BRPI0721083A2

BRPI0721083A2 - Tratamento de porcos com antígeno de pcv2

Info

Publication number: BRPI0721083A2
Application number: BRPI0721083-3A
Authority: BR
Inventors: Vicky Fachinger; Knut Elbers; Axel Lischewski; Marion Kixmoeller; Francois-Xavier Orveillon; Von Richthofen Isabelle Freiin; Michael Piontkowski
Original assignee: Boehringer Ingelheim Vetmed
Priority date: 2006-12-15
Filing date: 2007-12-14
Publication date: 2014-02-25
Also published as: JP2010513315A; KR20090088938A; TW200835515A; WO2008076915A2; CA2670836C; US20180250380A1; PT2481420T; EP2481420A1; WO2008076915A3; US8865183B2; RU2009126728A; AR064363A1; US10780156B2; DK2481420T3; EP2094872A2; AU2007333857B2; US10010603B2; HUE033130T2; EP2481420B1; ES2625460T3

Description

Relatório Descritivo da Patente de Invenção para "TRATAMEN- TO DE PORCOS COM ANTÍGENO DE PCV2".

O presente pedido de patente reivindica o benefício de priori- dade do Pedido de Patente U.S. N0 de Série 60/870.311, depositado em 15 de dezembro de 2005, os ensinamentos e conteúdos do mesmo são incor- porados no presente documento por referência.

LISTAGEM DE SEQÜÊNCIA

O presente pedido de patente contém uma listagem de seqüên- cia em formato de papel e em formato legível de computador, os ensinamen- 10 tos e conteúdo da qual são aqui incorporados por referência. A listagem de seqüência é idêntica àquela incorporada em W006/072065. ANTECEDENTES DA INVENÇÃO Campo da Invenção

A presente invenção refere-se ao uso de uma composição imu- 15 nogênica que compreende um antígeno de circovírus suíno tipo 2 (PCV2) para a prevenção, redução na severidade de manifestações clínicas, redu- ção na incidência de infecção e/ou manifestações clínicas e tratamento de várias manifestações clínicas (doenças) em animais tendo anticorpos espe- cíficos de anti-PCV2. Preferivelmente, estes anticorpos específicos de anti- 20 PCV-2 são anticorpos maternais.

Descrição da Técnica Anterior

O circovírus suíno tipo 2 (PCV2) é um vírus de DNA não-envelo- pado pequeno (17-22 nm de diâmetro), icosaedral, que contém um genoma circular de trançado simples. O PCV2 compartilha aproximadamente 80% de 25 identidade de seqüência com circovírus suíno tipo 1 (PCV1). Contudo, em contraste com o PCV1, que é geralmente não-virulento, a infecção de suíno com PCV2 foi recentemente associada com um número de síndromes de doença que foram coletivamente denominadas Doenças Associadas a Circovírus Suíno (PCVAD) (também conhecidas como Doenças de Circoví- 30 rus Suíno (PCVD)) (Allan et al, 2006, IPVS Congress). A Síndrome de Debili- tação Multissistêmica Pós-Desmame (PMWS) está geralmente relacionada para ser a maior manifestação clínica de PCVAD. (Harding et al., 1997, Swine Health Prod; 5: 201-203; Kennedy et al., 2000, J Comp Pathol; 122: 9- 24). A PMWS afeta porcos entre 5-18 semanas de idade. A PMWS é clini- camente caracterizada pela debilitação, palidez da pele, prodigalidade, afli- ção respiratória, diarréia, e icterícia. Em algum suíno afetado, uma combina- ção de todos os sintomas será aparente, enquanto outro suíno afetado terá somente um ou dois destes sintomas. (Muirhead, 2002, Vet. Rec.; 150: 456). Durante necropsia, lesões microscópicas e macroscópicas também apare- cem em tecidos e órgãos múltiplos, com órgãos Iinfoides sendo o local mais comum para lesões. (Allan and Ellis, 2000; J Vet. Diagn. Invest., 12: 3-14). Uma forte correlação tem sido observada entre a quantidade de ácido nucle- ico e antígeno de PCV2 e a severidade de lesões Iinfoides microscópicas. As taxas de mortalidade para suíno infectado com PCV2 can aproximação de 80%. Em adição a PMWS, PCV2 tem sido associado com várias outras infecções incluindo "pseudorabies", síndrome respiratória e reprodutiva de suíno (PRRS), doença de Glasser, meningite streptococcal, salmonelose, colibacillose pós-desmame, hepatose dietética, e broncopneumonia supu- rante. Contudo, a pesquisa não confirmou se qualquer destes sintomas clíni- cos são, de fato, o resultado direto de um infecção de PCV2. Além disso, não é ainda conhecido se qualquer destes sintomas clínicos podem ser efe- tivamente reduzidos ou curados pelo agente ativo dirigido contra PCV2.

Os caminhos para tratar a infecção de PCV2 baseados em uma vacina de DNA são descritos na Patente dos Estados Unidos N0 6.703.023. Em W003/049703, a produção de uma vacina quimérica viva é descrita, compreendendo um supirte de PCV-1 em que um gene imunogênico de uma 25 cepa de PCV2 patogênica substitui um gene do suporte de PCV-1. W099/18214 proporcionou várias cepas de PCV2 e procedimentos para a preparação de uma vacina de PVC2 morto. Contudo, nenhum dado de efici- ência foi reportado. Uma vacina de subunidade baseada em ORF-2 efetiva foi reportada em W006/072065 e em W02007/028823. Quaisquer de tais 30 vacinas são pretendidas para serem usadas para a vacinação/tratamento de suíno ou porcos mais velhos do que 3 semanas de idade. Nenhuma destas vacinas foram descritas para uso em leitões jovens, mais jovens do que 3 ou 2 semanas de idade.

Imunidade maternalmente derivada foi mostrada conferir um certo grau de proteção contra infecção de PCV2 e doenças clínicas associa- das com infecção de PCV2s. Esta proteção tem se mostrado ser dependente da titulação: titulações mais altas são geralmente protetoras, pelo que, titulações mais baixas não são (McKeown et al., 2005; Clin. Diagn. Lab. Im- munol.; 12: 1347-1351). A meia-vida de anticorpo média em animais recém desmamados foi estimada ser 19,0 dias, e a janela para queda de anticorpo passivo de PCV2 dentro de uma população é relativamente alta (Opriessnig et al. 2004, J. Swine Health Prod. 12:186-191). Baixas titulações de anticor- pos passivamente adquiridos de PCV2 presentes em 10-12 dias de idade foram encontradas para decadência por aproximadamente 4,9 ±1,2 sema- nas de idade, níveis moderados de anticorpos foram verificados decaírem por aproximadamente 8,1±1,9 semanas de idade, e altos níveis de anticor- pos foram verificados decaírem por aproximadamente 11,1±2,5 semanas de idade (Opriessnig et al., 2006, 37th Annual Meeting of the American Associa- tion of Swine Veterinarians). Em uma correlação reguladamente próxima com o abatimento, a titulação de anticorpo suporta a ocorrência de primeiros sinais clínicos de PCVAD que ocorrem quando os leitões têm aproximada- mente 5 e 12 semanas de idade (Allan et al, 2000, Vet. Diagn. Investigation, 12: 3-14). Além disso, o PCV2 foi também isolado de Iinfonodos de leitões neonatais (Hirai et al, 2001, Vet. Record; 148:482-484), indicando que leitões ainda mais jovens podem ser afetados por PCVAD na ausência de titulações de anticorpos maternais protetores. A correlação óbvia entre a titulação de anticorpo e proteção foi comprovada em um estudo de Campo espanhol: porcos com baixas titulações de anticorpo em 7 semanas de idade (titulação de anticorpo média 1:100, faixa 0 a 1:320) tinham uma taxa de mortalidade significantemente mais alta sobre as seguintes 5 semanas do que animais com titulações de anticorpo mais altas (Rodriguez-Arrioja et al., 2002, Am. J Vet. Res. 63:354-357).

A presença de anticorpo maternalmente derivado não somente pode conferir um certo grau de proteção contra infecções virais, que, contu- do, não é previsível, mas também ser conhecida por prejudicar a eficiência de imunização. Por exemplo, titulações mais altas de anticorpos derivados maternais a vírus de febre suína clássicos (CSFV) inibem ambas resposta imune mediada por célula e humoral a uma vacina de CSFV, mas titulação 5 mais baixa não tem influência significante (Suradhat e Damrongwatanapokin, 2003, Vet. Microbiol; 92: 187-194). Também para vacinas de PCV2 vivas foi prognosticado que elas operarão mais eficientemente quando dadas a lei- tões mais velhos do que 7 ou 8 semanas de idade, porque os anticorpos maternais têm na maioria das vezes declinado naquele momento. A interfe- 10 rência de anticorpo maternal é influenciada pelo tipo de resposta imune in- duzida (Th1 versus Th2) que é dependente (além de outros) do tipo de vaci- na, tipo de antígeno, tipo de adjuvante, bem como na quantidade de antígeno administrada. Consequentemente, a interferência de anticorpo ma- ternal possível pode diferir para vacinas ainda se elas protegem contra a 15 mesma patogenia. De modo geral, anticorpos derivados maternais anti- PCV2 podem conferir um certo grau de proteção contra PCV2, mas, por ou- tro lado, aqueles anticorpos podem prejudicar a eficiência de qualquer vaci- na de PCV2.

A proteção de animais por imunização ativa é ainda complicada pelo fato que a) o tempo para decadência de anticorpos derivados mater- nalmente (MDA) varia de animal para animal, e b) muitas doenças ocorrem curtamente após a decadência de anticorpos. Para enfrentar este problema, várias estratégias de vacinação preveem um regime de vacinação de dois cursos para animais jovens: a primeira vacinação é dada precocemente em vida de modo a proteger aqueles animais com baixo MDA. É aceito que esta primeira vacinação não pode ser efetiva em animais com altas titulações de MDA devido a uma interferência com o antígeno de vacina. De modo à também proteger estes animais, uma segunda vacinação é requerida, quan- do altos níveis de MDA são esperados terem declinado. Este tipo de tabela de vacinação é usado para muitas vacinas de animal pequeno (contra, por exemplo, parvovirose canina, hepatite canina), vacinas eqüinas (contra, por exemplo, vacinas de gripe equina) e vacinas suínas (contra, por exemplo, Actinobacillus pleuropneumoniae, Haemophilus parasuis). Como o começo de PCVAD em animais de 5 semanas de idade ou mais velhos parece estar ligado à decadência de anticorpos de PCV2 que é reportada para ocorrer em animais de 4-11 semanas de idade, vários caminhos de vacina contra PCVAD foram descritos usando um regime de vacinação de dois cursos de modo a evitar uma interferência de anticorpo maternal possível. Em WO 2007/028823, vacinação de leitões tendo anticorpos derivados mater- nais anti-PCV2 com mais do que 20 pg/dose de antígeno usando um regime de vacinação de dois cursos é descrita. A vacinação inicial foi administrada entre 1 e 4 semanas de idade. Todos os animais foram revacinados três semanas após a vacinação inicial, quando os anticorpos derivados mater- nais em animais com altos níveis de MDA no momento da primeira vacina- ção tinham declinado ou cessado. Desse modo, ainda nenhuma informação existe que descreva a influência exata de anticorpos derivados maternais anti-PCV2 no grau de proteção ou interferência. Por esta razão, é recomen- dado não vacinar leitões antes de três (3) semanas de idade pelo menos com um regime de vacinação de curso simples. A vacinação antes de 3 se- manas de idade está ligada com um certo grau de incerteza com relação à eficiência de imunização. Por outro lado, leitões com níveis mais baixos de anticorpos derivados maternais anti-PCV2, pelo que ainda ninguém conhece o que níveis mais baixos significam exatamente, não são suficientemente protegidos contra infecção de PCV2 antes de 3 semanas de idade. Em ou- tras palavras, rebanhos com baixas titulações de MDA que não são vacina- dos antes de 3 semanas de idade têm um risco inerente de infecção de PCV2s devido à falta de um estado imune suficiente.

Além disso, tais vacinas não foram descritas para conferirem imunidade protetora contra infecção de PCV2, ou reduzindo, diminuindo a severidade de, ou curando quaisquer sintomas clínicos associados com es- tas em porcos já tendo anticorpos anti-PCV2, preferivelmente tendo anticor- pos maternais anti-PC2 anticorpos.

BREVE DESCRIÇÃO DOS DESENHOS

Figura 1: é um gráfico de classes de titulação de anticorpo anti- PCV2 no momento de vacinação.

Figura 2: é um gráfico de comparação do peso corpóreo vivo em animais vacinados com baixos (< 1:100) e altos (> 1:1000) anticorpos anti- PCV2.

Figura 3: é um gráfico que ilustra a diferença de peso corpóreo

em vacinados (IVP) conforme comparada a animais de controle tratados com placebo(CP).

DESCRIÇÃO DA INVENÇÃO

A presente invenção supera os problemas inerentes na técnica anterior, e proporciona um avanço distinto no estado da técnica. De acordo com um aspecto geral, a presente invenção proporciona um método para o tratamento ou profilaxia de um infecção de PCV2, ou para redução de sintomas clínicos causados por ou associados com uma infecção de PCV2 em animais tendo anticorpos anti-PCV2, compreendendo a etapa de administrar uma quantidade efetiva de antígeno de PCV2, ou uma compo- sição imunogênica compreendendo um antígeno de PCV2 a este animal em necessidade de tal tratamento. Foi uma descoberta imprevisível e surpreen- dente que a presença de anticorpos anti-PCV2, em particular de origem maternal, não prejudica a eficiência de vacina compreendendo antígeno de PCV2.

Os termos "vacina" ou "composição imunogênica" (ambos ter- mos são usados sinonimamente), conforme aqui usados, referem-se a qual- quer composição farmacêutica contendo um antígeno de PCV2, cuja composição pode ser usada para prevenir ou tratar uma doença ou condição 25 associada a infecção de PCV2 em um indivíduo. Uma composição imunogê- nica preferida pode induzir, estimular ou intensificar a resposta imune contra PCV2. O termo, desse modo, envolve ambas composições imunogênicas de subunidade, conforme descrito abaixo, bem como composições contendo PCV2 totalmente morto, ou atenuado e/ou inativado.

Desse modo, de acordo com outro aspecto, a presente invenção

proporciona um método para o tratamento ou profilaxia de uma infecção de PCV2, ou para redução de sintomas clínicos causados por ou associados com uma infecção de PCV2 em animais tendo anticorpos anti-PCV2, em particular, anticorpos derivados maternais anti-PCV2, compreendendo a etapa de administrar uma quantidade efetiva de antígeno de PCV2, ou uma composição imunogênica compreendendo um antígeno de PCV2 a este 5 animal em necessidade de tal tratamento, no qual a composição imunogêni- ca é composição imunogênica de subunidade, uma composição contendo PCV2 totalmente morto, ou atenuado e/ou inativado.

O termo "composição imunogênica de subunidade", conforme aqui usado, refere-se a uma composição contendo pelo menos um polipeptí- 10 deo ou antígeno imunogênico, mas não todos os antígenos, derivados de, ou homólogos a um antígeno de PCV2. Tal composição é substancialmente livre de PCV2 intacto. Desse modo, uma "composição imunogênica de su- bunidade" é preparada de pelo menos polipeptídeos imunogênicos parcial- mente purificados ou fracionados (preferivelmente substancialmente purifica- 15 dos) de PCV2, ou análogos recombinantes destes. Uma composição imuno- gênica de subunidade pode compreender o antígeno ou antígenos de subu- nidade de interesse substancialmente livres de outros antígenos ou polipep- tídeos de PCV2, ou fracionados destes. Uma composição de subunidade imunogênica preferida compreende a proteína de PCV2 ORF-2, conforme 20 descrita abaixo. Mais preferidas são composições de subunidade imunogê- nicas que compreendem qualquer do antígeno de PCV2 providos em W006/072065, que são todos incorporados aqui por referência em sua tota- lidade.

Uma "resposta imune" significa, mas não é limitada a, desenvol- 25 vimento em um hospedeiro de uma reposta imune celular e/ou mediada por anticorpo para a composição ou vacina de interesse. Usualmente, uma "resposta imune" inclui, mas não é limitada a, um ou mais dos seguinte efei- tos: a produção ou ativação de anticorpos, células B, células T auxiliadoras, células T supressoras, e/ou células T citotóxicas, direcionadas especifica- 30 mente a um antígeno ou antígenos incluídos na composição ou vacina de interesse. Preferivelmente, o hospedeiro revelará, ou uma resposta terapêu- tica, ou uma resposta imunológica protetora (memória), tal que a resistência a nova infecção será intensificada, e/ou a severidade clínica da doença reduzida. Tal produção será demonstrada por, ou uma redução no número ou severidade de, ou falta de um ou mais dos sintomas associados com infecção de PCV2s, no atraso do começo de viremia, em uma persistência 5 viral reduzida, em uma redução da carga viral total, e/ou uma redução de excreção viral.

O termo "antígeno", conforme aqui usado, refere-se a uma seqüência de aminoácido que induz uma resposta imunológica conforme descrita acima. Um antígeno, conforme aqui usado, inclui a seqüência de 10 comprimento total de quaisquer proteínas de PCV2 proteínas, análogos des- tas, ou fragmentos imunogênicos destas. O termo "fragmento imunogênico" refere-se a um fragmento de uma proteína que inclui um ou mais epítopes e, desse modo, induz a resposta imunológica descrita acima. Tais fragmentos podem ser identificados usando-se qualquer número de técnicas de mapea- 15 mento de epítope bem-conhecidas na técnica. Vide, por exemplo, Epitope Mapping Protocols in Methods in Molecular Biology, Vol. 66 (Glenn E. Morris, Ed., 1996) Humana Press, Totowa, New Jersey. Por exemplo, epítopes line- ares podem ser determinados por, por exemplo, sintetização concorrente- mente de grandes números de peptídeos em suportes sólidos, os peptídeos 20 correspondendo às porções da molécula de proteína, e reagindo os peptídeos com anticorpos enquanto os peptídeos estão ainda fixados aos suportes. Tais técnicas são conhecidas na técnica e descritas em, por e- xemplo, Patente dos Estados Unidos No. 4.708.871; Geysen et al. (1984) Proc. Natl. Acad. Sei. USA 81:3998-4002; Geysen et al. (1986) Molec. Im- 25 munol. 23:709-715. Similarmente, epítopes conformacionais são prontamen- te identificados pela determinação da conformação espacial de aminoácidos, tais como, por, por exemplo, cristalografia de raios X e ressonância magnéti- ca nuclear bidimensional. Vide, por exemplo, Protocolos de Mapeamento de Epítope, supra.

Antígenos sintéticos são também incluídos dentro da definição,

por exemplo, poliepítopes, epítopes de flanqueamento, e outros antígenos recombinantes ou sinteticamente derivados. Vide, por exemplo, Bergmann et al. (1993) Eur. J. Immunol. 23:2777-2781; Bergmann et al. (1996), J. Immu- nol. 157:3242-3249; Suhrbier, A. (1997), Immunol. e Cell Biol. 75:402-408; Gardner et al., (1998) 12th World AIDS Conference, Geneva, Switzerland, June 28-July 3, 1998.

5 De acordo com outro aspecto, a composição imunogênica con-

forme aqui usada mais preferivelmente compreende o polipeptídeo, ou um fragmento deste, expresso por ORF-2 de PCV2. DNA e proteína de PCV2 ORF-2, aqui usados para a preparação das composições e dentro dos processos providos aqui, é um domínio altamente conservado dentro dos isolados de PCV2 e, desse modo, qualquer PCV2 ORF-2 seria efetivo como a fonte do DNA e/ou polipeptídeo de PCV ORF-2 conforme aqui usado. Uma proteína de PCV2 ORF-2 preferida é aquela de SEQ ID NO: 11 de W006/072065. Um polipeptídeo de PCV ORF-2 adicional preferido é provido como SEQ ID NO: 5 de W006/072065. Contudo, é compreendido por aque- Ies versados na técnica que esta seqüência pode variar por mais do que 6- 10% na homologia de seqüência, e ainda retém as características antigênicas que as tornam úteis em composições imunogênicas. As caracte- rísticas antigênicas de uma composição imunológica podem ser, por exem- plo, estimadas pelo experimento de desafio conforme provido pelo Exemplo 4 de W006/072065. Além disso, a característica antigênica de um antígeno modificado é ainda retida, quando o antígeno modificado confere pelo menos 70%, preferivelmente 80%, mais preferivelmente 90% da imunidade proteto- ra, conforme comparada a proteína de PCV2 ORF-2, codificada pela seqü- ência de polinucleotídeo de SEQ ID NO:3 ou SEQ ID NO:4, conforme provi- do em W006/072065.

Desse modo, de acordo com um outro aspecto, a presente in- venção proporciona um método para o tratamento ou profilaxia de uma i- nfecção de PCV2, ou para redução de sintomas clínicos causados por ou associados com uma infecção de PCV2 em animais tendo anticorpos anti- 30 PCV2, em particular anticorpos derivados maternais anti-PCV2, compreen- dendo a etapa de administrar uma quantidade efetiva de antígeno de PCV2, ou uma composição imunogênica, compreendendo um antígeno de PCV2 a este animal em necessidade de tal tratamento, no qual o antígeno de PCV2 é um antígeno de proteína de PCV2 ORF-2 que tem pelo menos 70%, prefe- rivelmente 80%, ainda mais preferivelmente 90% da imunidade protetora conforme comparada à proteína de PCV2 ORF-2, codificada pela seqüência 5 de polinucleotídeo de SEQ ID NO:3 ou SEQ ID NO:4, conforme provida em W006/072065. Preferivelmente, referida PCV2 ORF-2 tem a seqüência de SEQ ID NO: 11 ou SEQ ID NO: 5 de W006/072065.

Em algumas formas, porções imunogênicas de proteína de PCV2 ORF-2 são usadas como o componente antigênico na composição imunogênica, compreendendo antígeno de PCV2. O termo "porção imuno- gênica", conforme aqui usado, refere-se a formas truncadas e/ou substituí- das, ou fragmentos de proteína de PCV2 ORF-2 e/ou polinucleotídeo, res- pectivamente. Preferivelmente, tais formas truncadas e/ou substituídas, ou fragmentos, compreenderão pelo menos 6 aminoácidos contíguos a partir do polipeptídeo de ORF-2 de comprimento total. Mais preferivelmente, as for- mas truncadas ou substituídas, ou fragmentos, terão pelo menos 10, mais preferivelmente pelo menos 15, e ainda mais preferivelmente pelo menos 19 aminoácidos contíguos a partir do polipeptídeo de PCV ORF-2 de compri- mento total. Duas seqüências preferidas neste particular são providas como SEQ ID NO: 9 e SEQ ID N0:10 de W006/072065. É adicionalmente com- preendido que tais seqüências podem ser uma parte de fragmentos maiores ou formas truncadas.

Conforme mencionado acima, um polipeptídeo de PCV2 ORF-2 adicional preferido é qualquer um codificado pelas seqüências de nucleotí- 25 deo de SEQ ID NO: 3 ou SEQ ID NO: 4. Contudo, é compreendido por aque- les versados na técnica que esta seqüência pode variar por mais do que 6- 20% na homologia de seqüência, e ainda retém as características antigêni- cas que a tornam úteis nas composições imunogênicas. Em algumas for- mas, uma forma truncada ou substituída, ou fragmento deste, polipeptídeo 30 de PVC2 ORF-2 é usado como o componente antigênico na composição. Preferivelmente, tais formas truncadas ou substituídas, ou fragmentos, com- preenderão pelo menos 18 nucleotídeos contíguos a partir da seqüência de nucleotídeo de PCV2 ORF-2 de comprimento total, por exemplo, de SEQ ID NO: 3 ou SEQ ID NO: 4. Mais preferivelmente, as formas truncadas ou subs- tituídas, ou fragmentos, terão pelo menos 30, mais preferivelmente pelo me- nos 45, e ainda mais preferivelmente pelo menos 57 nucleotídeos contíguos 5 da seqüência de nucleotídeo de PCV2 ORF-2 de comprimento total, por e- xemplo, SEQ ID NO: 3 ou SEQ ID NO: 4.

"Identidade de Seqüência, conforme é conhecida na técnica, refere-se a um relacionamento entre duas ou mais seqüências de polipeptí- deos, ou duas ou mais seqüências de polinucleotídeos, a saber, uma 10 seqüência de referência e uma dada seqüência a ser comparada com a seqüência de referência. A identidade de seqüência é determinada por com- paração da dada seqüência à seqüência de referência após as seqüências terem sido otimamente alinhadas para produzirem o grau mais alto de simila- ridade de seqüência, conforme determinado pela equiparação entre fileiras 15 de tais seqüências. Sob tal alinhamento, a identidade de seqüência é deter- minada em uma base de posição por posição, por exemplo, as seqüências são "idênticas" a uma posição particular se naquela posição, os nucleotídeos ou resíduos de aminoácido são idênticos. O número total de tais identidades de posição é então dividido pelo número total de nucleotídeos ou resíduos 20 na seqüência de referência para dar % de identidade de seqüência. A identi- dade de seqüência pode ser prontamente calculada por métodos conheci- dos, incluindo, mas não limitados a, aqueles descritos em Computational Molecular Biology, Lesk, A. N., ed., Oxford University Press, New York (1988), Biocomputing: Informatics e Genome Projects, Smith, D.W., ed., A- 25 cademic Press, New York (1993); Computer Analysis of Sequence Data, Part I, Griffin, A.M., e Griffin, H. G., eds., Humana Press, New Jersey (1994); Se- quence Analysis in Molecular Biology, von Heinge, G., Academic Press (1987); Sequence Analysis Primer, Gribskov, M. e Devereux, J., eds., M. Stockton Press, New York (1991); e Carillo, H., e Lipman, D., SIAM J. Appli- 30 ed Math., 48: 1073 (1988), os ensinamentos dos quais sendo incorporados aqui por referência. Métodos preferidos para determinar a identidade de seqüência são designados para dar a maior equiparação entre as seqüências testadas. Métodos para determinar identidade de seqüência são codificados em programas de computador publicamente disponíveis que determinam a identidade de seqüência entre dadas seqüências. Exemplos de tais programas incluem, mas não estão limitados a, o pacote de programa 5 de GCG Devereux, J., et al., Nucleic Acids Research, 12(1 ):387 (1984)), BLASTP, BLASTN e FASTA (Altschul, S. F. et al., J. Molec. Biol., 215:403- 410 (1990). O programa BLASTX é publicamente disponível de NCBI e ou- tras fontes (BLAST Manual, Altschul, S. et al., NCVI NLM NIH Bethesda, MD 20894, Altschul, S. F. et al., J. Molec. Biol., 215:403-410 (1990), os ensina- 10 mentos dos quais sendo incorporados aqui por referência). Estes programas alinham otimamente seqüências usando pesos de folga de falha de modo a produzir o nível mais alto de identidade de seqüência entre a dada e seqüências de referência. Como uma ilustração, por um polinucleotídeo ten- do uma seqüência de nucleotídeo tendo pelo menos, por exemplo, 85%, pre- 15 ferivelmente 90%, ainda mais preferivelmente 95% de "identidade de se- qüência" para uma seqüência de nucleotídeo de referência, é pretendido que a seqüência de nucleotídeo do dado polinucleotídeo seja idêntica à seqüência de referência, exceto que a dada seqüência de polinucleotídeo pode incluir até 15, preferivelmente até 10, ainda mais preferivelmente até 5 20 mutações de ponto por cada 100 nucleotídeos da seqüência de nucleotídeo de referência. Em outras palavras, em um polinucleotídeo tendo uma seqüência de nucleotídeo tendo pelo menos 85%, preferivelmente 90%, ain- da mais preferivelmente 95% de identidade em relação à seqüência de nu- cleotídeo de referência, até 15%, preferivelmente 10%, ainda mais preferi- 25 velmente 5% dos nucleotídeos na seqüência de referência pode ser deletado ou substituído com outro nucleotídeo, ou um número de nucleotídeos até 15%, preferivelmente 10%, ainda mais preferivelmente 5% dos nucleotídeos totais na seqüência de referência podem ser inseridos na seqüência de refe- rência. Estas mutações da seqüência de referência podem ocorrer nas posi- 30 ções terminais 5' ou 3' da seqüência de nucleotídeo de referência, ou em qualquer lugar entre aquelas posições terminais, interespersadas ou individualmente entre nucleotídeos na seqüência de referência, ou em um ou mais grupos contíguos dentro da seqüência de referência. Analogamente, por um polipeptídeo tendo uma dada seqüência de aminoácido tendo pelo menos, por exemplo, 85%, preferivelmente 90%, ainda mais preferivelmente 95% de identidade de seqüência para uma seqüência de referência de 5 aminoácido, é pretendido que a dada seqüência de aminoácido do polipeptí- deo seja idêntica à seqüência de referência, exceto que a dada seqüência de polipeptídeo pode incluir até 15, preferivelmente até 10, ainda mais prefe- rivelmente até 5 alterações de aminoácido por cada 100 aminoácidos da seqüência de referência de aminoácido. Em outras palavras, para obter uma 10 dada seqüência de polipeptídeo tendo pelo menos 85%, preferivelmente 90%, ainda mais preferivelmente 95% de identidade de seqüência com uma seqüência de referência de aminoácido, até 15%, preferivelmente até 10%, ainda mais preferivelmente até 5% dos resíduos de aminoácido na seqüên- cia de referência pode ser deletado ou substituído com outro aminoácido, ou 15 um número de aminoácidos até 15%, preferivelmente até 10%, ainda mais preferivelmente até 5% do número total de resíduos de aminoácido na seqüência de referência pode ser inserido na seqüência de referência. Estas alterações da seqüência de referência podem ocorrer no amino, ou nas po- sições carbóxi terminais da seqüência de referência de aminoácido, ou em 20 qualquer lugar entre aquelas posições terminais, interespersadas ou individualmente entre resíduos na seqüência de referência, ou no um ou mais grupos contíguos dentro da seqüência de referência. Preferivelmente, as posições do resíduo que não são idênticas diferem por substituições de aminoácido conservativas. Contudo, substituições conservativas não são 25 incluídas como uma equiparação quando se determina a identidade de seqüência.

"Homologia de Seqüência", conforme aqui usado, refere-se a um método de determinar a ligação de duas seqüências. Para determinar a homologia de seqüência, duas ou mais seqüências são intimamente alinha- 30 das, e folgas são introduzidas se necessário. Contudo, em contraste à "identidade de seqüência", substituições de aminoácido conservativas são contadas como uma equiparação quando se determina à homologia de seqüência. Em outras palavras, para obter um polipeptídeo ou polinucleotí- seqüência. Em outras palavras, para obter um polipeptídeo ou polinucleotí- deo tendo 95% de homologia de seqüência com um seqüência de referên- cia, 85%, preferivelmente 90%, ainda mais preferivelmente 95% dos resí- duos de aminoácido ou nucleotídeos na seqüência de referência deve se 5 equiparar ou compreender uma substituição conservativa com outro aminoácido ou nucleotídeo, ou um número de aminoácidos ou nucleotídeos até 15%, preferivelmente até 10%, ainda mais preferivelmente até 5% dos resíduos de aminoácido totais ou nucleotídeos, não incluindo substituições conservativas, na seqüência de referência pode ser inserido na seqüência 10 de referência. Preferivelmente, a seqüência homóloga compreende pelo me- nos um estiramento de 50, ainda mais preferivelmente pelo menos 100, ain- da mais preferivelmente pelo menos 250, e ainda mais preferivelmente pelo menos 500 nucleotídeos.

Uma "substituição conservativa" refere-se à substituição de um resíduo de aminoácido ou nucleotídeo com outro resíduo de aminoácido ou nucleotídeo tendo características similares ou propriedades incluindo tama- nho, hidrofobicidade etc, tal que a funcionalidade total não muda significante- mente.

"Isolado" significa alterado "pela mão do homem" de seu estado 20 natural, isto é, se ocorre na natureza, foi mudado ou removido de seu ambi- ente original, ou ambos. Por exemplo, um polinucleotídeo ou polipeptídeo naturalmente presente em um organismo vivo não é "isolado," mas o mesmo polinucleotídeo ou polipeptídeo separado a partir dos materiais coexistentes de seu estado natural é "isolado", conforme o termo é empregado aqui.

Desse modo, de acordo com outro aspecto, a presente invenção

proporciona um método para o tratamento ou profilaxia de uma infecção de PCV2, ou para redução de sintomas clínicos causados por ou associados com uma infecção de PCV2 em animais tendo anticorpos anti-PCV2, em particular anticorpos derivados maternais anti-PCV2, compreendendo a 30 etapa de administrar uma quantidade efetiva de antígeno de PCV2, ou uma composição imunogênica compreendendo um antígeno de PCV2 a este animal em necessidade de tal tratamento, no qual referida proteína de PCV2 ORF-2 é qualquer uma daquelas descritas acima. Preferivelmente, referida proteína de PCV2 ORF-2 é

i) um polipeptídeo compreendendo a seqüência de SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 10 ou SEQ ID NO: 11 de

W006/07065;

ii) qualquer polipeptídeo que é pelo menos 80% homólogo ao polipeptídeo de i),

iii) qualquer porção imunogênica dos polipeptídeos de i) e/ou ii)

iv) a porção imunogênica de iii), compreendendo pelo menos 10 aminoácidos contíguos incluídos nas seqüências de SEQ ID NO: 5,

SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 10 ou SEQ ID NO: 11 de W006/072065,

v) um polipeptídeo que é codificado por um DNA compreendendo a seqüência de SEQ ID NO: 3 ou SEQ ID NO: 4 de W006/072065.

vi) qualquer polipeptídeo que é codificado por um polinucleotídeo que é pelo menos 80% homólogo ao polinucleotídeo de v),

vii) qualquer porção imunogênica dos polipeptídeos codificados pelo polinucleotídeo de v) e/ou vi)

viii) a porção imunogênica de vii), no qual polinucleotídeo que codifica re- ferida porção imunogênica compreende pelo menos 30 nucleotídeos

contíguos incluídos nas seqüências de SEQ ID NO: 3, ou SEQ ID NO: 4 de W006/072065.

Preferivelmente qualquer destas porções imunogênicas têm as características imunogênicas de proteína de PCV2 ORF-2 que é codificada pela seqüência de SEQ ID NO: 3 ou SEQ ID NO: 4 de W006/07065.

De acordo com um aspecto adicional, uma proteína de PCV2 ORF-2 é provida na composição imunogênica em um nível de inclusão de antígeno efetivo para indução da resposta imune desejada, a saber, redução da incidência de, diminuição da severidade de, ou prevenção ou redução de 30 um ou mais sintomas clínicos resultantes de ou associados com uma i- nfecção de PCV2. Preferivelmente, o nível de inclusão de proteína de PCV2 ORF-2 é pelo menos 0,2 pg de antígeno/ml da composição imunogênica fi- nal (pg/ml), mais preferivelmente de cerca de 0,2 a cerca de 400 Mg/ml, ain- da mais preferivelmente de cerca de 0,3 a cerca de 200 Mg/ml, ainda mais preferivelmente de cerca de 0,35 a cerca de 100 pg/ml, ainda mais preferi- velmente de cerca de 0,4 a cerca de 50 pg/ml, ainda mais preferivelmente 5 de cerca de 0,45 a cerca de 30 pg/ml, ainda mais preferivelmente de cerca de 0,5 a cerca de 18 pg /ml, ainda mais preferivelmente de cerca de 0,6 a cerca de 15 pg/ml, ainda mais preferivelmente de cerca de 0,75 a cerca de 8 pg/ml, ainda mais preferivelmente de cerca de 1,0 a cerca de 6 pg/ml, ainda mais preferivelmente de cerca de 1,3 a cerca de 3,0 pg/ml, ainda mais prefe- 10 rivelmente de cerca de 1,4 a cerca de 2,5 pg/ml, ainda mais preferivelmente de cerca de 1,5 a cerca de 2,0 pg/ml, e, mais preferivelmente, cerca de 1,6 pg/ml.

De acordo com um outro aspecto, o nível de inclusão de proteí- na de PCV2 ORF-2 é pelo menos 0,2 pg/ PCV2 ORF-2 proteína conforme descrito acima por dose da composição antigênica final (pg/dose), mais pre- ferivelmente de cerca de 0,2 a cerca de 400 pg/dose, ainda mais preferivel- mente de cerca de 0,3 a cerca de 200 pg/dose, ainda mais preferivelmente de cerca de 0,35 a cerca de 100 pg/dose, ainda mais preferivelmente de cerca de 0,4 a cerca de 50 pg/dose, ainda mais preferivelmente de cerca de 0,45 a cerca de 30 pg/dose, ainda mais preferivelmente de cerca de 0,5 a cerca de 18 pg/dose, ainda mais preferivelmente de cerca de 0,6 a cerca de pg/ml, ainda mais preferivelmente de cerca de 0,75 a cerca de 8 pg/dose, ainda mais preferivelmente de cerca de 1,0 a cerca de 6 pg/dose, ainda mais preferivelmente de cerca de 1,3 a cerca de 3,0 pg/dose, ainda mais preferi- velmente de cerca de 1,4 a cerca de 2,5 pg/dose, ainda mais preferivelmen- te de cerca de 1,5 a cerca de 2,0 pg/dose, e, mais preferivelmente, cerca de

1,6 pg/dose. Foi surpreendentemente verificado que o nível de inclusão de proteína de PCV2 ORF-2 (teor de antígeno) de menos do que 20 pg/dose, preferivelmente de cerca de 0,5 a 18 pg/dose, é adequado para conferir i- 30 munidade em animais jovens e/ou em animais que são positivos para anti- corpos de PCV2, em particular que são positivos para anticorpos derivados maternais anti-PCV2. Desse modo, de acordo com um outro aspecto, a presente invenção proporciona um método para o tratamento ou profilaxia de uma infecção de PCV2, ou para redução de sintomas clínicos causados por ou associados com uma infecção de PCV2 em animais tendo anticorpos an- ti-PCV2, em particular anticorpos derivados maternais anti-PCV2, compre- 5 endendo a etapa de administrar menos do que 20 pg/ dose, preferivelmente de cerca de 0,5 a 18 pg/dose de antígeno de PCV2, ou uma composição imunogênica compreendendo um antígeno de PCV2 a este animal em ne- cessidade de tal tratamento. Referido antígeno de PCV2 é qualquer um des- crito neste pedido de patente. Preferivelmente, referido antígeno de PCV2 é 10 qualquer proteína de PCV2 ORF-2, mais preferivelmente qualquer proteína de PCV2 ORF-2 conforme aqui descrita.

O polipeptídeo de PCV2 ORF-2 usado na composição imunogê- nica, de acordo com a presente invenção, pode ser derivado de qualquer modo incluindo isolamento e purificação de PCV2 ORF2, síntese de proteína 15 padrão, e metodologia recombinante. Métodos preferidos para obtenção de polipeptídeo de PCV2 ORF-2 são providos em W006/072065, os ensina- mentos e conteúdo sendo aqui incorporado por referência em sua totalidade. Brevemente, células susceptíveis são infectadas com um vetor viral recom- binante contendo seqüências de codificação de DNA de PCV2 ORF-2, poli- 20 peptídeo de PCV2 ORF-2 é expresso pelo vírus recombinante, e o polipeptí- deo de PCV2 ORF-2 expresso é recuperado a partir do sobrenadante e ina- tivado por qualquer método convencional, preferivelmente usando-se etileni- mina primária, que é, em seguida, neutralizada para cessar o processo de inativação.

A composição imunogênica, conforme aqui usada, também

refere-se a uma composição que compreende i) qualquer da proteína de PCV2 ORF-2 descrita acima, preferivelmente nas concentrações descritas acima, e ii) pelo menos uma porção do vetor viral que expressa referida pro- teína de PCV2 ORF-2, preferivelmente de um baculovírus recombinante. 30 Além disso, a composição imunogênica pode compreender i) qualquer das proteínas de PCV2 ORF-2 descritas acima, preferivelmente em concentra- ções descritas acima, ii) pelo menos uma porção do vetor viral que expressa referida proteína de PCV2 ORF-2, preferivelmente de um baculovírus re- combinante, e iii) uma porção de sobrenadante de cultura de célula.

Desse modo, de acordo com outro aspecto, a presente invenção proporciona um método para o tratamento ou profilaxia de uma infecção de 5 PCV2, ou para redução de sintomas clínicos causados por ou associados com uma infecção de PCV2 em animais tendo anticorpos anti-PCV2, em particular anticorpos derivados maternais anti-PCV2, compreendendo a etapa de administrar uma quantidade efetiva de antígeno de PCV2, ou uma composição imunogênica compreendendo um antígeno de PCV2 a este 10 animal em necessidade de tal tratamento, no qual o antígeno de PCV2 é PCV2 ORF-2 recombinante, preferivelmente um baculovírus expresso por PCV2 ORF-2. Preferivelmente, estes recombinante ou baculovírus expres- sos por PCV2 ORF-2 tendo a seqüência conforme descrita acima.

A composição imunogênica conforme aqui usada também 15 refere-se a uma composição que compreende i) qualquer das proteínas de PCV2 ORF-2 descritas acima, preferivelmente em concentrações descritas acima, ii) pelo menos uma porção do vetor viral que expressa referida prote- ína de PCV2 ORF-2, preferivelmente de um baculovírus recombinante, e iii) uma porção da cultura de célula; no qual cerca de 90% dos componentes 20 têm um tamanho menor do que 1 μιτι.

A composição imunogênica conforme aqui usada também refere-se a uma composição que compreende i) qualquer das proteínas de PCV2 ORF-2 descritas acima, preferivelmente em concentrações descritas acima, ii) pelo menos uma porção do vetor viral que expressa referida prote- 25 ína de PCV2 ORF-2, iii) uma porção da cultura de célula, iv) e agente de ina- tivação para inativar o vetor viral recombinante preferivelmente BEI, no qual cerca de 90% dos componentes i) a iii) têm um tamanho menor do que 1 pm. Preferivelmente, BEI está presente em concentrações efetivas para ina- tivar o baculovírus, preferivelmente em uma quantidade de 2 a cerca de 8 30 mM BEI, preferivelmente de cerca de 5 mM BEI.

A composição imunogênica conforme aqui usada também refere-se a uma composição que compreende i) qualquer das proteínas de PCV2 ORF-2 descritas acima, preferivelmente em concentrações descritas acima, ii) pelo menos uma porção do vetor viral que expressa referida prote- ína de PCV2 ORF-2, iii) uma porção da cultura de célula, iv) um agente de inativação para inativar o vetor viral recombinante BEI, e v) um agente de 5 neutralização para cessar a inativação mediada pelo agente de inativação, no qual cerca de 90% dos componentes i) a iii) têm um tamanho menor do que 1 pm. Preferivelmente, se o agente de inativação é BEI, referida composição compreende tiossulfato de sódio em quantidades equivalentes a BEI.

O polipeptídeo é incorporado em uma composição que pode ser

administrada a um animal susceptível a infecção de PCV2. Em formas prefe- ridas, a composição pode também incluir componentes adicionais conheci- dos àqueles versados na técnica (vide também Remington1S Pharmaceutical Sciences. (1990). 18th ed. Mack Publ., Easton). Adicionalmente, a compo- 15 sição pode incluir um ou mais transportadores veterinários aceitáveis. Con- forme aqui usado, "um transportador veterinário aceitável" inclui qualquer e todos solventes, meio de dispersão, revestimentos, adjuvantes, agentes de estabilização, diluentes, conservantes, agentes antibacterial e antifungal, agentes isotônicos, agentes de retardamento de adsorção, e similares. Em 20 uma concretização preferida, a composição imunogênica compreende prote- ína de PCV2 ORF-2 conforme provida aqui, preferivelmente em concentra- ções descritas acima, que é misturada com um adjuvante, preferivelmente Carbopol, e salina fisiológica.

Aqueles versados na técnica compreenderão que a composição 25 usada aqui pode incorporar soluções estéreis fisiologicamente aceitáveis injetáveis conhecidas. Para preparação de uma solução pronta para uso pa- ra injeção parenteral ou infusão, soluções isotônicas aquosas, tais como, por exemplo, salina ou soluções de proteína de plasma correspondente, são prontamente disponíveis. Em adição, as composições imunogênicas e vaci- 30 na da presente invenção podem incluir diluentes, agentes isotônicos, estabi- lizadores, ou adjuvantes. Diluentes podem incluir água, salina, dextrose, e- tanol, glicerol, e similares. Agentes isotônicos podem incluir cloreto de sódio, dextrose, manitol, sorbitol, e lactose, entre outros. Os estabilizadores inclu- em albumina e sais alcalinos de ácido etilendiamintetracático, entre outros.

"Adjuvantes", conforme aqui usados, podem incluir hidróxido de alumínio e fosfato de alumínio, saponins, por exemplo, Quil A, QS-21 (Cam- 5 bridge Biotech Inc., Cambridge MA), GPI-0100 (Galenica Pharmaceuticals, Inc., Birmingham, AL), emulsão água em óleo, emulsão óleo em água, emul- são águia em óleo em água. A emulsão pode ser baseada em particular em óleo de parafina líquida leve (European Pharmacopea type); óleo isoprenoi- de, tal como esqualeno ou óleo de esqualeno resultante de teoligomerização 10 de alquenos, em particular de isobuteno ou deceno; ésteres de ácidos ou de álcoois contendo um grupo alquila linear, mais particularmente óleos de planta, oleato de etila, propileno glicol di-(caprilato/caprato), gliceril tri- (caprilato/caprato) ou de propileno glicol dioleato; ésteres de ácidos graxos ramificados ou álcoois, em particular ésteres de ácido isoesteárico. O óleo é 15 usado em combinação com emulsificantes para formar a emulsão. Os emulsificantes são preferivelmente tensoativos não-iônicos, em particular ésteres de sorbitan, de manida (por exemplo, anidromanitol oleato) de glicol, de poliglicerol, de propileno glicol e ácido oleico, isoesteárico, ricinoleico ou hidroxiesteárico, que são opcionalmente etoxilatados, e blocos de copolíme- 20 ro de polioxipropileno-polioxietileno, em particular os produtos Pluronic, es- pecialmente L121. Vide Hunter et al., The Theory e Practical Application of Adjuvants (Ed.Stewart-Tull, D. E. S.). JohnWiIey e Sons, NY, pp51-94 (1995) e Todd et al., Vaccine 15:564-570 (1997).

Por exemplo, é possível usar a emulsão SPT descrita na página 147 de "Vaccine Design, The Subunit e Adjuvant Approach" editado por M. Powell e M. Newman, Plenum Press, 1995, e a emulsão MF59 descrita na página 183 deste mesmo livro.

Um exemplo adicional de um adjuvante é um composto escolhi- do a partir dos polímeros de ácido acrílico ou metacrílico e os copolímeros de anidrido maléico e derivado de alquenila. Compostos adjuvantes vantajo- sos são os polímeros de ácido acrílico ou metacrílico que são reticulados, especialmente com éteres de polialquenila de açúcares ou poliálcoois. Estes compostos são conhecidos pelo termo carbômero (Phameuropa Vol. 8, N0 2, June 1996). Os versados na técnica podem também se referirem a Patente dos Estados Unidos N0 2.909.462, que descreve tais polímeros acrílicos reticulados com um composto poli-hidroxilatado tendo pelo menos 3 grupos 5 hidroxila, preferivelmente não mais do que 8, os átomos de hidrogênio de pelo menos três hidroxilas sendo substituídas por radicais alifáticos insatura- dos tendo pelo menos 2 átomos de carbono. Os radicais preferidos são a- queles contendo de 2 a 4 átomos de carbono, por exemplo, vinilas, alilas e outros grupos etilenicamente insaturados. Os radicais insaturados podem 10 conter outros substituintes, tais como metila. Os produtos vendidos sob o nome Carbopol; (BF Goodrich, Ohio, USA) são particularmente apropriados. Eles são reticulados com uma alila sucrose ou com alila pentaeritritol. Entre eles, podem ser mencionados Carbopol 974P, 934P e 971 P. Mais preferido é o uso de Carbopol, em particular o uso de Carbopol 971P, preferivelmente 15 em quantidades de cerca de 500 pg a cerca de 5 mg por dose, ainda more preferido uma quantidade de cerca de 750 pg a cerca de 2,5 mg por dose, e mais preferido em uma quantidade de cerca de 1 mg por dose.

Adjuvantes adequados adicionais incluem, mas não estão limi- tados a, o sistema de adjuvante de RIBI (Ribi Inc.), Block co-polymer (CytRx, 20 Atlanta GA), SAF-M (Chiron, Emeryville CA), monofosforila lipídio A, adju- vante Avridine lipídio-amina adjuvante, enterotoxin instável a calor de E. coli (recombinante ou de outro modo), colera toxin, IMS 1314, ou peptídeo mu- ramila, entre muitos outros.

Preferivelmente, o adjuvante é adicionado em uma quantidade 25 de cerca de 100 pg a cerca de 10 mg por dose. Ainda mais preferivelmente, o adjuvante é adicionado em uma quantidade de cerca de 100 pg a cerca de 10 mg por dose. Ainda mais preferivelmente, o adjuvante é adicionado em uma quantidade de cerca de 500 pg a cerca de 5 mg por dose. Ainda mais preferivelmente, o adjuvante é adicionado em uma quantidade de cerca de 30 750 pg a cerca de 2,5 mg por dose. Mais preferivelmente, o adjuvante é adi- cionado em uma quantidade de cerca de 1 mg por dose.

Adicionalmente, a composição pode incluir um ou mais transpor- tadores farmacêuticos aceitáveis. Conforme aqui usado, "um transportador farmacêutico aceitável" inclui qualquer e todos os solventes, meio de disper- são, revestimentos, agentes de estabilização, diluentes, conservantes, agen- tes antibacterial e antifungal, agentes isotônicos, agentes de retardamento 5 de adsorção, e similares. Mais preferivelmente, a composição aqui provida contém proteína de PCV2 ORF-2 recuperada a partir do sobrenadante de células cultivadas in vitro, no qual referidas células foram infectadas com um vetor viral recombinante contendo DNA de PCV2 ORF-2 e expressando pro- teína de PCV2 ORF-2, e no qual referida cultura de célula foi tratada com 10 cerca de 2 a cerca de 8 mM BEI, preferivelmente com cerca de 5 mM BEl para inativar o vetor viral, e uma concentração equivalente de um agente de neutralização, preferivelmente solução de tiossulfato de sódio a uma concentração final de cerca de 2 a cerca de 8 mM, preferivelmente de cerca de 5 mM.

A presente invenção também refere-se a uma composição imu-

nogênica que compreende i) qualquer das proteínas de PCV2 ORF-2 descritas acima, preferivelmente em concentrações descritas acima, ii) pelo menos uma porção do vetor viral que expressa referida proteína de PCV2 ORF-2, iii) uma porção da cultura de célula, iv) um agente de inativação para 20 inativar o vetor viral recombinante preferivelmente BEI, e v) um agente de neutralização para cessar a inativação mediada pelo agente de inativação, preferivelmente tiossulfato de sódio em quantidades equivalentes para BEI; e vi) um adjuvante adequado, preferivelmente Carbopol 971 em quantidades descritas acima; no qual cerca de 90% dos componentes i) a iii) têm um 25 tamanho menor do que 1 pm. DE acordo com um outro aspecto, esta composição imunogênica compreende adicionalmente um sal farmacêutico aceitável, preferivelmente um sal de fosfato em concentrações fisiologica- mente aceitáveis. Preferivelmente, o pH de referida composição imunogêni- ca é ajustado para um pH fisiológico, significando entre cerca de 6,5 e 7,5.

A composição imunogênica, conforme aqui usada, também

refere-se a uma composição que compreende por um ml i) pelo menos

1,6 pg de proteína de PCV2 ÕRF-2 descrita acima, preferivelmente menos do que 20 pg, ii) pelo menos uma porção de baculovírus expressando referi- da proteína de PCV2 ORF-2, iii) uma porção da cultura de célula, iv) cerca de 2 a 8 mM de BEI, v) tiossulfato de sódio em quantidades equivalentes a BEI; e vi) cerca de 1 mg de Carbopol 971, e vii) sal de fosfato em uma con- 5 centração fisiologicamente aceitável; no qual cerca de 90% dos componen- tes i) a iii) têm um tamanho menor do que 1 μιτι, e o pH de referida composição imunogênica é ajustado a cerca de 6,5 to 7,5.

As composições imunogênicas podem adicionalmente incluir um ou mais outros agentes imunomodulatário, tais como, por exemplo, interleu- 10 quins, interferons, ou outras citoquinas. As composições imunogênicas po- dem também incluir Gentamicin e Merthiolate. Enquanto as quantidades e concentrações de adjuvantes e aditivos úteis no contexto da presente inven- ção podem prontamente serem determinadas pelo versado na técnica, a presente invenção contempla composições compreendendo de cerca de 50 15 pg a cerca de 2000 pg de adjuvante e, preferivelmente, cerca de 250 pg/ ml de dose da composição de vacina. Desse modo, a composição imunogênica conforme aqui usada também refere-se a uma composição que compreende de cerca de 1 ug/ml a cerca de 60 pg/ml de antibióticos, e, mais preferivel- mente, menos do que cerca de 30 pg/ml de antibióticos.

A composição imunogênica, conforme aqui usada, também

refere-se a uma composição que compreende i) qualquer das proteínas de PCV2 ORF-2 descritas acima, preferivelmente em concentrações descritas acima, ii) pelo menos uma porção do vetor viral expressando referida proteí- na de PCV2 ORF-2, iii) uma porção da cultura de célula, iv) um agente de 25 inativação para inativar o vetor viral recombinante preferivelmente BEI, e v) um agente de neutralização para cessar a inativação mediada pelo agente de inativação, preferivelmente tiossulfato de sódio em quantidades equiva- lentes a BEI; vi) um adjuvante adequado, preferivelmente Carbopol 971 em quantidades descritas acima; vii) uma concentração farmacêutica aceitável 30 de um tampão de salina, preferivelmente de um sal de fosfato, e viii) um a- gente ativo antimicrobiológico; no qual cerca de 90% dos componentes i) a iii) têm um tamanho menor do que 1 pm. A composição imunogênica, conforme aqui usada, também refere-se a Ingelvac® CircoFLEX®, (Boehringer Ingelheim Vetmedica lnc, St Joseph, MO, USA), CircoVac® (Merial SAS, Lyon, France), CircoVent (Inter- vet Inc., Millsboro, DE, USA), ou Suvaxyn PCV-2 One Dose® (Fort Dodge 5 Animal Health, Kansas City, KA, USA).

Desse modo, de acordo com um outro aspecto, a presente in- venção proporciona um método para o tratamento ou profilaxia de uma i- nfecção de PCV2, ou para redução de sintomas clínicos causados por ou associados com uma infecção de PCV2 em animais tendo anticorpos mater- 10 nais anti-PCV2, compreendendo a etapa de administrar uma quantidade efe- tiva de um antígeno de PCV2 a este animal em necessidade de tal trata- mento, no qual a composição imunogênica é CircoFLEX®, CircoVac®, Cir- coVent ou Suvaxyn PCV-2 One Dose®. Mais preferivelmente, a composição imunogênica é Ingelvac® CircoFLEX®, e/ou o antígeno de PCV2 é PCV2 15 ORF-2, preferivelmente, baculovírus expresso por PCV2 ORF-2, mais prefe- rivelmente conforme incluído em Ingelvac® CircoFLEX®.

Para investigação de uma possível interferência de antígeno de PCV2 com o anticorpo maternal, um estudo foi conduzido, no qual as titula- ções de anticorpo de animais de estudo foram determinadas no momento da 20 vacinação que foram, em seguida, agrupados em uma classe de anticorpo baixa, moderada e alta: Titulações de média geométrica de < 1:100 foram consideradas como titulações de anticorpo baixas, titulações de 1:100 a 1:1000 foram consideradas como titulações de anticorpo moderadas, e titu- lações de >1:1000 foram consideradas como titulações de anticorpo altas. 25 Este modelo de agrupamento é comparável àquele feito em um estudo de campo canadense onde titulações de anticorpo de 1:80 foram consideradas como baixas, titulações de anticorpo de 1:640 como moderadas, e titulações de anticorpo de > 1:1280 como altas (Larochelle et al., 2003, Can. J. Vet. Res.; 67: 114-120). De modo a analisar o impacto de titulações de anticorpo 30 baixas, médias e altas no momento da vacinação na viremia, animais vaci- nados e tratados com placebo foram comparados com relação ao começo, final, duração de viremia, o número de dias de amostragem positiva e a car- ga de vírus. Foi surpreendentemente verificado que a presença de anticor- pos anti-PCV2, em particular de anticorpos derivados maternais, não tinham impacto significante em qualquer destes parâmetros. Em outras palavras, foi surpreendentemente verificado que a eficiência do antígeno de PCV2 na prevenção e tratamento de uma infecção de PCV2, ou na redução de sintomas clínicos causados por ou associados com uma infecção de PCV2 em animais, não foi afetada no dia de vacinação pela presença de anticor- pos anti-PCV2, preferivelmente por titulações de anticorpo de anti-PCV2 de até 1:100, preferivelmente de mais do que 1:100, ainda mais preferivelmente de mais do que 1:250, ainda mais preferivelmente de mais do que 1:500, ainda mais preferivelmente de 1:640; ainda mais preferivelmente de mais do que 1:750, mais preferivelmente de mais do que 1:1000. O efeito pode ser mostrado em um experimento de vacinação de um curso, que significa que o antígeno de PCV2 foi administrado somente uma vez, e sem qualquer admi- nistração subsequente de antígeno de PCV2.

Métodos para detecção e quantificação de anticorpos anti-PCV2 são bem-conhecidos na técnica. Por exemplo, detecção e quantificação de anticorpos de PCV2 podem ser realizadas por imunofluorescência indireta, conforme descrito em Magar et al., 2000, Can. J. Vet Res.; 64: 184-186 ou 20 Magar et al., 2000, J. Comp. Pathol.; 123: 258-269. Ensaios adicionais para quantificação de anticorpos anti-PCV2 são descritos em Opriessnig et al., 2006, 37th Annual Meeting of the American Association of Swine Veterinari- ans. Além disso, o exemplo 2 também descreve um ensaio de imunofluores- cência indireta, que pode ser usado por um versado na técnica. Em casos de 25 resultados controversos e em qualquer questão de dúvida, titulações de anti- PCV2, conforme aqui mencionadas, referem-se àquelas que são/podem ser estimadas pelo ensaio conforme descrito no Exemplo 2.

Desse modo, de acordo com um outro aspecto, a presente in- venção proporciona um método para o tratamento ou profilaxia de uma i- nfecção de PCV2, ou para redução de sintomas clínicos causados por, ou associados com uma infecção de PCV2 em animais tendo anticorpos anti- PCV2, em particular anticorpos maternais, compreendendo a etapa de administrar uma quantidade efetiva de um antígeno de PCV2 a este animal em necessidade de tal tratamento, preferivelmente de menos do que 20 pg/dose, no qual referido animal tem uma titulação de anticorpo anti-PCV2 detectável de até 1:100, preferivelmente de mais do que 1:100, ainda mais 5 preferivelmente de mais do que 1:250, ainda mais preferivelmente de mais do que 1:500, ainda mais preferivelmente de 1:640, ainda mais preferivel- mente de mais do que 1:750, mais preferivelmente de mais do que 1:1000. Preferivelmente, esta titulação de anticorpo anti-PCV2 é detectável e quanti- ficável em um ensaio imune de anti-PCV2 específico, preferivelmente no 10 ensaio conforme descrito no Exemplo 2. Mais preferivelmente, estes anticor- pos anti-PCV-2 são anticorpos derivados maternais. Mais preferivelmente, o antígeno de PCV2 é somente administrado uma vez, preferivelmente com uma dose de menos do que 20 pg/dose.

Leitões com somente titulações baixas (< 1:100) ou titulações moderadas (< 1:1000) de anticorpos derivados maternais anti-PCV2 são suficientes protegidos contra infecção de PCV2s que ocorre antes da sema- na 3 de idade. Portanto, a vacinação em um estágio muito anterior de vida é desejável. Devido aos resultados imprevisíveis e inesperados providos aqui, e demonstrando falta de interferência de anticorpos anti-PCV2 com antígeno de PCV2, vacinação/tratamento de animais antes de 3 semanas de idade torna-se realística. Além disso, foi surpreendentemente verificado que titula- ções de anticorpo anti-PCV2 de mais do que 1:1000 não tinham influência na eficiência da vacina de PCV2, indiferente do nível de titulação de anticor- po inicial existente. Por exemplo, a vacinação de animais de titulação alta (titulação de anticorpo anti-PCV2 > 1:1000) resultou em uma duração 9,5 dias mais curta de viremia, um final anterior de 11,9 dias de viremia, 1,9 dias menos dias de amostragem virêmica, e uma redução de aproximadamente 2 vezes da soma de equivalentes genômicos/ml, conforme comparado a ani- mais de controle não vacinados. Após comparação de animais de titulação "alta", "moderada", e "baixa" vacinados, nenhuma diferença significante foi observada com relação a parâmetros diferentes de viremia de PCV2. Estes resultados indicam que também na presença de titulações de anticorpo anti- PCV2 altas, o antígeno de PCV2 usado para vacinação pode ainda reduzir significantemente a viremia no sangue (final de viremia, duração de viremia, carga de vírus). Em linha com esta descoberta, nenhuma diferença pode ser encontrada com relação ao peso corpóreo vivo quando comparando animais 5 de titulação baixa e alta dos grupos vacinados. Além disso, animais vacina- dos com uma titulação de anticorpo anti-PCV2 alta no momento de vacina- ção/tratamento (> 1:1000) também mostrou um peso corpóreo significante- mente mais alto após o começo de viremia, comparado a animais tratados com placebo com titulações de anticorpo altas iniciais (ver Figura 3). Conse- 10 quentemente, vacinação/tratamento de animais de 1 dia de idade ou mais velho com antígeno de PCV2 é possível. Contudo, a vacinação deve ser fei- ta dentro das primeiras 8, preferivelmente dentro das primeiras 7 semanas de idade. Desse modo, de acordo com um outro aspecto, a presente inven- ção proporciona um método para o tratamento ou profilaxia de uma infecção 15 de PCV2, ou para redução de sintomas clínicos causados por ou associados com uma infecção de PCV2 em animais, compreendendo a etapa de administrar a este animal em necessidade de tal tratamento no dia 1 de idade ou mais tarde, preferivelmente, mas não mais tarde do que, na sema- na 8 de idade, uma quantidade efetiva de um antígeno de PCV2. De acordo 20 com uma concretização preferida, menos do que 20 pg/dose de antígeno de PCV2 são requeridos para conferir imunidade em tal animal. De acordo com uma concretização mais preferida, o antígeno de PCV2, preferivelmente me- nos do que 20 pg/dose deste, é somente administrado uma vez ao animal em necessidade de tal tratamento.

De acordo com um outro aspecto mais geral, a presente inven-

ção proporciona um método para o tratamento ou profilaxia de uma infecção de PCV2, ou para redução de sintomas clínicos causados por ou associados com uma infecção de PCV2 em animais jovens, compreendendo a etapa de administrar uma quantidade efetiva de um antígeno de PCV2 a este animal em necessidade de tal tratamento.

O termo "animal jovem", conforme aqui usado, refere-se a um animal de 1 a 22 dias de idade. Preferivelmente, pelo termo animal jovem, um animal de 1 a 20 dias de idade é significativo. Mais preferivelmente, o termo animal jovem refere-se a um animal de 1 a 15 dias de idade, ainda mais preferivelmente de 1 dia de idade a 14 dias de idade, ainda mais prefe- rivelmente de 1 a 12 dias de idade, ainda mais preferivelmente de 1 a 10 5 dias de idade, ainda mais preferivelmente de 1 a 8 dias de idade, ainda mais preferivelmente de 1 a 7 dias de idade, ainda mais preferivelmente de 1 a 6 dias de idade, ainda mais preferivelmente de 1 a 5 dias de idade, ainda mais preferivelmente de 1 a 4 dias de idade, ainda mais preferivelmente de 1 a 3 dias de idade, ainda mais preferivelmente de 1 ou 2 dia(s) de idade, mais 10 preferivelmente a um animal de 1 dia de idade. Desse modo, de acordo com um outro aspecto, a presente invenção proporciona um método para o tratamento ou profilaxia de uma infecção de PCV2, ou para redução de sintomas clínicos causados por ou associados com uma infecção de PCV2 em animais jovens, compreendendo a etapa de administrar uma quantidade 15 efetiva de um antígeno de PCV2 a um animal de 1 a 22 dias de idade, prefe- rivelmente de 1 a 20 dias de idade, mais preferivelmente de 1 a 15 dias de idade, ainda mais preferivelmente de 1 a 14 dias de idade, ainda mais prefe- rivelmente de 1 a 12 dias de idade, ainda mais preferivelmente de 1 a 10 dias de idade, ainda mais preferivelmente de 1 a 8 dias de idade, ainda mais 20 preferivelmente de 1 a 7 dias de idade, ainda mais preferivelmente de 1 a 6 dias de idade, ainda mais preferivelmente de 1 a 5 dias de idade, ainda mais preferivelmente de 1 a 4 dias de idade, ainda mais preferivelmente de 1 a 3 dias de idade, ainda mais preferivelmente de 1 ou 2 dia(s) de idade, mais preferivelmente em 1 dia de idade em necessidade de tal tratamento. Por 25 exemplo, evidência é dada que vacinação/tratamento nos 19 a 22 dias de idade mostra alta eficiência de vacinação. Além disso, vacinação/tratamento em 12 a 18, preferivelmente 12 a 14 dias de idade tem também se mostrado ser muito efetivo na redução de sintomas clínicos associados com infecção de PCV2s, redução de carga viral total, redução de duração de viremia, re- 30 tardo no começo de viremia, ganho de peso. Além disso, vacinação a 1 se- mana de idade tem também mostrado ser muito efetiva na redução de sintomas clínicos associados com infecção de PCV2, redução de carga viral total, redução de duração de viremia, retardo no começo de viremia, ganho de peso. Preferivelmente, menos do que 20 pg/dose de antígeno de PCV2 são requeridos para conferir imunidade nestes animais jovens. De acordo com uma concretização mais preferida, o antígeno de PCV2, preferivelmente 5 menos do que 20 pg é somente administrado uma vez a este animal jovem em necessidade de tal tratamento.

Devido à ubiquidade de PCV2 no campo, muitos dos leitões jo- vens são seropositivos em relação a PCV2. Desse modo, de acordo com um outro aspecto, a presente invenção proporciona um método para o 10 tratamento ou profilaxia de uma infecção de PCV2, ou para redução de sintomas clínicos causados por ou associados com uma infecção de PCV2 em animais jovens tendo anticorpos anti-PCV2 no dia de vacinação, com- preendendo a etapa de administrar uma quantidade efetiva de um antígeno de PCV2 a um animal de 1 a 22 dias de idade, preferivelmente de 1 a 20 15 dias de idade, mais preferivelmente de 1 a 15 dias de idade, ainda mais pre- ferivelmente de 1 a 14 dias de idade, ainda mais preferivelmente de 1 a 12 dias de idade, ainda mais preferivelmente de 1 a 10 dias de idade, ainda mais preferivelmente de 1 a 8 dias de idade, ainda mais preferivelmente de 1 a 7 dias de idade, ainda mais preferivelmente de 1 a 6 dias de idade, ainda 20 mais preferivelmente de 1 a 5 dias de idade, ainda mais preferivelmente de 1 a 4 dias de idade, ainda mais preferivelmente de 1 a 3 dias de idade, ainda mais preferivelmente em 1 ou 2 dia(s) de idade, mais preferivelmente em 1 dia de idade em necessidade de tal tratamento. Preferivelmente, referidos animais jovens, no dia de vacinação/tratamento, tem uma titulação de anti- 25 corpo anti-PCV2 detectável de até 1:100, preferivelmente de mais do que 1:100, ainda mais preferivelmente de mais do que 1:250, ainda mais preferi- velmente de mais do que 1:500, ainda mais preferivelmente de 1:640, ainda mais preferivelmente de mais do que 1:750, mais preferivelmente de mais do que 1:1000 no dia de vacinação/tratamento. Preferivelmente menos do que 30 20 pg/dose de antígeno de PCV2 são requeridos para conferir uma imunida- de suficiente nestes animais jovens. De acordo com uma concretização mais preferida, o antígeno de PCV2, preferivelmente menos do que 20 pg é so- mente administrado uma vez a este animal jovem em necessidade de tal tratamento.

Conforme descrito acima, vacinação/tratamento de animais jo- vens com antígeno de PCV2 resultou no encurtamento da fase virêmica con- forme comparada a animais de controle não vacinados. O tempo de encur- tamento médio 9.5 dias conforme comparada a animais de controle não va- cinados da mesma espécie. Portanto, de acordo com um outro aspecto, a presente invenção também proporciona um método para o tratamento ou profilaxia de uma infecção de PCV2, ou para redução de sintomas clínicos causados por ou associados com uma infecção de PCV2 em animais jovens, compreendendo a etapa de administrar uma quantidade efetiva de um a- ntígeno de PCV2 a este animal em necessidade de tal tratamento, no qual o tratamento ou profilaxia resulta no encurtamento da fase de viremia de 5 ou mais dias, preferivelmente 6 ou mais dias, ainda mais preferivelmente de 7 ou mais dias, ainda mais preferivelmente de 8 ou mais dias, ainda mais pre- ferivelmente de 9, ainda mais preferivelmente de 10, ainda mais preferivel- mente de 12, ainda mais preferivelmente de 14, mais preferivelmente de mais do que 16 dias, conforme comparado a animais de um grupo de contro- le não tratado da mesma espécie. Em alguns casos a fase virêmica é encur- tada por mais do que 20 dias. Em geral, a vacinação de leitões jovens resultou em uma redução na perda de ganho de peso, na duração mais cur- ta de viremia, em um final antecipado da viremia, e em uma carga de viris mais baixa. Portanto, de acordo um aspecto adicional, a presente invenção proporciona um método para o tratamento ou profilaxia de uma infecção de PCV2, ou para redução de sintomas clínicos causados por ou associados com uma infecção de PCV2 em animais jovens, compreendendo a etapa de administrar uma quantidade efetiva de um antígeno de PCV2 a este animal em necessidade de tal tratamento, no qual referido tratamento ou profilaxia de infecção de PCV2 resulta em um aperfeiçoamento em comparação a animais de um grupo de controle não tratado da mesma espécie em um parâmetro de eficiência da vacina selecionado a partir do grupo consistindo em redução na perda de ganho de peso, na duração mais curta de viremia, em um final antecipado da viremia, uma carga de vírus inferior, ou combina- ções destes. Preferivelmente menos do que 20 pg/dose de antígeno de PCV2 são requeridos para causar qualquer do parâmetro de eficiência da vacina aperfeiçoado acima mencionado. Além disso, tal(is) parâmetro(s) de 5 eficiência da vacina aperfeiçoado(s) é(são) alcançado(s) por uma adminis- tração mais simples de somente uma dose.

O termo "uma quantidade efetiva", conforme aqui usado, signifi- ca, mas não é limitada a, uma quantidade de antígeno que induz ou é capaz de induzir uma resposta imune em um animal, ao qual referida dose efetiva 10 de antígeno de PCV2 é administrada. Preferivelmente, uma quantidade efe- tiva é definida como uma quantidade de antígeno que confere pelo menos uma duração de 10 semanas de imunidade (DOI), preferivelmente pelo me- nos 12 semanas (DOI), mais preferivelmente pelo menos 15 semanas (DOI), mais preferivelmente pelo menos 20 semanas (DOI).

A quantidade que é efetiva depende dos ingredientes da vacina

e da tabela de administração. Tipicamente, quando um vírus inativado ou uma preparação de vírus vivo modificada é usada na vacina de combinação, uma quantidade da vacina contendo cerca de 1020 a cerca de 1090 TCID50 por dose, preferivelmente cerca de 1030 a cerca de 1080 TCID50 por dose, 20 mais preferivelmente, cerca de 1040 a cerca de 1080 TCID50 por dose. Em particular, quando PCV2 vivo modificado é usado nas vacinas, a dose reco- mendada a ser administrada ao animal susceptível é preferivelmente cerca de 103 0 TCID50 (dose infectiva de cultura de tecido 50% do ponto final)/dose a cerca de 1060 TCID50/dose, e, mais preferivelmente, cerca de 104 0 TCID50/ 25 dose a cerca de 1050 TCID50/dose. Em geral, a quantidade de antígeno será entre 0,2 e 5000 microgramas, e entre 1020 e 1090 TCID50, preferivelmente entre 1030 e 1060 TCID50, mais preferivelmente entre 1040 e 1050 TCID50, quando antígeno purificado é usado.

Vacinas de subunidade são normalmente administradas com um nível de inclusão de antígeno de pelo menos 0,2 pg de antígeno per dose, preferivelmente com cerca de 0,2 a cerca de 400 pg/dose, ainda mais prefe- rivelmente com cerca de 0,3 com cerca de 200 pg/dose, ainda mais preferi- velmente com cerca de 0,35 a cerca de 100 pg/dose, ainda mais preferivel- mente com cerca de 0,4 a cerca de 50 pg/dose, ainda mais preferivelmente com cerca de 0,45 a cerca de 30 pg/dose, ainda mais preferivelmente com cerca de 0,5 a cerca de 18 pg/dose, ainda mais preferivelmente com cerca 5 de 0,6 a cerca de 16 pg/dose, ainda mais preferivelmente com cerca de 0,75 a cerca de 8 pg/dose, ainda mais preferivelmente com cerca de 1,0 a cerca de 6 pg/dose, ainda mais preferivelmente com cerca de 1,3 a cerca de 3,0 pg/dose.

Inesperadamente, foi verificado que o uso profilático das compo- sições imunogênicas descritas supra, é efetivo para redução de sintomas clínicos causados por ou associados com infecção de PCV2, preferivelmente em animais jovens e/ou em animais tendo imunidade passiva contra PCV2 no dia de tratamento. Em particular, foi descoberto que o uso profilático das composições imunogênicas conforme aqui descritas, e especificamente de composições compreendendo antígeno de PCV2 ORF-2, é efetivo para re- dução de linfadenopatia, depleção de Iinfoide e/ou histiócitos multinucleados/ gigantes em animais infectados com PCV2 e tendo anticorpos maternais anti-PCV-2 no dia de tratamento/vacinação. Além disso, foi descoberto que o uso profilático das composições imunogênicas conforme descritas aqui, e especificamente de composições compreendendo antígeno de PCV2 ORF-2, é efetivo para redução (1) de pneumonia intersticial com edema interlobular, (2) palidez cutânea ou icterícia, (3) fígados atróficos mosqueados, (4) úlce- ras gástricas, (5) nefrite e (6) distúrbios reprodutivos, por exemplo, aborto, parto de natimorto, "mummies", etc, (7) lesões similares a "Pia", normalmen- te conhecidas para serem associadas com infecções intracelulares de Lawsonia (lleitis), (8) linfadenopatia, (9) depleção de Iinfoide e/ou (10) histió- citos multinucleados/gigantes, (11) Dermatite Suína e Síndrome de Nefropa- tia (PDNS), (12) mortalidade associada a PCVAD, (13) perda de peso asso- ciada a PCVAD, (14), variabilidade de crescimento reduzido (15), frequência reduzida de 'animais raquíticos' (16), co-infecções reduzidas com Complexo de Doença Reprodutiva e Respiratória Suína (PRRSV). Tal composição i- munogênica é também efetiva no aperfeiçoamento de parâmetros de cres- cimento econômicos importantes, tais como tempo para matança, peso da carcaça, proporção de carne magra. Desse modo, o termo "sintomas clíni- cos", conforme aqui usado, significa, mas não é limitado a, (1) de pneumonia intersticial com edema interlobular, (2) palidez cutânea ou icterícia, (3) fíga- dos atróficos mosqueados, (4) úlceras gástricas, (5) nefrite e (6) distúrbios reprodutivos, por exemplo, aborto, parto de natimorto, "mummies", etc, (7) lesões similares a "Pia", normalmente conhecidas para serem associadas com infecções intracelulares de Lawsonia (lleitis), (8) linfadenopatia, (9) de- pleção de Iinfoide e/ou (10) histiócitos multinucleados/gigantes, (11) Dermati- te Suína e Síndrome de Nefropatia (PDNS), (12) mortalidade associada a PCVAD, (13) perda de peso associada a PCVAD, (14), variabilidade de crescimento reduzido (15), frequência reduzida de 'animais raquíticos' (16), co-infecções reduzidas com Complexo de Doença Reprodutiva e Respirató- ria Suína (PRRSV). Além disso, a composição antigênica aqui reduz a carga de circovírus total incluindo um começo posterior, uma duração mais curta, um final antecipado de viremia, e uma carga viral reduzida e seu impacto imunossupressivo em animais jovens, em particular naqueles tendo anticor- pos anti-PCV2 no dia de vacinação, resultando, desse modo, em um nível mais alto de resistência de doença geral e uma incidência reduzida de doen- ças e sintomas associados a PCV2.

Desse modo, de acordo com um outro aspecto, a presente in- venção proporciona um método para o tratamento ou profilaxia de uma i- nfecção de PCV2, ou para redução de sintomas clínicos causados por ou associados com uma infecção de PCV2 em animais jovens e/ou em animais 25 tendo anticorpos anti-PCV2, compreendendo a etapa de administrar uma quantidade efetiva de antígeno de PCV2, ou uma composição imunogênica compreendendo um antígeno de PCV2 a este animal em necessidade de tal tratamento, no qual estes sintomas clínicos são selecionados a partir do gru- po consistindo de: (1) de pneumonia intersticial com edema interlobular, (2) 30 palidez cutânea ou icterícia, (3) fígados atróficos mosqueados, (4) úlceras gástricas, (5) nefrite e (6) distúrbios reprodutivos, por exemplo, aborto, parto de natimorto, "mummies", etc, (7) lesões similares a "Pia", normalmente co- nhecidas para serem associadas com infecções intracelulares de Lawsonia (lleitis), (8) linfadenopatia, (9) depleção de Iinfoide e/ou (10) histiócitos multi- nucleados/gigantes, (11) Dermatite Suína e Síndrome de Nefropatia (PDNS), (12) mortalidade associada a PCVAD, (13) perda de peso associada a PC- 5 VAD, (14), variabilidade de crescimento reduzido (15), frequência reduzida de 'animais raquíticos' (16), co-infecções reduzidas com Complexo de Doen- ça Reprodutiva e Respiratória Suína (PRRSV). De acordo com um outro as- pecto, a presente invenção proporciona um método para o tratamento ou profilaxia de uma infecção de PCV2, ou para redução de sintomas clínicos 10 causados por ou associados com uma infecção de PCV2 em animais jovens, compreendendo a etapa de administrar uma quantidade efetiva de um a- ntígeno de PCV2 a este animal em necessidade de tal tratamento, no qual estes sintomas clínicos são selecionados a partir do grupo consistindo de: (1) de pneumonia intersticial com edema interlobular, (2) palidez cutânea ou 15 icterícia, (3) fígados atróficos mosqueados, (4) úlceras gástricas, (5) nefrite e (6) distúrbios reprodutivos, por exemplo, aborto, parto de natimorto, "mum- mies", etc, (7) lesões similares a "Pia", normalmente conhecidas para serem associadas com infecções intracelulares de Lawsonia (lleitis), (8) linfadeno- patia, (9) depleção de Iinfoide e/ou (10) histiócitos multinucleados/gigantes, 20 (11) Dermatite Suína e Síndrome de Nefropatia (PDNS), (12) mortalidade associada a PCVAD, (13) perda de peso associada a PCVAD, (14), variabili- dade de crescimento reduzido (15), frequência reduzida de 'animais raquíti- cos' (16), co-infecções reduzidas com Complexo de Doença Reprodutiva e Respiratória Suína (PRRSV).

A composição, de acordo com a invenção, pode ser aplicada

oralmente, intradermalmente, intratraquealmente, ou intravaginalmente. A composição preferivelmente pode ser aplicada intramuscularmente ou intra- nasalmente, mais preferivelmente intramuscularmente. Em um corpo de a- nimal, pode se comprovar vantajoso aplicar as composições farmacêuticas 30 conforme descritas acima via uma injeção intravenosa, ou por injeção direta nos tecidos alvos. Para aplicação sistêmica, rotas intravenosas, intravascula- res, intramusculares, intranasais, intraarteriais, intraperitoneais, orais, ou intratecais, são preferidas. Uma aplicação mais local pode ser efetuada subcutaneamente, intradermalmente, intracutaneamente, intracardialmente, intralobalmente, intramedularmente, intrapulmonarmente ou diretamente em ou próximo ao tecido a ser tratado (tecido conectivo-, de osso-, de músculo-, 5 de nervo-, epitelial). Dependendo da duração desejada e da eficiência do tratamento, as composições de acordo com a invenção podem ser adminis- tradas uma vez ou várias vezes, também intermitentemente, por exemplo, em uma base diária por vários dias, semanas ou meses, e em dosagens di- ferentes.

Preferivelmente, uma dose da composição imunogênica, con-

forme descrita acima, é intramuscularmente administrada ao indivíduo em necessidade desta. De acordo com um outro aspecto, o antígeno de PCV2, ou a composição imunogênica compreendendo qualquer tal antígeno de PCV2, conforme descritos aqui, é engarrafado em e administrado a um (1) 15 mL por dose. Desse modo, de acordo com um outro aspecto, a presente in- venção também proporciona 1 ml de composição imunogênica, compreen- dendo antígeno de PCV-2 conforme descrito aqui, para o tratamento ou pro- filaxia de uma infecção de PCV2, ou para redução de sintomas clínicos cau- sados por ou associados com uma infecção de PCV2 em animais jovens, 20 compreendendo a etapa de administrar uma quantidade efetiva de um a- ntígeno de PCV2 a este animal em necessidade de tal tratamento. De acor- do com um outro aspecto, a presente invenção também proporciona 1 ml de composição imunogênica, compreendendo antígeno de PCV-2, conforme descrito aqui, tratamento ou profilaxia de uma infecção de PCV2, ou para 25 redução de sintomas clínicos causados por ou associados com uma infecção de PCV2 em animais tendo anticorpos anti-PCV2, compreendendo a etapa de administrar uma quantidade efetiva de antígeno de PCV2, ou uma composição imunogênica compreendendo um antígeno de PCV2 a este animal em necessidade de tal tratamento.

De acordo com um outro aspecto, pelo menos uma administra-

ção adicional de pelo menos uma dose da composição imunogênica, con- forme descrita acima, é dada a um indivíduo em necessidade desta, no qual a segunda ou qualquer administração adicional é dada pelo menos 14 dias além das administrações inicial ou qualquer das duas. Preferivelmente, a composição imunogênica é administrada com um estimulante imune. Prefe- rivelmente, referido estimulante imune é dado pelo menos duas vezes. Pre- 5 ferivelmente, pelo menos 3 dias, mais preferivelmente pelo menos 5 dias, ainda mais preferivelmente pelo menos 7 dias estão entre a primeira e a se- gunda ou qualquer outra administração do estimulante imune. Preferivelmen- te, o estimulante imune é dado pelo menos 10 dias, preferivelmente 15 dias, ainda mais preferivelmente 20, ainda mais preferivelmente pelo menos 22 10 dias além da administração inicial da composição imunogênica aqui provida. Um estimulante imune preferido é, por exemplo, hemocianin de "keyhole" (KLH), preferivelmente emulsificada com adjuvante de Freund incompleto (KLH/ICFA). Contudo, é aqui compreendido que qualquer outro estimulante imune conhecido a um versado na técnica pode também ser usado. O termo 15 "estimulante imune", conforme aqui usado, significa qualquer agente ou composição que pode disparar a resposta imune, preferivelmente em iniciar ou aumentar uma resposta imune específica, por exemplo, a resposta imune contra uma patogenia específica. É adicionalmente instruído administrar o estimulante imune em uma dose adequada.

O "animal", conforme aqui usado, significa suíno, porco ou leitão.

DESCRIÇÃO DETALHADA DAS CONCRETIZAÇÕES PREFERIDAS

Os seguintes exemplos colocam materiais preferidos e procedi- mentos de acordo com a presente invenção. Embora quaisquer métodos e materiais similares ou equivalentes àqueles descritos aqui podem ser usa- 25 dos na prática ou teste da presente invenção, os métodos preferidos, dispo- sitivos, e materiais são agora descritos, É para ser compreendido, contudo, que estes exemplos são providos por meio de ilustração somente, e nada aqui deve ser considerado uma limitação do escopo total da invenção. EXEMPLO 1 30 Preparação de antígeno de PCV2 ORF-2

Culturas de célula iniciais SF+ de armazenamento de nitrogênio líquido foram crescidas em meio Excell 420 (JRH Biosciences, Inc., Lenexa, KS) em suspensão em frascos giratórios estéreis com agitação constante. As culturas foram crescidas em frascos giratórios de 100 ml_ a 250mL com 25 a 150 mL de meio livre de soro Excell 420. Quando as células se multipli- caram a uma densidade de célula de 1,0 - 8,0 x 106 células/mL, elas foram 5 repartidas em novos vasos com uma densidade de plantio de 0,5 - 1,5 x 106 células/mL. Culturas de expansão subsequentes foram crescidas em frascos giratórias até 36 litros de dimensão, ou em bioreatores de aço inoxidável de até 300 litros por um período de 2-7 dias a 25 - 29°C.

Após semeadura, os frascos foram incubados a 27°C por quatro 10 horas. Subsequentemente, cada frasco foi semeado com um baculovírus recombinante contendo o gene de PCV2 ORF-2 (SEQ ID NO: 4). O baculovírus recombinante contendo o gene de PCV2 ORF-2 foi gerado con- forme descrito em W006/072065. Após serem semeados com o baculovírus, os frascos foram, em seguida, incubados a 27 ± 2°C por 7 dias, e foram 15 também agitados a 100 rpm durante este tempo. Os frascos usam tampas ventiladas para permitir que o ar escoe.

Após incubação, os sobrenadantes resultantes foram colhidos, filtrados de modo a remover restos de célula, e inativados. O sobrenadante foi inativado trazendo-se sua temperatura a 37 ± 2°C, e etilenimina binária 20 (BEI) é adicionada ao sobrenadante a uma concentração final de 5mM. As amostras foram, em seguida, agitadas continuamente por 72 a 96 horas. Uma solução de tiossulfato de sódio a 1,0 M para dar uma concentração mí- nima final de 5 mM foi adicionada para neutralizar qualquer BEI residual. Após inativação, PCV2 ORF-2 tamponado com tampão de fosfato e 25 Carpopol foi adicionado a cerca de 0,5 a 2,5 mg/dose. A dose final compreende cerca de 16 pg de antígeno de PCV2 ORF-2.

EXEMPLO 2

Imunoensaio de Anti PCV-2

Células PK15 (por exemplo, ATCC CCL-33) ou VIDO R1 descri- tas em WO 02/07721, são semeadas em uma placa de 96 cavidades (cerca de 20.000 a 60.000 células por cavidades). As células são infectadas com um isolado de PCV2, quando monocamadas são aproximadamente 65 a 85% confluentes. As células infectadas são incubadas por 48 horas. O meio é removido, e as cavidades são lavadas 2 vezes com com PBS. O tampão lavado é descartado, e as células são tratadas com 50/50 metanol/acetona fixativo frio (~100 μΙ/cavidade) por cerca de 15 minutos a cerca de -20°C. O fixativo é descartado, e as placas são tratadas com ar. Diluições em série de amostras de soro suíno são preparadas em PBS, adicionadas às placas e incubadas para permitir que os anticorpos se liguem se presentes nas amos- tras de soro por cerca de 1 hora a 36,5±1°C. Em adição, diluições em série de uma amostra de controle positivo e negativo de anti-PCV2 (Amostras de Controle Positivo e de Controle Negativo) são operadas em paralelo. As pla- cas são, em seguida, lavadas três vezes com PBS. O PBS é descartado. As placas são, em seguida, manchadas com um Goat anti-Swine FITC comer- cial conjugado diluído 1:100 em PBS, e incubadas por cerca de 1 hora a 36,5+1 °C, que permite a detecção de anticorpos ligados às células infecta- das. Após a incubação ser completada, as microplacas são removidas do incubador, o conjugado é descartado, e as placas são lavadas 2 vezes com PBS. As placas foram lidas usando-se microscopia de UV, e as cavidades individuais reportadas como positivas ou negativas. As amostras de Controle Positivo e Controle Negativo são usadas para monitorar o sistema de teste. Se os controles estão dentro das faixas esperadas, os resultados de teste são aceitáveis em relação aos parâmetros de método de teste. As titulações de anticorpo de soro foram calculadas usando-se a diluição mais alta mos- trando reatividade de IFA específica e o número de cavidades positivas por diluição, ou um ponto final de 50% é calculado usando-se a fórmula de Reed-Muench apropriada.

EXEMPLO 3

Eficiência de PCV2 ORF-2 (Ingelvac® CircoFLEX®) em animais jovens tendo baixos ou altos anticorpos anti-PCV2

Para investigação de uma possível interferência da vacina com o anticorpo maternal, um estudo foi conduzido em que as titulações de anti- corpo de todos os animais do estudo foram determinadas no momento de vacinação que foram, em seguida, agrupados em uma classe de anticorpo baixa, moderada e alta: Titulações médias geométricas de < 1:100 foram consideradas como titulações de anticorpo baixas, titulações de 1:100 to 1:1000 foram consideradas como titulações de anticorpo moderadas, e titu- lações of >1:1000 foram consideradas como titulações de anticorpo altas.

DESEMPENHO DO ESTUDO

Aproximadamente 500 animais foram incluídos no estudo. Os animais de estudo foram balanceados e igualmente distribuídos entre ambos os grupos de tratamento com relação a peso corpóreo inicial e designação de ninhada. Aos 20 dias de idade, todos os animais receberam uma dose 10 simples (1 ml) da vacina de PCV2 (Investigational Veterinary Product, IVP), ou uma dose simples (1 ml) de um placebo contendo sobrenadante de cultura de célula com adjuvante (Control Product, CP) por injeção intramus- cular no lado direito do pescoço. Os animais de estudo foram seguidos até o final de engorda.

Amostras de sangue de todos os animais de estudo foram cole-

tadas e subsequentemente analisadas por IFAT de modo a determinar as titulações de anticorpo no momento de vacinação. Em seguida a isto, as titulações de anticorpo iniciais foram correlacionadas com o ganho de peso. Em adição, dependente da titulação de anticorpo inicial, os animais foram 20 agrupados em três classes (titulações de anticorpo iniciais baixas, modera- das e altas) e animais de 'titulação alta' de ambos os grupos de tratamento foram, em seguida, comparados para possíveis diferenças com relação a ganho de peso e viremia.

RESULTADOS Titulações de Anticorpo Iniciais

No momento de vacinação, a maioria dos animais tinham ou titulações de anticorpo moderadas (definidas como 1:100 a 1:1000), ou titulações de anticorpo altas (definidas como > 1:1000). Somente aproxima- damente 13% por cento dos animais tinham titulações de anticorpo baixas 30 (definidas como < 1:100). Devido à ausência de infecção de PCV2 no mo- mento de iniciação do estudo, pode ser concluído que as titulações de anti- corpo no dia de estudo 0 eram possivelmente maternalmente derivadas. Nenhuma diferença significante nas titulações de anticorpo do dia 0 de estu- do foram observadas entre os dois grupos de tratamento. Um resumo sobre a percentagem de animais por classe de titulação é dado na Figura 1. Correlação de Titulações de Anticorpo no Momento de Vacinação com Vire- mia no Sangue

De modo a determinar se uma titulação de anticorpo alta no momento de vacinação (> 1:1000) tinha um impacto na viremia, animais va- cinados e tratados com placebo com titulações de anticorpo iniciais altas foram comparados com relação ao começo, final, duração de viremia, o nú- 10 mero de dias de amostragem positiva e a carga de vírus. A Tabela 1 resume a comparação de parâmetros de viremia dos 'animais de titulação alta' de ambos os grupos dé tratamento.

Tabela 1: Comparação de viremia em 'animais de titulação alta' de ambos

os grupos de tratamento

Parâmetro Grupo de Número Média Média P Investigado Tratamento de porcos Começo de CP 38 111,90 dias 113.00 dias 0,7843 Viremia IVP 36 109,50 dias 113.00 dias Ns CP-IVP 2,4 dias Duração de CP 38 27,00 dias 27.50 dias <0,0001 Viremia IVP 36 17.50 dias 6.50 dias *** CP-IVP 9.50 dias Final de CP 38 138,90 dias 141,00 dias 0,0033 Viremia IVP 36 127,00 dias 122,50 dias ** CP-IVP 11,9 dias Dias de CP 39 3,70 dias 3.00 dias 0,0082 amostragem IVP 47 1,80 dias 1.00 dias ** positiva CP-IVP 1,9 dias Soma média CP 39 18,79 gE 17,21 gE <0,0001 gE (IogIO) IVP 47 9,12 gE 5,38 gE *** CP-IVP 9,67 gE gE: soma de equivalentes genômicos por ml;

P: valor-p do teste de Wilcoxon Mann-Whitney para comparações entre grupos; ns: não significante, p>0,05; ** significante, p < 0,01; *** signifi- cante, p < 0,001. Comparados aos animais de titulação alta tratados com placebo, os animais de titulação alta tinham 9,5 dias de duração mais curta de viremia, um final antecipado de 1,9 dias de viremia, 1,9 dias menos de dias de amostragem virêmica, e uma redução aproximadamente 2 vezes da so- 5 ma de equivalentes genômicos/ml sobre o curso do estudo. Estes resultados indicam que também na presença de titulações de anticorpo maternais altas, o IVP pode ainda significantemente reduzir viremia no sangue (final de vire- mia, duração de viremia, carga de vírus).

Correlação de Titulações de Anticorpo no Momento de Vacinação com Ganho de Peso

Foi em seguida investigado se a titulação de anticorpo inicial ti- nha qualquer efeito no ganho de peso sobre o curso do estudo. A Tabela 2 apresenta a correlação da titulação de anticorpo inicial com o ganho de peso em intervalos de tempo diferentes conforme determinado pelo cálculo do coeficiente de classificação de Spearman e o valor p.

Uma correlação negativa estatisticamente significante entre a titulação de anticorpo e o ganho de peso foi encontrada para ambos grupos de tratamento nas semanas de estudo 0 a 7, indicando que uma titulação de anticorpo maternal alta influencia negativamente o desenvolvimento de 20 ganho de peso na fase anterior. Nenhuma outra correlação estatisticamente significante entre a titulação de anticorpo inicial e o ganho de peso durante intervalos de tempo diferentes foram observadas. Pode, portanto, ser conclu- ído que o nível de titulação de anticorpo maternal não tem uma influência no ganho de peso de 10 semanas de idade (semana 7 de estudo) em diante 25 para animais nem vacinados, ou para animais tratados com placebo. Tabela 2: Correlação da titulação de anticorpo de PCV2 no momento de

vacinação com ganho de peso corpóreo sobre o curso do estudo

Correlação de titulação de anticorpo no momento de vacinação com ganho de peso Semana Semana Semana Semana de estudo de estudo de estudo de estudo 0-7 7-12 12-17 17-22 r -0,09623 0,03501 -0,00521 -0,02774 CP P 0,0086** 0,3425 ns 0,8884 ns 0,4617 ns n 744 737 728 706 r -0,09748 0,04309 -0,00954 0,026694 IVP P 0,0077** 0,2440 ns 0,7974 ns 0,4710 ns n 746 733 727 718 r: coeficiente de correlação de classificação de Spearman P: valor p de teste em r=0: ns: não significante, p >0,05;

5 ** significante, p < 0,01 n: Número de animais.

Em linha com esta descoberta, nenhuma diferença pode ser en- contrada com relação ao peso corpóreo vivo quando comparando animais de baixa e alta titulação do grupo vacinado. A Figura 2 mostra que o peso corpóreo após o começo de viremia (semana de estudo 17 e 22) foi compa- rável, independente do nível de titulação de anticorpo inicial (Figura 2).

Adicionalmente animais vacinados com uma titulação de anti- corpo alta no momento de vacinação (> 1:1000) também mostraram um pe- 15 so corpóreo significantemente mais alto após o começo de viremia compa- rado a animais tratados com placebo com titulações de anticorpo iniciais al- tas. Conforme pode ser visto na Figura 3, o peso corpóreo (LS Médio) na semana de estudo 17 e na semana de estudo 22 foi, de fato, significante- mente mais alto em 'animais de titulação alta' vacinados (semana de estudo 20 17: 1,55 kg, p = 0,0328; semana de estudo 22: 3,06 kg, p = 0,0007) do que nos 'animais de titulação alta' tratados com placebo. Juntas estas descober- tas demonstram que não existe interferência do IVP com a titulação de anti- corpo no momento de vacinação.

Conclusão

Para análise de uma possível interferência de anticorpo mater- nal, a titulação de anticorpo inicial está correlacionada com os dois parâme- 5 tros de eficiência, viremia no sangue e peso corpóreo vivo. Comparado aos 'animais de titulação alta' tratados com placebo, as seguintes descobertas estatísticas significantes foram notadas para os 'animais de titulação alta' vacinados:

- redução na perda de ganho de peso

- duração mais curta de viremia e final antecipado de viremia

- carga de vírus baixa EXEMPLO 4

Eficiência de PCV2 ORF-2 (Ingelvac® CircoFLEX®) em animais jovens tendo anticorpos anti-PCV2 com relação a depleção de linfoide. inflamação de linfoide. e imunohistoguímica de linfoide (IHC)

O objetivo deste estudo de provocação de vacinação foi avaliar em qual idade os porcos vacinados com Vacina de Circovírus Suíno, Tipo 2, Killed Baculovírus Vector, estabeleceu imunidade na presença de anticorpos maternalmente derivados de Circovírus Suíno Tipo 2 (PCV2). Três parâme- 20 tros principais foram analisados seguindo provocação. Estes três parâmetros incluíam depleção de linfoide, inflamação de linfoide, e imuno-histoquímica de linfoide (IHC). Para demonstrar imunidade na presença de anticorpos de- rivados maternalmente de PCV2, porcos convencionalmente nascidos vaci- nados com vacina de PCV2 em 3 semanas de idade ou em 8 semanas de 25 idade devem demonstrar diferenças estatisticamente significantes (p<0,05) para depleção de linfoide, inflamação de linfoide, e IHC de linfoide, compa- rado com porcos de controle de provocação tratados com Produto de Con- trole em 3 semanas de idade.

DESEMPENHO DO ESTUDO Cento e vinte (120) porcos convencionalmente nascidos, 21 dias

de idade no Dia 0 (DO), foram designados completamente aleatoriamente para um de cinco grupos de tratamento. Em D0, amostras de sangue foram coletadas de todos os porcos.

• Grupo 1a foi tratado com Produto Veterinário Investigacional (IVP; vacina de referência de PCV2) em 3 semanas de idade.

• Grupo 1b foi tratado com Produto Veterinário Investigacional (IVP; vacina de referência de PCV2) em 8 semanas de idade.

• Grupo 2 foi tratado com Produto de Controle (CP) em 3 se- manas de idade.

Os porcos foram observados para avaliações clínicas pós- vacinação de D-1 a D59. Amostras de sangue pré-provocadas foram coletadas em D14, D28, D42, D56 e D63. Um resumo de Titulações Médias Geométricas sorológicas de Grupo de PCV2 (GMT) pré-provocadas são mostradas abaixo na Tabela 3.

Tabela 3: Titulações Médias Geométricas Sorológicas de Grupo de PCV2 (GMT) Pré-Provocadas

Grupo-T ratamento Sorologia PCV2 - GNT DO D14 D28 D42 D56 D63 Gruoo 1 a 556,5 252,8 142,0 56,2 32,0 51,3 IVP administrado em 3 semanas de idade Gruoo 1b 476,2 308,2 151,6 36,2 29,3 48,3 IVP administrado em 8 semanas de idade Grupo 2 513,8 310,7 134,3 36,9 16,9 24,5 CP administrado em 3 semanas de idade Todos os porcos remanescentes receberam 2,0 ml_ de hemoci-

anin de lapa "keyhole" (KLH) emulsificado em adjuvante incompleto de Freund (ICFA) IM no D60 (Dis Pós-Provocação (DPC) -3) e D66 (DPC 3). Em D63 (DPC 0), os porcos remanescentes receberam 1,0 mL de material 20 de provocação PCV2 Iowa State University Veterinary Diagnostic Laboratory (ISUVDL) (4,75 Iog10 TCID50/mL) IM e 1,0 mL do mesmo material IN. Os pe- sos corpóreos, temperaturas retais, observações clínicas, amostras de san- gue e mechas nasais foram coletados no dia de provocação e periodicamen- te pós-provocados. Na necropsia para cada porco, lesões graves foram no- tadas e amostras de tecido de pulmão e de linfoide foram coletadas. Os teci- dos de pulmão e de linfoide foram examinados microscopicamente por 5 ISUVDL para lesões e para a presença de antígeno de PCV2 por teste de IHC. Uma descrição geral da fase de provocação do estudo é mostrada abaixo na tabela 4.

Tabela 4: Fase de Provocação de Estudo

Grupo-T ratamento N0 KLH/ICFA PCV2 KLH/ICFA Dia de no D60 Provocação no D66 Necropsia (DPC-3) no D63 (DPC-3) (DPC-O) Gruoo 1 a 20 Sim Sim Sim D87 (DPC IVP administrado 24)ou D88 em 3 semanas (DPC 25) de idade GruDO 1b 21 Sim Sim Sim D87 (DPC IVP administrado 24)ou D88 em 8 semanas (DPC 25) de idade Gruoo 2 20 Sim Sim Sim D87 (DPC CP administrado 24)ou D88 em 3 semanas (DPC 25) de idade Em D86, as titulações médias geométricas foram 906,6, 2447,1,

2014,9, respectivamente.

RESULTADOS

Seguindo exposição de provocação de PCV2 em D63 e subse- quente necropsia, o Grupo 1a tinha uma proporção inferior estatisticamente 15 significante de porcos positivos para depleção de linfoide (p=0,0084), uma proporção inferior de porcos positiva para inflamação de linfoide (p=0,0079), e uma proporção inferior de porcos com linfoide IHC-tecidos positivos (p=0,0031), todos em comparação ao Grupo 2. Seguindo provocação de PCV2, o Grupo 1b tinha uma proporção inferior estatisticamente significante 20 de porcos positivos para depleção de linfoide (p=0,0148), uma proporção inferior de porcos positiva para inflamação de linfoide (p=0,0036), e uma proporção inferior de porcos com linfoide IHC-tecidos positivos (p=0,0013), todos em comparação ao Grupo 2. Um resumo dos resultados de parâmetro de eficiência primária para os Grupos 1a, 1b e 2 são mostrados abaixo na tabela 5.

Tabela 5: Sumário dos Resultados de Parâmetro de Eficiência Primária pa-

ra os Grupos 1a e 1b comparados com o Grupo 2

Grupo-Tratamento PCV2Soro- Depleção Inflamação HICde lógico estado de Linfoide de Linfoide Linfoide no Dia 0 (+/total) (+/total) (+/total) Gruoo 1a Soropositivo 1/20 (5%) 3/20(15%) 3/20(15%) IVP administrado *p=0,0084 *p=0,0079 *p=0,0031 em 3 semanas de idade Gruoo 1b Soropositivo 2/21 (9,5%) 3/21 (14,3%) 3/21 (4,3%) IVP administrado *p=0,0148 *p=0,0036 *p=0,0013 em 8 semanas de idade Gruoo 2 Soropositivo 9/20 (45%) 12/20 (60%) 13/20 (65%) CP administrado em 3 semanas de idade * valor p comparado com Grupo 2 - Teste Exato de Fisher.

Existem diferenças significantes entre os Grupo 1a e 1b compa-

rado com o Grupo 2 para inflamação de pulmão microscópica (p<0,0407), mas nenhuma diferença significante entre estes grupos para teste de tecido de pulmão positivo para antígeno de PCV2 por teste de IHC (p>0,2317). Não existem diferenças significantes entre os Grupos 1a e 1b comparado com o 15 Grupo 2 para avaliações clínicas pós-vacinação, ADG, sinais clínicos pós- provocação, pirexia, derramamento nasal de PCV2, % de classificações de pulmão total e limpadenopatia.

Em conclusão, o Grupo 1a, vacinado em 3 semanas de idade e tendo um GMT de 556,6 no momento da vacinação, foi significantemente protegido de depleção de linfoide, inflamação de linfoide, e teste de tecidos de linfoide positivos para a antígeno de PCV2 por teste de IHC, comparado com o Grupo 2. O Grupo 1b, vacinado em 8 semanas de idade e tendo um GMT de 151,6 uma semana antes da vacinação, foi significantemente prote- gido de depleção de linfoide, inflamação de linfoide, e teste de tecidos de 5 linfoide positivos para a antígeno de PCV2 por teste de IHC, comparado com o Grupo 2. Porcos com anticorpos maternalmente derivados de PCV2 foram protegidos de Doença Associada a Circovírus Suíno (PCVAD) quando vacinados antes de 3 semanas de idade. LISTAGEM DE SEQÜÊNCIA

<110> BOEHRINGER INGELHEIM VETMEDICA GMBH <120> TRATAMENTO DE PORCOS COM ANTÍGENO DE PCV2 <130> P01-2169 <160> 11 <170> Patentln version 3.3 <210> 1 <211> 8 <212> DNA <213> Artificial <220> <223> seqüência de Kozak modificada <400> 1 ccgccatg 8 <210> 2 <211> 6 <212> DNA <213> Artificial <220> <22 3> Seqüência Eco Rl recombinante <400> 2 gaattc 6 <210> 3 <211> 713 <212> DNA <213> Circovírus suino <400> 3 cagctatgac gtatccaagg aggcgttacc gcagaagaag acaccgcccc cgcagccatc ttggccagat cctccgccgc cgcccctggc tcgtccaccc ccgccaccgc taccgttgga gaaggaaaaa tggcatcttc aacacccgcc tctcccgcac cttcggatat actgtggaga aggaaaaatg gcatcttcaa cacccgcctc tcccgcacct tcggatatac tgtgacgact ttgttccccc gggagggggg accaacaaaa tctctatacc ctttgaatac tacagaataa 60

120

180

240

300 gaaaggttaa ggttgaattc tggccctgct cccccatcac ccagggtgat aggggagtgg 360 gctccactgc tgttattcta gatgataact ttgtaacaaa ggccacagcc ctaacctatg 420 acccatatgt aaactactcc tcccgccata caatccccca acccttctcc taccactccc 480 gttacttcac acccaaacct gttcttgact ccactattga ttacttccaa ccaaataaca 540 aaaggaatca gctttggctg aggctacaaa cctctagaaa tgtggaccac gtaggcctcg 600 gcactgcgtt cgaaaacagt aaatacgacc aggactacaa tatccgtgta accatgtatg 660 tacaattcag agaatttaat cttaaagacc ccccacttaa accctaaatg aat 713 <210> 4 <211> 713 <212> DNA <213> Circovírus suíno <400> 4 ccgccatgac gtatccaagg aggcgttacc gcagaagaag acaccgcccc cgcagccatc 60 ttggccagat cctccgccgc cgcccctggc tcgtccaccc ccgccaccgc taccgttgga 120 gaaggaaaaa tggcatcttc aacacccgcc tctcccgcac cttcggatat actgtcaagg 180 ctaccacagt cacaacgccc tcctgggcgg tggacatgat gagatttaat attgacgact 240 ttgttccccc gggagggggg accaacaaaa tctctatacc ctttgaatac tacagaataa 300 gaaaggttaa ggttgaattc tggccctgct cccccatcac ccagggtgat aggggagtgg 360 gctccactgc tgttattcta gatgataact ttgtaacaaa ggccacagcc ctaacctatg 420 acccatatgt aaactactcc tcccgccata caatccccca acccttctcc taccactccc 480 gttacttcac acccaaacct gttcttgact ccactattga ttacttccaa ccaaataaca 540 aaaggaatca gctttggctg aggctacaaa cctctagaaa tgtggaccac gtaggcctcg 600 gcactgcgtt cgaaaacagt aaatacgacc aggactacaa tatccgtgta accatgtatg 660 tacaattcag agaatttaat cttaaagacc ccccacttga accctaagaa ttc 713 <210> 5 <211> 233 <212> PRT

<213> Circovírus suíno <400> 5

Met Thr Tyr Pro Arg Arg Arg Tyr Arg Arg Arg Arg His Arg Pro Arg 15 10 15

Ser His Leu Gly Gln Ile Leu Arg Arg Arg Pro Trp Leu Val His Pro 20 25 30

Arg His Arg Tyr Arg Trp Arg Arg Lys Asn Gly Ile Phe Asn Thr Arg 35 40 45

Leu Ser Arg Thr Phe Gly Tyr Thr Val Lys Ala Thr Thr Val Thr Thr 50 55 60

Pro Ser Trp Ala vai Asp Met Met Arg Phe Asn Ile Asp Asp Phe Val 65 70 75 80

Pro Pro Gly Gly Gly Thr Asn Lys Ile Ser Ile Pro Phe Glu Tyr Tyr 85 90 95

Arg Ile Arg Lys Val Lys Val Glu Phe Trp Pro Cys Ser Pro Ile Thr 100 105 HO

Gln Gly Asp Arg Gly Val Gly Ser Thr Ala Val Ile Leu Asp Asp Asn 115 120 125

Phe vai Thr Lys Ala Thr Ala Leu Thr Tyr Asp Pro Tyr Val Asn Tyr 130 135 140

Ser Ser Arg His Thr Ile Pro Gln Pro Phe Ser Tyr His Ser Arg Tyr 145 150 155 160

Phe Thr Pro Lys Pro Val Leu Asp Ser Thr Ile Asp Tyr Phe Gln Pro 165' 170 175

Asn Asn Lys Arg Asn Gln Leu Trp Leu Arg Leu Gln Thr ser Arg Asn 180 185 190

Val Asp His Val Gly Leu Gly Thr Ala Phe Glu Asn Ser Lys Tyr Asp 195 200 205

Gln Asp Tyr Asn Ile Arg Val Thr Met Tyr Val Gln Phe Arg Glu Phe 210 215 220

Asn Leu Lys Asp Pro Pro Leu Lys Pro 225 230

<210> 6 <211> 233 <212> PRT

<213> Circovírus suíno <400> 6 Met Thr Tyr Pro Arg Arg Arg Tyr Arg Arg Arg Arg His Arg Pro Arg 10 15

Ser His Leu Gly Gln lie Leu Arg Arg Arg Pro Trp Leu Val His Pro 25 30

Arg His Arg Tyr Arg Trp Arg Arg Lys Asn Gly Ile Phe Asn Thr Arg 40 45

Leu Ser Arg Thr Phe Gly Tyr Thr Val Lys Ala Thr Thr Val Thr Thr

50 55 60

Pro ser Trp Ala Val Asp Met Met Arg Phe Asn Ile Asp Asp Phe Val 65 70 75 80

Pro Pro Gly Gly Gly Thr Asn Lys Ile Ser Ile Pro Phe Glu Tyr Tyr

85 90 95

Arg lie Arg Lys Val Lys vai Glu Phe Trp Pro Cys ser Pro Ile Thr 100 105 110

Gln Gly Asp Arg Gly vai Gly Ser Thr Ala Val Ile Leu Asp Asp Asn 115 120 125

Phe vai Thr Lys Ala Thr Ala Leu Thr Tyr Asp Pro Tyr Val Asn Tyr

130 135 140

Ser ser Arg His Thr Ile Pro Gln Pro Phe ser Tyr His ser Arg Tyr 145 150 155 160

Phe Thr Pro Lys Pro Val Leu Asp Ser Thr Ile Asp Tyr Phe Gln Pro

165 170 175

Asn Asn Lys Arg Asn Gln Leu Trp Leu Arg Leu Gln Thr ser Arg Asn 180 185 190

vai Asp His vai Gly Leu Gly Thr Ala Phe Glu Asn ser Lys Tyr Asp 195 200 205

Gln Asp Tyr Asn Ile Arg vai Thr Met Tyr Val Gln Phe Arg Glu Phe

210 215 220

Asn Leu Lys Asp Pro Pro Leu Glu Pro 225 230

<210> 7 <211> 756 <212> DNA

<213> Artificial <220>

<223> Seqüência de circovirus suino tipo 2, fase aberta de

leitura 2, junto com a porção do vetor pGEM T-easy

<400> 7

gcggccgcgg gaattcgatc cgccatgacg tatccaagga ggcgttaccg cagaagaaga 60 caccgccccc gcagccatct tggccagatc ctccgccgcc gcccctggct cgtccacccc 120 cgccaccgct accgttggag aaggaaaaat ggcatcttca acacccgcct ctcccgcacc 180 ttcggatata ctgtcaaggc taccacagtc acaacgccct cctgggcggt ggacatgatg 240 agatttaata ttgacgactt tgttcccccg ggagggggga ccaacaaaat ctctataccc 300 tttgaatact acagaataag aaaggttaag gttgaattct ggccctgctc ccccatcacc 360 cagggtgata ggggagtggg ctccactgct gttattctag atgataactt tgtaacaaag 420 gccacagccc taacctatga cccatatgta aactactcct cccgccatac aatcccccaa 480 cccttctcct accactcccg ttacttcaca cccaaacctg ttcttgactc cactattgat 540 tacttccaac caaataacaa aaggaatcag ctttggctga ggctacaaac ctctagaaat 600 gtggaccacg taggcctcgg cactgcgttc gaaaacagta aatacgacca ggactacaat 660 atccgtgtaa ccatgtatgt acaattcaga gaatttaatc ttaaagaccc cccacttgaa 720 ccctaagaat tctatcacta gtgaattcgc ggccgc 756

<210> 8

<211> 10387 <212> DNA <213> Artificial <220>

<223> Circovirus suino tipo 2, construto ORF-2, que inclui baculovirus e seqüências codificantes pGEM T-easy <400> 8

aagctttact cgtaaagcga gttgaaggat catatttagt tgcgtttatg agataagatt 60 gaaagcacgt gtaaaatgtt tcccgcgcgt tggcacaact atttacaatg cggccaagtt 120 ataaaagatt ctaatctgat atgttttaaa acacctttgc ggcccgagtt gtttgcgtac 180 gtgactagcg aagaagatgt gtggaccgca gaacagatag taaaacaaaa ccctagtatt 240 ggagcaataa tcgatttaac caacacgtct aaatattatg atggtgtgca ttttttgcgg 300 gcgggcctgt tatacaaaaa aattcaagta gttcaagaat ttattgacac ggtaaaagaa ggcgtgcact gcacacacgg tattaatcgc cacaccctgg gtattgcgcc gcaggaagcc aaaattgaaa gacaaaatta cgttcaagat tttaacaaat actttatcct attttcaaat tgcttcgctt gctccgttta gcttgtagcc gattaggccg gatattctcc accacaatgt ggttttccac gtacgtcttt tggccggtaa cgcacaacac cggatgtttg cgcttgtccg ccaccacttt ggcaactaaa tcggtgacct tcttttgcat ggtttcctgg aagccggtgt tgacctgcaa atctttggcc tcgatctgct actcttgttt tttaacaagt tcctcggttt tgtgctcggt gaatgtcgca atcagcttag gtttgatcgc gggatcgtac ttgccggtgc gccattcttg taattctatg gcgtaaggca cggatttagt aatgagcact gtatgcggct cgctgttaga ggtagggccc ccattttgga tgtctacatg aacacgtata gctttatcac ccttggccac gaaccggacc tgttggtcgc cttctccaaa tttaaattct ccaattttaa tttgcaacaa ctattgtttt ttaacgcaaa tatgggggaa catgcgccgc tacaacactc ggcgcaagcg gctaaaacgt gttgcgcgtt tacagttttg atttgcatat taacggcgat atgacgccta caactccccg cccgcgttga cttcctccgt gtggccgaac acgtcgagcg cgacgcacaa gtatctgtac accgaatgat ggcaatattg gcaaattcga aaatatatac cgttgggcat gtacgtccga acgttgattt tagtgcgatt aaaacgttgt acatcctcgc

cctggccaga ctttgccgcc tgaaagcata 360 tttacagaaa agtgtcccgg catgttggtg 420 accggttaca tggtgtgcag atatttaatg 480 atagatagat tcgaaaaagc cagaggtcac 540 ttattaattt aattaatatt atttgcattc 600 tgttgcgctt cttccagcga accaaaacta 660 gatcagtggc gttgttccaa tcgacggtag 720 tggcaacgtt gatgttacgt ttatgctttt 780 tagccgtaaa cgtagtgccg tcgcgcgtca 840 cggggtattg aaccgcgcga tccgacaaat 900 gcgcgtcttt tttctgcatt atttcgtctt 960 acatgcggtt tagatcagtc atgacgcgcg 1020 tgtccttgat ggcaacgatg cgttcaataa 1080 tttgcgccac caccgcttgc agcgcgtttg 1140 tcaccaactg tttgctctcc tcctcccgtt 1200 agagcacttg aggaattact tcttctaaaa 1260 atttggactt cataatcagc tgaatcacgc 1320 gcaaatacag cgggtcgccc cttttcacga 1380 tggtctgctc aaataacgat ttgtatttat 1440 aaactgtata ttttaaactg ttagcgacgt 1500 gctctagcac gtaccgcagg ttgaacgtat 1560 cgcgagccat tttgatacac gtgtgtcgat 1620 ctaaacttat tgtggtaagc aataattaaa 1680 gtcgttatga acgcagacgg cgccggtctc 1740 caacgcggca aacatcgcaa aagccaatag 1800 tttttaaatt atcttattta ataaatagtt 1860 ctcgctgcac ctcgagcagt tcgttgacgc 1920 ggtggtcgat gaccagcggc gtgccgcacg 1980 cgtcgggcga aggcacgtcg gcctccaagt 2040 agttgggttg tttgcgcata tctatcgtgg 2100 gcatgcaagc cgaaattaaa tcattgcgat 2160 ttttaatcat gccgtcgatt aaatcgcgca 2220 atcgagtcaa gtgatcaaag tgtggaataa gcgcgtattt taacaaacta gccatcttgt aataatatat tatgtatcgc acgtcaagaa acgactatga tagagatcaa ataaagcgcg atctgtgcac gcgttccggc acgagctttg tgacccccgt agtgacaacg atcacgccca atgtcggtga cgttaaaact attaagccat tggtgcgaga agccgcgaag tatggcgaat agagcgtcat gtttagacaa gaaagctaca aaattgaccc taactccata cacggtattc ggactgcgat tgtacatgct gttaacggct aattttaaaa aacgcagcaa gagaaacatt aatgtcgtcg acatgctgaa caacaagatt aacgatttga aagaaaacaa tgtaccgcgc aactgttaca ttgcaaacgt ggtttcgtgt gctctgacgc atttctacaa ccacgactcc atcaaatccc aagatgtgta taaaccacca ctctgtccgt ttgctggcaa ctgcaagggt aaacaattat aaatgctaaa tttgtttttt catttgtagt attatctata attgaaaacg aatcattttc aaatgattca cagttaattt tagacgcctt gtcgtcttct tcttcgtatt aattaacata gttattatcg tatccatata tgtcataaat atatatgtct tttttaatgg tgtaatttac aacagtgcta ttttctggta aatttatata atcaatgaat ttgggatcgt acgcagcttc ttctagttca attacaccat ccaaaatgtt gtacgaaccg ttaaacaaaa ctgcgagcag ttgtttgttg ttaaaaataa atcacaaact ggaaatgtct atcaatatat gataaccatc tcgcaaataa ataagtattt aaacctataa atattccgga ttattcatac

tgttttcttt gtattcccga gtcaagcgca 2280 aagttagttt catttaatgc aactttatcc 2340 ttaacaatgc gcccgttgtc gcatctcaac 2400 aattaaatag cttgcgacgc aacgtgcacg 2460 attgtaataa gtttttacga agcgatgaca 2520 aaagaactgc cgactacaaa attaccgagt 2580 ccaatcgacc gttagtcgaa tcaggaccgc 2640 gcatcgtata acgtgtggag tccgctcatt 2700 tatttaattg atcccgatga ttttattgat 2760 tacaatggcg gggttttggt caaaatttcc 2820 ccgcccacta ttaatgaaat taaaaattcc 2880 tgtatgaaag aatgcgtaga aggaaagaaa 2940 aatatgcctc cgtgtataaa aaaaatattg 3000 ggcggtatgt acaggaagag gtttatacta 3060 gccaagtgtg aaaaccgatg tttaatcaag 3120 aagtgtgtgg gtgaagtcat gcatctttta 3180 aactgccaaa aaatgaaaac tgtcgacaag 3240 ctcaatccta tttgtaatta ttgaataata 3300 attaacgata caaaccaaac gcaacaagaa 3360 cgtagttata atcgctgagg taatatttaa 3420 gcgacaatat aattttattt tcacataaac 3480 CCttCtCttt ttcatttttc tcctcataaa 3540 tgtatctatc gtatagagta aattttttgt 3600 ggtgtatagt accgctgcgc atagtttttc 3660 gttcttcgga gtgtgttgct ttaattatta 3720 cggttttgta caatatgttg ccggcatagt 3780 tttttagcag caccggatta acataacttt 3840 acagttcacc tcccttttct atactattgt 3900 cagccattgt aatgagacgc acaaactaat 3960 agttgctgat atcatggaga taattaaaat 4020 tactgttttc gtaacagttt tgtaataaaa 4080 cgtcccacca tcgggcgcgg atcagatctg 4140 cagcggccgc gggaattcga tccgccatga cgtatccaag gaggcgttac cgcagaagaa 4200 gacaccgccc ccgcagccat cttggccaga tcctccgccg ccgcccctgg ctcgtccacc 4260 cccgccaccg ctaccgttgg agaaggaaaa atggcatctt caacacccgc ctctcccgca 4320 ccttcggata tactgtcaag gctaccacag tcacaacgcc ctcctgggcg gtggacatga 4380 tgagatttaa tattgacgac tttgttcccc cgggaggggg gaccaacaaa atctctatac 4440 cctttgaata ctacagaata agaaaggtta aggttgaatt ctggccctgc tcccccatca 4500 cccagggtga taggggagtg ggctccactg ctgttattct agatgataac tttgtaacaa 4560 aggccacagc cctaacctat gacccatatg taaactactc ctcccgccat acaatccccc 4620 aacccttctc ctaccactcc cgttacttca cacccaaacc tgttcttgac tccactattg 4680 attacttcca accaaataac aaaaggaatc agctttggct gaggctacaa acctctagaa 4740 atgtggacca cgtaggcctc ggcactgcgt tcgaaaacag taaatacgac caggactaca 4800 atatccgtgt aaccatgtat gtacaattca gagaatttaa tcttaaagac cccccacttg 4860 aaccctaaga attctatcac tagtgaattc gcggccgccg gccgctccag aattctagaa 4920 ggtacccggg atcctttcct gggacccggc aagaaccaaa aactcactct cttcaaggaa 4980 atccgtaatg ttaaacccga cacgatgaag cttgtcgttg gatggaaagg aaaagagttc 5040 tacagggaaa cttggacccg cttcatggaa gacagcttcc ccattgttaa cgaccaagaa 5100 gtgatggatg ttttccttgt tgtcaacatg cgtcccacta gacccaaccg ttgttacaaa 5160 ttcctggccc aacacgctct gcgttgcgac cccgactatg tacctcatga cgtgattagg 5220 atcgtcgagc cttcatgggt gggcagcaac aacgagtacc gcatcagcct ggctaagaag 5280 ggcggcggct gcccaataat gaaccttcac tctgagtaca ccaactcgtt cgaacagttc 5340 atcgatcgtg tcatctggga gaacttctac aagcccatcg tttacatcgg taccgactct 5400 gctgaagagg aggaaattct ccttgaagtt tccctggtgt tcaaagtaaa ggagtttgca 5460 ccagacgcac ctctgttcac tggtccggcg tattaaaaca cgatacattg ttattagtac 5520 atttattaag cgctagattc tgtgcgttgt tgatttacag acaattgttg tacgtatttt 5580 aataattcat taaatttata atctttaggg tggtatgtta gagcgaaaat caaatgattt 5640 tcagcgtctt tatatctgaa tttaaatatt aaatcctcaa tagatttgta aaataggttt 5700 cgattagttt caaacaaggg ttgtttttcc gaaccgatgg ctggactatc taatggattt 5760 tcgctcaacg ccacaaaact tgccaaatct tgtagcagca atctagcttt gtcgatattc 5820 gtttgtgttt tgttttgtaa taaaggttcg acgtcgttca aaatattatg cgcttttgta 5880 tttctttcat cactgtcgtt agtgtacaat tgactcgacg taaacacgtt aaataaagct 5940 tggacatatt taacatcggg cgtgttagct ttattaggcc gattatcgtc gtcgtcccaa 6000 ccctcgtcgt tagaagttgc ttccgaagac gattttgcca tagccacacg acgcctatta 6060 attgtgtcgg ctaacacgtc cgcgatcaaa tttgtagttg agctttttgg aattatttct 6120 gattgcgggc gtttttgggc gggtttcaat ctaactgtgc ccgattttaa ttcagacaac 6180 acgttagaaa gcgatggtgc aggcggtggt aacatttcag acggcaaatc tactaatggc 6240 ggcggtggtg gagctgatga taaatctacc atcggtggag gcgcaggcgg ggctggcggc 6300 ggaggcggag gcggaggtgg tggcggtgat gcagacggcg gtttaggctc aaatgtctct 6360 ttaggcaaca cagtcggcac ctcaactatt gtactggttt cgggcgccgt ttttggtttg 6420 accggtctga gacgagtgcg atttttttcg tttctaatag cttccaacaa ttgttgtctg 6480 tcgtctaaag gtgcagcggg ttgaggttcc gtcggcattg gtggagcggg cggcaattca 6540 gacatcgatg gtggtggtgg tggtggaggc gctggaatgt taggcacggg agaaggtggt 6600 ggcggcggtg ccgccggtat aatttgttct ggtttagttt gttcgcgcac gattgtgggc 6660 accggcgcag gcgccgctgg ctgcacaacg gaaggtcgtc tgcttcgagg cagcgcttgg 6720 ggtggtggca attcaatatt ataattggaa tacaaatcgt aaaaatctgc tataagcatt 6780 gtaatttcgc tatcgtttac cgtgccgata tttaacaacc gctcaatgta agcaattgta 6840 ttgtaaagag attgtctcaa gctcgccgca cgccgataac aagccttttc atttttacta 6900 cagcattgta gtggcgagac acttcgctgt cgtcgacgta catgtatgct ttgttgtcaa 6960 aaacgtcgtt ggcaagcttt aaaatattta aaagaacatc tctgttcagc accactgtgt 7020 tgtcgtaaat gttgtttttg ataatttgcg cttccgcagt atcgacacgt tcaaaaaatt 7080 gatgcgcatc aattttgttg ttcctattat tgaataaata agattgtaca gattcatatc 7140 tacgattcgt catggccacc acaaatgcta cgctgcaaac gctggtacaa ttttacgaaa 7200 actgcaaaaa cgtcaaaact cggtataaaa taatcaacgg gcgctttggc aaaatatcta 7260 ttttatcgca caagcccact agcaaattgt atttgcagaa aacaatttcg gcgcacaatt 7320 ttaacgctga cgaaataaaa gttcaccagt taatgagcga ccacccaaat tttataaaaa 7380 tctattttaa tcacggttcc atcaacaacc aagtgatcgt gatggactac attgactgtc 7440 ccgatttatt tgaaacacta caaattaaag gcgagctttc gtaccaactt gttagcaata 7500 ttattagaca gctgtgtgaa gcgctcaacg atttgcacaa gcacaatttc atacacaacg 7560 acataaaact cgaaaatgtc ttatatttcg aagcacttga tcgcgtgtat gtttgcgatt 7620 acggattgtg caaacacgaa aactcactta gcgtgcacga cggcacgttg gagtatttta 7680 gtccggaaaa aattcgacac acaactatgc acgtttcgtt tgactggtac gcggcgtgtt 7740 aacatacaag ttgctaacgt aatcatggtc atagctgttt cctgtgtgaa attgttatcc 7800 gctcacaatt ccacacaaca tacgagccgg aagcataaag tgtaaagcct ggggtgccta 7860 atgagtgagc taactcacat taattgcgtt gcgctcactg cccgctttcc agtcgggaaa 7920 cctgtcgtgc cagctgcatt aatgaatcgg ccaacgcgcg gggagaggcg gtttgcgtat 7980 tgggcgctct tccgcttcct agcggtatca gctcactcaa aggaaagaac atgtgagcaa gctggcgttt ttccataggc tcagaggtgg cgaaacccga cctcgtgcgc tctcctgttc ttcgggaagc gtggcgcttt cgttcgctcc aagctgggct atccggtaac tatcgtcttg agccactggt aacaggatta gtggtggcct aactacggct gccagttacc ttcggaaaaa tagcggtggt ttttttgttt agatcctttg atcttttcta gattttggtc atgagattat aagttttaaá tcaatctaaa aatcãgtgag gcacctatct ccccgtcgtg tagataacta gataccgcga gacccacgct aagggccgag cgcagaagtg ttgccgggaa gctagagtaa tgctacaggc atcgtggtgt ccaacgatca aggcgagtta cggtcctccg atcgttgtca agcactgcat aáttctctta gtactcaacc aagtcattct gtcaatacgg gataataccg acgttcttcg gggcgaaaac acccactcgt gcacccaact agcaaaaaca ggaaggcaaa aatactcata ctcttccttt gagcggatac atatttgaat

cgctcactga ctcgctgcgc aggcggtaat acggttatcc aaggccagca aaaggccagg tccgcccccc tgacgagcat caggactata aagataccag cgaccctgcc gcttaccgga ctcatagctc acgctgtagg gtgtgcacga accccccgtt agtccaaccc ggtaagacac gcagagcgag gtatgtaggc acactagaag gacagtattt gagttggtag ctcttgatcc gcaagcagca gattacgcgc cggggtctga cgctcagtgg caaaaaggat cttcacctag gtatatatga gtaaacttgg cagcgatctg tctatttcgt cgatacggga gggcttacca caccggctcc agatttatca gtcctgcaac tttatccgcc gtagttcgcc ,agttaatagt cacgctcgtc gtttggtatg catgatcccc catgttgtgc gaagtaagtt ggccgcagtg ctgtcatgcc atccgtaaga gagaatagtg tatgcggcga cgccacatag;cagaacttta tctcaaggat cttaccgctg gatcttcagc atcttttact atgccgcaaa aaagggaata ttcaatatta ttgaagcatt gtatttagaa aaataaacaa

tcggtcgttc ggctgcggcg 8040 acagaatcag gggataacgc 8100 aaccgtaaaa aggccgcgtt 8160 cacaaaaatc gacgctcaag 8220 gcgtttcccc ctggaagctc 8280 tacctgtccg cctttctccc 8340 tatctcagtt cggtgtaggt 8400 cagcccgacc gctgcgcctt 8460 gacttatcgc cactggcagc 8520 ggtgctacag agttcttgaa 8580 ggtatctgcg ctctgctgaa 8640 ggcaaacaaa ccaccgctgg 8700 agaaaaaaag gatctcaaga 8760 aacgaaaact cacgttaagg 8820 atccttttaa attaaaaatg 8880 tctgacagtt accaatgctt 8940 tcatccatag ttgcctgact 9000 tctggcccca gtgctgcaat 9060 gcaataaacc agccagccgg 9120 tccatccagt ctattaattg 9180 ttgcgcaacg ttgttgccat 9240 gcttcattca gctccggttc 9300 aaaaaagcgg ttagctcctt 9360 ttatcactca tggttatggc 9420 tgcttttctg tgactggtga 9480 ccgagttgct cttgcccggc 9540 aaagtgctca tcattggaaa 9600 ttgagatcca gttcgatgta 9660 ttcaccagcg tttctgggtg 9720 agggcgacac ggaaatgttg 9780 tatcagggtt attgtctcat 9840 ataggggttc cgcgcacatt 9900 tccccgaaaa gtgccacctg acgtctaaga aaccattatt atcatgacat taacctataa 9960 aaataggcgt atcacgaggc cctttcgtct cgcgcgtttc ggtgatgacg gtgaaaacct 10020 ctgacacatg cagctcccgg agacggtcac agcttgtctg taagcggatg ccgggagcag 10080 acaagcccgt cagggcgcgt cagcgggtgt tggcgggtgt cggggctggc ttaactatgc 10140 ggcatcagag cagattgtac tgagagtgca ccatatgcgg tgtgaaatac cgcacagatg 10200 cgtaaggaga aaataccgca tcaggcgcca ttcgccattc aggctgcgca actgttggga 10260 agggcgatcg gtgcgggcct cttcgctatt acgccagctg gcgaaagggg gatgtgctgc 10320 aaggcgatta agttgggtaa cgccagggtt ttcccagtca cgacgttgta aaacgacggc 10380 cagtgcc 10387

<210> 9 <211> 20 <212> PRT

<213> Circovirus suíno <400> 9

Ser Tyr Pro Arg Arg Arg Tyr Arg Arg Arg Arg His His Pro Pro Ser 10 15

His Leu Gly Gln 20

<210> 10 <211> 19 <212> PRT

<213> Circovirus suíno <400> 10

Pro Arg His His Tyr Arg Pro Arg Arg Lys Asn Gly Ile Phe Asn Thr 1 5 10 15

Thr Leu Ser <210> 11 <211> 233 <212> PRT <213> Artificial <220>

<223> Seqüência de aminoácido para circovírus suíno tipo 2, fase aberta de leitura 2 <400> 11

Met Thr Tyr Pro Arg Arg Arg Tyr Arg Arg Arg Arg His Arg Pro Arg 10 15

Ser His Leu Gly Gln Ile Leu Arg Arg Arg Pro Trp Leu Val His Pro 25 30

Arg His Arg Tyr Arg Trp Arg Arg Lys Asn Gly Ile Phe Asn Thr Arg

40 45

Leu Ser Arg Thr Phe Gly Tyr Thr Val Lys Ala Thr Thr Val Arg Thr 50 55 60

Pro Ser Trp Ala vai Asp Met Met Arg Phe Asn Ile Asp Asp Phe vai 65 70 75 80

Pro Pro Gly Gly Gly Thr Asn Lys Ile Ser Ile Pro Phe Glu Tyr Tyr 85 90 95

Arg Ile Lys Lys vai Lys Val Glu Phe Trp Pro Cys Ser Pro Ile Thr 100 105 110

Gln Gly Asp Arg Gly Val Gly Ser Thr Ala vai Ile Leu Asp Asp Asn

115 120 125

Phe Val Thr Lys Ala Thr Ala Leu Thr Tyr Asp Pro Tyr vai Asn Tyr 130 135 140

Ser Ser Arg His Thr Ile Pro Gln Pro Phe Ser Tyr His ser Arg Tyr 145 150 155 160

Phe Thr Pro Lys Pro Val Leu Asp Ser Thr Ile Asp Tyr Phe Gln Pro 165 170 175

Asn Asn Lys Arg Asn Gln Leu Trp Leu Arg Leu Gln Thr Ser Arg Asn 180 185 190

vai Asp His vai Gly Leu Gly Thr Ala Phe Glu Asn ser Ile Tyr Asp

195 200 205

Gln Asp Tyr Asn lie Arg vai Thr Met Tyr vai Gln Phe Arg Glu Phe 210 215 220

Asn Leu Lys Asp Pro Pro Leu Lys Pro 225 230

Claims

1. Método para o tratamento ou profilaxia de a) infecção de PCV2; ou b) para redução de sintomas clínicos causados por ou associados com uma infecção de PCV2 em animais tendo anticorpos anti-PCV2, e/ou tendo 1 a 22 dias de idade, compreendendo a etapa de administrar uma quantidade efetiva de um antígeno de PCV2 àquele animal em necessidade de tal tratamento.

2. Método, de acordo com a reivindicação 1, em que esses anticorpos anti-PCV2 são anticorpos maternais.

3. Método, de acordo com a reivindicação 1 ou 2, em que os animais têm uma titulação de anticorpo anti-PCV2 de mais do que 1:100 em um imunoensaio específico de PCV.

4. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, em que os animais têm uma titulação de anticorpo anti-PCV2 de mais do que 1:1000 em um imuno ensaio específico de PCV.

5. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 4, em que os animais tratados têm esta titulação de anticorpo anti-PCV2 no momento em que o antígeno de PCV2 é administrado.

6. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 5, em que o antígeno de PCV2 é administrado no T dia de idade, ou mais tarde.

7. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 6, em que o antígeno de PCV-2 é administrado no 14° dia de idade, ou mais tarde.

8. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 7, em que o antígeno de PCV-2 é administrado não mais tarde do que na 7a semana de idade.

9. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 8, em que o tratamento ou profilaxia resulta no encurtamento da fase de viremia de 5 ou mais dias conforme comparado a animais de um grupo de controle não tratado da mesma espécie.

10. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 9, em que referido antígeno de PCV2 é um polipeptídeo tendo pelo menos80% de homologia com ORF-2 de PCV2.

11. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 9, em que referido antígeno de PCV-2 é um ORF-2 expresso por baculovírus recombinante de PCV2.

12. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 11, em que o antígeno de PCV2 é Ingelvac® CircoFLEX®.

13. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 12, em que 0,5 a 18 pg/dose de referido antígeno de PCV2 é administrado a um animal em necessidade de tal tratamento.

14. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 13, em que somente uma dose de antígeno de PCV2 é administrado ao animal em necessidade de tal tratamento.

15. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 14, em que referido tratamento ou profilaxia de infecção de PCV2 resulta em um aperfeiçoamento em comparação a animais de um grupo de controle não-tratado da mesma espécie em um parâmetro de eficiência da vacina selecionado a partir do grupo consistindo em redução na perda de ganho de peso, uma duração mais curta de viremia, um final precoce para viremia, uma carga de vírus mais baixa, ou combinações destes.

16. Método, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a ,15, em que o animal é suíno.