CZ20012352A3 - Analoga nukleosidů s protivirovou aktivitou - Google Patents

Analoga nukleosidů s protivirovou aktivitou Download PDF

Info

Publication number
CZ20012352A3
CZ20012352A3 CZ20012352A CZ20012352A CZ20012352A3 CZ 20012352 A3 CZ20012352 A3 CZ 20012352A3 CZ 20012352 A CZ20012352 A CZ 20012352A CZ 20012352 A CZ20012352 A CZ 20012352A CZ 20012352 A3 CZ20012352 A3 CZ 20012352A3
Authority
CZ
Czechia
Prior art keywords
compound
group
dioxolane
nucleoside
amino
Prior art date
Application number
CZ20012352A
Other languages
English (en)
Inventor
Nghe Nguyen-Ba
Original Assignee
Shire Biochem Inc.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Shire Biochem Inc. filed Critical Shire Biochem Inc.
Publication of CZ20012352A3 publication Critical patent/CZ20012352A3/cs

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D473/00—Heterocyclic compounds containing purine ring systems
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/7042—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings
    • A61K31/7052—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides
    • A61K31/706—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom
    • A61K31/7064—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom containing condensed or non-condensed pyrimidines
    • A61K31/7076—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. nucleosides, nucleotides containing six-membered rings with nitrogen as a ring hetero atom containing condensed or non-condensed pyrimidines containing purines, e.g. adenosine, adenylic acid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A61P31/18—Antivirals for RNA viruses for HIV
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/20—Antivirals for DNA viruses
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H19/00—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof
    • C07H19/02—Compounds containing a hetero ring sharing one ring hetero atom with a saccharide radical; Nucleosides; Mononucleotides; Anhydro-derivatives thereof sharing nitrogen
    • C07H19/04—Heterocyclic radicals containing only nitrogen atoms as ring hetero atom
    • C07H19/16—Purine radicals
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C40—COMBINATORIAL TECHNOLOGY
    • C40B—COMBINATORIAL CHEMISTRY; LIBRARIES, e.g. CHEMICAL LIBRARIES
    • C40B40/00—Libraries per se, e.g. arrays, mixtures
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
    • Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
    • Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
    • Y02P20/55—Design of synthesis routes, e.g. reducing the use of auxiliary or protecting groups

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • AIDS & HIV (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Saccharide Compounds (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)

Description

(57) Anotace:
Analoga nukleosidů na bázi purinů, které jsou účinné jako protivirové agens mimo jiné proti HIV aHBV. Na obrázku je uvedeno stanovení toxicity sloučeniny A (-) na mitochondriální DNA,
10» 50 10 ___1 ,___ 1.Ž5 0.25 0.05
>1·“ mtDNA
* 28irDNA
1 1· W 100
Sloučenina A (>)(μΜ) tlam » 9M e.M Xotcltabln (μΜ) (13 ) Druh dokumentu: A3 (51) Int. Cl.7;
C07H 17/02
A 61 K 31/7076
A61P 31/12
A 61 P 31/18
179 719/HK
Analoga nukleosidů s protivirovou aktivitou
Oblast techniky
Předložený vynález popisuje nová analoga nukleosidů na bázi purinů, která jsou účinná jako antivirotika. Zejména pak předložený vynález popisuje nukleosidy na bázi purinů se zlepšenými farmakokinetickými vlastnostmi.
Dosavadní stav techniky
Ve Spojených státech se eviduje ročně více jak 12 milionů nových případů sexuálně přenosných onemocnění(STD) . Z 10 nejvíce citovaných onemocnění ve Spojených státech je 5 STD, tzn. chlamydia, gonorea, příjice, syndrom získané imunity (AIDS) a hepatitida B (HBV) , z čehož na AIDS a HBV neexistuje adekvátní léčba.
V případě AIDS, Světová zdravotnická organizace předpokládá, že v roce 2000 zde bude na 40 milionů lidí, kteří budou infikováni virem lidské imunodeficience (HIV), jenž způsobuje (AIDS) a hepatitida postihuje lidi pětkrát více. Světovou zdravotnickou organizací bylo publikováno, že 2000 milionů lidí v produktivním věku bylo infikováno virem HBV, ze kterých 350 milionů je chronicky infikováno, a tudíž jsou v neustálém riziku smrti na onemocnění jater.
Ačkoliv míra mortality u AIDS klesá díky novým terapiím, AIDS stále zůstává druhým nejrozšířenějším způsobem smrti dospělích v rozmezí od 29 až 40 roků. V současné době je standardem ošetření lidí nemocných na HIV kombinace terapií proti HIV. Nyní je na předpis k dispozici 11 léků proti onemocněni HIV.
kategorií:
didanosin,
Tyto léky proti HIV se rozdělují do tři analoga nukleosidů, která zahrnují zidovudin, zalcitabin, stavudin nebo lamivudin; inhibitory proteáz, které zahrnují indinavir, nelfinavir, saquinavir a ritonavir a nenukleosidové inhibitory reverzní transkriptázy(NNRTI), které zahrnují nevirapin, delavirdin a efavirenz. V porovnání s HIV je v současné době dostupných pouze několik patentovaných terapií na chronickou hepatitidu B, která zahrnují interferon a lamivudin. U dalších léčiv, famciclovir, lobucavir a adefovir, probíhají v součastnosti klinické zkoušky. Nicméně v mnoha studiích se ukázalo, že u většiny pacientů po proběhnutí terapie nastala recidiva nemoci a vyvinula se rezistence vůči lékům.
V současné době patří vznik rezistence mezi hlavní body výzkumu ošetření HIV a HBV. Rezistence se obvykle vyskytuje tam, kde používané léčivo není dostatečně silné na to, aby nekompromisně zastavilo replikaci viru. Pokud je umožněna reprodukce viru v prostředí léčiva, má vir šanci vytvářet změny ve své struktuře, zvané mutace, do té doby, dokud nenalezne takovou, která mu umožňuje množit se za přítomnosti léčiva. Jakmile se vyskytne mutace, nastává nedetektovatelný růst a v brzké době je u individua tento zmutovaný kmen dominantní, čímž se léčivo proti novému kmeni stává slabším. Nyní je také pozornost zaměřena na křížovou rezistenci, která se vyskytuje v případech, kdy mutace způsobující rezistanci vůči jednomu léčivu způsobují také rezistanci vůči druhému. Několik studií prokázalo, že kombinace dvou léčiv má za následek určité prodloužení doby vzniku rezistence na jedno nebo obě léčiva v porovnání s tím, kdy je podáváno pouze jedno léčivo. Další studie předpokládají, že kombinací tří léčiv se značně prodlouží doba vzniku rezistence. V důsledku
toho mnoho lidi věří, že nej lepším způsobem prevence nebo alespoň prodloužení doby vzniku rezistence je používat tzv. léčebné kokteily, tzn. kombinace několika druhů léčiv. Nicméně s vyšším počtem léčiv se také zvyšuje riziko nežádoucích interakci léčiv a jejich toxicita.
Jedním způsobem, jak zvýšit účinnost léčiva, je zlepšit jeho farmakokinetické vlastnosti, které přispívají k jeho terapeutické aktivitě. Farmakokinetika jako věda je studium faktorů, které určují množství chemických agens v místech jejich biologického účinku v různých časech po aplikaci agens nebo léčiva do biologického systému. Farmakokinetika zahrnuje studium absorpce a distribuce léčiva („biotranslokace,,) , studium chemických změn léčiva v organismu („biotransformace,,) a studium prostředků, pomocí kterých jsou léčiva deponována v organismu a odstraněna z něj. Při chronické terapii léčivem je biologická dostupnost důležitější faktor, protože popisuje vztah mezi velikostí organismu a absorbovaným množstvím a pronikání do krevního toku nebo je jiným způsobem léčivo dostupné pro ošetření(působení) příslušného místa v organismu. Biologická dostupnost je přímo spojena se schopností léčiva rozpustit se v biologických tekutinách.
Byly popsány (-)-(β-ϋ-2,6-diaminopurindioxolan (DAPD) a (-)-β-D-l, 3-dioxolanguanin (DXG) jako vysoce účinná léčiva u různých typů buněčných systémů s proti HIV-1 aktivitou, minimální křížová rezistence lamivudinu a jeho nízká toxicita. Nicméně tyto sloučeniny mají špatné farmakokinetické vlastnosti, které mohou být vylepšeny. Proto by bylo velice užitečné poskytnou sloučeniny mající zlepšené farmakokinetické vlastnosti, které by se mohly používat při ošetření pacientů infikovaných HIV aHBV.
•· ····
Podstata vynálezu
V rámci jednoho provedeni popisuje předložený vynález nové cis nukleosidy na bázi purinů, které jsou znázorněny vzorcem (I)
(i) a jejich farmaceuticky přijatelné soli, kde index n je 1 nebo 2 substituent R4 je vybrán ze skupiny sestávající z H, COOH, CONH2, OH, SH, NH2, N02, alkylové skupiny s 1 až 6 atomy uhlíku, alkenylové skupiny s 2 až 6 atomy uhlíku, alkynylové skupiny s 2 až 6 atomy uhlíku, halogenu, CORa, kde substituent Ra je alkylová skupina s 1 až 6 atomy uhlíku, alkenylová skupina s 2 až 6 atomy uhlíku, alkynylová skupina s 2 až 6 atomy uhlíku nebo COORb, kde substituent Rb je alkylová skupina s 1 až 6 atomy uhlíku, alkenylová skupina s 2 až 6 atomy uhlíku, alkynylová skupina s 2 až 6 atomy uhlíku;
substituent R3 je H nebo alkylová skupina s 1 až 6 atomy uhlíku, alkenylová skupina s 2 až 6 atomy uhlíku, alkynylová skupina s 2 až 6 atomy uhlíku;
X je vybráno ze skupiny sestávající z H, monofosfátu, difosfátu, trifosfátu, karbonylu substituovaného alkylovou skupinou s 1 až 6 atomy uhlíku, alkenylovou skupinou s 2 až 6 ···· • · • · · · atomy uhlíku, alkynylovou skupinou s 2 až 6 atomy uhlíku, arylovou skupinou s 6 až 10 atomy uhlíku nebo
O
II —P-Rc
I
Rr* nc , kde každý substituent Re je nezávisle vybrán ze skupiny sestávající z H, alkylové skupiny s 1 až 6 atomy uhlíku, alkenylové skupiny s 2 až 6 atomy uhlíku, alkynylové skupiny s 2 až 6 atomy uhlíku nebo skupiny chránící hydroxy skupinu; a kde uvedený nukleosid je ve formě (-) enantiomeru, (+) enantiomeru a jejich směsí, včetně racemátu.
Sloučeniny předloženého vynálezu jsou účinné při terapii, zejména jako protivirová agens.
V rámci dalšího provedení poskytuje předložený vynález způsob ošetření virových infekcí subjektu zahrnující podání subjektu, při potřebě takového ošetření, terapeuticky účinného množství sloučeniny nebo přípravku podle vynálezu.
V rámci dalšího provedení poskytuje předložený vynález farmaceutický přípravek obsahující sloučeninu podle vynálezu v kombinaci s farmaceuticky přijatelným nosičem nebo excipientem.
V rámci dalšího provedení poskytuje předložený vynález způsob ošetření virových infekcí subjektu zahrnující podání, při potřebě takového ošetření, kombinace léčiv obsahující alespoň jednu sloučeninu podle vzorce (I) a alespoň jeden další terapeutický agens vybraný z analog nukleosidů;
nenukleosidových inhibitorů reverzní transkriptázy (NNRTI); nebo inhibitorů proteáz.
V rámci dalšího provedení poskytuje předložený vynález farmaceutický přípravek obsahující alespoň jednu sloučeninu podle vzorce (I) a alespoň jeden další terapeutický agens vybraný ze skupiny analog nukleosidů; nenukleosidových inhibitorů reverzní transkriptázy (NNRTI); nebo inhibitorů proteáz a farmaceuticky přijatelný nosič nebo excipient.
V rámci dalšího provedení popisuje předložený vynález použití sloučeniny podle vzorce (I) při zpracování léku pro ošetření virových onemocnění.
Detailní popis vynýlezu
V rámci prvého provedení zahrnují sloučeniny podle předloženého vynálezu ty, ve kterých se vyskytují následující provedení buď nezávisle na sobě anebo v kombinaci.
V jednom provedení, X je H.
O
II —P-Rc
I
Rc
Nebo v jiném případě, X je , kde každý substituent Rc je nezávisle vybrán ze skupiny sestávající se z H, alkylové skupiny s 1 až 6 atomy uhlíku, alkenylové skupiny s 2 až 6 atomy uhlíku, alkynylové skupiny s 2 až 6 atomy uhlíku nebo skupiny chránící hydroxy skupinu, která je vybrána ze skupiny sestávající z S-acylthioethylesteru, acyloxymethylesteru nebo alkylmethylkarbonátu. V dalším
O
II —P-Rc
I
Rc provedení, X je , kde každý substituent Rc je nezávisle skupina chránící hydroxy skupinu, která je vybrána ze skupiny sestávající z acetyl-2-thioethylesteru, pivaloyloxymethylesteru nebo izopropyloxykarbonyloxymethylesteru.
V dalším provedení, index n nabývá hodnoty 1.
V dalším provedení, substituent R3 je H nebo methyl.
V dalším provedení, substituent R3 je H.
V dalším provedení, substituent R4 je vybrán ze skupiny sestávající se z H, COOH, CONH2, alkylové skupiny s 1 až 6 atomy uhlíku, alkenylové skupiny s 2 až 6 atomy uhlíku, alkynylové skupiny s 2 až 6 atomy uhlíku, nebo COORb, kde substituent Rb je alkylová skupina s 1 až 6 atomy uhlíku, alkenylová skupina s 2 až 6 atomy uhlíku, alkynylová skupina s 2 až 6 atomy uhlíku.
V dalším provedení, substituent R4 je H, COOH nebo alkylová skupina s 1 až 6 atomy uhlíku.
V dalším provedení, substituent R4 je H, COOH, methyl nebo ethyl.
V dalším provedení, substituent r4 je methyl nebo ethyl
v dalším provedení, substituent R4 je COOH.
v dalším provedení, substituent r4 je H.
V dalším provedení, substituent R3 je H nebo methyl a substituent R4 je H.
V dalším provedení, substituenty R4 a R3 jsou H.
• · · · · · • · « ·· · ” ’ ' Σ • » <·· · · · · · · · · · ····« ·· · ·· ··*
- 8 V dalším provedení jsou sloučeniny podle předloženého vynálezu znázorněny vzorcem (Ia)
(la) a její farmaceuticky přijatelné soli, kde každé X, R3 a R4 jsou definovány výše.
Odbornou veřejností bude zejména oceněno, že sloučeniny vzorce (I) a (Ia) obsahují alespoň dvě chirální centra, která jsou označena hvězdičkou (*) v obecném vzorci (I) a (Ia). To znamená, že sloučeniny vzorce (I) a (Ia) existují ve formě dvou různých optických izomerů (tzn. (+) nebo (-) enantiomery nebo β-L a β-D) . Všechny tyto enantiomery a jejich směsi, včetně racemátu, jsou zahrnuty do rozsahu předloženého vynálezu.
V souladu s předloženým vynálezem jsou popisovány sloučeniny se zlepšenými farmakokinetickými vlastnostmi.
Podle prvého provedení předloženého vynálezu jsou zde popisovány sloučeniny se zlepšenou biologickou dostupností.
Podle dalšího provedení předloženého vynálezu je zde popisován způsob ošetření virové infekce subjektu zahrnující
- 9 podáni, při potřebě takového ošetření, terapeuticky účinného množství sloučeniny vzorce I nebo její farmaceuticky přijatelné soli.
Podle dalšího provedení předloženého vynálezu je zde popisován způsob ošetření infekcí subjektu způsobených retrovirem zahrnující podání, při potřebě takového ošetření, terapeuticky účinného množství sloučeniny vzorce I nebo její farmaceuticky přijatelné soli.
Podle dalšího provedení předloženého vynálezu je zde popisován způsob ošetření subjektu infikovaného virem HIV zahrnující podání, při potřebě takového ošetření, terapeuticky účinného množství sloučeniny vzorce I nebo její farmaceuticky přijatelné soli.
Podle dalšího provedení předloženého vynálezu je zde popisován způsob ošetření subjektu infikovaného virem HBV zahrnující podání, při potřebě takového ošetření, terapeuticky účinného množství sloučeniny vzorce I nebo její farmaceuticky přijatelné soli.
Sloučeniny podle předloženého vynálezu zahrnují:
Sloučeninu A cis 2-hydroxymethyl-4-(2'-amino-6'cyklopropylamino-purin-9'-yl)-1,3-dioxolan
Sloučeninu B cis 2-hydroxymethyl-4-(2'-amino-6'cyklobutylamino-purin-9'-yl)-1,3-dioxolan
Sloučeninu C cis 2-hydroxymethyl-4-(2'-amino-6'-[1karboxylová kyselina-cyklopropylamino]-purin-9'-yl)-1,3dioxolan
V dalším provedení, sloučeniny vynálezu zahrnují:
Sloučeninu A(-) (-)-(2R,4R)-2-hydroxymethyl-4-(2'-amino-6'cyklopropylamino-purin-9'-yl)-1,3-dioxolan
Sloučeninu B(-) (-)-(2R,4R)-2-hydroxymethyl-4-(2'-amino-6'cyklobutylamino-purin-9'-yl)-1,3-dioxolan
Sloučeninu C(-) (-)-(2R,4R)-2-hydroxymethyl-4-(2'-amino-6'[1-karboxylová kyselina-cyklopropylamino]-purin-9'-yl)-1,3dioxolan
V rámci jednoho provedeni je sloučenina podle předloženého vynálezu ve formě (+)enantiomeru a alespoň z 95% bez odpovídajícího (-)enantiomeru.
• · ··· · ····
V rámci jednoho provedení je sloučenina podle předloženého vynálezu ve formě (+)enantiomeru a alespoň z 97% bez odpovídajícího (-)enantiomeru.
V rámci jednoho provedení je sloučenina podle předloženého vynálezu ve formě (+)enantiomeru a alespoň z 99% bez odpovídajícího (-)enantiomeru.
V rámci jednoho provedení je sloučenina podle předloženého vynálezu ve formě (-)enantiomeru a alespoň z 95% bez odpovídajícího (+)enantiomeru.
V rámci jednoho provedení je sloučenina podle předloženého vynálezu ve formě (-)enantiomeru a alespoň z 97% bez odpovídajícího (+)enantiomeru.
V rámci jednoho provedení je sloučenina podle předloženého vynálezu ve formě (-)enantiomeru a alespoň z 99% bez odpovídajícího (+)enantiomeru.
V rámci jednoho provedení je sloučenina podle předloženého vynálezu sloučenina A.
V rámci jednoho provedení je sloučenina podle předloženého vynálezu sloučenina A(-).
Předložený vynález také popisuje farmaceuticky přijatelné soli. Termínem farmaceuticky přijatelné soli sloučenin obecného vzorce (I) a (Ia) jsou míněny ty soli, které jsou odvozeny od farmaceuticky přijatelných anorganických a organických kyselin a bází. Příklady vhodných kyselin zahrnují chlorovodíkovou, bromovodíkovou, sírovou, φ· ···· ····
- 13 dusičnou, chloristou, fumarovou, maleinovou, fosforečnou, glykolovou, mléčnou, salicylovou, sukcinovou, toluen-psulfonovou, vinnou, octovou, citrónovou, methansulfonovou, mravenčí, benzoovou, malonovou, naftalen-2-sulfonovou a benzensulfonovou kyselinu. Další kyseliny, např. kyselina oxalová, jež není farmaceuticky přijatelná, může být použitelná jako meziprodukt při přípravě sloučenin podle předloženého vynálezu a jejich farmaceuticky přijatelných adičních solí s kyselinou.
Soli odvozené od příslušných bází zahrnují soli alkalických kovů(např. sodík), kovů alkalických zemin (např. hořčík), amonnné a NR4+(kde substituent R je alkylová skupina s 1 až 4 atomy uhlíku).
Níže uvedené odkazy na sloučeniny podle vynálezu zahrnují sloučeniny obecného vzorce (I) a (Ia) a jejich farmaceuticky přijatelné soli.
Pokud není definováno jinak, mají všechny technické a vědecké termíny, které jsou zde používány, stejný význam jako běžně používané termíny. Veškeré publikace, přihlášky vynálezu, patenty a dalších odkazy jsou zde pro úplnost citovány jako odkaz. V případě nesrovnalostí bude předložený podrobný popis, včetně definicí, směrodatný. Navíc látky, způsoby a příklady jsou zde pro ilustraci a nemají nikterak omezovat rozsah vynálezu.
Termín „alkylová skupina,,, jak je používán zde, se vztahuje na nesubstituovaný nebo substituovaný (halogenem, nitro skupinou, CONH2, COOH, alkylovou skupinou s 1 až 6 atomy uhlíku navázanou na atom kyslíku, alkenylovou skupinou ···· • · · ·
• 9 · · ♦ • · · · * • · · · · · ««·· i *
- 14 s 2 až 6 atomy uhlíku navázanou na atom kyslíku, alkynylovou skupinou s 2 až 6 atomy uhlíku navázanou na atom kyslíku, hydroxylem, amino skupinou nebo COOQ, kde Q je alkylová skupina s 1 až 6 atomy uhlíku, alkenylová skupina s 2 až 6 atomy uhlíku, alkynylová skupina s 2 až 6 atomy uhlíku) rozvětvený, nerozvětvený nebo cyklický uhlovodíkový řetězec(např. izopropylová, ethylová, fluorhexylová nebo cyklopropylová skupina). Termín alkylová skupina se také vztahuje na alkylové skupiny, ve kterých jeden nebo více atomů vodíku je nahrazen halogenem, výhodněji je halogen fluor (např. CF3- nebo CF3CH2-) .
Termíny alkenylová skupina a alkynylová skupina, jak je používán zde, se vztahuje na alkylovou skupinu obsahující alespoň jednu nenasycenou skupinu(např. allyl).
Termín skupina chránící hydroxy skupinu je velice dobře znám v oblasti organické chemie. Příklady takových skupiny lze nalézt např. v knize T. Greene, Protective Groups in Organic Synthesis, (John Wiley & Sons, 1981) . Příklady skupin chránících hydroxy skupinu zahrnují, ale není to nikterak limitováno, acetyl-2-thioethylester, pivaloyloxymethylester a izopropyloxykarbonyloxymethylester.
Tam, kde je obsažen atom síry, může být tento atom síry v různých oxidačních stupních, např. S, SO nebo S02. Všechny tyto oxidační stupně jsou v rozsahu předloženého vynálezu.
Termín „halogen,,, jak je používán zde, se vztahuje na fluor, chlor, brom a jod, např. fluor.
4444 •4 44··
4 444» * Σ i Σ : ··.· ’ ·· ·:·
- 15 Odbornou veřejností bude zejména oceněno, že množství sloučeniny podle vynálezu, které je potřené při ošetření, bude různé nejenom v závislosti na jednotlivé vybrané sloučenině, ale i v závislosti na způsobu podání, charakteru onemocnění, které má být ošetřeno, a věku a stavu pacienta, nicméně v konečném důsledku o něm bude rozhodovat lékař nebo veterinář. Ale obecně je výhodné rozpětí dávky od 0,1 do 750 mg/kg tělesné váhy denně, výhodně v rozmezí 0,5 až 60 mg/kg denně, nejvýhodněji v rozmezí 1 až 20 mg/kg denně.
Požadovaná dávka může být standardně obsažena v v jednorázové dávce nebo jako dělená dávka a podávána v příslušných intervalech, např. dvě, tři, čtyři nebo více dávek denně.
Sloučenina je standardně aplikována v jednotkové dávkovači formě; např. v množství 10 až 1500 mg, lépe 20 až 1000 mg, nejlépe 50 až 700 mg aktivní složky na jednotkovou dávkovači formu.
V ideálním případě by aktivní složka měla být aplikována k dosažení maxima koncentrace aktivní sloučeniny v plazmě, které se pohybuje okolo 1 až 75μΜ, výhodně 2 až 50 μΜ, nejvýhodněji 3 až 30 μΜ. Tuto koncentraci lze dosáhnout např. intravenózní injekcí 0,1 až 5% roztoku aktivní složky, případně ve fyziologickém roztoku, nebo perorální aplikací jako bolus obsahující okolo 1 až 500 mg aktivní složky. Požadované hladiny v krvi lze udržovat kontinuální infuzí 0,01 až 5,0 mg/kg za hodinu nebo intermitentní infuzí obsahující 0,4 až 15 mg/kg aktivní složky.
9 9 9 9 9 9 • 9 • 9 9 9 99 · 9 9 9 99 9 9
• 9 • 9 · • •
9 9 • 9 9 9 • 9 9
φ 9 9 9 9 • 9
• 99 9 • 9 • 9 9 9
Je také možné pro účely terapie aplikovat sloučeninu podle vynálezu ve formě surové látky, nicméně pro aplikaci je aktivní složka preferována ve formě farmaceutického přípravku. Proto předložený vynález dále popisuje farmaceutický přípravek obsahující sloučeninu vzorce (I) nebo (Ia) nebo její farmaceuticky přijatelnou sůl společně s jedním nebo více farmaceuticky přijatelnými nosiči a případně s dalšími terapeutickými a/nebo profylaktickými složkami. Nosič (e) musí být „přijatelný,, ve smyslu slučitelnosti s dalšími složkami přípravku a pro jeho příjemce nesmí být škodlivý.
Farmaceutické přípravky zahrnují formy vhodné pro perorální, rektální, nazální, místní(včetně bukální a sublingvální), transdermální, vaginální nebo parenterální(včetně intramuskulární, subkutánní a intravenózní) aplikace nebo formy vhodné pro aplikaci inhalací nebo insuflací. Tam, kde je to vhodné, mohou být přípravky standardně ve formě složených dávek a mohou být také připraveny způsoby známými ve farmcii. Všechny způsoby zahrnují krok, ve kterém dochází ke spojení aktivní složky a tekutých nosičů nebo jemně rozpojených pevných nosičů nebo obou, a poté, pokud je· třeba, formování produktu do požadovaného přípravku.
Farmaceutický přípravek vhodné pro perorální aplikaci může být běžně přítomen jako jednotka složená z více částí, např. kapsle, tobolky nebo tablety, každá obsahující předem stanovené množství aktivní složky; jako prášek nebo granule; jako roztok, suspenze nebo emulze. Aktivní složka může být také přítomna jako bolus, lektvar nebo kaše. Tablety a kapsle pro perorální aplikaci mohou obsahovat běžné excipienty, • · ·· ♦···
- 17 např. pojivá, fillery, lubrikanty, bobtnadla nebo detergenty. Tablety mohou být potaženy podle běžně používaných způsobů. Perorální tekuté preparáty mohou být ve formě, např. vodných nebo olejovitých suspenzí, roztoků, emulzí, sirupů nebo léčebných nápojů, nebo mohou být přítomny jako suché produkty vhodné před použitím pro smíchání s vodou nebo jiným vyhovujícím nosičem. Tyto tekuté preparáty mohou obsahovat standardní aditiva, např. suspendační prostředky, emulgátory, bezvodé nosiče(které mohou obsahovat jedlé tuky) nebo konzervační látky.
Sloučeniny podle předloženého vynálezu mohou být připraveny pro parenterální aplikaci (např. injekcí, např. injekce bolusu nebo kontinuální infúze) a mohou být přítomny v jednotkové dávkovači formě jako ampule, předem naplněné injekční stříkačky, infúze o malém objemu nebo obal na více dávek s přidanou konzervační látkou. Přípravky mohou být ve formě suspenzí, roztoků nebo emulzí v olejovitém nebo vodném nosiči a mohou obsahovat agens potřebná při přípravě preparátu, např. suspendační, stabilizační a/nebo dispergační prostředek. Nebo jinak může být aktivní složka pro smíchání s vhodným nosičem před použitím, např. sterilní voda bez pyrogenu ve formě prášku získaného aseptickou izolací sterilní pevné látky nebo lyofilizací z roztoku.
Pro místní aplikaci do epidermu mohou být sloučeniny podle předloženého vynálezu připraveny jako masti, krémy nebo lotion nebo jako transdermální náplasti. Tyto transdermální náplasti mohou obsahovat zesilovače penetrace, např. linalool, karvakrol, thymol, citral, menthol a t-anethol. Masti a krémy mohou být připraveny např. na vodném nebo olejovitém základě s přidaným vhodným agens zajišťujícím
Μ « · · · • ♦ > ♦
• · · ·♦ • · · · ·· • · · ·· ·♦♦·« ♦· ·
- 18 zahuštěni nebo želatinaci. Lotion může být připraven s vodným nebo olej ovitým základem a obecně obsahuje také jeden nebo více emulgátorů, stabilizačních, dispergačních, suspendačních, zhušťovacích nebo barvicích prostředků.
Přípravky, které jsou vhodné pro místní aplikaci na jazyk, zahrnují tablety obsahující aktivní složku přimíchanou s aromatickou látkou, obvykle sacharóza a arabská guma nebo tragant; pastilky obsahující aktivní složku v inertní základě, např. želatina a glycerin nebo sacharóza a arabská guma; ústní vody obsahující aktivní složku ve vhodném tekutém nosiči.
Farmaceutické přípravky vhodné pro rektální aplikaci, kde nosič je pevná látka jsou nejvýhodněji rektální čípky. Vhodné nosiče zahrnují kakaové máslo a jiné látky běžně používané v této technice a rektální čípky mohou být standardně připraveny smícháním aktivní sloučeniny se změkčeným nebo rozpuštěným nosičem(y), poté zchlazeny a formovány.
Přípravky, které jsou vhodné pro vaginální aplikaci, mohou být pesary, tampóny, krémy, gely, pasty, pěny nebo spreje obsahující vedle aktivní složky vhodné nosiče.
Pro intranazální aplikaci sloučenin podle vynálezu mohou být používány tekuté spreje nebo dispergovatelné prášky nebo kapky. Kapky mohou být připraveny s vodným nebo bez vodného základu, který obsahuje jeden nebo více dispergačních, suspendačních prostředků a prostředků pro rozpustnost. Tekuté spreje jsou standardně vytvořeny stlačením plynů.
·· ··· · ·* ·*«·
Pro aplikaci inhalací jsou sloučeniny podle vynálezu standardně podávány rozprašovačem, nebulizátorem nebo v balení vytvořených stlačením plynů nebo jiné konvenční prostředky pro dodání dávky ve formě aerosolového spreje.
Balení vytvořená stlačením plynů mohou obsahovat vhodné propellanty, např. dichlordifluormethan, trichlorfluormethan, dichlortetrafluorethan, oxid uhličitý nebo jiný vhodný plyn.
V případě ztlačeného aerosolu může být dávkovači jednotka stanovena změřením množství, které vyšlo z rozprašovače.
V jiném způsobu, při aplikaci inhalací nebo insuflací, mohou být sloučeniny podle vynálezu ve formě suchého prášku, např. práškový mix sloučeniny a vhodného práškového základu, např. laktóza nebo škrob. Přípravek ve formě prášku může být v jednotkové dávkovači formě, např. kapslích nebo pouzdrách, nebo jako např. želatina nebo jako měkké průhledné balení, ze kterého může být prášek aplikován s pomocí inhalátoru nebo insuflátoru.
Pokud je třeba, mohou být používány výše popsané přípravky upravené na postupného uvolňování aktivní složky.
Sloučeniny vynálezu mohou být používány v kombinaci s dalšími protivirovými agens.
V rámci jednoho provedení zahrnují kombinace podle předloženého vynálezu ty, ve kterých se vyskytují následující provedení buď nezávisle anebo v kombinaci.
« * «·· · • · ·♦· ·
V rámci jednoho provedení mohou být sloučeniny podle předloženého vynálezu používány společně s alespoň jedním dalším antivirovým agens, které je vybráno ze skupiny sestávající z analog nukleosidů, NNRTI nebo inhibitorů proteáz.
V rámci jednoho provedení je analog nukleosidu analog
1,3-oxathiolanu.
V dalším provedení je analog 1,3-oxathiolanu lamivudin, koviracil nebo 2-hydroxymethyl-4-(cytosin-1'-yl)-1,3oxathiolan.
V dalším provedení je analog 1,3-oxathiolanu 2-hydroxymethyl-4-(cytosin-1'-yl)-1,3-oxathiolan.
V dalším provedení je analog 1,3-oxathiolanu
2R-hydroxymethyl-4R-(cytosin-1'-yl)-1,3-oxathiolan.
V dalším provedení je analog 1,3-oxathiolanu
2S-hydroxymethyl-4S-(cytosin-1'-yl)-1,3-oxathiolan.
V rámci jednoho provedení mohou být sloučeniny podle vynálezu používány společně s alespoň jedním dalším protivirovým agens, který je vybrán ze skupiny sestávající z zidovudinu, didanosinu, zalcitabinu, stavudinu, lamivudinu, nevirapinu, delavirdinu, efavirenzu, indinaviru, nelfinaviru, sachinaviru nebo ritonaviru.
V rámci jednoho provedení mohou být sloučeniny podle vynálezu používány společně s alespoň jedním dalším protivirovým agens, který je vybrán ze skupiny sestávající z v · !»♦ # ♦ ···♦
- 21 nevirapinu, efavirenzu, zidovudinu,
stavudinu nebo lamivudinu.
V rámci jednoho provedení mohou být sloučeniny podle vynálezu používány společně s alespoň jedním dalším protivirovým agens, který je vybrán ze skupiny sestávající z efavirenzu, zidovudinu, stavudinu nebo lamivudinu.
V rámci jednoho provedení mohou být sloučeniny podle vynálezu používány společně s alespoň jedním dalším protivirovým agens, který je vybrán ze skupiny sestávající z efavirenzu, zidovudinu nebo lamivudinu.
V rámci jednoho provedení mohou být vynálezu používány společně s efavirenzem, sloučeniny podle zidovudinem nebo lamivudinem.
V rámci jednoho provedení mohou být sloučeniny podle vynálezu používány společně s alespoň jedním dalším protivirovým agens, který je vybrán ze skupiny sestávající z nevirapinu, zidovudinu, stavudinu nebo lamivudinu.
V rámci jednoho provedení mohou být sloučeniny podle vynálezu používány společně s nevirapinem, zidovudinem, stavudinem a lamivudinem.
V rámci jednoho provedení mohou být sloučeniny podle vynálezu používány společně s alespoň jedním dalším protivirovým agens, který je vybrán ze skupiny sestávající z zidovudinu, stavudinu nebo lamivudinu.
«· <*·♦ ···· •4 •· •· •· «« «·
9· •· •· tt· • A
V rámci jednoho provedeni vynálezu používána společně s lamivudinem.
mohou být zidovudinem, sloučeniny stavudinem nebo podle
V rámci jednoho provedení mohou být vynálezu používány společně s zidovudinem.
sloučeniny podle
V rámci jednoho provedení mohou být vynálezu používány společně s stavudinem.
sloučeniny podle
V rámci jednoho provedení mohou být vynálezu používány společně s lamivudinem.
sloučeniny podle
V rámci jednoho provedení mohou být vynálezu používány společně s nevirapinem.
sloučeniny podle
V rámci jednoho provedení mohou být s efavirenzem.
vynálezu používány společně
Výše formách uvedené kombinace farmaceutických obsahují výše přípravky s farmaceuticky přijatelným nosičem, a provedení vynálezu.
Jednotlivé složky buď postupně farmaceutických aplikovány sloučených sloučeniny podle mohou být standardně používány ve přípravků, definované tidíž farmaceutické kombinace společně další proto zahrnují takových kombinací mohou nebo najednou v oddělených přípravcích.
být nebo
Pokud je sloučenina (I) a (Ia) nebo jejich farmaceuticky přijatelné soli používány v kombinaci s druhým terapeutickým agens, který je aktivní proti stejnému viru, bude dávka každé ···· • · · ···· •· •·
W ·· •· ··
jednotlivé sloučeniny buď stejná anebo rozdílná od té, která by byla používána, pokud by byla sloučenina podávána samotná. Odborná veřejnost snadno stanoví příslušnou míru dávek.
Poměr mezi sloučeninami podle předloženého vynálezu a druhým terapeutickým agens bude odbornou veřejností velice snadno stanoven. Například lze použít sloučeniny podle vynálezu a druhý terapeutický agens v poměru 1:1 až 1:50.
V dalším provedení lze použít sloučeniny podle vynálezu a druhý terapeutický agens v poměru 1:1 až 1:30. V dalším provedení lze použít sloučeniny podle vynálezu a druhý terapeutický agens v poměru 1:1 až 1:20. V dalším provedení lze použít sloučeniny podle vynálezu a druhý terapeutický agens v poměru 1:1 až 1:15. V dalším provedení lze použít sloučeniny podle vynálezu a druhý terapeutický agens v poměru 1:1 až 1:10. V dalším provedení lze použít sloučeniny podle vynálezu a druhý terapeutický agens v poměru 1:1 až 1:5.
V dalším provedení lze použít sloučeniny podle vynálezu a druhý terapeutický agens v poměru 1:1 až 1:3. Pokud je přidán další terapeutický agens, bude poměr upraven podobným způsobem.
Sloučeniny podle předloženého vynálezu mohou být připraveny následovně.
Následující příklady mají ilustrovat různá provedení podle předloženého vynálezu a nemají nikterak limitovat rozsah vynálezu.
• · · · · · »4 · · · ·
- 24 Schéma 1
COOH
COOMe
BzO
COOMe Bz0
a:
a) PTSA. 100°C,nezř.; b) LiOH, MeOH-H2O; c) Pb(OAc)4, MeCN, pyridin;
d) TMSTf, CHaCla, TMS-6-CI-guanin, 80%; e) EtOH, cyclopropyiamin , 80°C; f) NH3, MeOH
Požadovaná sloučenina může být připraveny podle uvedeného schématu:
Krok
2-benzoyloxy-acetaldehyd 1 se nechá reagovat s methyl-(R)-(+)-2,2-dimethyl-l,3-dioxolan-4-karboxylátem 2 za přítomnosti para-toluensulfonové kyseliny (pTSA) za podmínek transketalizace, čímž se získá 2-benzoyloxymethyl1,3-dioxolan-4-karboxylmethylester 3 jako směs cis a trans izomerů v poměru 3:1 pro cis izomer.
Krok b: Methylester karboxylové hydrolyzuje hydroxidem lithným kyseliny 4a a 4b. Směs chromatografií(„flash používá dále odděleně.
kyseliny 3 se selektivně na odpovídající deriváty se chromatography) separuj e a každý zrychlenou izomer se
Krok c : Karboxylová funkční skupina konvertuje na acetoxy olovnatým.
sloučeniny odstupující skupinu reakcí
4a se pak s octanem • · · · • · · ·
- 25 Krok d : (2R)-2-Benzoyloxymethyl-l,3-dioxolan-4-acetoxy 4a se kopuluje se silylovaným 2-amino-6chlorpurinem s použitím katalyzátoru trimethylsilyl-trifluormethylsulfonátu (TMSTf), čímž se získají cis a trans izomery nukleosidových analog 6a a 6b v poměru 1,2:1 pro cis izomer. Směs se separuje zrychlenou chromatografií a každý izomer se dále používá odděleně.
Krok e: (-)-(2R,4R)-2-Benzoyloxymethyl-4-(2'-amino-6'~chlorpurin-9'-yl)-1,3-dioxolan 6a se nechá reagovat s cyklopropylaminem v ethanolu, čímž se získá odpovídající (-)-(2R,4R)-2-benzoyloxymethyl-4-(2'-amino-6'cyklopropylamino-purin-9'-yl)-1,3-dioxolan 7 v dobrém výtěžku.
Krok f : Odstranění benzoylové chránící skupiny se dosáhne reakcí (-)-(2R,4R)-2-benzoyloxymethyl-4-(2'-amino-6'cyklopropylamino-purin-9'-yl)-1,3-dioxolanu 7 s methanolickým amoniakem za vzniku požadovaného produktu (-)-(2R,4R)-2hydroxymethyl-4-(2'-amino-6'-cyklopropylamino-purin-9'-yl)1,3-dioxolanu A v dobrém výtěžku.
Příklady provedení vynálezu
Příklad 1
Methyl-2-(R,S)-benzoyloxymethyl-1,3-dioxolan-4-(R)-karboxylát
PTSA, toluen ,1 h
80-85’0, vakuum
Do roztoku methyl-2,3-0-izopropyliden-D-glycerátu (Fluka: cat #; 59449), (9,76g, 60,9 mmol, 1 ekviv.) a ♦ * MM
4 4 ·· · 4 4 4 4 ·4 4
44«444
4 4444 4444 · «44444
44444 44 4 44444
- 26 benzoyloxyacetaldehydu (lOg, 60,9 mmol, 1 ekviv.) v toluenu (20 ml) při teplotě 80°C, byla přidána p-toluensulfonová kyselina (460 mg, 2,4 mmol, 4 mol %) . Reakční baňka byla ponechána ve vakuu po dobu 1 hodiny a během této doby byl destilát spojen (80-85°C). Zbytek pak byl ochlazen na pokojovou teplotu a čištěn chromatografií na sloupci silikagelu v systému hexanů a ethylacetátu, čímž bylo získáno
13,2 g (81%) požadované sloučeniny jako směsi cis a trans izomerů v poměru 3:1.
Cis izomer: ^-NMR (CDC13) : δ (ppm) : 3,75 (s, 3H, CH3) ; 4,15 (dd, 1H, C5-CH), 4,30 (dd, 1H, C5-CH) ; 4,5 (m, 2H, CH2-O-COC6H5) ; 4,7 (m, 1H, C4-CH) ; 5,4 (t, 1H, C2-CH) ; 7,45-8,1 (m, 5H, Ar-CH).
Trans izomer:
XH-NMR (CDC13): δ (ppm) : 3,8 (s, 3H, CH3) ; 4,1 (dd, 1H, C5CH); 4,35 (dd, 1H, C5-CH) ; 4,45 (m, 2H, CH2-O-CO-C6H5) ; 4,75 (m, 1H, C4-CH); 5,5 (t, 1H, C2-CH); (m, 5H, Ar-CH).
Příklad 2 (2R,4R)-2-benzoyloxymethyl-l,3-dioxolan-4-karboxylová kyselina.
(2S,4R)-2-benzoyloxymethyl-l,3-dioxolan-4-karboxylová kyselina.
Do roztoku methyl-2-(R,S)-benzoyloxymethyl-1,3-dioxolan4-(R)-karboxylátu, (411 g, 1,54 mmol, 1 ekviv., směs cis a trans izomerů v poměru 2:1) ve směsi THF a vody v poměru 1:1 • 9 byl po částech v průběhu 30 minut přidáván hydroxid lithný (64,8 g, 1,54 mol, 1 ekviv.) takovým způsobem, aby teplota v reakční baňce byla pod 30°C. Po 90 minutách bylo ve vakuu odstraněno THF a vodný roztok byl okyselen na pH 2,5-3,2 pomalým přidání 30% kyseliny sírové. Výsledný roztok byl extrahován dichlormethanem(4x400 ml). Spojené organické fáze byly promývány solankou, sušeny síranem sodným a koncentrovány za vzniku 380 g tmavého oleje. Izomery byly odděleny chromatografií na sloupci silikagelu v systému 2% kyseliny octové v dichlormethanu. Bylo získáno 220g cis izomeru (56,5%) a 116g trans izomeru (30%). Jednotlivé izomery byly v dalším kroku používány odděleně.
Cis izomer:
(2R,4R)-2-benzoyloxymethyl-l,3-dioxolan-4-karboxylová kyselina.
1H-NMR (CDC13) : δ (ppm) : 4,2 (t, 1H, C5-H) ; 4,4 (m, 1H) ; 4,5 (m, 1H); 4,7 (m, (t, 1H, C2-CH) ; 7,45-8,1 (m, 5H, Ar-CH); 7,2-8,0 (bs, 1H, COOH).
Trans izomer:
(2S,4R)-2-benzoyloxymethyl-l,3-dioxolan-4-karboxylová kyselina.
XH-NMR (CDCI3) : δ (ppm) : 4,15 (dd, 1H, C5-H); 4,4 (t, 1H, C5H); 4,45 (m, 2H, CH2-OCOC6H5) ; 4,8 (dd, 1H, C4-CH) ; 5,6 (t, 1H, C2-CH); 7,45-8,1 (m, 5H, Ar-CH); 8,3-8,8 (bs, 1H, COOH).
Přiklad 3 (2R)-2-benzoyloxymethyl-4-(R,S)-acetoxy-1,3-dioxolan
BzO
OH
1. Pb(OAc)4, CH3CN, Py
BzO
18h, pokojová teplota
,OAc
Do roztoku (2R, 4R)-2-benzoyloxymethyl-l,3-dioxolan-4karboxylové kyseliny, (130g, 0,515 mol, 1 ekviv.) a pyridinu (60 ml, 0,741 mol, 1,44 ekviv.) v acetonitrilu při teplotě 4°C byl v průběhu 20 minut přidáván octan olovičitý (95%, 300g, 0,678 mol, 1,25 ekviv.). Reakční směs byla míchána po dobu 18 hodin při pokojové teplotě. Anorganické látky byly odstraněny filtrací, filtrát byl nalit do nasyceného roztoku hydrogenuhličitanu sodného (2 1) , poté byl přidán pevný hydrogenuhličitan sodný (pH = 7-8). Organická fáze byla oddělena a vodná fáze byla extrahována ethylacetátem (3X400 ml) . Spojené organické fáze byly koncentrovány a čištěny chromatografií na sloupci silikagelu v systému hexanů a ethylacetátu. Bylo získáno 93,5 g (68%) požadované sloučeniny jako směsi cis a trans izomerů v poměru 2:1. Směs byla používána v následujícím kroku.
Cis a trans izomery:
1H-NMR (CDCI3) : δ (ppm) : 2,0,2,15 (s, 3H, CH3; 4,05-4,45 (m,
4H, CH); 5, 45,5, 55 (t, 1H, C2-CH) ; 6,4,6,45 (dd, 1H, C4-CH) ; 7,45-8,1 (m, 5H, Ar-CH);
Přiklad 4 (2R,4R) a (2R,4S)-2-benzoyloxymethyl-4-(2-amino-6-chlorpurin-9'-yl)-1,3-dioxolan
Cl Cl
2-Amino-6-chlor-purin (4,15 g, 1,3 ekviv.) v 50 ml hexamethyldisilazanu (HMDS) a 100 mg síranu amonného bylo
zahříváno při refluxu po dobu 3 hodin, po kterých byl čirý roztok ve vakuu odpařen do sucha. Zbytek byl rozpuštěn ve 100 ml bezvodého 1,2-dichlorethanu. (2R)-2-benzoyloxymethyl-4acetoxy-1,3-dioxolan (5g) byl sušen koevaporací s benzenem (2x30ml) a rozpuštěn ve 100 ml bezvodého 1,2-dichlorethanu. Roztok byl zaveden do reakční baňky obsahující roztok silylovaného 2-amino-6-chlor-purinu. Směs byla na 15 minut vložena do olejové lázně předem vyhřáté na teplotu 60°C, poté byl přidán trimethylsilyltriflát (TMS-Tf, 3,8 ml, 1, 1 ekviv.). Směs byla zahřívána při refluxu pod dusíkem po dobu 3 hodin. Roztok zhnědl. Byla provedena TLC v sytému hex:EtOAc (7:3) pro cukr a hex:EtOAc (1:4) pro produkt, která prokázala úplné proběhnutí reakce, přičemž cukr zcela zreagoval, a přítomnost dvou velice dobře separovaných teček pro cis a trans produkt. Reakční směs byla ochlazena na pokojovou teplotu, nalita do nasyceného roztoku hydrogenuhličitanu sodného(100 ml) a míchána po dobu 10 minut. Organická vrstva byla spojena a vodná vrstva byla dvakrát extrahována methylenchloridem(2x50 ml). Spojený organický roztok byl promýván vodou, solankou a sušen síranem hořečnatým a rozpouštědlo bylo zcela odpařeno. Bylo získáno 7g pěny. Bylo provedeno 1H NMR, které prokázalo čisté cis a trans produkty v poměru 1,2:1 pro cis izomer. Surový produkt byl čištěn na sloupci silikagelu gradientem hexanu a ethylacetátu v poměrech 7:3, 1:1 a 2:3. Bylo získáno 2,5 g trans izomeru (méně polární α-anomer) ve formě pěny, který byl krystalizován v EtOH, a 3g cis izomeru (polárnější β-anomer) ve formě pěny, který byl krystalizován v EtOH a 0,3 g směsi cis a trans (více cis) ve formě pěny. Celkový výtěžek byl 82%.
• ·
[aD] -87,7 (c 0,2565 v CH2C12) 1H-NMR
4, 33 dd, 1H, C5-H) , 4,60-4, 64
OBz) ,5, 17 (b,2H,NH2) ,5,42 (t, ; 1H, C2-H,
1H, Cd-H) . 7.45 (t, 2H, aromát), 7,62
Trans izomer : (+)-(2R,4S)-2-benzoyloxymethyl-4-(2'-amino-6'chlorpurin-9'-yl)-1,3-dioxolan
Rf: 0,40 (hexan-EtOAc 3:7) [ccD] +21,16° (c 0,293 v CH2C12) XH-NMR (CDC13) δ (ppm) 4,45-4,55 (m, 4H; C5-H2, C2-CH2-OBz) ,
5,16 (b, 2H, NH, 5,83 (t, 1H, C2-H, J=3,8Hz), 6,39 (dd, 1H, C4-H) , 7,45 (t, 2H, aromát), 7,62 (t, 1H, aromát), 7,92 (s,
1H, C8--8), 8,10 (d, 2H, aromát).
U.V.:(CH3OH) kmax: 312nm:
Cis izomer: (-)-(2R,4R)-2-benzoyloxymethyl-4-(2'-amino-6'chlorpurin-9'-yl)-1,3-dioxolan
Rf: 0,26 (hexan-EtOAc 3:7) (CDCI3) : δ (ppm): 4,25(m, C5-H a C2-CH2J=3, 5Hz) , 6,33 (dd, (t, 1H, aromát), 7,95 (d, 2H, aromát), 8,05 (s, 1H, Cs-8),.
U.V.:(CH3OH) Xmax: 312nm:
Příklad 5 (-)-(2R,4R)-2-benzoyloxymethyl-4-(2'-amino-6'cyklopropylamino-purin-9'-yl)-1,3-dioxolan
Do roztoku (-)-(2R,4R)-2-benzoyloxymethyl-4-(2'amino-6'chlor-purin-9'-yl)-1,3-dioxolanu (600 mg) v ethanolu (30 ml) byl přidán cyklopropylamin (2 mol, 18 ekviv. ) . Směs byla • · · · * · • · · ·
jemně zahřívána při refluxu (80-85°C) po dobu 18 h a
ochlazena na pokojovou teplotu. Rozpouštědlo bylo ve vakuu
zcela odpařeno. Zbytek byl rozpuštěn ve 100 ml
methylenchloridu, promýván nasyceným roztokem NaHCO3, vodou, solankou a sušen síranem horečnatým. Rozpouštědlo bylo odstraněno ve vakuu a zbytek byl čištěn chromatografií na sloupci silikagelu v systému EtOAc a MeOH. Byl získán požadovaný produkt ve formě pěny v 80% výtěžku(506 mg).
Rf: 0, 26 (CH2Cl2:MeOH (95:5)) [aD] -67,7° (c 0,2565 v CH2C12) 1H-NMR (CDC13) : δ (ppm) : 0,64-0, 68 (m, 2H, CH2 z cyklopropylu), 0,91-0,96 (m, 2H, CH2 z cyklopropylu), 3,06 (b, 1H, CH z cyklopropylu), 4,27-4,30 (dd, 1H, C5-H), 4,544,57 (dd, 1H; C5-H) 4,60 (t, 2H, C2-CH2-OBz), 5,37 (b, 2H, NH2) , 5,42 (t, 1H, C2-H, J=3,5Hz), 6,28 (b, 1H, NH) , 6,35 (dd, 1H, C4-H), 7,45 (t, 2H, aromát), 7,58 (t, 1H, aromát),
7,77 (s, 1H, C8,-8), 8,01 (d, 2H, aromát),
U.V.: (CH3OH) ^^283 a 260nm.
Přiklad 6 (-)-(2R,4R)-2-hydroxymethyl-4-(2'-amino-6'-cyklopropylaminopurin-9'-yl)-1,3-dioxolan (sloučenina A)
Roztok (-)-(2R,4R)-2-benzoyloxymethyl-4-(2'-amino-6'cyklopropylamíno-purin-9'-yl)-1,3-dioxolanu (480 mg) v 30 ml nasyceného methanolického amoniaku byl míchán při pokojové • · • · • · · ·
- 32 teplotě po dobu 18 hodin. Směs byla ve vakuu odpařena do sucha. Zbytek byl rozpuštěn ve 20 ml vody, promýván methylenchloridem(2x10 ml) a lyofilizován, čímž bylo získáno 283 mg bílé pevné látky v 80% výtěžku.
Rf: 0, 26 (CH2C12: MeOH (9:1)) [aD] -35,9° (c 0,334 v MeOH) 1H-NMR (DMSOd_6) : δ (ppm) : 0,55 (m, 2H, CH2 z cyklopropylu) ,
0,95 (m, 2H, ch2 z cyklopropylu), 3,15 (b, 1H, ch2
cyklopropylu), 3,80 (m, 2H, CH2OH) , 4,30 (dd, 1H, C5- H) , 4,55
(dd, 1H; Cs-H), 5,08 (t, 1H, C2-H), 5,17 (b, H, OH), 6,15 (b,
2H, NH2), 6,52 (dd, 1H, C4-H), 7,72 (b, 1H, NH), 8,12 (s, 1H,
C8.-8) .
U.V.: (CH3OH) Xmax: 283 a 260nm.
Příklad 7 (-)-(2R,4R)-2-benzoyloxymethyl-4-(2'-amino-6'cyklobutylaminopurin-9'-yl)-1,3-dioxolan
Do roztoku (-)-(2R,4R)-2-benzoyloxymethyl-4-(2'-amino6’-chlor-purin-9'-yl)-1,3-dioxolanu (250 mg) v ethanolu (25 ml) byl přidán cyklobutylamin (0,17 ml, = 3 ekviv.). Směs byla jemně zahřívána při refluxu (80-85°C) po dobu 18 hodin a ochlazena na pokojovou teplotu. Rozpouštědlo bylo ve vakuu odpařeno do sucha. Zbytek byl rozpuštěn ve 100 ml methylenchloridu, promýván nasyceným roztokem NaHCO3, vodou, solankou a sušen síranem hořečnatým. Rozpouštědlo bylo
- 33 • · ··· ·
9··· odstraněno ve vakuu a zbytek byl čištěn chromatografií na sloupci silikagelu v systému EtOAc a MeOH v poměru 95:5, čímž byl získán požadovaný produkt ve formě pěny v 84% výtěžku(230 mg) .
Rf: 0,31 (CH2Cl2:MeOH 95:5) [aD] -62,5 (c 0,4925 v CH2C12) 1H-NMR (CDC13) : δ (ppm) : 1,74-1,78 (m, 2H, (CH2 z cyklobutylu), 1,95-2,00 (m, 2H, CH2 z cyklobutylu), 2,43-2,45 (m, 2H, CH2 z cyklobutylu), 4,27-4,30 (dd, 1H, C5-H), 4,544,57 (dd, 1H; C5-H) , 4,59 (t, 2H, C2-CH2-OBz) , 4,75 (b, 1H,
CH2 z cyklobutylu) , 5 z 37 (b, 2H , NH,), 5,41 (t, 1H, C2-H,
J=3,6Hz), 6,00 (b, 1H, NH), 6, 35 (dd, 1H, C4-H) , 7, 45 (t, 2H,
aromát), 7,58 (t, 1H, aromát), 7, 75 (s, 1H, C8< - 8) , 8,01 (d,
2H, aromát).
U.V.: (CH3OH) Xmax: 283 a 263 nm.
Příklad 8 (-)-(2R,4R)-2-hydroxymethyl-4-(2'-amino-6'cyklobutylaminopurin-9'-yl)-1,3-dioxolan (sloučenina B)
Roztok (-)-(2R,4R)-2-benzoyloxymethyl-4-(2'-amino-6'cyklobutylamino-purin-9'-yl)-1,3-dioxolanu (214 mg) ve 20 ml nasyceného methanolického amoniaku byl míchán při pokojové teplotě po dobu 18 hodin. Směs byla ve vakuu odpařena do sucha. Zbytek byl rozpuštěn ve 20 ml vody, promýván etherem(2x10 ml) a společně odpařován do sucha s ethanolem.
...j • * · · « ♦ • ·
Bylo získáno 154 mg čistého produktu ve formě pěny v 96 % výtěžku.
Rf: 0,52 (CH2Cl2:MeOH 9:1) [aD] -29, 04 (c 0,396 v MeOH) XH-NMR (DMSOa-6) δ (ppm) : 1,61 (m, 2H, CH2 z cyklobutylu) ,
2,06 (m, 2H, CH2 z cyklobutylu), 2,18 (m, 2H, CH2 z cyklobutylu), 3,58 (m, 2H, CH2OH) , 4,17 (dd, 1H, C5-H), 4,40 (dd, 1H; C5—H), 4,90 (b, 1H, CH z cyklobutylu), 5,01 (t, 1H, C2-H) , 5,42 (b, H, OH), 5,87 (b, 2H, NH2) , 6,19 (dd, 1H, C4H), 7,62 (b, 1H, NH), 7,85 (s, 1H, C8--8).
U.V.: (CH3OH) Xmax: 283 a 260nm.
Přiklad 9 (-)-(2R,4R)-2-hydroxymethyl-4-(2'-amino-6'-{1-karboxylová kyselina-cyklopropylamino}-purin-9'-yl)-1,3-dioxolan (sloučenina C)
COOH
Do roztoku (-)-(2R,4R)-2-benzoyloxymethyl-4-(2'amino-6'chlor-purin-9'-yl)-1,3-dioxolanu (210 mg) v ethanolu (30 ml) byla přidána 1-amino-l-cyklopropankarboxylová kyselina (113 mg = 2 ekviv.) a triethylamin (0,2 ml, 2,5 ekviv.). Směs byla jemně zahřívána při refluxu (80-85°C) po dobu 72 hodin a ochlazena na pokojovou teplotu. Rozpouštědlo bylo ve vakuu odpařeno do sucha. Zbytek byl rozpuštěn v methanolickém amoniaku (20 ml) a míchán přes noc. Rozpouštědlo bylo odstraněno ve vakuu a zbytek byl čištěn chromatografií na • · · · · ·
sloupci silikagelu gradientem systému CH2C12 a MeOH v následujících poměrech 95:5 až 9: 1. Tímto způsobem byl odstraněn vedlejší produkt a požadovaný produkt eluoval v systému CH2Cl2:MeOH (4:1) obsahujícím 0,5% octové kyseliny. Bylo získáno 80 mg čistého produktu (42,5% výtěžek)
Rf: 0,34 (CH2Cl2:MeOH 4:1 obsahující 0,5% AcOH) XH-NMR (DMSOde): δ (ppm) : 1,05 (b, 2H, CH2 z cyklopropylu) ,
1,45 (b, 2H, CH2 z cyklopropylu), 3,58 (b, 2H, CH2-OH), 4,17 (dd, 1H, Cs-H) , 4,41 (dd, 1H; C5-H) , 5,12 (t, 1H, C2-H) , 5,15 (b, 1H, OH), 5,82 (b, 1H, NH) , 6,19 (dd, 1H, C4-H) , 7,71 (b, Η, NH) , 7,86 (s, 1H, C8--8) .
U.V.: (CH3OH) Xmax: 283 a 264 nm.
Příklad 10
Aktivita proti HIV
Testy na protivirovou aktivitu
Aktivita sloučeniny A(-) proti
HIV-Iiub u různých typů buněk al, 1992,1994,1999; Rando
HIV-1 byla testována na podle výše uvedeného postupu((Gu et et al, 1994).
Buňky byly inkubovány po infekcí(MOI) et al, 1995; Salomon dobu 3 hodin virem multiplicitní monocytárních promytím buněk, testy na odstraněn buněk na destičky o
0,005 buněk.
poté na T-buňkách a 0,5 testy
Nenavázaný vir pak byl bylo provedeno naočkování kultivovány po dobu koncentrací testované jamkách. Infikované buňky byly dnů za přítomnosti sériových sloučeniny. Účinnost proti viru HIV-1
5-7 byla stanovena testováním RT aktivity HIV-1 nebo hladiny p24 v supernatantu buněčné kultury. Všechny testy byly prováděny dvojmo. V každém experimentu byly jako kontrolní vzorky zidovudin a/nebo lamivudin.
·9· ·
- 36 Srovnání sloučeniny A(-) a agens se známou aktivitou proti HIV. Sloučenina A(-) měla 0,083 μΜ EC5o proti HIV-1IIIB což je stejná hladina aktivity proti HIV-1 zalcitabin a abacavir, ale menší v buňkách MT-2, jako lamivudin, než zidovudin.
stavudin,
V tabulce sloučeniny A proti HIV-1 proti retrovirům(stanoveno je uvedeno srovnání aktivity a vyzkoušených agens s aktivitou pomocí RT aktivity).
Tabulka 1
Sloučenina EC50 (μΜ)±3.ϋ. u buněk MT-2
Sloučenina A(-) 0,0820+022
DXG 0,06501039
Zidovudin 0,0051+0,0025
Lamivudin 0,061010,028
Stavudin 0,3800+0,26
Zalcitabin 0, 05
Abacavir 0,10
Aktivita sloučeniny A(-) proti HIV-1 u různých typů buněk. Byla testována aktivita sloučeniny A(-) proti HIV-1 u různých typů buněk, včetně buněk lidských periferních monocytů (PBMCs), T-buněk (MT-2 a MT-4) a linie buněk monocytů (U937). Sloučenina A(-) měla u různých typu testovaných buněk submikromolární EC5o proti HIV-lmB. V tabulce 2 je uvedena účinnost sloučeniny A(-) proti HIV-1 u různých typů buněk(stanovena RT aktivitou).
·· ··· · • « · · · ·
Tabulka 2
Buňky EC50 μμΜ)
Sloučenina A (-) Zidovudin Lamivudin
PBMCs (3)* 0.22 0.0027 0.035
MT-2 (4) 0.082 0.0051 0.061
MT-4 (2) 0.14 0.015 0.17
U937 (1) 0.82 0.027 0.014
* čísla v závorkách znamenají počet testů
Mimoto byla aktivita sloučeniny A(-) proti retrovirům také stanovena na různých typech kmenů HIV-1. Výsledky uvedené v tabulce 3 ukazují, že sloučenina A(-) byla aktivní proti nebuněčnému celku vyvoláváj ícímu (HlV-lggsi) , duálním tropním (HIV-lmacBAL) a monocytropickým (HIV-1WRM8488 ) kmenům. V tabulce 3 je uvedena aktivita sloučenina A(-) proti HIV u různých typů kmenů HIV-1 (stanovena pomocí p24)
Tabulka 3
ECM (MM)
Vir Buňky - Sloučenina Á (-) Zidovudin
HIV-1 „BX PBMCs 0.59 0.0017
HIV-1^ PBMCs 4.14 0.043
m/m 0.022 <0.0011
HIV-lWRMme m/m 0.028 <0.0011
Příklad 11
Stanovení toxicity
Buněčná toxicita sloučenin byla testována na různých buňkách absorpcí [3H]-thymidinu. Různé buňky, včetně Molt-4, • ·
• · ··· · · - 38 - • · · ' ·♦ ·
HT1080, DU-145, HepG-2 a HSF, byly nanesny na destičky
v koncentraci l-2xl03 buněk na jamku(destička 0 96 jamkách).
Po 24 hodinové inkubačni době byly do kultivačního média
přidány 10x sériově zředěné sloučeniny (104 až ΙΟ-10 M) a buňky byly dál inkubovány po dobu 72 hodin. Během finální 18 hodinové inkubačni periody byl přidán [3H]-thymidin. Po inkubaci [3H]-thymidinem byly buňky promývány PBS(lx), nechaly se reagovat, pokud byly adhezívní, s trypsinem. Pak se znovu suspendovaly ve vodě(hypotonické lyžování buněk). Buněčný extrakt byl nanesen přímo do Tomtec Harvesteru 96. Za pomoci tohoto přístroje byla extrahovaná DNA adsorbována na filtry, promývána a inkorporovaný [3H]-thymidin byl spočítán. Byla stanovena 50% cytotoxická koncentrace (CC50) srovnáním počtu radioaktivních impulsů za minutu získaných od vzorků obsahujících sloučeniny proti kontrolním vzorkům.
Buněčná toxicita sloučenin byla také testována značováním WST-1 a vyhodnocením proliferace u MT-2, H9, Jurkat, U937, a CBMCs. Etablované buněčné linie byly kultivovány v RPMI médiu na destičkách o 96 jamkách v hustotě 5xl04 buněk na jamku, zatímco CBMCs bylo naneseno v koncentraci 0,5xl06 na jamku. V den nula byla přidána lOx sériově zředěná (10_4-107 M) sloučenina. Ve čtvrtý den byly buňky pasážovány změnou poloviny média obsahujícího příslušně zředěnou sloučeninu. Buněčné aktivity byly testovány v 7 den pomocí činidla WST-1 (Boehringer Mannheim) podle postupu dodavatele. Výsledky jsou uvedeny v tabulce 4.
a a a
a • a
>t-
• φ φφφ · φ ·Φ φ φφ
Příklad 12
Předběžné farmakokinetické studie
Biologická dostupnost sloučenin byla stanovena u dospělých samčích krys, kterým byla dávka aplikována intravenózně do žíly na ocase (5 mg/kg) a perorálně (20 mg/kg). Vzorky plazmy byly odebrány v 2, 5, 15, 30, 60, 90, 120 a 240 minutě po intravenózní dávce a 5, 15, 30, 60, 90, 120, 240 a 360 minut po perorální dávce.
Experimentální postupy
Příprava plazmy
Vzorky krve(l ml) byly odebrány z krysích ocasů, spojeny a vloženy do vakutaineru, který obsahoval EDTA (3 ml) pro iv i po aplikaci. Vzorky plazmy byly homogenizovány centrifugací při 2000 x g po dobu 15 minut při teplotě 4°C.
HPLC analýza
Podmínky analýzy:
Systém HPLC: Dva systémy pump Waters 616 a dva systémy Alliance 2690 vybavené PDA 996,
Sloupec: Phenomenex Luna C18 (2), 5 μπι, 250*4,6 mm,
Gradient : 0-35% rozpouštědla A ve 20 minutách. Rozpouštědlo A obsahovalo acetonitril s 0,01% TFA a rozpouštědlo B obsahovalo ultrafiltrovanou vodu (0,25 μπι filtr) s 0,01% TFA, Průtok: 1,0 ml/min, UV: 200-350 nm
Extrakce na pevné fázi:
Vzorky plazmy (zředěné na 1 ml vodou) byly naneseny na sorbent Abselut Nexus (# 1210-3100) a za nízkého vakua protahovány sloupcem (přibližně 5Hg). Do sorbentu byl přidán jeden mililitr deionizované vody a znovu byly vzorky za vakua • ·
protahovány. Extrakční sloupec byl sušen 1 minutu za vysokého vakua(>10Hg). Do sloupce Abselut Nexus byl přidán jeden mililitr methanolu a eluent byl spojována l-2ml za minutu. Eluent byl odpařen do sucha na přístroji Speed Vac. a vzorky byly rozmíchány ve 120 μΐ H2O; Pro injekci bylo použito 100 μΐ. Výsledky jsou uvedeny v tabulce 5, která uvádí PK a perorální biologickou dostupnost.
Tabulka 5
Slouč. Aplikace (mg/kg) Zvíře Orální BA (%) AUC (· g/ml.hod.) Tl/2 (hod.) Cmax (· g/ml)
DXG orální, 20 krysa 4.43+1.65 0.91+0.34 2.45+0.59 0.27+0.03
iv, 5 krysa ... 5.15 0.62 29.02
DAPD orální, 20 krysa 7.42+138 1.89+0.40 0.77+0.31 1.04+034
Slouč. orální, 20 krysa 45.56+2.78 8.64+0.53 0.64+0.24 4.20+0.65
A (-) iv, 5 krysa ... 4.74 0.37 14.26
Slouč. orální, 20 krysa 13.75 3.08 1.20 1.12
B(-> iv, 5 krysa ... 5.60 0.31 13.26
Slouč. orální, 20 krysa 4.58 0.44 0.31 0.67
C(-) iv, 5 krysa ... 2.40 032 14.53
Příklad 14
Profily rezistence vůči sloučenině A(-)
Rekombinantní varianty HIV-1 byly připraveny zavedením označených mutací do HXB2-D technikou mutageneze řízenou pro vazebné místo, která je popsána (Gu et alr 1992,1994). Virová kultura byla připravena operací buněk MT-4 s infekčními virovými konstrukty DNA. Protivirová aktivita sloučeniny A(-) byla stanovena podle způsobu z příkladu 10. Sloučenina A(-) měla mírně sníženou aktivitu proti variantám HIV-1 majícím K65R a/nebo M184V mutace v reverzní transkriptáze, nicméně zůstavala citlivá na další varianty , které byly rezistentní proti zídovudinu, nenukleosidovým inhibitorům a inhibitorů proteáz. V tabulce 6 je uvedena účinnost sloučeniny A(-) proti rekombinantním variantám HIV-1, které jsou jinak rezistantní proti příslušným léčivům(pomocí RT aktivity).
Vir RT genotyp ECjo (μΜ)
(počet stanovení) Sloučenina A (-) Zidovudin Lamivudin
HXB2-D (2) Wt 0.53 0.023 0.35
K65R (2) 65R 1.03 0.021 4.31
L74V (2) 74V 0.62 0.010 0.51
M184V (2) 184V 0.53 0.02 >40
M184I (2) 1841 0.99 0.009 >40
K65R/M184V (3) 65R, 184V 1.1 0.031 >40
E89G/M184V (2) 89G, 184V 0.51 0.022 >40
JM1(1) 41L, 184V.215Y 1.83 0.027 >40
JM4 (2) 41L, 70R, 215Y, 219Q 0.58 0.27 0.85
NNRTIa,(1) 106A, 181C 0.10 0.0061 0.15
PIKJř(2) 10R, 461,63P, 82T, 84V (genotyp proteázy) 0.20 0.017 0.29
1. EC50 pro nevirapin bylo >10·Μ
1. EC50 pro saquinavir bylo 0.028·Μ. EC50 wt HXB2-D pro saquinavir bylo 0.0015·Μ.
Přiklad 15
Účinnost sloučeniny A(-) proti klinickým izolátům HIV-1
Klinické kmeny byly izolovány z PBMCs subjektů infikovaných HIV-1 pomocí kokultivace s PBMCs od normálních
9· ♦···
- 43 9« ·9««
donorů. Ke stanoveni RT genotypu klinických izolátů HIV-1 byla extrahována provirová DNA z infikovaných CD4* T-buněk nebo PBMCs a kompletování RT kódujících úseků bylo doplněno pomocí PCR podle již publikovaného způsobu (Gu et al 1992). PCR produkt byl čištěn a poté přímo sekvenován pomocí primeru RTS (5'-CCAAAAGTTAAACAATGGC-3'), který je umístněn v části 5' RT kódujícího úseku(nukletid 2603-2621 z HXB2-D koordinát). Protivirová aktivita byla stanovena podle způsobu z příkladu 10. Tabulka 7 ukazuje aktivitu sloučeniny A(-) proti klinickým izolátům HIV-1(stanoveno pomocí RT aktivity).
Tabulka 7
Vir (počet izolátů) EC50 (μΜ)
Sloučenina A (-) Zidovudin Lamivudin
Zidovudin “ ,nl / Lamivudin s (7) 0.15“” (0.032-0.31) <w 0.021 (0.00340.051) 0.23 (0.028-0.69)
Zidovudin s / Lamivudin (3) 0.38 (0.13-0.51) 0.012 (0.00260.019) (5.1->10)
Zidovudin * / Lamivudin s (3) 0.19 (0.066-0.33) 0.83 (0.25-1.74) 0.25 (0.096-0.34)
Zidovudin * / Lamivudin * (2) 0.33 (0.27/0.39) 1.15 (0.49/1.81) 4.1 (3.6/4.6)
a. S znamená senzitivní, R znamená rezistantní.
b. Znamená hodnoty EC50
c. Rozmezí hodnot EC50 izolátů ve stejných skupinách
V tabulce 8 je uvedena aktivita sloučeniny A(-) proti klinickým izolátům v PBMCs(stanoveno pomocí p24), které jsou rezistantní proti příslušným léčivům.
«· ··*· • 4 · • · • · • · ···· 9
99 9999 9 9 9 9 9 9 99 9 9 9 9 9 9
9 9 9 9 9
í· · 9 99
- 44 Tabulka 8
Izoláty ICso (μΜ)
Sloučenina A ...... Lamivudin Zidovudin Abacavir Adefovir Stavudin
105/A(wt) 0.6 0.065 0.0043 <0.03 2.0 0.063
CCR15 (LamivudineRj 0.3 95 0.003 0.22 0.8 0.06
CCR18 (Lamivudin £) 1.3 300 0.0042 1.3 2.1 0.049
CCR19 (Lamivudin *) 1.6 95 0.003 0.58 2.3 0.05
105/F (zidovudin Λ) 0.84 0.17 0.23 0.07 7.0 0.12
★. R znamená rezistentní
Příklad 16
Účinky kombinace léčiv
Účinky kombinace sloučeniny A(-) s agens proti HIV-1 byly stanoveny u MT-2 nebo PBMCs pomocí HIV-1IIIB. Kombinace byly provedeny pomocí destiček s křížovým rozmístněním koncentrace léčiva. Protivirové účinky byly stanoveny sledováním RT aktivity v supernatantech kultury. Data byla analyzována podle způsobu, který popsal Chou a Talalay (Chou and Talalay, 1984) a Prichard (Prichard et al, 1993). Kombinační indexy (Cl) sloučeniny A(-) s dalším agens majícím aktivitu proti HIV-1 byly spočítány pomocí softwaru CalcuSyn (Biosoft, Cambridge, UK) . Teoreticky, hodnota Cl 1 znamená aditivní efekt, hodnota Cl >1 znamená antagonismus a hodnota Cl <1 znamená synergismus. K vypočítání synergistických a antagonistických objemů kombinace léčiv byl používán software • * • · · ·
- 45 MacSynergy II. V tabulce 9 je uveden účinek kombinace sloučeniny A(-) a Zidovudinu u buněk MT-2.
Tabulka 9
Molárni poměr Hodnoty Cl při: MacSynergy (μΜ2%) (95% spolehlivost)
EC5o ED75 ec95
Slouč.A(-): AZT
5 : 1 0,92 0, 96 1,03
10 : 1 0,64 0,70 0,82
20 : 1 0,27 0,37 0, 63
40 : 1 0,20 0,23 0,31
69,3
V tabulce 10 je uveden účinek kombinace sloučeniny A(-) a AZT(zidovudin) u PBMCs.
Tabulka 10
Molárni poměr Hodnoty Cl při: MacSynergy (μΜ2%) (95% spolehlivost)
EC50 ED75 EC95
Slouč.A(-): AZT
1,1 1 0, 84 0,74 0, 61
3,33 : 1 0,49 0,53 0,63
10 1 0,40 0,37 0, 37
30 : 1 0, 40 0,27 0,16
17,03
V tabulce 11 je uveden účinek kombinace sloučeniny A(-) a (Lamivudinu) u buněk MT-2.
• · · ·
Tabulka 11
Molárni poměr Hodnoty Cl při: MacSynergy (μΜ2%) (95% spolehlivost)
ECso ED75 ec95
Slouč.A(-): AZT
1 : 2 0,80 0,85 0,95
1 : 1 0,78 0,74 0,68
2 : 1 0,81 0,78 0,73
4 : 1 0, 91 0,96 1,06
-7,89/-11,6
V tabulce 12 je uveden účinek kombinace sloučeniny A(-) a Stavudinu(d4T) u buněk MT-2.
Tabulka 12
Molárni poměr Hodnoty Cl při: MacSynergy (μΜ2%) (95% spolehlivost)
ec50 ED75 ec95
Slouč.A(-) : AZT
1 : 4 0,61 0,55 0, 68
1 : 2 0,75 0,79 1,07
2 : 1 0, 68 0, 64 0,65
2,81/-5,64
V tabulce 13 je uveden účinek kombinace sloučeniny A(-) a nevirapinu u buněk MT-2.
• · • · · ·
Tabulka 13
Molární poměr Hodnoty Cl při: MacSynergy (μΜ2%) (95% spolehlivost)
ec50 ED75 ec95
Slouč.A(-): AZT
5 : 1 0,81 0,78 0,77
10 : 1 0,68 1,0 1,14
20 : 1 0,86 0,99 1, 04
-0,73
Příklad 17
Analýza cytotoxicity
Buněčná toxicita sloučenin byla stanovena absorpcí [3HJ— thymidinu(de Muys et al., 1999) a značením WST-1. Při experimentech s [3H]-thymidinem byly naneseny Molt-4, HT1080, DU-145, HepG-2 a HSF na destičky v koncentraci l-2xl03 buněk na jamku(destička o 96 jamkách). PBMCs stimulované PHA bylo kultivováno v koncentraci 4xl04 buněk na jamku. Po 24 hodinové preinkubačni době byly přidány testované sloučeniny (10“4 až ΙΟ10 M) a buňky byly inkubovány po dalších 72 hodin. Během finální 18 hodinové inkubační periody byl přidán [3H]-thymidin. Po inkubaci [3H]-thymidinem byly buňky promývány PBS(lx), nechaly se reagovat, pokud byly adhezívní, s trypsinem. Pak se znovu suspendovaly ve vodě(hypotonické lyžování buněk). Buněčný extrakt byl nanesen přímo do přístroje Tomtec Harvester 96. Byla stanovena 50% cytotoxická koncentrace (CC50) srovnáním počtu radioaktivních impulsů za
- 48 • · · · ·
minutu získaných od vzorků obsahujících oproti kontrolním vzorkům(neošetřovaným buňkám).
sloučeniny
Při experimentech se značením WST-1 byly kultivovány buněčné linie v RPMI médiu na destičkách j amkách v hustotě 5xl04 buněk na jamku, zatímco CBMCs bylo naneseno v koncentraci 0,5xl06 sloučeniny (104-107 M) .
na jamku. V den nula byly Životnost buněk byla testována přidány v 7 den pomoci činidla WST-1 (Boehringer Mannheim) podle postupu dodavatele.
Sloučenin A(-) měla o mnoho menší toxicitu různých typů buněk než zidovudin i zalcitabin inkorporací [3H]thymidinu, tak i značením jak při
WST-1. V stanovení tabulce 14 je uvedena cytotoxicita sloučeniny A(-).
Tabulka 14
Sloučenina CCS0 (μΜ) _________________WST-1____________________[aH1TTP
CBMC PBMC Molt4 HT800 U145 HepG2 HSF
Sloučenina A (-) >100 286 >500 >500 >500 >500 414
Zidovudin 74 9 3 5 >10 3 >10
Lamivudin ND >500 >100 >500 >500 >100 400
Zalcitabin 29 35.5 1 2.5 3.5 6.5 2
Příklad 18
Stanovení toxicity na mitochondriálni DNA
Toxicita sloučeniny A(-) na mitochondriálni DNA(mtDNA) byla testována na buňkách HepG2. Buňky byly kultivovány po
- 49 dobu 28 dnů za stálého působeni testované sloučeniny. Buňky byly pasážovány jednou týdně. Nicméně médium s buněčnou kulturou obsahující vlastní koncentraci sloučeniny bylo měněno dvakrát do týdne. Jako kontrolní vzorek byl používán Zalcitabin. Toxicita byla stanovena měřením poměru mtDNA a jaderné DNA(28s rDNA) southernovým hybridizačním testem(de Muys et al., 1999). Sloučenina A(-) nevykazovala signifikantní toxicitu na mtDNA i při koncentraci 100 μΜ, nejvyšší testovaná koncentrace. Tyto testy jsou uvedeny na obrázku 1.
Příklad 19
Farmakokinetické studie sloučenin podle vynálezu
Sloučenina A(-), DAPD a DXG byly aplikovány jako jednorázová dávka buď intravenózně do jugulární žíly v dávce 10 mg/kg nebo perorálně v dávce 20, 125, 500, 1000 nebo 2000 mg/kg. Všechny krysy byly 12 hodin před po dávkou vyhladověny. Pro obě dávky, iv a po, byl používán stejný nosič, tzn. 0,1% karboxymethylcelulóza a 0,1% Tween® 80 v destilované vodě, který byl okyselen na pH 3,15 1N HC1. Vzorky krve byly odebírány v časech, které jsou uvedeny níže perorálních bylo sedm žíly(2, aplikaci
480
5, dávkách. Z celkových 10 krys pro každou časů pro intravenózní
30, min)
15, (5-360 a 1440 min při všech aplikaci, jugulární perorální další časy ve dávky 125-2000 mg/kg. V důsledku
60, 120 v dávce byly pro toho, aplikaci a 240 min) a 20 mg/jg, perorální byly získány kde do pro dva aplikaci pro každý čas čtyři hodnoty, kromě 1440 min, při které byly odebrány vzorky krve z jugulární žíly od všech krys před tím, než byly usmrceny.
4· · ·· · • 4
- 50 Experimentální postupy
Příprava plazmy
Vzorky krve(l ml) byly odebrány z krysích ocasů, spojeny a vloženy do vakutaineru, který obsahoval EDTA (3 ml) pro iv i po aplikaci. Vzorky plazmy byly homogenizovány centrifugací při 2000 x g po dobu 15 minut při teplotě 4°C.
HPLC analýza
Podmínky analýzy:
Systém HPLC: Dva systémy pump Waters 616 a dva systémy Alliance 2690 vybavené PDA 996,
Sloupec: Phenomenex Luna C18 (2), 5 μιη, 250*4,6 mm,
Gradient : 0-35% rozpouštědla A ve 20 minutách. Rozpouštědlo A obsahovalo acetonitril s 0,01% TFA a rozpouštědlo B obsahovalo ultrafiltrovanou vodu (0,25 μιη filtr) s 0,01% TFA, Průtok: 1,0 ml/min, UV: 200-350 nm
Extrakce na pevné fázi:
Vzorky plazmy (zředěné na 1 ml vodou) byly naneseny na sorbent Abselut Nexus (# 1210-3100) a za nízkého vakua protahovány sloupcem (přibližně 5Hg). Do sorbentu byl přidán jeden mililitr deionizované vody a znovu byly vzorky protahovány za vakua. Extrakční sloupec byl sušen 1 minutu za vysokého vakua(>10Hg). Do sloupce Abselut Nexus byl přidán jeden mililitr methanolu a eluent byl spojován l-2ml za minutu. Eluent byl odpařen do sucha na přístroji Speed Vac. a vzorky byly rozmíchány ve 120 μΐ H2O; Pro injekci bylo použito 100 μΐ. Výsledky jsou uvedeny v tabulkách 15 a 16. Níže uvedená tabulka ukazuje doby odebírání krysích vzorků krve při perorální aplikaci.
Čas (min) 5 15 30 60 120 240 360 480 1440
Krysa 1 X X X X
Krysa2 X X X X
Krysa 3 X X X X X
Krysa4 X X X X X
Krysa 5 X X X X
Krysa 6 X X X X
Krysa 7 X X X X
Krysa 8 X X X X
Krysa 9 X X X X
Krysa 10 X X X X
Plazma bylo připraveno přibližně z 1 ml krve odebrané v dané době od příslušné krysy.
Tabulka 15 uvádí PK charakteristiku sloučeniny A(-) po iv(10 mg/kg) nebo po (20 mg/kg) aplikaci dávky kryse
Tabulka 15
Krysa Samčí jedinec Samičí jedinec
Způsob podání iv Po iv PO
Dávka(mg/kg) 10 20 10 20
Množství vzorku 4 4 4 4
Cmax (gg/ml) 19, 2 4,6 22, 9 5,5
Tmax (min) - 23,4 — 22,8
Poločas eliminace(min) 34,2 72,5 36,9 57,1
AUC (gg.min/ml) 304 600 328 602
Biologická dostupnost 99 92
« ♦ · · · · • · · ·
V tabulce 16 jsou uvedeny farmakokinetické charakteristiky DAPD&DXG u samčích a samičích krysích jedinců po iv nebo po aplikaci DAPD
Tabulka 16
Jednotlivé charakteristiky Samičí jedinec Samčí jedinec
Způsob podání iv po iv po
Dávka(mg/kg) 10 20 10 20
Cmax(gg/rnl) 22,1 2,5 16,2 1, 96
Tmax (min) 45 35
Tl/2 31,5 31,3 36,2 34
AUC (pg.min/ml) 357,9 307,2 271,2 196, 5
Cl(ml/min) 6, 6 13,7 9,5 23, 6
Biologická dostupnost 43 36
Níže jsou uvedeny veškeré odkazy citované v této patentové přihlášce:
1. De Muys, J.-M., H. Gourdeau, N. Nguyen-Ba, D. T.
Taylor, P.. S. Ahmed, T. Mansour, C. Locas, N. Richard, M. A. Wainberg, and R. F. Rando. 1999. Antihuman immunodeficiency virus type 1 activity, intracellular metabolism, and pharmacokinetic evaluation of 2'-deoxy- 3 ' -oxa-4'-thiocytidine. Antimicrob. Agents Chemother. 43: 1835-1844.
2. Gu, Z., Q. Gao, M. A. Parniak, and M. A. Wainberg.
1992. Novel mutation in the human immunodeficiency «· ·· ···· virus type 1 reverse transcriptase gene that encodes cross resistance to 2', 3'-dideoxyinosine and 2',3'~ dideoxycytidine. J. Virol. 66: 12-19.
3. Gu, Z. , Q. Gao, H. Fang, H. Salomon, M. A. Parniak,
E. Goldberg, J. Cameron, and M. A. Wainberg. 1994a. Identification of a mutation at codon 65 in the IKKK motif of reverse transcriptase that encode human immunodeficiency virus resistance to 2',3'dideoxycytidine and 2', 3'-dideoxy-3'-thiacytidine.
Antimicrob. Agents Chemother. 38: 275-281.
4. Gu, Z., M. A. Wainberg, N. Nguyen-Ba, L. L'Heureux, J. M. de Muys, T. L. Bowlin, and R. F. Rando. 1999. Mechanism of action and in vitro activity of 1,3dioxolanylpurine nucleoside analogues against seneitive and drug-resistant human immunodeficiency virus type 1 variants. 43: 2376-2382.
5. Chou, T. C., and p Talalay. 1984. Quantitative analysis of dose effect relationships : the combined effects of multiple drugs or enzyme inhibitors. Adv. Enzyme Regul. 22: 27-55.
6. Prichard, Μ. N., L. E. Prichard, and C. Shipman, Jr.
1993. Strategie design and three-dimentional analysis of antiviral drug combinations. Antimicrob. Agents Chenmother. 37: 540-545.
7. Rando, R. , J. Ojwang, A. Elbaggari, G. R. Reyes, R.
Tinder, M. S. McGrath, and Μ. E. Hogan. 1995. Suppression of human immunodeficiency virus type 1 activity in vivo by oligonucleotide which form intramolecular tetrads. J. Biol. Chem. 270: 17541760.
8. Salomon, H., A. Belmonte, K. Nguyen, Z. Gu, M.
Gelfand, and M. A. Wainberg. 1994. Comparison of cord
- 54 blood and peripheral blood mononuclear celis as targets for viral isolation and drug sensitivity studies involving human immunodeficiency virus type
1. J. Clin. Microbiol 32:2000-2002.
0(0 7

Claims (23)

  1. Patentové nároky
    1. Cis nukleosid vzorce (I) (i) a jeho farmaceuticky přijatelné soli, kde index n je 1 nebo 2 substituent R4 je vybrán ze skupiny sestávající z H, COOH, CONH2, OH, SH, NH2, N02, alkylové skupiny s 1 až 6 atomy uhlíku, alkenylové skupiny s 2 až 6 atomy uhlíku, alkynylové skupiny s 2 až 6 atomy uhlíku, halogenu, CORa, kde substituent Ra je alkylová skupina s 1 až 6 atomy uhlíku, alkenylová skupina s 2 až 6 atomy uhlíku, alkynylová skupina s 2 až 6 atomy uhlíku, nebo COORb, kde substituent Rb je alkylová skupina s 1 až 6 atomy uhlíku, alkenylová skupina s 2 až 6 atomy uhlíku nebo alkynylová skupina s 2 až 6 atomy uhlíku;
    substituent R3 je H nebo alkylová skupina s 1 až 6 atomy uhlíku, alkenylová skupina s 2 až 6 atomy uhlíku, alkynylová skupina s 2 až 6 atomy uhlíku;
    X je vybráno ze skupiny sestávající z H, monofosfátu, difosfátu, trifosfátu, karbonylu substituovaného alkylovou skupinou s 1 až 6 atomy uhlíku, alkenylovou skupinou s 2 až 6
    - 56 ·· ·♦·· atomy uhlíku, alkynylovou skupinou s 2 arylovou skupinou s 6 až 10 atomy uhlíku
    O
    II —P-Rc
    I
    Rc až 6 nebo atomy uhlíku, skupiny uhlíku, skupiny skupinu;
    (-)enantiomeru, , kde každý substituent Rc sestávající z H, alkylové alkenylové skupiny s 2 až 6 s 2 až 6 nezávisle vybrán ze až 6 atomy alkynylové a kde atomy uhlíku nebo uvedený nukleosid (+)enantiomeru a je skupiny s 1 atomy uhlíku, skupiny chránící hydroxy je přítomen ve formě jejich směsí, včetně racemátu.
  2. 2. Nukleosid podle nároku 1, vyznačující se tím, že uvedený nukleosid je ve formě (-) a alespoň z 95% bez odpovídající (+) formy.
  3. 3. Nukleosid podle nároku 1, vyznačující se tím, že uvedený nukleosid je ve formě (-) a alespoň z 97% bez odpovídající (+) formy.
  4. 4» Nukleosid podle nároku 1, vyznačující se tím, že uvedený nukleosid je ve formě (-) a alespoň z 99% bez odpovídající (+) formy.
  5. 5. Sloučenina podle nároku 1, kde skupina chránící hydroxy skupinu je vybraná ze skupiny sestávající z acetyl-2thioethylesteru, pivaloyloxymethylesteru nebo isopropyloxycarbonyloxymethylesteru.
    • · • ·
    6. Sloučenina podle nároku 1, kde X je H. 7. Sloučenina podle nároku 1, kde n je 1. 8. Sloučenina podle nároku 7, kde substituent R3 je H nebo
    methyl nebo substituent R4 je H.
  6. 9. Sloučenina podle nároku 7, kde substituent R4 je H; COOH; CONH2; alkylová skupina s 1 až 6 atomy uhlíku, alkenylová skupina s 2 až 6 atomy uhlíku, alkynylová skupina s 2 až 6 atomy uhlíku, nebo COORb, kde substituent Rb alkylová skupina s 1 až 6 atomy uhlíku, alkenylová skupina s 2 až 6 atomy uhlíku, alkynylová skupina s 2 až 6 atomy uhlíku.
  7. 10. Sloučenina podle nároku 7, kde substituent R4 je H, COOH, nebo alkylová skupina s 1 až 6 atomy uhlíku.
    11. Sloučenina podle nároku 7, kde substituent R4 je methyl nebo ethyl. 12. Sloučenina podle nároku 7, kde substituent R4 je COOH. 13. Sloučenina podle nároku 7, kde substituenty R3 a R4 jsou
    H.
  8. 14. Cis-2-hydroxymethyl-4-(2'-amino-6'-cyklopropylaminopurin-9'-yl)-1,3-dioxolan a jeho farmaceuticky přijatelné soli.
    ·· ·♦·· ·· ····
  9. 15. Cís-2-hydroxymethyl-4-(2'-amino-6'-cyklobutylaminopurin-9'-yl)-1,3-dioxolan a její farmaceuticky přijatelné soli.
  10. 16. Cis-2-hydroxymethyl-4-(2'-amino-6'-[1-karboxylová kyselina-cyklopropylamino]-purin-9'-yl)-1,3-dioxolan a její farmaceuticky přijatelné soli.
  11. 17. (-)-(2R,4R)-2-Hydroxymethyl-4-(2'-amino-6'cyclopropylamino-purine-9'-yl)-1,3-dioxolan alespoň z 97% bez odpovídajícího (+)enantiomeru.
  12. 18. (+)-(2S,4S)-2-Hydroxymethyl-4-(2'-amino-6'cyklopropylamino-purin-9'-yl)-1,3-dioxolan alespoň z 97% bez odpovídajícího (-)enantiomeru.
  13. 19. (-)-(2R,4R)-2-Hydroxymethyl-4-(2'-amino-6'cyklobutylamino-purin-9'-yl)-1,3-dioxolan alespoň z 97% bez odpovídajícího (+)enantiomeru.
  14. 20. (+)-(2S,4S)-2-Hydroxymethyl-4-(2'-amino-6'cyklobutylamino-purin-9'-yl)-1,3-dioxolan alespoň z 97% bez odpovídajícího (-)enantiomeru.
  15. 21. (-)-(2R,4R)-2-Hydroxymethyl-4-(2'-amino-6'-[1- karboxylová kyselina-cyklopropylamino]-purin-9'-yl)-1,3dioxolan alespoň z 97% bez odpovídajícího (+)enantiomeru.
  16. 22. (+)-(2S,4S)-2-Hydroxymethyl-4-(2'-amino-6'-[1- karboxylová kyselina-cyklopropylamino]-purin-9'-yl)-1,3dioxolan alespoň z 97% bez odpovídajícího (-)enantiomeru.
    • · · · · · • · · ·
  17. 23. Kombinace účinná při ošetření virových onemocnění, vyznačující se tím, že obsahuje alespoň jednu sloučeninu podle jakéhokoliv nároku 1 až 21 nebo její farmaceuticky přijatelnou sůl a dále obsahující alespoň jeden další terapeutický agens vybraný ze skupiny sestávající z analog nukleosidů; nenukleosidových inhibitorů reverzní transkriptázy(NNRTI); nebo inhibitorů proteáz.
  18. 24. Kombinace podle nároku 23, vyznačující se tím, že analog nukleosidu je vybrán ze skupiny sestávající z zidovudinu, didanosinu, zalcitabinu, stavudinu nebo lamivudinu.
  19. 25. Kombinace podle nároku 23, vyznačující se tím, že nenukleosidový inhibitor reverzní transkriptázy je vybrán ze skupiny sestávající z nevirapinu, delavirdinu nebo efavirenu.
  20. 26. Kombinace podle nároku 23, vyznačující se tím, že inhibitor proteáz je vybrán ze skupiny sestávající z indinaviru, nelfinaviru, saquinaviru nebo ritonaviru.
    27. Sloučenina podle j akéhokoliv nároku 1 až 22 pro použití při lékařské terapii. 28. Sloučenina podle jakéhokoliv nároku 1 až 22 pro použití při ošetření virových infekcí. 29. Sloučenina podle jakéhokoliv nároku 1 až 22 pro použití při ošetření infekce 1 3IV. 30. Sloučenina podle jakéhokoliv nároku 1 až 22 pro použití
    při ošetření infekce HBV.
    ·· ··· · *· ··<·
  21. 31., Použití sloučeniny podle jakéhokoliv nároku 1 až 22 při zpracování léčivého přípravku na ošetření virových onemocnění.
  22. 32. Způsob ošetření virových infekcí, vyznačující se tím, že zahrnuje podání subjektu, při potřebě takového ošetření, terapeuticky účinného množství sloučeniny podle jakéhokoliv z nároků 1 až 22.
    33. Způsob podle virová infekce je nároku infekce 32, virem vyznačuj ící HIV. se tím, ž e 34. Způsob podle nároku 32, vyznačuj ící se tím, ž e virová infekce je infekce virem HBV.
  23. 35. Farmaceutický přípravek, vyznačující se tím, že obsahuje alespoň jednu sloučeninu podle jakéhokoliv z nároků 1 až 22 společně s alespoň jedním farmaceuticky přijatelným nosičem nebo excipientem.
CZ20012352A 1998-12-23 1999-12-22 Analoga nukleosidů s protivirovou aktivitou CZ20012352A3 (cs)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US11379798P 1998-12-23 1998-12-23

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CZ20012352A3 true CZ20012352A3 (cs) 2001-10-17

Family

ID=22351590

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CZ20012352A CZ20012352A3 (cs) 1998-12-23 1999-12-22 Analoga nukleosidů s protivirovou aktivitou

Country Status (27)

Country Link
US (3) US6358963B1 (cs)
EP (1) EP1140937B1 (cs)
JP (1) JP2002533470A (cs)
KR (1) KR100653485B1 (cs)
CN (1) CN1117751C (cs)
AP (1) AP2001002207A0 (cs)
AT (1) ATE254126T1 (cs)
AU (1) AU760875B2 (cs)
BR (1) BR9916849A (cs)
CA (1) CA2355712C (cs)
CZ (1) CZ20012352A3 (cs)
DE (1) DE69912842T2 (cs)
DK (1) DK1140937T3 (cs)
EA (1) EA004767B1 (cs)
ES (1) ES2209532T3 (cs)
HU (1) HUP0104827A3 (cs)
ID (1) ID30477A (cs)
IL (1) IL143867A0 (cs)
MX (1) MXPA01006425A (cs)
NO (1) NO20013163L (cs)
NZ (1) NZ513094A (cs)
OA (1) OA11741A (cs)
PT (1) PT1140937E (cs)
TR (1) TR200102501T2 (cs)
UY (1) UY25878A1 (cs)
WO (1) WO2000039143A2 (cs)
ZA (1) ZA200105702B (cs)

Families Citing this family (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
MXPA01006425A (es) * 1998-12-23 2002-06-04 Iaf Biochem Int Analogos de nucleosido antivirales.
ATE360016T1 (de) * 2000-02-11 2007-05-15 Shire Biochem Inc Ein stereoselektives verfahren zur herstellung von nukleosidanalogen
AU2003261114A1 (en) * 2002-07-03 2004-02-09 Triangle Pharmaceuticals, Inc. Combination therapy with 1,3-dioxolanes and inosine monophosphate dehydrogenase inhibitors
AU2003294212B2 (en) 2002-08-06 2010-01-07 Pharmasset Inc. Processes for preparing 1,3-dioxolane nucleosides
US7706405B2 (en) * 2002-09-12 2010-04-27 Interdigital Technology Corporation System for efficient recovery of Node-B buffered data following MAC layer reset
US7955835B2 (en) 2002-11-18 2011-06-07 Shire Canada Inc. Stereoselective process for the production of dioxolane nucleoside analogues
DE10335061B4 (de) * 2003-07-31 2005-11-17 Wacker-Chemie Gmbh Verfahren zur Herstellung von OH-geschützten [4-(2,6-damino-9H-purin-9-yl)-1,3-dioxolan-2-yl]methanol-Derivaten
CA2554782C (en) * 2004-02-03 2013-08-13 Emory University Methods to manufacture 1,3-dioxolane nucleosides
US7322412B2 (en) * 2004-08-30 2008-01-29 Halliburton Energy Services, Inc. Casing shoes and methods of reverse-circulation cementing of casing
ATE516249T1 (de) * 2008-03-20 2011-07-15 Befesa Salzschlacke Gmbh Hochtonerdehaltiger rohstoff und verfahren zur herstellung
WO2012048455A1 (zh) * 2010-10-12 2012-04-19 武汉大学 一种抗病毒透皮吸收贴片及其制备方法

Family Cites Families (34)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4041037A (en) 1975-06-10 1977-08-09 American Home Products Corporation Antitumor derivatives of periodate-oxidized cytidine
US4000137A (en) 1975-06-10 1976-12-28 American Home Products Corporation Antitumor derivatives of periodate-oxidized nucleosides
JPS5668674A (en) 1979-11-08 1981-06-09 Shionogi & Co Ltd 5-fluorouracil derivative
JPS5738774A (en) 1980-08-19 1982-03-03 Chugai Pharmaceut Co Ltd Uracil derivative and its preparation
US4479942A (en) 1981-08-10 1984-10-30 Fujisawa Pharmaceutical Co., Ltd. Tetrahydrofurnancarboxylic acid derivatives, processes for preparation thereof and pharmaceutical compositions thereof
IL86007A0 (en) * 1987-04-09 1988-09-30 Wellcome Found 6-substituted purine nucleosides,their preparation and pharmaceutical compositions containing them
HU198933B (en) 1987-11-02 1989-12-28 Chinoin Gyogyszer Es Vegyeszet Process for producing new xanthine derivatives and pharmaceutical compositions comprising same as active ingredient
US5270315A (en) 1988-04-11 1993-12-14 Biochem Pharma Inc. 4-(purinyl bases)-substituted-1,3-dioxlanes
US5047407A (en) 1989-02-08 1991-09-10 Iaf Biochem International, Inc. 2-substituted-5-substituted-1,3-oxathiolanes with antiviral properties
US5041449A (en) 1988-04-11 1991-08-20 Iaf Biochem International, Inc. 4-(nucleoside base)-substituted-1,3-dioxolanes useful for treatment of retroviral infections
NZ228645A (en) * 1988-04-11 1991-09-25 Iaf Biochem Int 1,3-dioxolane derivatives substituted in the 5th position by a purine or pyrimidine radical; treatment of viral infections
US4987224A (en) 1988-08-02 1991-01-22 University Of Georgia Research Foundation, Inc. Method of preparation of 2',3'-dideoxynucleosides
DK0674634T3 (da) 1989-02-08 2003-08-04 Iaf Biochem Int Fremgangsmåde til fremstilling af substituerede 1,3-oxathiolaner med antivirale egenskaber
PT95516A (pt) * 1989-10-06 1991-08-14 Wellcome Found Processo para a preparacao de derivados de 2',3'-didesoxi nucleosidos 6-substituidos
US5276151A (en) 1990-02-01 1994-01-04 Emory University Method of synthesis of 1,3-dioxolane nucleosides
US5204466A (en) 1990-02-01 1993-04-20 Emory University Method and compositions for the synthesis of bch-189 and related compounds
US5700937A (en) 1990-02-01 1997-12-23 Emory University Method for the synthesis, compositions and use of 2'-deoxy-5-fluoro-3'-thiacytidine and related compounds
US5914331A (en) 1990-02-01 1999-06-22 Emory University Antiviral activity and resolution of 2-hydroxymethyl-5-(5-fluorocytosin-1-yl)-1,3-oxathiolane
GB9009861D0 (en) 1990-05-02 1990-06-27 Glaxo Group Ltd Chemical compounds
DK0560794T3 (da) 1990-11-13 1996-12-23 Iaf Biochem Int Substituerede 1,3-oxathiolaner med antivirale egenskaber
US5925643A (en) 1990-12-05 1999-07-20 Emory University Enantiomerically pure β-D-dioxolane-nucleosides
US5444063A (en) 1990-12-05 1995-08-22 Emory University Enantiomerically pure β-D-dioxolane nucleosides with selective anti-Hepatitis B virus activity
WO1992010496A1 (en) 1990-12-05 1992-06-25 University Of Georgia Research Foundation, Inc. ENANTIOMERICALLY PURE β-L-(-)-1,3-OXATHIOLANE NUCLEOSIDES
US5179104A (en) 1990-12-05 1993-01-12 University Of Georgia Research Foundation, Inc. Process for the preparation of enantiomerically pure β-D-(-)-dioxolane-nucleosides
IL100965A (en) 1991-02-22 1999-12-31 Univ Emory 2-Hydroxymethyl-5-(5-fluorocytosin-l-yl)-1,3-oxathiolane its resolution and pharmaceutical compositions containing it
WO1992018517A1 (en) 1991-04-17 1992-10-29 Yale University Method of treating or preventing hepatitis b virus
GB9109506D0 (en) 1991-05-02 1991-06-26 Wellcome Found Therapeutic nucleosides
GB9110874D0 (en) 1991-05-20 1991-07-10 Iaf Biochem Int Medicaments
ZA923640B (en) 1991-05-21 1993-02-24 Iaf Biochem Int Processes for the diastereoselective synthesis of nucleosides
GB9200150D0 (en) 1992-01-06 1992-02-26 Wellcome Found Therapeutic nucleosides
US5869461A (en) 1995-03-16 1999-02-09 Yale University Reducing toxicity of L-nucleosides with D-nucleosides
GB9525606D0 (en) * 1995-12-14 1996-02-14 Iaf Biochem Int Method and compositions for the synthesis of dioxolane nucleosides with › - configuration
US5792773A (en) 1996-11-15 1998-08-11 Yale University L-β-dioxolane uridine analog administration for treating Epstein-Barr virus infection
MXPA01006425A (es) * 1998-12-23 2002-06-04 Iaf Biochem Int Analogos de nucleosido antivirales.

Also Published As

Publication number Publication date
CN1117751C (zh) 2003-08-13
OA11741A (en) 2005-05-13
US6358963B1 (en) 2002-03-19
AU1765700A (en) 2000-07-31
EP1140937A2 (en) 2001-10-10
EP1140937B1 (en) 2003-11-12
EA004767B1 (ru) 2004-08-26
US6545001B2 (en) 2003-04-08
JP2002533470A (ja) 2002-10-08
IL143867A0 (en) 2002-04-21
AU760875B2 (en) 2003-05-22
US20040058893A1 (en) 2004-03-25
MXPA01006425A (es) 2002-06-04
ES2209532T3 (es) 2004-06-16
UY25878A1 (es) 2001-08-27
ID30477A (id) 2001-12-13
DK1140937T3 (da) 2004-03-22
WO2000039143A3 (en) 2000-11-02
DE69912842T2 (de) 2004-05-13
KR20020013485A (ko) 2002-02-20
HUP0104827A3 (en) 2002-08-28
AP2001002207A0 (en) 2001-09-30
DE69912842D1 (de) 2003-12-18
KR100653485B1 (ko) 2006-12-04
NZ513094A (en) 2004-05-28
NO20013163D0 (no) 2001-06-22
HUP0104827A2 (en) 2002-06-29
US20010049372A1 (en) 2001-12-06
ATE254126T1 (de) 2003-11-15
EA200100711A1 (ru) 2001-12-24
ZA200105702B (en) 2002-10-11
TR200102501T2 (tr) 2002-01-21
CN1334814A (zh) 2002-02-06
NO20013163L (no) 2001-08-20
CA2355712A1 (en) 2000-07-06
WO2000039143A2 (en) 2000-07-06
CA2355712C (en) 2009-03-17
BR9916849A (pt) 2001-10-30
PT1140937E (pt) 2004-04-30

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EP3980400B1 (en) Peptidomimetics for the treatment of coronavirus and picornavirus infections
KR100331714B1 (ko) 디데옥시뉴클레오티드유사체를이용한바이러스감염의치료방법
JPH07500317A (ja) １，３−オキサチオランヌクレオシド類似体
JPH06506199A (ja) 抗ウイルス性ヌクレオシドコンビネーション
AU627188B2 (en) Pharmaceutical products
CZ20012352A3 (cs) Analoga nukleosidů s protivirovou aktivitou
CN101132795B (zh) 用于hiv治疗的化合物
CN116745292A (zh) 经取代的吡啶并三嗪化合物及其用途
EP0361831B1 (en) Antiviral nucleoside combination
JP4887305B2 (ja) Ｈｉｖの治療に有用な化合物
JP2002538171A (ja) 抗ウイルス剤の医薬的組合せ
JP2008526713A5 (cs)
JPH07508531A (ja) 治療用ヌクレオシド
EP1899352B1 (en) 1- [2&#39; , 3&#39; -dideoxy-3&#39; c- (hydroxymethyl) - beta-d-erythro-pentofuranosyl] cytosine derivatives as hiv inhibitors
WO1988009796A1 (en) Nucleoside analogues
HK1107518B (en) Compounds useful in the treatment of hiv
WO2004113357A2 (en) Nucleoside analog inhibitors of reverse transcriptase