CS270819B1 - Method of net-like acidic polysaccharides preparation - Google Patents

Method of net-like acidic polysaccharides preparation Download PDF

Info

Publication number
CS270819B1
CS270819B1 CS881656A CS165688A CS270819B1 CS 270819 B1 CS270819 B1 CS 270819B1 CS 881656 A CS881656 A CS 881656A CS 165688 A CS165688 A CS 165688A CS 270819 B1 CS270819 B1 CS 270819B1
Authority
CS
Czechoslovakia
Prior art keywords
acid
mol
bis
ether
moles
Prior art date
Application number
CS881656A
Other languages
Czech (cs)
English (en)
Other versions
CS165688A1 (en
Inventor
Jiri Ing Csc Zemek
Eva Ing Zelenayova
Original Assignee
Zemek Jiri
Zelenayova Eva
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Zemek Jiri, Zelenayova Eva filed Critical Zemek Jiri
Priority to CS881656A priority Critical patent/CS270819B1/cs
Publication of CS165688A1 publication Critical patent/CS165688A1/cs
Publication of CS270819B1 publication Critical patent/CS270819B1/cs

Links

Landscapes

  • Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)

Description

(57) Riešenia sa týká přípravy sletovaných kyslých polysacharidov postupom, kedy na 1 mol použitej anhydroglykozylovej jednotky kyslého polysacharidu sa aplikuje 0,1 až 1,5 molu homo- alebg hatarobifunkčného činidla, ako 2,2 ,-bis(oxiranylmetyljéteru alebo 2-chlororpetylooxiránu v prostředí 0,4 až 1,2 molu hydro-z xidu sodného alebo draselného pre 2-chlorom^tyloxirán alebo pri pH nad 11,2 pre 2,2 -bis(oxiranylmetyl)éter po dobu 1 až 3 hodin pri 40 až 80 °Č. RieŠenie má uplatnenie v analytickej biochémii v preparatívnej bioorganickej chémii, v klinickej biochémiiv enzýmovom lnžinierstve a v technologiach využívajúcich rekombinantnú dezoxyribonukleovú kyselinu.
CS 270 819 81
Vynález sa týká sposobu přípravy sletovaných kyslých polysacharidov pre využitie v analytickej biochémii, dioorganickej syntéze a enzýmovom inžinierstve.
Aj кеЭ v dosledku rozvoja biotechnologií dochádza к dynamickému rozvojů nových analytických a preparátivnych metod, založených na použití ionexov anorganického a organického syntetického povodu, biopolyméry, predovšetkým však polysacharidy kyslého a bazického povodu si ponechávajú svoj význam a to predovšetkým s ohl’adom na vysokú čistotu východiskových surovin - izolovaných pročištěných biopolymérov, ich pravidelní) štruktúru a vysoké zastúpenie funkčných skupin, karboxylových (pektin, kyselina pektová, kyselina alginová, kyselina hyaluronová, chondroitín, heparin a proteiny kyslého typu), sulfónových (chondroitín 6-sulfát, keratan sulfát, dermatan sulfát, hsparín) a primárných aminoskupin (chitozan, bazické proteiny). Ionexy připravené z prírodných polymérov sa nevyznačujú vysokými nespecifickými sorpciami a vzhladom к vysokej čistotě použitých surovin nedochádza к negativnému ovplyvneniu vlastností stanovovaných alebo izolovaných biologicky aktivnych látok.
Přípravou pektínového katexu sa zaoberá čsl. patent 140 713, kde východiskovou surovinou pre reakciu sietovania js kyselina pektová (deesterifikovaný pektin). Přibližné ekvimolárne zastúpenie jednotlivých zložiek v reakčnej zmesi (pektin, hydroxid sodný a 2-chlórometyloxiran) neumožňuje přípravu sletovaného gélu o vhodných hydrodynamických vlasnostiach. Pri přípravě sietovaného gélu kyseliny pektovej podl'a A.O. 218 702 sa sice vychádza priamo z citrusového pektínu a deesterifikačná raakcia spolu s reakciou sietovania prebiehajú v jednom reakčnom stupni, připravený gél, vhodný po 3alšej aktivácii i imobilizácii enzýmov, nevyhovuje však к použitiu ako katex a to pre nízký stupeň sietovania a vysoký napučací objem. Oe potřebné však súčasna zdoraznit, že podmienky sietovania 2-chloromethyloxiránom vyhovujú len pre alkalistabilnejšie biopolyméry, zatial čo alkalilabilné sa v přítomnosti vysokej koncentrácie hydroxidov rozkládají.
Uvedené nedostatky odstraňuje postup podlá vynálezu, podstata ktorého spočívá v tom, že kyslý polysachrid sa sletuje homo- alebo heterobifukčným činidlom, s výhodou 2,2-bis(oxiranylmetyl)éterom alebo 2-chlórometyloxiránom v pomere na 1 mol substituovanej anhydroglykozylovej jednotky kyslého polysacharidu 0,1 až 1,5 molu 2,2z-bis(oxiranylmetyl) éteru alebo 2-chlórometyloxiránu pri pH nad 11,2 pře sletováni© 2,2'-bis (oxiranylmetyl)éterom alebo v přítomnosti 0,4 až 1,2 molu hydroxidu sodného alebo draselného na 1 mól substituovanéj anhydroglykozylovej jednotky polysacharidu, pri sletovaní 2-chlórmetyloxiránom a 5 až 20 mólov destilovanej vody, pri teplote 40 až 80 °C po dobu 1 až 3 hodin.
Po zosietení sa reakčná zmes zaleje nadbytkom destilovanej vody, rozvolni, neutralizuje pomocou kyseliny octovej alebo chlórovodikoVej, připadne vybieli účinkom zriedeného chlornanu sodného, odvodní postupným účinkom nadbytku 50% a potom 96 - 100% etanolu alebo acetonu a vysuší vo vákuovej sušiarni. Vysušený gél sa vytriedi na sitách na frakcie o potrebnom zrnění a upraví na vhodnú hodnotu pH pre ňalšie použitie.
Výhodou uvedeného postupu je skutočnost, že základný materiál, kyslý polysacharid je povaČŠine lahko dostupný a lačný, stupeň substitúcie DS kyslými fukčnými skupinami v případe kyseliny pektovej, alginovej, chondritín 6-sulfátu a dermetan sulfátu je okolo 1, v případe keratan sulfátu a hyaluronovej kyseliny Js okolo 0,5 a u heparínu je okolo 2. Pri sletovaní esterifikovaných kyslých polysacharidov predovšetkým pomocou 2-chlorometyloxiránu dochádza aj к súčasnej deesterifikácii· V případe sietovania pomocou 2,2'-bis(oxiranylmetyl)éteru možno reakciu sietovania zabezpečit aj bez deesterif ikácie. Zostavou reakčnej zmesi možno regulovat stupeň sietovania gélu a jeho napučaci objem v rozsahu od 3,8 až po 25 ml.g*.
CS 270 819 B1
Příklad 1
Ku kyselina pektovej (176 g; 1 mol anhydrogalakturónovej kyseliny) sa přidalo za miešania 40 ml destilovanej vody a potom postupné v priebehu dalších 30 minút za stálého miešania 1 mol NaOH, rozpuštěný v 50 ml destilovanej vody. Po dokonalom zvlhčeni a zhomogenizovaní reakčnej zmesi za stálého miešania a chladenia sa přidávalo postupné 0,5 molu 2-chlórometyloxiránu a po dokladnom premiešaní sa zvýšila teplota reakčnej zmesi na 40 °C. Po 3 hodinách priebehu sa vybielil účinkom 200 ml 0,5% chlornanu sodného, znovu vymyl v destilovanej vodě a adjustoval do H4 cyklu účinkom 400 ml 2% kyseliny fosforečnej. Nadbytok volnej kyseliny fosforečnej sa vymyl opakované 500 ml destilovanej vody a vysušil postupným odvodněním pomocou 50% etanolu alebo acetonu (1000 ml) a 96 až 100% etanolu alebo acetonu a dosušil vo vakuovej sušiarni. Získaný sletovaný gél kyseliny pektovej (204 g) mal výmennú kapacitu 5,2 mol.g'^ a napučaoí objem 12,5 ml.g~^o , Přiklad 2
Postupuje sa tak, ako Je uvedené v přiklade 1 s tým rozdielom, Že namiesto kyseliny pektovej sa použije 187 g jablčného pektinu o stupni esterifikácie 62%. Reakčným produktom bolo 205 g gélu sietovanej kyseliny pektovej o výmennej kapacitě 5,2 mól.g“^ a napučacom objeme 12 ml.g~^.
Příklad 3
Postupuje sa tak, ako je uvedené v přiklade 1 s tým rozdielom, že namiesto 40 ml destilovanej vody sa ku zvlhčeniu kyseliny pektovej použije 100 ml a 1,2 molz NaOH sa rozpustí v Salšich 100 ml destilovanej vody. К sietovaniu sa použilo 1,5 molu 2-chlórometyloxiránu. Reakcia sietovania prebiehala pri 80 °C po dobu 1 hodiny. Získaný gél kyseliny pektovej (211 g) mal výmennú kapacitu 4,6 mól.g^ a napučaci objem 6,0 ml.g1.
Přiklad 4
Postupuje sa tak, ako v přiklade 1 s tým rozdielom, že sa к sietovaniu použije 0,1 mol 2-chlórometyloxiránu a 0,4 molu KOH. Získaný gél sietovanej kyseliny pektovej (145 g) mal výmennú kapacitu 5,4 mol.g1 a napučaci objem 25 ml.g 1.
Přiklad 5 ·
Postupuje sa tak, ako je uvedené v přiklade 1, s tým rozdielom, že namiesto kyseliny pektovej sa použije kyselina alginová. Získaný gél sietovanej kyseliny alginovej * (145 g) mal výmennú kapacitu 4,8 mól.g 1 a napučaci objem 23 ml.g 1.
* Příklad 6
Postupuje sa tak, ako v přiklade 1 s tým rozdielom, že kyselina pektová sa rozpustí v 150 ml borátového pufru (pH 11,2; 0,05 mol) а к sietovaniu sa použije 1 mol 2,2*-bis (oxiranylmetyl)éteru. Získaný gél sietovanej kyseliny pektovej (218 g) mal výmennú kapacitu 5,1 mol.g a napučaci objem 15,6 ml.g .
Přiklad 7
Postupuje sa tak ako v příklade 6, s tým rozdielom, že namiesto kyseliny pektovej sa použije 0,01 molu substituovaných anhydroglykozylových skupin heparinu. Získaný gél sletovaného heparinu (210 g) mal výmennú kapacitu 7,1 mol.g 1 (SO3) a 2,1 mol.g karboxylových skupin. Napučaci objem získaného gélu bol 18,5 ml.g 1.
Přiklad 8
Postupuje sa tak, ako je uvedené v přiklade 6, s tým rozdielom, že namiesto kyseli
CS 270 819 81 ny pektovej sa použije kyselina hyaluronová (2 g; tj. cca 0,01 mol). Pri zachováni'· ostatných molárnych proporci! tak, ako je uvedené v přiklade 6 sa získal gél sietovanej kyseliny hyalurónovej v množstve 2,1 g o výmennej kapacita 2,8 mol.g 1 (karboxylová skupina) a napučacom objeme 17,7 ml.g 1.
Příklad 9
Postupuje sa tak, ako je uvedené v přiklade 8, s tým rozdielom. že sa namiesto kyseliny hyalurónovej použije chondroitín 6-sulfát. Získaný gél 2,4 g sletovaného chondroitin 6-sulfátu mal výmennú kapacitu 2,4 mol.g“1 (karboxylová skupina) a 2,1 mol.g“1 (-SO3).
Příklad 10
Postupuje sa tak, ako je uvedené v přiklade 8, s tým rozdielom, že namiesto kyseliny hyalurónovej sa použije keratan sulfát. Získaný gél, 1,6 g sletovaného keratan sulfátu mal výmennú kapacitu 1,6 mol.g’1 (-SO3) a napučací objem 14,1 ml.g“1.
Příklad 11
Postupuje sa tak, ako je uvedené v příklade 8, s tým rozdielom, že sa namiesto kyseliny hyalurónovej použije dermatan sulfát. Získaný gél, 1,8 g sletovaného dermatanu mal výmennú kapacitu 2,4 mol.g“1 (karboxylová skupina) a 2,2 mol.g“1 (-30Σ) a napučaci -1 J objem 19,2 ml.g .
Vynález má široké uplatnenie predovšetkým v analytickej biochémii, v bioorganickej chémii, v enzýmovom inžinierstve a v, technológiach využivajúcich rekombinantnú dezoxyribonukleovú kyselinu. \

Claims (1)

  1. PREDMET VYNÁLEZU
    Sposob přípravy sletovaných kyslých polysacharidov vyznačený tím, že kyslý polysacharid sa sletuje homo- alebo heterobifunkčným činidlom, s výhodou 2,2*-bis(oxiranylmetyl)éterom alebo 2-chlórometyloxiránom v pomere na 1 mol substituovanej anhydroglykozylovej jednotky kyslého polysacharidu 0,1 až 1,5 molu homo- alebo heterobifunkčného Činidla pri pH nad 11,2 pre sietovanie 2,2z-bis(oxiranylmetyl)éterom alebo v prítomnos- * ti 0,4 až 1,2 molu hydroxidu sodného alebo draselného na 1 mol substituovanéj anhydroglykozylovej jednotky polysacharidu, pri sletovaní 2-chlórometyloxiránom a 5 až 20 mólov destilovanej vody při teplote 40 až 80 °C po dobu 1 až 3 hodin.
CS881656A 1988-03-14 1988-03-14 Method of net-like acidic polysaccharides preparation CS270819B1 (en)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CS881656A CS270819B1 (en) 1988-03-14 1988-03-14 Method of net-like acidic polysaccharides preparation

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CS881656A CS270819B1 (en) 1988-03-14 1988-03-14 Method of net-like acidic polysaccharides preparation

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CS165688A1 CS165688A1 (en) 1989-12-13
CS270819B1 true CS270819B1 (en) 1990-08-14

Family

ID=5351475

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CS881656A CS270819B1 (en) 1988-03-14 1988-03-14 Method of net-like acidic polysaccharides preparation

Country Status (1)

Country Link
CS (1) CS270819B1 (sk)

Also Published As

Publication number Publication date
CS165688A1 (en) 1989-12-13

Similar Documents

Publication Publication Date Title
KR100375299B1 (ko) 히알루론산의 가교결합형 아마이드 유도체와 이의 제조방법
Helting et al. Occurrence and biosynthesis of β-glucuronidic linkages in heparin
DK164068B (da) Geldannende blanding af polysaccharid og gelatine, vandigt geldannende praeparat og gel fremstillet deraf
Chemin et al. Well-defined oligosaccharides by mild acidic hydrolysis of hemicelluloses
CA2401704A1 (en) Salmon-origin chondroitin sulfate
AU656953B2 (en) Oligosaccharide having affinity for fibroblast growth factor and process for producing same
Crescenzi et al. New cross‐linked and sulfated derivatives of partially deacetylated hyaluronan: Synthesis and preliminary characterization
Zhang et al. Improved method for synthesis of cysteine modified hyaluronic acid for in situ hydrogel formation
Gomez et al. Synthesis and characterization of a β-CD-alginate conjugate
CN1100794C (zh) 可生物降解的热塑性多糖类衍生物及其制备方法和应用
US3639389A (en) Low d.e. starch hydrolysate derivatives
US6388060B1 (en) Process for the sulfation of uronic acid-containing polysaccharides
EP3279220A1 (en) Method for sulfating glycosaminoglycan
Kozlowski et al. Hydrolytic degradation of heparin in acidic environments: nuclear magnetic resonance reveals details of selective desulfation
TOMODA et al. Plant mucilages. XL. A representative mucilage,“Hibiscus-mucilage SF,” from the flower buds of Hibiscus syriacus
Spasojevic et al. Peroxidase-sensitive tyramine carboxymethyl xylan hydrogels for enzyme encapsulation
Maccari et al. Glycosaminoglycan blotting on nitrocellulose membranes treated with cetylpyridinium chloride after agarose‐gel electrophoretic separation
Egusa et al. Surface modification of a solid-state cellulose matrix with lactose by a surfactant-enveloped enzyme in a nonaqueous medium
CS270819B1 (en) Method of net-like acidic polysaccharides preparation
US6800754B1 (en) Method for producing cellulose sulfoacetate derivatives and products and mixtures thereof
Endo et al. Synthesis of neoproteoglycans using the transglycosylation reaction as a reverse reaction of endo-glycosidases
Takano Desulfation of sulfated carbohydrates
US6342367B1 (en) Method for the preparation of chondroitin sulfate compounds
JP2008519595A (ja) 変性アルギネートおよびその製造方法および用途
Schiller et al. Synthesis and characterization of chemically modified hyaluronan and chondroitin sulfate