxoetil)carbamato de terc-butila (72 mg, 0,45 mmol). Depois da agitação em TA durante 10 minutos, AcOH (35 μΙ_) e STAB (287 mg, 1,35 mmol), foram adicionados. Depois da agitação durante 1 hora, a mistura foi extinguida com NaHCO3 sat. (2 ml) e diluída com DCM (10 ml). A camada orgânica foi lavada com 1M de HCI (10 ml), 1M de Na2CO3 (10 ml) e salmou- ra (10 ml), seca (MgSO4) e evaporada sob pressão reduzida para isolar o produto bruto (240mg). ESMS: m/z 476 [M+H]+.

Estágio 2- 4-(2-Aminoetil)piperazina-1,2-dicarboxilato de 1-benzil 2- ciclopentila

Procedimento como no [esquema 14 estágio 2].

ESMS: m/z 376 [M+H]+ 1H RMN (300 MHz, CDCI3) δ: 7,17 - 7,31 (5H, m), 4,98-5,20 (3H, m), 4,44 - 4,91 (2H, m), 3,83 (1H, t, J = 14,8 Hz), 3,04 - 3,52 (4H, m), 1,91 - 2,46 (4H, m) e 1,44 -1,85 (8H, m). Intermediário 12C

4-(2-Aminoetil)piperazina-1,2-dicarboxilato de 1-benzil 2-terc-butila

Em uma solução de piperazina-1,2-dicarboxilato de 1-benzil 2-

O

O

O intermediário título foi preparado de acordo com o procedi- mento esboçado abaixo (esquema 16). ,boc tricloroacetimidato de 'butila

,boc

Cbz

Xj BF3 OEt2, ciclohexano, DCM Cbz"Nx-T HCl a 4M em dioxano Cbz-N-

Estágio 1

NH

OH

Estágio 2

O^ boc

DCE, STAB

Estágio 3

Cbz

O' O

HCi a 4M em dioxano

Estágio 4

Cbz

υ

Esquema 16

Estágio 1- Piperazina-1,2,4-tricarboxilato de 1-benzil 2,4-di-ferc-butila

Em uma solução de ácido 1-[(benzilóxi)carbonil]-4-(ferc- butoxicarbonil)piperazina-2-carboxílico (500 mg, 1,37 mmol) em DCM (10 ml) e cicloexano (10 ml) a 0°C, foi adicionado eterato de trietila de trifluoreto de boro seguido imediatamente por adição lenta de tricloroacetimidato de 'butila (600 mg, 2,74 mmols) em cicloexano (10 ml) durante 15 min. A reação foi permitida aquecer em TA e agitada durante 30 min. Carbonato de hidrogê- nio de sódio (80 mg) foi adicionado, e a agitação continuada durante um adi- cional de 10 minutos antes de filtrar através de Celite®. O Celite® foi lavado completamente com DCM, e o solvente de filtrado removido sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia de coluna (EtOAc a 10%/heptano), para proporcionar o produto como um sólido branco (0,240 g, 42% de rendimento). ESMS: m/z 443 [M+H]+. Estágio 2- Piperazina-1,2-dicarboxilato de 1-benzil 2-ferc-butila

Piperazina-1,2,4-tricarboxilato de 1-benzil 2,4-di-ferc-butila (240 mg, 0,57 mmol) foi dissolvido em HCI/dioxano a 4M (1,5 ml) e agitado em TA durante 1 hora. A mistura foi diluída em EtOAc (10 ml) e lavada em 2M de NaOH. A camada orgânica foi em seguida seca (MgSO4) e evaporada sob pressão reduzida, para produzir o produto bruto (240mg). ESMS: m/z 321 [M+H]+.

Estágio 3- 4-{2-[(íerc-Butoxicarbonil)amino]etil}piperazina-1,2-dicarboxilato de 1-benzil 2-ferc-butila

Procedimento como no [esquema 15 estágio 1]

ESMS: m/z 464 [M+H]+.

Estágio 4- 4-(2-Aminoetil)piperazina-1,2-dicarboxilato de 1-benzil 2-terc- butila

Procedimento como no [esquema 13 estágio 3]

ESMS: m/z 364 [M+H]+. 1H RMN (300 MHz, CDCI3) δ: 7,17 - 7,31 (5H, m), 4,98-5,20 (3H, m), 4,44 - 4,91 (2H, m), 3,83 (1H, t, J = 14,8 Hz), 3,04 - 3,52 (4H, m), 1,91 - 2,46 (4H, m) e 1,35 (9H, s). Intermediário 13

(2S)-2-r(terc-Butoxicarbonil)amino1pent-4-enoato de ciclopentila

o

O intermediário título foi preparado de acordo com o procedi- mento esboçado abaixo (esquema 17).

BOC2O, NaOH I) Ciclopentanol

" Dioxano f EDC1 DMAP, DMF

OH Estágiol boc,./OH Estágio 2

0

Esquema 17

Estágio 1 - Ácido (2S)-2-[(terc-butoxicarbonil)amino]pent-4-enoico

Em uma solução de ácido (2S)-2-aminopent-4-enoico (1,00 g, 8,70 mmols) em 1M de NaOH (20 ml) e dioxano (10 ml) a 0°C, foi adicionado BOC2O (2,28 g, 10,5 mmols). A mistura reacional foi permitida aquecer em TA e agitada durante um adicional de 18 horas. O pH foi checado e ajustado em básico quando necessário. A mistura reacional foi concentrada sob pressão reduzida, e a fase aquosa lavada com Et2O (2x10 ml) para remo- ver o BOC2O em excesso. A fase aquosa foi acidificada em pH2 com 2M de H2SO4 e extraída com EtOAc (4 χ 20 ml) ao mesmo tempo que saturando o aquoso cada vez com cloreto de sódio. As camadas orgânicas combinadas foram secas (MgSO4) e concentradas sob pressão reduzida para proporcio- 10

15

nar o produto (2,2 g, 100% de rendimento). ESMS m/z: 238 [M+Na]+. Estágio 2- (2S)-2-[(terc-Butoxicarbonil)amino]pent-4-enoato de ciclopentila

Em uma solução de ácido (S)-2-terc-butoxicarbonilamino-pent-4- enoico (2,20 g, 10,2 mmols) em DCM (50 ml), foram adicionados DMAP (125 mg, 1,02 mmol), ciclopentanol (1,1 ml, 12,2 mmols) e EDC (2,15 g, 11,2 mmols). A reação foi agitada durante 65 horas e concentrada sob pressão reduzida. A purificação por cromatografia de coluna (EtOAc a 5%/heptano) proporcionou o intermediário titulado como um óleo claro (1,75 g, 60% de rendimento). 1H RMN (300 MHz, CDCI3) δ: 5,61-5,79 (1H, m), 5,21 (1H, dd, J = 8,3, 3,4 Hz), 5,15 (1H, dd, J = 2,9, 1,2 Hz), 5,10 (1H, d, J = 1,3 Hz), 4,25 - 4,38 (1H, m), 2,49 (1H, dd, J = 12,8, 6,4 Hz), 1,53-1,92 (8H, m) e 1,44 (9H, s).

Exemplo 1

4-([(7R)-8-Ciclopentil-7-etil-5-metil-6-oxo-5,6,7,8-tetra-hidropteridin-2-

il1amino}-L-fenilalaninato de ciclopentila

o

O exemplo titulado foi preparado de acordo com o procedimento esboçado abaixo (esquema 18).

Intermediário 6A

Intermediário 1 Etoxietanol, ISO0C

Estágio 1

CU

boc

HCI / dioxano / DCM

CU

Estágio 2

Esquema 18

Estágio 1 - A/-(ferc-butoxicarbonil)-4-{[(7R)-8-ciclopentil-7-etil-5-metil-6-oxo- 5,6,7,8-tetra-hidropteridin-2-il]amino}-L-fenilalaninato de ciclopentila

Em uma solução de (7R)-2-cloro-8-ciclopentil-7-etil-5-metil-7,8- di-hidropteridin-6(5H)-ona [Intermediário 1] (100 mg, 0,34 mmol) em 2- etoxietanol (2 ml), foi adicionado 4-amino-N-(terc-butoxicarbonil)-L- fenilalaninato de ciclopentila [Intermediário 6A] (170 mg, 0,51 mmol). A mis- tura reacional foi aquecida a 150°C durante 4 horas, resfriada e concentrada sob pressão reduzida para produzir um resíduo marrom. O resíduo foi purifi- cado por cromatografia de coluna (5% de metanol /1% de NH4OH em EtO- Ac), para proporcionar o produto como um sólido amarelo (89 mg, 43% de rendimento). ESMS: m/z 607 [M+H]+.

Estágio 2- 4-{[(7f?)-8-Ciclopentil-7-etil-5-metil-6-oxo-5,6,7,8-tetra- hidropteridin-2-il]amino}-L-fenilalaninato de ciclopentila

Em uma solução de (S)-2-íerc-butoxicarbonilamino-3-[4-((R)-8- ciclopentil-7-etil-5-metil-6-oxo-5,6,7,8-tetra-hidropteridin-2-il]amino}-L- fenilalaninato (32 mg, 0,05 mmol) em DCM (3 ml), foram adicionados H- Cl/dioxano a 4M (3 ml). A mistura reacional foi agitada em TA durante 4 ho- ras e concentrada sob pressão reduzida para produzir um resíduo marrom. O pH do resíduo foi ajustado em 9 com solução de NaHCO3 saturada (3 ml), e em seguida extraído com EtOAc (3x10 ml). Os orgânicos combinados foram secos (MgSO4) e concentrados sob pressão reduzida para proporcio- nar o exemplo título como um sólido branco (9 mg, 34% de rendimento). ESMS: m/z 507 [M+H]+. 1H RMN (300 MHz, CDCI3) δ: 7,43 (2H, d, J = 7,7Hz), 7,04 - 7,33 (3H, m), 5,06 - 5,24 (1H, m), 4,02 - 4,18 (1H, m), 4,20 - 4,44 (2H, m), 3,14 (2H, m), 2,83 - 11,04 (1H, s), 1,32 - 2,14 (18H, m) e 0,80 (3H, t, J = 7,4Hz). Exemplo 2

(2S.4E)-2-Amino-5-(4-(í(7R)-8-ciclopentil-7-etil-5-metil-6-oxo-5.6.7.8-tetra- hidropteridin-2-inamino)fenil)pent-4-enoato de ciclopentila O exemplo título foi preparado de acordo com o procedimento

esboçado abaixo (esquema 19):

Intermediária 13 | Pd(dppf)CI2, Net3 boc

I fg o NBu4Br1DMF

HN

NNN H

Estágio 1

CT O

NNN H

Intermediária 2F

HCI / dioxane / DCM

Estágio 2

O O

NNN H

Esquema 19

Estágio 1 - (7R)-8-Ciclopentil-7-etil-2-[(4-iodofenil)amino]-5-metil-7,8-di- hidropteridin-6(5H)-ona

Em uma solução de (2S)-2-[(terc-butoxicarbonil)amino]pent-4- enoato de ciclopentila [Intermediário 13] (175 mg, 0,62 mmol) em DMF (3 ml), foram adicionados (7R)-8-ciclopentil-7-etil-2-[(4-iodo-fenil)amino]-5-metil- 7,8-di-hidropteridin-6(5/-/)-ona [Intermediário 2F] (197 mg, 0,41 mmol), Pd(dppf)CI2 (34 mg, 0,04 mmol), Et3N (0,13 ml, 0,90 mmol) e NBu4Br (133 mg, 0,40 mmol). A mistura reacional foi aquecida a 120°C durante 1 h no micro-ondas e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo bruto foi ab- sorvido em sílica e purificado por cromatografia de coluna (EtOAc a 40%/heptano) para produzir o produto (72 mg, 30% de rendimento). ESMS m/z: 633 [M+H]+.

Estágio 2- (2S,4E)-2-[(ferc-Butoxicarbonil)amino]-5-(4-{[(7R)-8-ciclopentil-7- etil-5-metil-6-oxo-5,6,7,8-tetra-hidropteridin-2-il]amino}fenil)pent-4-enoato de ciclopentila Em uma solução de (7R)-8-Ciclopentil-7-etil-2-[(4-

iodofenil)amino]-5-metil-7,8-di-hidropteridin-6(5/-/)-ona (36 mg, 0,06 mmol) em DCM (2 ml), foram adicionados HCI/dioxano a 4M (20.1, 0,08 mmol). A mistura reacional foi agitada em TA durante 2 h, e em seguida concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi redissolvido em DCM (10 ml) lavado com NaHCO3 a 1M (10 ml), seco (MgSO4) e evaporado sob pressão reduzi- da. A purificação por cromatografia de fase reversa proporcionou o exemplo do título como um óleo amarelo (3 mg, 10% de rendimento). ESMS m/z: 533 [M+H]+. 1H RMN (300 MHz, MeOD) δ: 7,55 - 7,62 (1H, m), 7,39 - 7,51 (4H, m), 6,61 (1H, d, J = 15,6 Hz), 6,17 (1H, ddd, J = 15,4, 7,6, 7,3 Hz), 5,26 - 5,34 (1H, m), 4,39 (1H, dd, J = 6,3, 3,3 Hz), 4,32 (1H, t, J = 8,8 Hz), 4,17 (1H, t, J = 6,2 Hz), 3,25 (3H, s), 2,83 (2H, t, J = 6,7 Hz), 1,79 - 2,06 (9H, m), 1,54 - 1,78 (9H, m) e 0,86 (3H, t, J = 7,4 Hz) Exemplo 3

0-(4-U(7R)-8-Ciclopentil-7-etil-5-metil-6-oxo-5,6.7.8-tetra-hidropteridin-2- il1amino>fenil)-L-homosserinato de ciclopentila

O exemplo titulado foi preparado de acordo com o procedimento geral esboçado abaixo (esquema 20).

boc

Esquema 20 ; 10

15

Estágio 1 - A/-(ferc-Butoxicarbonil)-0-(4-{[(7R)-8-ciclopentil-7-etil-5-metil-6- oxo-5,6J,8-tetra-hidropteridin-2-il]amino}fenil)-L-homosserinato de ciclopen- tila

hidroxifenil)amino]-5-metil-7,8-di-hidropteridin-6(5H)-ona [Intermediário 2A] (120 mg, 0,33 mmol) em DMF (2 ml), foram adicionados (2S)-4-bromo-2- [(íerc-butoxicarbonil)amino]butanoato de ciclopentila [Intermediário 3A] (114 mg, 0,33 mmol) e K2CO3 (90 mg, 0,65 mmol). A mistura reacional foi agitada durante 40 horas a 40°C, e em seguida a mistura reacional foi diluída com EtOAc (25 ml). A mistura foi lavada com água (2 χ 25 ml) e salmoura (25 ml). A camada orgânica foi seca (MgSO4) e concentrada sob pressão redu- zida para produzir um óleo marrom. A purificação por cromatografia de co- luna (100% de EtOAc) proporcionou o produto como um sólido marrom páli- do (177 mg, 85% de rendimento). ESMS: m/z 637 [M+H]+. Estágio 2- 0-(4-{[(7R)-8-Ciclopentil-7-etil-5-metil-6-oxo-5,6,7,8-tetra- hidropteridin-2-il]amino}fenil)-L-homosserinato de ciclopentila

oxo-5,6,7,8-tetra-hidropteridin-2-il]amino}fenil)-L-homosserinato de ciclopen- tila (177 mg, 0,28 mmol) foi suspenso em uma solução de 4M de HCI / dio- xano (2 ml). A mistura reacional foi agitada em TA durante 30 minutos e concentrada sob pressão reduzida para produzir um óleo amarelo espesso. A trituração com Et2O proporcionou um sólido esbranquiçado, que foi dividi- do entre DCM (25 ml) e Na2CO3 sat. (25 ml). A camada orgânica foi separa-

H

Em uma solução de (7/?)-8-ciclopentil-7-etil-2-[(4-

A/-(ferc-Butoxicarbonil)-0-(4-{[(7R)-8-ciclopentil-7-etil-5-metil-6- da, seca (MgSO 4) e concentrada sob pressão reduzida para proporcionar o exemplo título como um sólido esbranquiçado (90 mg, 60% de rendimento). ESMS: m/z 537 [M+H]+. 1H RMN (300 MHz, MeOD) δ: 7,55 (1H, s), 7,32 (2H, d, J = 9,0 Hz), 6,76 (2H, d, J = 9,0 Hz), 5,15-5,09 (1H, m), 4,28 - 4,19 (1H, m), 4,11 (1H, dd, J = 3,6, 7,5 Hz), 4,01 - 3,95 (2H, m), 3,55 (1H, t, J = 6,5 Hz), 3,20 (3H, s), 2,11-1,51 (20H, m) e 0,75 (3H, t, J = 7,5 Hz).

O exemplo na seguinte tabela foi preparado pelos métodos aná-

logos ao método descrito acima (esquema 20), utilizando os intermediários apropriados.___

Exem- plo Intermediários Utili- zados Nome ESMS 4 2B&3A 0-(4-{[(7R)-8-Ciclopentil-7- etil-5-metil-6-oxo-5,6,7,8- tetra-hidropteridin-2-il] ami- no}-3-metoxifenil)-L- homosserinato de ciclopen- tila m/z 567 [M+Hf

Exemplo 5

(2S)-2-Amino-4-f(4-(f(7R)-8-ciclopentil-7-etil-5-metil-6-oxo-5,6,7.8-tetra- hidropteridin-2-inamino)-3-metoxibenzoil)aminolbutanoato de ciclopentila

NH2 O |

V^fjjV*! n^TnY0

/-T0 H V^N^N^N^

vJ i H

O exemplo titulado foi preparado de acordo com o procedimento geral esboçado abaixo (esquema 21). Intermediário 6A, 7A-10 & 12B

TBTU1 DIPEA Ν'Ύ Y PCM, ta

H

Intermediário 2C

boc'NyuN 0 0

HCI a 4M em dioxano, ta

H

Estágio 2

Esquema 21

Estágio 1 - (2S)-2-[(ferc-Butoxicarbonil)amino]-4-[(4-{[(7R)-8-ciclopentil-7-etil-

5-metil-6-oxo-5,6,7,8-tetra-hidropteridin-2-il]amino}-3-

metoxibenzoil)amino]butanoato de ciclopentila

-boc

Em uma solução de ácido 4-{[(7f?)-8-ciclopentil-7-etil-5-metil-6- oxo-5,6,7,8-tetra-hidro-pteridin-2-il]amino}-3-metoxibenzóico [Intermediário 2C] (200 mg, 0,47 mmol) em DCM (5 ml), foi adicionado tetrafluoro-borato de 0-benzotriazol-1-il-A/,A/,/\/',/V-tetrametilurônio (166 mg, 0,52 mmol) e DIPEA (0,16 ml, 0,94 mmol). A mistura reacional foi agitada em TA durante 30 mi- nutos antes de adicionar (2S)-4-amino-2-[(terc- butoxicarbonil)amino]butanoato de ciclopentila [Intermediário 7A] (269 mg, 0,84 mmol). A mistura reacional foi agitada em TA durante mais 18 horas, em seguida diluída com DCM (20 ml), e lavada com água (2 χ 20 ml). A ca- mada orgânica foi seca (MgSO4) e concentrada sob pressão reduzida para produzir um óleo amarelo. A purificação por cromatografia de coluna (EtOAc a 100%) proporcionou o produto como um sólido amarelo (228 mg, 70% de rendimento). ESMS: m/z 694 [M+H]+.

Estágio 2- (2S)-2-Amino-4-[(4-{[(7R)-8-ciclopentil-7-etil-5-metil-6-oxo- 5,6,7,8-tetra-hidroptendin-2-il]amino}-3-metoxibenzoil)amino]butanoato de ciclopentila

(2S)-2-[(terc-Butoxicarbonil)amino]-4-[(4-{[(7R)-8-ciclopentil-7-

etil-5-metil-6-oxo-5,6,7,8-tetra-hidropteridin-2-il]amino}-3- metoxibenzoil)amino]butanoato de ciclopentila (228 mg, 0,33 mmol) foi dis- solvido em DCM (20 ml), e HCI a 4M /dioxano (10 ml), foram adicionados. A mistura reacional foi agitada em TA durante 2 horas, e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi apreendido em EtOAc (50 ml), lavado com Na2CO3 sat. (25 ml), salmoura (25 ml). A camada orgânica foi seca (MgSO4) e concentrada sob pressão reduzida para proporcionar o exemplo título co- mo um sólido branco (180 mg, 92% de rendimento). ESMS: m/z 594 [M+H]+. 1H RMN (300 MHz, CDCI3) δ: 8,55 (1H, d, J = 8,4 Hz), 7,70 (2H, br s), 7,62 (1H, s), 7,48 (1H, d, J = 1,5 Hz), 7,32 (1H, dd, J = 2,0, 8,6 Hz), 5,23-5,19 (1H, m), 4,55 - 4,49 (1H, m), 4,24 (1H, dd, J = 3,6, 7,8 Hz), 3,99 (3H, s), 3,92 - 3,80 (1H, m), 3,59 - 3,47 (2H, m), 3,35 (3H, s), 2,14-1,60 (22H, m) e 0,90 (3H, t, J = 7,4 Hz).

Os exemplos na seguinte tabela foram preparados pelos méto- dos análogos ao método descrito acima (esquema 21) utilizando os interme- diários apropriados. Exem- plo Estágio 1 Inter- mediá- rios utili- zados Nome ESMS 6 2C&8 (4S)-4-[(4-{[(7R)-8-Ciclopentil-7-etil-5- meti l-6-oxo-5,6,7,8-tetra-h id ropte rid in-2- il]amino}-3-metoxibenzoil)amino]-L- prolinato de ciclopentila m/z 606 [M+H]+ 7 2C &6A 4-[(4-{[(7/?)-8-Ciclopentil-7-etil-5-metil-6- oxo-5,6,7,8-tetra-hidropteridin-2-il]amino}- 3-metoxibenzoil)amino]-L-fenilalaninato de ciclopentila m/z 656 [M+H]+ 8 2C &7B A/6-(4-{[(7R)-8-Ciclopentil-7-etil-5-metil-6- oxo-5,6,7,8-tetra-hidropteridin-2-il]amino}- 3-metoxibenzoil)lisinato de ciclopentila m/z 622 [M+H]+ 9 2C & 10 0-( 4-{[(4-{[(7R)-8-Ciclopentil-7-etil-5- meti Ι-6-ΟΧΟ-5,6,7,8-tetra-hid ropterid in-2- il]amino}-3- metoxibenzoil)amino]metil}fenil)-L- homosserinato de ciclopentila m/z 700 [M+H]+ 2C&9 3-(1-{2-[(4-{[(7f?)-8-Ciclopentíl-7-etil-5- metil-6-oxo-5,6,7,8-tetra-hidropteridin-2- il]amino}-3- metoxibenzoil)amino]etil}piperidin-4- il)alaninato de ciclopentila m/z 691 [M+H]+ *11 2C &6B 4-[(4-{[(7R)-8-Ciclopentil-7-etil-5-metil-6- oxo-5,6,7,8-tetra-hidropteridin-2-il]amino}- 3-metoxibenzoil)amino]-L-fenilalaninato de íerc-butila m/z 644 [M+H]+

* Para alcançar a desproteção de Boc seletiva [esquema 21 estágio 2], a mistura foi agitada a O0C durante 30 minutos em vez de TA durante 2 horas. Exemplo 12

0-(4-([(4-([(7ffl-8-Ciclopentil-7-etil-5-metil-6-oxo-5.6.7.8-tetra-hidropteridin-2- illamino)-3-metoxibenzoinamino1metil)fenin-L-homosserinato de ferc-butila O

NH2 Yf

O /O

O exemplo titulado foi preparado de acordo com o procedimento geral esboçado abaixo (esquema 22).

Intermediários 11, 12A, 12B ou 12C Q

i? I TBTU1 DIPEA ^/Ν^,Ο

.N^O DCM, ta R1 L jf T

H 1 ^u

Intermediário 2C

HO N

O

Estágio 2

2 ΤΓ^Ι

A H

Esquema 22

Estágio 1 - A/-[(Benzilóxi)carbonil]-0-(4-{[(4-{[(7R)-8-ciclopentil-7-etil-5-metil-

6-oxo-5,6,7,8-tetra-hidropteridin-2-il]amino}-3-metoxibenzoil)amino]-

metil}fenil)-L-homosserinato de terc-butila

O

Xbz

HN

Procedimento como no [esquema 21 estágio 1] utilizando os intermediários 2C e 11.

Estágio 2- 0-(4-{[(4-{[(7R)-8-Ciclopentil-7-etil-5-metil-6-oxo-5,6,7,8-tetra- hidropteridin-2-il]amino}-3-metoxibenzoil)amino]metil}fenil)-L-homosserinato

de terc-butila Em uma solução de A/-[(benzilóxi)carbonil]-0-(4-{[(4-{[(7R)-8- ciclopentil-7-etil-5-metil-6-oxo-5,6,7,8-tetra-hidropteridin-2-il]amino}-3- metoxibenzoil)amino]-metil}fenil)-L-homosserinato de ferc-butila (132 mg, 0,16 mmol) em EtOH (5 ml) sob uma atmosfera de nitrogênio foi adicionado Pd/C (30 mg, 20% em p/p). A mistura reacional foi evacuada e colocada sob uma atmosfera de H2. Isto foi repetido mais duas vezes, e a reação permiti- da agitar sob uma atmosfera de H2 durante 1 hora. A mistura reacional foi filtrada através de Celite®, e o filtrado concentrado sob pressão reduzida e purificado por cromatografia de coluna (10% de MeOH / DCM) para produzir o exemplo titulado como um sólido branco (42 mg, 38% de rendimento). ESMS: m/z 688 [M+H]+. 1H RMN (300 MHz, CDCI3) δ: 8,52 (1H, d, J = 8,5Hz), 7,56 - 7,70 (2H, m), 7,48 (1H, d, J = 1,3Hz), 7,27 - 7,32 (2H, m), 6,88 (2H, d, J = 8,5Hz), 6,53 (1H, t, J = 5,5Hz), 4,44 - 4,62 (3H, m), 4,21 (1H, dd, J = 7,7, 3,6Hz), 3,95 (3H, s), 3,59 (1H, dd, J = 7,6, 5,0Hz), 3,31 (3H, s), 2,08 -2,28 (4H, m), 1,66-2,01 (10H,m), 1,47 (9H, m) e 0,87 (3H, t, J = 7,5Hz).

Os exemplos na seguinte tabela foram preparados pelos méto-

dos análogos ao método descrito acima (esquema 22) utilizando os interme- diários apropriados.__

Exem- plo Estágio 1 In- termediários utilizados Nome ESMS 13 2C & 12A 4-(4-{[(7f?)-8-Ciclopentil-7-etil-5-metil- 6-0x0-5,6,7,8-tetra-h id ropterid in-2- il]amino}-3-metoxibenzoil)piperazina- 2-carboxilato de ciclopentila m/z 606 [M+H]+ 14 2C & 12B 4-{2-[(4-{[(7R)-8-Ciclopentil-7-etil-5- metil-6-oxo-5,6,7,8-tetra- hidropteridin-2-il]amino}-3- m/z 325 [(M+2)/2] + Exem- plo Estágio 1 In- termediários utilizados Nome ESMS metoxibenzoil)amino]etil}piperazina- 2-carboxilato de ciclopentila 2C & 12C 4-{2-[(4-{[(7R)-8-Ciclopentil-7-etil-5- metil-6-oxo-5,6,7,8-tetra- hidropteridin-2-il]amino}-3- metoxibenzoil)amino]etil}piperazina- 2-carboxilato de íerc-butila m/z 637 [M+H]+

Exemplo 16

(2S)-2-Amino-4-(3-[(4-([(7/?)-8-ciclopentil-7-etil-5-metil-6-oxo-5.6,7.8-tetra- hidropteridin-2-inaminoV3-metoxibenzoil)aminolpirrolidin-1-il>bu^ de

ciclopentila

Ν Υ^Π N V-

H

O exemplo titulado foi preparado de acordo com o procedimento geral esboçado abaixo (esquema 23).

w

XXi1A

Ò

N-»,

TBTU, DIPEA, DCM v^vN Estágio 1

Intermediário 2C

N^W" H ò

HCI a 4M dioxano

Estágio 2

H

/N! 0 N

N

Λ

N N N H

ó

O-

O NH.

Nal, K2CO3, DMF í—Intermediário 3A ου 4A NHBoc

Estágio 3

1

Ok

J^o

N N'

4M HCI/Dioxane

Estágio 4

N'—.

a,

ó

Il Ϊ

I

N N' "N H

ò Esquema 23

Estágio 1 - 3-[(4-{[(7/^)-8-Ciclopentil-7-etil-5-metil-6-oxo-5,6,7,8-tetra- hidropteridin-2-il]amino}-3-metoxibenzoil)amino]pirrolidina-1-carboxilato de terc-butila

Em uma solução de ácido 4-{[(7f?)-8-ciclopentil-7-etil-5-metil-6-

oxo-5,6,7,8-tetra-hidropteridin-2-il]amino}-3-metoxibenzóico [Intermediário 2C] (200 mg, 0,47 mmol) em DCM (10 ml), foi adicionado TBTU (170 mg, 0,52 mmol) e DIPEA (163 μΙ_, 0,94 mmol). A mistura foi agitada em TA du- rante 30 minutos. 3-Aminopirrolidina-1-carboxilato de terc-butila (98 μΙ, 0,56 mmol), foi adicionado, e a mistura reacional foi agitada em TA durante mais 2 horas. A mistura foi diluída com DCM (10 ml), lavada com água (2 χ 20 ml) e salmoura (10 ml). A camada orgânica foi seca (MgSO4) e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia de coluna (0- 1% de MeOH em DCM), para proporcionar o produto como um sólido amare- Io (220 mg, 78% de rendimento). ESMS: m/z 594 [M+Hf.

Estágio 2- 4-{[(7f?)-8-Ciclopentil-7-etil-5-metil-6-oxo-5,6,7,8-tetra-

hidropteridin-2-il]amino}-3-metóxi-N-pirrolidin-3-ilbenzamida

H

N—■ O

3-[(4-{[(7R)-8-Ciclopentil-7-etil-5-metil-6-oxo-5,6,7,8-tetra- hidropteridin-2-il]amino}-3-metoxibenzoil)amino]pirrolidina-1-carboxilato de terc-butila (22 mg, 0,36 mmol) foi dissolvido em HCI a 4M / dioxano (6 ml) e agitado em TA durante 1 hora. A reação foi concentrada sob pressão redu- zida para proporcionar o produto como um sólido branco (120 mg, 68% de rendimento). ESMS: m/z 494 [M+H]+.

Estágio 3- (2S)-2-[(terc-butoxicarbonil)amino]-4-{3-[(4-{[(7R)-8-ciclopentil-7- etil-5-metil-6-oxo-5,6,7,8-tetra-hidropteridin-2-il]amino}-3- metoxibenzoil)amino] pirrolidin-1 -il}butanoato de ciclopentila

N-boc

O

Cl

a ri χ

H

ò

Em uma solução agitada de 4-{[(7R)-8-ciclopentil-7-etil-5-metil-6-

oxo-5,6,7,8-tetra-hidropteridin-2-il]amino}-3-metóxi-N-pirrolidin-3-ilbenzamida (120 mg,0,25 mmol) em DMF (5 ml), foi adicionado K2CO3 (140 mg, 1,0 mmol), Nal (75 μΙ, 0,5 mmol) e (S)-ciclopentila (2S)-4-bromo-2-[(ferc- butoxicarbonil)amino]butanoato [intermediário 3A] (130 mg, 0,37 mmol). A mistura reacional foi agitada durante a noite a 80°C e em seguida diluída com EtOAc (10 ml). A mistura foi lavada com água (2 χ 10 ml) e salmoura (10 ml). A camada orgânica foi seca (MgSO4) e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia de coluna (0-2% de MeOH/DCM), para proporcionar o produto como um sólido amarelo pálido (140 mg, 71% de rendimento). ESMS: m/z 522 [M+H]+.

Estágio 4- (2S)-2-amino-4-{3-[(4-{[(7R)-8-ciclopentil-7-etil-5-metil-6-oxo- 5,6,7,8-tetra-hidropteridin-2-il]amino}-3-metoxibenzoil)amino]pirrolidin-1- il}butanoato de ciclopentila

Oq

α

N N

H

ò

(2S)-2-[(íerc-butoxicarbonil)amino]-4-{3-[(4-{[(7R)-8-ciclopentil-7- etil-5-metil-6-oxo-5,6,7,8-tetra-hidropteridin-2-il]amino}-3-

metoxibenzoil)amino] pirrolidin-1-iljbutanoato de ciclopentila (140 mg, 0,18 mmol) foi dissolvido em HCI/dioxano a 4M (5 ml) e agitada em TA durante 2 horas. A reação foi concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi tritura- do com Et2O, filtrado e seco sob pressão reduzida, para proporcionar o e- xemplo título como um sólido branco (60 mg, 50% de rendimento). ESMS: m/z 663 [M+H]+. 1H RMN (300 MHz, CDCI3) δ: 8,56 (1H, d, J = 8,5 Hz), 7,69 (1H, s), 7,61 (1H, s), 7,51 (1H, d, J = 1,7 Hz), 7,44 (1H, d, J = 8,7Hz), 6,66 - 6,72 (1H, m), 5,09 - 5,16 (1H, m), 4,47 - 4,69 (2H, m), 4,23 (1H, dd, J = 7,9, 3,8 Hz), 3,99 (3H, s), 3,48 (1H, t, J = 6,2 Hz), 3,34 (3H,s), 2,95 - 3,05 (1H, m), 2,83 (1H, d, J = 10,0 Hz), 2,46 - 2,71 (3H, m), 2,11 - 2,45 (3H, m), 1,47 - 2,05 (22H, m), 0,89 (3H, t, J = 7,5 Hz).

O exemplo na seguinte tabela foi preparado pelos métodos aná-

logos ao método descrito acima (esquema 23) utilizando os intermediários apropriados.__

Exem- plo Estágio 3 In- termediário utilizado Nome ESMS 17 4A (2R)-2-amino-4-{3-[(4-{[(7R)-8- ciclopentil-7-etil-5-metil-6-oxo- 5,6,7,8-tetra-hidropteridin-2-il]amino}- 3-metoxibenzoil)amino]pirrolidin-1- il}butanoato de ciclopentila m/z 663 [M+H]+

Exemplo 18

(2S)-2-Amino-4-(6-í(4-([(7R)-8-ciclopentil-7-etil-5-metil-6-oxo-5.6,7.8-tetra- hidropteridin-2-inamino)-3-metoxibenzoil)amino1-3-azabicicloí3.1.01hex-3-il> butanoato de ciclopentila

O exemplo titulado foi preparado de acordo com o procedimento esboçado abaixo (esquema 24): HO

I

H

TBTU, DI ΡΕΑ, DCM

boc-

0

Intermediário 2C

^boc

N

A

Estágio 1

Intermediário 3Α K2CO3 Nal, DMF

N

-N

Λ ,,

N N N

H

Ò

HCI a 4Μ / dioxano

Estágio 2

nCK

HCI a 4M / dioxano NH,

ο-'Λ

ó

Estágio 3

XCC

H ò

Estágio 4

N N

ò

Esquema 24

Estágio 1 - 6-[(4-{[(7f?)-8-Ciclopentil-7-etil-5-metil-6-oxo-5,6,7,8-tetra- hidropteridin-2-il]amino}-3-metoxibenzoil)am^ carboxilato ferc-butila Em uma solução agitada de ácido 4-{[(7ft)-8-ciclopentil-7-etil-5-

metil-6-oxo-5,6,7,8-tetra-hidropteridin-2-il]amino}-3-metoxibenzóico [Interme- diário 2C] (200 mg, 0,47 mmol) em DCM (10 ml), foi adicionado DIPEA (0,16 ml, 0,94 mmol) e TBTU (167 mg, 0,52 mmol). A reação agitada em TA du- rante 30 minutos antes da adição de 6-amino-3-azabiciclo[3.1.0]hexano-3- carboxilato de terc-butila [W02006123121] (111 mg, 0,56 mmol). A reação foi agitada durante um adicional de 30 minutos e em seguida a mistura foi diluída com DCM (15 ml) e lavada com água (2x5 ml). A camada orgânica foi seca (MgSO4) e concentrada sob pressão reduzida. O sólido resultante foi triturado com Et20, para proporcionar o produto como um sólido branco (230 mg, 81 % de rendimento). ESMS: m/z 606 [M+H]+.

Estágio 2- N-3-azabiciclo[3.1.0]hex-6-il-4-{[(7R)-8-ciclopentil-7-etil-5-metil-6- oxo-5,6,7,8-tetra-hidropteridin-2-il]amino}-3-metoxibenzamida

6-[(4-{[(7R)-8-Ciclopentil-7-etil-5-metil-6-oxo-5,6,7,8-tetra- hidropteridin-2-il]amino}-3-metoxibenzoil)amino]-3-azabiciclo[3.1.0]hexano-3-

carboxilato de terc-butila (230 mg, 0,38 mmol) foi suspenso em HCI/dioxano a 4M (5 ml), e a mistura reacional foi agitada em TA durante 1,5 hora e con- centrada sob pressão reduzida. O resíduo foi triturado com EÍ20 e em se- guida dividido entre DCM (5 ml) e Na2CO3 sat. (5 ml). A camada orgânica lavada com Na2CO3 sat., seca (MgSO4) e concentrada sob pressão reduzida para proporcionar o produto como um sólido branco (152 mg, 80% de rendi- mento). ESMS: m/z 506 [M+H]+.

Estágio 3- (2S)-2-[(íerc-butoxicarbonil)amino]-4-{6-[(4-{[(7R)-8-ciclopentil-7- etil-5-metil-6-oxo-5,6,7,8-tetra-hidropteridin-2-il]amino}-3- metoxibenzoil)amino]-3-azabiciclo[3.1.0]hex-3-il}butanoato de ciclopentila.

Em uma solução agitada de /\/-3-azabiciclo[3.1.0]hex-6-il-4- {[(7R)-8-ciclopentil-7-etil-5-metil-6-oxo-5,6,7,8-tetra-hidropteridin-2-il]amino}- 3-metoxibenzamida (152 mg, 0,30 mmol) em DMF (3 ml), foi adicionado (2S)-4-bromo-2-[(terc-butoxicarbonil)amino]butanoato de ciclopentila [Inter- mediário 3A] (157 mg, 0,45 mmol), K2C03 (166 mg, 1,20 mmol) e Nal (90 mg, 0,60 mmol). A mistura foi aquecida a 80°C durante 24 horas. A mistura reacional foi concentrada sob pressão reduzida, o resíduo resultante foi dis- solvido em EtOAc (10 ml) e lavado com salmoura (10 ml). A camada orgâni- ca foi seca (MgSO4) e concentrada sob pressão reduzida para proporcionar o produto do título como um sólido marrom (228 mg, 98% de rendimento). ESMS: m/z 775 [M+H]+.

Estágio 4- (2S)-2-Amino-4-{6-[(4-{[(7R)-8-ciclopentil-7-etil-5-metil-6-oxo- 5,6,7,8-tetra-hidropteridin-2-il]amino}-3-metoxibenzoil)amino]-3- azabiciclo[3.1.0]hex-3-il} butanoato de ciclopentila. (2S)-2-[(íerc-Butoxicarbonil)amino]-4-{6-[(4-{[(7f?)-8-ciclopentil-7-

etil-5-metil-6-oxo-5,6,7,8-tetra-hidropteridin-2-il]amino}-3- metoxibenzoil)amino]-3-aza biciclo[3.1.0]hex-3-il}butanoato de ciclopentila (228 mg, 0,29 mmol) foi suspenso em HCI/dioxano a 4M (5 ml), e a mistura reacional foi agitada em TA durante 1,5 hora e concentrada sob pressão re- duzida. O resíduo foi purificado utilizando HPLC preparativa e em seguida o produto concentrado através de secagem por congelamento durante 60 ho- ras. O sólido resultante foi dissolvido em DCM (5 ml) e Na2CO3 (5 ml) e agi- tado durante 20 minutos. A camada orgânica foi separada, seca (MgSO4) e concentrada sob pressão reduzida para proporcionar o exemplo título como um óleo claro (23 mg, 12% de rendimento). ESMS: m/z 675 [M+H]+. 1H RMN (300 MHz, CDCI3) δ. 8,47 (1H, d, J = 8,5Hz), 7,43 - 7,65 (3H, m), 7,25 (1H, d, J = 6,6Hz), 5,23 (2H, s), 5,16 (1H, t, J = 5,9 Hz), 4,34 - 4,49 (1H, m), 4,15 (1H, dd, J = 7,9, 3,8Hz), 3,92 (2H, s), 3,55 (1H, dd, J = 8,4, 3,9 Hz), 3,22 - 3,31 (4H, m), 3,18 (1H, d, J = 9,0Hz), 2,92 (1H, br. s), 2,57 (2H, t, J = 8,3Hz), 2,34 - 2,44 (2H, m), 1,38 - 2,15 (20H, m) e 0,81 (3H, t, J = 7,4Hz). Exemplo 19

5-(4-f(4-(í(7R)-8-Ciclopentil-7-etil-5-metil-6-oxo-5.6.7,8-tetra-hidro-pteridin-2- il1amino)-3-metoxibenzoil)amino1fenil}-L-norvalinato de ciclopentila

O composto do título foi preparado pela seguinte metodologia

(esquema 25):

o

HO N

" " Ó

EDC, DMAP, DIPEA THF

Estágio 1

Intermediário 2C

boc ι

boc

HN

HN

Pd/C, H2 MeOH o

O'

Estágio 3

HCI a 4M / dioxano DCM

Estágio 4

Esquema 25 Estágio 1 - 4-{[(7f?)-8-Ciclopentil-7-etil-5-metil-6-oxo-5,6,7,8-tetra-

hidropteridin-2-il]amino}-N-(4-iodofenil)-3-metoxibenzamida.

Em uma solução agitada de 4-{[(7R)-8-ciclopentil-7-etil-5-metil-6- oxo-5,6,7,8-tetra-hidropteridin-2-il] ácido amino}-3-metoxibenzóico [Interme- diário 2C] (200 mg, 0,47 mmol) em THF (4 ml), foi adicionado 4-iodoanilina (154 mg, 0,71 mmol), DMAP (6 mg, 0,05 mmol), DIPEA (0,25 ml, 1,41 mmol) e EDC (99 mg, 0,52 mmol). A mistura reacional foi agitada durante a noite em TA, lavada com água (10 ml), seca (MgSO4) e concentrada sob pressão reduzida. A purificação por cromatografia de coluna (de 40 a 50% de EtO- Ac/heptano) proporcionou o produto (81,9 mg, 28% de rendimento). ESMS m/z: 627 [M+Hf.

Estágio 2- (2S,4E)-2-[(terc-Butoxicarbonil)amino]-5-{4-[(4-{[(7R)-8- ciclopentil-7-etil-5-metil-6-oxo-5,6,7,8-tetra-hidropteridin-2-il]amino}-3- metoxibenzoil)amino]fenil}pent-4-enoato de ciclopentila. Em uma solução agitada de 4-{[(7R)-8-ciclopentil-7-etil-5-metil-6-

oxo-5,6,7,8-tetra-hidropteridin-2-il]amino}-N-(4-iodofenil)-3-metoxibenzamida (81,9 mg, 0,13 mmol) em DMF (3 ml), foi adicionado (2S)-2-[(terc- butoxicarbonil)amino] pent-4-enoato de ciclopentila [intermediário 13] (56 mg, 0,20 mmol), Pd(dppf)CI2 (11 mg, 0,01 mmol), Et3N (40 μΙ, 0,29 mmol) e NBu4Br (42 mg, 0,13 mmol). A mistura reacional foi aquecida a 120°C du- rante 1h no micro-ondas e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo bruto foi carregado em sílica e purificado por cromatografia de coluna (EtO- Ac a 40%/heptano) para produzir o produto (50 mg, 30% de rendimento). ESMS m/z: NI.

Estágio 3- /V-{[(terc-Butoxicarbonil)óxi]carbonil}-5-{4-[(4-{[(7R)-8-ciclopentila -7-etil-5-metil-6-oxo-5,6,7,8-tetra-hidropteridin-2-il]amino}-3- metoxibenzoil)amino] fenil}-L-norvalinato de ciclopentila.

(2S,4E)-2-[(terc-Butoxicarbonil)amino]-5-{4-[(4-{[(7R)-8- ciclopentil-7-etil-5-metil-6-oxo-5,6,7,8-tetra-hidropteridin-2-il]amino}-3- metoxibenzoil)amino] fenil}pent-4-enoato de ciclopentila (50 mg, 0,06 mmol) em MeOH (5 ml) foi passado através de um hidrogenador contínuo H-Cube®. (Thales Nanotechnology, HC - 2, SS). A reação foi realizada utilizando um CatCart® de 30mm (10% de Pd/C) em modo de H2 completo. Uma taxa de fluxo de 1ml_/min foi mantida durante 30 min., com uma temperatura de 25°C e pressão de H2 de 0,1 MPa 1 bar. A solução foi em seguida evaporada até a secura, para proporcionar o produto (50 mg, 100% de rendimento). ESMS m/z: 784 [M+H]+.

Estágio 4- 5-{4-[(4-{[(7R)-8-ciclopentil-7-etil-5-metil-6-oxo-5,6,7,8-tetra- hidropteridin-2-il]amino}-3-metoxibenzoil)amino]fenil}-L-norvalinato de ciclo- pentila.

Em uma solução de A/-{[(terc-butoxicarbonil)óxi]carbonil}-5-{4- [(4-{[(7R)-8-ciclopentila-7-etil-5-metil-6-oxo-5,6,7,8-tetra-hidropteridin-2-

il]amino}-3-metoxibenzoil)amino] fenil}-L-norvalinato de ciclopentila (25 mg, 0,03 mmol) em DCM (1 ml), foi adicionado HCI/dioxano a 4M (30(1, 0,12 mmol). A mistura reacional foi agitada em TA durante 1 hora e evaporada sob pressão reduzida. A purificação por HPLC preperativa proporcionou o exemplo do título como um sólido branco (3 mg, 14% de rendimento). ESMS m/z: 342 [(M+2)/2]+. 1H RMN (300 MHz, MeOD) δ; ppm 8,14 (1H, d, J = 8,1 Hz), 7,66 - 7,78 (4H, m), 7,26 - 7,54 (3H, m), 5,37 (1H, dd, J = 4,0, 1,9 Hz), 4,53 (1H, dd, J = 6,8, 3,4 Hz), 4,45 (1H, t, J = 8,2 Hz), 4,09 (2H, s), 3,38 (3H, s), 2,73 - 2,95 (2H, m), 1,90 - 2,21 (10H, m), 1,62-1,87 (12H, m) e 0,94 (3H, t, J = 7,5 Hz). Exemplo 20

(2S,4E)-2-amino-5-{4-[(4-{[(7f?)-8-ciclopentil-7-etil-5-metil-6-oxo-5,6,7,8-tetra- hidropteridin-2-il]amino}-3-metoxibenzoil)amino]fenil}pent-4-enoato de ciclo- pentila

I-LNL ^ ^ ^

O |

N^O

O composto do título foi preparado pela seguinte metodologia

(esquema 26): boc HN

Η,N

CT O

ό

^""N N' "N' O Η

HCl a 4Μ /dioxano DCM

Estágio 1

cr o

ó

» ι riLo

^vN N N' O H

Ó " ~ " " ò

Esquema 25 Estágio 2

Esquema 26

Estágio 1 - (2S,4E)-2-Amino-5-{4-[(4-{[(7/?)-8-ciclopentil-7-etil-5-metil-6-oxo- 5,67,8-tetra-hidropteridin-2-il]amino}-3-metoxibenzoil)amino]fenil}pent-4- enoato de ciclopentila Em uma solução agitada de (2S,4E)-2-[(ferc-

butoxicarbonil)amino]-5-{4-[(4-{[(7R)-8-ciclopentil-7-etil-5-metil-6-oxo-5,6,7,8- tetra-hidropteridin-2-il]amino}-3-metoxibenzoil)amino]fenil}pent-4-enoato de ciclopentila [esquema 25, estágio 2] (36 mg, 0,06 mmol) em DCM (2 ml), foi adicionado HCI/dioxano a 4M (20 μΙ_, 0,08 mmol). A mistura reacional foi agitada em TA durante 2 horas, concentrada sob pressão reduzida e redis- solvida em DCM (10 ml). A camada orgânica foi lavada com NaHCO3 a 1M (10 ml), seca (MgSO4) e evaporada até a secura. A purificação por HPLC preperativa proporcionou o exemplo titulado como um óleo amarelo (3 mg, 10% de rendimento). ESMS m/z: 342 [M/2]+. 1H RMN (300 MHz, MeOD) δ: 7,55 - 7,62 (1H, m), 7,39 - 7,51 (4H, m), 6,61 (1H, d, J = 15,6 Hz), 6,17 (1H, ddd, J = 15,4, 7,6, 7,3 Hz), 5,26-5,34 (1H, m), 4,39 (1H, dd, J = 6,3, 3,3 Hz), 4,32 (1H, t, J = 8,8 Hz), 4,17 (1H, t, J = 6,2 Hz), 3,25 (3H, s), 2,83 (2H, t, J = 6,7 Hz), 1,79 - 2,06 (9H, m), 1,54-1,78 (9H, m) e 0,86 (3H, t, J = 7,4 Hz). Exemplo 21

5-(4-[(4-([(7R)-8-Ciclopentil-7-etil-5-metil-6-oxo-5.6.7,8-tetra-hidropteridin-2- inamino>-3-metoxibenzoil)amino]fenil>-4-hidróxi-L-norvalinato de ciclopentila

OH

cr O

O composto do título foi preparado pela seguinte metodologia (esquema 27): boc

boc

ò "

BH3SMe2 THF1 EtOH1 NaBO3

Estágio 1

ò "

HCI a 4M / dioxano Estágio 1

^^^N N N ò

Esquema 27

Estágio 1 - A/-(ferc-butoxicarbonil)-5-{4-[(4-{[(7R)-8-ciclopentil-7-etil-5-metil- 6-0X0-5,6,7,8-tetra-hidropteridin-2-il]amino}-3-metoxibenzoil)amino]fenil}-4- hidróxi-L-norvalinato de ciclopentila.

Em uma solução de (2S,4E)-2-[(ferc-butoxicarbonil)amino]-5-{4- [(4-{[(7R)-8-ciclopentil-7-etil-5-metil-6-oxo-5,6,7,8-tetra-hidropteridin-2- il]amino}-3-metoxibenzoil)amino]fenil}pent-4-enoato de ciclopentila [esquema 25, estágio 2] (130 mg, 0,17 mmol) em THF (2 ml) a O0C foi adicionado com- plexo de borano-dimetilsulfeto (80ul, 0,87 mmol). A mistura foi agitada du- rante 5 horas a 0°C antes de adicionar etanol (0,3 ml), água (0,27 ml) e te- traidrato de perborato de sódio (133 mg, 0,87 mmol). A reação foi agitada a 0°C durante um adicional de 3 horas e em seguida em TA durante 8 horas. A mistura reacional foi concentrada, extraída em EtOAc (3 χ 50 ml), seca (MgSO4) e concentrada para produzir o produto (90 mg, 75% de rendimen- to). ESMS: m/z 800 [M+H]+.

Estágio 2- 5-{4-[(4-{[(7/?)-8-Ciclopentil-7-etil-5-metil-6-oxo-5,6,7,8-tetra- hidro-pteridin-2-il]amino}-3-metoxibenzoil)amino]fenil}-4-hidróxi-L-norvalinato de ciclopentila

Procedimento como no [esquema 26, estágio 2]

ESMS: m/z 700 [M+Hf. 1H RMN (300 MHz, MeOD) δ: 8,12 (1 Η, d, J = 8,3 Hz), 7,74 - 7,66 (5H, m), 7,40 (2 H, dd J = 1,8, 8,6Hz), 5,31 (1 H, m), 4,49 - 4,38 (3H, m) 4,04 (3 H, s), 3,33 (3H, s), 3,10 - 3,09 (2H, m), 2,17-1,62 (22H, m) e 0,89 (3 H, t, J = 7,5 Hz). Exemplo 22 (2S)-2-Amino-4-{4-[(4-(f(7f?)-8-ciclopentil-7-etil-5-metil-6-oxo-5.6,7.8-tetra- hidropteridin-2-il1amino)-3-metoxibenzoil)amm^ de

ciclopentila

O exemplo titulado foi preparado de acordo com o procedimento

geral esboçado abaixo (esquema 28):

TBTU, DIPEA DCM1 rt

O | bocv

v^x ò

Ό

BocN

α

R1

Intermediário 2C-2E

Estágio 1

H ò

4M HCI / dioxane, rt

R2 O O

Estágio 2

R3,

α

Intermediário 3A-4B I K,C03, Nal, DMF, 40 °C

Ό

R1

Método A = HCI a 4M / dioxano, ta ou

Método B = EtOAc1 20% PdOH1 H2 R2

" ò

Estágio 3

R1

I

Al

N N N' H

ΙγΟ

ò

Estágio 4

H,N

r" ó

Esquema 28

Estágio 1 - 4-[(4-{[(7f?)-8-Ciclopentil-7-etil-5-metil-6-oxo-5,6,7,8-tetra- hidropteridin-2-il]amino}-3-metoxibenzoil)amino]piperidina-1-carboxilato de terc-butila Em uma suspensão de ácido 4-{[(7f?)-8-ciclopentil-7-etil-5-metil- 6-0X0-5,6,7,8-tetra-hidropteridin-2-il]amino}-3-metoxibenzóico [Intermediário 2C] (500 mg, 1,18 mmol) em DCM (20 ml), foi adicionado TBTU (415 mg, 1,29 mmol) e DIPEA (0,41 ml, 2,35 mmols). A mistura reacional foi agitada em TA durante 30 minutos e em seguida 4-aminopiperidina-1-carboxilato de terc-butila (282 mg, 1,41 mmol), foi adicionado. A mistura reacional foi agi- tada em TA durante mais 30 minutos e em seguida diluída com DCM (30 ml). A solução foi lavada com água (2 χ 30 ml), seca (MgSO4) e concentra- da sob pressão reduzida para produzir um óleo marrom espesso. A tritura- ção com Et20/heptano (1:3) proporcionou o produto como um sólido bege (528 mg, 74% de rendimento). ESMS: m/z 608 [M+H]+. Estágio 2- 4-{[(7/?)-8-ciclopentil-7-etil-5-metil-6-oxo-5,6,7,8-tetra-

hidropteridin-2-il]amino}-3-metóxi-N-piperidin-4-ilbenzamida

4-[(4-{[(7R)-8-Ciclopentil-7-etil-5-metil-6-oxo-5,6,7,8-tetra- hidropteridin-2-il]amino}-3-metoxibenzoil)amino]piperidina-1-carboxilato de terc-butila (528 mg, 0,87 mmol) foi suspenso em uma solução de H- Cl/dioxano a 4M (10 ml). A mistura reacional foi agitada em TA durante 1 hora e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi triturado com Et2O e em seguida dividido entre DCM (100 ml) e Na2CO3 sat. (50 ml). A camada orgânica foi separada, lavada com Na2CO3 sat. (50 ml), seca (MgSO4) e

10

• 15

concentrada sob pressão reduzida para proporcionar o produto como um óleo amarelo espesso que solidificou-se em repouso (407 mg, 92% de ren- dimento). ESMS: m/z 508 [M+H]+.

Estágio 3- (2S)-2-[(terc-butoxicarbonil)amino]-4-{4-[(4-{[(7R)-8-ciclopentil-7- etil-5-metil-6-oxo-5,6,7,8-tetra-hidropteridin-2-il]amino}-3- metoxibenzoil)amino]piperidin-1-il}butanoato de ciclopentila.

Em uma solução de 4-{[(7R)-8-ciclopentil-7-etil-5-metil-6-oxo- 5,6,7,8-tetra-hidropteridin-2-il]amino}-3-metóxi-N-piperidin-4-ilbenzamida (100 mg, 0,20 mmol) em DMF (2 ml), foi adicionado (2S)-4-bromo-2-[(terc- butoxicarbonil)amino]butanoato de ciclopentila [Intermediário 3A] (103 mg, 0,30 mmol), K2CO3 (109 mg, 0,79 mmol) e Nal (59 mg, 0,40 mmol). A mistu- ra reacional foi agitada a 80°C durante 15 horas, diluída com EtOAc (20 ml), lavada com água (2 χ 20 ml), salmoura (20 ml) e seca (MgSO4). O solvente foi concentrado sob pressão reduzida para produzir um óleo amarelo. A pu- rificação por cromatografia de coluna (5% de MeOH/DCM) proporcionou o produto como um sólido branco (86 mg, 56% de rendimento). ESMS: m/z 777 [M+H]+.

Estágio 4 (Método A)- (2S)-2-Amino-4-{4-[(4-{[(7R)-8-ciclopentil-7-etil-5- metil-6-oxo-5,6,7,8-tetra-hidropteridin-2-il]amino}-3- metoxibenzoil)amino]piperidin-1-il}butanoato de ciclopentila.

(2S)-2-[(íerc-Butoxicarbonil)amino]-4-{4-[(4-{[(7R)-8-ciclopentil-7- etil-5-metil-6-oxo-5,6,7,8-tetra-hidropteridin-2-il]amino}-3- metoxibenzoil)amino]piperidin-1-il}butanoato de ciclopentila (86 mg, 0,11 mmol) foi suspenso em uma solução de HCI/dioxano a 4M (5 ml). A mistura reacional foi agitada em TA durante 20 minutos e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi triturado com Et2O e em seguida dividido entre DCM (25 ml) e Na2CO3 sat. (25 ml). A camada orgânica foi separada, seca (Mg- SO4) e concentrada sob pressão reduzida para proporcionar o exemplo título como um sólido branco (49 mg, 65% de rendimento). ESMS m/z 677 [M+H]+. 1H RMN (300 MHz, CD3OD) 8,49 (1H, d, J = 9,0 Hz), 7,77 (1H, s), 7,50 - 7,47 (2H, m), 5,24-5,19 (1H, m), 4,54 - 4,47 (1H, m), 4,28 (1H, dd, J = 3,5, 7,7 Hz), 4,01 (3H, s), 3,95 - 3,87 (1H, m), 3,66 - 3,59 (1H, m), 3,32 (3H, s), 3,01 (2H, s), 2,50 (2H, t, J = 7,2 Hz), 2,19 - 2,10 (2H, m), 1,99-1,68 (23H, m) e 0,86 (3H, t, J = 7,5 Hz). Exemplo 23

5-(4-r(4-{f(7R)-8-Ciclopentil-7-etil-5-metil-6-oxo-5.6.7.8-tetra-hidropteridin-2-

inamino)-3-metoxibenzoiDamino]piperidin-1 -il)-L-norvalinato de terc-butila

o

O exemplo titulado foi preparado de acordo com o procedimento geral e metodologia esboçada acima (esquema 28)

Estágios de 1 a 3 Como esquema 28 utilizando intermediários 2C (estágio

1) e 3D (estágio 3).

A etapa de desproteção do estágio 4 foi realizada utilizando-se o

método B como esboçado abaixo.

Estágio 4 (Método B)- 5-{4-[(4-{[(7R)-8-Ciclopentil-7-etil-5-metil-6-oxo- 5,6,7,8-tetra-hidropteridin-2-il]amino}-3-metoxibenzoil)amino]piperidin-1-il}-L- norvalinato de terc-butila.

Em uma solução do produto do estágio 3; A/-[(benzilóxi)carbonil]- 5-{4-[(4-{[(7R)-8-ciclopentil-7-etil-5-metil-6-oxo-5,6,7,8-tetra-hidropteridin-2- il]amino}-3-metoxibenzoil)amino]piperidin-1 -il}-L-norvalinato de terc-butila (290 mg, 0,36 mmol) em EtOAc (6 ml), foi adicionado hidróxido de paládio (60 mg, 20% em p/p). O sistema foi evacuado e colocado sob uma atmosfe- ra de hidrogênio (utilizando um mecanismo de torneira de 3 maneiras e ba- lão preenchido com hidrogênio), isto foi duas vezes repetido, e a mistura foi permitida agitar durante 90 horas em TA sob uma atmosfera de hidrogênio. O sistema foi evacuado de hidrogênio e os resíduos de paládio filtrados em Celite®. O Celite® foi lavado completamente com EtOAc e os filtrados com- binados evaporados sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cro- matografia de coluna (EtOAc a 100% para remover as impurezas seguido por de 5 a 10% de MeOH / DCM para eluir o produto), para proporcionar o exemplo título como um sólido branco (37 mg, 15% de rendimento). ESMS: m/z 679 [M+H]+. 1H RMN (300 MHz, CDCI3) δ: 8,53 (1 Η, d, J = 8,5 Hz), 7,67 (1 Η, s), 7,58 (1 Η, s), 7,47 (1 Η, d, J = 1,5 Hz), 7,34 (1 Η, dd, J = 8,5,1,5 Hz), 6,45 (1 Η, d, J = 7,5 Hz), 4,50 (1 Η, t, J = 7,7 Hz), 4,21 (1 Η, dd, J = 7,8, 3,7 Hz), 4,00. 4,10 (1H, m), 3,97 (3 H, s), 3,31 - 3,44 (1 H, m), 3,32 (3 H, s), 2,95 (2 H, d, J = 8,9 Hz), 2,40 (2 H, t, J = 6,7 Hz), 1,59 - 2,21 (20 H, m), 1,45 (9 H, s) e 0,87 (3 H, t, J = 7,4 Hz). Os exemplos na seguinte tabela foram preparados pelos méto-

dos análogos ao método descrito acima (esquema 28) utilizando os interme-

E- Intermediá- rios utiliza- dos Mé- todo de ESMS xem Es- tágio 1 Es- tágio 3 está Nome pio gio 4 24 2C 3C A 5_{4-[(4-{[(7R)-8-ciclopentil-7-etil-5- metil-6-oxo-5,6,7,8-tetra-hidropteridin- 2-il]amino}-3- metoxibenzoil)amino]piperidin-1-il}-L- norvalinato de ciclopentila m/z 691 [M+H]+ 2C 3B B (2S)-2-amino-4-{4-[(4-{[(7R)-8- ciclopentil-7-etil-5-metil-6-oxo-5,6,7,8- tetra-hidropteridin-2-il]amino}-3- metóxi benzoil) amino]piperidin-1- m/z 665 [M+H]+ il}butanoato de t-Butila 26 2D 3B B (2S)-2-amino-4-{4-[(4-{[(7/?)-8- ciclopentil-7-etil-5-metil-6-oxo-5,6,7,8- tetra-hidropteridin-2-il]amino}-3- metilbenzoil) amino]piperidin-1 - iljbutanoato de t-Butila m/z 649 [M+H]+ 27 2C 4B A 5-{4-[(4-{[(7f?)-8-ciclopentil-7-etil-5- metil-6-oxo-5,6,7,8-tetra-hidropteridin- 2-il]amino}-3- metoxibenzoil)amino]piperidin-1-il}-D- norvalinato de ciclopentila m/z 691 [M+H]+ 28 2D 3A A (2S)-2-amino-4-{4-[(4-{[(7f?)-8- ciclopentil-7-etil-5-metil-6-oxo-5,6,7,8- tetra-hidropteridin-2-il]amino}-3- metilbenzoil) amino]piperidin-1- iljbutanoato de ciclopentila m/z 661 [M+H]+ 29 2E 3B B (2S)-2-amino-4-{4-[(4-{[(7fl)-8- ciclopentil-7-etil-5-metil-6-oxo-5,6,7,8- tetra-hidropteridin-2-il]amino}-3- fluorobenzoil)amino]piperidin-1- iljbutanoato t-Butila m/z 653 [M+Hf 2E 3A A (2S)-2-amino-4-{4-[(4-{[(7/?)-8- ciclopentil-7-etil-5-metil-6-oxo-5,6,7,8- tetra-hidropteridin-2-il]amino}-3- fluorobenzoil)amino lambari]piperidin- 1-iljbutanoato de ciclopentila m/z 665 [M+H]+ 31 2C 4A Um (2R)-2-amino-4-{4-[(4-{[(7/?)-8- ciclopentil-7-etil-5-metil-6-oxo-5,6,7,8- tetra-hidropteridin-2-il]amino}-3- metoxibenzoil) amino]piperidin-1 - iljbutanoato de ciclopentila m/z 677 [M+H]+

Exemplo 32

(2S)-2-amino-4-(4-f(4-U(7f?)-8-ciclopentil-7-etil-5-metil-6-oxo-5.6.7.8-tetra- hidropteridin-2-il1amino>-3-metoxibenzoil)aminolpiperidin-1-il)butanoato de (1 R^S.SR^-isopropil-S-metilciclo-hexila

O composto do título foi preparado pela seguinte metodologia (esquema 29):

o I

[Exemplo 22 Estágio 2 produto] STAB1 DCE

HN

O I

V<

XX0T^0

r

HN

Estágio 1

N ^^ nI0 I

r" ò

Intermediário 5

4M HCI / dioxane Estágio 2

.O

ò

N

Esquema 29

Estágio 1- (2S)-2-[(ferc-butoxicarbonil)amino] -4-{4-[(4-{[(7R)-8-ciclopentil-7- etil-5-metil-6-oxo-5,6,7,8-tetra-hidropteridin-2-il]amino}-3- metoxibenzoil)amino]piperidin-1-il}butanoato de (1 R,2S,5R)-2-isopropil-5- metilciclo-hexila

oxobutanoato de (1R,2S,5R)-2-isopropil-5-metilciclo-hexila [Intermediário 5] (140 mg, 0,39 mmol) em DCE (15 ml), foi adicionado 4-{[(7R)-8-ciclopentil-7- etil-5-metil-6-oxo-5,6,7,8-tetra-hidropteridin-2-il]amino}-3-metóxi-N-piperidin- 4-ilbenzamida [exemplo 22, estágio 2] (108 mg, 0,30 mmol). A solução foi agitada durante 30 min antes da adição de triacetóxi-boroidreto de sódio (193 mg, 0,91 mmol). A reação agitada durante um adicional de 18 horas em TA. NaHCO3 Sat.(10 ml), foi adicionado, e a reação agitada durante 20 minutos. DCM (10 ml), foi adicionado, e a camada orgânica separada. A camada aquosa foi extraída com DCM (2 χ 10 ml). As camadas orgânicas combinadas foram secas (MgSO4) e concentradas sob pressão reduzida. A purificação por cromatografia de coluna flash (2% de MeOH / DCM) propor- cionou o produto como um óleo claro (68 mg, 24% de rendimento). ESMS m/z 847 [M+H]+.

Estágio 2- (2S)-2-amino-4-{4-[(4-{[(7R)-8-ciclopentil-7-etil-5-metil-6-oxo- 5,6,7,8-tetra-hidropteridin-2-il]amino}-3-metoxibenzoil)amino]piperidin-1-

Em uma solução de (2S)-2-[(terc-butoxicarbonil)amino]-4- iljbutanoato de (1R,2S,5ft)-2-isopropil-5-metilciclo-hexila

Em uma solução de (2S)-2-[(terc-butoxicarbonil)amino] -4-{4-[(4- {[(7R)-8-ciclopentil-7-etil-5-metil-6-oxo-5,67,8-tetra-hidropteridin-2-il]amino}-

3-metoxibenzoil)amino]piperidin-1-il}butanoato de (1R,2S,5R)-2-isopropil-5- metilciclo-hexila (11 mg, 0,01 mmol) em DCM (1 ml), foram adicionados H- Cl/dioxano a 4M (1 ml). A solução foi agitada em TA durante 3 horas. A mistura foi em seguida concentrada sob pressão reduzida para produzir um exemplo título como um sólido branco (6,1 mg, 63% de rendimento). ESMS m/z 747 [M+H]+. 1HNMR (300 MHz1 MeOD) δ 7,90 (1H, d, J = 8,3Hz), 7,68 - 7,55 (3H, m), 4,56 - 4,47 (1H, m), 4,45 - 4,07 (4H, m), 4,01 (3H, s), 3,75 (2H, m), 3,67 (2H, s), 2,77 (1H, m), 2,64-1,06 (38H, m) e 082 (3H, d, J = 7,0Hz). Exemplo 33

4-f(4-(f(7/?)-8-ciclopentil-7-etil-5-metil-6-oxo-5,6.7.8-tetra-hidropteridin-2-

il1aminoV3-metoxibenzoil)amino1-L-fenilalanina

o

O composto do título foi preparado pela seguinte metodologia (esquema 30):

Esquema 30

Estágio 1 - 4-[(4-{[(7R)-8-ciclopentil-7-etil-5-metil-6-oxo-5,6,7,8-tetra- hidropteridin-2-il]amino}-3-metoxibenzoil)amino]-L-fenilalanina

Em 4-[(4-{[(7R)-8-ciclopentil-7-etil-5-metil-6-oxo-5,6,7,8-tetra- hidropteridin-2-il]amino}-3-metoxibenzoil)amino]-L-fenilalaninato de ciclopen- tila [Exemplo 7] (45 mg, 70 μίτιοΙ) em THF (3 ml), foi adicionado a uma solu- ção de hidróxido de lítio (8,4 mg, 0,35 mmol) em água (3 ml). A mistura rea- cional foi agitada durante a noite em TA e concentrada sob pressão reduzi- da. Água (4 ml), foi adicionada, e o pH foi ajustado em pH=5-6 com 1M de HCI. O aquoso foi extraído com n-butanol (3 x10 ml). As camadas orgâni- cas combinadas foram lavadas com água (5 ml), salmoura (5 ml), secas (MgSO4) e concentradas sob pressão reduzida. A purificação por HPLC preparativa proporcionou o exemplo de título como um sólido branco (37 mg, 90% de rendimento). ESMS m/z: 588 [M+H]+. 1H RMN (300 MHz, DMSO-d6) δ: 10,17 (1H, s), 8,48 - 8,75 (1H, m), 8,18-8,34 (4H, m), 7,83 (1H, s), 7,73 (2H, d, J = 8,7Hz), 7,61 - 7,67 (2H, m), 7,23 (2H, d, J = 8,5 Hz), 4,36 (1H, dd, J = 6,8, 3,2 Hz), 4,14 - 4,30 (2H, m), 3,96 (3H, s), 3,23 (3H, s), 3,07 (2H, d, J =6,4 Hz), 1,43 - 2,04 (10 H, m) e 0,76 (3 H, t, J = 7,4 Hz).

Os exemplos na seguinte tabela foram preparados pelo método

de hidrólise de éster descrito acima (esquema 30).

Éster N0 do Exemplo Nome ácido Ácido Exemplo Não. ESMS 1 4-{[(7ft)-8-Ciclopentil-7-etil-5-metil-6- oxo-5,6,7,8-tetra-hidropteridin-2- il]amino}-L-fenilalanina 34 m/z 439 [M+Hf 2 Ácido (2S,4E)-2-amino-5-(4-{[(7/?)-8- ciclopentil-7-etil-5-metil-6-oxo-5,6,7,8- tetra-hidropteridin-2-il]amino}fenil)pent- 4-enoico 35 m/z: 465 [M+H]+ 3 0-(4-{[(7R)-8-Ciclopentil-7-etil-5-metil-6- oxo-5,6,7,8-tetra-hidropteridin-2- il]amino}fenil)-L-homosserina 36 m/z 469 [M+H]+ 4 0-(4-{[(7R)-8-Ciclopentil-7-etil-5-metil-6- oxo-5,6,7,8-tetra-hidropteridin-2-il] ami- no}-3-metoxifenil)-L-homosserina 37 m/z 499 [M+Hf Ácido (2S)-2-amino-4-[(4-{[(7R)-8- ciclopentil-7-etil-5-metil-6-oxo-5,6,7,8- tetra-hidropteridin-2-il]amino}-3- metoxibenzoil)amino]butananóico 38 m/z 526 [M+H]+ Éster N0 do Exemplo Nome ácido Ácido Exemplo Não. ESMS 6 (4S)-4-[(4-{[(7f?)-8-Ciclopentil-7-etil-5- metil-6-oxo-5,6,7,8-tetra-hidropteridin-2- il]amino}-3-metoxibenzoil)amino]-L- prolina 39 m/z 538 [M+H]+ 8 N6-(4-{[(7tf)-8-ciclopentil-7-etil-5-metil-6- oxo-5,6,7,8-tetra-h id ropterid i n-2- il]amino}-3-metoxibenzoil)lisina 40 m/z 554 [M+H]+ 9 0-(4-{[(4-{[(7/?)-8-Ciclopentil-7-etil-5- meti l-6-oxo-5,6,7,8-tetra-h id ropte rid i n-2- il]amino}-3- metoxibenzoil)amino]metil}fenil)-L- homosserina 41 m/z 632 [M+H]+ 13 Ácido 4-(4-{[(7R)-8-Ciclopentil-7-etil-5- metil-6-oxo-5,6,7,8-tetra-hidropteridin-2- il]amino}-3-metoxibenzoil)piperazina-2- carboxílico 42 m/z 538 [M+H]+ 14 Ácido 4-{2-[(4-{[(7R)-8-Ciclopentil-7-etil- 5-metil-6-oxo-5,6,7,8-tetra-hidropteridin- 2-il]amino}-3-metoxibenzoil) ami- no]etil}piperazina-2-carboxílico 43 m/z 581 [M+H]+ 16 Ácido (2S)-2-amino-4-{3-[(4-{[(7R)-8- ciclopentil-7-etil-5-metil-6-oxo-5,6,7,8- tetra-hidropteridin-2-il]amino}-3- metoxibenzoil)amino]pirrolidin-1- iljbutanóico 44 m/z 595 [M+H]+ 18 Ácido (2S)-2-amino-4-{6-[(4-{[(7f?)-8- ciclopentil-7-etil-5-metil-6-oxo-5,6,7,8- tetra-hidropteridin-2-il]amino}-3- metoxibenzoil)amino]-3- 45 m/z 607 [M+H]+ Éster N0 do Exemplo Nome ácido Ácido Exemplo Não. ESMS azabiciclo[3.1.0]hex-3-il}butanóico 24 5-{4-[(4-{[(7R)-8-Ciclo pentil-7-etil-5- metil-6-oxo-5,6,7,8-tetra-hidropteridin-2- il]amino}-3- metoxibenzoil)amino]piperidin-1-il}-L- norvalina 46 m/z 623 [M+Hf Éster N0 do Exemplo Nome ácido Ácido Exemplo Não. ESMS 27 5-{4-[(4-{[(7R)-8-Ciclopentil-7-etil-5- metil-6-oxo-5,6,7,8-tetra-hidropteridin- 2-il]amino}-3- metoxibenzoil)amino]piperidin-1-il}-D- norvalina 47 m/z 623 [M+H]+ 28 Ácido (2S)-2-amino-4-{4-[(4-{[(7/?)-8- ciclopentil-7-etil-5-metil-6-oxo-5,6,7,8- tetra-hidropteridin-2-il]amino}-3- metilbenzoil)amino]piperidin-1 - iljbutanóico 48 m/z 593 [M+H]+ Ácido (2S)-2-amino-4-{4-[(4-{[(7R)-8- ciclopentil-7-etil-5-metil-6-oxo-5,6,7,8- tetra-hidropteridin-2-il]amino}-3- fluorobenzoil)amino]piperidin-1- il}butanóico 49 m/z 598 [M+H]+ 31 Ácido (2R)-2-amino-4-{4-[(4-{[(7R)-8- ciclopentil-7-etil-5-metil-6-oxo-5,6,7,8- tetra-hidropteridin-2-il]amino}-3- metoxibenzoil)amino]piperidin-1- 50 m/z 609 [M+H]+ Éster Nome ácido Ácido ESMS N0 do Exemplo Exemplo Não. il}butanóico 7 4-[(4-{[(7R)-8-Ciclopentil-7-etil-5-metil- 51 m/z 588 6-oxo-5,6,7,8-tetra-h id ropterid i n-2- [M+Hf il]amino}-3-metoxibenzoil)amino]-L- fenilalanina 13 Ácido 4-(4-{[(7R)-8-ciclopentil-7-etil-5- 52 m/z 539 metil-6-oxo-5,6,7,8-tetra-hidropteridin- [M+Hf 2-il]amino}-3-metoxibenzoil)piperazina- 2-carboxílico 22 Ácido (2S)-2-amino-4-{4-[(4-{[(7R)-8- 53 m/z 609 ciclopentil-7-etil-5-metil-6-oxo-5,6,7,8- [M+H]+ tetra-hidropteridin-2-il]amino}-3- metoxibenzoil)amino]piperidin-1- il}butanóico Medida de Atividade Biológica

Ensaio de Enzima PLK1

A capacidade dos compostos inibir a atividade de PLK-1 cinase foi medida em um ensaio realizada por Invitrogen (Paisley, UK). O ensaio bioquímico de Z'-LYTE™ emprega um formiato de enzima acoplada com base em fluorescência e é com base na sensibilidade diferencial de peptí- deos fosforilados e não fosforilados para clivagem proteolítica. O substrato de peptídeo é rotulado com dois fluoroforos - um em cada extremidade - que prepara um par de FRET. Na reação primária, a cinase transfere o gama- fosfato de ATP para um único resíduo de serina ou treonina em um peptídeo de FRET sintético. Na reação secundária, uma protease sítio-específica re- conhece e cliva os peptídeos de FRET não fosforilados. A fosforilação de peptídeos de FRET suprime a clivagem pelo Reagente de Desenvolvimento. A clivagem rompe FRET entre os fluoroforos doadores (isto é, cumarina) e aceptores (isto é, fluoresceína) no peptídeo de FRET, considerando que peptídeos de FRET fosforilados, não clivados mantêm FRET. Um método radiométrico, que calcula a relação (a Relação de Emissão) de emissão de doador para emissão de aceptor depois da excitação do fluoroforo doador em 400nm, é utilizado para quantificar o progresso da reação.

A Reação de Cinase final 10 μΙ_ consiste em 2,8-25,3 ng de

PLK1, de substrato de Peptídeo de 2 μΜ de Ser/Thr 16 e ATP a 50 mM de HEPES pH 7,5, 0,01% de BRIJ-35, MgCI2 a 10mM, EGTA a 1mM. O ensaio é realizado em uma concentração de ATP em, ou perto de Km. Depois de 60 minutos de incubação da Reação de Cinase em TA, 5 μΙ_ de uma diluição 10 de 1:8 de Reagente de Desenvolvimento são adicionados. A placa de en- saio é incubada durante um adicional de 60 minutos em TA e lido em uma leitora de placa de fluorescência.

Pontos de dados duplicados são gerados de uma série de dilui- ção de Iog 1/3 de uma solução de matéria- prima do composto teste em 15 DMSO. Nove etapas de diluições são feitas de uma concentração de topo de 10 μΜ, e um intervalo de 'nenhum composto' é incluído. Dados são cole- tados e analisados utilizando o software XLfit de IDBS. A curva de dose resposta é a curva adaptada ao número modelo 205 (modelo de dose- resposta sigmoidais). Da curva gerada, a concentração que produz 50% de 20 inibição é determinada e relatada.

Resultados de IC50 foram alocados em uma das 3 faixas como

segue:

Faixa A: IC5o < 100nM

Faixa B: IC50 de 100nM a 500nM Faixa C: IC50 >500nM

NT = não testado

Os resultados obtidos para os compostos dos exemplos aqui são dados na tabela abaixo.

Ensaio de inibição de célula Ensaios de inibição de célula foram realizados utilizando o mé-

todo A ou método B.

Método A As células foram semeadas em placas de cultura de tecido de 96W (1 cavidade = 30 mm2) em uma densidade de 500 células por cavidade em 50 μΙ do meio de cultura apropriado (vide abaixo). 24 h depois, 50 μΙ do composto preparado no mesmo meio foram adicionados como diluições de 4 5 vezes para produzir concentrações finais na faixa 0,15nM - 2500nM (n=6 para cada concentração). As placas foram em seguida incubadas a 37°C, 5% de CO2 durante 120 h. Proliferação de célula foi avaliada utilizando WST-1 (uma tintura de indicador metabólico, Roche Cat n° 1.644.807) de acordo com as instruções dos fabricantes. Os resultados foram calculados 10 como porcentagem de resposta de veículo e valores de IC50 representam a concentração de composto que inibiu a resposta de veículo por 50%.

Meio de cultura HCT-116 - Dulbeccos MEM (Sigma D6546) mais 10% de soro de bezerro fetal inativado por calor (Hyclone SH30071 Thermo Fischer Scientific) contendo Glutamina a 2mM (Sigma cat no G- 7513) e 50U/ml de Penicilina e Sulfato de Estreptomicina (Sigma Cat no P- 0781).

Método B

As células foram semeadas em placas de cultura de tecido 96W em 50 μΙ do meio de cultura apropriado (1 cavidade = 30mm2) em uma den- sidade de acordo com o tipo de célula [HCT-116, 750células/cavidade, Hut- 78 & U937, 1500células/cavidade].

24 horas depois, 50 μΙ do composto preparado no mesmo meio foram adicionados, feitos como diluições de 12 vezes para produzir concen- trações finais de 10000 nM para 0,28 pM (n=6 para cada concentração).

As placas foram em seguida incubadas a 37°C, 5% de CO2 du-

rante 72 horas.

Um ensaio de incorporação de timidina tritiada foi utilizado como uma medida de proliferação celular. Em síntese, as células foram incubadas com 0,4 μCi/cavidade durante 4 horas antes da colheita em esteiras de fil- 30 tragem. Estas foram secas, folhas de cintilação meltilex fundidas, em segui- da seladas em bolsas e emissões de 3H contadas com uma contadora mi- crobeta Trilux. Os resultados são calculados como porcentagem de resposta de veículo e valores de IC50 representam a concentração do composto que inibe a resposta de veículo por 50%.

Resultados de IC50 foram alocados em uma de 3 faixas como

segue:

Faixa A: IC50 < 100 nM

Faixa B: IC50 de 100 nM a 500 nM

Faixa C: IC50 >500 nM

NT = não testado

Os resultados obtidos para os compostos dos Exemplos aqui

são dados na tabela abaixo.

Número de exemplo Atividade Inibidora Atividade Inibidora vs PLK1 vs linhagem celular HCT 116 (método A) 1 A B 2 A A 3 A B 4 A A A A 6 A A 7 B A 8 A A 9 B A A A 11 A B 12 A A 13 A B 14 A A A A 16 A A 17 A A 18 A A Número de exemplo Atividade Inibidora Atividade Inibidora vs PLK1 vs linhagem celular HCT 116 (método A) 19 A A A A 21 NT NT 22 A A 23 A A 24 A A A A 26 A A 27 A A 28 A A 29 A A A A 31 A A 32 A NT 33 A NT 34 A NT A NT 36 A NT 37 A NT 38 A NT 39 A NT 40 A NT 41 A NT 42 A NT 43 A NT 44 A NT 45 A NT 46 A NT Número de exemplo Atividade Inibidora Atividade Inibidora vs PLK1 vs linhagem celular HCT 116 (método A) 47 A NT 48 A NT 49 A NT 50 A NT 51 A NT 52 A NT 53 A NT Ensaio de Carboxilesterase de Célula Quebrada

Qualquer determinado composto da presente invenção em que R7 é um grupo éster, pode ser testado para determinar se satisfaz a exigên- cia que é ser hidrolisado por esterases intracelulares, testando-se no ensaio seguinte.

Preparação de extrato celular

Células de tumor U937 ou HCT 116 (~ 109) foram lavadas em 4 volumes de PBS de Dulbeccos (~ 1 litro) e empelotadas em 525 g durante 10 min. a 4°C. Isto foi duas vezes repetido, e a pélete celular final foi ressus- 10 pensa em 35 ml de tampão de homogenização frio (Trizma 10 mM, NaCI 130 mM, CaCI2 0,5 mM pH 7,0 a 25°C). Homogenados foram preparados por cavitação de nitrogênio (49,21 kg/cm2 durante 50 min. a 4°C). O homogena- do foi mantido em gelo e suplementado com um coquetel de inibidores em concentrações finais de:

Leupeptina 1 μΜ

Aprotinina 0,1 μΜ E64 8 μΜ Pepstatina 1,5 μΜ Bestatina 162 μΜ Quimostatina 33 μΜ.

Depois da clarificação do homogenado de célula por centrifuga- ção em 525 g durante 10 min., o sobrenadante resultante foi utilizado como uma fonte de atividade de esterase, e foi armazenado a -80°C até requerido. Medida de clivagem de éster

A hidrólise de ésteres para os ácidos carboxílicos corresponden- tes pode ser medida utilizando o extrato celular, preparado como acima.

5 Para este efeito, o extrato celular (~30 μ9 / volume de ensaio total de 0,5 ml) foi incubado a 37°C em um Tris - HCI 25 mM, tampão de 125 mM de NaCI, pH 7,5 a 25°C. No tempo zero, o éster (substrato), foi em seguida adiciona- do em uma concentração final de 2,5 μΜ, e as amostras foram incubadas a 37°C durante o tempo apropriado (normalmente 0 ou 80 minutos). As rea- 10 ções foram interrompidas pela adição de volumes de 3 x de acetonitrila. Pa- ra amostras do tempo zero, a acetonitrila foi adicionada antes do composto de éster. Depois da centrifugação a 12000 g durante 5 min., as amostras foram analisadas quanto ao éster e seu ácido carboxílico correspondente em TA por LCMS (Sciex API 3000, bomba binária de HP1100, CTC PAL). A 15 cromatografia foi baseada em uma coluna AceCN (75 x 2,1 mm) e uma fase móvel de 5 a 95% de acetonitrila em água /0,1% de ácido fórmico.

A tabela abaixo apresenta os dados que mostram que vários motivos de éster de aminoácido, conjugados aos vários inibidores de enzima intracelulares por várias químicas de Iigador diferentes, são todos hidrolisa- dos por carboxiesterases intracelulares para o ácido correspondente. Estrutura de conjugado de éster de aminoá- R Ligador -aixa de taxa de hidrólise Preparação de cido U937Células (pg/mL/min) conjugado de amino éster R---Ligador Q; ~CH2CH20~ 100-1000 W02006117552 MeO ° H tx H2N R-Ligador ^^^NHOH °Í4 -(CH2)3O---^ ---CH2NHCH2- 1000-50000 W02006117548 S \\ H2N O R-Liqador Λ -CH2-^ CH2NHCH2- >50000 W02006117549 s \\ aW O R-Lipador Me NH; °H -CH2CH20- >50000 W02006117567 H2N R---Ligador Me ^ cU -CH2CH20- 1000-50000 W02006117567 or R-Lioador^. Me NH; Cr0IfV -CH2- 1000-50000 W02006117567 R--- Liaador Me NHj Λ -CO- >50000 W02006117567 H Lii σ'/** R-Ligador - y- -CH2-^)---CH2NHCH2- >50000 W02006117549 O Cr°TV R---Lígador ^\^)Τ\^ΝΗΟΗ <^Ò -CH2-^ ^-CH2NHCH2- >50000 W02006117549 O A tabela abaixo mostra que o Exemplo 22 que contém um moti-

vo de esterase clivável tem atividade muito maior nas células, do que o composto desprovido de motivo de esterase, composto I (Exemplo 46 em W004076454), embora ambos tenham atividades de enzima similares. Composto Estrutura Inibição de PLK Inibição de Relação (IC50, nM) proliferação célula/enzima éster ácido Composto I H I 4 1,6 0,4 I ó Exemplo CCCn . 6 6 0,09 0,015 22 "V.-OX (Exemplo " ó 53)

Claims (22)

1. Composto de fórmula (I), ou um sal, N-óxido, hidrato ou solva- to dos mesmos: <formula>formula see original document page 94</formula> em que Ri é hidrogênio, ou um grupo (Ci-C6)alquila, (C2-CeJaIqueniIa1 (C2-C6)alquinila ou (C3-C6)cicloalquila opcionalmente substituído; R2 é hidrogênio, ou um grupo (Ci-C6)alquila, (C2-C6)alquenila, (C2-CeJaIquiniIa ou (C3-C6)cicloalquila opcionalmente substituído; R3 e R3' são independentemente selecionado a partir de hidro- gênio, -CN, hidroxila, halogênio, (Ci-C6)alquila, (C2-Ce)alquenila, (C2- Ce)alquinila ou (C3-C6)cicloalquila opcionalmente substituída, -NR5R6 ou Ci- C4 alcóxi, em que R5 e R6 são independentemente hidrogênio ou (C-i- C6)alquila opcionalmente substituída; opcionalmente substituído ou um sistema de anel que tem até 12 átomos de anel; T é um radical de fórmula R-L1-Y1- em que Y1 é uma ligação, -O-, -S-, -NR6-, -(C=O)-, -S(O2)-, -(C=O)NR6-, - NR6(C=O)-, -S(O2)NR6-, -NR6S(O2)- ou -NR6(C=O)NRg-, em que R6 e Rg são independentemente hidrogênio ou (Ci-C6)alquila opcionalmente substituída; heterocíclico opcionalmente substituído que têm de 5 a 13 membros de anel ou (ii), no caso onde p é 0, um radical divalente de fórmula -Q1-X2- em que X2 é -O-, -S- ou NRa- em que Ra é hidrogênio ou CrC3 alquila opcionalmen anel A é um anel mono- ou bicíclico carbocíclico ou heterocíclico L1 é um radical divalente de fórmula -(Alq1)m(Q)n(Alq2)p- em que m, n e p são independentemente O ou 1, Q é (i) um radical divalente mono- ou bicíclico carbocíclico ou te substituída, e Q1 é um radical divalente mono- ou bicíclico carbocíclico ou heterocíclico opcionalmente substituído que têm de 5 a 13 membros de anel, Alq1 e Alq2 independentemente representam radicais de (C3- C6)cicloalquila divalente opcionalmente substituídos, ou radicais de (C-i- C6)alquileno, (C2-C6)alquenileno ou (C2-C6)alquinileno, lineares ou ramifica- dos opcionalmente substituídos, que podem opcionalmente conter ou termi- naram em uma ligação de éter (-0-), tioéter (-S-) ou amino (-NRa-), em que Ra é hidrogênio ou (CrC3)alquila opcionalmente substituída; R é um radical de fórmula (X) ou (Y) <formula>formula see original document page 95</formula> em que R7 é um grupo ácido carboxílico (-COOH) ou um grupo éster que é hidrolisável por uma ou mais enzimas carboxilesterase intracelulares para um grupo ácido carboxílico; R8 é hidrogênio; ou C1-C6 alquila, C3-C7 cicloalquila, arila ou he- teroarila opcionalmente substituída, ou -(C=O)R6, -(C=O)OR6 ou -(C=O)NR6, em que R6 é hidrogênio ou (Ci-C6)alquila opcionalmente substituída; e D é um anel monocíclico heterocíclico de 5 ou 6 átomos de anel, em que R7 é ligado a um carbono de anel adjacente ao nitrogênio de anel mostrado, e o anel que D é opcionalmente fundido a um segundo anel car- bocíclico ou heterocíclico de 5 ou 6 átomos de anel, no caso em que a liga- ção mostrada cruzado por uma linha ondulada, pode ser de um átomo de anel no referido segundo anel.

2. Composto de acordo com a reivindicação 1, em que Ri é etila.

3. Composto de acordo com a reivindicação 1 ou 2, em que R2 é ciclopentila.

4. Composto de acordo com quaisquer das reivindicações ante- riores, em que o anel A é um anel de fenila.

5. Composto de acordo com quaisquer das reivindicações ante- riores, em que R3 e R3' são hidrogênio, metóxi, trifluorometóxi, -CN, hidroxila, cloro, flúor, metila, trifluorometila, etila, n- e isopropila, alila, -CH2C=CH, ci- clopropila, ciclopentila, ciclo-hexila, -NR5R6, em que R5 e R6 são indepen- dentemente hidrogênio, metila ou etila.

6. Composto de acordo com quaisquer das reivindicações de 1 a 4, em que R3 ê metóxi, flúor ou cloro, e R13 é hidrogênio, flúor ou cloro.

7. Composto de acordo com a reivindicação 1, tendo a fórmula (IA): <formula>formula see original document page 96</formula> (IA) em que R3 é metóxi, flúor ou cloro, e as variáveis restantes são como defini- das na reivindicação 1.

8. Composto de acordo com quaisquer das reivindicações ante- riores, em que R7 é de fórmula -(C=O)ORio, em que Rio é RnRi2Ri3C-, em que (i) Rn é hidrogênio ou opcionalmente substituído (C1-C3JaIquiI- (Z1)a-[(Ci-C3)alquil]b- ou (C2-C3)alquenil-(Z1)a-[(Ci-C3)alquil]b-, em que a e b são independentemente 0 ou 1, e Z1 é -O-, -S- ou -NRi4-, em que Ri4 é hi- drogênio ou (Ci-C3)alquila; e Ri2 e Ri3 são independentemente hidrogênio ou (CrC3)alquila-; (ii) Rn é hidrogênio ou Ri5Ri6N-(Ci-C3)alquila- opcionalmente substituída, em que Ri5 é hidrogênio ou (Ci-C3)alquila, e R16 é hidrogênio ou (Ci-C3)alquila; ou Ri5 e Ri6 juntos com o nitrogênio ao qual eles são ligados formam um anel monocíclico heterocíclico opcionalmente substituído de 5 ou 6 átomos de anel ou sistema de anel bicíclico heterocíclico de 8 a 10 á- tomos de anel, e Ri2 e Ri3 são independentemente hidrogênio ou (C1- C3)alquila-; ou (jjj) R11 e R12 empregados juntos com o carbono ao qual eles são ligados, formam um anel monocíclico carbocíclico opcionalmente substituído de 3 a 7 átomos de anel ou sistema de anel bicíclico carbocíclico de 8 a 10 átomos de anel, e Ri3 é hidrogênio.

9. Composto de acordo com a reivindicação 8, em que R10 é me- tila, etila, n- ou iso-propila, n-, sec- ou terc-butila, ciclo-hexila, alila, fenila, benzila, 2-, 3- ou 4-piridilmetila, N-metilpiperidin-4-ila, tetra-hidrofuran-3-ila, metoxietila, indanila, norbonila, dimetilaminoetila, morfolinoetila.

10. Composto de acordo com a reivindicação 8, em que R1O é ciclopentila ou terc-butila.

11. Composto de acordo com quaisquer das reivindicações ante- riores, em que R é um radical de fórmula (X) e R8 é hidrogênio.

12. Composto de acordo com quaisquer das reivindicações ante- riores, em que, no radical L1, Y1 é -NHC(=0)-.

13. Composto de acordo com quaisquer das reivindicações ante- riores, em que, no radical L1, radicais os Alq1 e Alq2, quando presentes, são selecionados a partir de -CH2-, -CH2CH2-, -CH2CH2CH2-, -CH2CH(OH)CH2-, - CH2CH2CH2CH2-, -CH=CH-, -CH=CHCH2-, -CH2CH=CH-, -CH2CH=CHCH2-, -C=C-, -C=CCH2-, -CH2C=C-, CH2C=CCH2 -CH2W-, -CH2CH2W-, - CH2CH2WCH2-, -CH2CH2WCH(CH3)-, -CH2WCH2CH2-, CH2WCH2CH2WCH2-, -WCH2CH2-, -Ch2CH2N(CH2CH2OH)CH2, e radicais de ciclopropila, ciclopen- tiia e ciclo-hexila divalentes; W sendo -O-, -S-, -NH- ou -N(CH3)-.

14. Composto de acordo com quaisquer das reivindicações ante- riores, em que, no radical L1, Q, quando presente, é um radical de fenileno, piridinileno, pirimidinileno, pirazinileno, piperidinileno, piperazinileno, pirroli- denileno, pirroleno, ciclopropileno, ciclobutileno, ciclopentileno, ciclo-hexileno ou 3-aza-biciclo[3.1.0]hexileno divalente.

15. Composto de acordo com quaisquer de reivindicações de 1 a 13, em que Q, quando presente, é um radical de 1,4-fenileno, 1,4- piperidinileno ou 1,4-piperazinileno divalente.

16. Composto de acordo com a reivindicação 1, selecionado a partir do grupo que consiste em: 4-[(4-{[(7f?)-8-Ciclopentil-7-etil-5-metil-6-oxo-5,6,7,8-tetra- hidropteridin-2-il]amino}-3-metoxibenzoil)amino]-L-fenilalaninato de ciclopen- tila, o-(4-{[(4-{[(7R)-8-Ciclopentil-7-etil-5-metil-6-oxo-5,6,7,8-tetra- hidropteridin-2-il]amino}-3-metoxibenzoil)amino]metil}fenil)-L-homosserinato de ciclopentila,4-[(4-{[(7/?)-8-Ciclopentil-7-etil-5-metil-6-oxo-5,6,7,8-tetra- hidropteridin-2-il]amino}-3-metoxibenzoil)amino]-L-fenilalaninato de terc- butila, o-(4-{[(4-{[(7 R)-8-Ciclopenti 1-7-eti l-5-meti l-6-oxo-5,6,7,8-tetra- hidropteridin-2-il]amino}-3-metoxibenzoil)amino]metil}fenil)-L-homosserinato de terc-butila,4-{2-[(4-{[(7R)-8-Ciclopentil-7-etil-5-metil-6-oxo-5,6,7,8-tetra- hidropteridin-2-il]amino}-3-metoxibenzoil)amino]etil}piperazina-2-carboxilatode ciclopentila,4-{2-[(4-{[(7R)-8-Ciclopentil-7-etil-5-metil-6-oxo-5,6,7,8-tetra- hidropteridin-2-il]amino}-3-metoxibenzoil)amino]etil}piperazina-2-carboxilato de terc-butila, (2S)-2-Amino-4-{4-[(4-{[(7R)-8-ciclopentil-7-etil-5-metil-6-oxo-5.6.7.8-tetra-hidropteridin-2-il]amino}-3-metoxibenzoil)amino]piperidin-1- iljbutanoato de ciclopentila,5-{4-[(4-{[(7R)-8-Ciclopentil-7-etil-5-metil-6-oxo-5,6,7,8-tetra- hidropteridin-2-il]amino}-3-metoxibenzoil)amino]piperidin-1-il}-L-norvalinato de terc-butila,5-{4-[(4-{[(7R)-8-Ciclopentil-7-etil-5-metil-6 -oxo-5,6,7,8-tetra- hidropteridin-2-il]amino}-3-metoxibenzoil)amino]piperidin-1-il}-L-norvalinato de ciclopentila, (2S)-2-amino-4-{4-[(4-{[(7R)-8-ciclopentil-7-etil-5-metil-6-oxo-5.6.7.8-tetra-hidropteridin-2-il]amino}-3-metoxibenzoil)amino]piperidin-1- il}butanoato de t-butila, (2S)-2-amino-4-{4-[(4-{[(7R)-8-ciclopentil-7-etil-5-metil-6 -oxo-5.6.7.8-tetra-hidropteridin-2-il]amino}-3-metilbenzoil)amino]piperidin-1- iljbutanoato de terc-butila, (2S)-2-amino-4-{4-[(4-{[(7f?)-8-ciclopentil-7-etil-5-metil-6-oxo- 5.6.7.8-tetra-hidropteridin-2-il]amino}-3-metilbenzoil)amino]piperidin-1- iljbutanoato de ciclopentila, (2S)-2-amino-4-{4-[(4-{[(7R)-8-ciclopentil-7-etil-5-metil-6-oxo-5 5,6,7,8-tetra-hidropteridin-2-il]amino}-3-fluorobenzoil)amino]piperidin-1- il}butanoato de terc-butila, (2S)-2-Amino-4-{4-[(4-{[(7R)-8-ciclopentil-7-etil-5-metil-6-oxo- 5.6.7.8-tetra-hidropteridin-2-il]amino}-3-fluorobenzoil)amino]piperidin-1- il}butanoato de ciclopentila, e sais, N-óxidos, hidrato ou solvatos dos mesmos.

17.Composição farmacêutica que compreende um composto como definido em quaisquer das reivindicações anteriores, junto com um veículo farmaceuticamente aceitável.

18.Uso de um composto, como definido em quaisquer de reivin- dicações de 1 a 16, na preparação de uma composição para inibição de ati- vidade de PLK1 in vitro ou in vivo.

19. Método de tratamento de condições mediadas por atividade de PLK1, que compreende administrar a um indivíduo que sofre de tal doen- ça, uma quantidade eficaz de um composto de fórmula (I) como definido em quaisquer das reivindicações de 1 a 16.

20. Uso de acordo com a reivindicação 18, ou um método de acordo com a reivindicação 19, para tratamento de doenças proliferativas de célula.

21. Uso de acordo com a reivindicação 18, ou um método de acordo com a reivindicação 19, para tratamento de tumores sólidos.

22. Uso de acordo com a reivindicação 18, ou um método de acordo com a reivindicação 19, para tratamento de tumores hemato- oncológicos.