CZ193495A3 - The use of dehydroepiandrosterone derivatives for the preparation of a pharmaceutical preparation and pharmaceutical composition containing the derivative - Google Patents

Description

O 2 -C2- as

Použití flor i vátu fi (' h y ri ι· n c> p i ;i n d r n s I. n r η n onu pro výrobu f λ r ma c 0111 i c -k é h o prostředku a f armaceut i ok ý p r o s I. ř*e riqk ojb s a h u j ά c í .ďer i valt" dtT-~ I "Τ' i _l 1 C ! ΛΟ j v 1 σ o zr C j r~· — 1 o CD :s l o 08/2 A 22~, po- hydroepiandrosterononu

Ohia s t to π ίι n i k dnou 9. března 1993 a týká se způsobu prevence a snižování vlivů ischemie, způsobů prevence nebo snižování bakteriální translokace a syndromu dýchacích potíží dospělých. Podle vynálezu se takovým chorobným stavům předchází podáváním dehydroepiandrosteronu (DHEA) n e b o j e h o cl e r i. v á t ň . D o s a v a d n í__s t a v .. t_e o h n j k_v'

Ischemie může být. způsobena příklad infarktem, popáleninami, chirurgickým traumatem a úrazovým traumatem. Ischemii může také předcházet reperfusní poškození.

Zjistilo sc, že udržování vaskulární integrity je důležitým faktorem odezvy na taková poškození. Komplex hemostatických me- i c h a n i s m ů koagulace, funkce destiček a fihrinolysis minimalizuje nepříznivé následky vaskulárních poruch a urychluje vaskulární o-právu. Vaskulární e n d o t h e 1. i. a 1 a buňky hladkého s 1 v a 1 s t v a aktivně udržují odolnost cévních, stěn proti t. hrombňm -expres í· některých an t i throiftbot icých charakteristik. Při porohách vaskulární buňky vykazují expresi thrombogeniokých charakteristik. Hemostatické charakteristiky normálních a narušených vaskulárních buněk popsal

RodgeFs G°7m . ΎΓ9 8 8” "FAS PlfT'j Γ^Τ'^Ι'ΓΓΓ'ΤΓδ až”'l 2ΤΠ “ —~'

Porucha dodávání okysličené krvi- do tkání se označuje jako ischemie. Je známo, že působením ischemie dochází k postupnému, to znamená v průběhu doby pokračujícímu- poškození buněčné vitality n tkáň so nok rot i zuje . Celková se t r váv.a j í c í ischemie s omezenou per fusí kyslíku pro tkáně vede ke smrti buněk a případně k nok ros i navozené koagulací vzdor re per fuse arteriální krví. ls-čhomie je pravděpodobné n c j d ů I. e ž i I ě j š í příčinou kougu lati v n i n e k -rosy v lidských nemocech . Významný podíl potíží, spojených s is- 2 - c hs mih,, je. výsky t -př-hhpd -spo j β n ýc h—s—r ©per f u3 s c hemi c.kých^t ká ň í označovaných jako reperf usní poškození.Z klinického hiediksa jsou tři stupně poškození buněk v závislosti na trvání ischemie: 1) Při krátce trvající ischemii reperfuse (a opětné dodání kyslíku) dokonale obnovuje strukturální a funkční integritu buňky. A i již došlo k jakémukoliv pooškození buněk, zotavují se buňky r e o xy g e n_a c í _ d okonale. Například_z_mě_n y_m.e_ro.b_rš_n_o_v.é.ho_p.ojt.©.n.c - Lá- Lu.,~ metaboíi-smu a u i tr as t r ukt ur y jsou krátkodobé, pokud se rychle obnov (cirkulace. 2) Při dlouhodobější ischemii není reperfuse spojena s obno vením struktury a funkce buňky avšak spíše s poškozením a smrtí buňky. Odezvou na reoxygenaci v tomto případě je rychlý a intenzivní zápal. 5, str. 2529 až 2537). Po aktivaci endothe1 iá1 ních buněk se P-se-lektin tychle translokuje z intrace1u1árních organel do plasmové membrány, kde působí k omezení cirkulijících neutrofilů a k jejich stabilizaci pro aktivaci endothe1 iá1 ně vázaným faktorem aktivujícím destičky, cytokiny odvozenými od endothelia a jinými biologicky aktivními mediátory (Weyrich A.S. a kol. 1993, J.Clin. Invest. 91, str. 2620 až 2629). Proto fysiologické vzájemné působení mezi aktivovaným endotheliem a akt ivováným neutrofi 1em se považuje za rozhodující a benzprostředně časný jev v reperfusním poškození orgánů a tkání. Jiné celulární a biochemické mediátory Izánětlivého poškození jako destičky a komplementní kaskáda a koa-^g;u lační systém jsou rovněž důležité, uplatňují se však v kaskádě mnohem později, v procese označovaném jakožto koagulativní nekro-sa. Konečně monocyty, makrofagy, fibroblasty a infiltrace buněk hladkého svalstva jsou zodpovědné za rekonstrukci a náhr.adu mrtvé tkáně novou vitální tkání, přičemž se takový proces označuje jako hojení rány. Všeobecně rozšířená teorie se zaměřuje na částečné redukované a tak aktivované druhy kyslíku v iniciaci poškození membrány v reperfusním poškození. Současné poznatky naznačují, že aktivovaný kyslík (superoxid, peroxid, hydoxylové radikály) se vytváří v průběhu ischemických příhod, a proto reaktivní druhy kyslíku poškozují ischemické buňky. Toxické druhy kyslíku se negeneřují v průběhu samotné ichemické periody avšak spíše při obnovení toku krve nebo při reperfusi. Dva zdroje aktivovaných druhů kyslíku ”j sbu'" z'ahr n ut y - jako ž to’ časné- pří pady -Tsper f usní^ho = poš kozen í*:-. zdr o*-je produkované intrace1u1árnně xanthinoxidasovou cestou a zdroje, které se mohou transportovat na extrace1u1ární prostředí aktivovanými neutrof i 1y (Hernandez L.A a kol. 1987, Am. J. Physiol. 253 [Heart Cir. Physiol. 22]:H699 až H703, Luccesi B.R., 1990, Am. J. Cardiology 65, str. 141 až 231, Lefer A.M. a kol.,1991, FASEB J., 5, str.. 2029 až 2034, Brown J.M. a kol., 1988, J. Clin.Invest 81, str. 1 297 až 1301. "Cellular Injur.y and Adaptation" v Pathologic Basis of Disease, Cotran a kol. vyd. WB Saunders. Phi1adelphia, str. 1 až 81, 1989) 4 .... ... -V^ css tš zá.v.Ls.lé. na. xan-t h i.no x i-ďase-vy·tvaře-j.í—{>tir i-ny >=--odvozen-é-od katabo í i srnu ATP v průběhu i 3 c h e m i cké per i ody, substráty pro aktivitu xanthinoxidasy, která vyžaduje kyslík v katalyse vytváření močové kyseliny. Druhy aktivovaného kyslíku jsou vedlejšími produkty této reakce. Druhy kyslíkových radikálů, odvozených od xanthinoxidasové cesty, jsou O2" (superoxid s jedním elektronem) _a H2 O2 ( pero x i_d vo d í k u se dvěma ne párovým i elektrony). Super oxidy se generují uvnitř cytosoiu xanthi noxi dasoti (nacházející se v cy-tosolu). Superoxidy jsou pak katabo1 isovány na peroxidy v myto-chondria superoxidismutasou. Peroxidy se dále převádějí na vodu buď glutathionperoxidasou v cytosoiu nebo katalasou v peroxiso-mes. Jak g1utathi onperoxidasu tak katalasu zahrnují antioxidanto-vé obranné mechanismy většiny buněk. Hlavním důkazem pro tuto do-mněku je schopnost a 11 opuri no 1u, inhibitoru xanthi noxidasy, chránit proti reperfusnímu poškození v případě pokusných modelů. V případě- cesty, závislé na NADPH, se NADPH oxidasa aktivuje ke generování superoxidů .prostřednictví mm redukce molekulárního kyslíku v plasmě membrány. Superoxidy se redukují na peroxid vodíku superoxidovou dismutasou v plasmě membrány nebo ve fagoly-sosomes. Konečně peroxid vodíku ve fago1ysosomes se může redukovat v příromnosti superoxidů mebo železnatých iontů na hydroxylo-vé radikály. Třetí forma kyslíkových metabolitů je zprostředková- V «J í l U' -myto ps r axrcas o u: v— ρ r řtomno sti- -chloru- k redukci- peroxidu vu — ns cnl ornou kys.e.! i nu.. H.ydroxylový radikál je mimořádně reaktivní. M i toc ho ndr i á 1 n í membrány poskytují četné vhodné substráty pro atakování hydroxv-Lo.výnu_„ra d,Lk.á.L.y^.. -.Ko ne č-ný-m.=,.výs.Ue dke..m=.-j.e=nev-r.a.t né—po š ko-z-e-ní^na---=-m4.-tochondria trvající masivním přílivem válenatých iontů. Jinou pravděpodobnou příčinou smrtí buněk v důsledku hydroxy1 ových radikálů je oeroxidace fosfolipidu v plasmové membráně. Nenasycené mastné kyseliny jsou vysoce citlivými štíty pro hydroxylové radikály. Odstraněním vodíkového atomu z mastných kyselin buněčných membránových fosfolipidu se vytvářejí volné lipidové radikály. Tyto lipidové radikály fungují podobně jako hydroxylové radikály 7. a v y t v á ř_e_n í jJ_n_ý_c_h—1 1 -D-i_d-p et^o x. i d-o výc h radiál Ů-.—De-S t r u-k-c e -Π-β-Π a s y - 5 cených mastných kyselin fosfolipidů vede ke ztrátě'membránoové fluidity a ke smrti buňky. Někteří výzkumní pracovníci se domnívají, že vlivy oxidativního stresu způsobují programovanou smrt buněk u různých buněčných typů.

Infarkty a traumatické poškození zahrnuje četné tkáně včetně vaskulární tkáně. Jednou odezvou-na .traumatické poškození je pokles dodávky krve do poškozené tkáně. Účelem této odezvy je chránit jedince od zavlečení infekčních činidel do těla. Závažné snížení dodávky krve je halvním faktorem progresivní ischemie v oblasti traumatického poškození. S progresivní ischemií se rozšiřuje nekrosa tkáně od přímo napadené tkáně k zahrnutí okolní nenapadené tkáně. Tato progresivní ischemie má významný úkol v* definování konečné patologie tkáně, pozorované v případě lidí, jako následek traumatického poškození (Robson M.C. a kol., 1979 Plastic and Reconstrictive Surgery 63, str. 781 až 787).

Jednou formou traumatického poškození, která získala velkou pozornost, je tepelné poškození nebo spálenina. Rána, způsobená spáleninou, představuje nerovnoměrné poškození a spektrum poškození je od tkáně, která je dokonale koagulována ve chvíli poškození po tkáň, která je poškozena toliko minimálně. Mezi těmito dvěma extremy je tkáň, která je závažně poškozena a nikoliv plné rozrušena, která je však určena k odumření. Etiologie postupné šířky nekrosy je označována jako stase a thrombosa krve v kožních cévách způsobující ischemii a destrukci epithe1 iá1 ních prvků. Tato ischemie nastává 24 až 48 hodin po tepelném poškození ( Robson "MTC". “a "~"k o 9 7 9 ' PT a s t i c - a n d Re co n s t r i e ti ve= S u r ger y 6 3 ,,, str 7.8 J. až 787 a Robson M.C. a kol., 1980, J.Trauma 20, str. 722 až 725). Byly pozorovány četné jevy po tepelném poškození včetně adhese leukocytů na stěny cév, aglutinace buněk červených krvinek a uvolnění vos.oakt i vn í c h a nekr o t i z u j í c í c h látek (Robson M.C.a kol. 1980, J. Trauma 20, str. 722 až 725).

Zjistilo se. že mikrovaskulární okluse a ischemie, související se spáleninou, jsou způsobovány na čase závislém zvrůstu vývoje, mikrothrombi v zóně stase, jehož podmínky popřípadě vedou k celkové oklusi arteriol a mikrocirkulační zástavě. Zatímco mar- - 6 - g i nace^eryt hr o.e y t ů,... gr an,u,l. o c y t.ů_a______d.e.s.t.i.č ek_.n.a^cé y.n.í.ch__s/t ě n á ch_ J.e_-tváření destiček mikrothrombi (ke kterému dochází přibližně 24 hodiny po chirurgickém zásahu) je pravděpodobně zodpovědná za vytváření stavu, které způsobují dokonalé nebo permanentní vasku-lární okluse a tkáňovou destrukci (Rockwell W.B. a Ehrlich H.P., 1992, J. Burn Care Rehab 13, str. 403 až 406 a Boykin J.V. a kol. ní destiček mikrothrombi se jeví na ceiuíární bázi pro rozšiřování zóny dokonalé okluse a ischemické nekrosy, která postupuje do zóny.stase po tepelném poškození.

Mnoho úsilí se věnovalo zlepšení péče o spáleniny a o jiná traumatická poškození a byla navržena četná řešení ke snížení progresivní ischemie spojené s takovým poškozením. Zjistilo se, že protizánětl ivá činidla jako indomethacin, acety1sa1 icy1 ová kyselina a methy1predniso nacetát chrání před dermální perfusí (Rob-son M.C. a kol. 1979, Plastic and Reconstricti ve Surgery 63, str. 781 až 787). Tři thromboxanové inhibitory, imidazol, methimazol a dipyridamol se osvědčily v předcházení vaskulárních změn v případě ran způsobených popálením, umožňují dermální perfusí a umožňují jinou prastaglandinovou syntesu, která maří nepříznivé působení proti zánět 1 ivých Činidel (Robson M.C. a kol., 1980, J. Trauma ?Ω,Γ -fi.h r . .7 7 7____a,ž^.-.7--?.FL).............íla.cap.a.iitLc.k š_________d.á.v.k.v_^Lh.u.pr.až.&n,u^..a^-,Lm.Ldaz,Q.La. se osvědčují v předcházení dermální vasku1ární okluse tím, že působí jako antagonisty k plasmi novému inhibitoru (Ehrlich H.P., 1984, J. Trauma 24, str. 311 až 318). Redukce cirkulace fibrino-qenu, vykázaná________při podání ancrodu (jed_____zmije), vede k zachování vaskulární potence v místě poškození (Ehrlich H.P. 1987, J. Trauma 27, str. 420 až 424). Zjistilo se také, že inhibice leukocyt-endothe1 iá1ní adherence, vykázaná při použití monok1oná1 ních protilátek, předchází rozšíření/progrese spálenin v marginální zóně stase (Mileski W. a kol. 1992, J.Sugg.Res. 52, str. 334 asž 339).

Bakteriální translokace je proces, při kterém vlastní střevní flora penertruje střevní barieru a napadá sterilní tk á n ě . T e n -to proces zahrnuje migraci mikrobiálních organismů do drenážních 7 mesenterických lymfatických uzlin, do sleziny, do jater, do krve a v některých případech do plic (Morehouse J.L a kol. 1986 Garst-roenterol 91, str. 673 až 682 a Maejimak a kol. 1984, Arch. Surg. 119, str. 166 až 172). Tento jev byl popsán u lidí po tepelném poškození (Czaja A.J. a kol. 19974 N. Engl. J. Med. 291,str. 925 až 929, Seavitt S. 1967, Br. J.Surg. 54, str. 32 až 41 a Desai M. H. a kol., 1991 Surgery Gyn. Obstet. 8 str. 257 až 261) a po i s-chemia— reperf usním poškození (Deitch E.A. a R.Berg 1 987 J. Burn Rehab 8, str, 475 až 482).

Za normálních podmínek je střevní sliznice nepropustná pro možné škodlivé látky ze střevního lumenu (Morehouse J.L a kol. 1086 Garstroentero 1 91, str. 673 až 682, Deitch E.A. a R.Berg 1987 J. Burn Rehab 8, str. 475 až 482 a Edmiston C.E. a R.E. Con-don 1991, Surgery, Gyn. Obstet. 173, str. 73 až 83). Současné poznatky potrvzují, že rozrušení integrity/permeabili ty sliznice podporuje bakteriální translokaci, jelikož obnažuje ke stresu, foterý produkuje hotitelskou odezvu charakterizovanou celulárním poškozením a nekrotická tkáň je v souhlase s vývojem bakteriální t-ranslokace (R.E. Condon 1991, Surgery, Gyn. Obstet. 173, str. 73 až 83). Klinicky důležitá reperkuse bakteriální translokace je sepse a mu 1ti systémové orgánové selhání (Deitch E.A. a R.Berg 1987 J. Burn Rehab 8, str. 475 až 482 a Edmiston C;E. a R.E. Condon 1991, Surgery, Gyn. Obstet. 173, str. 73 až 83 a Deitch E. A. 1990, Arch. Surgery 125, str. 403 až 404). Výskyt sepse a rozšíření nákazy orgánů po stresu je největší u pacientů, kteří ma jn- také sní ženou i munní ochranu ( De i tch- E τ-A-—a—*R . Berg -1 987-, J.-Burn Rehab 8, str. 475 až 482 a Edmiston C.E. a R.E. Condon 1991, Surgery, Gyn. Obstet. 173, str. 73 až 83), která se pozoruje u jedinců s popáleninami (Deitch E. A, 1990, Arch. Surgery 125, str. 403 až 404 a Saadia R. a kol., 1990, Br. J. Surg. 77, str. 487 až 492). Proto v odezvě na stres někteří jedinci vykazují bakteriální translokaci za nepřítomnosti závažných následků. Jedinci této skupsny mají zachovanou neporušenou imunologickou odezvu (Deitch E.A. a R.Berg 1987 J. Burn Rehab 8, str. 475 až 482 a Edmiston C.E, a R.E. Condon 1991, Surgery, Gyn.Obstet. 173,str.

- 8 - 73 _až 8.3 a Dpitch E. Δ. 1990. Arch.. Surqery 125, str.403 až 404) .

Pro dobře známou modulaci hostitelovy imunní., odezvy po závažných ___^ 9 popáleninách je bakteriální translokace jednou z nejzávážnějších následků tepelného poškození lidí (Deitch E. A. 1990, Arch. Sur— a gery 125, str. 403 až 404 a Saadia R. a kol. 1990, Br.J.Surg. 77, str. 487 až 492).

Pokusné modely bakteriální translokace doložily, že k nevrat- ** Á my. **\ a a λ ^ a a t a f í q tj ρλττ·^ e 5 £ GO 2 ^ h n rí i nárh η η τνη 5 1c π 7 Q n í cm 1VV« « <f I 9 V 1 W W *uv**« β V « W iiw «· w v *-> ** -j-rw w * ** >· ·»* ^ ^ . i. teplem a za 48 hodin po zviditelnění histoiogickýcn změn střevní vaskulámí tkáně (Desai M.H. a kol., 1991 Surgery Gyn. Obstet. str. 257 až 261 a Mainous H.R. a kol. 1991, Arch. Surgery 126, str. 33 až 37). Tyto experimentální systémy jsou užitečné pro definování farmakologických mediátorů, které se jeví jako užitečné k vytvoření kaskády efektorových molekul zodpovědných za nek-rosu tkáně. Kromě úlohy, kterou mají katecho 1aminy, jsou zahrnuty kyslíku prosté radikály a endotoxi ny, faktory jako interferon a, inter1eukin-6, faktor ' nekrosy nádoru, faktor aktivující destičky a četné vasoaktivní mastné kysel iny, odvozené od metabol ismu arašídové kyseliny (Morehouse J.L a kol. 1986 Garstroentero1 91,str. 673 až 682). Příspěvek kyslíku prostých radikálů, endotoxinu, prostaglandinů a thromboxanů při podpoře destrukce tkáně je podporován skutečností, že inhibice bakteriální translokace a muko- .s44·.ηΛίΚο-=..ρο5ΛΚ.e_...d.o.s.a*huj;e^pQ.u.žJi.t1Lm^,aJ1JJo:aujr Ln.aA.,u (JJ-.aMg.ha,o,...W..JS... . . a kol. 1992, J. Ped. Surg. 27, str. 968 až 973) (jakožto inhibitoru xanthinoxidasy) , endotoxi novou desentizací (Deitch E.A. a kol. 1992, Circ. Schock 36, str. 206 až 216), prostaglandinovými a n a 1 o q y ( F u k u s h i ma _ R . a ^k o 1 1 9 9 2 , An r.. S u r g_^ 2 16, s t r . 4 3 8 a ž 444) a inhibitory tromboxanové synthetasy (Tokyay R a kol. 1992, J. Trauma 32, str. 704 až 713).

Skutečnost zahrnutí úlohy neutrofilů v syndromu dechových obtíží dospělých ("adult respirátory distress syndrome" = ARDS) je podstatná avšak nepřímá (Simon R.H. a Ward P.A. 1992, Inflam-mation: Basic Principles and Clinical Correlates 2. vydání, Ga lin J.I. a kol. vyd. R.aven Press. Ltd. New York str. 999 až 1016). Některé z prvních poznatků, že neutrofily mohou způsobovat_ 9 obraz podobný jako ARDS, byly zjištěny u závažně neutropenických jedinců, kterým byly dodány intravenozní infuzí donorové neutrc-fily. Případně v rámci hodiny neutrofilní i nf use došlo k odtržení “white-out" plic (rentgenové paprsky) a k nástupu syndromu ARDS. Četné studie ukázaly, že se neutrofily akumulují v plicích v průběhu ARDS. Jejich přítomnost byla dokázána například histologic-ky. V průběhu časné fáze ARDS počet cirkulujících krevních buněk prudce klesá pravděpodobně pro jejich abnormální pulmonární sek- * « vestraci. Něco neutrifilů, které se akumulují v plicních kapilárách, opouští vaskulární prostor a migruje do interstitia a do alveolárních vzduchových prostor. U normálních zdravých dobrovolníků je počet neutrofilů menší než 3 % buněk, které se mohou získat bronchoa1veolárním promytím (BAL). V případě nemocných ARDS procento neutrofilů v promytí je značně zvýšené, 76 až 85 %. Aku-mulsce neutrofilů je spojena s evidencí jejich aktivace. Vykazují podpořenou cherno taxis a generují abnormálně vysoké hladiny kyslíkového metabolismu po stimulaci in vitro. Zvýšené koncentrace i neutrofilních sekret ač nich produktů, například laktoferrinu, byly zjištěny v plasmě jedinců s ARDS. Další jev, že se neutrof i ly aktivně podílejí na poškození plic, se získán z klinické studie jedinců s mírným poškozením, plic, které je neutropenické pro nesouvisející důvody (například při chemoterapii). Zjistilo se, že poškození plic se často zhorší, když se zlepší hemato1ogický stav a počty cirkulujících neutrofilů se vrátí na normální hladiny.

Jakkoliv je jasné zahrnutí neutrofilů do genese lidské ARDS .sJt.á.I,# _.ν_š .Lrp ké, mí ře_. n^e cmé.,=_j s.,qji ...hpdjigt.y do k!á_da j í c í__. výz nam neu-trolifů v případě různých živočiných modelů akutního poškození plic přesvědčivé. Běžný přístup, kterého se používá k doložení neutrofilní nezávislosti, je zbavit živočichy cirkulujících neutrofilů a měřit snížení plicního poškození, ke kterému dojde. Jakkoliv se použilo četných experimentálních modelů pro studium neutrofilní závislosti sliční ho poškození, bylo jich zde do diskuze zahrnuto jen několik (pro nedostatek místa).

Jedním extens i vně studovaným modelem je podání endotoxinu ovci. Jestliže se endotoxin zavádí ovci intravenosně, dochází ke komplexním jevům., z nichž jedním je vzrůst permeability pulmonár-ního kápi ioárni ho endothelia. To se projevuje vzrůstem toku piic-ni lymfy, která obsahuje výší koncentraci proteinu než normálně. Tyto změny naznačují snížení schopnosti kapilárního endothelia zadržovat proteiny plasmy ve vaskulárnim prostoru. Nsutror i i ní závislost permeabi 1 itního poškození se ustavuje, jestliže se zjistí, že se ovce zbavují neutrofilů před infuzí endotoxinu, kt ery Je chřThΠ J i nyTnvrvo model akutnΠκΓ poskozerfí pTTc žařTr-~ nu je intravenosní infuzi faktoru jedu kobry krysám, která způsobuje komplementní aktivaci následovanou ieukoagregací a sekvest-rací neutrofilů v pulmonmární mikrovaskulatuře. Dochází k a lve o-lárnímu poškození stěn vedoucímu k interstitiá1 ní mu a intraalveo-lárnímu otoku s hemoragií a s ukládáním fibrinu. Opět odstranění neutrofilů předchází vzrůstu pulmonárního kapilárního výtoku.

Isolované perfundované ÍTra”l~Tč_í ň~ě~5o krys í pTí c e šě rovněž použily ke studiu mechanismu alveolárního poškození za okolností, které umožňují zlepšenou kontrolu faktorů které ovlivňují tok kapaliny. Jestliže se přidají neutrofily do perfusátu a pak se stimulují, uvolňuje se albumin z vaskulární oblasti do plicního i n-terstitia a do alveolárních vzduchových prostor. Nesti mu 1 ované neutrolily nebo samotný stimulus (například forbolmyristátacetát) selhávají při zvyšování a 1 veo 1ární kapilární permeability.

Jak je dáhe doloženo, stimulované neutrořI 1y mohou nezávisle poškozovat plicní tkáň. Pokusy in vitro se provedly za použití vaskulární ch endothe1 i á1 ní ch a piicních epithe1 iá 1 ních buněk jakožto štítů. V některých zprávách se neutrolfily ukázaly jako vyčleňující endothe1 iá1ní buňky nebo alveolární epithelíální buňky z povrchu misky se tkáňovou kulturou. Zřejmě pokud k něčemu takovému dochází in vivo, odkrytý povrch umožňuje podstatné uvolňování plasmových obsahů. Kromě toho mnohé zprávy pokládají za jasné, že stí mu lované neutrofily jsou sc ho pn.y usnadňovat lysí kultivova — n ýc h va s k u 1 á r n í c h e n do t heliálních buněk a alveolárních epit he1 i — ál nich buněk.

Dehydroepi androsteron (DHEA) je endogenní androgenický ste-roid, který vykazuje nesčetné biologické aktivity. Araneo B.A. a kol. (1993, Arch. Surgery 128, str. 318 až 325) doložili, že podávání dehydroepi androsteronu (DHEA) popálené myši v průběhu jedné hodiny po poškození vede k uchování normální imunologické kompetence včetně normální kapacity produkovat od T buněk odvozené lymfokiny, generace buněčné imunní odezvy a schopnosti odolávat navozené infekci. Eich D.M. a kol. (1992, americký patentový spis číslo 5 110810 a 1992, americký patentový spis číslo 5 162198) popisuje použití dehydroep'i androsteronu (DHEA) ke snížení rychlosti agregace destiček a použití dehydroepiandrostero nu (DHEA) nebo dehydroepiandrosteronsu1fátu (DHEA-S) ke případnému snížení produkce thromboxanu.

Nestler S. ('990, americký patentový spis číslo 4 920115) u-vádí, že podáváním dehydroepi androstero nu (DHEA) je možno u lidí snížit hmotu tuku, zvýšit svalovou hmotu, snížit hladinu LDL cholesterolu bez ovlivnění hladiny HDL cholesterolu, snížit hladiny sérového apo1 ipoprotei nu B a neovlivnit citlivost tkáně k inzulíny. Kent S. (1982 Geriatrics 37, str. 157 až 159) popisuje dehyd-roepiandrosteron (DHEA) jakožto "zázračnou drogu", kterou se může předcházet obezita, stárnutí, diabetes mellitus a onemocnění srdce. Dehydroeoi androsteron (DHEA) se v široké mí ře předepisuje jakožto účinná látka po mnoho let. Avšak organizace Food and Drug Administrati on nejnověji omezila jeho používání. Dehydroepiandrosteron (DHEA) je ochotně interkonvertibi 1ní se svým sulfátovým esterem DHEA-S prostřednictvím působení intrace1u1árních sulfatas a sulfotransferas.

Nehledě na shora uvedené objevy, zaměřené na působení různých sloučenin na spáleniny, je potřebva identifikovat další sloučeniny, které by byly schopné předcházet nebo snižovat reperfusní poškození jakožto důsledek ischemie, působení ischemie spojené s infarkty nebo s traumatickým poškozením a identifikovat sloučeniny, které jsou schopné předcházet nebo snižovat bakteriální translokaci a AR??. Proto se vynalez týká předcházení nebo snižování progresivní r.ekrosy tkáně, pře‘dcházení nebo snižování reper-fusního poškození, předcházení nebo snižování bakteriální trans-lokace a předcházení nebo snižování syndromu dýchacích potíží do- -S-Pě 1 ýoh-.(.AROS ) .

Podstat.a vy ná ] a z_u

Podstatou vynálezu jo použití derivátu d o h y d r o e p i a. rtd r os t o r o -nu obecného vzorce T

k rl i R 1 R2 R3 z n a m o n a . atom kyslíku nebo hydroxy 1 ovoji skupinu, atom vodíku, methylovou .skupinu, hydroxylovou skupinu nebo atom ha I ο;-Γ··ηιι , pokud R1 znamená atom kyslíku n atom vodíku, pokud R1 znamená hydroxylovou skupinu, atom vodíku, zbytek mastné kyseliny sc 4 až 22 atomy uhlíku, skupinu a 1 kýlovou s 1 až 10 atomy uhlíku, alkenylovou s 1 až —τΟ“η1θΒΙ'Ϋ^f b^l rk+i^T^aC 0’t y r ě řr i C'k o Ve"S" ’ 1'1*0·^'Qžto m y --VI% r flf fenylalkyl s 1 n hi. í.ku i .· pod i 1 (X ) n-feny 1 a 1kenyIovou s 1 až 5 'atomy uhlíku v alkenylovém podílu, nebo skupinu obecného vzorce -C0-R8 RíL.a R?

Ln.eb o—Ra.t Gm=.^v.od=úku-,=diJí.d ivo-xy to.V:O U-s-kn p iuvu™.ao~=-a.t om^h ai q g nu , atom vodíku, když čárkovaná čárka znamená dvojnou vazbu, a-toin kyslíku nebo vodíku a halogenu, když čárkovaná čárka 1 znamená jednoduchou vazbu, R8 atom voflíku, zbytek mastné kyseliny s 1 až 22 atomy uhlíku, skupinu alkylovou s 1 nž 10 atomy uhlíku, alkenylovou s 1 až 10 atomy uhlíku, ačetylenickou s 1 až 10 atomy uhlíku, (\}n-_ItD-n-yJ-u-l-k-y-l-o-v-t-Mi-—s—1-a-ž—f>__a4._omy—n-h4-í-k-u-v—a-l-k-y^Lo-v_é_m_p-0-i:LL_Liu^ 13 (X)n~fenylalkenylovou s 1 až 5 atomy uhlíku v alkenylovém podílu, X na sobě nezávisle atom halogenu, skupinu alkylovou s 1 až 5 atomy uhlíku, alkenylovou s 1 až 4 atomy uhlíku, alkoxysku-pinu s 1 až 5 atomy uhlíku, karboxyskupinu, nitroskupi nu, Sulfátovou skupinu, slufonylovou skupinu, skupinu karboxylo-vého esteru s 1 až 6 atomy uhlíku nebo skupinu sulfátového esteru s 1 až 6 atomy uhlíku a n 0, 1, 2 nebo 3, pro výrobu farmaceutických prostředků k prevenci progresivní nek-rose tkáně, reperfusního poškození, bakteriální translokace a syndromu dýchacích potíží dospělých, pro prevenci nebo snižování bakteriální translokace.

Farmaceutický prostředek podle vynálezu .je tedy vhodný pro prevence nebo redukce reperfusního poškození po ischemii, po poškození buněk spojeném s ischemickou příhodou, jako jsou infarkt nebo traumatické poškození a tak prevence nebo snížení následné postupné nekrosy tkáně spojené s takovou ischemii. Tohoto efektu se dosahuje podáváním dehydroepiandrcsteronu (DHEA) nebo derivátů DHFA jedincům. Podstatou vynálezu je také prevence nebo snížení bakteriální translokace a způsobu prevence nebo snížení ARDS. Podobně se bakteriální translokace a ARDS předcházejí nebo snižují podáváním dehydroepiandrosteronu (DHEA) nebo derivátů DHEA. Jakožto takové vhodné deriváty DHEA se uvádějí příkladně 16cr-brom-DHEA, androstendiol a deriváty, které mají postranní řetězce v po 1 ohách" 2"46 nebo 7'. Takové postranní řetězce nenarušují nativní aktivitu DHEA. jsou však schopné inhibovat sulf o transfer asu k předcházení konverze dehydroepiandrosteronu (DHEA) na DHEA-S. S překvapení se zjistilo, že DHEA-S je užitečný k předcházení nebo ke snižování ischemie.

Vynález blíže objasňuje následující p o d r o bn ý _p o £_i s_s_ př i .po -’ jenýmí obrázky:

Na obr. 1 jsou výsledky analyzy vytváření edema (otoku ucha) a jeho rozrušení v případě spálených uší myši kontrolní a o-šetřené dehydroepi antírosteronem (DHEA).

Na ose x je počet hodin po tepelném poškození, na ose y otok ucha (v 0,001 palců), čára se čtverečky je pro samot- — —......-ný"π'σ*ϊ~δ7' š koj'¥c‘ky' pro ošetření dehydroepi androateronem.

Na obr. 2 je analýza vytváření otoku (otok ucha) a jeho rozrušení v případě spálených uší myši kontrolní a ošetřené dehydroepi androsteron (DHEA), androstendi o 1em, 16a—brom—DHEA nebo známým antiglukortikoidemRU486.

Na ose x je ošetřování myši (denní) vždy v prvním sloupci stav před spálením, ve druhém sloupci 12 hodin po spálení ——--~a—ve th^vrtrTri šl oupc i hodiny po spálení, přičemž v první sade sloupců jde o ošetření samotným nosičem, ve druhé sadě o ošetření dehydroepi androsteronem, ve třetí sadě o o-šetření androstendiolem, ve čtvrté sadě o ošetření anti- glukortiko;dem R U 4 8 5 a páté sadě sloupců o ošetření 16a- brom-DHEA, a na ose y je otok ucha (v 0,001 palců)

Na obr.3A je schopnost dehydroepiandrostero nu (DHEA) chránit proti většině progresivních následků ischerrtie nebo proti tepelné mu poškození ucha. ___________ _ ^ ^______

Na obr. 3B je schopnost androstendi o 1u chránit proti většině progresivních následků ischemia nebo proti tepelnému poškození ucha.

Na obr. 3C je schopnost 16a-brom-DHEA chránit proti většině progresivních následků ischemia nebo proti tepelnému poškození ucha.

Na obr. 3D jsou progresivní ischemické následky tepelného poškození ucha při podání samotného nosiče.

Na obr. 3 E jsou progresivní ischemické následky tepelného poškození ucha oři podání samotného androstendi o 1u.

Na obr. 3F jsou progresivní ischemické následky tepelného poškození ucha oři podání samotného RU486. 15

Na obr. 4 je vliv ošetření dehydroepi androstsronem (DHEA) na progresivní ischemii při podání 0 až 6 hodin po tepelného poškození.

Na ose x je doba ošetření po spáleni, přičemž v prvním sloupci jde o ošetření pouhým nosičem v následujících sloupcích jde vždy o ošetření dehydroepiandrosteronem, a to ve druhém sloupci bezprostředně po spálení, ve třetím jednu hodinu, ve čtvrtém dvě hodiny, v pátém 4 hodiny a v šestém šest hodin po spálení. Na ose y je střední stupeň ztráty tkáně.

Na obr. 5A je počet volných kapilár v blízkosti postkapilárních žilek v zóně 1 v průběhu reperfusního poškození.

Na obr. 5B je počet volných kapilár v blízkosti postkapilárních žilek v zóně 2 v průběhu reperfusního poškození.

Na obr. 5C je počet volných kapilár v blízkosti postkapilárních žilek v zóně 3 v průběhu reperfusního poškození.

Na ose x je vždy doba po reperfuzi, na ose y kumulativní skoré, čára se čtverečky je pro samotný nosič, s kolečky pro předběžné ošetření dehydroepi androstero nem .

Na obr. 6A je počet leukocytů procházejících lumenem postkapilárních žilek ve dvouminutové periodě.

Na obr. 6B je počet leukocytů při línající ích nebo nalepujících se na 1 uměn postkapilárních žilek ve dvouminutové periodě.

Na obr. 6C je počet leukocytů migrujících přes endothelium ve dvouminutové periodě. -.....— -Os a ·· x a=y., =j e -p ro s t e-jmé—ho d no ty -jako po-d l-e^o br á z ků ' 5 č á-ro kovaný sloupec je pro samotný nosič, tečkovaný pro předběžné ošetření dehydroepi androsteronem.

Na obr. 7A je rychlost červených krvinek v ž i lni krvi po reper-f us i .

Na' obr. ?8 je rychlost červených krvinek arteriální krve po cepe r f us i .

Osa x a y je pro stejné hodnoty jako podle obrázků 5,čár-kovaný sloupec je pro samotný nosič, tečkovaný pro předběžné ošetření dehydroepi androsteronem. 16 _____ ^ ... „ .Vyná.Lez. .se. t e.d týká,. .z.p ůs o.b ti prsvsne e_.ne,b o. s ní. ž s.n i . ^ r, e pe rf. u.s.- - n f ho poškození v důsledku i s c hs ro i θ s buněčného t r.3 ums , spojeného-s ischemickými příhodami, jako je infarkt nebo traumatické poškození. Příkladně se jako infarkt uvádí infarkt myokardu. Příkladně se jako traumatické poškození uvádí poškození popálením, chirurgií, chemie kým popálením a tr ž nými ranami. Při prevenci nebo snížení reperfusní ho poškození v důsledku ischemie a buněčného trau- • iiio -f ομυ jtjiicuu o i o u ιιθ nit c £\ yi π i i i 11 \j u σ mi i , o « t α λ e μι euuiiaii ucOu o o snižuje následující postupné odumírání tkáně, spojené s takovým infarktem nebo poškozením. Podle vynálezu se reperfusní mu poškození nebo buněčnému poškození, spojenému s ischemickými’ příhodami, jako je infarkt nebo traumatické po š.kožení, předchází nebo se snižuje podáváním dehydroepiandrosteronu (DHEA) nebo derivátů de-hydroepi androstero nu ošetřovaným jedincům tak brzy, jak je to jen možné, s výhodou v průběhu čtyř hodin a nejvýhodněji v průběhu dvou hodin ischemie, infarktu nebo traumatického poškození.

Vynález se rovněž týká způsobu prevence nebo snižování bakteriální translokace. Podle vynálezu se bakteriální trans lokaci předchází nebo se snižuje shora popsaným podáváním dehydroepiandrosteronu (DHEA) nebo derivátů dehydrospi androsteronu ošetřovaným jedincům. Dehydroepi androsteron (DHEA) nebo deriváty dehydroepi a ndr o s t e r o nu se ošetřovaným jedincům podávají v průběhu -24· ho- _____________________,ρα. ..nn .....m ,n .á.b -.

Vvnélsz ss rovněž l v k á 2o(jsobti orsv^ncs nsbo snižování syn** dromu dýchacích potíží dospělých (ARDS). Podle vynálezu se ARDS předchází nebo se snižuje shora popsaným podáváním dehydroepi an-drosteronu ( DHEA) nebo der i vá tu__deh.ydroeDÍ androsteronu ošetřova-ným jedincům. Dehydroepi androsteron (DHEA) nebo deriváty dehydroe p i a ndr o s t e r o nu se ošetřovaným jedincům podávají před klinickými symtomy ARDS, hlavně jedincům, u nichž je nebezpoečí ARD.3. V obecném vzorci I jsou atomy halogenu atom bromu, chloru, w fluoru a jodu. Jakožto výhodné významy symbolů R.4 , R.5 a R.6 se u- vádějí hydroxylová skupina a atom bromu. Jiné vhodné substituenty je možno stanovit (a) podání vím derivátů dehydroepiandrosteronu ___popáleným jedincům a určováním jejich proti ischemického působení__ 17 a (b) stanovením množství sulfát o váné ho derivátu.

Je známo, že při reperfusní m poškození, infarktech a při traumatickém poškození, jako jsou například infarkt myokardu, spáleniny, velká chirurgie, chemické popáleniny a řezné rány, může docházet k poškození, při kterém postupuje odumírání tkání a k přímému ovlivnění obklopující nenapadené- tkáně. Tato progresivní ischemie má významný úkol v definování konečné patologie tkáně, pozorované v případě lidí, jako následek traumatického poškození (Robson M.C. a kol., 1979 Plastůc and Reconstricti ve Surgery 63, str. 731 až 787). Je rovněž známo, že důsledkem tepelného poškození je bakteriáTní translokace. Tepelné poškození, napři k·-l,ad popálením, je nejvhodnější pro studium traumatického poškození, při kterém dochází k progresivní i s chemii.

Ztráta živoucí pokožky v důsledku procesu postupné ischemic-ké nekrosy přispívá významně k velké ztrátě pokožku, která vyžaduje chirurgické naroubování po spáleninách (Jackson, 1953, Bri-tish J. Surg 4 0.. str. 5 88 až 593). Byly zkoumány četné zvířecí modely velmi napodobující vzhled klinických popálenin. Například p.o experimentálním opaření více než 20 % celkového povrchu těla hlodavce ( napři k'.· ad působením vody o teplotě 72 ’C po dobu 7 sekund) se bezprostředně opařená tkáň chová zcela obdobně jako ex-tensivně poškozená a okolní . pokožková tkáň vyvinutá v následujících,24 až 72 hodinách. Pozorované jak klinické tak experimentální spáleniny dokládají, že celková ztráta pokožky při závažném tepelném poškození je sumou bezprostředně rozrušené tkáně a la-„t ent ní ho poškození, -ke· k t er ému -do c ház í···- na e p i dermi s;; dermi s ’3"-na' struktuře pokožky n a p a d e n é a obklopující n a p a d e n é místo.

Počáteční výzkumy, používající zádové části kůže hlodavců, vedly k některým dramatickým poznatkům. Zjisti lo se, že opařením poškozená myš, která'se ošetří v průběhu jedné hodiny po tepelném poškození mírným androgenním steroidovým hormonem dahydroepi an-drosteron (DHEA). vykazuje vývoj poranění zcela odlišný od neose-třené nebo simulované ošetřené, stejně poškozené myši. Tři až čtyři dny po tepelném poškození vykazují všechna kontrolní poškozená zvířata třetí až čtvrtý stupeň poškození rozlehlé většiny po kož ková- tkáně v mí s tě -poškozenň.--Skuteé ně. -vešker á—kůžs- -v-napa dené oblasti je definitivně ztracena j a -k o následek postupné i 3 — chemické nekrosy. Míra poškození tkáně u těchto zvířat se spojuje s velkou ztrátou struktury kůže (vlasových foliklů, krevních cév, neuronů a mazových žláz), s infiltrací fibroblastů, s extensivní kontrakcí rány a s vytvářením četných fibrozních adhezí pod nápade no u ___o bj a s t _í_______kůž e.___Zví ř a ta_ oš e t ř e n a__ď e hydr o epi androsteronem (přibližně 2 mg/kg/den-po počáteční dávce 4 mg/kg) však vykazují podstatnou ztrátu patologických jevů s mnohem menším progresivním poškezením dertnis, subdermis a spojené struktury kůže. Zatímco je epithe1 i a 1 izace aktivní jak u kontrolních tak u dehydroepi andro-steronem ošetřených myší, myši ošetřené dehydrosoi androsteronem vykazují mnohem menší kontrakci rány s výrazně menším vytvářením f i brosnícn adhesí pod místem rány._

Na modelu zádového poškození kůže je jasně doloženo, že o-šetření dehydroepi androsteronem vykazuje velmi kladné působení na progresi rány. Tento poznatek dokládá, že ošetření tepelně poškozených zvířat dehydroepiandrosteronem může ovlivnit hojení rány na základě zásadní schopnosti předcházet ischemil. Proto modifikace způsobu, který popsal Boykin J.V. a kol. (1980, Plastic Re-contruct. Surgery 56, str.191 až 198) a Ericksson E. a kol.(1980, Microvascu!ar Res. 19, str. 374 až 379) byla vyvinuta k umožnění ki n e tú!c,ke'ho“'no'dno‘ce'nsf’-%e^<kva-n^,rf’rkacai,--"p*r o'gres'*' Vn'f--k:ffžuvK·—«i''3C‘he'íTv<t»e' II H č i ϊ.Ρ dně =» τι rs Jíte

>' r· K í- a η λ 1 n á m nnšlrn- zení ucha myši. Technika, použitá v těchto studiích, usnadňuje přes né a postupné monitorování na čase závislém postupu poškození _k ůž-ea_^i_e c.h.e.m.,Lc.k..e_.n e.kno-sy.=uc ha.. my.š.i. _c p ar.s.né,_ho ckejuo do u_(,o^he.p^— lotě 52 °C v průběhu 24 sekund) a pokytuje dobrý živočišný model pro výzkum progresivní ischemie spálením poškozené tkáně.

Myší ucho sestává ze dvou vrstev pokožky, z chrupavky, z řídkých svalových buněk a ze spojovací tkáně. Organizace vasku-1 a tury ucha je dobře organi zována, zahrnuje arterioly, pr e kapitá r n í arterioly, post kap i 1ární žilky a žilky. Použitím aparatury, vhodné pro aplikaci řízeného tepelného poškození r.a celou plochu -uc-ha____royš-L,—j e _mo ž ný—v-ý-Z-k-um_be z ar_0-S t ř e_d n_i ,c_ h _z m ě n v i-n k π krve__JLaJsja 19 výsledek přesných morfo 1ogických studií hamodynamických změn po poškození spálením myšího ucha jsou popsány tři oddělené zóny, snadno oddělitelné podle stupně patologie. Tři zóny zahrnují zónu kompletní kapilární okluze, zónu parciální okluse (stasis) a zónu kapilární hyperemia. Použitím aparatury, vhodné pro aplikaci řízeného tepelného poškození na celou plochu ucha myši (Bo.ykin J.V. a kol.,1980, Plastic Recontruct.Surgery 66, str.191 až 198). Jednu hodinu po poškození se plocha celkové kapilární okluse omezí na vzdálený okraj myšího ucha. Zóna parciální okluse nebo stasis je umístěna bezprostředněji do- této nejokrajovější a bezprostředně citlivé oblasti. Je to hlavní oblast ušní tkáně, která·vyká zu-ja postupnou ischemii v průběhu 24 až 72 hodin po tepelném poškození a která nakonec podléhá nekrose. Konečné nejbezprostřednějsí oblast napadeného ucha je zóna hyperemia. Tato oblast je téměř o-dolná progresivní pospá1eni nové ischemii.

Zjistilo se, že výsledkem podávání terapeuticky účinného množství dehydrospi androsteronu nebo jeho derivátů obecného vzorce I ve fysiologicky vhodném nosiči tak brzy, jak je jen možné, s výhodou v průběhu čtyř hodin reperfusního poškození, infarktu nebo traumat i cké ho poškození je prevence nebo snížení i schemi e, související s reperf usní m poškozením, s infarktem nebo s traumatickým poškozením. Prevencí nebo snížením isc.hemie se dosáhne prevence nebo snížení následující nekrosy tkáně, spojené s takovou ischemii. Toto snížení ischemie je následkem snížení přilnavosti neutrofilů k endotheliálním buňkám, jak dokládá příklad. *—Ná-s4 e-d k e m-s -n-í-ž er> é ~n e u t r·of-i tni- př-i^Hna vost-i-se^ne-uí r of i j y neak t. i vu-: jí a neprodukují buněčné faktory, které vedou k a g r e g a c i destiček. Je ne j výho d ~. ě jš í , aby se dehydroep i andros teron nebo jeho deriváty obecného vzorce I podávaly v průběhu dvou hodin, kdy jedinec podléhá reperřusi, infarktu nebo traumatickému poškození. Dehydroep iandroste-on nebo jeho deriváty obecného vzorce Γ se podávají jedincům ve formě esteru nebo v jiné farmaceut i cky vhodné formě a v poj idi ech, elixírech nebo v jiných farmaceut i cky vhodných směsích nebe s jinými farmaceuticky vhodnými nosiči.

Farmaceut i cké prostředky, obsahující dehydroep i androsteron 20 ..obecného yzo.rce. L po.d I„e. y.yná 1 e.z.u . .j.a.k.Q.ž.t.o. .účj.nno.u. .l.á.t.ku. _...._v_ těys.ne, směsi s f armaceut i. ckým nos i čem s s fno ho u připravovat způsoby o. sobě známými pro přípravu farmaceutických prostředků. Nosič může mít nejrůznější formu v závislosti na formě podání žádoucího farmaceutického prostředku například pro případ i nravenosní ho, c-rálního nebo paranterá1 ní ho podání. Pro přípravu farmaceutických prostředků pro orální podání se může používat jakéhokoliv běžného 20 V· IV< s Λ A If i mu v 9 u f I Λ Λ k A ^ν*ΛΛ5+·ν·ΛΑίΐ V « V I1W p i U O V i P u li i ^ Ir η ί β Λ ff Λ ^ 5 » t I » Ι1Λ J • j g λ v J-£> vs u i i&yi t n j αν· v w w leje, alkoholy, óchticovací· přísady, konservační přísady a barviva pro orální kapalné prostředky (jako jsou například suspenze, elixíry a roztoky). Nebo se může používat nosičů, jako jsou například škroby, cukry, ředidla, granulační přísady, mazadla, pojidla, rozptylovací činidla pro orální pe vné prostředky (jako jsou například prásky, kapsle a tablety). Popřípadě se tablety mohou povlékat cukrem nebo enterickým povlak o sobě známými způsoby. Pro paranterálni podání je nosičem zpravidla sterilní voda, přičemž v úvahu přicházejí také jiné složky, například napo má ha jící rozpouštění nebo konservování. Vstřikovátelné suspenze se rovněž mohou připravovat ve vhodném kapalném nosiči za použití suspenza č n í ho činidla. Dávka dshydroepi androsteronu nebo jeho derivátu obecného vzorce I podle vynálezu se řídí o sobě známými farmaceutickými ,z,á,s-adaaí.L,,,..^o^=z,n,3me,ná,,.„ž,e>^s^ yoo Z&Q,, .mgykk.g,,*·, s výhodou 2 až 50 ma/kg. Dávka se může podávat denně nebo ob den ve formě jedné dávky nebo ve formě rozdělených dávek k dosažení vhodné denní dávky. V případě nechráněných sloučenin, to znamená s 1 o u cenin , __k_t e r é _mo hou. být su I f a t pyj n .v ... l_j.d s k ým i s.u_l_f o t r a_ns_f.e r asa —... mi nebo sulfatasami, je výhodné podávat dávku v nadbytku k zajištění podání dostatečného množství účinné látky, zvláště v případech, kdy jsou s u1f a t a sy neaktivní v místě poškození tkáně. Je výhodné. abv byly nechráněné sloučeniny podá vá ny denně, za tímc o chráněné sloučeniny se mohou nedávat buď denně nebo ob den. Jedinec s e ošetřuje d » hydroep i a n-iros te r o nem nebo jeho derivátem obecného vzorce 1 po dobu 3 až 30 dní, s výhodou 7 až 14 dní po in- f arktu nebo po traumatickém poškození ._ '/ případe jedinců, u kterých je nebezpečí i níarktu myokardu nebo nebezpečí reperfusního poškození, ja možné předcházet nebo snižovat progresivní ischemii, spojenou s takovým infarktem nebo reperfusním poškozením, podáním dehydroepi androstsro nu nebo jeho derivátu obecného vzorce I současně a/nebo po infarktu nebo po reperfusním poškození ve shora uvedené dávce. Ošetření po infarktu myokardu je shora popsáno. Dehydroepi androsteron nebo jeho deriváty obecného vzorce I se jedincům s klasickými známkami hrozícího infarktu myokardu mohou podávat stejně, jako shora popsáno pro ošetřování stavu po infarktu. V případě jedinců, u kterých je nebezpečí bakteriální tra ηΒίο kace se takové bakteriální trans lokaci předchází nebo se snižuje podá.váním da hyd řo e p i a ndr o s t e r o nu. nebo jeho derivátů obecného vzorce I jako shora popsáno a ve shora uvedených dávkách. Podávání pro předcházen í nebo snižování bakteriální translokace pokračuje tak dlouho, dokud u jedinece trvá nebezpečí bakteriální translokace.

Zjistilo se, že je rozhodující, aby dehydroepi androsteron nebo jeho deriváty obecného vzorce I byl podáván brzy po, reperfusním poškození, po infarktu nebo po traumatickém poškození k předcházení nebo ke snížení jakékoliv poškození buněk. Pokud k podávání těchto sloučenin dojde příliš pozdě, krevní žíly . o k1ud u j í (zpočátku 5 neutrofily přiléhajícími na endotne 1 iá1 ní buňky), přičemž v takovém případě je podávání těchto sloučenin k předcházení nebo k redukci ischemie nevhodné. Chvíle, ve které se má za-č í _t_ s _oo dá vání. m.^ m y.ž.s. „z.ájyj se t _ na t y.p,u_. re per.f u s ní hq_ _poSiko_z en í., i n -farktu nebo traumatického poškození a může se snadno stanovit na vhodných zvířecích modelech. Je však výhodné, aby se s podáváním dehydroepi androstero nu nebo jeho derivátů obecného vzorce I započato v průběhu čtyř hodin a především v průběhu dvou hodin ische— mie, infarktu nebo traumatického poškození. Podávání dehydroep i -androsteronu neb: i e ho derivátů k předcházení nebo k redukci bakteriální trans lok? : e má začínat v průběhu 24 hodin poškození nebo příhody způsobu ; í cí stres. Je výhodné, aby podávání těchto sloučenin k předcházení nebo k redukci bakteriální translokace začalo - 22 -

v průběhu č hyr hodin a přede vš í m v průběhu dvou hod iji . Poddávání ^ q Kwrj π o p i s n d r q « ^ c r λ n y n a Kn John rí o r ι V 3 ť. ^ R. pr0CÍCi"i32í5r!Í fíS^O k redukci ARDS má začít před nastoupením klinických symptomů. 0-becně se sloučeniny mají podávat jedincům s nebezpečím ARDS.

Vynález blíže objasňují, nijak však neomezuji následující příklady praktického provedení. Používá se o sobě známých způsobů v oboru nebo specificky popsaných způsobů. P ř £ k..L.a dy.....pro ve d e ní.........vyná lezu Příklad 1

Experimentální model tepelného poškození

Byl vyvinut experimentální model tepelného poškození používající myších uší, přičemž teplota a doba vystavení působení teploty se stanovují empiricky. Podmínky představují mini má 1n í poškození spálením s až celkovou nekrosou tkáně vystaveného ucha neušetřené myši 24 až 72 hodin po spálení. Skupiny myši Ba 1b/c ve věku přibližně devět týdnů, označené identifikačními značkami, se rozdělí na kontrolní a ošetřené podskupiny. Zaznamenává se tloušťka ucha ponořovaného do horké vody a pak se cele ucho a neste t i zc váné myši ponoří do vody o t e-p i o t ě 52 °C přesně na 24 •-*-1 ~ s fkun'čýí ' mždá ~~~myš“ se p.a'k vrátí " ďo~ s vé kT sc’s po vs t ř t knut~í_ "butf propylenglvkolového nosiče (kontrola) nebo 100 u g zkoušená látky, rozpuštěné v pro pyleng1yko1u. Zaznamenávají se změny otoku ucha jednotlivé myši před spálením a v r ů z n ýc h *ho d i- n a c h po t e pe 1 n e rn poškození . Příklad 2

Skupiny myši Ba 1b/c ve věku přibližné devět týdnů, označené identifikačními značkami, se rozdělí na kontrolní a ošetřené pod- * skupiny. Z 3 znamená vá se tloušťka ucha ponořovaného do horké vody a pak se celé ucho anesteti z ované myši ponoří do vody o teplotě 52 0C přesně na 24 sekundy. Každá myš se pak vrátí do své klece 23 po vs t ř i kn u t í buď propylenglykolového nosiče (kontrola) nebo 100 pg cfehydroepi androsteronu rozpuštěného v pr o py 1 e ng 1 yk o l u . Zaznamenávají ss změny otoku ucha jednotlivé myši před spálením a 1, 3, 6, 9, 12, 18, 24 a 48 hodin po tepelném poškození. Výsledky a na 1yzy vytváření otoku a rozlišení uší kontro 1ních myší a myší ošetřených dehydroepi androsteronsm jsou na obr. 1. Zbobtnání uší, jako míra otoku, dosahuje vrcholu jak u myší ošetřených dehydroepiandrosteronem tak u kontrolních spálených myší šest hodin po tepelném poškození. U neošetřených rriyší míra otoku začíná klesat po 12 hodinách a rychlý pokles pokračuje v následujících 12 hodinách. Mezi 24 a 48 hodinou po spálení se měření ucha přerušuje v případě neošetřené skupiny pro naprostou ztrátu tkáně v důsledku kompletní mikrovaskulární ok lůse původní zóny stase. Kinetická analýza otoku neošetřené myši a myši ošst-řené dehydroepiandrostsronsm dokládá po tepelném poškození, že příhody v průběhu prvních 24 hodin po tepelném poškození jsou rozhodující pro život tepelně poškozené tkáně, přičemž případné zachování živé tkáně ucha ve 48. hodině je nepřímo úměrné rychlosti, se kterou otok ustupuje mezi pikem v šesté hodině a konečnými 48 hodinami.

Kromě analyzy otoku myši tepelně poškozené neošetřené a myši ošetřené dehydrospi androsteronem se fotograficky dokumentují změny životnosti samotné ušní tkáně. Poškození ušní tkáně myši, které se podal toliko nosič, je extensivní s větší než 70¾ nekro-tizací ušní tkáně a s destrukcí ve 48 hodinách. Celkově napadená •pd-ocha- -se-j e-v+= zahrnovat.· j a k. .zóau= kompJ e t-ní. va.s k u-l árn í .-.ok Uus e :..ta.k původní zónu stase. Tato další zóna se poškozuje jako sekundární důsledek tepelného poškození, přičemž se tento stav definuje jako progresivní dermální ischemie po spálení. Avšak rnyš ošetřená de-hydroepi androsteronem vykazuje nepatrné poškození a z achování . uš-ní spálené tkáně. Jediná oblast ušní tkáně, která byla zjevně ovlivněna, -nikoliv však' z t ráčená, tepelným poškozením, odpovídá ρουζ b o úvodní zóně k o m p l e * n í (/askulárni o k l use'. _P ř.í k 1 ad 3

Vliv různých sloučenin na tepelně poškozený model

Skupiny myši Balfa/č ve věku přibližně devět týdnů, se rozdělí na podskupiny, kterým se podává buď samotný nosič, dehydroepi-androstsron (DHEA), adrostendi ot, 16-α-brom-DHEA, androstend ion nebo potentní anti-gl akokojrt ijko i d,___R.U4 8 6 .....„Jedjio t.LLvé_____myš..L_..s.& podává 100 pg uvedených steroiaů nebo samotný nosič bezprostředně po spálení (clen 0) a další dávky 50 pg každých 24 hodin po dobu trvání pokusu. Odezva otoku uší každé jednotlivé označené myši se zaznamenává před spálením a 12,-24 a 48 hodin po spálení.,

Spálené uši myši ošetřené terapeuticky adrostendi o 1em, dahyd-roepi androsteronem nebo nemetabo1 i zovaným syntetickým derivátem dehydroepi androsteronu, 16-a-brom-DHEA, vyví ieií vždy významný_o - tok ucha jako odezvu na poškození teplem (obr. 2) a vykazují pomalou a konstantní rychlost vymizení otoku. Tato pomalá ztráta o- toku po tepelném poškození ucha je paralelní s toliko minimální dermální i schemi í a nakrosou oblasti. Výsledky této studie také potvrzují, že vývoj otoku spáleného ucha neošetřené myši dosahuje píku a pak se ztrácí poněkud rychleji takže 24 až 48 hodin po spálení dochází k výraznému rozsahu ischemie tkáně a nekrosy. Obdobný obraz otoku po postupné ischemické nekrosa se poz.oruj.e u ..my;|,L.waš-e-t^«e-%éwa-aď!«3^.fe^^d»^©^-e»m^^'©-do!b^ě-,--'O^b^-o%-n^'0‘bfr’a'zr~xrťdír£r''t}'ír“|n5',ř' stupně ischemické nákrese se jjozorujs u skup my myši tepelně- poškozených ošetřených RU436, což znamená, že dehydroepi andrcíteron nepůsobí pouze svými a n t i g 1 u k o k o r t i k o i d n í m i v 1 i vy.

Obr. 3 A a ž_ _3C__dokl á.d.a. j.L „s.c ho.pn o s.t=-d e hy d.AO-e p-i-a n-dr o-s~t- euHo-n-u— a ndr os t end i o 1 u a 1 6-or-brom-DHEA chránit proti většině i schemi c-kých důsledků tepelného poškození ucha. Myš, ošetřená jedním z těchto steroidních hormonů, vykazuje časné změny ušní tkané s mí mou ztrátou nebo bez ztráty ušni tkáně několik dní po tepelném poškození . Zdá se, že napadená oblast odpovídá zóně komP1etn í o k 1 use definované Boyk i nem J . V . a k.o t . (1980, P 1 as t i c S ec o nt r uc t .

Surgery 66, str .191 až 198). Myš, které se podal samotný nosič, a n d r o stendion nebo RLÍ4 8 6 (.O-bu:___3 D-aJ-3 F )—ztrácí—p-o—fe-e-p-e-l-ft-é-m- 25 poškození více než 70 % tkáně vystavené tepelnému poškození v prvních 48 hodinách po tepelném poškození v důsledku postupné popálsninové ischemické nekrosy. Bez účinného ošetření nekrotizo-vaná oblast ucha po tepelném poškození odpovídá zóně kompletní ok!use plus zóně stase. Tak je doloženo, že ošetření tepelně poškozené myši buď samotným dehydroepi androsteronem, androstend ιοί em nebo 16-a-brom-DHEA nejen mění' přirozený průběh vytvořeného otoku ucha, ale také poněkud chrání napadenou tkáň od postupného poškození inhibicí vývoje ischemie v zóně stase a konečného vývoje nekrosy této oblasti. Při podobná zkoušce se zjistilo, že 1Sa-hydroxy-DHEA méně chrán;, to znamená snižuje rozsah avšak nepředchází totálně postupné ischemii a 1δα-chlor-DHEA mírně chrání proti postupné i s-chemii. P ř í k 1 a d 4

Načasování počátečního podání dehydroepi androsteronu

Provádí se zkouška pro stanovaní, zdali podání dehydroepi an-drost.eronu musí být bezprostředně nebo až za několik hodin, po tepelném poškození. Myši se anestet izují, popálí se v a asststi z o váném stavu, čtyřem myším se podá samotný nosič, čtyřem se podá 100 pg dehydrospi androsteronu a zbylé myši se rozdělí na další skupiny po čtyřech. Všem myším v jednotlivé skupině se podá 100 pg de-hydroepi androsteronu jednu, dvě, čtyři nebo šest hodin po tepe!-· né m^pci.ko..2.e.Q-í=-„ ,2.trJk ta,-T k á ně- pří-padě -k-a ždé-myš i-—se -hodnot í 7 2 hodin po tepelném poškození a výsledky jsou uvedeny na obr. 4.

Obr 4 dokládá, že použití dshydroepi androsteronu se může odložit na dobu až dvou hodin bez výrazného rozdílu chránícího působení dehydroaoiandrosteronu, které se hodnotí stupněm 1,24 * 0/25 <p je menší než 0,001 V·* I za při' prodlevě čtyř hodin před podáním dehydroep;androsteronu je střední hodnotící stupeň 2,75 ± 0,479 ip je menš. než .0,016) . Při prodlevě šesti hodin před. podáním dehydroepiandrosteronu je střední hodnotící stupeň ztráty tkáně 4,00 ± 0,403 a to je značný rozdíl od skupiny, které se po- - 26 - - 26 - d a 1 us hydr oepi androstero n_ bf_z pr ostř °dn ě po. te,pe.l n é .no, jsoškoz en í vose, jsou obr ns ko1 i k hod i n po } ci mft n «

Sk utec u os t i .. va α o u c í k ne k r.o se, j s o <r nhi-áM po ně úměrná podání dehydroepi androstsrona až tepelném poškození.

Shora popsané.př ť k t ady dokládají, že mírně intenzi vní teoel-né poškození myšího ucha je směrodatným a raprodukovats1ným modelem pro zkoušení postupné ischemická nekrosy kůže. Z výsledků je zřejmé, ža bezprostřední, použití dehydr o e p i a ndr os t s r o nu .po spálení má ochranné působení na dermální ischemii, navozenou tepelným poškozením. Kromě dehydroepi androsteronu se zkoušely se zřetelem na terapeutické působní některé jiné steroidní hormony. Výsledky jsou uvedeny v tabulce I.

T e b u 1 k a I Výsledky zkoušky stero i dních hormonů Analýza ischemie (100 μg/mys) DHEA-S DHEA 16a — brom-DHEA a n d r o s t a n d i o 1 a ndrostendi on RU 436 (na modelu myšího ucha) nechrání chrání chrání chrání nechrán í nechrání tí O Λ DHEA a ndr o s t _L0ýL .¾. u .s. n. i. i. i\ ~i týdny, kdy je DHEA má méně chránící působení a ' 6a-ch1 or-DHEA chrání mírně. A v š a k DHEA-S , ar. íros tendion a RfJ 4 3 6 je zcela neúčinný, př i čem ž poškození ucha a z t rátá tkáně je stejná 'jako une ošetř en_ý.ch... kontrolních myši v případě všech zvířat v průběhu 43 hodin po tepelném poškození. Schopnost odd1ě 1 i t chránící s t er o i dy od nechání-c í ch s t e r o i d ů u mode 1Q tepelně poš kb z a ný ch je nej pravděpodobněj i u s n a d η I n a s k u t e č n r -11 , že je p ř í rrfé n a b o b e “prost ř e d n í poškození s p á I a it i m u ·’ n í t k á z ? minimální a že v·? * š i n a o o s k o zení, ke k t e rám u dochází, i <? způsobena postupnou ischemii .» nekrosou, způsobenou odezvou jedince na spáleninu opařením. Výsledky dok!ádají, že dehydroepiandrosteron, nikoliv jeden 27 z jeho př i r c z £ n jo h metabol i tů, je činidlem zprostředkuj í'cím ochranu proti postupné ischsrnická ne kr ose . Podklad pro tonto závěr je jasný. 1 δα-Brom-DHFA je analog dshydrospiandrosteronu, který se nemůže účinně metabolizovat na androgenové steroidy a jeho chránící působení je stejné jako dehydroepiandrosteronu. Andro— stend i o I má také stejné bio logické působení jako dehydroep i andro-stero n v případě modlu ucha tepelně poškozeného. Tento staro id je přírodním metabo! i tem dehydroepiandrosteronu, který se může. převádět zpět na dehydroepiandrosteron modifikací závislou na enzymu. Také s8 může dále metabolizovat na testosteron. Androsten-dion, rovněž sekundární metabolit dehydroepiandrosteronu, se může metabolizovat pouze na produkty (například testosteron a estroge-ny) bez známé konverze na dehydroepiandrosteron. Proto androste lidi on nemůže chránit proti postupné dermální ischemii v tomto modelu, přičemž nedostatek tohoto působení podpírá závěr, že aktivním starci dam je dehydroe:·: androsteron a nikoliv androgen nebo estrogen. Kromě ‘o ho se zjistilo, že sul fetovaný dehydroepiandrosteron, který se v ' idskérn tele přirozené vyskytuje, je neschopný chrání t ρ r o fc i p c - u n v jící i ? - h e m i i . . Π e h y droezia n -i r o s t e r o o m á z v e ře j ně nou s c hepnost pře d c h á z e t některým biologickým jevům, způsobeným q1ukokor t i ko i dy. Možnost, že dehydroepiandrosteron půs zbí jako antiglukokortikoid v případě modelu dermální ischemie myšího ucha poškozeného teplem-se zkoušela podáním známého anti-giukokortikoidu, RU 486, myši bezprostředně po tepelném poškození. Jak tento model doložil a za zfcu-.Ž.e_bn.í.c.dmí^nji k. ,j. 1 á,t.k.y, s ? ýt i -g 1 'J_kz_kort i ko i dtu^ úč_i_nnos t í nsoos -k y t1y p ř íz n i vé p isobení . Příklad 5 V 1 i v de hyd - o e p i a z o ·, t e r o n u - a reperf usní poškoz s> r. í

Samečci k r y- y Spη a g ue- " ·.· ·· ! -» y o hm o t n o s ti Π0 až 17 0 g se Π3 “ h o d n é u r č i k n;? o '· ; ť ř e η 1 , k p ř sdbě ž ném u o š e třeni samotným n o sičem nebo k předběžné mu ose tř e ní dehydroe p i a n d rosteronem (4 mg/kg) . Myš i s ? ošetřuj' nosičem nebo de hydr o e p i androsteronem den před

Gili r πr g i c kým zásahem ..a ...v. den chi r-ur g-ického- --zásahu-. Anestesis^sa navodí .íntraperi toneáiním podáním pa nto bar b-i t a 1 a ( S O až 70 mg/kg). Krysy se umístí na vyhřívanou podložku a tělesná teplota (měřená rektální sondou) se udržuje na 35 až 37 C. Detekce kre— masterového s-va 1 u na jeho nsurovaskukárním pedunkulu se provádí o sobě známými způsoby (Anderson G.L. a kol. 1938, Microvascu1 ar J*as. 3 S , str. 5 3 až 83; S i emi onow_ M. _a _ko_K 1991, Mi crocirc. En- óoth. Lymphat i cs 7, str. 183 až 137; Siemionow M. a kol, i 393 J. Hand Surgery 18A, str. 963 až 971). Vyřízne se kůže z předního kyčel ní ho hřbetu k vytipování skrota. Testíci s nedotčeným kre-masterovým sva1e~ se odřízne od skřeta. Vytvoří se 1 cm otvor na břišním povrchu kremasteru a odstraní se testíci a odstraní se sperme vy provazec. Pod mikroskopem = e dokonala izoluje naurovas-kulárni pendi kalus, sestávající z p u b i c k o epigastrických arterií, z žíly a z ge n i t o f e rno r á 1 n í ho nervu, vnější kýče lni arteria a žíly. Nakon vé ho svalového váčku otevře a o s t r plátku se připraví pro intravitálr. vloží do speciálně určené tkáňové : rozprostře na krycí sklíčko v otvoru - O hedvábnými stehy. Pak se ze spod s optickým vláknem. Sval se udržuje íPl Las ,Lai4ýjTt_ LLLm a.m^—dĎká.ň-QJvá—^Uá^et^^-. <u-r· ě* loty, se naplní C.9¾ solankou a tele Mikroskop se vybsví barevnou video k k u 1 a c e je na rno n i t o r-u 4 8 2,6 mm, při č Mě ře _n i m i kro vasku já r n í. a k t.i__.v i t y __se ^ k nastavení prei schemi cké základní n é m umístění svorek k do ko n a 1é mu vy1 transplantátu je ischsmická period svorek k navozen'' reperf usní ho p o š k o v a s k ulát u r y 3 0, 8 '? a 9 O m i n u t p o re-, še ných subjektu následuje ischemie v počáteční periodě toku krve mi kr k u 1 a č n í aktiv i t y je n á s I e d o v á n r e p e vyříznutím k začátku žil od ec se čelní stěna krsmaster o -cvek kramastsrového svalového í videomik. ros kopii. Krysa se ?tně a kremastero vý plátek se v 9 dnu lázně a fixuje se s 5 prosvítí wolframovou lampou vlhký a pokrytý nepropustným 8«rvé—s ψ ρ-ΐ'-ο—ř*fZ'ewH;’e,fr-

* 3 3 a TjdrŽuje Γι3 3 5 i Z 36 ^ C =m»rou. Videoobraz mikrocir-"’5 je konečné zvětšení 1300, --tz.ri.i3 m.eJn..áj/,á..^..pL.o*™íi,i.i.z.Q.La.c.riJ^_SAř-aíLu. “ : d noty (baseline). P o s p r á v - - učen í t oku k r ve do s v a 1 o v ého' - š e s t h o d i η . P o o d s ť r a n ě n í - ?n{ s a měří akt i v i ta mikro- " i u s i . V případě všech z ko u - po obnovení toku krve a pak uzirkulací. Tento průlom cir- " t . U sním DOS ko_Z e η f m_k t p r é na- 29 vozu je ztrátu toku. c h

Pro hodnocení stavu m:krovasku i atorního systému kremaster vé ho svalu před ischemií a po reperfusi se používá následující parametrů: 1) Hustota perfundovaných kapilár

Hustota pe r f undo vaných kapilár v každé ze tří o b 1 as 1 p i á ~ λu (zóna 1,2 a 3) se měří počítáním protékaných kapilár v blízkosti předem vybrané pcstkapilární žilky. Počítá se devět viditelných polí kapilár v případě každá postkapilární žilky pro celkem 27 podílů na kremasterovém plátku. Výsledky jsou na o br . , 5A, 5B a 5C pro zóny 1, 2 a 3. 2.) Počet l eukocy t ů v pos tka p 1 ár ní ch žilkách

Videozáznam tří preae1ektovaných postkapi 1árních žilek se snímá v blízké střední . a vzdálené oblasti plátku. Zaznamenává se pro každou žilku počet 1eukscytů protékajících 1 uměn, počet přiléhajících k endotheliu a počet migrovaných přes endothelium v průběhu dvou minut. Výsledky jsou uvedeny na obr. 6A, 5B a 6C. 3 ) Rychlosti bur.ěk červe n ých kr v i n.ek v A 1 ( p r vn í ho r á d-u) a A2 (druhého řádu' arterioléch

Rychlosti buněk červených krvinek se zaznamenávají v hlavních arteriolách kremasterováho plátku za použití obvyklého optického velocimetru Doppler. Výsledky jsou uvedeny na obr. 7 A a 7B pro rychlost ž:lni a artiriální krve. A. Re parfusní poškození neušetřených a nosičem ošetřených krys ’ ----3¾-3 t—kr-ys^se - ne-o-ě e t ř-u j e -a --šest k-r-ys- .se*.o,š.e.tŽJJ-j·^ .nos i-čem. 2$ podmínek šest i hoc:nové i schemi e‘ a 90 minutové reperfuse d r a ma t i c ~ ky vzrůs tá počet válečko·,·; tých, přilnutých a . t r a ns mi gr o va nýc h leukocytů v průběhu 60 minuto vé reperfuse a vykazuje další vzrůst v 9 0 minutách (obr . 6 7 A a z ') . Pozoru je se dramat i cký pok t es absolutního počtu os r f undo va - /ch kapilár na vysoce s i I. o vé po 1 § které se p o d r o b u ; a 30 a 60 minutové postreperfus i 6 pok račuj ící m poklesem počtu pr otékaných kápi |á r 90 minut po rěperfusi (obr. 54 až 50). Podobně rychlosti červených krvinek v nádobách rozměru A2 je podstatně nižší v 60 a 90 minutách po r e pe r f us i (0 br · ?A>a 7β) - 30 - ,.Β.....Re.p.e.r f.us.n.í poškození k r.ys. ošetřených dehydroapi andr o.s.tsconam . 4 2 a podmi ne k, kdy ss krysy předběžně ošetřují podkožním vstřiknutím 4 mg/kg dehydroepiandrosteronu den před a v den chirurgického zásahu se měří výrazné a vysoce významné ochranné působení t. erapie. Všechny tři parametry vykazují hodnoty, které se těsně blíží nebo jsou identické s normálními hodnotami. Hlavního významu je skutečnost, že ve všechn časových bodech jsou endote- Jí P* ά Ir 1 ** /ί·Λ í Λ k K Λ l . u _____ i- t__: : l I ! X 1 n i' . κ Λ A · ·> · · lf·· «KAMrmAMAAtt λ H Ir I ry ** ‘Pr* «/**»-*; r' i i αι u i'" α u ne Di v iu v- i f o i σ xv »- ot í o υ i rv y ucíiincucuy wy a. ^ c\ * €i w w » w·»»

Tento závěr je založen na skutečnosti, že četné váiečkovité, ulpívající a transmigrační leukocyty se jeví výrazně podobné základním hodnotám (obr. 6A až 6C). Rychlosti červených krvi vek ve A2 arteriolách se pomaleji vracejí k normálním rychlostem toku 6 s rychlostmi' v některých oblaStech měření 75 % normálu v 90 minutách po reperfusi (obr. 7A a 7.B). V čase 90 minut počet kapilár v mi krovaskulatuře není podstatně rodílný od základních hodnot, dosažených před ischemií (obr. 5A až 5C).

Bez snahy vázat na nějakou teorii fysiologické a biochemické operace dehydroepiandrosteronu a jeho derivátů obecného vzorce I se zdá, že anti i sc herní cké působení těchto sloučenin sou-v i 5 í « její o h působením na při lna v o s t, neutrof i lů na e ndot he l i á l n í buňky. Proto působení těchto sloučenin, při prevenci nebo snižování i s c h e m i e, která může být důsledkem různých typů poškození tká- --.můžs^ctad.ovžano^^na«o<vUó.v,Eo-vá!n,L^ -vprřá^i. oa«voA3»t>U-i-e<n,d-o.t1h,ahLL,Áj^úch,-..Jb-U^. n ě k Proto i n hi bi c e přilnavosti n e ut ro fι 1ů předchází a k ti v a ci neutrof i 15 a transmigraci do tkáňové strany endothetia. Jelikož se t r a n a mI g race - a u t r o f i 1 ů i nhi bu je, předchází se neutrof i ! y n a - j/q z e né mu ca a i vn í_mu po š.ko z β n í., ...s ndo_the.l_i_á 1 n í c h b ii n ě k____a _pa_r gjic hymá I - nich buněk. Jelikož se předchází n e u t r o f '· 1 k n í aktivaci produkce buněčných faktorů (neutrof i ly), předchází sa rovněž agregaci destiček.· Tím se předchází a sn i ž je se progra? i vní nekrosa tkáně. Kromě toho orogr a s i vní ischemie střevní tkáně (vedoucí k bakteri-á I n í t r a n ·* 1 o k a c i ) a ep i dermi s a srdečního s va 1 u a i s c he m i e a l ve o -t ámí $ t ěny' ( vedoucí k ARDS) se zprostředkovává podobným mechanismem. Proto jsou tyto sloučeniny účinné při předcházení nebo při snižování bakteriální translokace a ARDS.__ -31- ? ř i pomí ná se, že z půso b.y a sloučeniny podle vynálezu se mohou vnášet do formy ne j r ftzně j š f ho provedeni, přičemž je zde pojednáno toliko o několika takových formách. Pracovníkům v oboru 'je zřejmé, že v rámci vynálezu jsou možná i další provedení. Proto jsou shora uvedená provedení míněna toliko jako objasňující 3 neomezující příklady.

Průmys1ovávyužitelnost

Použití dehydroepiandrosteronu (DHEA) nebo jeho derivátů pro výrobu farmaceutických prostředků k prevenci progresivní nekrose tkána, reperfušního poškození, bakteriální trans lokace a syndromu dýchácích potíží dospělých. Jakožto vhodné deriváty DHEA se uvádějí příkladné 16cr-brom-DHEA, androstend i o 1 a deriváty které mají postranní řetězce v poloze 4' a/nebo 7’, které nenarušují nativní aktivitu DHEA, a jsou schopné inhibovat suifotransferasu k předcházení konverze DHEA na DHEA-S.

Claims (9)

1. ann

   Použití derivátu dehydroep j androst.eronu obecného vzcírce I

   z n a m e n a al-.oa kyslíku neho_h-V-d-p-o-x-v-hov-ou—s-k u-p-i-trn-j—------—' atom vodíku, methylovou skupinu, hydroxvlovou skupinu nebo o tom halogenu, pokud R1 znamená al.om kyslíku a atom vodíku, pokud II1 znamená hydroxv lovou skupinu, atom vodíku, zbytek mast.né kyseliny se -1 až 2 2 atomy uhlíku, skupinu a 1 k y I. o v o u s 1 a ž 10 atomy uhlíku, a 1 k e u y 1 o v o u s 1 až 10 atomy uhlíku, acety 1 on ickou s 1 až 10 atomy uhlíku, (X)n-fenyI aLky1 ovou s 1 až 5 atomy uhlíku v alky lovem podílu, { X ) n-.f e.nv ia 1 ke. ny 1 o voň. s ! _ až iy atomy u.hl ík.n v al ke ny lovem —" 1Vď”’KlčiT [Tinu db ěc né h ó v ?7o r c e - CO - R 8 a/iicbo. R5 atom vodíku, hydroxylovou skupinu nebo atoiii haloge nu , atom vodíku, -t o m=“k y s-h rk u když čárkovaná čárka znamená dvojnou vazbu, a-n eb o™v <T(t í^ku"F^“HTlT>^ nTiT kil y ž č á r k o v a n á ř á r k a znamená jednoduchou vazbu, atom vodíku, zbytek mastné kyseliny s 4 až 22 atomy uhlíku, st skupinu alkýlovou s 1 až 10 atomy uhlíku, a 1kenylovou s 1 až 10 atomy uhlíku, ae o I. y l r u i e kou s l až 10 atomy uhlíku, (X)n- 4 feny ! a 1 ky I nvon s 1 až f> atomy uhl íku v a 1 kýlovém podílu, ( X ) n - fo πy!a 1kouy1 ovou s 1 až Π atomy uhlíku v a 1keny lovem podílu, -n-a— s-a-bě—nozáv rsdre—atom—harFoií eřuij s"k u p ΓηΤι a TR ydovo u s 1 al 5 33 atomy uhlíku, alkenylovou s 1 až 4 atomy uhlíku, alkoxysku-pinu s 1 až 5 atomy uhLíku, karboxyskupinu, nitroskupinu, sulfátovou skupinu, slufonylovou skupinu, skupinu karboxylo-vého esteru s 1 až 6 atomy uhlíku nebo skupinu sulfátového esteru s 1 až 6 atomy uhlíku a n 0, 1, 2 nebo 3, pro výrobu farmaceutických prostředků k prevenci progresivní nek- 4 rose tkáně, reperfusního poškození, bakteriální translokace a syndromu dýchacích potíží dospělých, pro prevenci nebo snižování bakteriální translokace,
2. 2. Použití podie nároku 1 derivátu dehydroepiandrosteronu obecného vzorce I, kde znamená R3 atom vodíku nebo zbytek mastné kyseliny se 4 až 22 atomy uhlíku a ostatní symboly mají v nároku 1 uvedený význam.
3. 3. Použití podle nároku 1 derivátu dehydroepiandrosteronu obecného vzorce !, kde znamená R1 atom kyslíku a R2, R3, Ra, R5 , RA a R1 atom vodíku.
4. 4. Použití podle nároku 1 derivátu dehydroepiandrosteronu obecného vzorce I, kde znamená R1 hydroxylovou skupinu a. R2, R3, R4, R5, R2 a R1 atom vodíku.
5. 5. Použití podle nároku 1 derivátu dehydroepiandrosteronu ,qJ>ecného „v.zprx.e,_I , kd,e „ znaiená.. R i.,,atom_=_ky\s Líkn_, R 2 „ a t om^hnoiiui^a,^. R3, RJ, R5, R4 a R7 atom vodíku. 1 ' Farmaceutický prostředek k prevenci progresivní nekrose tkáně, reperfusního poškození, bakteriální translokace a syndromu dýchacích potíží dospělých a" pro prevenci nebo snižování bakte- 2 Použití.podle nároku 1 derivátu dehydroepiandrosteronu obecného vzorce I, kde znamená R1 atom kyslíku, R2 hydroxylovou skupinu a R3, Ra, Rs, R2 a R1 atom vodíku. *

   --. H ) kde znamen.á' R1 atom kysl íku něho hydroxylovon skupinu. _ ........._......................... n O Π. ^ atom- vodíkuj methylovou skupinu, hydroxylovou skupinu nebo atom halogenu, pokud R* znamená atom kyslíku a atom vodíku, pokud R1 znamená hydroxylovou skupinu, R3 atom vodíku, zhvt.ek mastné kyseliny se 4 až 22 atomy uhlíku, skupinu alkyl, o v ou s 1 až 10 atomy uhlíku, alkenylovou s l až 10 atomy uhlíku, acety 1eniokou s 1 až 10 atomy uhlíku, (X)n-fonyla1kylovou s 1 až 5 atomy uhlíku v alkvlovém podílu. (X)n-feny lalkenylovou s 1 až 5 atomy uhlíku v nlkenylovém podílu, nebo skupinu obecného vzorce -C 0-R8 Rα a/riebo R5 atom vodíku, hydroxy lovou skupinu nebo atom halogenu , R7 atom vodíku, když čárkovaná čárka znamená dvojnou vazbu, a-tom kyslíku nebo vodíku a halogenu, když čárkovaná čárka znamená jednoduchou vazbu, R8 atom vodíku, zbytek mastné kyseliny s 1 až 22 atomy uhlíku, ------s· "a řH O tomx^vih^M5leir,“crř*"' . 10 atomy un.iik.u, ace ty Isnickou s 1 a z- 10 atomy vtitiiKur \.\in-~· feny1 a 1ky1 ovou s 1 až 5 atomy uhlíku v alkylovém podílu, (X)n-feny) alkenylovou s 1 až f> atomy uhlíku v a l k e n y 1 o v é in X na sobě nezávisle atom halogenu, skupinu alkyl, o vou s 1 až 5 atomy uhlíku, alkenylovou s 1 až 4 atomy uhlíku, alkoxysku- V pinu s I až 5 atomy uhlíku, kurboxyskupi nu, uitros kup i nu , sulfátovou skupinu, s 1 ιι Γ o ny 1 o v ou skupinu, skupinu karboxylo- * - - 6 váho esteru s 1 až ři .atomy nh 1 íku nebo skupina sulfátového % esteru s 1 až 6 atomy uhlíku a η 0 , 1 , 2 n e h < > 3 , v 35 atomy uhlíku, alkenylovou s 1 až 4 atomy uhlíku, alkoxysku-pinu s 1 až 5 atomy uh1íku, karboxyskup i nuj nitroskupi nu, sulfátovou skupinu, slufony 1 o\yóu skupinu, skupinu karboxylo-vého esteru s 1 až 6 atomy uhlíku nebo skupinu sulfátového esteru s 1 až 6 atomy uhlíku a n 0, 1, 2 nebo 3,
6. 8. Farmaceutický prostředek podle nároku 7, vyznačující se, t í m , že obsahuj'e jakožto účinnou látku derivát dehydroepiandrosteronu obecného vzorce I, kde znamená R3 atom vodíku nebo zbytek mastné kyseliny a ostatní symboly mají v nároku 1 uvedený význam.
7. 9. Farmaceutický prostředek podle nároku 7, v y z n a č u- jící se tím, že obsahuje jakožto účinnou látku derivát dehydroepiandrosteronu obecného vzorce I, kde znamená R1 atom kyslíku a R2 , R3, Re, R5, R6 a R7 atom vodíku.
8. 10. Farmaceutický prostředek podle nároku 7, vyznač u- j í c í s e t. í m , že obsahuje jakožto účinnou látku derivát dehydroepiandrosteronu obecného vzorce í, kde znamená Rl hydroxy-lovou skupinu a R2, R3 , Rα , R5 , R,6 a R7 atom vodíku. 11· Farmaceutický prostředek podle nároku 7, v y z n a č u- j í c í s e t í m , že obsahuje jakožto účinnou látku derivát dehydroepiandrosteronu obecného vzorce I, kde znamená Rl atom ^ kyslíkn^-^R^atom^brbmir á“”R3"p"Řa ^ R 5 , r6 a r7 atom vodíku.
9. 12. Farmaceutický prostředek podle nároku 7» vy z n a č u- j í c í se t í m , že obsahuje jakožto účinnou látku derivát dehydroepiandrosteronu obecného vzorce I, kde znamená Rl atom kyslíku, R2 hyd ro xylovou skupinu a R3, Re, Rs, R6 a R7 atom vodíku .

   syoRčÍK