CS248086B1 - Sposob apyrogénnej úpravy zvieracieho albuminu pre veterinárně intravenózne použitie - Google Patents

Abstract

Riešenie možno použiť v imunologicko- -biologickej výrobě veterinárnych liečebných prípravkov. Očelom nového riešenie je podstatné zvýšenie kvalitatívnych parametrov doteraz vyrábaného zvieracieho albuminu, zvýšenie jeho liečebného efektu a rozšírenie indikácie. Zvýšenie účinku sa dosahuje tým, že komerčně vyrábaný zvierací albumin, ktorý vykazuje poměrně vysoké pyretické reakcie sa rozpustí v apyrogénnej vodě na roztok obsahujúci 2 až 2,5 hmotnostných percent bielkovín, pH roztoku sa upraví na hodnotu 5,6 až 5,9 a za stálého miešania přidává sa v malých dávkách chloroform v pomere 5 až 35 ml na 100 ml roztoku albuminu. Vyprecipitované bielkoviny hlavně lipoidného charakteru sa odseparujú a supernatant predstavujúci albumin sa filtruje cez azbestocelulózové filtre a zohrieva 10 až 48 hodin pri teplote 60 °C.

Description

í 54 J Sposob apyrogénnej úpravy zvieracieho albuminu pre veterinárně intravenózne použitie ^{1 2}

Riešenie možno použiť v imunologicko-biologickej výrobě veterinárnych liečebných prípravkov.

Očelom nového riešenie je podstatné zvýšenie kvalitatívnych parametrov doteraz vyrábaného zvieracieho albuminu, zvýšenie jeho liečebného efektu a rozšírenie indikácie.

Zvýšenie účinku sa dosahuje tým, že komerčně vyrábaný zvierací albumin, ktorý vykazuje poměrně vysoké pyretické reakcie sa rozpustí v apyrogénnej vodě na roztok obsahujúci 2 až 2,5 hmotnostných percent bielkovín, pH roztoku sa upraví na hodnotu 5,6 až 5,9 a za stálého miešania přidává sa v malých dávkách chloroform v pomere až 35 ml na 100 ml roztoku albuminu. Vyprecipitované bielkoviny hlavně lipoidného charakteru sa odseparujú a supernatant predstavujúci albumin sa filtruje cez azbestocelulózové filtre a zohrieva 10 až 48 hodin pri teplote 60 °C.

Vynález sa týká sposobu přípravy apyrogenného albuminu pre veterinárně intravenózne použitie.

V súčasnom období u nás zvierací albumin připravovaný v priemyselnom měřítku spravidla obsahuje pyrogenné látky, často hraničiace s toxicitou. To sú zrejme důvody, že použitie takéhoto přípravku k intravenóznej aplikácii je vylúčené. Príkladom je aj Biovetou n. p. — Nitra připravovaný 5 % zvierací albumin pod fy označením „PLAZBION — B“, iktorý sa doporučuje aplikovať iba podkožně, vnútrosvalovo alebo intraperitoneálne.

Příčinou tohto stavu je kontaminovanie východzieho materiálu a následné pomnoženie mikroflóry v priebehu používaných technologických postupov (odběr krve, transport, uskladnenie a technologické spracovanie j.

Medzi doteraz najznámejšie depyrogenizačné postupy plazmatických bielkovín možno zařadit adsorbciu na aktivně uhlie (Howard F., Spooner E. C. R,: Chemistry and Industry 19671946]; AI2O3 (Szeghi G., Torna E., Stanica E., Stoian C., Gartner M. Arch. Roum. de Pathol. Exper. 21/163/1962 J; Budilina J. A., Filimonova A. A., Ciumanov: ŽMEI 30, 89/1959), azbestové filtre (Co Tui F. W., Wright A. M.: Ann. Surgey 116, 412/1942, Zittle C. A., Devlin Η. B., Rodney G., Welche M.: J. Lab. Clin. Med. 40, 75/1945], popřípadě zohrievanie pri teplote 37 °C (Sgouris J. T., Storey R. W., Mc Call Κ. B., Anderson H. D.: Vox Sang. 7, 739/1962).

Nevýhoda citovaných depyrogenizačných spůsobov je nedokonalý depyrogenizačný efekt, nereprodukovatefnosť a v niektorých prípadoch dlhý technologický postup.

Vyššie uvedené nevýhody odstraňuje riešenie, ktorého podstata spočívá v tom, že komerčně připravený zvierací albumin sa rozpustí v apyrogennej vodě na 2 až 2,5 hmotnostných % bielkovín a za stálého miešania sa upraví jeho pH 1 M kys. octovou na hodnotu 5,6 až 5,9 a za stálého miešania sa přidává chloroform v pomere 5 až 35 mililtrov na 100 ml roztoku. Vzniklá zrazenina predstavujúca balastné bielkoviny hlavně lipoidného charakteru, představuje odpad, ktorý sa centrifugáciu odstráni v podobě sedimentu. Získaný supernatant je roztok albuminu, ktorý sa filtruje cez azbestocelulózové filtre a zohrieva pri teplote 60 °C po dobu 10 až 48 hodin. Keďže ide o určitý purifikačný postup strata na albumine Tabulka 1

Výrobok Vzostup teplůt na troch králíkoch °C je minimálna, nakolko pokles % bielkovín predstavujú balastné bielkoviny.

Výhoda navrhovaného postupu je technologická nenáročnost, dostupnost použitých surovin a materiálov a najmá vysoký jednoznačný depyrogenizačný efekt (viď tabulka č. 1).

Doterajšia aplikácia pyrogenného zvieracieho albuminu je málo účinná, lebo sa tento může podávat zvieratám iba intramuskulárne. Přitom chorobné stavy zvierat najmá mláďat pri metabolických poruchách zapříčiněných výživou a-ko aj patogenným agnens si vyžadujú doplnenie, resp. stabilizáciu koloidno-osmotického tlaku krvného riečišťa.

Příklad 1

100 g lyofilizovaného albuminu sa rozpustí v 3 500 ml apyrogennej vodě, hodnota pH roztoku sa upraví na 5,6 přidáním 1 M kys. octovej a za stálého miešania k roztoku albuminu po kvapkách sa přidává 575 ml chloroformu. Po dvojhodinovom miešení a 12 hodinovej precipitácii pri teplote + 10 °C vzniklý precipitát sa oddělí centrifugáclou. Supernatant sa filtruje cez čeriace a následné sterilizačné azbestocelulózové vložky. Filtrát sa namrazuje, lyofillzuje, potom rozpúšťa v roztoku stabilizátorov, sterilně filtruje a zohrieva pri 60 °C po dobu 10 hodin.

Příklad 2

100 g lyofilizovaného albuminu sa rozpustí v 3 500 ml apyrogennej vodě, hodnota pH roztoku sa upraví na 5,9 přidáním 1 M kys. octovej a za stálého miešania k roztoku albuminu po kvapkách sa přidává 450 ml chloroformu. Po dvojhodinovom miešení a 12 hodinovej precipitácii pri teplote + 10 °C vzniklý precipitát sa oddělí centrifugáciou Supernatant sa filtruje cez čeriace a následné sterilizačné azbestocelulózové vložky. Filtrát sa namrazuje, lyofilizuje, potom rozpusta v roztoku stabilizátorov, sterilně filtruje a zahrieva pri 60 °C po dobu 48 hodin. Hodnotenie stupňa depyrogenizácie:

V tabulke č. 1 sú uvedené hodnoty vzostupu teplůt na troch králikoch a priemer týchto hodnůt v °G u východzieho hovádzieho albuminu a hovádzieho albuminu po depyrogenizácii.

hotnůt 0 hodnota v °C poklesu v °C

Komerčně připravený

albumin	1,2; 2,1; 1,4	1,56
Depyrogenizovaný hovádzí albumin upravený podta	0,3; 0,4; 0,0	0,23

příkladu 2

Claims (2)

1. PREDMET

   1. Spósob apyrogennej úpravy zvieracieho albuminu pre veterinárně íntravenózne použitie, vyznačený tým, že sa komerčně připravený pyrogenný zvierací albumin rozpustí v apyrogennej vodě na roztok obsahujúci 2 až 2,5 hmotnostných % bielkovín, upraví sa jeho pH na hodnotu 5,6 až 5,9 a

   VYNALEZU za stálého miešania sa přidává chloroform v pomere 5 až 35 ml na 100 ml roztoku albuminu, vzniklá zrazenina sa odstředí a supernatant, predstavujúci roztok albuminu, sa filtruje azbestocelulózovým filtrom a zohrieva pri teplote 60 °C po dobu 10 až 48 hodin.