CH297190A

CH297190A - Verfahren zur Herstellung eines blutgerinnungshemmenden Mittels.

Info

Publication number: CH297190A
Authority: CH
Inventors: F Hoffmann- Aktiengesellschaft
Original assignee: Hoffmann La Roche
Priority date: 1951-07-12
Filing date: 1951-07-12
Publication date: 1954-03-15

Description

Verfahren zur Herstellung eines blutgerinnungshemmenden Mittels.

Die vorliegende Erfindung betrifft die Herstellung eines blutgerinnungshemmenden Mittels durch ein Verfahren, welches dadurch gekennzeichnet ist, dass man Chondroitin- schwefelsäure hydrolytisch auf eine Viskositätszahl (Zy) unter 0,25 (Konzentration in gllO0 cm" und Viskositätszahl gemessen in 0, in NaGl-Lösung) abbaut und die erhaltene Verbindung durch Sulfierung in einen Polyschwefelsäureester überführt.

Nach dem neuen Verfahren wird zunächst Chondroitinschwefelsäures beispielsweise aus Knorpel nach der Vorschrift von K. H. Meyer et al. (Helvetica ChimicaActa, Band 31 [1948], Seite 1402) hergestellt, vorzugsweise mit verdünnten Mineralsäuren, zum Beispiel Salzsaure, hydrolytisch abgebaut. Bei diesem Abbau wird vor allem der Polymerisationsgrad verringert, indem die Glukosidbindungen der Monosaccharid-Einheiten gespalten werden; es tritt dabei jedoch auch eine teilweise Desacetylierung und Desulfierung ein, so dass das hydrolytisch abgebaute Produkt nicht mehr als Chondroitinschwefelsäure angesprochen werden kann. Um einen gezielten, reproduzierbaren Abbaugrad zu erhalten, müssen die Abbaureaktionsbedingungen so gewählt werden, dass das Fortschreiten des Abbaues viskosimetrisch verfolgt werden kann.

Dies geschieht beispielsweise dadurch, dass man eine 5% ige wässerige Lösung von Chondroitinschwefelsäure in einem Rührkolben im Thermostaten auf 65" C erhitzt, mit dem zweihunderteten Raumteil konzentrier- ter Salzsäure versetzt und den Abbaugrad laufend durch Viskositätsproben verfolgt.

Nach Erreichen einer relativen Viskosität der Abbaulösung Wrel etwa 2,6 und weniger (je nach dem gewünschten Abbaugrad), wird die Hydrolyse durch Neutralisieren der Reaktionslösung mit Alkali unterbrochen. Die neutralisierte Reaktionslösung kann hierauf durch Dialyse oder eine andere gleich wirkende Operation entsalzt, unter vermindertem Druck auf ein geringes Volumen eingedampft und mit einem Fällungsmittel, wie zum Beispiel Alkohol oder Aceton, ausgefällt und getrocknet werden. Dieses Abbauprodukt besitzt eine Viskositätszahl (Z) zwischen 0,25 und 0,10, wenn die Abbaulösung ein oder zwischen 2,6 und 2,0 hatte.

(Dabei ist die Konzentration in g/100 cm3 angegeben und die Viskositätszahl in einer Lösung von 0,5n NaCl bei 25 C gemessen.)
Die Sulfierung kann nach einer an sich bekannten Methode durchgeführt werden, zum Beispiel in der Weise, dass man das abgebaute Produkt in ein etwa 70" 0 warmes Gemisch von Chlorsulfonsäure und Pyridin unter Rühren einträgt. Dabei ist es von Vorteil, mit der Reaktionstemperatur nicht wesentlich über 80 C zu gehen, da dadurch der Polymerisationsgrad des Endproduktes und damit seine Viskositätszahl beeinflusst werden kann.

Die Sulfierung kann auch mittels SO3, Oleum, usw. und andern organischen Basen als Pyridin, wie beispielsweise Chinolin, a-Picolin usw., durchgeführt werden,
Die Isolierung des sulfierten Produktes geschieht mit Vorteil in der Weise, dass man die abgekühlte Reaktionsmischung mit Eis versetzt und die erhaltene wässerige Lösung mit Alkohol fällt; sodann wird das ausgefällte Pyridinsalz in Wasser gelöst, mit Alkali, zum Beispiel Natronlauge, in das Alkalisalz übergeführt und erneut mit Alkohol gefällt.

Zwecks Reinigung kann das rohe Natriumsalz in ein schwerlösliches Alkaloidsalz, zum Beispiel in das Narcotinsalz, übergeführt werden, indem man die wässerige Lösung des Natriumsalzes mit Narcotinhydrochloridlösung versetzt und das ausgefällte Narcotinsalz durch Filtration isoliert; nach Auswaschen des Niederschlages wird das Nar cotinsalz mittels Soda in das Natriumsalz zurückgeführt und durch Umfällen gereinigt.

Der so erhaltene Polyschwefelsäureester ist ein farbloses bis leicht gefärbtes Pulver, welches sehr gut wasserlöslich ist. Er besitzt eine ausgezeichnete gerinnungshemmende Aktivität in vitro und in vivo, und seine Toxizität ist überraschenderweise nur von der Grössenordnung derjenigen des Heparins. Für Injektionszwecke verwendet man vorzugsweise Lösungen der Alkalisalze der neuen Verbindung.

Beispiel:
100 Gewichtsteile Chondroitinschwefelsäure werden mit Wasser ad 2000 Raumteilen gelöst und im Thermostaten auf 650 C erhitzt.

Dann wird mit 40 Raumteilen konzentrierter Salzsäure versetzt und bei 650 C gerührt. Sobald die relative Viskosität einen Wert von 2,3 erreicht hat, wird die Wärmequelle entfernt und der Abbau durch Neutralisation der Lösung mit Natronlauge unterbrochen.

Sodann wird die Lösung durch 24stündiges Dialysieren gegen laufendes Brunnenwasser entsalzt. Nach Einengen unter vermindertem Druck auf ein Volumen von etwa 400 Raumteilen wird das abgebaute Polysaccharid mit Methanol gefällt und getrocknet. Die Viskositätszahl dieses isolierten Produktes (Zy) beträgt 0,20 (Konzentration in g/100 cm3 und Viskositätszahl gemessen in 0,5n NaCl-Lösung). Dieses Produkt wird sodann in eine Mischung von 665 Raumteilen Pyridin und
160 Raumteilen Chlorsulfonsäure, welche auf 70" C aufgewärmt worden ist, unter Rühren eingetragen. Nun wird die Temperatur der Reaktionsmischung auf 80"C erhöht und 5/4 Stunden bei SO"C und nachher noch 2 Stunden ohne Erwärmen weitergerührt.

Dann wird die Reaktionsmischung mit 350 Gewichtsteilen Eis versetzt, die viskose Lösung durch Cellulose filtriert und mit etwa 8000 Raumteilen Methanol unter Rühren gefällt. Das etwas bräunlich gefärbte Pyridinsalz wird sodann in etwa 500 Raumteilen Wasser aufgenommen, mit Natronlauge auf p, 8-9 eingestellt und das entstandene Na triumsalz durch Eintragen in Methanol erneut gefällt. Die wässerige Lösung des Natriumsalzes wird anschliessend am Rührwerk mit etwa 2500 Raumteilen l0ok,iger Narcotinhydrochloridlösung versetzt abgesaugt, gewaschen und mit etwa 500 Raumteilen Wasser aufgeschlämmt.

Diese Aufschlämmung wird zwecks Überführung ins Natriumsalz mit 10% der Sodalösung etwa 2 Stunden ausgerührt und vom ausgefallenen Nareotin abgesaugt. Das Filtrat wird mit Eisessig neutralisiert, unter vermindertem Druck eingeengt und mit Methanol versetzt. Das dabei ausfallende Produkt zeigt einen Schwefelgehalt von etwa 14%; Zrj = 0,075 (Konzentration in g/100 cm3 und Viskositätszahl gemessen in 0, 5n NaCl-Lösung).

Claims

PATENTANSPRUCH: Verfahren zur Herstellung eines blutgerinnungshemmenden Mittels, dadurch gekennzeichnet, dass man Chondroitinschwefelsäure hydrolytisch auf eine Viskositätszahl (zu1) unter 0,25 abbaut und die erhaltene Verbindung durch Sulfierung in einen Polyschwefelsäureester überführt.

Dieser Polyschwefelsäureester ist ein farbloses Pulver, das sich in Wasser leicht löst.

UNTERANSPRÜCHE: 1. Verfahren nach Patentanspruch, dadurch gekennzeichnet dass man die Chon droitinschwefelsäure durch Einwirkung einer verdünnten Mineralsäure bei einer Temperatur von 50-800 C abbaut.

2. Verfahren nach Patentanspruch, dadurch gekennzeichnet, dass man die abgebaute Chondroitinschwefelsäure durch Einwirkung von Chlorsulfonsäure in Gegenwart von Pyridin in einen Polyschwefelsäureester überführt.

3. Verfahren nach Patentanspruch, dadurch gekennzeichnet, dass man den Polyschwefelsäureester über ein Alkaloidsalz reinigt.