CZ278971B6

CZ278971B6 - Pharmaceutical mixture for intravaginal administration

Info

Publication number: CZ278971B6
Application number: CS891490A
Authority: CZ
Inventors: Takeru Fujii; Seiichi Sako; Shigeyuki Takama; Toru Hibi; Akiya Yamada
Original assignee: Teikoku Seiyaku Co
Priority date: 1988-03-11
Filing date: 1989-03-10
Publication date: 1994-11-16
Also published as: CZ149089A3; CA1336676C; JPH01294632A; NZ228285A; KR890014131A; EP0332222B1; DE332222T1; AU617157B2; DK116789D0; KR0138658B1; US5840685A; EP0332222A2; DE68924491T2; ATE128874T1; GR900300006T1; DK116789A; NO891007D0; AU3125389A; JP2801249B2; US5824646A

Description

Oblast techniky

Vynález se týká farmaceutické směsi látek pro intravaginálni podáni, obsahující biologicky aktivní polypeptid, absorpční promotor, popřípadě živočišný a/nebo rostlinný protein a netoxický, farmaceuticky vhodný nosič nebo ředidlo ve formě vhodné pro intravaginálni podání. Vynález se také týká použití takových směsí pro léčení různých chorob. Vynález se rovněž týká způsobu zvyšování absorbovatelnosti intravaginálně podaného biologicky aktivního polypeptidu, zvyšování skladovatelnosti a snižování dráždivosti sliznice intravaginálně podávaného farmaceutického prostředku, obsahujícího biologicky aktivní peptid.

Dosavadní stav techniky

Polypeptidové hormony, jako jsou inzulín a kalcitonin, jsou ve vodě rozpustné sloučeniny s poměrně malou molekulovou hmotností, snadno se rozkládají žaludečními šťávami a střevními proteázami, jako pepsin a trypsin. Proto se při orálním podání málo absorbují a nevyvolávají účinnou farmakologickou odezvu. K získání žádané biologické účinnosti se obvykle polypeptidy zpracovávají na vstřikovatelnou formu. Nicméně je injekční forma nepohodlná a pro pacienta bolestivá, zvláště v případě nutnosti pravidelného a častého podávání; proto se usiluje o vyvinutí alternativních způsobů podávání polypeptidových hormonů.

Hirai a spol. v US patentu č. 4 659 696 a Usa a spol. v US patentu č. 4 670 419 /TAKEDA CHEMICAL INDUSTRIES, LTD/ popisují farmaceutické přípravky pro nosní, vaginální nebo rektální podání, obsahující hydrofilní terapeutickou látku, obtížně absorbovatelnou v gastrointestinálním traktu spolu s cyklodextrinem. Takové přípravky obsahují jako účinnou látku peptidy, např. inzulín, LH-RH analogy, oxytocin a TRH. Vhodným cyklodextrinem je α-cyklodextrin. V přípravcích mohou být přítomny různé farmaceutické pomocné látky.

Morishita a·spol. v US patentu č. 4 609 640 /TOYO JOZO COMPANY, LTD./ popisují terapeutické přípravky pro rektální nebo vaginální podání, které mají výborné absorpční vlastnosti a obsahují terapeutické, ve vodě rozpustné látky a ve vodě rozpustné chelatační činidlo částicového typu. Terapeutickou látkou může být polypeptidový hormon, jako je inzulín, somatostatin, kalcitonin atd. Ve vodě rozpuštěné polymery bez chelatační účinnosti, jako je želatina, kasein, albumin a globulin, mohou být použity, jestliže se použijí spolu s chelatačním činidlem nízké molekulární hmotnosti, tj. jednou z mnoha polykarboxylových kyselin a podobně. Další běžné přísady pro tyto lékové formy, jako například povrchově aktivní látky, mohou být také přítomny.

TEIJIN LIMITED v evropské patentové publikaci č. 0193372 uvádí nosní prásek, obsahující fyziologicky aktivní polypeptid, kvarterní amoniovou sloučeninu a nižší alkylethercelulózy, mající výbornou ochrannou schopnost a chemickou stabilitu. Výhodné směsi prásků obsahují inzulín nebo kalcitonin, benzalkoniumchlorid a hydroxypropylcelulózu. Různé vhodné pomocné látky mohou být

-1CZ 278971 B6 také přítomny, např. kluzné látky, vosky, pojivá, ředidla, barvicí činidla a vonné látky, antioxidanty, plnidla, izotonizující přísady a povrchově aktivní látky.

YAMANOUCHI PHARMACUETICAL CO.LTD. v evropské patentové publikaci č. 0183527 popisuje absorbovatelný nosní kalcitoninový přípravek, obsahující kalcitonin a nejméně jednu přísadu, zvyšující absorbci, vybranou ze souboru, který tvoří kyselina benzoová a její soli, kyselina kaprinová a její soli, polyethylenglykol 400, pyridoxal a jeho soli kyselina jablečná a její soli a kyselina pyrofosforečná a její soli. Další látky, vhodné pro nosní přípravky, mohou být přítomny. Použití jedné specifické látky, zvyšující absorpci, zvyšuje účinnost absorpce membránou nosní dutiny. Patentová publikace uvádí, že dřívější pokusy zlepšit nosní absorptivitu velkých polypeptidů, jako je kalcitonin, využívaly k tomuto účelu povrchově aktivní látky. Dřívější práce používaly jak amfoterní, tak kationogenní povrchově aktivní látky, zvláště neionogenní povrchově aktivní činidlo polyoxyethylenlaurylether; bohužel preferovaný etherový typ povrchově aktivní látky podporuje absorpci léčiva rozrušením nosní membrány.

SANDOZ LTD. v britské patentové přihlášce č. 8 326 436, publikované jako GB 2127689A, uvádí farmaceutické přípravky pro nosní podání, obsahující kalcitonin, benzalkoniumchlorid a/nebo povrchově aktivní látku, vhodnou pro nosní podání v kapalném nosiči nebo ředidle, vhodném pro aplikaci na nosní sliznici. Jestliže přípravky obsahují povrchově aktivní látku, je výhodné použít neionogenní látku, nejvýhodnější je použití polyoxyalkylen-vyšší alkohol-etheru. Uvádí se, že bylo u těchto inhalačních přípravků, obsahujících kalcitonin, dosaženo zlepšení biologické dostupnosti a zlepšení stability.

Matzuzawa a spol. v US patentu č. 3 917 825 /TAKEDA CHEMICAL INDUSTRIES, LTD./ uvádí farmaceutické přípravky pro rektální nebo vaginální podání LH-RH, nebo jeho analogů. Nona- nebo dekapeptid 'je homogenně dispergován v olejovém základu /např. olej-vosk nebo triglycerid mastných kyselin/, výhodně obsahuje neionogenní povrchově aktivní látku, jako je polyoxyethylen-vyšší alkohol-ether. Podání nonapeptidů a dekapeptidů různými způsoby je popsáno v mnoha patentech a publikacích, např. Beddell a spol. US patent č. 4 083 967; Immer a spol. US patent č. 3 888 838; Nestor a spol. US patent č. 4 234 571; Schally a spol. US patent č. 4 010 125; Schally a spůl. US patent č. 4 018 726 a Saito a spol. Fertility and Sterility, sv. 28, č. 3, březen 1977, 240-245.

Okada a spol., J.Pharm.Sci., sv. 72, č. 1, leden 1983, 75-78, uvádí vaginální absorpci účinného analogu LH-RH /leuprolid/, LH-RH samotného a inzulínu. Zvýšení absorpce je dosaženo použitím organických kyselin. Zvýšení účinnosti se ukázalo být v korelaci s chelatační schopností organických kyselin, viz také Okada, J. Takeda Res.Lab.42 /1/2/, 150 /1983/.

Touitou a spol., J.Pharm.Pharmac., 1978, 30,663, vyvinuli hydrofilní vehikulum pro rektální nebo vaginální podáni inzulínu, heparinu, fenolové červeně a gentamicinu, které obsahuje neionogenní povrchově aktivní látku, Cetomacrogol 1000 /polyethylenglykol 1000 monoacetylether/ v kombinaci s polyethylenglykoly. IL 54042 jeruzalémské university, zaměřená na farmaceutické příprav-2CZ 278971 B6 ky, obsahující neionogenní povrchově aktivní látky pro enterální nebo vaginální podání peptidových hormonů nebo heparinu, se výše * uvedené práci blíží.

Morimoto a spol. J.Pharm.Pharmacol. 1985, 37, 759-760, uvádějí účinek neionogenních povrchově aktivních látek, polyoxaethylensorbitanmonooleátu a polyoxyethan 9 lauryletheru, na zvýšení rektální absorpce semisyntetického analogu úhořího kalcitoninu v gelové bázi kyseliny polyakrylové. U gelové báze polyakrylové kyseliny bylo již dříve zjištěno, že zlepšuje absorpci inzulínu při rektálním, vaginálním a nosním podáni a kalcitoninu při rektálním a nosním podání. Dřívější zprávy také uvádějí, že absorpce léčiv, které se špatně absorbují, může být zvýšena současným podáním těchto léčiv s enaminem, karboxylovou kyselinou a povrchově aktivními látkami.

TEIJIN v JP 56122309 a také JP patentový věstník /B2/ SHO62-36498, uvádí kalcitoninové přípravky pro rektální podání, ve kterých jsou kalcitonin a povrchově aktivní látky /kyselina cholová, saponin, fosfolipid, polyoxyethylenalkylether, estery mastných kyselin s glycerinem, ester sorbitanu a mastné kyseliny nebo podobně/ homogenně dispergovány v čípkovém základu.

Muranishi S., Absorption Barriers and Absorption Promoters in the Intestine v Topics in Pharmaceutical Sciences 1987, popisuje absorpci léčiv ve střevech za použití různých prostředků, které podporují absorpci léčiva do buněk, které tvoří povrch sliznice. Je uváděn směsný micelový systém, který zahrnuje použití nenasycené alifatické karboxylové kyseliny s neionogenní povrchově aktivní látkou.

Nicméně uváděné alternativní metody mají obecně značné množství nevýhod. Tyto metody vyžadují vyšší dávky než dávky potřebné pro injekční podání a výsledkem je velké kolísání v hladinách léčiva po absorpci. Mimoto by bylo žádoucí poskytnout lékové formy polypeptidů, které jsou stabilní při skladování, které nedráždí, snadno se absorbují cílenou sliznicí a které jsou stabilní na místě podání. Zatímco bylo provedeno mnoho pokusů pro nalezení alternativních způsobů k parenterálnímu podání, nebyla věnována pozornost tomu, že biologicky aktivní polypeptidy mají sklon ztrácet svoji biologickou účinnost během skladování. Potřeba vyrábět stabilní lékové formy, obsahující biologicky aktivní polypeptidy, je důležitý problém při výrobě těchto léčiv. Navíc při hledání alternativ k injekčnímu podání se nevěnovala pozornost eliminaci enzymatického rozkladu polypeptidů v místě podání i během absorpčního procesu.

Úkolem vynálezu je proto vyvinout neinjekční farmaceutickou formu, obsahující biologicky aktivní polypeptid, jako je inzulín nebo kalcitonin, s cílem odstranění bolestivosti injekcí, minimalizace rozkladu polypeptidů a zvýšení jeho absorbovatelnosti.

Podstata vynálezu

Podstatou vynálezu je farmaceutická směs pro intravaginální podání, která obsahuje jako účinnou látku biologicky aktivní polypeptid ze souboru, zahrnujícího inzulín, angiotensin, vasopresin, desmopresin, LH-RH, somatostatin, kalcitonin, glukagon,

-3CZ 278971 B6 oxytocin, gastrin, sekretin, h-ANP, ACTH, MSH, betaendorphin, muramyldipeptid a neurotensin, dále anionogenní a/nebo neionogenní povrchově aktivní látku, živočišný a/nebo rostlinný protein a netoxický farmaceuticky vhodný nosič nebo ředidlo, a popřípadě alifatickou karboxylovou kyselinu se střední délkou řetězce nebo její sůl, zpracovaná pro intravaginální podání a vhodná pro léčení různých chorobných stavů.

Směs podle vynálezu vykazuje zvýšenou absorbovatelnost intravaginálně podaného biologicky aktivního polypeptidu, který se tedy podává současně s promotorem absorpce, kterým je anionaktivní a/nebo neíonogenní povrchově aktivní látka, nebo neionogenní povrchově aktivní látka a alifatická karboxylová kyselina se střední délkou řetězce nebo její sůl, a popřípadě s živočišným a/nebo rostlinným proteinem. Směs podle vynálezu vykazuje zvýšenou skladovatelnost. Směs vykazuje sníženou dráždivost vaginální sliznice, nebo je zcela nedráždivá a inhibuje vaginální proteázy v místě podání.

Obr. 1 - znázorňuje vliv zvyšujících se koncentraci laurylsulfátu sodného /SDS/ na zvýšení účinků absorpce vepřového kalcitoninu, podaného intravaginálně mladým oophorektomizovaným krysím samicím.

Obr. 2 - znázorňuje křivku dávkové odezvy absorpce vepřového kalcitoninu z vaginální sliznice mladých oophorektomizovaných krysích samic.

Obr. 3 - je graf, znázorňující, že sérový kalcitonin se zvyšuje úměrně se zvýšením dávky kalcitoninu, podaného intravaginálně, a sérové kalcium se snižuje odpovídajícím způsobem se zvýšením dávky kalcitoninu po podání lidského kalcitoninu mladým oophorektomizovaným krysím samicím.

Obr. 4 - sloupcový diagram, znázorňující, že podání vepřového kalcitoninu /P-CT/ dospělým oophorektomizovaným krysám s 1 % laurylsulfátu sodného /SDS/ vykazuje podobný poměr snížení sérového kalcia vůči kontrolní skupině, jako u skupiny, ošetřené intramuskulární injekcí.

Obr.’ 5 - sloupcový diagram, znázorňující účinek lidského sérového albuminu na stabilitu vepřového kalcitoninu /P-CT/ při vybraných hodnotách pH po intramuskulárním podání mladým krysím samcům.

Obr. 6 - graf, znázorňující profil sérového kalcia po podání čípku a filmu, obsahujícího vepřový kalcitonin /P-CT/, laurylsulfát sodný /SDS/, hovězí sérový albumin /BSA/ a netoxický farmaceuticky vhodný nosič nebo ředidlo.

Obr. 7 - graf, znázorňující, že hladina kalcia v séru se snižuje odpovídajícím způsobem se zvyšováním obsahu lidského kalcitoninu v séru /H-CT/ po vaginálním kapalném podání H-CT, Nonidetu P-40 a kaprinanu sodného a hovězího sérového albuminu mladým oophorektizovaným krysím samicím.

Obr. 8 - graf, znázorňující, že hladina kalcia v séru klesá odpovídajícím způsobem se zvýšením hladiny lososího kalcitoninu v séru /S-CT/ po vaginálním podání čípků, obsahujících S-CT, Nonidet P-40 a kaprinan sodný a BSA mladým oophorektizovaným samicím krys.

Biologicky aktivní polypeptidy pro použití podle předloženého vynálezu jsou polypeptidy relativně malé molekulární hmotnosti. Příklady biologicky aktivních polypeptidů pro použití podle

-4CZ 278971 B6 vynálezu jsou: inzulín, angiotenzin, vasopresin, desmopresin, LH-RH /luteinizační hormon-releasing hormon/, somatostatin, kalcitonin, glukagon, somatomedin, oxytocin, gastrin, sekretin, h-ANP /natriumuretický lidský polypeptid/, ACTH /adrenokortikotropní hormon/, MSH /melanocyty stimulující hormon/, beta-endorphin, muramyldipeptid, enkefalin, neurotensin, bombesin, VIP, CCK-8, PTH /parathyroidní hormon/, CGRP /ke kalcitonin genu vztažený peptid/, endothelin, TRH a podobně. Různé polypeptidy, kterých je možno použít, nezahrnují jen přírodní polypeptidy, ale také jejich farmaceuticky účinné deriváty a analogy. Tak například kalcitonin pro použití podle předloženého vynálezu zahrnuje nejen přírodní produkty, jako je lososí kalcitonin, lidský kalcitonin, vepřový kalcitonin, úhoří kalcitonin a kuřecí kalcitonin, ale také analogy jako je /Asu¹'⁷/-úhoří kalcitonin nebo elkalcitonin, produkt Toyo Jozo Company, Ltd. Podobně LH-RH nezahrnuje jen přírodní produkt, ale také farmaceutické deriváty a analogy tohoto produktu, jak jsou popsány v různých patentech a publikacích, uvedených výše, např. Matsuzawa a spol. US patent č. 3 917 825. Zvláště výhodné polypeptidy pro použití podle předloženého vynálezu zahrnují kalcitonin, inzulín, ACTH, LH-RH, PTH, CGRP a somatomedin.

Množství biologicky aktivního peptidu v intravaginálních přípravcích se může měnit v závislosti na použitém polypeptidu, ale musí to být množství, dostačující k zajištění požadovaného farmaceutického účinku. Tak například, jestliže zvoleným polypeptidem je kalcitonin, bude přítomen v množství, dostatečném pro stavy, jako je Pagetova choroba nebo hyperkalcemie, nebo osteoporosa. Typické přípravky mohou obsahovat například od asi 0,01 do asi 0,04 m.j./mg vepřového kalcitoninu. V případě inzulínu, množství dostatečné ke kontrole hladiny cukru v krvi a tak k léčení diabetů, v případě LH-RH nebo jejich analogů bude užito množství, dostatečné k léčení různých obtíží ženského reprodukčního systému, množství, potřebné k antikoncepčnímu účinku, nebo množství, postačující k vyvolání jiných známých biologických odezev na LH-RH, v případě PTH, CGRP, somatomedinu nebo jejich anologů bude použito množství, dostatečné k ošetření různých chorob kostního metabolismu, a podobně pro další biologicky aktivní peptidy, přicházející v úvahu.

Promotory absorpce pro použití podle vynálezu mohou být vybrány z anionaktivních a/nebo neionogenních povrchově aktivních látek a z kombinací absorpčního promotoru, například neionogenní povrchově aktivní látka a alifatická karboxylová kyselina středního řetězce a její soli.

Anionaktivní a neionogenní povrchově aktivní látky pro použití podle vynálezu mohou být užity jednotlivě nebo v kombinaci dvou nebo více jedné nebo obou kategorií. Výhodná anionaktivní povrchově aktivní činidla zahrnují laurylsulfát sodný, polyoxyethylenalkylfenylethersulfát sodný, alkylnaftalensulfonát sodný a alkylbenzensulfonát sodný, jakož i jiné estery sulfonových kyselin s vyššími alkoholy a jiné soli alkylnaftalensulfonové kyseliny. Výhodnými aniongenními povrchově aktivními látkami jsou laurylsulfát sodný a alkylnaftalensulfonát sodný /Pelex NBL™/, zvláště výhodný je laurylsulfát sodný. Tyto anionogenní povrchově aktivní látky jsou obvykle ve formě svých solí s alkalickými

-5CZ 278971 B6 kovy. Výhodné neionogenní povrchově aktivní látky jsou například estery mastné kyseliny a sorbitanu, estery polyoxysorbitanu a mastných kyselin a ethery polyoxyalkylenvyšších alkoholů. Nejvýhodnějším neionogenním povrchově aktivním činidlem je polyoxyethylen /23/ laurylether /Emulgen, ochranná známka/.

Kombinace promotoru absorpce je neionogenní povrchově aktivní látka a alifatická karboxylová kyselina středního řetězce, nebo její sůl. Neionogenní povrchově aktivní látkou je výhodně polyoxyethylenalkylfenylether. Polyoxyethylenová složka může být znázorněna jako /OCH₂CH₂/_n, kde n je v rozmezí od 5 do 30. Alkylová složka je výhodně představována přímým alkylovým řetězcem s 8 až 9 atomy uhlíku, např. polyoxyethylenoktylfenylether nebo polyoxyethylennonylfenylether. Nejvýhodnějšími polyoxyethylenalkylfenylethery jsou polyoxyethylen /9/ nebo /10/ nebo /30/ oktylfenylether, polyoxyethylen /10/ nebo /15/ nebo /20/ nonylfenylether. Zvláště výhodným polyoxyethylenalkylfenyletherem je Nonidet P-40, ochranná značka pro polyoxyethylen/9/oktylfenylether Sigma Chemical Company.

Alifatická karboxylová kyselina se středním řetězcem je výhodně nasycená a může být znázorněna obecným vzorcem R-COOH, kde R je výhodně přímý nasycený alkylový řetězec s 5 až 15 atomy uhlíku. Výhodnými alifatickými kyselinami se středním řetězcem jsou kapronan sodný, kaprylát sodný, kaprinan sodný a laurát sodný. Nejvýhodnější solí alifatické karboxylová kyseliny se středním řetězcem je kaprinan sodný.

Množství absorpčního promotoru podle předloženého vynálezu se bude zvolen absorpční promotor. Obecně absorpčního promotoru jako povrchově aktivní látky aktivní látky, jako je polyoxyethylenalkylfenylether a karboxylové alifatické kyseliny se středním mezi asi 0,01 a 5 % /hmotn./obj.

a 2 % /hmotn. /obj . %/., v intravaginálním měnit podle toho, řečeno, přípravku jaký byl použitá koncentrace anionaktivní a/nebo neionogenní nebo kombinace neionogenní povrchově řetězcem nebo %/, výhodně její soli, je mezi asi 0,05

Živočišné a roslinné proteiny, použité podle vynálezu, jsou výhodně vybrány z proteinů, které se již dříve používaly v potravinářských nebo medicinálních přípravcích. Výhodnými příklady živočišných proteinů jsou albumin, např. hovězí sérový albumin /BSA/, nebo lidský sérový albumin /HSA/, kasein, želatina a podobně. Zvláště výhodný je albumin. Příklady rostlinných proteinů,. které jsou vhodné pro použití podle vynálezu, jsou lepek, zein, protein sojových bobů a podobně. Může být použit buď živočišný nebo rostlinný protein, nebo kombinace živočišného a rostlinného proteinu ve vhodném poměru.

Živočišný nebo roslinný protein není v postupu podle vynálezu nezbytný. Protein.je nutný pouze tehdy, jestliže je biologicky aktivní polypeptid nebo jeho derivát nestabilní. Stabilita různých polypeptidů je odborníkům dobře známá. Elcatonin, například, je úhoří kalcitonin, který byl pro zvýšení stability modifikován. Proto není protein v přípravku, který obsahuje elcatonin, nutný. Přírodní úhoři kalcitonin však není tak stabilní jako elcatonin a proto musí být živočišný nebo přírodní protein

-6CZ 278971 B6 v přípravku přítomen, aby byla zajištěna jeho stabilita. Mnoho polypeptidů a derivátů polypeptidů je nestabilních. Odkazy je možno nalézt v obvyklých učebnicích a odborných publikacích, které popisují stabilitu jednotlivých polypeptidů.

Množství živočišného nebo rostlinného proteinu, použitého v přípravku podle předloženého vynálezu, je množství, potřebné k zajištění stability polypeptidů. Množství živočišného nebo rostlinného proteinu se obecně pohybuje v rozsahu od asi 0,001 do 25 % /hmotn./obj. %/ v závoslosti na polypeptidů, který je stabilizován .

Podání přípravku podle předloženého vynálezu může být provedeno jakýmkoliv ze způsobů vaginálního podání. Intravaginální přípravek podle předloženého vynálezu je kapalina, gel, /výhodně vysoce viskózní/, krém, čípek, film, tableta, měkká kapsle nebo tampónový přípravek, obsahující biologicky aktivní polypeptid, absorpční promotor a popřípadě živočišný nebo rostlinný protein. Intravaginální farmaceutický přípravek podle předloženého vynálezu může být připraven rozpuštěním polypeptidů, absorpčního promotoru a proteinu bud' v čištěné vodě, fyziologickém solném roztoku nebo pufrovaném roztoku jako nosiči nebo ředidle a pak se tato směs formuluje do vhodné dávkové formy.

Protože je žádoucí, aby pH intravaginálního farmaceutického přípravku podle vynálezu bylo pokud možno blízké nebo rovné pH uvnitř vagíny, upraví se pH rozpuštění biologicky aktivního polypeptidu, promotoru absorpce a popřípadě živočišného nebo rostlinného proteinu v čištěné vodě nebo fyziologickém solném roztoku nebo v pufrovaném roztoku pH tohoto roztoku na 3 až 7, výhodně mezi 4 a 6. Pro úpravu pH se jako chemikálie použiji známé kyseliny nebo báze, které jsou netoxické a nepůsobí dráždění u lidí. Příkladem výhodných organických kyselin je kyselina octová a kyselina citrónová, a dále se mohou použít slabé báze, jako je hydrogenuhličitan sodný a octan sodný.

Pro úpravu vlastností a vzhledu farmaceutického přípravku podle vynálezu mohou být do farmaceutického přípravku podle předloženého vynálezu přidány jedna nebo více přísad, barvicích činidel, isotonických činidel a antioxidantů, například přísady jako je škrob, dextrin, mannitol, sorbitol, cyklodextrin a tragant, barvicí činidla jako je beta-karoten, červeň č. 2 a modrá barva č. 1, isotonická činidla jako je chlorid sodný a glukóza a antioxidanty jako je kyselina askorbová a kyselina erythorbova a jejich soli nebo estery. Skutečné metody pro přípravu takových dávkových forem jsou známé, nebo budou odborníkům zřejmé. Viz například Remongtnon's Pharmaceutical Sciences, 17 vyd., 1985, ed. Alfonso R.Gennaro, Mack Publishing Company, Easton, Pennsylvania 18042.

Charakter přísad bude výhodně pomáhat při přípravě vybraných dávkových forem. Jak bude dále ilustrováno, určité dávkové formy lépe uvolňují biologicky aktivní polypeptid. Tyto lépe uvolňující dávkové formy jsou zvláště vhodné a nabízejí zvýšenou flexibilitu při podání polypeptidů.

Jestliže se přípravek podle vynálezu připraví ve formě čípku, budou typické čípkové základy zahrnovat triglyceridy /napří

-7CZ 278971 B6 klad Witepsol, produkt firmy Dynamit Nobel/, polyethylenglykoly, glyceroželatiny, polyvinylalkohol /PVA/ a podobně. Čipkové základy, vybrané z triglyceridů a podobně budou poskytovat rychle uvolňující čípky, zatímco čípky, vyrobené z glyceroželatiny a podobně, budou poskytovat čípky, mající retardované charakteristiky.

Vodné přípravky, obsahující biologicky aktivní polypeptid, mohou být míchány s čipkovým základem za použití mechanického míchacího zařízení, jako je Voltex-mixer při vhodné teplotě, umožňující zkapalnění čipkové báze a pak ochlazení směsi do čípkové formy.

Jestliže se přípravky podle vynálezu připravují ve formě filmu, mohou typické filmové základy obsahovat:

- hydrofilní polymery, jako je polyvinylalkohol, chitosan, polyhydroxyethylmethakrylát, glukomannan, pullulan a podobně a/nebo

- hydrofobní polymery, jako je ethylcelulóza, polyakrylátový ester, například Eudragit, ochranná značka firmy Róhm, Pharma GmbH, silikon a podobně.

Pro přípravu filmu se smísí vodný roztok biologicky aktivního polypeptidu s filmovým základem, jako je hydroxypropylcelulóza, chitosan, pullulan, glukomannan, polyakrylátový ester a pak se odlije a odpaří /suší/.

Když se směsi podle předloženého vynálezu připravují ve formě gelu, mohou typické gelové základy obsahovat:

- aniontové polymery, jako je sodná sůl kyseliny polyakrylové, sodná sůl karboxymethylcelulózy a podobně a polymery, jako je polyvinylalkohol, polyoxyethylenkopolymer, hydroxypropylcelulóza, a podobně. Gelové přípravky budou

- neiontové propylenglykolový blokový hydroxypropylmethylcelulóza trvale vykazovat rychle uvolňující účinek.

Pro přípravu vysoce viskózních gelových přípravků může být přidána látka, zvyšující viskozitu, která má známou viskozitu. Některé příklady vhodných látek, zvyšujících viskozitu, zahrnují nižší alkohol-ethery, polyvinylalkohol, polyvinylpyrrolidon /PVP/, polyoxyethylenoxypropylenglykolový blokový kopolymér /Pluronic™/, a podobně.

Jestliže se připravuje dávková forma krémového typu, lze připravit jak krémy typu voda-olej, tak typu olej-voda se směsmi podle vynálezu. Krémové přípravky budou opět vykazovat rychle uvolňující účinnost.

Jestliže se směsi podle vynálezu připraví do formy tablet, je nutno nejprve poznamenat, že lze připravit jak rozpadající se, tak nerozpadající, se tablety. Pro rozpadající se tablety je výhodná látka, silně podporující rozpadavost, jako je PVP-XL, Ac-di-sol /ochranná značka FMC Corporation/, explotab, HPC-L a podobně. Pro nerozpadající se tablety je nutný základ, schopný tvorby hydrogelová matrice pro směsi podle vynálezu ve vagíně. Takové základy zahrnují glukomannan, kyselinu alginovou a její vápenatou sůl, pektin, hydroxypropylmethylcelulózu a podobně.

-8CZ 278971 B6

Rozpadající se tablety poskytují rychle uvolňující účinek, zatímco nerozpadající se tablety poskytují retardovaný účinek.

Pro přípravu tablet může být přípravek, obsahující biologicky aktivní polypeptid, dobře smísen s vhodnou přísadou, jako je plnivo, pojivo a/nebo látka, podporující rozpadavost, poté vysušen a v případě potřeby mohou být přidány další přídavné látky, jako jsou kluzné látky. Konečná směs se stlačí do tablet tabletovacím strojem. Kromě toho lze použít zpěňovací látky, jako je hydrogenuhličitan sodný jako karbonátové činidlo a kyselina citrónová nebo vinná jako okyselující činidlo, buď jednotlivě nebo současně u rozpadajících se tablet, je-li to nutné.

Pro přípravu měkkých kapslí mohou být olejové nebo polyethylenové přípravky, obsahující biologicky aktivní polypeptid, začleněny do měkkého kapslového gelu.

Pro přípravu tampónových typů může být použito několik metod. Například tvarované tampónové jádro ze silikonové pryskyřice může být pokryto polymerním filmem, jako je chitosan a polyakrylátmethakrylátový kopolymer, obsahující biologicky aktivní polypeptid.

Další informace, týkající se přípravy intravaginálních dávkových forem, lze nalézt v Remington's Pharmaceutical Sciences, supra. Jestliže se farmaceutický přípravek podle vynálezu podává intravaginálně, biologicky aktivní polypeptid se snadno a účinně absorbuje vaginální sliznicí a vykazuje svoji charakteristickou biologickou účinnost. Dále je biologicky aktivní polypeptid, zejména kalcitonin nebo inzulín při této přípravě stabilní a nezmění se po dlouhé době skladování. /Nejvhodnější je, jestliže se přípravky podle vynálezu skladují na chladném místě, aby se zajistila jejich stabilita./ Mimoto intravaginální přípravky podle vynálezu nedráždí vaginální sliznici. S překvapením se také zjistilo, že promotory absorpce, jako jsou anionaktivní a/nebo neionogenní povrchově aktivní látky, působí jako inhibitory vaginální proteázy při začlenění do směsi podle vynálezu. Proto je biologicky aktivní polypeptid stabilní v místě podání.

Vynález blíže objasňuje následující příklady praktického provedení, které však vynález nijak neomezují.

Příklady provedení vynálezu

Příklad 1

Vliv laurylsulfátu sodného na absorpci kalcitoninu.

Provádí se oophorektomie na samicích krys Wistar, starých 5 až 6 týdnů, které přibližně po jednom měsíci se používají jako živočišný model žen v postmenopauze.

Ke 20 m.j. vepřového kalcitoninu se přidá 3 mg hovězího sérového albuminu /BSA/. K takto připravené směsi se pak přidá laurylsulfát sodný /dále označován SDS/, vytvoří se koncentrace 0,05; 0,1; 0,5 a 1 hmotn./obj. %. Směsi o různých koncentracích SDS se pak každá zředí 0,2M tlumivým roztokem kyseliny

-9CZ 278971 B6 octové/octanu sodného /pH 5,0/, vytvoří sel ml kalcitoninové roztoky. Krysy se anestetizují etherem a před podáním kalcitoninu se odebere požadované množství krve z pravé externální jugulární žíly. Pak se do vagíny krysy zavede malý smotek bavlny, kterým se podá vždy 50 mikrolitrů roztoku kalcitoninu o různých koncentracích SDS. Krev se odebírá vždy 2 hodiny po podáni kalcitoninu.

Po oddělení krevního séra se stanoví koncentrace kalcia v séru za pomoci Calcium C test kitu, ochranná známka Wako Chemical, Japonsko. Výsledky jsou znázorněny na obr. 1. Poměr snížení koncentrace sérového kalcia vzhledem ke kontrole, která byla ošetřena přípravkem bez SDS, se zvyšuje se zvyšující se koncentrací SDS v přípravku.

Příklad 2

Dávková odezva absorpce kalcitoninu z vaginální sliznice.

V tomto příkladu byl použit oophorektomizovaný menopauzální model krys, stejný jako v příkladu 1.

Hovězí sérový albumin byl přidán vždy k 1 ml 2, 10, 20, 40 a 80 m.j./ml vepřového kalcitoninu, rozpuštěného v tlumivém roztoku kyseliny octové /pH 5,0/ v množství 3 mg/ml. Pak byl ke každému roztoku přidán SDS v množství 1 hmotn./obj. %. Stejně jako v příkladu 1 byly tyto přípravky, obsahující různé koncentrace kalcitoninu, podány intravaginálně krysám a byla stanovena koncetrace sérového kalcia. Poměr snížení sérového kalcia vzhledem ke kontrole odpovídá zvýšené koncentraci kalcitoninu v podaném přípravku. Největší poměr snížení sérového kalcia vůči kontrole v tomto pokuse byl 30 %. Tímto pokusem bylo zjištěno, že koncentrace sérového kalcia by mohla být zřízena podáním vhodné dávky kalcitoninu. Viz obr. 2 .

Příklad 3

Sledování absorpce kalcitoninu vaginální sliznicí.

Tento příklad byl proveden pro prokázání toho, že se kalcitonin skutečně absorbuje vaginální sliznicí za použití intravaginální dávkové formy podle předloženého vynálezu.

Stejně jako v příkladech 1 a 2 byly v tomto pokuse použity oophorektomizované krysy. 1000 mikrogramů lidského kalcitoninu /HCT/ se rozpustí v 1 ml 0,1M acetátového pufru E /pH 5/, obsahujícího 0,3 % hmotn./obj. hovězího sérového albuminu a 1 % hmotn./obj. SDS. 10, 25, 50, 100 a 200 mikrogramů HCT /hmotnost proteinu/ v roztoku na 1 kg tělesné hmotnosti krys byly vneseny do výše uvedeného HCT roztoku a každá dávka roztoku HCT byla zředěna na 50 mikrolitrů 0,lM acetátovým pufrem /pH 5/, obsahujícím 0,3 % /hmotn./obj. %/ hovězího sérového albuminu a 1 % hmotn./obj.SDS. Každých 50 mikrolitrů HCT roztoku o různém množství HCT bylo podáno do vagíny malým bavlněným smotkem. Dvě hodiny po podání léčiva byla odebrána krev z pravé externální jugulární cévy anestetizované krysy a sérové kalcium bylo stanoveno Calcium C test kitem. Sérový kalcitonin byl také stanoven radio

-10CZ 278971 B6 imunoanalytickou metodou /RIA metoda/ za použití protilátky lidského kalcitoninu. Výsledky ukazují, že sérový kalcitonin se zvyšuje úměrně dávce kalcitoninu, podaného do vagíny a sérové kalcium se snižuje vzhledem ke zvýšené dávce kalcitoninu. Tento výsledek dokazuje, že absorpce lidského kalcitoninu a jeho biologická aktivita vykazuje odezvu, závislou na dávce, jestliže byl podán intravaginální přípravek podle předloženého vynálezu. Viz obr. 3.

Příklad 4

Působení na dospělé oophorektomizované krysy.

Vzhledem k tomu, že mnoho pacientů, léčených kalcitoninem, tvoří ženy v období post-menopauzy, byl proveden pokus pro potvrzení účinnosti intravaginálního přípravku podle předloženého vynálezu na dospělé oophorektomizované krysy.

Vaječníky 30 týdnů starých samic krys Wistar byly vyňaty asi 1 měsíc před použitím krys v pokuse. Před tímto pokusem byl proveden zvláštní pokus pro prokázání citlivosti dospělých oophorektomizovaných krys k vepřovému kalcitoninu. Do femorálního bicipitálního svalu byly krysám injokovány různé koncentrace kalcitoninu a bylo stanoveno snížení sérového kalcia. Citlivost dospělých krys ke kalcitoninu byla velmi nízká a největší poměr snížení sérového kalcia vzhledem ke kontrole byl asi 10 %; tento výsledek se výrazně liší od výsledku, získaného v pokuse, kde byly použity mladé krysy.

Podle postupu, uvedeného v příkladech 1 a 2, byla připravena dávka 4 m.j. kalcitoninu na krysu a podána intravaginálně zavedením malého smotku bavlny do vagíny. Postupem, uvedeným v příkladech 1 a 2, byla odebrána krev a stanovena koncentrace kalcia v krvi. Výsledkem přídavku 1 % SDS k intravaginálnímu přípravku podle vynálezu je, že intravaginální skupina vykazuje podobný poměr snížení sérového kalcia vůči kontrolní skupině, jako skupina, ošetřená intramuskulární injekcí. Viz obr. 4.

Příklad 5

Vliv laurylsulfátu sodného na stabilitu kalcitoninu.

Farmaceutický přípravek podle vynálezu, obsahující vepřový kalcitonin /P-CT/, byl připraven postupem, popsaným v příkladech 1 a 2 a byla zkoušena stabilita vepřového kalcitoninu ve výsledných přípravcích. 1 ml roztoku, obsahujícího 3 mg/ml hovězího sérového albuminu /BSA/, byl přidán ke 40 m.j. vepřového kalcitoninu a směs byla rozdělena do dvou stejných dílů. K jednomu dílu byl přidán SDS tak, že jeho konečná koncentrace byla 0,1 % hmotn./obj.; ke druhému dílu nebyl přidán žádný SDS, pH obou přípravků pak bylo upraveno na 5 tlumivým roztokem kyselina octová/octan sodný /0,114/. Tyto dva přípravky se pak ponechají 8 dní při 37 ”C. Biologická účinnost 8 dní skladovaného přípravku se pak zjišťuje za použití 5 týdnů starých samců krys Wistar. Dávka 0,12 m.j./kg kalcitoninu těchto dvou přípravků byla podána krysám do femorálního svalu injekcí. Hodinu po podáni léčiva byla

-11CZ 278971 B6 odebrána krev z pravé externální jugulární žíly a byl stanoven obsah krevního kalcia. Po osmidenním skladovacím období byla účinnost přípravku, který neobsahoval SDS, asi o polovinu nižší, než u čerstvé připraveného přípravku, zatímco přípravek, který obsahoval SDS, neztratil biologickou účinnost po osmidenním skladování. Viz tabulka 1 dále.

Tabulka 1

Vliv SDS na stabilitu kalcitoninu

Poměr snížení koncentrace kalcia vůči kontrole

Ošetření _____;____________0 den______________8 dní/při 37 °C/

P-CT 20,7 11,1

P-CT+0,1 % SDS 22,6 22,4

P-CT /40 m.j.//0,3%BSA/ml, při pH 5,0

Příklad 6

Stabilizační účinek živočišného proteinu na kalcitonin.

Vliv pH a lidského sérového albuminu /HSA/ na stabilitu kalcitoninu v přípravcích podle předloženého vynálezu byl zkoušen na 5 týdnů starých samcích krys Wistar za použití snížení obsahu kalcia v krvi jako indikace.

Čištěný vepřový kalcitonin /P-CT/ se rozpustí v roztocích tlumivého roztoku kyseliny octové o pH 3 a pH 5,0, a 0,lM tlumivém roztoku kyseliny fosforečné o pH 6,8 tak, že každý roztok obsahuje 0,03 m.j./ml vepřového kalcitoninu. Každý roztok kalcitoninu /pH 3,0, 5,0, 6,8/ se pak rozdělí na dvě části. Ve všech případech se k jedné části roztoků kalcitoninu přidá 3 mg/ml HSA, druhá část zůstane neošetřena. Výsledné přípravky se ponechají týden při 4 °C. Přípravky, obsahující kalcitonin, se pak injikují do femorálního bicipitálního svalu krys v dávce 0,06 m.j. na kg tělesné hmotnosti. Z pravé externální jugulární žíly se odebere potřebné množství krve a stanoví se koncentrace kalcitoninu v krvi Calcium C-Test křtem. Jak je zřejmé z obr. 5, je kalcitonin v tlumivém roztoku bez HSA stabilní při pH 3,0 a 5,0, ale je nestabilní při pH 6,8. Jestliže se k přípravku přidá HSA, je kalcitonin v roztoku o pH 6,8 stabilnější, než kalcitonin v roztoku o pH 3,0 nebo 5,0.

Příklad 7

Inhibiční účinek laur.ylsulfonátu sodného, povrchově aktivní látky na aktivitu proteázy.

Inhibiční účinek laurylsulfátu sodného /SDS/ na aktivitu proteázy byl zkoušen studií in vitro za použití trypsinu, typické sérové proteázy, mající optimum pH, blízké neutrálnímu a N-alfabenzoyl-L-arginin-ethylesteru /BAEE/, syntetického

-12CZ 278971 B6 substrátu. Farmaceutický přípravek, obsahující kalcitonin, se připraví podle příkladů 1 a 2. Přípravek byl pak zaveden do vagíny malým bavlněným smotkem. Dvě hodiny po zavedení se z vagíny vyjme vložený bavlněný smotek. Vagína se pak promyje stanoveným množstvím salinického roztoku, pufrovaného fosfátem, promývací roztok se spojí s bavlněným smotkem a aktivita proteázy se stanoví pomocí BAEE jako substrátu. Výsledek ukazuje, že aktivita proteázy se snižuje asi o 30 % při přídavku 1 % SDS ve srovnání s kontrolní skupinou, která je bez přídavku SDS. Výsledek dokládá, že SDS, začleněný do farmaceutického přípravku podle předloženého vynálezu, inhibuje rozklad kalcitoninu intravaginální proteázou při intravaginálním podání přípravku. Viz Tabulka 2.

Tabulka 2

Inhibice aktivity proteázy pomocí SDS

Ošetření BAEE jednotky/mg proteinu kontrola 23,4 /100,0/ % SDS 6,84 /29,2/

Příklad 8

Zvýšení absorpce inzulínu.

V příkladu byly použity oophorektomizované krysy, popsané v příkladu 1. Farmaceutický přípravek, obsahující inzulín podle předloženého vynálezu, byl intravaginálně podán krysám a byla sledována změna obsahu glukózy v plasmě. Hovězí sérový albumin a SDS byly přidány k roztoku 100 j./ml inzulínu v 0,lM tlumivém roztoku kyseliny octové/acetátu sodného tak, že výsledná koncentrace byla 3 mg/ml a 1 % hmotn./obj. Hodnota pH byla upravena na

5,0 0,lM tlumivým roztokem kyseliny octové/octanu sodného. 5 j. inzulínového přípravku bylo podáno do vagíny krysy pomocí malého bavlněného smotku. Byl stanoven obsah glukózy v séru 2 hodiny po podání a byl porovnán s hodnotou před podáním léčiva. Dvě hodiny po podání léčiva se obsah sérové glukózy snížil asi o 30 % v porovnání se stavem před podáním léčiva. Výsledky jsou shrnuty v tabulce 3.

Tabulka 3

Zvýšení absorpce inzulínu

Podmínky pokusu koncentrace glukózy v séru mg/dl /%/ před podáním po dvou hodinách

75± 8,5 /100/

53± 24,6 /70,7/

-13CZ 278971 B6

Příklad 9

Profil sérového kalcia po intravaginálním podání čípku a filmu, obsahujícího P-CT, SDS a BSA.

Farmaceutické přípravky, použité v tomto pokuse, jsou uvedeny v tabulce 4.

Tabulka 4

Dávková množství absorpční protein základ

forma	P-CT/jednot.	promotor		přípravku
čípek	1 m. j .	SDS	/1	%/	BSA	glycero-
					/0,3%/	želatina/glyce-
						rin:želatina:H₂O
						70:20:10/
čípek	1 m. j .	SDS	/1	%/	BSA	polyvinylalkohol
					/0,3%/
film	5 m. j .	SDS	/1	%/	BSA	chitosan+
					/0,3%/	HPMC

HPMC znamená hydroxypropylmethylcelulózu. Každý z přípravků, uvedených v tabulce 4, byl podán do vagíny oophorektomizovaných krys. Vzorky krve byly odebrány 2, 4, 8, 12 a 24 hodin po vaginálním podání a pomocí Calcium test kitu byla stanovena koncentrace sérového kalcia. Poměr snížení koncentrace sérového kalcia vůči kontrole byl vynesen proti časové stupnici. Výsledky jsou zobrazeny na obr. 6.

V tomto pokusu bylo zjištěno, že přípravky z tabulky 4 by mohly snižovat koncetraci sérového kalcia podobně jako kapalný vodný přípravek z příkladu 2.

Příklad 10

Absorpce lidského kalcitoninu vaginální sliznicí.

Tento pokus byl proveden pro ověření toho, že se H-CT skutečně absorbuje vaginální sliznicí krysy za přítomnosti kaprinanu sodného a Nonidetu P-40.

Byly použity stejné oophorektomizované krysy, jako v příkladu 3 . 1 mg H-CT byl rozpuštěn ve 400 mikrolitrech 0,1M acetátového pufru /pH 5/, obsahujícího 0,3 % hmotn./obj. hovězího sérového albuminu /BSA/ a 1 % kaprinanu sodného a 2 % Nonidetu P-40. 100 mikrolitrů H-CT roztoku /250 mikrogramů H-CT/ bylo podáno do vagíny krysy pomocí malého smotku bavlny. Vzorky krve byly odebrány z pravé externální jugulární žíly anestetizovaných krys 1,2a 4 hodiny po podání. Sérové kalcium bylo stanoveno pomocí Calcium C test kitu. Sérový H-CT byl také stanoven metodou RIA za použití protilátky lidského kalcitoninu. Výsledky jsou uvedeny na obr. 7.

-14CZ 278971 B6

Z výsledků je zřejmé, že obsah sérového kalcitoninu se zvyšuje úměrně zvýšení dávky kalcitoninu, podaného do vagíny a obsah sérového kalcia se snižuje odpovídajícím způsobem se zvýšením dávky kalcitoninu. Tento výsledek znamená, že absorpce H-CT a jeho biologická aktivita vykazuje odezvu, závislou na dávce, jestliže byl intravaginálně podán přípravek podle vynálezu, obsahující kombinaci absorpčního promotoru - kaprinanu sodného a Nonidetu P-40.

Příklad 11

Profil sérového kalcia a koncentrace lososího kalcitoninu /S-CT/ po intravaginálním podání čípků, obsahujících S-CT.

Pokusná zvířata a experimentální podmínky jsou stejné jako v příkladu 10. Čípky, použité v tomto příkladu, byly připraveny následovně. 1 mg S-CT byl rozpuštěn ve 100 mikrolitrech O,1M acetátového tlumivého roztoku /pH 5/, obsahujícího 1,5 mg BSA /hovězí sérový albumin/, 10 mg Nonidetu P-40 a 5 mg kaprinanu sodného. 383 mg čípkového základu, složeného z PEG 4000 /33 %/, PEG 6000 /47 %/ a destilované vody /20 %/ bylo zahřáto na 45 až °C, pak dobře promíseno s S-CT roztokem za použití Vortex mixeru /1 minuta míšení/, pak převedeno do mosazné čípkové formy a ochlazeno na 4 ’C po dobu asi 2 hodin. 125 mg S-CT čípek, obsahující 250 mikrogramů S-CT, byl zaveden do vagíny krysy. 1,2 a 4 hodiny po podání byly odebrány vzorky krve a koncentrace sérového kalcia a sérového kalcitoninu byly stanoveny stejným postupem, který byl použit v příkladu 10. Výsledky jsou uvedeny na obr. 8.

Z výsledků je zřejmé, že absorpce S-CT a jeho biologická aktivita vykazuje odezvu, závislou na dávce, jestliže byl intravaginálně podán přípravek podle vynálezu, obsahující jako kombinaci absorpčního promotoru kaprinan sodný a Nonidet P-40.

Příklad 12

Vliv kombinačního typu absorpčního promotoru.

Pokusná zvířata, použitá pro tento pokus, byla v zásadě stejná jako v příkladu 1 s tím rozdílem, že stáří oophorektomizovaných krys bylo různé. Pomocí smotku bavlny bylo do vagíny oophorektomizované krysy podáno 100 mikrolitrů P-CT /4 m.j./ acetátového tlumivého roztoku, obsahujícího 0,3 % hmotn./obj. BSA, kombinaci absorpčního promotoru /2 % polyoxyethylenalkylfenyletheru a 1 % sodné soli alifatické karboxylové kyseliny se střední délkou řetězce/. 2 hodiny po podání byly odebrány vzorky krve a byla stanovena koncentrace kalcia. Poměr snížení koncentrace kalcia vůči kontrole byl vypočten. Získané hodnoty jsou shrnuty v tabulce 5. Srovnávací údaje jsou uvedeny pod tabulkou 5. NP-1O znamená polyoxyethylen /10/nónylfenylether. NP-15 znamená polyoxyethylen/15/nonylfenylether. OP-10 znamená polyoxyethylen/10/oktylfenylether.

-15CZ 278971 B6

Kombinace absorpčního promotoru

Tabulka 5

Podle vynálezu poměr snížení Ca²⁺ stáří /týdny/

2	%	Nonidet P-40	+ . -
1	%	Na kaprylan		1,5	8-9
2	%	Nonidet P-40	+
1	%	Na kaprinan		13,7	8-9
2	%	Nonidet P-40	+
1	%	Na laurát		6,5	8-9
2	%	NP-10 +
1	%	Na kaprinan		5,9	32
2	%	NP-15 +
1	%	Na kaprinan		3,6	32
2	%	OP-10 +
1	%	Na kaprinan		4,3	32

Srovnávací údaje

Absorpční promotor poměr snížení Ca²⁺ stáří /týdny/

1	%	Na kaprylan	0,4	18
1	%	Na kaprinan	4,0	18
1	%	Na laurát	4,3	18
2	%	Nonidet P-40	0	18

Z výše uvedených údajů je zřejmé, že kombinace polyoxyethylenalkylfenyletheru a sodné soli alifatické karboxylové kyseliny se středním řetězcem poskytuje překvapivě lepší výsledky biologické odezvy, než samotná složka absorpčního promotoru, uvedená ve srovnávacích údajích.

Příklad 13

Vliv kombinačního typu absorpčního promotoru na elcatonin.

Zvířata, použitá v tomto pokusu, byla stejná jako v příkladu 1 s výjimkou stáří oophorektomizovaných krys. Do vagíny oophorektomizované krysy bylo pomocí smotku bavlny podáno 100 mikrolitrů roztoku elcatoninu /400 ng/ v O,1M acetátovém pufru, obsahujícím 0,3 % hmotn./obj. BSA a kombinaci absorpčního promotoru /2 % polyoxyethylenalkylfenyletheru a 1 % kaprinu sodného/. 2 hodiny po podání byly odebrány vzorky krve a stanovena koncentrace kalcia. Byl vypočten poměr sníženi koncentrace kalcia v séru vůči kontrole. Údaje jsou uvedeny v tabulce 6.

-16CZ 278971 B6

Absorpční promotor

Tabulka 6 ' ' 24· poměr sníženi Ca koncentrace v séru % Nonidet P-40 + % Na kaprinan % Na kaprinan

11,9 ± 1,1

4,2 ± 0,6

Stáří krys: 25 týdnů

Podstata vynálezu je z výše uvedeného dostatečně jasná a. pracovníci v oboru mohou provádět různé obměny a modifikace, spadající do rozsahu vynálezu.

Průmyslová využitelnost

Složení směsi pro intravaginálni podávání biologicky aktivních polypeptidů, například inzulínu a kalcitoninu. Směs vykazuje zvýšenou absorbovatelnost vaginální sliznicí, sníženou dráždivost této sliznice a zlepšenou skladovatelnost.

Claims

PATENTOVÉ NÁROKY

1. Farmaceutická směs pro intravaginální podání, vyznačující se tím, že jako účinnou látku obsahuje biolo- gicky aktivní polypeptid ze souboru, zahrnujícího inzulín, angiotensin, vasopresin, desmopresin, LH-RH, somatostatin, kalcitonin, glukagon, oxytocin, gastrin, sekretin, h-ANP, ACTH, MSH, beta-endorphin, muramyldipeptid a neurotensin, a dále anionogenní a/nebo neionogenní povrchově aktivní látku, živočišný a/nebo rostlinný protein a netoxický farmaceuticky přijatelný nosič nebo ředidlo.
2. Farmaceutická směs podle nároku 1, vyznačující se tím, že biologicky aktivním polypeptidem je kalcitonin.

3. Farmaceutická směs podle nároku 2, vyznačující se tím, že že kalcitoninem je úhoří, lidský, vepřový, lososí nebo kuřecí kalcitonin.

4. Farmaceutická směs podle nároku 1, v y z nač u j í c í se tím, že biologicky aktivním polypeptidem je inzulín. 5. Farmaceutická směs podle nároku 1, v y z nač u j í c í se tím, že biologicky aktivním polypeptidem je ACTH nebo LH-RH. 6. Farmaceutická směs podle nároku 1, v y z nač u j í c í se tím, že povrchově aktivní látkou je anionogenní povrchově aktivní látka. 7. Farmaceutická směs podle nároku 6, v y z nač u j í c í

se tím, že anionogenní látkou povrchově aktivní je laurylsulfát sodný, polyoxyethylenalkylfenylether-natriumsulfát, alkylnaftalensulfonát sodný nebo alkylbenzensulfonát sodný.

8. Farmaceutická směs podle nároku 7, vyznačující se tím, že anionogenní povrchově aktivní látkou je laurylsulfát sodný.
9. Farmaceutická směs podle nároku 1, vyznačující se tím, že povrchově aktivní látka je neionogenní látka.
10. Farmaceutická směs podle nároku 9, vyznačující se tím, že neionogenní povrchově aktivní látkou je ester sorbitanu a mastné kyseliny, polyoxysorbitanový ester mastné kyseliny a polyoxyalkylen-vyšší alkohol-ether.
11. Farmaceutická směs podle nároku 10, vyznačující se t i m, že neionogenní povrchově aktivní látkou je polyoxyethylen/23/-laurylether.

12. Farmaceutická směs podle nároku 1, vyznačující se tím, že proteinem je živočišný protein.

-18CZ 278971 B6

13.Farmaceutická se tím, želatina. směs podle nároku 12, že živočišným proteinem j vyznačuj ící e albumin, kasein nebo 14.Farmaceutická směs podle nároku 13, vyznačuj ící se tím, že živočišným proteinem je albumin. 15.Farmaceutická směs podle nároku 14, vyznačuj ící se tím, že albuminem je hovězí sérový albumin. 16.Farmaceutická směs podle nároku 1, vyznačuj ící se tím, že protein je tvořen kombinací živočišného a rostlinného proteinu. 17.Farmaceutická směs podle nároku 1, vyznačuj ící se tím, že proteinem je rostlinný protein. 18.Farmaceutická směs podle nároku 1, vyznačuj ící se tím, že její hodnota pH je 3 až 7. 19.Farmaceutická směs podle nároku 18, vyznačuj ící se tím, že její hodnota pH je 4 až 6. 20.Farmaceutická směs podle nároku 1, vyznačuj ící se tím, že je formulována jako kapalina. 21.Farmaceutická směs podle nároku 1, vyznačuj ící se tím, že je formulována jako viskózní gel. 22.Farmaceutická směs podle nároku 1, vyznačuj ící

se tím, že jako účinnou látku obsahuje stabilní biologicky aktivní polypeptid a dále promotor absorpce a netoxický, farmaceuticky vhodný nosič nebo ředidlo.

23. Farmaceutická směs podle nároku 22, vyznačující se tím, že biologicky aktivním polypeptidem je modifikovaný úhoří kalcitonin nebo elcatonin.

24. Farmaceutická směs podle nároku 1, vyznačující se tím, že jako účinnou látku obsahuje biologicky aktivní polypeptid a dále promotor absorpce, živočišný a/nebo rostlinný protein a netoxický, farmaceuticky vhodný nosič nebo ředidlo.

25. Farmaceutická směs podle nároku 1, vyznačující se tím, že biologicky aktivním polypeptidem je inzulín, angiotensin, vasopresin, desmopresin, LH-RH, somatostatin, kalcitonin, glukagon, somatomedin, oxytocin, gastrin, sekretin, h-ANP, ACTH, MSH, beta-endorphin, muramyldipeptid, enkefalin, neurotensin, bombesin, VIP, CCK-8, PTH, CGRP, endothelin, TRH a jejich analogy a deriváty.

26. Farmaceutická směs podle nároku 25, vyznačující se tím, že biologicky aktivním polypeptidem je kalcitonin .

-19CZ 278971 B6

27. Farmaceutická směs podle nároku 26, vyznačující se tím, že kalcitoninem je lososí, lidský, vepřový, úhoři nebo kuřecí kalcitonin.

28. Farmaceutická směs podle nároku 24, vyznačující se tím, že promotorem absorpce je směs neionogenní povrchově aktivní látky a nasycené alifatické karboxylové kyseliny se střední délkou řetězce nebo její alkalické soli.

29. Farmaceutická směs podle nároku 28, vyznačující se tím, že neionogenní povrchově aktivní látkou je polyoxyethylenalkylf enylether.

30. Farmaceutická směs podle nároku 29, vyznačující se tím, že polyoxyethylenf enyletherem je polyoxyethylen /5 až 50/alkyl/C-8 nebo C-9/fenylether.

31. Farmaceutická směs podle nároku 30, vyznačující se tím, že polyoxyethylenalkylfenyletherem je sloučenina ze souboru, zahrnujícího polyoxyethylen/9/ nebo /10/ nebo /30/ oktylfenylether nebo polyoxyethylen /10/ nebo /15/ nebo /20/ nonylfenylether.

32. Farmaceutická směs podle nároku 30, vyznačující se tím, že polyoxyethylenalkylf enyletherem je polyoxyethylen/9/oktylfenylether nebo polyoxyethylen/10/nonylfenylether .

33. Farmaceutická směs podle nároku 28, vyznačující se tím, že sůl nasycené alifatické karboxylové kyseliny se střední délkou řetězce je ze souboru, zahrnujícího kapronan sodný, kaprylát sodný, kaprinan sodný, laurát sodný, myristát sodný a palmitát sodný.

34. Farmaceutická směs podle nároku 33, vyznačující se tím, že obsahuje sodnou sůl kyseliny kaprinové.

35. Farmaceutická směs podle nároku 28, vyznačující se tím, že obsahuje směs promotoru absorpce v množství 0,01 až 5 % hmotn./obj.

36. Farmaceutická směs podle nároku 28, vyznačující se tím, že biologicky aktivním polypeptidem je inzulín, angiotensin, vasopresin, desmopresin, LH-RH, somatostatin, kalcitonin, glukagon, somatomedin, oxytocin, gastrin, sekretin, h-ANP, ACTH, MSH, beta-endorphin, muramyldipeptid, enkefalin, neurotensin, bombesin, VIP, CCK-8, PTH, CGRP, endothelin, TRH a jejich homology a deriváty.

37. Farmaceutická směs podle nároku 35, vyznačující se t í m, že biologicky aktivním polypeptidem je kalcitonin, PTH, CGRP nebo somatomedin.

38. Farmaceutická směs podle nároku 37, vyznačující se tím, že koncentrace absorpčního promotoru je mezi 0,05 až 2,00 % hmotn./obj.

-20CZ 278971 B6

39. Farmaceutická směs podle nároku 24, vyznačující se tím, že proteinem je živočišný protein.

40. Farmaceutická směs podle nároku 39, vyznačující se tím, že živočišným proteinem je albumin, kasein nebo želatina.

41.Farmaceutická směs podle nároku 40, v y z n a č u j í c í se tím, že živočišným proteinem je albumin. 4 2.Farmaceutická směs podle nároku 41, v y z n a č u j í c í se tím, že albuminem ; je hovězí sérový albumin. 43.Farmaceutická směs podle nároku 24, v y z n a č u j i c í se tím, že proteinem ; je rostlinný protein l . 44.Farmaceutická směs podle nároku 24, v y z n a č u j í c í se tím, že proteinem je směs živočišného a rostlinného proteinu. 45.Farmaceutická směs podle nároku 24, v y z n a č u j í c í se tím, že má hodnotu pH 5 až 7. 46.Farmaceutická směs podle nároku 45, v y z n a č u j í c í se tím, že má hodnotu pH 4 až 6 . 47.Farmaceutická směs podle nároku 1, v y z n a č u j í c í

se tím, že jako účinnou látku obsahuje stabilní biologicky aktivní polypeptid ze souboru, zahrnujícího kalcitonin, PTH, CGRP a somatonin, a dále směs absorpčního promotoru, zahrnující neionogenní povrchově aktivní látku a nasycenou alifatickou karboxylovou kyselinu se střední délkou řetězce nebo její alkalickou sůl a netoxický, farmaceuticky vhodný nosič nebo ředidlo.

48.Farmaceutická směs podle nároku 47, vyznačující setím, že obsahuje živočišný a/nebo rostlinný protein.