CH667180A5

CH667180A5 - Verfahren zur herstellung der neuen kamillensorte manzana.

Info

Publication number: CH667180A5
Application number: CH3128/84A
Authority: CH
Inventors: Chlodwig Franz; Otto Dr Isaac
Original assignee: Degussa
Priority date: 1983-06-29
Filing date: 1984-06-28
Publication date: 1988-09-30
Also published as: ZA844949B; HU209628B; ES8503231A1; FI80982C; HU203184B; FI80982B; IT1177840B; KE3762A; FI842616A0; IL72245A; FR2547982A1; EG17639A; IT8448462A0; CH667205A5; GB2142535B; FR2547982B1; CS244688B2; BR8403223A; JPS6047621A; ATA208784A

Description

BESCHREIBUNG Zubereitungen der Blütenköpfchen der Echten Kamille (Chamomilla recutita (L.) Rauschert, synonym mit Matricaria chamomilla L.) finden wegen ihrer antiphlogistischen und spasmolytischen Wirkung eine breite therapeutische Verwendung und bilden einen wichtigen Bestandteil des pflanzlichen Arzneischatzes. Besondere therapeutische Bedeutung kommt dabei den Wirkstoffen ( —)-a-Bisabolol und Chamazulen zu. Eine gute Kamillendroge sollte deshalb einen möglichst hohen Gehalt an diesen beiden Substanzen s aufweisen.

Unter der Bezeichnung «DEGUMILL» (es handelt sich hierbei um die im Patentanspruch der Deutschen Patentschrift 2 402 802 erwähnte Kamillensorte; DDR-Sorten-schutzrecht Degumill; Italienisches Patent 1 035 096) ist eine io Kamillensorte bekannt, die einen gleichzeitig hohen Gehalt an (—)-a-Bisabolol und Chamazulen aufweist. Der Chamazulen* und Bisabololgehalt dieser Kamillensorte DEGUMILL ist jedoch nur dann beständig, wenn jegliche Einkreu-zung beziehungsweise Fremdbestäubung mit anderen Kais millensorten, deren Bisabolol- und Chamazulengehalt erheblich niedriger ist, beziehungsweise mit der überall vorhandenen wirkstoffarmen Wildkamille, verhindert wird. Diese Einkreuzungsgefahr durch Fremdbestäubung ist fast immer vorhanden, da die Wildkamille praktisch überall vorkommt. 20 Weiterhin sind verschiedene tetraploide Kamillensorten bekannt (beispielsweise BODEGOLD, DDR; POHORE-LICKY, CSSR; ZLOTY LAN, Polen; BD-2, Ungarn). Diese tetraploiden Kamillensorten weisen einen Chamazulengehalt auf, der nicht wesentlich unter dem der neuen Kamillen-25 sorte Manzana liegt. Andererseits ist hingegen in diesen bekannten tetraploiden Kamillensorten der wichtige Wirkstoff (—)-a-Bisabolol nur in äusserst geringer Menge vorhanden und es herrschen stattdessen die übrigen Bisaboloide (Bisa-bololoxid A und B sowie Bisabolonoxid) vor, die zusammen 30 mehr als die Hälfte des ätherischen Öls bei den bekannten tetraploiden Kamillensorten ausmachen.

Es wurde nun ein Verfahren zur Herstellung einer neuen tetraploiden Kamillensorte mit vorteilhaften Eigenschaften gefunden.

35 Die Erfindung betrifft die durch die Patentansprüche definierten Gegenstände beziehungsweise Sachverhalte.

Die neue verfahrensgemässe tetraploide Kamillensorte mit der Bezeichnung Manzana zeichnet sich überraschenderweise gegenüber der bekannten Kamillensorte DEGUMILL 40 sowie den anderen bekannten tetraploiden Kamillensorten durch eine Reihe von neuen und vorteilhaften Eigenschaften aus.

Im Gegensatz zu DEGUMILL ist sie nicht mehr anfällig gegen die Fremdbestäubung mit den natürlich vorkommen-45 den Kamillen-Populationen (Wildkamille). Ausserdem hat sie einen beträchtlich höheren Gehalt an dem wichtigen Wirkstoff (-)-a-Bisabolol als die Sorte DEGUMILL. Gegenüber den bekannten tetraploiden Kamillensorten unterscheidet sich die verfahrensgemässe Sorte Manzana über-50 raschenderweise durch einen unvergleichlich höheren Gehalt an dem wichtigen Wirkstoff (—)-a-Bisabolol sowie einen sehr geringen Gehalt an den übrigen Bisaboloiden.

Darüberhinaus unterscheidet sich die verfahrensgemässe Sorte Manzana von den bekannten tetraploiden Kamillen-55 Sorten überraschenderweise noch durch folgende Eigenschaften: verbesserte Keimfähigkeit der Samen; geringerer Anfall von nicht brauchbarer Krautmasse (das heisst höherer Blütenertrag); niedrigerer Wassergehalt der Blüten (das heisst bessere Ausbeute an getrockneten Blüten und kürzere 60 Trocknungszeiten); bessere Eignung für die maschinelle Ernte, weil die Blüten weitgehend in einer Ebene lokalisiert sind und die meisten Blüten gleichzeitig blühen (dadurch wird auch ein einheitlicher Erntetermin möglich); bessere Haltbarkeit der Droge (geringere Neigung zu Zerfall und Grus-65 bildung); besonders aromatischer und typischer Kamillegeruch.

Weiterhin ist die verfahrensgemässe Kamillensorte Manzana im Gegensatz zu den bisher bekannten tetraploi-

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den Kamillensorten inhaltsstoffmässig homogen, wobei die Eigenschaften chamazulen- und (—)-a-bisabololhaltig beständig (das heisst homozygot) sind.

Demgegenüber zeigt die Einzelpflanzentestung der bekannten tetraploiden Kamillensorten, dass die einzelnen Individuen verschiedenen Inhaltsstofftypen zuzurechnen sind, das heisst jede Stichprobe einer hieraus hergestellten Droge liefert ein sowohl qualitativ als auch quantitativ unterschiedliches, inhomogenes Ergebnis.

Aufgabe der Erfindung ist die Herstellung einer neuen tetraploiden Kamillensorte mit verbesserten Eigenschaften, insbesondere einem erhöhten Gehalt an (—)-a-Bisabolol.

Die Herstellung der neuen verfahrensgemässen Kamillensorte erfolgt durch Tetraploidisierung der Kamillensorte DEGUMILL (Genmutation) und sich hieran anschliessende weitere Selektions- und Vermehrungsschritte (Mutterstammbaumzüchtung für vegetativ vermehrbare Fremdbefruchter). Die Sorte Manzana setzt sich aus 34 Stämmen beziehungsweise Linien, die in der Erhaltungszüchtung getrennt bearbeitet wurden, zusammen.

Die Tetraploidisierung kann beispielsweise in an sich bekannter Weise durch Behandlung von Pflanzenteilen (Samen, Wurzeln, Sprossspitzen, Keimen, Achselknospen) oder Gewebe der Kamillenpflanze DEGUMILL mit Chemikalien, Röntgenstrahlen, Gammastrahlen oder UV-Strahlen erfolgen. Sie kann weiterhin nach der Dekapitierungs-Kallus-Methode, durch Antherenkultur oder durch Anwendung von hohen oder auch niedrigen Temperaturen auf die Kamillenpflanze DEGUMILL beziehungsweise Pflanzentei-le oder Gewebe der Kamillenpflanze DEGUMILL erfolgen. Es wird hierzu beispielsweise auf das Buch von Werner Gottschalk «Die Bedeutung der Polyploidie für die Evolution der Pflanzen», Gustav Fischer Verlag, Stuttgart, 1976, insbesondere Seiten 13 bis 22 verwiesen.

Die Tetraploidisierung durch Chemikalien

Als Chemikalien für die Tetraploidisierung kommen zum Beispiel in Frage: Colchicin, Acenaphthen, Alkaloide wie Atropin, Veratrin, Nicotin, Sanguinarin, Derivate des Benzols, Diphenyls und Phenanthrens, Naphthalin und Naphthalinderivate, Diphenylamin, Tribromanilin, Paradichlorbenz-ol, Methylnaphthochinon, Methylnaphthohydrochinon, Sa-licylsäure und verwandte Substanzen, Hexachlorhexan, Per-vitin (Hydrochlorid), Alkyl-Alkali-Carbamate wie Isopro-pyl-Natrium-Carbamat, Phenylurethan, Salze der Kakodyl-säure (zum Beispiel Natriumsalz), Glykoside von Convallaria wie Convallarin, Convallatoxin und Convallamarin, He-teroauxin, Germisan (Phenylmercuribrenzkatechin), organische Quecksilberverbindungen wie Ethyl-Quecksilber-Phosphat, Ethyl-Quecksilber-Chlorid, Phenyl-Quecksilber-Hydroxid, Phenyl-Quecksilber-Dinaphthylmethandisulfo-nat, Chloroform, Lachgas (N2O) sowie Gemische dieser Stoffe. Weiterhin kommen auch Ölkuchen, Kompost und Kuhdung in Betracht.

Die Behandlung mit den hier erwähnten Stoffen erfolgt beispielsweise bei Temperaturen zwischen 0 und 35 :C, vorzugsweise zwischen 12 und 30 7C, insbesondere 15 und 25 C.

Die Applizierung erfolgt beispielsweise durch Behandeln von Samen, Sprossspitzen, Wurzeln (insbesondere Wurzelspitzen oder Wurzeln von Keimlingen), Fruchtknoten, von Schnittflächen an Blättern oder Stengeln, von Zellsuspensionen aus Meristem-Gewebe, von Kalluskulturen oder auch durch Injektion in die basale Stengelregion oder in den Bereich der Achselknospen. Die Chemikalien werden im allgemeinen in Form von Lösungen in Wasser, schwach alkoholischen (Alkoholgehalt in der Regel unter 5%) oder schwach sauren Lösungen angewendet. Der pH-Wert der schwach sauren Lösungen liegt beispielsweise bei 5,5—6,5, wobei das

Ansäuern beispielsweise mittels niederen organischen aliphatischen Säuren wie Essigsäure erfolgt. Falls man alkoholische Lösungen verwendet, können diese ebenfalls schwach sauer sein. Die Konzentrationen der Chemikalien in diesen Lösungen kann beispielsweise 0,01 bis 0,5%, vorzugsweise 0,02 bis 0,2%, insbesondere 0.05 bis 0,1% betragen. Gasförmige Stoffe kommen als solche, gegebenenfalls unter Druck (zum Beispiel 1 bis 10 bar) zur Anwendung. Die Behandlungsdauer beträgt beispielsweise 1 bis 36, vorzugsweise 2 bis 12, insbesondere 4 bis 6 Stunden.

Die wirksamsten Konzentrationen sowie die Einwirkungsdauer sollte zweckmässig jeweils in Vorversuchen getestet werden.

Besonders günstig ist zum Beispiel die Behandlung mit Colchicin bei Temperaturen zwischen 0 und 35 C, vorzugsweise 12 bis 30 C, insbesondere 15 bis 25 "C. Dies kann beispielsweise dadurch erfolgen, dass Samen der Kamillensorte DEGUMILL in einer 0,01 bis 0,2%igen, insbesondere 0,02 bis 0,l%igen, vorzugsweise 0,05%igen Colchicinlösung zum Quellen gebracht werden oder dass ausgekeimte, 5 bis 7 Tage alte gut entwickelte Keimlinge der Kamillensorte DEGUMILL (mit den Keimblättern nach unten) in eine 0,01 bis 0,2%ige, insbesondere 0,02 bis 0,l%ige, vorzugsweise 0,05%ige Colchicinlösung getaucht werden. Bei letzterem Verfahren soll die umgebende Atmosphäre nahezu 100% relative Luftfeuchtigkeit aufweisen. Die Dauer der Colchicin-Behandlung beträgt beispielsweise 3 bis 36 Stunden, insbesondere 4 bis 10 Stunden. Bei der Verwendung von Keimlingen ist im allgemeinen eine Einwirkungsdauer bis zu 10 Stunden ausreichend. Bei der Verwendung von Samen kann sich die Einwirkungsdauer gegebenenfalls bis zu 36 Stunden erstrecken.

Nach der Behandlung mit den Chemikalien werden die gequellten Samen, Keimlinge, beziehungsweise sonstige Pflanzenteile, mit Wasser mehrmals gespült. Die gequellten Samen werden beispielsweise ausgesät. Die Pflanzen mit behandelten Wurzeln oder sonstige Pflanzenteile oder die behandelten Keimlinge werden beispielsweise in Pflanzkisten pikiert. Aus den so behandelten Samen beziehungsweise Keimlingen werden die Pflanzen aufgezogen (zum Beispiel im Gewächshaus: Temperatur zwischen 18 bis 25 C am Tag und 10 bis 16 ~C nachts) und die Pflanzen ausgewählt, deren Pollen etwa 1V2 mal grösser sind als die Pollen des Ausgangsmaterials beziehungsweise eine Chromosomenzahl der somatischen Zellen von 36 aufweisen. Falls man sonstige Pflanzenteile (ober- oder unterirdische Teile) der Chemikalienbehandlung unterwirft, werden ausschliesslich die aus den behandelten Teilen hervorgegangenen Triebe, Wurzeln oder Blüten/Samen einer späteren Untersuchung auf erfolgte Tetraploidisierung unterzogen. Wenn beispielsweise eine Sprossbehandlung oder eine Achselbehandlung vorgenommen wurde, wird anschliessend nur der aus dieser Achsel beziehungsweise aus diesem Spross entstehende neue Trieb und die auf ihm gebildeten Blüten beziehungsweise Samen auf Chromosomenzahl untersucht.

Die Pollengrössenmessungen und die Chromosomenzählung können beispielsweise so durchgeführt werden wie in Beispiel 1 angegeben ist.

Die Tetraploidisierung durch Strahlen

Die Einwirkung erfolgt beispielsweise auf Samen oder Wurzelspitzen bei Temperaturen zwischen 0 und 35 ;C, vorzugsweise 10 und 30 C, insbesondere 15 und 25 "C. Bestrahlungssumme: 5 bis 50 Krad. Vorzugsweise kommen Gamma* oder Röntgenstrahlen in Frage.

Als UV-Strahlen kommen beispielsweise solche mit einer Wellenlänge von 400 bis 30 nm, vorzugsweise von 350 nm in Frage.

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Die so bestrahlten Pflanzen beziehungsweise Pflanzenteile werden dann ebenso weiterbehandelt wie nach der Behandlung mit Chemikalien.

Anwendung hoher und niedriger Temperaturen

Als hohe Temperaturen kommen beispielsweise Temperaturen zwischen 33 und 50 C, vorzugsweise 42 bis 45 C in Frage. Diesen Temperaturen werden beispielsweise ausgesetzt: gequollene Samen, Keimlinge, Triebspitzen und meri-stematisches Gewebe. Dauer der Behandlung: zum Beispiel 1 bis 48. vorzugsweise 12 bis 24 Stunden.

Als niedrige Temperaturen kommen beispielsweise in Frage: 0 bis 5 C, vorzugsweise 0,5 bis 4 C, insbesondere 2 C. Diesen Temperaturen werden beispielsweise ausgesetzt: gequollene Samen, Keimlinge, Triebe und meristematische Gewebe. Dauer der Behandlung: zum Beispiel 1 bis 100, vorzugsweise 20 bis 40 Tage. Die so behandelten Pflanzen beziehungsweise Pflanzenteile werden ebenso weiterbehandelt wie nach der Behandlung mit Chemikalien.

Die Dekapitierungs-Kallus-Methode (Dekapitierung = Köpfung oder Entspitzung oder Rückschnitt)

Die Dekapitierung wird beispielsweise an Jungpflanzen am Stengel, vorzugsweise am Spitzenvegetationskegel, nach Ausbildung von 4 bis 6 Blättern oder auch an Blattstielen oder Seitentrieben durchgeführt. Die aus dem Wundgewebe (Kallusgewebe) entstehenden Knospen beziehungsweise Sprosse werden abgeschnitten, zur Bewurzelung gebracht, in Töpfen weiterkultiviert und die tetraploidisierten Pflanzen in gleicher Weise wie bei der Chemikalienbehandlung ausselektiert.

Antherenkultur (Erzeugung von Pflanzen mit einfachem Chromosomensatz aus den Staubbeuteln mit anschliessender spontaner oder künstlicher T etraploidisierung)

Von blühenden Pflanzen werden geschlossene Röhrenblüten geerntet, deren Antheren (Staubbeutel) sich im Stadium vor der ersten Pollenmitose befinden. Die Antheren werden mittels Mikromanipulator aus den Blütenknospen entnommen und in Petrischalen übertragen, die beispielsweise . mit dem Nährmedium nach Nitsch und Nitsch (Tabelle 1) gefüllt sind. Anschliessend werden die Petrischalen in einem Kulturraum im 16-Stunden-Tag bei 28 C Tag- und 20 C Nachttemperatur aufbewahrt. Nach circa vier Wochen beginnen die Antheren aufzubrechen und Pflänzchen herauszuwachsen. Diese sind bei diploidem Elternteil haploid, bei te-traploidem Elternteil dihaploid; sie werden nach Ausbildung von Wurzeln beispielsweise in Gartenerde getopft und im Gewächshaus zum Blühen gebracht. Diese (di)haploiden Pflanzen sind steril, können jedoch durch Sprossspitzen-, Wurzel- oder Stengelbehandlung mit Chemikalien, wie zum Beispiel Colchicin polyploidisiert werden, wobei homozygote Pflanzen entstehen, die sich dann über Samen weitervermehren lassen. Weiteres Vorgehen siehe bei der Behandlung mit Chemikalien (zum Beispiel Colchicinbehandlung).

Tabelle 1

Kulturmedium nach Nitsch und Nitsch (Science, 1969)

mg 1

KNO, 950

NH4NO, 720

MgS04 x 7 H^O 185

CaCl^ 166

KH^P04 68

MnS04 x 4 HiO 25

H3BO3 10

ZnS04 x 7 HiO 10

Na->Mo04 x 2 H.O 0,25

5 CuS04 x 5 H20 0,025 5 ml einer Lösung aus 7,45 g Ethylendiamintetraessigsäure-dinatriumsalz und 5,57 g FeS04 x 7 H20 auf 1000 ml myo-Inosit 100

10 Glycin 2

Nicotinsäure 5

Pyridoxin-HCl 0,5

Thiamin-HCl 0,5

Folsäure 0,5

15 Biotin 0,05

Saccharose 20 g

Fertignährboden (DIFCO-Bacto-Agar) 8 g

Indolessigsäure 0,1

20 pH des Mediums eingestellt auf 5,5

Von den durch Pollengrössenmessung und/oder Chromosomenzählung ausselektierten tetraploiden Kamillenpflanzen, die nach den vorstehend beschriebenen Möglich-25 keiten erhalten werden können, werden dann nochmals die Pflanzen ausselektiert, die folgende Bedingungen erfüllen a) ungefähr gleichzeitiges Blühen,

b) eine gleichmässige, grundständige Verzweigung und eine schmale Blühzone von circa 5 cm,

30 c) grosse Blütenköpfchen mit einem Aussendurchmesser von circa 30 mm (25 bis 35 mm),

d) Mindestgehalt an Chamazulen von 150 mg% und Bisabolol von 300 mg% und einem Gehalt an übrigen Bisaboloiden (insbesondere Bisabololoxide) unter 50 mg% (bezo-35 gen auf die getrockneten Blüten, siehe Beispiel).

Die so ausgesuchten Pflanzen werden nun vegetativ durch Stecklinge vermehrt (verklont) und über 3 bis 5 Generationen ausgelesen, wobei die Auswahl stets nach den oben angegebenen Kriterien a)—d) erfolgt. Das heisst, die gemäss 40 den Kriterien a) —d) ausgesuchten Pflanzen werden verklont, aus den verklonten Pflanzen wird Saatgut gewonnen, die hieraus erhaltenen Pflanzen nach den Kriterien a)—d) ausselektiert und aus letzteren wieder Saatgut gewonnen.

Die Sequenz Aussaat — Selektion gemäss a) —d) — 45 Saatgutewinnung kann 2—4mal wiederholt werden. Daran schliesst sich nochmals eine Sequenz Aussaat — Selektion gemäss a) —d) — Verklonung — Saatgutgewinnung an.

Das zuletzt erhaltene Saatgut ist dann das Vermehrungsgut der verfahrensgemässen Kamillensorte Manzana. 50 Die Stecklingsvermehrung erfolgt dabei auf folgende Weise: Zur Stecklingsvermehrung müssen die Ausgangspflanzen (Klonmutterpflanzen) unter Kurztagbedingungen blütenknospenfreie Kurztriebe ausbilden. Dies erfolgt im Winterhalbjahr im Gewächshaus ohne Zusatzbeleuchtung 55 oder in Klimakammern bei einer Tageslänge von 6 bis 10, vorzugsweise 8 Stunden und Temperaturen von 10 bis 15 C, vorzugsweise 12 C. Zur Verklonung beziehungsweise Vermehrung eignen sich Blatt-, Trieb- und insbesondere Kurz-trieb-(Seitentrieb-)Stecklinge. Ihre Bewurzelung erfolgt bei 6012 bis 18 "C, vorzugsweise 15 "C und Tageslängen von 12 bis 16, vorzugsweise 14 Stunden in gespannter Atmosphäre (ca. 100% relative Luftfeuchte). Als Substrat kann beispielsweise ein Torf-Sand-Gemisch im Verhältnis 1 : 1 verwendet werden; es eignen sich aber auch reiner Quarzsand, Steinwolle-65 Stecklingswürfel, Torf-Stecklingswürfel und ähnliches.

Für die Aussaat kommen hierbei beispielsweise folgende Böden in Betracht: Gartenerde; humose, mittelschwere Lehmböden; lehmige oder humose Sandböden.

Es kann im Gewächshaus oder auch im Freiland ausgesät werden. Die Temperaturen für Keimung und Wachstum der Pflanzen liegen beispielsweise zwischen 12 bis 24 DC, insbesondere 18 bis 20 °C. Falls im Freiland ausgesät wird, wird vorzugsweise im Herbst (September/Oktober) oder im Frühjahr (März/April) gesät. Diese Termine gelten für sämtliche in Frage kommenden Anbaugebiete (zum Beispiel nördliche Hemisphäre, gemässigte bis subtropische Klimagebiete).

Die neue, verfahrensgemässe Kamillensorte Manzana gehört zur Kulturpflanzenart der echten Kamille mit der botanischen Bezeichnung Matricaria Chamomilla L. (synonym Chamomilla recutita (L.), Rauschert) und wird durch die Wirkstoffangaben des Patentanspruchs 1 definiert. Die im erfindungsgemässen Verfahren erforderliche Feststellung des Wirkstoffgehaltes erfolgt an Blüten, die ein solches Entwicklungsstadium aufweisen, dass 30 bis 70%, insbesondere 40 bis 60% aller Röhrenblüten eines Blütenköpfchens geöffnet sind (das heisst die für die Wirkstoffbestimmung verwendeten Blüten wurden zu diesem Zeitpunkt gepflückt und dann 72 Stunden bei 40 °C im Trockenschrank getrocknet).

Falls die Ernte der Kamillenblüten zu einem Zeitpunkt erfolgt, in dem das Blüten-Entwicklungsstadium weiter fortgeschritten ist, das heisst, wo beispielsweise 100% oder bis zu 100% aller Röhrenblüten eines Blütenköpfchens geöffnet sind (zum Beispiel Stadium der Vollblüte) und/oder falls die Trocknung der geernteten Blüten bei höherer Temperatur als 40 C erfolgt, ist der Gehalt an den Wirkstoffen (-)-a-Bisabolol und Chamazulen niedriger. Erfolgt also die Ernte in einem Vegetationsstadium, wo 30—100% der Röhrenblüten eines Blütenköpfchens geöffnet sind und wird hierbei bei einer Temperatur bis zu 60 °C getrocknet (vorzugsweise unter Ausschluss des Sonnenlichts, zum Beispiel unter solchen Trocknungsbedingungen, wie einige Seiten weiter angegeben wird), enthält die so gewonnene Kamillendroge mindestens 120 mg% Chamazulen und mindestens 200 mg% (—)-a-Bisabolol, während der Gehalt an übrigen Bisaboloiden nach wie vor unter 50 mg% bleibt.

Unter der Bezeichnung «übrige Bisaboloide» in dem Anspruch 1 werden insbesondere verstanden:

(—)-a-Bisabololoxid A und B; (—)-a-Bisabolonoxid A; Weitere Bestandteile des ätherischen Öls der verfahrensge-mässen Kamillensorte sind En-In-Dicycloether, Farnesen, Spathulenol und in geringen Konzentrationen verschiedene leichtflüchtige Terpenkohlenwasserstoffe.

Beispielsweise enthalten die im Trockenschrank bei 40 °C getrockneten Blüten (geerntet in dem Blütenentwicklungsstadium, wo 30 — 70% der Röhrenblüten eines Blütenköpfchens geöffnet sind), der verfahrensgemässen Sorte Manzana zwischen 150 — 200 mg% Chamazulen, zwischen 300 — 450 mg% (—)-cc-Bisabolol und nur wenig, das heisst zwischen 5 bis 50 mg% andere Bisaboloide bezogen auf die Trockensubstanz (das heisst bezogen auf das absolute Trok-kengewicht der Blüten). Dieses absolute Trockengewicht wird durch Trocknung einer separaten Probe von Kamillenblüten der verfahrensgemässen Sorte Manzana im Trok-kenschrank bei 105 CC bis zur Gewichtskonstanz (72 bis 96 Stunden) bestimmt. Der Wirkstoffgehalt der bei beispielsweise 35 bis 50 °C getrockneten Blüten (Droge) wird dann auf die bei 105 CC ermittelte Trockenmasse der Blüten berechnet.

In ihrem Phänotyp ist die verfahrensgemässe Sorte Manzana den bisher bekannten tetraploiden Kamillensorten (zum Beispiel Bodegold, Zloty Lan, BK-2, Pohorelicky Vel-kokvety) ähnlich; sie unterscheidet sich von diesen insbesondere dadurch, dass bei der verfahrensgemässen Sorte Manzana (-)-a-Bisabolol die Hauptkomponente des ätherischen Öls der Blüten ist, dass ausserdem der Chamazulenge-halt höher und der Gehalt an den übrigen Bisaboloiden (Bi-

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sabololoxide A und B; Bisabolonoxid) ganz erheblich niedriger ist. Weitere Bestandteile des ätherischen Öls der Sorte Manzana sind Farnesen, Spathulenol und En-In-Dicyclo-äther.

Die verfahrensgemässe Kamillensorte kann auf allen Böden mit Ausnahme von Böden mit einem Gehalt von mehr als 20% an organischer Substanz (Humusstoffe und Bodenorganismen) erfolgreich angebaut werden; es sind keine besonderen agrotechnischen Verfahren oder Kulturmassnah-men erforderlich; Lediglich ist für den Anbau ein Langtag mit über 13 Stunden maximale Tageslänge notwendig, das heisst für den Anbau kommen insbesondere die gemässigten Zonen und die Subtropen in Frage.

Die verfahrensgemässe Kamillensorte Manzana hat einen mittelspäten Erntetermin, eine einheitliche Wuchshöhe mit schmaler Blühzone und grosse Blütenköpfchen und ist daher besonders für mechanische Ernte geeignet. Hinzu kommt, dass zu gleicher Zeit ausgesäte Pflanzen der Sorte Manzana im allgemeinen praktisch zur gleichen Zeit gemeinsam abblühen, so dass auch hierdurch die Ernte sehr vereinfacht und erleichtert wird.

Die verfahrensgemässe Kamillensorte Manzana erbringt einen hohen Ertrag. Verwendungsmöglichkeiten sind beispielsweise: Gewinnung von Kamillendroge, Kamillenöl, Kamillenextrakte sowie natürlichem (—)-a-Bisabolol.

Eine aus der verfahrensgemässen Kamillensorte Manzana hergestellte Droge besitzt den maximalen Gehalt an den Wirkstoffen Chamazulen und Bisabolol, wenn die Ernte der Kamillenblütenköpfchen in dem Vegetationsstadium erfolgt, wo beispielsweise 30 bis 70%, vorzugsweise 40 bis 60%, das heisst im allgemeinen 50% der Röhrenblüten eines Blütenköpfchens geöffnet sind und die Trocknung bei einer Lufttemperatur von höchstens 50 °C, beispielsweise 35 bis 50 °C erfolgt. Die Trocknung kann hierbei entweder durch künstliche Luftzufuhr oder auch durch Trocknung im Schatten, gegebenenfalls auch in der Sonne erfolgen, wobei jedoch darauf geachtet werden soll, dass die Wärmezufuhr nicht über das zur vollständigen Trocknung erforderliehe Mass hinausgeht. Es ist also vorteilhaft, dass man sich durch jeweilige Kontrollwägungen von der erreichten Gewichtskonstanz überzeugt. Die Trocknung kann spontan oder künstlich (zum Beispiel mit künstlicher Warmluft) erfolgen. Die Wirkstoffausbeute ist am grössten bei spontanter Trocknung unter Ausschluss des Sonnenlichts. Der Trocknungsprozess soll möglichst bald beziehungsweise umgehend nach der Ernte stattfinden. Die Trocknung soll in dünnen Schichten, beispielsweise von 5 bis 20 cm, vorzugsweise 10 cm Dicke durchgeführt werden.

Die Bestimmung des Chamazulens erfolgt spektralphoto-metrisch ähnlich der bei Kamillenextrakten üblichen Weise. Die Bestimmung des (—)-a-Bisabolols sowie der übrigen Inhaltsstoffe des Kamillenöls erfolgt nach der hierfür üblichen gaschromatographischen Methode.

Eine genaue Schilderung der analytischen Bestimmungsmethoden enthält die Anlage A.

Der Wirkstoff Chamazulen liegt in den Kamillenblüten nicht als solcher, sondern in Form des Sesquiterpenlactons Matricin vor. Das Matricin besitzt eine pharmakologische Wirkung, die der des Chamazulens entspricht. Aus dieser Vorstufe Matricin entsteht beispielsweise beim Erhitzen (zum Beispiel Wasserdampfdestillation, Teeaufguss) sofort das Chamazulen. Es ist daher üblich, bei der Kamille nicht den Gehalt an Matricin, sondern den analytisch erfassbaren Gehalt des sich hieraus bildenden Chamazulens anzugeben.

Beispiel

Samen der Kamillensorte DEGUMILL wurden auf ein mit 0,05%iger wässriger Colchicinlösung getränktes Filter-

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papier aufgebracht und bei Raumtemperatur (20 °C) 6 Stunden quellen lassen. Daraufhin wurden sie vom Filterpapier entfernt, mit Wasser mehrmals gespült und in Saatkisten (Gewächshaus) ausgesät: Erde:Torf-Sand-Gemisch 1:1, Temperatur: 18 bis 20 °C, relative Luftfeuchtigkeit: circa 60%, Tageslänge bei künstlicher Belichtung: 14 Stunden.

Die keimenden Pflanzen wurden bis zur Blüte beobachtet, der Polyploidisierangserfolg wurde durch Vergleichsmessung der Pollen- und Samengrösse sowie durch Chromosomenzählung der Pflanzen (Fi-Nachkommenschaft = erste, aus Samen gezogene Nachkommenschaft der als tetra-ploid bestätigten colchicinierten Pflanzen) festgestellt.

Die Tetraploidisierung kann auch auf folgende Weise erfolgen:

Auf wassergetränktem Filterpapier ausgekeimte, 5 bis 7 Tage alte, gut entwickelte Kamillenkeimlinge der Sorte DEGUMILL wurden bei Raumtemperatur (20 °C) für 4 bis 6 Stunden mit den Keimblättern nach unten in eine 0,05%ige Colchicinlösung gestellt. Die empfindlichen Keimwurzeln wurden dabei geschont; um Trockenschäden an ihnen zu vermeiden, muss die umgebende Atmosphäre nahezu 100% relative Luftfeuchte aufweisen. Nach der Behandlung wurden die Keimlinge mit Wasser mehrmals gespült und in Pflanzenkistchen pikiert. Die weitere Behandlung erfolgte wie bei den Samen.

Die Pollengrössenmessungen werden mit einem Leitz-Binokular-Forschungsmikroskop mit Mikrometer-Messo-kular und Mikrometer-Objektträger durchgeführt.

Die Chromosomenzählung findet an Wurzelspitzen statt: Von den im Gewächshaus gezogenen Jungpflanzen oder Stecklingspflanzen werden 1 bis 2 cm lange frische Wurzelenden gesammelt, 5 Stunden in 0,002 molare Hydroxychino-lin-Lösung und anschliessend 15 Minuten in IN HCl eingelegt. Zur Untersuchung werden circa 1 mm der Wurzelspitzen mit 2%iger Orcein-Essigsäure angefärbt und in Ölim-mersion mikroskopisch untersucht. Bei den in Mitose befindlichen Zellen kann so der 4-fache Chromosomensatz der somatischen Zellen bestimmt werden (4n = 36).

Diejenigen Pflanzen, bei welchen der Pollendurchmesser um circa 50% grösser als derjenige des diploiden Ausgangsmaterials (circa 30 statt circa 20 (im) und bei denen der Chromosomensatz der somatischen Zellen auf 36 verdoppelt war (bei dem diploiden Ausgangsmaterial ist die entsprechende Zahl 18) sind tetraploid. Diese wurden ausselektiert. Ungefähr 0,1 bis 0,5% der Samen beziehungsweise der Keimlinge wurden bei der oben angegebenen Methode tetra-ploidisiert und entwickelten blühfähige, intakte Pflanzen. Es schliessen sich nun folgende Schritte an:

Schritt 1:

Von den (wie oben beschrieben) ausselektierten tetraploiden Kamillenpflanzen wurden diejenigen Individuen ausgelesen, die a) etwa gleichzeitig blühen,

b) eine gleichmässige, grundständige Verzweigung und eine schmale Blühzone von ca. 5 cm aufweisen,

c) grosse Blütenköpfchen mit einem Aussendurchmesser von ca. 30 mm aufweisen,

d) einen Mindestgehalt für Chamazulen von 150 mg% und Bisabolol von 300 mg% erreichen oder überschreiten und deren Gehalt an übrigen Bisaboloiden (insbesondere Bi-sabololoxide) deutlich unter 50 mg% liegt. (Sämtliche Werte beziehen sich auf Blütenköpfchen, die bei 40 °C getrocknet wurden und deren Ernte in dem Stadium erfolgte, wo erst circa 50% (40 bis 60%) der Röhrenblüten eines Köpfchens aufgeblüht werden).

Diese Pflanzen wurden verklont. Hierzu wurden die Pflanzen (Klonmutterpflanzen) zunächst auf circa 15 cm

Sprosslänge zurückgeschnitten, unter 8 bis 10 Stunden Tageslänge und 12 bis 14 C zum Neuaustrieb (kurze Seitentriebe) gebracht. Die Kurztriebe wurden geschnitten und in ein Torf-Sand-Gemisch gesteckt. Bei circa 100% relativer Luftfeuchte, 15 °C Lufttemperatur und einer Tageslänge von 14 Stunden dauerte die Bewurzelung der Stecklinge 7 bis 14 Tage.

Anstelle der angegebenen konventionellen Verklonung (Stecklingsvermehrung) kann auch die in-vitro-Vermehrung teilungsfähiger Gewebspartien der Pflanze eingesetzt werden (sogenannte Meristem-Vermehrung). Zur Etablierung einer Kamillen-Kultur eignen sich verschiedene Teile der Pflanze, vorzugsweise die Sprossspitzen oder die Achselknospen.

Nach Abspülen der Pflanzen mit H2O2 werden unter aseptischen Bedingungen im «Laminar Flow» (Hochlei-stungs-Schwebstoff-Filter mit turbulenzarmer Verdrängungsströmung) Sprossspitzen der Blattachselknospen entnommen und in Reagenzgläser übertragen, die mit einem Nährmedium, beispielsweise nach Murashige und Skoog (Physiol. Plant. 15,473 — 497,1962) gefüllt sind. Die Reagenzgläser werden in einen Klimaraum mit 12—18, vorzugsweise 16 Stunden Tageslänge (erreicht durch Fluoreszenz-Leuchtstoffröhren), einer Lichtintensität von 500—10 000 lux, vozugsweise 1000 — 3000 lux und einer Temperatur von 15—30 °C, vorzugsweise 22—27 °C gestellt.

Sobald die Explantate ein gutes Wachstum zeigen, werden sie auf ein obengenanntes Nährmedium, jedoch mit einer höheren Cytokininkonzentration (30 mg/1 N6-Isopente-nyladenin) und wenig oder gar keinem Auxin (0—0,3 mg/1) Indolessigsäure) überführt. In der Folge strecken sich die Achsen und es werden Adventivorgane sowie vermehrt Achselknospen gebildet. Diese können nach der vorerwähnten Weise entnommen und angezogen werden.

Die für die Pflanzenvermehrung in grösserer Zahl bestimmten Explantate (der 3. Passage = 3. Vermehrungsgeneration) werden nach Anwachsen und Ausbildung der Blätter auf dem erstgenannten Nährmedium auf einen Nährboden übertragen, welcher 10 mg/1 Indolessigsäure oder 3-In-dolbuttersäure oder 0,1 —0,3 mg/1 a-Naphthylessigsäure enthält. Dabei bewurzeln sich die Pflänzchen und können nach etwa 4 Wochen in mit sterilisierter Gartenerde (12 Stunden bei 120 °C gedämpft) gefüllte Töpfe gepflanzt und im Gewächshaus (unter Bedingungen wie für die konventionelle Stecklingsvermehrung üblich) weiterkultiviert werden.

Nährmedium nach Murashige & Skoog:

mg/1 mg/1

NH4NO3 400 Indolessigsäure 2,0

Ca(N03)2 • 4H2O 144 Furfuryladenin 0,1

KNO3 80 Thiamin 0,1

KH2PO4 12,5 Nicotinsäure 0,5

MgS04 • 7H20 72 Pyridoxin 0,5

KCl 65 Glycin 2,0

NaFe-EDTA 25 myo-Inosit 100

H3B03 1,6 Casein-Hydrolys. 1000

MnS04 • 4H20 6,5 Saccarose 2%

ZnS04 • 7H2O 2,7 gereinigtes

KJ 0,75 Agar-Pulver 1%

Schritt 2:

Die nach Schritt 1 erhaltenen Pflanzen blühten unter isolierten Bedingungen im Gewächshaus gemeinsam ab. Die Pflanzen standen hierbei in 11-cm-Töpfen, gefüllt mit Gartenerde, bei 18 bis 24 °C Tag- und 12 bis 14 °C Nacht-Temperatur. Die Tageslänge betrug mindestens 14 Stunden und wurde im Winterhalbjahr durch Zusatzbelichtung (200

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Watt/m2) erreicht. Die Wasserversorgung erfolgte nach Bedarf.

Von der Gesamtheit der selektierten Individuen wurden über einen Zeitraum von 4 Wochen laufend diejenigen Köpfchen zur Saatgutgewinnung geerntet, die verblüht und kurz vor dem Zerfallen waren. Das Saatgut wurde nach Nachtrocknen der geernteten Blüten bei Zimmertemperatur durch Ausblasen der leichteren Blütenbestandteile gewonnen.

Schritt 3:

Aus dem nach Schritt 2 erhaltenen Saatgut wurde eine Stichprobe entnommen und hieraus circa 2000 Nachkommen gezogen (ökologische Bedingungen wie bei Schritt 2) und nach den gleichen Kriterien a) bis d) von Schritt 1 selektiert. Mit den so selektierten Individuen wurde dann gemäss Schritt 2 verfahren.

Schritt 4:

Von dem Saatgut gemäss Schritt 3 wurde ein Teil an zwei verschiedenen Standorten im Herbst ausgesät.

Standord A)

450 m NN, 48,53 N/11,5° O, 750 mm Jahresniederschlagssumme,

feucht-gemässigtes Klima,

Januar —10 bis 0 °C,

Juli +10 bis+20 ^C,

NN = nördlich Normalnull = Seehöhe CN = nördliche Breite (ngrad)

O = östliche Länge (ngrad)

Standort B)

200 m NN, 42e N /1° O,

400 mm Jahresniederschlagssumme,

mediterranes Klima,

Januar 0 bis +10 °C,

Juli+20 bis+30 °C.

Die Aussaat erfolgte an beiden Standorten Ende September/Anfang Oktober.

Die so erhaltenen Feldversuchsbestände wurden hinsichtlich homogenem Wuchs, Blütengrösse und Erntetermin überprüft und beurteilt (bonitiert), ausserdem wurden Stichproben der Blüten auf die Wirkstoffgehalte untersucht. Aus dem Feldbestand wurden erneut diejenigen Individuen selektiert, die den bei Schritt 1 genannten Parametern entsprechen. Von diesen wird Saatgut entsprechend Schritt 2, letzter Satz, gewonnen.

Schritt 5:

Mit dem Saatgut gemäss Schritt 4 wurden die Schritte 3 und 4 in der angegebenen Reihenfolge und Weise wiederholt.

Schritt 6:

Aus dem nach Schritt 5 gewonnenen Saatgut wurden circa 1500 Individuen gezogen (Ökologische Bedingungen wie bei Schritt 2) und nach dem gleichen Prinzip, wie bei Schritt 1 angegeben ist, selektiert. Von den so ausselektierten Pflanzen wurden 34 Individuen ausgewählt und gemäss Schritt 1 verklont. Je 10 Pflanzen jedes Klons wurden in zufälliger Verteilung im Abstand 40 x 30 cm im Freiland (Standort A, siehe Schritt 4) an isolierter Stelle aufgepflanzt. Der Boden war Lösslehm, pH 7,0; die Pflanzung erfolgte Anfang Juni, die erste Ernte der Samen Mitte Juli, danach wurden die Pflanzen zurückgeschnitten, blühten nochmals und lieferten Mitte bis Ende August eine zweite Saatguternte.

Die Saatgutgewinnung dieses Materials erfolgte gemäss Schritt 2.

Das nach Schritt 6 erhaltene Saatgut ist das Vermehrungsgut der verfahrensgemässen Kamillensorte Manzana.

Blüten von Pflanzen aus diesem Vermehrungsgut (Aussaat September/Oktober, Ernte Anfang Juni des darauffolgenden Jahres), die zu dem Zeitpunkt gepflückt werden, wenn circa 50% (40 bis 60% der Röhrenblüten eines Köpfchens geöffnet sind, und die sofort anschliessend im Trockenschrank bei 40 "C 72 Stunden getrocknet wurden, enthalten bezogen auf das Gewicht der getrockneten Blüten (Trockensubstanz) beispielsweise: 150 mg% Chamazulen, 300 mg% (—)-a-Bisabo-lol und höchstens 50 mg% übrige Bisaboloide.

Weitere beispielhafte Angaben zu den gemäss Beispiel erhaltenen Pflanzen der verfahrensgemässen Kamillensorte:

1. Wuchs einheitliche Wuchshöhe (Ausgeglichenheit) mit schmaler Blühzone, daher besonders geeignet für die mechanische Ernte, grosse Blütenköpfchen, mittelhoher Ertrag;

Form: grundständig verzweigt (3 bis 5fach);

Stengel: aufrecht, wenig verzweigt:

2. Belaubung

Blatt: fiederteilig, 2- bis 3fach;

Stärke: mittel;

Fiederblatt, Farbe mittelgrün;

Fiederblatt (Stengelmitte); Fiederung: mittel bis stark gefiedert;

3. Blütenstand

Blütenkörbchen (Blütenköpfchen):

circa 30 mm äusserer Durchmesser,

circa 15 mm innerer Durchmesser; Einzelkörbchengewicht (trocken): circa 45 mg; Blütenspross, Länge (mm): circa 700, jedoch abhängig von Anbauort (Klima), Aussaattermin, Boden, Düngung, Pflanzenbehandlung, Witterung;

Beginn der Blüte (Tag ab 1. Januar):

circa 160. Tag (Aussaat September, Standord Freising Bundesrepublik Deutschland, ansonsten abhängig von den oben genannten Faktoren).

Blüte: Mitte Juni (siehe oben);

Blütenstände ohne Stiel, Gehalt an ätherischem Öl (% der Trockensubstanz): circa 1,0%; Gehalt an Azulen im ätherischen Öl: mindestens 15%;

Zerfall der getrockneten Blütenstände, Blütendroge: gering, wenn vor Öffnen der letzten Röhrenblüten geerntet; Pollendurchmesser: circa 30 |xm;

Samenlänge: circa 1,25 mm;

Chromosomenzahl der somatischen Zellen: 4 n: 36;

4. Frucht

Tausendkornmasse (TKM) der Samen: 0,06 bis 0,13 g;

5. Keimfähigkeit (KF)

75%;

6. Reinheit

94-95%;

7. Weitere Merkmale

Eintrocknungsverhältnis frisch : trocken (Blüte) = 5,5 bis 6 : 1, charakteristisch aromatischer Geruch der Droge, fein aromatischer, typischer Geschmack des Teeaufgusses.

Anlage A Gewinnung des ätherischen Öls Ausgangsmaterial ist eine Droge aus der Kamillensorte Manzana. Zur Herstellung der Droge werden nur solche Blütenköpfchen verwendet, bei denen 30 bis 70%, insbesondere 40 bis 60% der Röhrenblüten geöffnet sind. Die Trock-

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nung erfolgt in einem Trockenschrank bei 40 C während 72 Stunden.

Das ätherische Öl der Kamillenblüten wird wie im folgenden beschrieben durch zweistündige Wasserdampfdestillation der Droge gewonnen:

2.0 g unzerkleinerte Droge wird in einem Liter-Rundkolben mit 250 ml entsalztem Wasser versetzt und einer zweistündigen Rücklaufdestillation in einer Clevenger-Appara-tur (Wasserdampf-Destillations-Rücklauf-Apparatur zur gravimetrischen Bestimmung kleiner Mengen ätherischer Öle) unterzogen. Als Vorlage dient 1 ml Pentan pro analysi. Die Rücklaufgeschwindigkeit beträgt 40 + 4 Tropfen/Minute. Nach Beendigung der Destillation wird das in Pentan gelöste ätherische Öl möglichst wasserfrei in Reagenzgläser abgelassen und eventuell restliches in der Apparatur anhaftendes ätherisches Öl mit Pentan nachgespült. Zur Entfernung eventueller Wasserreste wird der Lösung eine Spatelspitze getrocknetes Na^SC^ zugesetzt und die Lösung anschliessend durch eine Glasfilternutsche der Porosität D 3 oder D 4 in Rollrandfläschchen abgenutscht. Nach Abdunsten des Pentans bei 40 C im Wasserbad und Nachtrocknen im Ex-sikkator wird die Ölmenge gravimetrisch bestimmt.

In dem so erhaltenen Öl (ca. 20 mg) werden anschliessend das Chamazulen und das Bisabolol bestimmt.

Spektralphotometrische Bestimmung des Chamazulens

Messlösung:

Messgerät:

Wellenlänge:

Küvette:

Spezifische Extinktion von Chamazulen (1 g 100 ml; 1 cm):

Kompensationsflüssigkeit:

Gefundener Gehalt an Chamazulen in mg 100 g:

Das gesamte, aus 2 g Droge erhaltene ätherische Öl (ca. 20 mg) (erhalten wie vorstehend beschrieben) wird in 25 ml n-Hexan oder Cyclo-hexan gelöst.

Filterphotometer (zum Beispiel Eppendorf).

578 nm

1 cm

20,8

n-Hexan oder Cyclohexan

120 • E578

Steht zur Messung kein Filterphotometer zur Verfügung, so kann die Bestimmung auch mit einem Spektralphotometer durchgeführt werden:

Messgerät:

Wellenlänge:

Küvette:

Spezifische Extinktion von Chamazulen (1 g 100 ml: 1 cm):

Kompensationsflüssigkeit:

Gefundener Gehalt an Chamazulen in mg 100 g:

Spektralphotometer (zum Beispiel PM Q II: oder PM Q III «ZEISS»)

605 cm

1 cm

24.5

n-Hexan oder Cyclohexan

In der Messlösung wird anschliessend das Bisabolol bestimmt.

Gaschromatographische Bestimmung des Bisabolols und der übrigen 5 Bisaboloide

Gaschromatograph:

io ^

Detektor:

Trägergas:

Säule:

i5 Säulenfüllung:

20 Temperatur: Detektor: Einspritzblock: Säule:

Temperatur-25 Programmierung:

Probenlösung:

Vergleichslösung:

30

Einspritzmenge:

35 Auswertung:

Gehalt an Bisabolol in mg pro 100 g Droge:

Hewlett Packard Modell 5750, Erba Fractovap 2350 oder änhliches Gerät

Flammen-Ionisations-Detektor Helium

Ys Zoll; 200 cm; Stahl

3% Nitrilsilicongummi «XE 60» auf Kieselgur silanisiert «Chromo-sorb WAW HP» 125 bis 150 \im als Trägermaterial

320 °C 220 :C 85-220 C

4 '/Minute

Es wird die Messlösung für das Chamazulen verwandt

Circa 15 mg Standard-Bisabolol werden in Cyclohexan zu 25 ml gelöst

Von Probenlösung und Vergleichslösung je 5 nl

Die Auswertung erfolgt durch Peakflächenvergleich

10 x Einwaage (Vergleich) Fläche (Probe)

[mg] x

Fläche (Vergleich)

Die Bestimmung der übrigen Bisaboloide kann ebenfalls 45 durch Gaschromatographie, beispielsweise unter folgenden Aufnahmebedingungen erfolgen:

50

Geräte:

)

Säulen: Füllung:

Trägergas:

60 Temperatur-Programm:

Injektor/Detektor-Temperatur:

65 Detektor:

Einspritzmenge:

102 ■ E,

Packard, Modell 7721, Serie 800 beziehungsweise Erba Fractovap Serie 2350

Glassäulen, 3 m/2 mm im Durchmesser; 2 m/2 mm im Durchmesser

3% Methylphenylsilicongummi «OV 1» auf Kieselgur silanisiert «Gaschrom Q» 125 bis 150 um als Trägermaterial

30 ml/Minute Ni

80 bis 180 C, 2,5 (3) ?C/Minute

200 C

Flammen-Ionisations-Detektor ca. 2 (il des ca. 1:50 verdünnten ätherischen Öls

605

9

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Die Auswertung erfolgt teils ohne, teils mit innerem Standard. Als innerer Standard eignen sich Laurinsäureme-thylester oder Hexadecan für chamazulenarme beziehungsweise chamazulenfreie Öle. Bei Ölen mit einem Chamazulen-

gehalt über 5% ist dieser als innerer Standard vorzuziehen, wobei die Gehaltsbestimmung photometrisch (bei 578 nm) erfolgt.

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S

Claims

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PATENTANSPRÜCHE

1. Verfahren zur Herstellung von Pflanzen oder Vermehrungsgut der tetraploiden Kamillensorte Manzana der Kulturpflanzenart Echte Kamille (Chamomilla recutita (L.) Rauschert, synonym mit Matricaria chamomilla L., Astera-ceae), deren bei 40 °C getrocknete Blüten, bezogen auf die Trockensubstanz, mindestens 150 mg% Chamazulen, mindestens 300 mg% ( —)-a-Bisabolol und weniger als 50 mg% an übrigen Bisaboloiden aufweisen, dadurch gekennzeichnet, dass die diploide Kamillensorte «DEGUMILL» tetra-ploidisiert wird und die ausselektierten tetraploiden Pflanzen auf den erforderlichen Wirkstoffgehalt weiteren Selektionsund Vermehrungsschritten unterworfen werden.
2. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass die Tetraploidisierung mittels Chemikalien bei Temperaturen zwischen 0 und 35 °C, mittels Gammastrahlen, Röntgenstrahlen oder UV-Strahlen bei Temperaturen zwischen 0 und 35 C, mittels hoher Temperaturen von

33 — 50 C, mittels niedriger Temperaturen vonO — 5°C, mittels der Dekapitierungs-Kallus-Methode oder durch Anthe-renkultur erfolgt.
3. Verfahren nach Anspruch 1 oder 2, dadurch gekennzeichnet, dass nach der Tetraploidisierung a) eine Selektion der tetraploiden Pflanzen nach Wirkstoffgehalt, nämlich mit mindestens 150 mg% Chamazulen, mindestens 300 mg% Bisabolol und weniger als 50 mg% übrige Bisaboloide, alles bezogen auf die Trockensubstanz, gleichzeitigem Blühtermin, gleichmässiger grundständiger Verzweigung sowie einer Blütenköpfchengrösse von

25 — 35 mm erfolgt, die so herausselektierten Pflanzen verklont werden und aus den durch die Verklonung erhaltenen Pflanzen Saatgut gewonnen wird,

b) aus dem so erhaltenen Saatgut Nachkommen gezogen werden, anschliessend eine Selektion gemäss a) erfolgt und aus den ausselektierten Pflanzen wiederum Saatgut gewonnen wird,

c) die Massnahmen gemäss b) 2—4mal wiederholt werden,

d) aus dem gemäss c) erhaltenen Saatgut Nachkommen gezogen werden, diese gemäss a) selektiert werden, die so selektierten Pflanzen verklont werden und aus den durch die Verklonung erhaltenen Pflanzen Saatgut gewonnen wird.
4. Kamille oder Kamillenvermehrungsgut, erhalten nach einem der Ansprüche 1—3.
5. Verfahren zur Herstellung einer Kamillendroge aus Blüten der Kamille nach Anspruch 4, die mindestens

150 mg% Chamazulen, mindestens 300 mg% (—)-a-Bisabo-lol und weniger als 50 mg% an übrigen Bisaboloiden enthält, dadurch gekennzeichnet, dass die Blüten in dem Vegetationsstadium geerntet werden, wo erst 30 — 70% der Röhrenblüten eines Blütenköpfchens geöffnet sind und die Blüten bei einer Lufttemperatur von nicht höher als 50 °C getrocknet werden.
6. Kamillendroge, die mindestens 150 mg% Chamazulen, mindestens 300 mg% (—)-a-Bisabolol und weniger als 50 mg% an übrigen Bisaboloiden enthält, dadurch gekennzeichnet, dass sie Blüten der Kamille nach Anspruch 4 enthält.