CH246130A - Procédé pour la préparation de substances antibactérielles à partir de ferments. - Google Patents

Description

  Procédé pour la préparation de substances     antibactérielles    à partir de ferments.    Cette invention se rapporte à un procédé  de préparation de substances     antibactérielles     à partir de ferments et concerne particulière  ment, mais     non    exclusivement, un procédé  pour préparer des substances     antibactérielles     (glucose     aérodéhydrogénase)    provenant     d'une     espèce particulière de     Penicillium        notatum          Westling.     



  Il est bien connu que certains ferments,  lorsqu'ils croissent dans des conditions dé  terminées, produisent des     subtauces    dont  quelques-unes ont des propriétés     antibacté-          rielles;    un certain nombre de celles-ci ont  été isolées dans des solutions filtrées du pro  duit du métabolisme des ferments et quel  ques-unes d'entre elles ont été     reconnues    pour  avoir des propriétés thérapeutiques.  



  Plusieurs de ces produits provenant de  ferments ont une structure relativement sim  ple. Par contre, d'autres sont plus complexes.  Certains de ces produits peuvent être isolés    par des méthodes simples sans perte     d'activité     biologique, mais d'autres ont tendance à per  dre la leur très rapidement, en sorte que  l'isolement de produits actifs à l'état solide  est d'une difficulté     extraordinaire.     



       Il    a été trouvé que, si l'on ajoute à des solu  tions des produits du métabolisme de ferments       certains    réactifs de nature acide, par exemple  certains de ceux qui précipitent les protéines,  comme l'acide picrique, l'acide     phosphotungs-          tique    et l'acide     tannique,    ces précipitants  forment avec les substances     antibactérielles,     qui sont de caractère très légèrement     basique,     des composés complexes peu solubles.

   Ces  produits complexes peuvent eux-mêmes avoir  des propriétés     antibactérielles    ou peuvent  être décomposés par un traitement subséquent  pour fournir des substances solides actives et  à l'état stable.  



  La présente invention se réfère à un pro  cédé pour la préparation d'une substance bac-           téricide    à partir de ferments, procédé selon  lequel on mélange avec une solution filtre  des produits du métabolisme contenant     une     substance     active    de caractère légèrement ba  sique, un réactif acide qui précipite la  substance     antibactérielle        sous    forme d'un  composé complexe avec l'agent précipitant, sé  pare ce produit complexe du liquide, et régé  nère     ladite    substance     antibactérielle    par dé  composition dudit complexe.  



  La substance     antibactérielle,    après sépa  ration de l'agent précipitant, peut être séchée,  par exemple dans     un    dessiccateur à vide sur  du charbon actif.  



  Les agents précipitant les protéines don  nant de bons résultats sont l'acide de     Rei-          necke,        NH4[Cr(NH3)a(SCN)4],    l'acide tanni  que et l'acide     flavianique    (jaune naphtol S).  L'acide     rufianique        (Quinizarine        2-sulfoni-          que)    donne des résultats     un    peu moins bons.

    L'acide tannique et l'acide de     Reinecke    sont  spécialement     indiqués,        puisque    les composés  complexes obtenus avec eux sont facilement  décomposés si l'on ajoute un excès de solvant  du     réactif        utilisé.    Le précipitant libéré est       dissous.    La substance     antibactérielle    peut  être obtenue sous forme de poudre qui peut  rapidement être séchée. Ainsi, si l'on décom  pose le complexe obtenu avec l'acide tannique  par traitement avec de l'acétone, on obtient  la substance     active    dans le précipité restant.

    De tels produits     secs    agissent in vitro contre  le     staphylococcus        aureus    à des dilutions su  périeures à 1 pour 400 millions en présence  d'air et de glucose ou d'autres sucres con  venables.  



       Il    va sans dire que le produit que l'on uti  lise pour précipiter les protéines doit être  choisi en fonction de la nature du produit à  précipiter et de la concentration de la  substance     antibactérielle    dans chaque solu  tion de produits de métabolisme particulier.       Ainsi,    l'acide     trichloracétique    n'est pas un  bon réactif pour la préparation,     parce    que la  solubilité du composé complexe est trop  grande.  



       Il    est, en outre, évident qu'il est nécessaire  de faire un simple essai préliminaire, afin de    s'assurer si un réactif pour     l'insolubilisation     de telle protéine particulière peut être utilisé  pour la précipitation d'un composé complexe  bactéricide provenant d'une solution particu  lière de produits du métabolisme.  



  On trouvera ci-dessous, .à titre d'exemple,  une description de deux     manières    de réaliser  l'invention:  <I>Exemple 1:</I>  100 litres d'une solution de produits de  métabolisme, préparée     conformément    à la mé  thode indiquée dans le brevet No 238922 et  possédant des propriétés     antibactérielles,    sont  séparés par filtration du ferment et au filtrat  est ajoutée une solution de 100 grammes  d'acide tannique dans un litre d'eau. Le  liquide trouble obtenu est centrifugé dans  une machine à centrifuger     Sharples    et la li  queur claire A qui en provient, mise de côté.

    Le dépôt pâteux brun sombre de complexes  laissé à l'intérieur, est traité avec de l'acé  tone, ce qui sépare l'acide tannique du com  plexe et le     dissout.    Le produit     antibactériel     reste sous forme d'une poudre brun clair qui  est facilement retirée du produit centrifugé  par un excès d'acétone (volume total environ  1 litre). La majeure partie de l'acétone est  alors décantée et ce qui est insoluble est sé  paré par centrifugation de la suspension rési  duaire. Ce produit solide est agité avec une  nouvelle quantité d'acétone, séparé et traité  avec 150     cm@    d'eau.

   Une portion     I3,    peu so  luble, est éliminée par centrifugation et la  liqueur claire est précipitée par une solution  de 5 g d'acide tannique dans 50 cm' d'eau.  Le précipité séparé de la liqueur C par cen  trifugation est dissocié par lavage avec l'acé  tone, comme cela. a été décrit     ci-dessus.    Une  purification ultérieure est effectuée en     r6pé-          tant    l'extraction avec 50 cm' d'eau (qui  abandonne un résidu insoluble D), en préci  pitant avec 2 g d'acide tannique dans 20 cm?  d'eau, en séparant le précipité (liqueur     sur-          nageante    E) et en dissociant avec l'acétone.

    Le produit, qui est un     aérodéhydrogénase    de  glucose, est finalement lavé plusieurs fois  avec l'acétone et séché 20 minutes dans un  dessiccateur à vide sur du charbon actif. Le      produit sec est actif in vitro contre le staphy  locoque     aureus    à des dilutions pouvant aller  jusqu'à 1 dans 400 millions en présence d'air  et de glucose ou tout autre sucre convenable.  



  Une nouvelle quantité de substance active  peut être obtenue en traitant les différents  précipités et liqueurs comme suit:  Tout précipité nouvellement obtenu de la  liqueur A reposée est séparé, traité par l'acé  tone, et le résidu est ajouté au précipité B.  La partie solide nouvelle est extraite avec de  l'eau et l'extrait, avec la liqueur C, est traité  avec une nouvelle quantité d'acide     tannique.     Le précipité ainsi obtenu est séparé, dissocié  avec l'acétone et le résidu ajouté au préci  pité D. Ces parties solides nouvellement obte  nues sont extraites avec de l'eau, et l'extrait  mélangé avec la liqueur E est précipité avec  de l'acide tannique. Le précipité est alors sé  paré, traité avec de l'acétone et séché, comme  précédemment, dans un dessiccateur à vide sur  du charbon actif.  



  <I>Exemple 2:</I>  100 cm' d'une solution     concentrée    conte  nant de la substance     antibactérielle    (obtenue  par évaporation sous pression réduite de 75  litres de bouillon de culture préparé con  formément aux spécifications du brevet  Ne 288922     jusqu'à    ce que le volume     atteigne     15 litres, et par trois précipitations avec  l'acétone et dissolution du précipité séparé),  sont mélangés à une solution de 2 g de sel  de     Reinecke    dans 90 cm' d'eau. La solution  est refroidie dans de la glace et acidifiée à un  pH de     3,5-4    avec une solution N d'acide acé  tique.

   Ou bien, la solution de sel de     Reinecke     peut d'abord .être acidifiée avec l'acide acéti  que N jusqu'au<B>pi,</B> 3 pour libérer l'acide de       Reinecke    et alors mélangée au produit con  centré. II se forme un précipité rosâtre qui  est rassemblé par centrifugation, et la solu  tion surnageante rouge est décantée et jetée.  Le résidu solide est mis en suspension dans  20 ou 30 cm' d'eau et la solution trouble cla  rifiée en centrifugeant. La substance     anti-          bactérielle    en solution est précipitée de la  solution     surnageante    avec 3 volumes d'acé-         tone,    le tout     étant    refroidi à la glace.

   Le pré  cipité est traité comme cela a été décrit dans  l'exemple 1. Le rendement et     l'activité    du  produit correspondent à ceux du produit  obtenu par le procédé décrit dans l'exemple 1.

Claims (1)

1. REVENDICATION Procédé pour la préparation d'une subs tance antibactérielle à partir de ferments, caractérisé par le fait que l'on mélange une solution filtrée de produits de métabolisme de ferments contenant une substance active de caractère faiblement basîque, avec un réactif acide qui précipite la substance anti- bactérielle sous forme d'un produit com plexe, côntenant l'agent précipitant, et régé nère ladite substance active par décomposi tion dudit complexe. SOUS-REVENDICATIONS 1.

   Procédé selon la revendication, carac térisé par le fait que la décomposition du produit complexe est effectuée par un réac tif qui dissout la matière précipitante. 2. Procédé selon la revendication et la sous-revendication 1, caractérisé par le fait que la substance antibactérielle est obtenue d'une solution contenant les produits de mé tabolisme de colonies de Penicillium nota- tum Westling. 3. Procédé selon la revendication et les sous-revendications 1 et 2, caractérisé par le fait que l'agent précipitant la substance antibactérielle est un agent précipitant les protéines. 4.

   Procédé selon la revendication et les sous-revendications 1 .à 3, caractérisé par le fait que la substance antibactérielle est pré cipitée par addition d'acide picrique. 5. Procédé selon la revendication et les sous-revendications 1 à 3, caractérisé par le fait que la substance antibactérielle est précipitée par addition d'acide phospho- tungstique. 6. Procédé selon la revendication et les sous-revendications 1 à 3, caractérisé par le fait que la substance antibactérielle est pré cipitée par addition d'acide tannique. 7.

   Procédé selon la revendication et les sous-revendications 1 à 3, caractérisé par le fait que la substance antibactérielle est pré cipitée par addition de l'acide de Reinecke. 8. Procédé selon la revendication et les sous-revendications 1 à 3, caractérisé par ie fait que la substance antibactérielle est pré cipitée par addition d'acide flavianique. 9.

   Procédé selon la revendication et les sous-revendications 1 ;à 3, caractérisé par le fait que la substance antibactérielle est pré cipitée par addition d'acide rufianique. 10. Procédé selon la revendication et les sous-revendications 1 à 3 et 6, caractérisé par le fait que la substance antibactérielle est libérée du complexe formé par la substance antibactérielle et l'acide tannique par trai tement par l'acétone. 11.

   Procédé selon la revendication et les sous-revendications 1 à 3 et 7, caractérisé par le fait que la substance antibactérielle .est libérée du complexe formé par celle-ci et l'acide de Reinecke par traitement par l'eau et précipitée de la solution aqueuse en ajou tant de l'acétone. 12. Procédé selon la revendication et les sous-revendications 1 à 3, caractérisé par le fait qu'on purifie la substance antibactérielle en répétant plusieurs fois la formation et décomposition du composé complexe.