CA2192073C - Nouveaux derives d'oligosides, leur procede de preparation et leurs applications - Google Patents

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Abstract

L'invention a pour objet des composés comprenant un ou plusieurs oligosides, chacun desdits oligosides étant fixé de façon covalente sur une ou plusieurs molécules, matrices ou particules, en particulier une, deux ou trois, grâce à une molécule intermédiaire possédant un atome d'azote porté par un carbone en a d un groupe C = O et un ou plusieurs groupes fonctionnels, en particulier un, deux ou trois, la liaison covalente entre ladite molécule intermédiaire et l'oligoside ayan t lieu par l'intermédiaire du susdit atome d'azote, et la liaison covalente entre ladite molécule intermédiaire et la susdite molécule, la susdite matrice, la susdite particule, ou les susdites molécules, les susdites matrices, les susdites particules ayant lieu par l'intermédiaire du ou des susdits groupes fonctionnels de ladite molécule intermédiaire et des groupes fonctionnels appropriés sur la (les) molécule(s), la (les) matrice(s) ou la (les) particule(s).

Description

&U 96100229 PCT/FR95/00790 NOUVEAUX DERIVES D'OLIGOSIDES, LEUR PROCEDE DE
PREPARATION ET LEURS APPLICATIONS.

L'invention a pour objet de nouveaux dérivés d'oligosides, leur procédé
de préparation et leurs applications.
Les oligosides naturels peuvent être préparés à l'état libre à partir de divers liquides physiologiques tels que le lait, ou extraits à partir des produits naturels ou transfotmés (miel, bière, etc). Les oligosides naturels peuvent également être obtenus par coupure d'une liaison glycosidique d'une des parties glucidiques de glycoconjugués (glycolipides, glycoprotéines, polyosides, protéoglycannes, etc), par hydrolyse à l'aide d'enzymes ou par catalyse chimique à partir desdits glycoconjugués.
Les oligosides naturels peuvent être utilisés comme substrats, comme inhibiteurs, comme signal de reconnaissance, etc. Dans la plupart des cas, il convient de fixer l'oligoside sur une molécule, une matrice ou une particule, qui peuvent être choisies parmi:
- une matrice comme support pour la chromatographie d'affmité ;
- une bille d'or, de latex, pour l'histologie et la cytologie ;
- une protéine pour la visualisation, la purification, etc, notamment 1) des récepteurs spécifiques des osides, récepteurs que l'on appelle lectines, adhésines, agglutinines etc, ou encore 2) des protéines à activité enzymatique ou non, qui ont une affinité pour les osides, notamment des glycosyltransférases, telles que la sialyltransférase, des sulfotransférases, des phosphotransférases, des exoglycosidases ou des endoglycosidases;
- un lipide pour la caractérisation des récepteurs précédents;
- des oligonucléotides pour augmenter sélectivement leur capture par des cellules cibles;
- une protéine ou des polymères pour le ciblage de médicaments, d'oligonucléotides ou de gènes, ou pour réaliser des inhibiteurs intramoléculaires.
La synthèse de dérivés d'oligosides susceptibles d'être liés de façon covalente à une protéine, une matrice, un oligonucléotide ou de façon générale à
une molécule organique ou une particule, tout en préservant l'intégrité de la structure et des fonctions de chacun de ses oses constitutifs - ce qui est nécessaire pour préserver la capacité fonctionnelle de l'oligoside - peut être obtenue essentiellement par deux voies: la synthèse totale dè novo et la transformation intermédiaire en glycosylamine. Une troisième voie conduit à un
2 dérivé également utile mais en détruisant l'ose terminal réducteur, c'est la voie d'amination en milieu réducteur.
S'agissant de la synthèse totale, cette voie exige une protection sélective des hydroxyles non engagés dans une liaison glycosidique, des étapes de condensation, des étapes de déprotection sélective, et une étape de déprotection fmale. Méme si au cours des dernières décennies les rendements de certaines de ~
ces étapes ont pu être améliorés, cette voie est une voie longue et le rendement global reste modeste, et ce d'autant plus que l'oligoside à synthétiser est plus complexe.
Les rendements sont compris pour chaque étape entre 20 et 95% selon les étapes considérées.
Par exemple la synthèse d'un dérivé para-nitrophénylé d'un pentasaccharide tel que le déterminant Lewis x:
Ga1G33(Fuca4)G1cNAcj33Ga1(34GIc(3-O-p-C6Hâ NO2 exige au total plusieurs dizaines d'étapes. Chaque étape a un rendement compris entre 50 et 95%, plus généralement 80%. Au total le rendement du produit attendu est de quelques %.
Le nombre élevé d'étapes vient de ce que les fonctions alcool de chaque ose doivent être protégées de façon différente selon que l'hydroxyle considéré
sera ou non impliqué dans une réaction de condensation.
Un ose tel que G1cNAc qui sera substitué 2 fois recevra momentanément 3 substituants différents pour permettre une substitution sélective sur l'hydroxyle
3 par le galactose, sur l'hydroxyle 4 par le fncose, l'hydroxyle 6 restant protégé
jusqu'à déprotection finale.
Pour chaque étape de condensation, le rendement est affecté par le fait que le produit formé est en général un mélange de deux formes anomériques a ou P.
En outre, il faut signaler que les produits intermédiaires doivent ètre purifiés, soit par cristallisation, soit par chromatographie, ce qui est une cause importante de la durée de la synthèse totale. Enfin, il faut signaler que les rendements peuvent être très faibles pour certaines étapes par cause d'encombrement stérique, ce qui est particulièrement le cas au niveau des branchements: 2 oses substituant un même ose.
En défmitive, cette synthèse globale est très coûteuse et très longue.
Quant à la formation d'une glycosylamine suivie d'acylation, cette voie repose sur une réaction décrite à la fm du siècle dernier: un oside possédant un ose réducteur, incubé en présence d'une concentration élevée d'ammoniac, d'un sel d'ammonium ou d'une amine aromatique, se transforme de façon réversible en glycosylamine.
Par exemple, le lactose donne une lactosylamine, avec l'ammoniac:
Gal(34G1c + NH3 => Ga1p4Glc(3-NHZ + H20 ou avec l'aniline:
Ga1R4Glc + NH2-C6II5 = Ga1R4Glc(3-NH-C6H5+ H20 Cette réaction est cependant réversible, c'est-à-dire que le produit isolé, dissous dans un tampon, s'hydrolyse pour redonner les produits de départ.
La glycosylamine peut cependant être stabilisée par acylation, par exemple par N-actétylation sélective:
Ga1R4Glcji-NH2 +(CH3 CO)2 0=> Ga1p4Glc(3-NH-CO-CH3 + CH3-CO2H
Sur ces bases, il a été récemment proposé de substituer l'amine des oligosylamines par un composé organique possédant un groupement fonctionnel réactif. Manger et al., 1992, Biochemistry 31, 10724 et 31, 10733.
Cette voie comprend la suite des étapes suivantes:

1) incubation de l'oside possédant un ose terminal réducteur en présence d'un sel d'ammonium très concentré.
Par exemple, Ga1p4Glc + NH4+ p Ga1R4Gicg-NH3+ + H20 C12H22011 + NH4+ q C12H2401oN + H20 2) Purification de la glycosylamine par chromatographie sur colonne pour éliminer le sel d'ammonium en excès.

3) Substitution de l'amine de la glycosylamine par réaction avec un dérivé
activé de l'acide monochloroacétique, en milieu alcalin.
Par exemple, Gal(34G1c(3NH2 + (CI-CHZ CO)2-O => Ga1p4Glc-NH-CO-CH2-CI
4) Transformation des résidus chloroacétyle en résidu glycyle.
Le chloroacétylglycosylamide est incubé en présence d'un sel d'ammonium très concentré, ce qui permet d'introduire une fonction amine. Par exemple:
Gal(34G1cp-NH-CO-CHZ-Cl + NH4+ => Ga1p4Glc(3-NH-CO-CHZ-NH3+, Cl-H+

2 . 192073 WO 96/00229 1 '~ , PCT/FR95/00790
5) Purification du glycyl-glycosylamide par chromatographie sur colonne pour éliminer les sels d'ammonium.
6) Condensation du glycyl-glycosylamide et d'un composé susceptible de réagir sélectivement sur un groupement aminé du résidu glycyl.
Par exemple:
Ga1(34G1c(iNH-CO-CH2-NH2 + R-CO-G => Ga1o4Glc(3-NH-CO-CH2-NH-CO-R + HG
dans lequel G est un activateur de la fonction carboxylique.
Cette voie en 6 étapes implique deux étapes de purification intermédiaire et l'utilisation d'un produit toxique: le dérivé activé de l'acide chloroacétique.
Le rendement de chaque étape est variable et varie entre 50 et 959b; le rendement global est inférieur à environ 60%.
Une autre voie a également été suggérée, mais elle entraîne la transformation de l'ose réducteur en polyol; cette voie a été proposée en 1974 par Gray (Arch. Biochem. Biophys., 163, 426-428).
L'oligoside est condensé avec un composé comportant une fonction amine (ou plusieurs) en présence de cyanoborohydtvre de sodium en milieu alcalin;
1'imine formée entre l'ose réducteur ét l'amine est réduit par le cyanoborohydrure de sodium en une amine secondaire.
Par exemple:
Gal(#Glc + NH2-R ~
Gal(4-O-CH(CHOH-CH2OH)-CHOH-CHOH-CH = N-R
+ NaBH3CN = Gal(34-O-CH(CHOH-CH2OH)-CHOH-CHOH-CH2-NH-R
Le rendement de cette réaction varie selon la taille des partenaires et est habituellement compris entre 5 et 70%.
Il y a destruction de l'ose réducteur, ce qui n'est pas souhaitable.
Le brevet français n 2 277 823 concerne des N-osides de l'acide L pyrrolidone-2-carboxylique-5, des dérivés de ceux-ci et leur procédé de préparation, consistant à condenser l'acide L pyrrolidone-2carboxylique-5 et/ou l'acide L-glutamique et/ou un sel de ces acides avec un ose ou un oside, à
propriétés réductrices ou non.
D'après les exemples, les sucres réducteurs sont tous des monosaccharides (cétoses ou aldoses), tandis que les sucres non réducteurs sont par exemple le saccharose; compte tenu des conditions réactionnelles, le saccharose s'hydrolyse en glucose et en fructose.

q (} `~ '' 1'j , O 96100229 ^ PCT/FR95/00790 Il faut également noter que dans le procédé du susdit brevet français n 2 277 823, la condensation se fait de préférence en milieu aqueux, et à une température de 50 C à 150 C, de préférence aux environs de 105 C.
= Ces conditions opératoires nécessitent de travailler avec des solutions très concentrées d'ose et d'acide qui sont inapplicables à la préparation d'oligosides;
la solubilité des oligosides décroït rapidement lorsque le nombre d'oses croît.
Par ailleurs, la réaction de condensation entre l'ose et l'acide étant une déshydratation thermique, elle est inapplicable à la préparation d'oligosides en raison de la fragilité des liaisons osidiques, qui sont facilement hydrolysées à
chaud (voir par exemple, le cas dn saccharose).
La condensation thermique présente en outre l'inconvénient de conduire à
l'obtention de produits colorés, témoins de réactions de dégradation et nécessitant une étape ultérieure de purification.
Ce procédé ne permet donc d'obtenir que des dérivés de monosaccharides et n'est pas adapté à la production de dérivés d'oligosides.
L'un des aspects de l'invention est de proposer de nouveaux dérivés d'oligosides dans lesquels les oligosides sont fixés sur au moins une molécule, une matrice ou une particule.
Un autre aspect de l'invention est de proposer des dérivés de glycosylaniine, stables en milieu aqueux, susceptibles d'être fixés sur au moins une molécule, une matrice ou une particule.
L'un des buts de la présente invention est de fournir un procédé de préparation d'oligosides fixés sur au moins une molécule, une matrice ou une particule, simple à mettre en oeuvre, présentant un nombre réduit d'étapes et permettant d'obtenir un rendement pouvant atteindre pratiquement 100%.
Un autre aspect de l'invention est de pouvoir fixer des oligosides de façon covalente sur au moins une molécule, une matrice ou une particule, tout en préservant la capacité fonctionnelle des oligosides.
L'invention a pour objet des nouveaux composés comprenant un ou plusieurs oligosides, chacun desdits oligosides étant fixé de façon covalente sur une ou plusieurs molécules, matrices ou particules, en particulier une, deux ou trois, grâce à une molécule intermédiaire possédant un atome d'azote porté par un carbone en a d'un groupe C = O et un ou plusieurs groupes fonctionnels, en particulier un, deux ou trois, la liaison covalente entre ladite molécule intermédiaire et l'oligoside ayant lieu par l'intennédiaire du susdit atome d'azote, et la liaison covalente entre ladite molécule intermédiaire et la susdite molécule, la susdite matrice, la susdite particule, ou les susdites molécules, les - --- - - - - - - - --susdites matrices, les susdites particules ayant lieu par l'intermédiaire du ou des susdits groupes fonctionnels de ladite molécule intermédiaire et des groupes fonctionnels appropriés sur la (les) molécule(s), la (les) matrice(s) ou la (les) particule(s).
L'invention a également pour objet des composés comprenant un ou plusieurs oligosides, chacun desdits oligosides étant fixé de façon covalente sur une ou plusieurs molécules, matrices ou particules, grâce à une molécule intermédiaire possédant un atome d'azote porté par un carbone en a d'un groupe C = O, l'atome d'azote étant N-acylé, et un ou plusieurs groupes fonctionnels, la liaison covalente entre ladite molécule intermédiaire et l'oligoside ayant lieu par l'intermédiaire du susdit atome d'azote, et la liaison covalente entre ladite molécule intermédiaire et la susdite molécule, la susdite matrice, la susdite particule, ou les susdites molécules, les susdites matrices, les susdites particules ayant lieu par l'intermédiaire du ou des susdits groupes fonctionnels de ladite molécule intermédiaire et des groupes fonctionnels appropriés sur la (les) molécule(s), la (les) matrice(s) ou la (les) particule(s).
Le terme oligosides correspond à la présence d'au moins deux, et avantageusement à la présence de plus de deux oses, et avantageusement d'au moins 4.
Les oligosides entrant dans la constitution des composés de l'invention sont tels qu'avant la liaison avec la molécule intermédiaire, ils présentent un ose terminal réducteur. De ce fait, la liaison covalente entre la susdite molécule intermédiaire et l'oligoside a lieu par l'intermédiaire de l'atome d'azote de la molécule intermédiaire et du carbone anomérique de l'ose terminal réducteur de l'oligoside, c'est-à-dire du carbone en position 1 de l'ose terminal réducteur de la série des aldoses, ou du carbone en position 2 de l'ose terminal réducteur de la série des cétoses.
L'invention a pour objet des composés de formule générale (I) oligosidyl - N CO(-D)a (Z)b-CH[-(CH2)p]j (i) COX
dans laquelle:
*a=0ou1, *j=0ou1, *b=0ou 1, 6a * p = 2 à 4, notamment 2, * sous réserve que ** a = b = 0, lorsque j= 1, ce qui entraîne la présence d'une molécule cyclique, ** ou a = b = 1, lorsque j= 0 ce qui implique l'absence de groupe (CHz)p, * D représente un résidu d'un acide organique de formule DCO,H, notamment H
ou une chaîne alkyle de l à 10 atomes de carbone, en particulier CH3, * Z représente
7 ** B, B étant H, un alkyle de 1 à 10 atomes de carbone, ou une chaîne latérale d'un acide a aminé, naturel ou synthétique tel que CH(CH3)2, CH2OH, CH3, et de préférence H, ou = ** B'-P', B' étant une chaîne alkyle de 1 à 10 atomes de carbone, ou une chaîne latérale d'un acide a aminé, naturel ou synthétique, lesdites chaînes = contenant un groupe dérivé d'un groupement fonctionnel susceptible d'être activé, tel que carboxylique, SH, OH ou amine, libre ou protégé, de préférence protégé, P' ayant les significations indiquées ci-après, * X représente:
le groupe [NH-(A;)-CO]m Q, (P )k ou le groupe [NH-(A;)-CO]m P, (P")k ou le groupe [NH-(A;)-CO],,i-R-P

(F)k * m étant un nombre entier de 0 à 10, de préférence de 0 à 5 et avantageusement 1 ou 2, k= 0 ou 1 * Q représente OH, OCH3, OCHrC6H5, O-C6H5, O-C6F5, O-pC6H4-NO2, O-N-CO-CHZ

* R représentant un groupe possédant une fonction alcool, phénol, thiol ou amine, * P étant tel que défmi ci-après, * A; représente un radical organique tel qu'une chaîne alkyle de 1 à 10 atomes de carbone, notanunent (CH2)Il W-(CHa),,., n + n' représentant un nombre entier de 0 à 10, W représentant CHY, Y étant H, un allcyle de 1 à 6 atomes de carbone linéaire ou ramifié, un résidu d'amino (x acide, naturel ou synthétique, ou W représentant un composé aromatique, notamment phényle, * P, P' et P" sont identiques ou différents et représentent :
une matrice comme support pour la chromatographie d'affinité;
une bille d'or, de latex, pour l'histologie et la cytologie;
une protéine pour la visualisation, la purification, etc, notamment 1) des récepteurs spécifiques des osides, récepteurs que l'on appelle lectines,
8 adhésines, agglutinines ete, ou encore 2) des protéines à activité enzymatique ou non, qui ont une affinité pour les osides, notamment des glycosyltransférases, telles que la sialyltransférase, des sulfotransférases, des phosphotransférases, des exoglycosidases ou des endoglycosidases;
- un lipide pour la caractérisation des récepteurs précédents;
- des oligonucléotides pour augmenter sélectivement leur capture par des cellules cibles;
- une protéine ou des polymères pour le ciblage de médicaments, d'oligonucléotides ou de gènes;
P, P' et P" possédant au moins une fonction permettant une réaction de condensation par réaction avec un oligopeptide, par exemple . une fonction amine (-NH2) permettant la formation d'amide avec un ester actif, d'amidine avec un imidate, de thiourée avec un isothiocyanate, . une fonction thiol (-SH) permettant la formation d'un pont disulfure avec un oligopeptide contenant un thiol, d'un thioether avec un oligopeptide contenant un groupement maléimide, ou halogéno-alkyle, ou un halogéno-alkanoyle, . un phénol (-C6H4OH) permettant la formation d'un azoïque avec un oligopeptide contenant un diazoïde, sous réserve que Z représente B'-P', et/ou X comporte P et/ou P" dans sa formule.
L'invention concerne également des composés de formule générale (I) oligosidyl - N--CO(-D)a (Z)b- CH[- (CH,)p]j (I) COX
dans laquelle:
*a=0ou1, *j0ou1, * b=0ou 1, *p2à4, * sous réserve que 8a ** a = b= 0, lorsque j= 1, ce qui entraîne la présence d'une molécule cyclique, ** ou a = b = 1, lorsque j= 0 ce qui implique l'absence de groupe (CHz)p, * D représente un résidu d'un acide organique de formule ECOZH, E étant H
ou une chaîne alkyle de 1 à 10 atomes de carbone, * Z représente ** B, B étant H, un alkyle de 1 à 10 atomes de carbone, ou une chaîne latérale d'un acide a aminé, naturel ou synthétique, ou ** B'-P', B' étant une chaîne alkyle de 1 à 10 atomes de carbone, ou une chaîne latérale d'un acide a aminé, naturel ou synthétique, lesdites chaînes contenant un groupe dérivé d'un groupement fonctionnel susceptible d'être activé, P' ayant les significations indiquées ci-après, * X représente:
. le groupe [NH-(Ai)-CO],,,-Q, (P")k . ou le groupe [NH-(A;)-CO],n P, (P")k . ou le groupe [NH-(A;)-CO],,,-R-P
(P~~)k * m étant un nombre entier de 0 à 10, de préférence de 0 à 5 et avantageusement 1 ou 2, k = 0 ou 1 * Q représente OH, OCH3, OCH2-C6H5, O-C6H5, O-CJ5, O-pC6H4-NO2, O-N-CO-CH2 * R représentant un groupe possédant une fonction alcool, phénol, thiol ou amine, * P étant tel que défini ci-après, * A; représente un radical organique, * P, P' et P" sont identiques ou différents et représentent :

8b - une matrice comme support pour la chromatographie d'affinité;
- une bille d'or ou de latex;
- une protéine;
- un lipide;
- des oligonucléotides;
- des polymères;
P, P' et P" possédant au moins une fonction permettant une réaction de condensation par réaction avec un oligopeptide, sous réserve que Z représente B'-P', et/ou X comporte P et/ou P" dans sa formule.
Dans la formule I et dans celles qui suivent, le groupe oligosidyle provient d'un oligoside dont l'ose terminal est réducteur.
On aura reconnu que dans la définition des composés de formule générale (I) indiquée ci-dessus, la molécule intermédiaire susmentionnée comprend dans sa structure l'entité chimique suivante:

- N CO(-D)a (ZI)b-CH[--(CH2)p]j COXI
dans laquelle D, a, b, j et p sont tels que définis ci-dessus, Z 1 et X 1 comportant un ou plusieurs groupes fonctionnels susceptibles de former au moins une liaison avec une (des) molécule(s), particule(s), ou une (des) matrice(s), dont question ci-dessus, et ZI et Xl étant plus précisément définis dans ce qui suit (cf produits de forniule la définis ci-après).

0 96100229 21 92 0~J' `j PCT/FR95/00790
9 i c ~

Dans les définitions ci-dessus, les acides aminés impliqués ont une configuration L ou D, et de préférence L.
Les composés de l'invention sont donc constitués d'un ou plusieurs oligosides, (identiques ou dont certains sont éventuellement différents) chacun de ces oligosides étant attaché:
à une molécule, une matrice ou une particule, par l'intermédiaire soit d'un groupe fonctionnel de X, soit d'un groupe fonctionnel de Z, - ou à deux molécules, matrices ou particules, par l'intermédiaire de groupes fonctionnels respectifs de X et de Z, ou par l'intermédiaire de deux groupes fonctionnels de X, ou à trois molécules, matrices ou particules, par l' intermédiaire de groupes fonctionnels de X et de Z.
Il faut noter que la formule générale (I) ne représente que les possibilités suivantes:
- un seul oligoside fixé à une molécule, une matrice ou une particule, P, - un seul oligoside fixé à une molécule, une matrice ou une particule, P', - un seul oligoside fixé à une molécule, une matrice ou une particule, P", - un seul oligoside fixé à deux molécules, matrices ou particules, respectifs P et P', ou P' et P" ou P et P", - un seul oligoside fixé à trois molécules, matrices ou particules, P, P' et P".
Une telle représentation a pour but de ne pas compliquer la compréhension de la formule générale (I). Mais on peut envisager la possibilité que plusieurs oligosides (identiques ou dont certains sont éventuellement différents) soient fixés soit à une molécule, une matrice ou une particule, P, soit à une molécule, une matrice ou une particule, P', soit à une molécule, une matrice ou une particule, P", ou que plusieurs oligosides (identiques ou dont certains sont éventuellement différents) soient fixés à deux molécules, matrices ou particules, P et P', ou P et P", ou P' et P", ou que plusieurs oligosides (identiques ou dont certains sont éventuellement différents) soient fixés à trois molécules, matrices ou particules, P, P' et P".
Comme exemple de B' on peut citer:
-CHZ S-ou CH2-S-ou -(CH2)3-NH-ou -(CH2)4-NH-wo 96ro0229 21920-7 3 PCa/FR95/00790 ( io Conune exemple de P, ou P' ou P", on peut citer la polylysine, notamment la polylysine gluconoylée.
Selon un mode de réalisation avantageux de l'invention, un ou plusieurs oligosides sont liés à une mëme molécule, matrice ou particule, P, constituant des composés pouvant être représentés par la formule générale (II) oligosidyl - N-CO(-D)a (B)b-CH[--(CHDp]j " (II) COX
dans laquelle:
*a=0ou1, *j0ou1, *b=0ou1, * p 2 à 4, notamment 2, * sous réserve que ** a = b = 0, lorsque j 1, ce qui entraîne la présence d'une molécule cyclique, ** ou a = b = 1, lorsque j 0 ce qui implique l'absence de groupe (CHZ)p, * D représente un résidu d'un acide organique de formule DCOZH, notamment H ou une chaîne alkyle de 1 à 10 atomes de carbone, en particulier CH3, * B représente H, un alkyle de 1 à 10 atomes de carbone, ou une chaîne latérale d'un acide a aminé tel que CH(CH3)2, CHZOH, CH3, et de préférence H, * X représente :
soit le groupe [NH-(A;)-CO]m P, soit le groupe [NH-(A;)-CO]m R-P
m étant un nombre entier de 0 à 10, de préférence de 0 à 5 et avantageusement 1 ou 2, R et P étant tels que défmis ci-après, * Ai représente un radical organique tel qu'une chaîne alkyle de 1 à 10 atomes de carbone, notamment (CH2)Il W-(CHZ),,., n + n' représentant un nombre entier de 0 à 10, W représentant CHY, Y étant H, un alkyle de 1 à 6 atomes de carbone linéaire ou ramifié, un résidu d'amino a acide, naturel ou synthétique, ou W représentant un composé aromatique, notamment phényle, *096/00229 2192073 `- PCgYFR95/00790 * R représentant un groupe possédant une fonction alcool, phénol, thiol ou amine, * P représente - une matrice comme support pour la chromatographie d'affinité;
une bille d'or, de latex, pour l'histologie et la cytologie;
= une protéine pour la visualisation, la purification, etc, des récepteurs spécifiques des osides, récepteurs que l'on appelle lectines, adhésines, agglutinines etc;
- un lipide pour la caractérisation des récepteurs précédents;
- des oligonucléotides pour augmenter sélectivement leur capture par des cellules cibles;
- une protéine ou des polymères pour le ciblage de médicaments, d'oligonucléotides ou de gènes.
Une classe avantageuse de composés selon l'invention répond à la formule générale (III) oligosidyl - N-CO-CH2 (III) -Cox dans laquelle X représente [NH-(Al)-CO]m P ou (NH-(A;)-CO]m R-P, A;, m, P
et R ayant les significations indiquées ci-dessus.
Une classe avantageuse de composés selon l'invention répond à la formule oligosidyl - N-CO-CH2 (III) COX

WO 96100229 " 3' PCTIFR95100790 dans laquelle X représente:
[NH-(A;)-COIm P, P"
ou [NH-(A;)-CO]m R-P, P"
A;, m, P, R et P" ayant les significations indiquées ci-dessus.
Une autre classe avantageuse de composés selon l'invention a comme formule générale (IV) oligosidyl - N-CO-D (IV) B-CH-COX

dans laquelle D et B ont les significations indiquées ci-dessus, et X
représente [NH-(A;)-CO]m P ou [NH-(A;)-CO]m R-P, Ai, m, R et P ayant les significations indiquées ci-dessus.
Une autre classe avantageuse de composés selon l' invention répond à la formule (IV):

oligosidyl - N-CO-D (IV) B-CH-COX
dans laquelle D et B ont les significations indiquées ci-dessus, et X
représente:
[NH-(Ai)-CO]m P, P"
ou [NH-(A;)-CO]ID R-P, P"
AI, m, R, P et P' ayant les significations indiquées ci-dessus.

&O 96/00229 PCd'/FR95/00790 Une autre classe avantageuse de composés selon l'invention a comme formule générale (V) oligosidyl - N-CO-CH2 (V) COX

dans laquelle X représente [NH-(A;)-CO]m P ou [NH-(A;)-CO]m R-P, P, A;, m et R ayant les significations indiquées ci-dessus.
L'invention a également pour objet de nouveaux produits, susceptibles notamment de servir de produits intermédiaires pour la préparation des composés de l'invention, lesdits produits comprenant un oligoside lié à une molécule possédant un atome d'azote, porté par un carbone en a d'un groupe C = O, et au moins un groupe fonctionnel, notamment un, deux ou trois groupes fonctionnels, la liaison covalente entre l'oligoside et la molécule s'effectuant par l'intermédiaire du susdit atome d'azote.
Les produits de l'invention répondent avantageusement à la formule générale (la) oligosidyl - N-CO(-D)a (Zi)b-CH[--(CH?)p]j (Ia) COXI
dans laquelle:
*a=0ou1, *j=0ou1, *b=0ou1, * p = 2 à 4, notamment 2, * sous réserve que ** a = b = 0, lorsque j= 1, ce qui entraine la pr$sence d'une molécule cyclique, ** ou a = b = 1, lorsque j 0 ce qui implique l'absence de groupe (CH?)p, * D représente un résidu d'un acide organique de formule DCO2H, notamment H ou une chaîne alkyle de 1 à 10 atomes de carbone, en particulier CH3, * Zi représente * B, B étant choisi parmi: H, une chaîne alkyle de 1 à 10 atomes de carbone, ou une chaîne latérale d'un acide a aminé tel que CH(CH3)2, CH2OH, CH3, et de préférence H, ou * B', B' étant choisi parmi: une chaîne alkyle de 1 à 10 atomes de carbone, ou une chaîne latérale d'un acide a aminé, lesdites chaînes contenant un groupe fonctionnel tel que carboxylique, SH, OH ou amine, libre ou protégé, * X ~ représente . le groupe [NH-(Ai)-CO],,,-R, . ou le groupe [NH-(A;)-CO],,,-Q

* R représente un composé possédant une fonction alcool, phénol, thiol ou amine, * Q représente OH, OCH3, OCH2-C6H5, O-Cf,Hs, O-C6F5, O-pC6H4-NO2, O-1~CO-CH2 * m étant un nombre entier de 0 à 10, de préférence de 0 à 5 et avantageusement 1 ou 2, * A; représente un radical organique tel qu'une chaîne alkyle de 1 à 10 atomes de carbone, notamment (CHz),-W-(CH,),,,, n+ n' représentant un nombre entier de 0 à 10, W représentant CHY, Y étant H, un alkyle de 1 à 6 atomes de carbone linéaire ou ramifié, un résidu d'amino a acide, naturel ou synthétique, ou W
représentant un composé aromatique, notamment phényle.
L'invention concerne également des produits de formule générale (Ia) oligosidyl - N CO(-D)a (Zi)b-CH[- (CHz)p]j (la) COXi dans laquelle:

14a *a=0ou1, *j=0ou1, *b=0ou1, *p=2à4, * sous réserve que ** a= b = 0, lorsque j = 1, ce qui entraîne la présence d'une molécule cyclique, ** ou a = b = 1, lorsque j = 0 ce qui implique l'absence de groupe (CH2)p, * D représente un résidu d'un acide organique de formule ECO~H, E étant H
ou une chaîne alkyle de 1 à 10 atomes de carbone, * Z, représente * B, B étant choisi parmi: H, une chaîne alkyle de 1 à 10 atomes de carbone, ou une chaîne latérale d'un acide a aminé, ou * B', B' étant choisi parmi: une chaîne alkylidène de 1 à 10 atomes de carbone, ou une chaîne latérale d'un acide a aminé, lesdites chaînes contenant un groupe fonctionnel, * X, représente . le groupe [NH-(A;)-CO],,,-R, . ou le groupe [NH-(Ai)-CO]õ-Q

* R représente un composé possédant une fonction alcool, phénol, thiol ou amine, * Q et choisi du groupe comprenant OH, OCH3, OCH2-C6HS, O-C6H5, O-C6F5, O-pC6H4-NO2, et O-hj-CO-CHZ

* m étant un nombre entier de 0 à 10, * Ai représente un radical organique.

Ces groupes sont des dérivés de glycosylamine acylés.
Les dérivés de glycosylamine acylés sont stables, en milieu aqueux dans une large gamme de pH de part et d'autre de la neutralité. Ceci signifie qu'il se produit 14b une hydrolyse inférieure à 1% à pH 5-8, pendant 24 h, quelle que soit la température entre 0 et 95 C.
Les sudits produits de formule (la) peuvent être utilisés tels quels.
Les susdits produits de formule (la) peuvent également être utilisés pour préparer les composés de l'invention de formule I.

Une classe avantageuse de produits selon l'invention, répond à la formule générale (IIa) oligosidyl - N-CO(-D)a (B)b-CH(-(CH7)p]j (IIa) CO[NH-Ai-CO]m R
dans laquelle:
*a=0ou1, *j=0ou1, *b=0ou1, * p= 2 à 4, notamment 2, * sous réserve que ** a = b = 0, lorsque j = 1, ce qui entraîne la présence d'une molécule cyclique, ** ou a= b = 1, lorsque j = 0 ce qui implique l'absence de groupe (CHz)p, * D représente un résidu d'un acide organique de formule DCO2H, notamment H ou une chaîne alkyle de 1 à 10 atomes de carbone, en particulier CH3, * B représente H, un alkyle de 1 à 10 atomes de carbone, ou une chaîne latérale d'un acide a aminé tel que CH(CH3)2, CH2OH, CH3, et de préférence H, * m étant un nombre entier de 0 à 10, de préférence de 0 à 5 et avantageusement 1 ou 2, * A; représente un radical organique tel qu'une chaîne alkyle de 1 à 10 atomes de carbone, notamment (CHZ)â W-(CH2), , n + n' représentant un nombre entier de 0 à 10, W représentant CHY, Y étant H, un alkyle de 1 à 6 atomes de carbone linéaire ou ramifié, un résidu d'amino a acide, naturel ou synthétique, ou W représentant un composé aromatique, notamment phényle, * R représente un composé possédant une fonction alcool, phénol, thiol ou amine.
Les susdits produits de formule (IIa) peuvent être utilisés pour préparer les composés de formule (II).

Une autre classe avantageuse de produits selon l'invention répond à la formule générale (IIla) oligosidyl - N-CO-CH2 (IIIa) f I

CO[NH-A;-CO]m R
dans laquelle A, m et R ont les significations indiquées ci-dessus.
Les susdits produits de formule (IIIa) peuvent être utilisés pour préparer les composés de formule (III).
Une autre classe avantageuse de produits selon l'invention répond à la formule générale (IVa) oligosidyl - N-CO-D (IVa) B-CH-CO[NH-A;-CO]m R

dans laquelle D, B, m, A; et R ont les significations indiquées ci-dessus.
Les susdits produits de formule (IVa) peuvent être utilisés pour préparer les composés de formule (IV).
Une autre classe avantageuse de produits selon l'invention répond à la formule générale (Va) oligosidyl - N-CO-CH2 (Va) CH-CHa-CH2 CO[NH-A;-CO].-R
dans laquelle A;, m et R ont les significations indiquées ci-dessus.
Les susdits produits de formule (Va) peuvent être utilisés pour préparer les composés de formule (V).
Les produits de formule (VI) oligosidyl - NH - CH - CO -[NH-(AJ-CO]m - R

B (VI) 0 96/00229 219 2 0 7 3 PNt95/00790 dans lesquels B, A;, m et R ont les significations indiquées ci-dessus, sont des produits intermédiaires obtenus au cours de la préparation des produits défmis ci-dessus et sont nouveaux.
Les produits de formule (VII) oligosidyl - NH - CH - CO - [NH- (A;)-CO]m - R

(CH2)p (VII) dans lesquels p, A;, R, et m ont les significations indiquées ci-dessus, sont des produits intermédiaires obtenus au cours de la préparation des produits définis ci-dessus et sont nouveaux.

Dans tous les composés ou produits de l'invention, R peut représenter les radicaux suivants:

OH, O-CH2-C6ii5i O-C6H5, O-C6F5, O-pC61I4-NO2, CO-CHZ
-NH-pC6H4-N=C=S et ses précurseurs:
-NH-pC6H4 NO2 -NH-PC6Ha-NH2 -NH-CH2-(CH2)m C(= NH2+)OCHg -NH-CH2-(CH2)m CN
-NH-CH,(CH,)m CHZ-NH-CO-CH2-(CH2,)m C(= NHZ})OCH3 -NH-CHa-(CH2).-CH2-NH-CO-CHZ-(CH m CN

ces composés permettant une addition sur un composé aminé.
R peut également représenter:

-NH-CHZ-(CH2)m CHr- N
dérivé de maléimide -NH-CHZ-(CH2)m CHZ-NH-CO-mC6H4- N
dérivé de m-maleimidyl benzoyl 0 &0 96/00229 2192073 PG rIFR95/00790 -NH-CH2-(CH2)m CHZ-NH-CO-pC6H,o-CH2- N
dérivé de N-méthylmaléimidyl p-cyclohexylcarboxy- 0 -NH-CH2-(CH2)m CH2-NH-CO-CHZ-T T = Br, I, CI
dérivé de halogénoacét l -NH-CHZ-CHa-NH-CO-CH2-(CH2)m S-S-Pyr dérivé de dithiopyridine N.B.: -Pyr: -2-pyridine -NH-CH2-(CH2)m CHZ-S-S-Pyr dérivé de dithiopyridine ces composés permettant une addition sur un thiol.
R peut également représenter:
H
-NH-CHZ-(CH2).-CHZ-NH-CO(CH2)4 NH
dérivé de biotine ce composé comprenant un résidu biotine permettant la formation d'un complexe avec l'avidine ou la streptavidine.
R peut également représenter:

-NH-CH2-(CH2)m CH2-NH-CO / \ N3 dérivé du -4-azidobenzoyl -NH-CH2-(CH2)m CH2-NH-CO . \ / Nz dérivé du 4-azido 2-nitrobenzoyl xp2 .
WO96/00229 2192073 PCT1FR95/00790 =
26, -NH-CHZ-(CH m CHz-NH-CO-CHa-(CH2)S NH
dérivé de 4-azido 2-nitroanilide NOZ

~ ~ N3 -NH-CHZ-(CH2)m CHa,-NH-CO-CHZ

c.1i dérivé du 7-azido 4-méthylcoumarine 3-acétyl -NH-CHZ-(CH2)m CH2-NH-CO 9-N, OH
dérivé du 4-azidosalicyclique ou du 4-azido 2-hydroxybenzoyle ces composés_permettant une fixation covalente sur un récepteur, une enzyme, un anticorps, spécifiques de la partie glucidique par activation photonique.
R peut également représenter:
-NH-(CH2)m pC6H4OH

-NH-CHa-(CHz)m CHa,-NH-CO-(CH2)m pC6H40H
ces composés permettant la fixation d'un ou deux atomes d'iode, particulièrement d'un atome d'iode radio-actif.

R peut également représenter:

-NH-CHZ-(CH2)m CHZ-NH-CS-NH,=
. / I

dérivé de COZ
fluorescéine / I \ \

-NH-CH2-(CH2)n CHZ-NH-SOa dérivé de dansyle N(CH3)Z
0 0 ~ Nti2 -NH-CH2-(CH2)m CHZ-NH-CO-CH2 CIi3 dérivé de 7-amino 4-méthylcoumarin 3-acétyl COOH
-NH

dérivé de l'amino-fluorescéine WO 96/00229 ~ j.i ~ Q 7 3 PCT/FR95100790 -NH-CHZ-(CH,)m CH2-NH

N/

dérivé du nitrobenzoxadiazole ces composés fluorescents permettant de visualer la position de l'oligosidylpeptide dans une cellule, un tissu, un organe, sur un gel ou une bande d'électrophorèse, etc...
Dans les composés de l'invention, P peut représenter un oligopeptide, ou un polypeptide, notamment la polylysine gluconoylée, et P' ou P" peut représenter un oligonucléotide, ou R peut représenter la fluorescéine ou un de ses dérivés ou un autre dérivé fluorescent, et P' ou P" peut représenter un oligonucléotide. P peut également représenter un agent thérapeutique ou toute molécule d'intérêt.
Dans les composés et produits de l'invention, le résidu oligosidique comporte de 2 à 50 oses et notamment est choisi parmi Iacto-N-tétraose Galp 3 GIcNAcp 3 Gal (3 4 Glc néolacto-N-tétraose Ga1p 4 GIcNAcp 3 Gal (3 4 Glc GroupeH Fuca2Ga1p 3Ga1p 4Glc Lewisa Gal5 3 GIcNAcp 3 Gal (3 4 Glc Fuc a 4-T

Lewisx Gal(3 4 GIcNAcp 3 Galp 4 Glc Fuc a 3-I' OWO 96/00229 PCT/F'R95100790 Lewisb Fuca 2 Ga1p 3 G1cNAc (3 3 Gal(3 4 Glc Fuc a 4-I' LewisY Fuc a 2 Ga1G3 4 G1cNAc(3 3 Gai(3 4 Glc Fuc a 3-1 Disialolacto-N-tétraose Neu 5Aca 3 Gal (3 3 G1cNAc j3 3 Gal (3 4 Glc Neu 5Aca 6-I' Type complexe à 3 antennes Gal(34GIcNAcp2 Mana6 Gal (3 4 GIcNAc (3 4 Man (3 4GIcNAc Mana6 Gal 4 G1cNAc 9 2 Sialylactose 3 Neu 5Ac a 3 Ga14 Glc Sialylactose 6 Neu 5Ac a 6 Gal (3 4 Glc Disialylactose 3 Neu 5Ac a 8 Neu 5Ac a 3 Gal (t 4 Glc - des osides simples ou complexes reconnus par des lectines membranaires, et choisis parmi:

a. Asialo-oligoside de type lactosamine triantenné: récepteur d' asialoglycoprotéine Gal(3 4GIcNAcg 2 Mana 6 Manp 4GIcNAc(3 2 4G1cNAc(3 -a Gal(3 4G1cNAc(i 4 Mana 3 Gal(i 4GIcNAc(3 2 b. Asialo oligoside de type lactosamine tétraantenné: récepteur d'asialoglycoprotéine Ga1R 4G1cNAc(3 6 Mana 6 \
Gal(3 4G1cNAc(3 2 Man(3 4GIcNAc(i 4GIcNAcR -a Gal(3 4G1cNAc(3 4 Mana 3 Gal(3 4GicNAc(3 2 WO 96/00229 ~õ 1 i~ 2 0 7 3 PCTIFR95100790 24 c. Lewis x: LECAM 213 Ga1R 4 G1cNAc(3 3Galp ->
Fuca 3 d. Sialyl Lewis x: LECAM 3/2 Neu5Aca3Ga1R 4 G1cNAcR 3Ga1(3 ~
Fuca 3 "Il' e. Dérivé de Lewis X sulfaté (âINK1): LECAM 1 (SOg ) 3Glc UAj3 3Ga1(3 4 GIcNAc(3 3Ga1p 4Glc ->
Fuca 3 f. Oligomannoside: récepteur du mannose Mana. 2Mana 6 \ Mana 6 Mana Manji 4G1cNAcR 4G1cNAc5 ->
Mana 2Mana Mana 3 /

g. Oligomannoside phosphorylé: récepteur de mannose 6 phosphate (HP03 ) 6 -'~-Mana 6 Mana 2 Mana 6 Mana 3 -"' \
Ivlan(i 4GIcNAc(3 4G1cNAc(i -a (HP03 ) 6 Mana 2 Mana 3 Mana 2 --"

h. Oligosaccharide de type lactosamine sulfaté: récepteur de GaINAc 4 sulfaté

(S03') 4GalNAc(3 4GlcNAc(3 2Mana 6\
Man(3 4GleNAc(3 4G1cNAcj3 -~
(S03') 4Ga1NAc(3 4G1eNAc~3 2Mana 3/

Pour préparer les composés de l'invention, il faut préalablement préparer les produits (dérivés de glycosylamine acylés), qui servent notanunent d'intermédiaires à
la préparation desdits composés de l'invention.
L'invention concerne également un procédé de préparation des composés mentionnées ci-dessus, caractérisé en ce que:
- l'on condense, dans un solvant approprié, un oligoside ayant un ose réducteur libre, sur l'atome d'azote d'une molécule intermédiaire, cet atome d'azote appartenant à un groupe amine, lié à un atome de carbone placé en a d'un groupe C = O, la molécule intermédiaire ne possédant pas de chaîne latérale contenant un groupe fonctionnel, pour obtenir un dérivé de glycosylamine dans lequel l'ose terminal de l'oligoside conserve sa structure cyclique, et dans lequel l'hydroxyle semiacétalique est remplacé par l'amine a de l'une des sudites molécules de départ, - on acyle le dérivé de glycosylamine obtenu à l'issue de l'étape précédente par addition d'un acide organique activé par un activateur classique, pour obtenir un dérivé
de glycosylamine N-acylé.
L'invention concerne également un procédé de préparation des composés mentionnées ci-dessus, caractérisé en ce que:
- l'on condense, dans un solvant approprié, un oligoside ayant un ose réducteur libre, sur l'atome d'azote d'une molécule intermédiaire, cet atome d'azote appartenant à un groupe amine, lié à un atome de carbone placé en a d'un groupe C = O, la molécule intermédiaire possédant une chaîne latérale contenant un groupe fonctionnel, pour obtenir un dérivé de glycosylamine dans lequel l'ose terminal de l'oligoside conserve sa structure cyclique, et dans lequel l'hydroxyle semiacétalique est remplacé
par l'amine a de l'une des susdites molécules de départ, - lorsque la molécule intermédiaire possède une chaîne latérale dont le groupe fonctionnel est protégé ou non, on acyle le dérivé de glycosylamine obtenu à
l'issue de l'étape précédente par addition d'un acide organique activé par un activateur classique, pour obtenir un dérivé de glycosylamine N-acylé, 215a - lorsque la molécule intermédiaire possède une chaîne latérale contenant un groupe carboxylique, on active le susdit groupe carboxylique afin qu'il réagisse intramoléculairement avec la susdite amine a, entraînant une cyclisation à
l'intérieur de la susdite molécule de départ, pour obtenir un dérivé de glycosylamine N-acylé, - lorsque la molécule intermédiaire possède une chaîne latérale contenant un groupe carboxylique, on peut ajouter l'agent d'acylation sous forme d'un ester actif.
L'invention concerne également un procédé de préparation des produits (dérivés de glycosylamine acylés) définis ci-dessus, caractérisé en ce que :
- l'on condense un oligoside ayant un ose terminal réducteur libre, sur l'atome d'azote d'une molécule intermédiaire, cet atome d'azote appartenant à un groupe amine, lié à un atome de carbone placé en a d'un groupe C = O, la molécule intermédiaire possédant éventuellement une chavie latérale contenant un groupe fonctionnel tel que OH, SH, NH2 ou COOH, libre ou protégé, cette molécule intermédiaire étant choisie parmi les niolécules intermédiaires suivantes :
acide a aminé, naturel ou synthétique, dérivé d'acide a aminé, aminoacide en position N-terminale d'un peptide, ou d'un dérivé peptidique, éventuellement en présence d'un catalyseur tel que l'imidazole, dans un solvant approprié pour obtenir un dérivé de glycosylamine dans lequel l'ose terminal de l'oligoside conserve sa structure cyclique, et dans lequel l'hydrosyle semiacétalique est remplacé par l'amine a de l'une des susdites molécules de départ.
- lorsque la molécule intermédiaire ne possède pas de chaîne latérale contenant un groupe fonctionnel tel que défini ci-dessus, ou possède une chaîne latérale dont le groupe fonctionnel est éventuellement protégé, on acyle le dérivé de glycosylamine obtenu à l'issue de l'étape précédente par addition d'un acide organique activé par un activateur classique tel que le carbonyl diimidazole, le BOP (benzotriazolyl N-oxy-tris(diméthylamino) phosphoniumhexafluorophosphate) ou HBTU (O-benzotriazol-l-yl-N,N,N',N', tétranléghyluronium hexafluorophosphate) pour obtenir un dérivé
de glycosylamine N-acylé, suivi éventuellement d'une déprotection du groupe fonctionnel de la susdite chaîne latérale, en vue d'une éventuelle substitution, - lorsque la molécule intermédiaire possède une chaîne latérale contenant un groupe carboxylique, on active le susdit groupe carboxylique afin qu'il réagisse intramoléculairement avec la susdite amine a, entraînant une cyclisation WO 96/00229 PCa/FR95/o0790 à l' intérieur de la susdite molécule intermédiaire, pour obtenir un dérivé de glycosylamine N-acylé, - lorsque la molécule intermédiaire possède une chaîne latérale contenant un groupe carboxylique, on peut ajouter l'agent d'acylation sous forme d'un ester actif.
Le susdit procédé de préparation de l'invention des dérivés de glycosylamine comprend donc deux étapes, une étape de condensation d'un oligôside sur une molécule intermédiaire pour obtenir un dérivé de glycosylamine, et une étape d'acylation du susdit dérivé de glycosylamine.
Dans l'étape d'acylation envisagée dans le procédé de l'invention, on utilise toujours un activateur, que la molécule intermédiaire possède ou non un chaîne latérale contenant un groupe fonctionnel.
Par ailleurs, il faut préciser que l'étape de condensation de l'oligoside sur la molécule intermédiaire, pour obtenir un dérivé de glycosylamine, ainsi que l'étape d'acylation du susdit dérivé de glycosylamine sont effectuées en présence de solvants organiques appropriés.
L'un des avantages d'utiliser un solvant organique est notamment de permettre de coupler aux oligosides des peptides et dérivés qui sont peu ou très peu solubles dans l'eau.
Ces cas peuvent être schématisés de la façon suivante:
1) la molécule intermédiaire ne possède pas de chaine latérale contenant un groupe fonctionnel, Oligoside + NH2-CH(Rl)-CO-R2 =* oligosyl-N-CH-RI CO-RZ
+ R3-CO2H + activateur Oligosyl-N(CO-R3)-CH(RI)-CO-R2 . Ri représentant un résidu d'une molécule organique ne comportant pas de groupement fonctionnel protégé, ou Rl pouvant également représenter H;
. R2 représentant un résidu d'une molécule organique telle que -CO-R2, soit un ester ou un amide:
. R3 représentant un résidu d'une molécule organique ne comportant pas, de préférence, de groupement fonctionnel libre.
L'ensemble R3-CO2H + activateur, peut être remplacé par le produit activé ou par un ânhydride.

&0 96100229 219 l'M 073 PCT/FR95100790 Dans ce qui précède, on peut aussi inclure le cas où R3 possède un groupement fonctionnel, et à cet égard, on peut se reporter au paragraphe 1 bis ci-après.

1 bis) la molécule intermédiaire ne, possède pas de chaîne latérale contenant un groupe fonctionnel, mais l'agent d'acylation est bifonctionnel, oligoside + NHZ CH(Rl)-CO-RZ => oligosyl-NH-CH(Rl)-CO-R2 + R3 COZH + activateur oligosyl-N-CH(RI)-CO-R2 R3 représentant une molécule organique comportant un second groupement fonctionnel tel que, en particulier SH, libre ou protégé, ou -CO2H.
Alternativement, l'ensemble R3-COZH + activateur peut être remplacé par le produit d'activation: R3-CO-activé.
Par exemple, R3 CO-Cl, (R3-CO)20 ou R3 CO-O-N-CO-CH2 ou encore un anhydride cyclique:
CHZ CO-O
1 ~
(CHZ),; CO, par exemple avec n entier égal à 1, 2, 3 ou 4;
ou encore un thioester:
CHZ CO

(CH2), S, avec n entier égal à 1, 2, 3 ou 4, de préférence n = 2 Lorsque l'acylation de l'azote lié sur l'oligoside est acylé par un anhydride cyclique, le produit obtenu est du type:
Oligosyl-N-(CO-CHZ (CH2)n-COZH)-CH(Rl)-CO-RZ
Le groupe carboxylique est utilisable pour une réaction de couplage sur une molécule organique ou une matrice, ou une particule possédant un groupement fonctionnel (hydroxyle ou amine par exemple).
Lorsque l'acylation de l'azote lié sur l'oligoside est acylé par un thio ester cyclique, le produit obtenu est du type:

WO 96100229 _ 219 ~ O~ V PCTIFR95/00790 Oligosyl-N-(CO-CHZ (CH2)n SH)-CH(Ri)-CO-R2 Le groupe thiol est utilisable pour une réaction de couplage sur une molécule soluble ou non, capable d'être substituée par un thiol, par exemple un dithiopyridine ou un dérivé maléimide.

2) la molécule intermédiaire possède une chaîne latérale fonctionnelle et on n'effectue pas de cyclisation, Oligoside + NH2-CH(R4)-CO-R2 =:> oligosyl-NH-CH(R4)-CO-R2 + R3-CO2H + activateur ~
Oligosyl-N(CO-R3)-CH(R4)-CO-R2, R2 et R3 ayant les significations indiquées ci-dessus, et R4 représentant un résidu d'une molécule organique possédant un groupement fonctionnel, en particulier un groupement carboxylique, R4 représentant notamment CHZ-CHZ
CO2H.
Dans ce cas, on utilise préférentiellement un produit d'activation de R3-CO2H tel que défini plus haut.
Le groupement fonctionnel contenu dans R4 est disponible pour une réaction de condensation ou de substitution sur une molécule soluble ou insoluble ou sur une matrice, ou une particule comportant un groupement susceptible de donner une liaison covalente avec le groupement fonctionnel de R4, par exemple une amine lorsque R4 comporte un groupement carboxylique.

3) La molécule intermédiaire possède une chaîne latérale contenant un groupe fonctionnel carboxylique, et on effectue une cyclisation, et on peut fixer la molécule sur 1 ou 2 molécule(s), matrice(s) ou particule(s), ib 0 96/00229 2 l^ Z0[ J PCTIFR95/00790 Oligoside + NHZ-CH(RS-COZH)-CO-R2 => oligosyl-NH-CH(R5-CO2H)-CO-R2 + activateur ~
Oligosyl-N-CH-CO-R2 CO-RS
R2 ayant les significations indiquées ci-dessus, RS-COZH étant un résidu d'une molécule organique telle que -(CH?)a COZH
. n étant un nombre entier de 1 à 10, de préférence 2 ou 3.
Le glycopeptide ainsi obtenu peut être utilisé en faisant réagir un groupement fonctionnel existant à l'état libre ou transformé en groupement actif sur R2. Par exemple, si R2 représente le groupe para-nitroanilide, le groupement NOZ est réduit en N112, puis transformé en isothiocyanate -N = C S, qui est un excellent réactif vis à vis des amines et des alcools.
Comme exemples de molécules intermédiaires, on peut citer:
Oligosyl-N-CH-CO-NH-pC6-H4-NCS
( CO-RS
Oligosyl-N-CH-CO-NH-(CH2)Il C(=NHZ+)OCH3 CO-RS

Oligosyl-N-CH-CO-NH-(CHz)õ+, Oligosyl-N-CH-CO-NH-(CH?)o+,-S-S-Pyr CO-RS

avecn=1à10. _ L'invention concerne également la préparation des composés de l'invention, caractérisée en ce que l'on fait réagir un ou plusieurs produits (dérivés de glycosylamine acylés) de l'invention, portant soit un groupe R tel que défini ci-dessus, activé ou activable, soit un groupe B' contenant un groupe fonctionnel activé
ou activable, soit un groupe A; contenant un groupe fonctionnel pouvant réagir sur une molécule, nlatrice ou particule, respectivement P, P' ou P", contenant un groupe fonctionnel, pour obtenir un produit du type :
(glycopeptidyl-R)õ-P, (glycopeptidyl-B')õ-P' ou (glycopeptidyl-A;)n-P"
L'invention concerne également la préparation de composés de l'invention, caractérisée en ce que l'on fait réagir un ou plusieurs produits (dérivés de glycosylamine acylés) de l'invention, portant d'une part un groupe R tel que défini ci-dessus, activé ou activable, d'autre part un groupe B' contenant un groupe activé ou activable, ou un groupe A; contenant un groupe fonctionnel sur des molécules, matrices ou particules P et P', ou des molécules, matrices ou particules P et P".
L'invention concerne également la préparation de composés de l'invention, caractérisée en ce que l'on fait réagir un ou plusieurs produits (dérivés de glycosylamine acylés) de l'invention, portant d'une part un groupe R tel que défini ci-dessus, activé ou activable, d'autre part un groupe B' contenant un groupe activé ou activable, et un groupe A; contenant un groupe fonctionnel respectivement sur des molécules, matrices ou particules P, P' et P".
L'invention concerne également un procédé de préparation d'un composé
mentionné ci-dessus, caractérisé en ce que l'ori fait réagir - un ou plusieurs produits (dérivés de glycosylamine acylés) mentionné ci-dessus, portant un groupe Q, activé ou activable, réagissant sur une molécule, matrice ou particule P, P' et P", - un ou plusieurs produits (dérivés de glycosylamine acylés) mentionné ci-dessus, portant soit un groupe R, activé ou activable, soit un groupe B' contenant un groupe fonctionnel activé ou activable, soit un groupe A; contenant un groupe fonctionnel sur une molécule, une matrice ou une particule, respectivement P, P' et P", contenant un groupe fonctionnel, pour obtenir un produit du type :
(glycopeptidyl-R)n-P, (glycopeptidyl-B')õ-P', ou (glycopeptidyl-A;)õ-P", n >1, 30a - un ou plusieurs produits (dérivés de glycosylamine acylés) de l'invention, portant d'une part un groupe R, activé ou activable, d'autre part un groupe B' contenant un groupe activé ou activable, ou un groupe A; contenant un groupe fonctionnel sur des molécules, matrices ou particules P et P', ou des molécules, nlatrices ou particules P et P", - un ou plusieurs produits (dérivés de glycosylamine acylés) de l'invention, portant d'une part un groupe R, activé ou activable, d'autre part un groupe B' contenant un groupe activé ou activable, et un groupe A; contenant un groupe fonctionnel respectivement sur des molécules, matrices ou particules P, P' et P", R, B', A;, P, P' et P" étant définis ci-dessus.
Les molécules, matrices ou particules entrant dans la préparation des composés de l'invention peuvent avantageusement être une molécule naturelle ou synthétique, soluble ou non dans un solvant organique, aqueux ou hydroorganique, une nanoparticule, une vésicule lipidique, une matrice insoluble dans un solvant organique, aqueux ou hydroorganique, une protéine, un lipide, un acide nucléique, un oligonucléotide, un polylysine, un polymère insoluble dans un solvant organique, aqueux ou hydroorganique, une bille de latex ou une bille d'or etc...
De façon détaillée, s'agissant du procédé selon l'invention, l'oligoside, ayant un ose réducteur libre est placé dans un solvant approprié, le diméthylsulfoxyde, la N-méthylpyrrolidone ou le diméthylformamide, par exemple, en présence d'une quantité équivalente ou de deux quantités équivalentes d'une molécule de départ choisie parmi : un acide aminé naturel ou synthétique, un peptide, un dérivé
d'acide aminé ou un dérivé de peptide.

&0 96100229 219 2 0 7 3 PCT/FR95/00790 Par solvant approprié, on désigne un solvant permettant, d'une part la solubilisation des composés à condenser, et d'autre part, la solubilisation des composés résultant de la condensation.
Le produit principal de la réaction est le produit de condensation du type "dérivé de glycosylamine": l'ose terminal réducteur conserve sa structure cyclique, son hydroxyl semiacétalique est remplacé par l'amine a de l'aminoacide, du dérivé d'aminoacide, ou de l'aminoacide en position N
terminale d'un peptide ou d'un dérivé peptidique.
Dans un second temps, le dérivé de glycosylamine ainsi formé est acylé
par addition d'un acide organique activé ou dans le cas d'acide a aminé
portant une chaîne latérale contenant un groupe fonctionnel telle qu'une chaîne latérale carboxylique, comme dans le cas de l'acide glutamique ou de ses homologues, par addition d'un activateur de groupement carboxylique.
Le produit ainsi formé est un dérivé de glycosylamine N-acylé.
Les dérivés glycosylamine acylés sont isolés par chromatographie de tamisage moléculaire ou par toute autre technique de purification classique connue de l'homme de l'art.
Les dérivés de glycosylamine acylés sont ensuite utilisés pour substituer un composé (protéine, lipide, acide nucléique, oligonucléotide, polylysine, polymère insolubles, billes de latex, bille d'or, etc).
On tire partie de la fraction aminoacide, ou du peptide ou d'un substituant du peptide pour réaliser la réaction de condensation, de façon à ce que l'oligoside conserve toutes ses propriétés et son accessibilité pour servir de substrats ou de signal de reconnaissance.
Selon le schéma général suivant :
oligoside + NH2 - CHB - CO - R
_> oligosidyl - NH - CHB - CO - R
=> oligosidyl - N - CO-D

CHB-CO-R
=> oligosidyl - N - CO-D
CHB-CO-P

WO 96/00229 2~ n~ 0 r7 `~ PCT/FR95/00790 =
.7 1 32.
Par exemple, la condensation du lactose avec le glycylparanitroanilide s'écrit GaIP4 Glc + NH2 - CHZ - CO - NH - pC6I-14 - NOZ
=>Gal(34Glcp -NH-CH2-CO-NH-pC61-14 -NOa L'addition d'acide acétique et d'un activateur d'acide organique conduit à:
=> GaIP4 Glc - N - CO - CH3 CHZ - CO - NH - pCb H4 - NO2 Dans l'exemple choisi, le groupement nitro peut être réduit quantitativement en amine, puis l'amine est transformée quantitativement en isothiocyanate (selon Roche et B1. 1983, G. Cell Biochem. 22, 131-140, Monsigny et al. 1984, Biol. Cell 21, 187-196).
Le composé ainsi activé peut réagir en milieu légèrement alcalin sur une amine portée par une protéine, un lipide, un polymère, (la polylysine par exemple), un support solide comportant des groupements amine, ou un oligonucléotide substitué par une amine, ou encore sur une amine portée par une molécule ou un corps appropriés, telle que NH2 - P.
On peut écrire, à titre d'exemple, le schéma réactionnel suivant:
=> GaIP4 Gic - N - CO - CH3 CH2 - CO - NH - pC6 H4 - NOZ
~ H2 GaIP4 Glc - N - CO - CH3 CHa - CO - NH - pC6 H4 - NH2 ~ CsCI2 y 73 =>Ga1j34Glc-N-COCH3 CHa-CO-NH-pC6ü4-N = C = S
~ PNH2 => Ga1p4 Glc - N- CO CH3 S
CHZ-CO - NH - C - NH - P

Dans le cas où l'amino acide ou le dérivé est un acide a aminé possédant une chaine latérale contenant un groupement carboxylique comme c'est le cas pour le glutamate, la réaction s'écrit, par exemple:
Ga1Gi4 Glc + Glu NH - pC6H4 - NOZ
=>Gal(34Glc(3-NH-CH-CO-NH-pCJ-I4 -NO2 L'addition d'un activateur de groupement carboxylique conduit au produit attendu:

Gal(34 GIcp - N - CO - CH2 CO-NH-p-C,J-14-NO2 De façon analogue, ce composé pourra être activé et pourra réagir sur une aminé NHZ - P, pour donner le produit fmal:

Gal(34 Glcp - N - CO - CHZ

~ S
II
CONH-p-CJ-14-NH-C-NH-P

WO 96/00229 219 2 0 7 3 PCl'/FR95/00790 EXEMPLES
ExamFlel Préparation d'un dérivé de glycosylamine acylé: le N-acétyl lactosyl ji-glycyl-pNA.
Le glycyl amido paranitrophenyl (0,1 mmole) et le lactose (0,1 mmole) sont dissous dans 1 ml de diméthylsulfoxyde.
La solution est maintenue à 50 C pendant 48 h. On ajoute 0,1 mmole de gly-pNA dans 0,5 ml de diméthylsulfoxyde aux temps 12 h, 24 h et 36 h. On refroidit à 25 C.
On ajoute ensuite 0,44 mmole du BOP, hexafluorophosphate, benzotriazolyl 1 yl-tris (diméthylamino) phosphonium, et 0,44 mmole d'acétate de diisopropyléthylamine et on agite 3 h à 25 C.
Le produit attendu est purifié par tamisage moléculaire dans une colonne d'Ultrogel GF05 (90 cm x 2,3) en utilisant comme solvant l'acide acétique 0,1, M contenant 3 % de n-butanol; avant l'injection, les produits de réaction sont dilués par addition de 7,5 ml de solvant de chromatographie.
Le produit attendu sort en tête, suivi des réactifs en excès et du diméthylsulfoxyde.
Le produit: le N-acétyl lactosyl(3-gly-pNA est obtenu par lyophilisation de la solution éluée de la colonne.

Exemnle 2 Préparation d'un dérivé de glycosylamine acylé intramoléculairement: le N-lactosyl(3-pyrogiu-pNA.
L'a glutamyl paranitroanilide (Glu-pNA) (0,1 mmole) et le lactose (0,1 mmole) sont dissous dans 1 tnl de diméthylsulfoxyde. La solution est maintenue à 50 C pendant 48 h. On ajoute 0,1 mmole de glu-pNA dissous dans 0,5 ml de dimethylsulfoxyde aux temps 12 h, 24 h, et 36h. On refroidit ensuite à 25 C.
On ajoute âlors 0,44 nunole de BOP et on agite 3 h à 25 C.
Le produit attendu est purifié dans les mêmes conditions que dans l'exemple précédent.

Exemple 3 Préparation d'un composé organique dont la chaîne latérale de l'amine contient un groupe fonctionnel et utilisation du groupe fonctionnel pour former un conjugué avec un oligonucléotide.

0 96/00229 ~ PCr/F1295100790 L'oligoside est incubé en présence de deux à quatre équivalents du dérivé
S-(thio-2-pyridine)cystéinyl-p-nitroanilide NHa CH-CO-NH p-C6-Hà NOZ

CH2 S-S / \
N
en solûtion dans la N-méthylpyrrolidone (ou dans du diméthylsulfoxyde ou du 1V-diméthylformamide) et en présence de quatre équivalents d'imidazole pendant 20 h à 50 C. La solution est refroidie à 25 C. On ajoute alors dix équivalents d'acide acétique, d'imidazole et de BOP. La réaction d'acylation s'effectue en une demi-heure.
Le glycopeptide est isolé par chromatographie de tamisage moléculaire (colonne d'Ultrogel GF05, par exemple), dans l'acide acétique 0,1M. La fraction contenant le glycopeptide purifié est congelée et lyophilisée.
Le glycopeptide dissous dans un tampon acétate de sodium 0,1M, pH 6 est réduit par addition d'un équivalent de TCEP (tris-carboxyéthylphosphine) à
25 C pendant 30 min (voir K. Arar et al.; 1993, Tetrahedron Letters 34, 8087-8090, J. A. Burns et al., 1991, J. Org. Chem., 56, 2648-2650). On ajoute alors un équivalent d'un oligonucléotide substitué sur son extrémité 5' par un substituant terminé par un groupement dithio-2-pyridine.
Le conjugué glycopeptide-oligonucléotide formé a la structure générale suivante:
oligosidyl-NH-CH-CO-X

CH3-CO CH2-S-S-5'-Oligonucléotide dans lequel X représente NH-p-C6 Hà N02, et 5' représente le bras réunissant le premier S du dithio-2-pyridine à l'hydroxyle primaire du premier nucléotide de l'oligonucléotide.

Exemple 4 Préparation du lactosyl-pyroglutamyl-paranitro-anilide (dans le diméthylsulfoxyde).
= Le lactose Ga1R4Glc (0,15 mmole) est dissous dans 1,25 ml de diméthylsulfoxyde (CH3-SO-CH3). On ajoute 0,30 mmole de Glu-pNA dans 1,25 nil de diméthylsulfoxyde contenant 0,6 mmole d'imidaaole (pNA = para nitro-aniline). La solution est gardée à 50 C pendant 20 h, puis refroidie à

WO 96/00229 PCT/FR95/00790 =

25 C. Plus de 95% du lactose est transformé en glycopeptide: lactosyl-glu-pNA.
On ajoute 0,33 mmole de BOP et 0,6 mmole d'imidazole. La solution est agitée pendant 30 min à 25 C. Plus de 95% du glycopeptide est cyclisé en lactosyl-pyroglutamyl-paranitro-anilide:
Ga1MG1cj3pGlu pNA
pGlu est: le résidu pyroglutamyle -NH-CH-CO-~ CHZ
CO-CHZ
ExeIDFlp5 -Préparation du lactosyl-pyroglutamyl p-nitroanilide (dans la N-méthylpyrrolidone).
Le lactose GalG34Glc (0,15 mmole) est dissous dans 1,25 ml de N-méthylpyrrolidone de formule: CO-CHZ
CH3-N ~ 1 On ajoute 0,3 mmole de Glu-pNA dans 1,25 mmole de N-méthyl-pyrrolidone contenant 0,6 mmole d'imidazole. La solution est gardée à 50 C
pendant 20 h puis refroidie à 25 C. Plus de 95% du lactose est transformé en glycopeptide: lactosyl-Glu-pNA. On ajoute 0,33 mmole de BOP et 0,6 mmole d'imidazole. La solution est agitée pendant 30 min à 25 C. Plus de 95% du glycopeptide est cyclisé en lactosyl-pyroglutamyl p-nitro-anilide.
Les analyses sont effectuées par chromatographie sur colonne à haute pression sur un appareil Dioxex, équipé d'un détecteur ampérométrique. Les rendements sont calculés par rapport à un témoin inteme (le sorbitol) ajouté à
la solution initiale de lactose.
Les temps de rétention des composés dans les conditions standard, exprimés en minutes, sont:

Lactose . 9,9 t 0,1 Lactosyl-Glu-pNA . 21,4 0,1 Lactosyl-p-Glu-p-NA . 16,2 0,1 Imidazole . 4,3 t 0,1 Sorbitol . 2,7 0,1 ~

Fxsmgjç 6 Préparation d'un composé de formule:
Oligosidyl-glycopeptidyl - oligopeptide oligonucléotide La préparation peut se faire selon le schéma réactionnel suivant.
Le produit de départ indiqué ci-après, peut être obtenu comme indiqué
précédenunent, à propos de la préparation des produits de l'invention.
Glycosyl-N-CH-CO-NH-CH-CO-OCH3 I {
ÇH2 CH2-S-S-Pyr ~ NHZ NHa, 4 C
Glycosyl-N-CH-CO-NH CH-CO-NH-NH2 CH2 C{I H2-S-S-Pyr CO-eH2 ~ HNO2 4 C, pH 1 Glycosyl-N-CH-CO-NH-CH-CO-N3 ! 2 ~ H2-S-S-Pyr pH 8 J~ NH2 ........peptide NHa CH-CO NH-CH-CO -OH
' I I
R; R; n R;: chaîne latérale d'aminoacides Glycosyl-N-CH-CO-NH-CHto NH-CH-CO OH

CH2 CHZ S-S-Pyr R n+1 TCEP, pH 5 TCEP=Tris carboxyéthylphosphine Glycosyl-N-CH-CO-NH-CH-CO NH-CH-CO OH

CH2 CH2-SH R; n+ 1 pH 7 Pyr-S-S-oligonucléotide Glycosyl-N-CH-CO-NH-CH-CO NH-CH-CO OH
1 ~
CH2 L R; n+l CO=éH2 CHZ S-S-oligonucIéotide L'exemple choisi correspond à la préparation d'un dérivé
d'oligonucléotide, tel que ce dérivé possède une activité biologique en relation avec la séquence de l'oligonucléotide choisi ('oligonucléotide sens, anti-sens, antigène, leurre etc.., est spécifique d'un élément cellulaire ou viral de nature acide nucléique ou protéine), l'oligoside petmet au dérivé d'être sélectivement reconnu par certaines cellules qui possèdent un récepteur membranaire (lectine) ayant une affmité pour l'oligoside choisi, le peptide permet au dérivé - une fois à l'intérieur des endosomes (vésicules intracellulaires), grâce au mécanisme d'endocytose dû à la lectine membranaire - de pénétrer dans les compartiments cytosolique, et ensuite nucléaire.
L'oligonucléotide est un oligomère comportant entre 10 et 40 nucléotides, de préférence 20 à 25. L'oligopeptide est un oligomère comportant entre 20 et 40 amino-acides, de préférence 20 à 25. Ce genre de dérivés correspond à une ligne de composés susceptibles d'être utilisés cotnme médicaments.

FxempjsZ
Préparation d'un composé de formule:
Glycosyl-N-CH-CO-NH-CH-CO-NH-Flu ~2 JH2-S-S-Pyr La préparation de ce composé peut se faire selon le schéma réactionnel suivant:

Oligoside + NH2-CH-CO-NH CH-CO-NH-Flu COZH-CHZ-CHZ CH2-S-S-Pyr Fmoc-NH-CH-CO2H

CH2-CH2-CO-OC(CH3)3 + NHa-CH-CO-NH-Flu CHZ S-S-Pyr I

Fmoc-NH-CH-CO-NH-CH-CO-NH-Flu I
CHZ-S-S-Pyr CHZ-CHa-CO-O-C(CH3)3 Fmoc-NH-CH-CO-NH-CH-CO-NH-Flu CHZ-S-S-Pyr I I
CHa-CH2-COZH
~ NH(C2H5)2 ~~ S~ = `} . ~y , r NHZ CH-CO-NH-CH-CO-NH-FIu CHa-S-S-Pyr 20h, 50 C oligoside, N-méthylpyrrolidone Oligosidyl-NH CH-CO-NH-CH-CO-NH-FIu COZH ICHa ( CH2-S-S-Pyr 30 min, 25 C y BOP, N-méthylpyrrolidone Oligosidyl-N 7-CO-NH-CH-CO-NH-FIu çH2 1 CO-CH2 CHZ-S-S-Pyr Oligosidyl-N T CO-NH-CH-CO-NH-Flu 1 ~H2 -CO-CH2 CH2-s-s-Pyr TCEP P-(CH2-COZ )3 Oligosidyl-N T CO-NH-CH-CO-NH-F1u Pyr-S-S-5'-oligonucléoflde Oligosidyl-N T CO-NH-CH-CO-NH-FIu = ~ ClH2 i CO-CH2 CH2-S-S-5'-oligonucléotide L'exemple choisi correspond à la préparation d'un dérivé glycopeptidique fluorescent d'utilisation générale.
Le résidu de fluorescéine permet une utilisation des glycopeptides à des fins de localisation, de visualisation, de façon générale, à des fms analytiques, en particulier en microscopie de fluorescence.
Le dérivé glycopeptidique fluorescent lié à un oligonucléotide peut également être utilisé comme agent antiviral ou anticancéreux, pour permettre à
la fois une étude de l'activité biologique du dérivé et de son trafic intracellulaire, ainsi que de la pharmacocinétique, chez l'animal.
Dans cet exemple, le pont disulfure est présent dans le composé d'origine sur un résidu Ai de la formule générale.

Exemple 8 Préparation d'un composé de formule:
Oligosidyl-glycopeptidyl - Flu oligonucléotide Oligoside + NHZ CH-CO-NH-Flu CH2-S-S-Pyr 20h, 50 C N-méthylpyrrolidone + Imidazole Oligosidyl-NH-CH-CO-NH-Flu CH2-S-S-Pyr CH3 COZH, BOP -WO 96/00229 PCT/FR95,00790 Oligosidyl - N - CH-CO-NH-Flu CH3-CO CHZ-S-S-Pyr y TCEP
Oligosidyl - N - CH-CO-NH-Flu CH3-CO CHZ-SH

J~ Pyr-S-S-oligonucléotide Oligosidyl - N - CH-CO-NH-Flu CH3 CO CHZ S-S-oligonucléotide Ce qui a été dit à propos du dérivé glycopeptidique de l'exemple 7, s'applique à cet exemple. II faut noter que dans l'exemple 8 ici considéré, le pont disulfure est présent dans le composé d'origine sur la chaîne Z de la formule générale.

Bxemole 9 Préparation de dérivés glycosylés de la polylysine gluconoylée.
La polylysine gluconoylée est utilisée pour transférer des gènes dans les cellules animales. La substitution de la polylysine gluconoylée par un ou des glycopeptides permet de rendre le transfert de gènes sélectifs.
Les dérivés glycosylés de la polylysine gluconoylée pénètrent de préférence (100 à 1000 fois) dans des cellules qui expriment à leur surface une lectine (récepteur d'oligosides), qui reconnaît spécifiquement l'oligoside du glycopeptide lié à la polylysine gluconoylée.
a) Liaison d'un glycopeptide à la polylysine gluconoylée via un pont disulfure.

La polylysine gluconoylée (degré de polymérisation 190; contenant 60 résidus gluconoyle), est substituée par un dérivé de la dithiopyridine; le polymère (20 mg; 0,33 pmol) est dissous dans 0,5 ml de diméthylsulfoxyde.
On ajoute 1 mol (312 g) de N-succinimidyl 3-(2-pyridyldithio)propionate et 20 mol (3,6 l) de diisopropyléthylamine. La solution est agitée à 20 C pendant 15 h. Le polymère est précipité par addition de 10 volumes d'isopropanol; le précipité est récupéré après centrifugation (1800 g, 15 min).
Après lavage par de l'isopropanol, le polymère est dissous dans un tampon phosphate de sodium 0,1 M de pH 7,2 (1 ml).
Le glycopeptide: oligosylpyroglutamyl amido éthyidithiopyridine:
Gal(34GIcp-pyroglutamyl-NH-(CH2)2-S-S-pyridine (1 mol) est traité par 1 mole de TCEP (triscarboxyéthylphosphine: P(CH2-CHZ COZ )3) dans un tampon phosphate de sodium 0,1 M (1 ml), pendant 1 h à 20 C. Cette solution est ajoutée à la solution de polylysine gluconoylée substituée par le pyridyldithiopropionate. Après 1 h à 20 C, le polymère est précipité par addition de 10 volumes d'isopropanol. Le précipité est récupéré après centrifugation (1 800 g, 15 min) et lavé dans l'isopropanol puis dissous dans l'eau et lyophilisé.
Le rendement de la réaction de couplage dans les conditions utilisées est égal ou supérieur à 90%.
Les réactions utilisées dans cette préparation sont dérivées de celles décrites dans Midoux, P., Mendes, C., Legrand, A., Rammond, J., Mayer, R., Monsigny, M. et Roche, A.C., 1993: Specific gene transfer mediated by lactosylated poly-l-lysine into hepatoma cells. Nucleic Acid Research, 21: 871-878, et dans Arar, K., Monsigny, M., et Mayer, R., 1993: Synthetis of oligonucleotide peptide conjugates containing a KDEL signal sequence.
Tetrahedron Letters, 34: 8087-8090.
b) Liaison d'un glycopeptide à la polylysine gluconoylée via une liaison thiourée.
La polylysine gluconoylée (degré de polymérisation 190; contenant 60 résidus de gluconoyle), est substituée par un glycopeptide activé sous forme de phénylisothiocyanate.
Le glycopeptide oligosylpyroglutamyl p-nitroanilide est réduit en un dérivé
p-amino anilide qui est ensuite activé en un dérivé p-cyanato-anilide:
Gal(34GIcp-pyroglutamyl-NH-p-C6H4-NCS selon un protocole adapté de celui décrit dans Roche, A.C., Barzilay, M., Midoux, P., Junqua, S., Sharon, N. et VVO 96100229 ~ 1~~ 0 7 3 PCT1FR95,00790 Monsigny, M. (1983): Sugar specific endocytosis of glycoproteins by Lewis lung carcinoma cells., J. Cell. Biochem., 22: 131-140.
Le dérivé cyanato-anilide (1 mole) est dissous dans le diméthylsulfoxyde (1 ml) contenant 1 tnole de polylysine gluconoylée et 4 moles de diisopropyl éthylamine. La solution est agitée à 20 C pendant 24 h. Le polymère glycosylé
est précipité par addition de 10 volumes d'isopropanol; le précipité est récupéré
après centrifugation, lavé à l'isopropanol, et finalement dissous dans l'eau et lyophilisé.
Dans les conditions décrites, le rendement du couplage du glycopeptide sur la polylysine gluconoylée est supérieur à 95 %

Exemple 10 Préparation d'un glycopeptide (l'oligosylpyroglutamyl p-nitroanilide) dans le diméthylformamide comme solvant.
L'a glutamyl-p-nitroanilide (0,2 mmoles) et le lactose (0,1 mmole) sont dissous dans 1 ml de diméthylformamide, en présence de 0,2 mmoles d'imidazole. La solution est maintenue à 50 C pendant 8 h.

On refroidit à 25 C, et on ajoute 0,2 mmole de BOP et 0,2 mmole d'imidazole et on attend 30 min. Dans ces conditions, plus de 95% de l'oside de départ est transformé en dérivé glycopeptidique. La purification est identique à
celle décrite en utilisant les autres solvants.

Description des figures:

La figure 1 représente le profil d'élution du G3-lactosyl-pyroGlu-pNA
obtenu par chromatographie d'échange d'anions à haute performance.
La figure 2 représente le profil d'élution du LewisA/LewisX-pyroGlu-pNA obtenu par chromatographie d'échange d'anions à haute performance.
Exemple 11 La pureté du produit préparé à l'exemple 2(N-lactosyl(3-pyroglu-pNA, que l'on désignera ci-après également par (3-lactosyl-pyroGlu-pNA) a été
vérifiée par chromatographie d'échange d'anions à haute performance et à
détection ampérométrique (HPAE-PAD) sur un appareil de marque DIONEX.
S'agissant de cette technique, on procède comme suit:
Les osides sont ionisés en milieu alcalin (soude 0,1M) sous forme de plurialcoolates. Leur séparation sur une résine cationique (ions ammoniums immobilisés) est très efficace. La détection des osides est avantageusement effectuée par une mesure ampérométrique en courant pulsé. L'appareil utilisé
(Dionex) a été spécialement conçu pour réaliser la chromatographie en milieu alcalin et la détection ampérométrique en ligne.
Les temps de rétention (tr) des différents produits ont été caractérisés (voir figure 1):
Pic tr (min) Composé
1 4,4 Imidazole 2 10,0 Lactose 3 27,5 R-lactosyl-Glu-pNA
4 22,9 j3-lactosyl-pyroGlu-pNA
Sur la figure 1:
la première courbe (à partir du haut de la planche) correspond à
l'injection de lactose seul, - la deuxième courbe correspond à l'injection du mélange réactionnel après 12h, - la troisième courbe correspond à l'injection du mélange réactionnel après 12 heures + 30 minutes de cyclisation.

Exemple 12 Préparation d'un dérivé de glycosylamine acylé intramoléculairement:
le LewisA/L.ewisKpyroGlu-pNA.

Le LewisA/LewisX (0,06 nunole) est dissout dans 1 ml de diméthylfotmamide. On ajoute 0,12 mmole de Glu-pNA puis 0,24 mmole d'imidazole. La solution est gardée à 50 C pendant 15 h. La stabilisation du glycopeptide est obtenue en ajoutant, au milieu réactionnel ramené à 20 C, 0,13 mmole de BOP et 0.24 mmole d'imidazole. Après 30 min, le glycopeptide est cyclisé en LewisA/LewisX-pyroGlu-pNA. La réaction est suivie par HPAE-PAD.

Synthèse de LewisA/LewisKpyroGlu-pNA. Profils d'élution Dionex.
Les temps de rétention (tr) des différents produits ont été caractérisés (voir figure 2):
Pic tr (min) Composé
1 4,5 Imidazole 2 8,9/9,4 LewisA/LewisX
3 22,5/22,7 LewisA/LewisX-Glu-pNA
4 17,4/17,6 LewisA/LewisX-pyroGlu-pNA
Sur la figure 2:
- la première courbe (à partir du haut de la planche) correspond à
l'injection du mélange réactionnel après 15 minutes, - la deuxième courbe correspond à l'injection du mélange réactionnel après 15 heures, et - la troisième courbe correspond à l'injection du mélange réactionnel après 15 heures + 30 minutes de cyclisation.

Puri6cation du glycopeptide.

Après la synthèse décrite ci-dessus, on procède à la purific4tion en deux étapes:

- par tamisage moléculaire dans une colonne de Trisacryl GF05 (100 cm x 2,3 cm) avec un débit de 10 ml/h, éluée par une solution aqueuse contenant 0.1 M d'acide acétique et 3% de n-butanol; cette première étape permet d'éliminer les oligosaccharides n'ayant pas réagi ainsi que les excès de BOP = hexafluorophosphate de benzotriazolyl-oxy-tris(diméthylamino)phosphonium, et de Glu pNA.
- par précipitation éthanolique (90%), au cours de laquelle l'échantillon est maintenu à 4 C pendant 24 h; cette deuxième étape permet d'éliminer l'excès d'imidazole.
La purification est suivie par HPAE-PAD.

Sur la figure 2, la quatrième courbe correspond à l'injection du produit LewisA/LewisX-pyroGlu-pNA purifié par tamisage moléculaire suivi d'une précipitation éthanolique (tr: 17,4/17,6).

= Caractérisation du glycopeptide (LewisA/LewisX-pyroGlu-pNA).
Une analyse en 1H RMN à 300 MHz a été réalisée.
Le LewisA/LewisX-pyroGlu-pNA est dissout dans D20 (6.10-3 mole/l).
LewisA possède un galactose terminal lié en 3 et un fucose terminal lié en 4 sur la N-acétylglucosamine. LewisX possède un galactose terminal lié en 4 et un fucose terminal lié en 3 sur la N-acétylglucosamine. L'examen du spectre a permis d'identifier un certain nombre de protons caractéristiques:
- communs aux 2 glycopeptides: 8,33 et 7,79 (4H, 2d, H aromatique);
4,90 (2H, m, H5 aFuc); 4,67 (1H, d, J12, 7,32 Hz, H1 (3G1cNAc);
4,37 (1H, d, J1 2 7,42 Hz, Hl (3Galint); 4,16 (1H, s, H4 (3Galmt); 2,83 (2H, m, yCH2 pyroGlu); 2,33 (2H, m, (3 et (i'CH2 pyroGlu); 2,05 et 2,04 (6H, 2s, CH3 Ac G1cNAc); 1,22 et 1,21 (6H, 2s, CH3 Fuc);
- spécifiques de LewisA: 5,05 (1H, d, Hl aFuc); 4,53 (1H, d, H1 PGal);
- spécifiquès de LewisX: 5,24 (1H, d, J1,2, 7,2 Hz, Hl aFuc);
4,50 (1H, d, Hi (3Gal).

Exemple 13 On a préparé comme indiqué à l'exemple 12, le LewisB-pyroGlu-pNA et l'oligoH-pyroGlu-pNA.

wo 96/00229 ~T i(1 ~(1 rt ~j PCT/FR95/00790 fw3e7 et ( u 48 On a récapitulé cï-après, l'analyse des glycopeptides obtenus, y compris celle du P-lactosyl-pyroGlu-pNA (N-Iactosyl(3-pyroG(u-pNA) et du LewisA/LewisX-pyroGlu-pNA.

Analyse des glycopeptides (appareil Dionex).

Séparation par chromatographie échangeuse d'anions. Colonne CarboPac PAl (4 x 250 mm). Débit: 1 mlfmin. Détection par ampérométrie pulsée.
Travail à température ambiante.

On a recours pour bien séparer à un gradient acétate de sodium:
Temps NaOH 100 mM NaOH 100 mM
(min) CH3COONa 1M

Injection 0,1 100 0 Temps de rétention exprimés en minutes:

Imidazole . 4,4 0,1 Lactose . 10,0 0,1 (3-lactosyl-Glu-pNA . 27,5 0,1 (3-lactosyl-pyroGlu-pNA . 22,9 0,1 Imidazole . 4,5 0,1 LewisA/LewisX . 8,9-9,4 0,1 LewisA/LewisX-Glu-pNA . 22,5/22,7 0,1 LewisA/LewisX-pyroGlu-pNA . 17,4/17,6 0,1 Imidazole . 4,4 0,1 LewisB 7,3 t 0,1 LewisB-Glu-pNA . 19,7 0,1 LewisB-pyroGlu-pNA . 16,6 0,1 Imidazole 4,5 t 0,1 OligoH . 8,2/8,7 t 0,1 OligoH-Glu-pNA . 23,8 0,1 OligoH-pyroGlu-pNA 18,9 0,1

Claims (27)

REVENDICATIONS
1. Composés comprenant un ou plusieurs oligosides, chacun desdits oligosides étant fixé de façon covalente sur une ou plusieurs molécules, matrices ou particules, grâce à une molécule intermédiaire possédant un atome d'azote porté par un carbone en .alpha. d'un groupe C = O, l'atome d'azote étant N-acylé, et un ou plusieurs groupes fonctionnels, la liaison covalente entre ladite molécule intermédiaire et l'oligoside ayant lieu par l'intermédiaire du susdit atome d'azote, et la liaison covalente entre ladite molécule intermédiaire et la susdite molécule, la susdite matrice, la susdite particule, ou les susdites molécules, les susdites matrices, les susdites particules ayant lieu par l'intermédiaire du ou des susdits groupes fonctionnels de ladite molécule intermédiaire et des groupes fonctionnels appropriés sur la (les) molécule(s), la (les) matrice(s) ou la (les) particule(s).
2. Composés de formule générale (I) dans laquelle:
* a = 0 ou 1, * j = 0 ou 1, * b = 0 ou 1, * p = 2 à 4, * sous réserve que ** a = b = 0, lorsque j = 1, ce qui entraîne la présence d'une molécule cyclique, ** ou a = b = 1, lorsque j = 0 ce qui implique l'absence de groupe (CH2)p, * D représente un résidu d'un acide organique de formule ECO2H, E étant H ou une chaîne alkyle de 1 à 10 atomes de carbone, * Z représente ** B, B étant H, un alkyle de 1 à 10 atomes de carbone, ou une chaîne latérale d'un acide .alpha. aminé, naturel ou synthétique, ou ** B'-P', B' étant une chaîne alkylidène de 1 à 10 atomes de carbone, ou une chaîne latérale d'un acide .alpha. aminé, naturel ou synthétique, lesdites chaînes contenant un groupe dérivé d'un groupement fonctionnel susceptible d'être activé, P' ayant les significations indiquées ci-après, * X représente :
. le groupe . ou le groupe . ou le groupe * m étant un nombre entier de 0 à 10, k = 0 ou 1 * Q représente OH, OCH3, OCH2-C6H5, O-C6H5, O-C6F5, * R représentant un groupe possédant une fonction alcool, phénol, thiol ou amine, * P étant tel que défini ci-après, * A i représente un radical organique, * P, P' et P" sont identiques ou différents et représentent :

- une matrice comme support pour la chromatographie d'affinité ;
- une bille d'or ou de latex ;

- une protéine ;
- un lipide ;

- des oligonucléotides ;
- des polymères, P, P' et P" possédant au moins une fonction permettant une réaction de condensation par réaction avec un oligopeptide, sous réserve que Z représente B'-P', et/ou X comporte P et/ou P" dans sa formule.
3. Composés selon l'une des revendications 1 ou 2, de formule générale (II) dans laquelle :

* a = 0 ou 1, * j = 0 ou 1, * b = 0 ou 1, * p = 2 à 4, * sous réserve que ** a = b = 0, lorsque j = 1, ce qui entraîne la présence d'une molécule cyclique, ** ou a = b = 1, lorsque j = 0 ce qui implique l'absence de groupe (CH2)p, * D représente un résidu d'un acide organique de formule ECO2H, E étant H ou une chaîne alkyle de 1 à 10 atomes de carbone, * B représente H, un alkyle de 1 à 10 atomes de carbone, ou une chaîne latérale d'un acide .alpha. aminé, * X représente :
. ou le groupe [NH-(A i)-CO]m-P, , ou le groupe [NH-(A i)-CO]m-R-P
m étant un nombre entier de 0 à 10, R et P étant tels que définis ci-après, * A i représente un radical organique, * R représentant un groupe possédant une fonction alcool, phénol, thiol ou amine, * P représente - une matrice comme support pour la chromatographie d'affinité ;
- une bille d'or ou de latex ;

- une protéine ;

- un lipide ;
- des oligonucléotides ;
- des polymères.
4. Composés selon l'une des revendications 1 ou 2, de formule générale (III) dans laquelle X représente [NH-(A i)-CO]m-P ou [NH-(A i)-CO]m-R-P, A i, m, P
et R ayant les significations indiquées à la revendication 2.
5. Composés selon l'une des revendications 1 ou 2, de formule générale (IV) dans laquelle D et B ont les significations indiquées à la revendication 2, et X
représente [NH-(A i)-CO]m-P ou [NH-(A i)-CO]m-R-P, A i, m, R et P ayant les significations indiquées à la revendication 2.
6. Composés selon l'une des revendications 1 ou 2, de formule générale (V) dans laquelle X représente [NH-(A i)-CO]m-P ou [NH-(A i)-CO]m-R-P, P, A i, m et R ayant les significations indiquées à la revendication 2.
7. Produits, susceptibles de servir de produits intermédiaires pour la préparation d'un des composés selon l'une quelconque des revendications 1 à 6, lesdits produits comprenant un oligoside lié à une molécule possédant un atome d'azote, porté
par un carbone en .alpha. d'un groupe C = O, et au moins un groupe fonctionnel, la liaison covalente entre l'oligoside et la molécule s'effectuant par l'intermédiaire du susdit atome d'azote.
8. Produits de formule générale (Ia) dans laquelle :

* a = 0 ou 1, * j = 0 ou 1, * b = 0 ou 1, * p = 2 à 4, * sous réserve que ** a = b= 0, lorsque j = 1, ce qui entraîne la présence d'une molécule cyclique, ** ou a = b = 1, lorsque j = 0 ce qui implique l'absence de groupe (CH2)p, * D représente un résidu d'un acide organique de formule ECO2H, E étant H ou une chaîne alkyle de 1 à 10 atomes de carbone, * Z1 représente * B, B étant choisi parmi : H, une chaîne alkyle de 1 à 10 atomes de carbone, ou une chaîne latérale d'un acide .alpha. aminé, ou * B', B' étant choisi parmi: une chaîne alkylidène de 1 à 10 atomes de carbone, ou une chaîne latérale d'un acide .alpha. aminé, lesdites chaînes contenant un groupe fonctionnel, * X1 représente .cndot. le groupe [NH-(A i)-CO]m-R, ou .cndot. le groupe [NH-(A i)-CO]m-Q

* R représente un composé possédant une fonction alcool, phénol, thiol ou amine, * Q est choisi du groupe comprenant OH, OCH3, OCH2-C6H5, O-C6H5, O-C6F5, * m étant un nombre entier de 0 à 10, * A i représente un radical organique.
9. Produits selon l'une des revendications 7 ou 8, de formule générale (IIa) dans laquelle :

* a = 0 ou 1, * j = 0 ou 1, * b = 0 ou 1, * p = 2 à 4, * sous réserve que ** a = b = 0, lorsque j = 1, ce qui entraîne la présence d'une molécule cyclique, * * ou a = b = 1, lorsque j = 0 ce qui implique l'absence de groupe (CH2)p, * D représente un résidu d'un acide organique de formule ECO2H, E étant H ou une chaîne alkyle de 1 à 10 atomes de carbone, * B représente H, un alkyle de 1 à 10 atomes de carbone, ou une chaîne latérale d'un acide .alpha. aminé, * m étant un nombre entier de 0 à 10, * A i représente un radical organique, * R représente un composé possédant une fonction alcool, phénol, thiol ou amine.
10. Produits selon l'une des revendications 7 ou 8, de formule générale (IIIa) dans laquelle A i, m et R ont les significations indiquées à la revendication 8.
11. Produits selon l'une des revendications 7 ou 8, de formule générale (IVa) dans laquelle D, B, m, A i et R ont les significations indiquées à la revendication 8.
12. Produits selon l'une des revendications 7 ou 8, de formule générale (Va) dans laquelle A i, m et R ont les significations indiquées à la revendication 8.
13. Produits de formule (VI) dans lequel B, A i, m et R ont les significations indiquées à la revendication 2.
14. Produits de formule (VII) dans lequel p, A i, R, m ont les significations indiquées à la revendication 2.
15. Composés ou produits selon la revendication 2 ou 8, caractérisés en ce que Q représente les radicaux suivants :
OH, O-CH2-C6H5, O-C6H5, O-C6F5, O-p C6H4-NO2,
16. Composés ou produits selon l'une quelconque des revendications 2 à 6 ou 8 à 14, caractérisés en ce que R représente l'un des radicaux suivants :

-NH-p C6H4-N=C=S et ses précurseurs :
-NH-p C6H4-NO2 -NH-p C6H4-NH2 -NH-CH2-(CH2)m-C(=NH2+)OCH3 -NH-CH2-(CH2)m-CN
-NH-CH2-(CH2)m-CH2-NH-CO-CH2-(CH2)m-C(=NH2+)OCH3 -NH-CH2-(CH2)m-CH2-NH-CO-CH2-(CH2)m-CN

-NH-CH2-(CH2)m-CH2-NH-CO-CH2-T T = Br, I, Cl -NH-CH2-CH2-NH-CO-CH2-(CH2)m-S-S-Pyr NH-CH2-(CH2)m-CH2-S-S-Pyr -NH-(CH2)m-pC6H4OH
-NH-CH2-(CH2)m CH2-NH-CO-(CH2)m-pC6H4OH
m représentant un nombre entier de 0 à 10, Pyr représentant le groupe 2-pyridine.
17. Composé selon la revendication 2, caractérisé en ce que P

représente un oligopeptide, ou un polypeptide, et P' ou P" représente un oligonucléotide, ou bien R représente la fluorescéine ou un de ses dérivés ou un autre dérivé
fluorescent, et P' ou P" représente un oligonucléotide ou P représente un agent thérapeutique.
18. Composés selon l'une quelconque des revendications 1 à 12, caractérisés en ce que le résidu oligosidique est soit monosaccharide soit un oligosaccharide comportant de 2 à 50 oses et est choisi parmi :
lacto-N-tétraose Gal.beta. 3 GlcNAc.beta. 3 Gal .beta. 4 Glc néolacto-N-tétraose Gal.beta. 4 GlcNAc.beta. 3 Gal .beta. 4 Glc groupe H Fuc .alpha. 2 Gal.beta. 3 Gal.beta. 4 Glc Lewis a Gal.beta. 3 GlcNAc.beta. 3 Gal 4 Glc Fuc .alpha. 4~.uparw.

Lewis x Gal.beta. 4 GlcNAc.beta. 3 Gal.beta. 4 Glc Fuc .alpha. 3~.uparw.

Lewis b Fuc.alpha. 2 Gal.beta. 3 GlcNAc .beta. 3 Gal.beta. 4 Glc Fuc .alpha. 4~.uparw.
Lewis y Fuc .alpha. 2 Gal.beta. 4 GlcNAc.beta. 3 Gal.beta. 4 Glc Fuc .alpha. 3~.uparw.

Disialolacto-N-tétraose Neu 5Ac.alpha. 3 Gal .beta. 3 GlcNAc .beta. 3 Gal .beta. 4 Glc Neu 5Ac.alpha. 6~.uparw.

Type complexe à 3 antennes Sialylactose 3 Neu 5Ac .alpha. 3 Gal 4 Glc Sialylactose 6 Neu 5Ac .alpha. 6 Gal .beta. 4 Glc Disialylactose 3 Neu 5Ac .alpha. 8 Neu 5Ac .alpha. 3 Gal .beta. 4 Glc des osides simples ou complexes reconnus par des lectines membranaires.
19. Composés selon la revendication 18, caractérisés en ce que le résidu oligosidique est choisi parmi les osides simples ou complexes suivants, reconnus par des lectines membranaires :

a. Asialo-oligoside de type lactosamine triantenné : récepteur d'asialoglycoprotéine b. Asialo oligoside de type lactosamine tétraantenné : récepteur d' asialoglycoprotéine c. Lewis x: LECAM 2/3 d. Sialyl Lewis X: LECAM 3/2 e. Dérivé de Lewis x sulfaté (HNK1) : LECAM 1 f. Oligomannoside : récepteur du mannose g. Oligomannoside phosphorylé : récepteur de mannose 6 phosphate h. Oligosaccharide de type lactosamine sulfaté : récepteur de GalNAc 4 sulfaté

20. Composés selon l'une quelconque des revendications 2 à 6 ou 8 à 14, caractérisés en ce que A; représente une chaîne alkylidène de 1 à 10 atomes de carbone.
21. Composés selon la revendication 20, caractérisés en ce que A i répond à la formule (CH2)n-W-(CH2)n1, n + n1 représentant un nombre entier de 0 à 10, W
représentant CHY, Y étant H, un alkyle de 1 à 6 atomes de carbone linéaire ou ramifié, un résidu d'amino .alpha. acide, naturel ou synthétique, ou W représentant un composé
aromatique.
22. Procédé de préparation des composés selon l'une des revendications 7 à 12, caractérisé en ce que :

- l'on condense, dans un solvant approprié, un oligoside ayant un ose réducteur libre, sur l'atome d'azote d'une molécule intermédiaire, cet atome d'azote appartenant à
un groupe amine, lié à un atome de carbone placé en .alpha. d'un groupe C = O, la molécule intermédiaire ne possédant pas de chaîne latérale contenant un groupe fonctionnel, pour obtenir un dérivé de glycosylamine dans lequel l'ose terminal de l'oligoside conserve sa structure cyclique, et dans lequel l'hydroxyle semiacétalique est remplacé par l'amine .alpha.
de l'une des susdites molécules de départ, - on acyle le dérivé de glycosylamine obtenu à l'issue de l'étape précédente par addition d'un acide organique activé par un activateur classique, pour obtenir un dérivé
de glycosylamine N-acylé.
23. Procédé de préparatron des composés selon l'une des revendications 7 à 12, caractérisé en ce que :
- l'on condense, dans un solvant approprié, un oligoside ayant un ose réducteur libre, sur l'atome d'azote d'une molécule intermédiaire, cet atome d'azote appartenant à
un groupe amine, lié à un atome de carbone placé en .alpha. d'un groupe C = O, la molécule intermédiaire possédant une chaîne latérale contenant un groupe fonctionnel, pour obtenir un dérivé de glycosylamine dans lequel l'ose terminal de l'oligoside conserve sa structure cyclique, et dans lequel l'hydroxyle semiacétalique est remplacé par l'amine .alpha.
de l'une des susdites molécules de départ, - lorsque la molécule intermédiaire possède une chaîne latérale dont le groupe fonctionnel est protégé ou non, on acyle le dérivé de glycosylamine obtenu à
l'issue de l'étape précédente par addition d'un acide organique activé par un activateur classique, pour obtenir un dérivé de glycosylamine N-acylé, - lorsque la molécule intermédiaire possède une chaîne latérale contenant un groupe carboxylique, on active le susdit groupe carboxylique afin qu'il réagisse intramoléculairement avec la susdite amine .alpha., entrâinant une cyclisation à l'intérieur de la susdite molécule de départ, pour obtenir un dérivé de glycosylamine N-acylé, - lorsque la molécule intermédiaire possède une chaîne latérale contenant un groupe carboxylique, on peut ajouter l'agent d'acylation sous forme d'un ester actif.
24. Procédé selon l'une quelconque des revendications 22 ou 23, caractérisé en ce que la molécule intermédiaire est choisie parmi les molécules suivantes :
acide .alpha.
aminé, naturel ou synthétique, dérivé d'acide .alpha. aminé, aminoacide en position N-terminale d'un peptide ou d'un dérivé peptidique.
25. Procédé selon l'une quelconque des revendications 22 à 24, caractérisé en ce que l'étape de condensation est effectuée en présence d'un catalyseur.
26. Procédé de préparation d'un composé selon l'une quelconque des revendications 1 à 6, caractérisé en ce que l'on fait réagir - un ou plusieurs produits (dérivés de glycosylamine acylés) selon l'une des revendications 8 à 12, portant un groupe Q, activé ou activable, réagissant sur une molécule, matrice ou particule P, P' et P", - un ou plusieurs produits (dérivés de glycosylamine acylés) selon l'une des revendications 8 à 12, portant soit un groupe R, activé ou activable, soit un groupe B' contenant un groupe fonctionnel activé ou activable, soit un groupe A i contenant un groupe fonctionnel sur une molécule, une matrice ou une particule, respectivement P, P' et P", contenant un groupe fonctionnel, pour obtenir un produit du type :

(glycopeptidyl-R)n-P, (glycopeptidyl-B')n-P', ou (glycopeptidyl-A i)n-P", n >= 1, - un ou plusieurs produits (dérivés de glycosylamine acylés) de l'invention, portant d'une part un groupe R, activé ou activable, d'autre part un groupe B' contenant un groupe activé ou activable, ou un groupe A i contenant un groupe fonctionnel sur des molécules, matrices ou particules P et P', ou des molécules, matrices ou particules P et P", - un ou plusieurs produits (dérivés de glycosylamine acylés) de l'invention, portant d'une part un groupe R, activé ou activable, d'autre part un groupe B' contenant un groupe activé ou activable, et un groupe A i contenant un groupe fonctionnel respectivement sur des molécules, matrices ou particules P, P' et P", R, B', A i, P, P' et P" étant définis selon l'une quelconque des revendications 1 à 6.
27. Procédé selon la revendication 26 dans lequel le composé à substituer est une protéine, un lipide, un acide nucléique, un oligonucléotide, une polylysine, un polymère insoluble, une bille de latex ou une bille d'or.
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