CH689507A5 - Procédé de fabrication et tests diagnostiques relatifs à des produits immuno-pharmacologiques. - Google Patents

Description

  
 



  Ce brevet décrit un produit destiné à l'élaboration d'une combinaison immuno-pharmacologique, un procédé de fabrication et des tests diagnostiques selon les revendications 1 à 9. 



  Les substances ou préparations pharmacologiques n'ont pas toujours toutes les qualités que l'on pourrait souhaiter pour obtenir un effet donné. La présente invention décrit une méthode pour créer des anticorps, qui possèdent une affinité pour une substance ou une préparation pharmacologique donnée. L'administration de la substance ou préparation pharmacologique en présence de ces anticorps spécifiques permet d'en modifier les qualités dans le sens désiré. 



  Les combinaisons immuno-pharmacologiques peuvent influencer la durée d'action d'une substance ou préparation pharmacologique donnée. Les combinaisons immuno-pharmacologiques, objet de cette invention et dont la description figure dans la revendication 1, circulent pendant des semaines dans l'organisme et la composante pharmacologique est lentement relâchée par les anticorps. La mise en Öuvre d'une prophylaxie antiparasitaire (par exemple, contre la malaria) en présence des anticorps spécifiques (anti-chloroquine ou nivaquine) est un exemple de cette application. 



  Un autre des buts de cette invention est la faculté de concentrer une substance ou préparation pharmacologique dans les zones de concentration des anticorps (le sang et les organes bien vascularisés). Le taux de la composante pharmacologique est alors élevé dans ces organes (il s'agit d'une sorte d'immuno-concentration). 



  Un autre des buts de cette invention est d'utiliser des substances ou préparations pharmacologiques d'une manière plus efficace et en quantités moindres ce qui diminue les effets secondaires et réduit les coûts. La substance ou composition pharmacologique, relâchée progressivement par l'anticorps qui l'aura préalablement séquestrée, peut exercer son action pharmacologique, puis être à nouveau liée par un anticorps spécifique pour être relâchée à nouveau ultérieurement (une espèce de recyclage chimique). 



  Un autre des buts de cette invention est d'utiliser la réaction croisée immunologique entre différentes compositions pharmacologiques afin d'obtenir une interaction séquentielle. L'opiacé héroïne et un de ses antagonistes auprès des récepteurs morphiniques, le naltrexone par exemple, montrent tous deux une réaction croisée immunologique avec des anticorps anti-héroïne. La prise d'un surdosage d'héroïne (première étape) en présence du complexe naltrexone-anticorps va donc protéger l'individu par le relâchement du naltrexone, remplacé dans l'anticorps spécifique par l'héroïne (deuxième étape), entraînant le bloquage des récepteurs morphiniques par l'antagoniste (troisième étape). Les combinaisons immuno-pharmacologiques préviennent des suites de surdosage d'une drogue. 



  Un autre des buts de cette invention est de stabiliser les taux disponibles d'une substance ou préparation pharmacologique, et cependant une période prolongée ainsi que de réduire l'écart entre les concentrations maxima et minima dûs aux cycles alternés d'une prise fréquente et d'une élimination rapide de la substance ou préparation pharmacologique. Les combinaisons immuno-pharmacologiques circulent normalement pendant plusieurs semaines dans le corps et la variation des titres de la substance ou préparation pharmacologique libre et complexée dans le sang ne varie que relativement peu d'un jour à l'autre. Ainsi, la prise de la substance anti-rétrovirale AZT (3 min -Azido-3 min -deoxythymidine), de composés similaires et/ou d'un ou plusieurs inhibiteurs des protéases rétro-virales en présence des anticorps spécifiques peuvent bénéficier de ce mécanisme. 



  Un autre des buts de cette invention est de décrire un test diagnostique, qui permet de doser: 
 
   a) le titre d'anticorps spécifiques libres, (non liés), pour la substance ou la préparation pharmacologique. 
   b) la taux total d'anticorps spécifiques, (liés et non liés) pour la substance ou la préparation pharmacologique. 
   c) le degré de substitution de la substance ou préparation pharmacologique par un autre composé pharmacologique ayant une réaction croisée immunologique avec les anticorps spécifiques. 
 



  Ces paramètres déterminent le moment où un patient est protégé par le vaccin, à quel moment et quelle quantité du composé pharmacologique doit lui être administré ainsi que le moment où le patient doit être revacciné. 


 Définitions 
 


 Composé pharmacologique, substance pharmacologique, composante pharmacologique, préparation pharmacologique. 
 



  Ces termes définissent dans le sens le plus large toute substance ou ensemble de substances qui exercent un effet pharmacologique. Par exemple, entrent dans cette définition des substances ou préparations anti-parasitaires comme la chloroquine, des anti-inflammatoires comme l'acide acétylsalicylique, des hormones, des drogues qui créent une dépendance comme l'héroïne ou leurs antagonistes comme le naltrexone. 


 Agoniste, Antagoniste. 
 



  Un agoniste est une substance qui se lie de manière réversible ou irréversible à un ou plusieurs types de récepteurs correspondants et qui le stimule. Par exemple, la morphine ou l'héroïne sont des agonistes des récepteurs des opiacés. 



  Un antagoniste est une substance ou une préparation pharmacologique, qui bloque ou inverse l'effet pharmacologique d'une autre substance. Par exemple, le naltrexone (Merck Index, 10 th. édition, 6209), qui se lie aux récepteurs des opiacés sans induire l'effet pharmacologique des opiacés. L'interaction de l'antagoniste avec le récepteur peut être réversible (naltrexone) ou irréversible (clocinnamox). 



  Les agonistes et les antagonistes sont importants dans le cadre de cette invention du fait qu'il est possible de créer dans un organisme des anticorps qui montrent une réaction croisée entre ces deux groupes de substances, les deux substances ayant une structure stérique similaire. La prise de l'agoniste en présence des combinaisons anticorps antagoniste peut déclencher la protection et la désensibilisation de l'individu. L'agoniste va se substituer à l'antagoniste dans la composition immuno-pharmacologique, l'antagoniste ainsi libéré va donc pouvoir se lier aux récepteurs spécifiques. 


 Anticorps, anticorps spécifiques, anticorps polyclonaux et monoclonaux, anticorps par génie génétique. 
 



  Les anticorps sont un type de protéines plasmatiques produit par la branche des cellules B du système immunitaire après stimulation par un antigène. Les anticorps ayant une affinité pour une substance donnée sont aussi appelés des anticorps spécifiques. Les anticorps monoclonaux sont des anticorps identiques, qui dérivent du même clone de cellules B. La méthode classique pour produire des anticorps monoclonaux consiste en la transformation d'une cellule B de la rate en lignée cellulaire, mais des anticorps monoclonaux peuvent aussi être produits par le génie génétique. 


 Antigène, haptène, protéine porteuse. 
 



  Un antigène est une substance qui est reconnue comme étant étrangère à l'organisme par son système immunitaire et qui induit la production d'anticorps spécifiques. Le poids moléculaire d'un antigène est en règle générale supérieur à 5000 daltons. 



  Un haptène est une substance avec un poids moléculaire plus bas, qui doit être liée à une protéine porteuse pour induire la production d'anticorps. La protéine porteuse peut contenir des lipides ou des sucres. Comme exemples de protéines porteuses, on peut citer le tetanus toxoïd, le cholera toxoïd ou l'albumine sérique. 



  Il est possible, dans certaines circonstances, de lier un haptène à un autre haptène directement ou par l'intermédiaire d'une autre molécule (crosslinking). Cette procédure permet à un haptène de devenir antigénique sans avoir recours à une protéine porteuse selon la procédure classique. Une molécule comme l'acide aminé lysine (haptène) peut donc être liée par carbodiimide ou glutaraldéhyde pour produire un polymer de polylysine qui est antigénique. 


 Composition immuno-pharmacologique, combinaison immuno-pharmacologique, complexe immuno-pharmacologique. 
 



  Cette composition a pour composantes une substance ou une préparation possédant une activité pharmacologique et son anticorps spécifique. L'anticorps spécifique peut être un anticorps polyclonal ou monoclonal, induit par vaccination, par transformation des cellules B (anticorps monoclonaux classiques) ou produit par le génie génétique. La composition immuno-pharmacologique peut aussi contenir plusieurs paires de substances pharmacologiques avec leurs anticorps spécifiques. 


 Interaction entre un anticorps spécifique et un antigène ou un haptène. 
 



  L'interaction d'un anticorps spécifique avec la surface de l'antigène correspondant (ou haptène) est réversible et la composition peut se dissocier en fonction de la force de liaison. La force de l'interaction est déterminée par le fait que les nuages des électrons sont complémentaires comme une clef avec sa serrure. Les bases de cette force sont l'interaction par les ponts des atomes d'hydrogène, les forces van der Waals, les forces électrostatiques et les interactions hydrophobiques. 


 Vaccination, vaccin, adjuvants, immunisation active et passive. 
 



  La vaccination est une procédure destinée à induire des anticorps spécifiques chez un sujet (humain ou animal). La vaccin contient un antigène ou un haptène lié à une protéine porteuse, ainsi qu'en règle générale, un adjuvant qui augmente la capacité du vaccin à induire la  création d'anticorps. Par exemple, comme adjuvant, on utilise souvent l'hydroxyde ou le phosphate d'aluminium ou l'adjuvant de Freund. L'induction d'anticorps chez un sujet constitue une immunisation active. Introduire des anticorps produits in vitro ou chez un autre sujet constitue une immunisation passive. Les anticorps requis pour une composition immuno-pharmacologique sont normalement induits par immunisation active mais l'immunisation passive reste néanmoins possible.

   L'administration de la composition immuno-pharmacologique se fait généralement par voie intramusculaire ou sous-cutanée, mais elle peut également être effectuée de n'importe quelle autre manière, telle que la voie orale (en capsules avec une couche protectrice), sur la peau comme composante d'une pommade, d'une crème ou d'un gel, sur la muqueuse etc... 


 Complexes immuns, complexes immuno-pharmacologiques, combinaison immuno-pharmacologique. 
 



  Les anticorps spécifiques se lient à l'haptène ou à l'antigène d'une manière réversible. Le complexe s'appelle complexe immun ou, si l'haptène est une substance pharmacologique, nous l'appelons complexe immuno-pharmacologique ou combinaison immuno-pharmacologique. La durée de l'interaction est déterminée par l'affinité de l'anticorps pour son antigène. En présence de réactions croisées, l'haptène cherchera, compétitivement, à se lier à l'anticorps. Un haptène libre peut donc remplacer un haptène lié à un anticorps.

   Les relations stoechiométriques entre haptène lié et haptène libre, d'une part, et entre les différents haptènes ayant une réaction croisée pour le même anticorps, d'autre part, sont principalement déterminées par l'affinité de l'anticorps pour l'haptène, les relations quantitatives entre les molécules et les zones de distribution des différents partenaires de la réaction. 



  Un haptène avec une haute affinité pour l'anticorps peut donc facilement remplacer un haptène doté d'une affinité plus faible. Prenons l'exemple d'un sujet immunisé contre les opiacés. Lorsqu'il prend un comprimé de naltrexone, cette substance va se lier à l'anticorps antiopiacés ayant une réaction croisée avec le naltrexone. Une haute dose d'opiacé va donc facilement saturer les anticorps spécifiques et chasser le naltrexone, dont une partie va aller se lier, par voie de conséquence, aux récepteurs spécifiques. 


 Le titre d'anticorps spécifiques libres pour la substance ou la préparation pharmacologique. 
 



  En présence d'un excédent d'anticorps spécifiques dans une solution (en général le sang), ces anticorps spécifiques peuvent encore lier une certaine quantité de la composition pharmacologique jusqu'à ce qu'un équilibre soit atteint. 


 Le taux total d'anticorps spécifiques pour la substance ou préparation pharmacologique. 
 



  Après dissociation des complexes immuno-pharmacologiques, les anticorps sont purifiés et on mesure le taux des anticorps spécifiques susceptibles de lier la substance ou la préparation pharmacologique. 


 Le degré de substitution de la substance ou préparation pharmacologique par une autre substance ou préparation pharmacologique ayant une réaction croisée immunologique avec des anticorps spécifiques. 
 



  Les anticorps peuvent souvent lier plusieurs substances ou préparations pharmacologiques avec une structure stérique similaire. Le degré de substitution est mesuré en ajoutant une quantité donnée d'une deuxième substance ou préparation pharmacologique et en dosant la quantité de la première substance ou préparation pharmacologique relâchée après un temps donné. 



  Nous proposons quelques exemples pour affiner la compréhension de l'invention. Ils sont donnés dans un but d'illustration pour quelques-unes des applications possibles. Ils ne sont ni exhaustifs ni limitatifs. 


 Exemple des liaisons chimiques de l'haptène avec la protéine porteuse. 
 



  Une méthode basée sur le glutaraldéhyde (liant les groupes amino): 
 
   a) 10 mg de Tétanus Toxoide sont mis en suspension dans 2 ml de tampon de borate (pH 10, 0.1 M). On ajoute 10 micromol de l'haptène. 
   b) 1 ml de 0.3% de glutaraldéhyde est lentement ajouté en utilisant un agitateur pour la suspension (température ambiante, 30 minutes) 
   c) 0.25 ml de 1 M glycine sont ajoutés pour occuper les sites libres du glutaraldéhyde (30 minutes, température ambiante) et le conjugé est dialysé dans un tube de dialyse (limite d'exclusion 10 000 Daltons) contre 10 litres de tampon de borate (pH 7.6, 0.1 M, 4 degrés Celsius, 8 heures, 3 changes de tampon). 
 


 Méthode pour préparer un vaccin anti-morphine. 
 



  La méthode de Wainer et al. est utilisée pour synthétiser la morphine 6-hémisuccinate (Wainer B. B et al. 1972, Science 176, 1143-45, Wainer B. B et al., 1972, Science 178, 647-8) et pour la lier au tetanus toxoïde. Une autre préparation est fabriquée en transformant la morphine en 3-0-carboxy-méthylmorphine par réaction avec du sodium-beta-chloracétate dans l'alcool absolu. (8 mg de Carboxyméthyl-morphine  sont dissous dans 2 ml d'eau distilée qui contiennent 10 mg de tetanus toxoïde et on ajoute 8 mg de 1-ethyl-3-(3-diméthylaminopropyl) carbodiimide après ajustement du pH à 6. Après incubation à la température ambiante, le mélange est généreusement dialysé contre un tampon de phosphate (Phosphate Buffered Saline = PBS, pH 7.6) et lyophylisé. 


 Vaccination: 
 



  Des souris (si non autrement précisé, il s'agit de souris Balb C, femelles, âgées de 6 mois) sont vaccinées par voie sous-cutanée 2 fois à 4 semaines d'intervalle avec 20 microgrammes de vaccin, par souris et par dose. Le conjugé pour la première injection a été adsorbé avec l'hydroxyde d'aluminium comme adjuvant (méthode classique selon instructions du producteur de l'adjuvant), la deuxième dose a été préparée sans recours à l'adjuvant. Le vaccin a été dilué dans 0.2 millilitre de PBS (phosphate buffered saline), pH 7.2 ou un autre tampon physiologique. 



  Les souris de contrôle sont vaccinées très précisément dans les mêmes conditions mais sans l'antigène ou l'haptène conjugé à la protéine porteuse. 


 Prise de sang: 
 



  Le sang est pris dans la veine (ou artère) de la queue. Pour tous les tests diagnostiques, le sérum est utilisé. 


 Test diagnostique: 
 



  a) Dosage du taux d'anticorps spécifiques libres à se lier à la substance pharmacologique:
 Les plaques microtiter pour les test ELISA et le lecteur de plaques sont fournis par Dynatech AG, Suisse, tous les autres produits par Sigma Chemicals, Buchs, Suisse. La substance pharmacologique conjugée à une protéine porteuse (qui est différente de celle utilisée pour la fabrication du vaccin) est liée à un support en matière synthétique, par adsorption, pendant la nuit à la température de 4 degrés dans un tampon bicarbonate à pH 9.2. Le support (plaque microtiter) est lavé après cette opération ainsi qu'après toutes les opérations suivantes. Le lavage se fait par 4 cycles de rinçage avec PBS-Tween 20, 0.1%, contenant 1% de lait en poudre.

   Les étapes suivantes sont: bloquage avec une solution contenant 1% de lait en poudre pendant 2 heures, incubation avec l'échantillon contenant les anticorps spécifiques (le sérum est dilué à 1:100 avec PBS-Tween avec 2 heures d'incubation à la température ambiante), incubation avec les anticorps, IgG fragment Fc (par exemple lapin anti-humain ou éventuellement un anticorps monoclonal) marqués par un enzyme (par exemple HRP = Horse Radish Peroxidase, la  péroxidase de raifort, l'anti-anticorps est dilué avec PBS-Tween à une concentration optimale qui a été déterminée par une expérience préalable), l'addition et l'incubation avec le substrat spécifique pour l'enzyme marqueur (ABTS = 2,2 min -azino-bis-(3-ethylbenz-thiazoline-6-sulfonic acid) dans un tampon contenant de sodium perborate, acide citrique et disodium hydrogène phosphate.

   Après 30 minutes, le résultat est lu dans un lecteur ELISA (Dynatech) équipé d'un filtre de 405 nm. 



  b) Dosage du taux total d'anticorps spécifiques susceptible de lier la substance pharmacologique: la même procédure que celle décrite sous a) est utilisée, mais les éventuels composantes immuno-pharmacologiques de l'échantillon à tester sont préalablement dissociées et les anticorps sont purifiés en utilisant une méthode qui ne permet pas une réassociation des complexes immuns. 


 Dissociation du complexe immuno-pharmaco-
 logique. 
 



  Il y a une dissociation spontanée de la combinaison immuno-pharmacologique, qui est déterminée par la constante de dissociation entre l'anticorps spécifique et la substance pharmacologique. Cette réaction est accélérée en y introduisant un ou plusieurs facteurs qui interfèrent avec la liaison réversible entre les deux composantes. Un pH bas ou élevé est une méthode, l'introduction des substances chaotropes en est une autre. Dans le cadre de cette invention, la méthode de prédilection pour dissocier les combinaisons immuno-pharmacologiques est l'utilisation des agents chaotropes comme par exemple 3 M sodium thiocyanate (NaSCN) ajusté à un pH de 8. Les anticorps doivent être purifiés après cette procédure, sans qu'il y ait une réassociation des complexes immuns (voir paragraphe suivant). 


 Purification des anticorps et du vaccin. 
 



  Il est souvent nécessaire de purifier les anticorps ou le vaccin pour les débarrasser des produits toxiques ou des composantes qui interfèrent avec d'autres réactions chimiques. Il n'est pas possible, par exemple, de doser le taux total d'anticorps spécifiques en présence d'une concentration significative d'un agent chaotropique. Dans le cadre de cette invention, la méthode de purification préférée est la microdialyse par un filtre ou un tuyau de dialyse (Sigma Chemicals ou les systèmes et méthodes de microfiltrage et dialyse de type "spinfuge" vendus par Biorad SA Suisse et Pierce SA Suisse, qui combinent le principe de la filtration avec une accélération par la centrifugation) avec, normalement, une limite d'exclusion d'environ 10 000 Dalton. 



  c) Dosage du degré de substitution de la substance pharmacologique par une autre substance pharmacologique ayant une réaction croisée immunologique avec des anticorps spécifiques: 



  Une quantité précise de l'échantillon, par exemple 10 microlitres de sérum dilués 1:100 avec PBS sont incubés avec la substance pharmacologique ayant une réaction croisée avec les anticorps spécifiques de l'échantillon (par exemple 1 microgramme/mI de naltrexone marqué par l'isotope tritium ayant une réaction croisée avec des anticorps anti-morphines). Après un temps d'incubation rigoureusement respecté, le degré de substitution est déterminé par séparation du naltrexone lié aux anticorps spécifiques du naltrexone libre en utilisant des microfiltres de dialyse de type "spinfuge". 



  Les dosages décrits peuvent aussi être effectués par un biosensor comme par exemple le BlAcore de Pharmacia Biosensor AB, Suède, qui utilise le principe de SPR (Surface Plasmon Résonance) pour observer les interactions, directement et sans marquage. Dans ce cas, le support de la plaque microtiter est remplacé par le support du biosensor (Malmqvist M. - 1993 - "Surface Plasmon Resonance for detection and measurement of antibody-antigen-affinity and kinetics". Current opinion in immunology, 5:282-286). 


 Exemple 1: 
 



  Cet exemple illustre le cas où un composant immuno-pharmacologique contient une drogue susceptible d'induire une dépendance et pour laquelle il existe un antagoniste. 



  Dix souris sont vaccinées avec le vaccin anti-morphine et le même nombre avec le vaccin de contrôle. Dix semaines après la vaccination de rappel, la moitié les animaux de chaque groupe reçoit 5 mg de naltrexone par jour pendant 5 jours et l'autre moitié une substance placebo (sans effet pharmacologique). Après une semaine, on injecte à tous les animaux 10 mg de morphine par voie intrapéritonéale. Seuls les cinq animaux qui ont reçu le vaccin et le naltrexone s'avèrent protégés (ainsi que le détermine leur survie) contre la toxicité de la morphine. 



  Le test diagnostique décrit plus haut est utilisé pour l'examen des sérums des souris de cette expérience. Des prises de sérum datant du début de l'expérience (prebleed = pb), de 72 heures avant (sérum avm) et de 48 heures après la stimulation avec la morphine (sérum apm) sont dilués 1:100 avec PBS et examinés. 



  Le taux d'anticorps anti-morphine libres susceptibles de lier la morphine est indétectable pour les sérums pb et tous les sérums des animaux qui n'étaient pas vaccinés contre la morphine. Par contre, pour ce qui est des animaux vaccinés, des titres significatifs sont mesurés pour les sérums avm et des titres moins élevés pour les sérums apm. 



  Le taux d'anticorps anti-morphine susceptibles de lier la morphine est mesuré après dissociation des complexes et purification des anticorps. Les mêmes serums qu'au préalable sont positifs avec des titrages plus importants. Le degré de substitution de la morphine et/ou de la naltrexone par le naloxone (antagoniste des opiacés, New England  Nuclear, Delaware, USA, catalogue numéro NET 719) - marqué par le tritium - montre des valeurs détectables dans les sera avm et apm. 


 Exemple 2: 
 



  Ce deuxième exemple illustre l'application de cette invention en présence de substances ou préparations pharmacologiques pour lesquelles on recherche une diffusion contrôlée et prolongée ainsi qu'un taux sérique libre stable pendant une période prolongée, tout en administrant une quantité minimale de la substance ou préparation pharmacologique. Cette manière de procéder est souhaitable pour la prophylaxie de certaines maladies comme la malaria ou pour la prophylaxie ou le traitement de certaines maladies chroniques comme une infection chronique par des germes (par exemple, Trimethoprime Powder, pour des infections urogénitales par les Echerischia Coli). 



  Les substances pharmacologiques suivantes, qui contiennent toutes un groupe de type amino sont liées séparément au toxoïd tétanique en utilisant le gutaraldéhyde comme agent de liaison: Trimethoprime, Primaquine, Chloroguanide, Pyrimethamine, Sulfadiazine, Dapsone (diaminodiphenylsulfone). 



  Cinq souris test et cinq souris de contrôle, pour chaque substance, sont vaccinées avec chacune des substances ou préparations pharmacologiques, préparées comme décrit plus haut. Après 12 semaines, un vingtième de la dose pour un adulte humain est donné par voie orale à chaque souris. Après une semaine, les animaux sont testés à une dose létale moyenne de 50% (LD 50) d'une souche de Plasmodium sensible à ces antibiotiques. La méthode et le protocole de R. Clemens sont utilisés pour cette expérience (R. Clemens et al.: Antithrombin III substitution affects survival rate in a murine malaria model. Parasitol-Res. 1989; 76 (1):36-8). Une comparaison du temps de survie, en utilisant le "log rank test" comme dans la publication de R. Clemens et al., démontre une prolongation de la survie moyenne significative du point de vue statistique. 

Claims (8)

1. Un produit destiné à l'élaboration d'une combinaison immuno-pharmacologique composé d'une part d'un vaccin capable d'induire des anticorps ayant une affinité spécifique pour une substance donnée et d'autre part, de ladite substance elle-même.

2. Un produit destiné à l'élaboration d'une combinaison immuno-pharmacologique, composé d'une part, d'anticorps produits par le génie génétique, le clonage ou appliqué par l'immunisation passive, ayant une affinité spécifique pour une substance donnée et, d'autre part, de ladite substance elle-même.

3.

Un procédé de fabrication du produit destiné à l'élaboration d'une combinaison immuno-pharmacologique, selon la revendication 1, comprenant les étapes suivantes: a) Préparation d'un vaccin destiné à induire la production d'anticorps contre une substance donnée, selon les phases suivantes: la substance est liée à une molécule porteuse afin de réaliser un complexe haptène/molécule porteuse. Un adjuvant est ajouté, facultativement, à ce complexe haptène/molécule porteuse. Cet adjuvant et ce complexe haptène/molécule porteuse sont préparés sous une forme galénique propre à permettre son administration comme un vaccin. b) Préparation de la substance: la substance est mise sous une forme galénique appropriée pour permettre son absorption dans l'organisme.

4.

Un procédé de fabrication pour un produit destiné à l'élaboration d'une combinaison immuno-pharmacologique, selon la revendication 2, comprenant les étapes suivantes: a) Préparation, sous une forme galénique appropriée qui en permette l'administration, d'anticorps ayant une affinité spécifique pour la substance, obtenus par le génie génétique, le clonage ou appliqués par immunisation passive. b) Préparation de la substance sous une forme galénique appropriée pour en permettre l'administration dans l'organisme.

5. Un produit selon la revendication 1, caractérisé par le fait que les anticorps spécifiques sont dirigés contre une drogue susceptible de créer une dépendance et contre son antagoniste, et dans laquelle la composante pharmacologique est un antagoniste de cette drogue susceptible de créer une dépendance.

6.

Un produit selon la revendication 1, caractérisé par le fait que les anticorps spécifiques sont dirigés contre une substance faisant partie des opiacés et contre le naltrexone, dans laquelle la composante pharmacologique est le naltrexone.

7. Un procédé de test diagnostique pour l'analyse des combinaisons immuno-pharmacologiques, selon les revendications 1 et 2, dans un échantillon donné, selon la procédure suivante:

a) Le taux d'anticorps libres, spécifiques à la composante pharmacologique est dosé par l'interaction d'un échantillon à examiner contenant ces anticorps spécifiques avec la composante pharmacologique correspondante, attaché sur un support et par le dosage du taux d'anticorps spécifiques qui se sont liés après cette interaction. b) Le taux total d'anticorps spécifiques à la composante pharmacologique est dosé en appliquant la même procédure ci-dessus, après dissociation du combiné immuno-pharmacologique et purification des anticorps spécifiques.

c) Le degré de substitution de la composante pharmacologique par une autre composante pharmacologique ayant une réaction croisée immunologique auprès des anticorps spécifiques est mesuré en ajoutant à une quantité de sérum donnée une quantité de la deuxième composante pharmacologique donnée et en dosant la quantité relâchée de la première substance pharmacologique après un laps de temps donné.

8.

Un produit pour test diagnostique destiné à l'analyse des combinaisons immuno-pharmacologiques, selon la revendication 1 et 2, dans un échantillon donné, selon la procédure suivante: a) Le taux d'anticorps libres, spécifiques à la composante pharmacologique est dosé par l'interaction d'un échantillon à examiner contenant ces anticorps spécifiques avec la composante pharmacologique correspondante, attachée sur un support, et par le dosage du taux d'anticorps spécifiques qui se sont liés après cette interaction. b) Le taux total d'anticorps spécifiques à la composante pharmacologique est dosé en appliquant la même procédure du point a), après dissociation du combiné immuno-pharmacologique et purification des anticorps spécifiques.

c) Le degré de substitution de la composante pharmacologique par une autre composante pharmacologique ayant une réaction croisée immunologique auprès des anticorps spécifiques est mesurée en ajoutant à une quantité de la deuxième substance pharmacologique, une quantité de sérum donnée et en dosant la quantité relâchée de la première substance pharmacologique après un laps de temps donné.