CZ287370B6 - Medicament for reducing formation of amyloidal beta A4 when suffering from Alzheimer's disease - Google Patents
Medicament for reducing formation of amyloidal beta A4 when suffering from Alzheimer's disease Download PDFInfo
- Publication number
- CZ287370B6 CZ287370B6 CZ19971251A CZ125197A CZ287370B6 CZ 287370 B6 CZ287370 B6 CZ 287370B6 CZ 19971251 A CZ19971251 A CZ 19971251A CZ 125197 A CZ125197 A CZ 125197A CZ 287370 B6 CZ287370 B6 CZ 287370B6
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- compound
- disease
- alzheimer
- app
- medicament
- Prior art date
Links
- 208000024827 Alzheimer disease Diseases 0.000 title claims abstract description 21
- 239000003814 drug Substances 0.000 title claims abstract description 6
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 title description 3
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims abstract description 16
- 102000014303 Amyloid beta-Protein Precursor Human genes 0.000 claims description 51
- 108010079054 Amyloid beta-Protein Precursor Proteins 0.000 claims description 51
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical group Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 15
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 13
- 238000012545 processing Methods 0.000 claims description 9
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 7
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 6
- 230000007450 amyloidogenic pathway Effects 0.000 claims description 4
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 claims description 4
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 abstract description 13
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 abstract description 13
- 102000009091 Amyloidogenic Proteins Human genes 0.000 abstract description 5
- 108010048112 Amyloidogenic Proteins Proteins 0.000 abstract description 5
- 230000003942 amyloidogenic effect Effects 0.000 abstract description 4
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract 3
- 239000002243 precursor Substances 0.000 abstract 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 50
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 13
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 9
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 8
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 8
- 230000008859 change Effects 0.000 description 7
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 7
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 7
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 6
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 6
- 238000000034 method Methods 0.000 description 6
- YBYRMVIVWMBXKQ-UHFFFAOYSA-N phenylmethanesulfonyl fluoride Chemical compound FS(=O)(=O)CC1=CC=CC=C1 YBYRMVIVWMBXKQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 5
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 5
- 210000004978 chinese hamster ovary cell Anatomy 0.000 description 5
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 5
- CANZROMYQDHYHR-UHFFFAOYSA-N oxotremorine M Chemical compound C[N+](C)(C)CC#CCN1CCCC1=O CANZROMYQDHYHR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 5
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L Magnesium chloride Chemical compound [Mg+2].[Cl-].[Cl-] TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- 102000014415 Muscarinic acetylcholine receptor Human genes 0.000 description 4
- 108050003473 Muscarinic acetylcholine receptor Proteins 0.000 description 4
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 4
- DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M Sodium laurylsulphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 4
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 4
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 4
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 4
- 230000004044 response Effects 0.000 description 4
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 3
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N Propylene glycol Chemical compound CC(O)CO DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 3
- 239000000556 agonist Chemical group 0.000 description 3
- 239000013592 cell lysate Substances 0.000 description 3
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 3
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 3
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 3
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 3
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 3
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 3
- 238000011049 filling Methods 0.000 description 3
- -1 methoxyimino Chemical group 0.000 description 3
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 3
- 102000013415 peroxidase activity proteins Human genes 0.000 description 3
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 3
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 3
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 3
- 230000008569 process Effects 0.000 description 3
- 239000012679 serum free medium Substances 0.000 description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 3
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 3
- 235000010356 sorbitol Nutrition 0.000 description 3
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 3
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 3
- 235000020357 syrup Nutrition 0.000 description 3
- 239000006188 syrup Substances 0.000 description 3
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 3
- 102000002659 Amyloid Precursor Protein Secretases Human genes 0.000 description 2
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 2
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 2
- 235000010643 Leucaena leucocephala Nutrition 0.000 description 2
- 240000007472 Leucaena leucocephala Species 0.000 description 2
- GDBQQVLCIARPGH-UHFFFAOYSA-N Leupeptin Natural products CC(C)CC(NC(C)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(C=O)CCCN=C(N)N GDBQQVLCIARPGH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 2
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 2
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 2
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 2
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- 239000008157 edible vegetable oil Substances 0.000 description 2
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 2
- 239000000945 filler Substances 0.000 description 2
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 2
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 2
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 2
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 2
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 2
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 2
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 2
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 2
- GDBQQVLCIARPGH-ULQDDVLXSA-N leupeptin Chemical compound CC(C)C[C@H](NC(C)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](C=O)CCCN=C(N)N GDBQQVLCIARPGH-ULQDDVLXSA-N 0.000 description 2
- 108010052968 leupeptin Proteins 0.000 description 2
- 238000000670 ligand binding assay Methods 0.000 description 2
- 229910001629 magnesium chloride Inorganic materials 0.000 description 2
- HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L magnesium stearate Chemical compound [Mg+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 2
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 2
- 239000000472 muscarinic agonist Substances 0.000 description 2
- 230000009871 nonspecific binding Effects 0.000 description 2
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 2
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 2
- 229920002981 polyvinylidene fluoride Polymers 0.000 description 2
- 235000013855 polyvinylpyrrolidone Nutrition 0.000 description 2
- 239000001267 polyvinylpyrrolidone Substances 0.000 description 2
- 229920000036 polyvinylpyrrolidone Polymers 0.000 description 2
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 2
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 2
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 2
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 2
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 2
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 2
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 235000019333 sodium laurylsulphate Nutrition 0.000 description 2
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 2
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 2
- 239000000080 wetting agent Substances 0.000 description 2
- ZSTLCHCDLIUXJE-ZGBAEQJLSA-N (2S,5S)-2-methylspiro[1,3-oxathiolane-5,3'-1-azabicyclo[2.2.2]octane] hydrate dihydrochloride Chemical compound O.Cl.Cl.C1S[C@@H](C)O[C@@]21C(CC1)CCN1C2.C1S[C@@H](C)O[C@@]21C(CC1)CCN1C2 ZSTLCHCDLIUXJE-ZGBAEQJLSA-N 0.000 description 1
- WLYYOFJEBGHKEC-VQYXCCSOSA-N (e)-but-2-enedioic acid;1-(4-pyrrolidin-1-ylbut-2-ynyl)pyrrolidin-2-one Chemical compound OC(=O)\C=C\C(O)=O.OC(=O)\C=C\C(O)=O.OC(=O)\C=C\C(O)=O.O=C1CCCN1CC#CCN1CCCC1.O=C1CCCN1CC#CCN1CCCC1 WLYYOFJEBGHKEC-VQYXCCSOSA-N 0.000 description 1
- ZORQXIQZAOLNGE-UHFFFAOYSA-N 1,1-difluorocyclohexane Chemical compound FC1(F)CCCCC1 ZORQXIQZAOLNGE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IIZPXYDJLKNOIY-JXPKJXOSSA-N 1-palmitoyl-2-arachidonoyl-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCC\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/CCCCC IIZPXYDJLKNOIY-JXPKJXOSSA-N 0.000 description 1
- CWWJZNKYUYUNNW-UHFFFAOYSA-N 2-(1-azabicyclo[2.2.2]octan-3-yl)acetonitrile Chemical compound C1CC2C(CC#N)CN1CC2 CWWJZNKYUYUNNW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- KZDCMKVLEYCGQX-UDPGNSCCSA-N 2-(diethylamino)ethyl 4-aminobenzoate;(2s,5r,6r)-3,3-dimethyl-7-oxo-6-[(2-phenylacetyl)amino]-4-thia-1-azabicyclo[3.2.0]heptane-2-carboxylic acid;hydrate Chemical group O.CCN(CC)CCOC(=O)C1=CC=C(N)C=C1.N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 KZDCMKVLEYCGQX-UDPGNSCCSA-N 0.000 description 1
- FCEZYVFHEBBVHO-UHFFFAOYSA-N 2-phenyl-1-azabicyclo[2.2.2]octane Chemical group C1CN2CCC1CC2C1=CC=CC=C1 FCEZYVFHEBBVHO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ALEVUYMOJKJJSA-UHFFFAOYSA-N 4-hydroxy-2-propylbenzoic acid Chemical compound CCCC1=CC(O)=CC=C1C(O)=O ALEVUYMOJKJJSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M Acetate Chemical compound CC([O-])=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 235000019489 Almond oil Nutrition 0.000 description 1
- 108010043324 Amyloid Precursor Protein Secretases Proteins 0.000 description 1
- 102000013455 Amyloid beta-Peptides Human genes 0.000 description 1
- 108010090849 Amyloid beta-Peptides Proteins 0.000 description 1
- 241000416162 Astragalus gummifer Species 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 229920002134 Carboxymethyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 229920002261 Corn starch Polymers 0.000 description 1
- 241000699802 Cricetulus griseus Species 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 1
- IAYPIBMASNFSPL-UHFFFAOYSA-N Ethylene oxide Chemical compound C1CO1 IAYPIBMASNFSPL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004354 Hydroxyethyl cellulose Substances 0.000 description 1
- 229920000663 Hydroxyethyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- 102000012750 Membrane Glycoproteins Human genes 0.000 description 1
- 108010090054 Membrane Glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 229920000168 Microcrystalline cellulose Polymers 0.000 description 1
- 229920002873 Polyethylenimine Polymers 0.000 description 1
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 1
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 1
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 1
- 229920001615 Tragacanth Polymers 0.000 description 1
- HOBWAPHTEJGALG-JKCMADFCSA-N [(1r,5s)-8-methyl-8-azoniabicyclo[3.2.1]octan-3-yl] 3-hydroxy-2-phenylpropanoate;sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O.C([C@H]1CC[C@@H](C2)[NH+]1C)C2OC(=O)C(CO)C1=CC=CC=C1.C([C@H]1CC[C@@H](C2)[NH+]1C)C2OC(=O)C(CO)C1=CC=CC=C1 HOBWAPHTEJGALG-JKCMADFCSA-N 0.000 description 1
- QPMSXSBEVQLBIL-CZRHPSIPSA-N ac1mix0p Chemical compound C1=CC=C2N(C[C@H](C)CN(C)C)C3=CC(OC)=CC=C3SC2=C1.O([C@H]1[C@]2(OC)C=CC34C[C@@H]2[C@](C)(O)CCC)C2=C5[C@]41CCN(C)[C@@H]3CC5=CC=C2O QPMSXSBEVQLBIL-CZRHPSIPSA-N 0.000 description 1
- OIPILFWXSMYKGL-UHFFFAOYSA-N acetylcholine Chemical group CC(=O)OCC[N+](C)(C)C OIPILFWXSMYKGL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 238000013019 agitation Methods 0.000 description 1
- 239000008168 almond oil Substances 0.000 description 1
- 108091007736 alpha-secretases Proteins 0.000 description 1
- 102000038380 alpha-secretases Human genes 0.000 description 1
- CEGOLXSVJUTHNZ-UHFFFAOYSA-K aluminium tristearate Chemical compound [Al+3].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O CEGOLXSVJUTHNZ-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 229940063655 aluminum stearate Drugs 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000003943 amyloidogenic processing Effects 0.000 description 1
- 239000005557 antagonist Substances 0.000 description 1
- 229960002028 atropine sulfate Drugs 0.000 description 1
- 108091007737 beta-secretases Proteins 0.000 description 1
- NZUPCNDJBJXXRF-UHFFFAOYSA-O bethanechol Chemical compound C[N+](C)(C)CC(C)OC(N)=O NZUPCNDJBJXXRF-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 1
- 229960000910 bethanechol Drugs 0.000 description 1
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 1
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 1
- UDSAIICHUKSCKT-UHFFFAOYSA-N bromophenol blue Chemical compound C1=C(Br)C(O)=C(Br)C=C1C1(C=2C=C(Br)C(O)=C(Br)C=2)C2=CC=CC=C2S(=O)(=O)O1 UDSAIICHUKSCKT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000001506 calcium phosphate Substances 0.000 description 1
- 229910000389 calcium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011010 calcium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- AIXAANGOTKPUOY-UHFFFAOYSA-N carbachol Chemical compound [Cl-].C[N+](C)(C)CCOC(N)=O AIXAANGOTKPUOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960004484 carbachol Drugs 0.000 description 1
- 239000001768 carboxy methyl cellulose Substances 0.000 description 1
- 235000010948 carboxy methyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 239000008112 carboxymethyl-cellulose Substances 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 210000003169 central nervous system Anatomy 0.000 description 1
- 230000002490 cerebral effect Effects 0.000 description 1
- 239000003240 coconut oil Substances 0.000 description 1
- 235000019864 coconut oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000003086 colorant Substances 0.000 description 1
- 235000008504 concentrate Nutrition 0.000 description 1
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 1
- 239000003636 conditioned culture medium Substances 0.000 description 1
- 239000008120 corn starch Substances 0.000 description 1
- 238000013016 damping Methods 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 239000005549 deoxyribonucleoside Substances 0.000 description 1
- 239000003599 detergent Substances 0.000 description 1
- 229940042399 direct acting antivirals protease inhibitors Drugs 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 1
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- 239000002702 enteric coating Substances 0.000 description 1
- 238000009505 enteric coating Methods 0.000 description 1
- 235000019441 ethanol Nutrition 0.000 description 1
- 230000001605 fetal effect Effects 0.000 description 1
- 239000000796 flavoring agent Substances 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 102000038383 gamma-secretases Human genes 0.000 description 1
- 108091007739 gamma-secretases Proteins 0.000 description 1
- 238000001502 gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 239000003365 glass fiber Substances 0.000 description 1
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 1
- 150000004677 hydrates Chemical class 0.000 description 1
- 235000019447 hydroxyethyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 235000010445 lecithin Nutrition 0.000 description 1
- 239000000787 lecithin Substances 0.000 description 1
- 229940067606 lecithin Drugs 0.000 description 1
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 1
- 239000003589 local anesthetic agent Substances 0.000 description 1
- 229960005015 local anesthetics Drugs 0.000 description 1
- 239000007937 lozenge Substances 0.000 description 1
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 1
- 239000012139 lysis buffer Substances 0.000 description 1
- 235000019359 magnesium stearate Nutrition 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 229920000609 methyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 125000002496 methyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 1
- 239000001923 methylcellulose Substances 0.000 description 1
- 235000010981 methylcellulose Nutrition 0.000 description 1
- 229940016286 microcrystalline cellulose Drugs 0.000 description 1
- 235000019813 microcrystalline cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 239000008108 microcrystalline cellulose Substances 0.000 description 1
- 229940126619 mouse monoclonal antibody Drugs 0.000 description 1
- 239000002687 nonaqueous vehicle Substances 0.000 description 1
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 1
- 235000019198 oils Nutrition 0.000 description 1
- 210000001672 ovary Anatomy 0.000 description 1
- 150000003891 oxalate salts Chemical class 0.000 description 1
- 239000003182 parenteral nutrition solution Substances 0.000 description 1
- 239000004031 partial agonist Substances 0.000 description 1
- 239000000137 peptide hydrolase inhibitor Substances 0.000 description 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 1
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 1
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 1
- 235000008476 powdered milk Nutrition 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 235000013772 propylene glycol Nutrition 0.000 description 1
- 238000000159 protein binding assay Methods 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 239000002342 ribonucleoside Substances 0.000 description 1
- IQWCBYSUUOFOMF-ZRDIBKRKSA-N sabcomeline Chemical compound C1CC2C(C(/C#N)=N/OC)CN1CC2 IQWCBYSUUOFOMF-ZRDIBKRKSA-N 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 229940079832 sodium starch glycolate Drugs 0.000 description 1
- 239000008109 sodium starch glycolate Substances 0.000 description 1
- 229920003109 sodium starch glycolate Polymers 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 239000012453 solvate Substances 0.000 description 1
- 239000001593 sorbitan monooleate Substances 0.000 description 1
- 235000011069 sorbitan monooleate Nutrition 0.000 description 1
- 229940035049 sorbitan monooleate Drugs 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 229940032147 starch Drugs 0.000 description 1
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 1
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 1
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 1
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 1
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 1
- 239000000829 suppository Substances 0.000 description 1
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 1
- 239000000375 suspending agent Substances 0.000 description 1
- 239000002278 tabletting lubricant Substances 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 239000003104 tissue culture media Substances 0.000 description 1
- 230000002110 toxicologic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000759 toxicological effect Toxicity 0.000 description 1
- 239000000196 tragacanth Substances 0.000 description 1
- 235000010487 tragacanth Nutrition 0.000 description 1
- 229940116362 tragacanth Drugs 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H tricalcium bis(phosphate) Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- GPRLSGONYQIRFK-MNYXATJNSA-N triton Chemical compound [3H+] GPRLSGONYQIRFK-MNYXATJNSA-N 0.000 description 1
- 238000009827 uniform distribution Methods 0.000 description 1
- 239000008215 water for injection Substances 0.000 description 1
- DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N β‐Mercaptoethanol Chemical compound OCCS DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
- A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
- A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
- A61K31/439—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom the ring forming part of a bridged ring system, e.g. quinuclidine
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Neurosurgery (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Neurology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Psychiatry (AREA)
- Hospice & Palliative Care (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Nitrogen Condensed Heterocyclic Rings (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
- Pyridine Compounds (AREA)
Description
Oblast vynálezu
Vynález se týká použití [R-(Z)]-alfa-(methoxyimino)-alfa-(l-azabicyklo[2,2,2]okt-3-yl)acetonitrilu k podpoření zpracování amyloidního proteinového prekurzoru po ne-amyloidogenní cestě u pacientů, trpících Alzheimerovou nemocí, nebo u pacientů, u nichž je riziko rozvinutí této nemoci.
Dosavadní stav techniky
Amyloidní proteinový prekurzor (APP) představuje integrální membránový glykoprotein, který je možno zpracovat několika způsoby. Proces štěpení beta a gama sekretázami vede v konečném stadiu k uvolnění beta-amyloidního proteinu (βΑ4), který se ukládá v mozku jedinců, trpících Alzheimerovou nemocí (AD). Alternativně rozštěpení alfa-sekretáz vede k uvolnění neamyloidogenních APP-fragmentů. Podle dosavadního stavu techniky bylo zjištěno, že muskarinní agonisty karbachol, bethanechol, AF-102B a xanomelin podporují tvorbu neamyloidogenních APP-fragmentů aktivací ml a/nebo m3 receptorových podtypů (viz Mitsch a kol., 1992, Buxhaum a kol., 1992, 1994, Haringakol, 1994, Growdon 1994).
V patentu EP-A-0392803 (přihlašovatel Beecham Group p.l.c.) se uvádí určité azabicyklické sloučeniny, které podporují acetylcholinovou funkci prostřednictvím působení na muskarinní receptory v centrálním nervovém systému, včetně [R-(Z)]-a-(methoxyimino)-a-(l-azabicyklo[2,2,2]-okt-3-yl)acetonitrilu (sloučenina vzorce I), a farmaceuticky přijatelných solí, a postup přípravy, vedoucí k získání těchto sloučenin.
V mezinárodní patentové přihlášce WO-93/17018 se uvádí alternativní postupy přípravy uvedených sloučenin obecného vzorce I.
Podstata vynálezu
Podle předmětného vynálezu bylo zjištěno, že sloučenina obecného vzorce I podporuje zpracovávání amyloidního proteinového rekurzoru po ne-amyloidogenní cestě, a z tohoto důvodu je tato sloučenina potenciálně použitelná k léčení Alzheimerovy nemoci snižováním tvorby βΑ4.
Vzhledem k výše uvedenému se tedy předmětný vynález týká použití sloučeniny vzorce I, [R(Z)-alfa-(methoxyimino)-alfa-(l-azabicyklo[2,2,2]okt-3-yl)-acetonitrilu, nebo farmaceuticky přijatelné soli, odvozené od této sloučeniny, pro přípravu léčiva pro podporování zpracovávání amyloidního proteinového prekurzoru po ne-amyloidogenní cestě u pacientů, trpících Alzheimerovou nemocí, nebo u nichž je riziko rozvinutí Alzheimerovy nemoci. Vynález se dále týká použití sloučeniny obecného vzorce I nebo farmaceuticky přijatelné soli, odvozené od této sloučeniny, pro léčení nebo profylaxi Alzheimerovy nemoci snížením tvorby βΑ4.
Ve výhodném provedení podle vynálezu je uvedenou farmaceuticky přijatelnou solí monohydrochlorid.
Při použití podle vynálezu dochází k podporování zpracovávání amyloidního proteinového prekurzoru po ne-amyloidogenní cestě u pacientů, postižených Alzheimerovou nemocí, nebo u lidí s rizikem rozvinutí Alzheimerovy nemoci, přičemž se při tomto ošetřování podává pacientům účinné množství sloučeniny obecného vzorce I nebo farmaceuticky přijatelné soli, odvozené od této sloučeniny. Při léčení nebo profylaxi Alzheimerovy nemoci snižování tvorby
-1 CZ 287370 B6 βΑ4 se pacientům, trpícím Alzheimerovou nemocí, nebo lidem s rizikem vyvinutí Alzheimerovy nemoci podává účinné netoxické množství sloučeniny vzorce I nebo farmaceuticky přijatelné soli, odvozené od této sloučeniny.
Sloučenina vzorce I může tvořit adiční soli se silnými kyselinami. Do rozsahu termínu farmaceuticky přijatelná sůl náleží solváty a hydráty.
Sloučenina vzorce I je výhodně k dispozici ve formě farmaceutického prostředku, který obsahuje tuto sloučeninu vzorce I nebo farmaceuticky přijatelnou sůl, odvozenou od této sloučeniny, a farmaceuticky přijatelnou nosičovou látku.
Tento prostředek může být ve formě tablet, kapslí, prášku, granulí, pastilek, čípků, rekonstituovatelných prášků nebo kapalných přípravků, jako jsou například perorální nebo sterilní parenterální roztoky nebo suspenze.
Za účelem získání formy vhodné pro podávání je výhodné formulovat tento prostředek jako jednotkovou dávkovou formu.
Touto jednotkovou dávkovou formou, vhodnou pro perorální podávání, mohou být například tablety a kapsle, přičemž tyto formy mohou obsahovat běžně používané excipienty, jako jsou například pojivová činidla, například sirup, akácie, želatina, sorbitol, tragakant nebo polyvinylpyrrolidon, dále plniva, jako je například laktóza, cukr, kukuřičný škrob, fosforečnan vápenatý, sorbitol nebo glycin, dále tabletační maziva (neboli kluzné prostředky), jako je například stearát hořečnatý, dále dezintegrační činidla, jako je například škrob, polyvinylpyrrolidon, sodná sůl škrobového glykolátu nebo mikrokrystalická celulóza, nebo farmaceuticky přijatelná smáčecí činidla, jako je například laurylsulfát sodný.
Tyto perorální prostředky v pevné formě je možno připravit obvyklými metodami, známými a používanými podle dosavadního stavu techniky, jako je smíchávání, plnění, tabletování a podobně. Opakované promíchávání je možno použít v těchto případech, kdy je nutno distribuovat účinnou látku v celém prostředku, kdy se používá velkých množství plniva. Rovněž i tyto operace patří k běžně používaným postupům podle dosavadního stavu techniky. Tyto tablety je rovněž možno samozřejmě opatřit povlakem, přičemž při tomto postupu se opět použije metod, všeobecně známých a používaných podle dosavadního stavu techniky, zejména se to týká enterosolventních povlaků.
Perorální kapalné prostředky mohou mít formu například emulzí, sirupů nebo elixírů, nebo je možno připravit ve formě suchých produktů, které se potom před použitím rozředí vodou nebo jiným vhodným vehikulem. Tyto kapalné přípravky mohou obsahovat běžně používaná aditiva, jako je například suspendační činidla, například sorbitol, sirup, methylcelulóza, želatina, hydroxyethylcelulóza, karboxymethylcelulóza, gel na bázi stearátu hlinitého nebo hydrogenované jedlé oleje, emulgační činidla, jako je například lecithin, sorbitanmonooleát nebo akácie, dále nevodná vehikula (která mohou zahrnovat jedlé oleje), například mandlový olej, frakční destilací zpracovaný kokosový olej, estery olejů, jako je například estery glycerinu, propylenglykolu nebo ethylalkoholu, dále konzervační přísady, jako je například methylester nebo propylester kyseliny p-hydroxybenzoové nebo kyseliny sorbové, a kromě toho v případě potřeby i běžně používané aromatizační nebo barvicí prostředky.
Pro parenterálního podávání se připravuje rovněž kapalná jednotková dávková forma, přičemž se při této přípravě použije vhodná účinná sloučenina a sterilní vehikulum. Tato sloučenina může být podle použitého vehikula a požadované koncentrace buďto suspendována nebo rozpuštěna v tomto vehikulu. Při přípravě roztoků pro parenterální podávání je možno tuto účinnou sloučeninu rozpustit ve vodě pro injekce a před plněním do vhodných ampulí a zapečetěním tyto roztoky sterilizovat zfíltrováním. Ve výhodném provedení podle uvedeného vynálezu je možno v tomto vehikulu rozpustit taková činidla, jako jsou lokální anestetika, konzervační přísady
-2CZ 287370 B6 a tlumicí činidla. Ke zvýšení stability je možno tyto prostředky zmrazit po naplnění do zkumavek a vodu odstranit za sníženého tlaku. Parenterální suspenze se připraví v podstatě stejným způsobem s tím rozdílem, že se účinná sloučenina suspenduje v použitém vehikulu místo toho, aby byla rozpuštěna, přičemž sterilizaci není možno provést filtrací. Tato sloučenina se sterilizuje vystavením působení ethylenoxidu před suspendováním ve sterilním vehikulu. Ve výhodném provedení se do prostředku podle uvedeného vynálezu vpraví povrchově aktivní látka nebo smáčecí činidlo k usnadnění rovnoměrného rozdělení sloučeniny.
Prostředek podle předmětného vynálezu může obsahovat 0,1 % až 99% hmotnostních účinné látky, ve výhodném provedení 10 % až 60 % hmotnostních účinné látky, což závisí na způsobu podávání.
Vynález se kromě toho dále týká farmaceutického prostředku, který byl definován výše, který je určen k použití pro podporování zpracovávání amyloidního proteinového prekurzoru po neamyloidogenní cestě u pacientů, trpících Alzheimerovou nemocí nebo s rizikem vzniku Alzheimerovy nemoci. Do rozsahu předmětného vynálezu dále náleží farmaceutický prostředek, který byl definován výše, pro léčení a/nebo profylaxi Alzheimerovy nemoci snižováním tvorby βΑ4.
Dávka aplikované sloučeniny se mění obvyklým způsobem v závislosti na vážnosti poruchy, na hmotnosti postiženého pacienta a na relativní účinnosti použité sloučeniny. Ovšem jako obecné vodítko k určení vhodné dávky je možno uvést, že tato dávka se může pohybovat v rozmezí od 5 do 300 pg, například v rozmezí od 10 do 200 pg, přičemž toto dávkové množství se může podávat víckrát než jednou denně, například dvakrát nebo třikrát denně, tak aby se celková denní dávka pohybovala v rozmezí od asi 30 pg do asi 600 pg, a tato terapie se může provádět po řadu roků.
V případě použití výše uvedených rozmezí dávkovaných množství nebyly zaznamenány žádné nepřijatelné toxikologické účinky v případě sloučeniny vzorce I.
V dalším jsou uvedeny farmakologické testy a výsledky těchto testů, ilustrujících předmětný vynález.
Farmakologické testy
Zpracovávání amyloidního proteinového prekurzoru za použití CHO buněk
Při tomto testu byl zkoumán účinek testované sloučeniny na APP zpracovávání v případě buněk vaječníku čínského křečka (CHO buňky), transferovaných lidskými muskarinními receptory, přičemž bylo použito metody „ Western blotting“. Skvrny byly kvantifikovány za použití laserového hustoměru na skanování imunoreaktivních pásů.
Použité materiály
Použity byly CHO buňky stabilně transfekované lidskými muskarinními receptory (Bonner 1988), které byly získány od firmy N.I.M.H. (Md. USA). Tkáňové kultivační médium a reakční činidla byla získána od firmy Gibco BRL (Skotsko). Obvykle používaná laboratorní činidla byla použita od firmy Sigma Chemical Co. (Dorset). Sloučenina monochlorid [R-(Z)]-a-(methoxyimino)-a-(l-azabicyklo[2,2,2]okt-3-yl)acetonitrilu je popisována v patentu EP-A-0392803 ve formě oxalátové soli.
K provedení testu byly použity následující protilátky: 22C11 myší monoklonální protilátky (Boehringer Mannheim Sussex, Velká Británie), která rozpoznává amino-terminální epitop APP (Weidemann a kol., 1989); anti 4βΑ4 1-25 králičí polyklonální protilátka, působící proti kiysímu
-3CZ 287370 B6 βΑ4 1-25; Ab54 králičí polyklonální protilátka, působící proti karboxy-terminálnímu epitopu APP (aminokyseliny 751-770 v APP770).
Sekundárními protilátkami byly anti-králičí a anti-myší IgG (Sigma Chem. Co., Dorset, Velká Británie) po králičí nebo myší peroxidáze/anti peroxidáze (PAP) (Sigma Chem. Co., Dorset, Velká Británie). Použitým substrátem byl zvětšený chemoluminiscenční kit (ECL) (RPN 2106), (Amersham Bucks, Velká Británie) a imunoreaktivní pásy byly určovány pomocí HyperfilmECL (Amersham, Bucks, Velká Británie).
Použití metody
Buněčná kultura
CHO buňky, transfekované lidskými muskarinními receptorovými podtypy hml, hm2, hm3 a hm4, byly pěstovány do spojené formy na tkáňových kultivačních miskách (v průběhu 10 centimetrů) v α-minimálním esenciálním médiu (aMEM) s ribonukleosidy a deoxyribonukleosidy, 10% fetálním kravským sérem, penicilinem 100 jednotek/mililitr a streptomycinem 100 pg/mililitr.
Zpracování buněk testovanou sloučeninou
Buňky byly pěstovány do spojení, jak bylo uvedeno výše, načež bylo médium, obsahující sérum, odstraněno a potom následovalo promytí buněk dvakrát v 5 mililitrech média, neobsahujícího sérum. Tyto buňky byly potom ošetřeny 5 mililitry média, neobsahujícího sérum a obsahujícího vhodnou koncentraci testované sloučeniny, přičemž inkubování bylo provedeno při teplotě 37 °C po dobu tří dnů.
Kondicionované médium bylo shromážděno a umístěno na led, přičemž byly přidány inhibitory proteázy (1 mM fenylmethylsulfonylfluorid (PMSF), 5 mM ethylendiamintetraoctová kyselina (EDTA), 1 pg/mililitr leupeptinu). Tato média byla potom odstřeďována po dobu 15 minut při 3000 G a teplotě 4 °C za účelem odstranění zbytků buněk. Supematant byl odstraněn a stokrát zkoncentrován za použití 10 koncentrátorů Centricon (Amicon, Gloucestershire, Velká Británie) odstřeďováním při 3000 G po dobu 90 minut při teplotě 4 °C. Zadržený podíl byl shromážděn a uchováván ve formě alikvotních podílů při teplotě -20 °C do stavu vhodného pro elektroforézu.
Tyto buňky byly dvakrát promyty 50 mililitry média, neobsahujícího sérum, setřeny a odstřeďovány po dobu 5 minut při 3000 G a při teplotě 4 °C za účelem získání pelet z buněk. Kapalina nad usazeninou byla odstraněna a pelety z buněk byly resuspendovány v šestinásobném objemu lyzového pufru (0,1 M Tris pH 7,5 obsahující 1 % Triton XI00, 5 mM EDTA, 1 mM PMSF, 1 pg/ml leupeptinu). Lyzát byl udržován na ledu po dobu 30 minut za přerušovaného promíchávání, načež následovalo odstřeďování, prováděné po dobu 5 minut při 10 000 G a při teplotě 4 °C za účelem odstranění buněčných zbytků. Supematant byl oddělen a uchováván v alikvotních podílech při teplotě -20 °C do stavu, vhodného pro elektroforézu.
Proteinový test
Buněčný lyzát a koncentrované vzorky kultivačního média byly testovány na protein před provedením gelové elektroforézy k zajištění ekvivalentního proteinového zatížení mezi zpracováními na gelu. Proteiny byly stanoveny za pomoci Bradfordova testu na vázání barviva (Bradford, 1976) a za použití Bio-Rad barvivového reakčního koncentrátu (Herts, Velká Británie). Tento test byl proveden na mikrotitračním platu s odečtem absorbance při 590 nm a za použití snímače plata s odpovídajícím softwarem Titretek Multiskan Plus MklI k analyzování získaných výsledků. Vzhledem ktomu, že různá reakční činidla, zejména detergenty, ruší provádění tohoto Brandfordova testu, byly kalibrace prováděny ve vhodném vehikulu vzorků.
-4CZ 287370 B6
SDS-PAGE
Proteiny byly fraktionovány za použití mini-gelového systému Novex (R & D Systems Europe Ltd, Oxon, Velká Británie). Použita byla ekvivalentní množství proteinu k porovnání výsledků mezi jednotlivými zpracováními na stejném gelu. Vzorky byly zředěny ve dvojnásobném redukčním vzorku pufru, obsahujícím 0,1 M Tris o pH 6,8, 10% dodecylsulfát sodný (SDS), 0,1 % bromfenolové modři v glycerolu a 50 % β-merkaptoethanolu. Proteiny byly oddělovány na 6 % Tris-glycin-polyakrylamidovém gelu, obsahujícím SDS (Laemmli, 1970), po dobu 90 minut při 100 voltech. Použití byly rovněž proteinové standardy o známé molekulové hmotnosti (Sigma).
Analýza „Western Blot“
Po SDS-PAGE byly gely promývány po dobu 20 minut v transferovém pufru, obsahujícím 2,5 mM Tris, 19,2 mM glycinu, 20 % methanolu o pH 8,3. Proteiny byly převedeny z gelu na Immobilon P Polyvinylidendifluoridovou (PVDF) membránu (Millipore, Herts, Velká Británie) za použití Bio-rad polo-suchého systému, což bylo prováděno 2 hodiny při 0,8 mA/cm2. Po převedení byly proteiny vizualizovány na membráně vyvoláním skvrny za použití 10% roztoku Ponceau S (Sigma), což bylo prováděno po dobu 2 minut. Tyto skvrny byly odstraněny opláchnutím destilovanou vodou.
Tato membrána byla blokována pomocí slaného roztoku s fosforečnanem jako pufrem (PBS), obsahujícím 0,1 % Twen 20 a 5 % sušeného mléka ve formě prášku, což bylo prováděno po dobu přinejmenším 1 hodiny při teplotě místnosti. Potom následovalo dvakrát prováděné promytí v PBS, obsahujícím 0,1 % Tween 20 (PBST) a potom byly primární protilátky inkubovány po dobu přes noc při teplotě 4 °C. Všechny tyto protilátky byly připraveny v PBST, obsahujícím 2 % bovinního sérového albuminu (Sigma). Membrány byly promývány v PBST po dobu 1 minuty, načež následovalo promývání po dobu pěti minut, což bylo prováděno dvakrát. Sekundární protilátky, proti-myší a proti—králičí IgG (Sigma), byly přidávány při odpovídajícím zředění 1/3000 nebo 1/5000 po dobu 1 hodiny při teplotě místnosti. Membrány byly promyty stejným způsobem, jako bylo uvedeno shora, načež byla myší nebo králičí peroxidáza/antiperoxidáza (Sigma) přidávána při zředění 1/3000 po dobu 1 hodiny při teplotě místnosti. Finální promývací stupeň byl proveden pouze v PBS, načež byly membrány převedeny do čisté misky k dodání ECL substrátu (Amersham). Imunoreaktivní pásy byly stanoveny pomocí Hyperfilm-ECL (Amersham), přičemž vyvolání bylo provedeno automatickým procesorem (Kodak).
Analýzy provedené hustoměrem
Změny úrovně APP byly měřeny za použití laserového hustoměru. Imunoreaktivní APP pásy byly skanovány za použití Pharmacia LKB Ultrascan XL, napojeného na počítač se softwarem Gelscan XI ke zpracovávání dat. Laserový paprsek, který prošel vzorkem a množství transmitovaného světla bylo měřeno fotodiodou, čímž byla stanovena úroveň absorbce. Hodnoty absorbance byly integrovány, čímž byly zjištěny hodnoty, týkající se plochy pod křivkou. Výsledky pro vehikulum a pro testovanou sloučeninu jsou vyjádřeny jako střední hodnota ze experimentů ± standardní odchylka od střední hodnoty (SEM).
Testy na ligandové vazby provedené in vitro
Cerebrální kontex byl oddělen od samečků krys Hooded Lister (Olac, Velká Británie) a přemístěn do 2,5 objemu (v porovnání s hmotností za vlhka) na ledu ochlazeného 50 mM tris o pH 7,7. Tento podíl byl potom homogenizován a odstřeďován při 24 000 G po dobu 15 minut při teplotě °C. Získaná peleta byla resuspendována ve 2,5 objemu a potom byly homogenáty uchovávány v 1 mililitru alikvotních podílů při teplotě -20 °C až do doby, kdy byly použity pro další účely.
-5CZ 287370 B6
Inkubace pro stanovení [3H]-OXO-M vazeb byly připraveny v celkovém objemu 2 mililitry ledově chladného 50 mM tris, obsahujícího 2 mM chloridu hořečnatého. Tento [3H]-OXO-M acetát (New England Nuclear, specifická aktivita 87 Ci/mmol) byl přidáván až do dosažení koncentrace 1,88 nM. Kortexový homogenát měl finální koncentraci 300 objemů, vztaženo na původní vlhkou hmotnost (ekvivalent 0,145 miligramů proteinu/mililitr). Nespecifické vazby byly definovány za použití 10 mikromolámího (μΜ) seskvifumarátu oxotremorinu. Inkubace byly prováděny do rovnovážného stavu při teplotě 37 °C po dobu rozmezí od 30 do 45 minut. Vzorky byly potom zfiltrovány pomocí filtrů Watman GF/B, které byly předem podrobeny nasakování po dobu 30 minut v 0,05% vodném roztoku polyethyleniminu k zabránění absorpce [3H]-OXO-M na skleněná vlákna.
Test na [3H]-QNB (specifická aktivita 44 Ci/mmol, finální koncentrace 0,27 nM) vazby byl proveden stejným způsobem, jako bylo provedeno výše s tím rozdílem, že nebyl použit chlorid hořečnatý a zředění homogenátu bylo zvýšeno na 1500 objemů (7,8 pg proteinu/mililitr). Nespecifické vazby byly definovány za pomoci 1 pM sulfátu atropinu.
Hodnoty, týkající se vazeb v případě uvedené testované sloučeniny, jsou uvedeny v následující tabulce 5.
Výsledky
Za použití výše uvedených metod byl zjištěn účinek testované sloučeniny, monohydrochloridu sloučeniny vzorce I, na zpracovávání amyloidního proteinového prekurzoru.
Celková délka APP s molekulovou hmotností 108 kD a dvěma pásy secemovaného APP s molekulovými hmotnostmi 108 kD a 118 kD byly zjištěny ve všech transfekovaných CHO buňkách.
CHOhml
Celková délka APP v buněčné membráně byla snížena účinkem monohydrochloridu sloučeniny I v rozsahu dávky 10'6 až W4 M po 3 hodinách zpracovávání. V kultivačním médiu bylo účinkem testované sloučeniny zvýšeno množství secemovaného APP 6 až 10-ti násobně v porovnání s koncentračním rozsahem (tabulka 1).
CHOhm2
Nenastala žádná změna v celkové délce APP v buněčné membráně, ovšem secemované APP se dvakrát zvýšilo v kultivačním médiu po zpracování za pomoci 1 x 104 M monohydrochloridu sloučeniny I po 3 hodinách (tabulka 2).
CHOhm3
Celková délka APP v buněčné membráně se snížila účinkem monohydrochloridu sloučeniny I v rozsahu dávky 10’6 až 10-4 M po 3 hodinovém zpracovávání. V kultivačním médiu se účinkem testované sloučeniny zvýšilo množství secemovaného APP přibližně na 20-ti násobek v porovnání s koncentračním rozsahem (tabulka 3).
CHOhm4
Nebyla zaznamenána žádná změna, pokud se týče celkové délky APP v buněčné membráně nebo pokud se týče secemovaného APP v kultivačním médiu po zpracování za použití 1 x ÍO^M monohydrochloridu sloučeniny I po 3 hodinách (tabulka 4).
-6CZ 287370 B6
Testy na ligandové vazby
Hodnoty, týkající se ligandových vazeb (tabulka 5), ukazují, že monohydrochlorid sloučeniny I vykazuje QNB/OXO-M poměr 22, což naznačuje na vlastnosti částečného aganisty (Brown a kol. 1988).
Závěr
Účinkem monohydrochloridu sloučeniny I se dosáhne změny zpracovávání APP stimulací ml a m3 receptorových podtypů. Ze zvýšeného uvolňování secemovaného APP, což je možno zjistit zejména pomocí βΑ4 1-25 protilátký (není rozpoznáván APP rozštěpený β-sekretázou), je zcela zřetelné, že proces probíhá ne-amyloidogenní cestou.
Z výše uvedeného je patrné, že monohydrochlorid sloučeniny I má potenciální využitelnost pro léčení Alzheimerovy nemoci snižováním tvorby βΑ4 v mozku jako výsledek ne-amyloidogenního zpracovávání APP.
Odkazy:
- Bonner, T (1988), NIH patent, č. PB89-125652, patentová přihláška US Appl-7-241 791, podaná 8.9.1988.
-Brodford, M. (1976) Anal Biochem., 72, 248-254, Brown, F., Clark, M. GravesD., Hatcher, J., McArthur, R. Riley, G. aSempleJ. (1988) Drug Dev Res, 14, 343-347,
- Buxbaum, J. D., Oishi, M., Chen, Η. I., Pinkas-Kramarski, R., R. Jaffe, E.A., Gandy, E.e. a Greengard, P. (1992) Proč. Nati. Acad., Sci., 89, 10075-10078,
- Buxbaum, J.D., Fuefli, A.A., Parker,C.A., Cypress, A.M. a Greengard, P. (1994) Proč. Nati. Acad. Sci., 91, 4489-4493,
- Growdon, J.H. (1994), „Muscarinic agonists: Effects on APP processing 4th International Meeting on Alzheimer's Disease, Minneapolis, červenec 1994,
- Haring, R., Gurwith, D., Barg, J., Pinkas-Kramarski, R, Heldman, E., Pittel, Z., Wengier, A., Meshulam, H, Marciano, D., Karton, Y, a Fisher, A. (1994) Biochem. Biophys. Res. Momm. 203(1), 652-658,
-Nitsh, R.M., Slack, B.E., Wurtman, Rj. a Growdon, J.H. (1992) Science, 258. 304-307,
- Weidemann, A., Konig, G. Bunke, D. Fischer, P., Salbaum, J.M., Masters, C.L. a Beyreuther, K. (1989), Cell, 57, 115-126.
Vysvětlivky k tabulkám:
Tabulka 1 - CHOhml dávková odezvy
Výsledky představují střední hodnoty tří experimentů a jsou vyjádřeny jako změny od kontrolní APP úrovně. (1-násobné zvýšení secemovaného APP = žádná změna od základní úrovně). Použitými protilátkami byly Ab54 v buněčných lyzátech ke zjištění celkové délky APP a 22C11 ke zjištění secemovaného APP.
-7CZ 287370 B6
Tabulka 2 - CHOhm2 odezva
Použité protilátky byly stejné jako v případě tabulky 1. Výsledky představují průměrné hodnoty ze tří experimentů a jsou vyjádřeny jako změny od kontrolní úrovně APP (1-násobné zvýšení secemovaného APP = žádná změna od základní úrovně).
Tabulka 3 - CH0hm3 dávková odezva
Použitými protilátkami byly Ab54 v buněčných lyzátech ke zjištění celkové délky APP a anti βΑ4 1-25 ke zjištění secemovaného APP. Experimenty byly prováděny třikrát. Výsledky představují průměrné hodnoty ze tří experimentů a jsou vyjádřeny jako změny od kontrolní úrovně APP (1-násobné zvýšení secemovaného APP = žádná změna od základní úrovně).
Tabulka 4 - CHOhm4 odezva
Použité protilátky byly stejné jako v případě tabulky 3. Výsledky představují průměrné hodnoty ze tří experimentů a jsou vyjádřeny jako změny do kontrolní úrovně APP (1-násobné zvýšení secemovaného APP = žádná změna od základní úrovně).
Tabulka 5 - Hodnoty týkající se ligandových vazeb při použití sloučeniny vzorce I
| [3H]-OXO-M IC50 | [3H]-QNB IC50 | QNB/OXO-M | |
| Sloučenina vzorce I* | 14 | 309 | 22 |
* monohydrochlorid,
OXO-M = oxotremorin-M, agonistový ligand,
QNB = chinuklidinylbenzilat, agonistový ligand,
QNB/OXO-M poměr je vodítkem pro vyjádření funkční účinnosti uvedené sloučeniny. Poměr větší než 100 se vztahuje na plné agonisty, antagonisty mají poměry blíže jednotce a mezilehlé hodnoty znamenají částečné agonisty.
Tabulka 1
CHOhml dávková odezva
| Hustota skvrny (AUC mm2) (±SEM) | Průměrné % snížení celkové délky APP | Hustota skvrny (AUC mm2) (±SEM) | Průměrný násobek zvýšení secemovaného APP | |
| Kontrolní | ||||
| sloučenina | 23,74±6,84 | 2,29+1,21 | ||
| Sloučenina I* | ||||
| lxlO^M | 14,03 ±7,27 | 40,9 | 17,54+9,78 | 7,7 |
| 1x10'5M | 12,32±5,91 | 48,1 | 14,48+7,25 | 6,3 |
| lxl O’6 M | 16,84±7,20 | 29,1 | 24,2±11,61 | 10,6 |
* monohydrochlorid.
-8CZ 287370 B6
Tabulka 2
CHOhm2 odezva
| Hustota skvrny (AUC mm2) (±SEM) | Průměrné % snížení celkové délky APP | Hustota skvrny (AUC mm2) (+SEM) | Průměrný násobek zvýšení secemovaného APP | |
| Kontrolní sloučenina | 12,61+1,0 | 2,74+0,55 | ||
| Sloučenina I* lxlO^M | 12,04+2,56 | 4,5 | 5,75+1,60 | 2,1 |
* monohydrochlorid.
Tabulka 3
CHOhm3 dávková odezva
| Hustota skvrny (AUC mm2) (+SEM) | Průměrné % snížení celkové délky APP | Hustota skvrny (AUC mm2) (+SEM) | Průměrný násobek zvýšení secemovaného APP | |
| Kontrolní | ||||
| sloučenina | 23,06+3,78 | 0,85+0,18 | ||
| Sloučenina I* | ||||
| 1x104M | 4,95+1,14 | 78,5 | 15,81+7,87 | 18,6 |
| 1x10'5M | 5,51+1,18 | 76,1 | 15,60+2,27 | 18,4 |
| lxl O’6 M | 7,46+3,36 | 67,7 | 16,33+5,37 | 19,2 |
* monohydrochlorid.
Tabulka 4
CHOhm 4 odezva
| Hustota skvrny (AUC mm2) (+SEM) | Průměrné % snížení celkové délky APP | Hustota skvrny (AUC mm2) (+SEM) | Průměrný násobek zvýšení secemovaného APP | |
| Kontrolní sloučenina | 25,24+0,68 | 20,80+4,42 | ||
| Sloučenina I* lxlO^M | 24,62+0,94 | 2,5 | 22,59+10,28 | 1,1 |
* monohydrochlorid.
Claims (3)
- PATENTOVÉ NÁROKY1. Použití [R-(Z)]-a-(methoxyimino)-a-(l-azabicyklo[2,2,2]okt-3-yl)acetonitrilu nebo farmaceuticky přijatelné soli, odvozené od této sloučeniny, pro přípravu léčiva pro zlepšení zpracovávání amyloidního proteinového prekurzoru po ne-amyloidogenní cestě u pacientů, trpících Alzheimerovou nemocí, nebo u pacientů, u nichž je riziko rozvinutí Alzheimerovy nemoci.
- 2. Použití [R-(Z)]-a-(methoxyimino)-a-(l-azabicyklo[2,2,2]okt-3-yl)acetonitrilu nebo farmaceuticky přijatelné soli, odvozené od této sloučeniny, pro přípravu léčiva k léčení nebo profylaxi Alzheimerovy nemoci snížením tvorby βΑ4.
- 3. Použití podle některého z předcházejících nároků, kde farmaceuticky přijatelnou solí je monohydrochlorid.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| GB9421472A GB9421472D0 (en) | 1994-10-25 | 1994-10-25 | Novel methods |
| PCT/EP1995/004082 WO1996012486A1 (en) | 1994-10-25 | 1995-10-17 | Use of [r-(z)]-alpha-(methoxyimino)-alpha-(1-azabicyclo [2.2.2] oct-3-yl) acetonitrile to reduce amyloid beta a4 formation in alzheimer's disease |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CZ125197A3 CZ125197A3 (en) | 1997-07-16 |
| CZ287370B6 true CZ287370B6 (en) | 2000-11-15 |
Family
ID=10763350
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CZ19971251A CZ287370B6 (en) | 1994-10-25 | 1995-10-17 | Medicament for reducing formation of amyloidal beta A4 when suffering from Alzheimer's disease |
Country Status (21)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5891887A (cs) |
| EP (1) | EP0786998B1 (cs) |
| JP (1) | JPH10509697A (cs) |
| KR (1) | KR100393365B1 (cs) |
| CN (1) | CN1085529C (cs) |
| AT (1) | ATE214926T1 (cs) |
| AU (1) | AU698695B2 (cs) |
| BG (1) | BG101500A (cs) |
| BR (1) | BR9509433A (cs) |
| CZ (1) | CZ287370B6 (cs) |
| DE (1) | DE69526102T2 (cs) |
| DK (1) | DK0786998T3 (cs) |
| ES (1) | ES2173977T3 (cs) |
| GB (1) | GB9421472D0 (cs) |
| HU (1) | HUT77007A (cs) |
| NO (1) | NO312055B1 (cs) |
| NZ (1) | NZ295155A (cs) |
| PT (1) | PT786998E (cs) |
| SK (1) | SK50497A3 (cs) |
| WO (1) | WO1996012486A1 (cs) |
| ZA (1) | ZA958946B (cs) |
Families Citing this family (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| AU751607B2 (en) * | 1995-07-29 | 2002-08-22 | Smithkline Beecham Plc | Method of treatment of dementia |
| GB9619074D0 (en) * | 1996-09-12 | 1996-10-23 | Smithkline Beecham Plc | Composition |
| DE19641180A1 (de) * | 1996-09-24 | 1998-03-26 | Schering Ag | Verfahren zur Darstellung von APP-Sekretase Modulation und deren Verwendung als Mittel zur Behandlung der Alzheimer'schen Erkrankung |
| WO1999045924A1 (en) | 1998-03-11 | 1999-09-16 | Smithkline Beecham Plc | Composition |
| GB9815383D0 (en) * | 1998-07-15 | 1998-09-16 | Smithkline Beecham Plc | Novel method of treatment |
| US6245884B1 (en) * | 1998-10-16 | 2001-06-12 | Vivian Y. H. Hook | Secretases related to alzheimer's dementia |
| US7816149B2 (en) * | 2004-03-29 | 2010-10-19 | Applied Photonics Worldwide, Inc. | Nanobioprocessor for protein and cell therapy |
| GB0428170D0 (en) * | 2004-12-23 | 2005-01-26 | Biopartners Ltd | Mono and Combination Therapy |
Family Cites Families (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| SG48315A1 (en) * | 1989-04-13 | 1998-04-17 | Beecham Group Plc | Novel compounds |
| JPH0725786A (ja) * | 1990-05-16 | 1995-01-27 | Univ Rockefeller | アルツハイマー病を伴うアミロイドーシスの治療 |
| US5385915A (en) * | 1990-05-16 | 1995-01-31 | The Rockefeller University | Treatment of amyloidosis associated with Alzheimer disease using modulators of protein phosphorylation |
| US5242932A (en) * | 1991-12-17 | 1993-09-07 | The Rockefeller University | Treatment of amyloidosis associated with alzheimer disease |
| MX9300875A (es) * | 1992-02-20 | 1993-08-31 | Smithkline Beecham Plc | Procedimiento para la preparacion de compuestos azabiciclicos. |
| WO1994009370A1 (en) * | 1992-10-09 | 1994-04-28 | Massachusetts Institute Of Technology | Release of alzheimer amyloid precursor stimulated by activation of muscarinic acetylcholine receptors |
| GB9409705D0 (en) * | 1994-05-14 | 1994-07-06 | Smithkline Beecham Plc | Novel compounds |
-
1994
- 1994-10-25 GB GB9421472A patent/GB9421472D0/en active Pending
-
1995
- 1995-10-17 DK DK95936515T patent/DK0786998T3/da active
- 1995-10-17 CZ CZ19971251A patent/CZ287370B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1995-10-17 AT AT95936515T patent/ATE214926T1/de not_active IP Right Cessation
- 1995-10-17 HU HU9701815A patent/HUT77007A/hu unknown
- 1995-10-17 DE DE69526102T patent/DE69526102T2/de not_active Expired - Fee Related
- 1995-10-17 WO PCT/EP1995/004082 patent/WO1996012486A1/en not_active Ceased
- 1995-10-17 EP EP95936515A patent/EP0786998B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1995-10-17 US US08/836,013 patent/US5891887A/en not_active Expired - Fee Related
- 1995-10-17 BR BR9509433A patent/BR9509433A/pt not_active Application Discontinuation
- 1995-10-17 JP JP8513628A patent/JPH10509697A/ja not_active Ceased
- 1995-10-17 SK SK504-97A patent/SK50497A3/sk unknown
- 1995-10-17 ES ES95936515T patent/ES2173977T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1995-10-17 PT PT95936515T patent/PT786998E/pt unknown
- 1995-10-17 NZ NZ295155A patent/NZ295155A/en unknown
- 1995-10-17 CN CN95196837A patent/CN1085529C/zh not_active Expired - Fee Related
- 1995-10-17 AU AU38431/95A patent/AU698695B2/en not_active Ceased
- 1995-10-17 KR KR1019970702700A patent/KR100393365B1/ko not_active Expired - Fee Related
- 1995-10-23 ZA ZA958946A patent/ZA958946B/xx unknown
-
1997
- 1997-04-24 NO NO19971899A patent/NO312055B1/no not_active IP Right Cessation
- 1997-05-20 BG BG101500A patent/BG101500A/xx unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| HUT77007A (hu) | 1998-03-02 |
| EP0786998B1 (en) | 2002-03-27 |
| WO1996012486A1 (en) | 1996-05-02 |
| MX9703077A (es) | 1997-07-31 |
| BR9509433A (pt) | 1997-09-16 |
| ES2173977T3 (es) | 2002-11-01 |
| KR100393365B1 (ko) | 2003-12-18 |
| NO971899L (no) | 1997-04-24 |
| NO971899D0 (no) | 1997-04-24 |
| EP0786998A1 (en) | 1997-08-06 |
| NZ295155A (en) | 2000-07-28 |
| ZA958946B (en) | 1996-08-20 |
| BG101500A (en) | 1998-01-30 |
| SK50497A3 (en) | 1997-09-10 |
| DE69526102T2 (de) | 2002-10-31 |
| US5891887A (en) | 1999-04-06 |
| HK1002057A1 (en) | 1998-07-31 |
| DE69526102D1 (de) | 2002-05-02 |
| ATE214926T1 (de) | 2002-04-15 |
| PT786998E (pt) | 2002-09-30 |
| JPH10509697A (ja) | 1998-09-22 |
| CN1085529C (zh) | 2002-05-29 |
| CZ125197A3 (en) | 1997-07-16 |
| AU3843195A (en) | 1996-05-15 |
| NO312055B1 (no) | 2002-03-11 |
| GB9421472D0 (en) | 1994-12-07 |
| DK0786998T3 (da) | 2002-07-15 |
| CN1170365A (zh) | 1998-01-14 |
| KR970706816A (ko) | 1997-12-01 |
| AU698695B2 (en) | 1998-11-05 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Goldman et al. | Aporphine enantiomers. Interactions with D-1 and D-2 dopamine receptors. | |
| US20010006972A1 (en) | Nk-1 receptor antagonists for the treatment of symptoms of irritable bowel syndrome | |
| AU1842999A (en) | Terfenadine metabolites and their optically pure isomers for treating allergic disorders | |
| CZ125197A3 (en) | Application of £r-(z)|-alpha-(methoxyimino)-alpha-(1-azabicyclo-£2,2,2|oct-3-yl)aceto- nitrile or pharmaceutically acceptable salt derived form said compound for preparing a medicament | |
| JPH10316567A (ja) | 過敏性腸症候群の症状の治療用のｎｋ−１受容体アンタゴニスト | |
| EP2535049A1 (en) | Tadalafil for the treatment of dementia | |
| JP2009525025A (ja) | ニューロンニコチン受容体リガンドおよびその使用 | |
| CA2126678A1 (en) | Use of spiperone or spiperone derivatives as immunosuppressant agents | |
| Syvälahti et al. | Effects of antiparkinsonian drugs on muscarinic receptor binding in rat brain, heart and lung | |
| US5968936A (en) | Methods for treating or preventing Alzheimer's Disease using substituted 1-aryl-3-morpholinopropanones | |
| Syvälahti et al. | Interaction of psychotropic drugs with brain muscarinic cholinoceptors: similarities of biperiden with pirenzepine in receptor binding properties | |
| HK1002057B (en) | Use of [r-(z)]-alpha- (methoxyimino)-alpha- (1-azabicyclo [2.2.2] oct-3-yl) acetonitrile to reduce amyloid beta a4 formation in alzheimer's disease | |
| CA2203670A1 (en) | Use of ¬r-(z)|-alpha-(methoxyimino)-alpha-(1-azabicyclo ¬2.2.2| oct-3-yl) acetonitrile to reduce amyloid beta a4 formation in alzheimer's disease | |
| MXPA97003077A (en) | Use of acetonitrila [r- (z)] - alpha- (metoximino) -alfa- (1-azabiciclo [2.2.2.] oct-3-ilo) to reduce the formation of beta a4 amylide in alzhei's disease | |
| Leysen et al. | Opposite regulation of serotonin-S2 and dopamine-D2 receptors in rat brain following chronic receptor blockade | |
| EP0228416B1 (en) | Pharmaceutical compositions containing azanaphthalenes | |
| US6750227B2 (en) | Method of treatment of neuropsychiatric symptoms in patients with Alzheimer's Disease | |
| Bhattacharya et al. | Clonidine-induced automutilation in mice as a laboratory model for clinical self-injurious behaviour | |
| Somogyi et al. | In‐vitro potencies of histamine H2‐receptor antagonists on tetraethylammonium uptake in rat renal brush‐border membrane vesicles | |
| WO1997025043A1 (en) | A method of treating hypercholesterolemia and related disorders | |
| Marchetti-Gauthier et al. | Early administration of RS 67333, a specific 5-HT 4 receptor agonist, prevents amyloidogenesis and behavioral deficits in the 5XFAD mouse model of Alzheimer’s disease | |
| Karton et al. | Rachel Haring", David Gurwitz"*, Jacob Bargº", Ronit Pinkas-Kramarski", Eliahu Heldman", Zipora Pittel', Ada Wengier", Haim Meshulam", Daniele Marciano" | |
| MXPA01000466A (en) | Method of treatment | |
| AU7177100A (en) | NK-1 receptor antagonists for the treatment of symptoms of irritable bowel syndrome |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PD00 | Pending as of 2000-06-30 in czech republic | ||
| MM4A | Patent lapsed due to non-payment of fee |
Effective date: 20051017 |