CZ290331B6 - Glukosaminové disacharidy, způsob jejich přípravy a farmaceutický prostředek - Google Patents
Glukosaminové disacharidy, způsob jejich přípravy a farmaceutický prostředek Download PDFInfo
- Publication number
- CZ290331B6 CZ290331B6 CZ19961418A CZ141896A CZ290331B6 CZ 290331 B6 CZ290331 B6 CZ 290331B6 CZ 19961418 A CZ19961418 A CZ 19961418A CZ 141896 A CZ141896 A CZ 141896A CZ 290331 B6 CZ290331 B6 CZ 290331B6
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- acyl
- group
- disaccharide
- fatty acid
- hydroxy
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 12
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 7
- 230000008569 process Effects 0.000 title claims abstract description 4
- -1 Glucosamine disaccharides Chemical class 0.000 title claims description 45
- MSWZFWKMSRAUBD-UHFFFAOYSA-N beta-D-galactosamine Natural products NC1C(O)OC(CO)C(O)C1O MSWZFWKMSRAUBD-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims description 28
- 229960002442 glucosamine Drugs 0.000 title claims description 27
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 title 1
- 150000002016 disaccharides Chemical class 0.000 claims abstract description 139
- GZQKNULLWNGMCW-PWQABINMSA-N lipid A (E. coli) Chemical compound O1[C@H](CO)[C@@H](OP(O)(O)=O)[C@H](OC(=O)C[C@@H](CCCCCCCCCCC)OC(=O)CCCCCCCCCCCCC)[C@@H](NC(=O)C[C@@H](CCCCCCCCCCC)OC(=O)CCCCCCCCCCC)[C@@H]1OC[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](OC(=O)C[C@H](O)CCCCCCCCCCC)[C@@H](NC(=O)C[C@H](O)CCCCCCCCCCC)[C@@H](OP(O)(O)=O)O1 GZQKNULLWNGMCW-PWQABINMSA-N 0.000 claims abstract description 63
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 claims abstract description 57
- 229920006008 lipopolysaccharide Polymers 0.000 claims abstract description 52
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims abstract description 22
- 239000007858 starting material Substances 0.000 claims abstract description 20
- 244000005700 microbiome Species 0.000 claims abstract description 10
- 230000002519 immonomodulatory effect Effects 0.000 claims abstract description 6
- 125000002252 acyl group Chemical group 0.000 claims description 63
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 claims description 42
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 claims description 28
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 claims description 27
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 claims description 27
- 125000004423 acyloxy group Chemical group 0.000 claims description 16
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 claims description 14
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 claims description 14
- 125000003545 alkoxy group Chemical group 0.000 claims description 12
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 claims description 12
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 claims description 11
- KYQCXUMVJGMDNG-SHUUEZRQSA-N keto-3-deoxy-D-manno-octulosonic acid Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CC(=O)C(O)=O KYQCXUMVJGMDNG-SHUUEZRQSA-N 0.000 claims description 11
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 claims description 10
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 claims description 8
- 239000000306 component Substances 0.000 claims description 8
- 150000004676 glycans Polymers 0.000 claims description 7
- 125000006273 (C1-C3) alkyl group Chemical group 0.000 claims description 6
- 239000008358 core component Substances 0.000 claims description 6
- POULHZVOKOAJMA-UHFFFAOYSA-N dodecanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCC(O)=O POULHZVOKOAJMA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 6
- 150000002431 hydrogen Chemical class 0.000 claims description 5
- 125000001476 phosphono group Chemical group [H]OP(*)(=O)O[H] 0.000 claims description 5
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 5
- 125000004442 acylamino group Chemical group 0.000 claims description 4
- 125000005035 acylthio group Chemical group 0.000 claims description 4
- 150000004804 polysaccharides Polymers 0.000 claims description 4
- KYQCXUMVJGMDNG-UHFFFAOYSA-N 3-Desoxy-D-manno-octulosonsaeure Natural products OCC(O)C(O)C(O)C(O)CC(=O)C(O)=O KYQCXUMVJGMDNG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 claims description 3
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 claims description 3
- 125000005157 alkyl carboxy group Chemical group 0.000 claims description 3
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 claims description 3
- 150000001768 cations Chemical class 0.000 claims description 3
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 3
- 229940124856 vaccine component Drugs 0.000 claims description 3
- 125000003282 alkyl amino group Chemical group 0.000 claims description 2
- 125000004414 alkyl thio group Chemical group 0.000 claims description 2
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 claims description 2
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 2
- 125000005313 fatty acid group Chemical group 0.000 claims 2
- 229910001413 alkali metal ion Inorganic materials 0.000 claims 1
- IPCSVZSSVZVIGE-UHFFFAOYSA-N hexadecanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(O)=O IPCSVZSSVZVIGE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 abstract description 16
- 230000007689 endotoxicity Effects 0.000 abstract description 16
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 abstract description 7
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 abstract description 5
- 239000003513 alkali Substances 0.000 abstract description 2
- 125000003473 lipid group Chemical group 0.000 abstract 1
- 238000004321 preservation Methods 0.000 abstract 1
- ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N Triethylamine Chemical compound CCN(CC)CC ZMANZCXQSJIPKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 57
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 34
- ARRNBPCNZJXHRJ-UHFFFAOYSA-M hydron;tetrabutylazanium;phosphate Chemical compound OP(O)([O-])=O.CCCC[N+](CCCC)(CCCC)CCCC ARRNBPCNZJXHRJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 34
- MWUXSHHQAYIFBG-UHFFFAOYSA-N Nitric oxide Chemical compound O=[N] MWUXSHHQAYIFBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 26
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 26
- 239000000047 product Substances 0.000 description 25
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 23
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 22
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 21
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 21
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 19
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 18
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 description 15
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 14
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 13
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 13
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 12
- 230000017306 interleukin-6 production Effects 0.000 description 12
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 12
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 11
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 11
- 102000000852 Tumor Necrosis Factor-alpha Human genes 0.000 description 11
- XEYBRNLFEZDVAW-ARSRFYASSA-N dinoprostone Chemical compound CCCCC[C@H](O)\C=C\[C@H]1[C@H](O)CC(=O)[C@@H]1C\C=C/CCCC(O)=O XEYBRNLFEZDVAW-ARSRFYASSA-N 0.000 description 11
- 239000003643 water by type Substances 0.000 description 11
- 102000004889 Interleukin-6 Human genes 0.000 description 10
- 108090001005 Interleukin-6 Proteins 0.000 description 10
- 229960002986 dinoprostone Drugs 0.000 description 10
- XEYBRNLFEZDVAW-UHFFFAOYSA-N prostaglandin E2 Natural products CCCCCC(O)C=CC1C(O)CC(=O)C1CC=CCCCC(O)=O XEYBRNLFEZDVAW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 10
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 9
- MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N (3s)-4-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(1s)-1-carboxy-2-hydroxyethyl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)-1-oxopentan-2-yl]amino]-3-[[2-[[(2s)-2,6-diaminohexanoyl]amino]acetyl]amino]-4-oxobutanoic acid Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCCCN MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N 0.000 description 8
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 8
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 8
- 238000010306 acid treatment Methods 0.000 description 8
- 235000021317 phosphate Nutrition 0.000 description 8
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 8
- 102000000589 Interleukin-1 Human genes 0.000 description 7
- 108010002352 Interleukin-1 Proteins 0.000 description 7
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 238000004992 fast atom bombardment mass spectroscopy Methods 0.000 description 7
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N Ammonia Chemical compound N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 6
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 6
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 6
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 6
- 230000002346 endotoxic effect Effects 0.000 description 6
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 6
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 6
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 6
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 6
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 6
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 6
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 6
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 6
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 6
- IOVCWXUNBOPUCH-UHFFFAOYSA-M Nitrite anion Chemical compound [O-]N=O IOVCWXUNBOPUCH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 5
- 229960000583 acetic acid Drugs 0.000 description 5
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 5
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 5
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 5
- 230000001143 conditioned effect Effects 0.000 description 5
- 150000002190 fatty acyls Chemical group 0.000 description 5
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 5
- 238000004817 gas chromatography Methods 0.000 description 5
- 235000011007 phosphoric acid Nutrition 0.000 description 5
- 239000012465 retentate Substances 0.000 description 5
- 238000004007 reversed phase HPLC Methods 0.000 description 5
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 5
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 5
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 4
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 4
- 206010051676 Metastases to peritoneum Diseases 0.000 description 4
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 4
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 4
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 4
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 4
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 4
- 238000002330 electrospray ionisation mass spectrometry Methods 0.000 description 4
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 4
- 239000012362 glacial acetic acid Substances 0.000 description 4
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 4
- 208000010918 peritoneal neoplasm Diseases 0.000 description 4
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 4
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 4
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 4
- 125000006527 (C1-C5) alkyl group Chemical group 0.000 description 3
- MSWZFWKMSRAUBD-IVMDWMLBSA-N 2-amino-2-deoxy-D-glucopyranose Chemical compound N[C@H]1C(O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O MSWZFWKMSRAUBD-IVMDWMLBSA-N 0.000 description 3
- 239000002028 Biomass Substances 0.000 description 3
- YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N Dichloromethane Chemical compound ClCCl YMWUJEATGCHHMB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 3
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 3
- DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N Propylene glycol Chemical compound CC(O)CO DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 3
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 3
- 238000005903 acid hydrolysis reaction Methods 0.000 description 3
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 3
- 229910021529 ammonia Inorganic materials 0.000 description 3
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 3
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 3
- 230000007893 endotoxin activity Effects 0.000 description 3
- 108010072542 endotoxin binding proteins Proteins 0.000 description 3
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 3
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 3
- 238000013467 fragmentation Methods 0.000 description 3
- 238000006062 fragmentation reaction Methods 0.000 description 3
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 3
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 3
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 3
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 3
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 3
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 3
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 3
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 3
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 3
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 3
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 3
- 238000002953 preparative HPLC Methods 0.000 description 3
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 3
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 3
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 3
- 238000004366 reverse phase liquid chromatography Methods 0.000 description 3
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 3
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 3
- 239000000377 silicon dioxide Substances 0.000 description 3
- 159000000000 sodium salts Chemical group 0.000 description 3
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 3
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 3
- 229910052717 sulfur Inorganic materials 0.000 description 3
- 230000006433 tumor necrosis factor production Effects 0.000 description 3
- HLDJGHAAKRKPAV-QDORLFPLSA-N 2,3,2',3'-tetrakis(3-hydroxytetradecanoyl)-alpha-D-glucosaminyl-1,6-beta-D-glucosamine 1-phosphate Chemical class O1[C@H](CO)[C@@H](O)[C@H](OC(=O)C[C@H](O)CCCCCCCCCCC)[C@@H](NC(=O)C[C@H](O)CCCCCCCCCCC)[C@@H]1OC[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](OC(=O)C[C@H](O)CCCCCCCCCCC)[C@@H](NC(=O)C[C@H](O)CCCCCCCCCCC)[C@@H](OP(O)(O)=O)O1 HLDJGHAAKRKPAV-QDORLFPLSA-N 0.000 description 2
- FYSSBMZUBSBFJL-UHFFFAOYSA-N 3-hydroxydecanoic acid Chemical group CCCCCCCC(O)CC(O)=O FYSSBMZUBSBFJL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XKRFYHLGVUSROY-UHFFFAOYSA-N Argon Chemical compound [Ar] XKRFYHLGVUSROY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 2
- 201000009030 Carcinoma Diseases 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 2
- 241000606768 Haemophilus influenzae Species 0.000 description 2
- 102000015696 Interleukins Human genes 0.000 description 2
- 108010063738 Interleukins Proteins 0.000 description 2
- 238000011050 LAL assay Methods 0.000 description 2
- 241000239218 Limulus Species 0.000 description 2
- 102000007651 Macrophage Colony-Stimulating Factor Human genes 0.000 description 2
- 108010046938 Macrophage Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 description 2
- OFOBLEOULBTSOW-UHFFFAOYSA-N Malonic acid Chemical compound OC(=O)CC(O)=O OFOBLEOULBTSOW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- PVNIIMVLHYAWGP-UHFFFAOYSA-N Niacin Chemical compound OC(=O)C1=CC=CN=C1 PVNIIMVLHYAWGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- WQDUMFSSJAZKTM-UHFFFAOYSA-N Sodium methoxide Chemical compound [Na+].[O-]C WQDUMFSSJAZKTM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N Sulfur Chemical compound [S] NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000007059 acute toxicity Effects 0.000 description 2
- 231100000403 acute toxicity Toxicity 0.000 description 2
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 description 2
- 230000000840 anti-viral effect Effects 0.000 description 2
- 239000008346 aqueous phase Substances 0.000 description 2
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical group [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000002585 base Substances 0.000 description 2
- 238000004166 bioassay Methods 0.000 description 2
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 2
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 2
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 2
- 125000004093 cyano group Chemical group *C#N 0.000 description 2
- 230000001085 cytostatic effect Effects 0.000 description 2
- 230000020176 deacylation Effects 0.000 description 2
- 238000005947 deacylation reaction Methods 0.000 description 2
- 230000034994 death Effects 0.000 description 2
- 231100000517 death Toxicity 0.000 description 2
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 2
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 2
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 2
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 2
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 2
- 210000000224 granular leucocyte Anatomy 0.000 description 2
- 229940047650 haemophilus influenzae Drugs 0.000 description 2
- 229910052736 halogen Inorganic materials 0.000 description 2
- 150000002367 halogens Chemical class 0.000 description 2
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 2
- 125000005842 heteroatom Chemical group 0.000 description 2
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 2
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 2
- 239000007928 intraperitoneal injection Substances 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 206010061289 metastatic neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 description 2
- 125000000449 nitro group Chemical group [O-][N+](*)=O 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N nitrogen Substances N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 2
- QJGQUHMNIGDVPM-UHFFFAOYSA-N nitrogen group Chemical group [N] QJGQUHMNIGDVPM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000012457 nonaqueous media Substances 0.000 description 2
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 2
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000001301 oxygen Chemical group 0.000 description 2
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 2
- QKFJKGMPGYROCL-UHFFFAOYSA-N phenyl isothiocyanate Chemical compound S=C=NC1=CC=CC=C1 QKFJKGMPGYROCL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 150000003013 phosphoric acid derivatives Chemical class 0.000 description 2
- BWHMMNNQKKPAPP-UHFFFAOYSA-L potassium carbonate Chemical compound [K+].[K+].[O-]C([O-])=O BWHMMNNQKKPAPP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 239000012048 reactive intermediate Substances 0.000 description 2
- 230000004044 response Effects 0.000 description 2
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 2
- 238000013207 serial dilution Methods 0.000 description 2
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 description 2
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 description 2
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 2
- 239000011593 sulfur Substances 0.000 description 2
- 125000003396 thiol group Chemical group [H]S* 0.000 description 2
- XMAGGKXFUYTRAI-ZBRNBAAYSA-N (2s)-2-amino-3-hydroxypropanoic acid;(2s)-2-amino-4-methylsulfanylbutanoic acid Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O.CSCC[C@H](N)C(O)=O XMAGGKXFUYTRAI-ZBRNBAAYSA-N 0.000 description 1
- NTWSFIZTCGNOPV-NYWHIHTDSA-N (2s)-2-amino-3-methylbutanoic acid;(2s)-2-aminopropanoic acid;(2s)-2,4-diamino-4-oxobutanoic acid Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O.CC(C)[C@H](N)C(O)=O.OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O NTWSFIZTCGNOPV-NYWHIHTDSA-N 0.000 description 1
- KJBQDYDTQCIAFO-ZLELNMGESA-N (2s)-2-amino-4-methylpentanoic acid;(2s)-2,6-diaminohexanoic acid Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O.NCCCC[C@H](N)C(O)=O KJBQDYDTQCIAFO-ZLELNMGESA-N 0.000 description 1
- IKRFTYQBIVDIMM-XMMPIXPASA-N (3r)-3-dodecanoyloxytetradecanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCC[C@H](CC(O)=O)OC(=O)CCCCCCCCCCC IKRFTYQBIVDIMM-XMMPIXPASA-N 0.000 description 1
- GMVPRGQOIOIIMI-UHFFFAOYSA-N (8R,11R,12R,13E,15S)-11,15-Dihydroxy-9-oxo-13-prostenoic acid Natural products CCCCCC(O)C=CC1C(O)CC(=O)C1CCCCCCC(O)=O GMVPRGQOIOIIMI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000006686 (C1-C24) alkyl group Chemical group 0.000 description 1
- TYMLOMAKGOJONV-UHFFFAOYSA-N 4-nitroaniline Chemical compound NC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 TYMLOMAKGOJONV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O Ammonium Chemical compound [NH4+] QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 1
- 239000004251 Ammonium lactate Substances 0.000 description 1
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 1
- 206010003445 Ascites Diseases 0.000 description 1
- 238000011603 BDIX rat Methods 0.000 description 1
- 208000035143 Bacterial infection Diseases 0.000 description 1
- 208000006386 Bone Resorption Diseases 0.000 description 1
- 241000589875 Campylobacter jejuni Species 0.000 description 1
- HXXFSFRBOHSIMQ-GASJEMHNSA-N D-glucopyranose 1-phosphate Chemical compound OC[C@H]1OC(OP(O)(O)=O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O HXXFSFRBOHSIMQ-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 230000005526 G1 to G0 transition Effects 0.000 description 1
- 206010059766 Haemorrhagic ascites Diseases 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 1
- 229930010555 Inosine Natural products 0.000 description 1
- UGQMRVRMYYASKQ-KQYNXXCUSA-N Inosine Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1N1C2=NC=NC(O)=C2N=C1 UGQMRVRMYYASKQ-KQYNXXCUSA-N 0.000 description 1
- 102100020881 Interleukin-1 alpha Human genes 0.000 description 1
- 108010082786 Interleukin-1alpha Proteins 0.000 description 1
- 241000239220 Limulus polyphemus Species 0.000 description 1
- 206010027476 Metastases Diseases 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 1
- 238000011785 NMRI mouse Methods 0.000 description 1
- 229910002651 NO3 Inorganic materials 0.000 description 1
- 206010028851 Necrosis Diseases 0.000 description 1
- 241000588650 Neisseria meningitidis Species 0.000 description 1
- 241000080590 Niso Species 0.000 description 1
- NHNBFGGVMKEFGY-UHFFFAOYSA-N Nitrate Chemical compound [O-][N+]([O-])=O NHNBFGGVMKEFGY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 1
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 1
- OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N Phosphorus Chemical compound [P] OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- 108010029485 Protein Isoforms Proteins 0.000 description 1
- 102000001708 Protein Isoforms Human genes 0.000 description 1
- 241000589517 Pseudomonas aeruginosa Species 0.000 description 1
- 206010037660 Pyrexia Diseases 0.000 description 1
- 239000012564 Q sepharose fast flow resin Substances 0.000 description 1
- 102100037486 Reverse transcriptase/ribonuclease H Human genes 0.000 description 1
- 239000008156 Ringer's lactate solution Substances 0.000 description 1
- 241001134684 Rubrivivax gelatinosus Species 0.000 description 1
- 241001222774 Salmonella enterica subsp. enterica serovar Minnesota Species 0.000 description 1
- 206010039491 Sarcoma Diseases 0.000 description 1
- 206010040047 Sepsis Diseases 0.000 description 1
- 206010040070 Septic Shock Diseases 0.000 description 1
- FKNQFGJONOIPTF-UHFFFAOYSA-N Sodium cation Chemical compound [Na+] FKNQFGJONOIPTF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000006044 T cell activation Effects 0.000 description 1
- 206010044248 Toxic shock syndrome Diseases 0.000 description 1
- 231100000650 Toxic shock syndrome Toxicity 0.000 description 1
- JDLWLEKXVFJDRZ-URZIEALYSA-N [(3r)-3-dodecanoyloxytetradecanoyl] (3r)-3-dodecanoyloxytetradecanoate Chemical compound CCCCCCCCCCCC(=O)O[C@H](CCCCCCCCCCC)CC(=O)OC(=O)C[C@@H](CCCCCCCCCCC)OC(=O)CCCCCCCCCCC JDLWLEKXVFJDRZ-URZIEALYSA-N 0.000 description 1
- PBCJIPOGFJYBJE-UHFFFAOYSA-N acetonitrile;hydrate Chemical compound O.CC#N PBCJIPOGFJYBJE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 238000005273 aeration Methods 0.000 description 1
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 description 1
- 125000005256 alkoxyacyl group Chemical group 0.000 description 1
- 150000003973 alkyl amines Chemical class 0.000 description 1
- 229960000711 alprostadil Drugs 0.000 description 1
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 description 1
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 1
- 229940059265 ammonium lactate Drugs 0.000 description 1
- 235000019286 ammonium lactate Nutrition 0.000 description 1
- 230000001093 anti-cancer Effects 0.000 description 1
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 1
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 1
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 1
- 239000007900 aqueous suspension Substances 0.000 description 1
- YZXBAPSDXZZRGB-DOFZRALJSA-N arachidonic acid Chemical class CCCCC\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/CCCC(O)=O YZXBAPSDXZZRGB-DOFZRALJSA-N 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052786 argon Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000012300 argon atmosphere Substances 0.000 description 1
- 125000004429 atom Chemical group 0.000 description 1
- 238000011888 autopsy Methods 0.000 description 1
- RZOBLYBZQXQGFY-HSHFZTNMSA-N azanium;(2r)-2-hydroxypropanoate Chemical compound [NH4+].C[C@@H](O)C([O-])=O RZOBLYBZQXQGFY-HSHFZTNMSA-N 0.000 description 1
- 208000022362 bacterial infectious disease Diseases 0.000 description 1
- MSWZFWKMSRAUBD-QZABAPFNSA-N beta-D-glucosamine Chemical class N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O MSWZFWKMSRAUBD-QZABAPFNSA-N 0.000 description 1
- UOXZUYOOTJSKKW-GQJDJNEMSA-N betaD-GlcN4P-(1->6)-alpha-D-GlcN1P Chemical compound O1[C@H](OP(O)(O)=O)[C@H](N)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1CO[C@H]1[C@H](N)[C@@H](O)[C@H](OP(O)(O)=O)[C@@H](CO)O1 UOXZUYOOTJSKKW-GQJDJNEMSA-N 0.000 description 1
- 239000012496 blank sample Substances 0.000 description 1
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 1
- 230000024279 bone resorption Effects 0.000 description 1
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 1
- XQPRBTXUXXVTKB-UHFFFAOYSA-M caesium iodide Chemical compound [I-].[Cs+] XQPRBTXUXXVTKB-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 1
- 238000001460 carbon-13 nuclear magnetic resonance spectrum Methods 0.000 description 1
- 150000004649 carbonic acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 150000007942 carboxylates Chemical class 0.000 description 1
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 1
- 150000001793 charged compounds Chemical class 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 1
- 238000005345 coagulation Methods 0.000 description 1
- 230000015271 coagulation Effects 0.000 description 1
- 239000000356 contaminant Substances 0.000 description 1
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 1
- 230000001461 cytolytic effect Effects 0.000 description 1
- 239000000824 cytostatic agent Substances 0.000 description 1
- 210000001151 cytotoxic T lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 1
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 1
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 238000000354 decomposition reaction Methods 0.000 description 1
- 238000001212 derivatisation Methods 0.000 description 1
- 238000010612 desalination reaction Methods 0.000 description 1
- 125000001142 dicarboxylic acid group Chemical group 0.000 description 1
- HPNMFZURTQLUMO-UHFFFAOYSA-N diethylamine Chemical compound CCNCC HPNMFZURTQLUMO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-M dihydrogenphosphate Chemical compound OP(O)([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000012470 diluted sample Substances 0.000 description 1
- 238000007865 diluting Methods 0.000 description 1
- 239000000539 dimer Substances 0.000 description 1
- AIUDWMLXCFRVDR-UHFFFAOYSA-N dimethyl 2-(3-ethyl-3-methylpentyl)propanedioate Chemical compound CCC(C)(CC)CCC(C(=O)OC)C(=O)OC AIUDWMLXCFRVDR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XPPKVPWEQAFLFU-UHFFFAOYSA-N diphosphoric acid Chemical group OP(O)(=O)OP(O)(O)=O XPPKVPWEQAFLFU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L disodium hydrogen phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].OP([O-])([O-])=O BNIILDVGGAEEIG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000002270 dispersing agent Substances 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- VFNGKCDDZUSWLR-UHFFFAOYSA-N disulfuric acid Chemical group OS(=O)(=O)OS(O)(=O)=O VFNGKCDDZUSWLR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 1
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- 231100000284 endotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 235000019387 fatty acid methyl ester Nutrition 0.000 description 1
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 1
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 1
- 238000001030 gas--liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 150000002301 glucosamine derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 150000002302 glucosamines Chemical class 0.000 description 1
- 230000009036 growth inhibition Effects 0.000 description 1
- 229940093915 gynecological organic acid Drugs 0.000 description 1
- BTIJJDXEELBZFS-QDUVMHSLSA-K hemin Chemical compound CC1=C(CCC(O)=O)C(C=C2C(CCC(O)=O)=C(C)\C(N2[Fe](Cl)N23)=C\4)=N\C1=C/C2=C(C)C(C=C)=C3\C=C/1C(C)=C(C=C)C/4=N\1 BTIJJDXEELBZFS-QDUVMHSLSA-K 0.000 description 1
- 229940025294 hemin Drugs 0.000 description 1
- 210000001624 hip Anatomy 0.000 description 1
- BHEPBYXIRTUNPN-UHFFFAOYSA-N hydridophosphorus(.) (triplet) Chemical group [PH] BHEPBYXIRTUNPN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000004679 hydroxides Chemical class 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 1
- 230000003308 immunostimulating effect Effects 0.000 description 1
- 238000009169 immunotherapy Methods 0.000 description 1
- 238000000099 in vitro assay Methods 0.000 description 1
- 230000005917 in vivo anti-tumor Effects 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 description 1
- 229960003786 inosine Drugs 0.000 description 1
- 238000010255 intramuscular injection Methods 0.000 description 1
- 239000007927 intramuscular injection Substances 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 1
- 230000009545 invasion Effects 0.000 description 1
- 231100001231 less toxic Toxicity 0.000 description 1
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 1
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 235000013372 meat Nutrition 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 description 1
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 1
- 230000009401 metastasis Effects 0.000 description 1
- 150000004702 methyl esters Chemical class 0.000 description 1
- 230000011987 methylation Effects 0.000 description 1
- 238000007069 methylation reaction Methods 0.000 description 1
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 1
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 1
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 1
- 235000010755 mineral Nutrition 0.000 description 1
- 239000011707 mineral Substances 0.000 description 1
- 150000007522 mineralic acids Chemical class 0.000 description 1
- 229910000402 monopotassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019796 monopotassium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- WZRRZVUZWWMSKH-UHFFFAOYSA-N n'-naphthalen-1-ylethane-1,2-diamine;hydrochloride Chemical compound Cl.C1=CC=C2C(NCCN)=CC=CC2=C1 WZRRZVUZWWMSKH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- LWGJTAZLEJHCPA-UHFFFAOYSA-N n-(2-chloroethyl)-n-nitrosomorpholine-4-carboxamide Chemical compound ClCCN(N=O)C(=O)N1CCOCC1 LWGJTAZLEJHCPA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000017074 necrotic cell death Effects 0.000 description 1
- 229930027945 nicotinamide-adenine dinucleotide Natural products 0.000 description 1
- BOPGDPNILDQYTO-NNYOXOHSSA-N nicotinamide-adenine dinucleotide Chemical compound C1=CCC(C(=O)N)=CN1[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OC[C@@H]2[C@H]([C@@H](O)[C@@H](O2)N2C3=NC=NC(N)=C3N=C2)O)O1 BOPGDPNILDQYTO-NNYOXOHSSA-N 0.000 description 1
- 235000001968 nicotinic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229960003512 nicotinic acid Drugs 0.000 description 1
- 239000011664 nicotinic acid Substances 0.000 description 1
- 125000002801 octanoyl group Chemical group C(CCCCCCC)(=O)* 0.000 description 1
- 235000008390 olive oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000004006 olive oil Substances 0.000 description 1
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 description 1
- 235000005985 organic acids Nutrition 0.000 description 1
- 210000002997 osteoclast Anatomy 0.000 description 1
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 1
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 1
- 125000004043 oxo group Chemical group O=* 0.000 description 1
- 125000005254 oxyacyl group Chemical group 0.000 description 1
- 125000004430 oxygen atom Chemical group O* 0.000 description 1
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 1
- 210000003200 peritoneal cavity Anatomy 0.000 description 1
- 210000003024 peritoneal macrophage Anatomy 0.000 description 1
- 239000012466 permeate Substances 0.000 description 1
- 229940117953 phenylisothiocyanate Drugs 0.000 description 1
- 125000002467 phosphate group Chemical group [H]OP(=O)(O[H])O[*] 0.000 description 1
- PJNZPQUBCPKICU-UHFFFAOYSA-N phosphoric acid;potassium Chemical compound [K].OP(O)(O)=O PJNZPQUBCPKICU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052698 phosphorus Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011574 phosphorus Substances 0.000 description 1
- 238000013379 physicochemical characterization Methods 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 229910000027 potassium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 description 1
- GMVPRGQOIOIIMI-DWKJAMRDSA-N prostaglandin E1 Chemical compound CCCCC[C@H](O)\C=C\[C@H]1[C@H](O)CC(=O)[C@@H]1CCCCCCC(O)=O GMVPRGQOIOIIMI-DWKJAMRDSA-N 0.000 description 1
- 150000003180 prostaglandins Chemical class 0.000 description 1
- 238000001243 protein synthesis Methods 0.000 description 1
- 238000000425 proton nuclear magnetic resonance spectrum Methods 0.000 description 1
- 230000007420 reactivation Effects 0.000 description 1
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 238000012552 review Methods 0.000 description 1
- 238000011894 semi-preparative HPLC Methods 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 1
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910001415 sodium ion Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 1
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 1
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 description 1
- FDDDEECHVMSUSB-UHFFFAOYSA-N sulfanilamide Chemical compound NC1=CC=C(S(N)(=O)=O)C=C1 FDDDEECHVMSUSB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L sulfate group Chemical class S(=O)(=O)([O-])[O-] QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 125000000020 sulfo group Chemical class O=S(=O)([*])O[H] 0.000 description 1
- 125000004434 sulfur atom Chemical group 0.000 description 1
- 230000020382 suppression by virus of host antigen processing and presentation of peptide antigen via MHC class I Effects 0.000 description 1
- 239000012730 sustained-release form Substances 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- JZRWCGZRTZMZEH-UHFFFAOYSA-N thiamine Chemical compound CC1=C(CCO)SC=[N+]1CC1=CN=C(C)N=C1N JZRWCGZRTZMZEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000002303 tibia Anatomy 0.000 description 1
- 230000014616 translation Effects 0.000 description 1
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000007306 turnover Effects 0.000 description 1
- 210000000689 upper leg Anatomy 0.000 description 1
- 235000015112 vegetable and seed oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000008158 vegetable oil Substances 0.000 description 1
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- 239000000080 wetting agent Substances 0.000 description 1
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
- C07H13/00—Compounds containing saccharide radicals esterified by carbonic acid or derivatives thereof, or by organic acids, e.g. phosphonic acids
- C07H13/02—Compounds containing saccharide radicals esterified by carbonic acid or derivatives thereof, or by organic acids, e.g. phosphonic acids by carboxylic acids
- C07H13/04—Compounds containing saccharide radicals esterified by carbonic acid or derivatives thereof, or by organic acids, e.g. phosphonic acids by carboxylic acids having the esterifying carboxyl radicals attached to acyclic carbon atoms
- C07H13/06—Fatty acids
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/04—Immunostimulants
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
- C07H15/00—Compounds containing hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals directly attached to hetero atoms of saccharide radicals
- C07H15/02—Acyclic radicals, not substituted by cyclic structures
- C07H15/04—Acyclic radicals, not substituted by cyclic structures attached to an oxygen atom of the saccharide radical
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Immunology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Crystallography & Structural Chemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Abstract
Disacharidy obecn ho vzorce I. Zp sob p° pravy spo v v tom, e se i) p°iprav v²choz materi l, obsahuj c skupinu lipidu A lipopolysacharid-obsahuj c ho mikroorganismu; a ii) v²choz materi l se podrob alkalick mu zpracov n p°i pH 10 a 14 tak, e skupina lipidu A je O-deacylov na v poloze 3 a poloze 3'. Slou eniny vykazuj kombinaci ni endotoxicity a zachov n biologick aktivity jako je imunomodulace a vykazuj protin dorovou aktivitu.\
Description
Oblast techniky
Předložený vynález se týká glukosaminových disacharidů, zejména 2-N- a/nebo 2'-N-acylovaných glukosaminových disacharidů, kde je alespoň jedna z acylových skupin rozvětvena a sloučenin, obsahujících tyto disacharidy. Předložený vynález se dále týká způsobů přípravy těchto disacharidů z výchozích materiálů, obsahujících lipid A skupinu lipopolysacharidů, kdy se výchozí materiál podrobí specifickému alkalickému zpracování. Vynález se týká také farmaceutických prostředků, obsahujících tyto disacharidy jako účinnou látku a konečně použití těchto disacharidů v terapii a profylaxi.
Dosavadní stav techniky
Lipopolysacharidy tvoří endotoxiny mikroorganismů jako jsou gramnegativní bakterie a zahrnují polysacharidovou složku a lipidovou složku. Tato lipidová složka, nazývaná také lipid A, určuje endotoxické vlastnosti lipopolysacharidů (Rietshcel E.Th. a spol. v Immunobiology, Vol. 186, str. 169-190 (1993)).
V US-A-4 912 094 byly modifikované lipopolysacharidy popsány jako vykazující redukované endotoxické vlastnosti při zachování svých antigenních a imunostimulačních vlastností. Tyto modifikované lipopolysacharidy jsou 3-O-deacylovány a mohou být převedeny na 3-O-deacylované disacharidy kyselou hydrolýzou. Z těchto sloučenin je monofosfoiyl-3-O-deacylovaný disacharid méně toxický než difosforyl-3-O-deacylovaný disacharid.
Předložený vynález se týká disacharidů, které jsou 3-O-deacylovány a 3'-O-deacylovány nebo obsahují v 3-O-poloze a/nebo 3'-O-poloze krátkou O-připojenou alkylovou nebo acylovou skupinu a obsahují alespoň N-připojenou, rozvětvenou acylovou skupinu v poloze 2, poloze 2' nebo v obou těchto polohách 2 a 2'. Tyto sloučeniny ještě vykazují nižší endotoxicitu při zachování biologické aktivity (jako je imunomodulace) a vykazují protirakovinovou aktivitu.
Je překvapující, že tyto specifické glukosaminové disacharidy vykazují kombinaci nižší endotoxicity a zachování biologické aktivity, protože syntetické 3-0- a 3'-O-deacylované glukosamin-disacharidy, obsahující N-připojenou acylovou skupinu v poloze 2 a 2' (sloučenina 307, Takada H. a spol. v CRC Critical Reviews in Microbiology, vol.16, str. 477-523 (1989); a sloučenina LA-19-PP, Rietchel a spol. (1993)) vykazují určité imunobiologické aktivity v in vitro eseji, tyto aktivity byly mnohem slabší než aktivity referenčních bakteriálních lipid A vzorků. Tyto také postrádají typické endotoxické aktivity.
-1 CZ 290331 B6
Podstata vynálezu
V souladu stím se předložený vynález týká β(1—>6) glukosaminových disacharidů obecného vzorce I
CH2
kde
Ri je hydroxylová skupina, dihydroxyfosfonoyloxyskupina nebo její forma, nesoucí náboj, (Ci-C5) acyloxyskupina;
(C1-C5) alkyloxyskupina nebo skupina X;
R2 a R2’ jsou (Ci—C24) acylová skupina nebo skupina Y s tou podmínkou, že alespoň jeden z R2 a R2, je skupina Y;
R3 a Ryj sou vodík, (C1-C3) alkylová skupina, nebo (C1-C3) acylová skupina;
R4 je vodík, (C1-C3) alkylová skupina, nebo (C1-C3) acylová skupina;
R4· je vodík, (C1-C5) acylová skupina, (C1-C5) alkylová skupina, dimethoxyfosfonoylskupina, nebo fosfonoskupina nebo její forma, nesoucí náboj a
Rů-je vodík, hydroxylová skupina, dihydroxyfosfonoyloxyskupina, hydroxysulfonyloxyskupina, její formy, nesoucí náboj, nebo skupina Z;
-2CZ 290331 B6 přičemž skupina X je vybrána ze skupiny, zahrnující karboxy (Ci-C5) alkyloxyskupinu;
-O-CH-[(CH2)mCOOH] [(CH2)mCOOH] skupinu, přičemž m = 0 až 4 a n = 0 až 5, fosfono (Ci-C5) alkylskupinu, dimethoxyfosfonoyloxyskupinu, hydroxysulfonyloxyskupinu, hydroxysulfonyl (Ci—C5) alkylskupinu a nesoucí náboj skupiny X;
přičemž skupina Y je vybrána ze skupiny, zahrnující (Ci-C24) acyloxy (C]-C24) acylskupinu, (Cj—C24) acylamino (Cj-C24) acylskupinu, (Ci-C24) acylthio (Ci-C24) acylskupinu, (Cj—C24) alkyloxy (Ci-C24) acylskupinu, (C]-C24) alkylamino (C]-C24) acylskupinu, (C]-C24) alkylthio (Ci-C24) acylskupinu a přičemž je skupina Z vybrána ze skupiny, zahrnující (Ci-C24) alkyloxyskupinu, (Cj—C24) acyloxyskupinu,
3-deoxy-D-manno-2-oktuIosonovou kyselinu (KDO);
(KDO)„, kde η = 1 až 10, polysacharidový postranní řetězec, jako je postranní řetězec pocházející z přírodního lipopolysacharidu; jádrovou složku jako je složka pocházející z přírodního lipopolysacharidu; a amino-JCi-Cg) alkylkarboxylovou skupinu;
a jejich soli.
Tyto glukosaminové disacharidy vykazují mnohem nižší endotoxicitu, stanovenou v limulus amoebocyte lyzátovém (LAL) testu, než lipopolysacharidy (LPS) například z E. coli, lipid A a modifikovaný lipid A podle US-A-4 912 094. Dále tyto glukosaminové disacharidy podle vynálezu indukují meziprodukty reagující s oxidem dusnatým a cytokiny jako je interleukin
1-alfa (IL 1-alfa), IL-6, faktor nádorové nekrózy (TNF) a prostaglandin (PGE).
Dále tyto disacharidy vykazují protinádorovou aktivitu, například v peritoneální karcinomatóze.
Konečně akutní toxicita těchto disacharidů je extrémně nízká. Nebyla zaznamenána žádná úmrtí u Swiss myši po intravenózní dávce 100 mg disacharidů na kg tělesné hmotnosti.
Předložený vynález se také týká způsobu přípravy těchto glukosaminových disacharidů za použití výchozího materiálu biologického původu, tj., jakéhokoliv výchozího materiálu, obsahujícího lipid A skupinu polysacharidů z mikroorganismů jako jsou gramnegativní bakterie. Podle vynálezu se tento výchozí materiál podrobí alespoň alkalickému zpracování tak, že se odstraní cukrové O-připojené acylové a/nebo O-připojené oxyacylové skupiny. Je-li to žádoucí může být alkalicky zpracovaný výchozí materiál podroben dalším zpracováním pro odstranění poly
-3CZ 290331 B6 sacharidů a jádrové složky (kyselým zpracováním) a pro změnu nebo výměnu substituentů v 1-poloze, 2-poloze, 3-poloze, 4-poloze, 2'-poloze, 3'-poloze, 4'-poloze 6'-poloze.
Nicméně glukosaminové disacharidy podle vynálezu mohou být také získány syntézou, vycházející ze zodpovídajících glukosaminových disacharidů a zavedením příslušných substituentů do polohy 2 a/nebo 2'.
Díky extrémně nízké indotoxicitě v kombinaci s výše popsanou biologickou aktivitou tvoří tyto disacharidy podle vynálezu elitní aktivní složku farmaceutického přípravku. Taková farmaceutická kompozice a disacharidy per se mohou být použity jako imunomodulační činidla, protinádorové činidlo a jako složka vakcíny.
Glukosaminové disacharidy podle vynálezu (β(1 ->6) D-glukosaminový dimer) se vyznačují tím, že každý glukosamin obsahuje v poloze 3 a 3' hydroxylovou skupinu nebo krátkou O-připojenou alkylovou nebo acylovou skupinu v podstatě neměnící endotoxicitu a/nebo biologickou aktivitu a dále alespoň jednu N-připojenou, rozvětvenou acylovou skupinu v poloze 2 nebo 2' nebo v obou polohách 2 a 2'. Zbývající 2 nebo 2' poloha je N-acylována. Předpokládaná přítomnost dvou hydrofobních řetězců v poloze 2 a poloze 2', z nichž alespoň jeden tvoří rozvětvenou acylovou skupinu, udílí disacharidům kombinaci extrémně nízké endotoxicity a zachování biologické aktivity.
Rozvětvená acylová skupina označovaná obecně jako skupina Y je vybrána ze skupiny, zahrnující acyloxyacylovou skupinu, acylaminoacylovou skupinu, acylthioacylovou skupinu, (C1-C24) alkoxyacylovou skupinu, (Cj-C24) alkylaminoacylovou skupinu, (C]-C24) alkylthioacylovou skupinu.
V případě acyloxyacylové skupiny jsou dvě acylové skupiny připojeny přes atom kyslíku, v případě acylaminoacylové skupiny přes NH skupinu a v případě acylthioacylové skupiny přes atom síry. Další členové skupiny Y, (Ci-C24) alkyloxyacylová skupina, (C]-C24) alkylaminoacylová skupina a (C]-C24) alkylthioacylová skupina mohou být získány z odpovídající hydroxy mastné kyseliny.
Výhodně skupina Y přestavuje N-připojenou acylovou skupinu připojenou k jeho poloze 3, jako je 3-acyloxyacylová skupina a 3-acylthioacylová skupina. Stejné se aplikuje na dříve uvedené (Ci-C24) alkylekvivalenty.
Výhodně zahrnují členové skupiny Y jednu nebo dvě acylové skupiny, výhodně vybrané ze zbytků mastných kyselin, zbytků hydroxymastných kyselin a zbytků oxy mastných kyselin. Jestliže je acyloxyacylová skupina výhodně 3-acyloxyacylová skupina, obsahují tyto acylové skupiny zbytek 3-hydroxymastné kyseliny nebo esterovou připojenou skupinu zbytku 3-oxomastné kyseliny. Typické příklady acyloxyacylové skupiny jsou 3-hydroxy(C]-C24)-mastná kyselina-acyly, které jsou esterově připojeny k 3-hydroxypoloze s (Ci-C24)-karboxylovou kyselinou. Výhodně acyloxyacylová skupina je 3-hydroxy(C8-C]8)-mastná kyselina-acyl, který je esterově připojen v poloze 3-hydroxy k (Cio-Ci8)-niastné kyseliny. Takové acyloxyacylové skupiny jsou přítomny v lipid A složce gramnegativní bakterie, jako je Escherichia coli, Haemophilus influenzae, Campylobacter jejuni, Rhodocyclus gelatinosus, Chromabacterium violaceum, Neisseria meningitidis, Salmonella minnesota.
V první skupině preferovaných glukosaminových disacharidů podle vynálezu je acyloxyacylová skupina N-připojeného 3-hydroxyC]4-mastná kyselina - acylesteru spojena s 3-hydroxypolohou C12-mastné kyseliny v poloze 2'. V dalším preferovaném glukosaminovém disacharidů podle vynálezu je acyloxyacylová skupina N-připojeného 3-hydroxyCi4-mastná kyselina - acylesteru spojena ve 3-hydroxypoloze s C]4-mastnou kyselinou a acyloxyacylová skupina je výhodně ve 2'-po!oze.
-4CZ 290331 B6
V dalším proferovaném glukosaminovém disacharidu podle vynálezu je acyloxyacylová skupina N-připojeného 3-hydroxyC)4-mastná kyselina - acylesteru spojena se 3-hydroxypolohou Ci2~mastné kyseliny s touto acyloxyacylskupinou v poloze 2. V dalším preferovaném glukosaminovém disacharidu podle vynálezu je acyloxyacylová skupina N-připojeného 3-hydroxyCI4mastná kyselina - acylesteru spojena ve 3-hydroxypoloze se C12-mastnou kyselinou, s acyloxyacylovou skupinou jak v poloze 2 tak 2
Jestliže skupina Y obsahuje chirální centrum, zahrnuje vynález všechny R- a S-enantiomery a jakékoliv racemické směsi.
Jiný N-připojený substituent může být acylová skupina nebo také acyloxyacylová skupina. Podle druhé skupiny disacharidů podle vynálezu je acylovou skupinou 3-hydroxy(C4-C24)-mastná kyselina, výhodně 3-hydroxy(Cio-C18)-mastná kyselina. V preferovaných disacharidech podle vynálezu je acylová skupina 3-hydroxyC]4-mastná kyselina v poloze 2 nebo poloze 2'.
Nicméně N-připojený substituent může být také acyloxyacylová skupina zde definovaná dříve a obsahující N-připojený 3-hydroxy(C4-C24)-mastná kyselina-acyl, který je esterově spojen se 3-hydroxypolohou (Ci-C2o)-karboxylové kyseliny, výhodně N-připojený 3-hydroxy(Cs-Ci8)mastná kyselina-acylester spojený ve 3-hydroxypoloze s (Cio-Ci8)-mastnou kyselinou. Navíc je výhodný disacharid, kde R2 je N-připojeného 3-hydroxyC14-mastná kyselina-acylesteru spojen ve 3-hydroxypoloze se C]2-mastnou kyselinou nebo Cu-mastnou kyselinou a kde R2' je N-připojený 3- hydroxyC μ-mastná kyselina-acylester spojen ve 3-hydroxypoloze s C]2-mastnou kyselinou nebo Ci4-mastnou kyselinou.
Je nutno uvést, že ve skupině Y mohou být acylové skupiny a/nebo acylová a alkylová skupina vzájemně spojeny.
V tomto popise výraz „zbytek mastné kyseliny“ znamená: v podstatě hydrofobní řetězec se C]-C24 atomy, kde tento řetězec může být přímý, rozvětvený, nasycený, mono- nebo polynenasycený, mající vložené jedno nebo více heteroatomů jako je dusík, kyslík, síra a kde tento řetězec může být substituován jedním nebo více substituenty jako je hydroxyl, oco, acyloxy, alkoxy, amino, nitro, kyano, halogen, sulfhydryl, s tou podmínkou, že není negativně ovlivněna biologická aktivita. Příklad zbytku substituované mastné kyseliny (obsahující amino-připojený substituent) je popsán v práci, jejímž autorem jsou Onozuka K. a spol. v Int. J. Immunopharmac, Vol. 15 str. 657-664(1993)).
Substituenty R] mohou být (C1-C5) acyloxyskupina nebo (C1-C5) alkyloxyskupina, zatímco R4' může být (C1-C5) acylová skupina nebo (C]-C5) alkylová skupina s tou podmínkou, že glukosaminové disacharidy nejsou negativně ovlivněny. Navíc může být R] hydroxylová skupina a R| může být vodík. Výhodně může být každý Ri a R4' skupina, obsahující fosfor. Zejména taková skupina v poloze 1 nebo 4' může ovlivňovat biologickou aktivitu, jako je odlišná stimulace cytokinů (viz Takada H. a Kotani S. v Bacterial Endotoxic Lipopolysaccharides, Morrison D. C. a Ryan J., CRC Press, voli, str. 107-134 (1992), zejména str. 123). Preferované disacharidy podle vynálezu obsahují dihydroxyfosnonoyloxyskupinu v poloze 4', přičemž skupina je v poloze 1 výhodně v a-konfiguraci.
Substituent R] může být také představován skupinou X. Skupina X je obecně při fyziologickém pH negativně nabita. Skupina X může být karboxy(C]-C5) alkyloxyskupina. Skupina X může být také dikarboxylová kyselina vzorce -O-CH-[(CH2)mCOOH] [(CH2)nCOOH], kde m - 0-10 a n = 0-10, jako jeman = 0an=l;am=lan = 3. Substituent dikarboxylové kyseliny v poloze 1, kde m a n= 1 jsou popsány v práci autora Onozuka a spol. (1993). Místo dikarboxylové kyseliny skupina X může představovat fosfono(C]-C5)-alkylovou skupinu jako je fosfonomethylskupina nebo fosfonoethylskupina.
-5CZ 290331 B6
Substituent X může mít také formu sulfátové skupiny nebo hydroxysulfonyl(Ci-C5)-alkylskupiny, jako je hydroxysulfonylmethylskupina.
Substituenty R3 a R3' mohou být krátká alkylová nebo acylová skupina, která škodlivě neovlivňuje endotoxicitu a/nebo biologickou aktivitu glukosaminových disacharidů podle vynálezu. Příklady jsou (C]-C3) alkylskupina, a (Cj—C3) acylová skupina. Výhodně jsou substituenty R3 a R3' oba vodík, což znamená, že 3-poloha a 3'-poloha nejsou acylovány.
Substituent R4 v poloze 4 může být (C]-C3) alkylová skupina nebo (Ci-C3) acylová skupina, jejichž významy byly definovány dříve. 4-O-Acylovaný disacharid může být syntetizován za použití metody popsané Kusumoto-em S., a spol., ACS Symposium Series, Vol. 231, str. 237-254 (1983). Nicméně je preferována v poloze 4 hydroxylová skupina (R4=H).
Substituent R$' může být vodík, hydroxylová skupina, dihydroxyfosfonouyloxyskupina, dihydroxysulfonyloxyskupina a jejich nabité formy.
Za účelem zlepšení rozpustnosti ve vodě glukosaminových disacharidů podle vynálezu může mít substituent v poloze 6' zřetelně hydrofilní charakter udělený skupinou Z. Skupina Z může být 3-deoxy-D-manno-2-oktulosonová kyselina (KDO) nebo některé KDO molekuly, jako jsou ty, které jsou přítomny ve vnitřním jádru přírodních polysacharidů přímo připojené k lipidové A složce.
Skupina Z může mít také kompletní nebo parciální polysacharidový řetězec, jako je postranní řetězec pocházející z přírodního lipopolysacharidu, nebo jádrová složka pocházející z přírodních lipopolysacharidů.
Skupina Z může také být amino-fCi-C») alkyl-karboxylová skupina.
Rozpustnost ve vodě disacharidů podle vynálezu je na jedné straně určena přítomností nabité skupiny, hydrofilním charakterem substituentu v poloze 6. Na druhé straně může být rozpustnost ve vodě zlepšena, jestliže je glukosamin disacharid ve formě soli, jako je sůl, zahrnující jeden nebo více kationtů alkalických kovů a/nebo amoniový iont tvořící pár s například, dihydroxyfosfonyloxyskupinami, karboxylátovými skupinami, fosfonoskupinami, hydroxysulfonyloxyskupinami a hydroxysulfonylalkylskupinami, jsou-li přítomny.
Jakýkoliv z alkylových a acylových řetězců nebo skupin může být přímý, rozvětvený, nasycený, mono- nebo polynenasycený, mající vložený jeden nebo více heteroatomů jako je dusík, kyslík, síra a kde tento řetězec může být substituován jedním nebo více substituenty jako je hydroxyl, oxo, acyloxy, alkoxy, amino, nitro, kyano, halogeno, sulfhydryl, stou podmínkou, že není podstatně nežádoucím způsobem ovlivněna biologická aktivita.
Glukosamindisacharidy podle vynálezu mohou být získány z výchozího materiálu, obsahujícího lipid A skupinu lipopolysacharidů, které jsou přítomny v mikroorganismech jako jsou gramnegativní bakterie. Tyto lipopolysacharidy jsou například přítomny na povrchu struktury, obsahující frakci těchto mikroorganismů a v lipopolysacharidech z nich pocházejících. Preferované gramnegativní bakterie použité jako zdroj výchozího materiálu jsou Escherichia coli a Haemophilus influenzae. Mohou však být použity komerčně dostupné LPS nebo lipid A jako výchozí materiál.
Selektivní deacylace v poloze 3 a 3'-poloze se provádí použitím alkalického zpracování. Podmínky alkalického zpracování jsou voleny tak, že jsou oba glukosaminy 3-hydroxy deacylovány. Alkalické zpracování může být provedeno za použití hydroxidů, uhličitanů a fosforečnanů jako je hydroxid sodný nebo uhličitan draselný. Příklady organických alkalických činidel jsou alkylaminy jako je diethylamin a triethylamin. Alkalické zpracování se normálně provádí ve vodném nebo organickém médiu. pH je typicky v rozmezí 10-14 jako 11-13, za
-6CZ 290331 B6 podmínek praktického provedení je pH například 12,2. Alkalické zpracování se normálně provádí při teplotě mezi teplotou okolí a 70 °C jako je 37 °C. Doba závisí na typu výchozího materiálu. Jestliže se vychází z mikroorganismů, mění se časová perioda mezi 1 hodinu až 10 dny, jako je 8 hodin a 5 dnů, ale normálně je v rozmezí 8-40 hodin. Jestliže se vychází z lipopolysacharidů nebo lipidu A může být časová perioda 0,2-10 hodin, jako 1-5 hodin. V praxi je časová perioda asi 1,5 až 3 hodiny.
Jestliže výchozí materiál obsahuje v 6'-poloze jádrovou složku, která má být odstraněna, podrobí se výchozí materiál kyselému zpracování pro odstranění jádrové složky. Toto kyselé zpracování může být provedeno před nebo po výše zmíněném alkalickém zpracování. Kyselé zpracování se provádí při pH 1-5, výhodně v pH rozmezí 2,5-4,5, normálně při pH vyšším než 3 a nižším než 4,5, jako je 3,5. Při pH 1 nebo nižším je glukosamin disacharid defosforylován, což vede k monofosforylované formě. Kyseliny, které mohou být použity, jsou minerální a organické kyseliny jako je kyselina chlorovodíková a ledová kyselina octová. Časová perioda pro kyselé zpracování je asi 30 minut až 5 hodin, jako 1-2 hodiny. Během kyselého zpracování se teplota zvýší na asi 70 až 100 °C, jako 80 až 100 °C, prakticky 95 °C. Následně se teplota sníží na teplotu okolí.
Glukosaminové disacharidy podle vynálezu mohou být také získány tak, že se vychází zodpovídajícího de-, mono- nebo di-fosforylovaného glukosaminového dimeru připojením acyloxyacylové skupiny, acylaminoacylové skupiny a/nebo acylhtioacylové skupiny jak ve
2-poloze tak 2'-poloze.
Po parciální deacylaci těchto glukosaminových disacharidů podle vynálezu a oddělení se získají produkty glukosaminových disacharidů, mající rozvětvenou acylovou skupinu v poloze 2 nebo poloze 2'.
Glukosaminové disacharidy podle vynálezu mohou být použity podle vynálezu ve farmaceutické kompozici nebo léčivu jako imunomodulační činidlo pro inhibici, stimulaci nebo vyvolání tolerování produkce oxid dusnatý reaktivních meziproduktů a cytokinů, v závislost na frekvenci podání a na dávce, jako protinádorové činidlo, jako například T-buněčné reaktivaci, jako vakcínová složka, jako kompetitor pro endotoxin vazebná místa a jako modulátor interleukinů. Díky extrémně nízké endotoxicitě jsou tyto disacharidy zcela nebo v podstatě prosté vedlejších účinků.
Disacharidy podle předloženého vynálezu mohou být aplikovány systemicky nebo místně za použití intravenózní injekce, subkutánní injekce, intraperitoneální injekce, intramuskulámí injekce a podobně. Dávka se bude měnit v závislosti na zvířecím nebo lidském pacientovi, věku, tělesné hmotnosti, symptomech nebo chorobě, které mají být ošetřovány, požadovaném terapeutickém účinku, způsobu podání a podobně. Bezpečných účinků bude dosaženo za použití dávky 0,001 až 500 mg/kg tělesné hmotnosti podávané v jedné nebo více denních dávkách nebo jako forma s prodlouženým uvolňováním.
Farmaceutická kompozice může obsahovat farmaceuticky přijatelný nosič nebo ředidlo, například pro neorální podání vodných nebo nevodných roztoků, suspenzí a emulzí. Vodné roztoky nebo suspenze mohou obsahovat destilovanou vodu nebo fyziologický solný roztok. Nevodné roztoky mohou zahrnovat propylenglykol, polyethylenglykol, rostlinné oleje jako je olivový olej, alkoholy. Kompozice může obsahovat jiná aditiva jako jsou ochranné látky, smáčecí činidla, emulgační činidla, dispergační činidla a podobně.
Pro úplné pochopení předloženého vynálezu je třeba poukázat na následující příklady, které jsou uváděny pouze z ilustračních důvodů a v žádném případě nijak neomezují rozsah předloženého vynálezu.
-7CZ 290331 B6
Příklady provedení vynálezu
Příklad 1
Escherichia coli 1-1147 (uložená vCNCM 3. října 1991 pod číslem 1-1147) bylo kultivována v kultivačním médiu složení, které je popsáno v tabulce 1.
Tabulka 1
Složení kultivačního média (rozpuštěno ve vodě) pro E. coli 1-1147
| Substance | množství/1 |
| inosin monohydrát kyseliny citrónové kyselina glutamová chlorid amonný síran hořečnatý.7H2O dihydrogenfosforečnan draselný (KH2PO4) arginin uráčil chlorid vápenatý chlorid sodný oligokovy (zás. 1000* konc.) L-leucin L-lysin. HC1 L-serin L-methionin | 0,200 g 0,300 g 1,300 g 1,050 g l,H0g 1,360 g 0,300 g 0,100 g 0,017 g 2,000 g 1 ml 10,0 g 10,0 g 10,0 g 10,0 g |
| L-valin L-alanin L-asparagin glukóza(zás. 500 g/1) | 10,0 g 10,0 g 10,0 g 5 ml |
Oligokovový zásobní roztok: 2,5 FeCl2.4H2O, 0,25 g CoC12.6H2O, 0,25 g NaMoO4.7H2O, 0,25 g MnSO4.4H2O, 0,25 g ZnSO4.7H2O, 0,25 g NiSO4.7H2O, 0,05 g H3BO4, 0,05 g CuSO4, potom se přidá 1,01H2O, promísí a přidá se 1,1 ml H2SO4 (85 %).
pH kultivačního média se upraví za použití 5N NaOH, 5 % amoniaku nebo 25 % HC1. Za provzdušňování a míchání (500 ot/min) se kultivuje Escherichia coli 1-1147 při 37 °C a pH 6,9.
Následně se obsah fermentoru inaktivuje tepelným zpracováním (105 °C 2 minuty).
Inaktivovaný obsah fermentoru se ultrafiltruje (dělení 1000 kD) a zadržené bakterie se promyjí za použití vodného 0,6 % NaCl roztoku. Promytá bakteriální suspenze se zakoncentruje ultrafiltrací. Získá se biomasa o suché hmotnosti 764 g.
Biomasa se zředí na 7,0 g/1 a podrobí se alkalickému zpracování přídavkem 345 ml 10,77N NaOH a inkubuje se při 37 °C 40 hodin (pH 12,2).
Alkalický extrakt se podrobí první ultrafiltrací (dělení 1000 kD) a druhé ultrafiltrací permeátu (10 kD). Retenát druhé ultrafiltrace se podrobí kyselému zpracování.
-8CZ 290331 B6
Retentát se zředí 7,0 1 vody a okyselí se použitím 370 ml ledové kyseliny octové (konečné pH
3,52). Směs se zahřívá na 95 °C během 120 minut za míchání. Potom se kyselá suspenze ochladí na 25 °C. Sraženina se oddělí odstředěním (4000 g po 50 minut). Peleta se resuspenduje ve vodě (3,7 1) a podrobí se extrakci za použití propan-2-olu (4,3 1) a po 60 minutách při 25 °C se přidá
252 ml triethylaminu (pH 9,0) a vmíchání se pokračuje 24 hodin.
Supematant se získá odstředěním (4000 x g, 25 °C po 50 minut) a peleta se reextrahuje dvakrát za použití propan-2-olu 90%. Supematanty se spojí a podrobí chromatografíí s reverzní fází (Waters č. 10001, preparativní CI8, 125 A).
Alternativně se kysele zpracovaný extrakt podrobí ultrafiltraci a retentát (>1 000 kD) se zahustí a dialyzuje proti 5 objemům vody. Dialyzovaný retentát se zředí 9 objemy propan-2-olu a pH se upraví na hodnotu 9 triethylaminem (TEA). Extrakce se provádí za míchání po 2 hodiny.
Supematant se odstraní jak je popsáno výše a sraženina se reextrahuje propan-2-olem. Supematanty se spojí a podrobí vakuovému zahuštění (40 °C, 12 torr) a nakonec se podrobí chromatografíi s reverzní fází C]8 Prep Sep Pak (Waters č. 10001).
Každý ze dvou supematantů se zření dvěma objemy vody a smísí s 5 mM tetrabutylamoniumfosfátu (TBAP) a nanese na sloupec, obsahující 50 g reverzní fáze C]8 Prep Sep Pak (Waters č. 10001,Preparative Ci8, 125 A) předem zpracovaný se 250 ml CH3Cn:H2O 1:1 (obj./obj.) + 5 mM TBAP. Sloupec se promyje 60 % CH3CN:H2O 1:1 (obj./obj.) + 5 mM TBAP a 40 % propan-2-olu : H2O 9:1 (obj./obj.) + 5 mM TBAP. Disacharidy podle vynálezu se eluují ve frakci, obsahující 30 % CH3CN:H2O 1:1 (obj./obj.) + 5 mM TBAP a 70 % propan-2-olu : H2O 9:1 (obj./obj.) + 5 mM TBAP.
Disacharidová frakce získaná v chromatografíí se reverzní fází se zředí vodou 1:1 (obj./obj.) + 25 mM TBAP a nanese se na preparativní HPLC sloupec (Millipore-Waters Bondapack Cl8 300A 15M, 300 x 47 mm 0). Disacharidová frakce podle vynálezu se eluuje 67 % propan-2olu : H2O 9:1 (obj./obj.) + 25 mM TBAP a 33 % CH3CN:H2O 1:1 (obj./obj.) + 25 mM TBAP. Tato frakce obsahuje 55 mg disacharidu A podle vynálezu.
Odsolení disacharidu
Sůl byla odstraněna z podílu disacharidové A frakce následovně. Sep Pak Vac Ci8 Plus kolona (silica CJ8, 0,6 ml, Waters č. 20515) se kondicionuje postupně vstřikováním 5 ml CHC13CNCH3OH 2:1 (obj./obj.),5 ml CH3CN a 5 ml CH3CN:H2O 1:1, (obj./obj.). Vzorek se přidá na kolonu po zředění HPLC frakce se 3 objemy H2O a získá se celkem 6 ml zředěného vzorku. TBAP se pak odstraní 10 ml CH3CN:H2O 1:1, (obj./obj.) + 10 ml mM HC1 a následovně 10 ml CH3CN. Čistý disacharid A se pak odstraní 5 ml CHC13-CH3OH 2:1 (obj./obj.).
Frakce se suší odpařením za vakua (12 torr) při 35 °C. Odsolený disacharid A se znovu rozpustí v H2O:TEA 1000:1 (obj ./obj.) pro FAB-MS.
Příprava formy sodné soli
Kolona, obsahující 10 g reverzní fáze Ci8 Prep Sep Pak (Waters č. 10001,Preparative C]g, 125 A) byla předem kondicionována postupně 50 ml CH3CN 50 ml CH3CN:H2O 1:1 (obj./obj.).
Vzorek (HPLC frakce) se vloží na kolonu po zředění 1 objemem H2O. Po adsorpci se kolona promyje 100 ml CH3CN:H2O 1:1, (obj./obj.) + 5 mM TBAP. Disacharid se pak odstraní 50 ml propan-2-olu : H2O 9:1 (obj./obj.) + 5 mM TBAP.
-9CZ 290331 B6
Výsledná frakce se čistí následovně. Kolona, obsahující 20 ml Q-Sepharose fast flow (Pharmacia
0510-01) se kondicionuje postupně se 30 ml NAOH 1M, promyje H2O pro neutralizaci, 30 ml
HC1 1M a promyje H2O pro neutralizaci.
Vzorek se aplikuje přímo na kolonu. Po adsorpci se neadsorbovaný materiál odstraní 200 ml H2O a 100 ml propan-2-olu: H2O 9:1 (obj./obj.). Disacharid se eluuje 100 ml NaCl 0,9%: izopropanolu 1:1,1 (obj./obj.).
Konečné čištění se provádí následovně. Kolona, obsahující 10 g reverzní fáze Cjg Prep Sep Pak byla předem kondicionována postupně 50 ml CH3CN a 50 ml 50 % CH3CN:H2O 1:1, (obj./obj.). Vzorek se vloží na kolonu po zředění 1 objemem vody. Po adsorpci se kolona postupně promyje 200 ml H2O, 200 ml propan-2-olu : H2O 9:1 (obj./obj.) a 50 ml CH3CN. .). Disacharid se eluuje 50 ml CHC13-CH3OH 2:1 (obj./obj.). Frakce se suší odpařením za vakua (12 torr) při 35 °C.
Sodná sůl byla snadno rozpustná ve vodě (až 100 mg/ml).
Příklad 2
Haemohilus influenzae (zakoupen od National Collection of Type Cultures (ATCC 9795)) byl kultivován v kultivačním médiu, jehož složení je uvedeno v tabulce 2.
Tabulka 2
Složení hlavního kultivačního média pro Haemohilus influenzae
| Složka | množství/L |
| chlorid sodný | 2g |
| monohydrogenfosforečnan sodný | 2g |
| octan sodný | 0,5 g |
| aneurin | 0,003 g |
| kyselina nikotinová | 0,003 g |
| 70 % roztok mléčnanu sodného | 2 ml |
| 60 % roztok mléčnanu amonného | 2 ml |
| masový extrakt | 7,5 g |
| pepton | 15 g |
| sojový pepton | 1 g |
| trypton | 3g |
| kvasnicový extrakt | 7,5 g |
| glukóza | 3 ml |
Kultivační médium bylo doplněno heminem (10mg/l) a NADH (4mg/l). pH se upraví na 7,0 ± 0,3 za použití 5N NaOH nebo 25 % HC1. Po započetí tvorby stacionární fáze kultivace byla přerušena a obsah fermentoru byl inaktivován tepelným zpracováním (100 °C po 100 sekund). Inkativovaná kultura byla podrobena odstřeďování a oddělená biomasa byla zředěna 0,6 % vodným NaCl roztokem (přibližně 60 g/1). Alkalické zpracování bylo provedeno přídavkem 10N NaOH na konečnou koncentraci 0,2N NaOH. Zpracování se provádí při 37 °C po 5 dnů za kontinuálního míchání.
Alkalicky zpracovaný lyzát se přímo podrobí zpracování kyselinou pro okyselení na pH 3,5 za použití ledové kyseliny octové. Směs se zahřívá na 95 °C 120 minut a pak se ochladí na teplotu místnosti.
Sraženina se odstřeďuje (10 000 * g, 30 minut při 4 °C) supematant se odloží.
- 10CZ 290331 B6
Sraženina se resuspenduje v CH3CN:H2O 1:1 (obj./obj.) a pH se upraví na pH 9 za použití TEA.
Po odstředění (15 000 x g, 10 minut) se supematant upraví na 5 mM TBAP. Supematant se nanese na . Sep Pak Vac C]8 kolonu (10 g silika CI8, 35 ml, Waters č. 43345) kondicionovanou za použití 50 ml CH3CN:H2O 1:1 (obj./obj.). Frakce, obsahující disacharid B podle vynálezu, se eluuje 50 ml propan-2-olu : H2O 9:1 (obj./obj.) + 5 mM TBAP.
Tato frakce se zahustí odpařením (35 °C, 12 torr) na asi 2 ml. Frakce se odstřeďuje (15 000 * g, 5 minut) a supematant se aplikuje na semipreparativní HPLC Cj8 kolonu (Macherey-Nagel č. 715 806, 250 x 10 mm 0, Nucleosil 300-7C18). Frakce, obsahující disacharid B podle vynálezu se eluuje ve frakci, obsahující 28 % CH3CN:H2O 1:1 (obj./obj.) + 25 mM TBAP a 72 % propan-2-olu : H2O 9:1 (obj./obj.) + 25 mM TBAP.
Disacharid B se odsolí za použití způsobu podobného způsobu podle příkladu 1.
Příklad 3
Lipopolysacharidy z Escherichia coli 0111:B4 (sigma Product No. L3024) byly podrobeny alkalickému zpracování ve 0,2 M NaOH při 37 °C po 1,5 hodiny. Roztok byl neutralizován použitím 1M kyseliny fosforečné.
400 μΐ alkalicky zpracovaného LPS roztoku bylo zahuštěn ultrafiltrací (Millipore Ultrafree-MC, UFC3 LGC 00, dělení 10 kD).
Retentát (> 10 kD) byl zředěn ve 400 μΐ H2O a podroben kyselému zpracování úpravou na 0,2M kyselinu octovou za použití ledové kyseliny octové. Okyselený roztok byl zahříván na 95 °C po 120 minut. Po chlazení na 25 °C byla sraženina odsedimentována odstřeďováním (15 000 x g, 10 minut) a supematant byl odložen. Sraženina byla rozpuštěna ve 20 μΐ H2O:TEA 1000:1 (obj./obj.) a tento roztok byl aplikován na analytickou HPLC C]8 kolonu (Supelco No. 58 985, Spelcosil LC-18, 3 pm, 150 x 4,6 mm 0). Disacharidové frakce podle vynálezu eluují ve frakci, obsahující 42 % CH3CN:H2O 1:1 (obj./obj.) + 5 mM TBAP.
Příklad 4
Roztok 2 mg/ml lipidu A z Escherichia coli F-583 (Sigma, Product No. L5399) byl připraven v H2O:TEA 1 000:1 (obj./obj.) a tento roztok byl podroben alkalickému zpracování za použití 0,2M NaOH při 37 °C po 2,5 hodiny. Roztok byl neutralizován za použití 1M kyseliny fosforečné.
Neutralizovaný roztok byl nanesen na analytickou HPLC kolonu (Supelco No. 58 958, Spelcosil LC-18, 3 pm, 150 x 4,6 mm 0). Disacharidy podle vynálezu eluují při 42 % CH3CN:H2O 1:1 (obj./obj.) + 5 mM TBAP a 58 % propan-2-olu : H2O 9:1 (obj./obj.) + 5 mM TBAP.
Příklad 5
2- Amino-2-deoxy-6-0-(2-amino-2-deoxy-4-0-fosfono-p-D-glukopyranosyl)-a-D- glukopyranosyl-dihydrogenfosfát [Holst a spol. Eur. J. Biochem. 214 (1993) 695-701] se zpracuje v methanolu s methoxidem sodným (přesně 4,0 mol. ekv.) a pak se anhydridem (R)-3-dodekanoyloxytetradekanové kyseliny (2,2 mol. ekv.) připravený reakcí kyseliny (R)-3-dodekanoyloxytetradekanové s DDC (0,5 mol. ekv.) v bezvodém dichlormethanu, viz Charon a spol., J. Chem. Soc. Perkin Trans. I. (1984) 2291-2295). Po 12 hodinách při teplotě místnosti se přidá voda (2X objem methanolu) a směs se extrahuje diethyletherem (pro odstranění kyseliny
3- dodekanoyloxytetradekanové). Vodná fáze se zahustí a surový disacharid C podle vynálezu se
-11CZ 290331 B6 podrobí HPLC s reverzní fází. Produkt se rozpustí H2O:TEA 1000:1 (obj./obj.) a tetrabutylamoniumfosfátu (TBAP) na koncentraci 5 mM. Tento roztok se pak nanese na preparativní HPLC kolonu (Millipore - Waters Bondapak C18 300A 15M, 300 x 47 mm 0). Disacharid C se eluuje s gradientem CH3CN:H2O 1:1 (obj./obj.) + 25 mM TBAP (rozpouštědlo A) a propan-2ol: H2O 9:1 (obj./obj.) + 25 mM TBAP (rozpouštědlo B) (50 % A/50 % B až 0 % A : 100 % B při 1 %/min, průtok 80 ml/min). HPLC frakce, obsahující disacharid C se zředí vodou a pak nanese na Cig-Sep Pak Vac Plus kolonu (Waters) [Cl8 reverzní fáze silikagel předem kondicionovaný postupně s CHCI3-CH3OH 2:1 (obj./obj.), CH3CN, CH3CN:H2O 1:1 (obj./obj.)]. TBAP se odstraní promýváním postupně s CH3CN:H2O 1:1 (obj./obj.), 10 mM HC1 a CH3CN. Čistý disacharid se eluuje CHC13 s CHC^CHsOH 2:1 (obj./obj.).
Příklad 6
Vodná fáze, obsahující disacharid C získaný v příkladu 5 (před čištěním) se zpravuje s vodným hydroxidem sodným (přesně 1,0 mol. ekv.; koncentrace poskytující počáteční pH 12,5); po 24 hodinách při teplotě místnosti se směs upraví na pH 6,5 až 7 a nanese na preparativní HPLC kolonu (Millipore - Waters Bondapak Cl8 300A 15M, 300 x 47 mm 0). Disacharidy A a D se eluují s gradientem CH3CN:H2O 1:1 (obj./obj.) + 25 mM TBAP (rozpouštědlo A) a propan-2ol: H2O 9:1 (obj./obj.) + 25 mM TBAP (rozpouštědlo B) (75 % A:25 % B až 0 % A : 100 % B při 1 %/min, průtok 80 ml/min). HPLC frakce, obsahující disacharidy A a D se odsolí jak je popsáno pro disacharid C v příkladu 5.
Srovnávací příklad (ne podle vynálezu)
Roztok 10 mg/ml lipidu A z Escherichia coli F-583 (Sigma, Product No. L5399) byl připraven v H2O:TEA 1 000:1 (obj./obj.) a následně se podrobí alkalickému zpracování s 0,2M NaOH při 37 °C po 20 minut. Tato časová perioda byla dostačující k pouze 3-0 deacylovaného lipidu A (Myers a spol. v Cellular and Molecular Acpects of Endotoxin Reactions, str. 145-156 (1990), Elsevier Science Publishers).
Roztok se neutralizuje kyselinou ortofosforečnou. Pro biologické eseje se zředí v 0,1 %TEA/0,9 % NaCl a použije bez dalšího čistění.
Pro FAB-MS se vzorek alkalicky zpracovaného lipidu A čistí HPLC s reverzní fází (Supelco No. 58 985, Spelcosil LC18, 3 pm, 15 mm x 4,6 mm 0). Hlavní pík, eluující při 18 % CH3CN:H2O 1:1 (obj./obj.) + 5 mM TBAP a 82 % a propan-2-ol: H2O 9:1 (obj./obj.) + 5 mM TBAP se odsolí za podmínek popsaných v příkladu 1. FAB-MS analýza poskytuje molekulární iont o 1 570,1 hmotnostních jednotkách (vypočteno 1 569,1 hmotnostních jednotek).
Fyzikálně chemické charakteristiky disacharidů podle vynálezu
Disacharidy A a B získané v příkladech 1 a 2 byly podrobeny fyzikálně - chemické charakterizaci.
Glukosamin byl stanoven po kyselé hydrolýze (4M HC1, 16 hodin, 100 °C, argonová atmosféra) a derivatizaci za použití fenylizothiokyanátu a následné kvantitativní analýzy pomocí HPLC (viz Anumula K. R. a spol., Analytical Biochemistry, Vol. 179, str. 113-122 (1991)).
Celkové mastné kyseliny byly stanoveny po kyselé hydrolýze (4M HC1, 4 hodiny, 100 °C) methylací za použití BF3 za přítomnosti methanolu a kvantitativním stanovením plynovou chromatografii (kolona OV-1, Hewlett /Packard) (viz Miller L. Gas-Liquid Chromatography of Cellular Fatty Acids as a Bacterial Identification Aid, Gas Chromatography Application Notě, str. 228 až 237 (1984)).
-12CZ 290331 B6
Esterově navázané mastné kyseliny byly stanoveny plynovou chromatografií po zpracování za použití NaOCH3 (viz Rietschel E.T. a spol., European Joumal of Biochemistry, Vol.28, str. 166-173 (1972)).
Fosfáty byly stanoveny metodou podle Amese (viz Ames B.N., Methods in Enzymology, Vol. 8, str. 115-118(1966)).
Kyselina 3-deoxy-D-manno-2-oktulosonová (KDO) byla stanovena za použití metody Karkhanise Y.D. a spol. (Analytical Biochemistry, Vol. 58, str. 595-601 (1978)).
Roztok disacharidu A obsahuje 2,1 pmol/ml fosfátu, l,9pmol/ml glukosaminu, l,0pmol/ml Cj2:o mastné kyseliny a 2,2 pmol/ml 3OH-C]4:0 mastné kyseliny. Pouze Ci2:0 mastná kyselina byla detekována po uvolnění zbytků esterově napojené mastné kyseliny, ukazující, že zbytky 30H-C]4:o mastné kyseliny byly amidově napojeny. KDO nebyla detekována (<1 mol na 10 mol disacharidu A).
V souladu s tím obsahuje disacharid na mol 2 mol 30H-Ci4;o mastné kyseliny a 1 mol Ci2:o mastné kyseliny.
Hmotová spektroskopie s bombardováním rychlými atomy (FAB-MS), negativní model vzorku v CHC13:CH3OH 1:1 (obj./obj.), koncentrace 1 mg/ml. Byl použit VG ZAB-2SE hmotový spektrometr při Vacc8 kV k získání spektra při 30 kV a emisním proudu 1 μΑ. Spektrometr je kalibrován za použití jodidu česného. FAB-MS spektrum je uvedeno na obr. 1. Disacharid A ukazuje molekulový pík při 1 133,55 hmotnostních jednotkách (vypočtená hmotnost 1 133,3). Jiné píky potvrzují fragmentaci produktu během analýzy. Pík 1 053,5 představuje ztrátu fosfátové skupiny a 951,3 ztrátu Ci2 mastné kyseliny.
FAB-MS spektrum disacharidu B je uvedeno na obr. 2 a vykazuje molekulární pík při 1 161,8 hmotnostních jednotkách (vypočteno 1 161,3). Pík při 1 183,8 hmotnostních jednotkách představuje adici sodíku. Pík při 951,6 představuje ztrátu Ci4 mastné kyseliny. Pík při 973,6 hmotnostních jednotkách představuje fragment píku 951,6 se sodným iontem.
'H-NMR-spektrum (Bruker 360 MHz) disacharidu A (sodná sůl v D2O) je uvedeno na obr. 3 a jeho 13C-NMR-spektrum (Bruker 90 MHz) je uvedeno na obr. 4 a 5 (expandovaná stupnice).
Strukturní vzorce následujících p-D-glukosamin-(l-6)-a-glukosaminových disacharidů:
*disacharid A (2-deoxy-6-0-[2-deoxy-2-[(R)-3-dodekanoyloxytetradekanoylamino]-4-0fosfono-p-D-glukopyranosyl]-2- [(R)-3-hydroxytetradekanoylamino] -a-D-glukopyranosyldihydrogenfosfát);
*disacharid B (2-deoxy-6-0-[2-deoxy-2-[(R)-3-tetradekanoyloxytetradekanoylamino]-4-0fosfono-p-D-glukopyranosyl]-2- [(R)-3-hydroxytetradekanoylaminoJ -a-D-glukopyranosyldihydrogenfosfát);
*disacharid C (2-deoxy-6-0-[2-deoxy-2-[(R)-3-dodekanoyloxytetradekanoylamino]-4-0fosfono-|3-D-glukopyranosyl]-2-[(R)-3-dodekanoyloxytetradekanoylamino]-a-D-glukopyranosyl-dihydrogenfosfát);
♦disacharid D (2-deoxy-6-O-[2-deoxy-2-[(R)-3- hydroxytetradekanoylamino]-4-O-fosfonoP-D-glukopyranosyl]-2- [(R)-3- dodekanoyloxytetradekanoylamino] -a-D-glukopyranosyldihydrogenfosfát);
jsou uvedeny dále.
- 13CZ 290331 B6
A
B
-14CZ 290331 B6
Endotoxicita a biologická aktivita disacharidů podle vynálezu
Endotoxicita a biologická aktivita disacharidů A (příklad 1) a disacharidů B (příklad 2) byla stanovena a porovnána s těmito vlastnostmi lipopolysacharidu pocházejícího z Escherichia coli 0111:B4 (Sigma, Product No. L3024), lipidu A (sigma, Product No. L3599; použitý jako výchozí materiál v příkladu 4) a 3-O-deacylovaného lipidu A pocházejícího z lipidu A Escherichia coli F583 (připravený ve srovnávacím příkladu), ale bez čištění pomocí HPLC.
1. Endotoxicita
Endotoxicita byla stanovena v testu Limulus amoebocyte lyzátu (LAL). Tento test je založen na pozorování, že endotoxiny indukují koagulaci hernolymfu Limulus polyphemus.
V gelifikačním testu sériových ředění byla testovaná sloučenina smísena sLAL 1:1 (obj./obj.) (Haemachem lne., citlivost LAL 0,06 endotoxinových jednotek/ml), a směs byla inkubována po jednu hodinu při 37 °C. Potom byla sledována tvorba gelu měřením optické hustoty při 405 nm. Poslední ředění, které vytvářelo gel, bylo stanoveno překlopením reakčních mikroploten. Endotoxinová aktivita ve vzorcích byla stanovena porovnáním se ředěními lipopolysacharidového standardu (1 endotoxinová jednotka = 0,1 ng LPS).
Endotoxicita byla také měřena ve chromogenním testu, ve kterém byla aktivace proteázy v LAL při LPS měřena za použití chromogenu (Ac-Ile-Glu-Ala-Arg-pNA; Bio Whittaker Kit No. 50-65OU). Tvorba barvy (uvolnění pNA (p-nitroanilin)) byla měřena při 405 nm.
Vzorky byly předinkubovány při 37 °C během 10 minut a následně byl přidáván chromogenobsahující LAL. Byla měřena doba vyžadovaná pro dosažení optické hustoty 0,2 při 405 nm. Endotoxinová aktivita byla vypočtena v porovnání s referenční křivkou získanou z LPS standardů.
Výsledky jsou vyjádřeny v tabulce 3 jako ng LPS na ng produktu.
Tabulka 3
Endotoxická aktivita v LAL (ng/ng)
| Typ testu | E.coli LPS*) | lipid A | 3-O-deacylovaný lipid A | Disacharid A | Disacharid B | monofosforyl disacharid A |
| gelifikace | 0,9±0,4 (n = 6) | 0,6±0,3 (n = 3) | l,0±0,l (n = 2) | 0,003±0,002 (n=12) | 0,004±0,002 (n = 7) | 0,0031± 0,0013 (n=10) |
| chromogen | 0,70 (n=l) | 0,7±0,3 (n = 3) | l,70±0,95 (n = 3) | 0,0014± 0,0013 (n = 9) | 0,0008± 0,0006 (n = 7) | 0,0016± 0,0009 (n=10) |
*) Endotoxinová aktivita LPS v LAL = 1 ng/ng, experimentální data jsou v rozsahu 0,3-3 ng/ng.
Tato tabulka 3 ukazuje, že disacharidy A a B podle vynálezu vykazují nízkou endotoxicitu, zejména s ohledem ke 3-O-deacylovanému lipidu A podle US-A-4 912 094.
-15CZ 290331 B6
2. In vitro biologická aktivita vyvolaná v makrofázích C57BL/6 myši
Kostní dřeň byla odebrána z kyčle, femuru a tibie šest týdnů starých samečků C57BL/6 myši. Po homogenizaci suspenze dřeně v Dulbecco modifikovaném médiu a odstředění byla peleta 5 resuspendována v Dulbecco modifikovaném médiu a buňky byly kultivovány v koncentraci
4x105 buněk na ml ve stejném médiu doplněném 30% supematantu L-929 fibroblastů (běžný zdroj kolonie stimulujícího faktoru 1 [CSF—1]) a 20 % koňského séra.
Po 7 dnech byly zralé makrofágy odděleny a resuspendovány v Dulbecco modifikovaném médiu ío 5 % fetálního telecího séra na koncentraci 7x10° buněk na ml. Tato buněčná suspenze byla smísena 1:1 (obj./obj.) se vzorky zředěnými ve stejném médiu a použity v biologických testech provedených v mikroplotnách se 70 000 buňkami/jamka (inkubace při37 °C po 32 hodin, 100 % vlhkost a 8 % CO2).
Produkce oxidu dusnatého (NO)
Oxid dusnatý (NO) je produkován makrofágy v odezvě na bakteriální infekci a zejména LPS. NO se jeví jako mající cytostatické a cytotoxické vlastnosti. NO je extrémně reaktivní a rychle se oxidací převádí na dusitan a dusičnan.
Tvorba dusitanu byla stanovena za použití Griessova testu (přídavek 1:1 obj./obj.) N-( 1-nafty 1)ethylendiaminhydrochloridu [1 g/1 ve vodě] a p-aminobenzensulfonamidu [10 g/1 v 5 % H3PO4]). Koncentrace dusitanu v supematantech aktivovaných makrofágů byla vypočtena v porovnání k NaNO2 standardům.
Výsledky jsou uvedeny v tabulce 4.
Tabulka 4
NO-produkce v supematantech makrofágů stimulovaných LPS a příbuznými produkty
| Produkt | maximum aktivity*) | minimum aktivity*) | aktivita 50 %*) | NO aktivita při 50 % v nmol NO27ml**) | počet analýz |
| LPS E.Coli | 100 | 0,0004 | 0,01 | 7 | n=6 |
| lipid A | 50 | 0,005 | 0,07 | 5 | n=7 |
| 3-O-deacylovaný | |||||
| lipid A | 50 | 0,005 | 0,16 | 5 | n=3 |
| disacharid A | 50 | 0,016 | 0,16 | 5 | n=6 |
| disacharid B | 16 | 0,005 | 0,05 | 5 | n=l |
| monofosforyl | |||||
| disacharid A | 50 | 5 | 8 | 4 | n=l |
*)Koncentrace produktu vyjádřena jako pg/ml, odpovídající indukované NO aktivitě.
**) Koncentrace N02/ml extrapolovaná z křivky postupného ředění.
LPS vyvolává nejvyšší NO produkci. Lipid A, 3-O-deacylovaný lipid A, disacharid B indukují řádově stejnou produkci NO.
Disacharidy A a B indukují NO-produkci v makrofázích tak silně jako lipid A a 3-O-deacylovaný lipid A.
Produkce interleukinu-ΐα (IL-la)
-16CZ 290331 B6
IL-Ια je produkován mnoha buňkami, zahrnujícími makrofágy, jsou-li stimulovány LPS.
Některé zprávy o IL-1 a aktivitách uvádějí aktivaci T-buněk, indukci 11-2 receptorové exprese a cytokin genové exprese v T-buňkách, ko-stimulaci B-buněčné proliferace a Ig sekrece a obohacení 11-2 a IFN-indukované aktivace NK-zprostředkované cytotoxicity, indukci akutní fáze syntézy proteinu a indukci horečky.
Koncentrace IL-1 a v supematantech makrofágů byla měřena ELISA-testem (kit GENZYME, Intertest-la).
Výsledky jsou shrnuty v tabulce 5.
Tabulka 5
Produkce IL-1 a v supematantech makrofágů stimulovaných LPS a příbuznými produkty
Produkt nejvyšší zkoušená koncentrace
Koncentrace
500 pg/ml minimální detekovaná koncentrace
| konc. (pg/ml) | IL-1 a (pg/ml) | IL-1 a (pg/ml) | konc. (pg/ml) | IL-1 a (pg/ml) | |
| slepý = TEA 0,1 % | 500 | <15*) | <15*) | <15*) | |
| LPS E.Coli | 1600 | 295 ±129 | 170**) | 1,56 | 18± 4 |
| lipid A | 500 | 53 ±35 | 53 ±35 | 50 | 17 ± 8 |
| 3-O-deacylovaný | |||||
| lipid A | 500 | 56 ± 19 | 56± 19 | 160 | 21 ±6 |
| disacharid A | 500 | 75 ±45 | 75 ±45 | 16 | 19± 11 |
*) Hranice detekce testuje řádově 15 pg/ml.
**) IL-1 a koncentrace extrapolovaná z křivky sériového ředění.
Nebylo možné stanovit maximální produkci IL-1 a, protože produkce se ještě zvyšovala při nejvyšší použité koncentraci.
Vyvolání IL-1 a produkce při koncentraci 500 pg/ml není významně rozdílné pro lipid A, 3-O-deacylovaný lipid A a disacharid A. LPS vyvolává produkci IL-Ια mnohem silněji.
IL-1 a produkce disacharidu A je alespoň tak silná jako u lipidu A a 3-O-deacylovaného lipidu A.
Produkce interleukinu-6 (IL—6)
IL-6 se produkuje aktivovanými monocyty nebo makrofágy, T- a B-lymfocyty. IL-6 indukuje mnoho jiných proliferací určitých typů buněk, růstovou inhibici určitých melanomových buněčných linií, diferenciaci B-lymfocytů a stimulaci IgG sekrece, diferenciaci cytotoxických T-buněk a slabou antivirální aktivitu.
IL-6 koncentrace v supematantech makrofágů byla stanovena ELISA testem (kit ENDOGEN, EM-IL-6).
Výsledky jsou shrnuty v tabulce 6.
Tabulka 6
Produkce IL-6 v supematantech makrofágů stimulovaných LPS a příbuznými produkty
-17CZ 290331 B6
| Produkt | nejvyšší zkoušená | koncentrace | minimální | ||
| koncentrace | 500 pg/ml | detekovaná koncentrace | |||
| konc. | IL-6 | konc. | IL-6 | konc. IL-6 | |
| (pg/ml) | (pg/ml) | (pg/ml) | (pg/ml) | (pg/ml) (pg/ml) |
| slepý = TEA 0,1 % | 500 | 1150 ±80 | 0 | 710 ±240 | — | — |
| LPS E.Coli | 1600 | 13860 ±2750 | 0,006 | 2400 ± 960 | 0,3 | 6950 |
| lipid A | 160 až 0,016 | 2800 až 2200*) | 0,016 | 2460 ±50 | ND**) | ND**) |
| 3-O-deacylovaný lipid A | 160 až 0,016 | 3000 až 2200*) | 0,016 | 2410±160 | ND**) | ND**) |
| disacharid A | 50 | 5700 ±2650 | 0,016 | 850 ±350 | 1 | 2850 |
*) Indukovaná aktivita je relativně konstantní v testovaném rozmezí a neposkytuje maximum. **) ND = nestanoveno.
Aktivita indukovaná nejslabší koncentrací testovaného produktu (0,016) je ještě větší než 50 % aktivita.
Stimulace IL-6 sekrece disacharidem A je významně nižší než u LPS. Nicméně disacharid A indukuje IL-produkci v makrofázích silněji než lipid A a 3-O-deacylovaný lipid A.
Produkce tumor-nekrosis-faktoru-alfa (INF-a)
TNF-a je hlavně produkován makrofágy a monocyty stimulovanými LPS. Aktivity indukované TNF-α mají inter alia antivirální aktivitu, cytolytickou a cytostatickou aktivitu pro určité buněčné typy, růst určitých buněčných linií, antigenovou expresi jako jsou hlavní histokompatibilní komplexy třídy I a II, nekrózu methylcholanthrenem indukovaného sarkomu, aktivaci polymorfonukleámích leukocytů (PMN), osteoklastovou aktivaci a kostní resorpci. TNF-α je také základní mediátor v toxickém šoku a sepsi.
Koncentrace TNF-α v supematantech makrofágů byla stanovena ELISA testem (kit GENZYME, Factor-test mTNF-a).
Výsledky jsou uvedeny v tabulce 7
Tabulka 7
Produkce TNF-α v supematantech makrofágů pomocí LPS a příbuznými produkty
| Produkt | nejvyšší zkoušená koncentrace | koncentrace IL-la (pg/ml) | minimální detekovaná koncentrace | ||
| konc. (pg/ml) | IL-la (pg/ml) | konc. (pg/ml) | IL-la (pg/ml) | ||
| slepý = TEA 0,1 % | 500 | 138 ±9 | 138 ± 9 | 0 | <100*) |
| LPS E.Coli | 100 až 6,25 | 257 až 284 | 130***) | 0,006 | 175 ±55 |
| lipid A | 500 | 223 ± 64 | 223 ± 64 | 0,016 | 118± 9 |
| 3-O-deacylovaný lipid A disacharid A | 500 | 311 ± 72 | 311 ± 72 | 0,016 | 155 ±6 |
| 500 | 530 ±139 | 530 ±139 | 0,16 | 159 ±43 |
*) Hranice detekce testuje řádově 100 pg/ml.
**) TNF-Ια koncentrace je relativně konstantní mezi 100 a 6,25 pg/ml. ***) TNF-α koncentrace je extrapolována z křivky postupného ředění.
- 18CZ 290331 B6
Nebylo možno stanovit maximální produkci TNF-α, protože produkce se ještě zvyšovala při nej vyšší testované koncentraci.
Na rozdíl od jiných testů byla produkce TNF-α indukovaná LPS nižší než u disacharidů A. Disacharid A indukuje TNF-α stejně nebo silněji než lipid A nebo 3-O-deacylovaný lipid A.
Prostaglandin E2 (PGE2) produkce
PGE1 a PGE2 jsou hlavní metabolity arachidonové kyseliny makrofágy stimulovanými LPS, TNF-α nebo IL-1. PGE vykazuje imunomodulační aktivity T- a B-lymfocytů. Jeví se jako indukující stimulaci Th2 a inhibici Thi T-lymfocytové subpopuace a obrat v izotypu imunoglobulinů.
PGE2 koncentrace v supematantech makrofágů byla měřena RIA-testem (kit PAESEL + LOREI, 36-104-6001 Prostaglandin E2 3H-RIA Kit).
Výsledky jsou shrnuty v tabulce 8.
Tabulka 8
Produkce PGE2 v supematantech makrofágů pomocí LPS a příbuznými produkty
| Produkt | nejvyšší koncentrace indukované aktivity | minimální koncentrace indukované aktivity | ||
| konc. (pg/ml) | PGE2 (pg/ml) | konc. (pg/ml) | PGE2 (pg/ml) | |
| slepý = TEA 0,1 % | 500 | <80*) | — | <80*) |
| LPS E.Coli | 1600 | 1120 až 135 | 6,25 | 153 ±29 |
| lipid A | 500 | <80*) | — | <80*) |
| 3-O-deacylovaný lipid A | 500 | 240 ± 25 | 500 | 240 ± 25 |
| disacharid A | 500 | 540 ± 65 | 16 | 80 ±41 |
*) Hranice detekce testuje řádově 80 pg/ml.
Nebylo možno stanovit maximální produkci PGE2, protože produkce se ještě zvyšovala při nejvyšší použité koncentraci. Stimulace PGE2 produkce disacharidem A je výrazně nižší než u LPS. Nicméně disacharid A byl aktivnější než lipid A a 3-O-deacylovaný lipid A. Lipid A neindukoval PGE2 produkci a 3-O-deacylovaný lipid A pouze v nejvyšší použité koncentraci.
Závěr
Disacharidy podle vynálezu jsou aktivní in vitro a indukují produkci NO, IL-Ία, IL-6, TNF-a a PGE2. Disacharidy podle vynálezu jsou tak aktivní nebo i aktivnější než lipid A a 3-Odeacylovaný lipid A, ale vykazují podstatně redukovanou endotoxicitu jak bylo stanoveno LAL testem. Nižší aktivita lipidu A a 3-O-deacylovaného lipidu A by mohla být způsobena rozdíly v čistotě. Disacharidy A a B jsou čištěny HPLC, lipid A je komerční biologický preparát (Sigma L—5399) a 3-O-deacylovaný lipid A se připraví podle US-A-4 912 054, vychází se z komerčního přípravku lipidu A. Pouze produkt s vyšší aktivitou je LPS, kteiý indukuje obecně vyšší odezvu a vyžaduje nižší koncentraci k vyvolání významného signálu.
-19CZ 290331 B6
3. In vivo biologická aktivita
In vivo biologická aktivita disacharidu A byla hodnocena na protinádorovou aktivitu proti peritoneální karcinomatosis indukované v BDIX krysách. Pro b buňky, získané podle metody Martina (Martin F. a spol., Intemational Joumal of Cancer, Vol.32, str. 326-327 (1983)), byly injektovány intraperitoneálně krysám (106 buněk na krysu). Po 10 dnech se objevují početné pevné uzlíky v mesenteriu jako mléčné skvmy a progresivně postupují do peritoneální dutiny (viz Lagadac P. a spol., Invasion and Metastasis, Vol.7, str. 83-95 (1987)). Hemorrhagický ascitus se objevuje po 4-5 týdnech a všechny krysy hynou během 8-12 týdnů.
Imunoterapie začíná 14 dnů po injekci tumorálních Pro b buněk. Ošetření zahrnuje intraperitoneální injekce disacharidu A; dávky 0,1, 1,3 a 0,8 mg/kg tělesné hmotnosti. Disacharid A byl rozpuštěn ve vodném roztoku 0,9 % NaCl a 0,1 % triethylaminu. Krysy dostaly pět injekcí po jedné každých 3,5 dne. Kontrolní skupina byla injektována vodným roztokem. Obě skupiny zahrnují 10 krys.
týdnů po injekci byla provedena autopsie tumorálních buněk. Rozsah peritoneální karcinomatózy byl hodnocen vizuálně a krysy byly klasifikovány podle zvyšující se karcinomatosis.
Klasifikace velkosti uzlíků je následující:
třída 0: neviditelné žádné nádorové uzlíky;
třída 1: málo uzlík velikosti menší než 0,2 cm;
třída 2: příliš mnoho uzlíků aby byly spočteny do velikosti až 0,5 cm;
třída 3: nádory velikosti až 1 cm;
třída 4: tumorální kavita plně invadována nádory, velikost několik cm.
Výsledky jsou uvedeny v tabulce 9.
Tabulka 9
In vivo protinádorová aktivita disacharidu A v peritoneální karcinomatosis
| Disacharid A (dávka) | počet krys s karcinomatózou třídy: | vliv produktu (1) | ascitický objem (ml/krysa) | vliv produktu (2) | |||||
| 0 | 1 | 2 | 3 | 4 | meze | průměr | |||
| 0 mg/kg | 0 | 1 | 1 | 2 | 6 | 0-64 | 40±24 | ||
| 0,1 mg/kg | 0 | 2 | 0 | 4 | 4 | NS | 0-18 | 7±7 | p< 0,001 |
| 0,3 mg/kg | 2 | 3 | 2 | 2 | 1 | p<0,01 | 0-20 | 2±6 | p < 0,001 |
| 0,8 mg/kg | 1 | 6 | 1 | 1 | 1 | p<0,01 | 0-2 | 0±l | p < 0,001 |
Statistická významnost protinádorové aktivity byla vypočtena testem Kruskal-Wallise (1) nebo (2) za použití varianční analýzy.
Je zřejmé, že disacharid A vykazuje dávkově závislý protinádorový účinek.
4. Akutní toxicita
Disacharid A byl injektován do kaudální vény samce a samice NMRI myši (stáří 6-7 týdnů). Dávka až 100 mg/kg tělesné hmotnosti nevyvolává jakoukoliv smrt.
-20CZ 290331 B6
Příklad 7
Výchozí materiál je lipopolysacharid zPseudomonas aeruginosa (Sigma, Product No. L7018). Struktura lipidu A je již známá (viz Kulshin a spol. v Eur. J. Biochem. 198 (1991) 697-704). Na rozdíl od lipidu A zE. coli převládající druhy obsahují acyloxyacylové zbytky na obou aminoskupinách diglukosaminového difosfátového řetězce. Navíc zde je 3-hydroxydekanová kyselina v poloze 3', ale stejný mastný - acylzbytek je pouze přítomen v poloze 3 v malé frakci.
Odstranění tohoto mastného - acylzbytku v poloze 3' by mohla vést k analogu disacharidů C. Další hydrolýza by mohla vést ke ztrátě esterifikovaného mastného - acylzbytku na acyloxyacylskupině buď v poloze 2 nebo 2'. Tyto struktury jsou analogické disacharidům C a D.
Lipopolysacharidy zPs. aeruginosa (Sigma L7018) byly rozpuštěny v 0,lM octanu sodném pH 4,0 při mg/ml a zahřívány 120 min na 100 °C. Po ochlazení bylo přidáno 0,5 objemů propan-2olu a pak tetrabutylamoniumfosfát (TBAP) na konečnou koncentraci 25 mM. Triethylamin (TEA) byl přidán na pH 9,0 (přibližně, pH papírky). Směs byla nanesena na Cl8 Sep-Pak (Waters) s recyklováním (10 průchodů). Sep-Pak byl promyt 10 ml 5 mM TBAP v acetonitrilu: H2O 1:1 (obj./obj.) a pak 10 ml acetonitrilu. Adsorbované substance byly eluovány 4 ml chloroformu: methanolu 2:1 (obj./obj.).
Dva hlavní píky, PsAl a PsA2 (obr. 6) byly čištěny pomocí HPLC a byly analyzovány mastné kyseliny. Složení mastných kyselin odpovídá molekulám popsaným Kulshinem a spol. (tabulka dále). PsAl je méně hydrofobní než PsA2 protože se eluuje z kolony s nižší retenční dobou (Rt). Toto odpovídá molekule se dvěma 2OH:C12:0 kyselými zbytky. PsA2 má jak 2OH-C12:0 aC12:0.
| Pík | identifikovaná mastná kyselina |
| PsAl | 30H:C10:0 2OH:C12:0 3OH:C12:0 |
| PsA2 | 30H:C10:0 C12:0 2OH:C12:0 3OH:C12:0 |
Rozpouštědlo bylo odstraněno na rotační odparce a zbytek byl znovu rozpuštěn v 0,2 % TEA ve vodě.
K roztoku Ps. aeruginosa lipid A byl přidán hydroxid sodný na koncentraci 0,2M a roztok byl inkubován při teplotě místnosti 60 minut. Roztok pak byl neutralizován (8,5 %) kyselinou ortofosforečnou. Potom byl aplikován na HPLC systém s reverzní fází (HP1050 se Supelco LC18, 3 pm kolona s reverzní fází, s předkolonou) ekvilibrovaný v 75 % rozpouštědle A (5 mM TBAP v acetonitrilu - vodě 1:1 (obj./obj.), a 25 % rozpouštědlo B (5 mM TBAP v propan-2-olu : vodě 9:1 (obj./obj.) a eluován s gradientem 2 % rozpouštědlo B/min na 100 % B. Píky byly detekovány při absorpci 210 nm. Hlavní píky byly spojeny (viz obr. 7). Tyto byly zředěny 2 objemy vody a aplokovány na Cl8 Sep-Pak patrony ekvilibrované v rozpouštědle A. Sep-Paky byly promyty 10 ml 0,45 % chloridu sodného v propan-2-olu : H2O 1:3 (obj./obj.), 10 ml vody a 10 ml acetonitrilu. Adsofbované substance byly eluovány se 4 ml chloroformu:methanolu 2:1 (obj./obj.) a rozpouštědla odstraněna za sníženého tlaku. Frakce byly znovu rozpuštěny ve 100 μΐ vody.
Mastný - acyl obsah frakcí byl analyzován plynovou chromatografií po hydrolýze ve 4M HC1, 100 °C, 4h. Uvolněné mastné kyseliny byly převedeny na methylestery podle Millera (Miller L. Gas Chromatography application notě 228-37 [Hewlett Packard] a analyzovány na plynovém
-21 CZ 290331 B6 chromatografií Hewlett Packard 5890 s připojenou křemičitou kolonou (Supelco 2-4026) s porovnáním ke standardním methylesterům mastných kyselin (Supelco).
Po hydrolýze extraktu lipidu A je pozorováno mnoho píků při HPLC s reverzní fází. Hlavní píky 5 (PaAOHl, 2, 4 a 6) byly shromážděny z HPLC. Mastné kyseliny byly identifikovány v každé frakci, jak je uvedeno dále.
| Pík | identifikovaná mastná kyselina |
| PsAOHl | 3OH-C12:0 2OH-C12:0 |
| PsAOH2 | 3OH-C12:0 2OH-C12:0 |
| PsAOH4 | 3OH-C12:0 C12:0 |
| PsAOH6 | 3OH-C12:0 2OH-C12:0 C12:0 |
Strukturní vzorce těchto disacharidů jsou následující:
*PsAOH 1:2-deoxy-6-0-[2-deoxy-2-[(R)-3-[(S)-2-hydroxydodekanoyloxy]-dodekanoylamino]-4-0-fosfono-P-D-glukopyranosyl]-2- [(R)-3-hydroxydodekanoylamino] -a-Dglukopyranosyl-dihydrogenfosfát;
*PsAOH2: 2-deoxy-6-0-[2-deoxy-2-[(R)-3-hydroxydodekanoylamino]-4-0-fosfono-p-Dglukopyranosyl]-2- [(R)-3-hydroxydodekanoyloxy]-dodekanoylamino) -a-D-glukopyranosyldihydrogenfosfát;
*PsAOH3: 2-deoxy-6-O-[2-deoxy-2-[(R)-3-dodekanoyloxydodekanoylamino]-4-O20 fosfono-p-D-glukopyranosyl]-2- [(R)-3-hydroxydodekanoylaminoj -a-D-glukopyranosyldihydrogenfosfát;
*PsAOH4: 2-deoxy-6-0-[2-deoxy-2-[(R)-3-dodekanoyloxydodekanoylamino]-4-0fosfono-p-D-glukopyranosyl]-2- [(R)-3- hydroxydodekanoylamino] -a-D-glukopyranosyl25 dihydrogenfosfát;
*PsAOH5: 2-deoxy-6-O-[2-deoxy-2-[(R)-3-dodekanoyloxydodekanoylamino]-4-Ofosfono-|3-D-glukopyranosyl]-2- [(R)-3-[(S)-2-hydroxydodekanoyloxy]-dodekanoylamino]a-D-glukopyranosyl-dihydrogenfosfát;
a jsou uvedeny dále.
-22CZ 290331 B6
disacharid F (PsAOH2)
-23CZ 290331 B6 disacharid (PsAOH4)
disacharid r (PsAOHS)
-24CZ 290331 B6
Frakce byly také analyzovány elektro - sprejovou hmotovou spektrometrií (ES-MS) v negativním modu. Vg Biotech BIO-Q zařízení bylo použito s trojnásobným kvadrupolovým analyzérem. 2 až 4 μΐ každého vzorku byly zředěny do 10 μΐ roztoku acetoniltril:voda:25 % amoniak 50:50:1 (obj./obj.). 10 μΐ pak bylo vstřikováno přímo do zdroje hmotového spektrometru. Jako eluent byl použit roztok acetoniltril:voda:25 % amoniak 50:50:1 (obj./obj.) při 7 μΐ 1/min. Pro analýzu fragmentace základních iontů byly rodičovské ionty z prvního kvadrupolu podrobeny kolizně aktivovanému rozkladu ve druhém kvadrupolu za použití argonu jako kolizního plynu. Dceřinné ionty byly detekovány ve třetím kvadrupolu.
Hmotnost vypočtená pro každý z píků a hmotnost pozorovaná při ES-MS jsou uvedeny dále.
| Pík | vypočtena hmotnost | pozorovaná hmotnost |
| PsAOHl | 1093,5 | 1093,4 |
| PsAOH2 | 1093,5 | 1093,1 |
| PsAOH4 | 1077,5 | 1077,0 |
| PsAOH6 | 1275,8 | 1275,7 |
V každém případě je dobrý soulad.
V případě PsAOHl a PsAOH2 jsou hmoty shodné. Toto indikuje, že tyto představují dvě izoformy molekuly, lipidy A jsou známé jako fragmentující za určitých analytických podmínek ve hmotové spektroskopii (Kulshin, 1991; a Cotter a spol., Biomed. Encl. Mass Spectrom. 14 (1987), 591-598). Jsou produkovány ionty, které představují neredukovanou polovinu molekuly sadící 102 hmotnostních jednotek. Takto může být se dvěma MS v tandemu fragmentován základní iont v prvním MS a „dceřinné“ ionty být detekovány ve druhém MS. Toto odstraňuje možnost, že sekundární pozorované ionty jsou kontaminanty; musí pocházet z původního iontu fragmentací. Hmotnost dceřinných iontů očekávaných pro každou frakci a hmotnosti pozorované na Ms-MS jsou uvedeny dále.
Pík_____________vypočtena hmotnost fragmentu_______pozorovaná hmotnost fragmentu
PsAOHl 558,5 nebo 756,8756,1
PsAOH2 558,5 nebo 756,8557,7
PsAOH4 558,5 nebo 740,8739,9
PsAOH6 558,5 nebo 740,8740,1
Tato pozorování jasně identifikují struktuiy disacharidů E, F, G a H.
Pro interní porovnání byl disacharid A také analyzován pomocí ES-MS. Vypočtená hmotnost byla 768,9 a pozorovaná hmotnost fragmentu 768.
Biologická aktivita frakcí byla zkoušena stimulací nitritové produkce v myších peritoneálních makrofázích jak jsou popsány dříve.
Množství každého analogu v zásobním roztoku bylo stanoveno absorpcí na HPLC s odkazem na absorpci disacharidů A. Frakce vykazují aktivity řádově stejné jako disacharid A (obr. 8). Disacharid H, který měl dvě acyloxyacylové skupiny a žádné mastné acylové zbytky je nejaktivnější. Poloha acyloxyacylu, 2 versus 2', má pouze malý vliv na aktivitu.
Za účelem odstranění možnosti, že aktivita byla způsobena kontaminací vzorků jinými substancemi jako je LPS, disacharidy E, F, G a H byly znovu čištěny HPLC s reverzní fází a oblasti HPLC základní linie právě před a právě po píku byly také shromážděny a zpracovány stejným způsobem jako frakce, obsahující píky materiálu. Aktivita píkových frakcí a frakcí se základní linií byla zkoušena. Píky, obsahující disacharid E, F, G a H vykazují podobnou aktivitu jak je možno vidět v první eseji. Slepé vzorky, představující oblasti HPLC profilu právě před a po
-25CZ 290331 B6 píku lipid A analogu, byly inaktivovány. Stimulace nitritové produkce je tak specificky spojena s lipid A analogy.
Endotoxicita disacharidů E, F, G a H byla stanovena za použití chromogenního LAL testu (viz výše). Nicméně místo použití 1 mg/ml hovězího sérového albuminu bylo použito 0,1 mg/ml. Výsledky (n = 4 nebo 6) jsou získány ve dvou sériích pokusů a jsou uvedeny dále.
Vzorek endotoxická aktivita v LAL (mg/ml)
| E. coli LPS | 0,58 | ± | 0,14 |
| E. coli lipid A | 0,32 | ± | 0,06 |
| disacharid E | 0,000005 | ± | 0,000002 |
| disacharid F | 0,000025 | ± | 0,000026 |
| disacharid G | 0,00006 | ± | 0,00003 |
| disacharid A | 0,000003 | ± | 0,000002 |
PATENTOVÉ NÁROKY
1. β—(1 —>6) glukosaminové disacharidy obecného vzorce
Claims (33)
1. β—(1 —>6) glukosaminové disacharidy obecného vzorce kde
Ri je hydroxylová skupina, dihydroxyfosfonoyloxyskupina nebo její forma, nesoucí náboj, (C1-C5) acyloxyskupina;
(C1-C5) alkyloxyskupina nebo skupina X;
R2 a R2, jsou (Ci-C24) acylová skupina nebo skupina Y s tou podmínkou, že alespoň jeden z R2 aR2,je skupina Y;
R3 a R3, jsou vodík, (C1-C3) alkylová skupina, nebo (C1-C3) acylová skupina;
-26CZ 290331 B6
R4 je vodík, (C1-C3) alkylová skupina, nebo (C]-C3) acylová skupina;
R4 je vodík, (C1-C5) acylová skupina, (Cj-Cs) alkylová skupina, dimethoxyfosfonoylskupina, nebo fosfonoskupina nebo její forma, nesoucí náboj a
Rí· je vodík, hydroxylová skupina, dihydroxyfosfonoyloxyskupina, hydroxysulfonyloxyskupina, její formy, nesoucí náboj, nebo skupina Z;
přičemž skupina X je vybrána ze skupiny, zahrnující karboxy (C1-C5) alkyloxyskupinu;
-O-CH-[(CH2)mCOOH] [(CH2)mCOOHJ skupinu, přičemž m = 0 až 4 a n = 0 až 5, fosfono (C]-C5) alkylskupinu, dimethoxyfosfonoyloxyskupinu, hydroxysulfonyloxyskupinu, hydroxysulfonyl (Cj—C5) alkylskupinu a nesoucí náboj skupiny X;
přičemž skupina Y je vybrána ze skupiny, zahrnující (Ci-C24) acyloxy (C]-C24) acylskupinu, (Cj-C24) acylamino (C]-C24) acylskupinu, (C]-C24) acylthio (C1-C24) acylskupinu, (C]-C24) alkyloxy (C]-C24) acylskupinu, (C1-C24) alkylamino (Ci-C24) acylskupinu, (Ci-C24) alkylthio (C3—C24) acylskupinu a přičemž je skupina Z vybrána ze skupiny, zahrnující (Ci-C24) alkyloxyskupinu, (Cj—C24) acyloxyskupinu,
3-deoxy-D-manno-2-oktulosonovou kyselinu KDO;
(KDO)n, kden=lažlO, polysacharidový postranní řetězec, jako je postranní řetězec pocházející z přírodního lipopolysacharidu; jádrovou složku jako je složka pocházející z přírodního lipopolysacharidu; a amino-(Ci-C8) alkylkarboxylovou skupinu;
a jejich soli.
-27CZ 290331 B6
2. Disacharid podle nároku 1, kde skupina Y zahrnuje
3—(C]—C24) acyloxy (C]-C24) acylovou skupinu,
3-(Ci-C24) acylamino (C]-C24) acylovou skupinu,
3-(C!-C24) acylthio (C]-C24) acylovou skupinu.
3. Disacharid podle nároku 1 nebo 2, kde skupina Y je (Ci-C24) acyloxy (Ci-C24) acylová skupina.
4. Disacharid podle nároků 1 až 3, kde (C]-C24) acylskupina je zbytek mastné kyseliny, 3-hydroxymastné kyseliny, 3-oxo-mastné kyseliny.
5. Disacharid podle nároků 1 až 4, kde (Ci-C24) acyloxy (C]-C24) acylová skupina, (C]-C24) acylamino (Ci-C24) acylová skupina a (C]-C24) acylthio (Ci-C24) acylová skupina tvořící skupinu Y, zahrnuje (Ci-C24) acylové skupiny vybrané ze skupiny, zahrnující zbytek mastné kyseliny, zbytek 3-hydroxymastné kyseliny, zbytek 3-oxomastné kyseliny.
6. Disacharid podle nároků 3 až 5, kde skupina Y je (Ci-C24) acyloxy (Ci-C24) acylová skupina, kde acylovou skupinou je 3-hydroxy-(C4-C24) acyl, výhodně jde o (C]-C24) acylester (Cs-Cu) mastné kyseliny připojený v poloze 3-hydroxy s (Cj-C20) acylem, výhodně acylem (Cio-Cu) mastné kyseliny.
7. Disacharid podle nároku 6, kde (C]-C24) acyloxyskupina je N-navázaný (Ci-C24) acylester 3-hydroxyCi4-mastné kyseliny spojený ve 3-hydroxypoloze s Ci2-mastnou kyselinou.
8. Disacharid podle nároku 6, kde (C]-C24) acyloxy (Ci~C24) acylová skupina je N-navázaný (Ci-C24) acylester 3-hydroxyCi4-mastné kyseliny připojený ve 3-hydroxypoloze s C]4mastné kyseliny.
9. Disacharid podle nároků 1 až 8, kde R2- je skupina Y.
10. Disacharid podle nároků 1 až 8, kde R2 je skupina Y.
11. Disacharid podle nároků 4 až 10, kde zbytek 3-hydroxymastné kyseliny je 3-hydroxy (C4-C24), výhodně 3-hydroxy(C)0-Ci8) mastné kyseliny.
12. Disacharid podle nároku 11, kde zbytek 3-hydroxymastné kyseliny je 3-hydroxyCi4-mastná kyselina.
13. Disacharid podle nároku 11 nebo 12, kde R2 je zbytek 3-hydroxymastné kyseliny.
14. Disacharid podle nároku 11 nebo 12, kde R2- je zbytek 3-hydroxymastné kyseliny.
15. Disacharid podle nároků 1 až 10, kde R2 a R2· oba znamenají skupinu Y.
16. Disacharid podle nároku 15, kde R2 a R2- znamenají (C]-C24) acyloxy (C]-C24) acylovou skupinu, obsahující N-napojený 3-hydroxy(C4-C24) acyl, výhodně (Ci-C24) acylester (Cg-Cig) mastné kyseliny, spojený ve 3-hydroxylové poloze s (C]-C2o) acylem, výhodně s acylem (Cio-Cig) mastné kyseliny.
-28CZ 290331 B6
17. Disacharid podle nároku 16, kde R2 a N-napojený (C|-C24) acylester 3-hydroxyC14-mastné kyseliny, spojený ve 3-hydroxypoloze s Ci6-mastnou kyselinou a kde R2 je N-napojený (Cj-C24) acylester 3-hydroxyC]4-mastné kyseliny, spojený ve 3-hydroxypoloze s C]2-mastnou kyselinou.
18. Disacharid podle nároků 1 až 17, kde Rj je dihydroxyfosfonoyloxyskupina.
19. Disacharid podle nároků 1 až 18, kde R4 je vodík.
20. Disacharid podle nároků 1 až 19, kde R| je v a-konfiguraci.
21. Disacharid podle nároků 1 až 20, kde R3 je vodík.
22. Disacharid podle nároků 1 až 21, kde R3- je vodík.
23. Disacharid podle nároků 1 až 22, kde R^· je hydroxylová skupina.
24. Disacharid podle nároků 1 až 23, kde R4· je fosfonoskupina.
25. Disacharid podle nároků 1 až 24, kde disacharid je ve formě soli, obsahující jeden nebo více kationtů.
26. Disacharid podle nároku 25, kde kationty jsou ionty alkalických kovů.
27. Způsob přípravy disacharidu podle nároků 1 až 26, vyznačující se tím, že se
i) připraví výchozí materiál obsahující lipid A skupinu lipopolysacharidů obsažených v mikroorganismech; a ii) výchozí materiál se podrobí alkalickému zpracování při pH 10 až 14 tak, že skupina lipidu A je O-deacylována v poloze 3 a poloze 3'.
28. Způsob podle nároku 27, vyznačující se tím, že výchozí materiál je vybrán ze skupiny, zahrnující lipopolysacharid - obsahující mikroorganismy, gramnegativní bakterie, povrchovou strukturu obsahující frakci těchto mikroorganismů a gramnegativní bakterie, nebo lipopolysacharidy těchto mikroorganismů a gramnegativních bakterií.
29. Způsob podle nároku 27 nebo 28, vyznačující se tím, že výchozím materiálem je lipid A gramnegativní bakterie.
30. Způsob podle nároku 27 nebo 29, vy znač u j í cí se t í m, že alkalickému zpracování podle nároku 27 předchází nebo je následuje kyselé zpracování při pH 1 až 5 pro odstranění skupiny jádra a polysacharidového postranního řetězce.
31. Farmaceutický prostředek, vyznačující se tím, že obsahuje jako účinnou složku disacharid podle nároků 1 až 26 a farmaceuticky přijatelný nosič nebo ředidlo.
32. Disacharid podle nároků 1 až 26 pro použití jako imunomodulační látka a/nebo protinádorová látka.
33. Disacharid podle nároků 1 až 26 pro použití jako složka vakcíny.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| EP93203223 | 1993-11-17 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CZ141896A3 CZ141896A3 (en) | 1996-10-16 |
| CZ290331B6 true CZ290331B6 (cs) | 2002-07-17 |
Family
ID=8214175
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CZ19961418A CZ290331B6 (cs) | 1993-11-17 | 1994-11-17 | Glukosaminové disacharidy, způsob jejich přípravy a farmaceutický prostředek |
Country Status (22)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US6005099A (cs) |
| EP (1) | EP0729473B1 (cs) |
| JP (1) | JP3967769B2 (cs) |
| KR (1) | KR100355470B1 (cs) |
| CN (1) | CN1055093C (cs) |
| AT (1) | ATE195740T1 (cs) |
| AU (1) | AU700485B2 (cs) |
| BR (1) | BR9408071A (cs) |
| CA (1) | CA2175375C (cs) |
| CZ (1) | CZ290331B6 (cs) |
| DE (1) | DE69425671T2 (cs) |
| DK (1) | DK0729473T3 (cs) |
| ES (1) | ES2149340T3 (cs) |
| GR (1) | GR3034872T3 (cs) |
| HU (1) | HU219810B (cs) |
| PL (1) | PL181241B1 (cs) |
| PT (1) | PT729473E (cs) |
| RO (1) | RO115731B1 (cs) |
| RU (1) | RU2154068C2 (cs) |
| SI (1) | SI0729473T1 (cs) |
| SK (1) | SK281944B6 (cs) |
| WO (1) | WO1995014026A1 (cs) |
Families Citing this family (142)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5681824A (en) * | 1995-06-05 | 1997-10-28 | Eisai Co., Ltd. | Substituted liposaccharides useful in the treatment and prevention of endotoxemia |
| US6372457B1 (en) * | 1997-01-14 | 2002-04-16 | Arkion Life Sciences Llc | Process and materials for production of glucosamine |
| CN1168702C (zh) * | 1998-06-30 | 2004-09-29 | Om药业 | 酰基-二肽类化合物,其制备方法以及含有前述化合物的药物组合物 |
| TR200102325T2 (tr) | 1999-02-10 | 2002-08-21 | Sankyo Company Limited | Eter tipi lipid A 1-karbosiklik asit analogları |
| ES2572834T3 (es) | 1999-02-17 | 2016-06-02 | Csl Limited | Complejos inmunogénicos y métodos relacionados con los mismos |
| ATE518874T1 (de) * | 1999-11-15 | 2011-08-15 | Oncothyreon Inc | Synthetische lipid-a analogen und verwendungen davon |
| WO2001046127A1 (fr) * | 1999-12-22 | 2001-06-28 | Om Pharma | Pseudodipeptides acyles porteurs d'un bras auxiliaire fonctionnalise |
| KR100898844B1 (ko) * | 1999-12-22 | 2009-05-21 | 옴 파르마 | 작용기화된 보조 아암을 가진 아실 슈도디펩티드 |
| SI2266603T1 (sl) | 2000-10-18 | 2012-12-31 | Glaxosmithkline Biologicals S.A. | Tumorska cepiva |
| DE10111682B4 (de) * | 2001-03-09 | 2004-03-25 | Aventis Pharma Deutschland Gmbh | Caloporosid-Derivate, Verfahren zu deren Herstellung und deren Verwendung |
| RU2289410C2 (ru) * | 2001-04-04 | 2006-12-20 | Корикса Корпорейшн | Профилактика и лечение инфекционных и других заболеваний с помощью соединений, основанных на моно- и дисахаридах |
| KR100465229B1 (ko) * | 2001-04-09 | 2005-01-13 | 주식회사 안지오랩 | 2-아미노-2-데옥시-ｄ-글루코피라노오즈 또는 그의약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 하는 혈관신생억제용 약학적 조성물 |
| JP2006512401A (ja) * | 2001-06-05 | 2006-04-13 | ザ リージェンツ オブ ザ ユニバーシティ オブ ミシガン | ナノエマルジョンワクチン |
| RU2288723C2 (ru) * | 2002-02-04 | 2006-12-10 | Корикса Корпорейшн | Профилактическое и терапевтическое лечение инфекционных и других заболеваний с помощью иммуноэффективных соединений |
| RU2289585C2 (ru) * | 2002-02-04 | 2006-12-20 | Корикса Корпорейшн | Новые аминоалкилглюкозаминидфосфатные соединения, иммуностимулирующая фармацевтическая композиция, их содержащая, и способ индуцирования иммунного ответа |
| ES2456066T3 (es) * | 2002-07-08 | 2014-04-21 | Corixa Corporation | Procesos para la producción de fosfato de aminoalquil glucosaminida e inmunoefectores disacáridos, e intermedios para ello |
| AU2003285932A1 (en) | 2002-10-23 | 2004-05-13 | Glaxosmithkline Biologicals S.A. | Methods for vaccinating against malaria |
| GB0321615D0 (en) | 2003-09-15 | 2003-10-15 | Glaxo Group Ltd | Improvements in vaccination |
| EP2269638A3 (en) | 2004-05-28 | 2012-06-13 | GlaxoSmithKline Biologicals S.A. | Vaccine compositions comprising virosomes and a saponin adjuvant |
| RU2396960C2 (ru) * | 2004-07-23 | 2010-08-20 | Ом Фарма | Комбинированная противоопухолевая терапия и фармацевтические композиции для нее |
| WO2006095270A1 (en) * | 2005-03-10 | 2006-09-14 | Om Pharma | Combination anticancer therapy or om-174 and pharmaceutical compositions therefor |
| GB0417494D0 (en) | 2004-08-05 | 2004-09-08 | Glaxosmithkline Biolog Sa | Vaccine |
| US20060210590A1 (en) | 2005-02-03 | 2006-09-21 | Alk-Abello A/S | Minor allergen control to increase safety of immunotherapy |
| GB0503337D0 (en) | 2005-02-17 | 2005-03-23 | Glaxosmithkline Biolog Sa | Compositions |
| AR054020A1 (es) | 2005-03-23 | 2007-05-30 | Glaxosmithkline Biolog Sa | Nuevo uso |
| GB0607088D0 (en) | 2006-04-07 | 2006-05-17 | Glaxosmithkline Biolog Sa | Vaccine |
| KR101515078B1 (ko) | 2005-12-22 | 2015-04-24 | 글락소스미스클라인 바이오로지칼즈 에스.에이. | 백신 |
| EP2476433A1 (en) | 2006-03-30 | 2012-07-18 | GlaxoSmithKline Biologicals S.A. | Immunogenic composition |
| KR100780868B1 (ko) * | 2006-07-10 | 2007-11-30 | 부경대학교 산학협력단 | 항암효과를 나타내는 4급 아미노 글루코사민 화합물 |
| PT2422810E (pt) | 2006-07-17 | 2014-12-03 | Glaxosmithkline Biolog Sa | Vacina da gripe |
| US9364525B2 (en) | 2006-07-18 | 2016-06-14 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Vaccines for malaria |
| US8323664B2 (en) | 2006-07-25 | 2012-12-04 | The Secretary Of State For Defence | Live vaccine strains of Francisella |
| PL2068918T5 (pl) | 2006-09-26 | 2024-12-02 | Access To Advanced Health Institute | Kompozycja szczepionki zawierająca syntetyczny adiuwant |
| US20090181078A1 (en) | 2006-09-26 | 2009-07-16 | Infectious Disease Research Institute | Vaccine composition containing synthetic adjuvant |
| EP2433648A3 (en) | 2006-10-12 | 2012-04-04 | GlaxoSmithKline Biologicals S.A. | Vaccine comprising an oil in water emulsion adjuvant |
| WO2008059307A2 (en) * | 2006-11-16 | 2008-05-22 | Om Pharma | Functionalized beta 1,6 glucosamine disaccharides and process for their preparation |
| PL2137210T3 (pl) | 2007-03-02 | 2017-06-30 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Nowy sposób i kompozycje |
| SI2114421T1 (en) | 2007-03-05 | 2018-04-30 | Om Pharma | A bacterial extract for respiratory disorders and a process for its preparation |
| PE20090146A1 (es) | 2007-04-20 | 2009-03-23 | Glaxosmithkline Biolog Sa | Composicion inmunogenica contra el virus influenza |
| CA2690708A1 (en) | 2007-06-26 | 2008-12-31 | Glaxosmithkline Biologicals S.A. | Vaccine |
| WO2009117035A1 (en) | 2007-12-19 | 2009-09-24 | The Henry M. Jackson Foundation For The Advancement Of Military Medicine, Inc. | Soluble forms of hendra and nipah virus f glycoprotein and uses thereof |
| JP5711972B2 (ja) | 2007-12-24 | 2015-05-07 | アイディー バイオメディカル コーポレイション オブ ケベック | 組換えｒｓｖ抗原 |
| ES2553113T3 (es) | 2008-04-16 | 2015-12-04 | Glaxosmithkline Biologicals S.A. | Vacuna |
| EP2293814A4 (en) * | 2008-05-23 | 2013-02-13 | Univ Michigan | NANOEMULSION AGENTS |
| WO2009143524A2 (en) | 2008-05-23 | 2009-11-26 | The Regents Of The University Of Michigan | Nanoemulsion vaccines |
| CA2735724C (en) | 2008-06-19 | 2018-07-24 | Variation Biotechnologies Inc. | Compositions and methods for treating influenza |
| CN102223876A (zh) * | 2008-09-26 | 2011-10-19 | 纳米生物公司 | 纳米乳剂治疗性组合物及其使用方法 |
| AU2009323996A1 (en) | 2008-12-03 | 2011-07-07 | Institut Pasteur | Use of phenol-soluble modulins for vaccine development |
| WO2010079081A1 (en) | 2009-01-07 | 2010-07-15 | Glaxosmithkline Biologicals S.A. | Methods for recovering a virus or a viral antigen produced by cell culture |
| GB0901411D0 (en) | 2009-01-29 | 2009-03-11 | Secr Defence | Treatment |
| GB0901423D0 (en) | 2009-01-29 | 2009-03-11 | Secr Defence | Treatment |
| US20110293660A1 (en) | 2009-02-06 | 2011-12-01 | Bruno Rene Andre | Novel method |
| PE20110992A1 (es) | 2009-02-17 | 2012-02-12 | Glaxosmithkline Biolog Sa | Composicion inmunogenica que comprende un antigeno del virus del dengue |
| GB0906234D0 (en) | 2009-04-14 | 2009-05-20 | Secr Defence | Vaccine |
| US20110097418A1 (en) * | 2009-05-29 | 2011-04-28 | Variation Biotechnologies, Inc. | Compositions and methods for treating influenza |
| CA2764374C (en) | 2009-06-05 | 2019-11-19 | Infectious Disease Research Institute | Synthetic glucopyranosyl lipid adjuvants |
| CA2765511C (en) | 2009-06-16 | 2015-05-12 | The Regents Of The University Of Michigan | Nanoemulsion vaccines |
| EP2445527A2 (en) | 2009-06-24 | 2012-05-02 | ID Biomedical Corporation of Quebec | Vaccine |
| HUE028085T2 (en) | 2009-06-24 | 2016-11-28 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Recombinant RSV antigens |
| CA2803282C (en) | 2009-07-06 | 2018-05-01 | David E. Anderson | Methods for preparing vesicles and formulations produced therefrom |
| JP5854559B2 (ja) | 2009-07-06 | 2016-02-09 | ヴァリエーション バイオテクノロジーズ インコーポレイテッド | 小胞を調製する方法及びこれから製造される製剤 |
| CA2768186A1 (en) | 2009-07-15 | 2011-01-20 | Novartis Ag | Rsv f protein compositions and methods for making same |
| GB0913680D0 (en) | 2009-08-05 | 2009-09-16 | Glaxosmithkline Biolog Sa | Immunogenic composition |
| JP5774010B2 (ja) | 2009-09-25 | 2015-09-02 | グラクソスミスクライン バイオロジカルズ ソシエテ アノニム | インフルエンザウイルスのための免疫拡散アッセイ |
| GB0919117D0 (en) | 2009-10-30 | 2009-12-16 | Glaxosmithkline Biolog Sa | Process |
| WO2011101332A1 (en) | 2010-02-16 | 2011-08-25 | Proyecto De Biomedicina Cima, S.L. | Compositions based on the fibronectin extracellular domain a for the treatment of melanoma |
| US20110229512A1 (en) * | 2010-03-19 | 2011-09-22 | The Regents Of The University Of Michigan | Compositions and methods for diagnosing and treating urinary tract infections |
| CA2797059A1 (en) | 2010-05-03 | 2011-11-10 | Glaxosmithkline Biologicals S.A. | Novel method |
| GB201009273D0 (en) | 2010-06-03 | 2010-07-21 | Glaxosmithkline Biolog Sa | Novel vaccine |
| US8658603B2 (en) | 2010-06-16 | 2014-02-25 | The Regents Of The University Of Michigan | Compositions and methods for inducing an immune response |
| WO2012006367A2 (en) | 2010-07-06 | 2012-01-12 | Variation Biotechnologies, Inc. | Compositions and methods for treating influenza |
| BR112013004582A2 (pt) | 2010-09-27 | 2016-09-06 | Crucell Holland Bv | método para induzir uma resposta imune em um sujeito contra um antígeno de um parasita que causa a malária |
| EP2627352B1 (en) | 2010-10-15 | 2017-05-10 | GlaxoSmithKline Biologicals S.A. | Cytomegalovirus gb antigen |
| US10736844B2 (en) | 2011-01-13 | 2020-08-11 | Variation Biotechnologies Inc. | Compositions and methods for treating viral infections |
| BR112013018074A2 (pt) | 2011-01-13 | 2020-12-01 | Variation Biotechnologies, Inc. | métodos para a preparação de vesículas e formulações produzidas a partir dessas |
| EP2505640A1 (en) | 2011-03-29 | 2012-10-03 | Neo Virnatech, S.L. | Vaccine compositions for birnavirus-borne diseases |
| EA027236B1 (ru) | 2011-04-08 | 2017-07-31 | Иммьюн Дизайн Корп. | Иммуногенные композиции и способы применения таких композиций для индукции гуморального и клеточного иммунного ответа |
| CA2835644C (en) | 2011-05-13 | 2021-06-15 | Novartis Ag | Pre-fusion rsv f antigens |
| CN103533953A (zh) | 2011-05-17 | 2014-01-22 | 葛兰素史密丝克莱恩生物有限公司 | 针对肺炎链球菌的疫苗 |
| PL2758432T3 (pl) | 2011-09-16 | 2019-08-30 | Ucb Biopharma Sprl | Przeciwciała neutralizujące przeciw głównym egzotoksynom tcda i tcdb z clostridium difficile |
| US20130122038A1 (en) | 2011-11-14 | 2013-05-16 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department | Heterologous prime-boost immunization using measles virus-based vaccines |
| AU2013208693B2 (en) | 2012-01-12 | 2017-12-07 | Variation Biotechnologies Inc. | Compositions and methods for treating viral infections |
| EP2806894A4 (en) | 2012-01-27 | 2015-11-04 | Variation Biotechnologies Inc | METHODS AND COMPOSITIONS FOR THERAPEUTIC AGENTS |
| WO2013139744A1 (en) | 2012-03-18 | 2013-09-26 | Glaxosmithkline Biologicals S.A. | Method of vaccination against human papillomavirus |
| US9241988B2 (en) * | 2012-04-12 | 2016-01-26 | Avanti Polar Lipids, Inc. | Disaccharide synthetic lipid compounds and uses thereof |
| US9518078B2 (en) * | 2012-04-12 | 2016-12-13 | Avanti Polar Lipids, Inc. | Disaccharide synthetic lipid compounds and uses thereof |
| HRP20181102T1 (hr) | 2012-05-16 | 2018-09-07 | Immune Design Corp | Cjepiva za hsv-2 |
| US20140037680A1 (en) | 2012-08-06 | 2014-02-06 | Glaxosmithkline Biologicals, S.A. | Novel method |
| AU2013301312A1 (en) | 2012-08-06 | 2015-03-19 | Glaxosmithkline Biologicals S.A. | Method for eliciting in infants an immune response against RSV and B. pertussis |
| EP2970398B1 (en) | 2013-03-13 | 2024-05-08 | The United States of America, as Represented by The Secretary, Department of Health and Human Services | Prefusion rsv f proteins and their use |
| BE1022174B1 (fr) | 2013-03-15 | 2016-02-24 | Glaxosmithkline Biologicals S.A. | Vaccin |
| MX370573B (es) | 2013-04-18 | 2019-12-17 | Immune Design Corp | Monoterapia con glucopiranosil lipido a para usarse en el tratamiento del cancer. |
| US9463198B2 (en) * | 2013-06-04 | 2016-10-11 | Infectious Disease Research Institute | Compositions and methods for reducing or preventing metastasis |
| US20160120967A1 (en) * | 2013-06-04 | 2016-05-05 | Petr Gennadievich Aparin | Modified endotoxic bacteria lipopolysaccharide (variants), combination of modified lipopolysaccharides (variants) and, containing same, a vaccine (variants) and a pharmaceutical composition (variants) |
| US11052142B2 (en) * | 2013-06-04 | 2021-07-06 | Petr G. Aparin | Modified endotoxic bacteria lipopolysaccharide (variants), combination of modified lipopolysaccharides (variants) and, containing same, a vaccine (variants) and a pharmaceutical composition (variants) |
| MX2016001695A (es) | 2013-08-05 | 2016-05-02 | Glaxosmithkline Biolog Sa | Composiciones inmunogenas de combinacion. |
| JP6851827B2 (ja) | 2013-08-30 | 2021-03-31 | グラクソスミスクライン バイオロジカルズ ソシエテ アノニム | 細胞培養中でのウイルスの大規模製造 |
| CN104436157A (zh) | 2013-09-23 | 2015-03-25 | 恩金生物有限公司 | 流感疫苗和治疗 |
| KR101977449B1 (ko) | 2013-11-01 | 2019-05-10 | 유니버시티에트 이 오슬로 | 알부민 변이체 및 이의 용도 |
| DK3069138T3 (en) | 2013-11-15 | 2019-04-08 | Univ Oslo Hf | CTL PEPTID EPITOPES AND ANTIGEN-SPECIFIC T-CELLS, METHODS OF RECOGNITION THEREOF, AND APPLICATIONS THEREOF |
| WO2015092710A1 (en) | 2013-12-19 | 2015-06-25 | Glaxosmithkline Biologicals, S.A. | Contralateral co-administration of vaccines |
| US10821175B2 (en) | 2014-02-25 | 2020-11-03 | Merck Sharp & Dohme Corp. | Lipid nanoparticle vaccine adjuvants and antigen delivery systems |
| WO2015165480A1 (en) | 2014-04-30 | 2015-11-05 | Institute For Research In Biomedicine | Human cytomegalovirus vaccine compositions and method of producing the same |
| MX384992B (es) | 2014-06-13 | 2025-03-14 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Combinaciones inmunógenas. |
| EP4112076A1 (en) | 2014-10-10 | 2023-01-04 | The Regents of The University of Michigan | Nanoemulsion compositions for preventing, suppressing or eliminating allergic and inflammatory disease |
| AU2015384786B2 (en) | 2015-03-03 | 2020-08-27 | The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | Display platform from bacterial spore coat proteins |
| CN107530416A (zh) | 2015-03-05 | 2018-01-02 | 西北大学 | 非神经侵染的病毒及其用途 |
| WO2016207730A1 (en) | 2015-06-22 | 2016-12-29 | The University Of Oslo | Targeting of vaccine antigen to an intracellular compartment |
| WO2016207408A1 (en) | 2015-06-26 | 2016-12-29 | Institute For Research In Biomedicine | Novel vaccines in prevention and treatment of malaria |
| CA3011887C (en) | 2016-03-14 | 2024-10-29 | Universitetet I Oslo | Genetically transformed immunoglobulins with altered FCRN binding |
| WO2017158421A1 (en) | 2016-03-14 | 2017-09-21 | University Of Oslo | Anti-viral engineered immunoglobulins |
| US11173207B2 (en) | 2016-05-19 | 2021-11-16 | The Regents Of The University Of Michigan | Adjuvant compositions |
| US11780924B2 (en) | 2016-06-21 | 2023-10-10 | University Of Oslo | HLA binding vaccine moieties and uses thereof |
| EP3504230A1 (en) | 2016-08-23 | 2019-07-03 | GlaxoSmithKline Biologicals SA | Fusion peptides with antigens linked to short fragments of invariant chain (cd74) |
| GB201614799D0 (en) | 2016-09-01 | 2016-10-19 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Compositions |
| WO2018060288A1 (en) | 2016-09-29 | 2018-04-05 | Glaxosmithkline Biologicals S.A. | Compositions and methods of treatment of persistent hpv infection |
| WO2018096396A1 (en) | 2016-11-22 | 2018-05-31 | University Of Oslo | Albumin variants and uses thereof |
| GB201620968D0 (en) | 2016-12-09 | 2017-01-25 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Adenovirus polynucleotides and polypeptides |
| US11084850B2 (en) | 2016-12-16 | 2021-08-10 | The Pirbright Institute | Recombinant prefusion RSV F proteins and uses thereof |
| WO2018162450A1 (en) | 2017-03-06 | 2018-09-13 | Fundación Para La Investigación Médica Aplicada | New inmunostimulatory compositions comprising an entity of cold inducible rna-binding protein with an antigen for the activation of dendritic cells |
| WO2018193063A2 (en) | 2017-04-19 | 2018-10-25 | Institute For Research In Biomedicine | Novel malaria vaccines and antibodies binding to plasmodium sporozoites |
| EP3638301A1 (en) | 2017-06-16 | 2020-04-22 | GlaxoSmithKline Biologicals S.A. | Method of treatment |
| EP3678698A1 (en) | 2017-09-07 | 2020-07-15 | University Of Oslo | Vaccine molecules |
| EP3678699A1 (en) | 2017-09-07 | 2020-07-15 | University Of Oslo | Vaccine molecules |
| WO2019051149A1 (en) | 2017-09-08 | 2019-03-14 | Infectious Disease Research Institute | LIPOSOMAL FORMULATIONS COMPRISING SAPONIN AND METHODS OF USE |
| GB201721068D0 (en) | 2017-12-15 | 2018-01-31 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Hepatitis B immunisation regimen and compositions |
| GB201721069D0 (en) | 2017-12-15 | 2018-01-31 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Hepatitis B Immunisation regimen and compositions |
| JP7362667B2 (ja) | 2018-02-12 | 2023-10-17 | イニミューン・コーポレーション | Ｔｏｌｌ様受容体リガンド |
| EP3807298A1 (en) | 2018-06-12 | 2021-04-21 | GlaxoSmithKline Biologicals S.A. | Adenovirus polynucleotides and polypeptides |
| EP3581201A1 (en) | 2018-06-15 | 2019-12-18 | GlaxoSmithKline Biologicals S.A. | Escherichia coli o157:h7 proteins and uses thereof |
| EP3833382A1 (en) | 2018-08-07 | 2021-06-16 | GlaxoSmithKline Biologicals S.A. | Processes and vaccines |
| EP3897846A1 (en) | 2018-12-21 | 2021-10-27 | GlaxoSmithKline Biologicals SA | Methods of inducing an immune response |
| CA3132601A1 (en) | 2019-03-05 | 2020-09-10 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Hepatitis b immunisation regimen and compositions |
| WO2021014385A1 (en) | 2019-07-24 | 2021-01-28 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Modified human cytomegalovirus proteins |
| JP2023553854A (ja) | 2020-12-02 | 2023-12-26 | グラクソスミスクライン バイオロジカルズ ソシエテ アノニム | ドナー鎖補完性ｆｉｍｈ |
| WO2022162012A2 (en) | 2021-01-26 | 2022-08-04 | Eth Zurich | Antibodies broadly targeting coronaviruses and uses thereof |
| WO2022161598A1 (en) | 2021-01-26 | 2022-08-04 | Eth Zurich | Antibodies broadly targeting coronaviruses and uses thereof |
| CN118510790A (zh) | 2021-12-13 | 2024-08-16 | 美国政府(由卫生和人类服务部的部长所代表) | 噬菌体λ-疫苗系统 |
| WO2023144665A1 (en) | 2022-01-28 | 2023-08-03 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Modified human cytomegalovirus proteins |
| WO2024133160A1 (en) | 2022-12-19 | 2024-06-27 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Hepatitis b compositions |
| KR20260015203A (ko) | 2023-05-19 | 2026-02-02 | 글락소스미스클라인 바이오로지칼즈 에스.에이. | 호흡기 세포융합 바이러스 및 스트렙토코쿠스 뉴모니아에 감염에 대한 면역 반응을 유발하는 방법 |
| WO2026041647A1 (en) | 2024-08-19 | 2026-02-26 | Om Pharma Sa | Small molecule targeting tlr4 overexpressing tumors and associated immunosuppressive, angiogenic and fibrotic complications |
Family Cites Families (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| NL8501582A (nl) * | 1985-02-12 | 1986-09-01 | Philips Nv | Videosignaalverwerkingsschakeling voor de verwerking van een geinterlinieerd videosignaal. |
| GR860379B (en) * | 1985-02-22 | 1986-06-11 | Akzo Nv | Novel disaccharide and trisaccharide derivatives of the lipid a type |
| US4912094B1 (en) * | 1988-06-29 | 1994-02-15 | Ribi Immunochem Research Inc. | Modified lipopolysaccharides and process of preparation |
| SU1652319A1 (ru) * | 1988-07-25 | 1991-05-30 | Тихоокеанский институт биоорганической химии Дальневосточного научного центра АН СССР | Производные хитоолигосахаридов, обладающие иммуномодулирующей и противоопухолевой активностью |
| US5158939A (en) * | 1989-07-21 | 1992-10-27 | Wisconsin Alumni Research Foundation | Method of stimulating the immune systems of animals and compositions useful therefor |
| JPH06206893A (ja) * | 1992-09-07 | 1994-07-26 | Suntory Ltd | 新規なジサッカライド誘導体 |
-
1994
- 1994-11-17 PL PL94314494A patent/PL181241B1/pl not_active IP Right Cessation
- 1994-11-17 AU AU12194/95A patent/AU700485B2/en not_active Ceased
- 1994-11-17 CN CN94194201A patent/CN1055093C/zh not_active Expired - Fee Related
- 1994-11-17 EP EP95903265A patent/EP0729473B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1994-11-17 HU HU9601312A patent/HU219810B/hu not_active IP Right Cessation
- 1994-11-17 SK SK613-96A patent/SK281944B6/sk not_active IP Right Cessation
- 1994-11-17 AT AT95903265T patent/ATE195740T1/de active
- 1994-11-17 RU RU96113100/04A patent/RU2154068C2/ru not_active IP Right Cessation
- 1994-11-17 PT PT95903265T patent/PT729473E/pt unknown
- 1994-11-17 RO RO96-00978A patent/RO115731B1/ro unknown
- 1994-11-17 BR BR9408071A patent/BR9408071A/pt not_active Application Discontinuation
- 1994-11-17 DK DK95903265T patent/DK0729473T3/da active
- 1994-11-17 US US08/648,022 patent/US6005099A/en not_active Expired - Lifetime
- 1994-11-17 CZ CZ19961418A patent/CZ290331B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1994-11-17 CA CA002175375A patent/CA2175375C/en not_active Expired - Fee Related
- 1994-11-17 SI SI9430340T patent/SI0729473T1/xx unknown
- 1994-11-17 KR KR1019960702587A patent/KR100355470B1/ko not_active Expired - Fee Related
- 1994-11-17 JP JP51423395A patent/JP3967769B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 1994-11-17 DE DE69425671T patent/DE69425671T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1994-11-17 WO PCT/EP1994/003852 patent/WO1995014026A1/en not_active Ceased
- 1994-11-17 ES ES95903265T patent/ES2149340T3/es not_active Expired - Lifetime
-
2000
- 2000-11-16 GR GR20000402561T patent/GR3034872T3/el unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| PT729473E (pt) | 2001-02-28 |
| PL314494A1 (en) | 1996-09-16 |
| JP3967769B2 (ja) | 2007-08-29 |
| PL181241B1 (pl) | 2001-06-29 |
| CZ141896A3 (en) | 1996-10-16 |
| AU700485B2 (en) | 1999-01-07 |
| EP0729473A1 (en) | 1996-09-04 |
| SK61396A3 (en) | 1996-11-06 |
| AU1219495A (en) | 1995-06-06 |
| RU2154068C2 (ru) | 2000-08-10 |
| ES2149340T3 (es) | 2000-11-01 |
| CN1055093C (zh) | 2000-08-02 |
| DE69425671T2 (de) | 2001-04-19 |
| DE69425671D1 (de) | 2000-09-28 |
| SK281944B6 (sk) | 2001-09-11 |
| ATE195740T1 (de) | 2000-09-15 |
| BR9408071A (pt) | 1996-12-24 |
| JPH09505071A (ja) | 1997-05-20 |
| HUT74738A (en) | 1997-02-28 |
| KR100355470B1 (ko) | 2003-02-17 |
| GR3034872T3 (en) | 2001-02-28 |
| CA2175375A1 (en) | 1995-05-26 |
| SI0729473T1 (en) | 2001-02-28 |
| DK0729473T3 (da) | 2000-10-30 |
| US6005099A (en) | 1999-12-21 |
| HU219810B (hu) | 2001-08-28 |
| CA2175375C (en) | 2010-01-05 |
| HU9601312D0 (en) | 1996-07-29 |
| RO115731B1 (ro) | 2000-05-30 |
| EP0729473B1 (en) | 2000-08-23 |
| WO1995014026A1 (en) | 1995-05-26 |
| CN1137799A (zh) | 1996-12-11 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CZ290331B6 (cs) | Glukosaminové disacharidy, způsob jejich přípravy a farmaceutický prostředek | |
| Gao et al. | Progress in the synthesis and biological evaluation of lipid A and its derivatives | |
| Kulshin et al. | Structural characterization of the lipid A component of Pseudomonas aeruginosa wild‐type and rough mutant lipopolysaccharides | |
| Moran et al. | Structural characterization of the lipid A component of Helicobacter pylori rough-and smooth-form lipopolysaccharides | |
| US5648343A (en) | Method for treating LPS-mediated disorders | |
| US8563523B2 (en) | Synthetic lipid A derivative | |
| RU2481352C2 (ru) | Функционализированные бета 1,6 глюкозамин-дисахариды и способ их получения | |
| Moran et al. | Structural analysis of the lipid A component of Campylobacter jejuni CCUG 10936 (serotype O: 2) lipopolysaccharide: Description of a lipid A containing a hybrid backbone of 2‐amino‐2‐deoxy‐D‐glucose and 2, 3‐diamino‐2, 3‐dideoxy‐D‐glucose | |
| Haishima et al. | Structural investigation on the lipopolysaccharide of Escherichia coli rough mutant F653 representing the R3 core type | |
| Haeffner-Cavaillon et al. | Interleukin-1 induction by lipopolysaccharides: structural requirements of the 3-deoxy-D-manno-2-octulosonic acid (KDO) | |
| Shang et al. | Chemical synthesis of the outer core oligosaccharide of Escherichia coli R3 and immunological evaluation | |
| US5210078A (en) | Trifluoromethyl analogs of fucose and uses thereof | |
| Iida et al. | Chemical structure of lipid A isolated from Comamonas testosteroni lipopolysaccharide | |
| Masoud et al. | The structure of the lipid A component of Sphaerotilus natans | |
| Urbanik-Sypniewska et al. | Cytokine inducing activities of rhizobial and mesorhizobial lipopolysaccharides of different lethal toxicity | |
| Kosma | Chemical synthesis of core structures | |
| Kocharova et al. | D-and L-aspartic acids: New non-sugar components of bacterial polysaccharides | |
| Knirel et al. | Structure of the β-L-fucopyranosyl phosphate-containing O-specific polysaccharide of Escherichia coli O84 | |
| CN120359231A (zh) | 神经节苷脂NGcGM3的合成变体及其在癌症治疗中的用途 | |
| Volk et al. | Structure of lipid A from the marine Gram-negative bacterium Pseudoalteromonas nigrifaciens IAM 13010T | |
| Ledvina et al. | Synthesis of O-[2-acetamido-2-deoxy-6O-stearoyl-and-6-O-(2-tetradecylhexadecanoyl)-β-d-glucopyranosyl]-(1→ 4)-N-acetylnormuramoyl-l-α-aminobutanoyl-d-isoglutamine, lipophilic disaccharide analogues of MDP | |
| Santi | Synthesis of carbohydrate antigens and their structural analogues for vaccines development | |
| Li | Isolation and structural characterization of a major mitogenic lipid derived from Bacillus subtilis as a glycerophosphoglycolipid | |
| Jiao | An anti-Clostridium difficile vaccine: chemical synthesis of the pentasaccharide repeating unit of polysaccharide PS-I | |
| WO2005095428A1 (ja) | バクテリアの効率的表面修飾方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PD00 | Pending as of 2000-06-30 in czech republic | ||
| MM4A | Patent lapsed due to non-payment of fee |
Effective date: 20111117 |