Verfahren zur Herstellung eines Kücken-Vitamin-D-präparates aus einem Steringemisch. Seit,es bekannt ist, dass Cholesterin kleine Mengen Provitamin-D enthält, hat man ver sucht,,dieses Provitamin-D-Sterin zu konzen trieren und so rein wie möglich zu isolieren.
Insbesondere nach .der Entdeckung von Waddell (Journ. of the Biol. Chemistry, Band 105, Juli 1934, Nr. 4, Seite 711/739), dass dieses Provitamin sich hinsichtlich der Aktivierbarkeit zu Kückenvitamin-D von pflanzlichem Ergosterin unterscheidet, ist die Herstellung .des praktisch reinen tierischen Provitamins-D bedeutungsvoll geworden.
Zur Konzentrierung dieses Provitamins hat man verschiedene Methoden anzuwenden versucht, z. B. fraktionierte Kristallisation, fraktio nierte Verdampfung im Hochvakuum, frak tionierte Extraktion des Digitoninkomplexes, fraktionierte Adsorption mit bestimmten Ad sorptionsstoffen. Keine dieser Methoden hat jedoch ein nennenswertes Resultat ,gehabt.
Es ist nun gefunden worden, dass es mög lich ist, ein gückenvitamin-D-Präparat zu er- halten, wenn man von einem Ester eines Pro vitamin-D enthaltenden.Steringemisches aus geht und den Provitamin-D-Glehalt durch fraktionierte Adsorption so weit, vorzugs weise bis mindestens 40 bis 50 %, steigert, dass diese @Steigerung mittels Umkristallisie- ren:
aus einem Lösungsmittel, zweckmässig aus Methylalkohol fortgesetzt werden kann, und nach idem Verseifen das so erhaltene konzentrierte Provitamin-D-Präparat be strahlt.
Für die Veresterung wird zweckmässig eine Säure gewählt, die an und für sich nicht zu einer besonders starken Adsorption An lass gibt, weil dadurch die Unterschiede in der Absorbierbarkeit der verschiedenen im Gemisch enthaltenen Sterine, wodurch .die Trennung überhaupt möglich wird, verdeckt werden könnten.
Vorzugsweise werden Steringemische als Ausgangsmaterial benutzt, die bereits einen ziemlich hohen Gehalt an Kückenprovita- min-,1) besitzen. Steringemische mit einem besonders hohen Gehalt können aus wirbel losen, Tieren, wie Salzwassermuscheln, Teich muscheln, Kreiselschnecken, Mehlwürmern. Erdschnecken, Wellhornschnecken, Regen würmern und andern erhalten werden.
Beil der Darstellung der für die Anwen dung der Erfindung zu benutzenden Aus- gangsmaterialien aus den obengenannten wirbellosen Tieren muss man dem Umstand Rechnung tragen, dass das Küekenprov ita- min-D ein verhältnismässig instabiler und gegen Sauerstoff empfindlicher Stoff ist.
Ein dafür geeignetes präparatives Ver fahren, bei dem für das Provitamin-D schäd liche Handlungen unterlassen werden, ist bei spielsweise das folgende: Die zu behandelnde gemahlene Masse wird entweder im Vakuum bei nur mässig erhöhter Temperatur (z.
B. etwa<B>50')</B> ge trocknet oder nach Zermahlen und gegebenen falls Zerreiben mdt Sand mittelst Na..,SO, Alkohol oder Aceton getrocknet. Alus dem auf diese Weise vorbehandelten Grundstoff wird dann da.s Fett extrahiert, wobei zweck mässig niedrig siedende Fettlösungsmittel, wie Äther oder Petrolä_ther, verwendet und zweckmässig halogenhaltige Extraktions mittel wie Chloroform oder Tetrachlorkohlen- stoff,
vermieden werden, da diese zur Bin dung von Salzsäure Anlass gehen können. Eine länger andauernde Berührung mit Äther ist zweckmässig zu vermeiden. da er häufig Peroxyd enthält oder wenigstens hei seiner Verwendung die Bildung von Peroxy den schwer ziz verhindern ist.
Ist der ('.rund- stoff mit Hilfe von Alkohol oder Aceton ge trocknet worden, so kann der darin gelöste Teil des Fettes durch Eindampfen des Lö- sungsmittels im Vakuum oder durch Extra hieren mit Äther oder Petroläther nach Ver dünnen mit )blasser gewonnen -erden. Die Fettlösung wird durch Filtrieren von gege benenfalls suspendierten Eiweissbestandteilen befreit und das Lösungsmittel durch Destillie ren entfernt.
Das Fett wird dann auf übliche Weise verseift, wobei zweckmässig wieder sehr hohe Temperaturen vermieden -erden und zum Beispiel eine Lösung von Na.OH oder KOH in wenigstens 80 % igem Alkohol verwendet wird.
Die Seifenlösung kann ge- wünschtenfalls durch Destillieren von einem Teil des Alkohols befreit werden. worauf der unverseifbare Teil entweder dadurch erhalten werden kann.
da.ss die Seifenlösung mit Wasser verdünnt und dann der unverseifbare Teil mit Hilfe von Äther oder Petroläther extrahiert wird, oder dass in der wässerigen Seifenlösung durch Behandlung mit einem Kalksalz die Kalkseifen niedergeschlagen und die zusammen mit den Kalkseifen nie.- dergeschlagenen unverseifbaren Bestandteile, z. B. mit Aceton, aus ihnen extrahiert wer den.
Aus dem auf diese Weise erhaltenen unverseifbaren Teil kann oft die Sterinfrak- tion durch Umkristallisieren. z. B. aus Al kohol, abgeschieden werden; zur weiteren Reinigung kann mit Erfolg eine Umkristal- lisierung aus Methylalkohol angewendet wer den. in dem bestimmte verunreinigende, z. B.
ölartige Stoffe oder farbige Lipoidbesta.nd- teile sehr wenig löslich sind. so dass sie auf diese Weise entfernt werden können. Insbe sondere in denjenigen Fällen, in denen die unverseifbaren Bestandteile erhebliche Men gen von Farbstoffen. wie Carotinoi.den, ent halten, kann unter dem Einfluss von Licht und Luft ein Teil des Provitamins verloren gehen; es ist daher erwünscht, auch diesem Umstand Rechnung zu tragen.
<I>Beispiel I:</I> 7 g eines 6,7% Provitaininacetat enthal tenden Sterinacetatgeinisehes, das aus einem aus Salzwassermuscheln (My tilus e@dulis) ge wonnenen Sterin hergestellt worden ist, wur den in 105 cm' eines Gemisches von Benzol und Petroläther (Siedepunkt -10 <B>-60'</B> C, Verhältnis 1 : 1) gelöst.
Die Lösung wurde auf eine aus<B>315</B> g Aluminiumoxyd nach Brockmann hergestellte Adsorptionssäule von 35 mm Durchmesser gegossen, die mit Pet_rol- äther vorbehandelt war. Die Herstellung einer solchen Adsorptionssäure ist in der Ar beit von A. Wintersteiner und G. Stein, Z. f. Physiol. Chem., Bd. 220, Seite 247 ff., <B>1933</B> beschrieben worden.
Nachdem die Lö sung in der Säule aufgenommen war, wurde mit im Ganzen<B>520</B> cm' Lösungsmittel (Ben- zol-Petroläther 1 : 1<B>,</B>) entwickelt.
Das gesamte Filtrat, 626 cm', enthielt 4;43<B>g</B> Acetat gemisch mit nur sehr wenig Provitaminacetat. Nach .Beendigung der Entwicklung wurden die obern 2 cm der Säule, die durch Verunrei nigungen gelblich gefärbt waren, mit einem Spatel vorsichtig entfernt und dann die ganze Säule mit 600 cm' Gemisches von Benzol und Methylalkob:ol (11:
1) eluiert. Das Eluat enthielt 2,51 g Acetatgemisch mit 1,5 % Pro,- vitamänacetat. 2,47 g dieses Präparates wur den in 317;5 cm3 Benzol-Petroläthergemisch (1 :
1) gelöst und damit eine zweite Adserp- tion vorgenommen (Säule aus 112,5 g A1203, 2,0 mm Durchmesser, ,200 cm' Entwicklungs,- flüssigkeit). Das Filtrat,<B>2137,5</B> cm' wurde verworfen, die obern 2 cm der Säule ent fernt, und der Rest der Säule mit 200 cm' Benzol-Methylalkoholgemisch (11, :
1) eluiert. Im Eluat befanden. sich O,7,8 g Aoetatgemisch mit etwa W % Provitaminacetat. Mit diesem Präparat wurde eine :dritte Adsorption vor genommen: 0,77 g wurden in 12 cm' Benzol- Petrol@äthergemis,ch (1 :
1) gelöst (Säule aus 36 g A1203, 11 mm Durchmesser, 115 cm' Entwicklungsflüssigkeit). Das Filtrat wurde in zwei Teilen gesondert aufgefangen;
die ersten 80 cm@, sowie die obern 2 cm der ,Säule wurden nach Vollendung der Entwicklung verworfen., die restlichen 9.7 cm' des Filtrates wurden mit dem mit 100 em3 Benzol-Methyl- alkoholgemisch <B>(11:</B> 1) gewonnenen F"luat vereinigt. Die Ausbeute .betrug 224 mg eines etwa V%igen Aoetatgemis,chm.
Dieses 57%ige Acetatgemisch wurde drei mal aus Methylalkohol (2-0, 15 und 12 cm') umkristallisiert, und ergab dann 49 mg gut kristallisiertes, Sterinacetat, dessen Absorp tionsspektrum zwischen 31002500 % . E praktisch dasselbe ist als beim Ergos terin- aoetat, das aber nach der Verseifung in be strahltem Zustande eine im Verhältnis zu bestrahltem Ergosterin sehr hohe antirachi tische Aktivität der Kücken hat.
Nach noch maliger Kristallisation aus Methylalkohol schmilzt es im evakui@erfen Schmelzpunkt- röhrchen bei 16,0'-1G1 , die Drehung be trägt [a] D = - 78 (in Benzol).
Aus diesem Acetat wird durch Versei fung und Kristallisation aus Methylalkohol ,das Sterin gewonnen. Es schmilzt im Va kuum bei 1:49;5 -15,0 C ([ä] D = 11$, [in Benzol]) sein Absorptionsspektrum un- terscheidet sich fast nicht von dem .des Ergo sterins. Das so erhaltene Präparat wird nun bestrahlt.
Beispiel II: 8 g eines aus Muscheln erhaltenen .Sterin- gemisches, das spektroskopisch gemessen, etwa<B>116</B> % Provitamin enthielt, wurden durch Behandlung mit 10 g Isobuttersäure- anhydrid und 20 cm@ Pyridin in das Iso- butyrat umgewandelt.
Nach anderthalbstün diger Erhitzung im Vakuum auf<B>11.0'</B> C wurde die Lösung abgekühlt und in 200 cm@ Alkoholgegossen. Das niedergeschlagene Ge misch von Isobutyraten wurde filtriert, mit kaltem Alkohol gewaschen bis es frei von Pyridin war und getrocknet. Ausbeute: 7,5 g.
7,45 .g dieses Isabutyratgemisches wurden in 105 em@eines Lösungsmittels gelöst, das aus gleichen Teilen: Benzol und Petroläther, bestand, Kochpunkt 40-G4 C. Diese Lö sung wurde in eine auf die im: Beispiel I an gegebene Weise aus 3'17 g A1203 hergestellte Adsorptionss ulegegossen;
die Säule wurde darauf mit<B>1960</B> cm' -Lösungsmittel ge- wa,sichen. Da der Provitaminester stärker ad- s6rbiert wurde, traten die Ester-der andern im Gemisch vorhandenen Sterine im Filtrat früher als der Provitaminester auf.
Durch Beobachtung,der Adsorpti.on des Filtrates in dem Gebiet zwischen 300,0 und 2i800 A (mit tels - einer photoelektrischen Cd-,Zelle mit Uviolglasfilter) liess sich leicht der Augen blick, in dem der Provitaminester im Filtrat zum Vorschein kam, sowie -der Augenblick seiner höchsten Konzentration feststellen.
Das Filtrat wurde .in drei Teilen aufgefangen; .der erste Teil wurde aufgefangen, bis, der Provitaminester 'erschien, der zweite Teil bis der Provitaminester seine höchste Kon- zentration erreichte und der dritte Teil bis der Provitaminester nahezu vollkommen aus der Säule gewaschen war.
Im vorliegenden Beispiel enthielten die ersten<B>375</B> ein' 0,62 g provitaminesterfreies Isobutyra.t, die folgen den 110 ein:' 4,50 g Isobutyrat mit etwa 7,5 % Provitaminester, ;
die letzten 1580 cm', 2,39 g Isobutyra-t mit .etwa 37,5 % Provitaminiso- butyrat. Diese 2,32 g, wurden in 8 cm' des Lösungsmittels gelöst und in dieselbe Säule gegossen, ihnen folgten 1455 cm' Lösungs- mittel. Das: Piitrat wurde wieder in Teilen aufgefangen;
die letzten 960 cm' enthielten 0,59 Isobutyra-tgemisch mit etwa 84% Pro- vita-minisobutyrat. 0,58 g des letzteren Ge misches wurden umkristallisiert, zunächst aus 50 cm' Äther-3iethylalkohol und dann aus 25 cm' Alkohol. Ausbeute 0,43g Provitamin- isobutyrat von 94 %. Der Provitamin-D-Ester wird hierauf verseift und das Verseifungsr produkt bestrahlt.
Reispiel <I>I11:</I> Aus etwa 8 kg Tubifex wurde auf die in der Beschreibung angegebene Weise die Sterinfraktion hergestellt.
Diese Sterinfrak- tion wurde durch Behandlung mit Essig- säurea.nhydrid und Pyri.din in das Acetat umgewandelt. Das erhaltene Aoetatgemisch wurde auf nahezu die gleiche Weise wie im Beispiel 1I einer fraktionierten Filtration durch eine Adsorptionssäule aus A1=0, unter- worfen. Aus 12;
5 g Acetatgemisch mit 2'4 Provitaminacetat wurde nach einer einzigen Behandlung eine Fraktion von 5,10 g mit etwa 47% Provitaminacetat erhalten. Diese Fraktion wurde für die zweite Behandlung benutzt, durch -die eine Fraktion von 3,12, g mit etwa <B>6,2%</B> Provitaminacetat erhalten wurde. Diese Fraktion wurde abermals einer ähnlichen Behandlung unterworfen;
die stärkste Fraktion, die erhalten wurde, im Gewicht von 1,11 g, enthielt etwa 83 % Pro- vitaminacetat. Dieses Präparat wurde ans Methylalkohol umkristallisiert. Ausbeute: 0,97 g mit 91 % Provitaminacetat. Nach einer wiederholten Umkristallisierung aus Methyl alkohol ergab sich, dass der Provitaminacetat- gehalt bis zu 96 % angestiegen war.
Der Pro- vitamin-D-Ester wird hierauf verseift.
Zur Herstellung eines Lückenvitamin D- Präparates wird das erhaltene konzentrierte Provita.min-D-Präparat bestrahlt.
Process for the production of a chicken vitamin D preparation from a sterling mixture. Ever since it was known that cholesterol contains small amounts of provitamin-D, attempts have been made to concentrate this provitamin-D-sterol and isolate it as pure as possible.
In particular after the discovery of Waddell (Journ. Of the Biol. Chemistry, Volume 105, July 1934, No. 4, Pages 711/739) that this provitamin differs from vegetable ergosterol in terms of its ability to be activated to give chick vitamin-D Production of the practically pure animal provitamins-D has become significant.
Attempts have been made to use various methods to concentrate this provitamin, e.g. B. fractional crystallization, fraktio nated evaporation in a high vacuum, fractional extraction of the digitonin complex, fractional adsorption with certain adsorbents. However, none of these methods has had any significant result.
It has now been found that it is possible to obtain a good vitamin D preparation if one starts with an ester of a sterine mixture containing pro vitamin D and the provitamin D balance by fractional adsorption so far , preferably up to at least 40 to 50%, increases that this @increase by means of recrystallization:
can be continued from a solvent, expediently from methyl alcohol, and after idem saponification the concentrated provitamin D preparation thus obtained be irradiated.
For the esterification, an acid is expediently chosen which in and of itself does not give rise to particularly strong adsorption, because this could mask the differences in the absorbability of the various sterols contained in the mixture, which would make the separation possible at all.
Preferably, the starting material used is sterling mixtures which already have a fairly high content of chicken provita- min 1). Stering mixtures with a particularly high content can be obtained from invertebrates, animals such as saltwater clams, pond clams, top snails, mealworms. Earth snails, whelks, rain worms and others can be preserved.
In the presentation of the starting materials to be used for the application of the invention from the above-mentioned invertebrates, one must take into account the fact that the chick provitamin-D is a relatively unstable and oxygen-sensitive substance.
A suitable preparative method in which actions harmful to provitamin-D are omitted is, for example, the following: The ground mass to be treated is either in a vacuum at only moderately increased temperature (e.g.
B. about <B> 50 ') </B> dried or dried after grinding and, if necessary, grinding with sand using Na .., SO, alcohol or acetone. The fat is then extracted from the raw material pretreated in this way, with low-boiling fat solvents such as ether or petroleum ether being used, and halogenated extraction agents such as chloroform or carbon tetrachloride,
should be avoided, as this can lead to the binding of hydrochloric acid. Long-term contact with ether is advisable to avoid. since it often contains peroxide, or at least when it is used, the formation of peroxy is difficult to prevent.
If the raw material has been dried with the help of alcohol or acetone, the part of the fat dissolved in it can be made paler by evaporating the solvent in vacuo or by extracting it with ether or petroleum ether after diluting it with). earth. The fat solution is freed from any suspended protein constituents by filtration and the solvent is removed by distillation.
The fat is then saponified in the usual way, again avoiding very high temperatures and using, for example, a solution of Na.OH or KOH in at least 80% alcohol.
The soap solution can, if desired, be freed from some of the alcohol by distillation. whereupon the unsaponifiable part can either be obtained thereby.
that the soap solution is diluted with water and then the unsaponifiable part is extracted with the aid of ether or petroleum ether, or that the lime soaps are precipitated in the aqueous soap solution by treatment with a lime salt and the unsaponifiable components that are never precipitated together with the lime soaps, e.g. . B. with acetone, extracted from them who the.
The sterol fraction can often be recrystallized from the unsaponifiable part obtained in this way. z. B. from alcohol, deposited; For further purification, recrystallization from methyl alcohol can successfully be used. in which certain contaminants, e.g. B.
oily substances or colored lipoid constituents are very sparingly soluble. so that they can be removed that way. In particular, in those cases in which the unsaponifiable constituents contain considerable amounts of dyes. like carotenoids, some of the provitamin can be lost under the influence of light and air; it is therefore desirable to take this fact into account as well.
<I> Example I: </I> 7 g of a 6.7% provitainin acetate-containing sterol acetate gel, which has been produced from a sterol obtained from saltwater mussels (My tilus e @ dulis), were in 105 cm 'of a mixture of Benzene and petroleum ether (boiling point -10 <B> -60 '</B> C, ratio 1: 1) dissolved.
The solution was poured onto an adsorption column of 35 mm diameter made from 315 g of Brockmann aluminum oxide, which had been pretreated with Pet_rol ether. The production of such an adsorption acid is in the work of A. Wintersteiner and G. Stein, Z. f. Physiol. Chem., Vol. 220, page 247 ff., <B> 1933 </B>.
After the solution had been taken up in the column, a total of 520 cm 'solvent (benzene-petroleum ether 1: 1) was developed.
The entire filtrate, 626 cm ', contained 4; 43 g of acetate mixture with only very little provitamin acetate. After the development had ended, the upper 2 cm of the column, which had been colored yellow by impurities, was carefully removed with a spatula and then the whole column was filled with a 600 cm mixture of benzene and methyl alcohol (11:
1) eluted. The eluate contained 2.51 g of acetate mixture with 1.5% pro-vitamin acetate. 2.47 g of this preparation were in 317; 5 cm3 benzene-petroleum ether mixture (1:
1) and a second adsorption was carried out with it (column of 112.5 g A1203, 2.0 mm diameter, “200 cm” developing liquid). The filtrate, <B> 2137.5 </B> cm 'was discarded, the top 2 cm of the column removed, and the rest of the column with 200 cm' benzene-methyl alcohol mixture (11,:
1) eluted. Found in the eluate. 0.7.8 g of acetate mixture with about W% provitamin acetate. A third adsorption was carried out with this preparation: 0.77 g were dissolved in 12 cm 'Benzol-Petrol @ äthergemis, ch (1:
1) dissolved (column of 36 g A1203, 11 mm diameter, 115 cm 'developing liquid). The filtrate was collected separately in two parts;
The first 80 cm @ and the top 2 cm of the column were discarded after development was complete. The remaining 9.7 cm of the filtrate were mixed with the benzene-methyl alcohol mixture containing 100 cubic meters of benzene-methyl alcohol <B> (11: </B> 1) The product obtained was combined. The yield was 224 mg of an approximately V% strength acetate mixture, chm.
This 57% acetate mixture was recrystallized three times from methyl alcohol (2-0, 15 and 12 cm '), and then gave 49 mg of well-crystallized sterol acetate, the absorption spectrum of which was between 31002500%. E is practically the same as that of ergosterol acetate, which, however, after saponification in the irradiated state, has a very high antiracial activity in the chickens in relation to irradiated ergosterol.
After another crystallization from methyl alcohol, it melts in the evacuated melting point tube at 16.0'-1G1, the rotation is [a] D = -78 (in benzene).
The sterol is obtained from this acetate by saponification and crystallization from methyl alcohol. It melts in a vacuum at 1:49; 5 -15.0 C ([ä] D = 11 $, [in benzene]) its absorption spectrum is almost indistinguishable from that of ergonene. The preparation obtained in this way is then irradiated.
Example II: 8 g of a sterine mixture obtained from mussels, which, measured spectroscopically, contained about 116% provitamin, was converted into isobutyrate by treatment with 10 g isobutyric anhydride and 20 cm @ pyridine converted.
After one and a half hours of heating in vacuo to <B> 11.0 '</B> C, the solution was cooled and poured into 200 cm @ alcohol. The precipitated mixture of isobutyrates was filtered, washed with cold alcohol until free of pyridine and dried. Yield: 7.5 g.
7.45 .g of this isabutyrate mixture were dissolved in 105 em @ of a solvent which consisted of equal parts: benzene and petroleum ether, boiling point 40-G4 C. This solution was in a manner given in: Example I from 3 17 g of A1203 produced adsorption ule poured;
the column was then washed with <B> 1960 </B> cm 'solvent. Since the provitamin ester was more strongly adsorbed, the esters of the other sterols present in the mixture appeared in the filtrate earlier than the provitamin ester.
By observing the adsorption of the filtrate in the area between 300.0 and 2800 Å (using a photoelectric Cd cell with uviol glass filter) it was easy to see when the provitamin ester appeared in the filtrate, as well - determine the moment of your highest concentration.
The filtrate was collected in three parts; The first part was collected until 'the provitamin ester' appeared, the second part until the provitamin ester reached its highest concentration and the third part until the provitamin ester was almost completely washed out of the column.
In the present example, the first 375 contained a 0.62 g provitaminester-free isobutyra.t, followed by the 110: 4.50 g isobutyrate with about 7.5% provitamin ester,;
the last 1580 cm ', 2.39 g isobutyra-t with about 37.5% provitamin isobutyrate. These 2.32 g were dissolved in 8 cm "of the solvent and poured into the same column, followed by 1455 cm" of solvent. That: Piitrat was collected again in parts;
the last 960 cm 'contained 0.59 isobutyrate mixture with about 84% provita-minisobutyrate. 0.58 g of the latter mixture were recrystallized, first from 50 cm 'ether-3iethyl alcohol and then from 25 cm' alcohol. Yield 0.43 g provitamin isobutyrate of 94%. The provitamin D ester is then saponified and the saponification product is irradiated.
Example <I> I11: </I> The sterol fraction was prepared from about 8 kg of Tubifex in the manner indicated in the description.
This sterol fraction was converted into the acetate by treatment with acetic anhydride and pyridine. The acetate mixture obtained was subjected to fractional filtration through an adsorption column composed of A1 = 0 in almost the same manner as in Example 11. From 12;
After a single treatment, a fraction of 5.10 g with approximately 47% provitamin acetate was obtained after 5 g of an acetate mixture with 24% provitamin acetate. This fraction was used for the second treatment, by which a fraction of 3.12 g was obtained with about 6.2% provitamin acetate. This fraction was again subjected to a similar treatment;
the largest fraction that was obtained, weighing 1.11 g, contained about 83% pro-vitamin acetate. This preparation was recrystallized from methyl alcohol. Yield: 0.97 g with 91% provitamin acetate. After repeated recrystallization from methyl alcohol it was found that the provitamin acetate content had increased by up to 96%.
The pro-vitamin D ester is then saponified.
To produce a gap vitamin D preparation, the concentrated Provita.min-D preparation obtained is irradiated.