CS269050B1 - Myši lymfocytárny hybridům VU VIH7 - Google Patents

Abstract

Riešenie sa týká myšieho lymfocy tárneho hybridůmu, produkujúceho protilátku podtriedy IgG 2a proti nukleoproteinu virusu chřipky A. Hybridům Je uložený v zbierke hybrídůmov Virologického ústavu SAV v Bratislavě pod označením VU VIH7

Description

Vynález sa týká myšieho lymfocytárneho hybridámu, t. j. hybridného jednobuňkového organizmu,·zostrojeného buňkovou fúziou myšej myelomovej linie Sp2/0 a myšej slezinovej buňky, produkujúceho protilátku proti virusu chřipky A,

Protilátky voči proteinem virusu chřipky sa doteraz pripravojú tak, že virus resp, jeho izolované proteiny sa opakované injikujú ako antigén pokusným zvierátám, najčastéjšie králikom, mySiam, alebo fretkám. Sérum takto imunizovaných zvierat, odobrste po určitej době posobenia antigénu, slúží ako zdroj protilátek, používaných predošetkým pre kvantitatívnu alebo kvalitatívnu analýzu antigénu virusu chřipky - vo výskume a v imunodiagnostickej praxi. í

Tento postup, nszývaný konvenčnou imunizáciou, má niekoíko nevýhod, V sére imunizovaných zvierat sa nechádza heterogenně zmes protilátek, kterých spektrůn je v každom jednotlivom organizme roine a neopakovatelné. Organizmus spravidla vytvoří okrem protilátok voči žiadanému antigénu i protilátky voči nečistotám entigenového preparátu, ktoré je potřebné zo sér odstranovaf vysycovaním. Výrobně šarže konvenčných sér sa preto dajú íažko Standardizoval a bývaje v širokom rozmedzi kvality. Pre výrobu každej šarže třeba připravil čistý imunizačný antigén a 3alšíe antigény na vysýtenie balastných protilětok proti nečistotám.

Uvedené nedostatky vyššie zmieneného a doslal používaného postupu odpadnu, ak je k dispozici! hybridám, produkujúci monoklonálnu protilátku proti nukleoproteinu virusu chřipky A, uložený v zbierke hybridámov Virologického ústavu SAV v Bratislavě, Mlýnská dolina 1, pod označením VUVIH7,

Uvedený hybridovi bol získaný spísobom známým z odbornej literatury (Kohler, G., Milstein, C. : Continuous cultures of fused calls secreting antibody of predefined specificity. Nature, 256, (1975), 495i Gerhard,W,: Fusion of cells in suspension and outgrowth of hybrids in conditioned medium. In; Monoclonal antibodies. Hybrids: A New Dimension in Biological Analyses. R, H. Kennet, T.O. McKearn, Κ.Θ. Bechtol, eds., Nex York, Plenum Press (1980), 370.) klonováním súboru hybridných buniek · po fúzii myšej myelomovej linie Sp2/0 s buniek, získaných zo sleziny myši kmeř.s BALB/c. imunizovaných víruson chřipky A/Dunedin/4/73 (H3N2),

Výhodou hybridámu podlá vynalezu je, ze produkuje homogenní protilátku, tzv, monoklonálnu protilátku, ktorá je schopná specificky reagoval s nukleoproteinom chřipkového virusu typu A. Hybridóm VU VIH7 možno kultivovef in vitro v médiach vhodných pre živočišné buňky, alebo in vivo v peritoneálnej dutině myši kmeřía BALB/c, Z konzerv, uchovaných v kvapalnom dusíku, možno zshájif produkciu protilátky bez dslšej imunizěcie antigénom.

Příklad

Pre účel pomnoženia hybridómových buniek in vivo sa aplikovalo 5 x 106 buniek do peritoneálnej dutiny myši. Pre lepšie uchytenie aplikovaných buniek bda myš

CS 269 050 βΐ dní před pranoson buniek hybridůmu premedikovaná parafínovým olejom (0,5 ml intraperitoneálne). Po 20 dJíoch rastu hybridůmu v peritoneálnaj dutině bola myš zabiti a vyprodukované ascitická tekutina odobratá. CaIkon sa získalo 7 ml ascitickej tekutiny obsahujucej 4 mg/ml imunoglobulfnu. Ascitické tekutina, obsahujúca produkt hybridůmu VU 315/4, vykazovala v radioimunoanalytickom teste spedifickú vazbu k virusem chřipky typu A (napr. eubtyp Hl, K2, H3), ale nie voči typu B, e v radioimunoprecipitacnom teste se viazala na nukleoproteín virusu chřipky A.

In vitro rastů buňky hybridůmu ako polosuspenzná kultura. Majů tvar (guíatý) a velkost charakteristické pra myalomové.buňky, obsahujú fúzovaná buňkové jadrá, sú aneuploidné, Bunkýhybridůmu W VIH7 májů ultraštrukturný obraz typických myelomových buniek, kde převažujúcou organalou sú volné a na membrány viazané polyribozomy. Základným kultivačnym médiom je Oulbeccova modifikácia Eaglovho minimálneho esenciálnsho média (Dulbecco.R. a Freeman,G., Virology Θ (1959), 396). Toto médium, označované sko DMEM, je pre kultiváciu hybridúmu doplněné gentamycínom a inaktivovaným prekolostrálnym serom (10 %, Biovata, Ivanovice na Hané), Hybridům je kultivovaný při 37 °C - jeho středná generačná doba je přibližné 24 h. Produkovaná protilátka je moooklonálny imunoglobulín podtriedy IgG 2a.

Hybridům VU VIH7 se može priemyselna využívat ako zdroj protilátky proti nukleoproteinu (nukleokapsidovému proteinu) virusu chřipky A v metůdach analytických, preparatívnych alebo diagnostických a to;

1. pri kvantitatívnom a kvalitatívnom vyhodnocovaní přítomnosti nukleoproteinu virusů chřipky A vo vyšetřováno® materiál! (napr,.klinické vzorky),

2. pri vyhodnocovaní apidemiologickej situacie,

3. pri purifikácii nukleoproteinu virusu chřipky A,

4, ako zdroj protilátky jedinej podtriedy (IgG 2a) pra přípravu sér Specifických pre uvedenú podtriedu.

Claims (1)

1. PŘEĎME T VYNÁLEZU

   Myší lymfocytárny hybrídom VU VIH7, produkujúci monoklonálnu podtriedy IgG 2a proti nukleoproteinu virusu chřipky A.

   protilátku