CH649312A5 - Verfahren zur herstellung von sisomicin. - Google Patents

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CH649312A5
CH649312A5 CH789/80A CH78980A CH649312A5 CH 649312 A5 CH649312 A5 CH 649312A5 CH 789/80 A CH789/80 A CH 789/80A CH 78980 A CH78980 A CH 78980A CH 649312 A5 CH649312 A5 CH 649312A5
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sisomicin
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micromonospora
danubiensis
fermentation
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Sandor Istvan
Istvan Dr Gado
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Chinoin Gyogyszer Es Vegyeszet
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Description

Die Erfindung betrifft ein Verfahren zur Herstellung von Sisomicin und dessen pharmazeutisch annehmbaren Salzen auf mikrobiologischem Wege.
Das Sisomicin (0-2,6-Diamino-2,3,4,6-tetradesoxy-a-D-glycerohex-4-en-pyranosyl-[l-4]-0-([3-desoxy-4-C-methyl-3]methylamino/-ß-L-arabopyranosyl-[l-6])-2-desoxy-D-strep-tamin] ist ein Antibiotikum mit breitem Spektrum.
Für die Herstellung des Sisomicins sind mehrere mikrobiologische Verfahren bekannt. So die US-Patentbeschreibungen Nr. 3 832 286 und 3 907 771. Nach diesen Patenten wird Sisomicin vom Mikroorganismus Micromonospora inyoensis (NRRL 3292) als Hauptkomponent produziert.
Der Stamm Micromonospora grisea (NRRL 3800) produziert neben Verdamicin (US-Patentschrift Nr. 3 951 746), der Stamm Micromonospora zionensis (NRRL 5466) produziert neben den Antibiotikum G-52 (US-Patentschrift Nr.
3 956 068) ferner produziert Micromonospora purpurea var. nigresnens (MNG 00122) neben Gentamycin-Komplex (Ungarisches Patent Nr. 168 778) das Sisomicin.
Im Laufe von Untersuchungen ungarischer Bodenmuster isolierten die Erfinder aus Donauschlamm einen neuen Mikroorganismus bezeichnet IMS-1, der Sisomicin produzierte. Dieser Stamm, welcher sich als verschieden von allen bisher bekannten Mikroorganismen erwies, wurde als Micromonospora danubiensis Spezies nova bezeichnet. Aus diesem Mikroorganismus erhielten die Erfinder den Stamm IMS-3 durch verschiedene Stammveredelungsverfahren, welcher am 19. Juni 1978 unter der Nummer 00171 bei der Nationalen Sammlung der Mikroorganismen, Gyali m. 2-6, H-1097 Budapest, deponiert wurde. Im Laufe von Fermentationen erhielten die Erfinder mit diesem Stamm Fermentationsmedien mit hohem Sisomicingehalt.
Gegenstand der vorliegenden Erfindung ist ein Verfahren zur Herstellung von Sisomicin in der Weise, dass man einen
Kohlenstoffquelle
Micromonospora danubiensis MNG 00171
Arabinose schwach (-)
Ribose mittelmässig ( + )
Xylose schwach ( — )
Rhamnose schwach ( — )
Fructose gut (4- + +)
Galactose mittelmässig ( + )
Glucose gut ( + + +)
Lactose schwach ( — )
Saccharose gut ( + + + )
Raffinose schwach ( —)
Dulcit schwach ( — )
Mannit gut (4* + +)
Inosit schwach ( — )
Stärke gut(+ + +)
50
Die Verwertung der Stickstoffquelle wurde auf folgenden Nährboden untersucht: Glucose 1%, Agar 1,5% in destilliertem Wasser. Die Ergebnisse sind in Tabelle 2 angegeben:
Tabelle 2
Stickstoffquelle
Micromonospora danubiensis MNG 00171
Hefeextrakt 0,5% N-Z Amin Typ A 1% Asparagin 1% Glutaminsäure 1% KNCh 1%
gut ( + + + )
gut(+ + +)
mittelmässig ( ± ) schwach schwach ( — )
schwach ( — )
65
Gelatine, Milch und Stärke werden hydrolysiert. Nitrat wird zu Nitrit reduziert. Die Bestimmung der Farben erfolgte aufgrund des Baumann-Farbton-Karte Atlas II und Paul
3
649 312
Tabelle 3
Nährboden
Micromonospora JMS-3 MNG 00171
Bennet-Agar
Czapek-Agar
Emerson-Agar Glucose-Asparagin-Agar Glucose-Hefeextrakt-Agar
Nähr-Agar Pepton-Eisen-Agar
Tyrosin-Agar
Kartoffelschnitzel mit CaCCb
Kartoffelschnitzel ohne CaCCh schwaches Wachstum, lebhaft orange gefärbt Oc 97-98 entsprechendes Wachstum, rotbraune Farbe O 142-145 kein Wachstum kein Wachstum entsprechendes Wachstum, lebhaft orange gefärbt Oc 99 entsprechendes Wachstum, weinrote, teilweise gelbbraune Farbe, Ro 193 bzw. Or 165-166 kein Wachstum, oder nur in Spuren, winzige Kolonien, schwach orange gefärbt. Oc 97 und CO 69. Kein lösliches Pigment
Wachstum in Spuren, Farbe kann nicht definiert werden, kein lösliches Pigment
Wachstum mittelmässig,
rotbraune Farbe O 136 und O
145-147
kein Wachstum
Aufgrund obiger Ergebnisse wurde festgestellt, dass der Stamm JMS-3 von den übrigen aus der Literatur bekannten Micromonospora-Spezies verschieden ist. Wenn man die oben aufgezählten Merkmale der Systemtheorie mit dem Micromonospora-System Luedemann's vergleicht, so erweist sich Stamm JMS-3 als ein neues Spezies, welches nach der Isolationsstelle Micromonospora danubiensis Spezies nova benannt wurde.
Nach einer vorteilhaften Ausführungsmethode werden die Stämme Micromonospora danubiensis unter aeroben Bedingungen submerser Kultur kultiviert.
In den zur Kultivierung des Sisomicins geeigneten Nährboden können verschiedene Kohlenstoff- und Stickstoffquellen, anorganische Salze, Spurenelemente und Antischaum-mittel zugegen sein. Als Kohlenstoff- und Stickstoff- bzw. Energiequellen können Stärke, lösliche Stärke, Dextrin, Glucose, Saccharose, Maismehl, Soyamehl, Soyamehlhydroly-sate, Caseinhydrolysate, Maisquellwasser, Hefeextrakt usw. verwendet werden.
Als anorganische Salze können verschiedene Ammonium-, Eisen-, Zink-, Mangan-, Magnesium-, Kalium- und Kobaltsalze verwendet werden. Zur Erhöhung der Pufferkapazität des Nährbodens verwendet man vorzugsweise Calci-umkarbonat und als Antischaummittel verschiedene pflanzliche Öle (z.B. Palmöl, Sonnenblumenöl und Soyaöl).
Die Verwendung von verschiedenen Nährbodenkomponenten ermöglicht die Herstellung von verschiedenen Nährböden. Der Nähranspruch der Herstellung des Inoculums weicht von demjenigen der Hauptfermentation ab. Zur Herstellung von Sisomicin erwies sich ein Nährboden, der Soyamehl, Maisquellwasser, Maismehl, Stärke, Saccharose, Calci-umkarbonat, Kobaltchlorid und Palmöl enthält, als meist vorteilhaft.
Die Temperatur der Fermentation kann zwischen 25-37 °C liegen eine Fermentation zwischen 28-33 °C erwies sich als die günstigste.
Die Drehzahl des Rührens kann abhängig von der Geometrie des Fermentors zwischen 100-600 variieren. Vorteilhafte Belüftung ist 1/1 V/V pro Minute.
Die Gesamtaktivität der im Laufe der Fermenation gebil-5 deten Antibiotika (Sisomicin und «minor» Komponenten) wird mit einem Testorganismus namens Staphylococcus epi-dermidis mittels der Agar-Diffusionsmethode auf Standard Sisomicin bezogen bestimmt.
Während der Fermentationszeit von 96-120 Stunden io erreicht die Gesamtaktivität des Fermentationsmediums 400-500 E/ml (1 E = 1 Lig/ml Sisomicinbase Aktivität).
Die Gewinnung des Sisomicins kann nach bekannten Methoden erfolgen. Aus der erhaltenen Sisomicinbase können erwünschtenfalls pharmazeutisch annehmbare Salze 15 gebildet werden.
Die Menge des produzierten Sisomicins mittels Micromonospora danubiensis ist die mehrfache derjenigen die mittels bisher bekannten Verfahren produziert wurde und übertrifft im Laboratorium 450 E/ml und im Fermentor des Versuchs-20 betriebes beträgt diese Menge 350-450 E/ml. Das Fermentationsmedium enthält neben Sisomicin bloss 10-15% Begleitantibiotika.
Das erfindungsgemässe Verfahren wird in den folgenden Beispielen illustriert.
25
Beispiele
1. In einem 5000 ml fassenden Erlenmeyerkolben befindliche 100 ml eines sterilen Nährbodens von folgender Zusammensetzung:
30 Stärke 25,0 g
Maisquellwasser 7,0 g
(NH4)2 S04 3,5 g
NaCl 5,0 g
CaCOi 8,0 g
35 Leitungswasser 1000 ml werden unter sterilen Bedingungen mit 1 ml (vegetative Keimzahl 107-10s/ml) des tiefgekühlten Myzels, Stamm Micromonospora danubiensis JMS-3 versetzt.
Der pH-Wert des Nährbodens wird vor Sterilisation auf 40 7,5 eingestellt, so wird dieser nach Sterilisation 7,0-7,2 betragen.
Die Kultur wird auf einer Planschüttelmaschine (220 Umdrehungen/Minute, Ausschlag 7,5 cm) 3 Tage lang bei einer Temperatur von 28 °C inkubiert. Mit der so erhaltenen 45 Kultur werden unter sterilen Bedingungen 6 Liter des sterilen Nährbodens in einem 10 Liter Fermentor inokuliert. Die Zusammensetzung des Nährbodens ist identisch mit derjenigen des zuvor angegebenen «Inokulum-Nährbodens».
Die Kultivierung im Glasfermentor wird bei einer Tempeso ratur von 28 °C ausgeführt, Umdrehungszahl des Rührers 400/Minute und bei einer Belüftung 1/1 V/V pro Minute. Als Antischaummittel wird - je nach Bedarf - Palmöl verwendet.
Das während 40 Stunden gebildete Inokulum wird zur Inokulation des Fermentationsmediums verwendet. Menge 55 des Inokulums beträgt 600 ml, Menge des Nährbodens 6 Liter, pH-Wert 7,0-7,2, Inhalt des Glasfermentors 10 Liter. Zusammensetzung des Nährbodens:
Soyamehl 50 g
Maisstärke 10 g
60 Saccharose 30 g
CaCÛ3 5,0 g
Maisquellwasser 5,0 g
CoCh-ÓHiO 4,5 mg
Leitungswasser 1000 ml
65 Die Kultivierung wird bei einer Temperatur von 31 0 C durchgeführt, Drehzahl des Rührers 400/Minute und Belüftung 6 Liter/Minute. Als Antischaummittel wird Palmöl verwendet.
649 312
4
Die Produktion des Antibiotikums beginnt in der 38-34sten Stunde der Fermentation und erreicht ihr Maximum nach 110 Stunden. Zu dieser Zeit beträgt der Antibiotikagehalt des Fermentationsmediums auf Standard-Sisomicin bezogen 440 E/ml bei Benutzung von Staphylococcus epider-midis als Testorganismus, durch Agardiffusionsmethode bestimmt (J.S. Simpson: Analytical Microbiology, Acad, Press, New York, Seiten 87-124, 1963).
2. Mit der vegetativen Kultur des Stammes Micromonospora danubiensis JMS-3 (MNG 00171) nach Beispiel 1 auf einer Planschüttelmaschine hergestellt wird der folgende Nährboden inokuliert):
Soyamehl 10,0g
Stärke 10,0g
Saccharose 10,0 g
CaCOj 4,0 g
Leitungswasser 1000 ml
Der pH-Wert nach Sterilisation beträgt 7,0-7,2, Menge 6 Liter (in einem 10 Liter fassenden Glasfermentor). Es wird bei 31 °C kultiviert, Bewegung mit einer Umdrehungszahl von 400/Minute und Lüftung 6 Liter/Minute. Als Antischaummittel wird - je nach Bedarf - Palmöl verwendet.
Das während 36 Stunden gebildete Inokulum, bzw. 600 ml davon, wird zur Inokulation des Fermentations-Nährbodens von folgender Zusammensetzung verwendet:
Soyamehl 30,0 g
Maismehl 25,0 g
CaCCb 5,0 g
C0CI2.6H2O 10,0 mg
Leitungswasser 1000 ml
Der pH-Wert des Nährbodens nach Sterilisation beträgt 7,0-7,2, Temperatur der Kultivation 33 °C, Bewegung mit einer Umdrehungszahl von 600/Minute und Lüftung 6 Liter/ Minute. Unterbindung des Schäumens mit Palmöl.
Die Produktion des Antibiotikums beginnt in der 26-30sten Stunde der Fermentation und der maximale Wert wird in der lOOsten Stunde der Fermentation erreicht. Zu dieser Zeit beträgt der gesamt Antibiotikagehalt auf StandardSi-somicin bezogen 420 E/ml.
3. Mit der vegetativen Kultur des Stammes Micromonospora danubiensis JMS-3 (MNG 00171) nach Beispiel 1 auf einer Planschüttelmaschine hergestellt wird der folgende Nährboden inokuliert:
Stärke 25,0 g
Soyamehl-Hydrolysat 15,0 g
(NH4)2SC>4 2,0 g
NaCl 3,0 g
ZnS04 0,5 g
CaCCh 8,0 g
Leitungswasser 1000 ml
Der pH-Wert des Nährbodens nach Sterilisation beträgt 7,0-7,2, die Menge 6 Liter (in einem 10-Liter-Glasfermentor). Die Hydrolyse des Soyamehls wurde mit einer NOVO bakteriellen Protease ausgeführt. Daten der Hydrolyse: Temperatur 60 °C, Zeitdauer 30 Minuten und pH-Wert 7,5.
Nach Inokulation wurde die Kultivation (Bebrütung) bei einer Temperatur von 28 0 C, Bewegung mit einer Umdrehungszahl von 400/Minute und bei einer Belüftung von 6 Liter Luft/Minute durchgeführt. Als Antischaummittel wurde Palmöl verwendet.
600 ml des während 40 Stunden gebildeten Inokulum wurde zur Inokulation (Beimpfung) des folgenden Fermentations-Nährbodens verwendet:
Soyamehl-Hydrolysat 50,0 g
Stärke 10,0 g
Dextrin 25,0 g
Saccharose 10,0g
CaCOs 5,0 g
CoCl2-6H20 4,5 mg
Leitungswasser 1000 ml
Der pH-Wert des Nährbodens nach Sterilisation beträgt 7,0-7,2, die Menge desselben 6 Liter (in einem 10 Liter Glasfermentor). Hydrolyse des Soyamehls wurde mit einer NOVO bakteriellen Protease bei 60 °C, 30 Minuten lang und bei einem pH-Wert von 7,5 ausgeführt.
Nach der Inokulation wird die Bebrütung bei einer Temperatur von 31 °C, mit einer Bewegung von 600 Umdrehungen/Minute und bei einer Belüftung von 6 Liter Luft/Minute ausgeführt. Als Antischaummittel wird Palmöl verwendet. Die Produktion des Antibiotikums beginnt nach 26-30 Stunden der Fermentation und der maximale Wert wird nach 100 Stunden erreicht. Zu dieser Zeit beträgt der gesamte Antibiotikagehalt auf Standard-Sisomicin bezogen 430 E/ml.
4. Mit der vegetativen Kultur des Stammes Micromonospora danubiensis JMS-3 (MNG 00171) nach Beispiel 2 in einem Glasfermentor entwickelt wird ein Nährboden folgender Zusammensetzung inokuliert (in einer Menge von 200 Liter, Volum des Vorfermentors 300 Liter, Werkstoff: nichtrostender Stahl):
Soyamehl 10,0g
Stärke 10,0g
Saccharose 10,0g
CaCOj 4,0 g
Leitungswasser 1000 ml
Der pH-Wert des Nährbodens nach Sterilisation beträgt 7,0-7,2. Als Antischaummittel wird Palmöl verwendet.
Die Kultivation wird bei einer Temperatur von 31 °C, mit einer Bewegung von 180 Umdrehungen/Minute und bei einer Belüftung von 200 Liter Luft/Minute durchgeführt.
Das während 36 Stunden gebildete Inokulum wird zur Inokulation des folgenden Fermentations-Nährbodens (Volum = 2000 Liter) verwendet:
Soyamehl 30,0 g
Maismehl 25,0 g
CaC03 5,0 g
CoCh-6H20 10,0 mg
Leitungswasser 1000 ml
Der pH-Wert des Nährbodens nach Sterilisation beträgt 7,0-7,2. Temperatur der Bebrütung 33 °C, Bewegung mit einer Umdrehungszahl von 220/Minute, Belüftung mit 2 m3 Luft/Minute, als Antischaummittel wird eine Mischung von 50% Soyaöl und 50% Palmöl verwendet.
Die Produktion des Antibiotikums beginnt nach 26-30 Stunden der Fermentation und erreicht den maximalen Wert in 100 Stunden. Zu diesem Zeitpunkt beträgt der gesamte Antibiotikagehalt auf Standard-Sisomicin bezogen 380 E/ml.
Nach Beendigung der Fermentation werden aus dem Fermentationsmedium nach bekannten Verfahren 288 g Sisomicinbase erhalten, die auch gebundenes Wasser enthalten.
Charakteristiken des Produktes
Schmp.: 198-201 °C; [a]D= + 189° (C = 0,3 Wasser) Elementaranalyse :
berechnet auf Monohydrat: C 49,80%, H 8,20, N 14,95% gefunden: C 49,15%, H 8,37%, N 15,15%
IR-Spektrum (KBr): vOH, NH 3170-3360, vCH = COC 1690, vCOC 1060 cm-'
PMR-Spektrum (D2O): 51,20 (Me-4",s,3H), 82,50 (Me-N-3",s,3H), 02,56 (H-3", d, irr = 10 Hz, 1H), 83,17 (H-6', bs, 2H), 53,30 (Hax-5", d, Jgem = 12 Hz, 1H), 83,80 (H-2", dd, h»3» = 10Hz, Jrz„ = 4 Hz, 1H), 84,04, (He-5", d, Jgem = 12 Hz, 1H), 84,88 (H-4', bt, 1H), 85,09 (H-l", d, J,--» = 4 Hz), 1H), 85,35 (H-l', d, Ji'2' = 2Hz, 1H) ppm
Massenspektrum: Molekulargewicht: 447 Massenzahl der charakteristischen Ionen (m/e): 447, 332, 304, 160, 145, 127, 118, 110, 100.
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
5
649 312
Herstellung von Sisomicinsulphat
Es werden 15 g der reinen Sisomicinbase in 60 ml ionfreien Wasser gelöst und man fügt der erhaltenen Lösung unter Rühren soviel 5 normale Schwefelsäure tropfenweise zu, dass der pH-Wert 4,3 beträgt.
Dann wird der Lösung aktive Kohle (1,5 g) zugefügt und das Gemisch wird 30 Minuten lang gerührt, nachher auf einer Seitzplatte filtriert. Die Filterplatte wird mit 3 x 5 ml entionisiertem Wasser durchgespült, dann werden die vereinigten Filtrate unter ständigem Rühren zu 1 Liter Methanol zugefügt. Die erhaltene, ein Niederschlag enthaltende Lösung wird in einem Kühlraum gestellt und nachher filtriert. Das 5 abfiltrierte Sisomicinsulphat wird mit 3 x 50 ml Methanol durchgespült, im Vacuum bei 50 °C über P2O5 bis zur Gewichtskonstanz getrocknet. Auf diese Weise werden 22 g Sisomicinsulphat erhalten.
G

Claims (7)

  1. 649 312
    2
    PATENTANSPRÜCHE
    1. Verfahren zur Herstellung des Antibiotikums Sisomicin und dessen pharmazeutisch annehmbaren Salzen mittels aerober Fermentation in einem assimilierbare Kohlenstoff-und Stickstoffquellen, sowie Mineralsalze enthaltenden Nährboden und gegebenenfalls darauffolgender Salzbildung, dadurch gekennzeichnet, dass man einen Stamm der Spezies Micromonospora danubiensis, in einem Nährboden unter aeroben Bedingungen kultiviert, und gegebenenfalls das erhaltene Sisomicin in ein pharmazeutisch annehmbares Salz überführt.
  2. 2. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass man den Stamm MNG 00171 kultiviert.
  3. 3. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass als Kohlenstoff- und Stickstoffquelle Stärke, Dextrin, Saccharose, Maismehl, Soyamehl, Maisquellwasser und hydrolysiertes Soyamehl verwendet wird.
  4. 4. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass das Kultivieren bei einer Temperatur von 25-37 °C durchgeführt wird.
  5. 5. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass als Mineralsalze Ammonium-, Kobalt- und Zinksalze verwendet werden.
  6. 6. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass die aus dem Fermentationsmedium isolierte Sisomicin-base in ein Sulphatsalz übergeführt wird.
  7. 7. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass man einen Soyamehl, Maismehl, Maisquellwasser, Stärke, Saccharose, Calciumkarbonat, Kobaltchlorid und Palmöl enthaltenden Nährboden verwendet.
    Stamm des Mikroorganismus-Spezies Micromonospora danubiensis, vorzugsweise den Stamm MNG 00171 auf einem Nährboden der assimilierbare Kohlenstoff- und Stickstoffquellen und Mineralsalze enthält unter aeroben Bedingungen 5 kultiviert und gegebenenfalls das gebildete Sisomicin in ein pharmazeutisch annehmbares Salz umwandelt.
    Die Beschreibung des neuen Mikroorganismus laut der Erfindung wird wie folgt angegeben:
    io Morphologie
    Makroskopisch: Nach Inkubation von 10 Tagen bei 37 °C auf Czapek-Agar ist das Wachstum entsprechend mittelmäs-sig, Luftmyzelium ist nicht sichtbar, die Kolonien sind herausragend, regelmässig rund geformt, rotbraun gefärbt. i5 Neben den Kolonien ist die Ausscheidung von löslichen Pigmenten nicht merkbar.
    Mikroskopisch : Lange, verzweigte Fäden ohne Scheidewand, Fadendurchmesser 0,5 u, die Sporen werden von einfachen Sporenhältern mit einem Durchmesser von 1-1,5 u 2o getragen. Die Sporen sind eier-kugelförmig geformt.
    Biochemische und physiologische Eigenschaften
    Der Stamm Micromonospora danubiensis MNG 00171 wächst gut bei 28-37 °C und wächst nicht bei 44 °C und bei 25 Temperaturen die höher liegen.
    Die Verwertung der Kohlenstoffquelle wurde an folgendem Nährboden untersucht: Hefeextrakt 0,5%, Kohlenstoffquelle 1,0%, CaCCb 0,1%, Agar 1,5% in destilliertem Wasser. Die Ergebnisse werden in der Tabelle 1 angegeben:
    30
    Tabelle 1
CH789/80A 1979-02-01 1980-01-31 Verfahren zur herstellung von sisomicin. CH649312A5 (de)

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HU79CI1906A HU179145B (en) 1979-02-01 1979-02-01 Process for microbiological producing sysomycin with fermenting micromonospora danubiensis

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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4977143A (en) * 1988-02-29 1990-12-11 American Cyanamid Company Antibacterial and antitumor agents LL-E33288EPSILON-I and LL-E33288EPSILON-BR
US7794713B2 (en) * 2004-04-07 2010-09-14 Lpath, Inc. Compositions and methods for the treatment and prevention of hyperproliferative diseases
US20090074720A1 (en) * 2005-10-28 2009-03-19 Sabbadini Roger A Methods for decreasing immune response and treating immune conditions
US20080213274A1 (en) * 2005-10-28 2008-09-04 Sabbadini Roger A Compositions and methods for the treatment and prevention of fibrotic, inflammatory, and neovascularization conditions of the eye
US7862812B2 (en) * 2006-05-31 2011-01-04 Lpath, Inc. Methods for decreasing immune response and treating immune conditions
USD1006451S1 (en) * 2020-11-10 2023-12-05 Shenzhen Jingrui Technology Co., Ltd. Combination comb and comb cover

Family Cites Families (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3832286A (en) * 1971-02-03 1974-08-27 Schering Corp Sisomicin and methods for its production
US3956068A (en) * 1972-07-14 1976-05-11 Schering Corporation Antibiotic G-52 and method for the production thereof

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Publication number Publication date
HU179145B (en) 1982-08-28
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