CH641452A5 - Sesquiterpenderivate, verfahren zu deren herstellung und pharmazeutische zusammensetzungen welche diese enthalten. - Google Patents

Description

Die Erfindung betrifft Sesquiterpenderivate und deren Salze, die eine inhibierende Aktivität und Antitumoraktivi-tät gegenüber dem komplementären System von Lebewesen haben (eine antikomplementäre Aktivität), und die als aktive Bestandteile in pharmazeutischen Zusammensetzungen gegen autoimmune Krankheiten, Nephritis, Rheumatismus, Kallagen-Krankheiten, allergische Erkrankungen, Cancer und dergleichen anwendbar sind. Die Erfindung betrifft auch Verfahren zur Herstellung solcher aktiven Bestandteile.

Der Ausdruck «komplementär» bezieht sich auf eine komplexe Gruppe von Proteinen in der Körperflüssigkeit, die mit den Antikörpern und anderen Faktoren zusammenarbeitet und eine wichtige Rolle als Zwischenträger bei immunen, allergischen, immuno-chemischen und/oder im-muno-pathologischen Reaktionen spielt. Reaktionen, bei denen eine komplementäre Verbindung teilnimmt, finden im Blutserum oder in anderen Körperflüssigkeiten statt und werden deshalb als humorale Reaktionen bezeichnet.

Es wurde berichtet, dass das komplementäre System eine Rolle spielt bei Entzündungen, Koagulation, Fibrinolyse, Antikörper-Antigen-Reaktionen und anderen metabolischen Verfahren (siehe US-PS 4 021 544, Bull World Health Org., 39,935-938 [1968], Scientific American 929, [Nr. 5], 54-56

[1973], Medicai World News, 11. Oktober, 53-58,64-66

[1974], Harvey Lectures, 66,75-104 [1972], The New England Journal of Medicin, 287,489-495, 545-549, 592-596,

642-646 [1972], The John Hopkins Medicai Journal, 128, 57-74 [1971] und Fédération Proceedings, 32, 134-137 [1973]).

Verschiedene Verbindungen sind als Verbindungen mit antikomplementärer Aktivität bekannt, wie Äthylendiamin-tetraessigsäure (EDTA), Saldox, Phlorizin (wie beschrieben von Borsos. J. Immunol. 94 [4], 628 [1964]), Hydroxybenzol-derivate (wie beschrieben in Shir. Mayer: Biochemistry N.Y. 7,3003 [1968]), Guanidine und Phenoxyacetamide (wie beschrieben von B. R. Baker in J. Med. Chem., 12,408 [1968]), Phosphonatester (wie beschrieben von E.L. Becker in B.B.A. 147,289 [1967]), Chlorophyllin, Glyzerrhizin und dergleichen. Diese Verbindungen sind jedoch aus praktischen Gründen nicht geeignet, weil sie sehr toxisch sind und nur eine niedrige antikomplementäre Aktivität aufweisen. Nach dem bisherigen Wissen sind keine antikomplementären Verbindungen oder Mittel bisher im Handel erhältlich.

Deshalb ist es ein Ziel der vorliegenden Erfindung, neue Sesquiterpenderivate und deren Salze zur Verfügung zu stellen, die eine hohe antikomplementäre Aktivität und eine niedrige Toxizität aufweisen.

Ein weiteres Zeil der Erfindung ist es, Verfahren zur Herstellung von Sesquiterpenderivaten und deren Salzen zu zeigen, die eine hohe antikomplementäre Aktivität und niedrige Toxizität haben.

Ein weiteres Ziel der Erfindung ist es, pharmazeutische Zusammensetzungen, welche solche Sesquiterpenderivate und deren pharmazeutisch annehmbaren Salze enthalten, aufzuzeigen.

Die Erfindung betrifft neue Sesquiterpenderivate der allgemeinen Formel (I)

CH3

6

CH3

5

CH3

worin bedeuten: 1

CH3

R1 ein Wasserstoffatom, eine Niedrigalkylgruppe oder eine Niedrigalkanoylgruppe.

R2 und R3, die gleich oder verschieden sein können, jeweils eine Formylgruppe, eine Hydroxymethylgruppe, eine Hydroxylgruppe, eine Carboxylgruppe, eine Niedrigal-kanoyloxymethylgruppe oder eine Gruppe der Formel -CH = CR7R8, worin R7 und R8, die gleich oder verschieden sein können, jeweils ein Wasserstoffatom, eine Cy-anogruppe, eine Niedrigalkoxycarbonylgruppe oder eine Carboxylgruppe bedeuten, oder worin

R2 und R3 zusammengenommen einen Lactonring der r 9

Formel -CH-O-C- bedeuten, worin R9 ein Wasserstoff-atom oder eine Hydroxylgruppe bedeutet,

R4 und R6, die gleich oder verschieden sein können, jeweils eine Hydroxylgruppe oder eine Niedrigaikanoyloxy-gruppe darstellen,

R5 ein Wasserstoffatom oder eine Hydroxylgruppe darstellt, wobei R4 und R5 zusammen eine Oxogruppe (=0)

5

10

15

20

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65

641452

4

bilden können und R4 und R6 zusammen «ine Niedrigalkyli-dendioxygruppe bilden können, sowie deren Salze,

Die Erfindung betrifft auch Verfahren zur Herstellung von Verbindungen der allgemeinen Formel (I) und deren Salze; diese Verfahren sind in Ansprüchen 7,8,9,10,11 und 12 definiert.

Die Erfindung betrifft auch eine pharmazeutische Zusammensetzung mit antikomplementärer Aktivität für Lebewesen, enthaltend eine therapeutisch wirksame Menge eines Sesquiterpenderivates der allgemeinen Formel (I) oder eines pharmazeutisch annehmbaren Salzes davon, neben einen pharmazeutisch annehmbaren Träger.

Fig. 1 und 2 sind Mikrofotografien von Stachybotrys complementi nov sp. K-76, welcher die Fähigkeit hat, die Verbindung der Formel (Ia) der Erfindung herzustellen.

Fig. 3 ist eine Mikrofotografie von Stachybotrys complementi nov sp. T-789.

Fig. 4 ist eine Mikrofotografie von Stachybotrys echinata värsp. T-791.

Fig. 5 ist ein kernmagnetisches Resonanzspektrum der Verbindung der Formel (Ia), die gemäss Beispiel 1 der Erfindung erhalten wird. Fig. 6 bis 8 sind kemmagnetische Resonanzspektren der Verbindung (Ib) gemäss der Erfindung, die im Beispiel 5 erhalten werden und die in drei verschiedenen Lösungsmitteln gemessen wurden.

Fig. 9 ist ein kernmagnetisches Resonanzspektrum der gemäss Beispiel 9 der vorliegenden Erfindung erhaltenen Verbindung.

Nachfolgend werden die erfindungsgemässen Sesquiterpenderivate der allgemeinen Formel (I) näher erläutert. Niedrigalkylgruppen für R1 schliessen lineare und verzweigte Alkylgruppen mit 1 bis 4 Kohlenstoffatomen, wie Methyl, Äthyl, n-Propyl, Isopropyl, n-Butyl und tert,-Butyl ein.

Stellt R1 eine Niedrigalkanoylgruppe dar, so sind eingeschlossen lineare oder verzweigte Alkanoylgruppen mit 2 bis 4 Kohlenstoffatomen, wie Acetyl, Propionyl, Butyryl und Isobutyryl.

Die Niederigalkanoyloxymethylgruppe, die für R2 und R3 stehen kann, schliesst Oxymethylgruppen ein, die mit den vorher erwähnten Niedrigalkanoylgruppen substituiert sind, wie Acetyloxymethyl, Propionyloxymethyl, Butyryloxyme-thyl und Isobutyryloxymethyl. Die Niedrigalkoxycarbonyl-gruppen bei R7 und R8 schliessen lineare oder verzweigte Al-koxycarbonylgruppen mit 2 bis 5 (insgesamt) Kohlenstoffatomen ein, wie Methoxycarbonyl, Äthoxycarbonyl, n-Pro-poxycarbonyl, n-Butoxycarbonyl und tert.-Butoxycarbonyl.

Die Niedrigalkanoyloxygruppen für R4 und R6 schliessen lineare oder verzweigte Alkanoyloxygruppen mit 2 bis 4 Kohlenstoffatomen ein, wie Acetyloxy, Propionyloxy, Buty-ryloxy und Isobutyryloxy.

Die Niedrigalkylidendioxygruppen für die Reste R4 und R6 schliessen lineare oder verzweigte Alkylidengruppen mit 1 bis 4 Kohlenstoffatomen, die mit 2 Sauerstoffatomen substituiert sind, wie Methylidendioxy, Äthylidendioxy, Iso-propylidendioxy und Butylidendioxy, ein.

Spezifische Beispiele für die Sesquiterpenderivate der vorliegenden Erfindung werden nachfolgend angeführt. Die Erfindung soll aber durch den Umfang dieser Beispiele in keiner Weise limitiert werden.

1. 6,7-Dihydroxy-2,5,5,8a-tetramethyl-l,2,3,4,4a, 5, 6,7,8,8a-

decahydronaphthalin-1 -spiro-2'-(6',7'-diformyl-4'-hy-

droxy-2',3'-dihydrobenzofuran)

2. 6,7-Dihydroxy-2,5,5,8a-tetramethyl-l,2,3,4,4a,5,6,7,8,8a-

decahydronaphthalin-l-spira-2'-(4',6',7'-trihydroxy-

2',3'-dihydrobenzofuran)

3. 6,7-Dihydroxy-2,5,5,8a-tetramethyl-l,2,3,4,4a,5,6,7,8,8a-

decahydronaphthalin-l-spiro-2'-[6',7'-di-(2,2-dicyanovi-

nyl)-4/-hydroxy-2',3'-dihydrobenzofuran]

4. 6,7-Dihydroxy-2,5,5,8a-tetramethyl-l,2,3,4,4a,5,6,7,8,8a-

decahydronaphthalin-1 -spiro-2'-[6',7'-di-(2-cyano-2-

äthoxycarbonylvinyl)-4'-hydroxy-2',3'-dihydrobenzofu-

ranj

5. 6,7-Dihydroxy-2,5,5,8a-tetramethyl-l,2,3,4,4a,5,6,7,8,8a-

decahydronaphthalin-1 -spiro-2,-[6',7'-di-(2-cyano-2-

isopropoxycarbonylvinyl)-4'-hydroxy-2',3'-dihydroben-

zofuran]

6. 6,7-Dihydroxy-2,5,5,8a-tetramethyl-l,2,3,4,4a,5,6,7,8,8a-

decahydronaphthalin-l-spiro-2'-[6',7'-di-(2-cyano-2-car-boxyvinyl)-4'-hydroxy-2',3'-dihydrobenzofuran]

7.6,7-Dihydroxy-2,5,5,8a-tetramethyl-l,2,3,4,4a,5,6,7,8,8a-decahydronaphthalin-1 -spiro-2'-[6',7'-di-(2-carboxyvi-nyl)-4'-hydroxy-2',3'-dihydrobenzofuran]

8. 6,7-Dihydroxy-2,5,5,8a-tetramethyl-l,2,3,4,4a,5,6,7,8,8a-decahydronaphthalin-l-spiro-2'-(7'-carboxy-6/-hydroxy-methyl-4'-hydroxy-2',3'-dihydrobenzofuran)

9.6,7-Dihydroxy-2,5,5,8a-tetramethyl-l,2,3,4,4a,5,6,7,8,8a-decahydronaphthalin-l-spiro-2'-[6',7'-di-(2,2-diäthoxy-carbonylvinyl)-4'-hydroxy-2',3'-dihydrobenzofuran]

10.6,7-Dihydroxy-2,5,5-8a-tetramethyl-l,2,3,4,4a,5,6,7,8,8a-decahydronaphthalin-l-spiro-2'-[6',7-di-(2,2-butoxycar-bonylvinyl)-4'-hydroxy-2',3'-dihydrobenzofuran]

11. 6,7-Dihydroxy-2,5,5,8a-tetramethyl-l,2,3,4,4a,5,6,7,8,8a-decahydronaphthalin-l-spiro-2'-(6',7'-dihydroxymethyl-4'-hydroxy-2',3'-dihydrobenzofuran)

12. 6,7-Dihydroxy-2,5,5,8a-tetramethyl-l,2,3,4,4a,5,6,7,8,8a-decahydronaphthalin-1 -spiro-2'-(6',7'-dihydroxymethyl-4'-methoxy-2',3'-dihydrobenzofuran)

13. 6,7-Dihydroxy-2,5,5,8a-tetramethyl-l,2,3,4,4a,5,6,7,8,8a-decahydronaphthalin-l-spiro-2'-(7'-carboxy-6'-formyl-4'-hydroxy-2', 3 '-dihydrobenzofuran)

14. 6,7-Dihydroxy-2,5,5,8a-tetramethyl-l,2,3,4,4a,5,6,7,8,8a-decahydronaphthalin-l-spiro-2'-(6'-carboxy-7'-formyl-4'-hydroxy-2',3'-dihydrobenzofuran)

15. 6,7-Dihydroxy-2,5,5,8a-tetramethyl-l,2,3,4,4a,5,6,7,8,8a-decahydronaphthalin-l-spiro-2'-(7'-carboxy-6'-formyl-4'-methoxy-2',3'-dihydrobenzofuran)

16. 6,7-Dihydroxy-2,5,5,8a-tetramethyl-l,2,3,4,4a,5,6,7,8,8a-decahydronaphthalin-1 -spiro-2'-[6',7'-di-(2,2-dicyanovi-nyl)-4'-äthoxy-2',3'-dihydrobenzofuran]

17. 6,7-Dihydroxy-2,5,5,8a-tetramethyl-l,2,3,4,4a,5,6,7,8,8a-decahydronaphthalin-l-spiro-2'-[6',7'-di-(2-cyano-2-carboxyvinyl)-4'-propoxy-2',3'-dihydrobenzofuran]

18. 6,7-Dihydroxy-2,5,5,8a-tetramethyl-l,2,3,4,4a,5,6,7,8,8a-decahydronaphthalin-l-spiro-2'-[7'-carboxy-6'-)2,2-dicy-anovinyl)-4'-hydroxy-2',3'-dihydrobenzofuran]

19. 6,7-Dihydroxy-2,5,5,8a-tetramethyl-l,2,3,4,4a,5,6,7,8,8a-decahydronaphthalin-l-spiro-2'-[7'-carboxy-6'-(2-cyano-2-carboxyvinyl)-4/-äthoxy-2',3'-dihydrobenzofuran]

20. 6,7-Dipropionyloxy-2,5,5,8a-tetramethyl-l,2,3,4,4a,5,6,7,8,8a-decahydronaphthalin-l-spiro-2'-(6',7'-diformyl-4'-propionyloxy-2',3'-dihydrobenzofu-ran)

21.6,7-Diacetyloxy-2,5,5,8a-tetramethyl-

l,2,3,4,4a,5,6,7,8,8a-decahydronaphthalin-l-spiro-2'-

[6',7'-(2,2-dicyanovinyl)-4'-acetyloxy-2',3'-dihydroben-

zofuran]

22. 6,7-Dibutyryloxy-2,5,5,8a-tetramethyl-l,2,3,4,4a,5,6,7,8,8a-l-spiro-2/-[6',7'-di-(2-cyano-2-äthoxycarbonylvinyl)-4'-butyryloxy-2',3'-dihydroben-zofuran]

23. 6,7-Diacetyloxy-2,5,5,8a-tetramethyl-l,2,3,4,4a,5,6,7,8,8a-decahydronaphthalin-l-spiro-2'-[6',7'-di-(2-cyano-2-carboxyvinyl)-4'-acetyloxy-2',3'-di-hydrobenzofuran]

24. 6,7-Diacetyloxy-2,5,5,8a-tetramethyl-l,2,3,4,4a,5,6,7,8,8a-decahydronaphthalin-l-spiro-2'-

s

10

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25

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35

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55

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65

5

641 452

[6',7'-di-(2,2-diäthoxycarbonylvinyl)-4'-acetyloxy-2',3'-dihydrobenzofuran]

25. 6,7-Diacetyloxy-2,5,5,8a-tetramethyl-

1,2,3,4,4a,5,6,7,8,8a-decahydronaphthalin-1 -spiro-2'-

(6',7'-diacetyloxymethyl-4'-acetyloxy-2',3'-dihydro-

benzofuran)

26. 7-Acetyloxy-6-hydroxy-2,5,5,8a-tetramethyl-l,2,3,4,4a,5,6,7,8,8a-decahydronaphthalin-l-spiro-2'-(6',7'-diacetyloxymethyl-4'-acetyloxy-2',3'-dihydroben-zofuran)

27. 6,7-Diacetyloxy-2,5,5,8a-tetramethyl-l,2,3,5,4,4a,5,6,7,8,8a-decahydronaphthalin-l-spiro-2'-(7'-carboxy-6'-formyl-4'-acetyloxy-2',3'-dihydrobenzofu-ran)

28. 6,7-Dipropionyloxy-2,5,5,8a-tetramethyl-l,2,3,4,4a,5,6,7,8,8a-decahydronaphthalin-l-spiro-2'-(7'-carboxy-6'-formyl-4'-methoxy-2',3'-dihydrobenzofuran)

29. 6,7-Diacetyloxy-2,5,5,8a-tetramethyl-

1,2,3,4,4a,5,6,7,8,8a-decahydronaphthalin-1 -spiro-2'-

[6',7'-di-(2,2-dicyanovinyl)-4'-äthoxy-2',3'-dihydroben-

zofuran]

30. 6,7-Diisobutyryloxy-2,5,5,8a-tetramethyl-l,2,3,4,4a,5,6,7,8,8a-decahydronaphthalin-l-spiro-2'-[6',7'-di-(2-cyano-2-carboxyvinyl)-4'-propoxy-2',3'-dihy-drobenzofuran]

31.6,7-Diacetyloxy-2,5,5,8a-tetramethyl-

l,2,3,4,4a,5,6,7,8,8a-decahydronaphthalin-l-spiro-2'-[7'-

carboxy-6'-(2,2-dicyanovinyl)-4'-acetyloxy-2',3'-dihy-

drobenzofuran]

32. 6,7-IsopropyIidendioxy-2,5,5,8a-tetramethyl-l,2,3,4,4a,5,6,7,8,8a-decahydronaphthalin-l-spiro-2'-(6',7'-diformyl-4'-hydroxy-2',3'-dihydrobenzofuran)

33. 6,7-Isopropylidendioxy-2,5,5,8a-tetramethyl-

1,2,3,4,4a5,6,7,8,8a-decahydronaphthalin-l-spiro-2'-

[6',7'-di-(2,2-dicyanovinyl)-4'-hydroxy-2',3'-dihydrobeii-

zofuran]

34. 6,7-Äthylidendioxy-2,5,5-8a-tetramethyl-l,2,3,4,4a,5,6,7,8,8a-decahydronaphthalin-l-spiro-2'-[6',7'-di-(2-cyano-2-äthoxycarbonylvinyl)-4'-hydroxy-2',3'-dihydrobenzofuran]

35. 6,7-Isopropylidendioxy-2,5,5,8a-tetramethyl-

1,2,3,4,4a,5,6,7,8,8a-decahydronaphthalin-1 -spiro-2'-

[6',7'-di-(2-cyano-2-isopropoxycarbonylvinyl)-4'-acetyl-

oxy-2',3'-dihydrobenzofuran]

36. 6,7-Methylendioxy-2,5,5,8a-tetramethyl-

1,2,3,4,4a,5,6,7,8,8a-decahydronaphthalin-1 -spiro-2'-

[6',7'-di-(2-cyano-2-carboxyvinyl)-4'-hydroxy-2',3'-dihy-

drobenzofuran]

37. 6,7-Isopropylidendioxy-2,5,5,8a-tetramethyl-

1,2,3,4,4a,5,6,7,8,8a-decahydronaphthalin-1 -spiro-2'-[6'-

7'-di-(2,2-dicyanovinyl)-4'-acetyloxy-2',3'-dihydroben-

zofuran]

38. 6,7-Propylidendioxy-2,5,5,8a-tetramethyl-l,2,3,4,4a,5,6,7,8,8a-decahydronaphthalin-l-spiro-2'-[6',7'-di-(2-carboxyvinyl)-4'-hydroxy-2',3'-dihydroben-zofuran]

39. 6,7-Isopropylidendioxy-2,5,5,8a-tetramethyl-l,2,3,4,4a,5,6,7,8,8a-decahydronaphthalin-l-spiro-2'-[6',7'-di-(2,2-diäthoxycarbonylvinyl)-4'-hydroxy-2',3'-di-hydrobenzofuran]

40. 6,7-Isopropylidendioxy-2,5,5,8a-tetramethyl-l,2,3,4,4a,5,6,7,8,8a-decahydronaphthalin-l-spiro-2'-(6',7'-dihydroxymethyl-4'-hydroxy-2',3'-dihydroben-zofuran)

41.6,7-Isopropylidendioxy-2,5,5,8a-tetramethyl-

1,2,3,4,4a,5,6,7,8,8a-decahydronaphthalin-1 -spiro-2'-

(6',7'-diacetyloxymethyl-4'-acetyloxy-2',3'-dihydroben-

zofuran)

42. 6,7-Isopropylidendioxy-2,5,5,8a-tetramethyl-l,2,3,4,4a,5,6,7,8,8a-decahydronaphthalin-l-spiro-2'-(6',7'-dihydroxymethyl-4'-methoxy-2',3'-dihydroben-zofuran)

43. 6,7-Isopropylidendioxy-2,5,5,8a-tetramethyl-l,2,3,4,4a,5,6,7,8,8a-l-spiro-2'-(7'-carboxy-6'-formyl-4'-hydroxy-2',3'-dihydrobenzofuran)

44. 6,7-Propylidendioxy-2,5,5,8a-tetramethyl-

1,2,3,4,4a,5,6,7,8,8a-decahydronaphthalin-1 -spiro-2'-(7'-carboxy-6'-formyl-4'-acetyloxy-2',3'-dihydrobenzofuran)

45. 6,7-Butylidendioxy-2,5,5,8a-tetramethyl-l,2,3,4,4a,5,6,7,8,8a-decahydronaphthalin-l-spiro-2'(7'-carboxy-6'-formyl-4'-methoxy-2',3'-dihydrobenzofuran)

46. 6,7-Isopropylidendioxy-2,5,5,8a-tetramethyl l,2,3,4,4a,5,6,7,8,8a-decahydronaphthalin-l-spiro-2'-[6',7'-di-(2,2-dicyanovinyl)-4'-äthoxy-2',3'-dihydroben-zofuran]

47. 6,7-Isopropylidendioxy-2,5,5,8a-tetramethyl-l,2,3,4,4a,5,6,7,8,8a-decahydronaphthalin-l-spiro-2'-[6',7'-di-(2-cyano-2-carboxyvinyl)-4'-acetyloxy-2',3'-di-hydrobenzofuran]

48. 6,7-Isopropylidendioxy-2,5,5,8a-tetramethyl-

1,2,3,4,4a5,6,7,8,8a-decahydronaphthalin-l-spiro-2'-[7'-

carboxy-6'-(2-cyano-2-carboxyvinyl)-4'-hydroxy-2',3'-di-

hydrobenzofuran]

49. 7-AcetyIoxy-6-oxo-2,5,5,8a-tetramethyl-l,2,3,4,4a,5,6,7,8,8a-decahydronaphthalin-l-spiro-2'-(6',7'-diacetyloxymethyl-4'-acetyloxy-2',3'-dihydroben-zofuran)

50. 7-Acetyloxy-6-oxo-2,5,5,8a-tetramethyl-l,2,3,4,4a,5,6,7,8,8a-decahydronaphthalin-l-spiro-2'-[6',7'-di-(2,2-dicyanovinyl)-4'-acetyloxy-2',3'-dihy-drobenzofuran]

51.7-Acetyloxy-6-oxo-2,5,5,8a-tetramethyl-

l,2,3,4,4a,5,6,7,8,8a-decahydronaphthalin-l-spiro-2'-

[6',7'-di-(2-cyano-2-äthoxycarbonylvinyl)-4'-acetyloxy-

2',3'-dihydrobenzofuran]

52. 7-Acetyloxy-6-oxo-2,5,5,8a-tetramethyl-

1,2,3,4,4a,5,6,7,8,8a-decahydronaphthalin-1 -spiro-2'-

[6',7'-di-(2-cyano-2-isopropoxycarbonylvinyl)-4'-meth-

oxy-2',3'-dihydrobenzofuran]

53. 7-Propionyloxy-6-oxo-2,5,5,8a-tetramethyl-l,2,3,4,4a,5,6,7,8,8a-decahydronaphthalin-l-spiro-2'-[6',7'-di-(2,2-butoxycarbonylvinyl)-4'-propionyloxy-2',3'-dihydrobenzofuran]

54. 7-Acetyloxy-6-oxo-2,5,5,8a-tetramethyl-l,2,3,4,4a,5,6,7,8,8a-decahydronaphthalin-l-spiro-2'-[6',7'-di-(2-cyano-2-carboxyvinyl)-4'-propoxy-2',3'-dihy-drobenzofuran]

55.4-Hydroxy-8-oxo-2,3,6,8-tetra-hydro-furo[3,4-g]-ben-zofuran-2-spiro-r-(6,,7'-dihydroxy-2',5',5',8'a-tetrame-thyl-r,2',3',4',4'a,5',6',7',8',8'a-decahydronaphthalin)

56. 4,6-Dihydroxy-8-oxo-2,3,6,8-tetrahydro-furo[3,4-g]-ben-zofuran-2-spiro-1 '-(6',7'-dihydroxy-2',5',5',8'a-tetrame-thyl-1',2',3',4', 4'a,5',6',7',8',8'a-decahydronaphthalin)

57. 6-Hydroxy-4-isopropoxy-8-oxo-2,3,6,8-tetrahydro-furo[3,4-g]-benzofuran-2-spiro-r-(6',7/-dihydroxy-2',5', 5,,8'a-tetramethyl-l,,2',3,,4',4'a,5',6/,7',8',8'a-decahy-dronaphthalin)

58. 4-Propionyloxy-8-oxo-2,3,6,8-tetrahydro-furo[3,4-g]-benzofuran-2-spiro-r-(6',7'-dipropionyloxy-2',5',5',-8'a-tetramethyl-l'^'^'^'^'a^'jó'^'^'jS'a-decaliydronaph-thalin)

59.4-Acetyloxy-6-hydroxy-8-oxo-2,3,6,8-tetrahydro-

furo[3,4-g]-benzofuran-2-spiro-l'-(6',7'-diacetyloxy-2',5', 5',8'a-tetramethyl-r,2',3',4', 4'a,5',6',7',8', 8'a-decahy-dronaphthalin)

5

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15

20

25

30

35

40

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50

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65

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6

60. 4-Butyryloxy-6-hydroxy-8-oxo-2,3,6,8-tetrahydro-furo[3,4-g]-benzofuran-2-spiro-r-(7'-butyryloxy-6'-hy-droxy-2',5',5',8'a-tetramethyl-r,2',3',4',4'a,5',6',7',8',8'a-decahydronaphthalin)

61.6-Hydroxy-4-propoxy-8-oxo-2,3,6,8-tetrahydro-furo[3,4-g]-benzofuran-2-spiro-r-(6',7'-propionyloxy-2',5',5/,8/a-tetramethyl-r,2',3',4',4'a,5',6',7',8',8'a-decahydronaph-thalin)

62. 4-Hydroxy-8-oxo-2,3,6,8-tetrahydro-furo[3,4-g]-ben-zofuran-2-spiro-r-(6',7'-isopropylidendioxy-2',5',5',8'a-tetramethyl-l',2',3',4',4'a,5',6',7',8', 8'a-decahydronaph-thalin)

63.4,6-Dihydroxy-8-oxo-2,3,6,8-tetrahydro-furo[3,4-g]-ben-zofuran-2-spiro-r-(6',7'-isopropylidendioxy-2',5',5',8'a-tetramethyl-r,2',3',4',4'a,5',6',7',8',8'a-decahydronaph-thalin)

64.6-Hydroxy-4-isopropoxy-8-oxo-2,3,6,8-tetrahydro-

furo[3,4-g]-benzofuran-2-spiro-r-(6',7'-propylidendioxy-2', y^'.S'a-tetramethyl-l'^'^'^'a^'^'J'.S'^'a-deca-hydronaphthalin)

65. 6-Hydroxy-4-acetyloxy-8-oxo-2,3,6,8-tetrahydro-furo[3,4-g]-benzofuran-2-spiro-r-(6',7/-isopropyliden-dioxy-2',5',5',8'a-tetramethyl-r,2',3',4',4/a,5',6',7/,8',8'a-decahydronaphthalin)

5 66. 4-Hydroxy-8-oxo-2,3,6,8-tetrahydro-furo[3,4-g]-ben-zofuran-2-spiro-1 '-(7'-acetyloxy-6-oxo-2',5',5',8'a-te-tramethyl-r,2',3',4',4'a,5',6',7',8',8'a-decahydronaph-thalin)

io 67. Dinatrium von 6,7-Dihydroxy-2,5,5,8a-tetramethyl-

l,2,3,4,4a,5,6,7,8,8a-decahydronaphthalin-l-spiro-2'-(7'-carboxylat-6/-formyl-4'-oxid-2',3'-dihydrobenzofuran)

Die Nomenklatur der vorgenannten Verbindungen bais siert auf den Stellungsbezeichnungen bei der allgemeinen Formel (I). Solche Verbindungen der allgemeinen Formel (I), in denen R2 und R3 zusammen mit den beiden Kohlenstoffatomen, an die sie gebunden sind, einen Lactonring bilden, werden in Übereinstimmung mit der Stellungszahl, die 20 in der folgenden Formel gezeigt wird, bezeichnet.

0 1

(IM

Nachfolgend werden Verfahren zur Herstellung der Sesquiterpenderivate der allgemeinen Formel (I) gemäss der Erfindung beschrieben.

(la) Herstellung der Verbindungen der allgemeinen Formel(Ia) Die Sesquiterpenderivate der.allgemeinen Formel (I) gemäss der Erfindung können nach verschiedenen Verfahren, 45 je nach der Art der Substituenten, hergestellt werden. Beispielsweise kann man eine Verbindung der allgemeinen Formel (I), in welcher sowohl R1 als auch R5 Wasserstoffatome sind, R2 und R3 beide Formylgruppen bedeuten, und R4 und R6 beide Hydroxylgruppen sind, wie dies in der allge-50 meinen Formel (Ia) gezeigt wird.

(Ia)

CH3

CH3

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herstellen unter Verwendung der folgenden bekannten Mikroorganismen, die zum Genus Stachybotrys gehören oder von Mikroorganismen vom Genus Stachybotrys, die neu aufgrund der vorliegenden Erfindung isoliert wurden: Stachybotrys alternans IFO 9355,

Stachybotrys chartarum IFO 5369,

Stachybotrys chartarum IFO 7222,

Stachybotrys cylindrospora 8858,

Stachybotrys echinata 7525 und Stachybotrys reniformis 7067.

Die Mikroorganismen, die neu isoliert wurden, sind neue Stämme, die zum Genus Stachybotrys gehören und werden nachfolgend beschrieben. Sie sind genannt worden Stachybotrys sp. K-76, Stachybotrys sp. T-789 und Stachybotrys sp. T-791.

A. Fundort

1. Stachybotrys complementi nov sp. K-76 (nachstehend als Stachybotrys sp. K-76 bezeichnet). Dieser Stamm wurde vom Boden bei Ishigaki City, Okinawa, Japan, isoliert.

2. Stachybotrys complementi nov sp. T-789 (nachstehend als Stachybotrys sp. T-789 bezeichnet). Dieser Stamm wurde vom Boden bei Naruto City, Tokushima, Japan, isoliert.

3. Stachybotrys echinata var sp. T-798 (nachstehend als Stachybotrys sp. T-791 bezeichnet). Dieser Stamm wurde vom Boden bei Tokushima City, Tokushima, Japan isoliert.

B. Eigenschaften der verschiedenen Kulturmedien 1. Stachybotrys sp. K-76

Die Kultureigenschaften dieses Stammes auf verschiedenen Kulturmedien wurden visuell und durch mikroskopische Untersuchungen (Fig. 1 und 2) festgestellt und sind die folgenden:

(a) Visuelle Beobachtung Es wird ein sehr gutes Wachstum auf verschiedenen Kulturmedien, wie man sie üblicherweise zum Kultivieren von Schimmelpilzen verwendet, festgestellt, aber die Adhäsion von Phialosporen ist nicht immer gut, ausgenommen auf einem Hafermehl-Agarmedium. Die Wachstumsbedingungen auf typischen Medien werden nachfolgend gezeigt:

i) Malzextrakt-Agarmedium

Das Wachstum ist verhältnismässig langsam; bei der Kultivierung bei 27 °C während 30 Tagen bildet sich eine grosse Kolonie einer Grösse von 30 bis 35 mm. Die Kolonie wächst kreisförmig, und der Umfang hat eine grosse gezackte Form. Die Oberfläche der Kolonie ist glatt, und der Luft ausgesetzte Micelfäden erstrecken sich dick wie ein kreisförmiges Geflecht im Zentrum der Kolonie und wachsen dort dicht. Die Kolonie verändert sich allmählich von weiss, im Anfangsstadium der Kultivierung, zu hell-elfenbeinfarben (Li Elfenbein, 2ca). Zwei Wochen nach Beginn der Kultivierung beginnen sich Phialosporen allmählich zu bilden, aber sie sind mit dem blossen Auge kaum erkennbar. Sclerotium und andere sporogene Geschlechtsorgane werden nicht gefunden. Die Farbe der Rückseite der Kolonie liegt im Bereich von farblos bis kupferfarben (Kupfer Tan, 5ie). Ein kupferfarbenes (Kupfer Tan, 5ie) lösliches Pigment wird gebildet.

ii) Kartoffelglucose-Agarmedium

Das Wachstum ist gut, und nach 30tägiger Kultivierung bei 27 °C erreicht die Kolonie eine Grösse von 45 bis 47 mm. Das Kolonienwachstum ist konvex im Kolonienzentrum, und der Umfang der Kolonie ist gezackt. Die Kolonie ist ein konzentrischer Kreis oder eine Falte, die im Zentrum der Kolonie entspringt. Im Anfangsstadium der Kultivierung ist die Kolonie dicht bedeckt mit weissen bis perlrosafarbenen (Perlrosa, 4ca) Micelfäden. Mit Fortschreiten der Kultivierung wird die Farbe der Kolonie schwarz-grau (Grau, i). Es bildet sich ein grosser Teil an sterigmatischer Sporenmasse. Es werden grosse Mengen an flüssigen Tröpfchen beobachtet. Die Farbe der Rückseite liegt im Bereich von rostfarben (Rostfarbe, 5ie) bis hellrosa-braun (Li Rosa-Braun, 6 '/2 lg). Ein gebildetes lösliches Pigment hat eine Butterbonbon-Farbe (Butter Scotch, 3ne) aber ist sehr schwachfarbig.

iii) Czapek's dox Agarmedium

Das Wachstum ist gut, und durch Kultivierung während 30 Tagen bei 27 °C erreicht die Kolonie eine Grösse von 40 bis 45 mm. Die Kolonie bildet eine konzentrische Falte, und die Kolonie hat im Kolonienzentrum eine wellige Form. Der Umfang der Kolonie ist wellig. Die Farbe der Rückseite der Kolonie ist «luggage tan» (Luggage Tan, 4ne). An der Oberfläche der Kolonie haften farblose bis weisse Micelfäden dünnen in konzentrischer Form vom mittleren Teil, der nicht mit der Luft ausgesetzten Micelfäden bedeckt ist und die eine Toast-Farbe (Toast Tan, 41g) haben. Man beobachtet keine flüssigen Tröpfchen, aber der zentrale Teil der Kolonie ist sehr hygroskopisch. Man findet kaum sterigmati-sche Sporen. Das lösliche Pigment ist schwach und hat eine Gold-Farbe (Gold, 21e).

iv) Hafermehr-Agarmedium

Sehr schnelles Wachstum und bei 30tägiger Kultivierung bei 27 °C erreicht die Kolonie eine Grösse von 60 bis 70 mm. Die Kolonie ist dünn und flach, und vom Anfangsstadium der Kultivierung werden farblose bis weisse Micelfäden an der gesamten Oberfläche der Kolonie gebildet. Nur im zentralen Bereich der Kolonie findet man aufrechte Micelfäden in einer Länge von 3 bis 4 mm, die jedoch nicht dicht sind. Zwei Wochen nach Beginn der Kultivierung verbreiten sich Phialosporen über die gesamte Oberfläche der Kolonie, und die Farbe der Kolonie verändert sich nach hellolivfarben (Li Olive Drab, Iii). Die Farbe der Rückseite der Kolonie ist beige-braun (Beige Brown, 3ig) bis sonnenbraun (Tan, 3ie). Das gebildete lösliche Pigment ist schwach kolonialgelb (Colonial Yellow, 2ca).

2. Stachybotrys sp. T-789

Es wurden die Kultivierungseigenschaften vom T-789-Stamm, der Fungi-Imperfecti ist, auf verschiedenen Kulturmedien visuell und mikroskopisch beobachtet (wie in Fig. 3 gezeigt wird), und die Ergebnisse werden nachfolgend beschrieben. Die morphologischen Eigenschaften des T-789-Stammes unter mikroskopischer Beobachtung stimmen gut mit denen von Stachybotrys sp. K-76 überein. Jedoch sind Unterschiede in den Eigenschaften auf den Kulturmedien vorhanden. Auf den folgenden beiden Medien treten die charakteristischen Unterschiede am stärksten auf.

(a) Visuelle Beobachtung i) Malzextrakt-Agarmedium

Das Wachstum ist sehr langsam, und nach 30tägiger Kultivierung bei 27 °C erreicht die Kolonie eine Grösse von 17 bis 20 mm. Der Umfang der Kolonie wächst wellenförmig und ist begrenzt. Die Kolonie zeigt eine wellige Form im Zentrum der Kolonie und eine radiale Falte an der Peripherie der Kolonie. Micelfäden, die der Luft ausgesetzt sind, breiten sich dünn über die gesamte Oberfläche der Kolonie aus. Im Anfangsstadium sind die Micelfäden weiss, und Co-nidia werden nur graduell gebildet. Der Zentralteil der Kolonie nimmt eine Leberfarbe (Mole, 1) an, und die Conidia wachsen dicht. Zum Umfang der Kolonie hin ist die Coni-diabildung ringförmig. Die Farbe der Rückseite ist korkfar-ben (CorkTan, 4ie), Das lösliche Pigment ist stark entwickelt und bernsteinfarben (Amber, 31e).

ii) Czapek's Agarmedium

Das Wachstum ist gut, und nach 30tägiger Kultivierung bei 27 °C erreicht es 45 mm. Das Zentrum der Kolonie ist

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konvex, und die Kolonie bildet eine radiale Falte. Der periphere Teil der Kolonie zeigt ein welliges Wachstum. Der Luft ausgesetzte, weisse Micelfäden haften dünn in konzentrischer Kreisform aussen vom zentralen konvexen Teil der Kolonie, und Conidia bilden sich konzentrisch nur am peripheren Teil der Kolonie. Die Micelfäden sind im konvexen Teil im aufgelösten Zustand und sehr hygroskopisch. Die Farbe der Rückseite der Kolonie ist senffarben braun (Mu-star Brown, 2pi). Es bildet sich kein lösliches Pigment.

3. Stachybotrys sp. T-791

Die Kultivierungseigenschaften von T-791, einem Fungi-Imperfecti, auf verschiedenen Kulturmedien, wurden visuell und mikroskopisch untersucht (wie in Fig. 4 gezeigt) und sind die folgenden:

(a) Visuelle Beobachtung i) Malzextrakt-Agarmedium

Das Wachstum ist schnell und unregelmässig. Die Farbe der Rückseite der Kolonie ist sonnenbraun (Tan, 3ie) bis dunkelbraun (Dk Brown, 2pn). Die Kolonie ist flach und die Conidiabildung gut. Die Farbe der Micelfäden ist bisquit-(Biscuit, 2ec) bis sonnen-farbig (Tan, 3ie), und es werden flüssige abgeschiedene Tröpfchen beobachtet. Es bildet sich kein lösliches Pigment.

ii) Kartoffel-Glucose-Medium

Das Wachstum ist sehr schnell, und nach 30tägiger Kultivierung bei 27 °C erreicht die Kolonie eine Grösse von 70 mm. Der periphere Teil der Kolonie ist verästelt und anhaftende verdünnte weisse Micelfäden werden beobachtet. Es treten flüssige Tröpfchen hervor. Man beobachtet kaum eine Sporenbildung, Die Rückseite der Kolonie ist hell-bernsteinfarben (Li Amber, 3ie). Es wird kein lösliches Pigment gebildet.

iii) Czapek's dox Agarmedium

Das Wachstum ist schwach.

iv) Synthetisches Mucor-Agarmedium

Das Wachstum ist schlecht.

v) Hafermehl-Agarmedium

Das Wachstum ist sehr gut, so dass innerhalb von 2 Wochen die Petri-Schale bedeckt ist. Die Kolonie ist dünn und flach. Es findet eine übermässige Bildung von Micelfäden vom Anfangsstadium der Kultivierung an statt, und die Conidiabildung ist auch sehr schnell. Die Farbe der Kolonie verändert sich von weiss bis dunkelbraun (Dk Brown, 3pn), mit Fortschreiten der Kultivierung. Es erscheinen grosse Mengen an flüssigen Tröpfchen auf den Micelfäden. Es wird kein lösliches Pigment gebildet.

C. Physiologische Eigenschaften

Stachybotrys K-76, T-789 und T-791 sind alle aerobe Stämme und haben die folgenden physiologischen Eigenschaften:

1. Stachybotrys sp. K-76

pH

Temperatur

Wachstumsbedingungen optimale

Wachsumsbedingungen

3,5-11,5 6,0- 9,5

15-35°C 20-32°C

2. Stachybotrys sp. T-789

PH

Temperatur

Wachstumsbedingungen optimale

Wachstumsbedingungen

3,5-11,5 4,5-10,5

15-38°C 20-32°C

3. Stachybotrys sp. T-791

pH Temperatur

Wachstumsbedingungen 3,5-11,5 15-38°C

optimale

Wachstumsbedingungen 4,5- 9,5 20-30°C

D. Morphologische Eigenschaften

1. Stachybotrys sp. K-76

Aus den Fig. 1 und 2 lässt sich das Folgende klar erkennen: Auf den verschiedenen Kulturmedien sind Sclerotium und andere geschlechtliche reproduzierende Organe nicht erkennbar, aber man kann die Bildung von asexualen Sporen der Phialosporenart erkennen.

Micelfäden werden auf den verschiedenen Kulturmedien gebildet, die vollständig verzweigt sind und sich in der Länge und Breite zu einer Grösse von 2 bis 4 |im erstrecken.

Phialophoren verzweigen sich einfach von den Micelfäden (keine Verzweigung von einem Phialophor zum anderen) und haben 3 bis 4 Septa von den Fusszellen im Basisteil. Die Phialophoren erstrecken sich aufrecht oder leicht gekrümmt. Die Breite der Micelfäden der Phialophoren ist 4,3 bis 4,7 (im am Grundteil und 3,6 bis 4,5 jxm im zentralen Teil. Die Enden der Phialophoren sind leicht aufgebauscht, und an den äussersten Enden der Phialophoren bilden sich 3 bis 7 elliptische bis obclavate, aufrecht stehende Phialide mit einer Grösse von 7,9 bis 9,3 x 3,6 bis 4,7 um. Die Phialide sind glatt und haben eine Farbe im Bereich von farblos bis schwach gelblich-braun. Die Phialosporen werden von den Enden der Phialide in Richtung zur Basis gebildet. Die Phialosporen bilden keine geraden Ketten, sondern werden eine schleimige, hängende halbkreisförmige Masse, deren Zahl 7 bis 26 beträgt. Die Phialophoren sind kugelförmig (sub-glu-bose) bis oval mit einer Grösse von 4,9 bis 8,0 x 3,3 bis 4,7 um, und die Oberflächen der Phialophoren sind rauh bis warzig. Die Farbe der Phialophoren ist dunkelbernsteinfar-big (Dk Ivy 24po) bis grau-schwarz. Keine Membranen aufgrund von schleimigen Massen ist auf den Phialosporenmas-sen erkennbar.

Der taxonomische Zustand der vorliegenden Stämme mit den vorerwähnten mikrobiologischen Eigenschaften ist erforscht worden durch G.L. Barron, The Genera Of Hy-phomycetes From Soil, The Williams & Wilkins Company, Baltimore (1968); J.C. Gilman, A Manual Of Soil Fungi, The Iowa State University Press, Ames, Iowa (1971); and J. A. von Arx, The Genera Of Fungi Sporelating In Pure Culture, Verlag von J. Cremer 3301 Lehre (1970). Nach dem taxonomischen System von Saccardo gehören die vorliegenden Stämme zur Klasse Hyphomycetes, Familie Demati-aceae, Genus Stachybotrys. Mit anderen Worten stimmen die Eigenschaften der vorhegenden Stämme, nämlich die Abwesenheit vom Ascocarpien und anderen geschlechtlich reproduzierenden Organen, die Bildung von dunkelbraunen Phialosporen aus Phialide, und die Sammlung der entstehenden Phialosporen in halbkreisförmiger Form an den oberen Enden der Phialide gut mit den Eigenschaften von Genus Stachybotrys überein.

Die verschiedenen Eigenschaften der vorliegenden Stämme wurden identifiziert aufgrund der folgenden Literaturstellen: G.R. Bisby, Trans. Brit. Mycol. Soc., 26:133-143 (1943); R.K. Zuck, Mycologia, 38: 69-76 (1946); G.L. Barron, Can. J. Bot., 39:153-157 (1961), und in Übereinstimmung mit den Standardstämmen, die vom Institute for Fermentation (IFO), Osaka, Japan, aufbewahrt werden. Als Ergebnis wurde festgestellt, dass der vorliegende Stamm K-76 ähnlich dem Stachybotrys lobulata IFO 5369 ist, weil die Phialosporen des vorliegenden Stammes K-76 rauhe warzige

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Vorsprünge haben und oval bis ellipsenförmig sind. Es bestehen aber Unterschiede darin, dass Stachybotrys lobulata ein Phialophor hat; das 1 mm Dicke erreichen kann, und während der K-76- Stamm einfache Verzweigung zeigt, hat der Stachybotrys lobulata- Stamm die Eigenschaft, dass ein anderes Phialophor abzweigt und sich von einem Phialophor erstreckt. Hinsichtlich des Wachstums auf verschiedenen Kulturmedien erzeugt der K-76- Stamm eine grosse Menge an einem löslichen Pigment, und die Conidiabildung ist sehr schlecht auf einem Agarmedium, ausgenommen auf einem Kartoffel-Glucose-Agarmedium und Hafermehl-Agar-medium. Anderseits wächst Stachybotrys lobulata sehr schnell auf verschiedenen Kulturmedien und bildet eine faltenfreie flache Kolonie. Die Conidiabildung ist auf fast allen Medien, mit Ausnahme von Czapek's dox Agarmedium, gut, so dass die Farbe der Kolonie typisch ist. Es wird kein lösliches Pigment gebildet oder zumindest nur sehr schwach.

Aus den obigen Unterschieden schliesst man, dass der vorliegende Stamm K-76 ein neuer Stamm ist, der unterschiedlich ist von Stachybotrys lobulata, und der vorliegende Stamm wurde als Stachybotrys sp. k-76 bezeichnet.

2. Stachybotrys sp. T-789

Auf Fig. 3 kann man folgendes erkennen: Dieser Stamm hat im wesentlichen die gleiche Morphologie wie Stachybotrys sp. K-76, obwohl Unterschiede der Koloniengrösse vorliegen. In gleicher Weise wie bei Stachybotrys sp. K-76 wurden die mikrobiologischen Eigenschaften verglichen mit Nachschlagewerken und Literaturverweisen, die vorher erwähnt wurden, und mit IFO-Typ-Stämmen. Es wurde festgestellt, dass dieser Stamm ausserordentlich ähnlich Stachybotrys lobulata IFO 5369 und Stachybotrys sp. K-76 ist. Der vorliegende Stamm zeigt eine gute Bildung von Phialosporen auf Czapek's dox Agar-Medium. Jedoch wird bei den ersten beiden Stämmen die Bildung von Phialosporen auf Czapek's dox Agarmedium kaum beobachtet. Dies ist ein Unterschied in der Kultur.

Ebenso wie dies hinsichtlich Stachybotrys K-76 vorher festgestellt wurde, unterscheidet sich der vorliegende Stamm evident vom Stachybotrys lobulata hinsichtlich der morphologischen Eigenschaften. Darüber hinaus ist der pH-Bereich für ein optimales Wachstum für den vorliegenden Stamm bei pH 4,5 bis 10,5. Auch in dieser Hinsicht unterscheidet sich der vorliegende Stamm vom Stamm K-76.

Deshalb wurde der vorliegende Stamm als neuer Stamm bezeichnet und Stachybotrys sp. T-789 genannt.

3. Stachybotrys sp. T-791

Auf Fig. 4 ist folgendes ersichtlich: Die Phialophoren sind einfach verzweigt und stehen aufrecht. Die Enden der Phialophoren sind leicht aufgewölbt und stäbchenförmig. Das Aufwölben ist aber nicht so stark, wie man es bei dem Stamm vom Typ Stachybotrys echinata IFO 7525 und 8856 beobachtet. Dieser Stamm hat Micelfäden einer Breite von 4,0 bis 4,5 um, was etwas breiter ist als die Phialophoren. Die Phialophoren, die sich aufrecht verzweigen mit Fusszellen von vegetativen Micelfäden oder der Luft ausgesetzten Micelfäden, haben zwei bis drei Septa und eine Grösse von 40 bis 80 x 3,0 bis 3,5 um. Die Zellwände der Phialophoren sind nicht stachelig, sondern glatt.

Drei bis sechs Phialide bilden sich von den aufgewölbten Teilen an den Enden der Phialophoren. Weiterhin bilden sich zur Basis hin sphärische bis kugelförmige Phialosporen aus einer Zelle mit stacheligen Ausbuchtungen und einer Grösse von 4,3 bis 5,2 x 3,0 bis 4,2 (xm kontinuierlich an den Spitzen der Phialide, und eine Kette von 24 bis 70 Conidia wird gebildet. Die Phialide haben eine obclavate Form und eine Grösse von 6,9 bis 10,7 x 3,5 bis 4,7 um. Die Phialophoren und Phialide sind farblos, und die Phialide haben eine Kaffee- (Coffee, 3pn) bis schwarze Farbe.

Der taxonomische Status der vorliegenden Stämme mit den vorerwähnten mikrobiologischen Eigenschaften wurde mit Nachschlagewerken, wie dies beim Stamm K-76 erläutert wurde, verglichen. Als Ergebnis hat man festgestellt, dass der vorliegende Stamm zum Genus Stachybotrys (Genus Menmoniella) gehört. Genau gesagt, besitzt der vor-ligende Stamm keine Ascocarps und andere geschlechtlich reproduzierende Organe, und es bilden sich kontinuierlich aus den Phialosporen dunkelbraune Phialide. Es werden langkettige Sporen gebildet. Die Eigenschaften des vorliegenden Stammes T-791 stimmen mit denen des Genus Stachybotrys (Genus Menmoniella) überein.

Die verschiedenen Eigenschaften des vorliegenden Stammes sind mit den vorher erwähnten Nachschlagewerken und Literaturhinweisen verglichen worden, wie R.K. Zuck, My-cologia, 38: 69-76 (1964) und G. Smith, Trans. Brit. Mycol. Soc., 45: 387-394 (1962), und wurden auch verglichen mit bei der IFO hinterlegten Stämmen. Als Ergebnis wurde festgestellt, dass, da kontinuierlich und zur Basis hin Phialosporen aus den Phialiden gebildet werden, der Stamm T-791 zu Menmoniella echinata (Bezeichnung von Höhnel) gehört. Aus den Berichten von R.K. Zuck und G. Smith geht hervor, dass der vorliegende Stamm T-791 als ein Stamm angesehen wird, der analog zu Stachybotrys echinata ist. Daher wurde er verglichen mit Stachybotrys echinata IFO 7525 und 8856.

Morphologisch werden bei dem vorliegenden Stamm T-791 auf den Zellwandungen der Phialophoren keine stacheligen Vorsprünge, wie sie spezifisch für die beiden Stämme sind, beobachtet. Weiterhin sind bei den Stämmen die Spitzen der Phialophoren aufgebauscht um das 2- bis 3fache der Breite der Micelfäden der Phialophoren, jedoch wird keine merkliche Ausbuchtung bei dem vorliegenden Stamm beobachtet. Die beiden Stämme weisen ein gutes Wachstum auf verschiedenen Kulturmedien auf, insbesondere auf Kartoffel-Glucose-Agarmedium, und bilden kreisförmige, etwas erhöhte Kolonien, und es haften Micelfäden sehr stark an. Weiterhin wird eine merkliche Conidiabildung beobachtet. Im Gegensatz dazu zeigt der vorliegende Stamm ein dendritisches unregelmässiges Wachstum, wie bereits erwähnt, und eine schlechte Micelfädenbildung und eine schlechte Conidiabildung wird beobachtet. Aus diesen mikrobiologischen Unterschieden schliesst man, dass es sich um einen neuen Stamm handelt, der als Stachybotrys sp. T-791 bezeichnet wird.

Die Farbbezeichnungen, wie sie vorher und nachstehend verwendet werden, stimmen überein mit den im Color Har-mony Manual, Container Corporation of America (1958), bezeichneten.

Proben der neuen Stämme Stachybotrys sp. K-76, Stachybotrys sp. T-789 und Stachybotrys sp. T-791 sind beim Fermentation Research Institute, Agency of Industriai Science and Technology, Ministry of International Trade and Industry, 1-3 Higashi 1-chome Yatabe-machi Tsubuka-gun, Ibaraki-Ken-305, Japan, unter den Hinterlegungsnummern FERM-P Nr. 3801, FERM-P Nr. 3802 bzw. FERM-P Nr. 3803 am 11. November 1976 hinterlegt worden.

Die obengenannten neuen Stämme sind auch bei der American Type Culture Collection, 12301 Parklawn Drive, Rockville, Maryland 20852, USA, unter den Hinterlegungsnummern ATCC-20511, ATCC-20512 bzw. ATCC-20513 am 12. Mai 1978 hinterlegt worden.

Ib. Herstellung der Verbindung der allgemeinen Formel (Ia) durch Mikroorganismen vom Genus Stachybotrys

Die Herstellung einer Verbindung der allgemeinen Formel (Ia) durch Mikroorganismen vom Genus Stachybotrys,

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wie er vorher beschrieben wurde, wird in der nachfolgenden Weise durchgeführt.

Zunächst wird der Mikroorganismus in einem Medium kultiviert, welches übliche Nährquellen und Zusätze enthält. Stickstoffquellen, die man im allgemeinen als Kultursubstrat verwendet, schliessen beispielsweise ein Sojabohnenpulver, Sojabohnenöl, Maismeische, Hefeextrakt, getrocknete Hefe, Hafermehl, Fleischextrakt, hydrolysiertes Kasein, Ammoniumsalze und Nitratsalze. Beispiele für geeignete Kohlenstoffquellen sind Glukose, Glyzerin, Maltose, Stärke, Lactose, Succrose und Melasse. Beispiele für Additive zum Kulturmedium schliessen ein anorganische Salze, wie Kal-ziumcarbonat, Natriumchlorid, Magnesiumsulfat und Phosphorsäure. Gewünschtenfalls kann das Kulturmedium weiterhin geringere Anteile an Metallsalzen, wie von Eisen, Kupfer, Mangan und Zink, enthalten. Die Kultivierung kann in einem gewöhnlichen wässrigen Medium, welches das oben erwähnte Substrat enthält, unter Anwendung von Oberflächenkulturverfahren oder durch eine untergetauchte Kultur unter Belüften und Rühren erfolgen. Eine untergetauchte Kultivierung mit Belüftung und Rührung wird bevorzugt. Die Kultivierung kann vorteilhaft durchgeführt werden bei Temperaturen von etwa 15 bis 35 °C, vorzugsweise 20 bis 32 °C während einer Zeit, die im allgemeinen bei etwa 3 bis 7 Tagen liegt, und zwar unter üblichen Belüftungsbedingungen, während man einen pH im Kulturmedium von etwa 3,5 bis 11,5, vorzugsweise 4,5 bis 9,5, aufrechterhält.

Nach dieser Kultivierung wird die gebildete Substanz aus der Kulturbrühe gewonnen. Das Verfahren zur Gewinnung ist nicht in irgendeiner Weise beschränkt, und die verschiedenen Verfahren, bei denen die physiko-chemischen Eigenschaften der gebildeten Substanz angewendet werden, können verwendet werden. Die Gewinnung erfolgt beispielsweise durch ein Verfahren, bei dem man die unterschiedlichen Löslichkeiten zwischen den Produkten und den Verunreinigungen ausnutzt, oder bei einem Verfahren, bei dem die Unterschiede in der Adsorptionskraft und die Affinität gegenüber gewöhnlichen Adsorbentien, wie Aktivkohle, XAD-2, Kieselgel, Ionenaustauschharze oder Sephadex (Handelsname für ein Produkt der Pharmacia Fine Chemicals), oder unter Anwendung eines Verfahrens, bei dem die Unterschiede des Verteilungskoeffizienten zwischen zwei flüssigen Phasen ausgenutzt wird, oder auch indem man solche Verfahren kombiniert.

Genauer gesagt wird die Kulturbrühe filtriert oder zen-trifugiert in üblicher Weise, um die Zellen zu entfernen.

Dann gibt man zu der überstehenden Flüssigkeit Methanol und rührt die Mischung und lässt sie 2 bis 3 Stunden stehen. Der Niederschlag wird durch eine weitere Zentrifugentrennung entfernt. Der Rückstand wird mit dem gleichen Volumen Äthylacetat extrahiert, und das Lösungsmittel wird abdestilliert. Das Extrakt wird zu Methanol gegeben, und die methanolische Lösung wird durch eine Säule mit Aktivkohle geschickt, und das Lösungsmittel wird aus dem Eluat abdestilliert. Der Rückstand wird gelfiltriert unter Verwendung von Sephadex LH-20. Die erhaltenen Fraktionen werden jeweils einen Antikomplementär-Aktivitätstest, wie er nachfolgend noch beschrieben wird, unterworfen. Die aktiven Fraktionen werden gesammelt, und das Lösungsmittel wird abdestilliert. Auf diese Weise kann 6,7-Dihydroxy-2,5,5,8a-tetramethyl-l,2,3,4,4a,5,6,7,8,8a-decahydronaphthalin-l-spiro-2'-(6,,7'-diformyl-4'-hydroxy-2',3'-dihydrobenzofuran) der Strukturformel (Ia) isoliert werden.

2. Herstellung anderer Verbindungen der allgemeinen Formel (I)

Sesquiterpenderivate der allgemeinen Formel (I) der vorliegenden Erfindung, die unterschiedlich sind von der Verbindung der Formel (Ia), können hergestellt werden aus der Verbindung der Formel (Ia) als Ausgangsmaterial nach einem der nachfolgend beschriebenen Verfahren oder durch eine Kombination von zwei oder mehr dieser Verfahren. Die hier angewendeten Verfahrensbedingungen und Verbindungen werden nachfolgend angegeben.

A. Verfahren (1)

Verbindungen der allgemeinen Formel (I), in denen ein oder beide Reste R2 und R4 eine Carboxylgruppe darstellen (nachfolgend als Verbindungen (IB) bezeichnet), werden erhalten, indem man Verbindungen der Formel (I), in denen ein oder beide R2 und R3 eine Formylgruppe bedeuten (nachfolgend als Verbindung (IA) bezeichnet) beispielsweise Verbindung (Ia) oxidiert.

Die Oxidationsreaktion kann erfolgen nach üblichen Verfahren zum Herstellen von aromatischen Carbonsäuren aus aromatischen Aldehydverbindungen. Beispiele für anwendbare Oxidationsverfahren sind Verfahren, unter Anwendung eines Oxidationsmittels, Verfahren bei denen Bestrahlung mit Licht in Abwesenheit eines Katalysators erfolgt, ein Kontakt-Oxidationsverfahren in Gegenwart eines Katalysators unter Verwendung von Luft oder Sauerstoff, ein elektrolytisches Oxidationsverfahren in Gegenwart einer Kupferverbindung oder von Schwefelsäure und ein Oxidationsverfahren unter Verwendung eines Enzyms. Aufgrund der Einfachheit der Verfahrensweisen und dergleichen und der Einfachheit der Abtrennung und Reinigung der Reaktionsprodukte und der Ausbeute und dergleichen, sind Verfahren unter Anwendung eines Oxidationsmittels und Kon-takt-Oxidations-Verfahren unter Verwendung von Luft oder Sauerstoff besonders vorteilhaft.

Hinsichtlich der Oxidationsmittel, die für die Durchführung der Verfahrensweise mit einem Oxidationsmittel verwendet werden können, liegen keine besonderen Beschränkungen vor. Alle üblichen anorganischen und organischen Oxidationsmittel können verwendet werden. Typische Beispiele für anorganische Oxidationsmittel sind Permanganat-salze, Manganoxid, Manganpyrophosphat, Chromsäure, Chromsalze, Silberoxid, Silbernitrat, Tollens-Reagenz, Goldoxid, Nickelperoxid, Selendioxid, Chlor, Brom, Jod, unterchlorige Säure, unterbromige Säure, Perchlorsäure, Peqodsäure, Salze der erwähnten unterhalogenigen Säuren und Perhalogensäuren, salpetrige Säure, Salpetersäure, Stickstofftetroxid, Stickstoffdioxid, Cobaltsalze, wie Cobalt-sulfat oder Cobaltacetat, Cersalze, wie Cersulfat, Ceroxid und Cerperchlorat, Wasserstoffperoxid und Ozon. Beispiele für organische Oxidationsmittel sind n-Bromsuccinimid, n-Chlorsuccinimid, Natrium-N-chlor-p-toluolsulfonamid, Natrium-N-chlorbenzolsulfonamid, Azoverbindungen, wie Äthylazodicarboxylat und 4-Phenyl-l,2,4-triazolin-3,5-dion und Percarbonsäuren, wie Perameisensäure, Peressigsäure, Monoperphthalsäure, Trifluorperessigsäure, Perbenzoesäure und m-Chlorbenzoesäure.

Von diesen Oxidationsmitteln werden besonders bevorzugt Permanganatsalze, Silberoxid, Wasserstoffperoxid, Chromsäure, Peressigsäure und Perbenzoesäure, wobei ganz besonders werden Permanganatsalze und Silberoxid.

Vorzugsweise wird das Oxidationsverfahren unter Anwendung eines Oxidationsmittels in einem geeigneten Lösungsmittel durchgeführt. Beispiele für geeignete Lösungsmittel sind Wasser und trockene oder feuchte organische Lösungsmittel, beispielsweise Alkohole, wie Methanol und Äthanol, Pyridin, Äther, wie Dioxan, Tetrahydrofuran und Diäthyläther, Ketone wie Acetone, Methyläthylketon, Carbonsäuren, wie Essigsäure und Propionsäure, Ester, wie

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Äthylacetat, aromatische Kohlenwasserstoffe, wie Benzol und Chlorbenzol, Hexamethylphosphoramid, Dimethylfor-mamid und Dimethylsulfoxid. Eine geeignete Menge an Oxidationsmittel beträgt etwa 1 bis 10 Äquivalente, vorzugsweise 1 bis 2 Äquivalente pro Formylgruppe der Ausgangsverbindung (Ia). Die Reaktion kann bei etwa —10 bis 100 °C, vorzugsweise 0 bis 50 °C, während 30 Minuten bis etwa 24 Stunden durchgeführt werden.

Bei einem Kontakt-Oxidations-Verfahren unter Verwendung eines Sauerstoff enthaltenden Gases, wie Luft oder Sauerstoff, kann man beispielsweise Sauerstoff oder Luft in eine wässrige Lösung von Natriumhydroxid oder Kaliumhydroxid in Abwesenheit eines Katalysators durchperlen lassen oder Luft oder Sauerstoff in eine wässrige Lösung in Gegenwart eines anorganischen Salzkatalysators, wie Kobaltnitrat, Manganacetat oder Kobaltacetat, oder in Gegenwart eines Radikalinitiators, wie Benzoylperoxid, oder unter Bestrahlung von Licht durchperlen lassen. Von diesem Verfahren wird ein Kontakt-Autooxidations-Verfahren, bei dem man Luft oder Sauerstoff in Abwesenheit eines Katalysators in eine wässrige alkalische Lösung leitet, besonders bevorzugt. Diese Umsetzung kann unter Rühren des Reaktionssystems gewöhnlich bei normaler Temperatur (etwas 1 bis 30 °C) bis 100 °C, vorzugsweise 40 bis 50 °C während etwa 30 Minuten bis 24 Stunden, gewöhnlich etwa 30 Minuten bis 2 Stunden, beendet werden.

Nach der vorgenannten Oxidationsreaktion wird das Oxidationsmittel, sofern eines verwendet wurde, mit einem Reduktionsmittel zersetzt, und dann werden anorganische Nebenprodukte durch Filtrieren, Neutralisation, Vakuumdestillation und dergleichen entfernt. Wird Luft oder dergleichen in das Reaktionssystem eingeperlt, so wird die Reaktionsmischung vorzugsweise mit Aktivkohle behandelt und dann angesäuert, beispielsweise mit Chlorwasserstoffsäure, um Kristalle auszufällen. Das Reaktionsmedium wird dann mit einem organischen Lösungsmittel, wie Äthylacetat, extrahiert und dann in üblicher Weise einem Reinigungs-Trennverfahren unterworfen, wie Säulenchromatografie oder fraktionierte Kristallisation. Auf diese Weise kann die gewünschte Verbindung (IB) abgetrennt und gewonnen werden.

Von den Verbindungen, die nach dem vorerwähnten Verfahren erhalten werden, hat eine Verbindung, in welcher eine der R2-und R3-Gruppen eine Formylgruppe und die andere der R2-und R3-Gruppen eine Carboxylgruppe ist (die-20 se Verbindung wird nachfolgend als Verbindung (lb) bezeichnet, die Struktur (Ib), die im kristallinen Zustand einen Lactolring hat. In einem Lösungsmittel, insbesondere in einem basischen Lösungsmittel, liegt die Verbindung (Ib) als Gleichgewichtsmischung der Verbindung (Ibj) und deren 25 tautomeren Form, der Monocarbonsäure (Ib2), vor, wie nachfolgend gezeigt wird.

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CH3 CH3

CHO

OOH

db2)

Die obigen Formeln sind ein Beispiel für eine Verbindung der Formel (I), worin R1 und R5 Wasserstoffatome, R2 eine Formylgruppe, R3 eine Carboxylgruppe und R4 und R6 Hydroxylgruppen sind.

Diese Struktur wurde bestätigt durch Auflösen der Verbindung (ibj) (kristallin) in Dimethylsulfoxid und Messung des kernmagnetischen Resonanzspektrums im Laufe der

Zeit. 20 Minuten nach dem Auflösen wurde eine Peak bei 9,89 ppm beobachtet, der ein charakteristisches Signal für ein Aldehydproton (—CHO) ist, neben einem Peak bei 65 6,36 ppm, der charakteristisch für ein Lactol ist. Das integrierte Verhältnis des ersteren Peaks zu dem letzteren Peak betrug etwa 73 zu 27. Zwei Stunden nach dem Auflösen nahm der Peak bei 9,89 ppm etwas zu und das integrierte

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Verhältnis zeigte etwa 70:30. Danach hat sich dieses integrierte Verhältnis im Laufe von 2 Stunden nach dem Auflösen kaum verändert. Dieses Ergebnis beweist, dass die Verbindung (Ibj) und die Verbindung (Ib2) als eine 7:3 molare Gleichgewichtsmischung in dem obigen Lösungsmittel vorlagen. Wird Methanol oder Pyridin als Lösungsmittel verwendet, konnte eine Bestätigung für die Verbindung (Ib2) die tautomer zu Verbindung (Ibi) ist, durch eine ähnliche NMR-spektroskopische Analyse nicht erfolgen.

B. Verfahren (2)

Verbindungen der Formel (I), in denen wenigstens ein R2 und R3 eine Hydroxymethylgruppe darstellen (nachfolgend als Verbindungen (IC) bezeichnet, können hergestellt werden, indem man (1) die Formyl- oder Carboxylgruppen der Verbindungen (IA) oder (IB) reduziert oder (2) indem man die Verbindungen der allgemeinen Formel (I), in denen R2

R9 O I H

und R3 in Form eines Lactonrings der Formel -CH-O-C— verbunden sind, wobei R9 ein Wasserstoffatom oder eine Hydroxylgruppe bedeutet (nachfolgend als Verbindungen (ID) bezeichnet), reduziert.

Diese vorstehend erwähnte Reduktion kann nach den folgenden beiden Verfahren durchgeführt werden.

Man kann die Reduktion der Formylgruppen durchführen unter Anwendung verschiedener üblicher Reduktionsverfahren für aromatische Aldehyde zu aromatischen Alkoholen, beispielsweise durch Anwendung eines Reduktionsmittels, einer katalytischen Reduktionsmethode oder einer elektrolytischen Reduktionsmethode.

Verwendet man ein Reduktionsmittel, so sind Beispiele für geeignete Reduktionsmittel Aluminiumhydrid-Verbin-dungen, wie Lithiumaluminiumhydrid, Natriumaluminiumhydrid, Natriumtriäthoxyaluminiumhydrid und Natrium-bis(2-methoxyäthoxy)-alumimumhydrid, Borhydridverbindungen, wie Natriumborhydrid, Lithiumborhydrid, Na-triumborhydridcyanid und Diboran, organische Zinnhydride, wie Tri-n-butylzinnhydrid, Diphenylzinnhydrid und Triäthylzinnhydrid, und Hydrosilane, wie Dimethylphenyl-silan und Triäthylsilan.

Verschiedene übliche Katalysatoren können bei einer katalytischen Reduktion verwendet werden. Beispiele für geeignete Katalysatoren sind Palladiumschwarz, Palladium auf Kohle, Raney-Nickel und Platinoxid. Annehmbare Mengen des Katalysators liegen im Bereich von etwa 1 bis 50 Gew.-%, vorzugsweise 6 bis 15 Gew.-%, bezogen auf das Gewicht der Ausgangsverbindung der Formeln (IA), (IB) oder (ID).

Die elektrolytische Reduktion kann durchgeführt werden unter Verwendung von beispielsweise Quecksilber, Blei, Platin, Zinn, Nickel, Palladium, Graphit und dergleichen als Kathode und indem man einen Gleichstrom einer Grösse von etwa 2 bis 12 V, vorzugsweise 4 bis 6 V, durch eine neutrale oder alkalische, die Verbindung enthaltende Lösung schickt.

Besonders vorteilhaft ist unter den angegebenen Reduktionsverfahren ein Verfahren, bei dem ein Reduktionsmittel angewendet wird, weil hier die Handhabung und auch die Kosten der Durchführung günstig sind. Besonders vorteilhaft ist die Verwendung von Natriumborhydrid als Reduktionsmittel. Im einzelnen kann dieses Verfahren durchgeführt werden in einem inerten Lösungsmittel, beispielsweise in einer wässrigen Lösung eines Alkalis, wie Natriumhydroxid oder Kaliumhydroxid, in Wasser, in einem niedrigen Alkohol, wie Methanol oder Äthanol, in einem Äther, wie Tetrahydrofuran oder Diaoxan, oder einer Mischung solcher Lösungsmittel. Die geeignete Menge an Reduktionsmittel, die man im allgemeinen verwendet, beträgt im allgemeinen wenigstens 1 Äquivalent, vorzugsweise 1 bis 8 Äquivalente, bezogen auf die zu reduzierenden Formylgruppen der Ausgangsverbindung. Die Reaktionstemperatur liegt im allgemeinen bei etwa 0 bis 60 °C, vorzugsweise 5 bis 25 °C. Im allgemeinen kann die Umsetzung in etwa 30 Minuten bis 10 Stunden beendet werden.

Wird die Verbindung (Ib) als Ausgangsverbindung bei der Reduktionsreaktion verwendet, muss ein basisches Material in das Reaktionssystem im voraus eingeführt werden, um den Lactolring zu öffnen. Dies ist erforderlich, weil unter neutralen oder sauren Bedingungen, die Verbindung (Ib) als Lactolverbindung vorliegt, mit der Struktur (Ibj), die sehr stabil ist und nicht leicht reduziert werden kann. Aus diesem Grund sollten die Reduktionsmittel, Lösungsmittel und die Reaktionsbedingungen, die vorher angegeben wurden, in Gegenwart eines basischen Materials, wie Natriumhydroxid, Kaliumhydroxid, Natriumcarbonat, Kaliumcarbonat oder Natriumhydrogencarbonat durchgeführt werden. Verwendbare Mengen des basischen Materials liegen bei etwa 1 Mol oder mehr pro Mol des Ausgangsmaterials. Vorzugsweise wird die oben erwähnte Ausgangsverbindung in Gegenwart einer basischen Substanz unter Rühren auf etwa 0 bis 80 °C, vorzugsweise 40 bis 60 °C, während etwa 1 bis 8 Stunden, zusammen mit wenigstens etwa 4 Äquivalenten, vorzugsweise 4 bis 16 Äquivalenten Natriumborhydrid als Reduktionsmittel erhitzt, und zwar in einem üblichen inerten Lösungsmittel, wie Wasser, Methanol, Äthanol, Tetrahydrofuran oder Dio-xan oder einer Mischung dieser Lösungsmittel.

Man kann die Reduktion der Carboxylgruppen in der Verbindung (IB) oder einer Verbindung (IC), die nach der vorher erwähnten Verfahrensweise erhalten wurde und in welcher einer der R2-und R3-Reste eine Hydroxymethylgruppe ist und der andere eine Carboxylgruppe ist und die zur Ausbildung eines Lactonrings verbunden sind (nachfolgend als Verbindung (Id) bezeichnet), in folgender Weise durchführen. Eine Verbindung (Id) wird mit wenigstens etwa 1 Äquivalent, vorzugsweise 1 bis 8 Äquivalenten pro Äquivalent der Verbindung (Id) Lithiumaluminiumhydrid als Reduktionsmittel in einem üblichen inerten Lösungsmittel, wie Dioxan oder Diäthyläther, bei etwa 0 bis 60 °C, vorzugsweise 5 bis 25 °C während etwa 30 Minuten bis 10 Stunden umgesetzt.

C. Verfahren (3)

Verbindungen der Formel (I), in denen R2 und R3 unter

O

«

Ausbildung eines Lactonrings der Formel -CH2-0-C- verbunden sind und die als Verbindungen (Id) bezeichnet werden, kann man leicht durch Cyclisierung unter Freigabe von Wasser herstellen, indem man Verbindungen der Formel (IC), die nach der vorher erwähnten Verfahrensweise erhalten wurden und in denen einer der Reste R2 und R3 eine Hydroxymethylgruppe und der andere dieser Reste eine Carboxylgruppe bedeutet, in Abwesenheit eines Lösungsmittels oder in Gegenwart eines geeigneten Lösungsmittels dehy-drocyclisiert.

Die obige Cyclisierungsreaktion durch Cyclisierung unter Freigabe von Wasser kann durch Direkterhitzen des Ausgangsmaterials auf etwa 100 bis 200 °C erfolgen. Alternativ kann man das Ausgangsmaterial in einem geeigneten inerten Lösungsmittel lösen und in Gegenwart einer katalytischen Menge einer sauren Verbindung von etwa 0,01 bis 50 Gew.-%, vorzugsweise 0,01 bis 10 Gew.-%, bezogen auf das Gewicht des Ausgangsmaterials, bei etwa 0 bis 200 °C, vorzugsweise 60 bis 150 °C während etwa 10 Minuten bis 24 Stunden, im allgemeinen 2 bis 10 Stunden, erhitzen. Beispiele für geeignete Lösungsmittel, die verwendet werden können, sind aromatische Kohlenwasserstoffe, wie Benzol undToluol, halogenierte Kohlenwasserstoffe, wie Dichlormethan, Di-

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chloräthan und Chloroform, Äther wie Dimethyläther, Tetrahydrofuran und Dioxan, Glycole, wie Äthylenglykol, und niedrige Alkohole, wie Äthanol und Methanol. Geeignete saure Verbindungen, die man verwenden kann, sind beispielsweise Chlorwasserstoff, konzentrierte Salzsäure, Phosphorsäure, Polyphosphorsäure, Bortrifluorid, Perchlorsäure, Trichlormethansulfonsäure, Trifluoressigsäure, Naphthalin-sulfonsäure, p-Toluolsulfonsäure, Benzolsulfonsäure, Thio-nylchlorid und Acetondimethylacetal.

D. Verfahren (4)

Verbindungen der allgemeinen Formel (I), in denen einer oder beide Reste R2 und R3 eine Gruppe der Formel -CH = CR7R8 bedeuten, worin R7 und R8 die vorher angegebenen Bedeutungen haben (die nachfolgend als Verbindungen (IE) bezeichnet werden), kann man herstellen, indem man Verbindungen (IA) mit aktiven Methylenverbindungen der allgemeinen Formel (II)

(l'I)

worin R7 und R8 die vorher angegebenen Bedeutungen haben, in Gegenwart eines Katalysators dehydrokondensiert.

Die Dehydrokondensierungsreaktion kann in Abwesenheit eines Lösungsmittels vorgenommen werden. Vorteilhaft wird die Dehydrokondensation aber in einem üblichen inerten Lösungsmittel, beispielsweise in wässriger Lösung eines Alkalis, wie Natriumhydroxid, Wasser, einem Alkohol, wie einem Methanol oder Äthanol, einem Äther, wie Dioxan oder Tetrahydrofuran, einem aromatischen Kohlenwasserstoff, wie Benzol oder Toluol, einem tertiären Amin, wie Pyridin oder Triäthylamin, oder einem halogenierten Kohlenwasserstoff, wie Methylenchlorid, Chloroform oder Tetrachlorkohlenstoff, durchgeführt. Wird eine wässrige alkalische Lösung verwendet und nimmt man Pyridin und Triäthylamin als Lösungsmittel, so wirken diese auch kataly-tisch, und es ist deshalb nicht erforderlich, einen weiteren Katalysator zuzufügen. Werden andere Lösungsmittel verwendet, so wird ein Katalysator, beispielsweise eine Aminosäure, wie ß-Alanin, ein cyclisches Amin, wie Piperidin oder Morpholin, Ammoniak, ein Amin, wie Äthylamin, Diä-thylamin oder Butylamin, Acetatsalze dieser Amine, ein Al-kaliacetat, wie Natriumacetat oder Kaliumacetat, oder ein Alkalialkoholat, wie Natriumäthylat oder Methylat in einer Menge von etwa 0,01 bis zu einem grossen Überschuss, vorzugsweise 0,05 bis 30 Gew.-%, bezogen auf das Gewicht des Ausgangsmaterials, verwendet.

Die Reaktionstemperatur und die Zeit werden in Abhängigkeit von dem verwendeten Lösungsmittel bestimmt. Wird ein unpolares Lösungsmittel, wie Benzol oder Chloroform verwendet, so wird die Reaktion im allgemeinen unter Erhitzen des Reaktionssystems auf eine Temperatur in der Nähe des Siedepunktes des Lösungsmittels durchgeführt, und während das bei der Reaktion gebildete Wasser als Azeotrop abgetrennt wird, wird die Umsetzung weitergeführt, bis die theoretische Menge an Wasser abgetrennt ist. Verwendet man ein gut mit Wasser lösbares Lösungsmittel, wie Äthanol, Pyridin oder Dioxan, so kann die Umsetzung gewöhnlich bei Raumtemperatur bis etwa 120 :C, vorzugsweise bei 30 bis 60 °C, während etwa 30 Minuten bis 24 Stunden, im allgemeinen 30 Minuten bis 3 Stunden durchgeführt werden, ohne dass man das während der Reaktion gebildete Wasser abtrennt.

Die Menge an verwendeter aktiver Methylenverbindung der Formel (II) bei der vorerwähnten Dehydrokondensa-tionsreaktion beträgt wenigstens etwa 1 Äquivalent, vorzugsweise 1 bis 2 Äquivalente, bezogen auf die Formylgrup-5 pen in der Ausgangsverbindung (IA).

E. Verfahren (5)

Verbindungen der allgemeinen Formel (I), in denen einer oder beide Reste R2 und R3 Hydroxylgruppen sind (nachfol-io gend als Verbindungen (IF) bezeichnet), kann man leicht herstellen, indem man Verbindungen der Formel (IA) mit Peroxiden in einem inerten Lösungsmittel umsetzt.

Beispiele für geeignete inerte Lösungsmittel sind wässrige Lösungen von Alkalien, wie Natriumhydroxid und Kalium-i5 hydroxid, Wasser, Pyridin, Methanol, Äthanol, Essigsäure, Propionsäure, Chloroform, Methylenchlorid, Methylenace-tat, Äthylacetat, Benzol und Toluol. Geeignete Peroxide sind organische oder anorganische Peroxide, wie Wasserstoffperoxid, Peressigsäure, Trifluorperessigsäure, m-Chlor-20 perbenzoesäure, Perbenzoesäure und Perfumarsäure.

Die Reaktionstemperatur liegt im allgemeinen bei etwa 0 bis 100 °C, vorzugsweise 0 bis 50 °C, und die Umsetzung wird unter Rühren des Reaktionssystems in etwa 1 bis 24 Stunden beendet. Die Menge an Peroxid beträgt wenigstens 25 etwa 2 Mol, vorzugsweise 2 bis 3 Mol pro Mol der Ausgangsverbindung (IA). Nach der Umsetzung gibt man ein geeignetes Neutralisationsmittel hinzu, und die Mischung wird unter vermindertem Druck konzentriert. Der Rückstand wird zu Eiswasser gegeben, und die ausgefallenen 30 Rohkristalle werden durch Filtrieren gesammelt, mit Wasser gewaschen und getrocknet. Die getrockneten Rohrkristalle werden in einem geeigneten Lösungsmittel, wie Chloroform, gelöst und durch Säulenschromatografie getrennt. Die gewünschte Verbindung (IF) erhält man gewöhnlich in einer. 35 mit Methanol eluierten Fraktion.

F. Verfahren (6)

Verbindungen der allgemeinen Formel (I), in denen beide Reste R2 und R3 Niedrigalkanoyloxymethylgruppen sind 40 (nachfolgend als Verbindungen (IG) bezeichnet), erhält man, indem man Verbindungen (IF), die nach dem Verfahren (5) erhalten wurden, acyliert.

Niedrige Alkansäuren, wie Essigsäure, Propionsäure, Butyrsäure, Isobutyrsäure, und dergleichen, deren Säurean-45 hydride oder die Säurehalogenide hiervon, wie Acetylchlo-rid, Propionylbromid, Butyrylbromid, Isobutyrylbromid und dergleichen, können beispielsweise als Acylierungsmittel bei dieser Reaktion verwendet werden. Niedrige Alkansäureanhydride und -säurehalogenide werden bevorzugt. Die so Acylierungsreaktion kann in Abwesenheit eines Lösungsmittels oder in Gegenwart eines üblichen inerten Lösungsmittels in Gegenwart einer basischen Verbindung durchgeführt werden. Beispiele für geeignete inerte Lösungsmittel sind aromatische Kohlenwasserstoffe, wie Benzol, Toluol, Äther, wie 55 Diäthyläther, Dioxan oder Tetrahydrofuran, halogenierte Kohlenwasserstoffe, wie Chloroform und Methylenchlorid, tertiäre Amine, wie Pyridin und Diäthylamin, Dimethylsulfoxid und Dimethylformamid. Geeignete basische Verbindungen schliessen beispielsweise ein Natriumcarbonat, Ka-6o liumcarbonat, Natriumhydrogencarbonat und tertiäre Amine, wie Pyridin, Chinolin, N,N-Dimethylanilin oder Triäthylamin.

Die Menge an basischer Verbindung liegt bei 1 Mol, vorzugsweise 1 bis 2 Mol pro Mol der Ausgangsverbindung, 65 wenn Säurehalogenid als Acylierungsmittel verwendet wird, und bei etwa 0,01 bis 10 Gew.-%, bezogen auf das Gewicht der Ausgangsverbindung, wenn Säureanhydrid als Acylierungsmittel verwendet wird.

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Die Umsetzung kann bei einer Temperatur von etwa —60 bis 150 °C, vorzugsweise 0 bis 100 °C, durchgeführt werden und ist in etwa 1 bis 20 Stunden beendet. Die Menge an Acylierungsmittel soll wenigstens etwa 1 Äquivalent, gewöhnlich 1 bis 10 Äquivalente, bezogen auf die Hydroxylgruppen der Ausgangsverbindung (IF) betragen.

Wird eine Verbindung der Formel (IF), in denen nicht nur R2 und R3, sondern auch wenigstens eine von -OR1, R4 oder R6 eine Hydroxylgruppe darstellen, als Ausgangsverbindung bei der vorerwähnten Acylierungsreaktion verwendet, so wird oder werden diese andere(n) Hydroxylgruppe(n) manchmal in Abhängigkeit von den Acylierungsbedingun-gen acyliert in Abhängigkeit von der Wahl der Reaktionstemperatur und der Menge des Acylierungsmittels. Wünscht man R2 und R3 selektiv zu acylieren und verwendet man als Ausgangsverbindungen solche der vorgenannten Art, so kann man die anderen Hydroxylgruppen (oder die Gruppe) unter Verwendung von üblichen Verfahren vor der Umsetzung schützen, und nach der Acylierung von R2 und R3 können die Schutzgruppen entfernt werden.

G. Verfahren (7)

Verbindungen der Formel (IA) bis (IG), die nach den vorher beschriebenen Verfahren erhältlich sind und in denen R1 eine Niedrigalkylgruppe bedeutet, werden erhalten, indem man die entsprechenden Verbindungen, in denen R1 ein Wasserstoffatom bedeutet, mit Alkylierungsmitteln umsetzt.

Beispiele für geeignete Alkylierungsmittel sind Alkyl-halogenide, wie Methyljodid, Äthylbromid, Propylbromid, Isopropylbromid, Butyljodid und tert.-butylbromid, Dial-kylsulfate, wie Dimethylsulfat oder Diäthylsulfat, und Dia-zoalkane, wie Diazomethan oder Diazoäthan.

Die Alkylierung wird bei Raumtemperatur bis etwa 100 °C, vorzugsweise bei 30 bis 70 °C durchgeführt, und zwar in einem üblichen inerten Lösungsmittel, beispielsweise einem Keton, wie Aceton oder Methyläthylketon, einem Äther, wie Tetrahydrofuran oder Djoxan, oder einem niedrigen Alkohol, wie Methanol oder Äthanol, und zwar in Gegenwart einer basischen Verbindung, wie Kaliumcarbonat, Natriumcarbonat, Natriumhydroxid oder Kaliumhydroxid, und zwar in einer Menge von etwa 0 bis 10 Mol, vorzugsweise 1 bis 2 Mol pro Mol des Acylierungsmittels. Die Umsetzung ist gewöhnlich in etwa 1 bis 8 Stunden beendet. Die Menge an Alkylierungsmittel soll wenigstens etwa 1 Mol, gewöhnlich 1 bis 5 Mol pro Mol der Ausgangsverbindung (IA) bis (IG) ausmachen. Verwendet man Diazomethan als Alkylierungsmittel, so entlallt die Verwendung einer basischen Verbindung.

H. Verfahren (8)

Verbindungen der Formel (IA) bis (IG), bei denen R1 eine niedrige Alkanoylgruppe ist, werden erhalten, indem man entsprechende Verbindungen, bei denen R1 Wasserstoff bedeutet, acyliert.

Die Acylierungsreaktion kann in Übereinstimmung mit dem vorher beschriebenen Verfahren (6) durchgeführt werden.

Verwendet man Verbindungen der allgemeinen Formel (I), in denen eine Hydroxylgruppe an anderer Position als in der 4-Stellung ist, als Ausgangsmaterial, so findet leicht eine Acylierung der Hydroxylgruppe unter den Acylierungsbe-dingungen des vorher erwähnten Verfahrens (6) statt. Infolgedessen muss man beim Acylieren solcher Ausgangsverbindungen die Hydroxylgruppe, die an einer anderen Position als in 4-Stellung steht, vorzugsweise in üblicher Weise mit einer geeigneten Schutzgruppe schützen.

I. Verfahren (9)

Verbindungen der allgemeinen Formel (IA) bis (IG), in denen R4 und R6 Niedrigalkanoyloxygruppen bedeuten, erhält man durch Acylieren der entsprechenden Verbindun- • gen, in denen R4 und R6 Hydroxylgruppen sind. Bei dieser Umsetzung können die gleichen Acylierungsbedingungen, Schutzmassnahmen und nachfolgende Abspaltung der Schutzgruppen für andere funktionelle Gruppen angewendet werden, wie beim Verfahren (6).

J. Verfahren (10)

Verbindungen der allgemeinen Formeln (IA) bis (IG), in denen R4 und R6 Niedrigalkylidendioxygruppen bedeuten, erhält man durch Umsetzung der entsprechenden Verbindungen, in denen R4 und R6 Hydroxylgruppen bedeuten, mit Aldehyden oder Ketonen der allgemeinen Formel

C=0 (Hl)

worin R10 und R11, die gleich oder verschieden sein können, jeweils ein Wasserstoffatom oder eine Niedrigalkylgruppe bedeuten, oder mit Acetalen oder Ketalen der folgenden allgemeinen Formel

11^ \

r' och,

o worin R10 und R11, die gleich oder verschieden sein können, die vorher erwähnte Bedeutung haben, in Gegenwart eines Katalysators.

Diese Umsetzung kann in Gegenwart oder in Abwesenheit eines Lösungsmittels durchgeführt werden. Beispiele für geeignete Lösungsmittel sind aromatische Kohlenwasserstoffe, wie Benzol und Toluol, Äther, wie Diäthyläther und Dioxan, halogenierte Kohlenwasserstoffe, wie Chloroform und Methylenchlorid, und Ketone, wie Aceton und Methyläthylketon. Beispiele für geeignete Katalysatoren sind Halogenwasserstoffe, wie Chlorwasserstoff und Bromwasserstoff, Lewis-Säuren, wie konzentrierte Schwefelsäure, wasserfreies Aluminiumchlorid, wasserfreies Zinkchlorid und Bortrifluorid, und p-Toluolsulfonsäure. Die Menge an verwendetem Katalysator liegt bei etwa 0,1 bis 20 Gew.-%, vorzugsweise 5 bis 10 Gew.-%, bezogen auf das Gewicht des Ausgangsmaterials. Die Verbindungen der allgemeinen Formeln (III) und (IV), die bei der Umsetzung verwendet werden, werden im allgemeinen im Überschuss eingesetzt, gegenüber den Verbindungen der allgemeinen Formeln (IA) bis (IG), weil sie auch als Lösungsmittel dienen. Geeignete Reaktionstemperaturen sind etwa 30 bis 70 °C, vorzugsweise 0 °C bis Raumtemperatur. Unter diesen Bedingungen ist die Umsetzung in etwa 30 Minuten bis 6 Stunden beendet.

K. Verfahren (11)

Verbindungen der allgemeinen Formeln (IA) bis (IG), in denen R4 und R5 zusammengenommen eine Oxogruppe (-0) bedeuten, erhält man durch Oxidieren der entsprechenden Verbindungen, in denen R4 eine Hydroxylgruppe und R5 ein Wasserstoffatom ist. Die Oxidationsreaktion kann unter Anwendung zahlreicher bekannter Oxidationsmittel, wie sie zum Oxidieren von sekundären Alkoholen zu einer s

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Oxogruppe verwendet werden, durchgeführt werden. Beispiele für geeignete Oxidationsmittel sind Chromsäure, Bichromsäure, Salze dieser Säuren mit Metallen, wie Natrium oder Kalium, Salpetersäure, Halogene, wie Brom oder Chlor, Oppenauer-Oxidationsmittel und Jones-Reagenz.

Die Umsetzung wird vorzugsweise in einem geeigneten Lösungsmittel durchgeführt. Beispiele für geeignete Lösungsmittel sind Wasser, Alkohole, wie Methanol und Äthanol, Äther, wie Dioxan, Tetrahydrofuran und Diäthylät-her, Ketone, wie Aceton und Methyläthylketon, organische Säuren, wie Essigsäure und Propionsäure, Ester, wie Äthylacetat, aromatische Kohlenwasserstoffe, wie Benzol und Chlorbenzol, halogenierte Kohlenwasserstoffe, wie Dichlor-methan und Dichloräthan, Dimethylformamid, Dimethylsulfoxid und Pyridin.

Die Menge an ausgewähltem Oxidationsmittel kann in einem weiten Bereich gewählt werden. Gewöhnlich wird das Oxidationsmittel im Überschuss angewendet.

Die Umsetzung kann bei etwa —10 bis 100 °C, vorzugsweise bei 0 °C bis Raumtemperatur, während etwa 30 Minuten bis 6 Stunden durchgeführt werden.

Wenn in der vorerwähnten Oxidationsreaktion Ausgangsverbindungen verwendet werden mit Gruppen, die leicht durch die Oxidationsreaktion verändert werden, wie Formyl- oder Hydroxylgruppen, so ist es wünschenswert, diese Gruppen mit geeigneten Schutzgruppen in üblicher Weise wie beim Verfahren (6) zu schützen. Die Entfernung der Schutzgruppen nach der Reaktion kann dann in einfacher üblicher Weise erfolgen.

Die Sesquiterpenderivate der allgemeinen Formel (I) der Erfindung kann man erhalten, indem man mehr als eines der Verfahren (1) bis (11) in geeigneten Reihenfolgen anwendet und gewünschtenfalls, indem man reaktive Stellen schützt und anschliessend die Schutzgruppen entfernt. Dabei kann man zahlreiche Trenn- und Reinigungsverfahren anwenden.

Von den Sesquiterpenderivaten der Formel (I) der Erfindung können solche, welche saure Gruppen enthalten, d.h. eine phenolische Hydroxylgruppe und/oder eine Carboxylgruppe mit basischen Verbindungen zur Bildung von Salzen, umgesetzt werden. Die Erfindung schliesst auch die Salze der Sesquiterpenderivate der allgemeinen Formel (I) ein.

Beispiele für basische Verbindungen, die man für die Herstellung von Salzen der Sesquiterpenderivate der allgemeinen Formel (I) verwenden kann, sind Hydroxide und Carbonate von Alkalimetallen und Erdalkalimetallen, wie Natriumhydroxid, Kaliumhydroxid, Kalziumhydroxid, Na-triumcarbonat, Kaliumcarbonat und Natriumhydrogencar-bonat. Auch organische Amine, wie Methylamin, Äthyl-amin, Isopropylamin, Morpholin, Piperazin, Piperidin und 3,4-Dimethoxyphenäthylamin, können als basische Verbindungen verwendet werden.

Die Salzbildung unter Verwendung der basischen Verbindungen kann leicht in einem organischen Lösungsmittel unter Anwendung üblicher Verfahren zur Salzbildung erfolgen. Beispiele für geeignete Lösungsmittel sind Wasser^ niedrige Alkohole, wie Methanol, Äthanol und Propano!, Äther, wie Dioxan und Tetrahydrofuran, Aceton, Benzol, Äthylacetat, Dimethylsulfoxid, Dimetylformamid, Metylenchlo-rid und Chloroform. Die Salzbildung kann bei Raumtemperatur bis etwa 100°C, vorzugsweise bei Raumtemperatur bis 50 °C, während etwa 5 Minuten bis 6 Stunden und gewöhnlich an der offenen Atmosphäre oder unter sauerstofffreien Bedingungen, vorzugsweise aber in einer Atmosphäre eines inerten Gases, wie Stickstoff oder Argon, durchgeführt werden. Die Menge an basischer Verbindung ist nient besonders beschränkt, aber im allgemeinen liegt eine geeignete

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Menge bei wenigstens etwa 1 Äquivalent, vorzugsweise 1 bis 2 Äquivalenten, bezogen auf die sauren Gruppen in der Ausgangsverbindung.

Nach Beendigung der vorher angegebenen Umsetzungen kann man die Endprodukte leicht unter Anwendung üblicher Trennverfahren abtrennen und reinigen. Beispielsweise kann man als Trennverfahren das Destillieren des Lösungsmittels, Lösungsmittelextraktion, Ausfällen, Umkristallisieren, Säulenschromatografie und präparative Chromato-grafie anwenden.

III. Therapeutische Mittel

Die Sesquiterpenderivate der allgemeinen Formel (I) und deren pharmazeutisch annehmbare Salze sind als Mittel zur Behandlung von Nephritis geeignet, und bei ihrer Anwendung als Behandlungsmittel gegen Nephritis werden sie zu pharmazeutischen Produkten, zusammen mit üblichen pharmazeutisch annehmbaren Trägern, verarbeitet. Geeignete Träger sind beispielsweise Verdünnungsmittel oder Ex-zipientien, wie Füllstoffe, Extender, Bindemittel, Befeuchtungsmittel, Mittel, die den Zerfall vereinfachen, oberflächenaktive Mittel und Schmiermittel, soweit diese Mittel je nach der Verabreichungsmethode zugesetzt werden.

Es können verschiedene Dosierungsverabreichungsfor-men für die therapeutischen Mittel als Mittel für die Behandlung von Nephritis, je nach dem Zweck der Therapie, verwendet werden. Typische Dosierungsformen sind Tabletten, Pillen, Pulver, flüssige Zubereitungen, Suspensionen, Emulsionen, Granulate, Kapseln, Suppositorien, und injizierbare Zubereitungen (Lösungen, Emulsionen, Suspensionen und dergleichen).

Beim Verformen einer pharmazeutischen Zubereitung, welche die Sesquiterpenderivate der allgemeinen Formel (I) oder deren Salze als aktiven Bestandteil enthalten, zu einer Tablette, kann eine grosse Zahl von Trägern, wie sie bekannt sind, verwendet werden. Beispiele für geeignete Träger sind Exzipientien, wie Lactose, Succrose, Natriumchlorid, Gluco-selösungen, Harnstoff, Stärke, Kalziumcarbonat, Kaolin, kristalline Zellulose und Kieselsäure, Bindemittel, wie Wasser, Äthanol, Propanol, einfacher Sirup, Glukose, Stärkelösungen, Gelatinelösungen, Carboxymethylzellulose, Shellac, Methylzellulose, Kaliumphosphat und Polyvinylpyrrolidon, Zerfallmittel, wie getrocknete Stärke, Natriumalginat, Agar-pulver, Laminariapulver, Natriumbicarbonat, Kalziumcarbonat, Tween, Natriumlaurylsulfat, Stearinsäuremonoglyze-rid, Stärke und Lactose, Zerfallsinbitoren, wie Succrose, Stearinsäure, Glyzerinester, Kakaobutter und hydrierte Öle, Absorptionsbeschleuniger, wie quaternäre Ammoniumbasen und Natriumlaurylsulfat, Mittel zum Beibehalten der Feuchtigkeit, wie Glyzerin und Stärke, Adsorbentien, wie Stärke, Lactose, Kaolin, Bentonit und kolloidale Kieselsäure, und Schmiermittel, wie gereinigter Talk, Stearinsäuresalze, Bor-säurepulver, Macragol und festes Polyäthylenglykol.

Beim Verformen der pharmazeutischen Zusammensetzungen zu Pillen kann eine grosse Anzahl von üblichen Trägern verwendet werden. Beispiele für geeignete Träger sind Exzipientien, wie Glucose, Lactose, Stärke, Butterfett, gehärtete Pflanzenöle, Kaolin und Talk, Bindemittel, wie Gummiärabikumpulver, Traganthpulver, Gelatine und Äthanol, und Zerfallsmittel, wie Laminaria und Agar. Gewünschtenfalls können die Tabletten beschichtet sein und zu zuckerbeschichteten, gelatinebeschichteten, enterischbe-schichteten, filmbeschichteten Tabletten oder Tabletten, die mit zwei oder mehr Schichten beschichtet sind, verarbeitet werden. Beim Verformen der pharmazeutischen Zusammensetzung zu Suppositorien kann eine grosse Zahl von bekannten Trägermaterialien verwendet werden. Geeignete Träger sind beispielsweise Polyäthylenglykol, Kakaobutter, höhere

15

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

65

641452

16

Alkohole, Ester von höheren Alkoholen, Gelatine und halbsynthetische Glyzeride.

Werden die pharmazeutischen Zusammensetzungen zu injizierbaren Zubereitungen formuliert, so können die flüssigen Lösungszubereitungen und Suspensionen vorzugsweise sterilisiert werden und im Hinblick auf das Blut isotonisch gemacht werden. Bei der Formulierung der pharmazeutischen Zusammensetzungen zu flüssigen Lösungen oder Suspensionen können alle für diesen Zweck üblichen Verdünnungsmittel verwendet werden. Beispiele für geeignete Lösungsmittel sind Wasser, Äthylalkohol, Propylenglykol, äthoxylierter Isostearylalkohol, Polyoxyäthylensorbitol und Sorbitester. Natriumchlorid, Glykose oder Glyzerin können in Mengen, die zur Herstellung von isotonischen Lösungen ausreichen, in ein therapeutisches Mittel eingearbeitet werden, beispielsweise in ein Mittel zur Bekämpfung der Nephritis. Das therapeutische Mittel kann auch gewöhnliche Auflösungshilfen, Puffer, schmerzlindernde Mittel und Konservierungsmittel sowie gewünschtenfalls Farbstoffe, Parfüms, Geschmacksstoffe, Süsser und andere Arzneimittel enthalten.

Die Menge der Verbindung der allgemeinen Formel (I) und deren pharmazeutisch annehmbare Salze, die man als aktive Bestandteile in einer pharmazeutischen Zubereitung verwendet, die zur Bekämpfung der Nephritis beabsichtigt ist, ist nicht besonders beschränkt und kann im weiten Bereich variieren. Eine therapeutisch wirksame Menge liegt gewöhnlich bei etwa 1 bis 70 Gew.-%, vorzugsweise 5 bis 50 Gew.-%, bezogen auf die gesamte Zusammensetzung.

Es gibt keine spezielle Beschränkung für die Anwendung als Bekämpfungsmittel gegen Nephritis, und das therapeuti-

15

sehe Mittel kann in der jeweils für das therapeutische Mittel geeigneten Form verabreicht werden. Beispielsweise können Tabletten, Pillen, flüssige Zubereitungen, Suspensionen, Emulsionen, Granulate oder Kapseln oral verabreicht wer-5 den. Die injizierbaren Zubereitungen werden intravenös verabreicht, und zwar entweder allein oder zusammen mit üblichen Hilfsmitteln, wie Glukose und Aminosäure. Weiterhin können gewünschtenfalls die therapeutischen Mittel intramuskulär, intrakutan, subkutan oder intraperitoneal ver-io abreicht werden. Suppositorien werden intrarektal verabreicht.

Die Dosierung der Nephritis-Behandlungsmittel wird dem Verwendungszweck und den Symptomen und dergleichen angepasst. Im allgemeinen werden die Verbindungen der Erfindung in Mengen von etwa 0,5 bis 20 mg/kg Körpergewicht pro Tag verabreicht.

Die erfindungsgemässen Verbindungen haben eine An-tikomplement-Aktivität und sind wirksam als therapeutische Mittel für autoimmune Krankheiten, Kollagen-Krankheiten 20 und rheumatische Krankheiten, bei denen jeweils komplementäre Systeme betroffen sind.

Die Ergebnisse bei pharmakologischen Versuchen mit den erfindungsgemässen Verbindungen der allgemeinen Formel (I) und deren Salze werden nachfolgend gezeigt.

25

1. Geprüfte Verbindungen

Die Verbindungen 1 bis 12 der Erfindung, die nachfolgend gezeigt werden, wurden geprüft. Dabei werden die Ver-30 bindungen 1 bis 10 durch die Bezugnahme auf die allgemeine Formel (I) beschrieben, bei denen die verschiedenen Sub-stituenten wie in Tabelle 1 vorliegen.

(I)

CU.3 CHz,

worin die Verbindungen der nachstehenden Tabelle 1 die folgenden sind: R4 = -OH, R5 =-H und Rs =-OH'.

Tabelle 1

Verbindung Nr.

R1

R2

R3

-H

-Na

-H

-CHO -CHO -OH

-CHO

-COONa

-OH

„CN

CN

-H

-CH=C.

-CH=C

CN

CN

17

Tabelle 1 (Fortsetzung)

641 452

Verbindung Nr.

R1

R2

R3

9 10

-h

-h

-h -h -h

-ch3

-ch=c

-CH = C

,cn scooc2h5

^CN ^cooh

-ch = chcooh -ch2oh

-ch2oh -ch2oh

-ch=c

-ch=c cn scooc2h5

_cn "cooh

-ch=chcooh

-cooh

-ch2oh

-ch2oh

Die Verbindung Nr. 11 hat die folgende Strukturformel:

l3 CH3

Die Verbindung Nr. 12 hat die folgende Strukturformel.

CH3 CH3

2. Antikomplementäre Aktivität

Die antikomplementären Aktivitäten wurden gemessen and bestätigt nach der in der japanischsprachigen Veröffent-

ichung «Meneki Kagaku» (Immuno-chemistry), Yuichi Ya-

nanura et al. S. 830 834, Asakura Shoten, Tokyo, Japan

1973), beschriebenen Methode. Im einzelnen wurde wie folgt gearbeitet: In ein Reagenzglas wurden 0,5 ml einer wässrigen Dispersion jeder der zu prüfenden Verbindungen 65 gegeben, 0,5 ml sensitivierte Erythrocyten (EA), enthaltend 1 x 108 Zellen/ml, 1 ml einer 5fach verdünnten Lösung eines Veronal-Puffers, enthaltend Gelatine, Ca+ + und Mg+ + (GVB + +) und 0,5 ml Komplement-Serum, verdünnt auf das

641 452

150fache mit der GVB+ + Verdünnungsflüssigkeit. Die Mischung wurde 60 Minuten bei 37 °C gehalten. Dann wurden 5 ml einer eiskalten physiologischen Kochsalzlösung zugegeben, und die Mischung wurde zentrifugiert. Das Absorbanz der überstehenden getrennten Flüssigkeit wurde mit OD4.13 gemessen, und das Ausmass, in dem die Versuchsverbindung die Hämolyse der sensitivierten Erythrocyten inhibierte, wurde bestimmt. Die 50% Hämolyse-Inhibierungsaktivitäts-zahl (y/ml), die nach der vorerwähnten Methode bestimmt wurde, wird für jede der geprüften Verbindungen in der nachfolgenden Tabelle 2 angegeben.

3. Akute Toxizität Die LD5 „-Werte (mg/kg) der geprüften Verbindungen bei intravenöser Verabreichung bei Mäusen wurde gemessen, und die Ergebnisse sind in der Tabelle 2 angegeben.

Tabelle 2

Verbindung

Antikomplementärer

LDS0-Wert

Nr.

Aktivitätswert (v/ml)

(mg/kg)

1

10

40

2

60

500

3

80

150

4

40

200

5

80

200

6

40

250

7

80

150

8

125

-

9

500

-

10

250

-

11

600

-

12

450

-

Chlorophyllin

40

-

18

4. Therapeutische Wirkung bei nephrotoxinartiger Nephritis

Ratten-Nephrotoxin (abgekürzt als «NT») wurde in der vorher erwähnten Weise erhalten. Rattennierencortex wurde 5 mit einer gleichen Menge physiologischer Kochsalzlösung homogenisiert. Die homogenisierte Mischung wurde mit Freund's Complete Adjuvants (ein Produkt der Difco Company) im Volumenverhältnis von 1:1 vermischt. Zwei ml der entstandenen Mischung wurden intramuskulär einem Ka-10 ninchen (Körpergewicht 3100 g zur Immunisierung verabreicht. Nach 1 V2 Monaten wurde Blut aus dem Herz des Kaninchens entnommen, und das Serum wurde gewonnen. Das erhaltene Serum wurde 30 Minuten bei 56 °C inaktiviert, dann mit einer 40%igen wässrigen Lösung von Ammonium-15 sulfat ausgesalzen und fraktioniert. Die y-Globulin- (IgG-) Fraktion wurde zur Bestimmung von NT gesammelt.

Die Bewertung erfolgte unter Verwendung von männlichen Wister-Ratten mit einem Körpergewicht von 150 bis 20 160 g, wobei jede Prüfverbindung 3mal eingesetzt wurde. Die Prüfverbindung wurde intraperitoneal verabreicht, und zwar lmal alle 24 Stunden während 7 Tagen. Eine Stunde nach der Verabreichung der Prüfverbindung am dritten Tag wurde die NT verabreicht. NT wurde intravenös injiziert in 25 einer Menge von 1 ml in die Schwanzvene. Chlorophyllin (CP) wurde als Vergleichsverbindung verwendet, und eine physiologische Kochsalzlösung wurde als Kontrolle verwendet.

Die Proteinharnstoffmenge (Gesamtmenge, die inner-30 halb 24 Stunden mit dem Urin ausgeschieden wurde) wurde gemessen nach der Trübungsmethode unter Verwendung von Rinderserumalbumin als Kontrolle mittels Sulfosalicyl-säure. Die Ergebnisse sind in der nachfolgenden Tabelle 3 angezeigt.

Tabelle 3

Verbindung Nr.

Dosierung (mg/Ratte)

Wiederholungen

Anzahl der Tage* 1 4

7

10

Verbindung Nr. 1

1

2,5**

1,5

0,8

8

3

2

4,3

2,1

1,8

10

3

1,7

1,1

0,9

7

Durchschnitt

2,8

1,6

1,2

8

Verbindung Nr. 2

1

2,7

1,8

0,7

9

5

2

4,1

2,0

1,5

12

3

2,3

1,3

1,2

7

Durchschnitt

3,0

1,7

1,1

9

Verbindung Nr. 6

1

2,1

1,9

0,8

13

5

2

1,5

1,2

0,9

7

3

3,7

2,3

1,4

9

Durchschnitt

2,5

1,8

1,0

10

Chlorophyllin

1

2,4

1,5

0,9

9

(Vergleich)

5

2

4,4

2,6

1,7

8

3

3,2

2,1

3,5

6

Durchschnitt

3,4

2,1

2,0

8

_

1

13

16

21

29

2

19

23

25

35

(Kontrolle)

3

11

18

24

40

Durchschnitt

14

19

23

35

* Die Zahl der Tage in Tabelle 3 wird berechnet von der Zeit der Verabreichung der geprüften Verbindung, was eine

Stunde vor der Anwendung von NT erfolgte.

** Die Menge an Proteinharnstoff wird in Einheiten von mg/Tag angegeben.

Die Proteinharnstoffmenge bei einer gesunden Ratte beträgt 0,5 bis 5 mg/Tag. Übersteigt die Proteinharnstoffmenge diesen Bereich, insbesondere wenn die Proteinharnstoffmenge mehr als 10 mg/Tag beträgt, kann man mit Sicherheit sagen, dass eine Nephritis vorliegt. Wie aus den Ergebnissen in Tabelle 3 ersichtlich wird, lag Nephritis bei den Kontrolltieren vor, während im Fall der Verbindungen der vorliegenden Erfindung und CP die Menge an Proteinharnstoff von der Zeit der Verabreichung von NT bis 10 Tage nach der Verabreichung im wesentlichen die gleiche ist wie bei gesunden Ratten. Somit ist ersichtlich, dass bei Verabreichung der erfindungsgemässen Verbindungen primäre und sekundäre Reaktionen inhibiert werden.

Wird der gleiche Versuch mit den Verbindungen Nr. 3 bis 5 und 7 bis 12 gemäss der Erfindung durchgeführt, so stellt man in allen Fällen fest, dass die primäre Reaktion einer nephrotoxinartigen Nephritis inhibiert wird.

5. Therapeutische Wirkung bei Heymann-artiger Nephritis

In diesem Versuch wurden männliche Wistar-Ratten mit einem Körpergewicht von 180 bis 200 g verwendet. Die Rattenniere wurde extrahiert und mit einer gleichen Volumen

Tabelle 4

Verbindung Nr. Dosierung Wiederholungen Anzahl der Tage

(mg/Ratte)

vor der Verabreichung

1

4

7

14

21

Verbindung Nr. 1

1

95

90

47

17

9

10

3

2

132

125

65

35

15

12

3

121

120

70

27

10

9

Durchschnitt

116

11

61

26

11

10

Verbindung Nr. 2

1

117

109

59

23

13

9

5

2

132

127

67

41

17

13

3

105

114

51

25

11

12

Durchschnitt

118

117

59

30

14

11

Verbindung Nr. 6

1

98

113

48

36

18

8

5

2

127

121

63

47

21

15

3

139

116

57

29

13

14

Durchschnitt

121

116

56

37

17

12

Chlorophyllin

1

123

116

72

32

16

10

(Vergleich)

5

2

117

108

63

29

12

8

3

129

121

52

22

15

13

Durchschnitt

123

115

62

28

14

10

_

1

135

127

132

135

114

126

(Kontrolle)

2

121

105

121

103

105

109

3

137

117

135

121

109

132

Durchschnitt

131

116

129

119

109

122

19 641452

menge einer physiologischen Kochsalzlösung homogenisiert. Das Homogenisat wurde mit einer Schwerkraft von 1500 G 1 Stunde zentrifugiert. Die überstehende Flüssigkeit wurde nach dem Verfahren von T. S. Edgington et al., Journal of s Expérimental Medicins, 127, 555 (1968), gereinigt und mit Freund's Complete Adjuvant 37 Ra (ein Produkt der Difco Company) in einem Volumenverhältnis von 0,4:1 vermischt. Die erhaltene Mischung wurde intraperitoneal isologen Ratten in einer Menge von 0,5 ml/Ratte injiziert. Anschliessend io wurde die gleiche Menge des Adjuvants alle 2 Wochen verabreicht, bis die Proteinharnstoffmenge 100 mg/Tag überstieg. (Diese Zeit beträgt etwa 6 bis 8 Wochen.)

Jede der in der Tabelle 4 gezeigten Prüfverbindungen wurde an die Ratten verabreicht, die mit Nephritis vom Hey-15 mann-Typ befallen waren und die ein Körpergewicht von 300 bis 350 g hatten. Die Verabreichung wurde lmal täglich während 7 Tagen vorgenommen, und die Menge an Proteinharnstoff (mg/Tag) wurde in gleicher Weise wie vorher angegeben gemessen. CP wird als Vergleichsverbindung verwen-

20 det, und die physiologische Kochsalzlösung wurde als Kontrolle verwendet. Es wurden 3 Wiederholungen für jede Prüfverbindung durchgeführt. Die Ergebnisse sind in der nachfolgenden Tabelle 4 gezeigt.

Zwei oder drei Wochen nach Beginn der Prüfung hatte sich das Körpergewicht der Ratten auf400 bis 500 g erhöht, und die normalen Proteinharnstoffmengen betrugen etwa 5 bis 15 mg/Tag. Wie aus den Ergebnissen der Tabelle 4 ersichtlich wird, können die Verbindungen gemäss der Erfindung eine Nephritis vom Heymann-Typ heilen.

Wird der gleiche Versuch durchgeführt mit den Verbindungen Nr. 3 bis 5 und 7 bis 12 gemäss der Erfindung, stellt man fest, dass sie im wesentlichen die gleiche Aktivität haben bei der Heilung von einer Nephritis vom Heymann-Typ.

IV. Beispiele

Zur besseren Beschreibung der vorliegenden Erfindung wird die Herstellung der Verbindungen gemäss der Erfin-

55 dung der allgemeinen Formel (I) in den nachfolgenden Beispielen näher erläutert. In den Referenzbeispielen erfolgt die Erläuterung der Herstellung von den erfindungsgemässen Verbindungen enthaltenden Mitteln zur Bekämpfung von Nephritis.

6o Wenn nicht anders angegeben, sind alle Teile, Prozentsätze und Verhältnisse auf das Gewicht bezogen; die hierin verwendete Raumtemperatur liegt bei etwa 15 bis 25 °C.

Beispiel 1

65 In einen 500-mI-Sakaguchi-KoIben wurden 100 ml eines Kulturmediums folgender Zusammensetzung vorgelegt, und Stachybotrys sp. K-76 wurde bei 28 °C und einem pH von 6 während 4 Tagen unter Schütteln kultiviert.

641452

20

Formulierung des Kulturmediums

Glyzerin

Stärke

Lactose

Sojabohnenpulver

Hefeextrakt

Malzextrakt

CaC03

MgSo4

%

0,5 1,0 0,2 0,5 0,1 0,2 0,3 0,05

Abtastzeit:

Abtastbreite:

Abtastende:

5 min 10 ppm 0 ppm

In einen 30-Liter-Glasfermentator wurden 201 eines Kulturmediums der obigen Formulierung gegeben, und ein Kolben der erhaltenen Saatkultur wurde in dem Kulturmedium bei 28 °C während 5 Tagen unter Rühren mit 300 U./min an der Luft kultiviert, wobei die Umlaufgeschwindigkeit 1Vs1 des Kulturmediums pro Minute betrug. Die erhaltene Kulturbrühe wurde mit einer Geschwindigkeit von 8000 U./min zentrifugiert zur Entfernung der Mikrobenzellen. Zu der überstehenden Flüssigkeit wurden 51 Methanol gegeben, und die Mischung wurde geführt und dann 3 Stunden stehengelassen. Die Mischung wurde zur Entfernung des Niederschlages zentrifugiert, die gebildeten Feststoffe wurden von der überstehenden Flüssigkeit entfernt, und der Rückstand wurde mit einer gleichen Volumenmenge Äthylacetat extrahiert. Das Lösungsmittel wurde aus der Äthylacetat-schicht unter vermindertem Druck abdestilliert. Der Rückstand wurde in Methanol gelöst und durch eine Säule mit Aktivkohle geleitet. Das Eluat wurde zur Trockene unter vermindertem Druck konzentriert. Die getrocknete Masse wurde in einer Mischung aus Chloroform/Äthylacetat (1:1 V/V) gelöst und durch eine Säule von Sephadex LH-20 gelfiltriert. Das Filtrat wurde einer Dünnschichtchromato-grafie unterworfen unter Verwendung einer Mischung aus Äthylacetat, Chloroform und Essigsäure (Volumenverhältnis 50:50:20) als Entwicklungsmittel, und es wurde eine Fraktion mit einer antikomplementären Aktivität entsprechend Rf = 0,34 gesammelt. Als Alternative wurde das Filtrat einer Dünnschichtchromatografie unter Verwendung einer Mischung aus Benzol, Butanol und Essigsäure (im Volumenverhältnis von 60:50:5) als Entwicklungsmittel unterworfen, und es wurde eine Fraktion mit einer antikomplementären Aktivität entsprechend einem Rf = 0,58 gesammelt. Beim Verdampfen des Lösungsmittels aus der Fraktion erhielt man 2,0 g 6,7-Dihydroxy-2,5,5,8a-tetramethyl-l,2,3,4,4a,5,6,7,8,8a-decahydronaphthalin-l-spiro2'-(6',7'-diformyl-4'-hydroxy-2',3'-dihydrobenzofuran), eine hellgelbe, schwach-saure Substanz mit einer antikomplementären Aktivität. Die Bildung dieser Verbindung wurde durch Messung der folgenden physikochemischen Eigenschaften bestätigt.

1- Md20 = —48° (C = 2,5, Methanol)

2. Elementaranalyse für C23H30O6

Berechnet %: C 68,64 H 7,51

Gefunden %: C 68,58 H 7,55

3. Ultraviolettes Absorptionsspektrum (UV-Analyse)

X Äthanol = 246 nm (e = 16 474)

max = 307 nm (s = 6659)

4. Kernmagnetisches Resonanzspektrum (NMR):

Die NMR-Analyse wurde unter Verwendung von Pyridin-ds [Natrium-2,2-dimethyl-2-silapentan-5-sulfonat] (DSS) als Lösungsmittel durchgeführt. Das so erhaltene kernmagnetische Spektrum wird in Fig. 5 gezeigt. Die Bedingungen zum Messen des NMR-Spektrums waren die folgenden:

s Beispiel 2

In einen 500-ml-Sakaguchi-Kolben wurden 100 ml eines Kulturmediums der folgenden Zusammensetzung vorgelegt und Stachybotrys chartarum IFO 5369, ein bekannter Stamm, wurde in 4 Tagen bei einem pH von 6 unter Schüt-lo teln bei 28 °C kultiviert.

Formulierung des Kulturmediums

Glyzerin

Stärke

Lactose

Sojabohnenpulver

Hefeextrakt

Malzextrakt

CaC03

MgS04

15

20

0,5 1,0 0,2 0,5 0,1 0,1 0,3 0,05

Spektralamplitude:

Filter:

RF-Output:

4x 100 0,1 sek 0,05 mG

In einen 30-Liter-Glasfermentator wurden 201 eines Kulturmediums der obigen Zusammensetzung gegeben, und 2 Kolben der entstandenen Saatkultur wurden bei 28 °C wäh-25 rend 5 Tagen unter Rühren mit einer Geschwindigkeit von 300 U./min mit einer Luftzirkulationsmenge von 11/11 des Mediums pro Minute kultiviert. Die erhaltene Kulturbrühe wurde mit einer Geschwindigkeit von 8000 U./min zur Entfernung der Mikrobenzellen zentrifugiert. Zu der über-30 stehenden Flüssigkeit wurden 51 Methanol gegeben, und die Mischung wurde gerührt und 3 Stunden stehengelassen. Die Mischung wurde zur Entfernung des Niederschlages zentrifugiert, die festen Bestandteile wurden entfernt, und die überstehende Flüssigkeit wurde entfernt. Der Rückstand 35 wurde mit einer gleichen Volumenmenge Äthylacetat extrahiert. Das Lösungsmittel aus der Äthylacetatschicht wurde unter vermindertem Druck entfernt und das Produkt zur Trockene konzentriert. Der Rückstand wurde in Methanol gelöst und durch eine Säule mit Aktivkohle geschickt. Das 40 Eluat wurde zur Trockene unter vermindertem Druck konzentriert, in einer Mischung aus Chloroform und Äthylacetat (1:1 V/V) gelöst und durch eine Kolonne aus Sephadex LH-20 gelfilbriert. Es wurden Fraktionen mit aktiven Peaks entsprechend den Rf-Werten der in Beispiel 1 beschriebenen 45 Dünnschichtchromatografie gesammelt. Beim Verdampfen des Lösungsmittels erhielt man 2,2 g 2,7-Dihydroxy-2,5,5,8a-tetramethyl-l,2,3,4,4a,5,6,7,8,8a-decahydronaph-thalin-l-spiro-2'-(6',7'-diformyl-4'-hydroxy-2',3'-dihydro-benzofuran) einer hellgelben, schwach-sauren Substanz mit so antikomplementärer Aktivität. Diese Verbindung hat die gleichen physiko-chemischen Eigenschaften wie das Produkt gemäss Beispiel 1, und die Bildung dieser Verbindung wurde aus diesen Eigenschaften bestätigt.

55 Beispiel 3

Stachybotrys sp. T-789 wurde kultiviert und in gleicher Weise wie in Beispiel 1 beschrieben gereinigt, mit der Ausnahme, dass ein Kulturmedium der folgenden Zusammensetzung, eingestellt auf einen pH von 7,5 verwendet wurde 60 und dass die Kultivierungstemperatur bei 32 °C gehalten wurde.

Formulierung des Kulturmediums

Glyzerin 65 Glucose

Kornmeische getrocknete Hefe Malzextrakt

0,5 1,2 0,5 0,1 0,2

21

641 452

MgS04 0,05

NaCl 0,3

Auf diese Weise wurde 6,7-Dihydroxy-2,5,5,8a-tetrame-thyl-l,2,3,4,5a,5,6,7,8,8a-decahydronaphthalin-l-spiro2'-(6',7'-diformyl-4'-hydroxy-2',3'-dihydrobenzofuran) erhalten, eine hellgelbe, schwach-saure Substanz mit antikomplementärer Aktivität. Die physiko-chemischen Eigenschaften dieser Verbindungen stimmten mit denen der gemäss Beispiel 1 isolierten und gereinigten überein.

Beispiel 4

Stachybotrys sp. T-791 wurde kultiviert und gereinigt, in gleicher Weise wie in Beispiel 1, mit der Ausnahme, dass ein Kulturmedium der nachfolgenden Zusammensetzung, das auf einen pH von 5,5 eingestellt worden war, verwendet wurde, und dass die Kultivierungstemperatur bei 25 °C gehalten wurde.

Formulierung des Kulturmediums

(%)

Glyzerin 0,5

Stärke 1,0

Sucrose 0,2

Sojabohnenpulver 0,5

Pepton 0,1

Malzextrakt 0,2

MgS04 0,3

HCl 0,05

Man erhielt so 6,7-Dihydroxy-2,5,5,8a-tetramethyl-l,2,3,4,4a-5,6,7,8,8a-decahydronaphthalin-l-spiro-2'-(6',7'-diformyl-4'-hydroxy-2',3'-dihydrobenzofuran), eine hellgelbe, schwach-saure Substanz mit antikomplementärer Aktivität. Die physiko-chemischen Eigenschaften dieser Verbindung stimmten mit denen der in Beispiel 1 erhaltenen überein.

Beispiel 5

Silbernitrat (2,1 g) wurde in 1 ml Wasser gelöst, und dazu wurden 3,5 ml einer 5,8 m wässrigen Lösung von Natriumhydroxid gegeben. Die Mischung wurde 20 Minuten bei Raumtemperatur gerührt. Dann wurde eine Lösung aus 1,0 g 6,7-Dihydroxy-2,5,5,8a-tetramethyl-l,2,3,4,4a,5,6,7,8,8a-decahydronaphthalin-l-spiro-2'-(6',7'-deformyl-4'-hydroxy-2',3'-dihydrobenzofuran) hergestellt, gemäss Beispiel 1, und 2 ml Äthanol wurden zugegeben. Das Reaktionsgemisch wurde bei Raumtemperatur 1,5 Stunden gerührt, und der pH wurde mit 2n Chlorwasserstoffsäure auf etwa 2 eingestellt.Das Reaktionsgemisch wurde mit einer gleichen Volumenmenge Äthylacetat extrahiert, und das Lösungsmittel in dem Extrakt wurde unter vermindertem Druck abgedampft. Der Rückstand wurde durch Kieselgel-chromatografie (Kieselgel «Wako C-200», ein Produkt der Wako Junyaku Kabushiki Kaisha; unter Verwendung von Chloroform/Äthylacetat/Essigsäure [100:50:2 auf das Volumen bezogen] als Eluiermittel) gereinigt. Es wurde eine Fraktion entsprechend einem Rf = 0,37 durch Dünnschichtchromatografie (unter Verwendung einer Mischung von Äthylacetat, Chloroform und Essigsäure im Volumenverhältnis von 50:50:2 als Entwicklungslösungsmittel) bzw. einer Fraktion entsprechend einem Rf = 0,71 durch Dünnschichtchromatografie (unter Verwendung einer Mischung von Benzol, Butanol und Essigsäure im Volumenverhältnis von 60:15:5 als Entwicklungsmittel) gesammelt. Beim Verdampfen des Lösungsmittels aus der Fraktion erhielt man 700 mg 4,6-Dihydroxy-8-oxo-2,3,6,8-tetrahydro-furo[3,4-g]-benzofuran-2-spiro-1 '-(6',7'-dihydroxy-2',5',5', 8'a-tetrame-thyl-l'^'^'^'^XS'^'J'XXa-decahydronaphthalin) als hellgelbe amorphe Kristalle. Das Produkt hatte die folgenden physiko-chemischen Eigenschaften, und die Bildung dieser Verbindung wurde durch diese Eigenschaften bestätigt.

1. [a]D20 = -44,8° (C = 0,9 Methanol)

2. Elementaranalyse für C23H30O7

Berechnet %: C 66,03 H 7,18

Gefunden %: C 65,93 H 7,21

3. Kernmagnetisches Resonanzspektrum:

i) Die NMR-Analyse wurde unter Verwendung von cd3od (DSS) als Lösungsmittel durchgeführt, und das erhaltene MRC-Spektrum wird in Fig. 6 gezeigt.

ii) Die NMR-Analyse wurde durchgeführt, unter Verwendung von Pyridin-d6 (DSS) als Lösungsmittel, und das entsprechende NMR-Spektrum wird in Fig. 7 gezeigt.

iii) Es wurde Dimethylsulfoxid-d6 als Lösungsmittel verwendet, und die NMR-Analyse wurde 2 Stunden und 63 Stunden nach dem Auflösen durchgeführt. Das erhaltene NMR-Spektrum wird in Fig. 8 gezeigt (die NMR-Spektren, die 2 Stunden nach Auflösung bzw. 63 Stunden nach Auflösung erhalten worden waren, stimmten miteinander überein).

Die Messbedingungen zum Erhalten dieser NMR-Spektren waren die folgenden:

Fig. 6

Fig. 7

Fig. 8

Spektralamplitude

9x100

5x100

8x100

Filter

0,1 sek

0,1 sek

0,1 sek

RF-Output

0,05 mG

0,05 mG

0,05 mG

Abtastzeit

5 min

5 min

5 min

Abtastbreite

10 ppm

10 ppm

10 ppm

Abtastende

0 ppm

Oppm

0 ppm

Beispiel 6

Silberoxid (0,65 g) wurde in einer In wässrigen Lösung von Natrimhydroxid suspendiert, und unter Rühren bei Raumtemperatur wurde 1,0 g 6,7-Dihydroxy-2,5,5,8a-tetra-methyl-l,2,3,4,4a,5,6,7,8,8a-decahydronaphthalin-l-spiro-2'-(6'-7'-diformyl-4'-hydroxy-2',3'-dihydrobenzofuran) zugegeben. Die Mischung wurde bei der gleichen Temperatur 1 Stunde gerührt, und der Niederschlag wurde 5mal mit je 10 ml Wasser gewaschen. Die Waschwässer und das Filtrat wurden kombiniert, und dazu wurde konzentrierte Salzsäure (36%ig) gegeben bis zur Einstellung des pH-Wertes auf etwa 2 bis 3, und anschliessend wurde auf 0 bis 10 °C gekühlt. Die ausgefallenen Kristalle wurden durch Filtrieren gesammelt, mit 10 ml Eiswasser 5mal gewaschen und getrocknet. Die getrockneten pulverförmigen Kristalle wurden in 50 ml Äthylacetat gelöst, und unlösliche Substanz wurde durch Filtrieren entfernt. Das Filtrat wurde auf ein Volumen von 5 ml unter vermindertem Druck konzentriert. Zu der konzentrierten Lösung wurden 50 ml Ligroin gegeben, und die Mischung wurde gerührt und auf 0 bis 10 °C abkühlen gelassen. Die ausgefallenen Kristalle wurden durch Filtrieren gesammelt, 2mal mit 20 ml Ligroin gewaschen und getrocknet, wobei man 1,01 g4,6-Dihydroxy-8-oxo-2,3,6,8-tetrahydro-furo[3,4-g]-benzofuran-2-spiro-r-(6',7'-dihydroxy-2',5',5',8'a-tetramethyl-r,2',3',4',4/a,5',6',7',8',8'a-decahy-dronaphthalin) erhielt. Die physiko-chemischen Eigenschaften der erhaltenen Verbindung stimmten mit denen der in Beispiel 5 erhaltenen Verbindung überein.

Beispiel 7

1,0 g 6,7-Dihydroxy-2,5,5,8a-tetramethyl-l,2,3,4,4a,5,6,7,8,8a-decahydronaphthalin-l-spiro-2'-(6',7'-diformyl-4'-hydroxy-2',3'-dihydrobenzofuran) wurden in 50 ml einer 10%igen wässrigen Lösung von Natriumhydroxid gelöst, und unter Einblasen von 59 °C warmer Luft in

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

65

641 452

die Lösung wurde diese 30 Minuten lang gerührt. Die Lösung wurde mit Chlorwasserstoffsäure auf einen pH von etwa 2 bis 3 angesäuert, und die ausgefallenen Kristalle wurden durch Filtrieren gesammelt. Die Kristalle wurden mit 10 ml kaltem Wasser 5mal gewaschen und getrocknet. Die Kristalle wurden in 50 ml Äthylacetat gelöst, und unlösliche Substanz wurde durch Filtrieren entfernt. Das Filtrat wurde mit Aktivkohle behandelt und unter vermindertem Druck auf ein Volumen von 5 ml konzentriert. Die konzentrierte Lösung wurde zu 50 ml Ligroin unter kräftigem Rühren gegeben. Die ausgefallenen Kristalle wurden durch Filtrieren gesammelt und Ligroin gewaschen und getrocknet, wobei man 0,72 g 4,6-Dihydroxy-8-oxo-2,3,6,8-tetrahydro-furo[3,4-g]-benzohydrofuran-2-spiro-1 '-(6',7'-dihydroxy-2',5',6',8,a-tetramethyl-r,2',3',4',4/a,5',6',7',8',8'a-decahy-dronaphthalin) erhielt. Die physiko-chemischen Eigenschaften der erhaltenen Verbindung stimmten mit der des Beispiels 5 überein.

Beispiel 8

1,0 g 6,7-Dihydroxy-2,5,5,8a-tetramethyl-l,2,3,4,4a,5,6,7,8,8a-decahydronaphthalin-l-spiro-2'-(6',7'-diformyl-4'-hydroxy-2',3'-dihydrobenzofuran) wurden in 25 ml einer In wässrigen Lösung von Kaliumhydroxid gelöst, und dazu wurden portionsweise unter Rühren 50 ml einer wässrigen Lösung aus 0,578 g Kaliumpermanganat gegeben. Nachdem die Farbe des Permanganats verschwand, wurde mit Rühren aufgehört. Der Niederschlag wurde durch Filtrieren unter Verwendung von Celite als Filterhilfe abgetrennt. Das Filtrat wurde mit Chlorwasserstoffsäure auf einen pH von etwa 2 bis 3 angesäuert. Die ausgefallenen Kristalle wurden durch Filtrieren gesammelt, mit 10 ml Wasser 3mal gewaschen und dann getrocknet. Die getrockneten Kristalle wurden in 30 ml Äthylacetat gelöst. Unlösliche Substanz wurde durch Filtrieren entfernt, und das Filtrat wurde unter Verwendung von Aktivkohle entfärbt und unter vermindertem Druck konzentriert. Zu der konzentrierten Lösung wurden 50 ml Ligroin gegeben, und die Mischung wurde gerührt. Die ausgefallenen Kristalle wurden durch Filtrieren gesammelt, mit Ligroin gewaschen und bei 60 °C unter vermindertem Druck getrocknet, wobei man 0,9 g 4,6-Di-hydroxy-8-oxo-2,3,6,8-tetrahydro-furo[3,4-g]-benzofuran-2-spiro-r-(6',7'-dihydroxy-2',5',5',8/a-tetramethyl-r^'jS'^'^'a^^ó'^'^'^'a-decahydronaphthalin) erhielt. Die physiko-chemischen Eigenschaften der erhaltenen Verbindung stimmten mit der Verbindung, die gemäss Beispiel 5 erhalten wurde, überein.

Beispiel 9

Zu 5 ml einer 0,4n wässrigen Lösung aus Natriumhydroxid und 5 ml Äthanol wurden 418 mg 4,6-Dihydroxy-8-oxo-2,3,6,8-tetrahydro-furo[3,4-g]-benzofuran-2-spiro-r-(6',7'-dihydroxy-2',5',5',8'a-tetramethyl-1 ',2',3',4',4'a,5',6',7',8',8'a-decahydronaphthalin) gegeben. Die Mischung wurde in einem Stickstoffstrom 30 Minuten bei 30 bis 40 °C gerührt. Nach der Umsetzung wurde das Lösungsmittel unter vermindertem Druck abdestilliert. Der Rückstand wurde getrocknet, und es wurden 10 ml Aceton zugegeben. Der acetonlösliche Teil wurde durch Filtrieren entfernt. Die entstandenen rohen Kristalle wurden aus Was-ser/Aceton durch portionsweise Zugabe von Aceton zu einer wässrigen Lösung umkristallisiert, bis Kristalle ausgefällt wurden, wobei man 342 mg des Dinatriumsalzes von 6,7-Di-hadroxy-2,5,5,8a-tetramethyl-l,2,3,4,4a,5,6,7,8,8a-decahy-dronaphthalin-1 -spiro-2'-(7'-carboxylat-6'-formyI-4'-oxid-2',3'-dihydrobenzofuran) als hellgelbe, amorphe Kristalle erhielt. Die erhaltene Verbindung hatte die folgenden physikochemischen Eigenschaften, und die Bildung dieser Verbindung wurde durch diese Eigenschaften bestätigt.

1. [ct]D20 = -44,2'- (C= 1,25, H20)

2. Elementaranalyse für C23H2 807Na2 Berechnet %: C 59,74 H 6,10 Gefunden %: C 59,48 H 5,91

3. Ultraviolett-Absorptionsspektrum (UV-Analyse) X h2o = 252 nm (e = 20 500)

max = 330 nm (e = 45 900)

4. Kernmagnetisches Resonanzspektrum (NMR-Analy-se). Die NMR-Anylse wurde unter Verwendung von D20 (DSS) als Lösungsmittel durchgeführt. Das erhaltene NMR-Spektrum wird in Fig. 9 gezeigt. Die Testbedingungen für das NMR-Spektrum waren die folgenden:

Spektralamplitude: 9 x 100

Filter: 0,1 sek

RF-Output: 0,05 mG

Abtastzeit: 5 min

Abtastbreite: 10 ppm

Abtastende: 0 ppm

Beispiel 10

418 mg 4,6-Dihydroxy-8-oxo-2,3,4,8-tetrahydro-furo[3,4-g]-benzofuran-2-spiro-r-(6',7'-dihydroxy-2',5',5',8,a-tetramethyl-l',2',3',4',4'a-5',6',7',8',8'a-decahy-dronaphthalin) wurden in 10 ml Äthylacetat gelöst und unter Mischen wurden 0,33 Mol einer 6n wässrigen Lösung aus Natriumhydroxid hinzugegeben. Die Mischung wurde 10 Minuten bei Raumtemperatur in einem Stickstoffstrom gerührt. Die ausgefallenen Kristalle wurden durch Filtrieren gesammelt, mit 10 ml Äthylacetat 3mal gewaschen und getrocknet, wobei man 390 mg des Dinatriumsalzes von 6,7- ■ Dihydrox-2,5,5,8a-tetramethyl-l,2,3,4,4a,5,6,7,8,8a-decahy-dronaphthalin-l-spiro-2'-(7,-carboxylat-6/-formyl-4'-oxid-2',3'-dihydrobenzofuran) als hellgelbe, amorphe Kristalle erhielt. Die physiko-chemischen Eigenschaften der entstandenen Verbindungen stimmten mit denen des Beispiels 9 überein.

Beispiel 11

4,02 g 6,7-Dihydroxy-2,5,5,8a-tetramethyl-l,2,3,4,4a,5,6,7,8,8a-decahydronaphthalin-l-spiro-2'-(6/,7'-diformyl-4'-hydroxy-2',3'-dihydrobenzofuran) wurden in einer In wässrigen Lösung von Natriumhydroxid gelöst, und dazu wurden 14,2 g einer 3%igen wässrigen Lösung von Wasserstoffperoxid gegeben. Die Mischung wurde 18 Stunden bei 50 °C gerührt. Dann wurde Essigsäure zum Einstellen des pH-Wertes der Lösung auf 3 bis 4 zugegeben. Die ausgefallenen Kristalle wurden durch Filtrieren gesammelt, mit Wasser gewaschen und getrocknet.

Die rohen Kristalle wurden chromatografiert über einer mit Kieselgel gefüllten Säule unter Verwendung einer Mischung aus Chloroform und Methanol (mit einem Volumenverhältnis von 9:1) als Eluiermittel. Das letzte Eluat wurde gesammelt und unter vermindertem Druck zur Trockene konzentriert. Zu dem Rückstand wurde Wasser gegeben, und die erhaltenen Kristalle wurden durch Filtrieren gesammelt, und anschliessend wurde mit Wasser gewaschen und getrocknet. Man erhielt so 0,80 g 6,7-Dihydroxy-2,5,5,8a-te-tramethyl-l,2,334,4a,5,6,7,8,8a-decahydronaphthalin-l-spi-ro-2'-(4',6',7'-trihydroxy-2',3/-dihydrobenzofuran) als braune amorphe Kristalle. Diese Verbindung zersetzt sich allmählich bei der Bestimmung des Schmelzpunktes bei 250 °C. Die physiko-chemischen Eigenschaften des entstandenen Produktes sind die folgenden, und die Bildung dieser Verbindung wurde durch diese Eigenschaften bestätigt:

1. Schmelzpunkt: Zersetzt sich allmählich bei etwa 250 °C und zeigt keinen definitiven Schmelzpunkt.

22

s io

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

65

23

641 452

2. Elementaranalyse für C21H30O6

Berechnet %: C 66,64 H 7,99

Gefunden %: C 66,43 H 8,13

3. Ultraviolett-Absorptionsspektrum (UV-Analyse)

X Methanoi =219 nm (s = 8700)

= 260 nm (e = 2300)

4. Infrarotabsorptionsspektrum (IR-Analyse):

Auf KBr-Tabletten zeigte das Produkt die folgenden

^max(eni ).

3450 (s), 2980 (s), 2980 (sh), 1640 (m), 1480 (m), 1400 (w), 1330 (w), 1260 (w), 1220 (w), 1140 (w), 1120 (w), 1060 (w), 1020 (w), 1010 (w), 910 (w), 890 (w), 760 (w),

(s bedeutet eine starke Absorption, m eine mittlere Absorption, w eine schwache Absorption und sh eine Schulter).

Diese Abkürzungen werden auch nachfolgend gebracht.

Beispiel 12

2,01 g 6,7-Dihydroxy-2,5,5,8a-tetramethyl-l,2,3,4,4a,5,6,7,8,8a-decahydronaphthalin-l-spiro-2'-(6',7'-diformyl-4'-hydroxy-2/,3'-dihydrobenzofuran) wurden in 50 ml Äthanol gelöst, und dazu wurden 1,45 g Malonitril und ein Tropfen Piperidin als Katalysator gegeben. Die Mischung wurde 30 Minuten bei 50 °C gerührt. Nach der Umsetzung wurde die Reaktionsmischung unter vermindertem Druck auf ein Volumen von 10 ml konzentriert und abkühlen gelassen. Die ausgefallenen Kristalle wurden durch Filtrieren gesammelt und mit eiskaltem Äthanol gewaschen (etwa 2 bis 5 °C).Die erhaltenen rohen Kristalle wurden in 50 ml einer In wässrigen Lösung aus Natriumhydroxid gelöst und mit Aktivkohle behandelt. Unter Eiskühlung wurde Chlorwasserstoffsäure zugegeben, um die Lösung anzusäuern (pH 2 bis 3). Die ausgefallenen Kristalle wurden durch Filtrieren gesammelt, gründlich mit Wasser gewaschen und getrocknet. Man erhielt so 1,02 g 6,7-Dihydroxy-2,5,5,8a-tetramethyl-l,2,3,4,4a,5,6,7,8,8a-decahydronaph-thalin-1 -spiro-2'-[6',7'-di-(2,2-dicyanovinyl)-4'-hydroxy-2',3',dihydrobenzofuran] als gelbe amorphe Kristalle.

Diese Verbindung zeigte die folgenden physiko-chemi-schen Eigenschaften:

1. Schmelzpunkt: Zersetzt sich allmählich bei 230 °C und zeigt keinen definitiven Schmelzpunkt.

2. Elementaranalyse für C29H30O4N4

Berechnet %: C 69,86 H 6,07 N 11,24

Gefunden %: C 69,58 H 6,32 N 11,09

3. Infrarot-Absorptionsspektrum unter Verwendung der KBr-Tablettenmethode: Das Produkt zeigt die folgenden ^max(cni ' )■

3450 (s), 2980 (s), 2900 (sh), 2210 (s), 1720 (w), 1660 (sh), 1640 (s) 1580 (sh), 1520 (w), 1470 (m), 1400 (m), 1380 (m), 1360 (m), 1340 (m), 1260 (m), 1200 (w), 1110 (w), 1050 (m), 1020 (w), 1000 (w), 980 (w), 960 (w), 940 (w), 900 (w), 840 (w), 760 (w).

Beispiel 13

2,01 g 6,7-Dihydroxy-2,5,5,8a-tetramethyl-l,2,3,4,4a,5,6,7,8,8a-decahydronaphthalin-l-spiro-2'-(6',7'-diformyl-4'-hydroxy-2/,3'-dihydrobenzofuran) wurden in 50 ml Äthanol gelöst, und dazu wurden 3 ml Äthylcyanoace-tat gegeben. Dazu wurden 3 Tropfen Piperidin als Katalysator gegeben, und die Mischung wurde 2 Stunden bei 60 °C gerührt. Nach der Umsetzung wurde die Reaktionsmischung zur Trockene unter vermindertem Druck konzentriert. Der Rückstand wurde mit einer geringen Menge verdünnter Chlorwasserstoffsäure (In) gewaschen, dann mit Wasser gewaschen und getrocknet, wobei man rohe Kristalle erhielt. Die rohen Kristalle wurden in 50 ml einer Mischung aus Methanol und Wasser (1:1 V/V) gelöst und mit Aktivkohle behandelt. Dazu wurde eine gleiche Volumenmenge Wasser zum Ausfällen der Kristalle gegeben. Die Kristalle wurden durch Filtrieren gesammelt, mit Wasser gewaschen und getrocknet. Man erhielt so 1,89 g 6,7-Dihydroxy-2,5,5,8a-te-tramethyl-1,2,3,4,4a,5,6,7,8,8a-decahydronaphthalin-1 -spi-ro-2'-[6',7'-di-(2-cyano-2-äthoxy-carbonylvinyl)-4'-hydroxy-2',3'-dihydrobenzofuran] als helle amorphe Kristalle. Die Bildung der Kristalle wurde durch die folgenden physikochemischen Eigenschaften bestätigt:

1. Schmelzpunkt: 161,0 bis 167,0 °C

2. Elementaranalyse für CssH^oOg^

Berechnet %: C 66,87 H 6,80 N 4,73

Gefunden %: C 66,63 H 7,02 N 4,51

3. Infrarot-Absorptionsspektrum (IR-Analyse) auf KBr-Tabletten: Das Produkt zeigte die folgenden A,majt(cm_1): 3450 (s), 2970 (sh), 2950 (m), 2900 (sh), 2240 (w), 1740 (s), 1630 (s), 1470 (s), 1460 (sh), 1400 (w), 1300 (w), 1250 (s),

1100 (m), 1050 (m), 1030 (m), 1020 (sh), 970 (w), 950 (sh), 940 (w), 900 (sh), 890 (w), 860 (w).

Beispiel 14

3,00 mg 6,7-Dihydroxy-2,5,5,8a-tetramethyl-l,2,3,4,4a,5,6,7,8,8a-decahydronaphthalin-l-spiro-2'-(6/,7/-diformyl-4'-hydroxy-2',3'-dihydrobenzofuran) wurden in 20 ml Piperidin gelöst, und dazu wurden 10,0 g Cyanoessig-säure und 1 Tropfen Piperidin als Katalysator gegeben. Die Mischung wurde 5 Stunden bei 50 °C gerührt. Nach der Umsetzung wurde das Reaktionsgemisch zur Trockene konzentriert. 50 ml Wasser wurden zu dem Rückstand gegeben, wobei man einen kristallinen Rückstand erhielt. Die Kristalle wurden durch Filtrieren gesammelt, mit Wasser gewaschen, dann mit verdünnter Chlorwasserstoffsäure (In) und dann wiederum mit Wasser gewaschen. Die rohen Kristalle wurden in 100 ml einer 10%igen wässrigen Lösung von Na-triumbicarbonat gelöst. Unlösliche Substanz wurde durch Filtrieren abgetrennt, und das Filtrat wurde mit Chlorwasserstoffsäure unter Eiskühlung angesäuert (pH 2 bis 3). Die ausgefallenen Kristalle wurden durch Filtrieren gesammelt, mit Wasser gewaschen und getrocknet, wobei man 1,1 g 6,7-Dihydroxy-2,5,5,8a-tetramethyl-I,2,3,4,4a,5,6,7,8,8a-deca-hydronaphthalin-1 -spiro-2'-[6',7'-di-(2-cyano-2-carboxyme-thyl)-4'-hydroxy-2',3'-dihydrobenzofuran] als hellgelbe amorphe Kristalle erhielt. Die Bildung dieser Verbindung wurde durch die folgenden physiko-chemischen Eigenschaften bestätigt:

1. Schmelzpunkt: 217 bis 223 °C

2- [<x]D20 = 23,2° (C = 0,8, Methanol)

3. Elementaranalyse für C29H32N208

Berechnet %: C 64,91 H 6,01 N 5,22

Gefunden %: C 64,63 H 6,25 N 5,01

4. IR-Analyse auf KBr-Tabletten:

Das Produkt zeigte die folgenden A,max(cm~ '): 3450 (s), 2950 (m), 2870 (sh), 2240 (w), 1710 (s), 1660 (m), 1610 (s), 1580 (m), 1460 (m), 1440 (m), 1400 (m), 1300 (m), 1250 (m), 1200 (sh), 1120 (w), 1100 (w), 1040 (w), 880 (w).

Beispiel 15

1,0 g 6,7-Dihydroxy-2,5,5,8a-tetramethyl-l,2,3,4,4a,5,6,7,8,8a-decahydronaphthalin-l-spiro-2'-(6',7/-diformyl-4'-hydroxy-2',3'-dihydrobenzofuran) wurde in 10 ml Pyridin und 1,0 g Malonsäure gelöst, und dazu wurden 3 Tropfen Piperidin als Katalysator gegeben. Die Mischung wurde 4 Stunden unter Rückfluss erhitzt. Nach der Umsetzung wurden zum Reaktionsgemisch 200 ml Wasser gegeben, und die Mischung wurde auf einen pH von 2 bis 3 angesäuert mit Chlorwasserstoffsäure und abkühlen gelassen. Das ausgefallene teerartige Material wurde gesammelt,

5

10

15

20

25

30

35

40

45

50

55

60

65

641452

mit Wasser gewaschen und in 100 ml Methanol gelöst und mit Aktivkohle behandelt und dann unter vermindertem Druck zur Trockene konzentriert. Der Rückstand wurde aus einer Mischung aus Methanol und Wasser (1:1 V/V) umkristallisiert, wobei man 0,58 g 6,7-Dihydroxy-2,5,5,8a-tetra-methyl-l,2,3,4,4a,5,6,7,8,8a-decahydronaphthalin-l-spiro-2'-[6',7'-di-(2-carboxyvinyl)-4'-hydroxy-2',3'-dihydrobenzo-furan] als hellbraune amorphe Kristalle erhielt. Die Bildung dieser Verbindung wurde durch die folgenden physiko-chemischen Eigenschaften bestätigt:

1. Schmelzpunkt: 190 bis 196 °C

2. Elementaranalyse für C27H3408

Berechnet %: C 66,65 H 7,04

Gefunden %: C 66,36 H 7,31

3. IR-Spektrum auf KBr-Tabletten:

Das Produkt zeigte die folgenden Ä,max(cm-1): 3450 (s), 2970 (m), 2950 (m), 2890 (sh), 1690 (s), 1620 (s), 1470 (s), 1390 (s), 1350 (m), 1330 (m), 1290 (w), 1260 (m), 1200 (w), 1120 (w), 1070 (w), 1050 (m), 960 (w), 950 (m).

Beispiel 16

1,0 g Natriumborhydrid wurde in 20 ml einer 0,ln wässrigen Lösung von Natriumhydroxid gelöst. Eine Lösung aus 0,9 g 4,6-Dihydroxy-8-oxo-2,3,6,8-tetrahydro-furo[3,4-g]-benzofuran-2-spiro-r-(6',7'-dihydroxy-2',5',5',8'a-tetrame-thyl-r,2',3',4',4'a,5',6',7',8',8'a-decahydronaphthalin)in 10 ml einer 1 %igen wässrigen Lösung von Natriumhydroxid wurde zugegeben. Die gemischte Lösung wurde 18 Stunden bei 60 °C gerührt, mit Eis (etwa 2 bis 5 °C) gekühlt und mit Chlorwasserstoffsäure (In) angesäuert. Die Lösung wurde unter vermindertem Druck zur Trockene konzentriert, und der Rückstand wurde in 50 ml Äthylacetat gelöst. Die unlöslichen Substanzen wurden durch Filtrieren entfernt. Das Filtrat wurde mit Wasser gewaschen und über wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet. Das Natriumsulfat wurde durch Filtrieren entfernt, und der Rückstand wurde unter vermindertem Druck zur Trockene konzentriert. Der Rückstand wurde aus 10 ml einer Mischung aus Methanol und Wasser (1:1 V/V) umkristallisiert, wobei man 0,28 g 6,7-Dihydroxy-2,5,5,8a-tetramethyl-l,2,3,4,4a,5,6,7,8,8a-decahydronaph-thalin-1 -spiro-2'-(7'-carboxy-6/-hydroxymethyl-4'-hydroxy-2',3'-dihydrobenzofuran) als farblose amorphe Kristalle erhielt. Die Bildung dieser Verbindung wurde durch die folgenden physiko-chemischen Eigenschaften bestätigt:

1. Schmelzpunkt: 212 bis 216 °C

2. Elementaranalyse für C23H3207

Berechnet %: C 65,71 H 7,62

Gefunden %: C 65,74 H 7,47

3. IR-Spektrum auf KBr-Tabletten:

Das Produkt zeigte die folgenden Ä,max(cmT *): 3450 (s), 2950 (sh), 2920 (m), 2900 (sh), 1740 (s), 1620 (m), 1475 (s), 1400 (w), 1360 (w), 1340 (m), 1260 (w), 1140 (w), 1080 (m), 1050 (w), 1030 (w), 960 (sh), 950 (m), 780 (w).

Beispiel 17

4,02 g 6,7-Dihydroxy-2,5,5,8a-tetramethyl-l,2,3,4,4a,5,6,7,8,8a-decahydronaphthalin-l-spiro-2'-(6',7'-diformyl-4'-hydroxy-2',3'-dihydrobenzofuran) wurden unter Erhitzen auf etwa 60 bis 70 °C in 100 ml Benzol gelöst. Dann wurden 10 ml Diäthylmalomat und als Katalysator 1 Tropfen Pyridin zugegeben. Wasser wurde durch azeotrope Destillation entfernt. Die Destillation wurde 4 Stunden durchgeführt, und nachdem nahezu die stöchiometrisch theoretische Menge Wasser entfernt war, wurde die Mischung unter vermindertem Druck konzentriert. Das zurückbleibende teerartige Material wurde mit Diäthyläther gewaschen, und

24

der ätherunlösliche Anteil wurde durch Filtrieren gesammelt, getrocknet und aus einer Mischung aus Diäthyläther und Wasser (1:2 V/V) umkristallisiert. Man erhielt so 1,32 g 6,7-Dihydroxy-2,5,5,8a-tetramethyl-l,2,3,4,4a,5,6,7,8,8a-de-5 cahydronaphthalin-1 -spiro-2'-[6',7'-di-(2,2-diäthoxycar-bonylvinyl)-4'-hydroxy-2',3'-dihydrobenzofuran] als farblose amorphe Kristalle. Die Bildung dieses Produktes wurde durch die folgenden physiko-chemischen Eigenschaften bestätigt:

10 1. Schmelzpunkt: 138 bis 142 °C

2. Elementaranalyse für C37H5o012

Berechnet %: C 64,70 H 7,34

Gefunden %: C 64,43 H 7,59

3. IR-Absorptionsspektrum auf KBr-Tabletten: 15 Das Produkt zeigte die folgenden Xmax(cm ~1):

3450 (s), 2980 (sh), 2950 (s), 2900 (s), 2880 (sh), 1730 (s), 1680 (m), 1630 (sh), 1600 (s), 1470 (m), 1440 (m), 1400 (m), 1320 (m), 1250 (s), 1120 (w), 1100 (w), 1080 (w), 1050 (w), 1020 (w), 970 (w), 950 (w), 890 (w), 760 (m).

20

Beispiel 18

1,0 Natriumborhydrid wurde in 50 ml einer In wässrigen Lösung von Natriumhydroxid gelöst, und bei Raumtemperatur wurde dazu eine Lösung aus 4,02 g 6,7-Dihy-

25 droxy-2,5,5,8a-tetramethyl-l,2,3,4,4a,5,6,7,8,8a-decahydro-naphthalin-l-spiro-2'-(6',7'-diformyl-4'-hydroxy-2/,3'-dihy-drobenzofuran) in 20 ml einer In wässrigen Lösung von Natriumhydroxid gegeben. Die gemischte Lösung wurde 3 Stunden gerührt. Nach der Umsetzung wurde die Reaktions-

30 mischung angesäuert mit Chlorwasserstoffsäure (auf einen pH von 2 bis 3) unter Eiskühlung (etwa 2 bis 5 °C). Die ausgefallenen Kristalle wurden durch Filtrieren gesammelt, mit Wasser gewaschen und getrocknet. Die rohen Kristalle wurden aus 50 ml einer Mischung aus Methanol und Wasser 35 (1:5 V/V) umkristallisiert, wobei man 2,51 g 6,7-Dihydroxy-2,5,5,8a-tetramethyl-l,2,3,4,4a,5,6,7,8,8a-decahydronaph-thalin-1 -spiro-2'-(6',7'-dihydroxymethyl-4'-hydroxy-2',3'-di-hydrobenzofuran) als hellbraune amorphe Kristalle erhielt. Die Bildung dieser Verbindung wurde durch die folgenden 40 physiko-chemischen Eigenschaften bestätigt:

1. Schmelzpunkt: zersetzte sich allmählich bei etwa 270 °C und zeigte keinen definitiven Schmelzpunkt.

2. Elementaranalyse für C23H34.06 45 Berechnet %: C 67,95 H 8,43

Gefunden %: C 67,71 H 8,66

3. IR-Absorptionsspektrum auf KBr-Tabletten:

Das Produkt zeigt die folgenden A.max(cm~1):

3450 (s), 2920 (m), 2880 (m), 1620 (m), 1600 (sh), 1440 (m), so 1390 (w), 1320 (w), 1260 (m), 1200 (w), 1100 (m), 1040 (w), 1000 (w), 980 (w), 940 (w), 830 (w).

Beispiel 19

1,00 g 6,7-Dihydroxy-2,5,5,8a-tetramethyl-55 l,2,3,4,4a,5,6,7,8,8a-decahydronaphthalin-l-spiro-2'-(6',7'-dihydroxymethyl-4'-hydroxy-2',3'-dihydrobenzofuran) wurde in 50 ml Methanol gelöst. Zu der Lösung wurden tropfenweise 20 ml einerfrisch zubereiteten diäthylätherischen Lösung, die 1,0 g Diazomethan erhielt, durch einen Tropftrich-60 ter bei Raumtemperatur zugegeben. Die Mischung wurde 2 Stunden bei Raumtemperatur gerührt und dann mit Eis gekühlt (etwa 2 bis 5 °C). In die Mischung wurde zur Zersetzung des überschüssigen Diazomethans Chlorwasserstoff eingeblasen. Dann wurden 100 ml Wasser zugegeben, und 65 die Mischung wurde unter vermindertem Druck zur Trok-kene konzentriert. Zum Rückstand wurden 10 ml einer 0,ln wässrigen Lösung von Natriumhydroxid gegeben, und der unlösliche Teil wurde durch Filtrieren gesammelt, mit Was

ser gewaschen und getrocknet. Man erhielt so 0,87 g 6,7-Di-hydroxy-2,5,5,8a-tetrametbyl-1,2,3,4,4a,5,6,7,8,8a-decahy-dronaphthalin-1 -spiro-2'-(6',7'-dihydroxymethyl-4'-me-thoxy-2',3'-dihydrobenzofuran) als farblose amorphe Kristalle. Die Bildung dieses Produktes wurde durch die folgenden physiko-chemischen Eigenschaften bestätigt:

1. Schmelzpunkt: 107 bis 115°C

2. Elementaranalyse für C24H3606 Berechnet %: C 68,54 H 8,63 Gefunden %: C 68,31 H 8,90

3. IR-Absorptionsspektrum auf KBr-Tabletten: Das Produkt zeigte die folgenden X,max(cm_1):

3320 (s), 2920 (m), 2880 (m), 1720 (w), 1620 (m), 1600 (s), 1500 (sh), 1450 (m), 1420 (m), 1390 (w), 1320 (m), 1230 (m), 1200 (w), 1120 (s), 1040 (m), 1000 (m), 940 (w), 820 (w).

Beispiel 20 2,00 g 6,7-Dihydroxy-2,5,5,8a-tetramethyl-1,2,3,4,4a,5,6,7,8,8a-decahydronaphthalin-l -spiro-2'-(7'-carboxy-6'-hydroxymethyl-4'-hydroxy-2',3'-dihydrobenzo-furan) wurden in 50 ml Äthylacetat gelöst, und dazu wurden 10 ml p-Toluolsulfonsäure gegeben. Die Mischung wurde unter Rückfluss erhitzt. Nach der Umsetzung wurde die Reaktionsmischung auf Raumtemperatur gekühlt, mit 10 ml einer In wässrigen Lösung Natriumhydroxid gewaschen, gründlich mit Wasser gewaschen und über wasserfreiem Natriumsulfat getrocknet. Das Natriumsulfat wurde durch Filtrieren abgetrennt, und der Rückstand wurde unter vermindertem Druck zur Trockene konzentriert. Man erhielt so 1,45 g 4-Hydroxy-8-oxo-2,3,6,8-tetrahydro-furo[3,4-g]-ben-zofuran-2-spiro-1 '-(6',7'-dihydroxy-2',5',5',8'a-tetramethyl-r,2',3',4',4'a,5',6',7',8',8'a-decahydronaphthalin) in Form von farblosen amorphen Kristallen. Die Bildung des Produktes wurde durch die folgenden physiko-chemischen Eigenschaften bestätigt:

1. Schmelzpunkt: 187 bis 193 °C

2. Elementaranalyse für C23H3o06 Berechnet %: C 68,63 H 7,51 Gefunden %: C 68,47 H 7,70

3. IR-Absorptionsspektrum auf KBr-Tabletten: Das Produkt zeigte die folgenden ^max (cm~ '):

3280 (s), 2950 (m), 2890 (m), 1730 (s), 1610 (m), 1460 (s), 1330 (s), 1240 (w), 1130 (w), 1080 (m), 1040 (w), 1000 (w), 940 (m), 750 (m).

Beispiel 21

100 mg 6,7-Dihydroxy-2,5,5,8a-tetramethyl-l,2,3,4,4a,5,6,7,8,8a-decahydronaphthalin-l-spiro-2'-(6',7'-dihydroxymethyl-4'-hydroxy-2',3'-dihydrobenzofuran) wurden in 2 ml trockenem Pyridin gelöst, und dazu wurde 1 ml Essigsäureanhydrid gegeben. Die Mischung wurde über Nacht bei Raumtemperatur stehen gelassen. Eiswasser wurde zu der Reaktionsmischung gegeben. Der Niederschlag wurde durch Filtrieren gesammelt und aus einer Mischung aus Äthylacetat und n-Hexan durch portionsweise Zugabe von n-Hexan zu der Äthylacetat-Lösung umkristallisiert, bis Kristalle ausgefällt wurden. Es wurden 105 mg 7-Acetoxy-6-hydroxy-2,5,5,8a-tetramethyl-l,2,3,4,4a,5,6,7,8,8a-decahy-dronaphthalin-1 -spiro-2'-(6',7'-diacetyloxymethyl-4'-acetyl-oxy-2',3'-dihydrobenzofuran) als weisse Kristalle gewonnen. Die Bildung dieser Verbindung wurde durch die folgenden physiko-chemischen Eigenschaften bestätigt;

1. Schmelzpunkt: 78 bis 83 °C

2. Elementaranalyse für C31H42O10 Berechnet %: C 64,79 H 7,37 Gefunden %: C 64,51 H 7,19

25 641452

3. IR-Absorptionsspektrum auf KBr-Tabletten: Das Produkt zeigte die folgenden Xma!1(cm~1): 3400 (w), 2900 (m), 2860 (sh), 1763 (sh), 1730 (s), 1715 (sh), 1620 (m), 1600 (m), 1465 (sh), 1447 (sh), 1430 (s), 1378 (sh), s 1364 (s), 1302 (m), 1250 (sh), 1220 (s), 1195 (s), 1160 (sh), 1126 (m), 1096 (s), 1020 (s), 1000 (sh), 980 (m), 950 (m), 915 (sh), 895 (sh), 865 (sh), 830 (sh), 810 (sh), 763 (w), 690 (sh), 592 (w).

io Beispiel 22

100 mg 6,7-Dihydroxy-2,5,5,8a-tetramethyl-l,2,3,4,4a,5,6,7,8,8a-decahydronaphthalin-l-spiro-2'-(6',7'-dihydroxymethyl-4'-hydroxy-2',3/-dihydrobenzofuran) wurden in 2 ml trockenem Pyridin gelöst, und dazu wurde 1 ml is Essigsäureanhydrid gegeben. Die Mischung wurde 2 Stunden auf 100 °C erhitzt. Der entstandene Niederschlag wurde durch Filtrieren gesammelt und aus einer Mischung aus Äthylacetat und n-Hexan durch portionsweise Zugabe von n-Hexan zu der Äthylacetat-Lösung umkristallisiert, bis Kri-20 stalle ausfielen, wobei man 115 mg 6,7-Diacetyloxy-2,5,5,8a-tetramethyl-l,2,3,4,4a,5,6,7,8,8a-decahydronaphthalin-l-spiro-2'-(6',7'-acetyloxymethyl-4'-acetyloxy-2',3'-dihydro-benzofuran) als weisse Kristalle erhielt.- Die Bildung dieser Verbindung wurde durch die folgenden physiko-chemischen 25 Eigenschaften bestätigt:

1. Schmelzpunkt: 76 bis 80 °C

2. Elementaranalyse für C33H44Ou Berechnet0/»: C 64,27 H 7,19 Gefunden %: C 64,12 H 7,03

30 3. IR-Absorptionsspektrum auf KBr-Tabletten: Das Produkt zeigte die folgenden X,max(cm_ '): 2920 (m), 2880 (sh), 1760 (sh), 1750 (sh), 1730 (s), 1624 (sh), 1603 (m), 1473 (sh), 1457 (sh), 1447 (sh), 1428 (s), 1376 (sh), 1363 (s), 1300 (s), 1260 (sh), 1220 (s), 1195 (s), 1150 (sh), 35 1125 (w), 1095 (s), 1035 (sh), 1020 (s), 980 (sh), 953 (s), 915 (m), 895 (sh), 870 (sh), 820 (w), 765 (w), 715 (w), 686 (w), 657 (w), 618 (sh), 596 (m), 583 (m).

Beispiel 23

40 100 mg 6-Acetyloxy-6-hydroxy-2,5,5,8a-tetramethyl-1,2,3,4,4a,5,6,7,8,8a-decahydronaphthalin-1 -spiro-2'-(6',7'-diacetyloxymethyI-4'-acetyloxy-2',3'-dihydrobenzofuran) wurden in 5 ml Aceton gelöst, und unter Eiskühlung wurden 0,lml Jones-Reagenz tropfenweise zugegeben. Die Mischung 45 wurde 1 Stunde gerührt. Isopropanol wurde zu der Reaktionsmischung tropfenweise zum Zersetzen des Überschusses von Jones-Reagenz gegeben. Dann wurde Wasser dazugegeben, und die Mischung wurde mit Äthylacetat extrahiert. Die organische Schicht wurde mit Wasser gewaschen, und 50 das Lösungsmittel wurde abdestilliert. Der Rückstand wurde aus einer Mischung aus Aceton und n-Hexan umkristallisiert, wobei man 72 mg 7-Acetyloxy-6-oxo-2,5,5,8a-tetra-methyl-l,2,3,4,4a,5,6,7,8,8a-decahydronaphthalin-l-spiro-2'-(6',7'-deacetoxymethyl-4'-acetyloxy-2',3'-dihydrobenzo-55 furan) als weisse Kristalle erhielt. Die Bildung dieser Verbindung wurde durch die folgenden physiko-chemischen Eigenschaften bestätigt:

1. Schmelzpunkt: 140 bis 143 °C 60 2. Elementaranalyse für C31H40Oi0 Berechnet %: C 65,02 H 7,04 Gefunden %: C 65,17 H 7,13

3. IR-Absorptionsspektrum auf KBr-Tabletten: Das Produkt zeigte die folgenden lmax(cm"1):

es 2900 (m), 2880 (sh), 1766 (sh), 1750 (s), 1720 (s), 1628 (m), 1600 (m), 1456 (s), 1427 (s), 1380 (sh),1363 (s), 1340 (sh), 1300 (s), 1265 (sh), 1220 (s), 1185 (s), 1120 (m), 1083 (s), 1070 (sh), 1030 (s), 1013 (sh), 1000 (sh), 970 (m), 950 (s), 936

641452

(sh), 926 (sh), 905 (m), 895 (m), 870 (m), 854 (sh), 827 (w), 780 (w), 766 (w), 738 (w), 712 (w), 666 (w), 610 (w), 588 (w).

Beispiel 24

100 mg 4-Hydroxy-8-oxo-2,3,4,6,8-tetrahydro-furo[3,4-g]-benzofuran-2-spiro-r-(6',7'-dihydroxy-2',5',5',8'a-tetra-methyl-r,2',3',4',4'a,5',6',7',8',8'a-decahydronaphthalin) wurden in 2 ml trockenem Aceton gelöst, und 1 ml 2,2-Di-methoxypropan und dann 5 mg wasserfreie p-Toluolsulfon-säure wurden dazugegeben. Die Mischung wurde 2 Stunden bei Raumtemperatur gerührt. Wasser wurde zu der Reaktionslösung gegeben, und die Mischung wurde mit Äthylacetat extrahiert. Die organische Schicht wurde mit einer gesättigten wässrigen Lösung von Natriumbicarbonat gewaschen und dann mit Wasser. Das Lösungsmittel wurde verdampft, und der Rückstand wurde aus einer Mischung aus Äthylacetat und n-Hexan umkristallisiert, wobei man 83 mg 4-Hy-droxy-8-oxo-2,3,6,8-tetrahydro-furo[3,4-g]-benzofuran-2-spiro-1 '-(6',7'-isopropylidendioxy-2',5',5',8'a-tetramethyl-r,2',3',4',4'a,5',6',7',8',8'a-decahydronaphthalin) in Form von weissen Kristallen erhielt. Die Bildung dieser Verbindung wurde durch die folgenden physiko-chemischen Eigenschaften bestätigt:

1. Schmelzpunkt: 142 bis 150°C

2. Elementaranalyse für C26H3306

Berechnet %: C 70,73 H 7,53

Gefunden %: C 70,51 H 7,38

3. IR-Absorptionsspektrum auf KBr-Tabletten:

Das Produkt zeigte die folgenden A.ma;!(cm~

3280 (w), 2920 (m), 2880 (sh), 1760 (sh), 1733 (s), 1620 (sh), 1608 (m), 1463 (s), 1387 (sh), 1368 (m), 1354 (s), 1330 (s), 1300 (sh), 1255 (sh), 1238 (m), 1216 (s), 1178 (w), 1153 (w), 1124 (w), 1106 (w), 1080 (m), 1060 (m), 1043 (s), 1016 (m), 1005 (sh), 985 (sh), 950 (m), 923 (w), 895 (w), 870 (sh), 858 (m), 784 (sh), 768 (sh), 753 (m).

Beispiel 25

100 mg 6,7-Dihydroxy-2,5,5,8a-tetramethyl-l,2,3,4,4a,5,6,7,8,8a-decahydronaphthalin-l-spiro-2'-(6',7'-dihydroxymethyl-4'-hydroxy-2',3'-dihydrobenzofuran) wurden in 2 ml trockenem Aceton gelöst, und dazu wurden 1 ml 2,2-Dimethoxypropan und 5 mg wasserfreie p-Toluolsulfon-säure gegeben. Die Mischung wurde 30 Minuten bei Raumtemperatur gerührt. Zu der Reaktionslösung wurde Eiswasser gegeben, und die Mischung wurde mit Äthylacetat extrahiert. Die organische Schicht wurde mit einer gesättigten wässrigen Lösung von Natriumbicarbonat und dann mit Wasser gewaschen, und das Lösungsmittel wurde abdestilliert. Der Rückstand wurde durch Kieselgelsäulenchromato-grafie gereinigt und aus einer Mischung aus Äthylacetat und n-Hexan durch portionsweise Zugabe von n-Hexan zu der Äthylacetat-Lösung umkristallisiert, bis Kristalle ausfielen, wobei man 21 mg 6,7-Isopropylidendioxy-2,5,5,8a-tetrame-thyI-I,2,3,4,4a,5,6,7,8,8a-decahydronaphthalin-l-spiro-2'-(6',7'-hydroxymethyl)-4'-hydroxy-2',3'-dihydrobenzofuran) in Form von weissen Kristallen erhielt. Die Bildung dieser Verbindung wurde durch die folgenden physiko-chemischen Eigenschaften bestätigt.

1. Schmelzpunkt: Zersetzt sich allmählich bei etwa 200 °C unter Verfärbung und zeigt keinen genauen Schmelzpunkt.

2. Elementaranalyse für C26H3806

Berechnet %: C 69,93 H 8,58

Gefunden %: C 69,71 H 8,39

3. IR-Absorptionsspektrum auf KBr-Tabletten:

Das Produkt zeigte die folgenden Xmax(cm~r):

3360 (m), 3040 (m), 2920 (m), 2880 (sh), 1735 (w), 1700 (w),

26

1618 (m), 1458 (sh), 1440 (s), 1386 (sh), 1368 (s), 1346 (m), 1313 (m), 1253 (m), 1237 (m), 1215 (m), 1180 (w), 1150 (w), 1106 (s), 1083 (m), 1052 (sh), 1047 (s), 1026 (m), 1000 (s), 974 (s), 952 (m), 920 (w), 895 (w), 870 (sh), 857 (m), 837 (m), 785 s (w), 765 (sh), 700 (w), 670 (w).

Beispiel 26

100 mg 4-Hydroxy-8-oxo-2,3,6,8-tetrahydro-furo[3,4-g]-benzofuran-2-spiro-l'-(6',7'-isopropylidendioxy-2',5',5',8'a-lo tetramethyl-r,2',3',4',4'a,5',6',7',8', 8'a-decahydronaphtha-lin) wurden in 5 ml trockenem Diäthyläther gelöst, und unter Eiskühlung wurden 5 mg Lithiumaluminiumhydrid zugegeben. Die Mischung wurde 1 Stunde gerührt. Zu der Reaktionslösung wurde Wasser gegeben, und die Lösung wurde ls schwach sauer (pH 3 bis 5) mit In Chlorwasserstoffsäure eingestellt und dann mit Äthylacetat extrahiert. Die organische Schicht wurde mit Wasser gewaschen, und das Lösungsmittel wurde abdestilliert. Der Rückstand wurde aus einer Mischung aus Äthylacetat und n-Hexan durch por-20 tionsweise Zugabe von n-Hexan zu der Äthylacetat-Lösung umkristallisiert, bis Kristalle ausfielen, wobei man 75 mg Isopropylidendioxy-2,5,5,8a-tetramethyl-l,2,3,4,4a,5,6,7,8,8a-decahydronaphthalin-l-spiro-2',(6',7'-hydroxymethyl-4'-hydroxy-2',3'-dihydrobenzofuran) als 25 weisse Kristalle erhielt. Die physiko-chemischen Eigenschaften der entstandenen Verbindung stimmten mit der des Beispiels 25 überein.

Referenzbeispiel 1 30 Verbindung Nr. 1 der Erfindung 500 mg Glucose 250 mg destilliertes Wasser für bis zur Gesamtmente

Injektionszwecke von 5 ml

Das Dinatriumsalz (III) der Verbindung (I) und Glucose 35 wurden in destilliertem Wasser zu Injektionszwecken gelöst. Die Lösung wurden in 5-ml-Ampullen gegeben. Die Atmosphäre wurde mit Stickstoff gespült, und zum Sterilisieren der Lösung wurde die Ampulle 15 Minuten auf 121 °C erhitzt, wobei man eine injizierbare Zubereitung erhielt.

40

Referenzbeispiel 2 Verbindung Nr. 2 der Erfindung 500 mg Natriumsulfit 5 mg

45 destilliertes Wasser für bis zur Gesamtmenge

Injektionszwecke von 5 ml

In gleicher Weise wie im Referenzbeispiel I wurde eine injizierbare Zubereitung hergestellt.

50 Referenzbeispiel 3

Verbindung Nr. 6 der Erfindung 500 mg Natriumsulfit 5 mg destilliertes Wasser für bis zur Gesamtmenge

Injektionszwecke von 5 ml

55 In gleicher Weise wie im Referenzbeispiel I wurde eine injizierbare Zubereitung hergestellt.

Referenzbeispiel 4 6o Verbindung Nr. 6 der Erfindung 750 mg halbsynthetische bis zu einer Gesamt-

Glyzeridbase menge von 2000 mg

Die Verbindung Nr. 6 gemäss der Erfindung wurde zu der halbsynthetischen Glyzeridbase gegeben und bei 50 °C 65 vermischt und suspendiert. Die Mischung wurde in eine Form gegeben und abkühlen gelassen. Das Produkt wurde aus der Form entnommen^ wobei man ein Suppositorium erhielt.

27

641 452

Referenzbeispiel 5 Verbindung Nr. 2 der Erfindung 750 mg Vitamin E 90 mg halbsynthetische bis zu einer Gesamt-

Glyzeridbase menge von 2000 mg

In gleicher Weise wie im Referenzbeispiel 4 wurden Suppositorien hergestellt.

150 g

40 g 30 g 2g

10 g 3g 40 g 40 g

Referenzbeispiel 6

Verbindung Nr. 2 der Verbindung Avicell (Handelsname für ein Produkt der Asahi Kasai Kabu-shiki Kaisha)

Maisstärke Magnesiumstearat TC-5 (Handelsname für Hydroxy-propylmethylzellulose)

Polyäthylenglykol 6000 Castor-01 Methanol

Die Verbindung Nr. 2, Avicell, Maisstärke und Magnesiumstearat wurden abgemischt und fein zermahlen und tablettiert und mit Zucker beschichtet (R = 10 mm). Die erhaltenen Tabletten wurden mit einem dünnen Überzug aus Hydroxypropylmethylzellulose, Polyäthylenglykol 6000, Cartor-Öl und Methanol unter Ausbildung von filmbeschichteten Tabletten beschichtet.

Referenzbeispiel 7

Verbindung Nr. 6

der Erfindung 100 g

Avicell 40 g

Maisstärke 30 g

Magnesiumstearat 2 g

Methylacrylat/Methylacrylsäure-

Copolymer 5,7 g

Triacetin 0,6 g

Äthanol 50,4 g

Verbindung Nr. 6, Avicell, Maisstärke und Magnesiumstearat wurden vermischt und fein zermahlen und dann tablettiert für eine Beschichtung mit Zucker (R = 10 mm). Die erhaltenen Tabletten wurden mit einem Filmbeschichtungs-mittel aus Methylacrylat/Methacrylsäure-Copolymer, Triacetin und Äthanol beschichtet, wobei man enterisch-be-schichtete Tabletten erhielt.

Referenzbeispiel 8

s Verbindung Nr. 6 der Erfindung 150,0 g

Zitronensäure 1,0 g

Lactose 33,5 g

Dikalziumphosphat 70,0 g io Pion F-68 (Pluronic F-68) 30,0 g

Natriumlaurylsulfat 15,0g

Polyvinylpyrrolidon 15,0g

Polyäthylenglykol

(Carbowax 1500) 4,5 g

15 Polyäthylenglykol

(Carbowax 6000) 45,0 g

Maisstärke 30,0 g trockenes Natriumlaurylsulfat 3,0 g trockenes Magnesiumstearat 3,0 g

2o Äthanol eine geeignete Menge

Die Verbindung Nr. 6, Zitronensäure, Lactose, Dikalziumphosphat, Pluronic F-68 und Natriumlaurylsulfat wurden vermischt.

25 Die Mischung wurde auf ein Sieb Nr. 60 gesiebt und nassgranuliert mit einer alkoholischen Lösung aus Polyvinylpyrrolidon, Carbowax 1500 und Carbowax 6000. Äthylalkohol wurde in gewünschter Menge zugegeben, um das Pulver in eine pastenartige Masse zu überführen. Dann wur-30 de Maisstärke zugegeben, und es wurde weitergemischt, bis man gleichförmige Teilchen erhielt. Die Teilchen wurden durch ein Sieb Nr. 10 gegeben, auf ein Blech gelegt und in einem Ofen bei 100 °C 12 bis 14 Stunden getrocknet. Die getrockneten Teilchen wurden durch ein Sieb Nr. 16 gesiebt 35 und mit trockenem Natriumlaurylsulfat und trockenem Magnesiumstearat vermischt. Die Mischung wurde in einer Tablettiermaschine in gewünschterWeise verformt.

Die so erhaltenen Kerne wurden mit einem Überzug versehen und darauf auch Talk gesprüht, um Feuchtigkeitsab-40 sorption zu vermeiden. Der Kernteil wurde mit einer Primärschicht und dann mit einem Lack beschichtet in der für periodische Verabreichung erforderlichen Häufigkeit. Um die Tabletten volllständig abzurunden und zu glätten, wurde weiterer Primer aufgebracht und dann ein Farbüberzug, bis 45 die gewünschte Form vorlag.

7 Blatt Zeichnungen

Claims (14)

1. 641452

   PATENTANSPRÜCHE 1. Sesquiterpenderivate der allgemeinen Formel (I)

   ÇH3

   CH3

   ch3

   CH3

   worin bedeuten:

   R1 ein Wasserstoffatom, eine Niedrigalkylgruppe oder eine Niedrigalkanoylgruppe,

   R2 und R3, die gleich oder verschieden sein können, jeweils eine Formylgruppe, eine Hydroxymethylgruppe, eine Hydroxylgruppe, eine Carboxylgruppe, eine Niedrigalkano-yloxymethylgruppe oder eine Gruppe der Formel -CH=CR7R8, worin R7 und R8, die gleich oder verschieden sein können, jeweils ein Wasserstoffatom, eine Cy-anogruppe, eine Niedrigalkoxy-carbonylgriippe oder eine Carboxylgruppe bedeuten, oder worin

   R2 und R3 zusammengenommen einen Lactonring der r 9

   Formel -CH-O-C- bedeuten, worin R9 ein Wasserstoffatom oder eine Hydroxylgruppe bedeutet,

   R4 und R6, die gleich oder verschieden sein können, jeweils eine Hydroxylgruppe oder eine Niedrigalkanoyloxy-gruppe darstellen,

   R5 ein Wasserstoffatom, oder eine Hydroxylgruppe darstellt, wobei R4 und R5 zusammen eine Oxogruppe bilden können und R4 und Rö zusammen eine Niedrigalkyliden-dioxygruppe bilden können, sowie deren Salze.
2. 2. Eine Verbindung gemäss Anspruch 1 der allgemeinen Formel (Ia)

   ho

   CHO

   :ho

   CH3

   CH3

   ho

   (Ia)

   ho

   CH3

   ch3

   und deren Salze.
3. 3. Verfahren zur Herstellung einer Verbindung der allgemeinen Formel (Ia)

   ho

   CHO

   CHO

   CH3

   (Ia)

   CH3

   ho ho

   CH3

   CH3

   dadurch gekennzeichnet, dass man aerobisch einen Mikroorganismus vom Stamme Stachybotrys in einem Kulturmedium, das Quellen von Stickstoff, Kohlenstoff, anorganischen Salzen und Spurenmineralien enthält, bei einem pH von 3,5 bis 11,5 und einer Temperatur von 15 bis 35 °C kultiviert und das erhaltene Produkt der Formel (Ia) aus der Kulturbrühe gewinnt.
4. 4. Verfahren nach Anspruch 3, dadurch gekennzeichnet, dass man das erhaltene Produkt in ein pharmakologisch annehmbares Salz überführt.
5. 5. Verfahren nach. Anspruch 3, dadurch gekennzeichnet, dass der Mikroorganismus ausgewählt ist aus der Gruppe bestehend aus Stachybotrys altermans IFO 9355, Stachybotrys chariarum IFO 5369, Stachybotrys chartarum IFO 7222, Stachybotrys cylindrospora 8858, Stachybotrys echinata 7525, Stachybotrys reniformis 7067, Stachybotrys sp. K-76, Stachybotrys sp. T-789 und Stachybotrys sp. T-791.
6. 6. Verfahren nach Anspruch 5, dadurch gekennzeichnet, dass der Mikroorganismus ausgewählt ist aus der Gruppe Stachybotrys sp. K-76, Stachybotrys sp. T-789 und Stachybotrys sp. T-791.
7. 7. Verfahren zur Herstellung einer Verbindung der allgemeinen Formel (I), in welcher R2, R3 oder beide eine Carboxylgruppe bedeuten und die übrigen Symbole die im Anspruch I angegebene Bedeutung besitzen, dadurch gekennzeichnet, dass man eine Verbindung der Formel (I), in welcher R2, R3 oder beide eine Formylgruppe bedeuten, oxi-diert.
8. 8. Verfahren zur Herstellung einer Verbindung (I), in welcher R1 eine Niedrigalkylgruppe bedeutet und die übrigen Symbole die im Anspruch 1 angegebene Bedeutung besitzen, dadurch gekennzeichnet, dass man eine Verbindung (I), in welcher R1 ein Wasserstoffatom bedeutet, mit einem Alkylierungsmittel umsetzt.
9. 9. Verfahren zur Herstellung einer Verbindung (I), in welcher R1 eine Niedrigalkanoyloxygruppe bedeutet und die übrigen Symbole die im Anspruch 1 angegebene Bedeutung besitzen, dadurch gekennzeichnet, dass man die Verbindung (I), in welcher R1 ein Wasserstoffatom bedeutet, acyliert.
10. 10. Verfahren zur Herstellung einer Verbindung (I), in welcher R4 und R6 Niedrigalkanoyloxygruppen bedeuten und die übrigen Symbole die im Anspruch 1 angegebene Bedeutung besitzen, dadurch gekennzeichnet, dass man die Verbindungen (I), in denen R4 und R6 eine Hydroxylgruppe bedeuten, acyliert.
11. 11. Verfahren zur Herstellung einer Verbindung (I), in welcher R4 und R6 eine Niedrigalkylidendioxygruppe bedeuten und die übrigen Symbole die im Anspruch 1 angegebene Bedeutung besitzen, dadurch gekennzeichnet, dass man die Verbindung (I), in welcher R4 und R® eine Hydroxylgruppe bedeuten, mit einem Keton der Formel

    2

    5

    10

    15

    20

    25

    30

    35

    40

    45

    50

    55

    60

    65

    3

    641452

    in welcher R10 und R11 ein Wasserstoffatom oder eine Niedrigalkylgruppe bedeuten, oder mit einem Acetal der Formel

    R10. OCH3

    r11 och3

    worin R1Q und R11 die vorher angegebenen Bedeutungen haben, in Gegenwart eines Katalysators umsetzt.
12. 12. Verfahren zur Herstellung einer Verbindung (I), in welcher R4 und R5 zusammen eine Oxogruppe bedeuten und die übrigen Symbole die im Anspruch 1 angegebene Bedeutung besitzen, dadurch gekennzeichnet, dass man eine Verbindung (I), in welcher R4 eine Hydroxylgruppe und R5 ein Wasserstoffatom bedeuten, oxydiert.
13. 13. Pharmazeutische Zusammensetzung mit antikomplementärer Aktivität für Lebewesen, enthaltend eine therapeutisch wirksame Menge eines Sesquiterpenderivates (I) gemäss Anspruch 1 oder eines pharmazeutisch annehmbaren Salzes davon, neben einem pharmazeutisch annehmbaren Träger.
14. 14. Zusammensetzung gemäss Anspruch 13, dadurch gekennzeichnet, dass der Gehalt des Sesquiterpenderivates (I) oder dessen pharmazeutisch annehmbaren Salzes darin 1 bis 70 Gew.-%, bezogen auf die gesamte pharmazeutische Zusammensetzung, beträgt.