CZ194693A3 - Copolymers polyoxypropylene/polyoxyethylene with enhanced biological activity - Google Patents

Copolymers polyoxypropylene/polyoxyethylene with enhanced biological activity Download PDF

Info

Publication number
CZ194693A3
CZ194693A3 CS931946A CS194693A CZ194693A3 CZ 194693 A3 CZ194693 A3 CZ 194693A3 CS 931946 A CS931946 A CS 931946A CS 194693 A CS194693 A CS 194693A CZ 194693 A3 CZ194693 A3 CZ 194693A3
Authority
CZ
Czechia
Prior art keywords
copolymer
polyoxypropylene
molecular weight
polyoxyethylene
daltons
Prior art date
Application number
CS931946A
Other languages
English (en)
Inventor
R Martin Emanuele
Robert L Hunter
Paula H Culbreth
Original Assignee
Cytrx Corp
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=27100911&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=CZ194693(A3) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Cytrx Corp filed Critical Cytrx Corp
Publication of CZ194693A3 publication Critical patent/CZ194693A3/cs

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/74—Synthetic polymeric materials
    • A61K31/765—Polymers containing oxygen
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/74—Synthetic polymeric materials
    • A61K31/765—Polymers containing oxygen
    • A61K31/77—Polymers containing oxygen of oxiranes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/56—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/56—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule
    • A61K47/59—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes
    • A61K47/60—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes the organic macromolecular compound being a polyoxyalkylene oligomer, polymer or dendrimer, e.g. PEG, PPG, PEO or polyglycerol
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/02—Antithrombotic agents; Anticoagulants; Platelet aggregation inhibitors
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08G—MACROMOLECULAR COMPOUNDS OBTAINED OTHERWISE THAN BY REACTIONS ONLY INVOLVING UNSATURATED CARBON-TO-CARBON BONDS
    • C08G65/00—Macromolecular compounds obtained by reactions forming an ether link in the main chain of the macromolecule
    • C08G65/02—Macromolecular compounds obtained by reactions forming an ether link in the main chain of the macromolecule from cyclic ethers by opening of the heterocyclic ring
    • C08G65/04—Macromolecular compounds obtained by reactions forming an ether link in the main chain of the macromolecule from cyclic ethers by opening of the heterocyclic ring from cyclic ethers only
    • C08G65/06—Cyclic ethers having no atoms other than carbon and hydrogen outside the ring
    • C08G65/08—Saturated oxiranes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08G—MACROMOLECULAR COMPOUNDS OBTAINED OTHERWISE THAN BY REACTIONS ONLY INVOLVING UNSATURATED CARBON-TO-CARBON BONDS
    • C08G65/00—Macromolecular compounds obtained by reactions forming an ether link in the main chain of the macromolecule
    • C08G65/02—Macromolecular compounds obtained by reactions forming an ether link in the main chain of the macromolecule from cyclic ethers by opening of the heterocyclic ring
    • C08G65/26—Macromolecular compounds obtained by reactions forming an ether link in the main chain of the macromolecule from cyclic ethers by opening of the heterocyclic ring from cyclic ethers and other compounds
    • C08G65/2603—Macromolecular compounds obtained by reactions forming an ether link in the main chain of the macromolecule from cyclic ethers by opening of the heterocyclic ring from cyclic ethers and other compounds the other compounds containing oxygen
    • C08G65/2606—Macromolecular compounds obtained by reactions forming an ether link in the main chain of the macromolecule from cyclic ethers by opening of the heterocyclic ring from cyclic ethers and other compounds the other compounds containing oxygen containing hydroxyl groups
    • C08G65/2609—Macromolecular compounds obtained by reactions forming an ether link in the main chain of the macromolecule from cyclic ethers by opening of the heterocyclic ring from cyclic ethers and other compounds the other compounds containing oxygen containing hydroxyl groups containing aliphatic hydroxyl groups
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08G—MACROMOLECULAR COMPOUNDS OBTAINED OTHERWISE THAN BY REACTIONS ONLY INVOLVING UNSATURATED CARBON-TO-CARBON BONDS
    • C08G65/00—Macromolecular compounds obtained by reactions forming an ether link in the main chain of the macromolecule
    • C08G65/02—Macromolecular compounds obtained by reactions forming an ether link in the main chain of the macromolecule from cyclic ethers by opening of the heterocyclic ring
    • C08G65/26—Macromolecular compounds obtained by reactions forming an ether link in the main chain of the macromolecule from cyclic ethers by opening of the heterocyclic ring from cyclic ethers and other compounds
    • C08G65/2618—Macromolecular compounds obtained by reactions forming an ether link in the main chain of the macromolecule from cyclic ethers by opening of the heterocyclic ring from cyclic ethers and other compounds the other compounds containing nitrogen
    • C08G65/2621—Macromolecular compounds obtained by reactions forming an ether link in the main chain of the macromolecule from cyclic ethers by opening of the heterocyclic ring from cyclic ethers and other compounds the other compounds containing nitrogen containing amine groups
    • C08G65/2624—Macromolecular compounds obtained by reactions forming an ether link in the main chain of the macromolecule from cyclic ethers by opening of the heterocyclic ring from cyclic ethers and other compounds the other compounds containing nitrogen containing amine groups containing aliphatic amine groups
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08G—MACROMOLECULAR COMPOUNDS OBTAINED OTHERWISE THAN BY REACTIONS ONLY INVOLVING UNSATURATED CARBON-TO-CARBON BONDS
    • C08G65/00—Macromolecular compounds obtained by reactions forming an ether link in the main chain of the macromolecule
    • C08G65/02—Macromolecular compounds obtained by reactions forming an ether link in the main chain of the macromolecule from cyclic ethers by opening of the heterocyclic ring
    • C08G65/30—Post-polymerisation treatment, e.g. recovery, purification, drying

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Polyethers (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
  • Detergent Compositions (AREA)
  • Lubricants (AREA)
  • Compositions Of Macromolecular Compounds (AREA)
  • Addition Polymer Or Copolymer, Post-Treatments, Or Chemical Modifications (AREA)
  • Radar Systems Or Details Thereof (AREA)
  • Materials For Medical Uses (AREA)

Description

Kopolymery polyoxypropylen/polyoxyethylen se zlepšenou biologickou aktivitou
-o
Oblast techniky r- X> ϊ> CP tn =; o
-< π £ >
lO
O O (ZX i—
O cn
-J n:
Předložený vynález se týká; pří přivý : kopolymeru _ polyoxypropylen/polyoxyethylen':, který má zlepšenou toxicitu a profil účinnosti. Předložený vynález také zahrnuje blokové kopolymery polyoxypropylen/polyoxyeťhylen s hodnotou polydisperzity menší než přibližně 1,05·
Dosavadní stav techiky
U určitých kopolymerů polyoxypropylen/polyoxyeth.ylen bylo zjištěno, že mají prospěšné biologické účinky při podání lidem nebo zvířatům. Tyto prospěšné biologie^ ké účinky jsou shrnuty následovně:
Kopolymery polyoxypropylen/polyoxyethylen jako rheologinká činidla 'ί
Kopolymery mohou být použity pro ošetřování oběho-. vých chorob bučí samotné nebo v kombinaci s jinými sloučeninami,které zahrnují, ale nejsou na ně omezeny, fibrino-lytieké enzymy, antikoagulant.y, pohlcovače volných radikálů, protizánětlivé činidla, antibiotika membránové stabilizátory a/nebo perfusní media. Tyto aktivity byly popsány v US patentech č. 4801452, 4873083, 4879109r 4837014, 4897263.,. 5064643, 5028599, 5047236, 5089260, 5017370, 5078995, 5032394, 5041288, 5071649, 5039520, 5030448, 4997644, 4937070, 5080894 a 4937070, které jsou zde všechny citovány jako odkazy.
Kopolymery polyoxypropylen/polyoxyethylen prokázaly, že mají/zcela výjimečné terapeutické aktivity. Povrchově aktivní kopolymery jsou vhodné prc léčení patologických - άinterakcí v krvi a jiných biologických tekutinách lidi a zvířat. Toto zahrnuje použití povrchově aktivního kopolymeru pro léčení chorob a stavů, ve kterých je rezistence ke krevnímu toku patologicky zvýšena poškozením způsobeným přítomností adhezivních hydrofobních proteinů nebo poškozených membrán. Tato adheze je produkována patologickými hydrofobními interakcemi a nevyžaduje interakci specifických ligandů s jejich receptory. Takové proteiny a/nebo poškozeně membrány zvyšují rezistenci, v mikrovaskulatuře zvýšením tření ε snížením účinného poloměru krevního řečiště. Předpokládá se, Že nejdůležitějším z těchto proteinů je rozpustný fibrin.
Patologické hydrofobní interakce mohou být léčeny podáním člověku nebo zvířeti, postiženým stavem vyvolaným hydrofobní interakcí, účinného množství povrchově aktivního kopolymeru. Povrchově aktivní kopolymer může být podáván buá samotný nebo může být podáván s jiným činidlem, zahrnujícím, ale neomezujícím sě na, fibrircolytieký enzym, antikoagulant, pohlcovač volných radikálů.
Metoda popsaná ve výše uvedených, patentech zahrnuje podání zvířeti nebo člověku, účinného množství povrchově aktivního kopolymeru· následujícího obecného vzorce
Ηοω^οι^ο^ωβίο^ω,Η kde a je celé číslo takové, že hydrofob představovaný vzorcem (C^HgO) má molekulovou hmotnost přibližně 950 až 4000 daltonů, výhodně asi 1200 až 3500 daltonů a b je celé číslo takové, Že hydrofilní podíl, představovaný vzorcem (CgH^O) tvoří přibližně 50 % až 95 % hmotnostních sloučeniny.
-3Výhodným povrchově aktivním kopolymerem' je kopolymer, mající následující vzorec .
kde molekulová hmotnost hydrofobu (C^HgO) je přibližně 1750 daltonú a celková molekulová hmotnost je přibližně 8400 daltonů.
Povrchově aktivní kopolymer je účinný v jakýchkoliv stavech, kde se vyskytuje patologická hydrofobní interakce mezi buňkami s/neb© molekulami* Tyto interakce.jsou. považovány ža; vyvolávající. 1 ) vyšší než' normální, končen-'' _tr 8Ci_f ibri no gen u *, i2.L gen er,ac i.. ;in± r av.as kul á rn&l/L ne.b.o__ lokálně rozpustného*fibrinu, zejména fibrinu o vysoké molekulové hmotnosti, 3) zvýšené třeni v mikrovaskulatuře. ne.bo 4) mechanické; nebo chemické trauma; krevníchr:. -sXpAek.t/Vš-ec.hnyjjtyt.o^st.avy-Lp.ůs-O-bíxzvýšení—patologických:
hy d r o £o.bních: i n t e r.šk c í\ k r..e vní c hs l.o ž e k: j. ako:. j s:o u >bun-ky v .a molekuly. . ·. »>
Předpokládá se, že fibrin, zejména rozpustný fib*rin., zvyšuje adhezi buněk: mezi sebou, výrazně zvyšuje tření,v malých krevních cévách a zvyšuje viskozitu krve, zejména při nízkých smykových . rychlostech. Účinky povrchově aktivního polymeru jsou považovány za v podstatě lubrikační efekty protože snižují tření vyvolané adhezí.
Bez- jakéhokoliv vázání se následující hypotézou se předpokládá, že povrchově aktivní kopolymer působí následujícím mechanismem: Hydrofobní interakce jsou rozhodujícími determinantami biologické struktury. Udržují fosfolipidy spolu v membránách a proteinových molekulách v:
-4jejich nativních konfiguracích. Pro pochopení biologie povrchově aktivního kopolymerů je.nezbytné přiblížit biologické aktivity sloučeniny .· Voda je kapalina silně vázající vodík, která ve svém kapalném stavu, tvoří vazby/ ve všech směrech s okolními molekulami. Vystavení hyčrofobnímu povrchu, definovanému jako jakýkoliv povrch, který tvoří nedostatečné vazby s vodou, produkuje povrchové napětí nebo ztrátu rovnováhy ve vodíkových vazbách v molekulách vody. Tato síla může být značně velká. Povrchové napětí vody (čisté) je přibližně 82
I dyn/cm. Toto se převede na^lu několika set tisíc libert na čtverční palec na povrchu molekul.
Při přiblížení dvou molekul nebo částic a, hydroftfbním povrchem1, se tyto dychtivě adherují. Tato adheze je poháněna redukcí volné energie, která se objeví při1, tom, kdy molekuly vody. přecházejí ze stresovaného vodík nevázajícího? hydrofobního povrchu k nestresované:'; kapalné fázi. Energie drží^ípolu takové povrchy, působení adheze, je přímou funkcí povrchového napětí částic fMamson AW, Physical Chemistry of. Surf aces, 4.vyd., John Wiley $ Sons, New York (1982)):
*Λ3= r-A* >B- V
AS kde působení adheze nebo energie nezbytná k oddělení jednoho Čtverečního centimetru mezičésticové plochy AB na dvě separátní částice, a fy jsou povrchová napětí částice A a částice 3, interfaciální napětí mezi těmito částicemi., .
-5Výsledkem je, že jakékoliv částice nebo molekuly v oběhu, které vyvíjejí významné povrchové napětí buďou spontánně adherovat k jiným. Takové adheze v membránách a makromolekulách je nezbytná pro udržení' jejich integrity. Je zde použivén__výr.az _.M nor.má 1 ní-hydr.of_obní_ interakce” pro popis takových sil. Za normálních poďmínek. mají všechny buňky a molekuly v oběhu h.ydrofilní neadhezivní povrchy. Receptory a ligandy, které modulují buněčné a molekulární interakce jsou obecně umístěny na nejhydrofiinějších' površíchbuněk'’a mole’kůl, kde tyto jsou prosty pohybu ve vodném mediu a interagují vzájemně. Speciální nosičové molekuly jsou nutné pro trfinRnftrt. lirHrtA a -i-imrnE bvdpb tf?npí v oběhů.. V tělesných kapalinách-jako je krev i jsou. zvláště' nežádoucí^nespecifické .8dheziv.ní^sí.lyr..me.ziT-mo.b.i.lními^_.-_. prvky. Tyto síly jsou definovány jako patologické hydrofobní interakce**, protože; omezují pohyb normálně mobilních' prvků;aipromotují nevhodnou..adhezi. buněk'..a .
molekul.... _:_ . ______________ . V poškozené tkáni hydrofobní domény normálně umis- _____ těné uvnitř buněk, a molekul mohou být vystaveny a produkovat patologické adhezivní povrchy, jejichž interakce zvyšuje poškození. Fibrin umístěný podél stěn cév také poskytuje adhezivní povrch. Takové adhezivní povrchy se jeví být charakteristickými pro poškozené tkáně.
Předpokládá se, že schopnost povrchově aktivního; kopolymeru vázat, se k adhezivním hydrofobním povrchům a převádět je na neadhezivní hydratované povrchy je velmi blízká' stavu v normálních tkáních a je na. ní založena potenciální terapeutická aktivita při zmírnění chorob^ných stavů.
-6Adheze způsobená povrchovým napětím jak je popsána výše se liší od adheze běžně studované v biologii. Obvykle? studovanou adhezí je adheze způsobené interakcemi specifických receptorových ligandů. Zejména se liší oď receptorem zprostředkované adheze fibrinogen.u - skupiny proteinů von WiT£brand*ova faktoru (viz obecně, Hemostasis and Thrombosis,Basic Principles and Clinical Practice, vyd.Colman a spol·., J.3'.Lippincotf Company (1987)·
Jak hydrofilní tak hydrofobní řetězce povrchově aktivního kopolymeru sají jedinečné vlastností, které přispívají k biologické aktivitě. Hydrofilní řetězce polyoxyethylenu (POE) jsou delší než řetězce většiny povrchově aktivních látek a jsou flexibilní. Vážou voďu interakcemi akceptoru vodíkové vazby s etherově vázanými kyslíky. Tyto dlouhé, silně hydratované flexibil> ní řetězce jsou relativně nekompresibilní a tvoří ba-~ riéru k hydrofobním povrchům jiných. Hydroxylové skupiny na konci molekuly jsou pouze skupiny schopné sloužit jako donory vodíkové vazby. Nejsou to skupiny nesoucí náboj.
Takto extrémně omezené možnosti vazebných schopností prevděpodobně vysvětlují neschopnost molekuly aktivovat hostitelův mediátorový a protizánětlivý mechanismus. POE řetězce nejsou však nicméně nezbytně inertní. Polyoxyethylen může vázat kationty iontově óipolovými interakcemi s kyslíkovými skupinami. Crown-poly.ethery a reverzní oktablokové kopolymerní ionofory jsou příklady takové kationtové vazby (Atkinson TP,a spol.,. An.J. Physiol., 254:020(1988). Je možné, že flexibilní POE řetězce t.voří konfigurace, které vážou a modulují pohyby vápenatých a jiných kationtů v blízkosti, poškozených
-7membrén nebo jiných hydrofobních struktur.
Hydřofobní složka povrchově aktivního kopolymerů je velká, slabá a flexibilní. Energie, kterou se váže ; ~ : k-buněčným membránám^nebo molekule proteinu je'menší - >
než energie, která drží fosfolipidovou membránu pohromadě nebo udržuje terciární konformaci proteinu. V důsledku 4 toho na ro2díl oď obvyklých óetergentů, které roz— -------------i_-.p.ouš-těj-í-membr-ánoy-é—l-i-pi-d-y— a-protei-ny-,v;6dheruje·-/povrchově-.--aktivní kopolymer k poškozeným místům membrán a zabraňuje, propagaci poškození.
i
..... ,, .............. Schopnos t. p.ov.rcho.vě„..ak.t ivního. kopolymer-U,.: bl.oko-V-e.tr— adhezi fibrihogenu k hydrofobním. povrchům .a: následně .adhezi.
_ 'J’deštíček3a''řěrvěných7krvínek7jé sháčň’o7dóiožiteíná. .in .
vitro. Většina povrchově aktivních látek zabraňuje adhezi
-— --—h-yd-rbfobn-í-ch-ČásTt-i-c-mez-i—sebou—avšak-povrchově—aktivní—1-·kopolymer*.mé·.vynikající rovnováhu vlastností, která, op- * ·** fimaTižuje? antiadhezivní aktivitu s mini m al i z:ac í t o x i - -. .. .
city. Povrchově aktivní kopolymer není rutinně používán —— ..................... ·...——biochemiky·,—kteří“-použí-vají“neÍOnťové-‘povrchOvě-“Sktivní-------------látky pro lýzi buněk nebo rozpuštění proteinových membrán. Povrchově aktivní kopolymer chrání buňky před lýzí.
- Hydrofo.b účinně-kontaktuje-poškozené-buňky a-molekuly- pro prevenci patologických hydrofobních interakcí, ale
- nemůže narušit mnohem silnější normální hydřofobní inter-·-------------- - --akce-j—k-te-ré-uďržuj-í—s-t-ruk-t-urní^-integri-tuv---------- -------------------- ·-. ........Ví q íf ησ.Ί t ft- Ifnlro i.ei nhon nž. _r\mrQÍř niTťín.ei. rr o ·** “ ** W T WM W T ' U Sx* Ί-Α V» UJ A J * ViiA determinant průtoku cévami s konstantním tlakem a geometrií. V nejmenšich cévách, jako jsou cévy v poškozené
L tkáni, se: stávají signifikantními jiné faktory.·. Je-li průměr -cévy menší než průměr buňky, musí se krevní buňky
- -deformovat· aby mohly vstoupit do cévy a p-ak musí klouzat.....
po stěnách cévy za vzniku tření. Peformabilita krevních
-8— buněk, vstupujících do malých .cév byla intenzivně studována (3rooks DE, a Evans EA, Rheology of blooď cdls in Clinical Hemorheology, Applications in Cardiovasctilar and Heaatological. Disease, Diabetes, Surgery an4 Gynecology·, S.Chien, J.Dormandy, E.Ernst a A.Matral, -vyď., Martinus? Nijhoff Publishers, Dorďrecht (1987)), ale adhezivní nebo třecí složka nebyla. Alheze buněk ke stěnám cév; se obecně'považuje za následek specifických interakcí s von Willebrandovým faktorem a jinými specifickými adhezivními molekulami (Thompson AR; a Parker LA, Manual of Hemostasis and Thrcmbosid, vyc,3., ?. A.Davia Company, Philadelphie (19835). Naše údaje potvrzují, že v petologických situacích se tření vznikající z nespecifické fyzikólně-chemické adheze mezi buňkou a stěnou cévy se stává hlavním determinantem toku.
1a
Matematicky, jak síla adheze mezi dvěma Částicemi tak síla tření, která je spojena s klouzáním složek po
-----so bě-r-js ou-přímými- funkc emi-' -jej i ch- povrchových' n apě tí y *-.......
‘h.
které.jsou z velké Části determinovány jejich stupněmt hydrofobní interakce. Tření buňky klouzající malou cévou zahrnuje adhezní, složku a deformační složku (Lee LH,Effect of surface energetice · on polymer friction and wear** v Advances in Polymer Friction and Wear, Polymer Science? and Technology, Vol.5A. L.H Lee, vyd., Plenům Press,
New York.(1974)), které je prakticky obtížné rozdělit:
F = Fa + Fď kde F je tření buněk, Fa je adhezní složka a Fd je deformační složka.
Deformační složka v cévě sa liší od; požadované pro vstup do cévy. Může být podobná té, která se objevuje ve
-9ve větších cévách s průtokem krve- při vyšší smykové, rychlosti Orooks and Evans, supra (1987)). Tření v krevních cévách bylo studováno velmi málo, ale nepochybně zahrnuje’ stejné principy, které se aplikují na polymerové systémy, ve kterých třecí sila je přímo úměrná adhezní síle (Lee (1974), supra):
Fa = kWA + c kde Ea je adhezní složka třecí síly, WA je adhezní síla a k a c jsou konstanty, které b.yly přiřazeny jednotlivému studovanému systému. Mnoho lubrikantů působí jako tenké filmy, které separují, dva povrchy a; snižují . adhezi (.ádam-.·· „. son (1982), supra)., .
Účinky povrchově aktivního kopolymeru na mikrovas--—kulámí-kr-e-v-ní—tok-jsou-hodnoceny—v—něk-ol-i-k-a-mode-l-ech, --od . in: vitro systémů, kde podstatné.-, proměnné mohly být CsTtřa^koňťrolovány dn^in v i vo- systémů, napodobujících' .. lidské choroby.z'a prvé·, může být povrchově aktivní ko- .
—.—polymer—účinným—l-ubrik-antemíj—jes-t-l-i-že-sé-použi-je-v-te-—--------rapeutických koncentracích v modelu označeném pro simulaci pohybu velkých buněk malými cévami. Výrazně' snižuje adhez.iyní složku„Jtření, ale. nemá de.teg.ova.t.elný... vliv. nadeformační složku tření. Z^druhé, povrchově aktivní kopolymer akceleruje tok úzkými kanálky vytvořenými tromboV.......-genním-i—povrchy-sk-la-a-v-zduchu.---Kapk-e--krve-se-um-í-s-tí--na- -......krycí sklíčko a sleduje pod mikroskopem se.záznamem, po dobu kdy krev .doteč? k rohům -krycího..sklíčka jako odezva na mírný tlak. Povrchově aktivní kopolymer inhibuje adhezi destiček ke sklu a udržuje flexibilitu červených krvinek, což jim umožňuje procházet mikroskopickými kanálky. I když povrchově aktivní kopolymer neinhibuje
- tvorbu sloupců červených krvinek, působí, že sloupec je
-10flexibilnější a snadněji rozrušitelný. Za třetí, povrchově aktivní kopolymer zvyšuje průtok krve-klikatými fibrinem vyloženými kanálky kapilární velikosti více než 2Okřát. Toto snižuje viskozitu krve v množství (10%) příliš malém pro zvýšení toku.
Ve více fyziologických modelech povrchově aktivní kopolymer zvyšuje koronární krevní průtok podobným množstvím v izolovaných krysích srdcích perfukovaných & lidskými červenými krvinkami při 30% hematokritu po ischemickém poškození.
V in vivo modelu mrtvice-: produkované ligaturou střední cerebrélní arterie králíků, zvyšuje povrchově aktivní kopolymer průtok krve ischemickou mozkovou tkání.
Až dvojnásobné zvýšení bylo naměřeno technikou vodíkového vymývání, V každém z těchto modelůfbyly kontroly hemodiluce a nebyl zjištěn měřitelný, vliv·'.ne, viskozitu .při. ja-...
-v- . > * kékoliv smykové·' rychlosti.
Uvažuje se., že> dostupná data potvrdí, že povrchově aktivní kopolymer působí jeko lubrikant ne zvýšení krevního toku poškozenou tkání. 31okujé adhezi. h.ydrofobních povrchů k jiným a tím redukuje tření a zvyšuje průtok.
^ato hypotéza je posílena pozorováním, že povrchově aktivní kopolymer má malý vliv na krevní průtok v normálních tkáních, kde jsou takové třecí síly malé (Grover F.L. ,'*A nonionic. surfactant and blood viscosity”, ARCH SURG, 106:
307 (1973)).
Povrchově aktivní kopolymery nejsou metabolizován.y tělem a jsou z krve rychle'eliminovány. Poločas’ životnosti kopolymeru v krvi se uvažuje přibližně dvě hodiny.
Povrchově aktivní, ko.polýmer ve zlepšené f ibrinolytické - kompozici není kovalentně vázán k jakékoliv jiné složce? v přípravku ani není kovalentně vázán na jakékoliv proteiny.
-11Povrchově aktivní ko.polymeir může být podáván s fibrinolytickým enzymem, pohlcovačem volných radikálů, nebo může být podáván samotný pro léčení určitých oběhových stavů, které jsou buď vyvolány nebo působí patologické interakce.krevních sIcTžěk7“Tyto stavy zahrnuji, alF i ' nejsou na ně omezeny, infakrt myokardu, mrtvici, střevní nebo jiné tkáňové infarkty, malignance, syndrom stresu ’ dýchání u dospělých (ARDS), roztroušenou intravasculární _—ko-agulací . (-DIC-)..cukrovku·,--nes-tabllní- anginu pek-toris,—· .-.--.....--.. hemolytický uremický syndrom, syndrom fragmentace červených krvinek, tepelnou mrtvici, zadržený ploď, eklampsii, 'malignantní hypertenzi, spáleniny, poškození rozdrcením,
...fraktury,, .trauma produkující .Šok,...velkou.chirurgii,., sep- ........ .
si, bakteriální·,, parasitické, virové a riketsiální in- ., .
””' fékcé:·,' které 'promotují7ákťiv'aci7koaguTafiníhňTsystámu,’.'/ ~ trauma centrálního nervového systému a během .a bezpro--s-tře dn ě —p Or-j -ak-é-k-ol-i-v-v e -1-ké—e h-i-r urg-i-i-.—Př e d p ok-l-á dá—s er-,—že-—.--. léčení. patologických .hydrof obnich::: interakcí.,v .krvi:·;, ke . “kterému dojde. :za. těchto, podmínek, výrazně:, re.dukuj.e. :mi’kr o-. · vaskulární a jiné' komplikace:·, které jsou běžně pozorovány. .
Povrchově aktivní kopolymer je také účinný při zvýšení kolaterální cirkulace do nepoškozených tkání s ohroženým..dodáváním, krve.Tak.o vé, tkáně., jsou často připojeny . ’ k plochám vaskulární okluze.. Mechanismem: se jeví být snižování patologických -hydrofobnich interakcí v malých
------k-revní-ch - cévách-. - Oběhové -st-avy-,--ve -kterých -jsou^povrcho-...... .......
vě aktivní kopolymery účinné zahrnují, ale nejsou na ně _ .. nm o . noro hná 1 n < ..+ nnm Knwi ...nero hnií lnY.omhnlii.. .1 n- ________ .
farkt myokardu, nestabilní angínu pektoris, přechodnýcerebrélní ischemický atak, občasné kulhání, plastickou a rekonstrukční chirurgii, balonovou angiopl.astii., periferólní vaskulární chirurgii a ortopedickou chirurgii, zejména· při použití turniketu. -12Povrchově aktivní kopolymer mé malý vliv na viskozitu normální krve? při smykových rychlostech v rozmezí od 2,3 s_1 (nízké) do 90 (vysoká). Nicméně výrazně redukuje abnormálně vysokou viskozitu' nalezenou u pooperativních pacientů a u pacientů-s určitými patologickými stavy. Tato pozorování vyvolávají dvě otázky: 1) co vyvolává zvýšenou viskozitu celé krve u těchto pacientů s _
2) jakým mechanismem působí povrchově aktivní kopolymer, který pouze málo působí na viskozitu krve zdravých osob, tak, že norm-lizuje patologická zvýšení viskosity?.
' Je obecně akceptováno, že hladiny hematokritu;, a plasmového fibrinogenu jsou hlavními determinantami viskozity celé krve.· Toto bylo potvrzeno u normálních jeď- i7’ notlivců a u mnoha pacientů se zánětlivými stavy. Nicídéně b,y tyto faktory neměly vysvětlovat pozorované změny. Ú '·” pacientů s chirurgicky provedeným kardiélním bypassem — -------------------koronární .ar-t.erie?-bylo nalezeao^l.e.,hematokrJX.kl.es.l. na----------i hkf.
- . průměr’ 23+4 % a fibrinogen klesl na 48+9 % během šesti ' Y .hodin po zákroku. Viskozita se- nesnížila podle očekávání, '.áť ale zvýšila z průměrných 23+2 na 38+4 centipoise? (při/ střihové rychlosti 2,3 s-1). Viskozity nad 100 byly zjištěny u některých pacientů. Abnormálně vysoká viskozita krve byla spojena s cirkulací polymerů rozpustného fibrinu, majících vysokou molekulovou hmotnost (Papadea C., a Hunΐΐ teir R., Effect of Rheothfíx copolymer on blood viscosity ' relateď to fibrin(ogen) concentratiorii, FASEB J2:A384 (1988)).
Hladiny rozpustného fibrinu stouply ze 19+5 ^ug/ml na 43+6, /ug/ml během chirurgického zákroku. Tyto studie?· využívají kolorimetrickou enzymatickou metodu pro rozpustný ' fibrin (Wiman B. a R&nby M., Detérmination of soluble fibrin in pi.asma by rapid and quantitative sp.ectrophoto-, metric assay”, Thromb.Haemost.55:189 (1986)), a postupy
--------- ··—Western-blott s 3D3-agarozovými· gely pro stanovení mole----------- —
-13kulové hmotnosti velkých proteinových polymerů (Connaghan DG, Francis CW, Lané? DA, a Mardeir VI. Specific Identification of fibrin polymers, fibrinogen degradation products, and crosslinked fibrin degradation products in plasma ___,_,__and_s.er-um-wi-th_new—sensÍ-ti-V-e_techniq-ue—Sloodi, .6 5:5-89__.__ (1985)).
Za nepřítomnosti specifických receptorů, buňky a molekuly v oběhu adherují vzájemně, jestliže adherence snižuje volnou energii nebo .povrchové napětí'mezi nimi'. Hodnocení, povrchového napětí různých složek krve může být provedeno měřením kontaktních úhlů.
červené krvinky,'lýsfocyty,.....destičky',' něůťrolily
m.ajíyšechny. ko.n t ak.tní;. úhly ..v; rozmezí.14^až::. 1 7:_s.t:upňůi·;...^. Proteiny periferní krve, jako je-albumin, ^makroglObulin a Hagemanův faktor mají kontaktní úhly v o něco nižším rozsahu 12-15. To znamená, že .tyto proteiny nemají’ adh.ejziyiníJ^en.e.r.g.i.i pr.o b.unky.Nao.p.ak;;fi.br.in.o.ge'nAmá kon='
Ψ ωΙλ .¼ A Q 1. Λ C )S Λ i4.' · & -i Κλί 1 N/aIa/ÍVisw r-uiiCx **f· O t-upil-Ut Q-l UXrJ/UQ.kUJ * * C Ď A CU Λ-C Li* · . r* i_ toho fibrinogen adheruje slabě k buňkám červených krvinek a jiným buňkám v oběhu za promotování tvorby sloupečků. Fibrin promotuje mnohem silnější adhezi než fibrinogen, protože má zvýšený kontaktní úhel a tendenci ke tvorbě polymerů s fibrinogenem. Rozpustný fibrin v cirkulaci produkuje zvýšenou adhezi, které vede k výrazně zvýšené viskozitě při nízkých smykových rychlostech.
Tato adheze také zahrnuje endotheliální stěny; krevních cév. Jestliže jsou adhezivní síly nedostatečné pro pomalý pohyb buněk, tyto produkují zvýšené tření. Toto je zvláště důležité ve velmi malých krevních cévách a kapilárách, jejichž průměry jsou rovny nebo- jsou menší než průměry sirkulujících buněk. Tření buněk klouzají+ cích těmito malými cévami je signifikantní. Povrchově aktivní kopolymer blokuje adhezi fibrinogenu a fibrinu k
-14hydrofobním povrchům buněk a endotheliélních buněk. Toto v
zabraňuje jejich adhezi a maže je, takže je značně redukována rezistence k toku. Toto může být měřeno pouze částečně měřeními viskozity.
Kdy. je určitá hladina fibrinogenu dostačující provyvolání problémů v oběhu je závislé na některých parametrech individuálního pacienta. Vysoké hematokrity a vysoké hladiny fibrinogenu jsou obecně považovány za primární znaky zvýšené viskozity. Nicméně zvýšené hladiny fibrinogenu jsou častěji spojeny se zvýšeným rozpustným fibrinem. v oběhu. Pečlivé studie demonstrovaly7, že fibrin je část©' . vznikající odezvou na nejtěžší změny. Normální hladina fibrinogenu je 200-400 /ug/ml. Bylo k stanoveno že u většiny pacientů budou hladiny fibrinogenu vyšší než asi 800 ^ug/ml vyvolávat vysokou viskozitu krve? při. nízkých střihových rychlostech uvedených.
_výše.._Normální-hlad-i-na -rozpus-tného f i-bri-nu--byla -uvó- ·+—— děna jako přibližně 9,2+1,9 (Wiman B. and R&nby M., ”Determination of soluble fibrin in plasma by s rapiď and quantitative spectrophotometric assay, Thromb.Heemo&t.
55i 189 (1986)). Použitím Wimanovy a Ranbyho metody, byla viskozita při nízkých smykových-' rychlostech nepřijatelně vysoká, vyšší než asi 15 /Ug/ml.Je nutno uvést, že rozpustné fibrinové průměrné molekulové druhy mají molekulovou hmotnost od asi 600000 do několika milionů.
Mnoho metod bylo použito pro demonstraci rozpustného fibrinu. Tyto zahrnují kryosrážení zejména kryofibrinogenp Heparin byl použit k zvýšené tvorbě sraženiny. Ethanol/a protamin také srážejí fibrin z plasmy. Moderní techniky demonstrovaly, že rozpustný fibrin v oběhu je obecně komplexován se solubilizačními činidly, těmi jsou nej č as tě j i f i br inogen ne bo degrad ační předukty fibřinu.
-15Des AA fibrin, ve kterém pouze fibrin peptiďových A skupin mohl být štěpen, má sklon tvořit relativně malé agregáty, obsahujíc! jednu molekulu fibrinu se dvěma fibrinogeny. Jestliže oba A a B peptidy byly štěpeny za vzniku AA3B fibrinu, pak jsbir~db_*ohěhii7^rodukovány“mnO'i= “7 hem větší agregáty. Produkty degradace? fibrinu mohou polymerovat s fibrinem za vzniku agregátů měnící se velikosti v závislosti na jednotlivém produktu, který je: — zahrnut-.----------: ------------ 7------: -------J - .....------_L--—;
Rozpustný fibrin v oběhu může významně zvyšovat viskozitu krve·, zejména při nízkých smykových rychlos........ .*tech.„Nicméně-v._,tah-Jté.to*.vl.as.tn.o.sti...ke..klinickým, si.tua^. . _ cím zůstává nejasný. Viskozita„príspívá primárně egrega„ ~je^'ěných ' krvinek“, .řtěrá je “ pouze“ jědhím”z“mhbha“ “ .·—— faktorů, které determinují in vivo cirkulaci. Jiné —-f-ak-tory-ov-l-i-vnované—roz-pus-t-n-ým—f-i-br-i-nem-js-ou-end-othe--— lilélní.. buňky., bílé, krvinky., a destičky. Rozpustný fib- . rin je- chemotaktický pro. endothělTálňí^bunkyj “dychtivě *k nim adheruje a působí jejich desorganizaci. iié také ——st-r.mul-ační“~úč'i-nky-*n-a'—bíié-kTV-i-nk-y-y— ze jména-m-akro-fágy'.—- -Některé z vlivů rozpustného fibrinu mohou být zprostředkovány.· „ specifickými receptory ne různých typech buněk. Nicméně, — protože volná·, energie, měřeno kontaktními úhly rozDUstného fibrinu,.je menší než u jakýchkoliv?jiných plasmových proteinů, adheruje dychtivě nespecifickými hydro- ,
------------f0-bní-nii--i-nter8kcemi—ke-vl:-as-tně-VŠ:em-vy-t-Vo-řeným--e-l-ementům---------v krvi.
Cirkulující rozpustný fibrin je normálně čištěn makrofégovými a fibrinolytickými mechanismy aniž by docházelo k poškození. Avšak'jestliže je produkce rozpustného fibrinu příliš vysoká nebo jestliže byl mechanismus ciearence ohrožen nebo jsou-li přít-omny--komplikující chorobné faktory, potom rozpustný fibrin může· vyvolávat škodlivé reakce.'
-16Rozpustný fibrin je produkován v poškozených nebo zanícených tkáních. V důsledku toho jsou jeho účinky nejvíce zřetelné v těchto tkáních, kde potahuje endotheliélní buňky a cirkulující krevní buňky způsobem, který výrazně redukuje perfuzi. Největší účinky jsou v malých krevních cévách, kde fibrinový potah endotheliálních buněk a bílých krvinek produkuje výrazné zvýšení tření při pohybu bílých krvinek, malými cévami.. Tření se jeví být nejobtížnějším problémem- bílých a červených krvinek, protože jsou větší a mnohem tužší.
Jestliže je produkce rozpustného, fibrinu dostačující, potom jsou účinky zaznamenány v jiných plochách. Nejlepší studií je-· syndrom respiračního stresu u dospělých, kde rozpustný fibrin produkovaný v plochách, poškozené tkáně produkuje mikrotromby a jiné procesy v plících,’ které mohou vyvolat pulmonérní selhání. Avšak menší stupně vaskulárního ohrožení může být demonstrován v mnoha jiných orgánech.
•J.
Rozpustný fibrin, buď samotný nebo v komplexu s fibrinogenem a jinými materiály, je nyní rozpoznáván jako hlavní přispěvatel, k patogenezi různých vaskulárních chorob od koronární trombózy přes trauma, spáleniny, reperfuzní poškození po transplantaci nebo jakémkoliv jiném stavu, kde byla lokalizována nebo generalizována aktivace koagulace. Studie z poslední doby demonstrují, že . téměř všichni pacienti s akutním infarktem myokardu nebo nestabilní anginou pektoris mají výrazně zvýšené hladiny rozpustného fibrinu ve svém oběhu.·
Příklad vlivů rozpustného fibrinu. byl ukázán ve studiích za použití psů. Normální pes byl podroben hysterektomii. Pak, když je zvíře ještě pod enestézí, se pečlivě obnaží - véna jugularis. externa* Alternativně můžer
-17být véna uzavřena mírným tlakem prstů na sedm minut.
Zkouší se skanovací elektronovou mikroskopií na adhezi fibrinu, červených krvinek a jiných vytvořených prvků.
3ylo zjištěno, že velmi málo buněk adherujě^k-ehó'othelu vén.; psů, kteří neprodělali hysterektomii nebo u nich nebyla stáze produkovaná sedmi minutovou okluzí. Podobně došlo pouze k malému zvýšení v adhezi červených
- ' k r v in ěk' k ě hďoťe Tu ~'j ug ulárn r vé-ηγ -. u -z v í ř aťkt e rá. by 1 a —. _. podrobena hysterektomii. Jestliže však zvířata měla hysterektomii navíc k mírné sedmiminutGvé okluzi vén, pak došlo k výraznému zvýšení v adhezi vytvořených prvků krve .
-endOtelióiním-povrchůiiE.v některých případech,za vzniku / klininky zjištěného, murálního·trombu. Jak červené krvinky .
tak fibrin byly viditelně aďherovány.k énďótéliěTňím~~ povrchům. Dále došlo k rozrušení normální stavby* *endotělu.. Všechna zvířata-m'ě'Ta_zvýšené~hladiny-roz-pus-t-né-ho--fibrinu. p.o chirurgickém zákroku. Tento; model’.demonstruje účinky .rozpustného fibrinu .produkovaného, relativně lokalizovanou chirurgií za vzniku výrazně zvýšeného rizika *hlub o k ě~ cé v ní“ť rom b*ozý~n a~ jíně ar*mí s t ě —------------ — —
Povrchově aktivní kopolymer se ujímá problémů fib,'rinu a fibrino-genu v krvi inhibici adheze- fibrinu., fibrinogenu, destiček, červených krvinek, a jiných detegovatelných prvků v krevním proudu. Blokuje tvorbu trombu napovrchu. Povrchově akťivh'í_'kopOiymer-nemé-v-li-v--na--v-i-s-ko— žitu vody nebo plasmy. Nicméně významně zvyšuje rychlost toku. vodý ”8” plasmy v malých segmentech cévkami··.- Přitom^ nost vzduchových mezivrstev; na konci sloupců nebo vzduchových bublinek, která poskytuje významné povrchové napětí produkuje tření podél.stěncévek. Povrchově aktivní kopolyraer redukuje toto povrchové napětí a tření a zlepšuje tok. Toto je příklad, kdy povrchově aktivní kopolymer· .. zlepšuje tok kapaliny tkáněmi vedením i když nemá vliv na viskozitu kapaliny podle obvyklého měření.
-18Povrchově aktivní kopolymer má jen malý vliv na viskozitu celé.krve normálních individuí. Mé malý vliv na zvýšení, které se objevuje s vysokým hematokritem. Avšak má vliv na velmi velké zvýšení viskozity při nízkých střihových rychlostech, které·, je považováno ze způsobené rozpustným fibrinem a fibrinogenovými polymery.
Studie posledních let demonstrují, že povrchově aktivní kopolymer má také schopnost, chránit myokardiální
irreverzibilní poškození jsou morfologicky intektní ale jsou neschopny přežít, jestliže se vrátí do normálního, prostředí. V minutách reperfuzep okysličenou krví, buňky obsahující takové skryté léze/vyví je jí pruhy botnání a kontrakce a umírají.
v
Irreverzibilně poškozené myokardiální buňky mají. mechanickou a osmotickou fragilitu a 'latentní aktivaci
lipázami, proteázami a jinými enzymy, fíeperfuze iniciuje sérii událostí, zahrnujících zatížení vápníkem, botnání buněk,rupturu mechanických membrán a tvorbu volných kyslíkových radikálů, které rychle rozrušují buňky. Povrchově aktivní kopolymer zpomaluje takové poškození na modelu izolovaného perfundovaného krysího srdce. Mechanismus pravděpodobně zahrnuje osmotickou stabilizaci a zvýšení mechaniské rezistence způsobem podobným ke způsobu známému pro červené krvinky.
Ochranné účinky povrchově aktivního kopolymeru na myokard nejsou omezeny na myokardiální buňky·. Chrání také endotheliální buňky mikrovaskuletury\podle morfo 1ogi c kéh o h ó dnoc e ní. Ud r ž ování m int egr i ty takových'bun ěk a napomáháním obnovení ® udržování needhA7.i,vních· novrchů. I má povrchově aktivní kopolymer sklon redukovat adhezi
-19makromolekul a buněk v mikrovaskulatuře, snižovat koronární vaskulární rezistenci a zpomalovat vývoj netokového fenoménu.
Pří řladýnšťavů7~kd’e~může~ bý t-použit-p ovrch ově-aktivní kopolymer jS;ou léčba chorob srpkovitých erytrocytů a ochrana orgánů pro transplantaci. V obou těchto případech se průtok krve snižuje? z důvodů patologických
--------hydr-ofobních-in-terakcí..—.......... _________’____________________
Během krize srpkovitých buněk agregují srpkovité červené krvinky z důvodu abnormálního tvaru buněk. V mnoha případech zde jsou.:.vysoké koncentrace' rozpustného fib- ... řinu způsobené roztroušenou in.travaskulární koagulací.
‘Toto vedek patologickým' hydrofobnínr inťerakcím-mezi*- --···-'krevními buňkami, buňkami obkládajícími krevní cévy a
-^p-ozpus-tným^f-i.br-inem-a-fibr-inog.enem’._Př.-i_p.o.dání_p.o_vr_c.h.o_yěl_J_ aktivního -.kopolymeru .pacientovi,se. zvýší krevní tok a ohroŽOhíTtkáně. se.:...tak; sní;žíT“Po_vř“chOvě^aktTvní~kopOÍy^--mer může být podán před krizí srpkovitých’buněk pro1'z'a—-——bránění —t ak-ové—k-riz i-.- Naví c- může™r.o.z.t-ok_s_úč i nným_.mn.ož-_„„ stvím povrchově aktivního kopolymeru také obsahovat, účinné množství antiko agulan tu.
V orgánech, které byly vyňaty z dárce pro transplantaci je tkán poškozena díky.ischemii a ztrátě.krve. Vý--------hodně—je—povrchově--ak-ti-vní- -kopolymer-smí sen -s.-p.e.r-f-uzním ------mediem. Perfuzní media, která mohou být použita s povrchově aktivním ..konolvmerem. isou ..dobře známá odborníkům. Perfuzním
....... i* v ~ ; ·' · ™· mediem může být také celá krev nebo plasma. Roztok může být perfundován orgánem, čímž se snižuje poškození tkáně. Protože poškozeni tkáně je sní ženo.perfuzí orgánu roztokem povrchově aktivního kopolymeru, prodlužuje se doba ž-iv-o-ta· orgánu -a -tím -doby, -kdy orgán může být trans pian-20tován.
Protože povrchově aktivní kopolymer zlepšuje tok krve chorobnou nebo poškozenou tkání s minimálním vlivem na průtok krve normální tkání, předpokládá se?, Že povrchově aktivní kopolymer zahrnuje óoruěení léčiv do poškozené tkáně, a tato metoda zahrnuje stupen podání zvířeti nebo člověku, roztoku, obsahujícího účinné množství léčiva a účinné množství povrchově aktivního kopolymerů·. '
Jakékoliv léčivp, které je aktivní v chorobné nebo poškozené tkáni, je vhodné pro použití s povrchově aktivním kopolymerem. Tato léčiva zahrnují:
1. antimikrobiální léčiva <
antibiotika · i íS antifungální léčiva i i* antivirová léčiva antiparazitická léčiva
2. antifungální léčiva, . i ' ®
3. chemoterapeutická léčiva,pro léčbu rakoviny a něk-* ·*’&
těrých nemocí, ...
4. léčiva, které jsou pohlcovači volných radikálů, včetně těch léčiv;, která zabraňují produkci volných radikálů,
5. fibrinolytická léčiva,
6. perfuzní media,
7. pro.tizánětlivá léčiva, včetně, ale bez omezení na ně, jak steroidní tak nesteroidní protizánětlivá léčiva,
8. membránové stabilizátory jako je dilantirr,
9. antikoagulanty,
Í0. ionotropní léčiva jako jsou blokátory vápníkových kanálků,
11.. modulátory1 autonomního nervového .systému.
Kopolymery polyoxypropylen/polyoxyethylen, jako přísady;
Jiné kopolymery polyoxypropylen/polyoxyethylerc jsou také vhodné jako přísada avákcinaVkterá obsahuje1 an-21 tigen a zlepšující přísadu. V jednom provedení se antigen smísí s účinným množstvím povrchově aktivního kopolymeru', majícího následující obecný vzorec:
H0(c2H40)b<c3a60)a(c2H4O)hH kde molekulová hmotnost hydrofobu (CjH^O) je mezi asi _4500_ až 5500 daltony a procenta hydrofilu (C2H4O) je mezi přibližně 5 % a 15 % hmotn..
Zlepšená vakcina také obsahuje antigen a přísadu, kde přísad,® obsahuje povrchově, aktivní, kopolymer následujícího obecného vzorce
HO(C2ff40)b>(03H60)a(C2H4 0)bH kde., molekulová hmotnost hydrofobu- (CjHgO) je mezi: při.b>..
11žně. 3000~až-55 0r~ďartoňů a proc.enta^hydrofil'u“CC2H4O jsou mezi přibližně 5- % a 15 % hmotnosti, který je foír——mu-l-ován“j-akoemulze-vod-a-v~ oleý-1-.—Kopolymery—obvy-kle-——— destabilizují běžně používané emulze voda v oleji, ale? s překvapením: zvyšují jejich; účinnost a zvyšují stabilitu, jestliže jsou vynechána. o-bvyklá..emulgační. činidla........ _
Zlepšená vakcina také obsahuje antigen a přísadu, kde
------------pří-sada-zOhrnúje-pov-rchově-ak-t-i-vní -kopo-l-ymer-nás ledují-.......
čího obecného vzorce
HO(C2H4O)b(C3H6O)a(C2H4O)bH kde molekulová hmotnost hydrofobu (C^HgO) je mezi přib.ližně 3-QQQ až 55.00 daltony a procenta hyórofilu (C^H^Q) jsou mezi asi 5 % a 15 % hmotnostními a lipopolysachari-22dový (LPS) derivát. Přísada, obsahující kombinaci LPS a povrchově aktivního kopolymerů poskytuje synergii účinků vyjádřenou pikem titru, dobou pro dosažení píku titru a délkou doby odezvy. Dále kombinace mé sklon: zvyšovat ochranné IgG2 isotypy.
Přísady také zahrnují oktablckov.ý kopolymer (polc.xamin) následujícího obecného vzorce:
(C2E4°^ (03I%0)b í02H40)a(°3H60)b
ÍC3H6O)bÍC2H4O)a kde molekulová hmotnost, hydrofobní části oktablokového kopolymeru, obsahující tC-jRgO) je mezi přibližně 5000 ,r a 7000 dal.tonů, a je číslo takové, že hydrofilní Část představovaná tvoří mezi přibližně 10 % a 40 % celkov.é molekulové hmotnosti sloučeniny, b je takové číslo, že (C^H-gO) podíl oktablokového kopolymeru tvoří mezi přibližně 60 % a 90 % sloučeniny a lipopolysacharidového derivátu.
(CjHg-O) podíl, kopolymerů může tvořit až 95 % sloučeniny. (C^H^O) podíl kopolymerů může tvořit až pouze 5 % sloučeniny.
Kombinace lipid-konjugovsného kopolymerů s kopolymerom a i činidlem n ©lrr\ í© _
---- -----------------------____ v ~--u *--~ ~ j — lipid A, indukuje produkci silné IgG odezvy, ve které
-23jsou přítomny všechny podtřídy IgG. IgG2 a IgG3 podtřídy jsou chránící proti pneumokokálním infekcím jako predominantní skupiny. Toto je neočekávané zjištění, protože v. imunogenním přípravku není žádný protein nebo peptid'.. - Předpokládá- se, že peptidové skupiny jsou pod*statné pro stimulaci T buněk, které jsou požadovány pro produkci těchto isotypů. Další autoři uvádějí, že polysacharid.y jsou neschopné stimulace T buněk. Nicméně j-é·' k-omjin-aee ^Ό·ρό1γ®β-Γ·νκ,:-1-Ι-ρί·5-^όη'·3ύ^·ον·'θβ£7ιο· p?ol'ysáčh-e-'ridu a imunomodulačního. činidla je schopna produkovat . takovou odezvu. -íktivita přísad poloxamerů e poloxaminů je detailně popsána v související US patentové při''hlášce^ č. 07/544831, která' je zde 'zahrnuta 'jako odkaze :——
Kopolymery polyoxypropylen/polyoxyethylen jako protiinfekční činidla
Jiná skupina kopolymerů polyoxypropylen/polyoxy-- . ethylen inhibuje růst bakterií a virů. Například tyto; povrchově aktivní kopolymery inhibují HIV viry, rody >ý^b‘sč^eHá ^Tbx3pl^sma~g6KďTil ” ~~
Povrchově aktivní kopolymery jsou účinné při ošetření virových infekcí’u lidí'nebo zvířat,. které zahrnují infekce způsobené HIV virem nebo odvozenými kmeny. Předložený vynález poskytuje přípravek, který může být podáván pacientům, kteří jsou infikováni HIV viry nebo podobnými viry. Povrchově aktivní kopolymer je. účinný při ’inhibici’’nebĎ~potIaČenÍreplikace HIV viru a odvozených virových kmenů v . buňkách.
Povrchově aktivní kopolymery jsou vhodné pro léčení infekcí způsobených mikroorganismy, použijí-li se samotné nebo s‘obvyklým antibiotikem. Některá běžná antibiotika, která.mohou být použita s povrchově aktivním kopolymerem
-24zahrnují, ale nejsou na ně omezena, íifampin, isoni-aziď, ethambútol, gentaraicin, tetracyklin a erythromycin.
Povrchově aktivní kopolymer mé následující obecný vzorec: * ' kde n je celé Číslo takové, že· hydrofob představovaný (C.jHgG) mé molekulovou hmotnost asi 1200 až 5300 daltonú, výhodně asi 1750 až 45C0 daltonů s b je celé óís,lo takové, že hydrofilní podíl představovaný (C^H^O) tvoří přibližně 10 % až 50 % hmotnosti sloučeniny.
Antiinfekční aktivita poloxamerů je detailně popsána v související US patentové přihlášce č. 07/760808, která je zde zahrnuta jako odkaz.
Kopolymery polyoxypropylen/polyoxyethylen? jako růstové , stimulátory a imunitní stimulátory.
Některé kopolymery polyoxyprop.ylen/polyoxyethylen jsou schopny ovlivňovat biologické systémy několika různými způsoby. Biologicky aktivní kopolymery jsou schopny stimulovat růst organismu, stimulovat motorickou aktivitu organismu, stimulovat produkci T-buněk v thymu-, periferní lymfoidní tkáni a buňkách kostní dřeně u zvířat a stimulovat imunitní odezvy u drůbeže?.
Biologicky aktivní kopolymery mají také velmi různé účinky na individuální buňky. Tyto sloučeniny mají ionoforní aktivitu, tj. vyvolávají transport určitých iontů membránami buněk.. Sloučeniny mohou působit degranulaci. necytolytických mastoidních buněk s následujícím uvolně.ΰίϊδ his í «urinu» Dálě uyiú Zjiaíěňú, že .někÍeři čieňúvé této třídy biologicky aktivních kopolymerů jsou schopny specificky úšmrcovát některé “rakovinové buněčné linie.
-25Některé biologicky aktivní kopolymery mohou být podávány orálně zvířatům pro stimulaci růstu zvířat chovaných pro potravu, jako jsou kuřata a prasata. Tyto a jiné.biologické aktivity jsou diskutovány detailně v související US patentové přihlášce- č, 07/107358 a 07/610417, - ' které jsou zde zahrnuty jako odkaz.
Struktura kopolymeru polyoxypropylen/polyoxyethylen
Sloky povrchově aktivního kopolymeru jsou vytvořeny kondenzaci ethylenoxidu- a propylenoxidu při zvýšené teplotě a tlaku za přítomností bázickeho katalyzátoru. Ni c mé ně ' zde- _ex i s tu j e“s t et ls t i cká?- v ar dač e-? v poč t u-m ono^ měrových jednotek, které se spojujcí za.vzniku, polymerového řetězce^1 v každém kopolymeru. Molekulové hmotnosti , které jsou udávány jsou aproximacemi průměrné molekulové hmotnosti molekuly . kopolymeru: v každém? přípravku... Podrobnější, diskusi o přípravě těchto sloučenin ne možno, nalézt v US, Deten.tu .č.. .26 7461 9. který ne zde zahrnut jako odkaz.. Obecnější diskuse struktury poloxamerú a poloxaminových blokových kopolymerů může být nalezena v práci Schmolka I.R., A Review of Block ?olymer Surfactants, J.Am.Oil Chemists*Soc., 54:110-116 (1977), která je zdě zahrnuta jako odkaz.
Bylo stanoveno, Že komerčně dostupné přípravky kopolymerů polyoxy.propylen/poíyoxyethylen. se široce mění pokud jde o velikost a konfiguraci vytvořených molekul* Například, přípravek poioxamern88, který je dostupný od BASŽ (Pársipany, N.J.) má publikovanou strukturu molekulové hmotnosti hydrofobu (C^H^O) přibližně 1750 daltonů a telkovou molekulovou hmotnost sloučeniny přibližně 8400 daltonů.
V-e skutečnosti je sloučenina složena z molekul v rozmezí molekulové hmotnosti menší než 3000 daltonů až naď 200’QÓ daltonů* Molekulová rozdílnost, a distribuce molekul v kom.erním poloxameru 188 je ilustrována Širokými primárními
-26a sekundárními píky detegovanými za použití gelové permeační chromatografie.
Dále Široká variace? ve velikosti polymeru v přípravcích poloxameru, které jsou dostupné, byla dále tím, že tyto frakce obsahují signifikantní množství nenasycení. Předpokládá se, že toto nenasycení v molekule? polymeru je odpovědné, alespoň z části, za toxicitu a různé biologické aktivity dostupných poloxsměrových přípravků.
,j,akto velká rozdílnost molekul, které jsou přítomny v obchodně dostupných kopolymerech polyoxypropylen/polyoxyethylen, činí obtížnou předpověď biologické aktivity. Dále, jak je ukázáno na přípravcích poloxameru 188, přítomnost jiných druhů molekul v přípravku může? vést k nežádoucím biologickým aktivitám.
Povrchově aktivní kopolymer poloxamer 188 byl použit jako emulgátor pro artificiální krevní přípravky, obsahující perfluorované uhlovodíky. Bylo zjištěno, žer. pacienti, kteří dostali artificiální krevní přípravky vykazovali toxické reakce. Toxické reakce zahrnují aktivaci komplementu (Vercellotte. G.M., a spol., Activation of Plasma Complement by Perfluorcarbon Artificial Blood: Probable Mechanism of Adverse Pulmonary ^eactions: in Tpeated Patiěnts. and Pationale for Conticosteroiď Prophylaxis“, Slood , vol.59, str. 1299-1304 (1982).), paralýzu migrace fagocytú (Lané T.A., a spol., Paralysis of phagocyte migratiorr. due to an artificial blood substitute“, Blood, vol.64, str.400-405 (1984) a cytotoxicitu k lidským a zvířecím buňkám ve tkáňové kultuře (Dane T. A. a spol., Reductión in the toxicity of component of an artificial blooď substitute by supercritical fluiď fractionation, Transfusion, vol.28,str.375-378 (1987)). Použití
-2Ίsuperkritické kapalinové frakcionaee- pro snížení toxicity kopolymerů poskytuje pouze částečné zlepšení (Lané T. A. a spol., Reóuction in the toxicity of component»*of an artificial blooď substitute by supercritical fluid frac-t i-o n-a-t-i-on-, —T-r-an sf-us i on-,—v-01.28,si r-..375^_3-76_( 1.987)). Dá 1 g v toxikologických studiích na psech beagle, infuze' poloxameru 188 vedla ke zvýšení enzymů v; jétřech , (SGOT) a zvýšené hmotnosti orgánů (ledviny). Histologické hoďnocení ledvin demonstruje dávku odpovídající cytoplasmové vakuolaci proximáíních tubulárních epithelíálních· buněk'.
Enorraí variace se mohou objevovat v biologické aktivitě, jestliže.se provedou jen velmi malé změny v délce? řetězce .v poloxamerových kopolymerečh, 'jak ilustruje práce' -Huntera a spol..-, The ,.Ad.j.uv-an.t...Ac.ti.vi.-ty. „o.fíNo.nionic;. Block..^ Polymer Suřfactants, III, Characterization of Selected Bjologically Active Surfac es”,; Sc anď. J. Immuno1., V o 1.2 3, str.28-300 (1986)). Autoři uvádějí, že rozdíly 10 % v délce -ř et-ěz-e e —pc-l-yo-x-y e-t hy-l-en o-v-ý-c h^-č é s-t í—pol ox.am erjo.v.é.h ο_ρ_ο.1 ymeru_ mohou-způsobit rozdíl mezi vynikající aktivitou přísady.
^.„celkově žádnou, akt i vitou přísady. Po 1 o x amer 121 má molekulovou hmotnost přibližně 4400 daltonů a obsahuje přibližně 10 % hmotn. polyoxyethylenu. Poloxamer 122 má molekulovou hmotnost přibližně 5000 daltonů a Činí- přibližně 20 % hmotnosti polyoxyethylenu. Množství póly— oxypr.opylenu v každé molekule je přibližně stejné. Jak ..je uvedeno. .v.p.rá.c.i...Huntera a. spol_., jes tli že se_ppuži je poloxamer 121 jako přísada s? hayězím sérovým albuminem., .byly.„titr.y_,protilátky 67,814+5916. Je_stliže se použije poloxameir 122 jako . adjuv.ans s hovězím sérovým albuminem za stejných podmínek, byl titr protilátky vůči BSA 184+45. Kontrolní titr bez jakéhokoliv? anjuvans byl 100. Relativně malé změny v délce řetězce? poloxameru? mohou vést
t.ak. k enormním změnám biologické aktivity.
-28Protože o komerčně dostupných zdrojích kopolymerů polyoxypropylen/polyoxyethyleai bylo uvedeno, že vykazují toxicitu jakož i variace v biologické aktivitě, co je nezbytné, je příprava kopolymerů polyoxypropylen/polyoxyv ethylen, které si udržují terapeutické aktivity, komerčních přípravků, ale jsou prosty jejich jiných biologie.·—ϋ- kých aktivit jako je toxicita. Dále co je nezbytné, je příprava kopolymerů polyoxypropylen/polyoxyethylěň, které 'mají menší polydisperzitu v molekulové hmotnosti a obs. ahují méně nenasycení a'jsou proto účinnější.
Podstata vynálezu
Předložený vynález poskytuje nové přípravky kopolymerů polyoxypropyíen/polyoxyethylen, které si udržují terapeutickou aktivitu komerčních přípravků, ale jsou prosty nežádoucích účinků, které jsou spojeny s přípravky podle známého stavu techniky. Protože, kopolymery polyoxypropylen/polyoxyethylen, které zahrnuje předložený vynález,,, jsou méně polydisperzní populace molekul než kopolymery ... polyoxypropyíen/polyoxyethylen podle známého stavu techniky, biologická aktivita kopolymerů je lépe definována a snadněji predpověditelná. Navíc jsou kopolymery polyoxypropylen/polyoxyethylen, které zahrnuje předložený vynález, v podstatě prosté, nenasycení.
Předložený vynález, zahrnuje také kopolymer polyoxypropylen/polyoxyethylen, která má následující vzorec HO(C2H40)b,(C3H60)a(C2H40)bH' kde molekulová hmotnost hydrofobu (C^HgO) je přibližně 1750 daltonň a celková hmotnost sloučeniny je přibližně 8400 daltonů. Sloučenina má hodnotu polyóisperzity menší než 'přibližně 1,05.
-29Sylo stanoveno, že toxicita vykazované komerčně dostupným povrchově aktivním kopolymerem poloxamerem 188 je primárně způsobena malými množstvími molekul o vysoké a nízké molekulové hmotnosti, které jsou přítomny jako následek, zpracovacího procesu. - Molekuly o. vysoké molekulové hmotnosti (větší než 15000 daltonů) jsou pravděpodobně zodpovědné za aktivaci systému koraplementu. Molekuly o nízké molekulové hmotnosti (nižší než 5000 daltonů) mejí-f y ziká lni- v.l-astnOst-í-.poďo-bné-de. t-er gent ům-,_- · k7t er é- — mohou být toxické pro bunk.y v kultuře. Dále molekuly snízkou molekulovou hmotností mají nenasycené polymery přítomné v populaci.
Optimální rheologické molekuly poloxameru 188 jsou- přibližně 8400 až“'94Ó0''ďaltbnůr~3ylo ’ťakéstahového,' že molekuly poloxameru 188 nad 15000 a poď. 5000 daltonů “jsou-méně: účinnými’: rheolOgi-ekými— č-i-n-i-d-l-y—a-v-y-k-azu-j-í—neoče-— kávané vedle jší . účinky.... Přípravek,. obsahující molekuly mezi.. 5000 a 15000'dal tony je účinnějším· Theologickým činidlem.
Předložený vynález také zahrnuje způsob přípravy blokových'kopolymerů polyoxypropylen/polyoxyethylen s hodnotou p oiy d i sper z-i-ty- menší než-1,05 · Zpús ob_pří pr avy netoxického- povrchově aktivního kopolymerů zahrnuje nejprve kondenzaci propylenoxidu se základní sloučeninou·, obsahující ‘mnoho 'reaktivních atomů’ vodíku- za-vzn-ik-u -po-l-y-ox-ypropylenovéh.o polymeru a pak kondenzaci ethylenox.idu s „_.h1 w* - ---následujícího:
polyoxypropyieňovým: polymerem.· z a vzniku lymeru pólyoxypiropylen/polyoxyethylen, obecného vzorce ·*
-30«I ,ť _τ •Μ··» •►σ·..
- HO(C2H4O)b(O3H6O)a(C2H4O)bH kde hodnota polydisperzity kopolymeru je menší než 1,05, se zlepšeným čištěním: polyoxypropylenctvého polymeru pro odstranění jakýchkoliv přítomných polymerů před kondenzací sethylenoxidem. Čištění polyoxypropylenůvého polymeru může být provedeno gelovou permeační chiromatografií.
V souladu s tím je objektem předloženého vynálezu poskytnutí, povrchově aktivního kopolymeru s vyšším, podílem terapeuticky aktivních molekul při'odstranění . Λ molekul zodpovědných za toxické účinky.
Dalším objektem předloženého vynálezu je poskytnutí homogennějšího kopolymeru polyoxypropylera/polyoxyethylen vzhledem, k. rozsahu molekulové hmotnosti.
Dalším objektem předloženého vynálezu je posk.yt-. nutí přípravku blokového kopolymeru polyox.yethyleu/poly- . óxypropylen’s hodnotou polydisperzity menší než 1,05.
Dalším objektem předloženého vynálezu je poskytnutí přípravku blokového kopolymeru polyoxyethylen/polyoxypropylen v podstatě se žádným·nenasycením.
Dalším objektem předloženého vynálezu je ..poskytnutí povrchově aktivního kopolymeru s terapeutickou aktivitou poloxameru 188, který nebude aktivovat komplement.
Ještě dalším objektem předloženého vynálezu je poskytnutí čištěného poloxameru 188, který může být použit bezpečně jak u lidí tak zvířat při ošetření tkáně, která byla poškozena ischemií.
-31Ještě dalším objektem předloženého vynálezu je poskytnutí povrchově aktivního kopolymerů, který může být bezpečně použit jak u lidí tak u zvířat při ošetření t ká ně,.k te ráb.yl a _p o š k o z en a-r-ep e r f uzí-»-------------—
Ještě dalším: objektem předloženého vynálezu je poskytnutí povrchově aktivního kopolymerů, který může být bezpečně použit jak u lidí_[tek jvfrat jako„vakcinoyé__ad ju-_____ vans.
tí
Dalším objektem- předloženého povrchově aktivního kopolymerů vynálezu je poskytnus terapeutickou aktivitou poloxameru 188, který je necytotoxický.
Ještě dalším objektem předloženého vynálezu je poskytnuti povrchově aktivního kopolymerů. který může být_ bezpečně použit jak u lidí tak u zvířat při ošetření mrtvice.___________
Ještě -dalším objektem předloženého y.ynálezu_j;e_p.os kytnutí povrchově aktivního kopolymerů, který má menší renélní aktivitu a aktivitu méně podobnou detergentu.
Ještě dalším objektem předloženého vynálezu je poskytnutí povrchově aktivního kopolymerů, který může být bezpečně použit jak uklidí tak u zvířat jako .an ti mikrobiální činidlo.
Ještě dalším objektem předloženého vynálezu je poskytnutí povrchově aktivního kopolymerů, který může být bezpečně použit jak u lidí tak u.zvířat jako antibakteriální, antivirové, antifungální a antiprotozoální činidlo.
-32 · I- - 1 1 . Ještě dalším objektem předloženého vynálezu je poskytnutí povrchově aktivního kopolymerů, který může být bezpečně použit jak u lidí tak u zvířat při léčbě poško, zení myokardu.
___úeštg dalším objektem předloženého—vynález-U—je—pos---— kytnutí povrchově aktivního kopolymerů, který’ může být použit jak. u lidí tak u zvířat při léčeni syndromu respiračního steru u dospělých.
lyto a další objekty, rysy a výhody předloženého vynálezu budou zřejmé z následujícího detailního popisu jednotlivých provedení a z připojených patentových nároků.
Popis obrázků na připojených výkresech
Obr.1 představuje poloxamerovou mřížku uvedených poloxa. . . měrových sloučenin.
•i
Obr.2 je chromat.ogram obchodně dostupného poloxameru 188 podrobeného gelové permeační chromatografií.
Obr.3 je chromatogram frakce 1 poloxameru 188 odebrané z chromatografie popsané v příkladu 1.
Obr.4. je chromatogram frakce 2 poloxameru 188 odehrané z chromatografie popsané v příkladu 1.
Obr.5 je chromatogram frakce 3 poloxameru 188 odebrané z chromatografie popsané v příkladu 1.
Obr.6 je chromatogram frakce 4 poloxameru 188 odebrané z chromatografie popsané v příkladu 1 . ___
-3>
-Gbr.—7—j-e-chrom-atogram-frak-ce-5-poloxameru—188 -odebrané--z chromatografie popsané v příkladu 1.
Obr.8 je chromatogrsm frakce 6 poloxameru 188 odebrané _________________z jchromatograf ie. popsané v příkladu J .____________
Obr. 9A až 9C jsou gelové permeační chromatogramy nefrakcionovaného a frakcionovaného poloxameru 760,5.
Obr.» 10A až. 10C jsou: spektra, nukleární, .magnetické rezo--· ----- · nance frakcí ..představovaných-obr.; 9A-až -9C. · — Obr. 11 A až 1 1C jsou gelové permeační chromátogramý tři__ frakcí poloxameru: 188.
Obr» 12A až 12C jsou'gelové’’ permeační chromátogramy ne?__:_____________ . frakcionovaného a frakcjonpvanéh^_p^lpxgmeru_3.3j^_
I když přípravky blokových kopolymerů polyoxypropylen/polyoxyěthylen podle známého stavu techniky mohou být vhodné pro průmyslové použití, bylo zjištěno, že nově
.. .. -......-.......objevené, .použi-tí.-kopolymerů. j.ako. ..terapeutických, činidel.
vyžadují méně polydisperzní populaci molekul v příprav, cích. ... ........ ...
Předložený, vynález zahrnuje: kopolymery polyoxypropylen/polyoxyethylen, které mají polydisperzní hodnotu menší než 1,05. Nové kopolymery mohou být připraveny odstraněním nesourodých molekul ze známých přípravků neb.q přípravou kopolymeru způsobem, který tvoří součást předloženého vynálezu. Způsobem přípravy kopolymerů podle předloženého vynálezu je čištění polyoxypropylenového bloku
-3γkopolymeru polyoxypropylen/polyoxyethylen přeď přidáním polyoxyethylenových bloků k molekule. Tímto způsohem se částečně polymerované polyoxypropylenové polymery odstraní před přidáním polyoxyethylenových polymerů k molekule. Toto poskytne blokový kopolymer, mající fyzikální parametry, které jsou v souladu s předloženým vynálezem.
Předložený vynález také zahrnuje blokový kopolymer; polyoxypropylen/polyoxyethylen, který má následující ., vzorec ;· , ι. - L·.· .
kde molekulová hmotnost polyoxypropylenové části kopplymeru je mezi přibližně 900 a 15000 daltony.s prefero- · .7.' vanější molekulovou hmotností mezi 1200 a 6500 daltonů 'ti a molekulovou hmotností polyoxyethylenové části kopoly- j meru tvořící; mě žit pří bližně;’ 5 % a 95- % kopolymeru s vyhodnějším rozmezím mezi 10 % a 90 % kopolymeru a hodnota, polydisperzity je menší než přibližně 1,07. '
Předložený vynález také zahrnuje; blokový kopolymer j polyoxypropylen/polyoxyethylen, který má následující \ vzorec ’
HO(C2H4O) b(03V’e (W>h,H kde molekulová hmotnost hydrofobu (C^H^O) je přibližně 1750 daltonů a průměrná hmotnost sloučeniny je přibližně 8300 až 9400 daltonů. Sloučenina má distribuci molekulové hmotnosti v rozmezí přibližně 5000 až 15000 daltonů s výhodným rozmezím molekulové hmotnosti mezi přibližně 7o0o až 12000 daltony. Dále, kopolymer v podstatě
-35*neobsahuje žádné nenasycení jak bylo zjištěno měřením nukleární magnetické rezonance.
Nomenklatura poloxamerových sloučenin je založena řraT^porox-amerové-mřfžce-('O'brr1-)“PolOxamerová-mř-í-žk-a—je-----vztah mezí nomenklaturou a složením různých polymerových členů. Hydrofob; (pclyoxypropylen.) má molekulové hmotnosti udávané jako přibližné střední hodnoty rozmezí. První
......-č-vě-číslice..pol-ox.amerjové.ho._čí.sl..a. n_a mřížce násobené 100______ udávají přibližnou molekulovou hmotnost hydrofobu. Poslední číslo násobeno 10 udává přibližná hmotnostní procenta hydrofÍlavého (polyoxyethylen) obsahu- povrchově aktivní látky > (Henr.y R.L.,, .a . spol., Burn Wound.,.Coveringa.’ and the’ ’Jse of:Poloxamer Preparations, Critical. Reviews
------in‘ Siocompatibrlřty (vvo1uí:5','Č-.-3-,;-s tr.-’2O7--2-2O-.-01 989-)-)-»-------řfapříklaď poloxamer 407, uvedený v horním pravém kvadnantu _mřížky_(.o.br_._1_)_j.e_o.dv_o.zen_o_d::_hydrofobu s molekulovou_______ hmotností.. 4000. s, hydrofilem,' tvořícím .70 % celkové mo~ΐΈ^±Όνέ^Ηπο1ηΌ5ΐχ--±ορο±γ&θΓαν-·-ύ-ΐ^&--ρ^4£'Ρ8άβ[ΐι—je-po-lo-xa-— meir’760., 5, který* má -hydrofob s molekulovou^hmotností*. ~ ____7.6.0.0_d:alt:onů_^„mé.^y-ů.r.of.il.,_kt^rý_iXfiř.í_.5„%_j3_eJkoyé_;______ hmotnosti kopolymeru.
Reprezentativní poloxamery, které jsou popsány v této patentové přihlášce spolu s jejich Pluronic- čísly . jsou uvedeny v tabulce I.
Tabulka I
Poloxamer č 188 331 760,5 10-0.0.,.5..
% POE
F68 LI 01
L1 80,5 L331 % 10 % 5 % .5 .%
-36. I když jsou molekulové hmotnostní průměry důležité a použitelné při obecné charakterizací polymerů, je důležité znát distribuci molekulové hmotnosti polymeru. Některé charakteristiky zpracování a konečného použití (tok taveniny, odolnost proti opakovanému ohýbání, pevnost v tahu. atd.) jsou často predpověditelné nebo pochopitelné ze' sledováni hodnot a/nebo změn, které se objevuji v průměrech, specifických molekulových hmotností. Tyto hodnoty mohou také být ve vztahu k biologickým vlastnostem kopolymerů polyoxypropylen/polyoxyethylen. Seznam charakteristik zpracování zahrnuje:
Průměry; mol. hmotnosti charakteristiky zpracování.'
Mz odolnost proti opakovanému ohýbání/tuhost
Mix křehkost, tok
Mw pevnost v tahu
Například šířka distribuce je známa jako polydisperzita (D) a je obvykle definována jako Mw/Mnc. Monodisperzní vzorek je definován jako vzorek, mající všechny molekuly identické. V takovém případě je polydisperzita (Mw/Mn) 1,0. Standardy úzkých molekulových hmotností mají hodnotu D blízkou 1 a typicky má polymer-rozsah 2 až 5. Některé polymery mají polydisperzitu nad 20.
• Rovnice pro vyjádření polydisperzity jsou následující:
£ plocha, ^nlocha. /M.
x i
-37— Έ Aplocha-) (1L )/ Mw = (plocha^) —* 2;/*(plockaň) )2-/
MZ = --1-=^/( plocha^) (M. )ý — '£Z(plocha,) (Μ. ) 3Z ^z+1 ~ ~
2/(ρ1οοΗ8.)(Μ.)ν
Mw
—..„.p.o.ly.di.sp.er.zi.t a ;„Í.DK=
Mn kdp plocha.- plocha řezu?
- Mi- = ’ mo-l-ekulová^-hmOťnOsť-T^-r^-řezu-- ” kovat určitou polydisperzitu, která je přijatelná pro farmaceutický přípravek. Vysoké hodnoty polydisperzity znamenají široké- variace· ve velikosti populace- molekul- v daném přípravku, zatímco nízké hodnoty polydisperzity znamenají nízké variace. Protože molekulové velikost je? “důležTťou''3ěťérmihhhťoli biolbgičké- akTívitý 'je''důležitě'
omezit disperzitu molekul v přípravku za účelem dosažení hútnúgeňně jšího biologického' účinku, /věření 'poiydispeFžity tak mohou být použita, k měření disp.erzity molekul . v přípravku a korelují s potenciálem sloučeniny pro proměnné v biologické aktivitě.
Hodnoty polýdisperžity, které jsou zdě popsány byly stanoveny z chromatogramů získaných ze použití chromátografického systému Model 600E Powerline', opatřeného modulempro vyhřívání kolony, detektorem indexu lomu Model 410, sofwarem-Maxima 820 (vše oď Waters;, Div. of Millipore, Milforď, MA), dvou LiChrogel PS-40-kolon, a LiChrogel PS-20 kolony zapojených v sérii (EM Science·, Gibbstown, NJ) a polyethylenglykolových standardů molekulové hmotnosti (PoPymer^Dabor atoires-lnc .,—Anherst,—MA). Hodnoty póly-disperzity získané za použití tohoto systému jsou vztaženy ke chromatograf ickým podmínkám·, standardům molekulové hmotnosti, a velikosti vylučovacích charakteristik gelových permeačníoh kolon. Měření polydisperzity využívající různé dělící principy mohou poskytnout absolutní hodnoty polydisperzity, které se liší od hodnot zde popsaných. Nicméně odborník v oboru může snadno; převést, jakoukoliv hodnotu polydisperzity, která se získá za použití různých separačních metoá na hodnoty zde popsaná jednoduchým průchodem jednoho vzorku oběma systémy a pak porovnáním hodnot polydisperzity z každého chromatogramu.
V souladu s předloženým vynálezem; je poskytnut přípravek, kterým je blokový kopolymer polyoxypropylen/polyoxyethylem, který má hodnotu polydisperzity menší než 1,07. Výhodně je hodnota polydisperzity menší než asi 1,05 a nejvýhodnější hodnota polydisperzity je 1,03. Ue třeba poznamenat, že předložený vynález zahrnuje, ale není na ně omezen, poloxamerové sloučeniny a poloxaminové sloučeniny.
Také v souladu s předloženým vynálezem je poskytnut přípravek, kterým je povrchově aktivní kopolymer, obsahující blokový kopolymer polyoxypropylen/polyoxyethylen následujícího obecného vzorce H0ÍC2H40>b(c3R60)a(C2H40)bH kde celková molekulová hmotnost kopolymeru je: mezi přibližně 5000 a 1 5000 daltony, výhodně molekulová hmotnost
-37je mezi asi 7000 a 12000 daltony a molekulová hmotnost představujíc! polyoxyethylenovou Část kopolymeru tvoří přibližně 80 % kopolymeru.
Jedno provedení předloženého vynálezu zahrnuje kopolymer polyoxypropylen/polyoxyethylem, který má následující vzorec ' HO(C2K4Ó)b(C3K6O)aCc2HzO)bH ......' .............
kde molekulová hmotnost hydrofobu (CjH^O) je přibližně _ 1 750. daltonů, ,a průměrná, molekulová „hmotnost sloučeniny je přibližně 8300 až 9400 daltonů. Hodnota polydisper- ' zi ty ‘ jemenšínež přibližně’ 1^ 05-. 3lokbvý“kbpolýme’ř7~ oč- povídající alespoň těmto fyzikálním parametrům má _—zlepšené—biologické—úč-i-nk-y—po-l-ox-yme-ru—1-88-pod-l-e—známé—:--ho stavu techniky, ale nevykazuje nežádoucí vedlejší účinky ^které-byly uváděny o sloučenině podle známého stavu techniky. Při snížení hodnoty poíydisperzity po„_^v.rnho-v.ě—aktivní ho-kopolymeru-~byl-o--z-j-ištěnoy-Žě—toxicita— spojená se známým poloxamerem 188 je výrazně snížena.
Nicméně je zachována terapeutická aktivita mod.ifikova... .nÁhQ_PAloxa^eru„..1_88..„.............. . ....... ................. ... ...... .
Povrchově aktivní-kopolymery podle předloženého vy------nálezu-mohou- bý-t -při-pr-sveny-mnoha-způsoby.--Hodnot-a -po-ly— --------disperzity může být redukována tím, že se sloučeniny
OOdleznámého Stavu .technikv nodrnhí nvk nppmonřnf----------chromatografií. Dále mohou být sloučeniny zpracovány technikami molekulových sít, které jsou známy odborníkům v; oboří®..
Povrchově ak-t-i-v-n-í -k-opo-l-ymer podle předloženého -vy- — nálezu . může být připraven různými způsoby. V první metodě se komerčně dostupný poloxamen 188 podrobí gelové permeační chromatografií. Chromatogram získaný z tohotn postupu je uveden na nhr-1.
-4C wr
Jak je zřejmé z obr.l komerční poloxamer 188 je složen z molekul o široké distribuci s pikem molekulové hmotnosti přibližně 7900 až 9500 daltonů. To odpovídá obecně publikované molekulové hmotnosti poloxameru 188 8400 daltonů.. Publikovaná molekulová hmotnost poloxameru V88_je“ďeterm'iTrĎváhe hydroxylovou metodou. Koncovými skupinami polyetherových řetězců jsou hydroxylové skupiny. Číselná .průměrná molekulová hmotnost může být vypočtena z analyticky stanoveného OH čísla vyjádřeného v mg KOH/g vzorku·. Je třeba chápat, že molekulová hmotnost polydisperzní sloučeniny se může lišit v závislosti na metodě použité pro. stanovení molekulové hmotnosti.. h'
Obr.,1 také znázorňuje malé sekundární píky nebo raménka ležící nalevo nebo napravo primárního píku. Tyto plochy chromatogramu poloxameru 188 představují molekuly s vysokou a nízkou molekulovou hmotností. Druhy s vysokou, molekulovou hmotností mají velikost od přibližně 24000 do;= 15000 daltonů. Předpokládá se, že tyto větší molekuly mají, větší kapacitu aktivovat komplement ve srovnání s druhy nižší molekulové hmotnosti. Raménko na právo nebo na straněί nižší molekulové hmotnosti na chromatogramu patří molekulám mezi přibližně 2300 daltony a 5000 daltony. Tyto druhy představují sloučeniny, které mají vlastnosti více podobné detergentům a jsou cytotoxické k buňkám.
Za použití gelové permeační chromatografie bylo stanoveno, že frakce? poloxameru 188 s molekulami v rozmezí přibližně 5000 daltonů až 15000 daltonů, výhodně mezi asi 6000 daltony a 13000 daltony, s pikem přibližně 8700 daltonů, představují populaci povrchově aktivních kopolymerů, které jsou v podstatě zbaveny toxických aktivit přičemž si ještě udržují zlepšené terapeutické aktivity obchodně dostupného.
arito novy přípřávek je .luuuueia nomugennejsi
-41než přípravek obchodně dostupný a neočekávaně má méně vedlejších účinků než přípravek podle známého stavu těch niky.
Je třeba chápat, že rozmezí molekulové hmotnosti., ““ které je popsáno jako optimální rozmezí pro kopolymer, je třeba považovat za okrajové rozmezí a že mnoho populací molekul, které spadají do rozsahu, je považováno ž-a převedení předlož eného-vynálezu. -. .-.. ·. ·. - -.. Předložený vynález také zahrnuje nový způsob přípravy přípravku povrchově aktivního kopolymerů se zde popsanými.. specifikacemi·.- Nové/metoda ..zahrnuje přípravu.... jednotného hydrof obního. polyoxypropylenového polymeru a pak zpracování' s přídavkem hydrofilního-polýóxýethýlěhú obvyklým způsobem. Předpokládá se, že toxické kopolymary“ k ťer é—j's'ou_vý sTe dk e m—s:tan ďar d n íc h-k o me rft$-í-ch—m e -t-o ď— přípravy poloxame.ru 188 jsou způsobeny, připojenými, polymerními řetězci a nenasyceními v; polymeru.
V“pr‘aktické'tn~pr'ovede'hí“př‘e'dl-ož-eného-vynái-ezu-*se—hydr fobní polyoxypropylen čistí za získání v podstatě jednotné populace polyoxypropylenových polymerů. Čištění se může-*provádě-t- za použití g-e-l-ov-é- permeáční chromatogra-. fie. Nicméně jakákoliv ze známých metod·, pro odborníky v oboru, která poskytne požadovaný rozsah polyoxypropylenových pol.ymerů, _může' být“použ i ta.
Při přípravě zlepšeného-Theologického- činidla bypolyox.y.propylenov.ý polymer měl mít průměrnou molekulovou hmotnost asi 1750 daltonů s přibližným rozsahem molekulové hmotnosti mezi 1000 a 2600 daltonů. Výhodný rozsah molekulové hmotnosti je mezí 1200 a 2400 daltonů.
Po získání požadovaného polyoxypropylenového kopolymeru se přidá ethylenový podíl kopolymerů k oběma
-42koncům; molekuly standardními metodami velmi- dobře známými odborníkům v oboru. Finální polymerové populace: by měla mít polyoxyethylenový podíl přibližně 20 % celkové molekulové hmotnosti molekuly.
Tento vynález je dále ilustrován následujícími příklady, které nejsou v žádném případě míněny jako omezení rozsahu vynálezu. Naopak, zcela 2řejmé, še jsou možné různé variace provedení, modifikace a jeho ekvivalenty, které- jsou zřejmé: z popisu, a mohou umožnit, odborníkům tato provedení bez porušení myšlenky předloženého vynálezu a/nebo rozsahu připojených nároků.
I“' 77^
Příklady provedeni vynálezu $ « & 'Ok , -w, » í
Příklad 1 ' ' 1 '''-tik
Poloxamer 188 (SASF Corporation, .Parsippany N.J.)_ se rozpustí v' tetrahydrofuranu na koncentraci 20 mg/ml. Pro .7 frakcionaci komerčně připraveného kopolymeru poloxamer , 188' se použije chromatografióký svstém Model 6Q0E Power., . line s modulem pro vyhřívání kolony, detektorem indexu lomu Model 410 a softwarem. Maxima 820 (všechno od Waters, ·: Div.pff Millipore, MilfordjMA), Chromatografický systém, je vybaven dvěma LiChrogel PS-40 kolonami a-kolonou LiChro*. gel PS-20 v sérii (EM Science, Glbbstown, NJ). Li Chrogel
PS-40 kolony jsou o velikosti částic 10 /um-a LiChrogel PS-20 kolona má velikost částic? 5 /um. Všechny kolony mají velikost 7 mm- krát 25 cm.
200 /Ul (4 mg): poloxameru. 188 v tetrahydrofuranu se přidá na kolonu a vzorek prochází kolonami a detekto. rem při 40 °C. Výsledný chromatogram je uvedeni na obr.2*
Příklad 2 ·
Vzorek, který byl odebrán v příkladu 1 byl frakcionováh na pět frakcí a každá frakce Drošla kolonou jak je
-43popsáne v příkladu 1. Chromatogramy z různých chromatografií jsou uvedeny na obr. 3 až 8. Frakce, která demonstruje nejmenší toxicitu při zachování terapeutické aktivity poloxameru 188 je uvedena na obr.5:. Jak je zřejmé, raménka na jedné straně píku na obr.5 nejsou přítomna.
Průměrné molekulová hmotnos.t pro každou frakci je uvedena v tabulce II, Chromatogram .k.ažó.é frakce- je -uvedeni na obr.3 až 8.
Tabulka II
Frakce obr. doba výstupu molekulová hodnota.
z kolony (min) hmotnost polydisperzity
-1-3-ι-ιτ5--'t-27o-—1-7000———lyojocr
4 12,0-12,5. 10270 1,0474 _ $ 1.2,5-1-3,0 8964 1 ,0280
-. 4 6. 13,0-13,5 . 8188 1,0332
--------------7---—..—5-4-ve—.----—ητΐΌΤ
8 14,0-14,5 3589 1,0459
.. Hodnota. polydisoer-2ity pro nefrakcionovaný-poloxamer 188 je 1,0896. Frakce nejblíže odpovídající poloxameru Ί88 je frakce 3,’která mé hodnotu polydisperzity přibližně
-1,-0280.------- --.......... - ......-............. .................. Příklad 3 , - -—· --- . - - Do jednolitrové tříhrdlé banky s kulatým dnem opatřené mechanickým míchadlem, zpětným chladičem, teploměrem' ^vstupem pro propylenoxiď, se umístí 57 g (0,75 mol) p.ropy-leng-l-y-k-olu· a 7,5 g bezvodého hydroxidu sodného. Banka se propláchne dusíkem pro odstranění vzduchu a zahřívá se na 120 °C za míchání až do rozpuštění hydroxidu sodného.
-44Propylenoxid se zavádí v dostatečném množství do směsi tak rychle jak. reaguje až produkt vykazuje vypočtenou molekulovou hmotnost přibližně 1750 daltonů. Produkt se; ochladí pod dusíkem a NaOH katalyzátor se neutralizuje: kyselinou sírovou a produkt se pak odfiltruje. Konečný produkt je ve vodě'nerozpustný polyoxypropylenglykol.
Příklad 4
Polyoxypropylenglykol z příkladu 3 se rozpustí v tetrahydrofuranu na koncentraci 20 mg/ml. ?ro frakcionaci obchodně dostupného kopolymeru poloxamer 188 se použije chromatagrafický systém Model 600E Powerline opatřený modulem pro vytápění kolony, detektorem indexu lomu Model 410. a softwarem Maxima 820 (všechno od Watera;, Div-, of Míllipore, Milf ord ,MA),. Chromatografický systém je vybaven dvěma LiChrogel PS-40 kolonami.....a kolonou DiChrogel PS-20 v sérii (EM ScienceGibbstown,NJ). Kolony. LiChrogel PS-40 jsou velikosti částic:· 10 yum a kolona LiChrogel PS-20 je velikosti Částic- 5 /um. Všechny kolony mají velikost 7 mm krát' 25 cm.'
200 yul (4 mg) polyoxypropylenglykolu v tetrahydrofuranu se vloží na sloupec a vzorek prochází kolonami a detektorem při 40 °C. Frakce, které odpovídají průměrné molekulové hmotnosti 1750 dalt.onů s distribucí molekulové hmotnosti mezi 1,000 a ^600 daltonů se shromáždí. Jiné frakce se odloží.
Příklad 5
Purifikov8ný polyóxypropylenglykol z příkladu 4 se umístí do stejného zařízení jak je popsáno v příkladu 3 se vhodným množstvím bezvodého hydroxidu sodného. Přidává ss vhodné uiúúžsíví ethylenoxidu. při průměrné’téplótě 120 UC za použití stejné techniky jak je popsána v příkladu 3·
-4-y*
Množství přidaného ethylenoxidu odpovídá 20 % celkové hmotnosti polyoxypropylenglykolové báze plus hmotnosti přidaného ethylenoxidu.
Tento-posťup~P'O'S'kytuje“~blOkový—kopolymer—poly-oxy=--— propylen/polyoxyethylen. složený z molekul, které jsou mnohem homogennější v molekulové velikosti a konfiguraci ve srovnání s komerčními přípravky.
Příklad 6; ........
Frakce poloxameru 760,5 připravené gelovou permeační chromátografií* byly analyzovány'na hmotnostní pro- , centa oxyethylenu a na. nenasycení ŇMR analýzou násiedovně: Poloxamer.—760-, 5· ('B-ASF-“/-Gorpor.ation,-Parsip-pany,,.NJ..X._..... se rozpustí na koncentraci 20 mg/ml. Pro frakcionaci _kome r.Čně_pr.ipr_av_eného poloxameru 760,5. byl použit chro-__ matografický systém opatřený (Model 6'OOE PówerlineO modulem pro vy ápěnf-koionyy detektorem· -indexu.-lomu Model- 410 .a-softwarem· Maximg-J820' (všechno oď' Wsters, Div. of Milli—p.ore.,—Miif.orď.,_MA)...._Chr„o.mat_ografi. cký,systém je .vybaven__
Ultrastyragel 10^ A a 500A v sériích (Waters, Div.of Millipore, MA). Velikost kolony je 7,8 mm· vnitřní průměr krát 3„0 cm. Pro ochranu kolon byly použity predkolonové filtry č.A-315 s odstranitelnými 2 /um těsněními (Upchurcft Scientific, Oak Her.bor, WA). 200 yul (4 mg) poloxameru-.. .. .7-6.0-, 5...v. tetrahy.órofur.an.u._s.e. ._při dá ,_n a _ kolonu a vzorek probíhá kolonami při 40 °C a detektorem při 45
Vzorek jedna je nefrakcionovaný vzorek poloxameru 760,5 získaný od BASF Corporation (Parsipanny, New Jersey) a je uveden na obr.9A. Frakce jedna-je ranná frakce z. chromatografického systému a je uvedena ha obr,.9B. Frakce·
j.e p.ozdní frakce, a j.ejuve.dena na obr.90. Všechny protonové NMR analýzy byly provedeny v souladu s NF postupem hmotnostní procent#/oxyethylenu na zařízení Bruker 300 MHz'.
-4ύ<HV. - *
Ml** ·=3Κ. ·>
Spektra protonové nukleární magnetické rezonance 'z obr. 99 a 9C ukazují slabá rozšíření ve spektru ve srovnání s nefrskcionovaným vzorkem. Později eluované frakce (frakce 2) obsahuje největší množství nenasycení jak je zřejmé z du.bletového signálu při asi 4,0 ppm. Protonové spektrum časně eluovsného píku (frakce 1) neukazuje žádné nečistoty s výjimkou vody.
Pro vzorky byla vypočtena hmotnostní procenta oxyethylenu. Jak je zřejmé ž tabulky III, časně eluovsná frakce, která je nejčistší frakcí, má nejnižěí procento oxyethylenu·. Tato frakce také^ykazuje žádná s.. nenasycení měřeno nukleární magnetickou rezonancí. Za použití poloxamerového nomenklaturního systému popsaného výše, měly různé frakce následující charakteristiky a poloxamerová čísla.
Tabulka III
Frakce % POES MWb ' Poloxamer nenasycení
nefrakcion. 5,5 8135 760,5 ano.
časná frakce 3,9 10856 104,4 ne
pozdní frakce 7,5 3085 291 ano
aměřeno NMR
X bpolyoxypropylentměřený gelovou permeační -chromatografií · · cměřeno NMR
Příklad 7 ® .
Poloxamer 1 38 . (KL uronic F68) byl frakcionován na systému pro gelovou permeační ohromatografií podle příklflfin 1 - Rv 1 V 4-4Í.4 / — ,j - — — ** “**7 **-* frakce. Obr·.'I A ukazuje ír akci 1-, časnou frakci o vysoké molekulové hmotnosti. Obr. 11B-ukazuje frakci- II, která je hlavním pikem. Obr.ΊΊ C '
-47ukazuje frakci ΠΙ, později eluovanou, populaci molekul s nižší molekulovou hmotností. Procenta oxyethylenu v. každé frakci byla stanoven© za použití protonové NMR užívající 200 MHz NMR spektrofotometr. Přibližně 10 mg každélT(r“vzPr ku^bylO-te stová no—V-zOrky-by-l-y-př-i-pr-aveny^..
přídavkem přibližně 0,7 ml CDCl-j do každé lahvičky. Roztok byl filtrován a přenesen do 5mm NMR zkumavky. Jedna kapka D2O byla přidána a zkumavka byla před měřením protrepéna.
Tabulka IV o b '
Frakce%POE“MW poioxamer ‘časná““ ’ ~ '85' ······—16,500 ’258—--------------------------------------------- střední frakce 82 8652 1 78 _p.o.2dní_frakce 90 3751_0.39__ aměř.eno NMR * .^měřeno gelovou permeační chromatografii
Jak je uvedeno v tabulce IV, Časně eluující,frakce s velkými molekulami mé vysoký procentický obsah, oxyethylenu a .odpovídá poloxameru 258. Střední frakce má nejmenší procentický obsah oxyethylenu zatímco později eluující frakce s malou molekulovou hmotností má nejvyšší procentický obsah oxyethylenu. Střední frakce má vypočteně poloxamerové číslo 178, které odpovídá blízce požadovanému číslu 188. Pozdější, frakce má vypočtené poloxamerové číslo 039. Komerčně dostupný poloxamerový přípravek má signifikantní populaci polymerů, které mohou být škodlivé v biologickém systému.
-4ářPříklad 8
R ' Poloxamer 331 (Pluronic LI 01) byl frakcionovón postupem podle příkladu 6. Chromstograáy nefrakcionovaného poloxameru 331, časně eluující.frakce a pozdě,ji eluující frakce jsou uvedeny na obr.12A až 12C. NMR spektra pro každý vzorek jsou stanovena jako v příkladu 6. Výsledky těchto spekter a chromatogramů jsou shrnuty v tabulce 5.
Tabulka 5
Frakce %POEa MWb poloxamer nenasycení0
nefrakcionovaný 17 4045 342 ano
Časná frakce 15 4452 381 ne
pozdní frakce 31 1466 103 ano
aměřeno NMR ^měřeno gelovou permeační chromatografií cměřeno NMR
Jestliže se vypočte na základě shromážděných empirických údajů poloxamerové Číslo každé frakce je zřejmé, že frakce pozdějšího polymeru je velmi rozdílný poloxamer od nefrakcionovaného přípravku. Dále byla frakcionací odstraněna nenasycená populace polymerů.
Výše uvedené příklady se týkají pouze výhodného provedení předloženého vynálezu a jsou možné různé modifikace nebo změnyj aniž by byla porušena myšlenka a rozsah vynálezu jak je definována připojenými patentovými nároky.

Claims (29)

1. Blokový kopolymer polyoxypropylen/poíyoxyethyíen následujícího obecného vzorceHO(C2H4O)b(C3H6O)a(C2H4O)bH kde molekulová hmotnost reprezentovaná polyoxypropylenovou částí kopolymeru je mezi přibližně 900 a 15000 daltonů. a molekulová hmotnost představovaná polyoxyethylenovou- částí kopolymeru tvoří Jmezipřtbli-žně-5%’ a--90’%.kopolymeru. a hodnota polydisperzity je menší než přibližně 1 ,07.
2. ‘ Blokový kopolymer; podle nároku 1, kde hodnota __polydisperzity je menší než asi 1,05. __
3. ' 31okový kopolymer podle nároku 1, kde hodnota polydisperzity je menší než asi' 1 ,Q’3· ~ ~~~
4. Blokový kopolymer podle nároku 1, kde kopolymer
Γ je v podstatě nenasycený. ' '
5. Blokový kopolymer podle nároku 1, kde kopolymer má molekulovou hmotnost v rozmezí mezi přibližně 1200 a 6500 daltonů.
6. . Blokový kopolymer podle nároku 5, kde polyoxyethylenovó část kopolymeru tvoří mezi přibližně 10 % a 90 %
I kopolymeru.
-507. Povrchově aktivní kopolymer, obsahující blokový kopolymer polyoxypropylen/polyoxyethylen: následujícího obecného vzorce HO(C2H40)bÍC3H6.0)aÍC2H40)bH kde molekulová hmotnost hydrofobu (C^H^O) je přibližně 1750 daltonů a průměrná celková molekulové hmotnost sloučeniny je přibližně 8400 daltonů a hodnota polydisperzity je menší než přibližně 1,07.
8. Povrchově aktivní kopolymer podle nároku 7, kde ,· hodnota polydisperzity je menší než přibližně 1 ,05·. p
9. Povrchově aktivní kopolymer podle nároku 7, kde hodnota polydisperzity je menší než přibližně 1,03.
10. Povrchově aktivní kopolymer podle nároku 7, kdes kopolymer je v podstatě nenasycený.
11. Povrchově aktivní kopolymer, obsahující blokový kopoiýmar polyoxypropylen/polyoxyethylen. následujícího obecného vzorce
HO(o2h4oib(σ3Η6ο)a(o2h4o) kde celková molekulová hmotnost kopolymeru je mezi přib ližně 5000 a 15000 daltony a molekulová hmotnost předst vovaná polyoxyethylenovou částí kopolymeru tvoří mezi přibližně 75 % a 85 % kopolymeru.
12. Povrchově aktivní kopolymer podle nároku 11, kde celková molekulová hmotnost kopolymeru je mezi přib ližně 7000 a 12000 daltony.
-5113. Povrchově aktivní kopolymer poóle nároku 11, kde kopolymer je v podstatě nenasycený.
__1-4-._____Povr-chov-ě—akt ivní_ kopolymer-,—o.bs.ahu jí.cí._blo.ko_vý— kopo lymer polyoxyprbpylen/polyoxyethyien, následujícího obecného vzorce
HO(C2H4O)b(C3H6O)a(02H4O,bH kde molekulová hmotnost hydrofobu (C-HcO)je ořibližně 9700 daltonů a průměrná celková hmotnost sloučeniny je přibližně, 1 0000,. d.al tonů a.hodnota pply.dis.per.zi.ty.,j.e menší než přibližně 1,07.
15. Povrchově aktivní kopolymer podle nároku 14,
- -kče-hodno-ta-polydisperzi-ty—je—menší—než-př-i-bl-ižně—1-,-0-5-.-r6~. Povrchově-akfivní_kopolymer podle nároku iTty^lcdě' hodnota polydisperžity je menší než přibližně 1,03.
17. Povrchově aktivní kopolymer podle nároku 14, kde kopolymer je v podstatě nenasycený.
18. Povrchově: aktivní' kopolymer., obsahující blokový kopolymer polyo.xypropylen/polyoxyethylem následujícího — - obecného-vzorce---------- - — - ·-------------·—------------ --HOÍC-H.O). .(C.HxO) (GrsH.OkH________________________. ..
C 4. ' o J O a £ 4 D -------------------------'7 kde molekulová hmotnost hydrofobu (C^Hg-O) je přibližně 3400 daltonů a průměrné celková molekulová hmotnost slou Čeniny je přibližně 4000 daltonů a hodnota Dolydisperzity je menší než přibližně 1,07.
-5119. Povrchově aktivní kopolymer podle nároku 18, kde hodnota polydisperzity je menší než přibližné 1,05.
20. Povrchově aktivní kopolymer podle nároku 18, kde hodnota polydisperzity je menší než přibližně 1,03.
21. Povrchově aktivní kopolymer podle nároku 18, kde tento kopolymer je v podstatě nenasycený.
22. ' Způsob príprew netoxickéhů povrchově aktivního kopolymerů, vyznačující se t, í m, že se nejprve kondenzuje propylenoxiď se základní sloučeninou., obsahující více reaktivních atomů vodíku za vzniku póly* oxypropylenového; polymeru a pak se kondenzuje ethylen- : oxiď s polyoxypropylenovým polymerem- za vzniku blokového kopolymerů polyoxypropylen/polyoxyethylen následuji-, čího obecného vzorce
HO(02H40)b(03H60)a(02H40)bH .
se zlepšeným Čištěním polyoxypropylenovéhn polymeru, před stupněm kondenzace ethylenoxidu- s polyoxypropylenovým polymerem, tak že hodnota polydisperzity blokového kopolymeru polyoxypropylen/polyoxyethylen je menší než přibližně 1,07.
23. Způsob podle nároku 22, vyznačující se t í m+ že hodnota polydisperzity kopolymerů- poly*· oxypropylen/polyox.yethylen je menší než přibližně 1,05.
24. Způsob podle nároku 22, vyznačující se t í m, že hodnota polydisperzity kopolymerů polyoxypropylen/polyoxyethylen je menší než přibližně 1,03.
r— ?s
25. Způsob podle nároku 22, vyznačující se t í m, že polyoxypropylenový polymer· je čištěn gelovou permeační chromatografií.
26.___Zp.ůs.o.b podle nároku 22, vyznačující se t í i, že kopolymer je v podstatě nenasycený.
27. Způsob přípravy netoxického povrchově aktivního kopolymeru, vyznačující se? tím, že zahrnuje nejprve kondenzaci propylenoxidu. se základní sloučeninou obsahující více reaktivních atomů vodíku za vzniku polyoxypropylenového polymeru a pak kondenzaci ethylenoxidu s polyoxypropylenovým polymerem za.vzniku blokovéhokopolymeru polycxypropylen/polyoxyethylen ' ...následujícího^vzorce.________________________.... ...... .___..._________ _HO (C?HÁO) h (C^O) a (C?H40) bH ___ kde-moTekulOvá—hmotnOst-hydrof obu~-(-eyHgp-)—;je-př-i-b-l-i-ž-ně— T 750 dálťonů a celková·molekulová hmotnost/ sloučeniny—j.e.-při.bl.i.žně^8_4:0.0„_dalt.onů.,___._____ .. . .. ...________________ se zlepšeným čištěním polyoxypropylenového polymeru před stupněm kondenzace; ethylenoxidu s polyoxypropylenovým po lymerem; za vzniku blokového kopolymeru pólyoxypropylen/ polyoxyethylen s hodnotou polydisperzity menší než přibližně 1,07,- ........
28. Způsob podle nároku 27, vyznačující s e. t. í m.;í ž.ei hodnota polydisperzity kopqlymeru_polyoxypropylen/polyoxyethylen je menší než přibližně 1,05·
29. , Způsob .podle nároku 27, vyznačující se t í m, že hodnota polydisperzity kopolymeru polyox-yprcpyl-en/poly-ox-yethylen je nižší než přibližně 1 ,Q3.·
-Vi
30. Způsob podle nároku 27, vyznačující se t í m, že polyoxypropylenový polymer je Čištěn gelovou permeační chromatografii.
31. Způsob podle nároku 27, vyznačující se tím, že kopolymer je v podstatě nenasycený.
32. Způsob přípravy netoxického povrchově aktivního kopolymeru, vyznačující se tím, že zahrnuje nejprve? kondenzaci propylenoxiďu se základní sloučeninou, obsahující více reaktivních;, atomů vodíku za : vzniku polyoxypropylenového polymeru a pak kondenzaci ethylenoxidu. s polyoxypropylenovým polymerem- za vzniku· blokového kopolymeru polyoxypropylen/polýoxyethylen následující vzorce
H0(C2H40)t(03H6 0)a(02H4 0)bH kde molekulová hmotnost hydrofobu ÍC^HgO). je přibližně 1750 daltonů a průměrná molekulová hmotnost sloučeniny . jé přibližně 8400 daltonů, se zlepšín, zahrnujícím čištění polyoxypropylenového polymeru před stupněm kondenzace ethylenoxidu. s polyoxypropylenovým polymerem, za vzniku přípravku blokového kopolymeru polyoxypropylen/polyoxyethylea, kde polyoxypropylenový podíl kopolymeru jé mezi přibližně 900 a 15000 daltony a molekulová hmotnost představující polyoxyethylenovou část kopolymeru tvoří přibližně 5 % až 95 %·
33· Způsob podle nároku 32, vyznačující s e Ví m, že kopolymer má molekulovou hmotnost v; rozmezí mezi přibližně 1200 a 6500 daltonů.
-5534. Způsob podle nároku 32, vyznačující se .tím, žeí polyoxyethylenové část kopolymeru tvoři mezi přibližně 10 % a 90 % kopolymeru.
35· Způsob. podle nároku 32, vyznačující se t í m, že kopolymer je v podstatě nenasycený.
CS931946A 1991-03-19 1992-03-18 Copolymers polyoxypropylene/polyoxyethylene with enhanced biological activity CZ194693A3 (en)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US67328991A 1991-03-19 1991-03-19
US84787492A 1992-03-13 1992-03-13
PCT/US1992/002254 WO1992016484A1 (en) 1991-03-19 1992-03-18 Polyoxypropylene/polyoxyethylene copolymers with improved biological activity

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CZ194693A3 true CZ194693A3 (en) 1994-03-16

Family

ID=27100911

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CS931946A CZ194693A3 (en) 1991-03-19 1992-03-18 Copolymers polyoxypropylene/polyoxyethylene with enhanced biological activity

Country Status (19)

Country Link
US (7) US5523492A (cs)
EP (1) EP0576612B1 (cs)
JP (1) JP2647556B2 (cs)
KR (1) KR100224539B1 (cs)
CN (1) CN1069741A (cs)
AT (1) ATE187154T1 (cs)
AU (1) AU662146B2 (cs)
CA (1) CA2106474C (cs)
CZ (1) CZ194693A3 (cs)
DE (1) DE69230372T2 (cs)
DK (1) DK0576612T3 (cs)
ES (1) ES2140408T3 (cs)
GR (1) GR3032726T3 (cs)
HU (1) HUT67762A (cs)
IE (1) IE920860A1 (cs)
IL (1) IL101305A (cs)
NO (1) NO307890B1 (cs)
SK (1) SK100893A3 (cs)
WO (1) WO1992016484A1 (cs)

Families Citing this family (78)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5674911A (en) * 1987-02-20 1997-10-07 Cytrx Corporation Antiinfective polyoxypropylene/polyoxyethylene copolymers and methods of use
US6933286B2 (en) 1991-03-19 2005-08-23 R. Martin Emanuele Therapeutic delivery compositions and methods of use thereof
USRE38558E1 (en) 1991-03-19 2004-07-20 Cytrx Corporation Polyoxypropylene/polyoxyethylene copolymers with improved biological activity
US7202225B1 (en) 1993-10-15 2007-04-10 Emanuele R Martin Therapeutic delivery compositions and methods of use thereof
ES2140408T3 (es) * 1991-03-19 2000-03-01 Cytrx Corp Copolimeros de polioxipropileno/polioxietileno con actividad biologica mejorada.
ZA933926B (en) * 1992-06-17 1994-01-03 Amgen Inc Polyoxymethylene-oxyethylene copolymers in conjuction with blomolecules
US6153193A (en) * 1993-04-28 2000-11-28 Supratek Pharma Inc. Compositions for targeting biological agents
US6277410B1 (en) * 1992-10-08 2001-08-21 Supratek Pharma Inc. Copolymer compositions for oral delivery
US6093391A (en) * 1992-10-08 2000-07-25 Supratek Pharma, Inc. Peptide copolymer compositions
JP3946246B2 (ja) * 1993-02-02 2007-07-18 ゾーマ・コーポレイション 殺菌性／浸透性増大タンパク質（Ｂａｃｔｅｒｉｃｉｄａｌ／Ｐｅｒｍｅａｂｉｌｉｔｙ Ｉｎｃｒｅａｓｉｎｇ ｐｒｏｔｅｉｎ：ＢＰＩ）及び界面活性剤を含有する医薬組成物
KR100361933B1 (ko) 1993-09-08 2003-02-14 라 졸라 파마슈티칼 컴파니 화학적으로정의된비중합성결합가플랫폼분자및그것의콘주게이트
WO1995010265A1 (en) * 1993-10-15 1995-04-20 Cytrx Corporation Therapeutic delivery compositions and methods of use thereof
US5932544A (en) * 1994-05-31 1999-08-03 Xoma Corporation Bactericidal/permeability-increasing protein (BPI) compositions
EP1181937A3 (en) 1994-08-09 2004-02-04 Cytrx Corporation Novel vaccine adjuvant and vaccine
US6353055B1 (en) 1994-11-18 2002-03-05 Supratek Pharma Inc. Polynucleotide compositions
US6221959B1 (en) 1994-11-18 2001-04-24 Supratek Pharma, Inc. Polynucleotide compositions
AU6358898A (en) * 1996-09-09 1998-04-17 Alexander V Kabanov Fluorinated copolymeric pharmaceutical adjuncts
US6312685B1 (en) 1998-03-13 2001-11-06 Timothy C. Fisher Red blood cells covalently bound with two different polyethylene glycol derivatives
US6942859B2 (en) 1998-03-13 2005-09-13 University Of Southern California Red blood cells covalently bound with polymers
WO2000021543A1 (en) * 1998-10-09 2000-04-20 Cytrx Corporation Method and composition for treating ischemia and sickle cell anemia
CN1762990A (zh) * 1999-06-08 2006-04-26 拉卓拉药物公司 包含氨基氧基的化合价平台分子
WO2001093914A2 (en) 2000-06-08 2001-12-13 La Jolla Pharmaceutical Company Multivalent platform molecules comprising high molecular weight polyethylene oxide
EP1335953A4 (en) * 2000-06-23 2005-03-30 Merck & Co Inc POLYNUCLEOTIDE VACCINE ADJUVANZIA AND FORMULATIONS CONTAINING CATIONIC SURFACTANTS AND ITS USES
US20040266983A1 (en) * 2000-08-17 2004-12-30 Reeve Lorraine E Purified polyoxyalkylene block copolymers
US6761824B2 (en) 2000-08-17 2004-07-13 Reeve Lorraine E Process for the fractionation of polymers
CA2426582A1 (en) * 2000-10-20 2002-08-08 Valentis, Inc. Gene delivery formulations and methods for treatment of ischemic conditions
US20040009940A1 (en) * 2000-10-20 2004-01-15 Coleman Michael E. Gene delivery formulations and methods for treatment of ischemic conditions
US6492881B2 (en) * 2001-01-31 2002-12-10 Compaq Information Technologies Group, L.P. Single to differential logic level interface for computer systems
EP1389121B1 (en) 2001-04-24 2012-02-22 Purdue Research Foundation Method and compositions for treating mammalian nerve tissue injuries
EP2316468A1 (en) 2002-02-22 2011-05-04 Shire LLC Delivery system and methods for protecting and administering dextroamphetamine
BR0313060A (pt) * 2002-07-29 2005-06-28 Transform Pharmaceuticals Inc Composições farmacêuticas aquosas de 2,6-diisopropilfenol
US6966990B2 (en) 2002-10-11 2005-11-22 Ferro Corporation Composite particles and method for preparing
AU2003293196A1 (en) * 2002-12-23 2004-07-29 Vical Incorporated Method for producing sterile polynucleotide based medicaments
US7521187B2 (en) * 2002-12-23 2009-04-21 Vical Incorporated Method for freeze-drying nucleic acid/block copolymer/cationic surfactant complexes
US7083748B2 (en) * 2003-02-07 2006-08-01 Ferro Corporation Method and apparatus for continuous particle production using supercritical fluid
AU2004224439B2 (en) 2003-03-24 2010-07-15 Genzyme Corporation Temporary embolization using inverse thermosensitive polymers
US20060008531A1 (en) * 2003-05-08 2006-01-12 Ferro Corporation Method for producing solid-lipid composite drug particles
BRPI0413771A (pt) * 2003-09-05 2006-10-31 Ivy Animal Health Inc copolìmeros de polioxipropileno/polioietileno purificados e método de preparação dos mesmos
US20050143678A1 (en) 2003-10-14 2005-06-30 Pluromed, Inc. Confinement of kidney-stone fragments during lithotripsy
US7700086B2 (en) 2003-11-06 2010-04-20 Pluromed, Inc. Internal clamp for surgical procedures
JP4521547B2 (ja) * 2004-04-15 2010-08-11 株式会社サンメディカル技術研究所 血液ポンプの流量推定装置
WO2006060723A2 (en) * 2004-12-03 2006-06-08 Vical Incorporated Methods for producing block copolymer/amphiphilic particles
CA2599219C (en) * 2005-02-25 2011-09-20 The Regents Of The University Of Michigan Compositions and methods for treating and preventing cardiomyopathy and heart disease
EP1868652A2 (en) 2005-04-05 2007-12-26 Istituto di Richerche di Biologia Molecolare P. Angeletti S.p.A. Method for shielding functional sites or epitopes on proteins
DK2601972T3 (en) 2005-05-02 2015-02-16 Genzyme Corp Kidney stone treatment without lithotripsy
WO2007008697A2 (en) * 2005-07-08 2007-01-18 University Of Chicago Compositions and methods for refolding of denatured proteins
WO2008018892A2 (en) * 2005-12-22 2008-02-14 Pluromed, Inc. Methods and kits for treating lacerations and puncture wounds using inverse thermosensitive polymers
EP2012804A4 (en) * 2006-04-24 2012-07-04 Bruce Medical Ab ANTICANCER AGENTS BASED ON POLYMERS
EP2046348B1 (en) * 2006-08-01 2015-07-22 Phrixus Pharmaceuticals, Incorporated Use of poloxamer for the prevention and/or treatment of heart failure
WO2008033728A2 (en) 2006-09-11 2008-03-20 Pluromed, Inc. Atraumatic occlusion balloons and skirts, and methods of use thereof
JP2010512230A (ja) * 2006-12-11 2010-04-22 プルーロームド インコーポレイテッド 灌流臓器止血法
EP2125092A4 (en) * 2007-02-22 2012-03-14 Pluromed Inc USE OF REVERSIBLE HEAT-SENSITIVE POLYMERS FOR FLOW CONTROL OF A BIOLOGICAL LIQUID AFTER MEDICAL USE
WO2008124088A2 (en) * 2007-04-05 2008-10-16 Phrixus Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for the treatment of heart failure
US20110212047A1 (en) * 2007-08-10 2011-09-01 Synth Rx, Inc. Polymer Therapy for the Treatment of Chronic Microvascular Diseases
EP2612867A1 (en) 2007-11-01 2013-07-10 Perseid Therapeutics LLC Immunosuppressive polypeptides and nucleic acids
WO2009070793A1 (en) 2007-11-29 2009-06-04 Pluromed, Inc. Endoscopic mucosal resectioning using purified inverse thermosensitive polymers
US8852568B2 (en) * 2007-12-17 2014-10-07 The Regents Of The University Of Michigan Compositions and methods for treating and preventing skeletal muscle deficiencies
CA2744100C (en) 2008-10-21 2020-06-30 The General Hospital Corporation Cell transplantation
DE102008043343A1 (de) * 2008-10-31 2010-05-06 Evonik Goldschmidt Gmbh Silikonpolyetherblock-Copolymere mit definierter Polydispersität im Polyoxyalkylenteil und deren Verwendung als Stabilisatoren zur Herstellung von Polyurethanschäumen
WO2010072769A1 (de) 2008-12-23 2010-07-01 Basf Se Verfahren zur herstellung von polyether-blockcopolymeren
EP2490722A4 (en) 2009-10-21 2014-03-05 Otonomy Inc MODULATION OF THE TEMPERATURE OF GELIFICATION OF FORMULATIONS CONTAINING POLOXAMERS
GB201008902D0 (en) * 2010-05-27 2010-07-14 Imp Innovations Ltd Membrane enhanced polymer sythesis
CN108504539B (zh) 2010-08-06 2021-11-02 通用医院公司以麻省总医院名义经营 用于细胞处理相关应用的系统和设备
KR20130097795A (ko) * 2010-11-15 2013-09-03 매스트 테라퓨틱스 인코포레이티드 위태로운 조직의 산소화 증강 방법
JP6388475B2 (ja) 2011-03-18 2018-09-12 バクスター・インターナショナル・インコーポレイテッドＢａｘｔｅｒ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｃｏｒｐ０Ｒａｔｅｄ グルコースポリマーを含む腹膜透析溶液
FR2977495B1 (fr) * 2011-07-07 2014-03-07 Sanofi Sa Composition pharmaceutique et forme galenique solide a haute teneur en dronedarone et son procede de preparation
US9662345B2 (en) 2013-06-14 2017-05-30 Professional Compounding Centers Of America Antibiotic composition for inhalation and irrigation
EP3057598A1 (en) 2013-10-16 2016-08-24 Mast Therapeutics, Inc. Diuretic induced alterations of plasma volume
JP6202471B2 (ja) 2013-10-31 2017-09-27 日油株式会社 医用ポリオキシプロピレン重合体の製造方法および医用ポリオキシプロピレン／ポリオキシエチレンブロック共重合体の製造方法
JP6747748B2 (ja) 2014-07-07 2020-08-26 ライフラフト バイオサイエンシーズ，インコーポレイテッド 長期循環物質のないポロクサマー組成物、その産生方法およびその使用
WO2016007542A1 (en) 2014-07-07 2016-01-14 Mast Therapeutics, Inc. Poloxamer therapy for heart failure
US20160000823A1 (en) * 2014-07-07 2016-01-07 Mast Therapeutics, Inc. Methods and compositions for improving hemostasis
US9757411B2 (en) 2014-07-07 2017-09-12 Aires Pharmaceuticals, Inc. Poloxamer therapy for heart failure
US20180353875A1 (en) * 2015-12-22 2018-12-13 Basf Se A process for purification of polyether block copolymers
US20200010618A1 (en) * 2017-02-09 2020-01-09 Basf Se A process for purification of polyether block copolymers
EP3728471A1 (en) * 2017-12-21 2020-10-28 Sigma Aldrich Co. LLC Poloxamer compositions and methods of making and using same
GB2579707A (en) 2018-10-15 2020-07-01 Avent Inc Compositions, systems, kits, and methods for neural ablation
WO2024160792A1 (en) 2023-01-30 2024-08-08 Cannamedical Pharma Gmbh Improved transmucosal patch comprising a cannabinoid and/or an opioid

Family Cites Families (89)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US2674619A (en) * 1953-10-19 1954-04-06 Wyandotte Chemicals Corp Polyoxyalkylene compounds
US2979528A (en) * 1953-10-19 1961-04-11 Wyandotte Chemicals Corp Nitrogen-containing polyoxyalkylene detergent compositions
US3022335A (en) * 1955-03-30 1962-02-20 Wyandotte Chemicals Corp Surface active polyoxyalkylene compounds having a plurality of heteric polyoxypropylene-polyoxyethylene chains
US2854378A (en) * 1955-12-08 1958-09-30 Bristol Lab Inc Tetracycline suppository
US3036118A (en) * 1957-09-11 1962-05-22 Wyandotte Chemicals Corp Mixtures of novel conjugated polyoxyethylene-polyoxypropylene compounds
US3089818A (en) * 1960-06-02 1963-05-14 Baxter Laboratories Inc Water dispersible antibiotics
US3228834A (en) * 1962-06-08 1966-01-11 Hoffmann La Roche Pharmaceutical diluent compositions
US3140232A (en) * 1962-12-19 1964-07-07 Pfizer & Co C Color stabilization of tetracycline compositions with polypropylene glycols
US3391196A (en) * 1965-08-16 1968-07-02 Wyandotte Chemicals Corp High equivalent weight hydroxy-terminated ethylene oxide-butylene oxide polyether polyols
US3740421A (en) * 1966-09-19 1973-06-19 Basf Wyandotte Corp Polyoxyethylene-polyoxypropylene aqueous gels
US3450502A (en) * 1967-09-25 1969-06-17 Wyandotte Chemicals Corp Method of operating heart-lung apparatus
US3641240A (en) * 1968-09-27 1972-02-08 Wyandotte Chemicals Corp Method for the treatment of an embolus or thrombus
US3867533A (en) * 1968-12-20 1975-02-18 Basf Wyandotte Corp Preparation of aqueous gel compositions containing a water-insoluble organic ingredient
US3577522A (en) * 1969-10-10 1971-05-04 Wyandotte Chemicals Corp Methods for the treatment of shock with ethylene oxide-polypropylene glycol condensates as blood plasma substitutes
US3590125A (en) * 1969-10-10 1971-06-29 Wyandotte Chemicals Corp Physiological salt solutions of ethylene oxide-polypropylene glycol condensation products as blood plasma substitutes
US3980772A (en) * 1969-12-02 1976-09-14 Baxter Laboratories, Inc. Methods of dissolving blood clots and the like with streptokinase chemically bonded to a carbohydrate matrix
CA959759A (en) * 1970-01-15 1974-12-24 John J. Miskel Method for absorption of drugs
US3867521A (en) * 1970-08-26 1975-02-18 Scherer Corp R P Method for absorption of drugs
US3956259A (en) * 1973-01-30 1976-05-11 Baxter Laboratories, Inc. Fractionation of blood using block copolymer of ethylene oxide and polyoxypropylene polymer to recover fraction suitable for organ perfusate
US4073886A (en) * 1973-01-30 1978-02-14 Baxter Travenol Laboratories, Inc. Blood fractionation process using block copolymers of ethylene oxide and polyoxypropylene
US4179337A (en) * 1973-07-20 1979-12-18 Davis Frank F Non-immunogenic polypeptides
US3997458A (en) * 1974-04-12 1976-12-14 Deknatel, Incorporated Method of cleansing contaminated wounds and surgical scrub solutions for same
US4104455A (en) * 1975-03-25 1978-08-01 Toyo Soda Manufacturing Co., Ltd. Polymerization of monomer
US4100271A (en) * 1976-02-26 1978-07-11 Cooper Laboratories, Inc. Clear, water-miscible, liquid pharmaceutical vehicles and compositions which gel at body temperature for drug delivery to mucous membranes
US4195167A (en) * 1976-05-28 1980-03-25 Union Carbide Corporation Gradient polymers of two or more cyclic, organic, ring-opening, addition polymerizable monomers and methods for making same
JPS545094A (en) 1977-06-09 1979-01-16 Tokyo Tanabe Co Production of pharmaceutical urokinase from contamination free human urine
DE2732929A1 (de) * 1977-07-21 1979-02-01 Bayer Ag Polyaether, verfahren zu ihrer herstellung sowie ihre verwendung als lipidabsorptionshemmer
DE2961374D1 (en) * 1978-01-27 1982-01-28 Bp Chem Int Ltd A method for increasing the selectivity to acetic acid in the production of a mixture of c1 to c3 monocarboxylic acids by oxidation of paraffinic hydrocarbons
DE2808865A1 (de) * 1978-03-02 1979-09-13 Hoechst Ag Mikrobiozide mittel auf der basis von alkyl-di-guanidinium-salzen
US4275244A (en) 1978-05-11 1981-06-23 Basf Wyandotte Corporation Linear polyalkylene ether glycols of high molecular weight
JPS5533194A (en) 1978-08-07 1980-03-08 Scholz D Thomas Stringgfastener device including tremolant
US4305922A (en) * 1978-10-04 1981-12-15 University Patents, Inc. Labeling proteins with 99m-Tc by ligand exchange
US4186253A (en) * 1978-10-10 1980-01-29 The Green Cross Corporation Perfusate for preserving organ to be transplanted and preserving method
DE2850058A1 (de) * 1978-11-18 1980-05-29 Bayer Ag Polyaether-derivate, verfahren zu ihrer herstellung und ihre verwendung als arzneimittel
FR2454409A1 (fr) * 1979-04-18 1980-11-14 Sovam Vehicule tracteur notamment pour avions gros porteurs
US4409209A (en) * 1979-10-12 1983-10-11 Ciba-Geigy Corporation Novel phosphorylmuramyl peptides and processes for the manufacture thereof
FI803077A7 (fi) * 1979-10-12 1981-04-13 Ciba Geigy Ag Foerfarande foer framstaellning av myramylpeptider
US4410660A (en) * 1980-05-05 1983-10-18 Montefiore Medical Center Binding assay for the detection of mycobacteria
US4575484A (en) * 1980-05-05 1986-03-11 Montefiore Medical Center, Inc. Binding assay for the detection of mycobacteria
US4489158A (en) * 1980-05-05 1984-12-18 Montefiore Hospital And Medical Center, Inc. Binding assay for the detection of mycobacteria
JPS578223A (en) * 1980-06-19 1982-01-16 Mitsui Petrochem Ind Ltd Production of alkylene oxide block copolymer
US4378347A (en) * 1980-06-30 1983-03-29 Franco Wayne P Composition for treating the heart for myocardial infarction
US4376118A (en) * 1980-10-06 1983-03-08 Miles Laboratories, Inc. Stable nonaqueous solution of tetracycline salt
GR78246B (cs) * 1981-01-23 1984-09-26 Ciba Geigy Ag
US4395393A (en) * 1981-08-10 1983-07-26 Basf Wyandotte Corporation Artificial blood emulsifiers
US4407790A (en) * 1981-09-25 1983-10-04 Economics Laboratory, Inc. Method of controlling bloat using nonionic surfactants
DE3380726D1 (en) * 1982-06-24 1989-11-23 Japan Chem Res Long-acting composition
DE3234084A1 (de) * 1982-09-14 1984-03-15 B. Braun Melsungen Ag, 3508 Melsungen Pharmazeutische zubereitungen zur behandlung von unerwuenschten verwachsungen sowie deren verwendung
SU1183112A1 (ru) * 1983-08-04 1985-10-07 Научно-Исследовательский Институт Экспериментальной И Клинической Терапии Министерства Здравоохранения Гсср Способ лечени острой ишемии миокарда
US4606918A (en) * 1983-08-22 1986-08-19 Syntex (U.S.A.) Inc. Polyoxypropylene-polyoxyethylene block polymer based adjuvants
US4600652A (en) * 1985-04-01 1986-07-15 Warner-Lambert Company Permanently bonded antithrombogenic polyurethane surface
US5114708A (en) * 1985-06-18 1992-05-19 Emory University Method for stimulating growth in animals
US5183687A (en) * 1985-06-18 1993-02-02 Emory University Method of treating poultry for coccidiosis
US4806352A (en) * 1986-04-15 1989-02-21 Ribi Immunochem Research Inc. Immunological lipid emulsion adjuvant
US4803070A (en) * 1986-04-15 1989-02-07 Ribi Immunochem Research Inc. Immunological emulsion adjuvants for polysaccharide vaccines
US5039520A (en) * 1986-05-15 1991-08-13 Emory University Plasma extender
US4879109A (en) * 1986-05-15 1989-11-07 Emory University Method for treating burns
US5078995A (en) * 1986-05-15 1992-01-07 Emory University Fibrionolytic composition
US5028599A (en) * 1986-05-15 1991-07-02 Emory University Method of treating mycardial damage
US5032394A (en) * 1986-05-15 1991-07-16 Emory University Method of treating burns
US4801452A (en) * 1986-05-15 1989-01-31 Hunter Robert L Fibrinolytic composition
US5047236A (en) * 1986-05-15 1991-09-10 Emory University Method of treating stroke
US5017370A (en) * 1986-05-15 1991-05-21 Emory University Improved method of performing angioplasty procedures
WO1987006831A1 (en) * 1986-05-15 1987-11-19 Emory University Composition and method for treating a thrombus and embolus
US5089260A (en) * 1986-05-15 1992-02-18 Emory University Method of treating ischemic tissue
WO1987006836A1 (en) * 1986-05-15 1987-11-19 Emory University Fibrinolytic composition
US5071649A (en) * 1986-05-15 1991-12-10 Emory University Method of preventing blockage in catheters
US5041288A (en) * 1986-05-15 1991-08-20 Emory University Method of treating tissue damaged by reperfusion injury
US5064643A (en) * 1986-05-15 1991-11-12 Emory University Method for treating sickle cell disease
US4837014A (en) * 1986-05-15 1989-06-06 Emory University An improved method of treating sickle cell anemia
US5030448A (en) * 1986-05-15 1991-07-09 Emory University Method of delivering drugs to damaged or diseased tissue
US4937070A (en) * 1986-05-15 1990-06-26 Emory University Methods and compositions for treatment of pathological hydrophobic interactions in biological fluids
US5198211A (en) * 1986-05-15 1993-03-30 Emory University Method of treating myocardial damage
US4897263A (en) * 1986-05-15 1990-01-30 Emory University Methods and compositions for treatment of pathological hydrophobic interactions in biological fluids
US5250294A (en) * 1986-05-15 1993-10-05 Emory University Improved perfusion medium for transplantation of organs
US4997644A (en) * 1986-05-15 1991-03-05 Emory University Method of treating adult respiratory distress syndrome
US4873083A (en) * 1986-05-15 1989-10-10 Emory University Fibrinolytic composition
US5080894A (en) * 1986-05-15 1992-01-14 Emory University Method and composition for reducing tissue damage
JP2527942B2 (ja) * 1986-09-18 1996-08-28 ティーディーケイ株式会社 磁気記録媒体
US5554372A (en) 1986-09-22 1996-09-10 Emory University Methods and vaccines comprising surface-active copolymers
US4764567A (en) 1986-11-20 1988-08-16 Basf Corporation Process for the preparation of polyoxyalkylene block polyethers having enhanced properties
WO1988006038A1 (en) * 1987-02-20 1988-08-25 Emory University Antiinfective compounds and method of use
US5811088A (en) 1987-02-20 1998-09-22 Emory University Antiinfective compounds and methods of use
JPH07109520B2 (ja) 1987-02-24 1995-11-22 株式会社リコー 電子写真用感光体
US5057540A (en) * 1987-05-29 1991-10-15 Cambridge Biotech Corporation Saponin adjuvant
DE4014923A1 (de) * 1990-05-10 1991-11-14 Basf Ag Verfahren zur herstellung von urethan- oder urethan- und isocyanuratgruppen enthaltenden hartschaumstoffen nach dem polyisocyanat-polyadditionsverfahren und die hierfuer geeigneten polyoxyalkylen-polyole
ES2140408T3 (es) * 1991-03-19 2000-03-01 Cytrx Corp Copolimeros de polioxipropileno/polioxietileno con actividad biologica mejorada.
US5294365A (en) * 1991-12-12 1994-03-15 Basf Corporation Hydroxypolyethers as low-foam surfactants
US5371253A (en) * 1993-12-14 1994-12-06 Arco Chemical Technology, L.P. Process for producing esterified alkoxylated monoglycerides and diglycerides

Also Published As

Publication number Publication date
NO933337D0 (no) 1993-09-17
USRE36665E (en) 2000-04-18
SK100893A3 (en) 1994-04-06
DE69230372D1 (de) 2000-01-05
AU662146B2 (en) 1995-08-24
US5691387A (en) 1997-11-25
ATE187154T1 (de) 1999-12-15
EP0576612B1 (en) 1999-12-01
CA2106474C (en) 2004-02-10
IE920860A1 (en) 1992-09-23
IL101305A0 (en) 1992-11-15
HU9302628D0 (en) 1993-12-28
JP2647556B2 (ja) 1997-08-27
US5990241A (en) 1999-11-23
EP0576612A1 (en) 1994-01-05
AU1773092A (en) 1992-10-21
NO933337L (no) 1993-11-17
EP0576612A4 (en) 1994-11-09
USRE37285E1 (en) 2001-07-17
IL101305A (en) 1995-11-27
NO307890B1 (no) 2000-06-13
KR100224539B1 (ko) 1999-10-15
US5523492A (en) 1996-06-04
CN1069741A (zh) 1993-03-10
GR3032726T3 (en) 2000-06-30
US6359014B1 (en) 2002-03-19
ES2140408T3 (es) 2000-03-01
DK0576612T3 (da) 2000-05-22
JPH06506258A (ja) 1994-07-14
US6747064B2 (en) 2004-06-08
CA2106474A1 (en) 1992-09-20
WO1992016484A1 (en) 1992-10-01
US20020183398A1 (en) 2002-12-05
HUT67762A (en) 1995-04-28
DE69230372T2 (de) 2000-06-15

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CZ194693A3 (en) Copolymers polyoxypropylene/polyoxyethylene with enhanced biological activity
US5696298A (en) Polyoxypropylene/polyoxyethylene copolymers with improved biological activity
IE83219B1 (en) Polyoxypropylene/polyoxyethylene copolymers with improved biological activity
US5567859A (en) Polyoxypropylene/polyoxyethylene copolymers with improved biological activity
US5674911A (en) Antiinfective polyoxypropylene/polyoxyethylene copolymers and methods of use
HU227992B1 (en) Interferon conjugates, process for prepairing them, pharmaceutical compositions, containing them and use of them
US7511023B2 (en) Anticancer drug-chitosan complex forming self-aggregates and preparation method thereof
USRE38558E1 (en) Polyoxypropylene/polyoxyethylene copolymers with improved biological activity
US20220354801A1 (en) Multifunctional Nanoparticles For Prevention And Treatment Of Atherosclerosis
HU210901A9 (en) Polymyxin conjugates
US6054492A (en) Fluorinated copolymeric pharmaceutical adjuncts
US20080057026A1 (en) Amphiphilic Star-Like Or Scorpion-Like Macromolecules, Various Compositions And Uses Threof
US7863408B2 (en) Body fluid compatible and biocompatible resin
US20190365907A1 (en) Zwitterionic polymer-insulin compositions and related methods
CN120187465A (zh) 脂质类似物、包含它们的脂质体及其用途
JP4177604B2 (ja) 生理活性複合体
WO2025216313A1 (ja) 共重合体、抗線維化剤、線維症治療用医薬組成物及び筋線維芽細胞を不活性化する方法
PL249375B1 (pl) Sposób otrzymywania micelarnych koniugatów jonowych na bazie polimerów szczepionych do współdostarczania leków przeciwgruźliczych oraz ich zastosowanie
PL249145B1 (pl) Sposób otrzymywania micelarnych koniugatów jonowych na bazie polimerów liniowych do współdostarczania leków przeciwgruźliczych oraz ich zastosowanie
PL249430B1 (pl) Sposób otrzymywania micelarnych koniugatów jonowych na bazie polimerów szczepionych do współdostarczania leków przeciwbakteryjnych oraz ich zastosowanie
CN117122694A (zh) 细胞穿透肽-多糖-小分子抗肿瘤药物聚离子复合物及其制法和应用
Braden et al. Enhanced Delivery of Bioactive Molecules to Intracellular Environments Utilizinga Cytosolically Reducable Grafted Analogof Polyethylenimine