Verfahren zur Herstellung reiner Polsäure. Die Gewinnung reiner Polsäure ist ein schwieriges Problem; so bietet die Trennung der Polsäure von den bei der Synthese (z. B. aus Pteridylaldehyd und p-Amino-benzoyl- glutaminsäure) vorhandenen oder entstehen den Begleitsubstanzen vor allem deswegen Schwierigkeiten, weil letztere in bezug auf Salzbildung und Löslichkeit sehr änhliche Eigenschaften besitzen wie die Polsäure (beide sind sehr schwer löslich), und weil die Be gleitsubstanzen eine ausgeprägte Fähigkeit zur Adsorption der Polsäure aufweisen.
Es wurde nun gefunden, dass die Gewin nung reiner Polsäure auf verhältnismässig ein fache Weise dadurch gelingt, dass man Formyl- folsäure einer Reinigung unterwirft und die reine Formylfolsäure zu Polsäure hydrolysiert. Die Reinigung der in verschiedenen Lösungs mitteln, wie z.
B. Ameisensäure, Äthylengly- kol, Glyzerin und Wasser, löslichen Formyl- folsäure kann beispielsweise durch Extraktion eines formylfolsäurehaltigen, Rohproduktes mit einem Gemisch aus Äther und Ameisensäure oder durch fraktionierte Fällung mit Äther aus einer Lösung des Rohproduktes in kon zentrierter Ameisensäure oder durch fraktio nierte Kristallisation, z. B. aus Wasser, be werkstelligt werden.
Die Verseifung der ge reinigten Formylfolsäure zu Polsäure muss unter schonenden Bedingungen vorgenommen werden, damit eine Spaltung der -CHi NH- Bindung vermieden wird; die Hydrolyse ge lingt z. B. durch Einwirkung wässeriger Alka- lien oder verdünnter Mineralsäuren bei Zim mertemperatur.
Die Formylsäure, welcher nach T. D. Spiess und Mitarbeiter, Blood Vol. III, Nr.1, Seite 121 (1948)
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zukommen dürfte, kann durch Formy lierung von Polsäure nach einer üblichen -Methode ge wonnen werden; sie ist. auch durch Konden sation von Pteridylaldehy d und p-Amino- benzoyl - glutaminsäure in Gegenwart von Ameisensäure erhältlich.
<I>Beispiel 1:</I> ?0 Gewichtsteile eines Gemisches, welches etwa 501/o Formylfolsäure enthält (wie es aus der Synthese anfällt), werden in 100 Raumteilen konzentrierter Ameisensäure kalt gerührt. Nach etwa 10 Minuten gibt man 90 Raumteile Äther zu, wodurch die schwerer löslichen Begleitsubstanzen ausgefällt werden. Man filtriert und wiederholt die gleiche Operation noch zweimal mit dem Füterrüek- stand mit, je 100 Raumteilen Ameisensäure und 90 Raumteilen Äther.
Die vereinigten Filtrate werden nun mit Äther versetzt, bis keine weitere Fällung mehr entsteht. Nach Filtrieren und gründlichem Auswaschen des Rückstandes mit Äther erhält man 8 Gewichts teile Formylfolsäure. Diese wird in 40 Raum teilen wässeriger 3 n-Natronlauge gelöst, wobei spontan Verseifung stattfindet. Die Lösung wird mit 100 Teilen Wasser verdünnt und mit 5 Gewichtsteilen aktiver Tierkohle ge schüttelt, filtriert und in 4000 Teile Wasser von 90 gegossen.
Nach Ansäuern mit Essigsäure auf etwa pg 3,8 fällt die Folsäure beim Er kalten in Form von Nadeln und Rosetten aus. Ausbeute etwa 6 Gewichtsteile. <I>Beispiel 2:</I> 20 Gewichtsteile eines Gemisches, welches 20 % Folsäure enthält, werden in 100 Raum- teilen Ameisensäure 5 Minuten gekocht und gerührt, wodurch die Folsäure formyliert wird.
Nach dem Abkühlen wird die Lösung mit 100 Raumteilen Äther versetzt; der dabei anfallende Niederschlag wird abfiltriert, mit 100 Raiunteilen konzentrierter Ameisensäure gerührt und durch Zusatz von 100 Raum teilen Äther wieder ausgefällt. Die vereinig ten Äther-Ameisensäurelösungen werden wie in Beispiel 1 weiterverarbeitet. Man erhält so 3 Gewichtsteile Formylfolsäure, welche wie in Beispiel 1 verseift werden.
Process for the production of pure poly acid. Obtaining pure poly acid is a difficult problem; Thus, the separation of the polyacid from those present during the synthesis (e.g. from pteridylaldehyde and p-amino-benzoylglutamic acid) presents difficulties or the accompanying substances cause difficulties mainly because the latter have very similar properties to salt formation and solubility the poly acid (both are very sparingly soluble), and because the Be gleitsubstanzen have a pronounced ability to adsorb the poly acid.
It has now been found that pure poly acid can be obtained in a relatively simple manner by subjecting formyl folic acid to purification and hydrolyzing the pure formyl folic acid to poly acid. The cleaning of the medium in various solvents, such as.
B. formic acid, ethylene glycol, glycerol and water, soluble formyl folic acid can be obtained, for example, by extracting a crude product containing formylfolic acid with a mixture of ether and formic acid or by fractional precipitation with ether from a solution of the crude product in concentrated formic acid or by fractionated Crystallization, e.g. B. from water, be made.
The saponification of the purified formylfolic acid to poly acid must be carried out under mild conditions so that cleavage of the -CHi NH- bond is avoided; the hydrolysis succeeds z. B. by the action of aqueous alkali or dilute mineral acids at room temperature.
The formylic acid, which according to T. D. Spiess and coworkers, Blood Vol. III, Nr.1, page 121 (1948)
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is likely to come, can be obtained by formylation of poly acid by a conventional method; she is. also available by condensation of pteridylaldehyde and p-aminobenzoyl - glutamic acid in the presence of formic acid.
<I> Example 1: </I>? 0 parts by weight of a mixture which contains about 501 / o formylfolic acid (as it is obtained from the synthesis) are stirred in 100 parts by volume of concentrated formic acid while cold. After about 10 minutes, 90 parts by volume of ether are added, which causes the less soluble accompanying substances to be precipitated. It is filtered and the same operation is repeated twice more with the remains of the food with 100 parts by volume of formic acid and 90 parts by volume of ether.
The combined filtrates are then mixed with ether until no further precipitation occurs. After filtering and thoroughly washing the residue with ether, 8 parts by weight of formylfolic acid are obtained. This is dissolved in 40 room parts of aqueous 3N sodium hydroxide solution, with spontaneous saponification taking place. The solution is diluted with 100 parts of water and shaken ge with 5 parts by weight of active animal charcoal, filtered and poured into 4000 parts of 90 water.
After acidification with acetic acid to about pg 3.8, the folic acid precipitates out in the form of needles and rosettes when it is cold. Yield about 6 parts by weight. Example 2: 20 parts by weight of a mixture containing 20% folic acid are boiled in 100 parts by volume of formic acid for 5 minutes and stirred, whereby the folic acid is formylated.
After cooling, 100 parts by volume of ether are added to the solution; the resulting precipitate is filtered off, stirred with 100 parts of concentrated formic acid and precipitated again by adding 100 parts of ether. The combined ether-formic acid solutions are processed as in Example 1. This gives 3 parts by weight of formylfolic acid, which are saponified as in Example 1.