CZ2001289A3

CZ2001289A3 - Isochinoliny jako inhibitory urokinasy

Info

Publication number: CZ2001289A3
Application number: CZ2001289A
Authority: CZ
Inventors: Christopher Gordon Barber; Roger Peter Dickinson; Paul Vincent Fish
Original assignee: Pfizer
Priority date: 1999-07-15
Filing date: 1999-07-15
Publication date: 2001-06-13

Abstract

Řešení popisuje isochinolylguanidinové sloučeniny obecného vzorce I, kde uvedené substituenty mají specifický význam, a jejich soli, jako inhibitory urokinasy.

Description

Oblast techniky

Předkládaný vynález se týká některých·isochinolinů použitelných jako inhibitory urokinasy, zejména isochinolylguanidinů použitelných jako inhibitory urokinasy.

Dosavadní stav techniky

Urokinasa (močový plasminogenový aktivátor neboli uPA; International Union of Biochemistry klasifikační číslo EC.3.4.21.31) je serin-proteasa produkovaná mnoha typy buněk (buňkami hladkého svalu, fibroblasty, endotelovými buňkami, makrofágy a nádorovými buňkami). Předpokládá se, že má klíčovou úlohu při buněčné invazi a při remodelování tkáně. Základním substrátem pro uPA je plasminogen, který je konvertován uPA vázanou na buněčný povrch na serin-proteasu plasmin. Lokálně vysoké koncentrace plasminu umožňují invazi buněk tím, že rozrušují extracelulární mezibuněčnou hmotu.

Mezi významné procesy obsahující buněčnou invazi a remodelování tkáně patří hojení ran, remodelování kosti, angiogenese, invaze nádoru a šíření metastas.

Příznivé účinky inhibitorů urokinasy byly popsány za použiti anti-urokinasových monoklonálnich protilátek a některých jiných známých inhibitorů urokinasy. Například bylo popsáno, že anti-urokinasové monoklonální protilátky blokují invazivitu nádorů in vitro (W. Hollas et al., Cancer Research 51: 3690; A. Meissauer et al., Exp. Cell Res. 192: 453 (1991); nádorové metastasy a invazi in vivo (L. Ossovski, J. Cell Biol. 107: 2437 (1988)); L. Ossowski et al., Cancer Research 51: 274 (1991)), a angiogenesi in vivo (J. A. Jerdan et al., • ·· · · ···· ·· • · · · · · · ··· • · · * · · ·

J. Cell Biol 115(3 Pt 2): 402a (1991). Také bylo popsáno, že Amilorid^<tm>, známý inhibitor urokinasy se slabou účinnosti, inhibuje nádorové metastasy in vivo (J.A. Kellen et al., Anticancer Res. 8: 1373 (1988)) a angiogenesi/tvorbu kapilární sítě in vitro (M.A. Alliegro et al., J. Cell. Biol. 115(3 Pt 2): 402a).

Mezi stavy zejména vhodné pro léčbu inhibitory urokinasy patří chronické kožní vředy (včetně žilních vředů, diabetických vředů a proleženin), které jsou hlavní příčinou morbidity ve starší populaci a které způsobují značné náklady pro zdravotnictví. Chronické kožní vředy jsou charakterizovány nekontrolovanou proteolytickou degradací vedoucí k rozšiřování vředu, ztrátou funkčních molekul matrice (například fibronektinu) a retardací epitelizace a hojení vředu. Mnoho skupin zkoumalo enzymy odpovědné za nadměrnou degradaci v ráně a byla osvětlena úloha aktivátorů plasminogenu (M.C. Stacey et al., Br. J. Surgery 80: 596; M. Palolahti et al., Exp. Dermatol. 2: 29, 1993; A.A. Rogers et al., Wound Repair and Regen, 3: 273, 1995). Také se předpokládá úloha urokinasové aktivity při psoriase (Jensen and Lavker (1996), Cell Growth Diff. 7: 1793-1804; Baker, B.S. and Fry L., (1992), Br. J.

Dermatol. 126(1): 1-9.2; Spiers, E.M. et al., (1994), J.

Invest Dermatol. 102(3): 333-338.3; Grondahl-Hansen J. et al., (1987), J. Invest Dermatol. 88(1) 28-32, Gissler H. et al., (1993), Br. J. Dermatol. 128(6): 612-8; Venning V.A. et al., (1993) Clin. Exp. Dermatol. 18(2): 119-23.

Normální lidská kůže obsahuje nízké hladiny plasminogenových aktivátorů, které jsou přítomny v krevních cévách a které jsou klasifikovány jako tkáňové plasminogenové aktivátory (tPA). Naopak, chronické vředy obsahují vysoké koncentrace urokinasových plasminogenových aktivátorů (uPA),

které jsou přítomné difusně okolo periferie vředu a léze a které jsou snadno detekovatelné v kapalině z rány.

uPA může ovlivňovat hojení ran několika způsoby. Plasmin, produkovaný aktivaci plasminogenu, může narušovat extracelulárni mezibuněčnou hmotu jak nepřímo (aktivací metaloproteas matrice), tak přímo. Bylo prokázáno, že plasmin degraduje několik složek extracelulárni mezibuněčné hmoty, včetně želatiny, fibronektinu, proteinů proteoglykanových jader a hlavního substrátu, fibrinu. Zatímco aktivace metaloproteas matrice (MMP) může být provedena mnoha proteasami zánětlivých buněk (například elastasou a kathepsinem G), uPA/plasminová kaskáda se předpokládá při aktivaci MMP in šitu, což rozšiřuje kapacitu pro degradaci všech složek extracelulárni matrice. Dále, kromě účinku na produkci plasminu bylo také prokázáno, že uPA katalyzuje přímé štěpení fibronektinu za vzniku antiproliferativních peptidů. Proto nadměrná exprese uPA v prostředí rány navozuje nekontrolovanou degradaci matrice a inhibici hojení rány. Inhibitory enzymu mohou proto podporovat hojení chronických ran.

Několik příbuzných enzymů, jako je tPA, která také působí prostřednictvím produkce plasminu, má klíčovou úlohu ve fibrinolytické kaskádě. Proto je významné, aby měl inhibitor adekvátní účinnost a selektivitu pro uPA vzhledem k tPA a plasminu, aby se vyloučila možnost antifibrinolytických vedlejších účinků.

Použitelnost takových účinných a selektivních inhibitorů urokinasy se předpokládá u mnoha invazivních biologických procesů a stavů zprostředkovaných urokinasou. Mezi tyto stavy a procesy patří, například, hojení ran, stavy související s

• 0

0 0 0 · 0 0 0 0 • 9 · 0 · · · •00 0 000 0 0 • 0000 00 0

00000 00 00 00 000 angiogenesí, jako je retinopatie, destrukce kosti, implantace embrya v děloze, infiltrace zánětlivých buněk do místa zánětu, ovulace, spermatogenese, psoriasa, remodelování tkáně při hojení ran a diferenciaci orgánů, fibrosa, lokální invaze nádorů do okolí, metastatické šíření nádorových buněk z primárních a sekundárních míst a destrukce tkáně při arthritidě.

Bylo popsáno, že různé aromatické amidiny inhibují uPA (J.D. Geratz, M.C.-F. Cheng, Thromb. Diathes. Haemorrh. (Stuttg.), 33: 230, 1975; J. Stiirzebecher, F. Markwardt, Pharmazie, 33, 599, 1978; J.D. Geratz et al., Thromb. Res.,

24: 73, 1981). Sloučeniny popsané v uvedených publikacích jsou obvykle relativně slabě účinné a/nebo neselektivní pro uPA vzhledem k jiným příbuzným serin-proteasám. EP 0 568 289 A2 popisuje sérii benzo[b]thiofen-2-karboxamidinů s významně vyšší účinností a selektivitou vzhledem k tPA a plasminu (viz též M.J. Towle et al., Cancer Res., 53: 2553, 1993; A.J. Bridges et al., Bioorg. Med. Chem., 1, 403, 1993).

Existuje několik prací popisujících guanidinové deriváty TM jako inhibitory uPA. Amilorid (viz dále) je slabý, ale selektivní inhibitor uPA (J.D. Vassalli. D. Bělin. FEBS Letters, 214, 187, 1987) a bylo popsáno, že různé substituované fenylguanidiny mají stejnou účinnost (H. Yang et al., J. Med. Chem., 33, 2956, 1990).

Amiloride • · · ·

Sloučeniny podle předkládaného vynálezu jsou účinné reversibilní kompetitivni inhibitory enzymové aktivity urokinasy, se selektivitou pro urokinasu vzhledem k některým jiným významným proteasám, včetně včetně fibrinolytických enzymů tkáňového aktivátoru plasminogenu (tPA) a plasminu.

Selektivita sloučenin podle předkládaného vynálezu pro inhibici urokinasy vzhledem k inhibici jiných proteas, jako je tPA a plasmin, a skutečnost, že inhibice je reversibilní, brání jejich trombogennímu potenciálu.

Podstata vynálezu

Předkládaný vynález poskytuje isochinolylguanidinové sloučeniny obecného vzorce (I):

W a jejich farmaceuticky přijatelné soli, kde:

G znamená N=C(NH)2nebo NHC(=NH)NH2;

R¹ znamená H nebo halogen;

X znamená CO, CH2 nebo SO2;

R² znamená H, aryl, heteroaryl, C3-7cykloalkyl nebo Ci-6alkyl, kde C3-7cykloalkyl a Ci-6alkyl jsou volitelně substituovaný jedním nebo více substituenty nezávisle vybranými ze skupiny • · ·· ♦··· • · · · · · · ···· ·»»· · • ···*··· ···· ♦ ♦ «9 ·· ·«· zahrnující následující skupiny: halogen, aryl, heterocyklus, C3-7cykloalkyl, Cs-7cykloalkenyl, OH, Ci-6alkoxy, O-Het¹, Ci-₃alkyl, CO₂R⁷ a NR⁴R⁵;

X znamená arylen, Ci-6alkylen volitelně substituovaný jednou nebo více R⁶ skupinami nebo cyklo (C4-7) alkylen volitelně substituovaný R , kde cyklo(C4-7)alkylenový kruh může volitelně obsahovat hetero skupinu vybranou z O, S(0)_p nebo NR⁷; nebo mohou R² a X¹ dohromady s atomem N, na který jsou navázány, tvořit azetidinový, pyrrolidinový, piperidinový nebo homopiperidinový kruh;

R³ znamená CO2R⁷, CH2OH, CONR⁸R⁹ nebo CH₂NR⁸R⁹;

nebo, když je X¹ vybrán nezávisle na R² a znamená methylen volitelně substituovaný jednou nebo více R⁶ skupinami, nebo znamená 1,1-cyklo (C4-7) alkylen volitelně obsahující hetero skupinu vybranou z 0, S (0) _p nebo NR⁷, nebo NR⁷ a volitelně substituovaný R⁶, tak mohou tvořit R² a R³ společně s N a X¹skupinou, na které jsou navázány, skupinu vzorce (IA) nebo (IB):

I, í.

X¹-NR* (IA) (IB) kde X² znamená ethylen, n-propylen nebo n-butylen;

R⁴ a R⁵ jsou každý nezávisle H, aryl nebo Ci-6alkyl volitelně substituovaný arylem;

R⁶ znamená halogen, OH, Ci-6alkoxy, Ci-6alkylthio, C3-7cykloalkyl, SH, aryl, CO₂R⁷, CONHR⁸ nebo Ci-6alkyl volitelně substituovaný • ·

9·#» « * · • · ♦ · · 9··· · . · 9 9··#«·» / ··· ···« ·« ·> _{99 ttt} arylem, Ci-₆alkoxy, CO₂H, OH, CONR⁸R⁹ nebo NR⁸R⁹;

R⁷ znamená H nebo Ci-6alkyl;

R⁸ a R⁹ jsou každý nezávisle H nebo Ci-6alkyl volitelně substituovaný OH, CO₂R⁷, Ci-galkoxy nebo NR⁴R⁵;

nebo mohou R⁸ a R⁹ společně s atomem N, na který jsou navázány, tvořit 4- až 7-členný kruh volitelně obsahující další heteroskupiny vybrané z 0, S a NR⁷;

p j e 0, 1 nebo 2;

aryl je fenyl volitelně substituovaný jedním nebo více substituenty nezávisle vybranými ze skupiny zahrnující skupiny: Ci-6alkyl, Ci-6alkoxy nebo halogen;

heterocyklus je nasycený nebo částečně nebo plně nenasycený 5- až 7-členný heterocyklus obsahující až 3 heteroatomy nezávisle vybrané z 0, N a S, který je volitelně substituovaný jedním nebo více substituenty nezávisle vybranými ze skupiny zahrnující skupiny: Ci-6alkyl, Ci-6alkoxy, CO₂R⁷ nebo halogen;

heteroaryl je plně nenasycený 5- až 7-členný heterocyklus obsahující až 3 heteroatomy nezávisle vybrané z 0, N a S, který je volitelně substituovaný jedním nebo více substituenty nezávisle vybranými ze skupiny zahrnující skupiny: Ci-6alkyl, Ci-6alkoxy, CO₂R⁷ nebo halogen;

het¹ je tetrahydropyran-2-yl (2-THP); a arylen je fenylen volitelně substituovaný jedním nebo více substituenty nezávisle vybranými ze skupiny zahrnující skupiny: Ci-6alkyl, Ci-6alkoxy, CO₂R⁷ nebo halogen.

·» φφφφ

Alkyl může mít přímý nebo rozvětvený řetězec. Halogen znamená F, Cl nebo Br.

Cykloalkylenové skupiny v definici X¹ spojovací skupiny, která volitelně obsahuje hetero skupinu vybranou z O, S(0)p nebo NR a je volitelně substituovaná R , může být navázána prostřednictvím jakých koliv dostupných atomů. 1,1-cykloalkylenové skupiny v definici X¹ spojovací skupiny, která volitelně obsahuje hetero skupinu vybranou z 0, S(0)p nebo NR a je volitelně substituovaná R , znamená vazbu přes společné kvarterní centrum v jedné pozici kruhu, viz například

I, 1-cyklobutylen a 4,4-tetrahydropyranylen, které oba náleží do skupiny 1,1-cykloalkylenu, která volitelně obsahuje hetero skupinu vybranou z 0, S(0)_p nebo NR⁷ a je volitelně substituovaná R⁶.

Dvě definice uvedené pro G skupinu ve sloučeninách vzorce (I) jsou samozřejmě tautomerni. Odborníkům v oboru bude jasné, že za určitých okolností převažuje jedna tautomerni forma a za jiných je přítomna směs tautomerních forem. Je třeba si uvědomit, že vynález zahrnuje všechny tautomerni formy sloučenin a jejich směsi.

Farmaceuticky přijatelné soli jsou dobře známé odborníkům v oboru a patří mezi ně soli uvedené například v Berge et al.,

J. Pharm. Sci. 66: 1-19 (1977). Vhodné adiční soli s kyselinami jsou tvořeny s kyselinami, které tvoří netoxické soli a patří mezi ně hydrochloridové, hydrobromidové, hydrojodidové, dusičnanové, síranové, dvoj síranové, fosforečnanové, hydrogenfosforečnanové, acetatové, trifluoacetatové, glukonatové, laktatové, salicylatové, citratové, vinanové, askorbatové, jantaranové, maleinanové, • · · · ·

fumaratové, glukonatové, mravenčnanové, benzoatové, methansulfonatové, ethansulfonatové, benzensulfonatové a ptoluensulfonatové soli.

Pokud obsahuje jeden ze substituentů sloučeniny obecného vzorce (I) kyselou skupinu, tak mohou být tvořeny vhodné farmaceuticky přijatelné adiční soli s bázemi, které tvoří netoxické soli, mezi které patří hlinité, vápenaté, lithné, hořečnaté, draselné, sodné, zinečnaté soli a soli farmaceuticky aktivních aminů, jako je diethanolamin.

Některé sloučeniny obecného vzorce (I), které obsahují kyselou skupinu, mohou existovat ve formě jednoho nebo více obojetných iontů. Je třeba si uvědomit, že všechny takové obojetné ionty spadají do rozsahu předkládaného vynálezu.

Některé sloučeniny obecného vzorce (I) mohou existovat jako geometrické formy. Sloučeniny obecného vzorce (I) mohou obsahovat jedno nebo více center asymetrie a proto mohou existovat ve dvou nebo více stereoizomerických formách. Předkládaný vynález zahrnuje všechny jednotlivé stereoizomery a geometrické izomery sloučenin obecného vzorce (I) a jejich směsi.

Jiným předmětem předkládaného vynálezu je farmaceutický prostředek obsahující sloučeninu nebo sůl podle výše uvedených definic a farmaceuticky přijatelné pomocné činidlo, ředidlo nebo nosič.

Ještě jiným předmětem předkládaného vynálezu je sloučenina nebo sůl podle výše uvedených definic pro použití jako léčivo.

Dalším předmětem předkládaného vynálezu je použití

10.

• φ φ · · 4 φ 4 • φ « φ • Φ 4 sloučeniny nebo soli podle výše uvedených definic pro výrobu léku pro léčbu stavů nebo procesů zprostředkovaných uPA, jako je angiogenese (neovaskularizace), destrukce kosti, implantace embrya v děloze, infiltrace zánětlivých buněk do místa zánětu, ovulace, spermatogenese, psoriasa, remodelování tkáně při hojení ran a diferenciaci orgánů, fibrosa, lokální invaze nádorů do okolí, metastatické šíření nádorových buněk z primárních a sekundárních míst a destrukce tkáně při arthritidě.

Ještě jiným předmětem předkládaného vynálezu je způsob léčby stavů nebo procesů zprostředkovaných uPA, jako je angiogenese (neovaskularizace), destrukce kosti, implantace embrya v děloze, infiltrace zánětlivých buněk do místa zánětu, ovulace, spermatogenese, psoriasa, remodelování tkáně při hojení ran a diferenciaci orgánů, fibrosa, lokální invaze nádorů do okolí, metastatické šíření nádorových buněk z primárních a sekundárních míst a destrukce tkáně při arthritidě, který zahrnuje podání terapeutických množství sloučenin nebo solí nebo prostředků podle výše uvedených definic.

Je třeba si uvědomit, že termín léčba zahrnuje profylaxi, stejně jako zmírnění příznaků způsobených stavy a procesy zprostředkovanými uPA.

G výhodně znamená N=C(NH)2.

R¹ výhodně znamená halogen.

Výhodněji znamená R¹ chlor nebo brom.

Nejlépe je R¹ chlor.

X znamená výhodně SO2.

•4 4444

4 • Φ • 4

4 4 » 4 4

R² znamená výhodně H, C3-7cykloalkyl nebo Ci-6alkyl, kde C3-7cykloalkyl a Ci-6alkyl jsou volitelně substituovaný arylem, heterocyklem, C3-7Cykloalkylem, OH, O-Het¹, Ci-6alkoxy, CO2H,

CO2 (Ci-6alkyl) nebo NR4R5; nebo mohou R² a X¹ dohromady s atomem N, na který jsou navázány, tvořit azetidinový, pyrrolidinový, piperidinový nebo homopiperidinový kruh.

R² znamená výhodněji H, Ci-3alkyl volitelně substituovaný arylem nebo volitelně substituovaný pyridylem nebo NR⁴R⁵ nebo HO nebo O-het¹; nebo mohou R² a X¹ dohromady s atomem N, na který jsou navázány, tvořit azetidinový, pyrrolidinový, piperidinový nebo homopiperidinový kruh.

Ještě výhodněji znamená R² H, CH2CH2N (CH3) 2, CH3, CH2CH2OH, CH2CH2O(2-THP), pyridinylmethyl, benzyl nebo methoxybenzyl, nebo mohou R² a X¹ dohromady s atomem N, na který jsou navázány, tvořit azetidinový, pyrrolidinový, piperidinový nebo homopiperidinový kruh navázaný na R³ skupinu přes 2-pozici uvedeného kruhu.

Nej výhodněji znamená R² H, CH2CH2N (CH3) 2, CH3, CH2CH2OH,

CH2CH2O (2-THP) nebo mohou R² a X¹ dohromady s atomem N, na který jsou navázány, tvořit pyrrolidinový kruh navázaný na R³ skupinu přes 2-pozici uvedeného kruhu.

X¹ znamená výhodně fenylen volitelně substituovaný jedním nebo více substituenty nezávisle vybranými ze skupiny zahrnující methoxy a halogen, nebo cyklo (C4-7) alkylen volitelně obsahující hetero skupinu vybranou z 0 nebo NR⁷, kde uvedený kruh je volitelně substituovaný R , nebo mohou dohromady s R² a s atomem N, na který jsou navázány, tvořit azetidinový, pyrrolidinový, piperidinový nebo homopiperidinový kruh.

»9

9» 9···

9 9 9 • 9 9 9 ♦ · 9 9 • 9 9 9 • •••9 99 99

X¹ znamená výhodněji methylen volitelně substituovaný jedním nebo více substituenty nezávisle vybranými ze skupiny zahrnující aryl nebo (Ci-4alkyl volitelně substituovaný OH, NH2 nebo CONHz) , nebo znamená cyklobutylen, cyklopentylen, cyklohexylen, cykoheptylen, tetrahydropyranylen, piperidylen substituovaný

R⁷, nebo mohou dohromady s R² a s atomem N, na který jsou navázány, tvořit azetidinový, pyrrolidinový, piperidinový nebo homopiperidinový kruh.

Ještě lépe znamená X¹ C(CH3)2, 1,1-cyklopentylen, 4,4tetrahydropyranylen, N-methyl-4,4-piperidylen, CH2,

CH(CH(CH₃)2, CH(CH₂)4NH₂, CH(CH₂)CONH₂, 1,1-cyklobutylen, 1,1cyklopentylen, 1,1-cyklohexylen, 1,1-cykloheptylen, N-methyl4,4-piperidinylen, 4,4-tetrahydropyralen, nebo tvoří dohromady s R² a s atomem N, na který je navázán, azetidinový, pyrrolidinový, piperidinový nebo homopiperidinový kruh navázaný na R³ skupinu přes 2-pozici.

Nejlépe znamená X¹ Ο(ΟΗ₃)2, 1,1-cyklopentylen, 4,4tetrahydropyranylen, N-methyl-4,4-piperidylen, nebo tvoří dohromady s R as atomem N, na který je navázán, azetidinový, pyrrolidinový nebo piperidinový kruh navázaný na R³ skupinu přes 2-pozici.

R³ znamená výhodně CO2R⁷ nebo CONR⁸R⁹.

Lépe znamená R³ CO₂H, CONH2, CON(CH₃) (CH₂)2OH,

CON(CH₃) (CH₂)2NHCH₃, CO2 (Ci-₃alkyl) , CONH (CH₂) 20H, CONH (CH₂) 2OCH₃, (morfolin)CO nebo (4-methylpiperazin)CO.

Nejlépe je R³ CO2H.

Výhodnou skupinou sloučenin jsou sloučeniny, kde X znamená • · · · · ,···

S0₂, kde je přítomna R³-X¹-NR²- skupina, kde X¹ je nezávislý na R² a znamená methylen volitelně substituovaný jednou nebo více skupinami R⁶, nebo znamená 1,1-cyklo (C4-7) alkylen volitelně obsahující hetero skupinu vybranou z O, S(O)p nebo NR a volitelně substituovaný R⁶, a

R² a R³ mohou společně s N a X¹ skupinou, na které jsou navázány, tvořit skupinu vzorce (IA) nebo (IB):

(ΙΑ) (IB) kde X² znamená ethylen, n-propylen nebo n-butylen.

V této skupině sloučenin (a) znamená X¹ výhodně C(CH3)2,

1.1- cyklobutylen, 1,1-cyklopentylen, 1,1-cyklohexylen, 4,4-tetrahydropyranylen nebo N-methyl-4,4-piperidylen, nejlépe

1.1- cyklopentylen.

V této skupině sloučenin (a) znamená X² výhodně ethylen.

Výhodnou skupinou sloučenin jsou sloučeniny, ve kterých má substituent R¹ významy uvedené v následujících příkladech, a jejich soli.

Výhodnou skupinou sloučenin jsou sloučeniny, ve kterých má substituent X významy uvedené v následujících příkladech, a jejich soli.

Výhodnou skupinou sloučenin jsou sloučeniny, ve kterých má substituent R² významy uvedené v následujících příkladech, a jejich soli.

• ·« ·« ···» »· * ·♦·· ♦ « · ·«·· • ···♦ 9 9 9 • 9 9 9 9 9 9 9 9 9 •9 9 9 9 9 9 9 9

999 9999 99 99 99 99 9

Výhodnou skupinou sloučenin jsou sloučeniny, ve kterých má substituent X¹ významy uvedené v následujících příkladech, a jejich soli.

Výhodnou skupinou sloučenin jsou sloučeniny, ve kterých má substituent R³ významy uvedené v následujících příkladech, a jejich soli.

Jinou výhodnou skupinou sloučenin jsou sloučeniny, ve kterých mají substituenty Rl, X, R², X¹ a R³ významy uvedené v následujících příkladech, a jejich soli.

Výhodnou skupinou sloučenin jsou sloučeniny, kde R¹ znamená chlor nebo brom; X znamená SO2; R² znamená H, CH2CH2N (CH3) 2, CH3, CH2CH2OH, CH2CH2O (2-THP) , pyridinylmethyl, benzyl nebo methoxybenzyl; nebo R a X dohromady s atomem N, na který jsou navázány, tvoří azetidinový, pyrrolidinový, piperidinový nebo homopiperidinový kruh, navázaný na R³ skupinu přes 2-pozici uvedeného kruhu;

X¹ znamená C(CH3)₂, 1,1-cyklopentylen, 4,4-tetrahydropyranylen, N-methyl-4,4-piperidylen, CH₂, CH(CH(CH₃)₂, CH(CH₂)₄NH₂,

CH (CH₂)CONH2, 1,1-cyklobutylen, 1,1-cyklopentylen, 1,1-cyklohexylen, 1,1-cykloheptylen, N-methyl-4,4-piperidinylen,

4,4-tetrahydropyralen, nebo tvoří dohromady s R² a s atomem N, na který je navázán, azetidinový, pyrrolidinový, piperidinový nebo homopiperidinový kruh navázaný na R³ skupinu přes 2pozici;

R³ znamená CO₂H, CONH₂, CON (CH₃) (CH₂) ₂0H, CON (CH₃) (CH₂) 2NHCH3,

C0₂ (Ci-₃alkyl) , CONH (CH₂) 2OH, CONH (CH₂) 2OCH3, (morfolin) CO nebo (4-methylpiperazin)CO;

a jejich soli.

.Λ

·· · · · ·

Jinou výhodnou skupinou sloučenin jsou sloučeniny, kde R¹znamená chlor; X znamená SO2; R² znamená H, CH2CH2N (CH3) 2, CH3, CH2CH2OH, CH2CH2O (2-THP) , nebo R² a X¹ dohromady s atomem N, na který jsou navázány, tvoří pyrrolidinový kruh, navázaný na R³skupinu přes 2-pozici uvedeného kruhu;

X¹ znamená C(CH3)2, 1,1-cyklopentylen, 4,4-tetrahydropyranylen, N-methyl-4,4-piperidylen, nebo tvoří dohromady s R² a s atomem N, na který je navázán, azetidinový, pyrrolidinový nebo piperidinový kruh navázaný na R³ skupinu přes 2-pozici; a R³ znamená CO2H;

a jejich soli.

Jinou výhodnou skupinou sloučenin jsou sloučeniny z následujících příkladů a jejich soli. V této skupině jsou nejvýhodnější sloučeniny příkladů 32(b), 36(b), 37(b), 38, 39 (a a b), 41(b), 43(b), 44(b), 71, 75, 76, 78, 79, 84(b), a 87(b a c) a jejich soli.

Vynález dále poskytuje způsoby přípravy sloučenin podle předkládaného vynálezu, které jsou popsány dále a v příkladech provedení vynálezu. Odborníkům v oboru bude jasné, že sloučeniny podle předkládaného vynálezu mohou být připraveny také jinými způsoby, než jsou zde popsané způsoby, adaptací zde popsaných způsobů a způsoby známými v oboru.

V následujících způsobech jsou - pokud není uvedeno jinak substituenty stejné, jak byly definovány pro sloučeninu obecného vzorce (I).

Způsob 1

Sloučeniny obecného vzorce (I) mohou být připraveny z příslušných 1-aminoisochinolinových derivátů vzorce (II) :

9 9 9 9 9

9

9999 (Π)

9 « • · 9

9 9 • 9 9 9

9« 99 reakcí s kyanamidem (NH2CN) nebo činidlem působícím jako NHC+=NH synthon, jako jsou deriváty karboxamidinu, například lH-pyrazol-l-karboxamidin (M. S. Bernatowicz, Y. Wu, G. R. Matsueda, J. Org. Chem., 1992, 57, 2497), jeho 3,5-dimethylpyrazolový analog (M.A.Brimble et al, J.Chem.Soc. Perkin Trans.I (1990), 311), prosté O-alkylthiouroniové sole nebo S-alkylisothiouroniové sole, jako je Omethylisothiomočovina (F.El-Fehail et al, J.Med.Chem. (1986) , 29, 984), S-methylisothiouroniumsulfat (S.Botros et al,

J.Med.Chem.(1986)29,874; P.S. Chauhan et al, Ind. J. Chem., 1993, 32B, 858) nebo S-ethylisothiouroniumbromid (M.L.Pedersen et al, J.Org.Chem.(1993) 58, 6966). Alternativně může být použita kyselina aminoiminomethansulsulphinic nebo kyselina aminoiminomethansulsulfonová (A.E.Miller et al, Synthesis (1986) 777; K.Kim et al, Tet.Lett.(1988) 29,3183).

Jiné metody pro tuto transformaci jsou známé v oboru (viz například Comprehensive Organic Functional Group Transformations, 1995, Pergamon Press, Svazek 6, str. 639, T. L. Gilchríst (Ed.); Pataiova Chemistry of Functional Groups, Svazek 2. The Chemistry of Amidines and Imidates, 1991,

488) .

Aminoisochinoliny (II) mohou být připraveny standardními publikovanými způsoby (viz například The Chemistry of Heterocyclic Compounds svazek 38, Pt 2, John Wiley & Sons,

4.

9999 » · · 9

99

Ed. F.G. Kathawala, G.M. Coppolq, H.F. Schuster), včetně, například přeskupení z příslušných karboxy-derivátů (přeskupení Hoffmannova, Curtiusova, Lossenova, Schmidtova typu) a následným odstraněním chránících skupin.

Aminoisochinoliny (II) mohou být alternatině připraveny přímým odstraněním odštěpitelných skupin, jako je Cl nebo Br, pomocí dusíkatého nukleofilního činidla, jako je azid (a potom následuje redukce), nebo amoniak, nebo Pd-katalýzou s vhodně chráněným aminem (jako je benzylamin), po které následuje odstranění chránících skupin za použití standardních způsobů známých v oboru.

Haloisochinoliny jsou komerčně dostupné nebo mohou alternativně být připraveny různými způsoby, včetně způsobů popsaných v: Goldschmidt, Chem.Ber. (1895) 28, 1532; Brown and Plasz, J.Het.Chem. (1971), 6:303; US Patent 3.930, 837; Halí et al, Can.J.Chem.(1966), 44,2473; White, J.Org.Chem.(1967) 32: 2689; a Ban, Chem.Pharm.Bull.(1964), 12: 1296.

l,4-(dichlor nebo dibrom)isochinoliny mohou být připraveny způsobem popsaným v M. Robison et al, v J.Org.Chem.(1958), 23: 1071, reakcí příslušné isokarbostyrylové sloučeniny s Pcl5 nebo Pbr5.

Způsob 2

Sloučeniny obecného vzorce (I) mohou být připraveny z příslušných 1-aminoisochinolinových derivátů vzorce (II), jak jsou definovány ve způsobu (I), reakcí s činidle účinkujícím jako chránění amidin(2+) synthon (III):

2+

CIU) φ φ φφφφ

18.

• φ φφφ φφφ φφφ φ φ • ΦΦΦ φφ φφφ jako je sloučenina PNHC (=Χ) ΝΗΡι, PN=CXNHPi nebo PNHCX=NPi, kde X je odštěpitelná skupina, jako je Cl, Br, I, mesylat, tosylat, alkyloxy atd., a kde P a Pi mohou být stejné nebo různé a znamenají chránící skupinu pro N, jak jsou dobře známé v oboru, jako je t-butoxykarbonyl, benzyloxykarbonyl, arylsulfonyl, jako je toluenesulfonyl, nitro, atd.

Příklady sloučenin, které účinkují jako synthony (III), zahrnují Ν,N'-chráněné-S-alkylthiouroniové deriváty,jako je Ν,N'-bis(t-butoxykarbonyl)-S-Me-isothiomočovina, Ν, N' -bis(benzyloxykarbonyl)-S-methylisothiomočovina, nebo deriváty těchto sloučenin s kyselinou sulfonovou (J. Org. Chem. 1986, 51, 1882), nebo S-arylthiouroniové deriváty, jako je Ν'-bis(t-butoxykarbonyl)-S-(2,4-dinitrobenzen) (S.G. Lammin, B.L. Pedgrift, A.J. Ratcliffe, Tet. Lett. 1996, 37, 6815), nebo mono-chráněné analogy, jako je methyl ester kyseliny [(4-methoxy-2,3,6-trimethylfenyl)sulfonyl]-karbamidothioové nebo příslušný 2,2,5,7,8-pentamethylchroman-6-sulfonylový analog (D.R. Kent, W.L. Cody, A.M. Doherty, Tet. Lett., 1996, 37: 8711), nebo S-methyl-N-nitroisothiomočovina (L. Fishbein et al, J.Am.Chem.Soc. (1954) 76, 1877) nebo různé substituované thiomočoviny, jako je Ν,Ν'-bis(t-butoxykarbonyl)thiomočovina (C. Levallet, J. Lerpiniere, S. Y .Ko, Tet. 1997, 53, 5291) s nebo bez přítomnosti promotoru, jako je Mukaiyamovo činidlo (Yong, Y.F.; Kowalski, J.A.; Lipton, M.A.; J. Org. Chem.,

1997, 62, 1540), nebo soli mědi, rtuti nebo stříbra, zejména chlorid rtuťnatý. Výhodně mohou být také použity N-chráněné 0alkylisomočoviny, jako je O-methyl-N-nitroisomočovina (N. Heyboer et al., Rec. Chim. Trav. Pays-Bas (1962), 81, 69). Alternativně mohou být použita jiná guanylační činidla známá v oboru, jako je 1-H-pyrazol-l-[Ν,N'-bis(tbutoxykarbonyl)]karboxamidin, příslušný bis-Cbz derivát (M.S. Bernatowicz, Y.

Wu, G.R. Matsueda, Tet. Lett. 1993, 34, 3389) nebo monoBoc nebo mono-Cbz derivát (B. Drake., Synthesis, 1994, 579, M.S. Bernatowicz., Tet. Lett. 1993, 34, 3389). Také může být použit

3,5-dimethyl-l-nitroguanylpyrazol (T. Wakayima et al., Tet. Lett. (1986), 29: 2143).

Reakce se výhodně provede za použití vhodného rozpouštědla, jako je dichlormethan, N,N-dimethylformamid (DMF), methanol.

Reakce se také výhodně provede za přidání chloridu rtuťnatého do směsi aminoisochinolinu (II) a thiomočovinového derivátu (III) ve vhodné bazi/směsi rozpouštědel, jako je triethylamin/dichlormethan.

Produktem této reakce je chráněný isochinolylguanidin (IV), kde G¹ je chráněná guanidinová skupina N=C(NHP)(NHPi) nebo její tautomerní forma, kde P a Pi jsou chránící skupiny pro N, jako je t-butoxykarbonyl (Boc), benzyl, benzyloxykarbonyl, atd., které mohou být odstraněny za zisku sloučeniny vzorce (I) nebo její soli.

Například, pokud je chránící skupinou P a/nebo Pi t-butoxykarbonyl, tak je odstranění chránící skupiny výhodně provedeno pomocí kyseliny, jako je kyselina trifluoroctová (TFA) nebo kyselina chlorovodíková, ve vhodném rozpouštědle, jako je dichlormethan, za zisku bis-trifluoracetatové soli

• ·· ·· 9 · ί .* ·♦·9999 vzorce (I).

Pokud je P a/nebo PÍ hydrolyzovatelná skupina, jako je benzyloxykarbonyl, tak může být odstranění chránících skupin provedeno hydrolýzou.

Jinými způsoby chránění/odstranění chránících skupin jsou: nitro (K. Suzuki et al., Chem. Pharm. Bull. (1985), 33: 1528; Nencioni et al., J. Med. Chem. (1991), 34: 3373; B.T. Golding et al, J.C.S. Chem. Comm.(1994), 2613; p-toluensulfonyl (J.F. Callaghan et al, Tetrahedron (1993), 49, 3479; mesitylsulfonyl (Shiori et al., Chem. Pharm. Bull. (1987), 35, 2698;

ibid. (1987), 35; 2561, ibid., (1989), 37, 3432, ibid., (1987),

35, 3880, ibid., (1987), 35, 1076; 2-adamantoyloxykarbonyl (Iuchi et al., ibid., (1987) 35, 4307; a methylsulfonylethoxykarbonyl (Filippov et al., Syn. Lett. (1994), 922).

Odborníkům v oboru bude jasné, že jiné postupy chránění a odstraňování chránících skupin mohou být použity při syntéze sloučenin podle předkládaného vynálezu, za použití běžných technik, jak jsou popsány, například, v Protective Groups in Organic Synthesis T.W. Greene and P.G.M. Wuts, John Wiley and Sons lne. (1991); a v P.J. Kocienski, v Protecting Groups, Georg Thieme Verlag (1994).

Způsob 3

Sloučeniny obecného vzorce (I) mohou být získány ze sloučenin vzorce (V) • · • · »

(V) kde Z je vhodná odštěpitelná skupina, jako je Cl, Br nebo OPh, odstraněním odštěpitelné skupiny pomocí volné baze guanidinu.

Sloučeniny vzorce (V) mohou být získány způsobem uvedeným výše pro přípravu sloučenin vzorce (II) ve způsobu (I) a běžnými variantami tohoto způsobu.

Volná baze guanidinu může být připravena z vhodné soli, jako je hydrochloridová, uhličitanová, dusičnanová nebo síranová sůl, za použití vhodné baze, jako je hydrid sodný, hydrid draselný nebo jiná baze alkalického kovu, výhodně v bezvodém aprotickém rozpouštědle, jako je tetrahydrofuran (THF), DMSO, Ν,Ν-dimethylformamid (DMF), dimethylether ethylenglykolu (DME), N,N-dimethylacetamid (DMA), toluen nebo jejich směsi. Alternativně může být připravena z vhodné soli za použití alkoxidu v alkoholovém rozpouštědle, jako například t-butoxidu draselného v t-butanolu, nebo v aprotickém rozpouštědle, jak byla uvedena výše.

Takto připravený volný guanidin může být smísen s 1isochinolinovým derivátem (V) a reakce vedoucí ke vzniku sloučenin obecného vzorce (I) mohou být provedeny při teplotě v rozmezí od teploty okolí do 200 °C, výhodně od 50 °C do 150 °C, s reakční dobou 4 hodiny až 6 dnů.

2

Odborníkům v oboru bude jasné, že některé funkce R , R a/nebo X¹ musí být chráněny a zbaveny chránících skupin po guanylaci, nebo musí být přidány nebo připraveny po přidání guanidinové skupiny k substrátu.

«· ···· • · · · » · · • · · · · • · · · « · ··

Například, kyselá skupinaměla reagovat v guanylačním stadiu, za chránění ve formě esteru a s následnou hydrolýzou. Baží katalyzovaná hydrolýza ethylesteru a kyselinou katalyzovaná hydrolýza t-butylesteru jsou dva příklady tohoto postupu. V jiném příkladu může být alkohol chráněn známými skupinami, jako je 2-tetrahydropyranyl ether (2-THP), a potom mohou být tyto skupiny odstraněny reakcí s kyselinou.

Adice nové funkce po navázání guanidinové skupiny spadá také do rozsahu předkládaného vynálezu. Například, alkylace sulfonamido-NH (t.j. X-NR² je SO2NH) alkylhalogenidem může být provedena za přítomnosti baze, jako je uhličitan draselný a volitelně za přítomnosti promotoru reakce, jako je například ΚΙ. V jiném příkladu může být kyselá skupina přeměněna na amid pomocí různých kopulačních reakcí známých odborníkům v oboru, nebo výhodně pomocí chloridu kyseliny za přítomnosti volného nebo chráněného guanidinu. Alternativně může esterová skupina přímo reagovat s aminem za vzniku amidu; pokud toto probíhá v intramolekulovém procesu, může vziknout laktam. Použitím podobných způsobů mohou být připraveny estery a laktony.

Další skupina může být v tomto stadiu přítomná v chráněné formě a potom mohou být chránící skupiny odstraněny příkladem je amino skupina, která může být chráněna skupinami dobře známými v oboru, jako je například Boc skupina, která může být potom odstraněna za použití standardních podmínek, jako je reakce se silnou baží, jako je HCI nebo TFA.

Způsob 4

Sloučeniny podle předkládaného vynálezu, ve kterých je jeden nebo více substituentů karboxylová kyselina nebo « 99 • 9 9 * • 9 • · • 9 • 99 ·«·· ·· <···· • · 9 • · 9 • · 9 • ·9 · •9 9· • 9

9 • 9 • 9

9 ** karbamoylová skupina nebo skupina obsahující karboxylovou kyselinu nebo karbamoylovou skupinu, mohou být připraveny z příslušných sloučenin, ve kterých je příslušným substituentem nitril, úplnou nebo částečnou hydrolýzou. Sloučeniny podle předkládaného vynálezu, ve kterých je jeden nebo více substituentů karboxylová kyselina nebo skupina obsahující karboxylovou kyselinu, mohou být připraveny z příslušných sloučenin, ve kterých je příslušným substituentem karbamoylová skupina, hydrolýzou.

Hydrolýza může být provedena způsoby dobře známými v oboru, jak jsou například popsány v Advanced Organic Chemistry, J. March, 3. vydání, Wiley Interscience), kapitola 6-5, a v odkazech zde uvedených. Výhodně je hydrolýza provedena za použití koncentrované kyseliny chlorovodíkové, při vyšších teplotách, a výsledný materiál vytváří hydrochloridovou sůl.

Způsob 5

Pokud je to žádoucí nebo nutné, je sloučenina obecného vzorce (I) přeměněna na farmaceuticky přijatelnou sůl. Farmaceuticky přijatelná sůl sloučeniny obecného vzorce (I) může být připravena smísením roztoku sloučeniny obecného vzorce (I) a vybrané kyseliny nebo baze, podle potřeby. Sůl může být vysrážena z roztoku a může být získána filtrací, nebo může být získána jiným způsobem, jako je například odpaření rozpouštědla.

Jiné způsoby

Sloučeniny obecného vzorce (I), ve kterých je jeden nebo více substituentů Cl nebo Br nebo obsahuje Cl nebo Br, mohou být dehalogenovány za zisku příslušných hydridových sloučenin • ·· ·· · · ·· ···· ··· ···· • · • · ♦ · · • · · ·· ·* ·· * · • · • · · • · ·♦ obecného vzorce (I) hydrogenolýzou, výhodně za použití palladia na aktivním uhlí, ve vhodném rozpouštědle, jako je ethanol, při teplotě přibližně 20 °C a zvýšeném tlaku.

Sloučeniny obecného vzorce (I), ve kterých je jeden nebo více substituentů karboxylová skupina nebo skupina obsahující karboxylovou skupinu, mohou být připraveny ze sloučenin s hydrolyzovatelnou skupinou, ze které vzniká karboxylová skupina, jako je například příslušný nitril nebo ester, hydrolýzou, například kyselou hydrolýzou, například s koncentrovanou HCI při teplotě zpětného toku. Jiné způsoby hydrolýzy jsou dobře známé v oboru.

Sloučeniny obecného vzorce (I), ve kterých je jeden nebo více substituentů amidová skupina nebo skupina obsahující amidovou skupinu, mohou být připraveny reakcí volitelně chráněné příslušné karboxy-sloučeniny, buď přímo kopulační reakcí s vybraným aminem, nebo přes počáteční přípravu příslušného chloridu kyseliny nebo směsného anhydridu, a potom reakcí s aminem, a potom odstraněním chránících skupin. Takové transformace jsou dobře známé v oboru.

Některé sloučeniny obecného vzorce (I), které mají elektrofilní skupiny navázané na aromatický kruh, mohou být připraveny reakcí příslušné hydridové sloučeniny s elektrofilním činidlem. Například při sulfonylaci aromatického kruhu pomocí standardních činidel a metod, jako je použití dýmavé kyseliny sírové, vzniká příslušná sulfonová kyselina. Tato kyselina může být volitelně přeměněna na příslušný šulfonamid způsobem známým v oboru, jako je například přeměna na chlorid kyseliny následovaná reakcí s aminem.

Některé sloučeniny podle předkládaného vynálezu mohou být

připraveny technikami křížové kopulace, jako je reakce sloučeniny obsahující bromový substituent navázaný na, například, aromatický kruh, s například derivátem kyseliny borité, olefinů nebo cínu, za použití způsobů dobře známých v oboru, jak jsou popsány, například, v následujících přípravách.

Některé sloučeniny podle předkládaného vynálezu mající elektrofilní substituenty mohou být připraveny výměnou halogen/kov, po které následuje reakce s elektrofilním činidlem. Například bromový substituent může reagovat s lithiačním činidlem, jako je n-butyllithium, a potom s elektrofilním činidlem, jako je CO2, aldehyd nebo keton, za zisku příslušné kyseliny nebo alkoholu.

Sloučeniny podle předkládaného vynálezu je možno získat za použití jakékoliv metody popsané v uvedeném vynálezu nebo pomocí upravených způsobů známých v oboru. Je třeba si uvědomit, že syntetické transformační způsoby mohou být provedeny v různém pořadí stupňů, které vedou z zisku požadovaných sloučenin. Odborníci v oboru budou schopni určit nejúčinnější sekvenci reakcí pro syntézu dané cílové sloučeniny.

Odborníkům v oboru bude jasné, že citlivé funkční skupiny musí být chráněny a zbavovány chránících skupin v průběhu syntézy sloučeniny podle předkládaného vynálezu. Toto může být provedeno za použití běžných technik, jak jsou popsány, například, v Protective Groups in Organic Synthesis T.W. Greene and P.G.M. Wuts, John Wiley and Sons lne. (1991); a v P.J. Kocienski, v Protecting Groups, Georg Thieme Verlag (1994) .

• *

Během některých zde uvedených reakcí je možné, že jakákoliv stereocentra mohou být, za určitých podmínek, racemizována, například tehdy, pokud je baze použita v reakci se substrátem majícím optické centrum obsahující skupinu sensitivní pro bázi. Toto se může stát, například, během guanylačního stupně. Mělobýt možné překonat potenciální problémy, jako je volba sekvence reakcí, podmínek, činidel, režimů chránění/odstraňování chránících skupin atd., za použití znalostí oboru.

Sloučeniny a soli podle předkládaného vynálezu mohou být separovány a přečištěny za použití běžných způsobů.

Separace diastereomerů může být provedena pomocí běžných technik, jako je například frakční krystalizace, chromatografie nebo HPLC stereoizomerické směsi sloučeniny obecného vzorce (I) nebo její vhodné soli nebo derivátu. Jednotlivý enantiomer sloučeniny obecného vzorce (I) může být připraven také z příslušného opticky čistého meziproduktu nebo rozdělením, například HPLC příslušného racematu za použití vhodného chirálního nosiče nebo pomocí frakční krystalizace diastereomerické soli vytvořené reakcí příslušného racematu s vhodnou opticky aktivní kyselinou nebo baží.

Pro použití u lidí může být sloučenina obecného vzorce (I) nebo její sůl podána samostatně, ale obvykle je podána ve směsi s farmaceuticky přijatelným nosičem nebo ředidlem vybraným podle zamýšleného způsobu podání a standardní farmaceutické praxe. Například, sloučeniny mohou být podány orálně, například sublinguálně, ve formě tablet obsahující přísady jako je laktosa nebo škrob, nebo ve formě kapslí nebo ovulí buď samostatně nebo ve směsi s přísadami, nebo ve formě » 9 · 9 9 9 9 9 9 • 9 9 9 9 9 f « • · · · 9 9 9 * ♦ 9 • 9 9 · 9 · · · · ····«·· «9 ·· 9 4 9*9 elixírů, roztoků nebo suspenzí obsahujících chuťová korigens nebo barviva. Sloučeniny mohou být také podány parenterálně, například intravenosně, intramuskulárně nebo podkožně. Pro parenterální podání jsou nejlépe použity ve formě sterilních vodných roztoků nebo suspenzí, které mohou obsahovat další substance, například soli nebo glukosu pro dosažení izotonicity roztoku s krví. Sloučeniny mohou být podány také lokálně, ve formě sterilních krémů, gelů, suspenzí, pleťových vod, mastí, zásypů, obkladů obsahujících lék nebo v náplastech. Například mohou být sloučeniny obsaženy v krému skládajícím se z vodné nebo olejové emulse z polyethylenglykolů nebo kapalného parafinu, nebo mohou být obsaženy v masti skládající se z měkké parafinové baze, nebo v hydrogelu s celulosou nebo polyakrylatovými deriváty nebo jinými činidly upravujícími viskozitu, nebo ve formě suchého prášku nebo aerosolu s butanem/propanem, HFA nebo CFC jako hnacím plynem, nebo ve formě obvazu obsahujícího lék, jako je tylový obvaz, s bílým měkkým parafinem nebo polyethylnglykoly jako impregnačními činidly pro tkaninu obkladu, nebo s hydrogelovými, hydrokoloidními, alginatovými nebo filmovými obklady. Sloučenina nebo její sůl může být podána také nitroočně ve formě očních kapek s vhodnými pufry, činidly modifikujícími viskozitu (například deriváty celulosy), konzervačními činidly (například benzalkoniumchloridem (BZK)) a činidly upravujícími tonicitu (například chloridem sodným).

Všechny takové prostředky mohou obsahovat také vhodná stabilizační a konzervační činidla.

Pro orální a parenterální podání u člověka je denní dávka sloučenin obecného vzorce (I) nebo jejich solí v rozmezí od 0,001 do 20, lépe od 0,01 do 20, nejlépe od 0,1 do 10 a ještě lépe od 0,5 do 5 mg/kg ( v jedné dávce nebo rozděleně do více

dávek). Tak může tableta nebo kapsle obsahovat od 0,1 do 500, lépe od 50 do 200 mg aktivní sloučeniny pro podání jednou nebo dvakrát nebo vícekrát za den.

• φφφφ

V každém případě určí nejvhodnější dávku pro určitého pacienta lékař a tato dávka se bude lišit podle věku, hmotnosti a odpovědi určitého pacienta. Výše uvedené dávky jsou příklady pro průměrné jedince; mohou se vyskytnout případy, ve kterých je vhodné podání vyšších nebo nižších dávek a takové případy spadají do rozsahu předkládaného vynálezu.

Je třeba si uvědomit, že termín léčba zahrnuje profylaxi, stejně jako zmírnění již přítomných příznaků léčeného onemocnění.

Testovací způsoby

Sloučeniny byly testovány na schopnost inhibovat lidskou urokinasu, lidskou tPA a lidský plasmin, za použití způsobu popsaného v Young et al., J. Med. Chem. (1990), 33: 2961. Urokinasový test byl proveden za použití S-2444 (Quadratech 820357) jako substrátu a použitou urokinasou byla HMWT Human Urokinase (Calbiochem 672081). tPA test byl proveden za použití S-2288 (Quadratech 820832) tPA substrátu, Quadratech 321116 jako tPA stimulátoru a použitou tPA byla Lidská tPA (Quadratech 881157). Plasminový test byl proveden za použití lidského plasminu (Quadratech 810665) působícího na ChromozymPL (Boehringer 378461) jako substrátu.

Sloučeniny z příkladů 32(b), 34(b), 36(b), 37(b), 38, 39 (a a b), 41(b), 43(b), 44(b), 71, 75, 76, 78, 79, 84(b) a 87(b a c) mají všechny hodnoty Ki 20 nM nebo nižší vůči urokinase.

• · · · « · · · • ♦ f * · w • » · 4 · · · · • · · « · · ·

Příklady provedení vynálezu

Obecná část

Teploty tání (t.t.) se určily za použití buď Gallenkamp nebo Electrothennal přístroje pro stanovení teploty tání a jsou nekorigované. Data protonové nukleární magnetické rezonance (^XH NMR) se získaly na Varian Unity 300 nebo na Varian lnová 400. Data hmotnostní spektrální analýzy s nízkým rozlišením (LRMS) se získaly za použití Fisons Instruments Trio 1000 (termální postřik) nebo Finnigan Mat TSQ 7000 (APCI). Rozbor kouřových plynnů (Analýza) se stanovil na Exeter Analytical UK. Ltd.

Chromatografie na koloně se provedla za použití Merck silikagelu 60 (0,040-0,063 mm). Chromatografie na koloně s reverzní fází seprovedla na Mitsubishi MCI gelu (CHP 20P) .

Jsou použity následující zkratky: roztok ammoniaku sp. gr. 0,880 (0,880 NH3) ; diethylazodikarboxylat (DEAD); 1,2-dimethoxyethan (DME); N,N-dimethylacetamid (DMA); N;N-dimethylformamid (DMF); dimethylsulfoxid (DMSO); tetrahydrofuran (THF); kyselina trifluoroctová (TFA); toluene (PhMe); methanol (MeOH); ethylacetat (EtOAc); propanol (PrOH). Další zkratky jsou použity podle běžné chemické praxe.

Některé chemické názvy byly přiděleny za použití IUPAC NamePro softwaru dostupného od Advanced Chemical Development lne. V některých přípravách obsahujících guanylaci meziproduktů obsahujících kvarterní centrum v sousedství skupiny citlivé na působení baze, jako je například ester, bylo zjištěno, že může proběhnout určitá racemizace, takže může být produkována směs enantiomerů.

• ·· ··«··» «· · • · * · · · φ φφφφ ♦ φ ί φ φφφφ · «φ φφφφφφφ • ΦΦ φφφφ φφ φφ »· ···

Příklad 1:

(a) terc.butyl 2-{[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl) sulfonyl]aminojbenzoat (b) Kyselina 2-{[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl) sulfonyl]amino}benzoová, hydrochlorid

Guanidinhydrochlorid (60 mg, 0,63 mmol) se přidá najednou do suspenze NaH (18 mg, 80% disperze v minerálním oleji (hmot./hmot.), 0,6 mmol) v DMSO (3,0 ml) a směs se zahřívá při teplotě 60 °C v atmosféře N2 po dobu 30 min. Přidá se terc-butyl-2-{[(1,4-dichlor-7-isochinolyl)sulfonyl] amino}benzoat (110 mg, 0,24 mmol) a směs se zahřívá při teplotě 100 °C po dobu 24 h. Chladná směs se vnese do vody a extrahuje se EtOAc (x3) a kombinovaná organická fáze se potom promyje solankou a odpaří se ve vakuu. Zbytek se přečistí chromatografií na silikagelové koloně za použití CH2Cl2-MeOH0,880 NH3 (97:3:0,3 až 95:5:0,5) jako eluens za zisku žluté pryskyřice (36 mg) . Tato pryskyřice se suspenduje ve vodě a extrahuje se etherem (x 3). Kombinovaná organická fáze se promyje solankou a odpaří se ve vakuu za zisku terc-butyl-2-{[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)sulfonyl]aminoJbenzoatu (30 mg, 0,063 mmol) ve formě hnědého pevného materiálu.

TLC Rf 0,60 (CH₂Cl₂-MeOH-0,880 NH₃, 90:10:1).

^XH (CD3OD, 400 MHz) (1,4 (9H, s), 7,1 (IH, dd), 7,5 (IH, dd) , 7,7 (IH, d), 7,8 (IH, d), 7,9 (IH, d), 8,0 (IH, d), 8,1 (IH, s), 9,1 (IH, s) ppm.

LRMS 475 (MH⁺) .

• ·* ··* · · · · « · · · • · · » · · » · • ♦·»· · · · * · • ♦ ··«· <· · a

.. ., »» ...

Silikagelová kolona se potom eluuje MeOH a kombinované výplachy se zahustí ve vakuu za zisku špinavě bílého pevného materiálu. Tento materiál se rozpustí v roztoku EtOH nasyceného HCI plynem a směs se mísí při teplotě okolí. Rozpouštědla se odpaří ve vakuu a zbytek se rozpustí v EtOAcMeOH, filtruje se a znovu se odpaří ve vakuu. Pevný materiál se trituruje s vodou a potom se suší za zisku hydrochloridu kyseliny 2-{[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)sulfonyl] amino}benzoové (11,8 mg, 0,02 mmol) ve formě světle žlutého pevného materiálu.

t.t. >280 °C (za rozkladu).

^XH (CD₃OD, 400 MHz) δ 7,0 (IH, dd) , 73 (IH, dd) , 7,65 (IH, d) , 7,8 (IH, d), 8,1 (IH, d), 8,2 (IH, d), 8,3 (IH, s), 8,9 (IH, s) ppm.

LRMS 420, 422 (M⁺) , 421 (MH⁺) .

Analýza: Zjištěno: C, 43,58; H, 3,37; N, 14,65. Vypočítáno pro C₁₇Hi4ClN₅O4S*HCl*0,7H₂O: C, 43, 54; H, 3,53; N, 14,94,

Příklad 2:

(a) terc.butyl 3-{[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl) sulfonyl]aminojbenzoat (b) Kyselina 3-{[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)sulfonyl] amino}benzoová, trifluoracetat

Guanidinhydrochlorid (140 mg, 1,47 mmol) se přidá najednou do suspenze NaH (44 mg, 80% disperze v minerálním oleji • ·· #····· ·· · • · · · · · · ···· * 9 9 9 9 999 • * · · * ·«·« · * ♦ · · · ♦ ··· ·····♦» »» .. ., ,,, (hmot./hmot.), 1,47 mmol) v DMSO (4,0 ml) a směs se zahřívá při teplotě 60 °C v atmosféře N2 po dobu 30 min. Přidá se roztok terč.butyl 3-{(1,4-dichlor-7-isochinolyl)sulfonyl]aminojbenzoatu (280 mg, 0,59 mmol) v DMSO (2,0 ml) a směs se zahřívá při teplotě 90 °C po dobu 18 h. Chladná směs se vnese do vody (50 ml), extrahuje se EtOAc (x3) a kombinovaná organická fáze se potom odpaří ve vakuu. Zbytek si přečistí chromatografií na silikagelové koloně za použití CH2Cl2-MeOH-0,880 NH3 (97:3:0,3 až 95:5:0,5) jako eluens za zisku terc.butyl-3-{(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)sulfonyl]aminojbenzoatu (64 mg, 0,13 mmol) ve formě světle hnědé pevné látky.

t.t. >142 °C (za rozkladu).

^XH (CD3OD, 400MHz) (1,5 (9H, s), 7,25-7,35 (2H, m), 7,65-7,7 (2H, m), 7,95 (IH, d), 8,05 (IH, d), 8,1 (IH, s), 9,1 (IH, s) ppm.

LRMS 475 (MH⁺) .

Analýza: Zjištěno: C, 51,07; H, 4,55; N, 13,94. Vypočítáno pro C2iH2₂ClN₅O₄S»0,23 CH2CI2: C, 51,46; H, 4,57; N. 14,13,

Terč.butyl 3-{[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)sulfonyl]aminojbenzoat (30 mg, 0,063 mmol) se rozpustí v CF3CO2H (1,0 ml) a směs se mísí při teplotě okolí po dobu 1 h. Směs se naředí PhMe a rozpouštědla se odpaří ve vakuu. Zbytek se trituruje s Et₂O a potom se azeotropuje s CH2CI2 za zisku trifluoracetátu kyseliny 3-{[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)sulfonyl]amino)-benzoové (29 mg, 0,055 mmol) ve formě špinavě bílého pevného materiálu.

t.t. >180 °C (za rozkladu).

¹H(CD₃OD, 400 MHz) (7,2-7,35 (2H, m) , 7,55 (IH, d) , 7,65 (IH, s), 8,15 (IH, d), 8,3 (IH, d), 8,35 (IH, s), 8,85 (IH, s) ppm LRMS 419,421 (MH⁺) .

• φ • 4 Ι·«» φ φ φ · · · 4 • · 4 4 4 fc? · 4 * • · · · # 4 · 4 •♦Φ ·· 44 «Φ A··

Analýza: Zjištěno: C, 42,51; H, 3,07; N, 13,19. Vypočítáno pro

Ci7H₁₄ClN₅O₄S*l,0 CF3CO2H: C, 42,75; H, 2,83; N, 13,12.

Příklad 3:

(a) Methyl-3-{[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)sulfonyl]amino}-4-methoxybenzoat (b) Kyselina 3-{[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)sulfonyl]amino}-4-methoxybenzoová, hydrochlorid

Guanidinhydrochlorid (179,8 mg, 1,88 mmol) se přidá najednou do suspenze NaH (54,9 mg, 80% disperze v minerálním oleji (hmot./hmot.), 1,83 mmol) v DMSO (10 ml) a směs se zahřívá při teplotě 60 °C v atmosféře N2 po dobu 20 min. Přidá se methyl-3 -{[(1, 4-dichlor-7-isochinolyl)sulfonyl]amino}-4methoxybenzoat (238,6 mg, 0,541 mmol) a směs se zahřívá při teplotě 90 °C po dobu 24 h. Rozpouštědla se odpaří ve vakuu a zbytek se přečistí chromatografií na silikagelové koloně za použití CH2CÍ2-MeOH-0,880 NH3 (97:3:0,3 až 90:10:1) jako eluens za zisku methyl-3-{[(4-chlor-l-guanidin-7isochinolyl)-sulfonyl]amino}-4-methoxybenzoatu (203,2 mg,

0,43 mmol) ve formě světle žlutého pevného materiálu, t.t. 134-137 °C (za rozkladu).

³Η (DMSO-de, 300 MHz) δ 3,45 (3H, s), 3,8 (3H,	s) , 6,95	(IH,
d), 7,05-7,4	(4H, brs), 7,7 (IH, d), 7,8 (IH,	s) , 8,0	(2H,
s), 8,1 (IH,	s), 9,05 (IH, s), 9,9 (IH, br s)	ppm.

LRMS 4 64, 4 66 (MH⁺)

9 9 9 9 « · « • 9 9«· 9 9

Analýza: Zjištěno: C, 48,37; H, 3,81; N, 14,75. Vypočítáno pro Ci9Hi₈ClN₅O5S*-0,15 CH₂C1₂: C, 48,26; H, 3,87; N, 14,69,

Vodný roztok NaOH (0,7 ml, 1,0 M, 0,7 mmol) se pomalu přidá do míšeného roztoku methyl-3{[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)sulfonyl]amino}-4-methoxybenzoatu (52,2 mg, 0,113 mmol) v dioxanu (2,5 ml) a směs se mísí při teplotě okolí poo dobu 1,5 h, a potom při teplotě 70 °C po dobu 3 h. Směs se ochladí na teplotu okolí, přidá se ředěná HCI (2 ml, 2 Ν), rozpouštědla se odpaří ve vakuu a zbytek se suší azeotropováním s i-PrOH (x3). Pevný materiál se extrahuje horkým i-PrOH (x4), kombinované organické extrakty se přefiltrují, a rozpouštědla se odpaří ve vakuu. Zbytek se trituruje s Et₂O za zisku hydrochloridu kyseliny 3-{[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)sulfonyl]amino}-4-methoxybenzoové (29 mg, 0,055 mmol) ve formě pevného materiálu, t.t. 258 °C (za rozkladu).

^XH (DMSO-de, 300 MHz) δ 3,45 (3H, s) , 6,95 (1H, d) , 7,7 (1H, d) , 7,8 (1H, s), 8,3-8,7 (4H, br s), 8,3 (1H, d), 8,4 (1H, d) , 8,45 (1H, s), 8,9 (1H, s), 10,05 (1H, br s), 10,9 (1H, br s), 12,75 (1H, br s) ppm.

LRMS 450 (MH⁺) .

Analýza: Zjištěno: C, 44,50; H, 4,60; N, 12,17. Vypočítáno pro Ci8Hi6ClN₅O₅S«-l,0 HC1*1,O (CH₃)₂CHOH*1,0 H₂O: C, 44,69; H, 4,82; N, 12,41.

Příklad 4:

(a) terc.butylester N-[(4-chlor-l-guanidin-7isochinolyl)sulfonyl]glycinu, hydrochlorid (b) N-[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)sulfonyl]glycin, trifluoracetat ·· 9 9 · 9

NaH (29 mg, 80% disperze v minerálním oleji (hmot./hmot.), 0,97 mmol) se přidá najednou do míšeného roztoku guanidinhydrochloridu (146 mg, 1,52 mmol) v DMSO (2,0 ml) a směs se zahřívá při teplotě 60 °C v atmosféře N₂ po dobu 30 min. Přidá se terc.butylester N-[(1,4-dichlor-7-isochinolyl)sulfonyl]glycinu (150 mg, 0,38 mmol) a směs se zahřívá při teplotě 90 °C po dobu 9 h. Chladná směs se naředí vodou (30 ml), extrahuje se EtOAc (4x20 ml) a kombinované organické extrakty se promyjí vodou, solankou, suší se (Na₂SO4) a odpaří se ve vakuu. Zbytek se rozpustí v Et₂O a přidá se roztok HCI v Et₂O (1 Μ) , za zisku lepivé sraženiny. Et₂O se dekantuje a zbytek se trituruje s EtOAc za zisku bílého pevného materiálu. Po filtraci s EtOAc a promytí Et₂O se získá terc.butylester N-[(4-chlor-l-guanidin-7isochinolyl)sulfonyl]-glycinu, hydrochlorid (68 mg, 0,14 mmol).

t.t. 172-175 °C.

^(DMSO-dg, 300 MHz) (1,2 (9H, s) , 3,75 (2H, s) , 8,3 (ÍH, d) , 8,35-8,4 (2H, m), 8,5 (ÍH, s), 8,5-8,9 (4H, br), 9,1 (ÍH, s) , 11,3 (ÍH, brs) ppm. LRMS 414, 416 (MH⁺) .

Analýza: Zjištěno: C, 42,45; H, 4,92; N, 14,76. Vypočítáno pro Ci6H2oClN50₄S«-l,0 HC1*O,33 H₂O· 0,2 EtOAc: C, 42,58; H, 4,95; N, 14,78.

Terc.butylester N-[(4-chlor-l-guanidin-7isochinolyl)sulfonyl]-glycinu, hydrochlorid (50 mg, 0,11 mmol) se rozpustí v CF3CO₂H (1,0 ml) a směs se mísí při teplotě okolí

po dobu 1,5 h. Směs se naředí PhMe a rozpouštědlo se odpaří ve vakuu. Zbytek se trituruje s Et2O a EtOAc za zisku N-[(4-chlor· l-guanidin-7-isochinolyl)sulfonyl]glycinu, trifluoracetatu (36 mg, 0,073 mmol) ve formě bílého prášku.

^XH (CF₃COP, 400 MHz) (4,1 (2H, s) , 8,25 (IH, d) , 8,3 (IH, s) , 8,55 (IH, d), 9,0 (IH, s) ppm.

LRMS 358 (MH⁺), 715 (M₂H⁺) .

Analýza: Zjištěno: C, 36,25; H, 2,86; N, 14,28. Vypočítáno pro Ci₂Hi₂C1N₅0₄S> 1,0 CF3CO2H· 0,2 EtOAc: C, 36,32; H, 3,01; N, 14,31.

Příklad 5:

(a) terč.butylester N-[(4-chlor-l-guanídín-7isochinolyl)sulfonyl]-β-alaninu (b) N-[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)sulfonyl]-β-alanin, trifluoracetat

Guanidinhydrochlorid (140 mg, 1,46 mmol) se přidá najednou do míšené suspenze NaH (35 mg, 80% disperze v minerálním oleji (hmot./hmot.), 1,17 mmol) v DMF (8,0 ml) a směs se zahřívá při teplotě 30 °C v atmosféře N2 po dobu 30 min. Přidá se terč.butylester N-[(1,4-dichlor-7isochinolyl)-sulfonyl]-β-alaninu (150 mg, 0,37 mmol) a směs se zahřívá při teplotě 90 °C po dobu 18 h. Ochlazená směs se naředí EtOAc, promyje se vodou, solankou, suší se (MgSO₄) a odpaří se ve vakuu. Zbytek se přečistíchromatografií na silikagelové koloně za použití CH2Cl2-MeOH-0,880 NH3 • ·· ·» ··♦· ·· « •J · J ♦· · ·«»· • ♦ * * · · > « · * * * · · · · «·· ···«··· «» », ...

(97:3:0,3 až 95:5:0,5) jako eluens, za zisku terc.butylesteru N-[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)sulfonyl]-β-alaninu (75 mg, 0,175 mmol) ve formě žluté pěny. t.t. >180 °C (za rozkladu).

^(DMSO-dg, 300 MHz) (1,35 (9H, s) , 2,3 (2H, t), 2,9 (2H, dt) , 7,1-7,4 (4H, br), 7,8 (ÍH, br t), 8,05 (2H, s) , 8,1 (ÍH, s), 9,1 (ÍH, s) ppm.

LRMS 428 (MH⁺) .

Analýza: Zjištěno: C, 47,32; H, 5,24; N, 16,02. Vypočítáno pro Ci7H22ClN5O₄S«0,2 H₂O: C, 47,32; H, 5,23; N, 16,23.

terč.butylester N-[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)sulfonyl]-β-alaninu (30 mg, 0,07 mmol) se rozpustí v CF3CO2H (1,0 ml) a směs se mísí při teplotě okolí po dobu 1 h. Směs se odpaří ve vakuu, azeotropuje se s PhMe, MeOH a potom s CH2CI2, za zisku N-[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)sulfonyl]-alaninu, trifluoracetatu (32 mg, 0,066 mmol) ve formě bílého pevného materiálu.

t.t. >200 °C (za rozkladu).

^XH (DMSO-dg + D₂O, 400 MHz) (2,35 (2H, t) , 3,0 (2H, t) , 8,2 (ÍH, d),8,3 (ÍH, d), 8,4 (ÍH, s), 9,1 (ÍH, s) ppm.

LRMS 372 (MH⁺) .

Analýza: Zjištěno: C, 37,38; H, 3,11; N, 14,52. Vypočítáno pro Ci₃Hi4ClN₅O4S·!, 0 CF3CO2H: C, 37,08; H, 3,11; N, 14,42.

Příklad 6:

(a) terč.butylester N-[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)sulfonyl]-N-methylglycinu (b) N-[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)sulfonyl]-Nmethylglycin, bis(trifluoroacetat)

·· 9 999

Guanidinhydrochlorid (286 mg, 2,99 mmol) se přidá najednou do míšené suspenze NaH (77,5 mg, 80% disperze v minerálním oleji (hmot./hmot.), 2,58 mmol) v DME (2,0 ml) a směs se zahřívá při teplotě 50 °C v atmosféře N₂ po dobu 20 min.

Přidá se roztok terč.butylesteru N-[(1,4-dichlor-7-isochinolyl)sulfonyl]-N-methylglycinu (393 mg, 0,97 mmol) v DME (10 ml) a směs se zahřívá při teplotě 90 °C po dobu 2 h. Rozpouštědla se odpaří ve vakuu a zbytek se přečistí chromatografií na silikagelové koloně za použití CH₂Cl₂-MeOH0.880 NH3 (97:3:0,3) jako eluens za zisku terč.butylesteru N[(4- -chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)sulfonyl]-N-methylglycinu (260 mg, 0,607 mmol) ve formě špinavě bílé pěny.

t.t. 84 °C.

^{DMSO-de, 300 MHz) (1,3 (9H, s) , 2,85 (3H, s) , 3,95 (2H, s) , 7,0-7,5 (4H, br), 8,0 (ÍH, d), 8,05 (ÍH, d), 8,1 (ÍH, s), 9,05 (ÍH, s) ppm.

LRMS 427 (MH⁺) , 855 (M₂H⁺) .

Analýza: Zjištěno: C, 47,92; H, 5,38; N, 15,07. Vypočítáno pro Ci7H₂₂ClN₅O₄S : C, 47,72; H, 5,18; N, 16,37.

terč.butylester N-[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)sulfonyl]-N-methylglycinu (255 mg, 5,96 mmol) se rozpustí v CF3CO₂H (4,0 ml) a CH₂C1₂ (2,0 ml) a směs se mísí při teplotě okolí po dobu 1 h. Směs se naředí PhMe a rozpouštědla se odpaří ve vakuu za zisku N-[(4-chlor-l-guanidin-7isochinolyl)-sulfonyl]-N-methylglycinu, bis(trifluoracetatu) • φφ φφ φφφφ ·· φ · ♦ * ♦ φ · · φ φ • φφφφ φ φ φφ φφφφ φφφ φφφ φφφφ φφ φφ φφ φφφ (349 mg, 0,56 mmol) ve formě bílého prášku.

t.t. 240-242 °C (za rozkladu).

^(DMSO-ds, 300 MHz) (2,9 (3H, s) , 4,05 (2H, s) , 8,3 (IH, d) , 8,4 (IH, d), 8,4-8, 7 (4H, br), 8,5 (IH, s), 8,9 (IH, s) ppm. LRMS 372, 374 (MH⁺) , 744 (M₂H⁺) .

Analýza: Zjištěno: C, 36,26; H, 3,10; N, 11,04. Vypočítáno pro Ci3Hi4ClN₅O₄S»2,0 CF3CO2H · 0,3 PhMe: C, 36,56; H, 2,96; N, 11,16,

Příklad 7:

(a) terc.butylester N-[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)sulfonyl]-N-fenylglycinu (b) N-[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)sulfony}-N-fenylglycin, trifluoracetat

NaH (32 mg, 80% disperze v minerálním oleji (hmot./hmot.), 1,07 mmol) se přidá najednou do míšené suspenze guanidinhydrochloridu (164 mg, 1,71 mmol) v DME (5,0 ml) a směs se zahřívá při teplotě 60 °C v atmosféře N₂ po dobu 30 min. Přidá se terc.butylester N-[(1,4-dichlor-7-isochinolyl)sulfonyl]-N-fenylglycinu (200 mg, 0,43 mmol) a se zahřívá při teplotě 95 °C po dobu 6 h. Rozpouštědla se odpaří ve vakuu a zbytek se přečistí chromatografií na silikagelové koloně za použití CH₂Cl2-MeOH-0,880 NH3 (97:3:0,3 až 95:5:0,5) jako eluens za zisku terč.butylesteru N-[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)sulfonyl]N-fenylglycinu (28 mg, 0,057 mmol) ve formě žluté pryskyřice.

« ·9

9· · · • 9

9 • 9 999··♦» ····

1Η (DMSO-dg, 300 MHz) (1,3 (9H, s), 4,45 (2H, s), 7,2-7,3 (2H, m) , 7,2-7,4 (4H, br), 7,37 (3H, m), 7,9 (1H, d), 8,0 (1H, d), 8,1 (1H, s), 8,95 (1H, s) ppm.

LRMS 490, 492 (MH⁺) , 981 (M₂H⁺) .

terč.butylester N-[(4-chlor-l-guanidin-7isochinolyl)sulfonyl]—N-fenylglycinu (25 mg, 0,05 mmol) se rozpustí v CF3CO₂H (1,0 ml) a směs se mísí při teplotě okolí po dobu 2 h. Směs se zahustí ve vakuu, azeotropuje se s PhMe a zbytek se trituruje s Et₂O za zisku N-[(4-chlor-l-guanidin-7isochinolyl)sulfonyl]—N-fenylglycinu, trifluoracetatu (13 mg, 0,23 mmol) ve formě světle žlutého prášku.

t.t. 218-223 °C.

^XH (DMSO-dg, 300 MHz) (4,5 (2H, s) , 7,1-7,2 (2H, d) , 7,25-7,4 (3H, m), 7,8-8,4 (4H, br), 8,0 (1H, d), 8,2 (1H, d), 8,35 (1H, s), 8,9 (1H, s) ppm.

LRMS 434, 436 (MH⁺) , 744 (M₂H⁺) .

Analýza: Zjištěno: C, 42,55; H, 3,39; N, 11,90. Vypočítáno pro Ci8HigClN5O4S*l,0CF₃CO₂HJ*H₂O»0,2 Et₂O: C, 42,74; H, 3,52; N,

12,22.

Příklad 8:

(a) terč.butylester N-[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)sulfonyl]-N-(cyklopentylmethyl)-glycinu (b) N-[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)sulfonyl]-N-(cyklopentylmethyl)glycin

• ·4 • · · · ·

• 9 • ♦ ······* ·· ···· • · ♦ · 44 44

4 49

4 4 • 4 · *· ···

Guanidinhydrochlorid (96 mg, 1,00 mmol) se přidá najednou do míšené suspenze NaH (19 mg, 80% disperze v minerálním oleji (hmot./hmot.), 0,63 mmol) v DME (5,0 ml) a směs se zahřívá při teplotě 60 °C v atmosféře N2 po dobu 30 min. Přidá se roztok terč.butylesteru N-[(1,4-dichlor-7-isochinolyl)sulfonyl]-N-(cyklopentylmethyl)glycinu (120 mg, 0,25 mmol) v DME (5,0 ml) a směs se zahřívá při teplotě 90 °C po dobu 3 h. Rozpouštědla se odpaří ve vakuu, zbytek se rozpustí v EtOAc (200 ml) a promyje se vodným roztokem NH4CI (150 ml), suší se (MgSO4) a odpaří se ve vakuu. Zbytek se přečistí chromatografií na silikagelové koloně za použití pentanu-EtOAc (100:0 až 40:60) jako eluens, za zisku terč.butylesteru N-[ (4-chlor-l-guanidin7-isochinolyl)-sulfonyl]-N(cyklopentylmethyl)-glycinu (60 mg, 0,12 mmol).

^XH (CDCI3, 400 MHz) δ 1,1-1,25	(2H, m), 1,35	(9H, s), 1,45-1,7
(4H, m) , 1,7-1,8 (2H, m), 2,1	(IH, m), 3,25	(2H, d), 4,0 (2H,
s), 8,05 (IH, d), 8,1 (IH, d),	8,15 (IH, s),	9,2 (IH, s) ppm.
LRMS 4 96 (MH⁺) .
Analýza: Zjištěno: C, 52,99; H	, 6,07; N, 13,	82. Vypočítáno

pro C22H30CIN5O4S: C, 53,38; H, 5,90; N, 14,15.

Roztok HCI (2 ml, 2M, 4 mmol) se přidá do roztoku terč.butylesteru N-[(4-chlor-l-guanidin-7isochinolyl)sulfonyl]-ΜΗ cyklopentylmethyl) glycinu (50 mg, 0,10 mmol) v dioxanu (4,0 ml) a směs se zahřívá při teplotě 60 °C po dobu 24 h. Rozpouštědla se odpaří ve vakuu a zbytek se trituruje s dichlormethanem za zisku N-((4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)sulfonyl]-N-(cyklopentylmethyl)glycinu, ♦

• ·*··

9999 99

9 9 9 9 9

9 9 9 9

9 9 9 9 9

9 9 9 9 9 hydrochloridu (40 mg, 0,080 mmol) ve formě bílého pevného materiálu.

t.t. 139-142 °C.

¹H(CD3OD, 400	MHz) (1,2-1,3	(2H,	m), 1,5-1,7	(4H,	m) ,	1,7-1,8
(2H, m) ,' 2,2	(IH, m), 3,65	(2H,	d), 4,2 (2H,	s) ,	8,35	(IH, d),
8,45 (IH, s),	8,45 (IH, d),	8,9	(IH, s) ppm.

LRMS 440 (MH⁺) .

Analýza: Zjištěno: C, 43,48; H, 5,32; N, 12,91. Vypočítáno pro Ci₈H22C1N5O4S*1,0 HCI· 1,0 H₂0*0.05 CH₂Cl₂«0,05 dioxan: C, 43,17;

H, 5,11; N, 13,92.

Příklad 9:

(a) terč.butylester N-[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl) sulfonyl]-N-(cyklohexylmethyl)glycinu (b) N-[ (4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)sulfonyl]-N-(cyklohexylmethyl)glycin, hydrochlorid

Guanidinhydrochlorid (125 mg, 1,31 mmol se přidá najednou do míšené suspenze NaH (25 mg, 80% disperze v minerálním oleji (hmot./hmot.) , 0,82 mmol) v DME (10 ml) a směs se zahřívá při teplotě 60 °C v atmosféře N2 po dobu 30 min. Přidá se terč.butylester N-[(1,4-dichlor-7-isochinolyl)sulfonyl] -ΝΗ cyklohexylmethyl)-glycinu (160 mg, 0,33 mmol) a směs se zahřívá při teplotě 80-90 °C po dobu 2,5 h. Rozpouštědla se odpaří ve vakuu, zbytek se rozpustí v EtOAc (200 ml), promyje se vodným roztokem NH4CI (150 ml), suší se (MgSO4) a odpaří se ve vakuu. Zbytek se přečistí chromatografií na silikagelové koloně za použití pentanu-EtOAc (100:0 až 40:60) jako eluens ··♦· ·· ···· • 4 · • 4 · • 4 4 • 4 9 4 ·· 94

4

4 4

4

994 za zisku terc.butylesteru N-[(4-chlor-l-guanidin-7isochinolyl) sulfonyl]-N-(cyklohexylmethyl)glycinu (65 mg, 0,127 mmol) ve formě špinavě bílé pěny.

¹H (CDC1₃, 400 MHz) δ 0,8-0,95 (2H, m) , 1,1-1,25 (3H, m), 1,3 (9H, s), 1,6-1,8 (6H, m), 3,1 (2H, d), 4,0 (2H, s), 8,0 (IH, d) , 8,1 (IH, d), 8,15 (IH,, s), 9,2 (IH, s) ppm.

LRMS 510 (MH⁺) .

Analýza: Zjištěno: C, 54,21; H, 6,46; N, 13,46. Vypočítáno pro C23H32CIN5O4S: C, 54,16; H, 6,32; N, 13,73.

Roztok HCI (2 ml, 2 M, 4 mmol) se přidá do roztoku terc.butylesteru N-[(4-chlor-l-guanidin-7isochinolyl)sulfonyl]-N- -(cyklohexylmethyl)glycinu (53 mg, 0,10 mmol) v dioxanu (4,0 ml). Směs se mísí při teplotě 23 °C po dobu 18 h a potom se zahřívá při teplotě 50-60 °C po dobu 16 h. Při ochlazování se z roztoku sráží bílá sraženina. Pevný materiál se odebere filtrací, trituruje se s EtOAc a potom se suší ve vakuu za zisku N-[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl) sulfonyl]-N-(cyklohexylmethyl)glycinu, hydrochloridu (26 mg, 0,057 mmol).

^XH (CDCI3, 400 MHz) ( 0,8-1,0 (2H, m) , 1,1-13 (3H, m), 1,55-1,8 (6H, m), 3,2 (2H, d), 4,15 (2H, s), 8,3 (IH, d), 8,45 (IH, d) , 8,45 (IH, 5), 8,9 (IH, 5) ppm.

LRMS 454, 456 (MH⁺) .

Analýza: Zjištěno: C, 44, 70; H, 5,15; N, 13,56. Vypočítáno pro C23H₃2C1N₅O4S»HC1*H2O: C, 44,89; H, 5,36; N, 13,77.

• ·· φφ φφ · φ φ · • «φφφ • · φ φ φ • ♦ · φ φ φφφ φφφφ φφ φφ • φφφ

Příklad 10:

(a) terc.butylester Ν-[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)sulfonyl]-N-benzylglycinu (b) N- [(4-chlor-l-guanidin-7-isoqninoÍinyl)sulfonyl]-N-benzylglycin, trifluoracetat

Guanidinhydrochlorid (180 mg, 1,88 mmol) se přidá najednou do suspenze NaH (45 mg, 80% disperze v minerálním oleji (hmot./hmot.), 1,5 mmol) v DME (11 ml) a směs se zahřívá při teplotě 60 °C v atmosféře N₂ po dobu 30 min. Přidá se terc.butylester N-[(1,4-dichlor-7-isochinolyl)sulfonyl]-N-benzylglycinu (225 mg, 0,467 mmol) a směs se zahřívá při teplotě 90 °C po dobu 18 h. Chladná směs se vnese do vody, extrahuje se EtOAc (x3) a kombinovaná organická fáze se potom promyje vodou, suší se (Na₂SO4) a odpaří se ve vakuu. Zbytek se přečistí chromatografií na silikagelové koloně za použití CH₂Cl₂-MeOH-0,880 NH3 (97:3:0,3) jako eluens za zisku terč.butylesteru N-[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)sulfonyl]-N-benzylglycinu (172 mg, 0,34 mmol) ve formě žluté pěny.

t.t. >150 °C (za rozkladu).

^(DMSO-de, 400 MHz) δ 12	(9H,	s) ,	3, 8	(2H, s), 4,45 (2H, s),
7,1-7,4(4H, br), 72-7,35	(5H,	m) ,	8,0	(IH, d), 8,1 (IH, d),
8,1 (s, IH), 9,1 (IH, s)	ppm.
LRMS 504, 506 (MH⁺) .

Analýza: Zjištěno: C, 55,19; H, 5,55; N, 13,23. Vypočítáno pro ···· φ φ φφφ

φ φ φ φ φ φ • φ φ • φ φ φ φφ φφ

C23H₂6ClN₅O4S»0,1 C₆Hu: C, 55,30; Η, 5,39; Ν, 13,66.

terč.butylester Ν-[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)sulfonyl]-N-benzylglycinu (50 mg, 0,10 mmol) se rozpustí v CF3CO2H (1,0 ml) a směs se mísí při teplotě okolí po dobu 1 h. Směs se naředí PhMe a rozpouštědlo se odpaří ve vakuu. Zbytek se azeotropuje s PhMe a potom CH2CI2 za zisku N-[(4-chlor-lguanidin-7-isochinolyl)sulfonyl]-N-benzylglycinu, trifluoracetatu (52 mg, 0,10 mmol) ve formě bílého pevného materiálu.

t.t. 274 °C (za rozkladu).

^(DMSO-de, 400 MHz) δ 3,95 (2H, s) , 4,5 (2H, s) , 7,2-7,35 (5H, m), 8,3 (IH, d), 8,35 (IH, d), 8,4-8,6 (4H, br), 8,45 (IH, s),

8,9 (IH, s), 10,6 (IH, br), 12,7 (IH, br) ppm.

LRMS 448, 450 (MH⁺) , 497 (M₂H⁺) .

Analýza: Zjištěno: C, 43,96; H, 3,39; N, 11,87. Vypočítáno pro Ci₉Hi₈C1N₅O4S*1,0 CF3CO2H· 0,5 H₂O: C, 44,18; H, 3,53; N, 12,27.

Příklad 11:

(a) terč.butylester N-[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)sulfonyl]-N-(2-methylbenzyl)glycinu (b) N- [ (4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)sulfonyl]-N-(2-methylbenzyl)glycin, trifluoracetat

HO,

Guanidinhydrochlorid (120 mg, 1,26 mmol) se přidá najednou do suspenze NaH (32 mg, 80% disperze v minerálním oleji (hmot./hmot.), 1,06 mmol) v DME (10 ml) a směs se zahřívá při

• «9 9 9 9 9 9	99 9 9 9 9	···· 9 9	99 9
9 9 9 9	9 9
9 9	9 9	9 9	9 9
99 9999	99	9 9	99	9 9

teplotě 60 °C v atmosféře N2 po dobu 30 min. Přidá se terč.butylester N-[(1,4-dichlor-7-isochinolyl)sulfonyl]-N-(2-methylbenzyl)glycinu (200 mg, 0,405 mmol) a směs se zahřívá při teplotě 90 °C po dobu 2 h. Ochlazená směs se naředí EtOAc, promyje se vodou, solankou, suší se (Na₂SO₄) a odpaří se ve vakuu. Zbytek se přečistí chromatografií na silikagelové koloně za použití pentanu-CH2Cl2 (50:50), potom CH2CI2, a nakonec CH2Cl2-MeOH-0,880 NH3 (95:5:0,5) jako eluens, za zisku terč.butylesteru N-[(4-chlor-l~guanidin-7-isochinolyl) sulfonyl]-N-(2-methylbenzyl)glycinu (94 mg, 0,18 mmol) ve formě špinavě bílého pevného materiálu.

t.t. >110 °C (za rozkladu).

IH (CDCI3, 400 MHz) δ 1,25 (9H, s), 2,3 (3H, s), 3,8 (2H, s), 4,6 (2H, s), 7,1-7,2 (4H, m), 8,05 (IH, d), 8,1 (IH, d),

8,15 (s, IH), 9,3 (IH, s) ppm.

LRMS 518, 520 (MH⁺) .

Analýza: Zjištěno: C, 56,21; H, 5,83; N, 12,57. Vypočítáno pro C₂₄H28ClN₅O₄S*0,3 H₂O· 0,25 C₆Hi₄: C, 56,20; H, 5,94; N, 12,85.

terč.butylester N-[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)sulfonyl]-N-(2-methylbenzyl)glycinu (30 mg, 0,058 mmol) se rozpustí v CF3CO2H (1,0 ml) a směs se mísí při teplotě okolí po dobu 1 h. Směs se naředíPhMe a rozpouštědlo se odpaří ve vakuu. Zbytek se azeotropuje s PhMe a potom s Et₂O za zisku N—[(4— -chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)sulfonyl]-N-(2-methylbenzyl)glycinu, trifluoracetatu (29 mg, 0,05 mmol) ve formě špinavě bílého pevného materiálu.

t.t. >150 °C(za rozkladu).

¹H(CD₃OD, 400 MHz) δ 2,3 (3H, s) , 3,95 (2H, s) , 4,7 (2H, s) , 7,05-7,2 (4H, m), 8,35 (IH, d), 8,45 (IH, s), 8,45 (IH, d) ,

8,9 (IH, s) ppm.

·*» ···· * · · · · · · · ·

4/ ······· ·· ··

LRMS 462, 464 (MH⁺) .

Analýza: Zjištěno: C, 45,51; H, 3,95; N, 11,36. Vypočítáno pro C2oH₂oC1N₅04S*1,0 CF₃CO₂H*l,0 Η₂Ο·0,1 PhMe: C, 45,20; H, 3,98; N, 11,61.

Příklad 12:

(a) terč.butylester N-[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)sulfonyl]-N-(2-methoxybenzyl)glycinu, trifluoracetat (b) N-[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)sulfonyl]-N-(2-methoxybenzyl)glycin, trifluoracetat

Guanidinhydrochlorid (225 mg, 2,36 mmol) se přidá najednou do míšené suspenze NaH (44 mg, 80% disperze v minerálním oleji (hmot./hmot.), 1,47 mmol) v DME (20 ml) a směs se zahřívá při teplotě 60 °C v atmosféře N₂ po dobu 30 min. Přidá se terč.butylester N-[(l,4-dichlor-7-isochinolyl)sulfonyl]-N-(2-methoxybenzyl)glycinu (300 mg, 0,59 mmol) a směs se zahřívá při teplotě 90 °C po dobu 2 h. Chladná směs se vnese do vody a extrahuje se EtOAc (x3). Kombinované organické extrakty se potom promyjí se vodou, solankou, suší se (Na₂SO4) a odpaří se ve vakuu. Zbytek se přečistí chromatografií na silikagelové koloně za použití hexanu-EtOAc (80:20)a potom CH₂Cl₂-MeOH:0,880 NH₃ (95:5:0,5 až 90:10:1) jako eluens, za zisku produktu ve formě žlutého semi-pevného materiál materiálu. Tento semi-pevný materiál se rozpustí v EtOAc, přidá se roztok TFA (35 μΐ) v EtOAc (25 ml) a rozpouštědlo se odpaří ve vakuu a materiál se azeotropuje s PhMe. Zbytek se trituruje s i-Pr₂O, získaný bílý pevný materiál se odfiltruje a potom se suší, za zisku terč.butylesteru N-[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl) sulfonyl]-N-(2-methoxybenzyl)-glycinu, trifluoracetatu (219 mg, 0,338 mmol).

t.t. >197 °C (za rozkladu).

^(DMSO-de, 400 MHz) δ 1,25 (9H, s) , 3,6 (3H, s) , 4,0 (2H, s), 4,45 (2H, s), 6,8-6,9 (2H, m) , 7,1-7,2 (2H, m), 8,3 (2H, s), 8,4-8,6 (4H, br s), 8,5 (s, ÍH), 8,8 (ÍH, s) ppm. LRMS 534, 536 (MH⁺)

Analýza: Zjištěno: C, 48,33; H, 4,55; N, 10,52. Vypočítáno pro C₂4H₂₈ClN5O₅S»l,0 CF₃CO₂H: C, 48,18; H, 4,51; N, 10,81.

terc.butylester N-[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)sulfonyl]-N-(2-methoxybenzyl)glycinu, trifluoracetat (150 mg, 0,231 mmol) se rozpustí v CF3CO₂H (1,0 ml) a směs se mísí při teplotě okolí po dobu 40 min. Směs se naředí PhMe, zahustí se ve vakuu, azeotropuje se s PhMe a zbytek se trituruje s i-Pr₂0 za zisku N-[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)sulfonyl]-N-(2-methoxybenzyl)glycinu, trifluoracetatu (122 mg, 0,206 mmol) ve formě bílého pevného materiálu.

t.t. >165 °C	(za rozkladu).
^XH (DMSO-dg,	400 MHz) δ 3,6	(3H,	s) , 4,0	(2H, s),	4,5 (2H,
s), 6,8 (ÍH,	d) , 6,85 (ÍH,	dd) ,	7,1-7,2	(2H, m),	8,3 (2H,
s), 8,35-8,5	(4H, br s), 8,	5 (s,	ÍH), 8,	8 (ÍH, s)	i ppm.
LRMS 478, 480	(MH+).

Analýza: Zjištěno: C, 44,64; H, 3,58; N, 11,83. Vypočítáno pro C₂oHC1N50₅S·!, 0 CF₃CO₂H: C, 44,69; H, 3,68; N, 11,63.

·· ·· ··«· ·· · · 9 • · · • · · · • · · »·*···♦ 91 • · · · • · · · • · · · · • · · · · *· ·· ·· ···

Příklad 13:

(a) terč.butylester N-[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)sulfonyl]-N-(3-methoxybenzyl)glycinu, hydrochlorid (b) N-[(4-chlor-l-guanidin-7 -isochinolyl)sulfonyl]-N-(3-methoxybenzyl)glycin

Guanidinhydrochlorid (149 mg, 1,55 mmol) se přidá najednou do suspenze NaH (35 mg, 80% disperze v minerálním oleji (hmot./hmot.), 1,16 mmol) v DME (10 ml) a směs se zahřívá při teplotě 60 °C v atmosféře N2 po dobu 30 min. Přidá se terč.butylester N-[(1,4-dichlor-7-isochinolyl)sulfonyl]-N-(3-methoxybenzyl)glycinu (200 mg, 0,39 mmol) a směs se zahřívá při teplotě 90 °C po dobu 2 h. Chladná směs se vnese do vody, extrahuje se EtOAc (x3) a kombinované organické extrakty se promyjí solankou, suší se (Na2SO₄) a odpaří se ve vakuu. Zbytek se rozpustí v Et2O-EtOAc a přidá se roztok HCI v Et2O (0,5 M) za vzniku sraženiny. Pevný materiál se odebere filtrací, trituruje se EtOAc a potom se suší za zisku terč.butylesteru N-[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)sulfonyl]-N-methoxybenzyl)glycinu, hydrochloridu (124 mg, 0,21 mmol) ve formě bílého pevného materiálu.

t.t. 203-205 °C.

^XH (DMSO-de, 300 MHz) δ 1,2 (9H, s) , 3,65 (3H, s), 4,05 (2H, s), 4,5 (2H, s), 6,7 (IH, s), 6,75-6,85 (2H, m), 7,2 (IH, dd),

8,3 (IH, d), 8,35 (IH, d), 8,5 (s, IH), 9,3 (IH, s) , 11,6 (IH, br s) ppm.

LRMS 534, 536 (MH⁺) , 1069 (M₂H⁺) .

Analýza: Zjištěno: C, 50,22; H, 5,11; N, 12,23. Vypočítáno r \ pro C24H₂8ClN₅O5S*l,0 HCI: C, 56,52; H, 5,12; N, 12,28.

terč.butylester N-[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)sulfonyl]-N-(3-methoxybenzyl)glycinu, hydrochlorid (95 mg, 0,167 mmol) se rozpustí v CF3CO2H (1,0 ml) a směs se mísí při teplotě okolí po dobu 1 h. Směs se naředí PhMe a rozpouštědlo se odpaří ve vakuu. Zbytek se rozpustí v EtOAc a mísí se při teplotě okolí po dobu 1 h. Vzniklá sraženina se odebere filtrací, promyje se Et₂O a suší se za zisku N-[(4-chlor~l-guanidin-7-isochinolyl)sulfonyl]-N-(3-methoxybenzyl)glycinu (65 mg, 0,128 mmol) ve formě bílého prášku.

t.t. 290 °C (za rozkladu).

A (CF₃CO₂D, 400 MHz) δ 3,9 (3H, s) , 4,3 (2H, s) , 4,6 (2H, s) , 6,9-7,0 (3H, m), 7,3 (IH, dd), 8,35 (IH, d), 8,45 (IH, s),

8,6 (IH, d), 8,95 (IH, s) ppm.

LRMS 477, 479 (ΜΗ), 955 (M₂H⁺) .

Analýza: Zjištěno: C, 48,67; H, 4,09; N, 13,88. Vypočítáno pro C2oH₂oClN₅05S*0,25 CF3CO2H: C, 48,62; H, 4,03; N, 13,83.

Příklad 14:

(a) terč.butylester N-[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)sulfonyl]-N-(3-chlorbenzyl)glycinu, hydrochlorid (b) N-[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)sulfonyl]-N-(3-chlorbenzyl)glycin, trifluoracetat

• · · · • ·

NaH (35 mg, 80% disperze v minerálním oleji (hmot./hmot.), 1,16 mmol) se přidá najednou do suspenze guanidinhydrochloridu (150 mg, 1,55 mmol) v DME (10 ml) a směs se zahřívá při teplotě 60 °C v atmosféře N₂ po dobu 30 min. Přidá se terc.butylester N-[(1,4-dichlor-7-isochinolyl)sulfonyl]-N- (3-chlorbenzyl)-glycinu (185 mg, 0,36 mmol) a směs se zahřívá při teplotě 90 °C po dobu 5 h. Ochlazená směs se naředí Et₂O, promyje se vodou, suší se (Na₂SO₄) a odpaří se ve vakuu. Zbytek se rozpustí v Et₂O a přidá se roztok HCI v Et₂O (1 M) za vzniku sraženiny. Rozpouštědla se odpaří ve vakuu a bílý pevný materiál se trituruje s EtOAc a potom se suší za zisku terč.butylesteru N-[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)sulfonyl]-N-(3-chlorbenzyl)-glycinu, hydrochloridu (85 mg, 0,145 mmol).

t.t. 203-205 °C.

^XH (DMSO-de, 300 MHz) δ 1,2 (9H, s), 4,1 (2H, s), 4,55 (2H, s), 7,2-7,35 (4H, m), 8,3 (1H, d), 8,35 (1H, d), 8,5 (s,

1H), 9,3 (1H, s), 11,55 (1H, br s) ppm.

LRMS 538, 540 (MH⁺) , 1076 (M₂H⁺) .

Analýza: Zjištěno: C, 47,04; H, 4,53; N, 11,82. Vypočítáno pro C₂₃H25C1₂N5O₄S*1,O HCI· 0,5 H₂O: C, 4731; H, 4,66; N, 11,99.

terc.butylester N-[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)sulfonyl]-N-(3-chlorbenzyl)glycinu, hydrochlorid (60 mg, 0,104 mmol) se rozpustí v CF3CO₂H (0,5 ml) a směs se mísí při teplotě okolí po dobu 1 h. Směs se naředí PhMe a rozpouštědla se odpaří ve vakuu. Zbytek se rozpustí v Et₂O a mísí se při teplotě okolí po dobu 1 h. Vzniklá sraženina se odebere filtrací, promyje se Et₂O a suší se za zisku N-[(4-chlor-lguanidin-7-isochinolyl)sulfonyl]-N-(3-chlorbenzyl)glycinu, trífluoracetatu (31 mg, 0,052 mmol) ve formě bílého pevného • ·· ·· 9 9 9· ·· • 9 · 9 ·· · · · · • 9 9 9 9 φ · materiálu.

t.t. 306-308 °C.

^XH (CF3COP, 400 MHz) δ 4,3 (2H, s), 4,55 (2H, s) , 7,0-7,1 (2H, m), 7,1-7,15 (2H, m), 8,25 (ÍH, d), 8,4 (ÍH, s), 8,5 (lH,d), 8,8 (ÍH, s) ppm.

LRMS 482,484 (MH⁺) , 496, 498 (MH⁺ příslušného methylesteru).

Analýza: Zjištěno: C. 42,60; H, 3,04; N, 12,03. Vypočítáno pro Ci₉Hi7Cl₂N₅O4S*l,O CF₃CO₂H: C, 42,29; H, 3,04; N, 11,74.

Příklad 15:

(a) terč.butylester N-[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)sulfonyl]-N-(4-methoxybenzyl)glycin, hydrochlorid (b) N-[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)sulfonyl]-N-(4methoxybenzyl)glycin

Guanidinhydrochlorid (118 mg, 1,24 mmol) se přidá najednou do míšené suspenze NaH (23 mg, 80% disperze v minerálním oleji (hmot./hmot.), 0,78 mmol) DME (10 ml) a směs se zahřívá při teplotě 60 °C v atmosféře N₂ po dobu 30 min. Přidá se terč.butylester N-[(1,4-dichlor-7-isochinolyl)sulfonyl]-N-(4-methoxybenzyl)glycinu (155 mg, 0,31 mmol) a směs se zahřívá při teplotě 90 °C po dobu 1 h. Chladná směs se vnese do vody a extrahuje se EtOAc (x3). Kombinované organické extrakty se potom promyjí vodou, solankou, suší se (Na₂SO₄) a odpaří se ve vakuu. Zbytek se přečistí chromatografií na silikagelové koloně za použití hexanu-EtOAc (80:20), a potom CH₂Cl₂-MeOH• ·· · · φφφφ ·· φφφφ φφ φ φφφ • φφφφ φφφ φφφ φφ φφ φφ φφφ

0,880 ΝΗ₃ (95:5:0,5 až 90:10:1) jako eluens, za zisku žluté pryže. Po trituraci s i-Pr20 se získá terc.butylester N-[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)sulfonyl]-N-(4-methoxybenzyl)glycinu (80 mg, 0,15 mmol) ve formě lepivého žlutého materiálu. Malý vzorek (10-15 mg) se rozpustí v EtOAc, přidá se roztok HCI v Et2O a rozpouštědla se odpaří ve vakuu, za zisku terč.butylesteru N-[(4-chlor-l-guanidin-7isochinolyl)sulfonyl]-N-(4-methoxybenzyl)glycinu, hydrochloridu (18 mg) ve formě pevného materiálu. (Všechna charakterizační data platí pro HCI sůl).

t.t. >192 °C (za rozkladu).

^(DMSO-de, 400 Mhz) δ 1,2 (9H, s) , 3,7 (3H, s) , 4,0 (2H, s) ,

4,4 (2H, s), 6,8 (2H, d) , 7,1 (2H, d), 8,3 (IH, d), 8,3 (IH, d), 8,4-8,9 (4H, br s), 8,5 (s, IH), 8,2 (IH, s) ppm.

LRMS 534, 536 (MH⁺) .

Analýza: Zjištěno: C, 51,36; H, 5,53; N, 11,23. Vypočítáno pro C24H28C1N₅05S*1,0 HCI· 0,28 i-Pr₂O: C, 51,48; H, 5,54; N, 11,69.

terc.butylester N-[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)sulfonyl]-N-(4-methoxybenzyl)glycinu (65 mg, 0,122 mmol) se rozpustí v CF3CO2H (1,0 ml) a směs se mísí při teplotě okolí po dobu 40 min. Směs se naředí PhMe, zahustí se ve vakuu a zbytek se přečistí chromatografií na silikagelové koloně za použití CH2Cl2:MeOH: 0,8 80 NH3 (83:15:3) jako eluens za zisku N-[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)sulfonyl]N-(4-methoxybenzyl)glycinu (11 mg, 0,023 mmol) ve formě bílého pevného materiálu.

t.t. >293 °C (za rozkladu).

^XH (DMSO-de, 400 MHz) δ 3,7 (3H, s) , 3,8 (2H, s) , 4,4 (2H, s) ,

«»

6,85 (2H, d), 7,15 (2H, d), 7,2-7,5 (4H, br s) , 8,0 (UI, d), 8,1 (1H, d), 8,15 (s, 1H), 9,1 (1H, s) ppm.

Analýza: Zjištěno: C, 48,44; H, 4,47; N, 14,12. Vypočítáno pro C2oH2oC1N₅0₅S·!, 0 H₂0: C, 48,34; H, 4,27; N, 14,28.

Příklad 16:

(a) terč.butylester N-[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)sulfonyl]-N-(2-pyridylmethyl)glycinu (b) N-[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)sulfonyl]-N-(2-pyridylmethyl)glycin, dihydrochlorid

Guanidinhydrochlorid (293 mg, 3,07 mmol se přidá najednou do míšené suspenze NaH (57 mg, 80% disperze v minerálním oleji (hmot./hmot.), 1,92 mmol) v DME (10 ml) a směs se zahřívá při teplotě 60 °C v atmosféře N2 po dobu 30 min. Přidá se roztok terč.butylesteru N-[(1,4-dichlor-7-isochinolyl)sulfonyl]-N-(2-pyridylmethyl)glycinu (370 mg, 0,78 mmol) v DME (10 ml) a směs se zahřívá při teplotě 90 °C po dobu 1 h. Rozpouštědla se odpaří ve vakuu, zbytek se rozpustí v EtOAc (200 ml) a promyje se vodným roztokem NH₄C1 (150 ml), suší se (MgSO₄) a odpaří se ve vakuu. Zbytek se přečistí chromatografií na silikagelové koloně za použití pentanu-EtOAc (100:0 až 20:80) jako eluens za zisku terč.butylesteru N-[(4-chlor-l-guanidin-7isochinolyl)-sulfonyl]-N-(2-pyridylmethyl)glycinu (120 mg,

0,24 mmol) ve formě světle žluté pěny.

*H (CDC13, 400 MHz) δ 1,3 (9H, s), 4,1 (2H, s), 4,65 (2H, s),

				• • · 55 í ♦ · ·	• · • * • • · • • · ··	• · · · · · • « ♦ y · < 4 · » • · · · • · « ·	• · * • · · · « · « • · * · • · · • 9 · · ·
7,2 (IH,	m) , 7,5	(IH,	d), 7,65	(IH,	dd),	8,05 (IH, d), 8,1
(IH, d),	8,1 (IH,	s) ,	8,45 (IH,	d),	9,25	(IH, s	) ppm.
LRMS 505	(MH⁺) .
Analýza:	Zjištěno	: C,	51,93; H,	5,03	; N,	15,45.	Vypočítáno

pro C22H₂5ClN₆O4S*0,1 Η₂0· 0,2 EtOAc: C, 52,24; H, 5,18; N,

15,89.

Roztok HCI (3 ml, 2 M, 6 mmol) se přidá do roztoku terč.butylesteru N-[(4-chlor-l-guanidin-7isochinolyl)sulfonyl]-N—(2-pyridylmethyl)glycinu (115 mg,

0,23 mmol) v dioxanu (5,0 ml) a směs se zahřívá při teplotě 60 °C po dobu 18 h. Rozpouštědla se odpaří ve vakuu a zbytek se trituruje s horkým EtOAc za zisku N-[(4-chlor-l-guanidin7-isochinolyl)-sulfonyl]-N-(2-pyridylmethyl)glycinu, dihydrochloridu (95 mg, 0,167 mmol) ve formě špinavě bílého pevného materiálu.

t.t. 216-220 °C.

¹H(CD3OD, 400 MHz) δ 4,4 (2H, s) , 5,1 (2H, s) , 8,05 (IH, m) ,

8,3 (IH, d), 8,4 (IH, d), 8,5 (IH, s), 8,5 (IH, d), 8,6 (IH, dd), 8,85 (IH, d), 9,3 (IH, s) ppm.

Analýza: Zjištěno: C, 39,01; H, 4,01; N, 14,14. Vypočítáno pro Ci₈Hi7ClN₆O4S*2,0 HC1«2,O Η₂Ο·0,12 dioxan: C, 39,05; H, 4,25; N, 14,78.

Příklad 17:

(a) terč.butylester N-[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)sulfonyl-N-(3-pyridylmethyl)glycinu (b) N-[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)sulfonyl-N-(3pyridylmethyl)glycin, dihydrochlorid ·· · ·· · • ·

Guanidinhydrochlorid (317 mg, 3,32,mmol se přidá najednou do míšené suspenze NaH (62,3 mg, 80% disperze v minerálním oleji (hmot./hmot.), 2,08 mmol) v DME (10 ml) a směs se zahřívá při teplotě 60 °C v atmosféře N2 po dobu 30 min.

Přidá se roztok terc.butylesteru N-[(l,4-dichlor-7isochinolyl)sulfonyl]-N-(3-pyridylmethyl)glycinu (400 mg,

0,83 mmol) v DME (10 ml) a směs se zahřívá při teplotě 80 °C po dobu 4 h. Rozpouštědla se odpaří ve vakuu, zbytek se rozpustí v EtOAc (200 ml), promyje se vodným roztokem NH4CI (200 ml), suší se (MgSO₄) a odpaří se ve vakuu. Zbytek se přečistíchromatografií na silikagelové koloně za použití (i) pentanu-EtOAc (70:30 až 50:50) a potom (ii) CH2Cl2-MeOH-0,880 NH3 (95:5:0,5 až 90:101) jako eluens, za zisku terc.butylesteru N-[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)sulfonyl]-N-(3-pyridylmethyl)glycinu (104 mg, 0,21 mmol) ve formě světle žlutého pevného materiálu.

hHCDCIa, 400 MHz) δ 1,3 (9H, s) , 3,8 (2H, s) , 4,5 (2H, s) , 6,4-6,8 (4H, br), 7,2 (ÍH, m) , 7,6 (ÍH, d) , 8,0 (ÍH, d) 8,05 (ÍH, s), 8,05 (ÍH, d), 8,4 (ÍH, s), 8,5 (ÍH, d), 9,3 (ÍH, s) ppm.

LRMS 505, 507 (MH⁺) .

Analýza: Zjištěno: C, 51,95; H, 5,02; N, 16,25. Vypočítáno pro C22HCIN6O4S: C, 52,33; H, 4,99; N, 16,64.

CF3CO2H (1,0 ml) se přidá do míšeného roztoku terc.butylesteru N-[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)sulfonyl]-N-(3-pyridylmethyl)glycinu (100 mg, 0,20 mmol) v CH2CI2 (1,0 ml) a směs se mísí při teplotě 23 °C po dobu 3,5 h • · φ · φφφφ φφ t 9 9 9 9 9 · « • · · ♦ · ·

Rozpouštědla se odpaří ve vakuu a směs se azeotropuje s PhMe a CH2CI2. olejový zbytek se rozpustí v EtOAc a přidá se roztok EtOAc nasycený HCI (3,0 ml), za vzniku sraženiny- Pevný materiál se odebere filtrací a suší se za zisku N-[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)sulfonyl]-N-(3-pyridylmethyl)glycinu, dihydrochloridu (48 mg, 0,086 mmol).

^TH (CD3OD, 400 MHz) δ 4,25 (2H, s), 4,9 (2H.s), 8,05 (IH, dd) .

8,4 (IH, d), 8,45 (IH, s) , 8,5 (IH, d), 8, 7 (IH, d), 8,8 (IH, d), 9,0 (IH, s), 9,2 (IH, s) ppm.

Analýza: Zjištěno: C, 39,32; H, 4,07; N, 15,07,Vypočítáno pro Ci8Hi7ClN₆O₄S*2,0 HCI· 1,5 H₂0· 0,05 EtOAc«0,05 CH2CI2: C, 39,19; H, 3,72; N, 14,64.

Příklad 18:

(a) terc.butylester N-[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)sulfonyl]-N-(4-pyridylmethyl)glycinu (b) N- [ (4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)sulfonyl]-N-(4-pyridylmethyl)glycin, dihydrochlorid

Guanidinhydrochlorid (300 mg, 3,14 mmol) se přidá najednou do míšené suspenze NaH (59 mg, 80% disperze v minerálním oleji (hmot./hmot.), 1,97 mmol) v DME (10 ml) a směs se zahřívá při teplotě 60 °C v atmosféře N2 po dobu 30 min. Přidá se roztok terč.butylesteru N-[(1,4-dichlor-7-isochinolyl)sulfonyl]-N-(4-pyridylmethyl)glycinu (379 mg, 0,79 mmol) v DME (10 ml) a směs se zahřívá při teplotě 80 °C po dobu 4 h. Rozpouštědla se odpaří ve vakuu, zbytek se rozpustí v EtOAc (200 ml) a promyje se vodným roztokem NH4CI (150 ml), suší se (MgSO4) a odpaří se ve vakuu. Zbytek se přečistíopakovanou chromatografií na silikagelové koloně za použití (i) pentanuEtOAc (70:30 až 50:50) a potom (ii) CH₂Cl₂-MeOH-0,880 NH3 (95:5:0,5 až 90:101) jako eluens, za zisku terč.butylesteru N[ (4-chlor-,l-guanidin-7-isochinolyl) sulfonyl] -N- (4-pyridylmethyl)glycinu (96 mg, 0,19 mmol).

^XH(CDC4, 400 MHz) δ 1,3 (9H, s), 3,9 (2H, s), 4,55 (2H, s),

7,25 (2H, d), 8,05 (IH, d) , 8,1 (IH, d) , 8,15 (IH, s), 8,6 (2H, d), 9,3 (IH, s)ppm.

LRMS 505, 507 (MH⁺) .

Analýza: Zjištěno: C, 52,63; H, 5,09; N, 16,18. Vypočítáno pro C₂₂H₂5C1N₆O4S: C, 52,33; H, 4,99; N, 16,64.

CF3CO₂H (1,0 ml) se přidá do míšeného roztoku terč.butylesteru N-[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)sulfonyl]-N-(4-pyridylmethyl)glycinu (88 mg, 0,17 mmol) v CH₂C1₂ (1,0 ml) a směs se mísí při 23 °C po dobu 3,5 h. Rozpouštědla se odstraní ve vakuu, směs se azeotropuje s CH₂C1₂. Olejový zbytek se rozpustí v CH₂Cl₂-MeOH (1,0 ml, 9:1) a přidá se roztok EtOAc nasycený HCI (3,0 ml), čímž vznikne sraženina. Bílý pevný materiál se odebere filtrací a suší se za zisku N-[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)sulfonyl]-N-(4-pyridylmethyl)glycinu, dihydrochloridu (18 mg, 0,033 mmol).

^XH(CD3OD, 400 MHz) δ 4,3 (2H, s) , 5,0 (2H, s) , 8,2 (2H, d) , 8,4 (IH, d), 8,5 (IH, s), 8,55 (IH, d), 8,8 (2H, d), 9,1 (IH, s) ppm.

Analýza: Zjištěno: C, 39,57; H, 4,12; N, 14,85. Vypočítáno pro Ci₈Hi7ClN6O₄S»2,0HCl*l,5 H₂O: C, 39,39; H, 4,04; N, 15,39.

ΦΦ φφ φφφφ φφ φ φ φφ φ φφφ • · φ ♦ φ φ φφ φφφφφφφ φφφ φφφφ φφ φφ ·* φφφ

Příklad 19:

(a) terč.butylester Ν-[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl) sulfonyl]-N-[(IR)-1-fenylethyl]glycinu (b) N-[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)sulfonyl]-N-[(IR)-1fenylethyl]glycin, hydrochlorid

NaH (30 mg, 80% disperze v minerálním oleji (hmot./hmot.), 1,01 mmol) se přidá najednou do míšené suspenze guanidinhydrochloridu (154 mg, 1,61 mmol) v DME (6,0 ml) a směs se zahřívá při teplotě 60 °C v atmosféře N2 po dobu 30 min. Přidá se roztok terč.butylesteru N-[(1,4-dichlor-7-isochinolyl)sulfonyl]-N-[(IR)-1-fenylethyl]glycinu (200 mg, 0,40 mmol) v DME (3,0 ml) a směs se zahřívá při teplotě 95 °C po dobu 5 h. Rozpouštědla se odpaří ve vakuu a zbytek se přečistíchromatografií na silikagelové koloně za použití pentanu-EtOAc (50:50 až 33:66) jako eluens za zisku terč.butylesteru N-[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)sulfonyl]-N-[(IR)-1-fenylethyl]glycinu (125 mg, 0,23 mmol) ve formě světle žluté pěny po opakovaném odpaření z CH2CI2 t.t. 106-111 °C.

tH (DMSO-de, 300 MHz) δ 1,2 (9H, s), 1,3 (3H, d), 3,7 (IH, d), 3,95 (IH, d), 5,05 (IH, q) , 7,1-7,4 (4H, br) , 7,2-7,3 (5H, m), 8,0 (IH, d), 8,1 (IH, s), 8,2 (IH, d), 9,15 (IH, s) ppm.

LRMS 518, 520 (MH⁺) , 1035 (M₂H⁺) .

Analýza: Zjištěno: C, 55,15; H, 5,55; N, 12,84. Vypočítáno pro C24H₂8C1N₅O₄S· 0,2 EtOAc· 0,1 CH2CI2: C, 54,96; H, 5,52; N,

12,87.

···· • 9 »999 9 9 • · · 9 · « · • 99 9 999 9 9 • «999 99 9 • 9 9» 99 99 99 999 terč.butylester Ν-[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)sulfonyl]-Ν-[(IR)-1-fenylethyl)glycinu (100 mg, 0,19 mmol) se rozpustí v roztoku EtOAc nasyceném HCI (7,0 ml) a směs se mísí při teplotě okolí po dobu 4 h. Směs se zahustí ve vakuu a zbytek se trituruje s EtOAc za zisku N-[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)sulfonyl]-N-[(IR)-1-fenylethyl]glycinu,

hydrochloridu (75 mg, 0,14	mmol) ve formě bílého	prášku.
t.t. 185-190 °C.
⁷H (DMSO-de, 300 MHz) δ	1,35	(3H, d),	3,85 (ÍH, d)	, 4,15 (ÍH,
d), 5,3 (ÍH, q), 7,15	(5H,	br s), 8	,3 (ÍH, d), 8	,4-8,8 (4H,
br), 8,4 (ÍH, d), 8,5	(ÍH,	s), 9,1	(ÍH, s), 11,3	(ÍH, br),

12,5 (ÍH, br) ppm.

Analýza: Zjištěno: C, 47,42; H, 4,40; N, 13,54. Vypočítáno pro C₂oH₂oC1N504S*1,0 HCI· 0,5 H₂O· 0,2 EtOAc: C, 47,59; H, 4,53; N, 13,34.

Příklad 20:

(a) terč.butylester N-[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)sulfonyl]-N-[(1S)-1-fenylethyl]glycinu (b) N-[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)sulfonyl]-N-[(1S)-1fenylethyl]glycin, hydrochlorid

NaH (30 mg, 80% disperze v minerálním oleji (hmot./hmot.), 1,0 1 mmol) se přidá najednou do míšené suspenze guanidinhydrochloridu (154 mg, 1,61 mmol) v DME (6,0 ml) a směs se zahřívá při teplotě 60 °C v atmosféře N₂ po dobu 30

9999 · · ·

I » ♦ Λ 9 9 99 min. Přidá se roztok terč.butylesteru N-[(l,4-dichlor-7isochinolyl)sulfonyl]-N-[(1S)-1-fenylethyl]glycinu (200 mg, 0,40 mmol) v DME (3,0 ml) a směs se zahřívá při teplotě 95 °C po dobu 5 h. Rozpouštědla se odpaří ve vakuu a zbytek se přečistíchromatografií na silikagelové koloně za použití pentanu-EtOAc (50:50 až 33:66) jako eluens za zisku terč.butylesteru N-[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)sulfonyl]-N-[(1S)-1-fenylethyl]glycinu (128 mg, 0,23 mmol) ) ve formě světle žluté pěny po opakovaném odpaření z CH2CI2. t.t. 109-115 °C.

^(DMSO-de, 300 MHz) δ 1,2 (9H, s) , 13 (3H, d) , 3,7 (IH, d) , 3,95 (IH, d), 5,05 (IH, q), 7,1-7,45 (4H, br), 7,2-7,3 (5H, m) , 8,0 (IH, d), 8,1 (IH, s), 8,2 (IH, d), 9,15 (IH, s) ppm. LRMS 518, 520 (MH⁺) , 1035 (M₂H⁺) .

Analýza: Zjištěno: C, 55,26; H, 5,56; N, 12,86. Vypočítáno pro C₂4H28ClN₅O4S*0,1 EtOAc· 0,05 CH2CI2: C, 55,28; H, 5,54; N,

12,97.

terč.butylester N-[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)sulfonyl]-N-[(1S)-1-fenylethyl]glycinu (100 mg, 0,19 mmol) se rozpustí v Roztoku EtOAc nasyceném HCI (4,0 ml) a směs se mísí při teplotě okolí po dobu 4 h. Směs se zahustí ve vakuu a zbytek se trituruje s EtOAc za zisku N-[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)sulfonyl]-N-[(1S)-1-fenylethyl]glycinu hydrochloridu (72 mg, 0,14 mmol) ve formě bílého prášku, t.t. 196-200 °C.

^XH (DMSO-de, 300 MHz) δ 1,35 (3H, d), 3,85 (IH, d), 4,15 (IH, d) , 5,3 (IH, q), 7,15 (5H, br s), 8,3 (IH, d), 8,4-8,8 (4H, br), 8,4 (IH, d), 8,5 (IH, s), 9,1 (IH, s), 11,3 (IH, br),

12,4 (IH, br) ppm.

Analýza: Zjištěno: 0,47,42; H, 4,30; N, 13,51. Vypočítáno pro • ♦ ···«··· « 9 9 9

99

C₂oH2oC1N₅04S*1,OHC1*1_zO Η₂Ο·0,1 EtOAc: C, 47,47; H, 4,45; N,

13,57.

Příklad 21:

(a) terč.butylester N-benzyl-N-[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)sulfonyl]-1-alaninu (b) N-benzyl-N-[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)sulfonyl]-1-alanin, hydrochlorid

NaH (30 mg, 80% disperze v minerálním oleji (hmot./hmot.) 1,01 mmol) se přidá najednou do míšené suspenze guanidinhydrochloridu (154 mg, 1,61 mmol) v DME (5,0 ml) a směs se zahřívá při teplotě 60 °C po atmosférou N2 po dobu 45 min. Přidá se roztok terč.butylesteru N-benzyl-N-[(1,4-dichlor-7-isochinolyl)sulfonyl]-1-alaninu (200 mg, 0,40 mmol) v DME (2,0 ml) a směs se zahřívá při teplotě 95 °C po dobu 4 h. Rozpouštědla se odpaří ve vakuu a zbytek se přečistí chromatografií na silikagelové koloně za použití pentanu:

EtOAc (50:50 až 20:80) jako eluens za zisku terč.butylesteru N-benzyl-N-[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)sulfonyl]-1-alaninu (120 mg, 0,225 mmol) ) ve formě světle žluté pěny po opakovaném odpaření z CH2CI2.

^XH (DMSO-dg, 300 MHz) δ 1,1 (9H, s), 1,15 (3H, d), 4,35 (IH, d), 4,5 (IH, q), 4,7 (IH, d), 7,1-7,45 (4H, br), 7,2-7,4 (5H, m), 8,0 (lH,d), 8,1 (IH, d), 8,15 (IH, s), 9,1 (IH, s) ppm. LRMS 518, 520 (MH⁺) .

Analýza: Zjištěno: C, 55,33; H, 5,55; N, 12,82. Vypočítáno pro C24H28CIN5O4S· 0,1 EtOAc· 0,05 CH2CI2: C, 55,30; H, 5,48; N,

• Φ ····

13,19.

terč.butylester N-benzyl-N-[(4-chlor-l-guanidin-7isochinolyl)sulfonyl]-1-alanin (1 00 mg, 0,lg mmol) se rozpustí v roztoku EtOAc nasyceném HCI (5,0 ml) a směs se mísí při teplotě okolí po dobu 18 h. Směs se zahustí ve vakuu, azeotropuje se s EtOAc, za zisku N-benzyl-N-[(4-chlor-l-guanidin-7 isochinolyl)sulfonyl]-1-alaninu, hydrochloridu (77 mg, 0,15 mmol) ve formě bílého prášku.

t.t. 256-262 °C.

^(DMSO-de, 300 MHz) δ 12 (3H, d) , 4,35 (IH, d) , 4,7 (IH, q) , 4,8 (IH, d), 7,1-7,4 (5H, m), 8,3 (2H, s), 8,4-8,7 (4H, br) , 8,5 (IH, s), 9,05 (IH, s), 11,2 (IH, br), 12,7 (IH, br) ppm.

LRMS 4 61, 4 63 (MH⁺) .

Analýza: Zjištěno: C, 48,02; H, 4,38; N, 13,33. Vypočítáno pro C2oH2oC1N₅0₄S*1,0 HCl*0,25 H₂O· 0,1 EtOAc: C, 47,88; H,

4,39; N. 13,69.

Příklad 22:

(a) terč.butylester N-(terc-butoxykarbonylmethyl)-N-[(4chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)sulfonyl]glycinu (b) N-(karboxymethyl)-N-[(4-chlor-l-guanidin-7isochinolyl)sulfonyl]glycin, hydrochlorid

(88 mg, 0,64 mmol) a potom terc.butyl , 0,38 mmol) se přidají do míšeného roztoku N-[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)Bezvodý K2CO3 bromacetat (56 ml terč.butylesteru

99·· • · · · • 9 • 9 • 9 999 ···· • * 9

9 9

9 9 9

99

sulfonyl]glycinu (132 mg, 0,33 mmol) v DMF (2,0 ml) a směs se mísí při 23 °C po dobu 18 h. Směs se naředí EtOAc (300 ml), promyje se solankou (150 ml), vodou (200 ml), suší se (MgSO₄) a odpaří se ve vakuu. Zbytek se přečistí chromatografií na silikagelové koloně za použití pentanu-EtOAc (80:20 až 50:50) jako eluens za zisku terč.butylesteru N-(tercbutoxykarbonylmethyl)-N-[(4-chlor-l-guanidin-7isochinolyl)sulfonyl]glycinu (101 mg, 0,19 mmol) ve formě světle žluté pěny.

^XH (CDCIs, 400 MHz) δ 1,4 (18H, s), 4,1 (4H, s), 8,0 (1H, d).

8,1 (1H, d). 8,15 (1H, s), 9,25 (1H, s) ppm.

LRMS 528 (MH⁺) .

Analýza: Zjištěno: C, 49,57; H, 5,78; N. 12,73. Vypočítáno pro C22H30CIN5O6S· 0,1 H₂O· 0,1 EtOAc: C, 49, 95; H, 5,80; N, 13,00.

Roztok HCI (3 ml, 2 M, 6 mmol) se přidá do roztoku terč.butylesteru N-[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl) sulfonyl]-N-(terc-butoxykarbonylmethyl)glycinu (90 mg. 0,17 mmol) v dioxanu (4,0 ml). Směs se mísí při 23 °C po dobu 18 h a potom se zahřívá při teplotě 70 °C. Rozpouštědla se odpaří ve vakuu a zbytek se suší za zisku N-karboxymethyl)-N-[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)sulfonyl]glycinu, hydrochloridu (61 mg, 0,127 mmol) ve formě bílého pevného materiálu.

t.t. 296-300 °C (za rozkladu).

^XH (DMSO-de, 400 MHz) δ 4,05 (4H, s) , 7,9-8,3 (4H, br) , 8,2 (1H, d), 8,25 (1H, d), 8,35 (1H, s), 9,0 (1H, s) ppm.

Analýza: Zjištěno: C, 38,29; IL 3,58; N, 14,13. Vypočítáno pro Ci₄Hi₄ClN50eS«l, 0 HCI· 0,1 H₂O· 0,3 dioxan: C, 37,99; H, 3,69; N,

14,57.

·· 4444

4 ·♦ 4 • ·♦ • 4 4 4 • 4 • · • 4 ··· 4444 •4 *

Příklad 23:

(a) terč.butylester N-[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)sulfonyl]-1-alaninu (b) N-[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)sulfonyl]-1-alanin, trifluoracetat

NaH (37 mg, 80% disperze v minerálním oleji (hmot./hmot.), 1,23 mmol) se přidá najednou do míšeného roztoku guanidinhydrochloridu (189 mg, 1,97 mmol) v DME (6 ml) a směs se zahřívá při teplotě 60 °C v atmosféře N2 po dobu 30 min. Přidá se terč.butylester 1-{[(1,4-dichlor-7-isochinolyl)sulfonyl]amino)-1-alaninu (200 mg, 0,49 mmol) a směs se zahřívá při teplotě 90 °C po dobu 7 h. Chladná směs se zahustí ve vakuu, zbytek se suspenduje ve vodě a extrahuje se EtOAc (3x30 ml). Kombinované organické extrakty se suší (MgSO₄) a rozpouštědla se odpaří ve vakuu. Zbytek se přečistí chromatografií na silikagelové koloně za použití CH2Cl2~MeOH-0,880 NH3 (95:5:0,5) jako eluens za zisku terč.butylesteru N-[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)sulfonyl]-L-alaninu (160 mg, 0,37 mmol) ve formě bílého prášku.

^XH (DMSO-de, 300 MHz) δ 1,1 (9H, s), 1.15 (3H, d), 3,8 (IH, dq), 7,1-7,4 (4H, br), 8,0 (IH, d), 8,05 (IH, d), 8,1 (IH, s),

8,3 (IH, d), 9,05 (IH, s) ppm.

CF3CO2H (1,0 ml) se přidá do míšeného roztoku terč.butylesteru N-[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)sulfonyl]-1-alaninu (přibl. 150 mg, 0,35 mmol) v CH2CI2 (3,0 • Φ ·· MM φφ • φ · φ φ φ φ φ φ φ φ φ · φ • φ φ φ φ · φφ φφφ ΜΜ Φ· φφ φφ ml) a směs se mísí při teplotě okolí po dobu 2 h. Směs se odpaří ve vakuu, azeotropuje se s PhMe a CH2CI2 a potom se trituruje s Et2O za zisku N-[ (4-chlor-l-guanidin-7isochinolyl)-sulfonyl]-1-alaninu, trifluoracetatu (62 mg,

0,126 mmol) ve formě bílého prášku.

t.t. >250 °C.

IH (CD3OD + TFA-d, 300 MHz) δ 1,35 (3H, d), 4,05 (IH, q), 8,3 (IH, d), 8,4 (IH, s), 8,45 (IH, d) , 8,9 (IH, s) ppm.

LRMS 389, 391 (MNH?) .

Analýza: Zjištěno: C, 36,66; H, 3,11; N, 14,00. Vypočítáno pro CnHuClNsOíS·!, 0 CF3CO2H· 0,3 H₂0: C, 36,64; H, 3,21; N, 4,24.

Příklad 24:

(a) methylester N-[ (4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)sulfonyl}-D-alaninu, (b) N-[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)sulfonyl}-D-alanin, hydrochlorid

NaH (35-mg, 80% disperze v minerálním oleji (hmot./hmot.), 1,17 mmol) se přidá najednou do míšeného roztoku guanidinhydrochloridu (179 mg, 1,87 mmol) v DMSO (5 ml) a směs se zahřívá při teplotě 60 °C v atmosféře N2 po dobu 45 min. Přidá se methylester l-{[(1,4-dichlor-7-isochinolyl)sulfonyl]amino}-D-alaninu (170 mg, 0,47 mmol) a směs se zahřívá při teplotě 90 °C po dobu 4 h. Chladná směs se vnese do vody a extrahuje se EtOAc (3x30 ml). Kombinované organické extrakty se suší (MgSO₄) a rozpouštědla se odpaří se ve vakuu. Zbytek se přečistí chromatografií na silikagelové koloně za použití pentanu-EtOAc (66:33 - 0:100) jako eluens za zisku methylesteru N-[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)sulfonyl]-D-alaninu (22 mg, 0,057 mmol) ve formě žluté pěny/oleje.

(CD₃OD, 300 MHz) δ 1,3 (3H, d), 3,4 (3H, s) , 4,1 (IH, q),

8,1 (IH, d), 8,1 (IH, d), 8,15 (IH, s), 9,1 (IH, s) ppm.

LRMS 386, 388 (MH⁺) .

Roztok NaOH (1 ml, 2 M, 2 mmol) se přidá se do roztoku methylesteru N-[(4-chlor~l-guanidin-7-isochinolyl) sulfonyl]-D-alaninu (17 mg, 0,044 mmol) v MeOH (3 ml) a směs se zahřívá při teplotě 60 °C po dobu 18 h. Chladná směs se neutralizuje ředěnou HCI (2 Μ), MeOH se odpaří ve vakuu a zbytek se trituruje s vodou (10 ml). Pevný materiál se odebere filtrací, bez dalšího promývání, a suší se ve vysokém vakuu za zisku N-[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)sulfonyl]-D-alaninu hydrochloridu (9 mg, 0,021 mmol), ve formě špinavě bílého prášku.

^XH (DMSO-de, 300 MHz) δ 1,2 (3H, d) , 3,8 (IH, dq) , 7,2-7,6 (4H, br), 8,05 (IH, d), 8,1 (IH, d), 8,15 (IH s), 8,2 (IH, m), 9,1 (IH, s) ppm.

Analýza: Zjištěno: C, 37,56; H, 3,98; N, 15,74, Vypočítáno pro Ci3Hi4ClN₅O₄S»l,0 HCI· 0,5 H₂O: C, 37,42; H, 3,86; N, 16,78.

Příklad 25:

(a) terc.butylester 1-{[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)sulfonyl]amino}-1-valinu (b) N-[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)sulfonyl]-1-valin, trifluoracetat • 94 444494 94

4 · 9 · 4 4 4 9 ·

4 4 9 4 4

NHj

9 4 4 4 9 4

44 ·* 944

NaH (35 mg, 80% disperze v minerálním 1,17 mmol) se přidá najednou do míšeného oleji (hmot./hmot.), roztoku guanidinhydrochloridu (176 mg, 1,84 mmol) v DMA (4 ml) pod atmosférou N2 a směs se zahřívá při teplotě 60 °C po dobu 30 min. Najednou se přidá terč.butylester 1-{[(1,4-dichlor-7-isochinolyl)sulfonyl]amino}-1-valinu (161 mg, 0,43 mmol) a směs se zahřívá při teplotě 80 °C po dobu 18 h. Chladná směs se vnese do vody (50 ml), extrahuje se EtOAc (2x20 ml) a kombinované organické extrakty se promyjí solankou, suší se (Na2SO4) a odpaří se ve vakuu. Zbytek se rozpustí v Et2O a přidá se roztok HCI v Et2O (1 M), čímž vznikne bílá sraženina. Et2O se dekantuje a pevný zbytek se rozpustí v MeCN a roztok se ochladí na přibližně 0 °C, za vzniku sraženiny. Tato sraženina se odebere filtrací a potom se suší za zisku terč.butylesteru 1—{[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)sulfonyl]amino}-l-valinu, hydrochloridu (36 mg, 0,072 mmol) ve formě bílého pevného materiálu. Odpařením kombinovaných organických původních kapalin se získá pryž, která se přečistí chromatografií na silikagelové koloně za použití CH2Cl2-MeOH— 0,880 NH3 (90:10:1) jako eluens za zisku terč.butylesteru 1-{[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)sulfonyl]amino}-1-valinu (1 04 mg, 0,228 mmol). (Vzorek se charakterizuje jako hydrochloridová sůl).

t.t. 192-194 °C (za rozkladu).

^XH (DMSO-de, 300 MHz) δ 0,8 (3H, d) , 0,85 (3H, d) , 1,05 (9H, s), 2,0 (1H, sept), 3,7 (1H, dd), 8,3 (1H, d), 8,4 (1H, d),

8,4 (1H, d), 8,45 (1H, s), 8,5-8,7 (4H, br), 9,05 (1H, s),

11,3 (1H, br), ppm.

LRMS 456, 458 (MH⁺) .

Analýza: Zjištěno: C, 45,67; H, 5,54; N, 13,97. Vypočítáno pro Ci9H2₆ClN5O₄S·!, 0 HC1*O,5 H₂O: C, 45,51; H, 5,63; N, 13,97.

terc.butylester l-{[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)sulfonyl]amino}-1-valinu (104 mg, 0,228 mmol) se rozpustí v CF3CO₂H (1,0 ml) a směs se mísí při teplotě okolí po dobu 1 h. Směs se naředí PhMe (25 ml) a zahustí se ve vakuu. Zbyté se krystalizuje s Et₂O obsahujícím malé množství EtOAc za zisku bílého pevného materiálu. Tento pevný materiál se potom trituruje s vodou za zisku 1-{[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)sulfonyl]amino}-1-valinu, trifluoracetatu (39 mg, 0,084 mmol).

t.t. >300 °C.

¹H (TFA-d, 400 MHz) δ 0,95 (3H, d) , 1,0 (3H, d), 2,25 (ÍH, sept), 4,0 (ÍH, d), 8,3 (ÍH, d), 8,4 (1H, s), 8,55 (ÍH, d),

9,0 (ÍH, s) ppm.

LRMS 400, 402 (MH⁺) .

Analýza: Zjištěno: C, 41.29; H, 4,37; N, 14,99. Vypočítáno pro Ci5Hi8ClN₅O₄S»0,5 CF₃CO₂H· 0,3 H₂O: C, 41,57; H, 4,16; N, 15,15.

Příklad 26:

(a) terc.butylester l-{[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)sulfonyl]amino}-D-valinu, hydrochlorid (b) N-[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)sulfonyl]-D-valin, hydrochlorid

NaH (35 mg, 80% disperze v minerálním oleji (hmot./hmot.),

• ·· • · · • ·	·· • •	• •	···· • •	99 • · • ·	9 9
• ·	•	•	•	9	• ·
• · ····	«·		··		99	• ·

1,17 mmol) se přidá najednou do míšeného roztoku guanidinhydrochloridu (176 mg, 1,84 mmol) v DMSO (2,5 ml) v atmosféře N2 a směs se zahřívá při teplotě 23 °C po dobu 30 min. Najednou se přidá terc.butylester l-{[(1,4-dichlor-7-isochinolyl)sulfonyl]amino}-D-valinu (200 mg, 0,46 mmol) a směs se zahřívá při teplotě 90 °C po dobu 3 h. Chladná směs se vnese do vody, extrahuje se EtOAc a kombinované organické extrakty se promyjí solankou, suší se (MgSO₄) a odpaří se ve vakuu. Zbytek se rozpustí v Et2O a přidá se roztok HCI v Et2O (0,5 ml, 1 Μ), čímž vznikne sraženina. Po přečištění chromatografií na silikagelové koloně za použití CH2Cl2~MeOH0,880 NH3 (95:5:0,5) jako eluens se získá produkt, který se opět zpracuje roztokem HCI v Et2O (1 M) za zisku terč.butylesteru l-{[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)sulfonyl]amino]-D valinu, hydrochlorid (76,6 mg, 0,151 mmol). t.t. 124-125 °C(za rozkladu).

^(DMSO-de, 300 MHz) δ 0,8 (3H, d) , 0,85 (3H, d) , 1,05 (9H, s) , 2,0 (IH, sept), 3,7 (IH, dd), 8,3 (IH, d), 8,4 (IH, d), 8,4 (IH, d), 8,45 (IH, s), 8,4-8,8 (4H, br), 9,05 (IH, s), 11,2 (IH, br) ppm.

LRMS 456, 458 (MH⁺) , 478, 480 (MNa⁺) .

Analýza: Zjištěno: C, 46,07; H, 5,67; N, 13,50. Vypočítáno pro Ci₉H26C1N5O₄S· 1,0 HCI· 0,5 MeOH: C, 46, 07; H, 5,75; N, 13,77.

terc.butylester 1-{[(4-chlor-l-guanidin-7 -isochinolyl)sulfonyl]amino]-D-valinu, hydrochlorid (61 mg, 0,12 mmol) se rozpustí v roztoku EtOAc nasyceném HCI (10 ml) při teplotě 0 °C, a směs se mísí při teplotě okolí po dobu 4 h. Směs se zahustí ve vakuu, zbytek se extrahuje horkým EtOAc, a organický roztok se potom zahustí ve vakuu a suší se za zisku 1—{[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)sulfonyl]amino]-D-valinu, hydrochloridů (24,3 mg, 0,050 mmol) ve formě světle žlutého pevného materiálu.

• ·· ♦ · · • ·	·* • v • ·	φ •
9 9 • ·	9 9
• ·		9 9	• ·
·····»	··	··	99	99

t.t. >190 °C (za rozkladu).

^XH(TFA-d, 400 MHz) δ 0,95 (3H, br s) , 1,0 (3H, br s), 2,3 (IH, br s), 4,05 (IH, br s), 8,35 (IH, br s), 8,4 (IH, br s), 8,55 (IH, br s), 9,1 (IH, br s) ppm.

LRMS 400 (MH⁺), 417 (MNH?) .

Analýza: Zjištěno: C, 41,29; H, 4,76; N, 14,16. Vypočítáno pro C15H18CIN5O4S· 1,0 HCI· 0,7 H₂O· 0.4 EtOAc: C, 41,18; H, 4,91; N,

14,46.

Příklad 27:

(a) terc.butylester 1-{[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)sulfonyl]amino}-D-terc-leucinu, hydrochlorid (b) N-[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)sulfonyl]-D-terc-leucin, hydrochlorid

NaH (58 mg, 80% disperze v minerálním oleji (hmot./hmot.), 1,27 mmol) se přidá najednou do míšeného roztoku guanidinhydrochlorid (191 mg, 2,0 mmol) v DMSO (5,0 ml) v atmosféře N2 a směs se zahřívá při teplotě 23 °C po dobu 30 min. Najednou se přidá roztok terč.butylesteru 1—{[(1,4— -dichlor-7-isochinolyl)sulfonyl]amino]-D-terc-leucinu (225 mg, 0,50 mmol) v DMSO (3,0 ml) a směs se zahřívá při teplotě 90 °C po dobu 9 h. Přidá se druhý podíl guanidinu (0,67 mmol) (připravený z guanidinhydrochloridu (100 mg) a NaH (20 mg)) v DMSO (1,0 ml) a směs se zahřívá při teplotě 90 °C po dobu dalších 18 h. Chladná směs se vnese do vody, extrahuje se EtOAc a kombinované organické extrakty se promyjí vodou, solankou, suší se (MgSO4) a odpaří se ve vakuu. Zbytek se

0 ·· 0000 0* • · · · 0 0 0 000 • 0 0 0 0 0 0 0 0 0000 000 00 00 00 000 rozpustí v Et2O a přidá se roztok HCI v Et2O (1,5 ml, 1 Μ), čímž vznikne sraženina. Rozpouštědla se odpaří ve vakuu a zbytek se trituruje s Et2O za zisku terc.butylesteru 1-{[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)sulfonyl]amino}-D-terc-leucinu, hydrochloridu (222 mg, 0,43 mmol).

t.t. 187-189 °C.

¹H(DMSO-d6, 400 MHz) δ 0,9 (9H, s) , 0,95 (9H, s) , 3,6 (ÍH, d) ,

8,3 (ÍH, d), 8,4 (ÍH, d), 8,48,8 (4H, br), 8,5 (ÍH, s), 9,0 (ÍH, s), 11.15 (ÍH, br) ppm.

LRMS 470, 472 (MH⁺) .

Analýza: Zjištěno: C, 46,55;H, 5,78; N, 13,46. Vypočítáno pro C2oH28C1N50₄S·!, 0 HCl*0,5H₂O: C, 46, 60; H, 5,87; N, 13,59.

terč.butylester l-{[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)sulfonyl]amino}-D-terc-leucinu, hydrochlorid (188 mg, 0,36 mmol) se rozpustí v roztoku EtOAc nasyceném HCI (30 ml) a směs se mísí při teplotě okolí po dobu 5 h. Směs se zahustí ve vakuu a zbytek se zahřívá s EtOAc za zisku bílého pevného materiálu. Horký organický roztok se dekantuje a pevný materiál se suší ve vakuu za zisku 1-{[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)sulfonyl]amino}-D-terc-leucinu, hydrochloridu (109,3 mg, 0,24 mmol) ve formě bílého pevného materiálu, t.t. 234-236 °C (za rozkladu).

^xH(TFA-d, 400 MHz) δ 1,1 (9H, s), 3,9 (ÍH, s) , 8,35 (ÍH, d),

8,5 (ÍH, s), 8,6 (ÍH, d), 9,1 (ÍH, s) ppm.

LRMS 414, 416 (MH⁺) .

Analýza: Zjištěno: C, 41,70; H, 4,86; N, 15,01. Vypočítáno pro Ci₆H2oC1N₅04S·!, 0 HCI· 0,5 H₂O: C, 41,84; H, 4,83; N, 15,25.

Příklad 28:

(a) terč.butylester N-[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)73 • ·· ·* ···· ·· · ···· »· · ···· • · · · · 9 · · • · · · · · « « * · • · · · · · · · © ··· ···· «· ·« «· ··· sulfonyl]-1-fenylalaninu (b) N-[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)sulfonyl]-1-fenylalanin, trifluoroacetat

NaH (22 mg, 80% disperze v minerálním oleji (hmot./hmot.), 0,73 mmol) se přidá najednou do míšené suspenze guanidinhydrochloridu (76,7 mg, 0,80 mmol) v DMSO (5,0 ml) a směs se zahřívá při teplotě 60 °C v atmosféře N2 po dobu 20 min. Přidá se terč.butylester N-[(1,4-dichlor-7-isochinolyl)sulfonyl]-1-fenylalaninu (103 mg, 0,21 mmol) a směs se zahřívá při teplotě 95 °C po dobu 17 h. Rozpouštědla se odpaří ve vakuu a zbytek se přečistí chromatografií na silikagelové koloně za použití CH2Cl2-MeOH-0,880 NH3 (95:5:0,5 až 80:20:2) jako eluens za zisku terč.butylesteru N-[(4-chlor-l-guanidin-

-7-isochinolyl)sulfonyl]L-fenylalaninu	(34,	7 m	g,	0,069 mmol)
ve formě žluté pryskyř	•ice.
^XH (DMSO-dg, 300 MHz) δ	1,0 (9H,	s), 2,7	(IH,	dd)	r	2,8 (IH, dd),
3,9 (IH, dd), 7,1-7,2	(5H, m),	7,1-7,3	(4H,	br	S)	, 7,9 (IH,
d), 7,95 (IH, d), 8,1	(s, IH),	8,5 (IH,	br	d) ,	8,	95 (IH, s)
ppm.
LRMS 504, 506 (MH⁺) .

terc.butylester N-[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)sulfonyl]-1-fenylalaninu (30 mg, 0,060 mmol) se rozpustí v CF3CO2H (2,5 ml) a směs se mísí při teplotě okolí po dobu 2,5 h. Směs se naředí CH2CI2 a PhMe, zahustí se ve vakuu, azeotropuje se s PhMe a zbytek se trituruje s Et2O za zisku N[ (4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)sulfonyl]-1-fenylalaninu,

	·· ·	·· ♦·*·
	• · · ·	• · · * ·	• ·
	• ·	• · · · ·
	• ·	• · · · · · ·
	• ·	• · · · · ·
74	··»· ···	·· ·· ··	• ·

trifluoracetatu (24,4 mg, 0,42 mmol) ve formě bílého pevného materiálu.

t.t. 306 °C (za rozkladu).

¹H(DMSO-d6, 300 MHz) δ 2,7 (IH, dd) , 3,0 (IH, dd) , 3,95 (IH, m), 6,9-7,1 (5H, m) , 7,8-8,4 (4H, br), 7,9 (IH, d), 8,05 (IH, d), 8,3 (s, IH), 8,6 (IH, br s), 8,8 (IH, s) ppm.

LRMS 448 (MH⁺) .

Analýza: Zjištěno: C, 44,35; H, 3,78;N, 11,38. Vypočítáno pro Ci9Hi₈ClN₅O4S*l,0 CF3CO2H· 0,5 Η₂Ο·0.12 Et₂O: C, 44,50; H, 3,69; N, 12,08.

Příklad 29:

(a) terč.butylester l-{[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)sulfonyl]amino}-O-methyl-D-serinu, hydrochlorid (b) N-[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)sulfonyl]-O-methylD-serin, hydrochlorid

NaH (50 mg, 80% disperze v minerálním oleji (hmot./hmot.), 1,66 mmol) se přidá najednou do míšeného roztoku guanidinhydrochloridu (260 mg, 2, 72 mmol) v DMSO (4 ml) v atmosféře N₂ a směs se zahřívá při teplotě 50 °C po dobu 30 min. Najednou se přidá terč.butylester 1-{[(1,4-dichlor-7-isochinolyl)sulfonyl]amino]-O-methyl-D-serinu (300 mg, 0,689 mmol) a směs se zahřívá při teplotě 90 °C po dobu 8 h. Chladná směs se vnese do vody (50 ml), vodný roztok se extrahuje EtOAc (x2) a kombinované organické extrakty se promyjí vodou, solankou a suší se (MgSO4) . Rozpouštědla se odpaří ve vakuu a zbytek se přečistí chromatografií na silikagelové koloně za použití CH₂Cl2-MeOH-0,880 NH₃ (90:10:1) jako eluens, za zisku β φφ ·· ·· · · φφ φ φφφ

Φφφφ φ φ požadovaného materiálu. Tento materiál se zpracuje roztokem HCI v Et2O (1,0 ml, 1 Μ), rozpouštědla se odpaří ve vakuu, a zbytek se trituruje s Et2O (x2) za zisku terč.butylesteru 1-{t(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)sulfonyl]amino)-O-methyl-D-serinu, hydrochloridu (18 mg, 0,036 mmol) ve formě bílého pevného materiálu.

^XH (d₄-MeOH, 300 MHz) δ 12 (9H,s), 3,2 (3H,s), 3,5-3,6 (lH,m), 3,6-3,7 (lH,m), 4,1-4,2 (lH,m), 8,35-8,5 (3H,m), 8,9 (lH,s) ppm.

LRMS 458 (MH⁺) .

terč.butylester l-{[(4-chlor-l-guanidin-7isochinolyl)sulfonyl]amino)-O-methyl-D-serinu, hydrochlorid (18 mg, 0,036 mmol) se rozpustí v roztoku EtOAc nasyceném HCI (5 ml) a směs se mísí při teplotě okolí po dobu 3 h.

Směs se zahustí ve vakuu a zbytek se trituruje s EtOAc (x3) za zisku 1-{[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)sulfonyl]amino)-1-terc-leucinu, hydrochloridu (9 mg, 0,02 mmol) ve formě špinavě bílého pevného materiálu.

^xH(d-TFA, 400MHz) 3,6 (3H,s), 4,0-4,2 (2H,m), 4,65 (IH, br s) ,

8,4 (lH,d), 8,5 (lH,s), 8,65 (lH,d), 9,1 (lH,s) ppm.

LRMS 402 (MH).

Příklad 30:

(a) di-terc.butylester kyseliny N-[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)sulfonyl]-D-asparagové (b) hydrochlorid kyseliny N-[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)sulfonyl]-D-asparagové

• « • · · · · 4

4 4 4 4 4

44 4 444 Λ

Guanidinhydrochlorid (190 mg, 2,0 mmol) se přidá najednou do míšené suspenze NaH (47 mg, 80% disperze v minerálním oleji (hmot./hmot.), 1,57 mmol) v DME (7 ml) a směs se zahřívá při teplotě 60 °C v atmosféře N2 po dobu 30 min. Přidá se di-terc.butylester kyseliny 1-{[(1,4-dichlor-7-chinolyl)-sulfonyl]amino}-D-asparagové (250 mg, 0,50 mmol) a směs se zahřívá při teplotě zpětného toku po dobu 18 h. Chladná směs se naředí EtOAc, promyje se vodou, solankou, suší se (MgSO₄) a rozpouštědla se odpaří ve vakuu. Zbytek se přečistí chromatografií na silikagelové koloně za použití CH2Cl2-MeOH-0,880 NH3) (97:3:0,3) jako eluens za zisku di-terc.butylesteru kyseliny N-[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)sulfonyl]-D-asparagové (50 mg, 0,095 mmol) ve formě žlutého pevného materiálu.

^XH (CDCla), 400 MHz) δ 1,2 (9H, s), 1,4 (9H, s), 2,7 (IH, dd), 2,8 (IH, dd) , 4,1 (IH, brt), 8,05 (IH, d), 8,1 (IH, d), 8,15 (IH, s), 9,3 (IH, 5) ppm.

LRMS 528, 530 (MH⁺) .

Di-terc.butylester kyseliny N-[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)sulfonyl]-D-asparagové (50 mg, 0,095 mmol) se rozpustí v roztoku EtOAc nasyceném HCI (10 ml) a směs se mísí při teplotě okolí po dobu 4 h. Směs se zahustí ve vakuu a zbytek se trituruje s PhMe a potom s Et2O za zisku hydrochloridu kyseliny N-[(4-chlor-l-guanidin-7isochinolyl)sulfonyl]-D-asparagové (29 mg, 0,062 mmol) ve formě špinavě bílého pevného materiálu.

^XH (CD3OD, 400 MHz) δ 2,7 (IH, dd), 2,8 (IH, dd), 4,4 (IH, br t), 8,35 (IH, d) , 8,45 (IH, s), 8,45 (IH, d), 8,9 (IH, s) ppm

77.

• · «

• ·

·4·

LRMS 415 (M⁺) .

Analýza: Zjištěno: C, 36,05; H, 3,72; N, 13,62. Vypočítáno pro CuHuCINsOeS·!, 0 HC1*O,8 H₂0: C, 36, 03; H, 3,59; N, 15,01.

Příklad 31:

(a) terc.butylester N-[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)sulfonyl-l-prolinu (b) N-[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)sulfonyl]-1-prolin, hydrochlorid

NaH (35 mg, 80% disperze v minerálním oleji (hmot./hmot.), 1,16 mmol) se přidá najednou do míšeného roztoku guanidinhydrochloridu (177 mg, 1,85 mmol) v DME (5 ml) a směs se zahřívá při teplotě 60 °C v atmosféře N2 po dobu 45 min. Přidá se roztok terč.butylesteru l-{[(1,4-dichlor-7isochinolyl)-sulfonyl]amino}-l-prolinu (200 mg, 0,46 mmol) v DME (2 ml) a směs se zahřívá při teplotě 95 °C po dobu 4 h. Rozpouštědla se odpaří ve vakuu a zbytek se přečistí chromatografií na silikagelové koloně za použití pentanu-EtOAc (80:20 až 0:100) jako eluens, a potom se azeotropuje s CH2CI2 za zisku terč.butylesteru N-[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)sulfonyl]-1-prolinu (153 mg, 0,32 mmol) ve formě světle žluté pěny. ^XH(DMSO-ds, 300 MHz) δ 1,35 (9H, s), 1,6-1,7 (1H, m) , 1,7-1,9 (2H, m) , 1,9-2,0 (1H, m), 3,15-3,25 (1H, m), 3,35-3,5 (1H, m), 4,1 (1H, dd), 7,15-7,4 (4H, br), 8,05 (1H, d), 8,1 (1H, d), 8,1 (1H, s), 9,05 (1H, s) ppm.

LRMS 454, 456 (MH⁺) , 907 (M₂H⁺) .

Analýza: Zjištěno: C, 50,02; H, 5,41; N, 14,84. Vypočítáno • · · · • 9 pro Ci9H₂6ClN₅O₄S*0.1 EtOAc»0,05 CH2CI2: C, 50,02; H, 5,37; N, 15,00.

terč.butylester N-[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl) sulfonyl]-1-prolinu (60 mg, 0,13 mmol) se rozpustí v roztoku EtOAc nasyceném HCI (5,0 ml) a směs se mísí při teplotě okolí po dobu 1 h. Směs se zahustí ve vakuu, azeotropuje se s EtOAc, a zbytek se trituruje s CH2CI2 za zisku N-[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)sulfonyl]-1-prolinu, hydrochloridu (44 mg, 0,095 mmol) ve formě bílého prášku.

t.t. 185-189 °C.

³Η (DMSO-de, 300 MHz) δ 1,5-1,7 (1H, m) , 1,7-2,0 (3H, m), 3,2 3,5 (2H, m), 4,2 (1H, dd), 8,3-8,8 (4H, br), 8,2 (2H, s) , 8,5 (1H, s), 8,1 (1H, s), 9,05 (1H, s), 11,2 (1H, br) ppm.

Analýza: Zjištěno: C, 39,89; H, 4,06; N, 14,93. Vypočítáno pro C15H16CIN5O4S· 1,0 HCI· 1,0 Η₂Ο·0,1 EtOAc: C, 40,11; H, 4,33; N, 15,19.

Příklad 32:

(a) terč.butylester N-[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)sulfonyl]-D-prolinu (b) N-[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)sulfonyl]-D-prolin, hydrochlorid

Guanidinhydrochlorid (220 mg, 2,3 mmol) se přidá najednou do míšené suspenze NaH (55 mg, 80% disperze v minerálním oleji (hmot./hmot.), 1,83 mmol) v DME (8 ml) a směs se zahřívá při teplotě 60 °C v atmosféře N₂ po dobu 30 min. Přidá se

I •9 «···

444 terč.butylester l-{[(1,4-dichlor-7-isochinolyl)sulfonyl]amino)-D-prolinu (250 mg, 0,58 mmol) a směs se zahřívá při teplotě zpětného toku po dobu 5 h. Ochlazená směs se naředí EtOAc, promyje se vodou, solankou, suší se (MgSO4) a rozpouštědla se odpaří ve vakuu. Zbytek se přečistí chromatografií na silikagelové koloně za použití CHzClž-MeOH0,880 NH3 (97:3:0,3) jako eluens za zisku terč.butylesteru N-[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)sulfonyl]-D-prolinu (200 mg, 0,44 mmol) ve formě žlutého pevného materiálu, t.t. >170 °C (za rozkladu).

^XH(CDCl3, 400 MHz) δ 1,45 (9H, s), 1,7-1,8 (IH, m) , 1,8-2,05 (3H, m), 3,3-3,45 (IH, m) , 3,5-3,6 (IH, m), 4,3 (IH, dd), 6,36,6 (4H, br), 8,05 (IH, d), 8,1 (IH, d), 8,1 (IH, s), 9,2 (IH, s) ppm.

LRMS 454, 456 (MH⁺) .

Analýza: Zjištěno: C, 49,57; H, 5,27; N, 14,95. Vypočítáno pro Ci9H24ClN₅O₄S»0,2 H2O· 0,04 CH₂C1₂: C, 49,61; H, 5,35; N, 15,19.

terč.butylester N-[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)sulfonyl]-D-prolinu (50 mg, 0,11 mmol) se rozpustí v roztoku EtOAc nasyceném HCI (10 ml) a směs se mísí při teplotě okolí po dobu 2,5 hodiny. Směs se zahustí ve vakuu, azeotropuje se s CH2CI2, za zisku N-[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)sulfonyl]-D-prolinu, hydrochloridu (40 mg, 0,092 mmol) ve formě bílého prášku.

t.t. >200°C (za rozkladu).

^XH(CD₃OD, 400 MHz) δ 1,7-1,85 (IH, m) , 1,9-2,2 (3H, m), 3,4 3,5 (IH, m), 3,5-3,6 (IH, m), 4,4 (IH, dd), 8,4 (IH, d) , 8,45 (IH, s), 8,5 (IH, d), 8,9 (IH, s) ppm.

LRMS 397, 399 ( (MH⁺) .

Analýza: Zjištěno: C, 40,22; H, 3,92; N, 14,88. Vypočítáno pro Ci₉H24C1N₅O4S·!, 0 HC1*O,2 Η₂Ο·0,25 CH₂C1₂: C, 39,89; H, 3,93; N, 15,25.

·»

9999

Bylo zjištěno, že za určitých podmínek může dojít při opakovaní postupu uvedeného výše k určité racemizaci. Byl proto připraven aletrnativní způsob pro příklad 32(b), který má obrácenou sekvenci guanylace/hydrolýzy.

1. Hydrolýza

terc.butyl (2S)-1-[(1,4-dichlor-7-isochinolyl)sulfonyl]-2-pyrrolidinkarboxylat (50,0 g, 0,116 mol) se rozpustí v konc. HCI (12 M, 200 ml) a směs se mísí po dobu 3,5 h. Během 30 minut se přidá voda (200 ml) a vzniklá bílá sraženina se mísí po dobu další 0,5 hodiny, přefiltruje se a promyje se vodou (3 x 100 ml). Po sušení ve vakuu se získá kyselina (2S)-1-[(1,4-dichlor-7-isochinolyl)sulfonyl]-2-pyrrolidinkarboxylová ve formě bílého pevného materiálu (42,9 g, 0,114 mol).

^XH (de- DMSO, 300 MHz) δ 1,6-1,95 (3H, m) , 1,95-2,1 (ÍH, m), 3,25-3,35 (ÍH, m) , 3, 35-3,45 (ÍH, m) , 4,3 (ÍH, dd), 8,35 (2H, s), 8,6 (ÍH, s), 8,65 (ÍH, s) ppm.

Chirální analýza se provedla za použití kapilární elektroforesy a ukázala 97,41% enantiomerickou čistotu.

2. Guanylace volné kyseliny

terc-butoxid draselný (49,0 g, 0,437 mol) a guanidin.HCl (42,8 g, 0,448 mol) v DME (210 ml) se zahřívá při teplotě zpětného toku pod atmosférou dusíku po dobu 20 min. Přidá se kyselina (2S)-1-[(1,4-dichlor-7-isochinolyl)sulfonyl]-2(

9 4

Φ · · « Φ 4

Φ 9 9 «

99

-pyrrolidinkarboxylová (42,0 g, 0,112 mol) a zahřívání pokračuje při teplotě zpětného toku po dobu 5,5 hodiny. Přidá se voda (420 ml) a směs se okyselí konc. HCI na pH = 5, čímž vznikne pevný materiál, který se odfiltruje, promyje se vodným DME (1:1, 2 x 75 ml) a vodou (2 x 75 ml) a suší se za zisku titulní sloučeniny (b) ve formě žlutého pevného materiálu (40,71 g, 0,102 mol).

¹H(d₆~DMSO, 300 MHz) δ 1,5-1,65 (IH, m) , 1,7-2,0 (3H, m) , 3,1325 (IH, m), 3,35-4,05 (IH, m), 42 (IH, dd) , 7,2-7,7 (4H, br s), 8,0 (IH, d), 8,1-8,2 (2H, m), 9,05 (IH, d) .

Chirální analýza se provedla za použití kapilární elektroforesy a ukázala 99,76% enantiomerickou čistotu (n=2).

Příklad 33:

4-chlor-l-guanidin-7-{[(2R)-(hydroxymethyl)-1-pyrrolidinyl]sulfonyl}isochinolin, hydrochlorid

NaH (26 mg, 80% disperze v minerálním oleji (hmot./hmot.), 0,87 mmol) se přidá najednou do míšeného roztoku guanidinhydrochloridu (126 mg, 1,32 mmol) v DMSO (2 ml) a směs se zahřívá při teplotě 50 °C v atmosféře N2 po dobu 20 min. Najednou se přidá roztok 1,4-dichlor-7-{[(2R)-(hydroxymethyl)-1-pyrrolidinyl]sulfonylJisochinolinu (120 mg, 0,33 mmol) v DMSO (3 ml) a směs se zahřívá při teplotě 80-90 °C po dobu 1 h. Chladná směs se vnese do vody, extrahuje se EtOAc (2x) a kombinované organické extrakty se potom promyjí (x3), solankou, suší se (MgSOí) a odpaří se ve vakuu. Zbytek se přečistí chromatografií na silikagelové koloně za použití CH2Cl2-MeOH-0.880 NH3 (95:5:0,5 až 80:20:5) jako eluens za zisku požadovaného materiálu ve formě špinavě

822 · se

9999

9 9

9 9 9

O bílého, lepivého pevného materiálu. Tento materiál rozpustí v MeOH, přidá se roztok HCI v Et2O (1 M) a rozpouštědla se odpaří ve vakuu. Zbytek se rekrystalizuje z MeOH za zisku 4-chlor-l-guanidin-7-{[(2R)-(hydroxymethyl)-1-pyrrolidinyl]-sulfonyl}isochinolinů, hydrochloridu (43 mg, 0,10 mmol) ve formě bílého pevného materiálu, t.t. 275-276,5 °C.

^TH (CD₃OD, 400 MHz) δ 1,5-1,65 (2H, m) , 1,8-1,95 (2H, m) , 3,25 -3,35 (2H, m), 3,45-3,55 (IH, m), 3,6-3,65 (IH, m) , 3,7-3,85 (2H, m), 8,4 (IH, d) , 8,45 (IH, s), 8,5 (IH, d), 8,9 (IH, s) ppm.

LRMS 383 (MH⁺), 405 (MNa⁺) , 767 (M₂H⁺) .

Analýza: Zjištěno: C, 42,36; H, 4,54; N, 16,14. Vypočítáno pro Ci5Hi₈ClN5O₃S·!, 0 HC1»O,25 H₂O: C, 42,41; H, 4,63; N, 16,49.

Příklad 34:

(a) Methylester kyseliny 1-{[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)sulfonyl]amino}isomáselné (b) Hydrochlorid kyseliny 2-{[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)sulfonyl]amino}isomáselné

NaH (32 mg, 80% disperze v minerálním oleji, (hmot./hmot.) , 1,07 mmol) se přidá najednou do míšeného roztoku guanidinhydrochloridu (167 mg, 1,7 mmol) v DMSO (5 ml) a směs se zahřívá při teplotě 50 °C v atmosféře N2 po dobu 20 min. Najednou se přidá methylester kyseliny l-{[(l,4-dichlor-7-isochinolyl)sulfonyl]amino]isomáselné (161 mg, 0,43 mmol) a směs se zahřívá při teplotě 80 °C po dobu 6,5 h. Chladná směs se vnese do vody (50 ml), extrahuje se EtOAc (2x100, 2x25 ml) ····

I · « 4 • 9 99 a kombinované organické extrakty se promyjí vodou, solankou, suší se (Na₂SO₄) a odpaří se ve vakuu. Zbytek se přečistíopakovanou chromatografií na silikagelové koloně za použití (i) CH₂Cl₂-MeOH-0, 880 NH₃ (95:5:0,5), (ii) hexanu-EtOAc (70:30), a potom (iii) CH₂Cl₂-MeOH-0,880 NH₃ (90:10:01), jako eluens, za zisku produktu ve formě žlutého oleje. Triturací s Et₂O se získá methylester kyseliny 1-{[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)sulfonyl]amino}isomáselné (23 mg, 0,054 mmol) ve formě žlutého pevného materiálu .

t.t. >170 °C (za rozkladu).

^(CDsOD, 300 MHz) δ 1,4 (6H, s) , 3,5 (3H, s) , 8,15-8,25 (3H, m), 9,1 (ÍH, s) ppm.

LRMS 400, 402 (MH⁺) .

Analýza: Zjištěno: C, 44,02; H, 4,65; N, 16,29. Vypočítáno pro Ci5Hi₈ClN₅O₄S*0.9 H₂O· 0,1 i-Pr₂O: C, 43, 95; H, 5,01; N, 16,43.

Roztok NaOH (1 ml, 2 M, 2 mmol) se přidá do roztoku methylesteru kyseliny l-{[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)sulfonyl]amino)isomáselnév (16,5 mg. 0,041 mmol) v MeOH (0,5 ml) a směs se zahřívá při teplotě 40-50 °C po dobu 16 h. Chladná směs se neutralizuje ředěnou HCI (0,5 ml, 2 M) za vzniku sraženiny. Sraženina se odebere filtrací, s opakovaným promytím vodou, a potom se rozpustí v konc. HCI. Rozpouštědla se odpaří ve vakuu azeotropováním s PhMe a směs se potom suší ve vysokém vakuu za zisku hydrochloridu kyseliny l-{[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)sulfonyl]-amino}isomáselné (12 mg, 0,026 mmol) ve formě krémového pevného materiálu.

t.t. 258 °C (za rozkladu) ^ΧΗ (CD₃OD, 400 MHz) δ 1,45 (6H, s), 8,4 (ÍH, d) , 8,4 (ÍH, s) , 8,45 (ÍH, d) , 8,9 (ÍH, s) ppm.

LRMS 386, 388 (MH⁺) .

Analýza: Zjištěno: C, 37,89; H, 4,33; N, 15,18. Vypočítáno pro Ci4Hi6ClN₅O₄S·!, 0 HCI·!, 5 H₂O· 0,05 Et₂O: C, 37,65; H, 4,56; N,

34·· *··· » · · « φφ φ·

15,46.

Příklad 35:

2-{(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)sulfonyl]amino}-2-methylpropanamid, hydrochlorid

NaH (41 mg, 80% disperze v minerálním oleji (hmot./hmot.) , 1,36 mmol) se přidá najednou do míšeného roztoku guanidinhydrochloridu (210 mg, 2,2 mmol) v DMSO (10 ml) v atmosféře N2 a směs se zahřívá při teplotě 23 °C po dobu 30 min. Najednou se přidá 2-{[(1,4-dichlor-7-isochinolyl)sulfonyl]amino}-2-methylpropanamid (225 mg, 0,50 mmol) a směs se zahřívá při teplotě 90 °C po dobu 8 h. Chladná směs se částečně zahustí ve vakuu a zbytek se vnese do vody. Vodný roztok se extrahuje EtOAc (x4) a kombinované organické extrakty se promyjí vodou, solankou a suší se (MgSO₄) . Rozpouštědla se odpaří ve vakuu a zbytek se přečistí chromatografií na silikagelové koloně za použití CH2Cl2-MeOH0,880 NH3 (90:10:1) jako eluens za zisku požadovaného materiálu. Tento materiál se rozpustí v MeOH a zpracuje se roztokem HCI v Et2O (1,0 ml, 1 M) za zisku 2-{[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)sulfonyl]amino}-2-methylpropanamidu, hydrochloridu (86 mg, 0,188 mmol) ve formě špinavě bílého prášku.

t.t. 279-281 °C.

^ΤΗ (TFA-d, 400 MHz) δ 1,6 (6H, s), 8,35 (IH, br s), 8,4 (IH, s), 8,55 (IH, s), 9,1 (IH, br s) ppm.

LRMS 385, 387 (MH⁺) .

Analýza: Zjištěno: C, 39,68; H, 4,81; N, 18,18. Vypočítáno pro

Ci4Hi7ClN₆O₃S· 1,0 HCI·!, 2 MeOH: C, 39,71; H, 5,00; N, 18,28.

• · · • 9 · « *	·· ···· 9 · · 9 9 *	• · • •		« ·
• ·	9 9 9 9	9	•
♦ · *···	99 99	9 9		• »

Příklad 36:

(a) Ethyl-l-{[(4-chlor-l-guanidin-7 isochinolyl)sulfonyl]aminoJcyklobutankarboxylat (b) Hydrochlorid kyseliny 1-{[(4-chlor-l-guanidin-7isochinolyl)sulfonyl]amino]-cyklobutankarboxylové

NaH (37 mg, 80% disperze v minerálním oleji (hmot./hmot.), 1,24 mmol) se přidá najednou do míšeného roztoku guanidinhydrochloridu (189 mg, 1,98 mmol) v DMSO (6 ml) a směs se zahřívá při teplotě 60 °C v atmosféře N2 po dobu 30 min. Najednou se přidá ethyl l-{[(1,4-dichlor-7-isochinolyl)sulfonyl]amino]-cyklobutankarboxylat (200 mg, 0,50 mmol) a směs se zahřívá při teplotě 80 °C po dobu 10 h. Chladná směs se vnese do vody, extrahuje se EtOAc (2x.50 ml) a kombinované organické extrakty se suší (MgSO4) a odpaří se ve vakuu.

Zbytek se přečistí chromatografií na silikagelové koloně za použití pentanu-EtOAc (50:50 až 0:100) jako eluens za zisku ethy1-1-{[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)sulfonyl]amino]cyklobutankarboxylatu (150 mg, 0,34 mmol) ve formě žlutého prášku.

t.t. 165-169 °C

*H (DMSO-de, 300 MHz) δ	1,0	(3H,	t) ,	1,6-1,8 (2H, m),	2,05-2,2
(2H, m), 2,25-2,4 (2H,	m),	3,8	(2H,	q), 7,0-7,4 (4H,	br) ,
8,05 (2H, s), 8,1 (IH,	s) ,	8,6	(IH,	s), 9,05 (IH, s)	ppm.
LRMS 426, 428 (MH⁺) .

Analýza: Zjištěno: C, 46,62; H, 4,62; N, 15,82. Vypočítáno pro • 9

9 • 9 99 9 9 • · · • 99 • 9 · • 9 9 9

9» 99

Ci7H₂oClN₅04S»0.25 CH₂C1₂: C, 46, 45; H, 4,63; N, 15,70.

Roztok NaOH (5 ml, 2 M, 10 mmol) se přidá do roztoku ethyll-{[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)sulfonyl]amino}cyklobutankarboxylatu (100 mg, 0,23 mmol) v MeOH (5 ml) a směs se zahřívá při teplotě 55 °C po dobu 6 h. Chladná směs se neutralizuje ředěnou HCI (5 ml, 2 M) za vzniku sraženiny a MeOH se odpaří se ve vakuu. Pevný materiál se odebere filtrací, s opakovaným promytím vodou, a suší se ve vysokém vakuu za zisku hydrochloridu kyseliny l-{[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)sulfonyl]amino)cyklobutankarboxylové (15 mg,

0,033 mmol).

^XH	(DMSO-de, 400 MHz) δ 1,65-1,8 (2H, m) , 2,05-2,2	(2H,	m) ,
2,	25-2,4 (2H, m), 8,3 (ÍH, d), 8,35-8, 7 (4H, br),	8,4	(ÍH
d)	, 8,5 (ÍH; s), 8, 7 (ÍH, s), 8,95 (ÍH, s) , 11,0	(ÍH,	br)

12,5 (ÍH, br) ppm.

Analýza: Zjištěno: C, 40,06; H, 4,34; N, 15,09. Vypočítáno pro Ci5Hi₆ClN₅O4S»l,0 HCI· 1.10 H₂O: C, 39, 83; H, 4,23; N, 15,48.

Příklad 37:

(a) ethylester N-[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl) sulfonyl]cyklo-leucinu (b) N-[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)sulfonyl]cykloleucin (c) N-[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)sulfonyl]cykloleucin, trifluoroacetat

87·

9 9* 9 9 9 9 *	9»	9999 9 •	• 9	9 9
9 9	9 9	9 9	9 9
• 9	9	9	9 9	9	9
99 9999		9>	99		• ®	9 9

NaH (1,12 g. 80% disperze v minerálním oleji (hmot./hmot.), 37,3 mmol) se po částech přidá do míšené suspenze guanidinhydrochloridu (5,85 g, 59,4 mmol) v DMSO (320 ml) a směs se zahřívá při teplotě 30-50 °C v atmosféře N₂ po dobu 30 min. najednou se přidá ethylester N-[(1,4-dichlor-l-guanidin-7-isochinolyl)sulfonyl]-cykloleucinu (6,2 g. 14,9 mmol) a směs se zahřívá při teplotě 80 °C po dobu 8 h. Chladná směs se zahustí ve vakuu na přibližně 160 ml a vnese se do vody (800 ml). Vodná směs se extrahuje EtOAc (4X^x50 ml) a kombinované organické extrakty se potom promyjí se vodou, solankou, suší se (MgSO4) a odpaří se ve vakuu. Zbytek se přečistí chromatografií na silikagelové koloně za použití CH₂Cl₂-MeOH0,880NH3 (95:5:0,5 - 90:10:1) jako eluens a potom se rekrystalizuje z EtOAc za zisku ethylesteru N-[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)sulfonyl]cyklo-leucinu (1,43 g, 3,25 mmol) ve formě žlutého pevného materiálu, t.t. 225-226 °C.

^XH(DMSO-d6, 300 MHz) δ 1,1 (3H, t), 1,35-1,45 (2H, m) , 1,45-1,5 (2H, m), 1,85-1,95 (4H, br), 3,9 (2H, q), 7,1-7,35 (4H, br),

8,0 (1H, d) , 8,05 (1H, d) , 8,1 (1H, s) , 9,1 (1H, s) ppm.

LRMS 440, 442 (MH⁺) .

Analýza: Zjištěno: C, 49,02; H, 4,97; N, 15,61. Vypočítáno pro C₁₈H₂₂C1N₅O4S: C, 49,14; H, 5,04; N, 15,92.

Roztok NaOH (75 ml, 2 M, 150 mmol) se přidá do roztoku ethylesteru N-[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)sulfonyl]cykloleucinu (1,39 g, 3,16 mmol) v MeOH (75 ml) a směs se zahřívá při teplotě 40-50 °C po dobu 24 h. Chladná směs se neutralizuje ředěnou HCI (75 ml, 2 M) za vzniku sraženiny a MeOH se odpaří ve vakuu. Pevný materiál se odebere filtrací, s opakovaným promytím vodou, suší se ve vysokém vakuu, za zisku N-[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)sulfonyl]cykloleucinu (1,27 g, 3,08 mmol) ve formě bílého « 4 ·· ♦···

4 4 4 · 4 4

4444 444 • 4444 4444 4 _ΛΛ 4 4 4444 »4 ·

88»·« ♦··· ·· ·· ·· ·«· prášku.

Analýza: Zjištěno: C, 46,40; H, 4,39; N, 16,66. Vypočítáno pro CieHisClNsOíS: C, 46, 66; H, 4,41; N, 17,00.

N-[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)sulfonyl]cykloleucin (8 mg) se rozpustí v CF3CO2H (ca. 1,0 ml) a směs se odpaří ve vakuu za azeotropování s PbMe. Zbytek se trituruje s i-Pr20 a Et₂O za zisku bílého pevného materiálu. Pevný materiál se rozpustí v MeOH, filtruje se a filtrát se odpaří ve vakuu za zisku N-[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)sulfonyl]cykloleucinu trifluoracetátu (12 mg).

t.t. >178 °C (za rozkladu).

^XH (DMSO-de, 400 MHz) δ 1,3-1,45 (2H, m), 1,45-1, 55 (2H, m) , 1,85-1,95 (4H, br) , 8,25-8,6 (4H, br), 8,3 (IH, d) , 8,4 (IH, d), 8,5 (IH, s), 8,85 (IH, s), 10,8 (IH, br) , 12,4 (IH, br) ppm.

LRMS 412, 414 (MH⁺) .

Analýza: Zjištěno: C, 39,50; H, 3,62; N, 11,50. Vypočítáno pro CieHieClNsOíS·!, 0 CF₃CO₂H*l,0 H₂O: C, 39, 75; H, 3,89; N, 12,88.

Příklad 38:

1-{[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)sulfonyl]amino}-N-(2-hydroxyethyl)cyklopentankarboxamin, hydrochlorid

(COC1)2 (60 μΐ, 0,67 mmol) a potom DMF (3 kapky) se přidají do míšené suspenze N-[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)sulfonyl]cykloleucinu, hydrochloridu (150 mg, 0,334 mmol) v CH2CI2 (15 ml) a směs se mísí při teplotě 23 °C po dobu 30 min.

• · *

84·· ·

• · ·

Rozpouštědla se odpaří ve vakuu za azeotropování s PhMe, za zisku příslušného chloridu kyseliny, tento materiál se opět rozpustí v CH2CI2 (15 ml) a přidá se do míšeného roztoku 2-hydroxyethylaminu (400 μΐ) v CH2CI2 (15 ml) a směs se mísí po dobu 1 h. Rozpouštědla se odpaří ve vakuu a zbytek se přečistí chromatografií na silikagelové koloně za použití CH2Cl2-MeOH0,880 NH3 (90:10:1) jako eluens za zisku l-{[(4-chlor-l -guanidin-7 -isochinolyl)sulfonyl]amino}-N-(2- hydroxyethyl)cyklopentankarboxaminu. Tento materiál se rozpustí v EtOAcEtOH a přidá se roztok HCI v Et2O (1 M), čímž vznikne sraženina. Rozpouštědla se dekantují a pevný materiál se trituruje s Et2O, odebere se filtrací a suší se za zisku 1-{[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)sulfonyl]amino]-N-(2-hydroxyethyl)cyklopentankarboxaminu, hydrochloridů (77 mg, 0,155 mmol) ve formě bílého pevného materiálu.

t.t. 244-246 °C.

^XH (CD3OD, 300 MHz) δ 1,35-1,5 (2H, m) , 1,5-1,65 (2H, m) , 1,852,0 (2H, m), 2,0-2,15 (2H, m) , 3,1-3,2 (2H, m) , 3,5-3,65 (2H, m) , 8,4 (IH, d), 8,45 (IH, s), 8,5 (IH, d), 8,95 (IH, s) ppm.

LRMS 455 (MH⁺) , 477 (MNa⁺) .

Analýza: Zjištěno: C, 43,63; H, 5,03; N, 16,65. Vypočítáno pro Ci₈H23C1N₆O4S·!, 0 HCl«0,25 H₂O: C, 43,60; H, 4,98; N, 16,95.

Příklad 39:

(a) l-{[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)sulfonyl]amino}-N-[2-(dimethylamino)ethyl]cyklopentankarboxamin (b) 1—{[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)sulfonyl]amino}-N-[2-(dimethylamino)ethyl]cyklopentankarboxamin, dihydrochlorid

HO, .NH.

NH.

• ·· • · # · • · • · ·

90»·· ···· ·· ··· · • · · • · · • « * • · · · ·· ··

Roztok HCI v Et₂O (0,5 ml, 1 M) se přidá do míšeného roztoku N-[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)sulfonyl]cykloleucinu (100 mg, 0,243 mmol) v MeOH. Rozpouštědla se odpaří ve vakuu a zbytek se azeotropuje se PhMe za zisku příslušné hydrochloridové soli.

(COC1)₂ (42 μΐ, 0,48 mmol) a potom DMF (2 kapky) se přidají do míšeného roztoku N-[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)sulfonyl]cykloleucinu, hydrochloridu (0,243 mmol) v CH₂C1₂ (5 ml) a směs se mísí při 23 °C po dobu 18 h. Rozpouštědla se odpaří ve vakuu, zbytek se znovu rozpustí v CH₂C1₂ (5 ml) , a přidá se 2-(dimethylamino)ethylamin (60 μΐ, 0,48 mmol) a směs se mísí po dobu 3 h. Rozpouštědla se odpaří ve vakuu a zbytek se rozdělí mezi EtOAc a vodný roztok NaHCO3 (10 %) . Organická fáze se suší a odpaří. Zbytek se přečistí chromatografií na silikagelové koloně za použití CH₂Cl₂-MeOH-0,88O-NH3 (95:5:0,5 až 90:10:1) jako eluens za zisku 1-{[ (4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)sulfonyl]amino}-N-[2(dimethylamino)ethyl]cyklopentankarboxaminu.

LRMS 482 (MH⁺) .

Tento materiál se rozpustí v EtOAc, přidá se roztok HCI v Et₂O (1 M) a rozpouštědla se odpaří ve vakuu za zisku 1—{[ (4 — chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)sulfonyl]amino}-N-[2-(dimethylamino)ethyl]cyklopentankarboxaminu, dihydrochloridu (28 mg, 0,048 mmol) ve formě bílého pevného materiálu.

^XH (TFA-d, 400 MHz) δ 1,5 (2H, br s) , 1,7(2H, br s) , 2,1 (4H, br s), 3,2 (6H, s), 3,7 (2H, br s), 4,0 (2H, br s), 7,8 (IH, br s), 8,45 (IH, d), 8,5 (IH, s), 8,6 (IH, d), 9,5 (IH, s) ppm. LRMS 482 (MH⁺) .

Analýza: Zjištěno: C, 41,25; H, 5,63; N, 16,59. Vypočítáno pro

C20H₂8ClN7O₃S»2,0 HCI· 1,5 HzO: C, 41,28; H, 5,72; N, 16,85.

Příklad 40:

4-chlor-l-guanidin-N-[1-(hydroxymethyl)cyklopentyl]-7-isochinolinsulfonamid, hydrochlorid α

NaH (30 mg, 80% disperze v minerálním oleji (hmot./hmot.), 1,0 mmol) se přidá najednou do míšeného roztoku guanidinhydrochloridu (157 mg, 1,6 mmol) v DMSO (5 ml) a směs se zahřívá při teplotě 60 °C v atmosféře N₂ po dobu 20 min. Najednou se přidá 1,4-dichlor-N-[1-hydroxymethyl)cyklopentyl]-7-isochinolinsulfonamid (150 mg, 0,40 mmol a směs se zahřívá při teplotě 80 °C po dobu 4 h. Přidá se druhá část guanidinu (0,40 mmol)[připraveného z guanidinhydrochloridu (38 mg) a NaH (12 mg)] v DMSO (1 ml) a směs se zahřívá při teplotě 80 °C po dobu dalších 6 h. Chladná směs se vnese do vody (80 ml), extrahuje se EtOAc (2x50 ml) a kombinované organické extrakty se potom promyjí solankou, suší se (MgSO4) a odpaří se ve vakuu. Zbytek se přečistí chromatografií na silikagelové koloně za použití CH₂Cl2-MeOH-0,880 NH₃ (97,5:2,5:0,25 až 80:20:5) jako eluens za zisku částečně přečištěného produktu (90 mg). Tento materiál se přemění na příslušnou hydrochloridovou sůl reakcí s roztokem HCI v Et₂O (1 M) a potom se rekrystalizuje z EtOH za zisku 4-chlor-l-guanidin-N-[1 -(hydroxymethyl)cyklopentyl]-7-isochinolinsulfonamidu, hydrochloridu (16 mg, 0,040 mmol) ve formě bílého pevného materiálu.

t.t. 245-247 °C.

^XH (CD₃OD, 400 MHz) δ 1,4-1,55 (4H, m) , 1,55-1,7 (2H, m), 1,892

1,9 (2H, m), 3,5 (2H, s), 8,4 (IH, d), 8,45 (IH, s) , 8,45 ·· ·

(IH, d), 8,9 (IH, s) ppm.

LRMS 398, 400 (MH⁺) .

Analýza: Zjištěno: C, 44,17; H, 4,84; N, 15,88. Vypočítáno pro

CieHaoClNsCbS·!, 0HC1: C, 44,24; H, 4,87; N, 16,12.

Příklad 41:

(a) ethylester N-[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)sulfonyl]-N-[2-(dimethylamino)ethyl] cykloleucinu, dihydrochlorid (b) N-[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)sulfonyl]-N-[2-(dimethylamino)ethyl]cykloleucin, dihydrochlorid

NaH (32 mg, 80% disperze v minerálním oleji (hmot./hmot.), 1,05 mmol) se přidá najednou do míšeného roztoku guanidinhydrochloridu (145 mg, 1,52 mmol) v DMSO (4 ml) a směs se zahřívá při teplotě 50 °C v atmosféře N2 po dobu 20 min. Najednou se přidá ethylester N-[ (1,4-dichlor-7-isochinolyl)sulfonyl]-N-[2-(dimethylamino)ethyl]cykloleucin, hydrochlorid (160 mg, 0,305 mmol) a směs se zahřívá při teplotě 90 °C po dobu 1 h. Chladná směs se vnese do vody, extrahuje se EtOAc (2x20 ml) a kombinované organické extrakty se potom promyjí solankou, suší se (Na2SO4) a odpaří se ve vakuu. Zbytek se rozpustí v Et2O, filtruje se, a přidá se roztok HCI v Et2O (1 Μ), čímž vznikne sraženina. Rozpouštědla se odpaří ve vakuu a zbytek se rekrystalizuje z horkého EtOH za zisku ethylesteru N-[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)sulfonyl]-N-[2-(dimethylamino)ethyl]cykloleucinu, dihydrochloridu (123 mg, 0,20 mmol) ve formě světle žlutého pevného materiálu.

0000

t.t. 228-230°C.

ÍH (TFA-d, 400 MHz) δ 1,45	(3H,	t), 1,7	(2H, br s) , 1,9 (:
br s), 2,2 (2H, br s), 2,5	(2H,	br s) ,	3,3 (6H, s), 3, 75
(2H, br s), 4,3 (2H, br s),	4,4	(2H, q)	, 8,15 (ÍH, br s) ,
8,4 (ÍH, d), 8,5 (ÍH, s), 8	, 65	(ÍH, d),	9,35 (ÍH, s) ppm.

LRMS 511, 513 (MH⁺.

Analýza: Zjištěno: C, 43,74; H, 5,88; N, 13,75. Vypočítáno pro C22H31CIN6O4S· 2,0 HCI· 1,0 H₂O: C, 43,90; H, 5,86; N, 13,96.

Roztok NaOH (5 ml, 5 M) se přidá do roztoku ethylesteru N- [ (4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)sulfonyl]-N-[2-(dimethylamino)ethyl]cykloleucinu, dihydrochloridu (75 mg, 0,128 mmol) v dioxanu (5 ml) a směs se zahřívá při teplotě 80 °C po dobu 30 h. Ochlazená směs se naředí vodou (20 ml), dioxan se odpaří ve vakuu a vodný zbytek se neutralizuje ředěnou HCI (2 M) na pH 6. Sraženina se odebere filtrací s dalším promytím vodou, potom se rozpustí v MeOH, přefiltruje se a odpaří se ve vakuu. Zbytek se přečistí chromatografií na silikagelové koloně za použití CH2Cl2-MeOH-0,880 NH3 (90:10:1 až 80:20:5) jako eluens za zisku požadovaného materiálu. Tento materiál se rozpustí v MeOH-EtOAc, přidá se roztok HCI v Et2O (1 M) a rozpouštědla se odpaří ve vakuu. Zbytek se trituruje s EtOAc za zisku N-[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)sulfonyl]-N-[2(dimethylamino)ethyl]cykloleucinu, dihydrochloridu (15,4 mg, 0,025 mmol).

*H (TFA-d, 400 MHz) δ 1,7 (2H, br s) , 1,9 (2H, br s) , 2,2 (2H, br s), 2,6 (2H, br s), 3,25 (6H, s), 3,8 (2H, br s), 4,3 (2H, br s), 8,1 (ÍH, br s), 8,4 (ÍH, d), 8,5 (ÍH, s), 8,65 (ÍH, d) , 9,4 (ÍH, s) ppm.

LRMS 483 (MH⁺) .

Analýza: Zjištěno: C, 39,03; H, 5,60; N, 14,02. Vypočítáno pro

9

9999

C2oH27C1N60₄S»2 HC1*3 H₂0: C, 39,38; H, 5,78; N, 13,78.

Příklad 42:

Ethylester N-(terc-butoxykarbonylmethyl)-N-[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)sulfony]cykloleucinu

Bezvodý K2CO3 (34 mg, 0,25 mmol) a terc.butyl bromacetat (44 μΐ, 0,30 mmol) se přidají do míšeného roztoku ethylesteru N- [ (4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)sulfonyl]cykloleucinu (11 0 mg, 0,25 mmol) v DMF (1,0 ml) a směs se mísí při 23 °C po dobu 18 h. Směs se naředí EtOAc (60 ml), promyje se vodou (3x100 ml), suší se (MgSO₄) a odpaří se ve vakuu. Zbytek se přečistíchromatografií na silikagelové koloně za použití pentanu-EtOAc (100:0 až 20:80) jako eluens za zisku ethylesteru N-(terc-butoxykarbonylmethyl)-N-[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)sulfonyl]cykloleucinu (95 mg, 0,17 mmol) ve formě bílého pevného materiálu.

^(CDCls, 400 MHz) δ 1.3 (3H, t) , 1,45 (9H, s), 1,6-1,7 (4H, m), 1,85-1,95 (2H, br) , 2,25-2,35 (2H, m), 4,2 (2H, q), 4,5 (2H, s), 8,1 (1H, d) , 8,15 (1H, s), 8,3 (1H, dd), 9,3 (1H, d) ppm.

LRMS 554 (MH⁺) .

Analýza: Zjištěno: C, 52,31; H, 5,94; N, 13,33. Vypočítáno pro C₂₄H32C1N₅O₆S·: C, 52,03; H, 5,82; N, 12,64.

Příklad 43:

(a) Methyl-1-{[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)sulfonyl]amino}cyklohexankarboxylat ·· ··Φ· • · ·

9 9

4 9 9

9 9 9

9 9

9 4 99 (b) Kyselina 1-{[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl) sulfonyl]amino}cyklohexankarboxylová, hydrochlorid

NaH (22,3 mg, 80% disperze v minerálním oleji (hmot./hmot.), 0, 743 mmol) se přidá najednou do míšeného roztoku guanidinhydrochloridu (117 mg, 1,98 mmol) v DMSO (5 ml) a směs se zahřívá při teplotě 50-70 °C v atmosféře N2 po dobu 25 min. Najednou se přidá Methyl 1-{ [ (1,4-dichlor-7-isochinolyl)sulfonyl]amino}cyklohexankarboxylat (124 mg, 0,30 mmol) a směs se zahřívá při teplotě 80 °C po dobu 8 h. Chladná směs se vnese do vody (50 ml), extrahuje se EtOAc (2x50 ml) a kombinované organické extrakty se promyjí vodou, solankou, suší se (MgSO₄) a odpaří se ve vakuu. Zbytek se krystalizuje z minimálního množství horkého EtOAc za zisku methyl l—{[(4— -chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)sulfonyl]amino)cyklohexankarboxylatu (12 mg, 0,043 mmol) ve formě žlutého pevného materiálu. Odpařením původních kapalin a triturací zbytku s Et2O se získá druhý podíl (7 mg).

t.t. >220 °C (za rozkladu).

^ΧΗ (DMSO-de, 400 MHz) δ 1,1-1,35 (6H, m) , 1,65-1,75 (2H, m) , 1,75-1,85 (2H, m), 3,35 (3H, s), 7,1-7,4 (4H, br), 8,0 (IH, d), 8,05 (IH, d), 8,1 (IH, s), 8,15 (IH, 5), 9,0 (IH, s) ppm. LRMS 440, 442 (MH⁺) .

Analýza: Zjištěno: C, 48,55; H, 5,12; N, 15,73. Vypočítáno pro Ci8H22ClN₅O₄S»0,3 H₂O: C, 49,14; H, 5,04; N, 15,92.

Roztok NaOH (1 ml, 2 M, 2 mmol) se přidá do roztok methyl 1—{[(4-chlor-lguanidin-7-isochinolyl)sulfonyl]amino}94 cyklohexankarboxylatu (12 mg, 0,027 mmol) v MeOH (4 ml) a směs se zahřívá pří teplotě 50-60 °C po dobu 4 d. Chladná směs se neutralizuje ředěnou HCI (1 ml, 2 M) za vzniku sraženiny.

Pevný materiál se odebere filtrací, s opakovaným promytím vodou, a potom se trituruje s EtOAc. Pevný materiál se rozpustí v konc. HCI, rozpouštědla se odpaří ve vakuu za azeotropování s PhMe, a potom se suší ve vysokém vakuu za zisku hydrochloridu kyseliny 1-{ [ (4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)sulfonylamino}cyklohexankarboxylové (11 mg, 0,021 mmol).

t.t. 194 °C (za rozkladu).

¹H(DMSO-d6, 400 MHz) δ 1,1-1,4 (6H, m) , 1,6-1,8 (2H, m) , 1,81,95 (2H, m), 8,15-8,7 (4H, br), 8,2 (IH, s) , 8,3 (IH, d), 8,4 (IH, d), 8,45 (IH, s) , 8,9 (IH, s), 10,9 (IH, br) , 12,4 (IH, br) ppm.

LRMS 426 (MH⁺) .

Analýza: Zjištěno: C, 39,87; H, 5,05; N, 13,16. Vypočítáno pro Ci7H₂oClN₅0₄S·!, 0 HC1«3,O H₂O: C, 39,54; H, 5,27; N, 13,56.

Příklad 44:

(a) Methyl 4-{[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)sulfonyl]amino]tetrahydro-2H-pyran-4-karboxylát (b) Hydrochlorid kyseliny 4-{ [ (4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)sulfonyl]amino]tetrahydro-2-karboxylové

NaH (33,5 mg, 80% disperze v minerálním oleji, (hmot./hmot.), 1,12 mmol) se přidá najednou do míšeného roztoku guanidinhydrochloridu (176 mg, 1,84 mmol) v DMSO (3,0

ml) v atmosféře N₂ a směs se zahřívá při teplotě 50 °C po dobu 15 min. Najednou se přidá methyl 4-{[(1,4-dichlor-7-isochinolyl)sulfonyl]amino)tetrahydro-2H-pyran-4-karboxylat (187 mg, 0,446 mmol) a směs se zahřívá při teplotě 80 °C po dobu 8 h. Přidá se druhý podíl guanidin (0,45 mmol)[připravený z guanidinhydrochloridu a NaH] v DMSO (1,0 ml) a směs se zahřívá při teplotě 90 °C po dobu dalších 4 h. Chladná směs se vnese do vody (100 ml), extrahuje se EtOAc (3x.5O ml) a kombinované organické extrakty se promyjí solankou a suší se (Na₂SO4) . Rozpouštědla se odpaří ve vakuu a zbytek se přečistí chromatografií na silikagelové koloně za použitíCH₂Cl₂-MeOH0,880 NH3 (95:5:0,5) jako eluens, a potom se krystalizuje z EtOAc, za zisku methyl 4-{[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)sulfonyl]amino}tetrahydro-2H-pyran-4-karboxylatu (83 mg, 0,186 mmol) ve formě žlutého pevného materiálu.

t.t. 245-247 °C.

^XH (CDCI3, 400 MHz) δ 3,3 (3H, s), 3,35-3,45 (8H, m) , 7,1-7,4 (4H, br), 8,05 (2H, s), 8,1 (IH, s), 8,4 (IH, s) , 9,0 (IH, s) ppm.

LRMS 442, 444 (MH⁺) .

Analýza: Zjištěno: C, 46,18; H, 4,56; N, 15,32. Vypočítáno pro Ci7H₂oClN₅0₅S»0,2 H₂O: C, 45,83; H, 4,62; N, 15,72.

Roztok NaOH (1 ml, 2 M, 2 mmol) se přidá do roztoku methyl 4-{[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)sulfonyl]amino}tetrahydro-2H-pyran-4-karboxylatu (68 mg, 0,153 mmol) v MeOH (12 ml) a směs se zahřívá při při teplotě zpětného toku po dobu 30 h. Chladná směs se neutralizuje ředěnou HCI (1 ml, 2 Μ), částečně se zahustí odpařením ve vakuu za vzniku sraženiny, která se odebere filtrací. Pevný materiál se extrahuje horkou konc. HCI, roztok se dekantuje nerozpustného materiálu a rozpouštědla se odpaří ve vakuu. Pevný zbytek se azeotropuje s PhMe a potom se suší ve vysokém vakuu za zisku

98.

hydrochloridu kyseliny 4-{[ (4-chlor-l-guanidin-7isochinolyl)sulfonyl]amino}tetrahydro-2H-pyran-4-karboxylové (30 mg, 0,062 mmol) ve formě bílého pevného materiálu.

t.t. 190-210 °C (za rozkladu).

¹H(DMSO-d₆, 400 MHz) δ 3,2-3,5 (8H, m) , 8,2-8,7 (4H, br), 8,3 (IH, d), 8,4 (IH, d), 8,45 (IH, s), 8,95 (IH, s) , 11,0 (IH, br s) , 12,6 (IH, br s) ppm.

Analýza: Zjištěno: C, 39,76; H, 4,33; N, 14,12. Vypočítáno pro CieHieClNsOsS·!, 0 HC1*1,1 H₂0: C, 39, 69; H, 4,41; N, 14,4.

Příklad 45:

(a) terc.butyl (±)-cis-2-{[(4-chlor-l-guanidin-7isochinolyl)sulfonyl)amino}cyklohexankarboxylat (b) Hydrochlorid kyseliny (±)-cis-2-{[(4-chlor-l-guanidin-7isochinolyl)sulfonyl]amino}cyklohexankarboxylově

Guanidinhydrochlorid (325 mg, 3,4 mmol) se přidá najednou do míšené suspenze NaH (89 mg, 80% disperze v minerálním oleji (hmot./hmot.), 2,97 mmol) v DME (5 ml) a směs se zahřívá při teplotě 60 °C v atmosféře N2 po dobu 30 min. Přidá se roztok terc.butyl (±)-cis-2-{[(l,4-dichlor-7isochinolyl)sulfonyl]-amino}cyklohexankarboxylatu (391 mg, 0,85 mmol) v DME (5 ml) a směs se zahřívá při teplotě 90 °C po dobu 6 h. Rozpouštědla se odpaří ve vakuu, zbytek se rozpustí v EtOAc, promyje se vodným roztokem NH4C1, suší se (MgSO₄) a odpaří se ve vakuu. Zbytek se přečistíchromatografií na silikagelové koloně za použití ·· • · • © • ···· ·· ···· • · · • · · • · * © · · · ·· »· ·· © «

9 • 9

9 toluenu-i-PrOH-O,880 NH3 (100:0:0 až 90:10:0,05) jako eluens za zisku terc.butyl (±)-cis-2-{[(4-chlor-l-guanidin-7isochinolyl)-sulfonyl]amino}cyklohexankarboxylatu (75 mg, 0,15 mmol) ve formě bílého pevného materiálu.

¹H (COCI3,	400	MHz)	δ 1,	1-1,8 (7H,	mm) ,	1,4 (9H, s), 1,95	(IH,
m) , 2,55	(IH,	dd) ,	3,45	(IH, br s)	, 5,	9 (IH, d), 6,0-6,5	(4H,
br), 8,05	(IH,	d) ,	8,1	(IH, d), 8,	15 (	IH, s), 93 (IH, s)	ppm.
LRMS 482,	484	(MH⁺)	_e

CF3CO2H (3,0 ml) se přidá do míšeného roztokuof terc.butyl (±)—cis-2-{[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)sulfonyl]amino]cyklohexankarboxylatu (66 mg, 0,14 mmol) v CH2CI2 (3,0 ml) a směs se mísí při 23 °C po dobu 6 h. Rozpouštědla se odpaří ve vakuu za azeotropování s CH2CI2 (x3) . Zbytek se rozpustí v EtOAc a přidá se roztok HCI v Et2O (200 μΐ, 1,0 Μ) , čímž vznikne sraženina. Bílý pevný materiál se odebere filtrací a suší se za zisku hydrochloridu kyseliny (±)-cis-2-{[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)sulfonyl]amino}cyklohexankarboxylové (35 mg, 0,069 mmol).

t.t. 220-223 °C (za rozkladu).

¹H(DMSO-d₆, 400 MHz) δ 1,1-1,3 (3H, m) , 1,4-1,6 (4H, m) , 1,71,8 (IH, m), 2,5 (IH, m), 3,75 (IH, br s), 8,0 (IH, d) , 8,258,6 (4H, br), 8,35 (2H, s), 8,45 (IH, s), 8,95 (IH, s) ppm. Analýza: Zjištěno: C, 42,95; H, 4,96; N, 13, 79. Vypočítáno pro Ci7H₂₀ClN₅O4S»l,0 HCI· 1,25 H₂O· 0,3 Et₂O: C, 43,11;H, 5,27 ;N, 13,81.

Příklad 46:

Ethyl (±)-trans-2-{[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)sulfonyl]amino]cyklohexankarboxylat

100

Guanidinhydrochlorid (458 mg. 4,8 mmol) se přidá najednou do míšené suspenze NaH (90 mg. 80% disperze v minerálním oleji (hmot./hmot.), 2,97 mmol) v DME (10 ml) a směs se zahřívá při teplotě 60 °C v atmosféře N2 po dobu 30 min. Přidá se roztok ethyl (±) -cis-2-{[(1,4-dichlor-7-isochinolyl)sulfonyl]amino}cyklohexankarboxylatu (377 mg, 0,87 mmol) v DMA (5 ml) a směs se zahřívá při teplotě 90 °C po dobu 4 h. Rozpouštědla se odpaří ve vakuu, zbytek se rozpustí v EtOAc (200 ml), promyje se vodným roztokem NH4CI (20 ml) , potom vodou (500 ml) a kombinované vodné výplachy se extrahují EtOAc (2x50 ml). Kombinované EtOAc extrakty se promyjí vodou (4X¹00 ml), suší se (MgSO4) a odpaří se ve vakuu. Zbytek se přečistí chromatografií na silikagelové koloně za použití toluenu-iPrOH-0,880 NH3 (100:0:0 až 90:10:0,05) jako eluens, za zisku ethyl (±)-trans-2-{[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)sulfonyl]amino)cyklohexankarboxylatu (65 mg, 0,14 mmol) ve formě bílého pevného materiálu. [Také se izoluje malé množství ethyl (±)-cis-2-{[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)sulfonyl]amino)cyklohexankarboxylatu (<20 mg)].

¹H(CDC1₃, 400 MHz) δ 1,1-1,8 (6H, mm), 1,1 (3H, t) , 1,9 (IH, m), 2,0 (IH, m), 2,25 (IH, td), 3,45 (IH, m), 3,8-4,0 (2H, m) , 8,05 (IH, d), 8,1 (IH, d), 8,15 (IH, s), 9,3 (IH, s) ppm.

LRMS 454, 456 (MH⁺) .

Příklad 47:

(a) terč.butyl cis-4-{[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)• ·

101

4 sulfonyl]amino}cyklohexankarboxylat (b) terč.butyl trans-4-{[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)sulfonyl]amino}cyklohexankarboxylat (c) Hydrochlorid kyseliny cis-4-{[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)sulfonyl]amino}cyklohexankarboxylové

Cl

NH,

Guanidinhydrochlorid (286 mg, 3,0 mmol) se přidá najednou do míšené suspenze NaH (56 mg, 80% disperze v minerálním oleji (hmot./hmot.), 1,82 mmol) v DME (5 ml) a směs se zahřívá při teplotě 60 °C v atmosféře N2 po dobu 30 min. Přidá se roztok terč.butyl cis-4-{[(1,4-dichlor-7-isochinolyl)sulfonyl]amino}cyklohexankarboxylatu (346 mg, 0,75 mmol) v DME (15 ml) a směs se zahřívá při teplotě 90 °C po dobu 2 h. Přidá se druhý podíl guanidinu (0,75 mmol)[připravený z guanidinhydrochloridu (72 mg) a NaH (22 mg)] v DME (5 ml)] a směs se zahřívá při teplotě 90 °C po dobu 1 h. Potom se do heterogenní reakční směsi přidá DMA (10 ml) a vzniklá homogenní směs se mísí po dobu dalších 6 hodin. Rozpouštědla se odpaří ve vakuu, zbytek se utlumí vodným roztokem NH4CI (10 ml), naředí se vodou (150 ml) a extrahuje se EtOAc (2X^x50 ml). Kombinované organické extrakty se promyjí vodou (100 ml), suší se (MgSO₄) a odpaří se ve vakuu. Zbytek se přečistí opakovanou chromatografií na silikagelové koloně za použití (i), pentanu-EtOAc (100:0 až 25:75) a potom (ii), PhMe-EtOAc (50:50 až 0:100) jako eluens, za zisku terč.butyl cis-4-{[(4-chlor-l-guanidin-7isochinolyl)-sulfonyl]amino]cyklohexankarboxylatu (247 mg,

0,51 mmol). [Také se izoluje malé množství terč.butyl trans-4-{[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)sulfonyl]amino}cyklohexankarboxylatu (20 mg)].

• · « ·

¹H(CDC1₃, 400	MHz)	δ 1,4 (9H, s)	, 1,5-1,8	(8H,	mm), 2,3 (IH,
m), 3,4 (IH,	m) ,	4,8-4,9 (IH,	br), 6,1-	6,55	(4H, br), 8,05
(IH, d), 8,1	(IH,	d), 8,15 (IH,	s), 9,3	(IH,	s) ppm.

LRMS 482 (MH⁺) , 963 (M₂H⁺) .

Analýza: Zjištěno: C, 52,14; H, 5,92; N, 14,19. Vypočítáno pro C21H28CIN5O4S·: C, 52,33; H, 5,86; N, 14,53.

terc.butyl cis-4-{[(4-chlor-l-guanidin-7sochinolyl)sulfonyl]-amino}cyklohexankarboxylat (55 mg, 0,121 mmol) se suspenduje v roztoku EtOAc nasyceném HCI (50 ml) a směs se zahřívá při teplotě zpětného toku. Směs se ochladí, bílý pevný materiál se odebere filtrací s promytím EtOAc a potom se suší za zisku hydrochloridu kyseliny cis-4-{[(4chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)-sulfonyl]amino}cyklohexankarboxylové (110 mg, 0,236 mmol).

t.t. 287-289 °C.

^XH (CDCI3, 400 MHz) δ 1,5-1,6 (6H, m) , 1,8-1,9 (2H, m) , 2,35 (IH, m), 3,4 (IH, m) , 8,35 (IH, d), 8,45 (IH, s) , 8,5 (IH, d) , 8,9 (IH, s) ppm.

Analýza: Zjištěno: C, 43,88; H, 4,61; N, 14,69; Vypočítáno pro C17H20CIN5O4S· 1,0 HCI· 0,2 H₂O: C, 43, 82; H, 4,63; N, 15,03.

Příklad 48:

(a) Ethyl trans-4-{[(4-chlor-l-guanidin-7isochinolyl)sulfonyl]amino}cyklohexankarboxylat (b) Hydrochlorid kyseliny trans-4-{[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)sulfonyl]amino}cyklohexankarboxylové • · · ·

NH,· NH,

Guanidinhydrochlorid (273 mg, 2,86 mmol) se přidá najednou do míšené suspenze NaH (55 mg, 80% disperze (hmot./hmot.) v minerálním oleji, 1,82 mmol) v DME (10 ml) a směs se zahřívá při teplotě 60 °C v atmosféře N₂ po dobu 30 min. Přidá se roztok ethyl trans-4{[(1,4-dichlor-7-isochinolyl)sulfonyl]amino}cyklohexankarboxylatu (370 mg, 0,78 mmol) v DMA (10 ml) a směs se zahřívá při teplotě 90 °C po dobu 3 h. Rozpouštědla se odpaří ve vakuu, zbytek se rozdělí mezi Et₂O (100 ml), vodný NH4CI (10 ml) a vodu (150 ml). Separovaná vodná fáze se extrahuje Et₂O (3X^x00 ml) a kombinované organické extrakty se suší (MgSC>4) a odpaří se ve vakuu. Zbytek se přečistíchromatografií na silikagelové koloně za použití toluenui-PrOH-0,880 NH3 (100:0:0 až 90:10:0,05) jako eluens, za zisku ethyl trans-4-{[(4-chlor-l-guanidin-7isochinolyl)sulfonyl]amino}cyklohexankarboxylatu (70 mg, 0,15 mmol).

IH (CDCI3, 400 MHz) δ 1,1 (3H, s), 1,1-1,3 (4H, mm}, 1,6 (2H, brd), 1,8 (2H, brd), 2,1 (IH, m) , 2,9 (IH, m), 3,95 (2H, q), 7,1-7,4 (4H, br), 7,8 (IH, d), 8,0 (IH, d), 8,1 (IH, d) , 8,1 (IH, s) , 9,1 (IH, s) ppm.

LRMS 454, 456 (MH⁺) .

Analýza: Zjištěno: C, 50,27; H, 5,56; N, 14,92. Vypočítáno pro C19H24CIN5O4S: C, 50,27; H, 5,32; N, 15,43.

Roztok HCI (5 ml, 2 M, 10 mmol) se přidá do roztoku ethyl trans-4-{[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)sulfonyl]amino}cyklohexankarboxylatu (5 5 mg, 0,121 mmol) v dioxanu (5,0 ml) a směs se zahřívá při teplotě zpětného toku po dobu 2 h.

·· · ·

104 .........

Rozpouštědla se odpaří ve vakuu a zbytek se přečistí chromatografií na Mel gelové koloně (CHP 20P) za použití vodyMeOH (100:0 až 20:80) jako eluens za zisku kyseliny trans-4-{[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)sulfonyl]amino}cyklohexankarboxylové. Tento materiál se rozpustí v ředěné HCI (20 ml, 0,1 Μ), rozpouštědla se odpaří ve vakuu a zbytek se trituruje s Et₂O za zisku hydrochloridu kyseliny trans-4-{[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)sulfonyl]amino}cyklohexankarboxylové (35 mg, 0,067 mmol) ve formě bílého pevného materiálu.

t.t. >205 °C (za rozkladu).

¹H(CD₃OD, 400 MHz) δ 1,2-1,4 (4H, mm), 1,8 (2H, br d) , 1,9 (2H, br d), 2,1 (ÍH, m), 3,1 (ÍH, m), 8,3 (ÍH, d), 8,45 (ÍH, s),

8,5 (ÍH, d), 8,9 (ÍH, s) ppm.

Analýza: Zjištěno: C, 42, 75; H, 5,04; N, 13,35. Vypočítáno pro Ci7H₂₀ClN5O₄S»l,0 HC1*1,5 Η₂Ο·0,4 Et₂O: C, 43,04; H, 5,44; N, 13,49.

Příklad 49:

(a) terč.butylester N-[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)karbonyl]glycinu (b) N-[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)karbonyl]glycin, trifluoracetat

NaH (34 mg, 60% disperse v minerálním oleji, 0,85 mmol) se

105 • · ···· ·· · • · · · · ·· • · · · · Σ ··· · · · Σ Σ • · · · · · * ·· ·· ·· ··· přidá do míšeného roztoku guandinhydrochloridu (80 mg, 0,84 mmol) v DMSO (2 ml) při teplotě 23 °C. Po 30 minutách se přidá terc.butylester N- [(1,4-dichlor-7-isochinolyl)karbonyl] glycinu (120 mg, 0,34 mmol) a vzniklý roztok se zahřívá při teplotě 90 °C po dobu 21 h. Po ochlazení s směs vnese do vody (30 ml), extrahuje se EtOAc a potom CH2CI2 a kombinované organické extrakty se suší (Na2SO₄) a odpaří se ve vakuu.

Zbytek se přečistí chromatografií na silikagelové koloně za použití CH2Cl2-MeOH-0,880 NH3 (90:10:1) jako eluens za zisku terč.butylesteru N-[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)karbonyl]-glycinu (25 mg, 0,07 mmol) ve formě žluté pryže.

LRMS 378 (MH⁺) , 756 (M₂H⁺) .

Roztok terč.butylesteru N-[(4-chlor-l-guanidin-7isochinolyl)karbonyl]glycinu (24 mg, 0,06 mmol) v CF3CO2H (0,5 ml) se mísí při 0 °C po dobu 1,5 h. Reakční směs se naředí PhMe, odpaří se ve vakuu za azeotropování s PhMe a zbytek se trituruje s Et2O za zisku N-[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)karbonyl]glycinu, trifluoracetatu (21 mg, 0,05 mmol) ve formě bílého pevného materiálu, t.t. > 300 °C.

^XH(TFA-d, 400 MHz) δ 4,6 (2H, s), 8,4 (IH, d) , 8,45 (IH, s),

8,6 (IH, d), 9,3 (IH, s) ppm.

LRMS 322 (MH⁺) .

Analýza: Zjištěno: C, 40,60; H, 2,91 ; N, 15,47. Vypočítáno pro Ci₃Hi2ClN₅03«CF3C02H: C, 40,58; H, 2,93; N, 15,46.

Příklad 50:

(a) terc.butylester N-[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)karbonyl]-β-alaninu (b) N-[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)karbonyl)-β-alanin • ·

NHj ΝΚ,

NaH (114 mg, 60% disperze v minerálním oleji, 2,85 mmol) se po částech přidá do míšeného roztoku guanidinhydrochloridu (272 mg, 2,85 mmol) v DMSO (8 ml) a roztok se zahřívá při teplotě 80 °C po dobu 20 min. Přidá se terč.butylester N[(1,4-dichlor-7-isochinolyl)karbonyl]-β-alaninu (420 mg, 1,14 mmol) a směs se zahřívá při teplotě 90 °C přes noc. Chladná směs se vnese do vody, extrahuje se EtOAc, a kombinované organické extrakty se promyjí vodou, nasycenou solankou, suší se (Na₂SO4) a odpaří se ve vakuu, zbytek se krystalizuje z i-Pr₂O-CH₂Cl₂ za zisku terč.butylesteru N-[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)karbonyl]-β-alaninu (190 mg, 0,48 mmol). t.t. 224-226 °C.

^XH (DMSO-de, 400 MHz) δ 1,4 (9H, s), 2,55-2,5 (2H, m), 3,5 (2H, dt), 7,0-7,3 <4H, br s), 7,85 (1H, d), 8,0 (1H, s), 8,1 (1H, d), 8,65 (1H, t), 9,1 (1H, s) ppm.

LRMS 392 (MH⁺), 783 (M₂H⁺) .

Analýza: Zjištěno: C, 54,89; H, 5,68; N, 17,94. Vypočítáno pro Ci₈H₂₂C1N₅O₃: C, 55,17; H, 5,66; N, 17,87.

Roztok terč.butylesteru N-[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)karbonyl]-β-alaninu (145 mg, 0,37 mmol) v CF3CO₂H (1,5 ml) se mísí při 0 °C po dobu 30 min a potom při teplotě okolí po dobu 1 h. Přidá se PhMe (15 ml), směs se odpaří ve vakuu a zbytek se trituruje s EtOAc a Et₂O za zisku N-[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)karbonyl]-β-alaninu (117 mg, 0,26 mmol) ve formě bílého pevného materiálu.

t.t. 235-236 °C.

107 ·· ··♦· ^XH (DMSO-d₆, 300 MHz) δ 2,6 (2H, t) , 3,55 (2H, dt) , 8,25 (lH, d), 8,35-8,4 (2H, m), 8,5 (4H, br s), 8,8-8,9 (2H, m) ppm. LRMS 336 (MH⁺) .

Analýza: Zjištěno: C, 42, 72; H, 3,56; N, 14,55. Vypočítáno pro Ci4Hi₄ClN₅O2*0,25 EtOAc: C, 42,75; H, 3,57; N, 14,49.

Příklad 51:

(a) ethylester N-[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)karbonyl}cykloleucinu (b) N-[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)karbonyl]cykloleucin

NaH (45 mg, 60% disperze v minerálním oleji, 1,13 mmol) se přidá k t-BuOH a směs se zahřívá při teplotě 50 °C po dobu 15 min. Přidá se guanidinhydrochlorid (105 mg, 1,10 mmol) a směs se zahřívá při teplotě 50 °C po dobu an dalších 15 min. Přidá se ethylester N-[(1,4-dichlor-7-isochinolyl)karbonyl]cykloleucinu (350 mg, 0,92 mmol) a směs se zahřívá při teplotě zpětného toku po dobu 17 h. Rozpouštědla se odpaří ve vakuu a zbytek se přečistí chromatografií na silikagelové koloně za použití CH2Cl2-MeOH-0,880 NH3 (90:10:1) jako eluens, po které následuje triturace s CH₂Cl2-i-Pr₂O, za zisku ethylesteru N-[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)karbonyl]cykloleucinu (55 mg, 0,14 mmol) ve formě světle žlutého prášku.

^ΧΗ (CDC1₃, 300 MHz) δ 1,0 (3H, t) , 1,5-1,65 (4H, m) , 1,8-2,0 (2H, m), 2,0-2,15 (2H, m), 3,9 (2H, q), 6,7 (4H, br s) , 7,5 (ÍH, s), 7,7 (ÍH, d), 7,8 (ÍH, s), 7,9 (ÍH, d), 8,95 (ÍH, s) ppm.

LRMS 404 (MH⁺) .

108

Analýza: Zjištěno: C, 55,94; H, 5,42; N, 16,94. Vypočítáno pro

Ci₉H22C1N₅O3*0,25 H₂O: C, 55,87; H, 5,55; N, 17,14.

9· ····

I · « > · · 1 ·· ··

Částečně heterogenní roztok ethylesteru N-[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)karbonyl]cykloleucinu (45 mg, 0,11 mmol) v dioxanu (1,5 ml) se mísí s vodným roztokem NaOH (1 ml, 2 M) po dobu 2,5 h při teplotě 23 °C. Přidá se ředěná HCI (1 ml, 2 Μ) , za zisku krémové suspenze. Pevný materiál se odebere filtrací a suší se ve vakuu za zisku N-[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)karbonyl]cykloleucinu (40 mg, 0,11 mmol). t.t. > 275 °C.

¹H(TFA-d, 400 MHz) δ 1,9-2,1 (4H, m) , 2,2-2,4 (2H, m) , 2,5-2,7 (2H, m), 8,3 (1H, d), 8,35 (1H, 5), 8,45 (1H, d) , 9,25 (1H, 5) ppm.

LRMS 376 (MH⁺) , 751 (M₂H⁺) .

Analýza: Zjištěno: C, 51,67; H, 4,92; N, 17,39. Vypočítáno pro Ci7Hi₈ClN₅O3*H₂O: C, 51,84; H, 5,11; N, 17,78.

Příklad 52:

(a) terc.butylester N-[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)karbonyl]-DL-fenylglycinu (b) N-[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)karbonyl]-DL-fenylglycin, trifluoracetat

Směs guanidinhydrochloridu (326 mg, 3,41 mmol) a NaH (137 mg, 60% disperze v oleji, 3,43 mmol) v DMSO (5 ml) se zahřeje na 70 °C, přidá se roztok terč.butylesteru N-[(1,4-dichlor-7109

0000 ·

000·

-isochinolyl)karbonyl]-DL-fenylglycinu (590 mg, 1,37 mmol) v DMSO (3 ml) a směs se zahřívá při teplotě 80-90 °C přes noc.

Po ochlazení se reakční směs vnese do vody (50 ml) a extrahuje se EtOAc (3x30 ml). Kombinované organické extrakty se promyjí vodou, suší se (Na2SO4) a odpaří se ve vakuu. Po přečištění zbytku-chromatografií na silikagelové koloně za použití CH2CI2MeOH-0,880 NH3 (90:10:1) jako eluens, po které následuje krystalizace z i-Pr2O, se získá terč.butylester N-[(4-chlor-l -guanidin-7-isochinolyl)karbonyl]-DL-fenylglycinu (110 mg, 024 mmol) ve formě světle žlutého pevného materiálu.

t.t. 158 °C (pěna), 170 °C (za rozkladu).

^τΗ (CDC1₃), 300 MHz) δ 1,4 (9H, s), 5,7 (ÍH, d) , 6,5 (4H, br s), 7,25-7,4 (3H, m) , 7,4-7,5 (3H, m), 8,05 (ÍH, d), 8,10 (ÍH, s), 8,15 (ÍH, d), 9,2 (ÍH, d) ppm.

LRMS 454 (MH⁺) .

Analýza: Zjištěno: C, 61,53; H, 5,96; N, 14,27. Vypočítáno pro C23H24CIN5O3· 0,3 i-Pr₂O: C, 61,53; H, 5,92; N, 14,27.

Roztok terc.butylesteru N-[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl) karbonyl]-DL-fenylglycinu (100 mg, 0,22 mmol) v CF3CO2H (1,5 ml) se mísí při 0 °C po dobu 30 min a potom při 23 °C po dobu 1 h. Reakční směs se naředí PhMe (15 ml) a odpaří se ve vakuu. Zbytek se formě klovatiny se trituruje s EtOAc, a potom s Et2O, a získaný bílý pevný materiál se suší ve vakuu za zisku N-[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)karbonyl]-DL-fenylglycinu, trifluoracetatu (50 mg, 0,10 mmol).

¹H(DMSO-d6, 300 MHz) δ 5,6 (ÍH, d) , 7,3-7,45 (3H, m) , 7,55 (2H, d) , 8,2 (ÍH, d), 8,2-8,4 (5H, m) , 8,45 (ÍH, d) , 8,95 (ÍH, s) , 9,4 (ÍH, d) ppm.

LRMS 398 (MH⁺) .

Analýza: Zjištěno: C, 49,72; H, 3,68; N, 14,04. Vypočítáno pro φ

φ φ

110 φ φφφφ

C19H16CIN5O3· 0,95 CF3CO2H: C, 4 9,27; Η, ·· φ

φ · φ« ΦΦΦΦ φ · · φ · · • · · φ · · * • Φ Φ·

3,35; Ν, φφ φφ

13,68.

Příklad 53:

(a) terč.butylester Ν-[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)karbonyl]-1-fenylglycinu (b) N- [(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)karbonyl]-1-

-fenylglycin,	trifluoracetat
0 _r	α	0	α	Q rr	σ ί
‘ JL lBuO,cd>N— ^H 0	α	IBuOjCdřN-tf ^Η 0	-- N<^.NH, NH,	ϊ JI J	,λΝ Ν^γ,ΝΗ, NH,
NaH (38 mg,	80%	disperze v	minerálním	oleji, 1,	27 mmol) se

přidá do míšeného roztoku guanidinhydrochloridu (121 mg, 1,27 mmol) v DMSO (4 ml) při teplotě 23 °C a směs se zahřívá při teplotě 80-85 °C po dobu 15 min. Přidá se terč.butylester N-[(1,4-dichlor-7-isochinolyl)karbonyl]-1-fenylglycinu (218 mg, 0,51 mmol) a směs se zahřívá při teplotě 85 °C po dobu 4 h. Chladný roztok se vnese do vody a extrahuje se EtOAc (x3). Kombinované organické extrakty se promyjí nasycenou solankou, suší se (Na₂SO₄) a odpaří se ve vakuu. Zbytek se krystalizuje s i-Pr₂O za zisku terč.butylesteru N-[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)karbonyl]-1-fenylglycinu (55 mg, 0,12 mmol) ve formě světle žlutého pevného materiálu.

t.t. 147 °C (za rozkladu).

^XH (CDCI3, 400 MHz) δ 1,4 (9H, s) , 5,7 {IH, d), 6,2-6,8 (4H, br s), 7,3-7,4 (3H, m) , 7,45-7,5 (3H, m) , 8,0-8,1 (2H, m), 8,1582 (IH, d), 9,2 (IH, s) ppm.

LRMS 454 (MH⁺) , 907 (M₂H⁺) .

Analýza: Zjištěno: C, 61,22; H, 6,01; N, 13,91. Vypočítáno pro C₂3H₂₄ClN5O₃S»0,4 i-Pr₂O: C, 61,21; H, 6,07; N, 14,05.

Φ

111 • Φ· ·· · * • φ • · · • φ • ΦΦ >··· φφ φφφφ

4 4

Φ 4 Φ ·

Φ 9 9 Φ

ΦΦ ΦΦ

ΦΦ

Roztok terc.butylesteru Ν-[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)karbonyl]-1-fenylglycinu (40 mg, 0,09 mmol) v CF3CO2H (1 ml) se mísí při teplotě okolí po dobu 1 h. Reakční směs se naředí PhMe, odpaří se ve vakuu a zbytek se trituruje s EtOAc za zisku N-[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)karbonyl]-1-fenylglycinu, trifluoracetatu (32 mg, 0,06 mmol) ve formě bílého prášku .

t.t. 163 °C (sraženina), > 200 °C (za rozkladu).

¹H(TFA-d, 400 MHz) δ 5,85 (IH, s) , 7,35-7,4 (3H, m) , 7,4-7,45 (2H, m), 8,25 (IH, d), 8,3 (IH, s), 8,4 (IH, d), 9,15 {IH, s) ppm.

LRMS 398 (MH⁺) , 795 (M₂H⁺) .

Analýza: Zjištěno: C, 48,28; H, 3,74; N, 13,57. Vypočítáno pro Ci9Hi6ClN5O3^eCF₃CO₂H*0,5 H₂0: C, 48,43; H, 3,48; N, 13,45.

Příklad 54:

(a) terc.butylester N-[ (4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)karbonyl]-D-fenylglycinu (b) N-[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)karbonyl]-D-fenylglycin, trifluoracetat

NaH (30 mg, 80% disperze v minerálním oleji, 1,0 mmol) se přidá do roztoku guanidinhydrochloridu (97 mg, 1,0 mmol) v DMSO (3 ml) a roztok se zahřívá při teplotě 80 °C po dobu 30 min. Přidá se terc.butylester N-[(1,4-dichlor-7-isochinolyl)karbonyl]-D-fenylglycinu (175 mg, 0,41 mmol), směs se zahřívá při teplotě 85 °C po dobu 3,5 h a potom při teplotě 23 °C

112

ΦΦΦ přes noc. Směs se vnese do vody (25 ml), extrahuje se EtOAc (3x20 ml), a kombinované organické extrakty se promyjí solankou, suší se (MgSOd a odpaří se ve vakuu. Zbytek se přečistí chromatografií na silikagelové koloně za použití CH2Cl2-MeOH-0,880 NH3 (95:5:0,5) jako eluens, po které následuje krystalizace z CH2Cl2-i-Pr2O, za zisku terč.butylesteru N-[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)karbonyl]-D-fenylglycinu (37 mg, 0,08 mmol) ve formě pevného materiálu.

t.t. 154-156 °C (za rozkladu).

^(CDCls, 400 MHz) δ 1,4 (9H, s), 5, 7 (IH, d) , 7,3-7,4 {3H, m), 7,4-7,5 (3H, m), 8,05 (IH, d), 8,05 (IH, s) , 8,15 (IH, d) , 9,2 {IH, s) ppm.

LRMS 454 (MH⁺) , 907 (M₂H⁺) .

Analýza: Zjištěno: C, 61,15; H, 6,00; N, 13,87. Vypočítáno pro C23H24CIN5O3· 0,45 i-Pr₂O· 0,2 H₂O: C, 61,31; H, 6,15; N, 13,91.

Roztok terč.butylesteru N-[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)karbonyl]-D-fenylglycinu (40 mg, 0,09 mmol) v CF3CO2H (0,5 ml) se mísí při teplotě okolí po dobu 1 h. Roztok se naředí PhMe, odpaří se ve vakuu a zbytek se trituruje s Et2O za zisku N-[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)karbonyl]-D-fenylglycinu, trifluoracetatu {21 mg, 0,04 mmol) ve formě bílého prášku.

t.t. 222 °C (za rozkladu).

¹H(TFA-d, 400 Mhz) δ 5,9 (IH, s), 7,4-7,5 (3H, m) , 7,5-7,55 (2H, m), 8, 3 (IH, d), 8,35 (IH, s) , 8,4 (IH, d) , 9,2 (IH, s) ppm.

LRMS 398 (MH⁺) , 795 (M₂H⁺) .

113

Analýza: Zjištěno: C, 49,02; H, 3,42; N, 13,26. Vypočítáno pro

Ci9Hi6ClN₅O3*CF3CO₂H*0,25 H₂O: C, 48,85; H, 3,42; N, 13,56.

Příklad 55:

(a) terč.butylester N-[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)karbonyl]-DL-valinu (b) N-[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)karbonyl]-DL-valin, trifluoracetat

NaH (88 mg, 60% disperze v minerálním oleji, 2,2 mmol) se přidá do míšeného roztoku guanidinhydrochloridu (210 mg, 2,2 mmol) v DMSO (5ml) při teplotě 70 °C a roztok se mísí po dobu 30 min. Přidá se terč.butylester N-[(l,4-dichlor-7-isochinolyl)karbonyl]-DL-valinu (350 mg, 0,88 mmol) a roztok se zahřívá při teplotě 80-90 °C přes noc. Chladná směs se vnese do vody, extrahuje se EtOAc (3x20 ml), a kombinované organické extrakty se suší (MgSO₄) a odpaří se ve vakuu. Zbytek se krystalizuje s CH₂Cl₂-i-Pr₂O za zisku terč .butylesteru N- [ (4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)karbonyl]-DL-valinu (285 mg, 0,68 mmol) ve formě žlutého pevného materiálu.

t.t. 178-180 °C (za rozkladu).

³Η (CDCI3) , 300 MHz) ukazuje 1:1 směs rotamerů, δ 1,0 (1/2 6H, d), 1,05 (1/2 6H, d), 1,5 (9H, s), 2,2-2,4 (ÍH, m) , 4,7 (1/2 ÍH, d), 4,75 (1/2 ÍH, d), 6,2-6,8 (4H, br s), 6,9 (ÍH, d) ,

8,05 (ÍH, d) , 8,1 (ÍH, s) , 8,15 (ÍH, d) , 9,1 (ÍH, s) ppm. LRMS 420 (MH⁺), 839 (M₂H⁺) .

Analýza: Zjištěno: C, 56,00; H, 6,35; N, 16,33. Vypočítáno pro C₂oH₂₆ClN₅03*0,5 H₂O: C, 55,71; H, 6,36; N, 16,32.

114

1111

Roztok terč.butylesteru N-[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)karbonyl]-DL-valinu (200 mg, 0,48 mmol] v CF3CO2H (1,5 ml) se mísí při teplotě O °C po dobu 30 min, a při teplotě 23 °C po dobu 1 h. Reakční směs se naředí PhMe, odpaří se ve vakuu a zbytek se trituruje s EtOAc za zisku N-[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)karbonyl]-DL-valinu, trifluoracetátu (170 mg, 0,36 mmol) ve formě bílého pevného materiálu.

t.t. 243-245°C (za rozkladu).

¹H (DMSO-d6, 300 MHz) ukazuje 1:1 směs rotamerů, δ 0,95 (1/2 6H, d), 1,0 (1/2 6H, d), 2,15-2,3 (IH, m) , 4,35 (IH, t), 8,25 (IH, d), 8,4 (IH, s), 8,45 (IH, d), 8,4-8,6 (4H, br s], 8,85 (IH, d), 8,9 (IH, s) ppm.

LRMS 364 (MH⁺) .

Analýza: Zjištěno: C, 44,96; H, 3,95; N, 14,56. Vypočítáno pro Ci6Hi₈ClN₅O3*CF3CO2H: C, 45,24; H, 4,01; N, 14,65.

Příklad 56:

(a) terč.butylester N-[(4-chior-l-guanidin-7-isochinolyl)karbonyl]-DL-prolinu (b) N-[ (4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl) karbonyl]-DL-prolin, trifluoracetat

			a .	>	ct
			ιΎί	í\|
			-	O-r
1 0	Cl	1 0	NH,	Ύ ⁰	N^NH, NH,
CO,tBu		CO/Bu	CO/1
NaH (65 mg,	60%	disperze v	minerálním	oleji,	1,63 mmol) se

přidá do míšeného roztoku guanidinhydrochloridu (154 mg, 1,61 mmol) v DMSO (5 ml) při teplotě 50 °C a roztok se mísí po dobu 15 min. Přidá se terč.butylester N-[(1,4-dichlor-7-isochinolyl)karbonyl]-DL-prolinu (253 mg, 0,64 mmol) a směs se zahřívá při teplotě 80 °C přes noc. Směs se vnese do vody • ·

115 (20 ml) a extrahuje se EtOAc (x2). Kombinované organické extrakty se promyjí vodou, solankou, suší se (MgSO4) a odpaří se ve vakuu. Zbytek se krystalizuje s CH₂Cl₂-i-Pr₂O za zisku terč.butylesteru N-[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)karbonyl]-DL-prolinu (241 mg, 0,58 mmol).

t.t. 147-149°C (za rozkladu).

¹H (CDCI3, 300 MHz) ukazuje 1:3 směs rotamerů, δ 1,55 (9H, s) , 1,8-2,1 (3H, m), 2,152,45 (IH, m) , 3,55-3, 65 (IH, m), 3,753,85 (IH, m), 4,35-4,45 (IH, m) , 6,5-7,2 (4H, br m), 7,7 (1/4 IH, d), 7,85 (3/4 IH, d), 7,9-8,1 (2H, m), 8,85 (1/4 IH, s), 8,95 (3/4 IH, s) ppm.

LRMS 418 (MH⁺), 835 (M₂H⁺) .

Analýza: Zjištěno: C, 58,46; H, 6,49; N, 14,95. Vypočítáno pro C2oH₂4C1N₅03· 0,4 i-Pr₂O: C, 58,65; H, 6,50; N, 15,27.

Roztok terč.butylesteru N-[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl) karbonyl]-DL-prolinu (175 mg, 0,42 mmol) v CF3CO₂H (1 ml) se mísí při teplotě okolí po dobu 1 h. Roztok se naředí PhMe, odpaří se ve vakuu a zbytek se trituruje s Et₂O za zisku N- [ (4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)karbonyl]-DL-prolinu, trifluoracetatu (156 mg, 0,33 mmol) ve formě bílého pevného materiálu.

t.t. 185 °C (za rozkladu).

¹H(DMSO-d₆ + 1 kapka TFA-d, 300 MHz) δ 1,8-2,1 (3H, m), 2,252,4 (IH, m), 3,45-3, 7 (2H, m), 4,4-4,5 (IH, m), 8,0-8,6 (4H, m) ppm.

LRMS 362 (MH⁺) .

Analýza: Zjištěno: C, 45,65; H, 3,84; N, 14,43. Vypočítáno pro Ci6Hi₆ClN5O3«CF3CO₂H: C, 45,43; H, 3,60; N, 14,72.

116

Příklad 57:

(a) terč.butylester N-[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)— karbonyl]-DL-fenylalaninu (b) N-(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)karbonyl]-DL-fenylalanin, trifluoracetat

NaH (78 mg, 60% disperze v minerálním oleji, 1,95 mmol) se přidá do roztoku guanidinhydrochloridu (188 mg, 1,97 mmol) v DMSO (6 ml) při teplotě 50 °C a roztok se mísí po dobu 15 min. Přidá se terč.butylester N-[(1,4-dichlor-7-isochinolyl)karbonyl]-DL-fenylalaninu (350 mg, 0,79 mmol) a směs se zahřívá při teplotě 80 °C přes noc. Chladná směs se vnese do vody (50 ml) a extrahuje se EtOAc (2x25 ml). Kombinované organické extrakty se promyjí solankou, suší se (Na2SO₄) a odpaří se ve vakuu, zbytek se krystalizuje s CH2Cl2-i-Pr2O za zisku terč.butylesteru N-[(4-chlor-l-guanidin-7isochinolyl)karbonyl]-DL-fenylalaninu (172 mg, 0,37 mmol) ve formě krémově zabarveného pevného materiálu.

201-203 °C (za rozkladu).

¹H(CDC1₃, 300 MHz) δ 1,45 (9H, s) , 1,5-1,8 (IH, br m) , 3,25 (2H, d), 5,0 (IH, dt), 6,0-6,8 (3H, br s), 6,9 (IH, d), 7,157,35 (5H, m), 8,0-8,1 (3H, m), 9,1 (IH, s) ppm.

LRMS 468 (MH⁺) , 935 (M₂H⁺) .

Analýza: Zjištěno: C, 61,60; H, 5,60; N, 14,97. Vypočítáno pro C₂₄H26C1N5O₃S: C, 61,60; H, 5,76; N, 14,68.

Roztok terč.butylesteru N-[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl) karbonyl]-DL-fenylalaninu (210 mg, 0,48 mmol) v • ·· · ♦ ··· · «· • · · · · · · 9 9 9

9 9 9 9 9 9

117

9 9 9 9 9 9 9 9

9999999 99 99 99 999

CF3CO2H (1 ml) se mísí při teplotě okolí po dobu 1 h. Roztok se naředí PhMe, odpaří se ve vakuu a zbytek se trituruje s Et2O za zisku N-[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)karbonyl]-DL-fenylalaninu, trifluoracetatu (196 mg, 0,37 mmol).

t.t. 192 °C (za rozkladu).

^XH (DMSO-de + 1 kapka TFA-d, 300 MHz) δ 3,1 (IH, dd), 3,25 (IH, dd), 4,7 (IH, dd), 7,1-7,35 (5H, m), 8,25 (IH, d) , 8,35 (IH, s), 8,35 (IH, d) , 8,9 (IH, s) , 9,15 (1/2H, d částečně zaměněný amid NH) ppm.

LRMS 412 (MH⁺) .

Analýza: Zjištěno: C, 50,92; H, 3,81; N, 13,57. Vypočítáno pro C2oHi8ClN₅0₃*0,9 CF3CO2H: C, 50, 90; H, 3,70; N, 13,61.

Příklad 58:

(a) terč.butylester N-[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)karbonyl]-DL-leucinu (b) N-[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)karbonyl]-DL-leucin, trifluoracetat

NaH (73 mg, 60% disperze v minerálním oleji, 1,83 mmol) se přidá do míšeného roztoku guanidinhydrochloridu (174mg, 1,82 mmol) v DMSO (6 ml) při teplotě 50°C a roztok se mísí po dobu 15 min. Přidá se terč.butylester N-[(1,4-dichlor-7isochinolyl)karbonyl]-DL-leucinu(300 mg, 0, 73 mmol)a roztok se zahřívá při teplotě 80 °C přes noc. Chladná směs se vnese do vody (50 ml), extrahuje se EtOAc (2x.25 ml) a kombinované organické extrakty se promyjí solankou, suší se (Na2SO4) a odpaří se ve vakuu. Zbytek se krystalizuje s CH2Cl2-i-Pr2O za • 9

118 zisku terč.butylesteru N-[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)karbonyl]-DL-leucinu (185 mg, 0,43 mmol).

t.t. 210-212°C (za rozkladu).

*H (CDCI3, 300	MHz)	δ 0,9-1,0 (6H,	m), 1,5	(9H, s),	1,6-1,8
(3H, m), 4, 7-	4,8	(1H, m), 6,47,0	(4H, br	s) , 6,85	(1H, d),
8,05 (1H, d),	8,05	(1H, s), 8,15	(1H, d),	9,15 (1H	, s) ppm

LRMS 434 (MH⁺) , 866 (M₂H⁺) .

Analýza: Zjištěno: C, 58,35; H, 6,75; N, 15,51. Vypočítáno pro C₂iH₂₈ClN₅O₃»0,15 i-Pr₂O: C, 58,55; H, 6,75; N. 15,59.

Roztok terč.butylesteru N-[(4-chlor-l-guanidin-7isochinolyl)karbonyl]-DL-leucinu (184 mg, 0,57 mmol) v CF3CO2H (1 ml) se mísí při teplotě okolí po dobu 1 h. Roztok se naředí PhMe, odpaří se ve vakuu a zbytek se trituruje s Et₂O za zisku N-[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)karbonyl]-DL-leucinu, trifluoracetatu (183 mg, 0,37 mmol).

t.t. 249 °C.

^XH (DMSO-d6, 300 MHz) 1:1 směs rotamerů, δ 0,9 (1/2 6H, d),

0,95 (1/2 6H, d), 1,6-1,8 (3H, m) , 4,45-4,5 (1H, m) , 8,35 (1H, d) , 8,4 (1H, s), 8,4 (1H, d), 8,3-8,6 (4H, br s), 8,95 (1H, s), 9,0 (1H, d) ppm.

LRMS 378 (MH⁺)

Analýza: Zjištěno: C, 46,31; H, 4,27; N, 14,08. Vypočítáno pro Ci7H₂oClN₅03*CF3C0₂H: C, 46,39; H, 4,30; N, 14,24.

Příklad 59:

(a) terč.butyl DL-3-{[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)karbonyl]amino} -3-f enylpropanoat (b) Trifluoracetát kyseliny DL-3-{[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl) karbonyljamino} -3-f enylpropanové

119 • ·

NaH (67 mg, 60% disperze v oleji, 1,68 mmol) se přidá do roztoku guanidinhydrochloridu (161 mg, 1,69 mmol) v DMSO (6 ml) a roztok se zahřívá při 50 °C po dobu 15 min. Přidá se terc-butyl DL-3-[(1, 4-dichlor-7-isochinolyl)karbonyl]amino}-3-fenylpropanoat (300 mg, 0,67 mmol) a směs se zahřívá při teplotě 80 °C přes noc. Chladná směs se vnese do vody (50 ml) a extrahuje se EtOAc (2x25 ml) . Kombinované organické extrakty se promyjí solankou, suší se (Na2SO₄) a odpaří se ve vakuu. Zbytek se krystalizuje s i-Pr2O za zisku terč.butyl DL-3-{(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)karbonyl]amino}-3-fenylpropanoatu (55 mg, 0,12 mmol) ve formě žlutého pevného materiálu.

t.t. 227 °C (za rozkladu).

^XH (CDC1₃ + kapka DMS0-d3, 300 MHz) δ 1,25 (9H, s) , 2,75 (IH, dd), 2,85 (IH, dd), 5,5 (IH, ddd), 6,4-6,8 (4H, br s), 7,17,35 (5H, m), 7,8 (IH, d), 7,9 (IH, d), 7,95 (IH, s) , 8,05 (IH, d), 9,05 (IH, s) ppm.

LRMS 4 68 (MH⁺) .

Analýza: Zjištěno: C, 61,48; H, 5,62; N, 14,70. Vypočítáno pro C₂₄H26C1N5O₃: C, 61,60; H, 5,60; N, 14,97.

Roztok terč.butyl DL-3-{(4-chlor-l-guanidin-7isochinolyl)-karbonyl]amino]-3-fenylpropanoatu (153 mg, 0,33 mmol) v CF3CO2H (1 ml) se mísí při teplotě okolí po dobu 1 h. Roztok se naředí PhMe, odpaří se ve vakuu, a zbytek se trituruje s Et2O za zisku trifluoracetatu kyseliny DL—3—{[(4— chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)karbonyl]amino]120 • 4 4 444444 ·· 4 • 444 4 4 4 4 4 · 4

4 4 4 4 4 4 4 • · ♦ · » 4 * · · ·

4444 444

4444444 44 44 ·· 444

3-fenylpropanové (132 mg, 0,25 mmol).

t.t.241-244°C.

^XH (DMSO-de + 1 kapka TFA-d, 300 MHz) δ 2,8 (IH, dd), 2,95 (IH, dd), 5,5-5,6 (IH, m), 7,2-7,35 (3H, m), 7,4 (2H, d), 8,25 (IH, d), 8,35 (IH, s), 8,4 (IH, d), 8,9 (IH, s) ppm.

LRMS 412 (MH⁺) .

Analýza: Zjištěno: C, 49,95; H, 3,64; N, 13,03. Vypočítáno pro C20H18CIN5O3.CF3CO2H: C, 50,25; H, 3,45; N, 13,32.

Příklad 60:

(a) a,β-di-terc.butylester kyseliny N-[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)karbonyl]-DL-asparagové (b) Trifluoracetat kyseliny N-[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)karbonyl]-DL-asparagové

NaH (53 mg, 80% disperze v minerálním oleji, 1,77 mmol) se přidá do roztoku guanidinhydrochloridu (168 mg, 1,76 mmol) v DMSO (6 ml) a roztok se zahřívá při 50 °C po dobu 30 min.

Přidá se a,β-di-terc.butylester kyseliny N-[(1,4-dichlor-7-isochinolyl) karbonyl]-DL-asparagové (330 mg, 0,70 mmol) a směs se zahřívá při teplotě 80-90 °C přes noc Chladná směs se vnese do vody (50 ml) a extrahuje se EtOAc (5x20 ml). Kombinované organické extrakty se promyjí vodou, solankou, suší se (Na₂SO4) a odpaří se ve vakuu. Zbytek se přečistí (I) triturací s i-Pr₂O (ii) chromatografií na silikagelové koloně za použití CH₂Cl₂-MeOH-0,880 NH3 (95:5:0,5) jako eluens, a (iii) krystalizaci z i-Pr₂O, za zisku a, β-d-terc.butylesteru

121 • '· · · · · kyseliny Ν-[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)karbonyl]-DL-asparagové (145 mg, 0,29 mmol) ve formě žlutého pevného materiálu.

t.t. 165-167 °C.

¹H(CDC1₃, 300 MHz) δ 1,45 (9H, s) , 1,5 (9H, s) , 2,9 (1H, dd),

3,0 (1H, dd), 4,95-5,0 (1H, m), 7,5 (1H, d) , 7,95 (1H, s), 8,0 (1H, d), 8,15 (1H, d), 9,2 (1H, s) ppm.

LRMS 492 (MH⁺) , 983 (M₂H⁺) .

Analýza: Zjištěno: C, 56,06; H, 6,28; N, 13,92. Vypočítáno pro C23H20CIN5O5: C, 56,15; H, 6,15; N, 14,24.

Roztok a,β-di-terc.butylesteru kyseliny N-[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)karbonyl]-DL-asparagové (120 mg, 0,24 mmol) v CF3CO2H (1 ml) se mísí při teplotě okolí po dobu 1 h. Roztok se naředí PhMe, odpaří se ve vakuu a zbytek se trituruje s Et₂O za zisku trífluoracetatu kyseliny N-[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)karbonyl]-DL-asparagové (60 mg, 0,12 mmol) .

t.t. 125 °C (za rozkladu).

^XH(TFA-d, 400 MHz) δ 3,3-3,4 (2H, m), 5,35-5,4 (1H, m), 8,25 (1H, d), 8,3 (1H, s), 8,45 (1H, d), 92 (1H, 5) ppm.

LRMS 380 (MH⁺) , 758 (M₂H⁺) .

Analýza: Zjištěno: C, 43,22; H, 3, 75; N, 14,31. Vypočítáno pro Ci5Hi4ClN₅O₅*0,8 CF₃CO₂H*0,25 Et₂O: C, 43,19; H, 3,56; N, 14,31.

122 «· ···« • » » · · · · • ···· ·· ·· ·· ·

Příklad 61:

(a) terc.butylester O-terc.butyl-N-((4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)karbonyl]-DL-serinu (b) N-(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)karbonyl]-DL-serin, trifluoracetat

NaH (54 mg, 80% disperze v minerálním oleji, 1,80 mmol) se přidá do roztoku guanidinhydrochloridu (173 mg, 1,81 mmol) v DMSO (6 ml) a roztok se zahřívá při teplotě 80 °C po dobu 30 min. Přidá se terc.butylester O-terc.butyl-N-[(1,4-dichlor-7-isochinolyl)karbonyl]-DL-serinu (330 mg, 0,70 mmol) a směs se zahřívá při teplotě 80 °C po dobu 3 h. Chladná směs se vnese do vody (50 ml) a extrahuje se EtOAc. Kombinované organické extrakty se promyjí vodou, solankou, suší se (Na₂SO4) a odpaří se ve vakuu. Zbytek se krystalizuje s i-Pr₂O za zisku terč.butylesteru O-terc.butyl-N-[(4-chlor-l-guanidin-7-

isochinolyl)-karbonyl]-DL-serinu žlutého pevného materiálu.	(138	mg,	0,30	mmol) ve formě
t.t. 215-219 °C.
^XH (CDC1₃, 300 MHz)	δ 1,2 (9H, s),	1,5	(9H	, s) ,	1,5-1,7 (ÍH, br
s), 3,75 (ÍH, dd),	3,95 (ÍH, dd),	4,8-	-4,9	(ÍH,	m), 6,2-6,8
(3H, brs), 7,25-7,3	(ÍH, m), 8,0	(1H,	s) ,	8,05	(ÍH, d), 8,15
(lH,d), 9,2 (ÍH, s)	ppm.
LRMS 464 (MH⁺) , 927	(M₂H⁺) .
Analýza: Zjištěno:	C, 56,88; H, 6	,65;	N,	15,10	. Vypočítáno pro

C₂₂H₃oC1N₅04*0,25 Η²Ο·0,2 i-Pr₂O: C, 57,00; H, 6,87; N, 14,32.

Roztok terč.butylesteru O-terc.butyl-N-[(4-chlor-l• Φ· ·· φφφφ ·· • · · · φ φ φ φφφ

123 φφ φφφφ φφφ φφφ φφφφ φφ «φ φφ φφφ

-guanidin-7-isochinolyl)karbonyl]-DL-serinu v CF3CO2H (1 ml) se mísí při teplotě okolí po dobu 1 hodiny. Roztok se naředí PhMe, odpaří se ve vakuu a zbytek se dvakrát rekrystalizuje z MeOH-EtOAc za zisku N-[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)karbonyl]-DL-serinu, trifluoracetatu (68 mg, 0,19 mmol) ve formě bílého pevného materiálu.

t.t. 203 °C (za rozkladu).

^XH(TFA-d, 400 MHz) δ 4,4 (IH, dd) , 4,5 (IH, dd), 5,2-5,25 (IH, m),8,35 (IH, s), 8,4 (IH, d) , 8,5 (IH, d) , 9,2 (IH, s) ppm. LRMS 352 (MH⁺) , 703 (M₂H⁺) .

Analýza: Zjištěno: C, 42,48; H, 3,69; N, 14,21. Vypočítáno pro Ci₄Hi4ClN₅O4«CF3CO2H*0,4 EtOAc: C, 42,19; H, 3,66; N, 13,98.

Příklad 62:

(a) terc.butylester N-[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)karbonyl]-DL-a-cyklopentylglycinu (b) N-[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)karbonyl]-DL-a-cyklopentylglycin, trifluoracetat

NaH (30 mg, 80% disperze v minerálním oleji, 1,00 mmol) se přidá do roztoku guanidinhydrochloridu (96 mg, 1,01 mmol) v DMSO (3 ml) a roztok se zahřívá při teplotě 75-80 °C. Přidá se terc.butylester N-[(1,4-dichlor-7-isochinolyl)karbonyl]-acyklopentylglycinu (170 mg, 0,40 mmol) a směs se zahřívá při teplotě 80 °C po dobu 4,5 h. Chladná směs se vnese do vody (25 ml) a extrahuje se EtOAc (3x20 ml). Kombinované organické extrakty se promyjí vodou, solankou, suší se (Na₂SO4) a odpaří

124 ·· ··»· • 0 000 se ve vakuu za zisku terc.butylesteru N-[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)karbonyl]-DL-a-cyklopentylglycinu (105 mg, 0,23 mmol) ve formě žlutého pevného materiálu.

Analytický vzorek se připraví následujícím způsobem: tento žlutý pevný materiál se extrahuje horkým i-Pr2O (3x20 ml) , horký roztok se přefiltruje a po ochlazení se získá titulní sloučenina ve formě světle žlutého pevného materiálu (40 mg), který se odfiltruje a suší ve vakuu.

t.t. 219-221 °C (za rozkladu).

hlíCDCls, 300 MHz) δ 1,4-1,8 (18H, m), 2,25-2,4 (ÍH, m), 4,7 (ÍH, dd), 6,2-6,9 (3H, br s), 6,95 (ÍH, d), 8,05 (ÍH, d), 8,1 (ÍH, s), 8,15 (ÍH, d), 9,15 (ÍH, s) ppm.

LRMS 446 (MH⁺) , 891 (M₂H⁺) .

Analýza: Zjištěno: C, 58,83; H, 6,39; N, 15,34. Vypočítáno pro C22H28ClN₅O₃«0,2 H₂0: C, 58,78; H, 6,37; N, 15,30.

Roztok terc.butylesteru N-[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)karbonyl]-DL-a-cyklopentylglycinu (65 mg, 0,15 mmol) v CF3CO2H (0,5 ml) se mísí při teplotě okolí po dobu 1 h Roztok se naředí PhMe, odpaří se ve vakuu a zbytek se krystalizuje se EtOAc. Tento pevný materiál se potom trituruji s Et2O za zisku N-[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)karbonyl]-DL-a-cyklopentylglycinu, trifluoracetatu (52 mg, 0,10 mmol) ve formě bílého prášku.

t.t. 235 °C (za rozkladu).

^XH(TFA-d, 400	MHz)	δ 1,4-1,	8 (6H,	m) ,	1,85-2,0	(2H,	m) , 2,4-
2,55 (ÍH, m),	4,8	(ÍH, d),	8,25	(ÍH,	d) , 8,35	(ÍH,	s), 8,45
(ÍH, d), 9,15	(ÍH,	s) ppm.
LRMS 390 (MH⁺)	, 779	(M₂H⁺) .

99 9999 99 • 9 99 9 999

9 9 9 9 9

999 9 999 9

9 9 9 9 9 9

9999 99 99 99 9

125

Analýza: Zjištěno: C, 47,34; H, 4,36; N, 13,60. Vypočítáno pro

Ci8H2oClN₅03»CF3C0₂H: C, 47,67; H, 4,20; N, 13,90.

•9 9999

Příklad 63:

(a) N-benzyl-N-[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)karbonyl) glycin,- hydrochlorid (b) N-benzyl-N-[{4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)karbonyl]glycin, hydrochlorid

NaH {16 mg, 80% disperze v minerálním oleji, 0,53 mmol) se přidá do roztoku guanidinhydrochloridu (82 mg, 0,86 mmol) v DME (4 ml) a směs se zahřívá při teplotě 60 °C po dobu 30 min. Přidá se roztok terč.butylesteru N-benzyl-N-[(1,4-dichlor-7-isochinolyl)karbonyl]glycinu (95 mg, 0,21 mmol) v DME (2 ml) a směs se zahřívá při teplotě 90 °C po dobu 4 h. Chladná směs se rozdělí mezi Et₂O a vodu a kombinované organické extrakty se suší a odpaří se ve vakuu. Zbytek se rozpustí v Et₂O a přidá se roztok HCI v Et₂O (1 M) za vzniku sraženiny N-benzyl-N-[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)karbonyl]glycinu, hydrochloridu. Odpařením etherální původní kapaliny se získá nezreagovaný terč.butylester N-benzyl-N-[(1,4-dichlor-7-isochinolyl)karbonyl]glycinu, který znovu reaguje s guanidinem (stejným způsobem) za zisku druhé vsádky. Celkový výtěžek: 70 mg, 0,15 mmol.

t.t. 130 °C (za rozkladu).

^XH (DMSO-d6, 400 MHz) 5:6 směs rotamerů, δ 1,2 (6/11 9H, s),

1,4 (5/11 9H, s), 4,0 (6/11 2H, s), 4,05 (5/11 2H, s), 4,5 (5/11 2H, s), 4,75 (6/11 2H, s), 7,2-7,5 (5H, m), 7,9-8,0 (IH, m) , 8,2-8,3 (IH, m), 8,35 (IH, s), 8, 75 (5/11 IH, s) , 8,85 • ·· ·· · · ♦ · • » · · • · · · · • · · · ······· ·· •t »···

126 ·· • · · • · · · • · · ·· ·· (6/11 IH, s) ppm.

LRMS 468 (MH⁺) , 934 (M₂H⁺) .

Analýza: Zjištěno: C, 56,98; H, 5,71; N, 13,01. Vypočítáno pro C24H26C1N₅03*HC1»0,5 Η₂Ο·0,2 i-Pr₂O: C, 56,70; H, 5,82; N, 13,12.

Roztok N-benzyl-N-[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)karbonyl]glycinu, hydrochloridu (50 mg, 0,10 mmol) v CF3CO2H (1 ml) se mísí při teplotě okolí po dobu 1 h. Roztok se naředí PhMe, odpaří se ve vakuu, a zbytek se trituruje s Et₂O za zisku bílého pevného materiálu (41 mg). Tento materiál se rozpustí v EtOAc a přidá se roztok HCI v Et₂O, čímž vznikne sraženina. Původní kapalina se dekantuje a pevný materiál se trituruje s MeCN za zisku N-benzyl-N-[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)karbonyl]glycinu, hydrochloridu (16 mg, 0,04 mmol) ve formě špinavě bílého prášku.

^xH(TFA-d, 400 MHz) 1:4 směs rotamerů, δ 4,2 (1/5 2H, s), 4,45 (4/5 2H, s), 4,7 (4/5 2H, s), 4,95 (1/5 2H, s), 7,2 (2H, d), 73-7,4 (3H, m) , 8,15 (1/5 IH, d), 82 (4/5 IH, d), 8,4 (IH, s), 8,45 (4/5 IH, d), 8,5 (1/5 IH, d), 8,7 (1/5 IH, s), 8,8 (4/5 IH, s) ppm.

LRMS 412 (MH⁺) , 823 (M2H⁺) , 845 (M2Na⁺) .

Analýza: Zjištěno: C, 52,55; H, 4,33; N, 15,10. Vypočítáno pro C₂oHi8ClN₅03*HCl*0,5 H₂O: C, 52,52; H, 4,41; N, 15,32.

Příklad 64:

(a) terc.butylester N-[ (4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)methyl]-N-methyl-DL-fenylglycinu (b) terc.butylester N-[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)methyl]-N-methyl-DL-fenylglycinu, dihydrochlorid (c) N-[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)methyl]-N-methyl-DL-fenylglycin, trifluoracetat

127 ·« ····

NaH (21 mg, 80% disperze v minerálním oleji, 0,7 mmol) se přidá k terc-BuOH (2,5 ml) a směs se zahřívá při teplotě 50 °C po dobu 15 min. Přidá se guanidinhydrochlorid (68 mg, 0,71 mmol) a směs se zahřívá při teplotě 50 °C po dobu dalších 15 min. Přidá se terč.butylester N-[(1,4-dichlor-7-isochinolyl)methyl]-N-methyl-DL-fenylglycinu (102 mg, 0,24 mmol) a směs se zahřívá při teplotě 95 °C po dobu 9,5 h. Chladná směs se odpaří se ve vakuu a zbytek se přečistí chromatografií na silikagelové koloně za použití hexanu-EtOAc (9:1) a potom CH₂Cl₂-MeOH-0,880 NH3 (90:10:1) jako eluens, za zisku terč.butylesteru N-[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)methyl]-N-methyl-DL-fenylglycinu (26 mg, 0,06 mmol) ve formě žluté klovatiny. Část tohoto materiálu se rozpustí v Et₂O, přidá se roztok HCI v Et₂O a vzniklá sraženina se trituruje s hexanem a potom s i-Pr₂O, za zisku příslušné dihydrochloridové soli.

¹H (CD3OD, 400 MHz) volná baze, δ 1,4 (9H, s) , 2,2 (3H, s), 3,7 (ÍH, d), 3,8 (ÍH, d), 4,2 (ÍH, s), 7,3-7,4 (3H, m) , 7,5 (2H, d) , 7,9 (ÍH, d), 8,05 (ÍH, d), 8,05 (ÍH, s), 8,35 (1H, s) ppm. LRMS 454 (MH⁺) .

Analýza: Zjištěno: C, 51,89; H, 6,01; N, 12,42. Vypočítáno pro C₂4H₂8C1N₅O₂*2HC1»1,5 H₂O: C, 52,04; H, 6,01; N, 12,64.

Roztok terč.butylesteru terč.butylesteru N-[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)methyl]-N-methyl-DL-fenylglycinu (20 mg, 0,44 mmol) v CH₂C1₂ (2 ml) se mísí s CF3CO₂H (2 ml) při teplotě okolí po dobu 4 h. Rozpouštědla se odpaří ve vakuu a zbytek se trituruje s Et₂O a potom s EtOAc za zisku N-[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)methyl]-N-methyl-DL« ·· ·* ··♦· ·· · · · · · • · · · · • · ♦ · · · • · · · · · ··· ···· ·· ··

128 ·«

9 9

99 9

-fenylglycmu, tnfluoracetatu (6,5 mg, 0,02 mmol) ve formě bílého pevného materiálu.

t.t. 180-182 °C.

^XH (TFA-d, 400 MHz) 3:5 směs rotamerů, δ 2,7 (5/8 3H, s), 3,05

(3/8	3H,	s), 3,95-4,05	(3/8	IH
4,95-	-5,1	(IH, m), 5,35	(5/8	IH
(5H,	m),	7,95 (3/8 IH,	d) , 8	,1
8,65	(2H,	m) ppm.
LRMS	400	(MH⁺) .

m), 4,55-4,7 (5/8 IH, m),
s) ,	5,45 (3/8 IH,	s) ,	7,4-	-7,7
(5/8	IH, d), 8,35	(IH,	s) ,	8,4

Analýza: Zjištěno: C, 50,1 0; H, pro C2oH2oClN₅02^eCF3C0₂H· H₂O: C, 4

4,27; N, 12,90. Vypočítáno ,87; H, 4,37; N, 13,22.

Příklad 65:

(a) terč.butylester N-benzyl-N-[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)methyl]glycinu (b) N-benzyl-N-[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)methyl]glycin, bistrifluoracetat

q a

NaH (48,6 mg, 80% disperze v minerálním oleji, 1,62 mmol) se přidá k t-BuOH (5 ml) a směs se zahřívá při teplotě 50 °C po dobu 15 min. Přidá se guanidinhydrochlorid (155 mg, 1,62 mmol) a směs se zahřívá při teplotě 50 °C po dobu dalších 120 min. Přidá se terč.butylester N-benzyl-N-[(1,4-dichlor-7-isochinolyl)methyl]glycinu (40 mg, 0,09 mmol) a směs se potom zahřívá při teplotě 95 °C po dobu 20 h. Chladná směs se odpaří ve vakuu a zbytek se přečistí chromatografií na silikagelové koloně za použití CH₂Cl₂-MeOH-0, 880 NH3 (95:5:0,5), po které následuje triturace s hexanem a krystalizace s i-Pr2O, za zisku φ» φ φφφ φ φ φ φ φ φφφφ φφφ φ <

φφ φ«

129 • ·· ·· φ · · • · · < φφφ φ φ φ φ·φ φφφφ φφ φφ φφφ* φ φ φ φ φ φφφ terč.butylesteru N-benzyl-N-[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)methyl]glycinu (5 mg, 0,01 mmol) ve formě bílého pevného materiálu.

IH (CD₃OD, 400 MHz) δ 1,45 (9H, s), 3,15 (2H, s), 3,8 (2H, s), 3,95 (2H,· s), 7,2-7,4 (5H, m) , 7,85-7,95 (IH, m) , 8,0-8,1 (2H, m), 8,5-8,55 (IH, m) ppm.

LRMS 454 (MH⁺), 907 (M₂H⁺) .

Analýza: Zjištěno: C, 62,57; H,6,13; N, 15,17. Vypočítáno pro C₂4H2₈ClN₅O2«0,4 H₂O: C, 62,51; H, 6,29; N, 15,19.

Roztok terč.butylesteru N-benzyl-N-[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)methyl]glycinu (16 mg, 0,04 mmol) v CF3CO2H (1 ml) se mísí při teplotě okolí po dobu 1,5 h. Roztok se naředí PhMe, odpaří se ve vakuu a zbytek se trituruje s Et₂O za zisku N-benzyl-N-[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)methyl]glycinu, bistrifluoracetatu (6 mg, 0,02 mmol) ve formě bílého pevného materiálu.

t.t. 199 °C dec.

^ΧΗ (TFA-d, 400 MHz) δ 4,2 (2H, s), 4,6 (IH, d) , 4,75 (IH, d), 4,85 (IH, d), 4,95 (IH, d), 7,37,5 (5H, m), 8,0 (IH, d), 8,3 (IH, s), 8,45 (IH, d), 8,55 (IH, s) ppm.

LRMS 398 (MH⁺) .

Analýza: Zjištěno: C, 44,50; H, 3,81; N, 10,80. Vypočítáno pro C2oH₂oClN502*2CF₃C02H*l,2 H₂0: C, 44,52; H, 3,80; N, 10,82.

Příklad 66:

(a) terč.butylester Na-[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)sulfonyl]-Νε-terc.butyloxykarbonyl-l-lysinu

130 (b) Να-[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)sulfonyl]-1-lysin, dihydrochlorid

NaH (44 mg, 80% disperze v minerálním oleji, 1,47 mmol) se najednou přidá do roztoku guanidinhydrochloridu (224 mg, 2,35 mmol) v DMSO (5 ml) a směs se mísí při teplotě okolí vzniku roztoku. Přidá se terc.butylester Na-[(1,4-dichlor-7-isochinolyl)sulfonyl]-Νε-terc.butyloxykarbonyl-l-lysinu (330 mg, 0,59 mmol) a roztok se mísí při teplotě 100 °C po dobu 6 h. Po ochlazení se reakce utlumí vodou (30 ml), reakční směs se extrahuje EtOAc (3 x 20 ml) a kombinované organické extrakty se promyjí vodou a solankou. Organický roztok se odpaří ve vakuu a zbytek se přečistí chromatografií na silikagelové koloně za použití CH2CÍ2-MeOH-0,880 NH3 (90:10:1) jako eluens za zisku Na-[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)sulfonyl] -Νε-terc-butyloxykarbonyl-l-lysinu, terč.butylesteru (152 mg, 0,26 mmol). Analytický vzorek se získá krystalizací z i-Pr2O.

^XH (CDCI3, 300 MHz) δ 1,15 (9H, s), 1,3-1,5 (13H, m), 1,5-1,8 (2H, m), 3,0-3,1 (2H, m) , 3,8-3,9 (IH, m) , 4,5-4,6 (IH, m), 5,2-5,4 (IH, m), 6,25-6,6 (3H, m) , 8,0 (IH, d) , 8,05 (IH, d) . 8,1 (IH, s), 9,1 (IH, s) ppm.

LRMS 585 (MH⁺) .

Analýza: Zjištěno: C, 51,02; H, 6,32; N, 14,12. Vypočítáno pro C25H37CIN6O6S: C, 51,32; H, 6,37; N, 14,36.

terc.butylester Na-[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)sulfonyl]-Νε-terc.butyloxykarbonyl-l-lysinu (119 mg, 0,20 mmol)

131 se rozpustí v EtOAc (10 ml) a nasytí se plynným HCI. Po 20 minutách se vzniklá bílá sraženina odfiltruje a rekrystalizuje se z EtOH za zisku Na-[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)sulfonyl]-1-lysinu (13 mg, 0,03 mmol).

^XH (DMSO-de + CF3CO2D, 300 MHz) δ 1,1-1,7 (6H, m) , 2,65-2,75 (2H, m), 3,75-3,80 (IH, m), 8,25 (IH, d) , 8,35 (IH, d), 8,2S (IH, s), 8,9 (IH, s) ppm.

LRMS 42 9 (MH⁺) .

Analýza: Zjištěno: C, 37,00; H, 4,93; N, 15,72. Vypočítáno pro Ci6H2iClN₆O4S*2HCl*H₂O*0,15 EtOH: C, 37,15; H, 4,95; N, 15,97.

Příklad 67:

Na-[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)sulfonyl]-D-lysin, dihydrochlorid

NH, NH,

NaH (33 mg, 80% disperze v minerálním oleji, 1,1 mmol) se přidá do míšeného roztoku guanidinhydrochloridu (170 mg, 1,78 mmol) v DMSO (3 ml) při teplotě 50°C. Po 30 min. se přidá terč.butylester Na-[(1,4-dichlor-7-isochinolyl}sulfonyl]-Νε-terc-butyloxykarbonyl-D-lysinu (250 mg, 0,44 mmol) a roztok se mísí při teplotě 90°C po dobu 8 h. Chladná směs se vnese do vody a sraženina se extrahuje do Et2O (4 x 15 ml}. Kombinované organické extrakty se promyjí solankou, suší se (Na2SO4] a zpracují se IN etherální HCI. Roztok se zahustí ve vakuu a zbytek se trituruje s Et2O a potom EtOAc-EtOH za zisku Na-[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl}sulfonyl]-D-lysinu,

132 dihydrochloridu (90 mg, 0,18 mmol).

^XH (DMSO-ds, 400 MHz) δ 1,2-1,4 (2H, m) , 1,4-1, 7 (4H, m) , 2, β2,75 (2H, m), 3,9-4,0 (1H, m) , 7,75-7,85 (3H, br 5), 8,3 (1H, d), 8,35 (1H, d), 8,4 (1H, d), 8,4 (1H, s), 8,2-9,0 (3H, br m) , 9,1. (1H, s) ppm.

LRMS 429 (MH⁺) .

Analýza: Zjištěno: C, 36,15; H, 5,10; N, 15,06. Vypočítáno pro

CisH2iClN6O₄S*2 HC1»2 H₂O· 0,13 EtOAc: C, 36,18; H, 5,16; N, 15,25.

Příklad 68:

(a) terc.butylester N-[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)sulfonyl]-l-glutaminu (b) N [(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)sulfonyl]-1-glutamin, trifluoracetat

NaH (25 mg, 80% disperze v minerálním oleji, 0,83 mmol) se přidá do roztoku guanidinhydrochloridu (128 mg, 1,34 mmol) v DMSO (2 ml) a směs se mísí při teplotě 50°C po dobu 1 h. Přidá se terc.butylester N-[(1,4-dichlor-7-isochinolyl)sulfonyl]-1-glutaminu (150 mg, 0,32 mmol) a vzniklý roztok se mísí při teplotě 100 °C po dobu 6 h, nechá se vychladnout a vnese se do vody. Vodná směs se extrahuje EtOAc (3 x 30 ml) a zahustí se ve vakuu. Zbytek se přečistí chromatografií na silikagelové koloně za použití CH2Cl2-MeOH-0,880 NH3 (90:10:1) jako eluens, za zisku terč.butylesteru N-[(4-chlor-l-guanidin-7isochinolyl)-sulfonyl]-l-glutaminu (30 mg, 0,06 mmol) ve formě šamoově zbarveného prášku.

133 ·· · · ·· · · · ·· • φ φ < ♦ · · · • φφφφ ···· · φ φ · · · · · · φ φφφ φφφφ φφ φφ ·· φφφ

IH (DMSO-de, 300 MHz) δ 1,0-1,2 (9Η, s) , 1,6-1, 75 (IH, m) , 1,75-1,9(1Η, m) , 2,05-2,15 (2Η, m) , 3,26-3,8 (IH, m), 6,656,75 (IH, br s) , 7,0-7,45 (5Η, br m), 7,95-8,1 (3Η, m), 8,35 (IH, d), 9,0 (IH, s) ppm.

LRMS 485 (MH⁺) .

terč.butylester N-[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)sulfonyl]-1-glutaminu (15 mg, 0,03 mmol) se rozpustí v kyselině trifluoroctové (1 ml) a vzniklý roztok se mísí při teplotě okolí po dobu 1 h, naředí se toluenem a zahustí se. Triturací s Et2O se získá prášek, do kterého se přidá MeOH a suspenze se přefiltruje. Filtrát se zahustí a potom se trituruje s EtOAc za zisku N-[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)sulfonyl]-1-glutaminu, trifluoracetatu (9 mg,

0,02 mmol).

^XH (DMSO-de + TFA-d, 300 MHz) δ 1,6-1,75 (IH, m) , 1,8-2,0 (IH, m) , 2,0-2,15 (2H, m) , 3,8-3,9 (IH, m), 8,3 (IH, d), 8,35 (IH, d) , 8,4 (IH, s), 8,8 (IH, s) ppm.

LRMS 429 (MH⁺) .

Příklad 69:

(2R)-1-({4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl}sulfonyl)-2-pyrrolidinkarboxamid

Oxalylchlorid (136 μΐ, 1,56 mmol) se přidá do roztoku N—[(4 -chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)sulfonyl]-D-prolinu (339 mg, 0,78 mmol) v CH2CI2 (30 ml), potom se přidá DMF (100 μΐ) a reakcí směs se mísí při teplotě okolí po dobu 10 min. Směs se odpaří ve vakuu a azeotropuje se s toluenemm, za zisku špinavě • · ··· · • · · « ·· · ···· • » · · · ··· • ···· ···· ·

1^4 ·· ······· ······· 9 9 9 9 9 9 99 9 bílého pevného materiálu. Tento materiál se suspenduje v CH2CI2 (15 ml), přidá se 0,880 NH3 (760 μΐ, 7,8 mmol) a reakční směs se mísí při teplotě okolí pp dobu 18 h. Směs se rozdělí mezi CH2CI2 a vodu a vrstvy se separují. Vodná fáze se extrahuje CH2CI2, kombinované organické roztoky se suší (MgSCH) a odpaří se ve vakuu. Surový materiál se přečistí chromatografií na silikagelové koloně za použití gradientově eluce CH2Cl2-MeOH0,880 NH3 (100:0:0 až 95:5:0,1) za zisku (2R)-1-({4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl}sulfonyl)-2-pyrrolidinkarboxamidu (102 mg, 0,26 mmol) ve formě světle žlutého pevného materiálu. ¹H(d₄-MeOH, 400 MHz) δ 1,5-1,6 (IH, m) , 1,7-2,0 (3H, m), 3,33,4 (IH, m), 3,55-3,65 (IH, m), 4,1-4,2, (IH, m) , 8,1-8,2 (3H, m) , 9,15 (IH, s) ppm.

LRMS 397 (MH⁺, 419 (MNa)⁺.

Analýza: Zjištěno: C, 44,05; H, 4,42; N, 20,14. Vypočítáno pro C15H17CIN6O3S + 0,15 CH2CI2: C, 44,43; H, 4,26; N, 20,52.

Příklad 70:

(2R)-1-({4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl}sulfonyl)-N-(2-hydroxyethyl)-2-pyrrolidinkarboxamid

Oxalylchlorid (40 μΐ, 0,46 mmol) se přidá do roztoku N-[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)sulfonyl]-D-prolinu (100 mg, 0,23 mmol) v CH2CI2 (10 ml), potom se přidá DMF (1 kapka) a reakční směs se mísí při teplotě okolí po dobu 30 min. Směs se odpaří ve vakuu a azeotropuje se s toluenem. Zbytek se rozpustí v CH2CI2 (5 ml) a přidá se do roztoku ethanolaminu (17 μΐ, 0,28 mmol) v CH2CI2 (5 ml), reakční směs se mísí při teplotě okolí po dobu 2 hodin a potom se zahustí ve vakuu.

·· ·

135

Surový materiál se přečistí chromatografií na silikagelové koloně za použití gradientově eluce CH2Cl₂-MeOH-0,880 NH3 (95:5:0,5 až 90:10:1) za zisku (2R)-1-({4-chlor-l-guanidin-7isochinolyl}sulfonyl)-N-2-hydroxyethyl)-2-pyrrolidinkarboxamidu (65 mg, 0,147 mmol) ve formě žluté pěny. , ^XH (DMSO-de, 300 MHz) δ 1,45-1,8 (4H, m), 3,15 (3H, m), 3,35-

3,55	(3H, m),	4,1 (IH,	m) , 4,	65 (IH, m), 7,9 (IH, m), 8,0 (IH,
d), 8	,15 (2H,	m), 9,1	(IH, s)	ppm.
LRMS	441, 443	(MH⁺)

Analýza: Zjištěno: C. 43,96; H, 4,89; H, 17,47. Vypočítáno pro Ci₇H2iClN₆O4S*0,4 CH2CI2: C, 44,01; H, 4,63; N, 17,70%.

Příklad 71:

(a) terc.butyl (2R)-1-({4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl}sulfonyl)-2-piperidinkarboxylat (b) Hydrochlorid kyseliny (2R)-1-({4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl}sulfonyl)-2-piperidinkarboxylové

Guanidinhydrochlorid (128 mg, 1,34 mmol) se přidá do roztoku NaH (32 mg, 80% disperze v minerálním oleji, 1,07 mmol) v DME (5 ml) a směs se mísí při teplotě 60 °C po dobu 30 min. Přidá se terc.butyl (2R)-1-[(1,4-dichlor-7-isochinolyl)sulfonyl]-2-piperidinkarboxylat (150 mg, 0,34 mmol) a reakční směs se zahřívá při teplotě zpětného toku po dobu 7 h a potom se mísí po dobu dalších 18 h při teplotě okolí. Směs se naředí EtOAc, promyje se vodou, solankou, suší se (MgSO4) a odpaří se ve vakuu. Zbytek se formě žluté klovatiny se přečistí

136 chromatografií na silikagelové koloně za použití CH2Cl₂-MeOH0,880 NH3 (97:3:0,3) jako eluens za zisku terc.butyl (2R)-1({4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl}sulfonyl) -2

-piperidinkarboxylatu ve formě žlutého pevného materiálu (126 mg, 0,27 mmol). t.t. 157-158°C ¹H(CDCl3, 400 MHz) δ 1,3 (9H, s) , 1,4 (IH, m) , 1,6-1,8 (4H, m) , 2,15 (IH, m), 3,3 (1, m) , 3,85 (IH, m), 4,75 (IH, m), 8,0 (IH, d), 8,1 (IH, d), 8,15 (IH, s) , 9,2 (IH, s) ppm.

LRMS 4 68 (MH⁺)

Analýza: Zjištěno: C, 51,23; H, 5,68; N, 14,51. Vypočítáno pro C20H26CIN5O4S: C, 51,33; H, 5,60; N, 14,97%.

Roztok terc.butyl (2R)-1-({4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl}-sulfonyl)-2-piperidinkarboxylatu (50 mg, 0,107 mmol) v EtOAc nasyceném HCI (10 ml) se mísí při teplotě okolí po dobu 2 h. Roztok se zahustí ve vakuu a azeotropuje se několikrát s CH2CI2, za zisku hydrochloridu kyseliny (2R)-1- ({4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl}sulfonyl)-2-piperidinkarboxylové (37 mg, 0,083 mmol) ve formě bílého pevného materiálu, t.t. dec > 220°C ^XH (CD3OD, 400 MHz) δ 135 (IH, m), 1,5 (IH, m), 1,65-1,8 (3H, m) , 2,2 (IH, m), 3,2-3,3 (2H, m), 3,95 (IH, m), 8,3 (IH, d), 8,45 (2H, m) , 8,9 (IH, 5) ppm.

LRMS 412, 414 (MH⁺)

Příklad 72:

(a) Methyl 4-[({4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl}sulfonyl)amino]-1-methyl-4-piperidinkarboxylat (b) Hydrochlorid kyseliny 4-[({4-chlor-l-guanidin-7137

-isochinolyl}sulfonyl)amino]-l-methyl-4-piperidinkarboxylové

9 9 • · 9 · 9 9

Guanidinhydrochlorid (270 mg, 2,83 mmol) se přidá do roztoku NaH (65 mg, 80% disperze v minerálním oleji, 2,16 mmol) v DMSO (6 ml) a roztok se mísí při teplotě 60°C po dobu 30 min. Přidá se methyl-4-{[(1,4-dichlor-7-isochinolyl)sulfonyl]amino}-l-methyl-4-piperidinkarboxylat (300 mg, 0,7 mmol) a reakční směs se mísí při teplotě 80°C po dobu 5 h. Přidá se další NaH (30 mg, 1 mmol) a guanidinhydrochlorid (135 mg, 1,4 mmol) v DMSO (1 ml) a reakční směs se zahřívá po dobu dalších 2,5 hod. Chladná směs se vnese do vody a extrahuje se EtOAc. Kombinované organické extrakty se promyjí solankou, suší se (Na₂SO4) a odpaří se ve vakuu. Zbytek ve formě žlutého pevného materiálu se přečistí chromatografií na silikagelové koloně za použití gradientově eluce CH₂Cl2-MeOH-0,880 NH₃(95:5:0,5 až 90:10:1) za zisku methyl-4-[({4-chlor-l-guanidin7-isochinolyl}sulfonyl)-amino]-l-methyl-4-piperidinkarboxylatu (232 mg, 0,51 mmol).

t.t. dec>205°C ¹H(CD₃OD, 400 MHz) δ 2,05 (4H, m) , 2,15 (3H, s) , 2,25 (2H, m) ,

2,4 (2H, m) , 3,4 (3H, s), 8,05-8,15 (3H, m), 9,1 (1H, s) ppm. LRMS 4 55 (MH⁺)

Analýza: Zjištěno: C, 47,17; H, 5,02; N, 17,96. Vypočítáno pro Ci8H₂₃ClN₆O4S»0,25 H₂O: C, 47,06; H, 5,16; N, 18,29%.

Roztok methyl-4-[({4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl}sulfonyl) amino]-l-methyl-4-piperidinkarboxylatu (100 mg, 0,22 • 99 ·· 9999 99 • 9 9 9 9 9 9 9 9 ·

138

9999 9 · 9 9 9 • · 9 9 9 9 99 9

999 9999 99 99 99 999 mmol) ve vodném NaOH (2 ml, 2M, 4mmol) a MeOH (5 ml) se mísí při 60°C po dobu 42 h. Chladný roztok se neutralizuje za použití 2M HCI a směs se zahušťuje ve vakuu do vzniku sraženiny. Pevný materiál se odfiltruje, suší se a rozpustí se v koncentrované HCI a roztok se odpaří se ve vakuu. Výsledný materiál se trituruje s Et₂O, potom s i-PrOH a suší se ve vakuu, za zisku 4hydrochloridu kyseliny -[({4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl}sulfonyl)amino]-l-methyl-4piperidinkarboxylové (18 mg, 0,035 mmol).

^(DMSO-de, 400 MHz) δ 2,1 (2H, m) , 2,3 (2H, m) , 2,7 (3H, s) , 2,8-3,0 (2H, m), 3,3 (2H, m), 8,25-8,75 (7H, m), 9,1 (ÍH, s) ppm.

LRMS 4 41 (MH⁺)

Příklad 73:

(a) terc.butyl N-[(l-guanidin-7-isochinolyl)sulfonyl]-D-prolinkarboxylat (b) N-[(l-guanidin-7-isochinolyl)sulfonyl]-D-prolin, hydrochlorid __

Směs terc.butyl N-[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)— sulfonyl]-D-prolinkarboxylatu (200 mg, 0,44 mmol) a 5% palladia na uhlíku (150 mg) v EtOH (30 ml) se hydrogenuje při 50 psi a 50°C po dobu 24 h. Chladná směs se přefiltruje přes Arbocel^r a filtrační vrstva se důkladně promyje EtOH. Kombinované filtráty se zahustí ve vakuu a zbytek se přečistí chromatografií na silikagelové koloně za použití gradientově eluce CH₂Cl₂-MeOH-0,880 NH) (97:3:0,3 až 95:5:0,5) za zisku • φφ φ» ···· φφ φ φφφφ φ φ · φ φ · φ

139 • · · · ΦΦΦ· φ φ φφφφ φφφ φφφ φφ φφ ·· ··· terč.butyl Ν-[(l-guanidin-7-isochinolyl)sulfonyl]-Dprolinkarboxylatu (143 mg, 0,34 mmol) ve formě špinavě bílého pevného materiálu.

^XH (CDCls, 400 MHz) δ 1,45 (9H, s), 1,75 (IH, m), 1,95 (3H, m) ,

3,4 (IH, m), 3,55 (IH, m) , 4,3 (IH, m) , 7,1 (IH, d) , 7,75 (IH, d), 8,0 (IH, d), 8,15 (IH, d), 9,25(1H, s)ppm.

LRMS 420 (MH⁺) .

Roztok terč.butyl N-[(l-guanidin-7-isochinolyl)sulfonyl] -D -prolinkarboxylatu (130 mg, 0,31 mmol) v EtOAc nasyceném HCI (7 ml) se mísí při teplotě okolí po dobu 1 h. Reakční směs se odpaří se ve vakuu a azeotropuje se s CH2CI2, za zisku N—[(l— -guanidin-7-isochinolyl)sulfonyl]-D-prolinu, hydrochloridů (118 mg, 0,295 mmol) ve formě bílého pevného materiálu, t.t. za rozkladu >250°C ¹H(DMSO-d₆, 400 MHz) δ 1,6 (IH, m) , 1,75-1,95 (3H, m) , 3,2 (IH m) , 3,4 (IH, m), 4,4 (IH, m) , 7,7 (IH, m), 8,2 (2H, m), 8,3 (IH, m), 9,05 (IH, s) ppm.

LRMS 364 (MH⁺) .

Příklad 74:

1-[({4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl}sulfonyl)amino]-N-methyl -N-[2(methylamino)ethyl)cyklopentankarboxamid, hydrochlorid

Cl

Cl NH

DMF (5 kapek) se přidá do suspenze hydrochloridů kyseliny l-{[(l-guanidin-4-chlor-7-isochinolyl)sulfonyl)amino}• 9

9 ·· 9999

140

9999 ·

-cyklopentankarboxylové (1,1 g, 2,4 6 mmol) v CH2CI2 (100 ml), potom se přidá oxalylchlorid (319 μΐ, 3,68 mmol), a reakční směs se mísí při teplotě okolí po dobu 45 min. Přidá se další oxalylchlorid (106 μΐ, 1,23 mmol) a míšení pokračuje po dobu dalších 30 min. Směs se odpaří ve vakuu, trituruje se s CH2CI2 a zbytek se rozpustí v v CH2CI2 (100 ml) . Tento roztok chloridu kyseliny (10 ml) se přidá do roztoku N,N'-dimethylethylenediaminu (500 μΐ, 4,7 mmol) v CH2CI2 (20 ml) a vzniklý roztok se mísí při teplotě okolí po dobu 1 h. Po odpaření do sucha se zbytek rozdělí mezi vodu a CH2CI2, vodná vrstva se separuje a extrahuje se EtOAc. Kombinované organické extrakty se suší (Na₂SO4) , odpaří se na klovatinu a přečistí se chromatografií na silikagelové koloně eluované CH₂Cl₂-MeOH0,880 NH3 (90:10:1), za zisku oleje. Tento olej se rozpustí v EtOAc, zpracuje se etherální HCI (IN) a bílá sraženina se odfiltruje a trituruje se s Et₂O, i-Pr₂O, a EtOH, za zisku titulní sloučeniny (28 mg, 0,058 mmol).

t.t. 206°C (pěny).

^ΧΗ (DMSO-ďe, 400 Mhz) δ 1,35 (4H, m) , 1,7 (2H, m) , 2,0 (2H, m) , 2,6 (3H, s), 3,05 (2H, m), 3,2 (3H, s), 3,4 (2H, m), 3,5 (2H, m), 8,35 (ÍH, d) , 8,4 (ÍH, d) , 8,45 (ÍH, s) , 8,6-8,8 (4H, m) , 9,2 (ÍH, s) ppm.

LRMS 482, 484 (MH⁺) .

Příklad 75:

1-[ ({4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl}sulfonyl)amino}-N-(2-hydroxyethyl)-N-methylcyklopentankarboxamid, hydrochlorid

Cl

OH

141

Suspenze l-{[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)sulfonyl]amino}cyklopentankarbonylchloridu (110 mg, 0,245 mmol) v CH2CI2 (10 ml) (připravená podle příkladu 76) se přidá během minuty do roztoku N-methylethanolaminu (500 μΐ, 6,25 mmol) v CH2CI2 (10 ml) a vzniklý žlutý roztok se mísí při teplotě okolí po dobu 72 h. Reakční směs odpaří se ve vakuu a zbytek se přečistí chromatografií na silikagelové koloně za použití CH2Cl2-MeOH-0,880 NH3 (90:10:1) jako eluens za zisku čiré klovatiny. Tento materiál se rozpustí v EtOAc, přidá se etherální HCI (IN), směs se odpaří ve vakuu a trituruje se s EtOAc. Vzniklý pevný materiá se odfiltruje a suší se ve vakuu při 50°C za zisku 1-[({4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl}sufonyl)amino]-N-(2-hydroxyethyl)-N-methylcyklopentankarboxamidu, hydrochloridu.

^XH (DMSO-de, 400MHz) δ 1,4 (4H, m) , 1,8 (2H, m) , 2,0 (2H, m) ,

2,6	(IH,	m) ,	3,05-	3,2	(4H,	m), 3,35-3,6	(4H,	m),	8,3	(IH,	d) ,
8,4	(IH,	d) ,	8,45	(IH,	s) ,	8,55 (4H, m),	9,0	(IH,	s)	, 11,	,0
(IH,	s) ,	ppm.
LRMS	468	,471	(MH⁺)

Analýza: Zjištěno: C, 41,87; H, 5,55; N, 15,40. Vypočítáno pro Ci9H25ClN₆O₄S*HCl*2H2O: C, 42,15; H, 5,58; N, 15,52%.

Příklad 76:

1-[({4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl}sulfony)amino]-N-(2-methoxyethyl}cyklopentankarboxamid, hydrochlorid

1-[({4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl}sulfony}amino]-N-(24 4 4 · · 4 4 4 4 ·· • ••4 44 4 4 4 4

4 4 4 4 4 4

142

4 4 4 4 444

444 4444 44 44 44 C44

-methoxyethyl)cyklopentankarboxamid se připraví z 2-methoxyethylaminu a 1-{[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)sulfonyl]amino]cyklopentankarbonylchloridu, postupem podle příkladu 76. Tento materiál se zpracuje etherální HCI (IN) a směs se odpaří ve vakuu. Pevný zbytek se rozpustí v EtOH a přidá se voda (1 kapka). Rpztok se zahušťuje ve vakuu do vzniku sraženiny. Získaný pevný materiál se odfiltruje, promyje se Et2O a suší se ve vakuu při 50°C, za zisku l—[({4— -chlor-l-guanidin-7-isochinolyl}sulfonyl)amino] -N-(2 -methoxyethyl)-cyklopentankarboxamidu, hydrochloridu (35 mg, 28%) .

^(DMSO-de, 300 MHz) δ 1,3-1,5 (4H, m) , 1,9 (4H, m) , 2,95 (2H, m) , 3,2 (5H, m), 7,55 (IH, t), 8,2 (IH, s), 8,35 (2H, m), 8,45 (IH, s), 8,6 (4H, m), 9,1 (IH, s) ppm.

LRMS 469, 471 (MH⁺) .

Analýza: Zjištěno: C, 43,33; H, 5,38; N, 15,82. Vypočítáno pro Ci9H₂₅ClN6O₄S*HCl«l,2 H₂O: C, 43,30; H, 5,43; N, 15,95%.

Příklad 77:

(a) N-(2-terc.butylaminoethylkarbamat}-l-[({4-chlor-lguanidin--7-isochinolyl}sulfonyl)amino]cyklopentankarboxamid (b) N-(2-aminoethyl)-1-[({4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl}-

sulfonyl]amino}cyklopentankarbonylchloridu (220 mg, 0,49 mmol) se přidá do roztoku terc-butoxy 2-aminoethylkarbamatu (250 mg,

143

1,56 mmol) v CH2CI2 (10 ml) a reakční směs se mísí při teplotě okolí po dobu 18 h. Směs se odpaří ve vakuu a zbytek se přečistí chromatografií na silikagelové koloně za použití CH2CÍ2-MeOH-0,880 NH3 (90: 1 0: 1) jako eluens, za zisku žlutého oleje. Tento materiál se krystalizuje z MeOH-i-Pr2O za zisku N-(2-terc.butylaminoethylkarbamat)-1-[({4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl}sulfonyl)amino]cyklopentankarboxamidu (27 mg, 0,05 mmol) ve formě světle žlutého pevného materiálu.

^(CDCls, 300 MHz) δ 1,3 (11 H,m) , 1,4 (2H, m) , 1,8 (2H, m) ,

1,9 (2H, m) , 2,45 (2H, m) , 3,05 (4H, m) , 5,65 (ÍH, m) , 6,8 (4H, m), 7,1 (ÍH, m) , 7,2 (ÍH, m), 7,9 (3H, m), 9,1 (ÍH, s) ppm.

LRMS 57 6 (MNa⁺) .

Roztok N-(2-terc.butylaminoethylkarbamat)-1-[({4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl}sulfonyl)amino]cyklopentankarboxamidu (20 mg, 0,036 mmol) v etherální HCI (1 ml,'IN) se mísí při teplotě okolí po dobu 2 h. Reakční směs se naředí MeOH, zahustí se ve vakuu a zbytek se trituruje s Et2O, potom s iPr2O a suší se, za zisku N-(2-aminoethyl)-1-[({4-chlor-lguanidin-7-isochinolyl}sulfonyl)amino]cyklopentankarboxamidu, dihydrochloridu (16 mg, 0,30 mmol) ve formě špinavě bílého prášku.

^XH (DMSO-	•d₆, 400 MHz)	δ 1,6 (4H, m)	, 1,85	(2H, m) , 1,9	(2H, m),
2,8 (2H,	m), 3,2 (2H,	m), 5,4 (ÍH,	br s)	, 7,9 (2H, br	s), 8,05
(ÍH, m),	8,2 (ÍH, s),	8,4 (ÍH, m),	8,45	(ÍH, s), 8,55-	-8, 75
(4H, m),	9,25 (ÍH, s)	ppm.
LRMS 454	(MH⁺) .

Příklad 78:

4-chlor-l-guanidin-N-[1-(morfolinokarbonyl)cyklopentyl]-7 -isochinolinsulfonamid, hydrochlorid

144

Titulní sloučenina se připraví z 1-{[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)sulfonyl]amino}cyklopentankarbonylchloridu a morfolinu, způsobem popsaným v příkladu 74.

¹H(DMSO-d₆, 300 MHz) δ 1,35 (4H, m) , 1,7 (2H, m) , 2,0 (2H, m) , 3,4-3,65 (8H, m) , 8-35-8,65 (8H, m), 8,95 (1H, s) ppm.

LRMS 480, 482 (MH⁺) .

Příklad 79:

4-chlor-l-guanidin-N-{1-[(4-methylpiperazin)karbonyl]cyklopentyl}-7-isochinolinsulfonamid, dihydrochlorid

-aminocyklopentyl)(4-methyl-l-piperazinyl)methanonu, dihydrochloridu (567 mg, 2,0 mmol) a 1,4-dichlor-7-isochinolinsulfonylchloridu (592 mg, 2,0 mmol) v CH2CI2 (25 ml) a reakční směs se mísí při teplotě okolí po dobu 18 h.

Směs se zahustí ve vakuu a zbytek se rozdělí mezi EtOAc a vodu a vrstvy se separují. Organická fáze se promyje vodou, extrahuje se HCI (2N) a tyto kombinované acidické extrakty se promyjí se EtOAc a znovu se alkalizují Na2CO3. Tento vodný roztok se extrahuje EtOAc, kombinované organické extrakty se promyjí solankou, suší se (Na2SO<j) a odpaří se ve vakuu za zisku pěny. Tento materiál se krystalizuje z CH2Cl2-i-Pr2O za • ·· ······ ·« · • · · · ·· · · · · · • · · · · · · · • · ···· ·«· ······· ti · · · * ···

145 zisku 1,4-dichlor-N-{1-[(4methyl-l-piperazinyl)karbonyl]cyklopentyl}-7-isochinolinsulfonamidu (1 53 mg, 0,33 mmol) ve formě pevného materiálu.

hUCDCls, 300 MHz) δ 1.5-1.75 (6H, m) , 2,2S-2,45 (9H, m) , 3,6 (4H, m), 5,1 (IH, s), 8,25 (IH, d) , 8,35 (IH, d), 8,5 (IH, s),

8,9 (IH, ' s) ppm.

Analýza: Zjištěno: C, 49,12; H, 5,02; N, 1,06. Vypočítáno pro C2oH₂4Cl2N40₃S»0,3 CH2CI2: C, 49,07; H, 4,99; N, 11,28%.

NaH (22 mg, 80% disperze v minerálním oleji, 0, 73 mmol) se přidá do roztoku guanidinhydrochloridu (142 mg, 1,49 mmol) v DMSO (2 ml) a roztok se mísí při 50°C po dobu 30 min. Přidá se 1,4-dichlor-N-{1-[(4-methyl-l-piperazinyl)karbonyl]cyklopentyl}-7-isochinolinsulfonamid (140 mg, 0,28 mmol) a reakční směs se mísí při 90°C po dobu 5 h. Chladná reakční směs se vnese do vody, extrahuje se EtOAc, a kombuinované extrakty se promyjí solankou, suší se (Na₂SO4) a odpaří se ve vakuu. Zbytek ve formě žluté pěny se rozpustí v i-PrOH, přidá se etherální HCI (IN), roztok se odpaří ve vakuu a produkt reakce se suspenduje v ethanolu. Tato směs se přefiltruje, filtrát se ochledí v ledové lázni a vzniklý pevný materiál se odfiltruje, promyje se EtOH a suší se, za zisku 4-chlor-l-guanidin-N-{1-[(4-methyl-l-piperazinyl)karbonyl]cyklopentyl}— 7-isochinolinsulfonamidu, dihydrochloridu (68 mg, 0,12 mmol).

^(DMSO-de, 300 MHz) δ 135 (4H, m) , 1,7 (2H, m) , 2,0 (2H, m) ,

2,75	(3H, s), 3,0 (2H, m), 3,25-3,45 (4H, m),	4,4	(2H, m) , 8,3
(IH,	d), 8,4	(IH, d), 8,45 (IH, s), 8,6 (4H,	m) ,	8,7 (IH, s),
9,1	(IH, s),	11,15 (2H, br s) ppm.
LRMS	494, 496	(MH⁺) .

Example 80:

(a) Ethylester N-[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)146 • ·· ·· · · · · ·· · · 9 9 9

9 9 9 9

9 9 9 9 9

9999999 99 9 9 sulphonyl]-N-(methyl)cykloleucinu (b) N-[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)sulphonyl]-N-(methyl)cykloleucin, hydrochlorid

NaH (31 mg, 80% disperze v minerálním oleji, 1,04 mmol) se přidá do roztoku guanidinhydrochloridu (164 mg, 1,67 mmol) v DMSO (4 ml) a roztok se zahřívá při 50°C po dobu 1 h. Přidá se ethylester N-[(1,4-dichlor-7-isochinolyl)sulfonyl]-N-(methyl)cykloleucinu (180 mg, 0,42 mmol) v DMSO (2 ml) a reakční směs se zahřívá při 80°C po dobu 3 h. Chladná reakční směs se vnese do vody a extrahuje se EtOAc. Kombinované organické extrakty se promyjí solankou, suší se (MgSO4) a odpaří se ve vakuu. Zbytek ve formě žlutého oleje se přečistí chromatografií na silikagelové koloně za použití CH2Cl2-MeOH0,088 NH3 (90:10:1) jako eluens, a krystalizuje se z EtOAc za zisku ethylesteru N-[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)sulfonyl]-N-(methyl)cykloleucinu (105 mg, 0,23 mmol) ve formě žlutého pevného materiálu.

t.t. 186-188°C ^XH (DMSO-de, 400 MHz) δ 1,1 (3H, t), 1,55 (4H, m), 2,0 (2H, m) , 2,2 (2H, m), 2,95 (3H, s), 4,0 (2H, q), 7,2-7,4 (4H, br s), 8,05 (2H, m), 8,15 (IH, s), 9,1 (IH, s) ppm.

LRMS 454, 456 (MH⁺)

Analýza: Zjištěno: C, 50,04; H, 5,38; N, 15,31. Vypočítáno pro Ci9H24ClN₅O₄S*0,2 H₂0: C, 49,88; H, 5,38; N, 15,31%.

Roztok N-[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)sulfonyl]-N-(methyl)cykloleucinu, ethylesteru (80 mg, 0,176 mmol) v NaOH • · » ·

147 (1 ml, 2N) a MeOH (10 ml) se mísí při 70°C po dobu 18 h. Chladná směs se neutralizuje HCI (2N) a MeOH se odstraní ve vakuu. Vzniklá sraženina se odfiltruje, promyje se vodou a znovu se rozpustí v koncentrované HCI. Tento roztok se odpaří ve vakuu, azeotropuje se s toluenem, zbytek se rozpustí v EtOH a přefiltruje se. Filtrát se odpaří se ve vakuu a získaný pevný materiál se rekrystalizuje z i-PrOH, za zisku N-[(4chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)sulfonyl]-N-(methyl)cykloleucinu, hydrochloridu (18 mg, 0,039 mmol) ve formě žlutého pevného materiálu.

t.t. 225°C (dec.).

^XH(DMSO-d6 + TFA-d, 400 MHz) δ 1,4-1,6 (4H, m) , 1,95-2,0 (2H, m) , 2,15-2,25 (2H, m), 3,0 (3H, s), 8,3 (IH, d) , 8,35 (IH, d), 8,45 (IH, s), 8,95 (IH, s) ppm.

LRMS 426, 428 (MH⁺) .

Analýza: Zjištěno: C, 41,50; H, 4,79; N, 13,82. Vypočítáno pro Ci7H2oClN₅0₄S«HCl·!, 8 H₂O: C, 41,27; H, 5,01; N, 14,15.

Enmple 81:

(a) terč.butylester N-[(4-brom-l-guanidin-7isochinolyl)sulfonyl]-D-prolinu, hydrochlorid (b) N-[(4-brom-l-guanidin-7-isochinolyl)sulfonyl]-D-prolin, hydrochlorid

NaH (48 mg, 80% disperze v minerálním oleji, 1,6 mmol) se přidá do roztoku guanidinhydrochloridu (233 mg, 2,43 mmol) v DMSO (8 ml) a roztok se mísí při teplotě okolí po dobu 30 min. Přidá se terč.butylester N-[(4-brom-l-chlor-7-isochinolyl)148

sulfonyl]-D-prolinu (290 mg, 0,61 mmol) a reakční směs se mísí při 60°C po dobu 2 h a nechá se zchladnout na teplotu okolí. Směs se vnese do vody a extrahuje se EtOAc. Kombinované organické extrakty se promyjí solankou, suší se (MgSO₄) a odpaří se ve vakuu. Zbytek ve formě žlutého oleje se přečistí chromatografií na silikagelové koloně za použití CH2Cl2-MeOH0,880 NH3 (97,5:2,5:0,25) jako eluens za zisku žluté pěny. Tento materiál se rozpustí v Et2O, zpracuje se etherální HCI, směs odpaří se ve vakuu a zbytek se trituruje s Et2O za zisku terč.butylester N-[(4-brom-l-guanidin-7-isochinolyl)sulfonyl]-D-prolinu, hydrochloridu (166 mg, 0,31 mmol) ve formě bílého pevného materiálu.

t.t. 203°C

^XH (DMSO-de, 300 MHz) δ 1,4	(9H,	s), 1,65	(IH, m), 1,8 (2H, m) ,
2,0 (IH, m), 3,35 (IH, m),	3, 45	(IH, m),	8,35 (2H, m), 8,5-8,8
(5H, m), 9,1 (IH, s) , 11,4	(IH,	s) ppm.
LRMS 4 97 , 4 99 (MH⁺) .
Analýza: Zjištěno: C, 41,96: H,	4,65; N,	12,65. Vypočítáno pro
Ci₉H24BrN₅O4S«HCl«0,5 H2O: C,	41,96: 4,82;	N, 12,88%.

Terč.butylester N-[(4-brom-l-guanidin-7-isochinolyl)sulfonyl]-D-prolinu, hydrochlorid (150 mg, 0,28 mmol) se zpracuje ledově chladným roztokem HCI v EtOAc (20 ml) a reakční směs se nechá ohřát na teplotu okolí a mísí se podobu 4 h. Roztok se zahustí ve vakuu a surový materiál se přečistí chromatografií na silikagelové koloně za použití CH2Cl2-MeOH0,880 NH3 (90: 1 0: 1) jako eluens. Získaný materiál se zpracuje etherální HCI, vzniklá sraženina se odfiltruje, promyje se E2O a suší se za zisku N-[(4-brom-l-guanidin-7-isochinolyl)sulfonyl]-D-prolinu, hydrochloridu (75 mg, 0,156 mmol) ve formě bílého prášku.

^(DMSO-de, 300 MHz) δ 1,6 (IH, m) , 1,7-2,0 (3H, m) , 3,2-3,45

149 •9 9999 (2H, m), 4,4 (1H, m), 8,3 (2H, m), 8,5-8,85 (5H, m), 9,15 (1H,

s) ppm.

LRMS 443 (MH⁺) .

Analýza: Zjištěno: C, 35,56; H, 3,54; N, 13,52. Vypočítáno pro CisHieBrNsOíS^HCl·!, 5 H₂0: C, 35, 62; H, 3,99; N, 13,85%.

Příklad 82:

(2R)-1-({4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl}sulfonyl)-N-[2-(dimethylamino)ethyl)-2-pyrrolidinkarboxamid

N-[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)sulfonyl]-1-prolin, hydrochlorid (300 mg, 0,69 mmol) se suspenduje v roztoku DMF (5 kapek) a CH2CI2 (15 ml) a po kapkách se přidá oxalylchlorid (150 μί, 1,72 mmol). Reakční směs se mísí při teplotě okolí po dobu 3 h, potom se zahustí ve vakuu a azeotropuje se s toluenem. Zbytek se rozpustí v CH2CI2 (15 ml), přidá se N-(2-aminoethyl)-N,N-dimethylamin (1 ml, 0,9 mmol) a reakční směs se mísí při teplotě okolí po dobu 2 h. Směs se odpaří ve vakuu, zbytek se rozdělí mezi EtOAc a roztok Na2CO3, vrstvy se separují a organická fáze se promyje solankou, suší se (Na₂SO4) a odpaří se ve vakuu. Zbytek ve formě žluté pevné látky se přečistí chromatografií na silikagelové koloně za použití gradientově eluce CH₂Cl₂-MeOH-0,880 NH3 (95:5:0,5 až 90:10:1) za zisku (2R)-1-({4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl}sulfonyl)-N-[2-(dimethylamino)ethyl]-2-pyrrolidinkarboxamidu (195 mg, 0,42 mmol) ve formě žlutého pevného materiálu.

φ φ» ······ φ φ φ • · · * ♦ · φ φ * · · φ φφφφ φφφ φ φφφφ φφφφ φ

15Π · · φφφφφφφ ^1UV φφφ φφφφ φφ φφ φφ φφφ ^ΧΗ (DMSO-de, 400 MHz) δ 1,55 <1Η, m) , 1,65 <1Η, m) , 1,7 (2Η,

m) , 2,15 (6Η, s) , 2,25 (2Η, t) , 3,2 (3Η, m) , 3,5 (ΙΗ,ιη) , 4,1 (IH, dd), 7,2-7,4 (4Η, brs), 7,8 (IH, m), 8,0 (IH, d), 8,15 (2Η, m) , 9,1 (IH, s) ppm.

Analýza: Zjištěno: C, 47,67; H, 5,61; N, 20,31. Vypočítáno pro Ci₉H26C1N7O₃S*0,5 H₂O: C, 47,84; H, 5,71; N, 20,56%.

Příklad 83:

l-{({4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl}sulfonyl)[2-(dimethylamino)ethyl]amino}-N-(2-hydroxyethyl)-N-methylcyklopentankarboxamid, dihydrochlorid

N-[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)sulfonyl]-N-[2-(dimethylamino)cykloleucin, dihydrochloride (170 mg, 0,31 mmol) se rozpustí v DMF (10 μΐ) a CH2CI2 (15 ml) . Přidá se oxalylchlorid (100 μΐ, 1,15 mmol) a směs se mísí při teplotě okolí po dobu 3 h. Rozpouštědlo se odstraní ve vakuu, nahradí se čerstvým CH2CI2, přidá se N-methylethanolamin (230 μΐ, 2,86 mmol) v CH2CI2 (10 ml) a reakční směs se mísí po dobu 2 h. Rozpouštědlo se odstraní ve vakuu a vzniklá klovatina se extrahuje Et2O a EtOAc. Tyto kombinované organické extrakty se zahustí ve vakuu a surový materiál se přečistí chromatografií na silikagelové koloně za použití CH2Cl2-MeOH-0,880 NH3 (90:10:1) jako eluens. Získaný žlutý olej se rozpustí v EtOAc a okyselí se HCI (IN) za zisku titulní sloučeniny jako krémové pevné látky (17 mg, 0,03 mmol).

^(DMSO-de + TFA-d, 300MHz) δ 1,55 (4H, m) , 2,0 (2H, m) , 2,4 • 9 9 9 9 9 99 9 ·· • «•9 99 « 999

151

9999 999

999 9999 99 99 99 999 (2Η, m), 2,6 (3Η, s) , 2,9 (6Η, s), 3,35 (2Η, m) , 3,5 (3Η, m), 3,95 (2Η, m), 4,3 (2Η, t), 8,4 (3Η, m), 8,5 (IH, s) , 935 (1Η, s) ppm.

LRMS 540, 542 (ΜΗ⁺) .

Příklad 84:

(a) Ethyl N-[(4-brom-l-guanidin-7-isochinolyl)sulfony}-N-[2-(dimethylamino)ethyl}-cykloleucin, dihydrochlorid (b) N-({4-brom-l-guanidin-7-isochinolyl}sulfonyl)-N-[2-(dimethylamino)ethyl}cykloleucin dihydrochlorid

Směs NaH (28 mg, 80% v minerálním oleji, 0,93 mmol) a guanidinhydrochloridu (126 mg, 1,32 mmol) v suchém DMSO (3 ml) se zahřívá při teplotě 5O°C po dobu 30 min. Přidá se N-[(4-brom-l-chlor-7-isochinolyl)sulfonyl]-N-[2-(dimethylamino)ethyl]cykloleucin, hydrochlorid (150 mg, 0,26 mmol) a směs se zahřívá při teplotě 90°C po dobu 1 hodiny, ochladí se, vnese se do vody a EtOAc (3 x). Kombinované organické extrakty se promyjí vodou a solanko, suší se (Na2SO4) a zahustí se ve vakuu za vzniku žluté klovatiny. Po chromatografií na silikagelové koloně eluované CH2Cl2-MeOH-0,880 NH3) (95:5:0,5) se zbytek rozpustí v EtOAc a okyselí se etherální HCI (IN) za zisku bílé sraženiny. Tento materiál se odfiltruje, suší se a rekrystalizuje se z EtOH za zisku bílého pevného materiálu (20 mg, 0,04 mmol). Zahuštěním původní kapaliny se získá druhý podíl (95 mg, 0,17 mmol) ethyl N-[(4-brom-l-guanidin-7-isochinolyl)sulfonyl]-N-[2-(dimethylamino)ethyl]cykloleucinu, dihydrochloridu.

^xH(DMSO-d₆, 300 MHz) δ 1,15 (3H, t) , 1,6 (4H, m) , 2,0 (2H, m) ,

152 • ·

2,3 (2H, m), 2,9 (6H, s), 3,5 (2H, m), 3,95 (2H, m), 4,0 (2H, q) , 8,34 (2H, s), 8,6 (ÍH, s), 9,4 (ÍH, s), 11,6 (ÍH, br s) ppm.

LRMS 555, 557 (MH⁺) .

Analýza: Zjištěno: C, 39,67; H, 5,61; N, 12,Sl. Vypočítáno pro C₂₂H3iBrN₆O₄S«2 HC1»2 H₂0: C, 39,77; H, 5,61; N, 12,65%.

Ethyl N-[(4-brom-l-guanidin-7-isochinolyl)sulfonyl]-N-[2-(dimethylamino)ethyl]cykloleucin, dihydrochlorid (95 mg, 0,17 mmol) v EtOH (3 ml) se zpracuje NaOH (4N, 8 ml) a roztok se mísí při teplotě 60°C po dobu 5 h a nechá se stát po dobu 60 h při teplotě okolí. Reakční směs se okyselí 2N HCI, zahustí se ve vakuu a zbytek se azeotropuje s i-PrOH za zisku špinavě bílého pevného materiálu. Tento materiál se extrahuje do MeOH, roztok se odpaří ve vakuu a zbytek se přečistí chromatografií na silikagelové koloně za použití CH₂C1₂ MeOH 0,880 NH) (80:20:5) jako eluens. Získaný materiál se suspenduje v EtOAc, zpracuje se etherální HCI, směs se odpaří ve vakuu a získaný materiál se trituruje s EtOAc za zisku N-({4-brom-l-guanidin-7-isochinolyl}sulfonyl)-N-[2-(dimethylamino)ethyl]cykloleucinu, dihydrochloridu (15 mg, 0,027 mmol) ve formě světle žlutého pevného materiálu.

³H (DMSO-de, 300 MHz) δ 1,45-1,6 (4H, m) , 1,95 (2H, m) , 2,2 (2H, m), 2,6 (6H, s), 3,1 (2H, m), 3, 7 (2H, t), 7,35 7,6 (4H, br s), 8,0 (ÍH, d), 8,15 (ÍH, d), 8,25 (ÍH, s), 9,15 (ÍH, s) ppm.

LRMS 527, 529 (MH⁺) .

Analýza: Zjištěno: C, 41,31; H, 5,35; N, 14,14. Vypočítáno pro C₂oH₂7BrN₆0₄S*HCl*H₂0: C, 41,27; H, 5,19; N, 14,44%.

153 • 4

9 •

• ····

Příklad 85:

(a) Ethyl 3-{[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)sulfonyl]amino}-2,2-dimethylpropanoat, hydrochlorid (b) N-({4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl}sulfonyl) -2,2-dimethyl-p-alanin, hydrochlorid

Ethyl 3-{[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)sulfonyl]amino}-2,2-dimethylpropanoat, hydrochlorid se připraví (29%), ve formě bílého pevného materiálu, z ethyl 3-{[(1,4-dichlor-7-isochinolyl)sulfonyl]amino}-2,2-dimethylpropanoatu, postupem podle příkladu 83.

t.t. 183-187°C ^(DMSO-de, 300 MHz) δ 1,1 (6H, s) , 1,15 (3H, t) , 2,95 (2H, d) , 4,0 (2H, q), 7,95 (IH, t), 8,35 (IH, m), 8,4 (IH, m) , 8,45 (IH, s), 8,5-8,65 (3H, br s), 9,1 (IH, s), 1,12 (IH, s) ,

LRMS 428 (MH⁺)

Analýza: Zjištěno: C, 43,99; H, 5,01; N, 14,69. Vypočítáno pro Ci7H22ClN₅O₄S*HCl: C, 43, 97; H, 4,99; N, 15,08%.

Roztok ethyl 3-{[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)sulfonyl]amino}-2,2-dimethylpropanoatu, hydrochloridu (28 mg, 0,06 mmol) v roztoku NaOH (2N, 0,5 ml) a MeOH (1 ml), se mísí při 75°C po dobu 24 h. Chladná směs se okyselí na pH 6 HCI (2N), zahustí se ve vakuu pro odstranění MeOH a vzniklá sraženina se odfiltruje, promyje se vodou a suší se. Pevný materiál se suspenduje roztoku MeOH/EtOAc, přidá se etherální HCI a směs se odpaří ve vakuu za zisku N-({ 4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl}sulfonyl)-2,2-dimethyl-alaninu, • 9

154

9999 • ·· * 9 9 9 9 9

9 9 9 9 9 9 9

9 « 9 9 9999 9

9999 999

999 9999 99 99 ·* 999 hydrochloridu, ve formě bílého pevného materiálu (22 mg, 0,05 mmol).

t.t. dec>304°C ¹H(DMSO-d₆, 300 MHz) δ 1,05 (6H, s) , 2,9 (2H, d) , 7,9 (1H, t) , 8,3-8,6 (6H, m), 9,05 (1H, s) ppm.

Příklad 86:

(a) 1-[({4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl}sulfonyl)amino)-N,N-dimethylcyklopentankarboxamid (b) l-{[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)sulfonyl] [2-(tetrahydro-2H-pyran-2-yloxy)ethyl]amin]-Ν,Ndimethylcyklopentankarboxamid (c) 1-[({4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl}sulfonyl) (2-hydroxyethyl) amino) -N, N-di-methylcyklopentanekarboxamid, hydrochlorid

Oxalylchlorid (3,5 ml, 4,0 mmol) se přidá k do suspenze N-({4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl}sulfonyl)cykloleucinu, hydrochloridu (870 mg, 1,94 mmol) v CH2CI2 (100 ml), potom se přidá DMF (5 kapek) a reakční směs se mísí při teplotě okolí po dobu 2 h. Roztok se zahustí ve vakuu a azeotropuje se s toluenem za zisku žluté klovatiny. Tento materiál se rozpustí v CH2CI2 (100 ml), roztok se ochladí na -20°C a přidá se chladný N,N-dimethylamin (10 ml). Reakční směs se nechá zahřít na teplotu okolí za stálého míšení, během 30 minut, potom se zahustí ve vakuu a zbytek se azeotropuje s toluenem. Surový materiál se přečistí chromatografií na silikagelové koloně za • 4 • 4

155

4444

4 4 4

44 použití CH2Cl2MeOH-0,880 NH3 (95:5:0,5) jako eluens a krystalizuje se z MeOH za zisku 1-[{{4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl}sulfonyl)amino]-Ν,Ndimethylcyklopentankarboxamidu (302 mg, 0,69 mmol) ve formě žlutého pevného materiálu, t.t. 264-268°C.

^XH (DMSO-de, 400 MHz) δ 1.35 (4H, m), 2,0 (2H, m), 2,2 (2H, m) , 3,1 (6H, s), 8,35 (2H, m), 8,4-8,7 (2H, m), 9,1 (IH, s) ppm. LRMS 439, 441 (MH⁺) .

Analýza: Zjištěno: C, 49,07; H, 527; N, 18,51. Vypočítáno pro Ci8H2₃ClNeO3S*0,3 H₂O:C, 48,66; H, 5,35; N, 18,91%.

K2CO3 (113 mg, 0,82 mmol) se přidá do roztoku 1-[ ({4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl}sulfonyl)amino]-N,Ndimethylcyklopentankarboxamidu (150 mg, 0,34 mmol) v DMF (2,5 ml) a směs se zahřívá při teplotě 75°C. Přidá se 2-(2-bromethoxy)tetrahydro-2H-pyran (J.C.S. 1948; 4187) (150 mg,

0,72 mmol) a potom se přidá jodid sodný (3 mg) a reakční směs se mísí při 75°C po dobu 3 dnů. chladná reakční směs se vnese do vody a extrahuje se EtOAc. Kombinované organické extrakty se promyjí solankou, suší se (Na2SO₄) a odpaří se ve vakuu. Zbytek ve formě žlutého oleje se přečistí chromatografií na silikagelové koloně za použití EtOAc jako eluens a trituruje se s roztokem hexanu-EtOAc (20:1), za zisku 1-{[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)sulfonyl][2-(tetrahydro-2H-pyran-2-yloxy)ethyl]amino}-N-N-dimethylcyklopentankarboxamidu (56 mg, 0,099 mmol).

^XH (CDCI3, 400MHz) δ 1,45-1,85 (?H, m) , 2,9-32 (6H, m), 3,353,6 (4H, m), 3,95 (2H, m), 4,1 (IH, m) , 4,65 (IH, s), 8,1 (3H, m), 925 (IH, s) ppm.

*· ·· ···· ·· ► · ·· · ···

156

Etherální HCI se přidává po kapkách do roztoku l—{[(4— -chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)sufonyl][2-(tetrahydro-2H-pyran-2-yloxy)ethyl]amino}-N-dimethylcyklopentankarboxamidu (37 mg, 0,065 mmol) v EtOAc (1,5 ml) do té doby, než ustane tvorba sraženiny. Získaná suspenze se mísí při teplotě okolí po dobu,20 min a potom se odpaří ve vakuu. Zbytek se přečistí chromatografií na silikagelové koloně za použití CH2Cl2-MeOH0,880 NH3 (95:5:0,5) jako eluens a azeotropuje se s toluenem. Tento materiál se rozpustí v roztoku MeOH-CH2Cl2, přidá se etherální HCI (5 ml) a směs se odpaří se ve vakuu a trituruje se s Et2O za zisku 1-[({4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl}sulfonyl)(2-hydroxyethyl)amino]-N,N-dimethylcyklopentankarboxamidu, hydrochloridů (9 mg, 0,017 mmol) ve formě krémového/bílého pevného materiálu.

^XH (DMSO-d₆+ TFA-d, 300MHz)	δ 1,25-1,45	(4H,	m) ,	1,7 (2H, m),
2,25 (2H, m), 2,8-3,0 (6H,	m), 3,3 (2H,	m) ,	3,7	(2H, t), 8,35
(IH, d), 8,4 (IH, d), 8,5	(IH, s), 8,6	(IH,	br	s), 9,0 (IH, s)

ppm.

LRMS 483 (MH⁺)

Příklad 87:

(a) Ethyl 1-{((4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)sulfonyl](2-(tetrahydro-2H-pyran-2-yloxy)ethyl]amino]cyklopentankarboxylat (b) Kyselina l-{((4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)sulfonyl]-(2-(tetrahydro-2H-pyran-2yloxy)ethyl]amino]cyklopentankarboxylová (c) N''-{4-chlor-7 -[(10-oxo-9-oxa-6-azaspiro[4,5]dec-6-yl)~ sulfonyl]-1-isochinolyl}guanidinhydrochlorid

NaH (45 mg, 80% disperze v minerálním oleji, 1,5 mmol) se přidá do roztoku guanidinhydrochloridu (231 mg, 2,4 mmol) v DMSO (5 ml) a roztok se mísí při teplotě 50°C po dobu 20 min. Přidá se ethyl l-{[(1,4-dichlor-7-isochinolyl)sulfonyl]-[2-(tetrahydro-2H-pyran-2yloxy)ethyl]amino}cyklopentankarboxylat (330 mg, 0,6 mmol) a reakční směs se mísí at 70°C po dobu 2,5 h. Chladná reakční směs se vnese do vody, extrahuje se EtOAc a kombinované organické extrakty se promyjí solankou, suší se (MgSO₄) a odpaří se ve vakuu. Zbytek ve formě žluté klovatiny se přečistí chromatografií na silikagelové koloně za použití CH2Cl2-MeOH-O.8-0 NH3 (95:5:0,5) jako eluens za zisku ethyl 1-{[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)sulfonyl] [2-(tetrahydro-2H-pyran-2-yloxy) ethyl]amino}cyklopentankarboxylatu ve formě oranžového oleje.

¹H(CDC1₃,	400 MHz)	δ 1,	25 (3H, t), 1,45-1,75 (14H, m), 2,1	(2H,
m) , 2,35	(2H, m),	3,5	(IH, m), 3,75-3,9 (4H, m), 4,0 (IH,	m) ,
4,2 (2H,	q) , 4,61	(IH,	s), 8,05-8,15 (3H, m), 9,25 (IH, s)
ppm.
LRMS 568	(M⁺) .

Roztok ethyl 1-{[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)sulfonyl][2-(tetrahydro-2H-pyran-2-yloxy)ethyl]amino]cyklopentankarboxylatu v MeOH (5 ml) se zahřeje na 75°C, přidá se roztok NaOH (1 ml, 2N, 2 mmol) a reakční směs se mísí při teplotě 50°C po dobu 48 h. Chladná reakční směs se zahustí ve vakuu pro odstranění MeOH a zbylý vodný roztok se okyselí na pH 6 IN HCI. Vzniklá sraženina se odfiltruje, promyje se vodou • ·· »* »··· ·· ···· · « · ·»· • · · · · · ·

158 ·· · · · · · · · 999 9999 99 99 99 999 a filtrát se extrahuje EtOAc. Kombinovaná organické extrakty se suší (MgSO₄) a odpaří se ve vakuu za zisku kyseliny l—{£(4— -chlor-l-guanidin-7-isochinoll)sulfonyl] [2-(tetrahydro-2H-pyran-2-yloxy)ethyl]amino}cyklopentankarboxylové (9 mg, 0,017 mmol) ve formě světle žlutého pevného materiálu.

hHCDCIa, 300 MHz) δ 1,4 (4H, m) , 1.55 (4H, m) , 2,0 (2H, m) , 22 (2H, m), 3,35 (3H, m) , 3,45-3,75 {5H, m), 4,5 (IH, m), 8,0 (IH, d) , 8,15 (2H, m), 9,15 (IH, s) ppm.

Analýza: Zjištěno: C, 49,50; H, 5,50; N, 1226. Vypočítáno pro C23H₃oC1N506S«H₂0: C, 49,50; H, 5,78; N, 12,55%.

Kyselina 1-{[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)sulfonyl]-[2(tetrahydro-2H-pyran-2-yloxy)ethyl]amino]cyklopentankarboxylová (20 mg, 0,037 mmol) se rozpustí v EtOAc (20 ml), přidá se etherální HCI (10 ml) a reakční směs se mísí při teplotě okolí po dobu 18 h. Vzniklá sraženina se odfiltruje, promyje se EtOAc a suší se ve vakuu za zisku Ν'’{4-chlor-7-[(10-oxo-9-oxa-6-azaspiro[4,5]dec-6yl)sulfonyl]-1-isochinolyl}guanidinhydrochloridu (17 mg, 0,36 mmol).

hUCDCls, 300 MHz) δ 1,6-1,8 (4H, m) , 2,25 (4H, m) , 3,95 (2H, t), 4,4 (2H, t), 8,35 (2H, m), 8,45 (IH, s) , 925 (IH, s), 11,5 (IH, s) ppm.

LRMS 437 (M⁺)

Analýza: Zjištěno: C, 44,04; H, 4,58; N, 14,17. Vypočítáno pro Ci8H2oClN₅0₄S*HCl*H₂0: C, 43,91; H, 4,71; N, 14,22%.

Příklad 88:

(a) methylester N-[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)methyl]cykloleucinu

159 (b) Ν-({4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl} methyl)cykloleucin, dihydrochlorid

• ··		····	··
• · ·	* «	Φ	•	•	• ·
• »	•	•		•	•
• ·	•	•	• ·	•	•
······	«·	··	44		··

NaH (52 mg, 80% disperze v minerálním oleji, 1,73 mmol) se přidá do roztoku guanidinhydrochloridu (265 mg, 2,77 mmol) v DMSO (2,5 ml) a směs se zahřívá při teplotě 50°C po dobu 20 min. Přidá se methylester N-[(1,4-dichlor-7-isochinolyl)methyl]cykloleucinu (245 mg, 0,69 mmol) v DMSO (2,5 ml) a po zahřívá roztoku po dobu 4,5hod. při 90 °C se roztok vnese do vody (50 ml). Směs se extrahuje EtOAc (2 χ), kombinované organické extrakty se promyjí vodou, solankou a potom se suší (Na2SO₄) . Zbytek se přečistíchromatografií na silikagelové koloně za použití CH2Cl2-MeOH-0,880 NH3 (90:10:1) jako eluens, za zisku žlutého pevného materiálu. Tento materiál se rozpustí v roztoku CH2Cl2-MeOH a okyselí se etherální HCI (1 Ν), zahustí se ve vakuu a surový materiál se rekrystalizuje z EtOH za zisku methylesteru N-[(4-chlor-l-guanidin-7isochinolyl)-methyl]cykloleucinu (30 mg, 0,08 mmol) ve formě krémově zbarveného pevného materiálu.

t.t. 271-275°C ^XH (DMSO-de, 300 MHz) δ 1,25 (3H, t) , 1,75 (2H, m) , 1,9 (2H, m) , 2,1-2,3 (4H, m), 4,25 (2H, q), 4,35 (2H, m), 8,25 (3H, m), 8,4 (IH, s), 9,3 (IH, s) , 11,7 (IH, s) ppm.

LRMS 390 (MH⁺)

Analýza: Zjištěno: C, 49,09; H, 5,74; N, 14,71. Vypočítáno pro

160

Ci₉H24C1N5O₂S»2,2 HC1*O,2 H₂O: C, 48,93; H, 5,71; N, 15,02%.

Methylester N-[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)methyl] cykloleucinu (100 mg, 0,27 mmol) se rozpustí v methanolu (4 ml) při 50°C, přidá se NaOH (2N, 1 ml) a reakční směs se zahřívá po dobu 2 dnů při teplotě 50°C. Chladná směs se alkalizuje na pH pH 6 NaOH (2N) za vzniku sraženiny, která se odfiltruje a promyje se vodou. Pevný materiál se rozpustí v MeOH/EtOAc, okyselí se etherální HCI (IN) a trituruje se s iPr₂O za zisku titulní sloučeniny (b) ve formě světle žlutého pevného materiálu (10 mg, 0,03 mmol).

t.t. 281-289°C ^XH (DMSO-de + TFA-d, 300 MHz) δ 1,8 (2H, m) , 1,85 (2H, m) , 2,15

(2H, m), 2,25 (2H, m), 4,4 (2H, s), 8,2 (ÍH, d) , 8,3 (ÍH, d) ,
8,4 (ÍH, LRMS 362	s), 9,15 (MH⁺) .	(ÍH,	s)	ppm.
Příprava	1:

7-brom-l,4-dichlorisochinolin

Roztok kyseliny 4-bromskořicové (5,03 g, 22,2 mmol) v SOC1₂(15 ml) se mísí při 23 °C po dobu 16 h, a potom se zahřívá při teplotě zpětného toku po dobu dalších 2 h. Rozpouštědla se odpaří ve vakuu a zbytek se azeotropuje s PhMe (x3) za zisku 4-bromcinnamoylchloridu (22 mmol) ve formě oranžovohnědého pevného materiálu.

^ΧΗ NMR (CDC1₃, 300 MHz) δ 6,65 (ÍH, d) , 7,4 (2H, d), 7,6 (2H,

d) , 7,8 (ÍH, d) ppm.

• ·

Roztok NaN3 (2,2 g, 33,8 mmol) ve vodě (7,5 ml) se přidá po kapkách během 5 min do míšeného roztoku of 4bromcinnamoylchloridu (22 mmol) v acetonu (22 ml) při -10 °C. Heterogenní směs se mísí při 0 °C po dobu lha naředí se vodou (25 ml). Sraženina se odebere filtrací a suší se ve vakuu přes P2O5 za zisku 4-bromcinnamoylazidu (5,22 g, 20,7 mmol) ve formě zlatavého pevného materiálu.

^XH NMR (CDCI3, 300 MHz) δ 6,4 (IH, d) , 7,4 (2H, d) , 7,5 (2H, d) , 7,65 (IH, d) ppm.

o

Horký roztok 4-bromcinnamoylazidu (5,22 g, 20, 7 mmol) v Ph2O (25 ml) se přidá po kapkách během 15 min do míšeného PH2O (10 ml) při 270 °C. [Pozor: potenciální výbušnina - použijte protivýbušnou clonu]. Směs se zahřívá při teplotě 270 °C po dobu 1,5 h, ochladí se na teplotu 23 °C a potom se vnese do hexanů (400 ml). Sraženina se odfiltruje, promyje se hexaney (2x100 ml) a přečistí se chromatografií na silikagelové koloně za použití hexanů-EtOAc (6:4 až 0:100) jako eluens za zisku Ί-brom-1(2H)-isochinolonu (1,64 g, 7,3 mmol) ve formě bílého pevného materiálu.

^XH NMR (DMSO-de, 300 MHz) δ 6,55 (IH, d), 7,25-7,15 (IH, m) ,

7,6 (IH, d), 7,8 (IH, d), 8,25 (IH, s), 11,4 (IH, br s) ppm.

ct

Směs 7-brom-l(2H)-isochinolonu (1,28 g, 5,69 mmol) a PCI5 (2,04 g, 9,80 mmol) se zahřívá při teplotě 140 °C po dobu 5 h. Chladná směs se utlumí ledem (50 g) a přidává se 0,880 NH3,

162 dokud není podle lakmusového papírku dosaženo alkalických hodnot. Vodná směs se extrahuje CH2CI2 (3x50 ml) a kombinované organické fáze se suší (MgSOí) a odpaří se ve vakuu. Zbytek se přečistí chromatografií na silikagelové koloně za použití hexanů-EtOAc (97:3 až 95:5) jako eluens, za zisku 7-brom-l,4-dichlorisochinolinu (1,13 g, 4,08 mmol) ve formě bílého pevného materiálu.

t.t. 133,5-135 °C.

^XH (CDCI3, 300 MHz) Ó 7,9 (1H, d), 8,1 (1H, d), 8,35 (1H, s), 8,5 (1H, s).

LRMS 276, 278 (MH⁺) .

Analýza: Zjištěno: C, 39,04; H, 1,32; N, 5,06. Vypočítáno pro C₉H4BrCl₂N:: C, 39,03; H, 1,46; N, 5,06.

Příprava 2:

terč.butyl 2-aminobenzoat

Směs 2-nitrobenzoylchloridu (15 ml, 110 mmol) a t-BuOH (100 ml) se zahřívá při teplotě zpětného toku po dobu 3 h. Chladná směs se vnese do ledové vody, alkylizuje se Na₂CO3 a extrahuje se CH2CI2 (x2). Kombinované organické extrakty se promyjí solankou, rozpouštědla se odpaří ve vakuu a zbytek se přečistí chromatografií na silikagelové koloně za použití hexanů-EtOAc (95:5) jako eluens, za zisku terč.butyl 2-nitrobenzoatu (4,9 g, 22 mmol) ve formě žlutého oleje.

*H (CDCI3, 300 MHz) δ 1,6 (9H, s), 7,5 (1H, dd), 7,6 (1H, dd) ,

7,7 (1H, d) , 7,8 (1H, d) ppm.

LRMS 240 (MNH4⁺) .

9···

163

9·99999

9 9 · ► 9 · ·

99

Roztok terc.butyl 2-nitrobenzoatu (4,9 g, 22 mmol) v EtOH (160 ml) se mísí s 10% palladiem na uhlíku (700 mg) v atmosféře H₂ (60 psi) při 23 °C. Po 4 h se směs přefiltruje a odpaří se ve vakuu za zisku terc.butyl 2-aminobenzoatu (4,0 g, 20, 7 mmol) ve formě žlutého oleje.

¹H(CDC1₃, 300 MHz) δ 1,6 (9H, s) , 5,6-5,8 (2H, br s) , 6,6 (ÍH, dd) , 6,6 (ÍH, d), 7,2 (ÍH, dd), 7,8 (ÍH, d) ppm.

LRMS 194 (MH⁺) .

Příprava 3 :

terc.butyl 2{[(1,4-dichlor-7isochinolyl)sulfonyl]aminojbenzoat

n-butyllithium (0,88 ml, 2,5 M v hexanech, 2,2 mmol) se přidá po kapkách do míšeného roztoku 7-brom-l,4dichlorisochinolinu (570 mg, 2,0 mmol) v THF-Et₂O (10 ml, 1:1) v atmosféře N₂ při -78 °C. Po 5 min se směs přidá do roztoku SO₂C1₂ (0,35 ml, 4,35 mmol) v hexanu (10 ml) při -78 °C v atmosféře N₂ a směs se pomalu zahřeje na 23 °C a potom se mísí po dobu 4,5 h. Rozpouštědla se odpaří ve vakuu, směs se azeotropuje s CH₂C1₂ a PhMe, zbytek se suspenduje v CH₂C1₂ (12 ml) obsahujícím NEt3 (1,15 ml, 8,25 mmol) a přidá se terc-butyl-2-aminobenzoat (520 mg, 2,7 mmol). Směs se mísí při teplotě okolí po dobu 3 dnů a potom se zahřívá při teplotě zpětného toku po dobu 6 h. Ochlazená směs se naředí CH₂C1₂, promyje se vodným roztokem HCI (2 Μ), solankou a potom se odpaří ve vakuu. Zbytek se přečistí chromatografií na

164

silikagelové koloně za použití hexanů-EtOAc (97:3 až 95:5) jako eluens, za zisku, nejprve, 1,4,7-trichlorisochinolinu (200 mg), a potom terč.butyl 2-{[(1,4~dichlor-7isochinolyl)sulfonyl]-aminojbenzoatu (120 mg, 0,26 mmol) ve formě žluté pryskyřice.

^XH (CDCls, 400 MHz) δ 1,5 (9H, s) , 7,05 (ÍH, dd), 7,5 (ÍH, dd) ,

7,7 (ÍH, d), 7,8 (ÍH, d), 8,2 (ÍH, d), 8,3 (ÍH, d), 8,4 (ÍH, s), 8,8 (ÍH, s), 10,0 (ÍH, s) ppm.

LRMS 454 (MH⁺) .

Příprava 4: terč.butyl-3-aminobenzoat

Směs kyseliny 3-nitrobenzoové (5 g, 30 mmol), di-terc.butyl dikarbonatu (20 g, 92 mmol) a DMAP (0,84 g, 6,9 mmol) v THF (60 ml) se mísí při 23 °C po dobu 2 d. Směs se vnese do ledové vody, alkylizuje se Na2CC>3 a extrahuje se CH2CI2 (x3) . Kombinované organické extrakty se promyjí solankou, rozpouštědla se odpaří ve vakuu a zbytek se přečistí chromatografií na silikagelové koloně za použití hexanů-EtOAc (95:5) jako eluens, za zisku terč.butyl-3-nitrobenzoatu (5,4 g, 24 mmol) ve formě bezbarvého oleje.

^XH (CDCI3, 400 MHz) δ 1,4 (9H, s) , 7,6 (ÍH, dd), 8,3 (ÍH, d),

8,4 (ÍH, d), 8,8 (ÍH, s) ppm.

Roztok terč.butyl-3-nitrobenzoatu (5,8 g. 26 mmol) v EtOH (260 ml) se mísí s 10% palladiem na uhlíku (1,0 g) v atmosféře

165 • 9

9

9999

H2 (60 psi) při 23 °C. Po 4 hodinách se směs přefiltruje a odpaří se ve vakuu za zisku terc.butyl 3-aminobenzoatu (4,0 g.

20,7 mmol) ve formě bílého pevného materiálu.

^XH (CDCls, 400 MHz) δ 1,6 (9H, s) , 3,6-3,9 (2H, br s) , 6,8 (IH, d), 7,2 (IH, dd), 7,3 (IH, s), 7,4 (IH, d) ppm.

LRMS 194 (MH⁺) , 387 (M₂H⁺) .

Příprava 5 :

terc.butyl 3-{[(1,4-dichlor-7-isochinolyl)sulfonyl]amino}benzoat

α

n-butyllithium (0,88 ml, 2,5 M v hexanech, 2,2 mmol) se přidá po kapkách do míšeného roztoku 7-brom-l,4-dichlorisochinolinu (570 mg, 2,0 mmol) v THF-Et2O (10 ml, 1:1) v atmosféře N2 při -78 °C. Po 5 min se směs přidá do roztoku SO2CI2 (0,35 ml, 4,35 mmol) v hexanu (10 ml) při -78 °C v atmosféře N2 a směs se pomalu zahřeje na 23 °C a potom se mísí po dobu 4,5 h. Rozpouštědla se odpaří ve vakuu, směs se azeotropuje s PhMe, zbytek se suspenduje v CH2CI2 (12 ml) a přidá se terč.butyl-3-aminobenzoat (520 mg, 2,7 mmol) a potom NEt3 (1,15 ml, 8,25 mmol). Směs se mísí při teplotě okolí po dobu 4 dnů a odpaří se ve vakuu. Zbytek se přečistí chromatografií na silikagelové koloně za použití hexanů-EtOAc (90:10 až 50:50) jako eluens za zisku, nejprve, 1,4,7-trichlorisochinolinu (150 mg), a potom terc-butyl-2-{[(1,4-dichlor-7-isochinolyl)sulfonyl]aminojbenzoatu (289 mg, 0,63 mmol) ve formě hnědého pevného materiálu, který se použije bez dalšího přečištění.

^XH (CDCI3, 400 MHz) vybraná data: δ 1,5 (9H, s) , 7,20-7,25 ·· · ♦ · · • · · !

i66

(IH, m),	7,3-7,45	(IH, m),	7,5	(IH, dd), 7,6 (IH, s), 8,45
(IH, d),	8,5 (IH,	d), 8,6	(IH,	s), 8,9 (IH, s) ppm.
LRMS 454	(MH⁺) .
Příprava	6:

1,4-dichlor-7-isochinolinsulfonylchlorid a

Roztok terc.butylesteru N-chlorsukcinimidu (9,66 g, 72 mmol) v MeCN (80 ml) se přidá po kapkách do míšeného roztoku 1-(2H)-isochinolonu (10 g, 69 mmol) v MeCN (250 ml), který se zahříval při teplotě zpětného toku. Směs se zahřívá při teplotě zpětného toku po dobu další 1,5 hodinya potom se ochladí na teplotu okolí. Vzniklá sraženina se odfiltruje, za promývání MeCN, a potom se suší ve vakuu za zisku 4-chlor1(2H)-isochinolonu (11,3 g, 62,9 mmol) ve formě světle růžového pevného materiálu.

^XH (DMSO-de, 300 MHz) δ 7,5 (IH, s) , 7,6 (IH, dd) , 7,8-7,9 (2H, m) , 8,25 (IH, d) , 11,5 (IH, br s) , ppm.

LRMS 180, 182 (MH⁺) , 359, 361, 363 (M₂H⁺) .

o

4-chlor-l-(2H)-isochinolon (20,62 g, 115 mmol) se po částech přidá do míšené kyseliny chlorsulfonové (61 ml, 918 mmol) při 0 °C. Směs se zahřívá při teplotě 100 °C po dobu 3,5 d a potom se ochladí na teplotu okolí. Reakční směs se po malých podílech přidá do vody [POZOR] a vzniklá sraženina se odfiltruje. Pevný materiál se promyje vodou, trituruje se s MeCN a potom se suší ve vakuu za zisku 4-chlor-l-oxo-l, 2167

-dihydro-7-isochinolinsulfonylchloridu (18, 75 g, 67,4 mmol) ve formě krémového pevného materiálu.

^(DMSO-dg, 400 MHz) δ 7,45 (IH, s) , 7,8 (IH, d) , 8,0 (IH, d) ,

8,5 (IH, s), 11,5 (IH, br s) ppm.

Analýza: Zjištěno: C, 39,37; H, 2,09; N, 4,94. Vypočítáno pro C9H5CI2NO3S: C, 38,87; H, 1,81; N, 5,04.

POCI3 (9,65 ml, 103,5 mmol) se přidá do míšené suspenze 4-chlor-l-oxo-1,2-dihydro-7-isochinolinsulfonylchloridu (22,1 g, 79,6 mmol) v MeCN (500 ml) při teplotě okolí a směs se potom zahřívá při při teplotě zpětného toku po dobu 15 h. Po ochlazení se z MeCN roztoku dekantuje nerozpustná drť a roztok se odpaří ve vakuu. Zbytek se estrahuje horkým EtOAc a odpaří se za zisku pevného materiálu, který se mísí s Et2O (1,2 1) při teplotě okolí přes noc. Z etherálního roztoku se odstraní nerozpustný materiál a roztok se odpaří ve vakuu za zisku 1,4-dichlor-7-isochinolinsulfonylchloridu (20 g, 67 mmol) ve formě světle žlutého pevného materiálu.

^XH (DMSO-dg, 400 MHz) δ 8,2 (2H, s), 8,5 (IH, s), 8,55 (IH, s) ppm.

Analýza: Zjištěno: C, 37,19; H, 1,34; N, 4,77. Vypočítáno pro C9H4CI3NO2S: C, 36,45; H, 1,36; N, 4,72.

Příprava 7:

Methyl 3-{ [(1,4-dichlor-7-isochinolyl)sulfonyl]amino}-4-methoxybenzoat

a

Methyl-3-amino-4-methoxybenzoat (212 mg, 1,17 mmol) se přidá do míšeného roztoku 1,4-dichlor-7-isochinolinsulfonylchloridu (342 mg, 1,15 mmol) v CH2CI2 (10 ml) obsahujícího 2,6-lutidin (0,135 ml, 1,16 mmol) v atmosféře N2 při 0 °C. Po 5 min. se směs zahřeje na teplotu okolí a mísí se po dobu 22 h. Rozpouštědla se odpaří ve vakuu a zbytek se suspenduje v EtOAc (50 ml) a potom se promyje, solankou, suší se (MgSOU a odpaří se ve vakuu. Zbytek se přečistí chromatografií na silikagelové koloně za použití hexanů-EtOAc (80:20 až 20:80) jako eluens, za zisku methyl-3-{[(1,4-dichlor-7-isochinolyl)sulfonyl]amino]-4-methoxybenzoatu (365 mg, 0,83 mmol) ve formě špinavě bílého pevného materiálu.

^XH (CDCla, 300 MHz) δ 3,7 (3H, s) , 3,9 (3H, s) , 6,75 (1H, d) , 7,2 (1H, s), 7,8 (1H, dd), 8,15 (1H, dd), 8,25 {1H, s), 8,3 (1H, d), 8,5 (s, 1H), 8,85 {1H, s) ppm.

LRMS 441 (MH⁺) , 458 (MNH?) .

Příprava 8:

terc.butylester N-[(1,4-dichlor-7-isochinolyl)sulfonyl]glycinu

NEt3 (0,59 ml, 4,24 mmol). se přidá do míšeného roztoku terč.butylesteru glycinu, hydrochloridu {340 mg, 2,02 mmol) a

1,4-dichlor-7-isochinolinsulfonylchloridu (500 mg, 1,68 mmol) v CH2CI2 (25 ml) v atmosféře N2 a směs se mísí při teplotě okolí po dobu 18 h. Směs se naředí CH2CI2 (25 ml), promyje se ředěnou HCI (x2, 1 Μ), nasyceným vodným roztoke NaHCCb, solankou, suší se (MgSCM) a odpaří se ve vakuu. Pevný materiál se trituruje s EtOAc, odfiltruje se a suší se za zisku

169 terč.butylesteru N-[(1,4-dichlor-7-isochinolyl)sulfonyl]glycinu (435 mg, 1,11 mmol) ve formě bílého pevného materiálu,

t.t. 194,196 °C.

• · ¹H(CDC1₃, 300 MHz) δ 13 (9H, s), 3,8 (2H, d), 5,3 (IH, br t) 8,25 (IH, d), 8,4 (IH, d), 8,5 (IH, s), 8,9 (IH, s) ppm.

LRMS 391 (MH⁺) , 408, 410 (MNH?) .

Analýza: Zjištěno: C, 45,58; H, 4,03; N, 7,03. Vypočítáno pro Ci₅Hi6Cl2N2O₄S: C, 46,04; H, 4,12; N, 7,16.

Příprava 9:

Terč.butylester N-[(1,4-dichlor-7-isochinolyl)sulfonyl]-βalaninu

α

NEt3 (0,60 ml, 4,3 mmol) se přidá do míšeného roztoku terč.butylesteru β-alaninu, hydrochloridu (331 mg, 1,82 mmol) a

1,4-dichlor-7-isochinolinsulfonylchloridu (510 mg, 1,72 mmol) v CH2CI2 (10 ml) v atmosféře N2 a směs se mísí při teplotě okolí po dobu 22 h. Směs se naředí CH2CI2 (50 ml), promyje se polovičním obejem nasycené solanky, suší se (MgSO₄) a odpaří se ve vakuu. Zbytek se přečistí chromatografií na silikagelové koloně za použití pentanu-EtOAc (90:10 až 60:40) jako eluens za zisku terč.butylesteru N-[(1,4-dichlor-7-isochinolyl)sulfonyl]-β-alaninu (580 mg, 1,43 mmol) ve formě bílého pevného materiálu.

^XH (CDCI3, 300 MHz) δ 1,4 (9H, s), 2,5 (2H, t), 3,25 (2H, dt),

5,5 (IH, br t), 8,25 (IH, d), 8,4 (IH, d), 8,5 (IH, s), 8,9 (IH, s) ppm.

LRMS 405, 407 (MH⁺) , 422 (MNH₄ ⁺) .

Analýza: Zjištěno: C, 47,41; H, 4,46; N, 6,80. Vypočítáno pro

170 • ···· ·· ····

C16HI8CI2N2O4S: C, 47,42; Η, 4,48; Ν, 6,91,

Příprava 10:

terč.butylester N-[(1,4-dichlor-7-isochinolyl)sulfonyl]-N-methylglycinu

Terč.butylester N-methylglycinu, hydrochlorid (264 mg, 1,45 mmol) se přidá do míšeného roztoku 1,4-dichlor-7-isochinolinsulfonylchloridu (376 mg, 1,27 mmol) v CH2CI2 (25 ml) obsahujícího NEt3 (0,44 ml, 3,16 mmol) v atmosféře N2 při 0 °C a směs se potom mísí při teplotě okolí po dobu 22 h. Rozpouštědla se odpaří ve vakuu, zbytek se rozpustí v EtOAc (50 ml), promyje se vodou, solankou, suší se (MgSO₄) a odpaří se ve vakuu. Zbytek se přečistí chromatografií na silikagelové koloně za použití pentanu-EtOAc (80:20) jako eluens,t za zisku terč.butylesteru N-[(1,4-dichlor-7-isochinolyl)sulfonyl]-N-methylglycinu (485 mg, 1,20 mmol) ve formě bílého pevného materiálu.

^(CDCls, 300 MHz) δ 1,35 (9H, s) , 3,0 (3H, s) , 4,05 (2H, d) , 8,2 (IH, d). 8,35 (IH, d), 8,5 (IH, s), 8,85 (IH, s) ppm.

LRMS 709 (M₂H⁺) .

Analýza: Zjištěno: C, 47,37; H, 4,43; N, 6,79. Vypočítáno pro Ci6Hi₈Cl2N₂O₄S: C, 47,42; H, 4,48;N, 6,91.

Příprava 11:

terč.butylester N-fenylglycinu tBuOjC Br

171

999 99·· ····

9 9

9 9 ·9 9

99

Terc.butyl-chloracetat (10 g, 66,3 mmol) se přidá po kapkách do míšeného roztoku anilinu (11,3 g, 120 mmol) v NEt3 (10 ml) a směs se mísí při teplotě okolí po dobu 24 h a potom při 60 °C po dobu 18 h. Ochlazená směs se naředí Et2O (100 ml), přefiltruje s proplachem Et2O a filtrát se potom promyje vodou, solankou, suší se (MgSOJ a odpaří se ve vakuu. Zbytek se přečistí chromatografií na silikagelové koloně za použití hexanů-EtOAc (98:2 až 92:8) jako eluens, za zisku terč.butylesteru N-fenylglycinu (6,56 g, 31,6mmol) ve formě oleje.

(CDCls, 400 MHz) δ 1,5 (9H, s), 3,8 (2H, s), 4,45 (1H, br s), 6,6 (2H, d), 6, 7 (1H, t), 7,2 (2H, dd) ppm.

LRMS 208 (MH⁺) , 415 (M₂H⁺) .

Příprava 12:

terč.butylester N-[(1,4-dichlor-7-isochinolyl)sulfonyl]-N-fenylglycinu

1,4-dichlor-7-isochinolinsulfonylchlorid (300 mg, 1,01 mmol) se přidá do míšeného roztoku terč.butylesteru N-fenylglycinu (228 mg, 1,10 mmol) v CH2CI2 (5,0 ml) obsahujícím NEt3 (0,35 ml, 2,5 mmol) v atmosféře N2 při teplotě okolí, a směs se mísí po dobu 5 dnů. Směs se naředí CH2CI2 (50 ml) , promyje se ředěnou HCI (20 ml, 1 Μ), nasyceným vodným roztokem NaHCCb, suší se (MgSCh) a odpaří se ve vakuu. Zbytek se přečistí chromatografií na silikagelové koloně za použití

	• ·· ·* ··»· ··	•
	a a 4 4 · · · 4 ·	• ·
	• · * · * · í • ««·· · · · ·	4 •
172	·· »44· · · ··· 4444 ·· ·· **	4 • •4

hexanů-EtOAc (90: 1 0 až 60:40) jako eluens, za zisku terč.butylesteru N-[(1,4-dichlor-7-isochinolyl)sulfonyl]-N-fenylglycinu (485 mg, 1,20 mmol) ve formě bílého pevného materiálu.

^xH(CDCl3, 300 MHz) δ 1,4 (9H, s), 4,4 (2H, d), 7,2-7,4 (5H, m) , 8,05 (1Ή, d), 8,3 (IH, d), 8,45 (IH, s), 8, 7 (IH, s) ppm. LRMS 4 67 (MH⁺) .

Příprava 13:

terč.butylester N-(cyklopentylmethyl)-N-[(1,4-dichlor-7-isochinolyl)sulfonyl]glycinu .BuO,C

Poh3 (243 ma, 1,5 mmol) a potom roztok DEAD (236 μΐ, 1,5 mmol) v THF (2 ml) se přidají do míšeného roztoku terč.butylesteru N-[ (1,4-dichlor-7-isochinolyl)sulfonyl]glycinu (391 mg, 1,00 mmol) a cyklopentanmethanolu (130 μΐ, 1,2 mmol) v THF (3 ml) v atmosféře N2 při teplotě 0 °C a směs se mísí při teplotě okolí po dobu 18 h. Přidá se další podíl cyklopentanmethanolu (1,2 mmol), Pph3 (1,5 mmol) a DEAD (1,5 mmol) a směs se mísí při teplotě okolí po dobu dalších 2 dnů. Rozpouštědla se odpaří ve vakuu a zbytek se přečistí chromatografií na silikagelové koloně za použití pentanu-EtOAc (100:0 až 95:5) jako eluens za zisku terč—butylesteru N-(cyklopentylmethyl)-N-[(1,4-dichlor-7-isochinolyl)sulfonyl]glycinu (144 mg, 0,30 mmol) ve formě bílého pevného materiálu. ^(CDCla, 400 MHz) δ 1,15-1,4 (3H, m) , 1,3 (9H, s) , 1,5-1,7 (3H, m), 1,7-1,8 (2H, m), 2,1 (IH, m), 3,25 (2H, d) , 4,1 (2H, s), 8,25 (IH, d), 8,35 (IH, d), 8,5 (IH, s), 8,85 (IH, s) ppm. LRMS 473 (MH⁺) , 490, 492 (MNH?) .

Analýza: Zjištěno: C, 53,23; H, 5,58; N, 5,86. Vypočítáno pro • · · ·

173

C21H26CI2N2O4S: C, 53,28; Η, 5,54; Ν, 5,92.

Příprava 14:

Terč.butylester N-(cyklohexylmethyl)-N-[(1,4-dichlor-7-isochinolyl)sulfonyl]glycinu

Cyklohexylmethylbromide (209 μΐ, 1,5 mmol) se přidá k míšenému roztoku terč.butylesteru N-[(1,4-dichlor-7-isochinolyl)sulfonyl]glycinu (391 mg, 1,00 mmol) a bezvodého K2CO3 (276 mg, 2,0 mmol) v DMF (5 ml) v atmosféře N2 při teplotě 23 °C. Směs se mísí po dobu 2 hodin a potom se zahřívá při teplotě 50-60 °C po dobu 6 h. Ochlazená směs se naředí EtOAc (200 ml), promyje se vodu (250 ml), suší se (MgSO4) a rozpouštědla se odpaří ve vakuu. Zbytek se přečistí chromatografií na silikagelové koloně za použití pentanu-EtOAc (100:0 až 95:5) jako eluens za zisku terč.butylesteru N-(cyklohexylmethyl)-N-[(1,4-dichlor-7-isochinolyl)sulfonyl]glycinu (320 mg, 0,66 mmol).

^(CDCls, 400 MHz) δ 1,15-1,3 (3H, m) , 1,3 (9H, s) , 1,5-1,8 (8H, m), 3,15 (2H, d), 4,05 (2H, s), 8,2 (IH, d) , 8,35 (IH, d) , 8,45 (IH, s), 8,85 (IH, s) ppm.

LRMS 487 (MH⁺) , 504, 506, 508 (MNH₄ ⁺) .

Příprava 15: Terč.butylester N-benzylglycinu lBuO,C Br

NH,

IBuOjC^NH

174 • ·· ······ 99 · ···· · · · · · · · • · · · · · · · • · ···· · · · ··· ···· ·· ·♦ ·· ···

Roztok terc.butyl bromacetatu (1,5 ml, 10,1 mmol) v CH2CI2 (10 ml) se přidá po kapkách do míšeného roztoku benzylaminu (10,9 ml, 100 mmol) v CH2CI2 (40 ml) při teplotě 0 °C, směs se mísí po dobu 1 hodiny a potom se zahřeje na teplotu okolí a mísí se -po dobu dalších 23 dnů. Směs se promyje vodou (3x50 ml), ředěnou HCI (1 N) a kombinované vodné výplachy se extrahují Et2O. Organická fáze se promyje nasyceným vodným roztokem NaHCO3, suší se (Na2SOí) a odpaří se ve vakuu. Zbytek se rozpustí v Et2O, zpracuje se roztokem HCI v etheru (0,5 M) a vzniklá sraženina se odebere a rozpustí se v EtOAc. Tento roztok se přefiltruje přes hyflo, částečně se odpaří ve vakuu za zisku husté kaše. Pevný materiál se odfitlruje, promyje se Et2O a potom se suší za zisku terč.butylesteru N-benzylglycinu, hydrochloridu (1,03 g, 4,00 mmol) ve formě bílého pevného materiálu.

¹H(COC1₃, 300 MHz) δ 1,4 (9H, s) , 3,5 (2H, s) , 4,4 (2H, s), 7,3-7,4 (3H, m) , 7,55-7,65 (2H, m) , 10,2-10,3 (2H, br s),

LRMS 222, (MH⁺) , 443 (M₂H⁺) .

Příprava 16:

Terč.butylester N-[(1,4-dichlor-7-isochinolyl)sulfonyl]-N-benzylglycinu

1,4-dichlor-7-isochinolinsulfonylchloride (300 mg, 1,01 mmol) se přidá do míšeného roztoku terč.butylesteru Nbenzylglycinu (310 mg, 1,20 mmol) v CH2CI2 (20 ml) obsahujícího NEt3 (0,35 ml, 2,5 mmol) v atosféře N2 a směs se mísí při teplotě okolí po dobu 3 d. Směs se naředí CH2CI2 a promyje se

175

ředěnou HCI (2 Μ) , nasyceným vodným roztokem NaHCC>3, solankou, suší se (Na₂SO₄) a potom se odpaří ve vakuu. Zbytek se přečistíchromatografií na silikagelové koloně za použití hexanu-EtOAc (90:10) jako eluens za zisku terč.butylesteru N -[(1,4-dichlor-7-isochinolyl)sulfonyl]-N-benzylglycinu (290 mg, 0,60 mmol) ve formě špinavě bílého pevného materiálu, t.t. 134-136 °C.

^(CDCla, 400 MHz) δ 1,3 (9H, s) , 3,9 (2H, s) , 4,55 (2H, s) , 7,25-7,4 (5H, m), 8,25 (ÍH, d), 8,4 (ÍH, d), 8,5 (ÍH, s), 8,9 (ÍH, s) ppm.

LRMS 481 (MH⁺) , 498 (MNH₄ ⁺) .

Analýza: Zjištěno: C, 54,52; H, 4,50; N, 5,77. Vypočítáno pro C₂₂H₂₂C1₂N₂O₄S: C, 54,89; H, 4,61; N, 5,82.

Příprava 17:

Terč.butylester N-(2-methylbenzyl)glycinu

Terc.butyl chloracetat (2,13 g, 14,1 mmol) se přidá do míšeného roztoku 2-methylbenzylaminu (1,71 g, 14,1 mmol) v CH₂C1₂ (20 ml) obsahujícího NEt3 (2,95 ml, 21,2 mmol) v atmosféře N₂ a směs se mísí při teplotě okolí po dobu 17 h. Rozpouštědla se odpaří ve vakuu, zbytek se suspenduje v EtOAc a promyje se vodou, solankou, suší se (MgSO₄) a odpaří se ve vakuu. Zbytek se přečistíchromatografií na silikagelové koloně za použití pentanů-EtOAc (95:5 až 80:20) jako eluens za zisku terč.butylesteru N-(2-methylbenzyl)glycinu (1,29 g, 5,48 mmol).

¹H (CDC1₃, 300 MHz) δ 1,5 (9H, 5), 2,35 (3H, s), 3,3 (2H, s), 3,8 (2H, s), 7,1-7,2 (3H, m) , 7,25-7,3 (ÍH, m) ppm.

LRMS 236 (MH⁺) , 471 (M₂H⁺) .

176

Příprava 18:

terc.butylester N-[(l,4 dichlor-7-isochinolyl)sulfonyl]-N-(2-methylbenzyl)glycinu

1,4-dichlor-7-isochinolinsulfonylchlorid (400 mg, 1,35 mmol) se přidá do míšeného roztoku terč.butylesteru N-(2-methylbenzyl) glycinu (380 mg, 1,61 mmol) v CH₂C1₂ (20 ml) obsahujícího NEt₃ (0,28 mi, 2,5 mmol) v atmosféře N₂ a směs se mísí při teplotě okolí po dobu 18 h. Směs se naředí CH₂C1₂ a promyje se ředěnou HCI (2 Μ), nasyceným vodným roztokem NaHCO₃, solankou, suší se (MgSO₄) a odpaří se ve vakuu. Zbytek se přečistí chromatografií na silikagelové koloně za použití pentanu-EtOAc (100:0 až 90:10) jako eluens za zisku terč.butylesteru N-[(1,4-dichlor-7-isochinolyl)sulfonyl]-N-(2-methylbenzyl)glycinu (480 mg, 0,97 mmol) ve formě bílého pevného materiálu.

t.t. 96-98 °C.

⁷H (CDC1₃, 400 MHz) δ 125 (9H, s) , 2,3 (3H, s), 3,9 (2H, s) ,

4,6 (2H, s), 7,1-725 (4H, m), 8,3 (ÍH, d), 8,4 (ÍH, d), 8,5 (ÍH, s) , 8,9 (ÍH, s) ppm.

LRMS 495 (MH⁺), 512 (MNH?) .

Analýza: Zjištěno: C, 55,70; H, 4,86; N, 5,63. Vypočítáno pro C₂₃H₂₄C1₂N₂O₄S: C, 55,76; H, 4,88; N, 5,65.

Příprava 19:

Terc.butylester N-(2-methoxybenzyl)glycinu

IBuO,C Br

NH, lBuO,C NH ‘OMe

OMe

177 • ·· ·

Roztok terc.butyl bromacetatu (1,5 ml, 10,2 mmol) v CH2CI2 (30 ml) se přidá do míšeného roztoku 2-methoxybenzylaminu (6,88 g, 50,2 mmol) v CH2CI2 (70 ml) v atmosféře N₂ při 0 °C a směs se potom mísí při teplotě okolí po dobu 1 h. Směs se důkladně promyje ředěnou HCI (30 ml, 1 M) a separovaná vodná fáze se extrahuje v CH2CI2, kombinované organické extrakty se promyjí nasyceným roztokem NaHCCb, solankou, suší se (Na_SC>4) a odpaří se ve vakuu. Zbytek se přečistí chromatografií na silikagelové koloně za použití v CH₂Cl2-MeOH (99:1 až 95:5) jako eluens za zisku terc.butylesteru N-(2-methoxybenzyl)-

glycinu (0,90 g, 3,	58 mmol)	ve	formě světle	žlutého oleje.
^XH (CDC1₃, 400 MHz)	δ 1,25	(9n,	s), 2,0 (IH,	br s) , 3,3 (2H
s), 3,8 (2H, s), 3,	85 (3H,	s),	6,85 (IH, d) ,	6,9 (IH, dd) ,
7,2-7,3 (2H, m) ppm
LRMS 252 (MH⁺) , 503	(M₂H⁺) ,	525	(M₂Na⁺) .

Analýza: Zjištěno: C, 66,52; H, 8,54; N, 5,54. Vypočítáno pro C14H21NO3: C, 66,91; H, 8,42; N, 5,57.

Příprava 20:

Terc.butylester N-[(1,4-dichlor-7-isochinolyl)sulfonyl]-N- (2-methoxybenzyl)glycinu

1,4-dichlor-7-isochinolinsulfonylchlorid (500 mg, 1,69 mmol) se přidá do míšeného roztoku terc.butylesteru N-(2methoxybenzyl) glycin (508 mg, 2,02 mmol) v CH2CI2 (30 ml)

178 obsahujícího Net3 (0,35 ml, 2,5 mmol) v atmosféře N2 a směs se mísí při teplotě okolí po dobu 21 h. Směs se naředí CH2CI2 a promyje se ředěnou HCI (2 Μ), nasyceným vodným roztokem NaHCCb, solankou, suší se (Na2SC>4) a odpaří se ve vakuu. Zbytek se přečistí chromatografií na silikagelové koloně za použití hexanů-EtOAc (95:5 až 90:10) jako eluens a potom se trituruje s hexanem-i-Pr20 za zisku terč.butylesteru N-[(1,4-dichlor-7-isochinolyl)sulfonyl]-N-(2-methoxybenzyl)glycinu (501 mg,

1,02 mmol) ve formě žlutého pevného materiálu.

t.t. 106-108	°C.
^XH (CDCls, 400	MHz)	δ 1,3 (9H
(2H, s), 6,8	(IH,	d), 6,9 1
d), 82 (IH, d), 8,	3 (IH, d)

LRMS 511, 513 (MH⁺) , 528 (MNH₄ ⁺)

Analýza: Zjištěno: C, 54,09; H, 4, 78; N, 5,33. Vypočítáno pro C23H24CI2N2O5S: C, 54,01; H, 4,73; N, 5,48.

Příprava 21:

Terč.butylester N-(3-methoxybenzyl)glycinu

IBuO,C Br

OMe

NH,

IBuO/: NH

OMe

Roztok terc.butyl bromacetatu (1,5 ml, 10,1 mmol) v CH2CI2 (30 ml) se přidá po kapkách do míšeného roztoku 3-methoxybenzylaminu (6,86 g, 50 mmol) v CH2CI2 (20 ml) při teplotě 0 °C a směs se zahřeje na teplotu okolí a mísí se po dobu 1,5 h. Přidá se ředěná HCI (30 ml, 1 M) a směs se mísí po dobu 15 min. Vodná fáze se extrahuje CH2CI2 a kombinované organické extrakty se promyjí vodou, solankou, nasyceným vodným roztokem NaHCCb, suší se (MgSO4) a odpaří se ve vakuu. Zbytek se přečistí chromatografií na silikagelové koloně za

179 • · · · · ·

použití CH2Cl2-MeOH (99:1 až90:10) jako eluens za zisku požadovaného aminu ve formě bezbarvého oleje. Zpracováním roztokem HCI v etheru (1 M) se získá terc.butylester N-(3methoxybenzyl)glycin, hydrochlorid (0,83 g, 2,88 mmol), ve formě bílého pevného materiálu.

t.t. 141-142 °C.

IH (CDCls, 300 MHz) δ 1,45 (9H, s), 3,5 (2H, s), 3,85 (3H, s), 4,35 (2H, s), 6,9 (IH, d), 7,1 (IH, d), 7,3 (IH, s), 7,3 7,35 (IH, m) , 10,3 (2H, br s) ppm.

LRMS 252 (MH⁺) , 503 (M₂H⁺) .

Analýza: Zjištěno: C, 58,37; H, 7,75; N, 4,83. Vypočítáno pro C14H21NO3: C, 58,43; H, 7,71; N, 4,87.

Příprava 22:

Terc.butylester N-[(1,4-dichlor-7-isochinolyl)sulfonyl]-N-(3-methoxybenzyl)glycinu

NEt3 (0,59 ml, 4,24 mmol) a potom 1,4-dichlor-7-isochinolinsulfonylchlorid (500 mg, 1,68 mmol) se přidají do míšeného roztoku terč.butylesteru N-(3-methoxybenzyl)glycinu, hydrochloridu (582 mg, 2,02 mmol) v CH2CI2 (25 ml) v atmosféře N2 a směs se mísí při teplotě okolí po dobu 18 h. Směs se naředí CH2CI2 (25 ml) , promyje se ředěnou HCI (x2, 1 Μ) , nasyceným vodným roztokem NaHCO3, solankou, suší se (MgSO4) a odpaří se ve vakuu. Zbytek se extrahuje i-Pr2O, čímž se získá po odstátí sraženina. Bílý pevný materiál se odfiltruje a suší se za zisku terč.butylesteru N-[(l,4-dichlor-7isochinolyl)sulfonyl]-N-(3-methoxybenzyl)glycinu (262 mg, 0,51 mmol).

···· 0 · · 0 • 0 · 0 · ·

000 0 000 0

0 0 0 0 0 ·

0000 00 «0 00 0

180

Druhý podíl (165 mg, 0,32 mmol) se získá odpařením původních kapalin a přečištěním zbytku chromatografií na silikagelové koloně za použití hexanů-EtOAc (80:20).

t.t. 129-131 °C.

¹H(CDC1₃, 400 MHz) δ 1,3 (9H, s) , 3,75 (3H, s) , 3,9 (2H, s) , 4,55 (2H, s), 6,8-6,9 (2H, _m) , 6,85 (ÍH, s) , 7,25 (ÍH, m) , 8,3 (ÍH, d), 8,4 (ÍH, d), 8,5 (ÍH, s) , 8,9 (ÍH, s) ppm.

LRMS 511 (MH⁺), 528 (MNH?) .

Analýza: Zjištěno: C, 54,03; H, 4,79; N, 5,34. Vypočítáno pro C23H24CI2N2O5S: C, 54,01; H, 4,73; N, 5,48.

Příprava 23:

Terč.butylester N-[(1,4-dichlor-7-isochinolyl)sulfonyl]-N-(3-chlorbenzyl)glycinu

3-chlorbenzylchlorid (0,063 ml, 0,50 mmol) se přidá do míšeného roztoku terc.butylesteru N-[(1,4-dichlor-7-isochinolyl)sulfonyl]glycinu (195,5 mg, 0,50 mmol) v DMF (5 ml) obsahujícího K2CO3 (83 mg, 0,60 mmol) a směs se mísí při teplotě okolí po dobu 18 h. Směs se naředí vodou (50 ml), extrahuje se Et2O (3x30 ml) a EtOAc (3x30 ml) a kombinované organické extrakty se potom promyjí vodou, solankou, suší se (Na2SO4) a odpaří se ve vakuu. Pevný materiál se trituruje s hexany, odfiltruje se a suší se za zisku terc.butylesteru N-[(1,4-dichlor-7-isochinolyl)sulfonyl]-N-(3-chlorbenzyl)glycinu (212 mg, 0,41 mmol) ve formě světle žlutého pevného materiálu.

t.t. 141-143 °C.

181 ·· ··· · ^XH (COCI3, 400 MHz) δ 1,3 (9H, s) , 3,95 (2H, d) , 4,5 (2H, 5), 7,15-7,3 (4H, m) , 8,25 (1H, d), 8,35 (1H, d), 8,5 (1H, 5), 8,85 (1H, s) ppm.

LRMS 515, 517 (MH⁺) , 532, 534 (MNH?) .

Analýza: Zjištěno: C, 51,14; H, 4,14; N, 5,31. Vypočítáno pro C22H2iCl'3N₂O₅S: C, 51,22; H, 4,10; N, 5,43.

Příprava 24: Terc.butylester N-(4-methoxybenzyl)glycinu

NH,

IfiuOjC Br

MeO·

Roztok terc.butyl bromacetatu (1,5 ml, 10,2 mmol) v CH2CI2 (30 ml) se přidá po kapkách do míšeného roztoku 4-methoxybenzylaminu (6,89 g, 50,2 mmol) v CH2CI2 (70 ml) při teplotě 0 °C a směs se potom zahřeje na teplotu okolí a mísí se po dobu 1 h. Přidá se ředěná HCI (30 ml, 1 M) a směs se mísí po dobu 10 min. Vodná fáze se extrahuje CH2CI2 a kombinované organické extrakty se promyjí nasyceným vodným roztokem NaHCCh, solankou, suší se (Na₂SO4) a odpaří se ve vakuu. Zbytek se přečistí chromatografií na silikagelové koloně za použití CH₂Cl₂-MeOH (99:1 až 90:10) jako eluens za zisku požadovaného aminu ve formě bezbarvého oleje. Reakcí s roztokem HCI v etheru (1 Μ), po které následuje triturace s Et₂O, se získá terc.butylester N-(4-methoxybenzyl)glycinu, hydrochlorid (148 mg, 0,51 mmol) ve formě oranžového pevného materiálu.

t.t. 133-134 °C.

^XH (CDCIs, 400 MHz) δ 1,45 (9H, s), 3,5 (2H, s), 3,8 (3H, s),

4,3 (2H, s), 6,9 (2H, d), 7,5 (2H, d), 10,2 (2H, br s) ppm. LRMS 252 (MH⁺) , 503 (M2H⁺) , 525 (M2Na⁺) .

Analýza: Zjištěno: C, 58,08; H, 7,71; N, 4,80. Vypočítáno pro • · · ·

182

Ci4H2iNO₃»HCl: C, 58,42; H, 7,71; N, 4,87.

Příprava 25:

terč.butylester N-[(1,4-dichlor-7-isochinolyl)sulfonyl]-N-(4-methoxybenzyl)glycinu • α

NEt3(0,25 ml, 1,78 mmol) a potom 1,4-dichlor-7-isochinolinsulfonylchlorid (210 mg, 0,71 mmol) se přidají do míšeného roztoku terč.butylesteru N-(4-methoxybenzyl)glycinu, hydrochloridu (245 mg, 0,85 mmol) v CH2CI2 (20 ml) v atmosféře N2 a směs se mísí při teplotě okolí po dobu 18 h. Směs se naředí CH2CI2, promyje se ředěnou HCI (2 Μ), nasyceným vodným roztokem NaHCCb, solankou, suší se (Na2SO₄) a odpaří se ve vakuu. Zbytek se přečistí chromatografií na silikagelové koloně za použití hexanu-EtOAc (95:5 až 90:10) jako eluens a potom se trituruje s hexanem-i-Pr2O, za zisku terč.butylesteru N-[(1,4-dichlor-7-isochinolyl)sulfonyl]-N-(4-methoxybenzyl)glycinu (160 mg, 0,31 mmol) ve formě bílého pevného materiálu, t.t. 117-118 °C.

¹H(CDC1₃, 300 MHz) δ 1,3 (9H, s) , 3,8 (3H, s) , 3,9 (2H, s), 4,5 (2H, s), 6,85 (2H, d), 7,2 (2H, d), 8,3 (IH, d), 8,35 (IH, d),

8,5 (IH, s), 8,9 (IH, s) ppm.

LRMS 511 (MH⁺) , 528 (MNH⁺) .

Analýza: Zjištěno: C, 53,90; H, 4,59; N, 5,34. Vypočítáno pro C23H₂₄C1₂N2O5S: C, 54,01; H, 4,73; N, 5,48.

Příprava 26:

Terč.butylester N-[(1,4-dichlor-7-isochinolyl)sulfonyl]-N-(2-pyridylmethyl)glycinu

183

2-(chlormethyl)pyridin, hydrochlorid (246 mg, 1,5 mmol) se přidá do míšeného roztoku terč.butylesteru N-[(1,4-dichlor-7-isochinolyl)sulfonyl]glycinu (391 mg, 1,0 mmol) a bezvodého K2CO3(415 mg, 3,0 mmol) v DMF (5 ml) v atmosféře N2 při teplotě 23 °C a směs se mísí po dobu 18 h. Chladná směs se azeotropuje s xylenem, ředí se EtOAc, promyje se vodu a organické extrakty se potom suší (MgSO₄) a odpaří se ve vakuu. Zbytek se přečistí chromatografií na silikagelové koloně za použití pentanu-EtOAc (100:0 až 50:50) jako eluens, za zisku terč.butylesteru N-[(1,4-dichlor-7-isochinolyl)sulfonyl]-N-(2-pyridylmethyl)glycinu (400 mg, 0,83 mmol) ve formě bílého pevného materiálu.

*H (CDC13,	400	MHz)	δ	1,	3 (9H, s)	, 4,	1 (2H, s), 4,7 (2H,	s), 7,1
(IH, m),	7,5	(IH,	d)	t	7,7 (IH,	dd) ,	8,25 (IH, d), 8,35	(IH,
d), 8,45	(IH,	m) ,	8,	5	(IH, s),	8,9	(IH, s) ppm.
LRMS 482,	484	(MH⁺	) ·

Příprava 27:

Terč.butylester N-[(1,4-dichlor-7-isochinolyl)sulfonyl]-N-(3-pyridylmethyl)glycinu

3-(chlormethyl)pyridin, hydrochlorid (246 mg, 1,5 mmol) se přidá do míšeného roztoku terč.butylesteru N-[(1,4-dichlor-7-isochinolyl)sulfonyl]glycinu (391 mg, 1,0 mmol) a bezvodého K2CO3 (416 mg. 3,0 mmol) v DMF (5 ml) v atmosféře N2 při ·· ···· teplotě 23 °C a směs se mísí po dobu 18 h. Chladná směs se azeotropuje s xylenem, naředí se EtOAc, promyje se vodou a organické extrakty se suší (MgSO₄) a odpaří se ve vakuu. Zbytek se přečistí chromatografií na silikagelové koloně za použití pentanu-EtOAc (100:0 až 50:50) jako eluens za zisku terč.butylesteru N-[(1,4-dichlor-7-isochinolyl)sulfonyl]-N-(3-pyridylmethyl)glycinu (400 mg. 0,83 mmol) ve formě bílého pevného materiálu.

^XH (CDCI3,	400	MHz)	δ	1,3 (9H, s), 4,1 (2H,	d), 4,7 (2H,	s), 7,1
(IH, m) ,	7,5	(IH,	d)	, 7,7 (IH, dd), 8,25	(IH, d), 8,35	(IH,
d), 8,45	(IH,	m) ,	8,	5 (III, s), 8,9 (IH,	s) ppm.
LRMS 482,	484	(MH⁺	) ·

Příprava 28:

Terc.butylester N-[(1,4-dichlor-7-isochinolyl)sulfonyl] -N-(4-pyridylmethyl)glycinu

4-(chlormethyl)pyridin, hydrochlorid (246 mg, 1,5 mmol) se přidá do míšeného roztoku terč.butylesteru N-[(1,4-dichlor-7-isochinolyl)sulfonyl]glycinu (391 mg. 1,0 mmol) a bezvodého K2CO3(416 mg, 3,0 mmol) v DMF (5 ml) v atmosféře N2 při teplotě 23 °C a směs se mísí po dobu 18 h. Chladná směs se azeotropuje s xylenem, naředí se EtOAc, promyje se vodou, a organické extrakty se suší (MgSO₄) a odpaří se ve vakuu. Zbytek se přečistí chromatografií na silikagelové koloně za použití pentanu-EtOAc (100:0 až 50:50) jako eluens za zisku terč.butylesteru N-[(1,4-dichlor-7-isochinolyl)sulfonyl]-N-(4 -pyridylmethyl)glycinu (397 mg, 0,82 mmol) ve formě bílého pevného materiálu.

185 • Φ φφφφ ·· • · « • · · « · · • · · « • · · · ·· ·· ^ΧΗ (CDCla, 400 MHz) δ 1,3 (9Η, s) , 4,0 (2Η, d) , 4,6 (2Η, s) ,

7,3 (2Η, d), 8,25 (IH, dd), 8,4 (IH, d), 8,5 (IH, s), 8,6 (2Η, d), 8,9 (IH, d) ppm.

LRMS 482, 484 (ΜΗ⁺) .

Příprava 29: Terč.butylester N-[(IR)-1-fenylethyl)]glycinu

ΙΒυΟ,Ο'^'Βί

NH,

Cr”'’

Me

Roztok terc.butyl bromacetatu (5,0 g, 25,6 mmol) v CH2CI2 (5 ml) se přidá po kapkách do míšeného roztoku (+)-(R)-a-methylbenzylaminu (4,65 g, 38,5 mmol) v CH2CI2 (40 ml) při 0 °C a směs se zahřeje na teplotu okolí a mísí se po dobu 18 h. Směs se naředí CH2CI2O, promyje se vodou, ředěnou HCI (1 M) a potom se suší (MgSO₄) . Rozpouštědla se odpaří ve vakuu za zisku terč.butylesteru N-[(IR)-1-fenylethyl)]glycinu (3,15 g, 13,4 mmol) ve formě bílého prášku.

t.t. 193-197 °C.

¹H(CDC1₃, 300 MHz) δ 1,4 (9H, s), 1.95 (3H, d) , 3,3 (IH, d) ,

3,6 (IH, d), 4,6 (IH, q) , 5,3 (IH, s), 7,3 7,45 (3H, m) , 7,5 7,65 (2H, m).

LRMS 236 (MH⁺) .

Příprava 30:

Terč.butylester N-[(1,4-dichlor-7-isochinolyl)sulfonyl]-N-[(IR)-1-fenylethyl)]glycinu

α

186

Směs NEt3 (0,59 ml, 4,21 mmol), 1,4-dichlor-7-isochinolinsulfonylchloridu (500 mg, 1,69 mmol) a terč.butylesteru N-[(IR)-1-fenylethyl)]glycinu (476 mg, 2,02 mmol) v CH2CI2 (8 ml) se mísí v atmosféře N₂ při teplotě okolí po dobu 18 h. Směs se naředí CH₂C1₂ (50 ml), promyje se ředěnou HCI (2 Μ) , nasyceným vodným roztokem NaHCCb, solankou, suší se (Na₂SO4) a odpaří se ve vakuu. Zbytek se přečistí chromatografií na silikagelové koloně za použití pentanu-EtOAc (90:10) jako eluens za zisku terč.butylesteru N-[(1,4-dichlor-7-isochinolyl)sulfonyl]-N-[(IR)-1-fenylethyl)]glycinu (490 mg, 0,99 mmol) ve formě bezbarvého oleje.

^XH (CDCI3, 300 MHz) 8 1,3 (9H, s), 1,4 (3H, d), 3,9 (ÍH, d) ,

4,1 (ÍH, d), 5,15 (ÍH, q), 7,17,25 (5H, m), 8,4 (ÍH, d), 8,5 (ÍH, d), 8,65 (ÍH, s), 8,7 (ÍH, d) ppm.

LRMS 495 (MH⁺) , 512 (MNH₄ ⁺) .

Příprava 31: Terč.butylester N-[ (1S)-1-fenylethyl)]glycinu

Bf

NH,

Roztok terc.butyl bromacetatu (5,0 g, 25,6 mmol) v CH₂C1₂ (5 ml) se přidá po kapkách do míšeného roztoku (-)-(S)-a-methylbenzylaminu (4,65 g, 38,5 mmol) v CH₂C1₂ (40 ml) při teplotě 0 °C a směs se potom zahřeje na teplotu okolí a mísí se po dobu 18 hodin. Směs se naředí CH₂C1₂, promyje se vodou, ředěnou HCI (1 M) a potom se suší (MgSCH) . Rozpouštědla se odpaří ve vakuu za zisku terč.butylesteru N-[(1S)-1187 ·· ··♦·

-fenylethyl)]glycinu (2,02 g, 8,6 mmol) ve formě bílého prášku.

t.t. 197-202 °C.

^XH (CDCla, 300 MHz) δ 1,4 (9H, s) , 1,9 (3H, d), 3,3 (1H, d), 3,55 (1H, d), 4,5 (1H, q), 5,3 (1H, s), 7,3-7,45 (3H, m), 7,57,6 (2H, m) ppm.

LRMS 236 (MH⁺) .

Příprava 32:

Terč.butylester N-[(1,4-dichlor-7-isochinolyl)sulfonyl]-N-[(1S) -1-fenylethyl)]glycinu

Směs NEt3(0,59 ml, 4,21 mmol), 1,4-dichlor-7-isochinolinsulfonylchloridu (500 mg, 1,69 mmol) a terč.butylesteru N-[(1S)-1-fenylethyl)]glycinu (476 mg, 2,02 mmol) v CH2CI2 (8 ml) se mísí v atmosféře N2 při teplotě okolí po dobu 24 h. Směs se naředí CH2CI2 (50 ml), promyje se ředěnou HCI (2 Μ) , nasyceným vodným roztokem NaHCO3, solankou, suší se (Na2SO4) a odpaří se ve vakuu. Zbytek se přečistí chromatografií na silikagelové koloně za použití pentanu-EtOAc (90:10) jako eluens za zisku terč.butylesteru N-[(1,4-dichlor-7-isochinolyl)sulfonyl]-N-[(1S)-1-fenylethyl)]glycinu (420 mg, 0,85 mmol) ve formě bezbarvého oleje.

¹H(CDCl3, 300 MHz) δ 1,3 (9H, s) , 1,4 (3H, d) , 3,9 (1H, d) , 4,1 (1H;, d), 5,15 (1H, q), 7,17,25 (5H, m) , 8,4 (1H, d) , 8,5 (1H, d), 8,65 (1H, s), 8,7 (1H, d) ppm.

LRMS 495 (MH⁺) , 512 (MNH₄ ⁺) .

·· ····

188 ··· ·· • 4 • ····

Příprava 33: terč.butylester N-benzyl-l-alaninu

IBuOjCď^NH,

CHO

Me i

lBuO,cď>NH

Benzaldehyd (2,69 ml, 26,4 mmol) se přidá k míšené kaši terč.butylesteru L-alaninu (4,0 g, 22,0 mmol) a NEt3 (3,07 ml, 22,C mmol) v CH2CI2 (70 ml) př teplotě 23 °C a směs se mísí po dobu 10 min. Postupně se přidá NaBH(OAc)3 (6,44 g, 30,4 mmol) a směs se mísí při teplotě 23 °C po dobu 24 h. Směs se promyje vodou, suší se (MgSOd a rozpouštědla se odpaří ve vakuu.

Zbytek se přečistí chromatografií na silikagelové koloně za použití CH2Cl2“MeOH (99: 1 - 95:5) jako eluens za zisku za zisku terč.butylesteru N-benzyl-L-alaninu (3,97 g, 16,9mmol) ve formě bezbarvého oleje.

^XH (CDCI3, 300 MHz) δ 1,3 (3H, d), 1,5 (9H, s), 2,1 (IH, s),

3,25 (IH, q) , 3,7 (IH, d), 3,8 (IH, d), 7,2-7,4 (5H, m) ppm. LRMS 236 (MH⁺) , 258 (MNa⁺) .

Příprava 34:

Terč.butylester N-benzyl-N-[(1,4-dichlor-7-isochinolyl)sulfonyl]-l-alaninu

Roztok 1,4-dichlor-7-isochinolinsulfonylchloridu (600 mg, 2,02 mmol) v CH2CI2 (3 ml) se přidá do míšeného roztoku terč.butylesteru N-benzyl-l-alaninu (571 mg, 2,43 mmol) a NEt3 (0,70 ml, 5,06 mmol) v CH2CI2 (3 ml) a směs se mísí při teplotě okolí po dobu 24 h. Směs se naředí CH2CI2 (50 ml), promyje se

κ¹

190 ^ΧΗ (CDCla, 300 MHz) δ 1,2 (9Η, s), 1,4 (3Η, d), 4,0 (IH, dq),

5,4 (IH, d), 8,25 (IH, d), 8,4 (IH, d), 8,5 (IH, s), 8,9 (IH, s) ppm.

LRMS 405 (MH⁺) .

Analýza: Zjištěno: C, 47,57; H, 4,39; N, 6,72. Vypočítáno pro C16H18CI2N2O4S: C, 47,42; H, 4,48; N, 6,91.

Příprava 36:

Methylester N- [(1,4-dichlor-7-isochinolyl)sulfonyl]-D-alaninu

Roztok 1,4-dichlor-7-isochinolinsulfonylchloridu (500 mg, 1,69 mmol) v CH2CI2 (3 ml) se přidá do míšeného roztoku methylesteru D-alaninu (247 mg, 1,77 mmol) a NEt3 (0,82 ml, 5,9 mmol) v CH2CI2 (6 ml) a směs se mísí při 23 °C po dobu 16 h. Směs se naředí CH2CI2, promyje se ředěnou HCI (2 Μ), nasyceným vodným roztokem NaHCCb, solankou, suší se (MgSC>4) a odpaří se ve vakuu. Zbytek se přečistí chromatografií na silikagelové koloně za použití pentanu-EtOAc (90:10 až 50:50) jako eluens za zisku terc.butylesteru N-[(1,4-dichlor-7-isochinolyl)sulfonyl]-D-alaninu (420 mg, 1,16 mmol) ve formě bílého prášku.

t.t. 150-152 °C.

^XH (CDCI3, 300 MHz) δ 1,45 (3H, d), 3,55 (3H, s), 4,15 (IH, dq), 5,4 (IH, d), 8,2 (IH, d), 8,4 (IH, d), 8,5 (IH, s), 8,9 (IH, s) ppm.

LRMS 363, 365 (MH⁺) .

Analýza: Zjištěno: C, 42,97; H, 3,29; N, 7,42. Vypočítáno pro C13H12CI2N2O4S: C, 42,99; H, 3,33; N, 7,71.

Příprava 37:

191

Terč.butylester N-[(1,4-dichlor-7-isochinolyl)sulfonyl]-1-valinu

Net3 (0,59 ml, 4,2 mmol) se přidá do míšené směsi 1,4-dichlor-7-isochinolinsulfonylchloridu (500 mg, 1,69 mmol) a terč.butylesteru L-valinu (354 mg, 1,69 mmol) v CH2CI2 (25 ml) a směs se mísí při 23 °C po dobu 3 d. Směs se promyje ředěnou HCI (2x20 ml, 1 Μ) , nasyceným vodným roztokem NaHCC>3, solankou, suší se (MgSOí) a odpaří se ve vakuu. Zbytek se extrahuje s hexan za krystalizace při odstátí, za zisku terč.butylesteru N-[(1,4-dichlor-7-isochinolyl)sulfonyl]-l-valinu (463 mg, 1,07 mmol) ve formě bílého pevného materiálu.

t.t. 127-129 °C.

¹H(CDC1₃, 300 MHz) δ 0,9 (3H, d) , 1,0 (3H, d) , 1,1 (9H, s) , 2,0-2,2 (IH, m), 3,8 (IH, dd), 5,25 (IH, d), 8,2 (IH, d), 8,35 (IH, d), 8,5 (IH, s), 8,9 (IH, s) ppm.

LRMS 433, 435 (MH⁺) , 450, 452 (MNH₄ ⁺) .

Analýza: Zjištěno: C, 49,86; H, 5,13; N, 6,40. Vypočítáno pro C18H22CI2N2O4S: C, 49,89; H, 5,18; N, 6,46.

Příprava 38:

Terč.butylester N-[(1,4-dichlor-7-isochinolyl)sulfonyl]-D-valinu

Terč.butylester D-Valine se připraví způsobem popsaným dříve, viz: Shepel. Ε. N.; Ivanov, S.; Ryabova, I.D.; Miroshnikov. A. I.; Ivanov. V. T.; Ovchinnikov. Yu A. Bioorg.

192 • ·« • · · · · • · · • · · · ··*···· ··

Khim. 1972, 2, 581-593.

Terc.butylester D-Valinu (354 mg, 1,69 mmol) a potom NEt3 (0,59 ml, 4,2 mmol) se přidají do míšeného roztoku 1,4-dichlor-7-isochinolinsulfonylchloridu (500 mg, 1,69 mmol) v CH2CI2 (20 ml) a směs se mísí při 23 °C po dobu 16 h. Směs se naředí CH2CI2 (50 ml) , promyje se nasyceným vodným roztokem NaHCO3, vodou, vodným roztokem kyseliny citrónové (1 Μ), vodou, solankou, suší se (MgSOí) a odpaří se ve vakuu. Zbytek se rozpustí v i-Pr2O a přidá se hexan, což způsobí vznik sraženiny. Rozpouštědla se odpaří ve vakuu a pevný materiál se trituruje s hexanem za zisku terč.butylesteru N-[(l,4-dichlor-7-isochinolyl)sulfonyl]D-valinu (532 mg, 1,22 mmol) ve formě bílého pevného materiálu. Analytický vzorek se získá rekrystalizaci z hexanu.

t.t. 117-119 °C.

^XH (CDCI3, 400 MHz) δ 0,9 (3H, d) , 1,0 (3H, d) , 1,1 (9H, s) , 2,0-2,2 (IH, m), 3,8 (IH, dd), 5,3 (IH, d) , 8,2 (IH, d), 8,35 (IH, d), 8,5 (IH, s), 8,9 (IH, s) ppm.

LRMS 433, 435 (MH⁺) .

Analýza: Zjištěno: C, 49,99; H, 5,28; N, 6,34. Vypočítáno pro C18H22CI2N2O4S: C, 49,89; H, 5,12; N, 6,46.

Příprava 39:

Terc.butylester N-[(1,4-dichlor-7-isochinolyl)sulfonyl]-Dterc-leucinu

Směs terč.butylesteru D-terc-leucinu, hydrochloridu (250 mg, 1,12 mmol), NEt3 (0,40 ml, 2,87 mmol) a 1,4-dichlor-7-isochinolinsulfonylchloridu (330 mg, 1,11 mmol) v CH2CI2 (20

193 ···· • 4 · · · •4 4 4 4 4 •• 4 4 4 4 ·· 44 44 ml) se mísí při 23 °C po dobu 16 h. Směs se naředí CH2CI2 (50 ml), promyje se vodou, vodným roztokem kyseliny citrónové (1 Μ) , vodou, nasyceným vodným roztokem NaHCCb, solankou, suší se (MgSO₄) a odpaří se ve vakuu. Zbytek se přečistí chromatografi na silikagelové koloně za použití hexanu-EtOAc (90:10) jako eluens za zisku terč.butylesteru N-[(1,4-dichlor-7-isochinolyl)sulfonyl]-D-terc-leucinu (250 mg, 0,56 mmol) ve formě bílé pěny.

t.t. 140-142°C.

^XH (CDCI3, 400 MHz)	δ 1,0	(9H, s), 1,05 (9H, s)	, 3,6 (IH,	d) ,
5,35 (IH, d), 8,2	(IH, d)	, 8,35 (IH, d), 8,45	(IH, s), 8,	85
(IH, s).
LRMS 447, 449, 451	(MH⁺) .
Analýza: Zjištěno:	C, 51,	03; H, 5,41; N, 6,13.	Vypočítáno	pro
Ci9H₂₄Cl2N₂O₄S: C, 51,01; H	, 5,41; N, 6,26.

Příprava 40:

Terč.butylester N-[(1,4-dichlor-7-isochinolyl)sulfonyl]-1-fenylalaninu

Směs terč.butylesteru L-fenylalaninu (352 mg, 1,37 mmol), NEt3 (0,41 ml, 2,97 mmol) a 1,4-dichlor-7-isochinolinsulfonylchloridu (399 mg, 1,35 mmol) v CH.2CI2 (10 ml) se mísí při 23 °C po dobu 20 h. Rozpouštědla se odpaří ve vakuu a zbytek se suspenduje v EtOAc. Tento roztok se promyje vodou, solankou, suší se (MgSO₄) a odpaří se ve vakuu. Zbytek se přečistí chromatografií na silikagelové koloně za použití pentanu-EtOAc (90: 10 až 70:30) jako eluens za zisku • · ·

194 • · · < • · « »··· ·· terč.butylesteru N-[(1,4-dichlor-7-isochinolyl)sulfonyl]-1-fenylalaninu (450 mg, 0,94 mmol) ve formě bílé krystalizující pěny.

^XH(CDC1₃, 300 MHz) δ 1,2 (9H, s) , 2,95 (IH, dd) , 3,1 (IH, dd) , 4,1 (IH, m) , 5,3 (IH, d) , 7,0-7,2 (5H, m), 8,1 (IH, d), 8,25 (IH, d) , 8,5 (IH, s), 8,75 (IH, d) ppm.

LRMS 481 (MH⁺) , 498 (MNH₄ ⁺) .

Příprava 41:

Terč.butylester N-(benzyloxykarbonyl)-O-methyl-D-serinu

MeO·

MeO\

X χ

IBuOjCOn o

H

Kondenzovaný plynný isobutylen (35 ml) se přidá do roztoku N-(benzyloxykarbonyl)-O-methyl-D-serinu ve formě dicyklohexylaminové soli (2,5 g, 5,76 mmol) v CH2CI2 (35 ml) při -78 °C v ocelové nádobě. Přidá se konc. H2SO4 (0,5 ml), nádoba se uzavře a směs se zahžeje na 23 °C [Pozor: Tlak].

Směs se mísí při 23 °C po dobu 6 dnů, nádoba se otevře a nadbytek isobutylenu se nechá odpařit. Směs se potom vnese do vodného roztoku NaHCO3 (30 ml, 10 %) , extrahuje se CH2CI2 (3x30 ml) a kombinované organické extrakty se suší (Na2SO4) a odpaří se ve vakuu. Zbytek se přečistí chromatografií na silikagelové koloně za použití hexanů-EtOAc (80:20) jako eluens za zisku terč.butylesteru N(benzyloxykarbonyl)-O-methyl-D-serinu (1,2 g, 3,88 mmol) ve formě bezbarvého oleje.

^XH(CDC1₃, 400 MHz) δ 1,45 (9H, s) , 3,35 (3H, s) , 3,6 (IH, dd) , 3,75 (IH, dd), 4,35 (IH, br d), 5,1 (2H, s), 5,6 (IH, br d), .* .··.···· : .···;: ·.

195

8,4-8,9 (5H, m) ppm.

LRMS 310 (MH⁺) , 327 (MNH?) Příprava 42: Terc.butylester O-Methyl-D-serinu “Π

IBuO,C^zZO^N <

MeOx.

ΙΒυΟ,Ο-^ο NH,

Roztok terč.butylesteru N-(benzyloxykarbonyl)-O-methyl-Dserinu (1,15 g, 3,72 mmol) v MeOH (20 ml) se hydrogenuje přes 10% Pd/C (150 mg) v atmosféře H₂ (15 psi) při teplotě 23 °C po dobu 18 h. Směs se přefiltruje a filtrát se odpaří ve vakuu. Zbytek se rozpustí v Et₂O, přidá se roztok HCI v Et₂O (1 M) a rozpouštědla se odpaří ve vakuu za zisku bíléhoho pevného materiálu a tento materiál se trituruje s hexanem za zisku terč.butylesteru O-methyl-D-serinu, hydrochloridu (0,62 g,

2,90 mmol).

t.t. 167-169 °C (za rozkladu).

^XH (CDC1₃, 400 MHz) δ 1,5 (9H, 5), 1,8-2,2 (ÍH, br s) , 3,4 (3H, s), 3,9 (ÍH, dd), 4,0 (ÍH, dd), 4,2 (ÍH, t), 8,4-8,9 (3H, br s) ppm.

LRMS 17 6 (MH⁺) .

Analýza: Zjištěno: C, 45,26; H, 8,59; N, 6,39. Vypočítáno pro C₈Hi7NO₃»HCl: C, 45,39; H, 8,57; N, 6,62.

Příprava 43:

Terc.butylester N-[(1,4-díchlor-7-isochinolyl)sulfonyl]-O-methyl-D-serinu

MeOs

Ί ιβυο/τοΝΗ, asó.

xíúxiN

196

4444

Směs terč.butylesteru O-methyl-D-serinu, hydrochloridu (300 mg, 1,42 mmol), NEt3 (0,50 ml, 3,6 mmol) a 1,4-dichioro 7-isochinolinsulfonylchloridu (420 mg, 1,42 mmol) v CH2CI2 (20 ml) se mísí při teplotě 23 °C po dobu 3 d. Směs se naředí CH2CI2 (30 ml), promyje se vodou, vodným roztokem kyseliny citrónové (1 M), vodou, nasyceným vodným roztokem NaHCCb, solankou, suší se (MgSO₄) a odpaří se ve vakuu. Zbytek se přečistíchromatografií na silikagelové koloně za použití hexanu-EtOAc (80:20) jako eluens za zisku terč.butylesteru N-[(1,4-dichlor-7-isochinolyl)sulfonyl]-O-methyl-D-serinu (356

mg, 0,82 mmol)	ve	formě bílého	pevného materiálu.
t.t. 135-137 ⁰	C.
¹H (CDCI3, 400	MHz)	δ 1,25	(9H,	s), 3,3 (3H, s), 3,6	(IH,	dd) .
3,7 (IH, dd),	4,1	(IH, br	s) ,	5,6 (IH, br d) , 8,25	(IH,	d) ,
8,35 (IH, d),	8,5	(IH, s)	, 8,	9 (IH, s) ppm.

LRMS 435, 437 (MH⁺) , 452, 454 {MNH?) .

Analýza: Zjištěno: C, 47,04; H, 4,62; N, 6,42. Vypočítáno pro C17H20CI2N2O5S: C, 46, 90; H, 4,63; N, 6,44.

Příprava 44:

Di-terc.butylester kyseliny N-[(1,4-dichlor-7-isochinolyl)sulfonyl]-D-asparagové

Směs di-terc.butylesteru kyseliny D-asparagové (462 mg,

1,64 mmol), NEt3 (0,50 ml, 3,6 mmol) a 1,4-dichlor-7-isochinolinsulfonylchloridu (400 mg, 1,35 mmol) v CH2CI2 (30 ml) se mísí při 23 °C po dobu 18 h. Směs se naředí CH2CI2 (30 ml), promyje se ředěnou HCI (2 Μ), nasyceným vodným roztokem NaHCO3, solankou, suší se (MgSO₄) a odpaří se ve vakuu za zisku di-terc.butylesteru kyseliny N-[(1,4-dichlor-7-isochinolyl)-

197 sulfonyl]-D-asparagové (520 mg, 1,03 mmol) ve formě bílého pevného materiálu.

·· ····

t.t. 106-110°C.

^XH (CDC1₃, 400 MHz) δ 1,2 (9H, s), 1,4 (9H, s), 2,7-2,8 (ÍH, dd), 2,8-2,9 (ÍH, dd), 4,15 (ÍH, m), 8,2 (ÍH, d), 8,4 (ÍH, d), 8,5 (ÍH, s), 8,9 (ÍH, s) ppm.

LRMS 507 (MH⁺) .

Příprava 45:

Terč.butylester N-[(1,4-dichlor-7-isochinolyl)sulfonyl]-1-prolinu

Směs terc.butylesteru L-prolinu, hydrochloridu (335 mg,

1,61 mmol), NEt3 (0,53 ml, 3,78 mmol) a 1,4-dichlor-7-isochinolinsulfonylchloridu (449 mg, 1,51 mmol) v CH2CI2 (10 ml) se mísí při 23 °C po dobu 20 h. Rozpouštědla se odpaří ve vakuu a zbytek se suspenduje v EtOAc. Tento roztok se promyje vodou, solankou, suší se (MgSCH) a odpaří se ve vakuu. Zbytek se přečistí chromatografií na silikagelové koloně za použití pentanu-EtOAc (90:)0 až 70:30) jako eluens za zisku terc.butylesteru N-[(1,4-dichlor-7-isochinolyl)sulfonyl]-1prolinu (543 mg, 1,26 mmol) ve formě bílého pevného materiálu.

^XH (CDCls, 300 MHz) δ 1,45 (9H, s) , 1,8-2,1 (3H, m) , 2,1-2,3 (ÍH, m) , 3,4-3,6 (2H, m) , 4,4 (ÍH, dd) , 8,3 (ÍH, d) , 8,4 (ÍH, d) , 8,5 (ÍH, s), 8,9 (ÍH, d) ppm.

LRMS 431 (MH⁺) , 448, 450 (MNH?) .

• 9

198 ·· • ·

Analýza: Zjištěno: C, 50,09; H, 4,62; N, 6,37. Vypočítáno pro

C18H20CI2N2O4S: C, 50,12; H, 4,67; N, 6,49.

Příprava 46:

Terč.butylester N- [(1,4-dichlor-7-isochinolyl)sulfonyl]-D-prolinu

• · • · aso.

Směs terč.butylesteru D-prolinu, hydrochloridu (340 mg,

1,64 mmol), NEt3 (0,50 ml, 3,6 mmol) a 1,4-dichlor-7-isochinolinsulfonylchloridu (400 mg, 1,35 mmol) v CH2CI2 (30 ml) se mísí při 23 °C po dobu 20 h. Směs se naředí CH2CI2 (50 ml), promyje se ředěnou HCI (2 Μ) , nasyceným vodným roztokem NaHCO3, solankou, suší se (MgSCU) a odpaří se ve vakuu za zisku terč.butylesteru N-[(1,4-dichlor-7-isochinolyl)sulfonyl]-D-prolinu (550 mg, 1,28 mmol) ve formě bílého pevného materiálu.

t.t. 80-82 °C.

^XH (CDCI3, 400 MHz) δ 1,4 (9H, s), 1,9-2,0 (3H, m), 2,2 (ÍH, m), 3,4-3,6 (2H, m) , 4,4 (ÍH, m), 8,3 (ÍH, d) , 8,4 (ÍH, d), 8,5 (ÍH, s), 8,9 (ÍH, s) ppm.

LRMS 431 (MH⁺) , 448 (MNH₄ ⁺) .

Analýza: Zjištěno: C, 49,76; H, 4,75; N, 6,39. Vypočítáno pro C18H20CI2N2O4S: C, 50,12; H, 4,67; N, 6,49.

Příprava 47:

1,4-dichlor-7-{[(2R)-(hydroxymethyl)-1-pyrrolidyl]sulfonyl}isochinolin

HO'

Cl

HO ·« o · • 9999

199

999 ·· 9999

9 • · • · · • · • 9

9 * 9 • 9

9 9

9

Směs (R)-2-pyrrolidinmethanolu (1,1 ml, 11,0 mmol), NEt3(l,5 ml, 20 mmol) a 1,4-dichlor-7-isochinolinsulfonylchloridu (3,0 g, 10 mmol) v CH2CI2 (50 ml) se mísí při 23 °C po dobu 30 min. Směs se naředí CH2CI2 (50 ml), promyje se vodným roztokem kyseliny citrónové (1 N), vodou, solankou, suší se (MgSCH) a odpaří se ve vakuu za zisku 1,4-dichlor-7-{[(2R)-(hydroxymethyl)-1-pyrrolidyl]sulfonyl}isochinolinu (4,0 g, 11 mmol) ve formě bílého pevného materiálu, t.t. 167,5-168,5 °C.

¹H(CDC1₃, 400 MHz) δ 1,5-1,55 (1H, m), 1,6-2,0 (3H, m) , 2,5 (1H, br t), 3,3-3,4 (1H, m) , 3,5-3,6 (1H, m), 3,7-3,8 (3H, m) , 8,25 (1H, d), 8,4 (1H, d), 8,5 (1H, s), 8,9 (1H, s) ppm.

LRMS 361, 363 (MH⁺, 378 (MNH?) , 383 (MNa⁺) .

Analýza: Zjištěno: C, 46,65; H, 3,91; N, 7,61. Vypočítáno pro C14H14CI2N2O3S: C, 46,55; H, 3,91; N, 7,75.

Příprava 48:

Methy1-2-{[(1,4-dichlor-7-isochinolyl)sulfonyl]amino}isobutyrat

Směs methyl-2-aminoisobutyratu (310 mg, 2,02 mmol), Net3 (0,70 ml, 5,05 mmol) a 1,4-dichlor-7-isochinolinsulfonylchloridu (500 mg, 1,69 mmol) v CH2CI2 (30 ml) se mísí při 23 °C po dobu 17 h. Směs se naředí CH2CI2 (50 ml), promyje se ředěnou HCI (2 Μ), nasyceným vodným roztokem NaHCO3, solankou, suší se (Na2SO4) a odpaří se ve vakuu. Zbytek

200

se přečistí chromatografií na silikagelové koloně za použití hexanu-EtOAc (70:30) jako eluens za zisku methyl-2-{[(1,4-dichlor-7-isochinolyl)sulfonyl)amino}isobutyratu (210 mg, 0,56 mmol) ve formě bílého pevného materiálu.

t.t. 159,5-161 °C.

¹H(CDC1₃, 400 MHz) δ 1,5 (6H, s) , 3,7 (3H, s) , 5,55 (IH, s) , 8,25 (IH, d), 8,35 (IH, d) , 8,5 (IH, s), 8,9 (IH, s) ppm. LRMS 377 (MH⁺) .

Analýza: Zjištěno: C, 44,24; H, 3,72; N, 7,29. Vypočítáno pro C14H14CI2N2O4S: C, 44,57; H, 3,74; N, 7,43.

Příprava 49:

2-{[(1,4-dichlor-7-isochinolyl)sulfonyl]amino}-2-methylpropanamid

Směs 2-amino-2-methylpropanamidu (200 mg, 1,96 mmol), NEt3 (0,69 ml, 5,0 mmol) a 1,4-dichlor-7isochinolinsulfonylchloridu (580 mg, 1,96 mmol) v CH2CI2 (20 ml) se mísí při 23 °C po dobu 17 h. Směs se naředí CH2CI2 (50 ml), promyje se vodou, vodným roztokem kyseliny citrónové (1 Ν), vodou, solankou, suší se (MgSCH) a odpaří se ve vakuu. Zbytek se přečistí chromatografií na silikagelové koloně za použití CH2Cl2~MeOHO, 880 NH3 (90:10:1) jako eluens za zisku 2{[(1,4-dichlor-7-isochinolyl)-sulfonyl]amino}-2-methylpropanamidu (228 mg, 0,62 mmol) ve formě bílého pevného materiálu.

t.t. 220-222 °C.

^XH (d₄- MeOH, 400 MHz) δ 1,4 (6H, s), 3,3 (2H, s), 8,4 (IH, dd), 8,45 (IH, d), 8,55 (IH, d) , 8,9 (IH, s) .

201

LRMS 362, 364 (MH⁺) , 379, 381 (MNH?) .

Analýza: Zjištěno: C, 42,81; H, 3,70; N, 11,15. Vypočítáno pro

CnHiaClzNgOaS^O, 25 H₂O: C, 42,58; H, 3,71; N, 11,46.

Příprava 50: Ethyl 1-aminocyklobutankarboxylat

HOjC NH, ElOjC NH,

Roztok kyseliny 1-aminocyklobutankarboxylové (500 mg, 4,34 mmol) v EtOH (10 ml) se nasytí HCI plynem a směs se mísí při 23 °C po dobu 4 d. Rozpouštědla se odpaří ve vakuu, směs se azeotropuje s PhMe a CH₂C1₂, za zisku ethyl 1

-aminocyklobutankarboxylatu, hydrochloridů (754 mg, 4,20 mmol) ve formě špinavě bílého pevného materiálu.

^XH (DMSO-de, 300 MHz) δ 1,25 (3H, t) , 1,9-2,1 (2H, m) , 2,3-2,5 (4H, m), 4,2 (2H, q), 8,8 (2H, br s) ppm.

LRMS 287 (M₂H⁺) .

Příprava 51 :

Ethyl-l-{[(1, 4-dichlor-7-isochinolyl) sulfonyl]amino}cyklobutankarboxylat

Směs ethyl-l-aminocyklobutankarboxylatu, hydrochloridů (382 mg, 2,12 mmol), NEt₃(l,04 ml, 7,43 mmol) a 1,4-dichlor-7-isochinolinsulfonylchloridu (630 mg, 2,12 mmol) v CH2CI2 (8 ml) se mísí při 23 °C po dobu 18 h. Směs se naředí CH2CI2, promyje se ředěnou HCI (2 Μ), nasyceným vodným roztokem NaHCCb, solankou, suší se (MgSO₄) a odpaří se ve vakuu. Zbytek se přečistíchromatografií na silikagelové koloně za použití • · • ·

202 pentanu-EtOAc (90:10 až 80:20) jako eluens za zisku ethyl-1-{[(1,4-dichlor-7isochinolyl)sulfonyl]amino}cyklobutankarboxylatu (480 mg, 1,19 mmol) ve formě bílého prášku.

t.t. 123-125 °C.

^XH (CDCls, 300 MHz) δ 1,2 (3H, t) , 1,9-2,1 (2H, m) , 2,4-2,6 (4H, m) , 4,0 (2H, q), 5,5 (1H, br s), 8,25 (1H, d) , 8,4 (1H, d), 8,5 (1H, s) , 8,9 (1H, s) ppm.

LRMS 403, 405 (MH⁺) , 420 (MNH₄ ⁺) .

Příprava 52: Ethylester cykloleucinu

Roztok cykloleucinu (8,94 g, 69,2 mmol) v EtOH (100 ml) se nasytí HCI plynem a směs se mísí při teplotě 23 °C po dobu 2 dnů. Rozpouštědla se odpaří ve vakuu, zbytek se rozpustí ve vodě (200 ml) a roztok se alkalizuje NaHCO3 v pevném stavu. Vodný roztok se extrahuje EtOAc (3x100 ml) a kombinované extrakty se promyjí solankou, suší se (MgSO₄) a odpaří se ve vakuu. Zbytek se rozpustí v hexanu-Et20 (1:1) a přidá se roztok HCI v Et20-dioxanu (0,5 M. 1:1), čímž vznikne sraženina. Tento špinavě bílý pevný materiál se odfiltruje a suší se za zisku ethylesteru cykloleucinu, hydrochloridu (6,57 g. 33,9 mmol).

^xH(d₆-DMSO, 400 MHz) δ 1,2 (3H, t), 1,6-1,8 (2H, m) , 1,8-2,0 (4H, m) , 2,05-2,15 (2H, m), 4,15 (2H, q), 8,6-8, 7 (3H, br s) ppm

Příprava 53:

• · ··«···· ··· ···· «· ·· ·* ···

203

Ethylester Ν-[(1,4-dichlor-7-isochinolyl)sulfonyl]cykloleucinu

Směs ethylesteru cykloleucinu, hydrochloridu (5,56 g,

28,7 mmol), NEt3 (9,9 ml, 72 mmol) a 1,4-dichlor-7-isochinolinsulfonylchloridu (7,10 g, 24,0 mmol) v CH2CI2 (480 ml) se mísí při 23 °C po dobu 3 dnů. Směs se naředí CH2CI2, promyje se ředěnou HCi (2 Μ) , nasyceným vodným roztokem NaHCC>3, solankou, suší se (Na2SO₄) a odpaří se ve vakuu. Zbytek se přečistí chromatografií na silikagelové koloně za použití pentanu-EtOAc (80:20 až 70:30) jako eluens, za zisku ethylesteru N-[ (1,4-dichlor-7isochinolyl)sulfonyl]cykloleucinu (6,36 g, 15,2 mmol) ve formě bílého pevného materiálu, t.t. 127-129 °C.

^XH (CDCI3, 400 MHz) δ 1,2 (3H, t) , 1,6-1,8 (4H, m) , 1,9-2,0 (2H, m), 2,1-2,2 (2H, m) , 4,1 (2H, q) , 5,25 (IH, s) , 8,25 (IH, d), 8,35 (IH, d), 8,5 (IH, s), 8,9 (IH, s) ppm.

LRMS 417, 419 (MH⁺) .

Analýza: Zjištěno: C, 48,57; H, 4,35; N, 6,58. Vypočítáno pro Ci7Hi₈Cl₂N3O₄S: C, 48,93; H, 4,35; N, 6,71.

Příprava 54:

1,4-dichlor-N-[1-(hydroxymethyl)cyklopentyl]-7-isochinolinsulfonamid

Směs 1-amino-l-cyklopentylmethanolu (559 mg, 4,86 mmol) ··· · · * · · • · · · · · · »··· · · «Φ nt

204

NEt3 (0,85 ml, 6,0 mmol) a 1,4-dichlor-7-isochinolinsulfonylchloridu (1,2 g, 4,05 mmol) v CH2CI2 (80 ml) se mísí při 23 °C po dobu 16 h. Směs se naředí CH2CI2 (50 ml), promyje se ředěnou HCI (2 Μ) , nasyceným vodným roztokem NaHCO3, solankou, suší se (Na2SO₄) a odpaří se ve vakuu. Zbytek se přečistí chromatografií na silikagelové koloně za použití CH2Cl2MeOH-0,880 NH3 (95:5:0,5) jako eluens, po které následuje triturace s Et2O, za zisku 1,4-dichlor-N-[1-(hydroxymethyl)cyklopentyl]-7-isochinolinsulfonamidu (0,62 g, 1,65 mmol) ve formě bílého pevného materiálu.

t.t. 148-	-150	°C.
¹H(CDCl3,	400	MHz)	δ i	,5-1,6 (4H, m)	, 1,6-1,7 (2H, m), 1,7-1,8
(2H, m),	2,2	(IH,	br	t), 3,65 (2H,	d), 5,1 (IH, s), 8,3 (IH,
d), 8,35	(IH,	d),	8,5	(IH, s), 8,9	(IH, s) ppm.
LRMS 375	(MH⁺	) -
Příprava	55:

Ethylester N- [(1,4-dichlor-7-isochinolyl)sulfonyl]-N-[2(dimethylamino)ethyl]cykloleucinu a

2-(dimethylamino)ethylchlorid (140 mg, 1,3 mmol) se přidá do míšeného roztoku ethylesteru N-[(1,4-dichlor-7isochinolyl)-sulfonyl]cykloleucinu (200 mg, 0,48 mmol) a bezvodého K2CO3 (80 mg, 0,58 mmol) v DMF (4 ml) v atmosféře N2 při teplotě 23 °C a směs se mísí po dobu 21 h. Ochlazená směs se naředí EtOAc, promyje se vodou, suší se (Na2SO₄) a rozpouštědla se odpaří ve vakuu. Zbytek se rozpustí v Et2O a přidá se roztok HCI v Et2O (1 Μ), čmž vznikne sraženina. Tento špinavě bílý pevný materiál se odfiltruje a suší se za zisku za zisku ethylesteru N-[(l,4• ·* ·9 ···· ·· • ΦΦΦ ·· Φ Φ φ Φ

205 • Φ · « ♦ ···· • Φ >·»··· «ΦΦΦΦ·» ΦΦ ΦΦ Φ·

-dichlor-7-isochinolyl)sulfonyl]-Ν-[2-(dimethylamino)ethyl] cykloleucinu (170 mg, 0,32 mmol).

t.t. 238-240 °C.

^XH (DMSO-de, 300 MHz) δ 1,15 (3H, t), 1,55-1,7 (4H, m), 2,0-2,1 (2H, m), 2,2-235 (2H, m), 2,8 (6H, s), 3,35-3,45 (2H, m), 3,75-3,85 (2H, m), 4,0 (2H, q) , 8,45 (IH, d), 8,5 (IH, d), 8,7 (IH, s), 8,7 (IH, s) ppm.

LRMS 488, 490 (MH⁺) .

Analýza: Zjištěno: C, 47,53; H, 5,37; N, 7,96. Vypočítáno pro C2iH27Cl₂N₃O4S«0,25 H₂0: C, 47,65; H, 5,43; N, 7,94.

Příprava 56:

Methyl-l-{[(1,4-dichlor-7-isochinolyl)sulfonyl]amino}cyklohexankarboxylat

Methyl-l-aminocyklohexankarboxylat se připraví dříve popsaným způsobem, viz: Didier, E.; Horwell, D. C.; Pritchard,

M. C., Tetrahedron. 1992, 48, 8471-8490.

Směs methyl-l-aminocyklohexankarboxylatu (325 mg, 1,68 mmol), NEt₃ (0,49 ml, 3,5 mmol) a 1,4-dichlor-7-isochinolinsulfonylchloridu (415 mg, 1,40 mmol) v CH2CI2 (30 ml) se mísí při 23 °C po dobu 16 h. Směs se naředí CH2CI2, promyje se ředěnou HCI (2 Μ) , nasyceným vodným roztokem NaHCO3, solankou, suší se (Na₂SO₄) a odpaří se ve vakuu. Zbytek se přečistí chromatografií na silikagelové koloně za použití hexanu-EtOAc (80:20 až 70:30) jako eluens, po které následuje triturace s i-Pr₂O, za zisku za zisku methyl-l-{[(1,4-dichlor206

-7-isochinolyl)sulfonyl]amino}-cyklohexankarboxylatu (132 mg,

0,32 mmol) ve formě bílého pevného materiálu,

t.t. 185-186 °C.

^XH (CDCla, 300 MHz) δ 1,2-1,5 (6H, m) , 1,8-2,0 (4H, m) , 3,6 (3H, s), 4,95 (IH, s), 8,25 (IH, d), 8,4 (IH, d) , 8,5 (IH, s),

8,9 (IH, s) ppm.

LRMS 418 (MH⁺) .

Analýza: Zjištěno: C, 48,94; H, 4,43; N, 6,42. Vypočítáno pro C17H18CI2N2O4S: C, 48,93; H, 4,35; N, 6,71.

Příprava 57:

Methyl-4-aminotetrahydro-2H-pyran-4-karboxylat

Kyselina 4-aminotetrahydro-2H-pyran-4-karboxylová s epřipraví způsobem popsaným dříve, viz: Palacin, S.; Chin, D.

N.; Simanek, Ε. E.; MacDonald, J. C.; Whitesides, G. M.; McBride, Μ. T.; Palmore, G., J. Am. Chem. Soc.. 1997, 119, 11807-11816.

Roztok kyseliny 4-aminotetrahydro-2H-pyran-4-karboxylové (0,50 g, 3,4 mmol) v MeOH (10 ml) se nasytí HCI plynem při teplotě 0-5 °C a směs se potom zahřívá při při teplotě zpětného toku po dobu 3,5 h. Rozpouštědla se odpaří ve vakuu. Zbytek se rozpustí v nasyceném vodném roztoku NaHCO3 a vodný roztok se extrahuje CH2CI2 (2x50 ml). Kombinované extrakty se suší (MgSO4) a odpaří se ve vakuu za zisku methyl-4-aminotetrahydro-2H-pyran-4-karboxylatu (410 mg, 2,58 mmol).

207 ·» ···* ^ςΗ (CDCls, 300 MHz) δ 1,4-1,6 (4H, m) , 2,05-2,2 (2H, m), 3,63,7 (2H, m) , 3,75 (3H, s), 3,8-3,9 (2H, m) ppm.

LRMS 160 (MH⁺) .

Příprava 58:

Methyl-4-{[(1,4-dichlor-7-isochinolyl)sulfonyl]amino}tetrahydro-2H-pyran-4-karboxylát

Směs methyl-4-aminotetrahydro-2H-pyran-4-karboxylatu (400 mg, 2,51 mmol), NEt3 (0,44 ml, 3,14 mmol) a 1,4-dichlor-7-isochinolinsulfonylchloridu (621 mg, 2,09 mmol) v CH2CI2 (30 ml) se mísí při 23 °C po dobu 20 h. Směs se naředí CH2CI2, promyje se ředěnou HCI (2 Μ), nasyceným vodným roztokem NaHCO3, solankou, suší se (Na2SO4) a odpaří se ve vakuu. Zbytek se přečistí chromatografií na silikagelové koloně za použití hexanu-EtOAc (80:20) a potom CH₂Cl₂-MeOH-0,880 NH₃ (95:5:0,5) jako eluens, po které následuje triturace s i-Pr2O, za zisku methyl-4-{[(1,4-dichlor-7-isochinolyl)sulfonyl]amino]tetrahydro-2H-pyran-4-karboxylatu (197 mg, 0,47 mmol) ve formě bílého pevného materiálu.

t.t. 168-170 °C.

(CDCls, 400 MHz) δ 1,8-1,95 (2H, m) , 2,1-2,2 (2H, m), 3,5 (3H, s), 3,5-3,7 (4H, m) , 5,4 (IH, s) , 8,25 (IH, d), 8,4 (IH, d), 8,5 (IH, 5), 8,9 (IH, s) ppm.

LRMS 419 (MH⁺) .

Analýza: Zjištěno: C, 45,97; H, 3,85; N, 6,36. Vypočítáno pro C16H16CI2N2O5: C, 45, 83; H, 3,85; N, 6,68.

Příprava 59:

•4 4« ···· 44

4 4 4 44«

4 4 4 4 4

208

Terč.butyl (±)-cis-2-{[(1,4-dichlor-7-isochinolyl)sulfonyl]amino]cyklohexankarboxylat

4 · 4 · 4·4

444 4444 44 44 44 444

Terč.butyl (±)-cis-2-aminocyklohexankarboxylat byl připraven dříve, viz: Xie, J.; Soleilhac, J. M.; Renwart, N.; Peyroux,

J.; Roques, Β. P.; Fournie-Zaluski, M. C., Int. J. Pept.

Protein Res. 1989, 34, 246-255.

Směs terč.butyl (±)-cis-2-aminocyklohexankarboxylatu, hydrochloridu (282 mg, 1,20 mmol), NEt3(0,33 ml, 2,37 mmol) a

1,4-dichlor-7-isochinolinsulfonylchloridu (282 mg, 0,95 mmol) v CH2CI2 (10 ml) se mísí při 23 °C po dobu 1 h. Rozpouštědla se odstraní ve vakuu a zbytek se suspenduje v EtOAc (100 ml).

Tento roztok se promyje ředěnou HCI (10 ml, 1 Μ) , vodou, suší se (MgSO₄) a odpaří se ve vakuu za zisku terč.butyl (±)-cis-2-{[(1,4-dichlor-7-isochinolyl)sulfonyl]amino}cyklohexankarboxylatu (395 mg, 0,86 mmol) ve formě bílého pevného materiálu.

^XH (CDCI3, 300 MHz) δ 1,1-1,8 (16H, m), 1,95-2,1 (IH, m), 2,52,6 (IH, m), 3,4-3,55 (IH, m) , 6,1 (IH, d) , 8,25 (IH, d), 8,35 (IH, d), 8,45 (IH, 5), 8,9 (IH, 5).

LRMS 459, 461 (MH⁺) .

Analýza: Zjištěno: C, 51,99; H, 5,28; N, 6,01. Vypočítáno pro C2oH2₄Cl₂N₂0₄: C, 52,29; H, 5,27; N, 6,10.

Příprava 60:

Ethyl (±)-cis-2-{[(1,4-dichlor-7-isochinolyl)sulfonyl]amino}cyklohexanekarboxylat

Směs ethyl (±)-cis-2-aminocyklohexankarboxylatu, hydrochloridu (251 mg, 1,20 mmol), NEt3 (0,33 ml, 2,4 mmol) a

1,4-dichlor-7-isochinolinsulfonylchloridu (296 mg, 1,00 mmol) v CH2CI2 (10 ml) se mísí při teplotě 23 °C po dobu 1 h. Směs se naředí CH2CI2 (100 ml), promyje se ředěnou HCI (30 ml, 1 Μ) , vodou, suší se (MgSCH) a odpaří se ve vakuu za zisku ethyl-(+)-cis-2-{[(1,4-dichlor-7-isochinolyl)sulfonyl]amino]cyklohexankarboxylatu (385 mg, 0,89 mmol) ve formě bílého pevného materiálu.

^XH (COCI3, 400 MHz) δ 1,2 (3H, t) , 1,2-1,4 (3H, m) , 1,4-1,7

(3H,	m) ,	1,75-1,85	(IH	, rn) ,	2,02,1 (IH, m)	, 2,65	(IH, q) , 3,5-
3, 6	(IH,	m) , 3,95-	-4,0	(IH,	m) , 4,05-4,15	(IH, m)	, 5,9 (IH, d),
8,2	(IH,	d), 8,35	(IH,	d),	8,5 (IH, s), 8,	9 (IH,	s) ,
LRMS	431,	433 (MH⁺)	1 _e
Analýza:	Zjištěno:	C,	50, 45	; H, 4,79; N, 6	,31. Vypočítáno pro

C18H20CI2N2O4S: C, 50,12; H, 4,67; N, 6,49.

Příprava 61:

Terč.butyl cis-4-{[(1,4-dichlor-7-isochinolyl)sulfonyl]amino)cyklohexankarboxylat

Terc.butyl cis-4-aminocyklohexankarboxylat byl připraven dříve, viz: Bamish, I. T.; James, K.; Terrett, Ν. K.; Danilewicz, J. C.; Samuels, G. M. R.; Wythes, M. J.; Eur. Patent, 1988, EP 274234.

Směs terc.butyl cis-4-aminocyklohexankarboxylatu (282 mg, • 9 9 9 ···· 99 9

99 9 «9 99

9 9 9 9 9 9

99« 9 9 · * 9 9 · · 9 · 9 · 9

9999 99 99 99 999

210

1,20 mmol), NEt3 (0,33 ml, 2,37 mmol) a 1,4-dichlor-7-isochinolinsulfonylchloridu (296 mg, 1,00 mmol) v CH2CI2 (10 ml) se mísí při 0 °C po dobu 1 h. Směs se naředí CH2CI2 (150 ml), promyje se ředěnou HCI (30 ml, 1 Μ), vodou, suší se (MgSO₄) a odpaří se ve vakuu. Zbytek se přečistí chromatografi na silikagelové koloně za použití pentanu-EtOAc (100:0 až 75:25) za zisku terč.butyl cis-4-{[(1,4-dichlor-7-isochinolyl)sulfonyl]amino}cyklohexankarboxylatu (360 mg,

0,78 mmol) ve formě bílého pevného materiálu.

^XH (CDCI3, 400 MHz) δ 1,4 (9H, s), 1,5-1,65 (6H, m), 1,75-1,85 (2H, m) , 2,3 (1H, m), 3,45 (1H, m) , 4,75 (1H, d), 8,25 (1H, d), 8,4 (1H, d), 8,5 (1H, s), 8,9 (1H, s) ppm.

LRMS 459, 461 (MH⁺) , 476 (MNH₄ ⁺) .

Analýza: Zjištěno: C, 52,34; H, 5,28; N, 5,98. Vypočítáno pro C20H2₄Cl₂N₂O₄S: C, 52,29; H, 5,27; N, 6,10.

Příprava 62:

Ethyl trans-4-{[(1,4-dichlor-7-isochinolyl)sulfonyl]amino}cyklohexankarboxylat

Ethyl trans-4-aminocyklohexankarboxylatpřipraven dříve, viz: Skaric, V.; Kovacevic, M.; Skaric, D. J. Chem. Soc., Perkin Trans.1 1976, 1199-1201.

Směs ethyl trans-4-aminocyklohexankarboxylatu (168 mg, 0,81 mmol), NEt3 (0,22 ml, 1,6 mmol) a 1,4-dichlor-7-isochinolinsulfonylchloridu (200 mg, 0,67 mmol) v CH2CI2 (8 ml) se mísí při 0 °C po dobu 1 h. Směs se naředí CH2CI2 (100 ml), promyje se ředěnou HCI (50 ml, 1 Μ), vodou, suší se • 0000

00 0· 000 (MgSO₄) a odpaří se ve vakuu za zisku ethyl trans-4-{[(1,4-dichlor-7-isochinolyl)sulfonyl]amino}cyklohexankarboxylatu (232 mg, 0,54 mmol) ve formě bílého pevného materiálu.

¹H(CDC1₃, 400 MHz) δ 1,15-1,3 (5H, m) , 1,4-1,55 (2H, m) , 1,92,0 (4H, m), 2,1-2,2 (ÍH, m) , 3,2-3,3 (ÍH, m), 4,1 (2H, t), 4,55 (ÍH, d), 8,25 (ÍH, d), 8,35 (ÍH, d), 8,5 (ÍH, s), 8,9 (ÍH, s)

LRMS 431 (MH⁺) .

Příprava 63:

1,4-dichlor-7-isochinolinkarbonylchloride σ

Roztok N-chlorsukcinimidu (4,13 g, 31 mmol) v MeCN (50 ml) se přidá po kapkách do míšeného roztoku 7-brom-l-(2H)-isochinolonu (6,6 g, 29,5 mmol) v MeCN (150 ml), který se zahřívá při teplotě zpětného toku. Směs se zahřívá při teplotě zpětného toku po dobu dalších 3 hodin a potom se ochladí na teplotu okolí. Vzniklá sraženina se odfiltruje s výplachem MeCN a potom se suší ve vakuu za zisku 7-brom-4-chlor-l(2H)-isochinolonu (6,72 g, 26,0 mmol) ve formě bílého pevného materiálu.

t.t. 241-243 °C.

^XH (DMSO-ď6, 300 MHz) δ 7,5 (ÍH, s), 7,73 (ÍH, d) , 7,8 (ÍH, dd) , 8,3 (ÍH, s) ppm.

LRMS 259 (MH⁺) , 517 (M₂H⁺) .

Analýza: Zjištěno: C, 41,69; H, 1,90; N, 5,37. Vypočítáno pro C₉H₅BrClNO: C, 41,80; H, 1,95; N, 5,42.

Cl

Bi

EIO,C

O

• ♦ · · • ♦ · * • ···· ·· ·«

212 ·« ····

Směs 7-brom-4-chlor-l(2H)-isochinolonu (1,0 g, 3,87 mmol) a bis(trifenylfosfin)palladium(II)chloridu (100 mg, 0,14 mmol) v EtOH (15 ml) a NEt₃ (2 ml) se zahřívá při teplotě 100 °C v tlakové nádobě v atmosféře CO (100 psi) po dobu 48 hodin. Po ochlazení a otevření nádoby se katalyzátor odfiltruje a filtrát se odpaří se ve vakuu. Zbytek se přečistí chromatografií na silikagelové koloně za použití hexanu-EtOAc (50:50) jako eluens, a potom krystalizací z i-Pr2O. Tento materiál se kombinuje s CH2CI2 výplachy zbytku katalyzátoru za zisku ethyl-4-chlor-l-oxo-l,2-dihydro-7-isochinolinkarboxylatu (743 mg, 2,95 mmol) ve formě bílého pevného materiálu, t.t. 184-186 °C.

^XH (CDCI3, 300 MHz) δ 1,45 (2H, t) , 4,45 (2H, q) , 7,4 (IH, s) , 7,95 (IH, d), 8,4 (IH, d), 9,05 (IH, s) ppm.

LRMS 252 (MH⁺) , 269 (MNH4⁺) , 503 (M2H⁺) .

Analýza: Zjištěno: C, 57,02; H, 3,99; N, 5,53. Vypočítáno pro C12H10CINO3: C, 57,27; H, 4,01; N, 5,57.

Ethyl-4-chlor-l-oxo-l,2-dihydro-7-isochinolinkarboxylat (500 mg, 1,99 mmol) se zahřívá v POCI3 (3 ml) do vzniku čirého roztoku a potom se nechá stát při 23 °C po dobu 18 h. Reakční směs se vnese do horké vody, extrahuje se EtOAc (3x20 ml) a kombinované organické extrakty se promyjí vodou a nasycenou solankou, suší se (MgSO₄) a odpaří se ve vakuu. Zbytek se přečistí chromatografií na silikagelové koloně za použití hexanu-EtOAc (90:10) jako eluens, po které následuje krystalizace z i-Pr₂O za zisku ethyl-1,4-dichlor-7-isochinolinkarboxylatu (377 mg, 1,40 mmol) ve formě světle • 99 ······ ··

9 9 9 ·· · · · ·

213 • 9 9 9 9 9999 9

9 9999 99 9 «99 ···· 9« 99 99 ·99 růžového pevného materiálu.

t.t. 92-94 °C.

(ČOC1₃, 300 MHz) δ 1,45 (2H, t) , 4,45 (2H, q) , 8,25 (ÍH, d) ,

8,4-8,45 (2H, m), 9,05 (ÍH, s) ppm.

LRMS 270 (MH⁺) .

Analýza: Zjištěno:: C, 53,27; H, 3,48; N, 5,14. Vypočítáno pro C12H9CI2NO2: C, 53,36; H, 3,36; N, 5,19.

Ethyl 1,4-dichlor-7-isochinolinkarboxylat (500 mg, 1,85 mmol) v THF (2 ml) se zpracuje vodným roztokem NaOH (3,7 ml, 1 M) a přidá se EtOH (několik kapek) za zisku jednofázové směsi. Směs se mísí při teplotě okolí přes noc, přidá se HCI (3,7 ml, 1 Μ) , za zisku husté kaše, která se přefiltruje, promyje se vodou a krystalizuje se z i-PrOH. Prachový bílý krystalický materiál se trituruje s hexanem a suší se za zisku kyseliny

1,4-dichlor-7-isochinolinkarboxylové (240 mg, 0,99 mmol). t.t. 226-228 °C.

^XH (DMSO-de, 300 MHz) δ 8,3 (ÍH, d) , 8,4 (ÍH, d) , 8,55 (ÍH, s), 8,8 (ÍH, s) ppm.

LRMS 242 (MH⁺) .

Analýza: Zjištěno: C, 49,59; H, 2,08; N, 5,74. Vypočítáno pro C10H5CI2NO2: C, 49,62; H, 2,08; N, 5,78.

Oxalylchlorid (144 μΐ, 1,65 mmol) se přidá do suspenze kyseliny 1,4-dichlor-7-isochinolinkarboxylové (200 mg, 0,83 mmol) při teplotě okolí v CH2CI2 (10 ml) a potom se přidá DMF

214 • 44 44 ···· 44 4 • 4 44 44 4 44 44

4444 444

4444 4444 4

4444 444

444 4444 44 44 44 444 (1 kapka). Po 30 minutách se vzniklý čirý roztok odpaří ve vakuu za zisku 1,4-dichlor-7-isochinolinkarbonylchloridu, který se použije bez dalšího přečištění.

Příprava 64:

Terč.butylester N-[(1,4-dichlor-7-isochinolyl)karbonyl]glycinu

Roztok 1,4-dichlor-7-isochinolinkarbonylchloridu (213 mg, 0,8 mmol) v CH2CI2 (10 ml) se přidá do míšené suspenze terč.butylesteru glycinu, hydrochloridu (166 mg, 0,99 mmol) a NEt3 (253 μΐ, 1,82 mmol) v CH2CI2 (5 ml). Reakční směs se mísí při teplotě okolí přes noc, reakce se utlumí kapkou vody a potom se reakční směs odpaří ve vakuu. Zbytek se poečistí chromatografií na silikagelové koloně za použití hexanu-EtOAc (70:30) jako eluens za zisku terč.butylesteru N-[(1,4-dichlor-7-isochinolyl)karbonyl]glycinu (140 mg, 0,39 mmol).

Analytický vzorek se připraví krystalizací z i-Pr2O-CH2Cl2. t.t. 162-164 °C.

¹H(CDC1₃, 300 MHz) δ 1,5 (9H, s) , 4,15-4,2 (2H, m) , 6,9 (IH, s), 8,25-8,3 (2H, m), 8,4 (IH, s), 8,75 (IH, s) ppm.

LRMS 355 (MH⁺) .

Analýza: Zjištěno: C, 53,98; H, 4,36; N, 7,83. Vypočítáno pro C16H16CI2N2O3: C, 54,10; H, 4,54; N, 7,89.

Příprava 65:

Terč.butylester N-[(1,4-dichlor-7-isochinolyl)karbonyl]-β-alaninu

215

• ·· • « ·	·· ··♦· • · ·	·· · • * · ·
• ·	Φ · · ·	• · ·
• · · · · ·	·· ··	·· ··

α

Roztok 1,4-dichlor-7-isochinolinkarbonylchloridu (450 mg,

1,7 mmol) v CH2CI2 (20 ml) se přidá do míšeného roztoku terc.butylesteru β-alaninu, hydrochloridu (376 mg, 2,07 mmol) a NEt3 (530 μΐ, 3,81 mmol) v CH2CI2 (10 ml) a směs se mísí při teplotě okolí po dobu 3 h. Směs se promyje HCI (2x30 ml, 1 Μ) , vodným roztokem NaHCO3 (10%, 30 ml) , suší se (Na2SO₄) a odpaří se ve vakuu. Zbytek se krystalizuje z i-Pr2O za zisku terc.butylesteru N-[(1,4-dichlor-7-isochinolyl)karbonyl]-β-

alaninu	(440 mg, 1,19 mmol) ve formě bílého pevného
materiálu
t.t. 131-	133 °C.
^ΧΗ (CDC13,	400 MHz) δ 1,5 (9H,	s) , 2,6	(2H, t). 3, 7-3,8 (2H,
m) , 7,15	(IH, br s), 8,2-8,3	(2H, m),	8,4 (IH, s), 8,65 (IH,
s) ppm.
LRMS 369	(MH⁺) , 740 (M₂H⁺) .
Analýza:	Zjištěno: C, 55,11;	H, 4,88;	N, 7,48. Vypočítáno pro

C17H18CI2N2O3: C, 55,29; H, 4,91; N, 7,59.

Příprava 66:

Ethylester N-[(1,4-dichlor-7-isochinolyl)karbonyl]cykloleucinu

Roztok 1,4-dichlor-7-isochinolinkarbonylchloridu (270 mg, 1,04 mmol) v CH2CI2 (12 ml) se přidá do míšeného roztoku ethylesteru cykloleucinu, hydrochloridu (300 mg, 1,55 mmol) a NEt3 (415 μΐ, 2,98 mmol) v CH2CI2 (20 ml) a směs se mísí při teplotě okolí po dobu lh. Směs se promyje ředěnou HCI (2 Μ), vodným roztokem NaHCO3 (10 %) , suší se (Na2SO₄) a odpaří se ve ·· ····

216 • · • · · · · · ·

9 9 9 99

9 9 9 9 9 9 9 • » · · · 9 ·

99999 99 99 99 vakuu, zbytek se krystalizuje z i-Pr20 za zisku ethylesteru N-[(1,4-dichlor-7-isochinolyl)karbonyl]cykloleucinu (372 mg. 0,98 mmol) ve formě bílého pevného materiálu.

t.t. 178-180 °C.

^XH (CDCla, 300 MHz) δ 1,3 (3H, t), 1,8-2,05 (4H, m), 2,1-2,3 (2H, m), 2,3-2,45 (2H, m), 4,25 (2H, q). 6,95 (IH, br s), 8,28,25 (2H, m), 8,4 (IH, s), 8,7(IH, s) ppm.

LRMS 382 (MH⁺) , 398 (MNH?) , 763 (M₂H⁺) .

Analýza: Zjištěno: C, 56,71 ; H, 4,77; N, 7,27. Vypočítáno pro C18H18CI2N2O3: C, 56,70; H, 4,76; N, 7,35.

Příprava 67:

Terč.butylester N-[(1,4-dichlor-7-isochinolyl)karbonyl]-DL-fenylglycinu

Roztok 1,4-dichlor-7-isochinolinkarbonylchloridu (450 mg, 1,73 mmol) v CH2CI2 (20 ml) se přidá do míšeného roztoku terč.butylesteru DL-fenylglycinu, hydrochloridu (505 mg, 2,07 mmol) a NEt3 (530 J.1L, 3,81 mmol) v CH2CI2 (30 ml) a směs se mísí při teplotě okolí po dobu 3 h. Směs se promyje ředěnou HCI (2x30 ml, 1 Μ), vodným roztokem NaHCO3 (10%), dried (Na2SO4) a odpaří se ve vakuu za zisku terč.butylesteru N[ (l,4-dichlor-7-isochinolyl) karbonyl]-DL-fenylglycinu (600 mg, 1,39 mmol) ve formě voskového pevného materiálu. Analytický vzorek se připraví pomalým odpařením roztoku v CH2CI2 za zisku vločkovitého bílého pevného materiálu.

t.t. 146-149 °C.

4« 44 4444 44

4« 4 9 4 4 4 4 4 4

217 • 44·· ···· · • 4 4444 444 • 44 44·· 44 44 ·· 444 ^ΧΗ (CDC13, 300 MHz) δ 1,5 (9Η, s), 5,7 (IH, d), 7,3-7,5 (6Η, m) , 8,2-8,3 (2Η, m), 8,4 (IH, s), 8,8 (IH, s) ppm.

LRMS 431 (MH⁺) , 861 (M₂H⁺) .

Analýza: Zjištěno: C, 60,57; H, 4,76; N, 6,42. Vypočítáno pro C22H₂oCl2N₂03*0,25 H₂O: C, 60,63; H, 4,74; N, 6,43.

Příprava 68:

Terč.butylester N-[(1,4-dichlor-7-isochinolyl)karbonyl]-1-fenylglyčinu

Roztok 1,4-dichlor-7-isochinolinkarbonylchloridu (148 mg, 0,57 mmol) v CH₂C1₂ (6 ml) se přidá do míšeného roztoku terč.butylesteru S-(+)-fenylglycinu, hydrochloridu (138 mg, 0,57 mmol) a NEt3 (200 μΐ, 1,44 mmol) v CH2CI2 (5 ml) a směs se mísí při teplotě okolí přes noc. Směs se naředí CH2CI2 (25 ml), promyje se ředěnou HCI (0,5 Μ), vodným roztokem NaHCCb (10%), solankou, suší se (Na₂SC>4) a odpaří se ve vakuu za zisku terč.butylesteru N-[(1,4-dichlor-7-isochinolyl)karbonyl]-1-fenylglycinu (218 mg, 0,51 mmol) ve formě klovatiny. Analytický vzorek se připraví tritutací s hexanem za zisku pevného materiálu.

t.t. 173-175 °C.

^XH (CDCI3, 300 MHz)	δ 1,45 (9H,	s), 5,7	(IH,	d) , 7,3-7,5 (6H,
m), 8,25 (2H, s), 8	,4 (IH, s),	8,8 (IH,	s)	ppm.
LRMS 431 (MH⁺), 448	(MNH?) , 861	(M₂H⁺) ,	883	(M₂Na⁺).
Analýza: Zjištěno:	C, 58,83; H,	4,88; N	, 5,	90. Vypočítáno pro

C22H₂oC1₂N203*H20: C, 58,80; H, 4,93; N, 6,23.

• ·· ·· ··»· ·· ···· · · · · · ·

218

Příprava 69:

Terc.butylester N-[(1,4-dichlor-7-isochinolyl)karbonyl]-D-fenylglycinu ·· · · · · · · · ··· ···· ·· ·· ·· ···

Roztok 1,4-dichlor-7-isochinolinkarbonylchloridu (148 mg, 0,57 mmol) v CH2CI2 (6 ml) se přidá do míšeného roztoku terč.butylesteru R-(+)-fenylglycinu, hydrochloridu (138 mg, 0,57 mmol) a NEt3 (200 μΐ, 1,44 mmol) v CH2CI2 (5 ml) a směs se mísí při teplotě okolí přes noc. Směs se naředí CH2CI2 (25 ml), promyje se ředěnou HCI (0,5 Μ) , vodným roztokem NaHCCU (10 %) , solankou, suší se (Na2SC>4) a odpaří se ve vakuu. Triturací tbytku s hexanem se získá terč.butylester.N-[(1,4-dichlor-7-isochinolyl)karbonyl]-D-fenylglycinu (203 mg, 0,47 mmol) ve formě bílého pevného materiálu.

²H (CDCI3, 300 MHz) δ 1,4 (9H, s), 5,7 (IH, d), 7,3-7,5 (6H, m) , 8,25 (2H, s), 8,4 (IH, s), 8,8 (IH, s) ppm.

LRMS 431 (MH⁺) , 448 (MNH4⁺) , 861 (M2H⁺) , 883 (M₂Na⁺).

Analýza: Zjištěno: C, 61,17; H, 4,70; N, 6,37. Vypočítáno pro C22H20CI2N2O3: C, 61,26; H, 4,67; N, 6,50.

Příprava 70:

Terc.butylester N-[(1,4-dichlór-7-isochinolyl)karbonyl]-DL-valinu

Roztok 1,4-dichlor-7-isochinolinkarbonylchloridu (450 mg, 1,73 mmol) v CH2CI2 (20 ml) se přidá do míšeného roztoku

9

219 •9 9999 • 9999 • 9

9

9 9 • 9 terč.butylesteru DL-valinu, hydrochloridu (435 mg, 2,07 mmol) a NEt3 (530 μΐ, 3,81 mmol) v CH2CI2 (10 ml) a směs se mísí při teplotě okolí po dobu 3 hodin. Směs se promyje ředěnou HCI (1 Μ) , vodným roztokem NaHCCb (10%), suší se (NasSCH) a odpaří se ve vakuu. Zbytek se krystalizuje s i-Pr2O za zisku terč.butylesteru N-[(1,4-dichlor-7-isochinolyl)karbonyl]-DLvalinu (390 mg, 0,98 mmol) ve formě bílého pevného materiálu.

¹H(CDC1₃, 400 MHz) δ 1,0-1,05 (6H, m), 1,5 (9H, s), 2,3-2,4 (1H, m), 4,7-4,8 (1H, m) , 6,85 (1H, d) , 8,25-8,3 (2H, m), 8,4 (1H, s), 8,75 (1H, s) ppm.

LRMS 397 (MH⁺) , 793 (M₂H⁺) .

Analýza: Zjištěno: C, 57,20; H, 5,53; N, 6,99. Vypočítáno pro C19H22CI2N2O3: C, 57,44; H, 5,58; N, 7,05.

Příprava 71:

Terc.butylester N-[(1,4-dichlor-7-isochinolyl)karbonyl]-DL-prolinu

Terc.butylester DL-prolinu, hydrochlorid (320 mg, 1,54 mmol) a potom NEt3 (513 μΐ, 3,69 mmol) se přidají do míšeného roztoku 1,4-dichlor-7-isochinolinkarbonylchloridu (270 mg, 1,04 mmol) v CH2CI2 (32 ml) a kalný roztok se mísí při teplotě okolí po dobu 4 h. Směs se naředí CH2CI2 (20 ml), promyje se ředěnou HCI (1 Μ) , nasycenou solankou, suší se (Na2SC>4) a odpaří se ve vakuu. Zbytek se krystalizuje s i-Pr2O za zisku terč.butylesteru N-[(1,4-dichlor-7-isochinolyl)karbonyl]-DL-prolinu, (395 mg, 1,00 mmol) ve formě bílého pevného materiálu.

t.t. 144-146 °C.

220

¹H (CDCÍ3, 300 MHz) ukazuje 3:1 směs rotamerů δ 1,15 (1/4 9H, s), 1,55 (3/4 9H, s), 1,8-2,15 (3H, m) , 2,2-2,4 (IH, m) , 3,453,9 (2H, m), 4,2-4,3 (1/4 IH, m), 4,6-4,7 (3/4 IH, m), 7,9 (1/4 IH, d), 8,05 (3/4 IH, d), 8,2-8,3 (IH, m) , 8,4 (IH, s), 8,55 (IH, s) ppm.

LRMS 395 (MH⁺) , 789 (M₂H⁺) .

Analýza: Zjištěno: C, 57,79; H, 5,11; N, 6,97. Vypočítáno pro C19H20CI2N2O3: C, 57,73; H, 5,10; N, 7,09.

Příprava 72:

Terč.butylester N-[(1,4-dichlor-7-isochinolyl)karbonyl]-DL-fenylalaninu

Směs NEt3 (330 μΐ, 2,37 mmol), terč.butylesteru DL-fenylalaninu, hydrochloridu (293 mg, 1,14 mmol) a 1,4-dichlor-7-isochinolinkarbonylchloridu (247 mg, 0,95 mmol) v CH2CI2 (20 ml) se mísí při teplotě okolí po dobu 18 h. Rozpouštědla se odpaří ve vakuu a zbytek se rozdělí mezi ředěnou HCI (IM) a EtOAc. Organická fáze se promyje solankou, suší se (Na2SO₄) a odpaří se ve vakuu. Zbytek se krystalizuje s i-Pr2O za zisku terč.butylesteru N-[(1,4-dichlor-7-isochinolyl)karbonyl]-DL-fenylalaninu (384 mg, 0,86 mmol) ve formě bílého pevného materiálu.

t.t. 156-157 °C.

^XH (CDCI3, 300 MHz) δ 1,5 (9H, s), 3,2-3,3 (2H, m), 5,0 (IH, dt), 6,8 (IH, d), 7,2-7,49 (5H, m), 82 (IH, d) , 8,25 (IH, d), 8,4 (IH, s), 8,6 (IH, s) ppm.

LRMS 4 45 (MH⁺) .

Analýza: Zjištěno: C, 62,02; H, 4,98; N, 6,28. Vypočítáno pro

221 • · · · ·

C23H22CI2N2O3: C, 62,03; Η, 4,98; Ν, 6,29.

Příprava 73:

Terc.butylester Ν-[(1,4-dichlor-7-isochinolyl)karbonyl]-DL-leucinu

Roztok 1,4-dichlor-7-isochinolinkarbonylchloridu (247 mg, 0,95 mmol) v CH2CI2 (10 ml) se přidá do roztoku terč.butylesteru DL-leucinu, hydrochloridu (255 mg, 1,14 mmol) a NEt₃ (330 μΐ, 2,37 mmol) v CH2CI2 (10 ml) a směs se mísí při teplotě okolí přes noc . Rozpouštědla se odpaří ve vakuu a zbytek se rozdělí mezi ředěnou HCI (1 M) a EtOAc. Organická fáze se promyje solankou, suší se (Na₂SO₄) a odpaří se ve vakuu. Zbytek se krystalizuje s i-Pr₂O za zisku terč.butylesteru N-[(1,4-dichlor-7-isochinolyl)karbonyl]-DLleucinu (285 mg, 0,69 mmol).

t.t. 183-184 °C.

^TH (COC1₃, 300 MHz) δ 1,0-1,1 (6H, m) , 1,5 (9H, s) , 1,65-1,85 (3H, m), 4,75-4,85 (ÍH, m), 6,8 (ÍH, d), 8,2 (2H, s), 8,4 (ÍH, s), 8,7 (ÍH, s) ppm.

LRMS 411 (MH⁺) .

Analýza: Zjištěno: C, 58,39; H, 5,84; N, 6,76. Vypočítáno pro C₂₀H₂₄Cl₂N₂O₃: C, 58,40; H, 5,88; N, 6,81.

Příprava 74:

Terč.butyl DL-3-{[(1,4-dichlor-7-isochinolyl)karbonyl]amino}-3-fenylpropanoat · · 44 4444 44

4444 44 4 444

4 4 4 4 4 4

222

4444 444

444 4444 44 44 44 444

Roztok 1,4-dichlor-7-isochinolinkarbonylchloridu (247 mg, 0,95 mmol) v CH2CI2 (10 ml) se přidá do roztoku terč.butylesteru kyseliny DL-3-amino-3-fenylpropionové (252 mg, 1,14 mmol) a NEt3 (2 60 μΐ, 1,87 mmol) v CH2CI2 (10 ml) a směs se mísí při teplotě okolí přes noc. Rozpouštědla se odpaří ve vakuu a zbytek se rozdělí mezi ředěnou HCI (1 M) a EtOAc. Organická fáze se promyje solankou, suší se (Na2SO₄) a odpaří se ve vakuu za zisku terč.butyl DL-3-{[(1,4-dichlor-7isochinolyl)-karbonyl]amino}-3-fenylpropanoatu (323 mg, 0,73 mmol). Analytický vzorek se připraví krystalizaci s i-Pr2Ohexanem za zisku bílého prášku.

t.t. 153-155 °C.

^XH (COCI3, 300 MHz) δ 1,4 (9H, m), 2,9-3,05 (2H, m), 5,6 (IH, dt), 7 2-7,4 (5H, m), 7,9 (IH, d), 82 (2H, s) , 8,4 (IH, s) , 8,7 (IH, s) ppm.

LRMS 4 45 (MH⁺) .

Analýza: Zjištěno: C, 61,99; H, 5,07; N, 6,15. Vypočítáno pro C23H22CI2N2O3: C, 62,03; H, 4,98; N, 6,29.

Příprava 75:

a, β-di-terc.butylester kyseliny N-[(1,4-dichlor-7-isochinolyl) karbonyl]-DL-asparagové

Roztok 1,4-dichlor-7-isochinolinkarbonylchloridu (247 mg, 0,95 mmol) v CH2CI2 (10 ml) se přidá do roztoku a,β-diterc.butylesteru kyseliny asparagové, hydrochloridu (321 mg, • 9 9 9 9 · · · · ·· • · · * 9 9 9 · · 9

223 ·· *999 9*9 *•••••9 99 9* 99 9*9

1,14 mmol) a NEt3 (330 μΐ, 2,37 mmol) v CH2CI2 (10 ml) a směs se mísí při teplotě okolí přes noc. Směs se naředí CH2CI2 (30 ml) , promyje se ředěnou HCI (3x30 ml, 1 Μ), nasyceným vodným roztokem Na2CO3, solankou, suší se (MgSCH) a odpaří se ve vakuu. Zbytek se krystalizuje z hexanu za zisku, ve dvou podílech, a,β-di-terc.butylesteru kyseliny N-[(1,4-dichlor-7-isochinolyl)karbonyl]-DL-asparagové (298 + 88 mg, 0,63 + 0,19 mmol) ve formě vločkovitého bílého pevného materiálu, t.t. 112-114°C.

^XH {CDCI3, 300 MHz) δ 1,45 (9H, m), 1,55 (9H, m) , 2,9 (IH, dd), 3,05 (IH, dd), 4,9-5,0 (IH, m) , 7,45 (IH, d), 8,25-8,35 (2H, m), 8,45 (IH, s), 8, 75 (IH, s) ppm.

LRMS 469 (MH⁺) , 491 (MNa⁺) , 959 (M₂Na⁺).

Analýza: Zjištěno: C, 56,20; H, 5,57; N, 5,88. Vypočítáno pro C22H26CI2N2O5: C, 56,29; H, 5,58; N, 5,97.

Příprava 76:

Terč.butylester O-terc.butyl-N-((1,4-dichlor-7-isochinolyl)karbonyl]-DL-serinu

Roztok 1,4-dichlor-7-isochinolinkarbonylchloridu (247 mg, 0,95 mmol) v CH2CI2 (1 0 ml) se přidá do roztoku terč.butylesteru O-terc.butyl-DL-serinu, hydrochloridu (288 mg, 1,14 mmol) a NEt3 (330 I1L, 2,37 mmol) v CH2CI2 (10 ml) a směs se mísí při teplotě okolí po dobu 3 h. Směs se naředí CH2CI2 (30 ml), promyje se HCI (1 Μ), nasyceným vodným roztokem Na2CO3, nasycenou solankou, suší se (Na2SO4) a odpaří se ve vakuu. Zbytek se krystalizuje z hexanu za zisku terč.butylesteru O-terc.butyl-N-((1,4-dichlor-7-isochinolyl)9 ·9 9· 9999 99

9999 99 9 999

224

9999 9999 9

9 9999 99 9

999 9999 99 99 99 999 karbonyl]-DL-serinu (378 mg, 0,86 mmol) ve formě bílého pevného materiálu, t.t. 116-117 °C.

¹H(CDC1₃, 300 MHz) δ 1,1 (9H, m) , 1,5 (9H, m) , 3,7 (ÍH, dd) ,

3,9 (ÍH, dd), 4,8-4,9 (ÍH, m), 7,15 (ÍH, d), 8,25-8,35 (2H, m) , 8,4 (ÍH, s), 8,75 (ÍH, s) ppm.

LRMS 441 (MH⁺) , 881 (M2H⁺) ) , 903 (M2Na⁺).

Analýza: Zjištěno: C, 57,15; H, 5,94; N, 6,27. Vypočítáno pro C₂iH₂₆C1₂N₂O4 : C, 57,15; H, 5,94; N, 6,35.

Příprava 77:

Terč.butylester N-[(1,4-dichlor-7-isochinolyl)karbonyl]-DL-a-cyklopentylglycinu

Roztok 1,4-dichlor-7-isochinolinkarbonylchloridu (148 mg, 0,57 mmol) v CH2CI2 (6 ml) se přidá do roztok terč.butylesteru DL-a-cyklopentylglycinu, hydrochloridu (134 mg, 0,57 mmol) a NEt3 (200 μΐ, 1,44 mmol) v CH2CI2 (5 ml) a směs se mísí při teplotě okolí přes noc. Reakční směs se naředí CH2CI2 (25 ml), promyje se ředěnou HCI (0,5 Μ), nasyceným vodným roztokem Na₂CO3, solankou, suší se (Na₂SO4) a odpaří se ve vakuu. Zbytek se krystalizuje z i-Pr₂O-hexanu za zisku terč.butylesteru N-[(1,4-dichlor-7-isochinolyl)karbonyl]-DL-a-cyklopentylglycinu (198 mg, 0,47 mmol) ve formě bílého pevného materiálu.

^XH (CDCI3, 300 MHz) δ 1,4-1,9 (17H, m), 2,3-2,5 (ÍH, m), 4,8 (ÍH, dd), 6,85 (ÍH, d), 8,2-8,3 (2H, m), 8,4 {ÍH, s) , 8,7 {ÍH, s) ppm.

LRMS 423 (MH⁺), 440 (MNH4⁺) , 445 (MNa⁺) , 845 (M2H⁺) , 867 (M₂Na⁺) .

225

Analýza: Zjištěno: C, 59,56; H, 5, 72; N, 6,57. Vypočítáno pro

C21H24CI2N2O3: C, 59,58; H, 5,72; N, 6,62.

Příprava 78:

Terč.butylester N-benzyl-N-[(1,4-dichlor-7-isochinolyl)karbonyl]glycinu

Oxalylchlorid (95 μΐ, 1,09 mmol) a potom DMF (2 kapky) se přidají do míšené suspenze kyseliny 1,4-dichlor-7-isochinolinkarboxylové (130 mg, 0,54 mmol) v CH2CI2 (10 ml) a směs se mísí po dobu 30 minut za zisku čirého roztoku příslušného chloridu kyseliny. Rozpouštědla se odpaří ve vakuu a zbytek se rozpustí v CH2CI2 (10 ml) . Přidá se terč.butylester N-benzylglycinu, hydrochlorid (152 mg, 0,59 mmol) a NEt3 (200 μΐ, 1,44 mmol) a směs se mísí při teplotě okolí přes noc. Rozpouštědla se odstraní ve vakuu a zbytek se rozdělí mezi Et2O a ředěnou HCI (1 Μ), organická fáze se promyje ředěnou HCI (1 Μ) , vodným roztokem Na2CC>3 (10 %, 20 ml), nasycenou solankou, suší se (Na2SO₄) a odpaří se ve vakuu. Zbytek se extrahuje horkým hexanem a z organického roztoku se odstraní nerozpustný materiál. Organický roztok se odpaří ve vakuu a zbytek se přečistí chromatografií na silikagelové koloně za použití hexanu-EtOAc (80:20) jako eluens za zisku terč.butylesteru N-benzyl-N-[(1,4-dichlor-7-isochinolyl)karbonyl]glycinu (130 mg, 0,29 mmol) ve formě oleje.

^χΗ(000ΐ3, 400 MHz) ukazuje 1:2 směs rotamerů δ 1,4 (1/3 9H, s), 1,5 (2/3 9H, s), 3,75 (1/3 2H, s), 4,1 (2/3 2H, s), 4,6 (2/3 2H, s), 4,85 (1/3 2H, s), 7,2-7,45 (5H, m), 7,9-8,05 (IH, m) ,

8,2-8,5 (3H, m) ppm.

•9 99 *999 99

9 9 9 9 9 9 * 9 9 9 9

226

9999 999

9999999 99 99 99 999

LRMS 445 (MH⁺) , 467 (MNa⁺) , 889 (M2H⁺) , 911 (M2Na⁺) .

Příprava 79:

7-(chloromethyl)-1,4-dichlor-isochinolin

LiBH₄ (530 mg, 24,3 mmol) se po částech přidá do míšeného roztoku ethyl-4-chlor-l-oxo-l,2-dihydro-7-isochinolinkarboxylatu (3,06 g, 12,2 mmol) v THF (100 ml) a směs se mísí při teplotě okolí po dobu 1 h. Heterogenní směs se utlumí ředěnou HCI (2 M) a extrahuje se CH₂C1₂ (2x100 ml) a EtOAc (5x100 ml). Zbytek ve formě pevného materiálu se odebere v horkém EtOH a nechá se vychladnout za zisku bílého vločkovitého pevného materiálu. Tento pevný materiál se smísí s kombinovanými organickými extrakty, odpaří se ve vakuu a krystalizuje se s EtOH za zisku 4-chlor-7-(hydroxymethyl)-1(2H)-isochinolon (2,19 g, 10,49 mmol) ve formě bílého pevného materiálu.

t.t. 266-268°C.

^(DMSO-de, 300 MHz) δ 4,6 (2H, d) , 4,6 (1H, t) , 7,4 (1H, s) , 7,7-7,8 (2H, m), 8,2 (1H, s) ppm.

LRMS 210 (MH⁺) , 419 (M₂H⁺) .

Analýza: Zjištěno: C, 57,11; H, 3,81; N, 6,54. Vypočítáno pro CioH₈C1N0₂: C, 57,29; H, 3,85; N, 6,68.

Roztok 4-chlor-7-(hydroxymethyl)-1(2H)-isochinolonu (1,00 g, 4,77 mmol) v POCI3 se mísí při 50 °C po dobu 19 hodin.

• ·· ······ ·· ♦ ···· ·· · ···« • · · · · ··· • ·*·· ···· · • · ···· ··· ··· ···> ·· ·· ·· ···

227

Reakční směs se ochladí v ledové lázni, utlumí se přidáním (po kapkách) ředěné HCI (1 M) (reakční teplota < 30°C) a potom se rozdělí mezi vodu a EtOAc. Vodná fáze se reextrahuje EtOAc a kombinované organické extrakty se suší (Na2SO₄) a odpaří se ve vakuu. Zbytek se přečistí chromatografií na silikagelové koloně za použití hexanu-EtOAc (80:20) jako eluens za zisku 7-(chlormethyl)-1,4-dichlorisochinolinu (870 mg, 3,53 mmol). t.t. 139-141°C.

^XH (CDC1₃, 400 MHz) δ 4,8 (2H, s) , 7,9 (IH, d) , 8,1 (IH, d) ,

8,3-8,4 (2H, m) ppm.

LRMS 241 [CnH9Cl2ON*H⁺; produkt MeO (z MeOH) substituce Cl]

Příprava 80:

Terč.butylester N-[(1,4-dichlor-7-isochinolyl)methyl]-N-methyl-DL-fenylglycinu

7-(chlormethyl)-1,4-dichloroisochinolin (230 mg, 0,93 mmol) se přidá do roztoku terč.butylesteru N-methyl-DL-fenylglycinu (248 mg, 0,96 mmol) a NEt₃ (187 μΐ, 1,34 mmol) v CH2CI2 (5 ml), a směs se zahřívá při teplotě zpětného toku po dobu 15 hodin. [TLC ukáže nedokončenou reakci]. Rozpouštědlo se odpaří ve vakuu, přidá se THF (30 ml) a NEt3 (100 μΐ, 0,72 mmol) a směs se zahřívá při při teplotě zpětného toku po dobu 24 h. Ačkoliv je reakce stále nedokončená, odpaří se rozpouštědlo ve vakuu a zbytek se přečistí chromatografií na silikagelové koloně za použití hexanu-Et2O (98:2) jako eluens za zisku terč.butylesteru N-[(1,4-dichlor-7-isochinolyl)methyl]-Nmethyl-DL-fenylglycinu (120 mg, 0,28 mmol) ve formě bezbarvého oleje.

228

0 0 0

Příslušná dihydrochloridová sůl se připraví následujícím způsobem: roztok aminu v hexanu se mísí s roztokem HCI v Et2O (0,5 Μ) , vzniklá bílá sraženina se odfiltruje a suší se. t.t. 120-122 °C.

¹H(COC1₃> 400 MHz) δ 1,5 (9H, s), 2,25 (3H, s), 3,8 (ÍH, d),

3,9 (ÍH, d), 4,3 (ÍH, s) , 7,3 7,4 (3H, m), 7,45 7,5 (2H, m), 7,95 (ÍH, d), 8,15 (ÍH, d) , 8,2 (ÍH, s), 8,3 (ÍH, s) ppm. LRMS 432 (MH⁺) .

Analýza: Zjištěno: C, 56,62; H, 5,58; N, 5,63. Vypočítáno pro C2₃H24Cl2N₂O2*HCl*H2O: C, 56,86; H, 5,60; N, 5,77.

Příprava 81:

Terč.butylester N-benzyl-N-[(1,4-dichlor-7-isochinolyl)methyl]glycinu

7-(chlormethyl)-1,4-dichlorisochinolin (378 mg, 1,53 mmol) se přidá do míšeného roztoku terc.butylesteru N-benzyl-glycinu (340 mg, 1,53 mmol) a Net₃ (256 μΐ, 1,84 mmol) v THF (20 ml) a směs se zahřívá při teplotě zpětného toku po dobu 18 hodin. Rozpouštědlo se odpaří ve vakuu a zbytek se přečistí chromatografií na silikagelové koloně za použití hexanů-EtOAc (95:5 až 90:10) jako eluens, za zisku terc.butylesteru N-benzyl-N-[(1,4-dichlor-7-isochinolyl)methyl]glycinu (245 mg, 0,57 mmol).

Příslušná dihydrochloridová sůl se připraví následujícím způsobem: roztok aminu v Et2O se mísí s roztokem HCI v dioxanu (0,5 Μ), vzniklá bílá sraženina se odfiltruje a suší se.

• ·

9 9999

t.t. 140-143 °C.

^XH (COC1₃, 400 MHz) 5 1,4 (9H, s) , 3,3 (2H, s) , 4,6 (2H, s) ,

4,8 (2H, s), 7,4-7,45 (3H, m) , 7,75-7,8 (2H, m), 8,35 (IH, d) ,

8,4 (IH, s), 8,45 (IH, s), 8,8 (IH, d) ppm.

LRMS 433 (MH⁺) .

Analýza: Zjištěno: C, 58,91; H, 5,38; N, 5,90. Vypočítáno pro C23H24Cl2N₂O₂*HCl: C, 59,05; H, 5,39; N, 5,99.

Příprava 82:

Terc.butylester Na-[(1,4 dichlor-7-isochinolyl)sulfonyl]-Νε-terc.butyloxykarbonyl-L-lysinu

NHBoc

Roztok 1,4-dichlor-7-isochinolylsulfonylchloridu (250 mg, 0,84 mmol), terč.butylesteru Ne-tercbutyloxykarbonyl-l-lysinu, hydrochloridu (286 mg, 0,84 mmol) a triethylaminu (235 J.ll, 1,69 mmol) v CH2CI2 (25 ml) se mísí při 23°C po dobu 3h. Reakční směs se promyje voduo (2 x 20 ml), suší se (MgSCh) a zahustí se ve vakuu za zisku zbytku, ze kterého se po trituraci s hexanem a potom s i-Pr₂O získá terc.butylester Na-[(1,4-dichlor-7-isochinolyl)sulfonyl]-Νε-terc-butyloxykarbonyl-l-lysinu ve formě bílého prášku (270 mg, 0,48 mmol).

^XH (CDCI3, 300 MHz) δ 1,1 (9H, s), 1,35-1,5 (13H, m), 1,6-1,85 (2H, m) , 3,0-3,2 (2H, m) , 3,8-3,95 (IH, m) , 4,45-4,6 (IH, br m) , 5,35 (IH, d), 8,2 (IH, dd), 8,35 (IH, d), 8,45 (IH, s), 8,8 (IH, d) ppm.

LRMS 562 (MH⁺) , 584 {Mna⁺) .

Analýza: Zjištěno: C, 51,04; H, 5,96; N, 7,42. Vypočítáno pro • ·« ·♦···· • · · · · · ·

230 • · · · · · ·«····· ·· ··

C24H33CI2N3O6S: C, 51,24; Η, 5,91; Ν, 7,47.

Příprava 83:

Terč.butylester Να-[(1,4-dichlor-7-isochinolyl)sulfonyl]-Νε-terc.butyloxykarbonyl-D-lysinu

Roztok 1,4-dichlor-7-isochinolylsulfonylchloridu (250 mg. 0,84 mmol), terč.butylesteru Νε-tercbutyloxykarbonyl-D-lysinu, hydrochloridu (286 mg, 0,84 mmol) a triethylaminu (235 μΐ, 1,69 mmol) v CH2CI2 (25 ml) se mísí při 23°C po dobu 18 hodin. Reakční směs se zahustí ve vakuu a zbytek se přečistí chromatografií na silikagelové koloně za použití hexanu-EtOAc (70:30) jako eluens. Po krystalizaci z i-PrO2 se získá terč.butylester Na-[(1,4-dichlor-7-isochinolyl)sulfonyl] -Νε-t-butyloxykarbonyl-D-lysinu (285 mg, 0,51 mmol).

^XH (CDCI3 400 MHz) δ 1,15 (9H, s), 1,2-1,55 (13H, m) , 1,55-1,8 (2H, m), 3,05-3,15 (2H, m) , 3,85-3,9 (IH, m) , 4,5-4,6 (IH, m),

5,4 (IH, br d), 8,2 (IH, d), 8,35 (IH, d), 8,45 (IH, s) , 8,8 (IH, s) ppm.

LRMS 584 (MNa⁺) .

Analýza: Zjištěno: C, 51,18; H, 5,89; N, 7,33. Vypočítáno pro C24H33CI2N3O6S: C, 51,24; H, 5,91; N, 7,47.

Příprava 84:

Terč.butylester N-[(1,4-dichlor-7-isochinolyl)sulfonyl]-1-glutaminu

CONH₂ tBuO₂C

L NH,

Cl

Cl • ·· ·« ···· ·· ···· ·· · · · ·

231

Roztok 1,4-dichlor-7-isochinolylsulfonychloridu (250 mg, 0,84 mmol), terč.butylesteru L-glutaminu, hydrochloridu (201 mg, 0,84 mmol) a triethylaminu (235 ~1, 1,69 mmol) v CH2CI2 (25 ml) se mísí při 23°C po dobu 18 hodin. Reakční směs se promyje vodou (2 x 20 ml) a rozpouštědla se odstraní ve vakuu za zisku terč.butylesteru N-[(1,4-dichlor-7-isochinolyl) sulfonyl]-1-glutaminu (309 mg, 0,67 mmol). Analytický vzorek se získá krystalizací z EtOAc.

^XH (CDCI3, 300 MHz) δ 1,05-1,15 (9H, s), 1,8-1,95 (IH, m), 2,1225 (IH, m), 2,35-2,55 (2H, m), 3,9-4,0 (IR m), 5,4-5,6 (IH, br s), 5,6-5,8 (IH, br s), 5,85 (IH, d), 82 (IH, d), 8,35 (IH, d), 8,5 (IH, s), 8,8 (IH, s) ppm.

LRMS 462 (MH⁺) , 479 (MNH?) .

Analýza: Zjištěno: C, 46,66; H, 4,54; N, 8,96. Vypočítáno pro C18H21CI2N3O5S: C, 46,75; H, 4,58; N, 9,09.

Příprava 85:

N-[(1,4-dichlor-7-isochinolyl)sulfonyl]-cyklopentylamin

1,4-dichlor-7-isochinolylsulfonylchlorid (250 mg, 0,84 mmol) se přidá do roztoku cyklopentylaminu (100 μΐ, 1,0 mmol) a triethylaminu (170 μΐ, 122 mmol) v CH2CI2 (15 ml) a reakční směs se mísí při teplotě okolí po dobu 18 hodin. Roztok se naředí CH2CI2, promyje se 2M kyselinou chlorovodíkovou, nasyceným vodným roztokem Na2CO3 a potom solankou. Tento roztok se suší (MgSOí) a odpaří se ve vakuu, za zisku N-[(1,4-dichlor232 • ·· ·· ···· ·· « • · · · ·· · ···· • · · · · « · · • · · · · · · · · · ·· ···· « · · ··· ·♦·· ·· ·· ·· ···

-7-isochinolyl)sulfonyl]-cyklopentylaminu (250 mg, 0,72 mmol) ve formě bílého krystalického pevného materiálu.

^XH (CDC1₃, 300 MHz) δ 1,4 (2H, m) , 1,5-1,7 (4H, m) , 1,85 (2H, m) , 3,75 (IH, m), 4,6 (IH, d), 8,25 (IH, d) , 8,4 (IH, d), 8,5 (IH, s), 8,95 (IH, s) ppm.

LRMS 34 6 (MH⁺) .

Analýza: Zjištěno: C, 48,68; H, 4,02; N, 7,97. Vypočítáno pro C14H14CI2N2O2S: C, 48,71; H, 4,09; N, 8,11%.

Příprava 86:

1,4-dichlor-7-(1-pyrrolidinylsulfonyl)isochinolin

Pyrrolidin (96 mg, 1,35 mmol) se přidá do roztoku 1,4-dichlor-7-isochinolylsulfonylchloridu (20 mg, 0,67 mmol) v CH2CI2 (5 ml) a reakční směs se mísí při teplotě okolí po dobu 72 h. Směs se zahustí ve vakuu a zbytek ve formě pevného materiálu se trituruje s vodou, přefiltruje se a suší se. Surový materiál se přečistí chromatografií na silikagelové koloně za použití EtOAc-hexanu (50:50) jako eluens, a rekrystalizuje se z i-Pr2O, za zisku 1,4-dichlor-7-(1-pyrrolidinylsulfonyl)isochinolinu (67 mg, 0,20 mmol) ve formě bílého pevného materiálu.

¹H(CDC1₃, 300 MHz) δ 1,8 (4H, m), 3,35 (4H, m), 8,25 (IH, d) ,

8,4 (IH, d), 8,5 (IH, s), 8,85 (IH, s) ppm.

LRMS : 331, 333 (MH⁺) .

Analýza: Zjištěno: C, 47,23; H, 3,60; N, 8,32. Vypočítáno pro C13H12CI2N2O2S: C, 47,14; H, 3,65; N, 8,46%.

Příprava 87:

233 terc.butyl (2R)-1-[(1,4-dichlor-7-isochinolyl)sulfonyl]-2-piperidinkarboxylat • *· ·« ···· ·♦ * • •4 9 9 9 4 4 9 44

4 4 9 9 4 4 4

4 4 4 4 9 4 4 4 4

4 9 4 4 4 4 4 9

4449444 44 94 94 944

Koncentrovaná H2SO4 (2,0 ml) se přidá k ledově chladnému roztoku kyseliny 2-(R)-piperidinkarboxylové (415 mg, 3,21 mmol) v dioxanu (10 ml). opatrně se přidá kondenzovaný isobutylen (40 ml) a reakční směs se mísí při teplotě okolí v uzavřené baňce po dobu 21 h. Reakční směs se vnese do ledově chladného roztoku Et2O (100 ml) a 5N NaOH (20 ml), směs se nechá zahřát na teplotu okolí (za míšení) a potom se naředí vodou. Fáze se separují, organická vrstva se promyje IN NaOH, potom se zahustí ve vakuu na polovinu objemu a extrahuje se 2N HCI. Kombinované acidické extrakty se alkalizují IN NaOH a extrahují se CH2C2, kombinované organické roztoky se suší (MgSOU a odpaří se ve vakuu za zisku terc.butyl 2(R)piperidinkarboxylatu (210 mg, 1,14 mmol) ve formě oleje. ^χΗ(0001₃, 300 MHz) δ 1,4-1,6 (11H, m) , 1,75 (3H, m) , 1,9 (1H, m), 2,65 (1H, m), 3,1 (1H, m), 3,2 (1H, m) ppm.

LRMS 18 6 (MH⁺) .

1,4-dichlor-7-isochinolylsulfonylchlorid (245 mg, 0,83 mmol) se přidá do roztoku terc.butyl 2(R)-piperidinkarboxylatu (153 mg, 0,83 mmol) a triethylaminu (170 μΐ, 1,22 mmol) v CH2CI2 (15 ml) a reakční směs se mísí při teplotě okolí po dobu 18 hodin. Roztok se naředí CH2CI2, promyje se 2M kyselinou chlorovodíkovou, nasyceným roztokema Na2CO3 a potom solankou, suší se (MgSOí) a odpaří se ve vakuu. Zbytek ve formě oleje se přečistí chromatografií na silikagelové koloně za použití

234

« ·· • ♦ · « ·		····	·· ·
• •	• •	• •	• •	9 •	··
• ·	•	•	• ·	•	•
······		··	··		··	··

gradientově eluce pentan-EtOAc (100:0 až 90:10), za zisku terc.butyl (2R)-1-[(1,4-dichlor-7-isochinolyl)sulfonyl]-2-piperidinkarboxylatu, (290 mg, 0,65 mmol) ve formě bezbarvého filmu.

¹H(CDCl3, 400 MHz) δ 1,3 (9H, s) , 1,55 (IH, m) , 1,7-1,85 (3H, m), 2,2 (IH, m) , 3,3 (IH, dd) , 3,9 (IH, dd), 4,75 (IH, d) , 8,15 (IH, d) , 8,35 (IH, dd), 8,45 (IH, s), 8,8 (IH, s) ppm. LRMS 462, 464 (MNH₄ ⁺) .

Analýza: Zjištěno:: C, 50,99; H, 4,95; N, 6,10. Vypočítáno pro C19H22CI2N2O4S; C, 51,24; H, 4,98; N, 6,29%.

Příprava 88:

Methyl 4-{[(1,4-dichlor-7-isochinolyl)sulfonyl]amino}-1-methyl-4-piperidinkarboxylat

Roztok kyseliny 4-amino-l-methyl-4-piperidinkarboxylové (4,0 g, 15,6 mmol) v methanolické HCI (100 ml) se mísí při teplotě zpětného toku po dobu 20 hodin. Chladná směs se zahustí ve vakuu a azeotropuje se s CH2CI2 za zisku oleje. Tento olej se rozpustí v ledově chladném roztoku Na2CO3 a extrahuje se CH2CI2 (2 x) . Kombinované organické extrakty se suší (MgSO₄) a odpaří se ve vakuu za zisku 4-amino-l-methyl-4-piperidinkarboxylatu (1,6 g, 9,3 mmol) ve formě oleje. hífCDCls, 400 MHz) δ 1,4-1,65 (4H, m) , 2,1-2,25 (2H, m) , 2,35 (3H, s), 2,4-2,55 (4H, m), 3,75 (3H, s) ppm.

LRMS 173 (MH⁺) .

235

1,4-dichlor-7-isochinolylsulfonylchlorid (1,0 g, 3,37 mmol) se přidá do roztoku methyl 4-amino-l-methyl-4-piperidinkarboxylatu (700 mg, 4,0 mmol) a triethylaminu (700 μΐ, 1,0 mmol) v CH2CI2 (60 ml) a reakční směs se mísí při teplotě okolí po dobu 18 h. Směs se zahustí ve vakuu a zbytek se přečistí chromatografií na silikagelové koloně za použití gradientově eluce CH2Cl2-MeOH-0,880 NH3 (97:3:0,3 až 95:5:0,5) za zisku methyl-4-{[(1,4-dichlor-7-isochinolyl)sulfonyl]amino]-l-methyl-4-piperidinkarboxylatu (700 mg, 1,62 mmol) ve formě bílého pevného materiálu.

^XH (CDCI3, 400 MHz) δ 2,05 (2H, m), 2,25 (6H, m), 2,4 (2H, m) , 2,55 (2H, m), 3,5 (3H, s), 8,25 (IH, d), 8,4 (IH, d), 8,5 (IH, s), 8,85 (IH, s) ppm.

LRMS 432, 434 (MH⁺) .

Příprava 89:

Ethylester N-[(1,4-dichlor-7-isochinolyl)sulfonyl] -N-(methyl)cykloleucinu

K2CO3 (238 mg, 1, 73 mmol) se přidá do roztoku ethylesteru N-[(1,4-dichlor-7-isochinolyl)sulfonyl]-cykloleucinu (300 mg, 0,72 mmol) v DMF (5 ml) a směs se mísí při teplotě okolí po dobu 40 minut. Přidá se methyljodid (47 μΐ, 0,76 mmol) a reakční směs se mísí po dobu dalších 30 minut při teplotě okolí. Směs se vnese do vody, extrahuje se EtOAc a kombinované organické extrakty se promyjí vodou, potom solankou, suší se (Na2SO₄) a odpaří se ve vakuu. Zbytek ve formě žlutého pevného materiálu se přečistí chromatografií na silikagelové koloně za • · • ·

236 použití EtOAc-hexanu (20:80) jako eluens za zisku ethylesteru

N- [(1,4-dichlor-7-isochinolyl)sulfonyl]-N-(methyl)cykloleucinu (204 mg, 0,47 mmol) ve formě bílého pevného materiálu.

¹H (CDCla, 400 MHz)	δ i	,25	(3H, t), 1, 75 (4H, m), 2,1 (2H,	m) ,
2,4 (2H, m) 3,05	(3H,	s) ,	4,2 (2H, q), 8,25 (IH, d) , 8,35	(IH,
d) , 8,5' (IH, s),	8,9	(IH,	s) ppm.
LRMS 431,433 (MH⁺)
Analýza: Zjištěno	: C,	50,	12; H, 4,66; N, 6,43. Vypočítáno	pro

Ci₈H2oC1₂N20₄S : C, 50,12; H, 4,67; N, 6,49%.

Příprava 90:

4-brom-l-chlor-7-isochinolinsulfonylchlorid

Suspenze isochinolinolu (10 g, 68,9 mmol) v MeCN (250 ml) při 50°C se zpracuje N-bromsukcinimidem (12,6 g, 70,8 mmol), za úplného rozpuštění před vznikem husté bílé sraženiny. Po zahřívání při teplotě zpětného toku po dobu 3 hodin se reakční směs ochladí na ledu a pevný materiál se odfiltruje, promyje se MeCN a suší se za zisku 4-brom-l-(2H)-isochinolonu (7,6 g, 34,0 mmol).

^{DMSO-de, 300 MHz) δ 7,55 (IH, s) , 7,6 (IH, m) , 7,75 (IH, d) . 7,85 (IH, m), 8,2 (IH, d), 11,55 (IH, br s) ppm.

LRMS 223, 225 (MH⁺) .

4-brom-l-(2H)-isochinolon (7,5 g, 33,0 mmol) se přidá po částech ke kyselině chlorsulfonové (23 ml, 346 mmol) a vzniklý roztok se zahřívá při 100°C po dobu 2 1/2 dne. Po ochlazení se reakční směs opatrně naleje na led za zisku bílého pevného materiálu, který se odfiltruje, promyje se vodou, MeCN a Et₂O a

237 suší se vzduchem za zisku krémového pevného materiálu. 4-Bromo-l-oxo-1,2-dihydro-7-isochinolinsulfonylchlorid (13,5 g) se použije ihned bez dalšího sušení.

t.t. >300°C.

^XH (DMSO-de, MHz) δ 7,45 (ÍH, s), 7,7 (lH, d), 8,0 (ÍH, d).

8,45 (ÍH, s), 11,55 (ÍH, brs) ppm.

Do míšeného roztoku of 4-brom-l-oxo-l,2-dihydro-7-isochinolinsulfonylchloridu (13,5 g) v acetonitrilu (200 ml) se po částech přidá POCI3 (10 ml, 110 mmol) . Vzniklá heterogenní směs se zahřívá při teplotě zpětného toku po dobu 24 hodin, nechá se ochladnout a odstraní se sueprnatant za zisku hnědého oleje, který se zahustí na pevný materiál. Extrakcí pevného materiálu do EtOAc se získá, po odstranění rozpouštědla, lepivý pevný materiálu, který se trituruje s Et₂O za zisku titulní sloučeniny (3,83 g, 11,0 mmol) ve formě bílého pevného materiálu.

t.t. 120,5-121 °C.

^xH(DMSO-d₆, 300 MHz) δ 8,2 (2H, m) , 8,5 (ÍH, s), 8,6 (ÍH, s) ppm.

Analýza: Zjištěno: C, 31,21; H, 1,27; N, 4,08. Vypočítáno pro C₉H₄BrCl₂NO₂*0,25 H₂O: C, 31,29; H, 1,31; N, 4,05.

Příprava 91:

Terc.butylester N-[(4-brom-l-chlor-7-isochinolyl)sulfonyl]-D-

4-brom-l-chlor-7-isochinolinsulfonylchlorid (400 mg, 1,17 mmol) v CH₂C1₂ (20 ml) reaguje s terč.butylesterem (D)-prolinu, • · 9 *· 9 9 9 9 9 9 • •99 99 9 999 • 9 f 9 9 9 9

9 9 9 9 «®9 9

O 9 9 999 99

238 ....... ♦» ·· ·· · hydrochloridem (250 mg, 1,20 mmol) a triethylaminem (410 μί, 2,94 mmol) a směs se mísí při teplotě okolí po dobu 2 h. Reakční směs se naředí CH2CI2, promyje se postupně vodou, 10% vodným roztokem kyseliny citrónové a solankou a potom se suší (MgSO₄) a zahustí se ve vakuu za zisku špinavě bílého pevného materiálu. Tento materiál se přečistí chromatografií na silikagelové koloně za použití EtOAc-hexanu (16:84) jako eluens, za zisku terč.butylesteru N-[(4-brom-l-chlor-7-isochinolyl)sulfonyl]-D-prolinu (350 mg, 0,74 mmol) ve formě bílého pevného materiálu.

t.t. 128,5-129,5°C.

hHCDCls, 300 MHz) δ 1,1 (9H, s) , 1,85-2,0 (3H, m) , 2,2 (1H, m) , 3,5 (2H, m), 4,4 (1H, dd), 8,3 (2H, m), 8,6 (1H, s), 8,9 (1H, s) ppm.

LRMS 475, 477 (MH⁺) .

Analýza: Zjištěno: C, 45,41; H, 4,21; N, 5,83. Vypočítáno pro Ci₈H₂₀BrClN₂O₄S: C, 45, 44; H, 4,24; N, 5,89.

Příprava 92:

Ethylester N-{[(4-brom-l-chlor-7-isochinolyl)sulfonyl]-N-[2-(dimethylamino)ethyl]-cykloleucinu, hydrochlorid

Triethylamin (1,02 ml, 7,33 mmol) se přidá do roztoku 4-brom-l-chlorisochinolylsulfonylchloridu (1,0 g, 2,93 mmol) v CH₂C1₂ (25 ml) a reakční směs se mísí při teplotě okolí po dobu 2 hodin. Reakční směs se promyje postupně IN HCI, roztokem Na₂CO3 a solankou, potom se suší (Na₂SO₄) a odpaří se ve vakuu. Zbytek ve formě oleje se krystalizuje z CH₂Cl₂-i-Pr₂O za zisku • · · · • · ···· ·· · · · ··

9 9 9 9 9 9 9 • « · · · ··♦· · • O *····*·

239 ··· ···· ·· ·· ·* ·· ethylesteru N-{[(4-brom-l-chlor-7-isochinolyl)sulfonyl]cykloleucinu (380 mg, 0,82 mmol) ve formě pevného materiálu.

^XH (CDC1₃, 300 MHz) δ 1,2 (3H, t) , 1,6-1,8 (4H, m) , 2,0 (2H, m), 2,15 (2H, m), 4,05 (2H, q), 8,25 (IH, d) , 8,35 (IH, d), 8,6 (IH, s) , 8,9 (IH, s) ppm.

LRMS 484 (MNa⁺)

K2CO3 (157 mg, 1,14 mmol) se přidá do roztoku ethylesteru N-{[(4-brom-l-chlor-7-isochinolyl)sulfonyl]cykloleucinu (300 mg, 0,65 mmol) v DMF (5 ml) a roztok se mísí po dobu 5 min. Přidá se N,N-dimethylaminoethylchlorid, hydrochlorid (112 mg, 0,78 mmol) a reakční směs se mísí při teplotě okolí po dobu 36 hodin. Reakční směs se rozdělí mezi vodu a EtOAc, vrstvy se separují a vodná fáze se extrahuje EtOAc. Kombinované organické roztoky se promyjí solankou, suší se (Na2SO4) a odpaří se ve vakuu. Zbytek se přečistíchromatografií na silikagelové koloně za použití CH2Cl2-MeOH-0,880 NH3 (95:5:0,5) jako eluens, za zisku klovatiny. Tento materiál se rozpustí v roztoku Et2O-EtOAc, přidá se etherální HCI a směs se odpaří ve vakuu. Vzniklý pevný materiál se trituruje s vodou, přefiltruje se a suší se za zisku ethylesteru N—{[ (4 — -brom-l-chlor-7-isochinolyl)sulfonyl]-N-[2-(dimethylamino)ethyl]cykloleucinu, hydrochloridu (90 mg, 0,16 mmol) ve formě pevného materiálu.

^XH (CDCI3, 300 MHz)	δ 1,3	(3H,	, t), 1,65	(2H, m), 1,8 (2H,	m) ,
2,15 (2H, m), 2,4	(2H, m)	, 2,	9 (6H, m) ,	3,6 (2H, m) , 4,0	(2H,
m), 4,2 (2H, q), 8	,2 (IH,	d)	, 8,4 (IH,	d), 8,65 (IH, s)	r
8,80 (IH, s) ppm.
LRMS 534 (MH⁺)
Analýza: Zjištěno:	C, 44,	17;	H, 4,97; N	, 7,24. Vypočítáno	pro
C₂iH27BrClN₃O4S«HCl:	C, 44,	30;	H, 4,96; N,	, 7,38%.

• · · · · · · · · · · • · · · · · · ···

240 • · · · · · <* · ··· ···· ·· »· ·· ·

Příprava 93:

Ethyl-3-{[(1,4-dichlor-7-isochinolyl)sulfonyl]amino}-2,2-dimethylpropanoat, hydrochlorid

Titulní sloučenina se získá ve formě bílého pevného materiálu (86%) z 1,4-dichlorsulfonylchloridu a ethyl-3-amino-2,2-dimethylpropanoatu, hydrochloridu, postupem podobným postupu podle přípravy 90.

^XH (CDCI3, 300 MHz) δ 1,25 (9H, m), 3,0 (2H, d), 4,1 (2H, q) , 5,4 (IH, t), 82 (IH, d), 8,4 (IH, d), 8,5 (IH, s), 8,9 (IH, s) ppm.

LRMS 404, 406 (MH⁺) .

Analýza: Zjištěno: C, 47,39; H, 4,44: N, 6,73. Vypočítáno pro C16H18CI2N2O4S: C, 47,42; H, 4,48; N, 6,91%.

Příprava 94:

Ethylester N-[(1,4-dichlor-7-isochinolyl)sulfonyl]-N-[2-(tetrahydro-2H-pyran-2-yloxy)ethyl]cykloleucinu

K2CO3 (238 mg, 1,73 mmol) se přidá do roztoku ethylesteru N -[{1,4-dichlor-7-isochinolyl)sulfonyl]cykloleucinu (600 mg, 1,44 mmol) v DMF (10 ml) a suspenze se mísí při teplotě okolí po dobu 30 min. Přidá se roztok 2-(2-bromethoxy)tetrahydro-2H9 ·· 9 9 9999 99

9999 99 9 999

241

9 « 9 9 9 9 9 » * 99 9 t · 9 9 9 9

999 9999 99 99 9 9 999

-pyranu (J.C.S. 1948; 4187) (316 mg, 1,44 mmol) v DMF (4 ml) a potom jodid sodný (10 mg) a reakční směs se mísí při teplotě 70°C po dobu 23 hodin. Chladná směs se vnese do vody a extrahuje se EtOAc. Kombinované organické extrakty se promyjí solankou, suší se (MgSOU a odpaří se ve vakuu. Zbytek ve formě žlutého oleje se přečistí chromatografií na silikagelové koloně za použití hexanu-Et₂O (75:25) jako eluens, azeotropuje se s CH₂C1₂ a suší se ve vakuu za zisku ethylesteru N-[(l,4-dichlor-7-isochinolyl)sulfonyl]-N-[2-(tetrahydro-2H-pyran-2-yloxy)ethyl]cykloleucinu (341 mg, 0,63 mmol) ve formě pevného materiálu.

^XH	(CDC1³, 400	MHz) δ 1,3 (	3H, t), 1,55 (4H, m)	r	1,65-1,8 (6H
m) ,	2,15 (2H,	m), 2,4 (2H,	m), 3,5 (ÍH, m), 3,	7	(3H, m), 3,8
(ÍH	, m) , 3,95	(ÍH, m), 4,2	(2H, q), 4,55 (ÍH,	m)	, 8,35 (2H,
s) ,	8,45 (ÍH,	s), 8,9 (ÍH,	s) ppm.

LRMS 545 (MH⁺) , 562 (MNH?) .

Analýza: Zjištěno: C, 52,31; H, 5,58; N, 4,84. Vypočítáno pro C24H₃oCl2N50₆S»0,3 H₂O: C, 52,33; H, 5,60; N, 5,09%.

Příprava 95:

Methylester N-[(1,4-dichlor-7-isochinolyl)methyl]cykloleucinu

7-chlormethyl-l,4-dichlor-isochinolin (400 mg, 1,62 mmol) se přidá dosuspenze methylesteru cykloleucinu (255 mg, 1,78 mmol), K2CO3 (500 mg, 3,62 mmol) a jodidu sodného (15 mg) a směs se zahřívá při 75 °C po dobu 2 l/2h. Po ochlazení, • · · ·

242 reakční směs se vnese do vody a extrahuje se CH2CI2 (2 x 60 ml). Organické extrakty se promyjí vodou, solankou, solankou, suší se (Na₂SO4) a zahustí se ve vakuu za zisku oleje. Tento materiál se přečistí chromatografií na silikagelové koloně za použití hexanů-EtOAc (85:15) jako eluens za zisku methylesteru N-[(1,4-dichlor-7-isochinolyl)methyl]cykloleucinu (414 mg,

1,17 mmol) ve formě žlutého oleje. Vzorek tohoto oleje se zpracuje etherální HCI a směs se odpaří za zisku hydrochloridové sole titulní sloučeniny ve formě bílého pevného materiálu.

^XH (CDCI3, 300 MHz) δ 1,4-1,8 (SH, m), 2,0 (3H, m), 3,75 (3H, 5), 4,15 (2H, s), 8,25 (3H, m) , 8,5 (ÍH, 5), 10,5 (2H, br s) ppm.

Analýza: Zjištěno: C, 52,53; H, 4,99; N, 6,84. Vypočítáno pro Ci7Hi₈Cl2N₂O₂*HCl: C, 52,39; H, 4,91; N, 7,19%.

Příprava 96:

(1-aminocyklopentyl)(4-methyl-l-piperazinyl)methanon, dihydrochlorid

1-(3-dimethylaminopropyl)-3-ethylkarbodiimid, hydrochlorid (2,49 g, 13,0 mmol) se po částech přidá do chladného (4°C) roztoku hydroxybenzotriazolhydratu (1,49 g, 11,0 mmol) a kyseliny 1-[(terc-butoxykarbonyl)amino]cyklopentankarboxylové (2,29 g, 10,0 mmol) v DMF (15 ml) a směs se mísí po dobu 30 minut. Přidá se N-methylpiperazin (1,10 g,ll,0 mmol), reakční směs se mísí po dobu 30 minut, nechá se zahřát na teplotu okolí míšení pokračuje po dobu dalších 17 hodin. Reakční směs • · · 9 · · · ·

9 9 9 · *

243 se odpaří ve vakuu a zbytek ve formě žlutého oleje se rozdělí mezi nasycený roztok Na2CO3 a EtOAc. Vrstvy se separují, vodná fáze se extrahuje EtOAc a kombinované organické roztoky se suší (MgSOí) a zahustí se ve vakuu. Zbytek ve formě pevného materiálu se pre-adsorbuje na silikagel a přečistí se chromatografií na silikagelové koloně za použití gradientově eluce CH₂Cl₂-MeOH-0, 880 NH₃ (97,5:2,5:0,25 až 90:10:1) a trituruje se s Et₂O za zisku terc.butyl-1-[(4-methyl-l-piperazinyl)karbonyl]cyklopentylkarbamatu (2,31 g, 7,4 mmol) ve formě krystalického pevného materiálu.

t.t. 171-175°C.

^XH (CDC1₃, 300 MHz) δ 1,4 (9H, s), 1,7 (6H, m), 2,25 (3H, s),

2,4 (6H, m), 3,65 (4H, m), 4,7 (IH, br s).

LRMS 312 (MH⁺)

Suspenze terc.butyl-1- [ (4-methyl-l-piperazinyl)karbonyl]cyklopentylkarbamatu (2,2 g, 7,06 mmol) v EtOAc (120 ml) při teplotě 4°C se nasytí HCI plynem a reakční směs se potom mísí po dobu 4 hodin. Směs se azeotropuje s EtOAc, potom se suchým Et₂O a suší se ve vakuu za zisku (1-aminocyklopentyl)(4-methyl-1-piperazinyl)methanonu, dihydrochloridu (2,1 g) ve formě bílého pevného materiálu.

t.t. 267-270°C (rozklad)

Analýza: Zjištěno: C, 43,29; H, 7,99; N, 13,84. Vypočítáno pro CiiH2iN₃O«2HCl*H₂O: C, 43, 71; H, 8,34; N, 13,90%.

LRMS 212 (MH⁺) .

Claims

0001-2-%^

Patentové nároky

1. Sloučenina obecného vzorce (I)

R’ X¹ NR¹—X a její farmaceuticky přijatelné soli, kde:

G znamená N=C(NH)2nebo NHC(=NH)NH2;

R¹ znamená H nebo halogen;

X znamená CO, CH2 nebo SO2;

R² znamená H, aryl, heteroaryl, C3-7cykloalkyl nebo Ci-6alkyl, kde C3-7cykloalkyl a Ci-6alkyl jsou volitelně substituovaný jedním nebo více substituenty nezávisle vybranými ze skupiny zahrnující následující skupiny: halogen, aryl, heterocyklus, C3-7cykloalkyl, Cs-7cykloalkenyl, OH, Ci-6alkoxy, O-Het¹, Ci₃alkyl, CO2R⁷ a NR4R5;

X znamená arylen, Ci-6alkylen volitelně substituovaný jednou nebo více R⁶ skupinami nebo cyklo (C4-7) alkylen volitelně substituovaný R⁶, kde cyklo (C4-7) alkylenový kruh může volitelně obsahovat hetero skupinu vybranou z 0, S(0)_p nebo NR⁷; nebo mohou R² a X¹ dohromady s atomem N, na který jsou navázány, tvořit azetidinový, pyrrolidinový, piperidinový nebo homopiperidinový kruh;

245 »4 · · · · · · ·· • « · · 4 9

4 9 9 4 9 4

4 9 4 4 4 94 9

9 4 4 4 9 9 9

944 9 94 4 9 94 ·

R³ znamená CO2R⁷, CH2OH, CONR⁸R⁹ nebo CH₂NR⁸R⁹;

nebo, když je X¹ vybrán nezávisle na R² a znamená methylen volitelně substituovaný jednou nebo více R⁶ skupinami, nebo znamená 1,1-cyklo (C4-7) alkylen volitelně obsahující hetero skupinu vybranou z 0, S (0)_p nebo NR⁷, nebo NR⁷ a volitelně substituovaný R⁶, tak mohou tvořit R² a R³ společně s N a X¹skupinou, na které jsou navázány, skupinu vzorce (IA) nebo (IB) :

kde X² znamená ethylen, n-propylen nebo n-butylen;

R⁴ a R⁵ jsou každý nezávisle H, aryl nebo Ci-6alkyl volitelně substituovaný arylem;

g

R znamená halogen, OH, Ci-6alkoxy, Ci-6alkylthio, C3-7cykloalkyl SH, aryl, CO2R⁷, CONHR⁸ nebo Ci-ealkyl volitelně substituovaný arylem, Ci-ealkoxy, C0₂H, OH, CONR⁸R⁹ nebo NR⁸R⁹;

R⁷ znamená H nebo Ci-6alkyl;

R⁸ a R⁹ jsou každý nezávisle H nebo Ci-6alkyl volitelně substituovaný OH, CO2R⁷, Ci-6alkoxy nebo NR4R5;

nebo mohou R⁸ a R⁹ společně s atomem N, na který jsou navázány tvořit 4- až 7-členný kruh volitelně obsahující další heteroskupiny vybrané z O, S a NR⁷;

p je 0, 1 nebo 2;

246 aryl je fenyl volitelně substituovaný jedním nebo více substituenty nezávisle vybranými ze skupiny zahrnující skupiny: Ci-6alkyl, Ci-6alkoxy nebo halogen;

heterocyklus je nasycený nebo částečně nebo plně nenasycený 5- až 7-členný heterocyklus obsahující až 3 heteroatomy nezávisle vybrané z O, N a S, který je volitelně substituovaný jedním nebo více substituenty nezávisle vybranými ze skupiny zahrnující skupiny: Ci-galkyl, Ci-6alkoxy, CO2R⁷ nebo halogen;

heteroaryl je plně nenasycený 5- až 7-členný heterocyklus obsahující až 3 heteroatomy nezávisle vybrané z O, N a S, který je volitelně substituovaný jedním nebo více substituenty nezávisle vybranými ze skupiny zahrnující skupiny: Ci-ealkyl, Ci-6alkoxy, CO₂R⁷ nebo halogen;

het¹ je tetrahydropyran-2-yl (2-THP); a arylen je fenylen volitelně substituovaný jedním nebo více substituenty nezávisle vybranými ze skupiny zahrnující skupiny: Ci-6alkyl, Ci-6alkoxy, CO2R⁷ nebo halogen.
2. Sloučenina nebo sůl podle nároku 1, kde R¹ znamená halogen.
3. Sloučenina nebo sůl podle jakéhokoliv z předchozích nároků, kde X znamená SO2.
4. Sloučenina nebo sůl podle jakéhokoliv z předchozích nároků, kde R² znamená H, C3-7cykloalkyl nebo Ci-6alkyl, kde C37cykloalkyl a Ci-6alkyl jsou volitelně substituovaný jedním nebo více substituenty nezávisle vybranými ze skupiny zahrnující následující skupiny: halogen, aryl, heterocyklus,

C3-7cykloalkyl, OH, O-Het¹, Ci-6alkoxy, CO2H, CO2 (C1-6) alkyl nebo

247 • ·· · * ··♦ · • · · · ♦ · · • · t · · • · · · * · «······ *· * ·

NR4R5; nebo mohou R² a X¹ dohromady s atomem N, na který jsou navázány, tvořit azetidinový, pyrrolidinový, piperidinový nebo homopiperidinový kruh.
5. Sloučenina nebo sůl podle jakéhokoliv z předchozích nároků, kde X¹ znamená výhodně fenylen volitelně substituovaný jedním nebo více substituenty nezávisle vybranými ze skupiny zahrnující methoxy a halogen, nebo znamená Ci-3alkylen volitelně substituovaný jednou nebo více skupinami vybranými z následujících skupin: aryl nebo (Ci6) alkyl volitelně substituovaný arylem, Ci-ealkoxy, CO2H, OH,

NH2 nebo CONH2;

nebo cyklo (C4-7) alkylen volitelně obsahující hetero skupinu vybranou z 0 nebo NR⁷, kde uvedený kruh je volitelně substituovaný R⁶, nebo mohou dohromady s R a s atomem N, na který jsou navázány, tvořit azetidinový, pyrrolidinový, piperidinový nebo homopiperidinový kruh.
6. Sloučenina nebo sůl podle jakéhokoliv z předchozích nároků, kde R³ znamená CO2R⁷ nebo CONR⁸R⁹.
7. Sloučenina nebo sůl podle jakéhokoliv z předchozích nároků, kde R¹ znamená chlor nebo brom.
8. Sloučenina nebo sůl podle jakéhokoliv z předchozích nároků, kde R² znamená H, Ci-3alkyl volitelně substituovaný arylem nebo volitelně substituovaný pyridylem nebo NR⁴R⁵ nebo HO nebo Ohet¹, nebo mohou R² a X¹ dohromady s atomem N, na který jsou navázány, tvořit azetidinový, pyrrolidinový, piperidinový nebo homopiperidinový kruh.
9. Sloučenina nebo sůl podle jakéhokoliv z předchozích nároků • *· ·· 4··· 4 4 • 4 · 4 44 4 4 4 4

248

44 4444 444

444 4444 44 44 44 444 kde X¹ znamená methylen volitelně substituovaný jedním nebo více substituenty nezávisle vybranými ze skupiny zahrnující aryl nebo (Ci-₄alkyl volitelně substituovaný OH, NH2 nebo CONH2, nebo znamená cyklobutylen, cyklopentylen, cyklohexylen, cykoheptylen, tetrahydropyranylen, piperidylen substituovaný R⁷, nebo tvoří dohromady s R² a s atomem N, na který jsou navázány, azetidinový, pyrrolidinový, piperidinový nebo homopiperidinový kruh.
10. Sloučenina nebo sůl podle jakéhokoliv z předchozích nároků, kde R³ znamená CO₂H, CONH2, CON(CH₃) (CH₂)2OH, CON(CH₃) (CH₂)2NHCH₃, CO₂ (Ci-₃alkyl) , CONH (CH₂) 2OH, CONH (CH₂) 2OCH3, (morfolin) CO nebo (4-methylpiperazin)CO.
11. Sloučenina nebo sůl podle jakéhokoliv z předchozích nároků, kde R¹ znamená chlor.
12. Sloučenina nebo sůl podle jakéhokoliv z předchozích nároků, kde R² znamená H, CH2CH2N (CH₃) 2, CH₃, CH2CH2OH, CH2CH2O (2-THP) , pyridinylmethyl, benzyl nebo methoxybenzyl, nebo mohou R² a X¹dohromady s atomem N, na který jsou navázány, tvořit azetidinový, pyrrolidinový, piperidinový nebo homopiperidinový kruh navázaný na R³ skupinu přes 2-pozici uvedeného kruhu.
13. Sloučenina nebo sůl podle jakéhokoliv z předchozích nároků, kde X¹ znamená C(CH₃)2, 1,1-cyklopentylen, 4,4tetrahydropyranylen, N-methyl-4,4-piperidylen, CH2,

CH(CH(CH₃)₂, CH(CH₂)₄NH₂, CH (CH2) CONH2, 1,1-cyklobutylen, 1,1• · · · · ·

249 cyklopentylen, 1,1-cyklohexylen, 1,1-cykloheptylen, nebo tvoří dohromady s R a s atomem N, na který je navázán, azetidinový, pyrrolidinový, piperidinový nebo homopiperidinový kruh navázaný na R³ skupinu přes 2-pozici.
14. Sloučenina nebo sůl podle jakéhokoliv z předchozích nároků, kde R³ znamená CO2H.
15. Sloučenina nebo sůl podle jakéhokoliv z předchozích nároků, kde R² znamená H, CH2CH2N (CH3) 2, CH3, CH2CH2OH, CH2CH2O (2-THP) nebo mohou R² a X¹ dohromady s atomem N, na který jsou navázány, tvořit pyrrolidinový kruh navázaný na R³ skupinu přes 2-pozici uvedeného kruhu.
16. Sloučenina nebo sůl podle jakéhokoliv z předchozích nároků, kde X¹ znamená C(CH3)2, 1,1-cyklopentylen, 4,4tetrahydropyranylen, N-methyl-4,4-piperidylen, nebo tvoří dohromady s R a s atomem N, na který je navázán, azetidinový, o

pyrrolidinový nebo piperidinový kruh navázaný na R skupinu přes 2-pozici.
17. Sloučenina nebo sůl podle jakéhokoliv z předchozích nároků, kde X znamená SO2, kde je přítomna R³-X¹-NR²- skupina, kde X¹ je nezávislý na R² a znamená methylen volitelně substituovaný jednou nebo více skupinami R⁶, nebo znamená 1,1-cyklo(C4-7) alkylen volitelně obsahující hetero skupinu vybranou z 0, S(0)_p nebo NR⁷ a volitelně substituovaný R⁶, a

R² a R³ mohou společně s N a X¹ skupinou, na které jsou navázány, tvořit skupinu vzorce (IA) nebo (IB):

9 ·· ·· 9 9 9 9 9 · • · · · · · « · · «

250

9 · · · · · ♦ · ♦ «

9f 99·««·« ··· 9·9· 99 «· ·9 «φ* (ΙΑ) (EB) kde X² znamená ethylen, n-propylen nebo n-butylen.
18. Sloučenina nebo sůl podle nároku 17, kde X¹ znamená C(CH3)2, 1,1-cyklobutylen, 1,1-cyklopentylen, 1,1-cyklohexylen,

4.4- tetrahydropyranylen nebo N-methyl-4,4-piperidylen.
19. Sloučenina nebo sůl podle nároků 17 nebo 18, kde X² znamená ethylen.
20. Sloučenina nebo sůl podle nároku 1, kde substituenty R¹, X,

2 1 3

R , X a R mají významy uvedené v příkladech provedení vynálezu.
21. Sloučenina nebo sůl podle nároku 1, kde R¹ znamená chlor nebo brom; X znamená SO2; R² znamená H, CH2CH2N (CH3) 2, CH3, CH2CH2OH, CH2CH2O (2-THP) , pyridinylmethyl, benzyl nebo methoxybenzyl; nebo R² a X¹ dohromady s atomem N, na který jsou navázány, tvoří azetidinový, pyrrolidinový, piperidinový nebo homopiperidinový kruh, navázaný na R³ skupinu přes 2-pozici uvedeného kruhu;

X¹ znamená C(CH3)₂, 1,1-cyklopentylen, 4,4-tetrahydropyranylen, N-methyl-4,4-piperidylen, CH₂, CH(CH(CH₃)₂, CH(CH₂)₄NH₂,

CH (CH₂)CONH₂, 1,1-cyklobutylen, 1,1-cyklopentylen, 1,1-cyklohexylen, 1,1-cykloheptylen, N-methyl-4,4-piperidylen,

4.4- tetrahydropyralen, nebo tvoří dohromady s R² a s atomem N, na který je navázán, azetidinový, pyrrolidinový, piperidinový nebo homopiperidinový kruh navázaný na R³ skupinu přes 2pozici; a

R³ znamená CO₂H, CONH₂, CON (CH3) (CH₂) ₂OH, CON (CH3) (CH₂) ₂NHCH₃,

OČI · · φ · · φ φ φ

2jl φφφ ···· ·· ·· ·< φ

CO₂(Ci-₃alkyl) , CONH (CH₂) 2OH, CONH (CH₂) ₂OCH₃, (morfolin) CO nebo (4-methylpiperazin)CO.
22. Sloučenina nebo sůl podle nároku 1, kde R¹ znamená chlor; X znamená S02; R², pokud je nezávislý, znamená H, CH2CH2N (CH3) 2, CH3, CH2CH2OH, CH2CH2O (2-THP) ;

X¹, pokud je nezávislý, znamená C(CH₃)2, 1,1-cyklopentylen,

4,4-tetrahydropyranylen, N-methyl-4,4-piperidylen, nebo tvoří X¹ a R² dohromady s atomem N, na který jsou navázány, azetidinový, pyrrolidinový neo piperidinový kruh navázaný na R³skupinu přes 2-pozici; a

R³ znamená CO2H.
23. Sloučenina vybraná ze sloučenin uvedených v příkladech provedení vynálezu a jejich solí.
24. Sloučenina nebo sůl vybraná ze skupiny zahrnující:

N-[ (4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl) sulf onyl]-D-prolin;

Kyselina 2-{[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)sulfonyl]amino}isomáselná;

Kyselina l-{[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)sulf onyljamino] cyklobutankarboxylová;

N-[ (4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl) sulfonyl]cykloleucin; l-{[ (4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl) sulfonyl]amino}-N- (2-hydroxyethyl)cyklopentankarboxamin;

l-{[ (4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl) sulfonyl]amino] -N-[2- (dimethylamino) ethyl]cyklopentankarboxamin;

1 —{[ (4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl) sulfonyl]amino}-N-[2- (dimethylamino) ethyl]cyklopentankarboxamin;

N-( (4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)sulfonyl]-N-[2- (dimethylamino) ethyl]cykloleucin;

Kyselina l-{[ (4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl) sulfonyl]amino]9 9

252

9 99

99 9 9

9 9

9 9

9 9

999 9999

9 9 9 9 9 •A 99 99 cyklohexankarboxylová;

Kyselina 4-{[ (4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl) sulfonyl]amino} tetrahydro-2H-pyran-4-karboxylová;

Terč.butyl (2R)-l-[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)sulfonyl] -2-piperidinkarboxylat;

Kyselina (2R)-l-[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl)sulfonyl]-2 -piperidinkarboxylová;

1 —{[ (4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl) sulfonyl]amino}-N- (2-hydroxyethyl)-N-methylcyklopentankarboxamid; l-{[(4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl) sulfonyl]amino}-N- (2-methoxyethyl)cyklopentankarboxamid;

4-chlor-l-guanidin-N-[l- (morfolinkarbonyl) cyklopentyl]-7-isochinolinsulfonamid;

4-chlor-l-guanidin-N-{l-[ (4-methylpiperazino) karbonyl]cyklopentyl}-7-isochinolinsulfonamid;

N-[ (4-brom-l-guanidin-7-isochinolyl)sulfonyl]-N-[2- (dimethylamino) ethyl]cykloleucin;

Kyselina l-{[ (4-chlor-l-guanidin-7-isochinolyl) sulfonyl][2- (tetrahydro-2H-pyran-2-yloxy) ethyl]amino}~ cyklopentankarboxylová; a

Ν''-{4-chlor-7-[(10-oxo-9-oxy-6-azaspiro[4.5]dec-6-yl)sulfonyl] -1-isochinolyl}guanidin; a jejich farmaceuticky přijatelné soli.
25. Farmaceutický prostředek obsahující sloučeninu nebo sůl podle jakéhokoliv z předšlých nároků a farmaceuticky přijatelné pomocné činidlo, ředidlo nebo nosič.
26. Sloučenina nebo sůl podle jakéhokoliv z nároků 1-24 pro použití jako léčivo.
27. Použití sloučeniny nebo soli podle jakéhokoliv z nároků 1

253 ·· ··♦·

24 pro výrobu léku pro léčbu stavů a procesů zprostředkovaných uPA.
28. Způsob léčby stavů a procesů zprostředkovaných uPA vyznačující se tím, že obsahuje podání účinného množství sloučeniny nebo soli podle jakéhokoliv z nároků 1 až 24, nebo prostředku podle nároku 25.
29. Způsob výroby sloučeniny obecného vzorce (I) nebo její soli podle nároku lvyznačující se tím, že zahrnuje reakci příslušného 1-aminoisochinolinového derivátu vzorce (II) :

s kyanamidem (NH2CN) nebo činidlem působícím jako NHC⁺=NH synthon, kde R¹, R², R³, X a X¹ jsou stejné, jak byly definovány v nároku 1.
30. Způsob výroby sloučeniny obecného vzorce (I) nebo její soli podle nároku lvyznačující se tím, že zahrnuje reakci příslušného 1-aminoisochinolinového derivátu vzorce (II):

kde R¹, R², R³, X a X¹ jsou stejné, jak byly definovány v nároku ♦ · ··*·

254

1, s (III) činidlem působícím jako chráněný ^: 2+ amidin(2+) synthon

PNH

MHPj kde G¹ je chráněná guanidinová skupina N=C(NHP)NHPi) nebo její tautomerní formy, kde P a Pi jsou chránící skupiny pro dusík, jako je terc-butoxykarbonyl (Boc), benzyl, benzyloxykarbonyl atd., které mohou být snadno odstraněny za zisku sloučeniny obecného vzorce (I) nebo její soli.
31. Způsob výroby sloučeniny obecného vzorce (I) nebo její soli podle nároku lvyznačující se tím, že zahrnuje reakci příslušné sloučeniny vzorce (V):

kde R¹, R²,

1, a Z je vhodná odštěpitelná skupina, jako je Cl, Br nebo Oph, která může být odstraněna guanidinem ve formě volné baze.
32. Sloučenina obecného vzorce (II):

«·

255 kde R¹, R², R³, X a X¹ jsou stejné, jak byly definovány v nároku

1, nebo její sůl.

kde R¹, R², R³, X a X¹ jsou stejné, jak byly definovány v nároku 1, a G¹ je chráněná guanidinová skupina N=C (NHP) NHPi) nebo její tautomerní forma, kde P a Pi jsou chránící skupiny pro dusík.
34. Sloučenina obecného vzorce (V):

kde R¹, R², R³, X a X¹ jsou stejné, jak byly definovány v nároku 1, a Z je odštěpitelná skupina.