BRPI1008749B1 - compostos derivados de benzodiazepina, seus conjugados, composição farmacêutica, seu uso e seus processos de preparação - Google Patents

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BRPI1008749B1
BRPI1008749B1 BRPI1008749-4A BRPI1008749A BRPI1008749B1 BR PI1008749 B1 BRPI1008749 B1 BR PI1008749B1 BR PI1008749 A BRPI1008749 A BR PI1008749A BR PI1008749 B1 BRPI1008749 B1 BR PI1008749B1
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cr40r41
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Nathan Elliott Fishkin
Wei Li
Robert Yongxin Zhao
Michael Louis Miller
Ravi V.J. Chari
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Immunogen, Inc
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Abstract

derivados de benzodiazepina. a presente invenção refere-se a novos derivados de benzodiazepina com atividade antiproliferativa e, mais especificamente, a novas benzodiazepinas de fórmula (i) e (ii), nas quais o anel diazepina (b) é fundido com um anel heterocíclico (cd), em que o anel heterocíclico é bicíclico ou um composto de fórmula (iii), no qual o anel diazepina (b) é fundido com um anel heterocíclico (c), em que o anel heterocíclico é monocíclico. a invenção fornece dímeros citotóxicos destes compostos. a invenção também fornece conjugados dos monômeros e dos dímeros. a invenção ainda fornece composições e métodos úteis para inibir crescimento celular anormal ou tratar um distúrbio proliferativo em um mamífero usando os compostos ou conjugados da invenção. a invenção ainda se refere a métodos para usar os compostos ou conjugados para diagnósticos in vitro, in situ e in vivo ou tratamento de células de mamífero ou condições patológicas associadas.

Description

CAMPO DA INVENÇÃO
[0001] A presente invenção refere-se a novos compostos citotóxicos e conjugados citotóxicos compreendendo estes compostos citotóxicos e agentes de ligação às células. Mais especificamente, esta invenção refere-se a novos compostos de benzodiazepina (por exemplo, indolinobenzodiazepinas ou oxazolidinobenzodiazepinas), derivados dos mesmos, intermediários dos mesmos, conjugados dos mesmos e sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos, que são úteis como medicamentos, em particular como agentes antiproliferativos.
ANTECEDENTES DA INVENÇÃO
[0002] Derivados de benzodiazepina são compostos úteis para tratar vários distúrbios, e incluem medicamentos como, antiepilépticos (imidazo [2,1-b][1,3,5]benzotiadiazepinas, Patente US No. 4.444.688; Patente US No. 4.062.852), antibacterianos (pirimido[1,2- c][1,3,5]benzotiadiazepinas, GB 1476684), diuréticos e hipotensivos (pirrolo(1,2-b)[1,2,5]benzotiadiazepina 5,5 dióxido, Patente US No.3.506.646), hipolipidêmicos (WO 03091232), antidepressivos (Patente US No.3.453.266); osteoporose (JP 2138272).
[0003] Recentemente, tem sido demonstrado em modelos de tumor animal que os derivados de benzodiazepina, como pirrolobenzodiazepinas (PBDs), atuam como agentes antitumorais (N- 2-imidazolil alquil substituído 1,2,5-benzotiadiazepina-1,1-dióxido, Patente US No.6,156,746), benzo-pirido ou dipirido tiadiazepina (WO 2004/069843), pirrolo [1,2-b] [1,2,5] benzotiadiazepinas e derivados de pirrol [1,2-b][1,2,5] benzodiazepina (WO2007/015280), derivados de tomaimicina (por exemplo, pirrolo[1,4]benzodiazepinas), como aqueles descritos em WO 00/12508, WO2005/085260, WO2007/085930, e EP 2019104 . Benzodiazepinas são ainda conhecidas por afetarem o crescimento e a diferenciação celular (Kamal A., et al., Bioorg Med Chem. 2008 Aug 15;16(16):7804-10 (e referências citadas neste); Kumar R, Mini Rev Med Chem. 2003 Jun;3(4):323-39 (e referências citadas neste); Bednarski J J, et al., 2004; Sutter A. P, et al., 2002; Blatt N B, et al., 2002), Kamal A. et al., Current Med. Chem., 2002; 2; 215-254, Wang J-J., J.Med. Chem., 2206; 49:1442-1449, Alley M.C. et al., Cancer Res. 2004; 64:6700-6706, Pepper C. J., Cancer Res 2004; 74:6750-6755, Thurston D.E. and Bose D.S., Chem Rev 1994; 94:433- 465; and Tozuka, Z., et al., Journal of Antibiotics, (1983) 36; 1699- 1708. A estrutura geral de PBDs está descrita na Publicação US Número 20070072846. Os PBDs se diferem no número, tipo e posição dos substituintes, em ambos os anéis aromáticos A e anéis pirrolo C, e no grau de saturação do anel C. Suas capacidades de formarem um aduto no menor sulco permite que eles interfiram com o processamento do DNA, por isso seu potencial uso como agentes antiproliferativos.
[0004] Ainda existe uma necessidade para novos derivados de benzodiazepina como terapêuticas efetivas e seguras para o tratamento de uma variedade de estados de doença proliferativa, como o câncer.
SUMÁRIO DA INVENÇÃO
[0005] Um objetivo da invenção é fornecer novas benzodiazepinas de fórmulas (I) e (II), no qual o anel diazepina (B) está fundido com um anel heterocíclico (CD), onde o anel heterocíclico é bicíclico.
Figure img0001
em que:
[0006] a linha dupla — entre N e C representa uma ligação simples ou uma ligação dupla, desde que quando é uma ligação dupla X está ausente e Y é H, e quando é uma ligação simples, X é H, ou uma fração protetora de amina que converte o composto em um profármaco que pode ser transformado em uma amina livre in vitro ou in vivo;
[0007] Y é selecionado de -OR, um éster representado por - OCOR', um carbonato representado por -OCOOR', um carbamato representado por -OCONR'R'', uma amina ou uma hidroxilamina representada por NR'R'', amida representada por -NRCOR', um peptídeo representado por NRCOP, onde P é um aminoácido ou um polipeptídeo contendo entre 2 a 20 unidades de aminoácidos, um tioéter representado por SR', um sulfóxido representado por SOR', uma sulfona representada por -SO2R', um sulfito -SO3, um bissulfito - OSO3, um halogênio, ciano, uma azida, ou um tiol, onde R, R' e R'' são o mesmo ou diferentes e são selecionados de H, alquila, alquenila ou alquinila lineares, ramificadas ou cíclicas, substituídas ou não substituídas contendo de 1 a 20 átomos de carbono, uma unidade de polietilenoglicol (-OCH2CH2)n, onde n é um número inteiro de 1 a 2000, um anel heteroarila de 5 ou 6 membros contendo um ou mais heteroátomos independentemente selecionados de nitrogênio, oxigênio, e enxofre, um sistema de anel fundido de 5 a 18, onde pelo menos um dos anéis é aromático, contendo um ou mais heteroátomos independentemente selecionados de nitrogênio, oxigênio, e enxofre, arila contendo de 6 a 18 átomos de carbono, um anel heterocíclico de 3 a 18 membros contendo 1 a 6 heteroátomos selecionados de O, S, N e P onde o substituinte é selecionado de halogênio, OR7, NR8R9, NO2, NRCOR', SR10, um sulfóxido representado por SOR', uma sulfona representada por -SO2R', um sulfito -SO3, um bissulfito -OSO3, uma sulfonamida representada por SO2NRR', ciano, uma azida, -COR11, OCOR11 ou OCONR11R12, onde R7, R8, R9, R10, R11 e R12 são cada um independentemente selecionados de H, alquila, alquenila, alquinila linear, ramificada ou cíclica contendo de 1 a 10 átomos de carbono, uma unidade de polietilenoglicol (-OCH2CH2)n, onde n é um número inteiro de 1 a 2000, um anel heteroarila de 5 ou 6 membros contendo um ou mais heteroátomos independentemente selecionados de nitrogênio, oxigênio, e enxofre, um sistema em anel fundido de 5 a 18 membros, onde pelo menos um dos anéis é aromático contendo um ou mais heteroátomos independentemente selecionados de nitrogênio, oxigênio, e enxofre, arila contendo de 6 a 18 átomos de carbono, anel heterocíclico de 3 a 18 membros contendo 1 a 6 heteroátomos selecionados de O, S, N e P e R10 opcionalmente é SR13 ou COR13, onde R13 é selecionado de alquila, alquenila, alquinila linear, ramificada ou cíclica, contendo de 1 a10 átomos de carbono, uma unidade de polietilenoglicol (-OCH2CH2)n, onde n é um número inteiro de 1 a 2000, um anel heteroarila de 5 ou 6 membros contendo um ou mais heteroátomos independentemente selecionados de nitrogênio, oxigênio, e enxofre, um sistema em anel fundido de 5 a 18 membros, onde pelo menos um dos anéis é aromático, contendo um ou mais heteroátomos independentemente selecionados de nitrogênio, oxigênio, e enxofre, anel heterocíclico de 3 a 18 membros contendo 1 a 6 heteroátomos selecionados de O, S, N e P e R11 pode ainda ser OR14, onde R14 é H ou tem a mesma definição que R, opcionalmente, R''é um OH;
[0008] W é C=O, C=S, CH2, BH (B=Boro), SO ou SO2;
[0009] R1, R2, R3, R4, são cada um independentemente selecionados de H, alquila, alquenila ou alquinila substituída ou não substituída linear, ramificada ou cíclica contendo de 1 a 10 átomos de carbono, uma unidade de polietilenoglicol (-OCH2CH2)n, onde n é um número inteiro de 1 a 2000, ou um substituinte selecionado de um halogênio, OR7, NR8R9, NO2, NRCOR', SR10, um sulfóxido representado por SOR', uma sulfona representada por -SO2R', um sulfito -SO3, um bissulfito -OSO3, uma sulfonamida representada por SO2NRR', ciano, uma azida, guanidina [-NH(C=NH)NH2], -COR11, - OCOR11 ou -OCONR11R12 onde R7, R8, R9, R10, R11 e R12 têm as mesmas definições conforme dadas abaixo, opcionalmente, qualquer um de R1, R2, R3, R4 é um grupo ligante que permite o acoplamento a um agente de ligação à célula através de uma ligação covalente ou é selecionado de uma unidade de polipirrolo, poli-indolila, poli- imidazolila, polipirrollo-imidazolila, poli-pirrolo-indolila ou poli-imidazolo- indolila operacionalmente transportando um grupo ligante que permite o acoplamento a um agente de ligação à célula;
[00010] R5 é selecionado de OR15, CRR'OH, SH, CRR'SH, NHR15 ou CRR'NHR15, onde R15 tem a mesma definição que R, R e R'têm a mesma definição conforme mencionada acima; opcionalmente, R5 é um grupo ligante que permite um acoplamento a um agente de ligação à célula através de uma ligação covalente ou é selecionado de uma unidade de polipirrolo, poli-indolila, poli-imidazolila, polipirrollo- imidazolila, poli-pirrollo-indolila ou poli-imidazolo-indolila opcionalmente transportando um grupo ligante que permite o acoplamento a um agente de ligação à célula;
[00011] R6 é OR, SR, NRR', onde R e R'têm a mesma definição que a mencionada acima, ou opcionalmente R6 é um grupo ligante;
[00012] Z é selecionado de (CH2)n, onde n é 1, 2 ou 3, CR15R16, NR17, O ou S, onde R15, R16 e R17 são cada um independentemente selecionados de H, alquila linear, ramificada ou cíclica contendo de 1 a 10 átomos de carbono, uma unidade de polietilenoglicol (-OCH2CH2)n, onde n é um número inteiro de 1 a 2000; ou seus solvatos, sais, hidratos ou sais hidratados farmaceuticamente aceitáveis, seus isômeros ópticos, racematos, diastereoisômeros, enantiômeros destes compostos desde que os compostos não tenham mais do que um grupo de ligação que permite o acoplamento a um agente de ligação à célula através de uma ligação covalente.
[00013] Um segundo objetivo da invenção é fornecer novas benzodiazepinas de fórmula (III), nas quais o anel diazepina (B) está fundido com um anel heterocíclico (C), onde o anel heterocíclico é monocíclico,
Figure img0002
em que:
[00014] a linha dupla — entre N e C representa uma ligação simples ou uma ligação dupla, desde que quando for uma ligação dupla X está ausente e Y é H, e quando for uma ligação simples, X é H ou uma fração protetora de amina que converte o composto no profármaco;
[00015] Y é selecionado de -OR, um éster representado por - OCOR', um carbonato representado por -OCOOR', um carbamato representado por -OCONR'R'', uma amina ou uma hidroxilamina representada por NR'R'', representada por -NRCOR', um peptídeo representado por NRCOP, onde P é um aminoácido ou um polipeptídeo contendo entre 2 a 20 unidades de aminoácidos, um tioéter representado por SR', um sulfóxido representado por SOR', uma sulfona representada por -SO2R', um sulfito -SO3, um bissulfito - OSO3, um halogênio, ciano, uma azida, ou um tiol, onde R, R' e R''são o mesmo ou diferentes e selecionados a partir de H, alquila, alquenila, alquinila, substituída ou não substituída, linear, ramificada ou cíclica contendo de 1 a 10 átomos de carbono, uma unidade de polietilenoglicol (-OCH2CH2)n, onde n é um número inteiro de 1 a 2000, um anel heteroarila de 5 ou 6 membros contendo um ou mais heteroátomos independentemente selecionados a partir de nitrogênio, oxigênio, e enxofre, um sistema em anel fundido de 5 a 18 membros, onde pelo menos um dos anéis é aromático, contendo um ou mais heteroátomos independentemente selecionados a partir de nitrogênio, oxigênio, e enxofre, arila contendo de 6 a 18 átomos de carbono, anel heterocíclico de 3 a 18 membros contendo 1 a 6 heteroátomos selecionados de O, S, N e P, onde o substituinte é selecionado a partir de halogênio, OR7, NR8R9, NO2, NRCOR', SR10, um sulfóxido representado por SOR', uma sulfona representada por -SO2R', um sulfito -SO3, um bissulfito -OSO3, uma sulfonamida representada por SO2NRR', ciano, uma azida, -COR11, OCOR11 ou OCONR11R12, onde R7, R8, R9, R10, R11 e R12 são cada um independentemente selecionados a partir de H, alquila, alquenila ou alquinila, linear, ramificada ou cíclica contendo de 1 a 10 átomos de carbono, uma unidade de polietilenoglicol (-OCH2CH2)n, onde n é um número inteiro de 1 a 2000, um anel heteroarila de 5 ou 6 membros contendo um ou mais heteroátomos independentemente selecionados de nitrogênio, oxigênio, e enxofre, um sistema de anéis fundidos de 5 a 18 membros, onde pelo menos um dos anéis é aromático, contendo um ou mais heteroátomos independentemente selecionados a partir de nitrogênio, oxigênio, e enxofre, arila contendo de 6 a 18 átomos de carbono, anel heterocíclico de 3 a 18-membros com 1 a 6 heteroátomos selecionados de O, S, N e P e R10 opcionalmente é SR13 ou COR13, onde R13 é selecionado de alquila, alquenila ou alquinila, linear, ramificada ou cíclica contendo de 1 a 10 átomos de carbono, uma unidade de polietilenoglicol (-OCH2CH2)n, onde n é um número inteiro de 1 a 2000, um anel heteroarila de 5 ou 6 membros contendo um ou mais heteroátomos independentemente selecionados a partir de nitrogênio, oxigênio, e enxofre, um sistema de anéis fundidos de 5 a 18 membros, onde pelo menos um dos anéis aromáticos, contendo um ou mais heteroátomos independentemente selecionados de nitrogênio, oxigênio, e enxofre, arila contendo de 6 a 18 átomos de carbono, anel heterocíclico de 3 a 18 membros contendo 1 a 6 heteroátomos selecionados de O, S, N e P e R11 podem ser também OR14, onde R14 é H ou tem a mesma definição que R, opcionalmente R''é OH; W é C=O, C=S, CH2, BH, SO ou SO2;
[00016] R5 é selecionado de OR15, CRR'OH, SH, CRR'SH, NHR15 ou CRR'NHR15, onde R15 tem a mesma definição que R ou é um grupo ligante que permite o acoplamento a um agente de ligação às células através de ligação covalente ou é selecionado a partir de uma unidade de polipirrol, poli-indol, poli-imidazol, polipirrol-imidazol, poli-pirrol-indol ou polimidazol-indol opcionalmente transportando um grupo ligante que permite o acoplamento a um agente de ligação às células;
[00017] R6 é OR, SR ou NRR', onde R e R'têm a mesma definição que a acima, opcionalmente R6 é um grupo ligante; X'é CH2, NR, CO, BH, SO ou SO2; Y'é O, CH2, NR ou S;
[00018] Z'é CH2 ou (CH2)n, onde n é 2, 3 ou 4; ou seus solvatos, sais, hidratos ou sais hidratados farmaceuticamente aceitáveis, seus isômeros ópticos, racematos, diasteroisômeros, enantiômeros ou estruturas polimórficas cristalinas destes compostos;
[00019] desde que os compostos não tenham mais que um grupo ligante que permite o acoplamento a um agente de ligação à célula através de ligação covalente.
[00020] Um terceiro objetivo da invenção é fornecer os dímeros citotóxicos (IV), (V) e (VI)
Figure img0003
[00021] dos monômeros de benzodiazepina de fórmulas (I) e (II) e (III), respectivamente, onde os compostos dímeros opcionalmente transportam um grupo ligante que permite o acoplamento aos agentes de ligação à célula, em que:
[00022] a linha dupla — entre N e C representa uma ligação simples ou uma ligação dupla, desde que quando for uma ligação dupla X está ausente e Y é H, e quando for uma ligação simples, X é H ou uma fração protetora de amina que converte o composto no profármaco;
[00023] Y é selecionado a partir de -OR, um éster representado por -OCOR', um carbonato representado por -OCOOR', um carbamato representado por -OCONR'R'', uma amina ou uma hidroxilamina representada por NR'R'', uma amida representada por -NRCOR', um peptídeo representado por NRCOP, onde P é um aminoácido ou um polipeptídeo contendo entre 2 a 20 unidades de aminoácidos, um tioéter representado por SR', um sulfóxido representado por SOR', uma sulfona representada por -SO2R', um sulfito -SO3, um bissulfito - OSO3, um halogênio, ciano, uma azida, ou um tiol, onde R, R' e R''são o mesmo ou diferentes e são selecionados a partir de H, alquila, alquenila ou alquinila, substituída ou não substituída, linear, ramificada ou cíclica contendo de 1 a 10 átomos de carbono, uma unidade de polietilenoglicol (-OCH2CH2)n, onde n é um número inteiro de 1 a 2000, um anel heteroarila de 5 ou 6 membros contendo um ou mais heteroátomos independentemente selecionados a partir de nitrogênio, oxigênio, e enxofre, um sistema de anéis fundidos de 5 a 18 membros de, onde pelo menos um dos anéis é aromático, contendo um ou mais heteroátomos independentemente selecionados de nitrogênio, oxigênio, e enxofre, arila contendo de 6 a 18 átomos de carbono, um anel heterocíclico de 3 a 18 membros contendo 1 a 6 heteroátomos selecionados a partir de O, S, N e P onde o substituinte é selecionado a partir de halogênio, OR7, NR8R9, NO2, NRCOR', SR10, um sulfóxido representado por SOR', uma sulfona representada por -SO2R', um sulfito -SO3, um bissulfito -OSO3, uma sulfonamida representada por SO2NRR', ciano, uma azida, -COR11, OCOR11 ou OCONR11R12, onde R7, R8, R9, R10, R11 e R12 são cada um independentemente selecionados a partir de H, alquila, alquenila ou alquinila, linear, ramificada ou cíclica contendo 1 a 10 átomos de carbono, uma unidade de polietilenoglicol (-OCH2CH2)n, onde n é um número inteiro de 1 a 2000, um anel heteroarila de 5 ou 6 membros contendo um ou mais heteroátomos independentemente selecionados a partir de nitrogênio, oxigênio, e enxofre, um sistema de anéis fundidos de 5 a 18 membros, onde pelo menos um dos anéis é aromático, contendo um ou mais heteroátomos independentemente selecionados a partir de nitrogênio, oxigênio, e enxofre, arila contendo a partir de 6 a 18 átomos de carbono, anel heterocíclico de 3 a 10-membros contendo anel heterocíclico de 3 a 18-membros contendo de 1 a 6 heteroátomos selecionados a partir de O, S, N e P e R10 é opcionalmente SR13 ou COR13, onde R13 é selecionado a partir de alquila, alquenila ou alquinila, linear, ramificada ou cíclica contendo de 1 a 10 átomos de carbono, um anel heteroarila de 5 ou 6 membros contendo um ou mais heteroátomos independentemente selecionados a partir de nitrogênio, oxigênio, e enxofre, um sistema de anéis fundidos de 5 a 18 membros, onde pelo menos um dos anéis é aromático, contendo um ou mais heteroátomos independentemente selecionados a partir de nitrogênio, oxigênio, e enxofre, arila contendo a partir de 6 a 18 átomos de carbono, anel heterocíclico de 3 a 18 membros contendo de 1 a 6 heteroátomos selecionados a partir de O, S, N e P, opcionalmente R11 é OR14, onde R14 tem a mesma definição que R, opcionalmente R''é OH; W é C=O, C=S, CH2, BH, SO ou SO2;
[00024] R1, R2, R3, R4, R1', R2', R3' e R4'são cada um independentemente selecionados a partir H, alquila, alquenila ou alquinila, substituída ou não substituída, linear, ramificada ou cíclica contendo de 1 a 10 átomos de carbono, uma unidade de polietilenoglicol (-OCH2CH2)n, onde n é um número inteiro a partir de 1 a 2000, contendo um substituinte selecionado a partir de um halogênio, guanidina [-NH(C=NH)NH2], OR7, NR8R9, NO2, NRCOR', SR10, um sulfóxido representado por SOR', uma sulfona representada por -SO2R', um sulfito -SO3, um bissulfito -OSO3, uma sulfonamida representada por SO2NRR', ciano, uma azida, -COR11, OCOR11 ou OCONR11R12 onde R7, R8, R9, R10, R11 e R12 são definidos opcionalmente acima, qualquer um de R1', R2', R3', ou R4'é um grupo ligante que permite o acoplamento a um agente de ligação às células através de uma ligação covalente ou é selecionado a partir de uma unidade de polipirrol, poli-indol, poli-imidazol, polipirrol-imidazol, poli- pirrol-indol ou polimidazo-indol opcionalmente transportando um grupo ligante que permite o acoplamento a um agente de ligação às células,
[00025] Z é selecionado de (CH2)n, onde n é 1, 2 ou 3, CR15R16, NR17, O ou S, onde R15, R16 e R17 são independentemente selecionados a partir de H, alquila, linear, ramificada ou cíclica contendo de 1 a 10 átomos de carbono, uma unidade de polietilenoglicol (-OCH2CH2)n, onde n é um número inteiro de 1 a 2000;
[00026] R6 é OR, SR ou NRR', onde R e R'têm a mesma definição que a mencionada acima, opcionalmente R6 é um grupo ligante;
[00027] X'é selecionado de CH2, NR, CO, BH, SO ou SO2 onde R tem a mesma definição que a acima;
[00028] Y'é O, CH2, NR ou S, onde R tem a mesma definição que a acima;
[00029] Z'é CH2 ou (CH2)n, onde n é 2, 3 ou 4, desde que X', Y' e Z' não sejam todos CH2 ao mesmo tempo;
[00030] A e A'são os mesmos ou diferentes e são selecionados a partir de O, -CRR'O, S, -CRR'S, -NR15 ou CRR'NHR15, onde R e R'têm a mesma definição como acima e onde R15 tem a mesma definição que R;
[00031] D e D'são os mesmos ou diferentes e independentemente selecionados a partir de alquila, alquenila ou alquinila, linear, ramificada ou cíclica contendo de 1 a 10 átomos de carbono, opcionalmente substituídos por qualquer um dos halogênios, OR7, NR8R9, NO2, NRCOR', SR10, um sulfóxido e representado por SOR', uma sulfona representada por -SO2R', um sulfito -SO3, um bissulfito - OSO3, uma sulfonamida representada por SO2NRR', ciano, uma azida, -COR11, OCOR11 ou OCONR11R12, onde a definição do R7, R8, R9, R10, R11 e R12 são como definido acima, ou uma unidade de polietilenoglicol (-OCH2CH2)n, onde n é um número inteiro de 1 a 2000;
[00032] L é grupo fenila opcional ou anel heterocíclico de 3 a 18 membros contendo de 1 a 6 heteroátomos selecionados a partir de O, S, N e P que é opcionalmente substituído, onde o substituinte é um grupo ligante que permite o acoplamento a um agente de ligação às células através de ligação covalente, ou é selecionado a partir de alquila, alquenila ou alquinila, linear, ramificada ou cíclica contendo de 1 a 10 átomos de carbono, opcionalmente substituída com qualquer um de halogênio, OR7, NR8R9, NO2, NRCOR', SR10, um sulfóxido representado por SOR', uma sulfona representada por -SO2R', um sulfito -SO3, um bissulfito -OSO3, uma sulfonamida representada por SO2NRR', ciano, uma azida, -COR11, OCOR11 ou OCONR11R12, onde R7, R8, R9, R10, R11 e R12 têm a mesma definição que acima, uma unidade de polietilenoglicol (-OCH2CH2)n, onde n é um número inteiro de 1 a 2000; opcionalmente, L por si próprio é um grupo ligante que permite o acoplamento a um agente de ligação à célula através de ligação covalente; ou seus solvatos, sais, hidratos ou sais hidratados farmaceuticamente aceitáveis, seus isômeros ópticos, racematos farmaceuticamente aceitáveis, diasteroisômeros, enantiômeros ou estruturas polimórficas cristalinas destes compostos; desde que os compostos não tenham mais de um grupo ligante que permite o acoplamento a um agente de ligação às células através de ligação covalente.
[00033] Um quarto objetivo da invenção é fornecer conjugados dos agentes de ligação à célula com os novos compostos de benzodiazepina ou derivados do mesmo da presente invenção. Estes conjugados são úteis como agentes terapêuticos, que são liberados especificamente a células-alvo e são citotóxicos.
[00034] A presente invenção inclui uma composição (por exemplo, uma composição farmacêutica) compreendendo novos compostos de benzodiazepina, derivados da mesma ou conjugados da mesma (e/ou solvatos, hidratos e/ou sais da mesma) e um veículo (um veículo farmaceuticamente aceitável). A presente invenção inclui ainda uma composição (por exemplo, uma composição farmacêutica) compreendendo novos compostos de benzodiazepina, derivados da mesma ou conjugados da mesma (e/ou solvatos, hidratos e/ou sais da mesma) e um veículo(um veículo farmaceuticamente aceitável), compreendendo ainda um segundo agente terapêutico. As presentes composições são úteis para a inibição do crescimento anormal das células ou tratamento de distúrbios proliferativos em mamíferos (por exemplo, seres humanos). As presentes composições são também úteis no tratamento da depressão, ansiedade, estresse, fobias, pânico, disforia, distúrbios psiquiátricos, dor, e doenças inflamatórias em um mamífero (por exemplo, seres humanos).
[00035] A presente invenção inclui um método de inibição do crescimento anormal de células ou tratamento de distúrbios proliferativos em mamíferos (por exemplo, seres humanos) compreendendo administrar ao dito mamífero uma quantidade terapeuticamente eficaz dos novos compostos de benzodiazepina, derivados dos mesmos ou conjugados dos mesmos, (e/ou solvatos e sais dos mesmos) ou uma composição dos mesmos, sozinhos ou em combinação com um segundo agente terapêutico.
[00036] A presente invenção inclui um método de sintetizar e usar um novo composto de benzodiazepina, derivado do mesmo e conjugados do mesmo, para diagnóstico in vitro, in situ, e in vivo ou para o tratamento de células de mamíferos, organismos, ou condições patológicas associadas.
[00037] Os compostos desta invenção, derivados dos mesmos ou conjugados dos mesmos e as composições compreendendo-os, são úteis para tratar ou diminuir a gravidade dos distúrbios, tal como caracterizados por crescimento celular anormal (por exemplo, câncer). Outras aplicações para os compostos e conjugados da invenção incluem, entre outras, o tratamento da osteoporose, depressão, ansiedade, estresse, fobia, pânico, disforia, distúrbios psiquiátricos e dor ou como antiepilépticos, antibacterianos, diuréticos e hipotensores, hipolipidêmicos e antidepressivos.
BREVE DESCRIÇÃO DAS FIGURAS
[00038] As figuras 1 a 10 mostram os esquemas para a síntese dos monômeros de indolinobenzodiazepina e oxazolidinobenzodiazepina, os ligantes e os dímeros representativos na presente invenção.
[00039] A figura 11 mostra o esquema para a síntese do monômero de indolinobenzodiazepina modificado por anel B representativo.
[00040] A figura 12 mostra o esquema para a síntese do monômero de isoindolinobenzodiazepina representativo.
[00041] A figura 13 mostra o esquema para a síntese do dímero representativo com o ligante diretamente fixado à fração de indolinobenzodiazepina na presente invenção.
[00042] As figuras 14 e 15 mostram os esquemas para a síntese dos dímeros representativos contendo frações (PEG)n nos ligantes.
[00043] A figura 16 mostra os esquemas para a síntese dos dímeros representativos misturados imina-imina e imina-amida indolinobenzodiazepina.
[00044] A figura 17 mostra o esquema para a síntese dos conjugados IBD-poli(N-metilpirrol-imidazol) representativos.
[00045] As figuras 18 a 19 mostram o esquema sintético para a preparação dos derivados dos monômeros polipirrol e polipirrol- imidazol.
[00046] A figura 20 mostra o esquema para a síntese de piperidinilbenzodiazepinas transportando um ligante hidrazona.
[00047] As figuras 21 a 26 mostram as atividades antiproliferativas in vitro doses dependentes dos conjugados muB38.1-IGN-03, huN901- IGN-03, huN901-IGN-07 e muB38.1-IGN-10 em linhagens de células de câncer antígenos positivas e antígenos negativas.
[00048] A figura 27 mostra a eficácia in vivo do conjugado huN901- IGN-07 em camundongos contendo tumores Molp-8.
[00049] As figuras 28 a 30 mostram dados que demonstram que IGN-01, IGN-02, e IGN-09 se formam aduto covalentemente com a fita dupla de DNA contendo resíduos de guanina nas fitas opostas.
[00050] A figura 31 contém a TABELA 1, a qual mostra o valor de IC50 para a atividade antiproliferativa in vitro dos dímeros de indolinobenzodiazepina e dímeros de oxazolidinobenzodiazepina em várias linhagens de células de câncer.
[00051] A figura 32 contém a TABELA 2, a qual mostra a comparação dos valores de IC50 para atividade antiproliferativa in vitro dos dímeros de indolinobenzodiazepina com e sem os ligantes.
[00052] As figuras 33 a 36, 39, 42, 43, 44, 48, 49 e 50 mostram o esquema sintético para a preparação dos compostos da presente invenção.
[00053] As figuras 37, 38, 40 e 41, 45, 46, e 47 mostram o esquema de síntese para a preparação dos compostos ligáveis da presente invenção.
[00054] A figura 51 mostra a citotoxicidade in vitro dos compostos da presente invenção.
[00055] As figuras 52, 54, 56, 57 e 58 mostram a citotoxicidade e a especificidade in vitro dos conjugados chB38.1.
[00056] As figuras 53 e 55 mostram a citotoxicidade e a especificidade in vitro dos conjugados huMy9-6.
[00057] A figura 59 mostra a atividade antitumoral in vivo do conjugado chB38.1.
DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO
[00058] Será feita referência em detalhes a certas modalidades da invenção, exemplos dos quais são ilustrados nas estruturas e fórmulas em anexo. Embora a invenção seja descrita em conjunto com as modalidades enumeradas, será entendido que elas não têm a intenção de limitar a invenção a estas modalidades. Pelo contrário, a invenção tem a intenção de cobrir todas as alternativas, modificações e equivalentes que possam estar incluídos no escopo da presente invenção conforme definido pelas reivindicações. Um versado na técnica reconhecerá muitos métodos e materiais semelhantes ou equivalentes aos descritos aqui, que poderiam ser usados na prática da presente invenção.
DEFINIÇÕES
[00059] "Alquila linear ou ramificada" como usado aqui refere-se a um radical hidrocarboneto monovalente de cadeia linear saturada ou ramificada de um a vinte átomos de carbono. Exemplos de alquila incluem, entre outros, metila , etila, 1-propila, 2-propila, 1-butila, 2- metil-1-propila, --CH2CH(CH3)2), 2-butila , 2-metil-2-propila, 1-pentila , 2-pentila, 3-pentila, 2-metil-2-butila, 3-metil-2-butila , 3-metil-1-butila, 2- metil-1-butila, 1-hexila), 2-hexila, 3-hexila, 2-metil-2-pentila, 3-metil-2- pentila, 4-metil-2-pentila, 3-metil-3-pentila, 2-metil-3-pentila, 2,3- dimetil-2-butila, 3,3-dimetil-2-butila, 1-heptila, 1-octila e similaress.
[00060] "Alquenila linear ou ramificada" refere-se a um radical hidrocarboneto monovalente de cadeia linear ou ramificada de dois a vinte átomos de carbono com pelo menos um sítio de insaturação, ou seja, uma ligação dupla carbono-carbono, onde o radical alquenila inclui radicais contendo orientações "cis" e "trans", ou alternativamente, orientações "E" e "Z". Exemplos incluem, entre outros, etilenila ou vinila (--CH=CH2), alila (--CH2CH=CH2), e similares.
[00061] "Alquinila Linear ou ramificada" refere-se a um radical hidrocarboneto monovalente linear ou ramificado de dois a vinte átomos de carbono com pelo menos um sítio de insaturação, ou seja, uma ligação tripla carbono-carbono. Exemplos incluem, entre outros, etinila, propinila, 1-butinila, 2-butinila, 1-pentinila, 2-pentinila, 3- pentinila, hexinila, e similar.
[00062] Os termos "alquila cíclica", "alquenila cíclica", "alquinila cíclica", "carbociclo", "carbociclila", "anel carbocíclico"e "cicloalquila" referem-se a anéis monovalentes não aromáticos, saturados ou parcialmente insaturados contendo 3 a 12 átomos de carbono como um anel monocíclico ou 7 a 12 átomos de carbono como um anel bicíclico. Carbociclos bicíclicos contendo 7 a 12 átomos podem ser organizados, por exemplo, como um sistema biciclo [4,5], [5,5], [5,6] ou [6,6], carbociclos bicíclicos contendo 9 ou 10 átomos no anel podem ser organizados como um sistema biciclo [5,6] ou [6,6], ou como sistemas em ponte como biciclo[2.2.1]heptano, biciclo[2.2.2]octano e biciclo[3.2.2]nonano. Exemplos de carbociclos monocíclicos incluem, entre outros, ciclopropila, ciclobutila, ciclopentila, 1-ciclopent-1-enila, 1- ciclopent-2-enila, 1-ciclopent-3-enila, ciclo-hexila, 1-ciclo-hex-1-enila, 1-ciclo-hex-2-enila, 1-ciclo-hex-3-enila, ciclo-hexadienila, ciclo-heptila, ciclo-octila, ciclononila, ciclodecila, cicloundecila, ciclododecila e similares.
[00063] "Arila" significa um radical hidrocarboneto monovalente aromático de 6 a 18 átomos de carbono derivados pela remoção de um átomo de hidrogênio a partir de um único átomo de carbono de um sistema de anel aromático parente. Alguns grupos arila são representados nas estruturas exemplares como "Ar". Arila inclui radicais bicíclicos compreendendo um anel aromático fundido a um anel saturado, parcialmente insaturado ou anel carbocíclico aromático ou heterocíclico. Grupos arila típicos incluem, entre outros, radicais derivados de benzeno (fenila), benzenos substituídos, naftaleno, antraceno, indenila, indanila, 1,2-di-hidronaftaleno, 1,2,3,4-tetra- hidronaftila, e similare.
[00064] Os termos "heterociclo,""heterociclila" e "anel heterocíclico" são usados de forma intercambiável aqui e referem-se a um radical carbocíclico saturado ou parcialmente insaturado (ou seja, contendo uma ou mais duplas e/ou triplas ligações dentro do anel) de 3 a 18 átomos no anel no qual pelo menos um átomo do anel é um heteroátomo selecionado de nitrogênio, oxigênio, fósforo, e enxofre, os átomos restantes do anel sendo C, onde um ou mais átomos do anel são opcionalmente substituídos independentemente com um ou mais substituintes descritos abaixo. Um heterociclo pode ser um monociclo contendo 3 a 7 membros no anel (2 a 6 átomos de carbono e 1 a 4 heteroátomos selecionados de N, O, P, e S) ou um biciclo contendo 7 a 10 membros no anel (4 a 9 átomos de carbono e 1 a 6 heteroátomos selecionados de N, O, P, e S), por exemplo: um sistema biciclo [4,5], [5,5], [5,6], ou [6,6]. Heterociclos são descritos em Paquette, Leo A.; "Principles of Modern Heterocyclic Chemistry" (W. A. Benjamin, New York, 1968), particularmente os Capítulos 1, 3, 4, 6, 7, e 9; "The Chemistry of Heterocíclico Compounds, A series of Monographs" (John Wiley & Sons, New York, 1950 to present), em particular Volumes 13, 14, 16, 19, e 28; e J. Am. Chem. Soc. (1960) 82:5566. "Heterociclila" também inclui radicais onde os radicais heterociclo estão fundidos com um anel saturado, parcialmente insaturado, ou anel aromático carbociclo ou heterocíclico. Exemplos de anéis heterocíclicos incluem, entre outros, pirrolidinila, tetra-hidrofuranila, di-hidrofuranila, tetra- hidrotienila, tetra-hidropiranila,_di-hidropiranila, tetra-hidrotiopiranila, piperidino, morfolino, tiomorfolino, tioxanila, piperazinila, homopiperazinila, azetidinila, oxetanila, tietanila, homopiperidinila, oxepanila, tiepanila, oxazepinila, diazepinila, tiazepinila, 2-pirrolinila, 3- pirrolinila, indolinila, 2H-piranila, 4H-piranila, dioxanila, 1,3-dioxolanila, pirazolinila, ditianila, ditiolanila, di-hidropiranila, di-hidrotienila, di- hidrofuranila, pirazolidinilimidazolinila, imidazolidinila, 3- azabiciclo[3.1.0]hexanila, 3-azabiciclo[4.1.0]heptanila, e azabiciclo[2.2.2]hexanila. Frações espiro também estão incluídas no escopo desta definição. Exemplos de um grupo heterocíclico onde os átomos do anel são substituídos com frações oxo (=O) são pirimidinonila e 1,1-dioxo-tiomorfolinila.
[00065] O termo "heteroarila" refere-se um radical aromático monovalente de anéis de 5 ou 6 membros, e inclui sistemas de anel fundido (pelo menos um dos quais é aromático) de 5-18 átomo, contendo um ou mais heteroátomos independentemente selecionados de nitrogênio, oxigênio, e enxofre. Exemplos de grupos heteroarila são piridinila (incluindo, por exemplo, 2-hidroxipiridinila), imidazolila, imidazopiridinila, pirimidinila (incluindo, por exemplo, 4- hidroxipirimidinila), pirazolila, triazolila, pirazinila, tetrazolila, furila, tienila, isoxazolila, tiazolila, oxazolila, isotiazolila, pirrolila, quinolinila, isoquinolinila, indolila, benzimidazolila, benzofuranila, cinolinila, indazolila, indolizinila, ftalazinila, piridazinila, triazinila, isoindolila, pteridinila, purinila, oxadiazolila, triazolila, tiadiazolila, furazanila, benzofurazanila, benzotiofenila, benzotiazolila, benzoxazolila, quinazolinila, quinoxalinila, naftiridinila, e furopiridinila.
[00066] Os grupos heterociclo ou heteroarila podem ser fixados por carbono (ligados por carbono) ou nitrogênio (ligados por nitrogênio) quando isso for possível. Por meio de exemplo, e não de limitação, heterociclos ou heteroarilas ligados por carbono são ligados na posição 2, 3, 4, 5 ou 6 de uma piridina, posição 3, 4, 5 ou 6 de piridazina, posição 2, 4, 5 ou 6 de uma pirimidina, posição 2, 3, 5 ou 6 de uma pirazina, posição 2, 3, 4 ou 5 de um furano, tetra-hidrofurano, tiofurano, tiofeno, pirrol ou tetra-hidropirrol, posição 2, 4 ou 5 de um oxazol, imidazol ou tiazol, posição 3, 4 ou 5 de um isoxazol, pirazol, ou isotiazol, posição 2 ou 3 de uma aziridina, posição 2, 3 ou 4 de uma azetidina, posição 2, 3, 4, 5, 6, 7 ou 8 de uma quinolina ou posição 1, 3, 4, 5, 6, 7 ou 8 de uma isoquinolina.
[00067] Por meio de exemplo e não de limitação, heterociclos de nitrogênio ligados ou heteroarilas são ligados na posição 1 de uma aziridina, azetidina, pirrol, pirrolidina, 2-pirrolina, 3-pirrolina, imidazol, imidazolidina, 2-imidazolina, 3-imidazolina, pirazol, pirazolina, 2- pirazolina, 3-pirazolina, piperidina, piperazina, indol, indolina, 1H- indazol, posição 2 de um isoindol, ou isoindolina, posição 4 de uma morfolina, e posição 9 de um carbazol, ou O-carbolina.
[00068] Os heteroátomos presentes na heteroarila ou heterociclila incluem as formas oxidadas como NO, SO, e SO2.
[00069] O termo "halo" ou "halogênio"refere-se a F, Cl, Br ou I.
[00070] O termo "composto" ou "composto citotóxico"ou "agente citotóxico"como usado aqui tem a intenção de incluir os compostos para os quais uma estrutura ou fórmula ou qualquer derivado do mesmo tenha sido revelado na presente invenção ou uma estrutura ou qualquer derivado do mesmo que tenha sido incorporado como referência. O termo inclui ainda, estereoisômeros, isômeros geométricos, tautômeros, solvatos, metabólitos, sais (por exemplo, sais farmaceuticamente aceitáveis) e profármacos, e sais de profármacos de um composto de todas as fórmulas reveladas na presente invenção. O termo inclui ainda qualquer solvato, hidrato e polimorfo de qualquer um dos anteriores. A recitação específica de "estereoisômeros", "isômeros geométricos", "tautômeros", "solvatos", "metabólitos", "sais""profármacos,""sal de profármaco,""conjugados," "sal conjugado,""solvato,""hidrato," ou "polimorfo" em certos aspectos da invenção neste pedido não devem ser interpretados como omissão pretendida destas formas em outros aspectos da invenção onde o termo "composto"é usado sem recitação destas outras formas.
[00071] O termo "conjugado" como usado aqui refere-se a um composto ou um derivado do mesmo que está ligado a um agente de ligação à célula e é definido por uma fórmula genérica: C-L-CBA, onde C = composto, L = ligante e CBA = agente de ligação à célula.
[00072] O termo "ligável a um agente de ligação à célula"como usado aqui refere-se a novos compostos de benzodiazepinas (por exemplo, indolinobenzodiazepina ou oxazolidinobenzodiazepina), derivados dos mesmos ou dímeros dos mesmos compreendendo pelo menos um grupo ligante ou um precursor do mesmo apropriado para ligar estes compostos, derivados dos mesmos ou dímeros dos mesmos para um agente de ligação à célula.
[00073] O termo "precursor" de um dado grupo refere-se a qualquer grupo que pode levar àquele grupo por qualquer desproteção, uma modificação química, ou uma reação de acoplamento.
[00074] O termo "ligado a um agente de ligação à célula"refere-se a uma molécula conjugada compreendendo pelo menos um novo composto de benzodiazepina (por exemplo, indolinobenzodiazepina ou oxazolidinobenzodiazepina), derivados dos mesmos ou dímeros dos mesmos ligados a um agente de ligação à célula através de um grupo ligante apropriado ou um precursor do mesmo.
[00075] O termo "quiral" refere-se a moléculas que têm propriedade de não-sobreposição da imagem especular correspondente, enquanto o termo "aquiral" refere-se a moléculas que são sobreponíveis na imagem especular correspondente.
[00076] O termo "estereoisômero"refere-se aos compostos que têm constituição química e conectividade idênticas, mas diferem em orientações de seus átomos no espaço que não podem ser interconvertidos por rotação sobre ligações simples.
[00077] "Diastereoisômero"refere-se a um estereoisômero com dois ou mais centros de quiralidade e cujas moléculas não são imagens especulares uma da outra. Diastereoisômeros têm propriedades físicas diferentes, por exemplo, pontos de fusão, pontos de ebulição, propriedades espectrais, e reatividades. Misturas de diastereoisômeros podem se separar sob procedimentos analíticos de alta resolução como cristalização, eletroforese e cromatografia.
[00078] "Enantiômeros"referem-se a dois estereoisômeros de um composto que são não-sobreponíveis nas imagens especulares um do outro.
[00079] As definições e convenções estereoquímicas usadas aqui seguem S. P. Parker, Ed., McGraw-Hill Dictionary of Chemical Terms (1984) McGraw-Hill Book Company, New York; and Eliel, E. and Wilen, S., "Stereochemistry of Organic Compounds", John Wiley & Sons, Inc., New York, 1994. Os compostos da invenção podem conter centros assimétricos ou quirais, e, portanto, existem em diferentes formas estereoisoméricas. Pretende-se que todas as formas estereoisoméricas dos compostos da invenção, incluindo entre outras, diastereoisômeros, enantiômeros e atropiômeros, bem como misturas dos mesmos como misturas racêmicas, formem parte da presente invenção. Muitos compostos orgânicos existem nas formas opticamente ativas, ou seja, têm a capacidade de girar o plano de luz polarizada. Ao descrever um composto opticamente ativo, os prefixos D e L, ou R e S, são usados para denotar a configuração absoluta da molécula sobre seu(s) centro(s) quiral(is). Os prefixos d e I ou (+) e (-) são empregados para designar o sinal de rotação do plano de luz polarizada pelo composto, com (-) ou 1 significando que o composto é levorrotatório. Um composto prefixado com (+) ou d é dextrorrotatório. Para uma dada estrutura química, estes estereoisômeros são idênticos exceto que são imagens especulares um do outro. Um estereoisômero específico pode ainda ser referenciado como um enantiômero, e uma mistura de tais isômeros é geralmente chamada de mistura enantiomérica. Uma mistura 50:50 de enantiômeros é referenciada como uma mistura racêmica ou um racemato, que pode ocorrer onde não há nenhuma estereosseleção ou estereoespecificidade em uma reação química ou processo. Os termos "mistura racêmica"e "racemato" referem-se a uma mistura equimolar de duas espécies enantioméricas, desprovida de atividade óptica.
[00080] O termo "tautômero"ou "forma tautomérica"refere-se a isômeros estruturais de diferentes energias que são interconvertidos através de uma barreira de energia inferior. Por exemplo, tautômeros de próton (também conhecidos como tautômeros prototrópicos) incluem interconversões através de migração de um próton, tal como isomerizações ceto-enol e imina-enamina. Tautômeros de valência incluem interconversões por reorganização de alguns dos elétrons de ligação.
[00081] Um substituinte é "substituível"se este compreende pelo menos um átomo de carbono, enxofre, oxigênio ou nitrogênio que está ligado a um ou mais átomos de hidrogênio. Assim, por exemplo, hidrogênio, halogênio, e ciano não estão dentro desta definição.
[00082] Se um substituinte é descrito como sendo "substituído,"um substituinte não hidrogênio no lugar de um substituinte hidrogênio em um carbono, oxigênio, enxofre ou nitrogênio do substituinte. Assim, por exemplo, um substituinte alquila substituído é um substituinte alquila onde pelo menos um substituinte não hidrogênio está no lugar de um substituinte hidrogênio no substituinte alquila. Para ilustrar, monofluoralquila é alquila substituída por um substituinte flúor e difluoralquila é alquila substituída por dois substituintes flúor. Deve-se reconhecer que se há mais de uma substituição em um substituinte, cada substituinte não hidrogênio pode ser idêntico ou diferente (salvo se declarado de outra forma).
[00083] Se um substituinte é descrito como sendo "opcionalmente substituído,"o substituinte pode ser (1) não substituído ou (2) substituído. Se um carbono de um substituinte é descrito como sendo opcionalmente substituído com um ou mais de uma lista de substituintes, um ou mais dos hidrogênios no carbono (na medida em que houver algum) pode separadamente e/ou juntos serem substituídos com um substituinte opcional independentemente selecionado. Se um nitrogênio de um substituinte é descrito como sendo opcionalmente substituído por um ou mais de uma lista de substituintes, um ou mais dos hidrogênios no nitrogênio (na medida em que houver algum) podem cada um ser substituídos por um substituinte opcional independentemente selecionado. Um substituinte exemplar pode ser descrito como --NR'R'', onde R' e R'' juntos com um átomo de nitrogênio ao qual estão ligados podem formar um anel heterocíclico. O anel heterocíclico formado a partir de R' e R'' juntos com o átomo de nitrogênio ao qual estão ligados pode ser parcialmente ou totalmente saturado. Em uma modalidade, o anel heterocíclico consiste em 3 a 7 átomos. Em outra modalidade, o anel heterocíclico é selecionado de um grupo que consiste em pirrolila, imidazolila, pirazolila, triazolila, tetrazolila, isoxazolila, piridila e tiazolila.
[00084] Este relatório descritivo usa os termos "substituinte," "radical" e "grupo" de forma intercambiável.
[00085] Se um grupo de substituintes é coletivamente descrito como sendo opcionalmente substituído por uma ou mais de uma lista de substituintes, o grupo pode incluir: (1) substituintes insubstituíveis, (2) substituintes substituíveis que não são substituídos pelos substituintes opcionais, e /ou (3) substituintes substituíveis que são substituídos por um ou mais dos substituintes opcionais.
[00086] Se um substituinte é descrito como sendo opcionalmente substituído como até um número particular de substituintes não hidrogênio, este substituinte pode ser (1) não substituído; ou (2) substituído até aquele número particular de substituintes não hidrogênio ou por até o número máximo de posições substituíveis no substituinte, o que for menor. Assim, por exemplo, se um substituinte é descrito como uma heteroarila opcionalmente substituída com até 3 substituintes não hidrogênio, então qualquer heteroarila com menos do que 3 posições substituíveis poderia ser substituída por até somente a quantidade de substituintes não hidrogênio que a heteroarila tenha posições substituíveis. Tais substituintes, em exemplos não limitantes, podem ser selecionados de uma alquila, alquenila ou alquinila linear, ramificada ou cíclica contendo de 1 a 10 átomos de carbono, halogênio, guanidina [-NH(C=NH)NH2], OR7, NR8R9, NO2, NRCOR', SR10, um sulfóxido representado por SOR', uma sulfona representada por -SO2R', um sulfito -SO3, um bissulfito -OSO3, uma sulfonamida representada por SO2NRR', ciano, uma azida, -COR11, OCOR11 ou OCONR11R12 onde R7, R8, R9, R10, R11 e R12 são cada um independentemente selecionados de H, alquila, alquenila ou alquinila linear, ramificada ou cíclica contendo de 1 a 10 átomos de carbono, uma unidade de polietilenoglicol (-OCH2CH2)n, onde n é um número inteiro de 1 a 2000, arila contendo de 6 a 10 átomos de carbono, anel heterocíclico contendo de 3 a 10 átomos de carbono.
[00087] O termo "profármaco"como usado aqui neste pedido refere-se a um precursor ou derivado de um composto da invenção que é capaz de ser enzimática ou hidroliticamente ativado ou convertido na forma parente mais ativa. Vide, por exemplo, Wilman, "Prodrug in Cancer Chemotherapy" Biochemical Society Transactions, 14, pp. 375-382, 615th Meeting Belfast (1986) and Stella et al., "Prodrugs: A Chemical Approach to Targeted Drug Delivery," Directed Drug Delivery, Borchardt et al., (ed.), pp. 247-267, Humana Press (1985). Os profármacos desta invenção incluem, entre outros, profármacos contendo éster, profármacoscontendo fosfato, profármacoscontendo tiofosfato, profármacoscontendo sulfato, profármacoscontendo peptídeo, profármacos contendo aminoácido D modificado, profármacosglicosilados, profármacoscontendo beta- lactama, profármacoscontendo fenoxiacetamida opcionalmente substituída, profármacoscontendo fenilacetamida opcionalmente substituída, profármacoscontendo 5-fluorcitosina e outroas profármacosde 5-fluoruridina que podem ser convertidos em um fármaco não citotóxico mais ativo. Exemplos de fármacos citotóxicos que podem ser derivados em uma forma de profármacopara uso nesta invenção incluem, entre outros, compostos da invenção e agentes quimioterápicos como os descritos acima.
[00088] O termo "profármaco" também tem a intenção de incluir um derivado de um composto que pode hidrolisar, oxidar ou de outra forma reagir em condições biológicas (in vitro ou in vivo) para fornecer um composto desta invenção. Profármacossomente podem se tornar ativos mediante essa reação em condições biológicas, ou eles podem ter atividade em suas formas não reagidas. Exemplos de profármacoscontemplados nesta invenção incluem, entre outras, análogos ou derivados de compostos de qualquer uma das fórmulas reveladas aqui que compreendem frações bio-hidrolisáveis como amidas bio-hidrolisáveis, ésteres bio-hidrolisáveis, carbamatos bio- hidrolisáveis, carbonatos bio-hidrolisáveis, ureídas bio-hidrolisáveis e análogos de fosfato bio-hidrolisáveis. Outros exemplos de profármacosincluem derivados dos compostos de qualquer uma das fórmulas reveladas aqui que compreendem frações --NO, --NO2, -- ONO, ou -ONO2. Profármacospodem tipicamente ser preparados usando métodos bem-conhecidos, como aqueles descritos por Burger's Medicinal Chemistry and Drug Discovery (1995) 172-178, 949-982 (Manfred E. Wolff ed., 5th ed); vide também Goodman and Gilman's, The Pharmacological basis of Therapeutics, 8th ed., McGraw-Hill, Int. Ed. 1992, "Biotransformation of Drugs".
[00089] Como usado aqui e, salvo se indicado de outra forma, os termos "amida bio-hidrolisável", "éster bio-hidrolisável", "carbamato bio-hidrolisável", "carbonato bio-hidrolisável", "ureida bio-hidrolisável" e "análogo de fosfato bio-hidrolisável" significam uma amida, éster, carbamato, ureída ou análogo de fosfato, respectivamente, que: 1) não destroem a atividade biológica do composto e conferem àquele composto propriedades vantajosas in vivo, como, absorção, duração da ação ou início da ação; ou 2) são por si só biologicamente inativos, mas são convertidos in vivo a um composto biologicamente ativo. Exemplos de amidas bio-hidrolisáveis incluem, entre outros, amidas de alquila inferior, amidas de alfa aminoácidos, amidas alcoxiacila e amidas alquilaminoalquilcarbonila. Exemplos de ésteres bio- hidrolisáveis incluem, entre outros, os ésteres de alquila inferior, ésteres de alcoxiacilóxi, ésteres de alquilacilaminoalquila e ésteres de colina. Exemplos de carbamatos bio-hidrolisáveis incluem, entre outros, alquilaminas inferiores, etilenodiaminas substituídas, aminoácidos, hidroxialquilaminas e aminas heterocíclicas e heteroaromáticas e aminas poliéter. Profármacosparticularmente preferenciais e sais de profármacos são aqueles que aumentam a biodisponibilidade dos compostos desta invenção, quando tais compostos são administrados a um mamífero.'
[00090] A expressão "sal farmaceuticamente aceitável", como usado aqui, refere-se aos sais orgânicos ou inorgânicos farmaceuticamente aceitáveis de um composto da invenção. Sais exemplares incluem, entre outros, o sulfato, citrato, acetato, oxalato, cloreto, brometo, iodeto, nitrato, bissulfato, fosfato, ácido fosfato, isonicotinato, lactato, salicilato, ácido citrato, tartarato, oleato, tanato, pantotenato, bitartarato, ascorbato, succinato, maleato, gentisinato, fumarato, gluconato, glucuronato, sacarato, formiato, benzoato, glutamato, metanossulfonato "mesilato", etanossulfonato, benzenossulfonato, p-toluenossulfonato, sais de pamoato (ou seja, 1,1'-metileno-bis-(2-hidróxi-3-naftoato)), sais de metais alcalinos (por exemplo, sódio e potássio), sais de metais alcalinoterrosos (por exemplo, magnésio) e sais de amônio. Um sal farmaceuticamente aceitável pode envolver a inclusão de outra molécula, como um íon acetato, um íon succinato ou outro contraíon. O contraíon pode ser qualquer fração orgânica ou inorgânica que estabiliza a carga no composto parente. Além disso, um sal farmaceuticamente aceitável pode ter mais de um átomo carregado em sua estrutura. Casos onde múltiplos átomos carregados são parte do sal farmaceuticamente aceitável,podem conter múltiplos contraíons. Assim, um sal farmaceuticamente aceitável pode conter um ou mais átomos carregados e/ou um ou mais contraíons.
[00091] Se o composto da invenção é uma base, o sal farmaceuticamente aceitável desejado pode ser preparado por qualquer método apropriado disponível na técnica, por exemplo, o tratamento da base livre com um ácido inorgânico, como o ácido clorídrico, ácido bromídrico, ácido sulfúrico, ácido nítrico, ácido metanossulfônico, ácido fosfórico e similares ou com um ácido orgânico, como ácido acético, ácido maleico, ácido succínico, ácido mandélico, ácido fumárico, ácido malônico, ácido pirúvico, ácido oxálico, ácido glicólico, ácido salicílico, ácido piranosidila, como o ácido glicurônico ou ácido galacturônico, um ácido alfa-hidróxi, como o ácido cítrico ou ácido tartárico, um aminoácido, como o ácido aspártico ou ácido glutâmico, um ácido aromático, como o ácido benzoico ou ácido cinâmico, um ácido sulfônico, como ácido p-toluenossulfônico ou ácido etanossulfônico, ou similar.
[00092] Se o composto da invenção é um ácido, o sal farmaceuticamente aceitável desejado pode ser preparado por qualquer método apropriado, por exemplo, o tratamento do ácido livre com uma base inorgânica ou orgânica, como uma amina (primária, secundária ou terciária), um hidróxido de metal alcalino ou hidróxido de metal alcalinoterroso ou similar. Exemplos ilustrativos de sais apropriados incluem, entre outros, sais orgânicos derivados de aminoácidos, como a glicina e arginina, amônia, aminas primárias, secundárias e terciárias e aminas cíclicas, como, piperidina, morfolina e piperazina e sais inorgânicos derivados de sódio, cálcio, potássio, magnésio, manganês, ferro, cobre, zinco, alumínio e lítio.
[00093] Como usado aqui, o termo "solvato" significa um composto que inclui ainda uma quantidade estequiométrica ou não estequiométrica de solvente, como água, isopropanol, acetona, etanol, metanol, DMSO, acetato de etila, ácido acético e diclorometano etanolamina, 2-propanol, ou similares, ligados por forças não covalentes intermoleculares. Solvatos ou hidratos dos compostos são facilmente preparados pela adição de pelo menos um equivalente molar de um solvente hidroxílico, como metanol, etanol, 1-propanol, 2- propanol ou água para o composto resultar em solvatação ou hidratação da fração imina.
[00094] Os termos "crescimento celular anormal" e "distúrbio proliferativo"são usados de forma intercambiável neste pedido. "Crescimento celular anormal", como utilizado aqui, salvo se indicado de outra forma, refere-se ao crescimento celular, que é independente de mecanismos regulatórios normais (por exemplo, perda de inibição por contato). Isto inclui, por exemplo, o crescimento anormal de: (1) células de tumor (tumores) que se proliferam pela expressão de uma tirosina quinase mutante ou a superexpressão de um receptor tirosina quinase, (2) células benignas e malignas de outras doenças proliferativas nas quais ocorrem uma ativação anômala da tirosina quinase (3) quaisquer tumores que se proliferam por receptores de tirosina quinase; (4) quaisquer tumores que se proliferam por ativação anômala da serina/treonina quinase e (5) células benignas e malignas de outras doenças proliferativas em que ocorre ativação anômala da serina/treonina quinase.
[00095] Os termos "câncer"e "cancerígeno"referem-se ou descrevem a condição fisiológica em mamíferos que normalmente é caracterizada pelo crescimento celular desregulado. O "tumor" compreende uma ou mais células cancerígenas. Exemplos de câncer incluem, entre outros, carcinoma, linfoma, blastoma, sarcoma, leucemia e ou malignidades linfoides. Exemplos mais particulares de ditos cânceres,incluem o câncer de células escamosas (por exemplo, câncer de células epiteliais escamosas), câncer de pulmão incluindo câncer de pulmão de células pequenas, câncer de pulmão de células não-pequenas ("NSCLC"), adenocarcinoma pulmonar e carcinoma escamosa do pulmão, câncer de peritônio, câncer hepatocelular, câncer gástrico ou câncer do estômago, incluindo câncer gastrointestinal, câncer pancreático, glioblastoma, câncer cervical, câncer de ovário, câncer hepático, câncer de bexiga, hepatoma, câncer de mama, câncer de cólon, câncer retal, câncer colorretal, carcinoma endometrial ou uterino, carcinoma de glândulas salivares, câncer de rim ou renal, câncer de próstata, câncer vulvar, câncer de tireoide, carcinoma hepático, carcinoma anal, carcinoma de pênis, leucemia aguda, bem como câncer de cabeça/cérebro e pescoço.
[00096] Um "agente terapêutico"engloba tanto a um agente biológico como um anticorpo, um peptídeo, uma proteína, uma enzima ou um agente quimioterápico. Um "agente quimioterápico" é um composto químico útil no tratamento de câncer. Exemplos de agentes quimioterápicos incluem Erlotinib (TARCEVA®, Genentech / OSI Pharm.), Bortezomib (VELCADE®, Millennium Pharm.) Fulvestrant (FASLODEX®, AstraZeneca), Sutent (SU11248, Pfizer), Letrozol (FEMARA ®, Novartis), Mesilato de Imatinib (GILVEC ®, Novartis), PTK787/ZK 222584 (Novartis), Oxaliplatina (ELOXATIN®, Sanofi), 5- FU (5-fluorouracila), Leucovorina, Rapamicina (Sirolimus, RAPAMUNE®, Wyeth), Lapatinib (TYKERB®, GSK572016, Glaxo Smith Kline), Lonafarnib (SCH 66336), Sorafenib (BAY43-9006, a Bayer Labs) e Gefitinib (IRESSA®, AstraZeneca), AG1478, AG1571 (SU 5271; SUGEN), agentes alquilantes como tiotepa e CYTOXAN® ciclofosfamida; sulfonatos de alquila, como bussulfano, improssulfano e pipossulfano; aziridinas como benzodopa, carboquona, meturedopa e uredopa; etilenoiminas e metilamelaminas incluindo altretamina, trietilenomelamina, trietilenofosforamida, trietilenotiofosforamida e trimetilomelamina; acetogeninas (especialmente bulatacina e bulatacinona); uma camptotecina (incluindo o análogo sintético topotecano); briostatina; calistatina; CC-1065 (incluindo seus análogos sintéticos adozelesina, carzelesina e dobizelesina); criptoficinas (particularmente criptoficinas 1 e criptoficinas 8); dolastatina; duocarmicina (incluindo os análogos sintéticos, KW-2189 e CB1-TM1); eleuterobina; pancratistatina; uma sarcodictina; espongistatina; mostardas nitrogenadas, por exemplo, clorambucila, clornafazina, clorofosfamida, estramustina, ifosfamida, mecloretamina, mecloretamina cloridrato óxido de mecloroetamina, melfalano, novembicina, fenesterina, prednimustina, trofosfamida, mostarda de uracila; nitrosoureias como carmustina, clorozotocina, fotemustina, lomustina, nimustina e ranimustina; antibióticos, como os antibióticos enedina (por exemplo, caliqueamicina, especialmente caliqueamicinagamal e caliqueamicinaomegal (AngewChemIntl Ed Engl (1994) 33:183-186); dinemicina, incluindo dinemicina A; bifosfonatos, tais como clodronato; uma esperamicina, bem como o cromóforo neocarzinostatina e cromóforos cromoproteina relacionadas ao antibiótico enedina), aclacinomisina, actinomicina, autramicina, azasserina, bleomicinas, cactinomicina, carabicina, caminomicina, carzinofilina, cromomicinas, dactinomicina, daunorrubicina, detorrubicina, 6-diazo-5-oxo-L-norleucina, ADRYAMICIN® (doxorrubicina), morfolino-doxorrubicina, cianomorfolino-doxorrubicina, 2-pirrolino-doxorrubicina e deoxidoxorrubicina), epirrubicina, esorrubicina, idarrubicina, marcelomicina, mitomicinas como mitomicina C, ácido micofenólico, nogalamicina, olivomicina, peplomicina, porfiromicina, puromicina, quelamicina, rodorrubicina, estreptonigrina, estreptozocina, tubercidina, ubenimex, zinostatina, zorubicina; antimetabólitos, como metotrexato e 5-fluorouracila (5-FU), análogos do ácido fólico, tais como denopterina, metotrexato, pteropterina, trimetrexato; análogos de purina como a fludarabina, 6- mercaptopurina, tianiprina, tioguanina; análogos de pirimidina como ancitabina, azacitidina, 6-azauridina, carmofur, citarabina, dideoxiuridina, doxifluridina, enocitabina, floxuridina; androgênios como calusterona, dromostalononapropionato, epitiostanol, mepitiostana, testolactona; antiadrenais, como aminoglutetimida, mitotano, trilostano; reforçador ácido fólico, como o ácido folínico; aceglatona; glicosídeo aldofosfamida; ácido aminolevulínico; eniluracila; amsacrina; bestrabucila; bisantreno; edatraxato; defofamina; demecolcina; diaziquona; elformitina; acetato de eliptinio; uma epotilona; nitrato de gálio; hidroxiureia de etoglucidio; lentinano; lonidainina; maitansinoides como maitansina e ansamitocinas; mitoguazona; mitoxantrona; mopidamol; nitraerina; pentostatina; fenameta; pirarrubicina; losoxantrona; ácido podofilínico ; 2-etil- hidrazida; procarbazina; complexo polissacarídicos PSK® (JHS Natural Products, Eugene, Oreg.); razoxana; rizoxina; sizofurano; espirogermânio; ácido tenuazônico; triaziquona; 2,2 ', 2''- triclorotrietilamina; tricotecenos (especialmente T toxina -2, verracurina A, roridina A e anguidina); uretano; vindesina; dacarbazina; manomustina; mitobronitol; mitolactol; pipobromano; gacitosina; arabinosídeo ("Ara-C"); ciclofosfamida; tiotepa; taxoides, por exemplo, o TAXOL ® (paclitaxel ; Bristol-Myers Squibb Oncology, Princeton, NJ), ABRAXANE ® (livre de cromóforo), formulações em nanopartículas de paclitaxel por albumina recombinante (American PartnersPharmaceutical, Schaumberg, Illinois) e TAXOTERE ® (doxetaxel; Rhone-PoulencRorer, Antony , França); cloranmbucila; GEMZAR ® (gemcitabina); 6-tioguanina; mercaptopurina, metotrexate; análogos de platina como a cisplatina e carboplatina, vinblastina, etoposídeo (VP-16); ifosfamida; mitoxantrona; vincristina; NAVELBINE® (vinorelbina); novantrona; teniposídeo; edatrexato; daunomicina; aminopterina; capecitabina (XELODA®); ibandronato; CPT-11; inibidor da topoisomerase RFS 2000; difluorometilornitina (DMFO); retinoides como o ácido retinoico, e sais farmaceuticamente aceitáveis, ácidos e derivativos de qualquer um dos mencionados acima.
[00097] Também incluídos na definição de "agente quimioterápico" estão: (i) agentes anti-hormonais que atuam regulando ou inibindo a ação hormonal em tumores como antiestrogênios e moduladores de receptores seletivos de estrogênio (SERMs), incluindo, por exemplo, o tamoxifeno (incluindo NOLVADEX®; citrato de tamoxifeno), o raloxifeno, droloxifeno, 4-hidroxitamoxifeno, trioxifeno, queoxifeno, LY117018, onapristona e FARESTON® (citrato de toremifina), (ii) inibidores de aromatase, que inibem a enzima aromatase, que regula a produção de estrogênio nas glândulas suprarrenais, como, por exemplo, 4(5)-imidazóis, aminoglutetimida, MEGASE® (acetato de megestrol), AROMASIN® (exemestano, Pfizer), formestano, fadrozol, RIVISOR® (vorozol), FEMARA® (letrozol; Novartis) e ARIMIDEX® (anastrozol; AstraZeneca), (iii) antiandrógenos, tais como a flutamida, nilutamida, bicalutamida, leuprolida, e goserelina; bem como troxacitabina (um análogo de 1,3-dioxolano do nucleosídeo citosina), (iv) inibidores de proteína quinase, (v) inibidores de lipídeo quinase; (vi) oligonucleotídeos antissenso, particularmente aqueles que inibem a expressão de genes em vias de sinalização envolvidas na proliferação celular anormal, como, por exemplo, PKC-alfa, Ralf e H- Ras; (vii) ribozimas, tais como os inibidores da expressão do VEGF (por exemplo, ANGIOZYME®) e inibidores da expressão HER2; (viii) vacinas como as vacinas de terapia genética, por exemplo, ALLOVECTIN®, LEUVECTIN® e VAXID®; PROLEUKIN® rIL-2; um inibidor de topoisomerase 1 como LURTOTECAN®; ABARELIX® rmRH; (ix) agentes antiangiogênicos como o bevacizumab (AVASTIN®, Genentech), e (x) sais, ácidos e derivados farmaceuticamente aceitáveis, de qualquer um dos acima mencionados. Outros agentes antiangiogênicos incluem inibidores da MMP-2 (matriz-metaloproteinase2), inibidores da MMP-9 (matriz- metaloproteinase), inibidores da COX-II (ciclo-oxigenase II) inibidores de receptor VEGF da tirosina quinase. Exemplos de tais inibidores úteis de matriz metaloproteinases que podem ser usados em combinação com os presentes compostos/composições estão descritos em WO 96/33172, 96/27583 WO, EP 818442, EP 1004578, WO 98/07697, WO 98/03516, WO 98/ 34918, WO 98/34915, WO 98/33768, WO 98/30566, EP 606046, EP 931788 E, WO 90/05719, WO 99/52910, WO 99/52889, WO 99/29667, WO 99/07675, EP 945864, Patente U.S. N ° 5.863.949, Patente US N ° 5.861.510, e EP 780.386, os quais estão aqui incorporados em suas totalidades como referência. Exemplos de inibidores de receptor VEGF da tirosina quinase incluem 4-(4-bromo-2-fluoroanilina)-6-metóxi-7-(1- metilpiperidina-4-ilmetóxi) quinazolina (ZD6474; Exemplo 2 em WO 01/32651), 4-(4-fluoro-2-metilindol-5-ilóxi)-6-metóxi-7-(3-pirrolidina-1- ilpropóxi)quinazolina (AZD2171;Exemplo 240 no WO 00/47212), vatalanib (PTK787; WO 98/35985) e SU11248 (sunitinib; WO 01/60814) e compostos como os revelados na Publicação PCT Nos. WO 97/22596, WO 97/30035, WO 97/32856 e WO 98/13354).
[00098] Outros exemplos de agentes quimioterápicos que podem ser usados em combinação com os presentes compostos incluem inibidores de PI3K (fosfatidilinositol-3 quinase), tais como os relatados em Yaguchiet al (2006) Jour. of Nat. Cancer Inst. 98 (8) :545-556; Patente US 7.173.029; Patente US 7.037.915; Patente US 6.608.056; Patente US 6.608.053; Patente US 6.838.457; Patente US 6.770.641; Patente US 6.653.320; Patente US 6.403.588; WO 2006/046031; WO 2006/046035; WO 2006/046040; WO 2007/042806; WO 2007/042810; WO 2004/017950; US 2004/092561; WO 2004/007491; WO 2004/006916; WO 2003/037886; US 2003/149074; WO 2003/035618; WO 2003/034997; US 2003/158212; EP 1417976; US 2004/053946; JP 2001247477; JP 08175990; JP 08176070; Patente US 6.703.414, e WO 97/15658, todos os quais estão aqui incorporados em suas totalidades como referência. Exemplos específicos de inibidores de tais PI3K incluem SF-1126 (inibidor da PI3K, Semafore Pharmaceuticals), BEZ-235 (inibidor da PI3K, Novartis), XL-147 (inibidor da PI3K, Exelixis, Inc.).
[00099] Um "metabólito" é um produto produzido através do metabolismo no organismo de um composto especificado, um derivado do mesmo, ou um conjugado do mesmo ou sal do mesmo. Metabólitos de um composto, um derivado do mesmo, ou um conjugado do mesmo, podem ser identificados utilizando técnicas de rotina conhecidas na técnica e suas atividades determinadas usando testes, como os descritos aqui. Tais produtos podem resultar, por exemplo, da oxidação, hidroxilação, redução, hidrólise, amidação, desamidação, esterificação, desesterificação, clivagem enzimática, e similares, do composto administrado. Desta forma, a invenção inclui metabólitos de compostos, derivados dos mesmos ou conjugados dos mesmos, da invenção, incluindo compostos, derivados dos mesmos, ou conjugados dos mesmos, produzidos por um processo que compreende contato com um composto, um derivado do mesmo, ou um conjugado do mesmo, desta invenção com um mamífero, por um período de tempo suficiente para produzir um produto metabólico do mesmo.
[000100] A frase "farmaceuticamente aceitável"indica que a substância ou composição deve ser quimicamente e/ou toxicologicamente compatível, com os outros ingredientes que compõem a formulação, e/ou o mamífero a ser tratado com a mesma.
[000101] O termo "grupo de proteção"ou "fração protetora" refere-se a um substituinte que é comumente empregado para bloquear ou proteger uma funcionalidade particular ao reagir outros grupos funcionais no composto, um derivativo do mesmo, ou um conjugado do mesmo. Por exemplo, um "grupo de proteção de amina" ou uma "fração de proteção de amina"é um substituinte ligado a um grupo amina que bloqueia ou protege a funcionalidade amina no composto. Grupos apropriados de proteção de amina incluem acetila, trifluoracetila, t-butoxicarbonila (BOC), benziloxicarbonila (CBZ) e 9- fluorenilmetilenoxicarbonila (Fmoc). Da mesma forma, um "grupo de proteção de hidróxi"refere-se a um substituinte de um grupo hidróxi que bloqueia ou protege a funcionalidade hidróoxi. Grupos apropriados de proteção incluem acetila e silila. Um "grupo de proteção carbóxi" refere-se a um substituinte do grupo carbóxi que bloqueia ou protege a funcionalidade carboxila. Grupos de proteção de carbóxi comuns incluem fenilsulfoniletila, cianoetila, 2-(trimetilsilil) etila, 2-(trimetilsilil) etoximetila, 2-(p-toluenossulfonil) etila, 2-(p-nitrofenilsulfenil) etila, 2- (difenilfosfino)-etílico nitroetila e similares. Grupos comuns de proteção de tiol incluem aqueles que convertem o tiol em um tioéster, tais como acetila, benzoíla ou trifluoracetila, em um tioéter, como benzílico, t- butila, trifenilmetila, 9-fluoronilmetila, metoximetila, 2-tetra-hidropiranila ou silila, em um dissulfeto, como metila, benzila, t-butila, piridila, nitropiridila, fenila, ou nitrofenildinitrofenila, em um tiocarbonato, como t-butoxicarbonila, em um tiocarbamato, tais como N-etila. Para uma descrição geral de grupos de proteção e seu uso, vide PGM Wuts TW & Greene, Protective Groups in Organic Synthesis, John Wiley& Sons, New York, 2007.
[000102] Para as novas benzodiazepinas de fórmulas (I) e (II),
Figure img0004
em que:
[000103] a linha dupla — entre N e C representa uma ligação simples ou uma ligação dupla, desde que quando é uma ligação dupla X está ausente e Y é H, e quando é uma ligação simples, X é H, ou uma fração protetora de amina que converte o composto no profármaco que pode ser transformado na amina livre in vitro ou in vivo;
[000104] Y é selecionado de -OR, um éster representado por - OCOR', um carbonato representado por -OCOOR', um carbamato representado por -OCONR'R'', uma amina ou uma hidroxilamina representada por NR'R'', amida representada por -NRCOR', um peptídeo representado por NRCOP, onde P é um aminoácido ou um polipeptídeo contendo entre 2 a 20 unidades de aminoácido, um tioéter representado por SR', um sulfóxido representado por SOR', uma sulfona representada por -SO2R', um sulfito -SO3, um bissulfito -OSO3, um halogênio, ciano, uma azida, ou um tiol, onde R, R' e R'' são o mesmo ou diferentes e são selecionados de H, alquila, aquenila ou alquinila substituída ou não substituída, linear, ramificada ou cíclica contendo de 1 a 20 átomos de carbono uma unidade de polietilenoglicol (-OCH2CH2)n, onde n é um número inteiro de 1 a 2000, um anel heteroarila de 5 ou 6 membros contendo um ou mais Heteroátomos independentemente selecionados de nitrogênio, oxigênio, e enxofre, um sistema de anel fundido de 5 a 18 membros, onde pelo menos um dos anéis é aromático, contendo um ou mais Heteroátomos independentemente selecionados de nitrogênio, oxigênio, e enxofre, arila contendo de 6 a 18 átomos de carbono, um anel heterocíclico de 3 a 18 membros contendo 1 a 6 heteroátomos selecionados de O, S, N e P onde o substituinte é selecionado de halogênio, OR7, NR8R9, NO2, NRCOR', SR10, um sulfóxido representado por SOR', uma sulfona representada por -SO2R', um sulfito -SO3, um bissulfito -OSO3, uma sulfonamida representada por SO2NRR', ciano, uma azida, -COR11, OCOR11 ou OCONR11R12, onde R7, R8, R9, R10, R11 e R12 são cada um independentemente selecionados de H, alquila, alquenila ou alquinila linear, ramificada ou cíclica contendo de 1 a 10 átomos de carbono, uma unidade de polietilenoglicol (-OCH2CH2)n, onde n é um número inteiro de 1 a 2000, um anel heteroarila de 5 ou 6 membros contendo um ou mais Heteroátomos independentemente selecionados de nitrogênio, oxigênio, e enxofre. um sistema de anel fundido de 5 a 18 membros, onde pelo menos um dos anéis é aromático contendo um ou mais heteroátomos independentemente selecionados de nitrogênio, oxigênio, e enxofre, arila contendo de 6 a 18 átomos de carbono anel heterocíclico de 3 a 18 membros contendo 1 a 6 heteroátomos selecionados de O, S, N e P e R10 opcionalmente é SR13 ou COR13, onde R13 é selecionado de alquila, alquenila ou alquinila linear, ramificada ou cíclica contendo de 1 a 10 átomos de carbono, uma unidade de polietilenoglicol (-OCH2CH2)n, onde n é um número inteiro de 1 a 2000, um anel heteroarila de 5 ou 6 membros contendo um ou mais heteroátomos independentemente selecionados de nitrogênio, oxigênio, e enxofre, um sistema de anel fundido de 5 a 18 membros, onde pelo menos um dos anéis é aromático, contendo um ou mais heteroátomos independentemente selecionados de nitrogênio, oxigênio, e enxofre, anel heterocíclico de 3 a 18 membros contendo 1 a 6 heteroátomos selecionados de O, S, N e P e R11 pode ainda ser OR14, onde R14 é H ou tem a mesma definição que R, opcionalmente, R''é um OH; W é C=O, C=S, CH2, BH (B=Boro), SO ou SO2;
[000105] R1, R2, R3, R4, são cada um independentemente selecionados de H, alquila, aquenila ou alquinila substituída ou não substituída, linear, ramificada ou cíclica contendo de 1 a 10 átomos de carbono, uma unidade de polietilenoglicol (-OCH2CH2)n, onde n é um número inteiro de 1 a 2000, ou um substituinte selecionado de um halogênio, OR7, NR8R9, NO2, NRCOR', SR10, um sulfóxido representado por SOR', uma sulfona representada por -SO2R', um sulfito -SO3, um bissulfito -OSO3, uma sulfonamida representada por SO2NRR', ciano, uma azida, guanidina [-NH(C=NH)NH2], -COR11, - OCOR11 ou -OCONR11R12 onde R7, R8, R9, R10, R11 e R12 são como definidos acima, opcionalmente, qualquer um de R1, R2, R3, R4 é um grupo ligante que permite o acoplamento a um agente de ligação à célula através de uma ligação covalente ou é selecionado de uma unidade de polipirrolo, poli-indolila, poli-imidazolila, polipirrolo- imidazolila, poli-pirrolo-indolila ou poli-imidazolo-indolila opcionalmente transportando um grupo ligante que permite o acoplamento a um agente de ligação à célula;
[000106] R5 é selecionado de OR15, CRR'OH, SH, CRR'SH, NHR15 ou CRR'NHR15, onde R15 tem a mesma definição que R, R e R'têm a mesma definição conforme mencionada acima; opcionalmente, R5 é um grupo ligante que permite o acoplamento a um agente de ligação à célula através de uma ligação covalente ou é selecionado de uma unidade de polipirrolo, poli-indolila, poli-imidazolila, polipirrolo- imidazolila, poli-pirrolo-indolila ou poli-imidazolo-indolila opcionalmente transportando um grupo ligante que permite o acoplamento a um agente de ligação à célula;
[000107] R6 é OR, SR, NRR', onde R e R'têm a mesma definição conforme mencionada acima, ou opcionalmente R6 é um grupo ligante;
[000108] Z é selecionado de (CH2)n, onde n é 1, 2 ou 3, CR15R16, NR17, O ou S, onde R15, R16 e R17 são cada um independentemente selecionados de H, alquila linear, ramificada ou cíclica contendo de 1 a 10 átomos de carbono, uma unidade de polietilenoglicol (-OCH2CH2)n, onde n é um número inteiro de 1 a 2000; ou seus solvatos, sais, hidratos ou sais hidratados farmaceuticamente aceitáveis, seus isômeros ópticos, racematos, diastereoisômeros, enantiômeros destes compostos desde que o composto tenha não mais do que um grupo ligante que permite o acoplamento a um agente de ligação à célula através de uma ligação covalente.
[000109] Em uma modalidade preferencial, a linha dupla — entre N e C representa uma ligação dupla e X está ausente e Y é H, ou uma linha dupla — entre N e C representa uma ligação simples onde X é H e Y é selecionado de -OR, um sulfito -SO3, ou uma fração protetora de amina que converte o composto na pró-droga; W é C=O, CH2, ou SO2;
[000110] R1, R2, R3, R4, são cada um H; opcionalmente, independentemente, qualquer um de R1, R2, R3 e R4 pode ser um grupo ligante que permite o acoplamento a um agente de ligação à célula através de uma ligação covalente;
[000111] R5 é selecionado de OR15, CRR'OH, SH, CRR'SH, NHR15 ou CRR'NHR15, onde R15 é H ou tem a mesma definição que a mencionada acima para R, ou é selecionado de uma unidade polipirrolo, poli-indolil, poli-imidazolil, polipirrolo-imidazolil, poli-pirrolo- indolil ou poliimidazolo-indolil opcionalmente transportando um grupo ligante que permite o acoplamento a um agente de ligação à célula, R e R' têm a mesma definição conforme mencionada acima; R6 é OCH3;
[000112] Z é selecionado de (CH2)n, onde n é 1 ou 2, NH, NCH3 ou S; ou seus solvatos, sais, hidratos ou sais hidratados farmaceuticamente aceitáveis, seus isômeros ópticos, racematos, diastereoisômeros, enantiômeros ou as estruturas cristalinas polimórficas destes compostos.
[000113] Em uma modalidade preferencial, compostos de fórmulas (I) e (II) são compostos de fórmulas (VII), (VIII) ou (IX):
Figure img0005
[000114] em que os substituintes são descritos como acima; ou seus solvatos, sais, hidratos ou sais hidratados farmaceuticamente aceitáveis, seus isômeros ópticos, racematos, diastereoisômeros, enantiômeros ou as estruturas cristalinas polimórficas destes compostos.
[000115] Para as novas benzodiazepinas de fórmula (III), nas quais o anel diazepina (B) está fundido com um anel heterocíclico (C), onde o anel heterocíclico é monocíclico,
Figure img0006
em que:
[000116] a linha dupla — entre N e C representa uma ligação simples ou uma ligação dupla, desde que quando é uma ligação dupla X está ausente e Y é H, e quando é uma ligação simples, X é H ou uma fração protetora de amina que converte o composto no profármaco;
[000117] Y é selecionado de -OR, um éster representado por - OCOR', um carbonato representado por -OCOOR', um carbamato representado por -OCONR'R'', uma amina ou uma hidroxilamina representada por NR'R'', amida representada por -NRCOR', um peptídeo representado por NRCOP, onde P é um aminoácido ou um polipeptídeo contendo entre 2 a 20 unidades de aminoácido, um tioéter representado por SR', um sulfóxido representado por SOR', uma sulfona representada por -SO2R', um sulfito -SO3, um bissulfito -OSO3, um halogênio, ciano, uma azida, ou um tiol, onde R, R' e R'' são o mesmo ou diferentes e selecionados de H, alquila, aquenila ou alquinila substituída ou não substituída, linear, ramificada ou cíclica contendo de 1 a 10 átomos de carbono, uma unidade de polietilenoglicol (-OCH2CH2)n, onde n é um número inteiro de 1 a 2000, um anel heteroarila de 5 ou 6 membros contendo um ou mais heteroátomos independentemente selecionados de nitrogênio, oxigênio, e enxofre, um sistema de anel fundido de 5 a 18 membros, onde pelo menos um dos anéis é aromático, contendo um ou mais heteroátomos independentemente selecionados de nitrogênio, oxigênio, e heteroarilenxofre compreendido de anéis de 5 ou 6 membros, incluindo sistemas de anéis fundidos (pelo menos um dos quais é aromático) de 5-18 átomos, contendo um ou mais heteroátomos independentemente selecionados de nitrogênio, oxigênio, e enxofre, arila contendo de 6 a 18 átomos de carbono ,anel heterocíclico de 3 a 18 membros contendo 1 a 6 heteroátomos selecionados de O, S, N e P, onde o substituinte é selecionado de halogênio, OR7, NR8R9, NO2, NRCOR', SR10, um sulfóxido representado por SOR', uma sulfona representada por -SO2R', um sulfito -SO3, um bissulfito -OSO3, uma sulfonamida representada por SO2NRR', ciano, uma azida, -COR11, OCOR11 ou OCONR11R12, onde R7, R8, R9, R10, R11 e R12 são cada um independentemente selecionados de H, alquila, alquenila ou alquinila linear, ramificada ou cíclica contendo de 1 a 10 átomos de carbono, uma unidade de polietilenoglicol (-OCH2CH2)n, onde n é um número inteiro de 1 a 2000, um anel heteroarila de 5 ou 6 membros contendo um ou mais heteroátomos independentemente selecionados de nitrogênio, oxigênio, e enxofre, um sistema de anel fundido de 5 a 18 membros, onde pelo menos um dos anéis é aromático, contendo um ou mais heteroátomos independentemente selecionados de nitrogênio, oxigênio, e heteroarilenxofre compreendido de anéis de 5 ou 6 membros, incluindo sistemas de anéis fundidos (pelo menos um dos quais é aromático) de 5-18 átomos, contendo um ou mais heteroátomos independentemente selecionados de nitrogênio, oxigênio, e enxofre, arila contendo de 6 a 18 átomos de carbono,anel heterocíclico de 3 a 18 membros contendo 1 a 6 heteroátomos selecionados de O, S, N e P e R10 opcionalmente é SR13 ou COR13, onde R13 é selecionado de alquila, alquenila ou alquinila linear, ramificada ou cíclica contendo de 1 a 10 átomos de carbono, uma unidade de polietilenoglicol (-OCH2CH2)n, onde n é um número inteiro de 1 a 2000, um anel heteroarila de 5 ou 6 membros contendo um ou mais heteroátomos independentemente selecionados de nitrogênio, oxigênio, e enxofre, um sistema de anel fundido de 5 a 18 membros, onde pelo menos um dos anéis é aromático, contendo um ou mais heteroátomos independentemente selecionados de nitrogênio, oxigênio, e heteroarilenxofre compreendido de anéis de 5 ou 6 membros, incluindo sistemas de anéis fundidos (pelo menos um dos quais é aromático) de 5-18 átomos, contendo um ou mais heteroátomos independentemente selecionados de nitrogênio, oxigênio, e enxofre, arila contendo de 6 a 18 átomos de carbono, anel heterocíclico de 3 a 18 membros contendo 1 a 6 heteroátomos selecionados de O, S, N e P e R11 pode ser ainda OR14, onde R14 é H ou tem a mesma definição que R, opcionalmente R''é OH;W é C=O, C=S, CH2, BH, SO ou SO2;
[000118] R5 é selecionado de OR15, CRR'OH, SH, CRR'SH, NHR15 ou CRR'NHR15, onde R15 é H ou tem a mesma definição que R, ou é um grupo ligante que permite o acoplamento a um agente de ligação à célula através de uma ligação covalente ou é selecionado de uma unidade de polipirrolo, poli-indolila, poli-imidazolila, polipirrolo- imidazolila,poli-pirrolo-indolila ou poli-imidazolo-indolila opcionalmente transportando um grupo ligante que permite o acoplamento a um agente de ligação à célula; é selecionado de uma unidade de poli- pirrolo, poli-indolila, poli-imidazolila, polipirrolo-imidazolila, poli-pirrolo- indolila ou poli-imidazolo-indolila opcionalmente transportando um grupo ligante que permite o acoplamento a um agente de ligação à célula, opcionalmente, R5 é um grupo ligante que permite o acoplamento a um agente de ligação à célula através de uma ligação covalente;
[000119] R6 é OR, SR ou NRR', onde R e R'têm a mesma definição conforme mencionada acima, opcionalmente R6 é um grupo ligante; X'é CH2, NR, CO, BH, SO ou SO2; Y'é O, CH2, NR ou S;
[000120] Z'é CH2 ou (CH2)n, onde n é 2, 3 ou 4; ou seus solvatos, sais, hidratos ou sais hidratados farmaceuticamente aceitáveis, seus isômeros ópticos, racematos, diastereoisômeros, enantiômeros ou as estruturas cristalinas polimórficas destes compostos;
[000121] desde que o composto não tenha mais do que um grupo ligante que permite o acoplamento a um agente de ligação à célula através de uma ligação covalente.
[000122] Em uma modalidade preferencial, a linha dupla — entre N e C representa uma ligação dupla e X está ausente e Y = H, ou uma linha dupla — entre N e C representa uma ligação simples onde X é H e Y é selecionado de -OR, um sulfito -SO3, ou uma fração protetora de amina que converte o composto no profármaco; W é C=O, CH2, ou SO2;
[000123] R5 é selecionado de OR15, CRR'OH, SH, CRR'SH, NHR15 ou CRR'NHR15, onde R15 é H ou tem a mesma definição que a mencionada acima para R, ou é selecionado de uma unidade de polipirrolo, poli-indolila, poli-imidazolila, polipirrolo-imidazolila, poli- pirroloindolila ou poli-imidazoloindolila opcionalmente transportando um grupo ligante que permite o acoplamento a um agente de ligação à célula; R6 é OCH3; X'é selecionado de CH2, ou C=O; Y'é O, CH2, NR ou S;
[000124] Z'é (CH2)n, onde n é 1 ou 2, desde que X', Y' e Z'não sejam todos CH2 ao mesmo tempo; ou seus solvatos, sais, hidratos ou sais hidratados farmaceuticamente aceitáveis, seus isômeros ópticos, racematos, diastereoisômeros, enantiômeros ou as estruturas cristalinas polimórficas destes compostos.
[000125] Em uma modalidade preferencial, composto de fórmula III é representado por um composto de fórmula (X) ou (XI),
Figure img0007
[000126] onde os substituintes são descritos conforme acima; ou seus solvatos, sais, hidratos ou sais hidratados farmaceuticamente aceitáveis, seus isômeros ópticos, racematos, diastereoisômeros, enantiômeros ou as estruturas cristalinas polimórficas destes compostos.
[000127] Para os dímeros citotóxicos representados por fórmulas (IV), (V) e (VI)
Figure img0008
[000128] a linha dupla — entre N e C representa uma ligação simples ou uma ligação dupla, desde que quando é uma ligação dupla X está ausente e Y é H, e quando é uma ligação simples, X é H ou uma fração protetora de amina que converte o composto no profármaco;
[000129] Y é selecionado de -OR, um éster representado por - OCOR', um carbonato representado por -OCOOR', um carbamato representado por -OCONR'R'', uma amina ou uma hidroxilamina representada por NR'R'', amida representada por -NRCOR', um peptídeo representado por NRCOP, onde P é um aminoácido ou um polipeptídeo contendo entre 2 a 20 unidades de aminoácido, um tioéter representado por SR', um sulfóxido representado por SOR', uma sulfona representada por -SO2R', um sulfito -SO3, um bissulfito -OSO3, um halogênio, ciano, uma azida, ou um tiol, onde R, R' e R'' são o mesmo ou diferentes e são selecionados de H, alquila, aquenila ou alquinila substituída ou não substituída, linear, ramificada ou cíclica contendo de 1 a 10 átomos de carbono, uma unidade de polietilenoglicol (-OCH2CH2)n, onde n é um número inteiro de 1 a 2000, um anel heteroarila de 5 ou 6 membros contendo um ou mais heteroátomos independentemente selecionados de nitrogênio, oxigênio, e enxofre, um sistema de anel fundido de 5 a 18 membros, onde pelo menos um dos anéis é aromático, contendo um ou mais heteroátomos independentemente selecionados de nitrogênio, oxigênio, e enxofre, arila contendo de 6 a 18 átomos de carbono, anel heterocíclico de 3 a 18 membros contendo 1 a 6 heteroátomos selecionados de O, S, N e P onde o substituinte é selecionado de halogênio, OR7, NR8R9, NO2, NRCOR', SR10, um sulfóxido representado por SOR', uma sulfona representada por -SO2R', um sulfito -SO3, um bissulfito -OSO3, uma sulfonamida representada por SO2NRR', ciano, uma azida, -COR11, OCOR11 ou OCONR11R12, onde R7, R8, R9, R10, R11 e R12 são cada um independentemente selecionados de H, alquila, alquenila ou alquinila linear, ramificada ou cíclica contendo de 1 a 10 átomos de carbono, uma unidade de polietilenoglicol (-OCH2CH2)n, onde n é um número inteiro de 1 a 2000, um anel heteroarila de 5 ou 6 membros contendo um ou mais heteroátomos independentemente selecionados de nitrogênio, oxigênio, e enxofre, um sistema de anel fundido de 5 a 18 membros, onde pelo menos um dos anéis é aromático, contendo um ou mais heteroátomos independentemente selecionados de nitrogênio, oxigênio, e enxofre, arila contendo de 6 a 18 átomos de carbono, anel heterocíclico de 3 a 10 membros contendo anel heterocíclico de 3 a 18 membros contendo 1 a 6 heteroátomos selecionados de O, S, N e P e R10 é opcionalmente SR13 ou COR13 , onde R13 é selecionado de alquila, alquenila ou alquinila linear, ramificada ou cíclica contendo de 1 a 10 átomos de carbono, um anel heteroarila de 5 ou 6 membros contendo um ou mais heteroátomos independentemente selecionados de nitrogênio, oxigênio, e enxofre, um sistema de anel fundido de 5 a 18 membros, onde pelo menos um dos anéis é aromático, contendo um ou mais heteroátomos independentemente selecionados de nitrogênio, oxigênio, e enxofre, arila contendo de 6 a 18 átomos de carbono, anel heterocíclico de 3 a 18 membros contendo 1 a 6 heteroátomos selecionados de O, S, N e P, opcionalmente R11 é OR14, onde R14 tem a mesma definição que R, opcionalmente R''é OH; W é C=O, C=S, CH2, BH, SO ou SO2;
[000130] R1, R2, R3, R4, R1', R2', R3' e R4'são cada um independentemente selecionados de H, alquila, aquenila ou alquinila substituída ou não substituída, linear, ramificada ou cíclica contendo de 1 a 10 átomos de carbono, uma unidade de polietilenoglicol (- OCH2CH2)n, onde n é um número inteiro de 1 a 2000, ou um substituinte selecionado de um halogênio, guanidina [-NH(C=NH)NH2], OR7, NR8R9, NO2, NRCOR', SR10, um sulfóxido representado por SOR', uma sulfona representada por -SO2R', um sulfito -SO3, um bissulfito -OSO3, uma sulfonamida representada por SO2NRR', ciano, uma azida, -COR11, OCOR11 ou OCONR11R12 onde R7, R8, R9, R10, R11 e R12 são conforme definidos acima, opcionalmente, qualquer um de R1, R2, R3, R4, R1', R2', R3', ou R4'é um grupo ligante que permite o acoplamento a um agente de ligação à célula através de uma ligação covalente ou é selecionado de uma unidade de polipirrolo, poli-indolila, poli-imidazolila, polipirrolo-imidazolila, poli-pirrolo-indolila ou poli- imidazolo-indolila opcionalmente transportando um grupo ligante que permite o acoplamento a um agente de ligação à célula,
[000131] Z é selecionado de (CH2)n, onde n é 1, 2 ou 3, CR15R16, NR17, O ou S, onde R15, R16 e R17 são cada um independentemente selecionados de H, alquila linear, ramificada ou cíclica contendo de 1 a 10 átomos de carbono, uma unidade de polietilenoglicol (-OCH2CH2)n, onde n é um número inteiro de 1 a 2000;
[000132] R6 é OR, SR ou NRR', onde R e R'têm a mesma definição conforme mencionada acima, opcionalmente R6 é um grupo ligante;
[000133] X'é selecionado de CH2, NR, CO, BH, SO ou SO2 onde R tem a mesma definição que a mencionada acima;
[000134] Y'é O, CH2, NR ou S, onde R tem a mesma definição que a mencionada acima;
[000135] Z'é CH2 ou (CH2)n, onde n é 2, 3 ou 4, desde que X', Y' e Z' não são todos CH2 ao mesmo tempo;
[000136] A e A'são o mesmo ou diferente e são selecionados de O, - CRR'O, S, -CRR'S, -NR15 ou CRR'NHR15, onde R e R'têm a mesma definição conforme mencionada acima e onde R15 tem a mesma definição que R .
[000137] D e D'são os mesmos ou diferentes e independentemente selecionados de alquila, alquenila ou alquinila linear, ramificada ou cíclica contendo 1 a 10 átomos de carbono, opcionalmente substituída com qualquer um de halogênio, OR7, NR8R9, NO2, NRCOR', SR10, um sulfóxido representado por SOR', uma sulfona representada por - SO2R', um sulfito -SO3, um bissulfito -OSO3, uma sulfonamida representada por SO2NRR', ciano, uma azida, -COR11, OCOR11 ou OCONR11R12, onde as definições de R7, R8, R9, R10, R11 e R12 são conforme definidas acima, ou uma unidade de polietilenoglicol (- OCH2CH2)n, onde n é um número inteiro de 1 a 2000;
[000138] L é um grupo fenila opcional ou anel heterocíclico de 3 a 18 membros contendo 1 a 6 heteroátomos selecionados de O, S, N e P que é opcionalmente substituído, onde o substituinte é um grupo ligante que permite o acoplamento a um agente de ligação à célula através de uma ligação covalente, ou é selecionado de alquila, alquenila ou alquinila linear, ramificada ou cíclica contendo de 1 a 10 átomos de carbono, opcionalmente substituída com qualquer um de halogênio, OR7, NR8R9, NO2, NRCOR', SR10, um sulfóxido representado por SOR', uma sulfona representada por -SO2R', um sulfito -SO3, um bissulfito -OSO3, uma sulfonamida representada por SO2NRR', ciano, uma azida, -COR11, OCOR11 ou OCONR11R12, onde as definições de R7, R8, R9, R10, R11 e R12 são conforme definidas acima, uma unidade de polietilenoglicol (-OCH2CH2)n, onde n é um número inteiro de 1 a 2000; opcionalmente, L por si só é um grupo ligante que permite o acoplamento a um agente de ligação à célula através de uma ligação covalente; ou seus solvatos, sais, hidratos ou sais hidratados farmaceuticamente aceitáveis, seus isômeros ópticos, racematos, diastereoisômeros, enantiômeros ou as estruturas cristalinas polimórficas destes compostos; desde que o composto não tenha mais do que um grupo ligante que permite o acoplamento a um agente de ligação à célula através de uma ligação covalente.
[000139] Em uma modalidade preferencial, a linha dupla — entre N e C representa uma ligação simples ou uma ligação dupla, desde que quando é uma ligação dupla X está ausente e Y é H, e quando é uma ligação simples, X é H ou um grupo protetor de amina que converte o composto no profármaco;
[000140] Y é selecionado de -OR, NR'R", um sulfito -SO3, ou um bissulfito -OSO3, onde R é selecionado de H, alquila, alquenila ou alquinila linear, ramificada ou cíclica contendo de 1 a 10 átomos de carbono, uma unidade de polietilenoglicol (-OCH2CH2)n, onde n é um número inteiro de 1 a 2000, arila contendo de 6 a 10 átomos de carbono, anel heterocíclico contendo de 3 a 10 átomos de carbono; W é C=O, CH2ou SO2;
[000141] R1, R2, R3, R4, R1'. R2'. R3' e R4' são cada um independentemente selecionados de H, NO2 ou um grupo ligante que permite o acoplamento a um agente de ligação à célula através de uma ligação covalente; R6 é OR18, onde R18 tem a mesma definição que R;
[000142] Z é selecionado de (CH2)n, onde n é 1, 2 ou 3, CR15R16, NR17, O ou S, onde R15, R16 e R17 são cada um independentemente selecionados de H, alquila linear, ramificada ou cíclica contendo de 1 a 10 átomos de carbono, uma unidade de polietilenoglicol (-OCH2CH2)n, onde n é um número inteiro de 1 a 2000; X'é selecionado de CH2, ou C=O; Y'é O, NR, ou S, onde R é definido conforme acima; Z'é CH2 ou r (CH2)2; A e A'são cada um O;
[000143] D e D'são os mesmos ou diferentes e independentemente selecionados de alquila, alquenila ou alquinila linear, ramificada ou cíclica contendo de 1 a 10 átomos de carbono;
[000144] L é um grupo fenila opcional ou um anel heterociclo contendo de 3 a 10 átomos de carbono que é opcionalmente substituído, onde o substituinte é um grupo ligante que permite o acoplamento a um agente de ligação à célula através de uma ligação covalente, ou é selecionado de alquila, alquenila ou alquinila linear, ramificada ou cíclica contendo de 1 a 10 átomos de carbono, opcionalmente substituída com qualquer um de halogênio, OR7, NR8R9, NO2, NRCOR', SR10,um sulfóxido representado por SOR', uma sulfona representada por -SO2R', um sulfito -SO3, um bissulfito -OSO3, uma sulfonamida representada por SO2NRR', ciano, uma azida, , - COR11, OCOR11 ou OCONR11R12, uma unidade de polietilenoglicol (- OCH2CH2)n, onde n é um número inteiro de 1 a 2000; opcionalmente, L por si só é um grupo ligante que permite o acoplamento a um agente de ligação à célula através de uma ligação covalente; ou seus solvatos, sais, hidratos ou sais hidratados farmaceuticamente aceitáveis, seus isômeros ópticos, racematos, diastereoisômeros, enantiômeros ou as estruturas cristalinas polimórficas destes compostos.
[000145] Em outra modalidade preferencial, o composto de fórmula (IV), (V) ou (VI) é representado por compostos de fórmulas (XII) e (XIII):
Figure img0009
[000146] onde a linha dupla — entre N e C representa uma ligação simples ou uma ligação dupla, desde que quando é uma ligação dupla X está ausente e Y é H, e quando é uma ligação simples, X é H ou um grupo protetor de amina que converte o composto no profármaco; Y é selecionado de OH, um éter representado por -OR, NR'R", um sulfito - SO3, ou um bissulfito -OSO3, onde R, R' e R" são selecionados de alquila, alquenila ou alquinila linear, ramificada ou cíclica contendo de 1 a 10 átomos de carbono;
[000147] um de R2, R3, R2' e R3' é um grupo ligante que permite o acoplamento a um agente de ligação à célula através de uma ligação covalente e os outros são H, NRCOR' ou NO2; R6 é OR, onde R tem a mesma definição que acima; Z é CH2 ou NR, onde R tem a mesma definição que acima; A é O ou NR15;
[000148] L é (CH2)nn, onde nn é 0 ou um número inteiro entre 1 e 5, ou uma alquila ou alquenila substituída ou não substituída contendo de 2 a 4 átomos de carbono, onde o substituinte é selecionado de halogênio, OR7, NR8R9, NO2, NRCOR', SR10,um sulfóxido representado por SOR', uma sulfona representada por -SO2R', um sulfito -SO3, um bissulfito -OSO3, uma sulfonamida representada por SO2NRR', ciano, uma azida, , -COR11, OCOR11 ou OCONR11R12, onde R7, R8, R9, R10, R11, R12 e R15 têm a mesma definição que a mencionada acima, opcionalmente, L por si só é um grupo ligante que permite o acoplamento a um agente de ligação à célula através de uma ligação covalente;
[000149] um de L', L'' ou L"'é um grupo ligante que permite o acoplamento a um agente de ligação à célula, enquanto os outros são H; preferencialmente L'é o grupo ligante; e
[000150] G é CH ou N ou seus solvatos, sais, hidratos ou sais hidratados farmaceuticamente aceitáveis, seus isômeros ópticos, racematos, diastereoisômeros, enantiômeros ou as estruturas cristalinas polimórficas destes compostos.
[000151] Ainda em outra modalidade preferencial, o composto de fórmula (IV), (V) ou (VI) é representado por compostos de fórmulas de fórmulas (XIV) e (XV):
Figure img0010
[000152] onde a linha dupla — entre N e C representa uma ligação simples ou uma ligação dupla, desde que quando é uma ligação dupla X está ausente e Y é H, e quando é uma ligação simples, X é H ou um grupo protetor de amina que converte o composto no profármaco; Y é selecionado de OH, um éter representado por -OR, um sulfito -SO3, ou um bissulfito -OSO3, onde R é selecionado de alquila, alquenila ou alquinila linear, ramificada ou cíclica contendo de 1 a 10 átomos de carbono; nn é 0 ou um número inteiro de 1 a 5;
[000153] um de R2, R3, R2' e R3'é um grupo ligante que permite o acoplamento a um agente de ligação à célula através de uma ligação covalente e os outros são H, NRCOR', ou NO2;
[000154] um de L', L'' ou L"'é um grupo ligante que permite o acoplamento a um agente de ligação à célula, desde que quando um de L', L'' ou L"'é um grupo ligante outros são H (por exemplo, se L'é um ligante, então L'' e L"'são H)
[000155] G é CH ou N ou seus solvatos, sais, hidratos ou sais hidratados farmaceuticamente aceitáveis, seus isômeros ópticos, racematos, diastereoisômeros, enantiômeros ou as estruturas cristalinas polimórficas destes compostos.
[000156] Com o objetivo de ligar os compostos citotóxicos (por exemplo, indolinobenzodiazepina ou oxazolidinobenzodiazepina), derivados dos mesmos, ou dímeros dos mesmos da presente invenção ao agente de ligação à célula, o composto citotóxico compreende uma fração ligante. Enquanto um ligante que se conecta a duas frações é bifuncional, uma extremidade da fração ligante pode reagir primeiro com o composto citotóxico para fornecer o composto transportando um grupo ligante monofuncional, que pode reagir com um agente de ligação à célula. Alternativamente, uma extremidade da fração ligante pode reagir primeiro com o agente de ligação à célula para fornecer o agente de ligação à célula transportando um grupo ligante monofuncional, que pode então reagir com um composto citotóxico. A fração ligante contém uma ligação química que permite a liberação da fração citotóxica em um local particular. Ligações químicas apropriadas são bem-conhecidas na técnica e incluem pontes dissulfeto, pontes tioéter, pontes lábeis a ácido, pontes fotolábeis, pontes lábeis a peptidase e pontes lábeis a esterase (vide por exemplo Patentes US 5.208.020; 5.475.092; 6.441.163; 6.716.821; 6.913.748; 7.276.497; 7.276.499; 7.368.565; 7.388.026 e 7.414.073). Pontes dissulfeto, tioéter e pontes lábeis a peptidase são preferenciais. Outros ligantes que podem ser usados na presente invenção incluem ligantes não cliváveis, como aqueles descritos em detalhes na publicação U.S. número 20050169933, ou ligantes carregados ou ligantes hidrofílicos e são descritos nos pedidos provisórios de patentes, 61/049.291, depositado em 30 de abril de 2008, 61/147.966, depositado em 28 de janeiro de 2009 e 61/049.289, depositado em 30 de abril de 2008, cada um dos quais estão expressamente incorporados aqui como referência.
[000157] Os compostos de fórmulas (1), (II), e (III) (ou seja, monômeros) podem ser ligados por R1, R2, R3, R4 ou R5. Destes, os grupos ligantes preferenciais são R2, R3, e R5, e o grupo ligante mais preferencial é R5. Exemplos de substituintes apropriados em R1, R2, R3, R4 e R5 para os compostos de fórmulas (I), (II) e (III) incluem, entre outros: -OH, -O(CR20R21)m(CR22R23)n(OCH2CH2)p(CR40R41)p"Y''(CR24R25)q(CO)tX'', - O(CR20R21)m(CR26=CR27)m'(CR22R23)n(OCH2CH2)p(CR40R41)p"Y''(CR24R2 5)q(CO)tX'', - O(CR20R21)m(alquinil)n'(CR22R23)n(OCH2CH2)p(CR40R41)p"Y''(CR24R25)q(C O)tX'', - O(CR20R21)m(indolo)p'(CR22R23)n(OCH2CH2)p(CR40R41)p"Y''(CR24R25)q(C O)tX''O(CR20R21)m(pirrolo)q'(CR22R23)n(OCH2CH2)p(CR40R41)p"Y''(CR24R25)q(C O)tX'', -O(CR20R21)m(pirrolo)q'(imidazolo)q''(CR22R23)n(OCH2CH2)p(CR40R41)p"Y'' (CR24R25)q(CO)tX'', - O(CR20R21)m(imidazolo)q''(CR22R23)n(OCH2CH2)p(CR40R41)p"Y''(CR24R25) q(CO)tX'', -O(CR20R21)m(pirrolo)q'(indolo)q''(CR22R23)n(OCH2CH2)p(CR40R41)p"Y'' (CR24R25)q(CO)tX'', -O(CR20R21)m(indolo)q'(imidazolo)q''(CR22R23)n(OCH2CH2)p(CR40R41)p"Y'' (CR24R25)q(CO)tX'', - O(CR20R21)m(piperazino)t'(CR22R23)n(OCH2CH2)p(CR40R41)p"Y''(CR24R25) q(CO)tX'', - O(CR20R21)mA"m"(CR22R23)n(OCH2CH2)p(CR40R41)p"Y''(CR24R25)q(CO)tX'' , -SH, -S(CR20R21)m(CR22R23)n(OCH2CH2)p(CR40R41)p"Y''(CR24R25)q(CO)tX'', - S(CR20R21)m(CR26=CR27)m'(CR22R23)n(OCH2CH2)p(CR40R41)p"Y''(CR24R2 5)q(CO)tX'', - S(CR20R21)m(alquinil)n'(CR22R23)n(OCH2CH2)p(CR40R41)p"Y''(CR24R25)q(C O)tX'', - S(CR20R21)m(indolo)p'(CR22R23)n(OCH2CH2)p(CR40R41)p"Y''(CR24R25)q(C O)tX'', - S(CR20R21)m(pirrolo)q'(CR22R23)n(OCH2CH2)p(CR40R41)p"Y''(CR24R25)q(CO)tX'', - S(CR20R21)m(imidazolo)q''(CR22R23)n(OCH2CH2)p(CR40R41)p"Y''(CR24R25) q(CO)tX'', -S(CR20R21)m(pirrolo)q'(imidazolo)q''(CR22R23)n(OCH2CH2)p(CR40R41)p"Y'' (CR24R25)q(CO)tX'', -S(CR20R21)m(pirrolo)q'(indolo)q''(CR22R23)n(OCH2CH2)p(CR40R41)p"Y'' (CR24R25)q(CO)tX'', -S(CR20R21)m(indolo)q'(imidazolo)q''(CR22R23)n(OCH2CH2)p(CR40R41)p"Y'' (CR24R25)q(CO)tX'', - S(CR20R21)m(piperazino)t'(CR22R23)n(OCH2CH2)p(CR40R41)p"Y''(CR24R25) q(CO)tX'', - S(CR20R21)mA"m"(CR22R23)n(OCH2CH2)p(CR40R41)p"Y''(CR24R25)q(CO)tX'' , -NH2, - NR28(CR20R21)m(CR22R23)n(OCH2CH2)p(CR40R41)p"Y''(CR24R25)q(CO)tX'', - NR28(CR20R21)m(CR26=CR27)m'(CR22R23)n(OCH2CH2)p(CR40R41)p"Y''(CR2 4R25)q-(CO)tX'', - NR28(CR20R21)m(alquinil)n'(CR22R23)n(OCH2CH2)p(CR40R41)p"Y''(CR24R25) q(CO)tX'', - NR28(CR20R21)m(indolo)p'(CR22R23)n(OCH2CH2)p(CR40R41)p"Y''(CR24R25)q (CO)tX'', - NR28(CR20R21)m(pirrolo)q'(CR22R23)n(OCH2CH2)p(CR40R41)p"Y''(CR24R25)q (CO)tX'', - NR28(CR20R21)m(imidazol)q''(CR22R23)n(OCH2CH2)p(CR40R41)p"Y''(CR24R2 5)q(CO)tX'', - NR28(CR20R21)m(pirrolo)q'(imidazolo)q''(CR22R23)n(OCH2CH2)p(CR40R41)p" Y''-(CR24R25)q(CO)tX'', -NR28(CR20R21)m(pirrolo)q'(indolo)q''(CR22R23)n(OCH2CH2)p(CR40R41)p"Y''- (CR24R25)q(CO)tX'', - NR28(CR20R21)m(indolo)q'(imidazolo)q''(CR22R23)n(OCH2CH2)p(CR40R41)p" Y''-(CR24R25)q(CO)tX'', - NR28(CR20R21)m(piperazino)t'(CR22R23)n(OCH2CH2)p(CR40R41)p"Y''(CR24 R25)q(CO)tX'', - NR28(CR20R21)mA"m"(CR22R23)n(OCH2CH2)p(CR40R41)p"Y''(CR24R25)q(CO )tX'', -(CR20R21)m(CR22R23)n(OCH2CH2)p(CR40R41)p"Y''(CR24R25)q(CO)tX'', - (CR20R21)m(CR26=CR27)m'(CR22R23)n(OCH2CH2)p(CR40R41)p"Y''(CR24R25) q(CO)tX'', - (CR20R21)m(alquinil)n'(CR22R23)n(OCH2CH2)p(CR40R41)p"Y''(CR24R25)q(CO )tX'', - (CR20R21)m(indolo)p'(CR22R23)n(OCH2CH2)p(CR40R41)p"Y''(CR24R25)q(CO) tX'', - (CR20R21)m(pirrolo)q'(CR22R23)n(OCH2CH2)p(CR40R41)p"Y''(CR24R25)q(CO) tX'', - (CR20R21)m(piperazino)t'(CR22R23)n(OCH2CH2)p(CR40R41)p"Y''(CR24R25)q( CO)tX'', -(CR20R21)m(pirrolo)q'(indolo)q''(CR22R23)n(OCH2CH2)p(CR40R41)p"Y''- (CR24R25)q(CO)tX'', (CR20R21)m(imidazolo)q''(CR22R23)n(OCH2CH2)p(CR40R41)p"Y''- (CR24R25)q(CO)tX'', (CR20R21)m(pirrolo)q'(imidazolo)q''(CR22R23)n(OCH2CH2)p(CR40R41)p"Y''- (CR24R25)q(CO)tX'', (CR20R21)m(imidazolo)q'(indolo)q''(CR22R23)n(OCH2CH2)p(CR40R41)p"Y''- (CR24R25)q(CO)tX'', -(CR20R21)mA"m"(CR22R23)n(OCH2CH2)p(CR40R41)p"Y''(CR24R25)q(CO)tX'', -(CR20R21)m(CR29=N- NR30)n"(CR22R23)n(OCH2CH2)p(CR40R41)p"Y''(CR24R25)q(CO)tX'', -(CR20R21)m(CR29=N- NR30)n"(CR26=CR27)m'(CR22R23)n(OCH2CH2)p(CR40R41)p"Y''(CR24R25)q(C O)tX'', -(CR20R21)m(CR29=N- NR30)n"(alquinil)n'(CR22R23)n(OCH2CH2)p(CR40R41)p"Y''(CR24R25)q(CO)tX'' , -(CR20R21)m(CR29=N- NR30)n"A"m"(CR22R23)n(OCH2CH2)p(CR40R41)p"Y''(CR24R25)q(CO)tX'', onde:
[000158] m, n, p, q, m', n', p', q', q'', são números inteiros de 1 a 10 e podem ser 0; t, m", n" e P"são 0 ou 1;
[000159] X"é selecionado de OR36, SR37, NR38R39, onde R36, R37, R38, R39 são H, ou alquila, alquenila ou alquinila linear, ramificada ou cíclica contendo de 1 a 20 átomos de carbono e, ou , uma unidade de polietilenoglicol -(OCH2CH2)n, opcionalmente R37 é um grupo protetor de tiol, ou quando t = 1, COX'' forma um éster reativo selecionado de ésteres de N-hidroxissuccinimida, ésteres de N-hidroxiftalimida, ésteres de N-hidroxi sulfo-succinimida, ésteres de para-nitrofenila, ésteres de dinitrofenila, ésteres de pentafluorofenila e seus derivados, onde os ditos derivados facilitam a formação de amida;
[000160] Y'' está ausente ou é selecionado de O, S, S-S ou NR32, onde R32 tem a mesma definição que a mencionada acima para R, ou
[000161] quando Y" não é S-S e t = 0, X" é selecionado de um grupo maleimida, um grupo haloacetila ou SR37, onde R37 tem a mesma definição que acima;
[000162] A" é um aminoácido selecionado de glicina, alanina, leucina, valina, lisina, citrulina e glutamato ou um polipeptídeo contendo entre 2 a 20 unidades de aminoácido;
[000163] R20, R21, R22, R23, R24, R25, R26, R27 são o mesmo ou diferente e são H ou uma alquila linear ou ramificada contendo de 1 a 5 átomos de carbono; R28 é H ou alquila;
[000164] R29 e R30 são o mesmo ou diferente e são H ou alquila de 1 a 5 átomos de carbono;
[000165] opcionalmente, um de R40 e R41 é um grupo funcional carregado negativa ou positivamente - e o outro é H ou alquila, alquenila, alquinila contendo 1 a 4 átomos de carbono.
[000166] Os compostos de fórmulas (IV), (V), (VI), (VII), (XII) e (XIII) (ou seja, dímeros) podem ser ligados por R1, R2, R3, R4, R1', R2', R3', R4', L', L'', L'''. Destes, os grupos ligáveis preferenciais são R2', R3', R4', L', L'', L''' e os grupos ligáveis mais preferenciais são R2', R3' e L'. Exemplos de grupos ligantes para os compostos de fórmulas (IV), (V), (VI), (VII), (XII) e (XIII) incluem, entre outros: -O(CR20R21)m(CR22R23)n(OCH2CH2)p(CR40R41)p"Y''(CR24R25)q(CO)tX'',O(CR20R21)m(CR26=CR27)m'(CR22R23)n(OCH2CH2)p(CR40R41)p"Y''(CR24R2 5)q(CO)tX'', - O(CR20R21)m(alquinil)n'(CR22R23)n(OCH2CH2)p(CR40R41)p"Y''(CR24R25)q(C O)tX'', - O(CR20R21)m(piperazino)t'(CR22R23)n(OCH2CH2)p(CR40R41)p"Y''(CR24R25) q(CO)tX'', - O(CR20R21)m(pirrolo)t'(CR22R23)n(OCH2CH2)p(CR40R41)p"Y''(CR24R25)q(C O)tX'', - O(CR20R21)mA"m"(CR22R23)n(OCH2CH2)p(CR40R41)p"Y''(CR24R25)q(CO)tX'' , -S(CR20R21)m(CR22R23)n(OCH2CH2)p(CR40R41)p"Y''(CR24R25)q(CO)tX'', - S(CR20R21)m(CR26=CR27)m'(CR22R23)n(OCH2CH2)p(CR40R41)p"Y''(CR24R2 5)q(CO)tX'', - S(CR20R21)m(alquinil)n'(CR22R23)n(OCH2CH2)p(CR40R41)p"Y''(CR24R25)q(C O)tX'', - S(CR20R21)m(piperazino)t'(CR22R23)n(OCH2CH2)p(CR40R41)p"Y''(CR24R25) q(CO)tX'', - S(CR20R21)m(pirrolo)t'(CR22R23)n(OCH2CH2)p(CR40R41)p"Y''(CR24R25)q(C O)tX'', - S(CR20R21)mA"m"(CR22R23)n(OCH2CH2)p(CR40R41)p"Y''(CR24R25)q(CO)tX'' NR33(C=O)p"(CR20R21)m(CR22R23)n(OCH2CH2)p(CR40R41)p"Y''(CR24R25)q( CO)tX'', - NR33(C=O)p"(CR20R21)m(CR26=CR27)m'(CR22R23)n(OCH2CH2)p(CR40R41)p" Y''(CR24R25)q (CO)tX'', -NR33(C=O)p"(CR20R21)m(alquinil)n'(CR22R23)n(OCH2CH2)p(CR40R41)p"Y'' (CR24R25)q(CO)tX'', - NR33(C=O)p"(CR20R21)m(piperazino)t'(CR22R23)n(OCH2CH2)p(CR40R41)p"Y ''(CR24R25)q (CO)tX'', -NR33(C=O)p"(CR20R21)m(pirrolo)t'(CR22R23)n(OCH2CH2)p(CR40R41)p"Y'' (CR24R25)q(CO)tX'', - NR33(C=O)p"(CR20R21)mA"m"(CR22R23)n(OCH2CH2)p(CR40R41)p"Y''(CR24R 25)q(CO)tX'', -(CR20R21)m(CR22R23)n(OCH2CH2)p(CR40R41)p"Y''(CR24R25)q(CO)tX'', - (CR20R21)m(CR26=CR27)m'(CR22R23)n(OCH2CH2)p(CR40R41)p"Y''(CR24R25) q(CO)tX'', - (CR20R21)m(alquinil)n'(CR22R23)n(OCH2CH2)p(CR40R41)p"Y''(CR24R25)q(CO )tX'', - (CR20R21)m(piperazino)t'(CR22R23)n(OCH2CH2)p(CR40R41)p"Y''(CR24R25)q( CO)tX'', -(CR20R21)mA"m"(CR22R23)n(OCH2CH2)p(CR40R41)p"Y''(CR24R25)q(CO)tX'', -(CR20R21)m(CR29=N- NR30)n"(CR22R23)n(OCH2CH2)p(CR40R41)p"Y''(CR24R25)q(CO)tX'', -(CR20R21)m(CR29=N- NR30)n"(CR26=CR27)m'(CR22R23)n(OCH2CH2)p(CR40R41)p"Y''(CR24R25)q(C O)tX'', -(CR20R21)m(CR29=N- NR30)n"(alquinil)n'(CR22R23)n(OCH2CH2)p(CR40R41)p"Y''(CR24R25)q(CO)tX'' , -(CR20R21)m(CR29=N- NR30)n"A"m"(CR22R23)n(OCH2CH2)p(CR40R41)p"Y''(CR24R25)q(CO)tX'', onde:
[000167] m, n, p, q, m', n', t'são números inteiros de 1 a 10, ou são opcionalmente 0; t, m", n" e P"são 0 ou 1;
[000168] X"é selecionado de OR36, SR37, NR38R39, onde R36, R37, R38, R39 são H, ou alquila, alquenila ou alquinila linear, ramificada ou cíclica contendo de 1 a 20 átomos de carbono e, ou , uma unidade de polietilenoglicol -(OCH2CH2)n, R37, opcionalmente, é um grupo protetor de tiol
[000169] quando t = 1, COX'' forma um éster reativo selecionado de ésteres de N-hidroxissuccinimida, ésteres de N-hidroxiftalimida, ésteres de N-hidroxissulfo-succinimida, ésteres de para-nitrofenila, ésteres de dinitrofenila, ésteres de pentafluorofenila e seus derivados, onde os aaditos derivados facilitam a formação de ligação amida;
[000170] Y'' está ausente ou é selecionado de O, S, S-S ou NR32, onde R32 tem a mesma definição que a mencionada acima para R, ou
[000171] quando Y" não é S-S e t = 0, X" é selecionado de um grupo maleimida, um grupo haloacetila ou SR37, onde R37 tem a mesma definição que acima;
[000172] A" é um aminoácido selecionado de glicina, alanina, leucina, valina, lisina, citrulina e glutamato ou um polipeptídeo contendo entre 2 a 20 unidades de aminoácido;
[000173] R20, R21, R22, R23, R24, R25, R26, e R27 são os mesmos ou diferentes e são H ou uma alquila linear ou ramificada contendo de 1 a 5 átomos de carbono;
[000174] R29 e R30 são o mesmo ou diferente e são H ou alquila de 1 a 5 átomos de carbono;
[000175] R33 é H ou alquila, alquenila ou alquinila linear, ramificada ou cíclica contendo de 1 a 12 átomos de carbono, uma unidade de polietilenoglicol -(OCH2CH2)n, ou R33 é -COR34, -CSR34, -SOR34, ou - SO2R34, onde R34 é H ou alquila, alquenila ou alquinila linear, ramificada ou cíclica contendo de 1 a 20 átomos de carbono ou, uma unidade de polietilenoglicol -(OCH2CH2)n; e
[000176] um de R40 e R41 é opcionalmente um grupo funcional carregado negativa ou positivamente e o outro é H ou alquila, alquenila, alquinila contendo 1 a 4 átomos de carbono.
[000177] Além disso, embora a síntese dos compostos citotóxicos (por exemplo, indolinobenzodiazepina ou oxazolidinobenzodiazepina), derivados dos mesmos, ou dímeros dos mesmos transportando uma fração de ligação seja descrita abaixo em termos de uma ligação amida, tioéter ou dissulfeto contendo frações de ligação em posições L' (no composto de fórmula XIII) ou R3 (no composto de fórmula XII), um versado na técnica entenderá que as frações de ligantes em outras posições e com outras ligações químicas, conforme descrito acima, podem ainda ser usadas com a presente invenção.
[000178] As estruturas de compostos representativos, conjugados e compostos reivindicados nos exemplos da presente invenção são mostrados nas Tabelas 3~9: Tabela 3. Estruturas de compostos representativos da presente invenção.
Figure img0011
Tabela 4. Estruturas de compostos representativos da presente invenção (Continuação).
Figure img0012
Tabela 5. Estruturas de compostos representativos da presente invenção (Continuação).
Figure img0013
Tabela 6. Estruturas de conjugados representativos da presenteinvenção.
Figure img0014
onde: Antibody = anticorpo dimer = dímero Tabela 7. Estruturas de compostos dos exemplos da presente invenção.
Figure img0015
Tabela 8. Estrutura dos compostos dos exemplos da presente invenção (Continuação).
Figure img0016
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Tabela 9. Estrutura dos compostos dos exemplos da presente invenção (Continuação).
Figure img0018
Figure img0019
Síntese de Compostos citotóxicos
[000179] O processo de preparação de um composto monômero da presente invenção, exemplificado pelo composto de indolinobenzodiazepina 8, é mostrado na figura 1. Iniciando do ácido indolina-2-carboxílico comercialmente disponível 1, seu éster metal 2 foi preparado em rendimento quantitativo por reação com cloreto de tionila em metanol. Metil indolina-2-carboxilato 2 foi acoplado com o cloreto ácido 4, ou diretamente com ácido 3, para fornecer a amida 5, que foi ainda reduzida com hidreto de di-isobutilalumínio (DIBAL) ao aldeído 6. Embora muitos métodos possam ser usados para reduzir o grupo funcional nitro de fórmula 5 ao grupo amino correspondente, neste exemplo, ditionito de sódio foi usado para converter de maneira conveniente para o aldeído 6 para o anel fechado composto 7 após outro tratamento com metanol sob condições ácidas. O grupo protetor de benzila foi removido para fornecer o monômero 8.
[000180] O processo de preparação do composto monômero de oxazolidinobenzodiazepina de fórmula 14 da invenção é apresentado na figura 2. Iniciando do composto 9 comercialmente disponível, seu metil éster 10 foi preparado em rendimento quantitativo pelo tratamento com cloreto de tionila em metanol. O composto 10 foi desprotegido seguido por acoplamento com o cloreto de acetila 4 ou diretamente com ácido 3 para fornecer uma amida 11, que foi ainda convertida ao aldeído 12. A redução do grupo nitro foi conseguida pelo tratamento com ditionito de sódio seguido por conversão eficiente ao anel fechado composto 13 após outro tratamento com metanol sob condições ácidas. O grupo protetor de benzila foi removido para fornecer o monômero 14.
[000181] O processo de preparação de compostos dímeros representativos da presente invenção é mostrado nas figuras 3 a 5 e 7. Os dímeros foram preparados pela reação dos monômeros de fórmula 8 ou fórmula 14 com compostos que possuem dois grupos de saída como Br, I, triflato, mesilato ou tosilato.
[000182] Os dímeros que possuem ligantes que podem reagir com anticorpos são preparados pela conversão dos metil ésteres aos ésteres reativos correspondentes de um grupo de saída como, entre outros, ésteres de N-hidroxissuccinimida, ésteres de N-hidroxiftalimida, ésteres de N-hidroxissulfo-succinimida, ésteres de para-nitrofenila, ésteres de dinitrofenila, ésteres de pentafluorofenila. Exemplos representativos para a síntese de dímeros ligáveis são mostrados na figura 8. A síntese de dímeros que possuem um tiol ou fração dissulfeto para permitir o acoplamento aos agentes de ligação à célula através de ligações reduzíveis ou não reduzíveis é mostrada nas figuras 9 e 10. O monômero modificado por anel B 58 desprovido de um grupo carbonila é conseguido a partir do composto álcool benzílico 52 pelas etapas mostradas na figura 11. O monômero isoindolino 66 pode ser preparado a partir de isoindol 59 como delineado na figura 12. O ligante pode ser ainda ligado diretamente à fração indolino. Metil indolino-2-carboxilato pode ser convertido no dímero ligável 82 através de etapas sintéticas mostradas na figura 13. A síntese de dímeros ligáveis transportando uma fração PEG é mostrada nas figuras 14 e 15.
[000183] Assim, em um aspecto, a invenção fornece um processo para a preparação do monômero indolinobenzodiazepina (IBD) de fórmula (I) (figura 1), o processo compreendendo as etapas de: a) acoplar o composto de fórmula (1) e o composto de fórmula (2) para gerar o composto de fórmula (3); b) converter o composto de fórmula (3) no aldeído de fórmula (4); e c) converter o composto de fórmula (4) no composto de fórmula (I),
Figure img0020
[000184] onde LG é um grupo de saída; W'é COOR ou CH2OW", onde R tem a mesma definição que acima e W"é um grupo protetor; Ri, R2, R3, R4, R5, R6, W, Z, X, Y e — têm a mesma definição como descrita acima.
[000185] Outro aspecto da invenção fornece um processo para a preparação de composto de fórmula (II) compreendendo as etapas de: a) acoplar o composto de fórmula (i) e o composto de fórmula (5) para gerar o composto de fórmula (6); b) converter o composto de fórmula (6) no aldeído de fórmula (7); e c) converter o composto de fórmula (7) no composto de fórmula (II),
Figure img0021
[000186] onde LG é um grupo de saída; W'é COOR ou CH2OW", onde R tem a mesma definição que acima e W"é um grupo protetor; R1, R2, R3, R4, R5, R6, W, X, Y e — têm a mesma definição conforme acima.
[000187] Outro aspecto da invenção fornece um processo para a preparação do composto de fórmula (III) compreendendo as etapas de: a) acoplar o composto de fórmula (1) e o composto de fórmula (8) para gerar composto de fórmula (9); b) converter o composto de fórmula (9) no aldeído de fórmula (10); e c) converter o composto de fórmula (10) no composto de fórmula (II),
Figure img0022
[000188] onde LG é um grupo de saída; W' é COOR ou CH2OW", onde R tem a mesma definição que acima e W" é um grupo protetor; R5, R6, W, X, Y, X', Y', Z' e — têm a mesma definição como acima.
[000189] Outro aspecto da invenção fornece um processo para a preparação de composto de fórmula (outro aspecto da invenção fornece um processo para a preparação de composto de fórmula (IV) compreendendo as etapas de:
[000190] acoplar o composto de fórmula (11), composto de fórmula (11)' e composto de fórmula (12) para gerar composto de fórmula (IV),
Figure img0023
[000191] onde LG é um grupo de saída; R1, R2, R3, R4, R1', R2', R3', R4', R6, W, X, Y, Z, A, A', D, D', L e — têm a mesma definição como acima.
[000192] Outro aspecto da invenção fornece um processo alternativo para a preparação do composto de fórmula (IV) da presente invenção compreendendo as etapas de: a) converter o composto de fórmula (15) no aldeído de fórmula (16); e b) converter o composto de fórmula (16) no composto de fórmula (IV),
Figure img0024
[000193] onde W'é COOR ou CH2OW", onde R tem a mesma definição que acima e W"é um grupo protetor; R1, R2, R3, R4, R1', R2', R3‘, R4', R6, W, X, Y, Z, A, A', D, D', L e — têm a mesma definição como acima.
[000194] Outro aspecto da invenção fornece um processo para a preparação de composto de fórmula (V) compreendendo a etapa de acoplar o composto de fórmula (13), composto de fórmula (13)' e composto de fórmula (12) para gerar composto de fórmula (V),
Figure img0025
[000195] onde LG é um grupo de saída; R1, R2, R3, R4, R1', R2', R3', R4', R6, W, X, Y, A, A', D, D', L e — têm a mesma definição como acima.
[000196] Outro aspecto da invenção fornece um processo alternativo para a preparação do composto de fórmula (V) da invenção compreendendo as etapas de: a) converter o composto de fórmula (17) no aldeído de fórmula (18); e b) converter o composto de fórmula (18) no composto de fórmula (V),
Figure img0026
[000197] onde W'é COOR ou CH2OW", onde R tem a mesma definição que acima e W" é um grupo protetor; R1, R2, R3, R4, R1', R2', R3', R4', Rβ, W, X, Y, A, A', D, D', L e — têm a mesma definição conforme acima.
[000198] Outro aspecto da invenção fornece um processo para a preparação de composto de fórmula (VI) da invenção compreendendo a etapa de acoplar o composto de fórmula (14), composto de fórmula (14)' e composto de fórmula (12) para gerar composto de fórmula (VI),
Figure img0027
[000199] onde LG é um grupo de saída; Rβ, W, X, Y, X', Y', Z' A, A', D, D', L e — têm a mesma definição conforme acima.
[000200] Outro aspecto da invenção fornece um processo para a preparação de composto de fórmula (VI) da invenção compreendendo as etapas de: a) converter o composto de fórmula (19) no aldeído de fórmula (20); e b) converter o composto de fórmula (20) no composto de fórmula (VI),
Figure img0028
[000201] onde W'é COOR ou CH2OW", onde R tem a mesma definição que acima e W" é um grupo protetor; R6, W, X, Y, X', Y', Z' A, A', D, D', L e — têm a mesma definição as acima.
• Citotoxicidade de Compostos In vitro
[000202] A citotoxicidade dos compostos citotóxicos in vitro (por exemplo, indolinobenzodiazepina ou oxazolidinobenzodiazepina), derivados do mesmo, dímeros dos mesmos ou conjugados dos mesmos da presente invenção pode ser avaliada para sua capacidade de suprimir a proliferação de várias linhagens de células de câncer in vitro (Tabelas 1, 2 nas figuras 31, 32.). Por exemplo, linhagens de células como linhagem de carcinoma de mama humano SK-Br-3, ou a linhagem de célula de carcinoma epidermoide humano KB, podem ser usadas para avaliação da citotoxicidade destes novos compostos. As células a serem avaliadas podem ser expostas aos compostos por 72 horas e as frações de células sobreviventes medidas em ensaios diretos por métodos conhecidos. Os valores de IC50 podem ser calculados a partir dos resultados dos ensaios.
[000203] Exemplos de citotoxicidade in vitro dos compostos da presente invenção que foram testados em um grupo de linhagens de células de câncer e seus dados são apresentados na Tabela 1. Todos os compostos dímeros indolinobenzodiazepina testados foram altamente potentes com valore de IC50 na faixa pequena de picomolar. IGN-09 reteve a maior parte de sua potência em linhagens de células resistentes a multifármacos como COLO205-MDR (somente 4 vezes maior IC50 do que COLO205). Os compostos da invenção são 1000 a 10.000 vezes mais citotóxicos do que outros fármacos que interagem com o DNA usados no tratamento de câncer, como doxorrubicina, melfalam e cisplatina. Em uma comparação direta, a potência dos compostos não ligante transportando compostos IGN1 (composto 18) e IGN09 (composto 15) foi comparada aos compostos transportando ligante IGN03 (composto 34) e o IGN05 (composto 36) foi testado para linhagem de células representativas Ramos. Como mostrado na Tabela 2, todos os quatro compostos são altamente potentes com valores de IC50 menores do que 1 picomolar, demonstrando que a incorporação do ligante não afeta a potência.
Agentes de Ligação à célula
[000204] A efetividade dos compostos (por exemplo, indolinobenzodiazepina ou oxazolidinobenzodiazepina), derivados do mesmo, dímeros dos mesmos ou conjugados dos mesmos da invenção como agentes terapêuticos depende da seleção cuidadosa de um agente de ligação à célula apropriado. O agente de ligação a células pode ser de qualquer tipo atualmente conhecido, ou que se torne conhecido e inclui peptídeos e não-peptídeos. Geralmente, estes podem ser anticorpos (especialmente anticorpos monoclonais), linfocinas, hormônios, fatores de crescimento, vitaminas, moléculas veículo de nutriente (como transferrina), ou qualquer outra molécula ou substância de ligação à célula.
[000205] Exemplos mais específicos de agente de ligação a células que podem ser usados incluem: anticorpos policlonais; anticorpos monoclonais;
[000206] fragmentos de anticorpos como Fab, Fab', e F(ab')2, Fv (Parham, J. Immunol. 131:2895-2902 (1983); Spring et al. J. Immunol. 113:470-478 (1974); Nisonoff et al. Arch. Biochem. Biophys. 89:230- 244 (1960)); interferons (por exemplo .alfa., .beta., .gama.); linfocinas como IL-2, IL-3, IL-4, IL-6;
[000207] hormônios como insulina, TRH (hormônio de liberação de tirotrofina), MSH (hormônio estimulador de melanócito), hormônios esteroidais, como androgênios e estrogênios;
[000208] fatores de crescimento e fatores estimuladores de colônia como EGF, TGF-alfa, FGF, VEGF, G-CSF, M-CSF e GM-CSF (Burgess, Immunology Today 5:155-158 (1984));
[000209] transferrina (O'Keefe et al. J. Biol. Chem. 260:932-937 (1985)); e vitaminas, como folato.
[000210] Técnicas de anticorpo monoclonal permitem a produção de agente de ligação a células extremamente específicos na forma de anticorpos monoclonais. São bem-conhecidas na prática técnicas para criação de anticorpos monoclonais produzidos por camundongos, ratos, hamsters ou qualquer outro tipo de mamífero imunizantes com o antígeno de interesse como a célula-alvo intacta, antígenos isolados da célula-alvo, vírus inteiros, vírus inteiros atenuados, e proteínas virais como proteínas de cápsula viral. Células humanas sensibilizadas podem ainda ser usadas. Outro método de criação de anticorpos monoclonais é o uso de bibliotecas de fagos de scFv (região variável de cadeia simples), especificamente scFv humano (vide por exemplo, Griffiths et al., Patentes U.S. Nos. 5.885.793 e 5.969.108; McCafferty et al., WO 92/01047; Liming et al., WO 99/06587). Além disso, anticorpos ressurgidos revelados na Patente US 5.639.641 podem ainda ser usados, como também os anticorpos quiméricos e anticorpos humanizados. A seleção do agente de ligação à célula apropriado é uma questão de escolha que depende da população particular de células a serem marcadas, mas em geral anticorpos monoclonais humanos são preferenciais se um apropriado anticorpo monoclonal é preferencial se um apropriado estiver disponível.
[000211] Por exemplo, o anticorpo monoclonal MY9 é um anticorpo IgG1 murino que se liga especificamente ao antígeno CD33 {J.D. Griffin et al 8 Leukemia Res., 521 (1984)} e pode ser usado se as células-alvo expressam CD33 como na doença de leucemia mieloide aguda (AML). De forma semelhante, o anticorpo monoclonal anti-B4 é um IgG1 murino, que se liga ao antígeno CD19 nas células B {Nadler et al, 131 J. Immunol. 244-250 (1983)} e podem ser usados se as células-alvo ou células B ou células adoecidas expressam este antígeno como no linfoma de não-Hodgkin ou leucemia linfoblástica crônica HuB4 é um anticorpo ressurgido derivado do anticorpo anti-B4 murino (Roguska et al., 1994, Proc. Natl. Acad. Sci., 91, pg 969-973). HuN901 é um anticorpo humanizado que se liga ao antígeno CD56 expresso em câncer pulmonar de células pequenas, mieloma múltiplo, câncer ovariano e outros tumores sólidos incluindo cânceres neuroendócrinos (Roguska et al., 1994, Proc. Natl. Acad. Sci., 91, pg 969-973). B38.1 é um anticorpo quimérico direcionado para EpCAM. Anticorpos totalmente humanos, tal como panitumumab, direcionados para o receptor EGF expresso em vários tumores sólidos podem ainda ser usados (Van Cutsem et al., J Clin Oncol. 2007;25(13):1658-1664). O agente de ligação à célula que compreende os conjugados e o agente de ligação às células modificado da presente invenção pode ser qualquer tipo atualmente conhecido, ou que se torne conhecido, e inclui peptídeos e não peptídeos. O agente de ligação à célula pode ser qualquer composto que se ligue a uma célula, seja de forma específica ou de forma não específica. Geralmente, estes podem ser anticorpos (principalmente anticorpos monoclonais e fragmentos de anticorpo), interferons, linfocinas, hormônios, fatores de crescimento, vitaminas, moléculas veículo de nutrientes (como transferrina), ou qualquer molécula ou substância de ligação à célula.
[000212] Onde o agente de ligação à célula é um anticorpo, este se liga a um antígeno que é um polipeptídeo e pode ser uma molécula transmembrana (por exemplo receptor) ou um ligante como um fator de crescimento. Antígenos exemplares incluem moléculas como renina; um hormônio de crescimento, incluindo hormônio de crescimento e hormônio de crescimento bovino; fator de liberação de hormônio do crescimento; hormônio paratireoide; hormônio estimulador de tireoide; lipoproteínas; alfa-1-antitripsina; cadeia de insulina; cadeia B de insulina; proinsulina; hormônio folículo- estimulante; calcitonina; hormônio luteinizante; glucagon; fatores de coagulação como fator vmc, fator IX, fator tecidual (TF), e fator de von Willebrand; fatores anticoagulação como Proteína C; fator natriurético atrial; tensoativo pulmonar; um ativador de plasminogênio, como uroquinase ou urina humana ou ativador de plasmídeo tipo-tecido (t- PA); bombesina; trombina; fator de crescimento hematopoiético; fator de necrose tumoral alfa e beta; encefalinase; RANTES (reguladas sob ativação normalmente expressas e secretadas por células T); proteína inflamatória de macrófago humano (MIP-1-alfa); uma albumina sérica, como albumina sérica humana; substância inibidora de Muellerian; cadeia A de relaxina; cadeia B de relaxina; prorelaxina; peptídeo associado a gonadotropina; uma proteína microbiana, como beta- lactamase; DNase; IgE; um antígeno citotóxico associado a linfócito T (CTLA), como CTLA-4; inibina; activina; fator de crescimento endotelial vascular (VEGF); receptores para hormônios ou fatores de crescimento; proteína A ou D; fatores reumatoides; um fator neurotrófico como fator neurotrófico derivado de osso (BDNF), neurotrofina-3, -4, -5, ou -6 (NT-3, NT4, NT-5, ou NT-6), ou um fator de crescimento de nervo como NGF-β; fator de crescimento derivado de plaqueta (PDGF); fator de crescimento de fibroblasto como aFGF e bFGF; fator de crescimento epidérmico (EGF); fator de crescimento transformador (TGF) como TGF-alfa e TGF-beta, incluindo TGF-β1, TGF-β2, TGF-π β3, TGF-β4, ou TGF-α β5; fator de crescimento tipo insulina I e II (IGF-I e IGF-II); des(1-3)-IGF-I (IGF-I cerebral), proteínas de ligação ao fator de crescimento tipo insulina, EpCAM, GD3, FLT3, PSMA, PSCA, MUC1, MUC16, STEAP, CEA, TENB2, receptores de EphA, receptores de EphB, receptor de folato, FOLR1, mesotelina, cripto, alfavbeta6, integrinas, VEGF, VEGFR, receptor de transferrina, IRTA1, IRTA2, IRTA3, IRTA4, IRTA5; CD proteínas como CD2, CD3, CD4, CD5, CD6, CD8, CD11, CD14, CD19, CD20, CD21, CD22, CD25, CD26, CD28, CD30, CD33, CD36, CD37, CD38, CD40, CD44, CD52, CD55, CD56, CD59, CD70, CD79, CD80. CD81, CD103, CD105, CD134, CD137, CD138, CD152 ou um anticorpo que se liga a um ou mais antígenos associados a tumores ou receptores de superfície celular revelados na Publicação US 20080171040 ou Publicação US 20080305044 e estão incorporadas aqui em sua totalidade como referência; eritropoetina; fatores osteoindutivos; imunotoxinas; uma proteína morfogenética de osso (BMP); um interferon, como interferon-alfa, -beta, e -gama; fatores estimuladores de colônia (CSFs), por exemplo, M-CSF, GM-CSF, e G-CSF; interleucinas (ILs), por exemplo, IL-1 a IL-10; superóxido dismutase; receptores células T; proteínas de superfície de membrana; fator de aceleração de decaimento; antígeno viral como, por exemplo, uma porção do envelope de HIV envelope; proteínas de transporte; receptores residentes; "addressinas"; proteínas regulatórias; integrinas, como CD11a, CD11b, CD11c, CD18, uma ICAM, VLA-4 e VCAM; um antígeno associado a tumor como receptor HER2, HER3 ou HER4; e fragmentos de qualquer um dos polipeptídeos acima listados.
[000213] Adicionalmente, GM-CSF, que se liga a células mieloides pode ser usado como um agente de ligação à célula para células adoecidas de leucemia mieloide aguda. A IL-2 que se liga a células T ativadas pode ser usada para a prevenção de rejeição de transplante de enxerto, para terapia e prevenção de doença enxerto-hospedeiro, e para o tratamento de leucemia de célula T aguda. MSH, que se liga a melanócitos, pode ser usado para o tratamento de melanoma. Ácido fólico pode ser usado para marcar o receptor de folato expresso em tumores ovarianos e outros. O fator de crescimento epidérmico pode ser usado para marcar cânceres escamosos. tais como câncer de pulmão e câncer de cabeça e pescoço. A somatostatina pode ser usada para marcar neuroblastomas e outros tipos de tumor.
[000214] Cânceres de mama e testículos podem ser sucessivamente marcados com estrogênio (ou análogos de estrogênios) ou anfrogênios (ou análogos de androgênios) respectivamente como agente de ligação a células.
Produção de Conjugados Citotóxicos
[000215] A presente invenção fornece ainda conjugados de composto citotóxico-agente de ligação à célula compreendendo um agente de ligação à célula ligado a um ou mais compostos citotóxicos através de uma variedade de ligantes, incluindo, entre outros, ligantes dissulfeto, ligantes tioéter, ligantes ligados à amina, ligantes lábeis a peptidase, ligantes lábeis a ácido, ligantes lábeis a esterase. Conjugados citotóxicos representantes da invenção são anticorpo/composto citotóxico, fragmento de anticorpo/composto citotóxico, fator de crescimento epidérmico(EGF)/composto citotóxico, hormônio estimulador de melanócito(MSH)/ composto citotóxico, hormônio estimulador da tireoide (TSH)/ composto citotóxico, somatostatina/composto citotóxico, folato/composto citotóxico, estrogênio/composto citotóxico, análogo de estrogênio/composto citotóxico, androgênio/composto citotóxico, e análogo de androgênio/composto citotóxico.
[000216] Em uma modalidade preferencial, a presente invenção fornece um conjugado de dímero indolinobenzodiazepina-agente de ligação à célula compreendendo o agente citotóxico e o agente de ligação à célula ligado através de uma ligação covalente. O ligante pode ser clivado em um sítio do tumor/células de proliferação não desejadas para liberar o agente citotóxico ao seu alvo de diversas formas. O ligante pode ser clivado, por exemplo, pelo baixo pH (hidrazona), ambiente redutor (dissulfeto), proteólise (ligação de amida/peptídeo), ou através de uma reação enzimática (esterase/glicosidase).
[000217] Em um aspecto preferencial, conjugados citotóxicos representativos da invenção são dímero anticorpo/ indolinobenzodiazepina, fragmento de anticorpo/dímero indolinobenzodiazepina, fator de crescimento epidérmico (EGF)/dímero indolinobenzodiazepina, hormônio estimulador de melanócito(MSH)/dímero indolinobenzodiazepina, hormônio estimulador de tireoide(TSH)/dímero indolinobenzodiazepina, somatostatina/dímero indolinobenzodiazepina, folato/dímero indolinobenzodiazepina, estrogênio/dímero indolinobenzodiazepina, análogo de estrogênio/dímero indolinobenzodiazepina , inibidor de antígeno de membrana específico de próstata (PSMA) inibidor/dímero indolinobenzodiazepina, inibidor de matriptase/dímero indolinobenzodiazepina, proteínas repetidas anquirina projetadas (DARPins)/dímero indolinobenzodiazepina , androgênio/dímero indolinobenzodiazepina e análogo de androgênio/dímero indolinobenzodiazepina.
[000218] Dissulfeto contendo conjugados citotóxicos podem ser preparados por reação de um agente citotóxico contendo tiol como 49 com agente adequadamente modificado de agente de ligação à célula. Estes conjugados podem ser purificados para remover o agente citotóxico não ligado usando gel-filtração, cromatografia de troca iônica, cromatografia de hidroxiapatita cerâmica (CHT), cromatografia de interação hidrofóbica (CHT), filtração de fluxo tangencial (TFF), ou por HPLC.
[000219] Uma solução de um anticorpo em tampão aquoso pode ser incubado com um excesso molar de um agente modificador de anticorpo como N-succinimidil-3-(2-piridilditio)propionato (SPDP) ou com N-succinimidil-4-(2-piridilditio)butanoato (SPDB) para introduzir grupos ditiopiridila. O anticorpo modificado é então reagido com o agente citotóxico contendo tiol como o composto 49 para produzir um conjugado anticorpo-dímero indolinobenzodiazepina ligado por dissulfeto. O conjugado citotóxico de ligação à célula pode então ser purificado usando qualquer um dos acima mencionados.
[000220] Alternativamente, o anticorpo pode ser incubado com um excesso molar de um agente modificador de anticorpo como 2- iminotiolano, L-homocisteína tiolactona (ou derivados), ou N- Succinimidil-S-acetiltioacetato (SATA) para introduzir grupos sulfidrila. O anticorpo modificado é, então, reagido com o agente citotóxico contendo dissulfeto apropriado, tal como o composto 51, para produzir um conjugado anticorpo-agente citotóxico ligado por dissulfeto. O conjugado anticorpo-agente citotóxico pode, então, ser purificado por filtração em gel ou outros métodos mencionados acima.
[000221] O número de moléculas citotóxicas ligado por molécula de anticorpo pode ser determinada por espectrofotometria medindo a razão de absorbância a 280 nm e 330 nm. Uma média de 1 a 10 moléculas citotóxicas/molécula(s) de anticorpo pode ser ligada por este método. O número médio preferencial de moléculas de agente citotóxico por molécula de anticorpo é de 2 a 5 e mais preferencial de 3 a 4,5.
[000222] Alternativamente, uma solução de um anticorpo em um tampão aquoso pode ser incubada com um excesso molar de um agente modificador de anticorpo como N-succinimidil-4-(N- maleimidometil)-ciclo-hexano-1-carboxilato para introduzir grupos maleimida, ou com N-succinimidil-4-(iodoacetil)-aminobenzoato (SIAB) para introduzir grupos iodoacetila. O anticorpo modificado é então reagido com o agente citotóxico contendo tiol para produzir um conjugado anticorpo-citotóxico ligado por tioéter. O conjugado anticorpo-citotóxico pode então ser purificado por filtração em gel ou outros métodos mencionados acima ou por métodos conhecidos por um versado na técnica.
[000223] Agentes citotóxicos contendo ligantes terminando em um éster N-hidróxi succinimidila (NHS), como os compostos 43, 44, e 46, podem reagir com o anticorpo para produzir conjugados ligados à amida diretos, tais como huN901-IGN-03 e huN901-IGN-07. O conjugado anticorpo-agente citotóxico pode então ser purificado por filtração em gel ou outros métodos mencionados acima.
[000224] Os seguintes conjugados de agente de ligação à célula/agente citotóxico podem ser preparados usando os ligantes apropriados. Os dímeros 1 e 2 com ligantes cliváveis por peptídeo podem ser preparados a partir dos ésteres NHS correspondentes. O dímero 3 pode ser preparado pela reação do agente citotóxico contendo tiol apropriado com agente de ligação à célula SMCC modificado, e hidrazona lábil a ácido. O dímero 4 pode ser preparado através de condensação de um agente citotóxico contendo uma alquila, aril cetona com um agente de ligação à célula modificado com hidrazida.
Figure img0029
[000225] Conjugados do dímero indolinobenzodiazepina assimétricos como os Dímeros 5-8 podem ainda ser preparados usando métodos semelhantes aos descritos acima.
Figure img0030
onde: Antibody - anticorpo e Dimer - dímero
[000226] Conjugados de agente de ligação a células com agentes citotóxicos da invenção podem ser avaliados por suas capacidades de suprimir a proliferação de várias linhagens de células não desejadas in vitro. Por exemplo, linhagens de células como a linhagem de carcinoma de cólon humano COLO 205, a linhagem de células de rabdomiossarcoma RH-30, e a linhagem de células de mieloma múltiplo MOLP-8 podem ser usadas para avaliação da citotoxicidade destes conjugados. As células a serem avaliadas podem ser expostas aos compostos por 1-5 dias e as frações sobreviventes das células medidas em ensaios diretos por métodos conhecidos. Os valores de IC50 podem então ser calculados a partir dos resultados dos ensaios.
[000227] Exemplos da potência in vitro e especificidade-alvo de conjugado anticorpo-agente citotóxicos da presente invenção são mostrados nas figuras 21 a 26. Todas as proporções de conjugados com agente citotóxico/anticorpo de 1 a 3 são extremamente citotóxicos nas células de câncer positivo para antígeno com um IC50 na faixa de baixo picomolar. Linhagens de células negativas para antígeno permaneceram viáveis quando expostas aos mesmos conjugados. A especificidade-alvo dos conjugados dos dímeros indolinobenzodiazepina é >1000 com os anticorpos huN901 (anti- CD56) e muB38.1 (anti-EpCAM). Por exemplo, o conjugado B38.1- IGN-3 matou a linhagem de células COLO 205 positiva para antígeno com um valor de IC50 de 1,86 pM, enquanto a linhagem de células Namalwa negativa para antígeno foi cerca de 200 vezes menos sensível com um valor de IC50 de 336,3 pM, demonstrando especificidade de antígeno. Adicionalmente, o conjugado é altamente potente para linhagem de células COLO 205 MDR resistente a multifármacos com um valor de IC50 de 16 pM. De forma semelhante, o conjugado huN901-IGN3 foi altamente potente, com um valor de IC50 de 15 pM para as células RH30 positivas para antígeno (figura 22). A adição de um excesso de anticorpo huN901 não conjugado excluiu este efeito citotóxico (IC50 > 3 nM), demonstrando especificidade de antígeno. Outro conjugado huN901-IGN (huN901-IGN-07) também mostrou alta potência para células RH-30 que expressam antígeno, com carga de fármaco dependente de citotoxicidade e valores de IC50 de 16 pm, 3 pM e 2 pM respectivamente para os conjugados transportando 1,2, 2,0 e 3,0 grupos ligados por molécula de anticorpo (figura 23). Resultados semelhantes foram obtidos com huN901-IGN07 e huN901-IGN03 para células Molp-8 positivas para antígeno. Hu901- IGN07 gerou valores de IC50 de 5 pM, 3 pM e 2 pM respectivamente para cargas de IGN07 de 1,2, 2,0 e 3,0 (figura 24). Os conjugados huN901-IGN07 e IGN03 foram muito mais potentes para células Namalwa negativas para antígeno com valores de IC50 variando de 1000 pM a >3000 pM (figura 25). O conjugado B38.1-IGN10 foi ainda especificamente potente para matar células COLO 205 positivas para antígeno, com um IC50 de 17 pM, e menos potente (170 pM) para células Ramos negativas para antígeno ( figura 26).
[000228] Em um exemplo, a eficácia in vivo de um conjugado de agente de ligação a célula/agente citotóxico foi medida. Camundongos nu transportando tumores MOLP-8 humanos foram tratados com conjugado huN901-IGN-07 e regressão significativa do tumor enquanto os tumores de camundongos não tratados cresceram rapidamente (figura 27). • Os dímeros indolinobenzodiazepina da presente invenção se ligaram e alquilaram DNA de fita dupla (dsDNA) contendo resíduos de guanina em fitas opostas espaçadas por 4 pares de base. As figuras 28-30 apresentam dados de ensaios de cromatografia de par iônico de fase reversa mostrando taxa de IGN-01, IGN-02, e IGN- 09 se ligante e fazendo cruzamento de ligação para dsDNA. O grupo indolino (IGN-01) é preferencial ao grupo oxazol (IGN-02) para ligação rápida ao DNA com ligações e ligações cruzadas entre fitas (ICL). Taxa inicial de formação de aduto IGN1-DNA é dependente da sequência de DNA. IGN1 se liga mais rapidamente ao DNA contendo um motivo GATC interno do que o DNA com uma sequência GTAC. Sonda de DNA substituída com deoxioinosina (I) (contendo nenhum grupo C-2 amina) no lugar de guanina (G) não mostrou reação com IGN-1 (figura 29). • Os valores de IC50 de vários compostos da presente invenção frente a um grupo de linhagens de células são listados na figura 31. A potência comparativa in vitro de compostos ligáveis e não ligáveis da presente invenção é mostrada na figura 32. A incorporação de um ligante não afeta de forma significativa a potência dos compostos parentes.
• Composições e Métodos de Uso
[000229] A presente invenção inclui uma composição (por exemplo, uma composição farmacêutica) compreendendo novos compostos benzodiazepinas (por exemplo, indolinobenzodiazepina ou oxazolidinobenzodiazepina), derivados do mesmo, ou conjugados dos mesmos, (e/ou solvatos, hidratos e/ou sais dos mesmos) e um veículo (um veículo farmaceuticamente aceitável). A presente invenção inclui ainda uma composição (por exemplo, uma composição farmacêutica) compreendendo novos compostos benzodiazepinas, derivados do mesmo, ou conjugados dos mesmos, (e/ou solvatos, hidratos e/ou sais dos mesmos) e um veículo (um veículo farmaceuticamente aceitável), compreendendo ainda um segundo agente terapêutico. As presentes composições são úteis para inibir o crescimento celular anormal ou tratar um distúrbio proliferativo em um mamífero (por exemplo, humano). As presentes composições são ainda úteis para tratar depressão, ansiedade, estresse, fobias, pânico, disforia, distúrbios psiquiátricos, dor e doenças inflamatórias em um mamífero (por exemplo, humano).
[000230] A presente invenção inclui um método para inibir o crescimento celular anormal ou tratar um distúrbio proliferativo em um mamífero (por exemplo, humano) compreendendo administrar a dito mamífero uma quantidade terapeuticamente eficiente de novos compostos benzodiazepinas (por exemplo, indolinobenzodiazepina ou oxazolidinobenzodiazepina), derivados dos mesmos, ou conjugados dos mesmos, (e/ou solvatos e sais dos mesmos) ou uma composição dos mesmos, isoladas ou em combinação com um segundo agente terapêutico.
[000231] A presente invenção fornece ainda métodos de tratamento compreendendo administrar a um sujeito que necessite de tratamento uma quantidade eficiente de qualquer um dos conjugados dos compostos descritos acima.
[000232] De forma semelhante, a presente invenção fornece um método para induzir a morte celular em populações de células selecionadas compreendendo contato com células-alvo ou tecido contendo células-alvo com uma quantidade efetiva de um agente citotóxico compreendendo qualquer um dos compostos de agente citotóxicos de ligação a células (por exemplo, dímero indolinobenzodiazepina ou oxazolidinobenzodiazepina ligado a um agente de ligação à célula) da presente invenção, um sal ou solvato do mesmo. As células-alvo são células as quais o agente de ligação à célula pode se ligar.
[000233] Se desejado, outros agentes ativos, como outros agentes antitumores, podem ser administrados junto com o conjugado.
[000234] Veículos, diluentes e excipientes farmaceuticamente aceitáveis apropriados, são bem-conhecidos e podem ser determinados pelos versados na técnica e podem ser determinados conforme as justificativas clínicas.
[000235] Exemplos de veículos, diluentes e/ou excipientes apropriados incluem: (1) salina fosfato de Dulbecco tamponada, pH cerca de 7,4, contendo ou não contendo cerca de 1 mg/ml a 25 mg/de albumina sérica humana, (2) salina 0,9% (0,9% p/v de NaCl), e (3) 5% (p/v) de dextrose; e pode ainda conter um antioxidante como triptamina e um agente estabilizador como Tween 20.
[000236] O método para induzir morte celular em populações de células selecionadas pode ser praticado in vitro, in vivo, ou ex vivo.
[000237] Exemplos de usos in vitro incluem tratamentos autólogos de medula óssea antes do transplante em alguns pacientes para matar células doentes ou malignas: tratamentos de medula óssea antes do transplante para matar células T competentes e prevenir a doença do enxerto-hospedeiro (GVHD); tratamentos de culturas de células para matar todas as células exceto as variantes desejadas que não expressam o antígeno-alvo; ou para matar variantes que expressão o antígeno não desejado.
[000238] As condições de uso não clínico in vitrosão prontamente determinadas por um versado na técnica.
[000239] Exemplos de uso clínico ex vivosão aqueles para remover células de tumor ou células linfoides a partir de medula óssea antes do transplante autólogo no tratamento de câncer de doença autoimune, ou para remover células T e outras células linfoides da medula óssea ou tecido autóloga ou alogênica antes do transplante para prevenir GVHD. O tratamento pode ser conduzido como a seguir. A medula óssea é coletada do paciente ou de outro indivíduo e em seguida incubada em meio contendo soro que é adicionado o agente citotóxico da invenção, faixas de concentrações de cerca de 10 μM a 1 pM, por cerca de 30 minutos até cerca de 48 horas a cerca de 37oC. As condições exatas de concentração e tempo de incubação, ou seja, a dose, são prontamente determinadas por um versado na técnica. Após a incubação as células de medula óssea são lavadas com meio contendo soro e retornam ao paciente de forma intravenosa de acordo com métodos conhecidos. Em circunstâncias onde o paciente recebe outro tratamento como um curso de quimioterapia ablativa ou irradiação total do corpo entre o tempo de coleta da medula e reinfusão das células tratadas, as células tratadas de medula óssea são congeladas em nitrogênio líquido usando equipamento médico padrão.
[000240] Para uso clínico in vivo, o agente citotóxico da invenção será fornecido como uma solução ou um pó liofilizado que são testados para esterilidade e níveis de endotoxina. Exemplos de protocolos apropriados de administração de conjugado são conforme a seguir. Os conjugados são administrados semanalmente por 4 semanas como um bolus intravenosa cada semana. As doses em bolus são administradas em 50 a 1000 ml de salina normal ao qual 5 a 10 ml de albumina sérica humana podem ser adicionadas. As doses serão de 10 μg a 2000 mg por administração, via intravenosa (faixa de 100 ng a 20 mg/kg por dia). Após quatro semanas de tratamento, o paciente pode continuar recebendo o tratamento semanalmente. Protocolos clínicos específicos com relação à via de administração, excipientes, diluentes, doses, tempos, etc., podem ser determinados por um versado na técnica conforme as justificavas da situação clínica.
[000241] Exemplos de condições médicas que podem ser tratadas de acordo com os métodos in vivo ou ex vivo de indução de morte celular em populações de células selecionadas incluem malignidade de qualquer tipo incluindo, por exemplo, câncer de pulmão, mama, cólon, próstata, rim, pâncreas, ovário, e órgãos linfáticos; doenças autoimunes, como lúpus sistêmico, artrite reumatoide, e esclerose múltipla; rejeições de enxerto, como rejeição de transplante renal, rejeição de transplante de fígado, rejeição de transplante de pulmão, rejeição de transplante cardíaco, e rejeição de transplante de medula óssea; doença do enxerto-hospedeiro; infecções virais, como infecção por CMV, infecção por HIV, AIDS, etc.; e infecções parasitárias, como giardiase, amebíase, esquistossomose, e outros conforme determinadas por um versado na técnica.
[000242] Terapias de câncer e suas dosagens, vias de administração, e uso recomendados são conhecidos na técnica e foram descritas na literatura como no Physician's Desk Reference (PDR). O PDR mostra as doses dos agentes que foram usados no tratamento de vários cânceres. O regime de doseamento e doses destes fármacos quimioterápicos que são terapeuticamente efetivos dependerão do câncer particular a ser tratado e outros fatores familiares ao médico versado na técnica e podem ser determinados pelo médico. Os conteúdos do PDR estão expressamente incorporados aqui em sua totalidade como referência. Um versado na técnica pode revisar o PDR, usando um ou mais dos seguintes parâmetros, para determinar o regime de doseamento e doses dos agentes quimioterápicos e conjugados que podem ser usados de acordo com os ensinamentos desta invenção. Estes parâmetros incluem: Índice Remissivo Por Fabricante Produtos (por empresa ou por nome comercial) Índice de categoria Índice genérico/químico (nomes comuns de fármacos não comerciais) Imagens coloridas de medicamentos Bulas, consistente com rotulagem FDA Informações químicas Função/ação Indicações e ContraindicaçõesEnsaio clínico, efeitos colaterais, advertências
• Análogos e derivados
[000243] Um versado na técnica de agentes citotóxicos prontamente entenderá que cada um dos agentes citotóxicos descritos aqui podem ser modificados de modo que o composto resultante mantenha ainda a especificidade e/ou atividade do composto de partida. O versado entenderá que muitos destes compostos podem ser usados no lugar dos agentes citotóxicos descritos aqui. Assim, os agentes citotóxicos da presente invenção incluem análogos e derivados dos compostos descritos aqui.
[000244] Todas as referências citadas aqui e nos exemplos que seguem estão expressamente incorporadas em suas totalidades.
• EXEMPLOS
[000245] A invenção será agora ilustrada com referência a exemplos não limitantes. Salvo se declarado de outra forma, todos os percentuais, proporções, partes, etc. são em peso. Todos os reagentes foram adquiridos de Aldrich Chemical Co., New Jersey, ou outras fontes comerciais. Os espectros de Ressonância Magnética Nuclear (1H RMN) foram conseguidos em um instrumento Bruker 400 MHz e os espectros de massa foram conseguidos em um instrumento Bruker Daltonics Esquire 3000 usando ionização de elestrospray. Exemplo 1 Éster metil do ácido (2S)-1-[5-metóxi-2-nitro-4-(fenilmetóxi)-benzoil]-2- indolinacarboxílico 5:
Figure img0031
[000246] A uma solução em agitação de ácido 4-benzilóxi-5-metóxi- 2-nitrobenzoico 3 (7,01 g, 23,1 mmols) em diclorometano anidro (100 mL) e THF (10 mL) foi adicionado cloreto de oxalila (4,1 mL, 46,2 mmols) e DMF (30 μL, 0,38 mmol) em temperatura ambiente. Quantidades grandes de bolhas se formaram após a adição de DMF. A mistura foi agitada durante a noite (a reação geralmente terminava dentro de 3 horas) e os solventes foram removidos por evaporação rotatória in vacuo. O resíduo foi coevaporado uma vez mais pela adição de diclorometano anidro e submetido a alto vácuo para gerar o cloreto de acetila 4 como um sólido amarelo, que foi diretamente usada para a etapa seguinte.
[000247] A uma solução em agitação de ácido (s)-(-)-Indolina-2- carboxílico 1 (3,43 g, 21,0 mmols) em metanol anidro (42 mL) foi adicionado cloreto de tionila (3,1 mL, 42,0 mmols) , sob gotejamento, a 0°C. O banho de gelo foi removido após 30 minutos e a mistura continuou a ser agitada em temperatura ambiente por 5 horas. O solvente foi removido sob pressão reduzida e o resíduo foi ainda seco em alto vácuo para gerar éster metílico 2, que foi dissolvido em THF anidro ((70 mL) em um frasco de fundo redondo de 500 mL. A solução foi resfriada a 0°C e trietilamina (9,7 mL, 69,3 mmols) foi adicionada, seguido rapidamente pela adição de cloreto de acetila 4 recém- preparado em THF anidro (70 mL) através de cânula a 0°C. A mistura foi agitada a 0~5°C por outra 1,5 hora em seguida em temperatura ambiente por 30 minutos. A reação foi resfriada bruscamente pela adição de HCl 5% frio e em seguida diluída com acetato de etila e água. A camada aquosa foi extraída com acetato de etila três vezes. As camadas orgânicas foram lavadas subsequentemente com salmoura, bicarbonato de sódio saturado e salmoura, secas em sulfato de sódio anidro e filtradas. Os solventes foram evaporados sob pressão reduzida e o resíduo foi purificado através de cromatografia de sílica-gel (Hexanos/Acetato de etila, 2:1, 1,5:1) para gerar éster metil de ácido (2S)-1-[5-metóxi-2-nitro-4-(fenilmetóxi)-benzoil]-2- indolinacarboxílico 5 como um sólido amarelo (9,1 g, rendimento = 94%). 1H RMN (400 Hz, CDCl3): o composto aparece como três rotômeros distintos, δ 8,27 (d, J = 8,4 Hz, 0,3H), 7,90 (s, 0,1H), 7,82 (s, 0,6H), 7,79 (s, 0,3H), 7,50-7,28 (m, 5,4H), 7,20-7,09 (m, 1,3H), 7,05 (s, 0,6H), 6,97-6,81 (m, 1,6H), 6,76 (s, 0,1H), 5,85 (d, J = 8,0 Hz, 0,1H), 5,70 (d, J = 8,0 Hz, 0,6H), 5,45-5,41 (m, 0,6H), 5,33-5,21 (m, 2,1H), 4,55 (dd, J1 = 10,8 Hz, J2 = 2,8 Hz, 0,3H), 3,98 (s, 1,8H), 3,94 (s, 0,9H), 3,83-3,81 (m, 2,4H), 3,62 (dd, J1 = 16,4 Hz, J2 = 11,4 Hz, 1H), 3,56 (s, 0,9H), 3,27-3,13 (m, 1H); 13C RMN (400 Hz, CDCl3): 171,5, 164,7, 155,2, 154,4, 148,6, 148,3, 140,3, 137,4, 135,11, 135,05, 130,5, 129,2, 128,7, 128,4, 127,9, 127,6, 127,5, 126,7, 125,5, 124,8, 124,3, 123,9, 117,6, 112,4, 110,1, 109,2, 108,8, 71,3, 71,2, 61,5, 60,2, 60,1, 56,7, 56,5, 52,5, 52,4, 33,6, 31,4; HRMS(ESI, m/z): calc. 463,1505 (M + H)+, encontrado 463,1516. (2S)-1-[5-metóxi-2-nitro-4-(fenilmetóxi)-benzoil]-2-indolinaldeído 6:
Figure img0032
[000248] A uma solução em agitação de éster metílico 5 (4,4 g, 9,5 mmols) em diclorometano anidro (11 mL) e tolueno (33 mL) foi adicionado dibal-H (19 mL, 1,0 M em tolueno), sob gotejamento, através de uma bomba em seringa em 30 minutos a -78°C. A mistura continuou a ser agitada a -78°C por 3 horas e TLC (hexanos/AcOEt, 1:1,5) mostrou que o material de partida foi quase todo consumido. A reação foi resfriada bruscamente com metanol (0,4 mL) e HCl 5% (30 mL) a -78°C. Acetato de etila (100 mL) foi adicionado e o gelo seco/banho de acetona foi removido. A mistura foi agitada em temperatura ambiente por 30 minutos e em seguida transferida para um funil de separação. A camada aquosa foi extraída com AcOEt duas vezes e as camadas orgânicas foram lavadas com salmoura, bicarbonato de sódio saturado e salmoura, e secas em sulfato de sódio anidro. Foi filtrada através de celite e os solventes foram removidos sob pressão reduzida (temperatura < 35°C). O resíduo foi purificado por cromatografia rápida (Hexanos/AcOEt, 1,5:1, 1:1, 1:1,5) para gerar o aldeído 6 como um sólido amarelo (2,85 g, rendimento = 69%). 1H RMN (400 Hz, CDCl3): o composto aparece como três rotômeros distintos, δ 10,02 (s, 0,3H), 9,85 (s, 0,5H), 9,45 (s, 0,2H), 8,32-8,31 (m, 0,2H), 7,93 (s, 0,3H), 7,83 (s, 0,5H), 7,79 (s, 0,2H), 7,53- 7,34 (m, 5,2H), 7,26-7,14 (m, 1,3H), 7,08 (s, 0,5H), 7,01-6,94 (m, 1H), 6,91-6,82 (m, 1H), 5,78 (d, J = 8,4 Hz, 0,3 H), 5,71 (d, J = 8,4 Hz, 0,5H), 5,52-5,48 (m, 0,5H), 5,35-5,21 (m, 2,3H), 4,53-4,50 (m, 0,2H), 4,06 (s, 1,5H), 3,98 (s, 0,6H), 3,94 (s, 0,9H), 3,63-3,17 (m, 2H); HRMS (ESI, m/z): calc. 433,1400 (M + H)+, encontrado 433,1387. Composto 7:
Figure img0033
[000249] A uma solução em agitação de aldeído 6 (2,16 g, 5 mmols) em THF (230 mL) foi adicionado água deionizada (150 mL) e ditionito de sódio (85%, 4,61 g, 22,5 mmols). A solução ligeiramente turva obtida se tornou clara após a adição de outros 5 mL de água deionizada. A mistura clara foi agitada em temperatura ambiente por 16 horas e 30 mL de MeOH foram adicionados. Após agitação por outras 2 horas, os solventes foram removidos sob pressão reduzida (temperatura do banho abaixo de 35°C). O resíduo foi suspenso em acetonitrila e evaporado para auxiliar a remoção de qualquer água remanescente. O sólido branco obtido foi ainda completamente seco deixando-o em alto vácuo por algumas horas. O resíduo foi suspenso em diclorometano/metanol (1:1) e filtrado por celite. O frasco e o sólido foram abundantemente lavados com diclorometano/metanol (1:1). O filtrado foi separado sob pressão reduzida. O resíduo foi dissolvido em metanol (50 mL) seguido pela adição de cloreto de acetila (1,8 mL, 25 mmols), sob gotejamento. A mistura foi agitada em temperatura ambiente por 30 minutos e concentrada sob pressão reduzida (temperatura do banho abaixo de 35°C) para remover metade do metanol. O remanescente foi resfriado bruscamente com bicarbonato de sódio saturado seguido pela adição de diclorometano (150 mL) e água (100 mL). A camada aquosa foi extraída com diclorometano (2x100 mL) e as camadas orgânicas foram lavadas com salmoura, secas em sulfato de sódio anidro e filtradas. Os solventes foram removidos sob pressão reduzida e o resíduo foi purificado por cromatografia de sílica-gel (Hexanos/AcOEt, 1:1, 1:1,3, 1:1,5) para gerar composto 7 como um sólido amarelo (1,41 g, rendimento = 73%). 1H RMN (400 Hz, CDCl3): δ 8,26 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,83 (d, J = 4,4 Hz, 1H), 7,57 (s, 1H), 7,46-7,23 (m, 7H), 7,11-7,08 (m, 1H), 6,86 (s, 1H), 5,23 (d, J = 12 Hz, 1H), 5,18 (d, J = 12 Hz, 1H), 4,44 (ddd, J1 = 11,2 Hz, J2 = 4,4 Hz, J3 = 4,0 Hz, 1H), 3,97 (s, 3H), 3,67 (dd, J1 = 16,4 Hz, J2 = 11,2 Hz, 1H), 3,46 (dd, J1 = 16,4 Hz, J2 = 4,0 Hz, 1H); 13C RMN (400 Hz, CDCl3): δ 163,8, 163,0, 150,9, 148,3, 141,96, 139,97, 136,0, 129,4, 128,6, 128,1, 128,08, 127,3, 124,7, 124,69, 120,7, 116,8, 111,9, 111,3, 70,8, 56,2, 54,9, 32,5; HRMS(ESI, m/z): calc. 385,1552 (M + H)+, encontrado 385,1592. Monômero Indolinobenzodiazepina (IBD) 8:
Figure img0034
[000250] A uma solução em agitação do material de partida 7 (1,41 g, 3,67 mmols) em diclorometano (26 mL) foi adicionada uma solução misturada recém -preparada de ácido metanossulfônico ácido (26 mL) em diclorometano (52 mL) em temperatura ambiente. A mistura foi agitada em temperatura ambiente por 1,5 hora e diluída com diclorometano (100 mL). A mistura foi vertida em gelo (~200 g)/MeOH (10 mL). O pH da solução obtida foi ajustado para 7 com NaHCO3 saturado, NaHCO3 sólido e água. A mistura separada e a camada de diclorometano foi lavada com salmoura. As camadas aquosas combinadas foram extraídas com acetato de etila (3x80 mL). As camadas de acetato de etila foram combinadas e lavadas com salmoura. O diclorometano e o acetato de etila foram combinados, secos em sulfato de sódio anidro e filtrados. Os solventes foram removidos e o resíduo (1,26 g) foi purificado por cromatografia de sílica-gel (CH2Cl2/MeOH, 20:1, 15:1) para gerar o monômero IBD 8 como um sólido amarelo (1,02 g, rendimento = 95%). 1H RMN (400 Hz, CDCl3): δ 8,29 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,91 (d, J = 4,8 Hz, 1H), 7,59 (s, 1H), 7,32-7,28 (m, 2H), 7,13 (t, J = 7,2 Hz, 1H), 6,94 (s, 1H), 6,02 (s, - OH), 4,50 (dt, J1 = 10,8 Hz, J2 = 4,4 Hz, 1H), 4,02 (s, 3H), 3,73 (dd, J1 = 16,8 Hz, J2 = 10,8 Hz, 1H), 3,52 (dd, J1 = 16,8 Hz, J2 = 3,6 Hz, 1H); HRMS (ESI, m/z): calc. 295,1083 (M + H)+, encontrado 295,1076. Exemplo 2 Metil éster de (s)-(-)-3-(Benziloxicarbonil)-4-oxazolidinacarboxílico 10:
Figure img0035
[000251] A uma solução em agitação de ácido (s)-(-)-3- (Benziloxicarbonil)-4-oxazolidinacarboxílico 9 (1,75 g, 6,96 mmols) em metanol anidro (15 mL) foi adicionado cloreto de tionila (1,02 mL, 13,9 mmols) a 0°C. Após 30 minutos, o banho de gelo/água foi removido e a mistura de reação continuou a ser agitada em temperatura ambiente por 3,5 horas. A reação foi resfriada bruscamente pela adição de bicarbonato de sódio saturado e diluída com diclorometano (100 mL) e água (50 mL). A mistura foi separada e a camada aquosa foi extraída com diclorometano (2x50 mL). As camadas orgânicas foram lavadas com salmoura, secas em sulfato de sódio anidro e filtradas. Os solventes foram removidos sob pressão reduzida e o resíduo foi purificado por cromatografia de sílica-gel (Hexanos/AcOEt, 1,5:1) para gerar metil éster de (s)-(-)-3-(Benziloxicarbonil)-4- oxazolidinacarboxílico 10 como um óleo incolor (1,84 g, rendimento = 99%). 1H RMN (400 Hz, CDCl3): o composto aparece com um par de rotômeros distintos, δ 7,35 (bs, 5H), 5,22-4,99 (m, 4H), 4,53-4,45 (m, 1H), 4,22-4,09 (m, 2H), 3,76 (s, 1,5H), 3,65 (s, 1,5H); MS (m/z): encontrado 288,0 (M + Na)+. Composto 11:
Figure img0036
[000252] A uma solução em agitação de metil éster de (s)-(-)-3- (Benziloxicarbonil)-4-oxazolidinacarboxílico 10 (1,04 g, 3,92 mmols) em acetato de etila (16 mL) foi adicionado trietilamina (1,4 mL, 10 mmols) e hidróxido de paládio em carbono (20%, 267 mg, 0,337 mmol). O ar em um frasco de reação foi removido por vácuo, em seguida um balão de hidrogênio foi aplicado e a mistura foi agitada sob atmosfera de hidrogênio em temperatura ambiente por 2 horas. A uma solução de cloreto de acetila 4 (preparada de 1,3 g, 4,3 mmols de ácido 4-benzilóxi-5-metóxi-2-nitrobenzoico 2 seguindo os procedimentos descritos acima) em THF anidro (15 mL) foi adicionado trietilamina (1,1 mL, 7,9 mmols) a 0°C, seguido pela adição da mistura de reação de hidrogenação acima por filtração através de celite. O catalisador de paládio/celite foi lavado com THF anidro (15 mL). A mistura obtida foi agitada a 0°C por 3 horas. Esta foi diluída com acetato de etila e cloreto de amônio saturado. O pH de uma mistura foi ajustado para 6~7 pela adição de ácido clorídrico 5%. A mistura foi separada e a camada aquosa foi extraída com acetato de etila (2x80 mL). As camadas orgânicas foram lavadas com salmoura, secas em sulfato de sódio anidro e filtradas. Os solventes foram removidos sob pressão reduzida e o resíduo foi purificado por cromatografia de sílica- gel (Hexanos/AcOEt, 1:2, 1:3) para gerar o composto 11 como um sólido amarelo-pálido (1,49 g, rendimento = 91%). 1H RMN (400 Hz, CDCl3): o composto aparece com um par de rotômeros distintos. δ 7,78 (s, 0,5H), 7,75 (s, 0,5H), 7,48-7,37 (m, 5H), 6,97 (s, 0,5H), 6,91 (s, 0,5H), 5,39 (d, J = 4,8 Hz, 0,5H), 5,26-5,23 (m, 2,5H), 4,95 (dd, J1 = 7,2 Hz, J2 = 4,4 Hz, 0,5H), 4,81 (d, J = 3,6 Hz, 0,5H), 4,67 (d, J = 3,6 Hz, 0,5H), 4,37-4,30 (m, 1H), 4,25-4,11 (m, 1,5H), 4,02 (s, 1,5H), 3,97 (s, 1,5H), 3,87 (s, 1,5H), 3,67 (s, 1,5H); HRMS (ESI, m/z): calc. 417,1298 (M + H)+, encontrado 417,1305. Aldeído 12:
Figure img0037
[000253] A uma solução em agitação do éster metílico 11 (1,49 g, 3,6 mmols) em diclorometano anidro (4 mL) e tolueno (12 mL) foi adicionado dibal-H (6,5 mL, 1,0 M em tolueno), sob gotejamento, através de uma bomba em seringa em 30 minutos a -78°C. A mistura continuou a ser agitada a -78°C for 2 horas. A reação foi resfriada bruscamente com metanol (146 μL, 3,6 mmols) e 5% HCl (30 mL) a - 78°C. Acetato de etila (100 mL) foi adicionado e o gelo seco/banho de acetona foi removido. A mistura foi agitada em temperatura ambiente por 30 minutos e em seguida transferida para um funil de separação. A camada aquosa foi extraída com AcOEt duas vezes. Todas as camadas orgânicas foram combinadas, lavadas com salmoura, bicarbonato de sódio saturado e salmoura. Foi seca em sulfato de sódio anidro e filtrada por celite. O filtrado foi evaporado sob pressão reduzida e o resíduo foi purificado por cromatografia de sílica-gel (Hexanos/AcOEt, 1:5, 1:10) para gerar o aldeído 12 como um sólido amarelo-pálido (980 mg, rendimento = 70%). 1H RMN (400 Hz, CDCl3): o composto aparece como um par de rotômeros distintos. δ 9,83 (s, 0,67H), 9,45 (s, 0,33H), 7,77 (s, 0,67H), 7,72 (s, 0,33H), 7,45-7,37 (m, 5H), 6,90 (s, 1H), 5,31-5,19 (m, 3H), 4,77 (bs, 1H), 4,67-4,56 (m, 1H), 4,36-3,94 (m, 5H); HRMS (ESI, m/z): calc, 387,1192 (M + H)+, encontrado 387,1184. Composto 13:
Figure img0038
[000254] A uma solução em agitação de aldeído 12 (154 mg, 0,4 mmol) em THF (21 mL) foi adicionado água deionizada (14 mL) e ditionito de sódio (85%, 369 mg, 1,8 mmol). A mistura clara foi agitada em temperatura ambiente por 16 horas e 5 mL de MeOH foram adicionados. Após ser agitado por outras 2 horas, os solventes foram removidos sob pressão reduzida (temperatura do banho inferior a 35°C). O resíduo foi suspenso em acetonitrila e evaporado para auxiliar a remoção da água remanescente. O sólido branco obtido foi ainda completamente seco deixando-o em alto vácuo por algumas horas. O resíduo foi suspenso em diclorometano/metanol (2:1) e filtrado por celite. O frasco e o sólido foram abundantemente lavados com diclorometano/metanol (1:1). O filtrado foi separado sob pressão reduzida. O resíduo foi dissolvido em metanol (5 mL) e uma solução de cloreto de acetila recém -preparada (0,15 mL)/MeOH (5 mL) foi adicionada rapidamente. A mistura foi agitada em temperatura ambiente por 30 minutos e resfriada bruscamente pela adição de bicarbonato de sódio saturado. Foi diluído com diclorometano e água. As duas camadas foram separadas e a camada aquosa foi extraída com diclorometano. As camadas de diclorometano combinadas foram lavadas com salmoura e secas em sulfato de sódio anidro. Os solventes foram removidos sob pressão reduzida para gerar 127 mg de produto bruto. A camada aquosa e a solução de lavagem foram combinadas e acidificadas até pH 2~3 com KHSO4. Foram concentradas até metade sob pressão reduzida (temperatura <40°C) e extraídas com diclorometano. O diclorometano combinado foi lavado com bicarbonato de sódio saturado e salmoura, seco em sulfato de sódio anidro. Foi filtrado e o filtrado foi evaporado sob pressão reduzida. O resíduo foi combinado com 127 mg de produto bruto acima e purificado em cromatografia de sílica-gel (Hexanos/AcOEt, 1:3, 1:5, 1:8) para gerar composto 13 como uma espuma incolor (80 mg, rendimento = 61%). 1H RMN (400 Hz, CDCl3): δ 7,77 (d, J = 4,0 Hz, 1H), 7,52 (s, 1H), 7,46-7,28 (m, 5H), 6,88 (s, 1H), 5,28 (d, J = 5,2 Hz, 1H), 5,23 (d, J = 12 Hz, 1H), 5,17 (d, J = 12 Hz, 1H), 5,05 (d, J = 5,2 Hz, 1H), 4,49 (dd, J1 = 9,6 Hz, J2 = 3,2 Hz, 1H), 4,33 (dd, J1 = 9,6 Hz, J2 = 6,4 Hz, 1H), 3,96 (s, 3H), 3,83 (dd, J1 = 6,4 Hz, J2 = 3,2 Hz, 1H); MS (m/z): encontrado 361,1 (M + Na)+, 379,1 (M + H2O + Na)+, 339,1 (M + H)+. Monômero Oxazolidinobenzodiazepina (OBD) 14:
Figure img0039
[000255] Uma solução do composto 13 (90 mg, 0,27mmol) e Pd/C (10%, 90 mg) em etanol absoluto (1,5 mL) foi borbulhada com argônio. 1,4-Ciclo-hexadieno (496 μl, 5,3 mmols) foi adicionado e o borbulhamento com argônio continuou por 3 horas até que o material de partida desaparecesse (TLC, diclorometano/metanol 10:1). A mistura foi então filtrada por celite e o celite foi lavado com metanol. O filtrado foi evaporado sob pressão reduzida para gerar 63 mg do produto bruto como espuma incolor, que foi purificada por cromatografia de sílica-gel (diclorometano/metanol, 20:1) para gerar o monômero OBD 14 (55 mg, rendimento = 82%) como um sólido branco. 1H RMN (400 Hz, CDCl3): aparece com uma mistura de imina e seus éteres metílicos, C11(R) e C11(S) (2:3:1), δ 7,71 (bs, 1H), 7,43 (s, 0,5H), 7,41 (s, 1H), 7,18 (s, 1,5H), 6,83 (s, 1H), 6,36 (s, 1,5H), 6,13 (s, 0,5H), 5,25 (d, J = 4,8 Hz, 0,5H), 5,22-5,20 (m, 1H), 5,14 (d, J = 5,2 Hz, 1,5H), 5,10 (d, J = 4,8 Hz, 0,5H), 5,05 (d, J = 5,2 Hz, 1,5H), 5,00- 4,97 (m, 1H), 4,47 (d, J = 8,8 Hz, 1,5H), 4,44-4,41 (m, 1H), 4,32 (apt, J = 8,0 Hz, 0,5H), 4,28-4,25 (m, 1H), 4,18-4,00 (m, 2x1,5H + 2x0,5H = 4H), 3,84 (bs, 3x1H + 0,5H = 3,5H), 3,76 (bs, 3x1,5H + 1H = 5,5H), 3,73 (s, 3x0,5H = 1,5H), 3,56 (dt, J1 = 8,8 Hz, J2 = 2,8 Hz, 1,5H), 3,34 (s, 3x1,5H = 4,5H), 3,22 (s, 3x0,5H = 1,5H); MS (m/z): encontrado 303,1 (M + MeOH + Na)+, 271,1 (M + Na)+. Exemplo 3 Dímero 15 (IGN-09):
Figure img0040
[000256] A uma solução de monômero IBD 8 (147 mg, 0,5 mmol) e 1,3-di-iodopropano (23 μl, 0,2 mmol) em DMF anidro (1,0 mL) foi adicionado carbonato de potássio (111 mg, 0,8 mmol). A mistura foi agitada em temperatura ambiente durante a noite (16 horas) e diluída com diclorometano. Foi lavado com cloreto de amônio saturado e salmoura, seco em sulfato de sódio anidroso e filtrado. O filtrado foi evaporado sob pressão reduzida e o resíduo foi purificado por HPLC de fase reversa preparativa (Coluna C18, acetonitrila/água) para gerar o dímero 15 (IGN-09) (18,9 mg, rendimento = 15%) como um sólido branco. 1H RMN (400 Hz, CDCl3): δ 8,26 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 7,87 (d, J = 4,4 Hz, 2H), 7,55 (s, 2H), 7,26 (s, 4H), 7,12-7,08 (m, 2H), 6,88 (s, 2H), 4,45 (ddd, J1 = 10,8 Hz, J2 = 4,4 Hz, J3 = 4,0 Hz, 2H), 4,36-4,26 (m, 4H), 3,94 (s, 6H), 3,70 (dd, J1 = 16,8 Hz, J2 = 10,8 Hz, 2H), 3,50 (dd, J1 = 16,8 Hz, J2 = 4,0 Hz, 2H), 2,45 (p, J = 6,0 Hz, 2H); HRMS (ESI, m/z): calc. 629,2400 (M + H)+, encontrado 629,2400. Exemplo 4 Dímero 18 (IGN-01):
Figure img0041
[000257] A uma solução em agitação de 1,3-Benzenodimetanol 16 (11 mg, 0,08 mmol) em diclorometano anidro (0,8 mL) foi adicionado trietilamina (33 μl, 0,24 mmol) depois cloreto de metanossulfonila (16 μL, 0,21 mmol) , sob gotejamento, em 15 minutos a -5 ~ -10°C. A solução foi agitada a -5 ~ -10°C por mais 60 minutos e foi resfriada bruscamente com gelo/água, diluída com acetato de etila frio. A mistura foi separada e a camada orgânica foi lavada com água fria, seca em sulfato de sódio anidro. Foi filtrada e o filtrado foi evaporado por evaporação rotatória in vacuo (temperatura < 35°C). O resíduo 17 foi submetido a alto vácuo por algumas horas antes de ser dissolvido em DMF anidro (1,5 mL). O monômero IBD 7 (94 mg, 0,32 mmol), carbonato de potássio anidro (50 mg, 0,36 mmol) e iodeto de potássio (27 mg, 0,16 mmol) foram adicionados subsequentemente. A mistura foi agitada em temperatura ambiente por 17 horas (verificada por espectro de massa) e diluída com diclorometano. Foi lavada com salmoura, seca em sulfato de sódio anidro e filtrada. O filtrado foi evaporado sob pressão reduzida e o resíduo foi purificado por HPLC de fase reversa (Coluna C18, CH3CN/H2O, coluna carregada com CH3CN/H2O, 3:1, agitado por 30 min e centrifugada antes da injeção) para fornecer o dímero 18 (IGN-01, 6,6 mg) como um sólido branco. 1H RMN (400 Hz, CDCl3): δ 8,21 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 7,79 (d, J = 4,4 Hz, 2H), 7,51 (s, 2H), 7,46 (s, 1H), 7,36 (bs, 3H), 7,23-7,18 (m, 4H), 7,06- 7,03 (m, 2H), 6,79 (s, 2H), 5,20 (d, J = 12,4 Hz, 2H), 5,14 (d, J = 12,4 Hz, 2H), 4,41 (ddd, J1 = 10,8 Hz, J2 = 4,4 Hz, J3 = 4,0 Hz, 2H), 3,92 (s, 6H), 3,64 (dd, J1 = 17,2 Hz, J2 = 11,2 Hz, 2H), 3,42 (dd, J1 = 16,8 Hz, J2 = 4,0 Hz, 2H); HRMS (ESI, m/z): calc. 691,2557 (M + H)+, encontrado 691,2570. Exemplo 5 Dímero 19 (IGN-02):
Figure img0042
[000258] A uma solução em agitação de 1,3-Benzenodimetanol 16 (10 mg, 0,074 mmol) em diclorometano anidro (0,8 mL) foi adicionado trietilamina (31 μl, 0,22 mmol) em seguida cloreto de metanossulfonila (15 μL, 0,19 mmol), sob gotejamento, em 15 minutos a -5 ~ -10°C. A solução foi agitada a -5 ~ -10°C por mais 60 minutos e foi resfriada bruscamente com gelo/água, diluída com acetato de etila frio. A mistura foi separada e a camada orgânica foi lavada com água fria, seca em sulfato de sódio anidro. Foi filtrada e o filtrado foi evaporado por evaporação rotatória in vacuo (temperatura < 35°C). O resíduo 17 foi submetido a alto vácuo antes de ser dissolvido em DMF anidro (1,5 mL). O monômero OBD 14 (70 mg, 0,28 mmol), carbonato de potássio anidro (51 mg, 0,37 mmol) e iodeto de potássio (25 mg, 0,15 mmol) foram adicionados subsequentemente. A mistura foi agitada em temperatura ambiente por 17 horas (verificada por espectro de massa) e diluída com diclorometano. Foi lavada com salmoura, seca em sulfato de sódio anidro e filtrada. O filtrado foi evaporado sob pressão reduzida e o resíduo foi purificado por HPLC de fase reversa (Coluna C18, CH3CN/H2O, coluna carregada com CH3CN/H2O, 3:1, agitado por 30 min e centrifugado antes da injeção) para fornecer o dímero 19 (IGN-02, 10,0 mg) como um sólido branco. 1H RMN (400 Hz, CDCl3): δ 7,75 (d, J = 4,0 Hz, 2H), 7,50-7,48 (bs, 3H), 7,38 (bs, 3H), 6,83 (s, 2H), 5,26 (d, J = 5,2 Hz, 2H), 5,21 (d, J = 14,4 Hz, 2H), 5,15 (d, J = 14,0 Hz, 2H), 5,03 (d, J = 5,6 Hz, 2H), 4,34-4,30 (m, 2H), 3,94 (s, 6H), 3,86-3,76 (m, 2H); HRMS (ESI, m/z): calc. 599,2142 (M + H)+, encontrado 599,2184. Exemplo 6 Triol 21:
Figure img0043
[000259] A uma solução em agitação de 5-hidróxi-isoftalato de dimetila 20 (2,1 g, 10 mmols) em THF anidro (50 mL) foi adicionado hidreto de alumínio e lítio (2,0 M em THF, 10 mL, 20 mmols) a -20 ~ - 30°C através de uma bomba em seringa em 30 minutos. O banho de resfriamento foi removido após 30 minutos e a mistura continuou a ser agitada em temperatura ambiente por 4 horas. Foi resfriada a 0 ~ - 10°C e resfriada bruscamente com sulfato de sódio saturado. A mistura foi diluída com acetonitrila e ácido clorídrico 5% (20 mL) foi adicionado. Foi agitada por 30 minutos e seca em sulfato de sódio anidro. A mistura foi filtrada por celite e o filtrado foi evaporado sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia de sílica- gel (Diclorometano/Metanol, 10:1, 8:1, 5:1) para gerar o triol 21 (1,5 g, rendimento = 99%) como um óleo incolor que se tornou um sólido branco após estocagem. 1H RMN (400 Hz, MeOD): δ 6,78, (s, 1H), 6,69 (s, 2H), 4,50 (s, 4H). 13C RMN (400 Hz, MeOD): δ 158,7, 144,4, 117,8, 113,8, 65,2; MS (m/z): 433,1400 (M + H)+, encontrado 433,1387. Composto 22:
Figure img0044
[000260] A uma solução de triol 21 (827 mg, 5,37 mmols) e 5- bromovalerato de metila (998 mg, 5,12 mmols) em acetonitrila (40 mL) foi adicionado carbonato de potássio (3,71 g, 26,9 mmols). A mistura foi colocada em banho de óleo a 86°C e refluxada por 6 horas. A mistura de reação foi removida do banho de óleo, resfriada até temperatura ambiente e os solventes foram evaporados sob pressão reduzida (temperatura < 35°C). O resíduo foi diluído com diclorometano e filtrado. O filtrado foi lavado com salmoura, seco em sulfato de sódio anidro e filtrado. O filtrado foi separado sob pressão reduzida e o resíduo foi purificado por cromatografia de sílica-gel (Hexanos/Acetato de etila, 1:2, 1:3) para gerar o composto 22 (1,15 g, rendimento = 84%) como um sólido branco. 1H RMN (400 Hz, CDCl3): δ 6,89 (s, 1H), 6,80 (s, 2H), 4,62 (s, 4H), 3,98-3,95 (m, 2H), 3,67 (s, 3H), 2,41-2,37 (m, 2H), 2,23 (bs, -OHx2), 1,84-1,78 (m, 4H); MS (m/z): encontrado 291,1 (M + Na)+. Composto 23:
Figure img0045
[000261] Seguindo o procedimento para preparar o composto 22, o composto 23 (1,43 g, rendimento = 75%) foi sintetizado como um sólido branco a partir do triol 21 (1,16 g, 7,53 mmols), 4-bromobutirato de metila (1,52 g, 8,39 mmols) e carbonato de potássio (5,2 g, 37,6 mmols). 1H RMN (400 Hz, CDCl3): δ 6,90 (s, 1H), 6,80 (s, 2H), 4,62 (s, 4H), 4,00 (t, J = 6,0 Hz, 2H), 3,68 (s, 3H), 2,51 (t, J = 7,2 Hz, 2H), 2,19 (s, -OHx2), 2,13-2,06 (m, 2H); MS (m/z): encontrado 277,1 (M + Na)+. Composto 24:
Figure img0046
[000262] Seguindo o procedimento para preparar o composto 22, o composto 24 (515 mg, rendimento = 37%) foi sintetizado como um sólido branco pegajoso a partir do triol 21 (953 mg, 6,19 mmols), bromoacetato de metila (587 μl, 6,19 mmols) e carbonato de potássio (4,3 g, 31 mmols). 1H RMN (400 Hz, CDCl3): δ 6,95 (s, 1H), 6,81 (s, 2H), 4,64 (s, -OHx2), 4,61 (s, 4H), 3,81 (s, 3H), 2,41 (s, 2H); 13C RMN (400 Hz, CDCl3): δ 169,4, 158,1, 143,0, 118,5, 112,1, 65,2, 64,8, 52,3; MS (m/z): encontrado 249,0 (M + Na)+. Composto 27:
Figure img0047
[000263] A uma solução de 5-nitro-m-xileno-α,α'-diol 25 (1,07 g, 5,84 mmols) em metanol (50 mL) foi adicionado Pd/C (10%, 311 mg, 0,29 mmol). Hidrogênio foi introduzido para substituir o ar, em seguida a mistura foi hidrogenada (H2, 34,47 KPa (5 psi)) por 2 horas em temperatura ambiente. A solução foi filtrada por celite e o filtrado foi evaporado por evaporação rotatória in vacuo para gerar o composto 26 como um sólido branco (900 mg, rendimento = 100%). 1H RMN (400 Hz, MeOD): δ 6,71 (s, 1H), 6,66 (s, 2H), 4,51 (s, 4H); 13C RMN (400 Hz, MeOD): δ 148,9, 143,8, 116,7, 114,3, 65,5; Foi dissolvido em acetonitrila anidra (30 mL) e bromoacetato de etila (443 μl, 4,67 mmols) e carbonato de potássio (807 mg, 5,84 mmols) foram adicionados. A mistura foi colocada em banho de óleo a 86°C e refluxada por 17 horas. A mistura de reação foi removida do banho de óleo, resfriada até temperatura ambiente e diluída com diclorometano. Foi filtrado por celite e o sólido foi lavado com diclorometano. O precipitado branco apareceu no filtrado. Foi coletado por filtração para gerar o composto 27 (414 mg, rendimento = 39%) como um sólido branco. 1H RMN (400 Hz, MeOD): δ 6,67 (s, 1H), 6,53 (s, 2H), 4,51 (s, 4H), 3,94 (s, 2H), 3,73 (s, 3H); 13C RMN (400 Hz, MeOD): δ 174,0, 149,7, 143,9, 116,2, 111,6, 65,6, 52,6, 46,5; MS (m/z): encontrado 248,0 (M + Na)+. Composto 28:
Figure img0048
[000264] A uma solução de 5-nitro-m-xileno-α,α'-diol 25 (564 mg, 3,08 mmols) em metanol (35 mL) foi adicionado Pd/C (10%, 164 mg, 0,154 mmol). Hidrogênio foi introduzido para substituir o ar, em seguida a mistura foi hidrogenada (H2, 34,47 KPa (5 psi)) por 2 horas em temperatura ambiente. A solução foi filtrada por celite e o filtrado foi evaporado por evaporação rotatória in vacuo para gerar o composto 26, que foi dissolvido em acetonitrila anidra (15 mL) e 4-bromobutirato de metila (557 mg, 3,08 mmols) e carbonato de potássio (426 mg, 3,08 mmols) foram adicionados. A mistura foi colocada em banho de óleo a 86°C e refluxada por 18 horas. A mistura de reação foi removida do banho de óleo, resfriada até temperatura ambiente e diluída com diclorometano. Foi filtrada por celite e o sólido foi lavado com diclorometano/acetonitrila (1:1). O filtrado foi evaporado sob pressão reduzida e o resíduo foi purificado por cromatografia de sílica-gel (Combiflash, diclorometano/metanol) para gerar o composto 28 (292 mg, rendimento = 37%) como um sólido branco. 1H RMN (400 Hz, MeOD): δ 6,62 (s, 1H), 6,55 (s, 2H), 4,50 (s, 4H), 3,65 (s, 3H), 3,13 (d, J = 7,2 Hz, 2H), 2,43 (d, J = 7,2 Hz, 2H), 1,89 (p, J = 7,2 Hz, 2H); 13C RMN (400 Hz, MeOD): δ 175,9, 150,5, 143,7, 115,5, 111,7, 65,7, 52,2, 44,3, 32,5, 25,8; MS (m/z): encontrado 276,0 (M + Na)+. Composto 29:
Figure img0049
[000265] A uma solução do composto 27 (230 mg, 1,02 mmol) em acetonitrila anidra (7 mL) foi adicionado iodeto de metila (70 μl, 1,12 mmol) e carbonato de potássio (155 mg, 1,12 mmol). A mistura foi colocada em banho de óleo a 86°C e refluxada por 17 horas. A mistura de reação foi removida do banho de óleo, resfriada até temperatura ambiente e diluída com diclorometano. Foi filtrada por celite e o sólido foi lavado com diclorometano/metanol (10:1). O filtrado foi evaporado sob pressão reduzida e o resíduo foi purificado por cromatografia de sílica-gel (Combiflash, diclorometano/metanol) para gerar o composto 29 (98 mg, rendimento = 40%) como um sólido branco. 1H RMN (400 Hz, MeOD): δ 6,70 (s, 1H), 6,63 (s, 2H), 4,84 (s, 2x-OH), 4,54 (s, 4H), 4,16 (s, 2H), 3,69 (s, 3H), 3,05 (s, 3H); 13C RMN (400 Hz, MeOD): δ 173,6, 150,9, 143,8, 115,6, 111,0, 65,7, 54,9, 52,4, 39,8; MS (m/z): encontrado 262,0 (M + Na)+. Composto 30:
Figure img0050
[000266] A uma solução do composto 28 (151 mg, 0,597 mmol) em acetonitrila anidra (4 mL) foi adicionado iodeto de metila (74 μl, 1,19 mmol) e carbonato de potássio (99 mg, 0,716 mmol). A mistura foi colocada em banho de óleo a 86°C e refluxada por 17 horas. A mistura de reação foi removida do banho de óleo, resfriada até temperatura ambiente e diluída com diclorometano. Foi filtrada por celite e o sólido foi lavado com diclorometano/metanol (10:1). O filtrado foi evaporado sob pressão reduzida e o resíduo foi purificado por cromatografia de sílica-gel (Combiflash, diclorometano/metanol) para gerar o composto 30 (63 mg, rendimento = 39%) como um óleo incolor. 1H RMN (400 Hz, MeOD): δ 6,67 (s, 2H), 6,65 (s, 1H), 4,54 (s, 4H), 3,65 (s, 3H), 3,36 (t, J = 7,2 Hz, 2H), 2,92 (s, 3H), 2,36 (t, J = 7,2 Hz, 1H), 1,87 (p, J = 7,2 Hz, 2H); 13C RMN (400 Hz, MeOD): δ 175,7, 151,3, 143,7, 115,0, 111,4, 65,9, 53,0, 52,2, 38,9, 32,2, 23,3; MS (m/z): encontrado 290,0 (M + Na)+. Composto 34 (IGN-03):
Figure img0051
[000267] A uma solução em agitação do composto 22 (80,4 mg, 0,3 mmol) em diclorometano anidro (2 mL) foi adicionado trietilamina (125 μl, 0,9 mmol) em seguida cloreto de metanossulfonila (60 μL, 0,78 mmol), sob gotejamento, em 15 minutos a -5 ~ -10°C. A solução foi agitada a -5 ~ -10°C por mais 60 minutos e foi resfriada bruscamente com gelo/água, diluída com acetato de etila frio. A mistura foi separada e a camada orgânica foi lavada com água fria, seca em sulfato de sódio anidro. Foi filtrada e o filtrado foi evaporado por evaporação rotatória in vácuo (temperatura < 35°C). O resíduo 31 foi submetido a alto vácuo antes de ser dissolvido em DMF anidro (3 mL). O monômero IBD 7 (221 mg, 0,75 mmol) e carbonato de potássio anidro (207 mg, 1,5 mmol) foram adicionados. A mistura foi agitada em temperatura ambiente por 20 horas (verificada por espectro de massa) e diluída com diclorometano. Foi lavada com água e salmoura, seca em sulfato de sódio anidro e filtrada. O filtrado foi evaporado sob pressão reduzida e o resíduo foi purificado por cromatografia de sílica- gel (hexanos/acetato de etila, 1:3, 1:4, 1:6, 1:10, em seguida etilacetato/metanol, 10:1) para gerar o composto 34 (169 mg, rendimento = 68%, 86% de pureza baseado em HPLC analítico de fase reversa) como um sólido amarelado. As frações que continham impurezas e o composto 34 foi também coletado e os solventes foram evaporados para gerar 70 mg de sólido amarelado. Os dois sólidos amarelados foram combinados e ainda purificados por HPLC de fase reversa (Coluna C18, CH3CN/H2O, coluna carregada com CH3CN/H2O, 3:1, agitada por 30 min e centrifugado antes da injeção) para fornecer o dímero 34 (IGN-03, 103 mg, rendimento = 41%) como um sólido branco. 1H RMN (400 Hz, CDCl3): δ 8,27 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 7,85 (d, J = 3,2 Hz, 2H), 7,58 (s, 2H), 7,29-7,24 (m, 4H), 7,12-7,07 (m, 3H), 6,94 (s, 2H), 6,83 (s, 2H), 5,22 (d, J = 12,8 Hz, 2H), 5,16 (d, J = 12,8 Hz, 2H), 4,47 (dt, J1 = 11,2 Hz, J2 = 4,4 Hz, 2H), 3,98 (bs, 8H), 3,73-3,64 (m, 2H), 3,68 (s, 3H), 3,48 (dd, J1 = 16,8 Hz, J2 = 3,6 Hz, 2H), 2,42- 2,38 (m, 2H), 1,83-1,80 (m, 4H); HRMS (ESI, m/z): calc. 821,3187 (M + H)+, encontrado 821,3188. Composto 35 (IGN-04):
Figure img0052
[000268] Seguindo o procedimento para preparar o composto 34, o composto 35 (IGN-04) foi sintetizado (151 mg, rendimento = 62%, 88% de pureza baseado em HPLC analítico de fase reversa) como um sólido amarelado. Parte deste foi ainda purificado por HPLC de fase reversa para análise de 1H RMN. 1H RMN (400 Hz, CDCl3): δ 8,17 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 7,74 (d, J = 5,2 Hz, 2H), 7,48 (s, 2H), 7,20-7,15 (m, 4H), 7,03-6,99 (m, 3H), 6,85 (s, 2H), 6,75 (s, 2H), 5,12 (d, J = 12,8 Hz, 2H), 5,06 (d, J = 12,8 Hz, 2H), 4,37 (dt, J1 = 11,2 Hz, J2 = 4,4 Hz, 2H), 3,93 (t, J = 6,0 Hz, 2H), 3,86 (s, 6H), 3,64-3,57 (m, 2H), 3,60 (s, 3H), 3,39 (dd, J1 = 16,8 Hz, J2 = 3,6 Hz, 2H), 2,44 (t, J = 7,2 Hz, 2H), 2,02 (p, J = 6,4 Hz, 2H); HRMS (ESI, m/z): calc. 807,3030 (M + H)+, encontrado 807,3008. Composto 36 (IGN-05):
Figure img0053
[000269] Seguindo o procedimento para preparar o composto 34, o composto 36 (IGN-05) foi sintetizado (84,5 mg, rendimento = 18%) como um sólido branco após HPLC de fase reversa preparativa. 1H RMN (400 Hz, CDCl3): δ 8,24 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 7,79 (d, J = 4,4 Hz, 2H), 7,55 (s, 2H), 7,26-7,22 (m, 4H), 7,12-7,07 (m, 3H), 6,96 (s, 2H), 6,81 (s, 2H), 5,18 (d, J = 12,8 Hz, 2H), 5,12 (d, J = 12,8 Hz, 2H), 4,64 (s, 2H), 4,44 (dt, J1 = 10,8 Hz, J2 = 4,4 Hz, 2H), 3,95 (s, 6H), 3,77 (s, 3H), 3,73-3,62 (m, 2H), 3,44 (dd, J1 = 16,8 Hz, J2 = 3,6 Hz, 2H); HRMS (ESI, m/z): calc. 779,2717 (M + H)+, encontrado 779,2703. Composto 39 (IGN-06):
Figure img0054
[000270] Seguindo o procedimento para preparar o composto 34, o composto 39 (IGN-06) foi sintetizado em 6% de rendimento como um sólido branco após HPLC de fase reversa preparativa. 1H RMN (400 Hz, CDCl3): δ 8,28 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 7,86 (d, J = 4,0 Hz, 2H), 7,58 (s, 2H), 7,31-7,26 (m, 4H), 7,12 (t, J = 7,2 Hz, 2H), 6,90-6,86 (m, 3H), 6,72 (s, 2H), 5,22 (d, J = 12,4 Hz, 2H), 5,13 (d, J = 12,4 Hz, 2H), 4,51-4,46 (m, 2H), 3,99 (s, 6H), 3,74-3,68 (m, 2H), 3,71 (s, 3H), 3,49 (dd, J1 = 16,8 Hz, J2 = 3,6 Hz, 2H), 3,09 (s, 3H); HRMS (ESI, m/z): calc. 792,3033 (M + H)+, encontrado 792,3013. Composto 40 (IGN-07):
Figure img0055
[000271] Seguindo o procedimento para preparar o composto 34, o composto 40 (IGN-07) foi sintetizado em 21% de rendimento como um sólido branco após HPLC de fase reversa preparativa. 1H RMN (400 Hz, CDCl3): δ 8,27 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 7,84 (d, J = 4,4 Hz, 2H), 7,58 (s, 2H), 7,30-7,23 (m, 4H), 7,21-7,02 (m, 3H), 6,88 (s, 2H), 6,74 (s, 2H), 5,23-5,13 (m, 4H), 4,50-4,42 (m, 2H), 3,99 (s, 6H), 3,74-3,70 (m, 2H), 3,67 (s, 3H), 3,51-3,33 (m, 4H), 2,92 (s, 3H), 2,36-2,30 (m, 2H), 1,93- 1,84 (m, 2H); HRMS (ESI, m/z): calc. 820,3346 (M + H)+, encontrado 820,3329. Exemplo 7 Composto 41:
Figure img0056
[000272] A uma soIução do composto 34 (42 mg, 0,051 mmoI) em 1,2-dicIoroetano anidro (1 mL) foi adicionado hidróxido de trimetiIestanho (139 mg, 0,77 mmoI). A mistura foi aquecida a 78~82°C (80°C, banho de óIeo) e agitada durante a noite. O TLC (CH2CI2/MeOH, 10:1) mostrou o desaparecimento do materiaI de partida. A mistura de reação foi resfriada até temperatura ambiente e diIuída com dicIorometano. Foi Iavada com gotas de ácido cIorídrico 5% em saImoura, cIoreto de amônio saturado e saImoura, seca em suIfato de sódio anidro, fiItrada e evaporada. O resíduo foi purificado por cromatografia de síIica-geI (combifIash, CH2CI2/MeOH, de 1:0 a 5:1) para gerar o ácido IGN-03 41 (33,8 mg, rendimento = 82%) como um sóIido amareIado. O resíduo pode ainda ser usado para a etapa seguinte sem purificação. MS (m/z): encontrado 805,1 (M -H) -, 823,0 (M + H2O - H) -, 829,2 (M + Na)+, 847,2 (M + H2O + Na)+. Composto 42:
Figure img0057
[000273] A uma solução em agitação do composto 35 (32 mg, 0,040 mmol) em uma mistura de THF (0,4 mL), metanol (0.1 mL) e água deionizada (0,1 ml) foi adicionada LiOH 2N recém -preparado (24 μl, 0,048 mmol) a 0°C. O banho de resfriamento foi removido e a mistura foi agitada em temperatura ambiente por 8 horas. A mistura de reação foi diluída com acetato de etila e água. O pH de uma mistura foi ajustado a 4~5 com 5% ácido clorídrico. Foi lavada com salmoura, seca em sulfato de sódio anidro e filtrada. O filtrado foi evaporado sob pressão reduzida e o resíduo foi purificado por HPLC de fase reversa preparativa (coluna C18, acetonitrila/H2O) para gerar o ácido IGN-04 42 (4,2 mg, rendimento = 13%) como um sólido branco. MS (m/z): encontrado 791,0 (M -H) -, 809,0 (M + H2O - H) -, 815,2 (M + Na)+, 833,1 (M + H2O + Na)+. Composto 43:
Figure img0058
[000274] A uma solução em agitação de ácido IGN-03 41 (8,9 mg, 0,011 mmol) em diclorometano anidro (0,2 mL) foram adicionados N- hidroxissuccinimida (2,6 mg, 0,022 mmol), cloridrato de N-(3- dimetilaminopropil)-N'-etilcarbodi-imida (4,2 mg, 0,022 mmol) e uma pequena partícula de dimetilaminopiridina. A mistura foi agitada em temperatura ambiente durante a noite e diluída com diclorometano. Foi lavada com cloreto de amônio saturado e salmoura, seca em sulfato de sódio anidro e filtrada. O filtrado foi evaporado sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia de sílica-gel (Combiflash, CH2Cl2/MeOH, de 1:0 a 10:1) para gerar o éster IGN-03 NHS 43 (7,9 mg, rendimento = 79%) como um sólido amarelado. A purificação em HPLC preparativo de fase reversa (Coluna C18, CH3CN/H2O, extraiu as frações do produto com diclorometano) gerou 3,2 mg de sólido branco para análise de 1H RMN. 1H RMN (400 Hz, CDCl3): δ 8,28 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 7,87 (d, J = 4,0 Hz, 2H), 7,59 (s, 2H), 7,31-7,27 (m, 4H), 7,15-7,10 (m, 3H), 6,97 (s, 2H), 6,86 (s, 2H), 5,25 (d, J = 12,4 Hz, 2H), 5,18 (d, J = 12,4 Hz, 2H), 4,49 (dt, J1 = 10,8 Hz, J2 = 4,0 Hz, 2H), 4,04 (t, J = 5,6 Hz, 2H), 4,01 (s, 6H), 3,72 (dd, J1 = 16,8 Hz, J2 = 10,8 Hz, 2H), 3,51 (dd, J1 = 16,8 Hz, J2 = 4,0 Hz, 2H), 2,85 (bs, 4H), 2,72 (t, J = 6,8 Hz, 2H), 1,99-1,91 (m, 4H); HRMS (ESI, m/z): calc. 904,3194 (M + H)+, encontrado 904,3182. Composto 44:
Figure img0059
[000275] Seguindo o procedimento para preparar o composto 43, o composto 44 foi sintetizado em 86% de rendimento como um sólido amarelado. MS (m/z): encontrado 944,2 (M + MeOH + Na)+, 976,2 (M + 2MeOH + Na)+. Composto 45 (ácido IGN-07):
Figure img0060
[000276] A uma solução do composto 40 (14 mg, 0,017 mmol) em 1,2-dicloroetano anidro (0,5 mL) foi adicionado hidróxido de trimetilestanho (62 mg, 0,34 mmol). A mistura foi aquecida a 78~82°C (80°C, banho de óleo) e agitada durante a noite. O TLC (CH2Cl2/MeOH, 10:1) mostrou o desaparecimento do material de partida. A mistura de reação foi resfriada até temperatura ambiente e diluída com diclorometano. Foi lavada com cloreto de amônio saturado e salmoura, seca em sulfato de sódio anidro, filtrada e evaporada para gerar o ácido IGN-07 45 como um sólido amarelado pálido (29,2 mg, contaminado com hidróxido de trimetilestanho). MS (m/z): encontrado 804,1 (M -H) -, 822,1 (M + H2O - H) -, 828,2 (M + Na)+, 846,2 (M + H2O + Na)+. Foi usado para a etapa seguinte sem purificação. Composto 46:
Figure img0061
[000277] A uma solução em agitação de ácido IGN-07 45 da reação acima (0,017 mmol) em diclorometano anidro (0,5 mL) foram adicionados N-hidroxissuccinimida (6,1 mg, 0,051 mmol), cloridrato de N-(3-dimetilaminopropil)-N'-etilcarbodi-imida (9,8 mg, 0,051 mmol) e uma pequena partícula de dimetilaminopiridina. A mistura foi agitada em temperatura ambiente durante a noite e diluída com diclorometano. Foi lavada com cloreto de amônio saturado e salmoura, seca em sulfato de sódio anidro e filtrada. o filtrado foi evaporado sob pressão reduzida. o resíduo foi purificado por cromatografia de sílica-gel (Combiflash, CH2Cl2/MeoH, de 1:0 a 10:1) para gerar o éster IGN-07 NHS 46 (9,1 mg, rendimento = 59% para as duas etapas de IGN-07) como um sólido amarelado. 1H RMN (400 Hz, CDCl3): δ 8,25 (d, J = 7,6 Hz, 2H), 7,82 (d, J = 4,4 Hz, 2H), 7,55 (s, 2H), 7,26-7,18 (m, 5H), 7,09 (t, J = 7,6 Hz, 2H), 6,84 (s, 2H), 6,74 (s, 2H), 5,21 (d, J = 12,4 Hz, 2 H), 5,15 (d, J = 12,4 Hz, 2H), 4,46-4,42 (m, 2H), 3,98 (s, 6H), 3,72- 3,64 (m, 2H), 3,44-3,37 (m, 4H), 2,95 (s, 3H), 2,74 (bs, 4H), 2,57 (t, J = 7,2 Hz, 2H), 1,95 (t, J = 7,2 Hz, 2H); HRMS (ESI, m/z): calc. 903,3354 (M + H)+, encontrado 903,3347. Exemplo 8 Composto 47:
Figure img0062
[000278] A uma solução em agitação de cisteamina cloridrato (568 mg, 5 mmols) em metanol anidro (15 mL) foi adicionado metanotiossulfonato de S-metila (519 μl, 5,5 mmols) a 0°C. A mistura foi agitada em temperatura ambiente durante a noite. Trietilamina (1,4 mL, 10 mmols) foi adicionado e os solventes foram removidos sob pressão reduzida. O resíduo foi dissolvido em 50 mL de diclorometano anidro e gerou uma solução a 0,1 M do composto 47 em diclorometano (assumindo 100% de rendimento). Uma alíquota de uma solução (0,2 mL) foi usada para a reação da etapa seguinte. O resto de uma solução foi diluído com diclorometano, lavado com bicarbonato de sódio saturado e salmoura, seco em sulfato de sódio anidro e filtrado. O filtrado foi evaporado sob pressão reduzida e o resíduo foi purificado por cromatografia de sílica-gel (diclorometano/metanol, 10:1 com 1% trietilamina) para gerar o composto 47 (82 mg, rendimento = 13%, perda do produto no trabalho aquoso devido à sua boa solubilidade em água) como um óleo incolor. 1H RMN (400 Hz, CDCl3): δ 3,02 (t, J = 6,4 Hz, 2H), 2,77 (t, J = 6,4 Hz, 2H), 2,41 (s, 3H), 1,34 (bs, 2H). Composto 48 (IGN-08):
Figure img0063
[000279] A um frasco contendo ácido IGN-03 41 (8,1 mg, 0,01 mmol) foi adicionado solução 0,1 M do composto 47 acima em diclorometano anidro (0,2 mL). Cloridrato de N-(3-dimetilaminopropil)-N'-etilcarbodi- imida (3,8 mg, 0,02 mmol), trietilamina (1,4 μl, 0,01 mmol) e uma pequena partícula de dimetilaminopiridina foram adicionados. A mistura foi agitada em temperatura ambiente durante a noite e diluída com diclorometano. Foi lavada com cloreto de amônio saturado e salmoura, seca em sulfato de sódio anidro e filtrada. O filtrado foi evaporado sob pressão reduzida e o resíduo foi purificado por HPLC de fase reversa preparativa (Coluna C18, acetonitrila/H2O) para gerar o composto 48 (4,0 mg, rendimento = 44%) como um sólido branco. 1H RMN (400 Hz, CDCl3): δ 8,25 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 7,84 (d, J = 4,4 Hz, 2H), 7,57 (s, 2H), 7,29-7,24 (m, 4H), 7,10 (t, J = 7,6 Hz, 2H), 7,06 (s, 1H), 6,92 (s, 2H), 6,82 (s, 2H), 5,22 (d, J = 12,8 Hz, 2H), 5,17 (d, J = 12,4 Hz, 2H), 4,46 (dt, J1 = 11,2 Hz, J2 = 4,4 Hz, 2H), 3,98 (bs, 8H), 3,69 (dd, J1 = 16,8 Hz, J2 = 10,8 Hz, 2H), 3,62 (d, J = 6,4 Hz, 1H), 3,58 (d, J = 6,0 Hz, 1H), 3,48 (dd, J1 = 17,2 Hz, J2 = 3,6 Hz, 2H), 2,82 (t, J = 6,4 Hz, 2H), 2,39 (s, 3H), 2,23 (t, J = 6,8 Hz, 2H), 1,80-1,78 (m, 4H); HRMS (ESI, m/z): calc. 912,3101 (M + H)+, encontrado 912,3118. Composto 49:
Figure img0064
A uma suspensão de cloridrato de tris(2-carboxietil) fosfino (TCEP.HCl, 3,8 mg, 0,013 mmol) em uma gota de água deionizada (~50 μL) foi adicionado bicarbonato de sódio saturado, sob gotejamento, (~25 μL) para ajustar o pH até cerca de 6~7, seguido pela adição de solução tampão a pH 6,5 (tampão fosfato 0,1 M, 0,3 mL). A mistura obtida foi adicionada a uma solução do composto 48 (IGN-08, 4,0 mg, 0,0044 mmol) em metanol (1,0 mL) e acetonitrila (1,0 mL). A solução foi agitada em temperatura ambiente por 1,5 hora e diluída com tampão pH 6,5 e diclorometano (a reação foi verificada por espectro de massa, que mostrou somente os sinais do produto). Foi separada e a camada orgânica foi lavada com salmoura, seca em sulfato de sódio anidro e filtrada. O filtrado foi evaporado sob pressão reduzida e o resíduo foi purificado por cromatografia de sílica-gel (Combiflash, diclorometano/MeOH) para gerar o produto 49 como um sólido amarelo-pálido (2,7 mg, rendimento = 71%). MS (m/z): encontrado 864,0 (M -H) -, 932,0 (M + MeOH + 2H2O - H) -, 888,1 (M + Na)+, 920,2 (M + MeOH + Na)+, 952,2 (M + 2MeOH + Na)+. Exemplo 9 Composto 50:
Figure img0065
[000280] A uma solução em agitação de cisteamina cloridrato (227 mg, 2 mmols) em metano anidro (10 mL) foi adicionado aldritiol (661 mg, 3 mmols). A solução de reação se tornou amarela-clara a de incolor-clara após a adição de aldritiol. A mistura foi agitada em temperatura ambiente por 21 horas. Trietilamina (279 μl, 2 mmols) foi adicionado e os solventes foram removidos sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia de sílica-gel (Combiflash, diclorometano/metanol, 1:0 to 15:1 com 0,1% trietilamina) para gerar o composto 50 (301 mg, rendimento = 81%) como um óleo incolor. 1H RMN (400 Hz, CDCl3): δ 8,52-8,49 (m, 1H), 7,69-7,60 (m, 2H), 7,15- 7,10 (m, 1H), 3,04 (t, J = 6,0 Hz, 2H), 2,92 (t, J = 6,0 Hz), 1,92 (bs, 2H). Composto 51 (IGN-10):
Figure img0066
[000281] A uma solução de ácido IGN-03 41 (de 0,05 mmol de IGN- 03 sem purificação) em diclorometano anidro (1 mL) foi adicionado o composto 50 (37 mg, 0,2 mmol), cloridrato de N-(3-dimetilaminopropil)- N'-etilcarbodi-imida (38 mg, 0,2 mmol) e uma pequena partícula de dimetilaminopiridina. A mistura foi agitada em temperatura ambiente durante a noite e diluída com diclorometano. Foi lavada com cloreto de amônio saturado e salmoura, seca em sulfato de sódio anidro e filtrada. O filtrado foi evaporado sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia de sílica-gel (Combiflash, diclorometano/metanol, 1:0 to 5:1) para gerar 51 mg de uma espuma amarela, que foi ainda purificada por HPLC de fase reversa preparativa (Coluna C18, acetonitrila/H2O) para gerar composto 51 (7,4 mg, rendimento = 15%) como um sólido amarelado. 1H RMN (400 Hz, CDCl3): δ 8,50 (d, J = 4,4 Hz, 1H), 8,28 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 7,87 (d, J = 4,4 Hz, 2H), 7,63-7,59 (m, 3H), 7,52 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,31-7,21 (m, 4H), 7,14-7,09 (m, 4H), 6,96 (s, 2H), 6,85 (s, 2H), 5,23 (d, J = 12,8 Hz, 2H), 5,18 (d, J = 12,4 Hz, 2H), 4,49 (dt, J1 = 11,2 Hz, J2 = 4,4 Hz, 2H), 4,03-4,00 (m, 8H), 3,72 (dd, J1 = 16,8 Hz, J2 = 11,2 Hz, 2H), 3,60 (d, J = 5,6 Hz, 1H), 3,57 (d, J = 5,6 Hz, 1H), 3,50 (dd, J1 = 16,8 Hz, J2 = 3,6 Hz, 2H), 2,95 (t, J = 5,6 Hz, 2H), 2,30 (t, J = 6,4 Hz, 2H), 1,85-1,84 (m, 4H); HRMS (ESI, m/z): calc. 975,3210 (M + H)+, encontrado 975,3190. Composto 53:
Figure img0067
[000282] A uma solução em agitação de álcool 4-benzilóxi-3- metoxibenzílico 52 (2,5 g, 10 mmols) em anidrido acético (30 mL) foi adicionado nitrato de cobre (II) hidrato (2,7 g, 11 mmols) lentamente em porção a 0°C. A suspensão obtida continuou a ser agitada a 0°C por 1 hora e em temperatura ambiente por 3 horas. A mistura de reação foi vertida em gelo/água e agitada por 1 hora. Foi filtrada para coletar o sólido amarelo, que foi subsequentemente dissolvido em MeOH/THF(1:1, V/V, 30 mL). Carbonato de potássio (2,1 g, 15 mmol) foi adicionado e a mistura obtida foi agitada em temperatura ambiente por 3 horas. Foi concentrado sob pressão reduzida e o resíduo foi diluído com diclorometano, lavado com água e salmoura, seco em sulfato de sódio anidro e filtrado. O filtrado foi evaporado sob pressão reduzida e o resíduo foi purificado por cromatografia de sílica-gel (CH2Cl2/MeOH, 20:1, 18:1, 15:1) para gerar o composto 53 (1,50 g, rendimento = 52%) como um sólido amarelo. 1H RMN (400 Hz, CDCl3): δ 7,78 (s, 1H), 7,48-7,33 (m, 5H), 7,20 (s, 1H), 5,18 (s, 2H), 4,96 (s, 2H), 4,01 (s, 3H). Exemplo 10 Composto 123:
Figure img0068
[000283] A uma solução em agitação do composto 122 (137 mg, 0,22 mmol) em THF (1,5 mL) e MeOH (0,5 mL) foi adicionada uma solução de hidróxido de lítio mono-hidrato (46 mg, 1,1 mmol) em água deionizada (0,5 mL). A mistura foi agitada em um banho de óleo a 60°C por 6 horas. Foi resfriado até temperatura ambiente e diluído com acetato de etila e água. O pH foi ajustado a 4~5 com ácido clorídrico 5%. A camada aquosa foi extraída com acetato de etila. As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com bicarbonato de sódio saturado e salmoura, secas em sulfato de sódio anidro e filtradas. O filtrado foi separado para gerar o composto 123 (87,5 mg, rendimento = 65%). MS (m/z): encontrado 606,1 (M -H) -. Composto 124:
Figure img0069
[000284] A uma solução de ácido 123 (87,5 mg, 0,14 mmol) em DMF anidro (1 mL) foi adicionado DMAP (21 mg, 0,17 mmol), 5- aminovalerato cloridrato de metila (26 mg, 0,15 mmol) e EDC (40 mg, 0,21 mmol). A mistura foi agitada em temperatura ambiente durante a noite e diluída com acetato de etila. Foi lavada com cloreto de amônio saturado, salmoura, bicarbonato de sódio saturado e salmoura, seca em sulfato de sódio anidro e filtrada. O filtrado foi separado e o resíduo foi purificado por cromatografia de sílica-gel (Combiflash, diclorometano/MeOH) para gerar composto 124 (71 mg, rendimento = 70%) como uma espuma amarela. 1H RMN (400 Hz, CDCl3): δ 9,07 (s, 1H), 8,62 (s, 1H), 8,40 (s, 1H), 7,19 (s, 1H), 7,17 (s, 1H), 7,09 (s, 1H), 7,00 (s, 1H), 6,74 (s, 1H), 6,62 (s, 3H), 6,46 (s, 1H), 3,94 (s, 3H), 3,85 (bs, 12H), 3,34-3,31 (m, 2H), 2,32 (t, J = 7,2 Hz, 2H), 1,68-1,55 (m, 4H), 1,48 (s, 9H); MS (ESI, m/z): encontrado 721,0 (M + H) +. Composto 125:
Figure img0070
[000285] A uma solução de monômero IBD 8 (118 mg, 0,4 mmol) e 4-bromobutirato de metila (109 mg, 0,6 mmol) em DMF anidro (1,5 mL) foi adicionado carbonato de potássio (111 mg, 0,8 mmol). A mistura foi agitada em temperatura ambiente durante a noite e diluída com acetato de etila, lavada com cloreto de amônio saturado e salmoura. Foi seca em sulfato de sódio anidro e filtrada. O filtrado foi separado sob pressão reduzida para gerar o composto 125 (146 mg, rendimento = 93%) como uma espuma amarela. 1H RMN (400 Hz, CDCl3): δ 8,25 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,84 (d, J = 4,4 Hz, 1H), 7,52 (s, 1H), 7,26-7,22 (m, 2H), 7,10-7,06 (m, 1H), 6,81 (s, 1H), 4,44 (dt, J1 = 10,8 Hz, J2 = 4,0 Hz, 1H), 4,15-4,07 (m, 2H), 3,92 (s, 3H), 3,68 (s, 3H), 3,67-3,64 (m, 1H), 3,46-3,43 (m, 1H), 2,55 (t, J = 7,2 Hz, 2H), 2,22-2,15 (m, 2H); MS (ESI, m/z): encontrado 465,2 (M + MeOH + K) +. Composto 126:
Figure img0071
[000286] A mistura do composto 125 (146 mg, 0,37 mmol) e hidróxido de trimetilestanho (669 mg, 3,7 mmols) em 1,2-dicloroetano anidro (2 mL) foi aquecida a 80°C (temperatura de banho de óleo) e agitada a esta temperatura por 18 horas. O banho de óleo foi removido e a mistura foi diluída com diclorometano, lavada com salmoura/5% HCl (0,5 mL), bicarbonato de sódio saturado e salmoura, seca em sulfato de sódio anidro e filtrada. O filtrado foi separado e o resíduo foi purificado por cromatografia de sílica-gel (Combiflash, diclorometano/MeOH) para gerar o composto 126 (90 mg, rendimento = 64%) como um sólido amarelo. 1H RMN (400 Hz, CDCl3): δ 8,26 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,83 (bs, 1H), 7,54 (s, 1H), 7,30-7,25 (m, 2H), 7,11 (t, J = 7,6 Hz, 1H), 6,88 (s, 1H), 4,48 (dt, J1 = 11,2 Hz, J2 = 4,0 Hz, 1H), 4,16-4,13 (m, 2H), 3,94 (s, 3H), 3,71 (dd, J1 = 16 Hz, J2 = 11,2 Hz, 1H), 3,47 (d, J = 16 Hz, 1H), 2,60 (t, J = 6,4 Hz, 2H), 2,22-2,18 (m, 2H). Composto 127 (IGN-11):
Figure img0072
[000287] A um frasco contendo o composto 124 (71 mg, 0,099 mmol) foi adicionado HCl 4N em dioxano (4 mL). A mistura foi agitada em temperatura ambiente por 2 horas e separado sob pressão reduzida. O resíduo foi dissolvido em diclorometano anidro (1,5 mL). O composto 126 (42 mg, 0,11 mmol), trietilamina (14 μl, 0,1 mmol), EDC (38 mg, 0,2 mmol) e DMAP (1 mg, 0,0099 mmol) foram adicionados subsequentemente. A mistura de reação foi agitada em temperatura ambiente por 22 horas e diluída com diclorometano, lavada com cloreto de amônio saturado e salmoura. Foi seca em sulfato de sódio anidro e filtrada. O filtrado foi separado sob pressão reduzida e o resíduo foi purificado por cromatografia de sílica-gel (Combiflash, diclorometano/MeOH) para fornecer o composto 127 (14 mg, rendimento = 49%) como um sólido amarelo. HRMS (ESI, m/z): calc. 983,4164 (M + H)+, encontrado 983,4167.
Exemplo 11 Preparação de solução estoque de éster IGN-03 NHS (composto 43) e éster IGN-07 NHS (composto 46):
[000288] Soluções de éster IGN-03 NHS e éster IGN-07 NHS são preparados frescas para um estoque 0,006 M baseado em um peso molecular de 903,93 g/mol (éster IGN-03 NHS) ou 902,95 (éster IGN- 07 NHS) em dimetilacetamida (DMA). A solução estoque é avaliada por espectrofotometria usando um coeficiente de extinção de referência determinado em 330 nm (ε330 nm = 15,231 M-1 cm-1). Exemplo 12 Ácido 4-(terc-Butoxicarbonilamino)-1-metil-1H-pirrol-2-carboxílico
Figure img0073
[000289] 4-(tert-butoxicarbonilamino)-1-metil-1H-pirrol-2-carboxilato de metila (Eldon E. Baird e Peter B. Dervan, J. Am. Chem. Soc. 1996, 118, 6141-6146) (5,0 g, 19,67 mmols) em 120 ml de 1:1 THF/H2O foram adicionados 8 g de NaOH em 30 ml de água. A mistura foi agitada durante a noite, concentrada, diluída com água, extraída com EtAc/Hexano (1:1). A solução aquosa foi ajustada para pH 4,0 com H3PO4 20% e extraída com EtAc (4 x 60 ml). As soluções orgânicas foram combinadas, secas em MgSO4, filtradas, evaporadas e cristalizadas com etanol/EtAc/Hexano para obter 3,81 g (81%) do produto do título. 1H RMN (CD3OD) 12,79 (s, 1H), 10,48 (br, 1H), 7,51 (s, 1H), 6,99 (s, 1H), 3,78 (s, 3H), 1,49 (s, 9H); 13C RMN 158,47, 153,82, 123,64, 121,56, 109,58, 79,52, 37,06, 28,42; MS m/z-239,2 (M-H). Ácido 4-(terc-butoxicarbonilamino)-1-metil-1H-imidazol-2-carboxílico
Figure img0074
[000290] 4-(terc-butoxicarbonilamino)-1-metil-1H-imidazol-2- carboxilato de metila (5,0 g, 19,59 mmols) em 120 ml de 1:1 THF/H2O foram adicionados 8 g de NaOH em 30 ml de água. A mistura foi agitada durante a noite, concentrada, diluída com água, extraída com EtAc/Hexano (1:1). A solução aquosa foi ajustada para pH 4,0 com H3PO420% e extraída com EtAc (4 x 60 ml). As soluções orgânicas foram combinadas, secas em MgSO4, filtradas, evaporadas e cristalizadas com etanol/EtAc/Hexano para obter 3,85 g (81%) do produto do título. 1H RMN (DMSO) 9,32 (s, 1H), 7,29 (s, 1H), 3,57 (s, 3H), 1,42 (s, 9H); 13C RMN 172,45, 159,78, 136,93, 135,44, 132,85, 79,50, 35,57, 28,07; MS m/z-240,8 (M-H). Ácido 1-Metil-4-nitro-1H-pirrol-2-carboxílico
Figure img0075
[000291] A 1-metil-4-nitro-1H-pirrol-2-carboxilato de metila (5,0 g, 27,17 mmols) em 120 ml de 1:1 THF/H2O foram adicionados 8 g de NaOH em 30 ml de água. A mistura foi agitada durante a noite, concentrada, diluída com água, extraída com EtAc/Hexano (1:1). A solução aquosa foi ajustada para pH 3 ~4 com H3PO420% e extraída com EtAc (4 x 60 ml). As soluções orgânicas foram combinadas, secas em MgSO4, filtradas, evaporadas e cristalizadas com etanol/EtAc/Hexano para obter 4,06 g (88%) do produto do título. 1H RMN (DMSO) 13,12 (s, 1H), 8,21 (s, 1H), 7,25 (s, 1H), 3,91 (s, 3H); 13C RMN 160,97, 134,01, 129,16, 123,81, 111,38, 37,47; MS m/z- 169,1 (M-H). 1 -metil-4-(1 -metil-4-nitro-1H-pirrol-2-carboxamido)-1H-pirrol-2- carboxilato de metila
Figure img0076
[000292] Em um frasco de hidrogenação foi adicionado 1-metil-4- nitro-1H-pirrol-2-carboxilato de metila (3,0 g, 16,30 mmols), 80 ml de THF, 405 mg de 10% Pd/C e 1,3 ml de HCl (conc.). Depois de retirado sob vácuo o frasco foi colocado sob hidrogênio a 206,84 KPa (30 psi) de hidrogênio e agitado por 5 horas. A mistura foi filtrada por celites, evaporada até secagem sem outra purificação. À mistura seca foi adicionado ácido 1-metil-4-nitro-1H-pirrol-2-carboxílico (2,75 g, 16,18 mmols), 80 ml de DMA, EDC (8,51 g, 44,27 mmols) e DIPEA (2,80 ml, 16,10 mmols). A mistura foi agitada sob Ar durante a noite, concentrada, diluída com THF/EtAc (1:2, 150 ml), e lavada com 1M NaH2PO4/NaCl (conc) e NaHCO3 (conc) separadamente. A camada orgânica foi separada e seca em MgSO4, filtrada, concentrada e cristalizada com THF/H2O para obter 3,74 g (75%) do produto do título. 1H RMN (DMSO) 10,25 (s, 1H), 8,17 (s, 1H), 7,25 (s, 1H), 6,52 (s, 1H), 6,08 (s, 1H), 3,90 (s, 3H), 3,78 (s, 3H), 3,56 (s, 3H); 13C RMN 157,87, 156,84, 133,76, 128,16, 123,39, 119,13, 118,18, 111,83, 107,50, 104,17, 51,55, 37,41, 36,03; MS m/z+ 329,1 (M+Na). 4-(4-(terc-butoxicarbonilamino)-1-metil-1H-pirrol-2-carboxamido)-1- metil-1H-imidazol-2-carboxilato de metila
Figure img0077
[000293] 4-(terc-butoxicarbonilamino)-1-metil-1H-imidazol-2- carboxilato de metila (2,50 g, 9,80 mmols) em 30 ml de EtAc foram adicionados 6 ml de HCl (conc.). Após agitação por 45 min, a mistura foi diluída com etanol e tolueno, concentrada e coevaporado com etanol/tolueno (1:1, 3x50 ml) até secagem sem outra purificação. Ao composto seco foi adicionado ácido 4-(terc-butoxicarbonilamino)-1- metil-1H-pirrol-2-carboxílico (2,35 g, 9,8 mmols), EDC ( 5,60 g, 29,1 mmols), DIPEA (1,70 ml, 9,8 mmols) e 80 ml de DMA. A mistura foi agitada sob Ar durante a noite, concentrada, diluída com THF/EtAc (1:2, 150 ml), e lavada 1M NaH2PO4/NaCl (conc) e NaHCO3 (conc) separadamente. A camada de solvente orgânico foi separada e seca em MgSO4, filtrada, concentrada e purificada em cromatografia SiO2 e eluída com EtAc/DCM (1:25 a 1:15) para obter 2,72 g (73%) do produto do título. 1H RMN (DMF-d7) 10,27 (s, 1H), 9,08 (s, 1H), 7,41 (s, 1H), 7,32 (s, 1H), 7,07 (s, 1H), 4,10 (s, 3H), 3,93 (s, 3H), 3,84 (s, 3H), 1,47 (s, 9H); 13C RMN 162,62, 161,20, 153,82, 145,32, 144,12, 132,56, 128,46, 124,39, 119,83, 79,51, 52,75, 36,06, 35,83, 28,88; MS m/z+ 400,2 (M+Na).4-(4-(terc-butoxicarbonilamino)-1-metil-1H-imidazol-2-carboxamido)-1- metil-1H-imidazol-2-carboxilato de metila
Figure img0078
[000294] 4-(terc-butoxicarbonilamino)-1-metil-1H-imidazol-2- carboxilato de metila (2,50 g, 9,80 mmols) em 30 ml de EtAc foram adicionados 6 ml de HCl (conc.). Após agitação por 30 min, a mistura foi diluída com etanol e tolueno, concentrada e coevaporada com etanol/tolueno (1:1, 3x50 ml) para secar o composto sem outra purificação. Ao composto seco composto foi adicionado ácido 4-(terc- butoxicarbonilamino)-1-metil-1H-imidazol-2-carboxílico (2,36 g, 9,8 mmols), EDC (5,90 g, 30,7 mmols), DIPEA (1,70 ml, 9,8 mmols) e 80 ml de DMA. A mistura foi agitada sob Ar durante a noite, concentrada, diluída com THF/EtAc (1:2, 150 ml), e lavada com 1M NaH2PO4/NaCl (conc) e NaHCO3 (conc) separadamente. A camada de solvente orgânico foi separada e seca em MgSO4, filtrada, concentrada e purificada em cromatografia de SiO2 eluída com EtAc/DCM (1:25 a 1:15) para obter 2,65 g (71,5%) do produto do título. 1H RMN (DMSO) 11,17 (s, 1H), 10,48 (s, 1H), 7,58 (s, 1H), 7,32 (s, 1H), 4,01 (s, 3H), 3,94 (s, 3H), 3,92 (s, 3H), 1,45 (s, 9H); 13C RMN 160,60, 157,30, 135,92, 135,45, 132,86, 126,12, 114,83, 79,50, 52,70, 35,58, 34,92, 28,08; MS m/z+ 401,8 (M+Na). Ácido 1 -Metil-4-(1 -metil-4-nitro-1H-pirrol-2-carboxamido)-1H-pirrol-2- carboxílico
Figure img0079
[000295] Ao 1-metil-4-(1-metil-4-nitro-1H-pirrol-2-carboxamido)-1H- pirrol-2-carboxilato de metila (2,0 g, 6,53 mmols) em 50 ml de DMA foram adicionados 2 g de LiOH em 30 ml de água. A mistura foi agitada durante a noite, concentrada, diluída com água, extraída com EtAc/Hexano (1:1). A solução aquosa foi ajustada até pH 4,0 com H3PO4 20% para formar os precipitados. Os precipitados foram filtrados, lavados com água e secos em P2O5 com vácuo para obter 1,4 g (73%) do produto do título. 1H RMN (DMF-d7) 10,34 (br, 1H), 8,17 (s, 1H), 7,62 (s, 1H), 7,51 (s, 1H), 7,00 (s, 1H), 4,09 (s, 1H), 3,91 (s, 1H); 13C RMN 158,47, 135,61, 129,11, 127,77, 123,65, 121,57, 121,50, 109,48, 108,52, 38,38, 37,05; MS m/z-291,0 (M-H). Ácido 4-(4-(terc-Butoxicarbonilamino)-1-metil-1H-pirrol-2- carboxamido)-1-metil-1H-imidazol-2-carboxílico
Figure img0080
[000296] 4-(4-(terc-butoxicarbonilamino)-1-metil-1H-pirrol-2- carboxamido)-1-metil-1H-imidazol-2-carboxilato de metila (2,0 g, 5,30 mmols) em 50 ml de DMA foram adicionados 2 g de LiOH em 30 ml de água. A mistura foi agitada durante a noite, concentrada, diluída com água, extraída com EtAc/Hexano (1:1). A solução aquosa foi ajustada até pH 4,0 com H3PO4 20% para formar precipitados. Os precipitados foram filtrados, lavados com água e secos em P2O5 com vácuo para obter 1,44 g (75%) do produto do título. 1H RMN (DMSO) 10,41 (br, 1H), 9,07 (s, 1H), 7,48 (s, 1H), 6,97 (s, 1H), 6,88 (s, 1H), 3,92 (s, 1H), 3,81 (s, 1H), 1,47 (s, 9H); 13C RMN 160,46, 158,42, 152,85, 145,21, 135,81, 129,11, 127,77, 122,39, 121,57, 113,58, 79,81, 36,06, 35,25, 28,17; MS m/z-362,1 (M-H). 4-(4-(4-(4-(terc-butoxicarbonilamino)-1-metil-1H-pirrol-2-carboxamido)- 1 -metil-1H-imidazol-2-carboxamido)-1-metil-1H-pirrol-2-carboxamido)- 1-metil-1H-pirrol-2-carboxilato de metila
Figure img0081
[000297] Em um frasco de hidrogenação foram adicionados 1-metil- 4-(1-metil-4-nitro-1H-pirrol-2-carboxamido)-1H-pirrol-2-carboxilato de metila (1,0 g, 3,27 mmols), 20 ml de THF, 305 mg de 10% Pd/C (50% úmido) e 0,25 ml de HCl (conc.). Após eliminação sob vácuo o frasco foi colocado em 344,73 KPa (50 psi) de hidrogênio e agitado por 4 horas. A mistura filtrada por celite, evaporada até secagem sem outra purificação. À mistura seca foi adicionado ácido 4-(4-(terc- butoxicarbonilamino)-1-metil-1H-pirrol-2-carboxamido)-1-metil-1H- imidazol-2-carboxílico (1,15 g, 3,16 mmols), 10 ml de DMA, EDC (2,0 g, 10,4 mmols) e DIPEA (0,70 ml, 4,02 mmols). A mistura foi agitada sob Ar durante a noite, concentrada, diluída com Hexano/EtAc (1:1, 10 ml) e água 10 ml para forma precipitados. Os precipitados foram filtrados, lavados com 1M NaH2PO4, 1 M NaHCO3 e água, secos em P2O5 com vácuo para obter 1,61 g (82%) do produto do título. 1H RMN (DMF-d7) 10,29 (s, 1H), 10,20 (s, 1H), 10,12 (s, 1H), 9,08 (s, 1H), 7,58 (s, 1H), 7,47 (d, 1H, J = 1,7 Hz), 7,26 (d, 1H, J = 1,5 Hz), 7,15 (d, 1H, J = 1,5 Hz), 6,98 (s, 1H), 6,91 (d, 1H, J = 1,8 Hz), 6,86 (s, 1H), 3,97 (s, 3H), 3,82 (s, 3H), 3,73 (s, 3H), 3,56 (s, 3H), 1,45 (s, 9H); 13C RMN 162,16, 160,05, 159,90, 157,20, 154,31, 137,88, 135,35, 124,56, 124,39, 124,24, 123,09, 120,09, 119,82, 115,32, 105,58, 102.27, 79,31, 51,51, 38,13, 36,01, 35,80, 35,08, 28,79; MS m/z+ 644,2 (M+Na). 1 -metil-4-(1 -metil-4-(1 -metil-4-(1 -metil-4-nitro-1H-pirrol-2-carboxamido)- 1H-pirrol-2-carboxamido)-1H-pirrol-2-carboxamido)-1H-pirrol-2- carboxilato de metila
Figure img0082
[000298] Em um frasco de hidrogenação foram adicionados 1-metil- 4-(1-metil-4-nitro-1H-pirrol-2-carboxamido)-1H-pirrol-2-carboxilato de metila (2,0 g, 6,53 mmols), 80 ml de DMA, 500 mg de 10% Pd/C (50% úmido) e 0,4 ml de HCl (conc.). Após eliminação sob vácuo, o frasco foi colocado sob 344,73 KPa (50 psi) de hidrogênio e agitado por 4 horas. A mistura foi filtrada por celite, evaporada até secagem sem outra purificação. À mistura seca foi adicionado ácido 1-metil-4-(1- metil-4-nitro-1H-pirrol-2-carboxamido)-1H-pirrol-2-carboxílico (1,49 g, 5,10 mmols), 30 ml de DMA, EDC (4,0 g, 20,8 mmols) e DIPEA (1,0 ml, 5,75 mmols). A mistura foi agitada sob Ar durante a noite, concentrada, diluída com Hexano/EtAc (1:1, 10 ml) e água (10 ml) para formar precipitados. Os precipitados foram filtrados, lavados com 1M NaH2PO4, 1 M NaHCO3 e água, secos em P2O5 sob vácuo para obter 2,13g (76%) do produto do título. 1H RMN (DMSO) 10,28 (s, 1H), 10,25 (s, 1H), 9,78 (s, 1H), 8,18 (s, 1H), 7, 86 (s, 1H), 7,52 (s, 1H), 7,31 (d, 1H, J = 1,7 Hz), 7,25 (s, 1H), 7,23 (s, 1H), 7,17 (d, 1H, J = 1,5 Hz), 6,98 (s, 1H), 6,71 (s, 1H), 4,02 (s, 3H), 3,94 (s, 3H), 3,83 (s, 3H), 3,73 (s, 3H), 3,56 (s, 3H), 1,47 (s, 9H); 13C RMN 160,78, 158,93, 158,06, 157,81, 135,25, 127,28, 126,36, 123,78, 122,57, 121,91, 121,.40, 120,94, 119,65, 110,73, 108,39, 107,34, 103,75, 80,81, 51,57, 39,74, 38,52, 38,22, 37,08, 28,63; MS m/z+ 573,2 (M+Na). Ácido 4-(4-(4-(4-(terc-butoxicarbonilamino)-1-metil-1H-pirrol-2- carboxamido)-1-metil-1H-imidazol-2-carboxamido)-1-metil-1H-pirrol-2- carboxamido)-1-metil-1H-pirrol-2-carboxílico
Figure img0083
[000299] 4-(4-(4-(4-(terc-butoxicarbonilamino)-1-metil-1H-pirrol-2- carboxamido)-1-metil-1H-imidazola-2-carboxamido)-1-metil-1H-pirrol-2- carboxamido)-1-metil-1H-pirrol-2-carboxilato de metila (510 mg, 0,82 mmol) em 10 ml de DMA foi adicionado 0,8 g de LiOH em 10 ml de água. A mistura foi agitada durante a noite, concentrada, diluída com água, extraída com EtAc/Hexano (1:1). A solução aquosa foi ajustada até pH 4,0 com H3PO4 20% para formar precipitados. Os precipitados foram filtrados, lavados com água e secos em P2O5 sob vácuo para obter 363 mg (73%) do produto do título. 1H RMN (DMF-d7) 10,31 (s, 1H), 10,18 (s, 1H), 10,11 (s, 1H), 9,10 (s, 1H), 7,58 (s, 1H), 7,54 (s, 1H), 7,41 (s, 1H), 7,33 (s, 1H), 7,21 (s, 1H), 7,10 (s, 1H), 7,06 (s, 1H), 4,10 (s, 1H), 3,98 (s, 1H), 3,95 (s, 1H), 3,93 (s, 1H), 1,47 (s, 9H); 13C RMN 162,16, 160,05, 159,90, 157,20, 154,31, 137,88, 135,35, 124,56, 124,39, 123,51, 123,09, 121,76, 120,09, 119,83, 118,96, 115,32, 109,53, 105,58, 102,27, 79,32, 38,13, 36,02, 35,81, 34,88, 28,79; MS m/z-606,2 (M-H). Etanotioato de S-3-(terc-butoxicarbonilamino)propila
Figure img0084
[000300] 3-hidroxipropilcarbamato de terc-butila (3,22 g, 18,37 mmols) em 100 ml de DCM a 0°C foi adicionado ácido tiolacético (2,0 ml, 26,73 mmols) e trifenilfosfino (7,0 g, 26,73 mmols) sob Ar. Após agitação a 0°C por 15 min, DIAD (6,0 ml, 28,93) foi adicionado. A mistura foi agitada a 0°C por 2 h em seguida, temperatura ambiente durante a noite. A mistura foi concentrada, diluída com 120 ml de EtAc/Hexano (1:2), filtrada por celite. A solução foi lavada com NaHCO3 (conc.)/NaCl (conc.) e 1 M NaH2PO4 respectivamente, seca em MgSO4, filtrada, evaporada e purificada em cromatografia de SiO2 eluída com EtAc/Hexano (1:7 a 1:6) para obter 3,22 g (75%) do composto título . 1H RMN (CDCl3) 3,09 (t, 2H, J = 6,5 Hz), 2,84 (t, 2H, J = 6,9 Hz), 2,27 (s, 3H), 1,69 (dt, 2H, J = 6,8, 13,5 Hz),1,38 (s, 9H); 13C RMN196,35, 156,16, 79,50, 39,26, 30,79, 30,24, 28,61, 26,44; MS m/z+ 256,0 (M + Na). Etanotioato de S-3-(terc-butoxicarbonil(metil)amino)propila
Figure img0085
[000301] A uma solução de NaH (0,57 g, 60%, 14,25 mmols) em 20 ml de THF a 0oC foi adicionado etanotioato de S-3-(terc- butoxicarbonilamino)propila (1,25 g, 5,36 mmols) sob Ar. Após agitação a 0oC por 30 min, MeI (1,0 ml, 16,06 mmols) foi adicionado a uma mistura. A agitação foi continuada a 0oC por 2 h em seguida, temperatura ambiente, durante a noite. A mistura foi concentrada, redissolvida em 120 ml de EtAc/Hexano (1:2), lavada com 1 M NaH2PO4 NaCl (conc.), seca em MgSO4, filtrada, evaporada e purificada em cromatografia de SiO2 eluída com EtAc/Hexano (1:7) para obter 1,121 g (85%) do composto do título, 1H RMN (CDCl3) 3,69 (t, 2H, J = 7,3 Hz), 2,41 (t, 2H, J = 7,3 Hz), 2,39 (s, 3H), 2,03 (s, 3H), 1,76 (m, 2H),1,47 (s, 9H); 13C RMN 173,21, 153,39, 83,28, 43,67, 31,84, 28,26, 28,19, 27,11, 15,65; MS m/z+ 270,0 (M + Na). Sal de cloreto de hidrogênio de etanotioato de S-3-(metilamino)propila
Figure img0086
[000302] Etanotioato de S-3-(terc-butoxicarbonil(metil)amino)propila (206 mg, 0,834 mmol) em 4 ml de EtAc foi adicionado 1,0 ml de HCl (conc.) em temperatura ambiente. A mistura foi agitada em temperatura ambiente por 1 h, diluída com etanol/tolueno (6 ml, 1:1), evaporada e coevaporado com etanol/tolueno (3 x 10 ml), cristalizada com etanol/EtAc/Hexano, filtrada, e seca a vácuo para obter 135 mg (88%) do composto do título. 1H RMN (CDCl3) 9,70 (br, 1H), 8,56 (br, 1H), 3,42 (m, 2H), 2,52 (m, 2H), 2,35 (s, 3H), 2,05 (s, 3H), 1,88 (m, 2H); 13C RMN 174,64, 40,57, 31,57, 27,69, 20,94, 15,62; MS m/z+ 170,0 (M + Na), 148,10 (M + H). 2-(piridin-2-ildissulfanil)etilcarbamato de terc-butila(217)
Figure img0087
[000303] A uma solução de 2,2'-ditiolpiridina (3,97 g, 18,02 mmols) em 100 ml de metanol e 80 ml de 1 M NaH2PO4, pH 6,8 foi adicionado 2-mercaptoetilcarbamato de terc-butila (1,00 g, 5,65 mmols) em 50 ml de metanol. A mistura foi agitada sob Ar durante a noite, concentrada, extraída com diclorometano, seca em MgSO4, filtrada, evaporada e purificada em cromatografia de SiO2 eluída com EtAc/Hexano (1:10 a 1:6) para obter 1,341 g (83%) do composto do título. 1H RMN (CDCl3) 8,39 (m, 1H), 7,56 (m, 1H), 7,49 (m, 1H), 7,03 (m, 1H), 7,00 (m, 1H), 3,34 (m, 2H), 2,84 (m, 2H),1,37 (s, 9H); 13C RMN 160,05, 159,39, 159,07, 149,87, 137,21, 120,78, 79,48, 39,58, 38,96, 28,57; MS m/z+ 309,2 (M + Na). 2-(piridin-2-ildissulfanil)etanamina
Figure img0088
[000304] 2-(piridin-2-ildissulfanil)etilcarbamato de terc-butila (1,06 g, 3,70 mmols) em 16 ml de EtAc foi adicionado 4,0 ml de HCl (conc.) em temperatura ambiente. A mistura foi agitada em temperatura ambiente por 0,5 h, diluída com etanol/tolueno (6 ml, 1:1), evaporada e coevaporada com etanol/tolueno (3 x 10 ml), cristalizada com etanol/EtAc/Hexano, filtrada, e seca em vácuo para obter 135 mg (88%) do composto do título. 1H RMN (CD3OD) 7,58 (m, 1H), 7,47 (m, 1H), 7,06 (m, 1H), 6,83 (m, 1H), 3,34 (m, 2H), 3,02 (m, 2H); 13C RMN 158,69, 149,07, 137,81, 122,48, 120,98, 39,52, 36,94; MS m/z+ 187,10 (M + H). 4-bromobutanoato de metila (223)
Figure img0089
[000305] Cloreto de 4-Bromobutanoíla (3,1 ml, 25,28 mmols) foi adicionado a 15 ml de metanol seco a 0oC. A agitação foi continuada a 0oC sob Ar por 2 h em seguida, em temperatura ambiente, em temperatura ambiente durante a noite. A mistura foi evaporada, diluída com EtAc/Hexano (1:5), filtrada por gel de SiO2 , e evaporada para obter 4,50 g (99%) do composto do título. 1H RMN (CDCl3) 3,65 (s, 3H), 3,43 (t, 2H, J = 6,5 Hz), 2,47 (t, 2H, J = 7,1 Hz), 2,13 (dt, 2H, J = 6,7, 13,6 Hz); 13C RMN 173,08, 51,84, 32,82, 32,34, 27,89; MS m/z+ 203,0 (M + Na). 4-(7-metóxi-2',3'-benzo[e]-5-oxo-5,11a-di-hidro-1H-benzo[e]pirrolo[1,2- a][1,4]diazepin-8-ilóxi)butanoato de (Z)-metila
Figure img0090
[000306] (Z)-2,3-Benzo-8-hidróxi-7-metóxi-1H-benzo[e]pirrolo[1,2- a][1,4]diazepin-5(11aH)-ona (60 mg, 0,20 mmol) em 4 ml de acetona foi adicionado Cs2CO3 (90 mg, 0,28 mmol), em seguida adicionado 4- bromobutanoato de metila (50 mg, 0,27 mmol). A mistura foi agitada sob Ar durante a noite, evaporada, e purificada em cromatografia de SiO2 eluída com EtAc/DCM (1:5 to 1:3) para obter 50,1 mg (63%) do composto do título. 1H RMN (CDCl3) 8,19 (d, 1H, J = 7,9 Hz), 7,80 (d, 1H, J = 4,2 Hz), 7,48 (s, 1H), 7,19 (m, 2H), 7,03 (d, 1H, J = 7,4 Hz), 6,77 (s, 1H), 4,41 (m, 1H), 3,88 (s, 3H), 3,64 (m, 2H), 3,62 (s, 3H), 3,42 (dd, 1H, J = 3,4, 13,7 Hz), 2,50 (t, 2H, J = 7,2 Hz), 2,12 (t, 2H, J = 6,8 Hz); 13C RMN, 173,64, 164,12, 163,24, 152,25, 148,41, 142,28, 140,34, 129,69, 128,39, 124,97, 120,85, 117,15, 112,15, 110,68, 68,08, 56,40, 55,18, 51,90, 32,84, 30,64, 24,50; MS m/z+ 187,10 (M + H), MS m/z+ 417,2 (M + Na), 435,2 (M + Na + H2O). Ácido 4-(7-metóxi-2,3-benzo[e]-5-oxo-5,11a-di-hidro-1H- benzo[e]pirrolo[1,2-a][1,4]diazepin-8-ilóxi)butanoico
Figure img0091
[000307] 4-(7-metóxi-2',3'-benzo[e]-5-oxo-5,11a-di-hidro-1H- benzo[e]pirrolo[1,2-a][1,4]diazepin-8-iloxipiperidina)butanoato de (Z)- metila (41 mg, 0,104 mmol) e hidróxido de trimetilestanho (302 mg, 1,67 mmol) em 15 ml de dicloroetano foi refluxada a 85oC sob Ar durante a noite. A mistura foi lavada com 1 M NaH2PO4, pH 3.5, seca em MgSO4, filtrada, evaporada e purificada em cromatografia de SiO2 eluída com EtAc/DCM/HCl (1:25:0,01%) para obter 30 mg (76%) do composto do título. 1H RMN (CDCl3) 8,18 (d, 1H, J = 7,9 Hz), 7,85 (m, 1H), 7,46 (s, 1H), 7,20 (m, 2H), 7,04 (d, 1H, J = 7,4 Hz), 6,81 (s, 1H), 4,40 (m, 1H), 3,86 (s, 3H), 3,63 (m, 2H), 3,23 (dd, 1H, J = 10,2, 16,3 Hz), 2,52 (t, 2H, J = 7,2 Hz), 2,12 (t, 2H, J = 6,8 Hz); 13C RMN, 173,64, 164,12, 163,24, 152,25, 148,41, 142,28, 140,34, 129,69, 128,39, 125,10, 120,85, 117,19, 112,15, 110,68, 67,94, 56,43, 55,18, 31,81, 30,64, 24,21; MS m/z-397,0 (M + H2O -H). Éster metil de ácido 4-{[4-({4-[4-(4-(7-metóxi-2',3'-benzo[e]-5-oxo- 5,11a-di-hidro-1H-benzo[e]pirrolo[1,2-a][1,4]diazepin-8- ilóxi)butirilamino]-1-metil-1 H-pirrol-2-carbonil}amino)-1-metil-1 H- imidazol-2-carbonil]amino}-1-metil-1 H-pirrol-2-carbonil]-amino}-1-metil- 1H-pirrol-2-carboxílico (226)
Figure img0092
[000308] À 4-(4-(4-(4-(terc-butoxicarbonilamino)-1-metil-1H-pirrol-2- carboxamido)-1-metil-1H-imidazol-2-carboxamido)-1-metil-1H-pirrol-2- carboxamido)-1-metil-1H-pirrol-2-carboxilato de metila (15 mg, 0,024 mmol) em 4 ml de EtAc foi adicionado 1,0 ml de HCl (conc.). A mistura foi agitada em temperatura ambiente por 0,5 h, diluída com etanol/tolueno (6 ml, 1:1), evaporada e coevaporada com etanol/tolueno (3 x 10 ml), e seca a vácuo. O composto sólido foi usado diretamente sem outra purificação. Ao sólido foi adicionado ácido 4-(7-metóxi-2',3'-benzo[e]-5-oxo-5,11a-di-hidro-1H- benzo[e]pirrolo[1,2-a][1,4]diazepin-8-ilóxi) butanoico (6 mg, 0,015 mmol), EDC (40 mg, 0,21 mmol), DIPEA (4 ul, 0,023 mmol) e 1 ml de DMA. A mistura foi agitada sob Ar durante a noite, evaporada e purificada em HPLC preparativa de coluna C-18 (coluna Φ10 mm * 200 mm, taxa de fluxo 9 mL/min e um sistema de gradiente de solvente iniciando em 75:25 solvente A:B no tempo 0-5 min a 40:60 A:B a 15 min em seguida a 20:80 A:B em 25 min até 10:90 A:B em 30 min. Solvente A - água, solvente B - acetonitrila/dioxano (1:2)) e liofilizada para obter um sólido branco (4.2 mg (30%) do composto do título). MS m/z-900,3 (M + H2O -H). Etanotioato de S-3-(4-(4-(4-(4-(terc-butoxicarbonilamino)-1-metil-1H- pirrol-2-carboxamido)-1-metil-1H-imidazol-2-carboxamido)-1-metil-1H- pirrol-2-carboxamido)-N,1-dimetil-1H-pirrol-2-carboxamido)propila (227).
Figure img0093
[000309] Ácido 4-(4-(4-(4-(terc-butoxicarbonilamino)-1-metil-1H- pirrol-2-carboxamido)-1-metil-1H-imidazol-2-carboxamido)-1-metil-1H- pirrol-2-carboxamido)-1-metil-1H-pirrol-2-carboxílico (256 mg, 0,42 mmol), NHS (60 mg, 0,52 mmol) e EDC (500 mg, 2,60 mmol) em 4 ml de DMA foram agitados sob Ar por 2 h, em seguida sal de cloreto de hidrogênio de etanotioato de S-3-(metilamino)propila (76,5 mg, 0,42 mmol) foi adicionado e a mistura foi mantida em agitação por 24 h, evaporada e purificada em cromatografia de SiO2 eluída com THF/DCM (1:5 a 1:4) para obter 198 mg (64%) do composto do título. 1H RMN (DMSO) 10,21 (s, 1H), 10,09 (s, 1H), 10,06 (s, 1H), 9,08 (s, 1H), 7,76 (d, 1H, J = 1,7 Hz), 7,52 (s, 1H), 7,28 (s, 1H), 7,21 (d, 1H, J = 1,7 Hz), 6,97 (s, 1H), 6,87 (s, 1H), 3,98 (s, 1H), 3,86 (s, 3H), 3,75 (s, 3H), 3,73 (s, 3H), 3,66 (m, 2H), 2,85 (s, 3H), 2,60 (m, 2H), 2,01 (s, 3H), 1,45 (s, 9H); 13C RMN 173,31, 162,16, 160,05, 159,90, 157,20, 154,31, 137,88, 135,35, 124,56, 124,39, 123,51, 123,09, 121,76, 120,09, 119,83, 118,96, 115,32, 109,53, 105,58, 102,27, 79,32, 43,67, 38,13, 36,02, 35,81, 34,88, 31,84, 28,79, 28,26, 28,21, 27,01; MS m/z+ 759,2 (M + Na). Etanotioato de (Z)-S-3-(4-(4-(4-(4-(4-(7-metóxi-2,3-benzo[e]-5-oxo- 5,11a-di-hidro-1H-benzo[e]pirrolo[1,2-a][1,4]diazepin-8- ilóxi)butanamida)-1-metil-1H-pirrol-2-carboxamido)-1-metil-1H- imidazol-2-carboxamido)-1-metil-1H-pirrol-2-carboxamido)-N,1 -dimetil- 1H-pirrol-2-carboxamido)propila
Figure img0094
[000310] Etanotioato de S-3-(4-(4-(4-(4-(terc-butoxicarbonilamino)-1- metil-1H-pirrol-2-carboxamido)-1-metil-1H-imidazol-2-carboxamido)-1- metil-1H-pirrol-2-carboxamido)-N,1-dimetil-1H-pirrol-2- carboxamido)propila (227) (27 mg, 0,037 mmol) foi agitada em 2 ml de dioxano e 0,5 ml de HCl (conc) por 15 min, diluída com etanol/tolueno (6 ml, 1:1), evaporada e coevaporada com etanol/tolueno (4 x 10 ml), cristalizada com EtOH/DCM/Hexano e seca em vácuo para obter 21 mg de sólido. O composto sólido foi usado diretamente sem outra purificação. Ao sólido foi adicionado ácido 4-(7-metóxi-2,3-benzo[e]-5- oxo-5,11a-di-hidro-1H-benzo[e]pirrolo[1,2-a][1,4]diazepin-8-ilóxi) butanoico (10 mg, 0,026 mmol), EDC (101 mg, 0,52 mmol), DIPEA (5 ul, 0,028 mmol) e 2 ml de DMA. A mistura foi agitada durante a noite, evaporada, diluída com DCM, lavada com 1 M NaH2PO4/NaCl (conc), pH 4.0, seca em MgSO4, filtrada, evaporada e purificada em HPLC preparativo coluna C-18 (coluna Φ10 mm * 200 mm, taxa de fluxo 9 mL/min e um sistema de gradiente de solvente iniciando de 75:25 solvente A:B no tempo 0-5 min a 40:60 A:B em 15 min em seguida a 20:80 A:B em 25 min até 10:90 A:B em 30 min. Solvente A - água, solvente B - acetonitrila/dioxano(1:2)) e liofilizada para obter 8,2 mg de um sólido branco (32%) do composto do título. MS m/z-1015,1 (M + H2O -H), UV ε(l= 305 nm) = 32800 M-1cm-1. 1 -metil-5-(1 -metil-2-(1 -metil-5-(1 -metil-5-(2-(piridin-2- ildissulfanil)etilcarbamoil)-1H-pirrol-3-ilcarbamoil)-1H-pirrol-3- ilcarbamoil)-1H-imidazol-4-ilcarbamoil)-1H-pirrol-3-ilcarbamato de terc- butila (229)
Figure img0095
[000311] Ácido 4-(4-(4-(4-(terc-butoxicarbonilamino)-1-metil-1H- pirrol-2-carboxamido)-1-metil-1H-imidazol-2-carboxamido)-1-metil-1H- pirrol-2-carboxamido)-1-metil-1H-pirrol-2-carboxílico (102 mg, 0,17 mmol), sal de cloreto de hidrogênio de 2-(piridin-2- ildissulfanil)etanamina (40 mg, 0,18 mmol), DIPEA (30 ul, 0,17 mmol) e EDC (200 mg, 1.,4 mmol) em 2 ml de DMA foram agitados sob Ar por 24 h, evaporados e purificados em cromatografia de SiO2 eluída com THF/DCM (1:5 a 1:4) para obter 90 mg (68%) do composto do título. 1H RMN (DMSO) 10,93 (s, 1H), 10,19 (s, 1H), 10,06 (s, 1H), 9,03 (s, 1H), 8,81 (m 1H), 8,29 (m, 1H), 8,03 (m, 1H), 7,68 (s, 1H), 7,47 (s, 1H), 7,28 (s, 1H), 7,24 (s, 1H), 7,18 (m, 1H), 6,87 (s, 1H), 3,96 (s, 1H), 3,86 (s, 3H), 3,75 (s, 3H), 3,73 (s, 3H), 3,58 (m, 2H), 2,48 (m, 2H), 1,45 (s, 9H); MS m/z+ 798,0 (M + Na), 776,0 (M + H). 4-(4-(4-(7-metóxi-2,3-benzo[e]-1-5-oxo-5,11a-di-hidro-1H- benzo[e]pirrolo[1,2-a][1,4]diazepin-8-ilóxi)butanamido)-1-metil-1H- pirrol-2-carboxamido)-1-metil-N-(1-metil-5-(1-metil-5-(metil(2-(piridin-2- ildissulfanil)etil)carbamoil)-1H-pirrol-3-ilcarbamoil)-1H-pirrol-3-il)-1H- imidazol-2-carboxamida
Figure img0096
[000312] 1-metil-5-(1-metil-2-(1-metil-5-(1-metil-5-(2-(piridin-2- ildissulfanil)etilcarbamoil)-1H-pirrol-3-ilcarbamoil)-1H-pirrol-3- ilcarbamoil)-1H-imidazol-4-ilcarbamoil)-1H-pirrol-3-ilcarbamato de terc- butila (229) (30 mg, 0,038 mmol) foi agitada em 2 ml de dioxano e 0,5 ml de HCl (conc) por 15 min, diluída com etanol/tolueno (6 ml, 1:1), evaporada e coevaporado com etanol/tolueno (4 x 10 ml), cristalizada com EtOH/DCM/Hexano e seca em vácuo para obter 19,5 mg de sólido. O composto sólido foi usado diretamente sem outra purificação. Ao sólido foi adicionado ácido 4-(7-metóxi-2,3-benzo[e]-5-oxo-5,11a-di- hidro-1H-benzo[e]pirrolo[1,2-a][1,4]diazepin-8-ilóxi) butanoico (10 mg, 0,026 mmol), EDC (102 mg, 0,52 mmol), DIPEA (5 ul, 0,028 mmol) e 2 ml de DMA. A mistura foi agitada durante a noite, evaporada, diluída com DCM, lavada com 1 M NaH2PO4/NaCl (conc), pH 4.0, seca em MgSO4, filtrada, evaporada e purificada em HPLC preparativa coluna C-18 (coluna Φ10 mm x 200 mm, taxa de fluxo 9 mL/min e um sistema de gradiente de solvente iniciando em 75:25 solvente A:B no tempo 0-5 min a 40:60 A:B em 15 min em seguida a 20:80 A:B em 25 min até 10:90 A:B em 30 min. Solvente A - água, solvente B - acetonitrila/dioxano (1:2)) e liofilizada para obter um sólido branco 7,5 mg (27%) do composto do título. MS m/z-1050,0 (M + H2O -H), UV ε(l= 305 nm) = 32855 M-1cm-1. 1-(4-(2-bromoietóxi)fenil)etanona
Figure img0097
[000313] 1-(4-hidroxifenil)etanona (8,2 g, 60,2 mmols), carbonato de potássio (15,2 g, 110,1 mmols), e KI (1,0 g, 6,0 mmols) em 100 DMF foi agitada por 5 min, em seguida 1,2-dibromoetano (60 ml, 696,2 mmols) foi adicionado. A mistura foi agitada durante a noite, evaporada, diluída com EtAc/Hexano (1:1), lavada com 0,1 M HCl/NaCl (conc), seca em MgSO4, filtrada, evaporada e purificada por cromatografia de SiO2 eluída com EtAc/Hexano (1:3 a 2:3) para obter 12,41 g (85,2%) do composto do título. 1H RMN (CDCl3) 7,87 (ddd, 2H, J = 2,8, 4,9, 9,7 Hz), 6,88 (ddd, 2H, J = 2,8, 4,9, 9,6 Hz), 4,29 (t, 2H, J = 6,2 Hz), 3,59 (t, 2H, J = 6,2 Hz); 13C RMN 196,88, 162,11, 131,15, 130,54, 113,80, 68,06, 29,50, 26,62; MS m/z+ 264,80 (M + Na), 266,80 (M + 2 + Na). (5-hidróxi-1,3-fenileno)dimetanol
Figure img0098
[000314] A uma solução de 100 ml de 2,0 M LiAlH4 em THF a 0oC foi adicionado 5-hidróxi isoftalato de dimetila (12,3 g, 58,5 mmols) em 120 ml de THF em 15 mim sob Ar. A mistura foi agitada a 0oC por 30 min em seguida em temperatura ambiente durante a noite. A mistura foi resfriada bruscamente com 20 ml de metanol a 0oC, e a mistura foi ajustada para pH 5,0 com adição de H3PO4, filtrada por celite, evaporada e cristalizada com éter/hexano para obter 76,6 (85%) do composto do título. 1H RMN (DMSO) 6,68 (s, 1H), 6,61 (s, 2H), 4,69 (s, 4H); MS m/z+ 177,0 (M +Na). 1 -(4-(2-(3,5-bis(hidroximetil)fenóxi)etóxi)fenil)etanona (235)
Figure img0099
[000315] A uma solução em agitação de (5-hidróxi-1,3- fenileno)dimetanol (3,0, 20,0 mmols), carbonato de sódio (2,5 g, 29,0 mmols) e iodeto de sódio (0,45 g, 2,9 mmols) em 60 ml de DMA foi adicionado 1-(4-(2-bromoetóxi)fenil)etanona (5,0, 20,57 mmols). A mistura foi agitada durante a noite, evaporada e purificada em cromatografia de SiO2 eluída com EtAc/Hexano (4:1 a 5:1) para obter 5.41 g (86%) do composto do título. 1H RMN (CD3OD) 7,99 (ddd, 2H, J = 2,8, 4,8, 9,8 Hz), 7,07 (ddd, 2H, J = 2,8, 4,7, 9,8 Hz), 6,94 (s, 1H), 6,89 (s, 2H), 4,58 (s, 4H), 4,42 (dd, 2H, J = 2,2, 6,1 Hz), 4,37 (m, 2H), 2,55 (s, 3H); 13C RMN 199,55, 164,66, 160,59, 144,72, 132,03, 131,74, 119,16, 115,64, 113,11, 68,36, 67,87, 65,20, 26,53; MS m/z+ 339,2 (M +Na). 1 -(4-(2-(3,5-bis(bromometil)fenóxi)etóxi)fenil)etanona (236)
Figure img0100
[000316] 1-(4-(2-(3,5-bis(hidroximetil)fenóxi)etóxi)fenil)etanona (0,216g, 0,68 mmol), tetrabrometo de carbono (0,50g, 1,50 mmol) e PPh3 (0,40g, 1,52 mmol) foi agitada em 18 ml de THF sob Ar durante a noite e filtrada. A solução foi concentrada, purificada em cromatografia de SiO2 eluída com EtAc/Hexano (1:4) e cristalizada com éter/hexano para obter 277 mg (92%) do composto do título. 1H RMN (CDCl3) 7,94 (ddd, 2H, J = 2,7, 4,6, 9,6 Hz), 7,02 (s, 1H), 6,98 (ddd, 2H, J = 2,7, 4,6, 9,6 Hz), 6,91 (d, 2H, J = 1,2 Hz), 4,62 (s, 4H), 4,35 (m, 4H), 2,55 (s, 3H); 13C RMN 197,05, 162,63, 159,14, 139,98, 130,96, 130,85, 122,57, 155,60, 114,52, 66,78, 66,73, 32,88, 26,57; MS m/z+ 462,9 (M +Na), 464,9 (M + 2 + Na). piperidina-2-carboxilato de (R)-metila (238)
Figure img0101
[000317] Ao ácido (R)-Piperidina-2-carboxílico (5,00 g, 38,73) em 150 ml de metanol seco a 0oC foi adicionado cloreto de tionila (5,2 ml, 71,28 mmols) sob Ar. A mistura foi agitada a 0oC por 30 min, em seguida em temperatura ambiente durante a noite, evaporada e cristalizada com EtOH/hexano para obter 4,96 g (92%) do produto do título. 1H RMN (CD3OD) 3,67 (s, 3H), 3,57 (m, 1H), 2,79 (m, 1H), 2,69 (m, 1H), 2,01 (m, 1H), 1,98 (m, 1H), 1,73 (m, 1H), 1,55 – 1,45 (m, 4H); 13C RMN 171,22, 62,50, 51,35, 45,35, 29,52, 28,41, 23,82; MS m/z + 144,0 (M + H). 1-(4-(benzilóxi)-5-metóxi-2-nitrobenzoil)piperidina-2-carboxilato de (R)- metila (239)
Figure img0102
[000318] Ácido 4-(benzoilóxi)-5-metóxi-2-nitrobenzoico (1,70 g, 5,61 mmols), piperidina-2-carboxilato de (R)-metila (1,05 g, 5,84 mmols), EDC (3,90 g, 20,31 mmols) e DIPEA (1,0 ml, 5,75 mmols) foi agitada em 20 ml de DMA durante a noite. A mistura foi evaporada, diluída com DCM, lavada com 1M NaH2PO4/NaCl (conc) e 0,1 M NaHCO3/NaCl (conc) separadamente. A camada de solvente orgânico foi separada e seca em MgSO4, filtrada, concentrada e purificada em cromatografia de SiO2 eluída com EtAc/DCM (1:15) para obter 1,772 g (74%) do produto do título. 1H RMN (CDCl3) 7,69 (s, 1H), 7,40 - 7,38 (m, 2H), 7,35 -7,27 (m, 3H), 6,76 (d, 1H), 5,15 (s, 2H), 3,91 (s, 3H), 3,83 (s, 1H), 3,73 (s, 3H), 3,18 (m, 2H), 1,70 (m 2H), 1,47 (m, 4H); 13C RMN 171,89, 171,33, 155,10, 154,78, 148,32, 135,59, 129,05, 128,74, 127,80, 109,66, 109,58, 109,41, 71,63, 56,92, 52,70, 52,19, 45,70, 39,92, 27,29, 26,35, 21,63; MS m/z+ 451,2 (M + Na). (R)-1-(4-(benzilóxi)-5-metóxi-2-nitrobenzoil)piperidina-2-carbaldeído
Figure img0103
[000319] 1-(4-(benzoilóxi)-5-metóxi-2-nitrobenzoil)piperidina-2- carboxilato de (R)-metila (1,50 g, 3,50 mmols) em 30 ml de 1:1 DCM/benzeno a -78oC foi adicionado 7,5 ml de 1,0 M DIBAL em tolueno sob Ar em 10 min. A mistura foi agitada a -78oC por 1 h e a reação foi resfriada bruscamente com 0,5 ml de metanol. A mistura foi diluída com 150 ml de EtAc e 100 ml de 0,2 M HCl. A camada de solvente orgânico foi separada e e a camada aquosa foi extraída com EtOAc (3 x 80 ml). As camadas orgânicas foram combinadas, secas em MgSO4, filtradas, concentradas e purificadas em cromatografia de SiO2 eluída com EtAc/hexano (3:2) para obter 1,52 g (90%) do produto do título. 1H RMN (CDCI3), 9,60 (s, 1H), 7,70 (s, 1H), 7,65 - 7,28 (m, 5H), 6,78 (m, 1H), 5,16 (s, 2H), 3,92 (s, 3H), 3,22, (m, 1H), 3,01 (m, 1H), 2,20 (m, 1H), 1,84 (m, 1H), 1,65 - 1,40 (m, 4H); 13C RMN 200,24, 171,31, 155,13, 154,78, 148,41, 146,20, 137,57, 135,47, 129,03, 128,73, 127,31, 109,83, 109,41, 71,61, 64,50, 56,96, 45,98, 25,25, 23,42, 18,70; MS m/z+ 421,1 (M + Na). (R,Z)-3-(benziIóxi)-2-metóxi-7,8,9,10-tetra-hidrobenzo[e]pirido[1,2- a][1,4]diazepin-12(6aH)-ona
Figure img0104
[000320] A (R)-1-(4-(benzilóxi)-5-metóxi-2-nitrobenzoil)piperidina-2- carbaldeído (1,0 g, 2,51 mmols) em uma mistura de solução de 25 ml de THF e 15 ml de água foi adicionado Na2S2O4 (3,0 g, 17,25 mmols). A mistura foi agitada por 4 h, diluída com metanol e dioxano, evaporada e coevaporado com dioxano (3 x 60 ml) até secagem. O sólido foi sonicado com uma mistura de CH3OH/CH2Cl2 (1:1, 80 ml), filtrada e evaporada até o sólido. O sólido gerado foi dissolvido em CH3OH (100 ml) e 0,4 ml de HCl (conc) foi adicionado. A mistura foi agitada por 1 h, neutralizada até pH 3,0 com 0,1 M NaHCO3, concentrada, e extraída com CH2Cl2 (4 x 60 ml), As camadas orgânicas foram combinadas, lavadas com 1M NaHCO3/NaCl (conc.), secas em Na2SO4, filtradas, evaporadas e purificadas em cromatografia de SiO2 eluída com EtAc/CH2Cl2 (1:3) para obter 615 mg (70%) do produto do título. 1H RMN (CDCl3), 7,81 (d, 1H, J = 5,7 Hz), 7,38 ~ 7,23 (m, 6H), 6,74 (s, 1H), 5,12 (dd, 2H, J = 2,3, 21,8 Hz), 4,18 (m, 1H), 3,88 (d, 3H), 3,69 (m, 1H), 3,15 (m, 1H), 1,99 (m, 1H), 1,87 (m, 1H), 1,79 ~ 1,65 (m, 4H); 13C RMN 167,76, 163,31, 150,72, 148,48, 140,09, 136,46, 128,87, 128,28, 127,53, 121,77, 111,01, 71,02, 56,41, 49,84, 39,93, 24,76, 23,21, 18,62; MS m/z+ 373,2 (M + Na), 391,2 (M + Na + H2O), 405,3 (M + Na + CH3OH). (R,Z)-3-Hidróxi-2-metóxi-7,8,9,10-tetra-hidrobenzo[e]pirido[1,2- a][1,4]diazepin-12(6aH)-ona (242)
Figure img0105
[000321] A (R,Z)-3-(benzilóxi)-2-metóxi-7,8,9,10-tetra- hidrobenzo[e]pirido-[1,2-a][1,4]diazepin-12(6aH)-ona (241) (215 mg, 0,614 mmol) em 25 ml de CH2Cl2 a 0oC foi adicionado 25 ml de CH2SO3H. A mistura foi agitada a 0oC por 10 min e em seguida em temperatura ambiente por 2 h, diluída com CH2Cl2, neutralizada com 1,0 M NaHCO3 frio, extraída com CH2Cl2, seca em Na2SO4, filtrada, evaporada e purificada em cromatografia de SiO2 eluída com CH3OH/CH2Cl2 (1:15) para obter 122 mg (70%) do produto do título. 1H RMN (CDCl3), 7,75 (d, 1H, J = 5,7 Hz), 7,28 (s, 1H), 6,70 (s, 1H), 4,08 (m, 1H), 3,83 (d, 3H), 3,61 (m, 1H), 3,08 (m, 1H), 1,91 (m, 1H), 1,81 (m, 1H), 1,71 ~ 1,55 (m, 4H); 13C RMN 167,81, 163,46, 148,53, 145,71, 140,84, 121,23, 111,89, 111,39, 56,45, 49,83, 39,96, 24,71, 23,22, 18,60; MS m/z+ 283,7 (M + Na). (5Z,5'Z,6aR,6a'R)-3,3'-(5-(2-(4-Acetilfenóxi)etóxi)-1,3- fenileno)bis(metileno)-bis(óxi)bis(2-metóxi-7,8,9,10-tetra- hidrobenzo[e]pirido[1,2-a][1,4]diazepin-12(6aH)-ona) (243)
Figure img0106
[000322] A uma solução em agitação de (R,Z)-3-hidróxi-2-metóxi- 7,8,9,10-tetra-hidrobenzo[e]pirido[1,2-a][1,4]diazepin-12(6aH)-ona (242) (42 mg, 0,16 mmol), Cs2CO3 (100 mg, 0,307 mmol), KI (3,2 mg, 0,018 mmol) em 5 ml de acetona foi adicionado 1-(4-(2-(3,5- bis(bromometil)fenóxi)etóxi)fenil)etanona (236) (36 mg, 0,081 mmol). A mistura foi agitada durante a noite, evaporada e purificada em HPLC preparativo coluna C-18 (coluna Φ10 mm * 200 mm, taxa de fluxo 9 mL/min e um sistema de gradiente de solvente iniciando em 80:20 solvente A:B no tempo 0-5 min to 50:50 A:B em 15 min em seguida a 30:70 A:B em 25 min até 10:90 A:B em 30 min. Solvente A - água, solvente B - dioxano) e liofilizada para obter um sólido branco 39,1 mg (61%) do composto do título. 1H RMN (DMF-d7), 8,30 (m, 2H), 7,75 (d, 2H, J = 5,7 Hz), 7,30 (s, 2H), 7,01 (m, 2H), 6,71 (s, 2H), 6,68 (s, 1H), 6,63 (s, 2H), 5,21 (s, 4H), 4,43 (m, 2H), 4,32 (m, 2H), 4,08 (m, 2H), 3,83 (s, 6H), 3,61 (m, 2H), 3,08 (m, 2H), 2,56 (s, 3H), 1,91 (m, 2H), 1,81 (m, 2H), 1,71 ~ 1,55 (m, 8H); MS m/z+ 823,2 (M + Na), 839,3 (M + K), 857,3 (M + K+ H2O); MS m/z-799,2 (M -H). 2-(4-(2,5-dioxo-2,5-di-hidro-1H-pirrol-1-il)butanoil)hidrazinacarboxilato de terc-butila (245)
Figure img0107
[000323] Ácido 4-Maleimidobutírico (245 mg, 1,33 mmol), hidrazinacarboxilato de terc-butila (201 mg, 1,52 mmol) e EDC (400 mg, 2,08 mmols) em 5 ml de CH2Cl2, foram agitados durante a noite sob Ar, lavados com 1 M NaH2PO4,/NaCl (conc), seca em MgSO4, filtrada, evaporada e purificada em cromatografia de SiO2 eluída com MeOH/DCM (1:25) para obter 335 mg (85%) do composto do título. 1H RMN (CDCl3), 7,83 (br, 1H), 6,65 (s, 2H), 6,50 (br, 1H), 3,58 (t, 2H, J = 6,3 Hz), 2,15 (t, 2H, J = 7,0 Hz), 1,90 (dt, 2H, J = 6,8, 13,4 Hz), 1,40 (s, 9H); 13C RMN 171,30, 155,61, 134,41, 82,00, 37,13, 31,38, 28,36, 24,95; MS m/z+ 320,2 (M + Na). Sal de ácido 4-(2,5-Dioxo-2,5-di-hidro-1H-pirrol-1-il)butano-hidrazida trifuoroacético (246)
Figure img0108
[000324] Ao 2-(4-(2,5-dioxo-2,5-di-hidro-1H-pirrol-1-il)butanoil)- hidrazinacarboxilato de terc-butila (245) (200 mg, 0,673 mmol) em 8 ml de DCM foi adicionado 2 ml de TFA. A mistura foi agitada por 45 min, diluída com etanol/tolueno (8 ml, 1:1), evaporada e coevaporado com etanol/tolueno (3 x 10 ml), cristalizada com etanol/EtAc/Hexano, filtrada, e seco sob vácuo para obter 188 mg (90%) do composto do título. 1H RMN (CD3OD) 6,72 (s, 2H), 5,39 (s, 0,6H), 3,47 (t, 2H, J = 6,6 Hz), 2,20 (m, 2H), 1,85 (m, 2H); 13C RMN 172,72, 135,56, 54,93, 39,20, 37,99, 25,20; MS m/z+ 197,9 (M + H).(E)-N'-(1-(4-(2-(3,5-bis(((S,Z)-2-metóxi-12-oxo-6a,7,8,9,10,12-hexa- hidrobenzo[e]pirido[1,2-a][1,4]diazepin-3-ilóxi)metil)fenóxi) etóxi)fenil)etilideno)-4-(2,5-dioxo-2,5-di-hidro-1H-pirrol-1-il)butano- hidrazida (247)
Figure img0109
[000325] Sal de ácido 4-(2,5-Dioxo-2,5-di-hidro-1H-pirrol-1-il)butano- hidrazida trifuoroacético (246) (3 mg, 0,0096 mmol), (5Z,5'Z,6aR,6a'R)- 3,3'-(5-(2-(4-acetiloxifenóxi)etóxi)-1,3- fenileno)bis(metileno)bis(óxi)bis(2-metóxi-7,8,9,10-tetra- hidrobenzo[e]pirido[1,2-a][1,4]diazepin-12(6aH)-ona) (243) (7,5 mg, 0,0093 mmol) e 50 mg de peneiras moleculares de 4 Â foi agitada em 2 ml de 5% HAc seco em DCM (um dia anterior seco por peneiras moleculares de 4 Â) por 2 h, neutralizado com 0,5 ml de DIPEA, evaporada e purificada em HPLC preparativo coluna C-18 (coluna Φ10 mm x 200 mm, taxa de fluxo 9 mL/min e um sistema de gradiente de solvente indo de 80:20 solvente A:B no tempo 0-5 min a 50:50 A:B em 15 min em seguida a 30:70 A:B em 25 min até 10:90 A:B a 30 min. Solvente A - água, solvente B - metanol/dioxano (2:1)) e liofilizada para obter 5,6 mg de um sólido branco (61%) do composto do título. MS m/z+ 1066,3 (M + 2CH3OH + Na).
Exemplo 13 Preparação do conjugado huN901-IGN-07:
[000326] O anticorpo huN901 que se liga ao antígeno CD56 foi selecionado para conjugação de derivados de IGN. Uma solução do anticorpo em uma concentração de 3 mg/mL em um tampão aquoso contendo ácido N-(2-hidroxietil)-piperazina-N'-2-etanossulfônico (HEPES) 0,05 M e ácido etilenodiaminatetra-acético (EDTA) 2 mM, pH 8 foi tratado com um excesso molar de 20 vezes de uma solução de éster IGN-07 NHS em dimetilacetamida (DMA) de modo que a concentração final de DMA no tampão fosse 10% v/v. A mistura de reação foi agitada em temperatura ambiente durante 120 min e depois carregada em uma coluna de filtração em gel com Sephadex G25 (Coluna de troca iônica HiPrep® 26/10 GE n° 17-5087-01) que havia sido previamente equilibrada em tampão aquoso contendo 0,01 M de citrato de sódio, 0,135 M de cloreto de sódio e pH 5,5. As frações contendo o anticorpo conjugado são coletadas e agrupadas para gerar o produto. A amostra agrupada foi dialisada durante a noite utilizando o mesmo tampão de eluição (0,01 M de citrato de sódio, 0,135M de cloreto de sódio, pH 5,5) para purificar ainda mais o produto.
[000327] O conjugado final foi analisado por espectrofotometria utilizando os coeficientes de extinção que foram determinados para IGN-07 (ε330 nm =15231 M-1 cm-1 e ε280 nm = 26864 M-1 cm-1) e para o anticorpo huN901 (ε280 nm = 225,000 M-1cm-1). Uma média de 3,1 moléculas de IGN por molécula de anticorpo estava ligada.
Figure img0110
Preparação da solução estoque de IGN-10 (composto 51)
[000328] Uma solução de IGN-10 fresca foi preparada para um estoque de 0,004 M baseado em um peso molecular de 975,14 g/mol de dimetilacetamida (DMA). A solução de estoque foi analisada por espectrofotometria utilizando o coeficiente de extinção de referência determinado a 330 nm ( ε330nm = 15,500 M-1 cm-1).
Exemplo 14 Preparação do conjugado muB38.1-IGN-10
[000329] O anticorpo muB38.1 que se liga ao antígeno EpCAM foi selecionado para a conjugação com derivados de IGN através de uma ligação dissulfeto. Uma solução de anticorpo muB38.1 a uma concentração de 2,5 mg/mL em tampão aquoso contendo salina tamponada com fosfato (PBS) pH 7,4 foi tratada com 120 excessos molares de tiolactona de 1-homocisteína por 12 horas a 37°C. A mistura de reação foi carregada em uma coluna de filtração com gel Sephadex G25 (Coluna de troca iônica HiPrep® 26/10 GE n° 17-5087-01) que foi previamente equilibrada em PBS pH 7,4. As frações contendo anticorpos são coletadas e agrupadas e analisados para a verificação da presença do conteúdo de tiol reativo usando o ensaio de Ellman. O anticorpo modificado foi então tratado com um excesso molar de 4 vezes IGN-10 (em DMA) por tiol livre e deixou-se reagir em temperatura ambiente por 8 horas. A mistura de reação foi carregada em uma coluna de filtração com gel Sephadex G25 (Coluna de troca iônica HiPrep® 26/10 GE n° 17-5087- 01) que havia sido previamente equilibrada em tampão aquoso contendo 0,01 M de citrato de sódio, 0,135 M de cloreto de sódio , pH 5,5 ). As frações contendo anticorpo são coletadas e agrupadas para aumentar o rendimento do produto. A amostra agrupada foi dialisada durante a noite utilizando o mesmo tampão de eluição (0,01 M de citrato de sódio, 0,135M de cloreto de sódio, pH 5,5) para purificar ainda mais o produto.
[000330] O conjugado final foi analisado por espectrofotometria utilizando os coeficientes de extinção que foram determinadas para IGN- 10 (ε330nm = 15,500 M-1 cm-1 e ε280nm = 26,864 M-1 cm-1) e anticorpos muB38.1 (ε280nm= 21,5525 M-1 cm-1). Uma média de 0,7 molécula de IGN por molécula de anticorpo estava ligada.
Figure img0111
Exemplo 15 Ensaio de sonda de DNA para medir a ligação do dímero IGN e alquilação a DNA (dsDNA) de fita dupla:
[000331] Condições de reação: dsDNA (concentração final 25 μM) em 100 mM TRIS, 1 mM EDTA, pH 8 foi misturado com 3,7 equivalentes molar de IGN-01 (composto 18), IGN-02 (composto 19), ou IGN-09 (composto 15) dissolvido em acetonitrila (concentração final de acetonitrila <2% por volume). A reação foi incubada a 15 °C (abaixo de TM do dsDNA) e alíquotas de 10 μl são injetadas em HPLC de fase reversa em vários momentos após a mistura.
[000332] Condições de HPLC: coluna Waters Xbridge C8 2,1 x 50 mm, Tampão A: 100 mM hexafluoroisopropanol, 16,3 mM trietilamina, em água, Tampão B: Metanol; 98% A ■> 100% B por 32 min, fluxo 0,25 ml/min, coluna aquecida a 60 °C, detecção a 260 nm. As áreas sob a curva (AUC) para o pico da sonda de DNA e o pico do aduto IGN/DNA resultante são usados para determinar a % de cruzamento de ligação em cada momento de incubação.
[000333] Recozimento de DNA: DNA de fita simples (Invitrogen) foi recozido em uma dsDNA usando um termociclador Peltier (PTC-200, MJ Research). 1 mM DNA em 100 mM TRIS, 1 mM EDTA pH 8 foi aquecido a 80 °C e em seguida gradualmente resfriado até 4 °C por 90 min em 15 etapas graduais. O dsDNA resultante foi mantido a 4 °C até ser usado no ensaio. IGN-01, IGN-02, e IGN-09 não formaram adutos covalentes com DNA de fita simples (ssDNA) em experimentos controle. Exemplo 16
Figure img0112
4-metilbenzenossulfonato de 2-(2-(2-metoxietóxi)etóxi)etila:
[000334] A uma solução em agitação de 2-(2-(2- metoxietóxi)etóxi)etanol (1,64 g, 10 mmols) em diclorometano anidro (30 mL) foi adicionado trietilamina (2,53 g, 25 mmols), cloreto de tosila (3,81 g, 20 mmols) e DMAP (0,061 g, 0,5 mmol) subsequentemente em temperatura ambiente. A mistura continuou a ser agitada durante a noite e foi trabalhada por diluição com acetato de etila e filtrada para remover o sólido de cloridrato de trietilamina. O sólido foi lavado com acetato de etila e o filtrado foi evaporado. O resíduo foi diluído com acetato de etila e filtrado para remover o precipitado adicional. O filtrado foi evaporado para gerar o produto bruto como um líquido. Foi purificado por cromatografia de sílica-gel (diclorometano/metanol) para gerar composto o 249a como um óleo (3,16 g, rendimento = 99%). 1H RMN (400 Hz, CDCl3): δ 7,81 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 7,35 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 4,17 (t, J = 3,2 Hz, 2H), 3,70 (t, J = 4,8 Hz, 2H) , 3,64-3,60 (m, 6H), 3,54 (t, J = 4,8 Hz, 2H), 3,38 (s, 3H), 2,46 (s, 3H); 13C RMN (400 Hz, CDCl3): δ 144,7, 133,0, 129,8, 127,9, 71,9, 70,7, 70,52, 70,50, 69,2, 68,6, 59,0, 21,6; MS (m/z): encontrada 341,1 (M + Na)+.
Figure img0113
(5-(2-(2-(2-metoxietóxi)etóxi)etilamino)-1,3-fenileno)dimetanol:
[000335] A uma mistura de tosilato 249a (1,85 g, 5,81 mmols) e composto anilina 26 (1,78g, 11,6 mmols) em DMF anidro (9 mL) foi adicionado carbonato de potássio anidro (1,61 g, 11,6 mmols). A mistura foi aquecida a 85°C e agitada nesta temperatura durante a noite. A solução foi resfriada até temperatura ambiente e diluída com diclorometano. Foi filtrada por celite e o sólido foi lavado com diclorometano. O filtrado foi evaporado e o resíduo foi diluído com diclorometano e filtrado novamente para remover o sólido adicional. O filtrado foi evaporado e o resíduo foi purificado por cromatografia de sílica-gel (diclorometano/metanol) para gerar o composto 249b como um óleo levemente amarelado (835 mg, rendimento = 48%). 1H RMN (400 Hz, CDCl3): δ 6,60 (s, 1H), 6,47 (s, 2H), 4,48 (s, 4H), 4,31 (bs, 1H), 3,66-3,59 (m, 8H), 3,55-3,52 (m, 2H), 3,36 (s, 3H), 3,24 (t, J = 4,8 Hz, 2H); 13C RMN (400 Hz, CDCl3): δ 148,5, 142,4, 114,6, 110,7, 71,8, 70,4, 70,3, 70,1, 69,4, 64,9, 58,9, 43,5; MS (m/z): encontrada 322,2 (M + Na)+.
Figure img0114
Composto 249c (ligante IGN-14):
[000336] A uma solução do composto 249b (319 mg, 1,07 mmol) e 4- bromobutirato de metila (248 mg, 1,37 mmol) em acetonitrila anidra (5 mL) foi adicionado carbonato de potássio anidro (177 mg, 1,28 mmol). A mistura foi agitada e aquecida sob refluxo (86°C banho de óleo) durante a noite. Foi resfriada temperatura ambiente e diluída com diclorometano. A mistura foi filtrada por celite e o filtrado foi evaporado. O resíduo foi purificado por cromatografia de sílica-gel (diclorometano/metanol) para gerar composto 249c (IGN-14 ligante) como óleo incolor (246 mg, rendimento = 58%). 1H RMN (400 Hz, CDCl3): δ 6,69 (s, 2H), 6,66 (s, 1H), 4,64 (s, 4H), 3,71 (s, 3H), 3,64- 3,62 (m, 8H), 3,57-3,54 (m, 4H), 3,40-3,38 (m, 5H), 2,38 (t, J = 7,2 Hz, 2H), 1,93 (p, J = 7,2 Hz, 2H); MS (m/z): encontrada 422,3 (M + Na)+.
Figure img0115
Composto 249d (IGN-14-OMe):
[000337] A uma solução em agitação do composto 249c (120 mg, 0,3 mmol) em diclorometano anidro (3 mL) foi adicionado trietilamina (146 μl, 1,05 mmol). A mistura foi resfriada até -10°C e cloreto de metanossulfonila (70 μl, 0,9 mmol) foi adicionado lentamente em 15 minutos. A solução continuou a ser agitada entre -10°C a -5°C por 60 minutos e resfriada bruscamente pela adução de gelo/água. Foi diluída com acetato de etila e lavada com água fria. A camada orgânica foi seca em sulfato de sódio anidro, filtrada, evaporada e submetida a alto vácuo para gerar o mesilato como óleo incolor. O mesilato foi transferido a um frasco de fundo redondo de 10 mL com acetato de etila, evaporado e submetido a alto vácuo. O composto 8 (221 mg, 0,75 mmol) foi adicionado seguido pela adição de DMF anidro (2 mL) e carbonato de potássio anidro (207 mg, 1,5 mmol). A mistura foi agitada em temperatura ambiente durante a noite. Foi diluída com diclorometano e lavada com salmoura. A camada orgânica foi seca em sulfato de sódio anidro, filtrada e evaporada. O resíduo foi purificado por HPLC de fase reversa preparativa (Coluna C18, eluída com CH3CN/H2O) para gerar o composto 249d (IGN-14-OMe) como um sólido ligeiramente amarelado (98 mg, rendimento = 34%). 1H RMN (400 Hz, CDCl3): δ 8,29 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 7,86 (d, J = 4,4 Hz, 2H), 7,58 (s, 2H), 7,31-7,26 (m, 4H), 7,12 (t, J = 8,0 Hz, 2H), 6,88 (s, 2H), 6,83 (s, 1H), 6,76 (s, 2H), 5,18 (dd, J1 = 23,2 Hz, J2 = 12,4 Hz, 4H), 4,49 (dt, J1 = 10,8 Hz, J2 = 4,4 Hz, 2H), 3,99 (s, 6H), 3,73-3,52 (m, 19H), 3,40-3,37 (m, 5H), 2,35 (t, J = 7,2 Hz, 2H), 1,90 (p, J = 7,2 Hz, 2H); 13C RMN (400 Hz, CDCl3): δ 173,7, 164,9, 163,2, 151,1, 148,5, 148,4, 142,1, 140,2, 137,8, 129,7, 128,2, 124,9, 120,7, 117,0, 113,8, 112,0, 111,4, 110,4, 72,0, 71,3, 70,7, 70,6, 68,6, 59,1, 56,3, 55,0, 51,7, 50,7, 32,7, 31,3, 22,4; MS (m/z): encontrada 974,6 (M + Na)+, 992,7 (M + H2O + Na)+, 1010,7 (M + 2H2O + Na)+, 950,3 (M - H)-, 1022,3 (M + 4H2O - H)-.
Figure img0116
Composto 249f (IGN-14-NHS):
[000338] A uma solução de composto 249d (105 mg, 0,11 mmol) em 1,2 dicloroetano anidro (2 mL) foi adicionado hidróxido de trimetilestanho (299 mg, 1,65 mmol). A mistura foi aquecida até 80°C e agitada durante a noite. Foi resfriada até temperatura ambiente, diluída com diclorometano e lavada com solução mista de cloreto de sódio saturado e ácido clorídrico 5% (~1 mL), em seguida, salmoura. A camada orgânica foi seca em sulfato de sódio anidro, filtrada e evaporada. O resíduo passou por uma coluna curta de sílica-gel e eluído com diclorometano/metanol para remover o hidróxido de trimetilestanho extra. As frações do produto foram evaporadas e submetidas a alto vácuo para gerar o ácido 249e como um sólido amarelado (102 mg, rendimento = 99%). MS (m/z): encontrada 936,1 (M -H)-, 960,3 (M + Na)+. O composto 249e foi então dissolvido em diclorometano anidro (1 mL). N-hidroxissuccinimida (NHS, 37,5 mg, 0,326 mmol) e cloridrato de N-(3-dimetilaminopropil)-N'-etilcarbodi- imida (EDC, 62,5 mg, 0,326 mmol) foi adicionado subsequentemente. A mistura foi agitada em temperatura ambiente durante a noite e diluída com diclorometano, lavada com salmoura e seca em sulfato de sódio anidro. Foi filtrada, evaporada e o resíduo foi purificado por HPLC de fase reversa preparativa (Coluna C18, eluído com acetonitrila/água). As frações do produto foram combinadas e extraídas com diclorometano. As camadas orgânicas foram secas em sulfato de sódio anidro, filtradas, evaporadas e submetidas a alto vácuo para gerar o composto 249f (IGN-14-NHS) como um sólido ligeiramente amarelado (57,8 mg, rendimento = 51%). 1H RMN (400 Hz, CDCl3): δ 8,28 (d, J = 7,6 Hz, 2H), 7,86 (d, J = 4,4 Hz, 2H), 7,58 (s, 2H), 7,31-7,27 (m, 4H), 7,12 (t, J = 7,6 Hz, 2H), 6,87 (s, 2H), 6,81 (s, 1H), 6,74 (s, 2H), 5,23 (dd, J1 = 26,4 Hz, J2 = 12,4 Hz, 4H), 4,49 (dt, J1 = 10,8 Hz, J2 = 4,4 Hz, 2H), 4,00 (s, 6H), 3,73-3,47 (m, 18H), 3,37 (s, 3H), 2,79-2,74 (m, 4H), 2,59 (t, J = 7,2 Hz, 2H), 1,97 (p, J = 7,2 Hz, 2H); MS (m/z): encontrada 1057,4 (M + Na)+. Exemplo 17
Figure img0117
Compostos 250a (IGN-16-OMe) e 250b (IGN-18-OMe):
[000339] A uma solução em agitação do composto 34 (111 mg, 0,135 mmol) em etanol absoluto (1,0 mL) e diclorometano anidro (0,5 mL) foi adicionado boro-hidreto de sódio (1,0 mg, 0,027 mmol) a 0°C. Após 30 minutos, o banho de gelo/água foi removido e uma mistura de reação continuou a ser agitada em temperatura ambiente por 3 horas. A reação foi resfriada bruscamente pela adição de cloreto de amônio saturado e diluída com diclorometano. A mistura foi separada e uma camada orgânica foi lavada com salmoura, seca em sulfato de sódio anidro e filtrada. Os solventes foram removidos sob pressão reduzida e o resíduo foi purificado por HPLC de fase reversa preparativa (Coluna C18, eluído com acetonitrila/água) para gerar os compostos 250a (IGN-16-OMe, 6,6 mg) e 250b (8,0 mg) como um sólido branco. 250a: MS (m/z), encontrada 845,3 (M + Na)+, 863,3 (M + H2O + Na)+, 250b: 1H RMN (400 Hz, CDCl3), δ 8,34 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 7,49 (s, 2H), 7,27-7,03 (m, 6H), 6,89-6,87 (m, 3H), 6,05 (s, 2H), 4,96 (dd, J1 = 20,8 Hz, J2 = 12,8 Hz, 4H), 4,40-4,34 (m, 2H), 3,94-3,91 (m, 2H), 3,87 (s, 6H), 3,67 (s, 3H), 3,53-3,42 (m, 6H), 2,78 (dd, J1 = 16,8 Hz, J2 = 4,0 Hz, 2H), 2,38-2,37 (m, 2H), 1,79-1,77 (m, 4H); MS (m/z), encontrada 847,3 (M + Na)+. Exemplo 18
Figure img0118
Composto 251a:
[000340] A uma solução em agitação do composto 5 (840 mg, 1,82 mmol) em acetato de etila (10 mL) foi adicionado paládio em carvão (10%, 193 mg, 0,182 mmol). O frasco foi submetido a vácuo rapidamente e substituído com H2 em um balão. A mistura continuou a ser hidrogenada durante a noite e filtrada por celite. O sólido foi lavado com metanol e o filtrado foi tratado com ácido clorídrico 5% (0,1 mL). A solução foi separada sob pressão reduzida e o resíduo foi purificado por cromatografia de sílica-gel (diclorometano/metanol) para gerar composto 251a como um sólido branco (512 mg, rendimento = 91%). 1H RMN (400 Hz, CDCl3), δ 8,21 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 8,09 (bs, NH), 7,53 (s, 1H), 7,31-7,25 (m, 2H), 7,12 (t, J = 7,6 Hz, 1H), 6,61 (s, 1H), 6,22 (bs, 1H), 4,73 (dd, J1 = 10,4 Hz, J2 = 2,8 Hz, 1H), 4,07 (dd, J1 = 16,4 Hz, J2 = 2,4 Hz, 1H), 3,98 (s, 3H), 3,34 (dd, J1 = 16,4 Hz, J2 = 10,4 Hz, 1H); MS (m/z), encontrada 333,1 (M + Na)+, 308,9 (M -H)-.
Figure img0119
Composto 251b (IGN-17-OMe):
[000341] A uma solução do composto 38 (0,165 mmol, preparado a partir de 44 mg do composto 30 após o procedimento descrito no exemplo 6) e 251a (128 mg, 0,413 mmol) em anidro DMF (1,5 mL) foi adicionado carbonato de potássio anidro (114 mg, 0,825 mmol). A mistura foi agitada em temperatura ambiente durante a noite e diluída com diclorometano, lavada com salmoura e seca em sulfato de sódio anidro e sulfato de magnésio. Foi filtrada, evaporada e parte do resíduo foi purificado por HPLC de fase reversa preparativa (Coluna C18, eluído com acetonitrila/água) para gerar 1,9 mg de composto 251b como um sólido branco. O resto do resíduo foi purificado por cromatografia de camada fina preparativa (diclorometano/metanol, 12:1) para gerar 36,8 mg de produto como um sólido branco. Um total de 38,7 mg do composto 251b (IGN-17-OMe) foi isolado (rendimento = 28%). 1H RMN (400 Hz, CDCl3): δ 8,61 (s, 2H), 8,15 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 7,48 (s, 2H), 7,25 (d, J = 7,6 Hz, 2H), 7,20 (t, J = 7,6 Hz, 2H), 7,07 (t, J = 7,6 Hz, 2H), 6,73 (s, 1H), 6,69 (s, 2H), 6,58 (s, 2H), 5,02 (dd, J1 = 17,6 Hz, J2 = 13,2 Hz, 4H), 4,66 (dd, J1 = 10,4 Hz, J2 = 2,8 Hz, 2H), 4,00 (dd, J1 = 16,4 Hz, J2 = 2,4 Hz, 2H), 3,90 (s, 6H), 3,68 (s, 3H), 3,39-3,23 (m, 4H), 2,89 (s, 3H), 2,44-2,30 (m, 2H), 1,91-1,92 (m, 2H); 13C RMN (400 Hz, CDCl3): δ 174,5, 169,1, 164,2, 151,6, 149,6, 146,9, 141,2, 137,3, 130,6, 129,4, 127,5, 124,9, 124,8, 119,6, 117,1, 114,2, 112,5, 110,9, 106,0, 71,4, 58,0, 56,2, 51,9, 51,7, 38,3, 31,1, 28,2, 21,8; MS (m/z), encontrada 874,3 (M + Na)+, 850,2 (M -H)-. Exemplo 19
Figure img0120
Composto 252a:
[000342] A mistura de 1,3-dibromoacetona (0,863 g, pureza 75%, 3,0 mmols) e (trifenilfosforanilideno)acetato de metila (1,505 g, 4,5 mmols) em THF anidro (15 mL) foi aquecido sob refluxo por 4,5 horas. A solução foi resfriada até temperatura ambiente e evaporada. O resíduo foi purificado por cromatografia de sílica-gel (hexanos/acetato de etila) para gerar composto 252a como um líquido incolor (485 mg, rendimento = 60%). 1H RMN (400 Hz, CDCl3): δ 6,06 (s, 1H), 4,76 (s, 2H), 4,19 (s, 2H), 3,79 (s, 3H); 13C RMN (400 Hz, CDCl3): δ 165,1, 150,4, 121,3, 51,8, 33,6, 25,5.
Figure img0121
Composto 252b (IGN-19-OMe):
[000343] A mistura do composto 252a (32 mg, 0,118 mmol), o monômero 8 (87 mg, 0,294 mmol) e carbonato de potássio anidro (49 mg, 0,353 mmol) em DMF anidro (1 mL) foram agitados em temperatura ambiente durante a noite. Foi diluído com diclorometano, lavado com salmoura e seco em sulfato de sódio anidro. A solução foi filtrada, evaporada e purificada por cromatografia de sílica-gel (diclorometano/metanol) para gerar 105 mg do composto 252b misturado com produtos colaterais como espuma amarelada. Parte dos produtos foram ainda purificados por HPLC de fase reversa preparativa (Coluna C18, eluído com acetonitrila/água) para gerar 10 mg do composto 252b (IGN-19-OMe) como um sólido branco. MS (m/z): encontrada 721,2 (M + Na)+, 739,2 (M + H2O + Na)+, 757,2 (M + 2H2O + Na)+, 697,1 (M - H)-, 769,1 (M + 4H2O - H)-. Exemplo 20
Figure img0122
Composto 253a:
[000344] A uma solução do 2-(metilditio)-isobutiraldeído (690 mg, 4,59 mmol) em etanol absoluto (15 mL) foi adicionado metilamina (629 μl, 33% em peso, 5,05 mmols). A mistura foi agitada em temperatura ambiente por quatro horas e resfriada a 0°C seguida pela adição de boro-hidreto de sódio (174 mg, 4,59 mmols). Após uma hora, a reação foi resfriada bruscamente com algumas gotas de ácido clorídrico 5% frio e então basificadas com bicarbonato de sódio saturado. A mistura foi diluída com diclorometano e lavada com salmoura. A camada orgânica foi seca em sulfato de sódio anidro, filtrada e evaporada sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia de sílica- gel (0,2% trietilamina em diclorometano/metanol) para gerar o composto volátil 253a como um líquido amarelado (491 mg, rendimento = 65%). 1H RMN (400 Hz, CDCl3): δ 2,61 (s, 2H), 2,45 (s, 3H), 2,39 (s, 3H), 1,32 (s, 6H), 1,20 (s, NH); 13C RMN (400 Hz, CDCl3): δ 61,2, 51,7, 37,2, 26,5, 25,3; MS (m/z): encontrada 166,0 (M + H)+.
Figure img0123
Composto 253b:
[000345] A mistura do composto 249c (117 mg, 0,293 mmol) e hidróxido de trimetilestanho (794 mg, 4,39 mmols) em 1,2-dicloroetano anidro (1,5 mL) foi aquecida a 80°C e agitada durante a noite. Foi resfriada até temperatura ambiente, diluída com diclorometano e lavada com solução mista de cloreto de sódio saturado e ácido clorídrico 5% (~1 mL), em seguida salmoura. A camada orgânica foi seca em sulfato de sódio anidro, filtrada e evaporada. O resíduo foi purificado por cromatografia de sílica-gel (diclorometano/metanol) para gerar o ácido 253b como um óleo incolor (93,9 mg, rendimento = 99%). 1H RMN (400 Hz, CDCl3): δ 6,62 (s, 2H), 6,57 (s, 1H), 4,50 (s, 4H), 3,63-3,54 (m, 8H), 3,53-3,46 (m, 4H), 3,36-3,31 (m, 5H), 2,29 (t, J = 6,8 Hz, 2H), 1,83 (p, J = 6,8 Hz, 2H); 13C RMN (400 Hz, CDCl3): δ 177,0, 148,2, 142,4, 113,8, 110,1, 71,9, 70,7, 70,6, 70,4, 68,8, 65,2, 59,0, 50,8, 50,7, 31,4, 22,3; MS (m/z): encontrada 384,2 (M -H)-, 408,4 (M + Na)+.
Figure img0124
Composto 253c:
[000346] A uma solução da amina 253a (44,3 mg, 0,268 mmol) e carboxílico ácido 253b (93,3, 0,244 mmol) em diclorometano anidro (1,5 mL) foram adicionados N-hidroxissuccinimida (NHS, 70,1 mg, 0,365 mmol) e DMAP (5,95 mg, 0,049 mmol). A mistura foi agitada em temperatura ambiente durante a noite e diluída com diclorometano, lavada com cloreto de amônio saturado e salmoura, seca em sulfato de sódio anidro, filtrada e evaporada. O resíduo foi purificado por cromatografia de sílica-gel (diclorometano/metanol) para gerar composto 253c como óleo incolor (69,1 mg, rendimento = 53%). 1H RMN (400 Hz, CDCl3): δ 6,71 (s, 2H), 6,64 (s, 1H), 4,57 (s, 4H), 3,63- 3,59 (m, 8H + 2OH), 3,54-3,51 (m, 4H), 3,38-3,34 (m, 5H), 3,08 (s, 2,35H), 3,00 (s, 0,65H), 2,86 (bs, 2H), 2,43 (s, 3H), 2,34 (t, J = 6,8 Hz, 2H), 1,95-1,88 (m, 2H), 1,36 (s, 1,3H), 1,31 (s, 4,7H); 13C RMN (400 Hz, CDCl3): δ 173,7, 148,5, 142,7, 113,2, 109,8, 72,0, 70,8, 70,7, 70,6, 68,9, 65,6, 59,1, 56,5, 53,0, 52,2, 51,0, 50,8, 38,8, 30,6, 26,6, 25,6, 22,3; MS (m/z): encontrada 555,5 (M + Na)+.
Figure img0125
Composto 253d:
[000347] A uma solução em agitação do composto 253c (69,1 mg, 0,13 mmol) em diclorometano anidro (1,5 mL) foi adicionado trietilamina (63 μl, 0,454 mmol). A mistura foi resfriada até -10°C e cloreto de metanossulfonila (30 μl, 0,389 mmol) foi adicionado lentamente em 15 minutos. A solução continuou a ser agitada entre - 10°C a -5°C por 60 minutos e resfriada bruscamente pela adição de gelo/água. Foi diluída com acetato de etila e lavada com água fria. A camada orgânica foi seca em sulfato de sódio anidro, filtrada, evaporada e submetida a alto vácuo para gerar o mesilato como óleo incolor. O mesilato foi transferido a um frasco de fundo redondo de 10 mL com acetato de etila, evaporado e submetido a alto vácuo. Composto 8 (99 mg, 0,338 mmol) foi adicionado seguido pela adição de DMF anidro (1 mL) e carbonato de potássio anidro (90 mg, 0,65 mmol). A mistura foi agitada em temperatura ambiente durante a noite. Foi diluída com diclorometano e lavada com salmoura. A camada orgânica foi seca em sulfato de sódio anidro, filtrada e evaporada. O resíduo foi purificado por cromatografia de sílica-gel (diclorometano/metanol) para gerar 150 mg de espuma amarelada, que foi ainda purificada por HPLC de fase reversa preparativa (Coluna C18, eluído com CH3CN/H2O) para gerar composto 253d como um sólido ligeiramente amarelado (50,7 mg, rendimento = 36%), MS (m/z): encontrada 1107,7 (M + Na)+, 1125,7 (M + H2O + Na)+, 1143,7 (M + 2H2O + Na)+, 1083,4 (M - H)-, 1155,5 (M + 4H2O - H)-.
Figure img0126
Legenda: buffer - tampão Composto 253e:
[000348] A um frasco pequeno contendo cloridrato de tris(2- carboxietil)fosfino (TCEP, 19,1 mg, 0,067 mmol) foram adicionadas algumas gotas de água deionizada. Bicarbonato de sódio saturado foi adicionado, sob gotejamento, até o pH ser cerca de 7 indicado por um papel de teste de pH. Foi então diluída com tampão fosfato pH 6,5 (0,4 mL) para gerar uma solução fresca de TCEP. A uma solução em agitação do composto 253d (24,1 mg, 0,022 mmol) em metanol (3 mL) e acetonitrila (1 mL) foi adicionada a solução TCEP e agitada em temperatura ambiente por 1,5 hora. Foi diluída com diclorometano e lavada com salmoura, seca em sulfato de sódio anidro, filtrada e evaporada para gerar o tiol como um sólido amarelado (21,9 mg) que foi diretamente usado para a etapa seguinte (o tiol não é capaz de ser purificado devido à agregação). A uma solução do tiol (21,9 mg, 0,021 mmol) em diclorometano anidro (0,1 mL) e metanol (0,4 mL) foi adicionado ácido 4-(2-piridilditio)butanoico (24,2 mg, 0,105 mmol) e trietilamina (29 μl, 0,211 mmol). A mistura foi agitada em temperatura ambiente for cinco horas e resfriada bruscamente por cloreto de amônio saturado. Foi diluída com diclorometano, separa e uma camada orgânica foi lavado com salmoura, seca em sulfato de sódio anidro, filtrada e evaporada. O resíduo foi purificado por HPLC de fase reversa preparativa (Coluna C18, eluído com acetonitrila/água) para gerar composto 253e como um sólido branco (7,3 mg, rendimento = 30%). 1H RMN (400 Hz, CDCl3): δ 8,28 (d, J = 7,6 Hz, 2H), 7,89 (bs, 2H), 7,60 (bs, 2H), 7,31-7,26 (m, 4H), 7,12 (t, J = 7,6 Hz, 2H), 6,91- 6,78 (m, 5H), 5,22-5,13 (m, 4H), 4,54-4,49 (m, 2H), 3,99 (s, 6H), 3,68- 3,41 (m, 20H), 3,38 (s, 3H), 3,07 (s, 3H), 2,78-2,77 (m, 2H), 2,47 (bs, 2H), 2,35 (bs, 2H), 2,01-1,95 (m, 4H), 1,31 (s, 6H); MS (m/z): encontrada 1179,7 (M + Na)+, 1197,7 (M + H2O + Na)+, 1073,6 (M + H2O - H)-, 1191,5 (M + 2H2O - H)-.
Figure img0127
Composto 253f:
[000349] A uma solução do composto 253e (9,0 mg, 0,00778 mmol) em diclorometano anidro (0,5 mL) foi adicionado N-hidroxissuccinimida (NHS, 2,68 mg, 0,023 mmol) e cloridrato de N-(3-dimetilaminopropil)- N'-etilcarbodi-imida (EDC, 4,47 mg, 0,023 mmol) subsequentemente. A mistura foi agitada em temperatura ambiente durante a noite e diluída com diclorometano, lavada com salmoura e seca em sulfato de sódio anidro. Foi filtrada, evaporada e o resíduo foi purificado por HPLC de fase reversa preparativa (Coluna C18, eluída com acetonitrila/água). As frações do produto foram combinadas e extraídas com diclorometano. As camadas orgânicas foram secas em sulfato de sódio anidro, filtradas, evaporadas e submetidas a alto vácuo para gerar composto 253f (IGN-20-NHS) como uma espuma amarelada (4,4 mg, rendimento = 45%). MS (m/z): encontrada 1276,7 (M + Na)+. Exemplo 21
Figure img0128
Composto 254a (IGN-23-OMe) e 254b (IGN-24-OMe):
[000350] A uma solução em agitação do composto 249d (91,8 mg, 0,103 mmol) em etanol absoluto (1,0 mL) e diclorometano anidro (0,4 mL) foi adicionado boro-hidreto de sódio (0,4 mg, 0,0106 mmol) a 0°C. Após 30 minutos, o banho de gelo/água foi removido e a mistura de reação continuou a ser agitada em temperatura ambiente por 3 horas. A reação foi resfriada bruscamente pela adição de cloreto de amônio saturado e diluída com diclorometano. A mistura foi separada e uma camada orgânica foi lavada com salmoura, seca em sulfato de sódio anidro e filtrada. Os solventes foram removidos sob pressão reduzida e o resíduo foi purificado por HPLC de fase reversa preparativa (Coluna C18, eluído com acetonitrila/água) para gerar os compostos 254a (IGN-23-OMe, 24,2 mg, rendimento = 24,5%) e 254b (IGN-24- OMe, 26,3 mg, rendimento = 26,6%) como um sólido amarelado. 254a: 1H RMN (400 Hz, CDCl3): δ 8,34 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 8,27 (d, J = 7,6 Hz, 1H), 7,83 (d, J = 4,4 Hz, 1H), 7,57 (s, 1H), 7,46 (s, 1H), 7,29-7,02 (m, 6H), 6,87 (s, 1H), 6,75 (s, 1H), 6,70-6,66 (m, 2H), 6,10 (s, 1H), 5,21-5,02 (m, 4H), 4,49-4,39 (m, 2H), 3,99 (s, 3H), 3,89 (s, 3H), 3,66 (s, 3H), 3,64-3,41 (m, 19H), 3,39-3,34 (m, 4H), 2,78 (dd, J1 = 16,4 Hz, J2 = 3,6 Hz, 1H), 2,33 (t, J = 7,2 Hz, 2H), 1,90-1,84 (m, 2H); 13C RMN (400 Hz, CDCl3): δ 173,8, 166,8, 164,0, 163,5, 152,3, 151,2, 148,7, 148,5, 143,0, 142,1, 140,7, 140,2, 138,5, 137,8, 129,8, 129,7, 128,3, 127,9, 125,0, 124,7, 123,9, 120,9, 117,5, 117,0, 114,6, 113,4, 113,2, 112,1, 111,6, 110,2, 110,1, 104,2, 72,1, 71,4, 71,2, 70,80, 70,76, 70,70, 68,7, 59,2, 57,3, 56,5, 56,4, 55,1, 54,8, 51,8, 50,9, 50,7, 33,3, 32,7, 31,3, 22,4; MS (m/z), encontrada 976,7 (M + Na)+, 994,6 (M + H2O + Na)+; 254b: MS (m/z), encontrada 978,7 (M + Na)+.
Figure img0129
Composto 254c e 254d (IGN-23-NHS):
[000351] A uma solução de composto 254a (31,8 mg, 0,033 mmol) em 1,2 dicloroetano anidro (1 mL) foi adicionado hidróxido de trimetilestanho (90 mg, 0,5 mmol). A mistura foi aquecida a 80°C e agitada durante a noite. Foi resfriada até temperatura ambiente, diluída com diclorometano e lavada com solução mista de cloreto de sódio saturado e ácido clorídrico 5% (~1 mL), em seguida salmoura. A camada orgânica foi seca em sulfato de sódio anidro, filtrada e evaporada. O resíduo passou por uma coluna curta de sílica-gel e eluída com diclorometano/metanol para remover o hidróxido de trimetilestanho extra. As frações do produto foram evaporadas e submetidas a alto vácuo para gerar o ácido 254c como um sólido amarelado (20,8 mg, rendimento = 66%). MS (m/z): encontrada 938,2 (M-H)-, 962,3 (M + Na)+. Composto 254c (20,8 mg, 0,022 mmol) foi então dissolvido em diclorometano anidro (1 mL). O frasco de reação foi submetido a vácuo rapidamente e substituído com argônio. N- hidroxissuccinamida (NHS, 5,09 mg, 0,044 mmol) e N-(3- dimetilaminopropil)-N'-etilcarbodiimida cloridrato (EDC, 8,48 mg, 0,044 mmol) foram adicionados subsequentemente. A mistura foi agitada em temperatura ambiente durante a noite e diluída com diclorometano, lavada com salmoura e seca em sulfato de sódio anidro. Foi filtrada, evaporada e o resíduo foi purificado por HPLC de fase reversa preparativa (Coluna C18, eluído com acetonitrila/água). As frações do produto foram combinadas e extraídas com diclorometano. As camadas orgânicas foram secas em sulfato de sódio anidro, filtradas, evaporadas e submetidas a alto vácuo para gerar composto 254d (IGN-23-NHS) como um sólido ligeiramente amarelado (9.8 mg, rendimento = 43%). MS (m/z): encontrada 1059,6 (M + Na)+, 1077,6 (M + H2O + Na)+.
Figure img0130
Composto 254e e 254f (IGN-24-NHS):
[000352] A uma solução de composto 254b (26,3 mg, 0,028 mmol) em 1,2 dicloroetano anidro (1 mL) foi adicionado hidróxido de trimetilestanho (74,6 mg, 0,413 mmol). A mistura foi aquecida a 80°C e agitada durante a noite. Foi resfriada até temperatura ambiente, diluída com diclorometano e lavada com solução mista de cloreto de sódio saturado e ácido clorídrico 5% (~1 mL), em seguida salmoura. A camada orgânica foi seca em sulfato de sódio anidro, filtrada e evaporada. O resíduo passou por uma coluna curta de sílica-gel e eluído com diclorometano/metanol para remover o hidróxido de trimetilestanho extra. As frações do produto foram evaporadas e submetidas a alto vácuo para gerar o ácido 254e como um sólido amarelado (26 mg, rendimento = 100%). MS (m/z): encontrada 940,5 (M - H)-, 964,6 (M + Na)+. Composto 2542 (26 mg, 0,028 mmol) foi então dissolvido em diclorometano anidro (1 mL). N- hidroxissuccinamida (NHS, 9,57 mg, 0,083 mmol), N-(3- dimetilaminopropil)-N'-etilcarbodiimida cloridrato (EDC, 15,9 mg, 0,083 mmol) e DMAP (0,34 mg, 0,0028 mmol) foi adicionado subsequentemente. A mistura foi agitada em temperatura ambiente durante a noite e diluída com diclorometano, lavada com cloreto de amônio saturado e salmoura, seca em sulfato de sódio anidro. Foi filtrada, evaporada e o resíduo foi purificado por HPLC de fase reversa preparativa (Coluna C18, eluído com acetonitrila/água). As frações do produto foram combinadas e extraídas com diclorometano. As camadas orgânicas foram secas em sulfato de sódio anidro, filtradas, evaporadas e submetidas a alto vácuo para gerar composto 254f (IGN- 24-NHS) como um sólido ligeiramente amarelado (3,0 mg, rendimento = 10%). MS (m/z): encontrada 1061,7 (M + Na)+. Note: DMAP não deve ser adicionado neste devido ao baixo rendimento. Exemplo 22
Figure img0131
Composto 255a:
[000353] A uma solução em agitação de O-metil-undecaetilenoglicol (5oo mg, o,968 mmol) em diclorometano anidro (3 mL) foi adicionado trietilamina (270 μl, 1,94 mmol), cloreto de tosila (277 mg, 1,45 mmol) e DMAP (5,91 mg, o,o48 mmol) subsequentemente em temperatura ambiente. A mistura continuou a ser agitada durante a noite e foi trabalhada pela diluição com acetato de etila e filtrada para remover o sólido trietilamina cloridrato. O sólido foi lavado com acetato de etila e o filtrado foi evaporado. O resíduo foi diluído com acetato de etila e filtrado para remover o precipitado adicional. O filtrado foi evaporado para gerar o produto bruto como um líquido. Foi purificado por cromatografia de sílica-gel (diclorometano/metanol) para gerar composto 255a como um óleo ligeiramente amarelado (630 mg, rendimento = 97%). 1H RMN (400 Hz, CDCl3): δ 7,81 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 7,35 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 4,17 (t, J = 4,8 Hz, 2H), 3,72-3,54 (m, 42H), 3,39 (s, 3H), 2,46 (s, 3H); MS (m/z): encontrada 693,6 (M + Na)+.
Figure img0132
Composto 255b:
[000354] A uma mistura de tosilato 255a (630 mg, 0,939 mmol) e anilina 28 (238 mg, 0,939 mmol) em DMF anidro (3 mL) foi adicionado carbonato de potássio anidro (195 mg, 1,409 mmol) e iodeto de potássio (31,2 mg, 0,188 mmol). A mistura foi aquecida a 85°C e agitada nesta temperatura durante a noite. A solução foi resfriada até temperatura ambiente e diluída com diclorometano. Foi filtrada por celite e o sólido foi lavado com diclorometano. O filtrado foi evaporado e o resíduo foi diluído com diclorometano e filtrado novamente para remover o sólido adicional. O filtrado foi evaporado e o resíduo foi purificado por cromatografia de sílica-gel (hexanos/10% metanol em THF) para gerar o composto 255b como um óleo incolor (41,8 mg, rendimento = 5,9%). 1H RMN (400 Hz, CDCl3): δ 6,66 (s, 2H), 6,65 (s, 1H), 4,60 (s, 4H), 3,69 (s, 3H), 3,66-3,58 (m, 42H), 3,56-3,53 (m, 2H), 3,39-3,36 (m, 5H), 2,52 (amplo s, 2OH), 2,36 (t, J = 7,2 Hz, 2H), 1,91 (p, J = 7,2 Hz, 2H); 13C RMN (400 Hz, CDCl3): δ 173,9, 148,5, 142,8, 113,4, 109,9, 72,1, 70,8, 70,7, 68,9, 65,7, 59,2, 51,8, 50,9, 50,7, 31,3, 22,4; MS (m/z): encontrado 774,3 (M + Na)+.
Figure img0133
Composto 255c (IGN-26-OMe):
[000355] A uma solução em agitação do composto 255b (41,8 mg, 0,056 mmol) em diclorometano anidro (1 mL) foi adicionado trietilamina (27 μl, 0,196 mmol). A mistura foi resfriada até -10°C e cloreto de metanossulfonila (12,9 μl, 0,167 mmol) foi adicionado lentamente em 15 minutos. A solução continuou a ser agitada entre -10°C a -5°C por 60 minutos e resfriada bruscamente pela adição de gelo/água. Foi diluída com acetato de etila e lavada com água fria. A camada orgânica foi seca em sulfato de sódio anidro, filtrada, evaporada e submetida a alto vácuo para gerar os mesilatos como óleo incolor. MS (m/z): encontrado 930,3 (M + Na)+. Os mesilatos (30 mg, 0,033 mmol) foram transferidos para um frasco de fundo redondo de 5 mL com acetato de etila, evaporado e submetido a alto vácuo. Composto 8 (29,2 mg, 0,099 mmol) foi adicionado seguido pela adição DMF anidro (0,5 mL), carbonato de potássio anidro (22,8 mg, 0,165 mmol) e iodeto de potássio (5,5 mg, 0,033 mmol). A mistura foi agitada em temperatura ambiente durante a noite. Foi diluída com diclorometano e lavada com salmoura. A camada orgânica foi seca em sulfato de sódio anidro, filtrada e evaporada. O resíduo foi purificado por cromatografia de sílica-gel (hexanos/10% metanol in THF) para gerar 20,5 mg de uma mistura que continha o composto 255c. Foi dissolvido em diclorometano anidro (0,3 mL). Trietilamina (4 μl, 0,03 mmol), cloreto de tosila (3,8 mg, 0,02 mmol) e DMAP (0,2 mg, 0,002 mmol) foram subsequentemente adicionados em temperatura ambiente. A mistura continuou a ser agitada em temperatura ambiente durante a noite e em seguida foi evaporada. O resíduo foi purificado por cromatografia de sílica-gel (diclorometano/metanol) para gerar 11 mg de uma espuma ligeiramente amarelada. Foi ainda purificada por HPLC de fase reversa preparativa (Coluna C18, eluída com CH3CN/H2O) para gerar o composto 255c (IGN-26-OMe) como uma espuma incolor (1,6 mg, rendimento = 2,2%). MS (m/z): encontrado 1326,5 (M + Na)+, 1344,6 (M + H2O + Na)+, 1362,5 (M + 2H2O + Na)+. Exemplo 23
Figure img0134
Composto 256a:
[000356] A uma solução em agitação do composto 7 (384 mg, 1,0 mmol) em etanol absoluto (6 mL) e diclorometano anidro (2 mL) foi adicionado borohidreto de sódio (37,8 mg, 1,0 mmol) a 0°C. Após 30 minutos, o banho de gelo/água foi removido e a mistura de reação continuou a ser agitada em temperatura ambiente durante a noite. A reação foi resfriada bruscamente pela adição de cloreto de amônio saturado e diluída com diclorometano. A mistura foi separada e a camada orgânica foi lavada com salmoura, seca em sulfato de sódio anidro e filtrada. Os solventes foram removidos sob pressão reduzida para gerar o composto 256a como um sólido branco (369 mg, rendimento = 96%). 1H RMN (400 Hz, CDCl3): δ 8,37 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,50 (s, 1H), 7,40-7,24 (m, 6H), 7,18 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 7,05 (t, J = 7,2 Hz, 1H), 6,12 (s, 1H), 5,06 (s, 2H), 4,40 (tt, J1 = 10,0 Hz, J2 = 3,6 Hz, 1H), 3,87 (s, 3H), 3,52-3,41 (m, 3H), 2,78 (dd, J1 = 16,8 Hz, J2 = 3,6 Hz, 1H); 13C RMN (400 Hz, CDCl3): δ 166,5, 152,1, 142,73, 142,70, 140,4, 136,3, 129,5, 128,5, 127,9, 127,7, 127,1, 124,5, 123,8, 117,2, 114,5, 112,7, 103,4, 70,5, 57,1, 56,2, 54,5, 33,1; MS (m/z), encontrado 409,2 (M + Na)+.
Figure img0135
Composto 256b:
[000357] A uma solução do composto 256a (369 mg, 0,955 mmol) em acetonitrila anidra (9 mL) foi adicionado iodometano (65 μl, 1,05 mmol) e carbonato de potássio (158 mg, 1,15 mmol). A mistura foi agitada, aquecida a 82°C e refluxada durante a noite. A mistura de reação foi removida do banho de óleo, resfriada até temperatura ambiente e diluída com diclorometano. Foi filtrada por celite e o filtrado foi evaporado sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia de sílica-gel (hexanos/acetato de etila) para gerar o composto 256b como uma espuma incolor (195 mg, rendimento = 51%). Ainda 123 mg do material de partida 256a foram recuperados. 1H RMN (400 Hz, CDCl3): δ 8,29 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,46 (s, 1H), 7,44 (s, 1H), 7,39-7,24 (m, 5H), 7,16 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 7,04 (t, J = 7,6 Hz, 1H), 6,46 (s, 1H), 5,19 (dd, J1 = 15,2 Hz, J2 = 12,4 Hz, 2H), 4,36-4,29 (m, 1H), 3,89 (s, 3H), 3,38-3,31 (m, 2H), 3,02 (dd, J1 = 10,8 Hz, J2 = 4,0 Hz, 1H), 2,70 (dd, J1 = 16,8 Hz, J2 = 2,8 Hz, 1H), 2,65 (s, 3H); 13C RMN (400 Hz, CDCl3): δ 166,9, 151,2, 144,2, 142,1, 141,9, 136,7, 129,8, 128,6, 128,0, 127,8, 127,3, 125,1, 123,9, 121,7, 117,1, 113,5, 104,7, 71,1, 64,2, 57,2, 56,3, 40,2, 32,0; MS (m/z): encontrado 423,2 (M + Na)+.
Figure img0136
Composto 256c:
[000358] A uma solução em agitação do composto 256b (195 mg, 0,487 mmol) em acetato de etila (2,5 mL) foi adicionado paládio em carvão (10%, 25,9 mg, 0,024 mmol). O frasco foi rapidamente submetido a vácuo e substituído com H2 em um balão. A mistura continuou a ser hidrogenada durante a noite e filtrada por celite. O filtrado foi separado sob pressão reduzida e o resíduo foi purificado por cromatografia de sílica-gel (diclorometano/metanol) para gerar o composto 256c como um sólido branco (126 mg, rendimento = 83%). 1H RMN (400 Hz, MeOD): δ 8,14 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,30-7,23 (m, 2H), 7,22 (s, 1H), 7,10 (t, J = 7,6 Hz, 1H), 6,56 (s, 1H), 4,46-4,38 (m, 1H), 3,88 (s, 3H), 3,48-3,37 (m, 2H), 3,12 (dd, J1 = 10,8 Hz, J2 = 4,4 Hz, 1H), 2,84 (dd, J1 = 16,8 Hz, J2 = 2,8 Hz, 1H), 2,80 (s, 3H).
Figure img0137
Composto 256d (IGN-29-OMe):
[000359] A uma soIução em agitação do composto 249c (136 mg, 0,34 mmoI) em dicIorometano anidro (2 mL) foi adicionado trietiIamina (142 μl, 1,02 mmol). A mistura foi resfriada a -10°C e cloreto de metanossulfonila (66 μl, 0,85 mmol) foi adicionado lentamente em 15 minutos. A solução continuou a ser agitada entre -10°C a -5°C por 60 minutos e resfriada bruscamente pela adição de gelo/água. Foi diluída com acetato de etila e lavada com água fria. A camada orgânica foi seca em sulfato de sódio anidro, filtrada, evaporada e submetida a alto vácuo para gerar o mesilato como óleo incolor. O mesilato foi transferido a um frasco de fundo redondo de 10 mL com acetato de etila, evaporado e submetido a alto vácuo. Os compostos 8 (120 mg, 0,41 mmol) e 256c (106 mg, 0,34 mmol) foram adicionados a este seguido pela adição de DMF anidro (1,5 mL), carbonato de potássio anidro (235 mg, 1,7 mmol). A mistura foi agitada em temperatura ambiente durante a noite. Foi diluída com diclorometano e lavada com salmoura. A camada orgânica foi seca em sulfato de sódio anidro, filtrada e evaporada. O resíduo foi purificado por HPLC de fase reversa preparativa (Coluna C18, eluído com CH3CN/H2O) para gerar o composto 256d (IGN-29-OMe) como um sólido levemente amarelado (46 mg, rendimento = 14%) e o composto 256e. 256d: 1H RMN (400 Hz, CDCl3), δ 8,27 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 7,84 (d, J = 4,8 Hz, 1H), 7,57 (s, 1H), 7,32-7,04 (m, 7H), 6,87 (s, 1H), 6,82 (s, 1H), 6,76-6,70 (m, 2H), 6,50 (s, 1H)5,18-5,12 )m, 4H), 4,49-4,43 (m, 1H), 4,40-4,35 (m, 1H), 3,98 (s, 3H), 3,89 (s, 3H), 3,68-3,52 (m, 18H), 3,41-3,36 (m, 6H), 3,08 (dd, J1 = 10,8 Hz, J2 = 4,4 Hz, 1H), 2,56 (dd, J1 = 16,8 Hz, J2 = 2,8 Hz, 1H), 2,70 (s, 3H), 2,34 (t, J = 7,2 Hz, 2H), 1,92-1,85 (m, 2H); MS (m/z): encontrado 990,6 (M + Na)+, 1008,6 (M + H2O + Na)+, 256e: MS (m/z): encontrado 1006,6 (M + Na)+.
Figure img0138
Composto 256f e Composto 256g (IGN-29-NHS):
[000360] A uma solução do composto 256d (46 mg, 0,048 mmol) em 1,2 dicloroetano (1,5 mL) foi adicionado hidróxido de trimetilestanho (129 mg, 0,71 mmol). A mistura foi aquecida a 80°C e agitada durante a noite. Foi resfriada até temperatura ambiente, diluída com diclorometano e lavada com solução misturada de cloreto de sódio saturado e ácido clorídrico 5% (~1 mL), em seguida com salmoura. A camada orgânica foi seca em sulfato de sódio anidro, filtrada e evaporada. O resíduo passou por uma coluna curta de sílica-gel e eluído com diclorometano/metanol para remover o hidróxido de trimetilestanho extra. As frações do produto foram evaporadas e submetidas a alto vácuo para gerar o ácido 256f como um sólido amarelado (36,9 mg, rendimento = 81%). MS (m/z): encontrado 952,8 (M - H)-. Composto 256f (36,9 mg, 0,039 mmol) foi então dissolvido em diclorometano anidro (0,8 mL). N-hidroxissuccinamida (NHS, 13,4 mg, 0,12 mmol) e cloridrato de N-(3-dimetilaminopropil)-N'-etilcarbodiimida (EDC, 22,2 mg, 0,12 mmol) foi adicionado subsequentemente. A mistura foi agitada em temperatura ambiente durante a noite e diluída com diclorometano, lavada com salmoura e seca em sulfato de sódio anidro. Foi filtrada, evaporada e o resíduo foi purificado por HPLC de fase reversa preparativa (Coluna C18, eluído com acetonitrila/água). As frações contendo produto foram combinadas e extraídas com diclorometano. As camadas orgânicas foram secas em sulfato de sódio anidro, filtradas, evaporadas e submetidas a alto vácuo para gerar o composto 256g (IGN-29-NHS) como um sólido ligeiramente amarelado (25,4 mg, rendimento = 62%). MS (m/z): encontrado 1073,4 (M + Na)+, 1091,4 (M + H2O + Na)+, 1103,3 (M + 3H2O - H)-. Exemplo 24
Figure img0139
1-(4-(benzilóxi)-5-metóxi-2-nitrobenzoil)-6-nitroindolino-2-carboxilato de metila óxi)(258b):
[000361] 6-nitroindolino-2-carboxilato de metila (258a) (0,233 g, 1,048 mmol) foi dissolvido em tetra-hidrofurano anidro (4 ml) em um frasco separado e resfriado a 0 °C em um banho de gelo. Em outro frasco cloreto de 4-(benzilóxi)-5-metóxi-2-nitrobenzoíla (4) (0,371 g, 1,153 mmols) foi dissolvido em tetra-hidrofurano anidro(4 ml) e resfriado a 0 °C em um banho de gelo. Ao frasco contendo o indolino foi adicionado trietilamina (0,438 ml, 3,15 mmols) com uma seringa e o cloreto de acetila 4 foi adicionado rapidamente a uma mistura de reação através de uma cânula a 0 °C. A reação foi agitada por 90 minutos a 0°C e em seguida em temperatura ambiente por 1 hora adicional. A reação foi então resfriada bruscamente com 5% HCl e extraída com acetato de etila (3x). As camadas orgânicas foram lavadas com salmoura, secas em sulfato de sódio anidro, e concentradas in vacuo. O resíduo foi purificado por cromatografia de sílica-gel usando 30% acetona em hexano para gerar 1-(4-(benzilóxi)- 5-metóxi-2-nitrobenzoil)-6-nitroindolino-2-carboxilato de metila (258b) (0,220 g, 0,434 mmol, 4144 % de rendimento) como uma espuma amarela. 1H RMN (400 Hz, CDCl3): δ 3,30 (m, 1H), 3,60 (s, 3H), 3,69 (m, 1H), 3,86 (s, 3H), 4,64 (dd, 1 H, J = 2,4 Hz, 10,8), 5,23 (s, 2H), 7,31 (m, 1H), 7,46 (m, 6H), 7,99 (dd, 1H, J = 2,0, 8,0 Hz), 9,04 (d, 1H, J = 2,0 Hz), MS (m/z), encontrado 530,1 ([M]++Na).
Figure img0140
1-(4-(benzilóxi)-5-metóxi-2-nitrobenzoil)-6-nitroindolino-2-carbaldeído (258c):
[000362] 1-(4-(benzilóxi)-5-metóxi-2-nitrobenzoil)-6-nitroindolino-2- carboxilato de metila (258b) (1,023 g, 2,016 mmols) foi dissolvido em uma mistura de diclorometano anidro (2,5 mL) e tolueno (7,5 mL) e resfriada a -78 °C em um banho de gelo seco e acetona. Após 15 minutos DIBAL-H (1,0M em THF) (4,03 mL, 4,03 mmols) foi adicionado através de uma bomba em seringa por um período de cerca de 20 minutos. A solução resultante foi agitada por 2 h a -78 °C após a qual o metanol (1ml) foi adicionado , sob gotejamento, para temperar a reação a -78 °C. A reação foi então diluída com 5% HCl e acetato de etila e aquecida até temperatura ambiente. A camada aquosa foi lavada com acetato de etila adicional e as camadas orgânicas foram lavadas com salmoura e secas em sulfato de sódio anidro. A mistura de reação passou por uma camada de celite e concentrada in vacuo. O resíduo bruto foi purificado por cromatografia de sílica-gel usando 40% acetona em hexano para gerar 1-(4-(benzilóxi)-5-metóxi-2- nitrobenzoil)-6-nitroindolino-2-carbaldeído (258c) (621 mg, 1,301 mmol, 64,5 % de rendimento). 1H RMN (400 Hz, CDCh): δα3,15- 3,60n(m, 2H), 3,90 (s, 0,6H), 3,92 (s, 1,2H), 3,97 (s, 1,2H), 4,57 (d, 0,2H, J = 4,8 Hz), 5,21 (m, 2,4H), 5,5 (m, 0,4H), 6,39 (s, 0,4H), 6,46 (s, 0,2H), 6,76 (s, 0,2H), 6,89 (s, 0,4H), 7,01 (s, 0,4H), 7,19-7,41 (m, 5,6H), 7,60-7,77 (m, 1,6H), 7,86-7,91 (m, 0,8H), 8,94 (s, 0,4H), 9,34 (s, 0,4H), 9,74 (s, 0,4H), 9,90 (s, 0,2H), MS (m/z), encontrado 500,1 ([M]++Na).
Figure img0141
Composto 258e:
[000363] 1-(4-(benzilóxi)-5-metóxi-2-nitrobenzoil)-6-nitroindolino-2- carbaldeído (258c) (0,125 g, 0,262 mmol) foi dissolvido em tetra- hidrofurano (8 mL) e água (5,33 mL). A esta solução foi adicionado hidrossulfito de sódio (0,456 g, 2,62 mmols) e a reação foi coberta com um septo ventilada com uma agulha (sem necessidade de nitrogênio/argônio) e agitada durante a noite. Metanol foi adicionado a uma mistura de reação e agitada por 30 minutos adicionais, o qual neste ponto a reação foi concentrada in vacuo para remover todos os solventes. O resíduo foi dissolvido em uma mistura 1:1 de metanol e diclorometano (20 mL) que deixaram um resíduo que não se dissolveu. A mistura passou por um pad pequeno de sílica no parte superior de um pequeno pad de celite e rinsada abundantemente com a mistura 1:1 de metanol e diclorometano. O filtrado foi filtrado novamente por celite e em seguida a solução de HCl em dioxano (4M) foi adicionada com agitação até o pH de~3-4 ser obtido. A reação foi então agitada por 30 minutos adicionais e em seguida bicarbonato de sódio aquoso foi adicionado até que a reação se tornasse básica (~pH 8 a 9) no momento que diclorometano adicional foi adicionado e uma camada orgânica removida. A camada aquosa foi lavada com diclorometano adicional e as camadas orgânicas resultantes foram combinadas e lavadas com salmoura, secas em sulfato de sódio anidro e concentradas in vacuo. O resíduo contendo o composto 258d (0,105 g, 0,263 mmol, 100 % de rendimento) foi usado na etapa seguinte sem outro tratamento. MS (m/z), encontrado 454,2 ([M]++Na+CH3OH).
[000364] A um pequeno frasco contendo 4-metil-4- (metildissulfanil)pentanoico (0,061 g, 0,313 mmol), EDC (0,060 g, 0,313 mmol), e DMAP (0,038 g, 0,313 mmol) foram dissolvidas em diclorometano (1 mL) com agitação. A esta mistura o composto 258d (0,125 g, 0,313 mmol) dissolvido em diclorometano (1,5 mL) foi adicionado e uma mistura foi agitada em temperatura ambiente durante a noite. Água foi adicionada e as camadas foram separadas. A camada orgânica foi lavada com salmoura, seca em sulfato de sódio anidro, e concentrada in vacuo. O resíduo foi purificado em uma coluna de sílica-gel usando acetato de etila 50% em hexano para gerar o composto 258e (0,037 g, 0,064 mmol, 20,54 % de rendimento). 1H RMN (400 Hz, CDCI3): δd 1,27 (s, 6H), 1,97 (t, 2H, J = 8,0 Hz), 2,06 (t, 2H, J = 8,0 Hz), 2,45 (s, 3H), 3,48 (m, 1H), 3,67 (m, 1H), 3,99 (s, 3H), 4,49 (m, 1H), 5,24 (q, 2H, J = 8,4 Hz), 6,90 (s, 1H), 7,22 (d, 1H, J = 8,0 Hz), 7,39 (m, 5H), 7,55 (s, 1H), 7,82 (d, 1H, J = 8,0 Hz), 7,87 (d, 1H, J = 4,0 Hz), 8,07 (s, 1H), MS (m/z), encontrado 630,3 ([M]++Na+MeOH).
Figure img0142
Composto 258f:
[000365] Composto 258e (0,0185 g, 0,032 mmol) foi dissolvido in diclorometano anidro (0,5 ml) e a esta solução foi adicionado ácido metanossulfônico (0,021 ml, 0,321 mmol) dissolvido em diclorometano anidro (0,500 ml) e a mistura resultante foi agitada em temperatura ambiente por três horas. A reação foi vertida em uma mistura de gelo e metanol e neutralizada até pH 7 com bicarbonato de sódio aquoso. A reação foi então diluída com diclorometano e as camadas foram separadas. A camada orgânica foi lavada com salmoura, seca em sulfato de sódio anidro, e concentrada in vacuo. O resíduo foi purificado por sílica ptlc usando metanol 3% em diclorometano para gerar monômero NH(4-metil-4-metildithio-pentanoate)-indol IGN (0,007 g, 0,014 mmol, 44,9 % de rendimento). MS (m/z), encontrado 484,0 ([M]+-1).
Figure img0143
Composto 258g:
[000366] Em um pequeno frasco o Composto 8 (0,033 g, 0,112 mmol) foi dissolvido em DMF (1,5 ml) com agitação em temperatura ambiente. 1,3-Di-iodopropano (0,065 ml, 0,561 mmol) foi adicionado seguido pela adição do carbonato de potássio (0,023 g, 0,168 mmol). A reação foi coberta e agitada em temperatura ambiente durante a noite. A reação foi diluída com diclorometano e lavada com cloreto de amônio anidro e salmoura. A camada orgânica foi seca em sulfato de sódio anidro, filtrada, e concentrada in vacuo. O resíduo foi purificado por sílica ptlc usando acetato de etila 50% em hexano para gerar o composto 258g (0,018 g, 0,039 mmol, 34,7% de rendimento). MS (m/z), encontrado 533,0 ([M]++K).
Figure img0144
Composto 258 h (IGN-15-SMe):
[000367] Em um pequeno frasco foi dissolvido o composto 258f (0,007 g, 0,014 mmol) em dimetilformamida (1 ml) com agitação em temperatura ambiente. Composto 8 (6,66 mg, 0,014 mmol) foi adicionado seguido pela adição de carbonato de potássio (1,992 mg, 0,014 mmol). A reação foi coberta com uma lâmina e agitada em temperatura ambiente durante a noite. A reação foi diluída com diclorometano e lavada com cloreto de amônio anidro e salmoura. A camada orgânica foi seca em sulfato de sódio anidro, filtrada, e concentrada em vácuo. O resíduo foi purificado por placa de sílica ptlc em metanol 5% em diclorometano para gerar o composto 258h (IGN- 15-SMe) (0,005 g, 7,32 μmol, 50,8% de rendimento). MS (m/z), encontrado 906,3 ([M]++Na+2CH3OH). Exemplo 25
Figure img0145
Composto 259a:
[000368] Em um pequeno frasco foi dissolvido o composto 8 (0,100 g, 0,340 mmol) em DMF (5 ml) com agitação em temperatura ambiente. 1,5-Di-iodopentano (0,506 ml, 3,40 mmols) foi adicionado seguido pela adição de carbonato de potássio (0,070 g, 0,510 mmol). A reação foi coberta com uma lâmina e agitada em temperatura ambiente durante a noite. A reação foi diluída com diclorometano e lavada com cloreto de amônio anidro e salmoura. A camada orgânica foi seca em sulfato de sódio anidro, filtrada, e concentrada a vácuo. O resíduo foi purificado por sílica ptlc usando acetato de etila 50% em hexano para gerar o Composto 259a (0,045 g, 7,32 μmol, 27 % de rendimento), 1H RMN (400 Hz, CDCI3): δα 1,64 (m, 2H), 1,94 (M, 4H), 3,24 (t, 2H, J = 6,5 Hz), 3,52 (dd, 1H, J = 4,0, 16,6 Hz), 3,73 (dd, 1H, J = 10,5, 16,6 Hz), 3,98 (s, 3H), 4,12 (m, 2H), 4,50 (dt, 1H, J = 4,0, 11,2 Hz), 6,84 (s, 1H), 7,13 (t, 1H, J = 6,0 Hz), 7,29 (m, 2H), 7,57 (s, 1H), 7,90 (d, 1H, J = 4,4 Hz), 8,29 (d, 1H, J = 8,0 Hz), MS (m/z), encontrado 533,3 ([M]++K).
Figure img0146
Composto 259b (IGN-21-SMe):
[000369] Em um pequeno frasco foi dissolvido o composto 258f (15 mg, 0,031 mmol) em dimetilformamida (1 ml) com agitação em temperatura ambiente. Composto 259a (17,42 mg, 0,036 mmol) foi adicionado seguido pela adição de carbonato de potássio (4,27 mg, 0,031 mmol). A reação foi coberta com lâmina e agitada em temperatura ambiente durante a noite. A reação foi diluída com diclorometano e lavada com cloreto de amônio anidro e salmoura. A camada orgânica foi seca em sulfato de sódio anidro, filtrada, e concentrada in vacuo. O resíduo foi purificado por placa de sílica ptlc em metanol 5% em diclorometano para gerar o Composto 259a (IGN- 15-SMe) (0,006 g, 7,32 μmol, 22 % de rendimento). MS (m/z), encontrado 934,1 ([M]++Na+2CH3OH). Exemplo 26
Figure img0147
Composto 260a:
[000370] Composto 256a (55 mg, 0,142 mmol foi dissolvido em diclorometano anidro e em seguida ácido 4-metóxi-4-oxobutanoico (76mg, 0,575 mmol), EDC (70mg, 0,365 mmol), e DMAP (8,69 mg, 0,071 mmol) foram adicionados sequencialmente. A mistura foi agitada durante a noite em temperatura ambiente e foi verificada por TLC para garantir que nenhum material de partida permaneceu. A reação foi então diluída com água e acetato de etila. Após outra extração com acetato de etila, a camada orgânica foi lavada com salmoura, seca em sulfato de sódio, filtrada e concentrada in vacuo. O resíduo bruto foi purificado por cromatografia de sílica-gel usando acetato de etila 50% em hexano para gerar o composto 260a (54 mg, rendimento = 76%). 1H RMN (400 Hz, CDCl3): δ 8,21 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,45-7,25 (m, 7H), 7,20 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 7,08 (t, J = 7,4 Hz, 1H), 6,825 (s, 1H), 5,27 (q, J = 15,1 Hz, 2H), 4,56 (t, J = 12,6 Hz, 1H), 4,35-4,29 (m, 1H), 3,99 (s, 3H), 3,65 (s, 3H), 3,44-3,38(m, 2H), 2,88 (dd, J1 = 16,4 Hz, J2 = 2 Hz, 1H ), 2,58-2,50 (m, 1H), 2,40-2,33 (m, 1H), 2,26-2,18 (m, 1H), 1,99- 1,92 (m, 1H); MS (m/z), encontrado 523,1 (M + Na)+.
Figure img0148
Composto 260b:
[000371] A uma solução do composto 260a (50mg, 0,100 mmol) em diclorometano anidro (11,5 ml) foi adicionado sob gotejamento ácido metanossulfônico (0,389 ml, 5,99 mmol) resultando em uma solução amarela. A reação foi agitada em temperatura ambiente e foi monitorada por TLC até conclusão começando em 30 minutos. Foi diluída com água e metanol em seguida neutralizada até pH 7 usando bicarbonato de sódio saturado. A camada aquosa foi extraída com diclorometano e a camada orgânica foi seca em sulfato de sódio. O produto bruto foi purificado por cromatografia de sílica-gel usando metanol 6% em diclorometano para gerar o composto 260b (40mg, rendimento = 98%). 1H RMN (400 Hz, CDCl3): δ 8,22 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,35 (s, 1H), 7,28 (t, J = 7,8 Hz, 1H), 7,22 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 7,09 (t, J = 7,4 Hz, 1H), 6,90 (s, 1H), 6,06 (s, 1H), 4,63 (t, J = 12,6 Hz, 1H), 4,38-4,30 (m, 1H), 4,00 (s, 3H), 3,66 (s, 3H), 3,47-3,39 (m, 2H), 2,90 (dd, J1= 16,2 Hz, J2 = 2,2 Hz, 1H), 2,69-2,59 (m, 2H), 2,52-2,45 (m, 1H), 2,22-2,14 (m, 1H); MS (m/z), encontrado 433 (M + Na)+.
Figure img0149
Composto 260c:
[000372] O composto 260b (20mg, 0,049 mmol) e o composto 259a (30mg, 0,061 mmol) foram dissolvidos em N,N-dimetilformamida anidra (1 ml). Carbonato de potássio (20,20 mg, 0,146 mmol) foi adicionado e a reação foi agitada durante a noite em temperatura ambiente. Foi resfriada bruscamente com água e extraída com diclorometano. A camada orgânica foi lavada com salmoura e seca em sulfato de sódio. O produto bruto foi purificado por cromatografia de sílica-gel usando metanol 5% em diclorometano para gerar o composto 260c (25 mg, rendimento = 66%). MS (m/z), encontrado 813,5 (M + Na + H2O)+. Exemplo 27
Figure img0150
Composto 261a:
[000373] O material de partida comercialmente disponível, ácido tiazolidina-4-carboxílico (1,3g, 9,59 mmols) foi dissolvido em metanol anidro (19,18 mL) e resfriada a 0°C em um banho de gelo. Cloreto de tionila (1,40 mL, 19,18 mmols) foi adicionado sob gotejamento e a reação foi agitada por 30 minutos. O banho de gelo foi removido e a agitação continuou por 4-5 horas ou durante a noite. O solvente foi separado e o produto foi colocado em alto vácuo para gerar cloreto de 4-(metoxicarbonil)tiazolidin-3-io. Sem outra purificação e assumindo 100% de rendimento, o 4-(metoxicarbonil)tiazolidin-3-io cloreto (1.761 g, 9,59 mmols) e o composto 4 (3,39 g, 10,55 mmols) foram cada um dissolvidos separadamente em tetra-hidrofurano (32,0 mL) e resfriados a 0°C. Trietilamina (4,41 mL, 31,6 mmol) foi adicionada a uma solução com cloreto de 4-(metoxicarbonil)tiazolidin-3-o e em seguida o composto 4 foi adicionado rapidamente por uma cânula. Após 20 minutos, o pH de uma solução foi verificado para garantir que estava básico. A reação foi agitada a 0°C por 1,5 hora e em seguida em temperatura ambiente por 30 minutos e foi verificada por MS. Foi resfriada bruscamente com ácido clorídrico 5% frio e diluída com acetato de etila frio e água. A solução foi extraída com acetato de etila três vezes e as camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, bicarbonato de sódio saturado e em seguida com salmoura novamente. Foi seca em sulfato de sódio, filtrada e separada. O material bruto foi purificado por cromatografia de sílica-gel usando um gradiente de 50% a 75% de acetato de etila em hexanos para gerar composto 261a (4,1g, rendimento = 99%). 1H RMN (400 Hz, CDCl3): o composto aparece como um par de rotômeros distintos. δ 7,78 (s, 0,6H), 7,74 (s, 0,4H), 7,48-7,35 (m, 5H), 6,96 (s, 0,4H), 6,92 (s, 0,6H), 5,40 (dd, J1 = 7,0Hz, J2 = 3,4 Hz, 0,6H), 5,31-5,22 (m, 2H), 5,13 (d, 9,6Hz, 0,4H), 4,60 (d, J = 9,6 Hz, 0,4H), 4,46 (dd, J1 = 4,4Hz, J2 = 3,2 Hz, 0,4 H), 4,36 (d, J = 8,4 Hz, 0,6 H), 4,26 (d, J = 8,4Hz, 0,6H), 4,02 (s, 1,8H), 3,96 (s, 1,2 H), 3,86 (s, 1,8H), 3,71 (s, 1,2H), 3,48-3,43 (m, 0,6H), 3,36-3,29 (m, 1,4H); MS (m/z), encontrado 455,3 (M + Na)+.
Figure img0151
Composto 261b:
[000374] Composto 261a (4,1 g, 9,48 mmols) foi dissolvido em diclorometano (11 mL) e tolueno (33 mL) em seguida resfriado a -78°C em um banho de acetona/gelo seco. Hidreto de di-isobutilalumínio (18,96 mL, 18,96 mmols) foi adicionado muito lentamente, por pelo menos 30 minutos, usando uma bomba em seringa. A reação foi agitada a -78°C por 3 horas e foi resfriada bruscamente com metanol (0,4mL) e em seguida ácido clorídrico 5% (30mL). Acetato de etila (100ml) foi adicionado e o banho de gelo foi removido. A mistura continuou a ser agitada em temperatura ambiente por 30 minutos. Foi extraída usando acetato de etila e a camada orgânica foi lavada com salmoura, bicarbonato de sódio saturado, e em seguida salmoura novamente. Foi seca em sulfato de sódio anidro e filtrado por celite. O material bruto foi purificado por cromatografia de sílica-gel usando 75% de acetato de etila em hexanos para gerar composto 261b (2,3g, rendimento = 60%). 1H RMN (400 Hz, CDCl3): o composto aparece como um par de rotômeros. δ 9,80 (s, 0,8H), 9,41 (s, 0,2H), 7,80 (s, 0,8H), 7,73 (s, 0,2H), 7,49-7,36 (m, 5H), 6,91 (s, 0,2H), 6,84 (s, 0,8H), 5,25-5,22 (m, 2H), 4,85-4,73 (m, 1H), 4,35-4,30 (m, 1H), 4,22-4,17 (m, 1H), 4,04-3,97 (m, 3H), 3,40-3,26 (m, 2H); MS (m/z), encontrado 425,0 (M + Na)+.
Figure img0152
Composto 261c:
[000375] Composto 261b foi dissolvido em tetra-hidrofurano (230 mL) em seguida água (150 mL). Hidrossulfito de sódio (5,27 g, 25,7 mmols) foi adicionado lentamente, em pequenas porções. Se uma solução permaneceu turva, água adicional foi adicionada sob gotejamento até a solução clarear. A reação foi coberta com um septo e uma agulha para permitir a liberação de gás SO2 e foi agitada durante a noite. A solução alterou de amarelo até muito pálida, solução incolor. Na manhã seguinte, água foi adicionada até a solução clarear e em seguida metanol (30 mL) foi adicionado. Foi agitada por 2 horas adicionais e os solventes foram então evaporados e o resíduo re- evaporado com acetonitrila pelo menos duas vezes. O resíduo branco foi colocado em alto vácuo por algumas horas. Este foi redissolvido em metanol:diclorometano [1:1], filtrado por celite, e separado. A etapa de filtro foi repetida até a diluição em metanol ficar clara sem partículas. O intermediário foi colocado em vácuo até completamente seco, em seguida, dissolvido em metano anidro (50ml). Cloreto de acetila (1,9ml, 26,7 mmol) foi adicionado sob gotejamento em temperatura ambiente, causando a formação de um precipitado amarelo. Foi agitado em temperatura ambiente por 30 minutos e foi resfriada bruscamente com bicarbonato de sódio saturado. A mistura foi diluída com diclorometano e água (130mL/85mL) e extraída com diclorometano. A camada aquosa foi acidificada com hidrogenossulfato de sódio, concentrada a um volume reduzido, e em seguida re-extraída. A camada orgânica combinada foi lavada com bicarbonato de sódio saturado e salmoura e seca em sulfato de sódio. O resíduo separado foi purificado por cromatografia de sílica-gel usando acetato de etila 60% em hexanos para gerar composto 261c (1,2g, rendimento = 59 %). 1H RMN (400 Hz, CDCl3): δ 7,69 (d, J = 4,4Hz, 1 H), 7,52-7,28 (m, 6H), 6,87 (s, 1H), 5,22 (q, J = 12,3 Hz, 2H), 4,85, (d, J = 10,4Hz, 1H), 4,58 (d, J = 10,4 Hz, 1H), 4,03-4,02 (m, 1H), 3,98 (s, 3H), 3,51-3,47 (m, 1H), 3,45-3,23 (m, 1H); MS (m/z), encontrado 377,3 (M + Na)+.
Figure img0153
Composto 261d:
[000376] Composto 261c (75mg, 0,212 mmol) foi dissolvido in ácido trifluoroacético puro (0,4 ml, 5,19 mmol). Foi refluxado por aproximadamente 1 hora a 50°C e em seguida a temperatura foi aumentada para 80°C. Após um total de 3 horas, o solvente foi evaporado. o resíduo foi diretamente purificado por PTLC usando metanol 5 % em diclorometano para gerar composto 261d (19,4 mg, 35%). 1H RMN (400 Hz, CDCl3): δ 7,72 (d, J = 4,4 Hz, 1H), 7,51 (s, 1H), 6,91(s, 1H), 6,18 (s, 1H), 4,85 (d, J = 10,4Hz, 1H), 4,58 (J = 10,4 Hz, 1H), 4,05-4,02 (m, 1H), 3,99 (s, 3H), 3,50 (dd, J1 = 12,4Hz, J2 = 6 Hz, 1H), 3,32, (dd, J1 = 12,4 H, J2 = 2 Hz, 1H); MS (m/z), encontrado 319,0 (M + Na+ MeOH)+. Exemplo 28
Figure img0154
Composto 262:
[000377] Composto 249c (18 mg, 0,045 mmol) foi dissolvido em diclorometano anidro (0,45mL) e em seguida resfriado em um banho de gelo/salmoura. Primeiro, trietilamina (0,022 ml, 0,158 mmol) e em seguida cloreto de metanossulfonila (10,46 μl, 0,135 mmol) foram adicionados; o segundo muito lentamente. A mistura continuou em agitação no banho por 1 hora. A reação foi resfriada bruscamente com gelo/água e diluída com acetato de etila frio. Após separação, a camada orgânica foi lavada novamente com água fria e seca em sulfato de sódio. Foi filtrada e evaporada sob pressão reduzida, mantendo a temperatura abaixo de 20°C, e em seguida colocado em alto vácuo para ser usada diretamente. Uma vez completamente seco, o produto, e o composto 261d (28,5 mg, 0,108 mmol)em N,N- dimetilformamida anidro (350 μL). Carbonato de potássio (29,8 mg, 0,216 mmol) foi adicionado. Após agitação durante a noite em temperatura ambiente, a reação foi diluída com diclorometano, lavada com salmoura, seca em sulfato de sódio, filtrada e separada.
[000378] O produto bruto foi primeiro purificado por cromatografia de sílica-gel usando metanol 4% em diclorometano para remover o resíduo basal. O material recuperado foi então purificado usando HPLC de fase reversa (Coluna C18, CH3CN/H2O, carregamento da coluna com 3:1, centrifugado antes da injeção) para gerar o composto 262 como um sólido. 1H RMN (400 Hz, CDCl3): δ 7,68 (dd, J1 = 4,4 Hz, J2 = 1,6 Hz, 2H), 7,51 (s, 2H), 6,86 (s, 2H), 6,78 (s, 1H), 6,71 (s, 2H), 5,16 (dq, J1= 8,4 Hz, J2 =2,2, 4H), 4,85 (d, J = 10,4 Hz, 2H), 4,58 (J = 10,4 Hz, 2H), 4,04-3,97 (m, 7H), 3,68-3,38 (m, 18 H), 3,40-3,29 (m, 7H), 2,33 (t, 7,2 Hz, 2H), 1,89-1,35 (m, 2 H) MS (m/z), encontrado 914,1 (M + Na)+. Exemplo 29 (IGN-13)
Figure img0155
3-(2-(2-(2-(3,5-bis(hidroximetil)fenóxi)etóxi)etóxi)etóxi)propanoato de metila (263b):
[000379] A uma mistura em agitação de 3-(2-(2-(2- (tosilóxi)etóxi)etóxi)etóxi)propanoato de metila (263a) (1,504 g, 3,85 mmol) e (5-hidróxi-1,3-fenileno)dimetanol (21) (0,54 g, 3,50 mmol) em DMF anidro (7,8 ml) foi adicionado carbonato de potássio (0,726 g, 5,25 mmol). A reação foi agitada em temperatura ambiente por 18 horas a 75°C. A mistura resfriando até temperatura ambiente, resfriada bruscamente com água, e extraída com acetato de etila. Os extratos orgânicos foram lavados com salmoura, secos em sulfato de magnésio anidro, filtrados e concentrados. A purificação por cromatografia de sílica-gel (5% MeOH/CH2Cl2) gerou 3-(2-(2-(2-(3,5- bis(hidroximetil)fenóxi)etóxi)etóxi)etóxi)propanoato de metila (263b)(340mg, 26%). 1H RMN (400 Hz, CDCl3): δ 6,83 (s, 1H), 6,75 (s, 2H), 4,52 (s, 4H), 4,05 (t, J = 4,8 Hz, 2H), 3,79 (t, J = 4,8 Hz, 2H), 3,70 (t, J = 6,4 Hz, 2H), 3,65 (s, 3H), 3,70-3,56 (m, 8H), 3,26 (s, 2H), 2,55 (t, J = 6,4 Hz, 2H); 13C RMN (400 Hz, CDCl3): δ 172,31, 159,1, 143,0, 117,7, 112,1, 70,8, 70,7, 70,5, 70,4, 69,8, 67,5, 66,6, 64,7, 51,8, 34,9; MS (m/z), encontrado 395,2 (M + Na)+.
Figure img0156
Composto 263c:
[000380] A uma solução em agitação de 3-(2-(2-(2-(3,5- bis(hidroximetil)fenóxi)etóxi)etóxi)etóxi)propanoato de metila (263b) (145 mg, 0,389 mmol) em diclorometano anidro (5,5 ml) foi adicionado trietilamina (0,163 ml, 1,168 mmol). A mistura foi resfriada até -5°C e cloreto de metanossulfonila (0,076 ml, 0,973 mmol) foi adicionado lentamente. Após agitação por uma hora a -5°C a reação foi resfriada bruscamente com água fria e extraída com acetato de etila frio. Os extratos orgânicos foram lavados com água fria, secos em sulfato de sódio anidro, filtrados e concentrados sob pressão reduzida para gerar 3-(2-(2-(2-(3,5-bis((metilsulfonilóxi)metil)fenóxi)etóxi)etóxi)etóxi) propanoato de metila. MS (m/z), encontrado 551,1 (M + Na)+. A uma mistura em agitação de 3-(2-(2-(2-(3,5- bis((metilsulfonilóxi)metil)fenóxi)etóxi)etóxi)etóxi)propanoato de metila (206 mg, 0,390 mmol) e o composto 8 (287mg, 0,974 mmol) em DMF anidro (3,9 ml) foi adicionado carbonato de potássio (269 mg, 1,949 mmol). A reação foi mantida em agitação em temperatura ambiente por 18 horas. A mistura foi resfriada bruscamente com água e extraída três vezes com diclorometano. Os extratos orgânicos foram lavados com água e salmoura, secos em sulfato de sódio anidro, filtrados e concentrados in vacuo. A purificação por cromatografia rápida de sílica-gel (5% MeOH/CH2Cl2) seguida por HPLC de fase reversa preparativa (Coluna C18, eluída com CH3CN/H2O) gerou o composto 263c (110mg, 30%) como um sólido branco. 1H RMN (400 Hz, CDCl3): δ 8,18 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 7,77 (m, 2H), 7,49 (s, 2H), 7,19 (m, 4H), 7,02 (m, 2H), 6,89 (s, 2H), 6,87 (s, 1H), 6,75 (s, 2H), 5,10 (m, 4H), 4,39 (m, 2H), 4,05 (m, 2H), 3,90 (s, 6H), 3,77 (m, 2H), 3,67 (t, J = 6,4 Hz, 2H), 3,64 (m, 2H), 3,59 (s, 3H), 3,70-3,54 (m, 8H), 3,40 (m, 2H), 2,51 (t, J = 6,4 Hz, 2H); MS (m/z), encontrado 965,3 (M + H2O+Na)+, 983,3 (M +2H2O+ Na)+.
Figure img0157
Composto 263d:
[000381] A uma solução do composto 263c (51 mg, 0,055 mmol) em 1,2-Dicloroetano (2,2 ml) foi adicionado hidróxido de trimetilestanho (199 mg, 1,103 mmol). A reação foi agitada por 18 horas a 80°C, em seguida resfriada até temperatura ambiente, e resfriada bruscamente com cloreto de amônio saturado. A mistura foi extraída com diclorometano. A camada orgânica foi lavada com salmoura, seca em sulfato de sódio anidro, filtrada e concentrada. A purificação por cromatografia de sílica-gel (10% MeOH/CH2Cl2) gerou o composto 263d (35mg, 70%). 1H RMN (400 Hz, CDCl3): δ 8,26 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 7,88 (m, 2H), 7,58 (s, 2H), 7,28 (m, 4H), 7,11 (m, 3H), 7,00 (s, 2H), 6,88 (s, 2H), 5,21 (m, 4H), 4,49 (m, 2H), 4,18 (m, 2H), 4,00 (s, 6H), 3,89 (m, 2H), 3,79 (m, 2H), 3,70 (m,10H), 3,51 (m, 2H), 2,62 (m, 2H); MS (m/z), encontrado 909,2 (M -1)-, 927,2 (M -1+ H2O)-, 945,2 (M -1+2H2O)-.
Figure img0158
Composto 263e:
[000382] A uma solução do composto 263d (30 mg, 0,033 mmol) em diclorometano anidro (2,5 mL) foi adicionado N-hidroxissuccinamida (9,77 mg, 0,082 mmol), EDC (15,78 mg, 0,082 mmol), e DMAP (0,406 mg, 3,29 μmol). A reação foi agitada por 18 horas em temperatura ambiente e em seguida diluída com diclorometano. A mistura foi lavada com cloreto de amônio saturado e salmoura. A camada orgânica foi seca em sulfato de sódio anidro, filtrada e concentrada in vacuo. O material bruto foi purificado por HPLC de fase reversa preparativa (Coluna C18, eluído com CH3CN/H2O). As frações contendo o produto foram extraídas com diclorometano, secas em sulfato de sódio anidro, filtradas e co-evaporadas com acetonitrila sob pressão reduzida para gerar composto 263e (4,5mg, 13%) como um sólido branco; MS (m/z), encontrado 1030,4 (M + Na)+, 1046,3 (M +K)+. Exemplo 30 (IGN-27)
Figure img0159
3-(2-(2-(2-(3,5-bis(hidroximetil)fenilamino)etóxi)etóxi) etóxi)propanoato de metila (264a):
[000383] A uma mistura de 3-(2-(2-(2- (tosilóxi)etóxi)etóxi)etóxi)propanoato de metila (263a) (250 mg, 0,640 mmol) e (5-amino-1,3-fenileno)dimetanol (26)(108 mg, 0,704 mmol) em DMF anidro (1,4 ml) foi adicionado carbonato de potássio (133 mg, 0,960 mmol). A reação foi agitada por 18 horas a 80°C e em seguida foi deixada resfriando até temperatura ambiente. A mistura foi resfriada bruscamente com água e extraída duas vezes com acetato de etila. Os extratos orgânicos foram lavados com salmoura, secos em sulfato de magnésio anidro, filtrados e concentrados. A purificação por cromatografia de sílica-gel (5% Metanol/cloreto de metileno) gerou o 3- (2-(2-(2-(3,5-bis(hidroximetil)fenilamino)etóxi)etóxi) etóxi)propanoato de metila (264a) (61mg, 25%); 1H RMN (400 Hz, CDCl3): δ 6,58 (s, 1H), 6,47 (s, 2H), 4,49 (s, 4H), 3,67 (t, J = 6,4 Hz, 2H), 3,62 (s, 3H), 3,64-3,54 (m, 10H), 3,21 (t, J = 5,2 Hz, 2H), 2,51 (t, J = 6,4 Hz, 2H); MS (m/z), encontrado 394,3 (M + Na)+ .
Figure img0160
Composto 264b:
[000384] A uma solução do 3-(2-(2-(2-(3,5- bis(hidroximetil)fenilamino)etóxi) etóxi)etóxi)propanoato de metila (264a)(60 mg, 0,162 mmol) em acetonitrila (1,6 ml) foi adicionado iodometano (0,013 ml, 0,210 mmol) e carbonato de potássio (26,8 mg, 0,194 mmol). A reação foi agitada a 82°C por 18 horas. A mistura foi resfriada até temperatura ambiente e em seguida o solvente foi removido sob pressão reduzida. O material bruto foi diluído com 3:1 CH2Cl2/MeOH e filtrado por Celite. O filtrado foi concentrado e purificado por cromatografia de sílica-gel eluindo com 5% Metanol/diclorometano para gerar o composto 264b (35mg, 56%). 1H RMN (400 Hz, CDCl3): δ 6,58 (s, 3H), 4,52 (s, 4H), 3,64 (t, J = 6,4 Hz, 2H), 3,60 (s, 3H), 3,53 (m, 12H), 2,91 (s, 3H), 2,51 (t, J = 6,4 Hz, 2H), 2,28 (s, 2H); 13C RMN (400 Hz, CDCl3): δ 172,1, 149,8, 142,4, 113,4, 109,9, 70,7, 70,6, 70,4, 70,3, 68,6, 66,5, 65,6, 52,3, 51,7, 38,9, 34,8; MS (m/z), encontrado 408,4 (M + Na)+ .
Figure img0161
Composto 264c:
[000385] A uma solução em agitação do composto 246b (60 mg, 0,156 mmol) em diclorometano anidro (2,8 mL) foi adicionado trietilamina (0,065 mL, 0,467 mmol). A mistura foi resfriada a -5°C e cloreto de metanossulfonila (0,030 mL, 0,389 mmol) foi adicionado lentamente. Após agitação por uma hora a -5°C a reação foi resfriada bruscamente com água fria e extraída com acetato de etila frio. A camada orgânica foi lavada com água fria, seca em sulfato de sódio anidro, filtrada e concentrada sob pressão reduzida para gerar o intermediário dimesilato. MS (m/z), encontrado 564,0 (M + Na)+. A uma mistura de ligante dimesilato (49 mg, 0,090 mmol) e o composto 8 (66,6 mg, 0,226 mmol) em DMF anidro (0,9 mL) foi adicionado carbonato de potássio (62,5 mg, 0,452 mmol). A reação foi agitada por 18 horas em temperatura ambiente, resfriada bruscamente com água e extraída três vezes com diclorometano. Os extratos orgânicos foram lavados com água e salmoura, secos em sulfato de sódio anidro, filtrados e concentrados in vacuo. A purificação por cromatografia rápida de sílica-gel (5% MeOH/CH2Cl2) seguida por HPLC de fase reversa preparativa (Coluna C18, eluído com CH3CN/H2O) gerou o composto 264c (16mg, 19%) como um sólido branco. 1H RMN (400 Hz, CDCl3): δ 8,18 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 7,76 (m, 2H), 7,48 (s, 2H), 7,18 (m, 4H), 7,02 (t, J = 7,2 Hz, 2H), 6,79 (m, 2H), 6,74 (s, 1H), 6,65 (s, 2H), 5,08 (m, 4H), 4,39 (m, 2H), 3,89 (s, 6H), 3,66 (t, J = 6,4 Hz, 2H), 3,62 (m, 2H), 3,60 (s, 3H), 3,53 (m, 12H), 3,40 (m, 2H), 2,91 (s, 3H), 2,51 (t, J = 6,4 Hz, 2H); MS (m/z), encontrado 978,3 (M + H2O + Na)+, 996,3 (M + 2H2O + Na)+.
Figure img0162
Composto 264d :
[000386] A uma solução do Composto 264c (26 mg, 0,028 mmol) em 1,2-Dicloroetano anidro (1,1 ml) foi adicionado hidróxido de trimetilestanho (100 mg, 0,554 mmol). A reação foi agitada por 18 horas a 80°C. A mistura foi deixada resfriando até temperatura ambiente e extraída com diclorometano e cloreto de amônio saturado. Os extratos orgânicos foram lavados com salmoura, secos em sulfato de sódio anidro, filtrados e concentrados in vacuo. A purificação por TLC preparativo em 5% Metanol/cloreto de metileno gerou o composto 264d (14mg, 55%). MS (m/z), encontrado 922,1 (M-1)-, 940,0 (M -1+ H2O)-, 958,1 (M -1+ 2H2O)-.
Figure img0163
Composto 264e :
[000387] A uma solução em agitação do composto 264d (13 mg, 0,014 mmol) em diclorometano anidro (1,0 mL) foi adicionado N- hidroxissuccinamida (5,01 mg, 0,042 mmol), EDC (8,09 mg, 0,042 mmol), e DMAP (0,172 mg, 1,407 μmol). A reação foi agitada por 18 horas em temperatura ambiente. A mistura foi extraída com diclorometano e cloreto de amônio saturado. A camada orgânica foi lavada com salmoura, seca em sulfato de sódio anidro, filtrada e concentrada in vacuo. O material bruto foi purificado por HPLC de fase reversa preparativa (Coluna C18, eluído com CH3CN/H2O). As frações contendo o produto foram combinadas com diclorometano, secas em sulfato de sódio anidro, filtradas e co-evaporadas com acetonitrila sob pressão reduzida para obter o composto 264e (4,1mg, 29%). MS (m/z), encontrado 1021,3 (M + H)+, 1043,2 (M + Na)+, 1061,2 (M + H2O + Na)+, 1079,2 (M + 2H2O + Na)+. Exemplo 31 (IGN-28)
Figure img0164
1-(tosilóxi)-3,6,9,12,15,18,21,24,27,30,33,36- dodecaoxanonatriacontan-39-oato de metila (265b):
[000388] A uma solução em agitação de 1-hidróxi- 3,6,9,12,15,18,21,24,27,30,33,36-dodecaoxanonatriacontan-39-oato de metila (265a)(1,2 g, 1,897 mmol) em diclorometano (9,48 mL) a 0°C foi adicionado trietilamina (0,529 mL, 3,79 mmols), sulfonilcloreto de tolueno (0,542 g, 2,84 mmol) e DMAP (0,023 g, 0,190 mmol). A mistura foi agitada por uma hora a 0°C e em seguida por três horas em temperatura ambiente, após o qual foi resfriada bruscamente com água e extraída duas vezes com diclorometano. Os extratos orgânicos foram lavados com salmoura, secos em sulfato de magnésio anidro, filtrados e concentrados in vacuo. A purificação por cromatografia de sílica-gel (5% MeOH/CH2Cl2) gerou 1-(tosilóxi)- 3,6,9,12,15,18,21,24,27,30,33,36-dodecaoxanonatriacontan-39-oato de metila (265b)(1,0g, 67%) como um óleo amarelo-claro. 1H RMN (400 Hz, CDCl3): δ 7,80 (d, J= 8,4Hz, 2H), 7,35 (d, J = 8,0Hz, 2H), 4,16 (t, J= 4,8Hz, 2H), 3,75 (t, J= 6,4Hz, 2H), 3,69 (s, 3H), 3,64 (m, 46H), 2,60 (t, J = 6,4 Hz, 2H), 2,45 (s, 3H).
Figure img0165
1-(3,5-bis(hidroximetil)fenilamino)-3,6,9,12,15,18,21,24,27,30,33,36- dodecaoxanonatriacontan-39-oato de metila (265c):
[000389] A uma mistura em agitação de 1-(tosilóxi)- 3,6,9,12,15,18,21,24,27,30,33,36-dodecaoxanonatriacontan-39-oato de metila (265b)(700 mg, 0,890 mmol) e (5-amino-1,3- fenilenofenileno)dimetanol (26) (150 mg, 0,978 mmol) em DMF anidro (2,0 ml) foi adicionado carbonato de potássio (184 mg, 1,334 mmol). A reação foi agitada a 80°C durante a noite. A mistura foi resfriada até temperatura ambiente, resfriada bruscamente com água e extraída com 10% Metanol/Cloreto de metileno. A camada orgânica foi lavada com salmoura, seca em sulfato de magnésio anidro, filtrada e concentrada in vacuo. O produto bruto foi purificado por cromatografia de sílica-gel (eluído com 5 ^15% MeOH/CH2Cl2) para gerar 1-(3,5- bis(hidroximetil)fenilamino)-3,6,9,12,15,18,21,24,27,30,33,36- dodecaoxanonatriacontan-39-oato de metila (265c) (285mg, 42%). 1H RMN (400 Hz, CDCl3): δ 6,62 (s, 1H), 6,51 (s, 2H), 4,52 (s, 4H), 3,72 (t, J = 6,4 Hz, 2H), 3,65 (s, 3H), 3,61 (m, 48H), 2,94 (s, 2H), 2,63 (s, 1H), 2,57 (t, J = 6,4 Hz, 2H); MS (m/z), encontrada 790,4 (M +Na)+.
Figure img0166
2-(3,5-bis(hidroximetil)fenil)-5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35,38- dodecaoxa-2-azahentetracontan-41-oato de metil (265d):
[000390] A uma solução em agitação e 1-(3,5- bis(hidroximetil)fenilamino)-3,6,9,12,15,18,21,24,27,30,33,36- dodecaoxanonatriacontan-39-oato de metila (265c) (67 mg, 0,087 mmol) em DMF anidro (1,0 ml) foi adicionado iodometano (7,06 μl, 0,113 mmol) e carbonato de potássio (14,47 mg, 0,105 mmol). A reação foi agitada a 82°C por 18 horas. A mistura foi resfriada até temperatura ambiente, diluída com água e extraída com diclorometano. A camada orgânica foi seca em sulfato de sódio anidro, filtrada e concentrada in vacuo. A purificação por TLC preparativa (10% MeOH/ CH2Cl2) gerou 2-(3,5-bis(hidroximetil)fenil)- 5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35,38-dodecaoxa-2-azahentetracontan- 41-oato de metila (265d) (62mg, 92%). 1H RMN (400 Hz, CDCl3): δ 6,65 (s, 3H), 4,59 (d, J = 5,6 Hz, 4H), 3,74 (t, J = 6,4 Hz, 2H), 3,67 (s, 3H), 3,61 (m, 46H), 3,54 (t, J = 6,0 Hz, 2H) 2,98 (s, 3H), 2,59 (t, J = 6,4 Hz, 2H), 2,55 (m, 2H); MS (m/z), encontrada 820,5 (M +K)+.
Figure img0167
Composto 265e:
[000391] A uma solução em agitação de 2-(3,5-bis(hidroximetil)fenil)- 5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35,38-dodecaoxa-2-azahentetracontan- 41-oato de metila (265d) (71 mg, 0,091 mmol) in diclorometano anidro (1,4 mL) foi adicionado trietilamina (0,038 mL, 0,272 mmol). A mistura foi resfriada a -5°C e cloreto de metanossulfonila (0,018 mL, 0,227 mmol) foi adicionado lentamente. Após agitação por uma hora a -5°C a reação foi resfriada bruscamente com água fria e extraída com acetato de etila frio. Os extratos orgânicos foram lavados com água fria, secos sobre sulfato de sódio anidro, filtrados e concentrados sob pressão reduzida para gerar 2-(3,5-bis((metilsulfonilóxi)metil)fenil)- 5,8,11,14,17,20, 23,26,29,32, 35,38-dodecaoxa-2-azahentetracontan- 41-oato de metila. MS (m/z), encontrada 960,2 (M + Na)+. A uma mistura de 2-(3,5-bis((metilsulfonilóxi)metil)fenil)- 5,8,11,14,17,20,23,26,29,32,35,38-dodecaoxa-2-azahentetracontan- 41-oato de metila (69 mg, 0,074 mmol) e composto 8 (54,1 mg, 0,184 mmol) em DMF anidro (0,8 mL) foi adicionado carbonato de potássio (50,8 mg, 0,368 mmol). A reação foi deixada em agitação por 18 horas em temperatura ambiente. A reação foi resfriada bruscamente com água e extraída duas vezes com diclorometano. A camada aquosa remanescente foi extraída duas vezes com 50% MeOH/CH2Cl2. Os extratos orgânicos combinados foram lavados com salmoura, secos em sulfato de sódio anidro, filtrados e concentrados in vacuo. A purificação por cromatografia rápida de sílica-gel (5% MeOH/CH2Cl2) seguida por HPLC de fase reversa preparativa (Coluna C18, eluído com CH3CN/H2O) gerou o composto 265e (23mg, 23%). MS (m/z), encontrada 1375,4 (M +Na + H2O)+, 1393,4 (M + Na + 2H2O)+.
Figure img0168
Composto 265f:
[000392] A uma solução em agitação do composto 265e (22 mg, 0,016 mmol) em 1,2-dicloroetaneo anidro (300 μL) foi adicionado hidróxido de trimetil estanho (44,7 mg, 0,247 mmol). A reação foi agitada a 90°C por 18 horas. A mistura foi deixada resfriando até temperatura ambiente e em seguida diluída com diclorometano. A camada orgânica foi lavada com salmoura contendo a algumas gotas 5% concentrada ácido clorídrico e em seguida com salmoura isolada, seca em sulfato de sódio anidro, filtrada e concentrada in vacuo. A purificação por TLC preparativa (2x 5% MeOH/CH2Cl2) gerou o composto 265f (7,5mg, 34%). MS (m/z), encontrada 1318,4 (M -1)-, 1336,4 (M -1+ H2O)-, 1354,4 (M -1+2H2O)-.
Figure img0169
Composto 265g:
[000393] A uma solução em agitação do composto 265f (7,5 mg, 5,68 μmol) em diclorometano anidro (400 μL) foi adicionado N- hidroxissuccinamida (1,961 mg, 0,017 mmol), EDC (3,27 mg, 0,017 mmol), e DMAP (0,069 mg, 0,568 μmol). A reação foi agitada por 18 horas em temperatura ambiente. A mistura foi extraída com diclorometano e cloreto de amônio saturado. A camada orgânica foi lavada com salmoura, seca em sulfato de sódio anidro, filtrada e o solvente foi removido sob pressão reduzida. O material bruto foi purificado por HPLC de fase reversa preparativa (Coluna C18, eluído com CH3CN/H2O). As frações contendo o produto foram extraídas com diclorometano, secas em sulfato de sódio anidro, filtrada e co- evaporadas com acetonitrila para gerar o composto 265g (1,5mg, 19%). MS (m/z), encontrada 1439,9 (M +Na)+, 1457,9 (M + Na + H2O)+. Exemplo 32 (IGN-22)
Figure img0170
Composto 266a:
[000394] A uma solução do composto 258d (20mg, 0,050mmol) em diclorometano (1,0mL) foi adicionado succinato de monometila (13,23 mg, 0,100 mmol), EDC (19,20 mg, 0,100 mmol), e DMAP (3,06 mg, 0,025 mmol) foi adicionado. A reação foi agitada em temperatura ambiente por 18 horas. A mistura foi diluída com água e extraída com acetato de etila. Os extratos orgânicos foram lavados com salmoura, filtrada e concentrada sob pressão reduzida. A purificação por cromatografia de sílica-gel (3% MeOH/CH2Cl2) gerou o composto 266a (15mg, 58%). MS (m/z), encontrada 568,4(M + Na + MeOH)+.
Figure img0171
Composto 266b:
[000395] A uma solução do composto 266a (15 mg, 0,029 mmol) em diclorometano (3,5 ml) foi adicionado ácido metanossulfônico (0,114 ml, 1,753 mmol). A reação foi agitada por uma hora em temperatura ambiente em seguida diluída com metanol e água. A mistura foi neutralizada com bicarbonato de sódio saturado até pH=7 e extraída três vezes com diclorometano. A camada orgânica foi seca em sulfato de sódio anidro, filtrada e concentrada in vacuo. A purificação por TLC preparativo (2x 5% MeOH/CH2Cl2) gerou o composto 266b (11,5mg, 93%). MS (m/z), encontrada 446,4(M +Na)+, 478,4 (M +Na+MeOH)+.
Figure img0172
Composto 266c:
[000396] A uma mistura de composto 266b (11,5 mg, 0,027 mmol) e composto 259a (19,98 mg, 0,041 mmol) em DMF anidro (0,5 ml) foi adicionado carbonato de potássio (11,26 mg, 0,081 mmol). A reação foi agitada por 18 horas em temperatura ambiente. A mistura foi resfriada bruscamente com água e extraída três vezes com diclorometano. A camada orgânica foi lavada com salmoura, seca em sulfato de sódio anidro, filtrada e concentrada sob pressão reduzida. A purificação por TLC preparativo (5% MeOH/CH2Cl2) seguido por HPLC de fase reversa preparativa (Coluna C18, eluído com CH3CN, H2O) gerou o composto 266c (4mg, 18%). 1H RMN (400 Hz, CDCl3): δ 8,27 (d, J = 8,0Hz, 1H), 8,06 (s, 1H), 7,87 (m, 2H), 7,74 (m, 1H), 7,55 (s, 1H), 7,52 (s, 1H), 7,49 (m, 1H), 7,26 (m, 1H) 7,19 (d, J = 8,8Hz, 1H), 7,10 (m, 1H), 6,82 (m, 2H), 4,49 (m, 2H), 4,12 (m, 4H), 3,95 (s, 6H), 3,71 (s, 3H), 3,48 (m, 4H), 2,75 (m, 2H), 2,66 (m, 2H), 1,98 (m, 4H), 1,70 (m, 2H); MS (m/z), encontrada 824,1(M +K)+. Exemplo 33 (IGN-31)
Figure img0173
3,5-bis((terc-butildimetilsililóxi)metil)-N-(2-(2-(2-metoxietóxi)etóxi) etil)anilina (267a):
[000397] A uma solução de (5-(2-(2-(2-metoxietóxi)etóxi)etilamino)- 1,3-fenilenofenileno)dimetanol (249b) (0,4 g, 1,336 mmol) em diclorometano (6,68 mL) foi adicionado cloreto de t-butildimetilsilano (0,604 g, 4,01 mmols) e imidazol (0,318 g, 4,68 mmol). A reação foi agitada em temperatura ambiente por 90 minutos. A mistura foi diluída com diclorometano e filtrada por Celite. O filtrado foi concentrado e purificado por cromatografia de sílica-gel eluindo com 20% Acetato de etila/Hexanos para gerar 3,5-bis((terc-butildimetilsililóxi)metil)-N-(2-(2- (2-metoxietóxi)etóxi)etil) anilina (267a) (600mg, 85%). MS (m/z), encontrada 550,3 (M + Na)+.
Figure img0174
N-(3,5-bis((terc-butildimetilsililóxi)metil)fenil)-N-(2-(2-(2- metoxietóxi)etóxi)etil)-4-metil-4-(metildissulfanil)pentanamida (267b):
[000398] A uma mistura de 3,5-bis((terc-butildimetilsililóxi)metil)-N-(2- (2-(2-metoxietóxi)etóxi)etil)anilina (267a) (525 mg, 0,995 mmol) e ácido 4-metil-4-(metildissulfanil)pentanoico (232 mg, 1,193 mmol) em diclorometano anidro (9,0 mL) foi adicionado EDC (229 mg, 1,193 mmol) e DMAP (12,15 mg, 0,099 mmol). A reação foi agitada em temperatura ambiente por cinco horas. A mistura foi diluída com diclorometano e água. A camada orgânica foi lavada com salmoura, seca em sulfato de sódio anidro, filtrada e concentrada sob pressão reduzida. A purificação por cromatografia de sílica-gel (30% Acetato de etila/Hexanos) gerou N-(3,5-bis((terc-butildimetilsililóxi)metil)fenil)-N-(2- (2-(2-metoxietóxi)etóxi)etil)-4-metil-4-(metildissulfanil)pentanamida (267b) (335mg, 48%).
Figure img0175
N-(3,5-bis(hidroximetil)fenil)-N-(2-(2-(2-metoxietóxi)etóxi)etil)-4-metil-4- (metildissulfanil)pentanamida (267c):
[000399] A uma solução em agitação de N-(3,5-bis((terc- butildimetilsililóxi)metil)fenil)-N-(2-(2-(2-metoxietóxi)etóxi)etil)-4-metil-4- (metildissulfanil)pentanamida (267b)(315 mg, 0,447 mmol) em acetonitrila anidra (7,0 mL) a 0°C foi adicionado piridina anidra (7,00 mL) seguido por, sob gotejamento, adição de HF.Piridina (3,1mL, 1mL/100mg). A reação foi agitada a 0°C por duas horas. Foi diluída com acetato de etila e lentamente resfriada bruscamente com bicarbonato de sódio saturado. A mistura foi extraída três vezes com acetato de etila. A camada orgânica foi lavada com água e salmoura, seca em sulfato de sódio, filtrada e concentrada. A purificação por cromatografia de sílica-gel, eluindo com 5% MeOH/CH2Cl2, gerou N- (3,5-bis(hidroximetil)fenil)-N-(2-(2-(2-metoxietóxi)etóxi)etil)-4-metil-4- (metildissulfanil)pentanamida (267c)(190mg, 89%). 1H RMN (400 Hz, CDCl3): δ 7,21 (s, 1H), 7,16 (s, 2H), 4,63 (s, 4H), 3,79 (t, J = 5,2,5,6 Hz, 2H), 3,53 (m, 6H), 3,48 (m, 4H), 3,29 (s, 3H), 2,53 (s, 2H), 2,27 (s, 3H), 2,07 (m, 2H), 1,84 (m, 2H), 1,08 (s, 6H); MS (m/z), encontrada 498,2 (M + Na)+.
Figure img0176
Composto 267d:
[000400] A uma solução em agitação de N-(3,5-bis(hidroximetil)fenil)- N-(2-(2-(2-metoxietóxi)etóxi)etil)-4-metil-4- (metildissulfanil)pentanamida (267c) (72 mg, 0,151 mmol) em diclorometano anidro (3,0 mL) foi adicionado trietilamina (0,063 mL, 0,454 mmol). A mistura foi resfriada a -5°C e cloreto de metanossulfonila (0,029 mL, 0,378 mmol) foi adicionado lentamente. Após agitação por uma hora a -5°C a reação foi resfriada bruscamente com água fria e extraída com acetato de etila frio. A camada orgânica foi lavada com água fria, seca em sulfato de sódio anidro, filtrada e concentrada sob pressão reduzida para gerar (5-(N-(2-(2-(2- metoxietóxi)etóxi) etil)-4-metil-4-(metildissulfanil)pentanamido)-1,3- fenileno)bis(metileno) dimetanossulfonato. MS (m/z), encontrada 654,1 (M + Na)+. A uma mistura de (5-(N-(2-(2-(2-metoxietóxi)etóxi)etil)-4- metil-4-(metildissulfanil)pentanamido)-1,3-fenileno)bis(metileno) dimetanossulfonato (89 mg, 0,141 mmol) e o composto 8 (83 mg, 0,282 mmol) em DMF anidro (1,5 mL) foi adicionado carbonato de potássio (97 mg, 0,704 mmol). A reação foi agitada por 18 horas em temperatura ambiente. A mistura foi resfriada bruscamente com água e extraída duas vezes com diclorometano. A camada orgânica foi lavada com salmoura, seca em sulfato de sódio anidro, filtrada e concentrada in vacuo. A purificação por cromatografia de sílica-gel (5% MeOH/CH2Cl2) e HPLC de fase reversa preparativa (Coluna C18, eluído com CH3CN/ H2O) gerou o composto 267d (27mg, 18%). 1H RMN (400 Hz, CDCl3): δ 8,28 (d, J = 4,8 Hz, 2H), 7,87 (m, 2H), 7,61 (s, 2H), 7,37-7,27 (m, 7H), 7,13 (t, J = 7,2, 7,6 Hz, 2H), 6,88 (s, 2H), 5,25 (m, 4H), 4,50 (m, 2H), 4,00 (s, 6H), 3,90 (m, 2H), 3,73 (m, 2H), 3,60 (m, 6H), 3,51 (m, 6H), 3,30 (s, 3H), 2,32 (s, 3H), 2,15 (m, 2H), 1,90 (m, 2H), 1,13 (s, 6H); MS (m/z), encontrada 1050,3 (M + Na)+, 1068,3 (M+H2O+Na)+, 1086,3 (M+2H2O+Na)+. Exemplo 34 (IGN-32)
Figure img0177
Composto 268a:
[000401] A uma mistura de composto 253b (150 mg, 0,389 mmol) e 3-(2-(2-(2-aminoacetamido)acetamido)acetamido)propanoato de terc- butila (148 mg, 0,467 mmol) em DMF anidro (1,5 ml) foi adicionado EDC (90 mg, 0,467 mmol) e DMAP (4,75 mg, 0,039 mmol). A reação foi agitada por 18 horas em temperatura ambiente. A mistura foi diretamente purificada por HPLC de fase reversa preparativa (Coluna C18, eluída com CH3CN/H2O + 0,1 % de ácido fórmico). Outra purificação por TLC preparativo (15% MeOH/CH2Cl2) gerou o composto 268a (170mg, 64%). 1H RMN (400 Hz, CDCl3): δ 7,62 (m, 1H), 7,56 (m, 1H), 7,38 (m, 1H), 7,11 (m, 1H), 6,55 (s, 2H), 6,52 (s, 1H), 4,45 (s, 4H), 4,17 (s, 2H), 3,63 (m, 6H), 3,55-3,40 (m, 12H), 3,28 (m, 7H), 2,33 (t, J = 6,4 Hz, 2H), 2,16 (m, 2H), 1,79 (m, 2H), 1,36 (s, 9H); MS (m/z), encontrada 706,3 (M + Na)+.
Figure img0178
Composto 268b:
[000402] A uma solução em agitação do composto 268a (59 mg, 0,086 mmol) em diclorometano anidro (1,75 ml) foi adicionado trietilamina (0,036 ml, 0,259 mmol). A mistura foi resfriada a -5°C e cloreto de metanossulfonila (0,017 ml, 0,216 mmol) foi adicionado lentamente. Após agitação por uma hora a -5°C a reação foi resfriada bruscamente com água fria e extraída com acetato de etila frio. Os extratos orgânicos foram lavados com água fria, secos em sulfato de sódio anidro, filtrada e concentrada sob pressão reduzida para gerar o intermediário dimesilato desejado. MS (m/z), encontrada 862,3 (M + Na)+.
[000403] A uma solução do intermediário dimesilato (65 mg, 0,077 mmol) e composto 8 (114 mg, 0,387 mmol) em DMF anidro (1,0 mL) foi adicionado carbonato de potássio (86 mg, 0,619 mmol). A reação foi agitada por 18 horas em temperatura ambiente, em seguida resfriada bruscamente com água e extraída três vezes com diclorometano. A camada orgânica foi lavada com salmoura, seca em sulfato de sódio anidro, filtrada e concentrada sob pressão reduzida. A purificação por cromatografia de sílica-gel (2%^ 10% MeOH/CH2Ch) gerou o composto 268b (22 mg, 21%). 1H RMN (400 Hz, CDCl3): δ 8,26 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 7,88 (m, 2H), 7,58 (s, 2H), 7,28 (m, 4H), 7,13 (t, J = 7,2 Hz, 2H), 6,89 (s, 2H), 6,81 (s, 1H), 6,73 (s, 2H), 5,19 (m, 4H), 4,48 m, 2H), 3,99 (s, 6H), 3,7-3,4 (m, 26H), 3,34 (s, 3H), 2,45 (t, J = 6,4 Hz, 2H), 2,30 (m, 2H), 1,81 (m, 2H), 1,44 (s, 9H).
Exemplo 35 Preparação do conjugado chB38,1-IGN14:
[000404] Uma solução do anticorpo chB38,1 em uma concentração de 2 mg/mL em um tampão aquoso contendo 0,05 M ácido N-(2- hidroxietil)-piperazina-N'-2-etanossulfônico (HEPES) e 2 mM ácido etilenodiaminotetracético (EDTA), pH 8 foi tratada com um excesso molar de 10 vezes de uma solução de IGN14-NHS em dimetilacetamida (DMA) de modo que a concentração final de DMA no tampão seja 10% v/v. A mistura de reação foi agitada em temperatura ambiente por 120 min e em seguida carregada em uma coluna Sephadex G25 de filtração em gel (HiPrep™ 26/10 Coluna de troca iônica GE# 17-5087-01) que foi previamente equilibrada em um tampão aquoso contendo 10 mM histidina, 250 mM glicina, 1% sacarose pH 5,5. As frações contendo anticorpo conjugado foram coletadas e agrupadas ao produto gerado. A amostra agrupada foi dialisada durante a noite contra o mesmo tampão de eluição para outra purificação do produto. O conjugado final foi analisado por espectrofotometria usando os coeficientes de extinção que foram determinados por IGN-14 (ε330 = 15,231 M-1 cm-1 eε 280 = 26,864 M-1 cm-1) e o anticorpo chB38,1 (ε280nm = 204,000 M-1cm-1). Uma média de 3,3 moléculas de IGN14 por molécula de anticorpo foi ligada.
Exemplo 36 Preparação do conjugado de huMy9-6-IGN23
[000405] Uma solução de anticorpo huMy9-6 em uma concentração de 2 mg/mL em um tampão aquoso contendo 0,05 M ácido N-(2- hidroxietil)-piperazina-N'-2-etanossulfônico (HEPES) e 2 mM ácido etilenodiaminetetracético (EDTA), pH 8,5 foi tratado com um excesso molar de 12,5 vezes de uma solução IGN23-NHS em dimetilacetamida (DMA), glicerol, e sacarose. A concentração final de DMA, glicerol e sacarose no tampão foi 15%, 5% e 5% (v/v) respectivamente. Uma mistura de reação foi agitada em temperatura ambiente por 120 min e em seguida carregada em uma coluna Sephadex G25 de filtração em gel (HiPrep™ 26/10 coluna de troca iônica GE# 17-5087-01) que foi previamente equilibrada em um tampão aquoso contendo 10 mM histidina, 250 mM glicina, 1% sacarose, pH 5,5. As frações contendo anticorpo conjugado foram coletadas e agrupadas ao produto gerado. A amostra agrupada foi concentrada usando dispositivos de filtro de centrifugação Millipore, e em seguida dialisada durante a noite contra o mesmo tampão de eluição para outra purificação do produto.
[000406] O conjugado final foi analisado por espectrofotometria usando os coeficientes de extinção que foram determinados por IGN- 23 (e330 = 15,231 M-1 cm-1 e e 280 = 26,864 M-1 cm-1) e huMy9-6 (e 280nm = 206,460 M-1cm-1). Uma média de 2,2 moléculas de IGN23 por molécula de anticorpo foi ligada.
Exemplo 37 Preparação de conjugado chB38,1-IGN27
[000407] Uma solução de anticorpo chB38,1 em uma concentração de 2 mg/mL em um tampão aquoso contendo 0,05 M ácido N-(2- hidroxietil)-piperazina-N'-2-etanossulfônico (HEPES) e 2 mM ácido etilenodiaminetetra-acético (EDTA), pH 8,5 foi tratada com um excesso molar de 12 vezes de uma solução de IGN27-NHS em dimetilacetamida (DMA, 5 mM estoque) de modo que a concentração final de DMA no tampão fosse 15% v/v. A mistura de reação foi agitada em temperatura ambiente por 4 hr e em seguida carregada em uma coluna Sephadex G25 de filtração em gel (HiPrep™ 26/10 coluna de troca iônica GE# 17-5087-01) que tinha sido previamente equilibrada em um tampão aquoso contendo PBS pH 7,4. As frações contendo anticorpo conjugado foram coletadas e agrupadas para gerar o produto. A amostra agrupada foi dialisada durante a noite contra o mesmo tampão de eluição para purificar novamente o produto.
[000408] O conjugado final foi analisado por espectrofotometria usando os coeficientes de extinção que foram determinados para IGN- 27 (e330 = 15,231 M-1 cm-1 e e280 = 26,864 M-1 cm-1) e chB38,1 anticorpo (e280nm = 204,000 M-1cm-1). Uma média de 2,9 moléculas de IGN27 por molécula de anticorpo estava ligada.
Exemplo 38 Potência In vitroFármacos Livres de IGN e Conjugados de IGN:
[000409] Procedimento Geral Usado: Amostras de Fármacos Livres de IGN ou Conjugados de IGN foram adicionadas a placas de cultura de tecido de 96 poços de fundo chato e tituladas usando diluições seriais para cobrir a faixa molar desejada. Células antígeno positivas (Ag+) ou antígeno negativas (Ag-) foram adicionadas aos poços em densidades específicas de células de modo que houvesse amostras em triplicata para cada concentração de fármaco para cada linhagem de células correspondentes. As placas foram então incubadas a 37oC em uma atmosfera de 5% CO2 por 4 a 5 dias dependendo da linhagem de células. COLO 205 (1,000 células/poço), Namalwa (3,000 células/poço) - 4 dias; RH30(1,000 células/poço), Ramos (10,000 células/poço), KB (1,000 células/poço) - 5 dias)
[000410] Ao fim do período de incubação, as potências citotóxicas foram avaliadas usando um ensaio de viabilidade de célula baseado em WST e as células sobreviventes foram medidas pelo desenvolvimento com WST (2 a 7 horas). A absorbância em cada poço foi medida e a fração de células sobreviventes em cada concentração foi plotada para revelar a citotoxicidade e especificidade do antígeno (dos conjugados).
[000411] A citotoxicidade dos Fármacos Livres de IGN e a potência e especificidade dos conjugados de IGN foram medidos contra um grupo de linhagens de células de câncer humano selecionados de COLO 205, NB-4, LOVO, Namalwa, RH30, Ramos, KB, e/ou LOVO. Os resultados estão ilustrados nas figuras 51 a 58.
[000412] Figura 51: Tabela que demonstra alta potência (in nM) dos Fármacos Livres de IGN contra múltiplas linhagens de células. Em geral os Fármacos Livres de IGN demonstram ser potentes na faixa de baixo picomolar contra este grupo de linhagens de células.
[000413] Figura 52: (A) conjugado chB38,1-IGN13 (3,8 IGN/Ab) demonstrou ser potente em níveis sub-picomolares contra células COLO 205 (Ag+) e a atividade foi significativamente diminuída (0,26 nM) quando os sítios de ligação do antígeno foram bloqueados 1 μM de anticorpo chB38,1 não conjugado indicando a alta especificidade deste conjugado (>260 vezes). (B) conjugado chB38,1-IGN13 (3,8 IGN/Ab) demonstrou ser potente em níveis picomolares (0,002 pM) contra células LOVO (Ag+) em um ensaio clonogênico.
[000414] Figura 53: conjugado huMy9-6-IGN13 (3,4 IGN/Ab) demonstrou ser potente em níveis picomolares contra células NB-4 (Ag+) (0,077 nM) e a atividade foi significativamente diminuída (1,0 nM) quando os sítios de ligação do antígeno foram bloqueados com 1 μM de anticorpo huMy9-6 indicando que este conjugado é específico.
[000415] Figura 54: (A) conjugado chB38,1-IGN14 (3,1 IGN/Ab) demonstrou ser potente em níveis sub-picomolares contra células COLO 205 (Ag+) e a atividade foi significativamente menor para células Namalwa (Ag-) (0,9 nM) indicando alta especificidade deste conjugado (>900 vezes). (B) conjugado chB38,1-IGN14 (2,6 IGN/Ab) demonstrou ser muito potente para células LOVO (Ag+) (0,12 nM) e a atividade foi significativamente menor para células Namalwa (Ag-) (>3,0 nM) indicando a alta especificidade deste conjugado (>250 vezes).
[000416] Figura 55: conjugado huMy9-6-IGN14 (3,3 IGN/Ab) demonstrou ser altamente potente contra células NB-4 (Ag+) (0,033 nM) e a atividade foi significativamente menor para células Namalwa (Ag-) (0,6 nM) indicando a alta especificidade deste conjugado.
[000417] Figura 56: (A) conjugado chB38,1-IGN23 (2,5 IGN/Ab) demonstrou ser potente em níveis de picomolar contra células LOVO (Ag+) (0,063 nM) e a atividade foi significativamente menor para células Namalwa (Ag-) (>3,0 nM) indicando a alta especificidade deste conjugado. (B) conjugado chB38,1-IGN23 (2,0 IGN/Ab) demonstrou ser potente em níveis picomolar contra células COLO 205 (Ag+) (0,006 nM) e a atividade foi significativamente diminuída (2,5 nM) quando os sítios de ligação do antígeno foram bloqueados com 1 μM de chB38,1 indicando que este conjugado é específico.
[000418] Figura 57: conjugado chB38,1-IGN29 (2,8 IGN/Ab) demonstrou ser potente em níveis subnanomolares contra células COLO 205 (Ag+) (0,410 nM) e a atividade foi significativamente diminuída (18 nM) quando os sítios de ligação do antígeno foram bloqueados com 1 μM chB38,1 indicando que este conjugado é específico.
Exemplo 39 Eficácia in vivo de conjugado chB38,1-IGN14 em camundongos nus contendo tumor COLO 205:
[000419] Neste estudo, a atividade antitumoral de chB38,1-IGN14 foi investigada em camundongos nus fêmeas contendo tumores COLO 205, um modelo de carcinoma de cólon humano. Células de tumor COLO 205, 2 x 106células/camundongo foram inoculadas por via subcutânea em um volume de 0,1 mL/camundongo na área sobre o ombro direito do camundongo nus fêmea atímica, de 5 semanas de idade. Oito dias após a inoculação com a célula tumoral os camundongos foram randomizados em grupos (n=6 por grupo) por volume do tumor. O tratamento foi iniciado no dia da randomização, e os grupos incluíram um grupo controle dosado com PBS (200 μL/injeção), anticorpo chB38,1 nu (2,8 mg/kg), conjugado chKTI não marcado-IGN14 (50 μg/kg) e chB38,1-IGN14 (dose de 50 μg/kg IGN14; dose de 2,5 mg/kg de anticorpo). Todos os tratamentos foram administrados duas vezes em uma agenda semanal (dias 8 e 15, pós- inoculação da célula). As setas indicam os tempos de doseamento após a inoculação. Todos os tratamentos foram bem tolerados com as perdas médias de massa corporal comparáveis à perda observada no camundongo controle PBS. O volume médio do tumor volume vs tempo é mostrado (Figura 58) com os dados demonstrando a atividade antitumoral do conjugado chB38,1-IGN14. Ambos os anticorpos não- marcados e nus não mostraram atividade além da observada no veículo controle, sugerindo que a atividade antitumoral observada com o conjugado chB38,1-IGN-14 é específica de antígeno.
Exemplo 40
[000420] A figura 59 mostra o espectro de massa de chB38,1-IGN14 (anticorpo deglicosilado). Os picos são marcados D1-D7 para indicar o número de moléculas de IGN14 ligadas por anticorpo. O número médio de moléculas de IGN14 por anticorpo foi calculado como sendo 3,5 (correspondente à carga de fármaco calculada por UV-vis).

Claims (25)

1. Composto, caracterizado pelo fato de que apresenta a fórmula (I) ou (II), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo:
Figure img0179
em que: a linha dupla — entre N e C representa uma ligação simples ou uma ligação dupla, contanto que quando ela é uma ligação dupla, X está ausente e Y é H, e quando ela é uma ligação simples, X é H, ou um grupo de proteção de amina que converte o composto em um profármaco que pode ser transformado na amina livre in vitro ou in vivo; Y é selecionado de -OR, um éster representado por - OCOR', um carbonato representado por -OCOOR', um carbamato representado por -OCONR'R'', uma amina ou uma amino hidroxila representada por NR'R'', amida representada por -NRCOR', um peptídeo representado por NRCOP, em que P é um aminoácido ou um polipeptídeo contendo entre 2 a 20 unidades de aminoácido, um tioéter representado por SR', um sulfóxido representado por SOR', uma sulfona representada por -SO2R', um sulfito -SO3, um bissulfito -OSO3, um halogênio, um ciano, um azido, ou um tiol, em que R, R' e R'' são os mesmos ou diferentes e são selecionados de H, uma alquila, alquenila ou alquinila linear, ramificada ou cíclica substituída ou não substituída, tendo de 1 a 20 átomos de carbono, uma unidade polietileno glicol (-OCH2CH2)n, em que n é um inteiro de 1 a 2000, um anel heteroarila de 5 ou 6 membros contendo um ou mais heteroátomos independentemente selecionados de nitrogênio, oxigênio e enxofre, um sistema de anel fundido de 5 a 18 membros, em que pelo menos um dos anéis é aromático, contendo um ou mais heteroátomos independentemente selecionados de nitrogênio, oxigênio e enxofre, uma arila tendo de 6 a 18 átomos de carbono, um anel heterocíclico de 3 a 18 membros tendo 1 a 6 heteroátomos selecionados de O, S, N e P, em que o substituinte é selecionado de halogênio, OR7, NR8R9, NO2, NRCOR', SR10, um sulfóxido representado por SOR', uma sulfona representada por -SO2R', um sulfito -SO3, um bissulfito -OSO3, uma sulfonamida representada por SO2NRR', um ciano, um azido, -COR11, OCOR11 ou OCONR11R12, em que R7, R8, R9, R10, R11 e R12 são, cada um independentemente selecionados de H, uma alquila, alquenila ou alquinila linear, ramificada ou cíclica, tendo de 1 a 10 átomos de carbono, uma unidade polietileno glicol (-OCH2CH2)n, em que n é um inteiro de 1 a 2000, um anel heteroarila de 5 ou 6 membros contendo um ou mais heteroátomos independentemente selecionados de nitrogênio, oxigênio e enxofre, um sistema de anel fundido de 5 a 18 membros, em que pelo menos um dos anéis é aromático, contendo um ou mais heteroátomos independentemente selecionados de nitrogênio, oxigênio e enxofre, uma arila tendo de 6 a 18 átomos de carbono, um anel heterocíclico de 3 a 18 membros tendo 1 a 6 heteroátomos selecionados de O, S, N e P, e R10 opcionalmente é SR13 ou COR13, em que R13 , é selecionado de uma alquila, alquenila ou alquinila linear, ramificada ou cíclica tendo de 1 a 10 átomos de carbono, uma unidade polietileno glicol (-OCH2CH2)n, em que n é um inteiro de 1 a 2000, um anel heteroarila de 5 ou 6 membros contendo um ou mais heteroátomos independentemente selecionados de nitrogênio, oxigênio e enxofre, um sistema de anel fundido de 5 a 18 membros, em que pelo menos um dos anéis é aromático, contendo um ou mais heteroátomos independentemente selecionados de nitrogênio, oxigênio e enxofre, um anel heterocíclico de 3 a 18 membros tendo 1 a 6 heteroátomos selecionados de O, S, N e P e R11 também pode ser OR14, em que R14 é H ou tem a mesma definição que R, opcionalmente, R''é uma OH; W é C=O, C=S, CH2, BH (B = boro), SO ou SO2; R1, R2, R3, R4, são cada qual independentemente selecionados de H, uma alquila, alquenila ou alquinila linear, ramificada ou cíclica substituída ou não substituída tendo de 1 a 10 átomos de carbono, uma unidade polietileno glicol (-OCH2CH2)n, em que n é um inteiro de 1 a 2000, ou um substituinte selecionado de um halogênio, OR7, NR8R9, NO2, NRCOR', SR10, um sulfóxido representado por SOR', uma sulfona representada por -SO2R', um sulfito -SO3, um bissulfito -OSO3, uma sulfonamida representada por SO2NRR', um ciano, um azido, guanidino [-NH(C=NH)NH2], -COR11, - OCOR11 ou -OCONR11R12, opcionalmente, qualquer um de R1, R2, R3, R4 é um grupo de ligação ou é selecionado de uma unidade polipirrolo, poli-indolila, poli-imidazolila, polipirollo-imidazolila, poli-pirollo-indolila ou polimidazolo-indolila opcionalmente carregando um grupo de ligação; R5 é selecionado de OR15, CRR'OH, SH, CRR'SH, NHR15 ou CRR'NHR15, em que R15 tem a mesma definição que R; opcionalmente, R5 é um grupo de ligação ou é selecionado de uma unidade polipirrolo, poli-indolila, poli-imidazolila, polipirollo- imidazolila, poli-pirollo-indolila ou polimidazolo-indolila opcionalmente carregando um grupo de ligação; R6 é OR, SR, NRR', ou, opcionalmente, R6 é um grupo de ligação; e Z é selecionado de (CH2)n, em que n é 1, 2 ou 3, CR15R16, NR17, O ou S, em que R15, R16 e R17 são cada qual independentemente selecionados de H, uma alquila linear, ramificada ou cíclica tendo de 1 a 10 átomos de carbono, uma unidade polietileno glicol (-OCH2CH2)n, em que n é um inteiro de 1 a 2000; contanto que o composto não tenha mais de um grupo de ligação que permita ligação a um agente de ligação celular através de uma ligação covalente.
2. Composto ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que: a linha dupla — entre N e C representa uma ligação dupla e X está ausente e Y é H, ou a linha dupla — entre N e C representa uma ligação simples em que X é H e Y é selecionado de -OR, um sulfito -SO3, ou um grupo de proteção de amina que converte o composto em um profármaco; W é C=O, CH2, ou SO2; R1, R2, R3, R4, são cada qual H; opcionalmente, independentemente, qualquer um de R1, R2, R3 e R4 pode ser o grupo de ligação; R5 é selecionado de OR15, CRR'OH, SH, CRR'SH, NHR15 ou CRR'NHR15, em que R15 é H ou tem a mesma definição dada acima para R, ou é selecionado de uma unidade polipirrolo, poli-indolila, poli- imidazolila, polipirollo-imidazolila, poli-pirollo-indolila ou polimidazolo- indolila opcionalmente carregando um grupo de ligação; R6 é OCH3; e Z é selecionado de (CH2)n, em que n é 1 ou 2, NH, NCH3 ou S.
3. Composto de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que é selecionado das fórmulas (VII), (VIII), e (IX):
Figure img0180
ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.
4. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 3, caracterizado pelo fato de que R5 é selecionado de: -OH, -O(CR20R21)m(CR22R23)n(OCH2CH2)p(CR40R41)p”Y’’(CR24R25)q(CO)tX’’, - O(CR20R21)m(CR26=CR27)m’(CR22R23)n(OCH2CH2)p(CR40R41)p”Y’’(CR24R2 5)q(CO)tX’’, - O(CR20R21)m(alquinil)n’(CR22R23)n(OCH2CH2)p(CR40R41)p”Y’’(CR24R25)q( CO)tX’’, - O(CR20R21)m(indolo)p’(CR22R23)n(OCH2CH2)p(CR40R41)p”Y’’(CR24R25)q(C O)tX’’ - O(CR20R21)m(pirrolo)q’(CR22R23)n(OCH2CH2)p(CR40R41)p”Y’’(CR24R25)q(C O)tX’’, -O(CR20R21)m(pirrolo)q’(imidazolo)q’’(CR22R23)n(OCH2CH2)p(CR40R41)p”Y’’ (CR24R25)q(CO)tX’’, - O(CR20R21)m(imidazolo)q’’(CR22R23)n(OCH2CH2)p(CR40R41)p”Y’’(CR24R25) q(CO)tX’’, -O(CR20R21)m(pirrolo)q’(indolo)q’’(CR22R23)n(OCH2CH2)p(CR40R41)p”Y’’(C R24R25)q(CO)t’, -O(CR20R21)m(indolo)q’(imidazolo)q’’(CR22R23)n(OCH2CH2)p(CR40R41)p”Y’’(CR24R25)q(O)tX’’, - O(CR20R21)m(piperazino)t’(CR22R23)n(OCH2CH2)p(CR40R41)p”Y’’(CR24R25) q(CO)tX’’, - O(CR20R21)mA”m”(CR22R23)n(OCH2CH2)p(CR40R41)p”Y’’(CR24R25)q(CO)tX’’ , -SH, -S(CR20R21)m(CR22R23)n(OCH2CH2)p(CR40R41)p”Y’’(CR24R25)q(CO)tX’’, - S(CR20R21)m(CR26=CR27)m’(CR22R23)n(OCH2CH2)p(CR40R41)p”Y’’(CR24R2 5)q(CO)tX’’, - S(CR20R21)m(alquinil)n’(CR22R23)n(OCH2CH2)p(CR40R41)p”Y’’(CR24R25)q(C O)tX’’, - S(CR20R21)m(indolo)p’(CR22R23)n(OCH2CH2)p(CR40R41)p”Y’’(CR24R25)q(C O)tX’’, - S(CR20R21)m(pirrolo)q’(CR22R23)n(OCH2CH2)p(CR40R41)p”Y’’(CR24R25)q(C O)tX’’, - S(CR20R21)m(imidazolo)q’’(CR22R23)n(OCH2CH2)p(CR40R41)p”Y’’(CR24R25) q(CO)tX’’, -S(CR20R21)m(pirrolo)q’(imidazolo)q’’(CR22R23)n(OCH2CH2)p(CR40R41)p”Y’’ (CR24R25)q(CO)tX’’, -S(CR20R21)m(pirrolo)q’(indolo)q’’(CR22R23)n(OCH2CH2)p(CR40R41)p”Y’’(CR 24R25)q(CO)t’’, -S(CR20R21)m(indolo)q’(imidazolo)q’’(CR22R23)n(OCH2CH2)p(CR40R41)p”Y’’( CR24R25)q(CO)tX’’,S(CR20R21)m(piperazino)t’(CR22R23)n(OCH2CH2)p(CR40R41)p”Y’’(CR24R25) q(CO)tX’’, - S(CR20R21)mA”m”(CR22R23)n(OCH2CH2)p(CR40R41)p”Y’’(CR24R25)q(CO)tX’’ , -NH2, -NR28(CR20R21)m(CR22R23)n(OCH2CH2)p(CR40R41)p”Y”(CR24R25)q(CO)tX”, -NR28(CR20R21)m(CR26=CR27)m’(CR22R23)n(OCH2CH2)p(CR40R41)p”Y’’(CR 24R25)q(CO)tX, - NR28(CR20R21)m(alquinil)n’(CR22R23)n(OCH2CH2)p(CR40R41)p”Y’’(CR24R25 )q(CO)tX”, - NR28(CR20R21)m(indolo)p’(CR22R23)n(OCH2CH2)p(CR40R41)p”Y’’(CR24R25)q (CO)tX”, - NR28(CR20R21)m(pirrolo)q’(CR22R23)n(OCH2CH2)p(CR40R41)p”Y’’(CR24R25) q(CO)tX”, -NR28(CR20R21)m(imidazole)q’’(CR22R23)n(OCH2CH2)p(CR40R41)p”Y’’(CR24 R25)q(CO)tX”, -NR28(CR20R21)m(pirrolo)q’(imidazolo)q”(CR22R23)n(OCH2CH2)p(CR40R41)p ”Y”(CR24R25)q(CO)tX”, -NR28(CR20R21)m(pirrolo)q’(indolo)q’’(CR22R23)n(OCH2CH2)p(CR40R41)p”Y”- (CR24R25)q(CO)tX”, - NR28(CR20R21)m(indolo)q’(imidazolo)q’’(CR22R23)n(OCH2CH2)p(CR40R41)p” Y’’-(CR24R25)q(CO)tX’’, - NR28(CR20R21)m(piperazino)t’(CR22R23)n(OCH2CH2)p(CR40R41)p”Y’’(CR24R25)q(CO)tX’’, - NR28(CR20R21)mA”m”(CR22R23)n(OCH2CH2)p(CR40R41)p”Y’’(CR24R25)q(CO )tX’’, -(CR20R21)m(CR22R23)n(OCH2CH2)p(CR40R41)p”Y’’(CR24R25)q(CO)tX’’, - (CR20R21)m(CR26=CR27)m’(CR22R23)n(OCH2CH2)p(CR40R41)p”Y’’(CR24R25) q(CO)tX’’, - (CR20R21)m(alquinil)n’(CR22R23)n(OCH2CH2)p(CR40R41)p”Y’’(CR24R25)q(C O)tX’’, - (CR20R21)m(indolo)p’(CR22R23)n(OCH2CH2)p(CR40R41)p”Y’’(CR24R25)q(CO) tX’’, - (CR20R21)m(pirrolo)q’(CR22R23)n(OCH2CH2)p(CR40R41)p”Y’’(CR24R25)q(CO )tX’’, - (CR20R21)m(piperazino)t’(CR22R23)n(OCH2CH2)p(CR40R41)p”Y’’(CR24R25)q( CO)tX’’, -(CR20R21)m(pirrolo)q’(indolo)q”(CR22R23)n(OCH2CH2)p(CR40R41)p”Y”(CR24R 25)q(CO)tX”, -(CR20R21)m(imidazolo)q’’(CR22R23)n(OCH2CH2)p(CR40R41)p”Y’’(CR24R25)q( CO)tX”, -(CR20R21)m(pirrolo)q’(imidazolo)q”(CR22R23)n(OCH2CH2)p(CR40R41)p”Y”(CR 24R25)q(CO)t”, -(CR20R21)m(imidazolo)q’(indolo)q”(CR22R23)n(OCH2CH2)p(CR40R41)p”Y”(C R24R25)q(CO)tX”, -(CR20R21)mA”m”(CR22R23)n(OCH2CH2)p(CR40R41)p”Y”(CR24R25)q(CO)tX”, -(CR20R21)m(CR29=N-NR30)n”(CR22R23)n(OCH2CH2)p(CR40R41)p”Y”(CR24R25)q(CO)tX”, -(CR20R21)m(CR29=N-NR30)n”(CR26=CR27)m’(CR22R23)n(OCH2CH2)p(CR40 R41)p”Y”(CR24R25)q(CO)tX”, -(CR20R21)m(CR29=N-NR30)n”(alquinil)n’(CR22R23)n(OCH2CH2)p(CR40R41)p ”Y’’(CR24R25)q(CO)tX’’, -(CR20R21)m(CR29=N-NR30)n”A”m”(CR22R23)n(OCH2CH2)p(CR40R41)p”Y”(C R24R25)q(CO)tX”, em que: m, n, p, q, m', n', p', q', q'', são inteiros de 1 a 10 e podem ser 0; t, m", n" e p"são 0 ou 1; X"é selecionado de OR36, SR37, NR38R39, em que R36, R37, R38, R39 são H, ou uma alquila, alquenila ou alquinila linear, ramificada ou cíclica tendo de 1 a 20 átomos de carbono e/ou uma unidade polietileno glicol -(OCH2CH2)n, opcionalmente R37 é um grupo protetor tiol, ou quando t = 1, COX'' forma um éster reativo selecionado de ésteres N-hidroxisuccinimida, ésteres N-hidroxiftalimida, ésteres N- hidróxi sulfo-succinimida, ésteres para-nitrofenila, ésteres dinitrofenila, ésteres pentafluorfenila e seus derivados, em que os ditos derivados facilitam formação de amida; 1. ' está ausente ou é selecionado de O, S, S-S ou NR32, em que R32 tem a mesma definição dada acima para R, ou quando Y" não é S-S e t = 0, X" é selecionado de um grupo maleimido, um grupo haloacetil ou SR37, em que R37 tem a mesma definição que acima; A" é um aminoácido selecionado de glicina, alanina, leucina, valina, lisina, citrulina e glutamato ou um polipeptídeo contendo entre 2 a 20 unidades de aminoácido; R20, R21, R22, R23, R24, R25, R26, R27 são os mesmos ou diferentes e são H ou uma alquila linear ou ramificada tendo de 1 a 5 átomos de carbono; R28 é H ou alquila; R29 e R30 são os mesmos ou diferentes e são H ou uma alquila de 1 a 5 átomos de carbono; opcionalmente, um de R40 e R41 é um grupo funcional carregado negativamente ou positivamente e o outro é H ou uma alquila, alquenila, alquinila tendo 1 a 4 átomos de carbono.
5. Composto de acordo com a reivindicação 3, caracterizado pelo fato de que o composto é representado pela fórmula (VIII):
Figure img0181
ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.
6. Composto, caracterizado pelo fato de que é selecionado da fórmula (IV) ou (V), ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo:
Figure img0182
em que: a linha dupla — entre N e C representa uma ligação simples ou uma ligação dupla, contanto que quando ela é uma ligação dupla X está ausente e Y é H, e quando ela é uma ligação simples, X é H ou um grupo amina protetor que converte o composto em um profármaco; Y é selecionado de -OR, um éster representado por - OCOR', um carbonato representado por -OCOOR', um carbamato representado por -OCONR'R'', uma amina ou uma amina hidroxila representada por NR'R'', amida representada por -NRCOR', um peptídeo representado por NRCOP, em que P é um aminoácido ou um polipeptídeo contendo entre 2 a 20 unidades de aminoácido, um tioéter representado por SR', um sulfóxido representado por SOR', uma sulfona representada por -SO2R', um sulfito -SO3, um bissulfito -OSO3, um halogênio, um ciano, um azido, ou um tiol, em que R, R' e R'' são os mesmos ou diferentes e são selecionados de H, uma alquila, alquenila ou alquinila linear, ramificada ou cíclica substituída ou não substituída tendo de 1 a 10 átomos de carbono, uma unidade polietileno glicol (-OCH2CH2)n, em que n é um inteiro de 1 a 2000, um anel heteroarila de 5 ou 6 membros contendo um ou mais heteroátomos independentemente selecionados de nitrogênio, oxigênio e enxofre, um sistema de anel fundido de 5 a 18 membros, em que pelo menos um dos anéis é aromático, contendo um ou mais heteroátomos independentemente selecionados de nitrogênio, oxigênio e enxofre, uma arila tendo de 6 a 18 átomos de carbono, um anel heterocíclico de 3 a 18 membros tendo 1 a 6 heteroátomos selecionados de O, S, N e P, em que o substituinte é selecionado de halogênio, OR7, NR8R9, NO2, NRCOR', SR10, um sulfóxido representado por SOR', uma sulfona representada por -SO2R', um sulfito -SO3, um bissulfato -OSO3, uma sulfonamida representada por SO2NRR', um ciano, um azido, -COR11, OCOR11 ou OCONR11R12, em que R7, R8, R9, R10, R11 e R12 são cada qual independentemente selecionados de H, uma alquila, alquenila ou alquinila linear, ramificada ou cíclica tendo de 1 a 10 átomos de carbono, uma unidade polietileno glicol (-OCH2CH2)n, em que n é um inteiro de 1 a 2000, um anel heteroarila de 5 ou 6 membros contendo um ou mais heteroátomos independentemente selecionados de nitrogênio, oxigênio e enxofre, um sistema de anel fundido de 5 a 18 membros, em que pelo menos um dos anéis é aromático, contendo um ou mais heteroátomos independentemente selecionados de nitrogênio, oxigênio e enxofre, uma arila tendo de 6 a 18 átomos de carbono, um anel heterocíclico de 3 a 18 membros tendo de 1 a 6 heteroátomos selecionados de O, S, N e P, e R10 é opcionalmente SR13 ou COR13 , em que R13 é selecionado de uma alquila, alquenila ou alquinila linear, ramificada ou cíclica tendo de 1 a 10 átomos de carbono, um anel heteroarila de 5 ou 6 membros contendo um ou mais heteroátomos independentemente selecionados de nitrogênio, oxigênio e enxofre, um sistema de anel fundido de 5 a 18 membros, em que pelo menos um dos anéis é aromático, contendo um ou mais heteroátomos independentemente selecionados de nitrogênio, oxigênio e enxofre, uma arila tendo de 6 a 18 átomos de carbono, um anel heterocíclico de 3 a 18 membros tendo 1 a 6 heteroátomos selecionados de O, S, N e P, opcionalmente R11 é OR14, em que R14 tem a mesma definição que R, opcionalmente R''é OH; W é C=O, C=S, CH2, BH, SO ou SO2; R1, R2, R3, R4, R1', R2', R3' e R4'são cada qual independentemente selecionados de H, uma alquila, alquenila ou alquinila linear, ramificada ou cíclica substituída ou não substituída tendo de 1 a 10 átomos de carbono, uma unidade polietileno glicol (- OCH2CH2)n, em que n é um inteiro de 1 a 2000, ou um substituinte selecionado de um halogênio, guanidino [-NH(C=NH)NH2], OR7, NR8R9, NO2, NRCOR', SR10, um sulfóxido representado por SOR', uma sulfona representada por -SO2R', um sulfito -SO3, um bissulfito -OSO3, uma sulfonamida representada por SO2NRR', um ciano, um azido, - COR11, OCOR11 ou OCONR11R12, opcionalmente, qualquer um de R1, R2, R3, R4, R1', R2', R3' ou R4'é um grupo de ligação ou é selecionado de uma unidade polipirrolo, poli-indolila, poli-imidazolila, polipirollo- imidazolila, poli-pirollo-indolila ou polimidazolo-indolila opcionalmente carregando um grupo de ligação; Z é selecionado de (CH2)n, em que n é 1, 2 ou 3, CR15R16, NR17, O ou S, em que R15, R16 e R17 são cada qual independentemente selecionados de H, uma alquila linear, ramificada ou cíclica tendo de 1 a 10 átomos de carbono, uma unidade polietileno glicol (-OCH2CH2)n, em que n é um inteiro de 1 a 2000; R6 é OR, SR ou NRR', opcionalmente R6 é um grupo de ligação; A e A'são os mesmos ou diferentes e são selecionados de O, -CRR'O, S, -CRR'S, -NR15 ou CRR'NHR15, em que R15 tem a mesma definição que R; D e D'são os mesmos ou diferentes e independentemente selecionados de uma alquila, alquenila ou alquinila linear, ramificada ou cíclica tendo 1 a 10 átomos de carbono, opcionalmente substituídos com qualquer um de halogênio, OR7, NR8R9, NO2, NRCOR', SR10, um sulfóxido representado por SOR', uma sulfona representada por - SO2R', um sulfito -SO3, um bissulfito -OSO3, uma sulfonamida representada por SO2NRR', um ciano, um azido, -COR11, OCOR11 ou OCONR11R12, ou uma unidade polietileno glicol (-OCH2CH2)n, em que n é um inteiro de 1 a 2000; L é ausente, ou um grupo fenila ou anel heterocíclico de 3 a 18 membros tendo 1 a 6 heteroátomos selecionados de O, S, N e P, em que o dito grupo fenila ou anel heterocíclico representado por L é opcionalmente substituído, em que o substituinte é um grupo de ligação, ou é selecionado de alquila, alquenila ou alquinila linear, ramificada ou cíclica tendo de 1 a 10 átomos de carbono, opcionalmente substituídos com qualquer um de halogênio, OR7, NR8R9, NO2, NRCOR', SR10, um sulfóxido representado por SOR', uma sulfona representada por -SO2R', um sulfito -SO3, um bissulfito -OSO3, uma sulfonamida representada por SO2NRR', um ciano, um azido, - COR11, OCOR11 ou OCONR11R12, uma unidade polietileno glicol (- OCH2CH2)n, em que n é um inteiro de 1 a 2000; opcionalmente, L por si só é um grupo de ligação; contanto que o composto não tenha mais de um grupo de ligação que permita ligação a um agente de ligação celular através de uma ligação covalente.
7. Composto ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo de acordo com a reivindicação 6, caracterizado pelo fato de que: a linha dupla — entre N e C representa uma ligação simples ou uma ligação dupla, contanto que quando ela é uma ligação dupla X está ausente e Y é H, e quando ela é uma ligação simples, X é H ou um grupo de proteção de amina que converte o composto em um profármaco; Y é selecionado de -OR, NR'R", um sulfito -SO3, ou um bissulfito -OSO3, em que R é selecionado de H, uma alquila, alquenila ou alquinila linear, ramificada ou cíclica tendo de 1 a 10 átomos de carbono, uma unidade polietileno glicol (-OCH2CH2)n, em que n é um inteiro de 1 a 2000, uma arila tendo de 6 a 10 átomos de carbono, ou um anel heterocíclico tendo de 3 a 10 átomos de carbono; W é C=O, CH2ou SO2; R1, R2, R3, R4, R1', R2', R3' e R4' são cada qual independentemente selecionados de H, NO2 ou um grupo de ligação que permite ligação a um agente de ligação celular através de uma ligação covalente;R6 é OR18, em que R18 tem a mesma definição que R; Z é selecionado de (CH2)n, em que n é 1, 2 ou 3, CR15R16, NR17, O ou S, em que R15, R16 e R17 são cada qual independentemente selecionados de H, uma alquila linear, ramificada ou cíclica tendo de 1 a 10 átomos de carbono, uma unidade polietileno glicol (-OCH2CH2)n, em que n é um inteiro de 1 a 2000; A e A'são cada qual O; D e D'são os mesmos ou diferentes e independentemente selecionados de uma alquila, alquenila ou alquinila linear, ramificada ou cíclica tendo de 1 a 10 átomos de carbono; L é ausente, ou um grupo fenila ou um anel heterocíclico tendo de 3 a 10 átomos de carbono, em que o dito grupo fenila ou anel heterocíclico representado por L é opcionalmente substituído, em que o substituinte é um grupo de ligação, ou é selecionado de uma alquila, alquenila ou alquinila linear, ramificada ou cíclica tendo de 1 a 10 átomos de carbono, opcionalmente substituídos com qualquer um de halogênio, OR7, NR8R9, NO2, NRCOR', SR10, um sulfóxido representado por SOR', uma sulfona representada por -SO2R', um sulfito -SO3, um bissulfito -OSO3, uma sulfonamida representada por SO2NRR', um ciano, um azido, -COR11, OCOR11 ou OCONR11R12, uma unidade polietileno glicol (-OCH2CH2)n, em que n é um inteiro de 1 a 2000; opcionalmente, L por si só é um grupo de ligação que permite ligação a um agente de ligação celular através de uma ligação covalente.
8. Composto ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo de acordo com a reivindicação 6, caracterizado pelo fato de que é selecionado das fórmulas (XII) e (XIII):
Figure img0183
em que: a linha dupla — entre N e C representa uma ligação simples ou uma ligação dupla, contanto que quando ela é uma ligação dupla, X está ausente e Y é H, e quando ela é uma ligação simples, X é H ou um grupo de proteção de amina que converte o composto em um profármaco; Y é selecionado de OH, um éter representado por - OR, NR'R", um sulfito -SO3, ou um bissulfito -OSO3, em que R, R' e R" são selecionados de alquila, alquenila ou alquinila linear, ramificada ou cíclica tendo de 1 a 10 átomos de carbono; um de R2, R3, R2' e R3' é um grupo de ligação e os outros são H ou NO2; R6 é OR; Z é CH2 ou NR; A é O ou NR15; L é (CH2)nn, em que nn é 0 ou um inteiro entre 1 e 5, ou uma alquila ou alquenila substituída ou não substituída tendo de 2 a 4 átomos de carbono, em que o substituinte é selecionado de halogênio, OR7, NR8R9, NO2, NRCOR', SR10, um sulfóxido representado por SOR', uma sulfona representada por -SO2R', um sulfito -SO3, um bissulfito -OSO3, uma sulfonamida representada por SO2NRR', um ciano, um azido, -COR11, OCOR11 ou OCONR11R12, opcionalmente, L por si só é um grupo de ligação; um de L', L'' ou L"'é um grupo de ligação, enquanto os outros são H; preferivelmente L'é o grupo de ligação; e G é CH ou N.
9. Composto ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo de acordo com a reivindicação 6, caracterizado pelo fato de que é selecionado das fórmulas (XIV) e (XV):
Figure img0184
em que: a linha dupla — entre N e C representa uma ligação simples ou uma ligação dupla, contanto que quando ela é uma ligação dupla, X está ausente e Y é H, e quando ela é uma ligação simples, X é H ou um grupo de proteção de amina que converte o composto em um profármaco; Y é selecionado de OH, um éter representado por -OR, um sulfito -SO3, ou um bissulfito -OSO3, em que R é selecionado de uma alquila, alquenila ou alquinila linear, ramificada ou cíclica tendo de 1 a 10 átomos de carbono; nn é 0 ou um inteiro de 1 a 5; um de R2, R3, R2' e R3' é um grupo de ligação e os outros são H ou NO2; um de L', L'' ou L"' é um grupo de ligação, contanto que quando um de L', L'' ou L"'é um grupo de ligação, os outro são H; e G é CH ou N.
10. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 6 a 9, caracterizado pelo fato de que um de R1, R2, R3, R4, R1', R2', R3', R4', L', L'', L'''é independentemente selecionado de: -O(CR20R21)m(CR22R23)n(OCH2CH2)p(CR40R41)p”Y’’(CR24R25)q(CO)tX’’, - O(CR20R21)m(CR26=CR27)m’(CR22R23)n(OCH2CH2)p(CR40R41)p”Y’’(CR24R2 5)q(CO)tX’’, - O(CR20R21)m(alkynyl)n’(CR22R23)n(OCH2CH2)p(CR40R41)p”Y’’(CR24R25)q(C O)tX’’, - O(CR20R21)m(piperazino)t’(CR22R23)n(OCH2CH2)p(CR40R41)p”Y’’(CR24R25) q(CO)tX’’, - O(CR20R21)m(pyrrolo)t’(CR22R23)n(OCH2CH2)p(CR40R41)p”Y’’(CR24R25)q(C O)tX’’, - O(CR20R21)mA”m”(CR22R23)n(OCH2CH2)p(CR40R41)p”Y’’(CR24R25)q(CO)tX’’ , -S(CR20R21)m(CR22R23)n(OCH2CH2)p(CR40R41)p”Y’’(CR24R25)q(CO)tX’’, - S(CR20R21)m(CR26=CR27)m’(CR22R23)n(OCH2CH2)p(CR40R41)p”Y’’(CR24R2 5)q(CO)tX’’, - S(CR20R21)m(alkynyl)n’(CR22R23)n(OCH2CH2)p(CR40R41)p”Y’’(CR24R25)q(C O)tX’’, - S(CR20R21)m(piperazino)t’(CR22R23)n(OCH2CH2)p(CR40R41)p”Y’’(CR24R25) q(CO)tX’’, - S(CR20R21)m(pyrrolo)t’(CR22R23)n(OCH2CH2)p(CR40R41)p”Y’’(CR24R25)q(C O)tX’’, - S(CR20R21)mA”m”(CR22R23)n(OCH2CH2)p(CR40R41)p”Y’’(CR24R25)q(CO)tX’’ NR33(C=O)p”(CR20R21)m(CR22R23)n(OCH2CH2)p(CR40R41)p”Y’’(CR24R25)q( CO)tX’’, -NR33(C=O)p”(CR20R21)m(CR26=CR27)m’(CR22R23)n(OCH2CH2)p(CR40R41) p”Y’’(CR24R25)q(CO)tX’’, -NR33(C=O)p”(CR20R21)m(alkynyl)n’(CR22R23)n(OCH2CH2)p(CR40R41)p”Y’’( CR24R25)q(CO)tX’’, -NR33(C=O)p”(CR20R21)m(piperazino)t’(CR22R23)n(OCH2CH2)p(CR40R41)p”Y’ ’(CR24R25)q(CO)tX’’, -NR33(C=O)p”(CR20R21)m(pyrrolo)t’(CR22R23)n(OCH2CH2)p(CR40R41)p”Y’’( CR24R25)q(CO)tX’’, - NR33(C=O)p”(CR20R21)mA”m”(CR22R23)n(OCH2CH2)p(CR40R41)p”Y’’(CR24R 25)q(CO)tX’’, -(CR20R21)m(CR22R23)n(OCH2CH2)p(CR40R41)p”Y’’(CR24R25)q(CO)tX’’, - (CR20R21)m(CR26=CR27)m’(CR22R23)n(OCH2CH2)p(CR40R41)p”Y’’(CR24R25) q(CO)tX’’, - (CR20R21)m(alkynyl)n’(CR22R23)n(OCH2CH2)p(CR40R41)p”Y’’(CR24R25)q(CO )tX’’, - (CR20R21)m(piperazino)t’(CR22R23)n(OCH2CH2)p(CR40R41)p”Y’’(CR24R25)q(CO)tX’’, -(CR20R21)mA”m”(CR22R23)n(OCH2CH2)p(CR40R41)p”Y’’(CR24R25)q(CO)tX’’, -(CR20R21)m(CR29=N- NR30)n”(CR22R23)n(OCH2CH2)p(CR40R41)p”Y’’(CR24R25)q(CO)tX’’, -(CR20R21)m(CR29=N-NR30)n”(CR26=CR27)m’(CR22R23)n(OCH2CH2)p(CR40 R41)p”Y’’(CR24R25)q(CO)tX’’, -(CR20R21)m(CR29=N-NR30)n”(alkynyl)n’(CR22R23)n(OCH2CH2)p(CR40R41)p” Y’’(CR24R25)q(CO)tX’’, -(CR20R21)m(CR29=N-NR30)n”A”m”(CR22R23)n(OCH2CH2)p(CR40R41)p”Y’’(C R24R25)q(CO)tX’’,em que: m, n, p, q, m', n', t'são inteiros de 1 a 10, ou são opcionalmente 0; t, m", n" e p"são 0 ou 1; X"é selecionado de OR36, SR37, NR38R39, em que R36, R37, R38, R39 são H, ou uma alquila, alquenila ou alquinila linear, ramificada ou cíclica tendo de 1 a 20 átomos de carbono e/ou uma unidade polietileno glicol -(OCH2CH2)n, R37, opcionalmente, é um grupo protetor tiol, ou quando t = 1, COX'' forma um éster reativo selecionado de ésteres N-hidroxisuccinimida, ésteres N-hidroxiftalimida, ésteres N- hidróxi sulfo-succinimida, ésteres para-nitrofenil, ésteres dinitrofenil, ésteres pentafluorfenil e seus derivados, em que os ditos derivados facilitam a formação de ligação amida; Y'' está ausente ou é selecionado de O, S, S-S ou NR32, em que R32 tem a mesma definição dada acima para R, contanto que, quando Y" não é S-S e t = 0, X" é selecionado de um grupo maleimido, um grupo haloacetil ou SR37, em que R37 tem a mesma definição que acima; A" é um aminoácido selecionado de glicina, alanina, leucina, valina, lisina, citrulina e glutamato ou um polipeptídeo contendo entre 2 a 20 unidades de aminoácido; R20, R21, R22, R23, R24, R25, R26, e R27 são os mesmos ou diferentes e são H ou uma alquila linear ou ramifiada tendo de 1 a 5 átomos de carbono; R29 e R30 são os mesmos ou diferentes e são H ou uma alquila de 1 a 5 átomos de carbono; R33 é H ou uma alquila, alquenila ou alquinila linear, ramificada ou cíclica tendo de 1 a 12 átomos de carbono, uma unidade polietileno glicol -(OCH2CH2)n, ou R33 é -COR34, -CSR34, -SOR34, ou - SO2R34, em que R34 é H ou uma alquila, alquenila ou alquinila linear, ramificada ou cíclica tendo de 1 a 20 átomos de carbono ou, uma unidade polietileno glicol -(OCH2CH2)n; e um de R40 e R41 é opcionalmente um grupo funcional negativamente ou positivamente carregado e o outro é H ou uma alquila, alquenila, alquinila tendo 1 a 4 átomos de carbono.
11. Composto, caracterizado pelo fato de que é selecionado do grupo que consiste em:
Figure img0185
Figure img0186
Figure img0187
Figure img0188
Figure img0189
Figure img0190
Figure img0191
Figure img0192
Figure img0193
12. Conjugado, caracterizado pelo fato de que compreende o composto, como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 11, com um agente de ligação celular.
13. Conjugado de acordo com a reivindicação 12, caracterizado pelo fato de que compreende um anticorpo e 1 a 10 compostos como definidos em qualquer uma das reivindicações 1 a 11.
14. Conjugado de acordo com a reivindicação 13, caracterizado pelo fato de que compreende um anticorpo e 2 a 5 compostos como definidos em qualquer uma das reivindicações 1 a 11.
15. Conjugado de acordo com a reivindicação 12, caracterizado pelo fato de que o agente de ligação celular se liga a células alvo selecionadas de células tumorais, células infectadas por vírus, células infectadas por microrganismo, células infectadas por parasitas, células autoimunes, células ativadas, células mielóides, células T ativadas, células B ou melanócitos; células que expressam os antígenos CD4, CD6, CD19, CD20, CD22, CD30, CD33, CD37, CD38, CD40, CD44, CD56, EpCAM, CanAg, CALLA ou Her-2; antígenos Her-3 ou células que expressam receptor de fator de crescimento de insulina, receptor de fator de crescimento epidérmico e receptor de folato; ou em que o agente de ligação celular é um anticorpo, um anticorpo de cadeia simples, um fragmento de anticorpo que especificamente se liga à célula alvo, um anticorpo com nova superfície, um anticorpo de cadeia simples com nova superfície, ou um fragmento de anticorpo com nova superfície, um anticorpo monoclonal, um anticorpo monoclonal de cadeia simples ou um fragmento de anticorpo monoclonal que especificamente se liga à célula alvo, um anticorpo humanizado, um anticorpo humanizado de cadeia simples, ou um fragmento de anticorpo humanizado, um anticorpo quimérico, um fragmento de anticorpo quimérico que especificamente se liga à célula alvo, um anticorpo de domínio, um fragmento de anticorpo de domínio que especificamente se liga à célula alvo, uma linfocina, um hormônio, uma vitamina, um fator de crescimento, um fator estimulante de colônia ou uma molécula de transporte de nutrientes.
16. Conjugado, de acordo com a reivindicação 15, caracterizado pelo fato de que o anticorpo é MY9, anti-B4 ou C242; ou em que o anticorpo é MY9 humanizado ou com nova superfície, anti- B4 humanizado ou com nova superfície ou C242 humanizado ou com nova superfície.
17. Composição farmacêutica, caracterizada pelo fato de que compreende um composto, como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 11 ou conjugado como definido em qualquer uma das reivindicações 12 a 16, e um veículo farmaceuticamente aceitável.
18. Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 11, ou conjugado, de acordo com qualquer uma das reivindicações 12 a 16, caracterizado pelo fato de ser para uso como um medicamento.
19. Composto de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 11, ou conjugado, de acordo com qualquer uma das reivindicações 12 a 16, caracterizado pelo fato de ser para uso em um método para inibir crescimento celular anormal ou tratar um distúrbio proliferativo, um distúrbio autoimune, distúrbio ósseo destrutivo, doença infecciosa, doença viral, doença fibrótica, distúrbio neurodegenerativo, pancreatite ou doença dos rins em um mamífero, compreendendo administrar ao dito mamífero uma quantidade terapeuticamente eficaz do composto ou do conjugado e, opcionalmente, um agente quimioterapêutico.
20. Conjugado para uso no método como definido na reivindicação 19, caracterizado pelo fato de que o distúrbio proliferativo é um tumor, por exemplo, em que as células tumorais são selecionadas de células de câncer de mama, células de câncer de próstata, células de câncer ovariano, células de câncer colorretal, células de câncer gástrico, células de câncer escamosas, células de câncer de pulmão de célula pequena e células de câncer testicular.
21. Uso de um composto, como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 11, ou um conjugado como definido em qualquer uma das reivindicações 12 a 16, caracterizado pelo fato de ser para preparação de um medicamento para inibir crescimento celular anormal ou tratar um distúrbio proliferativo, um distúrbio autoimune, distúrbio ósseo destrutivo, doença infecciosa, doença viral, doença fibrótica, distúrbio neurodegenerativo, pancreatite ou doença dos rins em um mamífero, em que o distúrbio proliferativo é um tumor, por exemplo, em que as células tumorais são selecionadas de células de câncer de mama, células de câncer de próstata, células de câncer ovariano, células de câncer colorretal, células de câncer gástrico, células de câncer escamosas, células de câncer de pulmão de célula pequena e células de câncer testicular.
22. Processo para a preparação de um composto de fórmula (I), caracterizado pelo fato de que compreende as etapas de: a) acoplar o composto de fórmula (1) e o composto de fórmula (2) para obter o composto de fórmula (3); b) converter o composto de fórmula (3) em aldeído de fórmula (4); e c) converter o composto de fórmula (4) no composto de fórmula (I),
Figure img0194
em que: a linha dupla - entre N e C, X, Y, W, Ri, R2, R3, R4, R5, R6 e Z são como definidos para a fórmula (I) na reivindicação 6; LG é um grupo de saída; W' é COOR ou CH2OW", em que R é como definido na reivindicação 6; e W" é um grupo protetor, ou sais farmaceuticamente aceitáveis desses compostos, contanto que o composto não tenha mais de um grupo de ligação que permita ligação a um agente de ligação celular através de uma ligação covalente.
23. Processo para a preparação de composto de fórmula (II), caracterizado pelo fato de que compreende as etapas de: a) acoplar o composto de fórmula (1) e o composto de fórmula (5) para obter o composto de fórmula (6); b) converter composto de fórmula (6) em aldeído de fórmula (7); e c) converter composto de fórmula (7) em composto de fórmula (II),
Figure img0195
em que: a linha dupla - entre N e C, X, Y, W é C=O, C=S, CH2, BH (B= boro), SO ou SO2, R1, R2, R3, R4, R5, R6 e Z são como definidos para a fórmula (II) na reivindicação 6, contanto que o composto não tenha mais de um grupo de ligação que permita ligação a um agente de ligação celular através de uma ligação covalente; LG é um grupo de saída; W'é COOR ou CH2OW", em que R é como definido na reivindicação 6; e W"é um grupo protetor, ou sais farmaceuticamente aceitáveis desses compostos, contanto que o composto não tenha mais de um grupo de ligação que permita ligação a um agente de ligação celular através de uma ligação covalente.
24. Processo para a preparação de composto de fórmula (IV), caracterizado pelo fato de que compreende: acoplar o composto de fórmula (11), o composto de fórmula (11)' e o composto de fórmula (12) para obter o composto de fórmula (IV),
Figure img0196
a) converter o composto de fórmula (15) em aldeído de fórmula (16); e b) converter o composto de fórmula (16) no composto de fórmula (IV), em que,
Figure img0197
a linha dupla - entre N e C, Y, W, Ri, R2, R3, R4, Ri’, R2’, R3’ e R4’, Z, R6, A, A’, D, D’ e L são como definidas na reivindicação 1, contanto que o composto não tenha mais de um grupo de ligação que permita ligação a um agente de ligação celular através de uma ligação covalente;LG é um grupo de saída; W'é COOR ou CH2OW", em que R é como definido na reivindicação 1; e W"é um grupo protetor, ou sais farmaceuticamente aceitáveis desses compostos, contanto que o composto não tenha mais de um grupo de ligação que permita ligação a um agente de ligação celular através de uma ligação covalente.
25. Processo para a preparação de composto de fórmula (V), caracterizado pelo fato de que compreende: a etapa de acoplar o composto de fórmula (13), o composto de fórmula (13)' e o composto de fórmula (12) para obter o composto de fórmula (V),
Figure img0198
compreendendo as etapas de: a) converter o composto de fórmula (17) em aldeído de fórmula (18); e b) converter o composto de fórmula (18) no composto de fórmula (V),
Figure img0199
em que, a linha dupla - entre N e C, Y, W, Ri, R2, R3, R4, Ri’, R2’, R3’ and R4’, Z, R6, A, A’, D, D’ e L são como definidas na reivindicação i, contanto que o composto não tenha mais de um grupo de ligação que permita ligação a um agente de ligação celular através de uma ligação covalente; LG é um grupo de saída; W' é CooR ou CH2oW", em que R é como definido na reivindicação i; e W" é um grupo protetor, ou sais farmaceuticamente aceitáveis desses compostos, contanto que o composto não tenha mais de um grupo de ligação que permita ligação a um agente de ligação celular através de uma ligação covalente.
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