SK6552003A3 - Condensed purine derivatives as A1 adenosine receptor antagonists and process for the preparation thereof - Google Patents

Description

Kondenzované purínové deriváty, ich použitie ako antagonisty A_x adenozinového receptora a spôsob ich prípravy

Oblasť techniky

Tento vynález sa týka medicinálnej chémie a farmakológie. Konkrétnejšie sa vynález týka antagonistov adenozínových receptorov, farmaceutických kompozícií obsahujúcich tieto zlúčeniny a spôsobov výroby a použitia týchto zlúčenín pri liečení chorôb.

Doterajší stav techniky

Táto prihláška nárokuje výhodu US provizórnej prihlášky č. 60/250 658 podanej 1. decembra 2000, ktorá je tu zahrnutá ako odkaz.

Adenozín je všadeprítomný biochemický messenger. Adenozín sa viaže (a tým ich aj aktivuje) na receptory spojené s G-proteínom sedemkrát prechádzajúce cez membránu, čím vyvoláva celý rad fyziologických odoziev. Adenozínové receptory sú rozdelené do štyroch známych subtypov, t. j. Ai, A_2a, A₂b a A₃. Tieto receptorové subtypy sprostredkovávajú rôzne a často aj protichodné efekty. Aktivácia adenozinového Ai receptora napríklad vyvoláva zvýšenú renálnu vaskulárnu rezistenciu, zatiaľ čo aktivácia adenozinového A_2a receptora vyvoláva zníženie renálnej vaskulárnej rezistencie. '

V prípade väčšiny cicavčích orgánových systémov vedie obdobie metabolického stresu k významnému zvýšeniu koncentrácie adenozínu v tkanivách. Srdce, napríklad produkuje a uvoľňuje adenozín na sprostredkovanie adaptívnej odozvy na stres, ako napríklad zníženie rýchlosti srdcového tepu a koronárnej vazodilatácie. Podobne koncentrácia adenozínu v obličkách sa zvyšuje ako odozva na hypoxiu, metabolický stres a mnohé nefrotoxické zlúčeniny. Aj obličky produkujú adenozín konštitutívne. Obličky ad2 justujú množstvo konštitutívne vyrábaného adenozínu s cieľom regulovať glomerulárnu filtráciu a reabsorpciu elektrolytu. Ak ide o riadenie glomerulárnej filtrácie, aktivácia Ai receptorov vedie ku konštrikcii aferentných arteriol, kým aktivácia A_2a receptorov vedie k dilatácii eferentných arteriol. Aktivácia A_2a receptorov vyvoláva vazodilatačné efekty v aferentnej arteriole. Celkovo sa účinkom aktivácie týchto glomerulárnych adenozínových receptorov redukuje rýchlosť glomerulárnej filtrácie. Okrem toho sú Ai adenozínové receptory umiestnené na proximálnych a distálnych miestach mikrotubulov. Aktivácia týchto receptorov stimuluje reabsorpciu sodíka z tubulárneho lumenu. Blokovanie účinkov adenozínu na tieto receptory teda vyvoláva zvýšenie rýchlosti glomerulárne j filtrácie a zvýšenie exkrécie sodíka.

Podstata vynálezu

Vynález je založený na zistení, že zlúčeniny všeobecného vzorca I a II sú účinnými a selektívnymi inhibítormi určitých subtypov adenozínových receptorov. Na základe tohto zistenia vynález opisuje adenozínové antagonisty užitočné pri prevencii a/alebo liečení mnohých ochorení, vrátane srdcových porúch a porúch obehového systému, degeneratívnych porúch centrálneho nervového systému, respiračných porúch a mnohých chorôb, v prípade ktorých je vhodné diuretické liečenie. Vo všeobecnosti sa vynález vzťahuje na vysoko účinné a selektívne antagonisty adenozínového Ai receptora.

Vynález opisuje zlúčeniny všeobecného vzorca I alebo II

(I)

Z----R³ (II)

kde

R¹ a R² sú navzájom nezávisle vybrané zo skupiny obsahujúcej:

a) atóm vodíka;

b) alkylovú skupinu, alkenylovú skupinu alebo alkinylovú skupinu, kde uvedená alkylová skupina, alkenylová skupina alebo alkinylová skupina sú buď nesubstituované alebo sú substituované jedným alebo viacerými substituentami vybranými zo skupiny obsahujúcej hydroxyskupinu, alkoxyskupinu, aminoskupinu, alkylaminoskupinu, dialkylaminoskupinu, heterocyklylovú skupinu, acylaminoskupinu, alkylsulfonylaminoskupinu a heterocyklylkarbonylaminoskupinu; a

c) arylovú skupinu alebo substituovanú arylovú skupinu;

R³ je vybraný zo skupiny obsahujúcej:

a) bicyklickú, tricyklickú alebo pentacyklickú skupinu vybranú zo skupiny obsahujúcej: '

kde bicyklická, tricyklická alebo pentacyklická skupina je buď nesubstituované alebo je substituovaná jedným alebo viacerými substituentami vybranými zo skupiny obsahujúcej:

(i) alkylovú skupinu, alkenylovú skupinu alebo alkinylovú skupinu, kde každá alkylová skupina, alkenylová skupina alebo alkinylová skupina je buď nesubstituované alebo je substituovaná jedným alebo viacerými substituentami vybranými zo skupiny obsahujúcej (alkoxykarbonyl)aralkylkarbamoylovú skupinu, (amino) (R^{(i) * * * 5}) -acylhydrazinylkarbonylovú skupinu, (amino) (R⁵) acyloxykarboxylovú skupinu, (hydroxy)(karboalkoxy)alkylkarbamoylovú skupinu, acylaminoalkylaminoskupinu, acyloxyskupinu, aldehydickú skupinu, alkenyloxyskupinu, alkenylaminoskupinu, alkenylsulfonylaminosku5 pinu, alkoxyskupinu, alkoxykarbonylovú skupinu, alkoxykarbonylalkylaminoskupinu, alkoxykarbonylaminoskupinu, alkoxykarbonylaminoacyloxyskupinu, alkoxykarbonylaminoalkylaminskupinu, alkylaminoskupinu, alkylaminoalkylaminoskupinu, alkylkarbamoylovú skupinu, alkylfosfónovú skupinu, alkylsulfonylaminoskupinu, alkylsulfonyloxyskupinu, aminoskupinu, aminoacyloxyskupinu, aminoalkylaralkylkarbamoylovú skupinu, aminoalkylkarbamoylovú skupinu, aminoalkylheterocyklylalkylkarbamoylovú skupinu, aminocykloalkylalkylcykloalkylkarbamoylovú skupinu, aminocykloalkylkarbamoylovú skupinu, aralkoxykarbonylovú skupinu, aralkoxykarbonylaminoskupinu, arylheterocyklylovú skupinu, aryloxyskupinu, arylsulfonylaminoskupinu, arylsulfonyloxyskupinu, karbamoylovú skupinu, karbonylovú skupinu, kyanoskupinu, kyanoalkylkarbamoylovú skupinu, cykloalkylaminoskupinu, dialkylaminoskupinu, dialkylaminoalkylaminoskupinu, dialkylaminoalkylkarbamoylovú skupinu, dialkylfosfónovú skupinu, haloalkylsulfonylaminoskupinu, atóm halogénu, heterocyklylovú skupinu, heterocyklylalkylaminoskupinu, heterocyklylkarbamoylovú skupinu, hydroxyskupinu, hydroxyalkylsulfonylaminoskupinu, oximinoskupinu, fosfátovú skupinu, fosfónovú skupinu, skupinu -R⁵, skupinu R⁵-alkoxy, R⁵-alkyl(alkyl)-aminoskupinu, R⁵-alkylalkylkarbamoylovú skupinu, R⁵-alkylaminoskupinu, R⁵-alkylkarbamoylovú skupinu, R⁵-alkylsulfonylovú skupinu, R⁵-alkylsulfonylaminoskupinu, R⁵-alkyltioskupinu, R⁵-heterocyklylkarbonylovú skupinu, substituovanú aralkylaminoskupinu, substituovanú arylkarboxyalkoxykarbonylovú skupinu, substituovanú arylsulfonylaminoalkylaminoskupinu, substituovanú heteroarylsulfonylaminoskupinu, substituovanú heterocyklylovú skupinu, substituovanú heterocyklylaminoalkylaminoskupinu, substituovanú heterocyklylsulfonylaminoskupinu, sulfoxyacylaminoskupinu, tiokarbamoylovú skupinu, trifluórmetylovú skupinu; a (ii) (alkoxykarbonyl)aralkylkarbamoylovú skupinu, (amino)(R⁵)-acylhydrazinylkarbonylovú skupinu, (amino) (R⁵)acyloxykarboxylovú skupinu, (hydroxy)(karboalkoxy)alkylkarbamoylovú skupinu, acylaminoalkylaminoskupinu, acyloxyskupinu, aldehydickú skupinu, alkenyloxyskupinu, alkenylaminoskupinu, alkenylsulfonylaminoskupinu, alkoxyskupinu, alkoxykarbonylovú skupinu, alkoxykarbonylalkylaminoskupinu, alkoxykarbonylaminoskupinu, alkoxykarbonylaminoacyloxyskupinu, alkoxykarbonylaminoalkylaminoskupinu, alkylaminoskupinu, alkylaminoalkylaminoskupinu, alkylkarbamoylovú skupinu, alkylfosfónovú skupinu, alkylsulfonylaminoskupinu, alkylsulfonyloxyskupinu, aminoskupinu, aminoacyloxyskupinu, aminoalkylaralkylkarbamoylovú skupinu, aminoalkylkarbamoylovú skupinu, aminoalkylheterocyklylalkylkarbamoylovú skupinu, aminocykloalkylalkylcykloalkylkarbamoylovú skupinu, aminocykloalkylkarbamoylovú skupinu, aralkoxykarbonylovú skupinu, aralkoxykarbonylaminoskupinu, arylheterocyklylovú skupinu, aryloxyskupinu, arylsulfonylaminoskupinu, arylsulfonyloxyskupinu, karbamoylovú skupinu, karbonylovú skupinu, kyanoskupinu, kyanoalkylkarbamoylovú skupinu, cykloalkylaminoskupinu, dialkylaminoskupinu, dialkylaminoalkylaminoskupinu, dialkylaminoalkylkarbamoylovú skupinu, dialkylfosfónovú skupinu, haloalkylsulfonylaminoskupinu, atóm halogénu, heterocyklylovú skupinu, heterocyklylalkylaminoskupinu, heterocyklylkarbamoylovú skupinu, hydroxyskupinu, hydroxyalkylsulfonylaminoskupinu, oximinoskupinu, fosfátovú skupinu, fosfónovú skupinu, skupinu -R⁵, R⁵-alkoxyskupinu, R⁵-alkyl(alkyl)aminoskupinu, R⁵-alkylalkylkarbamoylovú skupinu, R⁵-alkylaminoskupinu, R⁵-alkylkarbamoylovú skupinu, R⁵-alkylsulfonylovú skupinu, R^s-alkylsulfonylaminoskupinu, R⁵-alkyltioskupinu, R⁵-heterocyklylkarbonylovú skupinu, substituovanú aralkylaminoskupinu, substituovanú arylkarboxyalkoxykarbonylovú skupinu, substituovanú arylsulfonylaminoalkylaminoskupinu, substituovanú heteroarylsulfonylaminoskupinu, substituovanú heterocyklylovú skupinu, substituovanú heterocyklylaminoalkylaminoskupinu, substituovanú heterocyklylsulfonylaminoskupinu, sulfoxyacylaminoskupinu, tiokarbamoylovú skupinu, trifluórmetylovú skupinu;

R⁴ je vybraný zo skupiny obsahujúcej atóm vodíka, alkylovú skupinu obsahujúcu 1 až 4 atómy uhlíka, skupinu alkyl-CC^H v alkylovej časti obsahujúcu 1 až 4 atómy uhlíka a fenylovú skupinu, kde uvedená alkylová skupina, skupina alkyl-CO2H a fenylová skupina sú buď nesubstituované alebo substituované jedným až tromi substituentami vybranými zo skupiny obsahujúcej atóm halogénu, hydroxyskupinu, metoxyskupinu, aminoskupinu, nitroskupinu, benzylovú skupinu a benzylovú skupinu substituovanú jedným až tromi substituentami vybranými zo skupiny obsahujúcej atóm halogénu, hydroxyskupinu, metoxyskupinu, aminoskupinu a nitroskupinu;

R⁵ je vybraný zo skupiny obsahujúcej skupinu - (CR‘R‘) nCOOH, skupinu -C(CF3)2OH, skupinu -CONHNHSO2CF3, skupinu -CONHOR⁴, skupinu -CONHSO2R⁴, skupinu -CONHSO2NHR⁴, skupinu -C (OH) R⁴PO3H₂, skupinu -NHCOCF3, skupinu NHCONHSO₂R⁴, skupinu -NHPO3H2, skupinu NHSO2R⁴, skupinu -NHSO2NHCOR⁴, skupinu -OPO3H2, skupinu -OSO3H, skupinu -PO (OH) R⁴, skupinu -PO3H2, skupinu -SO3H, skupinu -SO₂NHR⁴, skupinu -SO3NHCOR⁴, skupinu -SO3NHCONHCO2R⁴ a nasledovné skupiny:

je 0, 1, 2, alebo 3;

je vybraný zo skupiny obsahujúcej skupinu -CH=CH-, skupinu skupinu -CH=CH-CH₂- a skupinu -CH₂-CH=CH~;

m je 1 alebo 2;

je atóm kyslíka alebo atóm síry;

-0-, skupinu — (CH₂)n^—λ skupinu -O(CH₂)i-2~, skupinu -CH2OCH2-,

Z je vybraný zo skupiny obsahujúcej jednoduchú väzbu, skupinu skupinu -(CH₂)i_₂O-, skupinu -CH=CHCH₂-, skupinu -CH=CH- a skupinu -CH₂CH=CH-;

R⁶ je vybraný zo skupiny obsahujúcej atóm vodíka, alkylovú skupinu, acylovú skupinu, alkylsulfonylovú skupinu, aralkylovú skupinu, substituovanou aralkylovú skupinu, substituovanou alkylovú skupinu a heterocyklylovú skupinu; a

R⁷ je vybraný zo skupiny obsahujúcej:

a) atóm vodíka;

b) alkylovú skupinu, alkenylovú skupinu obsahujúcu nie menej než 3 atómy uhlíka alebo alkinylovú skupinu obsahujúcu nie menej než 3 atómy uhlíka, kde uvedená alkylová, alkenylová alebo alkinylová skupina je buď nesubstituovaná alebo je substituovaná jedným alebo viacerými substituentami vybranými zo skupiny obsahujúcej hydroxyskupinu, alkoxyskupinu, aminoskupinu, alkylaminoskupinu, dialkylaminoskupinu, heterocyklylovú skupinu, acylaminoskupinu, alkylsulfonylaminoskupinu a heterocyklylkarbonylaminoskupinu;

c) arylovú skupinu alebo substituovanú arylovú skupinu; a

d) alkylarylovú skupinu alebo alkylovou skupinou substituovanú arylovú skupinu.

Zlúčeniny všeobecného vzorca I alebo II môžu byť prípadne vo forme achirálnej zlúčeniny, racemátu, opticky aktívnej zlúčeniny, čistého diastereoizoméru, zmesi diastereoizomérov alebo farmakologicky prijatelnej adičnej soli. V niektorých výhodných uskutočneniach tohto vynálezu sú zlúčeniny podía tohto vynálezu zlúčeninami všeobecného vzorca I alebo II, kde ani R¹ ani R² nie sú atóm vodíka, t. j. každý z R¹ a R² sú navzájom nezávisle vybrané zo skupiny obsahujúcej:

a) alkylovú skupinu, alkenylovú skupinu alebo alkinylovú skupinu, kde uvedená alkylová skupina, alkenylová skupina alebo al9 kinylová skupina je buď nesubstituovaná alebo substituovaná jedným alebo viacerými substituentami vybranými zo skupiny obsahujúcej hydroxyskupinu, alkoxyskupinu, aminoskupinu, alkylaminoskupinu, dialkylaminoskupinu, heterocyklylovú skupinu, acylaminoskupinu, alkylsulfonylaminoskupinu a heterocyklylkarbonylaminoskupinu; a

b) arylovú skupinu alebo substituovanú arylovú skupinu.

Výhodnejšie aspoň jeden z R¹ a R² je alkylová skupina. V ďalších výhodných uskutočneniach A je skupina -(CH)_m-(CH)_m-.

V ďalších výhodných uskutočneniach R⁷ je alkylová skupina a Z je výhodne jednoduchá väzba.

Výhodnými zlúčeninami podlá tohto vynálezu sú:

2-(4-Hydroxybicyklo[2.2.2]okt-l-yl)-7-izopropyl-4-propyl-1,4,6,7-tetrahydro-l,3,4,5a,8-pentaaza-as-indacen-5-ón (zlúčenina 1);

7-Etyl-2-(4-hydroxybicyklo[2.2.2]okt-l-yl)-4-propyl-l,4,6,7-tetrahydro-1,3,4,5a,8-pentaaza-as-indacen-5-ón (zlúčenina 2);

Kyselina 3-[4-(7-etyl-5-oxo-4-propyl-4,5,6,7-tetrahydro-lH-1,3,4,5a,8-pentaaza-as-indacen-2-yl)bicyklo[2.2.2]okt-l-yl] -propiónová (zlúčenina 3);

2-(4-Hydroxybicyklo[2.2.2]okt-l-yl)-7-metyl-4-propyl-l,4,6,7-tetrahydro-1,3,4,5a,8-pentaaza-as-indacen-5-ón (zlúčenina 4); a

Kyselina 3-[4-(7-izopropyl-5-oxo-4-propyl-4,5,6,7-tetrahydro-lH-1,3,4,5a,8-pentaaza-as-indacen-2-yl)bicyklo[2.2.2]okt-l-yl] -propiónová (zlúčenina 5).

Zlúčeniny podlá tohto vynálezu sa môžu modifikovať, aby sa zlepšili požadované vlastnosti. Tieto modifikácie sú známe v odbore a zahŕňajú také modifikácie, ktoré zvyšujú biologickú penetráciu do daného biologického systému (napríklad krv, lymfa10 tický systém, centrálna nervová sústava), zvyšujú orálnu dostupnosť, zvyšujú rozpustnosť, ktorá by dovolila podávanie pomocou injekcii, menia metabolizmus a/alebo menia rýchlosť vylučovania. Príklady týchto modifikácií zahŕňajú (výpočet nie je limitujúci) esterifikáciu s polyetylénglykolmi, derivatizáciu s pivolátmi alebo substituentami mastných kyselín, prevedenie na karbamáty, hydroxyláciu aromatických kruhov a substitúciu heteroatómu v aromatických kruhoch.

Vynález sa týka aj farmaceutických kompozícií zahŕňajúcich ľubovoľnú už opísanú zlúčeninu, samotnú alebo v kombinácii s vhodným excipientom.

Vynález sa týka aj spôsobu liečenia pacientov vyznačujúcich sa znakmi alebo symptómami choroby alebo poruchy, pričom v tejto chorobe alebo poruche zohráva príčinnú úlohu aktivácia adenozínových receptorov. Spôsob zahŕňa podávanie účinného množstva ľubovoľnej z už uvedených zlúčenín pacientom. Chorobou alebo poruchou môže byť napríklad systémová hypertenzia, renálne zlyhanie, diabetes, astma, edémové stavy, kongestívne zlyhanie srdca alebo renálna dysfunkcia (napríklad renálna dysfunkcia vyskytujúca sa ako vedľajší účinok diuretík používaných pri liečení kongestívneho zlyhania srdca alebo renálna toxiciua vyskytujúca sa ako vedľajší efekt pri liečení pomocou chemoterapeutických činidiel) .

Zlúčeniny podľa tohto vynálezu poskytujú nasledovné výhody. Napríklad:

(1) môžu sa použiť v nízkych dávkach, aby sa minimalizovala pravdepodobnosť výskytu vedľajších vplyvov, a (2) môžu sa zabudovať do mnohých dávkových foriem, vrátane (výpočet nie je úplný) piluliek, tabliet, kapsúl, aerosólov, čapíkov, kvapalných formulácií na trávenie alebo injekcie, diétne doplnky alebo miestne prípravky. Okrem aplikácií v humánnej medicíne sa môžu zlúčeniny podľa tohto vynálezu použiť vo vete- rinárnom liečení zvierat. V niektorých uskutočneniach je farmaceutická kompozícia formulovaná na orálne, intravenózne, intramuskulárne alebo subkutánne podávanie.

Tento vynález sa týka aj spôsobov prípravy už uvedených zlúčenín zahŕňajúcich nasledovné kroky:

a) alkylácia tioketónu, pričom vznikne tioéter;

b) reakcia tioéteru so substituovaným aminoalkoholom, pričom vznikne alkoholový intermediát; a

c) cyklizácia alkoholového intermediátu, pričom vznikne cyklizovaný produkt.

V niektorých uskutočneniach uvedený spôsob zahŕňa nasledovný krok:

a) prevedenie cyklizovaného produktu na derivát karboxylovej kyseliny.

V niektorých uskutočneniach spôsob zahŕňa nasledovné kroky:

a) kapling diaminouracilu s monometylesterom kyseliny bicyklo-[2.2.2]oktán-1,4-dikarboxylovej, pričom vznikne kyselina;

b) redukcia kyseliny na zodpovedajúci alkohol;

c) oxidácia alkoholu na aldehyd;

d) kapling aldehydu s metyl(trifenylfosforanylidén)acetátom, pričom vznikne kaplovaný produkt;

e) prevedenie kaplovaného produktu na tioketón;

f) alkylácia tioketónu, pričom vznikne tioéter;

g) reakcia tioéteru so substituovaným aminoalkoholom, pričom vznikne alkoholový intermediát;

h) cyklizácia alkoholového intermediátu, pričom vznikne pro- dukt; a

i) prevedenie cyklizovaného produktu na derivát karboxylovej kyseliny.

V niektorých uskutočneniach spôsob zahŕňa nasledovné kroky:

a) kapling diaminouracilu s monometylesterom kyseliny bicyklo-

-[2.2.2]oktán-1,4-dikarboxylovej, pričom vznikne kyselina;

b) esterifikácia kyseliny na zodpovedajúci ester;

c) prevedenie esteru na tioketón;

d) alkylácia tioketónu, pričom vznikne tioéter;

e) reakcia tioéteru so substituovaným aminoalkoholom na alkoholový intermediát;

f) cyklizácia alkoholového intermediátu, pričom vznikne produkt; a

g) prevedenie cyklizovaného produktu na derivát karboxylovej kyseliny.

V niektorých uskutočneniach spôsob zahŕňa nasledovné kroky:

a) nitrozácia 6-amino-l-propyl-l#-pyrimidin-2,4-diónu, pričom vznikne nitrózovaný intermediát;

b) redukcia nitrózovaného intermediátu, pričom vznikne zodpovedajúci diaminouracil;

c) prevedenie diaminouracilu na aminovú sol;

d) kapling aminovej soli s kyselinou 4-hydroxybicyklo[2.2.2]-

-oktán-l-karboxylovou, pričom vznikne kaplovaný produkt;

e) prevedenie kaplovaného produktu na tioketón;

f) alkylácia tioketónu, pričom vznikne tioéter;

g) reakcia tioéteru so substituovaným aminoalkoholom, pričom vznikne alkoholový intermediát; a

h) cyklizácia alkoholového intermediátu, pričom vznikne cyklizovaný produkt.

Ďalšie rysy a výhody tohto vynálezu budú zrejmé z nasledovného detailného opisu a z nárokov.

Detailný opis vynálezu

Ak sa neuvádza inak, všetky technické a vedecké termíny použité vo vynáleze majú rovnaký význam, ako sa obvykle vníma odborníkmi v odbore, ktorým je tento vynález určený. Hoci sa pri uskutočňovaní a/alebo testovaní tohto vynálezu môžu použiť metódy a materiály podobné alebo ekvivalentné tým, ktoré sa tu opisujú, vhodné materiály a spôsoby sú opísané ďalej. Všetky tu uvedené publikácie, patentové prihlášky, patenty a ďalšie odkazy sú tu zahrnuté celé ako odkazy. Okrem toho, materiály, spôsoby a príklady sú iba ilustratívne a nezamýšľajú sa ako limitujúce pre tento vynález.

V tomto vynáleze termín „zahŕňa alebo jeho varianty, ako „obsahuje je potrebné chápať tak, že predpokladá zahrnutie uvedeného celku alebo skupiny celkov, nevylučuje však ľubovoľný iný celok alebo skupinu celkov.

Termín „alkenylová skupina označuje alifatickú uhlíkovú, skupinu, ktorá obsahuje aspoň jednu dvojitú väzbu. Alkenylová skupina môže byť rovná alebo rozvetvená a môže obsahovať napríklad od 3 do 6 atómov uhlíka v reťazci a jednu alebo dve dvojité väzby. Príklady alkenylových skupín zahŕňajú (výpočet nie je limitujúci) alylovú skupinu a izoprenylovú skupinu.

Termín „alkinylová skupina označuje alifatickú uhlíkovú skupinu, ktorá obsahuje aspoň jednu trojitú väzbu. Alkinylová skupina môže byť rovná alebo rozvetvená a môže obsahovať napri14 klad od 3 do 6 atómov uhlíka v reťazci a jednu alebo dve trojité väzby. Príklady alkinylových skupín zahŕňajú (výpočet nie je limitujúci) propargylovú skupinu a butinylovú skupinu.

„Arylová skupina je fenylová alebo naftylová skupina alebo ich derivát. „Substituovaná arylová skupina je arylová skupina, ktorá je substituovaná jedným alebo viacerými substituentami, ako je alkylová skupina, alkoxyskupina, aminoskupina, nitroskupina, karboxylová skupina, karboalkoxyskupina, kyanoskupina, alkylaminoskupina, dialkylaminoskupina, atóm halogénu, hydroxyskupina, hydroxyalkylová skupina, merkaptoskupina, alkylmerkaptoskupina, trihaloalkylová skupina, karboxyalkylová skupina, sulfoxyskupina alebo karbamoylová skupina.

„Aralkylová skupina označuje alkylovú skupinu, ktorá je substituovaná arylovou skupinou. Príkladom aralkylovej skupiny je benzylová skupina.

„Cykloalkylová skupina je alifatický kruh, ktorý obsahuje napríklad 3 až 8 atómov uhlíka. Príklady cykloalkylových skupín zahŕňajú cyklopropylovú skupinu a cyklohexylovú skupinu.

„Acylová skupina je rovná alebo rozvetvená skupina alkyl-C(=0)- alebo formylová skupina. Príklady acylových skupín zahŕňajú alkanoylové skupiny (obsahujúce napríklad od 1 do 6 atómov uhlíka v alkylovej skupine). Príkladmi acylových skupín sú acetylová skupina a pivaloylová skupina. Acylové skupiny môžu byť substituované alebo nesubstituované.

Termín „karbamoylová skupina označuje skupinu, ktorá má štruktúru H2N-CO2-. „Alkylkarbamoylová skupina a „dialkylkarbamoylová skupina označujú karbamoylové skupiny, v ktorých atóm dusíka má miesto atómu vodíka pripojenú jednu alebo dve alkylové skupiny. Analogicky „arylkarbamoylová skupina a „arylalkylkarbamoylová skupina zahŕňajú arylovú skupinu miesto jedného atómu vodíka prípadne alkylovú skupinu miesto druhého atómu vodíka.

Výraz „karboxylová skupina označuje skupinu -COOH.

Výraz „alkoxyskupina označuje skupinu alkyl-Ο-, kde alkyl sa už opísal.

Výraz „alkoxyalkylová skupina označuje alkylovú skupinu, ktorá sa už opísala, kde je atóm vodíka nahradený alkoxyskupinou, ktorá sa už opísala.

„Atóm halogénu alebo „haloskupina označuje atóm fluóru, atóm chlóru, atóm brómu alebo atóm jódu.

„Heterocyklylová skupina je kruhová štruktúra, ktorá obsahuje 5 až 10 atómov, kde jeden alebo viacero atómov v kruhu je prvkom iným než atóm uhlíka, napríklad atóm dusíka, atóm kyslíka alebo atóm síry. Heterocyklylová skupina môže byť aromatická alebo nearomatická, t. j. môže byť nasýtená alebo môže byť parciálne alebo úplne nenasýtená. Príklady heterocyklylovej skupiny zahŕňajú pyridylovú skupinu, imidazolylovú skupinu, furanylovú skupinu, tienylovú skupinu, tiazolylovú skupinu, tetrahydrofuranylovú skupinu, tetrahydropyranylovú skupinu, morfolinylovú skupinu, tiomorfolinylovú skupinu, indolylovú skupinu, indolinylovú skupinu, izoindolinylovú skupinu, piperidylovú skupinu, pyrimidinylovú skupinu, piperazinylovú skupinu, izoxazolylovú skupinu, izoxazolidinylovú skupinu, tetrazolylovú skupinu a benzimidazolylovú skupinu.

Termín „substituovaná heterocyklylová skupina označuje heterocyklylovú skupinu, kde jeden alebo viacero atómov vodíka je nahradených substituentami, ako sú alkoxyskupina, alkylaminoskupina, dialkylaminoskupina, karbalkoxyskupina, karbamoylová skupina, kyanoskupina, atóm halogénu, trihalometylová skupina, hydroxyskupina, karbonylová skupina, tiokarbonylová skupina, hydroxyalkylová skupina alebo nitroskupina.

Termín „hydroxyalkylová skupina označuje alkylovú skupinu substituovanú hydroxyskupinou.

Termín „sulfamoylová skupina označuje štruktúru -S(O)₂NH₂.

„Alkylsulfamoylová skupina a „dialkylsulfamoylová skupina označujú sulfamoylové skupiny, kde atóm dusíka má pripojenú jednu alebo dve alkylové skupiny miesto atómov vodíka. Analogicky „arylsulfamoylová skupina a „arylalkylsulfamoylová skupina zahŕňajú arylovú skupinu miesto jedného z atómov vodíka prípadne alkylovú skupinu miesto druhého atómu vodíka.

Termín „antagonista označuje molekulu, ktorá sa viaže na receptor bez aktivácie receptora. Táto molekula súťaží s endogénnym ligandom o toto väzbové miesto, a tým znižuje schopnosť endogénneho ligandu stimulovať receptor.

V kontexte tohto vynálezu „selektívny antagonista označuje antagonistu, ktorý sa viaže na konkrétny subtyp adenozinového receptora s vyššou afinitou než na iné adenozínové receptorové subtypy. Antagonisty podlá tohto vynálezu môžu napríklad mať vyššiu afinitu pre Αχ receptor a sú selektívne, pričom majú (a) nanomolárnu väzbovú afinitu pre Αχ receptor, a (b) aspoň 10 x vyššiu, výhodnejšie 50 x vyššiu a najvýhodnejšie aspoň 100 x vyššiu afinitu pre Αχ receptorový subtyp než pre iné receptorové subtypy.

Termín „farmaceutický prijateľné množstvo označuje množstvo účinné pri liečení alebo prevencii podmienok charakterizovaných zvýšenou adenozínovou koncentráciou a/alebo zvýšenou citlivosťou voči adenozínu. V tomto vynáleze termínom „pacient sa označuje cicavec, vrátane ľudí.

„Farmaceutický prijateľný nosič alebo adjuvans označuje netoxický nosič alebo adjuvans, ktorý sa môže podávať živočíchom spoločne so zlúčeninou podľa tohto vynálezu, a ktorý neničí farmaceutickú aktivitu zlúčeniny.

Vo všeobecnosti sa vynález týka účinných a selektívnych an17 tagonistov adenozínových Αχ receptorov. Príklady zlúčenín podľa tohto vynálezu sú opísané v Tabuľke 1. Uvedené zlúčeniny sa vyznačujú hodnotami IC₅₀ proti potkaniemu Αχ receptoru v rozsahu od 7 do asi 1095.

Syntéza adenozínových antagonistov

Zlúčeniny podľa tohto vynálezu sa môžu pripraviť mnohými známymi spôsobmi. Napríklad sa zlúčeniny môžu pripraviť pomocou

spôsobov opísaných v Suzuki, F.	et	al. J. Med.	Chem.,	35,
3581-3583 (1992) a/alebo Shimada		Suzuki, F.	Tetrahedron
Lett., 33, 3151-3154 (1992).
Na prípravu zlúčenín podľa	tohto	vynálezu sú	uvedené	na-
sledovné tri všeobecné schémy.

Všeobecná schéma pre Metódu 1

Všeobecná schéma'pre Metódu 2

Všeobecná schéma pre Metódu 3

Ako je zrejmé odborníkom v odbore, uvedené syntetické schémy nie sú zamýšľané ako vyčerpávajúci zoznam všetkých prostriedkov, pomocou ktorých sa môžu syntetizovať zlúčeniny opísané a náro19 kované v tomto vynáleze. Ďalšie spôsoby budú zrejmé odborníkom v odbore.

Použitie adenozínových antagonistov

Aktivácia subtypu Αχ adenozínového receptora vyvoláva mnohé fyziologické odozvy, vrátane zníženia renálneho krvného toku, zníženia rýchlosti glomerulárnej filtrácie a zvýšenia reabsorpcie sodíka v obličkách. Aktivácia Αχ adenozínového receptora takisto znižuje rýchlosť srdcového tepu, znižuje rýchlosť kondukcie a znižuje kontraktilitu. Tieto a ďalšie efekty aktivácie Αχ adenozínových receptorov v ďalších orgánoch sú normálne regulačné procesy. Tieto efekty sa však stávajú patologickými v prípade mnohých ochorení. Teda Αχ adenozínové receptorové antagonisty majú široké aplikácie tak v prevencii ako aj pri liečení chorôb. Choroby, kde môžu pôsobiť ako prevencia a/alebo ktoré sa môžu liečiť Αχ adenozínovými receptorovými antagonistami zahŕňajú choroby a poruchy, kde aktivácia Αχ adenozínových receptorov zohráva úlohu v patofyziológii. Príklady týchto chorôb a porúch zahŕňajú, výpočet však nie je úplný, kongestívne srdcové zlyhanie, respiračné poruchy (napríklad bronchiálna astma, alergické plúcne ochorenie) a mnohé choroby, pre ktoré je indikované diuretické liečenie (napríklad akútne a chronické obličkové zlyhanie, obličková nedostatočnosť, hypertenzia).

Okrem toho vynález zaisťuje napríklad podávanie vysoko selektívnych a účinných Αχ receptorových antagonistov, napríklad na vyvolanie diuretickej odozvy, keď sa podávajú samotné, a na zosilnenie diuretickej odozvy tradičných diuretík. Okrem toho podávanie Αχ adenozínového receptorového antagonistu s tradičnými diuretikami zmierňuje zníženie rýchlosti glomerulárnej filtrácie vyvolané tradičnými diuretikami. To je užitočné napríklad pri liečení edematických podmienok, ako je kongestívne srdcové zlyhanie a ascites.

Podávanie adenozínových antagonistov

Zlúčeniny sa môžu podávať živočíchom (napríklad cicavcom, ako je človek, primáty, kone, pes, krava, prasa, ovca, koza, mačka, myš, potkan, morča, králik, škrečok, tarbík, fretka, jašterica, plaz alebo vták). Zlúčeniny sa môžu podávať mnohými spôsobmi vhodnými na podávanie farmakologických zlúčenín, vrátane (výpočet nie je úplný) piluliek, tabliet, kapsúl, aerosólov, čapikov, kvapalných formulácií na trávenie alebo na injekcie alebo na použitie ako ušné kvapky, diétne prídavky a miestne prípravky. Zlúčeniny sa môžu podávať orálne, intranasálne, transdermálne, intradermálne, vaginálne, intraanulárne, intraokulárne, bukálne, rektálne, transmukozálne alebo pomocou inhalácie, implantácie (napríklad chirurgicky) alebo intravenózne.

Zlúčeniny sa môžu prípadne podávať v spojení s farmaceutickou kompozíciou nemodifikujúcou adenozín (napríklad v kombinácii s diuretikami nemodifikujúcimi adenozín, ako sa uvádza napríklad v súbežne prejednávanej prihláške PCT/US99/08879 podanej 23. apríla 1999).

Farmaceutické kompozície

Antagonisty Ai adenozínového receptora môžu byť formulované do farmaceutických kompozícií na podávanie živočíchom, vrátane ľudí. Tieto farmaceutické kompozície výhodne zahŕňajú množstvo antagonistu Αχ adenozínového receptora účinné na zníženie vazokonštrikcie alebo na zvýšenie pulmonárnej hemodynamiky a farmaceutický prijateľný nosič.

Farmaceutický prijateľné nosiče použité vo farmaceutických kmpozíciách zahŕňajú napríklad iónomeniče, aluminu, stearát hlinitý, lecitín, sérové proteíny, ako napríklad ľudský sérový albumín, pufrovacie látky, ako sú fosfáty, glycín, kyselina sorbová, sorbát draselný, parciálne glyceridové zmesi nasýtených rastlinných mastných kyselín, voda, soli a elektrolyty, ako napríklad protamín sulfát, hydrogenfosfát sodný, hydrogenfosfát draselný, chlorid sodný, soli zinku, koloidná silika, trisilikát horečnatý, polyvinylpyrolidón, substancie na báze celulózy, polyetylénglykol, karboxymetylcelulóza sodná, polyakryláty, vosky, polyetylén-polyoxypropylén blokové polyméry, polyetylénglykol a lanolín.

Kompozície podľa tohto vynálezu sa môžu podávať parer.terálne, orálne, inhaláciou pomocou sprejov, topicky, rektálr.e, nasálne, bukálne, vaginálne alebo pomocou implantovaných rezervoárov. Termín „parenterálne označuje v tomto vynáleze subkutánne, intravenózne, intramuskulárne, intraartikulárne, intrasyr.oviálne, intrasternálne, intratekálne, intrahepatické, intralezionálne a intrakraniálne injekčné alebo infúzne techniky. Výhodne sa kompozície podávajú orálne, intraperitoneálne alebo intravenózne .

Sterilnými injikovateľnými formami kompozícií podľa tohto vynálezu môžu byť vodné alebo olejové suspenzie. Tieto suspenzie môžu byť formulované použitím techník známych odborníkom v odbore, pričom sa využívajú dispergačné alebo zmáčacie činidlá a suspendačné činidlá. Sterilným injikovateľným prípravkám môže byť aj sterilný injikovateľný roztok alebo suspenzia v netoxickom parenterálne prijateľnom riedidle alebo rozpúšťadle, napríklad roztok v 1,3-butándiole. Medzi prijatelné nosiče a rozpúšťadlá, ktoré sa môžu použiť, patrí voda, Ringerov roztok a izotonický roztok chloridu sodného. Okrem toho sa ako rozpúšťadlá alebo suspenzné médium konvenčné používajú sterilné fixované oleje. Na tento účel sa môže použiť ľubovoľný zmesný fixovaný olej, vrátane syntetických monoglyceridov alebo diglyceridov. Mastné kyseliny, ako je kyselina olejová a jej glyceridové deriváty, sú užitočné pri príprave injekcií, ako napríklad prírodné farmaceutický prijateľné oleje, ako je olivový olej alebo ricínový olej, obzvlášť v ich polyoxyetylovaných verziách. Tieto olejové roztoky alebo suspenzie môžu obsahovať aj alkoholové riedidlá alebo disperganty s dlhým reťazcom, ako napríklad karboxymetylcelulózu alebo podobné dispergačné činidlá, ktoré sa bežne používajú pri formulovaní farmaceutický prijateľných dávkových foriem, vrátane emulzií a suspenzií. Na účely formulova22 nia sa môžu použiť aj ďalšie bežne používané surfaktanty, ako je Tweeny, Spany a ďalšie emulgačné činidlá alebo látky na zvyšovanie biodostupnosti, ktoré sa bežne používajú pri výrobe farmaceutický prijateľných tuhých, kvapalných alebo iných dávkových foriem.

Parenterálne formulácie môžu byť jedna bolusová dávka, infúzia alebo záťažová bolusová dávka nasledovaná udržiavacou dávkou. Tieto kompozície sa môžu podávať jedenkrát denne alebo podľa potreby.

Farmaceutické kompozície podľa tohto vynálezu sa môžu podávať orálne v ľubovoľnej orálne akceptovateľnej dávkovej forme, vrátane kapsúl, tabliet, vodných suspenzií alebo roztokov. V prípade tabliet na orálne podávanie zahŕňajú bežne používané nosiče laktózu a kukuričný škrob. Typicky sa pridávajú aj lubrikačné činidlá, ako je stearát horečnatý. Na orálne podávanie vo forme kapsúl zahŕňajú užitočné riedidlá laktózu a sušený kukuričný škrob. Ak sa požadujú vodné suspenzie na orálne použitie, kombinuje sa aktívna zložka s emulgačným a suspendačným činidlom. Ak je to potrebné, môžu sa pridať niektoré sladidlá, ochucovadlá alebo farbiace činidlá.

Alternatívne sa farmaceutické kompozície podľa tohto vynálezu môžu podávať formou čapíkov na rektálne podávanie. Tieto sa môžu pripraviť zmiešaním činidla s vhodným nedráždivým excipientom, ktorý je tuhý pri teplote miestnosti, avšak kvapalný pri rektálnej teplote, ktorý sa teda topí v rekte a dochádza k uvoľňovaniu lieku. Takéto materiály zahŕňajú kakaové maslo, včelí vosk a polyetylénglykoly.

Farmaceutické kompozície podľa tohto vynálezu sa môžu podávať aj miestne. Topické aplikácia môžu byť účinné vo forme rektálnej čapíkovej formulácie, ako sa už uviedlo, alebo vo forme klystíru. Môžu sa použiť aj topické transdermálne náplasti.

Na topické aplikácie môžu byť farmaceutické kompozície for23 mulované ako vhodná masť obsahujúca aktívnu zložku suspendovanú alebo rozpustenú v jednom alebo viacerých nosičoch. Nosiče na topické podávanie zlúčenín podlá tohto vynálezu zahŕňajú minerálny olej, vazelínový olej, bielu vazelínu, propylénglykol, polyoxyetylén, polyoxypropylén, emulgovaný vosk a vodu. Alternatívne môžu byť farmaceutické kompozície formulované vo vhodných lotiónoch alebo krémoch obsahujúcich aktívne zlúčeniny suspendované alebo rozpustené v jednom alebo viacerých farmaceutický prijateľných nosičoch. Vhodné nosiče zahŕňajú, výpočet však nie je limitujúci, minerálny olej, sorbitan monostearát, polysorbát 60, cetylesterový vosk, cetearylalkohol, 2-oktadodekanol, benzylalkohol a vodu.

Na oftalmické použitie môžu byť farmaceutické kompozície podľa tohto vynálezu formulované ako mikronizované suspenzie v izotonickej, pH adjustovanom sterilnom fyziologickom roztoku, alebo výhodne ako roztoky v izotonickom, pH adjustovanom sterilnom fyziologickom roztoku buď s konzervačnými prostriedkami alebo bez nich, ako je benzylalkóniumchlorid. Alternatívne na oftalmické použitie môžu byť farmaceutické kompozície formulované v mastiach, ako je vazelína.

Farmaceutické kompozície podľa tohto vynálezu sa môžu podávať aj pomocou nazálnych aerosólov alebo inhalácie. Takézo kompozície sa pripravujú technikami dobre známymi v odbore farmaceutických formulácií a môžu sa pripraviť ako roztoky vc fyziologickom roztoku, pričom sa využíva benzylalkohol alebo iné vhodné konzervačné prostriedky, absorpčné promotéry na zvýšenie biodostupnosti, fluórované uhľovodíky a/alebo ďalšie konvenčné solubilizačné alebo dispergačné činidlá.

Množstvo antagonistu Αχ adenozínového receptora, kcoré sa môže kombinovať s materiálom nosiča, pričom vznikne jednotková dávková forma, sa bude líšiť v závislosti od liečeného hostiteľa a od konkrétneho spôsobu podávania. Kompozície sa môžu formulovať tak, aby dávka antagonistu Αχ adenozínového receptora podáva24 ná pacientovi bola medzi 0,01 až 100 mg/kg telesnej hmotnosti. V niektorých uskutočneniach tohto vynálezu je dávka 0,1 až 10 mg/kg telesnej hmotnosti. Kompozícia sa môže podávať ako jediná dávka, viacnásobná dávka alebo v priebehu určitého časového úseku ako infúzia.

Konkrétna dávka a liečebný režim pre konkrétneho pacienta sa bude líšiť v závislosti od mnohých faktorov, vrátane konkrétneho antagonistu Ai adenozínového receptora, pacientovho veku, telesnej hmotnosti, všeobecného zdravia, pohlavia a stravy, ako aj času podávania, rýchlosti vylučovania, kombinácie liekov a závažnosti konkrétnej liečenej choroby. Posúdenie týchto faktorov lekárom je v rámci právomocí odborníka v odbore. Množstvo antagonistu bude závisieť od konkrétneho liečeného pacienta, spôsobu podávania, typu formulácie, charakteristike použitej zlúčeniny, závažnosti ochorenia a požadovaného účinku. Množstvo antagonistov sa môže určiť pomocou farmakologických a farmakokinetických princípov dobre známych v odbore.

Aby tu opísaný vynález mohol byť úplne pochopený, sú uvedené nasledovné príklady. Malo by byť zrejmé, že tieto príklady sú iba na účely ilustrovania a nie sú zamýšľané ako obmedzujúce pre tento vynález.

Príklady uskutočnenia vynálezu

Príklad 1

Zlúčeniny 1, 2, 4, 8, 9, 11, 12 až 21, 24, 27, 28, 31 a 32 sa pripravili podľa nasledovnej metódy, pričom sa použil vhodný aminoalkohol v kroku 5. Aminoalkoholmi použitými na prípravu zlúčenín boli nasledovné aminoalkoholy: (R)-2-amino-3-metyl-l-butanol (zlúčenina 1); (R)-2-amino-l-butanol (zlúčenina 2); (R)-2-amino-l-propanol (zlúčenina 4); (R)-izoleucinol (zlúčenina 8); (R)-2-amino-l-butanol (zlúčenina 9); (R)-2-amino-l-pentanol (zlúčenina 11); (S)-l-amino-2-propanol (zlúčenina 12); (R)-225

-amino-2-fenetanol (zlúčenina 13); (R)-l-amino-2-propanol (zlúčenina 14); (S)-izoleucinol (zlúčenina 15); (R)-2-amino-3,3-dimetyl-butan-l-ol (zlúčenina 16); (R)-2-amino-4-metyl-pentan-2-ol (zlúčenina 17); (R)-2-amino-3-fenyl-propan-l-ol (zlúčenina 18); (R)-2-amino-hexan-l-ol (zlúčenina 19); 3-aminopropanol (zlúčenina 20); 2-aminoetanol (zlúčenina 21); (S)-2-amino-l-butanol (zlúčenina 24); 4-aminobutanol (zlúčenina 27; (R)-4-(2-amino-3-hydroxypropyl)fenol (zlúčenina 28); (R)-3-amino-butan-l-ol (zlúčenina 31) a (R)-3-amino-pentan-l-ol (zlúčenina 32).

Tabuľka 1 ukazuje štruktúry zlúčenín, ktoré sa syntetizovali, metódy použité na syntézy zlúčenín a údaje z hmotnostnej spektroskopie pre dané zlúčeniny.

Krok 1: 5,6-Diamino-l-propyl-lR-pyrimidín-2,4-dión, hydrochloridová soľ

Východiskový materiál, 6-amino-l-propyl-lH-pyrimidin-2,4-dión, sa pripravil podľa známeho postupu uvedeného v J. Med. Chem., 32, 1231 (1989) . Tento materiál (8,5 g, 50 mmol) sa rozpustil v 250 ml vodnej kyseliny octovej a potom sa ochladil v ľadovom kúpeli. V priebehu 15 minút sa pridal roztok dusitanu sodného (4,14 g, 1,2 ekv.) v 10 ml vody. Po asi 10 minútach začala z reakčnej zmesi vypadávať svetločervená zrazenina. Tuhá látka sa odfiltrovala a sušila sa vo vákuu cez noc, pričom vzniklo 8,0 g nitrózovaného intermediátu.

Nitrózovaný intermediát (6,0 g, 30 mmol) sa suspendoval v 100 ml vody a zohrieval sa na teplotu 80 až 85 °C. Potom sa pridal v priebehu 5 minút ditioničitan sodný (15,8 g, 3,0 ekv.). Po 5 minútach sa odstránil zdroj tepla a svetlozelená reakčná zmes sa ochladila na laboratórnu teplotu a potom v ľadovom kúpeli. Tuhá látka sa odfiltrovala a sušila sa vo vákuu, pričom vznikol diaminouracil. Ten sa potom previedol na hydrochloridovú soľ rozpustením v 10 ml vody obsahujúcej 1,5 ekv. HC1 a potom sa lyofilizoval.

Krok 2: 8-(4-Hydroxybicyklo[2.2.2]okt-l-yl)-3-propyl-3, 7-dihydropurín-2,6-dión

5, 6-Diamino-l-propyl-líí-pyrimidín-2,4-dión, hydrochloridová sol, (3,4 g) sa rozpustil· v 80 ml· DMF spoločne s kyselinou 4-hydroxybicyklo[2.2.2]oktán-l-karboxylovou (2,5 g, 15 mmol). Potom sa pridalo HATU (5,9 g, 1,05 ekv.) nasledované prídavkom Et₃N (8,30 ml, 4,05 ekv.). Vzniknutá zmes sa miešala pri teplote miestnosti cez noc. Reakčná zmes sa prefiltrovala, aby sa odstránila zrazenina. Filtrát sa zakoncentroval pri zníženom tlaku. Vzniknutý zvyšok sa rozpustil v 60 ml vody obsahujúcej NaOH (5,9 g, 10 ekv.). Reakčná zmes sa miešala pri teplote varu počas hodiny, ochladila sa na teplotu miestnosti a okyslila sa na pH koncentrovanou HCI. Vzniknutá zrazenina sa odfiltrovala a sušila sa, pričom vzniklo 1,85 g xantínového derivátu.

Krok 3: 8-(4-Hydroxybicyklo[2.2.2]okt-l-yl)-3-propyl-6-tioxo-1,3,6,7-tetrahydropurin-2-ón

8- (4-Hydroxybicyklo[2.2.2]okt-l-yl)-3-propyl-3,7-dihydropurín-2, 6-dión (500 mg, 1,57 mmol) sa rozpustil v 10 ml pyridínu. Potom sa pridal P₄Si₀ (1,05 g, 1,5 ekv.) a reakčná zmes sa miešala pri teplote varu pod spätným chladičom počas 6 hodín. Reakčná zmes sa potom ochladila na teplotu miestnosti a reakcia sa pomaly zastavila 5 ml vody. Zmes sa potom okyslila pri teplote 0 °C na pH 5 pomocou 6 N HCI. Vodná vrstva sa extrahovala EtOAc. Spojené organické vrstvy sa vysušili nad síranom sodným a zakoncentrovali sa pri zníženom tlaku. Prečistenie preparatívnou HPLC poskytlo 100 mg zlúčeniny uvedenej v názve.

Krok 4: 8-(4-Hydroxybicyklo[2.2.2]okt-l-yl)-6-metylsulfanyl-3-propyl-3,7-dihydropurin-2-ón

8-(4-Hydroxybicyklo[2.2.2]okt-l-yl)-3-propyl-6-tioxo-1,3,6,7-tetrahydropurin-2-ón (1,20 mg, 0,36 mmol) sa suspendoval v 3 ml vody a 1,5 ml EtOH. Potom sa pridal NaOH ako roztok v

0,4 ml vody nasledovaný Mel. Reakčná zmes sa miešala počas 1 ho27 diny pri teplote miestnosti. Potom sa reakčná zmes neutralizovala 0,1 N HC1 a extrahovala sa chloroformom. Spojené organické vrstvy sa vysušili nad síranom sodným a zakoncentrovali sa pri zníženom tlaku, pričom vzniklo prakticky kvantitatívne množstvo zlúčeniny uvedenej v názve.

Krok 5: 8-(4-Hydroxybicyklo[2.2.2]okt-l-yl)-6-(l-hydroxymeoyl-propylamino)-3-propyl-3,7-dihydropurin-2-ón

8-(4-Hydroxybicyklo[2.2.2]okt-l-yl)-6-metylsulfanyl-3-propyl-3,7-dihydropurin-2-ón (125 mg, 0,36 mmol) sa rozpustil v 3 ml DMSO spoločne s nadbytkom príslušného aminoalkoholu 'napríklad (R)-(-)-2-amino-l-butanol (0,24 ml, 7 ekv.) pre zlúčeninu 2) . Vzniknutá reakčná zmes sa miešala pri teplote 150 °C počas 3 hodín.

Krok 6:

7-Etyl-2-(4-hydroxybicyklo[2.2.2]okt-l-yl)-4-propyl-l,4,6,~-tetrahydro-1,3,4,5a,8-pentaaza-as-indacen-5-ón (Zlúčenina 2)

8-(4-Hydroxybicyklo[2.2.2]okt-l-yl)-6-(1-hydroxymetylpropylamino)-3-propyl-3,7-dihydropurin-2-ón (110 mg) sa rozpustil v 3 ml SOCI2 a miešal sa pri teplote varu počas 20 minút. Zmes sa potom zakoncentrovala. Zvyšok sa rozložil nasýteným roztokom NaHCO3 a extrahoval sa chloroformom. Spojené organické vrstvy sa vysušili nad síranom sodným a potom sa zakoncentrovali pri zníženom tlaku. Prečistenie pomocou preparatívnej HPLC poskytlo 50 mg zlúčeniny uvedenej v názve vo forme TFA soli.

Príklad 2

Zlúčeniny 3, 5 a 7 sa pripravili podlá nasledovného postupu, pričom sa v kroku 8 použil zodpovedajúci aminoalkohol. Aminoalkoholmi použitými na prípravu zlúčenín boli nasledovné aminoalkoholy: (R)-2-amino-l-butanol (zlúčenina 3); (R)-2-amino-3-metyl-l-butanol (zlúčenina 5) a (R)-2-amino-l-propanol (zlúčenina 7) .

Tabuľka 1 ukazuje štruktúry syntetizovaných zlúčenín, metódy použité na ich syntézu a údaje z hmotnostnej spektroskopie týchto zlúčenín.

Krok 1: Kyselina 4-(2,6-dioxo-3-propyl-2,3,6,7-tetrahydro-lH-purin-8-yl)bicyklo[2.2.2]oktán-l-karboxylová

5,6-Diamino-l-propyl-lH-pyrimidín-2,4-dión, hydrochloridová soľ (570 mg) sa rozpustil v 20 ml DMF spoločne s monometylesterom kyseliny bicyklo[2.2.2]oktán-1,4-dikarboxylovej (520 mg, 2,45 mmol). Potom sa pridalo HATU (980 mg, 1,05 ekv.) nasledované Et₃N (1,40 ml, 4,05 ekv.). Vzniknutá reakčná zmes sa miešala pri teplote miestnosti cez noc. Nasledujúce ráno sa reakčná zmes prefiltrovala, aby sa odstránila zrazenina. Filtrát sa zakoncentroval pri zníženom tlaku. Vzniknutý zvyšok sa rozpustil v 10 ml vody obsahujúcej NaOH (980 mg, 10 ekv.). Reakčná zmes sa miešala počas 2 hodín pri teplote varu pod spätným chladičom. Potom sa reakčná zmes ochladila na teplotu miestnosti a okyslila sa na pH 2 koncentrovanou HC1. Vzniknutá zrazenina sa odfiltrovala a sušila sa, pričom vzniklo 680 mg derivátu kyseliny.

Krok 2: 8-(4-Hydroxymetylbicyklo[2.2.2]okt-l-yl)-3-propyl-3,7-dihydropurín-2,6-dión

Kyselina 4-(2,6-dioxo-3-propyl-2,3,6,7-tetrahydro-l H-purin-8-yl)bicyklo[2.2.2]oktán-l-karboxylová (3,2 g, 9,25 mmol) sa rozpustila v 100 ml bezvodého THF a ochladila sa na teplotu 0 °C. Potom sa pridal komplex borán-THF (1,0 M v THF, 18,5 ml, 2 ekv.) a reakčná zmes sa miešala počas 10 minút pri teplote 0 °C a potom počas 48 hodín pri teplote miestnosti. Reakčná zmes sa opatrne rozložila 10 ml metanolu a potom sa zakoncentrovala pri zníženom tlaku. Vzniknutý zvyšok sa rozpustil v 20 ml metanolu a zakoncentroval sa pri zníženom tlaku. Toto spracovanie sa zopakovalo štyrikrát, pričom vznikol požadovaný alkohol.

Krok 3: 4-(2,6-Dioxo-3-propyl-2,3, 6, 7-tetrahydro-lH-purin-8-yl)-bicyklo[2.2.2]oktán-l-karbaldehyd

8-(4-Hydroxymetylbicyklo[2.2.2] okt-l-yl)-3-propyl-3,7-dihydropurín-2,6-dión (2,70 g, 8,13 mmol) sa rozpustil v 40 ml DMSO. Potom sa pri teplote miestnosti pridal komplex pyridín-SO3 (3,88 g, 3 ekv.) nasledovaný Et3N (7,4 ml, 7 ekv.). Vzniknutá reakčná zmes sa miešala počas 18 hodín pri teplote miestnosti. Potom sa zriedila EtOAc a premyla sa 5 % vodnou kyselinou citrónovou, vodou, solankou, vysušila sa nad síranom sodným a zakoncentrovala sa pri zníženom tlaku, pričom vzniklo 900 mg požadovaného aldehydu.

Krok 4: Metylester kyseliny 3-[4-(2,6-dioxo-3-propyl-2,3,6,7-tetrahydro-l/f-purin-8-yl) bicyklo [2.2.2] okt-l-yl] a kry love j

4-(2,6-Dioxo-3-propyl-2,3,6, 7-tetrahydro-l#-purin-8-yl)bicyklo[2.2.2]oktán-l-karbaldehyd (900 mg, 2,73 mmol) sa rozpustil v 25 ml THF a pridal sa metyl(trifenylfosforanylidén)acetát (1,83 g, 2 ekv.). Vzniknutá reakčná zmes sa miešala počas 18 hod pri teplote varu pod spätným chladičom. Potom sa ochladila na teplotu miestnosti a prečistila sa preparatívnou HPLC použitím zmesi vodného acetonitrilu, pričom vzniklo 300 mg požadovaného produktu.

Krok 5: Metylester kyseliny 3-[4-(2, 6-dioxo-3-propyl-2,3,6,7-tetrahydro-líí-purin-8-yl) bicyklo [2.2.2] okt-l-yl] propiónovej

Metylester kyseliny 3-[4-(2,6-dioxo-3-propyl-2,3,6,7-tetrahydro-l/í-purin-8-yl) bicyklo [2.2.2] okt-l-yl) akrylovej (300 mg) sa rozpustil v 20 ml THF. Potom sa pridalo 10 % Pd/C (25 mg) a vzniknutá reakčná zmes sa hydrogenovala pri tlaku vodíka 50 psi a teplote miestnosti počas 6 hodín. Reakčná zmes sa prefiltrovala cez celit a filtrát sa zakoncentroval pri zníženom tlaku, pričom vzniklo 280 mg požadovaného produktu.

Krok 6: Metylester kyseliny 3-[4-(2-oxo-3-propyl-6-tioxo-2,3,6,7-tetrahydro-lff-purin-8-yl)bicyklo[2.2.2]okt-l-yl]-propiónovej

Metylester kyseliny 3-[4-(2,6-dioxo-3-propyl-2,3,6,7-tetrahydro-l/í-purin-8-yl) bicyklo [2.2.2] okt-l-yl] propiónovej (250 mg, 0,64 mmol) sa rozpustil v 8 ml pyridínu. Potom sa pridal P4S10 (430 mg, 1,5 ekv.) a reakčná zmes sa miešala pri teplote varu počas 3 hodín. Reakčná zmes sa potom ochladila na teplotu miestnosti, rozložila 3 ml vody a okyslila sa dostatočným množstvom 6 N HC1 na pH 3. Vzniknutá reakčná zmes sa extrahovala chloroformom. Organické vrstvy sa vysušili nad síranom sodným a zakoncentrovali sa pri zníženom tlaku. Surový zvyšok sa prečistil preparatívnou HPLC, pričom vzniklo 100 mg požadovaného produktu.

Krok 7: Metylester kyseliny 3-[4-(6-metylsulfanyl-2-oxo-3-propyl-3,7-dihydro-2R-purin-8-yl]bicyklo[2.2.2]okt-l-yl]-propiónovej

Metylester kyseliny 3-[4-(2-oxo-3-propyl-6-tioxo-2,3,6,7-tetrahydro-lR-purin-8-yl) bicyklo [2.2.2] okt-l-yl] propiónove j (100 mg) sa rozpustil v 2 ml EtOH a 1 ml vody. Potom sa pridal NaOH (20 mg) vo forme roztoku v 1 ml vody a následne Mel (23 μΐ, 1,5 ekv.). Vzniknutá reakčná zmes sa miešala počas 30 minút pri teplote miestnosti. Potom sa extrahovala EtOAc. Organická vrstva sa vysušila nad síranom sodným a zakoncentrovala sa pri zníženom tlaku, pričom vzniklo 105 mg zlúčeniny uvedenej v názve.

Krok 8: Metylester kyseliny 3-{4-[6-(1-hydroxymetylpropylamino)-2-oxo-3-propyl-3,7-dihydro-2H-purin-8-yl]bicyklo[2.2.2]okt-l-yl]propiónovej

Metylester kyseliny 3-[4-(6-metylsulfanyl-2-oxo-3-propyl-3,7-dihydro-27í-purin-8-yl) bicyklo [2.2.2] okt-l-yl ] propiónove j (105 mg) sa rozpustil v 2 ml DMSO spoločne so zodpovedajúcim aminoalkoholom (napríklad 160 μΐ (R)-2-amino-l-butanolu pre zlúčeninu 3) . Reakčná zmes sa miešala počas 3 hodín pri teplote 150 °C. Potom sa prefiltrovala a prečistila sa pomocou preparatívnej HPLC, pričom vzniklo 50 mg zlúčeniny uvedenej v názve.

Krok 9: Kyselina 3-[4-(7-etyl-5-oxo-4-propyl-4,5,6,7-tetra31 hydro-lJí-1,3,4,5a, 8-pentaaza-indacen-2-yl) -bicyklo[2.2.2] -okt-1-yl]propiónová (zlúčenina 3)

Metylester kyseliny 3-{4-[6-(1-hydroxymetylpropylamino) -2-oxo-3-propyl-3,7-dihydro-2ff-purin-8-yl]bicyklo[2.2.2]okt-l-yl}-propiónovej (30 mg) sa rozpustil v 1 ml SOCI2 a miešal sa pri teplote varu počas 15 minút. Reakčná zmes ochladila na teplotu miestnosti a zakoncentrovala sa pri zníženom tlaku. Vzniknutý zvyšok sa rozpustil v roztoku obsahujúcom 1 ml vody, 0,5 ml MeOH a 0,1 ml 10 % roztoku NaOH. Reakčná zmes sa miešala pri teplote miestnosti počas 30 minút. Zmes sa potom okyslila na pH 2 zriedenou 1 N HC1 a zakoncentrovala sa. Vzniknutý surový produkt sa prečistil pomocou preparatívnej HPLC, pričom vznikla zlúčenina uvedená v názve.

Príklad 3

Zlúčeniny 6, 10, 22, 23, 25, 26, 29 a 30 sa pripravili podlá nasledovného spôsobu, pričom sa použil aminoalkohol v kroku 3. Aminoalkoholmi použitými na prípravu zlúčenín boli nasledovné aminoalkoholy: 2-aminoetanol (zlúčenina 6); (R)-2-amino-l-butanol (zlúčenina 10); (R)-2-amino-l-propanol (zlúčenina 22); (R)-2-amino-l-pentanol (zlúčenina 23); (R)-izoleucinol (zlúčenina

25); (S)-2-amino-l-butanol (zlúčenina 26); 3-aminopropanol (zlúčenina 29) a 4-aminobutanol (zlúčenina 30).

Tabuľka 1 ukazuje štruktúry syntetizovaných zlúčenín, spôsoby použité na ich syntézu a údaje z hmotnostnej spektrometrie týchto zlúčenín.

Krok 1: Metylester kyseliny 4-(2,6-dioxo-3-propyl-2,3,6,7-tetrahydro-lR-purin-8-yl)bicyklo[2.2.2]oktán-l-karboxylovej

Pripravila sa kyselina 4-(2,6-dioxo-3-propyl-2,3,6,7-tetrahydro-líí-purin-8-yl) bicyklo [2.2.2] oktán-l-karboxylová podľa už uvedeného postupu. Tento materiál (1,4 g) sa suspendoval v 50 ml

MeOH a pridalo sa 5 kvapiek koncentrovanej kyseliny sírovej.

Reakčná zmes sa miešala počas 18 hodín pri teplote varu pod spätným chladičom. Potom sa ochladila na teplotu miestnosti a zakoncentrovala sa pri zníženom tlaku. Vzniknutý zvyšok sa zriedil dichlórmetánom a premyl sa vodným roztokom NaHCO₃, selankou, vysušil sa nad síranom sodným a zakoncentroval sa, pričom, vzniklo 1,2 g zlúčeniny uvedenej v názve.

Krok 2: Metylester kyseliny 4-(6-metylsulfanyl-2-oxo-3-prcpyl-3,7-dihydro-2H-purin-8-yl)bicyklo[2.2.2]oktán-l-karboxylcvej

Metylester kyseliny 4-(2,6-dioxo-3-propyl-2,3,6,7-~etrahydro-lH-purin-8-yl)bicyklo[2.2.2]oktán-l-karboxylovej (1,2 g,

3,33 mmol) sa rozpustil v 20 ml pyridínu. Potom sa pridalo P₄Siq (2,22 g, 1,5 ekv. ) a reakčná zmes sa miešala pri teplote varu počas 3 hodín. Potom sa ochladila na teplotu 0 °C a opatrne sa rozložila vodou. Pridalo sa dostatočné množstvo 6 N HC1, aby adjustovalo pH reakčnej zmesi na hodnotu 5, a uskutočnila sa extrakcia dichlórmetánom. Organická vrstva sa vysušila nad síranom sodným a zakoncentrovala sa, pričom vzniklo 860 mg tioesterového derivátu. Tento materiál (860 mg, 2,29 mmol) sa rozpustil v 5 ml EtOH a 5 ml vody. Pridal sa roztok hydroxidu sodného '183 mg, 2 ekv.) v 2 ml vody nasledovaný Mel (213 μΐ, 1,5 ekv.). Vzniknutá reakčná zmes sa miešala pri teplote miestnosti počas 30 min. Zmes sa potom extrahovala EtOAc. Organická vrstva sa vysušila nad síranom sodným a zakoncentrovala sa pri zníženom tlaku, pričom vzniklo 800 mg zlúčeniny uvedenej v názve.

Krok 3: Metylester kyseliny 4-[6-(2-hydroxyetylamino)-2-oxo-3-propyl-3,7-dihydro-2H-purin-8-yl]bicyklo[2.2.2] oktán-l-karboxylove j

Metylester kyseliny 4-(6-metylsulfanyl-2-oxo-3-propyl-3,7-dihydro-2H-purin-8-yl)bicyklo[2.2.2]oktán-l-karboxylovej (50 mg) sa rozpustil v 1 ml z 2 ml DMSO spoločne so zodpovedajúcim aminoalkoholom (napríklad 7 ekv. 2-aminoetanolu pre zlúčeninu 6). Reakčná zmes sa miešala počas 3 hodín pri teplote 150 °C.

Reakčná zmes sa ochladila na teplotu miestnosti a prečistila sa preparátívnou HPLC, pričom vzniklo 30 mg zlúčeniny uvedenej v názve.

Krok 4: Kyselina 4-(5-oxo-4-propyl-4,5,6,7-tetrahydro-1,3,4,5a,8-pentaaza-as-indacen-2-yl)bicyklo[2.2.2]oktán-l-karboxylová

Metylester kyseliny 4-[6-(2-hydroxyetylamino)-2-oxo-3-propyl-3,7-dihydro-2H-purin-8-yl]bicyklo[2.2.2]oktán-1-karboxylovej (30 mg) sa rozpustil v 1 ml SOCI2 a zmes sa miešala počas 15 minút pri teplote varu. Reakčná zmes sa ochladila na teplotu miestnosti a zakoncentrovala sa pri zníženom tlaku. Vzniknutý zvyšok sa rozpustil v roztoku obsahujúcom 1 ml vody, 0,5 ml MeOH a 0,1 ml 10 % vodného NaOH. Reakčná zmes sa miešala pri teplote miestnosti počas 30 minút. Potom sa okyslila na pH 2 pomocou zriedenej 1 N HCI a zakoncentrovala sa. Vzniknutý surový produkt sa prečistil preparatívnou HPLC, pričom vznikla zlúčenina uvedená v názve.

Príklad 4

Metodológia stanovenia

Pripravili sa mnohé xantínové deriváty, ktoré majú štruktúru uvedenú v Tabuľke 1. Pre niektoré z týchto látok sa stanovili hodnoty Kí pre potkanie a ľudské adenozínové Ai receptory podľa nasledovného protokolu pre väzbovú analýzu.

Materiály

Adenozín deamináza a HEPES sa získali od firmy Sigma (St. Louis, MO) . Hamovo F-12 bunkové kultivačné médium a fatálne bovínne sérum a získali od firmy GIBCO Life Technologies (Gaitersburg, MD) . Antibiotikum G-418, Falcon 150 mM kultivačné dosky a Costar 12-jamkové kultivačné dosky sa získali od firmy Fisher (Pittsburgh, PA). [³H]-CPX sa získal od firmy Du Pont-New England Nuclear Research Products (Boston, MA). Peniciiín/strep34 tomycín antibiotická zmes sa získala od firmy Mediatech (Washington, DC) . Zloženie HEPES-pufrovaného Hankovho roztoku: 130 mM NaCI, 5,0 mM Cl, 1,5 mM CaCl₂, 0,41 mM MgSO₄, 3,4 9 mM Na₂HPO₄, 0,44 mM KH₂PO₄, 5,6 mM dextrózy a 5 mM HEPES (pH 7,4) .

Príprava membrány

Potkaní Αχ receptor: Membrány sa pripravili z potkaniehc cerebrálneho kortexu izolovaného z čerstvo usmrtených potkancv. Tkanivá sa homogenizovali v pufri A (10 mM EDTA, 10 mM Na-HEPES, pH 7,4) doplnenom proteázovými inhibítormi (10 pg/ml benzamidinu, 100 μΜ PMSP a 2 pg/ml každého aprotinínu, pepstatínu a leupeptínu) a centrifugovali sa pri 20 000 x g počas 20 minút. Pelety sa opätovne suspendovali a dvakrát sa premyli pufrom HE (10 mM Na-HEPES, 1 mM EDTA, pH 7,4) doplnenom proteázovými inhibítormi. Nakoniec sa pelety suspendovali v pufri HE doplnenom 10 í (w/v) sacharózou a proteázovými inhibítormi a alikvotné podiely sa vymrazili pri teplote -80 °C. Koncentrácie proteínov sa merali použitím sady na stanovenie proteínu BCA (Pierce).

Ľudský Αχ receptor: cDNA ľudského Ai adenozínového recepccra, sa získala pomocou RT-PCR a subklonovala sa do pcDNA3.1 (ír.vitrogen). Stabilná transfekcia CHO-K1 buniek sa uskutočnila neužitím LIPOFECTAMINE-PLUS (GIBCO-BRL), kolónie sa vybrali v 1 mg/ml G418 a uskutočnil sa sereening použitím rádioligandovej väzbovej analýzy. Na prípravu membrány sa CHO-K1 bunky pestovali ako monovrstvy v kompletnom médiu (F12 + 10 % FCS + 1 mg/ml G4Í8) , premyli sa PBS a získali sa v pufri A doplnenom proteázovými inhibítormi. Bunky sa homogenizovali, centrifugovali a premyli sa dvakrát pufrom HE podľa už uvedeného opisu. Nakoniec sa pelety uchovávali v alikvotných podieloch pri teplote -80 'C.

Rádioligandová väzbová analýza

Membrány (50 μg membránového proteínu pre potkanie ÄiARs a μg CHO-K1 membránového proteínu pre ľudské AiARs), rádioligan35 dy a rôzne koncentrácie kompetitivneho ligandu sa inkubovali v trojnásobnom experimente v 0,1 ml pufra HE obsahujúceho 2 U/ml adenozín deaminázy počas 2,5 hodiny pri teplote 21 °C. Rádioligand [³H]-DPCPX (112 Ci/mmol od NEN, konečná koncentrácia 1 nM) sa použil na kompetitívnu väzbovú analýzu na AjARs . Nešpecifická väzba sa merala v prítomnosti 10 μΜ BG9719. Väzbová analýza sa ukončila filtráciou cez filtre zo sklených vlákien Whatman GF/C použitím BRANDEL bunkového harvestra. Filtre sa premyli trikrát 3 až 4 ml ľadového 10 mM Tris-HCl (pH 7,4) a 5 mM MgCl₂ pri teplote 4 °C. Filtračný papier sa previedol do fiolky a pridali sa 3 ml scintilačného koktailu ScintiVerse (Fisher). Rádioaktivita sa počítala pomocou Wallac β-počítača.

Analýza väzbových údajov

Určenie hodnôt Κ_Σ: Kompetitívne väzbové údaje sa fitovali na väzbový model s jedným väzbovým miestom a vykreslili sa použitím Prizm GraphPad. Použila sa Cheng-Prusoffova rovnica

Kí = IC₅₀/ d + CH /K_D) na výpočet hodnôt Κχ z hodnôt IC50, kde Κ_Σ je afinitná konštanta pre kompetitívny ligand, [I] je koncentrácia voľného rádioligandu a K_D je afinitná konštanta pre rádioligand.

% väzby: Pre jednobodovú väzbovú analýzu sa údaje prezentovali v % celkovej špecifickej väzby pri 1 μΜ kompetitívnej zlúčeniny: % celku = 100 * (špecifická väzba s 1 μΜ kompetitívnej zlúčeniny/celková špecifická väzba). % väzby reprezentuje množstvo viazaného rádioligandu zostávajúce v prítomnosti 1 μΜ kompetitivnej zlúčeniny.

Výsledky

Všetky testované zlúčeniny sa vyznačovali hodnotami K_x pre potkaní A_x adenozínový receptor asi 4 až 800 nM. V tabuľke 2 sú uvedené hodnoty Κχ pre Αχ adenozínový receptor a % väzby pre zlú36 ceniny.

Príklad 5

Alternatívny spôsob stanovenia

Materiály

Pozri Príklad 4.

Bunková kultúra

CHO bunky stabilne exprimujúce rekombinantné ludské A_xAdoR (CHO: AiAdoR bunky) sa pripravili podlá opisu uvedeného v Kollias-Barker, et al., J. Pharm. Exp. Ther., 281 (2), 761 (1997) a kultivovali sa ako CHO: Wild bunky. CHO bunky sa kultivovali ako monovrstvy na plastických miskách v Hamovom F-12 médiu doplnenom 10 % fetálnym bovínnym sérom, 100 U penicilínu G a 100 μσ streptomycínu vo vlhčenej atmosfére 5 % CO₂/95 % vzduch pri teplote 37 °C. Hustota [³H]-CPX väzbových miest v CHO bunkách bola 26 ± 2 (n = 4) fmol/mg proteínu. Bunky sa subkultivovali dvakrát týždenne po oddelení použitím 1 mM EDTA v HEPES-pufrovanom Bankovom roztoku zbavenom iónov Ca²⁺ a Mg²⁺. Na experimenty sa použili tri rôzne klony CHO: A_xAdoR buniek a všetky výsledky sa potvrdili s bunkami z dvoch alebo troch klonov. Hustota AiAdoRs v týchto bunkách bola 4000 až 5000 fmol/mg proteínu podlá stanovenia s [³H]— -CPX špecifickou väzbou.

Väzba rádioligandu

CHO bunky pestované na 150 mm kultivačných miskách sa premyli HEPES-pufrovaným Hankovým roztokom, potom sa odstránili bunkovou škrabkou a homogenizovali sa v ľadovom 50 mM Tris-HCI (pH 7,4). Bunkové membrány sa peletovali centrifugáciou bunkového homogenizátu pri 48 000 x g počas 15 minút. Membránové pelety sa premyli dvojnásobnou resuspendáciou v čerstvom pufri a centrifugáciou. Nakoniec sa pelety resuspendovali v malom objeme 50 mM Tris-HCI (pH 7,4) a skladovali sa v 1 ml alikvótoch pri teplote

-80 °C až do stanovenia.

Na určenie hustoty AiAdoRs v CHO bunkových membránach sa

100 μΐ alikvóty membrán (5 μς proteínu) inkubovali počas 2 hodín pri teplote 25 °C s 0,15 až 20 nM [³H]-CPX a adenozín deaminázy (2 U/ml) v 100 μΐ 50 mM Tris-HCl (pH 7,4). Inkubácia sa ukončila zriedením so 4 ml ľadového 50 mM Tris-HCl pufra a membrány sa hneď zobrali prostredníctvom filtrov zo sklených vlákien (Schleicher a Schuell, Keene, NH) pomocou vákuovej filtrácie (Brandel, Gaitersburg, MD) . Filtre sa rýchlo trikrát premyli ľadovým pufrom aby kotúče obsahujúce umiestnili v 4 ml sa odstránil membrány

ScintiVerse neviazaný rádioligand. Filtračné viazaným (Fisher) a

BD rádioligandom rádioaktivita sa sa kvantifikovala použitím počítača väzby [³H]-CPX určenie nešpecifickej kvapalnej sa membrány scintilácie.

Na inkubovali podlá už uvedeného opisu a k inkubačnému

Nešpecifická väzba pufru sa pridalo 10 μΜ CPT. sa definovala ako [³H]-CPX viazané v prítomnosti 10 μΜ CPT. Špecifická väzba rádioligandu na A<AdoR sa určila odčítaním nešpecifickej väzby od celkovej väzby. Zistilo sa, že nešpecifická väzba sa zvyšuje lineárne s rastúcou koncentráciou [³H]-CPX. Pre každú testovanú koncentráciu ['H]-CPX sa stanovenie uskutočnilo trikrát.

Na určenie afinity antagonistov AjAdoRs pre ľudské rekombinantné AiAdoR exprimované v CHO bunkách sa merala väzba 2 nM [³H]-CPX v prítomnosti zvyšujúcej sa koncentrácie antagonistu. Alikvóty CHO bunkových membrán (100 μΐ: 5 μg proteínu), [³H]-CPX, antagonista (0,1 nM až 100 μΜ) a adenozín deamináza (2 U/ml) sa inkubovali počas 3 hodín pri teplote 25 °C v 200 μΐ 50 mM Tris-HC1 pufra (pH 7,4). Stanovenie sa ukončilo podľa už uvedeného opisu.

Ďalšie uskutočnenia

Je zrejmé, že hoci sa vynález opísal pomocou jeho detailného opisu, uvedený opis sa zamýšľa ako ilustratívny a nie ako obmedzujúci pre rozsah vynálezu, ktorý je definovaný pomocou nasledovných pripojených nárokov. Ďalšie aspekty, výhody a modifikácie sú v rámci rozsahu platnosti nasledovných nárokov.

Tabuľka 1

Zlúčenina	Štruktúra	Syntetická metóda	MS (M+l)
1	s	1	386
2	Λ·^·· 1	1	372
3		2	428
4		1	358
5		2	442
6		3	372
7	£r?A-	2	414

Zlúčenina	Štruktúra	Syntetická metóda	MS (M+l)
8	'X .b+9- ,	1	400
9		1	356
10		3	400
11		1	386
12		1	358
13	A. x+^··	1	420
14	s	1	358

Zlúčenina	Štruktúra	Syntetická metóda	MS (M+l)
15	h	1	400
16	X λι:^··	1	400
17	4 JLH ÍL \\<·0Η s	1	400
18	θ-ν« h	1	434
19	ολ5:^®~μ s	1	400
20	A* I jTV-ív^-cn h	1	358
21	S	1	344

Zlúčenina	Štruktúra	Syntetická metóda	MS(M+l)
22	ΧΧΗϊΗη	3	386
23		3	414
24	/ ŕ~n ( X. H JljT -j*—	1	372
25	-v xn-m	3	414
26	s	3	400
27		1	32
28	“<A .Xlr^-	1	450

Zlúčenina	Štruktúra	Syntetická metóda	MS(M+l)
29		3	386
30		3	400
31		1	372
32	λ y χγν/>-ΑλΑοη o^n^n '-J	1	372

Tabuľka 2

Zlúčenina Č.	Ki(nM)	% viazania	Zlúčenina Č.	Ki(nM)	% viazania
1	4,4	ND	17	166,7	ND
2	5,75	ND	18	708	ND
3	8,38	ND	19	ND	18,1
4	9,92	ND	20	ND	52,7
5	10,5	1,9	21	ND	12,2
6	ND	2,6	22	ND	24
7	13,7	2,5	23	ND	22,8
8	14,1	1	24	ND	11
9	26,7	0,1	25	ND	46,7
10	40,2	6,2	26	ND	41,1
11	43,2	3,7	27	ND	16,3
12	51,3	8,6	28	ND	36,3
13	68,3	ND	29	ND	81,8
14	68,5	7,8	30	ND	71
15	93	7,7	31	ND	40
16	155	ND	32	ND	61

PATENTOVÉ NÁROKY

Claims (4)

1. PATENTOVÉ NÁROKY

   PF kde

   R¹ a R² sú navzájom nezávisle vybrané zo skupiny obsahujúcej:

   a) atóm vodíka;

   b) alkylovú skupinu, alkenylovú skupinu alebo alkinylovú skupinu, kde uvedená alkylová skupina, alkenylová skupina alebo alkinylová skupina sú buď nesubstituované alebo sú substituované jedným alebo viacerými substituentami vybranými zo skupiny obsahujúcej hydroxyskupinu, alkoxyskupinu, aminoskupinu, alkylaminoskupinu, dialkylaminoskupinu, heterocyklylovú skupinu, acylaminoskupinu, alkylsulfonylaminoskupinu a heterocyklylkarbonylaminoskupinu; a

   c) arylovú skupinu alebo substituovanú arylovú skupinu;

   R³ je vybraný zo skupiny obsahujúcej:

   a) bicyklickú, tricyklickú alebo pentacyklickú skupinu vybranú zo skupiny obsahujúcej:

   kde bicyklická, tricyklická alebo pentacyklická skupina je buď nesubstituovaná alebo je substituovaná jedným alebo viacerými substituentami vybranými zo skupiny obsahujúcej:

   (i) alkylovú skupinu, alkenylovú skupinu a alkinylovú skupinu, kde každá alkylová skupina, alkenylová skupina alebo alkinylová skupina je buď nesubstituovaná alebo je substituovaná jedným alebo viacerými substituentami vybranými zo skupiny obsahujúcej (alkoxykarbonyl)aralkylkarbamoylovú skupinu, (amino) (R^{(i) * * * 5})acylhydrazinylkarbonylovú skupinu, (amino) (R⁵)acyloxykarboxylovú skupinu, (hydroxy)(karboalkoxy)alkylkarbamoylovú skupinu, acylaminoalkylaminoskupinu, acyloxyskupinu, aldehydickú skupinu, alkenyloxyskupinu, alkenylaminoskupinu, alkenylsulfonylaminoskupinu, alkoxyskupinu, alkoxykarbonylovú skupinu, alkoxykarbonylalkylaminoskupinu, alkoxykarbonylaminoskupinu, alkoxykarbonylaminoacyloxyskupinu, alkoxykarbonylaminoalkylaminoskupinu, alkylaminoskupinu, alkylaminoalkylaminoskupinu, alkylkarbamoylovú skupinu, alkylfosfónovú skupinu, alkylsulfonylaminoskupinu, alkylsulfonyloxyskupinu, aminoskupinu, aminoacyloxyskupinu, aminoalkylaralkylkarbamoyiovú skupinu, aminoalkylkarbamoylovú skupinu, aminoalkylheterocyklylalkylkarbamoylovú skupinu, aminocykloalkylalkylcykloalkylkarbamoylovu skupinu, aminocykloalkylkarbamoylovú skupinu, aralkoxykarbonylovú skupinu, aralkoxykarbonylaminoskupinu, arylheterocyklylovú skupinu, aryloxyskupinu, arylsulfonylaminoskupinu, arylsulfonyloxyskupinu, karbamoylovú skupinu, karbonylovú skupinu, kyanoskupinu, kyanoalkylkarbamoylovú skupinu, cykloalkylaminoskupinu, dialkylaminoskupinu, dialkylaminoalkylaminoskupinu, dialkylaminoalkylkarbamoylovú skupinu, dialkylfosfónovú skupinu, haloalkylsulfonylaminoskupinu, atóm halogénu, heterocyklylovú skupinu, heterocyklylalkylaminoskupinu, heterocyklylkarbamoylovú skupinu, hydroxyskupinu, hydroxyalkylsulfonylaminoskupinu, oximinoskupinu, fosfátovú skupinu, fosfónovú skupinu, skupinu -R⁵, R⁵-alkoxyskupinu, R⁵-alkyl(alkyl)aminoskupinu, R⁵-alkylalkylkarbamoylovú skupinu, R⁵-alkylaminoskupinu, R⁵-alkylkarbamoylovú skupinu, R⁵-alkylsulfonylovú skupinu, Reálky lsulf onylaminoskupinu, R⁵-alkyltioskupinu, R⁵-heterocyklylkarbonylovú skupinu, substituovanú aralkylaminoskupinu, substituovanú arylkarboxyalkoxykarbonylovú skupinu, substituovanú arylsulfonylaminoalkylaminoskupinu, substituovanú heteroarylsulfQnylaminoskupinu, substituovanú heterocyklylovú skupinu, substituovanú heterocyklylaminoalkylaminoskupinu, substituovanú heterocyklylsulfonylaminoskupinu, sulfoxyacylaminoskupinu, tiokarbamoylovú skupinu, trifluormetylovú skupinu; a (ii) (alkoxykarbonyl)aralkylkarbamoylovú skupinu, (amino) (R⁵)-acylhydrazinylkarbonylovú skupinu, (amino) (R⁵)acyloxykarboxylovú skupinu, (hydroxy)(karboalkoxy)alkylkarbamoylovú skupinu, acylaminoalkylaminoskupinu, acyloxyskupinu, aldehydickú skupinu, alkenoxyskupinu, alkenylaminoskupinu, alkenylsulfonylaminoskupinu, alkoxyskupinu, alkoxykarbonylovú skupinu, alkoxykarbonylalkylaminoskupinu, alkoxykarbonylaminoskupinu, alkoxykarbonylaminoacyloxyskupinu, aikoxykarbonylaminoalkylaminoskupinu, alkylaminoskupinu, alkylaminoalkylaminoskupinu, alkylkarbamoylovú skupinu, alkylfosfónovú skupinu, alkylsulfonylaminoskupinu, alkylsulfonyloxyskupinu, aminoskupinu, aminoacyloxyskupinu, aminoalkylaralkylkarbamoylovú skupinu, aminoalkylkarbamoylovú skupinu, aminoalkylheterocyklylalkylkarbamoylovú skupinu, aminocykloalkylalkylcykloalkylkarbamoylovú skupinu, aminocykloalkylkarbamoylovú skupinu, aralkoxykarbonylovú skupinu, aralkoxykarbonylaminoskupinu, arylheterocyklylovú skupinu, aryloxyskupinu, arylsulfonylaminoskupinu, arylsulfonyloxyskupinu, karbamoylovú skupinu, karbonylovú skupinu, kyanoskupinu, kyanoalkylkarbamoylovú skupinu, cykloalkylaminoskupinu, dialkylaminoskupinu, dialkylaminoalkylaminoskupinu, dialkylaminoalkylkarbamoylovú skupinu, dialkylfosfónovú skupinu, haloalkylsulfonylaminoskupinu, atóm halogénu, heterocyklylovú skupinu, heterocyklylalkylaminoskupinu, heterocyklylkarbamoylovú skupinu, hydroxyskupinu, hydroxyalkylsulfonylaminoskupinu, oximinoskupinu, fosfátovú skupinu, fosfónovú skupinu, skupinu -R⁵, R⁵-alkoxyskupinu, R⁵-alkyl (alkyl) -aminoskupinu, R⁵-alkylalkylkarbamoylovú skupinu, R⁵-alkylaminoskupinu, R⁵-alkylkarbamoylovú skupinu, R⁵-alkylsulfonylovú skupinu, R⁵-alkylsulfonylaminoskupinu, R⁵-alkyltioskupinu, R⁵-heterocyklylkarbonylovú skupinu, substituovanú aralkylaminoskupinu, substituovanú arylkarboxyalkoxykarbonylovú skupinu, substituovanú arylsulfonylaminoalkylaminoskupinu, substituovanú heteroarylsulfonylaminoskupinu, substituovanú heterocyklylovú skupinu, substituovanú heterocyklylaminoalkylaminoskupinu, substituovanú heterocyklylsulfonylaminoskupinu, sulfoxyacylaminoskupinu, tiokarbamoylovú skupinu, trifluórmetylovú skupinu;

   R⁴ je vybraný zo skupiny obsahujúcej atóm vodíka, alkylovú skupinu obsahujúcu 1 až 4 atómy uhlíka, skupinu alkyl-CO₂H obsahujúcu 1 až 4 atómy uhlíka v alkylovej časti a fenylovú skupinu, kde uvedená alkylová skupina, skupina alkyl-CO₂H a fenylová skupina sú buď nesubstituovaná alebo substituované jedným až tromi substituentami vybranými zo skupiny obsahujúcej atóm halogénu, hydroxyskupinu, metoxyskupinu, aminoskupinu, nitroskupinu, benzylovú skupinu a benzylovú skupinu substituovanú jedným až tromi substituentami vybranými zo skupiny obsahujúcej atóm halogénu, hydroxyskupinu, metoxyskupinu, aminoskupinu a nitroskupinu;

   je vybraný zo skupiny obsahujúcej skupinu - (CXE) _nCOOH, skupinu -C(CF3)₂OH, skupinu -CONHNHSO₂CF3, skupinu -CONHOR⁴, skupinu -CONHSO2R⁴, skupinu -CONHSO2NHR⁴, skupinu -C (OH) R⁴PO3H2, skupinu -NHCOCF3, skupinu NHCONHSO2R⁴, skupinu -NHPO3H₂, skupinu -NHSO₂R⁴, skupinu -NHSO2NHCOR⁴, skupinu -OPO3H₂, skupinu -OSO₃H, skupinu -PO (OH) R⁴, skupinu -PO3H2, skupinu -SO3H, skupinu -SO2NHR⁴, skupinu -SO3NHCOR⁴, skupinu -SO3NHCONHCO2R⁴ a nasledovné skupiny:

   je 0, 1, 2, alebo 3;

   je vybraný zo skupiny obsahujúcej skupinu -CH=CH~, skupinu

   -(CH)_m-(CH)_m-, skupinu -CH=CH-CH₂- a skupinu -CH₂-CH=CH-;

   m je 1 alebo 2;

   X je atóm kyslíka alebo atóm síry;

   Z je vybraný zo skupiny obsahujúcej jednoduchú väzbu, skupinu -0-, skupinu -(0Η₂)η^-, skupinu -0 (CH₂) 1-2“, skupinu -CH₂OCH₂-, skupinu -(CH₂)₁-₂O-;

   R⁶ je vybraný zo skupiny obsahujúcej atóm vodika, alkylovú skupinu, acylovú skupinu, alkylsulfonylovú skupinu, aralkylovú skupinu, substituovanú aralkylovú skupinu, substituovanú alkylovú skupinu a heterocyklylovú skupinu; a

   R⁷ je vybraný zo skupiny obsahujúcej:

   a) atóm vodíka;

   b) alkylovú skupinu, alkenylovú skupinu, ktorá má nie menej než 3 atómy uhlíka alebo alkinylovú skupinu, ktorá má nie menej než 3 atómy uhlíka, kde uvedená alkylová skupina, alkenylová skupina alebo alkinylová skupina je buď nesubstituované alebo je substituovaná jedným alebo viacerými substituentami vybranými zo skupiny obsahujúcej hydroxyskupinu, alkoxyskupinu, aminoskupinu, alkylaminoskupinu, dialkylaminoskupinu, heterocyklylovú skupinu, acylaminoskupinu, alkylsulfonylaminoskupinu a heterocyklylkarbonylaminoskupinu;

   c) arylovú skupinu alebo substituovanú arylovú skupinu; a

   d) alkylarylovú skupinu alebo alkylovou skupinou substituovanú arylovú skupinu.
2. 2. Zlúčenina podľa nároku 1, kde zlúčenina je vo forme vybranej zo skupiny obsahujúcej achirálnu zlúčeninu, racemát, opticky aktívnu zlúčeninu, čistý diastereoizomér, zmes diastereoizomérov a farmakologicky prijateľnú adičnú sol.
3. 3. Zlúčenina podlá nároku 1, kde R¹ a R² sú navzájom nezávisle vybrané zo skupiny obsahujúcej:

   a) alkylovú skupinu, alkenylovú skupinu alebo alkinylovú sku- pinu, kde uvedená alkylová skupina, alkenylová skupina alebo alkinylová skupina sú buď nesubstituované alebo sú substituované jedným alebo viacerými substituentami vybranými zo skupiny obsahujúcej hydroxyskupinu, alkoxyskupinu, aminôskupinu, alkylaminoskupinu, dialkylaminoskupinu, heterocyklylovú skupinu, acylaminoskupinu, alkylsulfonylaminoskupinu a heterocyklylkarbonylaminoskupinu; a

   b) arylovú skupinu alebo substituovanú arylovú skupinu.

   Zlúčenina podľa nároku 3, kde aspoň jeden z R¹ a R² je alky lová skupina.

   5.

   Zlúčenina podľa nároku 1, kde A je skupina - (CH)_m-(CH)_m-.

   6.

   Zlúčenina podľa nároku 1, kde R⁷ je alkylová skupina.

   Zlúčenina podľa nároku 1, ⁸ kde Z je jednoduchá väzba.

   8. Zlúčenina všeobecného vzorca II (II) kde

   R¹ a R² sú navzájom nezávisle vybrané zo skupiny obsahujúcej:

   a) atóm vodíka;

   b) alkylovú skupinu, alkenylovú skupinu alebo alkinylovú skúpi52 nu, kde uvedená alkylová skupina, alkenylová skupina alebo alkinylová skupina sú buď nesubstituované alebo sú substituované jedným alebo viacerými substituentami vybranými zo skupiny obsahujúcej hydroxyskupinu, alkoxyskupinu, aminoskupinu, alkylaminoskupinu, dialkylaminoskupinu, heterocyklylovú skupinu, acylaminoskupinu, alkylsulfonylaminoskupinu a heterocyklylkarbonylaminoskupinu; a

   c) arylovú skupinu alebo substituovanú arylovú skupinu;

   R³ je vybraný zo skupiny obsahujúcej:

   a) bicyklickú, tricyklickú alebo pentacyklickú skupinu vybranú zo skupiny obsahujúcej:

   kde bicyklická, tricyklická alebo pentacyklická skupina je buď nesubstituovaná alebo je substituovaná jedným alebo viacerými substituentami vybranými zo skupiny obsahujúcej:

   (i) alkylovú skupinu, alkenylovú skupinu a alkinylovú skupinu, kde každá alkylová skupina, alkenylová skupina alebo alkinylová skupina' je buď nesubstituovaná alebo je substituovaná jedným alebo viacerými substituentami vybranými zo skupiny obsahujúcej (alkoxykarbonyl)aralkylkarbamoylovú skupinu, (amino) (R⁵)acylhydrazinylkarbonylovú skupinu, (amino) (R⁵)acyloxykarboxylovú skupinu, (hydroxy) (karboalkoxy)alkylkarbamoylovú skupinu, acylaminoalkylaminoskupinu, acyloxyskupinu, aldehydickú skupinu, alkenyloxyskupinu, alkenylaminoskupinu, alkenylsulfonylaminoskupinu, alkoxyskupinu, alkoxykarbonylovú skupinu, alkoxykarbonylalkylaminoskupinu, alkoxykarbonylaminoskupinu, alkoxykarbonylaminoacyloxyskupinu, alkoxykarbonylaminoalkylaminoskupinu, alkylaminoskupinu, alkylaminoalkylaminoskupinu, alkylkarbamoylovú skupinu, alkylfosfónovú skupinu, alkylsulfonylaminoskupinu, alkylsulfonyloxyskupinu, aminoskupinu, aminoacyloxyskupinu, aminoalkylaralkylkarbamoylovú skupinu, aminoalkylkarbamoylovú skupinu, aminoalkylheterocyklylalkylkarbamoylovú skupinu, aminocykloalkylalkylcykloalkylkarbamoylovú skupinu, aminocykloalkylkarbamoylovú skupinu, aralkoxykarbonylovú skupinu, aralkoxykarbonylaminoskupinu, arylheterocyklylovú skupinu, aryloxyskupinu, arylsulfonylaminoskupinu, arylsulfonyloxyskupinu, karbamoylovú skupinu, karbonylovú skupinu, kyanoskupinu, kyanoalkylkarbamoylovú skupinu, cykloalkylaminoskupinu, dialkylaminoskupinu, dialkylaminoalkylaminoskupinu, dialkylaminoalkylkarbamoylovú skupinu, dialkylfosfónovú skupinu, haloalkylsulfonylaminoskupinu, atóm halogénu, heterocyklylovú skupinu, heterocyklylalkylaminoskupinu, heterocyklylkarbamoylovú skupinu, hydroxyskupinu, hydroxyalkylsulfonylaminoskupinu, oximinoskupinu, fosfátovú skupinu, fosfónovú skupinu, skupinu -R⁵, R⁵-alkoxyskupinu, R^s-alkyl (alkyl)-aminoskupinu, R⁵-alkylalkylkarbamoylovú skupinu, R⁵-alkylaminoskupinu, R⁵-alkylkarbamoylovú skupinu, R⁵-alkylsulfonylovú skúpi54 nu, R⁵-alkylsulfonylaminoskupinu, R⁵-alkyltioskupinu, R⁵-heterocyklylkarbonylovú skupinu, substituovanú aralkylaminoskupinu, substituovanú arylkarboxyalkoxykarbonylovú skupinu, substituovanú arylsulfonylaminoalkylaminoskupinu, substituovanú heteroarylsulfonylaminoskupinu, substituovanú heterocyklylovú skupinu, substituovanú heterocyklylaminoalkylaminoskupinu, substituovanú heterocyklylsulfonylaminoskupinu, sulfoxyacylaminoskupinu, tiokarbamoylovú skupinu, trifluórmetylovú skupinu; a (ii) (alkoxykarbonyl)aralkylkarbamoylovú skupinu, (amino) (R⁵)-acylhydrazinylkarbonylovú skupinu, (amino) (R⁵)acyloxykarboxylovú skupinu, (hydroxy)(karboalkoxy)alkylkarbamoylovú skupinu, acylaminoalkylaminoskupinu, acyloxyskupinu, aldehydickú skupinu, alkenoxyskupinu, alkenylaminoskupinu, alkenylsulfonylaminoskupinu, alkoxyskupinu, alkoxykarbonylovú skupinu, alkoxykarbonylalkylaminoskupinu, alkoxykarbonylaminoskupinu, alkoxykarbonylaminoacyloxyskupinu, alkoxykarbonylaminoalkylaminoskupinu, alkylaminoskupinu, alkylaminoalkylaminoskupinu, alkylkarbamoylovú skupinu, alkylfosfónovú skupinu, alkylsulfonylaminoskupinu, alkylsulfonyloxyskupinu, aminoskupinu, aminoacyloxyskupinu, aminoalkylaralkylkarbamoylovú skupinu, aminoalkylkarbamoylovú skupinu, aminoalkylheterocyklylalkylkarbamoylovú skupinu, aminocykloalkylalkylcykloalkylkarbamoylovú skupinu, aminocykloalkylkarbamoylovú skupinu, aralkoxykarbonylovú skupinu, aralkoxykarbonylaminoskupinu, arylheterocyklylovú skupinu, aryloxyskupinu, arylsulfonylaminoskupinu, arylsulfonyloxyskupinu, karbamoylovú skupinu, karbonylovú skupinu, kyanoskupinu, kyanoalkylkarbamoylovú skupinu, cykloalkylaminoskupinu, dialkylaminoskupinu, dialkylaminoalkylaminoskupinu, dialkylaminoalkylkarbamoylovú skupinu, dialkylfosfónovú skupinu, haloalkylsulfonylaminoskupinu, atóm halogénu, heterocyklylovú skupinu, heterocyklylalkylaminoskupinu, heterocyklylkarbamoylovú skupinu, hydroxyskupinu, hydroxyalkylsulfonylaminoskupinu, oximinoskupinu, fosfátovú skupinu, fosfónovú skupinu, skupinu -R⁵, R⁵-alkoxyskupinu, R⁵-alkyl(alkyl)-aminoskupinu, R⁵-alkylalkylkarbamoylovú skupinu, R⁵-alkylamino55 skupinu, R⁵-alkylkarbamoylovú skupinu, R⁵-alkyisulfonylovú skupinu, R^s-alkylsulfonylaminoskupinu, R⁵-alkyltioskupinu, R²-heterocyklylkarbonylovú skupinu, substituovanú aralkylaminoskupinu, substituovanú arylkarboxyalkoxykarbonylovú skupinu, substituovanú arylsulfonylaminoalkylaminoskupinu, substituovanú heteroarylsulfonylaminoskupinu, substituovanú heterocyklylovú skupinu, substituovanú heterocyklylaminoalkylaminoskupinu, substituovanú heterocyklylsulfonylaminoskupinu, sulfoxyacylaminoskupinu, tiokarbamoylovú skupinu, trifluórmetylovú skupinu;

   R⁴ je vybraný zo skupiny obsahujúcej atóm vodíka, alkylovú skupinu obsahujúcu 1 až 4 atómy uhlíka, skupinu alkyl-CO₂H obsahujúcu 1 až 4 atómy uhlíka v alkylovej časti a fenylovú skupinu, kde uvedená alkylová skupina, skupinu alkyl-CO₂H a fenylová skupina sú buď nesubstituované alebo substituované jedným až tromi substituentami vybranými zo skupiny obsahujúcej atóm halogénu, hydroxyskupinu, metoxyskupinu, aminoskupinu, nitroskupinu, benzylovú skupinu a benzylovú skupinu substituovanú jedným až tromi substituentami vybranými zo skupiny obsahujúcej atóm halogénu, hydroxyskupinu, metoxyskupinu, aminoskupinu a nitroskupinu;

   R⁵ je vybraný zo skupiny obsahujúcej skupinu ) _nCOOH, skupinu -C(CF3)₂OH, skupinu -CONHNHSO2CF3, skupinu -CONHOR⁴, skupinu -CONHSO2R⁴, skupinu -CONHSO2NHR⁴, skupinu -C (OH) R⁴PO3H2, skupinu -NHCOCF3, skupinu NHCONHSO2R⁴, skupinu -NHPO3H2, skupinu -NHSO2R⁴, skupinu -NHSO2NHCOR⁴, skupinu -OPO3H2, skupinu -OSO₃H, skupinu -PO (OH) R⁴, skupinu -PO3H2, skupinu -SO3H, skupinu -SO2NHR⁴, skupinu -SO3NHCOR⁴, skupinu -SO3NHCONHCO₂R⁴ a nasledovné skupiny:

   n je Ο, 1, 2, alebo 3;

   A je vybraný zo skupiny obsahujúcej skupinu -CH=CH-, skupinu -(CH)_m~(CH)_m-, skupinu -CH=CH-CH₂- a skupinu -CH₂-CH=CH-;

   m je 1 alebo 2;

   X je atóm kyslíka alebo atóm síry;

   Z je vybraný zo skupiny obsahujúcej jednoduchú väzbu, skupinu -0-, skupinu -(CH₂)_n-, skupinu -O(CH₂)₁.₂-, skupinu -CH₂OCH₂-, skupinu - (CH₂) i-₂0-;

   R⁶ j^e vybraný zo skupiny obsahujúcej atóm vodíka, alkylovú skupinu, acylovú skupinu, alkylsulfonylovú skupinu, aralkylovú skupinu, substituovanú aralkylovú skupinu, substituovanú alkylovú skupinu a heterocyklylovú skupinu; a

   R⁷ j^e vybraný zo skupiny obsahujúcej:

   a) atóm vodíka;

   b) alkylovú skupinu, alkenylovú skupinu, ktorá má nie menej než 3 atómy uhlíka alebo alkinylovú skupinu, ktorá má nie menej než 3 atómy uhlíka, kde uvedená alkylová skupina, alkenylová skupina alebo alkinylová skupina je buď nesubstituované alebo je substituovaná jedným alebo viacerými substituentami vybranými zo skupiny obsahujúcej hydroxyskupinu, alkoxyskupinu, aminoskupinu, alkylaminoskupinu, dialkylaminoskupinu, heterocyklylovú skupinu, acylaminoskupinu, alkylsulfonylaminoskupinu a heterocyklylkarbonylaminoskupinu ;

   c) arylovú skupinu alebo substituovanú arylovú skupinu;

   d) alkylarylovú skupinu alebo alkylovou skupinou substituovanú arylovú skupinu.

   9. Zlúčenina podľa nároku 8, kde zlúčenina je vo forme vybranej zo skupiny obsahujúcej achirálnu zlúčeninu, racemát, opticky aktívnu zlúčeninu, čistý diastereoizomér, zmes diastereoizomérov a farmakologicky prijateľnú adičnú sol.

   10. Zlúčenina podlá nároku 8, kde R¹ a R² sú navzájom nezávisle vybrané zo skupiny obsahujúcej:

   a) alkylovú skupinu, alkenylovú skupinu alebo alkinylovú skupinu, kde uvedená alkylová skupina, alkenylová skupina alebo alkinylová skupina sú buď nesubstituovaná alebo sú substituované jedným alebo viacerými substituentami vybranými zo skupiny obsahujúcej hydroxyskupinu, alkoxyskupinu, aminoskupinu, alkylaminoskupinu, dialkylaminoskupinu, heterocyklylovú skupinu, acylaminoskupinu, alkylsulfonylaminoskupinu a heterocyklylkarbonylaminoskupinu; a

   b) arylovú skupinu alebo substituovanú arylovú skupinu.

   11. Zlúčenina podlá nároku 10, kde aspoň jeden z R¹ a R^- je alkylová skupina.

   12. Zlúčenina podlá nároku 8, kde A je skupina - (CH)_m-(CH)_m-.

   13. Zlúčenina podlá nároku 8, kde R⁷ je alkylová skupina.

   14. Zlúčenina podľa nároku 8, kde Z je jednoduchá väzba.

   15. Zlúčenina podľa nárokov 1 alebo 8, kde zlúčenina je vybraná zo skupiny obsahujúcej zlúčeniny 1 až 32 z Tabuľky 1.

   16. Zlúčeniny podľa nároku 15, kde zlúčenina je vybraná zo skupiny obsahujúcej:

   2-(4-Hydroxybicyklo[2.2.2]okt-l-yl) -7-izopropyl-4-propyl-1,4,6,7-tetrahydro-l,3,4,5a, 8-pentaaza-as-indacen-5-ón (zlúčenina 1);
4. 7-Etyl-2-(4-hydroxybicyklo[2.2.2] okt-l-yl)-4-propyl-1,4,6,7-tetrahydro-1,3,4,5a,8-pentaaza-as-indacen-5-ón (zlúčenina 2);

   Kyselina 3-[4- (7-etyl-5-oxo-4-propyl-4,5,6,7-tetrahydro-lH-1,3,4,5a,8-pentaaza-as-indacen-2-yl)bicyklo[2.2.2]okt-l-yl]-propiónová (zlúčenina 3);

   2-(4-Hydroxy-bicyklo[2.2.2]okt-l-yl) - 7-metyl-4-propyl-1,4,6,7-tetrahydro-1,3,4,5a,8-pentaaza-as-indacen-5-ón (zlúčenina 4); a

   Kyselina 3- [4- (7-izopropyl-5-oxo-4-propyl-4,5,6,7-tetrahydro-1H-1,3,4,5a,8-pentaaza-as-indacen-2-yl)bicyklo[2.2.2]okt-l-yl]-propiónová (zlúčenina 5).

   17. Farmaceutická kompozícia, vyznačujúca sa tým, že obsahuje farmaceutický účinné množstvo zlúčeniny podlá nárokov 1 alebo 8 a farmaceutický prijateľný nosič, adjuvans alebo vehikulum.

   18. Farmaceutická kompozícia podlá nároku 17, vyznačujúca sa tým, že ďalej obsahuje neadenozinové modifikačné činidlo.

   19. Farmaceutická kompozícia podlá nároku 17, vyznaču j ú c a sa tým, že kompozícia je formulovaná na orálne, intravenózne, intramuskulárne alebo subkutánne podávanie.

   20. Použitie zlúčeniny podlá nárokov 1 až 16 na výrobu medikamentov na blokovanie Αχ adenozínových receptorov v prípade pacientov.

   21. Použitie zlúčeniny podľa ktoréhokoľvek z nárokov 1 až 16 na výrobu medikamentov na liečenie alebo prevenciu choroby alebo poruchy v prípade pacientov, kde aktivácia Αχ adenozínových receptorov je príčinou tejto choroby alebo poruchy.

   22. Spôsob liečenia pacientov vyznačujúcich sa známkami alebo symptómami choroby alebo poruchy, kde aktivácia Αχ adenozínového receptora je príčinou tejto choroby alebo poruchy, vyznačujúci sa tým, že sa uvedenému pacientovi podáva farmaceutický účinné množstvo farmaceutickej kompozície podľa nároku 17.

   23. Spôsob podľa nároku 22, vyznačujúci sa tým, že choroba alebo porucha je vybraná zo skupiny zahŕňajúcej systémovú hypertenziu, renálne zlyhanie, diabetes, astmu, edémové stavy, kongestívne zlyhanie srdca a renálnu dysfunkciu.

   24. Spôsob prípravy zlúčeniny podľa nárokov 1 alebo 8, vyznačujúci sa tým, že zahŕňa kroky:

   a) alkylácia tioketónu, pričom vznikne tioéter;

   b) reakcia tioéteru so substituovaným aminoalkoholom, pričom vznikne alkoholový intermediát; a

   c) cyklizácia alkoholového intermediátu, pričom vznikne cyklizovaný produkt.

   25. Spôsob prípravy podlá nároku 24, vyznačujúci sa tým, že ďalej zahŕňa krok:

   a) prevedenie cyklizovaného produktu na derivát karboxylovej kyseliny.

   26. Spôsob prípravy podlá nároku 25, vyznačujúci sa tým, že ďalej zahŕňa kroky:

   a) kapling diaminouracilu s monometylesterom kyseliny bicyklo- [2.2.2]oktán-1,4-dikarboxylovej, pričom vznikne kyselina;

   b) redukcia kyseliny na zodpovedajúci alkohol; c) oxidácia alkoholu na aldehyd; d) kapling aldehydu s metyl(trifenylfosforanylidén)acetátom,

   pričom vznikne kaplovaný produkt;

   e) prevedenie kaplovaného produktu na tioketón.

   27. Spôsob prípravy podlá nároku 25, vyznačujúci sa tým, že ďalej zahŕňa kroky:

   a) kapling diaminouracilu s monometylesterom kyseliny bicyklo-

   - [2.2.2]oktán-1,4-dikarboxylovej, pričom vznikne kyselina;

   b) esterifikácia kyseliny na zodpovedajúci ester;

   c) prevedenie esteru na tioketón.

   28. Spôsob prípravy podlá nároku 24, vyznačujúci sa tým, že ďalej zahŕňa kroky:

   a) nitrozácia 6-amino-l-propyl-lH-pyrimidín-2,4-diónu, pričom vznikne nitrózovaný intermediát;

   b) redukcia nitrózovaného intermediátu, pričom vznikne zodpovedajúci diaminouracil;

   c) prevedenie diaminouracilu na aminovú soľ;

   d) kapling aminovej soli s kyselinou 4-hydroxybicyklo[2.2.2]-

   -oktán-1-karboxylovou, pričom vznikne kaplovaný produkt; a

   e) prevedenie kaplovaného produktu na tioketón.