CS248086B1

CS248086B1 - A method for the pyrogenic treatment of animal albumin for veterinary intravenous use

Info

Publication number: CS248086B1
Application number: CS805284A
Authority: CS
Inventors: Ivan Mikula; Jan Rosocha; Jozef Bulik
Original assignee: Ivan Mikula; Jan Rosocha; Jozef Bulik
Priority date: 1984-10-23
Filing date: 1984-10-23
Publication date: 1987-01-15

Abstract

Riešenie možno použiť v imunologicko- -biologickej výrobě veterinárnych liečebných prípravkov. Očelom nového riešenie je podstatné zvýšenie kvalitatívnych parametrov doteraz vyrábaného zvieracieho albuminu, zvýšenie jeho liečebného efektu a rozšírenie indikácie. Zvýšenie účinku sa dosahuje tým, že komerčně vyrábaný zvierací albumin, ktorý vykazuje poměrně vysoké pyretické reakcie sa rozpustí v apyrogénnej vodě na roztok obsahujúci 2 až 2,5 hmotnostných percent bielkovín, pH roztoku sa upraví na hodnotu 5,6 až 5,9 a za stálého miešania přidává sa v malých dávkách chloroform v pomere 5 až 35 ml na 100 ml roztoku albuminu. Vyprecipitované bielkoviny hlavně lipoidného charakteru sa odseparujú a supernatant predstavujúci albumin sa filtruje cez azbestocelulózové filtre a zohrieva 10 až 48 hodin pri teplote 60 °C.The solution can be used in immunological-biological production of veterinary medicinal products. The purpose of the new solution is to significantly increase the quality parameters of the animal albumin produced so far, to increase its therapeutic effect and to expand the indication. The increase in effect is achieved by dissolving commercially produced animal albumin, which exhibits relatively high pyretic reactions, in apyrogenic water to a solution containing 2 to 2.5 percent by weight of proteins, adjusting the pH of the solution to 5.6 to 5.9 and adding chloroform in small doses in a ratio of 5 to 35 ml per 100 ml of albumin solution with constant stirring. The precipitated proteins, mainly of lipoid nature, are separated and the supernatant representing albumin is filtered through asbestos-cellulose filters and heated for 10 to 48 hours at a temperature of 60 °C.

Description

í 54 J Sposob apyrogénnej úpravy zvieracieho albuminu pre veterinárně intravenózne použitie ^{1 2} Method of pyrogen-free treatment of animal albumin for veterinary intravenous use ^{1 2}

Riešenie možno použiť v imunologicko-biologickej výrobě veterinárnych liečebných prípravkov.The solution can be used in the immunological-biological production of veterinary medicinal products.

Očelom nového riešenie je podstatné zvýšenie kvalitatívnych parametrov doteraz vyrábaného zvieracieho albuminu, zvýšenie jeho liečebného efektu a rozšírenie indikácie.The aim of the new solution is to substantially increase the qualitative parameters of the animal albumin produced so far, to increase its therapeutic effect and to extend the indication.

Zvýšenie účinku sa dosahuje tým, že komerčně vyrábaný zvierací albumin, ktorý vykazuje poměrně vysoké pyretické reakcie sa rozpustí v apyrogénnej vodě na roztok obsahujúci 2 až 2,5 hmotnostných percent bielkovín, pH roztoku sa upraví na hodnotu 5,6 až 5,9 a za stálého miešania přidává sa v malých dávkách chloroform v pomere až 35 ml na 100 ml roztoku albuminu. Vyprecipitované bielkoviny hlavně lipoidného charakteru sa odseparujú a supernatant predstavujúci albumin sa filtruje cez azbestocelulózové filtre a zohrieva 10 až 48 hodin pri teplote 60 °C.An increase in effect is achieved by dissolving commercially available animal albumin, which exhibits relatively high pyretic reactions, in pyrogen-free water to a solution containing 2 to 2.5 weight percent proteins, adjusting the pH of the solution to 5.6 to 5.9, and with stirring, chloroform is added in small portions at a rate of up to 35 ml per 100 ml albumin solution. The precipitated proteins of mainly lipoid character are separated and the supernatant representing albumin is filtered through asbestos cellulose filters and heated at 60 ° C for 10 to 48 hours.

Vynález sa týká sposobu přípravy apyrogenného albuminu pre veterinárně intravenózne použitie.The invention relates to a process for the preparation of pyrogen-free albumin for veterinary intravenous use.

V súčasnom období u nás zvierací albumin připravovaný v priemyselnom měřítku spravidla obsahuje pyrogenné látky, často hraničiace s toxicitou. To sú zrejme důvody, že použitie takéhoto přípravku k intravenóznej aplikácii je vylúčené. Príkladom je aj Biovetou n. p. — Nitra připravovaný 5 % zvierací albumin pod fy označením „PLAZBION — B“, iktorý sa doporučuje aplikovať iba podkožně, vnútrosvalovo alebo intraperitoneálne.At present, animal albumin produced on an industrial scale usually contains pyrogenic substances, often bordering on toxicity. These are obviously reasons that the use of such a preparation for intravenous administration is excluded. Bioveta n. p. - Nitra prepared 5% animal albumin under the name "PLAZBION - B", which is recommended to be administered only subcutaneously, intramuscularly or intraperitoneally.

Příčinou tohto stavu je kontaminovanie východzieho materiálu a následné pomnoženie mikroflóry v priebehu používaných technologických postupov (odběr krve, transport, uskladnenie a technologické spracovanie j.The cause of this condition is contamination of the starting material and subsequent propagation of the microflora during the technological procedures used (blood collection, transport, storage and technological processing).

Medzi doteraz najznámejšie depyrogenizačné postupy plazmatických bielkovín možno zařadit adsorbciu na aktivně uhlie (Howard F., Spooner E. C. R,: Chemistry and Industry 19671946]; AI2O3 (Szeghi G., Torna E., Stanica E., Stoian C., Gartner M. Arch. Roum. de Pathol. Exper. 21/163/1962 J; Budilina J. A., Filimonova A. A., Ciumanov: ŽMEI 30, 89/1959), azbestové filtre (Co Tui F. W., Wright A. M.: Ann. Surgey 116, 412/1942, Zittle C. A., Devlin Η. B., Rodney G., Welche M.: J. Lab. Clin. Med. 40, 75/1945], popřípadě zohrievanie pri teplote 37 °C (Sgouris J. T., Storey R. W., Mc Call Κ. B., Anderson H. D.: Vox Sang. 7, 739/1962).The most well known plasma protein depyrogenation processes to date include adsorption to activated carbon (Howard F., Spooner EC R: Chemistry and Industry 19671946); AI2O3 (Szeghi G., Torna E., Station E., Stoian C., Gartner M. Arch Roum de Pathol Experiment 21/163/1962 J; Budilina JA, Filimonova AA, Ciumanov: ZMEI 30, 89/1959), asbestos filters (Co Tui FW, Wright AM: Ann. Surgey 116, 412/1942 , Zittle CA, Devlin, B., Rodney, G., Welche, M .: J. Lab. Clin. Med. 40, 75/1945], or heating at 37 ° C (Sgouris JT, Storey RW, Mc Call) B., Anderson HD: Vox Sang. 7, 739/1962).

Nevýhoda citovaných depyrogenizačných spůsobov je nedokonalý depyrogenizačný efekt, nereprodukovatefnosť a v niektorých prípadoch dlhý technologický postup.The disadvantage of the cited depyrogenizing processes is the imperfect depyrogenizing effect, non-reproducibility and in some cases a long technological process.

Vyššie uvedené nevýhody odstraňuje riešenie, ktorého podstata spočívá v tom, že komerčně připravený zvierací albumin sa rozpustí v apyrogennej vodě na 2 až 2,5 hmotnostných % bielkovín a za stálého miešania sa upraví jeho pH 1 M kys. octovou na hodnotu 5,6 až 5,9 a za stálého miešania sa přidává chloroform v pomere 5 až 35 mililtrov na 100 ml roztoku. Vzniklá zrazenina predstavujúca balastné bielkoviny hlavně lipoidného charakteru, představuje odpad, ktorý sa centrifugáciu odstráni v podobě sedimentu. Získaný supernatant je roztok albuminu, ktorý sa filtruje cez azbestocelulózové filtre a zohrieva pri teplote 60 °C po dobu 10 až 48 hodin. Keďže ide o určitý purifikačný postup strata na albumine Tabulka 1The above-mentioned disadvantages are overcome by a solution which consists in dissolving commercially produced animal albumin in pyrogen-free water to 2 to 2.5% by weight of proteins and adjusting its pH with 1 M acid with stirring. acetic acid to 5.6-5.9 and chloroform is added at a rate of 5-35 milliliters per 100 mL of solution with stirring. The resulting precipitate, representing ballast proteins of mainly lipoid character, constitutes waste which is removed by centrifugation as sediment. The supernatant obtained is an albumin solution which is filtered through asbestos cellulose filters and heated at 60 ° C for 10 to 48 hours. As this is a certain purification procedure, loss of albumin Table 1

Výrobok Vzostup teplůt na troch králíkoch °C je minimálna, nakolko pokles % bielkovín predstavujú balastné bielkoviny.Product The rise in temperatures in three rabbits ° C is minimal since the decrease in protein% is a ballast protein.

Výhoda navrhovaného postupu je technologická nenáročnost, dostupnost použitých surovin a materiálov a najmá vysoký jednoznačný depyrogenizačný efekt (viď tabulka č. 1).The advantage of the proposed procedure is technological undemanding, availability of used raw materials and materials and especially high unambiguous depyrogenisation effect (see Table 1).

Doterajšia aplikácia pyrogenného zvieracieho albuminu je málo účinná, lebo sa tento může podávat zvieratám iba intramuskulárne. Přitom chorobné stavy zvierat najmá mláďat pri metabolických poruchách zapříčiněných výživou a-ko aj patogenným agnens si vyžadujú doplnenie, resp. stabilizáciu koloidno-osmotického tlaku krvného riečišťa.The application of pyrogenic animal albumin to date is poorly effective, since it can only be administered intramuscularly to animals. At the same time, the disease states of the animals, especially the offspring, in metabolic disorders caused by nutrition, as well as pathogenic agents, require supplementation, respectively. stabilization of colloid-osmotic pressure of the bloodstream.

Příklad 1Example 1

100 g lyofilizovaného albuminu sa rozpustí v 3 500 ml apyrogennej vodě, hodnota pH roztoku sa upraví na 5,6 přidáním 1 M kys. octovej a za stálého miešania k roztoku albuminu po kvapkách sa přidává 575 ml chloroformu. Po dvojhodinovom miešení a 12 hodinovej precipitácii pri teplote + 10 °C vzniklý precipitát sa oddělí centrifugáclou. Supernatant sa filtruje cez čeriace a následné sterilizačné azbestocelulózové vložky. Filtrát sa namrazuje, lyofillzuje, potom rozpúšťa v roztoku stabilizátorov, sterilně filtruje a zohrieva pri 60 °C po dobu 10 hodin.100 g of lyophilized albumin is dissolved in 3500 ml of pyrogen-free water, the pH of the solution is adjusted to 5.6 by adding 1 M acid. acetic acid and 575 ml of chloroform are added dropwise to the albumin solution while stirring. After stirring for 2 hours and precipitation for 12 hours at + 10 ° C, the precipitate formed is separated by centrifugation. The supernatant is filtered through clarifying and subsequent asbestos cellulose sterilization pads. The filtrate is frozen, lyophilized, then dissolved in a stabilizer solution, sterile filtered and heated at 60 ° C for 10 hours.

Příklad 2Example 2

100 g lyofilizovaného albuminu sa rozpustí v 3 500 ml apyrogennej vodě, hodnota pH roztoku sa upraví na 5,9 přidáním 1 M kys. octovej a za stálého miešania k roztoku albuminu po kvapkách sa přidává 450 ml chloroformu. Po dvojhodinovom miešení a 12 hodinovej precipitácii pri teplote + 10 °C vzniklý precipitát sa oddělí centrifugáciou Supernatant sa filtruje cez čeriace a následné sterilizačné azbestocelulózové vložky. Filtrát sa namrazuje, lyofilizuje, potom rozpusta v roztoku stabilizátorov, sterilně filtruje a zahrieva pri 60 °C po dobu 48 hodin. Hodnotenie stupňa depyrogenizácie:100 g of lyophilized albumin is dissolved in 3500 ml of pyrogen-free water, the pH of the solution is adjusted to 5.9 by adding 1 M acid. acetic acid and 450 ml of chloroform are added dropwise to the albumin solution. After stirring for 2 hours and precipitation at + 10 ° C for 12 hours, the precipitate formed is collected by centrifugation. The filtrate is frozen, lyophilized, then dissolved in a stabilizer solution, sterile filtered and heated at 60 ° C for 48 hours. Evaluation of the degree of depyrogenation:

V tabulke č. 1 sú uvedené hodnoty vzostupu teplůt na troch králikoch a priemer týchto hodnůt v °G u východzieho hovádzieho albuminu a hovádzieho albuminu po depyrogenizácii.In table no. 1 shows the temperature rise values in three rabbits and the mean of these values in ° G for the starting bovine albumin and the bovine albumin after depyrogenation.

hotnůt 0 hodnota v °C poklesu v °C0 value in ° C decrease in ° C

Komerčně připravenýCommercially prepared

albumin albumin 1,2; 2,1; 1,4 1.2; 2.1; 1.4 1,56 1.56 Depyrogenizovaný hovádzí albumin upravený podta Depyrogenized beef albumin treated substrate 0,3; 0,4; 0,0 0.3; 0.4; 0.0 0,23 0.23

příkladu 2of Example 2

Claims

SUBJECT

Process for the pyrogen-free treatment of animal albumin for veterinary intravenous use, characterized in that the commercially prepared pyrogenic animal albumin is dissolved in pyrogen-free water to a solution containing 2 to 2.5% by weight of proteins, adjusted to a pH of 5.6 to 5, 9 a

BACKGROUND OF THE INVENTION with stirring, chloroform is added at a rate of 5-35 ml per 100 ml albumin solution, the precipitate formed is centrifuged and the albumin solution supernatant is filtered with an asbestos cellulose filter and heated at 60 ° C for 10 to 48 hours.