CZ298216B6 - Polynukleotidová vakcína, intradermální prístroj tuto vakcínu obsahující a pouzití plazmidu pro prípravu této vakcíny - Google Patents

Polynukleotidová vakcína, intradermální prístroj tuto vakcínu obsahující a pouzití plazmidu pro prípravu této vakcíny Download PDF

Info

Publication number
CZ298216B6
CZ298216B6 CZ0010699A CZ10699A CZ298216B6 CZ 298216 B6 CZ298216 B6 CZ 298216B6 CZ 0010699 A CZ0010699 A CZ 0010699A CZ 10699 A CZ10699 A CZ 10699A CZ 298216 B6 CZ298216 B6 CZ 298216B6
Authority
CZ
Czechia
Prior art keywords
plasmid
intradermal
bovine
vaccine
polynucleotide vaccine
Prior art date
Application number
CZ0010699A
Other languages
English (en)
Other versions
CZ10699A3 (cs
Inventor
Antonius Maria Rijsewijk@Franciscus
Siebren Schrijver@Remco
Oirschot@Johannes Theodorus van
Original Assignee
Merial
Id-Dlo Institute Of Animal Science And Health
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Merial, Id-Dlo Institute Of Animal Science And Health filed Critical Merial
Publication of CZ10699A3 publication Critical patent/CZ10699A3/cs
Publication of CZ298216B6 publication Critical patent/CZ298216B6/cs

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/12—Viral antigens
    • A61K39/245—Herpetoviridae, e.g. herpes simplex virus
    • A61K39/265—Infectious rhinotracheitis virus
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/12—Viral antigens
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/12—Viral antigens
    • A61K39/155—Paramyxoviridae, e.g. parainfluenza virus
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/20—Antivirals for DNA viruses
    • A61P31/22—Antivirals for DNA viruses for herpes viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
    • A61K2039/525—Virus
    • A61K2039/5256—Virus expressing foreign proteins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/54—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the route of administration
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/55—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the host/recipient, e.g. newborn with maternal antibodies
    • A61K2039/552—Veterinary vaccine
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
    • C12N2710/00011—Details
    • C12N2710/16011—Herpesviridae
    • C12N2710/16711—Varicellovirus, e.g. human herpesvirus 3, Varicella Zoster, pseudorabies
    • C12N2710/16734—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
    • C12N2710/00011—Details
    • C12N2710/16011—Herpesviridae
    • C12N2710/16711—Varicellovirus, e.g. human herpesvirus 3, Varicella Zoster, pseudorabies
    • C12N2710/16741—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector
    • C12N2710/16743—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector viral genome or elements thereof as genetic vector
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2760/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses negative-sense
    • C12N2760/00011—Details
    • C12N2760/18011—Paramyxoviridae
    • C12N2760/18511—Pneumovirus, e.g. human respiratory syncytial virus
    • C12N2760/18534—Use of virus or viral component as vaccine, e.g. live-attenuated or inactivated virus, VLP, viral protein
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2760/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssRNA viruses negative-sense
    • C12N2760/00011—Details
    • C12N2760/18011—Paramyxoviridae
    • C12N2760/18511—Pneumovirus, e.g. human respiratory syncytial virus
    • C12N2760/18541—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector
    • C12N2760/18543—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector viral genome or elements thereof as genetic vector

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Pulmonology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Abstract

Vynález se týká polynukleotidové vakcíny, obsahující úcinné mnozství plazmidu, který obsahuje a exprimuje in vivo v kozní bunce bovinního hostitele molekulu nukleové kyseliny mající sekvenci kódujícíimunogen bovinního patogenu operativne pripojenouk eukaryotickému promotoru, pricemz takový promotor umoznuje expresi uvedeného imunogenu, jejíz podstata spocívá v tom, ze je ve forme pro podání intradermálním prístrojem pro tryskové vstriknutí kapaliny, který aplikuje vakcínu skotu bez jehly do pokozky, kuze nebo/a pod kuzi. Vynález se rovnez týká intradermálního prístroje pro tryskové vstriknutí kapaliny urceného pro podání formulace zvíreti do pokozky, kuze a/nebo pod kuzi bez jehly obsahujícího uvedenou vakcínu, jakoz i pouzití plazmidu obsahujícího sekvenci DNA kódující bovinní imunogena promotor umoznující expresi uvedeného imunogenupro prípravu polynukleotidové vakcíny prizpusobené pro intradermální podání pomocí intradermálního prístroje pro tryskové vstriknutí kapaliny.

Description

Oblast techniky
Vynález se týká polynukleolidové vakcíny, intradcrmálního přístroje pro tryskové vstríknutí kapaliny určeného pro podání formulace zvířeti do pokožky, kůže a/nebo pod kůži bez. jehly a použití plazmidu pro přípravu polynukleotidovc vakcíny.
Dosavadní stav techniky
Imunizace a očkování přímým podáním nuklcotidovýeh sekvencí kódujících proteinový imuno15 gen (tzv. polynukleotidové očkování nebo také očkování pomocí DNA) bylo popsáno v mezinárodní přihlášce WO-A-9011092. Protein kódovaný vsunutou nuklcotidovou sekvencí je v buňkách schopen exprese a vyvolání imunitní odezvy. V přihlášce se uvažuje o použití samotné DNA a DNA obsažené v liposomech. DNA sc výhodně zavádí do svalu. DNA je rovněž možné zavést do kůže, některých orgánů nebo do krve. Injekce může být provedena různými způsoby 20 podání Jakými jsou například intradermální, transkutánní nebo intravenózní podání,
Práce popisující uvedené způsoby očkování vyvolaly zájem odborníků usměrněný na možnost injikovat DNA buď intramuskulárním podáním nebo podáním pomocí tzv. „genového děla“, kteréžto podání spočívá v přímém zavedení mikročástic kovu, například mikročástic z lata, obloží zených DNA přímo do povrchových buněčných vrstev kůže.
Ulmcr J.B. a kol.. Science 259. 1745-1749 (1993). Co G.J.M. a kol., J. of Virology 67, 56645667 (1993), a Xiang Z.Q. Virology 199, 132-140 (1994) popsali způsoby očkování použitím DNA s intramuskulárního podání.
Bylo evidentně prokázáno, že výsledky dosažené při intramuskulárním podání jsou lepší vc srovnání s výsledky dosaženými při podání intradermální m. avšak vezme-li sc v úvahu použití genového děla, je aplikace genovým dělem nejslibnější vzhledem k tomu, žc dávky podávané tímto způsobem jsou mnohem nižší než dávky, které jsou podávány intrainuskulárně. V tomto ohledu 3? lze učinit odkaz na Fynan F. a kol. v P.N.A.S. USA 90, 11478-1 1482 (1993) a mezinárodní přihlášku WO-A-95/20660.
Tang D. a kol.. Nátuře 356, 152-154 (1992) popsali absenci imunitní odezvy po intradermálníni podání lidského růstového hormonu pomocí hypodermální jehly. Autoři naopak potvrdili imu4o nitní odezvu v případě podání za použití genového děla.
Pouze Raz a kol., v P.N.A.S. USA 90, 9519-9523 (1994) uvedli, že intradermální podání může být spojeno sc zvýšenými koncentracemi protilátek.
Samotný postup genového děla jc poměrně nevhodný vzhledem k obtížím při jeho použití a vzhledem k jeho nákladnosti způsobené tím, žc vyžaduje přípravu a použití mikročástic zlata potažených DNA a aplikaci pomocí speciálního šnekového ústrojí.
Vzhledem k tomu byla vyvinuta nová technika podání, předpokládající podání kapaliny pomocí 50 přístroje s tryskou. Firtli P.A. a kol., v Analytical Riochcmistry 205. 365-368 (1992) popsali zařízení nazvané „Ped-o-jet, což je určitý druh injekční stříkačky používané pro podávání lidských vakcín do svalových tkání, a tedy i vakcín obsahujících DNA. Autoři uvedli, že tato injekční stříkačka umožní průchod DNA kůží a její aplikace do svalů, tukových tkání a prsních tkání živých tvorů.
- 1 Wahlsing a kol. v Joumal of Immunological Methods 75, 11-22 (1994) popsali použití zařízení označeného jako ..Med-E-Jet“ jak pro transkutánní, tak i intramuskulární podání.
Rovněž lze uvést jenkins-e a kol., kteří ve Vaccine 13. Í658-Í664 (1995) popsali očkovaní za 5 použití intramuskulární injekční stříkačky.
Syncvciální dýchací bovinní virus BRSV se vyskytuje na celém světě a je schopen způsobit těžká onemocnění dolních částí dýchacího traktu hovězího dobytka, přičemž tato nemoc je podobná onemocnění dčtí lidským syncyciálním dýchacím virem. V rámci jedné studie bylo zjištěno, že κι více než 95 % dvouletých telat je infikováno virem BRSV (Van der Pocl a kol, Arch i ves of
Virology 133.309-321 (1993)), ’
V současné době je značná poptávka po vakcíně proti viru BRSV, vzhledem k tomu, žc žádná taková účinná vakcína není k dispozici. První pokusy očkování dětí vedly ke zjištění snadnějšího i? onemocnění po přirozené infekci, což vedlo k názoru, že očkování by mohlo být nebezpečné (Anderson a kol., Journal of Infectious Diseases, 171, 1-7 (1995)). Je nicméně známo, Žc protilátky proti dvěma hlavním povrchovým glykoproteinům (vazebný protein F a připojený protein Ci) by mohly brát ochrannou úlohu (Kimman a Wastenbronk. Arch i ves of Virology 112, 1-25 (1990)). Četné studie byly rovněž zaměřeny na zvířecí typy, jakými jsou například myši, psi a 2o fretky. Naproti tornu testy očkování hovězího dobytka za použití čištěného proteinu F neposkytly výsledek vedoucí k závěru že, jako u dčtí očkovaných virem HRSV, telata vyvinula neutralizační protilátky a neutralizační protilátky, které mohou interferovat s imunitní odezvou při následné infekci uvedeným virem (Nelson L.D. a kol.. Am. J. Vet. Res., 53, 1315-1321 (1992).
Cílem tohoto vynálezu bylo zdokonalení vakcíny pro očkování skotu podáváním DNA, kterc by bylo alespoň stejně účinné jako očkování intramuskulárním podáním nebo pomocí genového děla, ale které by bylo podstatně jednodušší a méně nákladné.
Dalším cílem vynálezu jc zdokonalení vakcíny v tom smyslu, že vakcína bude mít sníženou 30 škodlivost, zejména pokud jde o zbytky vakcíny přítomné vc tkáních.
Dalším cílem vynálezu týkajících se specificky zvířat určených ke konzumaci je zajistit lakovou neškodnost vakcíny. aby se její použití neprojevilo nežádoucími účinky v úrovni poskytování konzumovatelného masa.
Dalším cílem vynálezu je poskytnout prostředek pro hromadné očkování.
Specifickým cílem tohoto vynálezu je poskytnout vakcínu. která by poskytla skotu ochranu proti vorům BRSV. IBR, BVD nebo PI-3.
Podstata vynálezu
Předmětem vynálezu jc polynukleotidová vakcína, obsahující účinné množství plazmidu. který' 45 obsahuje a exprimuje in vivo v kožní buňce bovinního hostitele molekulu nukleove kyseliny mající sekvenci kódující imunogen bovinního patogenu operativně připojenou k eukarvotickému promotoru, přičemž takový promotor umožňuje expresi uvedeného imunogenu jejíž podstata spočívá v tom, ze je ve formě pro po dání intradermálním přístroji pro tryskové vstříknutí kapaliny. který' aplikuje vakcínu skotu bez jehly do pokožky, kůže nebo/a pod kůží,
Výhodné je plazmid přítomen v nosiči vhodném pro intradermální po dání dávky 0,1 a 0.9 ml intradermálním přístrojem pro tryskové vstříknutí kapaliny.
Výhodněji je plazmid přítomen \ nosiči vhodném pro intradermální podání dávky 0,2 a 0,6 ml 55 intradermálním přístrojem pro tryskové vstříknutí kapalíny.
Ještě výhodněji plazmid je přítomen v nosiči vhodném pro intradermální podání dávky 0,4 a
0,5 ml intradermálním přístrojem pro try skové vstříknutí kapaliny.
Výhodně jc plazmid přítomen v intradermálně účinném množství 10 ng až 1 mg.
Výhodněji je plazmid přítomen v intradermálně účinném množství 100 ngaž 0.5 mg.
Ještě výhodněji je plazmid přítomen v intradermálně účinném množství 0.5 gg až 50 gg.
Výhodné plazmid obsahuje a exprimuje v kožní brníce bovinního hostitele molekulu nukleové kyseliny mající sekvenci kódující gB protein infekčního rinotracheitidického viru (IBR virus), operativně připojenou k cytomegalovirovému (CMV) 1E promotoru.
i? Výhodně plazmid obsahuje a exprimuje v kožní bance bovinního hostitele molekulu nukleové kyseliny mající sekvenci kódující gen E2 a/nebo gen El infekčního bovinního virálního diarrhoeálního (BVD).
Výhodně plazmid obsahuje a exprimuje v kožní buňce bovinního hostitele molekulu nukleové 2(i kyseliny mající sekvenci kódující imunogen víru párách řipky typu 3 (PI-3).
Výhodně plazmid obsahuje a exprimuje v kožní buňce bovinního hostitele molekulu nukleové kyseliny mající sekvenci kódují gen 11N a/nebo gen F viru páráchřipky typu 3 (PI-3).
Výhodně plazmid obsahuje a exprimuje v kožní buňce bovinního hostitele molekulu nukleové kyseliny mající sekvenci kódující gen HN viru páráchřipky typu 3 (Pl-3).
Výhodně je polynukleotidová vakcína přítomna vc vícedávkovém zásobníku vybaveném intradermálním přístrojem pro tryskové vstříknutí kapaliny.
Předmětem vynálezu jc rovněž intradermální přístroj pro tryskové vstříknutí kapaliny určený pro podání formulace zvířeti do pokožky, kůže a/nebo pod kůži bez jehly, jehož podstata spočívá v tom, že obsahuje výše definovanou polynukleotidovou vakcínu.
Intradermální přístroj pro tryskové vstříknutí kapaliny výhodně zahrnuje ejektorovou hlavu sjednou až deseti tryskami, zejména se čtyřmi až šesti tryskami.
Intradermální přístroj pro tryskové vstříknutí kapaliny obzvláště výhodně zahrnuje ejektorovou hlavu s pěti nebo šesti tryskami.
Předmětem vynálezu je rovněž použití plazmidu obsahujícího sekvenci DNA kódující bovinní imunogen a promotor umožňující expresi uvedeného imunogenu pro přípravu polynukleotidová vakcíny přizpůsobené pro intradermální podání pomocí intradermálního přístroje pro tryskové vstříknutí kapaliny.
Předmětem vynálezu je rovněž použití plazmidu pro přípravu polynukleotidová vakcíny pro intradermální podání pomocí intradermálního přístroje pro tryskové vstříknutí kapaliny, při kterém je plazmid přítomen v množství 10 ng až 1 mg DNA.
Předmětem vynálezu jc rovněž použití plazmidu pro přípravu polynukleotidové vakcíny pro intradermální podání pomocí intradermálního přístroje pro tryskové vstříknutí kapaliny, při kterém jc plazmid přítomen v množství 100 ng až 500 ng DNA.
- ,1 CZ ZVříZlb B6
Předmětem vynálezu je rovněž použiti plazmidu pro přípravu polynukleotidové vakcíny pro intradermální podání pomocí intradermálního přístroje pro tryskové vstřikuutí kapaliny, při kterém je plazmid přítomen v množství 0.5 iig až 50 pg DNA.
Předmětem vynálezu je dále použití plazmidu, při kterém plazmid obsahuje a exprimuje in vivo v kožní buňce bovinního hostitele molekulu nukleovc kyseliny mající sekvenci kódující imunogen bovinního patogenu zvoleného z množiny zahrnující BRSV. IBR. BVD nebo Pl-3.
Předmětem vy nálezu je dále použití plazmidu, při kterém je plazmid přítomen v nosiči vhodném ίο pro intradermální podání dávky 0,1 až 0.9 ml pomoc intradermálního přístroje pro tryskové vstříknutí kapaliny.
Předmětem vynálezu jc konečně použití plazmidu. při kterém jc plazmid přítomen v nosiči vhodném pro intradermální podání dávkv 0.2 až 0,6 ml pomocí intradermálního přístroje pro tryskové 15 vstříknutí kapaliny.
Typicky se v rámci vynálezu formulace vakcíny podává ve více místech za účelem optimalizace transfekce buněk plazmidy. Toho se výhodně dosáhne použitím aplikační hlavy s více otvory;
to Typickým příkladem sekvence DNA použitelné v rámci vynálezu je sekvence DNA kódující imunogen viru BRSV, zejména gen G a/nebo F [například kmen 391-2 (viz Lerch R. a spol. Virology 181, 119-131, 1991)].
Jiným typickým příkladem sekvence DNA použitelné v rámci vynálezu je sekvence DNA kódu25 jící imunogen viru Rhinotrachctidis skotu (infekční, tzv. IBR) a viru herpes skotu (BHV) zvláště kódující gen gB a/nebo gen gD (například kmen ST: l.cung -Tack P. a kol.. Virology 199, 409 421,1994).
Dalším typickým příkladem sekvence DNA použitelné v rámci vynálezu je sekvence DNA 30 kódující imunogen viru onemocnění sliznicc (BVD). zejména gen E2 a/nebo gen El, například kmen Osloss: Dr. Moerlooze E.a kok. J. Gen. Virol. 74. 1433-1438 (1993). Rovněž lze připojit geny různých podtypů BVD, například severoamerický a evropský (Dekker A. a kol., Veterinarv MicrobioL 47, 317-329, 1995).
Ještě jiným typem sekvence DNA použitelné v rámci vynálezu je sekvence DNA kódující imunogen párách řipky typu 3 (Pl-3), zejména gen HN a/nebo F. výhodně HN (sekvence genu F a HN deponoval Shiguta 11. 1987, GenBank Y00115).
V případe kombinace dvou genů, například genů F a G BRSV, HN a F Pl-3 nebo gD a GB IBR 40 lze jednotlivé sekvence DNA vsunout do téhož plazmidu nebo do různých plazmidu.
V případě genu patogenního činidla se tímto genem rozumí nejen kompletní gen, ale také jeho dílčí fragmenty, které si zachovávají schopnost indukovat ochrannou odezvu. Pojem gen rovněž zahrnuje nukleotidové sekvence, které jsou ekvivalentní s nukleotidové mi sekvencemi, které byly přesně popsané v příkladech, tedy i odlišné sekvence, které kódují stejný protein. Tento pojem zahrnuje rovněž nukleotidové sekvence jiných kmenů uvažovaného patogenu zajištující kombinovanou ochranu nebo specifickou ochranu vztahující se k danému kmenu nebo skupině kmenů. Uvedená pojem rovněž zahrnuje nukleotidové sekvence, kterc byly modifikovány za účelem usnadnění exprese in vivo hostitelským živočichem avšak kódující stejný protein.
Je samozřejmé, že vynálezu spočívá na adaptaci vakcín DNA dosavadního stavu techniky pro intradermální podání intradermálním přístrojem pro tryskové vstříknutí kapaliny. Pokud uvedená adaptace zahrnuje modifikace v úrovni formulace vakcíny, zejména její viskozity, množství DNA a objemu dávky učené k podání, jc samozřejmé, že se vynález vztahuje na všechny formulace 55 vakcín DNA popsané v rámci dosavadního stavu techniky. Odborník se v tomto ohledu může
-4 CZ 298216 B6 řídit dosavadním stavem techniky v oblasti očkování pomocí DNA a zejména obsahem výše uvedených dokumentů.
Specificky řečeno, transkripční jednotky použité ve formulacích vakciny podle vynálezu budou 5 obsahovat silný eukaryotický promotor, jakým je promotor hCMV IE.
Formulování vakciny podle vynálezu lze provést za použití zásobníku uzpůsobeného pro obsah většího počtu dávek, například 10 až 100 dávek, který je uzpůsoben pro spojení s intradermálním přístrojem pro tryskové vstříknutí kapaliny, takým je například přístroj označovaný jako Pigjet 10 společnosti Endoscoptic. Leons. Francie.
Předmětem vynálezu je rovněž přenosné zařízen pro očkování skotu. které obsahuje intradermální přístroj pro tryskové vstříknutí kapaliny a zásobník schopný pojmout více dávek formulace vakciny, přičemž zařízení je určeno pro intradermální podání dávky uvedené vakciny.
!5
Intradermální přístroj pro tryskové vstříknutí kapaliny je opatřen aplikační hlavou s jednou až deseti tryskami, zejména se čtyřmi až šesti tryskami a výhodně s pěti nebo šesti tryskami.
Podávání formulace vakciny pomocí intradermálního přístroje pro tryskové vstříknutí kapaliny 2o může být provedeno jedním podáním celkového objemu dávky nebo opakovaným podáním dílčích dávek vakciny, přičemž tyto dílčí dávky mohou být časově rozloženy .
V následující části popisu bude vynálezu detailněji popsán pomocí neomezujících příkladů jeho provedení a s odkazy na připojené výkresy, na kterých obr. 1 znázorňuje plazmid obsahující gen G viru BRSV pod kontrolou promotoru hCMV pro očkování skotu proti uvedenému viru; a obr. 2 znázorňuje grafické vyjádření účinnosti očkování proti viru BRSV při intramuskulámím podání IM (skot 1349) a intradermálním podání ID (skot 1352 a 1353). přičemž, se osa úseček je uveden počet týdnů a na ose pořadnic je uveden infekční titr.
Příprava syntetického genu G BRSV
Syncyciálním dýchacím bovinním virem je Pneumovirus čeledi Paramyxovirus. Jedná sc o zapouzdřený vir. který se replikuje v cytoplazmě a má jednovláknovou genomovou RNA 55 s negativní orientací. Genom BRSV kóduje dva hlavní transmembránové glykoprotciny. tj.
vazebný protein F a připojený protein G.
Syntetická verze genu G byla realizována oddělením z tohoto genu všech potenciálních spojnicových signálů (Keil G.. Federl Rcscarch Centre fo Virus Diseases of Animals, Friedrich. Loffler 40 Institute, Insel Ricms Germany)
Oblast kódující gen G byla stanovena Ecrch-cm a kol, Joumal of Virology 64. 5559-5569 (1990). Kódující oblast odpovídá 257 aminokyselinám a charakteristice transmemhranového glykoproteinu typu II. Má cyloplazinovou N koncovou oblast o 40 aminokyselinách následova45 nou transmembránovou oblastí o 25 aminokyselinách. Zbytek, tj. 192 koncových aminokyselin, tvoří extraeclulární oblast proteinu G. Byla syntetizována sekvence DNA s otevřeným čtecím rámem kódujícím přesně 257 stejných aminokyselin nalezených Lerch en a kol., avšak bez potenciálních spojnicových signálů. Byl proveden inverzní přenos sekvence těchto 257 aminokyselin na všechny možné DNA sekvence kódující takovou aminokyselinovou sekvenci. To bylo 50 provedeno použitím inverzního přenosového programu sekvence proteinu RTRANS (PCGene od
Bairoch A., LI ni v., Zeneva, Švýcarsko (Intell iGenetics lne.). Byla stanovena potenciální spojnicová místa za použití programu analýzy nukleových kyselin „Signál·, fen to program je založen na metodě vážené matrice (Staden. Nuclcic Acids Research 12. 505 519, 1984). Tento program identifikuje místa potenciálních spojnicových donorú (vazby intron/exon) a místa potenciálních
V/. Z93Z10 L50 spojnicových akceptorů (vazby exon/intron). Na základě těchto sekvenčních údajů lze modifikovat všechny potenciální spojnicové signály, aniž by byla modifikována kapacita pro protein, Zejména dinukleotidy GT, kterc mohou mít konec 5' intronu a dinukleotidy AG, které mohou mít konec 3r' intronu byly pokud možno odstraněny.
Za účelem syntézy adaptované nukleotidové sekvence kódující gen G byly syntetizovány oligonuklcotidy s asi 100 zbytky pokrývající obě vlákna kompletní sekvence pomocí syntetizéru DNA (například syntetizéru DNA Pcrkin. Elmers/Applicd Biosystems 381 A; rovněž lze použít komerčně dostupné oligonukleotidy). Komplementární oligonukleotidy se hybridizuji za vzniku io dvouvláknového fragmentu a klonují do prokaryolických vektoru, jakými jsou například plJC18 nebo plJO 9, Za použití příslušných enzymatických rcstrikčních míst sc naváže celek klonovaných fragmentu DNA vc správném pořadí za použití standardních klonovacích metod (Sambrook a kol. Molccular Cloning: A laboratory Manual. 2, vydání. Cold Spring Harbor Laboratory. Cold Spring Harbor, New York. 1989). Řezultující nukleotidová sekvence fragmentu DNA byla stano15 véna použitím standardních sekvencovacích postupů (Sambrook a kok), aby se zjistilo, zda uvedená sekvence je správná.
Konstrukce eukaryotického expresního vektoru obsahujícího gen G za promotor hCMV
2(i Pro zajištění exprese genu G byl tento syntetický gen klonován do vektoru. Při tomto předběžném pokusu byl použit vektor, který byl bezprostředně k dispozici v laboratoři, kletým je expresní cukaryotický vektor 175hCMV. Tento plazmidový vektor obsahuje dva fragmenty viru HBVI, které byly původně na bocích glykoproteinu E holandského kmene označovaného jako Lam (Ven Engelenburg a kol., Journal og Genoral Virology 75. 2311 2318 (1994). Levý boční 25 fragment (Ctem gl) začíná v místě Pstl, nacházejícím sc v otevřeném čtecím rámu glykoproteinu gl a končí vmiste BstBI (nebo AsuII) a to 17 nukleotidů před počátkem (startem) otevřeného čtecího rámu genu gE, Tento fragment je označen jako Ctem GL Pravý boční fragment začíná v místě EcoNI nacházejícím se v úrovni konce kodonu otevřeného čtecího rámu gE a končí v úrovni prvního horního míst Smál v repetičním termínačním fragmentu (TR). Tyto dva frag50 menty byly klonovány do místě Pstl a místa EcoRi (volný konec) plazmidu pUC’18. Mezi místem BstBI a místem EcoNI byl klonován fragment A sel (volný konec) o 720 pb. obsahující největší část promotoru Immediate Karly lidského cytomegaloviru (hCMV-P), s polylinkerovou oblastí a ukončený polyadcnylačním signálem (poty A). Syntetický gen G byl klonován v orientaci indikované uvnitř míst Smál této polylinkerové oblasti. Získaný plazmid byl pojmenován symbolem .55 PR608 (viz obr, 1).
Kontrola exprese in vitro genu G z plazmidu PR608
Provede se test přechodné exprese za účelem zjištění, zda plazmid PR608 je schopen exprimovat 40 protein G. Při tomto testu se 1,5 mikrogramu přečištěné DNA plazmidu PR608 transfekuje do monobunččné vrstvy řezu bovinního embrya (EBTr). Tyto buňky EBTr byly kultivovány na minimální esenciální živné půdě Earlc s 10% bovinního fetálniho sera (Integro) a antibiotiky f 125 Ul penicilinu (Gist-Borocades). 125 mikrogramu strcptomycinu (Biochemie), 37,5 UI nystatinu (Sigma) a 37,5 mikrogramu kanamycinu (Sigma) na ml]. Transfekce byla provedena stan15 dardní metodou srážení fosforečnanu vápenatého podle E.L. Grahama a A. J, van der Eba (1973, Virology. 52, 456-467), Po transfekci byla plazmidová DNA transportována do jádra transfekováných buněk a kódované proteiny se exprimují mechanizmem hostitelských buněk. Normálně pouze 0,01 % až 0,1 % buněk transfekované monovrstvy internují DNA a exprimují kódované geny.
Příprava DNA pro polynukleotidovc očkování
DNA plazmidu PR608 byla připravena přidáním 100 mikrolitrů zásobní E. coli k 12 vglyccrolu. buněk DH5alfa E obsahujících plazmid PR608 ke 2 litrům živného prostředí LB, které přcdsla55 viijc standardní živné prostředí pro růst bakterií. Tato dvoulitrová kultura se inkubuje při teplotě
-6C'Z 298216 B6 °C po dobu 20 hodin a pomnožené buňky se izolují za použití 250 ml kyvet a odstředivky 1 UC
Ccntra-8R provozované při maximální rychlosti. Plazmidová DNA plazmidu PR608 se izoluje z buněk sedimentu metodou standardní alkalické lyže podle Birboima a Dolyho, která je popsána
Smabrookcni a kol (1989. Molecular Cloning. A press Laboratoře ManuaL 2. vydání, Cold
Spring Barbor Laboratoře Press). Izolovaná plazmidová DNA se potom rozpouští ve 20 ml 1 E (10 mM I ris a 1 mM EDTA, pEI 7,4) a podrobí elektroforéze za účelem stanovení koncentrace DNA a vyhodnocení kvality DNA. Z normální dvoulitrové kultury lze izolovat 40 mg plazmidů; asi 60 % plazmidu PR608 se nachází v supersvinutém stavu a asi 30 % plazmidu je ve vodném cirkulámím stavu.
Získané plazmidy se přechovávají při teplotě -20 °C. Před použitím DNA plazmidu PR608 se roztok DNA zředí na koncentraci 0.5 mg/ml a 1 x BBS a 1Έ. Tento roztok pufrované DNA se rozpipetuje do lahviček o objemu 10 ml upravených pro připojení k zařízení Pigjet a lahvičky se přechovávají při teplotě 4 °C' pro použití během následující hodiny až dvou hodin.
Aplikační zařízení Pigjet
Aplikační přenosné zařízení typu Pigjet obsahuje v pouzdru opatřeném rukojetí kalibrovanou komůrku o obsahu 0,2 ml a píst udržovaný normálně v poloze zatažené do komůrky pružinou 2o spojenou s uvedeným pístem.
Zařízení kromě toho obsahuje hlavu s pěti tryskami určenými pro kalibrování množství vstříknuté kapaliny nebo hlavu sjednou tryskou a filtrační ústrojí zabraňující vstříknutí přídavných nečistot. Try sky se nacházejí v malé vzdálenosti jedna od druhé.
Vytlačení kapaliny z try sky může být provedeno tlakem 107 Pa 100 barů v případě zařízení Pigjet s jednou try skou.
Stlačení pružiny vyvolané příslušným prostředkem vyvolá posunutí pístu a tedy nasátí dávky in vakcíny ze zásobníku nebo lahvičky připevněné k pouzdru.
Uvolnění pružiny vyvolá návrat pístu do původní polohy a vystříknutí dávky jednou nebo několika tryskami.
Očkování a referenční testy
Čtyři telata narozená císařským řezem a prostá specifických patogenních organismů byla zbavena collostra a chována v izolaci. Tato telata byla očkována Šestkrát v jednotýdenním intervalu počínaje dosažení stáří šestý týdnů. Dvě zvířata byla očkována intradermálně promocí zařízení Pigjet 40 sjednotí tryskou (Endoscoptic. Laons, Francie) a 2 zvířata byla očkována intramuskulárním podáním za použití jehly s kalibrem 25. Zařízení Pigjet sc použije tak, žc jeho hlava jc ve styku s kůží a je vzhledem k této kůži v kolmé poloze tak. abv trysk vstřikovaní vakcíny měl vzhledem ke kůži kolmý směr. Každé očkování zahrnuje podání 500 mikrogramů plazmidové DNA v I ml fosfátového pufru PBS. Intradermální očkování zahrnovala 5 injekcí 0,2 ml do kůže zadní nohy 4? zvířete a intramuskulární očkování zahrnovala 1 injekci do hýžďového svalu. Kůže byla v místě injekce předběžně oholena.
Byly získány koncentrace protilátek, které jsou uvedeny v následující tabulce I:
očkování v týdnech 0, 1,2, 3, 4, 5 zkouška v týdnu 6
- sledování koncentrace protilátek v týdnech 0 až 8.
// 2^3210 B6
Tabulka I
0 1 2 3 4 5 6 7 8
tele 1352 <5 <5 <5 80 640 1280 640 1280 >5120
Pigjet
tele 1453 <5 <5 <5 40 1280 640 640 640 (a
Pigjet:
tele 1349 <5 <5 <5 <5 <5 <5 <5 <5 <5
IM
tele 1350 <5 <5 <5 a)
IM
a) tato telata byla utracena vzhledem k výskytu závažných zdravotních problému, které nesouvisely s očkováním.
Po injekcích DNA se pozoruje objevení protilátek po uplynutí 3 týdnů u zvířat očkovaných inlra10 dermálním podáním a koncentrace protilátek se ustálí počínaje čtvrtým týdnem.
Telata byla potom podrobena zkoušce pomocí infekčního viru BRSV. lnokulace viru byla provedena 6 týdnů po prvním očkováním intranazální aplikací 1 ml viru kmene Odijk (]()'* TCIDsýml) do každé nozdry zvířete.
Za účelem vyhodnocení účinnosti očkování byla sledována exkrece viru infekčním titrem TCIDso/ml až do uplynutí 12 dnů po infikováni zvířat a to ve výtěrech z nozder (svvj a v tekutině získané promytím plic (Lav) (obr. 2).
Bylo prokázáno, že plazmid kódující protein G BRSV podaný intradcrmálně intradermálním přístrojem pro tryskové vstříknutí kapaliny chránil proti virulentní infekci uvedeným virem, lntradermální očkování pomocí aplikačního zařízení se vstřikovací hlavou sjedním otvorem rychle indukovalo zvýšené koncentrace protilátek proti proteinu G. což nebylo pozorováno v případě intramuskulárního očkování. Kromě toho koncentrace infekčního viru BRSV v tekutině získané promytím plic a ve výtěrech z nozder byly zvýšené v případě zvířat očkovaných intramuskulárně a uvedený virus byl v podstatě nepřítomen v uvedených tekutinách zvířat, která byla očkována intradermálním podáním. Klinické příznaky byly mírné a výrazně se nelišily od zvířete kc zvířeti.
Rovněž byla pozorována velmi dobrá neškodnost očkování v případě použití zařízení Pigjet, přičemž tato technika ostatně nevyžaduje indukování předběžného zánětu tkáně jako je tomu v případě mikročástic z lata.
Kromě toho jc pozoruhodné, žc sc dosáhne ochrany s proteinem G, který obvykle není příliš imunogenní (lýk. Collins v: The paramyxoviruses, 1991, nakl. D.W. Kingsburv. New-York. Plenům Press) a že zvýšená koncentrace protilátek dosažená po intradermálním podání je srovnatelná s koncentrací protilátek dosaženou po přirozené infekci nebo po očkování jinak testovanou živou vakcínou.

Claims (24)

  1. PATENTOVÉ NÁROKY
    CZ. B6
    1. Polynukleotidová vakcína. obsahující účinné množství plazmidu. který obsahuje a exprimuje in vivo v kožní buňce bovinního hostitele molekulu nukleové kyseliny mající sekvenci kódující imunogen bovinního patogenu operativně připojenou k cukaryotickému promotoru, přičemž takový promotor umožňuje expresi uvedeného imunogenu. vyznačená tím, že je ve formě pro podání intradermálním přístrojem pro tryskové vstříknutí kapaliny, který aplikuje vakcínu skotu bez jehly do pokožky, kůže nebo/a pod kůži.
  2. 2. Polynukleotidová vakcína podle nároku 1, vyznačená tím, že plazmidje přítomen v nosiči vhodném pro intradermální podání dávky OJ a 0,9 ml intradermálním přístrojem pro tryskové vstříknutí kapaliny.
  3. 3. Polynukleotidová vakcína podle nároku l.vyznacená tím. že plazmid jc přítomen v nosiči vhodném pro intradermální podání dávky 0.2 a 0.6 ml intradermálním přistrojeni pro tryskové vstříknutí kapaliny.
  4. 4. Polynukleotidová vakcína podle nároku l.vyznacená tím, žc plazmid je přítomen v nosiči vhodném pro intradermální podání dávky 0,4 a 0,5 ml intradermálním přístrojem pro tryskové vstříknutí kapaliny.
  5. 5. Polynukleotidová vakcína podle nároku l.vyznacená tím. že plazmid jc přítomen v intradermálně účinném množství 10 ng až 1 mg.
  6. 6. Polynukleotidová vakcína podle nároku l.vyznacená tím, že plazmid je přítomen v intradermálně účinném množství 100 ng až 0,5 mg.
  7. 7. Polynukleotidová vakcína podle nároku 1.vyznačená tím, že plazmidje přítomen v intradermálně účinném množství 0,5 gg až 50 gg.
  8. 8. Polynukleotidová vakcína podle nároku 1. vy značen á tím, že plazmid obsahuje a exprimuje v kožní buňce bovinního hostitele molekulu nukleové kyseliny mající sekvenci kódující gen G a/nebo gen F proteinu G syncyciálního dýchacího bovinního viru (BRSV), operativně připojenou k cytomegalovirovému (CMV) 1E promotoru,
  9. 9. Polynukleotidová vakcína podle nároku 1. vyznačená tím, že plazmid obsahuje a exprimuje v kožní buňce bovinního hostitele molekulu nukleové kyseliny mající sekvenci kódující gB protein infekčního rinotracheitidickcho viru (IBR virus), operativně připojenou k cytomegalovirověrnu (CMV) IE promotoru.
  10. 10. Polynukleotidová vakcína podle nároku 1, vyznačená tím. že plazmid obsahuje a exprimuje v kožní buňce bovinního hostitele molekulu nukleové kyseliny mající sekvenci kódující gen F.2 a/nebo gen El infekčního bovinního v i rá lni ho diarrhoeálního viru (BVD).
  11. 11. Polynukleotidová vakcína podle nároku l.vyznacená tím, že plazmid obsahuje a exprimuje v kožní buňce bovinního hostitele molekulu nukleové kyseliny mající sekvenci kódující imunogen viru parachripky typu 3 (Pl-3).
  12. 12. Polynukleotidová vakcína podle nároku 11,vyznačená tím, žc plazmid obsahuje a exprimuje v kožní buňce bovinního hostitele molekulu nukleové kyseliny mající sekvenci kódující gen HN a/nebo gen F viru parachripky typu 3 (Pl-3).
    -9V Z. zvnzio HO
  13. 13. Polynukleotidová vakcína podle nároku 1. v y z n a č e n á tím. že plazmid obsahuje a cxprimuje v kožní buňce bovinního hostitele molekulu nukleové kyseliny mající sekvenci kódující gen HN viru parachřipky typu 3 (Pl-3).
  14. 14. Polynukleotidová vakcína podle některého z nároku I až 13, v y z n a č e n á tím, žc je přítomna ve vícedávkovém zásobníku vybaveném intradermálním přístrojem pro tryskové vstříknutí kapaliny,
  15. 15. Intradermální přístroj pro tryskové vstříknutí kapaliny určený pro podání formulace zvířeti do pokožky, kůže a/nebo pod kůži bez jehly, vyznačený tím, že obsahuje polynukleotidovou vakcínu podle některého z nároků I až 13.
  16. 16. Intradermální přístroj pro tryskové vstříknutí kapaliny podle nároku 15. vyznačený tím , že zahrnuje ejektorovou hlavu s jednou až deseti tryskami, zejména se čtyřmi až šesti tryskami.
  17. 17. Intradermální přístroj pro tryskové vstříknutí kapaliny podle nároku 15, vyznačený tím, že zahrnuje ejektorovou hlavu s 5 nebo 6 tryskami.
  18. 18. Použití plazmidu obsahujícího sekvenci DNA kódující bovinní imunogen a promotor umožňující expresi uvedeného imunogenu pro přípravu polynuklcotidové vakcíny přizpůsobené pro intradermální podání pomocí intradermálního přístroje pro tryskové vstříknutí kapaliny.
  19. 19. Použití plazmidu podle nároku 18, při kterém plazmid obsahuje a cxprimuje in vivo v kožní buňce bovinního hostitele molekulu nukleové kyseliny mající sekvenci kódující imunogen bovinního patogenu zvoleného z množiny zahrnující BRSV, IBR, BVD nebo ΙΊ-3.
  20. 20. Použití plazmidu podle nároku 18 pro přípravu polynuklcotidové vakcíny pro intradermální podání pomocí intradermálního přístroje pro tryskové vstříknutí kapaliny, při kterém je plazmid přítomen v množství 10 ng až 1 mg DNA.
  21. 21. Použití plazmidu podle nároku 18 pro přípravu polynukleotidové vakcínv pro intradermální podání pomocí intradermálního přístroje pro tryskové vstříknutí kapaliny, při kterém je plazmid přítomen v množství 100 ng až 500 gg DNA.
  22. 22. Použití plazmidu podle nároku 18 pro přípravu polynukleotidové vakcíny pro intradermální podání pomocí intradermálního přístroje pro tryskové vstříknutí kapaliny , při kterém je plazmid přítomen v množství 0.5 pg až 50 pg DNA.
  23. 23. Použití plazmidu pode nároku 18. při kterém je plazmid přítomen v nosiči vhodném pro intradermální podání dávky 0,1 až 0,9 ml pomocí intradermálního přístroje pro tryskové vstříknutí kapaliny.
  24. 24. Použití plazmidu podle nároku 18. při kterém je plazmid přítomen v nosiči vhodném pro intradermální podání dávky 0,2 až 0,6 ml pomocí intradermálního přístroje pro tryskové vstříknutí kapaliny.
CZ0010699A 1996-07-19 1997-07-16 Polynukleotidová vakcína, intradermální prístroj tuto vakcínu obsahující a pouzití plazmidu pro prípravu této vakcíny CZ298216B6 (cs)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
FR9609402A FR2751228B1 (fr) 1996-07-19 1996-07-19 Vaccin polynucleotidique bovin pour voie intradermique

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CZ10699A3 CZ10699A3 (cs) 1999-04-14
CZ298216B6 true CZ298216B6 (cs) 2007-07-25

Family

ID=9494496

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CZ0010699A CZ298216B6 (cs) 1996-07-19 1997-07-16 Polynukleotidová vakcína, intradermální prístroj tuto vakcínu obsahující a pouzití plazmidu pro prípravu této vakcíny

Country Status (23)

Country Link
US (2) US6451770B1 (cs)
EP (1) EP0918540B1 (cs)
JP (1) JP2000515522A (cs)
AP (1) AP9701045A0 (cs)
AR (1) AR007863A1 (cs)
AT (1) ATE224732T1 (cs)
AU (1) AU722878B2 (cs)
BR (1) BR9710498A (cs)
CA (1) CA2261334C (cs)
CO (1) CO4700344A1 (cs)
CZ (1) CZ298216B6 (cs)
DE (1) DE69715879T2 (cs)
ES (1) ES2184122T3 (cs)
FR (1) FR2751228B1 (cs)
HU (1) HU224833B1 (cs)
ID (1) ID19427A (cs)
IL (1) IL127914A (cs)
MA (1) MA24271A1 (cs)
MX (1) MXPA99000684A (cs)
NZ (1) NZ333752A (cs)
PL (1) PL189184B1 (cs)
WO (1) WO1998003196A1 (cs)
ZA (1) ZA976285B (cs)

Families Citing this family (46)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FR2751228B1 (fr) * 1996-07-19 1998-11-20 Rhone Merieux Vaccin polynucleotidique bovin pour voie intradermique
US7294338B2 (en) * 1996-07-19 2007-11-13 Merial Polynucleotide vaccine formula against canine pathologies, in particular respiratory and digestive pathologies
FR2804028B1 (fr) * 2000-01-21 2004-06-04 Merial Sas Vaccins adn ameliores pour animaux de rente
US7078388B2 (en) * 2000-01-21 2006-07-18 Merial DNA vaccines for farm animals, in particular bovines and porcines
US6852705B2 (en) 2000-01-21 2005-02-08 Merial DNA vaccines for farm animals, in particular bovines and porcines
JP2004531578A (ja) 2001-06-29 2004-10-14 ベクトン・ディキンソン・アンド・カンパニー ワクチンおよび遺伝子治療剤のマイクロカニューレによる皮内送達
US7906311B2 (en) 2002-03-20 2011-03-15 Merial Limited Cotton rat lung cells for virus culture
EP2390352A1 (en) 2003-03-18 2011-11-30 Quantum Genetics Ireland Limited Systems and methods for improving protein and milk production of dairy herds
US7468273B2 (en) 2003-05-01 2008-12-23 Meial Limited Canine GHRH gene, polypeptides and methods of use
US20050214316A1 (en) 2003-11-13 2005-09-29 Brown Thomas P Methods of characterizing infectious bursal disease virus
EP1718770B1 (en) 2004-02-19 2011-05-25 The Governors of the University of Alberta Leptin promoter polymorphisms and uses thereof
SI1765387T1 (sl) * 2004-06-04 2013-04-30 Merial Limited Dajanje cepiv proti FeLV brez igle
RS51324B (sr) 2005-04-25 2010-12-31 Merial Ltd. Vakcine protiv nipah virusa
US20070055199A1 (en) 2005-08-10 2007-03-08 Gilbert Scott J Drug delivery device for buccal and aural applications and other areas of the body difficult to access
US20080241184A1 (en) 2005-08-25 2008-10-02 Jules Maarten Minke Canine influenza vaccines
US7771995B2 (en) 2005-11-14 2010-08-10 Merial Limited Plasmid encoding human BMP-7
CA2629522A1 (en) 2005-11-14 2007-05-18 Merial Limited Gene therapy for renal failure
US7862821B2 (en) 2006-06-01 2011-01-04 Merial Limited Recombinant vaccine against bluetongue virus
US20080274137A1 (en) * 2007-05-02 2008-11-06 Jean Christophe Francis Audonnet DNA plasmids having improved expression and stability
AU2007352618B2 (en) 2007-05-02 2013-07-18 Boehringer Ingelheim Animal Health USA Inc. DNA plasmids having improved expression and stability
CN102271704A (zh) 2008-11-28 2011-12-07 梅里亚有限公司 重组禽流感疫苗及其用途
CN103585643A (zh) 2009-04-03 2014-02-19 梅里亚有限公司 运载新城疫病毒的禽疫苗
AR079767A1 (es) 2009-12-28 2012-02-15 Merial Ltd Antigeno ndv (virus de la enfermedad de newcastle) recombinante y usos del mismo
US20130197612A1 (en) 2010-02-26 2013-08-01 Jack W. Lasersohn Electromagnetic Radiation Therapy
NZ602278A (en) 2010-03-12 2014-12-24 Biolex Therapeutics Inc Bluetongue virus recombinant vaccines and uses thereof
WO2012030720A1 (en) 2010-08-31 2012-03-08 Merial Limited Newcastle disease virus vectored herpesvirus vaccines
WO2012090073A2 (en) 2010-12-30 2012-07-05 The Netherlands Cancer Institute Methods and compositions for predicting chemotherapy sensitivity
US20140296248A1 (en) 2011-04-04 2014-10-02 Stichting het Nederlands Kanker Instiuut-Antoni van Leeuwenhoek ziekenhuis Methods and compositions for predicting resistance to anticancer treatment
AU2012240246A1 (en) 2011-04-04 2013-05-09 Netherlands Cancer Institute Methods and compositions for predicting resistance to anticancer treatment with protein kinase inhibitors
WO2012145577A1 (en) 2011-04-20 2012-10-26 Merial Limited Adjuvanted rabies vaccine with improved viscosity profile
AP2013007180A0 (en) 2011-04-25 2013-10-31 Advanced Bioscience Lab Inc Truncated HIV envelope proteins (ENV), methods andcompositions related thereto
ES2764079T3 (es) 2011-05-27 2020-06-02 Boehringer Ingelheim Animal Health Usa Inc Vacunas genéticas contra el virus Hendra y el virus Nipah
EP2714077B1 (en) 2011-06-01 2018-02-28 Merial, Inc. Needle-free administration of prrsv vaccines
LT2741740T (lt) 2011-08-12 2017-08-10 Merial, Inc. Biologinių produktų, ypatingai vakcinų, vakuuminis konservavimas
WO2013093629A2 (en) 2011-12-20 2013-06-27 Netherlands Cancer Institute Modular vaccines, methods and compositions related thereto
AU2013221502C1 (en) 2012-02-14 2018-03-01 Boehringer Ingelheim Animal Health USA Inc. Recombinant poxviral vectors expressing both rabies and OX40 proteins, and vaccines made therefrom
PT2814508T (pt) 2012-02-14 2017-07-19 Merial Inc Vacinas de subunidades de rotavírus e métodos para as produzir e uso das mesmas
WO2013138776A1 (en) 2012-03-16 2013-09-19 Merial Limited Novel methods for providing long-term protective immunity against rabies in animals, based upon administration of replication-deficient flavivirus expressing rabies g
CN110628822A (zh) 2012-06-13 2019-12-31 梅里亚有限公司 重配btv和ahsv疫苗
EP2968514A1 (en) 2013-03-12 2016-01-20 Merial, Inc. Reverse genetics schmallenberg virus vaccine compositions, and methods of use thereof
WO2016073410A1 (en) 2014-11-03 2016-05-12 Merial, Inc. Methods of using microneedle vaccine formulations to elicit in animals protective immunity against rabies virus
ES3050936T3 (en) 2015-06-23 2025-12-23 Boehringer Ingelheim Vetmedica Gmbh Prrsv minor protein-containing recombinant viral vectors and methods of making and use thereof
AU2016308630B2 (en) 2015-08-20 2019-09-19 Boehringer Ingelheim Animal Health USA Inc. FCV recombinant vaccines and uses thereof
ES2974666T3 (es) 2015-09-29 2024-07-01 Boehringer Ingelheim Animal Health Usa Inc Vacunas de partículas similares a virus (VLP) del parvovirus canino (CPV) y usos de las mismas
BR112018010494A8 (pt) 2015-11-23 2019-02-26 Merial Inc proteínas de fusão fmdv e e2 e seus usos
TWI760322B (zh) 2016-01-29 2022-04-11 美商百靈佳殷格翰動物保健美國有限公司 重組腺病毒載體裝載之fmdv疫苗及其用途

Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1992001471A1 (en) * 1990-07-24 1992-02-06 The Uab Research Foundation Methods of use of bovine respiratory syncytial virus recombinant dna, proteins vaccines, antibodies, and transformed cells
WO1995020660A2 (en) * 1994-01-27 1995-08-03 University Of Massachusetts Medical Center Immunization by inoculation of dna transcription unit

Family Cites Families (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FR2348709A1 (fr) * 1976-04-23 1977-11-18 Pistor Michel Procede de traitement mesotherapique et dispositif d'injection,formant micro-injecteur automatique,en comportant application
FR2652257B1 (fr) * 1989-09-26 1992-11-27 Rhone Merieux Installation portative de vaccination porcine.
GB9118204D0 (en) * 1991-08-23 1991-10-09 Weston Terence E Needle-less injector
US5643578A (en) * 1992-03-23 1997-07-01 University Of Massachusetts Medical Center Immunization by inoculation of DNA transcription unit
JP3487856B2 (ja) * 1993-07-31 2004-01-19 ウェストン メディカル リミテッド 無針注射器
US5736524A (en) * 1994-11-14 1998-04-07 Merck & Co.,. Inc. Polynucleotide tuberculosis vaccine
FR2751228B1 (fr) * 1996-07-19 1998-11-20 Rhone Merieux Vaccin polynucleotidique bovin pour voie intradermique

Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1992001471A1 (en) * 1990-07-24 1992-02-06 The Uab Research Foundation Methods of use of bovine respiratory syncytial virus recombinant dna, proteins vaccines, antibodies, and transformed cells
WO1995020660A2 (en) * 1994-01-27 1995-08-03 University Of Massachusetts Medical Center Immunization by inoculation of dna transcription unit

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
PROCEEDINGS OF THE NATIONAL ACADEMY OF SCIENCES OF USA, vol. 91, no. 20, (20.9.1994) *

Also Published As

Publication number Publication date
AR007863A1 (es) 1999-11-24
HUP9902792A2 (hu) 1999-12-28
US6803361B2 (en) 2004-10-12
HUP9902792A3 (en) 2000-03-28
US20020137716A1 (en) 2002-09-26
ZA976285B (en) 1999-01-19
ID19427A (id) 1998-07-09
IL127914A (en) 2001-05-20
IL127914A0 (en) 1999-11-30
US6451770B1 (en) 2002-09-17
NZ333752A (en) 2000-06-23
PL331237A1 (en) 1999-07-05
MA24271A1 (fr) 1998-04-01
BR9710498A (pt) 2000-01-18
DE69715879D1 (de) 2002-10-31
CZ10699A3 (cs) 1999-04-14
EP0918540A1 (fr) 1999-06-02
ATE224732T1 (de) 2002-10-15
CA2261334A1 (en) 1998-01-29
AU3773297A (en) 1998-02-10
EP0918540B1 (fr) 2002-09-25
AU722878B2 (en) 2000-08-10
FR2751228A1 (fr) 1998-01-23
CO4700344A1 (es) 1998-12-29
MXPA99000684A (es) 2006-02-10
PL189184B1 (pl) 2005-07-29
AP9701045A0 (en) 1997-07-31
DE69715879T2 (de) 2003-01-23
CA2261334C (en) 2010-11-16
FR2751228B1 (fr) 1998-11-20
ES2184122T3 (es) 2003-04-01
WO1998003196A1 (fr) 1998-01-29
HU224833B1 (en) 2006-03-28
JP2000515522A (ja) 2000-11-21

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US6803361B2 (en) Bovine polynucleotide vaccine for the intradermal route
TWI777093B (zh) 非洲豬瘟病毒疫苗
RU2305559C2 (ru) Вакцина свиней против респираторных патологий и патологий репродукции свиней
AU733563B2 (en) Polynucleotide vaccine formula for treating dog diseases, particularly respiratory and digestive diseases
AU734442B2 (en) Polynucleotide vaccine formula in particular against bovine respiratory pathology
CZ17499A3 (cs) Formulace vakciny proti nemocem lichokopytníků jmenovitě koní
US10227385B2 (en) Chimeric poly peptides and the therapeutic use thereof against a flaviviridae infection
PL191551B1 (pl) Kompozycje immunogenne, plazmidy, zastosowania plazmidów, zestawy oraz szczepionki
EP4570264A2 (en) Vaccine against porcine parvovirus
CN113186173A (zh) 一种基于减毒流感病毒载体的新型冠状病毒肺炎疫苗
AU732885B2 (en) Canine parvovirus DNA vaccines
MX2014015649A (es) Vectores de vacuna recombinante de herpesvirus bovino 1 (bohv-1) con baja virulencia.
EP1087014A1 (en) Hog cholera virus vaccine and diagnostic
ES2283150T3 (es) Mutantes del virus de la rabia atenuados estables y vacunas vivas de los mismos.
CN117586898A (zh) 用于非洲猪瘟的酿酒酵母口服疫苗及应用
KR20220115766A (ko) 재조합 돼지파보바이러스 항원 단백질 및 이를 포함하는 백신조성물
US7294338B2 (en) Polynucleotide vaccine formula against canine pathologies, in particular respiratory and digestive pathologies
CN101812473B (zh) 人乳头瘤病毒和沙眼衣原体嵌合核酸疫苗及其用途
NZ506427A (en) A canidae vaccine comprising the rabies G gene under the control of the CMV-IE promoter

Legal Events

Date Code Title Description
PD00 Pending as of 2000-06-30 in czech republic
MK4A Patent expired

Effective date: 20170716