CZ198497A3 - Cyclic peptides inhibiting fibronectin adhesion, process of their preparation and pharmaceutical compositions containing thereof - Google Patents

Description

Cyklické peptidy inhibujíci-^ribronektinovou adh^si,' 'způsob jejich přípravy a farmaceutické prostředky-^* k^eré-^j e ofc/sahují

Oblast techniky

Vynález se týká cyklických peptidů inhibujících fibronektinovou adhesi, způsobu jejich přípravy a farmaceutických prostředků které je obsahují.

Dosavadní stav techniky

Mnohé z interakcí, buňka-buňka a buňka-extracelulární matrix jsou zprostředkovány proteinovými ligandy (například fibronektinem, vitronektinem a VCAM-1) a jejich integrinovými receptory (například VLA-4 (α4βΐ)) . Nejnovějšími výzkumy bylo zjištěno, še tyto interakce hrají důležitou roli v mnohých fyziologických stavech (například embryonálním vývoji a hojení ran) a patologických stavech (například invazi nádorových buněk a metastázách, zánětech, atherosklerose a autoimunitních onemocněních). O činidlech, která mohou selektivně inhibovat některé z těchto interakcí, se' předpokládá) že budou vhodná pro léčení řady onemocnění.

Integriny jsou heterodimerní buněčné povrchové receptory, které jsou složeny z nekovalentně spojených (asociovaných) podjednotek α a β. Pomocí molekulární biologie a chemie proteinů byla identifikována řada podjednotek α a β. Integriny mohou být rozděleny do skupin na základě podjednotek β, které mohou být spojeny s jednou nebo více podjednotkami a. Nejrozšířenější integriny patří do skupiny βΐ, rovněž známé jako velmi pozdní antigeny (very latě antigens, VLA). Druhou skupinou integrinů jsou pro leukocyty specifické receptory, které se skládají z jedné ze tří podjednotek α (aL, aM nebo aX) v komplexu s proteinem β2. Třetí skupinu integrinů tvoří.cytoadhesiny αΙ]^β3 a ανβ3.

II

Jako ligandy pro integrinové receptory slouží rozsáhlá řada proteinů. Obecně spadají proteiny rozpoznávané integriny do jedné ze tří skupin: mezi extracelulární matricové proteiny, plasmové proteiny nebo molekuly buněčného povrchu. Extracelulární matricové proteiny, jako je kolagen, fibronektin, fibrinogen, laminin, thrombospondin a vitronektin, se vážou na řadu integrinů. Mnohé z těchto adhesivních proteinů rovněž cirkulují v plasmě a vážou se na aktivované krevní buňky. Mezi další složky v plasmě, které jsou ligandy pro integriny, patří fibrinogen a faktor X. Na buňku vázaný komplement C3bi a některé transmembránové proteiny, jako je buněčná adhesní molekula podobná Ig (ICAM-1,2,3) a vaskulární buněčná adhesní . molekula (VCAM-1), které jsou členy rodiny Ig, rovněž slouží jako ligandy na povrchu buněk pro některé integriny.

Byly identifikovány cílové aminokyselinové sekvence pro mnohé integriny. Například cílovou sekvencí v α5βΐ, αΙΐβ3 a ανβ3 je tripeptid Arg-Gly-Asp, který se nachází v proteinech, jako je fibronektin, fibrinogen, thrombospondin, kolagen typu 1, vitronektin a vWF. Nicméně sekvence. Arg-Gly-Asp není jediným rozpoznávacím motivem integrinů, který používají adhesivní ligandy. Další integrin α4βΐ váže variabilní oblast (CS1) fibronektinu pomocí sekvence Leu-Asp-Val a integrin z krevních destiček allbp3 rovněž rozpoznává sekvenci His-His-Leu-Gly-Gly-Ala-Lys-Gln-Ala-Gly-Asp-Val na C-konci gama-řetězce fibrinogenu.

Vynález se v principu týká činidel, která blokují interakci ligandu VCAM-1 s jeho integrinovým receptorem VLA-4 (α4βΐ). [Souhrná práce o VLA-4: Structure of the Integrin VLA-4 and Its Cell-Cell and Cell Matrix Adhesion Functions, Μ. E. Hemler, M. J, Elices, C. Parker a Y. Takada, Immunological Reviews, 114 (1990) 45 - 65.] Integrin α4βΐ je exprimován na řadě hematopoietických buněk a zavedených buněčných linií, včetně hematopoietických prekursorů, periferních a cytotoxických T-lymfocytů, B-lymfocytů, monocytú, thymocytů a eosinofilů. Narozdíl od ostatních βΐ-integrinů, které se podílejí póze na interakcích buňka-extracelulární matrix, zprostředkovává α4β1 jak interakce buňka-buňka tak buňka-extracelulární matrix. Buňky exprimující aktivovaný α4βΐ se vážou na C-koncovou buňky vázající doménu fibronektonu (tato vazba není zprostředkována Arg-Gly-Asp), na VCAM-1 exprimovaný na endoteliálních buňkách a k sobě navzájem,' v důsledku čehož dochází k homotypické agregaci. Exprese VCAM-1 endoteliálním buňkami je zvyšována prozánětli.vými cytokiny jako je INF-γ, ŤNF-α a IL-Ιβ.

Regulace adhese buněk zprostředkované α4βΐ je důležitá při řadě fyziologických procesů, včetně proliferace T-buněk, lokalizace B-buněk do germinativních center a adhese aktivovaných T-buněk a eosinofilů k endoteliálním buňkám. Kromě toho se .integrinem α4βΐ zprostředkované procesy podílejí na různých onemocněních jako je invaze .melanomových buněk v metastázách, infiltrace synoviálních membrán T-buňkami při revmatické artritidě, aučoímunitní diabetes, kolitida a penetrace leukocytů přes bariéru, mezi krví a mozkem při experimentální autoimunitní encefalomyelitidě, atherosklerosa, periferní vaskulární onemocnění, kardiovaskulární onemocnění a roztroušená sklerosa. Důkazy toho, že se interakce VLA-4/VCAM-1 podílí na výše uvedených chorobných procesech byly získány zkoumáním role peptidu CS-1 a protilátek specifických pro VLA-4 nebo VCAM-1 v různých in vitro a in vivo experimentálních modelech zánětů (jako je například kontaktní .kožní hypersenzitivní odpověď . u myši), experimentální autoimunitní encefalomyelitidy, plicní expozice antigenu, diabetes, ulcerativní kolitidy, nefritidy a odmítnutí alloštěpů. Mezi další relevantní onemocnění patří astma, psoriasa, restenosa, myokarditida a zánětlivá onemocnění střev.

Například v experimentálním modelu artritidy (artritidy vyvolané u inbredních samic krys (Lewís) jedinou intraperitoneální injekcí peptidoglykan-polysacharidových fragmentů ze skupiny A streptokokálních buněčných stěn) bylo zjištěno, že intravenosní podání CS-1 na počátku artritidy (dny 0 - 4, 3 00 μg/den) nebo ve dnech 11 - 16 zvířatům s rozvinutou artritidou, potlačuje jak akutní tak chronický zánět (viz: Synthetic Fibronectin Peptides Suppress Arthritis in Rats by Interrupting Leukocyte Adhesion and Recruitment, S. M. Wahl, J. B. Allen, K. L. Hines, T. Imamichi, A. M. Wahl, L. T. Furcht a J. B. McCarthy, J. Clin. Invest., 94 (1994) 655 - 662) .

V dalším modelu zánětu (kontaktní hypersenzitivní odpověď u oxazolonem nebo 2,4-dinitrofluorbenzenem senzitizovaných myší) intravenosní podání monoklonálních protilátek Rl-2 nebo P2/2 specifických proti a-4 (4 až 6 hodin před expozicí) podstatně inhibovalo eferentní odpověď (50 - 60% snížení otoku ucha jako odpovědi) . (viz Monoclonal Antibodies to the Integrin a-4 Subunit Inhibit the Murine Contact Hypersensitivity Response, P. L. Chisholm, C. A. Williams a

R. R. Lobb, Eur. J. Immunol., 23 (1993) 682 - 688)·. V modelu zánětu střev (akutní kolitida u kosmana), měla monoklonální protilátka HP1/2 proti integrinu ct4, která váže VLA-4, za následek podstatné zeslabení akutní kolitidy. Naproti tomu dvě monoklonální protilátky proti E-selektinu (BB11 a EH8) u kosmana mírně omezovaly kolitidu po desetidenní době. ošetřování (viz: Attenuation of Colitis in the Cotton-top Tamarin by Anti-a 4 Integrin Monoclonal Antibody, D. K. Podolsky, R. Lovv, N. King, C. D. Benjamin, B. Pepinsky, P. Sehgal a M. deBeaumont, J. Clin. Invest., 92 (1993) 372 až 380) .

Rovněž bylo zjištěno, že jsou tyto protilátky účine v modelu autoimunitní encefalomyelitidy (EAE) , zánětlivého stavu centrálního nervového systému, který je podobný roztroušené sklerose. U obou onemocnění cirkulující leukocyty penetrují přes bariéru mezi krví a mozkem a poškozují myelin, což má za následek narušení nervového vedení a paralýzu. Autoimunitní encefalomyelitidu lze vyvolat aktivně primární imunizací zvířete proteiny CNS, jako je myelinový bázícký protein (MBP), nebo adoptivně injekcí aktivovaných lymfocytu, které jsou specifické pro tyto antigeny CNS. Po injekci do ozářené samice myši (PL/J x SJL)F1 oddalovaly nástup onemocnění různé monoklonální protilátky (MK/1 (proti VCAM-1) a PS/2 a LPAM-1 (proti a4-integrinu)). Pokud se v injekcích protilátek proti a4-integrinu (LPAM-1 a PS/2) pokračovalo každé 3 dny až do doby po nástupu onemocnění, nejenže byl nástup onemocnění oddálen, ale v tomto případě byla rovněž podstatně snížena závažnost onemocnění (viz: Surface Expressioin of a4 Integrin by CD4 T Cells Is Required for Their Entry into Brain Parenchyma, J. L. Baron, J. A. Madri., N. H. Ruddle, J. Hashim a C. A. Janeway, Jr., J. Exp. Med., 177 (1993) 57 - 68) .

Bylo rovněž zjištěno, že protilátky specifické jak proti ct4-integrinu (LPAm-1) tak proti' jednomu z jeho ligandů, VCAM-1, jsou účinné při léčení insulin-dependentní diabetes mellitus u neobézních diabetických myší. Má se za to, že insulin-dependentní diabetes mellitus je autoimunitní oenmocnění, při kterém aktivované T-lymfocyty ničí β-buňky pankreatických ostrůvků produkující inzulín. Protilátka Rl-2 zabraňovala v závislosti na dávce nástupu insulitidy u neobézních diabetických myší. Blokování onemocnění bylo doprovázeno výrazným snížením infiltrace lymfocytu do Langerhansových ostrůvků (viz: The Pathogenesis of Adoptive Murine Autoimmune Diabetes Requires and Interaction Between a4-Integrins and Vascular Cell Adhesion Molecule-1, J. L. Baron, E-P. Reich, I. Visintin a C. A. Janeway, Jr., J. Clin. Invest., 93 (1994) 1700 - 1708).

Bylo zjištěno, že buňky exprimující integrin α4βΐ se vážou na sekvence ve vazebné doméně heparinu II a alterna6 tivně sestřiženém spojovacím segmentu typu III (type III connecting segment, IIICS), který se nachází v C-koncové buňky vázající doméně' fibronektinu. V oblasti IIICS se α4βΐ váže s vysokou afinitou na peptidové sekvence označené CS-1 (peptid obsahující 25 aminokyselin), což svědčí o tom, že toto místo je hlavním místem interakce s α4βΐ ve fibronektinu. Tripeptid Leu-Asp-Val je minimální sekvencí v CS-1 schopnou podporovat adhesi hematopoietických buněk nebo inhibovat vazbu buněk na. fibronektin zprostředkovanou α4βΐ (CS1 viz: The. Minimal Essential Sequence for a Major Cell Type-Specific Adhesion Sítě (CS1) Within the Alternatively Spliced- Type III Connecting Segment Domain of Fibronectin is Leucine-Aspartic Acid-Valine, A. Komoriya, L. J. Green, M. Mervic, S. S. Yamada, Κ. M. Yamada a M. J. Humphries, J. Biol. Chem., .23 (1991) 15075 - 15079; Activation-Dependen.t

Recognition by Hematopoietic Cells of the LDV Sequence in the V Region of Fibronectin, E. A. Wayner a N. L. Kovach, J. Cell Biol., 116 (1992) 489 - 497) .

Kromě výše zmíněných sekvencí obsahujících Leu-Asp-Val bylo popsáno, že cyklický- oktapeptid l-adamantanacetyl-Cys- -Gly-Ar-Gly-Asp-Ser-Pro-Cys (obsahující disulfidový můstek mezi uvedenými dvěma cysteinovými zbytky) je stejně účinný 'jako peptid Cys-Leu-His-Gly-Pro-Glu-Ile-Leu-Asp-Val-Pro-Ser-Thr obsahující sekvenci Leu-Asp-Val při blokování adhese buněk Jurkat na desky potažené CS-1 (IC₅₀ 30 /mol) . Tento cyklický peptid rovněž inhiboval vazbu buněk Jurkat na desky potažené fibronektinem. Kromě inhibice adhese indukované α4βΐ tento oktapeptid rovněž inhiboval funkci v ανβ3- jakož i αΙ^βΐΙΙβ-άθρβηάβηύηίοΐΊ testech. Tento peptid tudíž není selektivní pro adhesi zprostředkovanou α4β1. (viz.· Cyclic RGD Peptide Inhibits α4βΐ Interaction with Connecting Fragment 1 and -Vascular Cell Adhesion Molecule, Ρ. M. Cardarell, R. R. Cobb, D. M. Nowlin, W. Scholz, F. Gorcsan, M. Moscinski, M. Yasuhara, Ξ-L-Chiang a T. J. Lobl, J. Biol. Chem., 269 (1994)

18668 - 18673).

Bylo rovněž popsáno, že adhesi indukovanou α4βΐ inhibují některé malé nepeptidícké sloučeniny ' (viz; Non-peptiďic Surrogates of the Leu-Asp-Val Seguence and Their Use in the Treatment of Inflammation, Autoimmune Diseases and Tumour progression, YEDA Research and Development Co. Ltd, WO 94/02445, zveřejněno 3. února 1994).

Bylo rovněž popsáno, že disulfidóvý cyklický pentapeptid, Arg-Cys-Asp-thioprolin-Cys (thioprolin = thiazolidin-4-karboxylová kyselina) je inhibitorem buněčné adhese leukocytu k fibronektinu. Kromě toho· tento cyklický peptid rovněž inhiboval vazbu na chymotryptický fragment fibronektinu o velikosti 120 kDa, který obsahuje centrální buňky vázající doménu Arg-Gly-Asp. Tento peptid rovněž nebyl selektivní, váže se jak na α4βΐ tak na α5β1 (viz: A Novel Cyclic Pentapeptide Inhibits α4βΐ and α5β! Integrin-Mediated Cell Adhesion, D. M. Nowlin, F. Gorcsan, M. Moscinski, S-L. Chiang, T. J. Lobl a Ρ. M. Cardarelli, J. Biol. Chem., 268 (1993) 20352 - 20359) .

Podstata vynálezu

Vynález je založen na zjištění, že relativně malé cyklické peptidy mohou účinně inhibovat interakci VCAM-I a fibronektinu s integrinem VLA4.

Podle jednoho provedení vynález popisuje cyklický peptid obecného vzorce 1

AA1-AA2-AA3-AA4, ve kterém .

AA1 představuje L- nebo D-aminokyselinu vybranou ze souboru zahrnujícího Ile, Leu, Pro, Gly a Tic a jejich aminoky. selinové analogy,

AA2 znamená L-aminokyselínu vybranou ze souboru zahrnujícího Leu, Ile, Phe a Val a jejich aminokyselinové analogy,.

AA3 představuje L-aminokyselinu vybranou ze souboru zahrnujícího Asp a Glu a jejich aminokyselinové analogy,

AA4 znamená L-aminokyselinu vybranou ze souboru zahrnujícího Val, Leu, Ile, Phe a Cha (cyklohexylalanin) a jejich aminokyselinové analogy, a

LINKER představuje spojovací zbytek,pro spojení AA1 až AA4 za vzniku cyklického peptidu, přičemž spojovací zbytek je na délku menší než -(CH₂)_U-. (výhodně menší než -C (0} - (CH₂) _n-NH-, výhodně menší než -C (0) - (GH₂ϊ _l0-NH- , výhodně menší než -C (0) - (CH₂) ₉-NH-, výhodně menší než -C (0) - (CH₂) _B-NH-, výhodně menší než -Č (0) - (CH₂) ,-NH-} , přičemž tento peptid výhodně vykazuje ve zde popsaném testu buňky MOLT-4/f ibronektin hodnotu IC₅₀ méně než 20 μπιοί,'· výhodněji méně než 15 μπιοί nebo vykazuje ve zde popsaném testu buňky MOLT-4/rekombinantní rozpustný VCAM-1 hodnotu IC₅o méně než. 100 μπιοί, výhodně méně než 5 0 μπιοί, a AA1-4 mají obecný vzorec 2

R1 o

(2) ve kterém

Rl představuje postranní řetězec aminokyseliny, a symboly R2 a R3 nezávisle na sobě znamenají vždy atom vodíku nebo alkylovou skupinu s 1 až 4 atomy uhlíku (výhodně atom vodíku nebo methylovou skupinu, zejména atom vodíku).

Aminokyselinový analog je zde definován jako aminokyselina se stejnými charakteristikami postranního řetězce, například hydrofobností nebo přítomností funkční skupiny (například karboxylové skupiny) nebo jí napodobující skupiny (jako je například tetrazolový zbytek v případě karboxylové skupiny), jako má aminokyselina, kterou tento analog nahrazuje.

Výhodně je spojovací zbytek na délku větší než -C(0)-(CH₂) ₂-NH-. (Je třeba vzít v úvahu, že cyklický tetrapeptiď Ile-Leu-Asp-Val spojený N- k C-konci skupinou -C(0)-(CHj) 2-NH- (β-alanin) byl neúčinný v biologickém testu při 20 0 μτηοΐ) . Termín LINKER nezahrnuje opakování zbytku AA1-AA4 jako takového. (Další provedení vynálezu, ve kterém je LINKER definován jako součást heterocyklického kruhu vytvořeného s AA1-AA4, je uvedeno níže. Kde to přichází v úvahu, vztahují se výhodné významy symbolů a vysvětlení termínů k oběma způsobům definice vynálezu.)

V tomto popisu zahrnuje generický termín alkyl alkylové skupiny jak s přímým tak s rozvětveným řetězcem. Nicméně pokud jsou uvedeny konkrétní alkylové skupiny, jako je propyl, jedná se pouze o skupiny s přímým řetězcem, a pokud jsou uvedeny konkrétní rozvětvené alkylové skupiny, jako je isopropyl, jedná se pouze o skupiny s rozvětveným řetězcem. Totéž platí analogicky pro ostatní generické termíny. Sloučeniny podle vynálezu zahrnují solváty, jako jsou například hydráty. Sloučeniny podle vynálezu zahrnující profarmaka, jako jsou například in vivo hydrolyzovatelné estery. Termíny aryl a heteroaryl zahrnují skupiny popřípadě mono- či disubstituované skupinami nezávisle na sobě vybranými ze souboru zahrnujícího alkylové skupiny s 1 až 4 atomy uhlíku, alkoxyskupiny s 1 až 4 atomy uhlíku, hydroxyskupinu, atomy halogenů, kyanoskupinu a trifluormethy10 lovou skupinu.

Výhodné významy jednotlivých symbolu jsou následující':

AAl představuje Ile, D-íle nebo Melle (zejména D-Ile nebo

Melle); (zkratka Me znamená methyl),

AA2 znamená Leu,

AA3 představuje Asp, a

AA4 znamená Val.

Výhodné analogy· Ile jsou znázorněny na obrázku 5. Výhodným analogem Ile-je D-Ile.

Mezi výhodné významy symbolu LINKER nepatří disulfidové vazby, zejména mezi zbytky Cys. V tomto popisu má tetrapeptid -ΑΑ1-ΑΑ2-ΆΑ3-ΑΑ4- svůj N-konec na' AA1 a svůj C-konec na AA4, pokud není uvedeno jinak nebo pokud něco jiného' implicitně nevyplývá z kontextu. Aminokyseliny jsou v L-konfiguraci pokud není uvedeno jinak nebo pokud něco jiného implicitně nevyplývá z kontextu.

Mezi vhodné významy AA1 patří terč.Leu a terč.butyl-Ala.

Symbol LINKER výhodně představuje skupinu obecného vzorce 4 q R4 R5 (4) ve kterém n má hodnotu 3-5 (zejména 3), a symboly R4 a R5 představují vždy atom vodíku, nebo

R4 znamená, skupinu NH₂, která je popřípadě substituována skupinou C_woacyl nebo Ci.₁₀.O. CO (kde C₁._l0 znamená alkylovou, arylovou, heteroarylovou, arylalkylovou nebo heteroarylalkylovou skupinu s 1 až 10 atomy uhlíku), jako alkanoylovou skupinou se 2 až 5 atomy uhlíku (zejména isobutylkarbonylovou skupinou, skupinou CH₃C(O)-, CH₃CH₂C(O)-, cyklopropyl karbony lovou skupinou, cyklobutylkarbonylovou skupinou), terč.butoxykarbonylovou skupinou (Boc), benzyloxykarbonylovou skupinou nebo pyridylkarbonylovou skupinu (zejména pyridyl-3-yl-karbonylovou skupinou), nebo je skupina NH₂ popřípadě substituována aminokyselinami přes a-karboxylovou skupinu, například Glu, Asp, Pro-Glu nebo Pro-Asp, přičemž N-konec aminokyseliny je popřípadě chráněný skupinou C^^acyl nebo Ci.io-O.CO (kde Cí.ío znamená alkylovou, arylovou, heteroarylovou, arylalkylovou nebo heteroarylalkylovou skupinu s 1 až 10 atomy uhlíku), jako například skupinou CH₃C(O)-, CH₃CH₂C(O)-, cyklopropylkarbonylovou skupinou, cyklobutylkarbonylovou skupinou nebo terč.butoxykarbonylovou skupinou (Boc), nebo je skupina NH₂ popřípadě mono- nebo disubstituovaná alkylovou skupinou s.l až 4 atomy uhlíku (zejména se jedná o diethylaminoskupinu), nebo je skupina NH₂ popřípadě substituována benzylovou skupinou, pyridylovou skupinou, karboxyalkanoylovou skupinou se 2 až 5 atomy uhlíku v alkanoylové části (zejména 3-karboxypropionylovou skupinou) nebo aminoalkanoylovou skupinou se 2 až 5 atomy uhlíku (zejména 3-aminopropionylovou skupinou), a

R5 představuje atom vodíku, nebo Ř4 znamená atom vodíku, a

R5 představuje karboxylovou skupinu popřípadě substituovanou za vzniku esteru, jako například za vzniku skupiny '-COO-methyl, -COO-ethyl, -COO-propyl nebo

-COO-butyl, nebo R5 představuje amidovou skupinu jako je například skupina -CONH₂, -CONH-methyl, -CONH-ethyl, j

-CONH-propyl nebo -CONH-butyl. ''

Zejména výhodné je, pokud oba symboly R4 a R5 představují atomy vodíku. f

Mezi vhodné hodnoty symbolu n patří 3-9, 3-8, 3-7, 3-6,

3-5, 3-4, 3, 4, 5, 6, 7, 8 a 9.

Další výhodné významy symbolu LINKER jsou uvedeny na obrázcích 8 nebo/a 13.'

Podle jednoho provedení vynález popisuje cyklický peptid obecného vzorce I,ve kterém

AA1 představuje L- nebo D-aminokyselinu vybranou ze souboru zahrnujícího' Ile, Leu a jejich aminokyselinové analogy,

AA2 ' znamená L-aminokyselinu vybranou ze souboru zahrnujícího Leu a jeho aminokyselinové analogy,

AA3 představuje L-aminokyselinu vybranou ze souboru zahrnujícího Asp a její aminokyselinové analogy, které „ . obsahují v postranním řetězci karboxylovou skupinu (nebo popřípadě skupinu napodobuj ící karboxylovou skupinu, zejména tetrazolový zbytek),

AA4 znamená L-aminokyselinu vybranou ze souboru zahrnujícího Val a jeho aminokyselinové analogy, a

LINKER představuje spojovací zbytek pro spojení N-konce AA1 s C-koncem AA4 za vzniku cyklického peptidu obsahujícího heterocyklický kruh se 17 až 30 členy, přičemž tento cyklický peptid vykazuje ve zde popsaném testu buňky MOLT-4/fibronektin hodnotu IC₅₀ méně než 20 μτηοΐ (a výhodně, přičemž výhodnost postupně roste, méně než 10, méně než 3, méně než 1, méně než 0,3, méně než 0,1 a méně než 0,03 gmol) nebo/a vykazuje ve zde popsaném testu buňky

MOLT-4/rekombinantní rozpustný VCAM-1 hodnotu IC_5a méně než 100 μπιοί (a výhodně, přičemž výhodnost postupně roste, méně než 50, méně než 30, méně než 10, méně než 3, méně než 1, méně než 0,3, méně než 0,1 a méně než 0,03 μτηοΐ) , a AA1-4 mají obecný vzorec 2, ve kterém

Rl představuje postranní řetězec aminokyseliny, a symboly R2 a R3, které mohou být stejné nebo rozdílné pro každou z AA1 - AA4 nezávisle na sobě znamenají vždy atom vodíku, a jeho soli.

Výhodně činí počet členů v heterocyklickém kruhu vytvořeném spojovacím zbytkem (LINKER) pro spojení N-konce AA1 s C-koncem AA4 17 až 29, výhodněji 17 až 28 členů, ještě výhodněji 17 až 27 členů, ještě výhodněji 17 až 26 členů, ještě výhodněji 17 až 25 Členů, ještě výhodněji .17 až 24 členů, ještě výhodněji 17 až 23 členů, ještě výhodněji 17 až 22. členů, ještě výhodněji 17 až 21 členů, ještě výhodněji 17 až 20 členů, ještě výhodněji 17 až 19 členů, ještě výhodněji17 a.ž 18 členů, a zejména výhodně· 18 členů.

Pokud heterocyklický kruh vytvořený spojovacím zbytkem (LINKER) pro spojení N-konce AA1 s C-koncem AA4 sám obsahuje kruh (vnitřní kruh), počítá se počet členů v heterocyklickém kruhu tak, že zahrnuje pouze ty členy vnitřního kruhu, které tvoří nej kratší cestu pro uzavření heterocyklického kruhu. Například sloučenina 16 v tabulce 2 má v rámci této definice ve svém heterocyklickém kruhu 20 členů a podobně sloučenina 17 má 18 členů.

Výhodný je výše popsaný cyklický peptid, ve kterém mají jednotlivé symboly následující významy:

pro AA1 je aminokyselinový analog vybrán ze souboru zahrnujícího Val, Pro. Gly, Tic, terč.Leu, terč.butyl14

	-Ala, Phe, Nle, Met, Arg, Lys a Ala,
pro	AA2 je aminokyselinový analog vybrán ze zahrnujícího Ile, Phe, Val, terč.Leu, Nle, terč.butyl-Ala,	souboru Cha a
pro	AA3 je aminokyselinovým analogem Glu, a
pro	AA4 je aminokyselinový analog vybrán ze zahrnujícího Leu, Ile, Phe, Cha, Nle a Nva,	souboru

a jeho soli.

Ještě výhodnější je výše popsaný cyklický peptid, ve kterém mají jednotlivé symboly následující významy:

AAl je vybrán ze souboru zahrnujícího Ile a Leu, přičemž oba tyto zbytky jsou popřídě N-methylovány,

AA2 představuje Leu,

AA3 znamená Asp, a

AA4 představuje Val, a jeho soli.

Výhodný je výše popsaný cyklický peptid, ve kterém LINKER představuje skupinu obecného vzorce 4, kde n má hodnotu 3 - 5, a symboly R4 a R5 představují vždy atom vodíku, nebo

R4 znamená skupinu NH₂, která je popřípadě substituována skupinou ^.₁₀€(Ο)-, nebo je skupina NH₂ popřípadě substituována přirozenými aminokyselinami přes α-karboxylovou skupinu, přičemž N-kohec aminokyseliny je popřípadě substituován skupinou C^qCŮO)-, nebo je skupina NH₂ popřípadě mono- nebo disubstituo15 váná alkylovou skupinou s 1 až 4 atomy uhlíku, nebo je skupina NH₂ popřípadě substituována benzylovou skupinou, pyridylovou skupinou, karboxyalkanoylovou skupinou se 2 až 5 atomy uhlíku v alkanoylové části' nebo aminoalkanoylovou skupinou se 2 až 5 atomy uhlíku, a

R5 představuje atom vodíku, nebo R4 znamená atom vodíku, a

R5 představuje karboxylovou skupinu popřípadě substituovanou alkylovou skupinou s 1 až 4 atomy uhlíku za vzniku esteru, nebo R5 představuje amidovou skupinu obecného vzorce -CONR6R7, kde symboly R5 a R7 nezávisle na sobě znamenají vždy atom vodíku nebo alkylovou skupinu s 1 až 4 atomy uhlíku, a jeho soli.

V tomto popisu označují vazby nakreslené se šipkami přímé vazby nebo místa navázání, a neznamenají tedy skupiny -CH_Z-, pokud není uvedeno- jinak nebo pokud něco jiného implicitně nevyplývá z kontextu. V tomto popisu se aminokyseliny spojují běžným způsobem, pokud není uvedeno jinak nebo pokud něco jiného implicitně nevyplývá z kontextu, a aminokyseliny jsou v L-konfiguraci, pokud není uvedeno jinak nebo pokud něco jiného implicitně nevyplývá z kontextu.

Výhodný je výše popsaný cyklický peptid, ve kterém

LINKER představuje libovolný ze zbytků vzorců 6-44 uvedených na obrázku 13, a jeho soli.

Ještě výhodnější je výše popsaný cyklický peptid, ve kterém

LINKER představuje libovolný ze zbytků vzorců 6, 7, 8, 13,

17, 18, 19, 20 nebo 21 - 44 uvedených na obrázku 13, a jeho soli.

Výhodnými cyklickými peptidy, ve kterých se poznámky v hranatých závorkách týkají jejich části odpovídající symbolu LINKER, a Melle představuje N-methyl-Ile, jsou:

c(Ue-Leu-Asp-Val-NH-(CH₂)5-CO-) B-tle-Leu-Asp-Val-NH(CH₂)_sCO‘N i

H

Ac-

NH

Ile-Leu-Asp-Val 0 [D-Lys-analogl

NH

lle-Leu-Asp-Val—

H Ó [L-Orn-analogl CH,

^H3^C\>^CH3

Leu-Asp-Val-NH(CH₂)₅CO-}|

Ac

Ac

NH

D-lle-Leu-Asp-Val

O [D-Lys-analog] .NH

D-lle-Leu-Asp-Val _H o [L-Orn-analog] ^-D-lle-Leu-Asp-Val-NH(CH₂)₄CO^ eLeu-Leu-Asp-Val-NH(CH₂)₅CO

CH.CO-lle-Leu-Asp-Val —Ν ν I \_/

CH;

Ο

-Ν

Η

Η,

CH,

0’

ΝΗ

D-lle-Leu-Asp-Val Ο [D-Lys-analog]

ΝΗ.

Q-lle-Leu-Asp-Val·

Η Ο [D-Lys-analog]

CH,CO-D-Leu-Leu-Asp-ValN Ν—CH,

CH:

HN—CO

CH.-CO—Ile-Leu-Asp-Val—Ν N [ 71

CH₂-CH₂—NH-CO-CH.

CH.-CO—Ile-Leu-Asp-Val—Ν N ) \_y | ch₂-ch₂-ch₂— nh-co-CH, le-Leu-Asp^Val-D-Lys-N N

CO-CH,

Melle-Leu-Asp-Val-D-Lys^_N N

CO•CH, le-Leu-Asp-Val-N N—CH /

D-Lys-:-CO

Mělle-Leu-Asp-Val-D-Arg

COD-Arg-Melle-Leu-Asp-Val

COr~\

N N \_q

-ch₂

N N \_/

-ch₂ lle-Leu-Asp-Val-NHCH₂-CH₂N \\

CHi ²

CO

H O [beta-Ala-D-Lys-analog]

[N-Pyr-D-Lys-analog]

H O [N-Pyridylkarbonyl-D-Lys-anaiog] 'NH

GluD-Leu-Leu-Asp-Va falfa -Glu-D-Lys-analog] .pD-Leu-Leu-Asp-Val'NHCH₂CH—S

OC-CH₂

MeHe-Leu-Asp-Val-NH(CH₂)₄CO|-lle-Ueu-Asp-Val-NH-CH₂'CH₂-S

OC-CH₂-ch₂ c(D-Leu-Leu-Asp-Val-p-Ala-Pro) c(D-Leu-Leu-Asp-Val-D-AIa-D-Ala) c(D-Leu-LeU'Asp-Val-p-Ala-D-Ala)

c(Meíle-Leu-Asp-Val-p-Ala-Pro) c(Melle-Leu-Asp-Val-p-Ala-D-Ala) c(MeI!e-Leu-Asp-Val-D-Ala-D-Ala) c(Melle-Leu-Asp-Val-P-Ala-D-Om) c(MeIIe-Leu-Asp’VaI-p-AIa-D-Lys).

c(Melle-Leu-Asp-Val-D-Arg-D-Ala) c(Melle-Leu-Asp-Val-D-Ala-D-Arg) c(MeUe-Leu-Asp’Val-D-Orn-D-Ala) c(MelIe-Leu-Asp-Val-D-Lys-D-Ala) c(MeIIe-Leu-Asp’Val-D-Om(CHMe2)-£>-Ala) c(MeIle-Leu-Asp-Val-D-Om(cyktohexyl)-D-Ala) c(MeIle-Leu-Asp-Val-D-Om(4-chlor-benzyl)-D-Ala) c(MeIle-Leu-Asp-Val-D-Orn(Et2)-D-Ala) c(MeIle-Leu-Asp-Val-D-Lys(CHMe2)-D-Lys(CHMe2)) c(Melle-Leu-Asp-Val-D-Lys-D-Lys) c(Melle-Leu-Asp-Val-D-Ala-D-Lys) c(Melle-Leu-Asp-Val-D-Phe-D-Lys) c(Melle-Leu-Asp-Val-D-Trp-D-Lys) c(Melle-Leu-Asp-Val-D-Phe-D-Afg) c(Meíie-Leu-Asp’Val-D-Trp-D-Arg) c(MeIie-Leu-Asp-Val-D-Arg(Pmc)-D-AJa) c(MeIíe-Leu-Asp-Val'D-Ala-D-Arg(Pnic)) c(MeIIe-Leu-Asp-Val-D-Phe-D-Arg(Pmc)) c(MeIle-Leu-Asp-VaÍ-D-Trp-D-Arg(Pmc)) c(Melle-Leu-Asp-Val-D-His-D-Lys) c(MeIle-Leu-Asp-V al-D-Arg-D-Arg) c(MeIIe-Leu-Asp- V al-D-His-D-Arg) c(Melle-Leu-Asp-Val-D-Arg-D-His) c(Melle-Leu-Asp-Val-D-Ala-D-Orn) c(Melle-Leu-Asp-Val-D-Orn-D-Om) a jejich soli. .

Podle dalšího provedení vynález popisuje cyklický peptid obecného vzorce 5

AAO -AA1-AA2-AA3-AA4- AA5,

LINKER ve kterém mají jednotlivé symboly významy definované u obecného vzorce 1, a dále

AAO představuje Glu, a

AA5 znamená Pro.

Cyklické peptidy podle vynálezu vykazují alespoň jednu z následujících výhod: jsou v testech účinnější než známé sloučeniny, například CS1; jsou menší než CS-1, Což je peptid obsahující 25 aminokyselin, a tudíž se snadněji syntetizují; a cyklické peptidy jsou stabilnější vůči enzymovému odbourá-, vání.

Některé výhodné sloučeniny jsou uvedeny na obrázku 2.

Zejména výhodné sloučeniny vykazují účinnost v in vivo testech (například v in vivo modelu kontaktní hypersenzitivity (CHS) na myších - příklad 2.3), jak jsou popsány níže. CS1 v dávce 10 mg/kg/den a 1 mg/kg/den vykazoval inhibici 0 %.

Sloučeniny 3 a 4 (viz obrázek 2) byly účinné v dávce 10 mg,/kg/den (inhibice 39 %) a 1 mg/kg/den (inhibice 19 %) . U testovaných sloučenin podle vynálezu nebyla při podání účinné dávky pozorována žádná toxicita.

Podle· dalšího provedení vynález popisuje farmaceutický prostředek, který onbsahuje cyklický peptid podle vynálezu v kombinaci s farmaceuticky přijatelným ředidlem nebo nosičem.

Tento· prostředek může být ve formě vhodné pro orální použití, například ve formě tablety, kapsle, vodného nebo olejového roztoku, suspenze nebo emulze,· pro nasální použití, například ve formě šňupacího prásku, nosního spraye nebo nosních kapek, pro vaginální nebo rektální použití, například ve formě čípku, pro podání inhalací, například ve formě jemně rozemletého prášku nebo kapalného aerosolu, pro sublingvální nebo bukální použití, například ve formě tablety nebo kapsle, nebo pro .parenterální použití (včetně, intravenosní, subkutánní, intramuskulární, intravaskulární aplikace nebo aplikace infuzí), například ve formě sterilního vodného nebo olejového roztoku nebo suspenze, nebo ve formě depotní formulace, ve které je léčivo zapracováno do biologicky odbouratelného polymeru. Prostředek může být ve formě vhodné pro místní podání, jako například ve formě krémů, mastí a gelů. Rovněž je možná aplikace formou náplastí na kůži. Formulace jsou obecně popsány v kapitole 25.2 práce Comprehensive Medicinal Chemistry, svazek 5, editor Hansch a kol., Pergamon Press 1990.

Obecně lze výše uvedené prostředky připravit běžným způsobem za použití běžných nosných nebo/a pomocných látek. V případě prostředku pro orální podání může však být účelné, aby byl prostředek potažen povlakem chránícím cyklický peptid, který je účinnou látkou, před působením enzymů v žaludku.

Výhodným prostředkem podle vynálezu je prostředek vhodný pro orální podání v jednotkové dávkovači formě, například tabletě nebo kapsli, který obsahuje od 2,5 do 500 mg, a výhodně 10 až 100 mg, cyklického peptidu v každé dávkovači jednotce, nebo prostředek vhodný pro parenterální podání, který obsahuje od 0,5 do 100 mg cyklického peptidu na ml a.výhodně 1 až 10 mg cyklického peptidu na ml roztoku.

Parenterálním prostředkem je výhodně roztok v isotonickém roztoku chloridu sodného nebo isotonickém roztoku dextrosy, pokud je to nutné pufrovaný . n apH 5 až- 9. Alternativně může být parenterální prostředek upravený pro pomalé uvolňování účinné látky, v kterémžto případě je množství cyklického peptidu na jednotkovou dávku obecně větší než jako je nutné při použití běžné injikovatelné formulace. Výhodnou formulací s pomalým uvolňováním účinné látky je formulace s kontinuálním uvolňováním, například formulace typu popsaného v evropském patentu č. 58481. Pro formulace s pomalým uvolňováním účinné látky, které obsahují polymery na bázi polymléčné kyseliny nebo polyglykolové kyseliny, je výhodný cyklický peptid podle vynálezu obsahující v symbolu LINKER bázickou skupinu. Dalšími výhodnými zde popsanými cyklickými peptidy jsou ty cyklické ' peptidy, ve kterých LINKER představuje dipeptid (obecného vzorce <-NH-CHR'-CO-NH-CHR-CO—», kde symboly R' a R představují aminokyselinové postranní řetězce a tento dipeptid je popřípadě substituován alkylovou skupinou s 1 až 4 atomy uhlíku . (zejména, methylovou skupinou) na atomu dusíku v hlavním řetězci peptidu nebo/a postranním řetězci), který výhodně obsahuje alespoň jednu bázickou aminokyselinu nebo její sůl. Výhodněji jsou aminokyselinami v tomto dipeptidu D-aminokyseliny nebo jejích soli a zejména je tento dipeptid vybrán ze skupiny zahrnující dipeptidy vzroců 24 - 38, 43 a 44, jak jsou uvedeny na obrázku 13, a jejich soli. Bázická aminokyselina je- definována jako aminokyselina obsahující ve svém postranním řetězci bázickou funkční skupinu, jako je například aminoskupina nebo guanidinoskupina, přičemž kterákoli z těchto skupin muže být popřípadě substituována alkylovou skupinou s 1 až 4 atomy uhlíku. Výhodná parenterální formulace s pomalým uvolňováním účinné látky obsahuje od 10 do 100 mg cyklického peptidu na jednotkovou dávku. Podle dalšího provedení vynálezu ve kterém LINKER představuje dipeptid, může popřípadě být jednou aminokyselinou v tomto dipeptidu aminokyselina bez postranního řetězce, jako je například β-alanin.

Prostředek podle vynálezu se normálně podává tak, že denní orální dávka Činí od 0,1 mg/kg do 50 mg/kg a denní parenterální dávka činí od .20 ptg/kg do 10 mg/kg.

Podle dalšího provedení vynález popisuje způsob inhibice interakce mezi VCAM-1 nebo/a fibronektinem a integrinovým receptorem VLA-4 u teplokrevného živočicha, jako je člověk, který takové ošetření potřebuje, kterýžto způsob zahrnuje podání účinného množství cyklického peptidu obecného, vzorce I nebo jeho farmaceuticky přijatelné soli uvedenému živočichovi. Vynález rovněž zahrnuje použití takového cyklického peptidu obecného vzorce I nebo· jeho farmaceuticky přijatelné soli k přípravě nového léčiva pro použití k léčení, onemocnění nebo stavu zprostředkovaného interakcí mezi fibronektinem nebo/a VCAM-1 (zejména VCAM-1) a integrinovým receptorem VLA-4. Rovněž se předpokládá jeho využitelnost jako výzkumného nástroje.

Podle dalšího provedení vynález popisuje farmaceutický prostředek obsahující cyklický peptid, jak je zde popsán, v kombinaci s farmaceuticky přijatelným ředidlem nebo nosičem.

Výhodný je farmaceutický prostředek pro parenterální podání vytvořený pro pomalé uvolňování účinné látky po dobu alespoň 5 dnů.

Podle dalšího provedení vynález popisuje cyklický peptid, jak je zde popsán, pro použití jako léčivo. Podle ještě dalšího provedení se vynález týká způsobu inhibice interakce mezi VCAM-1 nebo/a fíbronektinem a integrinovým receptorem VLA-4 u savce, který takové ošetření potřebuje, kterýžto způsob zahrnuje podání účinného množství farmaceutického prostředku, jak je zde popsán, nebo jeho farmaceuticky, přijatelné soli uvedenému savci. Podle výhodného provedení tento savec potřebující ošetření trpí i

roztroušenou sklerosou nebo revmatickou artritidou.

Podle dalšího provedení vynález popisuje použiti cyklického peptidu obecného vzorce I. nebo jeho farmaceuticky přijatelné soli k přípravě léčiva pro použití k léčení onemocnění nebo stavu zprostředkovaného interakcí mezi'VCAM-1 nebo fÍbronektinem a integrinovým receptorem VLA-4.

Podrobnosti o syntéze

Cyklický peptid obecného .vzorce I podle vynálezu lez připravit libovolným způsobem o kterém je v oboru chemie peptidů známo, že je použitelný pro syntézu analogických sloučenin. Tak lze například cyklický peptid podle vynálezu získat pomocí analogických postupů jako jsou popsány v práci Solid Phase Peptide Synthesis: A practical approach, kterou napsali Atherton a Sheppard (publikoval IRL press u Oxford University Press, 1989), Solid Phase Peptide Synthesis, kterou napsali Stewart a Young (publikoval the Pierce Chemical Company, Illinois, Ί'984) , Principles of Peptide Synthesis, kterou napsal M. Bodanszky (publikoval Springer-Verlag, Berlin Heidelberg, 1984), The Practice of Peptide Synthesis, kterou napsali M. Bodanszky a A. Bodanszky (publikoval Springer-Verlag, Berlin Heidelberg, 1934), a v sérii knih Amino Acids, Peptides and Proteins (svazky 1 až 26, svazek 26 publikován roku 1995) (publikoval Royal Society of Chemistry, Cambridge, Velká Británie). Kromě knih byla o syntéze peptidů zveřejněna rovněž řada shrnujících článků (například Solid Phase Peptide Synthesis: a Silver

Anniversary Report, G. Barany, N. Kneib-Cordonier a D. G. Mullen, International Journal of Peptide and Protein Research, 30 (1987, 705 - 739,- Solid Phase .Peptide Synthesis Utilising 9-Fluorenylmethoxycarbonyl Amino Acids', G. B. Fields aR. L. Noble, International Journal of Peptide and Protein Research, 35 (1990), 161 - 214).· Pokroky v syntéze, jsou rovněž publikovány ve zprávách ze sympozií -American, European and Japanese Peptide Symposiums. Syntézu lze provádět automaticky nebo manuálně.

Podle dalšího provedení vynález popisuje způsob přípravy cyklického peptidů obecného vzorce 1, který spočívá v tom, Se se (a) odstraní jedna nebo několik obvyklých chránících skupin pro peptidy z chráněného cyklického peptidů obecného vzorce 3

ve kterém Prl představuje chránící skupinu na kyselé skupině v postranním řetězci aminokyseliny AA3, za vzniku cyklického peptidů podle vynálezu obecného vzorce 1 a popřípadě se současně nebo následně rovněž odstraní libovolné další obvyklé chránící skupiny pro peptidy přítomné ve skupině LINKER a popřípadě se, pokud je to žádoucí, přemění takto získaný produkt na jeho sůl, nebo že se (b) vytvoří amidová vazba kondenzací dvou peptidových jednotek, z nichž jedna obsahuje karboxylovou skupinu nebo její reaktivní derivát a druhá obsahuje aminoskupinu, takže se vytvoří chráněný nebo nechráněný cyklický peptid, který má sekvenci uvedenou v obecném vzorci l, a pokud je to nutné odstraní se chránící skupiny za použití výše popsaného způsobu (a) a popřípadě se, pokud je to žádoucí, přemění takto získaný produkt na jeho sůl, nebo že se (c) k přípravě cyklického peptidu obecného vzorce 1, který obsahuje v symbolu LINKER skupinu -S(0)- nebo -S(0₂)-, oxiduje atom síry (nebo dále skupina -SCO)- v případě přípravy skupiny -S(0₂) -) v symbolu LINKER prekurzorového cyklického peptidu, za vzniku cyklického peptidu obsahujícího v symbolu LINKER skupinu -S(0)- nebo -S(0₂)-, a popřípadě se, pokud je to žádoucí, přemění takto získaný produkt na jeho sůl.

Výše uvedené stupně odstraňování chránících skupin a kondenzace lze provádět bud' na pevném nosiči (syntéza peptidů na· pevné fázi) nebo v roztoku za použití obvyklých postupů používaných při syntéze' organických sloučenin. S výjimkou pevného nosiče jsou všechny další chránící skupiny, kondenzační činidla, deblokační činidla a purifikační postupy podobné jak v případě syntézy peptidů na pevné fázi tak v případě syntézy peptidů v roztoku.

V případě syntézy peptidů na pevném nosiči se vybere vhodná pryskyřice, která může bud' poskytovat volnou karboxylovou skupinu po odštěpení od pryskyřice nebo peptidový derivát, ze kterého lze selektivně odstranit chránící skupinu za vzniku C-koncové karboxylové skupiny. Pevný nosič mohou tvořit polystyrénové kuličky, polydimethylakrylamidové kuličky, kompozitní polymer polydimethylakrylamid/polystyren (Polyhip) nebo polystyren-polyoxyethylenová pryskyřice (pryskyřice Tentagel). Několik příkladů vhodných spojovacích skupin obsahujících pevné nosiče, používaných při syntéze peptidů na pevné fázi, je znázorněno níže. Kromě znázorněných spojovacích skupin lze použít rovněž některé další spojovací skupiny, jako je hydroxykrotonoylamidomethylová skupina (HYCRAM). První aminokyselina se poté nekondenzuje na pryskyřici pomocí způsobů popsaných v této přihlášce pro syntézu peptidů nebo pomocí libovolného z kondenzačních činidel používaných v syntéze peptidů. Příklady některých kondenzačních činidel jsou rovněž popsány v této přihlášce.

polymer polymer (pryskyřice Wang) (pryskyřice Sasrin)

CH₂-polymer (kyselá pryskyřice Rink)

polymer (2-chlortritylchloridová pryskyřice)

polymer (HMPB-linkerová pryskyřice)

(chlormethylová a hydroxymethylová pryskyřice Merrifield)

V průběhu sestavováni peptidů se aminokyselinové funkční skupiny, které se nepodílejí na reakci, chrání různými chránícími skupinami. Například N-koncové aminoskupiny a aminoskupiny postranního řetězce lze chránit za použití 9-fluorenylmethoxykarbonylové- skupiny (Fmoc), terc.butoxykarbonylové skupiny (Boc), bifenylisopropoxykarbonylové skupiny (Bpoc), 2-[3,5-dimethoxyfenyl]propyl-2-oxykarbonylove skupiny (Ddz), adamantyloxykarbonylové skupiny (Adoc), allyloxykarbonylove skupiny (Aloe), 2,2,2-trichlorethoxykarbonylové skupiny (Troc), benzyloxykarbonylové skupiny a různě substituovaných benzyloxykarbonylových skupin. Tyto chránící skupiny lze, když je to potřeba, odštěpit pomocí standardních postupů (například reakcí s kyselinou nebo bází, katalytickou hydrogenolýzou a pomocí Pd(0) nebo reakcí se zinkem a kyselinou octovou.

Mezi vhodné chránící skupiny používané pro chránění α-karboxylové skupiny nebo karboxylové skupiny postranního řetězce patří různé skupiny tvořící estery (například methylová, ethylová, terč.butylová, benzylová, nitrobenzylová, allylová a 9-fluorenylmethylová skupina).

Mezi vhodné chránící skupiny používané k chránění guanidinoskupiny v postranním řetězci v peptidech obsahujících argininový zbytek patří nitroskupina, adamantyloxykarbonylová skupina, 4-methoxy-2,3,6-trimethylbenzensulfonylová skupina, 2,2,4,6,7-pentamethyldihydrobenzofuran-5-sulfonylová skupina (Pbf) a 2,2,5,7,8-pentamethylchroman-6-sulfonylová skupina (Pmc). Mezi vhodné chránící skupiny používané k chránění imidazolové skupiny v postranním řetězci v peptidech obsahujících histidinový zbytek patří tritylová skupina, tosylová skupina, dinitrofenylová skupina, adamantyloxykarbonylová skupina (Adoc), terč.butoxykarbonylová skupina (Boc) nebo- 9-fluorenylmethoxykarbonylová skupina (Fmoc).

Reakce pro odštěpení chránící skupiny lze provádět při teplotách mezí 4° C a 40° C (výhodně při teplotě místnosti, okolo 25° C). Toto odštěpování může trvat po dobu od 10 minut do 24 hodin.

Mezi vhodné kondenzační postupy používané pro spojování jednotlivých aminokyselin nebo peptidových fragmentů patří běžně používané azidové metody, metody symetrických anhydridů, směsných a-nhydridů a různých aktivních esterů a karbodiimidů. V případě různých karbodiimidů (například dicyklohexyl- nebo diisopropylkarbodiimidu)· lze rovněž přidávat řadu dalších aditiv (například l-hydroxybenzotriazol a N-hydroxysukeinimid). Kromě toho lze spojování aminokyselin nebo fragmentů dosáhnout rovněž za použití řady jiných činidel, například lH-benzotriazol-l-yloxytris-pyrrolidinfosfonium-hexafluorfosfátu (PyBOP), 2-(ΙΗ-benzotriazol-l-yl)-1,1,3,3-tetramethyluronium-tetrafluoroborátu (TBTU) a 2-(lH-benzotriazol-l-yl)-1,1,3,3-tetramethyluronium-hexafluor fosfátu (HBTU).

Kondenzační reakce lze provádět při teplotách mezi -20° C a 40° C. Čas nutný pro dokončení reakce může být mezi 10 minutami a 24 hodinami.

Mezi vhodné purifíkační metody pro meziprodukty .a konečné produkty patří protiproudé rozdělování, iontová výměna, gelová filtrace a různé další chromatografické postupy včetně HPLC (vysokotlaké kapalinové chromatografie) spolu s mnohými dalšími standardními postupy používanými v organické chemii (například extrakce rozpouštědly a krystalizace) .

Soli lze připravit libovolným vhodným způsobem známým v oboru. Mezi farmaceuticky přijatelné soli patří, aniž by se na ně rozsah vynálezu omezoval, anorganické soli jako je sodná sůl, draselná sůl, vápenatá sůl a podobně a organické soli s aminy nebo organickými bázemi.

Popis obrázků na výkresech

Na obrázku 1 jsou shrnuty chemické obecné vzorce.

Na obrázku 2 jsou znázorněny některé výhodné sloučeniny podle vynálezu.

Obrázek 3 znázorňuje obecný postup používaný pro syntézu cyklických peptidů, -při kterém byl výchozí materiál připraven syntézou na pevné fázi na chlortritylové pryskyřici. Čísla 1 až 6 znamenají stupeň 1 až 6.

Obrázek 4 znázorňuje vzorce Tic (1,2,3,4-tetrahydroisochinolín-3-karboxylové kyseliny), Pyr (pyroglutamové kyseliny) a podrobný vzorec sloučeniny 3 z obrázku 2.

Obrázek 5 znázorňuje analogy Ile.

Na obrázku 6 jsou znázorněny sloučeniny uváděné v příkladu l, části 7. Čísla 1 až 6 na obrázku označují stupeň, ve kterém byla daná sloučenina připravena.

Obrázek 7 znázorňuje konečné produkty uváděné v příkladu l, částech 17 a 16.

Na obrázku 8 jsou znázorněny některé výhodné spojovací skupiny označované symbolem LINKER.

Na obrázku 9 jsou znázorněny sloučeniny uváděné v příkladu·!, části 22. '

Na obrázku 10 jsou srovnána různá zobrazení stejného cyklického peptidu.

Obrázek '11 znázorňuje syntézu konečného produktu 11 (z tabulky 2). Čísla 1 až 6 znamenají stupeň 1 až 6.

Obrázek 12 znázorňuje syntézu konečného produktu 17 (z tabulky 2). Čísla 1 aš 5 znamenají stupeň 1 až 5.

Obrázek 13 znázorňuje některé výhodné spojovací skupiny označované symbolem LINKER. Vzorce 6 aš 18 jsou znázorněny od C-konce k N-konci a zbylé· vzorce obráceně.

Obrázek 14 znázorňuje vzorec Fmoc-Arg(Pmc).

Obrázek 15 znázorňuje vzorce N-MeAla a Asp(0Bu^c) .

Obrázek 16 znázorňuje vzorce norleucinu (Nle), norvalinu (Nva) a cyklohexylalaninu (Cha)·.

Zkratky používané na obrázcích mají stejný význam jako v příkladech. Jejich vysvětlení je uvedeno na začátku příkladové části.

Níže uvedená tabulka 1 ilustruje syntézu a purifikaci cyklických peptidu. Poznámky v hranatých závorkách se týkají části cyklického peptidu odpovídající symbolu LINKER. V tabulce 2 jsou charakterizovány cyklické peptidy. Poznámky v hranatých závorkách se týkají části cyklického· peptidu odpovídající symbolu LINKER.

Na obrázcích a v tabulkách označují vazby nakreslené se šipkami pouze místa navázání nebo přímé vazby (nikoli tedy skupinu -CH₂-) , pokud není uvedeno jinak nebo pokud něco jiného implicitně nevyplývá z kontextu. Znázornění míst navázání označených šipkami pro spojovací skupiny je následující: atom dusíku se váže na skupinu -C{0)- na C-konci odpovídajícího peptidu a podobně se skupina -C{0)- váže' na atom dusíku na N-konci odpovídajícího peptidu, pokud není uvedeno jinak nebo pokud něco jiného implicitně nevyplývá z kontextu. Pro získání podrobnější představy lze srovnat vzorec lineárního prekurzoru s příslušným výsledným cyklickým peptidem v tabulce 1, a na obrázku 10 jsou srovnána různá zobrazení stejného vzorce.

Vynález ilustrují.následující příklady, kterými se však rozsah vynálezu v žádném směru neomezuje.

Příklady provedení vynálezu

Používají se následující zkratky:

Ac = acetyl,

Ahx = 6-aminohexanová kyselina,

Boc = terč.butoxykarbonyl,

But nebo Bu^t = terč.butyl,

Cha = cyklohexylalanín·,

Dab = 2>4-diaminomáselná kyselina,

Et = ethyl,

Fmoc ~ 9-fluorenylme.thoxykarbonyl,

HPLC = vysokotlaká kapalinová chromatografie,

Me = methyl

Nle = norleucin,

Orn = ornithin,

Pmc = 2,2,5,7,8-pentamethylchroman-6-sulfonyl,

Pyr = pyroglutamová kyselina (viz obrázek 4),

Tic = 1,2,3,4-tetrahydroisochinolin-3-karboxylové kyselina, a Z = benzyloxykarbonyl.

Příklad 1

Podrobnosti syntézy sloučenin 1 - 114 uvedených v tabulkách 1 a 2

Cyklické peptidy jako konečné produkty uvedené v tabulkách 1 a 2 (systém číslování viz tabulka 2) se získají cyklizací odpovídajících prekurzorových (obecně lineárních) peptidů uvedených v tabulce 1. (Nicméně je třeba vzít v úvahu, že konečnou amidovou vazbu lze vytvořit mezi libovolnými aminokyselinami nebo polohami v symbolu LINKER za vzniku stejného cyklického peptidu.) Obecný postup použitý pro jednu ze sloučenin, c(Ile-Leu-Asp-Val-NH-(CH₂) _s-C0) (sloučenina 3, tabulka 2) je znázorněn na obrázku 3 a je podrobně popsán níže. V případě dalších sloučenin jsou uváděny pouze odchylky od standardního postupu.

1. Syntéza C (Ile-Leu-Asp-Val-NH-(CH₂) ₅-C0) (sloučenina 3, obrázek 3)

Tento cyklický peptid se připraví postupem syntézy na pevné fázi za použití 2-chlortritylchloridové pryskyřice. Po sestavení částečně chráněného lineárního peptidu na pryskyřici se peptid odštěpí od pryskyřice a použije se v následujících stupních bez jakéhokoli čistění. Nicméně výsledný produkt se před charakterizací důkladně purifikuje pomocí vysokotlaké kapalinové chromatografie (HPLC)_ s obrácenými fázemi.

1.1 Příprava c (Ile-Leu-Asp-Val-NH-(CH₂) j-CO) (sloučenina 3) (stupeň 6, obrázek 3)

Na 125 mg (0,2 mmol) chráněného cyklického peptidu c (Ile-Leu-Asp (OBu⁶) -Val-NH- (CH₂) _S-CO) se po dobu 30 minut působí 15 ml směsi kyseliny trifluoroctové a vody v poměru 95 : 5 a 200 /tl triisopropylsilanu pro odstranění chránící skupiny z postranního řetězce kyseliny asparagové. Odpařením na malý objem a následující triturácí s etherem se získá 75 mg surového cyklického peptidu. Tento surový produkt se vyčistí preparatívní vysokotlakou kapalinovou chromatografií s obrácenými fázemi na koloně Vydac 218TP1022 za použití gradientově eluce směsí 15 - 55 % acetonitrilu a vody s obsahem 0,1 % kyseliny trifluoroctové během 65 minut s rychlostí průtoku 10,0 ml za minutu. Frakce obsahující produkt se smíchají a vysuší vymražením za vzniku 50 mg purifikováného cyklického peptidu. Tento peptid (vykazující při vysokotlaké kapalinové chromatografií jediný pík, retenční čas 18,03 minut na koloně Novapak C₁₈ za použití gradientově eluce směsí 10 - 60 % acetonitrilu a vody s obsahem 0,1 % kyseliny trifluoroctové během 30 minut s rychlostí průtoku 1,0 ml za minutu) se charakterizuje aminokyselinovou analýzou a hmotovou spektroskopií (viz tabulka 2).

Chráněný cyklický peptid používaný jako výchozí materiál se připraví následovně:

1.2 Příprava Fmoc-NH (CH₂) ₅-COO-chlortritylpryskyřice (stupeň 1, obrázek 3) g 2-chlortritylchloridové pryskyřice (Nova Biochem,

1,6 mml Cl / g) se nechá botnat v 10 ml dichlormethanu (vysušeného 2a použití molekulárního síta) po dobu 5 minut. Přidá se roztok 355 mg (1 mmol) Fmoc-NH- (CH₂)_S-COOH a 560 μΐ (3,2 mmol) diisopropylethylaminu v 5 ml dichlormethanu a suspenze se mechanicky třepe po dobu 45 minut. Přidá se 9 ml methanolu a 1 ml diisopropylethylaminu a ve třepání se pokračuje po dobu dalších 5 minut. Pryskyřice se izoluje filtrací a promyje se postupně dichlormethanem, dimethylformamidem, dichlormethanem, isopropanolem a etherem, a nakoned se vysuší- při teplotě 50° C ve vakuové sušárně. Hmotnost produktu činí 1,33 g.

1.3 Příprava Ile-Leu-Asp (OBu^c) ~Val-NH (CH₂) _s-COO-chlortritylpryskyřice (stupně 2 a 3, obrázek 3)

Výše uvedená pryskyřice se umístí do reakční nádoby vybavené destičkou ze slinutého skla. Poté se manuálně provede následující série reakcí pro získání požadované peptidyl-pryskyřice:

(a) Odstraní se skupina Fmoc dvěma reakcemi s 20% piperidinem v dimethylformamidu (jednou po dobu 5 minut a jednou po dobu 15 minut) a poté se směs pětkrát promyje dimethylformamidenr pro odstranění nadbytečných reakčních činidel a produktů vzniklých .štěpením.

(b) Provádí se acylace 678 mg (2 mmol) Fmoc-Val aktivovaného 760 mg (2 mmol) O-(benzotriazol-l-yl)-1,1,3,3-tetramethyluronium-hexafluorfosfátu (HBTU) a 700 μΐ (4 mmol) diisopropylethylaminu ve 4 ml dimethylformamidu po dobu 1 hodiny. Pryskyřice se znovu pětkrát promyje dimethylformamidem pro odstranění nadbytečných reakčních činidel.

Výše uvedené cykly deprotekce a kondenzace se opakuj £ za použití 822 mg (2 mmol) Fmoc-Asp (0Bu^c)-OH, 700 mg (2 mmol) Fmoc-Leu-OH a 700 mg, (2 mmol) Fmoc-Ile-OH, čímž se získá Fmoc- Ile-Leu-Asp (OBu^c) -Val-NH (CH2) 5-COO-chlortritylpryskyřice. N-koncová. skupina Fmoc se odštěpí (stupeň 3) 20% piperidinem v dimethylformamidu (jednou 5 minut a jednou 15 minut) a peptidyl-pryskyřice Ile-Leu-Αερ (OBu^s)-Val-NH (CH2) ₅-COO-chlortritylpryskyřice se postupně promyje dimethylformamidem, dichlormethanem a etherem a vysuší se ve vakuové sušárně při teplotě 50° C. Výtěžek činí 1,51 g.

1.4 Příprava hydrochloridu Ile-Leu-Asp (0Bu^c)-Val-NH (CH₂) ₅-COOH (stupeň 4, obrázek 3)

Peptidyl-pryskyřice Ile-Leu-Asp (OBu¹) -Val-NH (CHJ 5-COO-chlortritylpryskyřice se suspenduje ve 25 ml směsi kyseliny octové, trifluorethanolu a dichlormethanu v poměru 2:2:6 po dobu 2 hodin. Pryskyřice se odstraní filtrací a promyje se výše uvedenou směsí rozpouštědel. Smíchané filtráty se odpaří a pryskyřice se trituruje s etherem, čímž se získá Ile-Leu-Asp (0Bu^L)-Val-NH (CH2) s-COOH ve formě acetátu (428 mg).

Hmotová spektroskopie: [M+H]* 628,4; [M+NaP 650,5

Acetát se poté přemění na hydrochlorid tak, že se rozpustí v 60 ml směsi vody a acetonitrilu v poměru 2:1, tato směs se ochladí na teplotu 0° C, přidá se 1,05 ekvivalentů IN kyseliny chlorovodíkové a obsah se vysuší vymražením.

1.5 Příprava c (Ile-Leu-Asp (OBu^c)-Val-NH-(CH₂) ₅-C0) (stupeň

5, obrázek 3)

Část výše uvedeného, hydrochloridu lineárního peptidů, Ile-Leu-Asp (OBu¹¹)-Val-NH(CH₂) s-COOH.HCl (190 mg; . 0,288 mmol) se rozpustí ve 300 ml dimethylformamidu a k tomuto roztoku se přidá 109 mg (0,288 mmol) 0-(benzotriazol-l-yl)-1,1,3,3-tetramethylurónium-hexafluorfosfátu (HBTU), 45 mg (0,288 mmol)

1-hydroxybenzotr.iazolu a 117 μΐ (0,86 mmol) diisopropylethylaminu. Reakčni směs se míchá po dobu 3 hodin při teplotě místnosti a poté se odpaří do sucha ve vakuu. Zbytek se roztřepe mezi ethylacetát a vodu. Organická vrstva se poté postupně promyje IM kyselinou citrónovou, nasyceným roztokem .„chloridu sodného, 10% roztokem hydrogenuhličitanu sodného a nasyceným roztokem chloridu sodného, vysuší se - nad síranem hořečnatým a zahustí do sucha ve vakuu. Produkt se izoluje a vysuší nad směsí oxidu fosforečného a hydroxidu draselného, čímž se získá 125 mg surového produktu (retenční čas 20^!,71 minut na koloně, Vydac 218TP54 za použití gradientově elucesměsí 20 - 80 % acetonitrilu a vody s obsahem 0,1 % kyseliny trifluoroctové během 30 minut při rychlosti průtoku 1,0 ml za minutu), který se použije v posledním stupni (viz bod l.l) bez jakéhokoli čištění.

2. Syntézy sloučenin 1, 2 a 4

Tyto tři sloučeniny se syntetizují způsobem použitým v případě sloučeniny 3 s tím rozdílem, že sé na 2-chlortritylchloridovou pryskyřici místo Fmoc-NH(CHJ_S-CQOH použité v případě sloučeniny 3 nejprve napojí Fmoc-NH (CH₂)_}-COOH (k získání sloučeniny 1), Fmoc-NH (CH₂) ₄-COOH (k získání sloučeniny 2) a Fmoc-NH(CH₂) ₇-COOH (k získání sloučeniny 4).

. Syntézy sloučeniny 5-10

Tyto sloučeniny se syntetizují způsobem použitým v případě sloučeniny 3 s tím rozdílem, že se místo Fmoc-Ile použijí Fmoc-D-Ile (k získání sloučeniny 5) , Fmoc-D-Leu (k získání sloučeniny 6) , Fmoc-Pro (k získání sloučeniny 7) , Fmoc-Gly (k získání sloučeniny 8), Fmoc-terc.butylglycin (k získání sloučeniny 9) nebo Fmoc-terc.butylalanin (k získání sloučeniny 10). Vzorce terč.butylglycinu (terč.leucinu) a terč.butylalaninu (neopentylglycinu) jsou znázorněny na obrázku 5.

. Syntéza sloučeniny 11

Postup použitý pro syntézu sloučeniny 11 je znázorněn na obrázku 11.

4.1 Syntéza sloučeniny

(stupeň 6, obrázek 11)

Surový cyklický peptid použitý jako výchozí materiál se rozpustí ve 20 ml směsi kyseliny trifluoroctové a vody v poměru 95 : 5 a po přidání 200 μΐ triisopropylsilanu se směs míchá při teplotě místnosti po dobu 30 minut. Rozpouštědlo se odpaří ve vakuu a surový produkt se vyčistí vysokotlakou kapalinovou chromatografií s obrácenými fázemi, čímž se získá požadovaný konečný produkt, s výtěžkem 28 mg.

Surový cyklický peptid použitý jako výchozí materiál se připraví následovně:

4.2 Příprava Z-D-Lys (Fmoc)-Ile-Leu-Asp (OBu^e)-Val-chlortrityl-pryskyřice (stupeň 1, obrázek 11)

Z-D-Lys(Fmoc)-Ile-Leu-Asp-Val se sestaví na ' chlortrityl-pryskyřici podobným postupem jako je popsán výše pro Ile-Leu-Asp (OBu¹³) -Val-NH (CH₂) ₅-COO-chlortrityl-pryskyřici používanou při syntéze sloučeniny 3, s tím rozdílem, že se pryskyřice nejprve podrobí' reakci s Fmoc-Val místo Fmoc-NH(CHj )_S-COOK.

4.3 Příprava hydrochloridu Z-D-Lys-Ile-Leu-Asp(OBu^c)-Val (stupně 2 a 3, obrázek 11)

Podobným postupem jako je popsán výše pro přípravu hydrochloridu Ile-Leu-Asp (OBu^c) -Val-NH (CHj) ₅-COOH se Z-D-Lys (Fmoc) -Ile-Leu-Asp (OBu^c) -Val-chlortrityl-pryskyřice nejprve podrobí reakci s piperidinem pro odštěpení skupiny Fmoc a peptid se poté odštěpí z pryskyřice, čímž se získá Z-D-Lys-Ile-Leu-Asp (OBu*)-Val, který se poté přemění na hydrochlorid.

4.4 Příprava sloučeniny ^-^Ylíe-Leu-AspíOButJ-VaFNH H o [Q-Lys-analog] (stupeň 4, obrázek 11)

236 mg (0,291 mmol) hydrochloridu lineárního peptidů se rozpustí ve 350 ml dimethylformamidum, přidá se 110,5 mg (0,291 mmol) O-(benzotriazol-1-yl)-1,1,3,3-tetramethyluronium-hexafluorfosfátu (HBTU), 39,3 mg (0,291 mmol) 1-hydroxy39 benzotriazolu (HOBt) a 152 μΐ (0,873 mmol). diisopropylethylaminu a reakční směs se poté míchá po dobu 2 hodin při teplotě místnosti. Rozpouštědlo se' odstraní ve vakuu a zbytek se roztřepe mezi ethylacetát a vodu. Organická fáze se promyje IN kyselinou citrónovou, nasyceným roztokem chloridu sodného, 10% vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a nasyceným roztokem chloridu sodného. Organická fáze se poté vysuší nad síranem hořečnatým a rozpouštědlo se odstraní ve vakuu. Surový produkt (retenční čas 25,24 minuty na koloně Vydac za použití gradientově eluce 20 - 80% acetonitrilem ve vodě během 30 minut) se použije v následujícím stupni bez dalšího- čištění. .

4.5 Syntéza sloučeniny

(stupeň 5, obrázek 11)

157 mg (0,207 mmol) surového cyklického peptidu se rozpustí ve směsi 40 ml ethanolu, 6 ml vody a 10 ml kyseliny octové a přidá se palladium na uhlí (přibližně 200 mg). Míchanou reakční směsí se poté' nechá probublávat vodík po dobu 2 hodin, pro odštěpení N-koncové benzyloxykarbonylové skupiny. Katalyzátor se odstraní filtrací a filtrát se odpaří do sucha. Ke zbytku, rozpuštěnému v 10 ml dimethylformamidu, se přidá nadbytek acetanhydridu a roztok se nechá stát při teplotě místnosti po dobu 16 hodin. Rozpouštědlo se odstraní ve vakuu a zbytek se izoluje z'etheru, promyje se etherem a použije se ve stupni 6 (viz 4,1}.

5. Syntézy sloučenin 12, 13 a 14

Všechny tyto sloučeniny se připraví podobnými postupy x— lle<eu-Asp-Val-NHCH₂-CH^-\\ jako jsou popsány výše v případě sloučeniny 11. Vzorce odpovídajících lineárních peptidu sestavených na pryskyřici jsou uvedeny v tabulce 1.

6. Syntéza sloučeniny 15

Sloučenina 15 se syntetizuje způsobem použitým pro sloučeninu 3, s tím rozdílem, že se na 2-chlortritylchloridovou pryskyřici místo Fmoc-NH (CH₃) ₅-COOH použité· v případě sloučeniny 3 nejprve naváže. N-Fmoc-aminomethylbenzoová kyselina.

7. Syntéza sloučeniny 16 (obrázek 6)

CH, i ² '<--^:—-CO

7.1 Příprava cyklického peptidu 16 (stupeň 6, obrázek 6) ’

Lineární peptid použitý jako· výchozí materiál se cyklizuje a odstraní se z něj chránící skupina postupy popsanými výše pro· přípravu c (Ile-Leu-Asp-Val-NH-(CH₃) ₅-CO.) v odpovídajících stupních vpříkladu 1 (sloučenina 3), čímž se získá výsledný cyklický peptid jako konečný produkt (sloučenina 16) .

Lineární peptid použitý jako výchozí materiál se připraví následovně:

7.2 Příprava N“-Boc-histaminu (stupeň 1, obrázek 6)

K roztoku 10 g (54,3 mmol) histamin-dihydročhloridu a 15,3 ml (109 mmol) triethylaminu ve 100 ml methanolu se za míchání během 15 minut přidá 24 g (110 mmol) diterc.buyldikarbonátu v 50 ml methanolu. Směs se míchá při teplotě místnosti po dobu 24 hodin, rozpouštědlo se odstraní odpařením a zbytek se roztřepe mezi dichlormethan a vodu. Organická fáze se dvakrát promyje IM roztokem kyseliny citrónové a nasyceným roztokem chloridu sodného, vysuší se nad· síranem hořečnatým a odpaří, čímž se získá pevná látka. Překrystalováním z ethylacetátu se získá 12,99 g (76 %) N“, N^T-Boc-histaminu o teplotě tání 125 - 126° C. Při chromatografií na tenké vrstvě na silikagelových deskách se vytvoří jediná skvrna.

R_ř: 0,25 ve směsi ethylacetátu a isohexánu v poměru 1 : l a

0,62 ve směsi methanolu a chloroformu v poměru 1 : 9

K roztoku 8,3 g (26,7 mmol) N“, Ν'-Boc-histamínu ve

150 ml methanolu se přidá.1 ml diisopropylethylaminu a roztok Se míchá při teplotě místnosti po dobu 24 hodin. Rozpouštědlo se odstraní odpařením a zbytek se vysráží . ze směsi ethylacetátu a isohexánu. Výtěžek činí 5,46 g (97 %) , teplota tání produktu je 93 - 95° C. Při chromatografií na- tenké vrstvě na silikagelových deskách se vytvoří jediná skvrna.

R_s: ,0,53-ve směsi acetonitrilu a vody v poměru 3 : l, 0,23 ve směsi methanolu a chloroformu v poměru 1 : 9 a 0,73 ve směsi chloroformu, methanolu a .vody v poměru 55 : 40 : 10

7.3 Příprava sloučeniny

M

Boc-NHCH₂-CH,

CH₂COOC(CH₃)₃ (stupeň 2, obrázek 6)

K míchanému roztoku 2,5 g (11,8 mmol) ř^-Boc-histamínu a 2,06 ml (11,8 mmol) diisopropylethylaminu v 50 ml dichlormethanu se přidá 2,31 g (11,80 mmol) terč.butyl-bromacetátu v 6 ml dichlormethanu. V míchání se pokračuje po dobu 24 hodin při teplotě místnosti. Přidá se dalších 200 ml dichlormethanu a roztok se promyje 1M roztokem kyseliny citrónové a nasyceným roztokem chloridu sodného, vysuší se nad síranem hořečnatým a odpaří do sucha. Zbytkový olej se použije v následujícím stupni bez dalšího čištění.

7.4 Příprava sloučeniny

ch₂cooh (stupeň 3, obrázek 6)

Výše uvedený imidazolový derivát se rozpustí ve 100 ml směsi kyseliny trifluoroctové a vody v poměru 95 : 5 s obsahem 1 ml triisopropylsilanu a směs se nechá stát při teplotě místnosti po dobu 90 minut. Rozpouštědlo se odstraní odpařením za sníženého· tlaku a zbývající olej se trituruje s etherem a vysuší se ve vysokém vakuu nad oxidem fosforečným a hydroxidem draselným, čímž se získá 3,9 g pevné látky.

Hmotová spektroskopie: (M+H)⁺ 170

Při chromatografii na tenké vrstvě na silikagelových deskách se vytvoří jediná skvrna.

R_f: 0-,35 ve směsi acetonitrilu a vody v poměru 3 : 1 a 0,37 ve směsí chloroformu, methanolu a vody v poměru 55 : 40 : 10

3,9 g (14 mmol) imidazolového derivátu, ze kterého byla odštěpena chránící skupina, se rozpustí v 50 ml vody, 30 ml acetonu a 30 ml 1M uhličitanu sodného a roztok se ochladí v ledové lázni. V průběhu 20 minut se za míchání po kapkách přidá 4,76 g 9-fluorenylmethyTN-hydroxysukcinimidu ve 30 ml acetonu, přičemž se pH udržuje na hodnotě 9 přidáváním 1M roztoku uhličitanu sodného, a v míchání se pokračuje přes noc. Aceton se odstraní odpařením, vodný roztok se okyselí 1M hydrogensíranem draselným a produkt se extrahuje ethylacetá43 tem. Organická fáze se promyje vodou a nasyceným roztokem chloridu sodného, vysuší se nad síranem hořečnatým a odpaří za vzniku oleje. Triturací s etherem a směsí etheru a isohexanu se získá 3,66.g (66 %) pevné látky.

Hmotová spektroskopie: (M+H)* 392

7.5· Příprava sloučeniny

He-leu-Asp(OBut)-Val—NHCH₂-CH

M

N„ ch₂cooh (stupně 4 a 5, obrázek 6)

Ke. 2 g 2-chlortritylchloridové pryskyřice (Nova Biochem.) nabotnalé ve 25 ml dichlormethanu se přidá 782 mg (2 mmol) uvedeného Fmoc-histaminového derivátu v 10 ml dichlormethanu a 1,05 ml (6 mmol) diisopropylethylaminu a reakční směs se mírně třepe po dobu 75 minut. Přidá se 20 ml 10% roztoku diisopropylethylaminu a v třepání se pokračuje po dobu 15 minut. Pryskyřice se odfiltruje, promyje se postupně díchlormethanem, dimethylformamidem, díchlormethanem, methanolem a etherem a suší se při teplotě 50° C ve vakuové sušárně po dobu 16 hodin. Výtěžek činí 2,16 g.

Výše uvedená pryskyřice se umístí do reakční nádoby vybavené destičkou se slinutého skla a pomocí standardních postupů se na pryskyřici syntetizuje tetrapeptid (viz odpovídající stupně v příkladu 1 pro přípravu sloučeniny 3). Poté se pryskyřice odštěpí, čímž se získá požadovaný lineární peptid. .

8. Syntéza sloučeniny 17

Postup syntézy sloučeniny 17 je znázorněn na obrázku

8.4. Syntéza sloučeniny 17 (stupeň 5, obrázek 12)

Lineární peptid použitý jako výchozí . materiál se cyklizuje a odstraní se z něj chránící skupina postupy popsanými výše pro přípravu c(Ile-Leu-Asp-Val-NH-(CH₂) _s~C0) v odpovídajících stupních v příkladu 1 (sloučenina 3), čímž se získá výsledný cyklický peptid jako konečný produkt (sloučenina 17).

Lineární peptid použitý jako výchozí materiál' se připraví následovně:

8.1. Syntéza sloučeniny 17 (stupeň l, obrázek 12) (CH₃)₃COCO - - CH₂-COOC(CH₃)₃

K roztoku 4,65 g (25 mmol) terč.butyl-1-piperazin-karboxylátu a 3,5 ml (25 mmol) triethylaminu ve 30 ml dichlormethanu se přidá 4,88 g (25 mmol) terč.butyl-bromacetátův 50 ml dichlormethanu. Reakční směs se míchá přes noc, zfiltruje se, čímž se odstraní pevné látky oddělivší se přes' noc, a filtrát se odpaří do sucha. Zbytek se roztřepe mezi ethylacetát a vodu, organická vrstva se poté promyje vodou, vysuší se nad síranem hořečnatým a odpaří se do sucha. Zbytek se vykrystaluje ze směsi etheru a isohexanu, čímž, se získá

5,66 g (75 %) produktu o teplotě tání 99 - 100° C.

Elementární analýza pro C_1SH₂₃N₂O₄:

vypočteno: 60,0 % C, 9,4 % H, 9,33 % N; nalezeno: 59,8 % C, 9,6 % H, 9,1 % N.

Při chromatografií na tenké vrstvě na silikagelových deskách se vytvoří jediná skvrna.

R_£: 0,38 ve směsi ethylacetátu a isohexanu v poměru 1:1a

0,68 ve směsi methanolu a chloroformu v poměru 1 : 9

8.2. Syntéza sloučeniny 17 (stupeň 2, obrázek 12)

Fmoc—N N-d-L-COOH ²

Na 5 g (16,6 mmol) sloučeniny popsané v části 8.1 se nechá po dobu 1 hodiny působit. 50 ml směsi kyseliny trifluoroctové a vody v poměru 95 : 5. Kyselina se·odstraní odpařením ve vakuu a zbytkový' olej se trituruje s etherem, čímž se získá.pevná látka, která se Odfiltruje, promyje se etherem a vysuší se nad oxidem fosforečným a hydroxidem draselným ve vakuu. Získá se 6,25 g pevné látky o teplotě tání 177 až 182° C. Tato pevná látka se poté rozpustí ve 150 ml směsi vody a acetonu v poměru 1 : 1 s obsahem 6,92 g (3 ekvivalenty) uhličitanu draselného. V průběhu 20 minut se za míchání přidá 5,66 g (16,7 mmol) 9-fluorenylmethyl-N-hydroxysukcinimídu ve 3 0 ml acetonu. Hodnota pH roztoku se .udržuje na přibližně 9 přidáváním· IM roztoku uhličitanu·draselného. Směs se- míchá přes. noc při teplotě místnosti, poté se aceton odstraní odpařením ve vakuu á vodný roztok se okyselí roztokem hydrogensÍránu draselného. Produkt se extrahuje ethylacetátem a roztok se promje šestkrát vodou a poté nasyceným roztokem chloridu sodného. Organická vrstva se vysuší nad síranem hořečnatým a odpaří, čímž se získá olej, který ztuhne triturací s isohexanem a etherem. Výtěžek činí 3,72 g (60 %) . Vzorek této látky se překrystaluje ze směsi ethanolu a etheru, teplota- tání činí 179 - 182° C.

Hmotová spektroskopie: (M+H)* 367

8.3. Syntéza sloučeniny 17 (stupně 3 a 4, obrázek 12)

D-Leu-Leu-Asp(OBut)-Val-N^^N-CH₂COOH

K 1 g 2-chlortritylchloridové pryskyřice (Nova Biochem.) se přidá 366 mg (1 mmol) uvedeného Fmoc-piperazinového derivátu v 15 ml dichlórméthanu a 525 μΐ (3 ekvivalenty) diisopropylethylaminu a reakčni směs se mírně třepe po dobu 75 minut. Přidá se 10 ml 10% roztoku diisopropylethylaminu a v třepání se pokračuje po dobu 10 minut. Pryskyřice se odfiltruje, promyje se postupně dichlormethanem, dimethylformamidem, dichlormethanem a etherem a vysuší se při teplotě 50° C ve vakuové sušárně. Výtěžek činí 1,13 g.

Výše uvedená pryskyřice se umístí do reakčni nádoby vybavené destičkou se slinutého skla. Poté se manuálně provede následující série reakcí, čímž se získá požadovaná peptidyl-pryskyřice:

(a) Odstraní se skupina Fmoc dvěma reakcemi s 20% piperidinem v dimethylformamidu (jednou po dobu 5 minut a jednou po dobu 15 minut) a poté se směs pětkrát promyje dimethylformamidem pro odstranění nadbytečných reakčnich činidel a produktů vzniklých štěpením.

(b) Provádí se acylace 678 mg (2 mmol) Fmoc-Val aktivovaného 760 mg (2 mmol) O-(benzotriazol-1-yl)-1,1,3,3-tetramethyluronium-hexafluorfosfátu (HBTU) a 700 μΐ (4 mmol) diisopropylethylaminu ve 4 ml dimethylformamidu po., dobu 1 hodiny. Pryskyřice se znovu pětkrát promyje dimethylformamidem pro odstranění nadbytečných reakčnich činidel.

Výše uvedené cyklý deprotekce a kondenzace se opakují za použití 822 mg (2 mmol) Fmoc-Asp (OBu^c)-OH, 700 mg (2 mmol) Fmoc-Leu-OH a 700 mg (2 mmol) Fmoc-D-Leu-OH, čímž se získá chráněný tetrapeptid navázaný na chlortrityl-pryskyřici (stupeň 3). N-koncová skupina Fmoc se odštěpí 20% piperidinem v dimethylformamidu (jednou 5 minut a jednou 15 minut) a peptidyl-pryskyřice se postupně promyje dimethylformamidem, dichlormethanem a etherem a vysuší se ve vakuové sušárně při teplotě 50° C.

Peptidyl-pryskyřice se suspenduje po dobu 2 hodin ve 25 ml směsi kyseliny octové, trifluorethanolu a dichlormethanu v poměru 2:2:6. Pryskyřice se odstraní filtrací a promyje se výše uvedenou směsí rozpouštědel. Smíchané filtráty se odpaří a zbytek se trituruje s etherem, čímž se získá lineární tetrapeptid ve formě acetátu. Tento acetát se poté přemění na hydrochlorid rozpuštěním v 60 ml směsi vody a acetonitrilu v poměru 2 : 1, ochlazením na teplotu 0° C, přidáním 1,05 ekvivalentu IN kyseliny chlorovodíkové a vysušením obsahu vymražením.

9. Syntézy sloučeniny 18 a 19

Obě- tyto sloučeniny se' syntetizují postupy popsanými výše v případě sloučeniny 17. Lineární peptidy (jejichž struktury jsou znázorněny v tabulce 1). se cyklizují a odstraní se z nich chránící skupiny pomocí postupů popsaných výše pro přípravu c (Ile-Leu-Asp-Val-NH-(CH₂) ₅-C0) v odpovídajících stupních v příkladu 1 (sloučenina 3), čímž se získají výsledné cyklické peptidy jako konečné produkty (sloučeniny 18 a 19) ·.

10. Syntézy sloučenin 20 až 27

Všechny tyto sloučeniny se připraví podobnými postupy jako jsou popsány výše pro sloučeninu 11 (obrázek 11). Vzorce odpovídajících lineárních peptidů připravených na pryskyřici jsou znázorněny v tabulce 1.

11. Syntézy sloučenin 28 až 38

Tyto sloučeniny se syntetizují postupem použitým pro přípravu sloučeniny 3 (obrázek 3). První aminokyselinou nma pryskyřici je v případě sloučenin 30 - 32 aminohexanová kyselina a v případě sloučeniny 28 - 29 a 33 - 38 aminovalerová kyselina. Požadované lineární peptidy, jejichž aminokyselinové sekvence jsou znázorněny v tabulce 1, se připraví náhradou zbytků Ile nebo Val ve sloučenině 3 aminokyselinou přítomnou v odpovídající poloze ve sloučeninách 28 - .38, Vzorce nepřirozených aminokyselin (N-Me-Ala, N-Me-Ile, terč.butylglycinu (terč.leucinu) a terč.butylalaninu (neopentylglycinu)) jsou znázorněny na obrázcích 5 a 15.

12. Syntézy sloučenin 39 a 40

Sloučenina 40 se připraví podobným postupem jako je popsán výše v případě přípravy sloučeniny 11 (obrázek 11) . Pro získání sloučeniny 39 se postupem popsaným pro odpovídající stupeň v případě· sloučeniny 11 odštěpí N-koncová benzyloxykarbonylová. skupina.

13, Syntéza sloučeniny 41

Způsobem použitým pro syntézu sloučeniny 11 (obrázek 11) se syntetizuje částečně chráněný cyklický peptid obsahující na N-konci aminoskupinu, jehož vzorec je uveden níže. Tento peptid se používá k syntéze sloučeniny 14.

MU

n γH q [D-Lys-analog]

K roztoku 80 mg (0,141 mmol) výše Uvedeného peptidu v 7 ml dimethylformamidu se přidá 72 μΐ (0,563 mmol) anhydridu kyseliny propionové. Směs se míchá přes noc při teplotě místnosti, poté se rozpouštědlo odpaří ve vakuu a zbytek se vyčistí vysokotlakou kapalinovou chromatografií, čímž se získá požadovaný peptid 41.

14. Syntézy sloučenin 42 a 43

Obě tyto sloučeniny se syntetizují stejným způsobem a za použití stejného množství intermediárního peptidu jako je popsáno výše v případě přípravy sloučeniny 41. Místo anhydridů kyseliny propionové se v případě sloučeniny 42 použije 56,3 mg (0,564 mmol) anhydridů kyseliny jantarové a v případě sloučeniny 43 pak 105 mg (0,564 mmol) anhydridů kyseliny isovalerové.

15. Syntéza sloučeniny 44

Částečně chráněný cyklický peptid použitý k syntéze sloučeniny 44, jehož vzorec je uveden níže·, se syntetizuje stejným způsobem jako je popsán pro sloučeninu 11 (obrázek 11), s tím rozdílem, že se místo Fmoc-Ile použije Fmoc-D-Leu.

D-Leu-Leu-Asp(OBut)-VaT Ó [D-Lys-analog]

100 mg (0,16 mmol) výše uvedeného peptidu se rozpustí v 5 ml dimethylformamidu, přidá se 50 mg (0,16 mmol) Fmoc-p-Ala, 60,7 mg (0,16 mmol) O-(benzotriazol-l-ylj-1,1,3,3-tetramethyluronium-hexafluorfosfátu (HBTU), 22 mg (0,16 mmol) 1-hydroxybenzotriazolu (HOBt) a 83 μΐ (0,48 mmol) diisopropylethylaminu a reakční směs se míchá po dobu 16 hodin při teplotě místnosti. Rozpouštědlo se odpaří ve vakuu, ze surového peptidu se odstraní chránící skupiny (jak skupina Fmoc tak 0Bu^c) a vyčisti se pomocí standardních způsobů, čímž se získá sloučenina 44.

16. Syntéza sloučeniny 45

100 mg prekurzorového cyklického peptidu (ze kterého byla na N-konci odštěpena chránící skupina) se rozpustí v 5 ml dimethylformamidu a přidá se 9 μΐ acetaldehydu. Směs se míchá při teplotě místnosti po dobu 5 minut, poté se přidá

11.1 mg natriumkyanborohydridu a kapka kyseliny octové a v míchání se pokračuje po dobu 30 minut. Rozpouštědlo se poté odstraní odpařením a surový produkt se odblokuje (pro odštěpení terč.butylové esterové skupiny z Asp) a vyčistí se vysokotlakou kapalinovou chromatografii.

17. Syntéza sloučeniny 46

120 mg prekurzorového cyklického peptidu (ze kterého byla na N-konci odštěpena chránící skupina) se rozpustí v 10 ml dimethylformamidu a přidá se 20 μΐ benzaldehydu. Směs se míchá při teplotě místností po dobu 5 minut, poté se přidá

1.1.1 mg natriumkyanborohydridu a kapka kyseliny octové a v míchání se pokračuje po dobu 3 0 minut. Rozpouštědlo se poté odstraní odpařením a surový produkt se odblokuje (pro odštěpení terč.butylové esterové skupiny z Asp) a vyčistí se vysokotlakou kapalinovou chromatografii.

18. Syntézy sloučenin 47, 48 a 49 + ' ... H

Tři výše uvedené sloučeniny se syntetizují stejným způsobem a za použití stejného částečně chráněného peptidového meziproduktu jak je popsán výše v případě sloučeniny 44. Místo Βοο-β-Ala se pro sloučeniny 47, 48 a 49 použije 3-pyridyloctová kyselina, Fmoc-G.lu (OBu^Ě) respektive pyroglutamová kyselina.

19. Syntézy sloučenin 50 - 53

Čtyři výše uvedené sloučeniny se syntetizují způsobem použitým pro sloučeninu 3, s tím rozdílem, že se na 2-chlortritylchloridovou pryskyřici místo Fmoc-NH(CHJ₅-COOH použité v případě sloučeniny 3 nejprve naváže Fmoc-NH(CHJ₂-COOH (v případě sloučeniny 50), Fmoc-NH(CHJ₄-COOH (v případě sloučeniny 51), Fmoc-NH(CH₂) ₅-COOH (v případě sloučeniny 52) a Fmoc-NH(CHJ₇-COOH (v případě sloučeniny 53). Na pryskyřici se poté sestaví lineární peptidy, jejichž sekvence jsou uvedeny v tabulce 1, a požadované cyklické peptidy se získají pomocí standardních postupu. V koncovém stupni odblokování se odstraní chránící skupiny jak z Glu(Q8u^E) tak Asp(OBu^E) v postranním řetězci.'

20. Syntéza sloučeniny 54

Sloučenina 54 se syntetizuje postupem použitým v a

případe sloučeniny 3, s tím rozdílem, že se na 2-chlortritylchloridovou pryskyřici místo Fmoc-NH(CH₂) ₅-COOH použité v případě sloučeniny 3 nejprve naváže Fmoc-NH (CH₂) j-S-CHj-COOH. Na pryskyřici se poté sestaví lineární peptid, jehož sekvence je uvedena v tabulce 1, a požadovaný cyklický peptid se získá pomocí standardních postupu.

Výše použitá Fmoc-NH (CH_a) ₂ - S - CH₂ - COOH se získá z 2-aminoethanthiolu a 2-bromoctové kyseliny. 5,68 g (50 mmol) 2-aminoethanthiol-hydrochloridu se rozpustí ve 200 ml vody a přidá se 25,2 g (300 mmol) hydrogenuhličitanu sodného. K takto připravenému roztoku se za míchání v průběhu 30 minut po částech přidá 6,95 g (50 mmol) kyseliny 2-bromoctové rozpuštěné ve 100 ml acetonitrilu. Po 1 hodině při teplotě místnosti se přidá roztok 16,85 g (50 mmol) 9-fluorenylmethyl-N-hydroxysukcinimidu (Fmoc-OSu) ve 150 ml acetonitrilu a v míchání se pokračuje po dobu 16 hodin. Mírně kalný roztok se odpaří, čímž se odstraní většina acetonitrilu, a zbylý vodný roztok se extrahuje třikrát vždy 50 ml ethylacetátu a okyselí se na pH 2 přidáním kyseliny chlorovodíkové. Bílá pevná látka se izoluje, promyje se vodou a vysuší se ve vakuu při teplotě 45° C. Výtěžek činí 17 g (95 %) .

Hmotová spektroskopie: (M+H)⁺ 358,0

21. Syntézy sloučenin 55 a 56

Obě tyto sloučeniny se syntetizují způsobem' popsaným pro sloučeninu 3, s tím rozdílem, že se na 2-chlortritylchloridovou pryskyřici místo Fmoc-NH(CH₂) ₅-COOH použité v případě sloučeniny 3 nejprve naváže Fmoc-NH (CH₂.) ₄-COOH. Sestaví se lineární peptidy, jejichž sekvence jsou uvedeny v tabulce 1, a cyklické peptidy se získají pomocí, standardních postupů.

22. Syntéza sloučeniny 57

266 mg sloučeniny 54, cyklického peptidu použitého jako výchozí látka, se rozpustí v 50 ml směsi vody a acetonitrilu v poměru. 1 : 1 a k míchanému roztoku se v pěti stejných částech v průběhu pěti dnů přidá 150 μΐ peroxidu vodíku.. Rozpouštědlo se poté odstraní odpařením a zbytek se vyčistí vysokotlakou kapalinovou chromatografií, čímž se získá 140 mg produktu.

23. Syntéza”sloučeniny 58

Sloučenina 58 se syntetizuje postupem použitým v případě sloučeniny 3,, s tím rozdílem, že se na 2-chíortritylchloridovou pryskyřici místo Fmoc-NH(CH₂) _S-COOH použité v případě sloučeniny 3 nejprve naváže Fmoc-NH (CH₂) ₂-S-(CH₂) ₂-COOH. Na pryskyřici se poté sestaví lineární peptid, jehož sekvence je uvedena v tabulce 1, a požadovaný cyklický peptid se získá pomocí' standardních postupů.

Fmoc-NH (CH₂) ₂-S- (CH₂) _a-COOH se získá postupem popsaným výše pro Fmoc-NH (CH₂) ₂-S-CH₂-COOH (viz syntéza sloučeniny 54) za popužití 3-brompropionové kyseliny a 2-aminoethanthiolu. Hmotová spektroskopie: (M+H)⁺ 372

24. Syntézy sloučenin 59 - 69

Tyto sloučeniny se syntetizují pomocí postupů popsaných výše v případě sloučeniny 3. Na pryskyřici se syntetizují lineární peptidy, jejichž vzorce jsou znázorněny v tabulce 1, cyklizují- se pomocí standardních postupů, odstraní se z nich chránící skupiny a vyčistí se vysokotlakou kapalinovou chromatografií, čímž se získají výsledné cyklické peptidy jako konečné produkty 59 - 69.

25. Syntéza sloučeniny 70

Lineární peptid potřebný pro syntézu této sloučeniny (viz tabulka 1) se připraví navázáním Fmoc-isoglutaminu na Ile-Leu-Asp (OBu¹¹)-Val-OTrt-pryskyřici . Tato tetrapeptidyl-pryskyřice se připraví obvyklým způsobem (viz příprava sloučeniny 3)> počínaje od 2-chlortritylchloridové pryskyřice. Lineární peptid se poté cyklizuje, odstraní se z něj chránící skupina a vyčistí se standardním způsobem, čímž se získá cyklický peptid 70.

26. Syntézy sloučenin 71 - 77

Tyto sloučeniny se syntetizují pomocí postupů popsaných výše v případě sloučeniny 3. Na pryskyřici se syntetizují lineární peptidy, jejichž vzorce jsou znázorněny v tabulce 1, cyklizují se pomocí standardních postupů, odstraní se z nich chránící skupiny a vyčistí se vysokotlakou kapalinovou chromatografií, čímž se získají výsledné cyklické peptidy jako konečné produkty 71 - 77.

27. Syntézy sloučenin 78 a 79

Obě tyto sloučeniny se syntetizují pomocí postupů popsaných výše v případě sloučeniny 17 (obrázek 12) . Na pryskyřici se syntetizují lineární peptidy, jejichž vzorce jsou znázorněny v tabulce 1, cyklizují se pomocí standardních postupů, odstraní se z nich chránící skupiny a vyčistí se vysokotlakou kapalinovou chromatografií, čímž se získají výsledné cyklické peptidy jako konečné produkty 78 a 79.

28. Syntéza sloučeniny 80

Lineární peptid potřebný pro syntézu, tohoto peptidu (viz tabulka 1) se sestaví na 2-chlortritylchloridové pryskyřici. 3-brompropionová kyselina se podrobí reakci s pryskyřicí podobným způsobem jako je popsán v příkladu 1 (pro přípravu sloučeniny 3) pro Fmoc-NH(CH₂)_S-COOH. Ke 3-brompropionyl-0-(2-chlortrityl)-pryskyřici se poté přidá pětinásobný nadbytek piperazinu, čímž se získá piperazin-N-propionylderivát navázaný na pryskyřici, jehož vzorec je uveden níže:

HN N“CH₂-CH₂'CO-O’chlortritylpryskyřice

Poté se na pryskyřici· sestaví—lineární peptid, odštěpí se a cyklizuje pomocí postupů popsaných pro sloučeninu 11 (obrázek 11). N-koncová benzyloxykarbonylová skupina se odstraní katalytickou hydrogenolýzou za použití 5% palladia na uhlí, pomocí postupu popsaného pro odpovídající stupeň u sloučeniny 11. N-koncová aminoskupina se poté acetyluje reakcí cyklického peptidu s acetanhydridem v dimethylformamidu.' Odštěpením chránící skupiny z Asp(OBu^c) a následným vyčištěním surového peptidu vysokotlakou kapalinovou chromatografií se získá požadovaná cyklická sloučenina 80.

29. Syntéza sloučeniny 81

Sloučenina 81 se syntetizuje pomocí postupů popsaných výše v případě sloučeniny 16 (obrázek 6) . Na pryskyřici se syntetizuje lineární peptid, jehož vzorec je znázorněn v tabulce 1, cyklizuje se pomocí standardních postupů, odstraní se z něj chránící skupina a vyčistí se vysokotlakou kapalinovou chromatografií, čímž se získá výsledný cyklický peptid jako konečný produkt 81.

30. Syntéza sloučeniny 82

Analog sloučeniny 11 obsahující benzyloxykarbonylovou skupinu na N-konci a D-leucinový zbytek místo Ile, jehož vzorec je uveden níže, se syntetizuje stejným' způsobem jako je popsán pro sloučeninu 11 (obrázek 11).

2.

Ν'

H 0

NW

D-Leu-Leu-Asp(OBut)-VaF [D-Lys-anaíog]

N-koncová benzyloxykarbonylová skupina- se odštěpí stejným, způsobem a výsledná sloučenina (350 mg, 0,56 mmol) se rozpustí v 15 ml dimethylformamidu. Poté se přidá 86 mg 2-bromoctové kyseliny a následně 97 μΐ diisopropylkarbodiimidu. Po 16 hodinách při teplotě místnosti se přidá pětinásobný nadbytek piperazinu a reakční směs se nechá stát při teplotě místnosti po dobu dalších 24 hodin. Rozpouštědlo se odpaří ve vakuu a ze surového peptidu sé odštěpí chránící skupina a vyčistí se pomocí standardních způsobů.

31. Syntézy sloučenin 83 a 84

Cyklický peptid obsahující D-Lys-D-Leu, jehož vzorec je uveden výše u syntézy sloučeniny 82, se nechá po dobu 30 minut reagovat s kyselinou trifluoroctovou, čímž se získá cyklický peptid zcela bez chránících skupin, jehož vzorec je uveden níže. Tento peptid se použije k přípravě sloučenin 83

NH

Pro syntézu peptidu 83 se 55 mg Boc-4-aminomáselné kyseliny rozpustí ve 2 ml dimethylformamidu a podrobí se reakci se 41 μΐ diisopropylkarbodiimidu a 36 mg HOAt. Po 30 minutách při teplotě místnosti se reakční směs přidá k roztoku 177 mg (0,26 mmol) výše uvedeného cyklického peptidu a 92 μΐ diisopropylethylaminu v 10 ml dimethylformamidu a směs se míchá po dobu 6 hodin při teplotě místnosti. Rozpouštědlo se poté odpaří ve vakuu a ke zbytku se přidá kyselina trifluoroctová pro odštěpení N-koncová skupiny Boc a surový peptid se vyčistí vysokotlakou kapalinovou chromatografií, čímž se získá Čistá sloučenina 83.

Cyklický peptid 84 se připraví stejným, způsobem jako sloučenina 83', s tím rozdílem, že sě místo. Boc-4-aminomáselné kyseliny použije hydrochlorid Na-Boc-Arg.

32. Syntézy sloučenin 85 až 89

Sloučeniny 85 až 89 se syntetizují pomocí postupů použitých v případě sloučeniny 17 (obrázek 7). Vzorce lineárních peptidů ,sestavených na pryskyřici jsou uvedeny v tabulce 1.

33. Syntézy sloučenin 90 až 105

Tyto sloučeniny se syntetizuji pomocí postupů popsaných výše v případě přípravy sloučeniny 3. Lineární peptidy, jejichž vzorce' jsou uvedeny v tabulce l, se syntetizují na 2-chlortritylchloridové pryskyřici, cyklizují se pomocí standardních postupů, odstraní se z nich chránící skupiny a vyčistí se vysokotlakou kapalinovou chromatografií, čímž se získají výsledné cyklické peptidy jako konečné produkty 90 až 105. Ve sloučeninách obsahující zbytek D-Arg (sloučeniny 90, 91, 97, 98, 101, 102 a 103) se argininový zbytek zavede za použití derivátu Fmoc-Arg(Pmc) (viz obrázek 14). Během závěrečného postupu odštěpování chránících skupin za použití kyseliny trifluoroctové se rovněž izolují a běžnými způsoby charakterizují některé částečně chráněné sloučeniny (sloučeniny 106 - 109, které stále obsahují skupinu Pmc).

34. Syntézy sloučenin 110 až 114

Výše uvedené cyklické peptidy se připraví reakcí cyklického peptidu c(Melle-Leu-Asp-Val-D-Orn-D-Ala) (sloučeniny 92) , nebo c(Melle-Leu-Asp-Val-D-lys-D-Lys) (sloučeniny 95) s odpovídajícím aldehydem nebo ketonem a natriumkyanborohydridem, Například sloučenina 111 se připraví tak, že se 64 mg (100 μπιοί) cyklického peptidu 92 rozpustí ve 2 ml suchého acetonu a podrobí se reakci se 63 mg (10 ekvivalenty) natriumkyanborohydridu. Po jedné hodině se reakční směs odpaří do sucha a zbytek, rozpuštěný v 5 ml vody, se okyselí kyselinou octovou' a odpaří ve vysokém vakuu. Surový peptid se vyčistí vysokotlakou kapalinovou chromatografií.

Příklad 2

Testy in vitro a in vivo

V tomto příkladu se používají následující zkratky a zdroje materiálů:

Buňky MOLT-4 jsou linií lymfocytičkých T-buněk (získanou ze sbírky kultur ATCC)

Fibronektin: lidský fibronektin v čistotě reakčního činidla. Purifikuje se z lidské plazmy afinitní chromatografií na želatinové sefarose. Dodavatelem je Bio Products

Elstree Velká Británie, produkt č. 9136. Souhrnným článkem o fibronektinech je Fibronectins - Adhesive Glycoproteins of Cell Surface and Blood, Κ. M. Yamada a K. Olden, Nátuře, 275 (1978) 179 - 184.

rsVCAM-i je rekombinantní rozpustní VCAM-1 (viz: Biochem Biohpys Res Comm 1991 178 N3; 14 98 - 1504) . VCAM-1 je buněčný povrchový glykoprotein produkovaný vaskulárním endotelem, jakož i na buňkách podobných makrofágům a buňkách dandritického typu, jako odpověď na určité zánětlivé stimuly. VCAM-l inteřaguje· s integrinem VLA-4 přítomným na jednojaderných leukocytech.

cDNA pro VCAM-1 byla izolována screeningem cDNA-knihovny z lidských endoteliálních buněk aktivovaných IL-Ιβ. V hmyzích buňkách byla exprimována velká množství tohoto proteinu za použití baculovirového expresivního systému. Bylo zjištěno, že buňky exprimující VCAM-1 se specificky vážou na řadu buněčných linií exprimujících VLA-4 (Jurkat, THP-1, U937).

Další prací o VCAM-1 je Expression and Functional Characterisation of Recombinant Human Vascular Cell Adhesion Molecule-1 (VCAM-1) Synthesised by Baculovirus-Infected Insect Cells, J. K. Stoltenborg, R, A. Straney, R. J. Tritch, W. M. Mackin a H. J. George, Protein Expression and Purification, 4 (1993) 585 - 593.

RPMI 1640 je médium pro kultivaci buněk. Dodavatelem je Gibco BRL (Life technologies, katalogové číslo 31870-025).

Zkratka FCS označuje telecí fetální sérum. Dodavatelem je Advanced proteins products (West Midlands, Velká Británie), katalogové číslo AS-302-50.

Zkratka BCECF-AM· označuje acetoxymethylester 2\7'-bis-(2-karboxyethyl)-5-(ε6)-karboxyfluorosceinu. Dodavatelem je Molecular Probes lne USA, katalogové číslo B-1150.

CHO DG44 je vaječníková buněčná linie čínského křečka (získaná ze sbírky kultur ATCC; viz: Som Cell Mol Gen 1986, 12, 555 - 666) .

Zkratka DMEM' označuje Dulbeccem modifikované Eaglovo medium. Dodavatelem je Gibco BRL (Life technologies, katalogové číslo 41966-029).

Antibiotikem je penicilin-streptomycin. Dodavatelem je .Gibco BRL (Life technologies, katalogové číslo 15070-022).

Přístroj Eluorskan (název je ochrannou známkou) je fluorimetr.

HUVEC jsou endoteliální buňky z lidské pupeční šňůry. Primární kultury se připraví ze vzorků tkáně, {viz: J Clin Invest. 1973, 52, 2745 - 2747).

Rekombinantní lidský TNFa je faktor nádorové nekrosy (tumor necrosis factor).

Alzetová osmotická minipumpa je subkutánně implantovaná mikroosmotická pumpa, kterou dodává Alza Corporation Palo Alto, Kalifornie, USA.

2.1 Test adhese buňky M0LT-4/fibronektin-VCAM-1

Test adhese buňky MOLT-4/fibronektin-VCAM-1 se používá pro zkoumání interakce integrinu VLA4 (velmi pozdní antigen, α4/βΐ), exprimovaného na buněčné membráně buněk MOLT-4, s fibronektinem nebo rekombinantním rozpustným VCAM-1 (rsVCAM-1). Polystyrénové mikrotitrační desky s 96 jamkami se nechají při teplotě 4° C. přes noc potahovat fibronektinem nebo rsVCAM-1 v koncentracích 20 μ9/πι1 respektive 1 ^g/ml. Poté se k blokování nespecifických vazebných míst přidá koncentrovaný (10 mg/ml) roztok albuminu hovězího séra (BSA). Po odsátí. těchto roztoků se- přidají stejné objemy testované sloučeniny a suspenze buněk MOLT-4 v koncentraci lxlO⁶ buněk na ml. Adhese se provádí po dobu 2 hodin inkubací při teplotě

37° C, nepřichycené (neadherentní) nebo špatně přichycené buňky se odstraní jemným protřepáním a následným vakuovým odsátím. Stanovení množství zbývajících přichycených buněk se provede pomocí kolorimetrického testu kyselé fosfatasové aktivity, která se změří spektrofotometrem. Sloučeniny, které inhibují adhesi, způsobují snížení absorbance. Standardní, kontrolní a testovací pokusy se provádějí ve třech opakováních a vypočítá se procento inhibice vzhledem k úplným standardům (bez inhibitoru) a nespecifickým standardům (bez fibronektinu) na každé desce.'

2.2 Testy buňka-buňka

2.2.1 VCAM-1 CHO buňky

Buňky MOLT-4 (kultivované v médiu RPMI 1640 doplněném 5 % FCS a 2 mmol L-glutaminu) se označí fluorescenčním barvivém BCECF-AM v množství 30 ptg/ml na 3xlO^s buněk. CHO DG44 transfektované cDNA pro VCAM-1 o plné délce se selektují na základě exprese VCAM-1 pomocí analýzy FACS a nechají se růst do konfluence v deskách pro tkáňovou kultivaci s 96 jamkami. Před použitím v testu adhese se buňky CHO DG44 třikrát promyjí DMEM doplněným 5 % FCS, 2 mmol L-glutaminu a 2 % antibiotika. CHO buňky exprimující VCAM-1 se překryjí buňkami MOLT-4 v množství 10^s buněk na .jamku a provádí se inkubace po dobu 30 minut při teplotě 37° C, za obsahu oxidu uhličitého 5 %. Nepřichycené (neadherentní) buňky se odstraní trojnásobným omytím desek médiem RPMI 1640 doplněným 5 % FCS a 2 mmol L-glutaminu, a poté se desky blotují za sucha na tkáňový papír. Do každé, jamky se přidá 100 μΐ 2% přípravku Triton X-100 a desky se změří za použití fluorimetru Fluoroskan (excitace: 485 nm; emise: 538 nm). Testované sloučeniny se rozpustí v odpovídajících rozpouštědlech a přidají se k buňkám MOLT-4 před přidáním ke kulturám CHO DG44. Inhibice adhese se vypočítá srovnáním úrovně adhese (fluorescence) kontrolních buněk ošetřených pouze nosnou látkou a buněk ošetřených testovanou sloučeninou.

2.2.2 Endoteliální buňky lidské pupečníkové žíly

Buňky MOLT-4 (kultivované v médiu RPMI 1640 doplněném 5 % FCS a 2 mmol L-glutaminu) se označí fluorescenčním barvivém BCECF-AM v množství 30 ^g/ml na 3xlO^s buněk. Primární kultury HUVEC se nechají růst do konfluence v deskách pro tkáňovou kultivaci s 96 jamkami a inkubují se po dobu 18 hodin' s 2 U/ml rekombinantního lidského TNFa. Před použitím v testu adhese se jednovrstevný povlak primárních buněk HUVEC promyje M199 doplněným 5 % FCS, 2 mmol

L-glutaminu a 2 % antibiotika. Primární buňky HUVEC se překryjí buňkami MOLT-4 v množství 10^s buněk na jamku a provádí se inkubace po dobu 30 minut při teplotě 37° C, za obsahu oxidu uhličitého 5 %. Nepřichycené (neadherentní) buňky se odstraní trojnásobným omytím desek médiem RPMI 1640 doplněným 5 % FCS a 2 mmol L-glutaminu, a poté se desky blotují za sucha na tkáňový papír. Do každé jamky se přidá 100 μΐ 2% přípravku Triton X-100 a desky se změří za použití fluorimetru Fluoroskan (excitace: 485 nm; emise: 538 nm) . Testované sloučeniny se rozpustí v odpovídajících rozpouštědlech a přidají se k buňkám MOLT-4 před přidáním ke kulturám HUVEC. Inhibice adhese se vypočítá srovnáním úrovně adhese (fluorescence) kontrolních buněk ošetřených nosnou látkou a buněk ošetřených testovanou sloučeninou.

2.3 Kontaktní hypersenzitivní odpověď in vivo

Samci myší Balb/c o hmotnosti 20 - 25 g se senzitizují 50 μΐ 0,24% roztoku oxazolonu ve směsi acetonu a olivového' oleje místní aplikací na oholenou část kůže na zádech. O sedm dnů později se myším místně provokačně aplikuje 25 μΐ 0,25% roztoku oxazolonu ve směsi acetonu a olivového oleje na povrch ucha. Ucho otéká po dobu 24 hodin a poté se změří tloušťka ucha a srovná se s tloušťkou před provokační aplikací oxazolonu. Vypočítá se procento zvýšení tloušťky ucha. Testované sloučeniny se podávají jednou denně Alzetovou osmotickou minipumpou, která se implantuje 24 hodin před provokační aplikací oxazolonu. Inhibice zánětlivé odpovědi se vypočítá srovnáním hodnot naměřených u skupiny zvířat ošetřených nosnou látkou a skupiny ošetřené testovanou sloučeninou (počet zvířat ve skupině je 6).

2.4 Ovalbuminový model hypersenzitivity zpožděného typu in vivo

Samice myší Balb/C o hmotnosti 20 - 25 g se imunizují na boku emulzí ovalbuminu (od firmy Sigma; 0,1 ml subkutánní injekce roztoku o koncentrací 2 mg/ml smíchaného v poměru 1 : 1 s kompletním Freundovým adjuvans od firmy Difco). O sedm dnů později se myším subplantárně podá provokační injekce ovalbuminu (30 μΐ 1% teplem agregovaného ovalbuminu ve fyziologickém roztoku) do levé zadní tlapky. Tlapka otéká po dobu 24 hodin a poté se změří tloušťka tlapky a srovná se s tloušťkou před provokační injekcí ovalbuminu. Vypočítá se procento zvýšení tloušťky tlapky. Testované sloučeniny se podávají jednou denně Alzetovou osmotickou minipumpou, která se implantuje 24 hodin před provokací ovalbuminem. Inhibice zánětlivé odpovědi se vypočítá srovnáním hodnot naměřených u skupiny zvířat ošetřených nosnou látkou a skupiny ošetřené testovanou sloučeninou (počet zvířat ve skupině je 5).

2.5 Model antigenem vyvolané artritidy in vivo

Myši se imunizují a o 7 dnů později se jim subkutánně aplikuje kombinace 100 pg methylovaného albuminu hovězího séra (BSA) v kompletním Freundově adjuvans a poté se jim intraperitoneálně injikují organismy Bordetella pertussis.

Dva týdny po této aplikaci se zvířata intraartikulárně provokují 100 pg methylovaneho albuminu hovězího séra (BSA) a měřením otoku kolenního kloubu, histologickým měřením a měřením změn v obsahu proteinů akutní fáze se stanoví stupeň zánětu a artritidy. Testované sloučeniny se podávají po dobu 7 až 14 dnů počínaje den před provokační aplikací a stupeň zánětu a artritidy se srovná s kontrolními zvířaty a druhým kolenem.

2.6 Model experimentální autoimunitní encefalomyelitidy

Onemocnění se vyvolá subkutánní injekcí směsi míšního homogenitu, myelinového bazického proteinu (MBP) nebo encefalogenních peptidů s kompletním Freundovým adjuvans (CFA), v kombinaci s intraperitoneální injekcí pertussis-toxinu. Pro vyvolání akutního onemocnění se injekce pertussis-toxinu opakuje 2 dny po imunizaci. Pro vyvolání chronického onemocnění se podání pertussis-toxinu vynechá a myším se podají dvě injekce antigenu v kompletním Freundově adjuvans, s intervalem 7 dnů. Onemcnění se hodnotí klinickým pozorováním, doplněným histologickým rozborem. Testované sloučeniny se podávají po dobu 7 až 14 dnů počínaje den před provokační aplikací a symptomy se srovnají se symptomy u kontrolních zvířat.

Poznámky k tabulkám 1 a 2:

Pro přehlednost bylo každé sloučenině uvedené v tabulkách přiděleno zvláštní číslo. Nicméně některé sloučeniny s odlišnými čísly jsou ve skutečnosti stejné. Tyto sloučeniny jsou uvedeny níže:

= 224 = 225 = 226 =/227 = 228

155 = 156 = 157 = 161

158 = 159 = 160 = 162 = 163 = 196 = 197 = 198

171

Syntéza a purifikace cyklických peptidů

10-40% vodný aceto-

G]u(OBu^l)-Ue-Leu-Asp(OBu^l)Val-Pro-NH- 51 cfGlu-lle-Leu-Asp-Val-Pro-NH-CCHjJ^-CO) 10-50% vodný aceto(CH^-COOH. ___ nitril (60 minut)

GIufOBuO-De-Leu-AsníOBuO-Val-Pro-NH- 52 „ cfGIu-Ile-Leu-Asp-Val-Pro-NH-ÍCHAi-CO) 20-40% vodnv aceto-

200 ί Mell0-Leu-Asp(ÓBut)-Val-D-Lys{Bocb;N

-LL

αο

Γι

cp

Ή	*—
ε	-	Φ
'>1 C	ο	(Λ
0)	Ή	X
CJ	π
'(0	□	Φ
ld	χ	υ
XI	to	rH
0	tn X)	□ · XI 3
ω	0	(0 4-1 4-1 3
—	to	C
ε	ι—Ι	> -Η
ε	TJ >Φ	ε C
ο	4J	Φ Φ
ιΓ)	>ιη	TJ Ν
CN	3 0	φ > .-d
X	α Ν	3 Ε
ΓΜ	0	φ Ο
(Ν	C|	•η ,—
X	0	tn ή
CN	4-1	(0 C
ΓΊ	(0	>u 'to
Ο	4J	> tO '>1
Cu	»φ	ε
Η	XI	·—t 0
00	0	Φ ld TJ Ch
ΟΙ	>Ν	>φ
	ε ω	-U Ή >tn 4J
υ	>υ	3 «
rc	Η	0 0
Ό		Ch1
	CL	Ν X
>		0 O

ld >

>, <—I ld

	c	-H	Ci
	0	i-l	>φ tn
	i—1	JJ	ε
	0	Ή	0 -
	ύ£	C	Ch 3
		0	- F-1
	Ή	u	•rd
	4J	φ	3 Ci
	-rd	u	4-1 4-1
	>N	to	C Td
	3		Φ C
	0	to	•H O
	Ch		TJ 4-1
		<0	<0 Φ
	tú	TJ	ld O
	N	0	tr to
		>
	Ή		Ή -rd
		'rí	C
	'to	>P	rd Φ
	>	O ·	)N U
	0	> —	3 Π3
	i-l	4-1'φ	O Cl
	Ch	>	Ch 4-1
		ε o	C
	Φ	'Φ 4-1	(0 Φ
	tn	4-> υ	N O
		tn o	c
..	u	>i Ci	'to 0
»—	j	tn o	> Cí
	(X	3	'>·.
Q) [)	X	'>r-í	ε φ
	•	> U-l	0 tn
□	Ή —	O Ή	Ci
	C CO	^-t Cl	Ch Ή
Π3	> -	TJ 4-1	ε
•P	H U	)φ	Φ Ή
λ;	4J —	4-1 >	tn υ
	to	>tn c	'rd
tn	i-l -rd	3 -H	rc ·Γ“|
'S	to ε	O —1	C 3
s	Ch Φ	Ch Φ	O >tn
	φ N	n tn	i-l >
Φ	Cl '(0	0 >	0 >
	Ch u-i	Cí Cí	X, N

Asp 1,0, Val 0,96. Leu 1,97. Lys 0,95. 15,2 695,5

10-70% (40 min.)

CH

758,6

tt v Γ X

^r v Cs SO Γ-

ΤΓ 0 CM Γ-

m * r- V0 Γ-

í 749,0

749,0

XT θ' VO

Os * m 00 Ό

to <», 00 ^r σν

vn *» 00 Ov

1024,6

1063,5

SO so' X SO

X—s, c: Έ o· rt- s - ĚČ o co ó CM

c ‘Ě 0 9 , 'T ™ ĚČ . 0 vs ό CM

Z—\ c E 0.9 sr - £ O CO ó CM

c E 0 9 VS 5č 0 CO ó CM

c E ^.9 0 — -P 0 ST ó CM

c E SO 0 CO ST sř 0 T ό

c E 0 0 ,CO ST dí . .. o ST 1 0

Z—“s £ E r~ o \o cn CM O ST 1 0

c E 0 0 st m O ST ό

c Έ ^.9 00 Eč O co t o CM

z*V c £ ^9 Γ- 0 00 1 0 <N

Z^s, c E θ 9 ES 0 00 ó CM

c E °\9 0 00 ό CM

c E in O CM co cm eR O SO Ó

so* x o' ců — < Έ X 0' 00* G\ θ' Tg > . - f' <O X —' 0' X O (Λ <— < Cm

SO* 0 .0* on < so’ CS 0' £> G 00 Cs cT 75 > . - rj O. 00 — θ' X a uj £7 < H

UJ 5n G |G Cs O 2 O G 0* OS O* > <5 cť —'0' £ & < H

r-* Cs O* íň SO Cs θ' 3 4J G vs Cs θ' cg > G O cs · v — o X us US >, < G

TT Cv X CO L. C Ql 0* ** 2 υ G co* CS c 5 > O X UJ <

vd σ\ σ' co (m < <0 3 43 G 00 Ó* cg > ŠS ° O' £.52 < E

Γ-* Ov C? Gů -s, Γ’·’·* O «» 0 í G 00* Cs Ó* cg > ŘS ~ 0' s·- < X

Os CS θ' < SO* CS θ' 3 <Ú G CO Cs O cg > . - r- O Cs G· o' X 3 US v. < 0

teš as *w c u. O so* Cs θ' 3 O G 00 CS 0' cg > O* X U) <

ví cs o 00 < 0' 3 O G Ό* Cs θ' cg > cí ° Cs O s·« < <

0 s, co ke < 0 s. 2 <υ G <D 75 > “* o < <

UÍ Os θ' CO i— < SO* Os 0 3 O G SO* Cs O* Tg > . <D Os —* 0' X O Μ JO < X

G X 0' 00 L- < r-* X 0' 3 o G co* X 0' cg > x- O O co — 0 X cl « tr < H

Cí Tí u 0 OV σ' □ t> 00’ Cv C? —, r*i > 3 —Γ rt s < O, ví us X < O

*čo 1— < Ql ύ X X Ql 75 > cx US < 3 3 1 JJ 0 2 u

«-S CO b. < ά X Im Gl 1 73 > t X UJ < 3 <y G f 0 t> 's_Z υ

Z*>, (Λ G Ql X u> H Ql 75 > 1 X <S] < 1 2 υ G í JU ř—< t> 2 υ

uj ín G Ql us ΐ Ql 5 > 1 Cu (Λ < 3 3 1 JJ 73 s o

00 1— < Gl . 00 bri < Ql i 03 > CL to < 2 3 1 J) >*—4 OJ G Tj

'co m < Ql UJ X Ql 1 75 > X u) < < □ 1 — 73 s U

S, </> X Gl CO Ql 1 73 > 1 CL V) < 1 □ 1 JU 1) s 0

c*. c G. 0 Ql ca < Ql • > 1 CL VJ < 1 2· 3 1 0 Σ υ

c Ul 0 Ql 1 E 0 Gl 1 σ > t X US < 1 3 Q 1 ja 73 5. U

<“c Λ < Ql l z—s 0 E X 00 < Ql 1 73 > X (Λ < 1 □ 3 1 4J Z3 <υ 0

z—\ 0 — c X 'co u, < Ql cg < Ql > 73 > 1 X US < 1 2 Q 1 JU ►—« 4) s υ

0 Ξ X '•'S 0£ Ut < Ql 1 tí f-* X Ql t cd > X to < 1 2 3 1 JLJ 1—1 4) 2 z* u

Z™*s 0 E X '•'S 00 Im < Ql 1 Q. L. H Ql 1 73 > 1 X US < 1 3 JL) TJ s υ

rt < Ql 1 ΓΜ UJ 0 k. 0 Ql Ή > 1 CL to < 1 □ _t) 73 s s_x 0

r- 0

00 Cs

o Cv

0 0

0

CM O'

ΓΌ O

ΤΓ o

m 0

VO O T-H

Γη

00 0

σν o

0

φ

Ν
			|
			0			r«4
			Ρ			Φ
	Ή	0	Φ		·γ4	C
	ε	C	0		ε	φ
	'>	φ	φ		'Ρ		Φ
	c	TJ		Φ	υ	'φ	1^4
	φ	φ	φ	ω	'Ρ	>	>
	0	>			-ΓΊ	0	ρ
	'Φ	3	φ	Φ	3	C	φ
	ρ		Ό	C	>ω	•Η	C
	n	Φ	Ο	0	>
	0	υ	>		>	φ	'Ρ
		4		0	Ν	ω	>
	ω	3	'Ρ			>	U
		X	>Ρ		Φ	ρ	(Π
		Φ	0	•	ω	0,	>Ν
	ε	Ρ	>	,-'		C	0
	ε		Ρ	'φ	k>	Ή	C
		'Φ		>	—-·	ε	ε
	ο·	C	ε	0	Φ	φ
	ιΠ	Φ	'φ	ρ	φ		χ
	ΓΊ	TJ	Ρ	υ	ι—Η	Η	υ
		Φ	ω	0	3	>Ρ	Ρ
	X	>	>	Ρ	X!	&4	•ΓΊ
		3	ω	Ο	Φ		Φ
	UO			3	-Ρ	<	•ΓΊ
	κ	Φ		>—I		□
		>ω	>	u	>	-Ρ	Φ
			0	Η		3	Ι“4
		>	γΡ		C	C	φ
			Τ3	Ρ	Φ	Η
	m	Φ	>φ		Τ3	ε
	(X	>	Ρ	>1	Φ		£
	ÉH		>Φ	C	>	φ	Η
	CD	Ή	3	Η	3	Ν	γ-4
	Ι-	C	0	γΡ			φ
	ΟΙ	Φ	Ch	φ	Φ	•ρ	ω
		C	Ν	U]	'ΓΊ	ε
			0				Jí
	ο	Τ3	C£	JÍ	cn	<—	0
	(0	□			φ		C
	Tj	JÍ	<	dP	>υ	Ή	-Ρ
	>	0	o			C	ε
	>	CU	φ	Γ—	φ	'Φ	φ
			Τ3	S		>
	>	.	>1	ο	F-1		χ
	C		>		Φ	ε	φ
	0	Ε		'Ρ	Τ3	0	'>
		ε	Φ	•γί	>Φ	Ρ	£
	0		C	3	-Ρ	CU	Φ
	JÍ	ο	0	X	>ω		Ν
		ιΠ		Φ	3	'Ρ	0
	>*Φ	.—	0	(Λ	0	Ρ	Ρ
	3		JÍ	Ρ	Oj	ω	Η
	X	X		0	Ν	ο	5^4
			3		0	<-4	a
	Ή	σ>	C	Φ	Ρ	X	φ
	Ρ	**	Η	f—f		υ	C
	•Ρ	ΓΊ	C	τ3	Ρ
	)Ν	·—	φ	>Φ	>φ	Ρ	χ
	3		)ϋ	Ρ	ε		ο
	0	UÍ	3	>ω	0	ω	'>
	a	φ	Ο	3	a		Ρ
		α	ι—1	□	—	»	φ
	ω	Φ	ω	Ο-		3	-Ρ
	Ν	>		Ν	'3	1-i	ρ
		0	3	0	Ρ	•Ρ	>φ
	Ή	2	0	Ρ	C	Ρ	C
	Τ3		C		φ	-Ρ
	'(0	>	φ	0	Ρ	Ρ	-Ρ
	>	C	Ό	ρ	Ό	C	ω
	0	0		φ	Φ	0	0
	Ρ	r-1	0	Ρ	Ρ	-Ρ	C
..	a	0	Ρ		tm	φ	ε
ÍN		j:	Ú	>Φ		υ	0
	φ			Ρ	'r-l	φ	+J
ω	ω	0	Φ	0'	-Ρ		'Ρ
0		Ρ	ω		ι-4	ρ	>Ρ
r—1	U	Φ		>Ν	)Ν	ε	a
□	Ρ	C	Φ	ε	3	φ
X	CU		•ΓΊ	φ	0	α	φ
φ	I		Η	>υ	a	φ	C
X		00 >Ν	• Η		Ρ	>φ	Φ
	'(0	— Ζ3	»4	φ	Ρ	Ρ	C
x	JÍ	υ	0	α	Ν	C	>ω	'φ
	φ		α			φ	Ρ	>
Φ	•Η				'φ	φ	•ΓΊ	0
Ό	Ρ	Η		ι—1	>	C	Ν	>
c	>	ε	Ji	Ή		0		0
Φ	·-1	φ	φ	Ρ	ε	Jí	φ	C
cn	φ	Ν	C	Ρ	0		γΡ	φ
Φ	C	'3	-Η		Ρ	Φ		Ρ
J	<	tu	η	C	Cu	φ		ω

f .1 *Ď.

-J / v 2; / t Λ

Poznámky k zobrazení sekvencí^ c _ ^r_ £= O (= _o i i

V tabulkách 1 a 2 iv ’^_

Co.

O o

tOí

I Erjt I · i pppágu pe uveden čí^sloůaný seznam sloučenin. Níže jsou zobrazeny sekvence za použití/ softwaru Patentin, nicméně nejsou zde uvedeny některé? peptidy obsahující D-aminokyselinu.

V souladu s tím část Zobrazení sekvencí nezahrnuje všechny peptidy uvedené v tabulkách 1 a 2.

Pro účely přehlednosti a jasnosti je v následující tabulce uveden vztah mezi čísly sloučenin použitými v tabulkách- 1 a 2 a čísly sekvencí SEQ ID č. uvedenými v části Zobrazení sekvencí.

slouč. č.	SEQ ID Č.
1 - 85	1-85 (poznámka: některé obsahují D-aminokyselinu)
86 - 114	neuvedeny jelikož všechny obsahují D-aminokyselinu
115	86
116	87
117	88
118	89
119 - 120	neuvedeny jelikož všechny obsahují D-aminokyselinu
121	90
122	91
123	92
' 124	93
125 - 126	neuvedeny jelikož všechny obsahují D-aminokyselinu
127	94
128	neuvedena jelikož obsahuje D-aminokyselinu
129	95
130	96
131	neuvedena jelikož obsahuje D-aminokyselinu
132	97
133	neuvedena jelikož obsahuje D-aminokyselinu

slouč. č.	SEQ ID Č.
134	98
135 - 138	neuvedeny jelikož všechny obsahují D-aminokyselinu
139	99
140 - 144	neuvedeny jelikož všechny obsahují D-aminokyselinu
145	100
146	101
147	102
148	103
149	104
150	105
151	106
152	107
153 - 163	neuvedeny jelikož všechny obsahují D-aminokyselinu
164	108
165	109
166	110
167	111
168	neuvedena jelikož obsahuje D-aminokyselinu
169	112
170 - 171	neuvedeny jelikož všechny obsahují D-aminokyselinu
172	113
173 - 182	neuvedeny jelikož všechny obsahují D-aminokyselinu
183	114
184	115
185	116
186	117
187	118
188 - 191	neuvedeny jelikož všechny obsahují D-aminokyselinu
192	119
193	120
194	121
195.	122
196 - 228	neuvedeny jelikož všechny obsahují D-aminokyselinu

Zobrazení sekvencí

Informace o sekvenci SEQ ID č. 1:

(i) charakteristiky sekvence:

(A) délka: 5 aminokyselin (B) typ: aminokyselinová (C) počet řetězců: jednořetězcová (D) topologie: cirkulární (ii) typ molekuly: peptid (ix) vlastnost:

(A) jméno / klíč: modifikované místo (B) lokace:. 5 (D) další informace: produkt = jiný ka = 4-aminomáselná kyselina (xi) znázornění sekvence SEQ ID č. 1:

Ile Leu Asp Val Xaa 1 5 poznámInformace o sekvenci SEQ ID č. 2:

(i) charakteristiky sekvence:

(A) délka: 5 aminokyselin (B) typ: aminokyselinová (C) počet řetězců: jednořetězcová (D) topologie: cirkulární f η η \ 't rF** R»1 Λ I Λ * Ί » r . ν» λ — 1 j

V -h. HIVxCPtLixy ;

(ix) vlastnost:

(A) jméno / klíč: peptid (B) lokace: 5 (D) další informace: produkt = jiný ka = 4-aminopentanová kyselina (xi) znázornění sekvence SEQ ID č. 2:

. Ile Leu Asp Val Xaa poznam97

Informace o sekvenci SEQ ID č. 3:

(i) charakteristiky sekvence:

(A) délka: 5 aminokyselin (B) typ: aminokyselinová (C) počet řetězců: jednořetězcová (D) topologie: cirkulární (ii) typ molekuly: peptid . . (ix) vlastnost:

(A) jméno / klíč: peptid (B) lokace: 5 (D) další informace: produkt = jiný ka = 6-aminohexanová kyselina (xi) znázornění sekvence SEQ ID č. 3:

Ile Leu Asp Val Xaa 1 5

Informace o sekvenci SEQ ID č. 4:

(i) charakteristiky sekvence:

(A) délka: 5 aminokyselin (B) typ: aminokyselinová (C) počet řetězců: jednořetězcová (D) topologie: cirkulární (ii) typ molekuly: peptid (ix) vlastnost:

I Λ 1 -1 mórií-i / Ir 1 í X . Ť a (B) lokace: 5 (D) další informace: produkt = jiný, ka = 7-aminoheptanová kyselina (xi) znázornění sekvence SEQ ID č. 4:

Ile Leu Asp Val Xaa 1 5 poznámpoznám98 ’ιλ

Informace ο sekvenci SEQ ID č.

5:

(i) (ii) (ix) (ix) (xi)

Informace o (i) (ii) (ix) (ix) charakteristiky sekvence:

(A) délka: 5 aminokyselin (B) typ: aminokyselinová (C) počet řetězců: jednořetězcové (D) topologie: cirkulární typ molekuly: peptid vlastnost:

(A) jméno / klíč; peptid (B) lokace: 5 (D) další informace: produkt = jiný ka = 7-aminohexanová kyselina vlastnost:

(A) jméno / klíč: peptid (B) lokace: 1 (D) další informace: produkt = jiný ka = D-konfígurace znázornění sekvence SEQ ID č. 5:

Ile Leu Asp Val Xaa

5 sekvenci SEQ ID č.. 6:

charakteristiky sekvence:

(A) délka: 5 aminokyselin

- Λτπτ nrvtrwciAl i nrvro • ' -a C- - --------- ~--« (C) počet řetězců: jednořetězcová (D) topologie: cirkulární typ molekuly: peptid vlastnost ·.

(A) jméno / klíč: peptid (B) lokace: I (D) další informace: produkt = jiný, ka = D-konfigurace vlastnost:

poznámpoznámpoznám99 poznám (A) jméno / klíč: peptid (B) lokace: 5 (D) další informace: produkt = jiný ka = 6-aminohexanová kyselina (xi) znázornění sekvence SEQ ID Č. 6:

Leu Leu Asp Val Xaa 1 , 5 .

Informace o sekvenci SEQ ID č. 7:

(i) charakteristiky sekvence:

(A) délka:· 5 aminokyselin (B) typ: aminokyselinová (C) početřetězců: jednořetězcová (D) topologie: cirkulární (ii) typ molekuly: peptid (ix) vlastnost:

(A) jméno / klíč: peptid (B) lokace: 5 (D) další informace: produkt = jiný ka = 6-aminohexanová kyselina (xi) znázornění sekvence SEQ ID č. 7:

Pro Leu Asp Val Xaa 1 5

Informace o sekvenci SEQ ID č. 3:

(i) charakteristiky sekvence:

(A) délka: 5 aminokyselin (B) typ: aminokyselinová (C) počet řetězců: jednořetězcová (D) topologie: cirkulární (ii) typ molekuly: peptid (ix) vlastnost:

(A) jméno / klíč: peptid poznám

100 poznám(xi)

Informace (i) (ii) (ix) (ix) (xi)

Informace (i) (B) lokace: 5 (D) další informace: produkt = jiný ka = 6-aminohexanová kyselina znázornění sekvence SEQ ID č. 8:

Gly Leu Asp Val Xaa

5 sekvenci SEQ ID č. 9:

charakteristiky sekvence:

(A) délka: 5 aminokyselin (B) . typ: aminokyselinová (C) počet řetězců: jednořetězcová (D) topologie: cirkulární typ molekuly: peptid vlastnost:

(A) jméno / klíč: peptid (B) lokace: 1 (D) další informace: produkt = jiný ka = terciární leucin vlastnost:

(A) jméno / klíč: peptid (B) lokace: 5 (D) další informace: produkt = jiný, ka = 6-aminohexanová kyselina znázornění sekvence SEQ ID č. 9:

Xaa Leu Asp Val Xaa

5 sekvenci SEQ ID č. 10:

charakteristiky sekvence:

(A) délka: 5 aminokyselin.

(B) typ: aminokyselinová (C) počet řetězců: jednořetězcová poznámpoznám101 (D) topologie: církulární (ii) typ molekuly: peptid (ix) vlastnost:

(A) jméno / klíč: peptid (B) lokace: 1 (D) další informace: produkt = jiný ka = terc.butylalanin (ix) vlastnost:

(A) jméno / klíč: peptid (B) lokace: 5 (D) další informace: produkt = jiný ka = 6-aminohexanová kyselina (xi) znázornění sekvence SEQ ID č. 10:

Xaa Leu Asp Val Xaa 1 5

Informace o sekvenci SEQ ID č. 11:

(i) charakteristiky sekvence:

(A) délka: 5 aminokyselin (B) typ: aminokyselinová (C) počet řetězců: jednořetězcová (D) topologie: církulární poznámpoznám-

(ii)	typ molekuly: peptid
(ix)	vlastnost:
	(A)	jméno / klíč: peptid
	(B)	lokace: 1
	(D)	další informace: produkt = ka = N-acetyl-D-lysin
(xi)	znázornění sekvence SEQ ID č. 11
	Xaa Ile Leu Asp Val
	1	5

poznám102

Informace o sekvenci SEQ ID č. 12:

(i) charakteristiky sekvence:

(A) délka: 5 aminokyselin (B) typ: aminokyselinová (C) počet řetězců: jednořetězcové (D) topologie: cirkulární (ii) typ molekuly: peptid (ix) vlastnost:

(A) jméno / klíč: peptid (B) lokace: 1 (D) další informace: produkt = jiný, poznámka = N-acetyl-D-ornithin (xi) znázornění sekvence SEQ ID č. 12:

Xaa Ile Leu Asp Val 1 5

Informace o sekvenci SEQ .ID č. 13:

(i) charakteristiky sekvence:

(A) délka: 5 aminokyselin (B) typ: aminokyselinová (C) počet řetězců: jednořetězcové (D) topologie: cirkulární

(ii) (ix)

typ molekuly: peptid vlastnost: (A) jméno / klíč· peptid (B) lokace: 1 (D) další informace: produkt = jiný, poznám ka '= N-acetylornithin

(xi) znázornění sekvence SEQ ID č. 13:

Xaa Ile Leu Asp Val 1 5

103

Informace o sekvenci SEQ ID č. 14:

(i) charakteristiky sekvence:

(A) délka: 5 aminokyselin (B) typ: aminokyselinová (C) počet řetězců: jednořetězcová (D) topologie: cirkulární (ii) typ molekuly: peptid (ix) vlastnost:

(A) jméno / klíč; peptid (B) lokace: 1 (D) další informace: produkt = jiný, poznámka^ N-acetyl-D-lysin (ix) vlastnost:

(A) jméno / klíč: peptid (B) lokace: 2 (D) další informace: produkt = jiný, poznámka = D-konfigurace (xi) znázornění sekvence SEQ ID č. 14:

Xaa Ile Leu Asp Val 1 5

Informace o sekvenci SEQ ID č. 15:

(i) charakteristiky sekvence:

(A) délka: 5 aminokyselin (B) typ: Aminokyselinová (C) počet řetězců: jednořetězcová (D) topologie: cirkulární (ii) typ molekuly: peptid (ix) vlastnost:

(A) jméno / klíč: peptid (B) lokace: 5 (D) další informace: produkt = jiný, poznámka = 4-aminomethylbenzoová kyselina

104 (xi)

Informace (i) (ii) (ix) (xi)

Informace (i) (ii) (ix) znázornění sekvence SEQ ID č. 15:

Ile Leu. Asp Val Xaa

5 sekvenci SEQ ID č. 16:

charakteristiky sekvence:

(A) délka: 5 aminokyselin (B) typ: aminokyselinová (C) počet řetězců: jednořetězcová (D) topologie: cirkulární typ molekuly: peptid vlastnost:

(A) jméno / klíč: peptid (B) lokace: 5 (D) další informace: produkt = ''jiný”, poznámka = (4-(2-aminoethyl)imidazol-l-yl)octová kyselina znázornění sekvence SEQ IDe. 16:

Ile Leu Asp Val Xaa

5 sekvenci SEQ ID č. 17:

charakteristiky sekvence:

(A) délka: 5 aminokyselin (B) typ: aminokyselinová (C) počet řetězců: jednořetězcová (D) topologie: cirkulární typ molekuly: peptid vlastnost:

(A) jméno / klíč: peptid (B) lokace: 1 (D) další informace: produkt = jiný, poznámka = D-konfígurace

105 (ix) vlastnost:

(A) jméno / klíč: peptid (B) lokace: 5 (D) další informace: produkt = jiný, poznámka = piperazin-l-yloctová kyselina (xi) znázornění sekvence SEQ ID č. 17:

Leu Leu Asp Val Xaa . 5 . - -

Informace o sekvenci SEQ ID č. 18:

' (i) charakteristiky sekvence:

(A) délka: 6 aminokyselin (B) typ: aminokyselinová (C) počet řetězců: jednořetězcová (D) topologie: cirkulární (ii) typ molekuly: peptid (ix) vlastnost:

(A) jméno / klíč: peptid (B) lokace: 5 (D) další informace: produkt.= jiný, poznámka = piperazin-l-yloctová kyselina (ix) vlastnost:

(A) jméno / klíč: peptid (B) lokace: 6 (D) další informace: produkt = pAla (xi) ’žnázornění sekvence SEQ ID č. 18:

Ile Leu Asp Val Xaa Ala 1 5

Informace o sekvenci SEQ ID č. 19:

(i) charakteristiky sekvence:

(A) délka: 6 aminokyselin (B) typ: aminokyselinová

106 (C) počet řetězců: jednořetězcová (D) topologie: cirkulární (ii) typ molekuly: peptid (ix) vlastnost:

(A) jméno / klíč: peptid (B) lokace: l (D) další informace: produkt = jiný, poznám ka = D-konfígurace (ix) vlastnost:

(A) jméno / klíč: peptid (Β), lokace: 5 (D) další informace: produkt = jiný, poznám ka = piperazin-l-yloctová kyselina (ix) vlastnost:

(A) jméno / klíč: peptid (B) lokace: 6 (D) další informace: produkt = pAla (xi) znázornění sekvence SEQ ID č. 19:

Leu Leu Asp Val Xaa Ala 1 5

Informace o sekvenci SEQ ID č. 20:

(i) charakteristiky sekvence:

(A) délka: 5 aminokyselin (B) typ: aminokyselinová (C) počet řetězců: jednořetězcová . (D) topologie: cirkulární (ii) typ molekuly: peptid (ix) vlastnost:

(A) jméno / klíč: peptid (B) lokace: 1 (D) další informace: produkt = jiný, poznám ka = N-acetyl-D-lysin

107 (xi) znázornění sekvence SEQ ID č. 20:

Xaa Ile Leu Asp Val 1 5

Informace o sekvenci SEQ ID č. 21:

(i) charakteristiky sekvence:

(A) délka: 5 aminokyselin (B) typ: aminokyselinová (C) počet řetězců: jednořetězcová (D) topologie: cirkulární

(ii) (ix)

typ molekuly: peptid vlastnost: (A) jméno / klíč: peptid (B) lokace: 1 (D) další informace: produkt = jiný, poznám ka = N-acetylornithin

(ix) vlastnost:

(A) jméno / klíč: peptid (B) lokace: 2 (D) další informace: produkt = jiný, poznámka - D-konf igurace (xi) znázornění sekvence SEQ ID č. 21:

Xaa Ile Leu Asp Val 1 5

Informace o sekvenci SEQ ID č. 22:

(i) charakteristiky sekvence:

(A) délka: 5 aminokyselin (B) typ: aminokyselinová (C) počet řetězců: jednořetězcová (D) topologie: cirkulární (ii) typ molekuly: peptid

108 (ix) vlastnost:

(A) jméno / klíč: peptid (B) lokace: 1 (D) další informace: produkt = jiný, poznámka = N-acetyl-D-ornithin (ix) vlastnost:

(A) jméno / klíč: peptid (B) lokace: 2 (D) další informace: produkt = jiný, poznámka = D-konfigurace (xi) znázornění sekvence SEQ ID č. 22:

Xaa Ile Leu Asp Val 1 5

Informace o sekvenci SEQ ID č. 23:

(i) charakteristiky sekvence:

(A) délka: 5 aminokyselin (B) typ: aminokyselinová (C) počet řetězců: jednořetězcové (D> topologie: cirkulární

ii) ix)

typ molekuly: peptid vlastnost: (A) jméno / klíč: peptid (B) lokace: 1 (D) další informace: produkt = jiný, poznám ka - N-acetyllysin

(ix) vlastnost:

(A) jméno / klíč: peptid (B) lokace: 2 (D) další informace: produkt = jiný, poznámka = D-konfigurace (xi) znázornění sekvence SEQ ID č. 23:

Xaa Ile Leu Asp Val 1 5

109

Informace (i) (ii) (ix) (ix) (xi)

Informace (i) (ii) (ix) sekvenci SEQ ID č. 24:

charakteristiky sekvence:

(A) délka: 5 aminokyselin (B) typ: aminokyselinová (C) počet řetězců: jednořetězcová (D) topologie: cirkulární typ molekuly: peptid vlastnost: _ ... „ - ___ (A) jméno·/ klíč: peptid (B) lokace: l (D) další informace: produkt = jiný, poznámka = N-acetyl-2,4-díaminomáselná kyselina vlastnost:

(A) jméno / klíč: peptid (B) lokace: 2 (D) další informace: produkt = jiný, poznámka = D-konfigurace znázornění sekvence SEQ ID· č. 24:

Xaa Ile Leu Asp Val

5 sekvenci .SEQ ID č. 25:

charakteristiky sekvence:

(A) délka.· 5 aminokyselin (B) typ: aminokyselinová ..... .....

(C) počet řetězců: jednořetězcová (D) topologie: cirkulární. typ molekuly: peptid vlastnost:

(A) jméno / klíč: peptid (B) lokace: 1 (D) další informace: produkt = jiný, poznámka = N-acetyl-2,4-diaminomáselná kyselina

110 (xi) znázornění sekvence SEQ ID č. 25:

Xaa Ile Leu Asp Val 1 5

Informace o sekvenci SEQ ID č. 26:

(i) charakteristiky sekvence:

(A) délka: 5 aminokyselin (B) typ: aminokyselinová (C) počet řetězců: jednořetězcová (D) topologie: cirkulární (ii) typ molekuly: peptid (ix) vlastnost:

(A) jméno / klíč: peptid (B) lokace: 1 (D) další informace: produkt = jiný ka = N-acetyl-2,4-diaminomáselná D-konfigurace (xi) znázornění sekvence SEQ ID č. 26:

Xaa Ile Leu Asp Val 1 5

Informace o sekvenci SEQ ID č. 27:

(i) charakteristiky sekvence:

(A) délka: 5 aminokyselin (B) typ: aminokyselinová (C) počet řetězců: jednořetězcová (D) topologie: cirkulární poznámkyselina,

(ii) (ix)

typ molekuly: peptid vlastnost: (A) jméno / klíč: peptid (B) lokace: 1 (D) další informace: produkt = jiný ka = N-acetyl-2,4-diaminomáselná

poznámkyselina,

111

D-konfigurace (ix) vlastnost:

(A) jméno / klíc: peptid (B) lokace: 2 (D) další informace: produkt = jiný, poznámka = D-konfigurace (xi) znázornění sekvence SEQ ID č. 27:

Xaa Leu Leu Asp Val 1 5

Informace o sekvenci SEQ ID č. 28:

(i) charakteristiky sekvence:

(A) délka: 5 aminokyselin (B) typ: aminokyselinová (C) počet řetězců: jednořetězcová (D) topologie: církulární

(ii)	typ molekuly: peptid
(ix)	vlastnost:
	(A)	jméno / klíč: peptid
	(B)	lokace: 1
	(D)	další informace: produkt = jiný,	poznám
		ka = D-konfigurace
(ix)	vlastnost:
	(A)	jméno / klíč: peptid
	(B)	lokace: 5
	(D)	další informace: produkt = jiný,	poznám
		ka = 5-aminopentanová kyselina
(xi)	znázornění sekvence SEQ ID č. 28:
	Ile Leu Asp Val Xaa
	1	5

Informace o sekvenci SEQ ID č. 29:

(i) charakteristiky sekvence:

112 (A) délka: 5 aminokyselin (B) typ: aminokyselinová (C) počet řetězců: jednořetězcová (D) topologie; cirkulární

(ií) (ix)

typ molekuly: peptid vlastnost: (A) jméno / klíč: peptid (B) lokace: 1 (D) další informace: produkt = jiný, poznám ka = D-konfígurace

(ix) vlastnost:

(A) jméno / klíč: peptid (B) lokace: 5 (D) další informace: produkt = jiný, poznámka = 5-aminopentanová kyselina (xi) znázornění sekvence SEQ ID č. 29:

Leu Leu Asp Val Xaa 1 5

Informace o sekvenci SEQ ID č. 30:

(i) charakteristiky sekvence:

(A) délka: 5 aminokyselin (B) typ: aminokyselinová (C) počet řetězců: jednořetězcová (D) topologie: cirkulární

(ii) (ix)

typ molekuly: peptid vlastnost: (A) jméno / klíč: peptid (B) lokace: 1 (D) další informace: produkt = jiný, poznám ka = D-konfígurace

(ix) vlastnost:

(A) jméno / klíč: peptid (B) lokace: 5

113

(xi)	(D) další informace: produkt = jiný, ka = 6-aminohexanová kyselina znázornění sekvence SEQ ID č. 30: Val Leu Asp Val Xaa 1 5	poznám-
Informace o	sekvenci SEQ ID č. 31:
’(i)	charakteristiky s.ekvence: (A) délka: 5 aminokyselin (B) typ: aminokyselinová ' (C) počet řetězců; jednořetězcová (D) topologie: cirkulární
(ii)	typ molekuly: peptid
(ix)	vlastnost: (A) jméno / klíč: peptid (B) lokace: 1
	(D) další informace: produkt = jiný, ka = N-methylalanin	poznám-
(ix)	vlastnost: (A) ‘jméno / klíč: peptid (B) lokace: 5
	(D) další informace: produkt = jiný, ka = 6-aminohexanová kyselina	poznám-
(xi)	znázornění sekvence. SEQ ID č. 31: ττ — _ τ -n __ _
	ΛΟ,α 'LICU A&p· VCI.L' Ad.d ...... 1 5
Informace o	sekvenci SEQ ID č. 32:
(i)	charakteristiky sekvence: (A) délka: 5 aminokyselin (B) typ·: aminokyselinová (C) počet řetězců: jednořetězcová (D) topologie:'cirkulární

114 poznám(ii) typ molekuly: peptid (ix) vlastnost:

(A) jméno / klíč: peptid (B) lokace: 1 (D) další informace: produkt = jiný, ka = N-methylleucin (ix) vlastnost:

(A) jméno / klíč: peptid (B) lokace: 5 (D) další informace: produkt = jiný, ka = 6-aminohexanová kyselina (xi) znázornění sekvence SEQ ID č, 32:

poznámXaa Leu Ala Val Xaa 1 5

Informace o sekvenci SEQ ID č. 33:

(i) charakteristiky sekvence:

	(A)	délka: 5 aminokyselin
	(B)	typ: aminokyselinová
	(C)	počet řetězců: jednořetězcová
	(D)	topologie: cirkulární
(ii)	typ molekuly: peptid
(ix)	vlastnost:
	(A)	jméno / klíč: peptid
	(B)	lokace: 2
	(D)	další informace: produkt = j ka = terč.butylalanin

(ix) vlastnost:

poznám(A) jméno / klíč: peptid (B) lokace: 5 (D) další informace: produkt = jiný ka = 5-aminohexanová kyselina poznám115 (xi) znázornění sekvence SEQ ID č. 33:

Ile Xaa Asp Val Xaa 1 5

Informace o sekvenci SEQ ID č. 34:

(i) charakteristiky sekvence:

(A) délka: 5 aminokyselin (B) typ: aminokyselinová (C) počet řetězců: jednořetězcová (D) topologie: cirkulární (ii) typ molekuly: peptid (ix) vlastnost:

(A) jméno / klíč: peptid (B) lokace: 5 (D) další informace: produkt = jiný ka = 5-aminopentanová kyselina (xi) znázornění sekvence SEQ ID č. 34:

Ile Ile Asp Val Xaa 1 5 poznámInformace o sekvenci SEQ ID č. 35:

(i) charakteristiky sekvence:

(A) délka: 5 aminokyselin (B) typ: aminokyselinová (C) počet řetězců: jednořetězcová (D) topologie: cirkulární (ii) typ molekuly: peptid (ix) vlastnost:

(A) jméno / klíč: peptid (B) lokace: 2 (D) další informace: produkt = Nle (ix) vlastnost:

(A) jméno / klíč: peptid

116 (B) lokace: 5 (D) další informace: produkt = jiný, poznámka = 5-amínopentanová kyselina (xi) znázornění sekvence SEQ ID č, 35:

Ile Leu Asp Val Xaa 1 5 informace o sekvenci SEQ ID č. 36:

(i) charakteristiky sekvence:

(A) délka: 5 aminokyselin (B) typ: aminokyselinová (C) počet řetězců: jednořetězcové (D) topologie: cirkulární

ii) ix)

typ molekuly: peptid vlastnost: (A) jméno / klíč: peptid (B) lokace: 5 (D) další informace: produkt = jiný, poznám ka = 5-aminopentanová kyselina

(xi) znázornění sekvence SEQ ID č. 36:

Ile Val Asp Val Xaa 1 5

Informace o sekvenci SEQ ID č. 37:

(i) charakteristiky sekvence:

(A) délka: 5 aminokyselin (B) typ: aminokyselinová (C) počet řetězců: jednořetězcové (D) topologie: cirkulární (ii) typ molekuly: peptid (ix) vlastnost:

(A) jméno / klíč: peptid (B) lokace: 2

117 (D) další informace: produkt = jiný ka = cyklohexyl-alanin (ix) vlastnost:

(A) jméno / klíč: peptid (B) lokace: 5 (D) další informace: produkt = jiný ka = 5-aminopentanová kyselina (xi) znázornění sekvence SEQ ID č. 37:

Ile Xaa Asp Val Xaa 1 5

Informace o sekvenci SEQ ID č. 38:

(i) charakteristiky sekvence:

(A) délka: 5 aminokyselin (B) typ: aminokyselinová (C) počet řetězcůjednořetězcová (D) topologie: cirkulární (ii) typ molekuly: peptid (ix) vlastnost:

(A) jméno / klíč: peptid (B) lokace: 2 (D) další informace: produkt = jiný ka = terč.leucin (ix) vlastnost:

(A) jméno / klíč: peptid (B) lokace: 5 (D) další informace: produkt = jiný ka = 5-aminopentanová kyselina (xi) znázornění sekvence SEQ ID č. 38:

Ile Xaa Asp Val Xaa poznámpoznámpoznám poznám118

Informace o sekvenci SEQ ID č. 39:

(i) charakteristiky sekvence:

(A) délka: 5 aminokyselin (B) typ: aminokyselinová (C) počet řetězců: jednořetězcová (D) topologie: cirkulární (ii) typ molekuly: peptid (ix). vlastnost:

(A) jméno / klíč: peptid (B) lokace: 1 (D) další informace: produkt = jiný, ka = D-konfigurace (xi) znázornění sekvence SEQ ID č. 39:

Lys Ile Leu Asp Val 1 5

Informace o sekvenci SEQ ID č. 40:

(i) charakteristiky sekvence:

(A) délka: 5 aminokyselin (B) typ: aminokyselinová (C) počet řetězců: jednořetězcová (D) topologie: cirkulární

(ii)	. typ molekuly: peptid
(ix)	vlastnost:
	( Δ 'i 4 memc /	V-Ί τ* *í
	(B) lokace:	1
	(D) další informace: produkt =
	ka = Z-	-D-lysin

(ix) vlastnost:

poznám(A) jméno / klíč: peptid (B) lokace: 2 (D) další informace: produkt = jiný ka = D-konfigurace poznámpoznám119 (xi)

Informace (i) (ii) (ix) (ix) (xi)

Informace (i) (ii) znázornění sekvence SEQ ID č. 40:

Xaa Ile Leu Asp Val

5 sekvenci SEQ ID č. 41:

charakteristiky sekvence:

(A) délka: 5 aminokyselin (B) typ: aminokyselinová (C) počet řetězců: jednořetězcová (D) topologie: cirkulární typ molekuly: peptid vlastnost:

(A) jméno / klíč: peptid (B) lokace: 1 (D) další informace: produkt = jiný, poznám ka = N-(CH₃-CH₂-CO)-lysin, D-konfigurace vlastnost:

(A) jméno / klíč: peptid (B) lokace: 2 (D) další informace: produkt = jiný, poznám ka = D-konfigurace znázornění sekvence SEQ ID Č. 41:

Xaa Ile Leu Asp Val

5 sekvenci SEQ ID č. 42:

charakteristiky sekvence:

(A) délka: 5 aminokyselin (B) typ: aminokyselinová (C) počet řetězců: jednořetězcová (D) topologie: cirkulární typ molekuly: peptid

120 (ix) vlastnost:

(A) jméno / klíč: peptid (B) lokace: 1 (D) další informace: produkt = jiný, poznámka = , N-(HOOC-CH₂-CH₂-CO)-lysin, D-konfigurace (ix) vlastnost:

(A) jméno / klíč: peptid (B) lokace: 2 (D) další informace: produkt = jiný, poznámka = D-konfigurace (xi) znázornění sekvence SEQ ID č. 42:

Xaa Ile Leu Asp Val 1 5

Informace o sekvenci SEQ ID č. 43:

(i) charakteristiky sekvence:

(A) délka: 5 aminokyselin (B) typ: aminokyselinová' (C) počet řetězců: jednořetězcová (D) topologie: církulární

(ii) (ix)

typ molekuly: peptid vlastnost: (A) jméno / klíč: peptid (B) lokace: 1 (D) další informace: produkt = jiný, poznámka = N-((CH3) 2.CH.CO)-lysin, D-konfigurace

(ix) vlastnost:

(A) jméno / klíč: peptid (B) lokace: 2 (D) další informace: produkt = jiný, poznámka = D-konfigurace

121 (xi) znázornění sekvence SEQ ID č. 43:

Xaa Ile Leu Asp Val 1 5

Informace o sekvenci SEQ ID č. 44:

(i) charakteristiky sekvence:

(A) délka: 5 aminokyselin (B) typ: aminokyselinová (C) počet řetězců: jednořetězcová (D) topologie: cirkulární

(ii)	typ molekuly:	peptid
(ix)	vlastnost:
	(A) jméno /	klíč: peptid
	(B) lokace:	1
	(D) další informace: produkt = jiný, poznám-
	ka = N- ce	- (H2N.CH2.CH2.CO) -lysin, D-konfigura
(ix)	vlastnost:
	(A) jméno /	klíč: peptid
	(B) lokace:	2

(D) další informace: produkt = jiný, poznámka = D-konfigurace (xi) znázorněni sekvence SEQ ID č. 44:

Xaa Leu Leu Asp Val . 1 . 5 ..

Informace o sekvenci SEQ ID č. 45:

(i) charakteristiky sekvence:

(A) délka: 5 aminokyselin (B) typ: aminokyselinová (C) počet řetězců: jednořetězcová (D) topologie: cirkulární (ii) typ molekuly: peptid

122 (ix) vlastnost:

(A) jméno / klíč: peptid (B) lokace: 1 (D) další informace: produkt = jiný, poznám-, ka = N-(diethyl)lysin, D-konfigurace (ix) vlastnost:

(A) jméno / klíč: peptid (B) lokace: 2 (D) další informace: produkt = jiný, poznámka = D-konfigurace (xi) znázornění sekvence SEQ ID č. 45:

Xaa Leu Leu Asp Val 1 5

Informace o sekvenci SEQ ID č. 46:

(i) charakteristiky sekvence:

(A) délka: 5 aminokyselin (B) typ: aminokyselinová (C) počet řetězců: jednořetězcová (D) topologie: cirkulární . (ii) typ molekuly: peptid (ix) vlastnost:

(A) jméno / klíč: peptid (Bj lokace: 1 (D) další informace: produkt = jiný, poznámka = N-benzyllysin, D-konfigurace (ix) vlastnost:

(A) jméno / klíč: peptid (B) lokace: 2 (D) další informace: produkt = jiný, poznámka = D-konfigurace (xi) znázornění sekvence SEQ ID č. 46:

Xaa Leu Leu Asp Val

123

Informace o sekvenci SEQ ID č. 47:

(i) charakteristiky sekvence:

(A) délka: 5 aminokyselin (B) typ: aminokyselinová (C) počet řetězců: jednořetězcová (D) topologie: cirkulární

(ii)	typ molekuly:' peptid
(ix)	vlastnost:
	(A) jméno /	klíč: peptid
	(B) lokace:	1
	(D) další informace: produkt = jiný, poznám
	ka = N- race	- (pyridylkarbonyl)lysin, D-konfigu
(ix)	vlastnost:
	(A) jméno /	klíč: peptid
	(B) lokace:	2

(D) další informace: produkt = jiný, poznám ka = D-konfigurace (xi) znázornění sekvence SEQ ID č. 47:

Xaa Ile Leu Asp Val 1 5

Informace o sekvenci SEQ ID Č. 48:

(i) charakteristiky sekvence:

(A) délka: 5 aminokyselin (B) typ: aminokyselinová (C) počet řetězců: jednořetězcová (D) topologie: cirkulární (ii) typ molekuly: peptid (ix) vlastnost:

(A) jméno / klíč: peptid (B) lokace: 1 (D) další informace: produkt = jiný, poznám ka = N-(L-Glu)-D-lysin

124 (ix) (xi)

Informace (i) (ii) (ix) (ix) (xi)

Informace (i) vlastnost:

(A) jméno / klíč: peptid (B) lokace: 2 (D) další informace: produkt = jiný, poznámka - D-konfigurace znázornění sekvence SEQ ID č. 48:

Xaa Leu. Leu Asp Val

5 sekvenci SEQ ID č. 49:

charakteristiky sekvence:

(A) délka: 5 aminokyselin (B) typ: aminokyselinová (C) počet řetězců: jednořetězcová (D) topologie: cirkulární typ molekuly: peptid vlastnost:

(A) jméno / klíč: peptid (B) lokace: 1 (D) další informace: produkt - jiný, poznámka = N-(pyroglutamová kyselina)-D-lysin vlastnost:

(A) jméno / klíč: peptid (B) lokace: 2 (D) další informace: produkt = jiný, poznámka a D-konfigurace znázornění.sekvence SEQ ID č. 49:

Xaa Leu Leu Asp Val

5 sekvenci SEQ ID č. 50:

charakteristiky sekvence:

(A) délka-. 7 aminokyselin

125 (B) typ: aminokyselinová (C) počet řetězců: jednořetězcové (D) topologie: cirkulární (ii) typ molekuly: peptid (ix) vlastnost:

(A) jméno / klíč: peptid (B) lokace: 7 (D) další informace: produkt = jiný ka = 3-aminopropionová kyselina (xi) znázornění sekvence SEQ ID č. 50:

Glu Ile Leu Asp Val Pro Xaa 1 5

Informace o sekvenci SEQ ID č. 51:

(i) charakteristiky sekvence:

(A) délka: 7 aminokyselin (B) typ: aminokyselinová (C) počet řetězců: jednořetězcové (D) topologie: cirkulární (ii) typ molekuly: peptid (ix) vlastnost:

(A) jméno / klíč: peptid (B) lokace: 7 (D) další informace: produkt = jiný ka = 5-aminopentanová kyselina (xi) znázornění sekvence SEQ ID č. 51:

Glu Ile Leu Asp Val Pro Xaa 1 5 poznámpoznámInformace o sekvenci SEQ ID č. 52:

(i) charakteristiky sekvence:

(A) délka: 7 aminokyselin (B) typ: aminokyselinová

126 (C) počet řetězců: jednořetězcová (D) topologie: cirkulární

(ii) (ix)

typ molekuly: peptid vlastnost: (A) jméno / klíč: peptid (3.) lokace: 7 (D) další informace: produkt = jiný, poznám ka = 6-aminohexanová kyselina

(xi) znázornění sekvence SEQ ID č. 52:

Glu Ile Leu Asp Val Pro Xaa 1 5

Informace o sekvenci SEQ ID č. 53:

(i) charakteristiky sekvence:

(A) délka: 7 aminokyselin (B) typ: aminokyselinová (C) počet řetězců: jednořetězcová (D) topologie: cirkulární

(ii)	typ molekuly:	peptid
(ix)	vlastnost:
	(A) jméno /	klíč: peptid
	(B) lokace:	7
	(D) další informace: produkt = jiný, poznám ka = 8-aminooktanová kyselina

(xi) znázornění sekvence SEQ ID č. 53:

Glu Ile Leu Asp Val Pro Xaa 1 ⁵

Informace o sekvenci SEQ ID č. 54:

(i). charakteristiky sekvence:

(A) délka: 5 aminokyselin (B) typ: aminokyselinová (C) počet řetězců: jednořetězcová

127 (D) topologie: cirkulární (ii) typ molekuly: peptid (ix) vlastnost:

(A) jméno / klíč: peptid (B) lokace: 1 (D) další informace: produkt = jiný, poznámka - D-konfigurace (ix) vlastnost:

(A) jméno / klíč: peptid (B) lokace: 5 (D) další informace: produkt = jiný, poznámka = -NH.CH₂.CH₂.S.CH₂.CO- (xi) znázornění sekvence SEQ ID č. 54:

Leu Leu Asp Val Xaa 1 5

Informace o sekvenci SEQ ID č. 55:

(i) charakteristiky sekvence:

(A) délka: 5 aminokyselin (B) typ: aminokyselinová (C) počet řetězců: jednořetězcová (D) topologie: cirkulární

(ii) (ÍX)

typ molekuly: peptid vlastnost: (A) jméno / klíč: peptid (B) lókáče: '5' (D) další informace: produkt = jiný, poznám ka = 5-aminopentanová kyselina.

(xi) znázornění sekvence SEQ ID č. 55:

Ile Leu Asp Val Xaa 1 5

128

Informace o sekvenci SEQ ID č. 56:

(i) charakteristiky sekvence:

(A) délka: 5 aminokyselin (B) typ: aminokyselinová (C) počet řetězců: jednořetězcová (D) topologie: cirkulární

(ii)	typ molekuly:	peptid
(ix)	vlastnost:
	(A) jméno /	klíč: peptid
	(B) lokace:	1
	(D) další informace: produkt = jiný, poznám
	ka = terč.leucin, D-konfigurace
(ix)	vlastnost:
	(A) jméno /	klíč: peptid
	(B) lokace:	5

(D) další informace: produkt = jiný, poznámka = 5-aminopentanová kyselina (xi) znázornění sekvence SEQ ID č. 56:

Xaa Leu Asp Val Xaa 1 5

Informace o sekvenci SEQ ID č. 57:

(i) charakteristiky sekvence:

(A) délka: 5 aminokyselin (B) typ: aminokyselinová (C) počet řetězců: jednořetězcová (D) topologie: cirkulární (ii) typ molekuly: peptid (ix) vlastnost:

(A) jméno / klíč: peptid (B) lokace: 1 (D) další informace: produkt = jiný, poznámka = D-konfigurace

129 poznám(ix) vlastnost:

(A) jméno / klíč: peptid (B) lokace: 5 (D) další informace: produkt = jiný ka = -NH.CH2.CHj.SO.CH2. C0- (xi) znázornění sekvence SEQ ID č. 57:

Leu Leu Asp Val Xaa

5

..... -1*1 . -»* ·* “ *

Informace o sekvenci SEQ ID č. 58:

(i) charakteristiky sekvence··.

(A) délka: 5 aminokyselin (B) typ: aminokyselinová (C) počet řetězců: jednořetězcová (D) topologie: cirkulární (ii) typ molekuly: peptid (ix) vlastnost:

(A) jméno / klíč: peptid (B) lokace: 5 (D) další.informace: produkt = jiný ka = -NH.CHj.CHj.S.CHj.CHj.CO- (xi) znázornění sekvence SEQ ID č. 58:

Ile Leu Asp Val Xaa 1.5 poznámInformace o sekvenci SEQ.ID č. 59:

(i) charakteristiky sekvence:

(A) délka: 6 aminokyselin (B) typ: aminokyselinová (C) počet řetězců: jednořetězcová (D) topologie: cirkulární (ii) typ molekuly: peptid

130 poznám(ix) (xi)

Informace (i) (ii) (ix) (ix) (xi)

Informace o (i) vlastnost:

(A) jméno / klíč: peptid (B) lokace.· 1 (D) další informace: produkt = jiný ka = D-konfigurace znázornění sekvence SEQ ID č. 59:

Leu Leu Asp Val Gly Gly

5 sekvenci SEQ ID č. 60:

charakteristiky sekvence:

(A) délka: 6 aminokyselin (B) typ: aminokyselinová (C) počet řetězců: jednořetězcová (D) topologie: cirkulární typ molekuly: peptid vlastnost:

(A) jméno / klíč: peptid (B) lokace.· 5 (D) další informace: produkt = PAla vlastnost:

(A) jméno / klíč: peptid (B) lokace: 6 (D) další informace: produkt = PAla znázornění sekvence SEQ ID č. 60:

Leu Leu Asp Val Ala Ala

5 sekvenci SEQ ID č. 61:

charakteristiky sekvence:

(A) délka: 6 aminokyselin (B) typ: aminokyselinová (C) počet řetězců: jednořetězcová

131 (D) topologie: cirkulární

(ii) (ix)

typ molekuly: peptid vlastnost: (A) jméno / klíč: peptid (B) lokace: 1 (D) další informace: produkt = jiný, poznám ka = D-konfigurace

(ix) vlastnost:

(A) jméno / klíč: peptid.

(B) lokace: 5 (D) další informace: produkt = PAla (xi) znázornění sekvence SEQ ID č. 61:

Leu Leu Asp Val Ala Gly 1 5

Informace o sekvencí SEQ ID č. 62:

(i) charakteristiky sekvence:

(A) délka: 6 aminokyselin (B) typ: aminokyselinová (C) počet řetězců: jednořetězcová (Dj topologie: cirkulární (ii) typ molekuly: peptid (ix) vlastnost:.

(A) jméno / klíč: peptid (B) lokace: 1 ' ² (D) další informace: produkt = jiný, poznámka = D-konfigurace (ix) vlastnost:

(A) jméno / klíč: peptid (B) lokace: 5 (D) další informace: produkt = (ix) vlastnost:

(A) jméno / klíč: peptid (B) lokace: 6 pAla

132 (D) další informace: produkt = jiný, ka = N-methylalanin (xi) znázornění sekvence SEQ ID č. 62:

Leu Leu Asp Val Ala Xaa 1 5

Informace o sekvenci SEQ ID č. 63:

(i) · charakteristiky sekvence:

(A) délka: 6 aminokyselin (B) typ: aminokyselinová (C) počet řetězců: jednořetězcová (D) topologie: cirkulární (ii) typ molekuly: peptid (ix) vlastnost:

(A) jméno / klíč: peptid (B) lokace: 1 (D) další informace: produkt = jiný ka = D-konfigurace (ix) vlastnost:

(A) jméno / klíč: peptid (B) lokace: 5 (D) další informace: produkt = βΑίβ (xi) znázornění sekvence SEQ ID Č. 63:

Leu Leu Asp Val Ala Pro 1 5 ...

Informace o sekvenci SEQ ID č. 64:

(i) charakteristiky sekvence:

(A) délka: 6 aminokyselin (B) typ: aminokyselinová (C) počet řetězců: jednořetězcová (D) topologie: cirkulární (ii) typ molekuly: peptid poznámpoznám133 poznám(ix) vlastnost:

(A) jméno / klíč: peptid (B) lokace: 1 (D) další informace: produkt = jiný ka = D-konfigurace (ix) vlastnost:

(A) jméno / klíč: peptid (B) lokace: 5 (D) další informace: produkt = jiný ka = D-konfigurace (ix) vlastnost:

(A) jméno / klíč: peptid (B) lokace: 6 (D) další informace: produkt = jiný ka = D-konfigurace (xi) znázornění sekvence SEQ ID č. 64:

poznámpožnámLeu Leu Asp Val Ala Ala 1 5

Informace o sekvenci SEQ ID č. 65:

(i) charakteristiky sekvence:

(A) délka: 6 aminokyselin (B) typ: aminokyselinová (C) počet řetězců: jednořetězcová (D) topologie: cirkulární

(ii)	typ molekuly:	peptid
(ix)	vlastnost:
	(A) jméno /	klíč: peptid
	(B) lokace:	1
	(D) další informace: produkt =
	ka = D-	•konfigurace
(ix)	vlastnost:
	(A) jméno /	klíč: peptid
	(B) lokace:	5

poznám

134 (D) další informace: produkt = '^Ala (ix) vlastnost:

(A) jméno / klíč: peptid (B) lokace: 6 (D) další informace: produkt = jiný, poznámka = 4-aminomáselná kyselina (xi) znázornění sekvence SEQ ID č. 65:

Leu Leu Asp Val Ala Xaa 1 5

Informace o sekvenci SEQ ID č. 66:

(i) charakteristiky sekvence:

(A) délka: 6 aminokyselin (B) typ: aminokyselinová (C) počet řetězců: jednořetězcová (D) topologie: cirkulární

(ii)	typ molekuly: peptid
(ix)	vlastnost: (A) jméno / klíč: peptid (B) lokace: l
	(D) další informace: produkt = ka = D-konfigurace	jiný, poznám
(ix)	vlastnost: (A) jméno / klíč: peptid (B) lokace: 5
	'(D) další informace: produkt =	pAla
{ix)	vlastnost: (A) jméno / klíč: peptid (B) lokace: 6
	(D) další informace: produkt =	jiný, poznám

ka = D-konfigurace (xi) znázornění sekvence SEQ ID č. 66:

Leu Leu Asp Val Ala Ala 1 5

135

Informace o sekvenci SEQ ID č. 67:

(i) charakteristiky sekvence:

(A) délka: 6 aminokyselin (B) typ: aminokyselinová (C) počet řetězců: jednořetězcová (D) topologie: cirkulární

(li) (ix)

typ molekuly: peptid vlastnost: (A) jméno / klíč: peptid (B) lokace: 1 (D) další informace: produkt = jiný, poznám ka = D-konfigurace

(xi) znázornění sekvence SEQ ID č. 67:

Leu Leu Asp Val Pro Pro 1 5

Informace o sekvenci SEQ ID č. 68:

(i) charakteristiky sekvence:

(A) délka: 6 aminokyselin (B) typ: aminokyselinová (C) počet řetězců: jednořetězcová (D) topologie: cirkulární (ii) typ molekuly: peptid (ix) vlastnost:

(A) jméno./, klíč: peptid. ... (B) lokace: 1 (D) další informace: produkt = jiný, poznámka = D-konfigurace (ix) vlastnost:

(A) jméno / klíč: peptid (B) lokace: 6 (D) další informace: produkt = jiný, poznámka = D-konfigurace

136 (xi) znázornění sekvence SEQ ID č. 68:

Leu Leu Asp Val Pro Pro 1 5

Informace o sekvenci SEQ ID č. 69:

(i) charakteristiky sekvence:

(A) délka: 5 aminokyselin (B) typ: aminokyselinová (Cj počet řetězců: jednořetězcová (D) topologie: cirkulární (ii) typ molekuly: peptid (ix) vlastnost:

(A) jméno / klíč: peptid (B) lokace: 5 (D) další informace: produkt = jiný, ka = 5-aminopentanová kyselina (xi) znázornění sekvence SEQ ID č. 69:

Ile Leu Asp Leu Xaa 1 5

Informace o sekvenci SEQ ID č. 70:

(i) charakteristiky sekvence:

(A) délka: 5 aminokyselin (B) typ: aminokyselinová (C) počec řetězců: jednořetězcová (D) topologie: cirkulární poznám

(ii)	typ molekuly	: peptid
(ix)	vlastnost:
	(A) jméno	/ klíč: peptid
	(B) lokace	: 5
	(D) další ka =	informace: produkt = -NH.CH(CONH2) ,ch2.ch2

poznám

137 (xi) znázornění sekvence SEQ ID č. 70:

Ile Leu Asp Val Xaa . 5

Informace o sekvenci SEQ ID č. 71:

(i) charakteristiky sekvence:

(A) délka: 5 aminokyselin (B) typ: aminokyselinová (C) počet řetězců: jednořetězcová (D) topologie: cirkulární

(ii)	typ molekuly:	peptid
(ix)	vlastnost:
	(A)· jméno /	klíč: peptid
	(B) lokace:	. 5
	(D)' další informace: produkt = jiný, poznám ka = 5-aminopentanová kyselina

(xi) znázornění sekvence SEQ, ID č.. 71:

Ile Leu Asp Phe Xaa 1 5

Informace o sekvenci SEQ ID č. 72:

(i) charakteristiky sekvence:

(A) délka: 6 aminokyselin (B) typ: aminokyselinová (Čj počet řetězců: jednořetězcová· (D) topologie: cirkulární (ii) typ molekuly: peptid (ix) vlastnost:

(A) jméno / klíč: peptid (B) lokace: 5 (D) další informace: produkt = jiný, poznámka = 5-aminopentanová kyselina

138 (ix) (xi)

Informace (i) (ii) . (ix) ' (ix) (xi)

Informace (i) vlastnost:

(A) jméno / klíč: peptid (B) lokace: 6 (D) další informace: produkt = pAla znázornění sekvence SEQ ID č. 72:

Ile Leu Asp Val Xaa Ala ^{1 5} sekvenci SEQ ID č. 73:

charakteristiky sekvence:

(A) délka: 6 aminokyselin (B) typ: aminokyselinová.

(C) počet řetězců: jednořetězcová (D) topologie: cirkulární typ molekuly: peptid vlastnost:

(A) jméno / klíč: peptid (B) lokace: 1 (D) další informace: produkt = MethylIle vlastnost:

(A) jméno / klíč: peptid (B) lokace: 5 (D) další informace: produkt = pAla znázornění sekvence SEQ ID č. 73:

Ile Leu Asp Val Ala Pro

5 sekvenci SEQ ID č. 74:

charakteristiky sekvence:

(A) délka: 6 aminokyselin (B) typ: aminokyselinová (C) počet řetězců: jednořetězcová (D) topologie: cirkulární

139 (ii) (ix) (ix) (ix) (xi)

Informace o (i) (ii) (ix) (ix) typ molekuly, peptid vlastnost:

(A) jméno / klíč: peptid (B) lokace: 1 (D) další informace: produkt = methyllle vlastnost:

(A) jméno / klíč: peptid (B) lokace: 5 (D) další informace: produkt = pAla vlastnost:

(A) jméno / klíč: peptid (B) lokace: 6 (D) další informace: produkt = jiný, poznám ka = D-konfigurace znázornění sekvence SEQ ID č. 74:

Ile Leu Asp Val Ala Ala

5 sekvenci SEQ ID č. 75:

charakteristiky sekvence:

(A) délka: 6 aminokyselin (B) typ: aminokyselinová (C) počet řetězců: jednořetězcová (D) topologie: cirkulární typ molekuly: peptid vlastnost:

(A) jméno / klíč: peptid (B) lokace: 1 (D) další informace: produkt = methyllle vlastnost:

(A) jméno / klíč: peptid (B) lokace: 5 (D) další informace: produkt = jiný, poznám ka = D-konfigurace

140 (ix) vlastnost:

(A) jméno / klíč: peptid (B) lokace: 6 (D) další informace: produkt = jiný, poznámka = D-konfigurace (xi) znázornění sekvence SEQ ID č. 75:

Ile Leu Asp Val Ala Ala 1 . 5

Informace o sekvenci SEQ ID č. 76:

(i) charakteristiky sekvence:

(A) délka: 6 aminokyselin (B) typ: aminokyselinová (C) počet řetězců: jednořetězcová (D) topologie: cirkulární (ii) typ molekuly: peptid (ix) vlastnost:

(A) jméno / klíč: peptid (B) lokace: 1 (D) další informace-, produkt = methyllle (ix) vlastnost:

(A) jméno / klíč: peptid (B) lokace; 5 (D) další informace: produkt = pAla (ix) vlastnost:

(A) jméno. / klíč: peptid (B) lokace: 6 (D) další informace: produkt = Orn, poznámka = D-konfigurace (xi) znázornění sekvence SEQ ID č. 76:

Ile Leu Asp Val Ala Xaa 1 5

141

Informace (i) (ii) (ix) (ix) (ix) (xi)

Informace (i) (ii) (ix) sekvenci SEQ ID č. 77:

charakteristiky sekvence:

(A) délka: 6 aminokyselin (B) typ: aminokyselinová (C) počet řetězců: jednořetězcová (D) topologie: církulární typ molekuly: peptid vlastnost:

(A) jméno / klíč: peptid (B) lokace: 1 (D) další informace: produkt = methyllle vlastnost:

(A) jméno / klíč: peptid (B) lokace: 5 (D) další informace: produkt = βΑΙβ vlastnost:

(A) jméno / klíč: peptid (B) lokace: 6 (D) další informace: produkt = jiný, poznámka = D-konfigurace znázornění sekvence SEQ ID č. 77:

Ile Leu Asp Val Ala Lys

5 sekvenci SEQ ID č. 78:

charakteristiky sekvence:

(A) délka: 6 aminokyselin (B) typ: aminokyselinová (C) počet řetězců: jednořetězcová (D) topologie: církulární typ molekuly: peptid vlastnost:

(A) jméno / klíč: peptid (B) lokace: 5

142 (D) další informace: produkt = jiný, poznámka = piperazin-l-yloctová kyselina (ix) vlastnost:

(A) jméno / klíč: peptid (B) lokace: 6 (D) další informace: produkt = jiný, poznámka = -NH.CH₂.CH₂.CH₂.CO- (xi) znázornění sekvence SEQ ID č. 78:

Ile Leu Asp Val Xaa Xaa ¹ 5

Informace o sekvenci SEQ ID č. 79:

(i) charakteristiky sekvence:

(A) délka: 6 aminokyselin (B) typ: aminokyselinová (C) počet řetězců: jednořetězcová (Dj topologie: cirkulární (ii) typ molekuly: peptid (ix) vlastnost:

(A) jméno / klíč: peptid (B) lokace: 5 (D) další informace: produkt = jiný, poznámka = piperazin-l-yloctová kyselina (ix) vlastnost:

(A) jméno / klíč: peptid (B) lokace: 6 (D) další informace: produkt = jiný, poznámka = -NH.CH₂.CH₂.CH₂.CH₂.CO- (xi) znázornění sekvence SEQ ID č. 79:

Ile Leu Asp Val Xaa Xaa 1 5

143

Informace o sekvenci SEQ ID č. 80:

(i) charakteristiky sekvence:

(A) délka: 6 aminokyselin (B) typ: aminokyselinová (C) počet řetězců: jednořetězcová (D) topologie: cirkulární (ii) typ molekuly: peptid (ix) vlastnost:

(A) jméno / klíč: peptid (B) lokace·. 5 (D) další informace: produkt = jiný, poznámka - piperazin-1-ylpropionová kyselina (ix) vlastnost:

(A) jméno / klíč: peptid (B) lokace: 6 (D) další informace: produkt = jiný, poznámka = N-acetyllysin · (xi) znázornění sekvence SEQ ID č. 80:

Ile Leu Asp Val Xaa Xaa 1 5

Informace o sekvenci SEQ ID Č. 81:

(i) charakteristiky sekvence:

(A) délka: 6 aminokyselin

ÍB) t. vn · am i nn>veo 1 ίπηγΐ Λ J.” ” ---------J ·*«*.***<·* » (C) počet řetězců: jednořetězcová (D) topologie: cirkulární (ii) typ molekuly: peptid (ix) vlastnost:

(A) jméno / klíč: peptid (B) lokace: 5 (D) další informace: produkt = jiný, poznámka = (4-(2-aminoethyl)imidazol-l-yl)octová kyselina

144 (ix) (xi)

Informace (i) (ii) (ix) (ix) (xi)

Informace (i) vlastnost:

(A) jméno / klíč: peptid (B) lokace: 6 (D) další informace: produkt = pAla znázornění sekvence SEQ ID č. 81:

Ile Leu Asp Val Xaa Ala

5 sekvenci SEQ ID č. 82:

charakteristiky sekvence:

(A) délka: 5 aminokyselin (B) typ: aminokyselinová (C) počet řetězců: jednořetězcová (D) topologie: cirkulární typ molekuly: peptid vlastnost:

(A) jméno / klič: peptid (B) lokace: 1 (D) další informace: produkt = jiný, poznámka = N-(piperazin-l-ylacetyl)lysin, Ď-kon figurace vlastnost:

(A) jméno / klíč: peptid (B) lokace: 2 (D) další informace: produkt = jiný, poznámka = D-konfigurace znázornění sekvence SEQ ID Č. 82:

Xaa Leu Leu Asp Val

5 sekvenci SEQ ID č. 83:

charakteristiky sekvence:

(A) délka: 5 aminokyselin

145

(B) typ: aminokyselinová
	(C) počet řetězců: jednořetězcová (D) topologie: cirkulární
(ii)	typ molekuly: peptid
(ix)	vlastnost: (A) jméno / klíč: peptid (B) lokace: 1 (D) další informace: produkt = jiný1 ka = N- (NH2. CH2.CH2.CH2. CO) -lysin gurace
(ix)	vlastnost: (A) jméno / klíč: peptid (B) lokace: 2 (D) další informace: produkt = jiný1 ka = D-konfigurace
(xi)	znázornění sekvence SEQ ID č. 83: Xaa Leu Leu Asp Val 1 5
Informace o	sekvenci SÉQ ID č. 84:
(i)	charakteristiky sekvence: (A) délka: 5 aminokyselin (B) typ: aminokyselinová (C) počet řetězců: jednořetězcová (D) topologie: cirkulární
(ii)	typ molekuly.- peptid
(ix)	vlastnost: (A) jméno / klíč: peptid (B) lokace: 1 (D) další informace: produkt = jiný' ka = N-(Arg)-D-Lys
(ix)	vlastnost: (A) jméno / klíč: peptid (B) lokace: 2

poznámD-konfipoznámpoznám146 (D) další informace: produkt = jiný, poznámka = D-konfigurace (xi) znázornění sekvence SEQ ID č. 84:

Xaa Leu Leu Asp Val 1 5

Informace o sekvenci SEQ ID č. 85:

(i) charakteristiky sekvence:

(A) délka: 6 aminokyselin (B) typ: aminokyselinová (C) počet řetězců: jednořetězcová (D) topologie: cirkulární

(ii)	typ molekuly:	peptid
(ix)	vlastnost:
	(A) jméno /	klíč: peptid
	(B) lokace:	5
	(D) další informace: produkt = jiný, poznám
	ka = D-	-konfigurace
(ix)	vlastnost:
	(A) jméno /	klíč: peptid
	(B) lokace:	6

(D) další informace: produkt = jiný, poznámka = piperazin-l-yloctová kyselina (xi) znázornění sekvence SEQ ID č. 85:

' Ile Leu Asp Val Lys Xaa'

5

Informace o sekvenci SEQ ID č. 86:

(i) charakteristiky sekvence:

(A) délka: 5 aminokyselin (B) typ: aminokyselinová (C) počet řetězců: jednořetězcová (D) topologie: lineární

147 (ii) typ molekuly: peptid (ix) vlastnost:

(A) jméno / klíč: peptid (B) lokace: 3 (D) další informace: produkt = jiný, poznámka = O-(terč.butyl)-Asp (ix) vlastnost:

(A) jméno / klíč: peptid (B) lokace: 5 (D) další informace: produkt = 4-Abu (ix) vlastnost:

(A) jméno / klíč: peptid (B) lokace: 5 (D) další informace: produkt = jiný, poznámka = -NH.CH₂.CH₂.CH₂.COOH (xi) znázornění sekvence SEQ ID č. 86:

Ile Leu Xaa Val Xaa 1 5

Informace o sekvenci SEQ ID č. 87:

(i) charakteristiky sekvence:

(A) délka: 5 aminokyselin (B) typ: aminokyselinová (C) počet řetězců: jednořetězcová (D) topologie: lineární

(ii)	typ molekuly:	peptid
(ix)	vlastnost:
	(A) jméno /	klíč: peptid
	(B) lokace:	3
	(D) další informace: produkt = jiný, poznám
	ka = 0-	•(terc.butyl)-Asp
(ix)	vlastnost:
	(A) jméno /	klíč: peptid
	(B) lokace:	5

148

(xi)	(D) další informace: produkt = jiný, ka = -NH.CH2.CH2.CH2.CH2.COOH znázornění sekvence SEQ ID č. 87: Ile Leu Xaa Val Xaa 1 5	poznám-
Informace o	sekvenci SEQ ID č. 88:
(i)	charakteristiky sekvence: (A) délka: 5 aminokyselin (B) typ: aminokyselinová (C) počet řetězců: jednořetězcová (D) topologie: lineární
(ii)	typ molekuly: peptid
(ix)	vlastnost: (A) jméno / klíč: peptid (B) lokace: 5
	(D) další informace: produkt = jiný, ka = -NH.CH2.CH2.CH2.CH2.CH2.COOH	poznám-
(ix)	vlastnost: (A) jméno / klíč: peptid (B) . lokace: 3
	(D) další informace: produkt = jiný, ka = 0-(terč.butyl)-Asp	poznám-
(xi)	znázornění sekvence SEQ ID č. 88: Ile Leu Xaa Val Xaa - - 1 5
Informace o	sekvenci SEQ ID č. 89:
(i)	charakteristiky sekvence: (A) délka: 5 aminokyselin (B) typ: aminokyselinová (C) počet řetězců: jednořetězcová (D) topologie: lineární

149 (ii) typ molekuly: peptid (ix) vlastnost:

(A) jméno / klíč: peptid (B) lokace: 3 (D) další informace: produkt = jiný, poznámka = 0-(terč.butyl)-Asp (ix) vlastnost:

(A) jméno / klíč: peptid (B) lokace: 5 (D) další informace: produkt = jiný, poznámka = -NH.CH₂.CH_?.CH₂.CH₂.CH₂.CH₂.CHj,CQOH’' (xi) znázorněni sekvence SEQ ID č. 89:

Ile Leu Xaa Val Xaa

5

Informace o sekvenci SEQ ID č. 90:

(i) charakteristiky sekvence:

(A) délka-. 5 aminokyselin (B) typ: aminokyselinová (C) počet řetězců: jednořetězcová (D) topologie: lineární (ii) typ molekuly: peptid (ix) vlastnost:

(A) jméno / klíč: peptid (B) lokace: 3 (D) další informace: produkt = jiný, poznámka = 0-(terč.butyl)-Asp (ix) vlastnost:

(A) jméno / klíč: peptid (B) lokace: 5 (D) další informace: produkt = jiný, poznámka = -NH.CH2.CH2.CH2.CH2.CHj.COOH

150 (xi) znázornění sekvence SEQ ID č. 90:

Pro Leu Xaa Val Xaa 1 5

Informace o sekvenci SEQ ID č. 91:

(i) charakteristiky sekvence:

(A) délka: 5 aminokyselin (B) typ: aminokyselinová (C) počet řetězců: jednořetězcová (D) topologie: lineární (ii) typ molekuly: peptid (ix) vlastnost:

(A) jméno / klíč: peptid (B) lokace: 3 (D) další informace: produkt = jiný, ka = 0-(terč.butyl)-Asp (ix) vlastnost:

(A) jméno / klíč: peptid (B) lokace: 5 (D) další informace: produkt = jiný ka = -NH.CH₂.CH₂.CH₂.CH₂.CH₂.COOH (xi) znázorněni sekvence SEQ ID č. 91:

Gly Leu Xaa Val Xaa 1 5

Informace o sekvenci SEQ ID č. 92:

(i) charakteristiky sekvence:

(A) délka: 5 aminokyselin (B) typ: aminokyselinová (C) počet řetězců: jednořetězcová (D) topologie: lineární (ii) typ molekuly: peptid poznámpoznám-

151 poznám(ix) vlastnost:

(A) jméno / klíč: peptid (B) lokace: 1 (D) další informace: produkt = jiný ka = terč.Leu (ix) vlastnost:

(A) jméno / klíč: peptid (B) lokace: 3 (D) další informace: produkt = jiný ka = 0-(terč.butyl)-Asp (ix) vlastnost:

(A) jméno / klič: peptid (B) lokace: 5 (D) další informace: produkt = jiný ka = -NH. CHj. CH₂. CH₂. CHj. CH₂. COOH (xi) znázornění sekvence SEQ ID č. 92:

poznámpoznám

Xaa Leu Xaa Val Xaa 1 5

Informace o sekvenci SEQ ID č. 93:

(i) charakteristiky sekvence:

(A) délka: 5 aminokyselin (B) typ: aminokyselinová (C) počet řetězců: jednořetězcová (D) topologie: lineární

(ii)	typ molekuly:	peptid
(ix)	vlastnost:
	(A) jméno /	klíč: peptid
	(B) lokace:	1
	(D) další informace: produkt =
	ka - terc.butylalanin
(ix)	vlastnost:
	(A) jméno /	klíč: peptid
	(B) lokace:	3

poznám152 (D) další informace: produkt = jiný, ka = 0-(terč.butyl)-Asp (ix) vlastnost:

(A) jméno / klíč: peptid (B) lokace: 5 (D) další informace: produkt = jiný ka = -NH.CH₂.CH₂.CH₂.CH₂.CH₂.COOH (xi) znázornění sekvence SEQ ID č. 93:

Xaa Leu Xaa Val Xaa 1 5

Informace o sekvenci SEQ ID č. 94:

(i) charakteristiky sekvence:

(A) délka: 5 aminokyselin (B) typ: aminokyselinová (C) počet řetězců: jednořetězcová (D) topologie: lineární (ii) typ molekuly: peptid (ix) vlastnost:

(A) jméno / klíč: peptid (B) lokace: 1 (D) další informace: produkt = jiný ka = Z-0rn (ix) vlastnost:

(A) jméno / klíč: peptid (B) lokace: 4 (D) další informace: produkt = jiný ka = 0-(terč.butyl)-Asp (xi) znázornění sekvence SEQ ID č. 94:

Xaa Ile Leu Xaa Val 1 5 poznámpoznámpoznámpoznám153

Informace o sekvenci SEQ ID č. 95:

(i) charakteristiky sekvence:

(A) délka: 5 aminokyselin (B) typ: aminokyselinová (C) počet řetězců: jednořetězcová (D) topologie: lineární(ii) typ molekuly: peptid (ix) vlastnost:

(A) jméno / klíč: peptid (B) lokace: 3 (D) další informace: produkt = jiný, poznámka = 0-(terč.butyl)-Asp (ix) vlastnost:

(A) jméno / klíč: peptid (B) lokace: 5 (D) další informace: produkt = jiný, poznámka = 4-aminomethylbenzoová kyselina (xi) znázornění sekvence SEQ ID č. 95:

Ile Leu Xaa Val Xaa 1 5

Informace o sekvenci SEQ ID č. 96:

(i) charakteristiky sekvence:

(A) délka: 5 aminokyselin (B) ' typ: amixiokysel inová......

(C) počet řetězců: jednořetězcová (D) topologie: lineární (ii) · typ molekuly: peptid (ix) vlastnost:

(A) jméno / klíč: peptid (B) lokace: 3 (D) další informace: produkt = jiný, poznámka = 0-(terč.butyl)-Asp

154 (ix) vlastnost:

(A) jméno / klíč: peptid (B) lokace: 5 (D) další informace: produkt = jiný, poznámka = (4-(2-aminoethyl)imidazol-1-yl)octová kyselina (xi) znázornění sekvence SEQ ID č. 96:

Ile Leu Xaa Val Xaa 1 5

Informace o sekvenci SEQ ID č. 97:

(i) charakteristiky sekvence:

(A) délka: 6 aminokyselin (B) typ: aminokyselinová (C) počet řetězců: jednořetězcová (D) topologie: lineární (ii) typ molekuly: peptid (ix) vlastnost:

(A) jméno / klíč: peptid (B) lokace: 1 (D) další informace: produkt = pAla (ix) vlastnost:

(A) jméno / klíč: peptid (B) lokace: 4 (D) další informace: produkt = jiný, poznámka = 0-(terč.butyl)-Asp (ix) vlastnost:

(A) jméno / klíč: peptid (B) lokace: 6 (D) další informace: produkt = jiný, poznámka = piperazin-l-yloctová kyselina (xi) znázornění sekvence SEQ ID č. 97:

Ala Ile Leu Xaa Val Xaa 1 5

155

Informace o sekvenci SEQ ID č. 98:

(i) charakteristiky sekvence:

(A) délka: 5 aminokyselin (B) typ: aminokyselinová (C) počet řetězců: jednořetězcová (D) topologie: lineární (ii) typ molekuly: peptid (ix) vlastnost:

(A) jméno / klíc: peptid (B) lokace: 1 (D) další informace: produkt = jiný, poznámka = Z-Lys (ix) vlastnost:

(A) jméno / klíč: peptid (B) lokace: 4 (D) další informace: produkt = jiný, poznámka = 0-(terč.butyl)-Asp (xi) znázornění sekvence SEQ ID č. 98:

Xaa Ile Leu Xaa Val l 5

Informace o sekvenci SEQ ID č. 99:

(i) charakteristiky sekvence:

(A) délka: 5 aminokyselin (B) typ: aminokyselinová (C) počet řetězců: jednořetězcová (D) topologie: lineární

(ii) (ix)

typ molekuly: peptid vlastnost: (A) jméno / klíč: peptid (B) lokace: 1 (D) další informace: produkt = jiný, poznám ka = Z-(2,4-diaminomáselná kyselina)

156 (ix) vlastnost:

(A) jméno / klíč: peptid (B) lokace: 4 (D) další informace: produkt = jiný, poznámka = 0-(terč.butyl)-Asp (xi) znázornění sekvence SEQ ID č. 99:

Xaa Ile Leu Xaa Val 1 5

Informace o sekvenci SEQ ID Č. 100:

(i) charakteristiky sekvence:

(A) délka: 5 aminokyselin (B) typ: aminokyselinová (C) počet řetězců: jednořetězcová (D) topologie: lineární

(ii)	typ molekuly: peptid
(ix)	vlastnost: (A) jméno / klíč: peptid (B) lokace: 1 (D) další informace: produkt -	j iný,	poznám-
(ix)	ka = N-methylalanin vlastnost: (A) jméno / klíč: peptid (B) lokace: 3 (D) další informace: produkt =	jiný,	poznám-
(ix)	ka = 0-(terč.butyl)-Asp vlastnost: (A) jméno / klíč: peptid (B) lokace: 5 (D) další informace: produkt =	jiný,	poznám-

ka = -NH. CH₂. CH₂. CH₂. CH₂. CH₂. COOH (xi) znázornění sekvence SEQ ID č. 100:

Xaa Leu Xaa Val Xaa 1 5

157

Informace (i) (ii) (ix) (ix) (ix) (xi)

Informace (i) (ii) sekvenci SEQ ID č. 101:

charakteristiky sekvence:

(A) délka: 5 aminokyselin (B) typ: aminokyselinová (C) počet řetězců: jednořetězcová (D) topologie: lineární typ molekuly: peptid vlastnost:

(A) jméno / klíč: peptid (B) lokace: 1 (D) další informace: produkt = jiný ka = N-methylleucin vlastnost:

(A) jméno / klíč: peptid (B) lokace: 3 (D) další informace: produkt = jiný ka = O-(terč.butyl)-Asp vlastnost:

(A) jméno / klíč: peptid (B) lokace: 5 (D) další informace: produkt = jiný, ka = -NH.CH₂.CH₂.CH₂.CH₂.CH₂.COOH znázornění sekvence SEQ ID č. 101:

Xaa Leu Xaa Val Xaa

5 ......

sekvenci SEQ ID č. 102:

charakteristiky sekvence:

(A) délka: 5 aminokyselin (B) typ: aminokyselinová (C) počet řetězců: jednořetězcová (D) topologie: lineární typ molekuly: peptid poznámpoznámpoznám158 poznám(ix) vlastnost:

(A) jméno / klíč: peptid (B) lokace: 2 (D) další informace: produkt = jiný ka = terč.butylalanin (ix) vlastnost:

(A) jméno / klíč: peptid (B) lokace: 3 (D) další informace: produkt = jiný, ka = 0-(terč.butyl)-Asp (ix) vlastnost:

(A) jméno / klíč: peptid (B) lokace: 5 (D) další informace: produkt = jiný ka = -NH.CH₂.CH₂.CH₂.CH₂.CH₂.COOH (xi) znázornění sekvence SEQ ID č. 102:

poznámpoznámIle Xaa Xaa Val Xaa 1 5

Informace o sekvenci SEQ ID č. 103:

(i) charakteristiky sekvence:

(A) délka: 5 aminokyselin (B) typ: aminokyselinová (C) počet řetězců: jednořetězcová (D) topologie: lineární (ii) typ molekuly: peptid (ix) vlastnost:

(A) jméno / klíč: peptid (B) lokace: 3 (D) další informace: produkt = jiný ka = O-(terč.butyl)-Asp (ix) vlastnost:

(A) jméno / klíč: peptid (B) lokace: 5 poznám159 (xi)

Informace (i) (ii) (ix) (ix) (ix) (xi)

Informace (i) (D) další informace: produkt = jiný, ka = -NH.CH₂.CH₂.CH₂.CH₂.COOH znázornění sekvence SEQ ID č. 103:

Ile Ile Xaa Val Xaa

5 sekvenci SEQ ID č. 104:

charakteristiky sekvence:

(A) délka: 5 aminokyselin (B) typ: aminokyselinová (C) počet řetězců: jednořetězcová (D) topologie: lineární typ molekuly: peptid vlastnost:

(A) jméno / klíč: peptid (B) lokace: 2 (D) další informace: produkt = Nle vlastnost:

(A) jméno / klíč: peptid (B) lokace: 3 (D) další informace: produkt = jiný ka = 0-(terč.butyl)-Asp vlastnost:

(A) jméno / klíč: peptid (B) lokace: 5 (D) další informace: produkt - jiný ka = -NH.CH₂.CH₂.CH₂.CH₂.COOH znázornění sekvence SEQ ID č. 104:

Ile Leu Xaa Val Xaa ^{1 5} sekvenci SEQ ID č. 105:

charakteristiky sekvence:

poznámpoznámpoznám160 (A) délka: 5 aminokyselin (B) typ: aminokyselinová (C) počet řetězců: jednořetězcová (D) topologie: lineární

(ii)	typ molekuly: peptid
(ix)	vlastnost:
	(A) jméno / klíč: peptid
	(B) lokace: 3
	(D) další informace: produkt =
	ka = 0-(terč.butyl)-Asp
(ix)	vlastnost:
	(A) jméno / klíč: peptid
	(B) lokace: 5

poznám(Dj další informace: produkt = jiný ka = -NH.CH₂.CH₂.CH₂.CH₂.COOH (xi) znázornění sekvence SEQ ID Č. 105:

Ile Val Xaa Val Xaa

5

Informace o sekvenci SEQ ID č. 106:

(i) charakteristiky sekvence:

(A) délka: 5 aminokyselin (B) typ: aminokyselinová (C) počet řetězců: jednořetězcová (D) topologie: lineární (ii) typ molekuly: peptid (ix) vlastnost:

(A) jméno / klíč: peptid (B) lokace: 2 (D) další informace: produkt = jiný ka = cyklohexylalanin (ix) vlastnost:

(A) jméno / klíč: peptid (B) lokace: 3 poznámpoznám161 (D) další informace: produkt = jiný, poznámka = O-(terč.butyl)-Asp (ix) vlastnost:

(A) jméno / klíč: peptid (B) lokace: 5 (D) další informace: produkt = jiný, poznámka = -NH.CH₂.CH₂.CH₂.CH₂..COOH (xi) znázornění sekvence SEQ ID Č. 106:

Ile Xaa Xaa Val Xaa ¹ 5

Informace o sekvenci SEQ ID č. 107:

(i) charakteristiky sekvence:

(A) délka: 5 aminokyselin (B) typ: aminokyselinová (C) počet řetězců: jednořetězcová (D) topologie: lineární (ii) typ molekuly: peptid (ix) vlastnost:

(A) jméno / klíč: peptid (B) lokace: 2

(D)	další informace: produkt = ka = terč.leucin	jiný,	poznám-
ix) vlastnost:
(A)	jméno	/ klíč: peptid
(B)	lokace	3
(D)	další	informace: produkt =	jiný,	poznám-

ka = 0-(terč.butyl)-Asp (ix) vlastnost:

(A) jméno / klíč: peptid (B) lokace: 5 (D) další informace: produkt = jiný, poznámka = -NH.CH₂.CH₂.CH₂.CH₂.COOH

162 (xi) znázornění sekvence SEQ ID č. 107:

Ile Xaa Xaa Val Xaa 1 5

Informace o sekvenci SEQ ID Č. 108:

(i) charakteristiky sekvence:

(A) délka: 7 aminokyselin (B) typ: aminokyselinová (C) počet řetězců: jednořetězcová (D) topologie: lineární

(ii)	typ molekuly: peptid
(ix)	vlastnost:
	(A)	jméno / klíč: peptid
	(B)	lokace: 1
	(D)	další informace: produkt = ka = 0-(terč.butyl)-Glu
(ix)	vlastnost:
	(A)	jméno / klíč: peptid
	(B)	lokace: 4

poznám(D) další informace: produkt = jiný ka = O-(terč.butyl)-Asp (ix) vlastnost:

(A) jméno / klíč: peptid (B) lokace: 7 (D) další informace: produkt = jiný ka = -NH.CH₂.CH₂.COOH (xi) znázornění sekvence SEQ ID č. 108:

Xaa Ile Leu Xaa Val Pro Xaa 1 5

Informace o sekvenci SEQ ID č. 109:

(i) charakteristiky sekvence:

(A) délka: 7 aminokyselin poznámpoznám163

(ii)	(B) typ: aminokyselinová (C) počet řetězců: jednořetězcová (D) topologie: lineární typ molekuly: peptid
(ix)	vlastnost:
	(A) jméno / klíč: peptid (B) lokace: 1 (D) další informace: produkt = jiný,	poznám-
(ix)	ka = 0-(terc.butyl)-Glu vlastnost:
	(A) jméno / klíč: peptid (B) lokace: 4 (D) další informace: produkt = jiný,	poznám-
(ix)	ka = 0-(terč.butyl)-Asp vlastnost:
	(A) jméno / klíč: peptid (B) lokace: 7 (D) další informace: produkt = jiný,	poznám-
(xi)	ka = -NH.CH2.CH2.CH2.CH2.ČOOH znázornění sekvence SEQ ID č. 109:
Informace o	Xaa Ile Leu Xaa Val Pro Xaa 1 5 sekvenci SEQ.ID č. 110:
(i)	charakteristiky sekvence:
(ii)	(A) délka: 7 aminokyselin (B) typ: aminokyselinová (C) počet řetězců: jednořetězcová (D) topologie: lineární typ molekuly: peptid
(ix)	vlastnost:
	(A) jméno / klíč: peptid (B) lokace: 1 (D) další informace: produkt = jiný,	poznám-

164 poznámka = O-(terč.butyl)-Glu (ix) vlastnost:

(A) jméno / klíč: peptid (B) lokace: 4 (D) další informace: produkt = jiný ka = 0-(terč.butyl)-Asp (ix) vlastnost:

(A) jméno / klíč: peptid (B) lokace: 7 (D) další informace: produkt = jiný ka = -NH.CH₂.CH₂.CH₂.CH₂.CH₂.COOH (xi) znázornění sekvence SEQ ID č. 110:

Xaa Ile Leu Xaa Val Pro Xaa 1 5

Informace o sekvenci SEQ ID č. 111:

(i) charakteristiky sekvence:

(A) délka: 7 aminokyselin (B) typ: aminokyselinová (C) počet řetězců: jednořetězcová . (D) topologie: lineární (ii) typ molekuly: peptid (ix) vlastnost:

(A) jméno / klíč: peptid (B) lokace: 1 (D) další informace: produkt = jiný ka = 0-(terč.butyl)-Glu (ix) vlastnost:

(A) jméno / klíč: peptid (B) lokace: 4 (D) další informace: produkt = jiný ka = 0-(terč.butyl)-Asp (ix) vlastnost:

(A) jméno / klíč: peptid poznámpoznámpoznám165 (B) lokace: 7 (D) další informace: produkt = jiný, poznámka = -NH.CH₂.CH₂.CH₂.CH₂.CH₂.CH₂.CH₂.COOH (xi) znázornění sekvence SEQ ID č. 111:

Xaa Ile Leu Xaa Val Pro Xaa 1 5

Informace o sekvenci SEQ ID č. 112:

(i) charakteristiky sekvence:

(A) délka: 5 aminokyselin (B) typ: aminokyselinová (C) počet řetězců: jednořetězcová (D) topologie: lineární (ii) typ molekuly: peptid (ix) vlastnost:

(A) jméno / klíč: peptid (B) lokace: I (D) další informace: produkt = methyllle (ix) vlastnost:

(A) jméno / klíč: peptid (B) lokace: 3 (D) další informace: produkt = jiný, poznámka = 0-(terč.butyl)-Asp (ix) vlastnost:

(A) jméno / klíč: peptid (B) lokace: 5 (D) další informace: produkt = jiný, poznámka = -NH.CH₂.CH₂.CH₂.CH₂.COOH (xi) znázornění sekvence SEQ ID č. 112:

Ile Leu Xaa Val Xaa 1 5

166

Informace o sekvenci SEQ ID č.

113 :

(i) charakteristiky sekvence:

(A) délka: 5 aminokyselin (B) typ: aminokyselinová (C) počet řetězců: jednořetězcová (D) topologie: lineární

(ii)	typ molekuly:	peptid
(ix)	vlastnost :·
	(A) jméno /	klíč: peptid
	(B) lokace:	3
	(D) další informace: produkt =
	ka = 0-	(terč.butyl)-Asp
(ix)	vlastnost:
	(A) jméno /	klíč: peptid
	(B) lokace:	5

poznám(D) další informace: produkt = jiný ka = -NH.CH₂.CH₂.S.CH₂.CH₂.COOH (xi) znázornění sekvence SEQ ID č. 113:

Ile Leu Xaa Val Xaa 1 5 poznámInformace o sekvenci SEQ ID č. 114:

(i) charakteristiky sekvence:

(A) délka; 5 aminokyselin (3) typ: aminokyselinová (C) počet řetězců: jednořetězcová (D) topologie: lineární

(ii)	typ molekuly:	peptid
(ix)	vlastnost:
	(A) jméno /	klíč: peptid
	(B) lokace:	3
	(D) další informace: produkt =
	ka = 0-	-(terč.butyl)-Asp

poznám167 poznám(ix) vlastnost:

(A) jméno / klíč: peptid (B) lokace: 5 (D) další informace: produkt = jiný ka = -NH.CH₂.CH₂.CH₂.CH₂.COOH (xi) znázornění sekvence SEQ ID Č. 114:

Ile Leu Xaa Leu Xaa 1 5

Informace o sekvenci SEQ ID č. 115:

(i) charakteristiky sekvence:

(A) délka: 5 aminokyselin (B) typ: aminokyselinová (C) počet řetězců: jednořetězcová (D) topologie: lineární (ii) typ molekuly: peptid (ix) vlastnost:

(A) jméno / klíč: peptid (B) lokace: 1 (D) další informace: produkt - jiný ka = NH₂.CH(CO.NH₂) .CH₂.CH₂.CO- (ix) vlastnost:

(A) jméno / klíč: peptid (B) lokace: 4 (D) další informace: produkt = jiný ka = 0-(terč.butyl)-Asp (xi) znázornění, sekvence SEQ ID č. 115:

Xaa Ile Leu Xaa Val 1 5

Informace o sekvenci SEQ ID č. 116:

(i) charakteristiky sekvence:

(A) délka: 5 aminokyselin poznámpoznám168 (B) typ: aminokyselinová (C) počet řetězců: jednořetězcová (D) topologie: lineární (ii) typ molekuly: peptid (ix) vlastnost:

(A) jméno / klíč: peptid (B) lokace: 3 (D) další informace: produkt = jiný ka = 0-(terč.butyl)-Asp (ix) vlastnost:

(A) jméno / klíč: peptid (B) lokace: 5 (D) další informace: produkt = jiný ka = -NH.CH₂.CH₂.CH₂.CH₂.COOH (xi) znázornění sekvence SEQ ID č. 116:

Ile Leu Xaa Phe Xaa 1 5

Informace o sekvenci SEQ ID č. 117:

(i) charakteristiky sekvence:

(A) délka: 6 aminokyselin (B) typ: aminokyselinová (C) počet řetězců: jednořetězcová (D) topologie: lineární (ii) typ molekuly: peptid (ix) vlastnost:

(A) jméno / klíč: peptid (B) lokace: 1 (D) další informace: produkt = pAla (ix) vlastnost:

(A) jméno / klíč: peptid (B) lokace: 4 (D) další informace: produkt = jiný ka = O-(terč.butyl)-Asp poznámpoznámpoznám169 (ix) vlastnost:

(A) jméno / klíč: peptid (B) lokace: 6 (D) další informace: produkt = jiný, poznámka = -NH.CH₂.CH₂.CH₂.CH₂.COOH (xi) znázornění sekvence SEQ ID č. 117:

Ala Ile Leu Xaa Val Xaa 1 - 5

Informace o sekvenci SEQ ID č. 118:

(i) charakteristiky sekvence:

(A) délka: 6 aminokyselin (B) typ: aminokyselinová (C) počet řetězců: jednořetězcová (D) topologie: lineární (ii) typ molekuly: peptid (ix) vlastnost:

(A) jméno / klíč: peptid (B) lokace: 1 (D) další informace: produkt = PAla (ix) vlastnost:

(A) jméno / klíč: peptid (B) lokace: 3 (D) další informace: produkt = methyllle (ix) vlastnost:

(A) jméno / klíč: peptid (B) lokace: 5 (D) další informace: produkt = jiný, poznámka = 0-(terč.butyl)-Asp (xi) znázornění sekvence SEQ ID č. 118:

Ala Pro Ile Leu Xaa Val

170

Informace (i) (ii) (ix) (ix) (ix) (xi)

Informace (i) (ii) (ix) sekvenci SEQ ID č. 119:

charakteristiky sekvence:

(A) délka: 6 aminokyselin (B) typ: aminokyselinová (C) počet řetězců: jednořetězcová (D) topologie: lineární typ molekuly: peptid vlastnost:

(A) jméno / klíč: peptid (B) lokace: 1 (Dj další informace: produkt = 4-Abu vlastnost:

(A) jméno / klíč: peptid (B) lokace: 4 (D) další informace: produkt = jiný, poznámka = O-(terč.butyl)-Asp vlastnost:

(A) jméno / klíč: peptid (B) lokace: 6 (D) další informace: produkt = jiný, poznámka = piperazin-l-yloctová kyselina znázornění sekvence SEQ ID č. 119:

Xaa Ile Leu Xaa Val Xaa

5 sekvenci SEQ ID č. 120:

charakteristiky sekvence:

(A) délka: 6 aminokyselin (B) typ: aminokyselinová (C) počet řetězců: jednořetězcová (D) topologie: lineární typ molekuly.· peptid vlastnost:

(A) jméno / klíč: peptid

171 (B) lokace: 1 (D) další informace: produkt = jiný, poznámka = NH₂.CH₂.CH₂.CH₂.CH₂.CO- (ix) vlastnost:

(A) jméno / klíč: peptid (B) lokace: 4 (D) další informace: produkt = jiný, poznámka = 0-(terč.butyl)-Asp (ix) vlastnost:

(A) jméno / klíč: peptid (B) lokace: 6 (D) další informace: produkt = jiný, poznámka = piperazin-l-yloctová kyselina (xi) znázornění sekvence SEQ ID č. 120:

Xaa Ile Leu Xaa Val Xaa 1 5

Informace o sekvenci SEQ ID č. 121:

(i) charakteristiky sekvence:

(A) délka: 6 aminokyselin (B) typ: aminokyselinová (C) počet řetězců: jednořetězcová (D) topologie: lineární (ii) typ molekuly: peptid (ix) vlastnost:

(A) jméno / klíč: peptid (B) lokace: 1 (D) další informace: produkt = jiný, poznámka = NH₂.CH₂.CH₂.CH₂.CH₂. .CH(Z) .C0- (ix) ' vlastnost:

(A) jméno / klíč: peptid (B) lokace: 4 (D) další informace: produkt = jiný, poznámka = 0-(terč.butyl)-Asp

172 (ix) vlastnost:

(A) jméno / klíč: peptid (B) lokace: 6 (D) další informace: produkt = jiný, poznámka = piperazin-1-ylpropionová kyselina (xi) znázornění sekvence SEQ ID č. 121:

Xaa Ile Leu Xaa Val Xaa 1 5

Informace o sekvenci SEQ ID č. 122:

(i) charakteristiky sekvence:

(A) délka: 6 aminokyselin (B) typ: aminokyselinová (C) počet řetězců: jednořetězcová (D) topologie: lineární (ii) typ molekuly: peptid (ix) vlastnost:

(A) jméno / klíč: peptid (B) lokace: 1 (D) další informace: produkt = pAla (ix) vlastnost:

(A) jméno / klíč: peptid (B) lokace: 4 (D) další informace: produkt = jiný, poznámka = 0-(terc.butyl)-Asp (ix) vlastnost:

(A) jméno / klíč: peptid (B) lokace.· 6 (D) další informace: produkt = jiný, poznámka = (4-(2-aminoethyl)imidazol-l-yl)octová kyselina (xi) znázornění sekvence SEQ ID č. 122:

Ala Ile Leu Xaa Val Xaa

Claims (17)

1. Cyklický peptid obecného vzorce 1

LINKER .A1-AA2-AA:

(1) ve kterém

AAl představuje L- nebo D-aminokyselinu'vybranou.ze souboru zahrnujícího Ile, Leu a jejich aminokyselinové analogy,

AA2 znamená L-aminokyselinu vybranou ze souboru zahrnujícího Leu a jeho aminokyselinové analogy,

AA3 představuje L-aminokyselinu vybranou ze souboru zahrnujícího Asp a její aminokyselinové analogy obsahující ve svém postranním řetězci karboxylovou skupinu nebo skupinu napodobující karboxylovou skupinu,

AA4 znamená L-aminokyselinu vybranou ze souboru zahrnujícího Val a jeho aminokyselinové analogy, a

LINKER představuje spojovací zbytek pro napojení N-konce AAl na C-konec AA4 za vzniku cyklického peptidu obsahujícího heterocyklický kruh se 17 až 30 členy, přičemž tento cyklický peptid vykazuje ve zde popsaném testu buňky MOLT-4/fibronektin hodnotu .IC_SO 'méně než 20 gmol, nebo/a .......

tento cyklický peptid vykazuje ve zde popsaném testu buňky MOLT-4/rekombinantní rozpustný VCAM-1 hodnotu IC₅₀ méně než 100 μπιοί, a AA1-4 mají obecný vzorec 2

Rl o (2)

174 ve kterém

Rl představuje postranní řetězec aminokyseliny, a symboly R2 a R3, které mohou být pro každou z AA1 až AA4 stejné nebo rozdílné, nezávisle na sobě znamenají vždy atom vodíku nebo alkyiovou skupinu s 1 až 4 atomy uhlíku, nebo jeho sůl.

2. Cyklický peptid obecného vzorce 1 podle nároku 1, ve kterém aminokyselinový analog pro AA1 je vybrán ze souboru zahrnujícího Val, Pro, Gly, Tic, terč.Leu, terč.butylAla,' Phe, Nle, Met, Arg, Lys a Ala, aminokyselinový analog pro AA2 je vybrán ze souboru zahrnujícího Ile, Phe, Val, terč.Leu, Nle, Cha a terč.butylAla, aminokyselinovým analogem- pro AA3 je Glu, a aminokyselinový analog pro AA4 je vybrán ze souboru zahrnujícího Leu, Ile, Phe, Cha, Nle a Nva, nebo jeho sůl.

3. Cyklický peptid obecného vzorce 1 podle nároku 1, ve kterém

AA1 je vybrán ze souboru zahrnujícího Ile a Leu, přičemž oba tyto zbytky jsou popřípadě N-methylované,

AA2 znamená Leu,

AA3 představuje Asp, a

AA4 znamená Val, nebo jeho sůl.

175

4. Cyklický peptid obecného vzorce 1 podle libovolného z nároků 1 až 3, ve kterém

LINKER představuje skupinu obecného vzorce 4

R4

R5 (4) ve kterém n má hodnotu 3 - 5? a symboly R4 a R5 představují vždy atom vodíku, nebo

R4 znamená skupinu NH₂, která je popřípadě, substituována skupinou C^jqCÍO)-, nebo je skupina NH₂ popřípadě substituována přes a-karboxylovou skupinu přirozenými aminokyselinami, přičemž N-konec aminokyseliny je popřípadě substituován skupinou C_x.₁₀C(O)-, nebo je skupina NH₂ popřípadě mono- nebo disubstituovaná alkylovou skupinou s 1 až 4 atomy uhlíku, nebo je skupina NH₂ popřípadě substituována benzylovou skupinou, pyridylovou skupinou, karboxyalkanoylovou skupinou se 2 až 5 atomy uhlíku v alkanoylové části nebo aminoalkanoylovou skupinou se 2 až 5 atomy uhlíku, a ' Ř5 představuje atom vodíku,........

nebo R4 znamená atom vodíku, a

R5 představuje karboxylovou skupinu popřípadě substituovanou alkylovou skupinou s 1 až 4 atomy uhlíku za vzniku esteru, nebo R5 představuje amidovou skupinu obecného vzorce -CONR6R7, kde symboly R6 a R7 nezávisle na sobě znamenají vždy atom vodíku nebo alkylovou skupinu s 1 až 4 atomy uhlíku,

176 nebo jeho sůl.

5. Cyklický peptid obecného vzorce 1 podle libovolného z nároků 1 až 3, ve kterém

LINKER představuje skupinu libovolného ze vzorců 6-44 uvedených na obrázku 13, nebo jeho sůl.

6. Cyklický peptid obecného vzorce 1 podle libovolného z nároků 1 až 3, ve kterém

LINKER představuje skupinu libovolného ze vzorců 6, 7, 8, 13,

17, 18, 19, 20 nebo 21 - 44 uvedených na obrázku 13, nebo jeho sůl.

7. Cyklický peptid obecného vzorce 1 podle libovolného z nároků. 1 až 3, ve kterém

LINKER představuje dipeptid obsahující alespoň jednu bázickou aminokyselinu, nebo jeho sůl.

8. Cyklický peptid obecného vzorce 1 podle nároku 7, ve kterém jsou aminokyselinami v dipeptidu představovaném symbolem LINKER D-aminokyseliny, nebo jeho sůl.

9. Cyklický peptid obecného vzorce 1 podle nároku 8, ve kterém je dipeptid vybrán ze souboru zahrnujícího dipeptidy vzorců 24 - 38, 43 a 44 uvedených na obrázku 13, nebo jeho sůl.

10. Cyklický peptid obecného vzorce 1 podle nároku 1, vybraný ze skupiny zahrnující cyklické peptidy následujících vzorců, ve kterých se údaje v hranatých závorkách týkají

- 177 části odpovídající symbolu LINKER c(Ile-Leu-Asp-Val-NH-(CH₂)₅-CO-) D-lle-Leu-Asp-Val-NH(CH₂)₅COAc

NH'

Ile-Leu-Asp-ValCJ [D-Lys-analogl

H Ó [L-Orn-analogl

CH,

H₃Cv/,CH

HN

Leu-Asp-Val-NH(CH_a)_sCO—ή

AcNH

D-lle-Leu-Asp-Val

H O [D-Lys-analog] rtc-x. x^.u-iie-Leu-Asp-vaiN ]í

0 [L-Orn-analogl

D-lle-Leu-Asp-Val-NH(CH₂)₄CQeLeu-Leu-Asp-Val-NH(CH₂)₅CO

CH-CO-lle-Leu-Asp-Val-N n

-N

H

CH:

178

CH₂COD-Leu-Leu-Asp-Val-N N—CH₂

CH:

HN—CO

CH--CO—Ile-Leu-Asp-Val—N

CH₂-CH—NH-CO-CH,

CH.-CO—Ile-Leu-Asp-Val—N

y.

CH₂-CH₂-CH—NH-CO-CH, ry

Ie-Leu-Asp-Val-D-Lys-N N coCH.

/“Ά

Melle-Leu-Asp-Val-D-Lys^-^

CO-— CH₂ /“Λ le-Leu-Asp-Val—N N—CH /

D-Lys-CO

Me!le-Leu-Asp-Va!-D-Arg^-N\_

CO-CH,

179 r~y

D-Arg-Melle-Leu-AspA/al~N N

CO·

CHx—lle-Leu-Asp-Val-NHCHyCHf-Cx *1

-N.

YCH,

I ^£ co

NH-

NH,

D-Leu-Leu-Asp-VaT

O N

H O [beta-Ala-D-Lys-analog]

Pyr [N-Pyr-D-Lys-analog]

N

O N

NH, /x-D-Leu-Leu-Asp-Vát ¹ Y

H O

Glu·

NH.

D-Leu-Leu-Asp-VaT [alf a-Glu-D-Lys analog] pD-Leu-Leu-Asp-Val-NHCH₂CH—S

OCCHelle-Leu-Asp-Val-NH(CH₂),CO

180 plle-Leu-Asp-Val-NH-CH₂-CH₂-S

OC-C h₂-ch₂ c(D-Leu-Leu-Asp-Val-p-Ala-Pro) c(p-Leu-Leu-Asp-Val-D-AJa-D-AIa) c(D-Leu-Leu-Asp-VaJ-p-Ala-p-Ala) c(MelIe-Leu-Asp-Val-P-Ala-Pro) cfMelle-Leu-Asp-Val-P-Ala-D-Ala) c(Melle-Leu-Asp-Val-D-Ala-D-Ala) c(MeIie-Leu-Asp’VaI-P-AJa-D-Om) c(Melie-Leu-Asp-Val-P-Ala-D-Lys) c(Melle-Leu-Asp-Val-D-Arg-D-Ala) c(MelIe-Leu-Asp-VaJ-D-Ala-D-Arg) c(Melie-Leu-Asp-Vai-p-Orn-P-AJa) c(Melle-Leu-Asp-Val-D-Lys-D-Ala) c(MeUe-Leu-Asp-Val-D-Om(CHMe2)-D-Ala)· c(MeUe-Leu-Asp-Val-D-Om(cyklohexy!)~D-Ala) c(Meíle-Leu-Asp-Val-D-Om(4-chlor-benzyl)-D-AJa) c(Meíie-Leu-Ásp-VaÍ-p-Orn(Ét2)-D-AIa) c(MeIle-Leu-Asp-Val-D-Lys(CHMe2)-D-Lys(CHMe2)) c(MelJe-Leu-Asp-Val-D-Lys-P-Lys) c(MeUe-Leu-Asp-Val-P-Ala-D-Lys) c(Melle-Leu-Asp-Val-P-Phe-D-Lys) c(Melle-Leu-Asp-Val-D-Trp-D-Lys) cfMelIe-Leu-Asp-Val-P-Phe-D-Arg) cfMelle-Leu-Asp-Val-D-Trp-D-Arg)

181 c(Meíle-LeU’Asp-Val-D-Arg(Pmc)-D-?Ma) c(MeIle-Leu-Asp-Val-D-AJa-D-Arg(Pmc)) c(MeIle-Leu-Asp-Val-D-Phe-p-Arg(Pmc)) c(MeIle-Leu-Asp-Val-D-Trp-D-Arg(Pmc)) c(Meíle-Leu-Asp-Val-D-His-D-Lys) c(Melle-Leu-Asp-Vai-D-Arg-D-Arg) c(Melle-Leu-Asp-Val-p-His-D-Arg) c(Melle-Léu-Asp-Val-D-Arg-D-His) cfMelle-Leu-Asp-Val-D-Ala-D-Orn) c(Meíle-Leu-Asp-Vaí-POrn-D-Orri) a jejích soli.

11, Způsob přípravy cyklického peptidu- obecného vzorce 1 podle nároku 1, vyznačující se tím, že se (a) odstraní ; jedna nebo; několik obvyklých chránících, skupin pro peptidy- z' chráněného·-cyklického peptidu obecného vzorce 3 ve kterém Prl představuje-chránící- skupinu na kyselé skupině' v postranním řetězci aminokyseliny AA3, za vzniku cyklického peptidu podle vynálezu obecného vzorce 1 a popřípadě se současně nebo následně rovněž odstraní libovolné další obvyklé chránící skupiny pro peptidy přítomné ve skupině LINKER a popřípadě se, pokud je to žádoucí, přemění takto získaný produkt na jeho sůl, nebo že se (b) vytvoří amidová vazba kondenzací dvou peptidových jednotek, z nichž jedna obsahuje karboxylovou skupinu nebo

182 její reaktivní derivát a druhá obsahuje aminoskupinu za vzniku chráněného nebo nechráněného cyklického peptidů, který má sekvenci uvedenou v obecném vzorci 1, a pokud je to nutné odstraní se chránící skupiny za použití výše popsaného způsobu (a) a popřípadě se, pokud je to žádoucí, přemění takto získaný produkt na jeho sůl, nebo že se (c) k přípravě cyklického peptidů obecného vzorce 1, který obsahuje v symbolu LINKER skupinu -S(0)- nebo -S(0₂)-, oxiduje, atom síry, nebo dále skupina -S (0)- v případě přípravy skupiny -S(0₂) -, v symbolu LINKER prekurzorového cyklického peptidů, za vzniku cyklického peptidů obsahujícího v symbolu LINKER skupinu -S(0)- nebo -S(0₂)-, a popřípadě se, pokud je to žádoucí, přemění takto získaný produkt na jeho sůl.

12. Farmaceutický prostředek, vyznačuj icí se t í m , že obsahuje cyklický peptid obecného vzorce I podle libovolného z nároků.1 - 10 v kombinaci s farmaceuticky přijatelným ředidlem nebo nosičem.

13. Farmaceutický prostředek podle nároku 10 pro parenterální podání, vyznačující se tím , že je vytvořen pro pomalé uvolňování účinné látky v průběhu alespoň 5 dnů.

14. Cyklický peptid obecného vzorce i podle libovolného z nároků 1 až 10 pro použití jako léčivo.

15. Způsob inhibice interakce mezi VCAM-1 nebo/a fibronektinem a integrinovým receptorem VLA-4 u savce, který takové ošetření potřebuje, vyznačující se tím, že se tomuto savci podá účinné množství farmaceutického prostředku podle libovolného z nároků 12 - 13 nebo jeho farmaceuticky přijatelné soli.

I

- 183

16. Způsob podle nároku 15, vyznačující se t í m , že se ošetřuje savec trpící roztroušenou j 'í sklerosou nebo revmatickou artritidou.

17. Použití cyklického peptidu obecného vzorce 1 podle , libovolného z nároků 1-10 nebo jeho farmaceuticky přijatelné soli k přípravě léčiva pro použití k léčení V onemocnění nebo stavu zprostředkovaného interakcí mezi VCAM-1 nebo fibronektinem a integrinovým receptorem VLA-4. ί1