CS265305B1 - Hybridómy produkujúce monoklonálne protilátky rozlišujúce virusy komplexu kliešfovej encefalitidy - Google Patents
Hybridómy produkujúce monoklonálne protilátky rozlišujúce virusy komplexu kliešfovej encefalitidy Download PDFInfo
- Publication number
- CS265305B1 CS265305B1 CS855798A CS579885A CS265305B1 CS 265305 B1 CS265305 B1 CS 265305B1 CS 855798 A CS855798 A CS 855798A CS 579885 A CS579885 A CS 579885A CS 265305 B1 CS265305 B1 CS 265305B1
- Authority
- CS
- Czechoslovakia
- Prior art keywords
- monoclonal antibodies
- acid
- ken
- virus
- nek
- Prior art date
Links
Landscapes
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Očelom riešenia je příprava idiotypovo homogénnych protilátok rozlišujúcich virusy komplexu kliešťovej encefalitidy. Uvedeného účelu sa dosiahne použitím myších lymfocytárnych hybridómov KEN-10-2-1 a/alebo NEK-10-2-2, produkujúcich protivírusové monoklonálne protilátky. Myší lymfocytárny hybridom má použitie v medicíně.
Description
Vynález sa týká hybridómov produkujúcich monoklonálne protilátky rozlišujúce virusy komplexu kliešťovej encefalitidy.
Doposial používané Specifické polyklonálne protilátky neboli schopné navzájom rozlišit virusy kliešťovej encefalitidy v serologiokých technikách. Metody afinitnej chromatografie so Specifickými polyklonálnymi protilátkami boli pre diferenciáoiu virusov kliešťovej encefalitidy nedostačujúoe. Taktiež monoklonálne protilátky z myšieho lymfocytárneho hybridómu, označeného pracovným názvom KEMA, produkované do mikrokultivačného prostredia a do asoitickýoh tekutin, neboli schopné nevzájom rozlíšiť virusy kliešťovej encefalitidy.
Hybridóm KEN-10-2-1 a NEK-10-2-2 bol připravený známým spósobom, klonováním skupiny hybridómov v mSkkom agare, vzniklých fúziou buniek myšej 2-amino-6-hydroxy-8-azopurin (8-azaguanin) rezistentnej myelómovej linie označenej NSO a slezinových buniek inbrednej linie myší BALB/c, imunizovaných vírusom kliešťovej encefalitidy (kmeň 4 072) , získaným od chorého člověka v r. 1966 vo Sverdlovskej oblasti, resp. vírusom kliešťovej encefalitidy (kmeň skalica) ktorý bol získaný v ČSSR v roku 1974 z hrdziaka hórneho (Clethrionomys glareolus) £g. Kóhler,
C. Milstein: Nátuře 256, 495 (1975); G. Galfre, S. C. Howe, C. Milstein, G. W. Butcher, J.
C. Howard: Nátuře 286, 550 (1977); M. Grešíková, M. Mroiak, V. Brtek, M. Sekeyová: 2. Internát. Arbeitskolloquium Ober Naturherde von Infektionskrankheiten in Zentraleuropa, Graz, 105, (1976)J.
Uvedené nevýhody v podstatnej miere odstraňuje vynález ktorého podstata spočívá v myšom lymfocytámom hybridóme KEN-10-2-1, produkujúcom monoklonálne protilátky IgG a/alebo v myšom lymfocytárnom hybridóme NEK-10-2-2 produkujúcom monoklonálne protilátky triedy IgG, ktoré sú schopné rozlíšiť virusy komplexu kliešťovej encefalitidy. Tieto hybridómy sú uložené vo Virologickom ústave SAC, Mlýnská dolina 1, 817 83 Bratislava.
Výhodou hybridómu KEN-10-2-1 je, že produkuje idiotypovo homogénne protilátky, ktoré na rozdiel od specifických polyklonálnych a monoklonálnych protilátok produkovaných myšim lymfocytárnym hybridómom KEMA, rozlíšia virus kliešťovej encefalitidy od iných virusov tohoto komplexu. Výhodou NEK-10-2-2 je, že produkuje izotypovo homogénne protilátky, tzv. monoklonálne protilátky, ktoré na rozdiel od špecifiokých polyklonálnych protilátok a monoklonálnych protilátok produkovaných myším lymfocytárnym hybridómom KEMA, rozlišujú virus Powassan od ostatných členov komplexu virusov kliešťovej encefalitidy. Jednobunkové lymfocytárne hybridómy KEN-10-2-1 a NEK-10-2-2 rastů in vivo v peritoneálnej dutině BALB/c myši za súčasnej tvorby asoites. Rastů aj in vitro v kultivačných médiach vhodných pre živočišné buňky. Taktiež po zmrazení a uložení v tekutom dusíku a po opHtovnom rozmražení si zachovávajú svoju schopnost produkovat protivírusové monoklonálne protilátky. Na rozdiel od konvenčných antisér neobsahujú nevhodné, balastné protilátky. Monoklonálne protilátky si pri vhodnom uskladnění, v závislosti od ich póvodu, zachovávajú aktivitu minimálně 24 mesiacov.
Příklad 1
Pre přípravu hybridněj bunkovej linie sa použije 2.10 buniek myšej 2-amino-6-hydroxy-8-azapurín (8-azaguanin) rezistentnej myelómovej bunkovej linie, ktorá sa pomocou 1 ml 50 % □
hmot. polyetylénglykolu spoja s 1.10 slezinových lymfoidných buniek myši imunizovanéj vírusom Ruskej jarno-letnej encefalitidy (kmeň 4 072) a myši imunizovanéj vírusom kliešťovej encefalitidy (kmeň Skalica,. V priebehu 14 dní vyrastú pod selektivnym tlakom kyseliny 4-amino-pteroylglutámovej (aminopterínu) hybridně buňkové linie, ktoré produkujú monoklonálne protilátky proti vírusom Ruskej jarno-letnej encefalitidy a kliešťovej encefalitidy. Tieto buňky sa potom klónujú tak, že sa zmieša 0,5 % hmot. agaru s 5.10® až 10.10® myších slezinových buniek v médiu RPMI 1 640, ktoré obsahuje 100 mg.ml-1 tetrahydrátu dusičnanu vápenatého,
-1 —1 —1 2 000 mg.ml D-glukózy, 100 mg.ml heptahydrátu síranu horečnatého, 400 mg.ml chloridu draselného, 1 512 mg.ml-·1 hydrogenfosforečnanu sodného, 6 000 mg.ml 1 monohydrátu dihydrogenfosforečnanu sodného, 100 mg.ml-1 kyseliny 2-amino-5-guanidínvalérovej (argininu), 50 mg.ml-1 kyseliny 2-aminosukcíne.move j (asparaginu) , 20 mg.ml-1 kyseliny 2-aminojantárovej (kyseliny asparágovej) , 50 mg.ml-'1' kyseliny 3' , 3'-ditiobis/2-aminopropánovej) (cystínu) , 20 mg.ml 1 kyseliny 2-aminoglutárovej (kyseliny glutamovej), 300 mg.ml^ kyseliny 2-aminoglutarámovej (glutamínu), 1 mg.ml kyseliny 2-aminoglutaraminyl-2-merkaptopropionyl-aminooctovej (glutationu t. j. glutaminyl-cysteinyl-glycínu), 10 mg.ml kyseliny aminooctovej (glycínu), mg.ml kyseliny alfa-aminol-imidazol-4-propiónovej fhistidínu), 50 mg.ml^ kyseliny 2-amino-3-metylvalérovej (izoleucínu), 50 mg.ml kyseliny 2-amino-4-metylvalérovej (leucínu),
-1 -1 mg.ml kyseliny 2,6-diammohexánove j (lyzínu), 15 mg.ml kyseliny 2-amino-4-/metyltio/-maslovej (metionínu), 15 mg.ml kyseliny 2-amino-3-fenylpropiónovej (fenylalanínu), mg.ml 1 kyseliny 2-pyrolidínkarboxylovej (prolinu), 30 mg.ml-1 kyseliny 2-amino-3-hydroxypropiónovej (šeřinu), 20 mg.ml 1 kyseliny 2-amino-3-hydroxymaslovej (treonínu), 5 mg.ml-1 kyseliny 2-amino-3-/3-indolyl/propiónovej (tryptofánu), 20 mg.ml kyseliny 2-amino-3-/4-hydroxyfenyl/-propiónovej (tyrozínu), 20 mg.ml kyseliny 2-amino-3-metylmaslovej (valínu), — 1 r~ —♦ — 1
0,2 mg.ml kyseliny 5-/2-oxoimidazolíno /_4,5-cj tiol-2-yl/pentánove j (biotínu) , 0,005 mg.ml kobalt alfa^alfa-/5,6-dimetylbenzimidazolylJ-kobalt beta-kyanokobamid (vitamínu B.„),
0,250 mg.ml D-N/2,4-dihydroxy-3,3-dimetylbutyryl/-beta-2-aminopropionát vápenatý (pantotenát vápenatý), 3 mg.ml 2-hydroxyetyltrimetylamóniumchlorid (cholínchlorid), 1 mg.ml kyseliny N-/2-amino-4-hydroxypteridín-6-ylmetyl/-p-aminobenzoovej (kyseliny listovej), 35 mg.ml 1 /1,2,3,5/4,6/cyklohexándexol/ (myoinozitolu), 1 mg.ml pyridin-3-karboxyamidu (nikotinamidu),
-1 -1 1 mg.ml kyseliny 4-aminobenzoovej (kyseliny p-aminobenzoovej), 1 mg.ml 3-hydroxy-4,5-bis/hydroxymetyl/-2-metylpyridínchloridu (pyridoxínchloridu), 0,2 mg.ml 1 7,8-dimetyl-10-/1'-D-ribityl/izoaloxazínu (riboflavínu), 1 mg.ml 1 3-/4-amino-2-metyl-pyrimidyl-5-metyl/-5-/2-hydroxyetyl/-4-metyltiazolu (tiamínchloridu), 2 000 mg.ml hydrogenuhličitanu sodného doplnenom s 2 mmol kyseliny 2-a-minoglutarámovej (glutamínu), 5.10 mol 2-merkaptoetanolu,
100 jug.ml 0-alfa-L-2-deoxy-2-/metylamino/-glukopyranozyl-/l—»2/-0-alfa-L-deoxy-3-C-formyllyxofuranozyl-/l—M/-1,3-deoxy-l,3-diaguanidoscyloinozitsulfátu (streptomycínsulfátu),
100 jednotiek na mililiter kyseliny 6-/N-fenylacetoamido/-penicilánovej (penicilínu G), mmol kyseliny N-2-hydroxyetylpiperazín-N'-2-etánsulfónovej (Hepesu) sa rozpustí v trikrát redestilovanej vodě a doplní trikrát redestilovanou vodou na objem 900 ml roztoku, ktorý sa doplní 100 ml normálneho inaktivovaného koňského séra. Výsledné pH takto připraveného kultivačného média je 7,2. Po zatuhnutí agaru sa na vrstvu 0,5 % agaru nanesie 100 hybridných buniek v 0,25 % hmot. agare. Po 10 dňoch vyrastú kolonie, ktoré sa pomnožia v médiu RPMI -5
640 doplnenom s 2 mmol kyseliny 2-aminoglutarámovej (glutamínu), 5.10 mol 2-merkaptoetanolu, 100 /ug.ml-1 0-alfa-L-2-deoxy-2-/metylamino/-glukopyranozyl-/l-92/-0-alfa-L-deoxy-3-C-formyllyxofuranozyl-/l-54/-l,3-deoxy-l, 3-diguanidóscyloinozitosulfátu (streptomycínsulfátu), 100 jednotiek na milimiter kyseliny 6-/N-fenylacetamido/-penicilánovej (penicilínu G), 1 mmol kyseliny N-2-hydroxyetylpiperazín-N'-2-etánsulfónovej (Hepesu) sa rozpustí v trikrát redestilovanej vodě a doplní redestilovanou vodou na objem 900 ml roztoku, ktorý sa doplní 100 ml normálneho inaktivovaného koňského séra. Výsledné pH takto připraveného kultivačného média je 7,2. V 1 ml kultivačného média sa nachádza 350 až 700 tisíc hybridómov KEN a NEK produkujúcich 10 až 100 jug monoklonálnej IgG protilátky.
Příklad 2
Postupuje sa ako v příklade 1 s tým rozdielom, že sa v kultivačnom médiu použije nepredtestované běžné telacie fetálne sirům. Do takto připraveného kultivačného prostredia přenesené buňky po fúzii nie sú schopné rásť a produkovat monoklonálne protilátky.
Myší lymfocytárny hybridóm KEN-10-2-1 a NEK-10-2-2 sa kultivuje pri teplote 37 °C. Stredný generačný čas je 22 h, modálny počet chromózomov je 24 mesiacov po fúzii 83 (KEN-10-2-1) resp. 92 (NEK-10-2-2) chromozómov. Produkované monoklonálne protilátky sú myšie imunoglobulíny triedy IgG.
Monoklonálne protilátky produkované myšími lymfocytárnymi hybridómami KEN-10-2-1 a NEK-10-2-2móžu byt využité v medicíně k bezpečnej virologickej diagnostike vírusov komplexu kliešťovej encefalitidy.
V tabulke 1 sa uvádza aktivita monoklonálnych protilátok KEN a NEK v reakcii nepriamej imunofluorescencie s vírusom klieŠťovej encefalitidy a dalšími flavivírusmi. V tabulke 2 sa uvádza reakcia monoklonálnej protilátky KEN v teste nepriamej imunofluorescencie s vírusmi skupiny klieŠťovej encefalitidy,. V tabulke 3 sa uvádza reakcia monoklonálnej protilátky NEK-10-2-2 v reakcii vázby komplementu a imunofluorescencie s vírusmi komplexu klieŠťovej encefalitidy .
Tabulkal
Aktivita monoklonálnych pr'otilátok KEN a NEK v reakcii nepriamej imunof luorescencie s vírusom klieŠťovej encefalitidy a dalšími flavivírusmi
| Označenie MP | Titre protilátok s vírusmi | ||
| KE | JE YF DENGUE 1 DENGUE 2 | VEE |
| KEN-KM-1 | 32 | Z 2 | 4 2 | 4 2 | 42 | Z 2 |
| KEN-KM-2 | 16 | 4 2 | 4 2 | 4 2 | 4 2 | 4. 2 |
| KEN-KM-3 | 64 | < 2 | < 2 | 4 2 | 4 2 | 4. 2 |
| KEN-AT-1 | 10 240 | 410 | 410 | 410 | 410 | Z10 |
| KEN-AT-2 | 2 560 | 4110 | 410 | < 10 | 410 | 4 10 |
| KEN-AT-3 | 640 | z 10 | 410 | < 10 | 410 | 4 10 |
| NEK-KM-1 | 32 | z 2 | 4 2 | C 2 | 4 2 | 4 2 |
| NEK-KM-2 | 32 | Z 2 | Z 2 | Z 2 | 2 | 4 2 |
| NEK-KM-3 | 64 | Z 2 | Z 2 | 4 2 | Z 2 | < 2 |
| NEK-AT-1 | 10 240 | 410 | 410 | Z10 | <10 | 4 10 |
| NEK-AT-2 | 5 120 | 4 10 | 4 10 | 410 | 4 10 | 4 10 |
| NEK-AT-3 | 640 | < 10 | 4 10 | 4 10 | 4 10 | 4-10 |
| Kontroly | ||||||
| IAT proti virusu KE | 320 | Z 10 | 4 10 | 410 | 4 10 | 410 |
| IAT proti virusu YF | Z 10 | 4 10’ | 160 | 4 10 | 4 10 | Zlo |
| IAT proti virusu jE | Z 10 | 320 | 4 20 | 4 20 | 4 20 | 4 10 |
| IAT proti vírusom DENGUE | Z. 10 | 40 | 40 | 320 | 320 | Z 10 |
| IAT hybridómu MAK-VEE | Z 10 | <10 | < 10 | 4 10 | z. 10 | 2 560 |
Vysvětlivky:
KM - kultivačně médium
AT - ascitická tekutina
IAT - imúnna ascitická tekutina
MP - monoklonálna protilátka
KE - virus kliešťovej encefalitidy
JE - virus japonskej encefalitidy
YF - virus žltej zimnice
VEE - virus venezuelskej encefalitidy kóm
PK - polyklonálne protilátky
Tabulka 2
Reakcia PM KEN v teste nepriamej imunofluorescencie s vírusmi skupiny klieŠťovej encefa litídy (KE).
Tabulka 2 pokračování
Titer MP KEN
KM AT Polyklonálna AT proti virusu KE
| KE kmeň Sofin | 32 | 2 560 | 320 |
| KE kmeň 4 072 | 64 | 2 560 | 320 |
| KE kmeň Absetarov | 32 | 1 280 | 160 |
| Omská hemoragická horúčka | 8 | 160 | 320 |
| Louping-ill | 8 | 320 | 160 |
| Powassan | Z2 | Z10 | 40 |
| Virus choroby Kyasanúrskeho lesa | 8 | 160 | 320 |
| Skalica | έ 2 | Z 10 | 80 |
| Langat TR-21 | Z 2 | Z 10 | 320 |
| Negishi | Z 2 | 160 | 80 |
Odaje v tabulke poukazujú na to, že MP KEN plné odlišujú virus KE (kmeň Sofin, 4 072, Absetarov) od virusov Powassan, Langat TR-21 a kmeňa Skalica. S druhými virusmi komplexu KE - vírusom Omskej hemoragickej horúčky, vírusom Louping-ill, chroby Kyasanúrskeho lesa a Negishi reagujú MP v porovnaní s homológnymi protilátkami 4 až 8krát slabšie; MP NEK reaguj so všetkými virusmi komplexu KE, okrem virusu Powassan. Vysvětlivky sú uvedené v tabulke č. 1
Tabulka 3
Reakcia MP NEK-10-2-2 v RVK a IV s virusmi komplexu kliešťovej encefalitidy
| Virusy | Titre protilátok v AT | ||
| Kmene | IF | RVK | specifické PH pre virus KE (RVK) |
| KE kmeň Sofin | 2 560 | 1 280 | 320 |
| KE kmeň 4 072 | 2 560 | 2 650 | 320 |
| KE kmeň Absetarov | 2 560 | 2 560 | 160 |
| Skalica | 1 280 | 640 | 320 |
| Omská hemoragická horúčka | 280 | 160 | 320 |
| Louping-ill | 640 | 160 | 160 |
| Powassan | Z 10 | Z.10 | 40 |
| Virus choroby Kyasanúrskeho | 640 | 320 | - |
| lesa | |||
| Langat TR-21 | 320 | 320 | 160 |
| Negishi | 640 | 160 | 160 |
Vysvětlivky:
IF - imunofluorescencia
RVK - rakcia vazby komplementu (Ďalšie vysvětlivky sú uvedené v tabulke č. 1).
Claims (1)
- Myšie lymfocytárne hybridómy KEN-10-2-1 a/alebo NEK 10-2-2, produkujúce monoklonálne protilátky triedy IgG, rozlišujúce virusy komplexu kliešťovej encefalitidy.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS855798A CS265305B1 (sk) | 1985-08-09 | 1985-08-09 | Hybridómy produkujúce monoklonálne protilátky rozlišujúce virusy komplexu kliešfovej encefalitidy |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CS855798A CS265305B1 (sk) | 1985-08-09 | 1985-08-09 | Hybridómy produkujúce monoklonálne protilátky rozlišujúce virusy komplexu kliešfovej encefalitidy |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CS579885A1 CS579885A1 (en) | 1989-02-10 |
| CS265305B1 true CS265305B1 (sk) | 1989-10-13 |
Family
ID=5403566
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CS855798A CS265305B1 (sk) | 1985-08-09 | 1985-08-09 | Hybridómy produkujúce monoklonálne protilátky rozlišujúce virusy komplexu kliešfovej encefalitidy |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CS (1) | CS265305B1 (sk) |
-
1985
- 1985-08-09 CS CS855798A patent/CS265305B1/sk unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CS579885A1 (en) | 1989-02-10 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US5498499A (en) | Peptides and antibodies that inhibit platelet adhesion | |
| AU645770B2 (en) | Peptides and antibodies that inhibit integrin-ligand binding | |
| EP0550528A1 (en) | Active site of interleukin-8: polypeptide analogs and antibodies | |
| EP0436660A1 (en) | INTEGRIN-LIGAND BINDING PEPTIDES AND ANTIBODIES. | |
| EP0038642B1 (en) | A monoclonal antibody against hepatitis b and its production, a hybridoma producing the monoclonal antibody and compositions containing it, the propagation of the hybridoma and the monoclonal antibody for use as an antiviral agent against hepatitus b and in isolating hepatitus b surface antigen from a sample | |
| EP0014519A2 (en) | Cell lines, process for preparing them and process for producing antibodies | |
| JP2019193643A (ja) | 細胞培養培地及び抗体を産生する方法 | |
| EP0525005A1 (en) | METHOD FOR INHIBITING THE GROWTH OF CELLS AND COMPOSITIONS USEFUL IN THIS PROCESS. | |
| Naessens et al. | De novo expression of T cell markers on Theileria parva-transformed lymphoblasts in cattle. | |
| Borrebaeek et al. | Human monoclonal antibodies produced from L-leucine methyl ester-treated and in vitro immunized peripheral blood lymphocytes | |
| CS265305B1 (sk) | Hybridómy produkujúce monoklonálne protilátky rozlišujúce virusy komplexu kliešfovej encefalitidy | |
| Hadas et al. | Production of monoclonal antibodies: The effect of hybridoma concentration on the yield of antibody-producing clones | |
| KR101318498B1 (ko) | 재조합 단백질의 생산성 향상을 위한 배양용 배지 첨가용 조성물 | |
| DK165955B (da) | Monoklonale antistoffer mod atriale, natriuretiske peptider hos pattedyr, hybridomcellelinier, der producerer antistofferne, fremgangsmaade til fremstilling af antistofferne, fremgangsmaade til fremstilling af hybridomcellerne og anvendelse af antistofferne | |
| Schultz et al. | Production and characterization of monoclonal antibody against infectious hematopoietic necrosis virus | |
| Donohoe et al. | Making and using ‘conventional'mouse monoclonal antibodies | |
| CS259233B1 (sk) | Myší lymfocytámy hybridóm produkujúci monoklonálnu protilátku proti MSBI íymfoblastoidnej bunkovej linii | |
| CS259231B1 (sk) | Myši lymfocytámy hybridóm produkujúci monoklonálnu protilátku inhibujúcu hemaglutinačnú aktivitu virusu Newcastleskej choroby | |
| CS259230B1 (sk) | Myší lymfocytámy hybridóm produkujúci monoklonálne protilátky proti virusu Newcastleskej choroby | |
| KR20230124971A (ko) | 세포 배양 중 분비된 재조합 발현 단백질에서 시스테인잔기의 산화 수준을 감소시키는 방법 | |
| CS260264B1 (sk) | Myší lymfocytárny hybridom produkujúci monoklonálne protilátky neutralitujúce virus Newcastleskej choroby | |
| CS276567B6 (sk) | Myší hybridóm IFNA2-N7 produkujúci monoklonálnu protilátku | |
| JP2019526265A (ja) | 組換えタンパク質の生産プロファイルを改変するための方法 | |
| CS276203B6 (sk) | Myší hybridóm IFNA2-N10 produkujúci monoklonálnu protilátku viažúcu ludský interferon alfa 2 | |
| RU2070927C1 (ru) | Штамм гибридных культивируемых клеток животных mus musculus l., используемый для получения моноклонального антитела к гликопротеинам iiв-iiiа тромбоцитов человека |