CS244306B1 - Sposob přípravy krvného gama globulínu so zníženým hypotenzívnym a antikomplementárnym účinkom - Google Patents

Description

Vynález sa týká sposobu přípravy krvného gama globulínu, z normálně] alebo hyperimúnnej plazmy, připadne z normálneho alebo retroplacentárneho, připadne hyperimúnneho séra, ktorý je určený pre terapeutické účely.

Až doposial sa realizuje příprava gama globulínu pre terapeutické účely prevažne podlá kritérií pre intramuskulárne podanie, t. j. kladie sa doraz na výfažnosf, elektroforetickú čistotu a na obsah látok so schopnosťou vyvolat pyretickú reakciu.

Na precipitáciu gama globulínu zo zmesi plazmatických alebo sérových bielkovín bol použitý síran amónny a hydroxid hlinitý (Schultze Η. E., Matheka H. D.: Behringwerke Mitt. 28, 9, 1954; Schultze Η. E., Schonenberger M., Matheka H. D.: Behringwerke Mitt. 26, 21, 1952], rivanol (Hořejší J., Smetana R.: Acta Med. Scand. 155, 65, 1956), síran sodný (Amiraian K., Leikhim E. ].: J. Immunol. 87, 301, 1961), chlorid hlinitý (Lewin J.: Therapie 9, 523, 1954), DEAE celulóza (Sober H. A., Peterson E. A.: Fed. Proč. 17, 1 116, 1958; Peterson E. A., Sober H. A.: J. Am. Chem. Soc. 78, 756, 1956; Fahey J. L., Herbett A. P.: J. Biol. Chem. 234, 2 645, 1959; Stanworth D. H.; Nátuře 188, 156, 1960), kyselina kaprylová (Steinbuch M., Audran R.: Rev. Franc. D‘etud. Clin. Biol., 14, 1054,

1969), ionty Zn⁺⁺ a Al^{+ + +} (Rejnek J., Škvařil F.: Coll. Czechoslov. Chem. Commun. 22, 1 489, 1957); Rejnek )., Škvařil F.: Coll. Czechoslov. Chem. Commun. 23, 773, 1958; Krauze R., Naimski K., Zakrewski K.: Acta Biochim. Pol. 8, 209, 1961), polymetafosfát (Nitschman H. S., Rickli R., Kistler P.: Vox Sang. 5, 232, 1960), éter (Pennell R. B. v Putnám F. W. /ed/ The Plasma Proteins vol I Academie Press New York 1960, str. 9) a etanol (Cohn E. J., Gurd F. N. R., Surgenor D. M., Barnes B. A., Brown R. K., Derouaux

G. , Gillespie J. M., Kahnt F. W., Lever W. F., Liu C. H., Mittelman D., Mouton R. F., Schmid K., Uroma E.: J. Am. Chem. Soc. 72, 465, 1950; Deutsch H. F., Gostling G. L., Alberty R. A., Williams J. W.; J. Biol. Chem. 164, 109, 1946; Oncley J. L., Melin M., Rickert D. A., Cameron J. W., Gross P. M.: J. Am. Chem. Soc. 71, 541, 1949; Nitschman

H. S., Kistler P., Lergier W.: Helv. Chim. Acta 37, 866, 1954; Kistler P., Nitschman H.

S.: Vox Sang. 7, 414, 1962; Taylor H. L. Bloom F. C., McCall K. B., Hyndman L. A., Anderson H. D.: J. Am. Chem. Soc. 78, 1 356, 1956).

Preparáty gama globulínu připravené podá doposial' platných kritérií pre intramuskulárne podanie majú zpravidla dokazatelný obsah histamínu, ďalej hypotenzívny a antikomplementárny účinok, čo je pre kva244306 litu intravenóznych preparátov nepřípustné. Podanie intramuskulárneho preparátu týchto kvalit intravenózne může v důsledku náhlého poklesu krvného tlaku pacienta ohrozit a v důsledku antikomplementárnej aktivity oslabit jeho nespecifická imúnologickú obranu.

Napriek tomu, že hypotenzívny účinok pri intramuskulárnom podaní nemá taký priebeh ako pri intravenóznom podaní možno ho označit spolu s vysokým antikomplementárnym účinkom a dokazatelným obsahom histamínu za vlastnosti nežiadúce pre preparáty gama globulínu, ktoré sú určené pre terapeutické účely či už pre intramuskulárne alebo intravenózne podanie.

Na odstraňovanie antikomplementárnej aktivity gama globulínu, ktorý bol připravený zo zmesi plazmatických alebo sérových krvných bielkovín bola použitá úprava hodnoty pH na 4,0 pri 24hodinovej inkubácii pri 37 °C (Barandun S., Kistler P., Jeunet F., Isliker H.: Vox Sang. 7, 157, 1962).

Pokles antikomplementárnej aktivity gama globulínu bol zaznamenaný po přidaní aktívneho uhlia (Steinbuch M., Audran R., Amouch P., Blatrix C.: Vox Sang. 13, 103, 1967), po přidaní tricalciumfosfátu (Steinbuch M., Audran R., Amouch. P., Blatrix C.: Rev. med. Tours, suppl. No. 3, 79, 1968) a po přidaní albuminu (Auerswald W., Kiesewetter E.: Wien. med. Wschr. 115, 690,1965).

Znižovanie antikomplementárnej aktivity gama globulínového roztoku pomocou proteolytického štiepenia bolo realizované pepsínom (Schultze Η. E., Schwick G.: Dtsch. med. Wschr. 87, 1 643, 1962] a plazmínom (Sgouris J. T.: Vox. Sang. 13, 71, 1967; Barandun S., Castel F., Makula M. F., Morell

A., Pian R., Škvařil F.: Vox Sang. 28, 157, 1975).

Antikomplementárnú aktivitu gama globulinove) molekuly je možné znížiť jej chemickou redukciou beta merkaptoetanolom (Wiedermann G., Miescher P. A., Franklin E. C.: Proč. Soc. exp. Biol. Med. 113, 609, 1963), modifikáciou beta propiolaktonom (Stephan W.: Z. kliň. Chem. 7, 282, 1969; Stephan W.: Vox Sang. 28, 422, 1975), redukciou s dithioerythritolom (Isenman D. E., Dorrington K. J., Painter R. H.: J. Immun. 114, 1726, 1975), sulfonáciou (Masuho Y., Tomibe K., Matsuzawa K., Ohtsu A.: Vox Sang. 32, 175, 1977), amidáciou (Schmidtberger R.: US Patent No 4 118 379 /1978/), redukciou s dithiothreitolom a alkyláciou s jodacetamidom (Fernandes P. M., Lundblad J. L.: Vox Sang. 39, 101, 1980) a redukciou s dithiothreitolom v kombinácii s dithioerythritolom s následnou alkyláciou pomocou jodacetamidu alebo metyljodidu, akrylonitrilu, benzylbromidu, připadne etylénoxidu (Schroeder D. D, Tankersley E. L., Lundblad J. L.: Vox Sang. 40, 373, 1981).

Antikomplemeníárna aktivita gama globulínu súvisí jednak so vznikom polymérov gama globulínu, ktoré móžu vznikat' v procese technologickej izolácie a jednak vzniká v procese lyofilizácie v dosledku interakcie nízkomolekulárnych látok s molekulami gama globulínu. Použitie destilovanej apyrogénnej vody pri separácii nízkomolekulárnych látok z gama globulínu jednak sposobuje precipitáciu najma vyšších polymérov gama globulínu a jednak odstránenie nízkomolekulárnych látok, v důsledku čobo pri lyofilizácii nemóže dójsf ku ich interakcii s molekulami gama globulínu, číže nedochádza ku vzniku antikomplementárnej aktivity. Použitie vodného roztoku chloridu sodného, v koncentrácii do 30 g na liter, zaručuje polymérom gama globulínu v roztoku potřebná stabilitu a dochádza len ku separácii nízkomolekulárnych látok, ktoré spósobujú vznik antikomplementárnej aktivity v procese izolácie.

Antikomplementárna aktivita bola testovaná na základe úbytku aktivity komplementu. Úbytok známej hodnoty aktivity komplementu po přidaní známého množstva roztoku lyofilizovaného gama globulinového preparátu bol stanovený metodou podlá Kabáta a Mayera (Kabát E. A., Mayer Μ. M.: Experimentální imunochemie ČSAV, Praha, 1965, str. 180).

Efekt destilovanej apyrogénnej vody pri odstraňovaní antikomplementárnej aktivity je možné dokumentovat u 10 experimentálnych šarží gama globulínu, ktorý bol izolovaný pomocou extrakcie z frakcie III podlá Cohna a Oncleya. Pokial' bola použitá samotná destilovaná apyrogénna voda bolo dosiahnuté zníženie antikomplementárnej aktivity gama globulínu po lyofilizácii o 80 až 95 °/o. Použitie vodného roztoku chloridu sodného, za použitia toho istého gama globulínového materiálu, v koncentrácii do 30 gramov na liter spósobilo zníženie antikomplementárnej aktivity gama globulínu po lyofilizácii iba o 35 až 45 %. Pokial' niesu v roztoku gama globulínu přítomné jeho vyššie polyméry sú výsledky testovania antikomplementárnej aktivity v lyofilizovanom gama globulinovom preparáte, z ktorého bolí odstránené nízkomolekulárné látky za použitia destilovanej apyrogénnej vody alebo za použitia vodného roztoku chloridu sodného do 30 g na liter prakticky rovnaké.

Hypotenzívny účinok bol testovaný na základe poklesu krvného tlaku králika priamou krvnou metodou podfa ČSL 3 (ČSL 3, svazok I., vydanie III., Avicenum Praha 1970, str. 149) s tým, že králíkovi o váhe 2 až 3 kg sa aplikujú 2 ml gama globulinového roztoku na kg hmotnosti. Obsah gama globulínu v aplikovanom roztoku je 50 g na 1 000 ml roztoku. U preparátov připravených podfa navrhovaného postupu sa hypotenzívná aktivita nevyskytovala v tak výraznej intenzitě, čo je možné dokumentovat údajom, že z 10 připravených experimentálnych šarží podfa předloženého vynálezu bol stanovený pokles systolického krvného tlaku maximál244306 ne o 4 až 8 % v porovnaní s tým istým materiálom v tej istej dávke bez separácie nízkomolekulárnych zlúčenín, kde bol stanovený pokles systolickébo krvného tlaku od 20 do 30 %.

Obsah histamínu bol testovaný Gadurnovou modifikáciou (Gadum J. H.: J. Physiol 8, 467, 1949) Magnusonovej metody (Magnus R.: Pltlg. Arch. 102, 123, 1904). U preparátov připravených podl'a navrhovaného postupu sa kotraktácie morčacieho čreva nevyskytovali, čo je možné dokumentovat údajom, že z 10 experimentálnych šarží připravených podTa předloženého vynálezu bolo nájdené 0,0 mikrogramu histamínu na 100 gramu gama globulínu v porovnaní s tým istým materiálom, ktorý bol lyofilizovaný bez predchádzajúcej separácie nízkomolekulárnych látok, kde bol stanovený obsah histamínu v koncentrácii 20 až 40 mlkrogramov na 100 grarnov lyofilizovaného gama globulínu.

Súčasná technologická prax na jednej straně sice odděluje gama globulín od zmesi iných krvných bielkovín a jednak pri separácii a taktiež pri znižovaní antikomplementárnej aktivity zanáša do roztoku gama globulínu nízkomolekulárne látky anorganického alebo organického charakteru. Princip odstraňovania nízkomolekulárnych látok s využitím dialýzy, oproti 0,1 až 0,3 %-nému vodnému roztoku chloridu sodného bol použitý u gama globulínu (Štěpánek I.: AO č. 202 180; Štěpánek I., Uhrík J.: AO 208 868; Štěpánek I., Stachy A., Baria I., Banda I.: AO 204 168), ako aj u zmesného imunoglobulinového preparátu na báze IgG + IgA + + IgM (Štěpánek I., Uhrík J.: AO 208 867 j.

Podstatou vynálezu je odstránenie balastných negamaglobulínových příměsí, ktoré majú, vzhl'adom ku gama globulínu nižšiu molekulární! hmotnost. Za hraničně hodnoty možno považovat údaje okolo 50 000 molekulárnej hmotnosti.

Východziou surovinou može byť pasta frakcie II, izolovaná metodou podlá Cohna a Oncleya z normálnej alebo hyperimúnnej plazmy, připadne z normálneho alebo retroplacentárneho, připadne hyperimúnneho séra. Taktiež však možu byť použité bielkovinné gama globulínové materiály izolované pomocou iných metod.

Bielkovinný materiál sa rozpúšťa v takom množstve destilovanej apyrogénnej vody o teplote 0 °C až +6 °C, aby sa hodnota koncentrácie bielkovín nachádzala v rozmedzí 10 až 180 gramov na liter, s optimom 60 až 100 gramov na liter. Rozpúšťanie sa urýchl'uje miešaním. Po rozpuštění sa gama globulínový roztok vyčíri, například filtráciou.

V technologických pomeroch sú vyššie uvedené optimálně podmienky zpravidla zachované vtedy ak rozpúšťame 1 kg gama globulínovej pasty v 2 000 ml destilovanej apyrogénnej vody o teplote 0 °C až +6 °C. Hodnota pH takto připraveného gama globulínového roztoku bývá spravidla v rozme6 dzí 4,0 až 8,0 a koncentrácia bielkovín v rozmedzí 60 až 100 gramov na liter. Takto připravený roztok gama globulínu sa vyčíri, například filtráciou, a nízkomolekulárne zlúčeniny do molekulárnej hmotnosti 50 000 sa oddelia sposobom podl'a vynálezu ultrafiltráciou, diafiltráciou, gélovou filtráciou a dialýzou, oproti destilovanej apyrogénnej vodě při teplote 0 °C až + 6 °C, pri pH 4,0 až 8,0. Ďalej sa gama globulínový roztok po oddělení nízkomolekulových zlúčenín sterilizuje, například filtráciou alebo pomocou iných metod, a potom sa zakoncentrováva, například lyofilizáciou alebo pomocou membrán, vákuovou destiláciou, vymrazovaním alebo inými metodami a v případe potřeby sa podrobí ďalšiemu spracovaniu.

Vynález je ďalej objasněný na príkladoch prevedenia, ktorými jeho rozsah nieje ani obmedzený ani vyčerpaný.

Příklady prevedenia

Příklad 1

Východzou surovinou može byť pasta frakcie II izolovaná metodou podl'a Cohna a Oncleya z normálnej alebo hyperimúnnej plazmy, připadne z normálneho alebo retroplacentárneho, připadne hyperimúnneho séra s antibakteriálnou, antitoxickou alebo antivirovou protilátkovou aktivitou. Bielkovinný gama globulínový materiál sa rozpúšťa v takom množstve destilovanej apyrogénnej vody o teplote 0 °C až +6 °C, aby hodnota koncentrácie bielkovín sa nachádzala v rozmedzí 10 až 180 gramov na liter, s optimom 60 až 100 gramov na liter. Rozpúšťanie sa urýchluje miešaním. Po rozpustnení sa gama globulínový roztok vyčíri, například filtráciou.

V technologických pomeroch sú vyššie uvedené podmienky optima spravidla zachované vtedy, ak rozpúšťame 1 kg gama globulínovej pasty v 2 000 ml destilovanej apyrogénnej vody o teplote 0°C až +6 °C. Hodnota pH gama globulínového roztoku bývá spravidla v rozmedzí 4,0 až 8,0 a koncentrácia bielkovín v rozmedzí 60 až 100 gramov na liter. Takto připravený roztok puntíkovaného gama globulínu sa vyčíri, například filtráciou a nízkomolekulárne zlúčeniny sa z gama globulínového roztoku odstránia:

A. Gélovou filtráciou

B. Dialýzou

C. Ultrafiltráciou

D. Diafiltráciou

A.

V súčasnosti existuje celá rada komerčných materiálov pre gélovú filtráciu na báze dextranových gélov, pod označením Sephadex, polyakrylamidových gélov, pod o7 značením Biogel, hydroxyalkylmetakrylátových gélov, pod označením Spheron, polystyrénových gélov, pod označením Styragel, polyvlnylacetátových gélov pod označením Merckogel, porůzných silikátov, pod označením Porasil, a poréznych skiel pod označením Bloglas, ktoré majú odstupňované velkosti pórov v gélových časticiach a umožňujú gélovň filtráciu v poměrně širokých rozmedziach molekulárnych hmotností.

Odstránenie nízkomolekulárnych zlúčenín sa prevádza elučnou gélovou chromatografiou s destilovanou apyrogénnou vodou pri teplote 0 °C až +6 °C, pri pH 4,0 až 8,0 s vylučovacou medzou gélu vyjádřenou molekulérnou hmotnostou do 50 000, pričom je potřebné uvedené materiály používat v optimálnom zrnění zaručujúcom prietok v technologických podmienkach.

Do kolony naplnenej s napučaným gélovým materiálom necháváme nasávat gama globulínový roztok takou rýchlosťou, aby prietok spodnou plochou kolony sa pohyboval medzi 0,01 ml až 3,0 ml za minútu na plochu 1 cm². Množstvo gama globulínového roztoku nasadeného na kolonu nemá překročit 25 až 30 % objemu gélovej časti kolony. Účinnost delenia je možné sledovat podfa stupňa oddelenia etylalkoholu, chloroformu a ninhydrin pozitívnych látok z gama globulínového roztoku. Pokial' by nedošlo ku dokonalému oddeleniu je potřebné zmenšit obsah vkládaného gama globulínového roztoku na kolonu a spomalif. prietok. Po separácii nízkomolekulárnych zlúženín z gama globulínového roztoku sa tento ďalej spracováva.

B.

Dialýza sa v poslednom desaťročí znovu začína uplatňovat najma pri výrobě liečiv ako technologická metoda separácie tých zmesi prírodných alebo syntetických látok, ktorých molekuly majú podstatné rozdielnú hmotnost.

V súčasnosti existuje celá rada komerčných membrán pre dialýzu či už v podobě rovinnej membrány, alebo v podobě potrubia o menlivom priemere a menlivej velkosti pórov na báze regenerovanej celulózy alebo jej derivátov, připadne na báze kolódia a taktiež aj na báze vinylových polymérov.

Sterilný roztok purifikovaného gama globulínu sa opatrné přesaje do sterilného dialyzačného potrubia, ktoré sa před zahájením presávania v spodněj časti uzatvorí uzlom a po přesátí sa vrchná časť uzatvorí uzlom so smyčkou, za ktorú sa naplněné potrubie zavěsí na háčik, ktorý je tak umiestnený, aby roztok gama globulínu v dialyzačnom potrubí bol v styku s pretekajúcou destilovanou apyrogénnou vodou pri teplotě 0 °C až +6 °C pri pH 4,0 až 8,0, pričom velkost pórov v dialyzačnej membráně by mala byť tak velká, aby umožnila separáciu nízkomolekulárnych zlúčenín vyjadrenú molekulárnou hmotnos^ou do 50 000.

Koniec dialýzy je indikovaný negativnou reakciou na etanol, chlóroform a na ninhydrin pozitivně látky v pretekajúcej dialyzačnej tekutině ako aj negativnou reakciou na etanol a chloroform v gama globulínovom roztoku. Po skončení dialýzy sa dialyzačné potrubie s gama globulínovým roztokom zvesí z háčika, opatrné sa vyberie a po rozstrihnutí sa gama globulínový roztok preleje do zbernej nádoby a ďalej sa spracováva.

C.

Separácia relativné nízkomolekulárnych zlúčenín do molekúlovej hmotnosti do 50 000 sa može uskutočniť aj pomocou ultrafiltrácie, ktorú je možné uskutočniť v podobě dutých nití, pričom gama globulínový roztok preteká pod tlakom do 800 kP vo vnútri niťovej membrány a cez póry v stene niťovej membrány prestupujú relativné nízkomolekulárne látky vo vodnom roztoku do zbernej nádoby. Vzhladom na to, že roztok gama globulínu sa pri ultrafiltrácii zakoncentrováva prevedieme opatovné nariedenie s destilovanou apyrogénnou vodou a toto zakoncentrovávanie, například na polovičný objem a narieďovanie na povodný objem prevádzame dovtedy pokial' je reakcia gama globulínového roztoku na přítomnost chloroformu a etanolu pozitivna.

Ultrafiltráciu je možno realizovat aj v podobě kazetového systému, kde v rovinnom usporiadaní je alebo vyměnitelná membrána, alebo doska z umetej hmoty s definovanými velkosťami pórov. Gama globulínový roztok pod tlakom do 800 kP preteká, například nad membránou a cez póry v stene rovinnej membrány alebo došky z umelej hmoty prestupujú relativné nízkomolekulárne látky vo vodnom roztoku do zbernej nádoby. Gama globulínový roztok sa v případe potřeby ďalej spracováva.

Sterilizácia ultrafiltračného zariadenia sa prevádza alebo parou alebo chemickou cestou, například prepláchnutím aparatury vodným roztokom formalínu o koncentrácii do 50 g na liter a následným vymytím formalínu sterilnou destilovanou apyrogénnou vodou.

D.

Odstraňovanie relativné nízkomolekulárnych zlúčenín do molekulárnej hmotnosti 50 000 je možné uskutočniť aj pomocou diafiltrácie čo je kombinácia dialýzy a ultrafiltrácie. Diafiltráciu je možné uskutočniť jednak v podobě dutých nití, pričom gama globulínových roztok preteká pod mierným tlakom do 200 kP vo vnútri niťovej membrány a cez póry v stene niťovej membrány prestupujú relativné nízkomolekulárne látky do z vonkajšej strany pretekajúceho roztoku destilovanej apyrogénnej vody pri teplote 0 ^CC až +6 °C pri pH 4,0 až 8,0, ktorý nízkomolekulárne látky odplavuje od niťovej membrány do odpadu.

Diafiltráciu je možné realizovat aj v podobě kazetového systému, kde v rovinnom usporiadaní je alebo vyměnitelná membrána, připadne doska z umetej hmoty s definovanou velkostou pórov. Gama globulínový roztok pod mierným tlakom do 200 kP preteká, například nad membránou a cez póry v stene rovinnej membrány alebo poréznej došky prestupujú reálne velmi pomalým prietokom relativné nízkomolekulárne látky do pretekajúceho roztoku destilované] apyrogénnej vody, ktorá preteká, například pod doskou alebo membránou a odplavuje nízkomolekulárne látky do odpadu.

Vzhtadom na to, že roztok gama globulínu sa pri diafiltrácii zakoncentrováva prevedieme opatovné nariedenie s destilovanou apyrogénnou vodou a toto zakoncentrovávanie, například na polovičný objem a nariedovanie na póvodný objem prevádzame dovtedy, pokiaf je reakcia gama globulínového roztoku na přítomnost chloroformu a etanolu pozitivna. Gama globulínový roztok sa preleje do zbernej nádoby a ďalej sa spra· cováva.

Sterilizácia diafiltračného zariadenia sa prevádza alebo parou alebo chemickou cestou, například prepláchnutím aparatury vodným roztokom formalínu o koncentrácii do 50 g na liter a následným vymytím formalínu sterilnou destilovanou vodou.

Dokaž chloroformu sa prevádza Fujiwarovou reakciou (Fujiwara: Sitzber. Naturw. Ges. Rostock 6, 33, 1916), či už v povodnom usporiadaní alebo v novších aplikáciach podlá Seta a Schultzeho (Seto T. A., Schultze M. O.: Anal. Chem. 28, 1 625, 1956), Hildebrechta (Hildebrecht C. D.: Anal. Chem. 29, 1 037, 1957), Friedmana a Coopera (Friedman P. J., Cooper J. R.: Anal. Chem. 30, 1 674, 1958).

Ninhydrin pozitivně látky stanovujeme sposobom podlá Ruhemanna (Ruhemann S.: J. Chem. Soc. 97, 1 438, 1910). Stanovenie etanolu sa prevádza Agulhonovou reakciou (Agulhon H.: Bull. soc. chim. France /4/, 9, 881, 1911) či už v původnom usporiadaní, alebo v novších aplikáciach pódia Kelletta (Kellett E. G.: Analyst 62, 728, 1937) alebo

Webba (Webb D. A.: Sci. Proč. Roy Dublin Soc. 21, 281, 1936).

Gama globulínový roztok po oddělení nízkomolekulárnych látok sa sterilizuje, například filtráciou alebo inými metodami, a potom sa zakoncentrováva, například lyofilizáciou alebo pomocou membrán, vákuovou destiláciou, vymrazovaním alebo inými metodami, a v případe potřeby sa podrobí ďalšiemu spracovaniu.

Použitie destilovanej apyrogénnej vody v porovnaní s použitím 0,1 %-ného až 3,0 %-ného roztoku chloridu sodného v destilovanej apyrogénnej vodě je operatívnejšie a technologicky 1'ahšie realizovatelné. Umožňuje použiť horúcu destilovaná apyrogénnu vodu, ktorá priamo vytiekla z destilačného aparátu, po jej ochladení v prietokovom výmenníku tepla bezprostredne ku technologické) aplikácii, čím sa na minimum znižuje možnost vzniku bakteriálněj kontaminácie. Použitie 0,1 %-ného až 3,0 %-ného roztoku chloridu sodného v destilovanej apyrogénnej vodě vyžaduje nádobu na jeho zhotovenie a skladovanie pri zvýšenej teplote, vylučujúcej možnost vzniku kontaminácie, ako aj zariadenie na zhomogenizovanie roztoku. Plynulý chod technologickej linky využívajúcej vodný roztok chloridu sodného vyžaduje minimálně 2 takéto nádoby.

Oddelovanie nízkomolekulárnych látok s molekulárnou hmotnosťou do 50 000 pomocou ultrafiltrácie, diafiltrácie, gélovej filtrácie alebo dialýzy, proti 0,1 %-nému až 3,0 %-nému roztoku chloridu sodného v destilovanej apyrogénnej vodě bolo vyššie popísanými metodami, taktiež úspěšně odskúšané v technologickom měřítku.

Příklad 2

Východzou surovinou može byť bielkovinná pasta gama globulínu izolovaná aj pomocou iných metod. Bielkovinná pasta alebo bielkovinný roztok sa spracováva v ďalšom postupe podobné ako v případe č. 1 s tým rozdielom, že kritérium odstránenia nízkomolekulárnycb zlňčenín z roztoku gama globulínu nesúvisí s prítomnosfou liehu alebo chloroformu, ale s prítomnosfou precipitačnej látky, ktorá bola na oddelenie gama globulínu použitá alebo s gama globulínom vytvára přechodný rozrušitefný komplex.

Claims (2)

1. Sposob přípravy krvného gama globulínu sozníženym hypotenzívnym a antikomplementárnym účinkom spočívajúci v tom, že sa bielkovinný materiál obsahujúci purifikovaný gama globulín suspenduje za aseptických podmienok v takom množstve apyrogénnej destilovanej vody o teplote 0 °C až +6 °C, aby hodnota koncentrácie bielkovín sa nachádzala v rozmedzí 10 až 180 g/1, gama globulínový roztok sa vyčíri, například filtráciou, oddelia sa nízkomolekulárne látky pomocou ultrafiltrácie, diafiltrácie, gélovej filtrácie alebo dialýzy, oproti roztoku chloridu sodného v destilovanej apyrogénnej vodě, potom sa gama globulínový roztok sterilizuje, například filtráciou a následné vynalezu sa zakoncentrováva, například lyofilizáciou alebo pomocou membrán, vakuovou destiláciou, vymrazením a v případe potřeby sa podrobí ďalšiemu spracovaniu, vyznačujúci sa tým, že oddefovanie nízkomolekulárnych látok s molekulovou hmotnosfou do 50 000 sa prevádza pomocou ultrafiltrácie, diafiltrácie, gélovej filtrácie alebo dialýzy, oproti destilovanej apyrogénnej vodě.

2. Spůsob přípravy pódia bodu 1, vyznačujúci sa tým, že bielkovinný materiál je normálna alebo hyperimúnna plazma, připadne normálně, retroplacentárné alebo hyperimúnné sérum s definovanou antibakteriálnou, antitoxickou alebo antivírusovou protllátkovou aktivitou.