CZ112296A3 - ANTIMICROBIAL PROTEINS, RECOMBINANT DNAs ENCODING THEREOF AND THEIR USE FOR TRANSFORMATION OF PLANTS AND FIGHTING FUNGI - Google Patents
ANTIMICROBIAL PROTEINS, RECOMBINANT DNAs ENCODING THEREOF AND THEIR USE FOR TRANSFORMATION OF PLANTS AND FIGHTING FUNGI Download PDFInfo
- Publication number
- CZ112296A3 CZ112296A3 CZ961122A CZ112296A CZ112296A3 CZ 112296 A3 CZ112296 A3 CZ 112296A3 CZ 961122 A CZ961122 A CZ 961122A CZ 112296 A CZ112296 A CZ 112296A CZ 112296 A3 CZ112296 A3 CZ 112296A3
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- protein
- cys
- proteins
- sequence
- dna
- Prior art date
Links
- 230000000845 anti-microbial effect Effects 0.000 title claims abstract description 27
- 241000233866 Fungi Species 0.000 title claims description 6
- 230000009466 transformation Effects 0.000 title description 2
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 title 1
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 title 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 133
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims abstract description 123
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 claims abstract description 18
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 claims abstract description 18
- 239000004599 antimicrobial Substances 0.000 claims abstract description 9
- 239000013598 vector Substances 0.000 claims abstract description 8
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims abstract description 3
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims abstract 2
- 244000005700 microbiome Species 0.000 claims description 11
- 230000000843 anti-fungal effect Effects 0.000 claims description 10
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 10
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 claims description 5
- 239000000463 material Substances 0.000 claims description 4
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 4
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 claims description 3
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 claims description 3
- 230000001679 anti-nematodal effect Effects 0.000 claims description 3
- 230000000840 anti-viral effect Effects 0.000 claims description 3
- 229940121375 antifungal agent Drugs 0.000 claims description 3
- 230000002363 herbicidal effect Effects 0.000 claims description 3
- 239000004009 herbicide Substances 0.000 claims description 3
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 claims description 3
- 239000011368 organic material Substances 0.000 claims description 3
- 230000008635 plant growth Effects 0.000 claims description 3
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 claims description 2
- 238000000605 extraction Methods 0.000 claims description 2
- 238000002803 maceration Methods 0.000 claims description 2
- 230000008488 polyadenylation Effects 0.000 claims description 2
- 238000000638 solvent extraction Methods 0.000 claims description 2
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 97
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 34
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 description 25
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 22
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 17
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 17
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 17
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 16
- 238000004007 reversed phase HPLC Methods 0.000 description 9
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 241000335053 Beta vulgaris Species 0.000 description 7
- 235000021533 Beta vulgaris Nutrition 0.000 description 7
- 230000000692 anti-sense effect Effects 0.000 description 7
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 7
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 7
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 6
- DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M Sodium laurylsulphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- KWIUHFFTVRNATP-UHFFFAOYSA-N glycine betaine Chemical compound C[N+](C)(C)CC([O-])=O KWIUHFFTVRNATP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N silicon dioxide Inorganic materials O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 101710083587 Antifungal protein Proteins 0.000 description 5
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 5
- 241000219310 Beta vulgaris subsp. vulgaris Species 0.000 description 4
- 102000012286 Chitinases Human genes 0.000 description 4
- 108010022172 Chitinases Proteins 0.000 description 4
- 240000005979 Hordeum vulgare Species 0.000 description 4
- 235000007340 Hordeum vulgare Nutrition 0.000 description 4
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 244000061456 Solanum tuberosum Species 0.000 description 4
- 235000002595 Solanum tuberosum Nutrition 0.000 description 4
- 235000021536 Sugar beet Nutrition 0.000 description 4
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 4
- 108010016616 cysteinylglycine Proteins 0.000 description 4
- VPZXBVLAVMBEQI-UHFFFAOYSA-N glycyl-DL-alpha-alanine Natural products OC(=O)C(C)NC(=O)CN VPZXBVLAVMBEQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- XBGGUPMXALFZOT-UHFFFAOYSA-N glycyl-L-tyrosine hemihydrate Natural products NCC(=O)NC(C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 XBGGUPMXALFZOT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 108010087823 glycyltyrosine Proteins 0.000 description 4
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 4
- 239000000377 silicon dioxide Substances 0.000 description 4
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 241000530549 Cercospora beticola Species 0.000 description 3
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 3
- 108010079364 N-glycylalanine Proteins 0.000 description 3
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 3
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 3
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 3
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 3
- 229940098396 barley grain Drugs 0.000 description 3
- 229960003237 betaine Drugs 0.000 description 3
- 238000005277 cation exchange chromatography Methods 0.000 description 3
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 3
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 3
- 238000004811 liquid chromatography Methods 0.000 description 3
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 3
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 description 3
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 description 3
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 3
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 2
- KTXKIYXZQFWJKB-VZFHVOOUSA-N Ala-Thr-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O KTXKIYXZQFWJKB-VZFHVOOUSA-N 0.000 description 2
- 235000014698 Brassica juncea var multisecta Nutrition 0.000 description 2
- 235000006008 Brassica napus var napus Nutrition 0.000 description 2
- 240000000385 Brassica napus var. napus Species 0.000 description 2
- 235000006618 Brassica rapa subsp oleifera Nutrition 0.000 description 2
- 235000004977 Brassica sinapistrum Nutrition 0.000 description 2
- 241001157813 Cercospora Species 0.000 description 2
- 101710151414 Chitinase 4 Proteins 0.000 description 2
- ATPDEYTYWVMINF-ZLUOBGJFSA-N Cys-Cys-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O ATPDEYTYWVMINF-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 2
- ZMWOJVAXTOUHAP-ZKWXMUAHSA-N Cys-Ile-Gly Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)NCC(=O)O)NC(=O)[C@H](CS)N ZMWOJVAXTOUHAP-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 2
- 101710107414 Endochitinase 4 Proteins 0.000 description 2
- RTOOAKXIJADOLL-GUBZILKMSA-N Glu-Asp-His Chemical compound C1=C(NC=N1)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)N RTOOAKXIJADOLL-GUBZILKMSA-N 0.000 description 2
- KQDMENMTYNBWMR-WHFBIAKZSA-N Gly-Asp-Ala Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O KQDMENMTYNBWMR-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 2
- XBGGUPMXALFZOT-VIFPVBQESA-N Gly-Tyr Chemical compound NCC(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 XBGGUPMXALFZOT-VIFPVBQESA-N 0.000 description 2
- WRFOZIJRODPLIA-QWRGUYRKSA-N Gly-Tyr-Cys Chemical compound C1=CC(=CC=C1C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)NC(=O)CN)O WRFOZIJRODPLIA-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 2
- TWVKGYNQQAUNRN-ACZMJKKPSA-N Ile-Ser Chemical compound CC[C@H](C)[C@H]([NH3+])C(=O)N[C@@H](CO)C([O-])=O TWVKGYNQQAUNRN-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 2
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 2
- 101710096342 Pathogenesis-related protein Proteins 0.000 description 2
- 101710194991 Pro-hevein Proteins 0.000 description 2
- ZUGXSSFMTXKHJS-ZLUOBGJFSA-N Ser-Ala-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O ZUGXSSFMTXKHJS-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 2
- WGDYNRCOQRERLZ-KKUMJFAQSA-N Ser-Lys-Phe Chemical compound C1=CC=C(C=C1)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CO)N WGDYNRCOQRERLZ-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 2
- YRNBANYVJJBGDI-VZFHVOOUSA-N Thr-Ala-Cys Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)N)O YRNBANYVJJBGDI-VZFHVOOUSA-N 0.000 description 2
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Chemical compound CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 2
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 description 2
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 description 2
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 description 2
- 108010005233 alanylglutamic acid Proteins 0.000 description 2
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 2
- 235000013339 cereals Nutrition 0.000 description 2
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 2
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 description 2
- 108010004073 cysteinylcysteine Proteins 0.000 description 2
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 2
- 238000004925 denaturation Methods 0.000 description 2
- 230000036425 denaturation Effects 0.000 description 2
- VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N dithiothreitol Chemical compound SC[C@@H](O)[C@H](O)CS VHJLVAABSRFDPM-QWWZWVQMSA-N 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 2
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 2
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 description 2
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 2
- 230000009036 growth inhibition Effects 0.000 description 2
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 2
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 238000000520 microinjection Methods 0.000 description 2
- 239000011824 nuclear material Substances 0.000 description 2
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 2
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 2
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 2
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 2
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 2
- 108010048397 seryl-lysyl-leucine Proteins 0.000 description 2
- 108010071207 serylmethionine Proteins 0.000 description 2
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 2
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 2
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 2
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- SXGZJKUKBWWHRA-UHFFFAOYSA-N 2-(N-morpholiniumyl)ethanesulfonate Chemical compound [O-]S(=O)(=O)CC[NH+]1CCOCC1 SXGZJKUKBWWHRA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000589158 Agrobacterium Species 0.000 description 1
- 241000589155 Agrobacterium tumefaciens Species 0.000 description 1
- BYXHQQCXAJARLQ-ZLUOBGJFSA-N Ala-Ala-Ala Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O BYXHQQCXAJARLQ-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 1
- YYSWCHMLFJLLBJ-ZLUOBGJFSA-N Ala-Ala-Ser Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O YYSWCHMLFJLLBJ-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 1
- PBAMJJXWDQXOJA-FXQIFTODSA-N Ala-Asp-Arg Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCN=C(N)N PBAMJJXWDQXOJA-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- IKKVASZHTMKJIR-ZKWXMUAHSA-N Ala-Asp-Val Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O IKKVASZHTMKJIR-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 1
- DAEFQZCYZKRTLR-ZLUOBGJFSA-N Ala-Cys-Asp Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O DAEFQZCYZKRTLR-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 1
- KRHRBKYBJXMYBB-WHFBIAKZSA-N Ala-Cys-Gly Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)NCC(O)=O KRHRBKYBJXMYBB-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- IYCZBJXFSZSHPN-DLOVCJGASA-N Ala-Cys-Phe Chemical compound [H]N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(O)=O IYCZBJXFSZSHPN-DLOVCJGASA-N 0.000 description 1
- FOHXUHGZZKETFI-JBDRJPRFSA-N Ala-Ile-Cys Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)NC(=O)[C@H](C)N FOHXUHGZZKETFI-JBDRJPRFSA-N 0.000 description 1
- RTZCUEHYUQZIDE-WHFBIAKZSA-N Ala-Ser-Gly Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(O)=O RTZCUEHYUQZIDE-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- MMLHRUJLOUSRJX-CIUDSAMLSA-N Ala-Ser-Lys Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCCN MMLHRUJLOUSRJX-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- NZGRHTKZFSVPAN-BIIVOSGPSA-N Ala-Ser-Pro Chemical compound C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)N NZGRHTKZFSVPAN-BIIVOSGPSA-N 0.000 description 1
- QKHWNPQNOHEFST-VZFHVOOUSA-N Ala-Thr-Cys Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)NC(=O)[C@H](C)N)O QKHWNPQNOHEFST-VZFHVOOUSA-N 0.000 description 1
- KLKARCOHVHLAJP-UWJYBYFXSA-N Ala-Tyr-Cys Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](Cc1ccc(O)cc1)C(=O)N[C@@H](CS)C(O)=O KLKARCOHVHLAJP-UWJYBYFXSA-N 0.000 description 1
- 244000291564 Allium cepa Species 0.000 description 1
- 235000002732 Allium cepa var. cepa Nutrition 0.000 description 1
- 244000144730 Amygdalus persica Species 0.000 description 1
- 101000686977 Arabidopsis thaliana Pathogenesis-related protein 5 Proteins 0.000 description 1
- XTGGTAWGUFXJSV-NAKRPEOUSA-N Arg-Cys-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)N XTGGTAWGUFXJSV-NAKRPEOUSA-N 0.000 description 1
- DGFGDPVSDQPANQ-XGEHTFHBSA-N Arg-Cys-Thr Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)N)O DGFGDPVSDQPANQ-XGEHTFHBSA-N 0.000 description 1
- AUIJUTGLPVHIRT-FXQIFTODSA-N Arg-Ser-Cys Chemical compound C(C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)N)CN=C(N)N AUIJUTGLPVHIRT-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 1
- BDMIFVIWCNLDCT-CIUDSAMLSA-N Asn-Arg-Glu Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O BDMIFVIWCNLDCT-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- KXEGPPNPXOKKHK-ZLUOBGJFSA-N Asn-Asp-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O KXEGPPNPXOKKHK-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 1
- HLTLEIXYIJDFOY-ZLUOBGJFSA-N Asn-Cys-Asn Chemical compound NC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O HLTLEIXYIJDFOY-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 1
- KLKHFFMNGWULBN-VKHMYHEASA-N Asn-Gly Chemical compound NC(=O)C[C@H](N)C(=O)NCC(O)=O KLKHFFMNGWULBN-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- KAZKWIKPEPABOO-IHRRRGAJSA-N Asn-Met-Tyr Chemical compound CSCC[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(C=C1)O)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)N KAZKWIKPEPABOO-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 1
- PPCORQFLAZWUNO-QWRGUYRKSA-N Asn-Phe-Gly Chemical compound C1=CC=C(C=C1)C[C@@H](C(=O)NCC(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)N PPCORQFLAZWUNO-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 1
- VBKIFHUVGLOJKT-FKZODXBYSA-N Asn-Thr Chemical compound C[C@@H]([C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)N)O VBKIFHUVGLOJKT-FKZODXBYSA-N 0.000 description 1
- QYRMBFWDSFGSFC-OLHMAJIHSA-N Asn-Thr-Asn Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)N)O QYRMBFWDSFGSFC-OLHMAJIHSA-N 0.000 description 1
- YSYTWUMRHSFODC-QWRGUYRKSA-N Asn-Tyr-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(=O)NCC(O)=O YSYTWUMRHSFODC-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 1
- WSWYMRLTJVKRCE-ZLUOBGJFSA-N Asp-Ala-Asp Chemical compound OC(=O)C[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O WSWYMRLTJVKRCE-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 1
- WJHYGGVCWREQMO-GHCJXIJMSA-N Asp-Cys-Ile Chemical compound [H]N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O WJHYGGVCWREQMO-GHCJXIJMSA-N 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 240000007124 Brassica oleracea Species 0.000 description 1
- 235000003899 Brassica oleracea var acephala Nutrition 0.000 description 1
- 235000011301 Brassica oleracea var capitata Nutrition 0.000 description 1
- 235000001169 Brassica oleracea var oleracea Nutrition 0.000 description 1
- 235000004936 Bromus mango Nutrition 0.000 description 1
- 101100289888 Caenorhabditis elegans lys-5 gene Proteins 0.000 description 1
- 229920002101 Chitin Polymers 0.000 description 1
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 1
- 102000000989 Complement System Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010069112 Complement System Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102100031673 Corneodesmosin Human genes 0.000 description 1
- 101710139375 Corneodesmosin Proteins 0.000 description 1
- 229920000742 Cotton Polymers 0.000 description 1
- 244000241257 Cucumis melo Species 0.000 description 1
- 235000015510 Cucumis melo subsp melo Nutrition 0.000 description 1
- HRJLVSQKBLZHSR-ZLUOBGJFSA-N Cys-Asn-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O HRJLVSQKBLZHSR-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 1
- SQJSYLDKQBZQTG-FXQIFTODSA-N Cys-Asn-Met Chemical compound CSCC[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CC(=O)N)NC(=O)[C@H](CS)N SQJSYLDKQBZQTG-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- BCSYBBMFGLHCOA-ACZMJKKPSA-N Cys-Glu-Cys Chemical compound SC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CS)C(O)=O BCSYBBMFGLHCOA-ACZMJKKPSA-N 0.000 description 1
- MUZAUPFGPMMZSS-GUBZILKMSA-N Cys-Glu-Lys Chemical compound C(CCN)C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCC(=O)O)NC(=O)[C@H](CS)N MUZAUPFGPMMZSS-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- VDUPGIDTWNQAJD-CIUDSAMLSA-N Cys-Lys-Cys Chemical compound NCCCC[C@H](NC(=O)[C@@H](N)CS)C(=O)N[C@@H](CS)C(O)=O VDUPGIDTWNQAJD-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- 244000000626 Daucus carota Species 0.000 description 1
- 235000002767 Daucus carota Nutrition 0.000 description 1
- 241000192125 Firmicutes Species 0.000 description 1
- 235000016623 Fragaria vesca Nutrition 0.000 description 1
- 240000009088 Fragaria x ananassa Species 0.000 description 1
- 235000011363 Fragaria x ananassa Nutrition 0.000 description 1
- 108700007698 Genetic Terminator Regions Proteins 0.000 description 1
- BUVMZWZNWMKASN-QEJZJMRPSA-N Glu-Asn-Trp Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)N)C(O)=O)=CNC2=C1 BUVMZWZNWMKASN-QEJZJMRPSA-N 0.000 description 1
- XMBSYZWANAQXEV-QWRGUYRKSA-N Glu-Phe Chemical compound OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 XMBSYZWANAQXEV-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- UGVQELHRNUDMAA-BYPYZUCNSA-N Gly-Ala-Gly Chemical compound [NH3+]CC(=O)N[C@@H](C)C(=O)NCC([O-])=O UGVQELHRNUDMAA-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- QXPRJQPCFXMCIY-NKWVEPMBSA-N Gly-Ala-Pro Chemical compound C[C@@H](C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)NC(=O)CN QXPRJQPCFXMCIY-NKWVEPMBSA-N 0.000 description 1
- JXYMPBCYRKWJEE-BQBZGAKWSA-N Gly-Arg-Ala Chemical compound [H]NCC(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O JXYMPBCYRKWJEE-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- PYUCNHJQQVSPGN-BQBZGAKWSA-N Gly-Arg-Cys Chemical compound C(C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)NC(=O)CN)CN=C(N)N PYUCNHJQQVSPGN-BQBZGAKWSA-N 0.000 description 1
- NMROINAYXCACKF-WHFBIAKZSA-N Gly-Cys-Cys Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CS)C(O)=O NMROINAYXCACKF-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- CEXINUGNTZFNRY-BYPYZUCNSA-N Gly-Cys-Gly Chemical compound [NH3+]CC(=O)N[C@@H](CS)C(=O)NCC([O-])=O CEXINUGNTZFNRY-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- BIRKKBCSAIHDDF-WDSKDSINSA-N Gly-Glu-Cys Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CS)C(O)=O BIRKKBCSAIHDDF-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- ITZOBNKQDZEOCE-NHCYSSNCSA-N Gly-Ile-Lys Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)NC(=O)CN ITZOBNKQDZEOCE-NHCYSSNCSA-N 0.000 description 1
- PAWIVEIWWYGBAM-YUMQZZPRSA-N Gly-Leu-Ala Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O PAWIVEIWWYGBAM-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- IUZGUFAJDBHQQV-YUMQZZPRSA-N Gly-Leu-Asn Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O IUZGUFAJDBHQQV-YUMQZZPRSA-N 0.000 description 1
- YLEIWGJJBFBFHC-KBPBESRZSA-N Gly-Phe-Lys Chemical compound NCCCC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CN)CC1=CC=CC=C1 YLEIWGJJBFBFHC-KBPBESRZSA-N 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- VPZXBVLAVMBEQI-VKHMYHEASA-N Glycyl-alanine Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)CN VPZXBVLAVMBEQI-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- 241000219146 Gossypium Species 0.000 description 1
- 244000020551 Helianthus annuus Species 0.000 description 1
- 235000003222 Helianthus annuus Nutrition 0.000 description 1
- 101800002189 Hevein Proteins 0.000 description 1
- LEDRIAHEWDJRMF-CFMVVWHZSA-N Ile-Asn-Tyr Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=C(O)C=C1 LEDRIAHEWDJRMF-CFMVVWHZSA-N 0.000 description 1
- PARSHQDZROHERM-NHCYSSNCSA-N Ile-Lys-Gly Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)NCC(=O)O)N PARSHQDZROHERM-NHCYSSNCSA-N 0.000 description 1
- RKQAYOWLSFLJEE-SVSWQMSJSA-N Ile-Thr-Cys Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)N RKQAYOWLSFLJEE-SVSWQMSJSA-N 0.000 description 1
- ZSESFIFAYQEKRD-CYDGBPFRSA-N Ile-Val-Met Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)O)N ZSESFIFAYQEKRD-CYDGBPFRSA-N 0.000 description 1
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- ZUKPVRWZDMRIEO-VKHMYHEASA-N L-cysteinylglycine Chemical compound SC[C@H]([NH3+])C(=O)NCC([O-])=O ZUKPVRWZDMRIEO-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N L-threonine Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- 240000008415 Lactuca sativa Species 0.000 description 1
- 235000003228 Lactuca sativa Nutrition 0.000 description 1
- CNNQBZRGQATKNY-DCAQKATOSA-N Leu-Arg-Cys Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)N CNNQBZRGQATKNY-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- VCHVSKNMTXWIIP-SRVKXCTJSA-N Leu-Lys-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O VCHVSKNMTXWIIP-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000209510 Liliopsida Species 0.000 description 1
- 235000007688 Lycopersicon esculentum Nutrition 0.000 description 1
- FZIJIFCXUCZHOL-CIUDSAMLSA-N Lys-Ala-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CCCCN FZIJIFCXUCZHOL-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- VHFFQUSNFFIZBT-CIUDSAMLSA-N Lys-Ala-Cys Chemical compound C[C@@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCCN)N VHFFQUSNFFIZBT-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- SJNZALDHDUYDBU-IHRRRGAJSA-N Lys-Arg-Lys Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCCN=C(N)N)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(O)=O SJNZALDHDUYDBU-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 1
- SSYOBDBNBQBSQE-SRVKXCTJSA-N Lys-Cys-Leu Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O SSYOBDBNBQBSQE-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- DTUZCYRNEJDKSR-NHCYSSNCSA-N Lys-Gly-Ile Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCCCN DTUZCYRNEJDKSR-NHCYSSNCSA-N 0.000 description 1
- MSSJJDVQTFTLIF-KBPBESRZSA-N Lys-Phe-Gly Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](Cc1ccccc1)C(=O)NCC(O)=O MSSJJDVQTFTLIF-KBPBESRZSA-N 0.000 description 1
- HKXSZKJMDBHOTG-CIUDSAMLSA-N Lys-Ser-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CCCCN HKXSZKJMDBHOTG-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 1
- 235000011430 Malus pumila Nutrition 0.000 description 1
- 244000070406 Malus silvestris Species 0.000 description 1
- 235000015103 Malus silvestris Nutrition 0.000 description 1
- 240000007228 Mangifera indica Species 0.000 description 1
- 235000014826 Mangifera indica Nutrition 0.000 description 1
- 101000763602 Manilkara zapota Thaumatin-like protein 1 Proteins 0.000 description 1
- 101000763586 Manilkara zapota Thaumatin-like protein 1a Proteins 0.000 description 1
- CGUYGMFQZCYJSG-DCAQKATOSA-N Met-Lys-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O CGUYGMFQZCYJSG-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- CRVSHEPROQHVQT-AVGNSLFASA-N Met-Met-Lys Chemical compound CSCC[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)O)N CRVSHEPROQHVQT-AVGNSLFASA-N 0.000 description 1
- FDGAMQVRGORBDV-GUBZILKMSA-N Met-Ser-Met Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCSC FDGAMQVRGORBDV-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- MIXPUVSPPOWTCR-FXQIFTODSA-N Met-Ser-Ser Chemical compound [H]N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O MIXPUVSPPOWTCR-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- LBSWWNKMVPAXOI-GUBZILKMSA-N Met-Val-Ser Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CO)C(O)=O LBSWWNKMVPAXOI-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- 101000966653 Musa acuminata Glucan endo-1,3-beta-glucosidase Proteins 0.000 description 1
- 240000005561 Musa balbisiana Species 0.000 description 1
- 235000018290 Musa x paradisiaca Nutrition 0.000 description 1
- AUEJLPRZGVVDNU-UHFFFAOYSA-N N-L-tyrosyl-L-leucine Natural products CC(C)CC(C(O)=O)NC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 AUEJLPRZGVVDNU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XMBSYZWANAQXEV-UHFFFAOYSA-N N-alpha-L-glutamyl-L-phenylalanine Natural products OC(=O)CCC(N)C(=O)NC(C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 XMBSYZWANAQXEV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NSTPXGARCQOSAU-VIFPVBQESA-N N-formyl-L-phenylalanine Chemical compound O=CN[C@H](C(=O)O)CC1=CC=CC=C1 NSTPXGARCQOSAU-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- 101100205189 Neurospora crassa (strain ATCC 24698 / 74-OR23-1A / CBS 708.71 / DSM 1257 / FGSC 987) leu-5 gene Proteins 0.000 description 1
- 244000061176 Nicotiana tabacum Species 0.000 description 1
- 235000002637 Nicotiana tabacum Nutrition 0.000 description 1
- 240000007594 Oryza sativa Species 0.000 description 1
- 235000007164 Oryza sativa Nutrition 0.000 description 1
- AUJWXNGCAQWLEI-KBPBESRZSA-N Phe-Lys-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)NCC(O)=O AUJWXNGCAQWLEI-KBPBESRZSA-N 0.000 description 1
- BPCLGWHVPVTTFM-QWRGUYRKSA-N Phe-Ser-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(O)=O BPCLGWHVPVTTFM-QWRGUYRKSA-N 0.000 description 1
- WFHYFCWBLSKEMS-KKUMJFAQSA-N Pro-Glu-Phe Chemical compound N([C@@H](CCC(=O)O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(O)=O)C(=O)[C@@H]1CCCN1 WFHYFCWBLSKEMS-KKUMJFAQSA-N 0.000 description 1
- QEWBZBLXDKIQPS-STQMWFEESA-N Pro-Gly-Tyr Chemical compound [H]N1CCC[C@H]1C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(O)C=C1)C(O)=O QEWBZBLXDKIQPS-STQMWFEESA-N 0.000 description 1
- 102100034688 Protein PEAK3 Human genes 0.000 description 1
- 101710089604 Protein PEAK3 Proteins 0.000 description 1
- 235000006040 Prunus persica var persica Nutrition 0.000 description 1
- 235000014443 Pyrus communis Nutrition 0.000 description 1
- 240000001987 Pyrus communis Species 0.000 description 1
- SSJMZMUVNKEENT-IMJSIDKUSA-N Ser-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CO SSJMZMUVNKEENT-IMJSIDKUSA-N 0.000 description 1
- BTKUIVBNGBFTTP-WHFBIAKZSA-N Ser-Ala-Gly Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)NCC(O)=O BTKUIVBNGBFTTP-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- UBRXAVQWXOWRSJ-ZLUOBGJFSA-N Ser-Asn-Asp Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CO)N)C(=O)N UBRXAVQWXOWRSJ-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 1
- BTPAWKABYQMKKN-LKXGYXEUSA-N Ser-Asp-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O BTPAWKABYQMKKN-LKXGYXEUSA-N 0.000 description 1
- MIJWOJAXARLEHA-WDSKDSINSA-N Ser-Gly-Glu Chemical compound OC[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(O)=O MIJWOJAXARLEHA-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- KCGIREHVWRXNDH-GARJFASQSA-N Ser-Leu-Pro Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)NC(=O)[C@H](CO)N KCGIREHVWRXNDH-GARJFASQSA-N 0.000 description 1
- XUDRHBPSPAPDJP-SRVKXCTJSA-N Ser-Lys-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@@H](N)CO XUDRHBPSPAPDJP-SRVKXCTJSA-N 0.000 description 1
- AXOHAHIUJHCLQR-IHRRRGAJSA-N Ser-Met-Tyr Chemical compound CSCC[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC1=CC=C(C=C1)O)C(=O)O)NC(=O)[C@H](CO)N AXOHAHIUJHCLQR-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 1
- QMCDMHWAKMUGJE-IHRRRGAJSA-N Ser-Phe-Val Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC1=CC=CC=C1)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(O)=O QMCDMHWAKMUGJE-IHRRRGAJSA-N 0.000 description 1
- WLJPJRGQRNCIQS-ZLUOBGJFSA-N Ser-Ser-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O WLJPJRGQRNCIQS-ZLUOBGJFSA-N 0.000 description 1
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BQCADISMDOOEFD-UHFFFAOYSA-N Silver Chemical compound [Ag] BQCADISMDOOEFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 240000003768 Solanum lycopersicum Species 0.000 description 1
- 101000611441 Solanum lycopersicum Pathogenesis-related leaf protein 6 Proteins 0.000 description 1
- 235000009184 Spondias indica Nutrition 0.000 description 1
- 101710203193 Thaumatin-like protein Proteins 0.000 description 1
- LYGKYFKSZTUXGZ-ZDLURKLDSA-N Thr-Cys-Gly Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)NCC(O)=O LYGKYFKSZTUXGZ-ZDLURKLDSA-N 0.000 description 1
- ASJDFGOPDCVXTG-KATARQTJSA-N Thr-Cys-Leu Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O ASJDFGOPDCVXTG-KATARQTJSA-N 0.000 description 1
- NQQMWWVVGIXUOX-SVSWQMSJSA-N Thr-Ser-Ile Chemical compound [H]N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(O)=O NQQMWWVVGIXUOX-SVSWQMSJSA-N 0.000 description 1
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- 235000021307 Triticum Nutrition 0.000 description 1
- 244000098338 Triticum aestivum Species 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AUEJLPRZGVVDNU-STQMWFEESA-N Tyr-Leu Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 AUEJLPRZGVVDNU-STQMWFEESA-N 0.000 description 1
- CELJCNRXKZPTCX-XPUUQOCRSA-N Val-Gly-Ala Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(O)=O CELJCNRXKZPTCX-XPUUQOCRSA-N 0.000 description 1
- YDVDTCJGBBJGRT-GUBZILKMSA-N Val-Met-Ser Chemical compound CC(C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)O)N YDVDTCJGBBJGRT-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- FJJCIZWZNKZHII-UHFFFAOYSA-N [4,6-bis(cyanoamino)-1,3,5-triazin-2-yl]cyanamide Chemical compound N#CNC1=NC(NC#N)=NC(NC#N)=N1 FJJCIZWZNKZHII-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002390 adhesive tape Substances 0.000 description 1
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 1
- 108010076324 alanyl-glycyl-glycine Proteins 0.000 description 1
- 108010086434 alanyl-seryl-glycine Proteins 0.000 description 1
- 108010041407 alanylaspartic acid Proteins 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 230000003466 anti-cipated effect Effects 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010062796 arginyllysine Proteins 0.000 description 1
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 1
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 1
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 1
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004166 bioassay Methods 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 238000005341 cation exchange Methods 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 239000007979 citrate buffer Substances 0.000 description 1
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 1
- 108010060199 cysteinylproline Proteins 0.000 description 1
- UQHKFADEQIVWID-UHFFFAOYSA-N cytokinin Natural products C1=NC=2C(NCC=C(CO)C)=NC=NC=2N1C1CC(O)C(CO)O1 UQHKFADEQIVWID-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004062 cytokinin Substances 0.000 description 1
- 239000008121 dextrose Substances 0.000 description 1
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 1
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 1
- 235000013399 edible fruits Nutrition 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 1
- 241001233957 eudicotyledons Species 0.000 description 1
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 1
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 1
- 230000003203 everyday effect Effects 0.000 description 1
- 244000037666 field crops Species 0.000 description 1
- 238000005194 fractionation Methods 0.000 description 1
- 244000053095 fungal pathogen Species 0.000 description 1
- 238000001502 gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YMAWOPBAYDPSLA-UHFFFAOYSA-N glycylglycine Chemical compound [NH3+]CC(=O)NCC([O-])=O YMAWOPBAYDPSLA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010015792 glycyllysine Proteins 0.000 description 1
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 1
- WKMZPSWMEXVKKG-XITFREQTSA-N hevein Chemical group OC(=O)CC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)NCC(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@H](C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)NCC(=O)OC(=O)CC[C@H](NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)CO)[C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC1N=CN=C1)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(O)=O)CC1=CNC2=CC=CC=C12 WKMZPSWMEXVKKG-XITFREQTSA-N 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000007654 immersion Methods 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 description 1
- AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N isoleucine Natural products CCC(C)C(N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010034529 leucyl-lysine Proteins 0.000 description 1
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 1
- 108010025153 lysyl-alanyl-alanine Proteins 0.000 description 1
- 108010064235 lysylglycine Proteins 0.000 description 1
- 108010054155 lysyllysine Proteins 0.000 description 1
- 108010038320 lysylphenylalanine Proteins 0.000 description 1
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 1
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 1
- 108010005942 methionylglycine Proteins 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 230000008506 pathogenesis Effects 0.000 description 1
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010051242 phenylalanylserine Proteins 0.000 description 1
- 244000000003 plant pathogen Species 0.000 description 1
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 1
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 1
- 239000013636 protein dimer Substances 0.000 description 1
- 210000001938 protoplast Anatomy 0.000 description 1
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 1
- 230000029058 respiratory gaseous exchange Effects 0.000 description 1
- 235000009566 rice Nutrition 0.000 description 1
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 1
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 1
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910052709 silver Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000004332 silver Substances 0.000 description 1
- XMWGSPLTTNCSMB-UHFFFAOYSA-M sodium;2-hydroxypropane-1,2,3-tricarboxylic acid;chloride Chemical compound [Na+].[Cl-].OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O XMWGSPLTTNCSMB-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 1
- 108010072986 threonyl-seryl-lysine Proteins 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010078580 tyrosylleucine Proteins 0.000 description 1
- 239000004474 valine Substances 0.000 description 1
- 235000013311 vegetables Nutrition 0.000 description 1
- 244000052613 viral pathogen Species 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/82—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for plant cells, e.g. plant artificial chromosomes (PACs)
- C12N15/8241—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology
- C12N15/8261—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield
- C12N15/8271—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield for stress resistance, e.g. heavy metal resistance
- C12N15/8279—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield for stress resistance, e.g. heavy metal resistance for biotic stress resistance, pathogen resistance, disease resistance
- C12N15/8282—Phenotypically and genetically modified plants via recombinant DNA technology with agronomic (input) traits, e.g. crop yield for stress resistance, e.g. heavy metal resistance for biotic stress resistance, pathogen resistance, disease resistance for fungal resistance
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
- A01N65/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing material from algae, lichens, bryophyta, multi-cellular fungi or plants, or extracts thereof
- A01N65/08—Magnoliopsida [dicotyledons]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/415—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from plants
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Mycology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Natural Medicines & Medicinal Plants (AREA)
- Agronomy & Crop Science (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Dentistry (AREA)
- Environmental Sciences (AREA)
- Botany (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Nitrogen Condensed Heterocyclic Rings (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
Description
Oblast techniky
Vynález se týká antimikrobiálních proteinů, které lze izolovat z cukrové řepy.
Podstata vynálezu
Vynález popisuje antimikrobiální protein obsahující peptid s aminokyselinovou sekvencí AA1-AA2-AA3-Cys-AA5-AA6-AA7-AA3-AA9-Cys-AA11-AA12-AA13-AA14-Cys-Cys-AA17-AA18-AA19-AA20-AA21-Cys-AA23-AA24-AA2S-AA-S-AA27-AA28-Cys-AA3OZ kde AA označuje libovolnou z běžné se vyskytujících 20 aminokyselin. S výhodou AA7 znamená tyr; AA14 znamená tyr; a AA18 znamená lys. Kromě toho je ještě výhodnější pokud AA24 znamená val; AA2S znamená arg; a AA27 znamená ala.
Mezi antimikrobiální proteiny patří proteiny (samotné nebo v kombinaci s jiným materiálem), které jsou toxické nebo působí za libovolných podmínek inhibici růstu libovolného mikroorganismu, včetně bakterií (zejména Gram-pozitivních bakterií), virů a zejména hub. Mezi takové antimikrobiální proteiny patří proteiny, které vykazují antimikrobiální aktivitu při kontaktu s mikroorganismem a proteiny, které působí antimikrobiálně v důsledku jejich asimilace nebo respirace.
Vynález rovněž zahrnuje antimikrobiální protein, který má sekvenci uvedenou v kterékoli ze sekvencí SEQ ID č. 1-3.
Vynález ještě dále zahrnuje čistý protein, který je podstatně podobný libovolnému z výše zmíněných proteinů.
Termínem podstatně podobný se označují čisté proteiny mající aminokyselinovou sekvenci, která je alespoň z 85 % podobná sekvenci proteinů podle vynálezu. Výhodně činí stupeň podobnosti alespoň 90 % a ještě výhodněji činí stupeň podobnosti alespoň 95 %.
V kontextu vynálezu dvě sekvence aminokyselin, které vykazují podobnost alespoň 85 %, 90 % nebo 95 %, mají alespoň 85 %, 90 % nebo 95 % identických nebo konzervativně nahrazených aminokyselinových zbytků v odpovídající poloze při optimálním srovnání, při kterém se připouští až 4 mezery, s tou podmínkou, že každou mezerou nejsou celkově ovlivněny více než 3 aminokyselinové zbytky. V případě proteinů konkrétně uvedených v sekvencích SEQ ID č. 1 a 2 je možné počet mezer zvýšit na čtyři, s tou podmínkou, že každou mezerou není celkově ovlivněno více než 5 aminokyselinových zbytků.
Pro účely vynálezu lze konzervativní nahrazení provádět mezi aminokyselinami z následujících skupin:
(i) serin a threonin, (ii) kyselina glutamová a kyselina asparagová, (iii) arginin a lysin, (iv) asparagin a glutamin, (v) isoleucin, leucin, valin a methionin, (vi) fenylalanin, tyrosin a tryptofan, (vii) alanin a glycin.
Vynález dále zahrnuje čisté proteiny, které jsou alespoň z 90 % identické s antimikrobiálními proteiny podle vynálezu, jakož i čisté proteiny, které vykazují alespoň 90 % jejich specifické aktivity. Pro účely vynálezu je specifickou aktivitou měření rozsahu inhibice růstu nebo replikace vyvolané určitým množstvím proteinu na určitém množství určitých mikroorganismů.
Vynález dále zahrnuje uvedené čisté proteiny v kombinaci s alespoň jedním proteinem vybraným ze skupiny zahrnující proteiny uvedené v sekvencích SEQ ID č. 4 - 6. Takové kombinované proteiny lze dále kombinovat s jedním nebo několika známými proteiny souvisejícími s patogenezí (pathogenesis-related proteins, PR-proteins). Infekce rostlin houbovými nebo virovými patogeny může vyvolat ve vegetativních tkáních systémovou syntézu přibližně 10 rodin homologních proteinů souvisejících s patogenezí (PR-proteinů). Tyto PR-proteiny byly rozděleny do 5 skupin. Proteiny PR-2, PR-3 a PR-5 jsou beta-1,3-glukanasa, chitinasy, respektive proteiny podobné thaumatinu. Skupinám proteinů PR-1 a PR-4 nebyly přiřazeny specifické funkce. Proteiny PR-4 jsou podobné C-koncovým doménám proheveinu a předpokládaným zraněním indukovaným proteinům WIN bramboru, postrádají tedy N-koncovou heveinovou doménu. Je zejména výhodné, pokud jsou proteiny podle vynálezu zkombinovány s jedním nebo několika proteiny, které jsou bazickými doplňky skupiny proteinů PR-4 (basic counter parts of the PR-4 group of proteins), tedy bazickými doplňky proteinů podobných C-koncovým doménám proheveinu a předpokládaným zraněním indukovaným proteinům WIN bramboru. Je zejména výhodné, pokud je bazickým doplňkem uvedených proteinů souvisejících s patogenezí WIN-protein vázající chitin, zrejména takový, který je produkován zrnem ječmene nebo listy ječmene vystavenými stresu.
Vynález dále zahrnuje rekombinantní DNA obsahující sekvenci kódující protein, který má aminokyselinovou sekvenci výše popsaných anzimikrobiálních proteinů. DNA může zejména kódovat alespoň jeden z proteinů, jejichž sekvence jsou znázorněny v SEQ ID č. 1-3, popřípadě s alespoň jedním z proteinů jejichž sekvence jsou znázorněny v SEQ ID č. 4 - 6. Rekombinantní DNA může dále kódovat protein, který způsobuje rezistenci vůči herbicidům, podporuje růst rostlin, má antifungální, antibakteriální, antivirální nebo/a antinematodní vlastnosti. V případě, že má být tato DNA introdukována do heterologního organismu, může být modifikována pro odstranění známých motivů nestability mRNA (jako jsou oblasti bohaté na A a T) a polyadenylačních signálů (pokud jsou nějaké přítomny), nebo/a lze použít kodóny, které jsou upřednostňovány organismem, do kterého má být tato rekombinantní DNA inzertována, tak, že expresí takto modifikované DNA. v uvedeném organismu se získá protein podstatně podobný proteinu, který se získá expresí nemodifikované rekombinantní DNA v organismu, ve kterém je antimikrobiální protein podle vynálezu endogenní.
Vynález dále zahrnuje rekombinantní DNA, která je podobná rekombinantní DNA uvedené výše. Termínem podobná DNA se označuje sekvence, která je komplementární k testované sekvenci, která je schopná hybridizace s rekombinantní sekvencí podle vynálezu. Pokud jsou testovaná sekvence a sekvence podle vynálezu dvouřetězcové, má nukleová kyselina tvořící testovanou sekvenci poloviční teplotu denaturace (TM) výhodně v rozmezí 20 °C od poloviční teploty denaturace sekvence podle vynálezu. V případě, že testovaná sekvence a sekvence podle vynálezu jsou spolu smíchány a denaturovány současně, hodnoty poloviční teploty denaturace (TM) těchto sekvencí se od sebe výhodně liší v rozmezí do 10 ’C. Výhodněji se hydridizace provádí za přísných podmínek, přičemž buďto testovaná DNA nebo DNA podle vynálezu je výhodně na nosiči. Výhodně se tedy nejprve buďto denaturovaná testovaná sekvence nebo sekvence podle vynálezu naváže na nosič a hybridizace se provádí po určenou dobu při teplotě mezi 50 a 70 °C v 2x citrátovém pufru s chloridem sodným (SSC) obsahujícím 0,1 % dodecylsulfátu- sodného (SDS) s následným vymytím nosiče při stejné teplotě, ale pufrem se sníženou koncentrací SSC. V závislosti na požadovaném stupni přísnosti, a tedy na stupni podobnosti sekvencí, je takovou sníženou koncentrací pufru typicky lx SSC obsahující 0,1 %
SDS, 0,5x SSC obsahující 0,1 % SDS a 0, lx SSC obsahující
0,1 % SDS. Sekvencemi, které vykazují největší stupeň podobnosti jsou ty sekvence, jejichž hybridizace je nejméně ovlivněna promýváním v pufrech se sníženou koncentrací. Nejvýhodnější je, pokud testovaná sekvence a sekvence podle vynálezu jsou tak podobné, že hybridizace mezi nimi je podstatně neovlivněná promytím nebo inkubací v 0,lx SSC obsahujícím 0,1 % SDS.
Vynález dále zahrnuje komplementární k sekvenci, která podmínek s rekombinantní DNA podle která je za přísných
DNA-sekvenci, hybridizuj e vynálezu.
Vynález rovněž zahrnuje: vektor obsahující výše popsanou DNA, která je exprimovatelná v rostlinách a je spojená s promotorem a terminátorem operabilním v rostlinách; rostliny transformované takovou DNA; potomstvo takových rostlin obsahující tuto DNA stabilině inkorporovanou a dědičnou Mendelovým způsobem, nebo/a semena takových rostlin a takového potomstva. Transformované rostliny lze vytvořit pomocí známých způsobů, které zahrnují regeneraci roslinných buněk nebo protoplastů transformovaných DNA podle vynálezu za pomoci řady známých postupů (Ti a Ri plazmidy Agrobacteria, elektroporace, mikroinjektáž, vstřelování mikroprojektilů (micro-projectile gun) atd.). Z tansformované buňky mohou být ve vhodných případech regenerovány celé rostliny, ve kterých je jaderný materiál stabilně inkorporován do genomu. Tímto způsobem lze získat jak jednoděložné tak dvouděložné rostliny. Mezi příklady geneticky transformovaných rostlin podle vynálezu patří: ovocné plodiny, včetně rajčete, mangovníku, broskvoně, jabloně, hrušně, jahodníku, banánovníku a melounu, polní plodiny jako je řepka a řepice typu canola, slunečnice, tabák, cukrová řepa, drobnozrnné obilniny jako je pšenice, ječmen a rýže, kukuřice a bavlník, a zeleniny jako je brambor, mrkev, salát, brukev zelná a cibule. Výhodnými rostlinami jsou cukrová řepa a kukuřice.
Vynález dále zahrnuje protein získaný expresí uvedené DNA a antimikrobiální protein produkovaný expresí rekombinantní DNA v rostlinách, který jí byly transformovány.
Vynález dále zahrnuje antimikrobiální prostředek obsahující jeden nebo několik proteinů podle vynálezu; způsob potírání hub který zahrnuje jejich vystavení působení takových proteinů, a způsob extrakce pro získání antimikrobiálních proteinů z organického materiálu, který je obsahuje, kterýžto způsob zahrnuje podrobení materiálu, výhodně ve formě mikroorganismu, maceraci a extrakci pomocí rozpouštědel. Je vhodné, aby antimikrobiální protein vykazoval malý, pokud vůbec nějaký, antimikrobiální účinek na mikroorganismus, který je zdrojem organického materiálu uvedeného v předchozí větě.
Vynález dále ilustrují následující příklady a znázorněné sekvence a obrázky.
Popis obrázků
Obrázek 1 znázorňuje typický eluční profil kapaliny z intercelulárního promývání na koloně CM-Sepharose. Symbol t znamená čas v minutách, p/e znamená předek / eluent.
Obrázek 2 znázorňuje typický eluční profil frakce vymyté 0,3M chloridem sodným uvedené na obrázku 1, z kolony pro rychlou kapalinovou chromatografií proteinů (FPLC) Mono S. Symbol t znamená čas v minutách.
Obrázek 3 zobrazuje typický eluční profil proteinů představovaných pikem 3 na obrázku 2, z kolony pro vysoceúčinnou kapalinovou chromatografií s obrácenými fázemi (RP-HPLC).
Obrázek 4 ilustruje antifungální aktivitu 10 zug proteinu představovaného píky 3.1 a 3.2 na obrázku 3 (SEQ ID
č. 1 respektive 2). Symbol t znamená čas v hodinách.
Obrázek 5 znázorňuje chromatogram získaný gelovou filtrací Ο,ΙΜ-frakce uvedené na obrázku 1, na koloně Sephadex G75. Symbol t znamená čas v minutách, Symboly sfl až sfVI znamenají spojenou frakci I až spojenou frakci VI.
Obrázek 6 znázorňuje typický eluční profil píku (spojené frakce) V uvedeného na obrázku 5, z kolony pro rychlou kapalinovou chromatografií proteinů (FPLC) Mono S. Symbol t znamená čas v minutách.
Obrázek 7 ilustruje antifungální aktivitu 10 zug proteinu představovaného píky 1 a 2 na obrázku 6 (SEQ ID č. 3). Symbol t znamená čas v hodinách.
Obrázek 8A znázorňuje kombinovanou antifungální aktivitu vždy 2 zug proteinů představovaných sekvencemi SEQ ID č. 2 a 3, obrázek 8B znázorňuje kombinovanou antimikrobiální aktivitu vždy 2 zug proteinů představovaných sekvencemi SEQ ID č. 2 a 5. Symbol t znamená čas v hodinách.
Obrázky 9A a 9B ukazují morfologii hyf Cercospora beticola rostoucích za nepřítomnosti antimikrobiálních proteinů podle vynálezu. Obrázky 9C a 9D znázorňují hyfy, pokud houba roste po dobu 48 hodin za přítomnosti 2 zug proteinů se sekvencemi znázorněnými jako SEQ ID č. 2 respektive 3. Test se provádí v mikrotitračních deskách, jak je uvedeno níže. Zvětšení na obrázku 9A je 76x, na obrázcích 9B - 9D 294x.
Popis sekvencí
Sekvence SEQ ID č. 1 zobrazuje aminokyselinovou sekvenci proteinu představovaného pikem 3.1 na obrázku 3.
Sekvence SEQ ID č. 2 zobrazuje aminokyselinovou sekvenci proteinu představovaného pikem 3.2 na obrázku 3.
- 8 Sekvence SEQ ID č. 3 zobrazuje aminokyselinovou sekvenci proteinu představovaného píky 1 a 2 na obrázku 6.
Sekvence SEQ ID č. 4 - 6 znázorňují aminokyselinové sekvence tří známých antifungálních proteinů.
Sekvence SEQ ID č. 7 znázorňuje nukleotidovou sekvenci cDNA kódující protein uvedený v SEQ ID č. 3.
Sekvence SEQ ID č. 8 znázorňuje produkt translace transkriptu kódovaného sekvencí cDNA uvedenou v SEQ ID č. 7, kterýžto produkt obsahuje N- a C-koncová prodloužení proteinu uvedeného v SEQ ID č. 3.
Příklady provedení vynálezu
Izolace kapaliny z intercelulárního promývání
Kapalina z intercelulárního promývání se izoluje z 500 až 700 g listů cukrové řepy jejich ponořením do 20mM HAc (pH 4,5) . Tyto ponořené listy se poté umístí v desikátoru a vakuově se infiltrují po dobu 5 minut při maximálním tlaku 533 Pa. Povrch listů se vysuší na vzduchu a poté se izoluje kapalina z intercelulárního promývání centrifugací při 500 g po dobu 15 minut v centrifugačních kyvetách o objemu 500 ml.
Katexová chromatografie
Takto získaná kapalina z intercelulárního promývání se frakcionuje katexovou chromatografií na koloně CM-Sepharosy o objemu 10 ml (Pharmacia LKB), preekvilibrované s výchozím pufrem (20mM HAc (pH 4,5)). Frakcionace se provádí pří teplotě 4 °C při rychlosti průtoku 25 ml / h. Izolují se frakce o objemu 3 ml. Proteiny nenavázané na kolonu se odstraní rozsáhlým promýváním kolony výchozím pufrem. Navázané proteiny se vymývají aplikací dalšího výchozího pufru, který obsahuje postupně se zvyšující koncentrace soli:
Ο,ΙΜ chlorid sodný, 0,3M chlorid sodný a 0,5M chlorid sodný, na kolonu. Měří se absorbance eluátu při 280 nm a u frakcí, o kterých se usoudí že obsahují protein, se testuje jejich antifungální aktivita proti Cercospora beticola za použití dříve popsaného biologického testu na mikrotitrační desce (patentová přihláška PCT č. PCT/DK92/00108, zveřejněná pod číslem WO 92/17591, nyní převedená na Sandoz LTD).
Typický eluční profil je znázorněn na obrázku 1. Eluáty získané aplikací výchozího pufru obsahujícího 0,3M chlorid sodný a Ο,ΙΜ chlorid sodný na kolonu se dále purifikují jak je popsáno níže.
Purifikace antifungálních proteinů z eluátu získaného 0,3M chloridem sodným z CM-Sepharosy
Rychlá kapalinová chromatografie proteinů (FPLC)
Proteinová frakce vymytá 0,3M chloridem sodným se odsolí dialýzou prováděnou přes noc (hraniční hodnota: 3 kDa) proti 20mM HAc (pH 4,5) při teplotě 4 °C. K takto dialyzované proteinové frakci se přidá betain v 5% (hmotnost / objem) koncentraci. 4 ml výsledného roztoku se poté frakcionují rychlou kapalinovou chromatografií proteinů (FPLC) na katexu za použití kolony Mono S HR 5/5 (Pharmacia LKB) ekvilibrované s 20mM HAc (pH 4,5) obsahujícím 5 % (hmotnost / objem) betainu (A-pufr). Navázané proteiny se eluují lineárním gradientem soli od 0 do 0,3M chloridu sodného ve 30 ml A-pufru s následující elucí l,0M chloridem sodným ve stejném pufru. Rychlost průtoku činí 1 ml / min.
Obrázek 2 ukazuje, že frakce vymytá 0,3M chloridem sodným obsahuje řadu odlišných proteinů, z nichž kvantitativně nej významnější jsou označeny jako píky 1-5. Při separaci pomocí elektroforesy v SDS-polyakrylamidovém gelu (SDS-PAGE) za použití systému Phast System (Pharmacia
LKB) , stříbrem obarvených 10 - 15% gradientových nebo High Density gelů (Pharmacia LKB) se zjistí, píků 1-5 obsahuje 2-5 proteinových pásů.
Phast gelů že každý z
Vysoceúčinná kapalinová chromatografie (HPLC) s obrácenými fázemi
Proteinový pík 3 (uvedený na obrázku 2) z kolony Mono S se dále purifikuje pomocí vysoceúčinné kapalinové chromatografie s obrácenými fázemi (RP-HPLC) na koloně C4-silikagelu Vydac (The Separations Group, CA, USA) . Rozpouštědlovým systémem je A: 0,1% kyselina trifluoroctová ve vodě a B: 0,1% kyselina trifluoroctová v acetonitrilu. Proteiny se eluují lineárním gradientem od 5 do 45 % B-pufru aplikovaného 18 minut po nanesení vzorku a poté 60 % B-pufru po dobu 2 minut. Rychlost průtoku činí 0,7 ml / minutu. Protein se detekuje sledováním absorbance eluátu při 214 a 280 nm. Jednotlivé proteinové píky se izolují a Ivofilizují. Takto lyofilizované proteiny se promyjí dvakrát vodou, znovu se iyofilizují a následně se před analýzou čistoty a antifungální aktivity rozpustí v lOmM Tris-HCl (pH 8,0).
Obrázek 3 znázorňuje, že pík 3 z obrázku 2 se na koloně s obrácenými fázemi rozdělí na čtyři píky (označené na obrázku 3 jako 3.1 - 3.4). Elektroforesou píků 3.1 - 3.4 v SDS-polyakrylamidovém gelu (SDS-PAGE) se zjistí, že každý z nich je tvořen čistými proteiny s molekulovou hmotností přibližně 7 kDa (píky 3.1, 3.2 a 3.3) a 2,5 - 3 kDa (pík
3.4) .
Purifikace antifungálních proteinů v eluátu získaném 0,lM chloridem sodným z CM-Sepharosy ml eluátu získaného 0,lM chloridem sodným z obrázku 1 se frakcionuje gelovou filtrací na koloně Sephadex G-75 o objemu 370 ml (Pharmacia LKB) ekvilibrované s 50mM MES (4-morfolinethansulfonovou kyselinou) (pH 6,0) při rychlosti průtoku 20 ml / hodinu. Izolují se frakce o objemu 10 ml. Tyto frakce se následně spojí do šesti větších frakcí, I až VI, z nichž každá má objem přibližně 50 ml (viz obrázek 5).
Katexová chromatografie (Mono S)
Spojená frakce V (znázorněná na obrázku 5) z kolony Sephadex G-75 se nanese na kolonu pro rychlou kapalinovou chromatografií proteinů Mono S ekvilibrovanou s pufrem A: 50mM MES (pH 6,0) obsahující 5 % betainu (hmotnost / objem). Po promytí A-pufrem se navázané proteiny eluují při rychlosti průtoku 1 ml / minutu s lineárním gradientem od 0 do 0,5M chloridu sodného ve 30 ml A-pufru (viz obrázek 6) . Při podrobení proteinu představovaného píky 1 a 2 elektroforéze v SDS-gelu za přítomnosti dithiothreitolu (DTT) se zjistí dva odlišné pásy. První pás má molekulovou hmotnost mezi 2,5 a 3 kDa a druhý pás, který představuje neredukovaný dimer proteinu z prvního pásu, má molekulovou hmotnosti přibližně 5 kDa.
Identifikace antifungálních proteinů
Antifungální aktivita
Obrázky 4 a 7 - 9 svědčí o tom, že proteiny představované píky 3.1 a 3.2 (SEQ ID č. 1 respektive 2) na obrázku 3 a píky 1 a 2 (seQ id č. 3) na obrázku 6 vykazují podstatnou antifungální aktivitu, mimo jiné proti Cercospora beticoia. Inhibice růstu houby se měří v mikrotitračních deskách s 96 jamkami při 620 nm, v podstatě jak je popsáno ve WO 92/17591. Obrázek 9 znázorňuje, že Cercospora beticoia ošetřená takovými proteiny má zakrnělé hyfy, které jsou zesílené a více rozvětvené (obrázky 9C, 9D) ve srovnání s hyfami houby rostoucí za nepřítomnosti antimikrobiálních proteinů, (obrázky 9A, 9B) .
Tyto proteiny, buďto samotné nebo v kombinaci s WIN N (purifi kovaným ze zrna ječmene nebo listu ječmene vystaveného stresu jak popsali Hejgaard a kol. (FEBS Letters, 307, 389 392 (1992)), nebo/a proteinem který má sekvenci odpovídající alespoň jedné ze sekvencí uvedených v SEQ ID č. 4 - 6, se inkubují se sporami Cercospora beticola. Testovaná směs, která má objem 240 zul, obsahuje 100 zul vývaru bramborové dextrosy (Difco), 40 zul vzorku proteinu (nebo pufru jako kontroly) ve lOOmM Tris a 20mM chloridu sodném (pH 8,0), jakož i přibližně 400 spor ve 100 zul vody. Mikrotitrační desky se uzavřou lepicí páskou pro zamezení odpařování a kontaminaci a následně se inkubují při teplotě místnosti na třepačce pracující při 200 otáčkách za minutu. Každý den po dobu 8 dnů se měří absorbance při 620 nm a vynese se do grafu pro každou koncentraci proteinu proti času.
Sekvencování aminokyselin
Purifikované antifungální proteiny odpovídající pikům 3.1 a 3.2 na obrázku 3 (sekvence SEQ ID č. 1 respektive 2), které pocházejí z eluátu získaného 0,3M chloridem sodným z kolony CM-Sepharosy (obrázek 1) a protein odpovídající pikům 1 a 2 na obrázku 6 (sekvence SEQ ID č. 3), který pochází z eluátu získaného O,1M chloridem sodným z uvedené kolony CM-Sepharosy se karboxymethylují a podrobí se vysoceúčinné kapalinové chromatografií s obrácenými fázemi (RP-HPLC) na koloně C4-silikagelu Vydac . Rozpouštědlovým systémem je A: 0,1% kyselina trif luoroctová ve vodě a B: 0,1% kyselina trifluoroctová v acetonitrilu. Proteiny se eluují jako jediné píky s mírně odlišnými retenčními dobami. C-koncové sekvence proteinů se získají jejich štěpením endo-R-proteinasou a následnou purifikací pomocí vysoceúčinné kapalinové chromatografe s obrácenými fázemi (RP-HPLC) na koloně
C13-silikagelu Vydac.
Produkce transformovaných rostlin
Geny kódující proteiny podle vynálezu se introdukují do rostlin. Na bázi genově specifických primerů se z odpovídající mRNA za použití polymerasové řetězové reakce (PCR) syntetizují kódující oblasti genů kódujících proteiny. Po přidání promotorových a terminátorových sekvencí se geny kódující uvedené proteiny introdukují do vektoru pro transformaci rostlin. Tento vektor může popřípadě obsahovat gen kódující WIN-protein, jako je tento protein získaný z listu ječmene vystaveného stresu nebo zrna ječmene, nebo/a gen kódující protein znázorněný v sekvenci SEQ ID č. 4, SEQ ID č. 5 neboúa SEQ ID č. 6, nebo/a gen kódující chitinasu nebo/a glukanasu. Výhodnou chitinasou je chitinasa 4 popsaná v patentové přihlášce PCT č. PCT/DK92/00103 (zveřejněné pod číslem WO/92/17591). Těmito vektory lze transformovat například Agrobacterium tumefaciens. Takto transformované Agrobacterium se poté nechá působit na rostlinné buňky, a z takto transformovaných rostlinných buněk se regenerací získají celé rostliny, ve kterých je nový jaderný materiál stabilně začleněn do genomu. Je však třeba vzít v úvahu, že DNA kódující protein podle vynálezu (nebo kombinaci takových proteinů), a popřípadě kódující dále jiné proteiny, lze introdukovat do rostlinných buněk pomocí jiných známých postupů, včetně použití vstřelování mikroprojektilů (micro-projectile gun), elektroporace, elektrotransformace, mikroinjektáže atd., a že regenerace transformovaných buněk se provádí včetně ošetření je to nutné nebo za použití postupů známých těchto buněk cytokininy v žádoucí z důvodů zlepšení rostlinných odborníkovi, případě, že regenerační frekvence
Kromě toho lze vhodné mikroorganismy (t.j. takové, ve kterých není produkce proteinů podle vynálezu podstatně toxická) transformovat vektorem obsahujícím gen (nebo geny) kódující tento protein tak, že transformované mikroorganismy produkují takový protein. Tyto mikroorganismy mohou dále obsahovat geny kódující jiné proteiny, jako je WIN-protein nebo/a protein jehož sekvence je uvedena v jedné nebo několika sekvencích SEQ ID č. 4 - 6. Dále mohou mezi takové jiné proteiny patřit různé chitinasy nebo/a glukanasy. Je zejména výhodné, pokud je takovýmto jiným proteinem chitinasa 4, jak je popsána v patentové přihlášce PCT č. PCT/DK92/00108 (zveřejněné pod číslem WO92/17591).
Tyto mikroorganismy lze poté použít k potírání rostlinných patogenů. Například lze transformované mikroorganismy vysušit a postřikovat jimi infikované rostliny nebo rostliny v nebezpečí infekce.
Zobrazení sekvencí
Informace o sekvenci SEQ ID č. 1:
(i) charakteristiky sekvence:
(A) délka: 91 aminokyselin (B) typ: aminokyselinová (C) počet řetězců: jednořetězcová (D) topologie: neznámá (ii) typ molekuly: protein (iii) hypotetická: není (iii) anti-sense: není (vi) původní zdroj:
(A) organismus: Beta vulgaris (xi) znázornění sekvence SEQ ID č. 1:
| Ile 1 | Thr | Cys | Gly | Leu 5 | Val | Ala | Ser | Lys | Leu 10 | Ala | Pro | Cys | Ile | Gly 15 | Tyr |
| Leu | Gin | *iy | Ala 20 | Pro | Gly | Pro | Ser | Ala 25 | Gly | Cys | Cys | Gly | Gly 30 | Ile | Lys |
| Gly | Leu | Asn 35 | Ser | Ala | Ala | Ala | Ser 40 | Pro | Ala | Asp | Arg | Lys 45 | Thr | Ala | cys |
| Thr | Cys 50 | Leu | Lys | Ser | Ala | Ala 55 | Thr | Ser | Ile | Lys | Gly 60 | Ile | Asn | Tyr | Gly |
| Lys 65 | Ala | Ala | Ser | Leu | Pro 70 | Arg | Gin | Cys | Gly | Val 75 | Ser | Val | Pro | Tyr | Ala 80 |
| Ile | Ser | Pro | Asn | Thr 85 | Asn | Cys | Asn | Ala | Ile 90 | His |
Informace o sekvenci SEQ ID č. 2:
(i) charakteristiky sekvence:
(A) délka: 91 aminokyselin (B) typ: aminokyselinová (C) počet řetězců: jednořetězcová (D) topologie: neznámá (ii) typ molekuly: protein (iii) hypotetická: není (iii) anti-sense: není (vi) původní zdroj:
(A) organismus: Beta vulgaris
| (xi) | znázornění | sekvence SEQ ID č. 2: | |
| Ile | Thr | Cys Gly Leu Val | Ala Ser Lys Leu Ala Pro Cys Ile Gly Tyr |
| 1 | 5 | 10 15' | |
| Leu | Gin | Gly Ala Pro Gly | Pro Ser Ala Gly Cys Cys Gly Gly Ile Lys |
| 20 | 25 30 | ||
| Gly | Leu | Asn Ser Ala Ala | Ala Ser Pro Ala Asp Arg Lys Thr Ala Cys |
| 35 | 40 45 | ||
| Thr | Cys | Leu Lys Ser Ala | Ala Thr Ser Met Lys Gly Ile Asn Tyr Gly |
| 50 | 55 60 | ||
| Lys | Ala | Ala Ser Leu Pro | Arg Gin Cys Gly Val Ser Ile Pro Tyr Ala |
| 65 | 70 | 75 80 | |
| Ile | Ser | Pro Asn Thr Asn | Cys Asn Ala Ile His |
| 85 | 90 |
Informace o sekvenci SEQ ID č. 3:
(i) charakteristiky sekvence:
(A) délka: 30 aminokyselin (B) typ: aminokyselinová (C) počet řetězců: jednořetězcová (D) topologie: neznámá (ii) typ molekuly: protein (iii) hypotetická: není (iii) anti-sense: není (vi) původní zdroj:
(A) organismus: Beta vulgaris (xi) znázornění sekvence SEQ ID č. 3:
Ser Gly Glu Cys Asn Met Tyr Gly Arg Cys Pro Pro Gly Tyr Cys Cys 15 10 15
Ser Lys Phe Gly Tyr Cys Gly Val Gly Arg Ala Tyr Cys Gly 20 25 30
Informace o sekvenci SEQ ID č. 4:
(i) charakteristiky sekvence:
(A) délka: 46 aminokyselin (B) typ: aminokyselinová (C) počet řetězců: jednořetězcová (D) topologie: neznámá (ii) typ molekuly: protein (iii) hypotetická: není (iii) anti-sense: není (vi) původní zdroj:
(A) organismus: Beta vulgaris (xi) znázornění sekvence SEQ ID č. 4:
| Ala | Ile | Cys | Lys | Lys | Pro | Ser | Lys | Phe | Phe | Lys | Gly | Ala | Cys | Gly | Arg |
| 1 | 5 | 10 | 15 | ||||||||||||
| Asp | Ala | Asp | Cys | Glu | Lys | Ala | Cys | Asp | Gin | Glu | Asn | Trp | Pro | Gly | Gly |
| 20 | 25 | 30 | |||||||||||||
| Val | Cys | Val | Pro | Phe | Leu | Arg | Cys | Glu | Cys | Gin | Arg | Ser | Cys | ||
| 35 | 40 | 45 |
Informace o sekvenci SEQ ID č. 5:
(i) charakteristiky sekvence:
(A) délka: 46 aminokyselin (B) typ: aminokyselinová (C) počet řetězců: jednořetězcová (D) topologie: neznámá (ii) typ molekuly: protein (iii) hypotetická: není (iii) anti-sense: není (vi) původní zdroj:
(A) organismus: Beta vulgaris (xi) znázornění sekvence SEQ ID č. 5:
| Ala Thr Cys Arg 1 | Lys 5 | Pro | Ser | Met Tyr | Phe Ser 10 | Gly Ala Cys | Phe Ser 15 | |||||||
| Asp | Thr | Asn | Cys | Gin | Lys | Ala | Cys | Asn | Arg | Glu | Asp | Trp | Pro | Asn Gly |
| 20 | 25 | 30 | ||||||||||||
| Lys | Cys | Leu | Val | Gly | Phe | Lys | Cys | Glu | Cys | Gin | Arg | Pro | Cys | |
| 35 | 40 | 45 |
Informace o sekvenci SEQ ID č. 6:
(i) charakteristiky sekvence:
(A) délka: 32 aminokyselin (B) typ: aminokyselinová (C) počet řetězců: jednořetězcová (D) topologie: neznámá (ii) typ molekuly: protein (iii) hypotetická: není (iii) anti-sense: není (vi) původní zdroj:
(A) organismus: Beta vulgaris (xi) znázornění sekvence SEQ ID č. 6:
| Arg Cys 1 | Ile | Pro Cys 5 | Gly Gin Asp | Cys | Ile Ser Ser Arg Asn Cys Cys | ||||||||
| 10 | 15 | ||||||||||||
| Ser | Pro | Cys | Lys | Cys | Asn Phe Gly | Pro | Pro | Val | Pro | Arg | Cys | Thr | Asn |
| 20 | 25 | 30 |
Informace o sekvenci SEQ ID č. 7:
(i) charakteristiky sekvence:
(A) délka: 550 párů bází (B) typ: nukleová kyselina (C) počet řetězců: dvouřetězcová (D) topologie: neznámá (iii) hypotetická: není (iii) anti-sense: není (vi) původní zdroj:
(A) organismus: Beta vulgaris (ix) vlastnosti:
(A) jméno/klíč: CDS (B) lokace: 66..293 (xi) znázornění sekvence SEQ ID č. 7:
ACTCAACAAA TTCAGAAAAA AACAGAAGCA AAAAAAGTTT ATTGAAAGAG TAAGTTGAGG
TGAAA ATG ATG AAA AGC TTT GTG ATA GTT ATG TTG GTC ATG TCC ATG Met Met Lys Ser Phe Val Ile Val Met Leu Val Met Ser Met
10
ATG GTG GCT ACA TCT ATG GCA AGT GGT GAA TGC AAT ATG TAT GGT CGA
Met Val Ala Thr Ser Met Ala Ser Gly Glu Cys Asn Met Tyr Gly Arg
20 25 30
107
155
| TGC Cys | CCC Pro | CCA GGG | TAT TGT TGT | AGC AAG TTT GGC TAC TGT GGT GTC | GGA Gly | 203 | ||||||||||
| Pro | Gly | Tyr 35 | Cys | Cys | Ser Lys | Phe Gly Tyr Cys Gly Val | ||||||||||
| 40 | 45 | |||||||||||||||
| CGC | GCC | TAT | TGT | GGC | GAT | GCT | GAG | CAG | AAG | GTT | GAA | GAT | CAT | CCA | TCT | 251 |
| Arg | Ala | Tyr | Cys | Gly | Asp | Ala | Glu | Gin | Lys | Val | Glu | Asp | His | Pro | Ser | |
| 50 | 55 | 60 | ||||||||||||||
| AAT | GAT | GCT | GAT | GTT | CCT | GAG | TTT | GTT | GGA | GCT | GGT | GCC | CCA | 293 | ||
| Asn | Asp | Ala | Asp | Val | Pro | Glu | Phe | Val | Gly | Ala | Gly | Ala | Pro | |||
| 65 | 70 | 75 |
TGATGCTCGA AGCCAGGTAA TCGTAATGGC ATGGGTTACC TAATAAGTAA ACTCATTGTG 353
CCTAGCTTGC TACATGCTTA TCCACTATAA ATAAGCTCCT ACAGGAGTTG TGTTTTTCTT '413
TTAATTTTGT AATCAAGGGT TTGACTTTAA TTAATGAGAC CAATGTATAC TTGCATGTCG 473
GATAAATATN TAACTAAGCC ACTCGTATTG GTTTATTATA AAACTACTAT AAAAAAAAAA 533
AAAAAAAAAA AAAAAAA S50
Informace o sekvenci SEQ ID č. 8:
(i) charakteristiky sekvence:
(A) délka: 76 aminokyselin (B) typ: aminokyselinová (D) topologie: lineární (ii) typ molekuly: protein (xi) znázornění sekvence SEQ ID č. 8:
| Met 1 | Met | Lys | Ser | Phe 5 | Val | Ile | Val | Met | Leu 10 | Val | Met | Ser | Met | Met 15 | Val |
| Ala | Thr | Ser | Met 20 | Ala | Ser | Gly | Glu | Cys 25 | Asn | Met | Tyr | Gly | Arg 30 | Cys | Pro |
| Pro | Gly | Tyr 35 | Cys | Cys | Ser | Lys | Phe 40 | Gly | Tyr | Cys | Gly | Val 45 | Gly | Arg | Ala |
| Tyr | Cys 50 | Gly | Asp | Ala | Glu | Gin 55 | Lys | Val | Glu | Asp | His 60 | Pro | Ser | Asn | Asp |
Ala Asp Val Pro Glu Phe Val Gly Ala Gly Ala Pro 65 70 75
- 21 mi- η
Claims (19)
- PATENTOVÉ NÁROKY1. Antimikrobiální protein obsahující peptid s aminokyselinovou sekvencí AA1-AA2-AA3-Cys-AA5-AA6-AA.7-AA8-AA9-Cys-AA11-AA12-AA13-AA14-Cys-Cys-AA17-AA18-AA19-AA20-AA21-Cys-AA23-AA24-AA25-AA2S-AA27-AA28-Cys-AA30.
- 2. Antimikrobiální protein podle nároku 1, ve kterém AA7 znamená tyr, AA14 znamená tyr a AA18 znamená lys.
- 3. Antimikrobiální protein podle nároku 1 nebo 2, ve kterém AA^ znamená val, AA26 znamená arg a AA27 znamená ala.
- 4. Antimikrobiální protein, který má sekvenci uvedenou v libovolné ze sekvencí SEQ ID č. 1-3.
- 5. Čistý protein, který je alespoň z 90 % podobný proteinům podle libovolného z nároků 1 - 4.
- 6. Čisté proteiny podle libovolného z nároků 1-5, v kombinaci s alespoň jedním proteinem vybraným ze skupiny zahrnující proteiny znázorněné v sekvencích SEQ ID č. 4 - 6.
- 7. Čisté proteiny podle libovolného z nároků 1-6, v kombinaci s alespoň jedním dalším proteinem který způsobuje rezistenci vůči herbicidům, podporuje růst rostlin, má antifungální, antibakteriální, antivirální nebo/a antinematodní vlastnosti.
- 8. Rekombinantní DNA obsahující sekvenci kódující protein podle libovolného z nároků 1-5 nebo rekombinantní DNA mající sekvenci znázorněnou v SEQ ID č. 7.
- 9. Rekombinantní sekvence DNA podle nároku 8, která dále obsahuje sekvenci kódující alespoň jeden z proteinů znázorněných v sekvencích SEQ ID č. 4 - 6.
- 10. Rekombinantní DNA podle libovolného z nároků 8 nebo9, která dále kóduje protein který způsobuje rezistenci vůči herbicidům, podporuje růst rostlin, má antifungální, antibakteriální, antivirální nebo/a antinematodní vlastnosti.
- 11. Rekombinantní DNA podle libovolného z nároků 8 až10, která je modifikována tak, že jsou odstraněny známé motivy nestability mRNA nebo polyadenylační signály nebo/a jsou použity kodóny, které jsou preferovány organismem, do kterého má být tato rekombinantní DNA inzertována, takže se expresí takto modifikované DNA v shora uvedeném organismu získá podstatně podobný protein jako expresí nemodifikované rekombinantní DNA v organismu, ve kterém je protein endogenní.
- 12. Sekvence DNA, která je komplementární k sekvenci hybridizující za přísných podmínek s DNA podle libovolného z nároků 8 až 11.
- 13. Vektor obsahující sekvenci DNA podle libovolného z nároků 8 až 12, kterážto sekvence je exprimovatelná v rostlinách a je spojena s promotorem a terminátorem operabilním v rostlinách.
- 14. Biologický systém obsahující DNA podle libovolného z nároků 8 až 12 nebo vektor podle nároku 13.
- 15. Rostliny transformované rekombinantní DNA podle libovolného z nároků 8 až 12, potomstvo takových rostlin obsahující tuto DNA stabilně inkorporovanou a dědičnou Mendelovým způsobem, nebo/a semena takových rostlin nebo takového potomstva.
- 16. Protein získaný expresí DNA podle libovolného z nároků 8 až 12 a antimikrobiální protein produkovaný expresí rekombinantní DNA v rostlinách nebo jejich potomstvu nebo semenech podle nároku 15.
- 17. Antimikrobiální prostředek, vyznačuj ící se t i m , že obsahuje jeden nebo několik proteinů podle libovolného z nároků 1 až 7 a 16.
- 18. Způsob potírání hub, vyznačující se tím, že zahrnuje jejich vystavení působení proteinů nebo prostředků podle libovolného z nároků 1-7, 16 a 17.
- 19. Způsob extrakce pro získání antimikrobiálních proteinů podle libovolného z nároků 1-7 nebo nároku 16 z organického materiálu, který je obsahuje, kterýžto způsob zahrnuje podrobení tohoto materiálu maceraci a extrakci pomocí rozpouštědel·, vyznačující se že tímto materiálem je mikroorganismus nebo rostlina.tím1/9
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| GB939321714A GB9321714D0 (en) | 1993-10-21 | 1993-10-21 | Improvements in or relating to organic compounds |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CZ112296A3 true CZ112296A3 (en) | 1997-05-14 |
Family
ID=10743902
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CZ961122A CZ112296A3 (en) | 1993-10-21 | 1994-10-20 | ANTIMICROBIAL PROTEINS, RECOMBINANT DNAs ENCODING THEREOF AND THEIR USE FOR TRANSFORMATION OF PLANTS AND FIGHTING FUNGI |
Country Status (14)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US6218508B1 (cs) |
| EP (1) | EP0724641B1 (cs) |
| JP (1) | JPH09504427A (cs) |
| AT (1) | ATE256193T1 (cs) |
| AU (1) | AU683952B2 (cs) |
| CA (1) | CA2170506A1 (cs) |
| CZ (1) | CZ112296A3 (cs) |
| DE (1) | DE69433407T2 (cs) |
| DK (1) | DK0724641T3 (cs) |
| GB (1) | GB9321714D0 (cs) |
| HU (1) | HU223367B1 (cs) |
| PL (1) | PL181851B1 (cs) |
| RU (1) | RU2158762C2 (cs) |
| WO (1) | WO1995011306A1 (cs) |
Families Citing this family (44)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB9526238D0 (en) * | 1995-12-21 | 1996-02-21 | Sandoz Ltd | Improvements in or relating to organic compounds |
| US6121436A (en) | 1996-12-13 | 2000-09-19 | Monsanto Company | Antifungal polypeptide and methods for controlling plant pathogenic fungi |
| US8071703B2 (en) | 2007-03-22 | 2011-12-06 | Novartis Ag | Silicone-containing prepolymers with dangling hydrophilic polymer chains |
| RU2380374C1 (ru) * | 2008-07-15 | 2010-01-27 | Учреждение Российской академии наук Институт биоорганической химии им. академиков М.М. Шемякина и Ю.А. Овчинникова РАН | Пептид, обладающий антимикробной активностью |
| US8357760B2 (en) | 2008-07-21 | 2013-01-22 | Novartis Ag | Silicone hydrogel contact lenses with convertible comfort agents |
| ES2423914T3 (es) | 2010-07-30 | 2013-09-25 | Novartis Ag | Lentes de hidrogel de silicona con superficies ricas en agua |
| US8835525B2 (en) | 2010-10-06 | 2014-09-16 | Novartis Ag | Chain-extended polysiloxane crosslinkers with dangling hydrophilic polymer chains |
| EP2625216B1 (en) | 2010-10-06 | 2019-06-05 | Novartis AG | Polymerisable chain-extended polysiloxanes with pendant hydrophilic groups |
| CN103168067B (zh) | 2010-10-06 | 2015-08-05 | 诺华股份有限公司 | 可水处理的含硅氧烷预聚物及其用途 |
| JP5990579B2 (ja) | 2011-06-09 | 2016-09-14 | ノバルティス アーゲー | ナノテクスチャー表面を持つシリコーンヒドロゲルレンズ |
| SG11201400228WA (en) | 2011-10-12 | 2014-05-29 | Novartis Ag | Method for making uv-absorbing ophthalmic lenses by coating |
| HUE027313T2 (en) | 2011-11-15 | 2016-10-28 | Novartis Ag | Silicone hydrogel lens with cross-linked hydrophilic coating |
| US9261626B2 (en) | 2011-12-08 | 2016-02-16 | Novartis Ag | Contact lenses with enzymatically degradable coatings thereon |
| RU2483109C1 (ru) * | 2011-12-12 | 2013-05-27 | Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Институт общей генетики им.Н.И.Вавилова Российской академии наук (ИОГенРАН) | ГЕНЫ ПШЕНИЦЫ Triticum kiharae, КОДИРУЮЩИЕ АНТИМИКРОБНЫЕ ПЕПТИДЫ |
| NZ700848A (en) | 2012-06-14 | 2016-08-26 | Novartis Ag | Azetidinium-containing copolymers and uses thereof |
| US9395468B2 (en) | 2012-08-27 | 2016-07-19 | Ocular Dynamics, Llc | Contact lens with a hydrophilic layer |
| EP2931790B1 (en) | 2012-12-14 | 2017-02-15 | Novartis AG | Actinically-crosslinkable amphiphilic prepolymers |
| CN104871036B (zh) | 2012-12-17 | 2019-12-10 | 诺华股份有限公司 | 制备改进的uv吸收性眼用透镜的方法 |
| CN105917270A (zh) | 2013-11-15 | 2016-08-31 | 视觉力学有限责任公司 | 具有亲水层的接触透镜 |
| HUE038809T2 (hu) | 2013-12-17 | 2018-11-28 | Novartis Ag | Térhálósított hidrofíl bevonattal ellátott szilikon hidrogél lencse |
| EP3134461B1 (en) | 2014-04-25 | 2018-02-14 | Novartis AG | Hydrophilized carbosiloxane vinylic monomers |
| EP3186070B1 (en) | 2014-08-26 | 2019-09-25 | Novartis AG | Method for applying stable coating on silicone hydrogel contact lenses |
| BR112017003447B1 (pt) | 2014-08-26 | 2021-10-26 | Alcon Inc | Copolímero de poli(oxazolina-co-etilenoimina)-epicloridrina, material polimérico hidrofílico reticulável termicamente e solúvel em água, e métodos para produzir lentes de contato revestidas |
| JP6774947B2 (ja) | 2014-12-09 | 2020-10-28 | タンジブル サイエンス インコーポレイテッド | 生体適合性層を有する医療デバイスコーティング |
| US10266445B2 (en) | 2015-05-07 | 2019-04-23 | Novartis Ag | Method for producing contact lenses with durable lubricious coatings thereon |
| WO2017037611A1 (en) | 2015-09-04 | 2017-03-09 | Novartis Ag | Soft silicone medical devices with durable lubricious coatings thereon |
| CA2992823C (en) | 2015-09-04 | 2019-10-29 | Novartis Ag | Method for producing contact lenses with durable lubricious coatings thereon |
| KR102604468B1 (ko) | 2015-12-15 | 2023-11-22 | 알콘 인코포레이티드 | 실리콘 하이드로겔 콘택트 렌즈 상에 안정한 코팅을 적용하기 위한 방법 |
| RU2645070C2 (ru) * | 2016-06-06 | 2018-02-15 | Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Институт клеточного и внутриклеточного симбиоза Уральского отделения Российской академии наук | Способ получения антимикробных пептидов из тромбоцитов курицы домашней |
| MY189895A (en) | 2016-09-20 | 2022-03-18 | Novartis Ag | Process for producing contact lenses with durable lubricious coatings thereon |
| EP3516430B1 (en) | 2016-09-20 | 2021-02-17 | Alcon Inc. | Hydrogel contact lenses with lubricious coating thereon |
| HUE053707T2 (hu) | 2016-09-20 | 2021-07-28 | Alcon Inc | Színezett hidrogél kontaktlencsék rajtuk síkosító bevonattal |
| SG11201900553PA (en) | 2016-09-20 | 2019-04-29 | Novartis Ag | Method for producing a water-soluble thermally-crosslinkable polymeric material |
| US10782450B2 (en) | 2016-10-26 | 2020-09-22 | Alcon Inc. | Soft contact lenses with a lubricious coating covalently-attached thereon |
| HUE053839T2 (hu) | 2016-10-31 | 2021-07-28 | Alcon Inc | Eljárás felületi bevonattal ellátott, viselési kényelemmel rendelkezõ kontaktlencsék elõállítására |
| US10830923B2 (en) | 2017-12-13 | 2020-11-10 | Alcon Inc. | Method for producing MPS-compatible water gradient contact lenses |
| US11448796B2 (en) | 2018-04-13 | 2022-09-20 | Alcon Inc. | Evaluation method for the coverage of a coating on a contact lens surface |
| EP3890952B1 (en) | 2018-12-03 | 2023-07-05 | Alcon Inc. | Method for making coated silicone hydrogel contact lenses |
| US11099300B2 (en) | 2018-12-03 | 2021-08-24 | Alcon Inc. | Method for producing coated silicone hydrogel contact lenses |
| SG11202108875UA (en) | 2019-04-10 | 2021-10-28 | Alcon Inc | Method for producing coated contact lenses |
| CN117716262A (zh) | 2021-09-01 | 2024-03-15 | 爱尔康公司 | 用于生产可润湿硅酮水凝胶接触镜片的方法 |
| EP4658491A1 (en) | 2023-02-02 | 2025-12-10 | Alcon Inc. | Water gradient silicone hydrogel contact lenses |
| US20240293985A1 (en) | 2023-02-27 | 2024-09-05 | Alcon Inc. | Method for producing wettable silicone hydrogel contact lenses |
| CN121175595A (zh) | 2023-05-25 | 2025-12-19 | 爱尔康公司 | 涂层硅酮水凝胶接触镜片及其制备方法 |
Family Cites Families (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS62135492A (ja) * | 1985-12-10 | 1987-06-18 | Takara Shuzo Co Ltd | 新規キラ−トキシン |
| DK61691D0 (da) * | 1991-04-08 | 1991-04-08 | Danisco | Genetiske konstruktioner |
| GB9112300D0 (en) * | 1991-06-07 | 1991-07-24 | Ici Plc | Biocidal proteins |
| US5514779A (en) * | 1991-06-07 | 1996-05-07 | Zeneca Limited | Biocidal proteins from plants |
| DE69333781T2 (de) * | 1992-11-12 | 2006-05-11 | Syngenta Ltd., Guildford | Biozide chitin bindende proteine |
-
1993
- 1993-10-21 GB GB939321714A patent/GB9321714D0/en active Pending
-
1994
- 1994-10-20 CZ CZ961122A patent/CZ112296A3/cs unknown
- 1994-10-20 DK DK94931533T patent/DK0724641T3/da active
- 1994-10-20 WO PCT/EP1994/003449 patent/WO1995011306A1/en not_active Ceased
- 1994-10-20 EP EP94931533A patent/EP0724641B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1994-10-20 US US08/632,511 patent/US6218508B1/en not_active Expired - Fee Related
- 1994-10-20 DE DE69433407T patent/DE69433407T2/de not_active Expired - Fee Related
- 1994-10-20 AT AT94931533T patent/ATE256193T1/de not_active IP Right Cessation
- 1994-10-20 HU HU9601040A patent/HU223367B1/hu not_active IP Right Cessation
- 1994-10-20 RU RU96109325/13A patent/RU2158762C2/ru not_active IP Right Cessation
- 1994-10-20 CA CA002170506A patent/CA2170506A1/en not_active Abandoned
- 1994-10-20 PL PL94313526A patent/PL181851B1/pl not_active IP Right Cessation
- 1994-10-20 AU AU80587/94A patent/AU683952B2/en not_active Ceased
- 1994-10-20 JP JP7511335A patent/JPH09504427A/ja active Pending
-
2000
- 2000-01-19 US US09/488,200 patent/US6300103B1/en not_active Expired - Fee Related
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CA2170506A1 (en) | 1995-04-27 |
| US6300103B1 (en) | 2001-10-09 |
| WO1995011306A1 (en) | 1995-04-27 |
| US6218508B1 (en) | 2001-04-17 |
| DE69433407T2 (de) | 2004-06-09 |
| HU9601040D0 (en) | 1996-06-28 |
| PL313526A1 (en) | 1996-07-08 |
| DK0724641T3 (da) | 2004-04-13 |
| GB9321714D0 (en) | 1993-12-15 |
| PL181851B1 (en) | 2001-09-28 |
| RU2158762C2 (ru) | 2000-11-10 |
| AU683952B2 (en) | 1997-11-27 |
| HU223367B1 (hu) | 2004-06-28 |
| AU8058794A (en) | 1995-05-08 |
| HUT74395A (en) | 1996-12-30 |
| JPH09504427A (ja) | 1997-05-06 |
| EP0724641A1 (en) | 1996-08-07 |
| EP0724641B1 (en) | 2003-12-10 |
| DE69433407D1 (de) | 2004-01-22 |
| ATE256193T1 (de) | 2003-12-15 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CZ112296A3 (en) | ANTIMICROBIAL PROTEINS, RECOMBINANT DNAs ENCODING THEREOF AND THEIR USE FOR TRANSFORMATION OF PLANTS AND FIGHTING FUNGI | |
| EP0448511B1 (en) | Anti-pathogenically effective compositions comprising lytic peptides and hydrolytic enzymes | |
| US6187904B1 (en) | Biocidal proteins | |
| US5837545A (en) | Genes, polypeptides, and compositions for cold tolerance in plants | |
| EP2090658A2 (en) | Generation of plants with improved pathogen resistance | |
| Iuchi et al. | Characterization of two cDNAs for novel drought-inducible genes in the highly drought-tolerant cowpea | |
| EP0672146B1 (en) | Biocidal chitin binding proteins | |
| CZ289646B6 (cs) | Antimikrobiální proteiny, rekombinantní DNA, které je kódují, antimikrobiální prostředek, který je obsahuje, a způsob boje proti houbám či bakteriím | |
| EP1067946A4 (en) | ANTIBACTERIAL PROTEIN EXTRACTS FROM PUNCH SEEDS AND PAPRIKA | |
| JPH07502976A (ja) | 殺生物性蛋白質 | |
| US6242574B1 (en) | Antimicrobial proteins | |
| CA2351894C (en) | Novel protein, gene encoding the same and method of utilization thereof | |
| KR100538975B1 (ko) | 고추 유래의 리보뉴클레아제 활성을 갖는 병원관련 단백질 10 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PD00 | Pending as of 2000-06-30 in czech republic |