CZ20033055A3 - Způsob přípravy extraktu z listů Ginkgo biloba vysoce obohaceného účinnými látkami - Google Patents
Způsob přípravy extraktu z listů Ginkgo biloba vysoce obohaceného účinnými látkami Download PDFInfo
- Publication number
- CZ20033055A3 CZ20033055A3 CZ20033055A CZ20033055A CZ20033055A3 CZ 20033055 A3 CZ20033055 A3 CZ 20033055A3 CZ 20033055 A CZ20033055 A CZ 20033055A CZ 20033055 A CZ20033055 A CZ 20033055A CZ 20033055 A3 CZ20033055 A3 CZ 20033055A3
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- ginkgo biloba
- extract
- solution
- dry
- ethyl acetate
- Prior art date
Links
- 239000000284 extract Substances 0.000 title claims abstract description 98
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 41
- 235000008100 Ginkgo biloba Nutrition 0.000 title claims abstract description 28
- 244000194101 Ginkgo biloba Species 0.000 title claims abstract description 27
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 97
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 49
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims abstract description 34
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims abstract description 31
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 22
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims abstract description 18
- 239000012071 phase Substances 0.000 claims abstract description 17
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims abstract description 16
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 claims abstract description 13
- 238000000622 liquid--liquid extraction Methods 0.000 claims abstract description 13
- 238000000638 solvent extraction Methods 0.000 claims abstract description 13
- 238000005406 washing Methods 0.000 claims abstract description 13
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 claims abstract description 11
- 239000008346 aqueous phase Substances 0.000 claims abstract description 7
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims abstract description 5
- XDTMQSROBMDMFD-UHFFFAOYSA-N Cyclohexane Chemical compound C1CCCCC1 XDTMQSROBMDMFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 3
- IMNFDUFMRHMDMM-UHFFFAOYSA-N N-Heptane Chemical compound CCCCCCC IMNFDUFMRHMDMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 18
- 239000000843 powder Substances 0.000 claims description 15
- -1 flavon glycosides Chemical class 0.000 claims description 13
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims description 12
- 235000011949 flavones Nutrition 0.000 claims description 11
- 229930182470 glycoside Natural products 0.000 claims description 11
- VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N n-Hexane Chemical compound CCCCCC VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims description 9
- 229940106580 ginkgo biloba leaf extract Drugs 0.000 claims description 8
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 8
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 claims description 7
- 238000001816 cooling Methods 0.000 claims description 7
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims description 7
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 7
- 238000000605 extraction Methods 0.000 claims description 6
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 6
- 239000012267 brine Substances 0.000 claims description 4
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 4
- HPALAKNZSZLMCH-UHFFFAOYSA-M sodium;chloride;hydrate Chemical compound O.[Na+].[Cl-] HPALAKNZSZLMCH-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 4
- 208000018152 Cerebral disease Diseases 0.000 claims description 3
- 230000002490 cerebral effect Effects 0.000 claims description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 3
- 208000018262 Peripheral vascular disease Diseases 0.000 claims description 2
- 230000004770 neurodegeneration Effects 0.000 claims description 2
- 208000015122 neurodegenerative disease Diseases 0.000 claims description 2
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 claims description 2
- 238000011360 adjunctive therapy Methods 0.000 claims 1
- 238000011210 chromatographic step Methods 0.000 claims 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 abstract description 5
- PKMNZOFQIRXQDO-UHFFFAOYSA-N heptane;hexane Chemical compound CCCCCC.CCCCCCC PKMNZOFQIRXQDO-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 31
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 25
- MOLPUWBMSBJXER-YDGSQGCISA-N bilobalide Chemical compound O([C@H]1OC2=O)C(=O)[C@H](O)[C@@]11[C@@](C(C)(C)C)(O)C[C@H]3[C@@]21CC(=O)O3 MOLPUWBMSBJXER-YDGSQGCISA-N 0.000 description 21
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 16
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 229930184727 ginkgolide Natural products 0.000 description 12
- ZWEHNKRNPOVVGH-UHFFFAOYSA-N 2-Butanone Chemical compound CCC(C)=O ZWEHNKRNPOVVGH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- GAMYVSCDDLXAQW-AOIWZFSPSA-N Thermopsosid Natural products O(C)c1c(O)ccc(C=2Oc3c(c(O)cc(O[C@H]4[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](CO)O4)c3)C(=O)C=2)c1 GAMYVSCDDLXAQW-AOIWZFSPSA-N 0.000 description 9
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 9
- 229930003944 flavone Natural products 0.000 description 9
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N isopropyl alcohol Natural products CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- VHBFFQKBGNRLFZ-UHFFFAOYSA-N vitamin p Natural products O1C2=CC=CC=C2C(=O)C=C1C1=CC=CC=C1 VHBFFQKBGNRLFZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Natural products OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N methanol Natural products OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N methyl cyanide Natural products CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 7
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 7
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 7
- 239000012074 organic phase Substances 0.000 description 7
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 6
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 6
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 5
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 5
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 4
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N N-Butanol Chemical compound CCCCO LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 4
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 4
- 235000020686 ginkgo biloba extract Nutrition 0.000 description 4
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 4
- WOVKYSAHUYNSMH-RRKCRQDMSA-N 5-bromodeoxyuridine Chemical compound C1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C(=O)NC(=O)C(Br)=C1 WOVKYSAHUYNSMH-RRKCRQDMSA-N 0.000 description 3
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 3
- 101710166801 Translocator protein Proteins 0.000 description 3
- 102100031274 Translocator protein Human genes 0.000 description 3
- GLNADSQYFUSGOU-GPTZEZBUSA-J Trypan blue Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[Na+].C1=C(S([O-])(=O)=O)C=C2C=C(S([O-])(=O)=O)C(/N=N/C3=CC=C(C=C3C)C=3C=C(C(=CC=3)\N=N\C=3C(=CC4=CC(=CC(N)=C4C=3O)S([O-])(=O)=O)S([O-])(=O)=O)C)=C(O)C2=C1N GLNADSQYFUSGOU-GPTZEZBUSA-J 0.000 description 3
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 3
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 3
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 3
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 description 3
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 3
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 description 3
- IDGUHHHQCWSQLU-UHFFFAOYSA-N ethanol;hydrate Chemical compound O.CCO IDGUHHHQCWSQLU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 description 3
- 229930195712 glutamate Natural products 0.000 description 3
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 3
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 3
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 3
- 238000013268 sustained release Methods 0.000 description 3
- 239000012730 sustained-release form Substances 0.000 description 3
- 235000007586 terpenes Nutrition 0.000 description 3
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 2
- 208000024827 Alzheimer disease Diseases 0.000 description 2
- WOVKYSAHUYNSMH-UHFFFAOYSA-N BROMODEOXYURIDINE Natural products C1C(O)C(CO)OC1N1C(=O)NC(=O)C(Br)=C1 WOVKYSAHUYNSMH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229920000742 Cotton Polymers 0.000 description 2
- 239000009429 Ginkgo biloba extract Substances 0.000 description 2
- 101000845233 Homo sapiens Translocator protein Proteins 0.000 description 2
- REFJWTPEDVJJIY-UHFFFAOYSA-N Quercetin Chemical compound C=1C(O)=CC(O)=C(C(C=2O)=O)C=1OC=2C1=CC=C(O)C(O)=C1 REFJWTPEDVJJIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 2
- 230000032683 aging Effects 0.000 description 2
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 2
- 230000003833 cell viability Effects 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 238000013375 chromatographic separation Methods 0.000 description 2
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 2
- 238000010908 decantation Methods 0.000 description 2
- OAYLNYINCPYISS-UHFFFAOYSA-N ethyl acetate;hexane Chemical compound CCCCCC.CCOC(C)=O OAYLNYINCPYISS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000003818 flash chromatography Methods 0.000 description 2
- 229940068052 ginkgo biloba extract Drugs 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- 235000015110 jellies Nutrition 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L magnesium stearate Chemical compound [Mg+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 2
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 2
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 2
- 239000006187 pill Substances 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 239000008213 purified water Substances 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 2
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 2
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 2
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000011877 solvent mixture Substances 0.000 description 2
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 2
- 239000001648 tannin Substances 0.000 description 2
- 229920001864 tannin Polymers 0.000 description 2
- 235000018553 tannin Nutrition 0.000 description 2
- 150000003505 terpenes Chemical class 0.000 description 2
- 238000003828 vacuum filtration Methods 0.000 description 2
- KEQXNNJHMWSZHK-UHFFFAOYSA-L 1,3,2,4$l^{2}-dioxathiaplumbetane 2,2-dioxide Chemical compound [Pb+2].[O-]S([O-])(=O)=O KEQXNNJHMWSZHK-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 125000004182 2-chlorophenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C(Cl)=C(*)C([H])=C1[H] 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 1
- 208000000044 Amnesia Diseases 0.000 description 1
- 201000001320 Atherosclerosis Diseases 0.000 description 1
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 description 1
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108020001019 DNA Primers Proteins 0.000 description 1
- 239000003155 DNA primer Substances 0.000 description 1
- 206010012289 Dementia Diseases 0.000 description 1
- 229920001353 Dextrin Polymers 0.000 description 1
- 239000004375 Dextrin Substances 0.000 description 1
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- 241000218628 Ginkgo Species 0.000 description 1
- 235000011201 Ginkgo Nutrition 0.000 description 1
- 208000032843 Hemorrhage Diseases 0.000 description 1
- 208000023105 Huntington disease Diseases 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N Magnesium Chemical compound [Mg] FYYHWMGAXLPEAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010029350 Neurotoxicity Diseases 0.000 description 1
- 238000000636 Northern blotting Methods 0.000 description 1
- 239000004677 Nylon Substances 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 208000018737 Parkinson disease Diseases 0.000 description 1
- 239000004952 Polyamide Substances 0.000 description 1
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 1
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 1
- ZVOLCUVKHLEPEV-UHFFFAOYSA-N Quercetagetin Natural products C1=C(O)C(O)=CC=C1C1=C(O)C(=O)C2=C(O)C(O)=C(O)C=C2O1 ZVOLCUVKHLEPEV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HWTZYBCRDDUBJY-UHFFFAOYSA-N Rhynchosin Natural products C1=C(O)C(O)=CC=C1C1=C(O)C(=O)C2=CC(O)=C(O)C=C2O1 HWTZYBCRDDUBJY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000034189 Sclerosis Diseases 0.000 description 1
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 1
- 208000007536 Thrombosis Diseases 0.000 description 1
- 206010044221 Toxic encephalopathy Diseases 0.000 description 1
- 229920004890 Triton X-100 Polymers 0.000 description 1
- 239000013504 Triton X-100 Substances 0.000 description 1
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 1
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 1
- 208000035868 Vascular inflammations Diseases 0.000 description 1
- 206010054880 Vascular insufficiency Diseases 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- DPXJVFZANSGRMM-UHFFFAOYSA-N acetic acid;2,3,4,5,6-pentahydroxyhexanal;sodium Chemical compound [Na].CC(O)=O.OCC(O)C(O)C(O)C(O)C=O DPXJVFZANSGRMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 1
- 238000011374 additional therapy Methods 0.000 description 1
- 239000011543 agarose gel Substances 0.000 description 1
- 239000001166 ammonium sulphate Substances 0.000 description 1
- 238000000376 autoradiography Methods 0.000 description 1
- 208000034158 bleeding Diseases 0.000 description 1
- 230000000740 bleeding effect Effects 0.000 description 1
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 1
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 1
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 1
- 239000008366 buffered solution Substances 0.000 description 1
- 239000006227 byproduct Substances 0.000 description 1
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 1
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001506 calcium phosphate Substances 0.000 description 1
- 229910000389 calcium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011010 calcium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- 239000001768 carboxy methyl cellulose Substances 0.000 description 1
- 230000006037 cell lysis Effects 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 108091092328 cellular RNA Proteins 0.000 description 1
- 230000007541 cellular toxicity Effects 0.000 description 1
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 1
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 1
- 235000010980 cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001149 cognitive effect Effects 0.000 description 1
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 1
- 229920002770 condensed tannin Polymers 0.000 description 1
- 230000008094 contradictory effect Effects 0.000 description 1
- RGWHQCVHVJXOKC-SHYZEUOFSA-J dCTP(4-) Chemical compound O=C1N=C(N)C=CN1[C@@H]1O[C@H](COP([O-])(=O)OP([O-])(=O)OP([O-])([O-])=O)[C@@H](O)C1 RGWHQCVHVJXOKC-SHYZEUOFSA-J 0.000 description 1
- 230000006735 deficit Effects 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 235000019425 dextrin Nutrition 0.000 description 1
- 235000015872 dietary supplement Nutrition 0.000 description 1
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 238000011067 equilibration Methods 0.000 description 1
- LJQKCYFTNDAAPC-UHFFFAOYSA-N ethanol;ethyl acetate Chemical compound CCO.CCOC(C)=O LJQKCYFTNDAAPC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 1
- 150000002334 glycols Chemical class 0.000 description 1
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 1
- 230000000971 hippocampal effect Effects 0.000 description 1
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 1
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 1
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 230000010354 integration Effects 0.000 description 1
- 238000010255 intramuscular injection Methods 0.000 description 1
- 239000007927 intramuscular injection Substances 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 208000028867 ischemia Diseases 0.000 description 1
- MWDZOUNAPSSOEL-UHFFFAOYSA-N kaempferol Natural products OC1=C(C(=O)c2cc(O)cc(O)c2O1)c3ccc(O)cc3 MWDZOUNAPSSOEL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000002596 lactones Chemical class 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 1
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 description 1
- 239000011777 magnesium Substances 0.000 description 1
- 229910052749 magnesium Inorganic materials 0.000 description 1
- ZLNQQNXFFQJAID-UHFFFAOYSA-L magnesium carbonate Chemical compound [Mg+2].[O-]C([O-])=O ZLNQQNXFFQJAID-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000001095 magnesium carbonate Substances 0.000 description 1
- 229910000021 magnesium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000014380 magnesium carbonate Nutrition 0.000 description 1
- 235000019359 magnesium stearate Nutrition 0.000 description 1
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 229920000609 methyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 239000001923 methylcellulose Substances 0.000 description 1
- 235000010981 methylcellulose Nutrition 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 210000002569 neuron Anatomy 0.000 description 1
- 230000007135 neurotoxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000228 neurotoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 229920001778 nylon Polymers 0.000 description 1
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 230000010412 perfusion Effects 0.000 description 1
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 1
- 239000000590 phytopharmaceutical Substances 0.000 description 1
- 239000013600 plasmid vector Substances 0.000 description 1
- 229920002647 polyamide Polymers 0.000 description 1
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 1
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 1
- 229920006316 polyvinylpyrrolidine Polymers 0.000 description 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 229960001285 quercetin Drugs 0.000 description 1
- 235000005875 quercetin Nutrition 0.000 description 1
- 238000001953 recrystallisation Methods 0.000 description 1
- 239000012088 reference solution Substances 0.000 description 1
- 239000012266 salt solution Substances 0.000 description 1
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 1
- 210000000813 small intestine Anatomy 0.000 description 1
- 235000019812 sodium carboxymethyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 229920001027 sodium carboxymethylcellulose Polymers 0.000 description 1
- 239000012265 solid product Substances 0.000 description 1
- 229910001220 stainless steel Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010935 stainless steel Substances 0.000 description 1
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 1
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 1
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 1
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 239000000829 suppository Substances 0.000 description 1
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 1
- 239000000454 talc Substances 0.000 description 1
- 229910052623 talc Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000012222 talc Nutrition 0.000 description 1
- 230000000699 topical effect Effects 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H tricalcium bis(phosphate) Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- 238000001665 trituration Methods 0.000 description 1
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 1
- 230000002792 vascular Effects 0.000 description 1
- 208000019553 vascular disease Diseases 0.000 description 1
- 208000023577 vascular insufficiency disease Diseases 0.000 description 1
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
- A61K36/16—Ginkgophyta, e.g. Ginkgoaceae (Ginkgo family)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/02—Drugs for disorders of the nervous system for peripheral neuropathies
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/14—Drugs for disorders of the nervous system for treating abnormal movements, e.g. chorea, dyskinesia
- A61P25/16—Anti-Parkinson drugs
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
- A61P7/02—Antithrombotic agents; Anticoagulants; Platelet aggregation inhibitors
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
- A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
- A61P9/14—Vasoprotectives; Antihaemorrhoidals; Drugs for varicose therapy; Capillary stabilisers
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Public Health (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Neurology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Natural Medicines & Medicinal Plants (AREA)
- Neurosurgery (AREA)
- Alternative & Traditional Medicine (AREA)
- Mycology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Medical Informatics (AREA)
- Botany (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Cardiology (AREA)
- Heart & Thoracic Surgery (AREA)
- Vascular Medicine (AREA)
- Physical Education & Sports Medicine (AREA)
- Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
- Psychiatry (AREA)
- Hospice & Palliative Care (AREA)
- Psychology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
- Compounds Of Unknown Constitution (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Description
Způsob přípravy extraktu z listů Ginkgo biloba vysoce obohaceného účinnými látkami
Předmět vynálezu
Vynález se týká způsobu přípravy extraktu z listů Ginkgo biloba vysoce obohaceného účinnými látkami.
Dosavadní stav techniky
Jisté fytofarmaceutické standardizované přípravky na bázi extraktů z listů Ginkgo biloba jsou v současné době používány pro léčbu mozkových a periferálních vaskulárních poruch, zejména Evropě, ve Spojených státech a na Dálném východě. Extrakt Ginkgo biloba, který je v současné době nejvíce používán (EGb 761®), obsahuje 24 % flavonglykosidů, celkově 3 % ginkgolidů A, B, C a J a 3 % bilobalidu (viz K. Drieu, La Presse Médicale (1986), 15, 1455-1457). Doporučená denní dávka pro pacienta je 120 miligramů.
Vynález US 5,399,348 například popisuje způsob přípravy extraktu Ginkgo biloba s průměrným obsahem 24 % flavonglykosidů, 3 % ginkgolidů A, B, C a J a 3 % bilobalidů. Tento způsob zahrnuje následující kroky
i. extrakce suchého prášku listů v acetonu obsahujícín 40 % hmotn. vody;
φ φ φφφφ φ φ φ
ΦΦ φφφ · φ φ · φ φφφ φ φ φ φ φφφφφ φφφφφφ φφ · » φ · · ii. odstranění lipidů koncentrací extraktu za sníženého tlaku až do získání koncentrátu, obsahujícího přibližně 30 % pevných látek pro odstranění acetonu a potom zředění vodou pro získání obsahu 15 % pevných látek, ochlazení získané suspenze na přibližně 10 °C po dobu jedné hodiny před odstraněním lipidických precipitátu filtrací;
iii. obohacení organické fáze přidáním roztoku síranu amonného 30 % do vodného filtrátu následované extrakcí kapalina-kapalina směsí methylethylketonu a acetonu (od 9:1 do 4:6) a koncentrací organické fáze pro získání obsahu 50 a 70 % pevných látek;
iv. odstranění taninů zředěním koncentrátu ve směsi vody a ethanolu 50/50 hmotnostně pro získání obsahu 10 % pevných látek, přidání vodného roztoku olovnaté sole až do změny zabarvení z hnědé na jantarově žlutou a filtrace precipitátu olova a taninů pro získání čirého filtrátu;
odstranění olova ve formě nerozpustného síranu olovnatého koncentrací filtrátu pro udržení maximálního podílu 5 % ethanolu, přidání síranu amonného až do koncentrace přibližně 20 % s následnou extrakcí kapalinakapalina směsí methylethylketonu a ethanolu (od 8:2 do 1:1); a vi. sušení výsledného produktu koncentrací organické fáze pro získání obsahu 50 až 70 % pevných látek a sušení za ·· ···· ·· AAAA AA A • · A AA A AAA • · AAA AAAA • AAA A A A A AAAA
A A A AAAA AA A AAAAAA AA AA A <9 Í
- 3 vakua v peci za teploty 60-80 °C pro izolaci výsledného produktu obsahujícího méně než 5 % vody.
Za posledních deset let bylo vynaloženo velké úsilí pro obohacení extraktů Ginkgo biloba o účinné sloučeniny za současného snížení obsahu alergenogenních alkylfenolických sloučenin s dlouhým řetězcem, jako jsou ginkgolické kyseliny.
Je znám jistý počet přihlášek vynálezů a vynálezů, popisujících způsoby umožňující získání extraktů z listů Ginkgo biloba obohacených o flavon-glykosidy a terpenlaktony.
Například vynález US 5,389,370 se týká způsobů přípravy koncentrovaných extraktů se zvýšeným obsahem účinných sloučenin. Strategie použitá v tomto případě je smíchat frakci obohacenou o flavon-glykosidy, získanou extrakcí kapalina-kapalina s bilobalidem a ginkgolidy, isolovanými pomocí chromatografické separace v koloně pro získání žádoucího složení obsahujícího typicky 50 % flavonglykosidů a 6 % bilobalidu, 50 % flavon-glykosidů a 7 % ginkgolidů nebo 50 % flavon-glykosidů, 6 % bilobalidu a 7 % ginkgolidů. Popsaný způsob přebírá dva první kroky vynálezu US 5,399,348 uvedeného výše (které zde budou označeny jako je kroky 1 a 2), ke kterým jsou přidány následující po sobě jdoucí kroky
3. obohacení organické fáze: extrakce kapalina-kapalina směsí ethylacetátu a hexanu (9:1), vodná fáze se znovu « · ···· • · · · • · · · φ · « · ·
ΦΦΦ φ φ • · · * φ · · φ extrahuje pomocí n-butanolu a získaná n-butanolová fáze se koncentruje do sucha pro získání frakce obohacené o flavonglykosidy;
4. zpracování aktivním uhlím: promývání fáze ethylacetáthexan vodou, promytá fáze ethylacetát-hexan se potom zpracovává pomocí aktivního uhlí, filtruje se a koncentruje do sucha;
5. rekrystalizace: rozpuštění pevného residua ve směsi 50/50 hmotnostně ethanolu a vody, ochlazení pro krystalizaci a filtrace pro získání ginkgolidů;
6. kolonová chromatografie: koncentrace do sucha supernatantu kroku 5 a chromatografická separace v koloně silikagelu pro získání frakcí obohacených o bilobalid a ginkgolidy; a
7. smíchání frakcí: smíchání frakce obohacené o flavonglykosidy v kroku 3 s ginkgolidy získanými v kroku krok 5 *
nebo 6 a/nebo bilobalídem získaným v kroku 6.
- r
V jednom provedení výše uvedeného způsobu mohou být kroky 4 a 5 nahrazeny kolonovou chromatografií.
Kromě toho vynález US 6,030,621 popisuje způsob získání extraktů Gínkgo bíloba obohacených o flavon-glykosidy a terpen-laktony. Použitá strategie je analogií způsobu popsaného ve vynálezu US 5,389,370: frakce obohacená o flavon-glykosidy se smíchá s frakcemi obohacenými o terpen• · · · ·· ♦ · · · ·
999 9 9 9 9 99999 — 999999 9 9 9 9 9 9 * laktony, které se získají kolonovou chromatografií. Typicky připravené extrakty zahrnují 47,2 % flavon-glykosidů a 6,3 % terpen-laktonů nebo 70 % flavon-glykosidů a 10 % terpenlaktonů. Tento způsob zahrnuje následující kroky:
a) extrakce suchého prášku listů v ethanolu obsahujícím 50 % hmotn. vody;
b) odstranění lipidů koncentrací extraktu za sníženého tlaku až do odstranění ethanolu, zředění koncentrátu vodou, ponechání směsi v klidu po dobu 48 hodin a filtrace lipidických precipitátů;
c) zachycení účinné sloučeniny průchodem vodného filtrátu vrstvou pryskyřice, tvořené směsí pryskyřice XAD-4 (směs porézních polymerů) a polyamidu;
d) vymývání účinné sloučeniny používajíce směsi ethanolvoda postupně obsahující 30, 60 a 90 % hmotn. ethanolu; a
e) zkombinování všech frakcí získaných v kroku d), odpaření ethanolu, promývání vodného koncentrátu hexanem a odpaření do sucha vodná fáze získané promýváním pro získání extraktu obsahujícího 47,2 % flavon-glykosidů a 6,3 % terpenlaktonů .
V jednom provedení výše uvedeného způsobu se frakce získaná ze směsi ethanol-voda obsahující 30 % ethanolu podrobí mžikové chromatografií pro získání frakce obsahující alespoň 80 % terpen-laktonů. Stejným způsobem se frakce, • » · φφφ φ
9999 99
9· 9 9 získané vycházejíce ze směsí ethanol-voda obsahujících 60 a 90 % ethanolu zkombinují a podrobí mžikové chromatografií pro získání frakce obsahující alespoň 80 % flavonglykosidů. Frakce obsahující alespoň 80 % flavon-glykosidů a frakce obsahující alespoň 80 % terpen-laktonů se smíchají v různých poměrech, což umožní získání extraktů, obsahujících až 70 % flavon-glykosidů a 10 % terpenlaktonů.
Z důvodů navzájem si protiřečících požadavků v oblasti sanitární bezpečnosti se stává čím dále výhodnějším používat co nejčistší účinné látky. Tendence u extraktů Ginkgo biloba je tedy opustit časem extrakty jako je EGb 761® ve prospěch extraktů ještě více obohacených o účinné látky. Typicky je možno předvídat extrakty obsahující alespoň 50 % hmotn. flavon-glykosidů a 12 % hmotn. terpenlaktonů, nebo také extrakty obsahující alespoň 30 % hmotn. terpen-laktonů a alespoň 15 % hmotn. flavon-glykosidů. Způsoby podle vynálezů US 5,389,370 nebo 6,030,621 umožňují získání takových extraktů, ale ukazuje se, že za cenu vysokých nákladů, protože se jedná o použití kroků zahrnujících separaci chromatografií při přípravě v průmyslovém měřítku.
Přihlašovatelé nalezli způsob, umožňující získání extraktů z listů Ginkgo biloba, které vyhovují výše uvedeným speécifikacím, aniž by byl nutný krok chromatografické separace.
«» 9 · 9 9 • · ·
Předmět vynálezu
Předložený vynález se tedy týká způsobu přípravy extraktu z listů Gínkgo biloba, který zahrnuje následující po sobě jdoucí kroky
i. extrakce suchých fragmentů listů Ginkgo biloba v ethanolu obsahujícím maximálně 20 % hmotn. vody;
ii. koncentrace extraktu za sníženého tlaku v přítomnosti vodného roztoku chloridu sodného a odstranění tmavého oleje ze zbývajícího čirého roztoku;
iii. promývání reziduálního vodného roztoku extrakcí kapalina-kapalina pomocí n-hexanu, n-heptanu nebo cyklohexanu;
iv. extrakce kapalina-kapalina promyté vodné fáze ethylácetátem;
v. promývání ethylacetátové fáze získané v kroku iv roztokem chloridu sodného a potom odpaření do sucha promyté ethylacetátové fáze.
Výrazem suché fragmenty listů Ginkgo biloba se rozumí v předložené přihlášce vynálezu suché fragmenty, jejichž velikost částic nepřekračuje 5 mm.
Výhodně jsou podle předloženého vynálezu suché fragmenty listů Gínkgo biloba ve formě suchého prášku. Výrazem prášek
A · A A · A
A A AAAA ···· A A A · A A A· se v předložené přihlášce vynálezu rozumí prášek jejichž velikost částic nepřekračuje 1 mm (a výhodně nepřekračuje 0,5 mm). Způsob podle předloženého vynálezu může být aplikován
- buď na lyofilizované fragmenty (a výhodně na prášek) listů Ginkgo biloba, v tomto případě se získají extrakty obsahující alespoň 50 % hmotn. flavon-glykosidů a 12 % hmotn. terpen-laktonů;
- nebo na sušené fragmenty (a výhodně na prášek) listů Ginkgo biloba, v tomto případě se získají extrakty - dále označované jako základní extrakty - obsahující alespoň 30 % hmotn. terpen-laktonů a alespoň 15 % hmotn. flavonglykosidů (uvedený způsob umožňuje v tomto případě kromě toho získání vedlejších produktů extrakty - dále označované jako vedlejší extrakty - analogických produktům popsaným v přihlášce vynálezu PCT WO 96/33728, to jest extraktů obsahujících přibližně 30 až 35% hmotn. flavon-glykosidů a přibližně 1 % hmotn. terpen-laktonů).
V jednom provedení předloženého vynálezu se výše uvedený způsob aplikuje na lyofilizované fragmenty (nebo prášek) listů Ginkgo biloba a získaný extrakt je výhodně takový, že obsahuje přibližně 52 % hmotn. flavon-glykosidů a přibližně 13 % hmotn. terpen-laktonů.
Ve výhodném provedení předloženého vynálezu se výše uvedený způsob aplikuje na sušené fragmenty (nebo prášek) listů Ginkgo biloba a získaný základní extrakt je výhodně takový, • · · · · · ·· · • · · ♦ · · · • · · · ···· • · · · · · · · ···· • · · · ·· · · · · že obsahuje od 34 do 46 % hmotn. terpen-laktonů a od 18 do 30 % hmotn. flavon-glykosidů. Výhodněji se výše uvedený způsob aplikuje na sušené fragments (nebo prášek) listů Ginkgo biloba a získaný základní extrakt je takový, že obsahuje od 36 do 44 % hmotn. terpen-laktonů a od 20 do 28 % hmotn. flavon-glykosidů. Výše uvedený způsob se zejména aplikuje na sušené fragmenty (nebo prášek) listů Ginkgo biloba a získaný základní extrakt obsahuje přibližně 40 % hmotn. terpen-laktonů (a z nich přibližně 24,5 % hmotn. ginkgolidů A, B a C a přibližně 15,5 % hmotn. bilobalidu) a přibližně 24 % hmotn. flavon-glykosidů.
Extrakce v kroku i se výhodně provádí ethanolem obsahujícím mezi 10 a 20 % hmotn. vody a výhodněji mezi 15 a 20 % hmotn. vody. Výhodně se také směs získaná po koncentraci extraktu za sníženého tlaku v přítomnosti vodného roztoku chloridu sodného během kroku ii ochladí, například na teplotu přibližně 10 °C, výhodně po dobu od 10 nebo 15 minut do 1 nebo 2 hodin, před provedením odstranění tmavého oleje ze zbývajícího čirého roztoku. Také výhodně se do směsi získané po koncentraci extraktu za sníženého tlaku v přítomnosti vodného roztoku chloridu sodného v kroku ii přidá celit a veškerý ethanol, přítomný v uvedené směsi se odpaří před ochlazením uvedené směsi.
Výhodně se také promývání v kroku iii provádí pomocí nheptanu.
V jednom obzvláště výhodném provedení způsobu podle předloženého vynálezu, pokud je tento aplikován na sušené
9· » ·· ···« ·* ··♦» « · · · « ···· • · · · · · · · · 9 999 9 999 9999
- 10 - ···· ** ♦· *’ ·· · fragmenty (nebo prášek) listů Ginkgo biloba, se objem reziduálního vodného roztoku v kroku iii a množství chloridu sodného v roztoku předem upraví tak, aby na jedné straně hmotnostní obsah pevných vodou rozpustných látek byl přibližně 8% vzhledem k celkové hmotnosti roztoku a na druhé straně aby hmotnostní obsah chloridu sodného byl 16% vzhledem k celkové hmotnosti roztoku. Obsah pevných vodou rozpustných látek se určí odebráním vzorku ethanolového roztoku, který se odpaří pro odstranění ethanolu a potom extrahuje v dichlormethanu, zbytková vodná fáze se potom odpaří do sucha a zváží; obsah pevných vodou rozpustných látek může takto být odečten od hmotnosti získaného pevného residua.
Co se týče kroku iv, methylethylketon obsahující od 2 do 10% obj. acetonu nebo ethanolu může popřípadě být nahrazen ethylacetátem. Co se týče vodných roztoků chloridu sodného použitých v krocích ii a v, mohou tyto roztoky mít výhodně koncentraci alespoň 10 % hmotn. chloridu sodného pro krok ii, zatímco jsou výhodně nasycené chloridem sodným pro krok
v.
Ve výhodném provedení výše uvedeného způsobu, aplikovaného na sušené fragmenty (nebo prášek) listů Ginkgo biloba, slaná vodná fáze získaná extrakcí kapalina-kapalina v kroku iv může být odebrána způsobem zahrnujícím následující kroky
a) extrakce kapalina-kapalina směsí přibližně 1:1 ethylacetátu a ethanolu; a ·· 9999 99 9999 9· 9 • 9 9 99 9 999
9 99 9 9999 • 999 · 999 999*9
99 9999 99 9
- ···· ·· ·· ·· ·· ·
b) odpaření do sucha organická fáze získané v kroku a);
c) rozpuštění residua získanéo v kroku b) v absolutním ethanolu pro získání koncentrace přibližně 5% až 10% hmotn. pevných látek vzhledem hmotnosti ethanolového roztoku;
d) ochlazení směsi na teplotu výhodně nižší nebo rovnou 10 °C (například na teplotu od 2 do 8 °C) , výhodně po dobu v rozmezí od 30 minut do 12 hodin;
e) filtrace a odpaření ethanolu ze získaného filtrátu pro získání suchého extraktu. Tento dodatečný způsob dovoluje získat dodatečný extrakt, který obecně obsahuje přibližně 30 až 35% hmotn. flavon-glykosidů a přibližně 1 % hmotn. terpen-laktonů.
Výše uvedený způsob popřípadě může po krocích i až v zahrnovat ještě následující krok vi vi. rozpuštění suchého extraktu v ethanolu a ochlazení roztoku na teplotu výhodně nižší nebo rovnou 10 °C (například na teplotu od 2 do 8 °C), filtrace popřípadě precipitované soli a odpaření vzniklého roztoku do sucha.
V tomto případě, pokud se způsob podle předloženého vynálezu používá v průmyslovém měřítku, je výhodné v kroku v prostě koncentrovat organickou fázi až do získání koncentrace přibližně 50 až 70% hmotn. pevných látek (a nikoli odpaření do sucha) a přidat ethanol pro získání směsi obsahující 5 až 20% hmotn. vody, 5 až 20% hmotn.
• φ φφφφ φφ φφφφ ·· · • · φ φ φ φ φ·· φφ ΦΦΦ ΦΦΦ· • ΦΦΦ φ ΦΦΦ φφφφφ φ φφ φφφφ φφ φ φφφφφφ φφ φφ ·· φ pevných látek a nacházející se v ethanolu, dříve než se provede krok vi. Pokud se postupuje tímto způsobem, ušetří se jeden krok sušení.
Základní extrakty získané podle předloženého vynálezu jsou použitelné ve farmakologii nebo v potravinářství (například jako příměsi výživných doplňků), protože na jedné straně obsahují méně než 5 ppm alkylfenolů (měření prováděné chromatografií HPLC) a na druhé straně obsahují méně než 0,3 % prodelfinidinů (výhodně méně než 0,25 % a obecně mezi 0,05 až 0,25 % prodelfinidinů) . Mimo jiné také obsahují velmi málo lipofilních nečistot a velmi málo polysacharidů, proanthokyanidinů jiných než prodelfhinidiny a proteinů o vysoké molekulové hmotnosti.
Základní extrakty podle předloženého vynálezu jsou zejména v důsledku jejich nízkého obsahu prodelfinidinů lépe snášeny při podávání pacientům cestou intravenózní. Pro srovnání může komerční extrakt jako je EGb 761® obsahovat až 1,5% prodelfinidinů.
Mimo to jsou základní extrakty podle předloženého vynálezu výhodně takové, že maxima, odpovídající O-rhamnopyranosyl4-O-D-(trans-p-kumaroyl-6'' ')glukopyranosyloxy-3tetrahydroxy-3',4',5,7-flavonolu (nebo 3-(6'''-trans-pkumaroyl)-glukorhamnosidu kercetínu) O-rhamnopyranosyl-4-OD-(trans-p-kumaroyl-6''')glukopyranosyloxy-3-trihydroxy4',5,7-flavonolu (nebo 3-(6'''-trans-p-kumaroyl)glukorhamnosidu kamferolu) představují dohromady přibližně 39% celkové plochy maxim chromatogramu. Základní extrakty φ φ φφφφ φ φ φφφφ φφ φ
ΦΦ φφφ φφφφ φφ φφφ φφφφ φ φφφ φ φφφ φφφφ ·· φφφφ φφ φ φφφφφφ φφ φφ <· · podle předloženého vynálezu jsou zejména výhodně takové, že maximum odpovídající 0-rhamnopyranosyl-4-0-D-(trans-pkumaroyl-β' ' ' )glukopyranosyloxy-3-tetrahydroxy-3', 4' , 5,7flavonolu (nebo 3-(6'''-trans-p-kumaroyl)-glukorhamnosidu kercetinu) představuje přibližně 20% celkové plochy maxim chromatogramu. Kromě toho základní extrakty podle předloženého vynálezu jsou výhodně takové, že maximum odpovídaj ící 0-rhamnopyranosyl-4-0-D-(trans-p-kumaroyl6''')glukopyranosyloxy-3-trihydroxy-4',5,7-flavonolu (nebo 3-(6'''-trans-p-kumaroyl)-glukorhamnosidu kamferolu) představuje přibližně 19% celkové plochy maxim chromatogramu.
Mimo jiné obsahují vedlejší extrakty, získané způsobem podle předloženého vynálezům méně než 0,5% prodelfinidinů (výhodně méně než 0,40 % a obecně mezi 0,15 a 0,40% prodelfinidinů).
Předložený vynález se dále týká základních extraktů, které mohou být získány způsobem podle předloženého vynálezu. Předložený vynález se také týká těchto základních extraktů jako léčiv, farmaceutických kompozic, které obsahují jako účinnou látku uvedené základní extrakty a dále se týká použití uvedených základních extraktů pro přípravu léčiv určených pro léčbu onemocnění/poruch, zvolených ze souboru, následující onemocnění/poruchy: mozkové a vaskulární poruchy (jako je poruchy ateroskleróza, ischemie, trombózy, s cévní nedostatečností, cévní zánětů a symptomy související zahrnuj ícího periferální vaskulárního původu, symptomy související manifestace akutních ·· ···· ······ φφ · • · 9 9 9 9 9 9 9
Φ ΦΦ · ΦΦΦΦ φ 9999 9999 999
9 9 9 9 9 9 9 9 9
9999 99 99 99 Φ· Φ s krvácivými příhodami), neurodegenerativní onemocnění (jako je například Alzheimerova nemoc, Parkinsonova nemoc, Huntingtonova chorea nebo laterální amyotrofní skleróza) a patologický kognitivní a neurosenzitivní chronický deficit stárnoucího subjektu (zejména ztráta paměti stárnoucího subjektu, který není postižen Alzheimerovou nemocí nebo jinou demencí). Předložený vynález se nakonec týká použití uvedených základních extraktů pro přípravu léčiv určených pro dodatkovou terapii proliferativních onemocnění (zejména rakoviny).
Farmaceutické kompozice obsahující extrakt podle předloženého vynálezu mohou být v pevné formě jako například prášky, pilulky, granule, tablety, liposomy, želé nebo čípky. Pilulky, tablety nebo želé mohou být povlečeny látkou schopnou chránit kompozici před působením žaludeční kyseliny nebo enzymů v žaludku subjektu po dobu dostatečnou pro přechod kompozice v nenatrávené formě do tenkého střeva subjektu. Extrakt může také být podáván lokálně, například přímo do místa nádoru. Extrakt může také být podáván způsobem s prodlouženým uvolňováním (například používajíce kompozici s prodlouženým uvolňováním nebo perfúzní pumpu). Vhodné pevné nosiče mohou být například fosforečnan vápenatý, stearan hořečnatý, uhličitan hořečnatý, mastek, cukry, laktóza, dextrin, škrob, želatina, celulóza, methylcelulóza, sodná sůl karboxymethylcelulózy, polyvinylpyrrolidin a vosk.
Farmaceutické kompozice obsahující extrakt podle předloženého vynálezu mohou také být vytvořeny v kapalné
A A AAAA
A A A A AAA
A AAA formě jako například roztoky, emulze, suspenze nebo přípravky s prodlouženým uvolňováním. Vhodné kapalné nosiče mohou být například voda, organická rozpouštědla jako je glycerol nebo glykoly jako je polyethylenglykol, stejně tak jako jejich směsi v různých množstvích s vodou.
Podávání léčiva podle předloženého vynálezu se může provádět cestou topickou, orální, parenterální, intramuskulární injekcí a podobně.
Dávkování extraktu podle předloženého vynálezu pro léčbu onemocnění nebo poruch uvedených výše závisí na způsobu podávání, věku a tělesné hmotnosti léčeného subjektu stejně tak jako na jeho stavu a bude nakonec určeno ošetřujícím lékařem nebo veterinářem. Takové množství, určené ošetřujícím lékařem nebo veterinářem, je dále označováno jako terapeuticky účinné množství. Aniž by bylo předcházeno názoru ošetřujícího lékaře, a s uvážením obsahu účinných látek v základních extraktech podle předloženého vynálezu, je možno předpokládat například podávání lidskému pacientovi v denní dávce od 5 do 150 mg, výhodně v dávce od 10 do 100 mg (zejména v dávce od 40 do 80 mg, například od 50 do 70 mg) uvedených základních extraktů.
V předložené přihlášce vynálezu, výraz přibližně znamená interval okolo uvažované hodnoty. Tak, jak je používán v předložené přihlášce vynálezu, výraz přibližně X znamená interval od X minus 10% X do X plus 10% X a výhodně interval od X minus 5% X do X plus 5 % X.
·· ··· · ·· ··· · · * · ' · ··· * · · · • · · · · ···· • · · t · ··· · ··· • · · · * · 9 9 9 9
999999 99 99 99 9
Pokud nejsou definovány jiným způsobem, všechny technické a vědecké termíny, které jsou zde používány, mají stejný význam jako je ten, který je znám běžnému odborníkovi v oboru, do kterého spadá předložený vynález.
Mimo to všechny publikace, přihlášky vynálezů, všechny vynálezy a všechny další reference, které jsou zde uvedeny, jsou zahrnuty jako reference.
Příklady provedení vynálezu
Následující příklady jsou uvedeny pro ilustraci způsobů výše uvedených a nemohou být v žádném případě považovány za omezení rozsahu předloženého vynálezu.
Příklad 1
100 g rozdrcených lyofilizovaných listů Ginkgo biloba (velikost částic menší než 4 mm) se dvakrát extrahují, jednou pomocí 800 ml a podruhé pomocí 600 ml směsi ethanolvoda, obsahující 88 % hmotn. ethanolu, po každé za teploty 60 °C a po dobu 1 hodiny. Extrakty ze dvou kroků extrakce se filtrují a zbytky listů se proplachují 200 ml stejné směsi rozpouštědel. Zkombinované extrakty se zahustí odpařením na objem 100 ml s obsahem pevných produktů přibližně 35 g. 350 ml vodného roztoku chloridu sodného o koncentraci 10 % hmotn. se přidá do ethanolového koncentrátu a odpaření se provádí za sníženého tlaku a za teploty 50 °C pro odstranění zbytku ethanolu. Čirý oranžový ·· · • · · · · · · ♦ · • · ·· · · · · · • ··· · ··· ···· • » · · · · · · 9 t ·····« ·· · · * · · ·» ··«· solný roztok se oddělí od tmavého oleje dekantací přes bavlněný polštář ve filtrační nálevce a potom podtlakovou filtrací přes celit. Extrakt ve vodném solném roztoku se promývá dvěma dávkami 150 ml n-heptanu před extrakcí dvakrát 150 ml ethylacetátu. Zkombinované ethylacetátové fáze se promývají 50 ml nasyceného roztoku chloridu sodného a potom se odpaří do sucha za sníženého tlaku. Suchý extrakt se znovu rozpustí v 60 ml absolutního ethanolu, ponechá jednu noc v ledničce za teploty 5 °C, filtruje se pro odstranění soli popřípadě precipiované a filtrát se odpaří do sucha pro získání 1,42 g extraktu obsahujícího 51,7 % flavon-glykosidů a 13 % terpen-laktonů (6,55 % bilobalidu).
Příklad 2
100 g listů Ginkgo biloba získaných po sušení v průmyslové rotační peci a rozdrcených (velikost částic menší než 4 mm; obsah 1,8% hmotn. flavon-glykosidů a 0,12 % hmotn. ginkgolidů) se dvakrát extrahují, jednou 800 ml a podruhé 600 ml směsi ethanol-voda obsahující 80% hmotn. ethanolu, pokaždé za teploty 60 °C a po dobu 1 hodiny. Extrakty dvou kroků extrakce se filtrují a zbytky listů se promývají 200 ml stejné směsi rozpouštědel. Zkombinované extrakty se zahustí odpařením na objem 800 ml s obsahem pevných produktů přibližně 33 g. 60 g chloridu sodného, 100 ml vody a 22 g celitu se přidá k ethanolovému koncentrátu a odpaření se provádí za sníženého tlaku a za teploty 50 °C pro odstranění zbytků ethanolu. Vodný koncentrát se ochladí na teplotu 10 °C po dobu jedné hodiny a čirý oranžový solný ·· ··«· • · · • ·
• ♦ · · • · »· » • · · ·· · roztok se oddělí od tmavého oleje dekantací přes polštář bavlny ve filtrační nálevce a potom podtlakovou filtrací přes fritu pokrytou ložem celitu. Extrakt ve vodném solném roztoku (přibližně 300 ml) se promývá dvěma dávkami 125 ml n-heptanu před extrakcí dvakrát 125 ml ethylacetátu. Zkombinované ethylacetátové fáze se promývají 50 ml nasyceného roztoku chloridu sodného a potom se odpaří do sucha za sníženého tlaku. Suchý extrakt se znovu rozpustí v 23 ml absolutního ethanolu, ponechá jednu noc v ledničce za teploty 4 °C, filtruje se pro odstranění popřípadě precipitované soli a filtrát se odpaří do sucha pro získání 1,06 g extraktu obsahujícího 23,6 % flavon-glykosidů, 39,2 % terpen-laktonů (z toho 24,6 % ginkgolidů A, B a C a 14,5 % bilobalidu) a přibližně 0,14% prodelfinidinů.
Příklad 3
Vodná solná'fáze, která se získá po po sobě následujících krocích promývání pomocí n-heptanu a extrakci ethylacetátem způsobu přípravy extraktu podle příkladu 2 se podrobí extrakci kapalina-kapalina použitím dvou dávek 125 ml směsi ethylacetát-ethanol 1:1. Získaná organická fáze se odpaří do sucha. Suchý extrakt se vyjme v absolutním ethanolu tak, aby měl obsah 5% hmotn. suchého extraktu vzhledem k celkové hmotnosti roztoku. Směs se ponechá jednu noc v ledničce za teploty 4 °C před filtrací přes papír (pevné látky se promývají absolutním ethanolem o teplotě 4 °C). Po odpaření do sucha se získá extrakt obsahující 31,88% flavonglykosidů a 0,67% terpenů (z toho 0,50% ginkgolidů A, B a C a 0,17 % bilobalidu) a přibližně 0,21% prodelfinidinů.
β· ···· « · · • · e « • · » ··«· 99 ·« ····
9
9 9
9 9 9
9 9999
9 9
Charakterizace extraktů podle předloženého vynálezu
A) HPLC
Extrakty podle předloženého vynálezu mohou být charakterizovány pomoci vysokovýkonné kapalinové chromatografie (HPLC) vymýváním gradientem popsaným dále.
Materiály
- Chromatograf v kapalné fázi a vybavení upravené pro podmínky popsané dále
- Laboratorní sklo
- Váhy s přesností na 10® mg
Činidla
- Čistá voda (kvalita HPLC)
- Acetonitril (kvalita HPLC)
- Isopropanol (kvalita HPLC)
- Kyselina citrónová (kvalita HPLC)
- Methanol R
- Standardní referenční extrakt Ginkgo biloba
Procedura
Roztok testovaného extraku se připraví rozpuštěním 200 mg extraktu určeného k analýze v 10 ml methanolu. Současně se
200 mg standardního referenčního extraktu Ginkgo biloba • · • · · • ···· • · ·· ·* • · · ·· · (EGb 761®) rozpustí v 10-ml methanolu a představuje referenční roztok.
Použity jsou následující chromatografické podmínky
- Typ gradientu: lineární od 0% do 100% sekundární mobilní fáze za 15 minut a potom 5 minut s sekundární mobilní fází. Reekvilibrace kolony po dobu 10 minut primární mobilní fází
| před následující injekcí. | ||
| - Primární mobilní fáze: | ||
| purifikovaná voda | 1000 | ml |
| acetonitril | 200 | ml |
| isopropanol | 30 | ml |
| kyselina citrónová | 4, 92 | : g |
| - Sekundární mobilní fáze: | ||
| purifikovaná voda | 1000 | ml |
| acetonitril | 470 | ml |
| isopropanol | 50 | ml |
| kyselina citrónová - Průtok: 1,5 ml/min - Detekce: UV 360 nm | 6, 08 | ; g |
- Kolona : Nerezová ocel, 15 cm, průměr 4,6 mm; naplněná sílikagelem pro chromatografii R Nucleosil 5C18 MachereyNagel nebo ekvivalent (5 μη).
| - 21 - | .. .... .. ..... • * · ! a • · · ♦ · * • · · · * * ’ ···· · * ·* * | |
| - Injektovaný objem: | 5 μΐ | |
| - Teplota kolony: 20 | ± 2 °C | |
| Výsledky | ||
| Chromatogram získaný | pro extrakt | získaný v příkladu |
znázorněn na Obr. 1 a chromatogram pro extrakt získaný v příkladu 3 na Obr. 2.
Integrály určené pro různá maxima jsou uvedeny v tabulce I (extrakt z příkladu 2) a II (extrakt z příkladu 3). Hlavní maxima odpovídající retenční době přibližně 13 a 15 minut za podmínek popsaných výše odpovídají 0-rhamnopyranosyl-40-D-(trans-p-kumaroyl-β'' ' )glukopyranosyloxy-3tetrahydroxy-345,7-flavonolu (nebo 3-(6'''-trans-pkumaroyl ) -glukorhamnosid kvercetinu) a 0-rhamnopyranosyl-40-D- (trans-p-kumaroyl-β'' ' ' ) glukopyranosyloxy-3-trihydroxy45,7-flavonolu (nebo 3-(6'''-trans-p-kumaroyl)glukorhamnosidu kamferolu).
·· ····
Tabulka 1
| Č.maxima | Ret.doba (min) | Typ intgrace | Plocha | % plochy |
| 1 | 5, 66 | BV | 323169,34 | 1, 63 |
| 2 | 6, 09 | vv. | 40920,21 | 0,21 |
| 3 | 7,12 | VV | 69832,25 | 0,35 |
| 4 | 7,53 | VV | 335574,32 | 1,69 |
| 5 | 7,86 | VV | 119797,71 | 0, 60 |
| 6 | 8,42 | VV | 2633527,95 | 13,25 |
| 7 | 9,38 | VV | 272916,32 | 1,37 |
| 8 | 9,76 | VV | 1226466,81 | 6,17 |
| 9 | 10,04 | VV | 72124,84 | 0,36 |
| 10 | 10,29 | VV | 97259,69 | 0,49 |
| 11 | 10,61 | VV | 2967432,21 | 14,93 |
| 12 | 10,88 | VV | 343065,16 | 1,73 |
| 13 | 11,25 | VV | 61980,66 | 0,31 |
| 14 | 11,58 | vv | 405705,79 | 2,04 |
| 15 | 12,02 | vv | 193158,96 | 0, 97 |
| 16 | 12,32 | vv | 295426,85 | 1,49 |
| 17 | 12,66 | vv | 139571,25 | 0,70 |
| 18 | 13,25 | vv | 39600621,99 | 19, 93 |
| 19 | 13,79 | vv | 145778,77 | 0,73 |
| 20 | 13,99 | vv | 38952,25 | 0,20 |
| 21 | 14,26 | vv | 39634,91 | 0,20 |
| 22 | 14,67 | vv | 119350,40 | 0, 60 |
| 23 | 14,87 | vv | 85122,51 | 0, 43 |
| 24 | 15,18 | vv | 3789171,34 | 19, 07 |
| 25 | 15, 67 | vv | 60575,37 | 0, 30 |
• * · • · · · » · · · * • · · ····· • · · · • ♦ · · • · • · · · · · • · · * · • * · · • · ♦ · · ···· ·· · ·
| 26 | 15,94 | VV | 118616,10 | 0,60 |
| 27 | 16, 51 | VV | 208977,01 | 1,05 |
| 28 | 16, 69 | VV | 345205,90 | 1,74 |
| 29 | 17,13 | VV | 206765,44 | 1,04 |
| 30 | 17,32 | VV | 241246,27 | 1,21 |
| 31 | 17,68 | VV | 95087,16 | 0,48 |
| 32 | 17,80 | VV | 311413,97 | 1,57 |
| 33 | 18,08 | VV | 108167,40 | 0,54 |
| 34 | 18,40 | VV | 103158,38 | 0,52 |
| 35 | 18,88 | VV | 19884,37 | 0,10 |
| 36 | 19,15 | VV | 9701,13 | 0, 05 |
| 37 | 19, 35 | VV | 18389,23 | 0,09 |
| 38 | 19,75 | VV | 109237,26 | 0,55 |
| 39 | 20,42 | VV | 21754,52 | 0,11 |
| 40 | 20,82 | VV | 13348,93 | 0, 07 |
| 41 | 21,35 | VV | 26491,23 | 0,13 |
| 42 | 21,82 | VV | 55867,45 | 0,28 |
| 43 | 22, 18 | VV | 14634,07 | 0, 07 |
| 44 | 22,58 | VB | 7095,01 | 0,04 |
| Celkově | 19872178,50 |
• φ · φ • · • φ φ • •ΦΦΦ
Tabulka 2
| Č.maxima | Ret.doba (min) | Typ integrace | Plocha | % plochy |
| 1 | 4,25 | BV | 1082912,49 | 3,74 |
| 2 | 4,84 | VV | 853793,45 | 2,95 |
| 3 | 5,52 | VV | 767098,18 | 2,65 |
| 4 | 6, 06 | VV | 1634400,29 | 5,68 |
| 5 | 6, 59 | VV | 53647,35 | 0,19 |
| 6 | 6, 91 | VV | 127266,30 | 0,44 |
| 7 | 7,37 | VV | 5275614,83 | 18,22 |
| 8 | 7,69 | VV | 1062334,77 | 3, 67 |
| 9 | 8,28 | VV | 1918663,93 | 6, 63 |
| 10 | 8,95 | VV | 103523,93 | 0,36 |
| 11 | 9,23 | VV | 1390204,37 | 4,80 |
| 12 | 9, 63 | VV | 3866788,04 | 13,35 |
| 13 | 9,87 | VV | 2102182,30 | 7,26 |
| 14 | 10,48 | VV | 968935,87 | 3,35 |
| 15 | 10, 97 | VV | 314304,16 | 1,0 |
| 16 | 11,46 | VV | 1167341,28 | 4,03 |
| 17 | 11,86 | VV | 143179,61 | 0,49 |
| 18 | 12,20 | VV | 193515,76 | 0,67 |
| 19 | 12,56 | VV | 91823,99 | 0,32 |
| 20 | 13, 13 | VV | 1197144,99 | 4,13 |
| 21 | 13, 62 | VV | 94540,18 | 0,33 |
| 22 | 13,99 | VV | 33698,24 | 0,12 |
| 23 | 14,34 | VV | 78763,83 | 0,27 |
| 24 | 14,59 | VV | 334542,58 | 1,16 |
| 25 | 15,19 | VV | 9440Č+,64 | 3,26 |
• · • · ·
| 26 | 15, 45 | VV | 244838,93 | 0,85 |
| 27 | 15, 84 | VV | 473019,80 | 1,51 |
| 28 | 16,39 | VV | 569694,64 | 1,97 |
| 29 | 16, 55 | VV | 323620,29 | 1,12 |
| 30 | 16, 72 | VV | 255311,37 | 0,88 |
| 31 | 17,02 | VV | 370249,91 | 1,28 |
| 32 | 17,55 | VV | 106207,91 | 0,37 |
| 33 | 17,69 | VV | 338307,55 | 1,17 |
| 34 | 17,97 | VV | 134115,60 | 0,46 |
| 35 | 18,33 | VV | 148609,32 | 0,51 |
| 36 | 18,78 | VV | 31564,17 | 0,11 |
| 37 | 18,91 | VV | 17047,61 | 0,06 |
| 38 | 19, 20 | VV | 25147,79 | 0,09 |
| 39 | 19,64 | VV | 67214,23 | 0,23 |
| 40 | 20,06 | VV | 16329,48 | 0,06 |
| 41 | 20,65 | VV | 11266,06 | 0,04 |
| 42 | 21,23 | VV | 10502,29 | 0,04 |
| 43 | 21, 62 | VV | 40624,23 | 0,14 |
| Celkově | 28956906,57 |
B) Určení obsahu prodelfinidinů
Obsah prodelfinidinů u extraktů podle předloženého vynálezu se určí způsobem popsaným dále.
Přibližně 50 mg extraktu se rozpustí v 25 ml směsi isopropanolu a roztoku 3N kyseliny chlorovodíkové (5/1 • 0 000· • 0 · • 0 0 · 0 · · 0 000 0 · obj.) 5 ml získané směsi se přenese do 10 ml zazátkované baňky a baňka se potom ponoří do vroucí vody po dobu 45 minut. Po ochlazení na teplotu 20 °C se objem upraví na 10 ml přidáním směsi isopropanolu a roztoku 3N kyseliny chlorovodíkové. Absorbce se měří na vlnové délce 556 nm a procentní obsah prodelfinidinů se získá následujícím způsobem:
% prodelfinidinů = A x 86,206897/B, kde
A je absorbce na vlnové délce 556 nm
B je hmotnost vzorku v mg
Pro snížení nepřesnosti výsledku se měření se opakuje třikrát jako konečný výsledek se uvažuje průměrná hodnota.
Farmakologické vlastnosti extraktů podle předloženého vynálezu
Pro prokázání farmakologických vlastností extraktů podle předloženého vynálezu mohou být provedeny následující testy.
1) Buněčná proliferace
Linie buněk
Buněčné linie buněk rakoviny prsu MDA-231 byly získány z Lombardi Cancer Center (Georgetown University Medical • · ····
Center). Tyto linie buněk se kultivují v polystyrénových kultivačních nádobkách (Corning) v médiu Eagle, modifikace
Dulbecco (DMEM), s přídavkem 10 % fetálního hovězího séra (FBS) .
Testy vazby
Buňky MDA-231 se dispergují rozetřením v 5 ml fosfátem pufrovaného solného roztoku (SSTP) a potom centrifugují při 500 g po dobu 15 minut. Centrifugované buňky se resuspendují v SSTP a testují pro určení jejich obsahu proteinů. Testy [3H]PK 11195 mohou být provedeny jak je popsáno v Papadopoulos a kol., T. Biol. Chem. (1990), 265,
3772-3779 a Hardwick a kol., Cancer Res. (1999), 59, 831842. [n-methyl 3H]PK 11195 nebo (1-(2-chlorfenyl)-n-methyln-(1-methyl-propyl)-3-isochinolinkarboxamid byl získán od společnosti Du Pont-New England Nuclear (Wilmington, DE, USA) a PK 11195 u společnosti Research Biochemicals Incorporated (Natíck, MA, Spojené státy). Získané výsledky se analyzují programem LIGAND (Munson a Robard, Anal. Biochem. (1976),72,248-254.
Northern analýza RNA
Exprese mRNA receptorů benzodiazepinu periferního typu (PBR) v buňkách NMA-231 zpracovávaných extraktem z příkladu 1 nebo příkladu 2 nebo EGb 761® (reference) může být ohodnocena na základě analýzy Northern přenosem, jak je popsáno v v Hardwick a kol., Cancer Res. (1999), 59, 831842. Celková buněčná RNA byla isolována pomocí činidla • Q ···· • ♦ • · · • ····
RNAzol Β (TEL-TEST, lne., Friendswood, TX, Spojené státy) a chloroformu. 20 gg celkové RNA se nanese na gel 1 % agarózy a přenáší po jednu noc na nylonové membrány (S&S Nytran, Scheicher & Schuell, Keene, NH, Spojené státy). Fragment lidské cDNA PBR o délce 0,2 kb (derivát plasmidového vektoru pCMV5-PBR obsahující úplnou sekvenci lidského PBR) se označí pomocí [a 32P]dCTP pomocí náhodného systému identifikace primerů DNA (Life Technologies, Gaithersburg, MD, Spojené státy). Použité hybridizační podmínky jsou popsány v reference uvedené výše. Autoradiografie se provádí vystavením blotů filmu X-OMAT AR (Kodak, Rochester, NY, Spojené státy) za teploty -70 °C po dobu 4-48 hodin. Kvantifikativní určení mRNA v PBR se provádí pomocí programu SigmaGel (Jandel Scientific, San Rafel, CA, Spojené státy).
Buněčná proliferace
Buňky NMA-231 se vloží na destičky o 96 jamkách (Corning, NJ, Spojené státy) v koncentraci přibližně 10000 buněk na jamku (24 hodin inkubace) nebo 5000 buněk na jamku (48 hodin inkubace) v DMEM doplněném 0,1 % FBS. Buňky se potom inkubují v FBS 10 % s různými koncentracemi sloučeniny podle příkladu nebo referenční sloučeniny (EGb 761®) po výše uvedené doby. Rozdíly buněčné proliferace se analyzují měřením množství zabudovaného 5-brom-2'-deoxyuridinu (BrdU), které see určí používajíce materiál BrdU ELISA (Boehringer Mannheim, Indianapolis, IN, Spojené státy).
·· 9999 • ·
• ·
9 9
99 9
Zabudování BrdU se měří na vlnové délce 450 nm (reference : 690 nm).
2) Neurotoxicita indukovaná glutamátem
Extrakt podle předloženého vynálezu může být testován následujícím způsobem: neurony krysího mozku se ošetřují nebo neošetřují rostoucími koncentracemi extraktu podle příkladu 1 nebo příkladu 2 uvedených výše a potom, po 30 minutách, se vystaví glutamátu s koncentrací 250 μΜ. Dávka inhibující na 50 % toxicitu glutamátu (označená jako IC50) může být potom určena a porovnávána s dávkou získanou pro extrakt jako je EGb 761®, které obsahuje menší množství flavon-glykosidů a terpen-laktonů (konkrétně 100 μg EGb 761® na jeden ml).
3) Buněčná toxicita
Účinky extraktu podle předloženého vynálezu na životaschopnost buněk mohou být studovány na buněčných liniích HT 22 (buňky hippocampu myši). Životaschopnost buněk se odhaduje určením množství LDH uvolňovaného buňkami ošetřovanými rostoucími dávkami extraktu z příkladu 1 nebo z příkladu 2 uvedených výše a testem exkluse v modři Trypan.
Buněčné linie
- 30 90 0000 • 9
9 ► 9 9 «
90
Buněčná linie HT-22 byla získána z Salk Institute for Biological Research (La Jolla, CA, Spojené státy). Tato buněčná linie se udržuje při teplotě 37 °C v médiu Eagle, modifikace Dulbecco (DMEM) . s přídavkem 10 % fetálního hovězího séra (FBS), dále označovaném jako úplné médium.
Protokol testu
Buňky HT-22 se vloží na destičky s 96 jamkami v koncentraci 5.103 buněk na jamku v úplném médiu. Po 24 hodinách se extrakt z příkladu rozpustí v DMEM a přidá se v koncentraci 10, 25, 50, 100, 250, 500 a 1000 μρ/ηΐ; extrakt se potom ponechá v kontaktu po dobu 24 nebo 48 hodin. Měření LDH se provádí dávkovači soupravou Promega podle instrukcí výrobce. Absorbce se odečítají na vlnové délce 470 nm. Maximální uvolňování LDH se získá po úplné lýze buněk pomocí Triton X-100.
Pro měření životaschopnosti určované testem exkluse v modři Trypan se buňky umísí na destičky s 6 jamkami a přidá se extrakt z příkladu 1 nebo z příkladu 2 v koncentraci 100 pg/ml po dobu 24 hodin.
Buňky se potom promývají roztokem pufrovaným fosforečnanem bez vápníku a hořečíku a vystaví se trypsinu po dobu 5 minut za teploty 37 °C. Reakce se zastaví pomocí úplným médiem a do buněčné suspenze se přidá 0,04 % trypanové modři. Počet buněk v exklusi s barvivém (to znamená živých buněk) se určí hematocytometrem. Procento životaschopných
99·9
9999
9999 99 « · · 9 9 9 • 9 9 9 9 9 9
9 9 9 9 9 999
9 9 9 9 9 9
99 99 9 buněk se vypočte následujícím způsobem: počet živých buněk (neobarvených) / celkový počet buněk (neobarvených a obarvených) x 100.
Zastupuj e:
Dr. Otakar Švorčík • ♦ · • ·
Dr. Otakar Svorčík advokát
Hálkova 2,120 00 Praha 2 ♦ · ···· · · «· ·«*· • · ·
• · · • * · · · • * . .WO$- 3055·
Claims (16)
- PATENTOVÉ NÁROKY1. Způsob přípravy extraktu z listů Ginkgo biloba, vyznačující se tím, že zahrnuje následující po sobě jdoucí krokyi. extrakce suchých fragmentů listů Ginkgo biloba v ethanolu obsahujícím maximálně 20 % hmotn. vody;ii. koncentrace extraktu za sníženého tlaku v přítomnosti vodného roztoku chloridu sodného a odstranění tmavého oleje ze zbývajícího čirého roztoku;iii. promývání reziduálního vodného roztoku extrakcí kapalina-kapalina pomocí n-hexanu, n-heptanu nebo cyklohexanu;iv. extrakce kapalina-kapalina promyté vodné fáze ethylacetátem;j».v. promývání ethylacetátové fáze získané v kroku iv roztokem chloridu sodného a potom odpaření promyté ethylacetátové fáze do sucha.
- 2. Způsob podle nároku 1, vyznačující se tím, že nezahrnuje žádný krok chromatografie.·· ··· · ·· ♦ ··· • ·99 99 9· • · · • · · · ···· • · · ♦99 ·
- 3. Způsob podle nároku 1 nebo 2, vyznačující se tím, že suché fragmenty listů Ginkgo biloba v kroku i jsou nahrazeny suchým práškem listů Ginkgo biloba.
- 4. Způsob podle jednoho z nároků 1 až 3, vyznačující se tím, že extrakce v kroku i se provádí pomocí ethanolu obsahujícího od 10 do 20 % hmotn. vody.
- 5. Způsob podle jednoho z nároků 1 až 4, vyznačující se tím, že promýváni v kroku iii se provádí pomocí n-heptanu.
- 6. Způsob podle jednoho z nároků 1 až 5, vyznačující se tím, že vodné roztoky chloridu sodného použité v krocích ii a v mají koncentraci alespoň 10 % hmotn. chloridu sodného.
- 7. Způsob podle jednoho z nároků 1 až 6, vyznačující se tím, že zahrnuje kromě kroků i až v ještě následující krok vi vi. rozpuštění suchého extraktu v ethanolu a ochlazení roztoku, filtrace popřípadně precipitované soli a odpaření vzniklého roztoku do sucha.
- 8. Extrakt z listů Ginkgo biloba, který je možno získat způsobem přípravy podle jednoho z nároků 1 až 7.
- 9. Extrakt z listů Ginkgo biloba podle nároku 8, vyznačující se tím, že způsob se provádí vycházejíce z suchých fragmentů listů Ginkgo biloba.• · AAAA •A AAAAA ' AAAAAA A AAA A AAAA • ·A
- 10. Extrakt z listů Ginkgo biloba podle nároku 9, vyznačující se tím, že obsahuje od 34 do 4 6 % hmotn. terpen-laktonů a od 18 do 30 % hmotn. flavon-glykosidů.
- 11. Extrakt z listů Ginkgo biloba podle nároku .8, vyznačující se tím, že způsob se provádí vycházejíce z suchých lyofilizovaných fragmentů listů Ginkgo biloba.
- 12. Extrakt z listů Ginkgo biloba podle nároku 11, vyznačující se tím, že obsahuje přibližně 52 % hmotn. flavon-glykosidů a přibližně 13 % hmotn. terpen-laktonů.
- 13. Extrakt podle jednoho z nároků 8 až 12 jako léčivo.
- 14. Farmaceutická kompozice, vyznačující se tím, že, jako účinnou látku obsahuje extrakt podle jednoho z nároků 8 a12.
- 15. Použití extraktu podle jednoho z nároků 8 a 12 pro přípravu léčiva, určeného pro léčbu onemocnění/poruch, zvolených ze souboru, zahrnujícího následující onemocnění/poruchy: mozkové a periferální vaskulární poruchy a neurodegenerativní onemocnění.
- 16. Použití extraktu podle jednoho z nároků 8 až 12 pro přípravu léčiv určených jako doplňková terapie pro léčbu proliferativních onemocnění.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| FR0104942A FR2823116B1 (fr) | 2001-04-10 | 2001-04-10 | Procede de preparation d'une extrait de feuilles de ginkgo biloba hautement enrichi en principes actifs |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CZ20033055A3 true CZ20033055A3 (cs) | 2004-06-16 |
| CZ299652B6 CZ299652B6 (cs) | 2008-10-01 |
Family
ID=8862215
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CZ20033055A CZ299652B6 (cs) | 2001-04-10 | 2002-04-09 | Zpusob prípravy extraktu z listu Ginkgo biloba vysoce obohaceného úcinnými látkami |
Country Status (19)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US7048954B2 (cs) |
| EP (1) | EP1379262B1 (cs) |
| JP (1) | JP4416404B2 (cs) |
| KR (1) | KR100876233B1 (cs) |
| CN (1) | CN1245167C (cs) |
| AT (1) | ATE278411T1 (cs) |
| AU (1) | AU2002307981B2 (cs) |
| CA (1) | CA2443302C (cs) |
| CZ (1) | CZ299652B6 (cs) |
| DE (1) | DE60201525T8 (cs) |
| DK (1) | DK1379262T3 (cs) |
| ES (1) | ES2230512T3 (cs) |
| FR (1) | FR2823116B1 (cs) |
| HU (1) | HUP0303797A3 (cs) |
| NZ (1) | NZ528571A (cs) |
| PL (1) | PL204867B1 (cs) |
| PT (1) | PT1379262E (cs) |
| RU (1) | RU2297235C2 (cs) |
| WO (1) | WO2002083158A1 (cs) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CZ299802B6 (cs) * | 2006-10-12 | 2008-11-26 | Kalvoda@Jaroslav | Príprava zálivky obsahující extrakt z náprstníku cerveného, extrakt z jinanu dvoulalocného a dusicnan draselný, a její vliv na rostliny |
Families Citing this family (14)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2003006040A1 (en) | 2001-07-11 | 2003-01-23 | The Trustees Of Columbia University In The City Of New York | Method for isolating terpene trilactones (ginkgolides, bilobalide) from leaves and pharmaceutical powders of ginkgo biloba |
| WO2003082185A2 (en) | 2002-03-29 | 2003-10-09 | The Trustees Of Columbia University In The City Of New York | Analogs of terpene trilactones from ginkgo biloba and related compounds and uses thereof |
| JP2004307396A (ja) * | 2003-04-07 | 2004-11-04 | Kao Corp | デオドラント剤 |
| US7429670B2 (en) | 2003-08-27 | 2008-09-30 | The Trustees Of Columbia University In The City Of New York | Synthesis of derivatives of ginkgolide C |
| WO2005046829A2 (en) | 2003-11-12 | 2005-05-26 | The Trustees Of Columbia University In The City Of New York | Separation of ginkgolides and bilobalide from g. biloba |
| DE50307483D1 (de) * | 2003-12-04 | 2007-07-26 | Cognis Ip Man Gmbh | Verfahren zur Herstellung von Extrakten des Ginkgo Biloba |
| WO2006004386A1 (es) * | 2004-07-02 | 2006-01-12 | Rojas Castaneda Patricia | Uso de un extracto del ginkgo biloba para preparar una medicina para tratar la enfermedad de parkinson |
| CN1891242B (zh) * | 2005-07-06 | 2012-01-04 | 徐州技源天然保健品有限公司 | 一种从银杏叶提取物中脱除多环芳烃的生产工艺 |
| FR2904222A1 (fr) * | 2006-07-27 | 2008-02-01 | Sod Conseils Rech Applic | Utilisation d4extraits de ginkgo biloba pour le traitement de maladies mitochondriales |
| ES2709633T3 (es) * | 2007-12-21 | 2019-04-17 | Dr Willmar Schwabe Gmbh & Co Kg | Uso de un extracto de hojas de Ginkgo biloba |
| FR2926994B1 (fr) * | 2008-02-06 | 2010-08-27 | Sod Conseils Rech Applic | Nouveau procede pour la preparation d'extraits de ginkgo biloba |
| WO2011012141A1 (en) * | 2009-07-28 | 2011-02-03 | Velleja Research S.R.L. | Ginkgo biloba extract with a standardised ginkgo flavone glycosides content deprived of the paf-antagonist terpenic fraction, and compositions containing it, for the prevention and treatment of circulatory, cognitive, geriatric and sensory disorders |
| CN110893183A (zh) * | 2018-09-13 | 2020-03-20 | 成都百裕制药股份有限公司 | 银杏萜内酯在制备预防、缓解或治疗肌萎缩侧索硬化药物中的应用 |
| FR3152724A1 (fr) * | 2023-09-13 | 2025-03-14 | Chromavis France | Extrait de ginkgo biloba pour stimuler la croissance des cils |
Family Cites Families (18)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1044659C (zh) * | 1987-06-30 | 1999-08-18 | 吴羽化学工业株式会社 | 含有唑类衍生物的农业和园艺用的农药组合物 |
| DE3832056A1 (de) * | 1988-09-21 | 1990-03-22 | Scholle Helmut Dr Med | Verwendung eines ginkgo-extraktes |
| JPH02193907A (ja) * | 1989-01-19 | 1990-07-31 | Daicel Chem Ind Ltd | イチョウエキスの製法 |
| KR940002796B1 (ko) * | 1989-06-16 | 1994-04-02 | 주식회사 선경인더스트리 | 은행잎에서 징코라이드를 분리 및 정제하는 방법 |
| DE3940094A1 (de) * | 1989-12-04 | 1991-06-06 | Montana Ltd | Wirkstoffkonzentrate und neue wirkstoff-kombinationen aus blaettern von ginkgo biloba, ein verfahren zu ihrer herstellung und die wirkstoff-konzentrate bzw. die wirkstoff-kombinationen enthaltenden arzneimittel |
| DE3940091A1 (de) * | 1989-12-04 | 1991-06-06 | Schwabe Willmar Gmbh & Co | Extrakt aus blaettern von ginkgo biloba, verfahren zu seiner herstellung und den extrakt enthaltende arzneimittel |
| DE3940095A1 (de) * | 1989-12-04 | 1991-06-06 | Schwabe Willmar Gmbh & Co | Extrakt aus blaettern von ginkgo biloba, verfahren zu seiner herstellung und den extrakt enthaltende arzneimittel |
| DE3940092A1 (de) * | 1989-12-04 | 1991-06-06 | Schwabe Willmar Gmbh & Co | Extrakt aus blaettern von ginkgo biloba, verfahren zu seiner herstellung und den extrakt enthaltende arzneimittel |
| GB9107425D0 (en) * | 1991-04-09 | 1991-05-22 | Scras | Preparation of ginkgolide b |
| DE4308443C2 (de) * | 1993-03-17 | 1996-09-19 | Laves Hans Georg | Arzneimittel zur Behandlung von Retrovirusinfektionen |
| GB9408044D0 (en) * | 1994-04-22 | 1994-06-15 | Sod Conseils Rech Applic | Conversion of ginkgolide c to ginkgolide b |
| DE19756848C2 (de) * | 1997-12-19 | 2003-01-16 | Schwabe Willmar Gmbh & Co | Extrakte aus Blättern von Ginkgo biloba mit vermindertem Gehalt an 4'-O-Methylpyridoxin und Biflavonen |
| US6030621A (en) * | 1998-03-19 | 2000-02-29 | De Long; Xie | Ginkgo biloba composition, method to prepare the same and uses thereof |
| DE19829516B4 (de) * | 1998-07-02 | 2004-08-26 | Dr. Willmar Schwabe Gmbh & Co. Kg | Wasserlöslicher nativer Trockenextrakt aus Gingko biloba mit hohem Gehalt an Terpenoiden und Flavonglykosiden |
| CN1124275C (zh) * | 2000-06-02 | 2003-10-15 | 天津大学 | 由银杏叶或银杏叶浸膏制备药物银杏内酯a、b的方法 |
| ES2219259T3 (es) * | 2000-06-16 | 2004-12-01 | Linnea S.A. | Complejo soluble en agua de un extracto de ginkgo biloba, procedimiento para su preparacion y composicion que lo comprende. |
| WO2003006040A1 (en) * | 2001-07-11 | 2003-01-23 | The Trustees Of Columbia University In The City Of New York | Method for isolating terpene trilactones (ginkgolides, bilobalide) from leaves and pharmaceutical powders of ginkgo biloba |
| CN1287121C (zh) * | 2004-04-05 | 2006-11-29 | 广东科龙电器股份有限公司 | 可实现冷媒充灌量动态控制的空调器节流装置 |
-
2001
- 2001-04-10 FR FR0104942A patent/FR2823116B1/fr not_active Expired - Fee Related
-
2002
- 2002-04-09 ES ES02761922T patent/ES2230512T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2002-04-09 WO PCT/FR2002/001219 patent/WO2002083158A1/fr not_active Ceased
- 2002-04-09 HU HU0303797A patent/HUP0303797A3/hu unknown
- 2002-04-09 KR KR1020037013205A patent/KR100876233B1/ko not_active Expired - Fee Related
- 2002-04-09 PL PL366938A patent/PL204867B1/pl not_active IP Right Cessation
- 2002-04-09 CN CNB028080998A patent/CN1245167C/zh not_active Expired - Fee Related
- 2002-04-09 AU AU2002307981A patent/AU2002307981B2/en not_active Ceased
- 2002-04-09 DE DE60201525T patent/DE60201525T8/de active Active
- 2002-04-09 PT PT02761922T patent/PT1379262E/pt unknown
- 2002-04-09 EP EP02761922A patent/EP1379262B1/fr not_active Expired - Lifetime
- 2002-04-09 JP JP2002580960A patent/JP4416404B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2002-04-09 AT AT02761922T patent/ATE278411T1/de active
- 2002-04-09 RU RU2003132470/15A patent/RU2297235C2/ru not_active IP Right Cessation
- 2002-04-09 NZ NZ528571A patent/NZ528571A/en not_active IP Right Cessation
- 2002-04-09 CZ CZ20033055A patent/CZ299652B6/cs not_active IP Right Cessation
- 2002-04-09 CA CA2443302A patent/CA2443302C/fr not_active Expired - Fee Related
- 2002-04-09 US US10/472,408 patent/US7048954B2/en not_active Expired - Fee Related
- 2002-04-09 DK DK02761922T patent/DK1379262T3/da active
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CZ299802B6 (cs) * | 2006-10-12 | 2008-11-26 | Kalvoda@Jaroslav | Príprava zálivky obsahující extrakt z náprstníku cerveného, extrakt z jinanu dvoulalocného a dusicnan draselný, a její vliv na rostliny |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP4416404B2 (ja) | 2010-02-17 |
| NZ528571A (en) | 2005-06-24 |
| CN1501806A (zh) | 2004-06-02 |
| FR2823116A1 (fr) | 2002-10-11 |
| US7048954B2 (en) | 2006-05-23 |
| FR2823116B1 (fr) | 2004-11-19 |
| DK1379262T3 (da) | 2005-02-14 |
| JP2004538263A (ja) | 2004-12-24 |
| HK1066164A1 (en) | 2005-03-18 |
| WO2002083158A1 (fr) | 2002-10-24 |
| CN1245167C (zh) | 2006-03-15 |
| US20040109907A1 (en) | 2004-06-10 |
| EP1379262A1 (fr) | 2004-01-14 |
| DE60201525D1 (de) | 2004-11-11 |
| DE60201525T8 (de) | 2006-08-24 |
| ES2230512T3 (es) | 2005-05-01 |
| DE60201525T2 (de) | 2006-03-02 |
| ATE278411T1 (de) | 2004-10-15 |
| KR100876233B1 (ko) | 2008-12-26 |
| HUP0303797A3 (en) | 2005-05-30 |
| PT1379262E (pt) | 2005-02-28 |
| RU2003132470A (ru) | 2005-03-10 |
| PL366938A1 (en) | 2005-02-07 |
| CZ299652B6 (cs) | 2008-10-01 |
| EP1379262B1 (fr) | 2004-10-06 |
| KR20030087068A (ko) | 2003-11-12 |
| PL204867B1 (pl) | 2010-02-26 |
| RU2297235C2 (ru) | 2007-04-20 |
| CA2443302A1 (fr) | 2002-10-24 |
| CA2443302C (fr) | 2012-09-18 |
| AU2002307981B2 (en) | 2006-11-23 |
| HUP0303797A2 (hu) | 2004-03-29 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Xu et al. | Pharmacokinetics and bioavailability of ginsenoside Rb1 and Rg1 from Panax notoginseng in rats | |
| CZ20033055A3 (cs) | Způsob přípravy extraktu z listů Ginkgo biloba vysoce obohaceného účinnými látkami | |
| US20100197618A1 (en) | Extract of rehmannia glutinasa libosch for reducing blood sugar, reducing blood fat, treating leukemia, and preparation method uses thereof | |
| AU2002365415B2 (en) | Methods of making and using theaflavin, theaflavin-3-gallate, theaflavin-3'-gallate and theaflavin 3,3'-digallate and mixtures thereof | |
| JP2006516962A (ja) | マデカソサイドおよびターミノロサイドに富むセンテラアシアチカ抽出物を調製するための方法 | |
| JP2002508752A (ja) | アルツハイマー病および他のアミロイド症のための組成物および方法 | |
| CN109090611B (zh) | 一种AGEs抑制组合物及其应用、制备方法、制剂 | |
| Jack et al. | A polyphenol-enriched fraction of Cyclopia intermedia decreases lipid content in 3T3-L1 adipocytes and reduces body weight gain of obese db/db mice | |
| CN106860500B (zh) | 低毒雷公藤新多苷、其制备方法及其应用 | |
| US20090047368A1 (en) | Polymeric polyphenol extracted from fermented tea, therapeutic agent for mitochondrial disease, preventive/therapeutic agent for diabetes mellitus, and food or beverage | |
| US20020090403A1 (en) | Antidepressant | |
| JP2006170905A (ja) | テルペン並びにその血中濃度定量方法及び薬物動態解析方法 | |
| AU2012338742A1 (en) | Composition comprising chicory extract | |
| EP1848449A2 (en) | Bioactive complex of triterpene acids, its production process and medicinal products with therapeutical uses | |
| Bangar et al. | Isolation of α-glucosidase enzyme inhibitor from titanus (Leea aequata L.) | |
| KR100855526B1 (ko) | 테아플라빈, 테아플라빈-3-갈레이트,테아플라빈-3'-갈레이트 및 테아플라빈 3,3'-디갈레이트및 그의 혼합물을 사용 및 제조하는 방법 | |
| Dias et al. | First morphological-level insights into the efficiency of green tea catechins and grape seed procyanidins on a transgenic mouse model of celiac disease enteropathy | |
| JP2005503381A (ja) | 脂肪細胞分化阻害作用を有するセスキテルペノイド誘導体 | |
| CN103463145A (zh) | 以银杏落叶为原料的银杏叶精制提取物及其制备方法与应用 | |
| CN113633705A (zh) | 一种具有抗氧化活性的三叶青根茎多酚提取物及其质量控制方法和用途 | |
| Huynh et al. | Evaluating polyphenol components, lung cancer cell inhibition, and antioxidant activity of Polyscias spp. | |
| EP2356986A1 (en) | Composition for treatment of metabolic syndrome | |
| HK1066164B (en) | Method for preparing an extract of ginkgo biloba leaves highly enriched in active principles | |
| CN117338679A (zh) | 重楼提取物的抑制油脂分泌的应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | Patent lapsed due to non-payment of fee |
Effective date: 20130409 |