CZ20014701A3 - Polykationtové biokonjugáty pro transport aktivních látek - Google Patents
Polykationtové biokonjugáty pro transport aktivních látek Download PDFInfo
- Publication number
- CZ20014701A3 CZ20014701A3 CZ20014701A CZ20014701A CZ20014701A3 CZ 20014701 A3 CZ20014701 A3 CZ 20014701A3 CZ 20014701 A CZ20014701 A CZ 20014701A CZ 20014701 A CZ20014701 A CZ 20014701A CZ 20014701 A3 CZ20014701 A3 CZ 20014701A3
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- formula
- molecules
- polycationic
- bioconjugates
- conjugated
- Prior art date
Links
- 239000013543 active substance Substances 0.000 title claims abstract description 8
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 claims abstract description 85
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims abstract description 23
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 19
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 claims abstract description 15
- 230000000845 anti-microbial effect Effects 0.000 claims abstract description 13
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 claims abstract description 7
- 230000003211 malignant effect Effects 0.000 claims abstract description 6
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 claims abstract 2
- CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-N Hydrogen bromide Chemical class Br CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 75
- 241000894007 species Species 0.000 claims description 64
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 42
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 40
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 claims description 34
- 125000000129 anionic group Chemical group 0.000 claims description 30
- 230000001028 anti-proliverative effect Effects 0.000 claims description 28
- 125000002091 cationic group Chemical group 0.000 claims description 23
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 claims description 21
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 20
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims description 18
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 claims description 15
- 230000000840 anti-viral effect Effects 0.000 claims description 14
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 13
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 claims description 12
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims description 12
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims description 11
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims description 11
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims description 11
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 11
- 238000012546 transfer Methods 0.000 claims description 11
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims description 9
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 claims description 8
- 230000005298 paramagnetic effect Effects 0.000 claims description 8
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 claims description 8
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 claims description 8
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 claims description 7
- 239000002872 contrast media Substances 0.000 claims description 7
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 claims description 7
- 239000005556 hormone Substances 0.000 claims description 7
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 claims description 7
- 239000002502 liposome Substances 0.000 claims description 7
- 239000000178 monomer Substances 0.000 claims description 7
- -1 etc.) Proteins 0.000 claims description 6
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 claims description 6
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 5
- 150000001768 cations Chemical class 0.000 claims description 5
- 231100000915 pathological change Toxicity 0.000 claims description 5
- 230000036285 pathological change Effects 0.000 claims description 5
- 108020000948 Antisense Oligonucleotides Proteins 0.000 claims description 4
- 230000000692 anti-sense effect Effects 0.000 claims description 4
- 239000000074 antisense oligonucleotide Substances 0.000 claims description 4
- 238000012230 antisense oligonucleotides Methods 0.000 claims description 4
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 claims description 4
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 4
- 239000003667 hormone antagonist Substances 0.000 claims description 4
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 claims description 4
- 239000000813 peptide hormone Substances 0.000 claims description 4
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 claims description 4
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 4
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 claims description 4
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 claims description 4
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 claims description 4
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 claims description 4
- 201000003883 Cystic fibrosis Diseases 0.000 claims description 3
- 102000014150 Interferons Human genes 0.000 claims description 3
- 108010050904 Interferons Proteins 0.000 claims description 3
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 claims description 3
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 claims description 3
- 235000012000 cholesterol Nutrition 0.000 claims description 3
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 claims description 3
- 230000002637 immunotoxin Effects 0.000 claims description 3
- 229940051026 immunotoxin Drugs 0.000 claims description 3
- 239000002596 immunotoxin Substances 0.000 claims description 3
- 231100000608 immunotoxin Toxicity 0.000 claims description 3
- 229940047124 interferons Drugs 0.000 claims description 3
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 claims description 3
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 claims description 3
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 claims description 3
- 150000003628 tricarboxylic acids Chemical class 0.000 claims description 3
- 108010079709 Angiostatins Proteins 0.000 claims description 2
- 102000012936 Angiostatins Human genes 0.000 claims description 2
- 102000005427 Asialoglycoprotein Receptor Human genes 0.000 claims description 2
- 102000011022 Chorionic Gonadotropin Human genes 0.000 claims description 2
- 108010062540 Chorionic Gonadotropin Proteins 0.000 claims description 2
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 claims description 2
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 claims description 2
- 108010079505 Endostatins Proteins 0.000 claims description 2
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 claims description 2
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 claims description 2
- 102000009465 Growth Factor Receptors Human genes 0.000 claims description 2
- 108010009202 Growth Factor Receptors Proteins 0.000 claims description 2
- 208000026350 Inborn Genetic disease Diseases 0.000 claims description 2
- 102000015696 Interleukins Human genes 0.000 claims description 2
- 108010063738 Interleukins Proteins 0.000 claims description 2
- 102000004895 Lipoproteins Human genes 0.000 claims description 2
- 108090001030 Lipoproteins Proteins 0.000 claims description 2
- OFOBLEOULBTSOW-UHFFFAOYSA-N Malonic acid Chemical compound OC(=O)CC(O)=O OFOBLEOULBTSOW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 102000015636 Oligopeptides Human genes 0.000 claims description 2
- 108010038807 Oligopeptides Proteins 0.000 claims description 2
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 claims description 2
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 claims description 2
- 102000007238 Transferrin Receptors Human genes 0.000 claims description 2
- 108010033576 Transferrin Receptors Proteins 0.000 claims description 2
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 claims description 2
- 230000001093 anti-cancer Effects 0.000 claims description 2
- 230000000843 anti-fungal effect Effects 0.000 claims description 2
- 230000000842 anti-protozoal effect Effects 0.000 claims description 2
- 229940121375 antifungal agent Drugs 0.000 claims description 2
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 2
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 2
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 2
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 claims description 2
- 229940041181 antineoplastic drug Drugs 0.000 claims description 2
- 239000003904 antiprotozoal agent Substances 0.000 claims description 2
- 108010006523 asialoglycoprotein receptor Proteins 0.000 claims description 2
- 210000004204 blood vessel Anatomy 0.000 claims description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 2
- 150000001841 cholesterols Chemical class 0.000 claims description 2
- 239000000824 cytostatic agent Substances 0.000 claims description 2
- 230000001085 cytostatic effect Effects 0.000 claims description 2
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 claims description 2
- 102000006815 folate receptor Human genes 0.000 claims description 2
- 108020005243 folate receptor Proteins 0.000 claims description 2
- 208000016361 genetic disease Diseases 0.000 claims description 2
- 150000002327 glycerophospholipids Chemical class 0.000 claims description 2
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 claims description 2
- 239000003688 hormone derivative Substances 0.000 claims description 2
- 229940084986 human chorionic gonadotropin Drugs 0.000 claims description 2
- 229940047122 interleukins Drugs 0.000 claims description 2
- 230000005291 magnetic effect Effects 0.000 claims description 2
- 150000002772 monosaccharides Chemical class 0.000 claims description 2
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 claims description 2
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 claims description 2
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 claims description 2
- 229920001542 oligosaccharide Polymers 0.000 claims description 2
- 150000002482 oligosaccharides Chemical class 0.000 claims description 2
- 150000003904 phospholipids Chemical class 0.000 claims description 2
- 229940024999 proteolytic enzymes for treatment of wounds and ulcers Drugs 0.000 claims description 2
- 235000003441 saturated fatty acids Nutrition 0.000 claims description 2
- 150000004671 saturated fatty acids Chemical class 0.000 claims description 2
- 150000003431 steroids Chemical class 0.000 claims description 2
- 230000000699 topical effect Effects 0.000 claims description 2
- 235000021122 unsaturated fatty acids Nutrition 0.000 claims description 2
- 150000004670 unsaturated fatty acids Chemical class 0.000 claims description 2
- 230000029812 viral genome replication Effects 0.000 claims description 2
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 claims description 2
- 125000005647 linker group Chemical group 0.000 claims 8
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 claims 3
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 claims 2
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 claims 2
- 150000000921 Gadolinium Chemical class 0.000 claims 1
- 102000008072 Lymphokines Human genes 0.000 claims 1
- 108010074338 Lymphokines Proteins 0.000 claims 1
- 102000015731 Peptide Hormones Human genes 0.000 claims 1
- 108010038988 Peptide Hormones Proteins 0.000 claims 1
- 150000001450 anions Chemical class 0.000 claims 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 claims 1
- 150000001991 dicarboxylic acids Chemical class 0.000 claims 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 claims 1
- 230000004927 fusion Effects 0.000 claims 1
- 230000028993 immune response Effects 0.000 claims 1
- 210000005229 liver cell Anatomy 0.000 claims 1
- 238000012633 nuclear imaging Methods 0.000 claims 1
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims 1
- 229920000447 polyanionic polymer Polymers 0.000 claims 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 claims 1
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 abstract description 4
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 abstract 1
- 229910000042 hydrogen bromide Inorganic materials 0.000 description 36
- WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N Tetrahydrofuran Chemical compound C1CCOC1 WYURNTSHIVDZCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 24
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 20
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 18
- YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N tetrahydrofuran Natural products C=1C=COC=1 YLQBMQCUIZJEEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 229960004316 cisplatin Drugs 0.000 description 11
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M Sodium bicarbonate Chemical compound [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 8
- BASFCYQUMIYNBI-UHFFFAOYSA-N platinum Substances [Pt] BASFCYQUMIYNBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 229920000656 polylysine Polymers 0.000 description 8
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 8
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 8
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 7
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N N,N-Dimethylformamide Chemical compound CN(C)C=O ZMXDDKWLCZADIW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 6
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 6
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 6
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 6
- HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N cholesterol group Chemical group [C@@H]1(CC[C@H]2[C@@H]3CC=C4C[C@@H](O)CC[C@]4(C)[C@H]3CC[C@]12C)[C@H](C)CCCC(C)C HVYWMOMLDIMFJA-DPAQBDIFSA-N 0.000 description 5
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 5
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 5
- AZUYLZMQTIKGSC-UHFFFAOYSA-N 1-[6-[4-(5-chloro-6-methyl-1H-indazol-4-yl)-5-methyl-3-(1-methylindazol-5-yl)pyrazol-1-yl]-2-azaspiro[3.3]heptan-2-yl]prop-2-en-1-one Chemical compound ClC=1C(=C2C=NNC2=CC=1C)C=1C(=NN(C=1C)C1CC2(CN(C2)C(C=C)=O)C1)C=1C=C2C=NN(C2=CC=1)C AZUYLZMQTIKGSC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 4
- 238000012404 In vitro experiment Methods 0.000 description 4
- 108010039918 Polylysine Proteins 0.000 description 4
- 238000002595 magnetic resonance imaging Methods 0.000 description 4
- 229920000729 poly(L-lysine) polymer Polymers 0.000 description 4
- 239000000047 product Substances 0.000 description 4
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 4
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 4
- 235000017557 sodium bicarbonate Nutrition 0.000 description 4
- 229910000030 sodium bicarbonate Inorganic materials 0.000 description 4
- 230000032258 transport Effects 0.000 description 4
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 description 4
- NHJVRSWLHSJWIN-UHFFFAOYSA-N 2,4,6-trinitrobenzenesulfonic acid Chemical compound OS(=O)(=O)C1=C([N+]([O-])=O)C=C([N+]([O-])=O)C=C1[N+]([O-])=O NHJVRSWLHSJWIN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- CMSMOCZEIVJLDB-UHFFFAOYSA-N Cyclophosphamide Chemical compound ClCCN(CCCl)P1(=O)NCCCO1 CMSMOCZEIVJLDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N Dicylcohexylcarbodiimide Chemical compound C1CCCCC1N=C=NC1CCCCC1 QOSSAOTZNIDXMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 3
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 3
- 241000283984 Rodentia Species 0.000 description 3
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 3
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 3
- DQLATGHUWYMOKM-UHFFFAOYSA-L cisplatin Chemical group N[Pt](N)(Cl)Cl DQLATGHUWYMOKM-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 3
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 3
- IPCSVZSSVZVIGE-UHFFFAOYSA-N hexadecanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(O)=O IPCSVZSSVZVIGE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 3
- 229910052697 platinum Inorganic materials 0.000 description 3
- 230000008569 process Effects 0.000 description 3
- 238000013207 serial dilution Methods 0.000 description 3
- 229910052688 Gadolinium Inorganic materials 0.000 description 2
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000028018 Lymphocytic leukaemia Diseases 0.000 description 2
- NQTADLQHYWFPDB-UHFFFAOYSA-N N-Hydroxysuccinimide Chemical compound ON1C(=O)CCC1=O NQTADLQHYWFPDB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 2
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 2
- 238000009833 condensation Methods 0.000 description 2
- 230000005494 condensation Effects 0.000 description 2
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 2
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 2
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 2
- UIWYJDYFSGRHKR-UHFFFAOYSA-N gadolinium atom Chemical compound [Gd] UIWYJDYFSGRHKR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 2
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 2
- 235000018977 lysine Nutrition 0.000 description 2
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 2
- 229910021645 metal ion Inorganic materials 0.000 description 2
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 2
- 230000001151 other effect Effects 0.000 description 2
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 2
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 2
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 2
- 238000012552 review Methods 0.000 description 2
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 2
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 2
- KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-N succinic acid Chemical compound OC(=O)CCC(O)=O KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000035322 succinylation Effects 0.000 description 2
- 238000010613 succinylation reaction Methods 0.000 description 2
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 2
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 2
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 2
- FALRKNHUBBKYCC-UHFFFAOYSA-N 2-(chloromethyl)pyridine-3-carbonitrile Chemical compound ClCC1=NC=CC=C1C#N FALRKNHUBBKYCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108020004491 Antisense DNA Proteins 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 229920002134 Carboxymethyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N Copper Chemical compound [Cu] RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000017274 Diospyros sandwicensis Nutrition 0.000 description 1
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 1
- 206010018338 Glioma Diseases 0.000 description 1
- 241000700721 Hepatitis B virus Species 0.000 description 1
- 206010019799 Hepatitis viral Diseases 0.000 description 1
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- 241000282838 Lama Species 0.000 description 1
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 1
- 101710135898 Myc proto-oncogene protein Proteins 0.000 description 1
- 102100038895 Myc proto-oncogene protein Human genes 0.000 description 1
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 1
- 235000021314 Palmitic acid Nutrition 0.000 description 1
- 208000037273 Pathologic Processes Diseases 0.000 description 1
- 206010060862 Prostate cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000000236 Prostatic Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 108091034057 RNA (poly(A)) Proteins 0.000 description 1
- IWUCXVSUMQZMFG-AFCXAGJDSA-N Ribavirin Chemical compound N1=C(C(=O)N)N=CN1[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 IWUCXVSUMQZMFG-AFCXAGJDSA-N 0.000 description 1
- 206010039491 Sarcoma Diseases 0.000 description 1
- PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L Sodium Sulfate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=O PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 101710150448 Transcriptional regulator Myc Proteins 0.000 description 1
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 1
- UDMBCSSLTHHNCD-UHTZMRCNSA-N [(2r,3s,4s,5r)-5-(6-aminopurin-9-yl)-3,4-dihydroxyoxolan-2-yl]methyl dihydrogen phosphate Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](COP(O)(O)=O)[C@@H](O)[C@@H]1O UDMBCSSLTHHNCD-UHTZMRCNSA-N 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 210000001552 airway epithelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 239000003816 antisense DNA Substances 0.000 description 1
- 239000012736 aqueous medium Substances 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 238000001479 atomic absorption spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 230000004791 biological behavior Effects 0.000 description 1
- BOFNEFKSMURYOG-JEDNCBNOSA-N butanedioic acid;(2s)-2,6-diaminohexanoic acid Chemical compound OC(=O)CCC(O)=O.NCCCC[C@H](N)C(O)=O BOFNEFKSMURYOG-JEDNCBNOSA-N 0.000 description 1
- HAUGVDQUSLPQBX-UHFFFAOYSA-N butanedioic acid;1-hydroxypyrrolidine-2,5-dione Chemical compound ON1C(=O)CCC1=O.OC(=O)CCC(O)=O HAUGVDQUSLPQBX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 1
- 239000001768 carboxy methyl cellulose Substances 0.000 description 1
- 235000010948 carboxy methyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 239000008112 carboxymethyl-cellulose Substances 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 230000024245 cell differentiation Effects 0.000 description 1
- 230000032823 cell division Effects 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- GLNADSQYFUSGOU-UHFFFAOYSA-J chembl1640 Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[Na+].C1=C(S([O-])(=O)=O)C=C2C=C(S([O-])(=O)=O)C(N=NC3=CC=C(C=C3C)C=3C=C(C(=CC=3)N=NC=3C(=CC4=CC(=CC(N)=C4C=3O)S([O-])(=O)=O)S([O-])(=O)=O)C)=C(O)C2=C1N GLNADSQYFUSGOU-UHFFFAOYSA-J 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 210000000038 chest Anatomy 0.000 description 1
- WLNARFZDISHUGS-MIXBDBMTSA-N cholesteryl hemisuccinate Chemical compound C1C=C2C[C@@H](OC(=O)CCC(O)=O)CC[C@]2(C)[C@@H]2[C@@H]1[C@@H]1CC[C@H]([C@H](C)CCCC(C)C)[C@@]1(C)CC2 WLNARFZDISHUGS-MIXBDBMTSA-N 0.000 description 1
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 1
- 230000003021 clonogenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000005757 colony formation Effects 0.000 description 1
- 238000002648 combination therapy Methods 0.000 description 1
- 230000001268 conjugating effect Effects 0.000 description 1
- 229910052802 copper Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010949 copper Substances 0.000 description 1
- 239000002178 crystalline material Substances 0.000 description 1
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 1
- 238000002059 diagnostic imaging Methods 0.000 description 1
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 238000013535 dynamic contrast enhanced MRI Methods 0.000 description 1
- 230000005684 electric field Effects 0.000 description 1
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 1
- ODKNJVUHOIMIIZ-RRKCRQDMSA-N floxuridine Chemical compound C1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C(=O)NC(=O)C(F)=C1 ODKNJVUHOIMIIZ-RRKCRQDMSA-N 0.000 description 1
- 108700010309 gadopentetate dimeglumine polylysine Proteins 0.000 description 1
- 229930182830 galactose Natural products 0.000 description 1
- 210000005095 gastrointestinal system Anatomy 0.000 description 1
- 238000001476 gene delivery Methods 0.000 description 1
- 238000001415 gene therapy Methods 0.000 description 1
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 1
- 210000003494 hepatocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000001553 hepatotropic effect Effects 0.000 description 1
- 230000002519 immonomodulatory effect Effects 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- 210000004153 islets of langerhan Anatomy 0.000 description 1
- 238000011866 long-term treatment Methods 0.000 description 1
- 208000003747 lymphoid leukemia Diseases 0.000 description 1
- 150000002669 lysines Chemical class 0.000 description 1
- 230000036210 malignancy Effects 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 description 1
- 125000000896 monocarboxylic acid group Chemical group 0.000 description 1
- 210000000663 muscle cell Anatomy 0.000 description 1
- WQEPLUUGTLDZJY-UHFFFAOYSA-N n-Pentadecanoic acid Natural products CCCCCCCCCCCCCCC(O)=O WQEPLUUGTLDZJY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 229940127073 nucleoside analogue Drugs 0.000 description 1
- 229940046166 oligodeoxynucleotide Drugs 0.000 description 1
- 230000026792 palmitoylation Effects 0.000 description 1
- 206010033675 panniculitis Diseases 0.000 description 1
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 1
- 230000009054 pathological process Effects 0.000 description 1
- 229960003330 pentetic acid Drugs 0.000 description 1
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 description 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 1
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 1
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 229940115272 polyinosinic:polycytidylic acid Drugs 0.000 description 1
- 238000006116 polymerization reaction Methods 0.000 description 1
- 210000004896 polypeptide structure Anatomy 0.000 description 1
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 1
- 239000011814 protection agent Substances 0.000 description 1
- 239000002516 radical scavenger Substances 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 1
- 229960000329 ribavirin Drugs 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 238000009097 single-agent therapy Methods 0.000 description 1
- 210000004304 subcutaneous tissue Anatomy 0.000 description 1
- 239000001384 succinic acid Substances 0.000 description 1
- 229940014800 succinic anhydride Drugs 0.000 description 1
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 230000037317 transdermal delivery Effects 0.000 description 1
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 1
- 102000003390 tumor necrosis factor Human genes 0.000 description 1
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 1
- 201000001862 viral hepatitis Diseases 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
- A61K47/64—Drug-peptide, drug-protein or drug-polyamino acid conjugates, i.e. the modifying agent being a peptide, protein or polyamino acid which is covalently bonded or complexed to a therapeutically active agent
- A61K47/645—Polycationic or polyanionic oligopeptides, polypeptides or polyamino acids, e.g. polylysine, polyarginine, polyglutamic acid or peptide TAT
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Oncology (AREA)
- Virology (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Polyamides (AREA)
- Polyesters Or Polycarbonates (AREA)
- Materials For Medical Uses (AREA)
- Macromolecular Compounds Obtained By Forming Nitrogen-Containing Linkages In General (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Other Resins Obtained By Reactions Not Involving Carbon-To-Carbon Unsaturated Bonds (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)
- Polymers With Sulfur, Phosphorus Or Metals In The Main Chain (AREA)
Description
Polykationtové biokonjugáty pro transport aktivních látek
Oblast techniky
Předmětem předloženého vynálezu jsou polykationtové biokonjugáty, které jsou vhodné pro transport aktivních látek různých typů v savčím organismu, tj. fungují jako nosiče.
Podstata vynálezu
Nové polykationtové biokonjugáty se připravují kondenzováním [(k)Mxj a/nebo [(i)Mxj molekul, které nesou funkční skupiny pro konjugaci - které mohou být buď jednoho nebo mohou být různých (dvou nebo více, tj. x) druhů - s daným představitelem isopolypeptidových polykationtů, který má volné α-aminové skupiny, jako molekulami nosiče, chemickými vazbami. Tyto biokonjugáty syntetizované tímto způsobem lze popsat obecným vzorcem I
H[NH-CH2- (CH2) m-CH-CO] rOH
I (I), [ (i)Mx]*[(k)Mx]-NH a v polykationtových biokonjugátech existují molekuly isopolypeptidového polykationtového nosiče (zde dále molekuly nosiče), které mají volné α-aminové skupiny, které lze popsat obecným vzorcem l/a
H[NH-CH2- (CH2)m-CH-CO] rOH | (I/a), nh2 (volná α-aminová skupina) a v každé molekule nosiče obecného vzorce l/a existují monomery stejné konfigurace (tj. buď D- nebo L-), jednotlivé monomery nejsou spolu navázány svými aminovými skupinami v α-polohách, ale aminovými skupinami v jiných (tj. v β-, γ-, δ-, ε- atd.) i · ·· 4 4 · 4 ·· ·1 polohách podle hodnoty m a jejich struktury se proto odlišují od struktur polypeptidů vystavených obvyklými α-amino-peptidovými vazbami, které se obecně vyskytují v savčích organismech, přičemž r znamená střední hodnotu mezi 20 a 400, m znamená číslo 0,1,2, 3,.... k, [(k)Mxj znamená molekuly zesilovače a/nebo spojovací molekuly konjugované kovalentními (= k) vazbami s molekulou isopolypeptidového polykationtového nosiče, a [(i)Mx] znamená molekuly zesilovače konjugované iontovými (= i) vazbami s molekulou isopolypeptidového polykationtového nosiče, při čemž uvedené molekuly zesilovače a spojovací molekuly, které mají příslušné funkční skupiny pro konjugaci, mohou být buď identické nebo mohou být různých (dvou nebo více, tj. x) druhů, a molekuly zesilovače mohou být konjugovány:
- přímo a/nebo
- nepřímo spojovací molekulou, a dále výskyt napojení [(k)Mx] a [(i)Mx] ve stejném polykationtovém biokonjugátu je symbolizován [(k/i)Mxj. Na základě tohoto obecného vzorce I nových polykationtových biokonjugátů podle vynálezu mohou být odvozeny další molekuly obecných vzorců II, III, IV, VI, VII, IX, X a XI a schematických obecných vzorců V, Vlil, IX/a, X/a a Xl/a.
V případě [Exj] molekul zesilovače - které mohou být buď identické nebo mohou být různých (dvou nebo více, tj. x) druhů, jsou přímo konjugovány s daným představitelem molekul nosiče obecného vzorce l/a kovalentními vazbami, tedy [(k)Mx] = [ExJp1, a nové polykationtové biokonjugáty jsou popsány obecným vzorcem II
H [NH-CH2- (CH2) m-CH-CO] r0H | (II), [EXi]pl-NH
V případě [(-)CxJ spojovacích molekul výlučně aniontového charakteru - které mohou být buď identické nebo mohou být různých (dvou nebo více, tj. x) druhů - jsou konjugovány s daným představitelem molekul nosiče obecného vzorce l/a kovalentními vazbami, objevuje se další možnost vzniku iontových vazeb s kationty - které mohou být buď identické nebo mohou být různých (dvou nebo více, tj. x) druhů - potom:
l(k)Mx] = [OCXjJpz a tyto nové konjugáty jsou popsány obecným vzorcem III
H [NH-CH2- (CH2) m-CH-CO] rOH | (III), [ (-)CXj]P2-NH
V případě [EXdJ molekul zesilovače - které mohou být buď identické nebo mohou být různých (dvou nebo více, tj. x) druhů - jsou nepřímo konjugovány kovalentními vazbami s daným představitelem molekul nosiče obecného vzorce l/a [Cxck] spojovacími molekulami - které mohou být buď identické nebo mohou být různých (dvou nebo více, tj. x) druhů - potom:
[(k)Mx] — [CXck-EXek]p3 a tyto nové polykationtové biokonjugáty jsou popsány obecným vzorcem IV
H [NH-CH2- (CH2) m-CH-CO] rOH | (I) , [CXck-EXek] p3—NH « · • · · · • · · · «· · · · · ♦ · · · • · ··· ·· · • ···· · · · · · • · · ···· ··· ··· 99 99 ·9 99 999 9
V případě, že [Ex,] a/nebo [Cxck-Exek] molekul zesilovače a/nebo [(-)CxJ spojovacích molekul aniontového charakteru je také konjugováno s daným představitelem molekul nosiče obecného vzorce l/a a dále z hodnot pf, p2 a p3 alespoň dvě jsou větší než 0, potom [(k)Mxj = [Exj]pi + [Cxck-Exejpa + [(-)CXj]p2l a tyto nové polykationtové biokonjugáty jsou popsány schematickým obecným vzorcem V o o o o
II II II i •IpHlW- CH-C-NH-C112— (CH2)m-CH-C-NH-CU2— (CH2)n-CH-C-NH-CIJ2—(CH2)in— CH-C_. NH NH NH NH2
UMp, K-Xck - HxcjJpj I(')Cxjlp2 (V), v němž
Ex v [EXj]Pi znamená Ex molekul zesilovače různého (x) druhu konjugovaných přímo s daným představitelem molekul nosiče obecného vzorce l/a kovalentními vazbami, i znamená to, jestli Ex molekul zesilovače konjugovaných s danou molekulou nosiče kovalentními vazbami je identických (i = 1) nebo jestli jsou různého druhu počtu i (i = 2, 3,... x druhů), (-)Cx v [(-)Cxj]p2 znamená (-)Cx spojovacích molekul výlučně aniontového charakteru * různých (x) druhů konjugovaných s daným představitelem molekul nosiče obecného vzorce l/a kovalentními vazbami, aby se zajistila možnost vzniku iontových vazeb s kationty, j znamená to, jestli (-)Cx spojovacích molekul konjugovaných s danou molekulu nosiče kovalentními vazbami je identických (j = 1) nebo jestli jsou různého druhu počtu j (j = 2, 3,... x),
Cx-Ex v [Cxck - Exek]p3 znamená Ex molekul zesilovače různého (x) druhu konjugovaných kovalentními vazbami nepřímo Cx spojovacími moleku5 • ···· ·· ···· ·· ·· «· · · · · · · · ♦ • · · · · ·· · • · · · · · · · · · ··· ·· ·· ·· ·· ···· lamí různého (x) druhu, a tyto Cx molekuly jsou také konjugovány kovalentními vazbami s daným představitelem molekul nosiče obecného vzorce l/a, ck znamená to, jestli Cx spojovacích molekul konjugovaných s danou molekulu nosiče kovalentními vazbami je identických (ck = 1) nebo jestli jsou různého druhu počtu ck (ck = 2, 3, ... x), a tyto Cx spojovací molekuly - prakticky závisející na struktuře Ex molekul zesilovače mohou mít neutrální a/nebo aniontový a/nebo kationtový charakter, ek znamená to, jestli Ex molekul zesilovače konjugovaných s danou molekulu nosiče nepřímo Cx spojovacími molekulami kovalentními vazbami je identických (ek = 1), nebo jestli jsou různého druhu počtu ek (ek = 2,
3,... x),
Navíc stupeň nasycenosti v % daného představitele molekuly nosiče obecného vzorce l/a [Exj]pl a/nebo [Cx^-Ex^ molekulami zesilovače a/nebo [(-)CxJp2 spojovacími molekulami je dán různými hodnotami 'fy, p2 a p3”, přičemž souhrnná hodnota p] + p2 + p3 v daném polykationtovém biokonjugátu je > 0 a < 100, přičemž je stanoven poměr mezi volnými, nezahrnutými v chemických vazbách, a vázanými NH2-skupinami, který dále ovlivňuje náboj a kationtový charakter polykationtových biokonjugátů, a tedy
Pí znamená stupeň nasycenosti v % molekuly nosiče obecného vzorce l/a [ExJ molekulami zesilovače, p2 znamená stupeň nasycenosti v % molekuly nosiče obecného vzorce l/a [(-)CXj] spojovacími molekulami s výlučně aniontovým charakterem, p3 znamená stupeň nasycenosti v % molekuly nosiče obecného vzorce l/a [Cxck-Exekjpa molekulami zesilovače, kteréjsou vázány spojovacími molekulami, a na základě shora uvedeného ve schematickém obecném vzorci V platí, že pí + p2 + p3 > 0 a < 100 a z hodnot pf, p2 a p3 alespoň dvě jsou větší než 0, dále v daném polykationtovém biokonjugátu Ex molekul v [EXj] a (-)Cx molekul v [(-)CXj] není nutně identických s Ex a Cx molekulami vyskytujícími se v [Cxck-Exek], přičemž tento ··· ·· ·· ·· ·· ···· rozdíl je symbolizován x a bude o něm pojednáno v příkladech vhodně vybraných molekul zesilovače, a dále r a m znamenají stejně jako v obecném vzorci I.
V případě [(-)Axsj molekul zesilovače aniontového charakteru - které mohou být buď identické nebo mohou být různých (dvou nebo více, tj. x) druhů - jsou přímo konjugovány výlučně iontovými vazbami s volnými α-aminovými skupinami daného představitele molekul nosiče obecného vzorce l/a, potom [(i)Mxj = [(-JAxJe a tyto nové polykationtové biokonjugáty mohou být popsány obecným vzorcem VI
H[NH-CH2- (CH2) m-CH-CO] rOH | (VI) .
[ (-)Axs]t-NH
V případě [(+)ΚχΛ molekul zesilovače kationtového charakteru - které mohou být buď jednoho druhu nebo (dvou nebo více, tj. x) různých druhů - jsou konjugovány nepřímo [(-jCxJ spojovacími molekulami výlučně aniontového charakteru - které mohou být buď jednoho druhu nebo (dvou nebo více, tj. x) různých druhů - iontovými vazbami s daným předdstavitelem konjugátů obecného vzorce III, potom [(k)Mx]*[(i)Mx] = [(k/i)Mx] = [OCxM+m a tyto nové polykationtové biokonjugáty jsou popsány obecným vzorcem VII
H[NH-CH2- (CH2) m-CH-CO] rOH | (VII).
[( + )Kxll]z*[(-)Cxj]p2-NH
V případě [(-)Axsj molekul zesilovače aniontového charakteru - které mohou být identické nebo mohou být různých (dvou nebo více, tj. x) druhů - jsou konjugovány přímo ionotvými vazbami s volnými ct-aminoskupinami daného představitele polykationtových biokonjugátů obecného vzorce VII, potom • ·
[(k/i)Mx] = {[(-)CxJp2 * [(+)KxJz} * [(-)AxJt a tyto nové polykationtové biokonjugáty jsou popsány schematickým obecným vzorcem Vlil o
ll
...(CHjjn,—CH—c—NH—CH,-(CH^-CH—C—NH—CH2NH NH2 * l(+)K*ulz
-(CHjJn,—CHNHj
O
II
-CIBAxgJt
-CHI
NH2
-C...
(Vlil).
V případě [(-)AXs] molekul zesilovače aniontového charakteru - které mohou být buď identické nebo mohou být různých (dvou nebo více, tj. x) druhů - jsou konjugovány iontovými vazbami s volnými α-aminovými skupinami daného představitele polykationtových biokonjugátů obecného vzorce II nebo IV nebo schematického obecného vzorce V, potom [(k/i)Mx] = [Exjpi * [(-) Axs]t nebo [Cxck-ExekU * [(-)Axs]t nebo [EXj]Pi + [Cxck-Ex^pa * [(-)AxJt a tyto polykationtové biokonjugáty jsou popsány obecným vzorcem IX nebo schematickým obecným vzorcem IX/a
H [NH-CH2- (CH2) m-CH-CO] r0H [(-)Axs]t * | (IX), [(k)Mx-NH
(IX/a).
V případě daného představitele polykationtových biokonjugátů schematického obecného vzorce V, v němž existuje [(-)CxJ spojovacích molekul aniontového charakteru - které mohou být buď identické nebo mohou být různých (dvou nebo více, tj. x) druhů - a tedy získávají částečně aniontový charakter, takže dalších [(+)Kxu] molekul zesilovače kationtového charakteru - které mohou být buď identické nebo mohou být různých (dvou nebo více, tj. x) druhů - může být na ně konjugováno iontovými vazbami, potom [(k/i)Mx] = [EXijpi + {[(-)Cxj]p2 * [(+)KxJz} nebo [CXck-Exek]p3 + {[(-)CXj]p2 * [(+)KxJz} nebo [EXjjpi + [CXcx-EXekjps + {[(-)CXj]p2 * [(+)KxJz} a tyto polykationtové biokonjugáty jsou popsány obecným vzorcem X nebo schematickým obecným vzorcem X/a
H[NH-CH2- (CH2) m-CH-CO] rOH { [ ( —)CXj]p2 * i(+)Kxu]z} + [(k)Mx]-NH
O .-.(CH^— CH
NH
ΊΕ»φ>,
NH2 (X/a).
• · · · • · ·· · 9 9 99 9 9 ·· « · · · • · · · · • · ♦ · · · ····· 99 99 99 999 9
V případě dalších [(-)Axs] molekul zesilovače aniontového charakteru - které mohou být buď identické nebo mohou být různých (dvou nebo více, tj. x) druhů - které jsou konjugovány přímo iontovými vazbami s volnými a-amino-skupinami daného představitele polykationtových biokonjugátů obecného vzorce X, potom [(k/i)Mx] = [Exijpi + {[(-)Cxj]p2 * [(+)KXuh} * [(-)AxJ, nebo [CXck-Exek]p3 + {[(-)CXj]p2 * [(+)KXj]z} * [(-)AXs]t nebo [EXilpi + [CXck-EXekjpa + {[(-)CXj]p2 * [(+)KXul·} * [(-)AXsK a tyto polykationtové biokonjugáty jsou popsány obecným vzorcem XI nebo schematickým obecným vzorcem Xl/a
H[NH-CH2- (CH2) m-CH-CO] rOH [()Axs]t * | (XI), { i (HCxJpz* [ ( + )Kxu]z}+[ (k)Mx]-NH
O O o o (dřzXír—CH—C— NH—OÍ2—(cryfn—σι-c— nh— ch2—(ch,)^—ch-c— nh—(ayfR—ch— c.
NH NH NH, * NH lOCxppj ♦ í(+)Kxulz fOfck - fExOp, (Xla), v nichž (-)Ax v [(-)AXsjt znamená (-)Ax molekul zesilovače aniontového charakteru různých (x) druhů, které jsou přímo konjugovány s daným představitelem molekul nosiče obecného vzorce l/a iontovými vazbami, s znamená to, jestli (-)Ax aniontových/polyaniontových molekul konjugovaných s danou molekulou polykationtového nosiče iontovými vazbami je identických (s = 1) nebo jestli jsou různého druhu počtu s (s = 2, 3, ... x druhů), (+)Kxv [(+)Kxu]z znamená (+)Kx molekul zesilovače různého (x) druhu kationtového charakteru, které mohou být konjugovány nepřímo iontovými vazbami • · · · · · [(-)Cxj] spojovacími molekulami různých druhů (x) aniontového charakteru s daným představitelem molekul nosiče obecného vzorce l/a, které jsou podstatné pro konjugát obecného vzorce III, u znamená to, jestli (+)Kx kationtů a/nebo polykationtů konjugovaných s danou sloučeninou obecného vzorce III iontovými vazbami je identických (u = 1) nebo jestli jsou různého druhu počtu u (u = 2, 3, ... x druhů),
V označuje stupeň nasycenosti v % molekuly nosiče obecného vzorce l/a [(-)AXsj molekulami zachycovače, z znamená stupeň nasycenosti v % polykationtového biokonjugátu obecného vzorce I nebo molekuly nosiče obecného vzorce l/a [(+)KxJ molekulami zesilovače, které jsou konjugovány nepřímo [(-)Cxj] spojovacími molekulami aniontového charakteru, t v obecném vzorci VI, z v obecném vzorci VII, t+z ve schematickém obecném vzorci Vlil, ť^fy nebo ť+p3 nebo ť+pi+p3 v obecném vzorci IX a ve schematickém obecném vzorci IX/a, z+pi nebo z+p3 nebo zVp/Vpg v obecném vzorci X a ve schematickém obecném vzorci X/a a tVzVp/ ne|30 «(+2+^ neb0 ,Y,-«-z+p1”+p3 v obecném vzorci XI a ve schematickém obecném vzorci Xl/a a hodnoty každého z těchto součtů jsou mezi >0 a <100, a dále ty NH2 skupiny, které nejsou nasyceny T a/nebo z a/nebo pí a/nebo P3, zůstanou volné, přičemž je stanoven poměr mezi volnými (nezahrnutými v chemických vazbách) a vázanými NH2-skupinami, který dále ovlivňuje náboj a kationtový charakter polykationtových biokonjugátů, přičemž z” znamená stupeň nasycenosti molekul nosiče [(+)Kxuj molekulami kationtového zesilovače, které jsou konjugovány nepřímo [(-)CXjj spojovacími molekulami, proto z = p2, dále r, m a [(k)Mxj znamenají stejně jako v obecném vzorci I, [EXijpj znamená stejně jako v obecném vzorci II, [(-)Cxj]p2 znamená stejně jako v obecném vzorci lila • φφφφ »· φφφ » • Φ φ · φ φ φ φ · · · • φφφφ φ φφφ φφ φφ φφ φ φ φ φ φ φ · φφφ φ φ φφφφ [Cxck-Exek]P3 znamená stejně jako v obecném vzorci IV.
Stupeň novosti polykationtových biokonjugátů obecného vzorce I, předmětu předloženého vynálezu, spočívá v tom, že existují isopolypeptidy, které mají volné α-aminové skupiny jako molekuly polykationtového nosiče v nich, jejichž syntéza se provádí kondenzováním monomerů diamino-monokarboxylové kyseliny, kterou se vystaví tyto isopolypeptidy, nikoliv jejich aminovými skupinami v α-polohách, ale jejich aminovými skupinami v jiných (β-, γ-, δ-, ε- ... atd.) polohách; způsoby použité pro přípravu těchto molekul nosiče byly popsány v maďarském patentovém spisu 202 553 B s prioritou 21.10.1987, nazvaném Process for preparation of isopolypeptides from diamino-monocarbonic acids and the drugs containing them, and a plant protection agent containing polyisolysin, a dále v práci Szókána a spol.: Structure Determination and Synthesis of Lysině Isopeptides Influencing on Cell Proliferation (S/opolymers, J. Willey & Sons, lne., 1997, 42, 305 až 318.).
S daným představitelem molekul nosiče obecného vzorce l/a v nových polykationtových biokonjugátech obecného vzorce I, připravených podle vynálezu, může být prakticky jakákoliv organická a/nebo anorganická molekula, která má funkční skupiny vhodné pro konjugaci, kondenzována jako vhodně vybraná molekula zesilovače v souladu se způsobem, jak je uvedeno v obecných vzorcích II, III, IV, VI, VII, IX, X a XI nebo na schematických vzorcích V, Vlil, IX/a, X/a a Xl/a. Všechny tyto molekuly zesilovače mohou být s výhodou vybrány - neomezujícím způsobem - ze skupin sloučenin, které jsou zde níže uvedeny:
hormonů a antagonistů hormonů různého druhu (steroidů, proteinů, peptidů atd.) a aktivních fragmentů peptidových hormonů a jejich derivátů, nasycených a nenasycených mastných kyselin, cholesterolů, fosfolipidú (fosfoglyceridů, sfingomyelinů atd.) a jejich derivátů, nukleových kyselin/antimediátorových nukleotidů, monosacharidů, oligosacharidů a polysacharidů a jejich derivátů, vitaminů a jejich derivátů, známých protinádorových léčiv a aktivních látek a jejich derivátů a «4 ♦»·» *·Φ Φ
Φ Φ * Φ
ΦΦ ΦΦΦ Φ*··· • φ ΦΦΦ · Φ W φ ΦΦΦΦ ΦΦΦΦ Φ
ΦΦΦ ΦΦΦΦ ΦΦΦ
ΦΦΦ ΦΦ ·· ΦΦ »Φ ΦΦΦΦ aminokyselin, oligopeptidů, polypeptidu, dalších glykoproteinů a lipoproteinú, jejich fragmentů a jejich derivátů.
Nové polykationtové biokonjugáty obecného vzorce I připravené podle způsobu popsaného v tomto vynálezu obsahují molekuly nosiče obecného vzorce la a daný představitel těchto molekul nosiče je konjugován chemickými (kovalentními a/nebo iontovými) vazbami s molekulami zesilovače, které jsou vhodně vybrány, podle zamýšleného účinku (například mají antiproliferační účinek, antimikrobiální účinek, dodávají geny, zlepšují kvalitu diagnostického zobrazování magnetickou resonancí atd.), a tyto molekuly zesilovače mohou být buď identické nebo mohou být (dvou nebo více, tj. x) různých druhů, a díky aplikovatelnosti více molekul zesilovače v daném polykationtovém biokonjugátu obecného vzorce I, lze současně získat násobné přímé a/nebo nepřímé účinky. Seznam několika příkladů sloučenin, které mohou být s výhodou aplikovány pro tento účel, je zde dále uveden.
Sloučeniny obsahující část molekul přímého zesilovače - s neomezujícím charakterem:
sloučeniny, které mají antiproliferační účinky, například cytostatika používaná v klinické praxi, dále cytokiny, které ovlivňují dělení a diferenciaci buněk (např. různé růstové faktory stejně jako protilátky produkované proti receptorům těchto faktorů, interferony atd.), dále peptidy/proteiny inhibující tvorbu nových krevních cév kolem nádorových buněk (angiostatiny, endostatiny), dále nukleové kyseliny/antimediátorové oligonukleotidy, které vykazují antiproliferační účinky na maligně transformované buňky, sloučeniny, které mají antimikrobiální účinky, například protivirové, antibakteriální, antimykotikální, antiprotozoální atd. sloučeniny, používané v klinické praxi, dále nukleové kyseliny/komplexované antimediátorové oligonukleotidy, které inhibují replikaci mikrobů, nukleové kyseliny isolované nebo syntetizované pro účel přenosu genu, které jsou vhodné pro léčení genetických onemocnění (například cystické fibrózy), • · · • * • · • « · ·· « · *
9 9 • · ♦ · « ♦ 9 9
99 ·· »· * 9 9 <*
9 9 • Ο *
9 · ·· «·Λ · sloučeniny zlepšující kvalitu diagnostického zobrazování magnetickou resonancí, například paramagnetické ionty kovů a komplexy obsahující ionty kovů tohoto druhu, zvláště molekulové komplexy gadoliniového (Gd) iontu (například dimegluminová sůl Gd-diethylen-triamin-pentaoctové kyseliny), sloučeniny, které mají imunomodulační účinky (například interleukiny, nádorové nekrotické faktory atd.), které regulují danou funkci imunního systému, a četné vhodně vybrané sloučeniny s dalšími účinky, zde nedefinované, které se mohou používat s určitými účely, jako molekuly zesilovače.
Sloučeniny obsahující část molekul nepřímého zesilovače, které vyvíjejí nebo zvyšují selektivitu - s neomezujícím charakterem:
ve vztahu k antiproliferačnímu účinku například: monoklonální protilátky, které mají specifické afinity na povrchový antigen dané nádorové buňky stejně jako protilátky nebo jakákoliv sloučenina, která má anifinitu na tyto druhy receptorú (například transferinový receptor nebo folátový receptor mezi vitaminy atd.), které jsou přítomny ve větším poměru na povrchu nádorových buněk než na povrchu normálních (maligně netransformovaných) buněk, dále ve vztahu k antiproliferačním a jakýmkoliv dalším účinkům zacíleným na jakoukoliv sloučeninu, která má specifickou afinitu na jistý receptor vyskytující se výlučně na povrchu pouze dané normální buňky (tento receptor neexistuje jako výsledek patologického procesu), konkrétně například receptory asiaglykoproteinu na buněčném povrchu hepatických buněk (na který se specificky váže koncová galaktosa makromolekul) nebo receptory kondenzující jakoukoliv jinou sloučeninu, které jsou přítomny ve větším množství na povrchu daných cílových buněk, obecně sloučeniny, které se mohou vázat na danou cílovou buňku (například mikroby nebo buňky infikované mikroby atd.), aby se dosáhl nepřímý zvýšený účinek.
Sloučeniny obsahující část molekul přímého nebo současně nepřímého zesilovače s neomezujícím charakterem:
• ·
ve vztahu k antiproliferačním účinkům například: hormony, antagonisté hormonů a jejich deriváty, zvláště peptidové hormony a lidský choriogonadotropinový hormon, které mají antiproliferační účinky, dále protilátky produkované proti receptorům růstových faktorů různého druhu, které jsou přítomny ve větším poměru na povrchu dané nádorové buňky než na povrchu jiných buněk, a současně vykazují antiproliferační účinky na dané maligně transformované buňky, a dále imunotoxiny, které jsou produkovány proti dané nádorové buňce, ve vztahu k antimikrobiálním účinkům například: neutralizující protilátky, které jsou produkovány proti daným mikrobům (například virům, bakteriím, houbám atd.), a dále imunotoxiny, které jsou produkovány proti danému mikrobu.
Nové polykationtové biokonjugáty obecného vzorce I připravené podle vynálezu obsahují molekuly nosiče obecného vzorce l/a a daný představitel těchto molekul nosiče je konjugován s molekulami zesilovače - které mohou být bud identické nebo mohou být různých (dvou nebo více, tj. x) druhů - které jsou vhodně vybrány ze shora uvedených příkladů a konjugace těchto molekul zesilovače je symbolizována [EXj]p1 a/nebo [...-Εχ^, což ukazuje na to, že tyto molekuly jsou kondenzovány kovalentními vazbami, navíc [(-)Axsjt s aniontovým charakterem a/nebo [(+)KXu]z s kationtovým charakterem ukazují na molekuly, které jsou kondenzovány iontovými vazbami.
Nové polykationtové biokonjugáty obecného vzorce I připravené podle vynálezu obsahují molekuly nosiče obecného vzorce l/a a daný představitel těchto molekul nosiče je konjugován s molekulami zesilovače - které mohou být buď identické nebo mohou být různých (dvou nebo více, tj. x) druhů - které jsou vhodně vybrány ze shora uvedených příkladů molekuly zesilovače mohou být konjugovány přímo a/nebo nepřímo spojovacími molekulami, později uvedené mohou být kondenzovány s molekulami zesilovače kovalentně nebo iontově, což je symbolizováno [Cxac-la kovalentními a [(-)Cxj]p2 iontovými, a tyto spojovací molekuly mohou být vhodně vybrány - bez omezujícího charakteru - z prodlužovacích řetězců dikarboxylových kyselin, trikarboxylových kyselin, sacharidů, aminokyselin nebo peptidů.
Nové polykationtové biokonjugáty obecného vzorce I připravené podle vynálezu obsahují molekuly nosiče obecného vzorce l/a a daný představitel těchto molekul nosiče je konjugován s molekulami zesilovače - které mohou být buď identické nebo mohou být různých (dvou nebo více, tj. x) druhů - které jsou vhodně vybrány podle shora uvedených příkladů a ke konjugaci molekul zesilovače dochází kovalentními a/nebo iontovými chemickými vazbami přímo a/nebo nepřímo v stanoveném poměru s výhodou tak, aby se dosáhlo nasycení 10 až 100 %.
Mezi výhodné představitele molekul nosiče obecného vzorce l/a v nových polykationtových biokonjugátech obecného vzorce I podle vynálezu patří 60 až 120členné neracemické polyiso-L-lysiny, tj. hydrobromidy poly(s)-L-lysínu, které samy mají jisté antiproliferační a protivirové účinky, jak je popsáno v maďarském patentovém spisu 202 553 B s maďarskou prioritou 21. října 1987.
Předmětem tohoto vynálezu je dosažení toho, aby každý z nových polykationtových biokonjugátů obecného vzorce I, připravený způsobem popsaným v předloženém vynálezu, obsahoval molekuly nosiče obecného vzorce l/a a tyto molekuly nosiče (které samy mají jisté antiproliferační účinky) byly konjugovány chemickými vazbami se sloučeninami, které mají antiproliferační účinky (seznam některých sloučenin vhodně vybraných pro tento účel je uveden shora mezi molekulami přímého zesilovače) a takto získané biokonjugáty jsou úspěšně aplikovatelné pro léčení maligností vyvíjejících se v savčích organismech (dále: nádory) nebo se kombinují se způsoby inhibujícími nádory, které jsou přijaty v klinické praxi.
Další molekuly zesilovače, které vedou k vyvinutí příslušně zvolené selektivity, které byly specielně shora popsány (mezi molekulami nepřímých zesilovačů), napojené na biokonjugáty připravené podle vynálezu, zvyšují koncentraci účinných látek v nádorech, přičemž se mohou zmenšit nechtěné vedlejší účinky a tedy lze dále zvýšit účinnost léčení.
Konjugáty podobné těmto novým polykationtovým biokonjugátům s antiproliferačním účinkem podle předloženého vynálezu již byly dříve připraveny. Byly o nich publikovány také práce, z nich některé jsou zde dále uvedeny:
- Bogdanov A. A., ml., Martin C., Bogdanova A. V. a spol.: An aduct of cis-diamine-dichloroplatinum(ll) and poly(ethylenglykol)poly(L-lysine)-succinate: synthesis and cytotoxic properties, Bioconjug. Chem. 1996(leden-únor), 7(1), 144 až 149.
- Di-Stefano G., Buši C., Derenzini M. a spol.: Conjugation of 5-fluoro-2'-deoxyuridine with lactosaminated poly-l-lysine to reduce extrahepatic toxicity in the treatment of hepatocarcinomas, Ital. J. Gastroenterol. Hepatol. 1998(duben), 30(2), 173 až 177.
- Paprocka M., Boratynski J., Dus D. a spol.: Conjugation of the monoclonal antibody 17-1A with nitroacridine compound C921 with poly-L-lysine as an intermediate agent, Arch. Immunol. Ther. Exp. Warsz. 1997, 45(4), 343 až 349.
- Salazar A. M., Levý Η. B., Ondra S. a spol.: Long-term treatment of malignant gliomas with intramuscularly administered polyinosinic-polycytidylic acid stabilized with polylysine and carboxymethylcelulose: an open pilot study, Neurosurgery 1996(leden), 38(6), 1096 až 1104, diskuse 1103 až 1104.
Dalším poznáním obsaženým v předloženém vynálezu je znak molekul nosiče obecného vzorce l/a v nových polykationtových biokonjugáterch obecného vzorce I, že jako polykationty jsou vhodné pro transport stejně jako pro zavedení do cílových molekul vhodně vybraných nukleových kyselin polyaniontového charakteru jako molekul zesilovače, navázaných na ně iontovými vazbami, tj. pro přenos genu, využitím účinku, že konjugováním dalších molekul zesilovače kovalentními vazbami - podrobnosti viz zde shora - vedoucím k vyvinutí příslušně zvolené selektivity, jsou nové polykationtové biomolekuly navázány selektivně na cílové buňky nebo v podstatně vyšším poměru na tyto cílové buňky než na buňky jiného typu.
Konjugáty, podobné těmto novým polykationtovým biokonjugátům, podle předloženého vynálezu, schopné přenosu genu, již byl dříve připraveny. Ve vědecké • · · • · · · • ·
literatuře byly o nich publikovány práce, z nichž některé jako příklady jsou zde dále uvedeny:
- Erbacher P., Roche A. C., Monsigny M., Midoux P.: The reduction of the positive charges of polylysine by partial glukonylation increases the transfection efficiency of polylysine/DNA complexes, Biochim. Biphys. Acta 1997(21. února), 1324(1), 27 až 36.
- Ferkol T., Perales J. C., Mularo F., Hanson R. W.: Receptor-mediated gene transfer into macrophages, Proč. Natí. Acad. Sci. USA 1996(9. ledna), 93(1), 101 až 105.
- Kollen W., Erbacher, Midoux P. a spol.: Glykosylated polylysines. Nonviral vectors for gene transfer into cystic fibrosis airway epithelial celíš, Chest, 1997(leden), 111(6 Suppl.), 95S až 96S.
- Liang W. W., Shi X., Deshpande D. a spol.: Oligonucleotide targeting to alveolar macrophages by mannose receptor-mediated endocytosis, Biochim. Biophys. Acta 1996(13. března), 1279(2), 227 až 234.
- Schneider H., Huse K, Birkenmeier G. a spol.: Gene transfer mediated by alpha2-macroglobulin, Nucleic Acids Res. 1996(1. října) 24(19), 3873 až 3874.
- Scharzenberger P., Spence S. E., Gooya J. M. a spol.: Targeted gene transfer to human hematopoietic progenitor cell lineš through the c-kit receptor, Blood, 1996(15. ledna), 87(2), 472 až 478.
- Sosnowski B. A., Gonzales A. M., Chandler L. A. a spol.: Targeting DNA to celíš with basic fibroblast growth factor (FGF2), J. Biol. Chem. 1996(27. prosince), 271(52), 33647 až 33653.
- Stewart A. J., Pichon C., Meunier L. a spol.: Enhanced biological activity of antisense oligonucleotides complxed with glycosylated poly-L-lysine, Mol. Pharmacol. 1996(prosinec), 50(6), 1487 až 1494.
Navíc nové polykationtové biokonjugáty, které jsou vhodné pro přenos genu v případě další konjugace se sloučeninami, které mají antiproliferační účinky (vhodně vybrané sloučeniny, molekuly přímých zesilovačů), jsou vhodné pro účinnější léčení nádorů. Byly o nich publikovány vědecké práce, z nichž jsou zde uvedeny následující:
«··· · · ···· · · ·· • · · · · · · # • ···· ·«·· · ··· ·· ·· ·· ·· ····
-Cristiano R. J., Roth J. A.: Epidermal growth factor mediated DNA dleivery into lung cancer celíš via the epidermal growth factor receptor, Cancer Gene Ther. 1996(leden-únor), 3(1), 4 až 10.
- Foster B. J., Kem J. A.: HER2-targeted gene transfer, Hum. Gene Ther. 1997(10. dubna), 8(6), 719 až 727.
- Ginobbi P., Geiser T. A., Ombres D., Cifro G.: Folie acid-polylysine carrier improves efficiacy of c-myc antisense oligodeoxynucleotide on human melanoma (M14) celíš, Anticancer Res. 1997(1eden-únor), 17(1 A), 29 až 35.
- Nguyen D. M., Wiehle S. A., Roth J. A., Cristiano R. J.: Gene delivery into malignant celíš in vivo by a conjugated adenovirus/DNA complex, Cancer Gene Ther. 1997(květen-červen), 4(3), 183 až 90.
- Schachtschabel U., Pavlinkova G., Lou D., Kohler H.: Antibody-mediated gene delivery for B-cell lymphoma in vitro, Cancer Gene Ther. 1996(listopad-prosinec), 3(6/ 365 až 372.
- Shimizu N., Chen. J., Gamou S., Takayanagi A.: Immunogene approach toward cancer therapy using erythrocyte growth factor receptor-mediated gene delivery, Cancer Gene Ther. 1996(březen-duben), 3(2), 112 až 120.
- Watanabe N., Sáto Y., Yamauchi N., Niitsu Y.: Gene delivery into human cancer celíš via transferrin receptor, Nippon Rinsho, 1998(březen), 56(3), 724 až 730.
Další poznatek také patří k předmětu předloženého vynálezu, konkrétně to, že každý z nových polykationtových biokonjugátů obecného vzorce I vyrobený podle způsobu popsaného v tomto vynálezu, obsahuje molekuly nosiče obecného vzorce l/a a tyto molekuly nosiče (které mají samy jisté protivirové účinky) jsou konjugovány chemickou vazbou s vhodně vybranými sloučeninami, které mají protivirové účinky, jako molekuly přímého zesilovače, a díky tomu zvyšují protivirový účinek těchto nových polykationtových biokonjugátů.
Nové polykationtové biokonjugáty, které se připravují způsobem popsaným v předchozím odstavci, konjugované dále chemickou vazbou s vhodně vybranými sloučeninami, které vyvíjejí nebo zvyšují selektivitu na cílové buňky, které jsou infikovány »· · · ···· <
• · · · · c · virem (vhodně vybrané sloučeniny z molekul nepřímých zesilovačů) jsou vhodné pro zvýšení relativní koncentrace nových polykationtových biokonjugátů s protivirovým charakterem v buňkách, kteréjsou infikovány virem, a díky tomu účinnost léčení bude zvýšena a vedlejší účinky velice sníženy. Konjugáty podobné těmto novým polykationtovým biokonjugátům s protivirovým účinkem podle předloženého vynálezu již byly dříve popsány. Následují některé publikace, které o nich pojednávají a na které je zde odkazováno:
- Di Stefano G., Colonna F. P., Bongini A. a spol.: Ribavarin conjugated with lactosaminated poly-L-lysine: selective delivery to the liver and increased antiviral activity in mice with viral hepatitis, Biochem. Pharmacol. 1997(1. srpna), 54(3), 357 až 363.
- Fiume L., Di Stefano G., Buši C. a spol.: Liver targeting of antiviral nucleoside analogues through the asialoglycoprotein receptor, J. Viral Hepat. 1997, 4(6), 363 až 370.
- Fiume L., Di Stefano G., Buši C. a spol.: Hepatotropic conjugate of adenine arabinoside monophosphate with lactosaminated poly-L-lysine. Synthesis of the carrier and pharmacological properties of the conjugate, J. Hepatol. 1997(únor), 26(2), 253 až 259.
- Nakazano K., Ito Y., Wu C. H., Wu G. Y.: Inhibition of hepatitis B virus replication by targeted pretreatment of complexed antisense DNA in vitro, Hepatology 1996(leden), 23(6), 1297 až 1303.
Další poznatek také patří k předmětu předloženého vynálezu, konkrétně to, že každý z nových polykationtových biokonjugátů obecného vzorce I, vyrobený podle způsobu popsaného v tomto vynálezu, obsahuje molekuly nosiče obecného vzorce l/a a tyto molekuly nosiče jsou konjugovány chemickou vazbou se sloučeninanmi, které mají různé druhy antimikrobiálních účinků (vhodně vybrané sloučeniny z molekul přímých zesilovačů) a díky tomu tyto nové polykationtové biokonjugáty významně zvyšují antimikrobiální účinky převyšující protivirový charakter, který byl popsán v předcházejících třech odstavcích.
···· · -· ···« ··
Nové polykationtové biokonjugáty, které se připravují způsobem popsaným v předchozím odstavci, konjugované dále chemickou vazbou se sloučeninami, které vyvíjejí nebo zvyšují selektivitu na cílové buňky, které jsou infikovány různými druhy mikrobů (vhodně vybrané sloučeniny z molekul nepřímých zesilovačů), jsou vhodné pro zvýšení relativní koncentrace polykationtových biokonjugátů s antimikrobiálním charakterem v buňkách, které jsou infikovány danými mikroby a díky tomu účinnost léčení bude zvýšena a vedlejší účinky velice sníženy.
Další poznatek také patří k předmětu předloženého vynálezu, konkrétně to, že každý z nových polykationtových biokonjugátů obecného vzorce I vyrobený podle způsobu popsaného v tomto vynálezu, obsahuje molekuly nosiče obecného vzorce l/a a tyto molekuly nosiče jsou konjugovány chemickou vazbou s makromolekulámími paramagnetickými kontrastními činidly, například komplexy molekul gadolinia, a jejich deriváty (vhodně vybrané sloučeniny z molekul přímých zesilovačů) a díky tomu tyto nové polykationtové biokonjugáty významně zvyšují kvalitu diagnostického zobrazení magnetickou resonancí zvýšením kontrastu mezi různými druhy orgánů, tkání stejně jako různými patologickými změnami, napříklady nádory.
Nové polykationtové biokonjugáty, které se připravují způsobem popsaným v předchozím odstavci, konjugované dále chemickou vazbou se sloučeninami, které vyvíjejí nebo zvyšují selektivitu na různé druhy cílových orgánů nebo rozmanité patologické změny (vhodně vybrané sloučeniny z molekul nepřímých zesilovačů), jsou vhodné pro významné zvýšení relativní koncentrace polykationtových biokonjugátů s paramagnetickým kontrastním charakterem v různých druzích orgánů a tkání a rovněž i rozmanitých patologických změn a díky tomu dále zlepšují kvalitu zobrazení magnetickou resonancí.
Konjugáty podobné těmto novým polykationtovým biokonjugátům paramagnetického charakteru podle předloženého vynálezu již byly dříve připraveny. Následují některé publikace, které o nich pojednávají a na které je zde odkazováno:
• · · · · · · « » «
- Opsahl L. R., Uzgiris E. E., Věra D. R.: Tumor imaging with a macromolecular paramagnetic contrast agent: gadopentetate dimeglumine-polylysine, Acad. Radiol. 1995(zán), 2(9), 7Q2 až 767.
- Su Μ. Y., Muhler A., Lao X., Nalcioglu O.: 'Tumor characterization with dynamic contrast-enhanced MRI using MR contrast agents of various molecular weights, Magn. Reson. Med. 1998(únor), 39(2), 259 až 269.
- Věra D. R., Buonocore Μ. H., Wisner E. R. a spol.: A molecular receptor-binding contrast agent for magnetic resonance imaging of the liver, Acta Radiol. 1995(leden), 2(6), 497 až 506.
- Vogl T. J., Hoffmann Y., Juergens M. a spol.: Experimentelle Evaluierung der kontrastmittelverstárkten, hochauflósenden MR-Agiographie am Tiermodell. Gd-DTPA gegenúber Gd-DTPA A-Polylysin, Radiologie 1996(březen), 36(3), 254 až 262.
Další poznatek také patří k předmětu předloženého vynálezu, konkrétně to, že každý z nových polykationtových biokonjugátů obecného vzorce I vyrobený podle způsobu popsaného v tomto vynálezu obsahuje molekuly nosiče obecného vzorce l/a a tyto molekuly nosiče jako polykationty jsou vhodné pro to, aby se polykationtové biokonjugáty dostaly do savčího organismu transdermálním transportem iontoforézou.
Nové polykationtové biokonjugáty, které se transportují kůží, vykazují jejich účinky hlavně v různých vrstvách kůže a v podkožních tkáních, v oblasti iontoforézy a jistá jejich množství působí systémově. Tento druh působení závisí na molekulární velikosti, na fyzikálně-chemickém charakteru a na typu vhodně vybraných molekul přímých a/nebo nepřímých zesilovačů polykationtových biokonjugátů stejně jako na povaze aplikovaného elektrického pole.
Koncentrace těchto nových polykationtových biokonjugátů, které se připravují podle terapeutických cílů (například pro antiproliferační nebo protivirové účinky atd.) a které obsahují vhodně vybrané a shora uvedené molekuly přímých a/nebo nepřímých zesilovačů, se v místě transdermální aplikace zvýší a díky tomu bude velice zvýšena lokální účinnost léčení a vedlejší účinky budou sníženy. Jestliže cílem je dosáhnout systémový účinek transdermální aplikací, výhodou bude představovat konstantní, neinvazivní podávání polykationtových biomolekul, které se vyhýbají gastro-intestinálnímu systému. Konjugáty, které jsou podobné novým polykationtovým biokonjugátům schopným transdermální aplikace podle předloženého vynálezu, již byly dříve připraveny. Následují některé publikace, které o nich pojednávají a na které je zde odkazováno:
- Turner N. G., Ferry L., Price M. a spol.: lontophoresis of poly-L-lysines: the role of molecular weight?, Pharm. Res. 1997(říjen), 14(10), 1322 až 1331.
- Vanbever R., Prausnitz M. R., Preat V.: Macromolecules as novel transdermal transport enhancers for skin electroporation, Pharm. Res. 1997(květen), 14(5), 638 až 644.
Další poznatek také patří k předmětu předloženého vynálezu, konkrétně to, že každý z nových polykationtových biokonjugátů obecného vzorce I vyrobený podle způsobu popsaného v tomto vynálezu, obsahuje molekuly nosiče obecného vzorce l/a a tyto molekuly nosiče jsou konjugovány se shora uvedenými molekulami přímého a/nebo nepřímého zesilovače, které jsou vhodně vybrány podle daného terapeutického účelu (například antiproliferační nebo protivirové účinky nebo genová terapie atd.) a tyto nové polykationtové biokonjugáty se umístí do kationtových liposomů a díky tomu bude účinnost léčení zvýšena a vedlejší účinky budou velice sníženy. Konjugáty, které jsou podobné těmto novým polykationtovým biokonjugátům, které jsou vhodné pro umístění do kationtových liposomů podle předloženého vynálezu, již byly dříve připraveny. Následují některé publikace, které o nich pojednávají a na které je zde odkazováno:
- Gao X., Huang L.: Potentiation of cationic liposome-mediated gene delivery by polycations, Biochemistry, 1996(23. ledna), 35(3), 1027 až 1036.
- Lee R. H., Huang L.: Folate-targeted, anionic liposome-entrapped polylysine-condensed DNA for tumor cell-specific gene transfer, J. Biol. Chem. 1996(5. dubna), 271(14), 8481 až 8487.
• ···· ·♦ ···· ·· ·· • · « · » · · · · · • · · · · · * · • · · · · ···· « • · · ···· · 9 · <·· ·· ·· ·· ·* ····
- Mack K. D., Walzem R. L., Lehmann-Bruinsma K. a spol.: Polylysine enhances cationic liposome-mediated transfection of the hepatoblastoma cell line Hep G2, Biotechnol. Appl. Biochem. 1996 (23. ledna), 23(Pt 3), 217 až 220.
- Saldeen J., Curiel D. T., Eizirik D. L. a spol.: Efficient gene transfer to dispersed human pancreatic islet celíš in vitro using adenovirus-polylysine/DNA complexes or polycationic liposomes, Diabetes 1996(zán), 45(9), 1197 až 1203.
- Vitiello L., Chonn A., Wasserman J. D. a spol.: Condensation of plasmid DNA with polylysine improves liposome-mediated gene transfer into established and primary muscle celíš, Gene Ther. 1996(květen), 3(5), 396 až 404.
- Zelphati O., Szoka F. C. ml.: Mechanism of oligonucleotide release from cationic liposomes Proč. Nati. Acad. Sci. USA 1996(15. října), 93(21), 11493 až 11498.
Biologicky účinné konjugáty, které byly popsány ve vědeckých souhrnných článcích z lékařství a které byly shora uvedeny, obsahují molekuly nosiče, které jsou vytvořeny z díamino-monouhličitanových monomerů, konkrétně lysinů, které jsou kondenzovány navzájem peptidovými vazbami aminovými skupinami v α-polohách, čímž se jako výsledek jejich syntézy vytvoří poiy-(a)-L-lysin. Tyto skutečnosti každopádně podporují poznatky podle předloženého vynálezu.
Na základě shora uvedených aspektů - stupeň novosti tohoto vynálezu je obsažen v tom, že každý z nových polykationtových biokonjugátů obecného vzorce I, připravený podle vynálezu, obsahuje molekuly nosiče obecného vzorce l/a a tyto molekuly nosiče jsou sestaveny z díamino-monouhličitanových monomerů, které jsou kondenzovány peptidovými vazbami vytvořenými aminoskupinami v (β-, γ, δ-, ε- ... atd.) polohách odpovídajících hodnotě m a nikoliv aminoskupinami v α-poloze a tedy jako výsledek syntézy se vytvoří β-, γ-, δ-, ε-... atd. polypeptidy, které jsou strukturně zcela odlišné od těchto polypeptidů, které byly popsány v citovaných vědeckých souhrnných článcích. Biologické chování těchto nových polykationtových biokonjugátů obecného vzorce I bude tedy pozměněno. Například jsou odolnější vůči proteolytickým enzymům, dále pak molekuly nosiče obecného vzorce l/a samotné mají jinou antiproliferační a protivirovou aktivitu a jako důsledek je příznivě modifikována • ··♦· ·♦ *··· ·· ·· ♦ · · ♦ » ♦ · · t · • · · · · · · 9
9 9 9 9 9 9 9 9 · ··· 9 9 99 9 9 99 9 99 9 biologická účinnost nových polykationtových biokonjugátů obecného vzorce I. Tyto nové polykationtové biokonjugáty obecného vzorce I podle vynálezu jsou sestavovány jako farmaceutické přípravky, které jsou aplikovatelné perorálně, parenterálně nebo transdermálně pro systémové nebo místní použití.
Výhodnými představiteli těchto nových polykationtových biokonjugátů obecného vzorce I podle předloženého vynálezu jsou ty biokonjugáty, v nichž molekuly nosiče obecného vzorce l/a znamenají poly-(s)-L-lysiny. Příprava některých jejich představitelů je ilustrována následujícími příklady níže.
Příklady provedení vynálezu
Příklad 1
Příprava hydrogenbromidu palmitoyl-poly-feJ-L-lysinu
Reakční schéma:
CH3—(CH2)i4—COOH +
DCCI
O 'CCH3—<CH2))4-i!-O-ř/
I
NH2—CH—COÓ'
*Br
O
II !
CH3—(CH2),4—C—NH—CH—COÓ*
Íh2
Íh2
Íh2
Íh2 ϊίΗ3 + Br
I t
•
Vzorec hydrogenbromidu palmitoyl-poly-(e)-L-lysinu - podle nových polykationtových biokonjugátú podle vynálezu obecného vzorce II - je
H[HN-CH2-(CH2)m-CH-CO]rOH [Exj]pi —NH (II), v němž m znamená číslo 3, r znamená číslo 99 ± 2,
Έ znamená skupinu CH3-(CH2)i4-COi znamená číslo 1, tj. pouze jeden druh molekul zesilovače je navázán chemickou vazbou na molekulu nosiče, a
Pí znamená 12 ± 2 %.
a) Hydrogenbromid poly-(s)-L-lysinu (střední Mw = 12 700 ± 200, specifická optická rotace = + 32,4 °, stupeň polymerace: R = 99 ± 2) jako molekula nosiče podle vynálezu obecného vzorce l/a byl syntetizován podle způsobu popsaného v příkladu 1 i) maďarského patentového spisu č. 202 553 B.
b) Příprava palmitoyl-N-hydroxy-sukcinimidu potřebného pro palmitoylační reakci: 1,28 g (5 mmolů) kyseliny palmitové a 0,58 g (5 mmolů) N-hydroxy-sukcinimidu se rozpustí ve 12 ml absolutního tetrahydrofuranu a k tomuto roztoku se přidá ···· ·· ···· ·· ·· • · · 9 9 9 9 9
99 9
1,03 g (5 mmolů) dicyklohexylkarbodiimidu. Směs se pak míchá 4 hodiny za teploty 0 °C, potom se nechá stát 12 hodin pří + 4°C a vysrážený dicyklohexyl-karbamid, který se vytvořil během tohoto způsobu, se odfiltruje skleněnou fritou ve vakuu a třikrát se promyje tetrahydrofuranem; takto získaný čirý roztok se zahustí dosucha, pevný zbytek se rozpustí ve 100 ml ethylacetátu a poslední roztok se třikrát promyje 5% (hmotn.) roztokem hydrogenuhličitanu sodného a potom třikrát vodou, což vede ke konečnému produktu 1,08 g palmitoyl-N-hydroxy-sukcinimidu v bílé, krystalické formě. Jeho čistota byla zkontrolována TLC a IČ.
c) 250 mg Hydrogenbromidu poly(e)-L-lysinu, připraveného podle způsobu popsaného v příkladu 1a), se rozpustí v 1,5 ml vody a pH tohoto roztoku se přidáním 1N NaOH upraví na 8 za intenzivního míchání; potom se roztok vyčeří přidáním 1,5 ml tetrahydrofuranu a 0,5 ml dimethylformamidu; po přidání 50 mg hydrogenuhličitanu sodného za intenzivního míchání se k reakční směsi přidá 28 mg palmitoyl-N-hydroxy-sukcinimidu, čerstvě připraveného podle příkladu 1b), a rozpustí se ve směsi 0,2 ml tetrahydrofuranu s dimethylformamidem (6:1); následuje intenzivní míchání po dobu 4 hodin, přičemž se pH udržuje na hodnotě 8 přikapáváním 5N hydroxidu sodného k tomuto roztoku; směs se nechá stát 12 hodin při + 4 °C. Následuje přikapání 0,1 ml azeotropického roztoku bromovodíku, potom se reakční směs nalije do nadbytku (20 ml) tetrahydrofuranu a sraženina se čtyřikrát promyje tetrahydrofuranem dokud nezůstane práškovitá, potom se dvakrát promyje diethyletherem a následně se vysuší; tímto způsobem se získá konečný hydrogenbromid palmitoyl-poly-(8)-L-lysinu. Výtěžek byl 245 mg. Volné aminové skupiny produkty byly zkontrolovány analýzou s trinitrobenzensulfonovou kyselinou, podle které byl stupeň substituce 12 ± 2 %. Zvýšením množství reakčního činidla palmitoyl-N-hydroxy-sukcinimidu se rovněž zvýšil stupeň substituce a dosáhl nutné hodnoty.
·*· ·· ·· »· ·· ····
Příklad 2
Příprava hydrogenbromidu hemisukcinyl-poly-(e)-L-lysinu
Reakční schéma:
NH2—CH—COÓ’
CH2 <Jh2 ch2
V
O
II '
CH2—CH2—c—NH-CH-COÓ' COOH CH2
Br ch2
I ch2 ch2
NH3 + 'Br
Vzorec hydrogenbromidu hemisukcinyl-poly-(e)-L-lysinu - nových sloučenin podle vynálezu podle obecného vzorce III - je
H[HN-CHr<CH2)m-CH-CO]rOH
I [(-)CXj]p2-NH (mj
| v němž | |
| m | znamená číslo 3, |
| Mpll | znamená číslo 99 ± 2, |
| H(-)C | znamená skupinu -OC-CH2-CH2-COOH, |
| tljll | znamená číslo 1, tj. pouze jeden druh spojujících molekul je navázán kovalentními vazbami na molekulu nosiče, a |
| P2 | znamená 20 ± 2 %. |
• ·ΦΦ· φφ φφφφ φφ φφ • · · · φ · φφφφ φ Φ··· Φ··· « φφφ φφ φφ φφ φφ φφφφ
a) Hydrogenbromid poly-(s)-L-lysinu jako molekula nosiče obecného vzorce l/a podle vynálezu byl syntetizován podle způsobu popsaného v příkladu 1a) předložené patentové přihlášky.
b) 60 mg Hydrogenbromidu poly(e)-L-lysinu, připraveného podle způsobu popsaného v příkladu 1a), se rozpustí ve 2 ml vody, pH tohoto roztoku se přidáním 1N NaOH upraví na 8, za intenzivního míchání; potom se k tomuto roztoku po dávkách přidá 30 mg čerstvě připraveného anhydridu kyseliny jantarové během 40 minut, přičemž se pH udržuje na hodnotě 8 přikapáváním 5N hydroxidu sodného; následuje 40 minut míchání a pak se na konci reakci pH směsi přidáním 6M kyseliny chlorovodíkové sníží na 4,5; směs se naplní do dialyzačního sáčku a dialyzuje se proti vodě 48 hodin, potom při teplotě + 4 °C se zamění čtyřikrát vody; vysušením vymražením se isoluje konečný produkt, hydrogenbromidová sůl hemisukcinyl-poly-(8)-L-lysinu. Výtěžek byl 46 mg. Volné aminové skupiny produktu byly zkontrolvoány analýzou trinitrobenzensulfonovou kyselinou, podle které byl stupeň substituce 20 %. Zvýšením množství kyseliny jantarové se rovněž zvýšil stupeň substituce a dosáhl příslušné nutné hodnoty.
Příklad 3
Příprava hydrogenbromidu cholesteryl-hemisukcinyl-poly-(8)-L-lysinu
Reakční schéma:
v0
->
• ··«· ·* ···· ·# *· • · · · · · · · · · • · · · · ···· · ··· · · · · · · · ·*· 99 ·* 99 99 9999
NH2—ch—coó'
I
I • ·*«· «0 »··· ·« · ♦ · <·♦«·« ·«·· ···· « • · · ·« ·· 9 9
Vzorec hydrogenbromidové soli cholesteryl-hemisukcinyl-poly-(8)-L-lysinu nových polykationtových biokonjugátů obecného vzorce IV podle vynálezu - je
H[HN-CH2-(CH2)m-CH-CO]rOH [Exa -CxckJpj—NH (IV), v němž
| m | znamená číslo 3, |
| „pil | znamená číslo 99 ± 2, |
| C | znamená skupinu -OC-CH2-CH2-CO-, |
| ^E*1 | znamená cholesterol, |
| ek = ck | znamená číslo 1, tj. pouze jeden druh zesilovače a spojujících molekul j e navázán kovalentními vazbami na molekulu nosiče, a |
| P3 | znamená 15 ± 2 %. |
a) Hydrogenbromid poly-(e)-L-lysinu jako molekula nosiče obecného vzorce l/a podle vynálezu byl syntetizován podle způsobu popsaného v příkladu 1a) předložené patentové přihlášky,
| • 4 ·· · • · | • » • 4 | 9 99 9 9 | 99 99 9 9 9 9 |
| 9 · 9 | • · | 9 9 | 9 9 9 |
| 9 9 99 | • 9 | 99 | 99 999 9 |
b) Příprava cholesteryl-hemisukcinát-N-hydroxy-sukcinimidového esteru potřebného pro konjugaci: 0,98 g (2 mmoly) komerčně dostupného (např. od Sigma) cholesteryl-hemisukcinátu a 0,23 g (2 mmoly) N-hydroxy-sukcinimidu se rozpustí v 10 ml absolutního tetrahydrofuranu a k tomuto roztoku se přidá 0,41 g (2 mmoly) dicyklohexylkarbodiimidu. Směs se pak míchá 4 hodiny za teploty 0 °C, potom se nechá stát 12 hodin při + 4 °C a vysrážený dicyklohexyl-karbamid, který se vytvořil, se odifltruje skleněnou fritou ve vakuu a třikrát se promyje tetrahydrofuranem; takto získaný čirý roztok se zahustí dosucha, pevný zbytek se rozpustí v 50 ml ethylacetátu a poslední roztok se třikrát promyje 5% (hmotn.) roztokem hydrogenuhličitanu sodného a potom třikrát vodou. Vysuší se přidáním bezvodého síranu sodného. Následuje promytí ehtylacetátem a zahuštění roztoku. Získá se tak konečný produkt cholesteryl-hemisukcinát-N-hydroxy-sukcinimidový ester jako bílý, krystalický materiál. Výtěžek byl 0,73 g. Čistota byla zkontrolována TLC a IČ.
c) 240 mg hydrogenbromidu poly(e)-L-lysinu, připraveného podle způsobu popsaného v příkladu 3a), se rozpustí ve 4,8 ml vody, pH tohoto roztoku se přidáním 1N NaOH upraví na 8, za intenzivního míchání; potom se roztok vyčeří přidáním 1,6 ml tetrahydrofuranu; po přidání 200 mg hydrogenuhličitanu sodného za intenzivního míchání se k reakční směsi přidá 50 mg cholesteryl-hemisukcinát-N-hydroxy-sukcinimidu, čerstvě připraveného podle příkladu 3b), a rozpustí se ve 2,4 ml tetrahydrofuranu; následuje intenzivní míchání po dobu 4 hodin za teploty místnosti, přičemž se pH udržuje na hodnotě 8 přikapáváním 5N hydroxidu sodného k tomuto roztoku; směs se nechá stát 12 hodin při + 4 °C. Následuje přikapání 0,3 ml azeotropického roztoku bromovodíku, potom se reakční směs nalije do nadbytku (30 ml) tetrahydrofuranu a sraženina se čtyřikrát promyje tetrahydrofuran dokud nezůstane práškovitá, potom se dvakrát promyje diethyletherem a následně se vysuší; tímto způsobem se získá konečný hydrogenbromid cholesteryl-hemisukcinát-poly-(E)-L-lysinu. Výtěžek byl 275 mg. Volné aminové skupiny produkty byly zkontrolovány analýzou s trinitrobenzensulfonovou kyselinou, podle které byl stupeň substituce 15 ± 2 %. Zvýšením množství reakčního činidla cholesteryl-hemi-
| • 4 4 | • 4 | • 4 | ||
| • 4 | 4 4 | 4 | 4 4 | 4 4 |
| • 4 · | 4 · | 4 4 | • 4 | 4 |
| 4 4 4« | 4 4 | 4· | » 4 | • 44 4 |
sukcinát-N-hydroxy-sukcinimidu se rovněž zvýšil stupeň substituce a dosáhl nutné hodnoty.
Příklad 4
Příprava hydrogenbromidu poly-(E)-l_-lysin-cisplatiny
Reakční schéma:
Ck/C1 nh2 z nh2 ch2ÍoO' nh2. nh3
X cr ci
-CHa—<i—NH—CH—COÓ CH2
Íh2 ch2
CH2 .........
Vjh/ *Br
Vzorec hydrogenbromidu poly-(E)-L-lysin-cisplatiny - nových polykationtových biokonjugátů obecného vzorce VII - je (VII),
| • 4444 | •4 | *4*4 »4 | 44 | |
| • 4 | • | • | • · · | 4 · |
| • 4 4 · | • | 4 4 4 4 | 4 | |
| • · · | • | • | 4 4 »4 | 4 |
| »· 44 | 4* | 44 4« | 444 4 |
H [HN-CH2-(CH2)m-CH-CO]rOH I [(+)Κχ„]ζ . [(-)Cxj]p2 —NH v němž m znamená číslo 3, r znamená číslo 99 ± 2, (-)C znamená skupinu -OC-CH2-CH2-COO', (+)K znamená cisplatinu, u = j znamená číslo 1, tj. pouze jeden druh molekul zesilovače a spojujících molekul je navázán iontovými vazbami na molekulu nosiče, a u = P2 znamená 80 ± 2 %.
mg cisplatiny (Platidiam(R), výrobce: Lachema, Česká republika) se rozpustí ve 3 ml vody. K tomuto roztoku se přidá 23 mg hydrogenbromidové soli hemisukcinyl-poly-(e)-L-lysinu s 80% sukcinylací, který se připraví podle příkladu 1 předložené patentové přihlášky; tento roztok se nechá stát 48 hodin při 4 °C, potom se naplní do dialyzačního sáčku a dialyzuje se proti vodě 48 hodin při 4 °C, přičemž se voda čtyřikrát vymění. Konečný produkt hydrogenbromid poly-(e)-L-lysin-cisplatiny se pak isoluje vysušením vymražením. Výtěžek byl 15 mg. Obsah platiny (tj. obsah cisplatiny) produktu byl vyhodnocen atomovou absorpční spektroskopií. Podle vyhodnocení poměr hmotnost Pt/Br byl 16, molámí poměr 6,5, obsah platiny 2,7 mg/g; množství cis platiny v hydrogenbromidu poly-(s)-L-lysin-cisplatiny byl úměrný stupni sukcinylace hydrogenbromidové soli hemisukcinyl-poly-(s)-L-lysinu.
Biologická zkoumání
Byl studován účinek inhibování nádoru polykationtovými biokonjugáty, který je částí předmětu tohoto vynálezu, in vitro na kulturách nádorových buněk a in vivo na transplatovatelných nádorech hlodavců. In vitro inhibiční účinek na proliferaci buněk a in vivo inhibiční účinek různých polykationtových biokonjugátů připravených podle vynálezu na růst nádorů byl srovnán s neošetřenými kontrolami.
• · φ · · · · · · φφφ • •Φ ·Φ ·Φ ·· ·· ····
Byly provedeny biologické pokusy se sloučeninami, které byly připraveny podle příkladů 1, 2, 3 a 4 podle vynálezu, konkrétně s:
- hydrogenbromidem palmitoyl-poly-(s)-L-lysinu,
- hydrogenbromidem hemisukcinyl-poly-(8)-L-lysinu,
- hydrogenbromidem cholesteryl-hemisukcinyl-poly-(8)-L-lysinu a
- hydrogenbromidem poly-(e)-L-lysin-cisplatiny.
In vitro pokusy
Pokusy in vitro byly provedeny s hydrogenbromidem palmítoyl-poiy~(e)-L-lysinu, hydrogenbromidem hemisukcinyl-poly-(e)-L-lysinu a hydrogenbromidem poly-(ej-L-lysin-cisplatiny.
V těchto pokusech byly použity tyto buněčné linie:
buněčná linie P388 myší lymfocytické leukemie, pocházející od Arthur D. Little lne., Cambridge, Mass., USA, in vitro ošetřovaná v Národním onkologickém ústavu, Budapešt, Maďarsko (Cancer Treet. Rep. 1986, 70,279 až 284), buněčná linie MCF-7 lidské rakoviny prsu, pocházející z Americké sbírky typů kultur (ATCC) a buněčná linie PC3 lidské rakoviny prostaty, pocházející z Americké sbírky typů kultur (ATCC).
Při pokusech in vitro byly použity tyto způsoby:
1. Klonogenní test
Buňky MCF-7 a PC3 byly vysety na Petriho misky, potom byly ve vodném mediu a za příslušných podmínek a byly inkubovány se seriálovými ředěními různých polykationtových biokonjugátů připravených podle vynálezu. Kolonie, které sestávaly z minimálně 30 buněk, byly pak spočteny a získané hodnoty tří souběžných Petriho misek byly zprůměrovány. Byla vypočtena relativní účinnost klonování tak, že se • · 9 * • · 9 · • · · • 99 hodnoty kontroly berou jako 100 procent (Cancer Detection and Prevention 1996, 20(2), 146 až 152.).
2. Inhibice a proliferace
Test se sulforodaminem B (SRB): přibližně jeden až dva tisíce buněk bylo vloženo do každé jamky specielní malé misky z umělé hmoty (desky s mikrojamkami). Buňky byly inkubovány v příslušném mediu a za příslušných podmínek a po přilnutí k povrchu byly ošetřeny seriálovými ředěními různých polykationtových biokonjugátů připravených podle vynálezu. Na konci pokusu byly buňky fixovány, obarveny SRB a čtečkou mikrodesek CLS 962 ELISA byla zjištěna optická hustota, která je přímo úměrná proliferaci buněk. Relativní inhibice proliferace byla vypočtena tak, že se hodnoty kontroly berou jako 100 procent (Cancer Detection and Prevention 1996, 20(2), 146 až 152.).
Způsob počítání buněk s komůrkou Neubauerova typu: Suspenze kultur exponenciálně rostoucích buněk, které byly v příslušném mediu a za příslušných podmínek, byly ošetřeny seriálovými ředěními různých polykationtových biokonjugátů, které byly připraveny podle vynálezu. 24 a 48 hodin po ošetření byly buňky obarveny tripanovou modří a ošetřené a kontrolní buňky byly spočítány v modifikované hemocytometrové komůrce Neubauerova typu. Relativní inhibice proliferace byla vypočtena tak, že se hodnoty kontroly berou jako 100 procent.
Pokusy in vivo
Pokusy in vivo byly provedeny s hydrogenbromidem palmitoyi-poly-(e)-L-lysinu a hydrogenbromidem cholesteryi-hemisukcinyl-poly-(8)-L-lysinu jako monoterapie a společně s přípravkem Cytoxan(R) (Bristol-Myers) jako kombinační terapie. Sloučeniny byly podávány podle schématu jediné nebo opakované dávkové terapie a byly aplikovány intravenózně nebo intraperitoneálně.
Inhibiční účinek polykationtových biokonjugátů na růst nádorů byl studován na následujících transplantovatelných nádorech hlodavců buňky P-388 lymfatické leukemie, pocházející z Cambridge, Mass., USA, byly transplantovány i.p. a s.c. do těchto zvířat: myší samci BDF1 o hmotnosti 22 až 24 g, linie bez specifického patogenu (SPF), sarkom S-180, pocházející od Chester Beatty I., Londýn, byly transplantovány s.c. do těchto zvířat: myší samci BDF1 o hmotnosti 22 až 24 g, linie bez specifického patogenu (SPF).
Výsledky biologických pokusů
Pokusy in vitro
Na in vitro kulturách nádorových buněk hydrogenbromid palmitoyl-poly-(8)-L-lysinu, hydrogenbromid cholesteryl-hemisukcinyl-poly-(8)-L-lysinu a hydrogenbromid poly-íej-L-lysin-cisplatiny vykazují inhibici tvorby kolonií a proliferace buněk závislou na dávce. Nejúčinější inhibici vykazoval hydrogenbromid palmitoyl-poly-(8)-L-lysinu a hydrogenbromid poly-(8)-L-lysin-cisplatiny.
Pokusy in vivo
Na základě středních objemů nádorů a křivek růstu nádorů byl pozorován významný inhibiční účinek hydrogenbromidu palmitoyl-poly-(8)-L-lysinu a hydrogenbromidu cholesteryl-hemisukcinyl-poly-(8)-L-lysinu na transplantovatelné nádory hlodavců. Dále pak kombinované léčení hydrogenbromidem palmitoyl-poiy-(8)-L-lysinu s přípravkem Cytoxan(R) významně inhibovalo růst nádorů a významně zvýšilo dobu přežití pokusných zvířat s naočkovaným nádorem při srovnání s neošetřenou kontrolou stejně jako se zvířaty, které byly léčeny pouze přípravkem Cytoxan(R).
Claims (37)
- PATENTOVÉ NÁROKY1. Polykationtové biokonjugáty, vyznačující se tím, že každý z nich obsahuje molekuly isopolypeptidového polykationtového nosiče, které mají volné α-aminové skupiny, a tyto molekuly nosiče jsou konjugovány chemickými vazbami s vhodně vybranými molekulami, které mohou být buď identické nebo mohou být různých, dvou nebo více, tj. x, druhů, nesoucí funkční skupiny vhodné pro konjugaci, a tyto polykationtové biokonjugáty syntetizované tímto způsobem mohou být popsány obecným vzorcem IH[NH-CH2- (CH2)m-CH-CO]rOHI (I), [(i)Mx]*[(k)Mx]“NH v němž r znamená střední hodnotu mezi 20 a 400, m znamená číslo 0,1,2, 3,.... k, [(k)Mxj znamená molekuly zesilovače a/nebo spojovací molekuly konjugované kovalentními, = k, vazbami s molekulou isopolypeptidového polykationtového nosiče, a [(i)Mxj znamená molekuly zesilovače konjugované iontovými, = i, vazbami s molekulou isopolypeptidového polykationtového nosiče, při čemž uvedené molekuly zesilovače a spojovací molekuly, které mají příslušné funkční skupiny pro konjugaci, mohou být buď identické nebo mohou být různých, dvou nebo více, tj. x, druhů, a molekuly zesilovače mohou být konjugovány:- přímo a/nebo- nepřímo spojovací molekulou, a dále výskyt napojení [(k)Mxj a [(i)Mxj ve stejném polykationtovém biokonjugátu je symbolizován [(k/i)Mxj.
- 2. Polykationtové biokonjugáty obecného vzorce I vyrobené podle nároku 1, vyzná č u j í c í se t í m, že v molekulách isopolypeptidového polykation- ··» · tového nosiče existují monomery se stejnou konfigurací, tj. buď D- nebo L, a jednotlivé monomery nejsou spolu navázány svými jejich aminovými skupinami v α-polohách, ale aminovými skupinami v jiných, tj. v β-, γ-, δ-, ε-.... atd., polohách - podle hodnoty m - a tedy molekuly isopolypeptidového polykationtového nosiče, zde dále molekuly nosiče, které mají volnou α-aminovou skupinu, jsou sloučeniny obecného vzorce l/aH[NH-CH2- (CH2) m-CH-CO] rOHI (I), nh2 (volná α-aminová skupina) v němž 'Ϊ' a m znamenají stejně jako v obecném vzorci I.
- 3. Molekuly nosiče obecného vzorce l/a vyrobené podle nároku 2, vyznačující se t i m, že jejich struktura se odlišuje od polypeptidů vystavěných obvyklými α-amino-peptidovými vazbami, normálně se vyskytujícími v savčím organismu, a díky jejich odlišné chemické struktuře, například ε-amino-peptidovými vazbami, vykazují také odlišné biologické vlastnosti.
- 4. Molekuly nosiče obecného vzorce l/a podle nároku 3, vyznačující se t i m, že jsou odolnější vůči proteolytickým enzymům a jsou tedy zvláště výhodně aplikovatelné při transportu účinných látek různých typů v savčím organismu, tj. pro dosažení jejich funkcí nosiče.
- 5. Polykationtové biokonjugáty obecného vzorce I připravené podle nároku 1, vyznačující se tím, že vhodně vybrané [(k)Mxj a/nebo [(i)Mxj molekuly, které mohou být identické nebo mohou být různých, dvou nebo více, tj. x, druhů, jsou konjugovány s daným představitelem molekul nosiče obecného vzorce l/a kovalentními a/nebo iontovými vazbami.• · • · · · *·· · ·
- 6. Polykationtové biokonjugáty obecného vzorce I připravené podle nároku 5, vyznačující se tím, že konjugace molekul [(k)Mxj a/nebo [(i)Mx] molekul s daným představitelem molekul nosiče obecného vzorce l/a kovalentními a/nebo iontovými chemickými vazbami probíhá přímo a/nebo nepřímo v definovaném poměru, s výhodou tak, aby se dosáhlo nasycení 10 až 100 %.
- 7. Polykationtové biokonjugáty obecného vzorce I připravené podle nároku 1, vyznačující se tím, že zahrnují ty biokonjugáty, v nichž daný představitel molekul nosiče obecného vzorce l/a je přímo konjugován kovalentními vazbami s [Ex,] molekulami zesilovače, které mohou být buď identické nebo mohou být různých, dvou nebo více, tj. x, druhů, v těchto biokonjugátech [(k)Mxj = [ExJp1, a polykationtové biokonjugáty jsou popsány obecným vzorcem IIH[NH-CH2- (CH2) π,-CH-CO] rOHI (II), [EXi]pl-NH v němžEx v [EXj]Pi znamená Ex molekul zesilovače různého, x, druhu konjugovaných přímo s daným představitelem molekul nosiče obecného vzorce l/a kovalentními vazbami, i znamená vto, jestli Ex molekul zesilovače konjugovaných s danou molekulu nosiče kovalentními vazbami je identických, i = 1, nebo jestli jsou různého druhu počtu i, kde i = 2, 3,... x druhů, p/ označuje stupeň nasycenosti v % molekuly nosiče obecného vzorce l/a s [EXj] molekulami zesilovače, jehož hodnota je > 0 a < 100, přičemž je stanoven poměr mezi volnými, nezahrnutými v chemických vazbách, a vázanými NH2-skupinami, který dále ovlivňuje náboj a kationtový charakter polykationtových biokonjugátů, a • · • · • · · • · • · * » · · » · · · • · · • «· r a m znamenají stejně jako v obecném vzorci I.
- 8. Molekuly nosiče obecného vzorce l/a připravené podle nároku 2, vyznačují c í se t í m, že jejich daný představitel je konjugován kovalentními vazbami s [(-)Cxjj spojovacími molekulami aniontového charakteru, které mohou být buď identické nebo mohou být různých, dvou nebo více, tj. x, druhů, a tyto spojovací molekuly znamenají vhodně vybrané prodlužující řetězce dikarboxylových kyselin, trikarboxylových kyselin, sacharidů, aminokyselin nebo peptidů, v těchto sloučeninách [(k)Mx] = [(-)CxJp2 a tyto konjugáty jsou popsány obecným vzorcem IIIH[NH-CH2- (CH2) m-CH-CO] rOH | (III), [ (-JCXjlpz-NH v němž (-)Cx [(-)CXj]p2 znamená (-)Cx spojovacích molekul výlučně aniontového charakteru různých, x, druhů navázaných s daným představitelem molekul nosiče obecného vzorce l/a kovalentními vazbami, j znamená to, jestli (-)Cx spojovacích molekul, konjugovaných s danou molekulu nosiče molekulou kovalentními vazbami je identických, i = 1, nebo jestli jsou různého druhu počtu i, kde i = 2,3,... x” druhů, p2 označuje stupeň nasycenosti v % molekul nosiče obecného vzorce l/a [(-)Cxj] spojovacími molekulami výlučně aniontového charakteru, jehož hodnota je > 0 a < 100, přičemž je stanoven poměr mezi volnými, nezahrnutými v chemických vazbách, a vázanými NH2-skupinami, který dále ovlivňuje náboj a kationtový charakter polykationtových biokonjugátů, aΓ a m znamenají stejně jako v obecném vzorci I.
- 9. Polykationtové biokonjugáty obecného vzorce III podle nároku 8, vyznačují c í se t í m, že molekuly nosiče obecného vzorce l/a kationtového charakteru, díky konjugaci [(-)Cxj] spojovacích molekul aniontového chrarakteru s nimi kovalentními vazbami se stávají schopné vytvořit takové polykationtové biokonjugáty, v nichž existují další možnosti získat iontové vazby s molekulami zesilovače kationtového charakteru.
- 10. Polykationtové biokonjugáty obecného vzorce I podle nároku 1, vyznačující se t í m, že zahrnují ty biokonjugáty, v nichž daný představitel molekul nosiče obecného vzorce l/a je nepřímo konjugován s Ex molekulami zesilovače, které mohou být buď identické nebo mohou být různých, dvou nebo více, tj. x, druhů, prostřednictvím Cx spojovacích molekul, které také být buď identické nebo mohou být různých, dvou nebo více, tj. x, druhů, v těchto biokonjugátech jak chemické vazby mezi molekulou nosiče a Cx tak mezi Cx a Ex jsou kovalentní, v těchto biokonjugátech [(k)Mxj = [Cxck - Εχ<*]ρ3 a polykationtové biokonjugáty jsou popsány obecným vzorcem IVH[NH-CH2- (CH2) m-CH-CO] rOH | (II), [CXck — EXek]p3” NH v němžCx-Ex v [Cxck - EXek]p3 znamená Ex molekul zesilovače různého, x, druhu konjugovaných kovalentními vazbami nepřímo Cx spojovacími molekulami různého, x, druhu, které jsou také konjugovány kovalentními vazbami s daným představitelem molekul nosiče obecného vzorce l/a , « · * · • · ck znamená to, jestli Cx spojovacích molekul konjugovaných s danou molekulu nosiče kovalentními vazbami je identických, ck = 1, nebo jestli jsou různého druhu počtu ck, kde ck = 2, 3, ... x druhů, ek znamená to, jestli Ex molekul zesilovače konjugovaných s danou molekulu nosiče nepřímo Cx spojovacími molekulami kovalentními vazbami je identických, ek = 1, nebo jestli jsou různého druhu počtu ek, kde ek = 2, 3,... x druhů, p3 označuje stupeň nasycenosti v % molekul nosiče [EXdJ molekulami zesilovače kondenzovanými s [CXdJ spojovacími molekulami, jehož hodnota je > 0 a < 100, přičemž je stanoven poměr mezi volnými, nezahrnutými v chemických vazbách, a vázanými NH2-skupinami, který dále ovlivňuje náboj a kationtový charakter polykationtových biokonjugátů, a dále r a m znamenají stejně jako v obecném vzorci I.
- 11. Konjugáty obecného vzorce III podle nároku 8, vyznačující se tím, že [(-)Cxj] spojovacích molekul různého, x, druhu, vyskytujících se v nich jsou vhodně vybrané prodlužující řetězce dikarboxylových kyselin, trikarboxylových kyselin, sacharidů, aminokyselin nebo peptidů.
- 12. Polykationtové biokonjugáty obecného vzorce I podle nároku 1, vyznačující se t i m, že zahrnují ty biokonjugáty, v nichž daný představitel molekul nosiče obecného vzorce l/a je konjugován kovalentními vazbamia) [Exj] molekulami zesilovače a/nebob) [(-)Cxj] spojovacími molekulami aniontového charakteru a/neboc) [Οχ* - Exexj nepřímo kondenzovanými molekulami nosiče, které mohou být buď identické jendoho druhu nebo mohou být různých, dvou nebo více, tj. x, druhů, s tím, že z [Exj] a/nebo [(-)Cxj] a/nebo [Cxck - ExeJ typů molekul alespoň dvě jsou obsaženy v biokonjugátů, v těchto biokonjugátech:[(k)Mx] = [EXj]Pi + [(-)CXj]p2 nebo [EX;]P1 + [CXck-EXeklps nebo [Cxck-EXekU + [(-)Cxj]p2 nebo [EXjjpl + [CXck“EXek]p3 + [(-)CXj]p2l a polykationtové biokonjugáty jsou popsány schematickým obecným vzorcem V v němž [Ex]pi znamená shodně jako v obecném vzorci 11, [(-)CXj]p2 znamená shodně jako v obecném vzorci III, [Cxck-ExekV znamená shodně jako v obecném vzorci IV, m znamená stejně jako v obecném vzorci I, pro další hodnoty platí, že pí + p2 + P3 > 0 a < 100 a z hodnot pf, p2 a p3 alespoň dvě jsou větší než 0, dále v daném polykationtovém biokonjugátuEx molekul v [ExJ a (-)Cx molekulách v [(-)CxJ není nutně identických s Ex a Cx molekulami vyskytujícími se v [Cxck-Exek], přičemž tento rozdíl je symbolizován ”x.
- 13. Polykationtové biokonjugáty obecného vzorce I podle nároku 1, vyznačující se t i m, že zahrnují ty biokonjugáty, v nichž daný představitel molekul nosiče obecného vzorce l/a je přímo konjugován výlučně iontovými vazbami s (-)Ax molekulami zesilovače aniontového charakteru, které mohou být buď identické nebo mohou být různých, dvou nebo více, tj. x, druhů, v těchto biokonjugátech [(i)Mx] = [(-)Axs]t a takto získané polykationtové biokonjugáty mohou být popsány obecným vzorcem VIH[NH-CH2- (CH2) m-CH-CO] rOH (VI) , [ (-)Axs]t-NH v němž (-)Ax v [(-)Axs]t znamená (-)Ax molekul zesilovače aniontového charakteru, které mohou být identické nebo mohou být různých, dvou nebo více, tj. x, druhů, které jsou konjugovány s daným představitelem molekul nosiče obecného vzorce l/a iontovými vazbami, s znamená, jestli aniontové/polyaniontové molekuly konjugované s danou molekulou polykationtového nosiče iontovými vazbami jsou identické, s = 1, nebo jestli jsou různého druhu počtu s, kde s = 2, 3,... x druhů, t označuje stupeň nasycenosti v % daného představitele molekuly nosiče obecného vzorce l/a (-)Ax anionty, jehož hodnota je > 0 a < 100, přičemž je stanoven poměr mezi volnými, nezahrnutými v chemických vazbách, a vázanými NH2-skupinami, který dále ovlivňuje náboj a kationtový charakter polykationtových biokonjugátů, a r a m znamenají stejně jako v obecném vzorci I.
- 14. Polykationtové biokonjugáty obecného vzorce I podle nároku 1, vyznačující se t i m, že zahrnují konjugáty obecného vzorce III, připravené podle nároku 8, a ty jsou konjugovány s (+)Kx molekulami zesilovače kationtového charakteru, které mohou být buď jednoho druhu nebo, dvou nebo více, tj. x, různých druhů, iontovými vazbami (-)Cx spojovacích molekul aniontového charakteru, v těchto biokonjugátech ♦ · ·· • · · * ·· ··· · [(k/i)Mxj = [(-)CXj]p2 * [(+)KXu]z a polykationtové biokonjugáty jsou popsány obecným vzorcem VIIH[NH-CH2- (CH2)m-CH-C0]r0H | (VII), [ ( + )Kxu]z* [ (-)Cxj]p2-NH v němž (+)Kx v [(+)KXu]z znamená (+)Kx molekul zesilovače kationtového charakteru, které mohou být stejné nebo různých, dvou nebo více, tj. x, druhů, které jsou konjugovány s daným představitelem konjugátů obecného vzorce III, u znamená to, jestli kationty/polykationty konjugované s danou sloučeninou obecného vzorce III iontovými vazbami jsou identické, u = 1, nebo jestli jsou různého druhu počtu u, kde u = 2,3,.... t.j. x, druhů, z znamená stupeň nasycenosti v % daného představitele sloučenin obecného vzorce III [(+)Kxu] kationty, jehož hodnota je > 0 a < 100, přičemž je stanoven poměr mezi volnými, nezahrnutými v chemických vazbách, a vázanými NH2-skupinami, který dále ovlivňuje náboj a kationtový charakter polykationtových biokonjugátů, a jelikož [(+)KxJ molekul kationtového charakteru může být výlučně konjugováno [(-)CxJ spojovacími molekulami aniontového charakteru se sloučeninami obecného vzorce III, p2 = z, a dále [(“)CXj]P2 znamená stejně jako v obecném vzorci lila r a m znamenají stejně jako v obecném vzorci I.
- 15. Polykationtové biokonjugáty obecného vzorce I podle nároku 1, vyznačující se t i m, že zahrnují ty biokonjugáty, v nichž s volnými a-aminoskupinami daného představitele polykationtových biokonjugátů obecného vzorce VII, připravené podle nároku 14, jako s polykationtem, jsou konjugovány další9 99 • · · 9 9 9 molekuly zesilovače, které mohou být identické nebo mohou být různých, dvou nebo více, tj. x, druhů, aniontového charakteru [(-)AxJ, v těchto biokonjugátech:[(k/i)Mx] = {[(-)CXj]p2 * K+JKxJJ * K-)Axjt a polykationtové biokonjugáty znamenají konjugáty schematického obecného vzorce Vlil o...(CHjJm—CH-C-NH—CHj-(CH2)n,NH Χ[(-Χ^)ρ2 * K+)K>uIz-CHI nh2 oII-C—NHOII-CH,—(CHj)™—CH—C—NH— NH2 ♦ KJAxsJtOII (CHjXn— CH— C... nh2 (VHI) v němž [(-)CXj]p2 znamená shodně jako v obecném vzorci III, [(+)KXu]z znamená shodně jako v obecném vzorci VII, [(-)AXs]t znamená shodně jako v obecném vzorci VI a m znamená stejně jako v obecném vzorci I.
- 16. Polykationtové biokonjugáty obecného vzorce I podle nároku 1, vyznačující se t í m, že zahrnují ty biokonjugáty, v nichž s volnými a-aminoskupinami daného představitele polykationtových biokonjugátů obecného vzorce II nebo IV nebo schematického vzorce V, připravených podle nároků 7, 10 a 12, jako s polykationtem, jsou konjugovány iontovými vazbami další molekuly zesilovače, které mohou být buď identické nebo mohou být různých, dvou nebo více, tj. x, druhů, aniontového charakteru [(-)AxJ, v těchto biokonjugátech:f(k/i)Mx] = [EXijpi * [(-)AXs]t nebo [Cxck-Exekjpa * [(-) Axs]t nebo * [Exjpi + [Cxck-Exekjps * [(-)Axs]t *« · · a polykationtové biokonjugáty jsou popsány obecným vzorcem IX nebo schematickým obecným vzorcem IX/a [ (-)Axs]t *Η [ NH- CH2 - (CH2) ra-CH- CO ] rOHI [(k)Mx-NH (VII),OII oII oII-CH—c—NH-CHj-(CHzJm—CH—C-NH—Oh (CH^— CH-C-NH— (CH^— CH-C..NH \NHNHz^lOAxjJtNHz [ExQpi [<Xk-E>feklp3 (IX/a) v němž [(-)Axs]t znamená shodně jako v obecném vzorci VI, [EXj]p1 znamená shodně jako v obecném vzorci II, [CXck-EXekV znamená shodně jako v obecném vzorci IV, [(k)Mx] a m znamenají shodně jako v obecném vzorci I, p1+p2+t je větší než nula nebo < 100 a dále z Pí a p3 alespoň jeden má hodnotu > 0 a t > 0.
- 17.Polykationtové biokonjugáty obecného vzorce I podle nároku 1, vyznačující se t í m, že zahrnují ty biokonjugáty, které odpovídají polykationtovým biokonjugátům obecného schematického obecného vzorce V, připraveným podle nároku 12, včetně dalších těchto biokonjugátů, v nichž existují tyto spojovací molekuly aniontového charakteru [(-)Cxd, které mohou být buď identické nebo mohou být různých, dvou nebo více x druhů, a tyto spojovací molekuly se konjugují s iontovými vazbami molekul zesilovače kationtového charakteru [(+)KxJ, které mohou být buď identické nebo mohou být různých, dvou nebo více, tj. x, druhů, v těchto biokonjugátech:♦ ···9999 [(k/i)Mx] = [Exfjpi + {[(-)CXj]p2 * [(+)KxJz} nebo [Cxck-ExekU + {[(-)Cxj]p2 * [(+)Kxu]z} nebo [EXj]pj + [CXck~EXek]p3 + {[(-)CXj]p2 * [(+)KXu]z) a polykationtové biokonjugáty jsou popsány obecným vzorcem X nebo schematickým obecným vzorcem X/aH [NH-CH2- (CH2) m-CH-CO] rOHI (X), { [ (->0χ-)]ρ2 * [( + )Kxu]z} + [(k)Mx]-NHO...(CHjJnf- CH-C-NH~CH2— NHW,O o 2CHj)™—CH—£—NH—CH2—(CHjín,—CH—C—NH—CH2 (Cíh^—CH— C..INH \— PlřeVlrvINH \NH, (X/a).
- 18. Polykationtové biokonjugáty obecného vzorce I podle nároku 1, vyznačující se t í m, že zahrnují ty biokonjugáty, v nichž s volnými a-amino-skupinami daného představitele polykationtových biokonjugátů obecného vzorce X nebo schematického obecného vzorce X/a, připravené podle nároku 17, jako polykationem, jsou konjugovány iontovými vazbami další molekuly zesilovače aniontového charakteru [(-)Axsj, které mohou bud být identické nebo mohou být různých, dvou nebo více, tj. x, druhů, v těchto biokonjugátech:l(k/i)Mx] = [EXijps + {[(-)CXj]p2 * [WKxJJ * [(-)AXs]t nebo [CXck-EXek]p3 + {[(-)CxJp2 * K+jKXujJ * [(-)AxJ, nebo [EXjjpj + [CXck“EXek]p3 + {[(*)CXj]p2 * [(+)KXu]z} * [(-)Axs]t • ·· · φ * φφφφ φφ a polykationtové biokonjugáty jsou popsány obecným vzorcem XI nebo schematickým obecným vzorcem Xl/aH [NH-CH2- (CH2) m-CH-CO] r0H U-)Axs]t * | {[(HCXjlpz * [( + )Kxu]J + [(k)Mx]-NH (XI) z o o o oII II II II (CHz),”CH— C— NH—CH,—(CHyjjf—CH—C— Ntt-CHj—(Oh)m— CH—C—NH—CH—C.NH \,NH \(Qfck * ^<ek]p3NH (Βψ, (Xla)
- 19. Molekuly nosiče obecného vzorce l/a připravené podle nároku 2, které mají volné α-aminové skupiny, vyznačující se tím, že zahrnují hydrobromidové soli 60 až 120členných neracemických polyiso-L-lysinů, tj. hydrobromidů poly-(8)-L-lysinu, které samy mají jisté protinádorové, antiproliferační a protivirové účinky.
- 20. Molekuly nosiče obecného vzorce l/a podle nároku 19, vyznačující se t i m, že zvyšují antiproliferační a protivirové účinky molekul, které jsou na ně navázány.
- 21. Polykationtové biokonjugáty podle nároku 1, vyznačující se tím, že v případě molekul zesilovače konjugovaných s vhodnou vybranou molekulou nosiče obecného vzorce l/a samotné nemají očekávanou (např. antiproliferační) aktivitu, potom jako důsledek jejich konjugace zesílí původně existující biologická aktivita molekuly nosiče, například ty, které byly vyrobeny podle nároku 19.
- 22. Polykationtové biokonjugáty obecného vzorce I připravené podle nároku 1, vyznačující se tím, že že každý z nich obsahuje molekuly nosiče o»·» 499 999 99 9 9 9 99 9 4 4 · 9 9 · 4 4444 4444 ·4 4 · 444 · 9 9 9 999 99 44 44 44 4444 becného vzorce l/a a tyto vhodně zvolené molekuly nosiče jsou konjugovány způsobem, jak je uvedeno v obecných vzorcích II, III, IV, VI, VII, IX, X a XI nebo na schematických vzorcích V, Vlil, IX/a, X/a a Xll/a podle nároků 7, 8, 10,12, 13, 14, 15, 16, 17 a 18, s prakticky žádnou organickou a/nebo anorganickou molekulou, která má funkční skupiny vhodné pro konjugaci, a tyto posledně uvedené mohou být racionálně vybrány - neomezujícím způsobem - ze skupin sloučenin, které jsou zde níže uvedeny:hormonů a antagonistů hormonů různého druhu (steroidů, proteinů, peptidů atd.) a aktivních fragmentů peptidových hormonů a jejich derivátů, nasycených a nenasycených mastných kyselin, cholesterolů, fosfolipidů (fosfoglyceridů, sfingomyelinů atd.) a jejich derivátů, nukleových kyselin/antimediátorových nukleotidů, monosacharidů, oligosacharidů a poolysacharidů a jejich derivátů, vitaminů a jejich derivátů, známých protinádorových léčiv a aktivních látek a jejich derivátů a aminokyselin, oligopeptidů, polypeptidů, dalších glykoproteinú a lipoproteinů, jejich fragmentů a jejich derivátů.
- 23. Polykationtové biokonjugáty obecného vzorce I připravené podle nároku 1, vyznačující se tím, že každý z nich obsahuje molekuly nosiče obecného vzorce la, které jsou konjugovány přímo a/nebo nepřímo kovalentní a/nebo iontovou vazbou s molekulami zesilovače, které mají přímý antiproliferační účinek, které mohou být bud1 identické nebo mohou být, dvou nebo více, tj. x, různých druhu, a tyto polykationtové biokonjugáty jsou úspěšně aplikovatelné při léčení maligních nádorů vyskytujících se v organismech savců samotné, nebo v kombinaci se známými protinádorovými způsoby, přijatými v klinické praxi.
- 24. Polykationtové biokonjugáty obecného vzorce I podle nároku 23, vyznačují c i se t i m, že každý z nich obsahuje molekuly nosiče obecného vzorce ♦ · l/a, které jsou konjugovány s dalšími molekulami zesilovače, které mají nepřímý antiproliferační účinek, kterým je vyvinutá selektivita nebo zvýšená selektivita biokonjugátů na danou cílovou nádorovou buňku, při čemž zvyšují koncentraci biokonjugátů v nádorech a tak lze zmenšit nechtěné vedlejší účinky a účinnost léčení může být dále zvýšena.
- 25. Polykationtové biokonjugáty obecného vzorce I podle nároků 23 a 24, vyznačující se t i m, že pro to, aby měly protinádorový účinek se daného představitele molekuly nosiče obecného vzorce l/a konjugují se sloučeninami vhodně vybranými z molekul, které mají přímou a/nebo nepřímou antiproliferační aktivitu, jak je zde neomezujícími příklady ukázáno níže:sloučeniny, které mají antiproliferační účinky: cytostatika používaná v klinické praxi, dále cytokiny, které ovlivňují dělení a diferenciaci nádorových buněk (např. různé růstové faktory stejně jako protilátky produkované proti nim, interferony atd.), dále peptidy/proteiny inhibující tvorbu nových krevních cév kolem nádorových buněk (angiostatiny, endostatiny), další nukleové kyseliny/antimediátorové oligonukleotidy, které vykazují antiproliferační účinky na maligně transformované buňky, sloučeniny s nepřímým antiproliferačním účinkem, které vyvíjejí selektivitu nebo zvyšují selektivitu biokonjugátů na danou cílovou buňku: monoklonální protilátky, které mají specifické afinity na povrchový antigen dané nádorové buňky, stejně jako protilátky nebo jakékoliv sloučeniny, které mají afinitu na tyto druhy receptorů (například transferinový receptor nebo folátový receptor mezi vitaminy atd.), které jsou přítomny ve větším poměru na povrchu nádorových buněk než na povrchu normálních (nemaligně transformovaných) buněk, sloučeniny, které mají přímé a současně nepřímé antiproliferační účinky: hormony, antagonisté hormonů a jejich deriváty, zvláště polypeptidové hormony a lidský choriogonadotropinový hormon, které mají antiproliferační účinky, dále protilátky produkované proti receptorům růstových faktorů různého druhu, které jsou přítomny ve větším poměru na »*»» • · »· « · 9 · · · · • · ··· ·· · • ···· 9 · · · · • · · ···· · * · ··* 4« ·· *· ·· ···· povrchu nádorové buňky než na povrchu jiných buněk, a současně vykazují antiproliferační účinky na dané maligně transformované buňky, a dále imunotoxiny, které jsou produkovány proti dané nádorové buňce.
- 26. Polykationtové biokonjugáty obecného vzorce I podle nároku 1, vyznačující se t í m, že na vhodně vybraného daného představitele molekul nosiče obecného vzorce l/a, jako na polykation, je iontovou vazbou navázána vhodně vybraná nukleová kyselina, která znamená polyanion, a takto syntetizovaný nový konjugát je vhodný pro přenos genu.
- 27. Polykationtové biokonjugáty obecného vzorce I podle nároku 26, vyznačují c í se t í m, že kromě nukleové kyseliny kondenzované iontovými vazbami s daným představitelem sestávajícím z molekul nosiče obecného vzorce l/a, další molekuly, které mohou být buď identické nebo mohou být dvou nebo více x různých druhů, schopné navázaní selektivně a/nebo semiselektivně na cílové buňky vybrané pro přenos genu, jako jsou specifické protilátky, hormony a molekuly vázající se pouze na receptory na povrchu cílových buněk, které se například vyskytují - díky nepatologickým změnám - výlučně na některých typech buněk, konkrétně asialoglykoproteinový receptor na jaterních buňkách (na který se specificky navazují galaktosové zbytky v koncové poloze na makromolekulách) nebo ty molekuly, které se vážou na receptory, které se vyskytují častěji (ve více %) na daných cílových buňkách, jsou konjugovány kovalentními a/nebo iontovými vazbami, při čemž přenos cílového gneu na buněčné úrovni se dosahuje těmito novými konjugáty.
- 28. Polykationtové biokonjugáty obecného vzorce I podle nároku 26 a nároku 27, vyznačující se tím, že biokonjugáty, které jsou příslušné pro přenos genu, sestávající z vhodně isolovaných nebo syntetizovaných nukleových kyselin, komplexovaných antimediátorových oligonukleotidů, vykazují antiproliferační, antimikrobiální účinek, při čemž například se dosahuje inhibice virové *f·· »4 44444» 4444 « 4 4 » · * » 4 • * · 4 · · · · • · · 4 » ·» · 4 4 4444 4444 444444 «4 44 44 *4 444» replikace, jsou dále schopny léčit genetická onemocnění, např. cystickou fibrózu.
- 29. Polykationtové biokonjugáty obecného vzorce I podle nároku 1, vyznačující se t í m, že s vhodně vybranými danými representatnty sestávajícími z molekul nosiče obecného vzorce l/a, které samy mají jistou protivirovou aktivitu, se konjugují sloučeniny, které mají antimikrobiální účinky, např. protivirové, antibakteriální, antimykotické, antiprotozoální sloučeniny používané v klinické praxi, dále komplexní antimediátorové nukleové kyseliny inhibující replikaci virů, protilátky s neutralizujícím účinkem, při čemž se zvýší antimikrobiální účinek konjugovaných molekul.
- 30. Polykationtové biokonjugáty obecného vzorce I podle nároku 29, vyznačují c í se t í m, že kromě sloučenin s antimikrobiální aktivitou, konjugovaných s daným představitelem molekul nosiče obecného vzorce l/a, jsou konjugovány další molekuly, které mohou být identické nebo mohou být dvou nebo více x různých druhů, schopné vázat se selektivně na mikroby, jako specifické protilátky, které se na ně vážou, při čemž se dále zvyšuje antimikrobiální účinek.
- 31. Polykationtové biokonjugáty obecného vzorce I podle nároku 1, vyznačující se t í m, že daný představitel molekul nosiče obecného vzorce l/a, paramagnetický kontrastní materiál, například komplexní deriváty gadolinia, je konjugován pomocí chemických vazeb, přičemž se zlepší diagnostická hodnota zobrazení nukleární magnetickou resonancí, NMR, při srovnání se zobrazením pomocí nekonjugovaného paramagnetického kontrastního materiálu.
- 32. Polykationtové biokonjugáty obecného vzorce I podle nároku 31,vyznačují c i se t i m, že kromě molekul paramagnetického kontrastního materiálu konjugovaného s daným představitelem zahrnujícím molekuly nosiče obecného vzorce l/a, dále zahrnují také vhodně vybrané molekuly, které mohou být ···· • · · • · · • · · • 9 9 999 99 «·ν· ♦ · ·· « · »9 9 ·9 9· 99 9 999 9999 • · *9 9* ·♦· ·· identické nebo mohou být dvou nebo více x různých druhů, také konjugované, které jsou schopny být selektivně obohaceny v orgánech, tkáních nebo v patologických změnách, např. nádorech, které jsou zkoumány, a zvýšení jejich relativní koncentrace v dané cílové oblasti dále zlepšuje kvalitu zobrazení.
- 33. Polykationtové biokonjugáty obecného vzorce I podle nároků 31 a 32, vyznačující se tím, že molekuly zvyšující selektivitu, které jsou konjugovány s daným představitelem molekul nosiče obecného vzorce l/a, zahrnují protilátky, vázající se specificky na cílovou oblast, která má být zkoumána NMR, nebo závisející na povaze cílové oblasti, kterými jsou také iipofilní nebo hydrofilní látky.
- 34. Polykationtové biokonjugáty obecného vzorce I podle nároku 1, vyznačující se t i m, že jsou zaváděny do cílového organismu transdermálním způsobem iontoforézou.
- 35. Polykationtové biokonjugáty obecného vzorce I podle nároku 1, vyznačující se t i m, že jsou schopny být příslušně zahrnuty do liposomů.
- 36. Polykationtové biokonjugáty obecného vzorce I podle nároku 1, vyznačující se t i m, že regulační účinek molekul, které modifikují imunitní odpověď, například lymfokinů (interleukinů, interferonů atd.), které jsou konjugovány s daným představitelem molekul nosiče obecného vzorce l/a, jako složka shora uvedených polykationtových biokonjugátů, je vhodnější pro plné zobrazení.
- 37. Polykationtové biokonjugáty obecného vzorce I podle nároku 1, vyznačující se t i m, že se sestavují na farmaceuticky přijatelné formy a takto získané farmaceutické přípravky se aplikují perorálně, parenterálně nebo transdermálně při systémovém nebo místním použití.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| HU9902217A HUP9902217A3 (en) | 1999-06-29 | 1999-06-29 | Polycation based bioconjugates and process for producing thereof |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CZ20014701A3 true CZ20014701A3 (cs) | 2002-06-12 |
Family
ID=89998595
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CZ20014701A CZ20014701A3 (cs) | 1999-06-29 | 2000-06-28 | Polykationtové biokonjugáty pro transport aktivních látek |
Country Status (23)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US6727347B1 (cs) |
| EP (1) | EP1202748B1 (cs) |
| JP (1) | JP2003503363A (cs) |
| KR (1) | KR100795093B1 (cs) |
| CN (1) | CN1371288A (cs) |
| AT (1) | ATE408420T1 (cs) |
| AU (1) | AU784031B2 (cs) |
| BR (1) | BR0012633A (cs) |
| CA (1) | CA2377074A1 (cs) |
| CZ (1) | CZ20014701A3 (cs) |
| DE (1) | DE60040294D1 (cs) |
| EE (1) | EE200100715A (cs) |
| HU (1) | HUP9902217A3 (cs) |
| IL (2) | IL147380A0 (cs) |
| MX (1) | MXPA02000450A (cs) |
| NO (1) | NO20016391L (cs) |
| NZ (1) | NZ516666A (cs) |
| PL (1) | PL353933A1 (cs) |
| RU (1) | RU2250782C2 (cs) |
| SK (1) | SK19222001A3 (cs) |
| UA (1) | UA76940C2 (cs) |
| WO (1) | WO2001000242A2 (cs) |
| ZA (1) | ZA200200266B (cs) |
Families Citing this family (13)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| HUP9902217A3 (en) * | 1999-06-29 | 2002-07-29 | Szegoe Peter | Polycation based bioconjugates and process for producing thereof |
| WO2001071309A2 (en) * | 2000-03-21 | 2001-09-27 | Wisconsin Alumni Research Foundation | Methods and reagents for regulation of cellular responses in biological systems |
| AU2004244962A1 (en) | 2003-04-10 | 2004-12-16 | 3M Innovative Properties Company | Delivery of immune response modifier compounds using metal-containing particulate support materials |
| RU2270690C1 (ru) * | 2004-06-11 | 2006-02-27 | Государственный научный центр вирусологии и биотехнологии "Вектор" (ГНЦ ВБ "Вектор") | Комплексное анти-вич соединение |
| US8168922B2 (en) * | 2004-10-18 | 2012-05-01 | Lincoln Global, Inc. | Self-shielded flux cored electrode |
| US7834065B2 (en) * | 2005-01-31 | 2010-11-16 | Bmg Incorporated | Medical-use two part reactive adhesive and medical-use resin having self-degradation property |
| JP4989039B2 (ja) * | 2005-04-27 | 2012-08-01 | Ｊｎｃ株式会社 | 核酸複合体及びそれを用いる細胞内への核酸導入方法 |
| TW200800235A (en) * | 2005-10-18 | 2008-01-01 | Otsuka Pharma Co Ltd | Carrier composition for nucleic acid transport |
| CN103858859B (zh) * | 2008-06-27 | 2015-11-04 | 博傲沃德株式会社 | 细胞及组织的冷冻保存用组合物 |
| CN101891889B (zh) * | 2010-08-18 | 2012-05-23 | 中国科学院长春应用化学研究所 | 阳离子聚合物及其制备方法 |
| US8541556B1 (en) | 2012-03-02 | 2013-09-24 | Empire Technology Development Llc | Lignin derivatives and uses thereof |
| WO2014003753A1 (en) * | 2012-06-28 | 2014-01-03 | Empire Technology Development Llc | Lignin derivatives having polycations and uses thereof |
| EP2944195A1 (en) * | 2014-05-15 | 2015-11-18 | Monier Tadros | Negatively charged matrix and use thereof |
Family Cites Families (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4701521A (en) | 1978-07-17 | 1987-10-20 | The Trustees Of Boston University | Method of effecting cellular uptake of molecules |
| US4847240A (en) | 1978-01-16 | 1989-07-11 | The Trustees Of Boston University | Method of effecting cellular uptake of molecules |
| JPS6356501A (ja) * | 1986-08-26 | 1988-03-11 | Chisso Corp | アフイニテイークロマトグラフイー用カラム充填剤及びその製造方法 |
| HU202553B (en) | 1987-10-21 | 1991-03-28 | Mta Kutatas Es Szervezetelemzo | Process for producing isopolypeptides composed of diamino monokarboxylic acids and pharmaceutical compositions comprising same, as well as plant protective comprising polyisolysine |
| JPH0413741A (ja) * | 1990-05-02 | 1992-01-17 | Chisso Corp | ペクチン・ポリリシン高分子電解質複合体 |
| JPH05246963A (ja) * | 1992-03-02 | 1993-09-24 | Kanegafuchi Chem Ind Co Ltd | ε−ポリリジン誘導体 |
| DE4331011A1 (de) * | 1993-09-13 | 1995-03-16 | Bayer Ag | Nukleinsäuren-bindende Oligomere mit C-Verzweigung für Therapie und Diagnostik |
| RU2171250C2 (ru) * | 1996-08-05 | 2001-07-27 | Пролинкс, Инк. | Производные 2,6-дигидрокси-4-аминометилбензоата |
| JP4606524B2 (ja) * | 1997-11-19 | 2011-01-05 | チッソ株式会社 | ポリリジン、及びポリリジンの製造方法、及びポリリジン組成物、及びエンドトキシンを除去する医薬品の生産方法 |
| HUP9902217A3 (en) * | 1999-06-29 | 2002-07-29 | Szegoe Peter | Polycation based bioconjugates and process for producing thereof |
-
1999
- 1999-06-29 HU HU9902217A patent/HUP9902217A3/hu active IP Right Revival
-
2000
- 2000-06-28 US US10/018,806 patent/US6727347B1/en not_active Expired - Fee Related
- 2000-06-28 IL IL14738000A patent/IL147380A0/xx active IP Right Grant
- 2000-06-28 KR KR1020017016890A patent/KR100795093B1/ko not_active Expired - Fee Related
- 2000-06-28 SK SK1922-2001A patent/SK19222001A3/sk unknown
- 2000-06-28 UA UA2002010706A patent/UA76940C2/uk unknown
- 2000-06-28 WO PCT/HU2000/000061 patent/WO2001000242A2/en not_active Ceased
- 2000-06-28 CN CN00812216A patent/CN1371288A/zh active Pending
- 2000-06-28 NZ NZ516666A patent/NZ516666A/en unknown
- 2000-06-28 JP JP2001505949A patent/JP2003503363A/ja active Pending
- 2000-06-28 EE EEP200100715A patent/EE200100715A/xx unknown
- 2000-06-28 CA CA002377074A patent/CA2377074A1/en not_active Abandoned
- 2000-06-28 AU AU58351/00A patent/AU784031B2/en not_active Ceased
- 2000-06-28 AT AT00944116T patent/ATE408420T1/de not_active IP Right Cessation
- 2000-06-28 CZ CZ20014701A patent/CZ20014701A3/cs unknown
- 2000-06-28 PL PL00353933A patent/PL353933A1/xx unknown
- 2000-06-28 DE DE60040294T patent/DE60040294D1/de not_active Expired - Fee Related
- 2000-06-28 EP EP00944116A patent/EP1202748B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2000-06-28 MX MXPA02000450A patent/MXPA02000450A/es active IP Right Grant
- 2000-06-28 BR BR0012633-0A patent/BR0012633A/pt not_active IP Right Cessation
- 2000-06-28 RU RU2002102071/15A patent/RU2250782C2/ru not_active IP Right Cessation
-
2001
- 2001-12-27 NO NO20016391A patent/NO20016391L/no not_active Application Discontinuation
- 2001-12-27 IL IL147380A patent/IL147380A/en not_active IP Right Cessation
-
2002
- 2002-01-11 ZA ZA200200266A patent/ZA200200266B/xx unknown
-
2004
- 2004-02-23 US US10/782,962 patent/US7090846B2/en not_active Expired - Fee Related
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| US7090846B2 (en) | 2006-08-15 |
| MXPA02000450A (es) | 2002-07-02 |
| CN1371288A (zh) | 2002-09-25 |
| IL147380A (en) | 2007-02-11 |
| EP1202748B1 (en) | 2008-09-17 |
| NZ516666A (en) | 2004-04-30 |
| PL353933A1 (en) | 2003-12-15 |
| NO20016391D0 (no) | 2001-12-27 |
| UA76940C2 (en) | 2006-10-16 |
| HUP9902217A2 (hu) | 2001-04-28 |
| EP1202748A2 (en) | 2002-05-08 |
| JP2003503363A (ja) | 2003-01-28 |
| HU9902217D0 (en) | 1999-08-30 |
| KR20020031352A (ko) | 2002-05-01 |
| KR100795093B1 (ko) | 2008-01-17 |
| CA2377074A1 (en) | 2001-01-04 |
| EE200100715A (et) | 2003-02-17 |
| HUP9902217A3 (en) | 2002-07-29 |
| SK19222001A3 (sk) | 2004-05-04 |
| US6727347B1 (en) | 2004-04-27 |
| NO20016391L (no) | 2002-02-04 |
| BR0012633A (pt) | 2002-04-02 |
| US20040220083A1 (en) | 2004-11-04 |
| WO2001000242A2 (en) | 2001-01-04 |
| AU5835100A (en) | 2001-01-31 |
| ZA200200266B (en) | 2003-06-25 |
| IL147380A0 (en) | 2002-08-14 |
| WO2001000242A3 (en) | 2001-11-22 |
| DE60040294D1 (de) | 2008-10-30 |
| RU2250782C2 (ru) | 2005-04-27 |
| AU784031B2 (en) | 2006-01-19 |
| ATE408420T1 (de) | 2008-10-15 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| AU695056B2 (en) | Novel nucleic acid/polymer complexes, method for preparing same and use thereof for cell transfection | |
| Lee et al. | Super pH-sensitive multifunctional polymeric micelle for tumor pHe specific TAT exposure and multidrug resistance | |
| Gooding et al. | Synthesis and characterization of rabies virus glycoprotein-tagged amphiphilic cyclodextrins for siRNA delivery in human glioblastoma cells: in vitro analysis | |
| US11679160B2 (en) | Castration resistant prostate cancer | |
| JP2007521247A (ja) | 生体適合性−遺伝子送達剤としての新規カチオン性リポポリマー | |
| US6727347B1 (en) | Method for preparing polycation based bioconjugates suitable for transporting different kinds of active substances within the body | |
| Sk et al. | Enhancing the efficacy of Ara-C through conjugation with PAMAM dendrimer and linear PEG: a comparative study | |
| JP2014508521A (ja) | 細胞内へのカーゴ送達のためのシステム | |
| US20160367694A1 (en) | Peptide having cancer selective translocation function and use thereof | |
| Golan et al. | Conjugates of HA2 with octaarginine-grafted HPMA copolymer offer effective siRNA delivery and gene silencing in cancer cells | |
| CN115151278B (zh) | 用于核酸疗法的靶向肿瘤的多肽纳米颗粒递送系统 | |
| Bae et al. | Apoptin gene delivery by a PAMAM dendrimer modified with a nuclear localization signal peptide as a gene carrier for brain cancer therapy | |
| US9943606B2 (en) | Dendritic polypeptide-based nanocarriers for the delivery of therapeutic agents | |
| Ye et al. | Synthesis of a new pH-sensitive folate–doxorubicin conjugate and its antitumor activity in vitro | |
| Larson et al. | HPMA copolymer-aminohexylgeldanamycin conjugates targeting cell surface expressed GRP78 in prostate cancer | |
| RU2408607C2 (ru) | Способ направленной доставки днк в опухолевые и стволовые клетки | |
| Yi et al. | Guanidine-modified albumin-MMAE conjugates with enhanced endocytosis ability | |
| US20050220754A1 (en) | Vitamin directed targeting therapy | |
| US20120035320A1 (en) | Polyacridine nucleic acid delivery peptide complexes | |
| RU2377247C2 (ru) | Молекулярный конъюгат на основе синтетических аналогов люлиберина и его применение в качестве средства доставки днк в клетки гормон-чувствительных опухолей (варианты) | |
| CZ20011909A3 (cs) | Nová činidla pro přenos nukleových kyselin a farmaceutické prostředky, které je obsahují | |
| HUP0102455A2 (hu) | Új nukleinsav-transzfer ágensek, ezeket tartalmazó készítmények és alkalmazásuk | |
| Kizzire | Stabilizing circulating polyplexes through systematic modification of PEGylated polyacridine peptides in vivo | |
| CZ20003592A3 (cs) | Nové sloučeniny vhodné jako činidla pro přenos nukleové kyseliny do buňky, způsob jejich přípravy a farmaceutické přípravky obsahující tyto sloučeniny |