CS254164B1 - Sposob přípravy testovacích tabliet na stanovenie /3(l->3) glukanázy - Google Patents
Sposob přípravy testovacích tabliet na stanovenie /3(l->3) glukanázy Download PDFInfo
- Publication number
- CS254164B1 CS254164B1 CS855816A CS581685A CS254164B1 CS 254164 B1 CS254164 B1 CS 254164B1 CS 855816 A CS855816 A CS 855816A CS 581685 A CS581685 A CS 581685A CS 254164 B1 CS254164 B1 CS 254164B1
- Authority
- CS
- Czechoslovakia
- Prior art keywords
- glucanase
- tablets
- beta
- determination
- substrate
- Prior art date
Links
Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Účelom riešenia je příprava testovacích tablet na stanovenie beta(l->3) glukanázo- vej enzýmovej aktivity. Uvedený účel sa do siahne tak, že práškový chromolytický sub strát beta(l->3) glukánu izolovaný z buněč ných stien kvasiniek Saccharomyces cere visiae obsahujúci 6 až 8 % hmot. kovalent- ne viazaného farbiva s napúčacím objemem vo vodě 12 až 20 ml . g ' 1 sa zmieša s mik- rokryštalickou celulózou zosietenou epi- ehlórhydrínom v hmotnostnom pomere 1 : : 2 až 1:3 a nakoniec sa po přidaní 2 % hmot. mastenca a homogenizácii tabletuje na tabletovacom stroji na tablety o hmot nosti 100 mg + 3 mg. Sposob přípravy tes tovacích tablet na stanovenie beta glukaná zy má využitie v bioehémii.
Description
Vynález sa týká sposobu přípravy testovacích tablet na stanovenie (3(1-+3) glukanázy; EC 3.2.1.6.
V posledných rokoch sa na stanovenie polysacharid-hydrolázových enzýmových aktivit používá s úspechom příslušný chromolytický polysachariďový substrát, ktorý po enzýmavej hydrolýze poskytuje farebný titrát, intenzita ktorého je úměrná prítomnej enzýmovej aktivitě. Na tomto principe sú známe zahraničně a čsl. chromogénne substráty ako- například Phadebas Amylase Test [Clinical and technical Information Almwuist, Wiksells Boktryckeri (1979)], připadne Čs. AO 192 202 a 192 210, ktoré sa používajú najmá v klinickej praxi pri stanovení aktivity alfa amylazy v biologických tekutinách pre diagnostické účely. Obdobné sú známe i sposoby přípravy celulózového chromolytického substrátu či už pre meranie Ct zložky celulázovej aktivity [A. O. Stamm: Helv. Clin. Chim. Acta 46, 3008 (1963)] alebo Ci zložky celulázovej aktivity [R. P. Poincelot, P. R. Day: Appl. Microbiol. 23, 5, 875 (1972)]. Pri sériových analýzach je prášková forma chromolytického substrátu nevýhodná, pretože je potřebné pre každú analýzu zvlášť navažovať chromolytický substrát, čo znižuje produktivitu práce. Za tým účelom sa substráty tabletujú tak, že testovacia tableta sa v styku s vodným roztokom enzýmu 1'ahko rozpadne, substrát rýchlo niekoíko násobné napučí a tým sú vytvořené podmienky pre priebeh enzýmovej reakcie.
Zistili sme však, že polysacharidové substráty s kovalentne viazaným farbivom sa prakticky nedajú tabletovat, musia sa přidávat' pomocné látky, ktoré zabezpečujú jednak vhodné reologické vlastnosti granulátu při tabletovaní a rovnako neinhibujú vlastnú enzýmovú reakciu. U amylázových testovacích tablet sa tento problém rieši tým, že amylázový substrát v suchom stave sa zmieša s mikrokryštalickou celulózou, ktorá je inertná ku amylázovým enzýmom a zabezpečuje požadované fyzikálně vlastnosti jak granulátu tak i hotovej testovacej tablety.
Tento spósob sa však nedá s úspechom použit v prípadoch tabletovania substrátov- polysacharidov s vazbou /3(1-+3), respektive (3(1-+4), nakolko mikrokryštalická celulóza je polysacharid s vazbou /3(1-+4), t. j. příslušný enzým by reagoval nielen s chromogénnym substrátem, ale i s bezfarebným substrátom, čím by sa získali nesprávné hodnoty nameranej enzýmovej aktivity. Zistili sme, že sletovaná mikrokryštalická celulóza připravená například podta AO 136 062 nevykazuje žiadne substrátové vlastnosti pre ^(l-+3) 'glukanázu a preto je vhodná ako pomocná látka pri príprave tabletových testovacích foriem na stanovenie /3(1-+3) glukanázy.
Podstata vynálezu spočívá v tom, že práškový chromolytický substrát /3(1-+3) glukánu izolovaný z buněčných stien kvasiniek Saccharomyces cerevisiae obsahujúci 6 až 8 % hmot. kovalentne viazaného farbiva dvojsodnej soli kyseliny 8-amíno-5-[3-(sulf oetylsulf onyl) anilíno] 6-antrachinónsulfonovej a napúčacím objemom vo vodě 12 až 20 ml. g_1 sa zmieša s mikrokryštalickou celulózou zosietenou s 10 až 20 % hmot. epichlórhydrínom (2-chlórmetyloxiránom) v hmotnostnom pomere 1: 2 až 1:3 a nakoniec sa přidá 2 % hmot. mastenca a po homogenizácii sa tabletuje na tabletovacom stroji na tablety o hmotnosti 100 mg, s presnosťou + 3 °/o.
Optimálna veikosť častíc ako chromolytického substrátu /3(1-+3) glukanátu tak i sieťovanej mikrokryštalickej celulózy má byť v rozsahu 80 až 250 μτα. Aby bola dostatočne potlačená substrátová afinita mikrokryštalickej celulózy k /3(1-+3) glukanáze je potřebné aby celulóza bola zosietená s epichlórhydrínom tak, že obsahuje 10 až 15 percent viazaného epichlórhydrínu na hmotnost suchej mikrokryštalickej celulózy. Optimálna hmotnost testovacej'tablety je okolo 100 mg pre dostatočnú přesnost stanovenia (3(l-+3)glukanázovej aktivity.
Výhodou nového sposobu přípravy tabletového testu na stanovenie /3(1-+3) glukanázovej aktivity je, že umožňuje viac násobné zvýšit produktivitu práce pri sériových analýzach predmetnej enzýmovej aktivity, pri vysokej přesnosti použitej fotokolorimetrickej metódy a bez poklesu citlivosti metody, ktorá by bola nevyhnutná pri použití nesieťovanej mikrokryštalickej celulózy ako pomocného aditíva dosiahnutie optimálnych fyzikálno-mechanických vlastností testovacích tablet.
Příklad 1
100 g chromolytického substrátu /3(1-+3) glukánu izolovaného z buněčných stien kvasiniek Saccharomyces cerevisiae s obsahom 6 % hmot. viazaného farbiva dvojsodnej soli kyseliny 8-amíno-5-[3-(sulfoetylsulfonyljanilíno]6-antrachinónsulfonovej a vetkosťou častíc 80 až 250 a napúčacím objemom vo vodě 12 ml. g_1 sa homogenizuje s 200 g mikrokryštalickej celulózy sieťovanej s 20 % hmot. epichlórhydrínom s prídavkom 6 g mastenca, načo sa homogenizovaný suchý granulát tabletuje na tabletovacom stroji na tablety o hmotnosti 100 mg + 3 mg. Hotové tablety sú vhodné na sériové meranie,/3(1-+3) glukanázovej aktivity.
Příklad 2
Postupuje sa podl'a příkladu 1 s tým rozdielom, že sa použije 300 g sieťovanej mikrokryštalickej celulózy sieťovanej s 10 % hmot. s epichlórhydrínom a chromolytický substrát /3(1-+3) glukán s obsahom 8 % hmot.
5 4 viazaného farbiva a napúčacím objemom ml. gi.
Vynález može nájsť široké použitie v biochémii pri stanovení /3(l-*3) glukanázovej aktivity, či už pre výskumné účely alebo v priemyselných aplikáciách.
Claims (1)
- Sposob přípravy testovacích tablet na stanovenie /3(l->3 j glukanázy, EC 3.2.1.6 vyznačený tým, že práškový chromolytický substrát /3(l-*3) glukán izolovaný z buněčných stien kvasiniek Saccharomyces cervisiae obsahujúci 6 až 8 % hmot. kovalentne: viazaného farbiva dvojsodnej soli kyseliny 8-amíno-5- [ 3- (suit oetylsulfonyl) anilíno ] 6-antrachinónsulfonovej a napúčacím objemom vo vodě 12 až 20 ml. mg-* sa zmieša s mikrokryštallckou celulózou zosietenou s 10 až 20 % hmot. epichlórhydrínom v hmotnostnom pomere 1:2 až 1:3 a potom sa,po přidaní 2 % hmot. mastenca a homogenizácii tabletuje na tabletovacom stroji na tablety.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS855816A CS254164B1 (sk) | 1985-08-09 | 1985-08-09 | Sposob přípravy testovacích tabliet na stanovenie /3(l->3) glukanázy |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS855816A CS254164B1 (sk) | 1985-08-09 | 1985-08-09 | Sposob přípravy testovacích tabliet na stanovenie /3(l->3) glukanázy |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CS581685A1 CS581685A1 (en) | 1987-05-14 |
| CS254164B1 true CS254164B1 (sk) | 1988-01-15 |
Family
ID=5403779
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CS855816A CS254164B1 (sk) | 1985-08-09 | 1985-08-09 | Sposob přípravy testovacích tabliet na stanovenie /3(l->3) glukanázy |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CS (1) | CS254164B1 (sk) |
-
1985
- 1985-08-09 CS CS855816A patent/CS254164B1/sk unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CS581685A1 (en) | 1987-05-14 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Klein et al. | New chromogenic substrate for determination of serum amylase activity | |
| Lim et al. | An assay for iduronate sulfatase (Hunter corrective factor) | |
| Pinto et al. | Aldolase: I. colorimetric determination | |
| Schmidt et al. | The behaviour of Na+ K+-activated adenosine triphosphatase in various structures of the rat nephron after furosemide application | |
| Niedel et al. | Nicotinate Phosphoribosyltransferase of Human Erythrocytes: PURIFICATION AND PROPERTIES | |
| Reuvers et al. | Glycolipid intermediates involved in the transfer of N-acetylglucosamine to endogenous proteins in a yeast membrane preparation | |
| RU2122740C1 (ru) | Способ определения мочевины в биологических жидкостях и набор реактивов для его осуществления | |
| EP0275398B1 (en) | Reagent for the determination of chloride ions | |
| Butler | [89] Phosphodiesterase from snake venom | |
| Vretblad et al. | Preparation and properties of an immobilized Barley β‐amylase | |
| Barabino et al. | Coupled reactions of immobilized enzymes and immobilized substrates: clinical application as exemplified by amylase assay. | |
| US3759794A (en) | Method for determination of amylase activity | |
| Georges | Determination of ammonia and urea in urine and of urea in blood by use of an ammonia-selective electrode. | |
| Ho et al. | Enzymatic preparation of the (+), L-diastereoisomer of [methenyl-14C]-N5, N-10-methenyltetrahydrofolic acid | |
| US5229270A (en) | Reagent for the determination of chlorine ion | |
| CN100554939C (zh) | 血清钠离子酶法测定试剂及方法 | |
| Guo et al. | Homogeneous enzyme-based binding assay for studying glycosaminoglycan interactions with macromolecules and peptides | |
| EP0166505A2 (en) | Isolation and quantitation of alkaline phosphatase | |
| Malvoisin et al. | Gamma Glutamyl Transferase | |
| Calder et al. | Regulation of lysosomal glycogen metabolism: studies of the actions of mammalian acid α-glucosidases | |
| Lukomskaya et al. | Use of β-maltosides (p-nitrophenyl-β-d-maltoside, 2-chloro-4-nitrophenyl-β-d-maltoside and 4-methylumbelliferyl-β-d-maltoside) as substrates for the assay of neutral α-glucosidase from human kidney and urine | |
| Bais | Evaluation of an amylase method utilizing p-nitrophenyl glucosides as substrates | |
| JPS63214193A (ja) | ６−グルコシルマルトオリゴ糖誘導体の製法およびそれを用いるα−アミラ−ゼ活性測定法 | |
| US4395487A (en) | Method for assay of α-amylase activity | |
| la Marca | Silvia Funghini, Sabrina Malvagia, Giulia Polo |