CH139013A

CH139013A - Verfahren zur Darstellung eines Hormons aus weiblichen, innersekretorischen Organen in chemisch reiner Form.

Info

Publication number: CH139013A
Authority: CH
Inventors: Fraenkel Sigmund Dr Professor
Original assignee: Fraenkel Sigmund Dr Professor
Priority date: 1927-06-27
Filing date: 1928-06-21
Publication date: 1930-03-31

Description

Verfahren zur Darstellung eines Hormons aus weiblichen, innersekretorischen Organen in chemisch reiner Form. Es sind bereits eine Anzahl von Ver fahren bekannt, um aus weiblichen., inner- sekretorischen Organen physiologisch wirk same Stoffe in mehr oder weniger hoch gereinigter Form zu gewinnen. Aber auch die reinsten bisher erhaltenen Produkte konnten, ungeachtet ihrer ziemlich konstan ten Zusammensetzung und ihrer wohldefi nierten, chemischen, physikalischen Eigen schaften, nicht mit Sicherheit als chemische Individuen angesprochen werden.

Gegenstand vorliegender Erfindung ist nun ein Verfahren, welches die Isolierung Eines neuen Hormons aus weiblichen, inner- sekretorischen Organen in chemisch reiner Form als wohldefinierte Verbindung ge stattet.

Das neue Verfahren geht von einem aus diesen Organen gewonnenen und von Phos- phatiden, Cholesterin, Cholesterinester und Fetten befreiten, sowie zur Entfernung von Fettsäuren durch Behandlung mit Metall- salzen vorgereinigten Extrakt aus und ist dadurch gekennzeichnet, dass man eine Lö= sung dieses Extrakts in Petroläther zur rest losen Entfernung darin löslicher Metallseifen mit einem Elektrolyten behandelt,

dessen Kationen mit den ungesättigten Fettsäuren und dessen Anionen mit dem in Petroläther gelösten Kation, zum Beispiel Blei, in Petrol- Aher unlösliche Salze geben, 'und das tso in hochkonzentrierter Form erhaltene Hormon reinigt.

Die Reinigung erfolgt zweckmässig auf folgende zwei Arten: 1. Man konzentriert die Lösung des Hor mons in einem passenden,, absoluten Lösungs mittel, zum Beispiel trockenem Äther, und friert die Lösung bei sehr niedriger Tempe ratur (zweckmässig unterhalb - 5-0 ) aus, wobei die wirksame Substanz sich kristal- linisch abscheidet. Gewünschtenf alls kann man dieselbe aus Äther und dergleichen in der gälte umkristallisieren. 2.

Man führt das Hormon in einem orga nischen Lösungsmittel, vorzugsweise Äther öder Eisessig, mittelst Brom in sein Dibro- mid über, woraus durch Entbromung, vor zugsweise mit verkupfertem oder amalgiertem Zinkstaub das Hormon in reiner Form ge wonnen werden kann.

Die neue Substanz ist schwach hellgelb gefärbt und unter 0 kristallinisch. Die Elementaranalyse und Molekula-rgewiclits- bestimmung verweisen auf die Formel C1fiH2302# Sie ist das Lokton einer Oxysäure mit einer Doppelbindung zwischen dem 12. und 13. Kohlenstoffatom, was sowohl die Oxydation,. als auch die Ozonüsierun,,g be weisen. Die durch Aufspaltung des Loktons erhaltene Oxysäure erweicht bei 35 und schmilzt bei zirka. 40'.

Das neue Hormon ist in Methyl alkohol, Äthylalkohol, Äther, Petroläther und Benzol leicht löslich. Es zeigt in Methylalkohol die optische Drehung
EMI0002.0018
Es gibt folgende Reaktionen:
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Reaktion <SEP> von <SEP> Carr <SEP> und <SEP> Price <SEP> . <SEP> . <SEP> negativ
<tb> Reaktion <SEP> von <SEP> Raspa.il <SEP> und <SEP> Petten kofer <SEP> . <SEP> . <SEP> . <SEP> . <SEP> . <SEP> . <SEP> . <SEP> . <SEP> positiv
<tb> Reaktion <SEP> von <SEP> Fearon <SEP> . <SEP> . <SEP> . <SEP> . <SEP> negativ.

Die Chloroformlösung gibt mit Schwefel säure und Essigsäureanhydrid eine Rotfär bung, welche schnell in eine bleibende Braun färbung übergeht.

Durch Behandlung der Substanz mit Thionylchlorid und Hydrazinhydrat erhält man einen in feinen Nadeln kristallisierten g'örper vom Schmelzpunkt 104,5 , welcher als dimolekulares Hydrazid mit einer Äther brücke aufgefasst wird. Ihm kommt die For mel C32H6643N@ zu.

Von der in der schweizerischen Patent- wchrift Nr. 80147 beschriebenen, durch Va kuumdestillation gereinigten,, wirksamen Sub stanz aus weiblichen, innersekretorischen Organen unterscheidet sich das Produkt des vorliegenden Verfahrens in mehrfacher Hin sicht, unter anderem durch seinen niedrigeren Kohlenstoff- und seinen höheren Wasserstoff und Sauerstoff beha.lt und durch seine optische Aktivität.

Das neue Hormon bewirkt in geringen Dosen starke Vergrösserung der weiblichen Sexualorgane und Auslösung der Brunst bei kastrierten Tieren. Es soll zu therapeutischen Zwecken verwendet werden. <I>Beispiel 1:</I> 1 Teil entblutete und getrocknete Pla- centa, wird, feinst gepulvert und im Extrak tionsapparat mit Benzol oder einem andern Lösungsmittel, zum Beispiel Alkohol, bis zur Erschöpfung extrahiert. Das Lösungsmittel.

wird hierauf möglichst abdestilliert und der Rückstand mit dem mehrfachen Volumen Aceton aufgenommen. Der in Aceton unlös liche Anteil wird abfiltriert und mehrmals mit dem halben Gewichte an Aceton auf gekocht. Die Filtrate werden hierauf mit dem Hauptfiltrat vereinigt, worauf man die acetonige Lösung in die Kälte stellt und her nach von den ausgefällten und auskristalli sierten Substanzen durch Filtration befreit. Das Aceton wird abdestilliert und der Rück stand mit 2 '.teilen Methylalkohol aufgenom men.

Dies wird so lange wiederholt, bis sich die Substanz sowohl in Methylalkohol, als auch in Aceton und in Äther ohne Trübung löst. Hierauf wird sie in methylalkoholischer Lösung mit schwach ammoniakalischem, methylalkoholischem Bleiacetat so lange ver setzt;, als noch eine Fällung auftritt. Das Filtrat wird im Vakuum eingeengt und her nach in Wasser gegossen.. Hierauf wird mehr mals mit Petroläther ausgeschüttelt und:

die Petrolätherlösung zur Entfernung des über schüssigen Bleiacetates so lange mit Wasser rückgesohüttelt, bis das Wasser keine Blei reaktion mehr gibt.

Zur Entfernung von in Petroläther lös lichen Bleiseifen aus dem so vorgereinigten Extrakt schüttelt man die petrolätherische Lö sung tüchtig mit einer gereinigten wässe rigen Lösung von Natriumsulfat, bis eine filtrierte Probe des Petroläthers mit Scliwe- felammon nicht mehr Bleireaktion zeigt. Es scheiden sich hierbei die gefällten Natrium seifen sowie Bleisulfat ab.

Sollte die petrol- ätherische Lösung noch immer Spuren Blei enthalten so wird das Lösungsmittel im Va: kuum vol Mändig verjagt, der Rückstand mit wenig Methylalkohol aufgenommen und der bleihaltige Rückstand, verworfen.

Die in dieser Weise von Fettsäuren be freite Petrolätherlösung wird hierauf ein- (,reengt und der Rückstand in absolutem Äther aufgenommen. Die ätherische Lösung engt man bis zur passenden Konzentration ein und friert sie mit einem Gemisch von i@o)h- lensäureschnee und Äther aus. Die wirksame Substanz scheidet sich in Kristallen ab und kann durch Dekantieren oder durch geeignete Absaugevorrichtungen von der ätherischen Xutterlauge getrennt werden.

Zwecks wei terer Reinigung kann das so erhaltene Hor mon nochmals in Äther gelöst und hieraus durch Kälte abgeschieden werden. Aus den Mutterlaugen erhält man durch passendes Konzentrieren und Ausfrieren weitere Men gen der Substanz, welche man nun analysen rein kristallisieren kann. Die Substanz zeigt die in der Einleitung beschriebenen Eigen schaften.

Beispiel <I>2:</I> 1 Teil eines nach Beispiel 1 vorgereinig- ten Extraktes, aus Ovarien wird in 3 Teilen Petroläther aufgenommen. Die Lösung wird zur Entfernung von in Petroläther löslichen Bleiseifen mit einer konzentrierten Silber nitratlösung mehrmals ausgeschüttelt bis im Petroläth,er keine Bleireaktion mehr nach gewiesen werden kann.

Man engt den metall freien Petrollätherauszug ein, nimmt den Rückstand mit Äther oder Eisessig auf und setzt die durch einen kleinen Vorversuch er mittelte Menge Brom in ätherischer oder eis essigsaurer Lösung hinzu.

Die eventuell von einer geringen Abscheidung abfiltrierte Lö sung wird vorerst mit Soda oder einem gleich wertigen Mittel von überschüssigem Brom befreit, hierauf das Lösungsmittel im Va kuum entfernt, der Rückstand mit der mehr fachen Menge verkupfertem oder amalgamier- tem Zinkstaub so lang in alkoholischer L6. sung gekocht, bis das Brom entfernt ist. Hierauf wird vom Zink abfiltriert, in Was ser gegossen- und mit einem Lösungsmittel ausgeholt.

Letzteres wird' so lange mit Was ser geschüttelt, bis das Wasser keine Zink- oder Bromreaktion mehr gibt. Hierauf wird im Vakuum vom Lüsungsmi-Uel befreit, wo bei das neue Hormon. in reinem Zustande hinterbleibt. Es ist identisch mit dem nach Beispiel 1 gewonnenen Produkt.

Claims

PATENTANSPRUCH: Verfahren zur Darstellung eines neuen Hormons aus weiblichen, innersekretorisehen Organen, ausgehend von einem aus diesen Or ganen gewonnenen und von Phosphatiden, Cholesterin. Cholesterinester und Fetten be freiten, sowie zur Entfernung von Fettsäuren durch Behandlung mit Metallsalzen vor gereinigten Extrakt, dadurch gekennzeichnet, dass man eine Lösung dieses Extraktes in Petroläther zur restlosen Enfernung darin löslicher Metallseifen mit einem Elektrolyten behandelt,

dessen Kationen mit den ungesät tigten Fettsäuren und dessen Anionen mit dem in Petroläther gelösten Xation in Petrol- äther unlösliche Salze geben, und das so in hochkonzentrierter Form erhaltene Hormon reinigt. Die neue Substanz ist schwach hellgelb gefärbt und unter 0 kristallinisch. Gegen über Sauerstoff und Luft ist sie etwas emp findlich. Elementaranalyse und Molekulas- gewichtsbestimmung weisen auf die Formel C"H"02 hin.

Das' Hormon ist das Lakton einer Oxysäure mit einer Doppelbindung zwi schen dem 12. und 13. Kohlenstoffatom, was sowohl die Oxydation, als auch die. Ozoni- sierung beweisen. Die durch Aufspaltung des Laktons erhaltene Oxysäure erweicht bei 35 und schmilzt bei zirka 40'. Das neue Hormon ist in Methyla.Ikohol, Äthylalkohol, Äther, Petroläther und Benzol leicht löslich.

Es zeigt in Methylalkohol die optische DrehunLr EMI0003.0091 Das neue Hormon bewirkt in geringen Dosen starke Vergrösserung der weiblichen Sexualorgane und Auslösung der Brunst bei kastrierten Tieren. UNTERANSPRÜCHE: ?. Verfahren nach Patentanspruch, dadurch gekennzeichnet, dass man zur Reinigung das in hochkonzentrierter Form erhaltene Hormon ausfriert und aus einem passen den Lösungsmittel umlöst. 2.

Verfahren nach Patentanspruch, dadurch gekennzeichnet, dass man zur Reinigung das in hochkonzentrierter Form erhaltene Hormon in sein Bromadditionsprodukt überführt und dieses wieder entbromt. 3. Ausführung des Verfahrens nach Unter anspruch 2, dadurch gekennzeichnet, dass die Bromierung des Hormons in Eisessig lösung vorgenommen wird.

4. Ausführung des Verfahrens nach Unter- anspruch 2, dadurch gekennzeichnet, dass die Bromierung des Hormons in ätheri scher Lösung vorgenommen wird. 5. Ausführung des Verfahrens nach den Unteranosprüchen 2, 3 und 4., dadurch ge kennzeichnet, dass das Bro.madditionspro- dukt des Hormons mit verkupfertem Zink staub entbromt wird. 6.

Ausführung des Verfahrens nach den Unteraiis@prüchen 2, 3 und 4, dadurch ge kennzeichnet, dass das Broma.dditionspro- dukt des Hormons mit amalgamiertem Zinkstaub entbromt wird.