CS269049B1

CS269049B1 - Myší lymfocytárny hybridám VU 315/4

Info

Publication number: CS269049B1
Application number: CS888954A
Authority: CS
Inventors: Eva Rndr Csc Vareckova; Tatiana Rndr Betakova; Pavol Rndr Csc Ragac; Marta Rndr Miklosova
Original assignee: Vareckova Eva; Tatiana Rndr Betakova; Ragac Pavol; Miklosova Marta
Priority date: 1988-12-29
Filing date: 1988-12-29
Publication date: 1990-04-11
Also published as: CS895488A1

Description

CS 269 049 Bl 1

Vynález aa týká myšieho lymfocytárneho hybridámu, t.J. hybridného jedno-buňkového organizau, zostrojeného buňkovou fúziou myšej myelámovej linie Sp2/0a myšej slezinovej buňky, produkujúceho protilátku proti virusu chřipky A,

Protilátky voči proteinem virusu chřipky sa doteraz připravujú tak, ževirus resp. jeho izolované proteiny sa opakované injikujú ako antigén pokus-ným zvieratáp nejčastejšie králikom, myšiam, alebo fretkám. Sérum takto imunizo-vaných zvierat, odobraté po určitej době posďbenia antigénu, slúži ako zdrojprotilátek, používaných predovšetkým pře kvantitativnu alebo kvalitativnu analý-zu antigénu - virusu chřipky - vo výskume a v imunodiagnostickej praxi.

Tento postup, nazývaný konvenčnou imunizáciou, mé niekolko nevýhod, V séreimunizovaných zvierat sa nachádza heterogénna zmes protllátok, ktorých spektrumJe v každom jednotlivom organizme rožne a neopakovatelné. Organizmus spravidlavytvoří okrem protilátek voči žiadanému antigénu i protilátky voči nečistotámantigánového preparátu, ktoré Je potřebná zo sér odstraňovat vysycovanim, Výrobněšarže konvenčných sér sa preto dajú fažko Standardizovat a bývejú v širokom roz-medzi kvality. Pre výrobu každej šarže třeba připravit čistý imunizačný antigéna ďalšie antigény na vysýtenie balastných protllátok proti nečistotám.

Uvedené nedostatky vyššie zmieneného a dosial používaného postupu odpadní,ak je k dispozícii hybridám, produkujúci monoklonálnu protilátku proti nukleopro-teinu virusu chřipky A, uložený v zbierke hybridámov Virologického ústavu SAVv Bratislavě, Mlýnská dolina 1. pod označením VU 315/4,

Uvedený hybridám bol získaný sposobom známým z odbornej literatúry (KdňlerG,, Milstein. C,: Continuous cultures of fused cells secreting antibody of pre-defined specificity. Nátuře, 256, (1975), 495: Gerhard. W.: Fusion Of cells insuspension and autgrowth of hybrids in conditloned medium, In; Monoclonal antibo-dies, Hybrids; A New Oimension in.Biological Analyses. R. H. Kennet, T.3. McKearn, K.B. Bechtol, eds., New York, Plenům Press (1980), 370.) klonovanim súboru hy-bridných buniek po fúzii myšej myelámovej linie 3p2/0 a buniek, získaných zo sle-ziny myši kmeňa BALB/c, imunizovaných virusom chřipky A/Dunedin/4/73 (H3N2). Výhodou hybridámu podlá vynálezu je, že produkuje hémogénnu protilátku,tzv, monoklonálnu protilátku, ktorá je schopná Specificky reagovat s nukleoprotei-nom chřipkového virusu typu A, Hybridám VU 315/4 možno kultivovat in vitrov mádiách vhodných pre živočišné buňky, alebo in vivo v peritoneálnej dutině myšíkmeňa BALB/c, 2 konzerv, uchovaných v kvapalnom dusíku, možno zahájit produkciuprotilátky bez áaíšej imunizácie antigénom. Přiklad

Pre účel pomnoženia hybridámových buniek in vivo sa aplikovalo 5 x 106 bu-niek do peritoneálnej dutiny myši. Pre lepšie uchytenie aplikovaných buniek bolamyš 15 dni před přenosem buniek hybridámu premedikovaná parafinovým olejom(0,5 ml intraperitoneálne), Po 20 dňoch rastu hybridámu v peritoneálnej dutině bolamyš zabitá a vyprodukovaná ascitická tekutina odobratá, Celkom sa získalo 8 mlascitickej tekutiny obsahujúcej 5 mg/ml imunoglobulínu. Ascitická tekutina, obsa-hujíce prádukt hybridámu VU 315/4, vykazovala v radioimunoanalytickom taste Spe-cifická vazbu k virusom chřipky typu A (napr. subtyp Hl, H2, H3), ala nie vočitypu B, a v radioimunoprecipitačnom teste sa viazala na nukleoprotein virusu chřip-ky A.

Claims

2 CS 269 049 Bl In vitro restu buňky hybridúmu ako polosuspenzná kultíra. Mají tvar (gula»tý) a velkost charakteristické pra myelúmové buňky, obsahují fúzované buňkovéJadrá, sú aneuploidné, Buňky hybridúmu VU 3XS/4 mají ultraštruktírny obraz typic»kých myelůmových buniek, kde pravažajícou organelou sú volné a na neobrány viaza-né polyribozůmy. Základným kultivačným médiom Je Dulbeccova nodifikécia Eaglov-ho minimálneho aaanciálneho média (Dulbacco, R. a Fraeman,G., Virology 8 (1959),396). Toto nédiun, označované ako DMEM, Je pře kultivéciu hybridúmu doplněnégentamycinom a inaktivovaným prekolostrálnym aérom (10%. Bioveta, Ivanovice naHané). Hybridům Je kultivovaný pri 37 °C - Jeho středná generačná doba Je pri-bllžne 24 h. Produkovaná protilátka Je monoklonálny imunoglobulin podtriedyigGl. Hybridům VU 315/4 sa nože priemyselne využíval ako zdroj protilátky protinukleoproteinu (nukleokapsidovému proteinu) virusu chřipky A v metůdach analytických,preparativnych alebo diagnostických a to; 1) pri kvantitativnon a kvalitativnom vyhodnocováni pritomnosti nukleoproteinuvirusu chřipky A vo výšetrovanom materiál! (napr. klinické vzorky), 2) pri 'vyhodnocováni epidemiologickej situácie, 3) pri purifikácii nukleoproteinu virusu chřipky A, 4) ako zdroj protilátky jedinej podtriedy (IgG 1) pre pripravu sér Specifických , pre uvedení podtriedu. PREDMET VYNALEZU Myši lymfocytárny hybridům VU 315/4, produkujíc! monoklonálnu protilátkupodtriedy IgG 1 proti nukleoproteinu virusu chřipky A,