BRPI1003831A2

BRPI1003831A2 - mÉtodo de produÇço de um pà de minhoca seco

Info

Publication number: BRPI1003831A2
Application number: BRPI1003831-0A
Authority: BR
Inventors: Yoichi Ishii; Kazuyuki Shii; Hiroyuki Sumi; Etsuo Yoshida; Sayaka Ishii
Original assignee: Well Stone Co
Priority date: 2009-10-13
Filing date: 2010-10-08
Publication date: 2013-02-13
Also published as: RU2438681C1; JP2011084483A; EP2316464B1; IL208669A0; HK1155980A1; US8394417B2; CN102038713B; IL208669A; CA2716043C; BRPI1003831B1; TWI400070B; EP2316464A1; TW201127368A; CA2716043A1; AU2010226962A1; CN102038713A; BRPI1003831A8; KR20110040668A; JP4886017B2; US20110086106A1

Abstract

<UM>MÉTODO DE PRODUCçO DE UM Pà DE MINHOCA SECO<MV>. É fornecido um método de produção simples e fácil de um pó de minhoca seco inofensivo, ao suprimir a inativação das enzimas contidas nas minhocas. No método, um homogenato obtido através da trituração das minhocas vivas é submetido à secagem por congelamento e o produto seco é tratado por aquecimento a uma temperatura de 11O<198>C, ou mais elevada, porém mais baixa que 130<198>C. De preferência, o método de acordo com a presente invenção compreende adicionalmente um processo para a preparação das minhocas vivas, que precede a etapa de trituração, que compreende as etapas de: manter as minhocas vivas sob luz por 10 a 50 horas; remover a sujeira formada na pele das mesmas, colocar as minhocas em contato com um ácido orgânico por 30 segundos, ou menos; diluir o ácido com a adição de água para ajustar o pH da solução ácida aquosa a um pH que se situa na faixa de 2 a 5; manter a mistura de minhoca sob a condição de pH por 3 a 180 minutos; e, então, lavar as minhocas com água.

Description

^METODO DE PRODUCAO DE UM PO DE MINHOCA SECO"

A presente invengao refere-se a um metodo de produgao de um ρό de minhoca seco, em particular, a um metodo de produgao de um ρό de minhoca seco inofensivo ao suprimir a inativagao das enzimas contidas em uma minhoca.

As minhocas sao usadas desde os tempos antigos em paises orientals como farmacos para a prevengao e tratamento de varias doengas, e se encontraram aplicagoes como agente estimuIante de Iiberagao e contragao do calculo intracistico, agente anti-coloplania, parturifaciente, tonico, tdnico para crescimento capilar, contaminagao, antifebril, agente para tratamento de espasmos, acelerador de fluxo sanguineo, agente para tratamento de hemiplegia, analgesico indireto, agente de melhoramento de urinagao, agente ant卜asma bronquial, agente anti-hipertensao e outros.

E necessario remover a sujeira da minhoca que permanece nos tratos digestivos, ο deposito sobre a pele, e outros para a produgao de um remedio para administragao oral atraves da utilizagao da minhoca como a materia-prima, e varios metodos para este proposito foram apresentados.

Os exemplos dos mesmos propostos ate ο momento incluem metodos de produgao de um ρό de minhoca seco ύίίΙ como um agente anti-diabetes, agente anti-hiperlipidemia ou agente para ajuste de pressao sanguinea, atraves da imersao de corpos vivos de minhocas em uma solugao aquosa de um sal alcalino como sal de sodio ou sal de potassio, de modo a permitir que as mesmas excretem ο calculo nos tratos digestivos, da trituragao a molhado das minhocas e da secagem por congelamento da suspensao obtida deste modo sob vacuo (JP64-47718A, JP64-47719A, JP64-47720A e JP01-268639A), e um metodo de produgao de um remedio para pacientes com trombose, atraves da imersao de corpos vivos de minhocas em uma solugao acid a aquosa mantida de 6 a 26°C por 0,1 a 5 horas, de modo a permitir que as mesmas excretem ο calculo nos tratos digestivos, triturar as minhocas, desgaseificar ο homogenato e secar a vacuo ο homogenato, enquanto a temperatura e elevada gradualmente (JP03-72427A).

Os inventores tambem propuseram um metodo para fazer com a minhoca excrete seu eonteiido no trato digestivo ao colocar a minhoca sob um ambiente em condigao de habitat desagradavel gerado como acido organico (JP2008-081476A).

No entanto, os pos de minhoca produzidos atraves dos metodos de produgao convencionais tem um problema de que os microbios contidos na minhoca nao sao suficientemente esterilizados, dependendo da eta pa de secagem atraves da secagem por congelamento a vacuo e similares. Embora sejam tomadas as medidas como esterilizagao a alcool, estas medidas tambem tem problemas de trabalho aumentado e periodo alongado e, entao, de custo aumentado e, portanto, houve uma demanda por medidas que resolvessem os problemas.

Um objetivo da presente invengao e fornecer um metodo de produgao simples e facil de um ρό de minhoca seco inofensivo, ao suprimir a inativagao das enzimas contidas na minhoca.

Ap0s estudos intensivos para resolver ο problema acima, os inventores concluiram que e possfvel resolve-Io atraves do aquecimento do ρό de minhoca a uma temperatura particular a pos secagem por congelamento, e propuseram a presente invengao.

Geralmente, as enzimas sao comumente conhecidas por serem fdgeis ao aquecimento, a excegao daquelas em alguma bacteria termofilica e, entao, ο termotratamento ate cerca de 80°C foi conduzido, porem ο termotratamento a uma temperatura mais elevada que isto ainda nao foi discutido. Contudo, os inventores focaram no fato de que ο termotratamento e mais seguro, mais simples e mais conveniente metodo dentre os metodos estudados de esterilizagao de um ρό de minhoca e estudaram a temperatura de aquecimento mais adequada. Como resultado, os mesmos concluiram que a atividade das enzimas contidas em um ρό de minhoca foi preservada mesmo se ο ρό de minhoca foi aquecido a uma temperatura drasticamente mais elevada que aquela usada em outros metodos.

Especificamente, ο metodo de produgao de um ρό de minhoca seco, de acordo com a presente invengao compreende as eta pas de triturar minhocas vivas em um homogenato; secar por congelamento ο homogenato; e tratar por aquecimento ο produto submetido a secagem a uma temperatura que se situa na faixa de IlO0C ou mais elevada, porem mais baixa que 130°C.

De preferencia, ο metodo de produgao de um ρό de minhoca seco, de acordo com a presente invengao, compreende adicionalmente um processo para preparagao das minhocas vivas, que precede a eta pa de trituragao, que compreende as etapas de:

manter as minhocas vivas sob Iuz por 10 a 50 horas; remover a sujeira formada na pele das mesmas, colocar as minhocas em contato com um acido organico por 30 segundos ou menos; diluir ο acido com a adigao de agua para ajustar ο ρH da solugao

acida aquosa a um pH que se situa η a faixa de 2 a 5;

manter a mistura de minhoca sob a condigao de pH por 3 a 180 minutos; e, entao, Iavar as minhocas com agua.

Alternativamente, ο metodo de produgao de um ρό de minhoca seco, de acordo com a presente invengao, compreende adicionalmente um processo de preparagao das minhocas vivas, que precede a eta pa de trituragao, que compreende as etapas de:

manter as minhocas vivas sob Iuz por 10 a 50 horas; remover a sujeira formada na pele das mesmas, imergir as minhocas em uma solugao de um acido organico que tem um pH previamente ajustado que se situa na faixa de 2 a 5;

Alem disso, ρ metodo de produgao de um ρό de minhoca seco,

de aco.rdo com a presente invengao, compreende adicionaimente um processo para a preparagao das minhocas vivas, que precede a etapa.de. trituragao, que compreende as etapas de:

manter as minhocas vivas sob Iuz por 10 to 50 horas; remover a sujeira form a da na pele das mesmas,

colocar as minhocas em contato com um ρό de acido hidroxicarboxilico cristalino por 30 segundos ou menos;

diluir ο acido com a adigao de agua para ajustar ο pH da solugao acida aquosa a um pH que se situa na faixa de 2 a 5; manter a mistura de minhoca sob a condigao de pH por 3 a 180

minutos; e, entao, Iavar as minhocas com agua.

Adicionaimente, no metodo de produgao de um ρό de minhoca seco, de acordo com a presente invengao, e preferivel que a Iavagem com agua seja executada com agua que contenha bolhas em micro-nano. Mais adicionaimente, no metodo de produgao de um ρό de

minhoca seco, de acordo com a presente invengao, e preferivel que a secagem por congelamento seja executada sob vacuo apos ο homogenato ser congelado a -18°C a -35°C por 20 a 240 horas.

A presente invengao pode fornecer um metodo de produgao simples e facil de um ρό de minhoca seco inofensivo ao suprimir a inativagao das enzimas contidas na minhoca. No desenho:

A Figura 1 e um grafico que mostra os resuItados nos ExempIos

1 e 2 e ο Exemplo Comparativo 1. Doravante, sera descrito detalhadamente ο metodo de produgao de um ρό de minhoca seco, de acordo com a presente invengao.

No metodo de acordo com a presente invengao, as minhocas vivas sao usadas como a materia-prima, e exemplos das minhocas vivas incluem Lumbricus rubellus, Lumbricus terrestris, Eisenia foetid a, Allolobophora caliginosa, Dendrobaena octaedra, Allolobophora japonica Michaelsen, Drawida hattamimizu Hatai, Pheretima divergens Michaelsen, Pheretima communissima, Pheretima agrestis, Pheretima sieboldi Horst, Pheretima hilgendorfi, Pontodrilus matsushimensis Iizuka, Tubifex hattai Nomura, Limnodrilus gotoi Hatai (/.. social is Stephenson) e assim por diante.

A preparagao das minhocas vivas para ο uso no metodo inventivo antes da trituragao nao e, em particular, limitada, porem pode ser executada, por exemplo, da seguinte forma. Primeiramente, as minhocas vivas coletadas de um Ieito de cultivo sao transferidas para uma caixa plana como uma caixa de pao, e sao mantidas na mesma por 10 a 50 horas, de preferencia, por um dia. O conteiido das minhocas vivas na caixa deve ser uma quantidade que corresponde a uma espessura de 30 a 60 mm, de preferencia, 40 a 50 mm. Devem ser prestados os cuidados para assegurar que nenhum material do exterior como areia e lama permanegam na caixa plana, e a caixa plana deve ser mantida iluminada a noite, como nas culturas sob iluminagao, devido ao fato de que as minhocas sao noturnas e ativas em atividade de vida em local escuro e, deste modo, se pode consumir sua forga fisica. As minhocas vivas mostram sua fungao de auto-protegao sob ο tratamento, para preservar seu ambiente de vida ao excretar ο material da digestao que permanece nos tratos digestivos, cobrir tod ο ο corpo com a excregao e, deste modo, evitar a vaporizagao da agua, e e finalmente possivel remover quase que completamente ο material da

digestao nos tratos digestivos e os corantes depositados em suas peles, ao remover os corantes, isto e, a excregao, cobrindo as minhocas repetidamente atraves da utilizagao um meio adequado. A remogao dos corantes depositados sob re a pele pode ser executada ao cobrir as minhocas vivas, por exemplo, com um tecido nao-tecido e permitindo, deste modo, a absorgao dos corantes.

Entao, as minhocas vivas, das quais os corantes foram removidos, sao, de preferencia, expostas diretamente a um ambiente de vida desagradavel as minhocas vivas. Tal tratamento fa ζ com que as minhocas tentem aprimorar ο ambiente de vida ao excretar ο fluido .10 corporeo atraves da sua fungao de auto-protegao e, deste modo, e possivel fazer com que as minhocas excretem nao apenas ο material da digestao remanescente nos tratos digestivos, mas tambem amonia, uma causa de odor asqueroso, bem como ο fluido corporeo que contem arsenico que e toxico ao corpo.

Um exemplo do metodo de geragao de um ambiente de vida

desagradavel e fazer com que as minhocas vivas entrem em contato com um acido organico. Um ambiente de vida desagradavel para as minhocas vivas pode ser formado imediatamente ao colocar as minhocas em contato com ο acido organico. Quanto para ο contato com ο acido organico, um ρό de acido organico pode ser diretamente aspergido ou como uma solugao de acido organico aquosa concentrada nas minhocas vivas. Os exemplos dos acidos organicos usados incluem, entao, acido acetico, acido malico, acido citrico, acido latico, acido malonico, acido succinic。e similares. Estes acidos podem ser usados sozinhos ou como uma mistura de dois ou mais acidos. O acido organico particularmente favoravel e ο acido citrico. Se for gerado tal ambiente de vida desagradavel conforme descrito acima, um contato prolongado entre as minhocas vivas e um ρό de acido organico ou uma solugao de acido organico aquosa concentrada induz a morte das

minhocas com perda das fungoes vita is e, deste modo, a nao excregao do material da digestao nos tratos digestivos e, porta η to, ο acido organico deve ser diluido em agua ο mais rapido possivel, normalmente dentro de 30 segundos ou menos, de preferencia, 20 segundos ou menos, para ajustar ο pH da solugao acida aquosa a um pH que se situa na faixa de 2 a 5. E preferivel ο uso da seguinte agua em micro-nano que con tern bolhas como a agua para a diluigao do acido organico, devido ao fato de que induz a um aumento da quantidade do fluido corporeo excretado das minhocas.

Ao inves de colocar as minhocas em contato com ο ρό de acido organico ou a solugao de acido organico aquosa concentrada seguido pela diluigao mais rapida possivel conforme descrito acima, uma solugao de acido organico aquosa pode ser previamente preparada para ter um pH ajustado que se situa na faixa de 2 a 5 e as minhocas podem ser imersas na mesma, e a solugao de acido organico aquosa que contem bolhas em micro-nano tambem pode ser usada. O periodo em que a minhoca viva exibe a fungao de auto-protegao varia em certa medida, devido ao fato de que cerca de 65% do tecido de minhoca viva e umidade e, deste modo, ha alguma concessao periodica para a fungao de auto-protegao. Contudo, devido ao fato de que e indesejavel a morte das minhocas vivas, cuidados devem ser dados ao controle do periodo durante ο qual as minhocas vivas sao colocadas sob um ambiente de vida desagradavel. O periodo pode variar de acordo com a condigao usada, mas normalmente se situa na faixa de 3 a 180 minutos. Alem da diluiQao em agua, ο pH pode ser ajustado atraves da neutralizagao com base alcalina ou com ο uso de solugao tampao. O uso de tal acido organico e eficaz para fazer com que a minhoca excrete o material digestivo remanescente no orgao digestivo, conforme descrito acima e tambem na esteriIizagaο nao desejado de microbios que nao podem ser removidos atraves da Iavagem com agua devido ao fato da agao

microbicida do acido organico. As minhocas vivas podem ser colocadas em contato com um acido hidroxicarboxilico, conforme ο metodo de geragao de um ambiente de vida desagradavel. Neste caso, ο contato com with acido hidroxicarboxilico pode ser executado por qualquer metodo, mas, de preferencia, atraves da aspersao de um ρό de acido hidroxicarboxilico cristalino sob re as minhocas vivas seguido pela adigao de agua imediatamente para a diluigao do acido hidroxicarboxilico para ajustar ο pH da solugao acida aquosa a um pH que se situa na faixa de 2 a 5 e a mistura de minhoca e armazenada sob a condigao de pH por 3 a 180 minutos. O contato prolongado entre as minhocas vivas e ο ρό de acido hidroxicarboxilico leva a morte das minhocas com perda das fungoes vita is e, deste modo, a nao excregao do material de digestao nos tratos digestivos e, portanto, ο acido hidroxicarboxilico deve ser diluido em agua ο mais rapido possivel, normalmente dentro de 30 segundos ou menos, de preferencia, 20 segundos, ou menos, para ajustar ο pH da solugao acida aquosa a um ρH que se situa na faixa de 2 a 5. Alem da diluigao em agua, ο pH pode ser ajustado da neutralizagao com base alcalina ou com ο uso de solugao tampao. E preferivel ο uso da seguinte agua em micro-nano que contem bolhas como a agua para a diluigao do acido organico, devido ao fa to de que a mesma induz a um aumento da quantidade do fluido corporeo excreta do da minhoca. Se for usado tal acido hidroxicarboxilico, sua forte acidez decompoe a pela das minhocas vivas e sua atividade esterilizadora induz a geragao imediata de um ambiente de vida desagradavel para as minhocas tal que a minhoca tenta aprimorar ο ambiente de vida atraves da excregao de seu fluido corporeo sob fungao de auto-protegao. O tratamento de contato tambem e eficaz na redugao dos microbios patogenicos contidos no corpo da minhoca. O acido hidroxicarboxilico, que pode formar compostos complexos com metais pesados, Iigagoes aos

metais toxicos como mercijrio, cadmio e chumbo presentes no corpo da minhoca, de modo a excretar vantajosamente estes metais para fora do corpo. O acido hidroxicarboxilico cristalino usado em tal caso nao se iimita, particularmente, ao ntimero dos grupos de hidroxila ou grupos de carboxila contidos no mesmo, se ο composto e cristalino sob a condigao utilizada.

Deste modo, pode ser um acido monocarboxilico monohidroxi, um acido policarboxilico monohidroxi, um acido monocarboxilico polihidroxi ou um acido policarboxilico polihidroxi. Os exemplos dos acidos hidroxicarboxilicos incluem acido glicolico, acido latico, acido 3-hidroxipropionico/ acido α-hidroxi-n-butirico, acido β-hidroxi-n-butirico, acido α-hidroxi-n-valerico, acido β-hidrox卜n-val0rico, acido malico, acido α-metilmalico, acido α-hidroxiglutarico, acido β-hidroxiglutarico, acido citrico e similares, dentre os quais ο acido latico, acido malico e acido citrico sao preferiveis, do ponto de disponibilidade. Estes acidos hidroxicarboxilicos podem ser usados sozinhos ou como uma mistura de dois ou mais acidos.

Entao, os corpos vivos da minhoca, apos a remogao praticamente completa dos depositos, sao Iavados com agua purificada e, entao, aterrados em um homogenato do tipo em pasta ou liquido. A trituragao e executada, por exemplo, em um homogenizador, um misturador, um misturar para homogeneizagao do tipo "homomixer", uma maquina de amassar, ou uma fresa celular de aIta pressao, normalmente a uma temperatura de 1 a 25°C, de preferencia, 2 a 15°C. O homogenato e submetido, entao, a secagem por congelamento. Ja que as enzimas contidas nos corpos vivos da minhoca estao inativas quando as celulas ainda estao vivas, mas reagem instantaneamente com as celulas mortas para gerar calor e odor putrefato forte atraves da putrefagao, para a prevengao disto, e preferivel ο uso da secagem por congelamento sob

processo a vacuo em que ο homogenato pode ser rapidamente resfriado a uma temperatura de -18°C a -35°C a fim de inibir as agoes da enzima e a secagem por congelamento.

Para pulverizagao sem deterioragao na agao farmacologica inerente a minhoca, ο homogenato deve ser submetido a secagem por congelamento rapidamente, mas, por outro lado, ο congelamento extremamente rapido e desfavoravel, devido ao fa to de que quando ο homogenato e congelado em um periodo de tempo excessivamente curto,. as impurezas presentes juntamente com as proteinas, que sao ο componente principal da pasta de minhoca, podem nao ser separadas, enquanto formam regioes descongeladas manchadas. Por este motivo, ο congelamento e, de preferencia, realizado a uma baixa temperatura de -18°C a -35°C em um periodo de 20 a 240 horas, mas preferencialmente, de 50 a 170 horas.

Durante secagem por congelamento sob vacuo, importante selecionar uma condigao que permita a remogao favoravel de agua bem como impurezas. Para este proposito, e vantajoso realizar a secagem por congelamento sob vacuo atraves do aumento gradual da temperatura que se situa na faixa de -60°C a +90。C sob uma pressao de 50 Pa, ou menos, tomando de 10 a 60 horas. Por exemplo, conforme descrito acima, ο homogenato e

congelado a uma temperatura de -18°C a -35°C em um periodo de 20 a 240 horas e e realizada a secagem por congelamento sob vacuo por 10 a 60 horas atraves da aIteragao gradual da temperatura e da pressao que se situam na faixa de -60°C a +90°C e 40 a 25 Pa, respectivamente, a fim de obter um ρό de minhoca seco amarelo palido no estado esteril.

As minhocas vivas para uso na presente invengao sao, de preferencia, Iavadas com agua, por exemplo, apos tal tratamento acima e antes da pulverizagao, mas, em tal caso, a agua em micro-nano que contem bolhas pode ser usada de maneira favoravel como a agua usada. O uso de tal água tem uma vantagem que a eficácia da lavagem é aprimorada. A bolha em micro-nano significa, no presente documento, uma bolha que tem um diâmetro de 0,01 a 100 μητι, e a bolha pode ser uma bolha de ar ou uma bolha de oxigênio. A água em micro-nano que contém bolhas pode ser preparada, por exemplo, através de um método de produção das mesmas ao destruir as microbolhas sob alta pressão ou através de um método de produção de bolhas através da utilização de um filme da SPG (shirasu porous glass). Um exemplo do aparelho que produz a água que contém microbolhas é um sistema de alta qualidade dissolvénte/de geração de bolhas dotado de um dispositivo de produção de bolhas em incisão incorporado, como o sistema fabricado pela SPG Technology Co., Ltd.

O método de produção de um pó de minhoca seco, de acordo com a presente invenção, é caracterizado pelo termotratamento de um produto de minhoca seco, que é obtido através da secagem de um homogenato das minhocas vivas lavadas, a uma temperatura de IlO0C, ou mais elevada, porém mais baixa que 130°C, de preferência, de 115 a 125°C. Quando a temperatura de aquecimento é mais baixa que 110°C, o produto seco pode ser insuficientemente esterilizado, enquanto, quando é de 130°C, ou mais elevada, as enzimas contidas no produto de minhoca seco pode ser, de modo desfavorável, inativado, o que leva a uma diminuição em suas atividades. O método de aquecimento não se limita, em particular, e exemplos do mesmo incluem métodos para assoprar ar quente, através da utilização de uma jaqueta de aquecimento, ao aquecer através do aquecedor sobre uma bandeja e similares, através da utilização de um forno de temperatura constante e similares.

O período de aquecimento é, de preferência, 30 segundos a 130 minutos, mais preferencialmente, 30 minutos a 90 minutos, e ainda com mais preferência de 60 minutos a 90 minutos. De modo desfavorável, um período de aquecimento excessivamente curto pode induzir a uma esterilização insuficiente, enquanto um período excessivamente longo à inativação das enzimas.

Aplicabilidade Industrial O pó de minhoca seco produzido pelo método de produção de

acordo com a presente invenção é útil, por exemplo, como um agente de ajuste de pressão sangüínea, um agente anti-hiperlipidemia, um agente anti-diabetes e um agente trombolítico, similarmente aos pós de minhoca secos preparados através de métodos convencionais. Também é possível usar os pós como um ingrediente ativo em remédios, cosméticos e suplementos, através da extração do pó, por exemplo, com água purificada ou álcool, centrifugando a solução obtida e fracionando os ingredientes por peso molecular.

Doravante, a presente invenção será especificamente descrita com referência aos Exemplos, mas deve ser compreendido que a invenção não se limita a estes Exemplos.

Preparação de produto de minhoca seco

Quilogramas de minhocas vivas do tipo Lumbricus rubellus preparadas ao serem mantidas sob luz por 10 a 50 horas e que tem removidas a sujeira formada na pele das mesmas foram colocados e espalhados a uma espessura de aproximadamente 5 cm em uma caixa plana e 250 g de pó de ácido cítrico foi uniformemente aspergido na mesma e, após 15 segundos, o ácido foi diluído em 30 litros de água purificada. O pH da solução ácida aquosa, imediatamente após a adição de água, era de 2,25, enquanto o pH ao final da diluição era de 2,74.

Ao adicionar o pó de ácido cítrico através da aspersão, as minhocas excretaram fluido corpóreo amarelado imediatamente e, deste modo, foram removidos a amônia, a causa do odor nojento, os metais pesados, como arsênico, perigosos ao corpo, e substância que inibem a hiperfibrinólise.

As minhocas vivas foram, então, separadas da solução de ácido cítrico aquosa suja, lavadas com água e aterradas em uma pasta de minhoca a IO0C através da utilização de um homogenizador. Então, a pasta de minhoca foi desgaseificada sob vácuo, colocada em uma bandeja de aço inoxidável, instantaneamente resfriada a -35°C, e mantida a mesma temperatura, permitindo congelamento gradual em um período de 50 horas.

A secagem por congelamento sob vácuo foi realizada de tal

maneira que a pasta de minhoca congelada, deste modo, foi mantida permanentemente a uma de -35°C sob uma de 0 Pa por 2 horas, e a pasta de minhoca congelada foi gradualmente aquecida a uma temperatura de 25°C sob uma pressão de 40 Pa por 10 horas, a uma temperatura de 40°C sob uma pressão de 35 Pa por 14 horas, a uma temperatura de 65°C sob uma pressão de 35 Pa por 12 horas, e finalmente a uma temperatura de 80°C sob uma pressão de 25 Pa por 6 horas. O processo gerou um pó de minhoca seco amarelo pálido dotado de um teor de água de 8 % em massa.

Termotratamento de produto seco O pó seco obtido acima foi submetido a um termotratamento

em um aquecedor RM-50D (fabricado pela OKAWARA CORPORATION). A condição de aquecimento era de 110°C, 120°C ou 130°C, conforme descrito abaixo, e uma parte do pó seco foi retirada em um intervalo de 15 minutos após o pó ser aquecido a uma temperatura especificada. Em relação ao pó seco retirado, a atividade enzimática remanescente no pó foi avaliada em um teste através do método de placa de fibrina. Primeiramente, foi adicionado 20 ml de solução salina fisiológica a Ig do pó; a mistura foi agitada a temperatura ambiente e 150 rpm por 1 hora e centrifugada a 10000 rpm e 4°C por 15 minutos; e o supernadante obtido foi usada como amostra. No método de placa de fibrina, o fibrinogênio (fabricado por Sigma Aldrich Corporation) foi dissolvido em 10 ml de BSB (solução tampão salina boro-fisiológica, pH 7,8) em uma concentração final de 0,6% e foi adicionada trombina a uma concentração de 5,0 U/ml, para preparação de uma placa de fibrina; 30 μΙ da amostra foi colocado sobre a placa de fibrina; e a área da janela de fibrinólise gerada após a incubação a 37°C por 4 horas foi determinada. Os resultados obtidos foram sumarizados na Tabela 1 seguinte 1. O teste através do método de placa de fibrina foi repetido três vezes e a área do meio foi determinada. Em adição, o gráfico que mostra os resultados obtidos é mostrado na Figura 1.

Condição de aquecimento

Exemplo 1

Número de Operação Temperatura Período de Aquecimento Cumulativo Período mantido na Temperatura 110-60-0 IlO0C 60 minutos 0 minuto 110-75-15 IlO0C 75 minutos 15 minutos 110-90-30 IlO0C 90 minutos 30 minutos 110-105-45 IlO0C 105 minutos 45 minutos 110-120-60 IlO0C 120 minutos 60 minutos 110-135-75 IlO0C 135 minutos 75 minutos 110-150-90 IiooC 150 minutos 90 minutos Exemplo 2

Número de Operação Temperatura Período de aquecimento Cumulativo Período mantido na Temperatura 120-40-0 120°C 40 minutos 0 minuto 120-55-15 120°C 55 minutos 15 minutos 120-70-30 120°C 70 minutos 30 minutos 120-85-45 120°C 85 minutos 45 minutos 120-100-60 120°C 100 minutos 60 minutos 120-115-75 120°C 115 minutos 75 minutos 120-130-90 120°C 130 minutos 90 minutos

Exemplo Comparativo 1

Número de Operação Temperatura Período de aquecimento Cumulativo Período mantido na Temperatura 130-40-0 130°C 40 minutos 0 minuto 130-55-15 130°C 55 minutos 15 minutos 130-70-30 130°C 70 minutos 30 minutos 130-85-45 130°C 85 minutos 45 minutos 130-100-60 130°C 100 minutos 60 minutos 130-115-75 130°C 115 minutos 75 minutos 130-130-90 130°C 130 minutos 90 minutos Tabela 1 16/19

Área de Lise, mm2 Meio Primeiro Tempo Segundo Tempo Terceiro Tempo Controle* 495,0 508,2 488,4 488,4 Exem- plo 1 110-60-0 453,7 440,9 460,1 460,1 110-75-15 442,5 424,3 443,1 460,1 110-90-30 427,2 406,0 434,7 441,0 110-105-45 421,5 422,1 426,2 416,1 110-120-60 408,7 408,0 422,2 396,0 110-135-75 412,7 416,0 408,0 414,0 110-150-90 411,4 406,0 418,2 410,0 Exem- plo 2 120-40-0 421,6 420,2 430,5 414,1 120-55-15 396,7 398,0 398,0 394,0 120-70-30 368,1 370,6 355,3 378,3 120-85-45 361,6 361,0 359,1 364,8 120-100-60 355,3 351,5 355,3 359,1 120-115-75 330,0 336,7 325,8 327,6 120-130-90 322,2 329,4 313,2 324,0 Exemplo Comparativo 1 130-40-0 293,0 294,1 290,7 294,1 130-55-15 196,0 191,8 198,8 197,4 130-70-30 158,5 152,5 151,3 171,6 130-85-45 132,6 128,8 134,5 136,8 130-100-60 122,1 124,3 121,0 121,0 130-115-75 112,3 115,5 111,1 110,2 130-130-90 99,0 103,0 98,0 96,0

*Controle: pó seco não aquecido

Os resultados na Tabela Ieo gráfico da Figura 1 mostram claramente que a atividade das enzimas contida no pó de minhoca seco é suficientemente preservada após o aquecimento a IlO0C (Exemplo 1) ou a 120°C (Exemplo 2), embora haja alguma perda. Em contraste, a atividade das enzimas contida no pó de minhoca seco é rapidamente perdida através do aquecimento a 130°C (Exemplo Comparativo 1) como se torna óbvio ao comparar as atividades quando a temperatura de aquecimento alcança apenas 130°C (130-40-0) e aquelas mantidas a 130°C (130-55-15 e posterior).

Determinação da contagem celular

Conforme descrito acima, foi dissolvido Ig de cada um dentre os pós secos, sendo que cada um é termotratado a 120°C (Exemplos 2-1 a 2-5), a 80°C por 60 minutos (Exemplo Comparativo 2-1), a 90°C por 60 minutos (Exemplo Comparativo 2-2), e a IOO0C por 60 minutos (Exemplo Comparativo 2-3) em 20 ml de água, para gerar uma solução de teste; a contagem celular viável geral da mesma foi determinada através do método de incubação de placa de ágar padrão; a contagem de bactérias coliformes foi determinada através do método do meio de substrato enzimáticô sintético; e a contagem de bactérias termofílicas através do Método descritos nos Métodos Padrão de Análise em Regulamento de Segurança de Alimentos (condição de aquecimento: ebulição, 10 minutos). Os resultados obtidos foram sumarizados na Tabela 2 seguinte. Tabela 2 18/19

Contagem celular viáve geral (CFU/g) Contagem de bactérias co Iiform es (CFU/g) Contagem de bactérias termofílicas (CFU/g) Controle* 94.000 Negativa (menor que 10) 3.500 120-70-30 (Exemplo 2-1) 440 Negativa (menor que 10) 10 120-85-45 (Exemplo 2-2) 400 Negativa (menor que 10) Não detectada 120-100-60 (Exemplo 2-3) 220 Negativa (menor que 10) Não detectada 120-115-75 (Exemplo 2-4) 160 Negativa (menor que 10) Não detectada 120-130-90 (Exemplo 2-5) 50 Negativa (menor que 10) 10 80 0C (Exemplo Comparativo 2-1) 38.500 Negativa (menor que 10) 1.400 90 0C (Exemplo Comparativo 2-2) 18.800 Negativa (menor que 10) 1.100 100 0C (Exemplo Comparativo 2-3) 9.400 Negativa (menor que 10) 620

*Controle: pó seco não aquecido

Conforme se torna óbvio a partir dos resultados dos Exemplos Comparativos 2-1 a 2-3 na Tabela 2, o termotratamento a 80°C, 900C ou IOO0C resultou na sobrevivência de muitas bactérias termofílicas e das células viáveis gerais, embora a Escherichia coii tenha sido esterilizada. Em contraste, conforme se torna óbvio a partir dos resultados nos Exemplos 2-1 a 2-5, o termotratamento a 120°C induz a uma redução em todas as contagens de células viáveis gerais, Escherichia coli e bactéria termofílica a 1000 CFU/g, ou menos, o que demonstra a sua eficácia suficiente em esterilização.

Os resultados nos Exemplos mostram claramente que os pós de minhoca secos produzidos através do método de produção, de acordo com a presente invenção, retidos em uma atividade enzimática similar àquelas observadas em pós de minhoca secos preparados através de métodos convencionais e, em adição, foram suficientemente esterilizados.

Claims

1. Método de produção de um pó de minhoca seco caracterizado pelo fato de que compreende as etapas de: triturar as minhocas vivas em um homogenato; secar por congelamento o homogenato; e tratar por aquecimento o produto seco a uma temperatura que se situa na faixa de IlO0C, ou mais elevada, porém mais baixa que 130°C.

2. Método de produção de um pó de minhoca seco de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que a etapa de trituração é precedida por um processo para a preparação das minhocas vivas que compreende as etapas de: manter as minhocas vivas sob luz por 10 a 50 horas; remover a sujeira formada na pele das mesmas, colocar as minhocas em contato com um ácido orgânico por 30 segundos, ou menos; diluir o ácido com a adição de água para ajustar o pH da solução ácida aquosa a um pH que se situa na faixa de 2 a 5; manter a mistura de minhoca sob a condição de pH por 3 a 180 minutos; e, então, lavar as minhocas com água.

3. Método de produção de um pó de minhoca seco, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que a etapa de trituração é precedida por um processo para a preparação das minhocas vivas que compreende as etapas de: manter as minhocas vivas sob luz por 10 a 50 horas; remover a sujeira formada na pele das mesmas, imergir as minhocas em uma solução aquosa de um ácido orgânico dotado de um pH previamente ajustado que se situa na faixa de 2 manter a mistura de minhoca sob a condição de pH por 3 a 180 minutos; e, então, lavar as minhocas com água.

4. Método de produção de um pó de minhoca seco, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que a etapa de trituração é precedida por um processo para a preparação das minhocas vivas que compreende as etapas de: manter as minhocas vivas sob luz por 10 a 50 horas; remover a sujeira formada na pele das mesmas, colocar as minhocas em contato com um pó de ácido hldroxicarboxílico cristalino por 30 segundos, ou menos; diluir o ácido com a adição de água para ajustar o pH da solução ácida aquosa a um pH que se situa na faixa de 2 a 5; manter a mistura de minhoca sob a condição de pH por 3 a 180 minutos; e, então, lavar as minhocas com água.

5. Método de produção de um pó de minhoca seco, de acordo com qualquer uma das reivindicações 2 a 4, caracterizado pelo fato de que a lavagem por água é executada com água que contém bolhas em micro-nano.

6. Método de produção de um pó de minhoca seco, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 5, caracterizado pelo fato de que a secagem por congelamento é executada sob vácuo após o homogenato ser congelado a -18°C a -35°C por 20 a 240 horas.