CZ2013473A3 - Způsob detekce beta-laktamáz gramnegativních bakterií hmotnostní spektrometrií - Google Patents

Způsob detekce beta-laktamáz gramnegativních bakterií hmotnostní spektrometrií Download PDF

Info

Publication number
CZ2013473A3
CZ2013473A3 CZ2013-473A CZ2013473A CZ2013473A3 CZ 2013473 A3 CZ2013473 A3 CZ 2013473A3 CZ 2013473 A CZ2013473 A CZ 2013473A CZ 2013473 A3 CZ2013473 A3 CZ 2013473A3
Authority
CZ
Czechia
Prior art keywords
beta
lactamases
mass spectrometry
proteins
mixture
Prior art date
Application number
CZ2013-473A
Other languages
English (en)
Other versions
CZ304833B6 (cs
Inventor
Jaroslav Hrabák
Konstantinos Papagiannitsis
Original Assignee
Univerzita Karlova v Praze, Lékařská fakulta v Plzni
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Univerzita Karlova v Praze, Lékařská fakulta v Plzni filed Critical Univerzita Karlova v Praze, Lékařská fakulta v Plzni
Priority to CZ2013-473A priority Critical patent/CZ2013473A3/cs
Priority to EP14173225.5A priority patent/EP2816357B1/en
Priority to US14/398,705 priority patent/US9803229B2/en
Priority to PCT/CZ2014/000069 priority patent/WO2014202034A1/en
Publication of CZ304833B6 publication Critical patent/CZ304833B6/cs
Publication of CZ2013473A3 publication Critical patent/CZ2013473A3/cs

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/02—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving viable microorganisms
    • C12Q1/04—Determining presence or kind of microorganism; Use of selective media for testing antibiotics or bacteriocides; Compositions containing a chemical indicator therefor
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/02—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving viable microorganisms
    • C12Q1/18—Testing for antimicrobial activity of a material
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/34—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving hydrolase
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/569—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses
    • G01N33/56911—Bacteria
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
    • G01N33/6803—General methods of protein analysis not limited to specific proteins or families of proteins
    • G01N33/6848—Methods of protein analysis involving mass spectrometry
    • G01N33/6851—Methods of protein analysis involving laser desorption ionisation mass spectrometry
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/94—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving narcotics or drugs or pharmaceuticals, neurotransmitters or associated receptors
    • G01N33/9446—Antibacterials
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
    • G01N2333/90—Enzymes; Proenzymes
    • G01N2333/914—Hydrolases (3)
    • G01N2333/978—Hydrolases (3) acting on carbon to nitrogen bonds other than peptide bonds (3.5)
    • G01N2333/986—Hydrolases (3) acting on carbon to nitrogen bonds other than peptide bonds (3.5) acting on amide bonds in cyclic amides (3.5.2), e.g. beta-lactamase (penicillinase, 3.5.2.6), creatinine amidohydrolase (creatininase, EC 3.5.2.10), N-methylhydantoinase (3.5.2.6)

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • Bioinformatics & Computational Biology (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Spectroscopy & Molecular Physics (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Optics & Photonics (AREA)
  • Other Investigation Or Analysis Of Materials By Electrical Means (AREA)
  • Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)

Abstract

Řešení poskytuje způsob detekce beta-laktamáz gramnegativních bakterií pomocí hmotnostní spektrometrie. Z bakterií se nejprve vyextrahují proteiny vnější membrány buněčné stěny a periplasmového prostoru. V této směsi se beta-laktamázy stabilizují inhibitorem a/nebo substrátem beta-laktamáz. Proteiny se následně vysrážejí, rozpustí, nanesou na destičku pro MALDI-TOF hmotnostní spektrometrii, překryjí roztokem matrice a změří metodou MALDI-TOF hmotnostní spektrometrie, načež se výsledná spektra srovnají s referenčními peaky beta-laktamáz. Detekce může být používána k rychlému vyhodnocení rezistence bakterií vůči beta-laktamovým antibiotikům, s minimem falešně pozitivních výsledků.

Description

Zpûsob detekce beta-laktamâz gramnegativnich bakterii hmotnostni spektrometrii
Oblast techniky
Predklâdanÿ vynâlez se tÿkâ zpûsobu identifikace beta-laktamâz gramnegativnich bakterii hmotnostni spektrometrii, konkrétnèji pak zpûsobu identifikace beta-laktamâz a zjisteni rezistence gramnegativnich bakterii k beta-laktamovÿm antibiotikùm.
Dosavadni stay techniky
Beta-laktamâzy jsou enzymy produkované nëkterÿmi bakteriemi. Zpûsobuji rezistenci k betalaktamovÿm antibiotikùm (napf. peniciliny, cefalosporiny, karbapenemy). Detekce beta- laktamâz je jednim z vhodnÿch postupù zjistëni rezistence bakterii. Je dûlezitâ pro nasazeni ùcinné antibiotické lécby a nastaveni vhodnÿch preventivnich opatfeni pro zamezeni jejich sifeni.
Identifikace beta-laktamâz je provâdëna fenotypovÿmi metodami na zâkladë senzitivity k rûznÿm inhibitorûm. Precizni identifikace probihâ PCR amplifikaci jejich genû s nâslednou sekvenaci amplifikacnich produktû. Nëkolik laboratofi ve svëtë pracuje na vÿvoji metod identifikace beta-laktamâz pomoci hmotnostni spektrometrie (napf. Schaumann R, Knoop N, Genzel GH, Losensky K, Rosenkranz C, Stingu CS, Schellenberger W, Rodloff AC, Eschrich K. 2012. A step towards the discrimination of beta-lactamase-producing clinical isolates of Enterobacteriaceae and Pseudomonas aeruginosa by MALDI-TOF mass spectrometry. Med. Sei. Monit. 18: MT71-MT77).
Metoda detekce proteinù (beta-laktamâz) pomoci MALDI-TOF hmotnostni spektrometrie mùze poskytovat vÿsledky srovnatelné s molekulâmë-genetickÿmi testy (PCR, mikrocipy), avsak umozni celÿ procès vÿznamnë zrychlit a zlevnit. Dosud vsak nebyla publikovâna ùspësnâ metodika detekce tëchto enzymû pomoci MALDI-TOF hmotnostni spektrometrie.
Jedinou publikovanou praci, kdy byla zobrazena beta-laktamâza pomoci MALDI-TOF hmotnostni spektrometrie, je prâce z roku 2007 (Camara JE, Hays FA. 2007. Discrimination between wild-type and ampicillin-resistant Escherichia coli by matrix-assisted laser desorption/ionization time-of-flight mass spectrometry. Anal. Bioanal. Chern. 389: 1633— 1638). Vÿsledky publikované tëmito autory se vsak nepodafilo zopakovat. Zâroven nejsou k dispozici publikace, které by zâvëry vÿse citované prâce potvrdily.
Znâma je detekce karbapenemâz a cefalosporinâz pomoci hmotnostni spektrometrie, kde jsou ovsem nejprve proteiny stëpeny na krâtké peptidy a podle typického spektra tëchto peptidû je potom stanovovân typ karbapenemâz a cefalosporinâz (WO 2012/143^35, WO 2012/143(534). Dâle je znâma detekce rezistence u bakterii, kde jsou hmotnostni spektrometrii sledovâny produkty pûsobeni enzymù zpüsobujicich rezistenci, tedy kovalentnë modifikovanâ antibiotika nebo kovalentnë modifikované modelové slouceniny (US 2012/196309). Obdobnë je znâmo stanoveni pfitomnosti beta-laktamâz, zalozené na detekci produktû pûsobeni beta- laktamâz, tedy na detekci produktû hydrolytického stëpeni amidové vazby beta-laktamového kruhu beta-laktamovÿch antibiotik (WO 2011/154^517).
Vsechny dosud znâmé metody detekce enzymû bakteriâlni rezistence vyzaduji bud’ degradaci enzymû na peptidy, nebo provedeni enzymatické reakce a detekci produktû této reakce. Tim se do analyzované smësi zanâseji dalsi slozky a také se zvysuje riziko falesnë pozitivnich vÿsledkû.
Podstata vynâlezu
Pfedmëtem pfedklâdaného vynâlezu je zpûsob detekce beta-laktamâz gramnegativnich bakterii pomoci hmotnostni spektrometrie, jehoz podstata spocivâ v tom, ze se z bakterii vyextrahuji proteiny vnëjsi membrâny bunëcné stëny a periplasmového prostoru a proteiny, které maji bÿt detekovâny, se stabilizuji inhibitorem a/nebo substrâtem daného proteinu, stabilizované proteiny se nâslednë rozpusti, nanesou se na desticku pro MALDI-TOF hmotnostni spektrometrii, pfekryji roztokem matrice a zmëfi metodou MALDI-TOF (matrix assisted laser desorption/ionization time-of-flight, ionizace laserem za pfitomnosti matrice v kombinaci s detektorem doby letu) hmotnostni spektrometrie. Vÿslednâ spektra se pak srovnaji s referencnimi peaky (vrcholy) pro danou beta-laktamâzu. Referencni peaky betalaktamâz se ziskaji mëfenim standardû proteinû, jejichz identita je znâma nebo ovëfena znâmÿmi metodami.
Extrakce se s vÿhodou provâdi tak, ze bakterie pomnozené v médiu urceném pro kultivaci gramnegativnich bakterii, napf. vybraném z bujônu Mueller-Hintonové (MH bujônu) nebo média BHI (brain-heart infusion, infuze mozkové a srdecni tkânë), se ochladi na 0 az 6 °C a nâslednë centrifûgujp pro sedimentaci bakterii. Supernatant se odstrani, peleta se resuspenduje ve vodném roztoku sacharôzy o koncentraci alespon 20 % (w/w), s vÿhodou 20 az 40% (w/w) vodném roztoku sacharôzy, vÿhodnèji ve 40% (w/w) roztoku sacharôzy, a inkubuje minimâlnë 1 h^d] pri 2 az 8 °C. Ke smësi se nâslednë pfidâ pufr vhodnÿ pro aktivitu lysozymu (napfiklad Tris-HCl pufr) a lysozym, smés se inkubuje pfi 35 az 37 °C po dobu nutnou pro rozruseni vnëjsi membrâny bunëcné stëny a uvolnëni proteinû periplasmového prostoru (obvykle minimâlnë 1 h^>d|). Kvalitu extrakce/rozruseni vnëjsi membrâny bunëcné stëny Ize ovëfit mikroskopicky — dojde ke zmënë tyckovitého tvaru bakterii na sférické ùtvary (sferocyty).
Ve vÿhodném provedeni je inhibitorem ci substrâtem pouzitÿm pro stabilizaci napfiklad betalaktamové antibiotikum nebo beta-laktamovÿ inhibitor, napf. meropenem, ampicilin, kyselina klavulanovâ, cefepim, kyselina fenylboritâ.
S vÿhodou se vysrâzeni provede C1-C4 alkoholem, vÿhodnèji ethanolem, nebo acetonem, do kterÿch Ize s vÿhodou pfidat kyselinu trifluoroctovou, vÿhodnèji 0,1 objj % kyseliny trifluoroctové.
S vÿhodou se rozpustëni vysrâzenÿch stabilizovanÿch proteinû provede smësi acetonitrilu a vody s pfidavkem kyseliny trifluoroctové, vÿhodnèji se jednâ o smës s 50 obj J % acetonitrilu a 2,5 obj.j% kyseliny trifluoroctové.
Referencin' peaky beta-laktamâz se ziskaji mëfem'm standard!! beta-laktamâz, jejichz identita je znâma nebo ovèfena znâmÿmi metodami.
Dalsim pfedmëtem pfedklâdaného vynâlezu je kit pro detekci beta-laktamâz gramnegativnich bakterii pomoci hmotnostni spektrometrie, obsahujici Tris-HCl pufr (pH 8,0), lysozym, inhibitor ci substrât beta-laktamâz, C1-C4 alkohol nebo aceton, smës acetonitrilu a vody s pfidavkem kyseliny trifluoroctové, matrici, rozpoustëdlo pro matrici.
Pfehled obrâzkù na yykrgscidt
Obr. 1 znâzornuje pfiklady detekce beta-laktamâz typu CMY. Peaky odpovidajici beta- laktamâze jsou vyznaceny sipkou. A - spektrum purifikované beta-laktamâzy CMY-2, B -spektrum vzorku Proteus mirabilis produkujici beta-laktamâzu CMY-15, C - spektrum vzorku Escherichia coli produkujici beta-laktamâzu CMY-2.
Pfiklady provedeni vynâlezu
Pfiklad 1
Kultivace bakterii a extrakce β-laktamàz:
Izolât bakterii z celedi Enterobacteriaceae (testovâny byly Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Proteus mirabilis, Citrobacter freundii) byl naockovân do 50 ml bujonu Mueller-Hintonové (MH bujôn) nebo BHI (brain-heart infusion), s pfidavkem 50 mg/1 ampicilinu; kultivace byla provâdëna po dobu 12 az 18 h|»d} pfi 35 az 37 °C.
Médium s narostlou kulturou bylo nâslednë ochlazeno na cca 4 °C (inkubace na ledu cca 10 minut), centrifugace 20 minut. Supernatant byl odstranën. Peleta byla resuspendovâna v 90 μΐ vodného roztoku 40,% (w/w) sacharôzy a inkubovâna 1 h|>d| pfi 4 °C.
Ke smësi bylo nâslednë pfidâno 10 μΐ IM Tris-HCl pufru (pH 8,0), 1 μΐ lysozymu (koncentrace 10 mg/ml); inkubace byla provâdëna 90 minut pfi 35 az 37 °C. Kvalitu extrakce lze ovëfit mikroskopicky - dojde ke zmënë tyckovitého tvaru bakterii na sférické ùtvary (sferocyty).
Nâsledovala centrifugace pfi 14 000 g po dobu 5 minut. Supernatant obsahujici extrahované β-laktamâzy byl pouzit dâle.
Priprava a stabilizace β-laklamcîz ve smési:
100 μΐ pfipraveného extraktu bylo smiseno s 25 μΐ lOOmM meropenemu (byly testovany i kyselina klavulanovâ, kyselina fenylboritâ, s obdobnÿmi vÿsledky) a inkubovâno 10 minut pfi pokojové teplotë. Ke smësi byl pfidân 1 ml ledovë vychlazeného ethanolu s 0,1 obj. j% trifluoroctové kyseliny, vortexovâno 30 sekund, nâslednë centrifugovâno 20 minut pfi 14 000 g pfi 4 °C. Poté byl opatmë odstranën supernatant, peleta ususena 10 minut pfi 35 az 37 °C. Peleta pak byla rozpustëna v 50^μ1 roztoku acetonitrilu (500 μΐ acetonitrilu, 475 μΐ deionizované vody, 25 μΐ trifluoroctové kyseliny); vortexovâno 1 minutu.
Vlastni mëfeni:
μΐ roztoku byl nanesen na destiëku pro MALDI-TOF MS (mass spectrometry, hmotnostni spektrometrie) mëfeni, ponechân pfi pokojové teplotë uschnout. Vzorek byl pfevrstven 1 μΐ matrice (vodnÿ 50% (obj.) roztok ethanolu nasycenÿ kyselinou sinapovou) a ponechân zaschnout. Nâslednë bylo provedeno MALDI-TOF MS mëfeni.
Obr. 1 ukazuje, ze postupem podle vynâlezu Ize ziskat spektra s oddëlenÿmi a dobfe integrovatelnÿmi peaky, a s vÿbomÿm pomërem signâl-sum.

Claims (6)

  1. PATENTOVÉ NÂROKY
    1. Zpûsob detekce beta-laktamâz gramnegativnich bakterii pomoci hmotnostni spektrometrie, vyznacenÿ tim, ze se zbakterii vyextrahuji proteiny vnëjsi membrâny bunëcné stëny a periplasmového prostoru, v této smësi se proteinÿ stabiîizuji inhibitorem a/nebo substrâtem beta-laktamâz, proteiny se nâslednë vysrâzeji, vysrâzené proteiny se nâslednë rozpusti, nanesou se na desticku pro MALDI-TOF hmotnostni spektrometrii, pfekryji roztokem matrice urcené pro ionizaci proteinû s relativni molekulovou hmotnosti >10 000 a zmëfi metodou MALDI-TOF hmotnostni spektrometrie, nacez se vÿslednâ spektra srovnaji s referencnimi peaky beta-laktamâz.
  2. 2. Zpûsob podle nâroku 1, vyznacenÿ tim, ze extrakce se provede tak, ze bakterie v médiu urceném pro kultivaci gramnegativnich bakterii se ochladi na 0 az 6 °C a nâslednë centrifûguji alespon 20 minut, peleta se resuspenduje ve vodném roztoku sacharôzy o koncentraci alespon 20 % (w/w) a inkubuje se po dobu alespon 1 hodiny pfi 2 az 8 °C, ke smësi se nâslednë pfidâ roztok lysozymu v pufru a smës se inkubuje pfi 35 az 37 °C po dobu alespon 1 hodiny.
  3. 3. Zpûsob podle nâroku 1, vyznacenÿ tim, ze inhibitorem ci substrâtem je beta-laktamové antibiotikum nebo beta-laktamovÿ inhibitor, s vÿhodou je inhibitor ci substrât vybrân ze skupiny zahmujici meropenem, ampicilin, kyselinu klavulanovou, cefepim, kyselinu fenylboritou.
  4. 4. Zpûsob podle nâroku 1, vyznacenÿ tim, ze se vysrâzeni provede C1-C4 alkoholem nebo acetonem, s vÿhodou s pfidavkem kyseliny trifluoroctové.
  5. 5. Zpûsob podle nâroku 1, vyznacenÿ tim, ze se rozpustëni vysrâzenÿch stabilizovanÿch proteinû provede smësi acetonitrilu a vody s pfidavkem kyseliny trifluoroctové.
  6. 6. Kit pro detekci beta-laktamâz gramnegativnich bakterii pomoci hmotnostni spektrometrie, vyznacenÿ tim, ze obsahuje Tris-HCl pufr o pH 8,0, lysozym, inhibitor ci substrât betalaktamâz, C1-C4 alkohol nebo aceton, pfipadnë s pfidavkem kyseliny trifluoroctové, smës acetonitrilu a vody s pfidavkem kyseliny trifluoroctové, matrici, rozpoustëdlo pro matrici.
CZ2013-473A 2013-06-20 2013-06-20 Způsob detekce beta-laktamáz gramnegativních bakterií hmotnostní spektrometrií CZ2013473A3 (cs)

Priority Applications (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CZ2013-473A CZ2013473A3 (cs) 2013-06-20 2013-06-20 Způsob detekce beta-laktamáz gramnegativních bakterií hmotnostní spektrometrií
EP14173225.5A EP2816357B1 (en) 2013-06-20 2014-06-20 Method of detection of Gram-negative bacteria periplasmic space and cell wall outer membrane proteins by mass spectrometry
US14/398,705 US9803229B2 (en) 2013-06-20 2014-06-20 Method of detection of gram-negative bacteria periplasmic space and cell wall outer membrane proteins by mass spectrometry
PCT/CZ2014/000069 WO2014202034A1 (en) 2013-06-20 2014-06-20 Method of detection of gram-negative bacteria periplasmic space and cell wall outer membrane proteins by mass spectrometry

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CZ2013-473A CZ2013473A3 (cs) 2013-06-20 2013-06-20 Způsob detekce beta-laktamáz gramnegativních bakterií hmotnostní spektrometrií

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CZ304833B6 CZ304833B6 (cs) 2014-11-26
CZ2013473A3 true CZ2013473A3 (cs) 2014-11-26

Family

ID=51032943

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CZ2013-473A CZ2013473A3 (cs) 2013-06-20 2013-06-20 Způsob detekce beta-laktamáz gramnegativních bakterií hmotnostní spektrometrií

Country Status (4)

Country Link
US (1) US9803229B2 (cs)
EP (1) EP2816357B1 (cs)
CZ (1) CZ2013473A3 (cs)
WO (1) WO2014202034A1 (cs)

Families Citing this family (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2019034437A1 (en) * 2017-08-17 2019-02-21 Conicet - Consejo Nacional De Investigaciones Científicas Y Técnicas DIRECT DETECTION OF MALDI-TOF MASS SPECTROMETRY RESISTANCE MECHANISMS
JP2019143975A (ja) * 2018-02-15 2019-08-29 株式会社島津製作所 分析方法およびβ−ラクタム系抗菌薬耐性評価方法
KR101999574B1 (ko) * 2018-08-03 2019-09-27 다이아텍코리아 주식회사 질량분석법을 이용한 베타락탐 항생제 가수분해 효소의 활성형 직접 검출법
KR102729119B1 (ko) * 2019-08-02 2024-11-13 (재)씨젠의료재단 베타-락탐 항생제에 대한 내성을 가지는 병원성 균주의 직접 검출 방법
JP2026013695A (ja) * 2024-07-17 2026-01-29 株式会社島津製作所 微生物の薬剤耐性評価方法

Family Cites Families (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE102006021493B4 (de) * 2006-05-09 2010-04-01 Bruker Daltonik Gmbh Massenspektrometrische Messung mikrobieller Resistenzen
DE102010023452B4 (de) 2010-06-11 2012-11-08 Bruker Daltonik Gmbh Massenspektrometrische Messung von β-Lactamase-Resistenzen
US20120196309A1 (en) 2011-01-28 2012-08-02 Yale University Methods and Kits for Detection of Antibiotic Resistance
DE102011012060A1 (de) * 2011-02-23 2012-08-23 Bruker Daltonik Gmbh Massenspektrometrische Bestimmung der inhibitorischen Wirkung von Substanzen gegenüber beta-Lactamasen
WO2012143534A2 (fr) 2011-04-21 2012-10-26 Biomerieux Inc. Procede de detection d'au moins un mecanisme de resistance aux cephalosporines par spectrometrie de masse
CN107271686B (zh) 2011-04-21 2019-09-10 生物梅里埃公司 使用质谱检测至少一种碳青霉烯抗性机制的方法

Also Published As

Publication number Publication date
US20160138068A1 (en) 2016-05-19
WO2014202034A1 (en) 2014-12-24
US9803229B2 (en) 2017-10-31
EP2816357B1 (en) 2019-04-17
EP2816357A1 (en) 2014-12-24
CZ304833B6 (cs) 2014-11-26

Similar Documents

Publication Publication Date Title
ES2622127T3 (es) Metodos de determinación de resistencia a antibioticos en microorganismos
JP6216711B2 (ja) カルバペネムに対する耐性の少なくとも１つの機構を質量分析により検出する方法
JP6087341B2 (ja) セファロスポリンに対する耐性の少なくとも１つの機構を質量分析により検出する方法
CZ304833B6 (cs) Způsob detekce beta-laktamáz gramnegativních bakterií hmotnostní spektrometrií
Chenau et al. Detection of yersinia pestis in environmental and food samples by intact cell immunocapture and liquid chromatography–tandem mass spectrometry
Espinosa et al. Fast and easy detection of CMY-2 in Escherichia coli by direct MALDI-TOF mass spectrometry
Balogh et al. Listeria monocytogenes utilizes the ClpP1/2 proteolytic machinery for fine-tuned substrate degradation at elevated temperatures
US20250075247A1 (en) Method for determining the methicillin resistance of staphylococcus aureus strains
JP6232115B2 (ja) 微生物が潜在的に抗菌剤化合物に対して耐性を有するか否かを決定するための方法
CN115184516B (zh) 一种快速检测肠杆菌β-内酰胺酶的方法
Foschi et al. Use of liquid chromatography-tandem mass spectrometry (LC-MS/MS) to detect carbapenemase production in Enterobacteriaceae by a rapid meropenem degradation assay
McGee et al. Direct detection of intact Klebsiella pneumoniae carbapenemase variants from cell lysates: Identification, characterization and clinical implications
Fan et al. Rapid determination of bacterial aminoglycoside resistance in environmental samples using membrane electrospray ionization mass spectrometry
Shah et al. Determination of antimicrobial resistance using tandem mass spectrometry
RU2776822C2 (ru) Выявление продуцирующих карбапенемазу видов enterobacteriales, pseudomonas и acinetobacter с применением хромогена
KR102640511B1 (ko) 그람 음성균 유래 원형 단백질의 분리 방법
US9376705B2 (en) Method for detecting susceptibility of microorganisms to chemical agents
CN111133114B (zh) 用色原体检测产碳青霉烯酶的肠杆菌目、假单胞菌属和不动杆菌属种
JP2016027822A (ja) 微生物における抗生物質耐性の特徴付けの方法
Gaulton Characterisation of novel and complex mechanisms of antobiotic resistance using a proteomics approach