CZ281502B6 - Thrombin a způsob jeho výroby - Google Patents
Thrombin a způsob jeho výroby Download PDFInfo
- Publication number
- CZ281502B6 CZ281502B6 CS923309A CS330992A CZ281502B6 CZ 281502 B6 CZ281502 B6 CZ 281502B6 CS 923309 A CS923309 A CS 923309A CS 330992 A CS330992 A CS 330992A CZ 281502 B6 CZ281502 B6 CZ 281502B6
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- thrombin
- prothrombin
- virus
- activated
- activity
- Prior art date
Links
- 108090000190 Thrombin Proteins 0.000 title claims abstract description 40
- 229960004072 thrombin Drugs 0.000 title claims abstract description 38
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title claims description 7
- 108010094028 Prothrombin Proteins 0.000 claims abstract description 32
- 102100027378 Prothrombin Human genes 0.000 claims abstract description 28
- 229940039716 prothrombin Drugs 0.000 claims abstract description 28
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 7
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 6
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 claims description 3
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 claims description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 3
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 claims description 2
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 claims description 2
- 230000001376 precipitating effect Effects 0.000 claims 1
- 239000012678 infectious agent Substances 0.000 abstract description 5
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 abstract description 4
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 abstract description 3
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 abstract description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 12
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 10
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 8
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 description 7
- 102000015081 Blood Coagulation Factors Human genes 0.000 description 5
- 108010039209 Blood Coagulation Factors Proteins 0.000 description 5
- BHPQYMZQTOCNFJ-UHFFFAOYSA-N Calcium cation Chemical compound [Ca+2] BHPQYMZQTOCNFJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 108010018823 anti-inhibitor coagulant complex Proteins 0.000 description 5
- 239000003114 blood coagulation factor Substances 0.000 description 5
- 229910001424 calcium ion Inorganic materials 0.000 description 5
- AGVAZMGAQJOSFJ-WZHZPDAFSA-M cobalt(2+);[(2r,3s,4r,5s)-5-(5,6-dimethylbenzimidazol-1-yl)-4-hydroxy-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] [(2r)-1-[3-[(1r,2r,3r,4z,7s,9z,12s,13s,14z,17s,18s,19r)-2,13,18-tris(2-amino-2-oxoethyl)-7,12,17-tris(3-amino-3-oxopropyl)-3,5,8,8,13,15,18,19-octamethyl-2 Chemical compound [Co+2].N#[C-].[N-]([C@@H]1[C@H](CC(N)=O)[C@@]2(C)CCC(=O)NC[C@@H](C)OP(O)(=O)O[C@H]3[C@H]([C@H](O[C@@H]3CO)N3C4=CC(C)=C(C)C=C4N=C3)O)\C2=C(C)/C([C@H](C\2(C)C)CCC(N)=O)=N/C/2=C\C([C@H]([C@@]/2(CC(N)=O)C)CCC(N)=O)=N\C\2=C(C)/C2=N[C@]1(C)[C@@](C)(CC(N)=O)[C@@H]2CCC(N)=O AGVAZMGAQJOSFJ-WZHZPDAFSA-M 0.000 description 5
- 229940105776 factor viii inhibitor bypassing activity Drugs 0.000 description 5
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 5
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 108010074860 Factor Xa Proteins 0.000 description 4
- 108010049003 Fibrinogen Proteins 0.000 description 4
- 102000008946 Fibrinogen Human genes 0.000 description 4
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 4
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 4
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 4
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 4
- PGOHTUIFYSHAQG-LJSDBVFPSA-N (2S)-6-amino-2-[[(2S)-5-amino-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-4-amino-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-5-amino-2-[[(2S)-5-amino-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S,3R)-2-[[(2S)-5-amino-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S,3R)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-5-amino-2-[[(2S)-1-[(2S,3R)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2R)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-1-[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-amino-4-methylsulfanylbutanoyl]amino]-3-(1H-indol-3-yl)propanoyl]amino]-5-carbamimidamidopentanoyl]amino]propanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]-3-methylbutanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]acetyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]-3-sulfanylpropanoyl]amino]-4-methylsulfanylbutanoyl]amino]-5-carbamimidamidopentanoyl]amino]-3-hydroxybutanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-3-(1H-imidazol-5-yl)propanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]-3-hydroxybutanoyl]amino]-3-(1H-indol-3-yl)propanoyl]amino]-5-carbamimidamidopentanoyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]-3-hydroxybutanoyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-3-carboxypropanoyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-5-carbamimidamidopentanoyl]amino]-3-methylbutanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]-4-oxobutanoyl]amino]-5-carbamimidamidopentanoyl]amino]-3-(1H-indol-3-yl)propanoyl]amino]-4-carboxybutanoyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]hexanoic acid Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](Cc1c[nH]c2ccccc12)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](Cc1cnc[nH]1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](Cc1c[nH]c2ccccc12)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](Cc1ccccc1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](Cc1c[nH]c2ccccc12)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(O)=O PGOHTUIFYSHAQG-LJSDBVFPSA-N 0.000 description 3
- 108010000499 Thromboplastin Proteins 0.000 description 3
- 102000002262 Thromboplastin Human genes 0.000 description 3
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 3
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 3
- 229940012952 fibrinogen Drugs 0.000 description 3
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 3
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 description 2
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 2
- 238000011026 diafiltration Methods 0.000 description 2
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 2
- 150000003904 phospholipids Chemical class 0.000 description 2
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 2
- 108010014806 prothrombinase complex Proteins 0.000 description 2
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 2
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 2
- NWUYHJFMYQTDRP-UHFFFAOYSA-N 1,2-bis(ethenyl)benzene;1-ethenyl-2-ethylbenzene;styrene Chemical compound C=CC1=CC=CC=C1.CCC1=CC=CC=C1C=C.C=CC1=CC=CC=C1C=C NWUYHJFMYQTDRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 206010053567 Coagulopathies Diseases 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-ZXXMMSQZSA-N D-iditol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-ZXXMMSQZSA-N 0.000 description 1
- 108010062466 Enzyme Precursors Proteins 0.000 description 1
- 102000010911 Enzyme Precursors Human genes 0.000 description 1
- 108010014172 Factor V Proteins 0.000 description 1
- 102000009123 Fibrin Human genes 0.000 description 1
- 108010073385 Fibrin Proteins 0.000 description 1
- BWGVNKXGVNDBDI-UHFFFAOYSA-N Fibrin monomer Chemical compound CNC(=O)CNC(=O)CN BWGVNKXGVNDBDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101001038021 Lonomia obliqua Lopap Proteins 0.000 description 1
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 1
- 102000006833 Multifunctional Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108010047290 Multifunctional Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- 102100037486 Reverse transcriptase/ribonuclease H Human genes 0.000 description 1
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 description 1
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 description 1
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- PTFCDOFLOPIGGS-UHFFFAOYSA-N Zinc dication Chemical compound [Zn+2] PTFCDOFLOPIGGS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 239000012190 activator Substances 0.000 description 1
- 239000000853 adhesive Substances 0.000 description 1
- 230000001070 adhesive effect Effects 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 230000000740 bleeding effect Effects 0.000 description 1
- 230000023555 blood coagulation Effects 0.000 description 1
- 229940019700 blood coagulation factors Drugs 0.000 description 1
- 239000003593 chromogenic compound Substances 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 230000035602 clotting Effects 0.000 description 1
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 1
- 238000011066 ex-situ storage Methods 0.000 description 1
- 229950003499 fibrin Drugs 0.000 description 1
- 208000006454 hepatitis Diseases 0.000 description 1
- 231100000283 hepatitis Toxicity 0.000 description 1
- 239000003456 ion exchange resin Substances 0.000 description 1
- 229920003303 ion-exchange polymer Polymers 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 230000003278 mimic effect Effects 0.000 description 1
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 description 1
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 description 1
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 1
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- 229910052712 strontium Inorganic materials 0.000 description 1
- CIOAGBVUUVVLOB-UHFFFAOYSA-N strontium atom Chemical compound [Sr] CIOAGBVUUVVLOB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/14—Hydrolases (3)
- C12N9/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
- C12N9/50—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25)
- C12N9/64—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from animal tissue
- C12N9/6421—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from animal tissue from mammals
- C12N9/6424—Serine endopeptidases (3.4.21)
- C12N9/6429—Thrombin (3.4.21.5)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
- A61P7/04—Antihaemorrhagics; Procoagulants; Haemostatic agents; Antifibrinolytic agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y304/00—Hydrolases acting on peptide bonds, i.e. peptidases (3.4)
- C12Y304/21—Serine endopeptidases (3.4.21)
- C12Y304/21005—Thrombin (3.4.21.5)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Hematology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
- Amplifiers (AREA)
- Revetment (AREA)
- Ultra Sonic Daignosis Equipment (AREA)
Abstract
Thrombin lidského nebo zvířecího původu, který je zbaven infekčních látek a může se připravit aktivací prothrombinu, který se podrobil tepelnému zpracování k inaktivaci infekčních látek.ŕ
Description
Způsob výroby thrombinu zabezpečeného proti virům
Oblast techniky
Vynález se týká «způsobu výroby thrombinu lidského nebo zvířecího původu, zabezpečeného proti virům.
Dosavadní stav techniky
Při srážení krve probíhá řada po sobé následujících reakcí, při kterých jsou aktivovány faktory srážení krve a nakonec se účinkem aktivovaného prothrombinu (thrombinu) na fibrinogen vytvoří fibrin. Reakce prothrombinu na thrombin probíhá sama s faktorem Xa a vápníkem velmi pomalu. Tato reakce probíhá optimálně teprve potom, kdy je k dispozici opět komplex několika faktorů (prothrombinázový komplex). K tomuto komplexu kromě faktoru Xa náleží faktor V, fosfolipidy a vápník. Faktor Xa štěpí molekulu prothrombinu (molekulová hmotnost 68 kD) proteolyticky, a tím vytváří aktivní enzym thrombin (molekulová hmotnost 30 kD).
Plasmová proteáza thrombin je vícefunkční enzym, který není koagulován pouze štěpením fibrinogenu na fibrin, ale také aktivován srážecími faktory V, VIII a XIII a štěpen svým vlastním proenzymem (prothrombinem).
V terapii je thrombin sám nebo společně s fibrinogeny používán k zastavení krvácení nebo v chirurgii k spojování tkání lepicí technikou.
Aktivace prothrombinu přes prothrombinázový komplex je ex šitu obtížné napodobitelná, a proto nechyběly pokusy připravit thrombin působením proteázy lidského nebo zvířecího původu. Přitom je známo, že se má vyhnout každému kontaktu produktu s materiálem lidského nebo zvířecího původu, aby se zmenšilo nebezpečí kontaminace látkou způsobující infekci.
Pokusy zpracovat prothrombinové komplexy izolované z plasmy s vápenatými ionty, stejně jako s vápenatými ionty a suspenzí obsahující hovězí thromboplastin ukazují, že zpracování se samotnými vápenatými ionty vede k podstatnému snížení výtěžku a čistoty vzniklého thrombinu, jako při zpracování s vápenatými ionty a thromboplastinem (Cryobiology, 21, 661 až 663 /1984).
Z DE-A 38 43 126 je známo, že z plasmy, která je adsorbována na základní hmotě a zpracována s prothrombinovým aktivátorem, se může dostat thrombin. Jako aktivátor se mohou například uvést vápenaté ionty, a thromboplastin nebo faktor Xa. Během aktivace jsou přítomny všechny biologické kofaktory, které jsou také vázány na základní hmotu.
Při použití plasmatického prothrombinu k získání thrombinu vzniká nebezpečí kontaminace infekčními látkami (například viry hepatitidy nebo HIV). Kromě toho dochází ještě k tomu, že při obecné známém způsobu aktivace je vedle iontu dvojmocného vápníku doporučeno dodatečné použití biologických kofaktorů, čímž jsou dány další zdroje kontaminace.
-1CZ 281502 B6
Nyní je sice známo, že infekční látky v biologických preparátech se mohou spolehlivě inaktivovat působením tepla, zvláště pak v kombinaci s ošetřením parou (AT-B 385 657). Přitom se však ukázalo, že se thrombin na základě své tepelné nestálosti musí zahřívat v přítomnosti stabilizátorů (DE-A 38 09 991), aby se aktivita thrombinu nepoškodila. Použití stabilizátorů je však sporné, protože se během působení tepla ochrání nejen aktivita thrombinu, ale také se stabilizují viry.
Úkol vynálezu je poskytnout thrombin, který je bezpečný proti virům.
Podstata vynálezu
Thrombin bezpečný proti virům se dá získat z virově inaktivované plasmové frakce obsahující prothrombin, výhradní aktivací solemi aktivními při srážení, například vápenatými, strontnatými nebo zinečnatými ionty. Takovéto soli podporují tvorbu thrombinu z odpovídajících srážecích faktorů.
Vynález spočívá na poznatku, že infikující látky, které jsou přítomny v plasmatickém prothrombinu, se mohou stát neškodné zpracováním prothrombinu k inaktivaci virů, aniž by se biologická aktivita thrombinu získaného z prothrombinu podstatně ovlivnila.
S překvapením bylo zjištěno, že aktivace samotné virově inaktivované frakce, obsahující prothrombin, přídavkem solí aktivních při srážení, vede jednoduchým způsobem k vyššímu výtěžku nebo čistotě produktu, bez dalšího přídavku biologického kofaktoru, jako jsou srážecí faktory V, Xa nebo fosfolipidy. Kontaminace během aktivace se tedy zmenší, protože je také připravovaný thrombin, stejné jako výchozí materiál, zabezpečen proti virům.
Jako výhodné se ukázalo připravovat thrombin zabezpečený proti virům z virové inaktivovaného prothrombinového komplexu, obzvláště z virově inaktivovaného aktivovaného prothrombinového komplexu. Aktivace aktivovaného prothrombinového komplexu probíhá přídavkem solí aktivních při srážení překvapivě vyšší reakční rychlostí. Výtěžek thrombinu se také optimalizuje.
Zvláště výhodná je výroba thrombinu zabezpečeného proti virům z Factor Eight Inhibitor Bypassing Activity, označovaného v následujícím obecně používanou zkratkou FEIBA. Aktivovaný prothrombinový komplex nebo FEIBA se mohou připravit pomocí již známých opatření (AT-B 350 726, AT-B 368 883 a EP-B 0 041 173) z prothrombinového komplexu.
Předmětem předloženého vynálezu je tedy způsob výroby thrombinu zabezpečeného proti virům, který spočívá v tom, že se kombinují opatření, totiž že
- se připraví aktivovaný prothrombinový komplex z plasmové frakce obsahující prothrombin,
- aktivovaný prothrombinový komplex se zpracuje k inaktivaci infekčních látek a
- ke zpracovanému aktivovanému prothrombinovému komplexu se přidají soli aktivující srážení, aby se připravil thrombin.
-2CZ 281502 B6
Thrombin se s výhodou dále čistí iontoméničovou chromatografií a/nebo afinitní chromatografií.
Průmyslové využiti
Thrombin zabezpečený proti virům podle shora uvedeného popisu se hodí zvláště pro použití ve farmaceutických přípravcích a k výrobě diagnostik.
Příklady provedení vynálezu
Dále uvedené příklady ještě blíže objasňují vynález, přičemž příklady 3 a 4 se týkají dalšího čištění thrombinu připraveného podle příkladu 1.
Příklad 1 litrů lidské krevní plasmy, ochuzené o sraženinu odstraněnou kryoskopickým technickým postupem, se uvede do styku s prothrombinem (faktor II) a kromě toho srážecími faktory VII, IX a X na iontoměničové pryskyřici (DEAE-Sephadex). Po eluování frakci obsahujících faktor II pomoci 0,5-molárního roztoku chloridu sodného se sníží, v tomto roztoku koncentrace chloridu sodného na 0,15 mol/1 diafiltrací a nakonec se provede lyofilizace.
Aby se popřípadě obsažený původce nemoci inaktivoval, tato frakce se zahřívá podle návodu daného v AT-B 38-5 657 po dobu 10 hodin na teplotu 60 °C a po dobu jedné hodiny na teplotu 80 ’C.· Aktivita prothrombinu činí 5 250 jednotek. Prothrombin se rozpustí na roztok obsahující 2,5 jednotek na mililitr a pomalu míchá s 2,5 mmol/1 chloridu vápenatého za teploty +30 °C při hodnotě pH 7,0. Po 80 minutách se stanoví aktivita thrombinu (pomoci chromogenního substrátu Th-1 firmy IMMUNO AG, Vídeň/) 48 jednotek na 1 jednotku faktoru II.
Ochlazením na teplotu +4 ’C a přídavkem kyseliny ethylendiaminotetraoctové (EDTA) se zastaví tvorba thrombinu. Pomocí ultrafiltrace a/nebo diafiltrace za použití ultrafiltrační membrány (velikost pórů 10 000) se odstraní vápenatý komplex. Nakonec se koncentrát upraví na farmaceutický přípravek.
Příklad 2 ml roztoku obsahujícího FEIBA ( firmy IMMUNO AG, Vídeň) s aktivitou FEIBA 966 jednotek a 992 jednotkami faktoru II se zředí 0,9% roztokem chloridu sodného na 330 ml a pomalu se míchá s 2,75 mmol/1 chloridu vápenatého za teploty +30 °C. Po 90 minutách dosahuje aktivita thrombinu maxima 51 jednotek na 1 jednotku faktoru II. Aktivace se zastaví ochlazením roztoku na teplotu +4 ’C a přídavkem citronanu sodného.
Přiklad 3
Thrombin o aktivitě 20 000 jednotek, připravený podle přikladu 1, se adsorbuje na sloupci 20 ml S-sefarózy při vodivosti
-3CZ 281502 B6
10,5 mS/cm a při hodnotě pH 6,0. Nakonec se vše promyje 140 ml 150-milimolárního roztoku chloridu sodného, aby se odstranily nevázané proteiny.
Frakce obsahující thrombin se eluují 100 ml 750-milimolárního roztoku chloridu sodného, zkoncentruji, diafiltrují a nakonec upraví na farmaceutický přípravek.
Výtěžek aktivity thrombinu je větší než 90 %.
Příklad 4
Thrombin o aktivitě 10 000 jednotek, připravený podle příkladu 1, se vnese na sloupec 10 ml lysin-sefarózy ekvilibrovaný 150-milimolárním roztokem octanu sodného, o hodnotě pH 6,7. Naplněný sloupec se promyje stejným pufrem a frakce obsahující thrombin se eluují 300-milimolárním roztokem lysinu.
Aktivita thrombinu je 9 400 jednotek a specifická aktivita činí 1 850 jednotek na mg proteinu.
PATENTOVÉ NÁROKY
Claims (2)
1. Způsob výroby thrombinu zabezpečeného proti virům, vyznačující se tím, že se aktivovaný prothrombinový komplex, získatelný z plasmové frakce obsahující prothrombinový komplex, zpracuje k inaktivaci infekčních látek a ke zpracovanému aktivovanému prothrombinovému komplexu se přidají soli aktivní při srážení.
2. Způsob podle nároku 1, vyznačující se tím, že se thrombin dále čistí iontoméničovou chromatografií a/nebo afinitní chromatografií.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| AT0218391A AT398079B (de) | 1991-11-04 | 1991-11-04 | Präparation mit thrombinaktivität sowie verfahren zu ihrer herstellung |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CZ330992A3 CZ330992A3 (en) | 1993-06-16 |
| CZ281502B6 true CZ281502B6 (cs) | 1996-10-16 |
Family
ID=3529491
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CS923309A CZ281502B6 (cs) | 1991-11-04 | 1992-11-04 | Thrombin a způsob jeho výroby |
Country Status (19)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5714370A (cs) |
| EP (1) | EP0541507B1 (cs) |
| JP (1) | JP2572513B2 (cs) |
| AT (2) | AT398079B (cs) |
| AU (1) | AU645715B2 (cs) |
| CA (1) | CA2081703C (cs) |
| CZ (1) | CZ281502B6 (cs) |
| DE (1) | DE59209922D1 (cs) |
| DK (1) | DK0541507T3 (cs) |
| ES (1) | ES2165355T3 (cs) |
| FI (1) | FI104378B (cs) |
| HR (1) | HRP921171B1 (cs) |
| HU (1) | HU213867B (cs) |
| MX (1) | MX9206303A (cs) |
| NO (1) | NO312125B1 (cs) |
| PL (1) | PL170156B1 (cs) |
| SI (1) | SI9200299B (cs) |
| SK (1) | SK279193B6 (cs) |
| YU (1) | YU96192A (cs) |
Families Citing this family (48)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| AT402891B (de) * | 1991-06-20 | 1997-09-25 | Immuno Ag | Verfahren zur herstellung eines inaktivierten blutproduktes |
| DE4137996A1 (de) * | 1991-11-19 | 1993-05-27 | Behringwerke Ag | Verfahren zur herstellung eines virussicheren thrombinkonzentrates |
| AT399818B (de) * | 1992-04-24 | 1995-07-25 | Immuno Ag | Verfahren zur herstellung einer hochgereinigten virussicheren faktor viii-präparation |
| AU6653094A (en) * | 1992-12-16 | 1994-07-04 | Immuno Aktiengesellschaft | Process for preparing a virus-safe biological composition |
| DE4320294A1 (de) * | 1993-06-18 | 1994-12-22 | Immuno Ag | Verwendung von humanem Protein C zur Verhinderung und Behandlung von Thrombozytenablagerungen |
| JPH07308190A (ja) * | 1994-05-18 | 1995-11-28 | Green Cross Corp:The | トロンビンの製造方法 |
| US5506127A (en) * | 1994-09-21 | 1996-04-09 | Proba; Zbigniew | Therapeutic grade thrombin produced by chromatography |
| GB9503750D0 (en) * | 1995-02-24 | 1995-04-12 | Common Services Agency | Thrombin preparation |
| AT404597B (de) | 1995-11-24 | 1998-12-28 | Immuno Ag | Verfahren zur herstellung von proteinen |
| JP3944267B2 (ja) * | 1996-08-09 | 2007-07-11 | 財団法人化学及血清療法研究所 | プロトロンビンの活性化方法および該方法に基づくトロンビンの製造方法 |
| US7435425B2 (en) * | 2001-07-17 | 2008-10-14 | Baxter International, Inc. | Dry hemostatic compositions and methods for their preparation |
| US6066325A (en) | 1996-08-27 | 2000-05-23 | Fusion Medical Technologies, Inc. | Fragmented polymeric compositions and methods for their use |
| US8303981B2 (en) | 1996-08-27 | 2012-11-06 | Baxter International Inc. | Fragmented polymeric compositions and methods for their use |
| US8603511B2 (en) | 1996-08-27 | 2013-12-10 | Baxter International, Inc. | Fragmented polymeric compositions and methods for their use |
| AT405608B (de) * | 1997-04-08 | 1999-10-25 | Immuno Ag | Verfahren zur inaktivierung von pathogenen, insbesondere von viren, in einem biologischen material |
| AT405485B (de) | 1997-05-28 | 1999-08-25 | Immuno Ag | Eine das vwf-propeptid enthaltende pharmazeutische präparation |
| WO2001000667A2 (en) * | 1999-06-29 | 2001-01-04 | The Government Of The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | Anti-thrombin peptide from anopheles albimanus salivary gland |
| US7795218B2 (en) | 2001-04-12 | 2010-09-14 | Bioaxone Therapeutique Inc. | ADP-ribosyl transferase fusion variant proteins |
| GB0216002D0 (en) * | 2002-07-10 | 2002-08-21 | Nat Blood Authority | Process and composition |
| US8834864B2 (en) * | 2003-06-05 | 2014-09-16 | Baxter International Inc. | Methods for repairing and regenerating human dura mater |
| US7927626B2 (en) | 2003-08-07 | 2011-04-19 | Ethicon, Inc. | Process of making flowable hemostatic compositions and devices containing such compositions |
| MX2008014847A (es) * | 2006-05-31 | 2009-04-30 | Baxter Int | Metodo para crecimiento interno en la celula dirigido y regeneracion controlada de los tejidos en la cirugia espinal. |
| TWI436793B (zh) * | 2006-08-02 | 2014-05-11 | 巴克斯特國際公司 | 快速作用之乾密封膠及其使用和製造方法 |
| ES2662647T3 (es) | 2007-10-30 | 2018-04-09 | Baxter International Inc. | Uso de una biomatriz de colágeno biofuncional regenerativa para tratar defectos viscerales o parietales |
| CA2716872C (en) | 2008-02-29 | 2015-02-10 | Ferrosan Medical Devices A/S | Device for promotion of hemostasis and/or wound healing |
| MX2011006255A (es) | 2008-12-11 | 2012-01-20 | Baxter Int | Preparaciones a base de fibrinogeno y polisacaridos sulfatados. |
| KR101105026B1 (ko) * | 2009-04-06 | 2012-01-16 | 김기영 | 다방향 굴절형 핸드 그라인더 |
| US9039783B2 (en) * | 2009-05-18 | 2015-05-26 | Baxter International, Inc. | Method for the improvement of mesh implant biocompatibility |
| HRP20150255T1 (hr) * | 2009-06-16 | 2015-05-08 | Baxter International Inc. | Hemostatiäśna spužva |
| US8771258B2 (en) | 2009-12-16 | 2014-07-08 | Baxter International Inc. | Hemostatic sponge |
| SA111320355B1 (ar) | 2010-04-07 | 2015-01-08 | Baxter Heathcare S A | إسفنجة لايقاف النزف |
| ES2682302T3 (es) | 2010-06-01 | 2018-09-19 | Baxter International Inc | Proceso para la producción de composiciones hemostáticas secas y estables |
| JP5973997B2 (ja) | 2010-06-01 | 2016-08-23 | バクスター・インターナショナル・インコーポレイテッドＢａｘｔｅｒ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｃｏｒｐ０Ｒａｔｅｄ | 乾燥した安定な止血用組成物を作製するためのプロセス |
| AU2011260260B2 (en) | 2010-06-01 | 2015-09-03 | Baxter Healthcare S.A. | Process for making dry and stable hemostatic compositions |
| MX346958B (es) | 2011-10-11 | 2017-04-06 | Baxter Int | Composición hemostatica. |
| WO2013053759A2 (en) | 2011-10-11 | 2013-04-18 | Baxter International Inc. | Hemostatic compositions |
| SG11201401878SA (en) | 2011-10-27 | 2014-09-26 | Baxter Int | Hemostatic compositions |
| EP2793934B1 (en) * | 2011-12-23 | 2017-08-23 | Merz Pharma GmbH & Co. KGaA | Novel method for the manufacturing of di-chain proteins for use in humans |
| CN104159527B (zh) | 2012-03-06 | 2017-04-12 | 弗罗桑医疗设备公司 | 包含止血糊剂的压力容器 |
| RU2636240C2 (ru) | 2012-06-12 | 2017-11-21 | Ферросан Медикал Дивайсиз А/С | Сухая гемостатическая композиция |
| JP6390873B2 (ja) | 2013-06-21 | 2018-09-19 | フェッローサン メディカル ディバイス エー／エス | 減圧膨張させた乾燥組成物およびそれを保持するためのシリンジ |
| BR112016013322B1 (pt) | 2013-12-11 | 2020-07-21 | Ferrosan Medical Devices A/S | métodos para preparação de uma composição seca e para reconstituir uma composição seca, composição seca, uso de uma composição seca, e, kit |
| BR112017007466B1 (pt) | 2014-10-13 | 2021-03-02 | Ferrosan Medical Devices A/S | método para preparar uma composição seca, método para reconstituir a composição seca, pasta, composição seca, recipiente, kit homeostático, e, uso de uma composição seca |
| RU2705905C2 (ru) | 2014-12-24 | 2019-11-12 | Ферросан Медикал Дивайсиз А/С | Шприц для удерживания и смешивания первого и второго веществ |
| CA2986981A1 (en) | 2015-07-03 | 2017-01-12 | Ferrosan Medical Devices A/S | Syringe for mixing two components and for retaining a vacuum in a storage condition |
| KR20190123316A (ko) | 2017-03-09 | 2019-10-31 | 백스터 인터내셔널 인코포레이티드 | 용매 침착 시스템 및 방법 |
| EP4321182A3 (en) | 2018-05-09 | 2024-05-29 | Ferrosan Medical Devices A/S | Method for preparing a haemostatic composition |
| CN119685296A (zh) * | 2024-12-27 | 2025-03-25 | 中科世生(河南)生物科技有限公司 | 一种凝血酶的制备方法 |
Family Cites Families (21)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| AT350726B (de) * | 1976-08-30 | 1979-06-11 | Immuno Ag | Verfahren zur herstellung einer blut- gerinnungsfoerdernden praeperation aus menschlichem blutplasma |
| DE2902158A1 (de) * | 1979-01-20 | 1980-07-31 | Biotest Serum Institut Gmbh | Verfahren zur herstellung von fibrinogen, einem die gerinnungsfaktoren ii, vii, ix und x enthaltenden prothrombinkomplex, antithrombin iii und einer loesung von lagerstabilen serumproteinen |
| US4357321A (en) * | 1980-01-28 | 1982-11-02 | Baxter Travenol Laboratories, Inc. | Method and composition for treating clotting factor inhibitors |
| DE3019612A1 (de) * | 1980-05-22 | 1981-11-26 | Boehringer Mannheim Gmbh, 6800 Mannheim | Stabilisiertes thrombinpraeparat |
| US4404132A (en) * | 1980-05-27 | 1983-09-13 | Cutter Laboratories, Inc. | Blood coagulation promoting product |
| US4364861A (en) * | 1980-05-27 | 1982-12-21 | Cutter Laboratories, Inc. | Blood-coagulation-promoting products and methods of preparing them |
| AT368883B (de) * | 1980-07-22 | 1982-11-25 | Immuno Ag | Verfahren zur herstellung einer neuen blutgerinnungsfoerdernden praeparation auf basis von humanproteinen |
| US4495278A (en) * | 1981-04-27 | 1985-01-22 | Baxter Travenol Laboratories, Inc. | Process for making novel blood clotting enzyme compositions |
| US4480029A (en) * | 1981-04-27 | 1984-10-30 | Baxter Travenol Laboratories, Inc. | Biological indicators and their use |
| US4764369A (en) * | 1983-07-14 | 1988-08-16 | New York Blood Center Inc. | Undenatured virus-free biologically active protein derivatives |
| AT389815B (de) * | 1984-03-09 | 1990-02-12 | Immuno Ag | Verfahren zur inaktivierung von vermehrungsfaehigen filtrierbaren krankheitserregern in blutprodukten |
| AT385657B (de) * | 1984-03-09 | 1988-05-10 | Immuno Ag | Verfahren zur inaktivierung von vermehrungsfaehigen filtrierbaren krankheitserregern in blutprodukten |
| US4613501A (en) * | 1984-12-21 | 1986-09-23 | New York Blood Center, Inc. | Inactivation of viruses in labile blood derivatives |
| US4673733A (en) * | 1985-04-11 | 1987-06-16 | Sudhish Chandra | Treatment of biological and pharmaceutical products adsorbed on a solid phase with virus and pyrogen inactivating agents |
| JPS63243032A (ja) * | 1987-03-27 | 1988-10-07 | Green Cross Corp:The | トロンビンの加熱処理方法 |
| DE3843126C3 (de) * | 1988-12-22 | 1994-10-06 | Octapharma Ag | Verfahren zur Herstellung eines hochreinen Thrombinkonzentrates |
| ES2057191T5 (es) * | 1989-01-13 | 2003-05-01 | Mitsubishi Pharma Corp | Metodo de produccion para una composicion que contiene proteinas. |
| IE73210B1 (en) * | 1990-01-24 | 1997-05-07 | Warner Lambert Co | Process for the production of thrombin and high purity thrombin preparation thereby obtained |
| ATE177781T1 (de) * | 1990-02-20 | 1999-04-15 | Baxter Int | Gereinigtes, virusfreies menschliches thrombin |
| FR2679251B1 (fr) * | 1991-07-18 | 1993-11-12 | Nord Assoc Essor Transfusion San | Procede de preparation d'un concentre de thrombine humaine destine a un usage therapeutique. |
| DE4137996A1 (de) * | 1991-11-19 | 1993-05-27 | Behringwerke Ag | Verfahren zur herstellung eines virussicheren thrombinkonzentrates |
-
1991
- 1991-11-04 AT AT0218391A patent/AT398079B/de not_active IP Right Cessation
-
1992
- 1992-10-27 HU HU9203366A patent/HU213867B/hu not_active IP Right Cessation
- 1992-10-27 AU AU27361/92A patent/AU645715B2/en not_active Ceased
- 1992-10-29 CA CA002081703A patent/CA2081703C/en not_active Expired - Lifetime
- 1992-11-02 HR HRA2183/91A patent/HRP921171B1/xx not_active IP Right Cessation
- 1992-11-02 DK DK92890232T patent/DK0541507T3/da active
- 1992-11-02 AT AT92890232T patent/ATE206757T1/de not_active IP Right Cessation
- 1992-11-02 ES ES92890232T patent/ES2165355T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1992-11-02 EP EP92890232A patent/EP0541507B1/de not_active Revoked
- 1992-11-02 DE DE59209922T patent/DE59209922D1/de not_active Revoked
- 1992-11-03 NO NO19924229A patent/NO312125B1/no not_active IP Right Cessation
- 1992-11-03 MX MX9206303A patent/MX9206303A/es unknown
- 1992-11-03 PL PL92296460A patent/PL170156B1/pl not_active IP Right Cessation
- 1992-11-04 JP JP4294962A patent/JP2572513B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 1992-11-04 SI SI9200299A patent/SI9200299B/sl not_active IP Right Cessation
- 1992-11-04 YU YU96192A patent/YU96192A/sh unknown
- 1992-11-04 SK SK3309-92A patent/SK279193B6/sk unknown
- 1992-11-04 FI FI924975A patent/FI104378B/fi not_active IP Right Cessation
- 1992-11-04 CZ CS923309A patent/CZ281502B6/cs not_active IP Right Cessation
-
1995
- 1995-06-01 US US08/458,082 patent/US5714370A/en not_active Expired - Lifetime
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CZ281502B6 (cs) | Thrombin a způsob jeho výroby | |
| JP4101309B2 (ja) | 治療的用途のためのヒトトロンビン濃厚液の製造法 | |
| AU4353399A (en) | Pharmaceutical factor vii preparation | |
| US6358534B1 (en) | Immunotolerant prothrombin complex preparation | |
| JP4445386B2 (ja) | ウィルス不活性化トロンビン調製物の製造方法 | |
| JP2723445B2 (ja) | 血液凝固因子を活性化する方法 | |
| JP3944267B2 (ja) | プロトロンビンの活性化方法および該方法に基づくトロンビンの製造方法 | |
| JPH0698791A (ja) | 酵素的分解によるタンパク質の切断方法およびその利用方法 | |
| KR100377279B1 (ko) | 트롬빈의제조방법 | |
| US6245548B1 (en) | Activation of pure prothrombin to thrombin with about 30% to about 40% sodium citrate | |
| JP3810439B2 (ja) | トロンビンの製造法 | |
| KR950013455B1 (ko) | 순수한 인 혈액 응고 제 2 인자 및 제 9 인자의 정제 방법 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| IF00 | In force as of 2000-06-30 in czech republic | ||
| MM4A | Patent lapsed due to non-payment of fee |
Effective date: 20051104 |