CS331091A3

CS331091A3 - Synergistic combination of compounds inhibiting hiv-reverse transcriptase and a pharmaceutical based thereon

Info

Publication number: CS331091A3
Application number: CS913310A
Authority: CS
Inventors: Paul A Friedman; Emilio A Emini; Jack Nunberg; Julio C Quintero
Original assignee: Merck & Co Inc
Priority date: 1990-11-01
Filing date: 1991-10-31
Publication date: 1992-05-13
Also published as: CN1062138A; EP0484071A3; AU8693491A; HU913435D0; KR920009394A; YU172991A; FI915152A0; NZ240407A; FI915152A7; JPH04300834A; CA2054529A1; MX9101880A; IE913751A1; FI915152L; IL99843A0; AU648121B2; PT99394A; HUT60135A; EP0484071A2

Description

’> ύ - Ýi /-

Synergická kombinace sloučenin inhibující HlV-reversní transkriptasu a farmaceutický přípravek na její bázi

Oblast techniky Předložený vynález se týká synergické kombinace sloučenin,která inhibuje reversní transkriptasu kódovanou virem humánníimunodeficience (HIV). Tato synergická kombinace je užitečnápro prevenci infekce HIV, léčení infekce způsobené HIV a léče-ní vzniklého získaného syndromu imunitní nedostatečnosti (AIDS).Vynález se také týká farmaceutických přípravků obsahujících tu-to synergickou kombinaci, popřípadě spolu s dalšími činidlyvhodnými pro léčení AIDS nebo virových infekcí způsobených HIV.

Dosavadní stav techniky

Retrovirus, označovaný jako virus humánní imunodeficience(HIV) je etiologickým činidlem komplexní choroby, která zahrnu-je postupnou destrukci imunitního systému (syndrom získané imu-nitní nedostatečnosti, AIDS) a degeneraci centrálního a perifer-ního nervového systému. Tento virus bývá také označován názvyLAV, HTLV-III nebo ARV. Společným znakem replikace retroviruje- reversní traskripce genomu RNA virově kódovanou reversní trans-kriptasou za vzniku kopií DNA sekvencí HIV, což je nutný stupeňreplikace viru. 0 některých sloučeninách je známo, že jsou inhi-bitory reversní transkriptasy a účinnými činidly pro léčení AIDSa podobných chorob. Jedná se například o azidothymidin či AZT.

Sekvenováním nukleotidů HIV byla zjištěna přítomnost genupol v jednom otevřeném čtecím rámci (Ratner, L. a další, Nátuře,313, 277 (1985)). Homologie sekvence aminokyselin poskytuje dů-kaz, že sekvence pol kóduje reversní transkriptasu, endonukleasua HIV-proteasu /Toh, H. a další, EMBO J. 4, 1267 (1985); Power, M. D. a další, Science, 231, 1567 (1985); Pearl, L. H. a další, Nátuře 329, 351 (1987)/. 2 V souvislosti s vynálezem se nyní zjistilo, že synergickéinhibice reversní transkriptasy HIV je možno dosáhnout kombinacídvou tříd strukturně odlišných sloučenin. První třídu těchtosloučenin tvoří /((benzoxazol-2-yl)methyl)amino/-5-alkyl-6-alkyl--2-(1H)-pyridony a podobné aminopyridony, které jsou substituo-vány pyridylovými nebo fenylovými deriváty. Druhou třídu těchtosloučenin tvoří účinné analogy nukleosidů, jako je AZT nebo ddl.Zkombinováním sloučenin z těchto dvou tříd se může dosáhnoutzlepšené léčby AIDS nebo infekcí způsobených HIV.

Kromě toho, sloučeniny z první ze shora uvedených tříd slou-čenin jsou vysoce specifickými inhibitory reversní transkriptasyHIV, t j. například reversní transkriptasy AMV, MMLV nebo SIVinhibují jen velmi málo nebo vůbec ne. Sloučeniny z této třídytaké nevyžadují bioaktivaci, aby se staly účinnými.

Podstata vynálezu Předmětem vynálezu je především kombinace dvou tříd sloučenininhibující reversní transkriptasu HIV. Této kombinace sloučeninlze použít pro prevenci a léčení infekcí HIV a syndromu získanéimunitní nedostatečnosti (AIDS). Přitom se používá této kombina-ce sloučenin ve formě farmaceutických přípravků, které rovněžspadají do rozsahu tohoto vynálezu.

Shora uvedená kombinace sloučenin je tvořena sloučeninouz třídy A a sloučeninou z třídy B, přičemž třída A v podstatě za-hrnuje: 3-/ ( (4,7-dichlorbenzoxazol-2-yl)methyl) amino/-5-ethyl-6-methyl--2-(1H)-pyridinon, 3-/((4,7-dimethvlbenzoxazol-2-yl)methyl) amino/ -5-ethyl-6-methyl--2-(1H)-pyridinon, 3-/ ( (7-chIorbenzoxazol-2-yI) methyl) amino/-5-ethyl-δ-methy1-2- (1H) --pyridinon, 3-/ ( (7-methylbenzoxazol-2-yl)methyl) amino/-5-ethyl-6-methyl-2- (1H)pyridinon, 3 3-/((4-fluorbenzoxazol-2-yl)methyl)amino/-5-ethyl-6-methyl-2-(1H) —pyridinon, 3-/((7-fluorbenzoxazol-2-yl)methyl)amino/-5-ethy1-6-methy1-2-(1H)-pyridinon, 3-/((benzoxazol-2-yl)methyl)amino/-5-ethyl-6-methyl-2-(1H)-pyridinon; 3-/((4-chlorbenzoxazol-2-yl)methyl)amino/-5-ethyl-6-methyl-2-(1H)--pyridinon, 3-/((4-fluor-7-chlorbenzoxazol-2-yl)methyl) amino/-5-ethy1-6-methyl--2-(1H)-pyridinon, 3-/2-(benzoxazol-2-yl)ethyl/-5-ethyl-6-methyl-2-(1H)-pyridinon, 3-/N-(5-ethyl-2-methoxy-6-methyl-3-pyridylmethyl)amino/-5-ethy1-6--methyl-2-(1H)-pyridinon, 3-/N-(5,6-dimethyl-2-methoxy-3-pyridylmethyl) amino/-5-ethyl-6-methyl--2-(1H)-pyridinon, 3-/N- (5-ethyl-2-methoxybenzyl) amino/-5-ethyl-6-methyl-2- (1H) -pyridinon, 3-/N- (2-methoxy-4,5-dimethylbenzyl) amino/-5-ethyl-6-methyl-2- (1H) --pyridinon a 3-/N-(2,6-dimethoxybenzyl)amino/-5-ethyl-6-methyl-2-(1H)-pyridinon; a třída B v podstatě zahrnuje: 3'-azido-2,3'-dideoxythymidin (AZT), 2’,3'-dideoxycytidin (ddC), 2 ' , 3'-dideoxyinosin (ddl), 2',3'-didehydro-21,3'-dideoxythymidin (D4T), 1-/(2-hydroxyethoxy)methyl/-6-fenylthiothymidin (HEPT) a3'-fluor-2',3'-dideoxythymidin a jejich farmaceuticky vhodné soli, hydráty a estery. 4

Farmaceutické přípravky podle vynálezu mohou kromě shorauvedené kombinace sloučenin nebo jejich farmaceuticky vhodnýchsolí obsahovat také běžné farmaceutické přísady a popřípadě ta-ké jiná antivirální činidla, protiinfekční činidla, imunomodu-látory, antibiotika nebo vakciny. Výhodnou kombinací podle vynálezu je kombinace 3-/((4,7-di-chlorbenzoxazol-2-yl) methyl) amino/-5-ethyl-6-methyl-2- (1H) -pyri-dinonu nebo 3-/((4,7-dimethylbenzoxazol-2-yl)methyl)amino/-5-ethyl-6-methyl-2-(1H)-pyridinonu s AZT nebo ddl.

Jinou přednostní kombinací podle vynálezu je kombinace3-/((4,7-dichlorbenzoxazol-2-yl) methyl) amino/-5-ethyl-6-methyl--2-(1H)-pyridinonu s AZT.

Další přednostní kombinací podle vynálezu je kombinace3-/ ( (4,7-dimethylbenzoxazol-2-yl)methyl) amino/-5-ethyl-6-methyl--2-(1H)-pyridinonu s AZT.

Ještě další přednostní kombinací podle vynálezu je kombinace3-/ ( (4,7-dimethylbenzoxazol-2-yl) methyl) amino/-5-ethyl-6-methyl--2-(1H)-pyridinonu s ddl.

Sloučeniny podle vynálezu obsahují asymetrická centra amohou se vyskytovat jako racemáty, racemické směsi nebo jakoindividuální diastereomery, přičemž všechny tyto isomerní formyspadají do rozsahu tohoto vynálezu.

Pod pojmem "alkylskupina" se v tomto popisu rozumí nasyce-ná alifatická uhlovodíková skupina s přímým nebo rozvětvenýmřetězcem, obsahující uvedený počet atomů uhlíku.

Sloučeniny spadající do třídy A jsou aminopyridony, které jsou v 3-poloze substituovány aminoalkylenovým můstkem připoje- ným k heterocyklockému nebo arylovému zbytku, jako je benzoxazo- lový zbytek. Tyto sloučeniny jsou vysoce účinnými inhibitory 5 reversní transkriptasy HIV. V některých případech je shora uvedeným můstkem alkylen. Při syntéze sloučenin spadajících do třídy A podle tohotovynálezu se mohou mnohé potřebné meziprodukty připravovat podlepostupů a předpisů uvedených v US patentu č. 3 721 676. Přednostní způsoby syntézy jsou uvedeny dále. Při syntéze dále uvedených sloučenin obecného vzorce IIIse pro přípravu 3-nitropyridonů (první stupeň syntézy) může po-žít současné kondenzace a cyklizace sloučenin obecného vzorce

za přítomnosti báze, jako je piperidiniumacetát. Nitroacetamidse připraví způsobem popsaným v Brownstein, S. K., J. Org. Chem.23, 113 (1958). 3-nitropyridinové produkty z prvního stupně jetaké možno připravit přímou nitrací 3-nesubstituovaných pyridonů3-nitripyridonový produkt z prvního stupně obecného vzorce I

se redukuje ve druhém stupni na aminosloučeninu obecného vzor-ce II

přednostně katalytickou redukcí (pokud nejsou přítomny atomy síry) za přítomnosti například plynného vodíku a palladia na 6 aktivním uhlí. Reakce se provádí v rozpouštědle, jako napříkladv ethanolu (viz například Okafor, C. 0. a další, J. Heterocyclic.Chem. 20, 199 (1983)). Redukce ve druhém stupni se může alternativně provést chemicky (i když jsou přítomny atomy síry) napříkladpomocí hydrogensulfidu sodného, dithioničitanu sodného, kombina-ce železa a chloridu vápenatého, sirovodíku nebo kombinace cínua kyseliny chlorovodíkové. Redukce pomocí železa v přítomnostichloridu vápenatého je popsána v Okafor, C. 0., J. Org. Chem. 47, 592 (1982) . Třetí stupeň reakce, který je konečný a kterýmvznikají sloučeniny obecného vzorce III podle tohoto vynálezu

(III) zahrnuje kopulaci, která se provádí bud alkylací alkylhalogenidemnebo redukční alkylací aldehydem.

Karbaderiváty obecného vzorce IX obsahující mezi pyridono-vým kruhem a heterocyklickým nebo aromatickým zbytkem připojenýmv poloze 3 alkylenový můstek, je možno připravovat následujícímipostupy, z nichž přednost se dává prvnímu z nich. V prvním stupni se 3-kyano-2-(1H)-pyridinon připraví součas-nou kondezací a cyklizací sloučenin vzorce © Ό

za přítomnosti báze, jako je piperidiniumacetát nebo pyrrolidin-

acetát. Výsledný 3-kyano-2-(1H)-pyridon obecného vzorce IV 7 • ι

(IV)

se zahřívá v přítomnosti pentachloridu fosforečného (někdy vkombinací s oxytrichloridem fosforečným) za vzniku odpovídají-cího chlorpyridinu obecného vzorce V

(V)

Jedná se o konvenční způsob převádění pyridonů na chlorpyridiny.Pro výrobu odpovídajícího hromovaného derivátu (sloučenina obec-ného vzorce V, obsahující místo chloru brom) se může použítbromidu fosforitého. Sloučenina obecného vzorce V se potom pod-robí nukleofilní substituci za účelem připojení chránící alkoxy-skupiny. Získá se sloučenina obecného vzorce VI.

(VI)

Redukcí této sloučeniny například za přítomnosti diisobutylaluminiumhydridu se získá sloučenina obecného vzorce VII (VII) Ρ/1ΓΧ3- Alkyl

Jedná se o obvyklou metodu redukce nitrilů na aldehydy. Alterna- tivně se při přípravě sloučenin obecného vzorce VII může jako redukčního činidla použít lithiumtrialkoxyaluminiumhydridu. 8

Kondenzací sloučeniny obecného vzorce VII za přítomnostibáze při velmi nízké teplotě (přednostně při teplotě nejméně-100°C) s alkylsubstituovanou arylsloučeninou nebo alkylsubsti-tuovenou heterocyklickou sloučeninou se získá sloučenina obec-ného vzorce VIII

(VIII) (Wittigova reakce uvedená dále je výhodná v případě, že n máhodnotu vyšší než 1). Dehydratací získaného alkoholu a následu-jící dealkylací a poté hydrogenací se získají sloučeniny obec-ného vzorce IX (X = Cí^), což jsou sloučeniny podle vynálezu.

Dealkylace se obvykle provádí za tepla pomocí pyridiniumchloridu. K dehydrataci nemusí docházet při stejné reakci, nýbrž se můžeprovádět odděleně konvenčními postupy. Standardním kalatyzátorempro hydrogenací na produkt obecného vzorce IX je palladium, alemůže se použít i jiných ušlechtilých kovů. Alternativně se hydrogenace může provádět pomocí diimidu nebo Raneyova niklu. Pro dealky-laci, která není doprovázena dehydratací se může účelně použíttrichloridu boritého nebo tribromidu boritého při nízké teplotě.

Druhou alternativou pro provedení tří posledních stupňů je Wittigova reakce, při níž se aldehyd obecného vzorce VII nechá reagovat s arylsloučeninou nebo heterocyklylsloučeninou, z nichž 9 každá je substituována alkylentrifenylfosforaném. Při této konden·zaci se získá sloučenina s nenasyceným alkylenovým můstkem, kteráse potom může hydrogenovat na sloučeninu obecného vzorce IX,popsanou výše. Výhodou alternativy s Wittigovou reakcí je, žese s ní mohou přednostně syntetizovat sloučeniny obecného vzorceIX, v nichž má n hodnotu 2 nebo vyšší, tj. sloučeniny s delšímialkylenovými můstky. Wittigova reakce se také přednostně používápro výrobu sloučenin z třídy A, které obsahují na heterocyklickémzbytku labilní substituenty, zejména halogeny.

Sloučeniny ze třídy B jsou analogy nukleosidů, o nichž jeznámo, že vykazují biologickou účinnosti proti reversní trans-kriptase HIV. Obecně se jedná o terminátory řetězce. Pro každouz těchto sloučenin je uvedena separátní syntéza. AZT se syntetizuje způsoby popsanými v J. P. Horwitz a dalšíJ. Org. Chem. 29, 2076 (1964); R. P. Glinski a další, J. Org.Chem. 38, 4299 (1973); C. K. Chu a další, Tetrahedron Letters29, 5349 (1988). Použití AZT jako léčiva pro léčbu AIDS je po-psáno v US patentu č. 4 724 232.

Sloučenina ddC se syntetizuje způsoby popsanými v J. P.Horwitz a další, J. Org. Chem. 32, 817 (1965); R. Marumoto,

Chem. Pharm. Bull. 22, 128 (1974); a T.-S. Lin a další, J. Med.Chem. 30, 440 (1987). D4T se syntetizuje způsoby popsanými v Herdewijn, P. a dal-ší, J. Med. Chem. 30, 1270 (1987). HEPT se syntetizuje způsoby popsanými v Miyasaka, T. a dal-ší, J. med. Chem. 32 , 2507 (1989); a A. Rosowsky, J. Med. Chem.24, 1177 (1981). 3'-fluor-2',3'-dideoxythymidin se syntetizuje způsoby popsa-nými v Herdewijn, P. a další, J. Med. Chem. 30, 1270 (1987). Všechny shora uvedené citace jsou zde uvedeny náhradou zapřenesení jejich textu do obsahu tohoto popisu. 10

Synergická kombinace podle vynálezu je užitečná pro inhibi-ci reversní transkriptasy HIV, prevenci nebo léčení infekcí způ-sobených virem humánní imunodeficience (HIV) a léčení patologic-kých stavů touto infekcí podmíněných, jako je AIDS. Pod pojmem"léčba AIDS" nebo "prevence nebo léčení infekcí způsobených HIV"se rozumí léčení širokého spektra stavů vyvolaných infekcí HIV,jako je AIDS, ARC (AIDS related complex), a to jak symptomatic-kých tak asymptomatických, včetně skutečné nebo potenciální expo-zice HIV. Kombinace podle tohoto vynálezu je například užitečnápro léčení infekcí způsobených HIV, je-li podezření, že došlok expozici HIV, například při transfúzi krve, náhodném poraněníinjekční jehlou nebo při expozici krvi pacienta v průběhu chi-rurgického zákroku. K těmto účelům se sloučeniny podle vynálezu kombinovaněpodávají orálně, parenterálně (ve formě subkutánních injekcí,intravenózních, intramuskulárních, intrasternálních injekcí neboinfúzí), ve formě inhalačních sprejů nebo rektálně. Přitom sepoužívá přípravků zpracovaných do podoby jednotkových dávkovačíchforem obsahujících netoxické farmaceuticky vhodné nosiče, pomocnélátky a vehikula.

Vhodné farmaceutické přípravky mohou mít podobu orálně apli-kovatelných suspenzí nebo tablet, nasálních sprejů, sterilníchinjekčních přípravků, například sterilních injekčních vodnýchnebo olejových suspezní, nebo čípků.

Pokud se mají tyto přípravky podávat orálně ve formě suspen-ze, mohou obsahovat mikrokrystalickou celulózu za účelem zvětšeníobjemu, alginovou kyselinu nebo alginát sodný, jako suspenzníčinidlo, methylcelulózu, jako látku zvyšující viskozitu a sladid-la a/nebo aromatizační látky. Všechny tyto pomocné látky jsouznámé v daném oboru a také výroba těchto přípravků probíhá obvyk-lým způsobem. Tablety určené pro okamžité uvolnění účinné látkymohou obsahovat mikrokrystalickou celulózu, dikalciumfosfát,škrob, stearan hořečnatý a laktózu a/nebo jiné excipienty, poji-vá, nastavovadla, desintegrační látky (bubřidla), ředidla a ma-zadla, což jsou všechno látky běžně používané v tomto oboru. 11

Farmaceutické přípravky určené pro podávání ve formě nazál-ních aerosolů nebo inhalačních přípravků se vyrábějí o sobě zná-mým způsobem v oboru farmacie a mohou mít podobu roztoků ve fyzio-logickém roztoku kuchyňské soli. Při jejich výrobě se také použí-vá benzylalkoholu nebo jiných vhodných konzervačních prostředků,promotorů absorpce pro zvýšení biologické dostupnosti, fluorova-ných uhlovodíků a/nebo solubilizačních nebo dispergačních činidelznámých v tomto oboru.

Farmaceutické přípravky, které mají podobu injekčních roztokůnebo suspenzí, se mohou vyrábět o sobě známým způsobem za použitívhodných netoxických parenterálně přijatelných ředidel nebo roz-pouštědel, jako je mannitol, 1,3-butandiol, voda, Ringerův roztok,nebo isotonický roztok chloridu sodného nebo vhodných dispergátorůnebo smáčedel a suspenzních činidel, jako jsou sterilní, nedráždi-vé a stálé oleje, včetně syntetických mono- nebo diglyceridůa mastných kyselin, včetně kyseliny olejové. Čípky, které slouží pro rektální podávání se vyrábějí smíse-ním léčiva s vhodným nedráždivým excipientem, jako je kakaovémáslo, syntetické estery glycerinu nebo polyethylenglykoly, kteréjsou při okolních teplotách pevné, ale v rektální dutině docházík jejich zkapalnění a/nebo rozpuštění za současného uvolněníléčiva.

Sloučeniny podle vynálezu je možno humánním pacientům podá-vat orálně v dávce v rozmezí od 1 do 5 g/kg tělesné hmotnosti,ve formě dílčích dávek. Přednostní rozmezí dávkování sloučeninze třídy A při orálním podávání formou několika dílčích dávekčiní 1 až 100 mg/kg tělesné hmotnosti a v případě sloučenin zetřídy B podávaných orálně formou dílčích dávek, činí tato dávka50 mg až 5 g/kg tělesné hmotnosti. Je však samozřejmé, že konkrét-ně zvolená úroveň dávkování, poměr dávek a frekvence dávkováníse bude u konkrétních pacientů lišit a bude záviset na řadě fak-torů, jako je účinnost či potence specificky použitých sloučenin,jejich metabolická stabilita a trvání účinnosti, stáří pacienta,tělesná hmotnost, celkový zdravotní stav, pohlaví, strava, způsob 12 a doba podávání, frekvence vyměšování, kombinace léčiv, prudkostléčeného onemocnění apod.

Do rozsahu vynálezu také spadají kombinace sloučenin, kterépůsobí jako inhibitory reversní transkriptasy HIV s jedním nebovíce činidly užitečnými pro léčení AIDS. Sloučeniny podle vynále-zu je například možno efektivně podávat at již před expozicía/nebo po ní v kombinaci s účinnými množstvími jiných protiviro-vých látek účinných proti AIDS, imunomodulátorú, protiinfekčníchčinidel nebo vakcin. Příklady provedení vynálezu Příklad 1 Příprava 5-ethyl-6-methyl-3-(2-naftylmethylamino) -(1H)-pyridinonu

Stupeň A: Příprava 5-ethyl-6-methyl-3-nitro-2-(1H)-pyridinonu

Směs 2-ethyl-3-oxobutanalu ve formě sodné soli (7,5 g, 55 mmol),nitroacetamidu (6,6 g, 63 mmol), vodného piperidiniumacetátu(4,4 ml) /připraveného z 42 ml ledové kyseliny octové, 100 mlvody a 72 ml piperidinu/ ve vodě (45 ml) se 22 hodin míchá přiteplotě místnosti. Vzniklá žlutá sraženina se odfiltruje a vysu-ší na vzduchu. Získá se 8,0 g (80 %) 5-ethyl-6-methyl-3-nitro-2--(1H)-pyridinonu.

Stupeň B: Příprava 3-amino-5-ethyl-6-methyl-2-(1H)-pyridinonu Žlutý roztok 5-ethyl-6-methyl-3-nitro-2-(1H)-pyridinonu(10 g, 55 mmol) ve směsi methanolu a tetrahydrofuranu (100 ml,objemově 1 : 1) se katalyticky redukuje za přítomnosti 7% palla-dia na aktivním uhlí (0,7 g) pod atmosférou vodíku a při teplotěmístnosti po dobu 3,5 hodiny. Použitý tlak vodíku je 34,3 kPa.Výsledná směs se přefiltruje přes malou celitovou filtrační pod-ložku. Filtrát se zkoncentruje za sníženého tlaku (2 kPa) . 13 Získá se 5,7 g (68 %) odpovídajícího aminopyridonu.

Stupeň C: Příprava 5-ethyl-6-methyl-3-(2-naftylmethylamino)-2--(1H)-pyridinonu

Směs 3-amino-5-ethyl-6-methyl-2-(1H)-pyridinonu (3,0 g,

20 mmol), 2-brommethylnaftalenu (4,4 g, 20 mmol), triethylaminu(2,0 g, 20 mmol), v acetonitrilu (200 ml) se zahřívá na teplotuzpětného toku po dobu 4 hodin. Vzniklá směs se nechá zchladnoutna teplotu místnosti a potom se za sníženého tlaku (2 kPa) zkon-centruje. Zbytek se přečistí sloupcovou chromatografií na silika-gelu (300 g) za použití směsi methanol : chloroform (objemově5 : 95), jako elučního činidla. Příslušné frakce se spojí s zkon-centrují a tak se získá 2,4 g (42 %) naftylmethylaminopyridonu.Analýza pro C]_gH20N2O vypočteno: C, 75,71; H, 7,02; N, 9,30 nalezeno: C, 75,73; H, 6,71; N, 9,13 %. Příklad 2 3-/(2-benzoxazolvlmethyl)amino/-5-ethyl-6-methyl-2-(1H)-pyridinon

Roztok 3-amino-5-ethyl-6-methyl-2-(1H)-pyridinonu (152 mg,1,0 mmol), 2-chlormethyl-l,3-benzoxazolu (1,07 mmol) a triethyl-aminu (0,14 ml, 1,0 mmol) v acetonitrilu (10 ml) se míchá a re-fluxuje po dobu 24 hodin. Potom se směs zkoncentruje za sníženéhotlaku a zbytek se přečistí flash chromatografií na silikagelu.Eluce se provádí směsí 5 % methanolu a 95 % trichlormethanu. Získá se 132 mg produktu, který se překrystaluje ze směsi etha-nolu a vody, čímž se získá 95 mg analyticky čistého produktuo teplotě tání 202 až 203°C. Produkt začíná tát při 179°C, alepotom znovu ztuhne.

Analýza pro C-, gHy-^3°2 vypočteno: C, 67,83; H, 6,05; N, 14,83 nalezeno: C, 67,71; H, 6,03; N,14,76. 14 Příklad 3 Příprava 3-/((4,7-dimethylbenzoxazol-2-yl)methyl)amino/-5-ethvl--6-methyl-2-(1H)-pyridinonu

Stupeň A: Příprava 2-chlormethyl-4,7-dimethylbenzoxazolu K roztoku 2,5 dimethyl-6-aminofenolu (0,67 g, 4,9 mmol)v methylenchloridu se přidá pevný hydrochlorid ethyl 2-chlorimino-acetátu (0,85 g, 4,9 minol) . Výsledná suspenze se 18 hodin míchápři teplotě místnosti, potom se přefiltruje přes vrstvu infuso-riové hlinky a za sníženého tlaku (2 kPa) zkoncentruje. Pevnýzbytek se podrobí sloupcové chromatografii na silikagelu (50 g),přičemž eluce se provádí směsí 1 % methanolu v chloroformu.

Vhodné frakce se spojí a jejich zkoncentrováním se získá 0,85 g(89 %) benzoxazolu.

Stupeň B: Příprava 3-/( (4,7-dimethylbenzoxazol-2-yl)methyl)amino/--5-ethyl-6-methyl-2-(1H)-pyridinonu

Směs 3-amino-5-ethyl-6-methyl-2-(1H)-pyridinonu (0,23 g, 1,5 mmol), 2-chlormethyl-4,7-dimethylbenzoxazolu (0,29 g, 1,5 mmol),diiscpropylethylaminu (0,39 g, 3 mmol) v acetonitrilu (50 ml)se refluxuje pod atmosférou dusíku po dobu 12 hodin. Výslednásměs se zkoncentruje za sníženého tlaku (2 kPa). Zbytek se pře-čistí sloupcovou chromatografií na silikagelu (100 g), přičemželuce se provádí 4 % methanolu v chloroformu. Vhodné frakce sespojí a jejich zkoncentrováním se získá 0,2 g (44 %) benzoxazo-lylmethylaminopyridonu.

Analýza pro C18H21N3°2 vypočteno: C, 69,43; H, 6,80; N, 13,49 nalezeno: C, 69,32; H, 6,66; N, 13,47. 15 Příklad 4 Příprava 3-/2-(benzoxazol-2-yl)ethyl/-5-ethyl-6-methyl-2-(1H)--pyridinonu

Stupeň A: Příprava 3-kyano-5-ethyl-6-methyl-2-(1H)-pyridinonu

Postupuje se způsobem popsaným v J. Heterocvclic. Chem., 24, 351 (1987). Směs sodné soli 2-ethyl-3-oxobutanolu (37,5 g,0,275 mol), kyanoacetamidu (25,2 g, 0,30 mol), vodného piperi-diniumacetátu (22 ml) /připraveného z 4,2 ml ledové kyselinyoctové, 10 ml vody a 7,2 ml piperidinu/ ve vodě (775 ml) se re-fluxuje po dobu 4 hodin. Když začne srážení produktu, opatrněse ke směsi přidá ledová kyselina octová (30 ml) . Přitom dojdek velkému pěnění. Po ochlazení na teplotu místnosti se produktodfiltruje, promyje chladnou vodou a vysuší na vzduchu. Získáse 22,3 g (50 %) produktu o teplotě tání 237 až 240°C.

Stupeň B: Příprava 2-chlor-3-kyano-5-ethyl-6-methylpyridinu 3-kyano-5-ethyl-6-methyl-2-(1H) -pyridinon (22,9 g, 0,141 mol)se smíchá s pentachloridem fosforečným (33,1 g, 0,159 mol) nahomogenní směs, která se potom 1 hodinu zahřívá na 110 až 120°C.Zkapalněné pevné látky se potom nalijí do směsi drceného ledua vody a polopevná látka se extrahuje do chloroformu. Extraktse promyje vodou, nasyceným vodným roztokem hydrogenuhličitanusodného, vysuší síranem sodným, přefiltruje a odpaří. Jantarovězbarvený olej se rozpustí v hexanu a nerozpustná látka se od-filtruje přes vrstvu aktivního uhlí. Po odstranění rozpouštědlase získá světle žlutý olej, kterýztuhne (17,7 g). Triturací tétopevné látky s chladným hexanem se získá 15,6 g (61 %) čistéhoproduktu o teplotě tání 63 až 64°C.

Stupeň C: Příprava 2-methoxy-3-kyano-5-ethyl-6-methylpyridinu

Kovový sodík (3,25 g, 0,141 mol) se rozpustí v suchém me- thanolu (100 ml) pod atmosférou dusíku. Po jeho úplném rozpuštění 16 se ke směsi přidá suspenze 2-chlor-5-ethyl-6-methylpyridinu(17,95 g, 99,4 mmol) v suchém methanolu (70 ml) a reakční směsse 15 až 20 hodin zahřívá na 60°C. Potom se reakční směs ochladía přidá se diethylether (250 ml) a voda (200 ml) . Etherová vrstvase oddělí, promyje vodou, vysuší síranem sodným, přefiltrujea odpaří. Získá se světle žlutá pevná látka (17,5 g). Tato pevnálátka se trituruje s chladným hexanem a tak se získá 14,4 g(82 %) čistého produktu o teplotě tání 59 až 61°C.

Stupeň D: Příprava 2-methoxy-5-ethyl-6-methylnikotinaldehydu K roztoku 2-methoxy-3-kyano-5-ethyl-6-methylpyridinu (1,0 g,5,68 mmol) v suchém tetrahydrofuranu (50 ml), ochlazenému na-70°C se pod atmosférou dusíku přidá 1,3M roztok diisobutylalu-miniumhydridu v tetrahydrofuranu (17,4 ml, 22,7 mmol). Výslednásměs se nechá ohřát na teplotu místnosti a potom se 15 až 20hodin míchá. Reakční směs se okyselí 1N kyselinou chlorovodíko-vou a potom neutralizuje vodným roztokem hydrogenuhličitanu sod-ného. Ke směsi se přidá voda a produkt se extrahuje do diethyl-etheru. Etherový extrakt se vysuší síranem sodným, přefiltrujea rozpouštědlo se odpaří. Zbytek se přečistí flash chromatografiína silikagelu, přičemž eluce se provádí 10% roztokem diethylethe-ru v pentanu. Získá se 610 mg (61 %) produktu.

Stupeň E: Příprava 2-/2(R/S)-hydroxy-2-(2-methoxy-5-ethyl-6-methylpyridin-3-yl)ethyl/benzoxazolu K roztoku 2-methylbenzoxazolu (226 mg, 1,7 mmol) v bezvodémtetrahydrofuranu (4 ml), ochlazenému na -100°C pod atmosférouargonu se přidá pomalu, v průběhu 35 minut, 1,6M roztok N-butyl-lithia v hexanu. Po 0,5 hodiny se přikape roztok 2-methoxy-5--ethyl-6-methylnikotinaldehydu (300 mg, 1,7 mmol) v suchém tetra-hydrofuranu (1 ml). Reakční směs se nechá ohřát na teplotu míst-nosti a potom se nalije na rozdrcený led. Vzniklá směs se extrahu-je diethyletherem. Spojené extrakty se vysuší síranem hořečnatýma olej, který se získá po odpaření rozpouštědla,se přečistí flashchromatografií na silikagelu. Eluce se provádí směsí ethylacetátu 17 a hexanu (1 : 19). Získá se 340 mg (65 %) analyticky čistéhoracemického produktu o teplotě tání 102 až 103°C.

Analýza provypočteno: nalezeno: C18H20N2°3·0,1 H2° C, 68,81; H, 6,48; N, 8,91 C, 68,80; H, 6,76; N, 8,95

Stupeň F: Příprava 3-/2-(benzoxazol-2-yl)ethenyl/-5-ethyl-6-methyl-2-(1H)-pyridinonu

Směs 2-/2(R/S)-hydroxy-2-(2-methoxy-5-ethyl-6-methylpyridin--3-yl)ethyl/benzoxazolu (72 mg, 0,23 mmol) a hydrochloridu pyridi-nu (133 mg, 1,2 mmol) se pod atmosférou dusíku na 5 minut umístído předehřáté olejové lázně (165°C). Potom se reakční baňka vyjme,ochladí a k pevné látce se přidá voda. Surový produkt se extrahujedo chloroformu, extrakt se vysuší síranem hořečnatým a po odpařenírozpoutědla se z něho získá 49 mg (75 %) čistého produktu. Překry-stalováním z methanolu se získá 15 mg analyticky čistého produktuo teplotě tání 262 až 264°C.

Analýza provypočteno: C17H16N2°2 C, 72,83; H, 5,75; N, 10,00 C, 72,93; H, 5,95; N, 9,99. nalezeno:

Stupeň G: Příprava 3-/2-.(benzoxazol-2-yl) ethyl/-5-ethyl-6-methyl--2-(1H)-pyridinonu

Roztok 3-/2-(benzoxazol-2-yl)ethenyl/-5-ethyl-6-methyl-2-(1H)-pyridinonu o čistotě 80 % (200 mg) ve směsi methanolu, ethanolua tetrahydrofuranu (25 ml, 1 : 1 : 1) se hydrogenuje za atmosfe-rického tlaku v přítomnosti 5% palladia na aktivním uhlí po dobu4 hodin. Katalyzátor se odfiltruje, rozpouštědlo se odpaří azbytek se přečistí chromatografií na silikagelu. Elucí směsí2 % methanolu a 98 % chloroformu se získá 75 mg analyticky čisté-ho produktu o teplotě tání 155 až 156,5°C. 18

Anazýza provypočteno: nalezeno: c17H18N2°2 C, 72,31; H, 6,43; N,C, 72,45; H, 6,52; N, 9,92 9,99 Příklad 5 Příprava 3-/2-(4,7-dichlorbenzoxazolyl)methyl/amino-5-ethyl-6--methyl-lH-pyridin-2-onu

Stupeň A: Příprava 2-amino-3,6-dichlorfenolu Žlutý roztok 2,5-dichlor- 6-nitrofenolu (10,0 g, 48,0 mmol)v ethanolu (200 ml) a kyselině octové (13,8 ml) se při 0 C kata-lyticky redukuje v přítomnosti 5% platiny na aktivním uhlí (0,15 g)pod atmosférou vodíku (171,75 kPa) po dobu 1 hodiny v Parrověhydrogenačním přístroji. Výsledný bezbarvý roztok se přefiltrujea zkoncentruje za sníženého tlaku (2 kPa). Zbytek se vysuší zavysokého vakua (2,7 Pa). Sušení se provádí přes noc; získáse 8,52 g (100 %) 2-amino-3,6-dichlorfenolu.

Stupeň B: Příprava 2-chlormethyl-4,7-dichlorbenzoxazolu K roztoku 2-amino-3,6-dichlorfenolu (23,91 g, 134 mmol)v methylenchloridu (270 ml) se přidá pevný hydrochlorid ethylchloriminoacetátu (31,9 g, 202 mmol). Výsledná suspenze se míchápřes noc při teplotě místnosti, potom se přefiltruje přes vrstvucelitu a zkoncentruje za sníženého tlaku (2 kPa). Pevný zbytekse přečistí sloupcovou chromatografií na silikagelu, přičemželuce se provádí chloroformem. Vhodné frakce se spojí a zkoncen-trují. Získá se 26,6 g (86 %) 2-chlormethyl-4,7-dichlorbenzoxazolu.

Stupeň C: Příprava 3-/2-(4,7-dichlorbenzoxazolyl)methyl/amino-5--ethyl-6-methyl-lH-pyridin-2-onu

Směs 3-amino-5-ethyl-6-methylpyridin-2-onu (0,93 g, 6,1 mmol),2-chlormethyl-4,7-dichlorbenzoxazolu (1,45 g, 6,1 mmol), diisopro- 19 pylethylaminu (1,06 ml, 6,1 mmol) v acetonitrilu (30 ml) se reflu-xuje pod atmosférou dusíku po dobu 20 hodin. Výsledná směs seochladí na 0°C. Vysrážená pevná látka se odfiltruje a chromato-grafuje na sloupci silikagelu (za použití 4 % methanolu v chlo-roformu, jako elučního činidla). Vhodné frakce se spojí s zkoncen-trují. Získá se 0,76 g bílé pevné látky, která se překrystalujez ethanolu. Tak se získá 0,66 g (31 %) 3-/2-(4,7-dichlorbenzoxazo-lyl)methyl/amino-5-ethyl-6-methyl-lH-pyridin-2-onu.

Analýza pro: vypočteno: C16H15C12N3OS N, 11,93 c, 54,56; H, 4,29; nalezeno: C, 54,43; H, 4,12; N, 1,89 Příklad 6

Inhibice šíření viru

A. Příprava suspenze buněk MT-4 infikovaných HIV V den 0 se MT buňky o koncentraci 250 000 na jeden mililitrinfikují zásobním roztokem o zředění 1 : 2 000 HIV-1, kmene IlI-b(výsledná koncentrace 125 pg p24/ml; což postačuje pro získání 1% infikovaných buněk v den 1 a 25 až 100 % v den 4). Buňkyse infikují a nechají růst v médiu o složení RPMI 1640 (Whit-taker BioProducts), 10 % inaktivovaného fetálního hovězího séra, 4 mM glutaminu (Gibco Labs) a 1 : 100 penicilin-streptomycin(Gibco Labs).

Směs se inkubuje přes noc při 37°C v atmosféře obsahující 5 % oxidu uhličitého. B. Ošetření inhibitory Připraví se matrice s řádově nanomolární koncentrací látky 661 /3-(((4,7-dichlorbenzoxazol-2-yl)methyl)amino)amino/-5-ethyl- -6-methyl-2-(1H)-pyridinon/ a ΑΖΤ. V den 1 se alikvótní díly inhibitorů o objemu 125/Ul přidají ke stejným objemům buněk MT-4 20 infikovaných HIV (50 000 na jímku mikroplotny obsahující 96 mikrotitrových jímek pro buněčné kultury). V inkubaci se pokračujepo dobu 3 dnů při teplotě 37°C v atmosféře obsahující 5 % oxiduuhličitého. C. Měření šíření viru

Za použití mnohakanálového pipetoru se usazené buňky resus-pendují a potom se 125/Ul suspenze přenese na separátní mikrotit-rovou plotnu. Po usazení buněk se plotny zmrazí za účelem násle-dujícího stanovení antigenu HIV p24 v supernatantu.

Koncentrace antigenu HIV p24 se měří enzymatickým imunosta-novením, které je popsáno dále: alikvoty, v nichž má být měřenantigen p24 se přenesou do mikrojímek potažených monoklonálníprotilátkou, která je specifická pro jádrový antigen HIV. V tom-to okamžiku a také v jiných následujících vhodných stupních semikrojímky opláchnou. Potom se přidá biotinylovaná protilátkaspecifická vůči HIV a dále konjugát streptavidin-křenová per-oxidasa. Po přidání peroxidu vodíku a tetraměthylbenzidinovéhosubstrátu dojde k barevné reakci. Intenzita zbarvení je úměrnákoncentraci antigenu HIV p24. Příklad 7Výpočet stupně synergie U kombinací látky 661 (složení viz příklad 6B) s AZT (vizpříklad 6) vykazují výrazně posilnou inhibici šíření viru vesrovnání s jak látkou 661, tak látkou AZT samotnou. Účinnosttéto kombinace je vyšší než aditivní inhibice dosažená pomocílátky 661 a AZT. Získaná data se zpracují dvěma oddělenými způsoby: 21 1) Vypočítají se frakční inhibiční koncentrační poměry(FIC) způsobem popsaným v Elion a další, J. Biol. Chem., 203, 477 (1954). Minimální součet hodnot FIC, který představuje maxi-mální synergii odpovídá v případě kombinace látky 661 a AZT 0,4. 2) Synergie se také vyhodnocuje způsobem popsaným v Chou,T.-S. a další, "Applications of the Median-Effect Principle forthe Assessment of Low-Dose Risk of Carcinogens and for theQuantitation of Synergism and Antagonism of ChemotherapeuticAgents"; Harrap, K. R. a další, (eds.), New Avenues in Develop-mental Cancer Chemotherapy (1987), str. 37 a další.

Dosáhne se srovnatelných výsledků. Příklad 8 Příprava 3-/N-(5-ethyl-2-methoxy-6-methyl-3-pyridylmethyl)amino/--5-ethyl-6-methyl-2-(1H)-pyridinonu

Roztok 3-amino-5-ethyl-6-methyl-2-(1H)-pyrimidinonu (12,66 g,83,2 mmol), 5-ethyl-2-methoxy-6-methylnikotinaldehydu (15,0 g, 83,2 mmol) a kyseliny octové (5 kapek v 83 ml methanolu) se míchá18 hodin při teplotě místnosti pod atmosférou dusíku. Získanážlutooranžová sraženina se odfiltruje, promyje malým množstvímmethanolu a potom rozpustí za zahřívání ve směsi methanolu achloroformu (objemově 3:1). Výsledný roztok se nechá zchlad-nout na teplotu místnosti a potom se přidává natriumkyanborhydridtak dlouho, dokud nedojde k redukci celého množství Schiffovybáze. Roztok produktu se za vakua zkoncentruje a ke zbytku sepřidá voda a chloroform. Vodná vrstva se oddělí a ještě 3x extra-huje chloroformem. Organické extrakty se spojí, vysuší bezvodýmsíranem sodným, přefiltrují a za vakua zkoncentrují. Zbytekse přečistí sloupcovou chromatografií na silikagelu, přičemželuce se provádí směsí 5 % methanolu v chloroformu. Vhodné frak-ce se spojí a zkoncentrují. Po překrystalování zbytku z ethanoluse získá 10,5 g (40 %) sloučeniny uvedené v nadpisu. - 22 -

Analýza pro: vypočteno: nalezeno: C18H25N3°2 C, 68,54; H, 7,99; N, 13,32 C, 69,17; H, 7,99; N, 13,62 %. Příklad 9 3-/N-(2,6-dimethoxybenzyl)amino/-5-ethyl-6-methyl-2-(1H)-pyridinon 3-amino-5-ethyl-6-methyl-2-(1H)-pyridinon (152 mg, 1,00 mmol)a 2,6-dimethoxybenzaldehyd (168 mg, 1,00 mmol) se rozpustí vmethanolu (5 ml). Přidají se 2 kapky ledové kyseliny octové aroztok se míchá 2 hodiny. Potom se postupně k suspenzi přidánatriumborhydrid (378 mg, 10 mmol) a reakční směs se 30 minutmíchá při teplotě místnosti. Směs se zředí vodou a extrahujeethylacetátem. Ethylacetátová vrstva se promyje vodou, nasycenýmroztok chloridu sodného a vysuší síranem hořečnatým. Sušidlose odfiltruje a filtrát se za vakua zkoncentruje na bílou pevnoulátku (290 mg, výtěžek 96 %). Pevná látka se překrystaluje zethanolu, přičemž se získá titulní sloučenina ve formě bílýchpeříčkovitých jehliček (140 mg) o teplotě tání 220 až 222°C.

Analýza provypočteno: nalezeno: C17H22N2°3 C, 67,52; H, 7,34; N, 9,25 C, 67,69; H, 7,50; N, 9,18 %. 1h NMH (DMSO-άθ, 300 MHz): δ 11,1 (1E, s), 7,20 (ln,t, J=3 Hz), 6,65 (2H, d, J=8 Hz), 6,30 (1H, s) A,80(1Ξ, s), 4,16 <2H, s), 3,80 (6H, s) 2,26 (2H, q, J=7Ez), 2,00 (3H, s), 1,00 (3H, t, J=7 Hz). Příklad 10 3-/N- (5-ethyl-2-methoxybenzyl) amino/-5-ethyl-6-methyl-2- (1H) -pyri- dinon

Stupeň A: 4-ethylanisol 23 K suspenzi práškovitého hydroxidu draselného (9,18 g, 0,15 mol) v dimethylsulfoxidu (80 ml) se přidá 4-ethylfenol(500 g, 0,041 mol) a potom jodmethan (5,0 ml, 0,081 mol). Reakčnísměs se 10 minut míchá, potom se nalije do vody (800 ml) a extra-huje benzenem (3 x 200 ml). Organické extrakty se promyjí vodou,nasyceným roztokem chloridu sodného a vysuší síranem sodným.

Směs se přefiltruje a filtrát se za vakua zkoncentruje. Získanýsurový produkt (5,21 g) se chromatografuje na silikagelu za po-užití 5 % ethylacetátu v hexanu. Titulní sloučenina se získáve formě čirého oleje (4,67 g, výtěžek 84 %).

Iv NM3 (CDC13, 300 M3z): δ 7,38 (13, s), 7,11 (13, d, J=7 3z) , 6,83 (13, d, J=7 Hz), 3,79 (33, s), 3,58(23, q, 3=7 Hz), 1,21 (33, t, J=7 Hz).

Stupeň B: 4-ethyl-2-methoxybenzaldehyd

Roztok 4-ethylanisolu (4,54 g, 0,033 mol) v suchém etheru(45 ml) se ochladí na 0°C pod atmosférou dusíku. Ke vzniklémuroztoku se přidá n-butyllithium (13,3 ml, 2,5M roztoku v hexanu)prostřednictvím injekční stříkačky a reakční směs se přes nocmíchá při teplotě místnosti. Potom se reakční směs ochladí na-78°C a přidá se dimethylformamid (5,17 ml, 0,066 mol suchého,předestilovaného produktu). Reakční směs se 5 minut míchá při-78°C, 25 minut při 0°C a potom se přidá 10% kyselina chlorovodí-ková. Oddělí se vrstvy a organická fáze se promyje vodou, nasy-ceným roztok chloridu sodného a vysuší síranem sodným. Surovýprodukt se získá ve formě oleje (5,56 g) . 4,35 g táto látky sechromatografuje na silikagelu za použití 5 % ethylacetátu v he-xanu, jako elučního činidla. Získá se titulní sloučenina ve for-mě čirého oleje (2,18 g, výtěžek 51 %). -v NM?, (CDCI3, 300 MHz): 6 10.45 (13, s), 7.66 (13,d, 3=2 Hz), 7.39 (13, dá, 3=2, 8 3z), 6.92 (13, d, J=8 Hz), 3.91 (33, s), 2.62 (23, q, 3=7 Hz), 1.22(33, t, 3=7 Hz). 24

Stupeň C: 3-/N-(5-ethyl-2-methoxybenzyl)amino/-5-ethyl-6-methyl--2-(1H)-pyridinon 4-ethyl-2-methoxybenzaldehyd (0,561 g, 3,42 mmol) a 3-amino--5-ethyl-6-methyl-2-(1H)-pyridinon (0,520 g, 3,42 mmol) se spolunechají reagovat způsobem popsaným v souvislosti s přípravou3-/N-(2,6-dimethoxybenzyl)/amino-5-ethyl-6-methyl-2-(1H)-pyridinonu. Získaný surový produkt se překrystaluje z ethanolu, čímžse získá titulní sloučenina ve formě světle žlutých hranolů oteplotě tání 149 až 152°C (0,370 g).

Analýza pro: C18H24N2°2 vypočteno nalezeno: C, 71,71; H, 8,05; N, 9,32C, 71,93; H, 8,05; N, 9,18 %. NME (CDC13, 300 ΜΞζ): δ 11,33 (1E, bz s), 7,13(1H, d, 0=2 Ez), 7,06 (1E, dd, J=2, 8 Ez), 6,80 (1H,d, J=8 Ez), 6,21 (1E, s), 5,08 <1H, br, a), 4,28 <2E,d, J=6 Ez), 3,83 (3E, s) 2,55 (2Ξ, q, J=7 Ez), 2,32(2H, q J=7 Ez), 2,19 (3E, s), 1,16 (3H, t, J=7 Ez),1,05 <3E, t, 0=7 Hz). Příklad 11 3-/N-(2-methoxy-4,5-dimethylbenzyl)amino/-5-ethyl-6-methyl-2-(1H)-pyridinon

Stupeň A: 4,5-dimethyl-2-methoxybenzaldehyd

Roztok 3,4-dimethylanisolu (9,74 g, 0,071 mol) v suchémetheru (150 ml) se ochladí pod dusíkem na O°C. Pak se k roztokupřidá za míchání injekční stříkačkou n-butyllithium (28,6 ml,2,5M roztoku v hexanu). Reakční směs se míchá 1,5 hodiny při0°C a potom 16 hodin při teplotě místnosti. Potom se směs ochla-dí na 0°C a přidá se dimethylformamid (11,0 ml, 2 ekv.). Reakčnísměs se 1,5 hodiny míchá při 0°C, zředí se 10% vodnou kyselinou 25 chlorovodíkovou a oddělí se vrstvy. Etherový roztok se promyjevodou, nasyceným roztokem chloridu sodného a vysuší síranem ho-rečnatým. Sušidlo se odfiltruje a rozpouštědlo se za vakua odstra- »ní. Získají se 2 produkty (Rf = 0,37 a Rf = 0,25 při eluci 5 %ethylacetátu v hexanu na deskách se silikagelem pro chromatogra- *fii na tenké vrstvě). Surové produkty se rozdělí na silikageluza použití 5 % ethylacetátu v hexanu. Izoluje se látka s R^ = = 0,37 ve formě čirého oleje, který v průběhu stání ztuhne aje identifikován jako 5,6-dimethyl-2-methoxybenzaldehyd (1,4 g,výtěžek 11 %). Dále se získá titulní sloučenina ve formě bílépevné látky o teplotě 63 až 66°C (3,6 g, výtěžek 30 %), jakožtosloučenina s R^ = 0,25. 3-2 NMR (300 M2z, CDC13): δ 10,38 (1E, s), 7,57 (12,s), 6,76 (12, s), 3,89 (32, s), 2,32 (32, s), 2,22(32, s).

Stupeň B: 3-/N-(2-methoxy-4,5-dimethylbenzyl) amino/-5-ethyl-6--methyl-2-(1H)-pyridinon 4,5-dimethyl-2-methoxybenzaldehyd (240 mg, 1,45 mmol) senechá reagovat s 3-amino-5-ethyl-6-methyl-2-(1H) -pyridinonem(220 mg, 1,45 mmol) způsobem popsaným v souvislosti s přípravou3-/N-(2,6-dimethoxybenzyl)/amino-5-ethyl-6-methyl-2-(1H)-pyri-dinonu. Získaný surový produkt (426 mg, výtěžek 97 %) se překry-staluje z methanolu (25 ml) čímž se získá titulní sloučeninave formě světle žluté pevné látly (273 mg) o teplotě tání 175,5až 177°C. 3-2 NMK (300 MHz, DMS0-d6): δ 11.1 (12, br, s), 6.97(12, s), 6.73 (12, s), 6.08 (12, s), 5.3 (br, s. 12), 4.10 (22, s), 3.77 (32, s), 2.22 (22, q, J=7.6 Hz), 2.13 (32, s), 2.09 (32,s), 2.01 (32, s) 0.97 (32, t, J=7.5 Ez). 26

Shora uvedené příklady provedení, které blíže objasňujípředložený vynález, mají výhradně ilustrativní charakter a vžádném ohledu neomezují rozsah vynálezu, který je charakterizován pouze následujícími nároky. Do rozsahu vynálezu spadaji všechny běžné variace, adaptace a modifikace všech aspektůvynálezu uvedených v tomto popisu.

Claims

- ϊ - J Ρ A Τ Ε Ν Τ Ο V Ν Λ .RJ\A. γ %

1. Synergická kombinace sloučenin inhibující HIV - reversnítranskriptasu, vyznačující se tím, že obsahu-je sloučeninu z třídy A a sloučeninu z třídy B, přičemž třída Av podstatě zahrnuje: 3-/ ((4,7-dichlorbenzoxazol-2-yl)methyl)amino/-5-ethyl-6-methyl--2-(1H)-pyridinon, 3-/((4,7-dimethylbenzoxazol-2-yl)methyl)amino/-5-ethyl-6-methyl--2-(1H)-pyridinon, 3-/ ( (7-chlorbenzoxazol-2-yl) methyl) amino/-5-ethyl-6-methyl-2- (1H) --pyridinon, 3-/ ( (7-methylbenzoxazol-2-yl)methyl) amino/-5-ethyl-6-methyl-2- (1H) -pyridinon, 3-/ ( (4-f luorbenzoxazol-2-yl)methyl) amino/-5-ethyl-6-methyl-2- (1H) -pyridinon, 3-/ ( (7-fluorbenzoxazol-2-yl)methyl)amino/-5-ethyl-6-methyl-2-(1H)-pyridinon, 3-/ ((benzoxazol-2-yl)methyl)amino/-5-ethyl-6-methyl-2-(1H)-pyridinon, 3-/ ((4-chlorbenzoxazol-2-yl)methyl)amino/-5-ethyl-6-methvl-2-(1H)--pyridinon, 3-/((4-fluor-7-chlorbenzoxazol-2-yl)methyl)amino/-5-ethyl-6-methyl--2-(1H)-pyridinon, 3-/2- (benzoxazol-2-yl) ethyl/-5-ethyl-6-methyl-2- (1H) -pyridinon, · 3-/N- (5-sthyl-2-methoxy-6-methyl-3-pyridylmethyl) amino/-5-ethyl-o- ’-methvl-2-(1H)-pyridinon, 3-/N- ( 5,6-dimethyl-2-methoxy-3-pyridylmethyl) amino/-5-ethyl-6-methyl--2-(1H)-pyridinon, 3-/N- (5-ethyl-2-methoxybenzyl) amine/-5-ethyl-o-methy 1-2- (1H) -pyridinon, 3-/N- ( 2-methoxy-4,5-dimethylbenzyl) amino/-5-ethyl-6-methyl-2- (1H) --pyridinon a 3-/N- (2,6-dimethoxybenzyl)amino/-5-ethyl-6-methyl-2-(1H)-pyridinon; II a třída B v podstatě zahrnuje: 3'-azido-2,3'-dideoxythymidin, « . 2',3'-dideoxycytidin, F * 2 ' ,3 '-dideoxyinosin, 2',3'-didehydro-2',3'-dideoxythymidin, 1-/(2-hydroxyethoxy)methyl/-6-fenylthiothymidin a3'-fluor-2',3'-dideoxythymidin a jejich farmaceuticky vhodné soli, hydráty a estery.
2. Kombinace podle nároku 1, vyznačující setím, že jako sloučeninu z třídy A obsahuje sloučeninu zvole-nou ze souboru v podstatě zahrnujícího 3-/((4,7-dichlorbenzoxazol-2-yl)methyl)amino/-5-ethyl-6-methyl-2-(1H)-pyridinon a 3-/((3,7--dimethylbenzoxazol-2-yl)methyl)amino/-5-ethyl-6-methyl-2-(1H)-pyridinon a jako sloučeninu z třídy B obsahuje sloučeninu zvolenouze souboru v podstatě zahrnujícího 3'-azido-2',3’-dideoxythymidina 2',3'-dideoxyinosin; nebo jejich farmaceuticky vhodné soli, hydráty a estery.
3. Kombinace podle nároku 1, vyznačující setím, že jako sloučeninu z třídy A obsahuje sloučeninu zvole-nou ze souboru v podstatě zahrnujícího 3-/((4,7-dichlorbenzoxazol-2-yl)methyl)amino/-5-ethyl-6-methyl-2-(1H) -pyridinon a jako slou-čeninu z třídy B obsahuje sloučeninu zvolenou ze souboru v podsta 4 tě zahrnujícího 3’-azido-2,3'-dideoxythymidin; a jejich farmaceu- \ ticky vhodné adiční soli, hydráty a estery.
4. Kombinace podle nároku 1, vyznačující setím, že jako sloučeninu z třídy A obsahuje sloučeninu zvole-nou ze souboru v podstatě zahrnujícího 3-/((4,7-dimethylbenzoxa-zol-2-yl)methyl)amino/-5-ethyl-o-methyl-2-(1H)-pyridinon a jakosloučeninu z třídy B obsahuje sloučeninu zvolenou ze souboru vpodstatě zahrnujícího 31-azido-2,3'-dideoxythymidin; a jejich farmaceuticky vhodné adiční soli, hydráty a estery. III
5. Kombinace podle nároku 1, vyznačující setím, že jako sloučeninu z třídy A obsahuje sloučeninu zvole-nou ze souboru v podstatě zahrnujícího 3-/((4,7-dimethylbenzoxa-zol-2-yl)methyl)amino/-5-ethyl-6-methyl-2-(1H)-pyridinon a jakosloučeninu z třídy B obsahuje sloučeninu zvolenou ze souboru vpodstatě zahrnujícího 2',3'-dideoxyinosin; a jejich farmaceutic-ky vhodné adiční soli, hydráty a estery.
6. Farmaceutický přípravek užitečný pro synergickou inhibi-ci HIV-reversní transkriptasy, vyznačující setím, že kromě farmaceuticky vhodného nosiče obsahuje jako účin-nou složku účinné množství kombinace podle kteréhokoliv z nároků 1 až 5.
7. Farmaceutický přípravek užitečný pro prevenci nebo léčeníinfekce HIV nebo pro léčení AIDS nebo ARC, vyznačuj í -cí se tím, že kromě farmaceuticky vhodného nosiče obsahu-je jako účinnou složku účinnné množství kombinace podle kterého-koliv z nároku 1 až 5. MP-1166-91-HO *