BRPI0720853A2 - Nanoemulsão - Google Patents

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para "NANOE- MULSÃO".

Descrição

A presente invenção refere-se a uma nanoemulsão compreen- dendo pelo menos um componente aquoso e um veículo, onde o veículo compreende pelo menos um componente lipofílico, pelo menos um tensoati- vo e pelo menos um álcool. A presente invenção ainda refere-se a uma composição compreendendo a dita nanoemulsão e um agente ativo. Em par- ticular, a composição está presente como um gel e o agente ativo é ácido 5- amino levulínico (ALA), um seu derivado, precursor e/ou metabólito. A inven- ção ainda refere-se à preparação da dita nanoemulsão e/ou composição e seu uso para o tratamento de doenças dermatológicas, doenças associadas a vírus assim como doenças associadas com proliferação de células, em particular, doenças de tumor e/ou psoríase. A presente invenção é ainda direcionada ao uso da dita nanoemulsão em cosméticos.

Nanoemulsões constituem um sistema coloide. Sistemas coloi- dais incluem micelas, lipossomas, virossomas, nanossuspensões, microe- mulsões e soluções de polímeros. Nanoemulsões, baseadas em suas carac- terísticas físicas e químicas, pertencem ao grupo das microemulsões. Micro- 20 emulsões são dispersões aquosas de partículas de tamanho micro, homo- gêneas, compostas por um centro lipídeo circundado por monocamadas de tensoativo e cotensoativo. Nanoemulsões são caracterizadas por um tama- nho de partícula médio (diâmetro médio) de menos que 200 nm, frequente- mente menos que 100 nm, e uma estreita distribuição de tamanho de partí- 25 cuia monodispersa. Ainda, nanoemulsões são transparentes e levemente opalescentes. Elas são genericamente fabricadas através de fragmentação mecânica de uma fase oleosa em uma fase aquosa na presença de um ten- soativo. O tamanho muito pequeno dos glóbulos oleosos é frequentemente obtido em virtude de pelo menos um passe através de um homogeneizador 30 de alta pressão ou um sonificador. A preparação das nanoemulsões aqui descritas não requer tais dispositivos de alto cisalhamento. O pequeno ta- manho dos glóbulos e sua alta homogeneidade conferem aos mesmos pro- priedades cosmeticamente vantajosas que os distinguem de emulsões con- vencionais. Eles são transparentes e exibem uma nova textura. Ainda, eles podem carrear agentes ativos mais eficientemente e, assim, tornam-se cres- centemente importantes no campo de medicina e farmácia.

5 Microemulsões, chamadas nanodispersões, são conhecidas na

técnica as quais compreendem a) uma molécula formando membrana, por exemplo, Iecitina de soja, b) um coemulsificante, c) um componente lipofílico, por exemplo, triglicerídeo caprílico e/ou cáprico (Miglyol 812 ou Myritol 318) e, opcionalmente, d) álcool, em particular, etanol (EP O 956 853). Estas na- 10 nodispersões são usadas em formulações farmacêuticas como veículo de transporte para agentes farmaceuticamente ativos.

Entretanto, o uso de etanol em nanoemulsões sofre de várias desvantagens.

Primeiro, o uso de etanol como cotensoativo conduz a nanopar-' tículas maiores que o uso de álcoois com maiores cadeias de carbono. Maio- res partículas causam uma diminuição da superfície de contato entre a pele a nanoemulsão conduzindo a uma diminuição na taxa de penetração. Se- gundo, etanol tem uma viscosidade relativamente baixa de 1,10 cp que não é ótima para a estabilidade de microemulsões. Ainda, devido à hidrofobici- dade relativamente baixa de etanol, a penetração das nanoemulsões através de membranas fisiológicas lipofílicas da pele pode ser prejudicada. Como um resultado, a estabilidade da nanoemulsão assim como sua biodisponibili- dade, isto é, penetração em tecidos, é reduzida. Ainda, etanol é um álcool muito caro comparado a outros tipos de álcoois tal como álcool isopropílico. Em adição, etanol é sujeito a uma especial taxa de álcool sob certas condi- ções em vários países.

Por isso, foi um objeto da presente invenção prover uma nano- emulsão que supera as desvantagens daquelas mencionadas na técnica anterior e que, em particular, exiba ótimas propriedades físicas que possam 30 aperfeiçoar a estabilidade assim como penetração em células e tecidos, en- quanto ao mesmo tempo sendo mais barata que as nanoemulsões do esta- do da técnica. Este objeto é obtido de acordo com a presente invenção através de provimento de uma nanoemulsão compreendendo a) pelo menos um componente aquoso e b) um veículo, que compreende i) pelo menos um componente lipofílico, ii) pelo menos um tensoativo e iii) pelo menos um ál- 5 cool, onde o pelo menos um álcool tem pelo menos três átomos de carbono.

Os inventores agora verificaram que uma nanoemulsão de acor- do com a invenção tem um tamanho de partícula médio otimamente menor com uma estreita distribuição de tamanho de partícula. A redução do tama- nho de partícula contribui para uma aperfeiçoada estabilidade e uma melhor penetração da nanoemulsão em células e tecidos.

A quantidade de componente i) do veículo, isto é, o componente lipofílico, está preferivelmente presente em uma quantidade de 0,1% em pe- so a 15% em peso, mais preferivelmente de 1% em peso a 8% em peso e mais preferivelmente de 3% em peso a 4% em peso, baseado no peso total 15 da nanoemulsão. A quantidade de componente ii) do veículo, isto é o ten- soativo ou tensoativos, está preferivelmente presente em uma quantidade de 1% em peso a 30% em peso, mais preferivelmente de 2% em peso a 15% em peso e mais preferivelmente de 4% em peso a 6% em peso, baseado no peso total da nanoemulsão. A quantidade de componente iii) do veículo, isto 20 é, o álcool, está preferivelmente presente em uma quantidade de 0,1% em peso a 10% em peso, mais preferivelmente de 0,5% em peso a 5% em peso e mais preferivelmente de 1% em peso a 2% em peso, baseado no peso total da nanoemulsão.

O componente aquoso está preferivelmente presente na nanoe- 25 mulsão em uma quantidade de 50% em peso a 98% em peso, mais preferi- velmente de 70% em peso a 95% em peso e mais preferivelmente de 88% em peso a 92% em peso, baseado no peso total da nanoemulsão. Vantajo- samente, esta específica constituição da nanoemulsão conduz a uma nano- emulsão que é altamente tolerável para a pele e não resulta em uma sensa- 30 ção pegajosa durante aplicação à pele, que, inter alia, é devida à relativa- mente baixa proporção de tensoativos e componentes lipofílicos.

Em uma realização preferida da presente invenção, a nanoemul- são compreende como tensoativo um tensoativo formador de membrana e um cotensoativo formador de emulsão O/W. A razão em peso da quantidade de tensoativo formador de membrana : cotensoativo formador de emulsão O/W varia de 0,1:1 a 10:1, preferivelmente de 0,2:1 a 0,8:1, mais preferivel- 5 mente de 0,4:1 a 0,6:1.

Um álcool preferido tendo pelo menos 3 átomos de carbono den- tro do escopo da presente invenção é um álcool tendo 3-10 átomos de car- bono, preferivelmente 3-7 átomos de carbono, mais preferivelmente 3-5 á- tomos de carbono, e mais preferivelmente 3 átomos de carbono. Álcoois par- 10 ticularmente apropriados tendo 5 átomos de carbono são 1-pentanol e/ou 4- metil-2-pentanol. Álcoois apropriados tendo 4 átomos de carbono são álcool

1 -butílico, álcool t-butílico (2-metil-2-propanol) e/ou álcool s-butílico (2- butanol). São mais preferidos álcoois tendo 3 átomos de carbono, por exem- plo, álcool 1-propílico e álcool isopropílico, onde álcool isopropílico é preferi- 15 do. Através de uso de álcool-C3, em particular, álcool isopropílico na nanoe- mulsão inventiva, os presentes inventores verificaram que a nanoemulsão mostra um reduzido tamanho de partícula e mais estreita distribuição de ta- manho de partícula assim como aperfeiçoada estabilidade e uma aperfeiço- ada penetração em tecidos comparada às nanoemulsões do estado da téc- 20 nica usando etanol como álcool. Isto foi surpreendente, na medida em que isopropanol e etanol são muito similares em suas características fisiológicas e químicas.

Quando isopropanol é usado como álcool na nanoemulsão in- ventiva, o tamanho das partículas emulsificadas é menor comparado ao uso 25 de etanol. Devido à resultante aumentada superfície de contato da nanoe- mulsão com a pele, as propriedades de penetração são aumentadas. A re- dução do tamanho de partícula também é decisiva para uma aperfeiçoada estabilidade da nanoemulsão uma vez que é conhecido que a taxa de agluti- nação de partículas conduzindo por último a separação de fase aumenta 30 com o tamanho de partícula. Os vantajosos efeitos de isopropanol podem ser devidos a sua hidrofobicidade levemente maior, que pode resultar em uma melhor habilidade para penetrar através de membranas fisiológicas Iipo- fílicas. Ainda, isopropanol tem uma maior viscosidade (cp a 25°C de 2,32) comparado a etanol (viscosidade /cp, 25°C, 1,10). A dita maior viscosidade de isopropanol pode servir para um melhor mecanismo de estabilização em nanoemulsões, na medida em que viscosidade reduz a mobilidade de molé- 5 cuias. Ainda uma vantagem de isopropanol comparado a etanol é que ele é disponível em custos relativamente baixos, que são cerca de 1/3 dos custos de etanol, e livre de adicional taxa de álcool.

Preferivelmente, o pelo menos um componente lipofílico do veí- culo da nanoemulsão inventiva é um lipídeo, um óleo vegetal e/ou um óleo 10 animal. Lipídeos apropriados de acordo com a presente invenção são lipí- deos fisiologicamente aceitáveis tais como ceramida, mono-, di- e triacil gli- cerina (triglicerídeos), em particular, triglicerídeo caprílico e/ou cáprico e/ou uma sua mistura, particularmente preferivemente Miglyol (tais como Miglyol 812 ou Myritol 318 disponível, por exemplo, de Henkel). Apropriados óleos 15 vegetais e animais por exemplo, são óleo de girassol, óleo de soja, óleo de amendoim, óleo de colza, óleo de peixe e/ou cetáceo.

Um tensoativo formador de membrana apropriado é um fosfoli- pídeo, um lisofosfolipídeo, uma ceramida e/ou uma mistura dos mesmos. Preferivelmente, o fosfolipídeo é Iecitina ou cefalina de sojas ou ovos de ga- linha, mais preferivelmente a Iecitina é Iecitina de soja.

Preferivelmente, a Iecitina tem um teor de fosfatidil colina de pelo menos 80% em peso, mais preferivelmente de pelo menos 90% em peso,m e mais preferivelmente de pelo menos 94% em peso. Os inventores verifica- ram que a qualidade da lecitina, por exemplo, seu teor de fosfatidil colina, 25 desempenha um papel crucial para o tamanho das partículas da nanoemul- são. Quanto maior o teor de fosfatidil colina da lecitina, menor o tamanho das partículas da nanoemulsão.

Como cotensoativo formador de emulsão de O/W, tensoativos aniônicos, não-iônico, catiônicos e/ou anfotéricos são apropriados, assim como copolímeros de bloco. Apropriados tensoativos aniônicos são sabões, sulfonatos de alquil benzeno, alcano sulfonatos, sulfatos de alquila e/ou éter sulfatos de alquila. Apropriados tensoativos catiônicos são compostos de amônio quaternários, preferivelmente tendo um ou dois grupos hidrofóbicos (por exemplo, brometo de cetil trimetil amônio, e cloreto de cetil trimetil amô- nio) e/ou sais de aminas primárias de cadeia longa. Um tensoativo anfotérico apropriado é N-(acil amido alquil) betaína, β-amino propionato de N-alquila, e/ou N-óxido de amina. Um apropriado copolímero de bloco, por exemplo, é óxido de propileno. No escopo da presente invenção, um tensoativo não- iônico é particularmente preferido como cotensoativo formador de emulsão de O/W. Um apropriado tensoativo não-iônico é selecionado do grupo con- sistindo em poliglicol éter de álcool graxo, poliglico éter de alquil fenol, alquil poliglicosídeo, glucamida de ácido graxo, poliglicol éter de ácido graxo, polí- mero de bloco de óxido de etileno - óxido de propileno, éster de ácido graxo de poliglicerol, alcanolamida de ácido graxo, e éster de ácido graxo de sorbi- tano (etoxilado) (sorbitano). Um éster de ácido graxo de sorbitano etoxilado particularmente preferido é sorbitano mono oleato de polioxietileno, mais preferivelmente Polisorbato 80.

O componente aquoso da nanoemulsão da presente invenção preferivelmente compreende um sistema tampão fraco com baixo teor de sal, mais preferivelmente um tampão fosfato 5 mM a 30 mM e mais preferi- velmente tampão fosfato 10 mM. O valor de pH do tampão fosfato preferi- 20 velmente varia de pH 4 a pH 8, mais preferivelmente de pH 5 a pH 7, e é mais preferivelmente de pH 5,5 a pH 6,5. A água usada para preparar o tampão fosfato é preferivelmente água deionizada estéril e/ou água para in- jeções, mais preferivelmente água para injeções.

O diâmetro médio das partículas emulsificadas na nanoemulsão 25 (nanossomas) é de 5 nm a 500 nm, preferivelmente 10 nm a 200 nm, mais preferivelmente menos que 100 nm, em particular, até 90 nm, preferivelmen- te até 70 nm, ainda mais preferivelmente 10 nm a 50 nm, e mais preferivel- mente 15 nm a 35 nm. A distribuição de tamanho das nanopartículas é pre- ferivelmente monodispersa e segue distribuição Gaussiana. O diâmetro das 30 partículas emulsificadas da invenção é determinado por meio da distribuição de tamanho de partícula, que é medido pelo processo de dispersão de Iuz dinâmica (DLS) (também chamada espectroscopia de correlação de fó- ton(PCS)). A análise estatística da distribuição das partículas é realizada através de um processo chamado distribuição de número pesado de partícu- las de acordo com a presente invenção.

Ainda um objeto da presente invenção é um processo para a preparação da nanoemulsão de acordo com a invenção, compreendendo as seguintes etapas: a) provimento de um componente aquoso, b) provimento de um veículo compreendendo pelo menos um componente lipofílico, pelo menos um tensoativo e pelo menos um álcool, onde o pelo menos um álcool tem pelo menos três átomos de carbono, e c) mistura de componente aquo- so de etapa a) com o veículo de etapa b). Através de preparação de nanoe- mulsão, os componentes do veículo são providos no componente aquoso e a mistura é convertida em uma nanoemulsão através de homogeneização intensiva ou suave. Homogeneização pode ser realizada, por exemplo, por homogeneizadores comercialmente disponíveis. Após a preparação da na- noemulsão, ainda aditivos e excipientes podem ser adicionados, a presença dos quais não é apropriada durante homogeneização.

O processo para a preparação de uma nanoemulsão é preferi- velmente realizado sob condições assépticas, por exemplo, usando uma ca- pela de fluxo laminar.

Os inventores verificaram que, além da composição, algumas

etapas do processo de preparação são decisivas para o tamanho final e dis- tribuição de tamanho de partícula das partículas emulsificadas na nanoemul- são. Particularmente, tempera e condições de homogeneização durante eta- pa c desempenham um papel principal. A etapa c é realizada em uma tem- 25 peratura entre 50°C a 60°C. Todos os ingredientes são previamente aqueci- dos para esta temperatura. O recipiente e o misturador também devem ser otimizados para obtenção de uma mistura homogênea muito rápida dos componentes (dentro de segundos) evitando a formação de espuma. Ver Exemplo 1 para uma ilustração de tal procedimento. Alternativamente, a ho- 30 mogeneização não requer dispositivos de alto cisalhamento como sonifica- dores ou homogeneizadores de alta pressão.

Ainda um aspecto da presente invenção é uma composição far- macêutica e/ou cosmética compreendendo a nanoemulsão inventiva. A na- noemulsão inventiva é apropriada no campo de cosméticos, por exemplo, como agente antienvelhecimento, na medida em que ela provê um veículo elegante, translúcido e transparente que pode ser usado para uma variedade 5 de diferentes tipos de produtos. A nanoemulsão provê um sistema de balan- ço muito delicado, que tem níveis relativamente baixos de emulsificantes que são considerados irritantes. A nanoemulsão inventiva retem a desejável transparência ou translucidez, ela é capaz de acomodar uma razoável quan- tidade de aditivos tais como fragrâncias ou umectantes, enquanto permane- 10 cendo estável, suave e gentil sobre a pele do usuário devido ao baixo nível de emulsificante. Para o uso pretendido do produto final no caso de cosméti- cos, é possível adicionar agentes não-terapêuticos ou não-ativos tais como emolientes, aromas, corantes, fragrâncias, gelificantes, espessantes, filtros solares e semelhantes, que aperfeiçoam o uso final de um produto, particu- 15 Iarmente para propósitos de cosmético tópico, e contanto que seja tomado cuidado para evitar escolha de componentes que interferirão com a claridade do produto. O produto final pode tomar a forma de um leite, creme, loção, gel, soro ou espargimento líquido, entre outros. No caso de filtros solares, as nanoemulsões da invenção podem incorporar um ou mais agentes filtros

solares tais como benzofenonas, avobenzonas, cinamatos, salicilatos e se- melhantes.

As nanoemulsões também podem ser empregadas em composi- ções farmacêuticas, em particular, elas podem ser usadas para a fabricação de um medicamento tópico para o tratamento de doenças dermatológicas 25 como neurodermatite, psoríase, ceratose, em particular, ceratose actínica, e doenças associadas com proliferação de células tais como doenças de tu- mor. Preferivelmente, a doença de tumor é selecionada do grupo consistindo em carcinoma de célula basal, carcinoma de célula escamosa, Morbus Bo- wen, neoplasia intraepitelial vulvar (VIN) ou uma doença de câncer subcutâ- 30 neo ou nodular. Ainda, a nanoemulsão é apropriada para o tratamento de doenças associadas com vírus causadas por um vírus de papiloma humano tal como Condylomata acuminata. Através de incorporação de componente lipofílico da nanoemulsão, a perda transepidérmica de água pode ser influ- enciada vantajosamente, isto é, a função barreira da pele pode ser aperfei- çoada e, assim, doenças dermatológicas como neurodermatite podem ser afetadas vantajosamente.

5 Ainda um aspecto da presente invenção relaciona-se a uma

composição compreendendo a nanoemulsão inventiva e um agente ativo. Neste sentido, a composição é particularmente útil como uma composição farmacêutica e/ou cosmética, por exemplo, para aplicação à pele ou cabelos. As nanoemulsões da invenção compreendidas nas ditas composições pro- 10 porcionam um sistema de liberação muito eficiente para uma ampla varieda- de de agentes ativos. Exemplos de agentes ativos que podem ser úteis in- cluem agentes para a erradicação de pontos de idade, ceratoses e rugas, analgésicos, anestésicos, agentes antiacne, antibacterianos, agentes antile- vedura, agentes antifungos, agentes antivirais, agentes anticaspa, agentes 15 antidermatite, agentes antipruríticos, antieméticos, agentes de doença anti- movimento, agentes antiinflamatórios, agentes anti hiper-ceratolíticos, agen- tes antipele seca, antiperspirantes, agentes antiseborréicos, condicionadores de cabelo e agentes de tratamento de cabelos, agentes antienvelhecimento, agentes antirrugas, agentes antiasmáticos e broncodilatadores, agentes fil-

tros solares, agentes antiistamina, agentes de clareamento de pele, agentes de despigmentação, vitaminas, corticosteroides, hormônios, retinoides tais como ácido retinóico e retinol, agentes cardiovasculares tópicos, clotrimazol, cetoconazol, miconazol, griseofulvina, hidroxizina, difenidramina, pramoxina, lidocaína, procaína, mepivacaína, monobenzona, eritromicina, tetraciclina, 25 clidamicina, canamicina, meclociclina, hidroquinona, minociclina, naproxeno, ibuprofeno, teofilina, cromolina, albuterol, esteroides tópicos como hidrocorti- sona, 21-acetato de hidrocortisona, 17-valerato de hidrocortisona, e 17- butirato de hidrocortisona, valerato de betametasona, dipropionato de beta- metasona, triancinolona acetonida, fluocinonida, propionato de clobetasol, 30 peróxido de benzoíla, crotamiton, propanolol, prometazina, palmitato de vi- tamina A, acetato de vitamina E e suas misturas.

Em uma realização preferida da presente invenção o agente ati- vo é selecionado do grupo consistindo em ácido 5-amino levulínico, um seu derivado, precursor e/ou metabólito. "Derivado" é para ser entendido como sendo, em particular, uma esterificação do grupo amino de ácido 5-amino levulínico substituído com um ou dois grupos alquila, particularmente preferi- 5 velmente com um grupo metila. O derivado mais preferido é ácido metil ami- no levulínico. A derivação pode ser também entendida como complexos de sais e compostos de adição assim como compostos alquilados. "Precursor" e "metabólito" são para serem entendidos como substâncias convertidas em uma célula em protoporfirina IX. O agnete ativo ácido 5-amino levulínico ou 10 um seu derivado é especialmente preferido.

Ácido 5-amino levulínico é usado como uma pródroga no campo de terapia fotodinâmica. Terapia fotodinâmica é um processo promissor para o tratamento de diferentes doenças pré-malignas e malignas que são asso- ciadas com proliferação de células (Taylor EL e Brown SB, 2002, Journal of 15 Dermatological Treatment, 13, Suppl. 1, S3-11 e Peng Q. et al., 1997, Cân- cer, 79, S2282-2308). O princípio de terapia fotodinâmica é baseado na in- trodução de um assim chamado agente foto-sensibilizador no tecido Iesiona- do e subsequente radiação com Iuz de apropriado comprimento de onda de modo a transformar o agente em um agente citotoxicamente ativo que, por

sua vez, causa a destruição da célula. A seletividade deste processo é devi- da à aperfeiçoada concentração do agente sensibilizador em células Iesio- nadas ou proliferando rapidamente em comparação com tecido normal. Além disso, irradiação do foto-sensibilizador origina uma radiação de fluorescência característica que pode ser usada para propósitos diagnósticos, por exem- 25 pio, para detecção de células em proliferação.

Ácido 5-amino levulínico é uma substância endógena que é sin- tetizada a partir de glicina e succinil-CoA dentro de células. Dentro do esco- po de biossíntese de heme, a protoporfirina IX, que é fotoativa em um alto grau, é formada a partir de ácido 5-amino levulínico (5-ALA) e é então con- 30 vertida em heme.Este mecanismo de controle é driblado através de adminis- tração exógena de ácido 5-amino levulínico preparado sinteticamente, pelo que originando uma produção aumentada de protoporfirina IX. Uma vez que a degradação de protoporfirina IX é ainda inibida pelo mecanismo de contro- le natural, este composto torna-se concentrado nas células. Quando irradia- da com luz, protoporfirina IX é capaz de sofrer uma reação de oxidação foto- química e consequentemente atua como um foto-sensibilizador para a tera- pia fotodinâmica.

Aplicações sistêmicas de ácido 5-amino levulínico são associa- das com um número de efeitos colaterais que podem ser driblados com apli- cação tópica da droga. Um número de investigações usando composições de ácido 5-amino levulínico tópicamente aplicáveis são conhecidas a partir 10 da técnica anterior. Embora estas investigações tenham a característica em comum de que o ácido 5-amino levulínico empregado está na forma de uma emulsão de óleo-em-água, existem diferenças com relação a outros parâme- tros como o período de penetração, período de tratamento, tipo de Iuz em- pregada e a dose de Iuz empregada.

B. Thiele et al. (H+G, Vol 69, No. 3, pp 161-164 (1994)) descre-

vem investigações que envolvem uso de ácido δ-amino levulínico na forma de uma emulsão de óleo-em-água, com um período de penetração de 5 a 6 horas, e subsequentemente irradiando com um laser corante de íon bombe- ado de argônio (pico de emissão de 630 nm) rendendo uma dose total cumu-

Iativa de 50 a 100 J/cm2.

Wolf et al. (Journal of the American Academy of Dermatology, Vol. 28, pp. 17-21, 1993) descrevem investigações que envolvem o uso de ácido 5-amino levulínico 20% na forma de uma emulsão óleo-em-água, com um período de penetração de 4, 6 ou 8 horas, e irradiando com Iuz não- filtrada ou Iuz vermelha, rendendo uma dose de Iuz 30 J/cm2 a 100 J/cm2.

Embora as investigações mostradas na técnica anterior demons- trem claramente o promissor potencialde terapia fotodinâmica usando ácido 5-amino levulínico, emulsões óleo-em-água conhecidas sofrem de um núme- ro de desvantagens.

Por exemplo, M. Novo Rodriguez et al. (SPIE, Vol. 2371, pp.

204-209) mostraram que, nas altas concentrações requeridas para uma apli- cação clínica, ácido amino levulínico é instável em soluções aquosas em uma faixa de pH neutro para básico. Durante o período de investigação de 25 horas, resultados satisfatórios são somente obtidos em uma concentra- ção de 3% e em um pH de 5, que são especificadas como as condições óti- mas para soluções aquosas de ácido 5-amino levulínico. Para uso clínico, 5 entretanto, em geral será necessário prover também composições em uma maior faixa de concentração; além disso, para serem usadas comercialmen- te, as soluções de 5-ALA têm de ser estáveis por um período que está na dimensão de semanas ou meses.

V. von Arx et al. (J. Pharm. Pharmacol. 49:652-656, 1997) des- creve investigações com relação à aplicação tópica de ácido 5-amino levulí- nico em uma variedade de géis. Esta publicação estabelece que a melhor formulação para manutenção de estabilidade de ácido 5-amino levulínico é uma combinação com Novion AA-1, um ácido poliacrílico, em um pH < 6.

Hürlimann et I. (Dermatology, Vol. 197, N0 3, 1998, pp. 248-254) mostram loções nanocoloides contendo ácido 5-amino levulínico assim como seu uso em terapia fotodinâmica, sem ainda especificação de emulsão.

WO 00/28971 descreve composições compreendendo uma na- noemulsão e ácido 5-amino levulínico, onde a nanoemulsão consiste em Iecitina de ovo (83% fosfatidil colina), Miglyol 812 (triglicerídeo) e polisorbato 80 em tampão fosfato 20 mM (ver, exemplo 1 de WO 00/28971), mas ne- nhum álcool é usado como solvente. Formulações nanocoloides contendo Iecitina de ovo como um emulsificante, entretanto, sofrem da desvantagem de que elas são acentudamente coloridas mais fortemente que nanoemul- sões de ácido 5-amino levulínico contendo Iecitina de soja como um emulsi- ficante. A mudança de cor na formulação correlaciona-se com a formação de um produto de degradação do agente ativo ácido 5-amino levulínico. É para ser concluído do mesmo que formulações de nanoemulsão contendo Iecitina de ovo envolvem estabilização consideravelmente reduzida de ácido 5- amino levulínico comparado a formulações contendo Iecitina de soja como um emulsificante.

Uma outra desvantagem das emulsões óleo-em-água conheci- das em combinação com ácido 5-amino levulínico é que a profundidade de penetração do foto - sensibilizador no tecido danificado não é ótima. Conse- quentemente, o tecido doente é receptivo à terapia fotodinâmica somente em suas camadas superiores embora a profundidade de penetração da Iuz usada para ativar o fotossensibilizador permita também o tratamento de ca- 5 mada que estão mais profunda.

Portanto, a presente invenção tinha ainda como objetivo propor- cionar composições compreendendo ácido 5-aminolevulínico, que, pelo me- nos parcialmente, supera as desvantagens do estado da técnica.

De acordo com a presente invenção, esse objetivo é atingido ao 10 se proporcionar uma composição que compreende a nanoemulsão inventiva e o ácido 5-aminolevulínico, um derivado, precursor e/ou metabólito deste como agente ativo. Nessas composições, as propriedades mencionadas a- cirna com respeito à estabilidade, penetração em tecidos bem como custos mais baixos das nanoemulsões inventivas podem ser usados para transpor- 15 tar um ácido 5-aminolevulínico para os sítios-alvo dos tecidos.

Uma interação específica foi encontrada entre o ácido aminole- vulínico e as nanopartículas da emulsão. Em particular, o ácido 5- aminolevulínico, um derivado, precursor e/ou metabólito deste, é ligado ao lado externo da monocamada das nanopartículas da nanoemulsão. Assim, o 20 ácido aminolevulínico é transportado pelas partículas enquanto ele não está contido dentro do núcleo das partículas. Mais exatamente, o ácido aminole- vulínico está localizado do lado de fora do núcleo das partículas devido às interações entre o ácido aminolevulínico e a monocamada externa. Em na- noemulsões convencionais, em contraste com estas, o fármaco está contido 25 dentro do núcleo lipídico das partículas das nanoemulsões.

De modo surpreendente, foi verificado que a estabilidade do áci- do 5-aminolevulínico pode ser consideravelmente aumentada quando o áci- do 5-aminolevulínico é formulado com a nanoemulsão inventiva que com- preende pelo menos um álcool que tem pelo menos três átomos de carbono. 30 Embora as razões para isto não sejam conhecidas, parece que um micro- ambiente criado por nanossomos tem um efeito particularmente favorável na estabilidade do ácido 5-aminolevulínico. Foi também verificado surpreendentemente que uma penetração de célula e tecido aperfeiçoada por ser alcançada com as nanoemulsões de acordo com a invenção, resultando em mais doenças que ficam mais pro- fundas e/ou doenças com espessuras de camadas maiores se tornando 5 mais acessível ao tratamento. As profundidades de penetração maiores fo- ram especialmente surpreendentes especialmente devido a ter sido previa- mente assim assumido que, devido a seu tamanho pequeno, o ácido 5- aminolevulínico seria prontamente capaz, em qualquer caso, de penetrar através da epiderme Iesionada que está presente, por exemplo, no tecido 10 associado às inflamações, estágios pré-cancerosos e tumores.

Uma terceira vantagem surpreendente é que, quando formulado com nanossomas de acordo com a invenção, ácido 5-amino levulínico é evi- dentemente tomado muito eficientemente a partir de células. Isto primeira- mente aperfeiçoa alvejamento; em segundo lugar significa que o período de 15 penetração, isto é, o tempo entre aplicação de composição e irradiação de tecido adoentado com luz, pode ser reduzido, o que significa um distinto alí- vio para o paciente. Como pode ser reunido a partir de Exemplo 4, Figura 5, tomada de ácido 5-amino levulínico em células cultivadas e conversão de ácido amino levulínico a PpIX dentro de células é aperfeiçoada com crescen- 20 tes concentrações da nanoemulsão inventiva com concentração constante de ácido amino levulínico.

Estabilidade de estocagem, também, pode ser aperfeiçoada por meio das nanoemulsões da invenção que compreendem um álcool tendo pelo menos 3 átomos de carbono como um solvente no veículo.

De acordo com a invenção a composição preferivelmente com-

preende um agente ativo que é selecionado de ácido 5-amino levulínico, ou um seu derivado, precursor e/ou um metabólito. "Derivado" é para ser en- tendido como sendo, em particular, uma esterificação do grupo amino de ácido 5-amino levulínico substituído com um ou dois grupos alquila, particu- 30 Iarmente preferivelmente com um grupo metila. Mais preferido é ácido 5- amino levulínico ou ácido 5-metil amino levulínico. A derivação também pode ser entendida com complexos de sais e compostos adicionais assim como compostos alquilados.

"Precursor" e "metabólito" são para serem entendidos como substâncias convertidas em uma célula em protoporfirina IX. O agente ativo ácido 5-amino levulínico ou um seu derivado é especialmente preferido.

O tamanho das partículas emulsificadas na nanoemulsão (na-

nossomas) é como dado acima. O tamanho de partícula que é ótimo em ca- da caso depende ainda de parâmetros tais como a viscosidade da composi- ção. Por exemplo, bons resultados foram obtidos com uma nanoemulsão tendo uma viscosidade de 1 a 10 mPas em um diâmetro de partícula médio de menos que 100 nm.

A quantidade de agente ativo, preferivelmente ácido 5-amino levulínico, na composição depende essencialmente da aplicação pretendida. Em uma realização preferida, cerca de 1 a 30% em peso do agente ativo, baseado no peso total da composição, estão presentes. Doses maiores ou 15 menores, entretanto, também são apropriadas. Uma quantidade de preferi- velmente 3 a 15%, provou ser apropriada para aplicações em conexão com terapia fotodinâmica.

A composição inventiva preferivelmente ainda pode compreen- der pelo menos um preservativo e pelo menos um solvente.

Em uma realização particularmente preferida, a composição é

formulada como um gel. Agentes de formação de gel contidos são agentes de formação de matriz, preferivelmente xantano. Embora o tamanho de par- tícula da nanoemulsão na forma de um gel também seja preferivelmente menos que 100 nm, a viscosidade é consideravelmente maior, por exemplo, 500 a 2000 mPas.

Ainda um aspecto da presente invenção é uma composição far- macêutica, cosmética e/ou diagnostica que compreende a composição in- ventiva. Neste caso, a composição adicionalmente compreende aditivos e/ou excipientes cosmeticamente e/ou farmaceuticamente aceitável, em particu- 30 lar, substâncias comumente usadas em cosméticos e farmácia. Exemplos de tais substâncias são tampões, estabilizadores, emulsificantes adicionais, espessantes, etc. Ainda, a composição é livre de constituintes que não são farmaceuticamente ou diagnosticamente aceitáveis e preferivelmente livre de constituintes que, por exemplo, provocam irritação e/ou falsificam diagnósti- co. Em adição às substâncias carreadoras que já foram mencionadas, a preparação farmacêutica e/ou diagnostica ainda pode conter adjuvantes e/ou 5 aditivos que são aceitáveis e preferivelmente bem tolerados.

Preferivelmente, a composição está presente como líquido, ou semissólido. Líquidos apropriados dentro do escopo da presente invenção são selecionados do grupo consistindo em uma solução, preferivelmente gotas, um spray, um aerosso, uma emulsão ou uma loção. Apropriados se- 10 missólidos dentro do escopo da presente invenção são selecionados do gru- po consistindo em uma pomada, um creme (emulsão O/W), um creme graxo (emulsão W/O), um gel, uma loção, uma espuma, uma pasta e/ou uma sus- pensão.

Para aplicações dermatológicas e ginecológicas, a preparação 15 está preferivelmente em uma forma que é apropriada para administração tópica, especialmente em forma de gel. A preparação possui propriedades, por exemplo, viscosidade e reologia, que são favoráveis para a respectiva forma de aplicação desejada para assegurar que, após a preparação ter sido administrada, as nanossomas carregadas com o ácido 5-amino levulínico 20 penetram na extensão adequada no tecido-alvo. As ditas propriedades de viscosidade e reologia podem ser ajustadas através de adição de espessan- tes tais como estearil ésteres de polietileno glicol, estearatos de polietileno glicol, e/ou polissacarídeos como polissacarídeo B-1459, por exemplo.

Em uma realização particularmente preferida, a composição in- 25 ventiva é um gel. Gel exibe aperfeiçoadas propriedades galênicas compara- do com as formulações mencionadas acima. A formulação de gel inventiva mostra melhor adesividade, estabilidade, liberação de agente ativo e tole- rância sobre a pele e sobre membranas de mucosa. O gel inventivo preferi- velmente compreende 0,01% em peso a 50% em peso, mais preferivelmente 30 0,5% em peso a 30% em peso e mais preferivelmente 1% em peso a 20% em peso do agente ativo, 1% em peso a 60% em peso, mais preferivelmente 15% em peso a 50% em peso, mais preferivelmente 10% em peso a 30% em peso da nanoemulsão, 0,01% em peso a 4% em peso, mais preferivel- mente 1% em peso a 3% em peso do pelo menos um agente de enchimento, 1% em peso a 3% em peso de pelo menos um preservativo, baseado no peso total da composição, e o balanço sendo o pelo menos um solvente.

Ainda um aspecto da presente invenção é um processo para a

preparação da composição inventiva, compreendendo as seguintes etapas:

a) provimento de um componente aquoso,

b) provimento de um veículo compreendendo pelo menos um componente lipofílico, pelo menos um tensoativo, e pelo menos um álcool,

onde o pelo menos um álcool tem pelo menos três átomos de carbono,

c) mistura de componente aquoso de etapa a) com o veículo de etapa b), de modo a formar uma nanoemulsão,

d) adição de agente ativo antes de e/ou após a formação da dita nanoemulsão de etapa c), e

e) opcionalmente adicionando ainda aditivos e/ou excipientes

para etapa d).

Particularmente preferivelmente, o agente ativo na etapa d) é adicionado após a formação da dita nanoemulsão de etapa c).

O processo é preferivelmente realizado sob condições assépti- 20 cas, por exemplo, através do uso de uma capela de fluxo laminar. O compo- nente aquoso, o veículo e o agente ativo que são empregados no processo mencionado acima têm os mesmos significados preferidos e apropriados como mencionados acima. A mistura do componente aquoso com o veículo é preferivelmente realizada através de homogeneização intensiva. O ácido 25 5-amino levulínico e aditivos e/ou excipientes opcionalmente presentes po- dem ser adicionados antes de e/ou após a homogeneização, preferivelmente após a homogeneização.

Preferivelmente, ar é excluído enquanto realizando o processo, por exemplo, por meio de aplicação de um vácuo e/ou uma atmosfera de gás protetora. Em adição, é preferido implementar o processo enquanto ex- cluindo luz.

O processo é realizado em uma temperatura na qual a desejada nanoemulsão pode ser formada como mencionado acima e, para as etapas posteriores, os constituintes, em particular, a substância ativa, é adequada- mente estável. Em geral, foi verificado que uma faixa de temperatura de cer- ca de 5 a 30°C é apropriada. Entretanto, processamento de aditivos e/ou 5 excipientes que, por exemplo, são misturados primeiro e homogeneizados onde apropriado, em uma mistura separada, e somente após isto adiciona- dos à composição, também pode ser realizado em maiores temperaturas, por exemplo, até cerca de 70°C. Especialmente para aplicação farmacêutica, é tomado cuidado para assegurar que o resultante produto seja estéril, por 10 exemplo, através do uso de materiais de partida e através de manutenção de condições de processo estéreis e/ou por meio de uma etapa de esterili- zação seguindo preparação.

No campo de cosméticos, a composição inventiva é preferivel- mente usada como um agente antienvelhecimento, por exemplo, para erra- dicação de pontos de idade, rugas e/ou contra pele seca.

Uma importante área de uso para as composições de acordo com a invenção está no campo de terapia fotodinâmica, com particular prefe- rência sendo dada a aplicação de nanoemulsão topicamente. A nanoemul- são de acordo com a invenção pode ser empregada no caso de todas as doenças cujo controle compreende inibição de proliferação de, ou destruição de, células ou tecidos através de fotoativação de um sensibilizador que é formado a partir de ácido 5-amino levulínico. As doenças, em particular, in- cluem doenças associadas com vírus, com o vírus preferivelmente sendo selecionado do grupo de vírus papiloma humano (HPV). Mais preferivelmen- te, a doença associada com vírus é Condylomata acuminata. Condylomata acuminata é definida como epiteliomas benignos de gênese viral que são quase exclusivamente localizados genitoanalmente, o patógenos dos quais é vírus papiloma humano (HPV) tipos 6, 11 e 42. No curso da doença, pápulas no tamanho de uma cabeça de alfinete desenvolvem proliferações papilares semelhantes a crista de galo e couve-flor.

As composições da invenção também são apropriadas para tra- tamento de doenças dermatológicas tais como doenças associadas com ce- ratose, com ceratose actínica sendo especialmente preferida. Ceratose actí- nica é um carcinoma de célula escamosa de epiderme in situ. Ceratose actí- nica é uma proliferação de ceratinócitos transformados que é limitada a epi- derme. Ceratose actínica é induzida predominantemente por exposição crô- 5 nica a radiação ultravioleta, especialmente Iuz solar (também chamada cera- tose solar). Ceratose actínica se manifesta como máculas de descamação grosseiras, pápulas ou placas de cerca de 1 mm a cerca de 2 cm em diâme- tro.

Ainda, as composições inventivas são preferivelmente pretendi- das para o tratamento de doenças associadas com aumentada proliferação de células, desde que, neste caso, o foto-sensibilizador é concentrado para um grau particularmente alto através do aumentado metabolismo de célula em células adoentadas.

As composições de acordo com a invenção são consequente- 15 mente apropriadas para tratamento de doenças de tumor tal como adenoma de célula basal, carcinoma de célula escamosa, Morbus Bowen, neoplasia intraepitelial vulvar (VIN), e/ou doenças de câncer subcutâneo e/ou nodular. Psoríase é um exemplo de uma doença não-tumor associada com aumenta- da proliferação de células.

As composições da invenção são especialmente preferidas para

o tratamento de adenoma de célula basal. Adenoma de célula basal é carac- terizado como um tumor epitelial que cresce invasivamente e destrutivamen- te no local, entretanto, sofre metástase somente muito raramente e, por isso, é considerado semimaligno. Ele está localizado principalmente (80%) na re- 25 gião de cabeça e pescoço, especialmente na região da testa, canthus e na- riz. No caso de progressão desfavorável, destruição de tecido e mesmo mor- te resultam, por exemplo, através de erosão de osso e vascular e sangra- mento associado com as mesmas, assim como através de invasão de CNS. Adenoma de célula basal origina-se de células degenerativas da camada 30 germe (camada de célula basal) da epiderme e/ou a bainha de raiz exterior dos folículos de cabelo. Em contraste a células basais saudáveis que nor- malmente perdem sua capacidade de divisão quando passando através de epiderme, decaem e reformam o corneum, células de basalioma mantêm sua capacidade de divisão e não são mais capazes de formarem uma ca- mada córnea.

A invenção ainda refere-se ao uso da nanoemulsão de acordo 5 com a invenção para a fabricação de um medicamento em terapia fotodinâ- mica.

Assim, tratamento das doenças mencionadas acima é efetuado, por exemplo, através de aplicação tópica de uma nanoemulsão que contem o agente ativo, por exemplo, ácido 5-amino levulínico, e subsequentemente 10 incubando de modo a permitir que uma adequada quantidade do ácido 5- amino levulínico penetre no tecido que está sendo tratado. Durante a incu- bação, irradiação da área tratada com Iuz é preferivelmente evitado, por e- xemplo, cobrindo a mesma, de modo a evitar qualquer indesejável ativação prematura. Após o período de incubação, que é genericamente de cerca de 15 1 a 8 horas e usualmente cerca de 4 horas, ter expirado, o tecido é irradiado com uma dose adequada de radiação usando uma fonte de luz. Apropriadas fontes de Iuz incluem lâmpadas emitindo Iuz branca e também fontes de lu- zes monocromáticas. As doses de radiação estão normalmente em uma fai- xa de cerca de 20 J/cm2 a vários 100 J/cm2 por aplicação.

Um outro campo de aplicação de gel de ácido 5-amino levulínico

de acordo com a invenção refere-se à detecção da presença de células em proliferação em uma amostra, por exemplo, em uma amostra de tecido. De- tecção é baseada em concentração seletiva de um foto - sensibilizador, que é produzido por metabolismo do agente ativo, em células em proliferação 25 comparado com células normais. Preferivelmente, o agente ativo é ácido 5- amino levulínico e o foto - sensibilizador é protoporfirina IX. A extensão na qual o foto-sensibilizador foi concentrado pode ser determinada por meio de processos fotodiagnósticos, por exemplo, por irradiação com Iuz tendo um comprimento de onda de 405 nm e medindo a radiação de fluorescência ge- 30 rada pelo foto - sensibilizador. As nanoemulsões de acordo com a invenção são particularmente apropriadas para uso em diagnóstico de tumor.

Ainda, a invenção refere-se a um kit que compreende uma com- posição de acordo com a invenção compreendendo a nanoemulsão inventi- va e ácido 5-amino levulínico, um seu derivado, precursor e/ou metabólito que é apropriado para ser aplicado topicamente, e uma ou mais substâncias auxiliares. Exemplos destas substâncias auxiliares são um material de co- 5 bertura fotorresistor essencial tal como filme plástico que é aplicado ao sítio a ser tratado após a nanoemulsão ter sido aplicada ao dito sítio de modo a prevenir prematura ativação por luz, e meios para ligação de material de co- bertura ou outros meios para aplicação de nanoemulsão ao sítio a ser trata- do.

Ainda a invenção refere-se a um processo de tratamento de uma

doença associada com vírus, uma doença dermatológica e/ou uma doença associada com proliferação de células compreendendo administração de uma quantidade farmaceuticamente efetiva da composição inventiva a um sujeito em sua necessidade. Preferivelmente, o sujeito é um mamífero, mais preferivelmente um humano.

Ainda um aspecto da presente invenção refere-se a uma com- posição compreendendo um agente ativo selecionado do grupo consistindo em ácido 5-amino levulínico, um seu derivado, precurosr e/ou metabólito, e uma nanoemulsão, onde a nanoemulsão compreende um álcool.

Preferivelmente, a composição e, em particular, a nanoemulsão

ainda compreendem pelo menos um componente aquoso, preferivelmente água, e pelo menos um componente lipofílico e/ou pelo menos um tensoati- vo.

Ácido 5-amino levulínico, um seu derivado, precursor e/ou meta- 25 bólito que é apropriado para ser aplicado topicamente é usado. "Derivado" é para ser entendido como sendo, em particular, uma esterificação do grupo amino de ácido 5-amino levulínico substituído com um ou dois grupos alqui- la, particularmente preferivelmente com um grupo metila. Mais preferido é ácido 5-amino levulínico ou ácido 5-metil amino levulínico. A derivação tam- 30 bém pode ser entendida como complexos de sais e compostos de adição assim como compostos alquilados. "Precursor" e "metabólito" são para se- rem entendidos como substâncias convertidas em uma célula em protoporfi- rina IX. O agente ativo ácido 5-amino levulínico ou um seu derivado é espe- cialmente preferido.

Como álcool, um álcool C2 a Cs, em particular um álcool C3 a Cs, é preferido, e isopropanol e/ou álcool 1-propílico é ainda mais preferido pelas 5 razões dadas acima.

Preferivelmente, 0 ácido amino levulínico, um seu derivado, pre- cursor e/ou metabólito é ligado à camada exterior das partículas da nanoe- mulsão. O ácido amino levulínico está assim localizado fora do núcleo das partículas o que é devido a interações entre ácido amino levulínico e a mo- nocamada exterior.

Preferivelmente, o pelo menos um componente lipofílico é Migl- yol, o pelo menos tensoativo é lecitina, preferivelmente Iecitina de soja e/ou um tensoativo de tipo polioxietileno, preferivelmente Polisorbato 80.

Ainda um aspecto da invenção refere-se a uma composição far- macêutica e/ou diagnostica compreendendo a composição mencionada aci- ma.

Ainda um aspecto da presente invenção refere-se ao uso da dita nanoemulsão em composições farmacêuticas, em particular, para a fabrica- ção de um medicamento para 0 tratamento de doenças dermatológicas co- 20 mo psoríase, ceratose e, em particular, ceratose actínica. Ainda, a composi- ção é apropriada para doenças associadas com proliferação de células co- mo doenças de tumor, por exemplo, carcinoma de célula basal, carcinoma de célula escamosa, Morbus Bowen, neoplasia intraepitelial vulvar (VIN) ou doença de câncer subcutâneo e/ou nodular. Ainda, a composição é apropri- 25 ada para o tratamento de doenças associadas com vírus como Condylomata acuminata.

Um outro aspecto da invenção refere-se a uma composição compreendendo uma nanoemulsão e um agente ativo, onde o agente ativo está ligado na monocamada exterior das partículas da nanoemulsão. Isto é 30 particularmente útil para aperfeiçoamento de propriedades químicas (por exemplo, estabilidade) e propriedades farmacêuticas (por exemplo, profun- didade de penetração na pele e biodisponibilidade) do agente ativo. Preferivelmente, a nanoemulsão e/ou o agente ativo é definido como para a composição descrita acima (ver página 9 ff da descrição).

Ainda um aspecto refere-se uma composição farmacêutica e/ou cosmética compreendendo a composição, onde o agente ativo está ligado à monocamada exterior das partículas da nanoemulsão.

É também abrangido pela presente invenção o uso de uma composição compreendendo uma nanoemulsão e um agente ativo, onde o agente ativo está ligado na camada exterior das partículas da nanoemulsão para a fabricação de um medicamento para o tratamento de uma doença 10 associada com vírus, dermatológica, associada com proliferação de células e/ou na terapia fotodinâmica. Realizações preferidas de ditas doenças e a terapia fotodinâmica são como mencionadas acima.

As Figuras e os exemplos que se seguem são pretendidos para ainda ilustrarem a invenção.

A Figura 1 mostra a distribuição de tamanho de partícula de uma

batelada representativa de Nanoemulsão BF-200 medida por espectroscopia de correlação de fóton.

A Figura 2 mostra micrografias de elétrons de fratura - congela- mento de Nanoemulsão BF-200 (A) aumento de 1 200 000 vezes, (B) au- mento de 250 000 vezes.

A Figura 3 mostra micrografias de elétron de manchamento ne- gativo de Nanoemulsão BF-200 (A) aumento de 1 200 000 vezes, (B) au- mento de 250 000 vezes.

A Figura 4 mostra fluorescência PpIX induzida por UV medida em células Hela incubadas por três horas com ALA e diferentes concentra- ções de BF-200. Fluorescência foi medida duas horas após lavagem dos meios.

A Figura 5 mostra micrografias de elétrons de fratura - congela- mento de gel de ácido amino levulínico com um aumento de 50 000 vezes.

A Figura 6 mostra micrografias de elétrons de fratura - congela-

mento de gel de ácido amino levulínico (A) aumento de 250 000 vezes; (B) aumento de 1 200 000 vezes. Exemplos

Exemplo 1: Preparação de nanoemulsão BF200

A composição qualitativa e quantitativa da nanoemulsão BF200 é dada na tabela abaixo.

Ingrediente % (peso / peso) Função Qualidade Lecitina de soja 1,73 Tensoativo >94% fosfatidil colina, para uso farmacêutico, USP Polisorbato 80 3,40 Cotensoativo Ph. Eur. (mono-oleato de polioxietileno sorbitol) Triglicerídeos 3,45 Núcleo lipídeo Ph. Eur. caprílicos / cá- pricos Álcool isopropíli- 1,42 Solvente Ph. Eur. CO Tampão fosfato Ad 100,00 Solvente Água para inje¬ 10 mM, pH 6 ção: Ph. Eur. Fosfato de dis- sódio e hidroge- no fosfato de sódio: Ph. Eur. O processo de fabricação para a emulsão BF200 consiste nas seguintes etapas:

Etapa 1: Preparação de um tampão fosfato 10 mM, pH 6 (com- ponente aquoso)

Etapa 2: Preparação de um veículo contendo o componente Iipo-

fílico, os tensoativos e o álcool

Etapa 3: Fabricação da nanoemulsão através de mistura de componente aquoso de Etapa 1 e o veículo da Etapa 2.

Etapa 4: Esterilização em filtro e enchimento da nanoemulsão BF200 em garrafas de vidro estéreis sob capela de fluxo laminar. Descrição do processo de fabricação para um tamanho de batelada típico:

Etapa 1: tampão fosfato 10 mM (1000 g), pH 6, foi preparado e o tampão fosfato foi esterilizado através de filtração à vácuo através de um filtro estéril de 0,2 pm.

Etapa 2: preparação de um veículo contendo o componente Iipo-

fílico, os tensoativos e o álcool.

Tabela 2. Veículo

Ingredientes Peso (g) Lecitina de soja 17,30 Polisorbato 80 34,00 Triglicerideo caprílico, cáprico 34,50 Álcool isopropílico 14,20 Lecitina de soja (17,30 g) foi pesada em um vaso apropriado. Álcool isopropílico (14,20 g) foi adicionado e o vaso foi coberto para evitar

evaporação de álcool. Lecitina de soja foi dissolvida sob agitação contínua com um agitador apropriado em temperatura ambiente. Triglicerídeos capríli- cos / cápricos (34,50 g) e Polisorbato 80 (34,00 g) foram pesados e adicio- nados à solução de Iecitina de soja. A mistura foi agitada em um agitador apropriado em temperatura ambiente até ser obtida uma solução clara ho- 15 mogênea. Esta solução é o concentrado contendo todos os componentes emulsificantes e lipídeos de Nanoemulsão BF200.

Etapa 3: Fabricação de uma emulsão através de mistura de 900 q de tam- pão fosfato (de Etapa 1) e 100 q de veículo (de Etapa 2).

Primeiro, o componente aquoso compreendendo o tampão fosfa- 20 to foi aquecido a aproximadamente 55°C em um vaso apropriado. Então, o veículo (concentrado) de etapa 2 foi aquecido a aproximadamente 55°C. Subsequentemente, o veículo foi vertido no tampão fosfato sob agitação contínua com um misturador impulsor (700 rpm). A resultante nanoemulsão é agitada por 15 minutos. A temperatura foi mantida em aproximadamente 25 55°C durante todo o procedimento. Finalmente, a nanoemulsão foi resfriada para temperatura ambiente em um banho de água.

Etapa 4: A nanoemulsão foi esterilizada por filtração através de um filtro es- téril de 0.2 um e enchida em garrafas de vidro estéreis sob uma capela de fluxo laminar.

Exemplo 2: Preparação de ácido amino levulínico 1%. 3% e 10% e géis de placebo

As composições qualitativa e quantitativa do gel placebo e géis

de ácido amino levulínico 1%, 3%, 10% são dadas na tabela abaixo. Tabela 3. Composição de gel placebo

Ingrediente Quantidade por Função Qualidade grama de gel Goma xantano 20,375 mg Agente de en¬ Ph. Eur. chimento Nanoemulsão 175,0 mg Veículo Interna BF200 Propileno glicol 9,0 mg Preservativo Ph. Eur. Para hidroxi 0,7 mg Preservativo Ph. Eur. benzoato de me- tila Para hidroxi 0,3 mg Preservativo Ph. Eur. benzoato de propila Água para inje¬ 794,625 mg Solvente Ph. Eur. ção Tabela 4. Composição de gel 1% de ácido amino levulínico

Composição Quantidade por Função Qualidade grama de gel Cloridrato de 10,0 mg Substância dro¬ Interna ácido amino le¬ ga vulínico Goma xantano 20,125 mg Agente de en¬ Ph.Eur. chimento Nanoemulsão 175,0 mg Veículo Interna BF200 Propileno glicol 9,0 mg Preservativo Ph. Eur. Para-hidroxi 0,7 mg Preservativo Ph. Eur. benzoato de me- tila Composição Quantidade por Função Qualidade grama de gel Para-hidróxi- 0,3 mg Preservativo Ph.Eur. benzoato de pro- pila Água para inje¬ 784,875 mg Solvente Ph.Eur. ção Tabela 5: Composição de gel a 3% de ácido aminolevulínico

Ingrediente Quantidade por Função Qualidade grama de gel Cloridrato de 30,0 mg Substância do Interno ácido aminolevu¬ fármaco línico Goma xantano 19,625 mg Agente de en¬ Ph.Eur. chimento Nanoemulsão 175,0 mg Veículo Interno BF200 Propileno glicol 9,0 mg Preservativo Ph.Eur. Benzoato de pa- 0,7 mg Preservativo PH.Eur. ra-hidróxi-metila Benzoato de pa- 0,3 mg Preservativo Ph.Eur. ra-hidróxi-propila Água para inje¬ 756,375 mg Solvente Ph.Eur. ção Tabela 6: Composição de gel a 10% de ácido aminolevulínico

Ingrediente Quantidade por Função Qualidade grama de gel Cloridrato de 100,0 mg Substância do Interno ácido aminolevu¬ fármaco línico Goma xantano 17,875 mg Agente de en¬ Ph.Eur. chimento Nanoemulsão 175,0 mg Veículo Interno BF200 Propileno glicol 9,0 mg Preservativo Ph.Eur. Benzoato de pa- 0,7 mg Preservativo Ph.Eur. ra-hidróxi-metila Ingrediente Quantidade por Função Qualidade grama de gel Benzoato de pa- 0,3 mg Preservativo Ph.Eur. ra-hidróxi-propila Água para inje¬ 697,125 mg Solvente Ph.Eur. ção O processo de fabricação do gel de placebo ou o gel de ácido aminolevulínico consiste nas seguintes etapas:

- Etapa 1: Fabricação da base de gel por adição da goma xanta- no à água para injeção, mistura e esterilização a vapor

- Etapa 2: Preparação de uma solução concentrada dos preser-

vativos de benzoato de para-hidróxi- metila e para-hidróxi-parabenzoato de propila em propileno glicol

- Etapa 3, para placebo: preparação da formulação de gel final por adição da solução concentrada de preservativos da base de gel, adição

da Nanoemulsão BF200 à base de gel e homogeneização do gel

- Etapa 3, para géis de ácido aminolevulínico: Preparação da formulação de gel final da solução concentrada de preservativos à base de gel. Preparação de uma solução de cloridrato de ácido aminolevulínico em Nanoemulsão BF200. Adição da solução de cloridrato de ácido aminolevulí-

nico em Nanoemulsão BF200 à base de gel e homogeneização do gel. Descrição do processo de fabricação:

Etapa 1: Preparação da base de gel com goma xantano

Um vaso Stephan foi desinfetado com isopropanol a 70%. Água para injeção (97,50 de qunatidade unitária) foi colocada no vaso e então 20 Xantano (2,5 de quantidade unitária) foi espalhada sobre ela. A mistura foi dispersa sob vácuo em uma pressão de cerca de 10 Mpa (100 mbar) por minuto a 600 rotações por 90 minutos. O gel de base resultante foi preenchi- do em géis de frascos Schott, que foi rinsado antes com água para injeção (1/3 preenchido no máximo). O gel de base nos frascos foi então esterilizado 25 a vapor em uma autoclave por 20 minutos, a 1210C.

Etapa 2: Preparação de Parabeni conc.

Ácido metilpara-hidróxibenzóico (7,0 partes) e ácido propil para- hidroxibenzóico (3,0 partes) foram pesados em um vaso adequado. Propile- no glicol (90 partes) foi misturado a estes e os para-hidroxibenzoatos foram dissolvidos em propileno glicol. A mistura foi aquecida em uma placa de a- quecimento com agitação com um agitador magnético até dissolução da mis- 5 tura (70°C) e uma solução límpida foi obtida.

Etapa 3. parte 1: Preparação do gel de placebo

Tabela 7. Preparação do gel de placebo a partir do gel de base e Parabeni conc.

Componentes Quantidade Unitária A Base de gel 81,50 B Nanoemulsão BF200 17,50 D Parabeni com. FH 1,0 Total 100,0 Todas as etapas seguintes foram efetuadas em um fluxo aéreo 10 laminar sob condições assépticas. Uma quantidade unitária de parabeni conc. (D) e 81,5 de quantidade unitária de gel de base (A) foram adicionados a um vaso adequado. 17,5 de quantidade unitária de nanoemulsão (B) é fil- trada através de um filtro estéril de 0,2 μιτι e adicionada ao gel de base. A mistura é agitada por 10 minutos. Subsequentemente, 2 de quantidade uni- 15 tária do gel foram enchidos em tubos de alumínio laminado.

Etapa 3. parte 2: Preparação de gel a 1% de ácido aminolevulínico

TABELA 8. Preparação de gel a 1% de ácido aminolevulínico

Componentes Quantidade Unitária A Base de gel 81,50 B Nanoemulsão BF200 17,50 C ALA (cloridrato de ácido aminolevulínico 1,00 D Parabeni conc. FH 1,0 Total 100,00 Todas as operações seguintes foram efetuadas em fluxo aéreo

laminar sob condições assépticas. Uma quantidade unitária de parabeni conc. (D) e 80,5 de quantidade unidade do gel de base (A) foram vertidos em um vaso adequado. Uma quantidade unitária de ALA (C) foi dissolvida em 17,5 de quantidade unitária de nanoemulsão (B) por agitação suave até que a solução fosse obtida. A dita solução é filtrada através de um filtro esté- ril de 0,2 μιη e adicionada ao gel de base. A mistura é agitada por 10 minu- tos de modo a obter um gel homogêneo. Subsequentemente, 2 g do gel fo- ram, cada um, enchido em tubos de alumínio laminados.

Etapa 3. parte 3: Preparação de gel a 3% e a 10% de ácido aminolevulínico

Um gel a 3% e um gel a 10% foram preparados do mesmo modo que o descrito para o gel a 1%, mas usando 78,50 de quantidade unitária de gel de base e 3 de quantidade unitária de ALA ou 71,50 de quantidade unitá- ria de gel de base e 10 de quantidade unitária de ALA, respectivamente. Exemplo 3: Tamanho de partícula de Nanoemulsão BF-200

O tamanho médio de partícula da nanoemulsão fabricada, con- forme avaliação por Espectroscopia de Correlação de Fóton, PCS (também com a designação de Difusão de Luz Laser Dinâmica, DLS) é menor que 100 nm. Além disso, a nanoemulsão é caracterizada por uma distribuição de tamanho de partícula bastante estreita (vide Figura 1, abaixo).

A nanoemsulsão é estável em uma ampla variedade de tempe- raturas, mas pode ser destruída por congelamento e autoclavagem. Nanoe- mulsões são relativamente insensíveis a alterações a pH e resistência iônica e devido a sue pequeno tamanho elas podem ser esterilizadas por filtração através de filtro de 0,2 μιη. Nanoemulsões têm o potencial para aperfeiçoar a distribuição das substâncias ativas na pele, amplificando assim a eficácia dos fármacos topicamente aplicados.

A Nanoemulsão BF-200 é fabricada usando-se tecnologia de baixa energia; isto é, a preparação da nanoemulsão não requer dispositivos de alto cisalhamento, tais como sonicadores ou homogeneizadores de alta pressão.

A investigação das nanopartículas na Nanoemulsão BF-200 foi realizada por Espectroscopia de Correlação de Fóton e com duas técnicas de microscopia eletrônica: EM de congelamento-fratura e coloração negati- va.

A espectroscopia de Correlação de Fóton confirmou que BF-200 resulta em uma nanoemulsão com tamanho de partícula consistente e confi- ável e uma distribuição de partícula estreita. Essas características são está- veis por um período de tempo longo e a temperaturas diferentes (vide Tabe- la 9, abaixo). Tabela 9: Resultados da estabilidade da Nanoemulsão BF-200 Ponto de Condição de Aparência PH Viscosida¬ Tamanho médio Distribuição de tamanho de Tempo Armazenagem de a 20°C da nanopartícula partícula Mês Especificação Líquido levemente 5,5-6,5 mPas in¬ <100 nm 90% <200 nm Resultado Desvio pa¬ drão 0 - > opaIescente 6,2 n.t. 15 90% < 21 nm 4,7 1 25°C/60% r.h. > opalescente 6,2 n.t. 16 90% < 22 nm 4,6 40°C/75% r.h. > opalescente 6,2 n.t. 15 90% < 22 nm 5,7 2 5°C > opalescente 6,2 1 12 90% < 17 nm 4,2 25°C/60% r.h. > opalescente 6,2 1 15 90% < 21 nm 4,7 3 5°C > opalescente 6,2 6 14 90% < 20 nm 4,7 25°C/60% r.h. > opalescente 6,1 1 14 90% < 20 nm 4,8 6 5°C > opalescente 6,3 6 17 90% < 23 nm 5,0 25°C/60% r.h. > opalescente 6,3 6 14 90% < 20 nm 5,2 12 5°C > opalescente 6,2 2 9 90% < 12 nm - 25°C/60% r.h. > opalescente 6,1 2 11 90% < 15 nm - 18 5°C > opalescente 6,2 10 13 90% < 18 nm - 25°C/60% r.h. > opalescente 6,0 8 11 90% < 15 nm - Em resumo, todos os resultados estão dentro dos limites se- guindo até 12 meses de armazenagem em diferentes condições de armaze- nagem.

Micrográficos eletrônicos de congelamento-fratura da Nanoe- 5 mulsão BF-200 com um aumento de 1.200.000 vezes e 250.000 vezes são mostrados na Figura 2, abaixo. As características mais proeminentes dos micrográficos são um número grande de vesículas esféricas muito pequenas com um diâmetro que varia de 15 a 50 nm. Esses valores se correlacionam bem com aqueles medidos por Espectroscopia de Correlação de Fóton (vide 10 Tabela 9, acima). As vesículas são mais provavelmente unilamelares já que a espessura a membrana das vesículas é de 3 a 4 nm. Isso corresponde ao comprimento de uma molécula de fosfatidilcolina, que é o maior componente da lecitina, o tensoativo na nanoemulsão. Os Iipossomos e outras vesículas em bicamadas têm uma espessura de membrana acima de 7 nm.

A estrutura das vesículas pode ser observada em micrográficos

eletrônicos por coloração negativa. As nanopartículas na Nanoemulsão BF- 200 são esféricas, aproximadamente de 20 nm de diâmetro, com um vaso de espessura de 3 a 4 nm e enchido com material amorfo (vide Figura 3, abaixo). Não foram encontradas partículas ocas.

A investigação das nanopartículas em gel de ácido aminolevulí-

nico foi realizada com microscopia eletrônica usando-se técnicas de conge- lamento-fratura e coloração negativa.

Os micrográficos eletrônicos de congelamento-fratura do gel de ácido aminolevulínico confirmam que as nanopartículas presentes no gel têm 25 um tamanho de partícula similar àqueles da Nanoemulsão BF-200 pura. O micrográfico ilustra partículas simples bem como conglomerados (Figura 5). A morfologia e o tamanho das nanopartículas no gel não são influenciados pelas condições de armazenagem. Exame da BF-200 ALA (gel a 10% de- pois de 4 meses de armazenagem a 25°C (60% de UR) por microscopia ele- 30 trônica de congelamento-fratura revelou partículas com tamanho e configu- ração similares que as encontradas no gel feito recentemente. O estudo de estabilidade planejada com as bateladas do gel de BF-200 ALA (ácido ami- nolevulínico a 10%) e gel de placebo para gel de BF-200 ALA a serem usa- das no estudo clínico da Fase Ill em paralelo com o estudo clínico incluirá o exame do tamanho de partícula por microscopia eletrônica em pontos de temos mais tarde.

5 A Figura 6 mostra os micrográficos eletrônicos de congelamento-

fratura do gel com uma ampliação maior. A superfície da fratura mostra pre- dominantemente o envelope das partículas cobertas: A fratura através da própria partícula ocorre muito raramente. As vesículas parecem estar circun- dadas por uma camada de material que é interpretada como representando 10 o ácido aminolevulínico. Isso geral uma imagem similar a ovo frito (marcada com pontas de seta na Parte B da Figura 6).

Os micrográficos eletrônicos produzidos por coloração negativa de gel de ácido aminolevulínico a 10% apresentaram nanopartículas com uma estrutura de superfície difusa turva, que pode confirmar a estratificação do material sobre as partículas observadas nos micrográficos eletrônicos de congelamento-fratura.

Exemplo 4: Absorção em células mamíferas: estudo de cultura de células in vitro sobre a captação de ALA: Estudos de cultura de células:

A captação de ALA e conversão em protoforfirina IX (PpIX) em células cultivadas podem ser monitoradas medindo-se a fluorescência de PpIX induzida por UV. Os experimentos de célula de cultura foram realiza- dos com várias linhagens de células neoplásicas: HELA, HepG2 e CCD 106 KERTr (uma linhagem de células de ceratinócitos epiteliais humanos). As células foram incubadas em meios aquosos com MetiIa-ALA (MAL), ALA ou BF-200 com ALA por um máximo de 3 horas. Sob as concentrações de fár- macos selecionadas, todos os três meios de incubação mostraram um valor de pH similar. Depois da incubação, as células foram lavadas gentilmente e meios frescos foram adicionados. A produção de PpIX foi medida em pontos de tempo diferentes por quantificação de fluorescência. A Figura 5 mostra os resultados obtidos para as células HELA.

O efeito das concentrações crescentes da nanoemulsão BF-200 (em concentração de ALA constante) na síntese de PpIX é mostrado na Fi- gura 5. A fluorescência nas células foi maior com a concentração crescente de BF200 e alcançou um máximo em BF200 a 3%.

Exemplo 5

A eficácia da formulação da nanoemulsão de 5-ALA para a tera- 5 pia fotodinâmica actínica foi mostrada no estudo clínico de achado de dose da Fase Il foi iniciado no outono de 2006 e foi patrocinado pela Biofrontera Bioscience GmBH. O estudo controlado por placebo, aleatorizado e de du- plo-cego foi conduzido em 13 centros clínicos na Alemanha sob a direção médica do Prof. Rolf-Markus Szeimies, University Clinics of Regensburg. 10 Três doses ativas (1, 3 e 10% de ala) e placebo foram usados. Para verificar a eficácia do composto, 105 pacientes foram tratados uma vez com terapia fotodinâmica com uma das três diferentes concentrações de ALA ou place- bo.

Os pacientes com 3 a 10 lesões de ceratose no rosto ou no cou- ro cabeludo foram incluídos. Cada paciente recebeu um tratamento (1%, 3% ou 10% de ácido 5-aminolevulínico (ALA) ou placebo) de todas suas lesões. Luz vermelha foi aplicada depois de 3 horas de incubação. Depois da ses- são de tratamento, os pacientes retornaram à clínica após 3 semanas, 8 se- manas, e 12 semanas para monitorar o resultado clínico e o processo de cicatrização. Em cada tempo, o investigador avaliou a área da lesão de cera- tose clínica tratada (AK) para evidência das áreas remanescentes com sinais de AK e sintomas clínicas. A variável de eficácia primária foi a taxa de depu- ração total de todas as lesões de AK na visita após 12 semanas, definida como o número de lesões que mostravam remissão completa (as lesões fo- ram completamente limpas e nenhuma placa de descamação aderente de AKs estava visível). O aparecimento de dor durante a irradiação depois da aplicação de BF-200 ALA foi também monitorado.

Resultados: Pré-tratamento com ALA a 10% precedente a PDT foi considerado como sendo o mais eficaz das três concentrações testadas na remoção das lesões de AK (significância estatística superior à do place- bo). Quando os pacientes foram avaliados 12 semanas depois de um trata- mento simples com BF-200 ALA, pelo menos 60 a 70% das lesões tratadas estavam completamente curadas, dependendo da pesagem dos centros clí- nicos e da área da cabeça. As taxas de depuração no grupo do placebo fo- ram de 5 a 15% das lesões tratadas, dependendo da pesagem dos centros clínicos. A taxa de depuração correspondeu bem com os resultados publica- 5 dos dos estudos com ALA-PDT com projeto de estudo similar, mas com concentrações mais altas das substâncias ativas 5-ALA ou Metil ALA. Os resultados cosméticos foram excelentes. Somente 6% dos pacientes de queixaram de dor forte. Os efeitos colaterais relevantes não ocorreram du- rante o estudo, os resultados cosméticos eram excelentes. Não houve preo- 10 cupações com segurança com relação a qualquer um dos quatro grupos du- rante PDT e por um período de 12 semanas depois do PDT.

Como medida de segurança adicional, essa parte de encontrar a dose compreendeu avaliações farmacocinéticas. Os níveis plasmáticos sis- têmicos e de urina de ALA e seu metabólito protoporfirina IX foram medidos. As concentrações no plasma e na urina aumentaram em comparação com os valores fisiológicos naturais nos mesmos pacientes.

Claims (62)

1. Nanoemulsão compreendendo a) pelo menos um componente aquoso e b) um veículo, que compreende i) pelo menos um componente Ii- pofílico estando presente em uma quantidade de 0,1% em peso a 15% em peso, ii) pelo menos um tensoativo e iii) pelo menos um álcool, em que o pelo menos um álcool tem pelo menos três átomos de carbono, e em que o diâmetro médio das partículas emulsificadas é menos que 100 nm.

2. Nanoemulsão de acordo com a reivindicação 1, em que o veí- culo está presente no componente aquoso.

3. Nanoemulsão de acordo com a reivindicação 1 ou 2, em que o tensoativo está presente em uma quantidade de 1% em peso a 30% em pe- so e o álcool está presente em uma quantidade de 0,1% em peso a 10% em peso, baseado no peso total da nanoemulsão.

4. Nanoemulsão de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 1 a 3, em que o componente aqucsc está presentr em uma quantidade de 50% em peso a 98%, em peso, baseado no peso total da nanoemulsão.

5. Nanoemulsão de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 1 a 4, em que o pelo menos um álcool é álcool isopropílico e/ou álcool 1-propílico.

6. Nanoemulsão de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 1 a 5, em que o pelo menos um componente lipofílico são triglicerídeos e/ou uma mistura dos mesmos.

7. Nanoemulsão de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 1 a 6, em que o pelo menos um tensoativo é Iecitina e/ou um tensoativo tipo polioxietileno.

8. Nanoemulsão de acordo com a reivindicação 7, em que a Ieci- tina é Iecitina de soja e o tensoativo tipo polioxietileno é Polisorbato 80.

9. Nanoemulsão de acordo com a reivindicação 8, em que a Ieci- tina de soja tem um teor de fosfatidilcolina de pelo menos 80% em peso.

10. Nanoemulsão de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 1 a 9, em que o diâmetro médio das partículas emulsificadas varia de

11. Processo para a preparação da nanoemulsão como definida em qualquer uma das reivindicações 1 a 10, compreendendo as seguintes etapas: a) provimento de um componente aquoso, b) provimento de um veículo compreendendo pelo menos um componente lipofílico, pelo menos um tensoativo e pelo menos um álcool, em que o pelo menos um álcool tem pelo menos três átomos de carbono, e c) mistura de componente aquoso de etapa a) com o veículo de etapa b).

12. Composição farmacêutica e/ou cosmética compreendendo a nanoemulsão como definida em qualquer uma das reivindicações 1 a 10.

13. Composição compreendendo uma nanoemulsão como defi- nida em qualquer uma das reivindicações 1 a 12 e um agente ativo.

14. Composição de acordo com a reivindicação 13, em que o agente ativo é selecionado do grupo consistindo em ácido 5-aminolevulínico, um derivado, precursor e/ou metabólito do mesmo.

15. Composição de acordo com a reivindicação 15, em que áci- do 5-aminolevulínico, um seu derivado, precursor e/ou metabólito está ligado na monocamada externa das partículas da nanoemulsão.

16. Composição farmacêutica, cosmética e/ou diagnostica com- preendendo a composição como definida em qualquer uma das reivindica- ções 13 a 15.

17. Composição de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 13 a 16, em que a composição está presente como um gel e compre- ende 0,01% em peso a 50% em peso do agente ativo, 1% em peso a 60% em peso da nanoemulsão, 0,01% em peso a 4% em peso do pelo menos um agente de enchimento, 1% em peso a 3% em peso do pelo menos um pre- servativo, baseado no peso total da composição, e o balanço sendo o pelo menos um solvente.

18. Processo para a preparação de uma composição como defi- nida em qualquer uma das reivindicações 13 a 17, compreendendo as se- guintes etapas: a) provimento de um componente aquoso, b) provimento de um veículo compreendendo pelo menos um componente lipofílico, pelo menos um tensoativo e pelo menos um álcool, em que o pelo menos um álcool tem pelo menos três átomos de carbono, c) mistura de componente aquoso de etapa a) com o veículo de etapa b), de modo a formar uma nanoemulsão, d) adição de agente ativo antes de e/ou após a formação da dita nanoemulsão de etapa c), e e) opcionalmente adicionando ainda aditivos e/ou excipientes para etapa d).

19. Processo de acordo com a reivindicação 19, em que o agen- te ativo na etapa d) é adicionado após a formação da dita nanoemulsão de etapa c).

20. Uso cosmético de uma nanoemulsão como definido em qrnlquer uma das reivindicações 1 a 10 ou de uma comporição de acordo com qualquer uma das reivindicações 12 a 17 como agente antienvelheci- mento.

21. Uso de uma nanoemulsão como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 10, e/ou uma composição de acordo com qualquer uma das reivindicações 12 a 17, para a fabricação de um medicamento para o tratamento de uma doença associada com vírus.

22. Uso de acordo com a reivindicação 21, em que a doença associada com vírus é causada por um vírus papiloma humano (HPV).

23. Uso de acordo com a reivindicação 22, em que a doença associada com vírus é Condylomata acuminata.

24. Uso de uma nanoemulsão de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 10, e/ou uma composição de qualquer uma das reivindi- cações 12 a 17, para a fabricação de um medicamento para o tratamento de doenças dermatológicas.

25. Uso de acordo com a reivindicação 24, em que o distúrbio é selecionado do grupo consistindo em neurodermatite.

26. Uso de acordo com a reivindicação 25, em que a doença dermatológica é acne e/ou uma doença associada com ceratose.

27. Uso de acordo com a reivindicação 26, em que a ceratose é ceratose actínica.

28. Uso de uma nanoemulsão como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 10, e/ou de composição de acordo com qualquer uma de reivindicações 12 a 17, para a fabricação de um medicamento para o tra- tamento de uma doença associada com proliferação de células.

29. Uso de acordo com a reivindicação 28, em que a doença associada com proliferação de células é doença de tumor.

30. Uso de acordo com a reivindicação 29, em que a doença de tumor é selecionada do grupo consistindo em adenoma de célula basal, car- cinoma de célula escamosa, Morbus Bowen, neoplasia intraepitelial vulvar (VIN) e/ou uma doença de câncer subcutâneo e/ou nodular.

31. Uso de acordo com a reivindicação 24 ou 28, em que a do- ença é psoríase.

32. Uso de uma composição como definido em qualquer uma das reivindicações 14 a 17, para a fabricação de um medicamento na terapia fotodinâmica.

33. Uso de acordo com a reivindicação 32, em que a dita com- posição é administrada a um paciente em uma quantidade efetiva e incuba- da por um período de tempo apropriado para a provisão de uma quantidade suficiente do agente ativo no tecido a ser tratado, e onde o tecido é submeti- do a radiação de luz.

34. Uso de uma composição como definido em qualquer uma das reivindicações 14 a 17, para a detecção de células proliferantes.

35. Uso de uma composição como definido em qualquer uma das reivindicações 14 a 17, para o diagnóstico de doenças dermatológicas e/ou de tumor.

36. Kit, compreendendo uma composição como definido em qualquer uma das reivindicações 14 a 17, e pelo menos um componente, selecionado de a) uma cobertura fotorresistente b) um meio para ligação da dita cobertura a um sítio de aplica- ção, e c) um meio para aplicação da dita composição ao sítio de aplica- ção.

37. Método de tratamento de uma doença associada com vírus, uma dcença dermatológica e/ou uma doença associada com proliferação de células compreendendo administração de uma quantidade farmaceuticamen- te efetiva de uma nanoemulsão de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 1 a 10, e/ou de uma composição como definida em qualquer uma das reivindicações 12 a 17, a um sujeito em sua necessidade.

38. Composição compreendendo um agente ativo selecionado do grupo consistindo em ácido 5-amino levulínico, um derivado, precursor e/ou metabólito do mesmo, e uma nanoemulsão, em que a nanoemulsão compreeende um álcool.

39. ComposicsTc de acordo com a reivindicação 38, r.inda com- preendendo pelo menos um componente aquoso, preferivelmente água, pelo menos um componente lipofílico e/ou pelo menos um tensoativo.

40. Composição de acordo com qualquer uma das reivindica- ções 38 a 39, em que o álcool é um álcool C2-8- ern particular, um álcool C3_8.

41. Composição de acordo com a reivindicação 40, em que o álcool é álcool isopropílico e/ou álcool 1-propílico.

42. Composição como definida em qualquer uma das reivindi- cações 37 a 41, em que 0 ácido 5-aminolevulínico, um derivado, precursor e/ou metabólito do mesmo está ligado na monocamada exterior da nanoe- mulsão.

43. Composição como definida em qualquer uma das reivindi- cações 37 a 41, em que o pelo menos um componente lipofílico é Miglyol, 0 pelo menos um tensoativo é lecitina, preferivelmente Iecitina de soja, e/ou um tensoativo tipo polioxietileno, preferivelmente Polisorbato 80.

44. Composição farmacêutica e/ou diagnostica compreendendo a composição como definida em qualquer uma das reivindicações 37 a 43.

45. Uso de uma composição como definido em qualquer uma das reivindicações 37 a 43, para a fabricação de um medicamento para o tratamento de uma doença associada com vírus.

46. Uso de acordo com a reivindicação 45, em que a doença associada com vírus é causada por um vírus papiloma humano (HPV).

47. Uso de acordo com a reivindicação 46, em que a doença associada com vírus é Condylomata acuminata.

48. Uso de uma composição como definido em qualquer uma das reivindicações 38 a 43, para a fabricação de um medicamento para o tratamento de doenças dermatológicas.

49. Uso de acordo com a reivindicação 48, em que a doença dermatológica é acne e/ou uma doença associada com ceratose.

50. Uso como definido na reivindicação 43, em que a ceratose é ceratose actínica.

51. Uso de uma composição como definido em qualquer uma das reivindicações 38 a 43, para a frbricação de um medicamento para o tratamento de uma doença associada com proliferação de célula.

52. Uso de acordo com a reivindicação 51, em que a doença associada com proliferação de células é doença de tumor.

53. Uso de acordo com a reivindicação 52, em que a doença de tumor é selecionada do grupo consistindo em adenoma de célula basal, car- cinoma de célula escamosa, Morbus Bowen, neoplasia intraepitelial vulvar (VIN) e/ou uma doença de câncer subcutâneo e/ou nodular.

54. Uso de acordo com a reivindicação 48 ou 51, em que a do- ença é psoríase.

55. Uso de uma composição como definido em qualquer uma das reivindicações 38 a 43, para a fabricação de um medicamento na terapia fotodinâmica.

56. Uso de acordo com a reivindicação 55, em que a dita com- posição é administrada a um paciente em uma quantidade efetiva e incuba- da por um período de tempo apropriado para a provisão de uma quantidade suficiente do agente ativo no tecido a ser tratado, e em que o tecido é sub- metido a radiação de luz.

57. Uso de uma composição como definido em qualquer uma das reivindicações 38 a 43, para a detecção de células em proliferação.

58. Uso de uma composição como definido em qualquer uma das reivindicações 38 a 43, para o diagnóstico de doenças dermatológicas e/ou de tumor.

59. Composição compreendendo uma nanoemulsão e um agen- te ativo, em que o agente ativo está ligado à monocamada exterior das partí- culas da nanoemulsão.

60. Composição de acordo com a reivindicação 59, em que a nanoemulsão e/ou o agente ativo é definido como em qualquer uma das rei- vindicações 38 a 43.

61. Composição farmacêutica e/ou cosmética compreendendo a composição da reivindicação 59 ou 60.

62. Uso de uma composição como definido na reivindicação 59 ou 60, para a fabricação de um medicamento para o tratamento de uma do- ença associada com vírus, dermatológica, associada com proliferação de células e/ou na terapia fotodinâmica.