CZ298460B6 - Zlepšené zpusoby výroby nekovalentne komplexovaných a multivalentních proteosomových podjednotkových vakcin - Google Patents
Zlepšené zpusoby výroby nekovalentne komplexovaných a multivalentních proteosomových podjednotkových vakcin Download PDFInfo
- Publication number
- CZ298460B6 CZ298460B6 CZ0081998A CZ81998A CZ298460B6 CZ 298460 B6 CZ298460 B6 CZ 298460B6 CZ 0081998 A CZ0081998 A CZ 0081998A CZ 81998 A CZ81998 A CZ 81998A CZ 298460 B6 CZ298460 B6 CZ 298460B6
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- proteosome
- amphiphilic
- vaccine
- preparing
- vaccine according
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 72
- 229940031626 subunit vaccine Drugs 0.000 title description 5
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 claims abstract description 121
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 claims abstract description 101
- 229920006008 lipopolysaccharide Polymers 0.000 claims abstract description 101
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims abstract description 34
- 239000003599 detergent Substances 0.000 claims abstract description 32
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 claims abstract description 30
- 238000011026 diafiltration Methods 0.000 claims abstract description 24
- 241000606999 Plesiomonas shigelloides Species 0.000 claims abstract description 21
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 claims abstract description 20
- 241000607760 Shigella sonnei Species 0.000 claims abstract description 18
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 claims abstract description 9
- 229940031348 multivalent vaccine Drugs 0.000 claims abstract description 9
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 claims abstract description 7
- 241000607762 Shigella flexneri Species 0.000 claims abstract description 4
- 238000012545 processing Methods 0.000 claims abstract description 3
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 23
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 23
- 239000012466 permeate Substances 0.000 claims description 20
- DVEKCXOJTLDBFE-UHFFFAOYSA-N n-dodecyl-n,n-dimethylglycinate Chemical group CCCCCCCCCCCC[N+](C)(C)CC([O-])=O DVEKCXOJTLDBFE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 19
- 230000003053 immunization Effects 0.000 claims description 18
- 238000002649 immunization Methods 0.000 claims description 18
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims description 16
- 239000012465 retentate Substances 0.000 claims description 16
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 15
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 claims description 14
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 claims description 13
- DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M Sodium laurylsulphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 12
- 239000012510 hollow fiber Substances 0.000 claims description 12
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 claims description 12
- 241000607768 Shigella Species 0.000 claims description 11
- 229940115939 shigella sonnei Drugs 0.000 claims description 7
- 239000011148 porous material Substances 0.000 claims description 6
- 241000588653 Neisseria Species 0.000 claims description 4
- 241000588650 Neisseria meningitidis Species 0.000 claims description 3
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 claims description 3
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 3
- 241000588652 Neisseria gonorrhoeae Species 0.000 claims description 2
- 241000607766 Shigella boydii Species 0.000 claims description 2
- 230000009918 complex formation Effects 0.000 claims description 2
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 claims description 2
- 229940023143 protein vaccine Drugs 0.000 claims description 2
- 241000607000 Plesiomonas Species 0.000 claims 2
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 claims 1
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 claims 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 claims 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 abstract description 15
- 238000011109 contamination Methods 0.000 abstract description 9
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 abstract description 8
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 abstract description 3
- 230000007423 decrease Effects 0.000 abstract description 2
- 238000013341 scale-up Methods 0.000 abstract description 2
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 27
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 16
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 16
- 238000010668 complexation reaction Methods 0.000 description 15
- 241000147000 Shigella flexneri 2a Species 0.000 description 14
- 206010040550 Shigella infections Diseases 0.000 description 13
- 208000004429 Bacillary Dysentery Diseases 0.000 description 10
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 10
- 238000011194 good manufacturing practice Methods 0.000 description 10
- 230000004044 response Effects 0.000 description 10
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 9
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 9
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 9
- 239000000047 product Substances 0.000 description 9
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 9
- 201000005113 shigellosis Diseases 0.000 description 8
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 8
- 230000005875 antibody response Effects 0.000 description 7
- 231100000518 lethal Toxicity 0.000 description 7
- 230000001665 lethal effect Effects 0.000 description 7
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 7
- 239000000463 material Substances 0.000 description 7
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 7
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 6
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 6
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 6
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 6
- 238000011049 filling Methods 0.000 description 6
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 6
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 6
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 206010035664 Pneumonia Diseases 0.000 description 5
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 5
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 5
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 5
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 5
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 5
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 5
- 238000011146 sterile filtration Methods 0.000 description 5
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 101710116435 Outer membrane protein Proteins 0.000 description 4
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 4
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 4
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 4
- 230000000536 complexating effect Effects 0.000 description 4
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 4
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 4
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 4
- 230000000241 respiratory effect Effects 0.000 description 4
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108010028921 Lipopeptides Proteins 0.000 description 3
- 201000009906 Meningitis Diseases 0.000 description 3
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 3
- 238000011161 development Methods 0.000 description 3
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 3
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 3
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 3
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 3
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 3
- 230000002434 immunopotentiative effect Effects 0.000 description 3
- 238000011031 large-scale manufacturing process Methods 0.000 description 3
- 210000003296 saliva Anatomy 0.000 description 3
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 3
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 3
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 3
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 3
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 3
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 3
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000012506 Sephacryl® Substances 0.000 description 2
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 2
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 2
- 210000000628 antibody-producing cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 2
- 239000000385 dialysis solution Substances 0.000 description 2
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 2
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 238000000635 electron micrograph Methods 0.000 description 2
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 2
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 2
- 150000002270 gangliosides Chemical class 0.000 description 2
- 230000002496 gastric effect Effects 0.000 description 2
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000010931 gold Substances 0.000 description 2
- 229910052737 gold Inorganic materials 0.000 description 2
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 2
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 2
- 210000002011 intestinal secretion Anatomy 0.000 description 2
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 2
- -1 liposaccharides Polymers 0.000 description 2
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- 229940023041 peptide vaccine Drugs 0.000 description 2
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 description 2
- 229920001296 polysiloxane Polymers 0.000 description 2
- 230000003134 recirculating effect Effects 0.000 description 2
- 238000012770 revaccination Methods 0.000 description 2
- 230000000392 somatic effect Effects 0.000 description 2
- 101710099705 Anti-lipopolysaccharide factor Proteins 0.000 description 1
- 241000589562 Brucella Species 0.000 description 1
- 239000003109 Disodium ethylene diamine tetraacetate Substances 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 241000588722 Escherichia Species 0.000 description 1
- 101000867232 Escherichia coli Heat-stable enterotoxin II Proteins 0.000 description 1
- 229930186217 Glycolipid Natural products 0.000 description 1
- 241000588748 Klebsiella Species 0.000 description 1
- 108010052285 Membrane Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000018697 Membrane Proteins Human genes 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 229920002274 Nalgene Polymers 0.000 description 1
- 241000589516 Pseudomonas Species 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 238000013019 agitation Methods 0.000 description 1
- WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K aluminium hydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[OH-].[Al+3] WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 239000012459 cleaning agent Substances 0.000 description 1
- 238000004440 column chromatography Methods 0.000 description 1
- 235000019301 disodium ethylene diamine tetraacetate Nutrition 0.000 description 1
- 238000001493 electron microscopy Methods 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- 239000000945 filler Substances 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 230000036512 infertility Effects 0.000 description 1
- 230000035987 intoxication Effects 0.000 description 1
- 231100000566 intoxication Toxicity 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 1
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 1
- 201000004792 malaria Diseases 0.000 description 1
- 238000001000 micrograph Methods 0.000 description 1
- 238000010172 mouse model Methods 0.000 description 1
- 239000007908 nanoemulsion Substances 0.000 description 1
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 1
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 1
- 230000002572 peristaltic effect Effects 0.000 description 1
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 1
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 description 1
- 230000000750 progressive effect Effects 0.000 description 1
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 1
- 230000002685 pulmonary effect Effects 0.000 description 1
- 238000005086 pumping Methods 0.000 description 1
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 1
- 210000002345 respiratory system Anatomy 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- 238000005070 sampling Methods 0.000 description 1
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 238000002798 spectrophotometry method Methods 0.000 description 1
- 238000004611 spectroscopical analysis Methods 0.000 description 1
- 239000012086 standard solution Substances 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 1
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 1
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 1
- 238000010257 thawing Methods 0.000 description 1
- 230000000699 topical effect Effects 0.000 description 1
- 229940031572 toxoid vaccine Drugs 0.000 description 1
- 230000002485 urinary effect Effects 0.000 description 1
- 208000019206 urinary tract infection Diseases 0.000 description 1
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 1
- 238000012795 verification Methods 0.000 description 1
- 230000003442 weekly effect Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23J—PROTEIN COMPOSITIONS FOR FOODSTUFFS; WORKING-UP PROTEINS FOR FOODSTUFFS; PHOSPHATIDE COMPOSITIONS FOR FOODSTUFFS
- A23J1/00—Obtaining protein compositions for foodstuffs; Bulk opening of eggs and separation of yolks from whites
- A23J1/008—Obtaining protein compositions for foodstuffs; Bulk opening of eggs and separation of yolks from whites from microorganisms
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/385—Haptens or antigens, bound to carriers
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/10—Dispersions; Emulsions
- A61K9/127—Synthetic bilayered vehicles, e.g. liposomes or liposomes with cholesterol as the only non-phosphatidyl surfactant
- A61K9/1275—Lipoproteins or protein-free species thereof, e.g. chylomicrons; Artificial high-density lipoproteins [HDL], low-density lipoproteins [LDL] or very-low-density lipoproteins [VLDL]; Precursors thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/04—Antibacterial agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/04—Immunostimulants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
- A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/195—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/195—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria
- C07K14/22—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria from Neisseriaceae (F)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/195—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria
- C07K14/24—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria from Enterobacteriaceae (F), e.g. Citrobacter, Serratia, Proteus, Providencia, Morganella, Yersinia
- C07K14/25—Shigella (G)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
- A61K9/0043—Nose
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
- Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Public Health (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Immunology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Oncology (AREA)
- Dispersion Chemistry (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Vascular Medicine (AREA)
- Cardiology (AREA)
- Heart & Thoracic Surgery (AREA)
- Mycology (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
Abstract
Zpusob prípravy multivalentních vakcin proteosom-amfifilní determinant pomocí diafiltracní nebo ultrafiltracní technologie, vhodných pro parenterálnínebo mukosální podávání. Amfifilní determinanty zahrnují lipopolysacharidy z gramnegativních bakterií napr. S. flexneri, P. shigelloides a S. sonnei.Proteosomy se získávají z meningokoka skupiny B typ 2b. Aktivní komplexy proteosom - amfifilní determinant (nekovalentní komplexy) vakciny se tvorí pri užití diafiltrace nebo ultrafiltrace pro odstranení detergentu. Použití diafiltrace nebo ultrafiltrace snižuje cas procesu a príležitost ke kontaminaci a dále dovoluje pracovat pri okolní teplote aúcinne zvyšovat merítko. Mimo to proces dovoluje spolehlivé a kontinuální monitorování dialyzátu, což zvyšuje úcinnost celého procesu. Doba dialýzy pro produkci sarže vakciny je redukována z více než7 až 10 dnu na méne než 72 hodin a obvykle méne než 48 nebo 24 hodin. Použití postupu co nejlépe využívá prítomnost každé antigenní komponenty pri príprave multivalentních vakcin.
Description
Zlepšené způsoby výroby nekovalentně komplexovaných a multivalentních proteosomových podjednotkových vakcín (57) Anotace:
Způsob přípravy multivalentních vakcín proteosom-amfifilní determinant pomocí diafiltrační nebo ultrafiltrační technologie, vhodných pro parenterální nebo mukosální podávání. Amfifilní determinanty zahrnují lipopolysacharidy z gramnegativních bakterií např. S. flexneri, P. shigelloides a S. sonnei. Proteosomy se získávají z meningokoka skupiny B typ 2b. Aktivní komplexy proteosom - amfifilní determinant (nekovalentní komplexy) vakcíny se tvoří při užití diafíltrace nebo ultrafiltrace pro odstranění detergentu. Použití diafíltrace nebo ultrafiltrace snižuje čas procesu a příležitost ke kontaminaci a dále dovoluje pracovat při okolní teplotě a účinně zvyšovat měřítko. Mimo to proces dovoluje spolehlivé a kontinuální monitorování dialyzátu, což zvyšuje účinnost celého procesu. Doba dialýzy pro produkci šarže vakcíny je redukována z více než 7 až 10 dnů na méně než 72 hodin a obvykle méně než 48 nebo 24 hodin. Použití postupu co nejlépe využívá přítomnost každé antigenní komponenty při přípravě multivalentních vakcín.
Zlepšené způsoby výroby nekovalentně komplexovaných a multivalentních proteosomových podjednotkových vakcin
Oblast techniky
Vynález se týká způsobů výroby a složení nekovalentně komplexovaných multivalentních proteosomových vakcin pro mukosální a parenterální podávání.
Dosavadní stav techniky
Aby se u multivalentních podjednotkových vakcin stimulovaly optimální imunitní odezvy na každou ze složek, měly by být vhodně složeny a každá z nich by měla být přístupná pro imunitní systém tak, aby byla účinně rozeznána a zpracována buňkami imunitního systému. Prvotní příklady takových nekovalentně komplexovaných vakcin zahrnují proteosomní vakciny, které se skládají z neisseriálních bílkovinných proteosomů vnější membrány nekovalentně komplexovaných s nejrůznějšími antigeny, mezi něž patří peptidy, lipopetidy, transmembránové nebo toxoidisované proteiny, polysacharidy nebo lipopolysacharidy (LPS) (patentová přihláška 07/065,440 z 23. června 1987 „Immunogenic peptide vaccines and metods of preparation“; 07/336,952 z 12. dubna 1989 „Immunopotentiating systém for large proteins and polypeptides“; 07/958,426 z 8. října 1992 „Oral or Intranasal Vaccines Using Hydrophobic Complexes Having Proteosomes and Lipopolysaccharides“; 08/029,666 z 11. března 1993 „Immunopotentiating Systems for Preparation of Immunogenic Materials“; 08/143,365 z 29. října 1993 „Immunopotentiating Systems for preparation of Immunogenic Materials“; 93/10,402 z 29. října 1993 „Submicron Emulsions as Vaccine Adjuvants; 08/063,613 z 18. května 1994 „Solid Fat Nanoemulsions as Vehicles for Vaccine Delivery“ a publikace Orr N., Robin G., Cohen D., Amon R. and Lowell G. H. (1993): Imunogenicity and Effícacy of Oral or Intranasal Shigella flexneri 2a and Shigella sonnei Proteosome-Lipopolysaccharide Vaccines in Animal Models. Infect. Immun. 61:2390; Mallett C. P., Hale T. L., Kaminski R., Larsen T„ OrrN., Cohen D. a Lowell G. H. (1995): Intranasal or intragastric immunization with proteosome-Shigella lipopolysaccharide vaccines protéct against lethal pneumonia in a murine model of shigellosis. Infect. Immun. 63:2382-2386; Lowell G. H„ Kaminski R. W„ Grate S et al. (1996): Intranasal and intramuscular proteosome-staphylococcal enterotoxin B (SEB) toxoid vaccines:immunogenicity and effícacy against Lethal SEB intoxication in mice. Infect. Immun. 64:1706-1713. Lowell G. H. (1990): Proteosomes, Hydrophobic Anchors, Iscoms and Liposomes for Improved Presentation of Peptide and Protein Vaccines, in New Generation Vaccines: G. C. Woodrow a Μ. M. Levine, eds. (Marcel Dekker, NY), kapitola 12 (str 141-160) a Lowell G. H., Ballou W. R„ Smith L. F„ Wirtz R. A. Zollinger W. D. a HockmeyerW. T. (1988): Proteosome-lipopeptide vaccines: enhancement of immunogenicity for malaria CS peptides. Science 240:800.
Na obsah všech zde citovaných dokumentů se zde explicitně odkazuje.
Pro praktickou aplikaci při podávání vakcin k ochraně před nemocí je obvykle nutné podat několik takových antigenů současně vzhledem ke skutečnosti, že někteří jedinci jsou vnímaví k získání nemocí způsobených různými organismy. Mimo to, některé organismy, ať už jsou spolu příbuzné nebo nejsou často endemické ve stejném místě a proto jedinci, kteří vyžadují ochranu potřebují naočkovat několika druhy vakcin.
V minulosti se produkce vakcin, které vyžadují nekovalentní komplexování složek, prováděla jednoduchou dialýzou, při níž byly komponenty umístěny do dialyzačního zařízení v přítomnosti dialyzovatelného detergentu a směs se dialyzovala 7 až 10 dní, aby se zkusilo odstranění detergentu. Praktické nevýhody tohoto systému směřují k tomu, že přísně vylučují pokrok ve vývoji a komercionalizaci této technologie z několika důvodů, které představují 1) čas: dlouhá doba procedury: nezbytné používání GMP zdrojů po týdny, zatímco se vakcina dialyzuje, je nepraktické i
-1 CZ 298460 B6 vzhledem k vynaloženým nákladům i s ohledem na zvýšenou možnost selhání nebo kontaminace mechanických nebo biologických komponent během tohoto prodlouženého časového úseku; 2) kontaminace: zvýšená možnost kontaminace: dialyzační zařízení se obtížně sterilizuje, dialyzační zařízení vyžaduje ruční otevření a zavření systému a tím jsou složky vystaveny kontaminaci během postupu při plnění i vyprazdňování. Protože uběhne mnoho dní mezi plněním a vyprazdňováním, riziko malé kontaminace v počátečních dnech procesu, se může snadno zvětšit během mnoha dialyzačních dnů a tak se tato metoda stává neužitečná pro praktickou přípravu vakcin. Riziko propíchnutí vaku může způsobit ztrátu produktu. 3) Teplota: nezbytnost provádět dialýzu při 4 °C z důvodu dlouhé používané doby, 4) Objem dialyzační kapaliny: pro přípravu vakciny ve větším měřítku by bylo zapotřebí užívat mohutná množství dialyzační tekutiny, protože obvykle je kapaliny vně dialyzačního přístroje ke kapalině uvnitř dialyzačního přístroje zapotřebí v poměru 200:1. Tak například produkce poloprovozní šarže dvou litrů vakciny by vyžadovala 400 litrů kapaliny vně zařízení za den, 4000 litrů za 10 dní a produkce sériové šarže 20 až 200 litrů by vyžadovala 40.000 až 4,000.000 litrů. Tato množství jsou nehospodámá a nepraktická ve srovnání s metodami, které se užívají podle předloženého vynálezu; dialyzační zařízení nejsou dostupná pokud jsou problémem velká množství a 5) nezpůsobilost snadno změřit odstranění detergentu tak, aby byla maximalizována účinnost vakciny. Protože je dialyzační vak umístěn v kontejneru s 200 objemy pufru, probíhající měření odstranění detergentu není ani praktické ani proveditelné a 6) mimo to nebyla popsána metoda pro měření přítomnosti detergentu Empigenu BB, užívaného v preferovaném provedení.
Druhý problém řešený v tomto vynálezu je demonstrace způsobu výroby a podávání multivalentních vakcin. Složky mohou být buď vyrobeny společně, nebo připraveny separátně a smíseny před aplikací. Předkládaný vynález ukazuje optimální cestu pro přípravu takových multivalentních vakcin.
Podstata vynálezu
Předmět předkládaného vynálezu se všestranně vztahuje na výrobu a zhotovování vakcin proteosom-amfífílní determinanta. Předmětem vynálezu je způsob přípravy vakciny proteosom-amfifilní determinanta, který zahrnuje
a) vytvoření směsi proteosomu, dialyzovatelného detergentu a amfifilní determinanty,
b) podrobení směsi diafiltraci nebo ultrafiltraci k odstranění detergentu a vytvoření komplexu amfifilní determinanta-proteosom,
c) monitorování množství tvorby komplexu amfifilní determinanta-proteosom a
d) získání komplexu amfifilní determinanta-proteosom, přičemž nominální hranice molekulové hmotnosti NWMC diafiltrace nebo ultrafíltrace je 3000 nebo vyšší.
Tyto vakciny jsou určeny buď pro parenterální, nebo zejména pro mukosální podávání, které představuje, ale neomezuje se jen na, respiratomí (např. intranasální, intrafaryngální a intrapulmonámí), gastrointestinální (např. orální nebo rektální) nebo místní (např. spojivkovou nebo ušní) aplikaci pro vyvolání i systemické (sérum) i mukosální (včetně respiratomí a intestinální) protilátkové odezvy. Amfifilní determinantu představuje molekula s hydrofobními a hydrofilními oblastmi, která se, pokud je vhodně formulována s proteosomy, seskupuje s proteosomy do komplexu vyvolávajícího v subjektu imunologickou odezvu. Mezi typické amfifilní determinanty patří glykolipidy, liposacharidy (včetně detoxifikovaných lipopolysacharidů), lipopeptidy, transmembránové, obálkové nebo toxoidní proteiny, či proteiny nebo peptidy s vnitřním zakotvením hydrofobními aminokyselinami. Tyto determinantové materiály se dají získat z gramnegativních bakterií včetně escherichia, klebsiella, pseudomonas, hemophilus, brucella, shigella a neisseria. Podrobněji se vynález vztahuje na proteosomní vakciny, ve kterých proteosomní přípravky
-2CZ 298460 B6 meningokokálního proteinu vnější membrány (připravené z některého kmene N. meningitis nebo N. gonorrhea nebo jiných neisseriálních druhů) jsou nekovalentně komplexovány s nativními nebo detoxifikovanými shigellámími nebo neisseriálními polysacharidy nebo lipoligosacharidy a tvoří vakciny určené k ochraně proti nákazám způsobeným gramnegativními organismy, které obsahují některou ze složek komplexu obsahujícího meningokoky nebo shigelly. Zevrubněji se vynález vztahuje na proteosomní vakciny, které obsahují LPS, jež vyvolávají odezvy protilátek rozeznávajících typově specifické somatické polysacharidické O-antigeny lipopolysacharidů shigelly a tím poskytují homologickou ochranu proti shigellose. Ještě zevrubněji jsou připravovány lipopolysacharidy, které, jsou-li komplexovány sproteosomy, vyvolávají takové proti shigelle chránící imunitní odezvy, a izolují se buď z Shigella sonnei, nebo z Plesiomonas shigelloides pro imunitu vůči nákaze Shigella sonnei, z Shigella flexneri 2a pro imunitu vůči nákaze Shigella flexneri 2a a tak dále, s použitím LPS odvozených z homologických nebo antigenně křížově reagujících organismů pro propůjčení homologické imunity proti shigellose způsobené S. flexneri 2a (nebo 3a atd.), S. boydii, S. sonnei atd. Ještě více specificky, předkládaný vynález popisuje úspěšnou aplikaci proteosomních shigella vakcin, jež jsou multivalentní, protože dvě nezávisle zhotovené proteosomní vakciny za užití LPS shigelly odvozených z S. flexneri 2a (pro nákazu S. flexneri 2a) a P. shigelloides nebo S. sonnei (pro nákazu S. sonnei) jsou podávány spolu, vyvolávajíce tvorbu protilátek, které rozeznávají dva organismy a tím poskytují ochranu proti dvěma typům nákaz. Nejtypičtější je, že se předkládaný vynález týká proteosomní shigella LPS vakciny, ve které jsou komplexovány proteosomy zmeningokoků skupiny B typu 2b s P. shigelloides LPS pomocí technologie diafiltrace dutými vlákny a vzniká vakcina podávaná mukosální, respiratomí a/nebo gastrointestinální cestou pro vyvolání protilátek, které rozeznají LPS somatického O-antigenu S. sonnei a tím ochrání proti shigellose způsobené tímto organismem. Uvažují se i ostatní konvenční ultrafiltrace/diafiltrace, např. plošná membrána a membránová patrona.
Předkládaný vynález poskytuje metodologii produkování nekovalentně komplexovaných vakcin tím způsobem, že 1) zkracuje potřebný čas, 2) snižuje příležitost ke kontaminaci, 3) zvyšuje na okolní teplotu, při které mohou být takovéto vakciny produkovány, 4) umožňuje účinně zvyšovat produkční proces, aby vyžadoval minimální použití reagentů, 5) dovoluje spolehlivé a účinné vzorkování dialyzátu, aby se mohla opakovaně měřit míra odstranění detergentu, a aby se optimalizovala účinnost operace. To přímo vede ke vzrůstu účinnosti komplexace vakciny, tak aby se vakcina připravovala s měřitelně větší imunogenicitou v nízkých dávkách. Tímto způsobem se výrazně zlepšuje celková kvalita produktu. 6) Mimo to je popsána metoda měření přítomnosti Empigenu BB, detergentu použitého v preferovaném provedení. Místo Empigenu BB lze použít jiné dialyzovatelné detergenty. Dále bylo při použití postupu podle vynálezu prokázáno, že vakcina může být lyofílizována a rehydratována takovým způsobem, že se zachová optimální účinnost vakciny, jak bylo zjišťováno měřením imunogenicity vakciny.
Způsob podle předkládaného vynálezu činí nezbytným použití ultrafiltrační/diafiltrační patrony z dutých vláken, aby se uskutečnila komplexace odstraněním detergentu. Změnou velikosti pouzdra pro umístění patrony může být snížena doba dialýzy mnoha vakcin z více než 7 až 10 dnů na méně než 72 hodin a obvykle méně než 48 nebo 24 hodin. Protože se užívá takto krátká doba, je možné zvýšit reakční teplotu ze 4 °C na normální pokojovou teplotu, aniž by se sledovalo na postupu nebo integritě produktů. Zatím se postup prováděl asi při 20 °C a do úvahy přicházejí teploty mezi 0 a 40 °C. Protože se jedná o uzavřený systém je možnost kontaminace silně snížena. Vedle toho zvětšením velikosti pouzdra může být zpracováváno neobyčejně velké množství materiálu v poměrně krátké době a tím je umožněno účinné a reprodukovatelné rozšíření procedury pro komerční vývoj. Dále může být permeát opakovaně vzorkován pro stanovení odstranění detergentu. Empigenu BB, který je užíván v preferovaném provedení. Jedinečnost této metodologie vyžadovala experimentální ověření vzhledem k tomu, že nebylo zřejmé, zda komplexace a struktura vakciny na imunogenní materiály, která byla dosažena pomalou dialýzou po 7 až 10 dní pomocí stacionárního dialyzačního vaku, by se mohla vyrovnávat nebo být lepší než aplikace technologie dutých vláken, při které se podíly, které mají být komplexovány, pohybují vedením s výjimečně vysokým průtokem ve srovnání s průtokem stacionární dialyzační trubicí.
-3CZ 298460 B6
Ježto nominální řez molekulové hmotnosti užívané membrány může být vybírán mezi 1000, 3000, 5000, 10 000, 30 000, 50 000 nebo více, v závislosti na rozměru komponent, které mají být nekovalentně komplexovány, je tento systém snadno adaptovatelný na komplexování nativních nebo detoxifíkovaných lipopolysacharidů, lipidů, peptidů, lipopeptidů, liposacharidů, polysacharidů, gangliosidů nebo transmembránových, obálkových nebo nativních nebo toxoidovaných proteinů navzájem nebo s přípravky proteinů proteosomů vnější meningokokální membrány.
Výsledný produkt může být využit jako vakcina podávaná buď parenterálně, nebo mukosálně tj. cestou respiratomího nebo gastrointestinálního traktu, např. intranasálně, orálně, orofaryngeální inhalací, topicky nebo rektálně. V uvedeném příkladu se ukazuje, že proteosomy jsou nekovalentně komplexovány sP. shigelloides LPS a vytvářejí vakcínu, která vyvolává anti-S. sonnei LPS odezvy k ochraně proti shigellose S. sonnei.
Metodologie má tři stadia: předběžnou operaci; komplexaci proteosomů s amfífílní determinantou, např. S. Shigelloides LPS; následovanou sterilní filtrací.
Předkládaný vynález ukazuje, že pro optimální dodání multivalentních vakcin je nejlepším způsobem připravit specifické vakcíny individuálně a potom v témž dni imunizovat každou ze dvou individuálně připravených vakcin při optimální koncentraci. Jiné možnosti jako vytvoření hybridních vakcin během vzniku nekovalentních komplexů byly rovněž provedeny nebojsou uvažovány.
Přehled obrázků na výkresech
Obrázek 1. Intranasální imunizace vakcínou proteosom-P. shigelloides LPS: odezvy na sérum IgG zjištěné několika preparáty při snížených dávkách.
Obrázek 2. Intranasální imunizace vakcínou proteosom-P. shigelloides LPS: odezvy na sérum IgA zjištěné několika preparáty při snížených dávkách.
Obrázek 3. Podávání vakcíny proteosom-P. shigelloides LPS (pro shigellosu 5. sonnei) a vakciny proteosom-S. flexneri 2a společně ve stejném dni nebo v týdenním rozestupu vyvolává dobrou imunogenicitu k oběma LPS složkám S. sonnei a S. flexneri 2a.
Obrázek 4. Imunozlatem labelovaný elektronový mikrograf vakciny proteosom-shigella LPS ukazující sdružení shigella LPS s váčky proteosomů.
Obrázek 5. Vakcina proteosom-P. Shigelloides LPS chrání proti lethální Shigella sonnei pneumonia u zvířecího modelu Shigellosis.
Obrázek 6. Intranasální nebo orální imunizace vakcinami proteosom-shigella flexneri 2a LPS indukuje anti-shigella LPS IgG a IgA v séru a IgA v tekutinách z intestinálního a plicního výplachu, což může vydržet 30 až 60 dní po imunizaci.
Obrázek 7. Intranasální nebo orální imunizace lidí jednou nebo dvěma dávkami vakcin proteosom-P. shigelloides LPS pro Shigella sonnei při použití různých množství vakciny: indukce antishigella LPS IgA, IgG a IgM periferálních ASC odezev krve a odezev protilátek v séru, slinách a moči.
Obrázek 8. LPS v HPLC frakcích po aplikaci nekomplexovaných P. shigelloides LPS a demonstrace nekovalentního komplexování LPS a proteosomních proteinů při současné eluci LPS a proteinů v HPLC frakcích po aplikaci vakciny proteosom-P. shigelloides LPS.
-4CZ 298460 B6
Obrázek 9. Baktericidní odezva protilátek u myší na vakcinu z meningkokálního proteinu vnější membrány a detoxifíkovaného lipooligosacharidu; geometrický průměr reciprokých titrů proti meningokokálnímu kmenu 9162.
Příklady provedení vynálezu
Příklad 1
Tento příklad podrobně popisuje přípravu vakciny proteosom-P. shigelloides obsahující přibližně 2 až 3 g proteinu. Postup je stejně použitelný pro zvětšené měřítko používající 10ti až 100— násobně větší množství materiálu při příslušném zvětšení prostoru pro patronu membrány a příslušném vzrůstu objemů. Při použití vhodných velikosti membrán s vhodným řezem molekulových hmotností, aby zadržely antigeny, které mají být komplexovány, je tento postup stejně použitelný pro komplexaci proteosomů s ostatními nativními nebo detoxifikovanými lipopolysacharidy, lipidy, peptidy, lipopeptidy, liposacharidy, polysacharidy, gangliosidy nebo transmembránovými, obálkovými nebo nativními nebo toxoidovanými proteiny navzájem nebo s přípravky proteosomů proteinu vnější meningokokální membrány. Při tomto postupu je jako příklad detergentu používán Empigen BB; při postupu lze stejně aplikovat jakýkoliv dialyzovatelný detergent, který solobilizuje komponenty. Tento postup užívá patrony podle A/G technologie, avšak stejně dobře lze aplikovat jakýkoliv druh patron pro systém ultrafíltrace/diafiltrace.
5.0.0 Předběžné operace
5.0.0.1 Sterilně filtrovat zásobní roztok 30 % Empigenu BB, který je při postupu používaným detergentem.
5.0.0.2 Připravit 2X TEEN / 2 % Empigen (0,1 M Tris, 0,02 M dinatriem EDTA, 0,3 M chlorid sodný, WFI a 2 % Empigen, pH 8,0).
5.0.0.3 Připravit 150 1 roztoku TNS (tris normální fyziologický roztok) obsahující 0,05 M Tris, 0,15 M chloridu sodného pH 8,0 pro oddialyzování detergentu.
5.0.0.4. Připravit 10 litrů hydroxidu sodného pro čištění UF patrony.
5.0.0.5. Rozmrazit požadované množství lipopolysacharidu (LPS) Shigellaflexneri 2a.
5.0.1. Komplexace proteosomů s S. flexneri 2a LPS
5.0.1.6. Přidat stejný objem 2X TEEN pufru k objemu LPS a důkladně promíchat.
5.0.1.7. Rozmrazit a stanovit v mg množství masy proteosomů rovnající se množství LPS rozmražených ve stupni 5.
5.0.1.8. K proteosomům na litr přidat 30 ml sterilně přefiltrovaného Empigenu. Důkladně promíchat a spojit s LPS ze stupně 5.
5.0.1.9. Obě komponenty důkladně smíchat. Obvykle dostačuje 15 minut na desce míchadla v kombinaci s tyčkovým míchadlem.
5.0.1.10. Pro oddialyzování detergentu tak, aby proteosom mohl vytvořit komplexy, nastavit systém ultrafiltrace (založený na technice tangenciálního toku) za použití patrony dutých vláken s nominálním řezem molekulové hmotnosti (NMWC) velikosti pórů 10.000 vyráběné A/G Technology, lne., napojený na sterilizované silikonové trubice a peristaltické čerpadlo. Zdravotnické tlakoměry pro monitorování tlaku během průběhu jsou umístěny na vstupní a výstupní straně patrony. Pokud se týká adjustace výstupního tlaku, je ventil konečného tlaku umístěn na výstupní straně patrony.
5.0.1.11. Ultrafiltrační systém se čistí a sterilizuje pomocí WFI a 0,5 M NaOH při teplotě 50 °C po dobu delší než 60 minut. Systém se propláchne WFI a před použitím se uvede do rovnovážného stavu pomocí TNS pufru.
5.0.1.12. Sterilní zásobní nádoba se umísťuje do linky tak, že vstupující kapalina je hnána z rezervoáru a vracející se retentát se vrací do téhož reservoáru. Jakmile kapalina projde patronou membrány (permeát nebo filtrát) je znovu naplněna pufrem buď přímým přidáním, nebo kontinuálně pracujícím plnicím systémem. Seřízení kontinuálního plnicího
-5CZ 298460 B6 systému po připojení silikonového potrubí k nádobě obsahující TNS pufr k reservoáru vzorku je pak neprodyšné. Jakmile se z reservoáru vzorku odstraní kapalina, vytvoří se vakuum, které způsobí, že „TNS“ pufr je ze své nádoby tažen do reservoáru vzorku.
Pokud zůstává systém neprodyšný, zůstává hladina vzorku v reservoáru konstantní.
5.0.1.13. Spustit recirkulační čerpadlo pro zahájení diafiltrace. Nastavit rychlost čerpadla a ventil konečného tlaku tak, aby se na konci získal tlak 15 ± 4 psi (=103,4 ± 27,6 kPa).
5.0.1.14. Ověřovat progresivní odstraňování Empigenu BB testováním vzorků permeátu v každých 10 až 15 litrech pomocí testu na Empigenový precipitin. Tento test spočívá ve vytvoření série ředění permeátu a standardního roztoku známého množství Empigenu BB, přidání HC1 k okyselení roztoků a poté přidávání série ředění SDS (dodecylsulfátu sodného), aby vznikl assay šachovnicového typu. Maximum precipitátu se bude tvořit, když bude přítomno stejné množství Empigenu a SDS. Tímto způsobem může být kvantifikováno množství přítomného Empigenu zaznamenáváním ředění SDS, permeátů a standardů při kterých se vytváří maximum precipitátu. Jak postupuje diafiltrace, snižuje se množství Empigenu a zkumavka obsahující méně SDS bude zkumavkou s maximem precipitátu. Přítomnost precipitátu se kvantifikuje spektrometrickým měřením OD při 600 nm.
5.0.1.15. Pro množství komponent použitých v tomto příkladu, pokračovat v diafiltraci dokud se nezpracuje nejméně 120 litrů permeátu a chybí výrazné množství precipitátu při Empigen Precipitin Testu (maximum OD 600 nm je menší než 0.05).
5.0.1.16. Po skončení dialýzy koncentrovat produkt, aby konečný objem měl hodnotu OD280 blízkou 6,0. Vysušit systém a promýt 300 až 400 ml pufru „TNS“. Znovu vysušit systém a spojit obě části. Vyčistit patronu recirkulací velkých množství WFI následovaných 0,5 N NaOH při 50 °C po >60 minut. Vypláchnutí NaOH pomocí WFI a uchovávání systému v 0,01 N NaOH.
5.0.2. Sterilní filtrace
5.0.2.17. Pokud se požaduje, mohou být komplexy sterilně filtrovány. Koncentrace proteosomu může být upravena před nebo po 0,22 μ filtraci. Sterilní filtrace se normálně provádí s filtračními jednotkami od Millipore Corp. Tyto jednotky se nazývají Millipak a jsou k dispozici v různých velikostech. Dokud operace není dokončena skladuje se sfiltrovaný objem při 4 °C a testuje se na sterilitu.
5.0.3.0. Specifický účel: spojit objem GMP preparátů meningokokálních proteosomů proteinu vnější membrány a lipopolysacharidu S. flexneri 2a na nekovalentní komplexy odstraněním detergentu.
5.0.3.1. Aplikace: tato GMP procedura vyúsťuje ve velkoobjemovou produkci tvorby nekovalentních komplexů, proteosomů s lipopolysacharidem S. flexneri 2a pro užití jako vakciny proti infekci S. flexneri 2a.
Příklad 2
Nekovalentní komplexace zásobního množství čistých proteinů (proteosomů) vnější membrány Neisseria meningitis kmene 9162 a alkalicky detoxifikovaného lipooligosacharidu N. meningitidis L8 izolovaného z kmene 8532.
5.1.0. Zásobní množství proteinu (proteosomů) vnější membrány kmene 9162, šarže 0136 a šarže 0203 zásobního detoxifikovaného meningokokálního L8 lipooligosacharidu (LOS) byly vzaty ze zásoby a rozmraženy při teplotě místnosti. Zásobní množství LOS o objemu 182 ml obsahující 500 mg LOS ve sterilní destilované vodě bylo spojeno se zásobními proteosomy o objemu 306 ml, obsahujícími 400 mg proteinu v pufru složeném z 0,05 M Tris-HCI, 0,15 M NaCl, 0,01 M EDTA a 0,1 % Empigenu BB.
5.1.2. 30% roztok Empigenu BB byl sterilně filtrován filtrem s velikostí pórů 0,22 pm a jedna šedesátina objemu byla přidána ke spojeným proteosomům a LOS roztoku a při teplotě místnosti míchána 1 hodinu.
-6CZ 298460 B6
5.1.3. Pufrovací roztok detergentu byl odstraněn od proteosomů, LOS roztoku a nahrazen sterilní destilovanou vodou pomocí ultrafiltrace za použití ultrafíltrační patrony UEP3-C-6 A/G Technology s řezem molekulární hmotnosti pórů 3000.
5.1.4. Procedura sestavení, dezinfekce, promývání a čistění aparatury byly stejné jak je popsáno v příkladu 1. Vstupní tlak byl 15 ± 4 psi (=103,4 ± 27,6 kPa) a rychlost průtoku permeátu byla 175 ml za minutu.
5.1.5. Po každých 3 až 4 litrech byl permeát testován na přítomnost detergentu Empigenu BB srážecí metodou popsanou v příkladu 1. V ultrafiltraci se pokračovalo dokud nevznikl žádný precipitát při testu v dalších dodatečných 5 litrech. Nashromážděno bylo celkem 37 litrů permeátu.
5.1.6. Retentát byl čirý a byl sterilně filtrován filtrem s velikostí pórů 0,22 pm analyzovaném na protein a LOS a uchovávaným jako zásobní produkt při 4 °C.
5.1.7. Zásobní produkt byl zředěn na koncentraci 0,2 mg proteinu v ml a koncentrace NaCl byla upravena na 0,15 M. Pro konzervaci bylo přidáno 0,01 % Thimerasolu a vzniklý objem byl za sterilních podmínek rozdělen do nádobek pro konečné uchovávání, oštítkováných a skladovaných při -70 °C.
5.1.8. Tento produkt byl na myších testován na imunogenicitu, když byl podáván ve fyziologickém roztoku a absorbován na gelu hydroxidu hlinitého sloužícího jako adjuvans. Výsledky jsou uvedeny níže v Tabulce 1 a ukazují, že komplexy vakcin jsou imunogenní, když jsou myším podávány i.p.
Tabulka 1.
Baktericidní odezva protilátek u myší na vakcinu z meningokokálního proteinu vnější membrány a detoxifikovaného lipooligosacharidu. Geometrický průměr reciprokého titru proti meningokokálnímu kmeni 9162.
| Vakcina | Dávka | Adj uvans | Den 0 | Den 28 | Den 42 |
| xxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxxx | |||||
| Proteosomy | |||||
| dLOS | |||||
| podíl 0271 | i pg | žádné | <8 | <8 | 16 |
| 3 Pg | žádné | <8 | <8 | 128 | |
| 10 pg | žádné | <8 | <8 | 512 | |
| Proxeosomy | |||||
| dLOS | |||||
| podíl 0271 | 1 Pg | A1(OH)3 | <8 | <8 | 5X3 |
| 3 Pg | A1(OH)3 | <8 | <8 | 512 | |
| 10 pg | Al(OH)3 | <8 | 64 | 2048 |
Poznámka: Vakcina byla podávána intraperitoneálně v nultém a 28 dni skupině deseti křížených CD-1 myší.
5.1.9. Komplexace proteosomů a LOS byla ověřována sloupcovou chromatografii proteosomů a složek LOS před a po komplexaci (Obrázek 9). Chromatografická analýza zásobních meningokokálních L8 LOS a konečných komplexů proteosomy/LOS na nízkotlaké koloně Sephacryl S300. Kolona byla vymývána pufrem obsahujícím 0,05 M Tris-HCl, 0,01 M EDTA a 0,15 M NaCl. Protein byl stanovován pomocí absorbance při 280 nm a LOS byly stanovovány na základě inhibice ELISA (enzyme linked immunosorbant assay), při které vazba monoklonální protilátky na vyčištěný L8 LOS adsorbovaný na plastové desce byla inhibována sérií zřeďování frakcí ze sephacrylové kolony. Před komplexaci vycházely LOS z kolony jako široký peak se středem ve frakci 39. Po komCZ 298460 B6 plexaci byly LOS vymývány spolu s proteosomy v peaku se středem přibližně ve frakci
33.
5.1.10. Specifický úkol: spojit většinu GMP preparací proteosomů meningokokálních proteinů vnější membrány a detoxifikovaného lipopolysacharidu do nekovalentních komplexů odstraněním detergentu.
5.1.11. Aplikace: tato GMP procedura vyúsťuje ve velkoobjemovou produkci tvorby nekovalentních komplexů s detoxifíkovaným meningokokálním lipopolysacharidem pro užití jako vakciny proti menigokokální infekci N meningitides.
Příklad 3
Tento příklad je rovněž zaměřen na produkci vakciny proteosom-S. shigelloides. Tato procedura je rovnocenně aplikovatelná na větší měřítka při nasazování deseti- až tisícinásobně většího množství materiálu s příslušným zvětšováním pouzdra pro patronu membrány a příslušným nárůstem objemů.
5.8.1. Příprava 25 ml sterilně filtrovaného 30% roztoku Empigenu BB.
5.8.1.1. Použít 100 ml Nalgene filtrační jednotku pro jedno použití s filtrační membránou s velikostí pórů 0,2 μ pro sterilní filtraci kolem 25 ml 30% roztoku Empigenu BB.
5.8.2. Připravit 4 1 TEEN 2x se 2 % Empigenu BB (sestávající z 0,1 M Tris, 0,02 M dinatrium EDTA, 0,3 M chloridu sodného, WFI a 2% roztok Empigenu BB).
5.8.4. Připravit 10 litrů roztoku 0,5 M hydroxidu sodného.
5.8.6. Pokud je nutné, rozmrazit zásobní lipopolysacharid (LPS) P. shigelloides pro přípravu komplexace s proteosomy a zaznamenat číslo šarže a koncentraci LPS, požadované množství LPS v g a vypočtený objem LPS oddělit.
5.9.0. Komplexace proteosomů s LPS P. shigelloides
5.9.1. Příprava LPS pro komplexaci
5.9.1.2. Spojit alikvotní podíly zásobního LPS do čisté, sterilní, kalibrované 5 1 baňky. Změřit celkový objem a stanovit celkové množství LPS.
5.9.1.3. Přidat stejný objem pufru 2x TEEN jako je objem použitého LPS.
5.9.1.2. Změřit celkovou velikost spojených objemů, potom vložit tyčkové míchadlo a na míchací desce míchat 15 ± 2 minuty.
5.9.2. Příprava proteosomů pro komplexaci
5.9.2.1. Zaznamenat celkový čas rozmrazování proteosomů, pokud nějaký byl.
5.9.2.2. Spojit alikvotní podíly zásobních proteosomů do čistého, sterilního odměmého válce o objemu 1 1. Změřit celkový objem a stanovit celkové množství proteosomů.
5.9.2.3. Z odměmého válce ze stupně 5.9.2.2. převést do jiného čistého, sterilního 1 1 odměrného válce takový objem proteosomů, který v množství mg odpovídá mg množství LPS použitého ve stupni 5.9.1.2.
5.9.2.4. Do válce obsahujícího proteosomy přidat přes 0,22 μ zfiltrovaného 30 % roztoku Empigenu BB v množství 30 ml na 1 1 proteosomů. Míchat tyčkovým míchadlem 15±2 minut.
5.9.3 Smísit proteosomy s P. shigelloides LPS
5.9.3.1. Za mírného míchání tyčkovým míchadlem přidat proteosomy ze stupně 5.9.3.2. do odměmé 5 1 baňky s LPS a míchat 15±2 minut.
5.9.3.3. Odejmout čtyři 1 ml vzorky a uložit při -75 °C pro pozdější stanovení koncentrace proteinů Lowry-ho metodou a stanovení LPS pomocí KDO assay-e.
5.9.4. Odstranění detergentu pomocí ultrafiltrace/diafiltrace
5.9.4.1. Podrobnosti ultrafíltračního systému: A/G Technology lne., patrona s dutými vlákny, velikost pórů 10.000 NMWC, velikost pouzdra 6, ultrafiltrační patrona. Poznámka: nové patrony je nezbytné upravovat vymytím glycerolu. To se dá provést promýváním
-8CZ 298460 B6 litrů WFI skrze patrony o 6 sq/ft (=55,7 cm2) nebo méně bez tlaku na konci. Roztok permeátu nesmí být recyklován do reservoáru pro plnění.
Poznámka: Všechny ultrafiltrační kroky budou následovány čistěním, desinfekcí a skladovacími stupni. Nové patrony musí být před použitím čištěny a desinfikovány.
5.9.4.2. Sestavení a desinfekce A/G ultrafíltračního systému. Vyčistit a desinfikovat systém recirkulací nejméně 60 minut 2 až 3 litry 0,5 N hydroxidu sodného při počáteční teplotě 50 ± 5 °C. Promýt systém 4 až 5 litry WFI s následovanou recirkulací 2-3 litrů „TNS“ (pufr 0,05 M Tris/fyziologický roztok pH 8,0 ± 0,2) nejméně 20 ± 5 minut.
5.9.4.3. Změřit zvýšený objem v UF systému (včetně trubic vedení) přenesením z vstupních a výstupních trubic naplněných mimo reservoár kapalinou do 1 1 odměmého válce a potom vyčerpat dokud není UF systém prázdný.
5.9.4.4. Umístit 21 nádobu s postranním vývodem do hrnce a obklopit ledem s vodou po dobu trvání diafiltrační procedury.
5.9.4.5. Přenést 1,7 až 1,91 zásobní směsi proteosom/LPS ze stupně 5.9.3.3. do 21 nádoby s postranním vývodem. Nasadit zátku s dvěma otvory opatřenou dvěma 1 Oml pipetami a spojit vstupní a výstupní trubice diafiltračního systému s pipetami na nádobě.
5.9.4.6. Zapnout recirkulační čerpadlo a nastavit seřízení čerpadla na 4 až 6. Nastavit závěrku koncového tlaku tak, aby vstupní tlak byl 15 ± 4 psi (=103,4 ± 27,6 kPa). Koncentrovat na celkový objem 1,0 ± 1 1 včetně zvýšeného objemu.
5.9.4.7. Přenést 1 ± 0,1 1 směsi ze stupně 5.9.3.3. do 21 nádoby s postranním vývodem a opakovat stupeň 5.9.4.6.
5.9.4.8. Pokračovat v přenášení jako ve stupni 5.9.4.7. a koncentrování jako ve stupni
5.9.4.9. dokud všechna směs proteosom-LPS ze stupně 5.9.3.3. nebyla převedena do 21 nádoby s postranním vývodem a objem retentátu není 1,4 ± 0,2 1 i se zvýšeným objemem.
5.9.4.10. Nastavit ultrafiltrační přístroj na kontinuální plnění TNS (0,05 M Tris, fyziologický roztok) do dvoulitrové nádoby s postranním vývodem až se kapalina membránou odtáhne. Seřídit rezervoár s použitím 10 litrové láhve obsahující TNS a opatřené trubicí dosahující na dno láhve. Spojit vstupní a výstupní vedení ultrafíltračního systému. Spustit recirkulační čerpadlo a nastavit seřízení čerpadla na 4 až 6. Nastavit závěrku koncového tlaku tak, aby vstupní tlak byl 15 ± 4 psi (=103,4 ± 27,6 kPa).
5.9.4.11. Změřit rychlost toku permeátu na UF jednotce a zaznamenat vstupní tlak při zahájení měření.
5.9.4.12. Shromažďovat 15 až 20 ml vzorek permeátu po zpracování každých 12 ± 0,5 litrů, použít vlastnoručně zhotovených štítků („Permeát č. Pl, P2, P3 atd“) a zaznamenat čas, zpracovaný objem a maximální O.D.60o vzorku. Ověřit maximální odstranění Empigenu testováním vzorků na přítomnost Empigenu BB pomocí Empigen Precipitin Testu. Tento test spočívá na vytvoření sérií naředění permeátu a odděleně pak roztoku obsahujícího známé množství Empigenu BB, přidání HCI na okyselení roztoků a poté přidání série naředění SDS (dodecylsulfát sodný), aby se vytvořil šachovnicovitý test. Když jsou přítomna stejná množství Empigenu a SDS bude se tvořit maximum precipitátu. Tímto způsobem lze kvantifikovat množství Empigenu tak, že se zaznamenají naředění permeátu a SDS při nichž se precipitát tvoří a tato naředění se srovnají s naředěním standardů. Jak pokračuje diafíltrace, množství Empigenu se zmenšuje a zkumavka obsahující méně SDS bude zkumavkou s maximem precipitátu. Přítomnost precipitátu se kvantifikuje spektrofotometrickým měřením OD při 600 nm.
Pro množství komponent použitých v tomto příkladu pokračovat v diafiltraci pokud nebylo zpracováno nejméně 120 litrů permeátu a schází zřetelný výskyt precipitátu při Empigen Precipitin Testu (maximum OD 600 nm je menší než 0,05).
5.9.4.13. Produkt koncentrovat na konečný objem 500 ±50 ml retentátu včetně zvýšeného objemu (stupeň 9.4.3.). Odebrat 0,5 ml vzorku, vzorek zředit 1:10a měřit O.D.28o·
5.9.4.14. Požadované minimum O.D. pro koncentrovaný retentát je 5,7. Jestliže je O.D. menší než 5,7, pokračovat v koncentrování na 400 ± 50 ml včetně zvýšeného objemu (stupeň
5.9.4.3.) a opakovat O.D.28o.
5.9.4.15. Při uzavřeném vedení retentátu vně roztoku retentátu a výstupního vedení filtrátu, pomalu čerpat v opačném směru dokud patrona a vedení nejsou prázdné. Převést plnicí
-9CZ 298460 B6 vedení a vedení retentátu z láhve pro retentát do nové čisté nádoby s 350 ± 50 ml TNS.
Obrátit čerpání a zvolna recyklovat TNS 2 až 3 minuty.
5.9.4.16. Po recirkulaci TNS, zastavit čerpadlo, vyprázdnit systém, shromáždit promývací roztok retentátu do čistého, sterilního 11 odměmého válce a změřit objem a O.D.280.
5.9.4.17. Spojit původní roztok retentátu (stupeň 5.9.4.12. nebo 5.9.4.13.) s promývacím roztokem retentátu (stupeň 5.9.4.15.) a změřit konečný objem retentátu. Uskladnit zásobní retentát při 4 °C ± 2 °C až do aseptické filtrace.
5.9.4.18. Vyčistit filtrační jednotku pomocí WFI a potom 0,5 N hydroxidem sodným při počátečních 50 ± 5 °C nejméně po 60 minut. Vypláchnout čisticí činidlo pomocí WFI a potom promýt 3 až 4 litry 0,1 N NaOH jako konzervačním činidlem.
5.9.5. Sterilní filtrace
Pokud se to požaduje, mohou být komplexy sterilně filtrovány. Vzít zásobní komplexované proteosomy a LPS a prohlédnout zda není přítomen precipitát nebo zákal. Pokud je zásobní komplexovaný produkt čirý, asepticky filtrovat s použitím jednotky Milipak 40, 0,22 μ do sterilní, vyžíhané nádoby. Tento stupeň se má provádět ve sterilní skříni.
5.9.6. Specifický účel: spojit zásobu GMP preparátů proteosomů meningokokálních proteinů vnější membrány a lipopolysacharidu P. shigelloides (pro S. sonnei) do nekovalentních komplexů odstraněním detergentu.
5.9.7. Aplikace: tato GMP procedura vyúsťuje ve velkoobjemovou produkci preparace tvorby nekovalentních komplexů proteosomů s lipopolysacharidem P. shigelloides 2a pro užití jako vakcíny proti infekci S. sonnei.
5.10. Studie imunogenicity:
5.10.1. Imunogenicita vakcíny proteosom - P. shigelloides LPS za použití ultrafiltrace a diafiltrace na dutých vláknech
Obrázky 1 a 2 znázorňují, že tři různé preparáty vakciny proteosom - shigella LPS, získané za použití diafiltrační techniky s dutými vlákny (HL) (HF-1, HF-2 a GMP/HF3) pro odstranění detergentu a usnadnění komplexace, jsou efektivnější při nejnižší, nejpřesnější testované dávce než přípravky získané za použití jednoduché dialyzační trubice (DT). Jinak řečeno, silnější imunitní odezvy IgG (obrázek 1) a IgA (obrázek 2) byly vyvolány vakcinami produkovanými podle předloženého vynálezu než podle starší, méně účinné technologie. Protože silnější imunitní odezvy poskytují lepší úrovně ochrany, ukazují tato data jasně, že předkládaný vynález poskytuje vakciny, které se nejen efektivněji získávají, nýbrž i silněji působí. Silnější odezvy jsou dále vyvolávány vakcinou, když je podávána v nejnižší dávce (0,1 pg na dávku), čímž se ukazuje, že podle předloženého vynálezu by bylo zapotřebí méně vakciny, než by bylo nutné při užití starší technologie. Poněvadž formulace multivalentních vakcin vyžaduje mnoho různých antigenů, je pro minimalizaci celkového množství podávané vakciny vysoce výhodné, že lze použít jako složek vakciny komponenty, které jsou účinné při nízkých dávkách. Technologie podle vynálezu tak přímo ovlivňuje a usnadňuje způsobilost formulovat multivalentní vakciny, které mají širokou paletu specifit. Protože pro komerční vývoj vakcin je výhodné, aby vakciny bylo možné lyofilizovat, zjistili jsme se zadostiučiněním, že lyofilizace HF komplexů vakciny z vodného roztoku poskytuje překvapivě vakcinu, která konzistentně vyvolává odezvy, které byly mezi nejvyššími ze všech testovaných dávek. Vyšší imunogenicita byla tedy zjištěna pro anti-LPS IgG (obrázek 1) a IgA (obrázek 2), když bylo podáváno 0,1 pg vakciny připravené HF technikou (s anebo bez lyofilizace). Tato data jsou významná, protože zvětšené měřítko a GMP procedura podle předkládaného vynálezu použila HF technologii jak je ukázáno na obrázcích 1 a 2 příčně šrafovanými sloupci představujícími GMP/HF-3.
5.10.2. Studie imunogenicity při použití multivalentní vakciny
Jak je ukázáno na obrázku 3, podávání vakcin proteosom - P. shigelloides LPS (pro shigellosis
S. sonnei) a proteosom - S. flexneri 2a tentýž den nebo týdny poskytuje dobrou imunogenicitu vůči oběma LPS komponentám: S. sonnei LPS a S. flexneri 2a LPS.
-10CZ 298460 B6
5.11. Elektronová mikrofotografíe vakciny proteosom-Shigella
Sdružení shigella LPS s proteosomy je jasně a dramaticky zobrazeno mikrosnímkem z elektronového mikroskopu na obrázku 4. Na tomto obrázku jsou váčky proteosomů prostoupeny pro záření neprostupnými černými tečkami. Tyto tečky jsou růžencovitě připojeny k sekundárním protilátkám, což prokazuje specifické anti-shigella LPS protilátky. Přítomnost zlatých teček tedy indikuje přítomnost shigella LPS. Jak lze vidět, vzhledem ktomu, že zlaté tečky obklopují a vytečkovávají váčky proteosomů, je tímto prokázán a vysualizován obraz vakcin proteosomů s LPS nekovalentně vázaných na proteosomy. Konzistentní vesikulámí povaha vakcin připravených pomocí HF technologie podle předkládaného vynálezu nebyla překvapivě zjištěna, když DT preparáty získané podle starší technologie byly zkoumány elektronovou mikroskopií (nepublikované výsledky).
5.12. Ochrana vakcinou proteosom - P. schigelloides proti lethální pneumonii Shigella sonnei u zvířecího modelu shigellosy
Jak lze vidět na obrázku 5, vakcina proteosom - P. shigelloides LPS důsledně přináší výraznou ochranu proti lethální infekci P. shigelloides, jak bylo zjištěno na zvířecím modelu shigellosy, při němž byla zvířata pro zavedení lethální pneumonie vystavována živým organismům. Tato data také ukazují, že vakcinou proteosom - P. shigelloides LPS jsou produkovány nejen správné a ochranné protilátky, ale že také tato intranasální podjednotková vakcina může chránit proti lethální pneumonii.
5.13. Intranasální nebo orální imunizace vakcinami proteosom - Shigella flexneri 2a LPS vyvolávají anti-shigella LPS IgG a IgA v séru a IgA v intestinálních kapalinách a plicních sekretech, které mohou trvat 30 až 60 dní po imunizaci.
Jak ukazuje obrázek 6, dvě imunizace s vakcinami proteosom - shigella flexneri 2a vyvolávají protilátky v séru a plicních a intestinálních sekretech, které mohou trvat 30 až 60 dní po imunisaci. Tyto údaje ukazují, že vakciny proteosomů mohou stimulovat běžný mukosální imunitní systém k vylučování protilátek i v oblastech daleko vzdálených od místa imunisace. Konkrétně intranasální imunisace může vyvolávat protilátky v intestinálních sekretech a více versa. Tato schopnost rozšiřuje potenciální užitečnost vakcin proteosomů při ochraňování proti patogenům, které vznikají do hostitele mukosálními vstupními branami na těle.
5.14. Obrázek 7 znázorňuje indukci anti-shigella LPS IgA IgG a IgM periferálních ASC odezev v krvi a IgA a IgG protilátkových odezev v séru, slinách a moči po intranasální nebo orální imunisaci lidských dobrovolníků jednou nebo dvěma dávkami vakcin proteosom - P. shigelloides LPS pro Shigella sonnei v různých množstvích vakciny. Jak je ukázáno, intranasální imunisace vyvolává odezvy v dávce závislé na způsobu dávky, která vyvolává odezvy u všech šesti dobrovolníků. IgA, IgG a IgM odezvy v séru byly vyvolány v každé z intranasálních skupin. Kromě toho byly vyvolány silné ACS odezvy buněk vylučujících protilátky, ukazující, že mukosální imunisace stimulovala činnost buněk vylučujících protilátky - především zvláště buněk vylučujících IgA. Nej významnější je, že IgA odezvy byly také zjištěny ve vzorcích slin a zejména ve vzorcích moči, což naznačuje, že sekretomí IgA se produkovala na mukosálních površích (protože IgA neprochází ledvinami, urinámí IgA odpovídá na lokální sekreci protilátky a předpokládá, že tak intranasální vakciny rovněž produkují lokální intestinální IgA, a že intranasální vakciny mohou být použity k ochraně proti infekcím urinámího traktu způsobovaných gramnegativními organismy). Zaznamenání hodné je, že většina těchto ASC a protilátkových odezev byla zjištěna jen po jedné imunisaci, což naznačuje, že revakcinace nemusí být nutná. IgA a IgG ACS a urinámí IgA byly zjištěny také po orální imunisaci. Nejúčinnější aplikace orálního podávání je, pokud se ukáže nutné, revakcinace po nasální náloži.
5.15. Demonstrace nekovalentní komplexace multimolekulámích proteosomových proteinů a LPS je uvedena na obrázku 8. Graf ukazuje LPS v HPLC frakcích po aplikaci nekomplexovaného P. shigelloides LPS, který se vyskytuje v jiných částech elučního profilu kolony než když se aplikuje vakcina proteosom - LPS. Společná eluce LPS a proteinů
-11 CZ 298460 B6 v HPLC frakcích po aplikování vakciny proteosom - P. shigelloides LPS se ukazuje s peaky, které odpovídají největším proteinovým agregátům proteosomů. Údaje byly změřeny pomocí inhibice ELISA, pro stanovení LPS a pomocí OD při A280, aby se kvantifikovaly proteiny proteosomů. HPLC kolona byla Tosohaas 50000Pwxl a molekulární standardy jsou označeny šipkami.
PATENTOVÉ NÁROKY
Claims (24)
1. Způsob přípravy vakciny proteosom-amfifilní determinanta, vyznačený tím, že zahrnuje
a) vytvoření směsi proteosomů, dialyzovatelného detergentu a amfifilní determinanty,
b) podrobení směsi diafiltraci nebo ultrafiltraci k odstranění detergentu a vytvoření komplexu amfifilní determinanta-proteosom,
c) monitorování množství tvorby komplexu amfifilní determinanta-proteosom a
d) získání komplexu amfifilní determinanta-proteosom, přičemž nominální hranice molekulové hmotnosti NWMC diafiltrace nebo ultrafiltrace je 3000 nebo vyšší.
2. Způsob přípravy vakciny proteosom-amfifilní determinanta podle nároku 1,vyznačený t í m , že ultrafiltrace zahrnuje tangenciální tok.
3. Způsob přípravy vakciny proteosom-amfifilní determinanta podle nároku 1,vyznačený tím, že ultrafiltrace se provádí v systému voleném mezi patronou z dutých vláken, plošnou membránou a membránovou patronou.
4. Způsob přípravy vakciny proteosom-amfifilní determinanta podle nároku 3, vyznačený t í m , že ultrafiltračním systémem je patrona z dutých vláken s velikostí pórů nominální mezní molekulové hmotnosti 10 000.
5. Způsob přípravy vakciny proteosom-amfifilní determinanta podle nároku 3,vyznačený t í m , že ultrafiltračním systémem je patrona z dutých vláken s velikostí pórů nominální mezní molekulové hmotnosti 3000.
6. Způsob přípravy vakciny proteosom-amfifilní determinanta podle nároku 1,vyznačený t í m , že dále zahrnuje monitorování dialyzovatelného detergentu kontinuálním měřením vzorků permeátu.
7. Způsob přípravy vakciny proteosom-amfifilní determinanta podle nároku 1,vyznačený t í m , že monitorování zahrnuje měření optické hustoty vzorku permeátu nebo retentátu.
8. Způsob přípravy vakciny proteosom-amfifilní determinanta podle nároku 1, vyznačený tím, že monitorování zahrnuje měření množství odstraněného detergentu smísením vzorku permeátu se známým množstvím SDS (dodecylsulfát sodný) za vzniku precipitátu, pokud je detergent přítomen, a stanovení množství precipitace.
9. Způsob přípravy vakciny proteosom-amfifilní determinanta podle nároku 8, vyznačený tím, že amfifilní komplex proteosomů se získá poté, co byl v permeátu detergent v podstatě odstraněn.
10. Způsob přípravy vakciny proteosom-amfifilní determinanta podle nároku 1,vyznačený t í m , že detergentem je Empigen BB.
- 12CZ 298460 B6
11. Způsob přípravy vakcíny proteosom-amfífilní determinanta podle nároku 1,vyznačený t í m , že amfifilní determinantou je lipopolysacharid.
12. Způsob přípravy vakciny proteosom-lipopolysacharid podle nároku 11, vyznačený t í m , že se lipopolysacharid získává z gramnegativních bakterií.
13. Způsob přípravy vakciny proteosom-lipopolysacharid podle nároku 12, vyznačený t í m , že gramnegativní bakterií je plesiomonas.
14. Způsob přípravy vakciny proteosom-lipopolysacharid podle nároku 13, vyznačený t í m , že plesiomonas je Plesiomonas shigelloides.
15. Způsob přípravy vakciny proteosom-lipopolysacharid podle nároku 12, vyznačený t í m , že gramnegativní bakterií je shigella.
16. Způsob přípravy vakciny proteosom-lipopolysacharid podle nároku 15, vyznačený t í m , že shigella je Shigella flexneri, Shigella sonnei nebo Shigella boydii.
17. Způsob přípravy vakciny proteosom-lipopolysacharid podle nároku 12, vyznačený t í m , že gramnegativní bakterií je neisseria.
18. Způsob přípravy vakciny proteosom-lipopolysacharid podle nároku 17, vyznačený t í m , že neisseria je Neisseria meningitidis.
19. Způsob přípravy vakciny proteosom-amfífilní determinanta podle nároku 1,vyznačený t í m , že proteosom je odvozen z N. meningitidis nebo N. gonorrhea.
20. Způsob přípravy vakciny proteosom-amfífilní determinanta podle nároku 1,vyznačený t í m , že získání amfífilního komplexu proteosomu se uskutečňuje při klesající nebo konstantní monitorované rychlosti odstraňování detergentu.
21. Způsob přípravy vakciny proteosom-amfífilní determinanta podle nároku 1,vyznačený t í m , že dále zahrnuje
e) míšení získaného komplexu proteosom-amfífilní determinanta s fyziologicky akceptovatelným nosičem pro vytvoření vakciny.
22. Způsob přípravy vakciny proteosom-amfífilní determinanta podle nároku 21, vyznačený tím, že dále zahrnuje koncentrování amfífilního komplexu proteosomu před získáním komplexu.
23. Způsob přípravy vakciny proteosom-amfífilní determinanta podle nároku 22, vyznačený tím, že v koncentrování se pokračuje na žádanou konečnou koncentraci.
24. Způsob přípravy vakciny proteosom-amfífilní determinanta podle nároku 21, vyznačený t í m , že se proces provádí s různými typy amfifílních determinant za vzniku série komplexů proteosom-amfífilní determinanta, které jsou ve stupni e) spojeny za vytvoření multivalentní vakciny.
9 výkresů (10 str.)
-13 CZ 298460 B6
OBRÁZEK 1.
Imunogenicita několika preparací vakcíny proteosom Plesimonas shigelloides LPS: IgG titry anti-shígella sonnei LPS v myší» seru po dvou intranasálních inunisacích vakcinou obsahující 10, 1,0 nebo 0,1 gg proteinu
Přípravy vakcíny
DT-1 & DT-2 - Dialyzační trubice HF-1 & HP-2 - Patrona dutých vláken
HF-2L - Patrona dutých vláken a lyofilisace GMP - Běžné zpracovatelské procedury
- 14CZ 298460 B6
Plesimonas shigelloides LPS: IgA titry antl-Shigella sonnei LPS v myším seru po dvou intranasálních imunisacích vakcinou obsahující 10, 1,0 nebo 0,1 |tg proteinu
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US385995P | 1995-09-18 | 1995-09-18 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CZ81998A3 CZ81998A3 (cs) | 1998-10-14 |
| CZ298460B6 true CZ298460B6 (cs) | 2007-10-10 |
Family
ID=21707938
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CZ0081998A CZ298460B6 (cs) | 1995-09-18 | 1996-09-18 | Zlepšené zpusoby výroby nekovalentne komplexovaných a multivalentních proteosomových podjednotkových vakcin |
Country Status (20)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US6476201B1 (cs) |
| EP (1) | EP0854729B2 (cs) |
| JP (2) | JP4033489B2 (cs) |
| KR (1) | KR19990045763A (cs) |
| CN (1) | CN1211192A (cs) |
| AT (1) | ATE261313T1 (cs) |
| BR (1) | BR9610484A (cs) |
| CA (1) | CA2232410C (cs) |
| CZ (1) | CZ298460B6 (cs) |
| DE (1) | DE69631835T3 (cs) |
| DK (1) | DK0854729T3 (cs) |
| EA (1) | EA199800208A1 (cs) |
| ES (1) | ES2217325T5 (cs) |
| HU (1) | HUP9901577A3 (cs) |
| IL (1) | IL123720A (cs) |
| MX (1) | MX9802128A (cs) |
| NO (1) | NO320074B1 (cs) |
| PL (1) | PL325604A1 (cs) |
| PT (1) | PT854729E (cs) |
| WO (1) | WO1997010844A1 (cs) |
Families Citing this family (25)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5961970A (en) * | 1993-10-29 | 1999-10-05 | Pharmos Corporation | Submicron emulsions as vaccine adjuvants |
| WO1999061053A1 (en) * | 1998-05-29 | 1999-12-02 | Chiron Corporation | Combination meningitidis b/c vaccines |
| WO2000066741A2 (en) | 1999-04-30 | 2000-11-09 | Chiron S.P.A. | Conserved neisserial antigens |
| NZ515935A (en) | 1999-05-19 | 2004-01-30 | Chiron S | Combination Neisserial compositions and vaccines for the prevention of infections due to Neisseria bacteria such as meningococcal meningitis |
| EP1721618A3 (en) * | 2000-02-15 | 2007-01-10 | ID Biomedical Corporation of Quebec | Proteosome influenza vaccine composition |
| CA2400468C (en) | 2000-02-15 | 2012-12-18 | Intellivax International Inc. | Proteosome influenza vaccine |
| NZ521531A (en) | 2000-02-28 | 2005-12-23 | Chiron S | Heterologous expression of neisserial proteins |
| US7524509B2 (en) | 2001-03-09 | 2009-04-28 | Id Biomedical Corporation Of Quebec | Proteosome-liposaccharide vaccine adjuvant |
| US20060057160A1 (en) * | 2002-08-02 | 2006-03-16 | Ralph Biemans | Vaccine composition |
| HUE031886T2 (en) | 2002-10-11 | 2017-08-28 | Glaxosmithkline Biologicals Sa | Polypeptide vaccines for extensive protection against hypervirulent meningococcal lines |
| US7255867B2 (en) * | 2002-11-15 | 2007-08-14 | Id Biomedical Corporation Of Quebec | Vaccine |
| GB0316560D0 (en) * | 2003-07-15 | 2003-08-20 | Chiron Srl | Vesicle filtration |
| US7368537B2 (en) * | 2003-07-15 | 2008-05-06 | Id Biomedical Corporation Of Quebec | Subunit vaccine against respiratory syncytial virus infection |
| US20050152919A1 (en) * | 2003-09-15 | 2005-07-14 | Id Biomedical Corporation Of Quebec | Measles subunit vaccine |
| WO2005042017A1 (en) | 2003-10-22 | 2005-05-12 | Id Biomedical Corporation Of Quebec | Compositions and methods for activating innate and allergic immunity |
| CN101039691B (zh) | 2004-06-25 | 2013-07-31 | 魁北克益得生物医学公司 | 用于治疗神经疾病的组合物和方法 |
| EP1778283A2 (en) * | 2004-06-30 | 2007-05-02 | ID Biomedical Corporation of Quebec | Vaccine compositions for treating coronavirus infection |
| US7552948B2 (en) | 2006-03-29 | 2009-06-30 | Tokai Rubber Industries, Ltd. | Quick connector |
| CN110064053A (zh) * | 2006-08-07 | 2019-07-30 | 哈佛大学校长及研究员协会 | 蛋白质基质疫苗及这种疫苗的制备和给药方法 |
| BRPI0715396B8 (pt) * | 2006-08-07 | 2021-05-25 | Harvard College | método de produção de uma composição para vacina |
| EP2069054A1 (en) * | 2006-08-30 | 2009-06-17 | GE Healthcare Bio-Sciences Corp. | System and method for characterizing membranes and membrane filtration devices |
| UA99659C2 (uk) * | 2008-05-30 | 2012-09-10 | Дзе Ю.Ес.Ей., Ес Репрезентед Бай Дзе Секретарі Оф Дзе Армі, Он Бехаф Оф Уолтер Рід Армі | Мультивалентна вакцина з нативних везикул зовнішньої мембрани менінгококів, способи її застосування |
| CN102686238A (zh) * | 2009-09-09 | 2012-09-19 | 马特里瓦克斯研究和开发公司 | 具有改善的免疫原性的蛋白质基质疫苗 |
| AU2015321698B2 (en) * | 2014-09-24 | 2018-06-28 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Navy | Combined enterotoxigenic Escherichia coli and Campylobacter jejuni recombinant construct |
| CA3208643A1 (en) | 2021-01-18 | 2022-07-21 | Conserv Bioscience Limited | Coronavirus immunogenic compositions, methods and uses thereof |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU1522494C (ru) * | 1987-06-16 | 1994-11-15 | Научно-производственное объединение "Иммунопрепарат" | Способ получения инактивированной вакцины гриппа |
Family Cites Families (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4707543A (en) * | 1985-09-17 | 1987-11-17 | The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Army | Process for the preparation of detoxified polysaccharide-outer membrane protein complexes, and their use as antibacterial vaccines |
| RU2023448C1 (ru) * | 1987-07-30 | 1994-11-30 | Сентро Насьональ Де Биопрепарадос | Способ получения вакцины против различных патогенных серотипов менингита нейссера группы в |
| US5145702A (en) * | 1988-09-19 | 1992-09-08 | Opta Food Ingredients, Inc. | Hydrophobic protein microparticles and preparation thereof |
| EP0449958B9 (en) * | 1988-12-19 | 2003-05-28 | American Cyanamid Company | Meningococcal class 1 outer-membrane protein vaccine |
| US5102989A (en) * | 1991-03-15 | 1992-04-07 | Merck & Co., Inc. | Method of stabilizing recombinant hepatitis B virus surface proteins from recombinant host cells |
| CA2139517A1 (en) * | 1992-07-20 | 1994-02-03 | Paul M. Keller | Immunological conjugates of ompc and hiv-specific selected principal neutralization epitopes |
| US5576016A (en) * | 1993-05-18 | 1996-11-19 | Pharmos Corporation | Solid fat nanoemulsions as drug delivery vehicles |
| WO1995011700A1 (en) * | 1993-10-29 | 1995-05-04 | Pharmos Corp. | Submicron emulsions as vaccine adjuvants |
| CA2400468C (en) * | 2000-02-15 | 2012-12-18 | Intellivax International Inc. | Proteosome influenza vaccine |
-
1996
- 1996-09-18 CN CN96197616A patent/CN1211192A/zh active Pending
- 1996-09-18 KR KR1019980702007A patent/KR19990045763A/ko not_active Withdrawn
- 1996-09-18 PL PL96325604A patent/PL325604A1/xx unknown
- 1996-09-18 US US09/043,529 patent/US6476201B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1996-09-18 EP EP96932269A patent/EP0854729B2/en not_active Expired - Lifetime
- 1996-09-18 PT PT96932269T patent/PT854729E/pt unknown
- 1996-09-18 JP JP51287597A patent/JP4033489B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1996-09-18 ES ES96932269T patent/ES2217325T5/es not_active Expired - Lifetime
- 1996-09-18 DE DE69631835T patent/DE69631835T3/de not_active Expired - Lifetime
- 1996-09-18 EA EA199800208A patent/EA199800208A1/ru unknown
- 1996-09-18 CZ CZ0081998A patent/CZ298460B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1996-09-18 AT AT96932269T patent/ATE261313T1/de not_active IP Right Cessation
- 1996-09-18 BR BR9610484-8A patent/BR9610484A/pt not_active Application Discontinuation
- 1996-09-18 IL IL12372096A patent/IL123720A/en not_active IP Right Cessation
- 1996-09-18 DK DK96932269T patent/DK0854729T3/da active
- 1996-09-18 HU HU9901577A patent/HUP9901577A3/hu unknown
- 1996-09-18 WO PCT/US1996/015002 patent/WO1997010844A1/en not_active Ceased
- 1996-09-18 CA CA002232410A patent/CA2232410C/en not_active Expired - Lifetime
-
1998
- 1998-03-17 NO NO19981189A patent/NO320074B1/no not_active IP Right Cessation
- 1998-03-18 MX MX9802128A patent/MX9802128A/es unknown
-
2003
- 2003-10-24 JP JP2003365270A patent/JP2004099619A/ja active Pending
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU1522494C (ru) * | 1987-06-16 | 1994-11-15 | Научно-производственное объединение "Иммунопрепарат" | Способ получения инактивированной вакцины гриппа |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| NO981189L (no) | 1998-05-14 |
| WO1997010844A1 (en) | 1997-03-27 |
| DE69631835T2 (de) | 2005-02-10 |
| BR9610484A (pt) | 2001-09-11 |
| HUP9901577A3 (en) | 2000-03-28 |
| ES2217325T5 (es) | 2009-04-01 |
| DE69631835T3 (de) | 2009-03-05 |
| IL123720A (en) | 2002-02-10 |
| CN1211192A (zh) | 1999-03-17 |
| MX9802128A (es) | 1998-11-29 |
| JP2000507913A (ja) | 2000-06-27 |
| US6476201B1 (en) | 2002-11-05 |
| CA2232410C (en) | 2003-06-17 |
| EP0854729A1 (en) | 1998-07-29 |
| ES2217325T3 (es) | 2004-11-01 |
| US20020164357A1 (en) | 2002-11-07 |
| EP0854729B2 (en) | 2008-10-22 |
| EP0854729A4 (en) | 2000-02-02 |
| DE69631835D1 (de) | 2004-04-15 |
| PT854729E (pt) | 2004-08-31 |
| KR19990045763A (ko) | 1999-06-25 |
| EP0854729B1 (en) | 2004-03-10 |
| DK0854729T3 (da) | 2004-07-12 |
| NO320074B1 (no) | 2005-10-17 |
| JP4033489B2 (ja) | 2008-01-16 |
| NO981189D0 (no) | 1998-03-17 |
| JP2004099619A (ja) | 2004-04-02 |
| CA2232410A1 (en) | 1997-03-27 |
| IL123720A0 (en) | 1998-10-30 |
| ATE261313T1 (de) | 2004-03-15 |
| PL325604A1 (en) | 1998-08-03 |
| EA199800208A1 (ru) | 1998-10-29 |
| CZ81998A3 (cs) | 1998-10-14 |
| HUP9901577A2 (hu) | 1999-08-30 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CZ298460B6 (cs) | Zlepšené zpusoby výroby nekovalentne komplexovaných a multivalentních proteosomových podjednotkových vakcin | |
| EP0939647B2 (en) | Neisseria meningitidis serogroup b glycoconjugates and methods of using the same | |
| EP0624376B1 (en) | Preparation and uses of LOS-depleted outer membrane proteins of gram-negative cocci | |
| US6558677B2 (en) | Vaccine against gram negative bacteria | |
| CN108430500B (zh) | 用于针对肠外致病性大肠杆菌的免疫保护的方法和组合物 | |
| Frasch et al. | Protection against group B Neisseria meningitidis disease: preparation of soluble protein and protein-polysaccharide immunogens | |
| Frasch et al. | Outer membrane protein vesicle vaccines for meningococcal disease | |
| CA2212896C (en) | Oral vaccine against gram negative bacterial infection | |
| US20040131642A1 (en) | Outer membrane vesicle vaccine against disease caused by neisseria meningitidis serogroup a and process for the production thereof | |
| US20080020002A1 (en) | METHOD OF PRODUCING MENINGOCOCCAL MENINGITIS VACCINE FOR NEISSERIA MENINGITIDIS SERO TYPES A,C,Y, and W-135 | |
| US20050163808A1 (en) | Group A streptococcal polysaccharide immunogenic compositions and methods | |
| CN1709505B (zh) | 多价细菌荚膜多糖-蛋白质结合物联合疫苗 | |
| WO2023007456A1 (en) | A method for producing complexes of proteins with bacterial lipopolysaccharides, the use thereof, a vaccine comprising an lps/protein immunogenic complex and a method for producing the vaccine | |
| AU751063B2 (en) | Improved methods for the production of non-covalently complexed and multivalent proteosome sub-unit vaccines | |
| EP0471954A2 (en) | Immunogenic conjugates of nontoxic oligosaccharide derived from bordetella pertussis lipooligosaccharide | |
| Teerlink et al. | Synergistic effect of detergents and aluminium phosphate on the humoral immune response to bacterial and viral membrane proteins | |
| CN101829337B (zh) | 针对脑膜炎奈瑟氏球菌的免疫组合物 | |
| CA2047043A1 (en) | Class ii protein of the outer membrane of neisseria meningitidis having immune enhancement properties | |
| CN110652585A (zh) | 多糖-蛋白缀合物免疫制剂及其制备与应用 | |
| HK1021145B (en) | Neisseria meningitidis serogroup b glycoconjugates and methods of using the same | |
| CA2047030A1 (en) | Class ii protein of the outer membrane of neisseria meningitidis having immunologic carrier and enhancement properties |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PD00 | Pending as of 2000-06-30 in czech republic | ||
| MK4A | Patent expired |
Effective date: 20160918 |