CZ20031513A3

CZ20031513A3 - Kondenzované purinové deriváty jako antagonisty A1 adenosinového receptoru

Info

Publication number: CZ20031513A3
Application number: CZ20031513A
Authority: CZ
Inventors: Ko-Chung Lin; Chi Vu
Original assignee: Biogen, Inc.
Priority date: 2000-12-01
Filing date: 2001-11-30
Publication date: 2003-09-17
Also published as: PL362642A1; NO20032483L; EA009814B1; MXPA03004857A; BG107849A; TWI293301B; US20020111333A1; IS6821A; EP1347981B1; AU2002219977B2; JP2004514723A; ZA200408755B; NZ526511A; EE200300260A; KR20040011439A; NO20032483D0; ATE394402T1; CA2430508A1; YU42903A; EP1347981A1

Description

Oblast techniky

Tento vynález se týká medicinální chemie a farmakologie. Konkrétněji, vynález se týká antagonistů adenosinových receptorů, farmaceutických přípravků obsahujících tyto sloučeniny a způsobů výroby a použití těchto sloučenin při léčení nemocí.

Dosavadní stav techniky

Tato přihláška nárokuje výhodu US provizorní přihlášky č. 60/250 658, podané 1. prosince 2000, která je zde zahrnuta jako reference.

Adenosin je všudypřítomným biochemických mediátorem Adenosin se váže (a tím je i aktivuje) k sedmi receptorům spojených s G-proteinem přemosťujícím membránu, čímž vyvolává celou řadu fyziologických odezev. Adenosinové receptory jsou rozděleny do čtyřech známých podtypů, to jest. A_x, A_2a, A₂b a A₃. Tyto receptorové subtypy zprostředkovávají různé a často také protichůdné efekty. Aktivace adenosinového A_x receptoru, naříklad, vyvolává zvýšenou renální vaskulární resistenci, zatímco aktivace adenosinového A_2a receptoru vyvolává snížení renální vaskulární resistence.

U většiny savčích orgánových systémů vede období metabolického stressu k významnému zvýšení koncentrace adenosinu ve tkáních. Například, srdce produkuje a uvolňuje adenosin kvůli zprostředkování adaptivní odezvy na stress, jako třeba snížení rychlosti srdečního tepu a koronární vasodilatace. Podobně, koncentrace adenosinu v ledvinách se • · · · _Λ · 9 9 9 9 ···· ·· ·· ··· zvyšuje jako odezva na hypoxii, metabolický stress a mnohé nefrotoxické sloučeniny. Ledviny také produkují adenosin konstitutivně. Ledviny adjustují množství konstitutivně vyráběného adenosinu za účelem regulace glomerulární filtrace a reabsorpce elektrolytu. Pokud jde o řízení glomerulární filtrace, aktivace Ai receptorů vede ke konstrikci afferentních arteriol. Aktivace A_2a receptorů vyvolává vasodilatační efekty v afferentní arteriole. Celkově, účinkem aktivace těchto glomerulárních adenosinových receptorů je redukce rychlosti glomeulární filtrace. Kromě toho, A_xadenosinové receptory jsou umístěny v proximálním tubulu a v distálním tubulu. Aktivace těchto receptorů stimuluje reabsorpci sodíku z tubulárního lumenu. Blokování účinku adenosinu na tyto receptory tedy vyvolává zvýšení rychlosti glomerulární filtrace a zvýšení exkrece sodíku.

Podstata vynálezu

Vynález je založen na objevu, že sloučeniny vzorce I a II jsou účinnými a selektivními inhibitory určitých subtypů adenosinových receptorů. Na základě tohoto objevu vynález popisuje adenosinové antagonisty užitečné při prevenci a/nebo léčení četných onemocnění, včetně srdečních poruch a poruch oběhového systému, degenerativních poruch centrálního nervového systému, respiračních poruch a mnoha nemocí, u nichž je vhodné diuretické léčení. Obecně se vynález vztahuje k vysoce účinným a selektivním antagonistům adenosinového A_xreceptorů.

Vynález popisuje sloučeniny vzorce I nebo II:

» · · · · • · • ··· • · ·· ··

2-Rj

O)

-Ra (H) více substituenty hydroxyskup i nu, a 1 ky 1 ami no s kup i nu,

R?

kde R_x a R₂ jsou navzájem nezávisle vybrány ze skupiny obsahuj ící:

a) vodík;

b) alkylovou, alkenylovou nebo alkynylovou skupinu, kde zmíněná alkylová, alkenylová nebo alkynylová skupina jsou buď nesubstituované nebo jsou funkcionalizované s jedním nebo vybranými ze skupiny obsahující alkoxyskupinu, aminoskupinu, dialkylaminoskupinu, heterocyklylovou skupinu, acylaminovou skupinu, alkylsulfonylamino skupinu a heterocyklylkarbonylamino skupinu; a

c) aryl nebo substituovaný aryl;

R₃ je vybrán ze skupiny obsahující:

(a) bicyklickou, tricyklickou nebo pentacyklickou skupinu vybranou ze skupiny obsahující:

4 444«

4 • 4 4 4 • 4

kde bicyklická, tricyklická nebo pentacyklická skupina je bud' nesubstituována nebo je funkcionalizována s jedním nebo více substituenty vybranými ze skupiny obsahující:

(i) alkylovou, alkenylovou nebo alkynylovou skupinu, kde každá alkylová, alkenylová nebo alkynylová skupina je buď nesubstituované nebo je funkcionalizovaná s jedním nebo více substituenty vybranými ze skupiny obsahující (alkoxykarbonyl)aralkylkarbamoylovou skupinu, (amino) (R₅)acylhydrazinylkarbonylovou skupinu, (amino) (R₅)acyloxykarboxylovou skupinu, ♦ · • · · ·· ·· I* • · · · · • · · · • · · · · · · • · · · ···· ·* ·· ·· (hydroxy)(karboalkoxy)alkylkarbamoylovou skupinu, acylaminoalkylaminovou skupinu, acyloxyskupinu, aldehydickou skupinu, alkenoxyskupinu, alkenylaminovou skupinu, alkenylsulfonylaminovou skupinu, alkoxyskupinu, alkoxykarbonylovou skupinu, alkoxykarbonylalkylaminovou skupinu, alkoxykarbonylaminovou skupinu, alkoxykarbonylaminoacyloxy skupinu, alkoxykarbonylaminoalkylaminovou skupinu, alkylaminovou skupinu, alkylaminoalkylaminovou skupinu, alkylkarbamoylovou skupinu, alkylfosfonovou skupinu, alkylsulfonylaminovou skupinu, alkylsulfonyloxy skupinu, aminoskupinu, aminoacyloxyskupinu, aminoalkylaralkylkarbamoylovou skupinu, aminoalkylkarbamoylovou skupinu, aminoalkylheterocyklylalkylkarbamoylovou skupinu, aminocykloalkylalkylcykloalkylkarbamoylovou skupinu, aminocykloalkylkarbamoylovou skupinu, aralkoxykarbonylovou skupinu, aralkoxykarbonylaminovou skupinu, arylheterocyklylovou skupinu, aryloxyskupinu, arylsulfonylaminovou skupinu, arylsulfonyloxy skupinu, karbamoylovou skupinu, karbonylovou skupinu, kyanoskupinu, kyanoalkylkarbamoylovou skupinu, cykloalkylaminovou skupinu, dialkylaminovou skupinu, dialkylaminoalkylaminovou skupinu, dialkylaminoalkylkarbamoylovou skupinu, dialkylfosfonovou skupinu, haloalkylsulfonylaminovou skupinu, halogen, heterocyklylovou skupinu, heterocyklylalkylaminovou skupinu, heterocyklylkarbamoylovou skupinu, hydroxyskupinu, hydroxyalkylsulfonylaminovou skupinu, oximinoskupinu, fosfátovou skupinu, fosfonovou skupinu, skupinu -R₅, skupinu R₅-alkoxy, R₅-alkyl(alkyl)aminovou skupinu, R_salkylalkylkarbamoylovou skupinu, R₅-alkylaminovou skupinu, R₅-alkylkarbamoylovou skupinu, R₅-alkylsulfonylovou skupinu, R₅-alkylsulfonylaminovou skupinu, R₅-alkylthioskupinu, R₅heterocyklylkarbonylovou a ra1ky1ami novou skupinu, skupinu, substituovanou sub s t i t uovanou substituovanou substituovanou substituovanou substituovanou substituovanou skupinu, skupinu, skupinu, skupinu, skupinu, arylkarboxyalkoxykarbonylovou arylsulfonylaminoalkylaminovou heteroarylsulfonylaminovou heterocyklylovou skupinu, heterocyklylaminoalkylaminovou skupinu, heterocyklylsulfonylaminovou sulfoxyacylaminoskupinu, thiokarbamoylovou trifluormethylovou skupinu; a (ii) (alkoxykarbonyl)aralkylkarbamoylovou skupinu, (amino) (R₅)acylhydrazinylkarbonylovou skupinu, (amino) (R₅)acyloxykarboxylovou skupinu, (hydroxy)(karboalkoxy)alkylkarbamoylovou skupinu, acylaminoalkylaminovou skupinu, acyloxyskupinu, aldehydickou skupinu, alkenoxyskupinu, alkenylaminovou skupinu, alkenylsulfonylaminovou skupinu, alkoxyskupinu, alkoxykarbonylovou skupinu, alkoxykarbonylalkylaminovou skupinu, alkoxykarbonylaminovou skupinu, alkoxykarbonylaminoacyloxy skupinu, alkoxykarbonylaminoalkylaminovou skupinu, alkylaminovou skupinu, alkylaminoalkylaminovou skupinu, alkylkarbamoylovou skupinu, alkylfosfonovou skupinu, alkylsulfonylaminovou skupinu, alkylsulfonyloxy skupinu, aminoskupinu, aminoacyloxyskupinu, aminoalkylaralkylkarbamoylovou skupinu, aminoalkylkarbamoylovou skupinu, aminoalkylheterocyklylalkylkarbamoy1ovou s kup i nu, aminocykloalkylalkylcykloalkylkarbamoylovou skupinu, aminocykloalkylkarbamoylovou skupinu, aralkoxykarbonylovou skupinu, aralkoxykarbonylaminovou skupinu, arylheterocyklylovou skupinu, aryloxyskupinu, arylsulfonylaminovou skupinu, arylsulfonyloxy skupinu, ·♦ · · • · · 9 • · · · • ♦ · · • · · • 9 9 9 • · • 9 · · 9 · • 9 9 • · · · • · • 9

9 « karbamoylovou skupinu, karbonylovou skupinu, kyanoskupinu, kyanoalkylkarbamoylovou skupinu, cykloalkýlaminovou skupinu, dialkylaminovou skupinu, dialkylaminoalkylaminovou skupinu, dialkylaminoalkylkarbamoylovou skupinu, dialkylfosfonovou skupinu, haloalkylsulfonylaminovou skupinu, halogen, heterocyklylovou skupinu, heterocyklylalkylaminovou skupinu, heterocyklylkarbamoylovou skupinu, hydroxyskupinu, hydroxyalkylsulfonylaminovou skupinu, oximinoskupinu, fosfátovou skupinu, fosfonovou skupinu, skupinu -R₅, skupinu R₅-alkoxy, R₅-alkyl(alkyl)aminovou skupinu, R₅alkylalkylkarbamoylovou skupinu, R₅-alkylaminovou skupinu, R₅-alkylkarbamoylovou skupinu, R₅-alkylsulfonylovou skupinu, R₅-alkylsulfonylaminovou skupinu, R₅-alkylthioskupinu, R₅substituovanou substituovanou substituovanou substituovanou substituovanou substituovanou substituovanou skupinu, skupinu, skupinu, skupinu, heterocyklylkarbonylovou skupinu, aralkylaminovou skupinu, arylkarboxya1koxykarbony1ovou skup inu, arylsulfonylaminoalkylaminovou heteroarylsulfonylaminovou heterocyklylovou skupinu, heterocyklylaminoalkylaminovou skupinu, heterocyklylsulfonylaminovou sulf oxya cy1ami noskup inu, thi okarbamoylovou trifluormethylovou skupinu;

R₄ je vybrán ze skupiny obsahující vodík, alkyl mající 1 až 4 atomy uhlíku, skupinu Ci_₄ - alkyl-CO₂H, a fenyl, kde Ci_₄alkylová skupina, skupina Ci-₄-alkyl-CO₂H, a fenylová skupina jsou buď nesubstituované nebo funkcionalizované s jedním až třemi substituenty vybranými ze skupiny obsahující halogen, skupinu -OH, skupinu -OMe, aminoskupinu, nitroskupinu, benzylovou skupinu a benzyl funkcionalizovaný s jedním až « · 9 9

9 9 9 • · ·

999 9 ·

• ·· · ·· • · · • e · · · • · · • · ·

9 999 • 9 9

9 9

9 9 9

9 9 9 třemi substituenty vybranými ze skupiny obsahující halogen, skupinu -OH, skupinu -OMe, skupinu -NH₂ a skupinu -N0₂;

R₅ je vybrán ze skupiny obsahující skupinu - (CR¹R₂) _nCOOH, skupinu -C(CF₃)₂OH, skupinu -CONHNHSO₂CF₃, skupinu -CONHOR₄, skupinu -CONHSO₂R₄, skupinu -CONHSO₂NHR₄, skupinu C (OH) R₄PO₃H₂, skupinu -NHCOCF₃, skupinu NHCONHSO₂R₄, skupinu NHPO₃H₂, skupinu NHSO₂R₄, skupinu -NHSO₂NHCOR₄, skupinu OPO₃H₂, skupinu -OSO₃H, skupinu -PO(OH)R₄, skupinu -PO₃H₂, skupinu -SO₃H, skupinu -SO₂NHR₄, skupinu -SO₃NHCOR₄, skupinu SO₃NHCONHCO₂R₄, a následující:

n = 0, 1, 2, nebo 3;

A je vybrán ze skupiny obsahující skupinu -CH=CH-, skupinu (CH)_m-(CH)_m, skupinu CH=CH-CH₂ a skupinu -CH₂-CH=CH; m = 1 nebo 2;

X je 0 nebo S;

Z je vybrán ze skupiny obsahující jednoduchou vazbu, skupinu -0-, skupinu -(CH₂)_n-, skupinu -Ο(ΟΗ₂)_Χ-₂-, skupinu -CH₂OCH₂-, skupinu -(CH₂)i-₂O-, skupinu -CH=CHCH₂-, skupinu -CH=CH- a skupinu -CH₂CH=CH-, a

R₆ je vybrán ze skupiny obsahující vodík, alkylovou skupinu, acylovou skupinu, alkylsulfonylovou skupinu, aralkylovou skupinu, substituovanou aralkylovou skupinu, substituovanou alkylovou skupinu a heterocyklylovou skupinu; a

R₇ je vybrán ze skupiny obsahující:

49

4 9 9

4 · • · · · • · 9949 94

9 9

4 9 94

4 4 4

4 4

4 94

9

a) vodík;

b) alkyl, alkenyl mající ne méně než 3 atomy uhlíku nebo alkynyl mající ne méně než 3 atomy uhlíku, kde zmíněný alkyl, alkenyl nebo alkynyl je buď nesubstituovaný nebo je funkcionalizovaný s jedním nebo více substituenty vybranými ze skupiny obsahující hydroxyskupinu, alkoxyskupinu, aminoskupinu, alkylaminoskupinu, dialkylaminoskupinu, heterocyklylovou skupinu, acylaminovou skupinu, alkylsulfonylaminovou skupinu a heterocyklylkarbonylaminovou skupinu; a

c) aryl nebo substituovaný aryl;

d) alkylaryl nebo alkyl substituovaný aryl.

Sloučeniny vzorce I nebo II mohou být případně ve formě achirální sloučeniny, racemátu, opticky aktivní sloučeniny, čistého diastereoizomeru, směsi diastereoizomerů nebo farmakologicky akceptovatelné adiční soli. V některých preferovaných provedeních tohoto vynálezu jsou sloučeniny podle tohoto vynálezu sloučeninami vzorce I nebo II, kde ani Rx ani R₂ nejsou vodík, to jest každý z Ri a R₂ jsou navzájem nezávisle vybrány ze skupiny obsahující

a) alkylovou, alkenylovou nebo alkynylovou skupinu, kde zmíněný alkyl, alkenyl nebo alkynyl je buď nesubstituovaný nebo funkcionalizovaný s jedním nebo více substituenty, vybranými ze skupiny obsahující hydroxyskupinu, alkoxyskupinu, aminoskupinu, alkylaminoskupinu, dialkylaminoskupinu, heterocyklylovou skupinu, acylaminoskupinu, alkylsulfonylaminovou skupinu a heterocyklylkarbonylaminovou skupinu; a

b) aryl nebo substituovaný aryl.

·« AAA ·

A A AA ·♦ ♦»·» • AAA AAA A A 9 • · A ♦ Μ»· A · A

A AAA·· · AAA · ·

A AAA A AAA A aaaa aa aa aaa aa ··

Výhodněji alespoň jeden z R_x a R₂ je alkyl. V dalších preferovaných provedeních,

A je skupina - (CH)_m-(CH)_m.

R₇ je alkyl v dalších preferovaných provedeních a Z je s výhodou jednoduchá vazba.

Preferované sloučeniny podle tohoto vynálezu jsou:

2- (4-Hydroxy-bicyklo[2.2.2]okt-l-yl)-7-isopropyl-4-propyl1,4,6,7-tetrahydro-1,3,4,5a,8-pentaaza-as-indacen-5-on (sloučenina 1);

7-Ethyl-2-(4-hydroxy-bicyklo[2.2.2]okt-l-yl) -4-propyl1,4,6,7-tetrahydro-1,3,4,5a,8-pentaaza-as-indacen-5-on (sloučenina 2) ;

3- [4-(7-Ethyl-5-oxo-4-propyl-4,5,6,7-tetrahydro-lH1,3,4,5a,8-pentaaza-as-indacen-2-yl)-bicyklo[2.2.2]okt-l-yl]propionová kyselina (sloučenina 3) ;

2-(4-Hydroxy-bicyklo [2.2.2]okt-l-yl)-7-methyl-4-propyl1,4,6,7-tetrahydro-1,3,4,5a,8-pentaaza-as-indacen-5-on (sloučenina 4); a

-[4 -(7-Isopropyl-5-oxo-4-propyl-4,5,6,7-tetrahydro-lH1,3,4,5a,8-pentaaza-as-indacen-2-yl)-bicyklo[2.2.2]okt-l-yl]propionová kyselina (sloučenina 5) .

Sloučeniny podle tohoto vynálezu mohou být modifikovány kvůli zlepšení požadovaných vlastností. Tyto modifikace jsou známé v oboru a zahrnují takové, které zvyšují biologickou penetraci do daného biologického systému (např. krev, lymfatický systém, centrální nervová soustava), zvyšují orální dostupnost, zvyšují rozpustnost, která by dovolila podávání pomocí injekcí, mění metabolismus a/nebo mění rychlost vylučování. Příklady těchto modifikací zahrnují (výčet není limitující) esterifikaci s polyethylenglykoly, derivatizaci s pivoláty nebo substituenty mastných kyselin,

4 *· 44 44 4 4

4 4 4 4 4 4

4 4 4444

44444 4 4

4444 44 převedení na karbamáty, hydroxylaci aromatických kruhů a substituci heteroatomů v aromatických kruzích.

Vynález se také týká farmaceutických přípravků zahrnujících libovolnou výše popsanou sloučeninu, samotnou nebo v kombinaci společně s vhodným excipientem.

Vynález se také týká způsobu léčení pacientů vykazujících znaky nebo symptomy nemoci nebo poruchy, přičemž v této nemoci nebo poruše hraje příčinnou roli aktivace Al adenosinovýh receptorů. Způsob zahrnuje podávání účinného množství libovolné z výše uvedených sloučenin pacientům. Nemoc nebo porucha může být například, systémová hypertenze, renální selhání, diabetes, astma, edematické podmínky, kongestivní selhání srdce nebo renální dysfunkce (např. renální dysfunkce vyskytující se jako vedlejší účinek diuretik používaných při léčení kongestivního srdečného selhání nebo renální toxicita vyskytující se jako vedlejší efekt při léčení pomocí chemoterapeutických činidel).

Sloučeniny podle tohoto vynálezu poskytuje výhody, včetně těch následujících. Například, (1) mohou být použity v nízkých dávkách kvůli minimalizaci pravděpodobnosti výskytu vedlejších vlivů a (2) mohou být zabudovány do četných dávkových forem včetně (výčet není úplný) pilulek, tablet, kapslí, aerosolů, čípků, kapalných přípravků pro trávení nebo injekce, dietní doplňky nebo místní přípravky. Kromě aplikací v humánní medicíně mohou být sloučeniny podle tohoto vynálezu použity ve veterinárním léčení zvířat. V některých provedeních, farmaceutický přípravek je formulován pro orální, intravenosní, intramuskulární nebo subkutánní podávání.

Tento vynález se také týká způsobů přípravy výše uvedených sloučenin, zahrnujících kroky: a) alkylace thioketonu za vzniku thioetheru; b) reakce thioetheru se

0 0 · 0 0 • 000 0 0 0 0 0 • · · Φ 0 0 00 0 0 ₉ • Φ Φ Φ Φ Φ Φ 0·0 φ φ

J-2 * 0ΦΦ 00·00

1Ζ ΦΦΦΦ φφ φφ 000 00 4' substituovaným aminoalkoholem za vzniku alkoholického intermediátu a c) cyklizace alkoholického intermediátu za vzniku cyklizovaného produktu.

V některých rovedenich výše uvedený způsob zahrnuje kroky: a) převedení cyklizovaného produktu na derivát karboxylové kyseliny. V některých provedeních způsob zahrnuje kroky: a) kapling diaminouracilu s monomethylesterem bicyklo[2.2.2]oktan-1,4-dikarboxylově kyseliny za vzniku kyseliny; b) redukce kyseliny na odpovídající alkohol; c) oxidace alkoholu na aldehyd; d) kapling aldehydu s methyl(trifenylfosforanyliden)acetátem za vzniku kaplovaného produktu; e) převedení kaplovaného produktu na thioketon; f) alkylace thioketonu za vzniku thioetheru; g) rekace thioetheru se substituovaným aminoalkoholem za vzniku alkoholického intermediátu a h) cyklizace alkoholického intermediátu za vzniku produktu a i) převedení cyklizovaného produktu na derivát karboxylové kyseliny.

V některých provedeních způsob zahrnuje kroky a) kapling diaminouracilu s monomethylesterem bicyklo[2.2.2]oktan-1,4dikarboxylové kyseliny za vzniku kyseliny; b) esterifikace kyseliny na odpovídající ester; c) převedení esteru na thioketon; d) alkylace thioketonu za vzniku thioetheru; e) reakce thioetheru se substituovaným aminoalkoholem na alkoholický intermediát, a f) cyklizace alkoholického intermediátu za vzniku produktu, a g) převedení cyklizovaného produktu na derivát karboxylové kyseliny.

V některých provedeních způsob zahrnuje kroky: a) nitrosace 6-amino-l-propyl-lH-pyrimidin-2,4-dionu za vzniku nitrosointermediátu; b) redukce nitrosointermediátu za vzniku odpovídajícího diaminouracilu; c) převedení diminouracilu na aminovou sůl; d) kapling aminové soli s 4-hydroxybicyklo[2.2.2]oktan-l-karboxylovou kyselinou za vzniku

4444

4 4

4 444

4 4

444 • 4 ··· · o 4 4 4 4 • · 4

444 4

4 »444 44

4 4

4 4 4

44 káplováného produktu; a e) převedení kaplovaného produktu na thioketon, f) alkylace thioketonu za vzniku thioetheru, g) reakce thioetheru se substituovaným aminoalkoholem za vzniku alkoholického intermediátu, a h) cyklizace alkoholického intermediátu za vzniku cyklizovaného produktu.

Další rysy a výhody tohoto vynálezu budou zřejmé z následujícího detailního popisu a z nároků.

Detailní popis vynálezu

Pokud není uvedeno jinak, všechny technické a vědecké termíny použité ve vynálezu mají stejný význam jako je obvykle vnímáno odborníky v oboru, jimž je tento vynález určen. Ačkoliv pro provádění a nebo testování tohoto vynálezu mohou být použity metody a materiály podobné nebo ekvivalentní těm, které jsou zde popsány, vhodné materiály a způsoby jsou popsány níže. Všechny publikace, patentové přihlášky, patenty a další reference zde zmíněné jsou zde zahrnuty celé jako reference. Kromě toho, materiály, způsoby a příklady jsou pouze ilustrativní a nejsou zamýšleny jako limitující pro tento vynález.

V tomto vynálezu slovo „zahrnuje nebo jeho varianty jako „obsahuje je třeba chápat tak, předpokládá zahrnutí uvedeného celku nebo skupiny celků, ovšem nevylučuje libovolný jiný celek nebo skupinu celků.

Termín „alkenylová skupina označuje alifatickou uhlíkovou skupinu mající alespoň jednu dvojnou vazbu. Alkenylová skupina může být rovná nebo rozvětvená a může mít například od 3 do 6 uhlíkových atomů v řetězci a 1 nebo 2 dvojné vazby. Příklady alkenylových skupin zahrnují (výčet není limitující) allyl a isoprenyl.

Termín „alkynylová skupina označuje alifatickou uhlíkovou skupinu mající alespoň jednu trojnou vazbu.

4444

4 4 • 4 4«4·

• ·

4 4 • 4

Alkynylová skupina může být rovná nebo rozvětvená a může mít například od 3 do 6 uhlíkových atomů v řetězci a 1 nebo 2 trojné vazby. Příklady alkenylových skupin zahrnuji (výčet není limitující) propargyl a butynyl.

„Arylová skupina je fenylová nebo naftylová skupina nebo jejich derivát. „Substituovaná arylová skupina je arylová skupina, která je substituována s jedním nebo více substituenty jako je alkyl, alkoxy, amino, nitro, karboxy, karboalkoxy, kyano, alkylamino, dialkylamino, halogen, hydroxy, hydroxyalkyl, merkaptyl, alkylmerkaptyl, trihaloalkyl, karboxyalkyl, sulfoxy nebo karbamoyl.

„Aralkylová skupina označuje alkylovou skupinu, která je substituovaná s arylovou skupinou. Příklad aralkylové skupiny je benzyl.

„Cykloalkylové skupina je alifatický kruh mající např. 3 až 8 uhlíkových atomů. Příklady cykloalkylových skupin zahrnují cyklopropyl a cyklohexyl.

„Acylová skupina je rovná nebo rozvětvená alkyl-C(=O)skupina nebo formylová skupina. Příklady acylových skupin zahrnují alkanoylové skupiny (např. mající od 1 do 6 uhlíkových atomů v alkylové skupině). Acetyl a pivaloyl jsou příklady acylových skupin. Acylové skupiny mohou být substituovány nebo nesubstituovány.

Termín „karbamoylová skupina označuje skupinu mající strukturu H₂N-CO₂-. „Alkylkarbamoyl a „dialkylkarbamoyl označuje karbamoylové skupiny, ve kterých dusík má namísto vodíku připojenou jednu nebo dvě alkylové skupiny. Analogicky, „arylkarbamoyl a „arylalkylkarbamoylové skupiny zahrnují arylovou skupinu namísto jednoho vodíku, popř. alkylovou skupinu místo druhého vodíku.

Výraz „karboxyl označuje skupinu -COOH.

·· • * ··« « • 99 9 • 9 • · · · 999 9 9 9 ♦ ♦ ♦ 9 9 999 9 9 9

99999 9 999 9 9 • 9 9 9 9 9 9 9 9 •99 9 99 99 ·99 99 99

Výraz „alkoxylová skupina označuje skupinu alkyl-O-, kde „alkyl je popsán výše.

Výraz „alkoxyalkylová skupina označuje alkylovou skupinu popsanou výše, kde je vodík nahrazen alkoxyskupinou, popsanou dříve.

„Halogen nebo „haloskupina označuje fluor, chlor, brom nebo jod.

„Heterocyklylová skupina je kruhová struktura mající 5 až 10 atomů, kde jeden nebo více atomů v kruhu je prvek jiný než uhlík, například N, O, S. Heterocyklylová skupina může být aromatická nebo nearomatická, to jest může být nasycený nebo může být parciálně nebo zcela nenasycený. Příklady zahrnuj í pyridyl, imidazolyl, thiazolyl, tetrahydrofuranyl, tetrahydropyranyl, morfolinyl, thiomorfolinyl, indolyl, indolinyl, isoindolinyl, piperidinyl, pyrimidinyl, piperazinyl, isoxazolyl, isoxazolidinyl, tetrazolyl a benzimidazolyl.

Termín „substituovaný heterocyklyl označuje heterocyklylovou skupinu, kde jeden nebo více vodíků je nahrazeno substituenty jako jsou alkoxy, alkylamino, dialkylamino, karbalkoxy, karbamoyl, kyano, halogen, trihalogenmethyl, hydroxy, karbonyl, thiokarbonyl, hydroxyalkyl nebo nitro.

Termín „hydroxyalkyl označuje alkylovou skupinu substitovanou s hydroxylovou skupinou.

Termín „sulfamoylová skupina označuje strukturu S(O)₂NH₂.

„Alkylsulfamoyl a „dialkylsulfamoyl označuje sulfamoylové skupiny, kde dusíkový atom má připojenou jednu nebo dvě alkylové skupiny namísto vodíků. Analogicky, „arylsulfamoyl a „arylalkylsulfamoyl skupiny zahrnují heterocyklylové skupiny furanyl, thienyl,

Μ ·· » ♦ · · 9 9 9 · · · · 999 • 9 9 9 9 · 9 >9 •999 9« »· Μ»

9« ♦·«· » · · 9

99 arylovou skupinu namísto jednoho z vodíků, popř. alkylovou skupinu namísto druhého vodíku.

Termín „antagonista označuje molekulu, která se váže k receptoru bez aktivace receptoru. Tato molekula soutěží s endogenním ligandem o toto vazebné místo, a tím snižuje schopnost endogenního ligandu stimulovat receptor.

V kontextu tohoto vynálezu „selektivní antagonista označuje antagonistů, který se váže na konkrétní subtyp adenosinového receptoru s vyšší afinitou než k jiným adenosinovým receptorovým subtypům. Antagonisty podle tohoto vynálezu mohou např. mít vyšší afinitu pro Αχ receptor a jsou selektivní, mající (a) nanomolární vázací afinitu pro Αχ receptor a (b) alespoň 10 x vyšší, s výhodou 50x vyšší a nejvýhodněji alespoň lOOx vyšší afinitu pro Αχ receptorový subtyp než pro jiné receptorové subtypy.

Termín „farmaceuticky přijatelné množství označuje množství účinné při léčení nebo prevenci podmínek charakterizovaných zvýšenou adenosinovou koncentrací a/nebo zvýšenou citlivostí vůči adenosinu. V tomto vynálezu termín „pacient označuje savce, včetně lidí.

„Farmaceuticky přijatelný nosič nebo adjuvans označuje netoxický nosič nebo adjuvans, který může být podáván živočichům společně se sloučeninou podle tohoto vynálezu, a který neničí farmaceutickou aktivitu sloučeniny.

Obecně se vynález týká účinných a selektivních antagonistů adenosinových Αχ receptorů. Příklady sloučenin podle tohoto vynálezu jsou popsány v Tabulce 1. Sloučeniny zde uvedené vykazují hodnoty IC₅₀ proti krysímu Αχ receptoru v rozsahu od 7 do asi 1095.

Syntéza adenosinových antagonistů

Sloučeniny podle tohoto vynálezu mohou být připraveny mnoha známými způsoby. Například, sloučeniny mohou být • Φ ·*·« ·· ·· • ♦ · · · « · · · · • ♦ · · · *·· « · · • ·«· · · · «··· · » · ··· · připraveny pomocí způsobů popsaných v Suzuki, F. et al. J. Med. Chem. 1992, 35, 3581-3583 a/nebo Shimada, J., Suzuki, F. Tetrahedron Lett. 1992, 33, 3151-3154.

Tři obecná schémata pro přípravu sloučenin podle tohoto vynálezu jsou uvedena níže.

Obecné schéma pro Metodu 1

SOClu «·«·

4<

4444 4 4 4 44 4 *44 4 4 444 4 4 4

444 444 4444 4

444 44444

4444 44 «4 444 44 44

Obecné schéma pro Metodu 2 o

Jt.NHi.HCl

-A_h, crt< 'NHj

CO_aMe

CO₂H

HN cAh^n

1)bh₃

Z) pyr.SOj

3>FW>^oM_O

4>H_a

O q SMe q

HN O^N r¹

Ό P<S-in 2) NaOH/Mel

R

ΗΟ^Λ

NH,

NH

o

OMe 1} SOCIg 2) NaOH

0N^N

Obecné schéma pro Metodu 3 o

“73· %

CO₂Me

HN O^N' r¹ o

OH

// •N

CO_ZH

MeOH

H’

1) P₄S_W

2) NaOH/Mel

2) NaOH

SMe

N‘

%

CO^jWle ] X ₀^_n-^n

R

HO^A

NH₂

N cAn-^n

co₂h ·

44 4 4 ··♦· 4«

4 4 • 4 4 · 4

• 4 • ·

Jak je zřejmé odborníkům v oboru, výše uvedená syntetická schémata nejsou zamýšlena jako vyčerpávající seznam všech prostředků, pomocí kterých mohou být syntetizovány sloučeniny popsané a nárokované v tomto vynálezu. Další způsoby budou zřejmé odborníkům v oboru.

Použití adenosinových antagonistu

Aktivace subtypu Al adenosinového receptoru vyvolává mnohé fyziologické odezvy, včetně snížení renálního krevníh toku, snížené rychlosti glomerulární filtrace a zvýšení reabsorbce sodíku v ledvinách. Aktivace Al adenosinového receptoru také snižuje rychlost srdečního tepu, snižuje rychlost kondukce a snižuje kontraktilitu. Tyto a další efekty aktivace Al adenosinových receptoru v dalších orgánech jsou normální regulační procesy. Ovšem, tyto efekty se stávají patologickými u mnoha onemocnění. Tak Al adenosinové receptorové antagonisty mají široké aplikace jak v prevenci tak i při léčení nemocí. Nemoci, kde mohou působit jako prevence A/nebo které mohou být léčeny Al adenosinovými receptorovými antagonisty zahrnují nemoci a poruchy, kde aktivace Al adenosinových receptoru hraje roli v patofyziologii. Příklady těchto nemocí a poruch zahrnují, ovšem výčet není úplný, kongestivní srdeční selhání, respirační poruchy (např. bronchiální astma, alergické plicní onemocnění) a mnohé nemoci, pro něž je indikováno diuretické léčení (např. akutní a chronické ledvinové selhání, ledvinová nedostatečnost, hypertenze).

Kromě toho, vynález zajišťuje například podávání vysoce selektivních a účinných Al receptorových antagonistu, například kvůli vyvolání diuretické odezvy, když jsou podávány samy, a kvůli zesílení diuretické odezvy tradičních diuretik. Kromě toho, podávání Al adenosinového receptorového ·· ···· • · · • j ··· • tf 9999

99 • 9 9 9

9 9 • 999 9 tf · · •tf·· ·· • tftf

9 9 9 « • · · · · « ·· ··· ·» ·· antagonisty s tradičními diuretiky zmírňuje snížení rychlosti glomerulární filtrace vyvolaného tradičními diuretiky. To je užitečné např. při léčení edematických podmínek jako je kongestivní srdeční selhání a ascites.

ještěrka, plaz nebo pták) mnoha způsoby vhodnými

Podávání adenosinových antagonistů

Sloučeniny mohou být podávány živočichům (např. savcům jako je člověk, primáti, koně, pes, kráva, prase, ovce, koza, kočka, myš, krysa, morče, králík, křeček, gerbil, fretka, Sloučeniny mohou být podávány pro podávání farmakologických sloučenin, včetně (výčet není úplný) pilulek, tablet, kapslí, aerosolů, čípků, kapalných přípravků pro trávení nebo peo injekce nebo pro použití jako ušní kapky, dietní přídavky a místní přípravky. Sloučeniny mohou být podávány orálně, intranasálně, transdermálně, intradermálně, vaginálně, intraokulárně, bukálně, rektálně, nebo pomocí inhalace, implantace (např.

chirurgicky) nebo intravenosně.

Sloučeniny mohou být případně podávány ve spojení s farmaceutickými přípravky nemodifikujícími adenosin (např. v kombinaci s diuretiky nemodifikujícími adenosin, např. v souběžně projednávané přihlášce PCT/US99/08879 podané 23. dubna 1999) .

intraanulárně, transmukosálně

Farmaceutické přípravky

Antagonisty Al adenosinového receptorů mohou být formulovány do farmaceutických přípravků pro odávání živočichům, včetně lidí. Tyto farmaceutické přípravky s výhodou zahrnují množství antagonisty Al adenosinového receptorů účinné pro snížení vasokonstrikce nebo pro zvýšení pulmonární hemodynamiky a farmaceuticky přijatelný nosič.

·· ·· ·· ···· ·· ···· • 999 9 9 9 9 9 9 • · · 9 9 999 9 9 9 • ··· · · · 9 9 9 · <

• 999 99999

9999 99 99 999 99 99

Farmaceutickx přijatelné nosiče užitečné ve farmaceutických přípravcích zahrnují např. iontoměniče, aluminu, stearát hlinitý, lecithin, sérové proteiny jako třeba lidský sérový albumin, pufrovací látky jako fosfáty, glycin, sorbovou kyselinu, sorbát draselný, parciální glyceridové směsi nasycených rostlinných mastných kyselin, vodu, soli a elektrolyty jako třeba protamin sulfát, fosfát hydrogendisodný, hydrogenfosfát draselný, chlorid sodný, soli zinku, koloidní polyvinylpyrrolidon, polyethylenglykol, polyakryláty, vosky, trisilikát hořečnatý, na bázi celulosy, karboxymethylcelulosu, blokové podávány topicky, pomocí intraartikulární, intrathekální, silikagel, substance sodnou polyethylen-polyoxypropylen polymery, polyethylenglykol a lanolin.

Přípravky podle tohoto vynálezu mohou být parenterálně, orálně, inhalací pomocí sprejů, rektálně, nasálně, bukálně, vaginálně nebo implantovaných reservoárů. Termín „parenterální označuje v tomto vynálezu subkutánní, intravenosní, intramuskulární, intrasynoviální, intrasternální, intrahepatické, intralesionální a intrakraniální injekční nebo infusní techniky. S výhodou se přípravky podávají orálně, intraperitoneálně nebo intravenosně.

Sterilní injektovatelné formy přípravků podle tohoto vynálezu mohou být vodné nebo olej ovité suspenze. tyto suspenze mohou být formulovány s použitím technik známých odborníkům v oboru s využitím dispergačních nebo smáčecích činidel a suspenzních činidel. Sterilní injektovatelný přípravek může být také sterilní injektovatelný roztok nebo suspenze v netoxickém parenterálně přijatelném ředidle nebo rozpouštědle, např. roztok v 1,3-butandiolu. Mezi akceptovatelnými vehikuly a rozpouštědly, které mohou být

9

použity, jsou voda, Ringerův roztok a isotonický roztok chloridu sodného. Kromě toho se konvenčně používají sterilní fixované oleje jako rozpouštědla nebo suspenzní médium. Pro tento účel může být použit libovolný směsný fixovaný olej včetně syntetických mono- nebo di-glyceridů. Mastné kyseliny, jako je kyselina olejová a její glyceridové deriváty, jsou užitečné při přípravě injekcí, jako třeba přírodní farmaceuticky přijatelné oleje jako je olivový olej nebo ricínový olej, obzvláště v jejich polyoxyethyloaných verzích. Tyto olejové roztoky nebo suspenze mohou také obsahovat alkoholická ředidla nebo disperganty s dlouhým řetězcem, jako třeba karboxymethylcelulosu nebo podobná dispergační činidla, která se běžně používají při formulování farmaceuticky přijatelných dávkových forem včetně emulzí a suspenzí. Pro účely formulování mohou být také použity další běžně používané surfaktanty, jako je Tweens, Spans a další emulgační činidla nebo zvyšovače biodostupnosti, které se běžně používají při výrobě farmaceuticky přijatelných tuhých, kapalných nebo jiných dávkových forem.

Parenterální formulace mohou být dávky pro jeden bolus jako jsou infuze nebo dávky pro zátěžový bolus, následované udržovací dávkou. Tyto prostředky mohou být podávány jedenkrát denně nebo podle potřeby.

Farmaceutické přípravky podle tohoto vynálezu mohou být podávány orálně v libovolné orálně akceptovatelné dávkové formě včetně kapslí, tablet, vodných suspenzí nebo roztoků. V případě tablet pro orální podávání zahrnují běžně používané nosiče laktosu a kukuřičný škrob. Jsou také typicky přidávána lubrikační činidla jako je magnesium-stearát. Pro orální podávání ve formě kapslí zahrnují užitečná ředidla laktosu a sušený kukuřičný škrob. Jsou-li požadovány vodné suspenze pro orální použití, kombinuje se aktivní složka s emulgačním a • · ·* ··*· suspenzním činidlem. Pokud je to potřeba, mohou být přidána některá sladidla, chuúová činidla nebo barvící činidla.

Alternativně, farmaceutické přípravky podle tohoto vynálezu mohou být podávány formou čípků pro rektální podávání. Ty mohou být připraveny smícháním činidla s vhodným nedráždivým excipientem, který je tuhý při pokojové teplotě, ovšem kapalný při rektální teplotě, který tedy taje v rektu a dochází k uvolňování léku. Takovéto materiály zahrnují kakaové máslo, včelí vosk a polyethylen glykoly.

Farmaceutické přípravky podle tohoto vynálezu mohou být také podávány místně. Topické přípravky mohou být vyrobeny ve formě rektálního čípkového přípravku (viz výše) nebo ve formě klystýru. Topické transdermální náplasti mohou být také použity.

Pro topické aplikace mohou být farmaceutické přípravky formulovány ve vhodném mazání obsahujícím aktivní složku suspendovanou nebo rozpuštěnou v jednom nebo více nosičích. Nosiče pro topické podávání sloučenin podle tohoto vynálezu zahrnují minerální olej, vaselinový olej, bílou vaselinu, propylenglykol, polyoxyethylen, polyoxypropylenovou sloučeninu, emulgovaný vosk a vodu. Alternativně mohou být farmaceutické přípravky formulovány ve vhodných lotion nebo krémech, obsahujících aktivní sloučeniny suspendované nebo rozpuštěné v jednom nebo více farmaceuticky přijatelných nosičích. Vhodné nosiče zahrnují, ovšem výčet není limitující, minerální olej, sorbitan monostearát, polysorbát 60, cetylesterový vosk, cetearyl alkohol, 2-oktododekanol, benzylalkohol a vodu.

Pro oftalmické použití mohou být farmaceutické přípravky podle tohoto vynálezu formulovány jako mikronizované suspenze v isotonické, pH adjustované sterilní solance, nebo s výhodou jako roztoky v isotonické, pH adjustované sterilní solance • 4 · · · 4 • · · ······ « buď s nebo bez preservativ jako je benzylalkonium-chlorid. Alternativně, pro oftalmické použití mohou být farmaceutické přípravky formulovány v mazáních jako je vaselina.

Farmaceutické přípravky podle tohoto vynálezu mohou být také podávány pomocí nasálních aerosolů nebo inhalace. Takovéto přípravky se připravují technikami dobře známými v oboru farmaceutických formulací a mohou být připraveny jako roztoky v solance, s využitím benzylalkoholu nebo jiného vhodného preservativa, absorpčních promotérů kvůli zvýšení biodostupnosti, fluorovaných uhlovodíků a/nebo dalších konvenčních solubilizačních nebo dispergačních činidel.

Množství antagonisty Al adenosinového receptoru, které může být kombinováno s materiálem nosiče za vzniku jediné dávkové formy, se bude lišit v závislosti na léčeném hostiteli a na konkrétním způsobu podávání. Přípravky mohou být formulovány tak, aby dávka antagonisty Al adenosinového receptoru podávaná pacientovi byla mezi 0,01 až 100 mg/kg tělesné hmotnosti. V některých provedeních tohoto vynálezu je dávka 0,1 až 10 mg/kg tělesné hmotnosti. Přípravek může být podáván jako jediná dávka, vícenásobná dávka nebo během určité časové doby jako infuse.

Konkrétní dívka a léčebný režim pro konkrétního pacienta se bude lišit v závislosti na mnoha faktorech, včetně konkrétního antagonisty Al adenosinového receptoru, pacientova věku, tělesné hmotnosti, obecného zdraví, pohlaví a stravy a času podávání, rychlosti vyměšování, kombinace léků a závažnosti konkrétní léčené nemoci. Posouzení těchto faktorů lékařem je v rámci pravomocí odborníka v oboru. Množství antagonisty bude záviset na konkrétním léčeném pacientovi, způsobu podávání, typu formulace, charakteristice použité sloučeniny, závažnosti onemocnění a požadovaném účinku. Množství antagonistů může být určeno pomocí • · » · » · • · · • · farmakologických a farmakokinetických principů dobře známých v oboru.

Aby zde popsaný vynález mohl být plně pochopen, jsou uvedeny následující příklady. Mělo by být zřejmé, že tyto příklady jsou pouze pro účely ilustrování a nejsou zamýšleny jako omezující pro tento vynález.

Příklady provedení vynálezu

Příklad 1

Sloučeniny 1, 2, 4, 8, 9, 11, 12-21, 24, 27, 28, 31 a 32 byly připraveny podle následující metody s využitím vhodného aminoalkoholu v kroku 5. Aminoalkoholy použité k přípravě sloučenin byly: (R)-2-amino-3-methyl-l-butanol (sloučenina

1) ; (R)-2-amino-l-butanol (sloučenina 2); (R)-2-amino-lpropanol (sloučenina 4); (R)-isoleucinol (sloučenina 8); (R)2-amino-l-butanol (sloučenina 9) ; (R)-2-amino-1-pentanol (sloučenina 11); (S)-l-amíno-2-propanol (sloučenina 12); (R) 2-amino-2-fenethanol (sloučenina 13) ; (R)-l-amino-2-propanol (sloučenina 14); (S) - isoleucinol (sloučenina 15); (R)-2amino-3,3-dimethyl-butan-l-ol (sloučenina 16); (R)-2-amino-4methyl-pentan-2-ol (sloučenina 17); (R)-2-amino-3-fenylpropan-l-ol (sloučenina 18); (R)-2-amino- hexan-l-ol (sloučenina 19); 3-aminopropanol (sloučenina 20); 2aminoethanol (sloučenina 21) ; (S) - 2-amino-l-butanol (sloučenina 24) 4-aminobutanol (sloučenina 27; (R)-4-(2amino-3-hydroxy- propyl)-fenol (sloučenina 28); (R)-3-aminobutan-l-ol (sloučenina 31); a (R)-3-amino-pentan-l-ol (sloučenina 32).

Tabulka 1 ukazuje struktury sloučenin, které byly syntetizovány, metody použité pro syntézy sloučenin a data z hmotnostní spektroskopie pro dané sloučeniny.

Krok 1: 5,6-Diamino-l-propyl-lH-pyrimidin-2,4-dion hydrochloridová sůl:

Výchozí materiál, 6-amino-l-propyl-lH-pyrimidin-2,4-dio, byl připraven podle literárního postupu (J. Med. Chem. 1989, str. 1231). Tento materiál (8,5 g, 50 mmol) byl rozpuštěn ve 250 ml vodné kyseliny octové a poté byl ochlazen v ledové lázni. Byl přidán během 15 minut roztok dusitanu sodného (4,14 g, 1,2 ekv.) v 10 ml vody. Po asi 10 minutách začala z reakční směsi vypadávat světle červená sraženina. Tuhá látka byla zfiltrována a sušena ve vakuu přes noc za vzniku 8,0 g nitrosového intermediátu.

Nitrosový intermediát (6,0 g, 30 mmol) byl suspendován ve 10 0 ml vody a byl zahříván na teplotu 80-85° C. Pak byl přidán docela rychle během intervalu 5 minut dithionit sodný (15,8 g, 3,0 ekv.). Po 5 min byl zdroj tepla odstraněn a světle zelená reakční směs byla ochlazena na laboratorní teplotu a poté v ledové lázni. Tuhá látka byla zfiltrována a sušena ve vakuu za vzniku diaminouracilu. Ten byl poté převeden na hydrochloridovou sůl rozpuštěním v 10 ml vody obsahující 1,5 ekv. HCÍ a poté byl lyofilizován.

Krok 2: 8-(4-Hydroxy-bicyklo[2.2.2] okt-l-yl)-3-propyl-3,7dihydro-purin-2,6-dion:

5,6-Diamino-1-propyl-lH-pyrimidin-2,4-dion hydrochloridová sůl (3,4 g) byl rozpuštěn v 80 ml DMF společně s 4-hydroxybicyklo[2.2.2]oktan-l-karboxylovou kyselinou (2,5 g, 15 mmol). Pak bylo přidáno HATU (5,9 g, 1,05 ekv.), následované přídavkem Et₃N (8,30 ml, 4,05 ekv.). Vzniklá směs byla ·· ··· · míchána za laboratorní teplotě přes noc. Reakční směs byla zfiltrována kvůli odstranění sraženiny. Filtrát byl zkoncentrován za sníženého tlaku. Vzniklý zbytek byl rozpuštěn v 60 ml vody obsahující 10 ekv. NaOH (5,9 g) . Reakční směs byla míchána za refluxu 1 hod, ochlazena na laboratorní teplotu a okyselena na pH 2 s koncentrovanou HCl. Vzniklá sraženina byla zfiltrována a sušena za vzniku 1,85 g xanthinového derivátu.

Krok 3: 8-(4-Hydroxy-bicyklo[2.2.2] okt-1-vl)-3-propyl-6thioxo-1,3,6,7-tetrahydro-purin-2-on:

8-(4-Hydroxy-bicyklo[2.2.2]okt-l-yl)-3-propyl-3,7-dihydropurin-2,6-dion (500 mg, 1,57 mmol) byl rozpuštěn v 10 ml pyridinu. Pak byl přidán P₄S₁₀ (1,05 g, 1,5 ekv.) a reakční směs byla míchána 6 hod za refluxu. Reakční směs byla poté ochlazena na laboratorní teplotu a byla rozložena pomalu s 5 ml vody. Směs byla poté okyselena při teplotě 0 °C na pH 5 pomocí 6N HCl. Vodná vrstva byla extrahována s EtOAc. Spojené organické vrstvy byly sušeny (Na₂SO₄) a zkoncentrovány za sníženého tlaku. Čištění pomocí preparativní HPLC poskytlo 100 mg titulní sloučeniny.

Krok 4: 8-(4-Hydroxy bicyklo[2.2.2]okt-l-yl)-6methylsulfanyl- 3-propyl-3,7-dihydro-purin-2 -on:

8-(4-Hydroxy-bicyklo[2.2.2]okt-l-yl)-3-propyl-6-thioxo1,3,6,7-tetrahydro purin-2-on (1,20 mg, 0,36 mmol) byl suspendován ve 3 ml vody a 1,5 ml EtOH. Pak byl přidán NaOH jako roztok v 0,4 ml vody, následovaný s Mel. Reakční směs byla míchána 1 hod při laboratorní teplotě. Poté byla reakční směs neutralizována s 0,1 N HCl a byla extrahována s chloroformem. Spojené organické vrstvy byly sušeny nad ♦ · ···· síranem sodným a byly zkoncentrovány za sníženéh tlaku za vzniku prakticky kvantitativního množství titulní sloučeniny.

Krok 5: 8-(4-Hydroxy-bicyklo[2.2.2]okt-l-yl)-6-(1-hydroxymethyl-propylamino)-3-propyl-3,7-dihydro-purin-2-on:

8-(4-Hydroxy-bicyklo[2.2.2]okt-l-yl)-6-methylsulfanyl-3propyl-3,7-dihydropurin-2-on (125 mg, 0,36 mmol) byl rozpuštěn ve 3 ml DMSO společně s přebytkem příslušného aminoalkoholu (např. (R)-(-)-2-amino-1-butanol (0,24 ml, 7 ekv.) pro sloučeninu 2). Vzniklá reakční směs byla míchána při teplotě 150 °C po dobu 3 hod.

Krok 6: 7-Ethyl-2-(4-hydroxy-bicyklo[2.2.2]okt-l-yl)-4propyl-1,4,6,7 -tetrahydro-1,3,4,5a,8-pentaaza-as-indacen-5-on (Sloučenina 2):

8-(4-Hydroxy-bicyklo[2.2.2]okt-l-yl)-6-(1-hydroxymethylpropylamino)-3-propyl-3,7-dihydro-purin-2-on (110 mg) byl rozpuštěn ve 3 ml SOC12 a byl míchán za refluxu 20 minut. Směs byla poté zkoncentrována. Zbytek byl rozložen s nasyceným roztokem NaHCO3 a byl extrahován s chloroformem. Spojené organické vrstvy byly sušeny se síranem sodným a poté zkoncentrovány za sníženého tlaku. Čištění pomocí preparativní HPLC poskytlo 50 ml titulní sloučeniny ve formě TFA soli.

Příklad 2

Sloučeniny 3, 5 a 7 byly připraveny podle následujícího postupu s využitím odpovídajícího aminoalkoholu v kroku 8.

Aminoalkoholy použité pro přípravu sloučenin byly: (R)-2amino-1-butanol (sloučenina 3); (R)-2-amino-3 methyl-1butanol (sloučenina 5); a (R)-2-amino-1-propanol (sloučenina

7) .

• 99 9 ·

•9 9999

9 • 9 9 9

Tabulka 1 ukazuje struktury syntetizovaných sloučenin, metody použité k jejich syntéze a data z hmotnostní spektroskopie těchto sloučenin.

Krok 1: 4-(2,6-Dioxo-3-propyl-2,3,6,7-tetrahydro-lH-purin-8yl)- bicyklo[2.2.2]oktan-l-karboxylová kyselina:

5,6-Diamino-l-propyl-lH-pyrimidin-2,4-dion hydrochloridová sůl (570 mg) byla rozpuštěna ve 20 ml DMF společně s monomethylesterem bicyklo[2.2.2] oktan-1,4-dikarboxylové kyseliny (520 mg, 2,45 mmol). Pak bylo přidáno HATU (980 mg, 1,05 ekv.), následované s Et₃N (1,40 ml, 4,05 ekv.). Vzniklá reakční směs byla míchána za laboratorní teploty přes noc. Následující ráno byla reakční směs zfiltrována kvůli odstranění sraženiny. Filtrát byl zkoncentrován za sníženého tlaku. Vzniklý zbytek byl rozpuštěn v 10 ml vody obsahující 10 ekv. NaOH (980 mg) . Reakční směs byla míchána 2 hod za refluxu. Poté byla reakční směs ochlazena na laboratorní teplotu a byla okyselena na pH 2 pomocí koncentrované HCl. Vzniklá sraženina byla zfiltrována a sušena za vzniku 680 mg derivátu kyseliny.

Krok 2: 8-(4-Hydroxymethyl-bicyklo[2.2.2] okt-l-yl)-3-propyl3,7-dihydro-purin-2,6-dion:

4-(2,6-Dioxo-3-propyl-2,3,6,7-tetrahydro-lH-purin-8-yl)bicyklo[2.2.2]oktan-l-karboxylová kyselina (3,2 g, 9,25 mmol) byla rozpuštěna ve 100 ml bezvodého THF a byla ochlazena na teplotu 0°C. Pak byl přidán boran-THF (1,0 M v THF, 18,5 ml, 2 ekv.) a reakční směs byla míchána 10 minut při teplotě 0 °C a poté 48 hod míchána za laboratorní teploty. Reakční směs byla opatrně rozložena s 10 ml methanolu a poté byla zkoncentrována za sníženého tlaku. Vzniklý zbytek byl rozpuštěn ve 20 ml methanolu a byl zkoncentrován za sníženého •4 Μ·· » 4 4 ► 4 4 4 4 tlaku. Toto zpracování bylo opakováno čtyřikrát za vzniku požadovaného alkoholu.

Krok 3: 4 -(2,6-Dioxo-3-propyl-2,3,6,7-tetrahydro-lH-purin-8yl)bicyklo[2.2.2]oktan-1-karbaldehyd:

8-(4-Hydroxymethyl-bicyklo[2.2.2]okt-l-yl)-3-propyl-3,7dihydropurine-2,6-dion (2,70 g, 8,13 mmol) byl rozpuštěn ve 40 ml DMSO. Pak byl přidán pyridin-SO₃ komplex (3,88 g, 3 ekv.), následovaný s Et₃N (7,4 mL, 7 ekv.) při laboratorní teplotě. Vzniklá reakční směs byla míchána 18 hod při laboratorní teplotě. Pak byla naředěna s EtOAc a byla promyta s 5% vodnou kyselinou citrónovou, vodou, solankou, sušena (Na₂S0₄) a byla zkoncentrována za sníženého tlaku za vzniku 900 mg požadovaného aldehydu.

Krok 4: Methylester 3-[4-(2,6-dioxo-3-propyl-2,3,6,7tetrahydro-lH-purin-8-yl)-bicyklo[2.2.2]okt-l-yl]-akrylové kyseliny:

4-(2,6-Dioxo-3-propyl-2,3,6,7-tetrahydro-lH-purin-8-yl)bicyklo[2.2.2]oktan-l-karbaldehyd (900 mg, 2,73 mmol) byl rozpuštěn ve 25 ml THF a byl přidán methyl (trifenylfosforanyliden)acetát (1,83 g, 2 ekv.). Vzniklá reakční směs byla míchána 18 hod pod refluxem. Poté byla ochlazena na laboratorní teplotu a čištěna pomocí preparátivního HPLC s využitím směsi vodného acetonitrilu za vzniku 300 mg požadovaného produktu.

Krok 5: Methylester 3- [4- (2,6-dioxo-3-propyl-2,3,6,7tetrahydro-lH-purin-8-yl)-bicyklol[2.2.2]okt-l-yl]-propionové kyseliny:

Methylester 3- [4-(2,6-dioxo-3-propyl-2,3,6,7-tetrahydrolH-purin-8-yl)-bicyklo[2.2.2]okt-l-yl)-akrylové kyseliny (300 • · • · ♦·<· • φ • φφφ • · φ · ··· •Φ ΦΦΦ· • φ · • · φ • φ φ · φ · · φ φφ φφ • · mg) byl rozpuštěn ve 20 ml THF. Pak bylo přidáno 10%Pd na C (25 mg) a vzniklá reakční směs byla hydrogenována za tlaku 50 psi vodíku za laboratorní teploty po dobu 6 hod. Reakční směs byla zfiltrována přes celit a filtrát byl zkoncentrován za sníženého tlaku za vzniku 280 mg požadovaného produktu.

Krok 6: Methylester 3- [4-(2-oxo-3-propyl-6-thioxo-2,3,6,7tetra-hydro-lH-purin-8-yl)bicyklo[2.2.2] okt-l-yl]-propionové kyseliny :

Methylester 3- [4-(2,6-dioxo-3-propyl-2,3,6,7-tetrahydrolH-purin-8-yl)-bicyklo[2.2.2]okt-l-yl]-propionové kyseliny (250 mg, 0,64 mmol) byl rozpuštěn v 8 ml pyridinu. Pak byl přidán P₄Si₀ (430 mg, 1,5 ekv.) a reakční směs byla míchána pod refluxem po dobu 3 hod. Reakční směs pak byla ochlazena na laboratorní teplotu a poté byla rozložena se 3 ml vody a okyselena s dostatkem 6N HCl na pH 3. Vzniklá reakční směs byla extrahována s chloroformem. Organické vrstvy byly sušeny nad síranem sodným a zkoncentrovány za sníženého tlaku. Surový zbytek byl čištěn pomocí preparativního HPLC za vzniku 100 mg požadovaného produktu.

Krok 7: Methylester 3-[4-(6-methylsulfanyl-2-oxo-3-propyl3,7-dihydro-2H-purin-8-yl]bicyklo[2.2.2] okt-l-yl]-propionové kyseliny;

Methylester 3- [4-(2-oxo-3-propyl-6-thioxo-2,3,6,7tetrahydro-lH-purin-8-yl)-bicyklo[2.2.2] okt-l-yl]-propionové kyseliny (100 mg) byl rozpuštěn ve 2 mL EtOH a 1 ml vody. Pak bylo přidáno NaOH (2 0 mg) ve formě roztoku v 1 ml vody a následně Mel (23 μΐ, 1,5 ekv.). Vzniklá reakční směs byla míchána 30 min při laboratorní teplotě. Poté byla extrahována s EtOAc. Organická vrstva byla sušena nad síranem sodným a

99·9 • ·

9·9

9 99 9 byla zkoncentrována za sníženého tlaku za vzniku 105 mg titulní sloučeniny.

Krok 8: Methylester 3-{4-[6-(1-hydroxymethyl-propylamino)-2oxo-3-propyl-3,7-dihydro-2H-purin-8-yl]-bicyklo[2.2.2]okt-1yl]-propionové kyseliny :

Methylester 3- [4-(6-methylsulfanyl-2-oxo-3-propyl-3,7dihydro-2H-purin-8-yl)bicyklo[2.2.2]okt-l-yl]-pxopionové kyseliny (105 mg) bylo rozpuštěno ve 2 ml DMSO společně s odpovídajícím aminoalkoholem (např. 160 μΐ (R)-2-amino-1 butanol pro sloučeninu 3) . Reakční směs byla míchána 3 hod při teplotě 150 °C. Poté byla odfiltrována a čištěna pomocí preparativní HPLC za vzniku 50 mg titulní sloučeniny.

Krok 9: 3-[4-(7-Ethyl-5-oxo-4-propyl-4,5,6,7-tetrahydro-lH1,3,4,5a,8-pentaza-indacen-2-yl)-6-bicyklo[2.2.2]okt-l-yl]propionová kyselina (sloučenina 3) :

Methylester 3-[4-[6-(1-hydroxymethyl-propylamino)-2-oxo3-propyl-3,7-dihydro-2H-purin-8-yl]-bicyklo[2.2.2]okt-l-yl}propionové kyseliny (30 mg) byl rozpuštěn v 1 ml SOC1₂ a míchán za refluxu po bodu 15 min. Reakční směs byla ochlazena na laboratorní teplotu a zkoncentrována za sníženého tlaku. Vzniklý zbytek byl rozpuštěn v roztoku obsahujícím 1 ml vody, 0,5 ml MeOH a 0,1 ml 10% roztoku NaOH. Reakční směs byla míchána za laboratorní teploty po dobu 3é minut. Směs pak byla okyselena na pH 2 pomocí ředěné 1 N HCl a zkoncentrována. Vzniklý surový produkt byl čištěn pomocí preparativní HPLC za vzniku titulní sloučeniny.

Příklad 3

Sloučeniny 6, 10, 22, 23, 25, 26, 29 a 3 0 byly připraveny podle následujícího způsobu s využitím aminoalkoholu v kroku

99

9 9 9

9 9

9 9 9 9

9 •999 9« • 9 9 · 999 •9 9 9

9 9

999

9 9

9 9 9

99

3. Aminoalkoholy použité pro přípravu sloučenin byly: 2aminoethanol (sloučenina 6); (R)-2-amino-l-butanol (sloučenina 10); (R)-2-amino-l-propanol (sloučenina 22); (R) 2-amino-2-pentanol (sloučenina 23); (R)-isoleucinol (sloučenina 25); (S)-2-amino-l-butanol (sloučenina 26); 3aminopropanyl (sloučenina 2 9) ; a 4-aminobutanol (sloučenina 30) . Tabulka 1 ukazuje struktury syntetizovaných sloučenin, způsoby použité pro jejich syntézu a data z hmotnostní spektrometrie těchto sloučenin.

Krok 1: Methylester 4-(2,6-dioxo-3-propyl-2,3,6,7-tetrahydrolH-purin-8-vl)bicyklo[2.2.2]oktan-1-karboxylové kyseliny:

Byl připraven methylester 4-(2,6-dioxo-3-propyl-2,3,6,7tetrahydro-lH-purin-8-yl)-bicyklo[2.2.2]oktan-1-karboxylové kyseliny podle výše uvedeného postupu. Tento materiál (1,4 g) byl suspendován v 50 ml MeOH a bylo přidáno 5 kapek koncentrované kyseliny sírové. Reakční směs byla míchána 18 hod při laboratorní teplotě. Poté byla ochlazena na laboratorní teplotu a zkoncentrována za sníženého tlaku. Vzniklý zbytek byl naředěn s dichlormethanem a promyt s vodným roztokem NaHCO₃, solankou, sušen nad síranem sodným a zkoncentrován za vzniku 1,2 g titulní sloučeniny.

Krok 2: Methylester 4-(6-methylsulfanyl-2-oxo-3-propyl-3,7dihydro-2-purin-8-yl)bicyklo[2.2.2]oktan-1-karboxylové kyseliny:

Methylester 4- (2,6-dioxo-3-propyl-2,3,6,7-tetrahydro-lHpurin-8-yl)bicyklo[2.2.2]oktan-1-karboxylové kyseliny (1,2 g, 3,33 mmol) byl rozpuštěn ve 20 ml pyridinu. Pak bylo přidáno P₄Sio (2,22 g, 1,5 ekv.) a reakční směs byla míchána za refluxu po dobu 3 hod. Poté byla ochlazena na teplotu 0 °C a byla opatrně rozložena s vodou. Bylo přidáno dostatečné

9 9 9

9 9 9 ·

• t··

9999

9 9

9 9 « · · * · * · ·· ·· množství 6N HCl, které adjustovalo pH reakční směsi na hodnotu 5, a reakce byla extrahována s dichlormethanem. Organická vrstva byla sušena nad síranem sodným a byla zkoncentrována za vzniku 860 mg thioesterového derivátu. Tento materiál (860 mg, 2,29 mmol) byl rozpuštěn v 5 ml EtOH a 5 ml vody. Byl přidán roztok hydroxidu sodného (183 mg, 2 ekv.) ve 2 ml vody následovaný methyljodidem (213 μΐ, 1,5 ekv.). Vzniklá reakční směs byla míchána při laboratorní teplotě po dobu 3 0 min. Směs byla poté extrahována s EtOAc. Organická vrstva byla sušena nad síranem sodným a byla zkoncentrována za sníženého tlaku za vzniku 800 mg titulní sloučeniny.

Krok 3: Methylester 4-[6-(2-hydroxy-ethylamino)-2-oxo-3propyl-3,7-dihydro-2H-purin-8-yl-bicyklo[2.2.2]oktan-1karboxylové kyseliny:

Methylester 4-(6-methylsulfanyl-2-oxo-3-propyl-3,7dihydro-2H-purin-8-yl)bicyklo[2.2.2]oktan-1-karboxylové kyseliny (50 mg) byl rozpuštěn v 1 ml DMSO společně s odpovídajícím aminoalkoholem (např. 7 ekv. 2-aminoethanolu pro sloučeninu 6) . Reakční směs byla míchána 3 hod při teplotě 150 °C. Reakční směs byla ochlazena na laboratorní teplotu a byla čištěna pomocí preparativní HPLC za vzniku 30 mg titulní sloučeniny.

Krok 4: 4 -(5-Oxo-4-propyl-4,5,6,7-tetrahydro-1,3,4,5a,8 pentaaza-as-indacen-2-yl)-bicyklo[2.2.2]oktan-1-karboxylová kyselina:

Methylester 4- [6-(2-hydroxy-ethylamino)-2-oxo-3-propyl3,7-dihydro-2H-purin-8-yl-bicyklo[2.2.2]oktan-1-karboxylové kyseliny (30 mg) bylo rozpuštěno v 1 ml SOC1₂ a směs byla míchána 15 minut pod refluxem. Reakční směs byla ochlazena na • 4 4«

4 4 4

4 4

4 44 4

4

4444 44

4444

4 4

4 444 • 4 4

4 4

444

4444

4 4

4 4 ·

4 4 4

44 laboratorní teplotu a zkoncentrována za sníženého tlaku. Vzniklý zbytek byl rozpuštěn v roztoku obsahujícím 1 ml vody, 0,5 ml MeOH a 0,1 ml 10% vodného NaOH. Reakční směs byla míchána při laboratorní teplotě 30 minut. Poté byla okyselena na pH 2 pomocí ředěné IN HCI a byla zkoncentrována. Vzniklý surový produkt byl čištěn pomocí preparativní HPLC za vzniku titulní sloučeniny.

Přiklad 4

Metodologie stanovení

Byly připraveny četné xanthinové deriváty mající struktury uvedené v Tabulce 1. Pro některé z těchto látek byly stanoveny hodnoty Ki pro krysí a lidské adenosinové Al receptory podle následujícího protokolu pro stanovení vázání.

Materiály

Adenosin deamináza a HEPES byly získány od firmy Sigma (St. Louis, MO) . Hamovo F-12 buněčné kultivační médium a sérum telecího plodu byly získány od firmy GIBCO Life Technologies (Gaithersburg, MD) . Antibiotikum G-418, Falcon 150 mM kultivační desky a Costar 12-ti jamkové kultivační desky byly získány od firmy Fisher (Pittsburgh, PA). [³H] CPX byl získán od firmy DuPont-New England Nuclear Research Products (Boston, MA) . Penicilin/streptomycin antibiotická směs byla získána od firmy Mediatech (Washington, DC). Složení HEPES-pufrovaného Hankova roztoku: 130 mM NaCl, 5,0 mM Cl, 1,5 mM CaCl₂, 0,41 mM MgSO₄, 0,4 9 mM Na₂HPO₄, 0,44 mM KH₂PO₄, 5,6 mM dextrosy, a 5 mM HEPES (pH 7,4).

Příprava membrány

Krysí Al Receptor: Membrány byly připraveny z krysího cerebrálního kortexu izolovaného z čerstvě usmrcených krys. Tkáně byly homogenizovány v pufru A (10 mM EDTA, 10 mM Na-

· ·

11 1 1 ·♦ ··«* • * • ··· ·· ···· • · • · · • · • · · ♦ · 11

HEPES, pH 7,4) doplněném o proteázové inhibitory (10 pg/ml benzamidinu, 100 μΜ PMSP, ad 2 μg/ml každého aprotininu, pepstatinu a leupeptinu), a centrifugovány při 20,000 x g po dobu 20 minut. Pelety byly opětně suspendovány a dvakrát promyty s pufrem HE (10 mM Na-HEPES, 1 mM EDTA, pH 7,4, plus proteázové inhibitory). Nakonec byly pelety suspendovány v pufru HE, doplněném s 10% (w/v) sacharosou a proteázovými inhibitory a alikvotní podíly byly vymraženy při -80°C. Koncentrace proteinů byly měřeny s využitím sady pro stanovení proteinu BCA (Pierce).

Lidský Al Receptor: cDNA lidského Al adenosinového receptoru, byla získána pomocí RT-PCR a byla subklonována do pcDNA3.1 (Invitrogen). Stabilní transfekce CHO-Kl buněk byla provedena s využitím LIPOFECTAMINE-PLUS (GIBCO-BRL) a kolonie byly vybrány v 1 mg/ml G418, a byl proveden screening s využitím radioligandového vázacího stanovení. Pro přípravu membránu byly CHO-Kl buňky pěstované jako monovrstvy v kompletním médiu (F12+10%FCS+lmg/ml G418) byly promyty v PBS a byly získány v pufru A doplněném s proteázovými inhibitory. Buňky byly homogenízovány, centrifugovány a promyty dvakrát s pufrem HE podle výše uvedeného popisu. Nakonec byly pelety uchovávány v alikvotních podílech při teplotě -80 °C.

Radioligandové vázací stanovení

Membrány (50 μg membránového proteinu pro krysí AlARs, a 25 μg CHO-Kl membránového proteinu pro lidský AlARs), radioligandy a různé koncentrace kompetitivního ligandu bylo inkubováno v trojnásobném experimentu v 0,1 ml pufru HE plus 2 jednotky/ml adenosin deaminázy po dobu 2,5 h při teplotě 21 °C. Radioligand [³H]DPCPX (112 Ci/mmol od NEN, koncová »· 444« • 4 4444 • 4 · 4 4 444 4 · ♦ 444 4 « 4 4 4 4 4

0*7 · 4 4 4 4 9 4

J / 4444 44 44 444 44 koncentrace: 1 nM) byl použit pro kompetitivní vázací stanovení na AxARs. Nespecifické vázání bylo měřeno v přítomnosti 10 μΜ BG9719. Vázací stanovení bylo ukončeno filtrací přes filtry ze skleněných láken Whatman GF/C s využitím BRANDEL buněčného harvestoru. Filtry byly promyty třikrát se 3 až 4 ml ledového 10 mM Tris-HCl, pH 7,4 a 5 mM MgCl₂ při teplotě 4°C. Filtrační papír byl převeden do vialky a bylo přidáno 3 ml scintilačního koktejlu ScintiVerse(Fisher). Radioaktivita byla počítána pomocí Wallac β-počítače.

Analýza vázacích dat

Určení hodnot Κχ: Kompetitivní vázací data byla fitována na vázací model s jedním vazným místem a vykreslena s využitím Prizm GraphPad. Byla použita Cheng-Prusoff rovnice Ki =IC₅₀/(1+[I]/K_D) pro výpočet hodnot Κχ z hodnot IC₅₀, kde Ki je afinitní konstanta pro kompetitivní ligand, [I] je koncentrace volného radioligandu a K_D je afinitní konstanta pro radioligand.

% vázání: Pro jednobodové vázací stanovení byla data presentována v % celkového specifického vázání při 1 μΜ kompetitivní sloučeniny: % celku =100* (Specifické vázání s 1 μΜ kompetitivní sloučeniny/ celkové specifické vázání). % vázání reprezentuje množství vázaného radioligandu zbývající v přítomnosti 1 μΜ kompetitivní sloučeniny.

Výsledky

Všechny testované sloučeniny vykazovaly hodnoty pro krysí Αχ Κχ kolem 4 a kolem 800 nM. V tabulce 2 jsou uvedeny Κχ hodnoty pro Αχ adenosinový receptor a % vázání pro sloučeniny.

·· ···· ·· *· tf* tf··· ··· ·« · ·· · · ···· · · · • ··· ··· ···· · • ··· ····· ···· tftf tftf ··· ·· ·· • » ··

Barker et al. byly kultivovány

Příklad 5

Alternativní způsob stanovení

Materiály

Viz Příklad 4.

Buněčná kultura

CHO buňky stabilně exprimující rekombinantní lidské A^AdoR (CHO:AiAdoR buňky) byly připraveny podle popisu (KolliasJ. Pharma. Exp. Ther. 281(2), 761, 1997) a jako CHO:Wild buňky. CHO buňky byly kultivovány jako monovrstvy na plastických miskách v Hamově F-12 médiu doplněném s 10% sérem telecího plodu, 100 U penicilinu G a 100 gg streptomycinu v zavlažované atmosféře 5% CO₂/95% vzduch při teplotě 37 °C. Hustota [3H] CPX vázacích míst v CHO buňkách byla 26+2 (n=4) fmol/mg proteinu. Buňky byly subkultivovány dvakrát týdně po oddělení s využitím 1 mM EDTA v HEPES-pufrovaném Hankovo roztoku zbaveném Ca²⁺ a Mg²⁺ iontů. Pro experimenty byly použity tři různé klony CHO:AiAdoR buněk a všechny výsledky byly potvrzeny s buňkami ze dvou nebo tří klonů. Hustota AxAdoRs v těchto buňkách byla 4000-5000 fmol/mg proteinu, podle stanovení s [³H] CPX specifickým vázáním.

Vázání radioligandu

CHO buňky pěstované na 150 mm kultivačních miskách byly promyty s HEPES-pufrovaným Hankovým roztokem, poté byly odstraněny s buněčnou škrabkou a byly homogenizovány v ledovém 50 mM Tris-HCl, pH 7,4. Buněčné membrány byly peletovány pomocí centrifugace buněčného homogenizátu při 45,000 x g po dobu 15 minut. Membránové pelety byly promyty dvojnásobnou suspendací v čerstvém pufru a centrifugaci. Nakonec byly pelety suspendovány v malém objemu 50 mM Tris0 ·

• 0 «000

0 0 ·· 0000 0 0 · <·0

0 «00 • 0 · 0 · • ·0·0

HCl, pH 7,4, a byly skladovány 1 ml alikvotech při teplotě at -80 °C až do stanovení.

Kvůli určení hustoty AjAdoRs v CHO buněčných membránách, 100 μΐ alikvoty membrán (5 μ9 proteinu) byly inkubovány po dobu 2 hod při teplotě 25 °C s 0,15-20 nM [³H] CPX a adenosin deaminázy (2 U/ml) ve 100 μΐ 50 mM Tris-HCl, pH 7,4. Inkubování bylo ukončeno naředěním se 4 ml ledového 50 mM Tris-HCl pufru a membrány byly ihned sebrány pomocí filtrů ze skleněných vláken (Schleicher a Schuell, Keene, NH) pomocí vakuové filtrace (Brandel, Gaithersburg, MD) . Filtry byly rychle třikrát promyty s ledovým pufrem kvůli odstranění nevázaného radioligandu. Filtrační kotouče obsahující membrány s vázaným radioligandem byly umístěny ve 4 ml Scintiverse BD (Fisher) , a radioaktivita byla kvantifikována s využitím počítače kapalné scintilace. Kvůli určení nespecifického vázání [³H] CPX byly membrány inkubovány podle výše uvedeného popisu a k inkubačnímu pufru bylo přidáno 10 μΜ CPT. Nespecifické vázání bylo definováno jako [³H]CPX vázané v přítomnosti 10 μΜ CPT. Specifické vázání radioligandu na A_xAdoR bylo určeno odečtením nespecifického vázání od celkového vázání. Bylo zjištěno, že nespecifické vázání se zvyšuje lineárně s rostoucí koncentrací [³H]CPX. Pro každou testovanou koncentraci [³H]CPX bylo stanovení provedeno trojnásobně.

Kvůli určení afinity antagonistů AiAdoRs pro lidské rekombinantní A_xAdoR exprimované v CHO buňkách, bylo měřeno vázání 2 nM [³H]CPX v přítomnosti zvyšující se koncentrace antagonisty. Alikvoty CHO buněčných membrán (100 μΐ: 5 μg proteinu), [³H]CPX, antagonista (0,1 nM -100 μΜ) , a adenosin deamináza (2 U/ml) byly inkubovány po dobu 3 hod při teplotě ·· ··*<

* * • 0*0

0*

0 0 0 0

0*0 0 • 00400

4 0

000» 00 ·· 0000

0 0

0 0 « · 0 0 · 0 • 0 »000 040 00 00 °C ve 200 μΐ 50 mM Tris-HCl pufru (pH 7,4). Stanovení bylo ukončeno podle výše uvedeného popisu.

Další provedení

Je zřejmé, že zatímco vynález byl popsán pomocí jeho detailního popisu, předcházející popis je zamýšlen jako ilustrativní a nikoliv jako limitující pro rozsah vynálezu, který je definován pomocí následujících připojených nároků. Další aspekty, výhody a modifikace jsou v rámci rozsahu platnosti následujících nároků.

·· 0000 • · · • 0 00· • · 0 • 0 0 • 0 ·00 ·« «* * 0 0 » « 0 0 • ··· 9 * · ««·· 0« ·· ····

0

0 * 9

0 0

Tabulka 1

Sloučenina	Struktura	Syntetická metoda	MS (M+1)
1	s	1	386
2		1	372
3		2	428
4		1	358
5		2	442
6	5ý^·.	3	372

9« • 9 9 9

9 9

999 ·

•999 9« .:··· 9 999 9 9 ·

999 «9 9···

9

Sloučenina	Struktura	Syntetická metoda	MS (M+1)
7		2	414
8	X o $ xA	1	400
9	s	1	356
10		3	400
11		1	386
12	ŮW“	1	358

·· ·· • · · ·

Sloučenina	Struktura	Syntetická metoda	MS (M+1)
13	9-,.	1	420
14	J £ o^n-^-n ^--⁷ s	1	358
15		1	400
16	Ύ» _ox>^=«	1	400
17	Λ-» »5^	1	400
18	CK.	1	434

·· ···· ·· ···· ·· 99 • · · · • · · · · · · · · · · • · · · · · A AAA A A

A A A A AAAAA

AAAA AA AA AA· ·· ··

Sloučenina	Strulítura	Syntetická metoda	MS (M+1)
19		1	400
20		1	358
21		1	344
22		3	386
23	S	3	414
24	/	1	372

• 4 · 44 • · • · · • 4 · • · · · • 4 · ·

44

44 4

Sloučenina	Struktura	Syntetická metoda	MS (M+1)
25		3	414
26	u *Ί	3	400
27	X(X·· s	1	372
28	Oy	1	450
29		3	386
30		3	400

4 · 4 4 4 4 4 4·

Sloučenina	Struktura	Syntetická metoda	MS (M+1)
31	A S	1	372
32	X	1	372

• · • · · ·

Tabulka 2

Sloučenina č.	Ki(nM)	% vázání	Sloučenina č.	Ki(nM)	% vázání
1	4.4	ND	17	166.7	ND
2	5.75	ND	18	708	ND
3	8.38	ND	19	ND	18,1
4	9.92	ND	20	ND	52.7
5	10.5	1.9	21	ND	12.2
6	ND	2.6	22	ND	24
7	13.7	2.5	23	ND	22.8
8	14.1	1	24	ND	11
9	26.7	0.1	25	ND	46.7
10	40.2	6.2	26	ND	41.1
11	43.2	3.7	27	ND	16.3
12	51.3	8.6	28	ND	36.3
13	68.3	ND	29	ND	81.8
14	68.5	7.8	30	ND	71
1S	93	7.7	31	ND	40
16	155	ND	32	ND	61

• · · ·

Claims

Patentové nároky více substituenty hydroxys kup i nu, alkylaminoskupinu, kde Rx a R₂ jsou navzájem nezávisle vybrány ze skupiny obsahuj ící:

a) vodík;

b) alkylovou, alkenylovou nebo alkynylovou skupinu, kde zmíněná alkylová, alkenylová nebo alkynylová skupina jsou bud' nesubstituované nebo jsou funkcionalizované s jedním nebo vybranými ze skupiny obsahující alkoxyskupinu, aminoskupinu, dialkylaminoskupinu, heterocyklylovou skupinu, acylaminovou skupinu, alkylsulfonylamino skupinu a heterocyklylkarbonylamino skupinu; a

c) aryl nebo substituovaný aryl;

R₃ je vybrán ze skupiny obsahující:

(a) bicyklickou, tricyklickou nebo pentacyklickou skupinu vybranou ze skupiny obsahuj ící:

9 9 9 9 · · 9 9 9 • 9 9 9 9 · · • · 9 · · · · · • · · · · · · • 9 · · • 9 » · 99 99 999 kde bicyklická, tricyklická nebo pentacyklická skupina je buď nesubstituována nebo je funkcionalizována s jedním nebo více substituenty vybranými ze skupiny obsahující:

(i) alkylovou, alkenylovou a alkynylovou skupinu, kde každá alkylová, alkenylová nebo alkynylová skupina je buď nesubstituované nebo je funkcionalizovaná s jedním nebo více substituenty vybranými ze skupiny obsahující (alkoxykarbonyl)aralkylkarbamoylovou skupinu, (amino) (R₅)acylhydrazinylkarbonylovou skupinu, (amino) (R_s)acyloxykarboxylovou skupinu, * · · 0 · · • 0 · • 0 0 0 0

0 0 0

0 0 ·

00 0 0 0 • « 0 0 0« (hydroxy)(karboalkoxy)alkylkarbamoylovou skupinu, acylaminoalkylaminovou skupinu, acyloxyskupinu, aldehydickou skupinu, alkenoxyskupinu, alkenylaminovou skupinu, alkenylsulfonylaminovou skupinu, alkoxyskupinu, alkoxykarbonylovou skupinu, alkoxykarbonylalkylaminovou skupinu, alkoxykarbonylaminovou skupinu, alkoxykarbonylaminoacyloxy skupinu, alkoxykarbonylaminoalkylaminovou skupinu, alkylaminovou skupinu, alkylaminoalkylaminovou skupinu, alkylkarbamoylovou skupinu, alkylfosfonovou skupinu, alkylsulfonylaminovou skupinu, alkylsulfonyloxy skupinu, aminoskupinu, aminoacyloxyskupinu, aminoalkylaralkylkarbamoylovou skupinu, aminoalkylkarbamoylovou skupinu, aminoalkylheterocyklylalkylkarbamoylovou skupinu, aminocykloalkylalkylcykloalkylkarbamoylovou skupinu, aminocykloalkylkarbamoylovou skupinu, aralkoxykarbonylovou skupinu, aralkoxykarbonylaminovou skupinu, arylheterocyklylovou skupinu, aryloxyskupinu, arylsulfonylaminovou skupinu, arylsulfonyloxy skupinu, karbamoylovou skupinu, karbonylovou skupinu, kyanoskupinu, kyanoalkylkarbamoylovou skupinu, cykloalkylaminovou skupinu, dialkylaminovou skupinu, dialkylaminoalkylaminovou skupinu, dialkylaminoalkylkarbamoylovou skupinu, dialkylfosfonovou skupinu, haloalkylsulfonylaminovou skupinu, halogen, heterocyklylovou skupinu, heterocyklylalkylaminovou skupinu, heterocyklylkarbamoylovou skupinu, hydroxyskupinu, hydroxyalkylsulfonylaminovou skupinu, oximinoskupinu, fosfátovou skupinu, fosfonovou skupinu, skupinu -R₅, skupinu R₅-alkoxy, R₅-alkyl(alkyl)aminovou skupinu, R₅-alkylalkylkarbamoylovou skupinu, R₅-alkylaminovou skupinu, Rsal kyl karbamoy lovou skupinu, R₅-alkylsulfonylovou skupinu, R₅alkylsulfonylaminovou skupinu, R₅-alkylthioskupinu, R₅9 · • 9 9 9 • 9 9 9

9 9 9

9 9 99

9 9

9999 99

99 9 · 9 9 9 999

9 9 9 99

99 999 9

I · · «

99 99 heterocyklylkarbonylovou skupinu, substituovanou aralkylaminovou skupinu, substituovanou arylkarboxyalkoxykarbonylovou skupinu, substituovanou arylsulfonylaminoalkylaminovou skupinu, substituovanou heteroarylsulfonylaminovou skupinu, substituovanou heterocyklylovou skupinu, substituovanou heterocyklylaminoalkylaminovou skupinu, substituovanou heterocyklylsulfonylaminovou skupinu, sulfoxyacylaminoskupinu, thiokarbamoylovou skupinu, trifluormethylovou skupinu; a (ii) (alkoxykarbonyl)aralkylkarbamoylovou skupinu, (amino) (R_s)acylhydrazinylkarbonylovou skupinu, (amino) (R₅)acyloxykarboxylovou skupinu, (hydroxy)(karboalkoxy)alkylkarbamoylovou skupinu, acylaminoalkylaminovou skupinu, acyloxyskupinu, aldehydickou skupinu, alkenoxyskupinu, alkenylaminovou skupinu, alkenylsulfonylaminovou skupinu, alkoxyskupinu, alkoxykarbonylovou skupinu, alkoxykarbonylalkylaminovou skupinu, alkoxykarbonylaminovou skupinu, alkoxykarbonylaminoacyloxy skupinu, alkoxykarbonylaminoalkylaminovou skupinu, alkylaminovou skupinu, alkylaminoalkylaminovou skupinu, alkylkarbamoylovou skupinu, alkylfosfonovou skupinu, alkylsulfonylaminovou skupinu, alkylsulfonyloxy skupinu, aminoskupinu, aminoacyloxyskupinu, aminoalkylaralkylkarbamoylovou skupinu, aminoalkylkarbamoylovou skupinu, aminoalkylheterocyklylalkylkarbamoylovou skupinu, aminocykloalkylalkylcykloalkylkarbamoylovou skupinu, aminocykloalkylkarbamoylovou skupinu, aralkoxykarbonylovou skupinu, aralkoxykarbonylaminovou skupinu, arylheterocyklylovou skupinu, aryloxyskupinu, arylsulfonylaminovou skupinu, arylsulfonyloxy skupinu, karbamoylovou skupinu, karbonylovou skupinu, kyanoskupinu,

44 4444

Μ «9 #9 4499 «944 *44 44 · • 44 94 444 44 4

9 44499 9 494 4 4

4 944 99494

4494 94 44 449 99 44 kyanoalkylkarbamoylovou skupinu, cykloalkylaminovou skupinu, dialkylaminovou skupinu, dialkylaminoalkylaminovou skupinu, dialkylaminoalkylkarbamoylovou skupinu, dialkylfosfonovou skupinu, haloalkylsulfonylaminovou skupinu, halogen, heterocyklylovou skupinu, heterocyklylalkylaminovou skupinu, heterocyklylkarbamoylovou skupinu, hydroxyskupinu, hydroxyalkylsulfonylaminovou skupinu, oximinoskupinu, fosfátovou skupinu, fosfonovou skupinu, skupinu -R₅, skupinu R₅-alkoxy, R₅-alkyl(alkyl)aminovou skupinu, R₅alkylalkylkarbamoylovou skupinu, R₅-alkylaminovou skupinu, R₅-alkylkarbamoylovou skupinu, R₅-alkylsulfonylovou skupinu, R₅-alkylsulfonylaminovou skupinu, R₅-alkylthioskupinu, R₅heterocyklylkarbonylovou aralkylaminovou skupinu, skupinu, a ry1karboxya1koxykarbony1ovou skup inu, arylsulfonylaminoalkylaminovou skupinu, heteroarylsulfonylaminovou skupinu, heterocyklylovou skupinu, heterocyklylaminoalkylaminovou skupinu, heterocyklylsulfonylaminovou skupinu, substituovanou substituovanou substituovanou substituovanou substituovanou substituovanou substituovanou sulfoxyacylaminovou skupinu, skupinu;

thiokarbamoylovou skupinu, trifluormethylovou

R₄ je vybrán ze skupiny obsahující vodík, alkyl mající 1 až 4 atomy uhlíku, skupinu Ci_₄-alkyl-CO₂H, a fenyl, kde Ci-₄alkylová skupina, skupina Cx-₄-alkyl-CO₂H, a fenylová skupina jsou buď nesubstituované nebo funkcionalizované s jedním až třemi substituenty vybranými ze skupiny obsahující halogen, skupinu -OH, skupinu -OMe, aminoskupinu, nitroskupinu, benzylovou skupinu a benzyl funkciona1izovaný s jedním až třemi substituenty vybranými ze skupiny obsahující halogen, skupinu -OH, skupinu -OMe, skupinu -NH₂ a skupinu -N0₂;

Φ Φ φ φ φφφφ · • φ · » φ φφφ · φ • · φ •φφφ φφ φ· φφφ · φ φ φφφφ φ φ φφφφ

Φ Φ Φ

ΦΦΦ Φ Φ Φ

Φ · Φ Φ

ΦΦ Φ·

R-5 je vybrán ze skupiny obsahující skupinu - (CR^XR₂) _nCOOH, skupinu -C(CF₃)₂OH, skupinu -C0NHNHS0₂CF₃, skupinu -CONHOR₄, skupinu -CONHSO₂R₄, skupinu -CONHSO₂NHR₄, skupinu -C (OH) R₄PO₃H₂, skupinu -NHCOCF₃, skupinu NHCONHSO₂R₄, skupinu -NHPO₃H₂, skupinu -NHSO₂R₄, skupinu -NHSO₂NHCOR₄, skupinu -OPO₃H₂, skupinu -OSO₃H, skupinu -PO(OH)R₄, skupinu -PO₃H₂, skupinu' -SO₃H, skupinu -SO₂NHR₄, skupinu -SO₃NHCOR₄, skupinu -SO₃NHCONHCO₂R₄, a následující:

η = 0, 1, 2, nebo 3;

A je vybrán ze skupiny obsahující skupinu -CH=CH-, skupinu -(CH)_ra-(CH)_m, skupinu CH=CH-CH₂ a skupinu -CH₂-CH=CH;

m = 1 nebo 2;

X je 0 nebo S;

Z je vybrán ze skupiny obsahující jednoduchou vazbu, skupinu -0-, skupinu — (CH₂)_n~, skupinu -0(CH₂)i-₂-, skupinu -CH₂OCH₂-, skupinu - (CH₂) i_₂0-, a

R6 je vybrán ze skupiny obsahující vodík, alkylovou skupinu, acylovou skupinu, alkylsulfonylovou skupinu, aralkylovou skupinu, substituovanou aralkylovou skupinu, substituovanou alkylovou skupinu a heterocyklylovou skupinu; a

R₇ je vybrán ze skupiny obsahující:

a) vodík;

«4 4*44

4* 44 4 · ··*· • 4 4 · · 0 · 44 4 «0 4 4 0 fr« 4 4 4 4

4 404·· · 4 4 4 4 4

4 · · · 44440

4444 44 *· ·*4 44 44

b) alkyl, alkenyl mající ne méně než 3 atomy uhlíku nebo alkynyl mající ne méně než 3 atomy uhlíku, kde zmíněný alkyl, alkenyl nebo alkynyl je buď nesubstituovaný nebo je funkcionalizovaný s jedním nebo více substituenty vybranými ze skupiny obsahující hydroxyskupinu, alkoxyskupinu, aminoskupinu, alkylaminoskupinu, dialkylaminoskupinu, heterocyklylovou skupinu, acylaminovou skupinu, alkylsulfonylaminovou skupinu a heterocyklylkarbonylaminovou skupinu; a

c) aryl nebo substituovaný aryl;

d) alkylaryl nebo alkyl substituovaný aryl.
2. Sloučenina podle nároku 1, kde sloučenina je ve formě vybrané ze skupiny obsahující achirální sloučeninu, racemát, opticky aktivní sloučeninu, čistý diastereoizomer, směs diastereoizomerů a farmakologicky přijatelnou adiční sůl.
3. Sloučenina podle nároku 1, kde R_x a R₂ jsou navzájem nezávisle vybrány ze skupiny obsahující

a) alkylovou, alkenylovou nebo alkynylovou skupinu, kde zmíněná alkylová, alkenylová nebo alkynylová skupina jsou buď nesubstituované nebo jsou funkcionalizované s jedním nebo více substituenty vybranými ze skupiny obsahující hydroxyskupinu, alkoxyskupinu, aminoskupinu, alkylaminoskupinu, dialkylaminoskupinu, heterocyklylovou skupinu, acylaminovou skupinu, alkylsulfonylamino skupinu a heterocyklylkarbonylamino skupinu; a

b) aryl nebo substituovaný aryl.
4. Sloučenina podle nároku 3, kde alespoň jeden z R_x a R₂ je alkyl.

9 9 9 9 • 9 9 9

9 9 9

9 999

9 9

99 9 9 99

9 9 9· 9 t • 9 > 9 999 ·· ··· ·
5. Sloučenina podle nároku 1, kde A je (CH)_m-(CH)_m.
6. Sloučenina podle nároku 1, kde R₇ je alkyl.
7. Sloučenina podle nároku 1, kde Z je jednoduchá vazba.
8. Sloučenina vzorce II

-R₃ (ii) kde Ri a R₂ jsou navzájem nezávisle vybrány ze skupiny obsahuj ící:

a) vodík;

b) alkylovou, alkenylovou nebo alkynylovou skupinu, kde zmíněná alkylová, alkenylová nebo alkynylová skupina jsou buď nesubstituované nebo jsou funkcionalizované s jedním nebo více substituenty vybranými ze skupiny obsahující alkoxyskupinu, aminoskupinu, dialkylaminoskupinu, heterocyklylovou skupinu, acylaminovou skupinu, alkylsulfonylamino skupinu a heterocyklylkarbonylamino skupinu; a

c) aryl nebo substituovaný aryl;

R₃ je vybrán ze skupiny obsahující:

(a) bicyklickou, tricyklickou nebo pentacyklickou skupinu vybranou ze skupiny obsahující:

hydroxyskupinu, alkylaminoskupinu,

00 00 • 0 0 · • * · • 00« · • ·

0 000 ··

0 0 ··♦· • 0 0 • 0 0 0 0 • · 0 • 0 ·

0 0 · · ·

00 0000 kde bicyklická, tricyklická nebo pentacyklická skupina je buď nesubstituována nebo je funkcionalizována s jedním nebo více substituenty vybranými ze skupiny obsahující:

(i) alkylovou, alkenylovou a alkynylovou skupinu, kde každá alkylová, alkenylová nebo alkynylová skupina je buď nesubstituovaná nebo je funkcionalizovaná s jedním nebo více substituenty vybranými ze skupiny obsahující (alkoxykarbonyl)aralkylkarbamoylovou skupinu, (amino) (R₅)acylhydrazinylkarbonylovou skupinu, (amino) (R₅)acyloxykarboxylovou skupinu,
9 9 9 « · 9 ♦ · 9 9 9 9

99999 99 9

9 9 9 9 9 9 9

9 9 · 9 9 9 9

99 999 99 99

99 99

I 9 9 ·

9 9 9 ·· 9 99 9

9999 99 (hydroxy)(karboalkoxy)alkylkarbamoylovou skupinu, acylaminoalkylaminovou skupinu, acyloxyskupinu, aldehydickou skupinu, alkenoxyskupinu, alkenylaminovou skupinu, alkenylsulfonylaminovou skupinu, alkoxyskupinu, alkoxykarbonylovou skupinu, alkoxykarbonylalkylaminovou skupinu, alkoxykarbonylaminovou skupinu, a1koxykarbonylaminoacyloxy skup inu, alkoxykarbonylaminoalkylaminovou skupinu, alkylaminovou skupinu, alkylaminoalkylaminovou skupinu, alkylkarbamoylovou skupinu, alkylfosfonovou skupinu, alkylsulfonylaminovou skupinu, alkylsulfonyloxy skupinu, aminoskupinu, aminoacyloxyskupinu, aminoalkylaralkylkarbamoylovou skupinu, aminoalkylkarbamoylovou skupinu, aminoalkylheterocyklylalkylkarbamoylovou skupinu, aminocykloalkylalkylcykloalkylkarbamoylovou skupinu, aminocykloalkylkarbamoylovou skupinu, aralkoxykarbonylovou skupinu, aralkoxykarbonylaminovou skupinu, arylheterocyklylovou skupinu, aryloxyskupinu, arylsulfonylaminovou skupinu, arylsulfonyloxy skupinu, karbamoylovou skupinu, karbonylovou skupinu, kyanoskupinu, kyanoalkylkarbamoylovou skupinu, cykloalkylaminovou skupinu, dialkylaminovou skupinu, dialkylaminoalkylaminovou skupinu, dialkylaminoalkylkarbamoylovou skupinu, dialkylfosfonovou skupinu, haloalkylsulfonylaminovou skupinu, halogen, heterocyklylovou skupinu, heterocyklylalkylaminovou skupinu, heterocyklylkarbamoylovou skupinu, hydroxyskupinu, hydroxyalkylsulfonylaminovou skupinu, oximinoskupinu, fosfátovou skupinu, fosfonovou skupinu, skupinu -R₅, skupinu R₅-alkoxy, R₅-alkyl(alkyl)aminovou skupinu, R₅-alkylalkylkarbamoylovou skupinu, R₅-alkylaminovou skupinu, Rsal kyl karbamoy lovou skupinu, R₅-alkylsulfonylovou skupinu, R₅alkylsulfonylaminovou skupinu, R₅-alkylthioskupinu, R₅58 ♦ · ♦· • · ♦ · • t · • ♦♦· · • 9 • ·9< ·♦ ·♦ ♦· ·* ··· · * 9 • · · • · · ·

9 9 99 heterocyklylkarbonylovou skupinu, substituovanou aralkylaminovou skupinu, substituovanou arylkarboxyalkoxykarbonylovou skupinu, substituovanou arylsulfonylaminoalkylaminovou skupinu, substituovanou heteroarylsulfonylaminovou skupinu, substituovanou heterocyklylovou skupinu, substituovanou heterocyklylaminoalkylaminovou skupinu, substituovanou heterocyklylsulfonylaminovou skupinu, sulfoxyacylaminoskupinu, thiokarbamoylovou skupinu, trifluormethylovou skupinu; a (ii) (alkoxykarbonyl)aralkylkarbamoylovou skupinu, (amino) (R₅)acylhydrazinylkarbonylovou skupinu, (amino) (R₅)acyloxykarboxylovou skupinu, (hydroxy)(karboalkoxy)alkylkarbamoylovou skupinu, acylaminoalkylaminovou skupinu, acyloxyskupinu, aldehydickou skupinu, alkenoxyskupinu, alkenylaminovou skupinu, alkenylsulfonylaminovou skupinu, alkoxyskupinu, alkoxykarbonylovou skupinu, alkoxykarbonylalkylaminovou skupinu, alkoxykarbonylaminovou skupinu, alkoxykarbonylaminoacyloxy skupinu, alkoxykarbonylaminoalkylaminovou skupinu, alkylaminovou skupinu, alkylaminoalkylaminovou skupinu, alkylkarbamoylovou skupinu, alkylfosfonovou skupinu, alkylsulfonylaminovou skupinu, alkylsulfonyloxy skupinu, aminoskupinu, aminoacyloxyskupinu, aminoalkylaralkylkarbamoylovou skupinu, aminoalkylkarbamoylovou skupinu, aminoalkylheterocyklylalkylkarbamoylovou skupinu, aminocykloalkylalkylcykloalkylkarbamoylovou skupinu, aminocykloalkylkarbamoylovou skupinu, aralkoxykarbonylovou skupinu, aralkoxykarbonylaminovou skupinu, arylheterocyklylovou skupinu, aryloxyskupinu, arylsulfonylaminovou skupinu, arylsulfonyloxy skupinu, karbamoylovou skupinu, karbonylovou skupinu, kyanoskupinu,

99 99

9 9 9 9

9 9 9

9 999

9 9 • 999 ·♦ • * 99 9 9

9 · • ··· • · « · ···

9 9 9

9 9 9 • · 9 • · ♦ ·

99 99 • · ··· 9 kyanoalkylkarbamoylovou skupinu, cykloalkýlaminovou skupinu, dialkylaminovou skupinu, dialkylaminoalkylaminovou skupinu, dialkylaminoalkylkarbamoylovou skupinu, dialkylfosfonovou skupinu, haloalkylsulfonylaminovou skupinu, halogen, heterocyklylovou skupinu, heterocyklylalkylaminovou skupinu, heterocyklylkarbamoylovou skupinu, hydroxyskupinu, hydroxyalkylsulfonylaminovou skupinu, oximinoskupinu, fosfátovou skupinu, fosfonovou skupinu, skupinu -R₅, skupinu Rs-alkoxy, R₅-alkyl(alkyl)aminovou skupinu, R₅alkylalkylkarbamoylovou skupinu, R₅-alkylaminovou skupinu, R₅-alkylkarbamoylovou skupinu, R_s-alkylsulfonylovou skupinu, R₅-alkylsulfonylaminovou skupinu, R₅-alkylthioskupinu, R₅heterocyklylkarbonylovou skupinu, aralkýlaminovou skupinu, arylkarboxya1koxykarbonylovou skupinu, arylsulfonylaminoalkylaminovou skupinu, he t e roa ry1su1fonylami novou skupinu, heterocyklylovou skupinu, heterocyklylaminoalky1ami novou skupinu, heterocyklylsulfonylaminovou skupinu, skupinu, thiokarbamoylovou skupinu, skupinu;

substituovanou substituovanou substituovanou substituovanou substituovanou substituovanou substituovanou sulfoxyacylaminovou trifluormethylovou

R₄ je vybrán ze skupiny obsahující vodík, alkyl mající 1 až 4 atomy uhlíku, skupinu Ci_₄ - alkyl-CO₂H, a fenyl, kde C_x-₄alkylová skupina, skupina Ci-₄-alkyl-CO₂H, a fenylová skupina jsou buď nesubstituované nebo funkcionalizované s jedním až třemi substituenty vybranými ze skupiny obsahující halogen, skupinu -OH, skupinu -OMe, aminoskupinu, nitroskupinu, benzylovou skupinu a benzyl funkcionalizovaný s jedním až třemi substituenty vybranými ze skupiny obsahující halogen, skupinu -OH, skupinu -OMe, skupinu -NH₂ a skupinu -N0₂;

«9 99 99 99 99

999· 9*9 99 9

99 · · 9999 9 9 9

9 999 9 · 9 9999 9

9 999 999*9

Μ 9999

R₅ je vybrán ze skupiny obsahující skupinu - (CR^XR₂) _nCOOH, skupinu -C(CF₃)₂OH, skupinu -CONHNHSO₂CF₃, skupinu -CONHOR₄, skupinu -CONHSO₂R₄, skupinu -CONHSO₂NHR₄, skupinu

-C (OH) R₄PO₃H₂, skupinu -NHCOCF₃, skupinu NHCONHSO₂R_4/ skupinu -NHPO₃H₂, skupinu -NHSO₂R₄, skupinu -NHSO₂NHCOR₄, skupinu -OPO₃H₂, skupinu -OSO₃H, skupinu -PO(OH)R₄, skupinu -PO₃H₂, skupinu -SO3H, skupinu -SO₂NHR₄, skupinu -SO₃NHCOR₄, skupinu - SO₃NHCONHCO₂R₄, a následující:

η = 0, 1, 2, nebo 3;

A je vybrán ze skupiny obsahující skupinu -CH=CH-, skupinu - (CH) _m-(CH)_m, skupinu CH=CH-CH₂ a skupinu -CH₂-CH=CH; m = 1 nebo 2;

X je 0 nebo S;

Z je vybrán ze skupiny obsahující jednoduchou vazbu, skupinu -0-, skupinu -(CH₂)_n-, skupinu -O(CH₂)i_₂-, skupinu -CH₂OCH₂-, skupinu -(ΟΗ₂)χ.₂Ο-, a

R₆ je vybrán ze skupiny obsahující vodík, alkylovou skupinu, acylovou skupinu, alkylsulfonylovou skupinu, aralkylovou skupinu, substituovanou aralkylovou skupinu, substituovanou alkylovou skupinu a heterocyklylovou skupinu; a

R? je vybrán ze skupiny obsahující:

a) vodík;

4 4 *4 4 4 <4 4 4 • 444 4 4 4 4 4 4 • 4 4 · 4 ··· 4 4 4 • 4 · 4 · 4 4 · · « · φ • 4 4 4 4 4 4 4 4 ··'·< 44 444 «φ 4«

44 44*4

b) alkyl, alkenyl mající ne méně než 3 atomy uhlíku nebo alkynyl mající ne méně než 3 atomy uhlíku, kde zmíněný alkyl, alkenyl nebo alkynyl je buď nesubstituovaný nebo je funkcionalizovaný s jedním nebo více substituenty vybranými ze skupiny obsahující hydroxyskupinu, alkoxyskupinu, aminoskupinu, alkylaminoskupinu, dialkylaminoskupinu, heterocyklylovou skupinu, acylaminovou skupinu, alkylsulfonylaminovou skupinu a heterocyklylkarbonylaminovou skupinu; a

c) aryl nebo substituovaný aryl;

d) alkylaryl nebo alkyl substituovaný aryl.

9. Sloučenina podle nároku 8, kde sloučenina je ve formě vybrané ze skupiny obsahující achirální sloučeninu, racemát, opticky aktivní sloučeninu, čistý diastereoizomer, směs diastereoizomerů a farmakologicky přijatelnou adiční sůl.
10. Sloučenina podle nároku 8, kde R_x a R₂ jsou navzájem nezávisle vybrány ze skupiny obsahující

a) alkylovou, alkenylovou nebo alkynylovou skupinu, kde zmíněná alkylová, alkenylová nebo alkynylová skupina jsou buď nesubstituované nebo jsou funkcionalizované s jedním nebo více substituenty vybranými ze skupiny obsahující hydroxyskupinu, alkoxyskupinu, aminoskupinu, alkylaminoskupinu, dialkylaminoskupinu, heterocyklylovou skupinu, acylaminovou skupinu, alkylsulfonylamino skupinu a heterocyklylkarbonylamino skupinu; a

b) aryl nebo substituovaný aryl.
11. Sloučenina podle nároku 10, kde alespoň jeden z R_x a R₂je alkyl.

*9 999«

9« 999 ·

99 94 • 4 4

4 9 4 9 » »9» 9 9 · • 999 9 9 9 «··· 9 • 999 999··

9999 «9 ·· 999 99 99
12. Sloučenina podle nároku 8, kde A je skupina - (CH)_w-(CH)_m.
13. Sloučenina podle nároku 8, kde R₇ je alkyl.
14. Sloučenina podle nároku 8, kde Z je jednoduchá vazba.
15. Sloučenina podle nároků 1 až 8, kde sloučenina je vybrána ze skupiny obsahující sloučeniny 1 až 32 z Tabulky 1.
16. Sloučeniny podle nároku 15, kde sloučenina je vybrána ze skupiny obsahující:

2- (4-Hydroxy-bicyklo[2.2.2]okt-l-yl)-7-isopropyl-4-propyl1,4,6,7-tetrahydro-l,3,4,5a,8-pentaaza-as-indacen-5-on (sloučenina 1);

7-Ethyl-2 -(4-hydroxy-bicyklo[2.2.2]okt-l-yl)-4-propyl1,4,6,7-tetrahydro-l,3,4,5a,8-pentaaza-as-indacen-5-on (sloučenina 2);

3- [4-(7-Ethyl-5-oxo-4-propyl-4,5,6,7-tetrahydro-lH1,3,4,5a,8-pentaaza-as-indacen-2-yl)-bicyklo[2.2.2]okt-l-yl]propionová kyselina (sloučenina 3);

2 -(4-Hydroxy-bicyklo[2.2.2]okt-l-yl)-7-methyl-4-propyl1,4,6,7-tetrahydro-l,3,4,5a,8-pentaaza-as-indacen-5-on (sloučenina 4); a

3-[4-(7-Isopropyl-5-OXO-4-propyl-4,5,6,7-tetrahydro-1H1,3,4,5a,8-pentaaza-as-indacen-2-yl)-bicyklo[2.2.2]okt-l-yl]propionová kyselina (sloučenina 5) .
17. Farmaceutický přípravek, vyznačující se tím, že obsahuje farmaceuticky účinné množství sloučeniny podle nároků 1 až 8 a farmaceuticky přijatelný nosič, adjuvans nebo vehikulum.

re ····

44 ·· 44 ··** • « ♦ · ··· 4 · · • · 4 « »»·* * ♦ * • »44444 · 4 · · · • 444 * 4 « 4 «

4444 44 44 444 4« 44
18. Farmaceutický přípravek podle nároku 17, vyznačující se tím, že dále obsahuje neadenosinové modifikační činidlo.
19. Farmaceutický přípravek podle nároku 17, vyznačující se tím, že je přípravek formulován pro orální, intravenosní, intramuskulární nebo subkutánní podávání.
20. Použití sloučeniny podle nároků 1 až 16 pro výrobu medikamentů pro blokování Αχ adenosinových receptorů u pacientů.
21. Použití sloučeniny podle nároků 1 až 16 pro výrobu medikamentů pro léčení nebo prevenci nemoci nebo poruchy u pacientů, kde aktivace Al adenosinových receptorů je příčinnou této nemoci nebo poruchy.
22. Způsob léčení pacientů vykazujících známky nebo symptomy nemoci nebo poruchy, kde aktivace Al adenosinového receptoru je příčinnou této nemoci nebo poruchy, vyznačuj ící se t í m, že se zmíněnému pacientovi podává farmaceuticky účinné množství farmaceutického přípravku podle nároku 17.
23. Způsob podle nároku 22,vyznačuj ící se tím, že nemoc nebo porucha je vybrána ze skupiny obsahující systémovou hypertenzi, renální selhání, diabetes, astma, edematické podmínky, kongestivní srdeční selhání a renální dysfunkci.
24. Způsob přípravy sloučeniny podle nároků 1 až 8, vyznačující se tím, že zahrnuje kroky:

44 99

4 9 9 4

4 4 4

9 994 •r «♦·· • · * · 0*

49 4 49 9

4494 44

a) alkylace thioketonu za vzniku thioetheru;

b) reakce thioetheru se substituovaným aminoalkoholem za vzniku alkoholického intermediátu; a

c) cyklizace alkoholického intermediátu za vzniku cyklizovaného produktu.
25. Způsob přípravy podle nároku 24, vyznačuj ící se t í m, že zahrnuje krok: a) převedení cyklizovaného produktu na derivát karboxylové kyseliny.
26. Způsob přípravy podle nároku 25, vyznačuj ící se t i m, že zahrnuje kroky:

a) kapling diaminouracilu s monomethylesterem kyseliny bicyklo[2.2.2]oktan-1,4-dikarboxylové za vzniku kyseliny;

b) redukce kyseliny na odpovídající alkohol;

c) oxidace alkoholu na aldehyd;

d) kapling aldehydu s methyl(trifenylfosforanyliden)acetátem za vzniku kaplovaného produktu;

e) převedení kaplovaného produktu na thioketon.
27. Způsob přípravy podle nároku 25, vyznačuj ící se t í m, že zahrnuje kroky:

a) kapling diaminouracilu s monomethylesterem kyseliny bicyklo[2.2.2]oktan-1,4-dikarboxylove za vzniku kyseliny;

b) esterifikace kyseliny na odpovídající ester;

c) převedení esteru na thioketon.
28. Způsob přípravy podle nároku 24, vyznačuj ící se t í m, že zahrnuje kroky:

a) nitrosace 6-amino-l-propyl-lH-pyrimidin-2,4-dionu za vzniku nitrosointermediátu;

·· *·*· «· ·· • · · · • · · • ·*·

65 ···· ·« ·· ·«·· « · · · · · • ···♦ · · · * · · ···· · • · · · · · · ·· ··· «· ··

b) redukce nitrosointermediátu za vzniku odpovídajícího diaminouracilu;

c) převedení diminouracilu na aminovou sůl;

d) kapling aminové soli s 4-hydroxy-bicyklo[2.2.2]oktan-1karboxylovou kyselinou za vzniku kaplovaného produktu; a

e) převedení kaplovaného produktu na thioketon.