CZ160598A3

CZ160598A3 - Antiglukokortikoidní farmaceutický prostředek

Info

Publication number: CZ160598A3
Application number: CZ981605A
Authority: CZ
Inventors: Dmitrij Dmitrijevič Genkin; Kirill Gennadievič Surkov; Viktor Veniaminivič Tets; Sergej Dmitrievič Burlakov
Original assignee: Sergej Dmitrievič Burlakov; Dmitrij Dmitrijevič Genkin; Kirill Gennadievič Surkov; Viktor Veniaminivič Tets
Priority date: 1996-01-31
Filing date: 1996-02-01
Publication date: 1998-08-12
Also published as: CN1213964A; AU710479B2; LV12177A; PL187564B1; EE9800209A; GEP20001955B; MD1430B1; KR100347862B1; EP0896819A1; HUP9900504A2; CA2244985A1; LT98054A; SI9620053A; UA48212C2; SK65598A3; PL322596A1; LV12177B; EP0896819A4; US5965623A; JPH11504946A

Description

Oblast techniky

Vynález se týká medicíny, zejména antiglukokortikoidních přípravků nesteroidní povahy, t.j. sloučenin, které neobsahují v molekule steranové jádro.

Dosavadní stav techniky

Pro terapeutické účely se jako supresiva glukokortikoidů používají následující látky:

1. Sloučeniny, které inhibují různé stupně syntézy steroidních hormonů (inhibitory enzymů, které katalyzují různé stupně syntézy steroidních hormonů jsou například popsány v Modifiers of steroid-hormone metabolism: a rewiew of their chemistry, biochemistry and clinical operations. J. Steroid Bžochem., vol. 5, str. 501, 1974):

a) deriváty inhibuje syntézu hydroxylázy),	difenylmethanu, např.	amfenon B (který ll-β-, 17- a 21-
steroidů ve	stupni
b) deriváty	pyridinu	(skupiny	SU-c), například
metirapon (který	inhibuje	syntézu	ve stupni 11-β
hydroxylázy) ,

c) Substituované α,α-glutaramidy, například aminoglutethimid (který brání syntéze pregnolonu z cholesterinu tím, že inhibuje 20-a-hydroxylázu a C20, C-22 liázu.

- 2 d) Steroidní sloučeniny, například trilostan (3β-ΞubΞtituovaný ΞίβΓοίά-3βhydroxy-5-androsten-17-on), inhibující 3p-deoxysteroidhydrogenázu-5,4-izomerázu, viz G.O.Potts, J,E.Greange,

H.R.Hording, H.P.Shahe: Trilostene, an orally active inhibitor of steroid biosynthesis. Steroids, vol. 32, str. 257] .

2. Látky, inhibující reakci hormon-receptor glukokortikoidních hormonů, popsané v publikaci V.P.Golikov: Receptor mechanisms of the glucocortikoid effect, Moskovskaya Meditsina, 1990.

a) Steroidní látky,například mifepriston (Ιΐβ-substi- tuovaný steroidní derivát l^-(4-dimethylaminofenyl)-17 3hydroxy-17a-prop-l-inyl)-estra-4,9-dien-3-on), který tvoří s receptorem glukokortikoidních hormonů komplex, neschopný spustit mechanismy, ve kterých spočívá glukokortikoidní účinek, viz publikace C.M.Bamberger a G.P.Chrousos Glucocortikoir receptor and RU486 man Steroid receptor and antihormones, Annals of New York Acadamy of Science, vol. 761, str. 296 až 310, 1995.

b) nesteroidní látky, viz W.L.Duax, J.F.Griffin, C.M. Weeks, Wawrzak The mechanism of steroid antagonist: insight from crystallographic studies, J. Steroid Biochem, vol. 31, strany 481 až 492, (1988), například drotaverin hydrochlorid, což je derivát isochinolin-l-(3,4-diethoxybenzyliden)-6,7diethoxy-1,2,3,4-tetrahydroisochinolinu) nebo kyselina acetylsalicylová, viz publikaci V.P.Golikov: Receptor mechanisms of the glucocortikoid effect, Moskovskaya Meditsina, 1990.

Shora vyjmenované látky vykazují, pokud jsou použity jako složky různých terapeutických přípravků, určitý antiglukokortikoidní účinek.

Je také známo, že shora vyjmenované přípravky mají řadu podstatných nedostatků:

1. Přípravky, inhibující syntézu glukokortikoidů, inhibují v závislosti na cílových enzymech také syntézy jiných steroidních hormonů (t.j. sexuální steroidy a/nebo mineralokortikoidy) a tím způsobují hromadění predecesorú inhibovaných enzymů, které mají vlastní hormonální aktivitu.

2. Přípravky druhé skupiny, které jsou málo specifické, t.j. mají kromě antiglukokortikoidního účinku i jiné steroidní antihormonální účinky.

3. Veškeré steroidní látky narušují tak či onak rovnováhu steroidů v lidském organismu. Tyto látky mohou tvořit metabolity, které mají jinou aktivitu oproti té, která je žádoucí u léčiva.

Shora uvedený léčivý přípravek Mifepriston (RU 486) je steroidním léčivem, u kterého se v nejmenší míře vyskytují jmenované nežádoucí efekty, jeho schopnost blokovat receptory glukokortikoidů je nejvíce specifická. Tento přípravek je svými farmakologickými účinky v rámci dosavadního stavu techniky nejbližší skupině sloučenin podle vynálezu. Jeho podrobnější popis je například v publikaci C.M.Bamberger a G.P.Chrousos Glucocortikoid receptor and RU486 in man Steroid receptor and antihormones, Annals of llcv York Acadamy of Science, vol. 761, str. 296 až 31, (1995) nebo v publikaci H.J.Klosterterboer, G.H.Deckers, M.E.de Gooer, R.Dijkema, E.O.M.Orlemans, W.G.E.J.Schoonen: Pharmacological properties of a new selective antiprogesten: Org 33628 v Steroid receptor and antihormones. Annals of New York Acadeaiy of Science, vol. 761, Str. 192 až 201, (1995). S těmito sloučeninami je dále v popisu srovnáván účinek prostředku podle vynálezu. Přestože je mifepriston velmi dobrý, má také, stejně jako ostatní analogy, řadu slabých míst:

- přípravek je účinný pouze ve vysokých dávkách (400 mg za den,

- jde o účinnou sloučeninu obsahující v molekule steroidní jádro,

- jde o sloučeninu, která se váže také na receptory steroidních pohlavních hormonů, progestinů a mineralokortikoidů.

Jsou také známy biosyntetizované a vylučované specifickou vůni, působící hmyzí feromony - látky do okolí hmyzem, které mají na specifické (feromonové) receptory u vnímavých jedinců téhož hmyzího druhu a vyvolávající u nich určité chování nebo proces, například lákání jedinců opačného pohlaví na místo setkání, přípravu k oplodnění a další, viz V.N.Burov, A.P.Sazon: Biologičeski aktívnyje věščestva v zaščitě rastěnij, Moskva, 1987, str.

79.

Konkrétně jedna ze skupin feromonú zahrnuje nenasycené alifatické alkoholy, estery a acetáty, obsahující v lineárním uhlovodíkovém řetězci 10 až 21 uhlíkových atomů. Feromony z této skupiny se používají jako domácí a zemědělské

- 5 insekticidy, viz V.N.Burov, A.P.Sazon: Biologičeski aktívnje věščestva v zaščitě rastěnij”, Moskva, 1987, str. 79 a 96 až 116.

Specifické fyzikální a chemické vlastnosti shora uvedených feromonů a jejich syntetických analogů a derivátů (zejména pro hydrofóbní vlastnosti, které dodává přítomnost dlouhých řetězců v molekule) jim umožňují snadno se rozpouštět v tucích a proniknout do biologických membrán, přičemž mění fyzikální a mechanické vlastnosti (tekutost, penetrabilitu) těchto membrán. Druhá z uvedených vlastnosti umožňuje, že jsou použitelné jako přísady přípravků pro zvýšení transkutánní penetrability membrán, což je popsáno v publikaci R.O.Rotts, Francoer M.L. Topical pharmaceutical containing penetration enhancers. EP-A-331 382 (Cl. A61K47/00,06 září 1989, US Appl. 161926, 26.2.1988.

Hydrofóbní tendence dané skupiny feromonů vysvětluje také biologické vlastnosti dané skupiny feromonů, využívané v poslední době v biologii a v medicíně:

1) SCHOPNOST ANESTÉZIE, která umožňuje jejich použiti jako anestetik, jak je uvedeno v publikaci M.J.Pringle, K.B.Brown, K.Miller: Can the lipid theories of anaestesia account for the cutoff in anestetic potency in homologous series of alcohols?, Mol. Pharmacol., 1981, vol. 19, N. 1, str. 49 až 55.

2) SCHOPNOST POTLAČOVAT BAKTERIE (víz T.Namba, Y.Hattori, Y.Tsuda, M.Miyaji: Dentifrices containing fatty acids and unsatured alcohols for dentalcaries control, JP-A-63,881323 [88,88123] Cl. A61K31/20, 19.4.1988) A VIRY, viz J.Sands,

D.Auperin, W.Snipes: Extreme sensitivity of enveloped viruses, including herpes simplex, to long chain unsatured monoglycerides and alcohols, Antimicrob. Agent Chemother. , vol. 15, N. 1, str. 67 až 73 a J.Sands, P.Landin, D.Auperin, A.Reinhardt: Enveloped virus inactivation by fatty acid derivatives, Antinicrob. Agent Chemother. , vol. 15, N. 1, str. 134 až 136.

3) SCHOPNOST VYVOLAT ROZKLAD ERYTHROCYTŮ viz Osorio e Castro, et al. Hemolysis of erythrocytes and fluorescence polyrusation changes elicited by peptide toxines, alifatic alkohols related of glykols and benzylidene derivatives, Biochim. Biophys. Acta, 1990, vol. 1029, N. 2, str. 252 až 258 .

Je samozřejmé, že shora popsané známé vlastnosti zmíněné skupiny feromonů a jejich syntetických analogů a derivátů a jim odpovídající kosmetické, zemědělské a biologické aplikace nemají žádný vztah k aktivitě vůči glukokortkoidům (podrobně bude toto tvrzení prokázáno dále). Proto nikdo z nám známých odborníků neměl zájem o zmíněné sloučeniny z hlediska možnosti získání antiglukokortikoidního účinku s jejich pomocí.

Podstata vynálezu

Úkoly vynálezu jsou: 1) odstranění shora uvedených nedostatku antiglukokortikoidních analogů, 2) nalezení nové třídy léčivých látek, aby: a) byly schopny účinně a specificky inhibovat účinek glukokortikoidů, b) byly vhodné pro léčení širokého rozsahu patologických stavů, c) měly nízkou toxicitu a vysoký terapeutický účinek.

• · · · ♦·· · ·· • · · · · · · ···* ·

Shora uvedené úkoly byly vyřešeny podle vynálezu použitím antiglukokortikoidních léčivých nesteroidních feromonů (t.j. feromonů, jejichž chemická struktura neobsahuje žádné steranové jádro) nebo syntetických syntetických analogů takovýchto feromonů, mezi které patří buď nenasycené alifatické alkoholy, aldehydy nebo estery s dlouhým řetězcem, přičemž uvedené alifatické alkoholy, aldehydy nebo estery obsahují 10 až 21 uhlíkových atomů v lineárním uhlovodíkovém řetězci.

Shora uvedený výběr byl proveden na základě výsledků výzkumů, prováděných autory vynálezu, které vedly k objevu nových biologických vlastností, které projevují dané sloučeniny, přičemž mezi tyto vlastnostmi patří schopnost inhibovat receptory zprostředkovaný účinek glukokortikoidů na somatické buňky u cicavců.

Zejména tyto vlastnosti uvedených sloučenin, které byly dosud známy z dostupných informačních zdrojů, dovolily vyřešit zadaný úkol.

Kromě toho je možno pro zesílení terapeutického účinku je možno použít jako antihormonálního farmaceutického přípravku použít směsi několika feromonů a/nebo jejich syntetických analogů, přičemž výběr příslušných kombinací ze skupiny shora popsaných sloučenin pro přípravu těchto směsí se provádí tak, aby byl pokud možno co největší rozdíl mezi hydrofobností směšovaných sloučenin a aby byl rozdíl v délkách řetězců složek směsi nejméně pět uhlíkových atomů.

Pro doplnění uvedeného, aby se zjednodušil způsob výroby konkrétních lékových forem, je možno použít deriváty · · · · feromonů a/nebo jejich syntetických analogů, vybraných ze sloučenin, obsahujících stejné strukturní fragmenty.

Léková forma na bázi hmyzích feromonů obsahuje jednu, dvě nebo více účinných látek, smíšených s apyrogenní vodou, fyziologicky kompatibilním pufrovacím roztokem (j iným farmaceuticky přijatelným nosičem) nebo zapouzdřených do mikrokapsulí (například syntetické tukové struktury liposomy nebo jiné farmaceuticky přijatelné nosiče) a vyrábí se ve formě tabletek, kapsulí, injekčních roztoků, mastí a dalších lékových forem.

Struktura léčiva podle vynálezu umožňuje získání léčivých přípravků, které účinně a specificky inhibují funkci glukokortikoidních receptorů, vhodných pro terapeutickou korekci širokého okruhu patologických případů.

Možnosti přípravy léčiva podle vynálezu ilustrují následující praktické příklady.

Příklady provedení vynálezu

PŘÍKLAD 1. Použití jednoho feromonů nebo jeho syntetického analogu.

500 mg lipidů (dipalmitoylfosfatidylcholin a fosfatidylserin v molárním poměru 10 : 0,1) a 100 mg Z-ll-tetradecinolu (nenasycený alifatický alkohol s délkou uhlovodíkového řetězce 14 atomů uhlíku a s dvojnou vazbou v poloze 11) se rozpustí v 500 ml chloroformu při 22 °C a umístí se do silnostěnné baňky o objemu 4 litrů. Baňka se umístí do rotační odparky a při 65 °C se odpaří rozpouštědlo.

·· ·»··

Na stěnách nádoby se poté vytvoří tenké částečně průsvitná vrstva. Baňka se poté vloží do sušárny a dosuší se ve vakuu po dobu 1 hodiny. Poté se do baňky nalije 10 ml redestilované deionizované vody a po probublání baňky héliem se vrstva rehydratuje intenzivním protřepáváním po dobu 1 hodiny při teplotě 65 °C. Vytvoří se 10 ml viskózního gelu se zeleným odstínem. Gel se zředí v 90 ml fosfátového pufru (pH 7,4, 22°C) a protřepává se 30 minut při 22 °C. Vytvoří se 100 ml suspenze, na kterou se působí ultrazvukem o frekvenci 44 kHz třicetkrát po dobu 30 s minutovými intervaly. Na suspenzi ošetřenou ultrazvukem se pak působí tlakovým dusíkem, který se vhání přes polykarbonátové membrány s průměrem nejprve 500 a poté 100 nm. Vytvoří se opaleskující směs, která je tvořena vodní emulzí malých liposomů stejného složení o rozměru 80 až 130 nm, obsahující 500 mg lipidů a 100 mg Z-(11)-tetradecinolu. 100 ml získané suspenze se disperguje ve 120 ml základu masti, který tvoří vazelína, vosk, sorbitoltrioleát (30:2:5), zahřátého na 80 °C.

Získaný krém se plni do tub po 2 g, obsah 1 mg Z-(ll)-tetradecenolu ve 2 g liposomového krému.

PŘÍKLAD 2.

Použití feromonů nebo jejich syntetických analogů.

100 mg alifatický uhlíku a ester s s trans

Z-(11)-heptadecinolu řetězce 19 atomů

Z-(9)-tetradecenylacetátu délkou uhlovodíkového ře dvojnou vazbou v poloze 9) (nenasycený alifatický alkohol uhlíku a s trans

11) se rozpustí v 500 ml sterilního roztok se naplní do lahviček a ty se utěsní. Získá se léková forma, atomů

0 mg délkou poloze

Získaný dvojnou vazbou olivového oleje, sterilizují a hermeticky která je připravena pro ·« BA

W * ·

A • B *••4 ♦··♦

parenterální (podkožní) podávání.

PŘÍKLAD 3. Použití jednoho derivátu feromonu (benzylester alifatického nenasyceného alkoholu (Z-(14)-heptadecinol),

500 mg lipidů (fosfatidylcholin, fosfatidylethanolamin, cholesterin v molárním poměru 1:0,01:0,5) se rozpustí ve 400 ml diethylétheru při teplotě 22 °C. 50 ml

Z-(14)-heptadecinzlbenzoatu se rozpustí v 1 ml dimethzlsulfoxidu při 60 °C, potom se ochladí na 22 °C a leje se po kapkách ke 400 ml roztoku lipidů v diethyletheru ya intensivního míchání. K získanému roztoku se přidá 100 ml redestilované deionizované vody a na vzniklý dvoufázový systém se působí ultrazvukem tak dlouho, až zmizí rozhraní fází a vytvoří se dispersní systém (emulze). Organická fáze se odstraní na rotačním odpařováku při teplotě, převyšující teplotu fázového přechodu nejlépe rozpustného z přítomných fosfolipidu ze směsi (60 °C) při postupném snižování tlaku do 0,1 torr (na konci odpařování). Vytvoří se 100 ml viskózního gelu, který se podrobí lyofilizaci při ochlazování kapalným dusíkem. Vzniklý prášek o hmotnosti 550 mg se lisuje do tablet s obsahem 50 mg lipidu na 5 mg Z-(14)-heptadecinylbenzoátu nebo se plní do lahviček s obsahem 50 mg tuku a 5 mg Z-(14)-heptadecinylbenzoátu. Získá se léková forma, připravená pro perorální, parenterální nebo intranasální podávání.

Autoři vynálezu testovali většinu obecně známých hmyzích feromonů v dané skupině (nebo syntetických analogů těchto feromonů) za účelem stanovení jejich účinnosti na mléčné žlázy. Bylo zjištěno, že všechny tyto feromony vykazují v určité míře zmíněnou vlastnost. Volba feromonu je

- 11 v každém konkrétním případě determinována dostupností feromonů, jejich účinností po smísení se zvoleným vehikulem, jejich schopností penetrovat do biologických struktur, doba bezpečného skladování připravených forem feromonů, jejich toxicita a další faktory, které nemají základní význam z hlediska antihormonálního účinku, který je předmětem vynálezu. Je zřejmé, že pro účinné léčení konkrétních typů nemocí se může používat velké množství kombinací. Volba kombinace feromonů nebo jejich syntetických analogů se provádí podle proměnlivosti hydrofobních vlastnosti složek, což je rozhodující faktor pro jejich biologickou přístupnost do jednotlivých tkání a orgánů. Tak například relativně hydrofilní látky jsou lepší pro penetraci do ledvin, zatímco relativně hydrofobní látky jsou vhodnější pro penetraci do jater a mozku.

Průmyslová využitelnost

Přiložené tabulky 1,2,3 a 4 ukazují výsledky zkoušek léčivých látek podle vynálezu ve srovnáni s analogy a s kontrolní skupinou.

Tabulka 1 - ukazuje účinnost farmaceutického prostředku podle vynálezu při různých modelových somatických patologických stavech, způsobených nadbytkem glukokortikoidních hormonů.

Tabulka 2 - ukazuje účinnost farmaceutického prostředku podle vynálezu při potlačováni rozvoje kožní atrofie indukované glukokortikosteroidy (ztenčení kůže vyvolané podáním betametazonu).

- 12 Tabulka 3 - ukazuje antiglukokortikoidní (antikatabolickou) účinnost farmaceutického prostředku podle vynálezu při modelových zatíženích organismu (plaváni v bazénu).

Z tabulek 1 a 2 je vidět, že prostředek podle vynálezu má širší oblast účinného použití při léčení patologických somatických procesů, spjatých s vlivem glukokortikosteroidů a cytotoxických faktorů a kromě toho bylo s překvapením zjištěno, že má vyšší účinek než analogy a přípravky, které se nyní používají.

Z tabulky 3 vyplývá, že prostředek podle vynálezu je podstatně účinnější než analog potlačující rozvoj katabolických (glukokortikoidy zprostředkovaných) změn v organismu v průběhu intenzivní fyzické zátěže.

- 13 Tabulka 1

Účinnost použití látky podle vynálezu při léčení různých modelových somatických patologických stavech způsobených nadměrnou aktivitou glukokortikoidních hormonů.

Modelová somatická pathologie	Použitá látka rozvrh dávek velkost dávek	Znaky účinku
1	2		3
Obezita vlivem			Zmenšení přírůstků
přebytku gluko-			tělesné hmotnosti po
kortikoidů u			20 dnech (%)
krys plemena

Zucker

Prostředek podle vynálezu 10 mg/kg denně, lx podkožně (příklad 1)	88 %
Mifepriston 10 mg/kg
denně, lx podkožně	53 %
Kontrola	0 %

	II
• 4	a ·	v
*		•
•	• »	•
•	•	•
·«··	• · II	I I

		• I	··
1	•	• 1	• «
•		• I	4 ·
I	•	• ·« ·	* 4
	•	♦	• I
	11«	··	a *

Tabulka 1 - pokračování

Žaludečný vřed po aplikaci 100% ch₃cooh a následném denním zavádění 2,5 mg/kg hydrokortizonu, krysy plemena Wistar”

Zrušení odkladu zahojení vyvolané trvalým zaváděním hydrokortizonu;

po 14 dnech

Prostředek podle vynálezu 5 mg/kg, 3x denně intramuskulárně, 14 dní (příklad 1)

	Mifepriston, 20 mg/kg,3x denně intramuskulárně, 14 dní	45 %
	Cimetidin¹, 20 mg/kg, 3x denně intramuskulárně, 14 dní	15 %
	Kontrola	0 %

Vysvětlivky:

¹ Cimetidin byl testován pro doplnění srovnání, neboť představuje přípravek, který má jiný mechanizmus účinku, který není spojen s antiglukokortikoidním efektem a nyní se jeví jako nejpoužitelnější pro léčení stejných patologií.

·· ·· ·· ♦·♦* ·* · P ♦ ·· • « · · «*· t ♦·· « · · 9 9 9 9 «·· «9

9 9 9 9 9 99

9999 9999 99 ?·» «···

Tabulka 1 - pokračování:

1	2	3
Experimentální infarkt myokardu, krysa bez specifikace plemena		Snížení nekrózy	rozměrů v %
		1 den	7 dni
	Kontrola	0	0
	Farmaceutický prostředek podle vynálezu 10 mg/kg jednou intramuskulárně (příklad 3)	68	89
	Mifepriston (RU486)	17	28

intramuskulárně, jednou mg/kg

o Nitroglycerin	30	55
jednou intravenosně

Vysvětlivky:

o

Nitroglycerin byl použit pro doplněni srovnávacích látek, neboť působí jiným mechanismem, který není spojen s antiglukokortikoidním efektem a při tom je jedním z nejpoužívanějších léčiv v dané oblasti.

• · · · · · * · • · · · » · • · • · • · • · • · · • · •· •

•· •·

Tabulka 1 - pokračování:

1	2	3
Involuce thymu krys bez specifikace plemena		suprese involuce (% hmotnostní) STF³
1 den 7 dní

Kontrola 00 (neošetřené krysy)

Prostředek podle vyn.

mg/kgintramuskulárně 7057

3x denně 5 dní po traumatizaci

Mifepriston intramuskulárně 2517 mg/kg 3x denně, dní po traumatizaci

Levamizol⁴ 20 mg/kg 520

3x denně intramuskulárně dní po traumatizaci

Vysvětlivky:

o

Koncentrace thymového faktoru ⁴ Levamizol byl testován jako doplněk pro srovnání s látkami účinkujícími na odlišném (neantiglukokortikoidním) principu, avšak patří v poslední době mezi nejpoužívanější léčiva nemoci uvedeného typu.

• 4

- 17 Tabulka 2 Účinnost použití farmaceutického prostředku podle vynálezu při rozvoji glukokortikosteroidy indukované atrofii kůže (vyvolané podáváním betametazonu^) [%];

Přípravek, rozvrh a	Omezení ztenčení (atrofie) kůže
velikost dávek	vyvolaného betametazonem⁶, [%]
Kontrola	0
Mifepriston (RU 486) O 1,5 nmol/cm	7
Prostředek podle vynálezu 0,5 nmol/cm² (příklad 2)	87
1,25 dihydroxyvitamin 03 ⁷o 1 nmol/cm	65

Vysvětlivky:

- '

Přípravky se podavyly denně po dobu 10 dní na pozadí s podáváním betametazonu, myši C3H, 8 až 10 myší ve skupině ⁶ Betametazon o dobu 10 dní po 2,5 nmol/cm² denně

1,25-Dihydroxyvitamin D3 srovnávací látka, která mechanismem a je v současné terapii.

byl použit jako doplňková nepůsobí antiglukokortikoidním době často používány pro danou

* · • · · ·

- 18 Tabulka 3: Antiglukokortikoidní (antikatabolická) účinnost farmaceutického přípravku podle vynálezu modelovém vyčerpávajícím fyzikálním zatížení (plavání v bazénu).

Léčivo, Změna	svalové	Změna	Změna aktivity glu-
velikost hmoty		aktivity	kokortikoidních re-
a režim (% za	7 dní)	myofibrilární	ceptorů v leukocy-
dávek ⁸		q proteazy	těch¹⁰ (% za 7 dní)
Neosetřená zvířata	0	0	0
Kontrola	-10	+ 20	+ 35
Látka podle vynálezu, 10 mg/kg peror. 5 min. po ukončení námahy	+ 20	0	0
Mifepriston (RU 486) 20 mg/kg peror. 5 min. po ukončení námahy	+ 5	+7	+ 20

Vysvětlivky:

Q

Krysy bez specifikace plemene, 6 až 8 zvířat ve skupině ⁰ Jeden z významných biochemických ukazatelů katabolického účinku glukoproteidů na myocyty ¹⁰ Ukazuje stupeň aktivity reakce hormonu s receptorem a vliv hormonu na svalovou buňku.

Kromě cílových experimentů se při výzkumu sloučenin současně kontrolovalo i nebezpečí vedlejších a toxických • ·

- 19 účinků - podráždění kůže a sliznic, narušení kardiovaskulárního, nervového, zažívacího a vylučovacího systému, alergické reakce a pod. Terapeutický index byl u sloučenin podle vynálezu 100 až 300, což výrazně převyšuje terapeutický index mifepristonu (RU 486). Sledování úrovně pohlavních steroidních hormonů a mineralokortikoidů v krvi zvířat, na nichž byly prováděny testy nepřineslo žádné údaje, které by ukazovaly na změny v tomto směru po podáni látek podle vynálezu.

Podle našeho mínění odpovídá vynalezený farmaceutický prostředek všem kriteriím patentovatelnosti: je nový (z dostupných pramenů není známo použití hmyzích feromonů jako antihormonálního prostředku), je průmyslově využitelný (což přesvědčivě prokazují výsledky, uvedené v příkladech provedení a v tabulkách) a splňuje podmínku vynálezecké činnosti, neboř nebyl před vynalezením pro odborníka zřejmý.

Splnění posledního uvedeného kritéria lze ještě doložit následujícími důkazy:

1) Pokud je známo, ani jeden ze známých nesteroidních glukokortikoidních prostředků nepotlačuje bakterie a viry a nevyvolává rozklad erythrocytů v důsledku antiglukokortikoidního účinku, t.j. do dnešní doby není známa souvislost antikortikoidního účinku s biologickými vlastnostmi feromonů shora jmenovanými (v části o dosavadním stavu techniky).

2) Biologické vlastnosti dané skupiny feromonů, uvedené v části popisu, která se zabývá dosavadním stavem techniky (potlačování bakterii, virů a iniciace rozkladu erythrocytů) se projevuje pouze v koncentraci o několik řádů vyšší, než « · · (jak vyplývá z výsledků testů ověřování, uvedených v tabulkách) je koncentrace, při které se projevuje jejich glukokortikoidni působení, což se z hlediska klasické endokrinologie jeví jako ukazatel nespecifiónosti těchto vlastností (tedy potlačování a iniciace).

To, co bylo uvedeno ještě doplňuje a ukazuje, že dříve známé vlastnosti feromonů nemají vztah k antiglukotropnímu účinku.

3) Je známo, že ani viry ani bakterie nemají receptory pro glukokortikoidy, nesyntetizují je, a proto nemají připojovací místo, schopné reakce s glukokortikoidními hormony ani s odpovídáj íčími antiglukokortikoidy.

4) Je známo, že erythrocyty nemají jádro a, stejně jako v předešlém případě, nemají vazebná místa pro glukokortikoidy a nesytetizují pro ně receptory. Z těchto důvodů nemůže být jejich velmi silný účinek (rozklad membrány) vyvolán působením antikortikoidů.

Bylo by možno uvést i další důvody nezřejmosti a neočekávanosti použiti feromonů jako antiglukokortikoidního přípravku pro odborníky, t.j. splnění kritéria vynálezecké činnosti.

Claims

PATENTOVÉ NÁROKY změněné

1. Použití hmyzího feromonů nesteroidni povahy nebo jeho derivátu nebo jeho syntetického analogu, který je nenasyceným alifatickým alkoholem, aldehydem, nebo esterem a má délku lineárního alifatického uhlíkového řetězce 10 až 21 atomů uhlíku, jako antiglukokortikoidního prostředku.

2. Antiglukokortikoidní prostředek, vyznačující se tím, že obsahuje účinné množství hmyzího feromonů nesteroidni povahy a/nebo jeho derivátu a/nebo jeho syntetického analogu.

3. Prostředek podle nároku 2, vyznačující se tím, že obsahuje směs nejméně dvou hmyzích feromonů nesteroidni povahy a/nebo jejich derivátů a/nebo jejich syntetických analogů.

4. Prostředek podle nároku 3, vyznačující se tím, že rozdíl délek lineárních alifatických řetězců složek směsi není menší než 5.