BRPI1014802B1

BRPI1014802B1 - Profármacos de triptolida

Info

Publication number: BRPI1014802B1
Application number: BRPI1014802-7A
Authority: BR
Inventors: Ingrid Gunda Georg; Satish Prakash Patil; Ashok K. Saluja; Rohit Chugh; Selwyn M. Vickers
Original assignee: Regents Of The University Of Minnesota
Priority date: 2009-05-07
Filing date: 2010-05-07
Publication date: 2020-09-24
Also published as: MY160392A; BRPI1014802A2; JP2016065099A; CN102596977A; US8507552B2; MX2011011776A; ES2552163T3; EA021135B1; CA2760953C; AU2010245669A1; DK2427467T3; PT2427467E; CN102596977B; WO2010129918A1; KR101821823B1; KR20120015339A; BRPI1014802B8; EP2427467B1; PL2427467T3; CA2760953A1

Abstract

profármacos de triptolida. a presente invenção refere-se a compostos de fórmula i: ou um sal dos mesmos. a invenção também se refere a composições farmacêuticas que compreendem um composto de fórmula i, a processos para preparação de compostos de fórmula i, a intermediária úteis para preparação de compostos de fórmula i e a métodos terapêuticos usando os compostos de fórmula i.

Description

PROFÁRMACOS DE TRIPTOLIDA

Antecedente da Invenção

Câncer pancreático é uma doença particularmente agressiva e devastadora com uma taxa de sobrevida de cinco anos inferior a 5%. Não há atualmente nenhum tratamento eficaz com fármaco que possa prolongar eficazmente sobrevida do paciente. Em 2006, mais de 35.000 novos casos de câncer pancreático foram relatados com quase igual número sucumbindo à doença. Resistência a apoptose tem sido investigada como um fator-chave em resposta preventiva em pacientes a terapias para tratar câncer pancreático e outros cânceres.

Triptolida é um composto que ocorre naturalmente obtido da planta Tripterygium wilfordii. Sabe-se que triptolida é útil no tratamento de doenças autoimunes, rejeição de transplante (imunossupressão) e possui efeitos anticâncer e antifertilidade, bem como outros efeitos biológicos (Qui e Kao, 2003, Drugs R. D. 4, 1-18). Triptolida apresenta fortes efeitos antitumor contra tumores xenoenxertados (por exemplo, Yang e outros, Mol. Cancer Ther, 2003, 2, 65-72). Triptolida é um agente antiapoptótico com múltiplos alvos celulares que são envolvidos no crescimento de câncer e metástase. Triptolida inibe ativação de NF-kB, induz clivagem de bid, bloqueia indução do gene de sobrevida p21 WAF1/Cip1 (Wang e outros, Journal of Molecular Medicine, 2006, 84, 405-415) e inibe a função do fator de transcrição do choque térmico 1 (HSF1), suprimindo desse modo expressão endógena do gene Flsp70 (Westerheide e outros, 2006, Journal of Biological Chemistry, 281, 9616-9622). Triptolida também funciona como um potente inibidor de angiogênese de tumores (He e outros, 2010, Int. Journal of Cancer, 126, 266-278).

Existem diversos mecanismos nas células vivas que as protegem contra condições adversas, incluindo células cancerosas. A síntese de uma família de proteínas referidas como proteínas de choque térmico (HSPs) é um desses mecanismos protetores. HSPs principais incluem HSP90, HSP70, HSP60, HSP40 e HSPs menores. HSPs podem apresentarse na maioria dos compartimentos intracelulares, com HSP70 localizando-se principalmente no citosol.

Sabe-se que expressão desregulada de HSP70 é associada a muitas doenças que incluem cânceres. HSP70 é abundantemente expressa em tumores malignos de várias origens (por exemplo: Hantschel e outros, 2000, Cell Stress Chaperones, 5, 438-442), o que torna as células tumorais resistentes a terapia e conferem mau prognóstivo para o paciente (Fuqua e outros, 1994, Breast Cancer Res, Treatment 32, 67-71). Sabe-se que proteína de choque térmico 70 (Hsp70) é induzida e superexpressa em células de câncer pancreático em comparação com células normais. Além disso, HSP70 tem um efeito protetor sobre células cancerosas que inibe apoptose das células. Mostra-se que inibição de HSP70 em células de câncer pancreático aumenta a morte apoptótica dessas células (ver, por exemplo, Aghdas-si e outros, Cancer Research, 67(2) pp. 616-625 (2007)). Tem-se mostrado que triptolida inibe crescimento de tumores pancreáticos e metástase em camundongos. Mostrou-se também que triptolida quando usada em combinação com radiação ionizante aumenta seu efeito terapêutico no tratamento de câncer pancreático (Wang e outros, Proc. Amer. Assoc. Cancer Res., 2006, 47, resumo n° 4720, e Wang e outros, Clin. Cancer Res., 2007, 13, 4891-4899). Acredita-se que o efeito anticâncer associado a triptolida ocorre como resultado da redução de níveis da proteína HSP70 expressa em quantidades significativas por células de câncer pancreático em comparação com células pancreáticas normais. Assim, terapias com triptolida têm sido de interesse no campo médico por seu tratamento potencial de cânceres que su-perexpressam HSP70, incluindo câncer pancreático. Ver, por exemplo, Phillips e outros, Cancer Research, 67(19), p.9407-16 (2007).

Há, entretanto, certas desvantagens associadas à administração de triptolida e diferentes soluções para resolver esses problemas têm sido exploradas. Um problema associado à triptolida nativa é que ela é insolúvel em solução aquosa. Outro problema associado à triptolida natural é pouca biodisponibilidade e efeitos tóxicos colaterais. Triptolida, derivados de triptolida e certos profármacos que possuem solubilidade aperfeiçoada e reduzida toxicidade são conhecidos. Por exemplo, Dai e outros, Patente U.S. No. 6.548.537, descrevem profármacos de triptolida que apresentam elevada solubilidade e reduzida toxicidade.

A porção fosfonoximetila por si é conhecida no estado da técnica para fins de formação de compostos profármacos de certos compostos farmacêuticos. Por exemplo, Krise e outros, J. Med. Chem., 42, pp.3094-3100 (1999), descrevem preparação de profármacos de certos compostos de N-fosfono-oximetila para aperfeiçoar a solubilidade em água.

Todavia, profármacos devem possuir várias propriedades a fim de serem úteis de forma prática. Por exemplo, profármacos desejáveis devem ser estáveis para formulação e administração. Além disso, uma vez administrados e presentes no sistema do beneficiário, os profármacos têm de ser ativados com êxito. Ademais, tanto o profármaco quanto o composto ativado têm de ser compatíveis com fluidos biológicos, tais como plasma e homogenados de tecidos. Por fim, o composto ativado inicialmente transportado em forma de profármaco tem de apresentar seu efeito terapêutico ou farmacêutico desejado. Esses e outros fatores podem ser difíceis de alcançar simultaneamente, ou coletivamente equilíbrio, com certos tipos de compostos. Dentro do contexto de triptolida e compostos profármacos de triptolida tem sido difícil obter solubilidade aquosa aperfeiçoada, biodisponibilidade eficaz para formas de dosagem oral, liberação in vivo mais rápida de triptolida e toxicidade relativamente reduzida ou mais baixa em combinação com significativa inibição de crescimento de células cancerosas. Por exemplo, ver Chassaing e outros, Highly Water-Soluble Prodrugs of Anthelminthic Benzimidazole Carbamates: Synthesis, Pharmacodynamics and Pharmacokinetics, J. Med. Chem., 51(5), pp.1111-1114 (2008).

Formas de profármaco de triptolida como succinato são conhecidas, mas têm sido associadas a certas desvantagens. Ver, por exemplo, Harrousseau e outros, Haematologica, 2008, 93(s1), 14 Abstract 0038, e Kitzen e outros, European Journal of Cancer, 2009, 45, 1764-1772. Conversão incompleta e variável do profármaco de triptolida como succinato foi observada.

Desse modo, existe a necessidade nos campos médicos e farmacêuticos de produtos terapêuticos aperfeiçoados para tratar cânceres, incluindo cânceres de tumores sólidos agressivos, tal como câncer pancreático. Existe também uma necessidade adicional de transferência aperfeiçoada ou parâmetros farmacocinéticos aperfeiçoados ou toxicidade reduzida desses produtos terapêuticos. Há também uma necessidade de formas de profármacos de triptolida que apresentem solubilidade aperfeiçoada ou que apresentem liberação mais rápida do composto ativo triptolida ou que apresentem uma liberação terapeuticamente mais eficaz do composto ativo de triptolida ou de formas de profármacos de triptolida com biodisponibilidade aperfeiçoada.

Sumário de Invenção

Consequentemente, a invenção proporciona um composto da invenção que é um composto de fórmula I:

em que:
cada R1 é independentemente H, (C1-C6)alquila, ari-la(C1-C6)alquil-, (C3-C6)cicloalquila ou arila; e cada R2 é independentemente H, (C1-C6)alquila, arila(C1-C6)alquil-, (C3-C6)cicloalquila ou arila; ou R1 e R2 juntamente com o átomo a que se ligam formam uma (C3-C7)cicloalquila; em que qualquer alquila ou cicloalquila de R1 ou R2 poderá ser opcionalmente substituída por um ou mais grupos (por exemplo, 1, 2, 3, 4 ou 5) selecionados de halo, (C1-C6)alcóxi e NRaRb, e em que qualquer arila de R1 ou R2 poderá ser opcionalmente substituída por um ou mais grupos (por exemplo, 1, 2, 3, 4 ou 5) selecionados de halo, (C1-C6)alquila, (C1-C6)alcóxi, NRaRb, nitro e ciano;
Ra e Rb são cada independentemente selecionados de H, (C1-C6)alquila, (C3-C6)cicloalquila e arila; ou Ra e Rb juntamente com o nnitrogênio a que se ligam formam um pirrolidino, piperidino, piperazino, azetidino, morfolino ou tiomorfolino;
n é 1,2 ou 3; e
cada X é H;
ou um sal do mesmo.

A invenção também proporciona uma composição farmacêutica que compreende um composto de fórmula I, ou um sal farmaceuticamente aceitável desse composto, em combinação com um veículo farmaceuticamente aceitável.

A invenção também proporciona um composto de fórmula I, ou um sal farmaceuticamente aceitável desse composto, para uso em terapia médica.

A invenção também proporciona um método para tratar câncer (por exemplo, câncer pancreático, carcinoma do duto biliar, neuroblastoma, câncer de cólon, câncer de mama, mieloma, câncer gástrico, câncer de fígado, glioblastoma, câncer de ovário, câncer colorretal, linfoma não Hodgkin, câncer de pulmão, câncer de próstata, câncer de pulmão de células pequenas, câncer de pulmão de células grandes, câncer de rim, câncer de esôfago, câncer de estômago, câncer cervical ou tumores de linfoma) em um mamífero (por exemplo, um ser humano), compreendendo esse método administrar um composto de fórmula I, ou um sal farmaceuticamente aceitável desse composto, ao mamífero (por exemplo, um ser humano).

A invenção também proporciona um composto de fórmula I, ou um sal farmaceuticamente aceitável desse composto, para uso no tratamento profilático ou terapêutico de câncer (por exemplo, câncer pancreático, carcinoma do duto biliar, neuroblastoma, câncer de cólon, câncer de mama, mieloma, câncer gástrico, câncer de fígado, glioblastoma, câncer de ovário, câncer colorretal, linfoma não Hodgkin, câncer de pulmão, câncer de próstata, câncer de pulmão de células pequenas, câncer de pulmão de células grandes, câncer de rim, câncer de esôfago, câncer de estômago, câncer cervical ou tumores de linfoma).

A invenção também proporciona o uso de um composto de fórmula I, ou um sal farmaceuticamente aceitável desse composto, para a produção de um medicamento para o tratamento de câncer (por exemplo, câncer pancreático, carcinoma do duto biliar, neuroblastoma, câncer de cólon, câncer de mama, mieloma, câncer gástrico, câncer de fígado, glioblastoma, câncer de ovário, câncer colorretal, linfoma não Hodgkin, câncer de pulmão, câncer de próstata, câncer de pulmão de células pequenas, câncer de pulmão de células grandes, câncer de rim, câncer de esôfago, câncer de estômago, câncer cervical ou tumores de linfoma) em um mamífero (por exemplo, um ser humano).

A invenção também proporciona um método para inibir crescimento de células cancerosas em um câncer que expressa HSP70 (por e-xemplo, câncer pancreático, neuroblastoma, câncer de mama, câncer de cólon, câncer gástrico, câncer de fígado ou glioblastoma) em um mamífero (por exemplo, um ser humano), compreendendo o método administrar uma quantidade inibidora eficaz de um composto de fórmula I, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, ao mamífero (por exemplo, um ser humano).

A invenção também proporciona um composto de fórmula I, ou um sal farmaceuticamente aceitável desse composto, para uso na inibição profilática ou terapêutica de crescimento de células cancerosas em um câncer que expressa HSP70 (por exemplo, câncer pancreático, neuroblastoma, câncer de mama, câncer de cólon, câncer gástrico, câncer de fígado ou glioblastoma).

A invenção também proporciona o uso de um composto de fórmula I, ou um sal farmaceuticamente aceitável desse composto, para a produção de um medicamento para a inibição de crescimento de células cancerosas em um câncer que expressa HSP70 (por exemplo, câncer pancreático, neuroblastoma, câncer de mama, câncer de cólon, câncer gástrico, câncer de fígado ou glioblastoma) em um mamífero (por exemplo, um ser humano).

A invenção também proporciona novos processos e novos intermediários descritos aqui que são úteis para preparar compostos de fórmula I ou sais desses compostos, por exemplo, aqueles descritos no Esquema 1-2.

Breve Descrição das figuras

A figura 1 ilustra um diagrama de reação química para preparar o composto 1.
A figura 2 ilustra um diagrama de reação química que mostra triptolida sendo derivatizada em composto 1 e a subsequente clivagem en-zimática - decomposição química de composto 1 para liberar triptolida.
A figura 3 ilustra a conversão enzimática in vitro do profármaco de triptolida (composto 1) em triptolida.
A figura 4 ilustra os efeitos comparativos de triptolida e do profármaco de triptolida (composto 1) sobre viabilidade de células MiaPaca-2 in vitro em 48 horas.
A figura 5 ilustra os efeitos comparativos de triptolida e do profármaco de triptolida (composto 1) sobre viabilidade de células Panc-1 in vitro tanto em 24 horas como em 48 horas.
A figura 6 ilustra os efeitos comparativos de triptolida e do profármaco de triptolida (composto 1) sobre viabilidade de células S2VP10 in vitro em 24 horas e 48 horas.
A figura 7 ilustra crescimento de tumores em um grupo de camundongos de controle com cinco fotografias in situ e uma fotografia de tumores ex vivo.
A figura 8 ilustra crescimento de tumores em um grupo de camundongos sob triptolida com três fotografias in situ e uma fotografia de tumores ex vivo.
A figura 9 ilustra crescimento de tumores em um grupo de camundongos sob profármaco de triptolida (composto 1) com quatro fotografias in situ e uma fotografia de tumores ex vivo.
A figura 10 é uma fotografia da coleção de tumores ex vivo do experimento in vivo que mostra tamanhos comparativos de tumores do grupo de controle, do grupo de triptolida e do profármaco de triptolida (composto 1)·
A figura 11 ilustra peso comparativo dos tumores (g) de camundongos do grupo de controle, do grupo da triptolida e do profármaco de triptolida (composto 1) do experimento in vivo.
A figura 12 ilustra volume comparativo dos tumores (g) de camundongos do grupo de controle, do grupo da triptolida e do profármaco de triptolida (composto 1) do experimento in vivo.
A figura 13 ilustra análise de sobrevida para os camundongos tratados com composto 1 e camundongos de controle.
A figura 14 ilustra análise de sobrevida para os camundongos tratados com composto 1 e camundongos de controle.
A figura 15 ilustra carga tumoral (volume e peso) para os camundongos tratados com composto 1 triptolida e camundongos tratados com veículo.
A figura 16 ilustra carga tumoral (volume e peso) para camundongos tratados com composto 1 e camundongos tratados com veículo.
A figura 17 ilustra carga tumoral (volume e peso) para camundongos tratados com composto 1 e camundongos tratados com veículo.
A figura 18 ilustra volume dos tumores para camundongos tratados com composto e camundongos tratados com veículo.
A figura 19 ilustra viabilidade celular (Neuroblastoma N2a e SKNSH) na presença de triptolida.
A figura 20 ilustra atividade de Caspase 3 na presença de triptolida.

Descrição Detalhada da Invenção Definições

O termo "(C1-C6)alquila" como usado aqui refere-se a grupos alquila que apresentam de 1 a 6 átomos de carbono que são grupos normais ou ramificados. Esse termo é exemplificado por grupos tais como metila, eti-la, n-propila, isopropila, n-butila, t-butila, isobutila, n-pentila, neopentila e n-hexila, e similar.

O termo "(C1-C6)alcóxi" como usado aqui refere-se ao grupo (C1-C6)alquilO- em que (C1-C6)alquila é como definida aqui. Esse termo é exemplificado por grupos tais como metóxi, etóxi, propóxi, isopropóxi, butóxi, iso-butóxi, sec-butóxi, pentóxi, 3-pentóxi ou hexilóxi, e similar.

O termo "(C3-C7)cicloalquila" como usado aqui refere-se a um sistema de anel de hidrocarboneto cíclico saturado ou parcialmente insatu-rado que compreende 3 a 7 átomos de carbono. Esse termo é exemplificado por grupos tais como as ciclopropila, ciclobutila, ciclopentila, cicloexila, ciclo-exeno ou cicloeptano, e similar.

O termo "arila" como usado aqui refere-se a um radical fenila ou um radical carbocíclico bicíclico ortofundido que apresenta cerca de nove a dez átomos de carbono no anel, em que pelo menos um anel é aromático. Esse termo é exemplificado por grupos tais como fenila, indanila, indenila, naftila, 1,2-di-hidronaftila e 1,2,3,4-tetra-hidronaftila.

O termo "aril(C1-C6)alquil-" como usado aqui refere-se ao grupo aril-(C1-C6)alquil- em que (C1-C6)alquila e arila são como definidos aqui. Esse termo é exemplificado por grupos tais como benzila e fenetila, e similar.

Como usado neste relatório, os termos "compreendendo" ou "que compreende" significam os elementos indicados, ou seus equivalentes em termos de estrutura ou função, mais qualquer ou quaisquer outros elemento^) que não são indicados. Os termos "apresentando" ou "que apre-senta(m)" e "incluindo" ou "que inclui(em)" devem também ser considerados como abertos, a menos que o contexto sugira o contrário. Termos como "cerca de", "geralmente", "substancialmente" e similar devem ser interpretados como termos que modificam um termo ou valor tal que ele não seja absoluto, embora não se leia no estado da técnica. Tais termos serão definidos pelas circunstâncias e os termos que eles modificam são entendidos por a-queles versados no estado da técnica. Isso inclui no mínimo o grau de erro experimental, erro técnico e erro instrumental esperados para uma dada técnica usada para medir um valor.

As expressões "quantidade terapeuticamente eficaz" e "quantidade farmaceuticamente eficaz" são usadas aqui para, por exemplo, significar uma quantidade suficiente para reduzir ou inibir in vivo crescimento de células cancerosas após administração a um mamífero vivo. Entende-se que as expressões referem-se à quantidade determinada como sendo requerida para produzir o efeito fisiológico pretendido e associado ao ingrediente ativo dado, conforme medido de acordo com métodos e técnicas farmacocinéticos estabelecidos, em relação à via de administração dada.

A expressão "quantidade inibidora eficaz" como usada em associação à quantidade de composto ativo e composição da invenção é entendida referir-se, por exemplo, a propriedades antitumor exibidas conforme demonstrado mediante uso de técnicas padrões de ensaios de culturas de células.

Como usado neste relatório, o termo "profármaco" é entendido referir-se a um composto farmacêutico que exige metabolismo adicional (incluindo, mas sem se limitar ao fígado) antes de se tornar biologicamente ativo.

Será entendido por aqueles versados no estado da técnica que compostos da invenção que apresentam um centro quiral podem existir e ser isolados em formas opticamente ativas e racêmicas. Alguns compostos poderão exibir polimorfismo. Deve-se entender que a presente invenção a-brange qualquer forma racêmica, opticamente ativa, polimórfica ou estereoi-somérica, ou misturas dessas formas, de um composto da invenção, as quais possuem as propriedades úteis descritas aqui, sendo bem conhecido no estado da técnica como preparar formas opticamente ativas, por exemplo, por separação da forma racêmica por meio de técnicas de recristaliza-ção, por síntese de materiais de partida opticamente ativos, por síntese quiral ou por separação cromatográfica usando uma fase quiral estacionária.

Um sal de um composto de fórmula I pode ser útil como intermediário para isolar ou purificar um composto de fórmula I. Adicionalmente, administração de um composto de fórmula I como sal de ácido ou base farmaceuticamente aceitável pode ser apropriado. Exemplos de sais farmaceuticamente aceitáveis são sais de adição de ácidos orgânicos e sais inorgânicos.

O termo "cátion orgânico ou cátion inorgânico" ou "sal catiônico orgânico ou inorgânico" inclui cátions orgânicos ou cátions inorgânicos (por exemplo, sais de metais ou de amina) que são bem conhecidos no estado da técnica e incluem porções catiônicas que podem formar uma associação iônica com as porções O no composto e não afetam significativa e adversamente as propriedades desejadas do profármaco para fins da invenção. O termo "cátions orgânicos ou cátions inorgânicos farmaceuticamente aceitáveis" ou "sal catiônico orgânico ou inorgânico farmaceuticamente aceitável" inclui os "cátions orgânicos ou cátions inorgânicos" que são farmaceuticamente aceitáveis para uso em um mamífero e são bem conhecidos no estado da técnica.

Cátions orgânicos ou cátions inorgânicos incluem, mas sem se limitar aos mesmos, cátions lítio, sódio, potássio, magnésio, cálcio, bário, zinco, alumínio e amina. Cátions amina incluem, mas sem se limitar aos mesmso, cátions derivados de amónia, trietilamina, trometamina (TRIS), trie-tanolamina, etilenodiamina, glucamina, N-metilglucamina, glicina, lisina, orni-tina, arginina, etanolamina, colina e similar. Em uma modalidade, os cátions amina são cátions em que X+ é de fórmula YH+, em que Y é amônia, trietilamina, trometamina (TRIS), trietanolamina, etilenodiamina, glucamina, N-metilglucamina, glicina, lisina, ornitina, arginina, etanolamina, colina e similar.

Em uma modalidade, sais catiônicos orgânicos ou inorgânicos adequados que podem ser usados incluem porções catiônicas que podem formar uma associação iônica com as porções O no composto e não afetam significativa e adversamente as propriedades desejadas do profármaco para fins da invenção, por exemplo, aumento de solubilidade, estabilidade e liberação hidrolítica rápida da forma composto ativo. Preferencialmente, X é selecionado de Li+, K+ ou Na+. Mais preferencialmente, X é Na+, formando assim o sal dissódico.

Sais farmaceuticamente aceitáveis podem também incluir sais formados com ácidos que formam um ânion fisiológico aceitável, por exemplo, tosilato, metanossulfonato, acetato, citrato, malonato, tartrato, succinato, benzoato, ascorbato, a-cetoglutarato e a-glicerofosfato. Sais inorgânicos a-dequados poderão também ser formados, incluindo sais de hidrocloridreto, sulfato, nitrato, bicarbonato e carbonato. Sais, incluindo sais farmacêuticamente aceitáveis, poderão ser obtidos usando procedimentos padrões bem conhecidos no estado da técnica, por exemplo, reagindo um composto suficientemente básico tal como uma amina com um ácido adequado que fornece um ânion fisiologicamente aceitável.

A invenção inclui tanto o ácido livre (por exemplo, -OP(O)(OH)2) quanto monossais (por exemplo, -OP(O)(OH)(O-X+)) e dissais (por exemplo, -OP(O) O-X+)2) do compostos de fórmula I. O ácido e os sais podem ser purificados por meio de uma variedade de técnicas bem conhecidas no estado da técnica tal como cromatografia, seguida de liofilização ou recristalização.

Será entendido por aqueles versados no estado da técnica que um composto de fórmula I no qual X+ é um cátion orgânico ou cátion inorgânico pode ser convertido em um composto de fórmula I que compreende um ou mais cátions orgânicos ou inorgânicos diferentes. Essa conversão pode ser realizada usando uma variedade de técnicas e materiais bem conhecidos, incluindo, mas sem se limitar às mesmas, resinas de troca iônica, cromatografia de troca iônica e cristalização seletiva.
Um valor específico para R1 é H ou (C1-C6)alquila.
Outro valor específico para R1 é H.
Outro valor específico para R1 é (C1-C6)alquila.
Outro valor específico para R1 é metila ou etila.
Um valor específico para R2 é H ou (C1-C6)alquila.
Outro valor específico para R2 é H.
Um valor específico para X+ é H.

Outro valor específico para X+ é lítio, sódio, potássio, magnésio, cálcio, bário, zinco ou alumínio.

Outro grupo específico de compostos de fórmula I são compostos no qual X+ é de fórmula HY+ em que Y é amónia, trietilamina, trometamina, trietanolamina, etilenodiamina, glucamina, N-metilglucamina, glicina, lisina, ornitina, arginina, etanolamina ou colina.
Um outro valor específico para X+ é Li+, K+ ou Na+.
Um outro valor específico para X+ é Na+.
Um composto de fórmula I específico é sal dissódico de 4-O-fosfono-oximetiltriptolida, sal dissódico de 14-O-fosfono-oxietiltriptolida ou sal dissódico de 14-O-fosfono-oxipropiltriptolida, ou um sal desse composto de fórmula I.

Um grupo específico de compostos de fórmula I são compostos de fórmula la:

em que X+ é um cátion orgânico ou cátion inorgânico farmaceuticamente aceitável.

Outro grupo específico de compostos de fórmula I são compostos de fórmula la:

nos quais X+ é um sal catiônico orgânico ou inorgânico farmaceuticamente aceitável.

Processos que podem ser usados para preparar compostos de fórmula I e intermediários úteis para preparar compostos de fórmula 1 são mostrados no Esquema 1 e no Esquema 2.

em que Q é um grupo protetor tal como benzila ou terc-butila.

Um composto de fórmula I pode ser preparado removendo um ou mais grupos protetores de um composto de fórmula IA:

Q é um grupo protetor (por exemplo, benzila ou terc-butila)

para proporcionar o composto de fórmula I correspondente. Assim, o intermediário de fórmula IA é útil para preparar um composto de fórmula I.

Um composto de fórmula I pode também ser preparado convertendo o grupo -SMe a partir de um composto de fórmula IB:

em um grupo -OP(O)(O-X+)2 para proporcionar o composto de fórmula I correspondente. Assim, o intermediário de fórmula IB é útil para preparar um composto de fórmula I.

Um composto de fórmula I pode também ser preparado removendo um ou mais grupos protetores de um composto de fórmula IC:

Q é um grupo protetor (por exemplo, benzila ou terc-butila)

para proporcionar o composto de fórmula I correspondente. Assim, o intermediário de fórmula IC é útil para preparar um composto de fórmula I.

Um composto de fórmula I pode também ser preparado convertendo o grupo -SMe de um composto de fórmula ID:

em um grupo -OP(O)(O-X+)2 para proporcionar o composto de fórmula I correspondente. Assim, o intermediário de fórmula ID é útil para preparar um composto de fórmula I.

Consequentemente, a invenção proporciona um método:

a) para preparar um composto de fórmula I, compreendendo desproteger um composto de fórmula IA correspondente que transporta um ou mais grupos protetores para proporcionar o composto de fórmula I.
b) para preparar um composto de fórmula I, compreendendo converter o grupo -SMe de um composto de fórmula IB em um grupo -OP(O)(O-X+)2 para proporcionar o composto de fórmula I.
c) para preparar um composto de fórmula I, compreendendo desproteger um composto de fórmula IC correspondente que transporta um ou mais grupos protetores para proporcionar o composto de fórmula I.
d) para preparar um composto de fórmula I, compreendendo converter o grupo -SMe de um composto de fórmula ID em um grupo -OP(O)(O-X+)2 para proporcionar o composto de fórmula I.
e) para preparar um sal de um composto de fórmula I, compreendendo tratar um composto de fórmula I correspondente com um ácido (por exemplo, um ácido orgânico ou um ácido inorgânico) ou uma base (por e-xemplo, uma base de álcali ou base alcalina) para proporcionar o sal do mesmo.
f) para converter um composto de fórmula I em que um ou mais X+ é um sal catiônico orgânico ou inorgânico em um composto de fórmula I no qual um ou mais X+ é um sal catiônico orgânico ou inorgânico diferente.

O composto da invenção pode ser formulado em composições farmacêuticas também combinando-o com um veículo farmaceuticamente aceitável. Composições farmacêuticas podem ser preparadas de acordo com compostos e técnicas bem-conhecidos imediatamente disponíveis à-queles versados no campo farmacêutico. Para fins da invenção, o veículo farmaceuticamente aceitável pode ser qualquer substância biologicamente compatível ou inerte convencional e imediatamente disponível que é quimicamente compatível com o ingrediente farmacêutico ativo e não atenua significativamente seu efeito terapêutico pretendido após formulação ou transporte. Sais farmaceuticamente aceitáveis podem ser preparados usando procedimentos e técnicas padrões bem conhecidos no estado da técnica.

A forma sólida de um composto da invenção pode ser uma na-nopartícula, e, assim, formulada como uma nanopartícula. Consequentemente, a invenção proporciona nanopartículas de um composto de fórmula I e composições que compreendem nanopartículas de um composto de fórmula I.

Os compostos profármacos de triptolida da invenção podem ser formulados usando uma variedade de formulações de excipientes e preparados em várias formas de dosagens conforme descrito abaixo. As propriedades e atributos químicos associados aos compostos da invenção também podem proporcionar a preparação de uma forma de dosagem sólida oral dos compostos da invenção.

O composto da invenção pode ser formulado como composições farmacêuticas e administrado a um beneficiário em uma variedade de formas adequadas para a via ou sistema de administração particular desejada. Vias de administração podem incluir, mas sem se limitar às mesmas, vias orais, vias parenterais, vias intravenosas (incluindo vias intravenosas por meio de injeção por bomba), vias intramusculares, vias tópicas, incluindo colírios, vias subcutâneas e vias mucosas. Compostos da invenção podem ser administrados sistemicamente, por exemplo, oralmente, em combinação com um veículo farmaceuticamente aceitável tal como um diluente inerte ou veículo comestível assimilável. Assim, a composição farmacêutica que compreende os compostos da invenção como ingrediente ativo pode ser preparada em uma variedade de formas de dosagem. Por exemplo, as composições podem ser encapsuladas em cápsulas duras ou moles (por exemplo, materiais capsulares derivados de gelatina ou vegetais). As composições podem ser comprimidas em forma de comprimidos para ingestão ou assimilação trans-mucosa, trociscos, cápsulas, elixires, suspensões, xaropes, wafers, supositórios e similar. A quantidade de ingredient ativo pode variar de acordo com a quantidade de dosagem específica desejada farmaceuticamente eficaz.

Comprimidos, trociscos, pílulas, cápsulas e similares podem conter ingredientes adicionais tais como aglutinantes (tais como goma traga-canta, acácia, amido de milho ou gelatina); excipientes tal como fosfato di-cálcico; desintegrantes tais como amido de milho, amido de batata, ácido algínico e similares; lubrificantes (tal como estearato de magnésio), que podem ser usados para técnicas de compressão em comprimidos, por exemplo; edulcorantes tais como sacarose, frutose, lactose ou aspartame; e aro-matizantes tais como menta, gaultéria, cereja e similares. Ingredientes adicionais, que poderão ser incluídos em composições da invenção, são mani-tol, ureia, dextranos e açúcares não redutores de lactose.

Quando a forma de dosagem é uma cápsula, ela pode conter um veículo líquido que inclui polietilenoglicol, óleo vegetal, etc.. Outros materiais que podem ser usados com certas formas de dosagem incluem gelatina, cera, goma-laca, açúcar e similares. Xaropes ou formas de elixires podem conter sacarose ou frutose como edulcorantes, metil e propilparabenos como conservantes, corantes e colorantes, e aromatizantes.

Quando administradas intravenosa ou intraperitonealmente por infusão ou injeção, soluções do ingrediente ativo e seus sais podem ser preparadas em, por exemplo, água ou solução salina opcionalmente contendo um tensoativo não tóxico. Dispersões podem ser preparadas em giicerol, polietilenoglicóis líquidos, triacetina e misturas destes, e em óleos. Condições de armazenamento poderão necessitar da inclusão de um conservante também.

As formas de dosagens farmacêuticas adequadas para injeção ou infusão podem incluir soluções ou dispersões aquosas estéreis ou pós estéreis que compreendem o ingrediente ativo os quais são adaptados para a preparação extemporânea de soluções ou dispersões estéreis injetáveis ou infusíveis, opcionalmente encapsuladas em lipossomos. Em todos os casos, a forma de dosagem final deve ser estéril, fluida e estável sob as condições de produção e armazenamento. O veículo ou excipiente líquido pode ser um solvente ou meio de dispersão líquido compreendendo, por exemplo, água, etanol, um poliol (por exemplo, giicerol, propilenoglicol, polietilenoglicóis líquidos e similares), óleos vegetais, ésteres glicerílicos não tóxicos e misturas adequadas destes. A fluidez apropriada pode ser mantida, por e-xemplo, pela formação de lipossomos, pela manutenção do tamanho de partículas requerido no caso de dispersões ou pelo uso de surfatantes. A prevenção da ação de microorganismos pode ser realizada por meio de vários agentes antibacterianos e antifúngicos, por exemplo, parabenos, clorobuta-nol, fenol, ácido sórbico, timerosal e similar. Em muitos casos, sera prefível incluir agentes isotônicos, por exemplo, açúcares, tampões ou cloreto de sódio. Absorção prolongada das composições injetáveis pode ser realizada pelo uso nas composições de agentes retardadores de absorção, por exemplo, monoestearato de alumínio e gelatina.

Soluções injetáveis estéreis são preparadas incorporando o composto ativo na quantidade exigida no solvente apropriado com vários dos outros ingredientes enumerados acima, conforme requerido, seguido de esterilização por filtro. No caso de pós estéreis para a preparação de soluções injetáveis estéreis, os métodos de preparação preferidos são secagem a vácuo e as técnicas de secagem por congelamento, que produzem um pó do ingrediente ativo mais qualquer ingrediente adicional desejado presente nas soluções filtradas previamente esterilizadas.

Consequentemente, a invenção inclui preparação estéril de um composto da invenção. A invenção também inclui preparações não estéreis de um composto da invenção.

Formas de dosagens farmacêuticas injetáveis ou infusíveis podem incluir soluções ou dispersões aquosas estéreis ou pós estéreis que compreendem os compostos ativos da invenção preparados para formulação extemporânea. Veículos líquidos podem incluir solventes ou meios de dispersão líquido compreendendo água, etanol, um poliol (por exemplo, giicerol, propilenoglicol, polietilenoglicóis) e similar. Vários agentes podem ser adicionados para inibir ou prevenir atividade antimicrobiana, tais como parabenos, clorobutanol, fenol, ácido sórbico, timerosal e similar.

Compostos e composições da invenção podem ser administrados como única dose ou em intervalos de doses múltiplas. A quantidade de dosagem, forma de dosagem, via de administração e os ingredientes da formulação particular podem variar correspondentemente à concentração plasmática desejada e farmacocinética envolvida. Um aspecto significativo da invenção é que os compostos particulares da invenção poderão fornecer uma via de administração aperfeiçoada e eficaz de formas de dosagens orais em virtude das características e propriedades associadas à estrutura e localização do substituinte do composto inventivo.

Para administração tópica, será geralmente desejável administrar os compostos da invenção à pele como composições ou formulações, em combinação com um veículo dermatologicamente aceitável, que poderá ser um sólido ou um líquido.

Veículos sólidos úteis incluem sólidos finamente divididos tais como talco, argila, celulose microcristalina, sílica, alumina e similar. Veículos líquidos úteis incluem água, álcoois ou glicóis ou combinações água-álcool/glicol, em que os presentes compostos podem ser dissolvidos ou dispersos em níveis eficazes, opcionalmente com a ajuda de surfatantes não tóxicos. Adjuvantes tais como fragrâncias e agentes antimicrobianos adicionais podem ser adicionados para otimizar as propriedades para um dado uso. As composições líquidas resultantes podem ser aplicadas a partir de almofadas absorventes, usadas para impregnar bandagens e outros curativos, ou pulverizadas sobre a área afetada utilizando pulverizadores tipo bomba ou aerossol.

Espessantes tais como polímeros sintéticos, ácidos graxos, sais e ésteres de ácidos graxos, álcoois graxos, celuloses modificadas ou materiais minerais modificados podem também ser empregados com veículos líquidos veículos para formar pastas que se podem espalhar sobre a área afetada, géis, pomadas, sabões e similares, para aplicação diretamente à pele do usuário.

Exemplos de composições dermatológicas úteis que podem ser usadas para transportar os compostos de fórmula I à pele são conhecidos no estado da técnica; por exemplo, ver Jacquet e outros (Pat. U.S. No. 4.608.392), Geria (Pat. U.S. No. 4.992.478), Smith e outros (Pat. U.S. No. 4.559.157) eWortzman (Pat. U.S. No. 4.820.508).

Dosagens úteis dos compostos de fórmula I podem ser determinadas comparando sua atividade in vitro e atividade in vivo em modelos a-nimais. Métodos para a extrapolação de dosagens eficazes em camundongos, e em outros animais, para humanos são conhecidos no estado da técnica; por exemplo, ver Pat. U.S. No. 4.938.949.

A quantidade do composto, ou um sal ativo ou derivado desse composto, exigida para uso em tratamento variará não só com o sal particular selecionado como também com a via de administração, a natureza da condição que é tratada e a idade e condição do paciente, será, em última análise, a critério do médico ou clínico assistente.

Em geral, no entanto, uma dose adequada estará na faixa de cerca de 3 a cerca de 100 μg/kg de peso corporal por dia (por exemplo, de cerca de 6 a cerca de 96 μg/kg de peso corporal por dia ou de cerca de 6 a cerca de 48 μg/kg de peso corporal por dia, ou de cerca de 6 a cerca de 24 μg/kg de peso corporal por dia, ou de cerca de 12 a cerca de 24 μg/kg de peso corporal por dia).

O composto é convenientemente formulado em forma de dosagem unitária; por exemplo, contendo de cerca de 80 μg a cerca de 8000 μg, convenientemente de cerca de 480 μg a cerca de 7680 μg, convenientemente de cerca de 480 μg a cerca de 3840 μg e convenientemente de cerca de 960 μg a cerca de 1920 μg. Em uma modalidade, a invenção proporciona uma composição que compreende um composto da invenção formulado nessa forma de dosagem unitária.

A dose desejada poderá convenientemente ser apresentada em uma única dose ou como doses divididas administradas em intervalos apropriados, por exemplo, como duas, três, quatro ou mais subdoses por dia. A própria subdose pode ser adicionalmente dividida, por exemplo, em várias administrações separadas flexivelmente espaçadas, tais como inalações múltiplas mediante uso de um insuflador ou por meio de aplicação de uma multiplicidade de gotas nos olhos.

Compostos da invenção podem também ser administrados em combinação com outros agentes terapêuticos, por exemplo, outros agentes que são úteis para o tratamento de câncer (por exemplo, câncer pancreático, câncer ovariano, câncer colorretal, linfoma não Hodgkin, leucemia, leucemia mieloide aguda e crônica, neuroblastoma, carcinoma de tireoide, osteossar-coma, câncer de mama, câncer de próstata, câncer de esôfago, câncer de bexiga, câncer gástrico, câncer urothelial, glioblastoma multiforme, câncer de cólon, câncer cervical uterino, fibrossarcoma, carcinoma de células escamosas, mieloma múltiplo, colangiocarcinoma, câncer de pulmão de não células pequenas), como sensibilizadores de radiação para células cancerosas, doenças inflamatórias, doenças reumáticas, doenças autoimunes, doença renal policística, nefrite, sobrevida a enxerto por transplante (rim, coração), hipotensão pulmonar, inflamação pulmonar, fibrose pulmonar, neuroproteção, isquemia cerebral/lesão por reperfusão, parquinsonismo e úlceras cornea-nas. Exemplos desses agentes incluem 5-fluoruracila, TRAIL (ligante indutor de apoptose realcionado a TNF), aticorpos ativadores de DR-4/5, ciclofosfa-mida, hidroxidaunorubicina (doxorubicina), oncovina (vincristina), paclitaxel, doxetaxel, cisplatina, carboplatina, CPT-11, bortezimib e prednisona-prednisolona. Consequentemente, em uma modalidade a invenção também proporciona uma composição que compreende um composto de fórmula I, ou um sal farmaceuticamente aceitável desse composto, pelo menos um outro agente terapêutico e um diluente ou veículo farmaceuticamente aceitável. A invenção também proporciona um kit que compreende um composto de fórmula I, ou um sal farmaceuticamente aceitável desse composto, pelo menos um outro agente terapêutico, material de embalagem e instruções para administrar o composto de fórmula I ou o sal farmaceuticamente aceitável desse composto e o outro agente ou agentes terapêuticos a um animal (por exemplo, mamífero) para tratar câncer (por exemplo, câncer pancreático, câncer ovariano, câncer colorretal, linfoma não Hodgkin, leucemia, leucemia mieloide aguda e crônica, neuroblastoma, carcinoma de tireoide, os-teossarcoma, câncer de mama, câncer de próstata, câncer de esôfago, câncer de bexiga, câncer gástrico, câncer urothelial, glioblastoma multiforme, câncer de cólon, câncer cervical uterino, fibrossarcoma, carcinoma de células escamosas, mieloma múltiplo, colangiocarcinoma, câncer de pulmão de não células pequenas), uma doença inflamatória, um doença reumática, uma doença autoimune, uma doença renal policística, nefrite, sobrevida a enxerto por transplante (rim, coração), hipotensão pulmonar, inflamação pulmonar, fibrose pulmonar, neuroproteção, isquemia cerebral/lesão por reperfusão, parquinsonismo, úlceras cornearias ou colite. Noutra modalidade a invenção também proporciona um kit que compreende um composto de fórmula I, ou um sal farmaceuticamente aceitável desse composto, pelo menos um outro agente terapêutico, material de embalagem e instruções para administrar o composto de fórmula I ou o sal farmaceuticamente aceitável desse composto e o outro agente ou agentes terapêuticos a um animal (por exemplo, mamífero), para sensibilizar células cancerosas, revestir stents (eluição de fárma-co), reparar medula espinhal ou para uso na contracepção masculina e feminina em animais. Os seguintes documentos referem-se à triptolida em combinação com outros agentes terapêuticos: (1. Chen, Y. W. e outros, Anti-cancer Drugs, 2010, 21(5), 502-13. 2. Xu B. e outros, Cancer Lett, 2010, 291(2), 200-208. 3. Borja-Cacho, D. e outros, J. Gastrointest. Surg., 2010, 14(2), 252-60. Westfall S. D. e outros, Chemotherapy, 2008, 54(1), 67-76. 4. Tang X. Y. e outros, Postgrad. Med. J., 2007, 83(979), 338-43. 5. Panichakul T. e outros, Anticancer Res., 2006, 26(1A), 259-65. 6. Pediatr. Blood Cancer, 2008, 51(6):754-97. Matsui e outros, Oncogene, 2008, 27, 4603-614. 7. Chang e outros, The Journal of Biological Chemistry, 2001 276, 2221-2227. 8. Westfalí e outros, Chemotherapy, 2008, 54(1), 67-76. 9. Carter e outros, Blood, 2008, Vol. 111, No. 7, pp. 3742-3750. 10. Borja-Cacho e outros, J. Gastrointest Surg., 2010, 14, 252-260. 11. Tang e outros, Postgraduate Medical Journal, 2007, 83, 338-343. 12. Cen e outros, Anti-Cancer Drugs, 2010, 21(5), 502-513. 13. Kapoor, Int. J. Mol. Med., 2008, 22(4), 489-96. 14. Fidler e outros, Molecular Cancer Therapeutics, 2003, 2, 855).

Um importante aspecto da invenção é que compostos da invenção proporcionam combinações desejáveis de propriedades farmacocinéti-cas, propriedades físicas e vantagens terapêuticas em comparação com outras formas de profármacos de triptolida. Os compostos profármacos de triptolida da invenção exibem combinação desejável de atributos, incluindo estabilidade química, solubilidade elevada e liberação metabólica rápida da triptolida ativa da forma profármaco. Coletivamente, essas propriedades proporcionam efeitos terapêuticos anticâncer aperfeiçoados. Tais efeitos incluem a inibição eficaz de células de câncer pancreático mediante inibição dos efeitos protetores proporcionados por HSP70 dentro das células e resistência a a apoptose e tratamentos.

O caminho químico da clivagem metabólica e enzimática do profármaco de triptolida do Exemplo 1 é mostrado na figura 2. O composto nativo de partida (forma não profármaco) de triptolida apresenta características de pouca solubilidade em água. O composto preparado do Exemplo 1 exibe um alto nível de solubilidade. Quando submetido à clivagem e metabolismo enzimáticos, o composto do Exemplo 1 finalmente libera a forma ativa do composto de triptolida.

Os compostos e as composições da invenção podem ser empregados como um método para tratar cânceres em forma de tumores sólidos em mamífero com necessidade desse tratamento, compreendendo o método administrar uma quantidade farmaceuticamente eficaz de um composto conforme descrito acima como ingrediente ativo. Como usado no contexto de métodos de tratamento, o termo "mamífero" inclui humanos.

O composto e composição da invenção podem ser eficazes para inibir crescimento de células cancerosas in vitro e in vivo de cânceres que expressam HSP70. Exemplos de cânceres que expressam HSP70 incluem câncer pancreático, câncer de mama, câncer de pulmão, câncer neuronal, leucemia, neuroblastoma, câncer de cólon, câncer gástrico, câncer de fígado e glioblastoma.

Consequentemente, em uma modalidade, a invenção inclui a i-nibição de uma população de células cancerosas que exibem superexpres-são de proteína de choque térmico HSP70 pela administração de um composto de fórmula I. De importância específica para a invenção é o efeito de inibição celular eficaz sobre células de câncer pancreático que expressam HSP70, tais como células Mia-Paca, Panc-1 e S2VP10. Consequentemente, noutra modalidade a invenção proporciona um método para tratar um câncer de S2 (por exemplo, um câncer de S2VP10 ou S2013) em um mamífero (por exemplo, um ser humano), compreendendo esse método administrar um composto de fórmula I, ou um sal farmaceuticamente aceitável desse composto, a um mamífero (por exemplo, um ser humano).

Em ambos os sistemas in vitro e mamífero vivo, a enzima fosfa-tase alcalina converte o composto do Exemplo 1 na forma triptolida ativa como demonstrado nos exemplos fornecidos aqui. A meia-vida de hidrólise enzimática (VA) para o composto do Exemplo 1 indica uma taxa de conversão relativamente e, consequentemente, liberação mais rápida da forrma terapêutica ativa do composto.

Triptolida é usada para tratar uma variedade de doenças tais como doenças inflamatórias. Triptolida tem sido também envolvida como agente terapêutico para tratar uma variedade de doenças. Essas doenças incluem câncer (por exemplo, câncer pancreático, carcinoma do duto biliar, neuroblastoma, câncer de cólon, câncer de mama, mieloma, câncer gástrico, câncer de fígado, glioblastoma, câncer ovariano, câncer colorretal, linfoma não Hodgkin, câncer de pulmão, câncer de próstata, câncer de pulmão de células pequenas, câncer de pulmão de células grandes, câncer de rim, câncer de esôfago, câncer de estômago, câncer cervical, tumores de linfoma), doenças autoimunes, rejeição de transplante, doença renal policística, doenças inflamatórias, asma, artrite reumatoide, lúpus eritematoso sistêmico e nefrite. Triptolida tem sido também discutida no revestimento de stents (elui-ção de fármacos), reparo de medula espinhal, colite e contracepção em animais machos e fêmeas. Consequentemente, a invenção inclui, mas sem se limitar a esse procedimento, ao uso dos compostos de fórmula I para tratar doenças que incluem câncer (por exemplo, câncer pancreático, carcinoma do duto biliar, neuroblastoma, câncer de cólon, câncer de mama, mieloma, câncer gástrico, câncer de fígado, glioblastoma, câncer ovariano, câncer colorretal, linfoma não Hodgkin, câncer de pulmão, câncer de próstata, câncer de pulmão de células pequenas, câncer de pulmão de células grandes, câncer de rim, câncer de esôfago, câncer de estômago, câncer cervical, tumores de linfoma), doenças autoimunes, rejeição de transplante, doença renal policística, doenças inflamatórias, asma, artrite reumatoide, lúpus eritematoso sistêmico e nefrite. Compostos de fórmula I podem também ser usados para revestir stents (eluição de fármaco), reparo de medula espinhal, colite e contracepção em animais machos e fêmeas.

Os seguintes documentos referem-se à triptolida e ao câncer: (1. AML: Carter e outros, Blood, 2008, 111(7), 3742-3750. 2. Anaplastic thyroid carcinoma: Mol Pharmacol., 2009, 75(4), 812-9. 3. Câncer de bexiga: Yang e outros, Mol. Cancer Ther., 2003, 2(1), 65-72. 4. Melanoma B16: Yang e outros, Mol. Cancer Ther., 2003, 2(1), 65-72. 5. Câncer de mama: Liang e outros, Cancer Letters, 270(2), 2008, 337-341. Liu e outros, Phytomedicine, 2009, 16(11), 1006-1013. 6. Câncer cervical: Wang e outros, J. Mol. Med., 2006, 84(5), 405-15. 7. Colangiocarcinoma: Tengchaisri e outros, Cancer Letters, 1998, 133(2), 169-175. 8. CML: Lou e outros, Leukemia and Lymphoma, 2004, 45, 373-376. 9. Câncer de cólon: Tang e outros, Postgraduate Medical Journal, 2007, 83, 338-343. 10. Câncer de esôfago: Boult e outros, B. J. Cancer, 2008, 89, 1985-92. 11. Fibrossarcoma: Kiviharju e outros, Clinical Cancer Research, 2002, 8, 2666-2674. 12. Miyata e outros, Biochem. Biophys. Res. Commun., 2005, 336(4), 1081-6. 13. Câncer gástrico: Jiang., Oncogene, 2001, 20(55), 8009-18. 14. Yang e outros, Mol. Cancer Ther., 2003, 2(1), 65-72. 15. Glioblastoma multiforme: Lin e outros, J. Int. Med. Res., 2007, 35(4), 490-6. 16. Kapoor, Int. J. Mol. Med., 2008, 22(4), 489-96. 17. Células Epiteliais Prostáticas Humanas: Kiviharju e outros, 2002, Clinical Cancer Research, 8, 2666-2674. 18. Leucemias, incluindo AML: Carter e outros, Blood, 2006, 108(2), 630-7. 19. Mieloma múltiplo: Yinjun e outros, Leuk. Res., 2005 29(1), 99-105. 20. Neuroblastoma: Antonoff e outros, Surgery, 2009, 146(2), 282-90. 21. Linfoma não Hodgkin: Zhang e outros, Acta Pharmacologica Sinica, 2006, 27, 1438-1446. 22. Câncer de pulmão de não células pequenas: Chang e outros, The Journal of Biological Chemistry, 276, 2221-2227. 23. Osteossarcoma: Wang e outros, Pediatr. Blood Cancer., 2008, 51(6), 754-9. 24. Câncer ovariano: Westfall e outros, Chemotherapy, 2008, 54(1), 67-76. 25. Câncer pancreático: Wang e outros, J. Mol. Med., 2006, 84(5), 405-15; Zhou e outros, World J., Gastroenterol., 2008, 14(10), 1504-1509; Wang e outros, Clincal Cancer Research, 2007, 13, 4891; Phillips, Saluja e outros, Cancer Res., 2007. Carcinoma de células escamosas; Miyata e outros, Biochem. Biophys. Res. Commun., 2005, 336(4), 1081-6. 26. Carcinoma de tireoide: Zhu e outros, Oncol Rep., 2009, 22(6), 1397-401. 27. Carcinoma cervical uterino: Miyata e outros, Biochem. Biophys. Res. Commun., 2005, 336(4), 1081-6. 28. Câncer urotelial: Matsui e outros, Oncogene, (2008) 27, 4603-4614).

Os seguintes documentos referem-se à triptolida e doenças diferentes de câncer: 1. Doenças múltiplas: D Qui e outros, Drug R & D, 2003, 4, 1-16. 2. Transplante de órgãos: Chen, Leukemia and Lymphoma, 2001, 42, 253-256. 3. Transplante de rim: Zhang e outros, Journal of Ethnopharmaco-logy, 2009, 125(1), 141-46. 4. Sobrevida do enxerto transplantado (pele): Yang e outros, Int. J. Immunophamac., 1992, 14, 963-969. 5. Doença Enxerto Versus Hospedeiro: Chen e outros, Transplantation, 2000, 70, 1442-1447. 6. Doenças inflamatórias e autoimunes: P.E. Lipsky e outros, Seminars in Arthritis and Rheumatism, 1997, 5, 713-723. 7. Encefalomielite autoimune: Kizelsztein e outros, Journal of Neuroimmunology, 2009, 217, 28-37. 8. Isquemia cerebral/lesão por reperfusão: Wei e outros, Neural Regeneration Research, 2007. 9. Colite: Wei e outros, Clin. Immunol., 2008, 129, 211-218. 10. Contracepção em machos e fêmeas: Hikim e outros, Journal of Andro-logy, 2000, 21, 431-437; Huynh e outros, Journal of Andrology, 2000, 21, 689-699; Wang e outros, Asian Journal of Andrology, 1999, 1, 121-125; Lue e outros, Journal of Andrology, 1998, 19, 479-486. 11. Úlcera corneana: Lu e outros, Investigative Ophthalmology and Visual Science, 2006, 47, 3796-3800. 12. Inflamação pulmonar: Krishna, e outros, 2001, Am. J. Pathol., 2001, 158(3), 997-1004. 13. Nefrite: Tao e outros, Arthritis Rheum., 2008, 58(6), 1774-83. 14. Parkinsonismo e neuroproteção: Zhou e outros, Neurobiology of Disease, 2005, 18, 441-449. 15. Doença renl policística (PKD): Leu-enroth e outros, PNAS, 2007, 104, 4389-4394. 16. Reparo da medula espinhal: Su e outros, Glia, 2010, 58, 901-915. 17. Revestimento de stent. Q. Luo 2005, Pedido de patente 20050043788.

A invenção será agora ilustrada pelos Exemplos seguintes não limitativos.

Exemplo 1: Síntese de sal dissódico de 14-O-fosfono-oximetiltriptolida (composto 1)

A uma solução de 14-O-fosfono-oximetiltriptolida éster dibenzíli-co (50 mg, 0,08 mmol) em tetra-hidrofurano (5 mL) foi adicionado paládio sobre carbono (10%, 10 mg). A mistura foi agitada a temperatura ambiente sob hidrogênio (1 atm) por um período de 3 horas. O catalisador foi removido por filtração através de CELITE™ e o filtrado foi tratado com uma solução de carbonato de sódio hidratado (8,9 mg em 3 mL de água, 0,076 mmol). O tetra-hidrofurano foi evaporado sob pressão reduzida e a solução de água residual extraída com éter (3x3 mL). A camada aquosa foi evaporada até secura e o sólido resultante secado de um dia para o outro a vácuo, lavado com éter e novamente secado a vácuo para proporcionar sal dissódico de 14-0-fosfono-oximetiltriptolida (35 mg, 90% de rendimento) como um pó branco. RMN de 1H (400 MHz, D2O) δ 0,81 (d, 3H, J = 6,8 Hz), 1,00 (d, 3H, J = 6,8 Hz), 1,03 (s, 3H), 1,35 (m, 1H), 1,50 (m, 1H), 2,00 (dd, 1H, J, = 14,7 e J2 = 13,4 Hz), 2,08-2,61 (m, 4H), 2,85 (m, 1H), 3,63 (d, 1H, J = 5,5 Hz), 3,81 (d, 1H, J = 3,1 Hz), 3,86 (s, 1H), 4,12 (d, 1H, J = 3,1 Hz), 4,92 (m, 2H), 5,07 (m, 2H) ppm; RMN de 13C (100 MHz, D2O) δ 12,9; 16,0; 16,3; 16,5; 22,3; 25,5; 28,9; 35,2; 39,8; 55,4; 56,1; 61,0; 61,5; 65,1; 65,5; 71,9; 77,6; 91,7; 123,8; 164,2; 177,3 ppm; HRMS calculado para (C21H26O10P): m/z requerido, [M+1]+ 469,1264; m/z encontrado, 469,1267.

Preparação de 14-O-fosfono-oximetiltriptolida éster dibenzílico Etapa 1:

Uma solução de triptolida (100 mg, 0,29 mmol) em ácido acético (5 mL, 87,5 mmoles) e anidrido acético (1 mL, 10,5 mmoles) em DMSO (1,5 mL, 21,4 mmoles) foi preparada e agitada a temperatura ambiente por um período de 5 dias para fornecer intermediário 14-O-metilthiometiltriptolida. A mistura reacional foi então derramada em água (100 mL) e neutralizada com NaHCO3 sólido, adicionado em porções. A mistura foi extraída com acetato de etila (50 mL x 3) e o extrato orgânico combinado foi secado sobre sulfato de sódio anidro e concentrado para fornecer o produto como um óleo. Cro-matografia instantânea em coluna de sílica-gel (hexano/acetato de etila 3:2) proporcionou 14-O-metiltiometiltriptolida como 52% (60 mg) como uma espuma branca. RMN de 1H (400 MHz, CDCI3) δ 0,82 (d, 3H, J = 6,8 Hz), 1,00 (d, 3H, J = 6,8 Hz), 1,09 (s, 3H), 1,20 (m, 1H), 1,59 (m, 1H), 1,93 (dd, 1H, J, = 14,7 e J2 = 13,4 Hz), 2,19 (s, 3H), 2,10-2,42 (m, 4H), 2,68 (m, 1H), 3,24 (d, 1H, J = 5,5 Hz), 3,51 (d, 1H, J = 3,1 Hz), 3,67 (s, 1H), 3,79 (d, 1H, J = 3,1 Hz), 4,68 (m, 2H), 4,93 (d, 1H, J = 11,8 Hz), 5,07 (d, 1H, J = 11,8 Hz) ppm; RMN de 13C (100 MHz, CDCI3) δ 13,6; 14,8; 16,8; 17,0; 17,1; 23,4; 26,3; 29,5; 35,8; 40,4; 54,5; 55,0; 58,0; 61,5; 63,9; 64,4; 69,9; 75,8; 76,7; 125,5; 160,2; 173,2 ppm; HRMS calculado para (C22H28O6SNa): m/z requerido, [M+Na]+ 443,1505; m/z encontrado, 443,1507.

Etapa 2:

Uma solução de 14-O-metiltiometiltriptolida (50 mg, 0,12 mmol) em cloreto de metileno seco (2 mL) sob uma atmosfera de N2foi combinada com peneiras moleculares 4Â em pó ativadas (50 mg), seguido da adição de uma mistura de fosfato de dibenzila (40 mg, 0,14 mmol) e N-iodossuccinimida (32 mg, 0,14 mmol) em tetra-hidrofurano (2 mL). A mistura reacional foi agitada a temperatura ambiente por um período de 5 horas, filtrada e diluída com cloreto de metileno (20 mL). A solução resultante foi lavada com uma solução de tiossulfato de sódio (2 mL, solução 1M), uma solução saturada de bicarbonato de sódio, salmoura, secada sobre sulfato de sódio, filtrada e concentrada a vácuo. O resíduo oleoso foi purificado por cromatografia instantânea em sílica-gel (hexano/acetato de etila 1:2) para fornecer 14-O-fosfono-oximetiltriptolida éster dibenzílico (62 mg, 80% de rendimento) como uma espuma branca. RMN de 1H (400 MHz, CDCI3) δ 0,72 (d, 3H, J = 6,8 Hz), 0,89 (d, 3H, J = 6,8 Hz), 1,05 (s, 3H), 1,27 (m, 1H), 1,48 (m, 1H), 1,82 (dd, 1H, J, = 14,7 e J2 = 13,4 Hz), 2,03-2,35 (m, 4H), 2,64 (m, 1H), 3,14 (d, 1H, J = 5,5 Hz), 3,46 (d, 1H, J = 3,1 Hz), 3,65 (s, 1H), 3,76 (d, 1H, J = 3,1 Hz), 4,65 (m, 2H), 5,02 (m, 4H), 5,27 (m, 1H), 5,47 (m, 1H), 7,34 (m, 10H) ppm; RMN de 13C (100 MHz, CDCI3) δ 13,6; 16,8; 17,0; 23,3; 26,2; 29,62; 29,67; 35,7; 40,3; 54,7; 55,2; 59,3; 61,1; 63,6; 64,0; 69,36; 69,39; 69,42; 69,45; 69,9; 78,2; 92,9; 93,0; 125,5; 127,9; 128,0; 128,6; 135,5; 135,6; 160,1; 173,2 ppm; HRMS calculado para (C35H39O10PNa): m/z requerido, [M+Na]+ 673,2179; m/z encontrado, 673,2176.

Exemplo 2: Síntese de sal dissódico de 14-O-fosfono-oximetiltriptolida (composto 1)

A uma solução contendo 14-O-metiltiometiltriptolida (50 mg, 0,12 mmol), ácido fosfórico (82 mg, 0,84 mmol) e peneiras moleculares (4 A, 0,45 g) em THF (10 mL) a 0°C foi adicionada N-iodossuccinimida (41 mg, 0,18 mmol), e a mistura foi agitada a temperatura ambiente por 1 h. A mistura reacional foi filtrada através de Celite e os sólidos foram lavados com THF. O filtrado foi tratado com Na2S2O3 a 1 M até se tornar incolor; o filtrado foi tratado com uma solução de carbonato de sódio (13 mg em 3 mL de água, 0,12 mmol). O filtrado foi evaporado sob pressão reduzida e a solução de água residual extraída com éter (3x3 mL). A camada aquosa foi evaporada até secura e o resíduo resultante purificado por cromatografia (C18), eluindo com um gradiente de 0-100% de metanol em água para fornecer sal dissódico de 14-O-fosfono-oximetiltriptolida (43 mg, 70% de rendimento) como um pó incolor.

Preparação de 14-O-metiltiometiltriptolida

A uma solução de triptolida (100 mg, 0,28 mmol) e sulfeto de metila (0,16 mL, 2,24 mmoles) em acetonitrila (10 mL) a 0°C foi adicionado peróxido de benzoíla (0,27 g, 1,12 mmol) em quatro porções iguais durante 20 min, e em seguida a mistura foi agitada a 0°C por 1 h e, depois, a temperatura ambiente por 1 h. A mistura foi diluída com acetato de etila e lavada com Na2CO3 10% e em seguida com salmoura. A fase orgânica foi secada sobre MgS04, filtrada e evaporada. O resíduo foi purificado por cromatografia instantânea em sílica-gel (hexano/acetato de etila 1:1) para fornecer 14-O-metiltiometiltriptolida (63 mg, 54% de rendimento) como um pó incolor.

Exemplo 3: Síntese de sal dissódico de 14-O-fosfono-oxietiltriptolida

A uma solução contendo 14-O-metiltioetiltriptolida (52 mg, 0,12 mmol), ácido fosfórico (82 mg, 0,84 mmol) e peneiras moleculares (4 Å, 0,45 g) em THF (10 mL) a 0°C foi adicionado N-iodossuccinimida (41 mg, 0,18 mmol), e a mistura foi agitada a temperatura ambiente por 1 h. A mistura reacional foi filtrada através de Celite e os sólidos foram lavados com THF. O filtrado foi tratado com Na2S2O3 1 M até tornar-se incolor; o filtrado foi tratado com uma solução de carbonato de sódio (13 mg em 3 mL de água, 0,12 mmol). O filtrado foi evaporado sob pressão reduzida e a solução de água residual extraída com éter (3x3 mL). A camada aquosa foi evaporada até secura e o resíduo resultante purificado por cromatografia (C18), eluindo com um gradiente de 0-100% de metanol em água para fornecer sal dissódico de 14-O-fosfono-oxietiltriptolida (46 mg, 72% de rendimento) como um pó incolor. RMN de 1H (400 MHz, D2O) δ 0,68 (d, 3H, J = 6,8 Hz), 0,70 (d, 3H, J = 6,8 Hz), 1,03 (s, 3H), 1,21 (m, 1H), 1,57 (d, 3H, J = 5,3 Hz), 1,58 (m, 1H), 1,94 (dd, 1H, J1 = 14,7 e J2 = 13,4 Hz), 2,08-2,61 (m, 4H), 2,62 (m, 1H), 3,27 (d, 1H, J = 5,5 Hz), 3,45 (d, 1H, J = 3,1 Hz), 3,72 (d, 1H, J = 3,1 Hz), 3,79 (s, 1H), 4,63 (m, 2H), 6,43 (q, 1H, J = 5,3 Hz) ppm; RMN de 13C (100 MHz, D2O) δ 13,5; 16,9; 17,0; 17,1; 21,4; 23,5; 26,8; 29,5; 35,9; 40,3; 54,0; 55,1; 59,4; 61,2; 63,6; 64,2; 69,8; 75,8; 76,5; 91,6; 125,6; 164,2; 177,2 ppm; HRMS calculado para (C22H28O10P): m/z requerido, [M+1]+ 483,1137; m/z encontrado, 483,1134.

Preparação de 14-O-metiltioetiltriptolida

A uma solução de triptolida (100 mg, 0,28 mmol) e sulfeto de etila (0,24 mL, 2,24 mmoles) em acetonitrila (10 mL) a 0°C foi adicionado peró-xido de benzoíla (0,27 g, 1,12 mmol) em quatro porções iguais durante 20 min, e em seguida a mistura foi agitada a 0°C por 1 h e depois a temperatura ambiente por 1 h. A mistura foi diluída com acetato de etila e lavada com Na2C03 10% e em seguida com salmoura. A fase orgânica foi secada sobe MgS04, filtrada e evaporada. O resíduo foi purificado por cromatografia instantânea em sílica-gel (hexano/acetato de etila 1:1) para fornecer 14-O-metiltioetiltriptolida (60 mg, 50 % de rendimento) como um pó incolor. RMN de 1H (400 MHz, CDCI3) δ 0,68 (d, 3H, J = 6,8 Hz), 0,70 (d, 3H, J = 6,8 Hz), 1,04 (s, 3H), 1,20 (m, 1H), 1,57 (d, 3H, J = 5,3 Hz), 1,59 (m, 1H), 1,88 (dd, 1H, J1= 14,7 e J2 = 13,4 Hz), 2,19 (s, 3H), 2,06-2,27 (m, 4H), 2,62 (m, 1H), 3,24 (d, 1H, J = 5,5 Hz), 3,42 (d, 1H, J = 3,1 Hz), 3,70 (d, 1H, J = 3,1 Hz), 3,73 (s, 1H), 4,61 (m, 2H), 5,02 (q, 1H, J = 5,3 Hz) ppm; RMN de 13C (100 MHz, CDCI3) δ 13,6; 14,8; 16,9; 17,0; 17,1; 21,0; 23,5; 26,4; 29,6; 35,8; 40,5; 54,0; 55,2; 59,4; 61,3; 63,7; 64,2; 69,9; 75,8; 76,7; 125,6; 160,2; 173,2 ppm; HRMS calculado para (C23H30O6SNa): m/z requerido, [M+Na]+ 457,1763; m/z encontrado, 457,1765.

Exemplo 4: Síntese de sal dissódico de 14-O-fosfono-oxipropiltriptolida

A uma solução contendo 14-O-metiltiopropiltriptolida (54 mg, 0,12 mmol), ácido fosfórico (82 mg, 0,84 mmol) e peneiras moleculares (4 Å, 0,45 g) em THF (10 mL) a 0°C foi adicionada N-iodossuccinimida (41 mg, 0,18 mmol), e a mistura foi agitada a temperatura ambiente por 1 h. A mistura reacional foi filtrada através de Celite e os sólidos foram lavados com THF. O filtrado foi tratado com Na2S2O3 1 M até tornar-se incolor; o filtrado foi tratado com uma solução de carbonato de sódio (13 mg em 3 mL de á-gua, 0,12 mmol). O filtrado foi evaporado sob pressão reduzida e a solução de água residual extraída com éter (3x3 mL). A camada aquosa foi evaporada até secura e o resíduo resultante purificado por cromatografia (C18), elu-indo com um gradiente de 0-100% de metanol em água para proporcionar sal dissódico de 14-O-fosfono-oxipropiltriptolida (43 mg, 65% de rendimento) como um pó incolor. RMN de 1H (400 MHz, D2O) δ 0,66 (d, 3H, J = 6,8 Hz), 0,68 (d, 3H, J = 6,8 Hz), 0,99 (t, 3H, J = 5,3 Hz), 1,03 (s, 3H), 1,20 (m, 1H), 1,53 (m, 1H), 1,90 (dd, 1H, J1 = 14,7 e J2 = 13,4 Hz), 2,04-2,66 (m, 4H), 2,65 (m, 3H), 3,27 (d, 1H, J = 5,5 Hz), 3,49 (d, 1H, J = 3,1 Hz), 3,71 (d, 1H, J = 3,1 Hz), 3,78 (s, 1H), 4,69 (m, 2H), 6,31 (q, 1H, J = 5,3 Hz) ppm; RMN de 13C (100 MHz, D2O) δ 7,55; 13,5; 16,2; 16,9; 17,2; 20,8; 23,2; 26,1; 28,4; 34,7; 38,5; 54,1; 55,0; 59,0; 61,3; 62,5; 63,9; 68,5; 75,4; 76,4; 91,9; 125,7; 160,1; 174,5 ppm; HRMS calculado para (C23H29O10P): m/z requerido, [M+1]+ 497,1294; m/z encontrado, 497,1292.

Preparação de 14-O-metiltiopropiltriptolida

A uma solução de triptolida (100 mg, 0,28 mmol) e sulfeto de propila (0,32 mL, 2,24 mmoles) em acetonitrila (10 mL) a 0°C foi adicionado peróxido de benzoila (0,27 g, 1,12 mmol) em quatro porções iguais durante 20 min, e a mistura foi agitada a 0°C por 1 h e em seguida a temperatura ambiente por 1 h. A mistura foi diluída com acetato de etila e lavada com Na2CO3 a 10% e em seguida com salmoura. A fase orgânica foi secada sobre MgS04, filtrada e evaporada. O resíduo foi purificado por cromatografia instantânea em sílica-gel (hexano/acetato de etila 1:1) para fornecer 14-O-metiltiopropiltriptolida (60 mg, 48% de rendimento) como um pó incolor. RMN de 1H (400 MHz, CDCI3) δ 0,65 (d, 3H, J = 6,8 Hz), 0,67 (d, 3H, J = 6,8 Hz), 0,99 (t, 3H, J = 5,3 Hz), 1,01 (s, 3H), 1,20 (m, 1H), 1,59 (m, 1H), 1,88 (dd, 1H, J1 = 14,7 e J2 = 13,4 Hz), 2,18 (s, 3H), 2,01-2,26 (m, 4H), 2,62 (m, 3H), 3,24 (d, 1H, J = 5,5 Hz), 3,42 (d, 1H, J = 3,1 Hz), 3,70 (d, 1H, J = 3,1 Hz), 3,73 (s, 1H), 4,61 (m, 2H), 5,03 (q, 1H, J = 5,3 Hz) ppm; RMN de 13C (100 MHz, CDCI3) δ 7,68; 13,5; 14,6; 16,2; 17,0; 17,2; 21,4; 23,2; 26,1; 28,9; 34,7; 39,5; 54,1; 55,6; 59,0; 61,3; 63,5; 64,0; 69,5; 75,1; 76,4; 125,1; 160,9; 173,5 ppm; HRMS calculado para (C24H32O6SNa): m/z requerido, [M+Na]+ 471,1920; m/z encontrado, 471,1918.

Exemplo 5: Propriedades químicas dos compostos de fórmula I

As propriedades químicas dos compostos da invenção foram avaliadas. A solubilidade aquosa e a estabilidade química dos compostos foi também medida. Usando uma solução do composto do Exemplo 1 com pH ajustado em 7,4, a solubilidade a temperatura ambiente foi determinada como sendo de 61,4 mg/mL. A estabilidade dos compostos da invenção foram avaliadas em soluções de tampão Tris (pH 7,4) e tampão de Borato (pH 7,4) a temperatura ambiente. Após um período de 1 (um) mês, não se observou nenhuma degradação do composto do Exemplo 1. Os resultados são resumidos na tabela seguinte.

* Nenhuma degradação observada após um mês.

Exemplo 6: Conversão enzimática in vitro do composto 1

Composto 1 é convertido na forma de tritpolida ativa por ação da enzima fosfatase alcalina. Foi realizado um experimento in vitro para estudar a bioconversão do composto profármaco de tritpolida da invenção. Biocon-versão in vitro foi simulada usando fosfatase alcalina (de mucosa intestinal bovina, Tipe VII-S, disponível por Sigma-Aldrich (St. Louis, Missouri) em tampão de glicina (pH 9,8).

Fosfatases alcalinas são um grupo de enzimas encontradas principalmente no fígado (isoenzima ALP-1) e osso (isoenzima ALP-2), com pequenas quantidades sendo produzidas pelo revestimento celular do intestino delgado (isoenzima ALP-3), placenta e rins. Fosfatases alcalinas quebram o fósforo para criar um pH alcalino. Outras enzimas além de fosfatase alcalina poderão contribuir para hidrólise in vivo também.

Da figura 3, pode-se ver que as quantidades decrescentes da forma profármaco de triptolida foram coincidentes com as quantidades crescentes proporcionadas de triptolida liberada na forma ativa. Além disso, observou-se que a conversão ocorreu por um período de tempo relativamente curto, com a mior parte da conversão ocorrendo durante o período de tempo inicial de 10 minutos.

A constante de degradação de primeira ordem foi calculada ajustando a concentração restante versus o tempo de incubação. A meia-vida de degradação (t ½) do composto 1 foi determinada como sendo de 2 minutos.

Exemplo 7: Estudo comparativo de viabilidade celular in vitro

Foi conduzido um experimento para avaliar viabilidade celular comparativa in vitro usando triptolida, o profármaco de triptolida (composto 1), e controle (sem triptolida ou a forma profármaco). Viabilidade celular foi determinada usando Dojindo Cell Counting Kit-8 (disponível por Dojindo Laboratories, Rockville, Maryland). Células de câncer pancreático foram semeadas em uma placa de 96 poços sob 2 x 103 células por poço e deixadas aderir de um dia para o outro. As células foram então tratadas com o profármaco de triptolida (composto 1) da invenção e com triptolida nativa sob várias concentrações por períodos de 24 horas e 48 horas. O substato tetrazó-lio (10 μl) foi adicionado em cada poço da placa. A placa foi incubada a 37°C por 1 hora, após o que foi medida absorbância a 460 nm. Cada experimento foi realizado em triplicata e repetido três vezes independentes.

O efeito do composto 1 e triptolida sobra a viabilidade de células de câncer pancreático foi observado após incubação em meio contendo o profármaco de tritpolida em concentrações variando de 50 a 200 nmoles/L em 24 horas e 48 horas. Os dados foram coletados e convertidos nos gráficos da figura 4 (Viabilidade de Células Mia-Paca em 48 horas), figura 5 (Viabilidade de Células Panc-1 em 24 e 48 horas) e figura 6 (Viabilidade de Células S2VP10 em 24 e 48 horas).

Como se pode observar de cada um dos dados e figuras acima, a presença do profármaco de triptolida e fosfatase alcalina e triptolida em forma nativa reduziu significativamente a viabilidade de células pancreáticas in vitro de uma maneira dependente de tempo e doses.

Exemplo 8: Estudo comparativo in vivo de composto 1 em camundongos

Trinta camundongos nus da linhagem atímica nu/nu foram obtidos do Instituto Nacional do Câncer (NCI) (Rockville, Maryland) e mantidos em uma instalação RAR. Os camundongos foram anestesiados de acordo com as recomendações da instalação RAR usando 75-200 mg de cetami-na/kg e 4-8 mg/kg de xilazina. Uma pequena incisão de 3 mm foi feita no lado esquerdo da parede abdominal e o baço foi extraído puxado para fora com fórceps o mais suficiente para expor e acessar o pâncreas. Meio com células MiaPaca-2 foi preparado e mantido sobre gelo até transferência para os camundongos. Em cada um dos camundongos, um milhão de células Mi-aPaca-2 suspensas em MATRIGEL™ (disponível por Becton-Dickinson Corporation, Franklin Lakes, Nova Jérsei) foram injetadas na cauda do pâncreas (identificado por ligação anatômica com o baço) utilizando uma seringa Hamilton. Após transferência das células, a seringa foi mantida estável por 5-10 segundos adicionais para permitir que o MATRIGEL™ se ajustasse. O baço foi devolvido à cavidade abdominal e a parede abdominal foi fechada por sutura com vicrila de maneira contínua. A pele foi aposta e fechada usando grampos de sutura. Os camundongos foram então transferidos para uma almofada térmica até total recuperação antes de serem retornados à gaiola. Medicação para dor pós-operatória (buprenonorfina, 0,1 mg/kg) foi administrada intraperitonealmente logo após total recuperação de anestesia para impedir depressão respiratória, e, em seguida, com administração a cada 12 horas por dois dias. Os grampos de sutura foram removidos dos camundongos após 7 dias de cirurgia.

Os camundongos foram então separados aleatoriamente em três grupos, cada grupo possuindo 10 camundongos. Os grupos foram os seguintes: grupo de controle, grupo de triptolida e o grupo profármaco de triptolida (composto 1). O grupo de controle consistiu de camundongos que foram injetados intraperitonealmente com excipiente DMSO. Os indivíduos do grupo de triptolida receberam injeção de 0,2 mg/kg de triptolida dissolvida em DMSO e diluída com solução salina tamponada com fosfato até um volume de 100 μl, sendo as injeções intraperitoneais aplicadas diariamente durante um período de 60 dias. Os indivíduos de composto 1 receberam injeção in-traperitoneal diária por 60 dias com 0,28 mg/kg do composto dissolvido em solução salina tamponada com fosfato diluída até um volume de 100 μΙ.

Os camundongos foram submetidos a eutanásia sob anestesia na conclusion dos 60 dias de tratamento. Amostras foram coletadas (sangue, pulmão, baço, fígado, rins e tecido tumoral) e volume e peso do tumor foram medidos e comparados entre os diferentes grupos. Observações foram feitas sobre o crescimento iocorregional e crescimento do câncer.

A figura 8 (fotografias do grupo de controle), a figura 9 (fotografias do grupo de triptolida) e a figura 10 (fotografias do profármaco de triptolida do grupo do Exemplo 1) são uma coleção de fotografias que mostram o crescimento final de tumores de cada um dos grupos de camundongos do experimento in vivo. A figura 11 é uma fotografia da coleção de tumores ex-cisados tomados de camundongos de cada um dos grupos e alinhados ao longo de uma fila correspondente a cada grupo.

Os tumores excisados do grupo de controle não tratado foram consideravelmente maiores em 60 dias do que aqueles excisados dos outros dois grupos, mostrando crescimento agressivo contínuo das células de tumor pancreático. Em contrapartida, o composto do grupo do Exemplo 1 exibiu considerável inibição de crescimento de tumores pancreáticos em comparação com o grupo de controle não tratado, e substancial inibição eficaz de células tumorais em comparação com triptolida em forma nativa. Referin-do-se agora à figura 11 e à figura 12, que mostram peso e volume comparativos de tumores entre os três grupos, respectivamente, os tumores do grupo de controle foram consideravelmente mavelmente maiores tanto em termos de peso (g) quanto de volume (cm3) em comparação com os dados de tumores dos grupos de triptolida e de profármaco de triptolida (composto 1).

Assim, quando administrado a um mamífero vivo in vivo, o composto profármaco de triptolida da invenção pode inibir eficazmente crescimento de tumores e com eficácia de efeito inibidor comparável com a forma nativa não profármaco de triptolida. Como se pode ver dos dados e figuras acima, o crescimento de tumores de câncer pancreático nos camundongos tratados com triptolida nativa e profármaco de triptolida (composto 1) durante 60 dias exibiu volume tumoral significativamente reduzido em comparação com o grupo de controle não tratado. Além disso, foi significativo que tanto nos indivíduos do grupo de triptolida como nos indivíduos do grupo de profármaco de triptolida não houve impacto significativo aparente no peso corporal e nenhum sinal evidente de toxicidade nos indivíduos. Desse modo, os compostos da invenção podem proporcionar inibição tumoral e inibir crescimento de células cancerosas e, em particular, crescimento de células de câncer pancreático. Ademais, os compostos da invenção podem também proporcionar a base para tratamento eficaz para inibir câncer pancreático com baixos efeitos colaterais tóxicos em mamíferos vivos.

Exemplo 9: Composto 1 induziu regressão tumoral em um modelo ortotópico de câncer pancreático em camundongo (estudo de dosagens de 60 dias).

Células MIA PaCa-2 (1X106) foram suspensas em matrigel e submetidos a injeção na cauda do pâncreas de camundongos nus fêmeas de 4-6 semanas. Dez dias pós-implantação das células, os camundongos receberam injeção intraperitoneal com concentrações indicadas de composto 1 (0,1; 0,15; 0,3; 0,6 ou 0,9 mg/kg) ou 0,2mg/kg de Triptolida QD por 60 dias. Camundongos de controle receberam injeção de solução salina BID. O tratamento foi parado após 60 dias e os camundongos foram observados por outros 28 dias antes de serem sacrificados. Amostras de tumores, se houvesse, foram colhidas desses camundongos e peso e volume dos tumores medidos. Se a carga tumoral excedesse as diretrizes de cuidados com animais da Universidade de Minnesota, os camundongos eram sacrificados em pontos de tempo prematuros e seus tumores colhidos. A figura 13 ilustra o aumento de sobrevida de camundongos tratados com composto 1 e triptolida versus excipiente. A figura 14 ilustra o aumento de sobrevida de camundongos tratados com composto 1 versus excipiente. A figura 15 mostra a redução de carga tumoral, conforme medida em relação a volume ou peso de tumores, de camundongos tratados com composto 1 versus camundongos de controle.

Exemplo 10: Composto 1 induziu regressão tumoral em um modelo ortotópico de câncer pancreático em camundongo (estudo de dosagens de 21 dias).

1X106 células de S2013, uma linhagem de células de câncer pancreático altamente metastáticas, foram suspensas em matrigel e injetadas na cauda do pâncreas de camundongos nus fêmeas velhos de 4-6 semanas. Sete dias pós-implantação das células, os camundongos receberam injeção intraperitoneal de 0,42mg/kg de composto 1 por 21 dias. O tratamento foi parado após 21 dias e os camundongos sacrificados. Amostras de tumores, se houvesse, foram colhidas desses camundongos e peso e volume dos tumores medidos. Se a carga tumoral excedesse as diretrizes de cuidados com animais da Universidade de Minnesota, os camundongos eram sacrificados e seus tumores colhidos em um ponto de tempo prematuro. Camundongos de controle receberam injeção de solução salina QD. A figura 16 mostra a redução de carga tumoral, conforme medida em relação a volume ou peso de tumores, de camundongos tratados com composto 1 versus camundongos de controle.

Exemplo 11: Composto 1 induziu regressão tumoral em um modelo subcutâneo de colangiocarcinoma em camundongo.

Células SkChA-1 (5X105) foram suspensas em matrigel e injetadas subcutaneamente no flanco esquerdo de camundongos nus fêmeas velhos de 4-6 semanas. Sete dias pós-implantação das células, os camundongos receberam injeção intraperitoneal de 0,3 mg/kg de composto 1 BID por 25 dias. O tratamento foi parado nesse ponto e os camundongos sacrificados. Amostras de tumores, se houvesse, foram colhidas desses camundongos e peso e volume dos tumores medidos. Se a carga tumoral excedesse as diretrizes de cuidados com animais da Universidade de Minnesota, os camundongos eram sacrificados e seus tumores colhidos em um ponto de tempo prematuro. Camundongos de controle receberam injeção de solução salina BID. A figura 17 mostra a redução de carga tumoral, conforme medida em relação a volume ou peso de tumores, de camundongos tratados com composto 1 versus camundongos de controle.

Exemplo 12: Triptolida induziu regressão tumoral em um modelo ortotópico de neuroblastoma em camundongo.

Células de neuroblastoma N2 (1X106) foram suspensas em matrigel e injetadas no espaço retroperitoneal esquerdo de camundongos imu-nocompetentes A/J velhos de 4-6 semanas. Três dias pós-implantação das células, os camundongos receberam injeção de 0,4 mg/kg de triptolida intraperitonealmente por 21 dias. O tratamento foi parado nesse ponto e os camundongos sacrificados. Amostras de tumores, se houvesse, foram colhidas desses camundongos e peso e volume dos tumores medidos. Se a carga tumoral excedesse as diretrizes de cuidados com animais da Universidade de Minnesota, os camundongos eram sacrificados e seus tumores colhidos em um ponto de tempo prematuro. Camundongos de controle receberam injeção de DMSO por 21 dias. A figura 18 mostra a redução de carga tumoral nos camundongos tratados com triptolida versus os camundongos de controle, conforme medida em relação a volume e massa dos tumores.

Exemplo 13: Triptolida induziu morte celular e ativação de caspase-3 em células de neuroblastoma.

Células de neuroblastoma N2a e SKNSH foram tratadas com triptolida, resultando em morte celular dependente de dose e tempo em N2a, com mais de 50% de células mortas com triptolida 62,5 nM em 24 horas e aproximadamente 85% de células mortas com triptolida 250 nM em 48 horas (figura 19). Para confirmar a hipótese de que triptolida resulta em morte de células de neuroblastoma via caminho apoptótico, atividade de caspase-3 foi medida como marcador de apoptose. Em ambas as linhagens de células, ocorrem elevações na atividade de caspase com doses maiores de triptolida e duração mais longa de terapia. Tratamento com triptolida foi associado a elevações nos níveis de atividade de caspase-3 dependente de dose e tempo (figura 20). Esses resultados sugerem que morte celular mediada por triptolida ocorre via indução de apoptose.

Exemplo 14:

O que segue ilustra formas representativas de dosagens farmacêuticas, contendo um composto de fórmula I ('Composto X'), para o uso terapêutico ou profilático em humanos.

As formulações acima poderão ser obtidas por meio de procedimentos convencionais bem conhecidos no estado da técnica farmacêutico.

Todas as publicações, patentes e documentos de patentes são incorporados aqui como referência, ainda que individualmente incorporados como referência. A invenção foi descrita com referência a várias modalidades e técnicas específicas e preferidas. Entretanto, deve-se entender que muitas variações e modificações poderão ser efetuadas mantendo-se dentro do espírito e escopo da invenção

Claims

Composto, caracterizado pelo fato de que apresenta a fórmula I:
em que:
cada R1 é independentemente H ou (C1-C3)alquila; e cada R2 é independentemente H ou (C1-C3)alquila;
n é 1, 2 ou 3; e
cada X é H;
ou um sal do mesmo.
Composto, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que é um composto de fórmula Ia:
em que X+ é um cátion orgânico ou cátion inorgânico farmaceuticamente aceitável.
Composto, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que R1 é (C1-C3)alquila.
Composto, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que R1 é H.
Composto, de acordo com a reivindicação 1, 3 ou 4, caracterizado pelo fato de que R2 é (C1-C3)alquila.
Composto, de acordo com a reivindicação 1, 3 ou 4, caracterizado pelo fato de que R2 é H.7. Composto, de acordo com a reivindicação 1, 3, 4, 5 ou 6, caracterizado pelo fato de que cada X+ é H.
Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 6, caracterizado pelo fato de que cada X+ é lítio, sódio, potássio, magnésio, cálcio, bário, zinco ou alumínio.
Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 6, caracterizado pelo fato de que cada X+ é de fórmula HY+ em que Y é amônia, trietilamina, trometamina, trietanolamina, etilenodiamina, glucamina, N-metilglucamina, glicina, lisina, ornitina, arginina, etanolamina ou colina.
Composto, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 6, caracterizado pelo fato de que cada X+ é Na+.
Composto de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que é sal dissódico de 14-O-fosfono-oximetiltriptolida, sal dissódico de 14-O-fosfono-oxietiltriptolida ou sal dissódico de 14-O-fosfono-oxipropiltriptolida.
Composto de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que é sal dissódico de 14-O-fosfono-oximetiltriptolida.
Composição farmacêutica, caracterizada pelo fato de que compreende um composto de fórmula I como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 12, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em combinação com um veículo farmaceuticamente aceitável.
Composto de fórmula I de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 12, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, caracterizado pelo fato de ser para uso em terapia médica.
Composto de fórmula I de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 12, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, caracterizado pelo fato de ser para uso no tratamento terapêutico ou profilático de câncer.
Composto de fórmula I de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 12, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, caracterizado pelo fato de ser para uso na inibição terapêutica ou profilática de crescimento de células cancerosas em câncer que expressa HSP70.
Uso de um composto de fórmula I como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 12, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, caracterizado pelo fato de ser para a produção de um medicamento para o tratamento de câncer.
Uso, de acordo com a reivindicação 17, caracterizado pelo fato de que o câncer é selecionado de câncer pancreático, carcinoma do duto biliar, neuroblastoma, câncer do cólon, câncer de mama, mieloma, câncer gástrico, câncer de fígado, glioblastoma, câncer de ovário, câncer colorretal, linfoma não Hodgkin, câncer de pulmão, câncer de próstata, câncer de pulmão de células pequenas, câncer de pulmão de células grandes, câncer de rim, câncer de esôfago, câncer de estômago, câncer cervical e tumores de linfoma.
Uso, de acordo com a reivindicação 17, caracterizado pelo fato de que o câncer é câncer pancreático ou neuroblastoma.
Uso de um composto de fórmula I como definido em qualquer uma das reivindicações 1 a 12, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, caracterizado pelo fato de ser para a produção de um medicamento para a inibição de crescimento de células cancerosas em câncer que expressa HSP70.
Uso, de acordo com a reivindicação 20, caracterizado pelo fato de que o câncer que expressa HSP70 é câncer pancreático, câncer de mama, câncer de cólon, câncer gástrico, câncer de fígado, neuroblastoma ou glioblastoma.
Uso, de acordo com a reivindicação 20, caracterizado pelo fato de que o câncer que expressa HSP70 é neuroblastoma ou câncer pancreático.