CZ2003194A3 - Přípravek s cévy chránícím a antioxidačním účinkem a jeho použití - Google Patents

Description

Oblast techniky

Vynález se týká přípravku s cévy chránícím a antioxidačním účinkem a jeho použití.

Dosavadní stav techniky

Hypercholesterolemie, zejména zvýšená cholesterol nesoucí složka (Low density lipoprotein, LDL) jakož i oxidační přeměna LDL v krvi a v endoteliálních lézích jsou hlavními faktory způsobujícími vývoj aterosklerózy. Ateroskleróza je léta se vlekoucí onemocnění s lipidovými usazeninami v arteriálním cévním systému člověka.

Toto onemocnění může narůstáním plaků (lipidových usazenin uvnitř cév), nebo lézí vést k uzavření srdečních věnčitých cév (srdečnímu infarktu). V mozku k tomu může uvolňující se destička podmínit uzavření mozkové cévy (mrtvice). Ale také v jiných částech krevního oběhu se vyvíjí ateroskleróza.

Drastické zabránění LDL-oxidace (LDL-oxidace hraje kvantitativně nej významnější úlohu při vývoji aterosklerózy) pomocí antioxidantů vede ke snížení rizika srdečního infarktu, jakož i rizika mrtvice.

Vývoj aterosklerózy je významně podmíněn oxidací tak zvaných lipoproteinů, zejména oxidací LDL. Lipoproteiny jsou makromolekulámí komplexy proteinů a lipidů, které jsou charakterizovány fyzikálně chemickými parametry jako solnou hustotou a ultraodstředivostí, jakož i speciálními proteiny (apolipoproteiny). Lipoproteiny cirkulují v krvi a umožňují transport a přenos ve vodě nerozpustných tuků jako cholesterol, neutrální tuk (triglyceridy) a fosfolipidy, při čemž jsou rozlišovány podle své hydrátované hustoty jako Věry Low Density lipoproteiny (VLDL), Low Density lipoproteiny (LDL) a Hihg Density lipoproteiny (HDL). Za vytvoření

aterosklerózy jsou v podstatě zodpovědný zvýšený LDL cholesterol a zoxidovaný stav LDL.

LDL je hlavní transportní molekula pro cholesterol a cholesterolester v krevní plasmě. Skládá se zlipidového jádra, které je obklopeno obalem z fosfolipidů a neesterifikováného cholesterolu. V obalu je uložena proteinová molekula (Apo B-100).

V krevní plasmě nastává částečně biologická oxidace LDL cholesterolu, která je možná aktivovanými formami kyslíku za současné tvorby radikálů. Další oxidace nastává dodatečně v aterosklerotickém plaku výstelkovými buňkami (vnitřní vrstva cévy, také zvaná intima), jakož i hladkými svalovými buňkami (střední vrstva cévy, media). Za lipidperoxidačních procesů v LDL jsou vícenásobně nenasycené mastné kyseliny LDL odbourány na různé produkty. Přitom vznikají mezi jiným reaktivní aldehydy, které reagují s aminokyselinami Apo B-100 a tak vyvolávají další modifikace. V každém případě podmiňuje modifikace LDL, to znamená změna tukových a proteinových podílů, problém v opětném rozpoznání, důležitým, tělu vlastním receptorovým systémem, odpovědným za látkovou výměnu LDL-cholesterolu v různých tkáních lidského těla. Tyto pozměněné, vlastními receptory nepoznané LDL, jsou nyní makrofágy nekontrolované pohlceny (už jsou známé čtyři rozdílné receptory pro pohlcení oxidované LDL) a uloženy v intima (vnitřní vrstvě cévy). Toto vede k narušené funkci oblasti (výstelka, intima a hladké svalové buňky) cévních stěn s vytvořením tak zvaných destiček nebo cévních lézí, k začátku aterosklerózy.

Zabránění oxidace LDL a také VLDL a HDL, a tím zamezení vývoje aterosklerózy je s různými antioxidanty v mnoha zvířecích modelech již prokázáno, přičemž jsou prozkoumány různé látky obsažené v rostlinných extraktech. Většinou se jedná o vodní extrakty, které obsahují flavonoidy.

Podstata vynálezu

Proto je úkolem vynálezu poskytnout nový přípravek, který zabrání oxidaci LDL v krevní tekutině.

Tento úkol je vyřešen přípravkem s význaky nároku 1.

Podle vynálezu zahrnuje přípravek éterický olej obsahující terpinen, nebo terpinen. Především jsou používány éterické oleje z citrusových plodů, zejména z citronů, které obsahují γ-terpinen jako přírodní složku.

Použije-li se éterických olejů k výrobě přípravku podle vynálezu, může být také použit ve formě obohacené terpinenem.

Ve zvláště výhodné formě provedení přípravek navíc obsahuje ještě atokoferol (vitamin E) a/nebo koenzym Q (Qio). Kombinací těchto účinných látek podle vynálezu je dán výhodný synergický účinek, který nebyl odborníkem předvídán. Výrazné zabránění oxidace LDL v krvi je důsledkem.

Oxidace LDL in vitro je užívaný model k ověření antioxidačních vlastností různých látek, neboť předinkubací krevní tekutiny s (především lipofilními) testovacími látkami tyto mohou in vitro být v LDL obohaceny (McLean a Hagaman, 1989, Biochemistry 28 (1); 321-327, Esterbauer et al, 1991b, Am. J. Clin. Nutr. 53, 315S-321S). Po obohacení může být jejích vliv na oxidovatelnost LDL prozkoumán.

Antioxidační a tím lipidy snižující účinek citrónového oleje popřípadě γterpinenu mohl být v modelu LDL-oxidace prokázán. Tento účinek je pravděpodobně podmíněn strukturou, neboť na isopropylové skupině může být H-abstrakcí peroxylradikálů mastné kyseliny vytvořen relativně stabilní terciální radikál, který je aspoň jednou dvojnou vazbou mezomemě stabilizován. \

ΓΊ

• fl ·

Ochrana LDL před oxidací citrónovým olejem popřípadě v něm obsaženým γ-terpinenem spočívá také v jeho schopnosti reagovat s lipidperoxylradikály a tím vést jednak k přerušení řetězové reakce lipidperoxidace a jednak ke zpomalení oxidace proteinů.

Přípravek podle vynálezu se dá účelně použít v různých oborech. Přípravek tak může být použit jako lék, potravinový doplněk a/nebo jako dietetikum, při čemž mohou být podle potřeby obsaženy další účinné látky, nezávadné přísady a/nebo pomocné látky.

Podle výhodné formy provedení přípravku podle vynálezu jsou použity následující koncentrace:

γ-terpinen 0,5-20 hmotnostních % a-tokoferol 10-50 hmotnostních % koenzym Q (Qio) 10-50 hmotnostních %

Další výhodná provedení jsou charakterizována v závislých nárocích.

Přehled obrázků na výkresech

Následně je vynález vysvětlen podle výsledků výzkumu, které jsou doplňkově znázorněny na obr. 1-5, kde značí obr.l ovlivnění tvorby konjugovaných dienů v LDL jeho obohacením citrónovým olejem, obr.2 ovlivnění tvorby konjugovaných dienů v LDL jeho obohacením γterpinenem, obr.3 zpomalení tvorby konjugovaných dienů v LDL jeho obohacením γterpinenem, α-tokoferolem a redukovaným koenzymem Q (Qio): neočekávaný efekt, obr.4 Cu(II)-indukovaná ztráta tryptofanové fluorescence v kontrolním LDL a v LDL obohaceným citrónovým olejem, a obr.5 Cu(II)-indukovaná ztráta tryptofanové fluorescence v kontrolním LDL a v LDL obohaceným γ-terpinenem.

Příklady provedení vynálezu

Vliv citrónového oleje a γ-terpinenu na tvorbu konjugovaného dienu v LDL

Kontinuální měření tvorby konjugovaného dienu v LDL je uznávaná metoda ke srovnávání oxidovatelnosti lipidových podílů různých LDL zkoušek (Esterbauer a další 1989, Free Rad. Res. Comms. 6(1), 67-75; Parthasarathy a další 1998, Free Rad. Res. 28, 583-591). Lag-fáze přitom podává informaci o oxidovatelnosti LDL; delší Lag-fáze znamená oxidační rezistenci. Bylo zkoumáno, jestli obohacení LDL citrónovým olejem nebo γ-terpinenem může chránit LDL před Cu(II)-indukovanou oxidací. Jak ukazuje obr.l, je tvorba konjugovaného dienu v LDL jeho obohacením citrónovým olejem zřetelně prodloužena.

V dalším zkoušce byla krevní tekutina inkubována 0,5; 0,25; 0,1 a 0,18 % γ-terpinenem a z toho isolovaná LDL byla prozkoumána na její odolnost proti oxidaci vyvolané mědí. Přitom se ukázalo na koncentraci závislé prodloužení Lag-fáze. Už s0,01% γ-terpinenu v krevní tekutině se Lag-fáze zřetelně prodlouží, s0,l % γ-terpinenu v krevní tekutině se Lag-fáze prodlouží o asi 250 min, zkoušky s vyšší koncentrací v krevní tekutině po 500 min ještě nedosáhly propagační fáze (obr.2).

Je li krevní tekutina inkubována γ-terpinenem s přídavkem α-tokoferolu a koenzymu Q, dá se oxidační rezistence LDL opět zřetelně zvýšit.

Vliv citrónového oleje a γ-terpinenu na Cu(II)-indukovanou ztrátu tryptofanové fluorescence v LDL

Na základě 37 tryptofanových zbytků vApoB-100 ukazuje LDL vUVoblasti fluorescenci. Oxidace HDL nebo LDL s Cu(II) je doprovázena úbytkem tryptofanových zbytků (Reyftmann a další, 1990, Biochim. Biophys. Acta 1042, 159-167), toto může být sledováno měřením fluorescence. Po přidání Cu(II) k LDL-roztoku nastane nejdříve během několika sekund pokles fluorescence, který podle Quenching-efektů souvisí smědí. Následně se fluorescence víceméně lineárně zmenšuje, v druhé fázi se fluorescence rychle zmenší. Čas až po přechod z pomalejší k rychlejší fázi může být jakou u dienové konjugace definován jako Lag-fáze. (GieBauf a další, 1985, Biochim. Biophys. Acta 1256, 221-232). Rychlý pokles fluorescence nasazuje přibližně současně s propagační fází dienové konjugace a spočívá asi v reakci produktů lipidové peroxidace s tryptofanovými zbytky. Také při tomto testovacím systému bylo zkoušeno, jestli obohacení LDL citrónovým olejem nebo γterpinenem má vliv na Cu(II)-indukovanou ztrátu tryptofanové fluorescence. Zjistilo se, že citrónový olej může zřetelně zpozdit pozdější proteinovou oxidaci, γ-terpinenem se také zpomalí raná proteinová oxidace, koncentrací 0,5 % γ-terpinenu v krevní tekutině je oxidaci tryptofanových zbytků v LDL dokonce skoro docela zabráněno (obr.4 a obr.5).

Přípravek dle vynálezu může být zpracován v libovolnou formu podávání. Může sloužit jako léčivo, potravinový doplněk, nebo jako dietetikum. Zředěný může být vydáván například jako kapalina ve formě šťávy, nebo ve formě kapek. Dále může být také přidáván kapalinám, jako syrovátka, nebo pevným látkám, jako balastovým látkám nebo cereáliím.

Podle formy podávání může přípravek podle vynálezu obsahovat nezávadné přírodní nebo syntetické přísady nebo pomocné látky, jako pojivá, kypřidla, • · • · ··*» kluzné přípravky, dělicí přípravky, rozpouštědla, stabilizátory, barviva a chuťové korektory. Příklady pro vynález použitelných pomocných látek jsou

- pojivá, jako Škrob, algináty, želatina, cukr, mouka z jader svatojánského chleba, celulózové deriváty, jako celulózové étery a polymery, jako polyvinylpyrrolidon;

- kypřidla, jako škrob a škrobový éter;

- kluzné přípravky a dělicí přípravky jako mastek, stearáty jako vápníkový- a hořčíkový stearát, hořčíkový- a vápníkový karbonát, celulóza, oxid hořečnatý, koloidní kyselina křemičitá, silikáty jako sodný-, hořečnatý-,vápenatý- a hlinitý silikát, dělicí mouky jako chlebová mouka, obilné slupky, bramborová moučka, pohanková a dřevěná moučka a mouka z jader svatojánského chleba;

- rozpouštědla jako voda, alkohol a roztoky pojidel;

- stabilizátory jako tuky, oleje,aromatické látky a deriváty škrobu;

- barviva jako potravinová- a pro léčiva přípustná přírodní a syntetická barviva a pigmenty, například karoten, cukrový karamel, betanin, a licopin; a

- chuťové korektory jako koření, soli, sladidla a aromatické látky.

Výše uvedené pomocné látky se hodí zejména k tabletování a granulování. V případě použití jako potravinový doplněk může být přípravek podle vynálezu přidán v libovolném výrobním kroku žádanému výrobku.

Claims (10)

1. PATENTOVÉ NÁROKY

   1. Přípravek s cévy chránícím a antioxidačním účinkem vyznačující se tím, že zahrnuje terpinen obsahující éterický olej, nebo terpinen.
2. 2. Přípravek podle nároku 1 vyznačující se tím, že terpinen je γ-terpinen.
3. 3. Přípravek podle nároku 1 nebo 2 vyznačující se tím, že éterický olej je citrónový olej.
4. 4. Přípravek podle nároku 1 až 3 vyznačující se tím, že obsahuje další účinné látky, nezávadné přísady a/nebo pomocné látky.
5. 5. Přípravek podle nároku 4 vyznačující se tím, že obsahuje a-tokoferol.
6. 6. Přípravek podle nároku 4 nebo 5 vyznačující se tím, že obsahuje koenzymem Q (Qio)·
7. 7. Přípravek podle nároku 1 vyznačující se tím, že éterický olej je obohacen terpinenem.
8. 8. Použití přípravku podle jednoho z nároků 1 až 7 jako léčiva.
9. 9. Použití přípravku podle jednoho z nároků 1 až 7 jako potravinového doplňku.
10. 10. Použití přípravku podle jednoho z nároků 1 až 7 jako dietetika.