BRPI0908887B1 - composição farmacêutica líquida, recipiente farmacêutico, e, métodos para preparar e para fabricar uma composição farmacêutica - Google Patents

Abstract

COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA LÍQUIDA, RECIPIENTE FARMACÊUTICO, MÉTODOS PARA PREPARAR E PARA FABRICAR UMA COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA, E, USO DE UMA COMPOSIÇÃO FARMACÊUTICA A presente invenção diz respeito a uma composição farmacêutica líquida que compreende um polipeptídeo hormonal estimulador de folículo e cloreto de benzalcônico e álcool benzílico como preservantes. A composição compreende adicionalmente opcionalmente um ou mais outros excipientes farmaceuticamente aceitáveis. Em uma forma de realização, a composição contém metionina como um antioxidante. A composição mostra uma boa estabilidade de armazenagem e é especialmente útil para a profilaxia e tratamento de distúrbios e indicações médicas onde as preparações hormonais estimuladoras de folículo são consideradas como remédios úteis

Description

A presente invenção diz respeito a uma composição farmacêutica líquida que compreende um polipeptídeo hormonal estimulador de folículo, e cloreto de benzalcônio e álcool benzílico como preservantes. A composição compreende adicionalmente opcionalmente um ou mais outros excipientes farmaceuticamente aceitáveis. Em uma forma de realização, a composição contém metionina como um antioxidante. A composição mostra uma boa estabilidade de armazenagem e é especialmente útil para a profilaxia e tratamento de distúrbios e indicações médicas onde as preparações hormonais estimuladoras de folículo são consideradas como remédios úteis.

O hormônio estimulador de folículo (FSH) é produzido pelas células gonadotrópicas da pituitária anterior e liberado na circulação. O FSH atua junto com o hormônio luteinizante (LH) no controle de maturação de oócito em fêmeas e de espermatogênese em machos. Tanto o FSH quanto o LH pertencem a uma família de glicoproteínas heterodiméricas que consistem de duas cadeias α e β não ligadas covalentemente que são codificadas por genes separados. Tanto a cadeia α quanto a cadeia β são glicosiladas. A subunidade α consiste de 92 resíduos de aminoácido enquanto a subunidade β consiste de 111 resíduos de aminoácido, cada um dos quais tem dois locais de glicosilação ligados por asparagina potenciais.

O FSH humano é usado para o tratamento de mulheres com inovulação, para o estímulo de desenvolvimento multifolicular (superovulação) e na preparação para uma concepção assistida, tal como IVF, ICSI, GIFT ou CIFT. Além disso, o FSH humano é usado para estimular a maturação de folículos em mulheres com uma produção de FSH baixa ou inexistente e para o estímulo de espermatogênese em homens com hipogonadismo hipogonadotrópico congênito ou adquirido.

Até os anos 1980, uma fonte primária de FSH humano foi o FSH derivado da urina isolado de urina de mulheres em idade fértil. Uma outra forma purificada de FSH derivado de urina altamente puro foi introduzida nos anos 1990 e finalmente um FSH recombinante foi desenvolvido e amplamente usado desde o ano de 1998. Com o advento da tecnologia de DNA recombinante, tomou-se possível produzir FSH em culturas celulares transfectadas com as sequências de ácido nucleico que codificam quanto às cadeias α e β. As sequências de DNA que codificam quanto às cadeias oc e β e métodos para a produção de FSH recombinante foram descritas em, por exemplo, WO 88/10270, WO 86/04589 e EP 0 735 139.

Correntemente, existem dois produtos de FSH humanos recombinantes comerciais no mercado na Alemanha, GONAl-f® e Puregon®, ambos os quais são produzidos pela expressão das sequências de DNA que codificam quanto às cadeias oc e β do tipo selvagem em células de Ovário de Hamster Chinês (CHO).

Em geral, as proteínas têm uma vida média muito curta e sofrem a desnaturação, tal como agregação de monômeros, dissociação de dímeros e adsorção nas superfícies de vasos na exposição a vários fatores, tais como temperaturas desfavoráveis para a expressão da atividade de proteína, água, interface de ar, pressão alta, tensões físicas/mecânicas, solventes orgânicos e contaminação microbiana.

Consequentemente, as proteínas desnaturadas perdem as propriedades fisicoquímicas intrínsecas e os efeitos fisiologicamente ativos. A desnaturação de proteínas é irreversível e, portanto, as proteínas, uma vez desnaturadas, podem, raramente, recuperar suas propriedades naturais no estado inicial.

Em particular, as proteínas que têm uma estrutura heterodimérica consistindo de duas subunidades diferentes e são administradas em uma quantidade traço menor do que diversas centenas de microgramas de cada vez, tal como FSH humano, sofre de problemas associados com a perda relativamente alta de proteínas incluindo a perda de proteínas devido à dissociação de dímeros em soluções aquosas e adsorção de proteínas na superfície interna de vasos. As proteínas dissociadas perdem sua atividade fisiológica própria e os monômeros dissociados são facilmente suscetíveis à agregação. Além disso, as proteínas absorvidas na superfície interna de vasos também são facilmente vulneráveis à agregação por intermédio do processo de desnaturação. Quando estes são administrados ao corpo humano, as proteínas desta maneira desnaturadas podem servir como a causa de anticorpos contra as proteínas de ocorrência natural no corpo.

Alguns dos produtos farmacêuticos de proteína têm superado os problemas de estabilidade por intermédio da liofilização (secagem por congelamento). Embora estas preparações secadas por congelamento sejam estáveis o bastante para garantir vidas de prateleira suficientes, estes têm a desvantagem que antes da administração, a reconstituição é necessária. O paciente, portanto, necessariamente, tem que reconstituir a glicoproteína seca em um solvente (tal como, água para injeção) antes do uso, que é uma desvantagem e uma inconveniência para o paciente. Além disso, o solvente deve ser fornecido junto com as preparações secadas por congelamento do FSH. Para um paciente que necessita de injeções de um FSH em períodos regulares, por exemplo, um paciente que recebe uma dose diária de um FSH humano recombinante para a indução à ovulação, deve ser de importância que a formulação de gonadotropina seja fácil de se manusear, dosar e injetar. A reconstituição de uma preparação de gonadotropina secada por congelamento demanda prudência e cuidado e deve ser evitada, se possível. Deve facilitar o uso de gonadotropinas, se estas glicoproteínas puderem ser produzidas e distribuídas como uma solução estável ao paciente que deve injetar o medicamento diretamente sem reconstituição. Além disso, o processo de secagem por congelamento é uma etapa de processo caro e consumidor de tempo e seria uma vantagem se esta etapa puder ser evitada quando se prepara uma formulação de gonadotropina.

Portanto, existe uma necessidade quanto a uma preparação de injeção pronta para o uso, tendo uma estabilidade suficiente para garantir uma vida de prateleira razoável.

Como uma medida alternativa para enfrentar tais limitações, a estabilidade da proteína pode ser melhorada pela adição de um estabilizante à proteína no estado de solução. Como exemplos de estabilizantes de proteína úteis, existem tensoativos conhecidos, as proteínas, tais como albuminas, polissacarídeos, aminoácidos, polímeros, sais e outros. Entretanto, o estabilizador mais adequado deve ser selecionado e usado levando-se em consideração as propriedades fisicoquímicas únicas de proteínas individuais. Além disso, o uso combinado de estabilizantes diferentes pode causar efeitos colaterais adversos como suposto aos efeitos esperados, devido à ação competitiva e reação adversa entre os estabilizantes individuais. Além disso, a estabilização bem sucedida de proteínas presentes na solução requer a atenção cuidadosa e muitos esforços, visto que os estabilizantes individuais têm uma faixa de concentração específica favorável para a estabilização das proteínas correspondentes.

O FSH foi formulado tanto em formatos líquidos de dose simples quanto de múltiplas doses, em frascos, carpules ou ampolas. Os formatos de dose simples devem permanecer estáveis e potentes no armazenamento antes do uso. Os formatos de múltiplas doses devem, não apenas, permanecer estáveis e potentes no armazenamento antes do uso, mas também deve permanecer estável, potente e relativamente livre de bactérias no período de administração de uso de múltiplas doses, após o selo da ampola ser comprometido. Por esta razão, os formatos de múltiplas doses frequentemente contêm um agente bacteriostático.

GONAl-f®, uma preparação líquida pronta para o uso de FSH recombinante humano, é disponível como uma solução para a injeção administrada a partir de um caneta de injeção. A solução contém m-cresol como um preservante (ROTE LISTE 2007, N° 50 004). Puregon® também está disponível como uma preparação líquida pronta para o uso para a injeção que contém álcool benzílico como um preservante (ROTE LISTE 2007, N° 50 010).

As preparações líquidas de FSH contendo um preservante também foram descritas na literatura de patente. O pedido de patente internacional WO-A1-00/04913 descreve FSH e formulações variantes de FSH que compreendem um preservante selecionado de fenol, m-cresol, p- cresol, o-cresol, clorocresol, álcool benzílico, alquilparabeno, cloreto de benzalcônio, cloreto de benzetônio, desidroacetato de sódio e tiomerosal. Enquanto o uso destes preservantes é mencionado de uma maneira geral, não existe divulgação de como uma combinação ou mistura específicas de preservantes em uma formulação líquida de FSH humano recombinante.

Além disso, o pedido de patente internacional WO 2004/037607 é direcionado a uma formulação aquosa de FSH humano que compreende glicina, metionina, tensoativo não iônico e um tampão de fosfato como estabilizantes. Além disso, a formulação pode incluir opcionalmente um preservante, mencionando álcool benzílico, cresol, parabeno e misturas destes.

O pedido de patente internacional WO 2004/087213 Al descreve as composições farmacêuticas líquidas de FSH que compreende um tensoativo selecionado de Pluronic® F77, Pluronic® F87, Pluronic® F88 e Pluronic® F68. A composição adicionalmente pode compreender um agente bacteriostático selecionado de fenol, m-cresol, p-cresol, o-cresol, clorocresol, álcool benzílico, alquilparabeno, cloreto de benzalcônio, cloreto de benzetônio, desidroacetato de sódio e tiomerosal. As misturas ou combinações de agentes bacteriostáticos não são mencionados.

Desta maneira, enquanto for desejado fornecer formulações de gonadotropina contendo preservantes, de modo que a formulação é adequada para a administração múltipla, a produção de preparações farmacêuticas preservadas contendo proteína humana mostrou-se difícil. Foi observado que quando os preservantes são usados, estes dão origem a problemas de estabilidade se as preparações farmacêuticas forem armazenadas por períodos longos. Neste processo, as proteínas humanas são inativadas e aglomeradas são formadas podendo ser a causa da intolerância observada às soluções injetadas. Os processos usuais para a produção de formulações farmacêuticas preservadas para os propósitos de infusão ou injeção não podem ser usados no caso de ingredientes de proteína humana ativa, visto que as substâncias ativas são inativadas sob as condições de esterilização em autoclaves a 121 °C e sua estrutura é destruída. Também é conhecido que os preservantes usuais usados na farmácia reagem com os ingredientes de proteína humana ativa e estes são, desse modo, inativados. O tipo de preservativo usado, desempenha um papel importante para a tolerância. Todos os preservantes têm uma razão de alergia maior ou menor. Portanto, é crucial que os preservantes na formulação de proteína humana sejam selecionados em que a boa preservação é atingida, mas também as desvantagens de preservantes específicos em combinação com uma certa glicoproteína humana são minimizados.

Portanto, adicionalmente existe uma necessidade urgente quanto ao desenvolvimento de uma formulação líquida nova de FSH recombinante humano preservado pela presença de preservantes e que é capaz de manter estavelmente a atividade do FSH recombinante humano por um período estendido de tempo.

De acordo com a presente invenção, estes e outros problemas são resolvidos por meio das características da reivindicação principal.

As formas de realização vantajosas são definidas nas sub- reivindicações.

Foi surpreendentemente observado que a formulação de um FSH humano recombinante em uma composição farmacêutica líquida que compreende FSH ou uma variante do mesmo como o agente ativo e tanto cloreto de benzalcônio quanto álcool benzílico como preservantes fornece uma boa estabilidade da composição de modo que este possa ser usado para a dose simples bem como para o uso de múltiplas doses. A composição de acordo com a invenção pode ser armazenada sem esfriamento por um período prolongado de tempo, sem a perda significante de atividade e sem degradação significante. E assumido que a combinação de cloreto de benzalcônio e álcool benzílico como preservantes é particularmente vantajoso em conexão com o FSH glico-hormonal, visto que este fornece preservação melhor e garante que as interações desvantajosas com FHS são mantidas em um mínimo.

A não ser que indicado de outra maneira, as seguintes definições são pretendidas para ilustrar e definir o significado e o escopo dos vários termos usados para descrever a presente invenção.

O termo "FSH" refere-se a um polipeptídeo hormonal estimulador de folículo como uma proteína madura de comprimento total que inclui, mas não se limita a, FSH humano ou "hFSH", se produzido de maneira recombinante ou isolado de fontes humanas, tal como a urina de mulheres na pós-menopausa. A sequência de proteína da glicoproteína humana e a sequência de proteína da subunidade B de FSH humano são conhecidas pela pessoa habilitada na técnica de literatura científica e de patente (ver, por exemplo, WO 2004/087213).

A sequência de aminoácido da cadeia oc de FSH humano é descrita na SEQ ID N° 1 a sequência de aminoácido da cadeia β de FSH humano é descrito na SEQ ID N° 2 como ligado a este relatório descritivo. Estas sequências de aminoácido correspondem às sequências de aminoácido do tipo selvagem da cadeia oc e da cadeia β de FSH humano como depositado sob o número de acessão J 00152 no banco de dados EMBL e sob o número de acessão NM 000510 no banco e dados NCBI, respectivamente.

As sequências de ácido nucleico do tipo selvagem que codificam quanto ao FSH humano são mostradas na SEQ ID N° 3 (= cadeia oc) e N° 4 (= cadeia β).

O FSH recombinante pode ser codificado pela sequência de ácido nucleico do tipo selvagem como naturalmente encontrado no ser humano ou pode ser codificado por uma sequência de ácido nucleico alterada cuja expressão resulta em um FSH tendo a sequência de aminoácido do tipo selvagem, isto é, a sequência de proteína do tipo selvagem como naturalmente encontrada no ser humano.

A sequência de ácido nucleico que codifica quanto ao FSH humano pode, por exemplo, ser alterada de uma tal maneira que uma ou ambas as sequências de ácido nucleico que codificam quanto à cadeia α e β de FSH humano foram adaptadas ao uso de códon em células de Ovário de Hamster Chinês (CHO) a fim de aumentar o nível de expressão e rendimento de FSH recombinante nestes células hospedeiras.

Um exemplo de sequências de ácido nucleico que codificam quanto ao FSH humano que foram modificadas com respeito ao uso de códon em células CHO é descrito no pedido de patente internacional WO 2009/000913. A sequência de ácido nucleico modificado que codifica quanto à cadeia β de FSH humano é a região codificadora da sequência de ácido nucleico descrita na SEQ ID N° 5 (na SEQ ID N° 5 a região codificadora começa no nucleotídeo 56 e estende-se até o nucleotídeo 442) e a sequência de ácido nucleico modificada que codifica quanto à cadeia oc de FSH humano é a região codificadora da sequência de ácido nucleico dada na SEQ ED N° 6 (na SEQ ID N° 6, a região codificadora começa no nucleotídeo 19 e estende- se até o nucleotídeo 366). Uma linha de célula CHO contendo uma molécula de ácido nucleico recombinante que compreende uma primeira sequência de ácido nucleico modificada que codifica quanto à cadeia β de FSH e uma Segunda sequência de ácido nucleico que codifica quanto à cadeia oc de FSH humano foi depositado em 28 de março de 2007 no DSMZ em Braunschweig sob o número de depósito DSM ACC2833.

Em uma forma de realização preferida, a formulação líquida de FSH de acordo com a presente invenção contém um do tipo selvagem humano recombinante que é obtido pela expressão de gene recombinante de sequências de ácido nucleico de FSH que são modificadas com respeito ao uso de códon em células CHO com respeito tanto à cadeia β de FSH humano quanto à cadeia oc de FSH. Em uma outra forma de realização preferida, o FSH recombinante é obtido pela expressão das sequências de ácido nucleico de FSH descritas no WO 2009/000913.

A expressão "variante de FSH" é entendida abranger aquelas moléculas que diferem da sequência de aminoácido, padrão de glicosilação ou na ligação inter-subunidade de FSH humano, mas apresentando atividade de FSH. Os exemplos incluem CTP-FSH, um FSH recombinante modificado de ação longa, que consiste da subunidade oc do tipo selvagem e de uma subunidade β híbrida em que o peptídeo de terminal carbóxi de hCG foi fundido ao terminal C da subunidade β de FSH, como descrito em LaPolt et al. (1992) Endocrinology, 131, 2514-2520 ou Klein et al. (2003) Human Reprod., 18, 50-56. Também está incluída um CTP-FSH de cadeia simples, uma molécula de cadeia simples descrita por Klein et al. (2002) Fertility & Sterility, 77, 1248-1255. Outros exemplos de variantes de FSH incluem moléculas de FSH tendo locais de glicosilação adicionais incorporados na subunidade oc e/ou β, como descrito em WO 01/58493 e moléculas de FSH com ligações S-S inter-subunidade, como descrito no WO 98/58957. Outros exemplos de variantes de FSH são descritos no WO 2004/087213, que são caracterizados por anulações de terminal carbóxi da subunidade β. Outros exemplos de variantes de FSH incluem moléculas de FSH tendo um grau alterado de glicosilação em comparação com o FSH do tipo selvagem devido às mudanças na sequência de aminoácido da proteína pela qual os locais de glicosilação adicionais são introduzidos ou locais de glicosilação de ocorrência natural são anulados.

Além disso, o FSH ou a variante de FSH de acordo com a invenção podem ser uma molécula de FSH que foi modificada pelas porções químicas. Tais conjugados de FSH podem, por exemplo, compreender poli alquileno glicol (tal como PEG), hidroxialquil amido (tal como HES) ou outras porções poliméricas.

Os heterodímeros de FSH ou heterodímeros variantes de FSH podem ser produzidos por qualquer método adequado, tal como recombinantemente, por isolamento ou purificação de fontes naturais, como o caso pode ser ou pela síntese química ou qualquer combinação deste.

O uso do termo "recombinante" refere-se a preparações de FSH ou variantes de FSH que são produzidas através do uso de tecnologia de DNA recombinante (ver, por exemplo, WO 85/01958). As sequências para os clones genômicos e de cDNA de FSH são conhecidos pelas oc e β de diversas espécies. Vários métodos de produzir FSH recombinante ou variantes de FSH usando-se tecnologia recombinante são descritos na técnica anterior, ver, por exemplo, pedido de patente europeu EP 0 711 894 e pedido de patente europeu EP 0 487 512.

O FSH ou a variante de FSH usada de acordo com a presente invenção pode ser produzida não apenas por meios recombinantes, incluindo de células de mamífero, tais como células de Ovário de Hamster Chinês (CHO), mas também pode ser purificado a partir de outras fontes biológicas, tais como de fontes urinárias. As metodologias aceitáveis são descritas na técnica anterior.

O FSH humano recombinante pode ser purificado a partir do sobrenadante de cultura de célula hospedeira por uma ou mais etapas de purificação. Os métodos de purificação adequados são conhecidos pela pessoa habilitada e incluem cromatografia trocadora de íon, cromatografia de interação hidrofóbica, cromatografia de hidroxiapatita, cromatografia de afinidade e filtração de gel. Os métodos para a purificação de FSH recombinante humano são descritos, por exemplo, no WO 00/63248, WO 2006/051070 e WO 2005/063811.

Em uma forma de realização preferida da invenção, o FSH ou a variante de FSH corresponde ao FSH humano ou origina-se de FSH humano, respectivamente. Em uma forma de realização preferida da invenção, o FSH ou a variante de FSH foi produzida pela tecnologia recombinante.

Mais preferivelmente, o FSH é FSH humano que foi produzido recombinantemente, de maneira preferível, particularmente produzido em células de Ovário de Hamster Chinês transfectadas com um vetor ou vetores que compreendem codificação de DNA para a subunidade α de glicoproteína humana e a subunidade β de FSH, codificado por SEQ ID N° 3 e 4 (= sequências de ácido nucleico do tipo selvagem) ou pela SEQ ID N° 5 e 6 (= sequências de ácido nucleico otimizadas por códon). O DNA que codifica as subunidades oc e β podem estar presentes nos mesmos vetores ou diferentes.

O FSH recombinante tem diversas vantagens e sua contraparte urinária. As técnicas de cultura e de isolamento usando-se as células recombinantes permitem consistência entre os grupos. Em contraste, o FSH urinário varia grandemente de grupo a grupo em tais características como pureza, padrão de glicosilação, sialilação e oxidação das subunidades. Devido à consistência de grupo a grupo maior e pureza de FSH recombinante, o hormônio pode ser facilmente identificado e quantificado usando-se técnicas, tais como focalização isoelétrica (IEF). A facilidade com a qual o FSH recombinante pode ser identificado e quantificado permite o enchimento de frascos por massa de hormônio (enchimento-por-massa) em vez de enchimento por biomassa.

O termo "atividade de FSH" refere-se a capacidade de uma formulação de FSH para extrair as respostas biológicas associadas com FSH, tal como ganho de peso ovariano no ensaio Steelman-Pohley (Steelman et al. (1953) Endocrinology 53, 604-616), ou desenvolvimento folicular em um paciente fêmea. O desenvolvimento folicular em um paciente fêmea pode ser avaliado pelo ultrassom, por exemplo, em termos do número de folículos tendo um diâmetro médio de cerca de 16 mm no dia 8 de estímulo. A atividade biológica é avaliada com relação a um padrão aceitável por FSH.

O termo "diluente aquoso" refere-se a um solvente líquido que contém água. Os sistemas de solvente aquoso podem consistir unicamente de água, ou podem consistir de água mais um ou mais solventes misturáveis, e podem conter os solutos diluídos tal como açúcares, tampões, sais ou outros excipientes. Os solventes aquosos usados mais comuns são os alcoóis orgânicos de cadeia curta, tal como metanol, etanol, propanol, cetonas de cadeia curta, tal como acetona, e polialcoóis, tal como glicerol. Em uma forma de realização preferida da invenção, o diluente aquoso é água, isto é a formulação pronta para uso líquida de acordo com a invenção é uma formulação aquosa.

Um "agente de modificação de tonicidade" ou "agente de isotonicidade" é um composto que é fisiologicamente tolerado e comunica a tonicidade adequada a uma formulação para prevenir um fluxo de rede das membranas da célula cruzada por água que estão em contato com a formulação. Os agentes de isotonicidade adequados, mas não são limitados a, glicerol, aminoácidos ou proteínas (por exemplo, glicina ou albumina), sais (por exemplo, cloreto de sódio), açúcares (por exemplo., dextrose, sacarose, trealose e lactose) e alcoóis de açúcares (por exemplo., manitol e sorbitol).

O termo "bacteriostático" ou "agente bacteriostático" ou "preservante" refere-se a uma composição ou substância adicionada a uma formulação para atuar como um agente antibacteriano. Um FSH preservado ou variante de FSH contendo a formulação da presente invenção preferivelmente encontra diretrizes reguladoras ou estatutárias para a efetividade de preservante a ser um produto de uso múltiplo comercialmente viável, preferivelmente em humanos.

Os bacteriostáticos usados nas formulações de acordo com a invenção são cloreto de benzalcônio e álcool benzílico em combinação. Enquanto é possível incluir os preservantes adicionais, tal como fenol, m- cresol, p-cresol, o-cresol, clorocresol, alquilparabeno (metila, etila, propila, butila e outros), cloreto de benzetônio, desidroacetato de sódio ou timerosal, na composição, isto é em adição ao cloreto de benzalcônio e álcool benzílico, é preferido que apenas o cloreto de benzalcônio e álcool benzílico estejam presentes como preservantes.

O termo "tampão" ou "tampão fisiologicamente aceitável" refere-se às soluções de compostos que são conhecidos por segurar para o uso farmacêutico ou veterinário nas formulações e tem o efeito de manter ou controlar o pH da formulação na faixa de pH desejado para a formulação. Os tampões aceitáveis para o controle de pH em um pH moderadamente ácido a um pH moderadamente básico incluem, mas não são limitados a, tais compostos como fosfato, acetato, citrato, arginina, TRIS e histidina. Os tampões preferíveis são tampões de fosfato.

O termo "tampões de fosfato" refere-se às soluções contendo ácido fosfórico ou sais destes, ajustado ao pH desejado. Geralmente, os tampões de fosfato são preparados a partir de ácido fosfórico, ou um sal de ácido fosfórico, incluindo, mas não limitado a sais de sódio e potássio. Diversos sais de ácido fosfórico são conhecidos na técnica tal como monobásico de sódio e potássio, sais dibásicos e tribásicos do ácido. Sais de ácido fosfórico também são conhecidos para ocorrer como hidratos de ocorrência de sal. Os tampões de fosfato podem cobrir uma faixa de pHs, tal como de cerca de pH 4 a cerca de pH 10 e faixas preferidas de cerca de pH 5 a cerca de pH 9 e uma faixa mais preferida de ou cerca de 6,0 de ou cerca de 8,0, mais preferivelmente de ou cerca de pH 7.0. Em uma forma de realização preferida o sistema de tampão consiste unicamente de um tampão de fosfato, isto é nenhum outro agente de tamponamento do que fosfato está presente na formulação.

O termo "frasco" refere-se amplamente a um reservatório adequado para a retenção de FSH na forma líquida em um estado estéril contido. Exemplos de um frasco como usado neste incluem as ampolas, cartuchos, embalagens de bolhas, ou outros tais reservatórios adequados para a liberação de FSH ao paciente por intermédio de seringa, bomba (incluindo osmótico), cateter, emplastro transdérmico, pulverizador transmucosal ou pulmonar. Os frascos adequados para os produtos de acondicionamento para a administração parenteral, pulmonar, transmucosal ou transdérmica são bem conhecidos e reconhecidos na técnica.

O termo "estabilidade" refere-se a estabilidade conformational, química e física de FSH nas formulações da presente invenção (incluindo manutenção da atividade biológica). A instabilidade da formulação de proteína pode ser causada pela degradação química ou agregação das moléculas de proteína para formar os polímeros de ordem mais alta, pela dissociação de heterodímeros em monômeros, desglicosilação, modificação de glicosilação, oxidação (particularmente da oc-subunidade) ou qualquer outra modificação estrutural que reduz pelo menos uma atividade biológica de um polipeptídeo de FSH incluído na presente invenção.

Uma solução "estável" ou formulação ou composição farmacêutica é um em que o grau de degradação, modificação, agregação, perda da atividade biológica e outros, das proteínas neste é aceitavelmente controlada e não inaceitavelmente aumentada com o tempo. Preferivelmente, a formulação retém pelo menos em ou cerca de 80 % da atividade de FSH e pelo menos em um período de 6 meses em uma temperatura de ou cerca de 2 a 8°C. A atividade de FSH pode ser medida pelo uso do bioensaio do ganho de peso ovariano Steelman-Pohley.

O termo "tratamento" refere-se à administração, manutenção, direção e/ou cuidado de um paciente pelo qual a administração de FSH é desejável para o propósito do estímulo testicular ou do folículo ou qualquer outra resposta fisiológica regulada por FSH. O tratamento pode, deste modo, incluir, mas não é limitado a, a administração de FSH para a indução ou melhoramento da qualidade do esperma, estímulo de liberação de testosterona no macho, ou desenvolvimento folicular ou para a indução da ovulação na fêmea.

A expressão "administração de dosagem múltipla" ou "uso de dosagem múltipla" é pretendida incluir o uso de um frasco simples, ampola, carpuíe ou cartucho de uma formulação de FSH para mais do que uma injeção, por exemplo, 2, 3, 4, 5, 6 ou mais injeções. As injeções são preferivelmente feitas em um período de pelo menos em ou cerca de 12 horas, 24 horas, 48 horas etc., preferivelmente até o período de ou cerca de 12 dias. As injeções podem ser espaçadas em tempo, por exemplo, por um período de 6, 12, 24, 48 ou 72 horas.

Observou-se que pela formulação de variantes de FSH ou FSH com tanto cloreto de benzalcônio quanto álcool benzílico como um preservante, estes obtêm uma formulação que mostra uma estabilidade de proteína alta com preservação simultânea boa. Além disso, é assumido que as composições de formulação de FSH de acordo com esta invenção mostram uma tolerância de local melhorado (por exemplo, nenhuma irritação no ponto da injeção) comparado as formulações de FSH conhecidas nas técnicas.

O cloreto de benzalcônio é preferivelmente presente em uma formulação em uma concentração que é suficiente para manter a estabilidade de FSH no período de armazenagem desejada (por exemplo, 6 a 12 a 24 meses) e também em uma concentração que é suficiente para prevenir o desenvolvimento bacteriano.

Preferivelmente, a concentração de cloreto de benzalcônio na formulação líquida de acordo com a invenção é em ou cerca de 0,005 mg/ml de ou cerca de 0,05 mg/ml, mais preferivelmente em ou cerca de 0,01 mg/ml de ou cerca de 0,04 mg/ml, mais preferivelmente de ou cerca de 0,02 mg/ml (0,002 % (p/v)).

O álcool benzílico é preferivelmente presente e uma formulação em uma concentração que é suficiente para manter a estabilidade de FSH no período de armazenagem desejada (por exemplo, 6 a 12 a 24 meses) e também em uma concentração que é suficiente para prevenir o desenvolvimento bacteriano.

Preferivelmente, a concentração de álcool benzílico nas formulações líquidas de acordo com a invenção é em ou cerca de 0,5 mg/ml de ou cerca de 20,0 mg/ml, mais preferivelmente em ou cerca de 1,0 mg/ml de ou cerca de 15,0 mg/ml, mais particularmente preferivelmente em ou cerca de 5,0 mg/ml a cerca de 12,0 mg/ml, mais preferivelmente de ou cerca de 10,0 mg/ml (1,0 % (p/v)).

O hormônio que estimula o folículo (FSH) dentro das formulações líquidas de acordo com a invenção é preferivelmente presente em uma concentração em ou cerca de 150 IU/ml de ou cerca de 2.000 IU/ml, mais preferivelmente em ou cerca de 300 IU/ml de ou cerca de 1.500 IU/ml, mais particularmente preferivelmente em ou cerca de 450 IU/ml de ou cerca de 750 IU/ml, mais preferivelmente de ou cerca de 600 IU/ml.

A bioatividade in vivo específica de FSH recombinante é usualmente na faixa de cerca de 8.000 IU de FSH/mg de proteína a cerca de 16.000 IU de FSH/mg de proteína. Por exemplo, o FSH humano recombinante no produto Puregon comercialmente disponível (de Organon) tem a bioespecificidade de cerca de 10.000 IE/mg proteína e para GonAl-f a partir de Serono da bioatividade de FSH humano recombinante é cerca de 13.600 EE/mg de proteína.

A atividade de FSH pode ser determinada pelos métodos conhecidos em relação ao FSH e outras gonadotropinas. Tais métodos incluem, por exemplo, ensaio de imunoatividade de enzima (EIA) ou ensaios do gene repórter. A bioatividade é usualmente determinado pelo bioensaio descrito na European Pharmacopeia, 5o Edição para FSH derivado de urina. Realizando-se isto a bioatividade é estimada em comparação com o efeito de FSH na dilatação dos ovários dos ratos imaturos tratados com gonadotrofina croriônico com o mesmo efeito de uma preparação padrão.

A concentração da variante de FSH ou FSH na composição farmacêutica líquida de acordo com a invenção é usualmente na faixa de 10 a 200 μg/ml. Se a composição é pretendida pela administração de uso múltiplo, por exemplo, pelo uso de uma caneta de injeção, uma concentração útil de variante de FSH ou FSH será na faixa de 30 a 150 μg/ml, preferivelmente na faixa de 40 a 100 μg/ml.

Em general, a concentração de FSH dependerá do uso (dosagem simples ou dosagem múltipla), no meio de administração, na ferramenta de administração e na bioatividade da variante de FSH ou FSH.

Preferivelmente, a variante de FSH ou FSH é apenas o agente farmaceuticamente ativo presente na composição farmacêutica, adicionalmente em direção possível para incluir outras gonadotropinas, tal como LH.

A composição farmacêutica de acordo com a invenção adicionalmente pode compreender um tensoativo, preferivelmente um tensoativo não iônico, a fim de prevenir a absorção de variante de FSH ou FSH na superfície do frasco, ampola, carpule, cartucho ou seringa. Visto que, o tensoativo não iônico diminui a tensão da superfície de uma solução de proteína, portanto a prevenção da absorção ou agregação das proteínas na superfície hidrofóbica. Os exemplos preferidos do tensoativo não iônico que pode ser usado na presente invenção pode incluir um tensoativo não iônico com base no polissorbato e um tensoativo não iônico com base em poloxâmero. Estes tensoativos não iônicos podem ser usados sozinhos ou em qualquer combinação destes. Particularmente preferido é um tensoativo não iônico com base em polissorbato. Exemplos específicos do tensoativo não iônico com base em polissorbato incluem polissorbato 20, polissorbato 40, polissorbato 60 e polissorbato 80. Mais particularmente preferido são polissorbato 20 e polissorbato 80, mais preferido é polissorbato 20. O polissorbato 20 tem uma concentração de micela crítica relativamente baixa. Portanto, o polissorbato 20 não apenas reduz ou previne a absorção da superfície das proteínas adicionalmente em concentrações baixas, mas também inibem uma degradação química das proteínas. O uso de concentração alta de tensoativo não iônico na composição líquida de acordo com a invenção não é apropriado. Isto ocorre por causa do uso do tensoativo não iônico em concentração alta resulta nos efeitos inerentes, deste modo deste modo tomando difícil avaliar precisamente na estabilidade das proteínas, quando uma determinação da concentração ou avaliação da estabilidade das proteínas é realizado usando um método de análise tal como espectroscopia UV ou foco isoelétrico. Portanto, a formulação aquosa da presente invenção contém o tensoativo não iônico em uma concentração de menos do que 1,0 mg/ml e mais preferivelmente 0,05 a 0,5 mg/ml.

Em . uma forma de realização preferida, o polissorbato 20 é apenas tensoativo presente na formulação.

Preferivelmente, as formulações de FSH da presente invenção têm um pH entre em ou cerca de 6.0 e em ou cerca de 8.0, mais preferivelmente em ou cerca de 6.5 de ou cerca de 7.5, incluindo cerca de pH 6.8, pH 7.0, pH 7.2 e pH 7.4. O tampão preferido é fosfato, com os contra- íons preferidos sendo íons de sódio ou potássio.

As concentrações de tampão na solução total pode ser variada entre 5 mM, 10 mM, 50 mM, 100 mM, 150 mM, 200 mM, 250 mM e 500 mM. Preferivelmente, a concentração de tampão é em ou cerca de 50 mM. Particularmente preferido é um tampão 50 mM nos ions de fosfato com um pH de 7.0.

O pH da formulação pode ser ajustado pela adição de um ácido ou base adequada em uma quantidade apropriada. Em uma forma de realização, o pH da composição farmacêutica líquida é ajustada usando NaOH.

Preferivelmente, as formulações da invenção contêm um antioxidante, tal como metionina, bissulfeto de sódio, sais de ácido tetraacético de etilenodiamina (EDTA), hidroxitolueno butilado (BHT) e anisol de hidroxila butilado (BAH). Mais preferido é metionina. O antioxidante previne a oxidação de FSH (particularmente a a-subunidade).

A metionina na composição farmacêutica líquida é preferivelmente presente em uma concentração de ou cerca de 0,1 de ou cerca de 1,0 mg/ml, mais preferivelmente em ou cerca de 0,2 a 0,8 mg/ml, mais preferivelmente de ou cerca de 0,5 mg/ml.

Em uma forma de realização preferida, a metionina é apenas o antioxidante presente em uma formulação da invenção.

Preferivelmente, as formulações da invenção contêm um mono- ou dissacarídeo ou álcool de açúcar como um estabilizador e tonicidade que ajusta o agente, tal como sacarose, dextrose, lactose, sorbitol e/ou glicerol. Mais preferido é um álcool de açúcar, particularmente preferivelmente manitol.

O açúcar ou álcool de açúcar é preferivelmente presente em uma concentração de ou cerca de 1,0 a 10 mg/ml, mais preferivelmente em uma concentração de ou cerca de 5,0 mg/ml. Em uma forma de realização, manitol está presente na composição de acordo com a invenção em uma quantidade de 5,0 mg/ml.

Em uma forma de realização preferida, o manitol é apenas a tonicidade que ajusta o agente presente em uma formulação da invenção.

Em uma forma de realização preferida, a formulação de acordo com a invenção não contém qualquer glicina.

Em uma forma de realização, a composição farmacêutica líquida da invenção contém FSH ou uma variante do mesmo como o agente ativo, polissorbato 20 e/ou polissorbato 80 como tensoativo, manitol como modificador de tonicidade, fosfato como tampão, metionina como agente de estabilização e álcool benzílico e cloreto de benzalcônio como preservantes e água e nenhum excipiente adicional.

Como notado acima, a invenção fornece as formulações líquidas para o uso simples e uso de dosagem múltipla, contendo uma combinação de pelo menos dois agentes bacteriostáticos. As formulações da invenção são adequadas para o uso farmacêutico ou veterinário.

Em uma forma de realização, a invenção fornece um artigo de fabricação para o uso farmacêutico humano, que compreende o material de acondicionamento e um recipiente que compreende uma solução de variante de FSH ou FSH e álcool benzílico e cloreto de benzalcônio, opcionalmente com os tampões e/ou outros excipientes, em um diluente aquoso, em que o dito material de acondicionamento compreende o material escrito que indica que tal solução pode ser mantida em um período de 24 horas ou mais após o primeiro uso. O reservatório é preferivelmente uma seringa, frasco, frasco de infusão, ampola ou carpule. Mais preferivelmente, o reservatório é um carpule dentro de uma caneta de injeção.

Antes do primeiro uso, isto é, portanto, o selo do reservatório, frasco, ampola, carpule ou cartucho ser quebrado, as formulações da invenção podem ser mantidas por pelo menos em ou cerca de 6 meses, 12 meses ou 24 meses. Sob as condições de armazenagem preferidas, antes do primeiro uso, as composições farmacêuticas da invenção são mantidas sempre de luz clara (preferivelmente no escuro), em temperaturas de ou cerca de 2 a 8°C.

A formulação da invenção pode ser administrada usando os dispositivos reconhecidos. Exemplos que compreendem estes sistemas de frascos simples incluem dispositivos de canetas injetoras para a liberação de uma solução tal como conhecido como, ou de, EasyJect®, GONA1-F® Pen, Humaject®, Novopen®, B-D® Pen, AutoPen®, Follistim-Pen, Puregori-Pen e OptiPen®.

As formulações preservadas estáveis podem ser fornecidas aos a pacientes como as soluções claras. A solução pode ser para o uso simples ou este pode ser usado novamente em tempos múltiplos e podem satisfazer para um ciclo múltiplo ou simples do tratamento do paciente e deste fornece um regime de tratamento mais conveniente do que correntemente disponível.

A formulação aquosa de acordo com a invenção é uma solução pronta para uso, e não existe a reconstituição da preparação de FSH em qualquer ponto no período.

A variante de FSH ou FSH na formulação preservada estável descrita neste podem ser administrado a um paciente de acordo com a presente invenção por intermédio de uma variedade de métodos de liberação, incluindo injeção subcutânea ou intramuscular, transdérmica, pulmonar, transmucosal, implante, bomba osmótica, cartucho, micro bomba, oral, ou outros meios estimados pelo técnico habilitado, como bem conhecido na técnica.

Os seguintes exemplos são fornecidos meramente adicionalmente para ilustrar a preparação das formulações e composições da invenção. O escopo da invenção não deve ser construída como meramente consistente dos seguintes exemplos.

A invenção também diz respeito a um reservatório farmacêutico contendo a composição farmacêutica líquida da invenção. Os reservatórios farmacêuticos adequados são conhecidos a partir da técnica anterior. O reservatório pode, por exemplo, ser uma seringa, frasco, frasco de infusão, ampola ou carpule. Em uma forma de realização preferida, quando o reservatório é uma seringa, a seringa é equipada com um sistema de proteção de agulha. Tais sistemas de proteção de agulha que são bem conhecidos antes da técnica ajudam a reduzir o risco de danos. Em uma outra forma de realização, o reservatório é um carpule dentro de uma caneta de injeção.

A invenção também diz respeito a um método de preparação de uma composição farmacêutica líquida de acordo com a invenção, em que a variante de FSH ou FSH como o agente ativo é formulado em uma preparação aquosa que compreende o cloreto de benzalcônio e álcool benzílico como preservantes e adicionalmente excipientes farmacêuticos.

Em um outro aspecto, a invenção diz respeito ao uso de uma composição farmacêutica líquida de acordo com a invenção para a administração de dosagem múltipla. A composição farmacêutica da invenção pode ser vantajosamente usado no tratamento de infertilidade e outros distúrbios em conexão com FSH. Em uma forma de realização preferida, a formulação de FSH de acordo com a invenção é usada para a tratamento de um humano. Entretanto, no geral a composição farmacêutica da invenção também pode ser administrada a outros mamíferos, tal como ovelha, vaca, porco ou cavalo.

A formulação líquida farmacêutica de acordo com a invenção foi observada exibir uma estabilidade de armazenagem muito boa. Dentro do escopo da presente invenção, o termo "armazenagem estável" é entendida significar que o conteúdo da variante de FSH ou FSH ativa adicionalmente as quantidades de 80 % ou mais da concentração inicial após três meses de armazenagem da formulação a 25°C. Preferivelmente, após a armazenagem por três meses a 25°C, o conteúdo remanescente da atividade de FSH adicionalmente as quantidades de pelo menos 85 %, mais preferivelmente pelo menos 90 % e mais preferivelmente pelo menos 95 % da atividade original.

A atividade biológica da variante de FSH ou FSH pode ser estimada pela comparação, sob as contribuições dadas, seu efeito na dilatação dos ovários dos ratos imaturos tratados com gonadotropina croriônica com o mesmo efeito de uma preparação padrão internacional ou de uma preparação calibrada nas unidades internacionais (European Pharmacopeia, 5o Edição).

A medição da atividade de FSH in vitro é, por exemplo, descrito por Albanese et. al. (1994) Mol. Cell Endocrinol. 101:211-219.

A pureza da variante de FSH ou FSH usada na formulação de acordo com a invenção deve ser pelo menos 95 %, preferivelmente pelo menos 97 %, mais preferivelmente pelo menos 99 % e mais preferivelmente maior do que 99 %. O grau de pureza pode ser determinado por meio da análise HPLC. Os materiais adequados e protocolos para a conduta de tal análise podem ser obtidos de fornecedores comerciais tal como Vydac ou TOSOH Bioscience.

Os componentes para a formulação das soluções de acordo com a invenção podem ser obtidos de fontes convencionais, por exemplo, a partir de companhias tal como Sigma ou Merck.

A produção da formulação da invenção pode ser realizada de acordo com os métodos convencionais. Os componentes da formulação podem ser dissolvidos em um tampão aquoso. Altemativamente, a variante de FSH ou FSH já podem ser obtidos em um tampão aquoso como o resultado do processo de purificação.

Finalmente, a formulação líquida finalizada é carregada em um reservatório farmacêutico adequado, onde este é armazenado sob a administração.

Os seguintes exemplos são pretendidos para ilustrar a invenção sem a limitação do seu escopo.

EXEMPLOS Exemplo 1 Preparação de um FSH humano recombinante pelas tecnologias recombinantes

O FSH humano recombinante é produzido nas células hospedeiras CHO transfectadas pelos métodos padrão. Estes métodos incluem a geração de um clone da célula CHO que produz o FSH humano recombinante de uma ou mais moléculas de ácido nucleico recombinantes que codificam para a cadeia oc e cadeia β de FSH humano, cultivo de células hospedeiras sob as condições estáveis e purificação do FSH humano recombinante a partir da cultura celular. Os processos adequados são descritos na técnica anterior, como mencionado acima.

Em uma forma de realização preferida, o FSH humano recombinante é produzido como descrito no Pedido de Patente Internacional WO 2009/000913.

Exemplo 2 Formulação de FSH líquida Uma formulação líquida que compreende o FSH humano recombinante foi preparada pela formulação dos seguintes componentes em uma solução aquosa de tampões de fosfato.

A bioatividade do FSH humano recombinante foi determinado como cerca de 10.000 IU/mg. O valor de pH da composição foi ajustado pela adição de

NaOH. Todos os ingredientes são de qualidade de acordo com a European Pharmacopoeia (Ph. Fur.). A formulação tem uma tonicidade de 254 mOsmol/kg.

Além disso, duas formulações de técnicas anteriores de FSH foram preparadas como formulações comparativas:

A) Formulação comparativa GonAl-f: 10 mM de fosfato de sódio, 60 mg/ml de sacarose, 0,1 mg/ml de metionina, 0,1 mg/ml de poloxâmero 188, 3 mg/ml de m-cresol, pH 7.0.

B) Formulação comparativa Puregon: 50 mM de citrato de sódio, 50 mg/ml de sacarose, 0,5 mg/ml de metionina, 0,2 mg/ml de polissorbato 20, 10 mg/ml de álcool benzílico, pH 7.0.

Exemplo 3 Testes de estabilidade das formulações de acordo com a presente invenção

As preparações aquosas como descritas no Exemplo 2 foram submetidas a alíquota em 1 ml/frasco e armazenadas a 2 a 8°C, a 25°C e a 37°C. Após a armazenagem por 12 semanas a 25°C e 9 semanas a 37°C as amostras foram testadas por vários parâmetros de teste. A preservação suficiente foi testado de acordo com a European Pharmacopoeia, 5o edição. % de recuperação de FSH, % de diminuição de FSH dimérico (dissociação de FSH em monômeros) e pureza de FSH foram medidos por SE-HPLC e SDS- PAGE.

A formulação da invenção exibiu mais do que 95 % de recuperação de FSH humano recombinante sob armazenagem de 2 a 8°C, 25°C e 37°C. Além disso, a formulação exibiu menos do que 5 % de diminuição do FSH dimérico sob a armazenagem a 2 a 8°C, 25°C e 37°C. Ainda, a formulação exibiu mais do que 95 % de pureza de FSH sob a armazenagem de 2 a 8°C, 25°C e 37°C.

A partir destes resultados, este pode ser visto que a formulação de FSH aquosa compreende o polissorbato 20 como tensoativo, manitol como modificador de tonicidade, fosfato como tampão, metionina como agente de estabilização e álcool benzílico e cloreto de benzalcônio como preservantes de acordo com a invenção previne a perda de proteína e desnaturação e dissociação da proteína nos monômeros constituintes e estabiliza FSH para um período prolongado de tempo. Além disso, devido o desempenho de preservação benéfica a formulação é uma preparação útil para a administração de dosagem múltipla.

A eficácia da preservação antimicrobiana das formulações de FSH de acordo com esta invenção foi determinada com um teste de desafio de acordo com a European Pharmacopoeia, 5o Edição. O teste consiste de desafios das composição de formulação aquosa com um material usado na inoculação prescrito dos microorganismos definidos, armazenagem da formulação inoculada em uma temperatura prescrita, amostras retiras da formulação em intervalos específicos de tempo e contagem de organismos nas amostras deste modo removido. As propriedades preservantes da preparação são adequadas se, existe uma falha significante ou pelo menos nenhum aumento no número de microorganismos.

As formulações de FSH de acordo com esta invenção mostraram uma diminuição significante no número de microorganismos e demonstrou, portanto propriedades preservantes muito boas.

Ainda, foi observado que as formulações da presente invenção têm uma estabilidade que é comparável a estabilidade da técnica anterior das formulações comparativas GonAl-f e Puregon.

Listagem de sequência: SEQ ID N°. 1: sequência de aminoácido da ot-cadeia de FSH humano. SEQ ID N°. 2: sequência de aminoácido da β-cadeia de FSH humano. SEQ ID N°. 3: sequência de ácido nucleico de tipo selvagem codificada pela a-cadeia de FSH humano. SEQ ID N°. 4: sequência de ácido nucleico de tipo selvagem codificada pela β-cadeia de FSH humano. SEQ ID N°. 5: sequência de ácido nucleico otimizada por 5 códon codificada pela β-cadeia de FSH humano. SEQ ID N°. 6: sequência de ácido nucleico otimizada por códon codificada pela a-cadeia de FSH humano.

Claims (15)

1. Composição farmacêutica líquida, caracterizada pelo fato de que compreende hormônio estimulador de folículo (FSH) ou uma variante do mesmo e tanto cloreto de benzalcônio quanto álcool benzílico como preservantes.

2. Composição farmacêutica líquida de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo fato de que o cloreto de benzalcônio está presente em uma concentração de 0,005 a 0,03 mg/ml e álcool benzílico está presente em uma concentração de 5,0 a 12,0 mg/ml.

3. Composição farmacêutica líquida de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizado pelo fato de que o FSH ou uma variante do mesmo está presente em uma concentração de 10 a 200 μg/ml.

4. Composição farmacêutica líquida de acordo com qualquer uma das reivindicações precedentes, caracterizada pelo fato de que compreende adicionalmente metionina como um antioxidante.

5. Composição farmacêutica líquida de acordo com qualquer uma das reivindicações precedentes, caracterizada pelo fato de que compreende adicionalmente um tensoativo.

6. Composição farmacêutica líquida de acordo com a reivindicação 5, caracterizada pelo fato de que o tensoativo é um éster alquílico de polióxi etileno sorbitano.

7. Composição farmacêutica líquida de acordo com qualquer uma das reivindicações precedentes, caracterizada pelo fato de que compreende adicionalmente um agente modificador de tonicidade.

8. Composição farmacêutica líquida de acordo com a reivindicação 7, caracterizada pelo fato de que o agente modificador de tonicidade é álcool de açúcar ou açúcar.

9. Composição farmacêutica líquida de acordo com qualquer uma das reivindicações precedentes, caracterizada pelo fato de que têm um pH na faixa de 6,5 a 7,5.

10. Composição farmacêutica líquida de acordo com qualquer uma das reivindicações precedentes, caracterizada pelo fato de que compreende adicionalmente um agente de tamponamento fisiologicamente aceitável.

11. Composição farmacêutica líquida de acordo com qualquer uma das reivindicações precedentes, caracterizada pelo fato de que a composição contém FSH ou uma variante do mesmo como o ingrediente ativo, Polisorbato 20 e/ou Polisorbato 80 como tensoativo, manitol como modificador de tonicidade, fosfato como tampão, metionina como agente estabilizante e álcool benzílico e cloreto de benzalcônio como preservantes e nenhum excipiente adicional.

12. Recipiente farmacêutico, caracterizado pelo fato de que contém uma composição farmacêutica líquida como definida em qualquer uma das reivindicações precedentes.

13. Método para preparar uma composição farmacêutica líquida como definida em qualquer uma das reivindicações de 1 a 11, caracterizado pelo fato de que o FSH ou uma variante do mesmo como o agente ativo é formulado em uma preparação aquosa que compreende tanto cloreto de benzalcônio quanto álcool benzílico como preservantes e adicionalmente excipientes farmacêuticos.

14. Método para fabricar uma composição farmacêutica acondicionada, caracterizado pelo fato de que compreende colocar uma solução que compreende FSH ou uma variante do mesmo e cloreto de benzalcônio e álcool benzílico em um frasco, ampola, carpule ou cartucho.

15. Composição farmacêutica líquida de acordo com qualquer uma das reivindicações de 1 a 11, caracterizada pelo fato de ser para uso em administração de múltiplas doses.