CZ321696A3 - Subtilisin bpn variants with reduced adsorption and increased ability to hydrolysis - Google Patents

Subtilisin bpn variants with reduced adsorption and increased ability to hydrolysis Download PDF

Info

Publication number
CZ321696A3
CZ321696A3 CZ963216A CZ321696A CZ321696A3 CZ 321696 A3 CZ321696 A3 CZ 321696A3 CZ 963216 A CZ963216 A CZ 963216A CZ 321696 A CZ321696 A CZ 321696A CZ 321696 A3 CZ321696 A3 CZ 321696A3
Authority
CZ
Czechia
Prior art keywords
asp
amino acid
glu
substitution occurs
asn
Prior art date
Application number
CZ963216A
Other languages
English (en)
Inventor
Philip Frederick Brode Iii
Bobby Lee Barnett
Donn Nelton Rubingh
Chanchal Kumar Ghosh
Original Assignee
Procter & Gamble
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Procter & Gamble filed Critical Procter & Gamble
Publication of CZ321696A3 publication Critical patent/CZ321696A3/cs

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C11—ANIMAL OR VEGETABLE OILS, FATS, FATTY SUBSTANCES OR WAXES; FATTY ACIDS THEREFROM; DETERGENTS; CANDLES
    • C11D—DETERGENT COMPOSITIONS; USE OF SINGLE SUBSTANCES AS DETERGENTS; SOAP OR SOAP-MAKING; RESIN SOAPS; RECOVERY OF GLYCEROL
    • C11D3/00—Other compounding ingredients of detergent compositions covered in group C11D1/00
    • C11D3/16—Organic compounds
    • C11D3/38—Products with no well-defined composition, e.g. natural products
    • C11D3/386—Preparations containing enzymes, e.g. protease or amylase
    • C11D3/38609—Protease or amylase in solid compositions only
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
    • A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
    • A61K8/30—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing organic compounds
    • A61K8/64—Proteins; Peptides; Derivatives or degradation products thereof
    • A61K8/66—Enzymes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
    • A61Q11/00—Preparations for care of the teeth, of the oral cavity or of dentures; Dentifrices, e.g. toothpastes; Mouth rinses
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C11—ANIMAL OR VEGETABLE OILS, FATS, FATTY SUBSTANCES OR WAXES; FATTY ACIDS THEREFROM; DETERGENTS; CANDLES
    • C11D—DETERGENT COMPOSITIONS; USE OF SINGLE SUBSTANCES AS DETERGENTS; SOAP OR SOAP-MAKING; RESIN SOAPS; RECOVERY OF GLYCEROL
    • C11D3/00—Other compounding ingredients of detergent compositions covered in group C11D1/00
    • C11D3/16—Organic compounds
    • C11D3/38—Products with no well-defined composition, e.g. natural products
    • C11D3/386—Preparations containing enzymes, e.g. protease or amylase
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/14—Hydrolases (3)
    • C12N9/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
    • C12N9/50—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25)
    • C12N9/52—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from bacteria or Archaea
    • C12N9/54—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from bacteria or Archaea bacteria being Bacillus

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Birds (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Oral & Maxillofacial Surgery (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Enzymes And Modification Thereof (AREA)
  • Detergent Compositions (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Description

Oblast techniky
c O
-σ Γ” 73
>
F' C/7 c·
• —1 -< Ti
2 07 >
O O σ
—1 <
< T*
—T O
po r*·
LO' o<
Předkládaný vynález se týká nových enzymových variant použitelných v různých druzích čisticích prostředků a dále se týká genů, které takové enzymové varianty kódují.
Dosavadní stav techniky
Enzymy tvoří největší třídu přirozeně se vyskytujících proteinů. Každý druh enzymu obyčejně katalyzuje (urychluje reakci, aniž by byl spotřebován) odlišný druh chemické reakce. Jedna třída enzymů nazývaných proteázy je známa svou schopností hydrolyzovat jiné proteiny (rozložit sloučeninu do dvou nebo více jednodušších sloučenin s tím, že přijme části H a OH z molekuly vody na každé straně štěpené chemické vazby). Tato schopnost hydrolyzovat proteiny byla využita tak, že přirozeně se vyskytující a proteiny ovlivňujíc proteázy byly zahrnuty jako přísada do detergentních prostředků na praní prádla. Mnohé nečistoty na šatech jsou proteinové povahy a proteázy se širokou specifičností mohou podstatně zlepšit odstranění těchto nečistot.
Bohužel často úroveň účinnosti těchto enzymů v jejich přirozeném bakteriálním prostředí neodpovídá účinnosti v relativně nepřirozeném prostředí při praní. Přesněji,
Τ’ vlastnosti proteáz jako jsou tepelná stabilita, pH stabilita, oxidační stabilita a substrátová specifičnost nejsou nevyhnutelně co nejlépe rozvinuty při použití mino přirozené prostředí enzymu.
Vlastnosti proteázy určuje její aminokyselinová sekvence. Změna aminokysel inové sekvence proteázy může do různého stupně pozměnit vlastnosti enzymu nebo může dokonce inaktivovat enzym, což závisí na poloze, povaze a/nebo velikosti změny v aminokyselinové sekvenci- Při pokusu zlepšit vlastnosti proteáz s cílem zvýšit jejich účinnost v pracím prostředí byly použity různé přístupy ke změně aminokyselinové sekvence proteáz divokého typu. Tyto přístupy zahrnují takovou změnu aminokyselinové sekvence, aby se zvýšila tepelná stabilita a zlepšila oxidační stabilita za zcela odlišných podmínek.
Navzdory rozmanitosti přístupů v oboru popsaných trvá potřeba nových účinných variant proteáz použitelných k čištění různých druhů povrchů.
Předmětem předkládaného vynálezu je poskytnout varianty enzymu subtilisinu, které ve srovnání s divokým typem enzymu zvýšeně hydrolyzují.
Předmětem předkládaného vynálezu je poskytnout také čisticí prostředky, které obsahují tyto varianty enzymu subti1isinu.
Podstata vynálezu
Předkládaný vynález se týká variant BPN' subtilisinu které mají zaměněnou sekvenci aminokyselin proti aminokyselinové sekvenci BPN' divokého typu. Aminokyselinová sekvence divokého typu zahrnuje oblast první smyčky, oblast druhé smyčky. oblast třetí smyčky. oblast čtvrté smyčky a oblast páté smyčky. kde změněná sekvence aminokyselin obsahuje jiné aminokyseliny. než které se vyskytují v divokém typu BPN' subtilisinu (tj. substituce) ve specificky identifikovaných polohách v jedné nebo více oblastech smyček, čímž má varianta BPN' sníženou adsorpci a zvýšeně hydrolyžuje nerozpustný substrát ve srovnání s divokým typem BPN' subtilisinu. Předkládaný vynález se také týká genů, které kódují tyto varianty BPN' subtilisinu.
Předkládaný vynález se také týká prostředků pro čištění různých druhů povrchů. které obsahují tyto varianty BPN* subti1isinu.
I. Varianty subtilisinu
Tento vynález se týká enzymů subtilisinů, zejména BPN’.
které byly modifikovány změnou různých nukleotidových sekvencí kódujících enzym, a tím se měnila aminokyselinová sekvence enzymu. Modifikované enzymy subtilisiny (dále jen varianty BPN'“) předkládaného vynálezu mají sníženou adsorpci a zvýšeně hydrolyzují nerozpustný substrát ve srovnání s divokým typem BPN' subtilisinu. Předkládaný vynález se také týká mutovaných genů kódujících takové varianty BPN'.
Enzymy subtilisiny předkládaného vynálezu patří do třídy enzymů známých jako proteázy. Proteáza je katalyzátor štěpení peptidových vazeb. Jeden typ proteázy je serinová proteáza. Serinové proteáza se vyznačuje tím. že v aktivním místě je esenciální serinové reziduum.
Pozorování, že se rychlost enzymové hydrolýzy rozpustného substrátu zvyšuje s koncentrací enzymu, je dobře doloženo. Proto by se zdálo možné, že pro povrchově vázané substráty, takové na jaké se naráží při mnoha způsobech čištění, se rychlost hydrolýzy bude zvyšovat se zvyšující povrchovou koncentrací- Což se prokázal být tento případ.
CBrode, P.F. III a D.S. Rauch, LANGMUIR, Subtilisin BPN'
Activity on an Immobilized Substráte, Vol. 8, pp.
1325-1329 ¢1992)). Vlastně byla pro nerozpustné substráty nalezena lineární závislost rychlosti na povrchové koncentraci při měnící se povrchové koncentraci enzymu.
CRubingh, D.N. a M.D. Bauer, Catalysis of Hydrolysis by
Proteases at the Protein-Solution Interface, v POLYMER
SOLUTIONS, BLENDS AND INTERFACES, Ed. I- Noda a D-N.
Rubingh, Elsevier, p. 464 ¢1992)). Překvapivě při snaze použít tuto základní myšlenku při hledání variant proteáz, které mají lepší čisticí výkon, jsme nezjistili, že enzymy, které se více adsorbují jsou výkonnější. Ve skutečnosti jsme překvapivě zjistili, že opak je pravdou: snížená adsorpce enzymu k substrátu vedla ke zvýšené hydrolýze substrátu Ctj.
lepší čisticí výkon).
Ačkoli si nepřejeme být svázáni teorií, věří se, že zvýšený výkon při srovnání jedné varianty s druhou, je výsledek faktu, že enzymy, které méně adsorbují jsou také méně těsně vázány, a proto jsou mnohem více pohyblivé na povrchu, ze kterého má být odstraněn nerozpustný proteinový substrát. Při srovnatelných koncentracích enzymu v roztoku je tato zvýšená mobilita dostatečná k tomu. aby převážila jakoukoli výhodu, které se dosáhne dodáním vyšší koncentrace enzymu k povrchu.
Mutace popsané v tomto textu jsou určeny k tomu. aby změnily (t j. snížily) adsorpci enzymu k povrchově vázaným nečistotám. V BPN' tvoří určité aminokyseliny vnější smyčky enzymové molekuly. V diskusi budou tyto smyčky zmiňovány jako oblasti první. druhé. třetí, čtvrté a páté smyčky.
Přesněji. polohy aminokyselin 59-66 tvoří oblast první smyčky. polohy 95-107 tvoří oblast druhé smyčky, polohy
126-133 tvoří oblast třetí smyčky. polohy 154-167 tvoří oblast čtvrté smyčky. polohy 187-191 tvoří oblast páté smyčky a polohy 199-220 tvoří oblast šesté smyčky (polohy jsou číslované analogicky k polohám v aminokyselinové sekvenci pro divoký typ BPN' subtilisinu (sekvence identifikačního čísla D).
Věří se. že tyto oblasti smyček hrají významnou roli v adsorpci molekuly enzymu k povrchově vázanému peptidu a specifické mutace v jedné nebo více těchto smyčkových oblastech mají významný efekt na tuto adsorpci. Ačkoli si nepřejeme být svázáni teorií, věří se. že smyčkové oblasti jsou pro adsorpci molekuly BPN’ důležité přinejmenším ze dvou důvodů. Za prvé, aminokyseliny, které jsou obsaženy v oblastech smyček mohou vytvářet těsnější kontakty s každým povrchem, kterému je molekula vystavena. Za druhé, blízkost oblastí smyček k aktivnímu místu a vazebnému místu (kapse) molekuly BPN* dává smyčkám roli v katalyticky produktivní adsorpci enzymu k povrchově vázaným substrátům (peptidové/proteinové nečistoty).
Termín varianta, jak se používá v tomto textu.
znamená enzym. jehož sekvence aminokyselin se liší od sekvence divokého typu.
Termín mutovaný gen BPN’, jak se používá v tomto textu, znamená gen kódující variantu BPN*.
Termín divoký typ subtilisinu BPN'. jak se používá v tomto textu, se vztahuje na enzym subtilisin znázorněný sekvencí identifikačního čísla 1. Aminokyselinová sekvence subtilisinu BPN' je dále popsána autory Wells. J.A.. E.
Ferrari. D.J. Henner. D.A. Estell a E.Y. Chen. NUCLEIC ACIDS
RESEARCH. Vol. II. 7911-7925. (1983). zahrnuto v odkazech.
Termín aminokyselinová sekvence divokého typu, jak se používá v tomto textu. zahrnuje sekvenci identifikačního čísla 1 a také sekvenci identifikačního čísla 1 mající modifikace aminokyselinové sekvence jiné než v některé z těchto poloh 59-66. 95-107. 126-133, 154-167. 187-191 a 199-220.
Termín hydrofilnější aminokyselina. jak se používá v tomto textu, se vztahuje na jakoukoli jinou aminokyselinu.
která má vyšší hydrofilnost než předmětná aminokyselina.
s odkazem na tabulku hydrofilnosti níže. Následující tabulka hydrofilnosti (Tabulka 1) uvádí aminokyseliny v sestupném poradí zvyšující se hydrofilnosti (viz Hopp. T.P. a Voods,
K.R., Prediction of Protein Antigenic Determinante frora
Amino Acid Sequences“. PROCEEDINGS OF THE NATIONAL ACADEMY
OF SCIENCE USA. Vol. 78. pp- 3824-3828. 1981. zahrnuto v odkazech).
Tabulka 1
Aminokyselina Hodnota hydrofi 1nosti
Trp -3.4
Phe -2,5
Tyr -2,3
Leu. Ile -1.8
Val -1.5
Met -1,3
Cys -1.0
Ala. His -0,5
Thr -0,4
Pro, Gly -0,0
Gin, Asn 0,2
Ser 0,3
Arg+, Lys*·, Glu~, Asp~ 3,0
Tabulka 1 také ukazuje, které aminokyseliny nesou náboj (tato vlastnost se vztahuje k pH od 8 až 9). Pozitivně nabité aminokyseliny jsou Arg a Lys, negativně nabité aminokyseliny jsou Glu a Asp a zbývající aminokyseliny jsou neutrální. V preferovaném ztělesnění předkládaného vynálezu je substituující aminokyselina buď neutrální nebo negativně nabita, výhodněji negativně nabita (tj. Glu nebo Asp).
Proto, například, prohlášení substituovat Gin stejně nebo více hydrofilní aminokyselinou, která je neutrální nebo má negativní náboj znamená, že Gin by byl nahrazen Asn (který je stejně hydrofilní jako Gin) nebo Ser, Glu nebo Asp (které jsou hydrofilnější než Gin). každá z nich je neutrální nebo má negativní náboj a má větší hodnotu hydrofi 1nosti ve srovnání s Gin. Podobně prohlášení substituovat Pro hydrofilnější aminokyselinou. která je neutrální nebo má negativní náboj znamená, že Pro by byl nahražen Gin, Asn. Ser, Glu nebo Asp.
V jednom ztělesnění předkládaného vynálezu má varianta
BPN' modifikovanou aminokyselinovou sekvenci proti sekvenci aminokyselin divokého typu, přičemž modifikovaná aminokyselinová sekvence obsahuje substituci v jedné nebo více polohách v jedné nebo více oblastech smyček, první, druhé, třetí, čtvrté nebo páté, čímž má varianta BPN* sníženou adsorpci a zvýšeně hydrolyzuje nerozpustný substrát ve srovnání s divokým typem subtilisinu BPN*.
V dalším ztělesnění předkládaného vynálezu varianta
BPN' obsahuje dále jednu nebo více substitucí v oblasti šesté smyčky.
V preferovaném ztělesnění předkládaného vynálezu aminokyselina substituující jednu nebo více poloh v jedné nebo více oblastech smyček je, s odkazem na Tabulku 1, neutrální nebo negativně nabitá a stejně nebo více hydrofilní, výhodně hydrofilnější, než aminokyselina v příslušné poloze v aminokyselinové sekvenci divokého typu.
A. Substituce v oblasti první smyčky
Když substituce nastane v oblasti první smyčky, substituce nastane v jedné nebo více z poloh 59, 60, 61,
62, 63. 65 nebo 66.
Když substituce nastane v poloze 59. substituující aminokyselina je Asn, Asp, Glu nebo Ser.
Když substituce nastane v poloze 60, substituující aminokyselina je GluKdyž substituce nastane v poloze 61, substituující aminokyselina je Asp, Gin, Glu nebo Ser.
Když substituce nastane v poloze 62, substituující aminokyselina je Asp, Gin, Glu nebo Ser.
Když substituce nastane v poloze 63, substituující aminokyselina je Asp nebo Glu.
Když substituce nastane v poloze 65, substituující aminokyselina je Asn, Asp, Gin, Glu, Pro nebo Ser.
Když substituce nastane v poloze 66, substituující aminokyselina je Asn, Asp, Gin, Glu, Gly, Pro nebo Ser.
B. Substituce v oblasti druhé smyčky
Když substituce nastane v oblasti druhé smyčky, substituce nastane v jedné nebo více z poloh 95, 96, 97,
98. 99, 100. 101, 102. 103. 104. 105, 106 nebo 107.
Když substituce nastane v aminokyselina je Ala, Asn, Asp,
Met, Pro, Ser nebo Thr.
Když substituce nastane v aminokyselina je Ala, Asn, Asp,
Ile, Met, Pro, Ser, Thr nebo Val.
Když substituce nastane v aminokyselina je Asn, Asp, Gin, Glu poloze 95, substituující
Cys. Gin, Glu, Gly, His, poloze 96, substituující
Cys, Gin, Glu, Gly, His, poloze 97, substituující , Pro nebo Ser.
Když substituce nastane v poloze 98. substituující aminokyselina je Asn. Asp. Gin, Glu, Gly, His, Pro, Ser nebo
Thr.
Když substituce nastane v poloze 99, substituující aminokyselina je Glu.
Když substituce nastane v poloze 100, substituující aminokyselina je Asn, Asp, Gin, Glu, Pro nebo Ser.
Když substituce nastane v poloze 101, substituující aminokyselina je Asp nebo Glu.
Když substituce nastane v poloze 102, substituující aminokyselina je Asn, Asp, Gin, Glu, Pro nebo Ser.
Když substituce nastane v poloze 103, substituující aminokyselina je Asn, Asp, Glu nebo Ser.
Když substituce nastane v poloze 104, substituující aminokyselina je Ala, Asn, Asp, Cys, Gin, Glu, Gly, His,
Ile, Leu, Met, Pro, Ser, Thr nebo Val.
Když substituce nastane v poloze 105, substituující aminokyselina je Asp nebo Glu.
Když substituce nastane v poloze 106, substituující aminokyselina je Ala, Asn, Asp, Cys, Gin, Glu, Gly, His,
Ile, Leu, Met, Phe, Pro, Ser, Thr, Tyr nebo Val.
Když substituce nastane v poloze 107, substituující aminokyselina je Ala, Asn, Asp, Cys, Gin, Glu, Gly, His,
Leu, Met, Pro, Ser, Thr nebo Val.
C. Substituce v oblasti třetí smyčky
Když substituce nastane v oblasti třetí smyčky, substituce nastane v jedné nebo více z poloh 126, 127, 128,
129, 130, 131, 132 nebo 133.
Když substituce nastane v poloze 126, substituující aminokyselina je Ala. Asn. Asp. Cys. Gin. Glu. Gly, His,
Ile, Met, Pro, Ser. Thr nebo Val.
Když substituce nastane v poloze 127, substituující aminokyselina je Asn. Asp, Gin, Glu, Pro nebo Ser.
Když substituce nastane v poloze 128, substituující aminokyselina je Asn, Asp, Gin, Glu, Gly nebo Ser.
Když substituce nastane v poloze 129, substituující aminokyselina je Asn, Asp, Gin, Glu, Gly nebo Ser.
Když substituce nastane v poloze 130, substituující aminokyselina je Asp nebo Glu.
Když substituce nastane v poloze 131, substituující aminokyselina je Asn, Asp, Gin, Glu, Gly nebo Ser.
Když substituce nastane v poloze 132, substituující aminokyselina je Asp nebo Glu.
Když substituce nastane v poloze 133, substituující aminokyselina je Asn, Asp, Gin, Glu, Gly, His, Pro, Ser nebo
Thr.
D. Substituce v oblasti čtvrté smyčky
Když substituce nastane v oblasti čtvrté smyčky, substituce nastane v jedné nebo více z poloh 154, 155, 156,
157, 158, 159, 160. 161. 162. 163. 164, 165, 166 nebo 167.
Když substituce nastane v poloze 154, substituuj ící
aminokyselina je Asn, Asp. Gin, Glu ι, Pro nebo Ser.
Když substituce nastane v poloze 155, substituuj ící
aminokyselina je Asp, Gin, Glu nebo i Ser.
Když substituce nastane v poloze 156, substituuj ící
aminokyselina je Asp.
Když substituce nastane v po1oze 157, substituuj ící
aminokyselina je Asn, Asp, Gin, Glu, Pro nebo
Když substituce nastane v po1oze 158
aminokyselina je Asn, Asp, Gin, Glu, Gly, Pro
Když substituce nastane v poloze 159
aminokyselina je Asp nebo Glu.
Když substituce nastane v poloze 160
aminokyselina je Asn, Asp, Gin, Glu, Pro nebo
Když substituce nastane v poloze 161
aminokyselina je Asp nebo Glu.
Když substituce nastane v poloze 162
aminokyselina je Asp nebo Glu.
Když substituce nastane v poloze 163
aminokyselina je Asp nebo Glu.
Když substituce nastane v poloze 164
aminokyselina je Asn, Asp, Gin, Glu, Gly, Pro
Když substituce nastane v po1oze 165
aminokyselina je Ala, Asn, Asp, Cys, Gin,
Met, Pro, Ser nebo Thr
Když substituce nastane v poloze 166
aminokyselina je Asn. Asp, Gin, Glu, Pro nebo
Když substituce nastane v poloze 167
aminokyselina je Ala, Asn, Asp, Cys. Gin,
Ile, Leu, Met, Pro, Ser, Thr nebo Val.
E. Substituce v oblasti páté smyčky
Když substituce nastane v oblasti substituce nastane v jedné nebo více z poloh
190 nebo 191.
Ser.
substituující nebo Ser.
substituuj ící substituující
Ser.
substituuj ící substituuj ící substituující substituuj ící nebo Ser.
substituuj ící
Glu, Gly, His, substituuj ící
Ser.
substituuj ící
Glu, Gly, His, páté smyčky,
187, 188, 189,
Když substituce nastane v poloze 187, substituující aminokyselina je Asn. Asp, Gin. Glu. Gly.
a Thr.
Když substituce nastane v poloze 188, aminokyselina je Asp nebo Glu.
Když substituce nastane v poloze 189, aminokyselina je Ala. Asn. Asp. Cys. Gin,
Ile. Leu, Met, Pro, Ser, Thr, Tyr nebo Val.
Když substituce nastane v poloze 190, aminokyselina je Asp nebo Glu.
Když substituce nastane v poloze 191, aminokyselina je Asp nebo Glu.
F. Substituce v oblasti šesté smyčky
Když substituce nastane v oblasti substituce nastane v jedné nebo více z poloh
202. 203. 204, 205, 206, 207. 208. 209, 210,
214, 215. 216. 217, 218, 219 nebo 220.
Když substituce nastane v poloze 199, aminokyselina pro polohu 199 je Cys, Ala,
Gly, Gin, Asn, Ser. Asp nebo Glu.
Když substituce nastane v poloze 200, aminokyselina pro polohu 200 je His, Thr,
Asn, Ser, Asp nebo Glu.
Když substituce nastane v poloze 201, aminokyselina pro polohu 201 je Gly, Gin, Asn,
Glu.
Když substituce nastane v poloze 202, aminokyselina pro polohu 202 je Pro, Gin, Asn,
His, Pro, Ser substituující substituující
Glu, Gly, His, substituuj ící substituující šesté smyčky,
199, 200, 201,
211, 212, 213, substituuj ící
His. Thr, Pro, substituuj ící
Pro, Gly, Gin, substituuj ící
Ser, Asp nebo substituující
Ser, Asp nebo
Glu14
Když substituce nastane v poloze 203, substituující aminokyselina pro polohu 203 je Met, Cys, Ala, His, Thr,
Pro, Gly, Gin, Asn, Ser, Asp nebo Glu.
Když substituce nastane v poloze 204, substituující aminokyselina pro polohu 204 je Asp nebo Glu.
Když substituce nastane v poloze 205, substituující aminokyselina pro polohu 205 je Leu, Val, Met, Cys, Ala,
His, Thr, Pro, Gly, Gin, Asn, Ser, Asp nebo Glu.
Když substituce nastane v poloze 206. substituující aminokyselina pro polohu 206 je Pro, Asn, Ser, Asp nebo Glu.
Když substituce nastane v poloze 207, substituující aminokyselina pro polohu 207 je Asp nebo Glu.
Když substituce nastane v poloze 208, substituující aminokyselina pro polohu 208 je Pro, Gly, Gin, Asn, Ser, Asp nebo Glu.
Když substituce nastane v poloze 209, substituující aminokyselina pro polohu 209 je Ile, Val, Met, Cys, Ala,
His, Thr, Pro, Gly, Gin, Asn, Ser, Asp nebo Glu.
Když substituce nastane v poloze 210, substituující aminokyselina pro polohu 210 je Ala, Gly, Gin, Asn, Ser, Asp nebo Glu.
Když substituce nastane v poloze 211, substituující aminokyselina pro polohu 211 je Ala, Pro, Gin, Asn, Ser, Asp nebo Glu.
Když substituce nastane v poloze 212, substituující aminokyselina pro polohu 212 je Gin, Ser, Asp nebo Glu.
Když substituce nastane v poloze 213, substituující aminokyselina pro polohu 213 je Trp, Phe, Tyr, Leu, Ile,
Val. Met. Cys. Ala. His. Thr.
nebo Glu.
Když substituce nastane aminokyselina pro polohu 214
Cys. Ala. His. Thr, Pro, Gly,
Když substituce nastane aminokyselina pro polohu 215 je nebo Glu.
Když substituce nastane aminokyselina pro polohu 216
Asn, Ser, Asp nebo Glu.
Když substituce nastane aminokyselina pro polohu 217
Ala. His. Thr. Pro, Gly, Gin.
Když substituce nastane aminokyselina pro polohu 218 je
Když substituce nastane aminokyselina pro polohu 219 je
Glu.
Když substituce nastane aminokyselina pro polohu 220 je nebo Glu.
Pro, Gly. Gin. Asn. Ser. Asp v poloze 214, substituující je Phe. Leu. Ile. Val, Met.
Gin, Asn, Ser, Asp nebo Glu.
v poloze 215, substituující
Thr, Pro, Gin, Asn, Ser, Asp v poloze 216. substituující je His, Thr, Pro, Gly, Gin, v poloze 217, substituující je Leu, Ile, Val, Met, Cys,
Asn, Ser, Asp nebo Glu.
v poloze 218, substituující
Gin, Ser, Asp nebo Glu.
v poloze 219, substituující
Pro, Gin, Asn, Ser, Asp nebo v poloze 220, substituující
Pro, Gly, Gin, Asn, Ser, Asp
II. Čisticí prostředky
V dalším ztělesnění předkládaného vynálezu je účinné množství jedné nebo více enzymových variant zahrnuto do prostředků k čištění různých druhů povrchů při potřebě odstranit nečistoty bílkovinné povahy. Takové čisticí prostředky zahrnují detergentní prostředky na čištění pevných povrchů, neomezené formou (tj. tekuté a práškové), detergentní prostředky pro čištění tkanin - prací prostředky, neomezené formou (tj. práškové, tekuté a prostředky v pevné formě, např. kostkách), prostředky do myček na nádobí (neomezené formou), prostředky na čištění ústní dutiny, neomezené formou (tj. prostředek na čištění zubů, zubní pasta a ústní voda), prostředky na čištění umělého chrupu, neomezené formou (tj. tekuté, tablety) a prostředky na čištění kontaktních čoček, neomezené formou (tj- tekuté, tablety).
Čisticí prostředky také obsahují, kromě variant BPN' popsaných výše, jeden nebo více materiálů čisticích prostředků, které jsou kompatibilní s enzymem proteázou. Termín materiál čisticího prostředku, jak se v tomto textu užívá, znamená jakýkoliv tekutý, pevný nebo plynový materiál vybraný pro konkrétní typ požadovaného čisticího prostředku a formu produktu (např. tekutina, prášek, sprej, kostka, tyčinka, pasta, gel), a tyto materiály jsou také kompatibilní s variantou BPN’ použitou v prostředku.
Specifický výběr materiálů čisticího prostředku se snadno učiní tak, že se vezme do úvahy materiál povrchu, který má být čištěn, a požadovaná forma prostředku pro podmínky během použití (např. během použití mycího detergentu). Termín kompatibilní, jak je v tomto textu použit, znamená, že materiály čisticího prostředku nesnižují proteolytickou aktivitu varianty BPN' do takové míry, že proteáza není účinná tak, jak se vyžaduje při normálním použití. Příklady specifických materiálů čisticích prostředků jsou detailně uvedeny níže.
Termín účinné množství varianty enzymu, jak se v tomto textu používá, se vztahuje na množství enzymové varianty potřebné k dosažení enzymatické aktivity nezbytné ve specifickém čisticím prostředku. Taková účinná množství jsou odborníkem snadno určena a jsou založena na mnoha faktorech, jako je použitá konkrétní varianta enzymu, čisticí použití, specifické složení čisticího prostředku a zdali se vyžaduje tekutý nebo suchý prostředek (např. prášek, kostka), a pod. Čisticí prostředky výhodně obsahují od 0,0001% do 10% jedné nebo více variant enzymu předkládaného vynálezu, výhodněji od 0,001% do 1%, ještě výhodněji od 0,01% do 0,1%. Několik příkladů různých čisticích prostředků, kde jsou použity enzymové varianty, je detailně pojednáno níže. Všechny v tomto textu použité díly, procenta a poměry jsou hmotnostní, pokud není uvedeno jinak.
Termín čisticí prostředky kromě na tkaniny, jak se v tomto textu používá, zahrnuje čisticí prostředky na pevné
povrchy, prostředky do myček na nádobí, prostředky na
čištění ústní dutiny a prostředky na čištění kontaktních
čoček.
A. Čisticí prostředky na pevné povrchy, nádobí a tkaniny
Varianty enzymu předkládaného vynálezu mohou být použity v různých druzích detergentních prostředků, kde se vyžaduje silné pěnění a dobré odstranění nerozpustného substrátu. Tak mohou být enzymové varianty použity s různými obvyklými přísadami a poskytnou plně definované čističe pevných povrchů, prostředky do myček na nádobí, prací prostředky a pod. Takové prostředky mohou být ve formě tekutiny, prášku, v pevné formě (kostky) a pod. Tyto prostředky mohou být vyjádřeny jako moderní koncentrované detergenty, které obsahují 30%-60% (hmotnostních) povrchově aktivních látek (surfaktantfl).
Čisticí prostředky vynálezu mohou volitelně a výhodně obsahovat rflzné aniontové, neionogenní, obojetně ionogenní a pod. surfaktanty. Tyto surfaktanty jsou typicky přítomné v množství od 5% do 35% prostředku.
Neomezující příklady použitelných surfaktantfl zahrnují obvyklé Cn-Cie alkylbenzen sulfonáty a primární a náhodné alkyl sulfáty, Cio-Cie sekundární (2,3) alkyl sulfáty vzorců
CH3(CH2)x(CH0S03)-M+)CH3 a CH3 (CH2 )y(CH0S03“M+)CH2CH3 , kde x a (y+1) jsou celá čísla nejméně 7, výhodně nejméně 9, a M je ve vodě rozpustný kation, především sodík, C10-C18 alkyl alkoxy sulfáty (hlavně E0 1-5 ethoxy sulfáty),
Cio-Ci8 alkyl alkoxy karboxyláty (hlavně E0 1-5 ethoxykarboxyláty) C10-C18 alkyl polyglykosidy a jejich odpovídající sulfatované polyglykosidy, C12-C18 alfa sulfatované estery mastných kyselin, C12-C18 alkyl a alkyl fenol alkoxyláty (hlavně ethoxyláty a smíšené ethoxy/propoxy), C12-C18 betainy a sulfobetainy (sultainy”), Cio-Cie amin oxidy a pod. Preferované jsou alkyl alkoxy sulfáty (AES) a alkyl alkoxy karboxyláty (AEC).
(Také se preferuje použití těchto surfaktantfl ve spojení se svrchu uvedenými aminooxidovými a/nebo betainovými či sultainovými surfaktanty, záleží na požadavcích tvůrce).
Další běžně používané surfaktanty jsou vyjmenovány ve standardní literatuře. Obzvláště použitelné surfaktanty zahrnují Cio-Cie N-metyl glukamidy popsané v US patentu
194 639, Connor a kol., vydaném 16. března 1993, zahrnuto v odkazech.
V prostředcích může být obsažena celá řada dalších přísad používaných v detergentních Čisticích prostředcích, včetně jiných aktivních složek, nosičů, hydrotropních látek, výrobních pomocných prostředků, barev nebo pigmentů, rozpouštědel pro tekuté směsi, atd. Jestliže se požaduje další zvýšení pěnění, mohou být do prostředků zahrnuty zesilovače pěnění, jako Cio-Cie alkolamidy, typicky v množství od 1 do 10%. Typickou třídu takových zesilovačů pěnění zastupují Cio-Ci-4 monoetanol a dietanol amidy. Je také výhodné použití těchto zesilovačů pěnění se surfaktanty, které vysoce pění sami o sobě, jako amin oxidy, betainy a sultainy zmíněné výše. Je-li vyžadováno další pěnění, je možno přidat rozpustné hořečnaté soli jako
MgCl2, MgSG4 a pod., v množství od 0,1% do 2%.
Tekuté detergentní prostředky mohou jako nosiče obsahovat vodu a jiná rozpouštědla. Jsou vhodné primární nebo sekundární alkoholy o nízké molární hmotnosti, například metanol, etanol, propanol a isopropanol. Pro rozpouštěcí surfaktanty se preferují jednosytné alkoholy.
ale mohou být také použity polyoly, které obsahují od 2 do atomů uhlíku a od 2 do 6 hydroxy skupin Cnapř.
1,3-propandiol, etylenglykol, glycerin a 1,2-propandiol).
Prostředky takové nosiče obsahují v množství od 5% do 90%, typicky od 10% do 50%.
Detergentní prostředky jsou výhodně navrženy tak, že během použití při čisticích úkonech ve vodném prostředí bude mít mycí voda pH mezi 6,8 a 11,0. Typicky jsou konečné produkty navrženy v tomto rozmezí. Technologie upravování pH při doporučeném dávkování zahrnuje použití pufrů, zásad, kyselin, atd. a je odborníkům dobře známa.
Při návrhu složení čisticích prostředků předkládaného vynálezu na pevné povrchy a na tkaniny může navrhovatel použít různé základní složky v množstvích od 5¾ do 50¾ (hmotnostních). Typické základní složky zahrnují zeolity o velikosti částic 1-10 mikronů, po1ykarboxyláty jako citráty a oxydisukcináty, vrstvené silikáty, fosfáty a pod.
Další obvyklé základní složky jsou vyjmenovány ve standardních sbírkách vzorců.
Podobně může navrhovatel v těchto prostředcích použít různé přidatné enzymy, jako jsou celulázy, lipázy, amylázy a proteázy, typicky v množstvích od 0,001¾ do 1¾ (hmotnostního). V oboru pracích detergentů jsou velmi dobře známy různé čisticí a tkaniny ošetřující enzymy.
V těchto prostředcích mohou být použity různé bělicí sloučeniny, jako perkarbonáty, perboráty a pod., typicky v množstvích od 1¾ do 15¾ (hmotnostních). Je-li vyžadováno, tyto prostředky mohou také obsahovat bělicí aktivátory, jako jsou tetraacetyl etylendiamin, nonanoyloxybenzen sulfonát a pod., které jsou v oboru také dobře známy. Použitá množství jsou typicky v rozmezí od 1¾ do 10¾ (hmotnostních).
V těchto prostředcích mohou být použity také různé prostředky na odstraňování nečistot, hlavně aniontového o1igoesterového typu. různá chelatační činidla. hlavně aminofosfonáty a etylendiaminosukcináty. různé prostředky na odstranění hlinitých nečistot. hlavně ethoxy1ováný tetraetylen pentamin, různá dispergovadla. hlavně polyakryláty a polyaspartáty, různé zjasňovače, hlavně aniontové. různé potlačovače pěnění. hlavně silikony a sekundární alkoholy. různé změkčovače tkanin. hlavně smektity (valchářské hlíny). a podobně. vše se v prostředcích používá v množstvích pohybujících se v rozmezí od 1% do 35% (hmotnostních). Standardní sbírky vzorců a publikované patenty obsahují četné detailní popisy těchto obvyklých materiálů.
V čisticích prostředcích mohou být také použity stabilizátory enzymů. Tyto enzymové stabilizátory zahrnují propylenglykol (výhodně od 1% do 10%). formiát sodný (výhodně od 0.1% do 1%) a formiát vápenatý (výhodně od 0.1% do 1%).
1. Čisticí prostředky na pevné povrchy
Termín čisticí prostředek na pevné povrchy, jak se v tomto textu používá. se vztahuje na tekuté a práškové detergentní prostředky na čištění pevných povrchů jako jsou podlahy, zdi. koupelnové dlaždičky apod. Čisticí prostředky na pevné povrchy předkládaného vynálezu obsahují účinné množství jedné nebo více enzymových variant předkládaného vynálezu, výhodně od 0,001% do 10%. výhodněji od 0,01% do
5%. ještě výhodněji od 0,05% do 1% (hmotnostního) aktivního enzymu v prostředku. Kromě obsahu jedné nebo více enzymových variant tyto čisticí prostředky na pevné povrchy typicky obsahují surfaktant a ve vodě rozpustnou ochrannou základní složku. Avšak někdy se v určitých specializovaných produktech, jako jsou čističe oken ve spreji, surfaktanty nepoužívají, nebot mohou zanechávat na skleněném povrchu nepravidelně pruhovaný povlak.
Je-li surfaktant v prostředku přítomen, pak čisticí prostředek může obsahovat jenom 0,1%, ale typicky obsahuje od 0,25% do 10%, výhodněji od 1% do 5% surfaktantu.
Typicky prostředek obsahuje od 0,5% do 50% detergentní základní složky, výhodně od 1% do 10%.
Výhodně by pH mělo být v rozmezí od 8 do 12. Je-li nezbytné, mohou být použity obvyklé prostředky na upravení pH, jako jsou hydroxid sodný, karbonát sodný nebo kyselina c h1orovod í ková.
V prostředku mohou být obsažena rozpouštědla.
Použitelná rozpouštědla zahrnují, ale nejen je, glykolétery jako je dietylenglykol monohexyl éter, dietylenglykol monobuty1 éter, etylenglykol monobuty1 éter, etylenglykol monohexyl éter, propylenglykol monobuty1 éter, dipropylenglykol monobuty1 éter,
2,2,4-trimetyl-l,3-pentandiol a
Jsou-li použita, pak jsou tato rozpouštědla typicky přítomna v množstvích od 0,5% do 15%, výhodně od 3% do 11%.
Navíc v předkládaných prostředcích mohou být použita vysoce těkavá rozpouštědla jako je isopropanol nebo etanol, aby se usnadnilo vysychání prostředku z povrchů, když se povrch neopláchne po použití neředěného prostředku. Jsou-li použita, pak jsou těkavá rozpouštědla v prostředku typicky a dioly jako · je
2-ety1-1,3-hexand i o1.
přítomna v množstvích od 2% do 12¾.
Ztělesnění čisticího prostředku na pevné povrchy je doloženo příklady.
2. Prostředky do myček na nádobí
V dalším ztělesnění předkládaného vynálezu obsahují jednu nebo více enzymových variant předkládaného vynálezu prostředky do myček na nádobí. Termín prostředky do myček na nádobí, jak se v tomto textu používá, se vztahuje na všechny formy prostředkft na mytí nádobí, včetně. ale neomezeno na. práškové a tekuté formy. Ztělesnění prostředku do myček na nádobí je doloženo příklady.
3. Čisticí prostředky na tkaniny - prací prostředky
V dalším ztělesnění předkládaného vynálezu obsahují jednu nebo více enzymových variant předkládaného vynálezu prací prostředky. Termín prací prostředky, jak se v tomto textu používá, se vztahuje na všechny formy detergentních prostředků na praní tkanin. včetně, ale neomezeno na, práškové, tekuté a pevné formy (např- kostka). Preferované prací prostředky jsou v tekuté formě.
a. Práškové prací prostředky
Práškové prací prostředky předkládaného vynálezu obsahují účinné množství jedné nebo více enzymových variant předkládaného vynálezu, výhodně od 0,001¾ do 10¾. výhodněji od 0,005¾ do 5¾. nejvýhodněji od 0,01¾ do 1¾ (hmotnostního) aktivního enzymu v prostředku. Kromě jedné nebo více enzymových variant práškové prací prostředky typicky obsahují alespoň jeden surfaktant, jednu nebo více základních složek a v některých případech bělicí prostředek.
Ztělesnění práškového pracího prostředku ie doloženo příklady.
b. Tekuté prací prostředky
Tekuté prací prostředky předkládaného vynálezu obsahují účinné množství jedné nebo více enzymových variant předkládaného vynálezu, výhodně od 0,005¾ do 5¾. výhodněji od 0,01¾ do 1¾ (hmotnostního) aktivního enzymu v prostředku. Tyto tekuté prací prostředky navíc typicky obsahují aniontový surfaktant, mastnou kyselinu, ve vodě rozpustnou detergentní základní složku a vodu.
Ztělesnění tekutého pracího prostředku je doloženo příklady.
c. Pevné prací prostředky
Pevné prací prostředky předkládaného vynálezu vhodné pro ruční praní zašpiněných tkanin obsahují účinné množství jedné nebo více enzymových variant předkládaného vynálezu, výhodně od 0,001¾ do 10¾. výhodněji od 0,01¾ do 1¾ (hmotnostního) prostředku.
Ztělesnění pevného pracího prostředku je doloženo příklady.
B. Přídatné čisticí prostředky
Kromě čisticích prostředků na pevné povrchy, do myček na nádobí a pracích prostředků pojednávaných výše může být jedna nebo více enzymových variant začleněno do různých druhů dalších čisticích prostředků, kde se vyžaduje hydrolýza nerozpustného substrátu. Takové přídatné čisticí prostředky zahrnují, ale nejsou omezeny na, prostředky na čištění ústní dutiny, prostředky na čištění umělého chrupu a prostředky na čištění kontaktních čoček.
1. Prostředky na čištění ústní dutiny
V dalším ztělesnění předkládaného vynálezu je obsaženo farmaceuticky přijatelné množství jedné nebo více enzymových variant předkládaného vynálezu v prostředcích použitelných na odstraňování nečistot bílkovinné povahy ze zubů a umělého chrupu. Termín prostředky na čištění ústní dutiny, jak se v tomto textu používá, se vztahuje na prostředky na čištění zubů, zubní pasty, zubní gely, zubní prášky, ústní vody, ústní spreje, ústní gely, žvýkací gumy, zdravotní pastilky, váčky s práškem, tablety, biogely. preventivní pasty, zubní léčebné roztoky a pod. Výhodně prostředky na čištění ústní dutiny obsahují od 0,0001¾ do 20¾ jedné nebo více enzymových variant předkládaného vynálezu, výhodněji od 0,001¾ do 10¾.
ještě výhodněji od 0,01¾ do 5¾ (hmotnostních) prostředku a farmaceuticky přijatelný nosič. Termín farmaceuticky přijatelný, jak se v tomto textu používá, znamená, že léky, léčiva nebo inertní složky. které termín popisuje, jsou vhodné pro použití v kontaktu s lidskými tkáněmi a tkáněmi zvířat bez nepatřičné toxicity, nesnášenlivosti, nestability, podráždění, alergické reakce a pod., s přiměřeně přijatelným poměrem účinek/riziko.
Typicky prostředky na čištění ústní dutiny obyčejně obsahují od 50¾ do 99.99¾. výhodně od 65¾ do 99,99¾.
výhodněji od 65¾ do 99¾ (hmotnostních) farmaceuticky přijatelného nosiče v prostředku na čištění ústní dutiny.
Odborníkům jsou dobře známy farmaceuticky přijatelné nosiče a volitelné složky, které mohou být obsaženy v prostředcích na čištění ústní dutiny předkládaného vynálezu. Celá řada typů prostředků, nosičů a volitelných složek použitelných v prostředcích na čištění ústní dutiny je popsána v U.S. patentech: 5 096 700, Seibel, vydaný 17. března 1992, 5 028 414, Sampathkumar, vydaný 2- července
1991, 5 028 415, Benédict, Bush a Sunberg, vydaný 2.
července 1991, všechny zahrnuty v odkazech.
Ztělesnění prostředku na Čištění ústní dutiny je doloženo příklady.
2. Prostředky na čištění umělého chrupu
V dalším ztělesnění předkládaného vynálezu obsahují jednu nebo více enzymových variant předkládaného vynálezu prostředky na čištění umělého chrupu vně ústní dutiny. Tyto prostředky na čištění umělého chrupu obsahují účinné množství jedné nebo více enzymových variant, výhodně od
0,0001% do 50% jedné nebo více enzymových variant, výhodněji od 0,001% do 35%, ještě výhodněji od 0,01% do 20% (hmotnostních) prostředku a nosič čisticího prostředku.
V oboru jsou dobře známy různé formy prostředků na čištění umělého chrupu, jako šumivé tablety a pod- Cviz např. U.S. patent 5 055 305, Young, zahrnuto v odkazech) a jsou všeobecně vhodné ke spojení s jednou nebo více enzymovými variantami pro odstraňování nečistot bílkovinné povahy z umělého chrupu.
Ztělesnění prostředku na čištění umělého chrupu předkládaného vynálezu je doloženo příklady.
3. Prostředky na čištění kontaktních čoček
V dalším ztělesnění předkládaného vynálezu obsahují jednu nebo více enzymových variant předkládaného vynálezu prostředky na čištění kontaktních čoček. Tyto prostředky na čištění kontaktních čoček obsahují účinné množství jedné nebo více enzymových variant, výhodně od 0,01¾ do 50¾ jedné nebo více enzymových variant, výhodněji od 0,01¾ do 20¾.
ještě výhodněji od 1¾ do 5¾ (hmotnostních) prostředku a nosič čisticího prostředku. V oboru jsou dobře známy různé formy prostředků na čištění kontaktních čoček, jako tablety, tekutiny a pod. (viz např. U-S- patent 4 863 627, Davies,
Meaken a Rees, vydaný 5. září 1989, U.S. patent Re. 32 672,
Huth, Lam a Kiral, znovu vydaný 24. května 1988, U-S. patent
609 493, Scháfer, vydaný 2. září 1986, U.S. patent
690 793, Ogunbiyi a Smith, vydaný 1. září 1987, U.S. patent 4 614 549, Ogunbiyi, Riedhammer a Smith, vydaný 30. září 1986 a U.S. patent 4 285 738, Ogata, vydaný 25. srpna 1981, všechny zahrnuty v odkazech) a jsou všeobecně vhodné ke sloučení s jednou nebo více enzymovými variantami pro odstraňování nečistot bílkovinné povahy z kontaktních čoček.
Ztělesnění prostředku na čištění kontaktních qoček předkládaného vynálezu je doloženo příklady.
Zatímco byla popisována konkrétní ztělesnění předkládaného vynálezu, je odborníkům zřejmé, že se mohou provádět různé změny a úpravy předkládaného vynálezu, aniž by se opustila základní myšlenka a oblast vynálezu. V připojených patentových nárocích je zamýšleno pokrýt všechny tyto úpravy, které jsou v oblasti vynálezu.
Příklady provedení vynálezu
Příprava enzymových variant
Příklad 1
Mutované geny BPN’
Fagemid (pSS-5) obsahující gen divokého typu subtilisinu BPN' (Mitchinson. C. a J.A. Wells, ¢1989), “Protein Engineering of Disulfide Bonds in Subtilisln BPN’, BIOCHEMISTRY, Vol. 28, pp. 4807-4815) je transformován do kmene CJ236 Escherichia coli ung a vytvoří se jednovláknový templát DNA obsahující uracll za použití pomocného fága
VCSM13 (Kunkel, T.A., J.D. Roberts a R.A. Zakour, Rapid and efficlent site-specific mutagenesis vithout phenotypic selection“, METHODS IN ENZYMOLOGY, Vol. 154, pp. 367-382, ¢1987), jak modifikováno autory Yuckenberg, P.D., F. Vitney,
J. Geisselsoder a J. McClary, “Site-directed in vitro mutagenesis using uraci1-containing DNA and phagemid vectors“. DIRECTED MUTAGENESIS - A PRACTICAL APPROACH. Ed.
M.J. McPherson, pp. 27-48, ¢1991), oba články jsou zahrnuty v odkazech). K tvorbě všech mutací (v podstatě jak prezentováno Yuckenbergem a kol., 1991, výše) je použita modifikace metody řízené mutageneze za použití jediného primerů dle Zollera a Smithe (Zoller, M.J. a M- Smith,
01igonucleotide-directed mutagenesis using M13-derived vectors: an efficient and generál proceduře for the production of point mutatlons in any fragment of DNA,
NUCLEIC ACIDS RESEARCH, Vol. 10, pp. 6487-6500, (1982). zahrnuto v odkazech). 01igonukleotidy jsou tvořeny za použití syntetizátoru DNA Applied Biosystem lne. 380B. Reakční produkty mutageneze jsou transformovány do kmene MM294 Escherichia coli (American Type Culture Collection
E. coli 33625). Správnost všech mutantů je potvrzena sekvenováním DNA a izolovaná DNA je transformována do expresního kmene BG2036 Bacillus subtilis (Yang, M.Y., E.
Ferrari a D.J.Henner, (1984), Cloning of the Neutrál
Protease Gene of Bači 1lus subtilis and the Use of the Cloned
Gene to Create an In Vitro-derived Deletion Mutation“,
JOURNAL OF BACTERIOLOGY, Vol. 160, pp. 15-21). Pro některé mutanty je použit k tvorbě uracilového templátu modifikovaný pSS-5 s posunovou mutací ve stopovacím kodonu v aminokyselině 217. 01igonukleotidy jsou navrženy tak, aby obnovily správný čtecí rámec v poloze 217 a také kódovaly náhodné substituce v polohách 59, 60, 61, 62, 63, 64, 65,
66, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106,
107, 126. 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 154, 155, 156,
157, 158. 159, 160, 161. 162, 163, 164, 165, 166, 167, 187,
188, 189. 190, 191, 199, 200, 201. 202, 203, 204, 205, 206,
207, 208, 209, 210, 211, 212, 213, 214, 215. 216, 217, 218,
219 a 220 (ekvimolární a/nebo různé směsi všech čtyř nukleotidů pro všechny tri báze v těchto kodonech). Mutace, které opravují posunovou mutaci ve stopovacím kodonu a tvoří funkční enzym, jsou rozpoznávány podle schopnosti štěpit kasein. Náhodné substituce se zjistují sekvenováním DNA.
Příklad 2
Fermentace
Buňky Bacillus subtilis (BE2036) obsahující zkoumanou mutaci subtilisinu se pěstují do střední logaritmické fáze v jednom litru kultivačního bujónu LB s glukózou a očkují se do kvasné kádě (fermentoru) Blostat ED (B. Braun Biotech.
Inc.. Allentovn. Pennsylvania) do celkového objemu 10 litrů.
Kultivační médium obsahuje kvasinkový výtažek, škrob, přípravek snižující pěnivost, pufry a stopové minerály (viz FERMENTATION: A PRACTICAL APPROACH, Ed. B. McNeil a L.M.
Harvey, 1990). Bujón je během fermentačního pochodu udržován na konstantním pH=>7.0. Pro antibiotickou selekci mutovaného plazmidu se přidává chloramfenikol. Buňky se pěstují přes noc ve 37 °C až do hodnoty Αβοο=60 a pak se sklízí.
Příklad 3
Čištění
Aby se získal čistý enzym, fermentační bujón prochází následujícími kroky. Odstředěním se odstraní z bujónu buňky
Bacillus subtilis a bujón se přečistí odstraněním jemných částic pomocí molekulárního síta s limitem molekulární hmotnosti 100K. Pak následuje koncentrace na molekulárním sítě s limitem 10K, průtoková dialýza ke snížení iontové síly a nastavení pH na 5,5 za použití 0.025M pufru MES (2-(N-morfolin)ethansulfonová kyselina). Enzym se dále čistí navrstvením buď na chromatografickou kolonu s měničem kationtů nebo na afinitně adsorpční chromatografickou kolonu a vyluhuje se z kolon pomocí gradientu s NaCl nebo propylenglýkolem (viz Scopes, R.K-, PROTEIN PURIFICATION PRINCIPLES AND PRACTICE, Springer-Verlag, Nev York, (1984), dokončení čisticí zásobního roztoku zahrnuto v odkazech)K určení koncentrace aktivního enzymu ve frakcích sbíraných během gradientově eluce se používá zkouška s pNA (DelMar, E.G. , C. Largman, J.V. Brodrick a M.C. Geokas,
ANAL. BIOCHEM., Vol. 99, pp. 316-320, (1979), zahrnuto v odkazech). Tato zkouška měří rychlost, kterou se uvolňuje p-nitroani1in při enzymové hydrolýze rozpustného syntetického substrátu, sukcinyl-alanin-alanin-prolinfenylalanin-p-nitroani1idu (sAAPF-pNA). Rychlost tvorby žluté barvy při hydrolytické reakci se měří na spektrofotometru ve 410 nm a je úměrná koncentraci aktivního enzymu. Navíc se používají měření absorbance ve 280 nm k určení celkové koncentrace proteinu. Poměr aktivní enzym/celkový protein udává čistotu enzymu a používá se ke zjištění frakcí, které budou sloučeny do zásobního roztoku.
Aby se zabránilo autolýze enzymu během skladování, přidává se ke sloučeným frakcím získaným z chromatografických kolon stejná váha propylenglykolu. Po procedury se kontrolovala čistota enzymu SDS-PAGE (elektroforéza v polyakrylamidovém gelu s natrium dodecylsulfátem) a čistá koncentrace enzymu se určovala metodou titrace aktivního místa za použití trypsinového inhibitoru typu II-T: bílku krocaního vejce zakoupeného od Sigma Chemical Company (St.
Louis. Missouri). Měřené konverzní faktory ukazují, které změny vytvořené v molekule enzymu v různých polohách vedou k enzymové variantě, která má zvýšenou aktivitu proti divokému typu na rozpustném substrátu pNA.
V přípravku pro použití se vyluhuje zásobní roztok enzymu přes kolonu se Sephadexem-G25 CPharmacia, Piscatavay,
Nev Jersey), aby se odstranil propylenglykol a vyměnil pufr.
Pufr MES ze zásobního roztoku enzymu se vymění za pufr 0,ÍM
Tris (Tris(hydroxymetyl-aminometan)). který obsahuje 0,0ÍM
CaCl2 a pH má upraveno na 8,6 pomocí HCl- Všechny pokusy jsou prováděny v pufru Tris o pH 8,6 zahřátém na 25 °C.
Příklad 4
Příprava modelového povrchu
Jako podklad pro kovalentně navázaný substrát sAAPF-pNA zakoupený od Bachem, Inc. CTorrence, California) je použito aminopropylové porézní sklo CCPG) zakoupené od
CPG Inc. CFairfield, Nev Jersey). Reakce se uskutečňuje v dimetyl sulfoxidu a jako vazebné činidlo se používá
1-etyl-3-[3-Cdimety1am i no)propy11karbod im i d hydroch1oř i d
CEDC). Po dokončení (monitorováno zkouškou pNA) je odstraněno přebytečné rozpouštědlo a CPG=sAAPF-pNA je opláchnut dimetyl sulfoxidem CDMSO) a dvojitě destilovanou vodou. Následuje sušení v sušárně s profukováním N2 při °C. Reakční schéma a příprava immobi1izovaného substrátu se provádí dle popisu Brode, P.F. III, a D-S. Rauch,
Subtilisin BPN*: Activity on an Immobi lized Substráte'*,
LANGMUIR, Vol. 8, pp. 1325-1329, (1992), zahrnuto v odkazech.
Povrch CPG váže 62 000 ± 7 000 molekul pNA na jum2 . Povrchová plocha zůstane nezměněna od hodnoty 50,0 m2/g, lak udává CPG Inc. pro použité sklo CPG. Toto naznačuje, že postup použitý k navázání sAAPF-pNA na CPG nezničí porézní strukturu (střední průměr je 486 X).
Příklad 5
Test povrchové hydrolýzy
Za použití CPG=sAAPF-pNA mohou být měřeny v jediném pokuse jak adsorpce enzymové varianty tak i hydrolýza peptidu navázaného na CPG. Do baňky obsahující pufr Tris a CPG=sAAPF-pNA, který byl zbaven plynu, se přidá malý objem zásobního roztoku enzymové varianty. Baňka se protřepává na třepačce po dobu 90 minut, během kterých se třepačka zastavuje v různých časových intervalech (například, každé 2 minuty během časných stadií adsorpční hydrolýzy, např. prvních 20 minut, a každých 10 minut až do konce pokusu). CPG=sAAPF-pNA je umožněno sedimentovat a roztok se odebírá
na vzorky. Experimentální postup a kalkulace adsorpce
a hydrolýzy se provádí dle popisu Brodyho a kol., 1992,
výše.
Všechny enzymy se monitorují na stabilitu proti
autolýze a neměly by projevit znatelnou ztrátu způsobenou autolýzou v průběhu celého pokusu. Proto adsorpce enzymu může být určena měřením úbytku z roztoku. Rozdíl mezi původní koncentrací enzymové varianty a koncentrací měřenou v každém jednotlivém časovém bodu udává množství adsorbované enzymové varianty. Množství pNA hydrolyžovaného z povrchu se měří odečtením absorbance při 410 nm poměrné části vzorku. Celkové množství hydrolyžovaného pNA se vypočítává sečtením množství odebraného na vzorky a množství zbylého v baňce. Tato hodnota se koriguje odečtením množství pNA, který je hydrolyzován pufrem Tris při pH 8.6 v nepřítomnosti enzymu. Tato bazická hydrolýza je v rozmezí 7-29¾ celkové hydrolýzy závislé na účinnosti enzymu.
Příklad 6
Kinetická analýza rozpustného substrátu
Rychlosti hydrolýzy rozpustného substrátu sAAPF-pNA se monitorují měřením přírůstku adsorbance jako funkce času ve
410 nm na spektrofotometru DU-70. Koncentrace enzymu je udržována konstantní a pohybuje se v rozmezí 6-10 nanomolů. zatímco koncentrace substrátu se mění od 90 do 700 μΜ sAAPF-pNA pro každé kinetické stanovení. Každou sekundu po dobu 900 sekund se odebírají údaje adsorbance a data jsou přenesena do kalkulační tabulky programu LOTUS™ (Lotus Development Corporation, Cambridge, Massachusetts). Analýza kinetických parametrů se provádí standardní Linevear Burkovou analýzou, ve které data v počáteční části testu (obyčejně první minuta) jsou fitována lineární regresní křivkou a poskytnou tak hodnotu vo- Data vo a so jsou vynesena do grafu standardním inverzním způsobem a umožní určit hodnoty Km a kcat Tabulky variant BPN' k příkladům 1 až 6
Příklady variant BPN’ předkládaného vynálezu, které mají sníženou adsorpci a zvýšenou hydrolýzu k povrchově vázaným substrátům, jsou uvedeny v tabulkách 2-25, viz níže. V popisu specifických mutací je originální aminokyselina vyskytující se v divokém typu uvedena jako první, na druhém místě je číslo polohy a substituující aminokyselina je třetí.
Tabulka 2
Smyčka 1 - varianty s jedinou mutací
Gln59Asn
Gln59Asp
Gln59Glu
Gln59Ser
Asp 60 Glu
Asn6IAsp
Asn61Gln
Asn61Glu
Asn61Ser
Asn62Asp
Asn62Gln
Asn62Glu
Asn62Ser
Ser63Asp
Ser63Glu
Gly65Asn
Gly65Asp
Gly65Gln
Gly65GIu
Gly65Pro
Gly65Ser
Thr66Asn
Thr66Asp
Thr66Gln
Thr66Glu
Thr66Gly
Thr66Pro
Thr66Ser
Tabulka 3
Smyčka 1 - varianty s dvojitou mutací
Gln59Ser + Asn62Glu
Asp60Glu + Asn61Ser
Asn61Glu + Asn62Ser
Gln59Ser + Gly65Gln
Asn61Gln + Gly65Asn
Asn61Ser + Asn62Asp
Gln59Glu + Asn61Gln
,i; Asp60Glu + Gly65Gln
Gln59Asp + Gly65Pro
Asn61Asp + Gly65Asn
Gln59Ser + Asn62Asp
Gln59Asn + Gly65Gln
Asn62Asp + Thr66Gly
Gln59Asn + Asn62Glu
Asn61Ser + Ser63Glu
Gln59Ser + Asp60Glu
Asp60Glu + Thr66Gln
Asn61Glu + Thr66Gly
Asp60Glu + Asn62Gin
Asn62Gin + Gly65Pro
Asn61Ser + Thr66Ser
Asp60Glu + Gly65Pro
Ser63Glu + Gly6SPro
Asp60Glu + Thr66Ser
Gln59Ser + Asn61Glu
Asn62Asp + Gly65Gln
Asn61Gln + Ser63Asp
Gln59Asp + Gly65Asn
Ser63Asp + Thr66Pro
Ser63Glu + Thr66Asn
Asn62Glu + Thr66Asn
Asn61Asp + Gly65Ser
Gly65Pro + Thr66Ser
Gln59Ser + Asn62Ser
Asp60Glu + Gly65Ser
Ser63Asp + Gly65Ser
Asn61Gln + Ser63Glu
Asn61Asp + Asn62Ser
Gln59Glu + Gly65Pro
Gln59Ser + Asn61Asp
Gln59Asp + Asn62Ser
Gln59Asn + Gly65Ser
Ser63Glu + Thr66Ser
Asn61Ser + Ser63Asp
Asn62Ser + Gly65Pro
Tabulka 4
Smyčka 1 - varianty s trojitou mutací
Gln59Ser + Šer63Asp + Gly65Pro
Asn62Gln + Gly65Ser + Thr66Asp Gln59Ser + Asp60Glu + Thr66Gln Gln59Asn + Ser63Glu +'Thr66Pro Asn61Ser + Gly65Asn + Thr66Glu Ser63Glu + Gly65Ser 4 Thr66Asn Asn62Asp + Gly65Ser + Thr66Gly Gln59Ser + Asn62Asp + Thr66Pro Gln59Ser * Asp60Glu + Asn61Gln Asn61Gln + Ser63Asp 4 Gly65Ser Asn62Glu + Gly65Asn 4 Thr66Gln Asp60Glu + Gly65Asn + Thr66Ser Asn62Ser 4- Ser63Asp 4 Thr66Gln Gln59Asp + Asn62Gin + Gly65Pro Asn62Ser + Ser63Glu + Thr66Gly
- Asn61Asp 4 Asn62Ser 4 Gly65Asn
Asp60Glu 4 Asn61Gln 4 Asn62Ser Asp60Glu 4 Asn61Gln 4 Gly6SSer Asp60Glu 4 Gly65Pro 4 Thr66Asn Gln59Ser 4 Asn61Glu + Asn62Asp Asn61Asp 4 Asn62Asp 4 Gly65Pro Asn61Glu 4 Asn62Glu 4 Thr66Gln Gln59Asp 4 AspSOGlu 4 Thr66Gln Gln59Asp 4 Asp60Glu 4 Thr66Pro Asn62Asp 4 Ser63Asp 4 Gly65Asn Asn62Glu 4 Ser63Glu + Gly65Asn Asn62Asp 4 Ser63Glu 4 Gly65Gln Gln59Ser 4 Asn62Asp 4 Ser63Glu Asn62Glu 4 Ser63Asp 4 Gly65Ser Asn61Asp 4 Asn62Asp 4 Ser63Glu Gln59Glu 4 Asp60Glu 4 Asn61Glu Asp60Glu 4 Asn62Glu 4 Ser63Asp Asp60Glu 4 Asn61Glu 4 Ser63Glu Gln59Ser 4 Asp60Glu 4 Asn62Glu
Tabulka 5
Smyčka 1 - varianty se čtyřnásobnou mutací
Gln59Ser 4 Asp60Glu + Gly65Gln 4 Thr66Gln
Gln59Ser 4 Asn62Ser 4 Ser63Asp 4 Gly65Gln Asp60Glu 4 Asn62Ser 4 Gly65Pro 4 Thr66Gln Asn62Gln 4 Ser63Glu 4 Gly65Pro 4 Thr66Gln Asn61Gln 4 Asn62Gln 4 Ser63Asp 4 Gly65Pro Gln59Asn 4 Asp60Glu 4 Asn61Gln 4 Gly65Asn Gln59Glu 4 Asn62Ser 4 Gly65Pro 4 Thr66Ser
Gln59Asn + AsnčlAsp Gln59Asp + Asp60Glu Asn61Gln + Asn62Asp Asp60Glu 4* Asn61Asp Asn61Asp + Asn62Glu Asn61Asp + Asn62Glu Gln59Glu + Asp60Glu Asp60Glu + Asn62Asp Asp60Glu 4- Asn62Glu Asp60Glu 4- Asn62Glu Asp60Glu 4- Asn61Asp Gln59Ser 4 Asp6OGlu Asp60Glu 4- Asn61Asp Asp60Glu 4- Asn61Asp Asp60Glu + Asn61Asp Gln59Ser 4* Asp60Glu Asp60Glu 4- Asn62Asp Asp60Glu 4- Asn61Gln Gln59Ser 4- Asp60Glu Asp60Glu 4- Asn61Ser Asp60Glu 4 Asn61Ser Gln59Ser 4 Asp60Glu Asp60Glu 4 Ser63Glu Gln59Asn 4 Asp60Glu Asp60Glu 4 Ser€3Glu
Asn62Asp 4 ThrGGAsn 4 Asn62Ser 4 Gly65Ser 4 Ser€3Glu 4 Thr66Gln 4 Asn62Glu 4 Gly65Ser 4 Ser63Glu 4 Thr66Ser 4 Ser63Asp 4 Gly65Ser 4 AsnGlAsp 4 Gly65Ser 4 Ser63Glu 4 Thr66Pro 4 Ser63Glu 4 Thr66Asn 4 Ser63Asp 4 Gly65Ser 4 Ser63Glu 4 Thr66Asn · 4 Asn61Asp 4 Ser63Asp 4 ser63Asp 4 Gly65Pro 4 SerG3Asp 4 Thr66Gly 4 Ser63Glu 4 Gly65Asn 4 Asn62Asp 4 Thr66Gly 4 Gly65Ser 4 Thr66Pro . 4 Asn62Glu 4 Gly65Ser 4 Asn62Asp 4 Gly65Gln 4 Asn62Gln 4 Ser63Glu 4 Ser63Asp 4 Thr66Pro 4 Asn61Gln 4 Ser63Glu 4 Gly65Ser 4 Thr66Asn 4 Ser63Asp 4 Gly€5Gln 4 Gly65Pro 4 Thr66Ser
Tabulka 6
Smyčka 2 - varianty s jedinou mutací
Val95Ala Val95Asn Val95Asp Val95Cys Val95Gln Val95Glu Val95Gly Val95His Val95Met Val95Pro Val95Ser Val95Thr Leu96Ala Leu96Asn Leu96Asp Leu96Cys Leu96Gln Leu96Glu Leu96Gly Leu96His Leu96Ile
Leu96Met
Leu96Pro
Leu96Ser
Leu96Thr
Leu96Val
Gly97Asn
Gly97Asp
Gly97Gln
Gly97Glu
Gly97Pro
Gly97Ser
Ala98Asn
Ala98Asp
Ala98Gln
Ala98Glu
Ala98Gly
Ala98His
Ala98Pro
Ala98Ser
Ala98Thr
Asp99Glu
GlylOOAsn
GlylOOAsp
GlylOOGln
GlylOOGlu
GlylOOPro
GlylOOSer
SerlOlAsp
SerlOlGlu
GlylO2Asn
GlylO2Asp
GlylO2Gln
GlylO2Glu
Glyl02Pro
GlylO2Ser
GlnlO3Asn
GlnlO3Asp
GlnlO3Glu
GlnlO3Ser
TyrlO4Ala
TyrlO4Asn
TyrlO4Asp
TyrlO4Cys
TyrlO4Gln
TyrlO4Glu
TyrlO4Gly
TyrlO4His
TyrlO4Ile
TyrlO4Leu
TyrlO4Met /•.i·?#?·.·
-i
Tyrl04Pro TyrlO4Ser TyrlO4Thr TyrlO4Val SerlOSAsp SerlOSGlu TrplOťSAla TrplOSAsn TrplOSAsp TrplOčCys TrplOSGln TrplOSGlu TrplOGGly TrplO6His TrpíO61le TrplO6Leu TrplO6Met TrplO6Phe Trpl06Pro TrplO6Ser TrplO6Thr TrplO6Tyr TrplO6Val IlelO7Ala IlelO7Asn IlelO7Asp IlelO7Cys IlelO7Gln IlelO7Glu IlelO7Gly IlelO7His IlelO7Leu IlelO7Met Ilel07Pro IlelO7Ser IlelO7Thr IlelO7Val
Tabulka 7
Smyčka 2 - varianty s dvojitou mutací
Val 95Gln + SerlOlGlu Gly 97Ser + GlylOOGln SerlOSGlu + TrplO6Gly Asp 99Glu + GlnlO3Asn Ala 98Gln + TrplO6Thr Gly 97Asp + IlelO7Thr GlylOOSer + GlylO2Gln Leu 96Ser + SerlOlGlu Asp 99Glu + IlelO7Ala
Leu 96Asn + Asp 99Glu GlylO2Gln + TrplOSAsp TyrlO4Leu + TrplO6Glu Tyrl04Pro + IlelO7Asp Gly 97Ser + SerlOlAsp GlylOOPro + SerlOlGlu Val 95Asn + Ala 98Asp Val 95Met + IlelO7Gly Asp 99Glu + TrplO6Cys GlylOOAsn + TrplO6Thr GlnlO3Ser + Trpl06Pro GlylO2Asp + GlnlO3Ser GlylO2Ser + TrplO6Gln SerlOlAsp + Glyl02Pro Leu 96Cys + TrplO6Asp Asp 99Glu + GlylO2Ser GlylO2Asp + TrplO6Val Gly 97Ser + TrplO6Phe GlnlO3Asp + TyrlO4Thr Ala 98His + GlylOOGln SerlO5Glu + TrplO6Leu Leu 96His + TyrlO4Thr Gly 97Pro + SerlOlGlu Val 95Thr + TrplO6Ile GlylOOAsp + TyrlO4Xle Val 95Pro + GlnlO3Asn GlnlO3Asn + TrplO6Ile Ala 98His + Glyl02Pro TrplO6Asn + IlelO7His Val 95Gln + Leu 96Asp Gly 97Asp + Ala 98Gln GlylOOSer + SerlOlGlu Val 95Asp + TyrlO4Gly TyrlO4Ala + SerlOSAsp GlylOOPro ·»· SerlO5Glu Leu 96Cys + TyrlO4Leu Val 95Gly + GlylOOSer GlylO2Gln + TyrlO4Ser Ala 98Gly + TrplO6Phe GlylOOAsp + TrplO6Phe Val 95Glu + Ala 98Gln SerlOlGlu + TyrlO4Asn Leu 96Val + SerlOlAsp GlylO2Glu + GlnlO3Asn GlylO2Glu + TrplO6Gly Ala 98Gln + GlylOOAsp GlylOOGln + GlnlO3Ser Gly 97Glu + TyrlO4Leu SerlOlAsp ♦ GlylO2Ser Ala 98His + SerlOlAsp
Gly 97Asp ♦ GlnlO3Asn
Tabulka 8
Smyčka 2 - varianty s trojitou mutací
Val 95Gln 4 Leu 96Thr + SerlOlGlu
Ala 98His + GlnlO3Glu + TrplO6Cys Ala 98Gln + SerlOlGlu + TyrlO4Met SerlOlAsp + GlnlO3Ser 4 IlelO7Cys Ala 98Pro 4 Asp 99Glu 4 Glyl02Pro Val 95Pro + Gly 97Glu + GlylOOGln SerlOlGlu + Glyl02Pro + IlelO7His Leu 96Pro + GlylOOPro + GlylO2Asn GlylOOGlu + GlylO2Asn 4- TrplO6Tyr Ala 98Asn + GlnlO3Glu 4- IlelO7Ser Gly 97Pro + GlylOOAsp + TrplO6Met GlnlO3Asn 4* TyrlO4Leu + SerlOSAsp Gly 97Pro 4· Ala 98Gln 4- TyrlO4Cys Ala 98Gly 4- GlylOOGlu 4- GlnlO3Ser Leu 96Ile 4- Gly 97Pro 4- SerlOSAsp Ala 98Pro 4- GlylOOPro 4- IlelO7Ala Val 95Pro 4- GlnlO3Asp 4- IlelO7Met Val 95Gln 4· SerlOlGlu 4- TrplO6Phe Leu 96Val 4- SerlOlGlu 4- llel07Pro Leu 96Gly 4· Gly 97Glu 4- TrplO6Thr Gly 97Asp 4· TyrlO4Ser 4- TrplO6His Gly 97Ser 4· GlylOOPro 4· TyrlO4Cys GlnlO3Ser 4- SerlOSAsp + IlelO7His Ala 98Glu 4- TyrlO4Cys 4· TrplO6Phe Val 95Gln 4· GlylOOPro 4· GlylO2Ser Val 95Ala 4- GlylO2Asp 4- TyrlO4Ser Val 95Ala 4- Leu 96Met 4· SerlOSAsp GlylO2Gln 4- TrplO6Leu 4- IlelO7Gly Leu 96Asn 4- Gly 97Glu 4· Ilel07Pro GlylOOPro 4- GlylO2Gln 4- GlnlO3Glu Gly 97Asp 4- Ala 98Asn 4- TrplO6Leu Ala 98Gln 4· GlylOOPro 4- TrplO6His Leu 96Thr 4· GlylOOAsn 4· SerlOSGlu Val 95Ser 4- Leu 96Asn 4- Gly 97Pro GlylOOGln 4- SerlO5GÍu 4- TrplO6Gln Gly 97Glu 4- TyrlO4Thr 4- TrplO6Val Leu 96Ala + Ala 98Gln 4- GlylOOGlu Val 95His 4- Gly 97Gln 4- SerlOlGlu Val 95Pro 4- GlylO2Asn 4- GlnlO3Glu GlnlO3Asn 4- TrplO6Ile 4· IlelO7Ala Gly 97Ser 4- Ala 98Glu 4- TyrlO4Gln Val 95Glu 4· Leu 96Ile 4- IlelO7Gln Leu 96Gln 4- Ala 98Ser 4- Asp 99Glu Leu 96Pro 4- SerlOlGlu 4· Glyl02Pro Gly 97Asn 4- Ala 98Pro 4- GlylOOPro
Gly 97Asn + Ala 98Glu + GlylOOAsn Glyl02Pro + TrplOfiAla + IÍel07Pro GlylOOSer + GlylO2Glu + írplO6Cys Leu 96Thr * GlylO2Glu + IlelO7Val Leu 96Cys + TrplO6Leu + Ilel07Pro Leu 96Thr + SerlO5Glu + TrplO6Tyr Leu 96Ala + GlylOOAsp + SerlOlAsp Gly 97Asn + SerlOlGlu +.GlylO2Asp Val 95Gln + SerlOlAsp + GlylO2Asp Asp 99Glu + GlylOOAsp + TrplO6Phe TyrlO4Glu + SerlOSAsp + llelO7Asp Leu 96Glu + SerlOlGlu + TrplO6Val TyrlO4Met + SerlOSAsp * IlelO7Asp Gly 97Asp + GlylOOAsp + Trpl06Pro Val 95Ala + Gly 97Asp + Asp 99Glu
Tabulka 9
Smyčka 2 - varianty se čtyřnásobnou mutací
Leu 96Gln + Gly 97Ser + SerlOlGlu + TrplO6Val Val 95Ala + Ala 98Gln + GlylOOAsn + GlnlO3Asp Val 95Gln + TyrlO4Ile + TrplO6Gly + Ilel07Pro Val 95Met + Leu 96Gly + GlylOOPro + TrplO6Gly Ala 98Gln + GlylOOPro + TyrlO4Thr + TrplO6His Gly 97Pro + Ala 98His + GlylOOPro + IlelO7Asp Ala 98Pro + GlylOOGlu + TrplO6Ser + IlelO7Met Leu 96Gln + Gly 97Ser + SerlOSAsp + IlelOTVal Ala 98Gly + SerlOlAsp + TrplO6Ala + IlelO7Gln Val 95Ser + Gly 97Ser + Asp 99Glu + GlnlO3Ser Leu 96Thr + Gly 97Ser + Asp 99Glu + TyrlO4Asn Val 95Thr + Leu 96Gln + Ala 98Pro + SerlO5Glu Val 95Gly + Gly 97Ser + TyrlO4Asn + TrplO6Glu Leu 96Gln + Gly 97Ser + TyrlO4Thr + IlelO7Glu Val 95Ser + Leu 96Pro + GlylOOGln + SerlOlAsp Leu 96Met + GlylOOSer + SerlOlAsp + TrplOSAsn Leu 96Ile + Ala 98Ser + GlylOOPro + GlylO2Glu Val 95Asn + Ala 98Gly + GlnlO3Ser + TyrlO4Val Gly 97Asn + Asp 99Glu + GlylO2Asn + TrplO6His Gly 97Ser + GlylO2Asp + GlnlO3Asp + IlelO7His Val 95Pro + GlylOOGlu + SerlOlGlu + TyrlO4Gly Ala 98Pro + GlylOOAsp + SerlOlAsp + IlelO7Cys Leu 96Gly + SerlOlAsp + GlylO2Asp + IlelO7Gly Val 95His + TyrlO4Asp + SerlOSAsp + TrplO6Ala Glyl02Pro + SerlOSAsp + TrplO6Asp + IlelO7Thr Leu 96Glu + Ala 98Gln + GlylO2Asp + Tyrl04Pro Ala 98Thr + Asp 99Glu + GlylOOGlu + SerlOlGlu Gly 97Ser + Ala 98Glu + Asp 99Glu + GlylOOGlu Leu 96Asp + Gly 97Glu + GlylOOGlu + IlelO7Asn Leu 96Asn + GlylOOAsp + SerlOlAsp + GlylO2Glu Val 95Gly + SerlOlGlu '♦ GlylO2Asp + GlnlO3Asp
v
Val 95His Leu 96Glu Gly 97Asp Gly 97Glu Leu 96Ile GlnlO3Asp Val 95Pro Val 95His Leu 96Asn Ala 98Asp Leu 96Thr Val 95Glu Leu 96Gly GlylO2Glu Asp 99Glu Asp 99Glu GlylO2Glu Val 95His Gly 97Ser Val 95Glu Val 95Thr Val 95Glu Leu 96Ala Val 95Asp Val 95Pro Leu 96Asn Leu 96Asn Leu 96Ser Leu 96Thr
Leu 96Glu + GlylOOGln 4 GlylOOAsp 4 Asp 99Glu + Gly 97Gln + SerlOSAsp
4- Ala 98Pro + Asp 99Glu + Asp 99Glu 4- Asp 99Glu 4- Gly 97Glu + GlylO2Asp + GlylO2Asp 4- GlnlO3Glu 4- SerlOlGlu 4- SerlOlGlu + GlnlO3Asn 4- Leu 96Val 4- GlylO2Ser 4- Leu 96Asp 4· GlylO2Glu 4 Gly 97Glu 4· Gly 97Pro 4- Leu 96Asp 4- GlylO2Glu 4 GlylO2Asp 4- GlylO2Asp 4- Gly 97Gln 4- Asp 99Glu
GlylOOGln 4 4- SerlOlAsp + 4- GlylOŽPro + 4- GlylOOPřo 4 4- GlnlO3Glu + 4- TrplO6Asn + 4 GlnlO3Glu + 4· SerlOlGlu 4 4· GlylOOAsn + 4- SerlOlAsp 4 4- GlylOOGlu 4· 4- TyrlO4Ser 4 4- GlnlO3Asp ♦ 4- SerlOSGlu 4 4· GlylO2Glu 44 GlylO2Glu 4 4· TyrlO4Asp 4 + GlnlO3Glu 4 4- GlnlO3Glu 4 4 GlnlO3Asp 4 4 TrplO6Tyr 4 4 Ala 98Gly 4 4 Ala 98Asp 4 4 TyrlO4Glu 4 4 Tyrl04Pro 4 4 GlnlO3Asn 4 4 TyrlO4Ala 4 4 GlylO2Glu 4 4GlylO2Asp4
SerlOlGlu GlylO2Ser IlelO7Gly TyrlO4Ser SerlO5Glu IlelO7His SerlOSAsp Gly102Pro SerlOlGlu Ilel07Pro GlylO2Asp IlelO7Glu SerlO5Glu TrplO6Cys GlnlO3Asn TrplO6Gly IlelO7Thr IlelO7Glu IlelO7Glu IlelO7Asn IlelO7Asp GlylOOAsp SerlOlAsp IlelO7Ser SerlOSAsp SerlO5Glu SerlO5Glu SerlOSAsp IlelO7Gly
Tabulka 10
Smyčka 3 - varianty s jedinou mutací
Leul26Ala
Leul26Asn
Leul26Asp
Leul26Cys
Leul26Gln
Leul26Glu
Leul26Gly
Leul26His
Leul26Ile .
Leul26Met
Leul26Pro
Leul26Ser
Leul26Thr
Leul26Val
Glyl27Asn
Glyl27Asp
Glyl27Gln
Glyl27Glu
Glyl27Pro
Glyl27Ser
Glyl28Asn
Glyl28Asp
Glyl28Gln
Glyl28Glu
Glyl28Pro
Glyl28Ser
Prol29Asn
Prol29Asp
Prol29Gln
Prol29Glu
Prol29Gly
Prol29Ser
Serl30Asp
Serl30Glu
Glyl31Asn
Glyl31Asp
Glyl31Gln
Glyl31Glu
Glyl31Pro
Glyl31Ser
Serl32Asp
Serl32Glu
Alal33Asn
Alal33Asp
Alal33Gln
Alal33Glu
Alal33Gly
Alal33His
Alal33Pro
Alal33Ser
Alal33Thr
Tabulka 11
Smyčka 3 - varianty s dvojitou mutací
Leul26Gln + Serl30Glu
Glyl31Gln + Alal33Asn Prol29Asp + Glyl31Gln Glyí28Ser + Serl30Glu Leul26Pro + Alal33Gly Glyl27Asp + Alal33Gly Leul26Asp + Prol29Gln Glyl31Asn + AIal33Gln Glyl27Pro + GlyI31Glu Glyl28Asn + Glyl31Asp Prol29Gln + Serl30Glu Glyl28Pro + Serl30Asp
Glyl28Gln Gly128 Asn Leul26Val Leul26Val Leul26Cys Glyl27Asp Glyl28Pro Glyl27Ser Leul26His Glyl31Pro Glyl27Ser Prol29Asn Leul26Val Prol29Gly Leul26Val Prol29Glu Prol29Gly Leul26His Glyl28Asn Glyl27Pro Glyl27Gln Glyl28Pro Glyl28Asn Leul26Cys Prol29Asn Leul26Ser Glyl28Glu Prol29Asn Leul26Ser Prol29Gln Glyl27Asp Glyl28Gln Glyl27Pro Prol29Gln Leul26Val Glyl28Ser Leul26Asn Leul26Ile Glyl28Ser Glyl27Ser Leul26Cys Glyl27Pro Leul26His Glyl31Ser Glyl31Pro Glyl31Asp Leul26Asp Leul26Glu + Prol29Ser 4- Prol29Gly 4- Serl30Asp + Prol29Ser + Prol29Glu + Alal33Thr + Prol29Glu + Glyl31Asp 4 Prol29Asp
Alal33Glu + Glyl28Ser 4- Glyl31Glu 4- Prol29Asp 4- Alal33Asp 4- Serl30Glu 4- Alal33Pro 4- Serl30Asp 4- Glyl28Glu 4- Serl32Glu 4- Serl32Asp 4· Prol29Gln 4- Prol29Asp 4- Serl30Glu 4· Prol29Asn 4- Serl32Glu 4- Serl32Asp 4- Glyl31Ser 4- Serl30Asp + Serl32Glu 4· Glyl31Pro 4- Glyl28Gln 4- Prol29Glu 4- Prol29Gly 4- Alal33Gln 4· Glyl28Asp + Serl32Glu 4- Prol29Gly 4- Alal33Gly 4- Glyl31Gln 4- Serl30Asp 4- Serl32Asp 4- Serl30Glu 4- Alal33Asp 4- Alal33Glu 4· Alal33Gln 4- Alal33Ser 4- Alal33Asn 4- Prol29Gln
Tabulka 12
Smyčka 3 - varianty s trojitou mutací · Leul26His + Prol29Glu + Alal33Asn
Leul26Asp + Glyl28Ser + Glyl31Gln Pro129 Asn + Glyl31Ser + Serl32Glu Glyl28Pro + Prol29Asn + Serl30Glu Glyl28Gln + Serl30Glu + Alal33Ser Glyl31Gln + Serl32Glu + Alal33Gln Glyl28Asp + Glyl315er + Alal33Asn Glyl31Ser +Serl32Asp + Alal33Pro Prol29Ser + Glyl31Gln + Alal33Glu Glyl28Asn 4 Serl30Glu + Glyl31Gln Leul26Gly + Glyl27Gln + Glyl31Pro Leul26Pro + Glyl27Glu + Glyl28Pro Leul26Ser + Prol29Ser + Serl32Asp Glyl28Ser + Serl32Glu + Alal33Asn Leul26Val + Serl32Glu + Alal33Gln Prol29Gly + Serl30Glu + Glyl31Pro Leul26Thr + Glyl27Pro + Alal33Asn Leul26His + Serl30Asp + Alal33Pro Leul26Cys + Glyl27Ser + Prol29Ser Leul26Gly + Serl32Asp + Alal33Ser Glyl28Gln + Prol29Gln + Glyl31Asn Glyl28Asp + Glyl31Asn + Alal33HÍs Leul26Cys 4 Serl30Glu 4- Alal33Gly Glyl27Ser + Serl30Asp* Alal33Gly Leul26His + Prol29Asn + Serl30Asp Leul26Asn + Glyl31Asp + Alal33Gln Leul26Met + Glyl28Asn + Serl32Asp Leul26Glu + Glyl27Gln + Alal33His Leul26Met + Serl32Asp + Alal33HÍS Serl30Glu + Glyl31Gln + Alal33Gln Glyl27Pro + Glyl28Ser + Alal33Ser Leul26Ala + Prol29Gly + Serl32Glu Glyl31Asn + Serl32Asp + Alal33Asn Leul26Val + Glyl31Asp + Alal33Ser Leul26Ser + Glyl27Asn + Alal33Gln Prol29Gln + Serl30Glu + Alal33His Leul26Met + Glyl27Ser + Serl30Asp Leul26Cys + Prol29Asn + Glyl31Asp Prol29Ser + Serl30Asp + Alal33Asn Leul26Ser + Prol29Gly + Serl32Glu Glyl27Ser + Prol29Gln + Serl32Asp Glyl27Pro + Glyl28Asn + Prol29Gln Leul26His + Serl32Asp + Alal33Asn Glyl28Pro + Prol29Glu + Alal33Thr Prol29Ser + Glyl31Glu + Alal33Pro Leul26His + Glyl28Pro + Prol29Gln
Leul26Met
Glyl28Pro
Glyl3IAsp
Glyl28Glu
Prol29Ser
Leul26Asn
Prol29Asn
Leul26His
Prol29GIu
Glyl27Ser
SerI30Asp
Glyl28Asp
Leul26Met
Glyl28Asp + Glyl27Asp + Glyl31Glu + Serl32Glu + Prol29Glu + Serl32Glu + Serl30Glu + Serl30Glu + Serl30Glu * Serl30ksp + Prol29Asp + Glyl31Asp + Serl30Glu 4- Glyl28Glu + Prol29Asn + Glyl28Asp 4- Serl32Asp 4- Alal33Pro 4- Alal33Asn 4- Alal33Glu 4- Glyl31Asp 4- Glyl31Asp +. Glyl31Glu 4- GIyl31Asn 4- Serl30Asp 4- Serl32Asp 4- Glyl31Asn 4- Serl30Asp 4· Serl30Glu
Tabulka 13
Saycka 3 - varianty se čtyřnásobnou mutací
Leul26Ser 4- Prol29Asn Leul26Met 4· Prol29Ser Glyl27Ser 4- Glyl31Gln Leul26Asn 4- Glyl27Pro Leul26Asn 4- Prol29Gly Leul26Gly 4- Prol29Gly Leul26Gly + Glyl27Asp Glyl27Asn 4· Prol29Gln Leul26Pro 4- Glyl27Ser Leul26Ala 4- Glyl27Gln Leul26Asn 4- Glyl27Ser Glyl28Gln 4- Prol29Gln Leul26His 4- Glyl28Ser Leul26Gln 4- Prol29Ser Leul26Val 4- Glyl28Pro Leul26Val 4- Prol29Gly Leul26Thr 4- Glyl27Pro Glyl28Asp 4- Prol29Gly Leul26Asn 4- Glyl28Glu Leul26Pro 4· Glyl27Pro Glyl27Pro 4- Glyl28Gln Leul26Ile 4- Glyl27Gln Leul26Val 4- Glyl31Asp Glyl28Asp + Prol29Asp Prol29Asn 4- Glyl31Ser Leul26Gln 4- Glyl31Pro Glyl27Pro 4- Serl30Glu Leul26Gln 4- Prol29Gln Glyl27Ser 4- Serl30Asp Leul26Ser 4- Glyl27Pro Serl30Glu 4- Glyl31Glu Glyl27Gln 4- Serl30Glu
4- Serl30Asp 4· Alal33His 4- Serl32Glu 4- Alal33Asn 4- Serl32Glu 4- Alal33Gln 4- Glyl28Glu 4- Prol29Gly 4- Glyl31Asp 4- Alal33Gly 4- Serl32Glu + Alal33Pro + Prol29Gly 4- Glyl31Pro 4- Glyl31Asp 4- Alal33Gly 4- Glyl28Gln 4- Serl30Glu + Prol29Asn 4· Serl30Glu 4· Serl30Glu 4- Alal33Thr 4- Serl30Asp 4- Glyl31Ser 4- Glyl31Ser 4- Serl32Asp 4- Serl30Asp 4- Alal33His 4- Prol29Asn 4- Alal33Asp 4- Serl30Glu 4- Alal33Thr 4- Serl32Glu 4· Alal33Thr 4- Glyl31Pro 4- Alal33Ser 4- Prol29Gln 4- Glyl31Pro 4- Prol29Ser 4· Serl30Asp 4- Glyl31Glu 4· Serl32Glu + Glyl31Asp 4- Serl32Glu 4- Serl32Asp 4- Alal33Pro 4· Glyl31Asn 4- Alal33Pro 4- Serl32Asp + Alal33Asp 4> SerI32Asp 4- Alal33Asp 4- Glyl31Glu 4- Alal33His + Serl30Asp 4- Glyl31Glu + Glyl31Glu 4- Alal33Gln 4- Prol29Glu 4- Serl30Glu 4· Serl32Glu 4· Alal33Ser 4- GIyl31Asp 4- Serl32Asp
GlyI28Gln + Serl30Glu + Glyl27Asn + Serl30Glu + Glyl27Ser + Prol29Asp + GIyl27Asn + Prol29Asp + Glyl28Asn + Prol29Glu + Leul26Ser + Glyl28Asp + GlyI27Asn + Glyl28Asp + Glyl28Glu + Serl30Glu + Leul26Val + Serl30Asp 4Prol29Ser + Serl30Glu + Leul26His + Serl30Glu + Leul26Ala + Serl30Glu + Glyl27Pro + Glyl28Gln + Leul26Ser + Serl30Asp + Serl30Glu + Glyl31Pro + Glyl28Gln + Serl30Asp + Leul26Ala 4- Prol29Asn + Glyl27Gln + Glyl28Pro + Glyl28Gln + Prol29Asp + Leul26Asn + Prol29Glu + Leul26Met + Prol29Glu + Glyl27Asp + Glyl28Gln + Leul26His + Prol29Gly + Glyl28Glu + Prol29Gly + Prol29Gly + Serl30Glu + Leul26Gln + Serl30Glu + Leul26Gly + Prol29Asp + Prol29Asp + Serl30Glu 4Glyl31Asp 4- Serl32Asp Glyl31Asp 4- Serl32Asp Serl30Glu 4- Glyl31Glu Serl30Asp 4- Glyl31Asp Serl30Glu 4· Glyl31Asp Serl30Glu 4- Alal33Pro Serl30Glu 4- Alal33Pro Glyl31Pro 4· Alal33His Serl32Asp 4- Alal33Asn Serl32Asp + Alal33Gly Serl32Asp 4- Alal33His Serl32Glu 4· Alal33Asn Serl30Asp 4- Serl32Glu Glyl31Pro 4- Serl32Asp Serl32Glu 4- Alal33Ser Glyl31Ser + Serl32Glu Serl30Asp 4- Serl32Glu Prol29Glu 4- Glyl31Asp Glyl31Glu 4- Alal33Asn Glyl31Asp 4- Alal33Ser Glyl31Glu 4· Alal33Thr Prol29Asp 4- Alal33Gln GIyi31Glu 4- Alal33Glu Glyl31Asp 4- Alal33Asn Serl32Asp 4- Alal33Glu Serl32Glu 4- Alal33Glu Seťl30Glu 4- Serl32Glu Glyl3ISer 4· Serl32Asp
Tabulka 14
Smyčka 4 - varianty s jedinou mutací
Glyl54Asn
Glyl54Asp
Glyl54Gln
Glyl54Glu
Glyl54Pro
Glyl54Ser
Asnl55Asp
Asnl55Gln
Asnl55Glu
AsnlSSSer
Glul56Asp
Glyl57Asn
Glyl57Asp
Glyl57Gln
Glyl57Glu
Glyl57Pro
Glyl57Ser
Thrl58Asn
Thrl58Asp
Thrl58Gln
Thrl58Glu
Thrl58Gly
Thrl58Pro
Thrl58Ser
Serl59Asp
Serl59Glu
Glyl60Asn
Glyl60Asp
Glyl60Gln
Glyl60Glu
Glyl60Pro
Glyl60Ser
Serl61Asp
Serl61Glu
Serl62Asp
Serl62Glu
Serl63Asp
Serl63Glu
Thrl64Asn
Thrl64Asp
Thrl64Gln
Thrl64Glu
Thrl64Gly
Thrl64Pro
Thrl64Ser
Vall65Ala
Vall65Asn
Vall65Asp
Vall65Cys
Vall65Gln
Vall65Glu
Vall65Gly
Vall65His
Vall65Met
Vall65Pro
Vall65Ser
Vall65Thr
Glyl66Asn
Glyl66Asp
Glyl66Gln
Glyl66Glu
Glyl66Pro
Glyl66Ser
Tyrl67Ala
Tyrl67Asn
Tyrl67Asp
Tyrl67Cys
Tyrl67Gln
Tyrl67Glu
Tyrl67Gly
Tyrl67His
Tyrl67Ile
Tyrl67Leu
Tyrl67Met
Tyrl67Pro
Tyrl67Ser
Tyrl67Thr
Tyrl67Val
Tabulka 15
Smyčka 4 - varianty s dvojitou mutací
Ásnl55Ser + Glul56Asp
Glyl54Ser + Tyrl67Gln Glyl54Glu + Vall65Ala Asnl55Glu + Thrl64Pro Glyl57Pro + Serl59Asp Glyl54Ser + Serl61Asp Serl61Glu + Vall65Pro Glyl54Gln + Serl61Glu AsnlSSAsp + Thrl58Pro Thrl64Asn + Glyl66Gln Asnl55Glu + Tyrl67His Glul56Asp + Thrl58Gly Glyl54Pro + Glyl57Glu Asnl55Ser + Tyrl67Asp Thrl58Pro + Glyl66Asp Thrl64Gln + Tyrl67Glu Glyl57Gln + Thrl58Glu Thrl58Asn + Serl62Asp Glyl54Asn + Tyrl67Glu Glyl57Gln + Serl61Asp Thrl64Asp + Tyrl67Ala Glyl60Asp + Vall65His Glyl54Glu + Glyl57Ser Glul56Asp + Tyrl67Ile Asnl55Ser + Thrl58Asp Glyl57Gln + Thrl64Pro Thrl64Ser + Tyrl67Ile Serl59Glu + Tyrl67Thr Thrl64Glu + Vall65Gln Thrl58Gly + Glyl60Ser Serl61Asp + Glyl66Pro Glyl54Glu + Glyl66Ser Glyl60Asp + Vall65Asn Serl62Glu + Vall65Gln Glyl57Asn + Serl59Glu Serl61Asp + Vall65Asn .·/ >1
Asnl55Asp 4- Vall65Pro Glul56Asp + Glyl66Ser Glyl54Pro 4 Serl59Asp Glyl54Ser + Tyrl67Cys Glyl60Pro + Thrl64Asp Serl61Glu + Vall65Gly Serl62Glu + Tyrl67Asn Glyl54Asn 4- Glyl66Glu Serl61Glu + Tyrl67Ala Glyl60Gln + Vall65Pro Glyl54Glu 4- Vall6SGly Glyl60Ser 4- Serl63Asp Glyl57Glu 4* Thrl58Asn Glyl60Asp 4- Vall65Pro Glyl60Asn 4- Serl62Asp Thrl64Gln 4- Glyl66Gln Asnl55Ser 4- Thrl58Gln Serl61Glu 4 Tyrl67Gly Serl62Asp 4- Glyl66Ser Glyl54Glu 4- Thrl58Gly Glyl54Ser + Thrl58Ser Glyl57Asp 4- Glyl60Pro Serl63Glu 4- Vall65His Glyl54Pro 4 Glyl66Asp
Tabulka 16
Smyčka 4 - varianty s trojitou mutací
Glyl54Gln 4 Asnl55Ser 4- Glul56Asp Glyl54Ser 4 Glyl60Asp 4 Tyrl67Gln Asnl55Glu 4 Glyl57Ser ♦ Thrl64Pro Glyl57Asn 4 Serl59Asp 4- Glyl60Ser Glul56Asp 4- Glyl60Ser 4· Vall65Thr Glyl60Pro 4 Serl62Glu 4 Thrl64Asn Glyl54Ser 4- Glul56Asp 4 Thrl58Gln Glyl60Asn 4- Serl62Glu 4- Glyl66Ser Glyl60Ser ♦ Vall65Gly 4· Glyl66Gln Thrl58Gln 4 Serl62Asp 4 Tyrl67Val Glyl57Gln 4· Serl62Glu 4 Tyrl67Leu Serl62Glu + Thrl64Gln 4· Vall65Cys Glyl57Ser 4 Vall65Met 4· Glyl66Glu Glyl54Ser 4 Glul56Asp + Glyl66Pro Thrl58Ser + Serl61Asp + Thrl64Gly Glul56Asp + Glyl57Ser .4- Glyl60Asn Glyl54Gln 4- Asnl55Asp 4· Glyl66Ser Serl63Glu 4· Vall65Thr 4 Tyrl67Pro Glyl57Asp + Thrl58Gln 4- Vall65Ser Glyl57Asn 4· Serl59Asp + Glyl66Ser Glyl60Gln 4- Serl63Glu 4- Vall65Met Glyl54Asn 4 Asnl55Asp 4- Glyl57Pro
Glul56Asp + Thrl58Asn + Glyl54Asn + Asnl55Glu + Thrl58Glu + Asnl55Gln + Asnl55Ser + Glyl54Gln + Serl63Glu + Asnl55Ser + Glyl57Asp + Serl63Asp + Serl63Asp + Glul56Asp + Glyl57Gln + Serl61Asp + Glyl54Asn + Serl59Asp + Serl59Glu + Thrl58Asp + Serl61Glu + Serl61Glu + Asnl55Glu + Glyl57Glu + Serl61Asp + Glyl57Glu + Glyl57Glu + Glyl57Asp + Serl59Glu + Serl59Asp + Thr158Asp + Thrl58Glu + Thrl58Glu + Glyl57Ser + Thrl58Asp + Thrl58Glu + Glul56Asp + Asnl55Glu +
Thrl58Asn + Glyl60Glu + Glyl57Pro + Glyl57Ser + Glyl6OSer + Glul56Asp + Serl62Glu + Thrl58Gly +· Vall65Ala + Glyl60Glu + Thrl64Ser + Thrl64Glu + Thrl64Asp + Glyl57Asp * Glyl66Asp + Serl62Glu + Serl59Glu + Serl62Glu + GlylGOSer + Serl61Glu + Serl63Asp + Serl63Glu + Glul56Asp + Thrl64Glu + Serl63Glu + Thrl58Gln + Serl59Asp + Serl63Glu + Serl63Asp + Serl63Asp + Serl61Asp + Serl62Asp + Serl62Asp + Thrl58Asp + Serl63Glu + Serl63Asp + Glyl66Glu + Glyl57Pro +
Vall65Cys
Thrl64Pro
Thrl58Gln
Thrl58Gln
Tyrl67Val
Thrl64Ser
Vall6SMet
Glyl66Asp
Glyl66Asn
Thrl64Gln
Glyl66Pro
Tyrl67Met
Vall65Met
Thrl64Gln
Tyrl67Glu
Tyrl67His
Serl62Glu
Vall65Cys
Serl61Asp
Serl62Glu
Thrl64Ser
Vall65His
Thrl58Glu
Vall65Gly
Thrl64Glu
Serl59Glu
Tyrl67Cys
Thrl64Glu
Thrl64Gly
Thrl64Asn
Serl63Glu
Thrl64Asn
Vall65Thr
Serl62Glu
Thrl64Asn
Tyrl67Gly
Tyrl67Ile
Thrl64Asp
Tabulka 17
Smyčka 4 - varianty se čtyřnásobnou mutací
SerlS9Glu + Thrl64Ser + Vall65Thr + Glyl66Přo
Asnl55Ser + Glyl57Pro + Vall65Ser + Glyl66Glu
Glyl57Asn + Vall65Pro + Glyl66Glu + Tyrl67Val t Thrl58Ser + Glyl60Gln + Vall65His + Glyl66Asp
Glyl54Ser + Glyl57Pro + Serl63Glu + Thrl64Ser
Glyl57Gln + Glyl60Asp + Thrl64Ser + Vall65Asn
Glyl57Asn + Glyl60Asp + Vall65Cys + Tyrl67Leu
Glul56Asp + Thrl58Ser + Vall65Asn + Glyl66Pro
Glul56Asp + Thr158Pro Asnl5SGln + Glul56Asp Thrl58Gly + Glyl60Ser Serl59Asp + Glyl60Gln Glyl54Pro + Thrl64Gln Glyl54Asn 4- Glyl60Pro Asnl55Ser + Glyl57Asn Gly157Asn 4 Thrl58Asn Glyl60Glu + Serl61Asp Asnl55Glu + Glul56Asp Asnl55Asp + Glul56Asp Asnl55Asp + Glul56Asp Glyl54Ser + Thrl58Gln Glyl54Asn 4- Asnl55Gln Glul56Asp 4- Glyl57Glu Glul56Asp 4- Glyl57Glu Glyl54Pro 4- Glyl57Pro Glyl54Ser 4· Gly 157Asn Glyl57Pro 4- Glyl60Pro Glyl54Asn 4· Serl61Glu Glyl54Asp 4 Asnl55Asp Glyl54Gln 4 Serl59Glu Thrl58Ser 4· Serl59Asp Asnl55Ser 4- Glul56Asp Glyl57Asn 4 Serl59Asp Glyl54Asn + Glul56Asp Glyl57Gln 4- Glyl60Asp Glyl60Glu 4- Serl62Asp Glyl54Asp 4 Asnl55Ser Glyl54Asp 4 Glul56Asp Glyl54Gln 4 Glyl57Pro Serl59Glu 4 Serl61Asp Serl59Asp 4 Serl61Asp Glul56Asp 4 Thrl58Glu Glul56Asp 4 Thrl58Asp Asnl55Gln 4 Thrl58Asp Serl63Glu + Thrl64Asp Serl61Asp 4 Serl63Asp Serl61Asp 4 Serl63Glu Glyl57Pro 4 Serl59Glu Glyl54Pro 4 Glul56Asp Asnl55Asp + Glul56Asp Glul56Asp 4 Serl59Asp Thrl58Gln + Serl59Asp Glyl54Gln 4 Serl59Asp Asnl55Ser 4 Glyl60Asp Glyl54Gln 4 Glyl60Asp Glul56Asp 4 Glyl60Pro Glyl60Glu 4 Serl63Asp Glyl60Glu 4- Serl63Glu
Thrl64Gln 4 Vall65Pro 4 Thrl64Gly 4 Vall65Thr 4- Serl63Asp 4 Tyr 167Asn + Glyl66Ser 4 Tyrl67Pro 4· Vall65Gly 4 Glyl66Asp 4 Serl61Glu 4- Glyl66Pro 4· Thr 164Gin 4- Tyrl67Asp 4· Serl63Glu 4- Vall65Gln 4· Vall65Met 4 Tyrl67Pro 4· Thrl58Gln 4· Glyl66Pro 4 Vall65Asn 4 Glyl66Asn 4 Glyl60Ser 4 Thrl64Asn 4- Serl62Glu + Serl63Glu 4- Serl63Glu 4 Thrl64Glu 4 Glyl60Gln 4 Thrl64Gly 4- Thrl58Ser 4 Vall65Cys 4- Thrl58Asp 4 Serl59Asp 4- Thrl58Glu 4- Serl59Glu 4 Glyl66Asp 4 Tyrl67Glu 4 Serl62Glu 4 Tyrl67Asn 4· Thrl64Gln 4 Glyl66Asn 4- Glyl60Glu 4 Serl61Asp 4· Glyl60Asp + SerlSlAsp 4 Glyl57Asp 4 Thrl58Glu 4- Serl61Glu 4 Ser 162Glu 4- Glyl57Glu 4 Thrl64Glu 4- Serl62Asp 4 Vall65Thr + Thrl64Asn 4 Glyl66Gln 4- Glul56Asp 4 Thrl64Ser 4 Glyl57Glu 4 Thrl58Gly 4- Serl59Asp 4 Serl61Asp 4 Glyl66Ser 4 Tyrl67His 4 Glyl66Pro 4 Tyrl67Ser 4 Vall65Ala 4 Glyl66Gln 4 Glyl66Pro 4 Tyrl67Ala 4 Thrl64Asp 4 Tyrl67Val + Vall65Met 4 Glyl66Glu 4- Vall65Thr 4 Tyrl67His 4 Thrl64Gln 4 Glyl66Asn 4 Serl61Asp 4 Serl63Clu 4 Serl63Asp 4 Thrl64Glu 4 Thrl58Asp 4 Thrl64Asn 4 Thrl64Asp 4 Vall65Ala 4 Serl63Glu 4 Vall65Cys 4 Serl63Asp 4 Glyl66Pro 4 Serl62Glu 4 Thrl64Asp 4- Serl62Glu 4 Thrl64Glu 4 Vall65Pro 4 Glyl66Glu 4 Thrl64Gly 4 Tyrl67Leu 4 Thrl64Pro 4 Glyl66GXn
Asnl55Asp + Thrl58Pro + Serl63Glu + Thrl64Asp Asnl55Ser 4- Glul56Asp 4- Serl63Asp 4- Glyl66Glu
Tabulka 18
Smyčka 5 - varianty s jedinou mutací
Alal87Asn
Alal87Asp
Alal87Gln
Alal87Glu
Alal87Gly
Alal87His
Alal87Pro
Alal87Ser
Alal87Thr
Serl88Asp
Serl88Glu
Phel89Ala
Phel89Asn
Phel89Asp
Phel89Cys
Phel89Gln
Phel89Glu
Phel89Gly
Phel89His
Phel89Ile
Phel89Leu
Phel89Met
Phel89Pro
Phel89Ser
Phel89Thr
Phel89Tyr
Phel89Val
Serl90Asp
Serl90Glu
Serl91Asp
Serl91Glu
Tabulka 19
Smyčka 5 - varianty s dvojitou mutací
Alal87Asp 4· Alal87Ser 4Serl88Glu 4Alal87Asp + Alal87Asn 4· Alal87Gln 4Alal87Glu 4Alal87Pro 4·
Phel89Gln
Serl88Asp
Phel89Pro
Phel89His
Serl91Glu
Serl91Asp
Phel89Pro
Phel89Asp
Serl88Asp + Phel89His + Serl88Glu + Alal87HiS + Alal87Asn + Serl88Glu + Alal87Asp + Serl88Asp + Alal87Gln + Alal87Ser + Alal87Pro + Serl88Glu + Phel89Ser + Alal87Gly + Alal87Asn + Alal87Thr + Alal87His + Serl88Glu + Alal87Ser + Serl88Glu + Phel89Asn + Alal87Gln + Alal87Gln + Alal87Ser + Phel89Val + Serl88Glu + Alal87Pro + Phel89Asn + Phel89Ile + Alal87Glu + Alal87His + Serl88Asp + Alal87Gly + Serl88Asp + Alal87Gly + Alal87Gln + Phel89Tyr + Alal87Ser + Alal87Thr + Alal87Asn + Alal87Gly + Alal87Gly + Phel89Cys + Alal87Asp + Serl88Asp + Serl88Asp + Alal87Asn + Alal87Pro + Phel89Met + Alal87Thr +
Phel89Cys
Serl91Asp
Phel89Ala
Serl88Asp
Serl88Glu
PheI89Gln
Phel89Ser
Phel89Val
Serl88Glu
Serl88Glu
Serl91Asp
Phel89Val
Serl91Glu
Serl91Glu
Serl91Asp
Serl9IAsp
Serl88Glu
Phel89Gly
Phel89Ile
Phel89Met
Serl91Asp
Phel89Tyr
Serl91Glu
Phel89Ala
Serl91Asp
Phel89Leu
Serl88Glu
Serl91Glu
Serl91Asp
Phel89Met
Serl91Glu
Phel89Tyr
Phel89Val
Phel89Gln
Phel89Tyr
Phel89Asp
Serl91Glu
Serl91Asp
Serl88Glu
Serl88Asp
Serl88Asp
Phel89Cys
Serl91Glu
Phel89Gly
Phel89Leu
Phel89Gly
Phel89Asp
Serl91Glu
Serl91Asp
Serl88Asp
Phel89Ala + Serl91Glu Phel89Leu 4 Serl91Glu
Tabu1ka~20
Smyčka 5 - varianty s trojitou mutací
Alal87Pro 4 Phel89Cys 4 Serl91Glu
Alal87Thr 4 Phel89Tyr 4 Serl91Glu Alal87Ser 4 Serl88Glu 4· Phel89Ser Alal87Gln 4 Phel89Asn 4 Serl91Glu Alal87Gln 4 Serl88Asp 4 Phel89His Alal87Gln 4 Serl88Glu 4 Phel89His Alal87Gly 4 Serl88Asp 4 Phel89Met Alal87Gly 4 Serl88Asp 4 Phel89Cys Alal87Pro 4 Phel89His 4 Serl91Glu Alal87Pro 4 Phel89Gln 4 Serl91Glu Alal87Asn 4 Serl88Asp 4 Phel89Asn Alal87Gly 4 Serl88Glu 4 Phel89Ser Alal87Gln 4 Phel89Met 4 Serl91Asp Alal87Gly 4 Serl88Asp 4 Phel89Pro Alal87Thr 4 Phel89His 4 Serl91Asp Alal87Asn 4 Serl88Glu 4 Phel89Cys Alal87Gln 4 Phel89Val 4 Serl91Glu Alal87Pro 4 Phel89Met 4 Serl91Glu Alal87Ser 4 Serl88Glu 4 Phel89His Alal87Ser 4 Phel89Gln 4 Serl91Asp Alal87Gln 4 Serl88Asp 4 Phel89Pro Alal87Gly 4 Serl88Asp 4 Phel89Gly Alal87His 4 Phel89Gln 4 Serl91Glu Alal87Thr 4 Serl88Glu 4 Phel89Ile Alal87Pro 4 Phel89Gly 4 Serl91Glu Alal87Thr 4 Phel89Met 4 Serl91Glu Alal87Gly 4 Phel89Thr 4 Serl91Glu Alal87Gln 4 Phel89Leu 4 Serl91Glu Alal87Thr 4 Phel89Thr 4 Serl91Asp Alal87Gln 4 Serl88Asp 4 Phel89Met Alal87Pro 4 Phel89Ser 4 Serl91Glu Alal87Asp 4 Serl88Glu 4 Phel89Val Alal87Glu 4 Serl88Glu 4 Phel89Ser Alal87Asp 4 Serl88Glu 4 Phel89Met Alal87Asp 4 Serl88Asp 4 Phel89Gln Alal87Asp 4 Serl88Glu 4 Phel89Cys Alal87Asp 4 Serl88Glu 4 Phel89Tyr Alal87Glu 4 Serl88Glu 4 Phel89Tyr Alal87Asp 4 Serl88Asp 4 Phel89Gly Alal87Glu 4 Serl88Glu 4 Phel89Leu Alal87Asp 4 Serl88Glu 4 Phel89Ser Alal87Glu 4 Serl88Asp 4 Phel89Gly Alal87Asp 4 Serl88Asp 4 Phel89Pro Alal87Asp 4 Serl88Glu 4 Phel89His Alal87Glu 4 Serl88Glu 4 Phel89Thr i
Alal87Glu + Alal87Glu + Alal87Ser + Alal87Gly + Alal87Gly + Alal87Pro + Alal87Asp + Alal87Glu + Alal87Asp + Alal87Glu + Alal87Gly + Alal87Gly + Alal87Thr + Serl88Glu + Serl88Glu +
Serl88Asp + Serl88Asp + Serl88Glu + Serl88Asp + Serl88Glu + Serl88Glu + Serl88Glu + Serl88Asp + Serl88Glu + Serl88Glu + Phel89Glu + Phel89Glu + Phel89Glu + Phel89Glu + Phel89Glu +
Phel89Ile
Phel89Asn
Phel89Glu
Phel89Glu
Phel89Asp
Phel89Asp
Phel89Glu
Phel89Asp
Phel89Asp
Phel89Glu
Serl91Asp
Serl91Glu
Serl91Glu
Serl91Glu
Serl91Asp
Tabulka 21
Smyčka 5 - varianty se čtyřnásobnou mutací
Alal87Ser +Serl88Glu + Phel89Asp + Serl91Asp Alal87Pro + Serl88Glu + Phel89Glu + Serl91Glu Alal87His + Serl88Glu + Phel89Asp + Serl91Glu Alal87Gly + Serl88Asp + Phel89Asp 4- Serl91Glu Alal87His + Serl88Glu 4· Phel89Glu 4- Serl91Asp Alal87Thr 4· Serl88Asp 4- Phel89Asp 4- Serl91Glu Alal87Asn 4- Serl88Glu 4- Phel89Glu 4- Serl91Glu Alal87Pro 4- Serl88Asp 4- Phel89Glu 4- Serl91Glu Alal87Pro 4- Serl88Asp 4- Phel89Asp 4- Serl91Asp Alal87Ser + Serl88Glu 4- Phel89Asp + Serl91Glu Alal87His 4- Serl88Asp 4· Phel89Glu 4- Serl91Asp Alal87Thr 4· Serl88Glu 4- Phel89Asp 4· Serl91Asp Alal87Asn + Serl88Asp 4- Phel89Glu + Serl91Glu Alal87Gln 4· Serl88Glu 4- Phel89Asp 4- Serl91Glu Alal87Gly 4- Serl88Asp 4- Phel89Glu 4- Serl91Glu Alal87Glu 4- Serl88Asp 4- Phel89Gly 4- Serl91Asp Alal87Glu 4- Serl88Glu 4- Phel89Met 4· Serl91Asp Alal87Asp 4- Serl88Asp 4- Phel89Ile 4- Serl91Glu Alal87Asp 4- Serl88Glu 4- Phel89Leu 4- Serl91Asp Alal87Asp 4- Serl88Glu 4· Phel89Thr 4· Ser 19?Asp Alal87Glu 4- Serl88Glu 4- Phel89Leu 4- Serl91Asp Alal87Glu 4- Serl88Asp 4· Phel89Tyr + Serl91Asp Alal87Glu 4- Serl88Glu 4- Phel89Gln 4- Serl91Asp Alal87Glu 4- Serl88Glu 4· Phel89Cys 4- Serl91Glu Alal87Glu 4- Serl88Glu 4- Phel89Gln 4- Serl91Glu Alal87Glu 4- Serl88Glu 4· Phel89Pro 4- Serl91Glu Alal87Asp 4- Serl88Glu 4- Phel89Ser 4- Serl91Glu Alal87Glu 4- Serl88Glu + Phel89Cys 4· Serl91Asp Alal87Asp 4- Serl88Asp 4- Phel89Leu 4· Serl91Asp Alal87Glu 4- Serl88Asp 4- Phel89Ile 4- Serl91Asp Alal87Asp 4- Serl88Asp 4· Phel89His + Serl91Glu
Alal87Glu
Alal87Glu
Alal87Asp
Alal87Asp
Alal87Glu
Alal87Asp
Alal87Asp
Alal87Asp
Alal87Asp
Alal87Glu
Alal87Asp
Alal87Glu
Alal87Asp
Alal87Asp
Alal87Glu
Alal87Asp
Alal87Asp
Alal87Gly
Alal87His
Alal87Thr
Alal87Ser
Alal87Ser
Alal87Thr
Alal87Ser
Alal87Asn
Alal87Gln
Alal87Asn
Alal87Gly
Alal87His + Serl88Asp + Serl88Asp + Serl88Glu + Serl88Asp 4- Serl88Glu + Serl88Asp 4- Serl88Asp 4- Serl88Asp 4- Serl88Asp 4- Serl88Glu 4- Serl88Asp 4- Serl88Asp 4- Serl88Asp 4- Serl88Glu 4- Serl88Asp 4- Serl88Glu 4- Serl88Glu 4- Serl88Glu 4- Serl88Asp 4- Serl88Asp 4· Serl88Glu 4· Serl88Asp 4- Serl88Asp 4- Serl88Glu + Serl88Glu 4- Serl88Asp 4· Serl88Asp 4- Serl88Asp + Serl88Asp
4- Phel89His 4· Phel89Val 4- Phel89Gly 4- Phel89Cys 4- Phel89Asn + Phel89Thr 4- Phel89Ile 4· Phel89Ala 4- Phel89Val 4- Phel89Ala 4- Phel89Ser 4- Phel89Asn 4- Phel89Cys 4- Phel89Cys 4- Phel89Ser 4- Phel89Tyr + Phel89Ala + Phel89Thr 4- Phel89Met 4- Phel89Ser 4- Phel89Met 4- Phel89Ser 4- Phel89Tyr 4- Phel89Ala 4· Phel89Gly 4- Phel89Asn 4- Phel89His 4- Phel89Ser 4- Phel89Val
4- Serl91Asp + Serl91Asp 4- Serl91Glu 4- Serl91Asp 4* Serl91Glu 4- serl91Glu 4* Serl91Asp 4- Ser 191 Glu 4- Serl91Glu 4- Serl91Glu 4- Serl91Asp 4- Serl91Asp 4- Serl91Glu 4- Serl91Asp 4· Serl91Glu 4- Serl91Glu 4- Serl91Asp 4- Serl91Asp 4- Serl91Glu + Serl91Asp 4- Serl91Asp 4· Serl91Asp 4- Serl91Glu 4- Serl91Asp 4- Serl91Asp 4· Serl91Glu + Serl91Glu 4· Serl91Glu 4· Serl91Asp
Tabulka 22
Vícesmyčkové varianty s dvojitou mutací
Leu 96Gly 4· Gin 59Ser + Val 95Gln + TyrlO4Cys 4Glyl27Gln 4Serl88Glu 4· Gly 97Gln 4· Gln206Asp 4Asp 60Glu 4· Thrl58Asp 4· Pro210Gln 4TyrlO4Glu 4Tyrl67Pro + IlelO7Leu 4· Gly 97Glu 4· Thr 66Pro 4· Alal33Gly 4·
Ser204Glu Asn 62Ser Asn218Asp Lys213Glu Ala216Pro Gly215Asn Ile107 Ala Tyr217Thr Gln206Asn Gln206Ser Gly215Asn IlelO7Leu Gly211Glu Alal87Asp Thrl64Pro Val203Cys Tyr217Ser
Serl05Glu Tyrl67Asp Serl61Glu Ser 63Asp Leu 96Gln Ala 98Gly Leu 96Asn Ser 63Asp Thrl58Gln Leul26Gln Serl59Asp SerlOlAsp GlylOOAsn Gin 59Asp Glyl57Glu Trpl06Pro Ala216Ser Thr 66Gln GlylO2Gln Asn212Ser Gln206Ser TyrlO4Glu Val 95Asp TyrlO4Asp Thr 66Pro Asn 61Glu Asp €0Glu Prol29Gln Glyl60Asp Serl61Glu Leu 96Pro TrplO6Asn SerlOlAsp Alal33Gln SerlOlAsp IlelO7Ala Alal33Thr Phel89Ser Gly 97Asp Gin 59Asn Pro201Ser Serl62Glu Gly 65Ser Lys213Asp Val203Ala Ala216Thr Glyl31Asn TyrlO4Glu Glyl27Ser TrplO6Gly
Phel89Val 4 Alal87Thr 4 Ala216Thr 4 GlnlO3Ser 4 Prol29Glu 4 Tyr214Glu 4 Asn212Ser 4 Phel89Leu 4 Lys213Glu 4 Glyl60Asp 4 Tyr217Gln 4 Val203Ala 4 Gly215Glu 4 Glyl31Gln 4 Leu209Pro 4 Tyr217Ile 4 Gly219Asp 4 Leul26Asn 4 Gly219Asp 4 Lys213Asp 4 Lys213Glu 4 Asnl55Gln 4 Leul26Ser 4 Glyl66Gln 4 Ser204Glu 4 Phel89Pro 4 Tyrl€7Ala 4 Gln206Asp 4 Ala216Asn 4 Glyl66Asn 4 GlylOOAsp 4 Val203Asn 4 Glyl27Ser 4 Va12O3Asp 4 Gly202Ser 4 Glyl60Asn 4 Tyr214Ile 4 Ser204Asp 4 TrplOSPhe 4 Glul56Asp 4 Lys213Glu 4 Gly202Gln 4 Gln206Asp 4 Ala216Pro 4 Lys213Asp 4 Tyr217Pro 4 Asn218Glu 4 Glyl31Pro 4 Thrl58Asp 4 Serl32Asp
Asn 62Ser + Alal87Ser Serl63Asp 4 Phel89Ser Pro201Gln 4 Gly215Glu GlylOOGln 4 Tyr217Thr Serl30Glu 4 Glyl54Asn Asp 60Glu‘ 4 Tyr214Thr AsnlSSGlu 4 Tyr217Gln Ala 98Gln 4 GlylO2Asn Pro201Asn 4 Gly219Asp Thr 66Ser 4 Glyl27Gln Leul26Glu 4 Ala216Thr Asn 61Ser 4 Asnl55Glu Thr 66Ser 4 Glyl57Asíp Prol29Ser 4 Thrl64Gln Ala216Asp 4 Tyr217Val Serl30Glu 4 Tyr217Leu Asn 62Asp 4 Tyr214Leu Val 95Ser 4 Phel89Val GlylOOPřo 4 Serl59Asp Asnl55Gln 4 Ser204Glu Prol29Asp 4 Val203Ser SerlOlGlu 4 Thrl58Asn Alal87Pro 4 Asn218Asp Val 95Gly 4 SerI61Asp Gly202Pro 4 Ala216Gln Gly 97Ser 4 Gly215Asp Tyrl67Asp 4 Gln206Ser Thr 66Ser 4 Asn212Glu Ala216Thr 4 Tyr217Gln Ala200Asn 4 Tyr217Ala Asp 60Glu 4 Val203Pro Val 95Thr 4 Tyr217Met Val203Asn 4 Lys213Glu Glyl02Asp 4 Val203Gly Serl30Asp 4 Alal33Thr TyrlO4Ala 4 Glyl66Ser Leu 96Met 4 Tyr217Asp SerlOlAsp 4 Glyl02Pro SerlOlAsp 4 Thr220Pro Val 95Asn 4 Ala216Pro Tyrl04Asn 4 Prol29Asp Gly202Asn 4 Gln206Asp Gin 59Glu 4 HelO7Cys Thr 66Glu 4 Tyrl04Pro Val 95Met 4 Asp 99Glu Ser204Glu 4 Gly211Pro P'ro210Glu 4 Gly219Ser Leul26Pro 4 Ser204Glu Prol29Asp 4 Ala200His Ilel07Gly 4 Gly215Pro
Thr 66Glu + Asnl55Asp + Gly211Asp + Ala216Asp + Thrl58Gly + GlylOOGlu + Ala 98Ser + GlnlO3Asn + Glyl54Gln + Leul26Pro + Ala216His + Glyl54Glu + Gly 97Ser + TrplO6Ile + GlylO2Ser 4· Glyl54Glu + Lys213Glu + Asn 62Asp 4Thr 66Gly 4Glyl57Pro 4· Gin 59Asp + Leu 96Met + Ala 98Gly + Asn 62Gln + Glyl27Asn 4Glyl60Pro 4Leu 9 6Thr 4TrplO6Phe 4· Glyl31Pro 4· Gly 65Gln 4· Glyl27Asn 4Alal33Asn + Ser204Glu + Glul56Asp 4Asp 60Glu 4Asn 61Gln + Pro210Asn + Alal33Asp + Gly219Ser 4Serl91Asp + Glyl60Glu 4Serl62Glu 4· Ala 98Gln 4Val 95Asp 4TyrlO4Ser 4· GlylOOPro 4Gly 97Asp 4· Gln206Ser + Alal87Asn 4Ala 98Gly 4Gln206Asn
Leu209His
Tyr217Val
Thr220Gln
Ser204Asp
IlelO7Ser
Glyl54Asn
Ala216Glu
Pro210Gln
Ala216His
Tyr217Leu
Tyr217Ser
Tyrl67Thr
Ala216Gly
Phel89Gly
Gly219Asn
Ala216Pro
Leul26Ser
Gln206Glu
Val203Cys
Tyr214Ser
GlylOOSer
Lys213Asp
Leu 96Asp
Gln206Glu
Gly219Asn
Tyr217Ala
Tyr217Thr
Lys213Glu
Asp 99Glu
Glyl28Gln
Glyl54Asn
Gly215Ser
Pro210Ser
Gln206Ser
Ala216Asn
Asn212Asp
Val203Asn
Thr220Gly
Val203Thr
Ala216Thr
Ala216Gln
Tyr217Asn
Gln206Asn
Ser204Asp
Phel89Gln
Tyr217His
Gly211Asn
Serl88Asp
Asp 99Glu
Thrl64Asn + Phel89Cys Val203Gln + Gln206Ser TrplO6Cys + Glyl57Ser Thrl58Ser + Glyl60Ser Serl88Asp + Tyr217Gly Glyl57Asn + Phel89Met Serl88Asp + Ala216Asn Glyl28Asn + Glyl66Ser Leul26Asn + Ala216Ser Glyl27Asp + Gln206Asn Gin 59Glu 4- Leu 96Hls Serl32Asp + Tyr217Ala Glyl66Ser + Gly219Glu Serl63Glu + Val203Met Ala 98His + Tyr217Met Ala 98Pro + Serl30Asp Glyl60Asn 4- Ser204Glu Gln206Asn 4- Gly215Asp GlnlO3Ser 4- Serl30Asp Alal33Gly + Thr22OGly Serl32Glu 4· Ala216Gln Asn 61Gln 4- HelO7His Leul26Ala 4- Glyl31Glu Gln206Asp 4· Thr220Gly Gln206Glu + Tyr2l7Cys Glyl57Ser 4· Pro210Asp Glyl66Glu 4- Tyr214Gln Serl88Glu 4- Ala216His Thr 66Glu 4· Glyl66Gln Glyl02Pro 4- Glyl66Glu Val 95Gln 4· TyrlO4Xle Serl91Glu 4- Gly219Ser Asp 99Glu 4- Asn218Gln GlylOOAsn + SerlO5Glu Glyl66Pro 4- Pro210Asn Gin 59Asn + Thrl64Ser Leul26His 4- Tyr214Ala Thr 66Pro 4- Lys213Asp TrplO6His 4· Gly211Ser Tyrl67Leu 4- Ser204Glu Val 95Thr 4· Alal33Gly IlelO7Ser 4· Gln206Glu Phel89Tyr 4- Lys213Asp Gly 65Asn + Asn218Asp Tyrl67Val 4· Lys213Glu Gly 97Gln 4- Serl32Glu Asp 99Glu 4- Glyl02Pro Leul26Cys 4· Ala216Asp Leul26Cys 4- Glyl27Ser Serl91Asp + Ala216Asn )
.•4
GlylOOGln 4- Glyl54Asp Asn 61Asp 4- Gly211Ser Serl61Asp 4- Phel89Leu Ue205Gln 4- Ala216Glu Asn 62Gln 4- Tyr217Leu IlelO7Met 4- Serl61Asp Leul26Ile 4- Tyr217Ser Ala 98His + Serl62Asp Asn 61Asp 4- Glyl28Ser Asnl55Glu 4- Gly215Gln Asnl55Gln 4- Ser204Asp AsnlSSGlu 4- Thr220Gln Lys213Asp + Tyr217His Glyl27Pro 4- Ser204Glu Ser204Asp 4- Tyr217Ala Glul56Asp + Val203Gly Glyl27Glu 4- Alal33His GlylOOAsn + Glyl31Ser Gly211Gln 4- Lys213Asp Alal87Asp 4- Phel89Leu Ala216Glu 4- Tyr217Cys Ser204Asp 4- Ala216Thr Glyl31Ser 4- Thrl58Asp GlylOOAsn 4- Gln206Asn SerlOSAsp 4- Glyl31Gln Ser2O4Asp 4- Tyr214Val Tyr214Met 4- Tyr217Ile Ser 63Glu + Thrl64Asn IlelO7Cys 4- Ala216Pro TrplO6Gly 4- Gln206Asp GlylO2Asp 4- Thrl64Pro Asp 99Glu 4- Ala216Gln Lys213Glu 4- Ala216Gln Alal33Ser + Pro210Glu Asp 60Glu 4- TyrlO4Asn Asn 62Gln 4- IlelO7Cys Tyrl67Ala 4- Gly211Asp Glul56Asp 4- Tyr217Ile Glyl31Pro 4- Leu209Pro Lys213Glu 4- Asn218Gln Glyl60Ser 4- Val203Glu AsnlSSSer 4- Tyrl67Ala Asp 60Glu 4- Phel89Gly Thrl64Gln 4- Gly219Ser Serl62Asp 4- Gln206Asn GlylOOGlu 4· Tyrl04Asn Glyl60Pro 4- Gln206Ser Thr 66Gly 4- Ala216Gly TyrlO4Ile 4- Gly215Pro Pro201Gln 4- Ala216Thr .· ..-..ve
GlnlO3Glu 4- Alal33Asn Serl63Glu 4- Phel89His Glyl27Ser 4- Tyr217Ser Gln206Asn 4- Leu209His Pro210Glu + Ala216Gln Asn 62Ser 4- Gln206Asn Serl61Glu 4- Gly219Asn Val203Gly 4- Asn212Glu Ala 98Glu 4- Leul26Met Vall65Gln 4- Ser204Asp. Glyl54Ser + Ala216His Pro201Gly 4- Gly211Glu Serl61Asp 4- Gly219Gln Asnl55Glu 4· Thr220Asn Leu 96Glu 4- IlelO7Leu Thrl58Ser 4- Gly215Ser Ser 63Glu 4- Prol29Ser Val 95Asn 4- Serl63Glu GlylO2Asn 4- Leul26Glu Thr 66Gly 4· Ala216Pro Glyl57Ser 4· Thrl58Glu Ala 98Asp 4· Alal87Ser Asp 99Glu 4· Thri64Gln Thr 66Ser 4- SerlO5Glu GlnlO3Asp 4- GlylS4Pro Thr 66Glu 4· Tyr217His Glyl27Gln 4- Ser204Glu Phel89Ile 4- Tyr217Thr Alal33Gln 4- Lys213Asp Serl30Asp 4· Tyr217Thr Leul26Ile 4- Asn212Ser Glyl54Asn 4- Gln206Asp Thr 66Pro 4- Glul56Asp GlnlO3Asn 4- Lys213Asp Phel89Met 4- Gln206Asp Leul26Asn 4- GlylS4Gln Pro210Gly 4- Gly215Glu Leul26Val 4- Ala216Pro Gln206Ser 4· Tyr217His Leu 96Asn 4- Lys213Asp Leul26Pro 4- Ala216Ser Val203His 4- Gly211Asp Tyrl67Ala 4- Tyr217Asp TrplO6Asn 4· Gln206Asn Glyl27Ser + Serl61Glu Lys213Glu 4- Gly219Asn Val 95Thr 4- Thr208Gly Thrl58Gly 4- Ser204Glu Gly 97Pro + TrplO6Tyr Phel89Ile 4· Val203His
Leu 96Gln 4 Lys213Glu Gln206Glu 4 Ala216Thr Glyl54Ser 4 Asnl55Glu Serl32Asp 4 Tyr214Asn Prol29Gln 4 Alal33Pro Ala 98Asn 4 Glyl27Asp Gly211Gln 4 Asn218Asp TrplO6Cys 4 Serl63Asp Leu 96His 4 Ala216Gly Gly 97Asn 4 Ser204Asp Asn 61Ser 4 Glyl57Asp Pro210Asn 4 Tyr217His Asp 60Glu 4 TyrlO4Ala Thrl64Asn 4 Ala200Gly Tyr214Val 4 Ala216Asp Leul26Hls 4 Ala216Ser Glyl28Gln 4 Asn212Asp Serl62Glu 4 Gln206Ser Gln206Glu 4 Ala216Ser Thrl64Pro 4 Thr220Asp Val203Ser 4 Gly219Asp Gln206Asn 4 Gly219Asp Ser 63Asp 4 IlelO7Gln GlylO2Gln 4 Val203Ala SerlOlGlu 4 Vall6SGln Gin 59Ser 4 Glyl66Glu SerlOlGlu 4 Tyr217Ser Glyl31Asn 4 Alal87Glu GlylO2Ser 4 Tyr214Gly Thrl58Ser 4 Thr220Glu Asp 99Glu 4 Gly215Gln Val 95Gly 4 Thr220Asp Ala200Ser 4 Tyr214Val Serl88Glu 4 Ala216Asn Tyr214His 4 Ala216Asp Thrl58Glu 4 Phel89Asn Asnl55Gln 4 Serl91Asp Thr 66Ser 4 Leul26Ser Thr 66Gly 4 Gln206Asp SerlOSAsp 4 Tyr214Thr Glyl02Pro 4 Thrl64Gln TrplO6Gly 4 Pro210Gly Asnl55Asp 4 Thr220Gln
Tabulka 23
Vícesmyčkové varianty s trojitou mutací
Gin 59Ser 4 Leu 96Gly 4 Ser204Glu
Asn 62Ser 4 Val 95Gln 4 Asn218Asp TyrlO4Cys 4 Glyl27Gln 4 Lys213Glu
Serl88Glu + Gly215Asn 4- Ala216Pro Gly 97Gln 4- IlelO7Ala 4· Glyl57Glu Serl62Glu 4- Pro210Gln + Gly215Asn Thr 66Pro 4- Val203Cys 4- Tyr217Ser SerlOSGlu 4· Alal33Gly 4- Phel89Val Leu 96Asn 4- Asn212Ser 4- Tyr214Glu Gin 59Asp 4- Glyl31Gln 4- Leu209Pro Trpl06Pro 4- GlylS7Glu +. Tyr217Ile Thr 66Gln 4- Leul26Asn 4- Serl88Glu Asn212Ser 4- Lys213Asp 4- Gly219Gln Val 95Asp + Leul26Ser + Asnl55Gln Asn 61Glu 4· Thr 66Pro 4- Phel89Pro Glyl60Asp 4- Glyl66Asn 4· Ala216Asn TrplO6Asn 4- Glyl27Ser 4- Val203Asn SerlOlAsp 4· HelO7Ala 4- Gly202Ser Alal33Thr 4- Phel89Ser 4- Tyr214Ile Gin 59Asn 4- Gly 97Asp 4- TrplO6Phe GlylS7Pro 4- Pro210Gly 4· Ala216Glu Glyl6OSer 4- Asn212Ser + Tyr217Thr Asn 62Gln 4- Gln206Asn 4- Ala216Ser Prol29Ser 4- Gly215Glu + Tyr217Pro Ala 98Asn + Tyr217His + Thr220Gly Val203Gly 4- Gly211Glu + Ala216Asn Glyl27Glu + Tyr214Asn 4- Ala216His Trpl06Pro 4- Alal33Pro 4- Gln206Asp Val 95Ser 4- Glyl28Glu + Tyr217Cys Serl59Asp 4- Glyl66Gln 4- Gly219Gln Leu 96Val 4· GlulS6Asp 4· Glyl57Pro Alal33Gly + Thr208Pro 4- Tyr214Pro TrplO6Asn + Glyl28Pro + Val203Met Gly 65Ser 4· GlylO2Asn 4· Alal87His Ala200Gln 4- Gln206Glu + Tyr217His GlnlO3Ser + Glul56Asp 4· Ala216Ser Gin 59Asn 4- Ala216Thr 4- Gly219Pro GlylO2Ser + Pro210Asp 4- Tyr217Ile GlylOOGlu 4- IlelO7Ser 4- Thrl58Gly Ala 98Glu + Glyl54Gln 4- Pro210Gln GlnlO3Glu + Leul26Pro + Ala216His Lys213Glu 4· Ala216His 4- Tyr217Leu Glyl54Glu + Tyrl67Thr 4- Tyr217Ser Gly 97Ser 4· TrplO6Ile + Ala216Gly GlylO2Ser + Phel89Gly + Gly219Asn Glyl57Pro + Glyl60Asp + Val203Cys Leu 96Met + Ala 98Gly + GlylOOSer Glyl27Asn + Glyl60Pro + Gln206Glu Leu 96Thr + Tyr217Ala + Gly219Asn TrplO6Phe + Lys213Glu 4· Tyr217Thr GlylO2Glu + Glyl27Asn + Glyl28Gln Alal33Asn 4· Glyl54Asn 4- Serl61Asp Asn 61Gln 4- Gln206Ser 4- Ala216Asn
Ser204Asp
Ala 98Gin
Gly 97Asp
Gln206Ser
Ala 98Gly
Asp 99Glu
TrplO6Cys
Glyl57Asn
Glyl66Ser
Leul26Asn
Leu 96Hls
Ala 98His
Ala 98Pro
Serl30Asp
Asn 61Gln
Gln206Glu
Glyl57Ser
Val 95Gln
TyrlO4Ile
Asp 99Glu
Glyl31Glu
Leul26His
Thr 66Pro
TrplO6His
Val 95Thr
Gly 97Gln
Leul26Cys
GlylOOGln
Asn 62Gln
Leul26Ile
Prol29Glu
Glyl27Glu
Glyl31Ser
Glyl31Ser
GlylOOAsn
Gly 97Glu
IlelO7Cys
TrplO6Gly
Alal33Ser
Asn 62Gln
Glyl31Pro
Asnl55Ser
Asp 60Glu
Glyl60Pro
Thr 66Gly
Tyrl04Ile
Glyl27Ser
Serl88Glu
Asn 62Ser
Ala 98Glu + Gly219Ser 4 Serl59Glu 4 GlylOOPřo 4 Gly211Asn 4 Alal87Asn 4 Thrl64Asn 4 Glyl57Ser 4 Serl88Asp 4 Serl88Asp 4 Glyl28Asn 4 Serl32Asp 4 Lys213Glu 4 Serl30Asp 4 Alal33Gly 4 IlelO7His 4 Tyr217Cys 4 Pro210Asp 4 Glyl02Pro 4 Serl91Glu 4 GlylOOAsn 4 Glyl66Pro 4 Thrl64Ser 4 Gly211Ser 4 Tyrl67Leu 4 Alal33Gly 4 Glyl02Pro 4 Serl91Asp 4 Glyl54Asp 4 Ala216Glu 4 Serl61Asp 4 Asnl55Gln 4 Alal33His 4 Gly211Gln 4 Thrl58Asp 4 SerlOSAsp 4 Glyl60Gln 4 Lys213Asp 4 Gln2O6Asp 4 Lys213Glu 4 HelO7Cys 4 Leu209Pro 4 Tyrl67Ala 4 Thrl64Gln 4 Ser204Glu 4 GlylOOAsp 4 Gly215Pro 4 Lys213Asp 4 Gln206Asn 4 Gln206Asn 4 Leul26Met
Thr220Gly 4 Tyr217Asn 4 Phel89Gln 4 Tyr217His 4 Serl88Asp 4 Phel89Cys 4 Gln206Ser
4. Tyr217Gly 4 Ala216Asn 4 Ala216Ser 4 Tyr217Ala 4 Tyr217Met 4 Glyl60Asn 4 Thr220Gly 4 Asn218Glu 4 Thr220Gly 4 Tyr214Gln 4 Glyl66Glu 4 Gly219Ser 4 Asn218Gln 4 Pro210Asn 4 Tyr214Ala 4 Lys213Asp 4 Ser204Glu 4 Gln206Glu 4 Serl32Glu 4 Ala216Asn 4 Gly211Ser 4 Tyr217Leu 4 Tyr217Ser 4 Thrl58Gln 4 Val203Gly 4 Lys213Asp 4 Ala216Thr 4 Gln206Asn 4 Thrl64Asn 4 Ala216Pro 4 Ala216His 4 Ala216Gln 4 Thrl64Asp 4 Tyr217Ile 4 Phel89Gly 4 Gly219Ser 4 Gln206Ser 4 Ala216Gly 4 Ala216Thr 4 Tyr217Ser 4 Leu209His 4 Pro210Glu 4 Val203Gly
Glyl54Ser 4 Serl61Glu 4 Ala216His Pro201Gly 4 Gly211Glu 4 Ala216Thr Serl61Asp 4 Gly219Gln 4 Thr220Asn Asn 62Glu 4 Thrl58Ser 4 Gly215Ser GlylO2Asn 4 Leul26Glu 4 Ala216Pro Glyl27Gln 4 Ser204Glu 4 Tyr217Thr Alal33Gln 4 Phel89Ile 4 Lys213Asp Serl30Asp 4 Asn212Ser 4. Tyr217Thr Leul26Ile 4 Glyl54Asn 4 Gln206Asp Thr 66Pro 4 GlnlO3Asn 4 Lys213Asp Leul26Asn 4 Glyl54Gln 4 Pro210Gly Leul26Val 4 Gly215Glu 4 Ala216Pro Gln206Ser 4 Lys213Asp 4 Tyr217His Leu 96Asn 4 Leul26Pro 4 Ala216Ser Ser 6 3Asp 4 TrplO6Asn 4 Gln206Asn Glyl27Ser 4 Serl61Glu 4 Gly219Asn Val 95Thr 4 Thr208Gly 4 Lys213Glu Gly 97Pro 4 TrplOCTyr 4 Asn218Glu Leu 96Gln 4 Phel89Ile 4 Val203His Serl32Asp 4 Alal33Pro 4 Tyr214Asn Ala 98Asn 4 Glyl27Asp 4 Gly211Gln Leu 96His 4 Gly 97Asn 4 Ala216Gly Pro210Asn 4 Gly215Glu 4 Tyr217His Asp 60Glu 4 TrplO6Tyr + Prol29Gln Glyl57Asn 4 Phel89Val 4 Asn218Asp GlylOOAsp 4 Thrl64Asn 4 Ala200Gly Leul26His 4 Gln206Asp 4 Ala216Ser Ser 63Asp 4 HelO7Gln 4 Val203Ala SerlOlGlu 4 GlylO2Gln 4 Vall65Gln Asp 99Glu 4 Thrl58Ser 4 Gly215Gln Ala200Ser 4 Ser204Glu 4 Tyr214Val Asnl55Gln 4 Thrl58Glu + Phel89Asn Thr 66Gly 4 SerlO5Asp 4 Tyr214Thr Glyl02Pro 4 Thrl64Gln 4 Pro210Gly TrplO6Gly 4 Asnl55Asp 4 Thr220Gln Thrl58Gly 4 Alal87Gln 4 Ser204Glu Glyl54Gln 4 Tyrl67Cys 4 Ser204Glu Asp 60Glu 4 Ala 98His 4 Glyl02Pro Glyl31Ser 4 He205Val 4 Ala216Asp Glyl28Gln 4 Vall65Cys 4 Gly211Gln Gly 97Asn 4 llelO7Gln 4 Glyl66Gln Glyl60Asp 4 Glyl66Pro 4 Tyr214Ile Gin 59Asp 4 Glyl54Ser 4 Asn218Gln Glyl54Ser 4 Vall65His 4 Ser204Glu Ser 63Glu 4 Prol29Ser 4 Tyr217Gly Glyl57Pro 4 Thrl58Ser 4 Lys213Glu Thrl64Glu 4 Gly215Ser 4 Ala216Asn Thr 66Pro 4 Asp 99Glu + Tyr217Cys TrplO6Met 4 Alal87Ser 4 Tyr2l7lle IlelO7Thr 4 Glul56Asp 4 Tyr217Cys
Leul26Pro Tyrl67His Val 95Pro Val 95His Val 95Ala Asp 60Glu Glyl60Asn Glyl02Gln Asn 62Gln GlylOOPro SerlOSGlu Thr 66Gly GlnlO3Asn Asp 60Glu Gin 59Glu Asn 61Glu Asn 62Gln SerlOSGlu GlylOOSer Gly 97Pro GlylOOSer Serl32Asp Gin 59Asp GlnlO3Asn Glyl28Gln Thr 66Glu Asp 60Glu Serl32Asp Asn 62Asp Gin 59Asn Val 95Ser Ala216Pro Ser 63Asp Gly 97Asn Ala 98His GlylO2Asn IlelO7Val TyrlO4Leu Pro201Asn Glyl66Asn Ala 98Ser Alal33His Ala 98Glu Leu 96Ile Tyrl67Thr Leu 96Gln Glyl27Glu Glyl60Ser TyrlO4Ser Asn 62Ser + Glyl31Asn 4 Gly219Pro 4 TrplO6Ile 4 Gln206Asn 4 Alal87Ser 4 Asn 62Gln 4 Alal87Gly 4 TrplO6His 4 Serl88Glu 4 Gly202Gln 4 llel07Thr 4 Glyl31Asp 4 Alal87Ser 4 Thrl64Pro 4 Asn212Ser 4 Glyl66Gln 4 Glyl60Gln 4 Tyrl67Ala 4 Asnl55Ser 4 Leul26Ala 4 Glyl31Gln 4 Alal87Pro 4 Gln206Asn 4 XlelO7Asn 4 Prol29Asn 4 TrplO6Ala 4 Gly 65Asn 4 Glyl57Asn 4 lle205Thr 4 Gly 65Pro 4 GlylO2Ser 4 Tyr217Pro 4 Glyl27Ser 4 Glyl54Gln 4 TrplO6Val 4 IlelO7Gln 4 Lys213Glu 4 Gln206Glu 4 Pro210Asn 4 lle205Asn 4 Gln206Ser 4 Serl88Asp 4 Glyl31Pro 4 Serl88Asp 4 Gln206Ser 4 Serl61Glu 4 Thrl58Pro 4 Lys213Glu 4 Leul26His 4 GlylGOGlu
Tyr217Leu 4 Thr220Glu 4 Tyr217Gly *1- Lys213Glu 4 Tyr217Glu 4 Tyrl67lle 4 Gln206Ser
4. Serl63Glu 4 Pro210Gln 4 Ala216Ser 4 Glyl31Pro 4 Phel89Ser 4 Ser204Glu 4 Ala216Ser 4 Tyr217Ser 4 Gly215Pro 4 Gly219Ser 4 Tyr217Ser 4 Tyr217Asn 4 Glyl57Gln 4 Phel89Glu 4 Gln206Asn 4 Tyr217Ile 4 Aial33Ser 4 Ala216Asp 4 Alal87Ser 4 Tyr214Ser 4 Ala216Ser 4 Gln206Ser 4 Val 95Asp 4 Lys213Asp 4 Asn218Ser 4 Thr220Asn 4 Ala216Asn 4 Ala216Gln 4 Serl62Asp 4 Ala216Ser 4 Thr220Asn 4 Gly211Gln 4 Ala216Thr 4 Gly215Ser 4 Tyr217Gly 4 Glyl57Pro 4 Val203His 4 Tyr217His 4 Ala216Thr 4 Pro201Gly 4 Ala216Ser 4 Tyr214His 4 Ala216His
Leu 96Cys
Glyl31Gln
Asp 60Glu
GlylO2Glu
Asn 62Gln
Gly 97Pro
Thr 66Pro
Gly 97Asn
TyrlO4Ala
Glyl57Asn
Alal33Hls
Leul26Gln
Asn 61Asp
Thr 66Pro
Ser204Glu
Ser204Asp
Ser204Asp
GlnlO3Asn
Gly202Gln
Ser204Glu
Ser204Asp
Tyrl67Ala
Gly211Asp
Gly211Asp
Tyrl67Val
Asp 60Glu
Glyl60Glu
Ser204Glu
Ser204Glu
IlelO7Cys
Ser204Glu
Serl61Asp
Thrl64Pro
Asp 60Glu
Asp 60Glu
Alal87Glu
Serl30Glu
Thrl58Asp
Gly154Asp
Serl88Glu
Asp 60Glu
Thrl64Pro
Asp 99Glu
Ser204Glu
Ser204Asp
Thr 66Asp
SerlOlGlu
Asn 61Glu
Asp 60Glu
SerlOlGlu + Thrl64Ser + Phe1891le 4- Gly 65Gln 4· Glyl28Ser 4· Val 95Gly 4· Glyl54Asp 4- Leu 96Val 4- Asnl55Glu + Tyrl67Glu 4- Asn218Glu 4· Thrl64Gln 4* Serl59Glu 4- Asn 62Asp 4- GlylOOGlu 4- Ile205Gln 4- Ala216Glu + Ala216Asp 4- Ser204Glu 4· Ser204Glu 4- Gln206Asp 4· Gln206Glu 4- Ser204Asp 4- Lys213Glu 4- Lys213Glu 4- Gly211Asp + Asn 62Asp + Serl62Glu 4- Gln2O6Asp 4· Gln206Glu 4- Ser204Glu 4· Gln206Glu 4· Serl63Asp + Gln206Glu 4- Gln206Asn 4- TyrlO4Asn 4· Val203Glu 4- Glyl66Glu 4· Serl62Glu 4- Val203Ser 4· Serl91Asp 4- Gly 97Glu 4- Ser204Glu 4- GlylO2Asp 4- Gln206Asn 4· Gln206Asp 4- Gly211Glu 4· Leul26Glu 4- Leu 96Glu 4· Leu 96Glu 4· Glyl27Glu + Ser204Asp 4- Val203A5p 4· Thr 66Asn 4- Ala216Gln 4- Gln206Asn 4- Asn2l8Gln 4- Ala216Pro 4·. Tyr214Val + Ala216Pro 4· Thr220Gly + Glyl66Ser 4- Glyl60Asp 4- Glyl28Ser 4* SerlOlGlu 4- Ala216Glu + Tyr217Cys 4- Thr220Gln 4- Ala216Glu 4- Asn218Asp 4- Ala216Asp 4- Ala216Asp 4- Tyr217Asp 4- Ala216Thr + Tyr217Pro 4- Lys213Glu 4- Tyr217Leu 4- Ala216Thr + Tyr217Leu 4- Ala216Thr 4- Gln206Glu 4· Gly215Asn 4- Ala216His 4- Tyr217Asp 4- Pro210Asp 4- Pro210Glu 4- Asn218Glu 4- Phel89Tyr 4- Gln206Ser 4- Gly219Asp 4- Ala216Asn 4- Asp 99Glu 4· Gly219Glu 4- Ala216Gln + Gly215Asp + Tyr214Asp 4- Lys213Asp 4- Tyr214His 4- IlelO7Leu 4- Glyl66Pro 4- Alal87Gln
Ser 63Glu Ser 63Asp SerlOSGlu Ser204Asp Ser204Glu Asp 99Glu Ser 63Asp Thrl58Gln Gln206Glu Glyl57Asp Ser 63Glu GlylOOGlu Gly154Glu Val 95Gly Gin 59Asn Ser204Glu Alal87Asp Ser 63Glu Asn 61Asp Prol29Glu Ser 63Asp Gln206Asp Glul56Asp IlelO7Glu GlylOOAsn GlnlO3Asp Serl30Asp GlylOOAsp Prol29Asp Val203Asp Serl32Asp SerlOlGlu Ala 98Asp Ser204Asp Glnl03Asp Serl32Asp Ala 98Glu Ser204Asp Ser204Glu Serl62Asp Glyl28Glu Asp 60Glu Asp 99Glu GlnlO3Ser Phel89Asp Asn 61Asp Thr 66Glu SerlOlGlu Glyl57Glu Asp 99Glu + Glyl31Asn + Phel89Leu 4- Serl32Glu 4- Ala216Glu + Lys213Asp 4· SerlOlAsp 4- Pro210Glu 4- Gln206Asp 4- Lys213Glu 4- Tyr214Gly 4- GlylOOSer 4- GlnlO3Asp 4- Serl63Asp 4- Lys213Asp 4- Leul26Glu 4· Gln206Asp 4- Ser204Glu 4- Ser204Glu 4- Ser 63Asp 4- Asnl55Glu 4· Ilel07Leu 4- Pro210Asp 4- Serl63Glu 4- Glyl31Ser 4- Gly211Asp 4- Glyl27Glu + Glyl31Asp 4- SerlOlGlu 4· Serl30Asp 4- Ser204Glu 4- Ala216Glu 4- Alal87Glu 4· Asp 99Glu 4- Gln206Asp 4- Glul56Asp 4- Ser204Glu 4- Ser204Glu + Lys213Ásp + Gly211Asp 4- Glyl66Asp 4- Glyl66Glu .+ Asn 62Glu 4- SerlOlAsp 4- Gln206Glu 4· Pro210Asp 4- SerlOlGlu + Glyl66Gln 4- Ser204Glu 4- Ser204Glu 4- Ser204Asp +
+ +
4· +
44+· +
+ +
+
4+ +
+ +
+ +
+ +
+ +
+ +
+ +
+ +
+
4* +
+ +
+ +
444+ +
+ +
4·
4· +
+ +
+
4Lys213Glu
Lys213Glu
Tyrl67Gly
Thr220Glu
Gly215Asp
TyrlO4Asp
Tyr217Glu
Lys213Asp
Ala216His
Thr220Asp
Tyr217Asp
Gln206Asn
Val203Met
Ala216Glu
Prol29Glu
Lys213Glu
Gln206Glu
Ala216Asp
Ala216Glu
Serl63Asp
Asn212Asp
Asn212Asp
Gly219Asp
Serl32Asp
Gly215Glu
Ala216Gln
Lys213Glu
Serl63Asp
Tyr217Glu
Lys213Glu
Tyr217Glu
Serl88Glu
Ser204Asp
Asn212Asp
Serl91Glu
Ala216Asp
Ala216Glu
Asn218Glu
Tyr217Asp
Asn212Ser
Gln206Glu
Ser204Asp
Glyl54Glu
Gly219Asp
Lys213Glu
Glyl28Asp
Ala216Glu
Gln206Asp
Gln206Glu
Gln2O6Glu v
Gly 97G1U + SerlOlAsp + Serl61Glu + Serl30Asp + Serl30Glu + Prol29Glu + Asn 62Gln + Serl32Glu + Asp 60Glu + Glyl31Glu + Serl59Glu + Thrl58Glu + TyrlO4Glu + Asp 99Glu + Ser 63Glu + Serl88Asp + Gin 59Glu + Ser204Glu + Asp 6OGlu + Leul26Asp + Thrl64Glu + Asp 60Glu + SerlOSAsp + Asp 99Glu + Gin 59Glu + Glyl66Glu + AsnlSSGlu + Thr 66Asp + Ser 63Asp + Ser 63Asp + SerlOSAsp + Ser 63Asp + Ser 63Glu + Thrl64Glu + Leul26Glu + Glyl31Glu + Ser 63Asp + Glyl6OGlu + Alal33Glu + Ser 63Glu + Lys213Asp + Serl30Asp .+ Asp 99Glu + Asn 61Asp + GlylO2Asp + Glyl27Asp + Thr 66Glu + Glyl54Asp + GlylO2Asp + GlnlO3Asp +
Ser204Glu + GlylO2Ser + Serl63Asp + Serl32Glu + Serl32Glu + Glyl31Glu + Thrl58Asp + Gln206Glu + Phel89His + Lys213Asp + Serl63Glu + Serl62Asp + Serl32Glu + Glul56Asp + Serl88Asp + Serl91Glu + Serl88Asp + Lys213Glu + Ser204Asp + Glyl66Asp + Serl88Glu + Gln206Glu + Leul26Glu + Glul56Asp + Asn 62Asp + Val203Asp + Alal87Glu + Ser204Glu + Serl88Glu + SerlOSAsp + Serl32Glu + Gly 97Asp + SerlOlAsp + Gln206Glu + Gln206Asp + Gln206Asp + Trpl06Asp + Lys213Glu + Lys213Asp + Gln206Asp + Ala216Asn + Alal87Asp + Serl88Glu + Serl88Glu + Ser204Glu + Serl91Glu + Gly 97G1U + Alal87Glu + Glyl54Glu + Serl32Asp +
Gln206Asp
SerlOSAsp
Gln206Asp
Asn212Glu
Glyl60Asp
Gly215Glu
Glyl66Glu
Tyr217Asp
Asn212Glu
Gly215Glu
Ser204Glu
Gly219Asp
Asn212Asp
Serl59Glu
Serl91Asp
Ala216Asp
Serl91Asp
Gly219Glu
Gly219Asp
Ser204Asp
Gln206Ser
Lys213Asp
Thr220Asp
Serl88Asp
Alal87Glu
Gln206Glu
Lys213Asp
Lys213Asp
Asn218Glu
Lys213Asp
Gln206Glu
AsnlSSAsp
SerlOSAsp
Lys213Glu
Lys213Asp
Lys213Asp
Tyr217Glu
Ala216Glu
Ala216Asp
Gly215Gln
Tyr217Glu
Ser204Glu
Asn218Asp
Asn218Glu
Thr220Glu
Lys213Asp
Tyr217Cys
Gly215Asp
Serl88Glu
Gln206Glu
Asn218Asp
Glyl60Glu
Asn218Asp
Serl59Asp
Serl91Asp
Glyl66Glu
Tyr214Val
Tyrl67His + Asp 60G1U + GlnlO3Glu + Asp 60Glu + GlnlO3Glu + Ala 98Asp + Serl88Asp +
Serl91Glu + Glul56Asp + Glyl54Glu + Asnl55Glu + Serl61Glu + Serl32Asp + Ser204Asp +
Tabulka 24
Víčesnyčkové varianty s čtyřnásobnou autací “ Gin 59Ser 4 Asn 62Ser + Leu 96Gly 4- Ser204Glu : Glyl27Gln 4- Serl88Glu 4 Gly215Asn 4- Ala216Pro
Asn 62Gln 4 IlelO7Ala 4- Gln206Asp 4- Tyr217Thr
Asn 61Ser 4· Leu 96His 4- Glyl57Pro 4- Ala216Gly
Leu 96Gln 4 Glyl27Gln 4- Glul56Asp + Thr220Asn Thrl58Glu 4 Gly202Ser 4 Gln206Ser 4 Thr220Ser Gly 97Asn 4- Serl05Asp 4· Gly215Ser 4 Ala216Ser Leul26Thr + Gly211Gln 4 Lys213Asp 4- Ala216Ser
GlylOOAsp 4 TrplO6Asn 4- Glyl27Ser 4 Val203Asn
IlelO7Ala 4 Glyl60Asn 4 Glyl66Asp 4 Gly202Ser
Alal33Thr 4 Phel89Ser 4 Tyr214Ile 4 Ala216Glu
Asn 62Ser 4 Serl63Asp 4 Phel89Ser 4 Pro201Gln
Ala 98Gln 4 GlylO2Asn 4 Pro2ÓlAsn + Gly219Asp
Thr 66Ser 4 Leul26Glu 4 Glyl27Gln 4 Ala216Thr
Prol29Ser 4 Thrl64Gln 4- Ala216Asp + Tyr217Val
Glyl28Gln 4- Thrl58Gln 4 Gln206Asn + Asn212Asp
Glyl57Ser 4 Gln206Glu 4· Tyr217Cys 4 Thr220Gly Val 95Gln 4 TyrlO4Ile 4 Serl91Glu 4 Gly219Ser
Gin 59Asn 4 Gly 97Asn 4 Glyl54Pro 4 Asn218Ser
Prol29Gly 4 Thrl58Asn 4 Gln206Asn 4 Gly211Pro Ala 98His 4 TrplO6His 4 Gln206Asn 4 Lys213Asp Leul26Ile 4 Ser204Glu 4 Gln206Asn 4 Tyr217Thr Gin 59Glu 4 Asn 62Gln 4 Phel89Leu 4 Val203Ala Prol29Gln 4 Glyl54Pro 4 Alal87Thr 4- Lys213Glu Ser 63Glu 4 Thrl64Asn 4 Gln206Ser 4 Pro210Asn
Leu 96Meť 4 GlnlO3Asn 4 Alal33Ser 4- Ser204Glu
TrplO6Ala 4 Glyl54Pro 4 Alal87Asn 4 Gly219Pro Asn 62Glu 4 Glyl02Pro 4 Glyl60Asn 4- Asn218Ser
Thr 66Gly 4 GlylOOAsp 4- TyrlO4Ile 4· Ala21foly
GlylO2Asp 4 Pro201Gln 4 Gly215Pro 4 Ala216Thr Leul26Met 4 Val203Gly 4 Asn212Glu 4· Gly219Asn Leu 96Glu 4 IlelO7Leu 4 Thrl58Ser 4 Gly215Ser Serl30Asp 4 Alal33Gln 4 Asn212Ser 4 Tyr217Thr Thr 66Gly 4 GlylOOSer 4 Leul26Gly 4 Ala216Glu GlnlO3Asp 4 TyrlO4Ile 4 Glyl28Gln 4 Tyr217Cys Leul26Pro 4 Ser204Asp 4 Gln206Asn 4- Thr208Asn Prol29Ser 4 Glyl57Asn 4 Thrl64Glu 4 Ala200Ser Glyl28Gln 4 Vall65Cys 4- Gly211Gln 4- Lys213Glu Glyl60Asp 4 Glyl66Pro 4 Gly211Ser 4 Tyr214Ile
GlnlO3Ser + Glyl66Asn + Asn 61Asp + TyrlO4Ser + Gly 65Gln + Glyl31Gln + Asn 62Gln + Thr 66Asp + Thr 6€Pro + Gly 97Pro + Val 95Pro + TyrlO4Gly + Asp 99Glu + TrplOSAla + Asn 61Gln + Val 95Asp + IlelO7Gln + Val203Ser + Val 95Thr + Gly202Gln + Thrl58Pro + Val203Gly + Trpl06Pro + Asnl55Asp + GlylO2Asn + Glyl57Ser + Glyl60Asn + Val203Thr + IlelO7Ser + Glyl28Asn + GlnlO3Asn + Prol29Gly + Asn 61Ser + Ser 63Asp + TyrlO4Gly + Prol29Ser + Glyl02Pro + Glyl31Asp + Asn 61Ser + Val 95Gln + Thrl58Asn + Alal87Gly + Gly 65Gln + Gly 97Pro + Glyl28Asn + Serl59Glu + Leul26Asn + Asnl55Gln + Thr 66Ser + TyrlO4Val + GlylO2Asn + Glyl28Gln + Serl32Glu + Thrl58Gln + Asn 62Glu + Leu 96Ile + Thr208Pro + Pro210Gly + GlylOOGln + Glyl60Asn + TyrlO4Asp + Glyl54Pro + Leu 96Gln + Leul26Thr + Glyl28Asn + Alal87Pro + GlnlO3Ser + Glyl57Glu + Leul26Ser + Thrl64Glu + Thrl64Gly + Val203Met + Serl59Asp + Val203Asn + Gly 65Asn + Gln206Asp + GlnlO3Asn + IlelO7Cys + Glyl28Glu + Asnl55Gln + Ala 98His + Serl62Glu +
Tyr214Ile
Leul26His
Phel89Ile
Val 95Gly
Glyl54Asp
Glyl27Ser
Pro201Gln
GlylO2Asn
Ser204Asp
Ser204Asp
Lys213Glu
Gln206Ser
Tyrl67Ala
Pro210Glu
Asnl55Glu
Glyl66Gln
Thr 66Gly
Gln206Ser
Asnl55Ser
Ser2O4Asp
Tyr217Ala
Serl30Glu
Pro201Ser
Gly202Gln
Glyl54Glu
Serl61Glu
Thrl64Asn
Gly211Ser
Ala216Thr
Pro201Gly
Alal87Asn
Serl62Glu
Pro201Gly
Thrl58Gln
Val203Pro
Ala216Asp
Ile205Asn
Ala2l6Gly
Thrl64Asp
Thrl58Ser
Gln206Asn
Glyl28Ser + Thrl64Asn + Ser204Glu Glyl27Gln + Glyl57Ser + Serl59Asp Glyl57Asn + Gln206Asn + Tyr217Val Thr 66Ser + Alal33Thr + Serl63Asp Leu 96Thr + Glyl31Asp + Gln206Asn Asn 61Ser + Serl32Glu + Gly211Ser GlylOOSer + TyrlO4Ala + Ser204Asp Leu 96His + Ala 98Glu + Prol29Gln Asn 62Glu + Glyl28Gln + Alal87Asn
Gly215Pro
Tyr214His
Val203Asp
Gln206Asn
Ala216Pro
Gly215Asp
Ala216Gly
Alal87Asn
Gly215Ser
Ala216Asn
Tyr217Ser
Tyr214Ala
Ala216Asn
Asn218Gln
Ala216Gly
Thr220Gly
Glyl54Ser
Gly219Ser
Tyr217His
Ala216Gln
Gly219Asp
Pro210Asn
Tyr217Val
Asn212Ser
Gly215Asn
Tyr217Met
Gln206Asn
Gly219Ser
Tyr217Met
Asn212Asp
Val203Ser
Tyr217Val
Ser204Glu
Ala216Gln
Gly211Gln
Tyr217Gln
Pro210Ser
Tyr217His
Val20JThr
Glyl60Ser
Tyr217Gly
Tyr217Gly
Tyr217Val
Gly219Pro
Thr208Gln
Ala216Gly
Asn218Gln
Gly211Gln
Alal33Asn
Gly215Ser
Leu 96Ile + GlylS7Ser + Asn 61Gln + Val 95Thr + Leu 96Cys + Glyl28Pro + TrplO6Ala 4 Glyl31Gln + Asn 61Ser 4- Ala216Gln + TyrlO4Gly 4 SerlOSGlu + Alal33Ser 4 Phel89Thr + TyrlO4Ser + ThrlSSGly + Gin 59Asn 4 Thr 66Asn 4 IlelO7His 4 Glyl57Ser 4 Glyl27Ser 4 Gln206Asp 4 Leul26Gly 4 Glyl31Glu 4 Thrl58Gln 4 Lys213Glu 4 Asn 61Gln 4 Leul26Gly 4 Asn 62Asp 4 Prol29Gly 4 Asp 60Glu 4 Val 95Gln 4 GlnlO3Glu 4 HelO7Val 4 IlelO7Thr 4 Prol29Gln 4 TyrlO4His 4 Glyl54Gln 4 Gin 59Asn 4 TrplO6Cys 4 Thr 66Gln 4 Gly 97Ser 4 GlylOOAsn 4 Ser204Asp 4 Asn 62Ser 4 IlelO7Gly 4 Leul26His 4 GlylS4Asp 4 SerlOlGlu 4 Glyl57Gln 4 Asn €2Gln 4 Serl62Glu 4 TyrlO4Gln 4 TrplO6Gly 4 Gin 59Ser 4 val 95Pro 4 Leu 96Pro 4 Glyl60Asp 4 Serl59Glu 4 Glyl60Asp 4 Asn212Glu 4 Lys213Glu 4 Thrl58Asp 4 Serl59Asp 4 Ala 98Asp 4 Asp 99Glu 4 Gly 97Pro 4 Glyl31Pro 4 GlylO2Ser 4 TrplO6Gln 4 GlylOOGln 4 Ser204Glu 4 Val 95Pro 4 Ser204Glu 4 Ser204Glu 4 Ile205Gln 4 Gly 97Ser 4 Glyl54Asn 4 Gly 97Asp 4 Ala 98Gln 4 Thrl58Gln 4 Vall65Met 4 Glyl6OGlu 4 Serl62Asp 4 Asn 61Ser 4 Thr 66Ser 4 Thrl58Asp 4 Serl59Asp 4 Val 95Asp 4 GlylO2Glu 4 Asn 62Glu 4 GlylOOAsp 4 Ser204Asp 4 Gln206Glu 4 Glyl54Asn 4 Ser204Glu 4 Thr 66Gln 4 Serl30Glu 4 Asp 60Glu 4 Gly 65Asn 4
Val203Ala 4 Ala216Ser Glyl60Asp 4 Ala216His Serl91Glu 4 Thr208Asn Val203Ala 4 Tyr214Gln Tyr217Leu 4 Gly219Asn Thrl58Ser 4 Leu209Thr Asn212Glu 4 Tyr217Thr Thrl64Glu 4 Ala216Pro Thrl64Gly 4 Alal87Pro Lys213Glu 4 Tyr217Asn Gly215Gln 4 Tyr217Leu Tyrl67Met 4 Thr220Gln Gly215Ser 4 Tyr217Gly Thrl64Ser 4 Asn218Asp Gln206Ser 4 Ala216His Leul26Pro 4 Val203Thr Phel89Asn 4 Ala216Thr Lys213Glu 4 Tyr217Thr Glyl57Asp 4 Tyr217Ser Ala200Thr 4 Ala216Gln Glyl27Pro 4 Tyr217Asp Pro210Ser 4 Tyr214Gly Leul26Cys 4 Thr220Gly Asn218Gln 4 Thr220Asn Tyr214Pro 4 Ala216His Val203Ser 4 Ala216Thr Leul26Asp 4 Asn212Gln Gly202Asn 4 Tyr217Ser Serl61Glu 4 Glyl66Asn Tyrl67Gly 4 Phel89Val Ala216Ser 4 Tyr217Gln Gly215Asn 4 Ala216Thr Thr164Gin 4 Alal87Ser Glyl54Asp 4 Asnl55Asp Glyl57Glu 4 Phel89Asp Tyr214Ile 4 Ala216Glu Ala216Gly 4 Asn218Glu Pro210Gly 4 Asn218Asp Gln206Asp 4 Gly215Asp Asp 99Glu 4 Glyl54Ser Gly211Glu 4 Lys213Glu Tyrl67Ile 4 Gly219Ser Asnl55Glu 4 Glyl57Asp Thrl64Asp 4 Gly211Asn Alal87Pro 4 Tyr217Pro Thr2O8Asn 4 Tyr217His Gly211Gln 4 Ala216His Gln206Asp 4 Tyr217Thr Serl32Asp 4 Thrl58Pro Thr 66Glu 4 Tyr214Ser
Asp 60Glu 4- Gln206Ser Thrl58Asp + Serl63Glu Ser204Asp 4- Gly215Gln Thrl58Asp 4· Alal87Asp Glyl28Gln + Prol29Asn Gly 97Asn 4- IlelO7Gln TrplO6Asn 4· Glyl57Gln Glyl27Asp 4- Glyl28Asn Val 95Ser 4- Prol29Gly Asnl55Asp 4- Serl88Asp TrplO6Phe 4- Ser204Asp Asn 62Asp 4- Gly 97Gln Val 95Asp 4- TyrlO4Asp GlylOOAsn 4- Gln206Asp Gln206Asp 4- Lys213Asp GlylO2Gln 4- Asnl55Glu Gin 59Glu 4- Thr 66Glu Leul26Cys 4· Glyl57Asp Thr 66Asp 4- Gln206Asp Asn 62Asp 4- Ser 63Glu Leul26Asn 4- Prol29Asn Thr 66Asp 4- GlylOOAsn IlelO7Val 4- Phel89Asp Ser 63Asp + Val 95Ser IlelO7His 4· Val203Cys Asn 62Ser 4- SerlOSAsp Ser 63Glu 4- Leu 96Cys Alal87Gly 4· Gly215Asp Glyl60Ser 4- Gln206Glu Glyl31Pro 4- Phel89Leu Prol29Asn 4- Alal33Gln Ala 98His + Glyl54Glu Val203His 4- Gln206Glu Leul26Ala 4- Ser204Glu IlelO7Leu 4- Glyl57Glu Ala 98Glu 4- GlylO2Asp Thr 66Gln 4- Lys213Glu Ser204Glu 4· Gln206Asn Glyl27Asp 4- Serl32Asp Ser 63Glu 4- Val203His Gln206Glu 4- Lys213Glu Gln206Asp + Lys213Glu Glyl57Pro 4- Serl88Glu Gin 59Glu 4· Thr 66Asp TrplO6Ser 4- Alal87Asp Serl59Glu 4· Asn212Gln Glyl60Asp 4· Serl61Asp Thr 66Glu 4- Tyrl67Gln Prol29Asn + Serl63Glu AsnlSSGlu 4- Glul56Asp
4- Pro210Glu + Gly219Ser 4· Serl91Glu 4- Ile205Gly 4- Ala216Glu 4- Gly219Asp 4- Phel89Glu 4- Tyr217Met 4- Val203Asp 4- Ala216Asp 4- Ser204Glu 4- Gly219Glu 4- Ser204Asp 4- Gly219Asp 4- Serl30Asp 4- Gly219Gln 4- Asnl55Glu 4- Serl88Glu 4- Phel89Asn 4- Ala216Gly 4- Gln206Asp 4· Tyr214Asp— 4- Pro210Asp + Gly211Glu 4· Leul26Ser 4- Asnl55Gln 4- Lys213Glu + Ala216Asp 4· Ala216Glu ♦ Tyr217Asn 4- Val203Glu 4· Asn218Asp 4- Gly 102Pro 4- Glyl66Gln 4- Serl63Asp + Ala216His 4· Ala216Asp 4· Gly219Pro 4- Glyl31Asn + Lys213Glu + Serl91Asp 4· Gly219Glu 4· Glyl27Ser 4 Lys213Glu 4· Val203Glu 4- Ala216Gln 4- Lys213Asp 4- Ala216Ser 4- Tyr214Glu + Tyr217Asp 4· TrplO6Gly 4- Serl32Asp 4- Pro210Glu 4- Ala216Glu 4 Tyr217Thr 4- Asn218Glu 4- Lys213Glu 4- Ala216Ser 4· Gln206Glu + Lys213Glu 4· Gln206Glu 4- Lys213Glu 4- Serl63Asp 4- Tyr217Met 4- Gly211Glu + Lys213Asp 4- Gln20€Asp 4- Lys213Glu 4- Val203His 4- Gly219Glu 4- SerlOSGlu 4· Leu209Thr 4- Ala216Glu 4- Asn218Glu 4- Pro210Glu 4· Gly215Asp 4· Glyl54Asp 4· Vall6SGln + Asn212Glu 4- Tyr217Leu 4- Tyr217Ala 4- Asn218Glu 4- Ala216Asn 4- Asn218Asp 4· Ser204Glu 4- Ala216Asp 4- GlylOOGln + Gly215Glu 4- Gln206Glu 4- Tyr217Asp 4· Gly215Asp 4- Ala216Glu 4- Gln206Asp 4· Tyr214Asn 4- Gln206Glu + Gly211Pro 4· Tyr217Glu 4- Asn218Glu + Ser204Glu + Tyr214Thr ,±.
Gin 59Asp 4 Serl62Asp Leul26Pro 4 Serl62Glu GlylOOGlu 4 Val203Cys SerlOSGlu 4 Alal87Ser GlnlO3Asp 4 Serl63Glu Val 95Gln 4 Glul56Asp Serl62Glu 4 Thrl64Gln Asp 99Glu 4 GlylOOGlu Ala 98Glu 4 Asp 99Glu Asn 62Glu 4 Ser 63Glu Asn 61Glu 4 Gln206Glu Thr 66Pro 4 GlnlO3Asp Asp 60Glu 4 Ser2O4Asp SerlOSAsp 4 Ser204Asp Thrl58Asn 4 Serl62Asp Gin S9Asp 4 Glyl57Ser Gly 97Ser 4 Glyl28Glu TrplO6Asp 4 Val203Cys SerlO5Glu 4 Alal87Thr Gly 97Asn 4 AsnlSSGlu Val 95Asp 4 TrplO6Glu GlnlO3Asp 4 TrplO6Glu Glyl28Glu 4 Serl30Asp GlnlO3Asp 4 SerlOSGlu Serl59Glu 4 Gly211Glu Gin 59Asn 4 Serl88Asp IlelO7Glu 4 Gly211Glu SerlS9Asp 4 Serl62Glu Asp 60Glu 4 Asn 62Asp Asp 60Glu 4 Ser 63Asp Leu 96Cys 4 Glyl66Asp Val 95Glu 4 Ala 98Asn Ser 63Asp 4 Tyrl67His TyrlO4Asp 4 Thrl58Asp GlylS4Pro 4 Serl59Glu GlylO2Glu 4 Ser204Asp AsnlSSGln 4 Serl63Asp Glyl31Asp 4 Thrl58Gln Tyrl67Asp 4 Ser204Glu Gly 97Asp 4 Alal33Gly Glyl27Asp 4 Ser204Glu GlylO2Glu 4 Glyl27Gln Gly 97Glu 4 Serl30Glu Asn 62Glu 4 Alal87Gly SerlOlAsp 4 SerlOSAsp Serl30Asp 4 Serl32Glu Serl30Glu 4 Sérl32Glu GlylOOGlu 4 TyrlO4Thr Gin S9Ser 4 Glyl60Asp Glyl27Asp 4 Prol29Glu
Serl63Glu 4 Ala216Thr 4 Serl63GlU 4 Tyr217Glu 4 Asn212Asp 4 Lys213Glu 4 Val203Glu 4 Ser204Asp 4 Thrl64Glu 4 Pro201Gln 4 Glyl57Asp 4 Lys213Glu 4 Ala216Asp 4 Tyr217Glu 4 Serl59Glu 4 Ala216Thr 4 TrplO6Gly + GlylS4Asp 4 Prol29Ser 4 AsnlSSAsp 4 Ala216Glu 4 Tyr217Cys 4 Glul56Asp 4 Serl91Asp 4 Ala216Asp 4 Tyr217Ile 4 Gln206Ser 4 Ala216Glu 4 Ser204Asp 4 Asn218Asp 4 Ser204Asp 4 Asn218Asp 4 Gln206Glu 4 Gly21SAsp 4 Ser204Glu 4 Tyr217Glu 4 Ser204Glu 4 Tyr217Glu 4 Serl63Glu 4 Tyr214Val
4. Alal87Pro 4 Val203Asp 4 Glyl28Asn 4 Serl62Asp 4 Serl88Glu 4 Ala216Gln 4 Glyl54Glu 4 Ala216Thr 4 Lys213Asp 4 Tyr217Gly 4 Gly211Glu 4 Lys213Glu 4 Lys213Asp 4 Tyr217Gln 4 Pro210Glu 4 Ala216Asn 4 Serl91Asp 4 Tyr217Leu 4 IlelO7Asn 4 Phel89Glu 4 Pro210Asp 4 Lys213Asp 4 GlylO2Glu 4 Serl62Glu 4 Ala216Glu 4 Gly219Glu 4 Serl91Glu 4 Asn218Ser 4 Ser204Asp 4 Gln206Asp 4 Gln206Glu 4 Tyr217His 4 Ser204Glu 4 Gln206Glu 4 Ser204Asp 4 Gln206Asp 4 Gln206Glu 4 Tyr217Asn 4 Ser204Asp 4 Gln206/isp 4 Gln2O6Glu 4 Tyr21.Asn 4 AsnlSSAsp 4 Thr220Asp 4 Tyrl67Asp 4 Tyr217Val 4 Pro210Asp 4 Ala216Glu 4 Ala216His 4 Tyr217His 4 Asn212Glu 4 Ala216Gln 4 Glyl60Asp 4 Thr220Gly 4 Serl30Asp 4 Serl32Asp 4 Gln206Glu 4 Tyr217Asp 4 Serl88Asp 4 Gln206Asn
Serl59Asp + Thrl64Glu Asn 61Asp 4- Gly 97Asp Serl59Glu 4· Serl63Glu Thrl58Asp + Serl62Glu Leu 96Val 4- Thrl58Glu Asp 99Glu + Thrl58Asp Val 95Asp 4- Glyl31Asn Asn 61Glu 4- Asp 99Glu Asn 62Asp 4- Glyl66Ser GlylO2Asp 4- SerlOSAsp Serl88Asp 4- Serl91Glu Asp 60Glu 4- Gly 97Asp Thr 66Asp 4- Leu 96Glu Asn 62Glu 4- Thr 66Asp Asn 61Ser 4- Ala 98Asp GlylOOGlu 4- TyrlO4Glu Asp 60Glu 4- Leul26Asn Ala 98Glu 4· Glyl54Pro Glyl28Gln 4- Alal33Glu SerlOlGlu + Glyl54Asn Serl32Asp 4- AsnlSSAsp Asn 61Glu 4- AsnlSSAsp GlnlO3Glu 4- Glyl60Asn Gin 59Glu 4- GlylOOGlu Ser 63Glu 4- SerlOlAsp Gin 59Asp 4- Thr 66Asp Ser 63Glu 4- SerlOlGlu Asp 60Glu 4- Val 95Ala TrplO6Met 4- Serl91Glu Ser 63Asp 4- Glyl60Asp GlylO2Asp 4- Glyl57Asn Gin 59Ser 4- SerlOSAsp Glyl27Pro 4- Serl62Glu Ser 63Asp 4- SerlOSAsp Thr 66Gln 4- Glyl28Glu Glyl28Asp + Glyl57Asn GlulSGAsp 4- Gln206Glu Asp 99Glu 4» Glyl57Pro Serl63Asp 4- Gln206Asp Glyl54Glu 4- Serl63Glu Gly 154Asp 4· Glyl57Asn Glyl54Ser 4- GlyÍ57Asp Glyl57Ser 4- Thrl58Glu SerlOlGlu 4- Glyl54Pro GlylOOAsp 4- Lys213Glu Asn 62Ser 4- Thrl58Glu Thr 66Asn 4· IlelO7Val Glyl57Asn 4- Pro201Gln Glyl27Glu 4- Thrl58Pro Asp 99Glu 4- Alal33Gly
4- Phel89Hls 4- Lys213Glu 4- Serl59Glu 4- Thr220Ser + Ser204Glu 4- Tyr217Ser 4- Alal87Pro 4- Ala216Glu 4- Serl62Asp * Gly219Asp 4· Serl62Asp 4- Val203Met 4- Serl63Asp 4- Serl91Glu 4- Ser204Asp 4- Tyr217Gly 4· Ser2O4Asp 4- Gly215Glu 4- Tyrl67Ala 4- Gly211Glu 4· Ala216Gly 4· Tyr217Glu 4- TrplO6Asn 4- Serl59Glu 4- Phel89Gly 4- Gly215Asp 4· Tyrl04Pro 4- Glyl66Asp 4· AsnlSSAsp 4- Serl88Glu + Serl30Glu 4- Asnl5SGln + Gln206Glu 4- Lys213Asp 4- GlulSSAsp + Serl88Glu 4· Alal87Glu 4- Serl91Asp + Gly211Glu 4- Tyr214Glu 4- Thrl58Glu 4· Ala216Thr + Alal87Asp 4- Asn212Gln 4- Gln206Glu 4- Asn218Glu 4- Thrl64Pro 4- Gly211Asp 4- Glyl31Ser 4- Val203Pro ♦ TyrlO4Val 4- Alal33Asp 4- Alal33HÍs 4- Ala216Glu 4- Lys213Glu 4- Tyr217Ala 4· Lys213Glu 4- Gly219Glu 4- Lys213Asp 4- Ala216His 4- Serl62Glu + Serl91Glu 4- Serl62Asp 4- Serl91Asp 4- Serl91Glu 4- Asn212Asp 4- Serl32Asp 4- Ala216His 4- Glul56Asp 4- Ala218Asp 4- Pro210Gln 4· Thr220Glu 4- Lys213Glu 4- Ala216Asn + Gln206Asp 4- Lys213Glu 4· Lys213Glu 4- Tyr217Ala 4- Pro210Gln 4· Tyr217Asp 4· Serl63Asp 4· Ser204Glu 4- Lys213Glu 4· Ala216Glu 4- Lys213Asp 4· Ala216Asp 4- Lys213Asp 4- Ala216Glu + Ala216Asp 4·. Tyr217Leu 4- Ser204Asp 4· Thr220Asp + Lys213Asp 4· Tyr217Asp + Lys213Glu 4· Tyr217Asp + Alal87Asp + Ser204Glu 4- Serl88Glu + Thr220Glu
Asp 60Glu 4- Serl88Glu + Gin 59Asp + Leu 96Glu + SeřlOlGlu + Prol29Asp + Ser 63Glu 4- Serl63Asp + GlylO2Gln 4- Glyl60Glu + Val 95Glu 4- Asp 99Glu + SerlO5Glu 4- Alal33Glu 4· GlnlO3Asp 4- Serl32Glu + Asp SOGlu 4- SerlOlAsp 4Gln 5 9Asp 4- Asp 99Glu + Asp 60Glu 4- Serl59Asp + Asn 62Glu 4- Serl€3Glu + Asn 62Glu 4- Serl32Asp + GlylO2Asn 4- Serl62Asp + Serl88Asp 4- Ser204Asp + Ser 63Glu 4- Glyl66Gln + GlnlO3Glu 4- Glyl31Glu 4Asp 60Glu 4- Phel89His + Asnl55Gln 4· Gly215Glu 4GlylO2Asn 4- Leul26Glu + Ala 98Asp + Glyl66Glu + Asn 62Glu 4- Asnl55Ser + Asp 60Glu 4· SerlOSGlu + Asp 60Glu + Gln206Ser + Ser 63Glu 4- Gly 97Gln ♦ Ser 63Glu + Val 95Ala 4· Ser 6 3Asp + IlelO7Met + Prol29Asn 4- Serl30Asp + Prol29Asn + Serl91Glu + Gly 97Gln 4· GlylO2Asp 4· Gin 59Asn 4· Serl62Glu + Glyl27Pro + Glyl28Glu + Leu 96Pro 4· SerlO5Asp + Tyrl67His 4· Serl91Glu 4· Asn 61Glu 4· Thrl58Gln + Gin 59Asp 4· Glyl57Asp + GlylS4Ser 4- Serl63Glu + Leu 96Asn + Serl30Asp + IlelO7Asp 4- Serl88Asp + Gln206Glu 4- Ala216Gly 4 GlylO2Glu + Leul26Cys + Asn 62Glu 4- Glyl60Asp 4· SerlOlAsp 4- TrplOSMet + Asp SOGlu + GlylO2Glu 4· GlulS6Asp 4- Gln206Ser + Prol29Glu 4· SerlS9Asp + Prol29Asp + Serl59Glu + SerlO5Glu 4- TrplO6Leu 4· SerlOlAsp 4- Alal33Gln + Ser 63Glu 4- Serl30Asp +
Gln206Ser 4- Asn218Glu Glyl31Gln 4- Serl32Asp Thrl58Asn 4- Val203Ser Ala216Asp 4- Tyr217Gln Serl91Glu 4- Lys213Glu Gly215Glu 4- Asn218Gln Val203Glu 4- Asn218Gln Serl62Glu 4- Gln206Ser Thrl64Gly 4- Lys213Asp Glnl03Asn 4- Alal87Pro Tyrl67Leu 4- Serl88Asp Gly211Glu 4- Ala21SHis Pro210Gly 4- Gly211Glu Gln206Asp 4- Gly219Asp Tyr217Leu 4· Thr220Gln Ala216Thr 4- Asn218Glu Tyr217Thr 4· Thr220Glu Asn212Glu + Ala216Asp Tyr217Pro 4- Gly219Asp Serl30Glu + Lys213Asp Pro210Asp 4- Tyr214Gln Lys213Asp 4- Tyr217Leu Lys213Glu 4· Thr220Gln Lys213Asp 4- Asn218Asp GlnlO3Asp 4- Gln206Asp Serl30Asp + Gln206Asp Serl91Asp 4- Gln206Asp Lys213Glu 4- Tyr217Glu Lys213Asp + Tyr217Glu Prol29Glu + Phel89Gln Phel89Asp + Ser204Asp Phel89Glu + Ser204Asp Serl30Glu 4- Alal33Gly Asn212Glu 4- Asn218Asp Lys213Asp 4- Tyr217Asn Gln206Ser 4- Asn218Asp Serl88Glu 4- Ser204Asp Serl88Asp 4- Ser204Glu Ser204Asp + Gln206Asn Tyr217Leu 4- Thr220Asp Serl30Glu 4- Tyr214Asp Lys213Glu 4- Ala216Gly Glyl54Asp 4- Serl62Asp Gln206Asn 4- Ala216Asp Pro210Asp 4- Tyr217Asp Gln206Glu + Tyr217Pro Lys213Asp + Tyr217His Glyl27Glu + Serl63Glu Serl91Asp 4- Val203Asp Tyr217Gln + Gly219Asp
Glyl31Asp 4- Serl63Asp IlelO7Asp 4- Gln206Ser Leul26Gly 4- Serl30Asp Gin 59Asp 4· SerlOSAsp Asn 61Asp 4· Serl05Glu SerlOSAsp 4- Phe 1891 le Ser 63Glu 4- Glyl31Gln Glyl57Pro 4- Thrl64Glu Leu 96Ile 4- SerlOlAsp Thr 66Gln 4- Leu 96Met TyrlO4Cys 4- Glyl60Asp Asp 60Glu 4- Serl30Asp llelO7Asp 4- Serl91Asp Gin 59Asp 4- Val 95Asn Val 95Gln + TyrlO4Cys Asn 62Asp 4- Gly 97Asn GlnlO3Glu 4- Ser204Asp SerlOlAsp 4- Serl62Asp Leul26Ile 4- Glyl28Asp GlylOOGlu 4- Glyl60Ser Glnl03Asn 4- Serl32Asp + Glyl66Asn + Ser204Asp 4- Asn212Glu 4- Ala21€Asp 4- GlylS4Asn 4- Asn218Asp 4- Glyl66Gln 4- Ser204Asp 4· Alal87Gln 4- Ala216Gly 4· Lys213Glu 4- Gly219Gln 4- Ser204Glu 4- Gly219Asn 4- Gln206Asn 4- Lys213Asp 4- Gln206Glu 4- Tyr214Ala 4- Tyrl67Glu 4· Serl88Glu 4- Ile205Pro 4- Ala216Glu 4- Pro201Gln 4* Ala216Gly 4- Gln206Asp 4- Ala216Thr 4- SerlOlGlu 4- Serl63Glu 4- Lys213Glu 4* Asn218Asp 4- Ala 98Ser 4- Serl62Glu 4- Gln206Asn + Ala216Pro 4· Glyl66Ser 4· Tyr217Thr 4- Pro210Ser 4- Asn218Glu 4- Glyl66Glu 4- Ala216Thr 4- Serl63Glu+Serl88Asp
Tabulka 25
Vícesmyčkové varianty s pětinásobnou mutací
Val 95Gln 4- TyrlO4Cys 4- Glyl27GLn 4- Lys213Glu 4- Ala216Pro
Asn 61Ser 4· Leu 96His 4· Glyl57Pro 4- Val203Asp 4· Ala2l6Gly
Leu 96Gln + Glyl27Gln 4- Glul56Asp 4· Tyr214Ala 4- Thr220Asn
GlylOOGln 4- Tyrl67Cys 4- Serl88Glu 4- Val203Gln 4· Ala216His
Asn 62Ser 4· TrplO6Gly + Serl32Asp 4- Alal87Ser 4· Phel89Ser
Thr 66Ser + Glyl27Gln 4· Pro201Asn 4- Ala216Thr 4- Gly219Asp
Gly 97Asn 4- Glyl54Pro 4- Gln206Asn 4- Pro210Glu 4· Gly211Pro
Prol29Gly 4· Serl32Glu 4- Thrl58Asn 4· Vall65Thr 4· Gln206Asn Gly 65Ser + Gly 97Gln 4- Glyl28Ser 4- Lys213Asp 4- Gly219Gln
Leu 96Met 4- Glnl03Asn 4- Alal33Ser 4- Glyl54Pro + Gly219Pro
Asn 61Gln 4- TrplOSAla 4- Gly211Pro 4- Asn218Asp 4· Gly219Asn
Thr 66Gly 4- TyrlO4Ile 4- Gly211Glu 4· Gly215Pro 4· Ala216Gly
Leul26Ile 4- Serl30Asp 4- Glyl54Asn 4· Asn212Ser 4· Tyr217Thr
Leul26Val 4- Gln206Ser 4- Pro210Gly 4- Gly215Glu 4- Ala216Pro
Leu 96Asn 4- Leul26Pro 4- Lys213Asp + Ala216Ser 4· Tyr217His
TrplO6Asn 4- Glyl27Ser 4- Serl61Glu 4- Gln206Asn 4- Gly219Asn
SerlOlGlu + GlylO2Gln 4- IlelO7Gln 4· Vall65Gln 4· Val203Ala
Asp 60Glu 4· Ala 98Gly 4- HelO7Ser 4- Glyl57Ser 4· Thrl64Ser
Prol29Glu 4· Glyl60Pro 4- Glyl66Asn 4- Alal87Pro 4· Gly202Ser
Leu 96lle + Tyrl67Thr 4- Serl88Asp 4· Val203His 4- Gln206Ser
Asn 61Gln + Val 95Asp 4· GlylO2Asn + Glyl31Asn 4- Alal87Asn
Glyl60Asn 4- Val203Thr 4- Pro210Glu 4- Asn218Gln 4- Thr220Gln
Glyl28Asn + Asnl55Glu 4- Glyl66Gln 4· Ala216Gly 4- Thr220Gly
Gly 65Ser 4 Val 95Met 4- GlylOOAsn 4· Glyl31Asp 4· Tyr214Gly
TyrlO4Gly + Prol29Ser 4- Serl€3Glu 4- Gln206Ser 4- Gly219Ser
Asn 61Ser + Gly 65Gln 4 TrplO6Ser 4 Leu 96Met 4 GlylOOGlu 4 Asn 62Glu 4 Glyl02Asp 4 Serl32Glu 4 Ala 98Pro 4 Glyl27Pro 4 GlylOOAsn 4 Glyl57Asn 4 •Leu 96Thr 4 GlylOOSer 4 SerlOlAsp 4 Thr 66Gly 4 Thr 66Asn 4 Glyl28Gln 4 Alal33Ser 4 TyrlO4Ser 4 Gin 59Asn 4 Gly 97Gln 4 Thr 66Asn 4 Asp 60Glu 4 IlelO7Asp 4 Val 95Ser 4 TrplO6Thr 4 Glyl28Pro 4 TrplO6Gln 4 Asp 60Glu 4 G.ln 59Asn 4 Asn 62Ser 4 Asn 62Gln 4 Gin 59Asn 4 <Thr 66Ser 4 Glyl28Pro 4 Gin 59Ser 4 GlnlO3Ser + Gly 97Pro 4 Leul26Asn 4 Glyl57Ser 4 Alal33Thr 4 GlylOOGln 4 Glyl27Asp 4 GlylOOGln 4 Glul56Asp 4 Glyl57Gln 4 Leul26Gly 4 Leu 96Ser 4 AsnlSSGlu 4
Val 95Gln 4 Gly 97Pro 4 Glyl28Asn 4 Leul26Asn 4 Thrl58Gln 4 Leu 96Ile 4 Tyrl67Ala 4 Thrl58Pro 4 Trpl06Pro 4 Alal33Asn 4 Trpl06Pro 4 Ser204Asp 4 Glyl31Asp 4 TyrlO4Ala 4 Prol29Ser 4 GlylO2Asn 4 GlylO2Glu 4 Glyl54Asn 4 Glyl57Ser 4 Thrl58Gly 4 GlnlO3Asn 4 GlylO2Asp 4 Gln206Glu 4 Thr 66Gly 4 Glyl60Asn 4 TrplO6Cys 4 Thrl58Ser 4 Alal87Ser 4 Leul26Gly 4 Val 95Gln 4 TrplO6Cys 4 IlelO7Gly 4 Thrl58Glu 4 Asp 60Glu 4 Asnl55Gln 4 Phel89Met 4 Asn 62Ser 4 Glyl28Gln 4 Prol29Gln 4 Thrl58Gln 4 Ser204Glu 4 Phel89Ser 4 Glyl54Asn 4 Glyl28Glu 4 TrplO6Thr 4 Thrl58Asp 4 Val203Asp 4 Prol29Glu 4 Serl30Asp 4 Glyl60Asn 4
Ser204Asp
Serl30Glu
Serl59Glu
Asnl55Gln
Thrl64Asn
Gly 97Ser
Pro210Gly
Phel89Thr
Glyl60Pro
Thrl64Glu
Glyl27Ser
Gln206Asn
Alal33Thr
Thrl64Asp
Phel89Val
TyrlO4Hls
TrplO6Gly
Tyrl67Gly
Phel89Thr
Thrl64Glu
Thrl64Gly
Glyl27Ser
Tyr214Ile
Leu 96Gly
Vai203Pro
Vall65Gln
Thr164Pro
Gln206Asn
Thrl64Ser
Leul26Pro
Ala200Thr
Leul26Cys
Val203Ser
TrplO6Phe
Val203Gln
Val203Gly
Leu 96Gly
Ser204Glu
Glyl57Asn
Vall65Met
Gln206Asp
Ser204Asp
Ser204Glu
Glyl54Glu
Serl30Asp
Tyrl67Gly
Ser204Asp
Glyl31Glu
Glyl66Glu
Glyl66Glu
Pro210Gly + Glyl54Ser 4 Pro201Ser 4 Serl88Glu 4 Gln206Asn 4 Gly211Ser 4 Ala216Thr 4 Ala200Gln 4 Ala216Asn 4 Gly211Gln 4 Lys213Glu 4 Tyr217Val 4 Gln206Asn 4 Gly211Gln 4 Pro201Asn 4 TrplO6Thr 4 Glyl66Ser 4 Tyr217Leu 4 Gly202Asn 4 Gln206Asn 4 Alal87Pro 4 Phel89Gln 4 Ala216Thr 4 Ala216His 4 Gly211Pro 4 Pro210Gln 4 Ser204Glu 4 Asn212Ser 4 Val203Gln 4 Glyl57Asn 4 Gly211Gln 4 Pro210Glu 4 Gly215Ser 4 Glyl54Gln 4 Gln206Glu 4 Ser204Glu 4 Ser204Glu 4 Gly211Asn 4 Ser204Asp 4 Gly211Glu 4 Tyr217Cys 4 Gln206Asp 4 Gln206Asp 4 Glyl57Asn 4 Tyrl67Glu 4 Pro201Gln 4 Ala216Pro 4 Tyrl67Met 4 Ala2l6Gln 4 Tyr217Cys
Ala216Gln 4 Pro210Asn 4 Tyr217Val 4 Gly202Gln 4 Ala216Thr 4 Gly219Ser 4 Tyr217Met 4 Tyr214Ala 4 Tyr217Asp 4 Tyr214Thr 4 Tyr214Ala 4 Gly219Pro + Ala216Gly 4 Thr220Ser 4 Ala216Ser 4 Alal87Asn 4 Ala216Thr 4 Asn218Glu 4 Asn212Glu 4 Ala216Pro 4 Thr220Asp 4 Tyr217Leu 4 Tyr217Cys 4 Tyr217Asn 4 Gly219Asn 4 Tyr217Glu 4 Thr220Pro 4 Gly215Asp 4 Asn218Asp 4 Val203Thr 4 Ala216Gln 4 Thr220Gly 4 Ala216Thr 4 Thr208Pro 4 Tyr217His 4 Ala216Glu 4 Asn218Asp 4 Asn218Glu 4 xsn218Glu 4 Lys213Glu 4 Thr220Gly 4 Tyr214Ile 4 Tyr217Thr 4 Phel89Ser 4 Tyr217Thr 4 Gly215Ser 4 Gly219Asp 4 Thr220Gln 4 Tyr217Ile 4 Thr220Asp
Asn 62Asp Val 95Asp Glyl54Glu IlelO7Leu TrplO6Ile GlylOOAsp Alal33Pro Thr 66Gly GlylOOGlu Leul26His Asp 60Glu Leu 96Cys Ser 63Asp Glu 5 9Asp SerlOlGlu Asn 62Asp Asp 60Glu Asp 60Glu GlylO2Gln Asn 61Ser Prol29Asn Asn 61Ser Gin 59Asn Phel89Gln Ala 98His Leu 96Met Gly 97Pro Vall65Ser Serl91Glu Glyl02Pro Asnl55Asp Glyl60Ser Ala 98Thr Glyl27Pro Leul26Met SerlOlAsp Val 95Ala Asnl55Glu Trpl06Pro Prol29Ser TyrlO4Val Leu 96Asp Serl59Glu Gin 59Asp GlnlO3Ser Val 95Glu Val 95Glu Ser 63Asp Glyl60Asp Leu 96His + Gly 97Gln + TyrlO4Glu + Thrl58Asp + Glyl54Asp 4- Asnl55Ser 4- Leul26Asp 4- Gln206Glu 4- SerlOlGlu 4- GlylO2Glu 4- Alal87Glu 4- Leu 96Asn 4- IlelO7Ala 4- Thrl58Gly 4· Asn 62Asp 4- Glyl27Glu 4- Ser 63Glu 4· Gly 97Asp 4- Val 95G1U + Glyl54Glu 4- Thr 66Ser 4- Alal33Gln + Gln206Asp 4- Glyl28Asn 4- Val203Gly 4- Glyl54Glu 4· Prol29Gly 4- Ser204Glu 4- Lys213Glu 4- Ser204Glu 4· Asnl55Asp 4· Gly215Pro 4- Ser204Glu 4- Alal87Ser 4- Ser204Glu 4- Prol29Glu 4- Ser204Asp 4- Tyrl67Asp 4- Glul56Asp 4- Glyl27Asp 4- Ser204Asp + Leul26Asp 4- Gly 97Asp 4· Asn212Gln 4· Asn 62Glu 4· TyrlO4Ala 4- Glul56Asp 4· Gly215Glu 4· Glyl60Asp 4- Serl61Asp 4· TrplO6Asp
4· TrplO6Gly 4- Leul26Ser 4- Phel89Glu 4- Glyl57Glu 4- Serl59Asp 4- Glyl27Ser 4- Tyr214Ala 4- GlylO2Asn + TyrlO4Glu + Val203Glu 4· Prol29Gln 4* Alal33Pro 4- Gln206Asp 4- GlylOOGlu 4- Alal87Gln 4- GlylOOAsp 4- Ala 98Glu 4· Asp 99Glu 4- Asnl55Glu 4· Leul26Glu 4- Phel89Ile 4- Lys213Glu 4- Ala200Thr 4- Gln206Asp 4- Serl63Asp 4- Glyl54Glu 4- Lys213Asp + Tyr214Cys 4· Gln206Asp 4- Ala216Glu 4- Ala216Glu 4- Gln206Glu 4- Ser204Glu 4- Gln206Glu 4· Serl63Glu 4- Gln206Glu 4· Ser204Glu 4· Thrl64Asp 4- Serl30Asp 4· Gln206Glu 4· Glyl57Asp 4· GlnlO3Asp 4· Lys213Glu 4· Ser 63Glu 4· Val203Asp 4- Glyl57Asp 4- Ala216Glu 4- Serl61Glu 4- Tyrl67Met 4· Gln206Asn
4· Pro210Asp 4· Asnl55Gln 4- Gly215Asn 4· Val203His 4- Serl91Glu 4- Prol29Gln 4- Asn218Glu 4-. Leul26Glu 4- Asnl55Gln 4- Gln206Asp 4- Gly211Glu 4- GlylS7Asp 4- Tyr214Asp 4- Phel89Tyr 4- Gln206Asn 4- Glyl31Asn 4- Phel89His 4- SerlOlAsp 4- Serl91Asp 4- Asnl55Glu 4- Gln206Glu 4- Tyr217Ala 4- Gln206Glu 4- Lys213Asp 4· Val203Met 4- Serl63Glu 4- Ala216Glu 4- Ala216Glu 4- Tyr214His 4- Tyr217His 4· Tyr217Ser 4- Lys213Glu + Gln206Glu 4- Lys213Glu 4· Phel89Thr 4- Ala216Asn 4- Gln206Glu 4· Ser204Glu 4· Asnl55Asp 4- Pro210Asp 4· Serl63Asp 4· Tyr217Cys 4- Gly215Asp 4- Prol29Ser 4· Gln206Asp 4· Tyr214Gly 4· Tyr217Leu 4· Val203Ser 4- Ser204Asp 4- Asn218Asp
4· Asn212Gln 4- Gln206Ser + Tyr217Met 4- Gly219Glu 4- Ala216Thr 4- Thr220Ser 4- Gly219Ser 4- Ala216Pro 4- Val203Ala 4* Asn218Glu + Tyr217Met 4- Glyl60Asp 4- Tyr217Asp 4- Tyr214Met 4· Tyr217Ile 4- Lys213Glu 4- Gly211Glu 4- Vall65Thr 4- Gln206Asp 4· Glyl57Asp 4· Lys213Glu 4- Gly219Asn 4· Lys213Glu 4· Tyr217Pro 4- Tyr217Met 4- Tyr217Ser 4- Gly219Ser 4- Tyr217Pto 4- Ala216Asp 4- Asn218Glu 4- Asn218Glu 4- Ala216Ser 4· Lys213Asp 4- Tyr217Ala + Asn218Ser + Tyr217Glu 4- Tyr217Glu 4· Tyr214Thr 4- Gly219Gln 4- Asn218Glu 4· Thrl64Asp 4· Gly219Asp 4- Ala216Glu 4· Asnl55Asp 4- Lys213Glu 4- Thr220Asp 4- Gly219Ser + Tyr217Cys 4- Tyr217Ala 4- Gly219Asp
GlylOOGlu SerlO5Glu Asp 60Glu GlnlO3Asp Val 95Gln Thrl58Asp SerlOSAsp Gin 59Glu GlnlO3Asp Ala 98Asp <-Glyl54Asp Asn 6lGlu •Glyl57Ser Val 95Thr TyrlO4His Glyl28Asp Asn 62Glu Glyl66Asp Serl30Asp Gly 97Pro Glyl54Asp Asn 61Gln Gin 59Asp Alal33Gly Glyl54Asn Leu 96Glu Serl62Glu Val 95Asp Glyl54Glu Gly 97Glu Thr 66Gly ?GlnlO3Glu Thr 66Gln ;Prol29Asn Serl59Asp Asp 99Glu GlnlO3Glu Asn 62Ser Glyl60Glu Asp 60Glu Glyl54Glu SerlO5Asp Asn 62Glu Asn 62Asp Asp 60Glu Serl62Glu Gly 97Glu Glyl28Glu Asp 60Glu Gly 97Asp
SerlOlAsp 4 Alal87Ser 4 TrplO6Asn 4- Serl63Glu 4 GlylOOAsn 4 Seřl59Asp 4 TrplO6Glu 4 Asp 60Glu 4 Serl61Glu 4 Asp 99Glu 4 Asnl55Asp 4 TyrlO4Ser 4 Thrl58Glu 4 Glyl57Glu 4 AsnlSSGlu 4 Glyl57Asn 4 Val 95Ala 4 Gln206Ser 4 Serl63Asp 4 Serl32Asp 4 Serl91Asp 4 IlelO7His 4 Ala 98Glu 4 Glyl54Asp 4 Glyl60Ser 4 Ala 98Asn 4 Thrl64Glu 4 IlelO7Asp 4 Glyl66Asp 4 Asp 99Glu 4 GlnlO3Asp 4 SerlO5Glu 4 Thrl64Asp 4 Glyl31Gln 4 Serl62Glu 4 SerlOlAsp 4 TyrlO4Gly 4 Serl32Asp 4 Serl62Asp 4 Ser 63Asp 4 Glul56Asp 4 TrplO6Gly 4 GlylOOGlu 4 Prol29Gly 4 GlylOOAsn 4 Thrl64Glu 4 Serl30Glu 4 Serl63Glu 4 Asn 61Glu 4 SerlOlAsp
TrplO6Met 4 Val203Glu 4 Val203Glu 4 Thrl64Glu 4 Glul56Asp 4 Ser204Glu 4 Thrl64Asn 4 TyrlO4Asn 4 Serl62Asp 4 SerlO5Glu 4 Ser204Glu 4 Gln206Glu 4 Gln206Asp 4 Serl88Glu 4 Glyl57Asn 4 Pro210Gln 4 GlylOOAsp 4 Gly215Pro 4 Tyrl67Ser 4 Thrl58Gly 4 Lys213Asp 4 Ser204Glu 4 GlylO2Asp 4 Gln206Glu 4 Glyl66Glu 4 Tyrl67Asn 4 Thr208Gln 4 Tyrl67His 4 Lys213Asp 4 Glul56Asp 4 TrplO6Glu 4 Thrl58Ser 4 Val203His 4 Thrl64Glu 4 Gln206Ser 4 Glyl31Asn 4 Thrl64Pro 4 Glyl60Glu 4 Tyrl67Ile 4 Serl30Glu 4 Pro210Glu 4 Glyl27Asp 4 Glyl57Asn 4 Alal33Gly 4 Ser204Asp 4 Val203Thr 4 Tyrl67Asp 4 Glyl66Glu 4 Alal87Gly 4 TyrlO4Glu
Serl62Asp 4 4 Ser204Asp 4 4 Ser204Glu 4 4 Pro201Gln 4 4 Glyl57Asp 4 4 Glý215Asn 4 4 Ala216Asp 4 .4 Serl91Glu 4 4 Gln206Ser 4 4 Thrl64Gln 4 4 Ala216Gln 4 4 Ala216Glu 4 4 Lys213Asp 4 4 Ser204Glu 4 4 Tyrl67Glu + 4 Asn218Glu 4 4 Lys213Glu 4 4 Tyr217Asp 4 4 Serl91Asp 4 4 Ser204Glu 4 4 Tyr214Ala 4 4 Lys213Glu 4 4 SerlOSGlu 4 4 Gly215Glu 4 4 Gln206Asp 4 4 Gln206Glu 4 4 Ala218Asp 4 4 Serl88Glu 4 4 Ala216Ser 4 4 Tyrl67Ala 4 4 Glyl28Asn 4 4 Leu209Thr 4 4 Gly211Glu 4 4 Gly211Glu 4 4 Pro210Glu 4 4 Lys213Glu 4 4 Pro210Asp 4 4 Serl62Glu 4 4 Ser204Glu r 4 Gly202Gln 4 4 Lys213Asp 4 4 Glyl54Asp 4 4 Glyl66Glu 4 4 Ser204Asp 4 4 Gln206Glu 4 4 Ser204Asp 4 4 Tyr217Val 4 4 Gln206Glu 4 4 Lys213Glu 4 4 Serl61Glu 4
Thrl64Pro
Ala216Gly
Ala216Gln
Ala216Pro
Lys213Glu
Tyr217Cys
Gly219Ser
Pro201Gln
Tyr217His
Alal87Ser
Tyr217Ala
Tyr217Cys
Ala216Asp
Ala216Asp
Gly202Ser
Thr220Glu
Tyr217His
Gly219Asp
Tyr217Met
Ala216Asp
Tyr217Asn
Asn218Glu
Leu209Thr
Thr220Gln
Gly215Asp
Gly215Glu
Tyr217Glu
Thr220Asn
Tyr217Cys
Ala216Pro
Serl62Asp
Lys213Glu
Lys213Glu
Lys213Asp
Tyr214Ala
Gly215Ser
Asn212Glu
Ala216His
Gly219Ser
Gly215Ser
Asn218Gln
Vall65Gln
Tyr217Leu
Gln206Asp
Pro210Ser
Asn212Ser
Gly219Ser
Ala216Ser
Ala216Glu
Tyr217Val
Ser 63Glu + IlelO7Gln + Gln206Asp + Ala216Asp + Thr220Glu Serl30Glu + Serl32Glu + Glyl60Asp + Ala216Gln + Thr220Gly Val 95Glu + Serl30Asp + Serl32Glu + Ala200Gly + Tyr217His Thr 66Gly + GlylOOGlu + GlnlO3Asp + Serl32Asp + Tyr217Asn Asp 60Glu 4 Glyl28Glu + Gln206Asn + Pro210Glu + Ala216Gln Leul26Val + Thrl58Glu + Val203Met + Lys213Asp + Gly215Glu Asp 99Glu + Serl59Glu + Thrl64Glu + Tyrl67Leu + Gln206Ser Val 95Asp + Prol29Asn + Thrl64Gln * Ala216Glu + Asn218Glu Glyl54Asp + Alal87Gly + Gly215Asp + Tyr217Thr + Asn218Glu Asn 62Glu + Gly 97Asp + GlylOOAsn + Ser204Glu + Tyr217Cys Asn 62Glu + Gly 97Asp + Glul56Asp + Val203Cys + Ala216Gly Asn 62Asp + Gly 97Asp + Ser204Asp + Tyr214Leu 4 Tyr217Leu Glul56Asp + Serl63Asp + Gln206Ser + Gly215Asp + Ala216Asp Serl59Glu + Serl63Glu + Phel89His + Ser204Glu + Tyr217Ser GlylOOPro + Asnl55Gln + Serl59Asp + Serl63Asp + Ser204Glu GlylO2Asp 4 Alal87Asp + Serl88Asp + Val203His + Ser204Asp Asp 99Glu 4 Thrl58Asp + Serl62Asp + Val203Met + Ala216Thr Val 95Cys + Gly 97Pro + Serl63Glu + Serl91Asp + Ser204Asp Leu 96Glu + Asp 99Glu + Serl59Glu + Gln206Asn + Ala216Thr Glyl27Pro + Serl62Glu + Serl91Glu + Gly211Glu + Asn212Asp Ser 63Glu 4 Serl91Asp + Gln206Asp + Ala216Asp + Tyr217Gln Ser 63Glu + Phel89Ile + Val203Met + Gln206Asp + Gly211Glu TrplO6Tyr + Phel89Asp 4 Pro210Asp 4 Lys213Glu 4 Asn218Glu Serl91Glu 4 Gln206Glu 4 Ala216Gly + Tyr217Leu 4 Thr220Asp Val 95Gly 4 Thrl58Asp 4 Serl61Asp 4 Alal87Pro 4 Asn218Asp Thr 66Glu 4 Glyl66Glu 4 Phel89Val 4 Serl91Glu 4 Gly219Ser Asp 60Glu 4 Asp 99Glu 4 Gln206Glu 4 Gly211Pro 4 Ala216Glu Asn 61Asp 4 Ser 63Asp 4 GlnlO3Glu 4 Lys213Asp 4 Tyr217Pro TyrlO4Glu 4 Glyl28Gln 4 Serl32Glu 4 Asn212Asp 4 Ala216Ser Asn 62Asp 4 Ser204Asp 4 Gly215Glu 4 Ala216Gln 4 Tyr217Leu Asn 61Asp 4 GlylOOAsp 4 TrplO6Ala 4 Asn212Gln 4 Lys213Asp Glyl27Glu 4 Glyl57Gln 4 Ser204Asp + Lys213Asp + Ala216Glu Leu 96Glu 4 Gly'97Ser 4 GlylOOGlu 4 Gln206Asp + Lys213Asp Asp 60Glu 4 Leu 96Cys 4 Gly 97Glu 4 Ser204Glu 4 Gly215Asn Tyrl67Pro 4 Ser204Asp 4 Lys213Glu 4 Ala216His.+ Gly219Glu Gly 97Ser 4 SerlOSAsp 4 Asnl55Glu 4 Glyl66Asp 4 Val203Asn GlylO2Asn 4 Glyl60Asn 4 Thrl64Glu 4 Gln206Asn 4 Thr220Asp Asn 61Ser 4 Ala 98Asp 4 Asnl55Asp 4 Serl88Glu 4 Val203Ser Glul56Asp 4 Ser204Asp 4 Gln206Glu 4 Lys213Glu 4 Ala216Pro Asp 99Glu 4 Glyl57Pro 4 Ser204Glu 4 Gln206Asp 4 Lys213Glu Serl30Asp 4 Glyl60Asn 4 Ser204Glu 4 Gln206Asn 4 Gly215Asp Glyl27Glu 4 Glul56Asp 4 Ser204Glu 4 Gln206Asp 4 Tyr214Pro Ala 98Glu 4 Asp 99Glu 4 TrplO6Gly 4 Glyl54Asp 4 Asn218Glu Gin 59Ser 4 Val 95Glu 4 Ala 98Asn 4 SerlOSGlu 4 Gln206Glu Gly 97Pro 4 Glyl28Glu 4 Lys213Asp 4 Ala216Glu 4 Asn218Glu Glnl03Asp 4 Ilel07Asp 4 Glyl57Pro 4 Tyrl67Glu 4 Ala216Glu Asp 60Glu 4 Gln206Glu 4 Lys213Asp 4 Gly215Pro 4 Asn218Glu Serl30Glu 4 Thrl64Glu 4 Val203Met + Ser204Asp + Gln206Aep Asp 60Glu 4 Ser 63Glu 4 Glyl54Asp + Glyl66Ser 4 Serl88Asp Leu 96His + Serl30Glu 4 Glul56Asp + Tyrl67Glu + Lys213Glu
Gin 59Ser + Glyl27Glu + Glnl03Glu + Ser 63Asp + Asp 60Glu + Gly 97Asp + Asn 62Asp + Ala 98Pro + Ser 63Asp + Asp 60Glu + Asp 60Glu + ;IlelO7Asp + /Ser 63Asp + Asnl55Glu + 'Ser 63Asp + Ser 63Asp + Thr 66Glu + Thrl58Asp + Ser 63Glu + Gly 97Ser + Val 95Glu + Gin 59Glu + Ala 98His + Ser 63Asp + Glyl27Glu + Serl62Asp + Glyl57Glu + Glyl60Glu + Asp 60Glu + TyrlO4Cys + TyrlO4Asp + Serl32Glu + Gly 97Asp + .SerlOlGlu + Asp 99Glu + Šerl30Glu + Gin 59Asn + Asp 60Glu + Serl30Asp + Asn 61Asp + Glyl02Pro + Glul56Asp + Thr 66Pro + Glyl31Pro + Ala 98Glu + TyrlO4Leu + Ser 63Glu + Thrl58Glu + TrplO6Thr + Ala 98Ser +
Glul56Asp + Asnl55Asp + Glyl60Asn + Gly202Pro + Leu 96Glu + GlnlO3Asp + Thr 66Glu + Prol29Asp + Glul56Asp + GlylO2Gln + Thrl58Gln + Glyl31Asp t GlylOOGlu 4· Glyl57Glu 4· IlelO7Met 4Val 95Ala 4GlylOOGln 4Serl61Asp + Serl62Asp 4SerlOlAsp 4Asp 99Glu 4Thr 66Asp 4SerlOlGlu 4Glyl60Asp + Serl62Glu + Alal87Glu 4· Phel89Tyr 4Serl61Asp + Serl59Asp + Serl62Glu 4Glyl28Asn + Glyl57Ser 4Ala 98Asp + Thrl58Gln 4GlylOOAsp 4Serl61Glu 4· TyrlO4Asp 4· SerlOlGlu 4Serl59Asp + GlylOOAsp 4Glyl31Asp 4· Ser204Asp + GlnlO3Asp + Phel89Leu + Glyl57Ser 4Thrl58Glu 4Ala 98Gln 4Glyl66Asn + Glyl54Ser 4Alal87Glu 4Glyl60Glu Alal87Hls Gln206Glu Lys213Asp Thrl58Gln Phel89Ala Tyrl04Pro Serl30Asp Gln206Glu SerlO5Glu Lys213Glu Ala216Asp GlnlO3Asp Gln206Asn Prol29Asn Asp 99Glu Glnl03Asp Gln206Asp Alal87Gln Val203Cys Ser204Asp Serl63Asp Glyl66Gln Val203Ala Serl63Glu Pro201Gln Val203Glu Tyrl67Glu Thrl64Glu Lys213Glu Serl30Asp Serl63Asp Prol29Glu Alal87Glu Asnl55Asp Serl62Asp Thrl58Asp Ser204Glu Serl63Glu Trpl06Pro Serl88Asp Gln206Asp Glul56Asp Serl91Glu Gln206Asp Gly202Ser GlylO2Asn Pro210Glu Glyl57Asp Lys213Asp
4· Gly211Glu + 4- Ala216Glu + 4- Tyr214Gly + 4· Gly215Gln 44· Glyl66Pro + 4· Gln206Ser + + Serl32Asp + + Lys213Glu 44* Lys213Glu + 4- Thrl64Gln + 4- Ala216Gln 4* 4- Tyr217His 44- Gln206Asn + 4- Pro210Asp 4· 4- Serl91Asp 44- Leul26Thr 44- Lys213Asp 44- Tyr217Cys 44· Gly211Asn 44- Tyr214Glu 44- Gly215Glu 44- Pro201Gln + 4- Serl88Asp 44· Ser204Asp + 4- Lys213Asp + 4- Gln206Asp 44- Ser204Glu 4· 4· Gly202Asn + 4- Phel89His 44- Asn218Asp + 4· Glyl57Ser 44· Asn212Asp 4· 4- Tyrl67Leu 4· 4- Serl88Glu 44- Glyl66Gln + 4· Thrl64Asn 44· Serl91Glu 4· 4· Gln206Ser 44· Pro210Gln 4· 4- Glyl28Glu + 4· Ser204Glu 44- Asn212Asp 4· 4· Serl91Glu 44- Gln206Glu + 4· Lys213Asp 44- Gln206Glu + 4- Serl30Asp 44- Lys213Glu 4· 4· Lys213Glu 4· 4- Gly215Gln 4Lys213Glu
Tyr217His
Asn218Glu
Asn218Asp
Gln206Asp
Lys213Asp
Asn212Asp
Tyr217Glu
Ala216Pro
Gly211Glu
Tyr217Val
Asn218Asp
Gly219Asp
Ala216Glu
Gly219Glu
Serl63Asp
Ala216Asn
Gly219Asp
Lys213Asp
Tyr217Asp
Asn218Gln
Gly215Glu
Val203Asp
Gln206Glu
Ala216His
Tyr217Glu
Lys213Glu
Gln206Glu
Lys213Glu
Gly219Glu
Ser204Glu
Lys213Glu
Gln206Asp
Gln206Glu
Ser204Glu
Gly211Asp
Asn218Glu
Pro210Asp
Tyr?17Asp
Tyr217Asp
Gln206Glu
Ala216His
Gln206Asp
Lys213Glu
Gly215Gln
Lys213Glu
Tyr217Glu
Thr220Glu
Ala216Glu
Ala216Asp
Tyrl04Pro Leul26Asn SerlOlAsp Asn 61Asp Val 95Asp Leu 96Glu SerlOlGlu Asp 99Glu Leu 96Ala Ala 98Glu Asn 61Glu Gly 97Asp Leul26Ala Val 95Glu Asn 61Glu GlylO2Asp Serl30Asp Alal33Asp Serl32Glu Glyl57Glu Thr 66Ser Asp 99Glu Thr 66Ser Asp 60Glu Ser 63Glu Prol29Gly Glyl31Asp GlylO2Asp Glyl31Asp Gin 59Asn Ala 98Glu GlnlO3Asp Val 95Asp SerlOlAsp Thr 66Glu Val 95Asp Val 95Ser Asn 62Asp Ser 63Asp Gin 59Asp Val 95Glu Serl32Glu SerlOlAsp Thr 66Asp Asn 62Glu Ilel07Asp SerlO5Asp Asnl55Asp SerlOlGlu Gin 59Glu + Serl59Asp + + Asnl55Glu + + Val203His + + Serl63Asp + + TrplO6Glu + + GlylOOAsp + + Ser204Asp + + Serl59Glu + + GlnlO3Asp + + SerlO5Glu + + Serl59Glu + + SerlOlAsp + + Glyl31Glu + + Ala 98Asn + + GlylOOAsn + + Glyl27Ser + + Asnl55Gln + + Serl59Glu + + Thrl64Asp + + Tyrl67Asp + + Serl30Glu + + Serl59Glu + + SerlO5Asp + + Glyl27Asp + + Serl30Asp + + Serl59Glu + + Glul56Asp + + TrplO6Glu + + Serl61Asp + + Serl88Asp + + Glyl57Asp + + TrplO6Tyr + + Glyl31Gln + + GlnlO3Glu + + Glyl28Pro + + Glyl31Glu + 4· Ala 98Glu + + Leul26His + + Serl30Glu + + Glyl57Asp + + Asp 99Glu + + Glyl54Gln + + Glyl31Pro + + Leu 96Glu + + Glyl66Gln + + Alal87Asp + + Serl59Glu + + Serl63Asp + + Glyl31Asn + + Glyl60Asp +
Gly202Asn + Thrl64Asn + Ser204Asp + Val203His + Serl61Glu + Trpl06Cys + Gly211Glu + Serl62Glu ·+ Leul26Val + Glyl54Glu + Gln206Ser + Alal33Glu + Ser204Glu + GlylO2Glu + Prol29Asp + Thrl58Asp + Thrl58Glu + Serl61Asp + Ser204Asp + Ser204Glu + Thrl58Glu + Ser204Glu + Serl59Glu + Ser204Glu + Gln206Asp + Serl88Glu + Serl62Glu + Serl59Glu + Serl63Asp + Gln206Asp + Thrl64Asp + Glyl60Asp + Serl59Asp + Serl61Glu + Glyl54Asp + Serl63Asp + SerlOlAsp + Glyl31Pro + Thrl58Pro + Gln206Glu + Gly215Asp + Glyl57Glu + Serl88Asp + Glul56Asp + Serl88Glu + Serl91Asp + Serl91Asp + Vall65Asn + Asnl55Glu + Serl88Asp +
Lys213Glu
Lys213Asp
Gly211Asp
Ser204Glu
Alal87Pro
Serl88Glu
Lys213Asp
Ser204Asp
Glyl28Asp
Glul56Asp
Pro210Glu
Gln206Glu
Pro210Asp
Serl62Asp
Serl63Glu
Glyl60Glu
Serl91Asp
Ser204Asp
Gln206Glu
Gln206Glu
Ser204Glu
Gln206Glu
Ser204Glu
Gln206Glu
Ala216Gly
Phel89Cys
Alal87Pro
Pro210Gln
Glyl66Asn
Gly211Glu
Phel89Thr
Lys213Glu
Ala216Asp
Gln206Glu
Thrl64Asp.
Serl91Glu
Glyl31Asp
Lys213Glu
Ala216Glu
Tyr214Val
Ala216Asn
Serl61Asp
Serl91Glu
Val203His
Gly211Glu
Gln206Asp
Lys213Asp
Gln206Ser
Alal87Glu
Val203Glu
4- Ala216Asp 4- Ala216Glu 4- Tyr217Asp 4- Tyr217Asp 4· Ser204Asp 4* Gln206Asp 4- Gly215Asn 4- Gly219Asn 4- Ser2O4Asp + Phel89Pro 4- Ala216Glu + Gly219Pro 4· Lys213Glu 4- Ser204Glu 4- Asn218Ser 4- Lys213Glu 4· Gly215Glu 4- Ala216Gln 4- Tyr217Pro 4- Ala216Asn 4- Gln206Glu 4· Tyr217Pro 4· Gln206Asp 4- Tyr214Asn 4- Asn218Asp 4- Ser204Asp 4- Tyr214Gly 4- Thr220Asp 4- Ser204Asp 4- Tyr217Glu 4- Lys213Asp 4- Gly215Asp 4- As n218Asp 4- Ala216His + Ser204Glu 4- Gln206Asn 4- Phel89Asp 4· Tyr217Asp 4- Tyr217Ile 4- Asn218Asp 4- Tyr217Ile + Tyr214Ser 4· Gln206Glu 4- Gly215Asp 4· Ala216His 4· Ala216Thr 4- Ala216Thr 4- Lys213Glu + Lys213Asp 4- Tyr217Ile
Alal33Asp Glnl03Glu Ser 63Glu SerlOlGlu Asp 60Glu GlnlO3Ser GlylO2Asn Thr 66Gln Asp 99Glu Thr 66Asp Ser 63 Asp Glyl02Pro Gin 59Glu .Asp 60Glu .Asp 60Glu SerlOlAsp SerlOlAsp Serl32Asp GlnlO3Asp Leu 96Ile Thr 66Glu Ala 98Asp Ser 63Glu Gin 59Glu Ser 63Glu GlylO2Asp SerlO5Asp Asp 60Glu SerlOlGlu Gin 59Glu Gly 97Asp TyrlO4Asp Serl32Glu Leu 96Thr Asp 60Glu
Thrl64Asp
Serl61Glu
Tyrl67Met
Serl88Glu
Glyl28Asn
Alal33Gly
Gln206Asp
Glnl03Glu
Glyl57Asn
Serl59Glu
Tyrl67Ala
Glul56Asp
GlnlO3Glu
Ala200Gln
Glyl57Asp
TyrlO4Glu
Val203Asp
Gly211Pro
Serl63Asp
Serl91Glu
Ser204Glu
Glyl66Glu
Val203Met
Glyl28Asp
IlelO7Ser
Serl62Glu
Serl91Asp
TrplO6Gly
Thrl64Glu
Glyl57Asp
Gln206Asp
Glyl60Asn
Serl63Glu
Asnl55Glu
Leul26Gly + Serl61Glu 4 + TyrlO4Cys 4 + GlylfiOAsp + 4 Leul26Glu 4 4- Leu 96Glu 4 4 Serl30Asp + 4 Serl62Asp 4 4 Asp 99Glu 4 4- GlnlO3Asp + 4 Prol29Asp 4 4 Gly 97Asp 4 4 TyrlO4Ala 4 4 Asn 62Gln 4 4 Serl62Glu 4 4 IlelO7Glu 4 4 GlylO2Ser 4 4 SerlOSAsp 4 4 Asnl55Glu 4 4 Glyl28Asp 4 4 Glyl28Asp 4 4 GlnlO3Asp 4 4 Serl32Asp 4 4 Prol29Glu 4 4 Gly 97Asp 4 4 GlnlO3Glu 4 4 Glyl57Asn 4 4 Serl62Asp 4 4 Val 95Glu 4 4 TrplO6Asp 4 4 GlylOOGln 4 4 Serl30Asp 4 4 Glyl54Asp 4 4 Glyl54Glu 4 4 Alal33Glu 4 4 Asp 99Glu 4
Ser204Asp 4 Thrl64Asp 4 Lys213Asp 4 Lys213Asp 4 Serl30Glu 4 Gln206Glu 4 Tyr217Gly 4 Val203Ser 4 Lys213Asp 4 Lys213Asp 4 Serl88Asp 4 Tyrl67Glu 4 Glyl31Glu 4 Val203Glu 4 Glyl60Glu 4 Phel89Asp 4 Ala216His 4 Lys213Glu 4 Alal87Glu 4 Gly202Asn 4 Lys213Asp 4 Pro210Asp 4 Iys213Glu 4 Serl59Glu 4 Glul56Asp 4 Serl91Glu 4 Pro210Gly 4 Prol29Glu 4 Ser2O4Asp 4 Gly211Asp 4 Lys213Asp 4 Serl63Asp 4 Pro210Gly 4 Lys213Asp 4 Serl30Asp
Asn218Ser 4 Lys213Glu 4 Asn218Asp 4 Ala216Asn 4 Gln206Glu 4 Gly219Asp 4 Gly219Asp 4 Tyr217Asp 4 Ala216Gln 4 Tyr217His 4 Ser204Glu 4 Ser204Glu 4 Phel89Leu 4 Gly211Asp 4 Phel89Ser 4 Lys213Glu 4 Tyr217His 4 Asn218Asp 4 Tyr217Ile 4 Gln206Glu 4 Gly219Ser 4 Tyr214Gln 4 Gly219Asp 4 Ala216Ser 4 Lys213Asp 4 Ser204Glu 4 Gly211Glu 4 serl59Asp 4 Pro210Ser 4 Tyr217Glu 4 Ala216Asn 4 Ser204Glu 4 Asn212Asp 4 Ala216Asp 4 Serl62Glu
Příklady 7-12
Tekuté čisticí prostředky na pevné povrchy
Příklad č.
Složka 7 8 9 10 11 12
SerlO5Glu 0,05 0,50 0,02 0,03 0,10 0,03
Glyl27Gln+Ala216Pro - - - - 0,20 0,02
Na2DIDft*‘
EDTA'”' - - 2,90 2,90 - -
citrát sodný - - - - 2,90 2.90
NaCi2 alkylbenzen 1,95 - 1,95 - 1,95 -
sulfonát
NaCi2 alkylsulfát - 2,20 - 2,20 - 2,20
NaCi2 Cethoxy)~~~ - 2,20 - 2,20 - 2,20
sulfát
Ci2dimetylamin - 0,50 - 0,50 - 0,50
oxid
Na kumensulfonát 1,30 - 1,30 - 1,30 -
hexyl karbitol’””* 6,30 6,30 6,30 6,30 6,30 6,30
vodaXXXA k vyrovnání do 100¾
^N-dietylenglykol-N,N-iminodiacetát dvojsodný xxNa^ etylendiamin dioctová kyselina '“'-'diety lenglykol monohexyl éter χχχχρΗ všech látek upraveno na 7
V příkladech 7-10 je SerlOSGlu. mezi jiným, nahrazen variantami BPN* vyjmenovanými v tabulkách 2-25, v podstatě se stejnými výsledky.
V příkladech 11-12 jsou Glyl27Gln + ftla216Pro, mezi jiným, nahrazeny kteroukoli kombinací variant BPN' vyjmenovaných v tabulkách 2-25. v podstatě se stejnými výsledky.
Příklady 13-18
Sprejové prostředky pro čištění pevných povrchů a odstraňování domácích plesnivých skvrn
Složka 13 Příklad č. 18
14 15 16 17
Tyrl04Ile+Gly215Pro 0.50 0.05 0,60 0.30 0.20 0.30
Asp99Glu - - - - 0.30 0.10
octylsulfát sodný 2.00 2.00 2.00 2.00 2.00 2,00
dodecylsulfát sodný 4.00 4.00 4,00 4.00 4.00 4.00
hydroxid sodný 0.80 0,80 0.80 0.80 0.80 0.80
silikát (Na) 0.04 0.04 0.04 0,04 0.04 0,04
parfém 0.35 0.35 0,35 0,35 0,35 0.35
voda k vyrovnání do 100¾
pH produktu je 7.
V příkladech 13-16 jsou TyrlO4Iie + Gly215Pro, mezi jiným, nahrazeny variantami BPN' vyjmenovanými v tabulkách
2-25, v podstatě se stejnými výsledky.
V příkladech 17-18 jsou Tyrl04Ile ♦ Gly215Pro a Asp99Glu. mezi jiným. nahrazeny kteroukoli kombinací variant BPN' vyjmenovaných v tabulkách 2-25, v podstatě se stejnými výsledky.
Příklady 19-24
Prostředky do myček na nádobí
Složka Příklad č.
19 20 21 22 23 24
G1 n59Ser-t-Leu96G 1 y
+Ser204Glu 0.05 0.50 0,02 0,40 0,10 0,03
Lys96Gly+Ser204G1u - - - - 0,40 0,02
C12-Ci^N-metyl
glukamid 0.90 0,90 0.90 0,90 0,90 0.90
Ci2etoxy<l)sulfát 12.00 12,00 12,00 12,00 12,00 12,00
kyselina 2-metyl
undekanová 4.50 4,50 4,50 4,50 4,50 4,50
Ci2 etoxy(2)karboxylát 4.50 4,50 4.50 4,50 4,50 4,50
Ci2alkoholetoxylátC4> 3.00 3,00 3.00 3,00 3,00 3,00
Ci2aminoxid 3.00 3,00 3,00 3,00 3,00 3,00
Na kuraensulfonát 2.00 2,00 2,00 2,00 2,00 2,00
etanol 4.00 4,00 4,00 4,00 4,00 4,00
Mg++<jako MgCl2) 0.20 0,20 0,20 0.20 0,20 0,20
Ca++Cjako CaCl2> 0.40 0,40 0.40 0,40 0,40 0,40
voda k vyrovnání do 100¾
pH produktu je upraveno na 7.
V příkladech 19-22
Ser204Glu, mezi jiným.
vyjmenovanými v tabulkách jsou Gln59Ser + Leu96Gly + nahrazeny variantami BPN’
2-25. v podstatě se stejnými výsledky.
V příkladech 23-24 jsou Gln59Ser + Leu96Gly -► Ser204Glu a Lys96Gly + Ser204Glu, mezi jiným, nahrazeny kteroukoli kombinací variant BPN' vyjmenovaných v tabulkách
2-25. v podstatě se stejnými výsledky.
Příklady 25-28
Práškový prací prostředek
Složka 25 Příklad 26 v c.
27 28
SerlOlAsp 0,10 0,20 0,03 0,05
Thr66Glu - - 0.02 0,05
Ci3 lineární alkylbenzen
sulfonát 22,00 22,00 22,00 22,00
fosfát (natřium
tripolyfosfáty) 23.00 23.00 23,00 23,00
uhličitan sodný 23,00 23,00 23,00 23.00
křemičitan sodný 14,00 14,00 14,00 14,00
zeolit 8,20 8,20 8,20 8.20
chelát (kyselina dietylen-
tr i am i npentaoctová 5 0.40 0.40 0.40 0,40
síran sodný 5,50 5,50 5,50 5,50
voda k vyrovnán í do 100%
V příkladech 25-26 je SerlOlAsp, mezi jiným, nahrazen variantami BPN' vyjmenovanými v tabulkách 2-25, v podstatě se stejnými výsledky.
V příkladech 27-28 jsou SerlOlAsp a Thr66Glu. mezi jiným, nahrazeny kteroukoli kombinací variant BPN' vyjmenovaných v tabulkách 2-25, v podstatě se stejnými výsledky.
Příklady 29-32
Práškový prací prostředek
Složka Příklad č. 29 30 31 32
Val 95Asp+Leu 126Ser-»-Asnl55G 1 n 0,10 0,20 0,03 0,05
Gly65Ser+Glyl02Asn+Val203Glu - - 0,02 0,05
Ci2alkylbenzen sulfonát 12,00 12.00 12,00 12,00
zeolit A (1-10 mikrometr) 26,00 26.00 26,00 26,00
kyselina 2-butylkaprylová 4,00 4.00 4,00 4,00
Ci2“Ci4 sekundární (2,3) alkyl
sulfát, sodná sůl 5,00 5,00 5,00 5,00
citrát sodný 5,00 5,00 5,00 5,00
optický zjasnovač 0,10 0,10 0.10 0.10
síran sodný 17,00 i 17,00 17.00 17,00
voda a menšinové složky k vyrovn ání do 100¾
V příkladech 29-30 jsou Val95Asp + Leul26Ser +
Asnl55Gln, mezi jiným, nahrazeny variantami BPN’ vyjmenovanými v tabulkách 2-25, v podstatě se stejnými výs1edky.
V příkladech 31-32 jsou Val95Asp + Leul26Ser +
Asnl55Gln a Gly65Ser + Glyl02Asn * Val203Glu, mezi jiným, nahrazeny kteroukoli kombinací variant BPN’ vyjmenovaných v tabulkách 2-25, v podstatě se stejnými výsledky.
Příklady 33-36
Práškový prac í prostředek
Složka 33 Příklad 34 č- 35 36
Ser63Glu 0.10 0,20 0,03 0,05
Leu96Asn*Lys213Asp - - 0,02 0,05
Ci3 lineární alkylbenzen
sulfonát 22.00 22.00 22,00 22,00
fosfát (natřium
tripolyfosfáty) 23,00 23.00 23,00 23.00
uhličitan sodný 23,00 23.00 23,00 23.00
křemičitan sodný 14,00 14.00 14,00 14.00
zeolit 8,20 8.20 8.20 8.20
chelát (kyselina dietylen-
tr i am i npentaoctová) 0.40 0.40 0,40 0,40
síran sodný 5,50 5.50 5,50 5,50
voda k vyr ovnání do 100¾
V příkladech 33-34 je Ser63Glu, mezi jiným, nahrazen variantami BPN' vyjmenovanými v tabulkách 2-25, v podstatě se stejnými výsledky.
V příkladech 35-36 jsou Ser63Glu a Leu96Asn +
Lys213Asp, mezi jiným, nahrazeny kteroukoli kombinací variant BPN’ vyjmenovaných v tabulkách 2-25, v podstatě se stejnými výsledky.
Příklady 37-40
Práškový prací prostředek
Složka Příklad č.
37 38 39 40
Asn62Ser+Serl63Asp+Phel89Ser
+Ala216Glu 0,10 0,20 0.03 0.05
G1y97Ser+TrplO6I1e+Tyr217Leu - - 0,02 0,05
Ci2alkylbenzen sulfonát 12,00 12,00 12.00 12,00
zeolit A (1-10 mikrometr) 26.00 26.00 26,00 26,00
kyselina 2-butylkaprylová 4,00 4.00 4.00 4,00
C12-C14 sekundární (2,3) alkyl
sulfát, sodná sůl 5,00 5,00 5.00 5,00
citrát sodný 5,00 5,00 5,00 5,00
optický zjasňovač 0,10 0.10 0,10 0,10
síran sodný 17,00 17,00 17,00 17,00
voda a menšinové složky k vyrovnání do 1 100%
V příkladech 37-38 jsou Asn62Ser + Serl63Asp + Phel89Ser + Ala216Glu, mezi jiným, nahrazeny variantami BPN' vyjmenovanými v tabulkách 2-25, v podstatě se stejnými výsledky.
V příkladech 39-40 jsou Asn62Ser + Serl63Asp +
Phel89Ser + Ala216Glu a Gly97Ser + Trpl06Ile + Tyr217Leu, mezi jiným, nahrazeny kteroukoli kombinací variant BPN' vyjmenovaných v tabulkách 2-25. v podstatě se stejnými výsledky.
Příklady 41-42
Práškový prací prostředek
Složka Příklad 41 č. 42
lineární alkylbenzen sulfonát 11,40 10,70
lojovitý alkyl sulfát 1,80 2,40
Ci4-15 alkyl sulfát 3,00 3,10
Ci4-15 alkohol 7x ethoxy1ováný 4,00 4,00
lojovitý alkohol llx ethoxylovaný 1.80 1,80
dispergovad1o 0,07 0,10
silikonová kapalina 0,80 0,80
citrát trojsodný 14,00 15,00
kyselina citrónová 3.00 2,50
zeolit 32,50 32,10
kopolymer kyselin maleinové a
akry1ové 5,00 5,00
kyselina dietylentriaminpenta-
mety1enfosfonová 1,00 0,20
A1a98As p+A1al87Ser 0,30 0,30
1ipáza 0,36 0,40
amyláza 0,30 0,30
křemičitan sodný 2,00 2,50
síran sodný 3,50 5.20
polyvinylpyrolidon 0.30 0.50
perborát 0,50 1.00
fenol sulfonát 0,10 0,20
peroxidáza 0,10 0.10
menšinové složky do 100 do 100
Příklady 43-44
Práškový prac í prostředek
Složka Příklad S.
43 44
lineární C12 alkylbenzen
sulfonát sodný 6,5 8,0
síran sodný 15,0 18,0
zeolit A 26,0 22,0
natr i um nitrilotr i acetát 5,0 5,0
polyvinylpyrolidon 0.5 0,7
tetraacety1ety1endiamin 3,0 3,0
kyselina boritá 4,0 -
perborát 0,5 1,0
fenol sulfonát 0,1 0,2
G1 n59Ser-+-As n62Ser+Leu96G1y +Ser204Gln 0,4 0,4
plnidla (např. silikáty, karbonáty, parfémy, voda) do 100 do 100
Příklad 45
Kompaktní zrnitý prací prostředek
Složka váhové %
alkyl sulfát 8,0 alkyl ethoxysulfát 2,0 směs alkoholů C25 a C45 3 a 7x ethoxy1ováných 6,0 amid polyhydroxymastné kyseliny 2,5 zeolit 17,0 vrstvený si1ikát/citrát 16,0 uhličitan 7.0 kopolymer kyselin raaleinové a akry1ové 5,0 polymer uvolňující nečistoty 0,4 karboxymetyl celulóza 0.4 polyC4-vinylpyridin)-N-oxid 0.1 kopolymer vinylImidazolu a vinylpyrolidonu 0.1
PEG2000 0.2
Va195G1n+Tyrl04G1u+Gly127G1n+Lys213G1u +Ala216Asp 0,5 lipáza 0.2 celuláza 0,2 tetraacetyletylendiamln 6,0 perkarbonát 22,0 kyselina etylendiamIndi jantarová 0,3 potlačovač pěnění 3.5
4,4’-bisC2-morfolin-4-ani1In-s-triazin
-6-ylamino)stilben-2.2'-disulfonát dvojsodný 0,25
4,4'-bisC2-sulfostyri1)bifenyl dvojsodný 0,05 voda, parfém a menšinové složky do 100
Příklad 46
Práškový prací prostředek
Složka váhové % lineární alkylbenzen sulfonát 7,6
Ci6-i8 alkyl sulfát 1,3
C14-15 alkohol 7x ethoxylovaný 4,0 koko-alkyl-dimetyl hydroxyetyl amonium chlorid 1,4 dispergovadlo 0,07 silikonová kapalina 0,8 citrát trojsodný 5,0 zeolit 4A 15,0 kopolymer kyselin maleinové a akrylové 4,0 kyselina dietylentriaminpentametylenfosfonová 0.4 perborát 15,0 tetraacetyletylendiamin 5,0 smektit (valchářská hlína) 10,0
PolyCoxy etylen)Cm,v, 300 000) 0,3
Ser63Glu+Thrl04Asn+Gln206Ser+Tyr217Thr 0.4 lipáza 0,2 amyláza 0,3 celuláza 0,2 křemičitan sodný 3,0 uhličitan sodný 10,0 karboxymetyl celulóza 0,2 z i asňovače 0,2 voda, parfém a menšinové složky do 100
Příklad 47
Práškový prací prostředek
S1ožka váhové % lineární alkylbenzen sulfonát 6,92 lojovitý alkyl sulfát 2.05
Ci4-15 alkohol 7x ethoxylovaný 4,4
C12-15 alkyl ethoxy sulfát - 3x ethoxylovaný 0,16 zeolit 20,2 citrát 5,5 uhličitan 15,4 křemičitan 3,0 kopolymer kyselin maleinové a
100 akrylové 4,0 karboxymetyl celulóza 0,31 polymer uvolňující nečistoty 0,30
Asn62Ser+Trpl06Gly+Serl32Asp+Alal87Ser +Phel89Ser 0,2 lipáza 0.36 celuláza 0,13 perborát tetrahydrát 11,64 perborát monohydrát 8,7 tetraacetyletylendiamin 5.0 kyselina dietylentriaminpentametylenfosfonová 0,38 síran hořečnatý 0,40 zjasňovač 0,19 parfém, silikon, potlačovače pěnění 0,85 menšinové složky do 100
Příklady 48-52
Tekuté prací prostředky
Příklad č-
Složka 48 49 50 51 52
Serl61Glu+Gly219Asn 0,05 0,03 0,30 0.03 0,10
Asn62Ser+I1el07AIa+G1u206Asp
+Tyr217Thr - - - 0.01 0.20
C12-C14 alkyl sulfát sodný 20,00 20,00 20.00 20.00 20.00
kyselina 2-butylkaprylová 5.00 5,00 5.00 5,00 5.00
citrát sodný 1,00 1,00 1,00 1.00 1,00
Cioalkohoi ethoxylát C3) 13.00 13,00 13,00 13.00 13,00
monetanolamin 2.50 2,50 2.50 2.50 2,50
voda/propylenglýko1/ etanol ¢100=1=1) k vyrovnání do 100¾
101
V příkladech 48-50 jsou Serl61Glu + Gly219Asn, mezi jiným, nahrazeny variantami BPN’ vyjmenovanými v tabulkách 2-25, v podstatě se stejnými výsledky.
V příkladech 51-52 jsou Serl61Glu + Gly219Asn a Asn62Ser + IlelO7Ala + Glu206Asp + Tyr217Thr, mezi jiným.
nahrazeny kteroukoli kombinací variant BPN’ vyjmenovaných v tabulkách 2-25, v podstatě se stejnými výsledky.
Příklady 53-57
Tekuté prací prostředky
Příklad č.
Složka 53 54 55 56 57
Serl01Asp+Ilel07Ala
+Gly202Ser 0,05 0,03 0,30 0,03 0,10
Va195Thr+Thr208G1y - - - 0,01 0,20
C12-C14 alkyl sulfát sodný 20,00 20,00 20,00 20,00 20,00
kyselina 2-butylkaprylová 5.00 5,00 5,00 5,00 5,00
citrát sodný 1,00 1,00 1,00 1,00 1,00
Cioalkohol ethoxylát (3) 13,00 13,00 13,00 13,00 13,00
monoetanolamin 2.50 2,50 2,50 2,50 2,50
voda/propy1englýko1/ etanol (100=1=1) k vyrovnání do 100%
V příkladech 53-55 jsou SerlOlAsp + Ilel07Ala +
Gly202Ser, mezi jiným, nahrazeny variantami BPN' vyjmenovanými v tabulkách 2-25, v podstatě se stejnými výsledky.
V příkladech 56-57 jsou SerlOlAsp + IlelO7Ala +
Gly202Ser a Val95Thr + Thr208Gly. mezi jiným, nahrazeny
102 kteroukoli kombinací variant BPN* vyjmenovaných v tabulkách 2-25, v podstatě se stejnými výsledky.
Příklady 58-59
Práškový prac í prostředek
Příklad e.
Složka 58 59
kyselina C12-14 alkenyl jantarová 3.0 8.0
monohydrát kyseliny citrónové 10.0 15,0
natrium C12-1S alkylsulfát 8,0 8,0
natřium sulfát C12-15 alkoholu
2x ethoxy1ováného - 3,0
C12-15 alkohol 7x ethoxylovaný - 8,0
Ci2-15 alkohol 5x ethoxylovaný 8,0 -
kyselina dietylentriaminpenta-
mety1enfosfonová 0,2 -
kyselina olejová 1,8 -
etanol 4.0 4.0
propandiol 2,0 2.0
Asp60G1u+G1n206Asn 0.2 0,2
polyvinylpyrolidon 1.0 2.0
potlačovač pěnění 0.15 0,15
NaOH až do PH 7.5
perborát 0.5 1.0
fenol sulfát 0.1 0,2
peroxidáza 0,4 0,1
voda a menšinové složky do 100 1 částí
V každém příkladu 58 a 59 jsou AspčOGlu + Gln206Asn, mezi jiným, nahrazeny variantami BPN' vyjmenovanými v tabulkách 2-25, v podstatě se stejnými výsledky.
103
Příklady 60-62
Tekuté prací prostředky
Složka Příklad č.
60 61 62
kyselina citrónová 7,10 3,00 3.00
mastná kyselina 2,00 - 2,00
etanol 1,93 3,20 3,20
kyselina boritá 2,22 3,50 3,50
monoetanolamin 0.71 1.09 1,09
1,2 propandiol 7,89 8.00 8,00
Na kumensulfonát 1,80 3,00 3,00
formitá sodný 0,08 0.08 0,08
NaOH 6,70 3,80 3.80
silikonové protipěnové činidlo 1,16 1,18 1,18
Asn61Glu 0,0145 - -
Gly97G1u+Thrl64Pro - 0,0145 -
Asn62Glu+Thrl58Ser+Gly215Ser - - 0,0145
1 i páza 0,20 0,20 0,20
celuláza - 7,50 7,50
polymer uvolňující nečistoty 0,29 0,15 0,15
protipěnová činidla 0,06 0,085 0,085
zjasňovač 36 0,095 - -
zjasňovač 3 - 0,05 0,05
kyšelina Ci 2 alkylbenzensu1fonová 9,86 - -
C12-15 alkylpolyethoxylát(2,5)
sulfát 13,80 18,00 18,00
Ci2 glukózoamid - 5,00 5,00
C12-13 alkylpolyethoxylát(9) 2.00 2,00 2,00
voda, parfém a menšinové složky k vyrovnání do 100¾
104
Příklady 63-66
Prací prostředky v pevné formě
Složka Příklad č-
63 64 65 66
G1y97G1u+Thr164Pro 0,3 — 0.1 0.02
A1a98Ser+Gly154Asn - - 0.4 0,03
C12-C16 alkylsulfát sodný 20,0 20.0 20.0 20.0
Ci2-Ci4 N-metylglukamid 5.0 5,0 5.0 5,0
C11—C13alkylbenzensulfonát sodný 10,0 10.0 10,0 10,0
uhličitan sodný 25,0 25.0 25.0 25.0
natrium pyrofosfát 7.0 7,0 7.0 7.0
natrium tripolyfosfát 7.0 7,0 7,0 7,0
zeolit A (0.1-10μ) 5,0 5.0 5,0 5,0
karboxymety1ce1u1óza 0,2 0.2 0,2 0.2
polyakrylát (m.h. 1400) 0.2 0.2 0.2 0,2
kokosový monoetanolamin 5,0 5,0 5.0 5.0
zjasňovač, parfém 0,2 0,2 0,2 0,2
CaS04 1,0 1,0 1.0 1,0
MgS04 1,0 1,0 1.0 1,0
voda 4,0 4,0 4,0 4,0
plnidlo5* k vyrovnání do 100¾
'‘Může být vybráno z příhodných materiálů jako jsou CaCCb , talek, jíl. silikáty a pod.
V příkladech 63-64 jsou Gly97Glu + Thrl64Pro, mezi jiným, nahrazeny variantami BPN' vyjmenovanými v tabulkách
2-25, v podstatě se stejnými výsledky.
V příkladech 65-66 jsou Gly97Glu Thrl64Pro a Ala98Ser + Glyl54Asn, mezi jiným, nahrazeny kteroukoli kombinací variant BPN’ vyjmenovaných v tabulkách 2-25, v podstatě se stejnými výsledky.
105
Příklady 67-70
Prací prostředky v pevné formě
Složka Příklad č.
67 68 69 70
Val203Glu 0.3 — 0,1 0,02
Glyl00Glu+Ilel07Ser - 0,3 0,4 0,03
C12-C16 alkylsulfát. Na 20.0 20.0 20.0 20,0
C12-C14 N-metylglukamid 5,0 5.0 5,0 5,0
Cn-Ci 3 alky lbenzensulf onát, Na 10,0 10.0 10,0 10.0
uhličitan sodný 25,0 25,0 25.0 25,0
natřium pyrofosfát 7,0 7,0 7,0 7.0
natřium tripolyfosfát 7,0 7,0 7,0 7,0
zeolit A C0,l-10u) 5.0 5,0 5.0 5,0
karboxymety1ce1u1óza 0.2 0.2 0,2 0,2
polyakrylát Cm.h. 1400) 0,2 0,2 0,2 0,2
kokosový monoetanolamin 5,0 5,0 5,0 5,0
zjasňovač, parfém 0,2 0.2 0,2 0,2
CaSCM 1,0 1,0 1,0 1,0
MgSCUj 1,0 1,0 1.0 1,0
voda 4,0 4,0 4,0 4,0
plnidlo” k vyrovnán í do 100¾
''Může být vybráno z příhodných materiálů jako jsou CaC03 . talek, jíl, silikáty a pod.
V příkladu 67 je Val203Glu, mezi jiným. nahrazen variantami BPN’ vyjmenovanými v tabulkách 2-25, v podstatě se stejnými výsledky.
V příkladu 68 jsou GlylOOGlu + IlelO7Ser, mezi jiným.
nahrazeny variantami BPN' vyjmenovanými v tabulkách 2-25, v podstatě se stejnými výsledky.
V příkladech 69-70 jsou Val203Glu a GlylOOGlu *
106
IlelO7Ser, mezi jiným, nahrazeny kteroukoli kombinací variant BPN* vyjmenovaných v tabulkách 2-25, v podstatě se stejnými výsledky.
Příklady 71-74
Prostředek na čištění zubů
Složka Příklad č. 74
71 72 73
G1n59Asp+A1a98G1u+G1y102Asp
+SerlO5Glu+LeulO9Thr 2,000 3,500 1,500 2,000
sorbit <70% vodný roztok) 35,000 35,000 35.000 35.000
PEG-6~ 1,000 1,000 1,000 1,000
zubní křemenný brusný
prostředek’**' 20,000 20.000 20.000 20,000
fluorid sodný 0,243 0,243 0,243 0,243
kysličník titaničitý 0,500 0,500 0,500 0,500
glukaran sodný 0,286 0.286 0,286 0,286
natriura alkyl sulfát <27,9%
vodný roztok) 4,000 4,000 4,000 4,000
příchuť 1,040 1,040 1.040 1,040
polymer karboxyvinylu 0,300 0,300 0.300 0,300
Carrageenan’”'’' 0.800 0,800 0.800 0,800
voda k vyrovnání do 100%
**PEG-6 « polyetylenglykol mající molekulární váhu 600. '‘'‘Srážený křemen totožný se Zeodentem 119 poskytnutým J.M. Huberem.
'‘'‘'‘Carbopol poskytnutý B.F. Goodrich Chemical Company. '‘''Jota Carrageenan poskytnutý Hercules Chemical Company.
V příkladech 71-74 jsou Gln59Asp + Ala98Glu +
GlylO2Asp + SerlOSGlu + Leul09Thr, mezi jiným. nahrazeny
107 kteroukoli kombinací variant BPN’ vyjmenovaných v tabulkách
2-25. v podstatě se stejnými výsledky.
Příklady 75-78
Ústní voda
Příklad ě.
Složka 75 76 77 78
Leu96Thr+Gly128Asp+A1al33G1u
+Asnl55Glu+Lys213Asp
-»-Ala216Asp 3.00 7,50 1,00 5,00
alkohol SDA 40 8.00 8.00 8,00 8,00
příchuť 0.08 0,08 0,08 0,08
emulgátor 0,08 0,08 0,08 0,08
fluorid sodný 0,05 0,05 0,05 0,05
glycerin 10.00 10,00 10,00 10,00
sladidlo 0,02 0,02 0,02 0,02
kyselina benzoová 0,05 0,05 0,05 0,05
hydroxid sodný 0,20 0.20 0.20 0,20
barva 0,04 0,04 0,04 0,04
voda k vyrovnán í do 100¾
V příkladech 75-78 jsou Leu96Thr + Glyl28Asp +
Alal33Glu + Asnl55Glu + Lys213Asp ·♦· Ala216Asp, mezi jiným.
nahrazeny kteroukoli kombinací variant BPN' vyjmenovaných v tabulkách 2-25. v podstatě se stejnými výsledky.
108
Příklady 79-82
Zdravotní pastilky
Příklad č.
Složka 79 80 81 82
Serl32Asp+Tyr217Leu 0.01 0.03 0.10 0.02
sorbit 17.50 17.50 17.50 17.50
mannit 17.50 17.50 17.50 17.50
škrob 13.60 13.60 13.60 13.60
sladidlo 1.20 1.20 1.20 1,20
příchuť 11.70 11.70 11.70 11,70
barva 0.10 0.10 0.10 0.10
kukuřičný sirup k vyrovnání do 100*
V příkladech 79 -82 jsou Serl32Asp + Tyr217Leu, mezi
j i ným, nahrazeny kteroukoli kombinací variant BPN'
vyjmenovaných v tabulkách 2-25. v podstatě se stejnými výs1edky.
Příklady 83-86 Žvýkací guma
Příklad č.
Složka 83 84 85 86
Thr66Pro+G1nlO3Asn+Lys213Asp 0,03 0.02 0.10 0,05
krystaly sorbitu 38,44 38,40 38,40 38,40
gumová báze Pajola-T’< 20,00 20.00 20.00 20,00
sorbit (70* vodný roztok) 22,00 22,00 22,00 22.00
mann i t 10,00 10,00 10,00 10,00
glycerin 7,56 7,56 7.56 7,56
příchuť 1,00 1,00 1,00 1,00
109 ^Dodáno L.A. Dreyfus Company.
V příkladech 83-86 jsou Thr66Pro + GlnlO3Asn +
Lys213Asp. mezi jiným, nahrazeny kteroukoli kombinací variant BPN’ vyjmenovaných v tabulkách 2-25, v podstatě se stejnými výsledky.
Příklady 87-90
Dvouvrstevná šumivá čisticí tableta na umělý chrup
Složka Příklad č. 90
87 88 89
Kyselá vrstva
G1n59G1u+Ser63G1u+Va195Met
+Gly97Pro+Tyr217Ala 1,00 1,50 0,01 0.05
kyselina vinná 24,00 24,00 24,00 24,00
uhličitan sodný 4,00 4,00 4,00 4,00
kyselina sulfaminová 10,00 10,00 10,00 10,00
PEG 20 000 4,00 4,00 4,00 4,00
natrium bikarbonát 24,50 24,50 24.50 24,50
kalium persulfát 15,00 15,00 15,00 15,00
kyselý pyrofosfát sodný 7,00 7,00 7,00 7,00
pyrogenní křemen 2,00 2,00 2,00 2.00
TAED~ 7.00 7,00 7,00 7,00
ricínoleylsulfosukcinát 0.50 0,50 0,50 0,50
příchut 1,00 1,00 1,00 1,00
Zásaditá vrstva
natrium perborát monohydrát 32,00 32,00 32,00 32,00
natrium bikarbonát 19,00 19,00 19,00 19,00
EDTA 3.00 3,00 3.00 3,00
natrium tripolyfosfát 12,00 12,00 12,00 12.00
PEG 20 000 2,00 2,00 2,00 2,00
kalium persulfát 26,00 26,00 26,00 26.00
110
uhličitan sodný 2,00 2.00 2.00 2,00
pyrogenní křemen 2.00 2,00 2,00 2,00
barva/příchut 2,00 2,00 2.00 2.00
^tetraacetylen diamin
V příkladech 87-90 Isou Gln59Glu + Ser63Glu ·*· Val95Met + Gly97Pro + Tyr217Ala, mezi jiným, nahrazeny kteroukoli kombinací variant BPN' vyjmenovaných v tabulkách 2-25, v podstatě se stejnými výsledky.
Příklady 91-94
Enzymatický čisticí prostředek na kontaktní čočky
Příklad č.
S1oŽka 91 92 93 94
Serl91G1u+Gly219Ser 0,01 0.50 0.10 2,00
glukóza 50,00 50,00 50,00 50,00
neionogenní surfaktant (kopo-
lymer polyoxyetylenpolyoxy-
propylen) 2.00 2.00 2,00 2.00
aniontový surfaktant (sodný ester
kys. sírové polyoxyetylenalkyl-
fenyletheru) 1,00 1,00 1,00 1,00
chlorid sodný 1.00 1.00 1.00 1.00
borax 0.30 0.30 0,30 0.30
voda k vyrovnání do 100¾
V příkladech 91-94 jsou Serl91Glu + Gly219Ser, mezi jiným, nahrazeny kteroukoli kombinací variant BPN' vyjmenovaných v tabulkách 2-25, v podstatě se stejnými výs1edky.
112
Ser Ser Ser Thr Val 165 Gly Tyr Pro Oly ty· 170 Tyr Pro Ser Val Zle 175 Ala
Val Gly Ala Val 180 Aep Ser Ser Asn Gin 185 Arg Ala Ser Phe Ser 190 Ser Val
Gly Pro Glu 195 Leu Asp Val Met Ala 200 Pro Gly Val Ser Zle 205 Gin Ser Thr
Leu Pro 210 Gly Aen Lys Tyr Cly 215 Ala Tyr Aen Gly Thr 220 Ser Met Ala Ser
Pro 225 Hle Val Ala Gly Ala Ala 230 Ala Leu t Zle Leu 235 Ser Lys Ble Pro Asn 240
Trp Thr Asn Thr Gin 245 Val Arg Ser Ser Leu 250 Glu Aen Thr Thr Thr 255 Lys
Leu Gly Aep Ser 260 Phe Tyr Tyr Gly Lys 265 Gly Leu Zle Aen Val 270 Gin Ala
Ala Ala Gin 275
111
SEZNAM SEKVENCÍ
C2> INFORMACE PRO SEKVENCI IDENTIFIKAČNÍHO ČÍSLA 1=
Ci) CHARAKTERISTIKA SEKVENCE:
CA) DÉLKA: 275 aminokyselin
CB) TYP: aminokyselina
CD) TOPOLOGIE: lineární
Cii) TYP MOLEKULY: protein
Cxi) POPIS SEKVENCE: SEKVENCE IDENTIFIKAČNÍHO ČÍSLA 1=
Ala Gin Ser Val Pro Tyr Gly Val Ser Gin Xle Lys Ala Pro Ala Leu
1 5 10 15
His Ser Gin Gly Tyr'Thr Gly Ser Asn Val Lys Val Ala Val Xle Asp
20 25 30
Ser Gly Xle Asp Ser Ser His Pro Asp Leu Lys Val Ala Gly Gly Ala
35 40 45
Sar Kat Val Pro Ser Glu Thr Asn Pro Phe Gin Aap Asn Asn Ser His
SO 55 60
Cly Thr Bis 65 Val Ala Oly Thr 70 Val Ala Ala Leu Asn Asn Ser Xle Oly 75 80
Val Leu Gly Val Ala Pro Ser 85 Ala Ser Leu Tyr Ala Val Lys Val Leu 90 95
Gly Ala Asp Gly Ser Gly Gin 100 Tyr Ser Trp Xla Xle Asn Oly Xle Olu 105 110
Trp Ala Xle 115 Ala Asn Asn Mat Asp Val Xle Asn Met Ser Leu Gly Gly 120 125
Pro Ser Gly 130 Ser Ala Ala Leu 135 Lys Ala Ala Val Asp Lys Ala Val Ala 140
Ser Gly Val 145 Val Val Val Ala 150 Ala Ala Gly Asn Glu Gly Thr Ser Gly 155 160
113
Průmyslová využitelnost
Předkládaný vynález poskytuje varianty enzymu subtilisinu, které mají ve srovnání s divokým typem enzymu sníženou adsorpci a zvýšeně hydrolyžují. Dále vynález poskytuje čisticí prostředky, které obsahují účinné množství jedné nebo více variant enzymu subtilisinu a lze je použít k čištění různých druhů povrchů při potřebě odstranit nečistoty bílkovinné povahy. Tyto čisticí prostředky zahrnují detergentní prostředky na čištění pevných povrchů, prací prostředky, prostředky do myček na nádobí, prostředky na čištění ústní dutiny, prostředky na čištění umělého chrupu a prostředky na čištění kontaktních čoček.

Claims (11)

  1. PATENTOVÉ NA R O i:
    < Ό r— 73 ) > CP CO S c> -f ·< O 07 o w · O r— C σ * c/x r— $ ”3 < m ze o LO' o •“4
    o<
    1. Varianta BPN' vyznačující se t í m, že má změněnou sekvenci aminokyselin proti aminokyselinové sekvenci divokého typu. aminokyselinová sekvence divokého typu zahrnuje oblast první smyčky, oblast druhé smyčky, oblast třetí smyčky, oblast čtvrté smyčky a oblast páté smyčky, charakterizovanou tím. že změněná sekvence aminokyselin obsahuje substituci v jedné nebo více polohách v jedné nebo více oblastech smyček, kde
    A. když substituce nastane v oblasti první smyčky, substituce nastane v jedné nebo více z poloh 59, 60, 61,
    62, 63, 65 nebo 66, kde
    a. když substituce nastane v poloze 59, substituující aminokyselina je Asn, Asp, Glu nebo Ser,
    b. když substituce nastane v poloze 60, substituující aminokyselina je Glu,
    c. když substituce nastane v poloze 61, substituující aminokyselina je Asp, Gin, Glu nebo Ser,
    d. když substituce nastane v poloze 62, substituující aminokyselina je Asp, Gin, Glu nebo Ser.
    e. když substituce nastane v poloze 63, substituující aminokyselina je Asp nebo Glu,
    f. když substituce nastane v poloze 65, substituující aminokyselina je Asn, Asp, Gin. Glu, Pro nebo Ser a
    g. když substituce nastane v poloze 66, substituující aminokyselina je Asn. Asp, Gin, Glu, Gly, Pro nebo Ser,
    B. když substituce nastane v oblasti druhé smyčky.
    115 substituce nastane v jedné nebo více z poloh 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101. 102, 103, 104, 105, 106 nebo 107. kde
    a. když substituce nastane v poloze 95, substituující aminokyselina je Ala, Asn, Asp, Cys, Gin, Glu, Gly, His. Met, Pro. Ser nebo Thr,
    b. když substituce nastane v poloze 96, substituující aminokyselina je Ala, Asn. Asp. Cys, Gin, Glu, Gly, His, Ile, Met, Pro, Ser, Thr nebo Val,
    c. když substituce nastane v poloze 97, substituující aminokyselina je Asn, Asp. Gin, Glu, Pro nebo Ser,
    d. když substituce nastane v poloze 98, substituující aminokyselina je Asn, Asp, Gin, Glu, Gly, His, Pro, Ser nebo
    Thr.
    e. když substituce nastane v poloze 99, substituující aminokyselina je Glu,
    f. když substituce nastane v poloze 100. substituující arainokyse1ina je Asn, Asp, Gin, Glu, Pro nebo Ser,
    g. když substituce nastane v poloze 101, substituující aminokyselina je Asp nebo Glu,
    h. když substituce nastane v poloze 102, substituující aminokyselina je Asn, Asp, Gin, Glu, Pro nebo Ser,
    i. když substituce nastane v poloze 103, substituující aminokyselina je Asn, Asp, Glu nebo Ser,
    j. když substituce nastane v poloze 104, substituující aminokyselina je Ala. Asn. Asp, Cys, Gin. Glu, Gly, His,
    Ile, Leu, Met. Pro, Ser, Thr nebo Val,
    k. když substituce nastane v poloze 105, substituující aminokyselina je Asp nebo Glu.
    116
    l. když substituce nastane v poloze 106, substituující aminokyselina je Ala, Asn. Asp, Cys, Gin, Glu. Gly. His,
    Ile, Leu, Met, Phe, Pro, Ser. Thr, Tyr nebo Val a
    m. když substituce nastane v poloze 107, substituující aminokyselina je Ala, Asn, Asp, Cys, Gin, Glu, Gly, His,
    Leu, Met, Pro, Ser, Thr nebo Val,
    C. když substituce nastane v oblasti třetí smyčky, substituce nastane v jedné nebo více z poloh 126, 127, 128,
    129, 130. 131, 132 nebo 133, kde
    a. když substituce nastane v poloze 126, substituující aminokyselina je Ala, Asn, Asp, Cys, Gin, Glu. Gly, His,
    Ile, Met, Pro, Ser, Thr nebo Val,
    b. když substituce nastane v poloze 127, substituující aminokyselina je Asn, Asp, Gin, Glu, Pro nebo Ser,
    c. když substituce nastane v poloze 128, substituující aminokyselina je Asn. Asp, Gin, Glu, Gly nebo Ser,
    d. když substituce nastane v poloze 129, substituující aminokyselina je Asn, Asp, Gin, Glu. Gly nebo Ser,
    e. když substituce nastane v poloze 130, substituující aminokyselina je Asp nebo Glu,
    f. když substituce nastane v poloze 131. substituující aminokyselina je Asn, Asp, Gin, Glu, Gly nebo Ser,
    g. když substituce nastane v poloze 132, substituující aminokyselina je Asp nebo Glu a
    h. když substituce nastane v poloze 133, substituující aminokyselina je Asn, Asp, Gin, Glu, Gly, His. Pro. Ser nebo
    Thr,
    D. když substituce nastane v oblasti čtvrté smyčky.
    117 substituce nastane v jedné nebo více z poloh 154. 155. 156.
    157. 158, 159, 160. 161, 162, 163, 164, 165, 166 nebo 167, kde a. když substituce nastane v poloze 154. substituující aminokyselina je Asn, Asp, Gin, Glu, Pro nebo Ser, b. když substituce nastane v poloze 155, substi tuu jící
    aminokyselina je Asp. Gin. Glu nebo Ser,
    c. když substituce nastane v poloze 156, substituuj ící aminokyselina je Asp, d- když substituce nastane v poloze 157, substituující aminokyselina je Asn, Asp, Gin, Glu, Pro nebo Ser, e. když substituce nastane v poloze 158, substituuj ící aminokyselina je Asn, Asp, Gin, Glu, Gly, Pro nebo Ser, f - když substituce nastane v poloze 159, substituuj ící
    aminokyselina je Asp nebo Glu,
    g. když substituce nastane v 1 poloze 160, substituující Ser, aminokyselina je Asn, Asp, Gin, Slu, Pro nebo h. když substituce nastane v poloze 161, substituuj ící aminokyselina je Asp nebo Glu. i. když substituce nastane v poloze 162, substituuj ící aminokyselina je Asp nebo Glu, j- když substituce nastane v poloze 163, substituuj ící aminokyselina je Asp nebo Glu, k- když substituce nastane v poloze 164, substituuj ící aminokyselina je Asn. Asp, Gin, Glu, Gly. Pro nebo Ser, 1- když substituce nastane v poloze 165, substituuj ící
    aminokyselina je Ala, Asn, Asp, Cys, Gin, Glu, Gly, His,
    Met, Pro, Ser nebo Thr.
    118
    m. když substituce nastane v poloze 166. aminokyselina je Asn. Asp. Gin. Glu. Pro nebo
    n. když substituce nastane v poloze 167. aminokyselina je Ala. Asn, Asp, Cys, Gin,
    Ile, Leu, Met. Pro, Ser, Thr nebo Val a
    E. když substituce nastane v oblasti substituce nastane v jedné nebo více z poloh
    190 nebo 191, kde
    a. když substituce nastane v poloze 187, aminokyselina je Asn, Asp, Gin, Glu. Gly, a Thr, substituující
    Ser a substituuj ící
    Glu, Gly, His, páté smyčky,
    187, 188, 189, substituuj ící
    His. Pro. Ser
    b. když substituce nastane v poloze 188, substituující aminokyselina je Asp nebo Glu,
    c. když substituce nastane v poloze 189, substituující aminokyselina je Ala, Asn, Asp, Cys, Gin, Glu, Gly, His,
    Ile, Leu. Met, Pro, Ser, Thr, Tyr nebo Val,
    d. když substituce nastane v poloze 190, substituující aminokyselina je Asp nebo Glu,
    e. když substituce nastane v poloze 191, substituující aminokyselina je Asp nebo Glu, čímž má varianta BPN' sníženou adsorpci a zvýšeně hydrolyzuje nerozpustný substrát ve srovnání s divokým typem
    BPN' subtilisinu.
  2. 2. Varianta BPN’podle nároku 1,vyznačuj ící se tím, že jedna nebo více substitucí nastane v oblasti první smyčky.
    119
  3. 3. Varianta BPN'podle nároku 1, vyznačující se tím, že jedna nebo více substitucí nastane v oblasti druhé smyčky.
  4. 4. Varianta BPN'podle nároku 1,vyznačuj ící se tím, že jedna nebo více substitucí nastane v oblasti tret í smyčky.
  5. 5.Varianta BPN’podle nároku tím. že jedna nebo více čtvrté smyčky.
    1, vyznačující se substitucí nastane v oblasti
  6. 6. Varianta BPN’podle nároku 1,vyznačuj ící se t í m, že jedna nebo více substitucí nastane v oblasti páté smyčky.
    v
  7. 7. Varianta BPN'podle kteréhokoliv z nároků 1-6, vyznačující se tím, že aminokyselinová sekvence divokého typu dále obsahuje oblast šesté smyčky, charakterizovanou tím, že změněná aminokyselinová sekvence dále obsahuje jednu nebo více substitucí v oblasti šesté smyčky, kde substituce v oblasti šesté smyčky nastanou v jedné nebo více z poloh 199, 200, 201, 202, 203, 204,
    205, 206. 207, 208. 209, 210, 211, 212. 213, 214, 215, 216,
    217. 218. 219 nebo 220, kde
    a. když substituce nastane v poloze 199, substituující aminokyselina pro polohu 199 je Cys, Ala, His, Thr, Pro,
    Gly, Gin, Asn, Ser. Asp nebo Glu.
    120
    b. když substituce nastane v poloze 200, substituující aminokyselina pro polohu 200 je His. Thr, Pro. Gly. Gin, Asn, Ser. Asp nebo Glu,
    c. když substituce nastane v poloze 201, substituující aminokyselina pro polohu 201 je Gly, Gin, Asn, Ser, Asp nebo
    Glu.
    d. když substituce nastane v poloze 202. substituující aminokyselina pro polohu 202 je Pro. Gin, Asn , Ser, Asp nebo Glu. e. když substituce nastane v poloze 203. substituující aminokyselina pro polohu 203 je Met, Cys, Ala, His, Thr, Pro, Gly, Gin, Asn. Ser, Asp nebo Glu. f. když substituce nastane v poloze 204, substituuj íc í
    aminokyselina pro polohu 204 je Asp nebo Glu,
    g. když substituce nastane v poloze 205, substituující aminokyselina pro polohu 205 je Leu, Val, Met, Cys, Ala. His, Thr, Pro, Gly, Gin, Asn, Ser, Asp nebo Glu,
    h. když substituce nastane v poloze 206, substituující aminokyselina pro polohu 206 je Pro, Asn, Ser, Asp nebo Glu.
    i. když substituce nastane v poloze 207, substituující aminokyselina pro polohu 207 je Asp nebo Glu,
    j. když substituce nastane v poloze 208, substituující aminokyselina pro polohu 208 je Pro, Gly, Gin, Asn, Ser, Asp nebo Glu.
    k. když substituce nastane v poloze 209. substituující aminokyselina pro polohu 209 je Ile, Val, Met, Cys, Ala, His, Thr, Pro. Gly. Gin, Asn. Ser, Asp nebo Glu,
    l. když substituce nastane v poloze 210, substituující
    121 aminokyselina pro polohu 210 je Ala, Gly, Gin, Asn, Ser, Asp nebo Glu,
    m. když substituce nastane v poloze 211, substituující aminokyselina pro polohu 211 je Ala, Pro, Gin, Asn, Ser, Asp nebo Glu,
    n. když substituce nastane v poloze 212. substituující aminokyselina pro polohu 212 je Gin, Ser, Asp nebo Glu,
    o. když substituce nastane v poloze 213, substituující , aminokyselina pro polohu 213 je Trp, Phe, Tyr, Leu, Ile,
    Val. Met, Cys, Ala, His. Thr, Pro, Gly, Gin, Asn, Ser, Asp nebo Glu,
    p. když substituce nastane v poloze 214, substituující aminokyselina pro polohu 214 je Phe, Leu, Ile, Val, Met,
    Cys, Ala, His, Thr, Pro, Gly, Gin, Asn, Ser, Asp nebo Glu,
    q. když substituce nastane v poloze 215, substituující aminokyselina pro polohu 215 je Thr, Pro, Gin, Asn, Ser, Asp nebo Glu,
    r. když substituce nastane v poloze 216, substituující aminokyselina pro polohu 216 je His, Thr, Pro, Gly, Gin,
    Asn, Ser, Asp nebo Glu,
    s. když substituce nastane v poloze 217, substituující a aminokyselina pro polohu 217 je Leu, Ile, Val, Met, Cys,
    Ala, His, Thr, Pro, Gly, Gin, Asn. Ser, Asp nebo Glu,
    t. když substituce nastane v poloze 218, substituující aminokyselina pro polohu 218 je Gin, Ser, Asp nebo Glu,
    u. když substituce nastane v poloze 219, substituující aminokyselina pro polohu 219 je Pro, Gin, Asn, Ser, Asp nebo
    Glu a
    122
    v. když substituce nastane v poloze 220, substituující aminokyselina pro polohu 220 je Pro, Gly, Gin, Asn, Ser, Asp nebo Glu.
  8. 8. Čisticí prostředek vyznačující se tím, že obsahuje variantu BPN' kteréhokoliv z nároků 1-7, a nosič čisticího prostředku a je vybrán ze skupiny skládající se z čisticích prostředků na pevné povrchy, prostředku do myček na nádobí, prostředku na čištění ústní dutiny, prostředku na čištění umělého chrupu, prostředku na čištění kontaktních čoček a pracího prostředku.
  9. 9. Čisticí prostředek podle nároku 8vyznačuj íc í se tím, že čisticí prostředek je čisticí prostředek na pevné povrchy.
  10. 10. Čisticí prostředek podle nároku 8vyznačuj íc í s e t í m, že čisticí prostředek je prací prostředek.
  11. 11. Mutovaný gen BPN' vyznačující se tím, že kóduje variantu BPN' dle kteréhokoliv z nároků 1-7.
CZ963216A 1994-05-02 1995-03-16 Subtilisin bpn variants with reduced adsorption and increased ability to hydrolysis CZ321696A3 (en)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US23793994A 1994-05-02 1994-05-02
US28746194A 1994-08-11 1994-08-11
US08/394,011 US6436690B1 (en) 1993-09-15 1995-03-03 BPN′ variants having decreased adsorption and increased hydrolysis wherein one or more loop regions are substituted

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CZ321696A3 true CZ321696A3 (en) 1997-05-14

Family

ID=27399035

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CZ963216A CZ321696A3 (en) 1994-05-02 1995-03-16 Subtilisin bpn variants with reduced adsorption and increased ability to hydrolysis

Country Status (13)

Country Link
US (1) US6436690B1 (cs)
EP (1) EP0758388A1 (cs)
JP (1) JPH09511652A (cs)
CN (1) CN1151761A (cs)
AU (1) AU2159195A (cs)
BR (1) BR9507597A (cs)
CA (1) CA2189426C (cs)
CZ (1) CZ321696A3 (cs)
HU (1) HUT75559A (cs)
IL (1) IL113048A0 (cs)
MX (1) MX9605357A (cs)
PE (1) PE27897A1 (cs)
WO (1) WO1995030010A1 (cs)

Families Citing this family (94)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6436690B1 (en) * 1993-09-15 2002-08-20 The Procter & Gamble Company BPN′ variants having decreased adsorption and increased hydrolysis wherein one or more loop regions are substituted
US6440717B1 (en) * 1993-09-15 2002-08-27 The Procter & Gamble Company BPN′ variants having decreased adsorption and increased hydrolysis
US6599730B1 (en) * 1994-05-02 2003-07-29 Procter & Gamble Company Subtilisin 309 variants having decreased adsorption and increased hydrolysis
US5780285A (en) * 1995-03-03 1998-07-14 Genentech, Inc. Subtilisin variants capable of cleaving substrates containing dibasic residues
US5837516A (en) * 1995-03-03 1998-11-17 Genentech, Inc. Subtilisin variants capable of cleaving substrates containing basic residues
US6455295B1 (en) * 1995-03-08 2002-09-24 The Procter & Gamble Company Subtilisin Carlsberg variants having decreased adsorption and increased hydrolysis
US6475765B1 (en) * 1995-03-09 2002-11-05 Procter & Gamble Company Subtilisin DY variants having decreased adsorption and increased hydrolysis
IL117350A0 (en) * 1995-03-09 1996-07-23 Procter & Gamble Proteinase k variants having decreased adsorption and increased hydrolysis
US6682924B1 (en) * 1995-05-05 2004-01-27 Novozymes A/S Protease variants and compositions
DE19535082A1 (de) 1995-09-21 1997-03-27 Henkel Ecolab Gmbh & Co Ohg Pastenförmiges Wasch- und Reinigungsmittel
DE19615776A1 (de) 1996-04-20 1997-10-23 Henkel Kgaa Löslichkeitsverbessertes Enzymgranulat
DE19636035A1 (de) 1996-09-05 1998-03-12 Henkel Ecolab Gmbh & Co Ohg Pastenförmiges Wasch- und Reinigungsmittel
BR9712878A (pt) * 1996-11-04 2000-02-01 Novo Nordisk As Variante de enzima subtilase, processos para a identificação de uma variante de protease apresentando estabilidade autoproteolìtica e paraq a produção de uma enzima subtilase mutante e de uma variante de subtilase, sequência de dna, vetor, célula hospedeira microbiana, composição e uso de uma variante de subtilase.
EP0948610B1 (en) 1996-11-04 2011-05-25 Novozymes A/S Subtilase variants and compositions
DE19703364A1 (de) 1997-01-30 1998-08-06 Henkel Ecolab Gmbh & Co Ohg Pastenförmiges Wasch- und Reinigungsmittel
US6284246B1 (en) 1997-07-30 2001-09-04 The Procter & Gamble Co. Modified polypeptides with high activity and reduced allergenicity
JP5095884B2 (ja) 1997-08-29 2012-12-12 ノボザイムス アクティーゼルスカブ プロテアーゼ変異体及び組成物
JP2001514846A (ja) 1997-08-29 2001-09-18 ノボ ノルディスク アクティーゼルスカブ プロテアーゼ変異体及び組成物
EP0913458B1 (en) * 1997-10-22 2004-06-16 The Procter & Gamble Company Liquid hard-surface cleaning compositions
ES2368718T3 (es) 1997-10-23 2011-11-21 Danisco Us Inc. Variantes de subtilisina con múltiples sustituciones.
RU2269572C2 (ru) * 1997-10-23 2006-02-10 Джененкор Интернэшнл, Инк. Варианты протеазы, замещенные в нескольких положениях
AR015977A1 (es) 1997-10-23 2001-05-30 Genencor Int Variantes de proteasa multiplemente substituida con carga neta alterada para su empleo en detergentes
US6780629B2 (en) 1997-11-21 2004-08-24 Novozymes A/S Subtilase enzymes
US6773907B2 (en) 1997-11-21 2004-08-10 Peter Kamp Hansen Subtilase enzymes
CA2310454C (en) 1997-11-21 2012-01-24 Novo Nordisk A/S Protease variants and compositions
US6495136B1 (en) 1998-03-26 2002-12-17 The Procter & Gamble Company Proteases having modified amino acid sequences conjugated to addition moieties
US6908757B1 (en) 1998-03-26 2005-06-21 The Procter & Gamble Company Serine protease variants having amino acid deletions and substitutions
CN1301305A (zh) 1998-03-26 2001-06-27 宝洁公司 具有氨基酸取代的丝氨酸蛋白酶变体
CN1319002A (zh) * 1998-09-22 2001-10-24 宝洁公司 含有与水不溶性底物结合的取代枯草杆菌蛋白酶的个人护理组合物
US6831053B1 (en) 1998-10-23 2004-12-14 The Procter & Gamble Company Bleaching compositions comprising multiply-substituted protease variants
US6376450B1 (en) 1998-10-23 2002-04-23 Chanchal Kumar Ghosh Cleaning compositions containing multiply-substituted protease variants
DE19857687A1 (de) 1998-12-15 2000-06-21 Henkel Ecolab Gmbh & Co Ohg Pastenförmiges Waschmittel
EP1803817B1 (en) 1998-12-18 2011-04-06 Novozymes A/S Subtilase enzymes of the I-S1 and I-S2 sub-groups having an additional amino acid residue in an active site loop region
DE69936935T2 (de) * 1998-12-18 2008-05-15 Novozymes A/S Subtilase enzyme der i-s1 und i-s2 untergruppen mit einem zusätzlichen aminosäurerest in einer aktiven schleifenregion
EP1183342B2 (en) † 1999-05-20 2012-06-13 Novozymes A/S Subtilase enzymes of the i-s1 and i-s2 sub-groups having at least one additional amino acid residue between positions 128 and 129
AU4392800A (en) 1999-05-20 2000-12-12 Novozymes A/S Subtilase enzymes of the i-s1 and i-s2 sub-groups having at least one additionalamino acid residue between positions 126 and 127
AU4392500A (en) 1999-05-20 2000-12-12 Novozymes A/S Subtilase enzymes of the i-s1 and i-s2 sub-groups having at least one additionalamino acid residue between positions 132 and 133
CA2374350C (en) † 1999-05-20 2012-10-23 Novozymes A/S Subtilase enzymes of the i-s1 and i-s2 sub-groups having at least one additional amino acid residue between positions 97 and 98
ATE402996T1 (de) 1999-05-20 2008-08-15 Novozymes As Subtilase-enzyme der i-s1 und i-s2 untergruppen mit wenigstens einem zusätzlichen aminosäurerest zwischen positionen 125 und 126
EP1183341B2 (en) 1999-05-20 2012-05-02 Novozymes A/S Subtilase enzymes of the i-s1 and i-s2 sub-groups having at least one additional amino acid residue between positions 127 and 128
ATE408678T1 (de) 1999-05-20 2008-10-15 Novozymes As Subtilase enzyme der i-s1 und i-s2 untergruppen mit mindestens einer zusätzlichen aminosäure zwischen position 129 und 130
US6946128B1 (en) 1999-07-22 2005-09-20 The Procter & Gamble Company Protease conjugates having sterically protected epitope regions
MXPA02000840A (es) * 1999-07-22 2002-07-30 Procter & Gamble Variantes de proteasa de subtilisina que tienen substituciones de aminoacidos en regiones de epitopes definidas.
JP2003505067A (ja) 1999-07-22 2003-02-12 ザ、プロクター、エンド、ギャンブル、カンパニー 特定のエピトープ領域にアミノ酸欠失及び置換を有するサブチリシンプロテアーゼの変異体
EP1196548A2 (en) 1999-07-22 2002-04-17 The Procter & Gamble Company Protease conjugates having sterically protected clip sites
AU5911599A (en) * 1999-09-09 2001-04-10 Procter & Gamble Company, The A detergent composition containing a protease
US6727085B2 (en) 1999-12-15 2004-04-27 Fanoe Tina Sejersgaard Subtilase variants having an improved wash performance on egg stains
US6777218B1 (en) 2000-03-14 2004-08-17 Novozymes A/S Subtilase enzymes having an improved wash performance on egg stains
AU2001254622A1 (en) * 2000-04-28 2001-11-12 Novozymes A/S Laccase mutants
US6803222B2 (en) 2000-11-22 2004-10-12 Kao Corporation Alkaline proteases
DK200101090A (da) 2001-07-12 2001-08-16 Novozymes As Subtilase variants
US7153820B2 (en) 2001-08-13 2006-12-26 Ecolab Inc. Solid detergent composition and method for solidifying a detergent composition
DE10153792A1 (de) 2001-10-31 2003-05-22 Henkel Kgaa Neue Alkalische Protease-Varianten und Wasch- und Reinigungsmittel enthaltend diese neuen Alkalischen Protease-Varianten
DE10162728A1 (de) 2001-12-20 2003-07-10 Henkel Kgaa Neue Alkalische Protease aus Bacillus gibsonii (DSM 14393) und Wasch-und Reinigungsmittel enthaltend diese neue Alkalische Protease
DE10162727A1 (de) 2001-12-20 2003-07-10 Henkel Kgaa Neue Alkalische Protease aus Bacillus gibsonii (DSM 14391) und Wasch-und Reinigungsmittel enthaltend diese neue Alkalische Protease
US20030157645A1 (en) * 2001-12-21 2003-08-21 Direvo Bio Tech Ag. Subtilisin variants with improved characteristics
DE10163884A1 (de) 2001-12-22 2003-07-10 Henkel Kgaa Neue Alkalische Protease aus Bacillus sp. (DSM 14392) und Wasch- und Reinigungsmittel enthaltend diese neue Alkalische Protease
AU2003210551A1 (en) * 2002-01-16 2003-09-02 Genencor International, Inc. Multiply-substituted protease variants
DK1523553T3 (da) * 2002-01-16 2010-04-19 Genencor Int Multi-substituerede proteasevarianter
TWI319007B (en) * 2002-11-06 2010-01-01 Novozymes As Subtilase variants
US7888093B2 (en) * 2002-11-06 2011-02-15 Novozymes A/S Subtilase variants
DE10260903A1 (de) * 2002-12-20 2004-07-08 Henkel Kgaa Neue Perhydrolasen
BRPI0409992A (pt) 2003-05-07 2006-05-09 Novozymes As enzima subtilase, polinucleotìdeo isolado, construção de ácido nucleico, vetor de expressão recombinante, célula hospedeira recombinante, método para produzir a subtilase, composição limpadora ou detergente, usos de uma subtilase e de uma composição limpadora ou detergente, e, métodos para limpar ou lavar louças, lavar uma superfìcie dura ou lavar roupas e para remover manchas de ovo de uma superfìcie dura ou de roupas para lavar
EP1678296B1 (en) 2003-10-23 2011-07-13 Novozymes A/S Protease with improved stability in detergents
EP1700907A1 (en) 2005-03-11 2006-09-13 Unilever N.V. Liquid bleaching composition
EP1700904A1 (en) 2005-03-11 2006-09-13 Unilever N.V. Liquid detergent composition
US20070161531A1 (en) * 2005-07-08 2007-07-12 Novozymes A/S Subtilase variants
WO2007122175A1 (en) 2006-04-20 2007-11-01 Novozymes A/S Savinase variants having an improved wash performance on egg stains
US8093200B2 (en) 2007-02-15 2012-01-10 Ecolab Usa Inc. Fast dissolving solid detergent
BRPI0810863A2 (pt) 2007-04-30 2014-10-07 Danisco Us Inc Genencor Div Uso de hidrolisados de proteína para estabilizar formulações de detergente de metaloprotease.
KR101575741B1 (ko) 2007-10-18 2015-12-08 에코랍 인코퍼레이티드 압축된 왁시 고형 세정 조성물 및 이의 제조 방법
EP2297314B1 (en) * 2008-06-06 2015-04-15 Danisco US Inc. Compositions and methods comprising variant microbial proteases
CA2743123A1 (en) * 2008-11-11 2010-05-20 Danisco Us Inc. Compositions and methods comprising a subtilisin variant
CN102762222B (zh) * 2009-12-09 2015-11-25 丹尼斯科美国公司 包含蛋白酶变体的组合物和方法
EP2510092A1 (en) 2009-12-09 2012-10-17 The Procter & Gamble Company Fabric and home care products
US20110150955A1 (en) 2009-12-23 2011-06-23 Shannon Elizabeth Klingman Products and Methods for Reducing Malodor from the Pudendum
CN101824467B (zh) * 2009-12-29 2012-07-18 广州益善生物技术有限公司 Cyp2d6基因突变检测液相芯片及检测方法
BR112012028467B1 (pt) * 2010-05-06 2021-02-17 Danisco Us Inc. variantes de subtilisina, seu método de produção, ácido nucleico, e método de limpeza
BR112013028007A2 (pt) 2011-05-20 2017-01-10 Ecolab Usa Inc detergentes não-fosfato e ácidos não-fosfóricos em um sistema alternado alcalinidade/acidez para a lavagem de louça
CA2856820C (en) 2011-05-20 2019-10-29 Ecolab Usa Inc. Acid formulations for use in a system for warewashing
EP2726500B1 (en) * 2011-06-30 2019-03-20 Novozymes A/S Method for screening alpha-amylases
CN103998590B (zh) 2011-12-13 2019-02-01 艺康美国股份有限公司 浓的器皿洗涤组合物和方法
EP2607468A1 (en) 2011-12-20 2013-06-26 Henkel AG & Co. KGaA Detergent compositions comprising subtilase variants
US20140335596A1 (en) 2011-12-20 2014-11-13 Novozymes A/S Subtilase Variants and Polynucleotides Encoding Same
US10093911B2 (en) * 2012-02-17 2018-10-09 Novozymes A/S Subtilisin variants and polynucleotides encoding same
US9745543B2 (en) 2012-09-10 2017-08-29 Ecolab Usa Inc. Stable liquid manual dishwashing compositions containing enzymes
CN105518118B (zh) 2013-09-09 2019-09-17 艺康美国股份有限公司 通过螯合剂组合来协同去污
US9796950B2 (en) 2013-09-09 2017-10-24 Ecolab Usa Inc. Synergistic stain removal through an alkali metal hydroxide-based detergent composition with novel chelator combination
JP6254693B2 (ja) 2013-10-24 2017-12-27 エコラボ ユーエスエー インコーポレイティド 表面から汚れを除去する組成物及び方法
DE102016204814A1 (de) * 2016-03-23 2017-09-28 Henkel Ag & Co. Kgaa Verbesserte Reinigungsleistung an Protein sensitiven Anschmutzungen
DE102016204815A1 (de) * 2016-03-23 2017-09-28 Henkel Ag & Co. Kgaa Proteasen mit verbesserte Enzymstabilität in Waschmittel
EP3768835A1 (en) * 2018-03-23 2021-01-27 Novozymes A/S Subtilase variants and compositions comprising same
US12157869B2 (en) 2019-07-10 2024-12-03 Jeffrey Dean Lindsay Methods and compositions for reducing persistent odor in clothing and mitigating biofilms on various materials
CN114207101B (zh) 2019-07-31 2024-05-31 埃科莱布美国股份有限公司 免用个人防护设备的脱灰剂组合物

Family Cites Families (60)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4760025A (en) * 1984-05-29 1988-07-26 Genencor, Inc. Modified enzymes and methods for making same
NZ208612A (en) * 1983-06-24 1991-09-25 Genentech Inc Method of producing "procaryotic carbonyl hydrolases" containing predetermined, site specific mutations
US5310675A (en) * 1983-06-24 1994-05-10 Genencor, Inc. Procaryotic carbonyl hydrolases
US5371190A (en) * 1984-05-29 1994-12-06 Genencor International, Inc. Substrate assisted catalysis
US5182204A (en) * 1984-05-29 1993-01-26 Genencor International, Inc. Non-human carbonyl hydrolase mutants, vectors encoding same and hosts transformed with said vectors
US5371008A (en) * 1984-05-29 1994-12-06 Genencor International, Inc. Substrate assisted catalysis
US5155033A (en) * 1989-01-06 1992-10-13 Genencor, Inc. Subtilisins modified at position 225 resulting in a shift in catalytic activity
US5972682A (en) * 1984-05-29 1999-10-26 Genencor International, Inc. Enzymatically active modified subtilisins
US5346823A (en) * 1984-05-29 1994-09-13 Genencor, Inc. Subtilisin modifications to enhance oxidative stability
US5185258A (en) * 1984-05-29 1993-02-09 Genencor International, Inc. Subtilisin mutants
US5244791A (en) * 1984-05-29 1993-09-14 Genecor International, Inc. Methods of ester hydrolysis
US5763257A (en) * 1984-05-29 1998-06-09 Genencor International, Inc. Modified subtilisins having amino acid alterations
WO1987004461A1 (en) 1986-01-15 1987-07-30 Amgen THERMALLY STABLE AND pH STABLE SUBTILISIN ANALOGS AND METHOD FOR PRODUCTION THEREOF
US4908773A (en) * 1987-04-06 1990-03-13 Genex Corporation Computer designed stabilized proteins and method for producing same
JPS63502959A (ja) * 1986-02-12 1988-11-02 ジェネックス、コ−ポレ−ション 突然変異誘発及びスクリ−ニング方法並びに生成物
US4990452A (en) * 1986-02-12 1991-02-05 Genex Corporation Combining mutations for stabilization of subtilisin
US4980288A (en) * 1986-02-12 1990-12-25 Genex Corporation Subtilisin with increased thermal stability
US5013657A (en) * 1988-04-12 1991-05-07 Bryan Philip N Subtilisin mutations
US5240632A (en) * 1986-03-26 1993-08-31 Amway Corporation Machine dishwasher water spot control composition
SG30639G (en) * 1986-04-30 1995-09-01 Genencor Int Non-human carbonyl hydrolase mutants DNA sequences and vectors encoding same and hosts transformed with said vectors
NZ221627A (en) 1986-09-09 1993-04-28 Genencor Inc Preparation of enzymes, modifications, catalytic triads to alter ratios or transesterification/hydrolysis ratios
PT86864B (pt) * 1987-02-27 1992-05-29 Gist Brocades Nv Processo para clonagem molecular e expressao de genes que codificam para enzimas proteoliticas
US5260207A (en) * 1987-04-06 1993-11-09 Enzon Labs Inc. Engineering of electrostatic interactions at metal ion binding sites for the stabilization of proteins
EP0353250B1 (en) * 1987-04-06 1999-09-08 Novo Nordisk A/S The engineering of electrostatic interactions at metal ion binding sites for the stabilization of proteins
US4914031A (en) * 1987-04-10 1990-04-03 Amgen, Inc. Subtilisin analogs
DK6488D0 (da) 1988-01-07 1988-01-07 Novo Industri As Enzymer
AU595096B2 (en) * 1988-02-10 1990-03-22 Astra Pharmaceuticals Pty Ltd Plastic cartridge and syringe
US6287841B1 (en) * 1988-02-11 2001-09-11 Genencor International, Inc. High alkaline serine protease
PT89702B (pt) 1988-02-11 1994-04-29 Gist Brocades Nv Processo para a preparacao de novos enzimas proteoliticos e de detergentes que os contem
US5324653A (en) * 1988-02-11 1994-06-28 Gist-Brocades N.V. Recombinant genetic means for the production of serine protease muteins
US5116741A (en) * 1988-04-12 1992-05-26 Genex Corporation Biosynthetic uses of thermostable proteases
US5246849A (en) * 1988-04-12 1993-09-21 Enzon, Inc. Thermally stable serine proteases
US5118623A (en) * 1988-05-27 1992-06-02 Solvay Enzymes, Inc. Bleach stable enzymes
WO1990014420A1 (en) * 1989-05-17 1990-11-29 Amgen Inc. Multiply mutated subtilisins
BR9006827A (pt) * 1989-06-26 1991-08-06 Unilever Nv Composicoes detergentes enzimaticas
JPH04500384A (ja) 1989-06-26 1992-01-23 ユニリーバー・ナームローゼ・ベンノートシヤープ 酵素洗剤組成物
US5665587A (en) * 1989-06-26 1997-09-09 Novo Nordisk A/S Modified subtilisins and detergent compositions containing same
DK316989D0 (da) 1989-06-26 1989-06-26 Novo Nordisk As Enzymer
US5352603A (en) * 1989-08-31 1994-10-04 Kali-Chemie Ag Highly alkaline proteases
US6271012B1 (en) * 1989-10-11 2001-08-07 Genencor International, Inc. Protease muteins and their use in detergents
DE4009534A1 (de) * 1990-03-24 1991-09-26 Henkel Kgaa Fluessiges handreinigungsmittel
DK97190D0 (da) * 1990-04-19 1990-04-19 Novo Nordisk As Oxidationsstabile detergentenzymer
US5629173A (en) * 1990-08-09 1997-05-13 Genentech, Inc. Methods of use of serine protease variants having peptide ligase activity
ATE187495T1 (de) * 1990-08-09 1999-12-15 Genentech Inc Serinproteasevarianten mit peptidligase aktivität
DK271490D0 (da) * 1990-11-14 1990-11-14 Novo Nordisk As Detergentkomposition
US5482849A (en) * 1990-12-21 1996-01-09 Novo Nordisk A/S Subtilisin mutants
FI932832A7 (fi) 1990-12-21 1993-08-13 Novozymes As Entsyymimutantteja, joilla on alhainen molekyylivarauksen vaihteluaste pH-alueella
US5340735A (en) * 1991-05-29 1994-08-23 Cognis, Inc. Bacillus lentus alkaline protease variants with increased stability
EP0995801A1 (de) * 1991-07-27 2000-04-26 Genencor International GmbH Verfahren zur Verbesserung des Stabilität von Enzymen und stabilisierte Enzyme
US5275945A (en) * 1991-10-08 1994-01-04 Vista Chemical Company Alkaline proteases stable in heavy-duty detergent liquids
JP4028592B2 (ja) 1992-07-17 2007-12-26 ジェネンコー インターナショナル インコーポレイテッド 高アルカリ性セリンプロテアーゼ
US5567601A (en) * 1993-06-01 1996-10-22 University Of Maryland Subtilisin mutants lacking a primary calcium binding site
US5470733A (en) * 1993-06-01 1995-11-28 University Of Maryland Calcium free subtilisin mutants
CN1057123C (zh) 1993-09-15 2000-10-04 普罗格特-甘布尔公司 降低了吸附能力以及增加了水解能力的枯草杆菌蛋白酶bpn变体
US6436690B1 (en) * 1993-09-15 2002-08-20 The Procter & Gamble Company BPN′ variants having decreased adsorption and increased hydrolysis wherein one or more loop regions are substituted
AU1253695A (en) * 1993-10-14 1995-05-04 Procter & Gamble Company, The Bleaching compositions comprising protease enzymes
ES2287931T3 (es) * 1993-10-14 2007-12-16 THE PROCTER &amp; GAMBLE COMPANY Composiciones limpiadoras que contienen proteasa.
ES2364776T3 (es) * 1994-02-24 2011-09-14 HENKEL AG &amp; CO. KGAA Enzimas mejoradas y detergentes que las contienen.
US6599730B1 (en) * 1994-05-02 2003-07-29 Procter & Gamble Company Subtilisin 309 variants having decreased adsorption and increased hydrolysis
US5780285A (en) * 1995-03-03 1998-07-14 Genentech, Inc. Subtilisin variants capable of cleaving substrates containing dibasic residues

Also Published As

Publication number Publication date
EP0758388A1 (en) 1997-02-19
HUT75559A (en) 1997-05-28
CA2189426A1 (en) 1995-11-09
AU2159195A (en) 1995-11-29
BR9507597A (pt) 1997-10-07
HU9603031D0 (en) 1997-01-28
US6436690B1 (en) 2002-08-20
CN1151761A (zh) 1997-06-11
MX9605357A (es) 1997-12-31
PE27897A1 (es) 1997-08-13
WO1995030010A1 (en) 1995-11-09
IL113048A0 (en) 1995-06-29
JPH09511652A (ja) 1997-11-25
CA2189426C (en) 2002-09-17

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CZ321696A3 (en) Subtilisin bpn variants with reduced adsorption and increased ability to hydrolysis
US6599730B1 (en) Subtilisin 309 variants having decreased adsorption and increased hydrolysis
US6455295B1 (en) Subtilisin Carlsberg variants having decreased adsorption and increased hydrolysis
US6451574B1 (en) Proteinase K variants having decreased adsorption and increased hydrolysis
EP0719339B1 (en) Subtilisin bpn&#39; variants with decreased adsorption and increased hydrolysis
US6475765B1 (en) Subtilisin DY variants having decreased adsorption and increased hydrolysis
JPH09512433A (ja) ズブチリシンｂｐｎ′変異体を含む布帛クリーニング組成物
CZ280097A3 (cs) Varianty termitasy mající sníženou adsorbci a zvýšenou hydrolýzu
WO1996028558A9 (en) Thermitase variants having decreased adsorption and increased hydrolysis
US6440717B1 (en) BPN′ variants having decreased adsorption and increased hydrolysis

Legal Events

Date Code Title Description
PD00 Pending as of 2000-06-30 in czech republic